JPS6034183A - プラスミドｐＵＴ３２ - Google Patents
プラスミドｐＵＴ３２Info
- Publication number
- JPS6034183A JPS6034183A JP58143438A JP14343883A JPS6034183A JP S6034183 A JPS6034183 A JP S6034183A JP 58143438 A JP58143438 A JP 58143438A JP 14343883 A JP14343883 A JP 14343883A JP S6034183 A JPS6034183 A JP S6034183A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plasmid
- bacillus
- put32
- host
- dna
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- Granted
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/75—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Bacillus
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明はプラスミドベクター１）ＵＴ３２に関する。
ｐＵＴ３２は、バチルス属細菌を宿主として増殖できる
ものである。
ものである。
従来、バチルス属細菌を宿主として増殖できるベクター
としては、ｐｕｎｉｉｏをはじめ多数のスクフィロコソ
カス属菌由来のベクターが知られているが、これらは、
何れもバチルス、ズブチリスへ４株及びその系統の株を
宿主とするものが多く、工業生産菌として知られるバチ
ルス拳ズブチリスＩく株を宿主として増殖できるベクタ
ーの例は少ない。例えば、ｐＵＢｌｌｏはバチルス・ズ
ブチリスに株では全く発現せず、又、プラスミドｆ）Ｔ
Ｐ４はに株を殆んど形質転換しなく、いずれも実用的な
ベクターといえなかった。そこで、バチルス・ズブチリ
スに株を宿主として増殖できる実用的なベクターの開発
を口重して種々検討した。
としては、ｐｕｎｉｉｏをはじめ多数のスクフィロコソ
カス属菌由来のベクターが知られているが、これらは、
何れもバチルス、ズブチリスへ４株及びその系統の株を
宿主とするものが多く、工業生産菌として知られるバチ
ルス拳ズブチリスＩく株を宿主として増殖できるベクタ
ーの例は少ない。例えば、ｐＵＢｌｌｏはバチルス・ズ
ブチリスに株では全く発現せず、又、プラスミドｆ）Ｔ
Ｐ４はに株を殆んど形質転換しなく、いずれも実用的な
ベクターといえなかった。そこで、バチルス・ズブチリ
スに株を宿主として増殖できる実用的なベクターの開発
を口重して種々検討した。
その結果、本発明者らは、バチルス属細菌を宿主として
増殖するプラスミドである、分子量４．５メガダルトン
であって第１図に示す制限酵素地図を有するプラスミド
ベクターｐＵＴ３２を造成することに成功した。このプ
ラスミドベクターは、カリ−マイシン及びクロラムフェ
ニコール耐性の遺伝情報を有し、コピー数が大きく、更
に制限酵素Ａｕａｌ、１１ａｍＨＩ、 Ｐｖｕｒｒ、Ｅ
ｃｏＲＩ。
増殖するプラスミドである、分子量４．５メガダルトン
であって第１図に示す制限酵素地図を有するプラスミド
ベクターｐＵＴ３２を造成することに成功した。このプ
ラスミドベクターは、カリ−マイシン及びクロラムフェ
ニコール耐性の遺伝情報を有し、コピー数が大きく、更
に制限酵素Ａｕａｌ、１１ａｍＨＩ、 Ｐｖｕｒｒ、Ｅ
ｃｏＲＩ。
ｎｇ＋ｎでは１箇所しか切断されない。更にバチルス・
ズブチリスに株のみならず、多種のバチルス属細菌を宿
主として増殖でき、ベクターとして極めて勝れている。
ズブチリスに株のみならず、多種のバチルス属細菌を宿
主として増殖でき、ベクターとして極めて勝れている。
プラスミドベクターｐＵＴ３２は実施例１に示す方法に
より造成した。
より造成した。
本発明の宿主菌として利用しうる菌株は、バチルス属細
菌に属する菌株であり、例えば次のようなものがあげら
れる。
菌に属する菌株であり、例えば次のようなものがあげら
れる。
バチルス・ズブチリス ＡＴＣＣＧＯ５］ （Ｍ株）バ
チルス０ズブチリス １八Ｍ＋５２３ （Ｋ株）バチル
ス参プレビス ＡＴＣＣ８２４Ｂバチルス−セレウス
ＡＴＣＣ＋４５７９バチルスーステアロザーモフイラス
へＴＣＣ１２９８０ハ（−ルスｅリヘニホルミス へ
ＴＣＣ１４５８０バチルス・メガテリウム ＡＴＣＣ１
４５８１バチルス・ボリミキ号 八ＴＣＣ８４２バチル
ス・プミルス ＡＴＣＣ７０Ｂ＋バ チ ル ス ・
γミロリクエファーシェンス へ丁ＣＣ２３３５０バチ
ルス・チューリンジエンシス ＾ＴＣＣＩ０７９２プラ
スミドｆ）ＵＴ３２の宿主として、制限酵素活性が低め
られた変異を用いるのが好ましい。
チルス０ズブチリス １八Ｍ＋５２３ （Ｋ株）バチル
ス参プレビス ＡＴＣＣ８２４Ｂバチルス−セレウス
ＡＴＣＣ＋４５７９バチルスーステアロザーモフイラス
へＴＣＣ１２９８０ハ（−ルスｅリヘニホルミス へ
ＴＣＣ１４５８０バチルス・メガテリウム ＡＴＣＣ１
４５８１バチルス・ボリミキ号 八ＴＣＣ８４２バチル
ス・プミルス ＡＴＣＣ７０Ｂ＋バ チ ル ス ・
γミロリクエファーシェンス へ丁ＣＣ２３３５０バチ
ルス・チューリンジエンシス ＾ＴＣＣＩ０７９２プラ
スミドｆ）ＵＴ３２の宿主として、制限酵素活性が低め
られた変異を用いるのが好ましい。
本発明のプラスミドとして、ｐＵＴ３２に外来又は異種
の遺伝子が挿入されたようなものも含まれる。外来又は
異種遺伝子のｆ）ＵＴ３２の挿入位置は、前記制限酵素
切断箇所が１である箇所が好ましい。
の遺伝子が挿入されたようなものも含まれる。外来又は
異種遺伝子のｆ）ＵＴ３２の挿入位置は、前記制限酵素
切断箇所が１である箇所が好ましい。
本発明で示すプラスミドｐＵＴ３２は、アミノ酸、核酸
、各種酵素、抗生物質等の工業生産菌を宿主とすること
ができ、組換えＤＮＡ法による有用菌株の育種に使用す
ることができる。
、各種酵素、抗生物質等の工業生産菌を宿主とすること
ができ、組換えＤＮＡ法による有用菌株の育種に使用す
ることができる。
実施例１
（１） 材料プラスミドの調製
（Ｔ） プラスミドｐＵＢＩＩＯはスタフィロコッカス
ｅオーレウス由来の分子量３．０メガダルトンのプラス
ミドであり、バチルス・ズブチリスＭ株を宿主として増
殖し、カナマイシン耐性を発現する（Ｋｃｇｇｉｎｓ、
に、Ｍ、、Ｌｏｕｅｔｔ。
ｅオーレウス由来の分子量３．０メガダルトンのプラス
ミドであり、バチルス・ズブチリスＭ株を宿主として増
殖し、カナマイシン耐性を発現する（Ｋｃｇｇｉｎｓ、
に、Ｍ、、Ｌｏｕｅｔｔ。
Ｐ、Ｓ、ａｎｄ Ｄｕｖａｌ Ｉ、Ｅ、Ｊ、、ｒ’ｒｏ
ｃ。
ｃ。
Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、７５．１４２３（１０
７８））。プラスミドｐＵＢ １１０ＤＮＡは次の様に
して調製した。
７８））。プラスミドｐＵＢ １１０ＤＮＡは次の様に
して調製した。
バンド・ペリーツセイブロス （Ｂａｃｔｏ −ｒ’ｅ
ｎａｓｓａｙ Ｂｒｏｔｈ） （ディフコ社製）１１中
、３０’Ｃにてバチルス・ズブチリスＩＥＯ（プラスミ
ドｐＵｎｌｌｏ保有菌株）を対数増殖期後期まで培養し
、菌体を集めた。得られた菌体をリゾデームとＳＤＳに
より溶菌せしめた後、菌体を、２０．００Ｏｒｐｍで３
０分間遠心分離し、９０１ｅの上澄液を得た。上澄液中
のプラスミドＤＮＡを、上澄液に２容の冷エタノールを
添加して沈澱せしめて採取した。この沈澱を６紅のＴＥ
Ｎ緩衝液に溶解した。
ｎａｓｓａｙ Ｂｒｏｔｈ） （ディフコ社製）１１中
、３０’Ｃにてバチルス・ズブチリスＩＥＯ（プラスミ
ドｐＵｎｌｌｏ保有菌株）を対数増殖期後期まで培養し
、菌体を集めた。得られた菌体をリゾデームとＳＤＳに
より溶菌せしめた後、菌体を、２０．００Ｏｒｐｍで３
０分間遠心分離し、９０１ｅの上澄液を得た。上澄液中
のプラスミドＤＮＡを、上澄液に２容の冷エタノールを
添加して沈澱せしめて採取した。この沈澱を６紅のＴＥ
Ｎ緩衝液に溶解した。
この試料３．５ｍ、ｆ：に０．２５ＭＥＤＴＡ１紅。
エヂジ・ンムプロマイド溶液（４，６、／ｕｇ）０．５
Ｍ。
Ｍ。
塩化セシウｌｚ ５ ｇを混合溶解し、屈折率を１．３
９０にｎ製した後、この溶液について１５℃、４０．０
０Ｏｒｐｍにて２０時間、平衡密度勾配遠心を行った。
９０にｎ製した後、この溶液について１５℃、４０．０
０Ｏｒｐｍにて２０時間、平衡密度勾配遠心を行った。
遠心終了後、３，８５０オングストロームの紫外線照射
下でＤＮＡの蛍光バンドを検出し、プラスミドＤＮＡ両
分を分取し、精製し２５０μｇの純粋なプラスミドＤＮ
Ａを分離した。
下でＤＮＡの蛍光バンドを検出し、プラスミドＤＮＡ両
分を分取し、精製し２５０μｇの純粋なプラスミドＤＮ
Ａを分離した。
（ｎ） プラスミドｆ）ＴＰ４はバチルス・ズブチリス
ＩＥ１２ （プラスミドｐＴＰ４保有菌株）を使用して
、（１）と同様の方法により２００μｇの純粋なプラス
ミドＤＮＡを得た。
ＩＥ１２ （プラスミドｐＴＰ４保有菌株）を使用して
、（１）と同様の方法により２００μｇの純粋なプラス
ミドＤＮＡを得た。
（２） 複合プラスミド液の調製
（Ｉ） ｆ）ＵＢＩＩＯのＤＮＡ （５μｇ）を制限酵
素ＸｂａＩ （ｒＪＲＬ社製）１０ユニツトを使用して
３７°Ｃ，１２０分の反応により完全に切断した。
素ＸｂａＩ （ｒＪＲＬ社製）１０ユニツトを使用して
３７°Ｃ，１２０分の反応により完全に切断した。
（ＩＩ ） ｆ） Ｔ Ｐ ４のＤＮＡ （５μｇ）は
、制限酵素Ｘｄａｌ（ｎＲ１，、社製）１０ｊ−ニット
を使用して、３７℃、１２０分の反応により、完全に切
断した。
、制限酵素Ｘｄａｌ（ｎＲ１，、社製）１０ｊ−ニット
を使用して、３７℃、１２０分の反応により、完全に切
断した。
（ｎＩ） （Ｉ）と（ＩＩ）で得たＤＮＡを混合し制限
酵素を不活化するため６５℃で１０分間熱処理した後、
ＡＴＰとジヂオスレイトール存在下にて２２°Ｃで２時
間０．０１ユニツトのＴ４フ、−ジＤＮＡリガーゼを作
用させた。Ｔ４ファージＤＮＡリガーゼを６５°Ｃ３１
０分間の処理で不活化し、これに２倍量のエタノールを
加えた後、１０，０００ｒｐｍ、１５分間の遠心分離に
よりＤＮＡを回収した。このようにして得た複合プラス
ミド溶液を次項で述べる形質転換に使用した。
酵素を不活化するため６５℃で１０分間熱処理した後、
ＡＴＰとジヂオスレイトール存在下にて２２°Ｃで２時
間０．０１ユニツトのＴ４フ、−ジＤＮＡリガーゼを作
用させた。Ｔ４ファージＤＮＡリガーゼを６５°Ｃ３１
０分間の処理で不活化し、これに２倍量のエタノールを
加えた後、１０，０００ｒｐｍ、１５分間の遠心分離に
よりＤＮＡを回収した。このようにして得た複合プラス
ミド溶液を次項で述べる形質転換に使用した。
（３） 形質転換株の選択
バチルス・ズブチリスＡＪ１１７１１（アルギニン、ロ
イシン複要求性変異株）をｒ Ｐｅｎｎａｓｓａｙ１３
ｔｏｔｈＪ （Ｄｉｒｃｏ）に接種して３０℃にて一晩
振盪培養を行い、第１培養培地（グルコース０．５ｇ／
ｄＪ！、（Ｎｌ−１４）２３０４ ０．２ｆｆ／ｄＪ！
、ＫＨ２Ｐｏ４０．６ｇ／ｄｉＳＫ２１−ＨＰＯ４１、
４ｇ／ｄｆ！１Ｍｇ５Ｏ４１１７１１ｚ Ｏ０，０２ｇ
／ ｄｚ ％ クエン酸ナトリウム０．１ｇ／ｃｌＪ
！、酵母エキス０．２ｇ／ｃｌｊ！、１、−アルギニン
２５ ＩＩｇ／ｄＪ！、Ｌ−ロイシン５Ｉ１ｇｌｄＩ！
を含む）に接種し、３７℃にて４時間振盪培養を行った
後、さらに第■培養培」ｉｌｌ （クルコース０． ５
ｇ ／Ｍ１ （Ｎｌ−Ｉ４ ） ２ ＳＯ４０，２ｇ
／ｄｆ！、ＫＨｐ Ｉ”０４０．８ ｇ／ｄＪｌ！、Ｋ
２１１ｒ’０４１−４ ｇ／ｄ１１Ｍｇ ＳＯ４＠７１
１２０ ０． １．２ｇ／ ｄＩ！、クエン酸ナトリウ
ム０．１ｇ／ａｔ、酵母エキス０．０２ｇ／ｄＩ！、Ｌ
−アルギニン５■／ｄ６及び１．−ロイシン０．５＋＋
ｇ／ｄｊ！を含む）へ接種し、３７°Ｃにて１．５時間
′振盪培養を行うことによっていわゆるコンピテントな
（ＤＮＡ取り込み能を有ず粂）細胞整調製した（参考
文献：Ｊ。
イシン複要求性変異株）をｒ Ｐｅｎｎａｓｓａｙ１３
ｔｏｔｈＪ （Ｄｉｒｃｏ）に接種して３０℃にて一晩
振盪培養を行い、第１培養培地（グルコース０．５ｇ／
ｄＪ！、（Ｎｌ−１４）２３０４ ０．２ｆｆ／ｄＪ！
、ＫＨ２Ｐｏ４０．６ｇ／ｄｉＳＫ２１−ＨＰＯ４１、
４ｇ／ｄｆ！１Ｍｇ５Ｏ４１１７１１ｚ Ｏ０，０２ｇ
／ ｄｚ ％ クエン酸ナトリウム０．１ｇ／ｃｌＪ
！、酵母エキス０．２ｇ／ｃｌｊ！、１、−アルギニン
２５ ＩＩｇ／ｄＪ！、Ｌ−ロイシン５Ｉ１ｇｌｄＩ！
を含む）に接種し、３７℃にて４時間振盪培養を行った
後、さらに第■培養培」ｉｌｌ （クルコース０． ５
ｇ ／Ｍ１ （Ｎｌ−Ｉ４ ） ２ ＳＯ４０，２ｇ
／ｄｆ！、ＫＨｐ Ｉ”０４０．８ ｇ／ｄＪｌ！、Ｋ
２１１ｒ’０４１−４ ｇ／ｄ１１Ｍｇ ＳＯ４＠７１
１２０ ０． １．２ｇ／ ｄＩ！、クエン酸ナトリウ
ム０．１ｇ／ａｔ、酵母エキス０．０２ｇ／ｄＩ！、Ｌ
−アルギニン５■／ｄ６及び１．−ロイシン０．５＋＋
ｇ／ｄｊ！を含む）へ接種し、３７°Ｃにて１．５時間
′振盪培養を行うことによっていわゆるコンピテントな
（ＤＮＡ取り込み能を有ず粂）細胞整調製した（参考
文献：Ｊ。
ｎａｃｔｃｒｉｏｌ、、８１，７４１（１９６１））。
この；７ンビテント細胞懸濁液に（２）で得たＤＮＡの
（ 溶ｄｋを加えて３７℃でさらに２時間振盪培養を行って
形質転換反応を完了させた後、細胞懸濁液を）Ｊナマイ
シン５μｇ／ｌｌｌ、 クロラムフェニコール１０μｇ
／ １．ｇ含イｒ最少培地プレート（グルコース０．
５ｇ／ｄ６、（ＮＩＬ４）２ ＳＯ４０，２ＥＣＩＡｅ
。
（ 溶ｄｋを加えて３７℃でさらに２時間振盪培養を行って
形質転換反応を完了させた後、細胞懸濁液を）Ｊナマイ
シン５μｇ／ｌｌｌ、 クロラムフェニコール１０μｇ
／ １．ｇ含イｒ最少培地プレート（グルコース０．
５ｇ／ｄ６、（ＮＩＬ４）２ ＳＯ４０，２ＥＣＩＡｅ
。
ＫＩＩ２ ｒ’ｏ４０．６ ｇ／１３ｆ！、、Ｋ２ Ｈ
ＰＯ４１，４ｇ／ ｄ、ｅ ％ Ｍ ｇＳ Ｏａ ・７
１−１２００−０２ ｇ ／ ｄｉ ｓクエン酸ナトリ
ウム０． １ ｇ／ｄｅ、 Ｌ−アルギニ７１０ ｍｇ
／ ａｔ、ｌ、 −ｏイシ７１０＋ｍｇ／ｄｊ！、寒
天２ｇ／、＋ｅ、ｒｌＴＩ７．２）にゆ沫し、３７°Ｃ
で培養した。３日後に」−記培地十に５個のコロニーが
出現したので、これを釣菌し各クローンをそれぞれ純什
に分離した。
ＰＯ４１，４ｇ／ ｄ、ｅ ％ Ｍ ｇＳ Ｏａ ・７
１−１２００−０２ ｇ ／ ｄｉ ｓクエン酸ナトリ
ウム０． １ ｇ／ｄｅ、 Ｌ−アルギニ７１０ ｍｇ
／ ａｔ、ｌ、 −ｏイシ７１０＋ｍｇ／ｄｊ！、寒
天２ｇ／、＋ｅ、ｒｌＴＩ７．２）にゆ沫し、３７°Ｃ
で培養した。３日後に」−記培地十に５個のコロニーが
出現したので、これを釣菌し各クローンをそれぞれ純什
に分離した。
得られた形質転換株の性質は、いずれもアルギニン、［
１イシン複要求性、カナマイシン耐性、クロラムフェニ
コール耐性を示した。
１イシン複要求性、カナマイシン耐性、クロラムフェニ
コール耐性を示した。
尚、ｐ Ｕ ｎ ＋１０１ｐＴ Ｐ ４いずれか又は両
方のＤＮＡを除いた区分ではコロニーは得られなかった
。」二で得られたコロニーの内、バチルス・ズブチリス
ＡＪ １２０６８を代表として選び、プラスミドの側
視酵素切断地図を作製した。
方のＤＮＡを除いた区分ではコロニーは得られなかった
。」二で得られたコロニーの内、バチルス・ズブチリス
ＡＪ １２０６８を代表として選び、プラスミドの側
視酵素切断地図を作製した。
（４） プラスミドの同定
バチルス−ズブチリス ＡＪ １２０６８を用いてＫ
ａ、 ｄ ｏらの方法（Ｋａｄｏ、Ｃ，！、、ａｎｄＬ
ｉｕ、ｓ、”ｒ、＋ Ｊ、ｌ１ａｃｔｅｒｊｏ１．。
ａ、 ｄ ｏらの方法（Ｋａｄｏ、Ｃ，！、、ａｎｄＬ
ｉｕ、ｓ、”ｒ、＋ Ｊ、ｌ１ａｃｔｅｒｊｏ１．。
１４５．１３６５ （１９８１））によりプラスミドの
検出及び分子量の測定を行なった。分子量は、４．５メ
ガダルト／であり、このプラスミドをｐＵＴ３２と命名
した。Ｉ）ＵＴ３２の構築過程と、各種制限酵素による
切断地図を第１図２ご示した。
検出及び分子量の測定を行なった。分子量は、４．５メ
ガダルト／であり、このプラスミドをｐＵＴ３２と命名
した。Ｉ）ＵＴ３２の構築過程と、各種制限酵素による
切断地図を第１図２ご示した。
尚、ｐＵＴ３２を保をするバチルス・ズブチリス ＡＪ
１２０６８はＦＥＲＭ−Ｐ７１８１．！：ｌ。
１２０６８はＦＥＲＭ−Ｐ７１８１．！：ｌ。
て寄託されている。
（５）ｐＵＴ３２による再形質転換
（１）と同様の方法により、複合プラスミドｐＵＴ３２
を保存するバチルス−ズブチリ７、ＡＪ１２０６８から
、ｐＵＴ３２を調製し２ｏｏμｇを得た。
を保存するバチルス−ズブチリ７、ＡＪ１２０６８から
、ｐＵＴ３２を調製し２ｏｏμｇを得た。
次に複合プラスミドの形質発現を確認する目的で、（３
）と同様な方法により、バチリス争ズブヂリス ＡＪ１
１７１１．（アルギニン、ロイシン複要求性変異株）に
複合プラスミドｐＵＴ３２を導入した。その結果、ｌμ
ｇのｐＵＴ３２あたり５×１０４個のカナマイシン耐性
かつクロラムフェニコール耐性のコロニーが出現した。
）と同様な方法により、バチリス争ズブヂリス ＡＪ１
１７１１．（アルギニン、ロイシン複要求性変異株）に
複合プラスミドｐＵＴ３２を導入した。その結果、ｌμ
ｇのｐＵＴ３２あたり５×１０４個のカナマイシン耐性
かつクロラムフェニコール耐性のコロニーが出現した。
とのコ１１ニーより、２４コロニーを釣菌し、（４）の
Ｋａｄｏらの方法によりプラスミドの検出をしたところ
、何れのコロニーもｐＵＴ３２と同じく分子量（４，５
メガダルトン）であった。
Ｋａｄｏらの方法によりプラスミドの検出をしたところ
、何れのコロニーもｐＵＴ３２と同じく分子量（４，５
メガダルトン）であった。
（６） バチルス・ズブチリスに株への形質転換頻度バ
チルス・ズブチリスに株をプロトプラスト化し、次にプ
ラスミドを移入する方法（Ｃｈ ａ ｎ ｇ ＋Ｓ、ａ
ｎｄ Ｃｈｏｅｎ、Ｓ、Ｎ、、Ｍｏ１ｃｃ。
チルス・ズブチリスに株をプロトプラスト化し、次にプ
ラスミドを移入する方法（Ｃｈ ａ ｎ ｇ ＋Ｓ、ａ
ｎｄ Ｃｈｏｅｎ、Ｓ、Ｎ、、Ｍｏ１ｃｃ。
Ｇｅｎ、Ｇｅｎｅ ｔ、、１６８，１１１（８１７９＞
）により、プラスミドをに株に形質転換し、その頻度を
測定した。結果を第１表に示す。
）により、プラスミドをに株に形質転換し、その頻度を
測定した。結果を第１表に示す。
第 １ 表
ｐ Ｕ １３１．１０ ＫｍＹ ０
ｐＴＰ４ Ｃｍγ ８
ｐＵＴ３２ ＫｍＹ、 Ｃｍγ１０４
※ １μｇのプラスミドＤＮＡ当り出現する薬剤耐性コ
ロニーの発現数。
ロニーの発現数。
ＫｍＹ：カナマイシン耐性
Ｃｍγ゛クロラムフ、ニール耐性
即ち、ｐＵＴ３２は、プラスミドＩ）ＵＢＩＩＯ。
ｐ Ｔ Ｐ ４と比較して極めて高い形質転換頻度を示
した。
した。
第１図は、ｐＴＵ３２の制限酵素切断地図及びその造成
経過の説明図である。 特許出願人 味の索株式会−社
経過の説明図である。 特許出願人 味の索株式会−社
Claims (1)
- 分子量４．５メガダルトンであって、第１図に示す制限
酵素切断地図を有するプラスミドベクターｐＵＴ３２゜
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58143438A JPS6034183A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | プラスミドｐＵＴ３２ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58143438A JPS6034183A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | プラスミドｐＵＴ３２ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6034183A true JPS6034183A (ja) | 1985-02-21 |
| JPH0314434B2 JPH0314434B2 (ja) | 1991-02-26 |
Family
ID=15338703
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58143438A Granted JPS6034183A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | プラスミドｐＵＴ３２ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6034183A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2219806A (en) * | 1988-05-20 | 1989-12-20 | Ciba Geigy Ag | Bacillus thuringiensis and b.cereus transformation |
| US4894337A (en) * | 1989-01-17 | 1990-01-16 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Process for the bioproduction of cyclic hydroxides |
-
1983
- 1983-08-05 JP JP58143438A patent/JPS6034183A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2219806A (en) * | 1988-05-20 | 1989-12-20 | Ciba Geigy Ag | Bacillus thuringiensis and b.cereus transformation |
| GB2219806B (en) * | 1988-05-20 | 1993-01-13 | Ciba Geigy Ag | Bacillus thuringiensis and bacillus cereus recombinant transformation |
| US4894337A (en) * | 1989-01-17 | 1990-01-16 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Process for the bioproduction of cyclic hydroxides |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0314434B2 (ja) | 1991-02-26 |
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