KR900005485B1 - 잠혈(潛血) 시험을 위한 개량된 피검물 슬라이드 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

잠혈(潛血) 시험을 위한 개량된 피검물 슬라이드

배설물에서 잠혈을 검출하기 위한 피검물 시험 슬라이드 및 공정들이 공지되어 있다. 예를 들면, 미국특허 번호 3,996,006호는 전면 판넬의 하나 혹은 그 이상의 구멍과 후면 판넬의 하나의 구멍 및 이들 구멍을 덮는 추축(樞軸)을 가진 전면 판넬과 후면 판넬 사이의 피검물 수용 시-트로 구성되는 기질(基質)을 가진 슬라이드들을 소개하고 있다. 전형적으로, 배설물에서 잠혈용 시험을 할 경우, 피검물 수용 시-트는 과이억(guaiac)으로 침투시키거나 프린트된 흡수지이고 과산화물 용액과 같은 현상액이 후면 판넬에 있는 구멍을 통하여 가해진다. 한가지 그와 같은 테스트 슬라이드가 "헤모컬트(Hemoccult)"라는 상표로 판매되고 있다.

간단하게, 그 테스트공정은 다음과 같다. 배설물 시료를 전면 판넬의 구멍을 통하여 과이억지(紙)에 칠한다. 그 다음에 판넬을 닫고 후면 판넬의 뚜껑을 연다. 과산화수소와 같은 현상액을 후면 판넬의 상응하는 구멍을 거쳐 과이억지에 넣는다. 혈액이 그 배설물에 존재하면 그 과이억 반응은 종이가 푸른색을 띄게할 것이다. 푸른색같은 과이억의 산화를 촉진하는 헤모그로빈에 기인된다.

과이억 테스트의 제한된 특성중의 하나는 청색 형성을 촉진하는 헤모그로빈이 pH에 의존된다는 것이다. 현상액은 일정 pH 이하로는 재생할 수 있게 조작이 안된다. 상기 알려진 계통의 성공적인 수행을 위한 pH의 범위는 4.0에서부터 7.0까지이고 최적 조건의 pH는 5.5에서부터 6.0까지이다. 그래서, 헤모그로빈이 최적조건의 pH와는 두드러지게 다른 매질에의 과이억 처리된 대상체에 적용된다면 거의 무색이거나 아마도 전혀 색이 검출되지 않을 것이다.

본 슬라이드의 상기한 불이익으로 인하여, 그것은 2이하의 pH를 가질 수 있는 위액과 같은 낮은 pH를 갖는 피검물에서 잠재혈액의 존재를 시험하기 위해서는 설계되어 있지 않다. 위 내용물에는 보통 존재하지 않는 화합물의 검출, 특히 잠혈의 존재를 검출하는 것은 임상적으로 중요하다. 위 내용물의 혈액은 위장관 외부의 창상(瘡像)으로 인하여 빨아드려진 혈액과 위장 출혈을 포함하는 많은 근원으로부터 비롯된다. 위암, 소화성 궤양 및 위염과 같은 몇가지 병리해부학적 조건에서는, 혈액이 위속에 존재할 수 있다. 알콜과, 아스피린, 다른 진통제 및 코르티코스테로이드와 같은 여러가지 약제들의 섭취는 위 점막세포에서 침식증을 일으켜서 결국 위장 출혈을 일으키는 원인이 될 수 있다.

위 침식과 이에 따른 출현은 역시 위험한 부상이나 화상 치료를 위해 병원에 입원한 환자에게서 기록된 바 있다. 이런 형태의 침식은 창상 시초로부터 24시간이내에 나타날 수 있고 생명이 절박한 급성 위 출혈에 이를 수 있다. 이러한 위 장관에서의 잠재혈을 예상외로 조기 발견하는 것이 중요한 점은 조기 단계에서 몇가지 상기 상태를 진단하는데 도움이 되고 한편 이런 증상들을 보다 효과적으로 치료할 수 있다.

그러므로 본 발명의 목적은 시료나 피검물 pH의 변화에 의해 영향을 미치지 않으면서, 배설물외에 피검물을 위해 이용될 수 있는 피검물 테스트 슬라이드를 제공하기 위한 것이다.

또한 본 발명의 목적은 위액에 잠재한 혈을 조기 검진하여 위장 상태의 치료에 도움을 주기 위한 빠르고, 간편한 정성 시험을 제공하는 것이다.

본 발명의 더 부가적인 목적은 과산화물 효소, 철, 구리 혹은 시메티딘과 같은 약품의 존재에 의하여 위양성반응(僞陽性反應)을 제거할 피검물 테스트 슬라이드를 제공하는 것이다.

앞서의 시도는 pH의 변화 및 과산화물 효소와 같은 간섭 물질에 대한 과이억 합침지나 시험대(帶)를 안정화 하기 위해 행해진 것이다. German Offenlegungsohrift 2,716,060호는 상기 언급한 문제들을 극복하기 위하여 과이억 페이퍼에 완충제나 킬레이트제의 도입을 공개하고 있다. 완충의 가장 결정적 필요성은 시험에 사용된 매체가 위액에서와 같이 최적 조건의 pH와 크게 다를때나 헤모그로빈과 같은 촉매의 적은량의 존재가 탐지될 것이다.

의외에도, 완충제가 현상액에는 존재하면서 기술적으로 공개된 바와 같은 과이억 페이퍼에는 함침되지 않았을 때는, 피검물 테스트 슬라이드는 시료나 피검물 pH의 변화에 의해서는 영향을 미치지 않고 위양성반응은 과산화물 효소 및 금속 이온의 존재에 기인되며 시메티딘은 제거되었음을 발견하였다.

몇가지 중요하고 유익한 점은 완충액으로 과이억 페이퍼를 함침하는 대신에 현상액을 완화시켜서 얻는다. 과이억 페이퍼에 적용될 수 있는 완충제의 량은 그 종이의 흡수성에 의해서 한정된다. 그러므로, 강한 완충이 필요시되면 현상제를 완화하는 것이 더욱 효과적일 것이다. 또한 종이에 완충액을 균일 배포하는 것도 어려울 것이다. 현상액은 완화시키므로서, pH가 대상체의 pH에 한정되지는 않는다. 즉 그 pH는 변경될 수 있다. 한번 종이가 함침되면 그 pH는 순조롭게 정해지며 또 제한된다. 고도의 염농도를 가진 종이는 또한 다른 시약에 영향을 미치며 그 종이 자체의 물리적 성질을 변화시킨다. 현상액의 완화에 의하여 피검물 테스트 슬라이드의 제조 공정에는 아무런 변화가 없을 것이다. 이러한 상태의 도달은 매우 효과적으로 비용이 든다.

가장 유익한 결과는 산 처리된 과이억 페이퍼와 완충된 현상액의 복합 사용으로 얻어진다. 과이억 페이퍼의 산 처리는 시메티딘으로 위양성반응을 배제하였고, 과산화물 효소로부터 간섭 물질을 감소하였음을 발견하였다. 더욱이, 이외에도 과이억 페이퍼에서의 산은 저장중, 대기 산화에 일어날 수 있을 때 과이억의 청색변화를 방지한다. 완충된 현상액은 과이억에서 존재하는 산성 조건하에서 헤모그로빈 검출을 할때 필요시 된다.

이것은 다음의 실험들의 결과에 의해서 상세히 설명된다. ml당 0.05mg의 헤모그로빈과 30mg의 시메티딘을 함유하는 합성 위액 시료를 준비했다. 25μL 시료를 "헤모컬트(Hemoccult)" 슬라이드에 넣고 완충된 것과 완충화 되지 않은 현상액으로 현상하였다. 그 다음 "헤모컬트" 슬라이드를, 시료를 넣고 현상하기 전의 산 처리된 과이억 페이퍼로 산성화시켰다. 아래의 표 1과 2는 이를 시험 결과를 입증하는 것이다.

[표 1]

[표 2]

"헤모컬트" 슬라이드를 25μL의 0.1M 구연산으로 과이억 페이퍼의 중앙을 처리하여 산성화시켰다. 그 종이는 사용전 대기상태에서 건조시켰다. 완충 현상액은 pH 5.8을 갖는 0.2M 구연산/구연산 완충액에 과산화수소를 함유한 것이다. 비완충 현상액은 에탄올 및 물에 과산화수소를 포함하는 상업상의 "헤모컬트" 현상액이었다.

청색강도는 무색일때를 제로로 하여 1 내지 5의 범위로 분류된다. 정규 "헤모컬트"에 완충 현상액의 사용은 보다 철저한 헤모그로빈 양성 반응을 일으킨다는 것을 표 1에서 알게될 것이다. 완충 현상액은 또한 시메티딘에 의해 원인이 되는 위양성반응을 제거했다. 표 2의 결과는 완충 현상액과 결합된 산성화 과이억 페이퍼의 사용은 비록 시험 기록을 지연시켜서 규정된 30초후에 기록했다 하드라도 시메티딘에 의하여 위양성 결과를 나타내지는 않을 것이라는 것을 입증하는 것이다. 이 처리는 헤모그로빈에 대한 반응과는 방해되지 않는다는 것을 알게될 것이다.

위 양성 반응을 촉진시킨 과산화물 효소는 역시 pH에 의존하는데, 그 촉매 반응은 pH의 감소로서 감소한다. 시료 적용이전 과이억 페이퍼의 산 처리는 산에 불안정한 과산화물 효소에 의해서 촉진되는 위 양성 반응을 방어한다. 그 처리된 종이가, 완충 현상액과 같이 사용될 때 시료에 함유된 헤모그로빈으로 청색을 나타낼 것이며, 헤모그로빈을 위한 반응을 방해하지는 않을 것이다. 예를 들면, 정제된 고추냉이 과산화물 효소[2유니트/ml]을 함유하는 pH 6.5의 합성 위액을 "헤모컬트"로 시험할 때 위양성 결과를 얻는다. 과이억 페이퍼를 산으로 전 처리하고 상기 과산화물 효소로 합성된 합성위액을 이용하여 현상된 5분간 산으로 반응시켰을 때 양성의 청색이 나타나지 않았다.

과이억 처리를 위해 효과적인 것으로 찾아낸 산은 염산, 황산, 구연산, 인산 및 수산이었다. 다른 유기강산과 무기강산이 이용될 수도 있다. 과이억 페이퍼의 산 처리를 위한 바람직한 조성 및 방법은 다음과 같다.

용액 2는 함침이나 도포에 의해서 흡수지에 적용할 수 있다. 현상액은 예컨데, 구연산/구연산나트륨, 구연산/2염기 인산소다, 트리스-말레인산염이나 EDTA와 같은 몇가지 잘 알려진 완충계로 완충화할 수도 있다.

완충 현상액은 약 1%에서부터 약 5%까지의 과산화수소를 함유하는 것이 바람직할 것이다. pH 5.8을 갖는 0.2M 구연산/구연산염 완충액인 다음의 완충 현상액은 유익하게 본 발명에 이용되었다.

바람직하게는 비이온성 세척제를 과산화물 효소 억제를 돕기 위해서 완충 현상액에 첨가하는 것이다. 가장 유익하게는 트리톤×세척제, 폴리에틸렌글리콜, p-옥틸 페닐에테르를 이용하는 것이다.

완충 현상액이 산 처리된 과이억 페이퍼의 기질(基質)에 이용되면 피검물 테스트 슬라이드는 안정성이 있는 결과가 되며 위액과 같은 낮은 pH를 갖는 피검물에서 잠재혈액의 존재를 시험할 수 있는 결과가 된다. 더욱이, 시메티딘, 과산화물 효소 및 구리와 철과 같은 금속이온에 의한 위양성 결과는 배제된다.

Claims (8)

1. 시험 시약으로서 과이억을 함유하는 산 처리된 흡수성 기질을 포함하고 있는 잠재혈액을 시험하기 위한 피검물 테스트 슬라이드.
2. 기질이 한장의 흡수지로 구성된 청구범위 1항의 슬라이드.
3. 산이 구연산인 청구범위 1항의 슬라이드.
4. 시약으로서 과이억을 함유하는 산 처리된 흡수성 기질에 위액을 공급하고 상기 기질에 완충 현상액을 공급하고 그 기질이 청색을 띄게되는 것을 관찰하는 것으로 구성된 위액에서 잠재혈액을 시험하는 방법.
5. 현상액이 과산화수소를 함유한 청구범위 4항의 방법.
6. 과이억 시약을 함유하는 산 처리된 흡수성 기질로 구성되는 위액의 잠재혈액의 존재를 판정하기 위한 시험 용구 및 그 기질을 청색으로 색깔을 내게 하기 위해 상기 시약과 반응하는 완충 현상액을 포함한 용기.
7. 약 5.8의 pH를 갖는 0.2M 구연산/구연산나트륨에 의해 완충된 약 1%에서 약 5%까지의 과산화수소로 구성되는 수성 현상액.
8. 비이온성 세척제가 첨가되는 청구범위 7항의 용액.