KR850003167A - 야로비아 리폴리티카의 형질전환 방법 - Google Patents

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Abstract

내용 없음

Description

야로비아 리폴리티카의 형질전환 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도 pBR 322 중의 야로비아 리폴리티카의 Sau 3A 부분 분해 유전자 라이브러리. 이 아가로즈 겔은 라이브러리(LIB로 표시됨)가 2.3kb λ-Hind Ⅲ 표준폼(STD 표지된) 바로 위로 이주하는 삽입 DNA가 없는 플라스미드로 슈퍼코일된 몇가지 pBR322를 함유하는 반면에, 나머지 분자는 상기의 4.3kb 표준폼위에 거의 연속 도말로서 이주하는 야로비아 리폴리티카 DNA의 다양한(4-10kb) 크기로 분할된 삽입물을 함유함을 나타낸다. 가운데 레인(land)은 절단되지 않은 플라스미드(pLD 21)를 함유하여 2개의 뚜렷한 밴드를 나타낸다.
제2도 야로비아 리폴리티카로부터 분리된 벌크 DNA 및 방사성 pLD 25로 프로브된 pLD 25를 분해하는 ECORI의 사우던하이브리드화(southern hibridization) pLD 25의 b, c, 및 d로 라벨된 3개의 내부밴드는 총 야로비아 리폴리티카 DNA의 동일한 크기로 절단된 동족체를 나타낸다. 야로비아 리폴리티카 레인중의 2개의 희미한 밴드(1 및 2로 표시된)는 추측하기로는 플라스미드밴드 a 및 e의 야로비아 리폴리티카 부분에 동족 관계이다. STD로 표시된 레인은 λ-Hind Ⅲ 사이즈 표준폼을 함유한다. p로 표시된 레인은 약 pLD 25를 분해하는 2㎍의 EcoRI을, 함유하는 "Y1"으로 표시된 레인은 약 1㎍의 총 야로비아 리폴리티카 DNA를 함유한다. pBR 322를 프로브로서 이용하는 유사한 사우던 실험에 있어서 pLD 25로부터의 a 및 e 밴드만이 하이브리드화되었다.
제3도. pLD 25의 제한지도. 단일 및 몇가지 이중 제한분해를 근거로 하는 부분도를 나타낸다. 괄호안의 개소는 서로에 관해 규제받지 않았다. 나타난 모든 사이즈는 아가로즈 겔 관찰을 근거로한 근사값이다. 얇은선은 pBR 322 DNA를 나타내고(12시에서 EcoRI 개소와의 표준 포오맷(format)에 있어서)굵은 선은 야로비아 리폴리티카에서 삽입 DNA를 나타낸다. 삽입체는 3EcoRV (RV), 8 Aral (A-그러나 오직 하나만이 그려져 있다), 1 sphⅠ(Sp), 1 kpnⅠ(k), 2SalⅠ(s), 4EcoRI (RI), 2 xhol (x) 및 2 클로즈-투게더(close-together) Bgl Ⅱ (B)개소를 갖는다. 삽입체에는 Hind Ⅲ, Cla BamH 및 Nrul 개소가 부족하다. leu 2라 표시된 EcoRI 말단과 접하고 있는 2.3kb 서브클론은 pBR 322의 EcoRI개소에서 오직 1방향중의 대장균에서 기능을 발휘한다.

Claims (19)

  1. 야로비아 리폴리티카(Yarrowia lipolytica)와 동종의 부분 및 검출할 수 있는 유전 마커(genetic marker)를 함유하는 DNA를 야로비아 리폴리티카로 이입시킴을 특징으로하여 야로비아 리폴리티카를 형질전환시키는 방법.
  2. 제1항에 있어서, DNA가 야로비아 리폴리티카 DNA의 단편을 함유하고, 이 DNA가 야로비아 리폴리티카중에서 검출될 수 있는 방법.
  3. 제2항에 있어서, DNA가 야로비아 리폴리티카 DNA의 단편을 함유하는 벡터(vector)인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 벡터가 야로비아 리폴리티카 단편을 함유하는 자발적으로 복제하는 대장균 플라스미드이고, 이 단편이 야로비아 리폴리티카중에서 생리학적으로 작용하는 유전자를 갖는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 야로비아 리폴리티카가 ATCC 20688와 동일한 특징을 갖는 야로비아 리폴리티카인 방법.
  6. 플라스미드 pBR 322를 제한 효소로 직선화하고, 이 직선 pBR 322를 야로비아 리폴리티카와 동종인 부분 및 검출할수 있는 유전 마커를 함유하는 DNA와 연결하여, 이 생성물로 대장균 돌연변이주(mutant)를 형질전환시켜 작용성의 야로비아 리폴리리티카 유전자를 검출할 수 있도록 함을 특징으로 하여, 야로비아 리폴리티카를 형질전환시키는 벡터를 제조하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 벡터가 야로비아 리폴리리티카의 크로모좀성 DNA와 동종인 부분 및 검출할 수 있는 유전마커를 포함하는 DNA를 함유하는 대장균내에서 자발적으로 복제하는 벡터인 방법.
  8. 제6항에 있어서, 벡터가 대장균 플라스미드의 DNA 및 야로비아 리폴리티카의 크로모좀성 DNA를 함유하는 자발적으로 복제하는 대장균 벡터이고, 이 크로모좀성 DNA가 야로비아 리폴리티카중에서 검출될 수 있는 선택적 유전마커를 갖는 방법.
  9. 제8항에 있어서, 야로비아 리폴리티카 DNA가 대장균 및 야로비아 리폴리티카 모두에서 작용하는 유전자를 포함하는 야로비아 리폴리티카 DNA 단편을 함유하는 벡터인 방법.
  10. 제8항에 있어서, DNA가 야로비아 리폴리티카의LEU 2, HIS 1또는URA3유전자를 포함하는 방법.
  11. 제9항에 있어서, 대장균 플라스미드가 대장균 복제플라스미드 pBR 322를 함유하는 방법.
  12. 제1항에 있어서, 야로비아 리폴리티카중에 선택성 마커에 상응하는 유전자의 돌연변이를 갖는 제7항에 정의된 벡터를 함유하는 형질전환체가 얻어지는 방법.
  13. 제1항에 있어서, 야로비아 리폴리티카 ATCC 20688내에 제3도에 도시된 제한 엔도뉴클레아제 절단지도에 의해 특징지어지는 플라스미드 pLD 25가 이입된 야로비아 리폴리티카 ATCC 20687의 형질전환체가 얻어지는 방법.
  14. 제6항에 있어서, 대장균 JC-355가 제13항에 정의된 플라스미드 pLD 25에 의해 대장균 ATCC 39464의 형질전환체로 형질전환되는 방법.
  15. 제6항에 있어서, 대장균내에 제9항에 정의된 벡터가 함유된 형질전환체로 형질전환되는 방법.
  16. 제1항에 있어서, 야로비아 리폴리티카내에 제8도에 도시된 제한 패턴에 의해 특징지어지는 벡터 pLD 55가 이입된 야로비아 리폴리티카 ATCC 20718의 형질전환체가 얻어지는 방법.
  17. 야로비아 리폴리티카와 동종의 부분 및 검출할 수 있는 유전 마커를 함유하는 DNA를 야로비아 리폴리티카내로 이입시킴을 특징으로하여, 야로비아 리폴리티카중의 돌연변이주의 보족에 의해 유전자를 클로닝(cloning)하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 야로비아 리폴리티카가 상기의 선택적 마커에 상응하는 유전자의 돌연변이를 갖는 방법.
  19. 제18항에 있어서, 돌연변이가 야로비아 리폴리티카의LEU 2, 또는URA 3유전자중에서 일어나는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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