KR20230052291A - Ceacam 양성 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

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KR20230052291A
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hla
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슈에인 왕
칼 알렉산더 캠브
한 수
마크 엘 샌드버그
도라 톨레도 바르샤비아크
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에이투 바이오쎄라퓨틱스, 인크.
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Abstract

본 개시내용은 CEA에 특이적인 제1 활성화제 수용체 및 제2 억제 수용체를 포함하는 면역 세포, 및 암의 치료를 위해 이를 제조하고 사용하는 방법을 제공한다.

Description

CEACAM 양성 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법
관련 출원
본 출원은 2020년 8월 20일에 출원된 미국 가출원 번호 63/068,244에 대한 우선권을 주장하고, 그 내용은 본원에 참조로 포함된다.
기술 분야
본 개시내용은 입양 세포 요법(adoptive cell therapy) 및 암 치료법에 관한 것이다.
서열 목록의 참조에 의한 통합
서열 목록 단락 출원서는 EFS-WEB를 통해 ASCII 형식으로 제출되었고, 그 전체가 참조로 본원에 통합된 서열 목록을 포함한다. 2021년 8월 17일에 생성된 상기 ASCII 사본은 A2BI_022_01WO_SeqList_ST25.txt로 명명되며, 크기는 914 KB이다.
세포 요법은 다양한 질환, 특히 암 치료를 위한 강력한 도구이다. 종래의 입양 세포 요법에서, 면역 세포는 특정 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 발현하도록 조작되며, 이는 표적 세포에 의해 발현되는 리간드와 수용체의 상호작용을 통해 세포 표적에 대한 면역 세포의 활성을 지시한다. 많은 표적이 정상 조직에서 발현되기 때문에 적합한 표적 분자를 식별하는 것은 여전히 어려운 일이다. 이 발현은 이식된 세포가 표적 분자를 발현하는 정상 조직을 표적으로 할 때 독성을 유발할 수 있다. 따라서, 입양 세포 요법에 의한 질환, 특히 암의 치료에 유용한 조성물 및 방법이 당업계에 필요하다.
요약
본 개시내용은 입양 세포 요법에 사용되는 면역 세포의 특이성을 증가시키기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 본 개시내용은 표적 항원을 발현하는 표적 세포에 대해 면역 세포의 특이성을 증가시키는 2-수용체 시스템을 포함하는 면역 세포를 제공한다. 면역 세포는 표적 항원에 의한 제1 수용체의 결합에 반응하여 면역 세포를 활성화시키는 제1 활성화제 수용체를 포함한다. 면역 세포는 비-표적 항원에 특이적인 제2 억제 수용체를 추가로 포함한다. 이 제2 수용체는 제1 수용체가 표적 항원과 결합하더라도 제2 수용체가 비-표적 항원과 결합하면 면역세포의 활성화를 억제한다.
본 개시내용은 (a) CEA 세포 부착 분자 5 (CEA)에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제1 수용체; 및 (b) CEA+ 암 세포에서 소실된 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제2 수용체를 포함하는 면역 세포를 제공하며, 여기서 제1 수용체는 CEA에 반응하는 활성화제 수용체이고; 여기서 제2 수용체는 비-표적 항원에 반응하는 억제 수용체이다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 이형접합성(heterozygosity)의 소실을 통해 CEA+ 암 세포에서 소실된다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 단백질의 대립형질 변이체에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A, HLA-B, 또는 HLA-C 단백질의 대립형질 변이체에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*03, HLA-A*11, HLA-B*07, 또는 HLA-C*07에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*02에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 표 6에 개시된 바와 같은 상보성 결정 영역 (CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 표 6의 CDR에 비해 최대 1, 2 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 103-108 또는 서열 번호 109-114의 상보성 결정 영역 (CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 서열 번호 103-108 또는 서열 번호 109-114의 CDR에 비해 최대 1, 2 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 표 5에 개시된 폴리펩티드 서열로부터 선택된 폴리펩티드 서열; 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 91-102 중 임의의 하나; 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 제1 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다. 일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 55-58로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 상보성 결정 영역 (HC-CDR)의 세트를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 부분 및 서열 번호 59-63으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 상보성 결정 영역의 세트를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 부분; 또는 서열 번호 55-58 또는 서열 번호 59-63에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 55-57을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 (HC-CDR) 세트를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 부분 및 서열 번호 59, 61 및 63을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 세트를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 부분, 또는 서열 번호 55-57 또는 서열 번호 59, 61 및 63에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 144 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 부분, 및 서열 번호 148 또는 이에 대해 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 66-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 68의 scFv 서열; 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 제1 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 힌지 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 도메인은 CD8α 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CD8α 힌지 도메인은 서열 번호 71의 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CD28 막관통 도메인은 서열 번호 75의 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 CD28 공동 자극 도메인, 4-1BB 공동 자극 도메인, 및 CD3ζ 활성화 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 158의 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 52의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 제2 수용체는 LILRB1 세포내 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, LILRB1 세포내 도메인은 서열 번호 131과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 99% 동일한 서열, 또는 이와 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체는 LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체는 서열 번호 135와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 99% 동일한 서열 또는 이와 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체는 LILRB1 힌지 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, LILRB1 힌지 도메인은 서열 번호 134와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 99% 동일한 서열 또는 이와 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체는 LILRB1 세포내 도메인, LILRB1 막관통 도메인, LILRB1 힌지 도메인, 이들 중 임의의 것의 기능적 변이체, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, LILRB1 힌지 도메인, LILRB1 세포내 도메인 및 LILRB1 막관통 도메인은 서열 번호 132, 또는 서열 번호 132와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 99% 동일한 서열 또는 이와 동일한 서열을 포함한다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 제2 수용체는 서열 번호 164의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, CEA+ 암 세포는 췌장암 세포, 결장직장암 세포, 폐암 세포, 식도암 세포, 위암 세포, 두경부암 세포, 담낭암 세포, 미만성 거대 B 세포 암 세포, 또는 급성 골수성 백혈병 암 세포이다. 일부 구현예에서, CEA+ 암 세포는 폐암 세포, 결장직장암 세포, 또는 췌장암 세포이다. 일부 구현예에서, CEA+ 암 세포는 HLA-A*02를 발현하지 않는 CEA+/HLA-A*02- 암 세포이다. 일부 구현예에서, CEA+/HLA-A*02- 암 세포는 HLA-A*02의 소실을 야기하는 HLA-A에서의 이형접합성의 소실에 의해 CEA+/HLA-A*02+ 세포로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 함께 이형접합성의 소실을 갖는 CEA+/HLA-A*02- 암 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 함께 이형접합성의 소실에 의해 HLA-A*02를 소실하지 않은 CEA+ 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화하지 않는다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 면역 세포는 T 세포이다. 일부 구현예에서, T 세포는 CD8+ CD4- T 세포이다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 유전자의 발현 및/또는 기능은 감소되거나 제거되었다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 유전자는 베타-2-마이크로글로불린 (B2M)이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 간섭 RNA를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함하며, 간섭 RNA는 B2M mRNA의 서열에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 간섭 RNA는 표 11에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 최대 1, 2, 3, 또는 4개의 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 간섭 RNA는 B2M mRNA의 RNAi-매개 분해를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, 간섭 RNA는 짧은 헤어핀 RNA (shRNA)이다. 일부 구현예에서, shRNA는 (a) B2M mRNA의 서열에 상보적인 서열을 5' 말단부터 3' 말단으로 갖는 제1 서열; 및 (b) 제1 서열에 상보적인 서열을 5' 말단부터 3' 말단으로 갖는 제2 서열을 포함하며, 여기서 제1 서열 및 제2 서열은 shRNA를 형성한다. 일부 구현예에서, shRNA는
GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC (서열 번호 179) 또는 GTTAACTTCCAATTTACATACACCATACCGAAGTATGTAAATTGGAAGTTAAC (서열 번호 180)의 서열, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 서열에 의해 암호화된다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 유전자의 발현 및/또는 기능은 감소되거나 제거되었다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 유전자는 베타-2-마이크로글로불린 (B2M)이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 B2M을 암호화하는 서열에 대한 하나 이상의 변형을 추가로 포함하며, 여기서 하나 이상의 변형은 발현을 감소시키고/시키거나 B2M의 기능을 제거한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 변형은 B2M을 암호화하는 내인성 유전자의 하나 이상의 불활성화 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 불활성화 돌연변이는 결실, 삽입, 치환, 또는 프레임시프트 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 불활성화 돌연변이는 B2M을 암호화하는 내인성 유전자의 서열을 특이적으로 표적화하는 적어도 하나의 가이드 핵산 (gNA)과의 복합체에서 핵산 가이드된 엔도뉴클레아제와 함께 도입된다. 일부 구현예에서, gNA는 표 10에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 최대 1, 2, 3 또는 4개의 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열을 포함한다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 유전자의 발현 및/또는 기능은 감소되거나 제거되었다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 유전자는 HLA-A*02이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 HLA-A*02 mRNA의 서열에 상보적인 서열을 포함하는 간섭 RNA를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 간섭 RNA는 HLA-A*02 mRNA의 RNA 간섭(RNAi)-매개 분해를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, 간섭 RNA는 (a) 5' 말단부터 3' 말단까지 HLA-A*02 mRNA의 서열에 상보적인 서열을 갖는 제1 서열; 및 (b) 5' 말단부터 3' 말단까지 제1 서열에 상보적인 서열을 갖는 제2 서열을 포함하는 짧은 헤어핀 RNA (shRNA)이고, 여기서 제1 서열 및 제2 서열은 shRNA를 형성한다. 일부 구현예에서, shRNA는 표 12에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열을 포함한다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 유전자의 발현 및/또는 기능은 감소되거나 제거되었다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 유전자는 HLA-A*02이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 HLA-A*02를 암호화하는 내인성 유전자의 서열에 대한 하나 이상의 변형을 포함하며, 여기서 하나 이상의 변형은 발현을 감소시키고/시키거나 HLA-A*02의 기능을 제거한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 변형은 HLA-A*02를 암호화하는 내인성 유전자의 하나 이상의 불활성화 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 불활성화 돌연변이는 HLA-A*02를 암호화하는 내인성 유전자의 서열을 특이적으로 표적화하는 적어도 하나의 가이드 핵산 (gNA)과의 복합체에서 핵산 가이드된 엔도뉴클레아제와 함께 도입된다. 일부 구현예에서, gNA는 표 9에 제시된 서열을 포함한다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 52의 서열을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 164의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC(서열 번호 179)를 포함하는 서열 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열에 의해 암호화된 shRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 단일 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되고, 여기서 제1 수용체 및 제2 수용체를 암호화하는 서열은 자가-절단 폴리펩티드를 암호화하는 서열에 의해 분리된다. 일부 구현예에서, 자가-절단 폴리펩티드는 GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 번호 181)의 서열을 포함하는 T2A 자가-절단 폴리펩티드를 포함한다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 면역 세포는 자가유래(autologous)이다.
본 개시내용의 면역 세포의 일부 구현예에서, 면역 세포는 동종이계(allogeneic)이다.
본 개시내용은 치료적 유효량의 본 개시내용의 면역 세포를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함한다.
본 개시내용은 CEA+ 암의 치료에서 약제로 사용하기 위한 치료적 유효량의 본 개시내용의 면역 세포를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 (a) CEA 세포 부착 분자 5 양성 (CEA)에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제1 수용체; 및 (b) CEA+ 암 세포에서 소실된 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제2 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템을 제공하며, 여기서 제1 수용체는 CEA+ 암 세포 상의 CEA에 반응하는 활성화제 수용체이고; 제2 수용체는 비-표적 항원에 반응하는 억제성 수용체이다.
본 개시내용의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템의 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템은 본 개시내용의 면역 세포를 생성하는데 사용하기 위한 제1 수용체 및 제2 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본 개시내용의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템의 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템은 B2M에 특이적인 shRNA를 암호화하는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체, 제2 수용체 및 B2M에 특이적인 shRNA를 암호화하는 서열은 동일한 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, (a) B2M에 특이적인 shRNA를 암호화하는 서열은 GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC (서열 번호 179) 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하고; (b) 제1 수용체를 암호화하는 서열은 서열 번호 143 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하고; (c) 제2 수용체를 암호화하는 서열은 서열 번호 165 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
본 개시내용은 본 개시내용의 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
본 개시내용은 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 면역 세포 또는 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, MHC 클래스 I 유전자좌에서 이형접합성의 소실을 갖는 CEA+ 암 세포를 사멸시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 면역 세포 또는 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, MHC 클래스 I 유전자좌에서 이형접합성의 소실을 갖는 CEA+ 종양을 갖는 대상체에서 CEA+ 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (a) 대상체의 정상 세포 및 복수의 암 세포의 HLA-A 유전자형 또는 발현을 결정하는 단계; (b) 임의로, 대상체의 복수의 암 세포에서 CEA의 발현을 결정하는 단계; 및 (c) 정상 세포가 HLA-A*02를 발현하고 복수의 암 세포가 HLA-A*02를 발현하지 않고 복수의 암 세포가 CEA-양성인 경우 대상체에 유효량의 본 개시내용의 면역 세포 또는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용의 방법의 일부 구현예에서, 대상체는 CEA (CEA+)를 발현하고 HLA-A*02 발현을 상실한 악성종양을 갖는 이형접합성 HLA-A*02 환자이다. 일부 구현예에서, 대상체는 CEA를 발현하고 HLA-A*02 발현을 상실한 재발성 절제불가능 또는 전이성 고형 종양을 갖는 이형접합성 HLA-A*02 환자이다. 일부 구현예에서, 암은 췌장암, 결장직장암, 폐암, 식도암, 위암, 두경부암, 담낭암, 미만성 거대 B 세포 암, 또는 급성 골수성 백혈병을 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 폐암, 결장직장암, 또는 췌장암을 포함한다.
본 개시내용의 방법의 일부 구현예에서, 암 세포는 HLA-A*02를 발현하지 않는 CEA+/HLA-A*02- 암 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, CEA+/HLA-A*02- 암 세포는 HLA-A*02의 소실을 야기하는 HLA-A에서 이형접합성의 소실에 의해 CEA+/HLA-A*02+ 세포로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 함께 CEA+/HLA-A*02- 암 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 함께 HLA-A*02를 소실하지 않은 CEA+ 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화하지 않는다.
본 개시내용의 방법의 일부 구현예에서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체에서 종양의 크기를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 종양은 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100% 감소된다. 일부 구현예에서, 종양은 제거된다. 일부 구현예에서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체에서 종양의 성장을 정지한다. 일부 구현예에서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체에서 종양의 수를 감소시킨다.
본 개시내용의 방법의 일부 구현예에서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체에서 정상 세포가 아닌 암 세포의 선택적 사멸을 초래한다. 일부 구현예에서, 사멸된 세포의 적어도 약 60%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 적어도 약 65%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 적어도 약 70%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 적어도 약 75%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 적어도 약 80%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 적어도 약 85%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 적어도 약 90%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 적어도 약 95%가 암 세포이거나, 또는 사멸된 세포의 약 100%가 암 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체의 적어도 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 모든 암 세포의 사멸을 초래한다.
본 개시내용의 방법의 일부 구현예에서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 제1 활성화제 수용체를 포함하지만 제 2억제 수용체를 포함하지 않는 다른 동등한 면역 세포의 투여보다 대상체에 대한 더 적은 부작용을 초래한다.
본 개시내용은 (a) 복수의 면역 세포를 제공하는 단계, 및 (b) 복수의 면역 세포를 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드, 폴리뉴클레오티드 시스템 또는 벡터로 형질전환시키는 단계를 포함하는, 복수의 면역 세포를 제조하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 본 개시내용의 면역 세포 또는 약학 조성물을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 구현예에서, 키트는 사용을 위한 사용 설명서를 추가로 포함한다.
도 1은 TNFRS11 (RANKL)에 결합된 TNFRSF11A (RANK)의 결정 구조이며, 이는 변이체 TNFRSF11A 에피토프가 단백질 표면 상에 있고, 아마도 항체에 접근 가능하다는 것을 나타낸다.
도 2는 인간 인테그린 알파-E (ITGAE) (서열 번호 182)와 인간 인테그린 알파-X (ITGAX, P20702, ITAX_HUMAN) (서열 번호 183)의 정렬을 나타낸다. ITGAE rs1716 R950W (MAF 0.2654, 1000 게놈 프로젝트로부터의) 및 rs2976230 V1019A/V1019G (MAF 0.282, 1000 게놈 프로젝트로부터의)에서의 SNP 변이체가 박스에 나타나있다.
도 3은 ITGAE에 대해 27% 동일성을 갖는 ITGAX의 불활성 형태의 결정 구조이다. ITGAE SNP의 위치는 표지로써 표시된다.
도 4는 RANK 차단제 수용체와 조합된 CEA TCR로 치료될 수 있는 어드레스가능한(addressable) 결장직장암 (CRC) 환자 집단이 어느 RANK 변이체가 사용되는지에 따라 2,000 내지 5,000명의 환자로 추정된다는 것을 보여주는 표이다. 표에서, 치료 가능한 환자의 상기 소계는 5,000-11,000 명이고, 언급된 바와 같이 높은 CEA+ 환자의 백분율을 포함한다. 치료된 환자는 다음과 같이 계산된다: HLA-A*02 담체 빈도 (0.5) x 랜덤 소실 (0.5) x RANK 변이체 het 빈도 (0.2 - 0.5) x 암 RANK LOH 빈도 = [0.05 - 0.125] x LOH 빈도.
도 5는 정상 조직에서의 CEA(CEACAM5)의 발현을 나타낸다.
도 6은 정상 조직에서 TNFRSF11A(RANK)의 발현을 나타낸다.
도 7은 모든 TCGA 암(종양 및 정상 샘플을 가짐)에 걸친 CEA의 발현을 나타낸다. 약어: BLCA(방광암), BRCA(유방암), CESC(자궁 경부 편평 상피 세포 암종 및 자궁 경부 선암종), CHOL 담관 암종), COAD(결장 선암종), ESCA(식도 암종), GBM(다형성 교모세포종), HNSC(두경부 편평 상피 세포 암종), KICH(신장 발색소암), KIRP(신장 유두 상피 세포 암종), LIHC(간 간세포 암종), LUAD(폐 선암종), LUSC(폐 편평 상피 세포 암종), PAAD(췌장 선암종), PRAD(전립선 선암종), PCPG(갈색세포종 및 부신경절종), READ(직장 선암종), SARC(육종), SKCM(피부 피부의 흑색종(Skin Cutaneous Melanoma)), THCA(갑상선 암종), THYM(흉선종), STAD(위 선암종), UCEC(자궁체 자궁내막 암종(Uterine Corpus Endometrial Carcinoma)).
도 8은 TCGA 암(종양 및 정상 샘플을 가짐)에 걸친 TNFGSF11A의 발현을 나타낸다.
도 9는 미국암학회(American Cancer Society)에서 얻은 통계인, 암 부위별 미국 내 사망 추정치를 보여주는 표이다.
도 10은 HLA-A*02 억제 수용체가 CEA CAR에 의한 저캇(Jurkat) 세포의 활성화를 차단할 수 있다는 것을 나타내는 일련의 플롯이다.
도 11은 잠재적인 비-표적 항원 (차단제) 후보 유전자를 식별하기 위해 사용되는 바이오인포매틱스 검색 과정을 나타내는 다이어그램이다.
도 12는 이형접합성의 소실(LOH)을 사용한 종양과 정상 조직 사이의 구별을 나타내는 한 쌍의 다이어그램이다. 조작된 면역 세포는 종양을 죽이지만 정상 세포는 남겨둔다. 예시적인 구현예의 경우, 면역 세포는 CEA CAR을 발현하고, 활성화제 항원은 CEA이고, 차단제 항원은 HLA-A*02이다. 종양에서 HLA-A*02의 생식계열 이형접합성 및 HLA-A*02의 클론성 LOH를 갖는 환자가 선택된다.
도 13은 CEA CAR 및 HLA-A*02 scFv LILRB1 억제 수용체를 포함하는 본 개시내용의 예시적인 이중 수용체 시스템의 분자 조성을 나타내는 다이어그램이다.
도 14는 HeLa 세포에서 CEA 및 HLA-A*02 항원의 발현을 나타낸다. A*02: HLA-A*02.
도 15는 조작된 HeLa 세포를 세포독성에 대한 표적으로 사용하여 저캇 세포에서 CEA 활성화제 및 HLA-A*02 LILRB1 억제 수용체가 기능하는 것을 나타낸다. A*02: HLA-A*02; Tmod: 세포는 CEA CAR 및 HLA-A*02 억제 수용체를 발현하며; CAR: 세포는 CEA CAR만을 발현한다.
도 16은 HeLa 세포 상의 단일 공여자로부터의 공여자 T 세포에서 CEA 활성화제 및 HLA-A*02 LILRB1 억제 수용체가 기능하는 것을 나타낸다. Tmod: 세포는 CEA CAR 및 HLA-A*02 억제 수용체를 발현하며; CAR: 세포는 CEA CAR만을 발현한다.
도 17은 HeLa 세포 상의 4개의 공여자로부터의 T 세포에서 CEA 활성화제 및 HLA-A*02 LILRB1 억제 수용체가 기능하는 것을 나타낸다. Tmod: 세포는 CEA CAR 및 HLA-A*02 억제 수용체를 발현하며; CAR: 세포는 CEA CAR만을 발현한다. 표적 세포는 CEA만을 발현하거나 또는 CEA와 HLA-A*02를 발현하는 HeLa 세포이다.
도 18은 HeLa 세포에서 mRNA 적정에 의한 CEA 및 HLA-A*02의 세포 표면 발현을 나타낸다. A*02: HLA-A*02.
도 19는 안정하게 발현된 CEA 활성화제 및 HLA-A*02 차단제 수용체를 갖는 저캇 효과기 세포를 사용하여 HeLa 세포에서 CEA 표면 분자의 수의 함수로써 측정된 CEA CAR 활성화제 및 HLA-A*02 LILRB1 차단제 민감도를 나타낸다.
도 20은 CEA CAR Tmod (CEA CAR 및 HLA-A*02 둘 모두 및 LILRB1 억제 수용체), CAR-단독, 및 CEA TCR을 발현하는 1차 T 세포의 활성화제 및 차단제의 민감도를 나타낸다. 활성화제에 대한 용량 반응 곡선 (우측)은 CEA CAR, HLA-A*02 차단제를 갖는 CEA CAR (Tmod), 및 CEA TCR에 대해 나타내어지는 반면, 억제 수용체 (차단제)에 대한 용량 반응 곡선은 단지 CEA CAR 및 HLA-A*02 차단제를 갖는 CEA CAR (Tmod)에 대한 것이다. A*02: HLA-A*02.
도 21은 CEA CAR 및 HLA-A*02 억제 수용체의 조합이 정상 조직을 보호하면서 종양을 사멸시킬 것으로 예측됨을 나타낸다. TPM: 백만당 전사체; A*02: HLA-A*02; LOH: 이형접합성의 소실.
도 22는 분자/세포를 TPM 값으로 변환하는데 사용되는 표준 곡선을 나타낸다. CEA 표준 곡선 (좌측)의 데이터는 GTEx 데이터베이스로부터의 mRNA (TPM)에 대해 플롯팅된 Bacac 등 2016, Clin Cancer Res 22, 3286-3297로부터의 CEA 세포 표면 발현을 나타낸다. TPM: 백만당 전사체.
도 23은 H508 및 SW1463 세포주 상에서의 CEA 및 HLA-A*02의 표면 발현을 나타낸다. WT: 야생형; KO: 표시된 유전자가 녹아웃된다.
도 24는 3개의 HLA-A*02(-) 공여자로부터 유래된 CEA Tmod 발현 세포 (CEA CAR 및 HLA-A*02 scFv 억제 수용체 둘 모두를 발현하는 세포)의 세포독성 데이터를 나타내며, 이는 표적으로 결장직장 세포주를 사용하여 검정되었다. A*02: HLA-A*02.
도 25는 CEA TCR 또는 Tmod 이중 수용체 시스템으로 형질도입된 HLA-A*02(+) 공여자 T 세포를 사용하여 상이한 E:T 비율로 종양 및 정상 세포의 CEA CAR Tmod 및 TCR T 사멸의 시간 경과를 나타낸다.
도 26은 CEA CAR Tmod 이중 수용체 시스템을 발현하는 효과기 세포가 CEA TCR을 발현하는 세포와 유사하게 종양 세포를 사멸시키지만, CEA(+) HLA-A*02(+) 정상 H508 표적 세포를 사멸시키는데 ~ 70x 덜 활성임을 나타낸다. 종양: CEA(+) HLA-A*02(-) 표적 세포; B 단독: 표적 세포는 HLA-A*02만을 발현하며; 정상: CEA(+) HLA-A*02(+) 표적 세포.
도 27은 혼합된 종양 및 정상 세포 배양물을 1:1 비율로 제시하였을 때 CEA CAR Tmod 이중 수용체를 발현하는 효과기 세포의 선택적 세포독성을 나타낸다. 종양 세포는 GFP (녹색)를 안정하게 발현하는 H508 CEA(+) HLA-A*02(-) 세포였다. 정상 세포는 RFP (적색)를 안정하게 발현하는 H508 CEA(+) HLA-A*02(+) 세포였다. T 세포는 HLA-A*02(+) 공여자 D12333으로부터 얻었다. 축척 막대(scale bar)는 500 마이크론이다.
도 28은 종양:정상 표적 세포의 1:1 혼합물에서 CEA CAR 및 HLA-A*02 억제 수용체 (Tmod)를 발현하는 특이적 사멸 효과기 세포의 요약을 나타낸다. H508 표적 세포 유전자형은 도 26과 같고, IL-2는 첨가되지 않았다. 공여자 T 세포는 공여자 183534를 제외하고는 HLA-A*02(+)였다.
도 29는 연속적으로 공동 배양된 표적 세포의 이미지를 나타낸다. 세포독성 검정을 위해, T 세포가 형질도입되고, 차단제 항원에 대해 풍부화되고, 하나의 특정 유형의 표적 세포로부터 다음 표적 세포로 옮겨졌다. 정상 세포와 종양 세포 둘 모두는 GFP로 표지되지만, 종양 세포를 가시화하기 위해 적 가색(red pseudocolor)이 사용되었고, 정상 세포에 대해 녹색이 사용되었다. 축척 막대는 500 마이크론을 나타낸다.
도 30은 반복된 항원 챌린지에서 CEA CAR Tmod 발현 세포 및 CEA CAR 발현 세포의 시간 경과를 나타낸다. 수평 화살표는 표적 세포 유형 (종양 또는 정상 H508)으로부터의 전달을 나타낸다. CEA CAR, 또는 Tmod 이중 수용체로 형질도입된 공여자 T 세포는 HLA-A*02(+) (D12333)이었다.
도 31은 가용성 CEA (sCEA; 10ug/mL)의 존재가 H508 세포에서 CEA CAR Tmod 세포독성에 유의하게 영향을 미치지 않는다는 것을 보여준다. 종양, 정상 및 B의 유전자형은 다음과 같다: 종양: CEA(+) HLA-A*02(-) 표적 세포; 정상: CEA(+) HLA-A*02(+) 표적 세포; B: CEA(-) HLA-A*02(+) 표적 세포.
도 32는 CEA CAR Tmod 이중 수용체 및 CEA(+) 표적 세포주를 발현하는 효과기 T 세포를 사용한 세포독성 검정을 나타낸다. E:T는 표적 세포 공동 배양물에 대해 3:1이었고, H508 표적 세포가 사용되었다. B 단독은 CEA(-) HLA-A*02(+) 표적 세포를 지칭한다.
도 33은 CEA CAR Tmod 이중 수용체 및 CEA(+) 표적 세포주를 발현하는 효과기 T 세포를 사용한 세포독성 검정을 나타낸다. E:T는 표적 세포 공동 배양물에 대해 3:1이었고, SW1463 표적 세포가 사용되었다. B 단독, CEA(-) HLA-A*02(+) 표적 세포.
도 34는 CEA Tmod 이중 수용체를 발현하는 효과기 T 세포 (세포는 별개의 활성화제 및 차단제 렌티바이러스 벡터를 사용하여 형질도입됨)가 결장직장암 세포주 H508에서 종양 대 정상 세포의 선택적 사멸을 가능하게 함을 나타낸다. Tmod 수용체를 발현하는 T 세포는 벤치마크 CEA TCR보다 정상 세포에 대해 민감하지만 더 선택적이다. T 세포는 HLA-A*02(-) 공여자(D4809)로부터 유래되었다.
도 35는 HLA-A*02(-) 공여자 세포 (D4809)에서 CEA Tmod 이중 수용체 (2개의 별개의 렌티바이러스 벡터를 통해 전달됨)를 발현하는 효과기 T 세포에 의한 가역적 세포독성의 정량화를 나타낸다. T 세포가 1회차에 종양 또는 정상 세포 중 하나에 먼저 노출된 후, 2회차에 각각 정상 또는 종양 세포에 노출되고, 선택적 종양 대 정상 세포 사멸이 측정되었다. WT: 야생형; A2KO: HLA-A*02 녹아웃.
도 36은 인간 성인 조직 유전자 발현의 90% 초과를 나타내도록 선택된 세포주 패널을 사용한 CEA CAR Tmod 이중 수용체 오프-표적 선택성의 저캇 세포 검정을 나타낸다. Tmod 수용체를 발현하는 저캇 효과기 세포를 표 26에 기재된 개별 표적 세포주와 공동 배양하였다. 종양 세포를 나타내는 양성 대조군 세포주가 2 ug의 CEA mRNA로 형질감염되거나, 천연적으로 CEA를 발현하였다. 정상 세포는 CEA(-) HLA-A*02(+)이다. 수평 점선은 저캇 세포 (Tmod 수용체를 발현함) 단독으로부터의 데이터의 평균 + 2x 표준 편차 (SD)에 배치된다. 공동 배양물은 각 웰에서 10,000개의 (10K) 저캇 세포 및 10K개의 표적 세포의 것이었다. 좌측 막대: CEA+ HLA-A*02(-) 세포를 갖는 Tmod 이중 수용체를 발현하는 저캇 세포; 중간 막대: CEA(-) 표적 세포를 갖는 저캇 세포를 발현하는 CAR; 우측 막대: CEA(-) HLA-A*02(+) 표적 세포를 갖는 둘 모두의 수용체를 발현하는 저캇 세포. 음성 대조군은 회색 상자에 있다.
도 37은 3개의 HLA-A*02(+) 공여자로부터 유래된 CEA CAR Tmod 이중 수용체를 발현하는 효과기 T 세포에 대한 세포독성 데이터의 요약을 나타낸다. UTD, 형질도입되지 않음.
도 38은 1차 T 효과기 세포를 사용한 선택성 데이터의 요약을 나타낸다.
도 39는 CEA CAR 또는 CEA Tmod 이중 수용체를 발현하는 인간 T 세포를 사용한 마우스 이종이식 연구의 설계를 나타낸다. 이종이식 실험 설계 및 시간에 대한 종양 부피가 나타나있다.
도 40은 마우스 이종이식 연구에서 캘리퍼(caliper)에 의해 측정된 종양 부피를 나타낸다. 오차 막대는 SEM이다. N = 7마리의 마우스/그룹 (식염수 및 UTD, 또는 형질도입되지 않은, 그룹에서 5마리); 이종이식 = 반딧불이 루시퍼라제를 발현하는 H508 결장암 세포주; 용량 = 꼬리 정맥 주사를 통한 2E7 인간 T 세포/마우스. BLI % 변화 = 100x (BLI t일차- BLI 35일차)/(BLI 35일차). 우측 하단의 y-축에서 -100%는 0 생물발광 신호를 나타내며; 즉, 어떠한 잔류 종양 세포의 증거도 없음. 마우스 혈액 중 인간 T 세포가 hCD3 mAb로 검출되었다.
도 41은 시간의 경과에 따라 생물발광(루세리파제)을 측정하는데 사용된 각각의 그룹(도 40의 것의 서브세트)으로부터의 5마리의 마우스의 이미지를 나타낸다. 하나의 Tmod 마우스 (왼쪽에서 2번째, 64일차)는 실수로 BLI 기질을 받지 않았다.
도 42는 마우스 당 5E6 T 세포의 T 세포 용량에 대한 이종이식 연구 결과를 나타낸다. 중앙 하단 패널은 보다 높은 해상도로 종양 부피를 나타내기 위해 상기 패널로부터 재플롯팅된 데이터를 보여준다. UTD: 형질도입되지 않음; CAR, CEA CAR 단독으로 형질도입된 T 세포; Tmod, CEA CAR 및 HLA-A*02 scFv LILRB1 억제 수용체로 형질도입된 T 세포.
도 43은 마우스 이종이식 연구로부터의 개별 종양 데이터를 나타낸다. 밝은 회색 가는 선: 개별 마우스; 검은 굵은 선: 평균; 점선 세로선: T 세포 주사일 (35일차). UTD, 형질도입되지 않은 T 세포; CAR, CEA CAR로 형질도입된 T 세포, Tmod, CEA CAR 및 HLA-A*02 ScFv LILRB1 억제 수용체 둘 모두로 형질도입된 T 세포; 식염수, 식염수 대조군으로 주사된 마우스.
도 44는 이종이식 연구에서의 개별 마우스에서 생물발광 (BLI)을 나타낸다. % BLI는 도 40에 대해 기재된 바와 같이 결정되었다. UTD, 형질도입되지 않은 T 세포; CAR, CEA CAR로 형질도입된 T 세포, Tmod, CEA CAR 및 HLA-A*02 ScFv LILRB1 억제 수용체 둘 모두로 형질도입된 T 세포; 식염수, 식염수 대조군으로 주사된 마우스.
도 45는 이종이식 연구로부터의 마우스 비장의 세포 분석을 나타낸다. T 세포 주사 후 30 일차에 세포를 수확하였다.
도 46은 HLA-A*02 항원이 어떻게 HLA-A*02 (+) T 세포에서 시스(cis)로 HLA-A*02 Tmod 차단제 수용체에 결합하여 정상 세포에 대하여 트랜스(trans)로 차단제 수용체 결합/기능을 방지할 수 있는지를 나타내는 도표이다. 이러한 효과는 표지된 HLA-A*02 사량체를 통해 그리고 기능적 검정에 의해 검출될 수 있다.
도 47은 B2M에 대한 가이드 RNA (gRNA) 및 B2M shRNA를 사용한 CRISPR이 세포 표면 상에서 HLA 발현을 감소시키고 HLA-A*02(+) T 세포에서 차단제 수용체 이용률을 증가시킨다는 것을 나타낸다.
도 48은 CEA CAR 및 HLA-A*02 scFvLILRB1 억제 수용체 (Tmod)를 발현하는 1세대 자가 T 세포에 대한 시스 결합에 대한 B2M shRNA 작제물(construct)의 효과를 나타낸다.
도 49는 급성 세포독성 검정에서 사이토카인 분비를 나타낸다. 종양 세포는 CEA(+) HLA-A*02(-) H508 세포였으며; 정상 세포는 CEA(+) HLA-A*02(+) H508 세포였으며; L.D., 검출 한계 = 배경 + 3x 각 검정에 대한 표준 편차이다.
도 50은 HeLa 표적 세포를 사용하여 검정시 HLA-A*02 LILRB1 억제 수용체가 HLA-A*02(+) 및 HLA-A*02(-) 저캇 세포에서 동등하게 민감하다는 것을 나타낸다.
도 51은 HLA-A*02 scFv LILRB1 억제 수용체를 발현하는 T 세포에서 B2M shRNA의 공동 발현이 수용체를 자유롭게 하여 1차 T 세포 상의 프로브에 결합함을 나타낸다.
도 52는 급성 세포독성 검정에서 사이토카인 분비를 나타낸다. 종양, CEA(+) HLA- A*02(-) H508 세포; 정상 CEA(+) HLA-A*02(+) H508 세포; L.D., 검출 한계 = 배경 + 3x 각 검정에 대한 표준 편차.
도 53은 본원에 기재된 일부 구현예의 이중 수용체 시스템의 특성을 요약한 표이다.
암과 정상, 야생형 세포 사이의 리간드의 유전자 발현 차이에 반응하는 2-수용체 시스템을 포함하는 면역 세포를 사용하여 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법이 본원에 제공된다. 발현의 이러한 차이는 암 세포의 이형접합성 소실로 인한 것일 수 있다. 대안적으로, 발현의 차이는 유전자 발현이 암세포에서 발현되지 않거나 정상 세포보다 낮은 수준으로 암세포에서 발현되기 때문일 수 있다. 2-수용체 시스템은 면역 세포, 예를 들어 입양 세포 요법에 사용되는 면역 세포에서 발현되며, 이형접합성의 소실 또는 발현 차이를 나타내는 암세포에 대한 이들 면역 세포의 활성을 표적으로 한다. 이러한 2-수용체 시스템에서, 제1 수용체 (활성화제 수용체, 때때로 여기에서 A 모듈로 언급됨)는 면역 세포를 활성화하거나 또는 면역 세포의 활성화를 촉진하는 반면, 제2 수용체 (억제 수용체, 때때로 여기에서 차단제, 또는 억제제 수용체, 또는 B 모듈로 언급됨)는 제1 수용체에 의한 면역 세포의 활성화를 억제하는 작용을 한다. 각각의 수용체는 특정 리간드에 결합하는 리간드 결합 도메인 (LBD)을 함유한다. 리간드 결합 시 두 수용체로부터의 신호는 면역 세포에 의해 통합된다. 예를 들어, 암 세포에서 억제 리간드를 암호화하는 유전자좌의 이형접합성 소실 또는 전사 수준의 차이를 통해, 암 및 정상 세포에서 제1 및 제2 수용체에 대한 리간드의 차등적 발현은 제1 활성화제 리간드를 발현하지만 제2 억제 리간드를 발현하지 않는 표적 암 세포에 의한 면역 세포의 활성화를 매개한다.
본원에 제공된 조성물 및 방법의 특정 구현예에서, 본원에 기재된 2-수용체 시스템을 포함하는 면역 세포는 CEA 세포 부착 분자 5 (CEA) 양성 암을 치료하는데 사용된다. 이는 위장관(GI)의 CEA-양성 암을 포함한다. CEA-양성 암의 경우, 활성화제 수용체의 표적 항원은 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 CEA 또는 이의 펩티드 항원이다. CEA는 막으로부터 절단되고 가용성 형태로 방출될 수 있는 표면 단백질로서 GI 조직의 정상 성인에서 우세하게 발현된다. GI 종양에서 이의 선택적 발현 때문에, CEA-양성 암 세포가 적절한 치료제로 특이적으로 표적화될 수 있다면, 이는 GI 종양의 선택적 사멸을 매개할 수 있는 매력적인 종양 특이적 항원으로 오랫동안 여겨져 왔다. 더욱이, CEA 유전자 생성물은 사실상 모든 결장직장 종양 (및 다른 고형 종양의 큰 서브세트)에서의 높은 발현 및 성인 조직에서의 제한된 발현 때문에 암에 대해 매력적인 표적이다. 그러나, 비-암 (비-표적) 세포에서 정상 CEA 발현은 입양 세포 요법과 같은 표적화 요법을 위한 CEA의 효과적인 사용을 방해하였다. CEA에 대해 지시된 여러 치료제가 임상에서 시험되었고, 용량-제한 독성(DLT)으로서 대장염을 유도하는 것으로 밝혀졌다. 2011년에, HLA-A*02(즉, pMHC)와 복합체화된 CEA 펩티드에 대해 지시된 뮤린 TCR을 사용한 임상 연구는 결장에 대한 국소화된 독성 때문에 1상 연구 (n=3)에서 중단되었다(Parkhurst 등 Molecular Therapy 2011 19(3): P620-626; Parkhurst 등 Clin Cancer Res. 2009 Jan 1; 15(1): 169-180). DLT는 2-4E8 세포/환자의 현저하게 낮은 용량에서 발생하였다.
종양의 서브세트에서 HLA 이형접합성 유전자 소실은 온-표적(on-target), 오프-종양(off-tumor) 독성으로부터 환자를 보호하기 위해 이용될 수 있다. 활성화제 수용체를 억제 수용체와 쌍을 지어, 본원에 제공된 방법은 입양 세포 요법의 특이성을 증가시키고, 용량-제한 독성과 같은 이들 요법과 관련된 유해한 효과를 감소시킨다. CEA 활성화제 수용체 및 HLA-A*02 특이적 억제 수용체를 포함하는 면역 세포는 시험관내 및 생체내에서 A*02(-) 종양 세포를 선택적으로 사멸시켰다. 이들 면역 세포는 임상적으로 활성인 CEA TCR-T 세포만큼 강력하지만, HLA-A*02가 결여된 종양 세포에 대해 매우 선택적이었다. 억제 수용체와 쌍을 이룬 CEA CAR은 정상 조직이 CEA-매개 세포독성으로부터 보호될 수 있도록 종양 세포에서 결실된 유전자에 의해 활성이 지시되는 고체 종양 치료제 후보이다.
일부 구현예에서, 활성화제에 대한 리간드는 MHC 클래스 I과 복합체화된 CEA 펩티드, 예를 들어 HLA-A*02를 포함하는 MHC 복합체이다. 본원에 기재된 방법에서, 이 CEA 표적화 활성화제 수용체는 억제 수용체와 쌍을 이루며, 이는 정상 CEA-양성 조직에 대한 이의 세포용해 효과를 차단함으로써 활성화제의 안전창(safety window)을 증가시킨다. 이론에 구애되고자 함이 없이, 이들 조직은 대부분 위장관에 있는 것으로 생각된다. 그러나, 종양 세포가 억제제 또는 차단제, 수용체에 대한 리간드를 발현하지 않기 때문에, 활성화제 수용체는 여전히 2-수용체 시스템을 포함하는 면역 세포에 의한 종양 세포의 표적화된 사멸을 지시한다. 제2, 억제 수용체에 대한 표적은 위장(GI) 조직에 의해 발현되지만 암세포에서는 발현되지 않으며, 억제 수용체는 이 "비-표적 항원"을 억제 자극으로 인식한다. 제2 억제 수용체에 대한 예시적인 표적은 정상 GI 상피 세포의 표면 상에서 발현되고, 이형접합성(LOH)의 소실 또는 다른 메커니즘을 통해 GI 종양 세포로부터 소실되어, 억제 수용체 상의 대립유전자 특이적 리간드 결합 도메인을 통해 다른 대립유전자로부터 구별될 수 있는 암 세포 내의 단일 대립유전자 형태를 남긴다. 억제 수용체의 예시적인 표적은 인간 백혈구 항원 A(HLA-A). HLA-B, HLA-C 및 다른 HLA와 같은 주요 조직적합성 복합체(MHC) 단백질을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. HLA는 HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*03, HLA-C*07 등과 같은 변이체 유전자에 의해 암호화되며, 이는 이형접합성의 소실을 통해 CEA 양성 암 세포로부터 소실될 수 있다. 대안적으로, 억제 수용체의 추가 예시적인 표적은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 11a (TNFRSF11A, RANK라고도 함), 인테그린 서브유닛 알파 E (ITGAE), 콜린성 수용체 니코틴성 베타 1 서브유닛 (ACHRB, 또는 CHRNB), 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 V 구성원 1 (TRPV1), 및 스캐빈저 수용체 클래스 F 구성원 1 (SREC, 또는 SCARF)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 이들 각각은, CEA 또는 CEA pMHC 반응 활성화제 수용체와 같은 활성화제 수용체에 의해 활성화된 조작된 T 세포를 갖는 GI 암 환자를 안전하게 치료하도록 설계된 세포 통합체에 대한 B 모듈 표적으로 사용될 수 있는, 항체에 접근가능한 세포외 도메인의 아미노산 변경을 갖는 일반적인 비동의 변이체 형태를 갖는다.
본 개시내용의 조성물 및 방법은 정상 GI 조직 상의 CEA의 발현에 의해 야기되는 용량 제한 독성 (DLT)을 감소시키거나 제거할 수 있다. 이론에 구애되고자 함이 없이, CEA의 발현은 제한적이기는 하지만 임상에서 입양 세포 요법 또는 면역요법을 위한 표적으로서 CEA의 추가 발생을 방지한 중증도의 이상 반응(adverse event)을 유도하기 위해 GI 관에서 충분히 높은 것으로 생각된다. 본 개시내용은 제2 리간드 (CEA 이외의 리간드, 비-표적 항원 또는 대안적으로 차단제 항원으로 지칭됨)의 존재 하에 입양 면역 세포의 활성화를 차단하는 제2 억제 수용체를 첨가함으로써 입양 세포 요법을 사용하여 CEA-양성 암을 치료하기 위해 암 세포에서 CEA를 표적화하는 방법을 제공한다. 본원에 기재된 조성물 및 방법을 사용하여, CEA를 발현하는 종양 세포는 2개의 수용체를 발현하는 입양 면역 세포에 의해 공격받는데, 이는 이들 종양 세포가 활성화제 리간드인 CEA만을 발현하기 때문이다. 대조적으로, CEA 플러스 비-표적 항원 (대안적으로 "차단제 항원"으로 지칭됨)을 발현하는 정상 세포는 입양 면역 세포로부터 보호된다. 정상 세포 상의 비-표적 항원에 대한 억제 수용체 반응은 CEA 표적 활성화제 수용체에 의한 면역 세포의 활성화를 방지한다. 이러한 이중-표적화 접근법은 CEA-지시 세포 요법이 CEA-양성 암 환자에서 안전하고 효과적으로 투약될 수 있게 하는 치료창(therapeutic window)을 생성한다.
본 개시내용은 온-표적 독성을 유도하는 강력한 CEA CAR 및 TCR의 사용을 허용하는 방법 및 조성물을 제공하고, 이들 CEA 표적화 수용체를 이들의 독성을 완화시킴으로써 치료제로서 유용하게 만든다. 세포 및 거대-분자 요법을 포함하는 임상에서 시험된 기존의 치료제 중 어느 것도 정상 CEA-양성 조직을 보호하기 위한 메커니즘을 제공하지 않는다.
변형으로, 본원에 기재된 조성물 및 방법은 표적 세포를 사멸시키고/시키거나 비-표적 항원의 발현이 비-표적 항원을 암호화하는 서열에서의 부분 유전자 결실, 후생적 침묵, 및 점 돌연변이 또는 절단 돌연변이를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 이형접합성의 소실 이외의 원인에 의해 부분적으로 또는 완전히 감소된 대상체를 치료하는 데 사용될 수 있다.
정의
본 개시내용을 보다 상세하게 설명하기 전에, 본원에서 사용되는 특정 용어의 정의를 제공하는 것이 이를 이해하는 데 도움이 될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 특정 구현예의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 조성물, 방법 및 재료의 바람직한 구현예가 본원에 기술되어 있다. 본 개시내용의 목적을 위해, 다음 용어는 아래에 정의된다. 추가적인 정의는 본 개시내용 전반에 걸쳐 제시된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약" 또는 "대략"은 기준 수량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 비해 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 만큼 변하는 수량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 지칭한다. 한 구현예에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 기준 수량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 ± 15%, ± 10%, ± 9%, ± 8%, ± 7%, ± 6%, ± 5%, ± 4%, ± 3%, ± 2%, 또는 ± 1% 수량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이 범위를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "단리된"은 본래의 상태에서 일반적으로 동반하는 성분이 실질적으로 또는 본질적으로 없는 물질을 의미한다. 특정 구현예에서, 용어 "수득된" 또는 "유래된"은 단리된 것과 동의어로 사용된다.
용어 "대상체," "환자" 및 "개체"는 본원에서 척추동물, 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간을 지칭하기 위해 상호 교환적으로 사용된다. 조직, 세포, 및 생체 내에서 얻거나 시험관 내에서 배양한 생물학적 독립체의 자손도 포함된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "대상체," "환자" 또는 "개체"는 본원에서 고려되는 벡터, 조성물 및 방법으로 치료될 수 있는 통증을 나타내는 임의의 동물을 포함한다. 적합한 대상체 (예를 들어, 환자)는 실험동물 (예를 들어 마우스, 랫트, 토끼 또는 기니피그), 농장 동물 및 가축 또는 애완동물 (예를 들어 고양이 또는 개)을 포함한다. 비인간 영장류 및 바람직하게는 인간 환자가 포함된다.
본원에서 사용된 "치료" 또는 "치료하는"은 임의의 유익하거나 바람직한 효과를 포함하며, 심지어 증상의 최소한의 개선도 포함할 수 있다. "치료"는 반드시 질환이나 병태 또는 관련 증상의 완전한 박멸이나 치유를 의미하지는 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "예방하다," 및 "예방된," "예방하는" 등과 같은 유사한 단어는 질환 증상의 가능성을 예방, 억제 또는 감소시키기 위한 접근법을 나타낸다. 또한, 질환 또는 병태의 발병 또는 재발을 지연시키거나 질환 증상의 발생 또는 재발을 지연시키는 것을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "예방" 및 유사한 단어는 또한 개시 또는 재발 전에 질환의 강도, 영향, 증상 및/또는 부담을 감소시키는 것을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "양"은 임상 결과를 포함하여 유익하거나 원하는 예방 또는 치료 결과를 달성하기 위한 바이러스의 "유효한 양" 또는 "유효량"을 지칭한다.
바이러스 또는 세포의 "치료적 유효량"은 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 바이러스 또는 세포가 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 능력과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 치료적 유효량은 또한 바이러스 또는 세포의 임의의 독성 또는 해로운 효과가 치료적으로 유익한 효과보다 더 큰 양이다. 용어 "치료적 유효량"은 대상체 (예를 들어, 환자)를 "치료"하는 데 효과적인 양을 포함한다.
예를 들어, 전기생리학적 활성 또는 세포 활성과 같은 생리학적 반응의 "증가된" 또는 "향상된" 양은 전형적으로 "통계적으로 유의한" 양이며, 처리되지 않은 세포의 1.1, 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30배 이상 (예를 들어, 500, 1000배) (1 초과의 모든 정수 및 소수점 포함, 예를 들어, 1.5, 1.6, 1.7. 1.8 등) 활성 수준 증가를 포함할 수 있다.
예를 들어, 전기생리학적 활성 또는 세포 활성과 같은 생리학적 반응의 "감소된" 또는 "줄어든" 양은 전형적으로 "통계적으로 유의한" 양이며, 처리되지 않은 세포의 1.1, 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30배 이상 (예를 들어, 500, 1000배) (1 초과의 모든 정수 및 소수점 포함, 예를 들어, 1.5, 1.6, 1.7. 1.8 등) 활성 수준 감소를 포함할 수 있다.
"유지하다," 또는 "보존하다," 또는 "유지," 또는 "변화없음," 또는 "실질적인 변화없음," 또는 "실질적인 감소 없음"은 일반적으로 두 비히클 또는 대조군 분자/조성물에 의해 유발된 반응에 비교 가능한 생리학적 반응을 지칭한다. 비교 가능한 반응은 기준 반응과 크게 다르지 않거나 측정 가능한 차이가 없는 반응이다.
일반적으로, "서열 동일성" 또는 "서열 상동성"은 각각 2개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열의 정확한 뉴클레오티드-대-뉴클레오티드 또는 아미노산 대 아미노산 대응을 지칭한다. 전형적으로, 서열 동일성을 결정하기 위한 기술은 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열 결정 및/또는 그에 의해 암호화된 아미노산 서열 결정, 및 이들 서열을 제2 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열과 비교하는 것을 포함한다. 2개 이상의 서열 (폴리뉴클레오티드 또는 아미노산)은 이들의 "퍼센트 동일성"을 결정하여 비교할 수 있다. 핵산 또는 아미노산 서열이든, 두 서열의 퍼센트 동일성은 더 짧은 서열의 길이로 나누고 100을 곱한 2개의 정렬된 서열 간의 정확한 일치 수이다. 퍼센트 동일성은 또한, 예를 들어, 국립보건연구원에서 구할 수 있는 버전 2.2.9를 포함한 고급 BLAST 컴퓨터 프로그램을 사용하는 서열 정보를 비교함으로써 결정할 수 있다. BLAST 프로그램은 Karlin 및 Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268 (1990)의 정렬 방법에 기초하고 Altschul, 등, J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990); Karlin 및 Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877 (1993); 및 Altschul 등, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997)에서 논의된 바와 같다. 간략하게, BLAST 프로그램은 동일하게 정렬된 기호 (일반적으로 뉴클레오티드 또는 아미노산)의 수를 두 서열 중 더 짧은 기호의 총 수로 나눈 것으로 동일성을 정의한다. 이 프로그램은 비교되는 단백질의 전체 길이에 걸쳐 퍼센트 동일성을 결정하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, blastp 프로그램에서 짧은 쿼리 시퀀스로 검색을 최적화하기 위해 기본 매개변수가 제공된다. 이 프로그램은 또한 Wootton 및 Federhen, Computers and Chemistry 17:149-163 (1993)의 SEG 프로그램에 의해 결정된 바와 같이 쿼리 시퀀스의 세그먼트를 마스크-오프하기 위해 SEG 필터의 사용을 허용한다. 원하는 정도의 서열 동일성의 범위는 약 80% 내지 100%이고 그 사이의 정수 값이다. 전형적으로, 개시된 서열과 청구된 서열 사이의 퍼센트 동일성은 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "폴리뉴클레오티드 시스템"은 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 하나 이상의 폴리뉴클레오티드는 특정 적용을 위해 협력하여 작동하도록 또는 원하는 형질전환된 세포를 생성하도록 설계될 수 있다.
용어 "외인성"은 본원에서 유기체 외부로부터 기원하는 핵산, 단백질 또는 펩티드, 소분자 화합물 등을 포함하는 임의의 분자를 지칭하는 데 사용된다. 대조적으로, 용어 "내인성"은 유기체 내부로부터 기원하는 (즉, 유기체에 의해 자연적으로 생성되는) 임의의 분자를 지칭한다.
용어 "MOI"는 감염 다중도를 지칭하는 데 사용되고, 이는 감염 표적 (예를 들어 세포)에 대한 작용제 (예를 들어 바이러스 입자)의 비율이다.
본 명세서에서, 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비율 범위 또는 정수 범위는 달리 명시되지 않는 한, 인용된 범위 내의 임의의 정수 값 및 적절한 경우 그의 분수 (예를 들어 정수의 1/10 및 1/100)를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 숫자(number) 또는 수사(numeral) 바로 앞에 오는 용어 "약"은 숫자 또는 수사가 플러스 또는 마이너스 최대 10% 범위라는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "표적 세포"는 입양 세포 요법에 의해 표적화된 세포를 지칭한다. 예를 들어, 표적 세포는 입양 세포 요법의 이식된 T 세포에 의해 사멸될 수 있는 암 세포일 수 있다. 본 개시내용의 표적 세포는 본원에 기재된 바와 같이 표적 항원을 발현하고, 비-표적 항원을 발현하지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "비-표적 세포"는 입양 세포 요법에 의해 표적화되지 않는 세포를 지칭한다. 예를 들어, 암 세포를 표적으로 하는 입양 세포에서, 정상, 건강한 비암성 세포는 비표적 세포이다. 대상체의 일부 또는 모든 비표적 세포는 표적 항원과 비표적 항원을 모두 발현할 수 있다. 대상체의 비-표적 세포는 이러한 세포가 또한 표적 항원을 발현하는지에 관계없이 비표적 항원을 발현할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "비-표적 대립형질 변이체"는 그 생성물이 비-표적 세포에 의해 발현되지만 표적 세포에 의해서는 발현되지 않는 유전자의 대립유전자를 지칭한다. 예를 들어, 비-표적 대립형질 변이체는 대상체의 정상, 비-암 세포에 의해 발현되지만, 대상체의 암 세포에 의해서는 발현되지 않는 유전자의 대립유전자이다. 비-표적 대립형질 변이체의 발현은 이형접합성의 소실, 돌연변이, 또는 비-표적 대립형질 변이체를 암호화하는 유전자의 후성적 변형을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 메커니즘에 의해 암 세포에서 소실될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 리간드 결합 도메인, 예컨대 항원 결합 도메인과 관련하여 사용될 때 "에 특이적" 또는 "에 특이적으로 결합하는"은 명명된 표적에 대해 높은 특이성을 갖는 리간드 결합 도메인을 지칭한다. 항체 특이성은 리간드 결합 도메인과 상응하는 리간드 사이의 적합도, 또는 리간드 결합 도메인이 유사하거나 유사하지 않은 리간드를 구별하는 능력의 척도로 볼 수 있다. 특이성과 비교하여, 친화도는 리간드 결합 도메인과 리간드 사이의 결합 강도의 척도로서, 저-친화도 리간드 결합 도메인은 약하게 결합하고 고-친화도 리간드 결합 도메인은 견고하게 결합한다.　표적 대립유전자에 특이적인 리간드 결합 도메인은 유전자의 상이한 대립유전자를 구별할 수 있는 것이다. 예를 들어, HLA-A*02에 특이적인 리간드 결합 도메인은 HLA-A*01 또는 HLA-A*03과 같은 다른 HLA-A 대립 유전자에 결합하지 않거나 약하게만 결합한다. 당업자는 리간드 결합 도메인이 특정 표적에 특이적이라고 말할 수 있고, 본원에 기술된 수용체 시스템에서 그의 기능에 영향을 미치지 않는 하나 이상의 추가 표적에 여전히 낮은 수준의 결합을 갖는다는 것을 이해할 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "표적 항원"은 항원이라는 용어를 사용하든 특정 항원의 이름을 사용하든 암 세포와 같은 표적 세포에 의해 발현되는 항원을 지칭한다. 표적 항원의 발현은 표적 세포에 국한되지 않는다. 표적 항원은 대상체에서 암 세포 및 정상, 비-암 세포 모두에 의해 발현될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "비-표적 항원" (또는 "차단제 항원")은 항원이라는 용어를 사용하든 특정 항원의 이름을 사용하든 정상, 비-암 세포에서 발현되고 암 세포에서 발현되지 않는 항원을 지칭한다. 이러한 발현의 차이는 억제 수용체가 비표적 세포의 존재 하에서 면역 세포 활성화를 억제하도록 하지만 표적 세포의 존재 하에서는 그렇지 않다.
다형성은 모집단에서 뉴클레오티드 서열의 두 개 이상의 변이체의 존재를 지칭한다. 다형성은 하나 이상의 염기 변화, 삽입, 반복 또는 결실을 포함할 수 있다. 다형성은 예를 들어 단순 서열 반복 (SSR) 및 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP)을 포함하고, 이는 아데닌 (A), 티민 (T), 시토신 (C) 또는 구아닌 (G)의 단일 뉴클레오티드가 변경될 때 발생하는 변이이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "친화도"는 수용체, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 수용체의 항원 결합 도메인에 대한 항원 상의 단일 리간드 결합 부위에 대한 리간드의 결합 강도를 지칭한다. 리간드 결합 도메인은 리간드와 더 약한 상호작용 (낮은 친화도) 또는 더 강한 상호작용 (높은 친화도)을 가질 수 있다.
Kd, 또는 해리 상수는 예를 들어, 수용체와 동족 리간드를 포함하는 거대분자 복합체가 리간드와 수용체로 분리되는 경우와 같이 더 작은 성분으로 가역적으로 분리되는 더 큰 물체의 성향을 측정하는 평형 상수의 한 유형이다. Kd 가 높다는 것은 수용체를 점유하기 위해서는 고농도의 리간드가 필요하고 리간드에 대한 수용체의 친화력이 낮다는 것을 의미한다. 반대로, 낮은 Kd는 리간드가 수용체에 대해 높은 친화도를 갖는다는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "반응하는" 또는 "에 반응하는" 수용체는 리간드 (즉, 항원)에 의해 결합될 때 세포내 도메인의 알려진 기능에 해당하는 신호를 생성하는 세포내 도메인을 포함하는 수용체를 지칭한다. 표적 항원에 결합된 활성화제 수용체는 활성화제 수용체를 발현하는 면역 세포의 활성화를 유발하는 신호를 생성한다. 비-표적 항원에 결합된 억제 수용체는 활성화제 수용체를 발현하는 면역 세포의 활성화를 방지하거나 감소시키는 억제 신호를 생성할 수 있다. 수용체의 반응성 및 수용체를 발현하는 면역 세포를 활성화 또는 억제하는 능력은 리포터 분석 및 세포독성 분석을 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 공지되고 본원에 기술된 임의의 수단에 의해 분석될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 면역 세포의 "활성화" 또는 "활성화된" 면역 세포는 면역 반응의 특징적인 하나 이상의 기능을 수행할 수 있는 면역 세포이다. 이러한 기능에는 증식, 사이토카인 방출 및 세포독성, 즉 표적 세포의 사멸이 포함된다. 활성화된 면역 세포는 당업자에게 명백할 마커를 발현한다. 예를 들어, 활성화된 T 세포는 CD69, CD71, CD25 및 HLA-DR 중 하나 이상을 발현할 수 있다. 활성화제 수용체 (예를 들어 CEA CAR)를 발현하는 면역 세포는 표적 세포에 의해 발현되는 표적 항원 (예를 들어 CEA)에 대한 수용체의 결합에 반응하게 될 때 활성화제 수용체에 의해 활성화될 수 있다. "표적 항원"은 "활성화제 항원"으로도 지칭될 수 있고 표적 세포에 의해 단리되거나 발현될 수 있다. 억제 수용체를 발현하는 면역 세포의 활성화는 억제 수용체가 비-표적 항원 (예를 들어 HLA-A*02)의 결합에 반응하게 될 때, 심지어는 활성화제 수용체가 표적 활성화제 리간드에 결합할 때, 예방될 수 있다. "비-표적 항원"은 또한 "억제 리간드" 또는 "차단제"로도 지칭될 수 있고, 표적 세포에 의해 단리되거나 발현될 수 있다.
면역 세포 상의 수용체 발현은 본원에 기술된 활성화제 수용체 및 억제 수용체의 존재를 보고하는 검정에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 면역 세포 집단은 표지된 분자 (예를 들어 형광단 표지된 수용체 특이적 항체 또는 형광단 표지된 수용체 특이적 리간드)로 염색될 수 있고, 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 유세포 분석법을 사용하여 정량화했다. 이 방법은 활성화제 수용체, 억제 수용체, 또는 수용체 모두를 발현하는 것을 특징으로 하는 면역 세포의 집단에서 면역 세포의 백분율을 허용한다. 본원에 기술된 면역 세포에 의해 발현되는 활성화제 수용체 및 억제 수용체의 비율은 예를 들어, 디지털 액적 PCR에 의해 결정될 수 있다. 이들 접근법은 본원에 기술된 면역 세포, 약학 조성물, 및 키트의 생산 및 제조를 위한 세포 집단을 특징규명하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기술된 면역 세포, 약학 조성물 및 키트의 경우, 활성화제 수용체 및 억제 수용체 모두를 발현하는 면역 세포의 적합한 백분율은 본원에 기술된 방법에 대해 구체적으로 결정되는 것으로 이해된다. 예를 들어, 활성화제 수용체 및 억제 수용체를 모두를 발현하는 면역 세포의 적합한 백분율은 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%일 수 있다. 예를 들어, 활성화제 수용체 및 억제 수용체를 모두를 발현하는 면역 세포의 적합한 백분율은 최대 50%, 최대 55%, 최대 60%, 최대 65%, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90%, 또는 최대 95%일 수 있다. 예를 들어, 면역 세포에서 활성화제 수용체와 억제 수용체의 적절한 비율은 약 5:1, 약 4:1, 약 3:1, 약 2:1, 약 1:1, 약 1:2, 약 1:3, 약 1:4, 또는 약 1:5일 수 있다. 본원에 기술된 면역 세포, 약학 조성물 및 키트에 대한 적합한 값을 충족시키기 위해 면역 세포 집단에 정제, 농축 및/또는 고갈 단계를 사용할 수 있음을 이해한다.
본원에 기재된 면역 세포에 의해 발현되는 반응성 수용체는 수용체의 세포내 도메인에 의해 생성될 것으로 예상되는 신호의 생성을 측정하는 검정에 의해 검증될 수 있다. 저캇-루시퍼라제 NFAT 세포 (저캇 세포)와 같은 수용체 세포주는 반응성 수용체를 특징규명하는 데 사용할 수 있다. 저캇 세포 T 세포로부터 유래되고 활성화된 T-세포 (NFAT)-유도성 루시퍼라제 리포터 시스템의 안정적으로 통합된 핵 인자를 포함한다. NFAT는 면역 세포 활성화에 필요한 전사 인자 계열이며, 그의 활성화는 T 세포 활성화에 대한 신호 마커로 사용될 수 있다. 저캇 세포는 본원에 기술된 활성화제 수용체 및/또는 억제 수용체로 형질도입되거나 형질감염될 수 있다. 활성화제 수용체는 저캇 세포가 루시퍼라제 리포터 유전자를 발현하는 경우 리간드의 결합에 반응하며, 반응성 수준은 리포터 유전자 발현 수준에 의해 결정될 수 있다. 루시퍼라제의 존재는 루시페린과 같은 임의의 공지된 루시퍼라제 검출 시약을 사용하여 결정할 수 있다. 억제 수용체는 저캇 세포에서 활성화제 수용체와 함께 발현될 때, 정상적으로 반응하는 면역 세포가 활성제 수용체에 대한 반응으로 루시퍼라제를 발현하는 것을 방지하는 경우 리간드의 결합에 반응한다. 예를 들어, 억제 수용체의 반응성은 다음을 관찰함으로써 활성제와 억제제 모두를 발현하는 저캇 세포에서 결정되고 정량화될 수 있다: 1) 저캇 세포는 활성화제 수용체 리간드의 존재 및 억제 수용체 리간드의 부재 하에 루시퍼라제를 발현한다; 및 2) 저캇 세포에서 루시퍼라제 발현은 활성화제 수용체 리간드 및 억제 수용체 리간드 둘 다의 존재 하에 감소되거나 제거된다. 이 접근법은 활성화제 수용체 및 활성화제 수용체와 억제 수용체의 특정 쌍의 민감도, 효능 및 선택성을 결정하는 데 사용할 수 있다. 민감도, 효능 및 선택성은 활성화제 수용체 리간드 및/또는 억제 수용체 리간드가 활성화제 수용체 또는 활성화제와 억제 수용체의 특정 쌍을 발현하는 저캇 세포의 배양물로 적정되는, 용량 반응 실험을 사용하여 EC50 또는 IC50 값으로 정량화될 수 있다. 대안적으로, EC50 및 IC50 값은 활성화제 수용체 또는 활성화제와 억제 수용체의 특정 쌍을 발현하는 면역 세포 (예를 들어 저캇 세포 또는 1차 면역 세포) 및 증가하는 양의 활성화제 리간드 또는 억제제 리간드를 발현하는 표적 세포의 공동 배양물에서 결정될 수 있다. 증가하는 양의 활성화제 리간드 또는 억제제 리간드는 예를 들어, mRNA를 표적 세포로 암호화하는 활성화제 리간드 또는 억제제 리간드의 적정, 또는 상이한 수준의 표적 리간드를 자연적으로 발현하는 표적 세포의 사용에 의해 표적 세포에서 달성될 수 있다. 다양한 양의 표적 및 비-표적 리간드를 발현하는 사용된 표적 세포로 결정된 활성화제 및 억제 수용체에 대한 예시적인 적합한 EC50 및 IC50 값은 활성화제 수용체에 대해 260 백만당 전사체 (TPM) 이하 EC50, 예를 들어 10 내지 260 TPM의 EC50, 및 억제 수용체에 대해 10 TPM 이하의 IC50, 예를 들어 1-5 TPM의 IC50를 포함한다.
활성화제 수용체 또는 활성화제와 억제 수용체의 특정 쌍을 발현하는 본원에 기재된 면역 세포의 활성화는 상기 면역 세포와의 공동 배양 후 표적 세포의 생존력을 측정하는 검정에 의해 추가로 결정될 수 있다. 때때로 효과기 세포로 지칭되는, 면역 세포는 활성화제 수용체 리간드, 억제 수용체 리간드, 또는 활성화제 및 억제 수용체 리간드를 모두 발현하는 표적 세포와 공동 배양된다. 공동 배양 후, 표적 세포의 생존력은 세포 배양물에서 생존력을 측정하기 위한 임의의 방법을 사용하여 측정한다. 예를 들어, 활성 미토콘드리아 효소를 측정하기 위해 테트라졸륨 염 기질을 사용하는 미토콘드리아 기능 분석을 사용하여 생존력을 결정할 수 있다. 생존력은 이미징 기반 방법을 사용하여 결정할 수도 있다. 표적 세포는 녹색 형광 단백질 또는 적색 형광 단백질과 같은 형광 단백질을 발현할 수 있다. 전체 세포 형광의 감소는 표적 세포의 생존력 감소를 나타낸다. 활성화제 수용체 또는 활성화제와 억제 수용체의 특정 쌍을 발현하는 면역 세포와의 배양 후 표적 세포의 생존력 감소는 면역 세포의 표적 세포-매개 활성화로 해석된다. 면역 세포의 선택성의 척도는 또한 이 접근법을 사용하여 결정될 수 있다. 활성화제와 억제 수용체 쌍을 발현하는 면역 세포는 다음이 관찰되는 경우 선택적이다: 1) 억제 수용체 리간드가 아닌 활성화제 수용체 리간드를 발현하는 표적 세포에서 생존력이 감소된다; 2) 활성화제 수용체 리간드 및 억제 수용체 리간드를 모두 발현하는 표적 세포에서 생존력이 감소하지 않는다. 이들 측정으로부터, 음성 대조군 (활성화제 수용체를 발현하지 않는 면역 세포)의 백분율로서 표적 세포의 생존력 감소에 기초하여 면역 세포 활성화의 백분율을 정량화하는 "특이적 사멸" 값이 도출될 수 있다. 추가로, 이러한 측정으로부터 활성화제 수용체 리간드 및 억제 수용체 리간드를 모두 발현하는 표적 세포에서 관찰된 특이적 사멸에 대해 억제 수용체 리간드의 부재 하에 활성화제 수용체 리간드를 발현하는 표적 세포에서 관찰된 특이적 사멸의 비율을 나타내는 "선택성 비율" 값이 도출될 수 있다. 이 접근법은 본원에 기술된 면역 세포, 약학 조성물 및 키트의 생산 및 제조를 위한 세포 집단을 특징규명하는 데 사용될 수 있다.
면역 세포, 약학 조성물 및 키트에 대해 적합한 특이적 사멸 값은 예를 들어 다음 기준일 수 있다: 1) 억제 수용체 리간드의 부재 하에 활성화제 수용체 리간드를 발현하는 표적 세포 및 면역 세포의 48시간 공동-배양 후 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 특이적 사멸; 및 2) 활성화제 수용체 리간드 및 억제 수용체 리간드 둘 모두를 발현하는 표적 세포의 40% 이하, 35% 이하, 30% 이하, 25% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하, 5% 이하, 3% 이하 또는 1% 이하의 특이적 사멸.
추가의 예로서, 면역 세포, 약학 조성물 및 키트에 대해 적합한 특이적 사멸 값은 다음 기준일 수 있다: 1) 활성화제 리간드를 발현하지만 억제 리간드는 발현하지 않는 표적 세포의 30% 내지 99%, 40% 내지 99%, 50% 내지 99%, 55% 내지 95%, 60% 내지 95%, 60% 내지 90%, 50% 내지 80%, 50% 내지 70% 또는 50% 내지 60%가 사멸되고; 2) 활성화제 리간드 및 억제제 리간드를 발현하는 표적 세포의 1% 내지 40%, 3% 내지 40%, 5% 내지 40%, 5% 내지 30%, 10% 내지 30%, 15% 내지 30% 또는 5% 내지 20%가 사멸된다.
또 다른 추가의 예로서, 면역 세포, 약학 조성물 및 키트에 대해 적합한 특이적 사멸 값은 예를 들어 다음 기준일 수 있다: 1) 면역 세포와 억제 수용체 리간드의 부재 하에 활성화제 수용체 리간드를 발현하는 표적 세포의 48시간 공동-배양 후 적어도 50% 특이적 사멸; 및 2) 활성화제 수용체 리간드 및 억제 수용체 리간드를 모두 발현하는 표적 세포의 20% 이하의 특이적 사멸. 추가 예로서, 면역 세포가 6시간, 12시간, 18시간, 24시간, 30시간, 36시간, 42시간, 48시간, 54시간, 또는 60시간의 기간에 걸쳐 억제제 리간드가 아닌 활성화제 리간드를 발현하는 표적 세포의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%를 사멸시킬 수 있는 동안, 동일한 기간 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 3% 미만 또는 1% 미만의 활성화제 및 억제제 리간드를 발현하는 표적 세포를 사멸시킨다.
면역 세포, 약학 조성물, 및 키트에 대한 억제 리간드 값의 부재 하에 활성화제 리간드를 발현하는 표적 세포의 적합한 특이적 사멸 값은 예를 들어, 적어도 약 50% 내지 적어도 약 95%일 수 있다. 면역 세포, 약학 조성물, 및 키트에 대한 억제 리간드 값의 부재 하에 활성화제 리간드를 발현하는 표적 세포에 대해 적합한 특이적 사멸 값은 예를 들어, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%일 수 있다. 면역 세포, 약학 조성물, 및 키트에 대한 억제 리간드 값의 부재 하에 활성화제 리간드를 발현하는 표적 세포의 적합한 특이적 사멸 값은 예를 들어, 최대 약 50%, 최대 약 55%, 최대 약 60%, 최대 약 65%, 최대 약 70%, 최대 약 75%, 최대 약 80%, 최대 약 85%, 최대 약 90%, 또는 최대 약 95%일 수 있다. 면역 세포, 약학 조성물, 및 키트에 대한 활성화제 수용체 리간드 및 억제 수용체 리간드를 모두 발현하는 표적 세포의 적합한 특이적 사멸 값은 약 50% 미만, 약 45% 미만, 약 40% 미만, 약 35% 미만, 약 30% 미만, 약 25% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 또는 약 5% 미만일 수 있다. 면역 세포, 약학 조성물, 및 키트에 대해 적합한 특이적 사멸 값은 표적 세포와 면역 세포의 약 6시간, 약 12시간, 약 18시간, 약 24, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 54시간, 약 60시간, 약 66시간, 또는 약 72시간 공동-배양 후 결정될 수 있다.
면역 세포, 약학 조성물, 및 키트에 대한 억제 리간드 값의 부재 하에 활성화제 리간드를 발현하는 표적 세포의 적합한 특이적 사멸 값은 예를 들어, 적어도 약 50% 내지 적어도 약 95%일 수 있다. 면역 세포, 약학 조성물, 및 키트에 대한 억제 리간드 값의 부재 하에 활성화제 리간드를 발현하는 표적 세포의 적합한 특이적 사멸 값은 예를 들어, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%일 수 있다. 면역 세포, 약학 조성물, 및 키트에 대한 억제 리간드 값의 부재 하에 활성화제 리간드를 발현하는 표적 세포의 적합한 특이적 사멸 값은 예를 들어, 최대 약 50%, 최대 약 55%, 최대 약 60%, 최대 약 65%, 최대 약 70%, 최대 약 75%, 최대 약 80%, 최대 약 85%, 최대 약 90%, 또는 최대 약 95%일 수 있다. 면역 세포, 약학 조성물, 및 키트에 대해 활성화제 수용체 리간드 및 억제 수용체 리간드를 모두 발현하는 표적 세포의 적합한 특이적 사멸 값은 약 50% 미만, 약 45% 미만, 약 40% 미만, 약 35% 미만, 약 30% 미만, 약 25% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 또는 약 5% 미만일 수 있다. 면역 세포, 약학 조성물, 및 키트에 대해 적합한 특이적 사멸 값은 표적 세포와 면역 세포의 6시간, 약 12시간, 약 18시간, 약 24, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 54시간, 약 60시간, 약 66시간, 또는 약 72시간의 공동-배양 후 결정될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "기능적 변이체"는 모 단백질과 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖고, 모 단백질의 하나 이상의 원하는 활성을 유지하는 단백질을 지칭한다. 기능적 변이체는 모체 단백질의 하나 이상의 원하는 활성을 유지하는 단백질의 단편 (즉, N- 및/또는 C-말단 결실을 갖는 변이체)일 수 있다.
본원에 언급된 모든 간행물 및 특허는 각각의 개별 간행물 또는 특허가 구체적이고 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 표시되는 것처럼 전체적으로 참조로 포함된다. 상충하는 경우, 본원의 모든 정의를 포함하여 본 출원이 우선한다. 그러나, 본원에 인용된 모든 참조, 기사, 간행물, 특허, 특허 공개 및 특허 출원에 대한 언급은 그들이 유효한 선행 기술을 구성하거나 세계 어느 국가에서나 일반적인 일반 지식의 일부를 형성한다는 것을 인정하거나 어떤 형태의 제안으로 간주해서는 안 된다.
활성화제 수용체
본 개시내용은 암 세포 특이적 항원, 또는 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)와의 복합체에서 이의 펩티드 항원을 포함하는 표적 항원에 특이적인 제1 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제1 수용체를 제공한다. 제1 수용체는 활성화제 수용체이고, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인에 의한 표적 항원 결합 시 제1 수용체를 발현하는 면역 세포의 활성화를 매개한다. 제1 수용체는 표적 항원 (즉 활성화제 리간드)에 반응성이다. 예를 들어, 표적 항원이 제1 수용체에 결합하거나 접촉할 때, 제1 반응성이 있고 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인에 의한 표적 항원의 결합 시 제1 수용체를 발현하는 면역 세포를 활성화한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 T 세포 수용체 (TCR)이다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 인간화된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "인간화"는 비-인간 종으로부터 단리되거나 유도된 이식유전자 내의 서열 또는 부분서열(subsequence)을 상동적이거나 기능적으로 동등한 인간 서열로 대체하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 인간화 항체는 마우스 CDR을 인간 프레임워크 서열에 이식한 다음, 특정 인간 프레임워크 잔기를 공급원 항체의 해당 마우스 잔기로 역치환하여 생성할 수 있다.
활성화제 표적
일부 구현예에서, 제1 수용체에 대한 표적 항원은 암 세포 특이적 항원이다. 표적 암 세포에 의해 발현되는 임의의 세포 표면 분자는 제1 수용체 리간드 결합 도메인에 대한 적합한 표적 항원일 수 있다. 예를 들어, 세포 부착 분자, 세포-세포 신호전달 분자, 세포외 도메인, 화학주성에 관여하는 분자, 당단백질, G 단백질-결합 수용체, 막관통, 신경전달물질에 대한 수용체 또는 전압 개폐 이온 채널이 표적 항원으로 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서의 암 세포 특이적 항원의 펩티드 항원이다. 표적 암 세포에 의해 발현되고 암 세포 표면 상의 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)에 의해 펩티드 항원 (pMHC)으로서 제시되는 임의의 분자는 제1 수용체 세포외 리간드 결합 도메인에 대한 적합한 표적 항원일 수 있다.
일부 구현예에서, 암 세포 특이적 항원은 CEA 세포 부착 분자 5 (CEA), 또는 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서의 이의 펩티드 항원이다.
주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)은 면역계의 세포에 항원을 제시하여 면역 반응을 유발하는 단백질 복합체이다. MHC-I에 해당하는 인간 백혈구 항원 (HLA)은 HLA-A, HLA-B 및 HLA-C이다.
HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-E, HLA-F 또는 HLA-G 중 임의의 것을 포함하는 암 세포 특이적 pMHC 항원은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 암 세포 특이적 항원은 HLA-A를 포함한다. HLA-A 수용체는 무거운 α 사슬과 더 작은 β 사슬을 포함하는 이종이량체이다. α 사슬은 HLA-A의 변이체에 의해 암호화되는 반면, β 사슬 (β2-마이크로글로불린)은 불변이다. 수천 개의 변이 HLA-A 유전자가 있으며, 이들 모두는 본 개시내용의 범위 내에 속한다. 일부 구현예에서, MHC-I는 인간 백혈구 항원 A*02 대립유전자 (HLA-A*02)를 포함한다.
일부 구현예에서, 암 세포 특이적 항원은 HLA-B를 포함한다. HLA-B　유전자의 수백 가지 버전 (대립유전자)이 알려져 있으며, 각 버전에는 특정 번호가 부여된다 (예를 들어 HLA-B27).
일부 구현예에서, 암 세포 특이적 항원은 HLA-C를 포함한다. HLA-C는 HLA 클래스 I 중쇄 파라로그(paralogue)에 속한다. 이 클래스 I 분자는 중쇄 및 경쇄 (베타-2 마이크로글로불린)로 이루어진 이종이량체이다. 100개가 넘는 HLA-C 대립유전자가 당업계에 알려져 있다.
일부 구현예에서, 암 세포 특이적 항원은 결장직장암 항원이다. 일부 구현예에서, 결장직장암 항원은 CEA 또는 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 이의 펩티드 항원을 포함한다.
일부 구현예에서, 암 세포 특이적 항원은 CEA 세포 부착 분자 5 (CEA), 또는 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서의 이의 펩티드 항원이다. CEA는 다양한 암 세포에 의해 발현되는 180-kDa 당단백질 종양-연관 단백질이다. CEA는 반복된 면역글로불린 도메인으로 구성된 GPI-고정 부착 분자이다. 이는 대장암에서 진단 및 치료 반응의 대용품(surrogate) 둘 모두로서의 바이오마커로 사용된다. CEA를 발현하는 암은 선암종, 결장직장암 및 결장직장 선암종을 포함하는 선택된 다른 상피 암을 포함한다. 그러나, CEA는 또한 위장관 전체에 걸쳐 다양한 정상 상피 세포에서, 예를 들어 결장 크립트(colonic crypt)의 상부 3분의 1에서 고도로 분화된 상피 세포에서 발현된다 (CEA 발현에 대해 도 7 참조).
CEA의 모든 이소형은 본 개시내용의 암 세포 특이적 항원으로 생각된다. CEA 이소형 1은 NCBI 기록 번호 NP_001278413.1에 기재되어 있으며, 그 내용은 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, CEA는 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00001
일부 구현예에서, CEA는 서열 번호 1에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. CEA 이소형 2는 NCBI 기록 번호 NP_001295327.1에 기재되어 있으며, 그 내용은 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, CEA는 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00002
일부 구현예에서, CEA는 서열 번호 15에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 암 세포 특이적 항원은 CEA로부터 유래된 펩티드 항원이다. 일부 구현예에서, 펩티드 항원은 서열 번호 1의 부분서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 항원은 서열 번호 1의 부분서열과 동일한 서열을 포함한다. 예시적인 CEA 펩티드 항원은 서열 번호 1의 아미노산 691-699 (IMIGVLVGV), 서열 번호 1의 아미노산 605-613 (YLSGANLNL), 및 서열 번호 1의 아미노산 694-702 (GVLVGVALI)를 포함한다. 일부 구현예에서, CEA 펩티드 항원은 서열 번호 1의 아미노산 691-699 (IMIGVLVGV)를 포함하거나, 이로 필수적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, 펩티드 항원은 서열 번호 15의 부분서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 항원은 서열 번호 15의 부분서열과 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CEA 펩티드 항원은 MHC-I과 복합체화된다. 일부 구현예에서, MHC-I은 인간 백혈구 항원 A*02 대립유전자(HLA-A*02)를 포함한다.
세포외 리간드 결합 도메인
본 개시내용은 표적 항원에 특이적인 제1 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제1 수용체를 제공한다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 암 세포 특이적 항원을 포함한다.
일부 구현예에서, 암 세포 특이적 항원은 CEA 또는 MHC-I과 복합체화된 CEA-유래 펩티드 항원이고, 제1 수용체의 리간드 결합 도메인은 CEA 항원을 인식하고 결합한다.
리간드 의존적 방식으로 수용체의 활성을 조절할 수 있는 임의의 유형의 리간드 결합 도메인은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 생각된다. 일부 구현예에서, 리간드 결합 도메인은 항원 결합 도메인이다. 예시적인 항원 결합 도메인은 특히, scFv, SdAb, Vβ-단독 도메인, 및 TCR α 및 β 사슬 가변 도메인으로부터 유도된 TCR 항원 결합 도메인을 포함한다.
임의의 유형의 항원 결합 도메인은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 생각된다.
예를 들어, 제1 세포외 리간드 결합 도메인은 예를 들어, 마우스, 인간화 또는 인간 항체로부터 유래된 Vβ 단독 도메인, 단일 도메인 항체 단편 (sdAb) 또는 중쇄 항체 HCAb, 단일 사슬 항체 (scFv)를 포함하는 연속 폴리펩티드 사슬의 일부일 수 있다 (Harlow 등, 1999, Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y.; Harlow 등, 1989, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, N.Y.; Houston 등, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; Bird 등, 1988, Science 242:423-426). 일부 양태에서, 제1 세포외 리간드 결합 도메인은 항체 단편을 포함하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 추가 양태에서, 제1 세포외 리간드 결합 도메인은 scFv 또는 sdAb를 포함하는 항체 단편을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "항체"는 항원에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자로부터 유래된 단백질 또는 폴리펩티드 서열을 지칭한다. 항체는 폴리클로날 또는 모노클로날 기원의 온전한 면역글로불린, 또는 이의 단편일 수 있고 천연 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다.
용어 "항체 단편" 또는 "항체 결합 도메인"은 항원 결합 도메인, 즉, 항원 및 이의 정의된 에피토프와 같은 표적에 대한 항체 단편의 인식 및 특이적 결합을 부여하기에 충분한 온전한 항체의 항원성 결정 가변 영역을 함유하는 항체, 또는 이의 재조합 변이체의 적어도 하나의 부분을 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 단일 사슬 (sc)Fv ("scFv") 항체 단편, 선형 항체, 단일 도메인 항체 (약칭 "sdAb") (VL 또는 VH), 낙타류 VHH 도메인, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "scFv"는 경쇄의 가변 영역을 포함하는 적어도 하나의 항체 단편 및 중쇄의 가변 영역을 포함하는 적어도 하나의 항체 단편을 포함하는 융합 단백질을 지칭하고, 여기서 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 짧은 유연한 폴리펩티드 링커를 통해 연속적으로 연결되고, 단일 폴리펩티드 사슬로 발현될 수 있으며, 여기서 scFv는 그것이 유래된 온전한 항체의 특이성을 유지한다.
항체와 관련하여 "중쇄 가변 영역" 또는 "VH" (또는, 단일 도메인 항체의 경우, 예를 들어, 나노바디, "VHH")는 프레임워크 영역으로 알려진 플랭킹 스트레치 사이에 개재된 개의 CDR을 포함하는 중쇄의 단편을 지칭하고, 이러한 프레임워크 영역은 일반적으로 CDR보다 더 많이 보존되며 CDR을 지지하는 스캐폴드를 형성한다.
명시되지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같이 scFv는 예를 들어, 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단과 관련하여, 순서대로 VL 및 VH 가변 영역을 가질 수 있으며, scFv VL-링커-VH를 포함하거나 VH-링커-VL을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 활성화제 및/또는 억제 수용체의 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 링커에 의해 연결된 VL 및 VH 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 글리신 세린 링커, 예를 들어 GGGGSGGGGSGGGGSGG (서열 번호 146)를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 scFv의 N 말단에서 신호 서열을 추가로 포함한다. 예시적인 신호 서열은 MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC (서열 번호 184)를 포함하고, 이는 ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCTCCGAGGTGCCAGATGT (서열 번호 185)에 의해 암호화된다.
용어 "항체 경쇄"는 항체 분자에 자연적으로 발생하는 형태로 존재하는 두 가지 유형의 폴리펩티드 사슬 중 더 작은 것을 지칭한다. 카파 ("κ") 및 람다 ("λ") 경쇄는 2개의 주요 항체 경쇄 아이소타입을 지칭한다.
용어 "재조합 항체"는 예를 들어, 박테리오파지 또는 효모 발현 시스템에 의해 발현된 항체와 같은 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성된 항체를 지칭한다. 용어는 또한, 항체를 암호화하는 DNA 분자의 합성에 의해 생성되고 DNA 분자가 항체 단백질을 발현하는 항체 또는 항체를 지정하는 아미노산 서열을 의미하는 것으로 해석되어야 하며, 여기서 DNA 또는 아미노산 서열은 이용 가능하고 당업계에 잘 알려진 재조합 DNA 또는 아미노산 서열 기술을 사용하여 수득된다.
용어 "Vβ 도메인", "Vβ-단독 도메인", "β 사슬 가변 도메인" 또는 "단일 가변 도메인 TCR (svd-TCR)"은 제2 TCR 가변 도메인의 부재 하에 항원에 특이적으로 결합하는 단일 T 세포 수용체 (TCR) 베타 가변 도메인으로 본질적으로 이루어진 항원 결합 도메인을 지칭한다. Vβ-단독 도메인은 상보성 결정 영역 (CDR)을 사용하여 항원과 결합한다. 각각의 Vβ-단독 도메인은 3개의 보체 결정 영역 (CDR1, CDR2, 및 CDR3)을 함유한다. 추가 요소는 Vβ 도메인이 제2 TCR 가변 도메인이 없을 때 에피토프에 결합하도록 구성된다면 조합될 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 항체 단편, 단일 사실 Fv 항체 단편 (scFv), 또는 β 사슬 가변 도메인 (Vβ)을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 TCR α 사슬 가변 도메인 및 TCR β 사슬 가변 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 세포외 리간드 결합 도메인은 CEA 항원에 결합하는 TCR 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CEA 항원은 MHC-I과 복합체화되고, MHC-I은 HLA-A*02 대립유전자를 포함한다. CEA MHC-I HLA-A*02 항원에 결합하고 이를 인식하는 예시적인 TCR 항원 결합 도메인은 Parkhurst 등 Molecular Therapy 2011 19(3): P620-626에 기재되어 있으며, 그 내용은 본원에 참조로 포함된다. HLA-A*02 MHC-I와 복합체화된 서열 번호 1의 아미노산 691-699 (IMIGVLVGV)를 인식하는 예시적인 TCR 세포외 리간드 결합 도메인은 TRAV8-1*01 및 TRAJ6*01의 TCR 알파 도메인, 및 TRBV26*01, TRBD1*01, TRBJ2- 7*01 및 TRBC2의 TCR 베타 도메인을 포함한다.
IMIGVLVGV (서열 번호 2)를 포함하는 CEA MHC-I HLA-A*02 항원을 인식하는 예시적인 CDR을 하기 표 1에 나타나있다.
표 1. MHC-I HLA-A*02 + CEA에 대한 CDR (IMIGVLVGV (서열 번호 2))
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일부 구현예에서, 제1 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 3-12 또는 이에 대해 적어도 85% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열로부터 선택된 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체의 리간드 결합 도메인은 TCR 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, TCR α 사슬 가변 도메인은 TSITA(서열 번호 3)의 CDR-1, IRSNER(서열 번호 4)의 CDR-2, 및 ATDLTSGGGNYK(서열 번호 5), ATDFTSGGGNYK(서열 번호 6), ATDLTTGGNYK(서열 번호 7) 또는 ATDFTTGGNYK(서열 번호 8)를 포함하는 CDR-3을 포함하고; TCR β 사슬 가변 도메인은 KGHPV(서열 번호 9)의 CDR-1, FQNQEV(서열 번호 10)의 CDR-2, 및 ASSLGLGDYEQ(서열 번호 11) 또는 ASSLGTGDYEQ(서열 번호 12)의 CDR-3 또는 이에 대해 적어도 85% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, TCR α 사슬 가변 도메인은 서열 번호 9의 CDR-1, 서열 번호 10의 CDR-2 및 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 CDR-3을 포함하고; TCR β 사슬 가변 도메인은 서열 번호 3의 CDR-1, 서열 번호 4의 CDR-2 및 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7 또는 서열 번호 8을 포함하는 CDR-3, 또는 이에 대해 적어도 85% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
표 1로부터의 CDR을 포함하는 예시적인 TCR 알파 및 베타 사슬이 하기 표 2에 나타나있다. 표 2의 서열에는 CDR에 밑줄이 쳐져 있다. 표 2에서, TCR 알파 및 TCR 베타 사슬은 P2A 자가-절단 펩티드 (ATNFSLLKQAGDVEENPGP (서열 번호 186)) 및 GSG 링커에 의해 분리된다.
표 2. MHC-I HLA-A*02 + CEA (IMIGVLVGV (서열번호 2)) TCR 서열
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일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 16-31 또는 36-51 중 어느 하나의 서열 또는 부분서열과 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 적어도 99.5% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 16-31 또는 36-51 중 어느 하나의 서열 또는 부분서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 16-31 중 어느 하나의 아미노산 1-270, 또는 이에 대해 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 적어도 99.5% 동일한 서열을 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어지는 TCR 알파 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 16-31 중 어느 하나의 아미노산 1-270을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어지는 TCR 알파 사슬을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 16-31 중 어느 하나의 아미노산 293-598, 또는 이에 대해 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 적어도 99.5% 동일한 서열을 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어지는 TCR 베타 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 16-31 중 어느 하나의 아미노산 293-598을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어지는 TCR 베타 사슬을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 16-31 중 어느 하나의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬, 및 서열 번호 16-31 중 어느 하나의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 36-51 중 어느 하나의 아미노산 1-268, 또는 이에 대해 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 적어도 99.5% 동일한 서열을 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어지는 TCR 알파 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 36-51 중 어느 하나의 아미노산 1-268을 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어지는 TCR 알파 사슬을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 36-51 중 어느 하나의 아미노산 291-596, 또는 이에 대해 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 적어도 99.5% 동일한 서열을 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어지는 TCR 베타 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 36-51 중 어느 하나의 아미노산 291-596을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어지는 TCR 베타 사슬을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 서열 번호 36-51 중 어느 하나의 아미노산 1-268을 포함하는 TCR 알파 사슬, 및 서열 번호 36-51 중 어느 하나의 아미노산 291-596을 포함하는 TCR 베타 사슬을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv 도메인은 CEA에 결합한다. 일부 구현예에서, scFv는 CAR의 리간드 결합 도메인이다. CEA 표적화 scFv 도메인을 포함하는 예시적인 CAR 서열은 하기 표 3에 나타나있다. 표 3에서, CDR 서열에 밑줄이 쳐져 있다.
표 3. CEA를 표적으로 하는 scFv를 갖는 예시적인 CAR
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일부 구현예에서, CEA scFv는 EFGMN (서열 번호 55)의 CDR-H1, WINTKTGEATYVEEFKG (서열 번호 56)의 CDR-H2, WDFAYYVEAMDY (서열 번호 57) 또는 WDFAHYFQTMDY (서열 번호 58)의 CDR-H3, KASQNVGTNVA (서열 번호 59) 또는 KASAAVGTYVA (서열 번호 60)의 CDR-L1, SASYRYS (서열 번호 61) 또는 SASYRKR (서열 번호 62)의 CDR-L2 및 HQYYTYPLFT (서열 번호 63)의 CDR-L3 또는 이에 대해 적어도 85% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CEA scFv는 EFGMN (서열 번호 55)의 CDR-H1, WINTKTGEATYVEEFKG (서열 번호 56)의 CDR-H2, WDFAYYVEAMDY (서열 번호 57) 또는 WDFAHYFQTMDY (서열 번호 58)의 CDR-H3, KASQNVGTNVA (서열 번호 59) 또는 KASAAVGTYVA (서열 번호 60)의 CDR-L1, SASYRYS (서열 번호 61) 또는 SASYRKR (서열 번호 62)의 CDR-L2 및 HQYYTYPLFT (서열 번호 63)의 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, CEA scFv는 EFGMN (서열 번호 55)의 CDR-H1, WINTKTGEATYVEEFKG (서열 번호 56)의 CDR-H2, WDFAYYVEAMDY (서열 번호 57)의 CDR-H3, KASQNVGTNVA (서열 번호 59)의 CDR-L1, SASYRYS (서열 번호 61)의 CDR-L2 및 HQYYTYPLFT (서열 번호 63)의 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, CEA scFv는 EFGMN (서열 번호 55)의 CDR-H1, WINTKTGEATYVEEFKG (서열 번호 56)의 CDR-H2, WDFAYYVEAMDY (서열 번호 57)의 CDR-H3, KASAAVGTYVA (서열 번호 60)의 CDR-L1, SASYRKR (서열 번호 62)의 CDR-L2 및 HQYYTYPLFT (서열 번호 63)의 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, CEA scFv는 EFGMN (서열 번호 56)의 CDR-H1, WINTKTGEATYVEEFKG (서열 번호 56)의 CDR-H2, WDFAHYFQTMDY (서열 번호 58)의 CDR-H3, KASAAVGTYVA (서열 번호 60)의 CDR-L1, SASYRKR (서열 번호 62)의 CDR-L2, 및 HQYYTYPLFT (서열 번호 63)의 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 55-58로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 상보성 결정 영역 (HC-CDR)의 세트를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 부분 및 서열 번호 59-63으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 상보성 결정 영역의 세트를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 부분; 또는 서열 번호 55-58 또는 서열 번호 59-63에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 55-57을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 (HC-CDR)의 세트를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 부분 및 서열 번호 59, 61 및 63을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역의 세트를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 부분; 또는 서열 번호 55-57 또는 서열 번호 59, 61 및 63에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 55-57을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 (HC-CDR)의 세트를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 부분 및 서열 번호 59, 61 및 63을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역의 세트를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 부분을 포함한다.
CEA를 인식하는 예시적인 scFv는 하기 표 4에 나타나있다. 밑줄은 CDR 서열을 나타낸다.
표 4. CEA를 표적으로 하는 예시적인 scFv
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일부 구현예에서, CEA scFv는 서열 번호 64-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CEA scFv는 서열 번호 64-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다. 추가의 예시적인 항-CEA 항체 서열이 Stewart 등 Cancer Immunol. Immunother. 47:299-306 (1999); WO　1999/043817　A1; US　2002/0018750　A1; US　2011/0104148　A1; US　2016/0108131　A1; US20160075795A1; US　2019/0185583　A1; US　2020/0123270　A1; WO　2020/259550　A1; WO　2021/053587　A1; WO 2021/110647 A1에 제공되며; 그 내용은 항-CEA VH, VL, scFv 및/또는 리간드 결합 도메인 서열을 제공할 목적으로 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 144 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 부분 , 및 서열 번호 148 또는 이에 대해 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 부분을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 144를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 부분, 및 서열 번호 148을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 VH 부분과 VL 부분 사이에 링커를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 66-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 68의 scFv 서열; 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제 1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 68의 scFv 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항원 결합 도메인의 CDR에서 하나 이상의 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개) 아미노산 잔기는 또 다른 아미노산으로 치환된다. 치환은 동일한 패밀리의 아미노산 내의 치환이라는 의미에서 "보존적"일 수 있다. 자연적으로 발생하는 아미노산은 다음 4가지 패밀리로 나눌 수 있으며 이러한 패밀리 내에서 보존적 치환이 일어날 것이다: (1) 염기성 측쇄를 갖는 아미노산: 라이신, 아르기닌, 히스티딘; (2) 산성 측쇄를 갖는 아미노산: 아스파르트산, 글루탐산; (3) 하전되지 않은 극성 측쇄를 갖는 아미노산: 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신; 및 (4) 비극성 측쇄를 갖는 아미노산: 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판, 시스테인. 항체의 CDR의 아미노산 서열을 아미노산의 첨가, 결실 또는 치환에 의해 변화시킴으로써, 표적 항원에 대한 결합 친화력 증가와 같은 다양한 효과를 얻을 수 있다.
키메라 항원 수용체 (CAR)
본 개시내용은 제1, 활성화제 수용체 및 이를 포함하는 면역세포를 제공한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 키메라 항원 수용체이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "키메라 항원 수용체 (CAR)"는 T-세포 수용체로부터 유래된 인공 수용체를 지칭할 수 있고 인공 특이성을 특정 면역 효과기 세포에 이식하는 조작된 수용체를 포함한다. CAR은 모노클로날 항체의 특이성을 T 세포에 부여하여, 예를 들어, 입양 세포 요법에 사용하기 위해 많은 수의 특정 T 세포가 생성되도록 하는 데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, CAR은 예를 들어 종양 관련 항원에 대한 세포의 특이성을 지시한다. 예시적인 CAR은 세포내 활성화 도메인, 막관통 도메인, 및 종양 관련 항원 결합 영역을 포함하는 세포외 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 힌지 도메인을 추가로 포함한다. 특정 양태에서, CAR은 CD3 막관통 도메인 및 엔도도메인에 융합되는, 모노클로날 항체로부터 유도된 단일 사슬 가변 단편 (scFv)을 포함한다. 다른 CAR 디자인의 특이성은 수용체의 리간드 (예를 들어, 펩티드)에서 유래될 수 있다. 특정 경우에, CAR은 추가적인 공동자극 신호전달을 위한 도메인, 예를 들어 CD3, 4-1BB, FcR, CD27, CD28, CD137, DAP10, 및/또는 OX40을 포함한다. 일부 경우에, 공동자극 분자, 영상화를 위한 리포터 유전자, 전구약물 첨가 시 T 세포를 조건부로 제거하는 유전자 생성물, 귀소 수용체, 사이토카인 및 사이토카인 수용체를 포함하는 분자가 CAR과 함께 발현될 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 CAR의 세포외 도메인에 융합된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CAR은 세포외 힌지 영역을 포함한다. 힌지 영역의 통합은 CAR-T 세포의 사이토카인 생산에 영향을 미치고 생체 내 CAR-T 세포의 확장을 향상시킬 수 있다. 예시적인 힌지는 IgD 및 CD8 도메인, 예를 들어 IgG1로부터 단리되거나 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 힌지는 CD8α 또는 CD28로부터 단리되거나 유래된다.
일부 구현예에서, 힌지는 CD8α 또는 CD28로부터 단리되거나 유래된다. 일부 구현예에서, CD8α 힌지는 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (서열 번호 71)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD8α 힌지는 서열 번호 71을 포함한다. 일부 구현예에서, CD8α 힌지는 서열 번호 71로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, CD8α 힌지는 ACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGAT (서열 번호 72)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD8α 힌지는 서열 번호 72에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, CD8α 힌지는 서열 번호 156의 서열과 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD8α는 서열 번호 156에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, CD28 힌지는 CTIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP (서열 번호 73)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD28 힌지는 서열 번호 73을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, CD28 힌지는 TGTACCATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCC (서열 번호 74)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD28 힌지는 서열 번호 74에 의해 암호화된다.
본 개시내용의 CAR은 CAR의 세포외 도메인에 융합되는 막관통 도메인을 포함하도록 설계될 수 있다. 일부 구현예에서, CAR의 도메인 중 하나와 자연적으로 연관된 막관통 도메인이 사용된다. 예를 들어, CD28 공동 자극 도메인을 포함하는 CAR은 또한 CD28 막관통 도메인을 사용할 수 있다. 일부 경우에, 막관통 도메인은 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하기 위해 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 이러한 도메인의 결합을 피하기 위해 아미노산 치환에 의해 선택되거나 변형될 수 있다.
막관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 막 결합 단백질 또는 막관통 단백질에서 유래될 수 있다. 막관통 영역은 T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD28, CD3 입실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, 또는 IgG4와 같은 면역글로불린으로부터 단리되거나 또는 유래될 수 있다 (즉, 적어도 이의 막관통 영역(들)을 포함한다). 대안적으로 막관통 도메인은 합성일 수 있으며, 이 경우 그것은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함할 것이다. 일부 구현예에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중체는 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 임의로, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커, 바람직하게는 2 내지 10개 아미노산 길이가 막관통 도메인과 CAR의 세포질 신호전달 도메인 사이의 연결을 형성할 수 있다. 글리신-세린 이중체는 특히 적합한 링커를 제공한다.
본 개시내용의 CAR의 일부 구현예에서, CAR은 CD28 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CD28 막관통 도메인은 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (서열 번호 75)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD28 막관통 도메인은 서열 번호 75을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, CD28 막관통 도메인은 TTCTGGGTGCTGGTCGTTGTGGGCGGCGTGCTGGCCTGCTACAGCCTGCTGGTGACAGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTG (서열 번호 76)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD28 막관통 도메인은 서열 번호 76에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD28 막관통 도메인은 서열 번호 157의 서열과 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD28 막관통 도메인은 서열 번호 157에 의해 암호화된다.
본 개시내용의 CAR의 일부 구현예에서, CAR은 IL-2R베타 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-2R베타 막관통 도메인은 IPWLGHLLVGLSGAFGFIILVYLLI (서열 번호 77)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-2R베타 막관통 도메인은 서열 번호 77을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, IL-2R베타 막관통 도메인은 ATTCCGTGGC TCGGCCACCT CCTCGTGGGC CTCAGCGGGG CTTTTGGCTT CATCATCTTA GTGTACTTGC TGATC (서열 번호 78)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, IL-2R베타 막관통 도메인은 서열 번호 78에 의해 암호화된다.
본 개시내용의 CAR의 세포질 도메인 또는 그렇지 않으면 세포내 신호전달 도메인은 CAR이 배치된 면역 세포의 정상 효과기 기능 중 적어도 하나의 활성화를 담당한다. 용어 "효과기 기능"은 세포의 특화된 기능을 지칭한다. 따라서 용어 "세포내 신호전달 도메인"은 효과기 기능 신호를 변환하고 세포가 특화된 기능을 수행하도록 지시하는 단백질 부분을 지칭한다. 일반적으로 전체 세포내 신호전달 도메인이 사용될 수 있지만, 많은 경우에 전체 도메인을 사용할 필요는 없다. 세포내 신호전달 도메인의 절단된 부분이 사용되는 한, 이러한 절단된 부분은 효과기 기능 신호를 변환하는 한 온전한 사슬 대신에 사용될 수 있다. 일부 경우에, 다수의 세포내 도메인은 도메인이 조합되어 본 개시내용의 CAR-T 세포의 원하는 기능을 달성할 수 있다. 용어 세포내 신호전달 도메인은 따라서 전달하기에 충분한 하나 이상의 세포내 신호전달 도메인의 임의의 절단된 부분을 포함하는 것을 의미한다.
본 개시내용의 CAR에 사용하기 위한 세포내 신호전달 도메인의 예는 T 세포 수용체 (TCR) 및 항원 수용체 후 신호 전달을 개시하기 위해 함께 작용하는 공동-수용체의 세포질 서열, 뿐만 아니라 이들 서열의 임의의 유도체 또는 변이체 및 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열을 포함한다.
따라서, 본 개시내용의 CAR의 세포내 도메인은 적어도 하나의 세포질 활성화 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 활성화 도메인은 CAR T-세포의 효과기 기능을 활성화하는 데 필요한 T-세포 수용체 (TCR) 신호전달이 있음을 보장한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 세포질 활성화는 CD247 분자 (CD3ζ) 활성화 도메인, 자극 킬러 면역글로불린 유사 수용체 (KIR) KIR2DS2 활성화 도메인, 또는 12 kDa의 DNAX-활성화 단백질 (DAP12) 활성화 도메인이다.
일부 구현예에서, CD3ζ 활성화 도메인은 RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열 번호 79)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD3ζ 활성화 도메인은 서열 번호 79를 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, CD3ζ 활성화 도메인은 AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGCGTAGAGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGACTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC (서열 번호 80)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD3ζ 활성화 도메인은 서열 번호 80에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD3ζ 활성화 도메인은 서열 번호 163의 서열과 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD3ζ 활성화 도메인은 서열 번호 163에 의해 암호화된다.
TCR만을 통해 생성된 신호는 종종 T 세포의 완전한 활성화에 불충분하며 2차 또는 공동 자극 신호도 필요하다는 것이 알려져 있다. 따라서, T 세포 활성화는 세포질 신호 서열의 2가지 별개 부류에 의해 매개된다고 말할 수 있다: TCR을 통해 항원-의존성 1차 활성화를 개시하는 서열 (1차 세포질 신호전달 서열) 및 항원-비의존적 방식으로 작용하여 2차 또는 공동 자극 신호를 제공하는 서열 (2차 세포질 신호전달 서열).
1차 세포질 신호전달 서열은 자극 방식 또는 억제 방식으로 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호전달 서열은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 알려진, 신호전달 모티프를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, ITAM은 류신 또는 이소류신으로부터 임의의 2개의 다른 아미노산 (YxxL/I (서열 번호 983)에 의해 분리된 티로신을 함유한다. 일부 구현예에서, 세포질 도메인은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 ITAM을 함유한다. 세포질 도메인을 함유하는 예시적인 ITAM은 CD3ζ 활성화 도메인이다. 본 개시내용의 CAR에 사용될 수 있는 1차 세포질 신호전달 서열을 함유하는 ITAM의 추가 예는 TCRζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD3ζ, CD5, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로부터 유래된 것들을 포함한다.
일부 구현예에서, 단일 ITAM을 포함하는 CD3ζ 활성화 도메인은 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLHMQALPPR (서열 번호 81)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3ζ 활성화 도메인은 서열 번호 81을 포함한다. 일부 구현예에서, 단일 ITAM을 포함하는 CD3ζ 활성화 도메인은 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLHMQALPPR (서열 번호 81)의 아미노산 서열로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, 단일 ITAM을 포함하는 CD3ζ 활성화 도메인은
AGAGTGAAGT TCAGCAGGAG CGCAGACGCC CCCGCGTACC AGCAGGGCCA GAACCAGCTC
TATAACGAGC TCAATCTAGG ACGAAGAGAG GAGTACGATG TTTTGCACAT GCAGGCCCTG
CCCCCTCGC (서열 번호 82)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD3ζ 활성화 도메인은 서열 번호 82에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, CAR의 세포질 도메인은 그 자체로 CD3ζ 신호전달 도메인을 포함하거나 본 개시내용의 CAR의 맥락에서 유용한 임의의 다른 원하는 세포질 도메인(들)과 조합되도록 설계될 수 있다. 예를 들어, CAR의 세포질 도메인은 CD3ζ 사슬 부분 및 공동 자극 도메인을 포함할 수 있다. 공동 자극 도메인은 공동자극 분자의 세포내 도메인을 포함하는 CAR의 일부를 지칭한다. 공동자극 분자는 항원에 대한 림프구의 효율적인 반응에 필요한 항원 수용체 또는 그 리간드 이외의 세포 표면 분자이다. 이러한 분자의 예는 IL-2Rβ, Fc 수용체 감마 (FcRγ), Fc 수용체 베타 (FcRβ), CD3g 분자 감마 (CD3γ), CD3δ, CD3ε, CD5 분자 (CD5), CD22 분자 (CD22), CD79a 분자 (CD79a), CD79b 분자 (CD79b), 암 배아 항원 관련 세포 부착 분자 3 (CD66d), CD27 분자 (CD27), CD28 분자 (CD28), TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9 (4-1BB), TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 4 (OX40), TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 8 (CD30), CD40 분자 (CD40), 프로그램된 세포 사멸 1 (PD-1), 유도성 T 세포 공동자극 (ICOS), 림프구 기능 관련 항원-1 (LFA-1), CD2 분자 (CD2), CD7 분자 (CD7), TNF 수퍼패밀리 구성원 14 (LIGHT), 킬러 세포 렉틴 유사 수용체 C2 (NKG2C) 및 CD276 분자 (B7-H3) c-자극 도메인, 또는 이의 기능적 변이체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 공동 자극 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CAR의 세포내 도메인은 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 공동 자극 도메인은 CD28로부터 단리되거나 유래된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CAR의 세포내 도메인은 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 공동 자극 도메인은 CD28 로부터 단리되거나 유래된다. 일부 구현예에서, CD28 공동 자극 도메인은 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS (서열 번호 83)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD28 공동 자극 도메인은 서열 번호 83)을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, CD28 공동 자극 도메인은 AGGAGCAAGCGGAGCAGACTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCCGGAGGCCTGGCCCCACCCGGAAGCACTACCAGCCCTACGCCCCTCCCAGGGATTTCGCCGCCTACCGGAGC (서열 번호 84)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD28 공동 자극 도메인은 서열 번호 84에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD28 공동 자극 도메인은 서열 번호 160의 서열과 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD28 공동 자극 도메인은 서열 번호 160에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 공동 자극 도메인은 4-1BB로부터 단리되거나 유래된다. 일부 구현예에서, 4-1BB 공동 자극 도메인은 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (서열 번호 161)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 4-1BB 공동 자극 도메인은 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (서열 번호 161)를 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, 4-1BB 공동 자극 도메인은 AAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGGCCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTG (서열 번호 162)의 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, CAR의 세포내 도메인은 CD28 공동 자극 도메인, 4-1BB 공동자극 도메인, 및 CD3ζ 활성화 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서 CAR의 세포내 도메인은 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열 번호 158)의 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 세포내 도메인은 서열 번호 159, 또는 이에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖는 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CAR의 세포내 도메인은 서열 번호 159에 의해 암호화된다.
본 개시내용의 CAR의 세포질 신호전달 부분 내 세포질 도메인은 무작위 또는 지정된 순서로 서로 연결될 수 있다. 임의로, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커, 예를 들어 2 내지 10개 아미노산 길이는 연결을 형성할 수 있다. 글리신-세린 이중체는 적합한 예시를 제공한다. 예시적인 링커는 GGGGSGGGGSGGGGSGG (서열 번호 146)의 서열을 포함한다.
본 개시내용의 CAR의 세포질 신호전달 부분 내 세포질 도메인은 무작위 또는 지정된 순서로 서로 연결될 수 있다. 임의로, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커, 예를 들어 2 내지 10개 아미노산 길이는 연결을 형성할 수 있다. 글리신-세린 이중체는 적합한 예시를 제공한다.
T 세포 수용체 (TCR)
본 개시내용은 제1, 활성화제 수용체 및 이를 포함하는 면역 세포를 제공한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 T 세포 수용체 (TCR)이다.
본 개시내용에서 사용하기 위한 세포내 도메인을 포함하는 예시적인 TCR은 2020년 9월 6일에 출원된 PCT/US2020/045250에 기재되어 있으며, 그 내용은 본원에 참조로 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 때때로 "TCR 복합체" 또는 "TCR/CD3 복합체"라고도 하는 "TCR"은 TCR 알파 사슬, TCR 베타 사슬, 및 때때로 서브유닛으로 지칭되는, 불변 CD3 사슬 (제타, 감마, 델타 및 입실론) 중 하나 이상을 포함하는 단백질 복합체를 지칭한다. TCR 알파 및 베타 사슬은 펩티드-MHC 복합체에 결합하는 이종이량체로서 기능하도록 이황화 연결될 수 있다. TCR 알파/베타 이종이량체가 펩티드-MHC와 결합하면, 관련 불변 CD3 서브유닛에서 TCR 복합체의 구조적 변화가 유도되어, 인산화 및 다운스트림 단백질과의 결합을 유도하여 1차 자극 신호를 전달한다. 예시적인 TCR 복합체에서, TCR 알파 및 TCR 베타 폴리펩티드는 이종이량체를 형성하고, CD3 입실론 및 CD3 델타는 이종이량체를 형성하고, CD3 입실론 및 CD3 감마는 이종이량체를 형성하고, 2개의 CD3 제타는 동종이량체를 형성한다.
임의의 적합한 리간드 결합 도메인은 본원에 기재된 TCR의 세포외 도메인, 힌지 도메인 또는 막관통에 융합될 수 있다. 예를 들어, 리간드 결합 도메인은 항체 또는 TCR의 항원 결합 도메인이거나, 항체 단편, Vβ 단독 도메인, 선형 항체, 단일 사슬 가변 단편 (scFv), 또는 단일 도메인 항체 (sdAb)을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 리간드 결합 도메인은 하나 이상의 TCR 서브유닛의 하나 이상의 세포외 도메인 또는 막관통 도메인에 융합된다. TCR 서브유닛은 TCR 알파, TCR 베타, CD3 델타, CD3 입실론, CD3 감마 또는 CD3 제타일 수 있다. 예를 들어, 리간드 결합 도메인은 TCR 알파, 또는 TCR 베타에 융합될 수 있거나, 리간드 결합의 일부는 2개의 서브유닛에 융합될 수 있으며, 예를 들어 리간드 결합 도메인의 일부는 TCR 알파 및 TCR 베타 모두에 융합될 수 있다.
TCR 서브유닛은 TCR 알파, TCR 베타, CD3 제타, CD3 델타, CD3 감마 및 CD3 입실론을 포함한다. TCR 알파, TCR 베타 사슬, CD3 감마, CD3 델타, CD3 입실론, 또는 CD3 제타, 또는 이의 단편 또는 유도체 중 임의의 하나 이상은 본 개시내용의 자극 신호를 제공할 수 있는 하나 이상의 도메인에 융합될 수 있으며, 이로써 TCR 기능 및 활성을 향상시킨다.
임의의 공급원으로부터 단리되거나 유래된 TCR 막관통 도메인은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 간주된다. 막관통 도메인은 천연 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 임의의 막 결합 단백질 또는 막관통 단백질에서 유래될 수 있다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 TCR 복합체가 표적에 결합할 때마다 세포내 도메인(들)에 신호 전달할 수 있다. 특정 용도의 막관통 도메인은 적어도 예를 들어, TCR의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD3 델타, CD3 입실론 또는 CD3 감마, CD28, CD3 입실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154의 막관통 영역(들)을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 힌지, 예를 들어, 인간 단백질로부터의 힌지를 통해 TCR의 폴리펩티드의 세포외 영역, 예를 들어, TCR 알파 또는 베타 사슬의 항원 결합 도메인에 부착될 수 있다. 예를 들어, 힌지는 인간 면역글로불린 (Ig) 힌지, 예를 들어, IgG4 힌지, 또는 CD8a 힌지일 수 있다. 일부 구현예에서, 힌지는 CD8α 또는 CD28로부터 단리되거나 유래된다.
일부 구현예에서, 세포외 리간드 결합 도메인은 TCR의 하나 이상의 막관통 도메인에 부착된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 TCR 알파 막관통 도메인, TCR 베타 막관통 도메인, 또는 둘 모두를 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통은 CD3 제타 막관통 도메인을 포함한다.
막관통 도메인 막관통 영역에 인접한 하나 이상의 추가 아미노산, 예를 들어, 막관통이 유래된 단백질의 세포외 영역과 관련된 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 세포외 영역의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 최대 15개 아미노산) 및/또는 막관통이 유래된 단백질의 세포내 영역과 관련된 하나 이상의 아미노산 (세포내 영역의 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 최대 15개 아미노산)을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 이러한 도메인이 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 결합하는 것을 피하기 위해, 예를 들어, 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하기 위해 아미노산 치환에 의해 선택되거나 변형될 수 있다.
존재하는 경우, 막관통 도메인은 천연 TCR 막관통 도메인, 이종 막 단백질로부터의 천연 막관통 도메인, 또는 인공 막관통 도메인일 수 있다. 막관통 도메인은 막 앵커 도메인일 수 있다. 제한 없이, 천연 또는 인공 막관통 도메인은 막관통 도메인은 약 20개 아미노산의 소수성 a-나선을 포함할 수 있으며, 종종 막관통 세그먼트의 측면에 양전하를 가진다. 막관통 도메인은 하나의 막관통 세그먼트 또는 하나 초과의 막관통 세그먼트를 가질 수 있다. 막관통 도메인/세그먼트의 예측은 공개적으로 이용 가능한 예측 도구를 사용하여 이루어질 수 있다 (예를 들어 TMHMM, Krogh 등 Journal of Molecular Biology 2001; 305(3):567-580; 또는 TMpred, Hofmann & Stoffel Biol. Chem. Hoppe-Seyler 1993; 347: 166). 막 앵커 시스템의 비제한적 예는 혈소판 유래 성장 인자 수용체 (PDGFR) 막관통 도메인, 글리코실포스파티딜이노시톨 (GPI) 앵커 (신호 서열에 번역 후 첨가됨) 등을 포함한다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 TCR 알파 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, TCR 알파 막관통 도메인은 VIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLW (서열 번호 85)의 서열에 대해 적어도 85% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 96% 동일성, 적어도 97% 동일성, 적어도 98% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, TCR 알파 막관통 도메인은 서열 번호 85을 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, TCR 알파 막관통 도메인은 GTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGG (서열 번호 86)의 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 TCR 베타 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, TCR 베타 막관통 도메인은 TILYEILLGKATLYAVLVSALVL (서열 번호 87)의 서열에 대해 적어도 85% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 96% 동일성, 적어도 97% 동일성, 적어도 98% 동일성, 적어도 99% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, TCR 베타 막관통 도메인은 서열 번호 87를 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, TCR 베타 막관통 도메인은 ACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTG (서열 번호 88)의 서열에 의해 암호화된다.
본 개시내용의 TCR은 하나 이상의 세포내 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 막관통 도메인에 자극 신호를 제공할 수 있는 하나 이상의 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 자극 신호를 제공할 수 있는 제1 세포내 도메인 및 자극 신호를 제공할 수 있는 제2 세포내 도메인을 포함한다. 다른 구현예에서, 세포내 도메인은 자극 신호를 제공할 수 있는 제1, 제2 및 제3 세포내 도메인을 포함한다. 자극 신호를 제공할 수 있는 세포내 도메인은 CD28 분자 (CD28) 도메인, LCK 원발암유전자, Src 계열 티로신 키나제 (Lck) 도메인, TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9 (4-1BB) 도메인, TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 18 (GITR) 도메인, CD4 분자 (CD4) 도메인, CD8a 분자 (CD8a) 도메인, FYN 원발암유전자, Src 계열 티로신 키나제 (Fyn) 도메인, T 세포 수용체 관련 단백질 키나제 70의 제타 사슬 (ZAP70) 도메인, T 세포 (LAT) 도메인의 활성화를 위한 링커, 림프구 세포질 단백질 2 (SLP76) 도메인, (TCR) 알파, TCR 베타, CD3 델타, CD3 감마 및 CD3 입실론 세포내 도메인으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 적어도 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 세포내 신호전달 도메인은 세포의 기능, 예를 들어 TCR 함유 세포, 예를 들어, TCR- 발현 T-세포의 면역 효과기 기능을 촉진하는 신호를 생성한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 제1 수용체의 세포내 도메인은 적어도 하나의 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 예를 들어, CD3 감마, 델타 또는 입실론의 세포내 도메인은 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인은 동일한 단백질, 예를 들어 T-세포 수용체 (TCR) 알파, TCR 베타, CD3 델타, CD3 감마, CD3 입실론 또는 CD3 제타로부터 단리되거나 유래된다.
본 개시내용의 활성화제 수용체에서 사용하기 위한 세포내 도메인의 예는 TCR 알파, TCR 베타, CD3 제타, 및 4-1BB의 세포질 서열, 및 항원 수용체 결합 후 신호 전달을 개시하기 위해 함께 작용하는 세포내 신호전달 공동-수용체, 뿐만 아니라 이들 서열의 임의의 유도체 또는 변이체 및 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 재조합 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 1차 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 예시적인 1차 세포내 신호전달 도메인은 1차 자극, 또는 항원 의존적 자극을 담당하는 단백질로부터 유래된 것들을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 CD3 델타 세포내 도메인, CD3 입실론 세포내 도메인, CD3 감마 세포내 도메인, CD3 제타 세포내 도메인, TCR 알파 세포내 도메인 또는 TCR 베타 세포내 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 TCR 알파 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, TCR 알파 세포내 도메인은 Ser-Ser를 포함한다. 일부 구현예에서, TCR 알파 세포내 도메인은 TCCAGC의 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 TCR 베타 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, TCR 베타 세포내 도메인은 다음 서열에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 90% 동일성을 갖거나 동일한 아미노산 서열을 포함한다: MAMVKRKDSR (서열 번호 89). 일부 구현예에서, TCR 베타 세포내 도메인은 서열 번호 89를 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, TCR 베타 세포내 도메인은 ATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGA (서열 번호 90)의 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 적어도 하나의 자극 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 1차 세포내 신호전달 도메인, 예를 들어 CD3 델타, CD3 감마 및 CD3 입실론 세포내 도메인, 및 하나의 추가 자극 세포내 도메인, 예를 들어 공동 자극 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 1차 세포내 신호전달 도메인, 예를 들어 CD3 델타, CD3 감마 및 CD3 입실론 세포내 도메인, 및 2개의 추가 자극 세포내 도메인을 포함한다.
예시적인 공동 자극 세포내 신호전달 도메인은 공동 자극 신호, 또는 항원 독립적 자극을 담당하는 단백질로부터 유래된 것들을 포함한다. 공동 자극 분자는 MHC 클래스 I 분자, BTLA, Toll 리간드 수용체, 뿐만 아니라 DAP10, DAP12, CD30, LIGHT, OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18) 4-1BB (CD137, TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9), 및 CD28 분자 (CD28)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 공동 자극 단백질은 다음 단백질 패밀리로 나타낼 수 있다: TNF 수용체 단백질, 면역글로불린 유사 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 신호전달 림프구 c 활성화 분자 (SLAM 단백질), 및 활성화 NK 세포 수용체. 이러한 분자의 예는 CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, GITR, CD30, CD40, ICOS, BAFFR, HVEM, 림프구 기능 관련 항원-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, CD83, CD4와 특이적으로 결합하는 리간드 등을 포함한다. 공동 자극 도메인은 이것이 유래된 분자, 또는 이의 기능적 변이체의 전체 세포내 부분, 또는 전체 천연 세포내 신호전달 도메인을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 자극 도메인은 공동 자극 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 공동 자극 도메인은 CD28 또는 4-1BB 공동 자극 도메인을 포함한다. CD28 및 4-1BB 완전한 T 세포 활성화에 필요하고 T 세포 효과기 기능을 향상시키는 것으로 알려진 잘 특징규명된 공동 자극 분자이다. 예를 들어, CD28 및 4-1BB는 키메라 항원 수용체 (CAR)에 활용되어 CD3 제타 신호전달 도메인만을 함유하는 1세대 CAR에 비해 사이토카인 방출, 세포 용해 기능, 및 지속성을 향상시킨다. 마찬가지로, TCR에 공동 자극 도메인, 예를 들어 CD28 및 4-1BB 도메인을 포함하면 T 세포 효과기 기능을 증가시킬 수 있으며 특히 일반적으로 표면에서 하향 조절되는 공동 자극 리간드가 없는 경우 공동 자극을 허용할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 도메인은 CD28 세포내 도메인 또는 4-1BB 세포내 도메인을 포함한다.
억제 수용체
본 개시내용은 암 세포에서 소실된 비-표적 항원, 예를 들어 유전자의 대립형질 변이체에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제2 수용체를 제공한다. 비-표적 대립형질 변이체는 제한 없이 비-표적 대립형질 변이체 발현에 영향을 미치는 후생유전학적 변화, 비-표적 대립형질 변이체를 암호화하는 유전자에 대한 돌연변이, 비-표적 대립형질 변이체의 발현을 조절하는 세포 신호전달의 파괴, 염색체 소실, 게놈 유전자좌의 부분적 또는 완전한 결실, 핵산 또는 이종염색질의 변형을 통한 유전자 침묵, 또는 다른 메커니즘을 통한 발현 상실과 같은 임의의 메커니즘을 통해 암 세포에서 소실될 수 있다. 본원에 개시된 조성물 및 방법의 변형에서, 치료된 세포 또는 대상체는 비-유전적 변화로 인해 비-표적 대립형질 변이체의 발현 상실을 나타낼 수 있다. 따라서 본 개시내용은 세포를 죽이고/이거나 이형접합성의 소실을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 원인으로부터 비-표적 항원의 발현이 결여된 대상체를 치료하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다.
비-표적 항원은 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)와 복합체 내의 단백질, 또는 이의 항원 펩티드일 수 있고, 여기서 비-표적 항원은 다형성을 포함한다. 비-표적 항원은 다형성이기 때문에, 암세포에서 이형접합성의 소실을 통해 발생할 수 있는, 비-표적 항원을 암호화하는 유전자의 단일 카피의 소실은 유전자의 다른 다형성 변이체를 유지하는 암 세포를 산출하지만, 비-표적 항원을 소실한다. 예를 들어, HLA 유전자좌에서 HLA-A*02 및 HLA-A*01 대립유전자를 갖는 대상체는 HLA-A*02 대립유전자만 소실되는 암에 걸릴 수 있다. 그러한 대상체에서, 억제제 수용체가 HLA-A*02 (또는 다른 비-표적 항원)에 특이적인 것으로 설계되기 때문에 HLA-A*01 단백질은 존재하지만, 암 세포와 마주치는 면역 세포의 억제 수용체에 의해 인식되지 않는다. 정상 비-악성 세포에서, HLA-A*02 (또는 다른 비-표적 항원)가 존재하고 조작된 면역 세포의 활성화를 억제한다. 이형접합성이 소실된 암세포에서는, HLA-A*02 대립형질 변이체 (또는 다른 비-표적 항원)가 소실된다. 억제 수용체를 발현하도록 조작된 면역 세포는 억제 수용체가 암 세포에 없는 HLA-A*02 (또는 다른 비-표적 항원)에만 반응하기 때문에, 억제 수용체로부터 억제 신호를 받지 않는다. 이 메커니즘에 의해, 면역 세포는 선택적으로 활성화되어, CEA을 발현하지만 이형접합성의 소실로 인해 HLA-A*02 (또는 또 다른 비-표적 항원)를 소실한 암세포를 선택적으로 사멸시킨다. HLA-A를 여기서 예로 사용한다. 유사한 다형성 변이가 다른 MHC 유전자 및 다른 비-MHC 유전자 집단에서도 발생한다. 따라서, 본 개시내용은 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 TNFRSF11A, ACHRB, ITGAE, TRPV1, 및 SREC, 또는 이의 항원 펩티드로부터 선택되는 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인를 포함하는 제2 수용체를 제공하며, 비-표적 항원은 다형성, 및 이를 포함하는 면역 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 수용체는 억제 키메라 항원 수용체 (억제 수용체)이다.
일부 구현예에서, 제2 수용체는 억제 수용체이다. 일부 구현예에서, 제2 수용체는 인간화된다.
일부 구현예에서, 제2 수용체는 서열 번호 164, 또는 이에 대해 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 174 또는 이에 대해 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 동일성을 공유하는 서열.
본 개시내용은 비-표적 항원의 단일 아미노산 변이 대립유전자를 구별할 수 있는 세포외 리간드 결합을 포함하는 억제 수용체인, 제2 수용체를 제공한다. 비-표적 항원의 대립형질 변이체를 구별하는 이러한 능력은 제2 수용체가 리간드 결합 도메인에 의해 인식되는 대립유전자를 발현하는 비-표적 세포의 존재 하에 제2 수용체를 포함하는 면역 세포의 활성화를 억제할 수 있게 한다. 그러나, 면역 세포의 활성화는 대립유전자를 소실한 표적 세포, 예를 들어 이형접합성의 소실을 통해 유전자의 하나의 대립 유전자를 소실한 암 세포의 존재 하에서 억제되지 않는다.
본 개시내용은 비-표적 항원의 상이한 발현 수준을 구별할 수 있는 세포외 리간드 결합을 포함하는 억제 수용체인 제2 수용체를 제공한다. 이는 제2 수용체가 제2 수용체에 대한 리간드를 발현하는 비-표적 세포의 존재 하에 제2 수용체를 포함하는 면역 세포의 활성화를 억제할 수 있게 하지만, 제2 수용체에 대한 리간드를 낮은 수준으로 발현하거나, 발현하지 않는 암 세포의 존재 하에 면역 세포의 활성화를 허용할 수 있다.
억제제 리간드
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 표적 세포에 의해 발현되지 않고, 비-표적 세포에 의해 발현된다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 건강한 세포, 즉 암세포가 아닌 세포에 의해 발현된다. 일부 구현예에서, 표적 세포는 이형접합성 소실 (LOH)을 통해 비-표적 항원의 발현을 상실한 복수의 암 세포이다. 일부 구현예에서, 비-표적 세포는 표적 및 비-표적 항원 모두를 발현하는 복수의 건강한 세포 (즉, 비-암, 정상, 또는 건강한 세포)이다.
표적 세포에 의해 발현되지 않는 비-표적 세포에 의해 발현되는 임의의 세포 표면 분자는 제2 수용체 세포외 리간드 결합 도메인에 대한 적합한 비-표적 항원일 수 있다. 예를 들어, 세포 부착 분자, 세포-세포 신호전달 분자, 세포외 도메인, 화학주성에 관여하는 분자, 당단백질, G 단백질 결합 수용체, 막관통, 신경전달물질 수용체 또는 전압 개폐 이온 채널은 비-표적 항원으로 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 TNFRSF11A, ACHRB, ITGAE, TRPV1, 및 SREC의 다형성 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 TNFRSF11A, ACHRB, ITGAE, TRPV1, 또는 SREC의 다형성 잔기를 포함하는 항원 펩티드이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서의 암 세포 특이적 항원의 펩티드 항원이다.
HLA-A, HLA-B, HLA-C 또는 HLA-E 중 임의의 것을 포함하는 비-표적 MHC-1 (pMHC) 항원이 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 간주된다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, MHC는 MHC 클래스 I이다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 단백질은 인간 백혈구 항원(HLA) 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A, HLA-B, HLA-C, 또는 HLA-E로 이루어진 군으로부터 선택된 HLA 클래스 I 단백질의 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A 대립유전자는 HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*03 또는 HLA-A*11을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-B 대립유전자는 HLA-B*07을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-C 대립유전자는 HLA-C*07을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A의 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A의 대립유전자는 HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*03 또는 HLA-A*11을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*69를 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 대립유전자 HLA-B를 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-B의 대립유전자는 HLA-B*11을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-C의 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-C 대립유전자는 HLA-C*07을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 TNFRSF11A, ACHRB, ITGAE, TRPV1, 및 SREC로 이루어진 군으로부터 선택된다. CEA 및 TNFRSF11A (RANK)는 T 세포에서 낮거나/부재하여, 다른 리간드의 시스 챌린지(cis challenge)를 회피한다. TNFRSF11A 유전자좌에 대한 LOH 빈도는 극히 높다 (직장암에서 ~90%).
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 MHC-I과의 복합체에서 TNFRSF11A 또는 이의 항원 펩티드를 포함한다. 인간 TNFRSF11A는 Chr18q: 35,237,593 - 37,208,541에 위치하고, 결장직장암 세포에서 LOH를 통해 자주 소실된다.
야생형 인간 TNFRSF11A 이소형 1은 NCBI 기록 번호 NP_003830.1에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, TNFRSF11A는 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00016
일부 구현예에서, TNFRSF11A는 서열 번호 13에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. TNFRSF11A의 다형성 잔기는 서열 번호 13에서 볼드체로 표시되어 있고 밑줄이 쳐져 있다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 TNFRSF11A의 다형성을 포함한다. 예를 들어, 비-표적 항원은 TNFRSF11A의 다형성 잔기를 포함하는 TNFRSF11A로부터 유래된 펩티드를 포함한다. TNFRSF11A의 다형성 잔기는 서열 번호 13의 아미노산 잔기 141 및 192를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 13의 아미노산 141 (rs35211496, H141Y) 또는 192 (rs1805034, V192A)를 포함하는 TNFRSF11A의 펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, TNFRSF11A의 다형성은 TNFRSF11A의 H141/A192V 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF11A의 다형성은 다음의 서열을 포함한다:
Figure pct00017
일부 구현예에서, TNFRSF11A의 다형성은 TNFRSF11A의 H141Y/A192 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF11A의 다형성은 다음의 서열을 포함한다:
Figure pct00018
일부 구현예에서, TNFRSF11A의 다형성은 TNFRSF11A의 H141Y/A192V 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFRSF11A의 다형성은 다음의 서열을 포함한다:
Figure pct00019
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 13의 위치 192에서 A를 갖는 TNFRSF11A 다형성을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 13의 위치 192에서 V를 갖는 TNFRSF11A 리간드보다 서열 번호 13의 위치 192에서 A를 갖는 TNFRSF11A 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 13의 위치 192에서 V를 갖는 TNFRSF11A 다형성을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 13의 위치 192에서 A를 갖는 TNFRSF11A 리간드보다 서열 번호 13의 위치 192에서 V를 갖는 TNFRSF11A 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 13의 위치 141에서 H를 갖는 TNFRSF11A 다형성을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 13의 위치 141에서 Y를 갖는 TNFRSF11A 리간드보다 서열 번호 13의 위치 141에서 H를 갖는 TNFRSF11A 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 13의 위치 141에서 Y를 갖는 TNFRSF11A 다형성을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 13의 위치 141에서 H를 갖는 TNFRSF11A 리간드보다 서열 번호 13의 위치 141에서 Y를 갖는 TNFRSF11A 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는 리간드 결합 도메인을 포함한다.
마우스 TNFRSF11A 이소형 1은 NCBI 기록 번호 AH19185.1에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, TNFRSF11A는 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00020
일부 구현예에서, TNFRSF11A는 서열 번호 32에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. TNFRSF11A의 다형성 잔기는 서열 번호 32에서 볼드체로 표시되어 있고 밑줄이 쳐져 있다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 TNFRSF11A의 다형성을 포함한다. TNFRSF11A의 다형성 잔기는 서열 번호 32의 142 및 193을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 32의 아미노산 142 또는 193을 포함하는 TNFRSF11A의 펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 MHC-I과의 복합체에 인테그린 알파-E (ITGAE) 또는 그의 항원 펩티드를 포함한다. ITGAE는 세포외 도메인에 2개의 다형성을 포함한다: 0.2654의 마이너 대립유전자 빈도 (minor allele frequency, MAF)를 갖는 R950W (rs1716) 및 0.282의 MAF를 갖는 V1019A/V1019G (rs2976230).
인간 ITGAE (R950/V10109)는 NCBI 기록 번호 NP_002199.3에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, ITGAE는 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00021
일부 구현예에서, ITGAE는 서열 번호 14와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. ITGAE의 다형성 잔기는 서열 번호 14에서 볼드체로 표시되고 밑줄이 쳐져 있다.
일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 ITGAE의 R950W/V1019 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00022
일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 ITGAE의 R950/V1019A 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00023
일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 ITGAE의 R950/V1019G 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00024
일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 ITGAE의 R950W/V1019 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00025
일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 ITGAE의 R950W/V1019A 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00026
일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 ITGAE의 R950W/V1019G 대립유전자를 포함한다. 일부 구현예에서, ITGAE의 다형성은 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00027
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 ITGAE의 다형성을 포함한다. 예를 들어, 비-표적 항원은 ITGAE의 다형성 잔기를 포함하는 ITGAE로부터 유래된 펩티드를 포함한다. ITGAE의 다형성 잔기는 서열 번호 14의 아미노산 950 및 1019를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 14의 아미노산 950 또는 1019를 포함하는 ITGAE의 펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 14의 위치 950에서 R을 갖는 ITGAE 다형성을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 14의 위치 950에서 W를 갖는 ITGAE 리간드보다 서열 번호 14의 위치 950에서 R을 갖는 ITGAE 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 14의 위치 950에서 W를 갖는 ITGAE 다형성을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 14의 위치 950에서 R을 갖는 ITGAE 리간드보다 서열 번호 14의 위치 950에서 W를 갖는 ITGAE 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 14의 위치 1019에서 V를 갖는 ITGAE 다형성을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 14의 위치 1019에서 A 또는 G를 갖는 ITGAE 리간드보다 서열 번호 14의 위치 1019에서 V를 갖는 ITGAE 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 14의 위치 1019에서 A를 갖는 ITGAE 다형성을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 14의 위치 1019에서 V 또는 G를 갖는 ITGAE 리간드보다 서열 번호 14의 위치 1019에서 A를 갖는 ITGAE 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 14의 위치 1019에서 G를 갖는 ITGAE 다형성을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 14의 위치 1019에서 V 또는 A를 갖는 ITGAE 리간드보다 서열 번호 14의 위치 1019에서 G를 갖는 ITGAE 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는 리간드 결합 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 MHC-I과의 복합체에 ACHRB (CHRNB 또는 CHRNB1로도 지칭됨) 또는 이의 항원 펩티드를 포함한다. 인간 ACHRB는 NCBI 기록 번호 NP_000738.2에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, ACHRB는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00028
일부 구현예에서, ACHRB는 서열 번호 33에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. ACHRB의 다형성 잔기는 서열 번호 33에서 볼드체로 표시되고 밑줄이 쳐져 있다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 ACHRB의 다형성을 포함한다. 예를 들어, 비-표적 항원은 ACHRB의 다형성 잔기를 포함하는 ACHRB로부터 유래된 펩티드를 포함한다. ACHRB의 다형성 잔기는 서열 번호 33의 32를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 33의 아미노산 32를 포함하는 ACHRB의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 33의 아미노산 32에 E를 포함하는 ACHRB의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 33의 아미노산 32에 G를 포함하는 ACHRB의 펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 MHC-I과의 복합체에 TRPV1 또는 이의 항원 펩티드를 포함한다. 인간 TRPV1은 NCBI 기록 번호 NP_542435.2에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, TRPV1은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00029
일부 구현예에서, TRPV1은 서열 번호 34와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 94%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. TRPV1의 다형성 잔기는 서열 번호 34에서 볼드체로 표시하고 밑줄이 쳐져 있다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 TRPV1의 다형성을 포함한다. 예를 들어, 비-표적 항원은 TRPV1의 다형성 잔기를 포함하는 TRPV1로부터 유래된 펩티드를 포함한다. TRPV1의 다형체 잔기는 서열 번호 34의 위치 585, 459 및 469를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 34의 아미노산 585, 459 또는 469를 포함하는 TRPV1의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 34의 아미노산 585에서 I를 포함하는 TRPV1의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 34의 아미노산 585에서 V를 포함하는 TRPV1의 펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 MHC-I과의 복합체에서 SREC 또는 이의 항원 펩티드를 포함한다. 인간 SREC 이소형 1은 NCBI 기록 번호 NP_003684.2에 기재되어 있으며, 그 내용은 본원에 전문이 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, SREC는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00030
일부 구현예에서, SREC는 서열 번호 35에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 94%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. SREC의 다형성 잔기는 서열 번호 35에서 볼드체로 표시되고 밑줄이 쳐져 있다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 SREC의 다형성을 포함한다. 예를 들어, 비-표적 항원은 SREC의 다형성 잔기를 포함하는 SREC로부터 유래된 펩티드를 포함한다. SREC의 다형성 잔기는 서열 번호 35의 위치 339 및 425를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 35의 아미노산 339 또는 425를 포함하는 SREC의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 35의 아미노산 425에서 A를 포함하는 SREC의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 35의 아미노산 425에서 V를 포함하는 SREC의 펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 MHC-I과의 복합체에서 C-X-C 모티프 케모카인 리간드 16 (CXCL16) 또는 이의 항원 펩티드를 포함한다. 인간 CXCL16 전구체는 NCBI 기록 번호 NP_001094282.1에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, CXCL16은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00031
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 CXCL16의 다형성을 포함한다. 예를 들어, 비-표적 항원은 CXCL16의 다형성 잔기를 포함하는 CXCL16으로부터 유래된 펩티드를 포함한다. CXCL16의 다형성 잔기는 서열 번호 136의 위치 142 및 200을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 136의 아미노산 142 또는 200을 포함하는 CXCL16의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 136의 아미노산 200에서 A를 포함하는 CXCL16의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 136의 아미노산 200에서 V를 포함하는 CXCL16의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 136의 아미노산 142에서 I를 포함하는 CXCL16의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 136의 아미노산 142에서 T를 포함하는 CXCL16의 펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 MHC-I과의 복합체에서 콜렉틴 서브패밀리 구성원 12 (COLEC12) 또는 이의 항원 펩티드를 포함한다. 인간 COLEC12는 NCBI 기록 번호 NP_569057.2에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, COLEC12는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00032
일부 구현예에서, COLEC12는 서열 번호 137에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 94%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. COLEC12의 다형성 잔기는 서열 번호 137에서 볼드체로 표시되고 밑줄이 쳐져 있다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 COLEC12의 다형성을 포함한다. 예를 들어, 비-표적 항원은 COLEC12의 다형성 잔기를 포함하는 COLEC12로부터 유래된 펩티드를 포함한다. COLEC12의 다형성 잔기는 서열 번호 137의 위치 522를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 137의 아미노산 522를 포함하는 COLEC12의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 137의 아미노산 522에서 S를 포함하는 COLEC12의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 137의 아미노산 522에서 P를 포함하는 COLEC12의 펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 MHC-I과의 복합체에서 APC 하향 조절 1(APCDD1) 또는 이의 항원 펩티드를 포함한다. 예시적인 인간 APCDD1은 UniProtKB 기록 번호 Q8J025에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, APCDD1은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00033
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 APCDD1의 다형성을 포함한다. APCDD1의 예시적인 다형체은 서열 번호 138의 위치 150에서의 V, I 또는 L일 수 있는 rs3748415을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 138의 아미노산 150을 포함하는 APCDD1의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 138의 아미노산 150에서 V를 포함하는 APCDD1의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 138의 아미노산 150에서 I를 포함하는 APCDD1의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 138의 아미노산 150에서 L을 포함하는 APCDD1의 펩티드를 포함한다.
추가의 예시적인 인간 APCDD1은 UniProtKB 기록 번호 V9GY82에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, APCDD1은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00034
APCDD1의 예시적인 다형성은 서열 번호 139의 위치 165에서 Y 또는 S일 수 있는 rs1786683을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 139의 아미노산 165를 포함하는 APCDD1의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 139의 아미노산 165에서 Y를 포함하는 APCDD1의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 139의 아미노산 165에서 S를 포함하는 APCDD1의 펩티드를 포함한다.
추가의 예시적인 인간 APCDD1은 UniProt 기록 번호 J3QSE3에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, APCDD1은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00035
APCDD1의 예시적인 다형체는 서열 번호 140의 위치 28에서 Q 또는 R일 수 있는 rs9952598을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 140의 아미노산 28을 포함하는 APCDD1의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 140의 아미노산 28에서 Q를 포함하는 APCDD1의 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 서열 번호 140의 아미노산 28에서 R을 포함하는 APCDD1의 펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, APCDD1은 서열 번호 138-140 중 어느 하나에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 94%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. APCDD1의 다형성 잔기는 서열 번호 138-140에서 볼드체로 표시되고 밑줄이 쳐져 있다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*03, HLA-A*11, HLA-B*07 또는 HLA-C*07을 포함한다. 본원에 기재된 구현예에서 사용하기 위한, 특정 HLA 대립유전자에 결합하거나 이를 인식하는 다양한 단일 가변 도메인이 표 5에 기재되어 있다. 이러한 scFv는, 예를 들어 그리고 비제한적으로, 하기 표 5에 나타낸 펩티드-비의존적 방식으로 HLA 대립유전자에 결합하는 하기 마우스 및 인간화 scFv 항체 (상보성 결정 영역은 밑줄 쳐져 있음)를 포함한다:
표 5. HLA scFv 결합 도메인
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
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Figure pct00050
Figure pct00051
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Figure pct00053
일부 구현예에서, 제2 억제 수용체의 리간드 결합 도메인은 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*3, HLA-A*11, HLA-B*07 또는 HLA-C*07에 결합하고, 서열 번호 91-102, 250-260, 262, 264, 266, 268, 270, 272, 274, 276 및 278-345, 또는 표 5에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*3, HLA-A*11, HLA-B*07 또는 HLA-C*07에 결합하고, 표 5에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*01을 포함하고, 제2 수용체의 비-표적 세포외 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열 번호 337-345를 포함하는 HLA-A*01 scFv 서열, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*02를 포함하고, 제2 수용체의 비-표적 세포외 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열 번호 91-102를 포함하는 HLA-A*02 scFv 서열, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*03을 포함하고, 제2 수용체의 비-표적 세포외 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열 번호 323-336을 포함하는 HLA-A*03 scFv 서열, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*11을 포함하고, 제2 수용체의 비-표적 세포외 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열 번호 260, 262, 264, 266, 268, 270, 272, 274 또는 276을 포함하는 HLA-A*11 scFv 서열, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-B*07을 포함하고, 제2 수용체의 비-표적 세포외 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열 번호 250-259를 포함하는 HLA-B*07 scFv 서열, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-C*07을 포함하고, 제2 수용체의 비-표적 세포외 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열 번호 278-322를 포함하는 HLA-C*07 scFv 서열, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*03, HLA-A*11, HLA-B*07 및 HLA-C*07 리간드 결합 도메인에 대한 예시적인 중쇄 및 경쇄 CDR (각각 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3, 또는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)이 하기 표 6에 나타나 있다.
표 6. HLA 항원 결합 도메인에 상응하는 CDR
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
Figure pct00061
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 억제 수용체의 리간드 결합 도메인은 표 6에 제시된 CDR 서열을 포함하는 HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*03 또는 HLA-A*11 리간드 결합 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-B를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 억제 수용체의 리간드 결합 도메인은 표 6에 제시된 CDR 서열을 포함하는 HLA-B*07 리간드 결합 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-C를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 억제 수용체의 리간드 결합 도메인은 표 6에 제시된 CDR 서열을 포함하는 HLA-C*07 리간드 결합 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A, HLA-B 또는 HLA-C 단백질의 대립형질 변이체와 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*03, HLA-A*11, HLA-B*07, 또는 HLA-C*07에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*01에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 표 6에 개시된 바와 같은 HLA-A*01 상보성 결정 영역 (CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 표 6의 HLA-A*01 CDR에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*02에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 표 6에 개시된 바와 같은 HLA-A*02 상보성 결정 영역 (CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 표 6의 HLA-A*02 CDR에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 103-108 또는 서열 번호 109-114의 상보성 결정 영역 (CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 서열 번호 103-108 또는 서열 번호 109-114의 CDR에 비해 최대 1, 2 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*03에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 표 6에 개시된 바와 같은 HLA-A*03 상보성 결정 영역 (CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 표 6의 HLA-A*03 CDR에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*11에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 표 6에 개시된 바와 같은 HLA-A*11 상보성 결정 영역 (CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 표 6의 HLA-A*11 CDR에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-B*07에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 표 6에 개시된 바와 같은 HLA-B*07 상보성 결정 영역 (CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 표 6의 HLA-B*07 CDR에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-C*07에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 표 6에 개시된 바와 같은 HLA-C*07 상보성 결정 영역 (CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 표 6의 HLA-C*07 CDR에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함한다.
임의의 리간드 결합 도메인의 추가 구현예에서, 각각의 CDR 서열은 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실을 가질 수 있다. CDR 서열은 치환, 결실, 또는 삽입을 허용할 수 있다. 서열 정렬 도구, 통상적인 실험 및 공지된 검정을 사용하여, 당업자는 과도한 실험 없이 CDR 서열에서 1, 2, 3개 이상의 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 변이체 서열을 생성하고 시험할 수 있다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*02를 포함하고, 제2 수용체의 리간드 결합 도메인은 HLA-A*02 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 리간드 결합 도메인은 HLA-A*02를 포함하는 pMHC 복합체의 펩티드와는 독립적으로 HLA-A*02에 결합한다. 일부 구현예에서, HLA-A*02 리간드 결합 도메인은 scFv 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*02 리간드 결합 도메인은 서열 번호 91-102 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*02 리간드 결합 도메인은 서열 번호 91-102 중 어느 하나의 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, HLA-A*02 scFv는 서열 번호 103-114 중 어느 하나의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호 103-114 중 어느 하나와 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인의 중쇄는 서열 번호 103-114 중 어느 하나의 중쇄 CDR을 포함하고, 여기서 항원 결합 도메인의 경쇄는 서열 번호 103-114 중 어느 하나의 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*02 항원 결합 도메인은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열 번호 106-108 및 112-14로부터 선택된 CDR을 포함하고 경쇄는 서열 번호 103-15 및 109-111로부터 선택된 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, HLA-A*02 항원 결합 도메인은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열 번호 91-102 중 어느 하나의 중쇄 부분과 적어도 95% 동일한 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 91-102 중 어느 하나의 경쇄 부분과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 중쇄는 서열 번호 91-102 중 어느 하나의 중쇄 부분과 동일한 서열을 포함하고, 여기서 경쇄는 서열 번호 91-102 중 어느 하나의 경쇄 부분과 동일한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, HLA-A*02 scFv는 서열 번호 91-102 중 어느 하나와 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한 또는 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*02 scFv는 서열 번호 91-102 중 어느 하나와 동일한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*01을 포함하고, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*01 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*1 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하는 scFv 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*01 scFv는 표 6에 제시된 HLA-A*1 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*03을 포함하고, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*03 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*03 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하는 scFv 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*03 scFv는 표 6에 제시된 HLA-A*03 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*111을 포함하고, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*11 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*11 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하는 scFv 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*11 scFv는 표 6에 제시된 바와 같은 HLA-A*11 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-B*07을 포함하고, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-B*07 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-B*07 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하는 scFv 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-B*07 scFv는 표 6에 제시된 바와 같은 HLA-B*07 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-C*07을 포함하고, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-C*07 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-C*07 리간드 결합 도메인은 표 5에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하는 scFv 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-C*07 scFv는 표 6에 제시된 바와 같은 HLA-C*07 CDR 서열을 포함한다.
억제 수용체
본 개시내용은 억제 키메라 항원 수용체인 제2 수용체를 제공한다. 억제 수용체는 MHC-I 복합체에서 비-표적 항원 또는 이의 펩티드 유도체에 결합하고 인식하는 세포외 리간드 결합 도메인을 포함할 수 있다.
예시적인 억제 수용체는 2020년 9월 6일에 출원된 PCT/US2020/045228, 2020년 12월 11일에 출원된 PCT/US2020/064607, 2021년 4월 29일에 출원된 PCT/US2021/029907, 및 2020년 11월 10일에 출원된 PCT/US2020/059856에 기재되어 있으며, 그 각각의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
본원에서 사용된 용어 "억제 수용체"는 면역 세포의 면역 활성을 억제하거나 저해하는 억제 신호를 변환(transducing)할 수 있는 세포내 신호전달 도메인에 융합된 리간드 결합 도메인을 지칭한다. 억제 수용체는 면역 세포 억제 잠재력을 갖고, 면역 세포 활성화 잠재력을 갖는 수용체인, CAR과 별개이고 구별된다. 예를 들어, CAR은 세포내 자극 및/또는 공동 자극 도메인을 포함하기 때문에 활성화 수용체이다. 억제 수용체는 세포내 억제 도메인을 함유하는 억제 수용체이다.
본원에서 사용된 "억제 신호"는 면역 반응의 억제 (예를 들어, 사이토카인 생성 감소 또는 면역 세포 활성화의 감소)를 유발하는 면역 세포에서의 신호 전달 또는 단백질 발현의 변화를 지칭한다. 면역 세포의 방해 또는 억제는 선택적 및/또는 가역적이거나 비선택적 및/또는 가역적일 수 있다. 억제 수용체는 비-표적 항원 (예를 들어 HLA-A*02)에 반응한다. 예를 들어, 비-표적 항원 (예를 들어 HLA-A*02)이 억제 수용체에 결합하거나 접촉하면, 억제 수용체가 반응하고 억제 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인에 의한 비-표적 항원 결합 시 억제 수용체를 발현하는 면역 세포에서 억제 신호를 활성화한다.
본 개시내용의 억제 수용체는 세포외 리간드 결합 도메인을 포함할 수 있다. 리간드 의존적 방식으로 수용체의 활성을 조절할 수 있는 임의의 유형의 리간드 결합 도메인은 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 생각된다.
일부 구현예에서, 리간드 결합 도메인은 항원 결합 도메인이다. 예시적인 항원 결합 도메인은 특히, scFv, SdAb, Vβ-단독 도메인, 및 TCR α 및 β 사슬 가변 도메인으로부터 유래된 TCR 항원 결합 도메인을 포함한다.
임의의 유형의 항원 결합 도메인은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 생각된다.
일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 scFv이다.
일부 구현예에서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 억제 CAR의 세포외 도메인에 융합된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 억제 수용체는 세포외 힌지 영역을 포함한다. 예시적인 힌지는 IgD 및 CD8 도메인, 예를 들어 IgG1로부터 단리되거나 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 힌지는 CD8α 또는 CD28로부터 단리되거나 유래된다.
본 개시내용의 억제 수용체는 억제 수용체의 세포외 도메인에 융합된 막관통 도메인을 포함하도록 설계될 수 있다. 일부 경우에, 막관통 도메인은 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하기 위해 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 이러한 도메인의 결합을 피하기 위해 아미노산 치환에 의해 선택되거나 변형될 수 있다.
막관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 막 결합 단백질 또는 막관통 단백질에서 유래될 수 있다. 막관통 영역은 T-세포 수용체, CD28, CD3 입실론, CD45,　CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, 또는 IgG4와 같은 면역글로불린의 알파, 베타 또는 제타 사슬로부터 단리되거나 유래 (즉 이의 적어도 막관통 영역(들)을 포함)할 수 있다. 대안적으로 막관통 도메인은 합성일 수 있으며, 이 경우 그것은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함할 것이다. 일부 구현예에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중체는 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 임의로 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커, 바람직하게는 2 내지 10개 아미노산 길이가 막관통 도메인과 억제 수용체의 세포내 도메인 사이의 연결을 형성할 수 있다. 글리신-세린 이중체는 특히 적합한 링커를 제공한다.
본 개시내용은 세포내 도메인을 포함하는 억제 수용체를 제공한다. 본 개시내용의 억제 수용체의 세포내 도메인은 억제 수용체를 포함하는 면역 세포의 활성화 억제를 담당하고, 그렇지 않으면 제1 수용체에 의한 활성화 신호에 대한 반응으로 활성화될 수 있다. 일부 구현예에서, 억제 세포내 도메인은 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함한다. 일부 구현예에서, ITIM을 포함하는 억제 세포내 도메인은 CTLA-4 및 PD-1과 같은 면역 관문 억제제로부터 단리되거나 유래될 수 있다. CTLA-4 및 PD-1은 T 세포의 표면에 발현된 면역 억제 수용체이고, T 세포 반응을 약화시키거나 종료시키는 데 중추적인 역할을 한다.
일부 구현예에서, 억제 세포내 도메인은 인간 종양 괴사 인자 관련 세포자멸사 유도 리간드 (TRAIL) 수용체 및 CD200 수용체 1로부터 단리된다. 일부 구현예에서, TRAIL 수용체는 TR10A, TR10B 또는 TR10D를 포함한다.
일부 구현예에서, 억제 세포내 도메인은 글리코스핑고지질 마이크로도메인 1 (PAG1)을 갖는 인단백질 막 앵커로부터 단리된다. 일부 구현예에서, 억제 세포내 도메인은 백혈구 면역글로불린 유사 수용체 B1 (LILRB1)로부터 단리된다.
일부 구현예에서, 억제 도메인은 인간 단백질, 예를 들어 인간 TRAIL 수용체, CTLA-4, PD-1, PAG1 또는 LILRB1 단백질로부터 단리되거나 유래된다.
일부 구현예에서, 억제 도메인은 세포내 도메인, 막관통 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 억제 도메인은 세포내 도메인, 막관통 도메인, 힌지 영역 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 억제 도메인은 킬러 세포 면역글로불린 유사 수용체, 3개의 Ig 도메인 및 긴 세포질 테일 2 (KIR3DL2), 킬러 세포 면역글로불린 유사 수용체, 3개의 Ig 도메인 및 긴 세포질 테일 3 (KIR3DL3), 백혈구 면역글로불린 유사 수용체 B1 (LIR1, LIR-1 및 LILRB1이라고도 함), 프로그램된 세포 사멸 1 (PD-1), Fc 감마 수용체 IIB (FcgRIIB), 킬러 세포 렉틴 유사 수용체 K1 (NKG2D), CTLA-4, 합성 공통 ITIM, ZAP70 SH2 도메인을 함유하는 도메인 (예를 들어, N 및 C 말단 SH2 도메인 중 하나 또는 둘 모두), 또는 ZAP70 KI_K369A (키나제 불활성 ZAP70)로부터 단리되거나 유래된다.
일부 구현예에서, 억제 도메인은 인간 단백질로부터 단리되거나 유래된다.
일부 구현예에서, 제2, 억제 수용체는 억제 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2, 억제 수용체는 억제 세포내 도메인 및/또는 억제 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 억제 세포내 도메인은 억제 수용체의 세포내 도메인에 융합된다. 일부 구현예에서, 억제 세포내 도메인은 억제 수용체의 막관통 도메인에 융합된다.
일부 구현예에서, 제2, 억제 수용체는 동일한 단백질, 예를 들어 ITIM 함유 단백질로부터 단리되거나 유래된 세포질 도메인, 막관통 도메인, 및 세포외 도메인 또는 이의 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2, 억제 수용체는 세포내 도메인 및/또는 막관통 도메인, 예를 들어 ITIM 함유 단백질과 같은 동일한 단백질로부터 단리되거나 유래된 힌지 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 수용체는 억제 도메인을 포함하는 TCR (억제 TCR)이다. 일부 구현예에서, 억제 TCR은 억제 세포내 도메인 및/또는 억제 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 억제 세포내 도메인은 TCR 알파, TCR 베타, CD3 델타, CD3 감마 또는 CD3 입실론 또는 이의 일부 TCR의 세포내 도메인에 융합된다. 일부 구현예에서, 억제 세포내 도메인은 TCR 알파, TCR 베타, CD3 델타, CD3 감마 또는 CD3 입실론의 막관통 도메인에 융합된다.
일부 구현예에서, 제2 수용체는 억제 도메인을 포함하는 TCR (억제 TCR)이다. 일부 구현예에서, 억제 도메인은 LILRB1로부터 단리되거나 유래된다.
LILRB1 억제 수용체
본 개시내용은 LILRB1 억제 도메인, 및 임의로, LILRB1 막관통 및/또는 힌지 도메인, 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는 제2, 억제 수용체를 제공한다. 억제 수용체에 LILRB1 막관통 도메인 및/또는 LILRB1 힌지 도메인을 포함하면 다른 막관통 도메인 또는 또 다른 힌지 도메인을 갖는 참조 억제 수용체와 비교하여 억제 수용체에 의해 생성된 억제 신호를 증가시킬 수 있다. LILRB1 억제 도메인을 포함하는 제2, 억제 수용체는 본원에 기재된 바와 같은 CAR 또는 TCR일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 임의의 적합한 리간드 결합 도메인은 LILRB1-기반 제2, 억제 수용체에 융합될 수 있다.
백혈구 면역글로불린 유사 수용체 B1로도 알려진, 백혈구 면역글로불린 유사 수용체 서브패밀리 B 구성원 1 (LILRB1), 뿐만 아니라 ILT2, LIR1, MIR7, PIRB, CD85J, ILT-2 LIR-1, MIR-7 및 PIR-B는 백혈구 면역글로불린 유사 수용체 (LIR) 계열의 구성원이다. LILRB1 단백질은 LIR 수용체의 서브패밀리 B 클래스에 속한다. 이들 수용체는 2 내지 4개의 세포외 면역글로불린 도메인, 막관통 도메인, 및 2 내지 4개의 세포질 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다. LILRB1 수용체는 면역 세포에서 발현되며, 항원-제시 세포 상의 MHC 클래스 I 분자에 결합하고 면역 반응의 자극을 억제하는 음성 신호를 전달한다. LILRB1은 세포 독성뿐만 아니라 염증 반응을 조절하고, 자가 반응성을 제한하는 역할을 하는 것으로 생각된다. LILRB1의 상이한 이소형을 암호화하는 다수의 전사 변이체가 존재하며, 이들 모두는 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 간주된다.
본원에 기재된 억제 수용체의 일부 구현예에서, 억제 수용체 LILRB1로부터 단리되거나 유래된 하나 이상의 도메인을 포함한다. LILRB1으로부터 단리되거나 유래된 하나 이상의 도메인을 갖는 수용체의 일부 구현예에서, LILRB1의 하나 이상의 도메인은 서열 번호 115의 서열 또는 부분서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 동일한 또는 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, LILRB1의 하나 이상의 도메인은 동일한 서열 번호 115의 서열 또는 부분서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, LILRB1의 하나 이상의 도메인은 서열 번호 115의 서열 또는 부분서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 동일한 또는 동일한 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 구현예에서, LILRB1의 하나 이상의 도메인은 동일한 서열 번호 115의 서열 또는 부분서열과 동일한 아미노산 서열로 이루어진다.
LILRB1으로부터 단리되거나 유래된 하나 이상의 도메인을 갖는 수용체의 일부 구현예에서, LILRB1의 하나 이상의 도메인은 서열 번호 116의 서열 또는 부분서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 동일한 또는 동일한 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
LILRB1의 하나 이상의 도메인을 갖는 수용체의 일부 구현예에서, LILRB1의 하나 이상의 도메인은 서열 번호 116의 서열 또는 부분서열과 동일한 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
다양한 구현예에서, 폴리펩티드를 포함하는 억제 수용체가 제공되며, 여기서 폴리펩티드는 다음 중 하나 이상을 포함한다: LILRB1 힌지 도메인 또는 이의 기능적 변이체; LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체; 및 LILRB1 세포내 도메인 또는 적어도 하나, 또는 적어도 2개의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함하는 세포내 도메인, 여기서 각각의 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 독립적으로 선택된다.
본원에서 사용된 "면역수용체 티로신계 억제 모티프" 또는 "ITIM"은 면역계의 많은 억제 수용체의 세포질 꼬리에서 발견되는, S/I/V/LxYxxI/V/L (서열 번호 984) 등의 보존 서열을 갖는 아미노산의 보존된 서열을 지칭한다. ITIM-보유 억제 수용체가 그들의 리간드와 상호작용한 후, ITIM 모티프는 인산화되어, 억제 수용체가 포스포티로신 포스파타제 SHP-1 및 SHP-2, 또는 SHIP로 불리는 이노시톨 포스파타제와 같은 다른 효소를 모집할 수 있다.
일부 구현예에서, 폴리펩티드는 적어도 하나의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM), 적어도 2개의 ITIM, 적어도 3개의 ITIM, 적어도 4개의 ITIM, 적어도 5개의 ITIM 또는 적어도 6개의 ITIM을 포함하는 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 ITIM을 갖는다.
일부 구현예에서, 폴리펩티드는 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로 이루어진 ITIM 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 ITIM을 포함하는 세포내 도메인을 포함한다.
추가 특정한 구현예에서, 폴리펩티드는 적어도 2개의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함하는 세포내 도메인을 포함하고, 여기서 각각의 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 ITIM NLYAAV (서열 번호 117) 및 VTYAEV (서열 번호 118) 둘 모두를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 121과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 121과 동일한 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 ITIM VTYAEV (서열 번호 118) 및 VTYAQL (서열 번호 119) 둘 모두를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 122와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 122와 동일한 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 ITIM VTYAQL (서열 번호 119) 및 SIYATL (서열 번호 120) 둘 모두를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 123과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 123과 동일한 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 ITIM NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), 및 VTYAQL (서열 번호 119)을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 124와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 124와 동일한 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 ITIM VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 125와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 125와 동일한 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 ITIM NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)을 포함한다. 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 126과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 서열 번호 126과 동일한 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 LILRB1 세포내 도메인 (서열 번호 131)과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 LILRB1 세포내 도메인 (서열 번호 131)과 동일한 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다.
본 개시내용의 LILRB1 세포내 도메인 또는 이의 기능적 변이체는 적어도 1, 적어도 2, 적어도 4, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 또는 적어도 8개의 ITIM을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, LILRB1 세포내 도메인 또는 이의 기능적 변이체는 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 ITIM을 갖는다.
특정 구현예에서, 세포내 도메인은 2, 3, 4, 5 또는 6개의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함하며, 여기서 각각의 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, 세포내 도메인은 적어도 3개의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함하며, 여기서 각각의 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, 세포내 도메인은 3개의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함하며, 여기서 각각의 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, 세포내 도메인은 4개의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함하며, 여기서 각각의 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, 세포내 도메인은 5개의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함하며, 여기서 각각의 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, 세포내 도메인은 6개의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함하며, 여기서 각각의 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, 세포내 도메인은 적어도 7개의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함하며, 여기서 각각의 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 독립적으로 선택된다.
LILRB1 단백질은 D1, D2, D3 및 D4라고 불리는 4개의 면역글로불린 (Ig) 유사 도메인을 갖는다. 일부 구현예에서, LILRB1 힌지 도메인은 LILRB1 D3D4 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, LILRB1 D3D4 도메인은 서열 번호 127과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 동일한 또는 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, LILRB1 D3D4 도메인은 서열 번호 127을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 폴리펩티드는 LILRB1 힌지 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 구현예에서, LILRB1 힌지 도메인 또는 이의 기능적 변이체는 서열 번호 134, 서열 번호 127, 또는 서열 번호 128과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 동일한 또는 동일한 서열을 포함한다. 구현예에서, LILRB1 힌지 도메인 또는 이의 기능적 변이체는 서열 번호 134, 서열 번호 127, 또는 서열 번호 128과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, LILRB1 힌지 도메인은 서열 번호 134, 서열 번호 127, 또는 서열 번호 128과 동일한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, LILRB1 힌지 도메인은 서열 번호 134, 서열 번호 127, 또는 서열 번호 128과 동일한 서열로 본질적으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체이다. 일부 구현예에서, LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체는 서열 번호 135에 대해 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한 또는 적어도 99%인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체는 서열 번호 135와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, LILRB1 막관통 도메인은 서열 번호 135와 동일한 서열을 포함한다. 구현예에서, LILRB1 막관통 도메인은 서열 번호 135와 동일한 서열로 본질적으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 힌지, 예를 들어, 인간 단백질로부터의 힌지를 통해 제2, 억제 수용체, 예를 들어, 항원 결합 도메인 또는 리간드 결합 도메인의 세포외 영역에 부착될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 힌지는 인간 면역글로불린 (Ig) 힌지, 예를 들어, IgG4 힌지, CD8a 힌지 또는 LILRB1 힌지일 수 있다.
일부 구현예에서, 제2, 억제 수용체는 억제 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2, 억제 수용체는 억제 세포내 도메인 및/또는 억제 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 억제 도메인은 LILR1B로부터 단리되거나 이로부터 유래된다.
LILRB1 도메인 조합을 포함하는 억제 수용체
일부 구현예에서, 본 개시내용의 LILRB1-기반 억제 수용체는 하나 초과의 LILRB1 도메인 또는 이의 기능적 등가물을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 억제 수용체는 LILRB1 막관통 도메인 및 세포내 도메인, 또는 LILRB1 힌지 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 억제 수용체는 LILRB1 힌지 도메인 또는 이의 기능적 단편, 및 LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 129와 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한 또는 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 129와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 129와 동일한 서열을 포함한다.
추가 구현예에서, 억제 수용체는 LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체, 및 LILRB1 세포내 도메인 및/또는 적어도 하나의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM)를 포함하는 세포내 도메인을 포함하고, 여기서 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드 LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체, 및 LILRB1 세포내 도메인 및/또는 적어도 2개의 ITIM을 포함하는 세포내 도메인을 포함하며, 여기서 각각의 ITIM은 NLYAAV (서열 번호 117), VTYAEV (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 120)로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, 억제 수용체는 LILRB1 막관통 도메인 및 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 130과 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한 또는 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 130과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 130과 동일한 서열을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 억제 수용체는 LILRB1 힌지 도메인 또는 이의 기능적 단편 또는 변이체; LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체; 및 LILRB1 세포내 도메인 및/또는 적어도 2개의 면역수용체 티로신 기반 억제 모티프 (ITIM)를 포함하는 세포내 도메인을 포함하며, 여기서 각각의 ITIM은 LYAAV (서열 번호 117), VTYAE (서열 번호 118), VTYAQL (서열 번호 119), 및 SIYATL (서열 번호 11)로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, 억제 수용체는 서열 번호 132 또는 서열 번호 133과 적어도 95% 동일한, 또는 서열 번호 132 또는 서열 번호 133과 적어도 99% 동일한, 또는 서열 번호 132 또는 서열 번호 133과 동일한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 129와 적어도 99% 동일한, 또는 서열 번호 129와 적어도 99% 동일한, 또는 서열 번호 129와 동일한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 130과 적어도 99% 동일한, 또는 서열 번호 130과 적어도 99% 동일한, 또는 서열 번호 130과 동일한 서열을 포함한다.
표 7. 예시적인 LILRB1-기반 억제 수용체에 대한 폴리펩티드 서열
Figure pct00062
Figure pct00063
Figure pct00064
Figure pct00065
폴리뉴클레오티드 및 벡터
본 개시내용은 본 개시내용의 제1 및 제2 수용체의 서열(들)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 개시내용은 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드 및 벡터를 포함하는 면역 세포를 제공한다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 수용체의 서열은 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 제1 수용체를 암호화하는 서열은 제1 프로모터에 작동 가능하게 연결되고, 제2 수용체를 암호화하는 서열은 제2 프로모터에 작동 가능하게 연결된다.
본 개시내용은 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 제1 벡터에 의해 암호화되고 제2 수용체는 제2 벡터에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 두 수용체 모두 단일 벡터에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 벡터는 shRNA, 예를 들어 B2M shRNA를 포함한다.
일부 구현예에서, 두 수용체 모두가 단일 벡터에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 벡터는 shRNA, 예를 들어 B2M shRNA를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 수용체는 단일 벡터에 의해 암호화된다. 단일 벡터를 사용하여 다수의 폴리펩티드를 암호화하는 방법은 당업자에게 공지되어 있을 것이며, 특히, 상이한 프로모터의 제어 하에 다수의 폴리펩티드를 암호화하거나, 단일 프로모터를 사용하여 다수의 폴리펩티드의 전사, 내부 리보솜 진입 부위 (IRES) 및/또는 자가 절단 펩티드를 암호화하는 서열의 사용을 제어하는 경우를 포함한다. 예시적인 자가 절단 펩티드는 T2A, P2A, E2A 및 F2A 자가 절단 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, T2A 자가 절단 펩티드 EGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 번호 489)의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, P2A 자가 절단 펩티드는 ATNFSLLKQAGDVEENPGP (서열 번호 186)의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, E2A 자가 절단 펩티드는 QCTNYALLKLAGDVESNPGP (서열 번호 490)의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, F2A 자가 절단 펩티드는 VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (서열 번호 491)의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T2A 자가 절단 펩티드는 EGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 번호 489)의 서열을 포함한다. 전술한 것 중 임의의 것은 또한 N 말단 GSG 링커를 포함할 수 있다. 예를 들어, T2A 자가 절단 펩티드는 또한 GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 번호 181)의 서열을 포함할 수 있고, 이는 GGATCCGGAGAGGGCAGAGGCAGCCTGCTGACATGTGGCGACGTGGAAGAGAACCCTGGCCCC (서열 번호 492)의 서열에 의해 암호화될 수 있다.
일부 구현예에서, 벡터는 발현 벡터, 즉 적합한 세포에서 제1 및/또는 제2 수용체의 발현을 위한 것이다.
렌티바이러스와 같은 레트로바이러스에서 유래된 벡터는 이식 유전자의 장기적이고 안정적인 통합과 딸 세포에서의 전파를 허용하기 때문에 장기 유전자 전달을 달성하는 데 적합한 도구이다. 렌티바이러스 벡터는 간세포와 같은 비증식 세포를 형질도입할 수 있다는 점에서 뮤린 백혈병 바이러스와 같은 종양-레트로바이러스에서 유래한 벡터에 비해 추가적인 이점이 있다. 그들은 또한 낮은 면역원성이라는 추가적인 이점을 가지고 있다.
수용체를 암호화하는 천연 또는 합성 핵산의 발현은 전형적으로 수용체 또는 그의 일부를 코딩하는 핵산을 프로모터에 작동 가능하게 연결하고 작제물을 발현 벡터에 혼입함으로써 달성된다. 벡터는 복제 및 통합 진핵생물에 적합할 수 있다. 전형적인 클로닝 벡터는 원하는 핵산 서열의 발현 조절에 유용한 전사 및 번역 종결자, 개시 서열 및 프로모터를 함유한다.
수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 여러 유형의 벡터로 클로닝될 수 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 플라스미드, 파지미드, 파지 유도체, 동물 바이러스 및 코스미드를 포함하지만 이에 제한되지 않는 벡터로 클로닝될 수 있다. 특히 관심있는 벡터에는 발현 벡터, 복제 벡터, 프로브 생성 벡터 및 시퀀싱 벡터가 포함된다.
추가로, 발현 벡터는 바이러스 벡터의 형태로 면역 세포와 같은 세포에 제공될 수 있다. 바이러스 벡터 기술은 당업계에 잘 알려졌으며, 예를 들어, Sambrook 등 (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York), 및 기타 바이러스학 및 분자생물학 매뉴얼에 기재되어 있다. 벡터로서 유용한 바이러스는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스 바이러스 및 렌티바이러스를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일반적으로, 적합한 벡터는 적어도 하나의 유기체에서 기능적인 복제 기점, 프로모터 서열, 편리한 제한 엔도뉴클레아제 부위 및 하나 이상의 선택가능한 마커를 함유한다 (예를 들어, WO 01/96584; WO 01/29058; 및 미국 특허 번호 6,326,193).
다수의 바이러스 기반 시스템이 포유류 세포로 유전자 전달을 위해 개발되었다. 예를 들어, 레트로바이러스는 유전자 전달 시스템을 위한 편리한 플랫폼을 제공한다. 선택된 유전자는 당업계에 공지된 기술을 사용하여 벡터에 삽입되고 레트로바이러스 입자에 패키징될 수 있다. 이어서 재조합 바이러스는 단리되어 생체 내 또는 생체 외 대상체의 세포로 전달될 수 있다. 다수의 레트로바이러스 시스템이 당업계에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 아데노바이러스 벡터가 사용된다. 다수의 아데노바이러스 벡터가 당업계에 공지되어 있다. 한 구현예에서, 렌티바이러스 벡터가 사용된다.
추가 프로모터 요소, 예를 들어, 인핸서는 전사 개시 빈도를 조절한다. 전형적으로, 이들은 시작 부위의 업스트림 30-110 염기쌍 (bp) 영역에 위치하지만, 최근에는 많은 프로모터가 시작 부위의 다운스트림에도 기능적 요소를 포함하는 것으로 나타났다. 프로모터 요소 사이의 간격은 종종 유연하므로 요소가 반전되거나 서로 상대적으로 이동할 때 프로모터 기능이 보존된다. 티미딘 키나제 (tk) 프로모터에서, 프로모터 요소 사이의 간격은 활성이 감소하기 시작하기 전에 50 bp 간격으로 증가될 수 있다. 프로모터에 따라, 개별 요소가 협력적으로 또는 독립적으로 기능하여 전사를 활성화할 수 있는 것으로 보인다.
적합한 프로모터의 한 예는 즉시 초기 시토메갈로바이러스 (CMV) 프로모터 서열이다. 이 프로모터 서열은 작동 가능하게 연결된 임의의 폴리뉴클레오티드 서열의 높은 수준의 발현을 유도할 수 있는 강력한 구성적 프로모터 서열이다. 적합한 프로모터의 또 다른 예는 신장 성장 인자-1α (EF-1α)이다. 그러나, 유인원 바이러스 40 (SV40) 초기 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스 (MMTV), 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 긴 말단 반복 (LTR) 프로모터, MoMuLV 프로모터, 조류 백혈병 바이러스 프로모터, 엡스테인-바 바이러스 즉시 초기 프로모터, 라우스 육종 바이러스 프로모터, U6 프로모터, 뿐만 아니라 액틴 프로모터, 미오신 프로모터, 헤모글로빈프로모터, 및 크레아틴 키나제 프로모터와 같지만, 이에 제한되지 않는 인간 유전자 프로모터를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 다른 구성적 프로모터 서열이 사용될 수 있다. 추가로, 본 개시내용은 구성적 프로모터의 사용에 제한되지 않아야 한다. 유도성 프로모터도 본 발명의 일부로 고려된다. 유도성 프로모터의 사용은 그러한 발현이 요구될 때 작동 가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 켜거나 발현이 원하지 않을 때 발현을 끌 수 있는 분자 스위치를 제공한다. 유도성 프로모터의 예는 메탈로티오닌 프로모터, 글루코코르티코이드 프로모터, 프로게스테론 프로모터, 및 테트라사이클린 프로모터를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
수용체의 발현을 평가하기 위해, 세포 내로 도입될 발현 벡터는 또한 바이러스 벡터를 통해 형질감염 또는 감염시키려는 세포 집단으로부터 발현 세포의 식별 및 선택을 용이하게 하기 위해 선별 마커 유전자 또는 리포터 유전자 또는 둘 모두를 함유할 수 있다. 다른 양태에서, 선별 가능한 마커는 별도의 DNA 조각으로 운반될 수 있고 공동-형질감염 절차에 사용될 수 있다. 선별 가능한 마커 및 리포터 유전자 모두는 숙주 세포에서 발현을 가능하게 하는 적절한 조절 서열과 함께 플랭킹될 수 있다. 유용한 선별 마커는 예를 들어, neo 등과 같은 항생제 내성 유전자를 포함한다.
리포터 유전자는 잠재적으로 형질감염되거나 형질도입된 세포를 식별하고 조절 서열의 기능을 평가하는 데 사용된다. 일반적으로, 리포터 유전자는 수용 유기체 또는 조직에 존재하지 않거나 이에 의해 발현되지 않으며 그의 발현이 예를 들어 효소 활성과 같은 쉽게 검출할 수 있는 특성에 의해 나타나는 폴리펩티드를 암호화하는 유전자이다. 리포터 유전자의 발현은 DNA가 수용 세포에 도입된 후 적합한 시간에 분석된다. 적합한 리포터 유전자는 루시퍼라제, 베타-갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제, 분비된 알칼리 포스파타제 또는 녹색 형광 단백질 유전자를 암호화하는 유전자를 포함할 수 있다 (예를 들어, Ui-Tei 등, 2000 FEBS Letters 479: 79-82). 적합한 발현 시스템은 잘 알려졌고 공지된 기술을 사용하여 제조되거나 상업적으로 입수될 수 있다. 일반적으로, 가장 높은 수준의 리포터 유전자 발현을 나타내는 최소 5' 플랭킹 영역을 갖는 작제물이 프로모터로 식별된다. 이러한 프로모터 영역은 리포터 유전자에 연결될 수 있으며 프로모터-작동 전사를 조절하는 능력에 대한 제제를 평가하는 데 사용될 수 있다.
유전자를 세포에 도입하고 발현시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 발현 벡터와 관련하여, 벡터는 당업계의 임의의 방법에 의해 숙주 세포, 예를 들어 포유동물, 박테리아, 효모 또는 곤충 세포 내로 용이하게 도입될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 물리적, 화학적 또는 생물학적 수단에 의해 숙주 세포로 전달될 수 있다.
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하기 위한 물리적 방법은 인산칼슘 침전법, 리포펙션법, 입자 충격법, 미세주입법, 전기천공법 등을 포함한다 벡터 및/또는 외인성 핵산을 포함하는 세포를 생산하는 방법은 당업계에 잘 알려졌다. 예를 들어, Sambrook 등 (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York) 참조. 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하는 한 가지 방법은 인산칼슘 형질감염이다.
관심 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하기 위한 생물학적 방법은 DNA 및 RNA 벡터의 사용을 포함한다. 바이러스 벡터, 특히 레트로바이러스 벡터는 포유동물, 예를 들어, 인간 세포에 유전자를 삽입하는 데 가장 널리 사용되는 방법이 되었다. 다른 바이러스 벡터는 렌티바이러스, 폭스바이러스, 단순 헤르페스 바이러스 I, 아데노바이러스 및 아데노 관련 바이러스 등으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,350,674 및 5,585,362을 참조한다.
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하기 위한 화학적 방법은 거대분자 복합체, 나노캡슐, 마이크로스피어, 비드, 및 수중유 에멀젼, 미셀, 혼합 미셀 및 리포솜을 포함하는 지질 기반 시스템과 같은 콜로이드 분산 시스템을 포함한다. 예시적인 시험관 내 및 생체 내 전달 비히클로 사용하기 위한 예시적인 콜로이드 시스템은 리포솜 (예를 들어, 인공 막 소포)이다.
외인성 핵산을 숙주 세포에 도입하는 방법 또는 본 발명의 억제제에 세포를 노출시키는 방법과 상관없이, 숙주 세포 내 재조합 DNA 서열의 존재를 확인하기 위해 다양한 분석을 수행할 수 있다. 이러한 검정은 예를 들어, 서던 및 노던 블로팅, RT-PCR 및 PCR과 같은 당업자에게 잘 알려진 "분자 생물학적" 검정; 예를 들어, 면역학적 수단 (ELISA 및 웨스턴 블롯) 또는 본 개시내용의 범위 내에 속하는 작용제를 확인하기 위한 본원에 기재된 검정에 의해 특정 펩티드의 존재 또는 부재를 검출하는 것과 같은 "생화학적" 검정을 포함한다.
면역 세포
본 개시내용은 본원에 기재된 수용체, 벡터 및 폴리뉴클레오티드를 포함하는 면역 세포를 제공한다.
일부 구현예에서, 면역 세포는 (a) (i) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 암 세포-특이적 항원 또는 이의 펩티드 항원; 또는 (ii) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에 CEA 세포 부착 분자 5 (CEA) 또는 이의 펩티드 항원으로부터 선택된 표적 항원에 특이적인 제1 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제1 수용체; 및 (b) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에 TNFRSF11, ACHRB, ITGAE, TRPV1 및 SREC로부터 선택된 비-표적 항원 또는 이의 항원 펩티드에 특이적인 제2 세포외 리간드 결합을 포함하는 제2 수용체를 포함하며, 여기서 비-표적 항원은 다형성을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체는 CAR 또는 TCR이다. 일부 구현예에서, 제2 수용체는 억제 수용체, 예컨대 억제 키메라 항원 수용체 또는 TCR이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "면역 세포"는 선천적 또는 후천적 (획득) 면역계에 관여하는 세포를 지칭한다. 예시적인 선천성 면역 세포는 호중구, 단핵구 및 대식세포와 같은 식세포, 자연 살해 (NK) 세포, 호중구 호산구 및 호염기구와 같은 다핵성 백혈구 및 단핵구, 대식세포 및 비만 세포와 같은 단핵 세포를 포함한다. 후천 면역의 역할을 하는 면역세포는 T-세포 및 B-세포와 같은 림프구를 포함한다.
본 개시내용은 서열 번호 52의 서열을 포함하는 제1 수용체, 및 서열 번호 164의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 제2 수용체를 포함하는 면역 세포를 제공한다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC (서열 번호 179)를 포함하는 서열 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열에 의해 암호화된 shRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 서열 번호 52의 서열을 포함하는 제1 수용체, 서열 번호 164의 서열을 포함하는 제2 수용체, 및 서열 번호 179의 서열을 포함하는 shRNA를 암호화하는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 단일 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되고, 여기서 제1 수용체 및 제2 수용체를 암호화하는 서열은 자가-절단 폴리펩티드를 암호화하는 서열에 의해 분리된다. 일부 구현예에서, 자가-절단 폴리펩티드는 GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 번호 181)의 서열을 포함하는 T2A 자가-절단 폴리펩티드를 포함한다.
본 개시내용은 서열 번호 141의 서열 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 면역 세포를 제공한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 141을 포함한다.
본 개시내용은 서열 번호 142의 서열 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 면역 세포를 제공한다. 일부 구현예에서, 폴리누클레오티드는 서열 번호 142를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "T-세포"는 흉선에서 발생하는 골수 전구체로부터 유래하는 유형의 림프구를 지칭한다. 흉선으로 이동할 때 발생하는 여러 개별 유형의 T-세포는 헬퍼 CD4+ T-세포, 세포독성 CD8+ T 세포, 기억 T 세포, 조절 CD4+ T-세포 및 줄기 기억 T-세포를 포함한다. 상이한 유형의 T-세포는 그들의 마커 발현에 기초하여 통상의 기술자에 의해 구별될 수 있다. T-세포 유형을 구별하는 방법은 당업자에게 쉽게 자명할 것이다.
일부 구현예에서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 함께 표적 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화시킨다.
일부 구현예에서, 면역 세포는 T 세포, B 세포 및 자연 살해 (NK) 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 감마 델타(γδ) T 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 불변 T 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 불변 자연 살해 T 세포 (iNKT 세포)이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 T 세포, NK 세포 또는 대식세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 B 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 자연 살해 (NK) 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 CD8-이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 CD8+이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 CD4+이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 CD4-이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 CD8-/CD4+이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 CD8+ CD4- T 세포이다.
일부 구현예에서, 면역 세포는 비-자연 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 단리된다.
T 세포와 같은, 면역 세포의 집단을 본 개시내용의 벡터로 형질전환시키는 방법은 당업자에게 쉽게 자명할 것이다. 예를 들어, CD3+ T 세포는 제조업체의 지침에 따라 CD3+ T 세포 음성 분리 키트 (Miltenyi)를 사용하여 PBMC로부터 분리할 수 있다. T 세포는 CD3/28 다이나비드 (1:1 세포 대 비드 비율) 및 300 단위/mL의 IL-2 (Miltenyi)의 존재 하에 5% 인간 A/B 혈청 및 1% Pen/strep이 보충된 X-Vivo 15 배지에서 1 x 10^6 세포/mL의 밀도로 배양될 수 있다. 2일 후, 당업계에 공지된 방법을 사용하여 렌티바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터로 T 세포를 형질도입할 수 있다. 일부 구현예에서, 바이러스 벡터는 5의 감염 다중도 (MOI)에서 형질도입된다. 그런 다음 세포는 IL-2 또는 IL-7/15/21의 조합과 같은 다른 사이토카인에서 농축 전 추가 5일 동안 배양될 수 있다. B 세포와 같은 면역 세포의 다른 집단, 또는 다른 T 세포의 다른 집단을 단리하고 배양하는 방법은 당업자에게 쉽게 자명할 것이다. 이 방법은 잠재적인 접근 방식을 설명하지만 이러한 방법론이 빠르게 진화하고 있다는 점에 유의해야 한다. 예를 들어 말초 혈액 단핵 세포의 우수한 바이러스 형질도입은 성장 5일 후에 달성되어 >99% CD3+ 고도로 형질도입된 세포 집단을 생성할 수 있다.
TCR, CAR, 억제 수용체, 수용체 또는 이를 암호화하는 벡터를 포함하는 T 세포 집단을 활성화 및 배양하는 방법은 당업자에게 쉽게 자명할 것이다.
TCR을 발현하기 위한 T 세포의 유전적 변형 전이든 후이든, T 세포는 일반적으로 예를 들어, 미국 특허 번호 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041, 10040846; 및 미국 특허 출원 공개 번호 2006/0121005에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 활성화되고 확장될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 T 세포는 시험관 내에서 확장되고 활성화된다. 일반적으로, 본 개시내용의 T 세포는 CD3/TCR 복합체 관련 신호를 자극하는 작용제 및 T 세포의 표면 상의 공동 자극 분자를 자극하는 리간드가 부착된 표면과의 접촉에 의해 시험관 내에서 확장된다. 특히, T 세포 집단은 예를 들어 항-CD3 항체와의 접촉에 의해 본원에 기술된 바와 같이 자극될 수 있다. T 세포의 표면의 보조 분자의 공동 자극을 위해, 보조 분자에 결합하는 리간드가 사용된다. 예를 들어, T 세포의 집단은 T 세포의 증식을 자극하기에 적합한 조건 하에서 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와 접촉할 수 있다. CD4+　T 세포 또는 CD8+　T 세포의 증식을 자극하기 위해, 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체를 사용할 수 있다. 항-CD28 항체의 예는 당업계에 일반적으로 알려진 다른 방법을 사용할 수 있는 9.3, B-T3, XR-CD28 (Diaclone,
Figure pct00066
, 프랑스)을 포함한다 (Berg 등, Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998; Haanen 등, J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999; Garland 등, J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, 1999).
일부 구현예에서, T 세포에 대한 1차 자극 신호 및 공동 자극 신호는 상이한 프로토콜에 의해 제공될 수 있다. 예를 들어, 각 신호를 제공하는 작용제는 용액에 있거나 표면에 결합될 수 있다. 표면에 커플링될 때, 작용제는 동일한 표면 (즉, "시스" 형태) 또는 분리된 표면 (즉, "트랜스" 형태)에 커플링될 수 있다. 대안적으로, 하나의 작용제는 표면에 결합되고 다른 작용제는 용액에 커플링될 수 있다. 일부 구현예에서, 공동 자극 신호를 제공하는 작용제는 세포 표면에 결합되고 1차 활성화 신호를 제공하는 작용제는 용액 중에 있거나 표면에 결합된다. 특정 구현예에서, 두 제제 모두 용액 상태일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 작용제는 가용성 형태일 수 있고, 이어서 Fc 수용체를 발현하는 세포 또는 작용제에 결합할 항체 또는 다른 결합제와 같은 표면에 가교 결합될 수 있다. 이와 관련하여, 예를 들어, 본 개시내용에서 T 세포를 활성화 및 확장하는데 사용하기 위해 고려되는 인공 항원 제시 세포 (aAPC)에 대한 미국 특허 출원 공개 번호 20040101519 및 20060034810을 참조한다.
일부 구현예에서, 2개의 작용제는 동일한 비드, 즉, "시스," 또는 별도의 비드, 즉, "트랜스" 상의 비드에 고정화된다. 예로서, 1차 활성화 신호를 제공하는 작용제는 항-CD3 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고 공동 자극 신호는 항-CD28 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고; 두 작용제는 동일한 분자량으로 동일한 비드에 공동 고정화된다. 한 구현예에서, CD4+　T 세포 확장 및 T 세포 성장을 위해 비드에 결합된 1:1 비율의 각 항체가 사용된다. 일부 구현예에서, 비드에 결합된 CD3:CD28 항체의 비율은 100:1 내지 1:100 범위이고 그 사이의 모든 정수 값이다. 본 개시내용의 한 양태에서, 항-CD3 항체보다 더 많은 항-CD28 항체가 입자에 결합되며, 즉 CD3:CD28의 비율은 1 미만이다. 본 개시내용의 특정 구현예에서, 비드에 결합된 항 CD28 항체 대 항 CD3 항체의 비율은 2:1보다 크다.
1:500 내지 500:1의 입자 대 세포 비율 및 그 사이의 임의의 정수 값을 사용하여 T 세포 또는 다른 표적 세포를 자극할 수 있다. 당업자가 쉽게 알 수 있는 바와 같이, 입자 대 세포의 비율은 표적 세포에 대한 입자 크기에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 작은 크기의 비드는 몇 개의 세포에만 결합할 수 있는 반면 큰 비드는 많은 세포에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서 세포 대 입자의 비율은 1:100 내지 100:1 범위이고 그 사이의 임의의 정수 값이고 추가 구현예에서 비율은 1:9 내지 9:1 및 그 사이의 임의의 정수 값을 포함하고, T 세포를 자극하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 1:1 세포 대 비드의 비율이 사용된다. 당업자는 다양한 다른 비율이 본 발명에 사용하기에 적합할 수 있음을 이해할 것이다. 특히, 비율은 입자 크기와 세포 크기 및 유형에 따라 달라질 것이다.
본 개시내용의 추가 구현예에서, 세포, 예를 들어 T 세포는 제제-코팅된 비드와 조합되고, 비드 및 세포는 후속적으로 분리된 다음 세포가 배양된다. 대안적인 구현예에서, 배양 전에 제제-코팅된 비드 및 세포는 분리되지 않고 함께 배양된다. 추가 구현예에서, 비드 및 세포는 자기력과 같은 힘의 적용에 의해 먼저 농축되어 세포 표면 마커의 결찰이 증가되어 세포 자극을 유도한다.
예로서, 세포 표면 단백질은 항-CD3 및 항-CD28가 부착된 상자성 비드가 T 세포와 접촉하도록 함으로써 결찰될 수 있다. 한 구현예에서 세포 (예를 들어, CD4+ T 세포) 및 비드 (예를 들어, 1:1 비율의 DYNABEADS CD3/CD28 T 상자성 비드)는 완충액에서 조합된다. 다시, 당업자는 임의의 세포 농도가 사용될 수 있음을 쉽게 인식할 수 있다. 특정 구현예에서 세포와 입자의 최대 접촉을 보장하기 위해 입자와 세포가 함께 혼합되는 부피를 유의하게 감소시키는 것 (즉, 세포의 농도를 증가시키는 것)이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 한 구현예에서, 약 20억 세포/ml의 농도가 사용된다. 또 다른 구현예에서, 1억 초과 세포/ml가 사용된다. 추가 구현예에서, 1천, 1천5백, 2천, 2천5백, 3천, 3천5백, 4천, 4천5백, 또는 5천만 세포/ml의 세포 농도가 사용된다. 또 다른 구현예에서, 7천5백, 8천, 8천5백, 9천, 9천5백, 또는 1억 세포/ml의 세포 농도가 사용된다. 추가 구현예에서, 1억 2500만 또는 1억 5000만 세포/ml의 농도가 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 1x106 세포/mL의 밀도로 배양되는 세포가 사용된다.
일부 구현예에서, 혼합물은 수 시간 (약 3시간) 내지 약 14일 또는 그 사이의 임의의 시간당 정수 값 동안 배양될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 비드 및 T 세포는 2-3일 동안 함께 배양된다. T 세포 배양에 적합한 조건은 혈청 (예를 들어, 태아 소 또는 인간 혈청), 인터루킨-2 (IL-2), 인슐린, IFN-γ, IL-4, IL-7, GM-CSF, IL-10, IL-12, IL-15, TGFβ, 및 TNF-α 또는 당업자에게 공지된 세포 성장을 위한 임의의 기타 첨가제를 포함하는, 증식 및 생존력을 위해 필수적인 인자를 함유할 수 있는 적절한 배지 (예를 들어, 최소 필수 배지 또는 RPMI 배지 1640 또는, X-vivo 15, (Lonza))를 포함한다. 세포 성장을 위한 기타 첨가제는 계면활성제, 플라스마네이트, 및 N-아세틸-시스테인 및 2-머캅토에탄올과 같은 환원제를 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 배지는 RPMI 1640, AIM-V, DMEM, MEM, α-MEM, F-12, X-Vivo 15, 및 X-Vivo 20, 옵티마이저를 포함할 수 있고, 아미노산, 피루브산나트륨 및 비타민이 추가되거나, 무혈청이거나 적절한 양의 혈청 (또는 혈장) 또는 정의된 일련의 호르몬, 및/또는 T 세포의 성장 및 확장에 충분한 양의 사이토카인으로 보충된다. 일부 구현예에서, 배지는 5% 인간 A/B 혈청, 1% 페니실린/스트렙토마이신 (pen/strep) 및 300 단위/ml의 IL-2 (Miltenyi)이 보충된 X-VIVO-15 배지를 포함한다.
T 세포는 성장을 지원하는 데 필요한 조건, 예를 들어, 적절한 온도 (예를 들어, 37℃) 및 대기 (예를 들어, 공기 +5% CO2) 하에서 유지된다.
일부 구현예에서, TCR, CAR 및 본 개시내용의 억제 수용체를 포함하는 T 세포는 자가 세포이다. 확장 및 유전적 변형 전에, T 세포의 공급원은 대상체로부터 수득된다. T 세포와 같은 면역 세포는 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위의 조직, 복수, 흉수, 비장 조직 및 종양을 포함하는 다수의 공급원으로부터 얻을 수 있다. 본 개시내용의 특정 구현예에서, 당업계에서 이용 가능한 임의의 수의 T 세포주가 사용될 수 있다. 본 개시내용의 특정 구현예에서, T 세포는 Ficoll™ 분리와 같은 당업자에게 공지된 임의의 수의 기술을 사용하여 대상체로부터 수집된 혈액 단위로부터 수득될 수 있다.
일부 구현예에서, 개체의 순환 혈액으로부터의 세포는 성분채집술에 의해 얻어진다. 성분채집 생성물은 일반적으로 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 유핵 백혈구, 적혈구 및 혈소판을 포함하는 림프구를 포함한다. 일부 구현예에서, 성분채집법에 의해 수집된 세포는 혈장 분획을 제거하고 후속 처리 단계를 위해 적절한 완충액 또는 배지에 세포를 넣기 위해 세척될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포는 인산염 완충 식염수 (PBS)로 세척된다. 대안적인 구현예에서, 세척 용액은 칼슘이 부족하고 마그네슘이 부족할 수 있거나 전부는 아니지만 많은 2가 양이온이 부족할 수 있다. 당업자는 세척 단계가 제조업체의 지침에 따라 반자동 "유동식" 원심분리기 (예를 들어, Cobe 2991 cell processor, Baxter CytoMate, 또는 Haemonetics Cell Saver 5)를 사용하여 당업자에게 알려진 방법에 의해 달성될 수 있음을 쉽게 이해할 것이다. 세척 후, 세포는 예를 들어, Ca2+-프리, Mg2+-프리 PBS, PlasmaLyte A, 또는 완충액이 있거나 없는 다른 식염수와 같은 다양한 생체 적합성 완충액에 재현탁될 수 있다. 대안적으로, 성분채집 샘플의 바람직하지 않은 성분을 제거하고 세포를 배양 배지에 직접 재현탁할 수 있다.
일부 구현예에서, T 세포와 같은 면역 세포는 예를 들어, PERCOLL™ 구배를 통한 원심분리 또는 역류 원심 분리에 의해 적혈구를 용해시키고 단핵구를 고갈시킴으로써 말초 혈액 림프구로부터 단리된다. T 세포, B 세포, 또는 CD4+ T 세포와 같은 면역 세포의 특정 하위 집단은 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리될 수 있다. 예를 들어, 한 구현예에서, T 세포는 원하는 T 세포의 양성 선택에 충분한 시간 동안, 항-CD4 -접합 비드와 함께 배양함으로써 분리된다.
음성 선택에 의한 T 세포 집단과 같은 면역 세포 집단의 농축은 음성 선택 세포에 고유한 표면 마커에 대한 항체의 조합으로 달성될 수 있다. 한 가지 방법은 음성으로 선택된 세포에 존재하는 세포 표면 마커에 대한 모노클로날 항체 칵테일을 사용하는 음성 자기 면역 부착 또는 유세포 분석법을 통한 세포 분류 및/또는 선택이다. 예를 들어, 음성 선택으로 CD4+ 세포를 강화하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 일반적으로 CD 14, CD20, CD 11b, CD 16, HLA-DR, 및 CD8에 대한 항체를 포함한다.
양성 또는 음성 선택에 의한 원하는 면역 세포 집단의 단리를 위해, 세포 및 표면 (예를 들어, 비드와 같은 입자)의 농도는 다양할 수 있다. 특정 구현예에서, 세포와 비드의 최대 접촉을 보장하기 위해 비드와 세포가 함께 혼합되는 부피를 유의하게 감소시키는 것 (즉, 세포의 농도를 증가시키는 것)이 바람직할 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 2-10℃ 또는 실온에서 다양한 속도로 다양한 시간 동안 회전기에서 배양될 수 있다.
자극을 위한 T 세포, 또는 T 세포와 같은 면역 세포가 단리되는 PBMC도 세척 단계 후에 동결될 수 있다. 이론에 얽매이지 않기를 바라면서, 동결 및 후속 해동 단계는 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도 단핵구를 제거함으로써 더욱 균일한 생성물을 제공한다. 혈장과 혈소판을 제거하는 세척 단계 후 세포를 동결 용액에 현탁할 수 있다. 많은 동결 용액 및 매개변수가 당업계에 알려졌고 이러한 맥락에서 유용할 것이지만, 한 방법은 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민을 함유하는 PBS, 또는 10% 덱스트란 40 및 5% 덱스트로스, 20% 인간 혈청 알부민 및 7.5% DMSO, 또는 31.25% Plasmalyte-A, 31.25% 덱스트로스 5%, 0.45% NaCl, 10% 덱스트란 40 및 5% 덱스트로스, 20% 인간 혈청 알부민, 및 7.5% DMSO를 함유하는 배양 배지 또는 예를 들어, Hespan 및 PlasmaLyte A를 함유하는 다른 적합한 세포 동결 배지를 사용하는 것을 포함하고, 이어서 세포는 분당 1°의 속도로 -80℃로 동결되고 액체 질소 저장 탱크의 증기 상태로 저장된다. -20℃ 또는 액체 질소에서 즉시 제어되지 않은 동결뿐만 아니라 제어된 동결의 다른 방법을 사용할 수 있다.
본 개시내용은 본원에 기재된 활성화제 및/또는 차단제 수용체를 발현하는 면역 세포를 제공하며, 여기서 면역 세포는 주요 조직적합성 (MHC) 클래스 I 복합체의 감소된 발현 및/또는 기능을 갖는다.
일부 구현예에서, 면역 세포는 자가유래이다. 예를 들어, 면역 세포는 치료 요법의 일부로서 세포를 수용할 동일한 대상체로부터 단리되거나 유래된다. MHC 클래스 I 항원에 특이적인 차단제 수용체로 MHC 클래스 I의 감소된 발현 및/또는 기능을 갖도록 자가유래 면역 세포를 변형시키는 것이 유리할 수 있다. 이론에 구애됨이 없이, MHC 클래스 I의 감소된 발현 및/또는 기능을 갖도록 하는 자가유래 면역 세포의 변형은 시스 또는 트랜스로 면역 세포에 의해 발현되는 MHC 클래스 I에 의한 억제 수용체의 결합을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 면역 세포는 모두 동종이계이다. 동종이계 면역 세포는 면역 세포가 투여될 대상체 이외의 공여자로부터 유래될 수 있다. 동종이계 면역 세포는 다양한 유전형의 대상체에서 사용하기 위해 동종이계 세포를 준비하고 보관할 가능성 때문에 세포 요법에서 일반적으로 "규격품(off the shelf)" 또는 "보편적"이라고 한다.
MHC 클래스 I 복합체의 발현 및/또는 기능을 감소시키는 임의의 적합한 방법은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 간주되며, 특히 MHC 클래스 I 성분을 암호화하는 하나 이상의 RNA를 녹다운시키는 간섭 RNA의 발현, 또는 MHC 클래스 I 성분을 암호화하는 유전자의 변형을 포함한다. 본원에 기재된 MHC 클래스 I 복합체의 발현 및/또는 기능을 감소시키는 방법은 동종이계 및 자가유래 면역 세포 둘 모두와 함께 사용하기에 적합하다.
주요 조직적합성 복합체 (MHC)는 적응 면역계에 필요한 일련의 폴리펩티드를 암호화하는 척추동물 게놈 상 유전자좌이다. 이들 중에는 HLA-A, HLA-B, 및 HLA-C 및 이의 대립유전자를 포함하는 MHC 클래스 I 폴리펩티드가 있다. MHC 클래스 I 대립유전자는 매우 다형성이 있으며 모든 유핵 세포에서 발현된다. HLA-A, HLA-B, 및 HLA-C 및 이의 대립유전자에 의해 암호화되는 MHC 클래스 I 폴리펩티드는 β2마이크로글로불린 (B2M)과 이종이량체를 형성하고 세포 표면에서 항원과 복합체로 존재한다. 본원에서 언급된 바와 같이, MHC 클래스 I 유전자 또는 폴리펩티드는 MHC 또는 상기 폴리펩티드를 암호화하는 상응하는 유전자에서 발견되는 임의의 폴리펩티드를 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 면역 세포는 MHC 클래스 I 폴리펩티드, 예를 들어 HLA-A, HLA-B, 및 HLA-C 및 이의 대립유전자를 포함하는 억제제 리간드에 의해 불활성화된다. HLA-A 대립유전자는 예를 들어 제한 없이, HLA-A*02, HLA-A*02:01, HLA-A*02:01:01, HLA-A*02:01:01:01이고/이거나, HLA-A*02 단백질과 동일하거나 유사한 단백질을 암호화하는 임의의 유전자일 수 있다. 따라서, 본원에 기술된 바와 같은 자가분비 신호전달/결합을 방지하기 위해, 면역 세포에서 HLA-A, HLA-B, 및 HLA-C 및 이의 대립유전자에 의해 암호화되는 폴리펩티드의 발현을 제거하거나 감소시키는 것이 바람직하다.
MHC 클래스 I 폴리펩티드 발현이 감소된 면역 세포
일부 구현예에서, 본원에 기재된 면역 세포는 내인성 MHC 클래스 I 폴리펩티드의 대립유전자를 암호화하는 내인성 유전자의 발현 또는 기능을 불활성화시키거나 감소 또는 제거하도록 변형된다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 폴리펩티드를 암호화하는 유전자는 HLA-A, HLA-B, 및/또는 HLA-C이다. HLA-A, HLA-B 및 HLA-C는 HLA-A, HLA-B 및 HLA-C 유전자좌에 의해 암호화된다. 각각의 HLA-A, HLA-B 및 HLA-C는 많은 변이 대립유전자를 포함하며, 이들 모두는 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 폴리펩티드를 암호화하는 유전자는 HLA-A이다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 폴리펩티드를 암호화하는 유전자는 HLA-A*02이다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 폴리펩티드를 암호화하는 유전자는 HLA-A*02:01이다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 폴리펩티드를 암호화하는 유전자는 HLA-A*02:01:01이다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 폴리펩티드를 암호화하는 유전자는 HLA-A*02:01:01:01이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 유전적으로 조작된 면역 세포는 B2M 유전자 생성물의 발현을 감소시키거나 제거하도록 변형된다. 베타-2 마이크로글로불린 (B2M) 유전자는 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 클래스 I, 즉 MHC-I 복합체와 관련된 단백질을 암호화한다. MHC-I 복합체는 세포 표면에 항원을 제시하는 데 필요하다. MHC -I 복합체는 B2M이 결실될 때 파괴되고 기능하지 않는다 (Wang D 등 Stem Cells Transl Med. 4:1234-1245 (2015)). 또한, B2M 유전자는 당업계에 알려진 유전자 편집 기술을 사용하여 고효율로 파괴될 수 있다 (Ren 등 Clin. Cancer Res. 23:2255-2266 (2017)). B2M을 줄이거나 제거하면 면역 세포의 표면 상의 기능적 MHC I를 감소시키거나, 제거할 수 있다.
본 개시내용은 면역 세포에서 내인성 표적 유전자를 편집하기 위한 유전자 편집 시스템을 제공한다. 본 개시내용은 표적 유전자의 서열에 특이적인 간섭 RNA를 제공한다. CRISPR/Cas 시스템, TALEN 및 징크 핑거(zinc finger)와 같은 유전자 편집 시스템을 사용하여 이중 가닥 절단을 생성할 수 있으며, 이는 상동성 지정 복구 또는 비-상동성 말단 접합 (NHEJ)과 같은 유전자 복구 메커니즘을 통해 돌연변이를 도입하는 데 사용할 수 있다. 절단 끝의 절제 후 NHEJ, 또는 부적절한 끝 접합을 사용하여 결실을 도입할 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 유전자는 MHC-I 복합체의 서브유닛을 암호화하는 유전자를 포함한다.
표적 유전자 서열은 프로모터, 인핸서, 인트론, 엑손, 인트론/엑손 접합부, 전사 생성물 (pre-mRNA, mRNA, 및 스플라이스 변이체), 및/또는 3' 및 5' 비번역 영역 (UTR)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 임의의 유전자 요소 또는 유전자 요소의 조합은 본원에 기재된 면역 세포에서 유전자 편집의 목적을 위해 표적화될 수 있다. 표적 유전자에 대한 변형은 표적 유전자 또는 유전자 생성물의 발현 또는 기능을 변경하거나 방해하는 표적 유전자를 편집하기 위해 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, MHC 클래스 I 폴리펩티드를 암호화하는 유전자를 변형시키는 것은 유전자의 전부 또는 일부를 결실시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 폴리펩티드를 암호화하는 유전자를 변형시키는 것은 유전자에 돌연변이를 도입하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 결실, 삽입, 치환 또는 프레임시프트 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 유전자를 변형시키는 것은 핵산 유도 엔도뉴클레아제를 사용하는 것을 포함한다.
본원에 기재된 표적 유전자에 대한 유전자 서열은 당업계에 공지되어 있다. 서열은 NCBI GenBank 또는 NCBI 뉴클레오티드 데이터베이스와 같은 공용 데이터베이스에서 찾을 수 있다. 서열은 유전자 식별자를 사용하여 찾을 수 있고, 예를 들어, HLA-A 유전자는 NCBI 유전자 ID: 3105를 갖고, HLA-B 유전자는 NCBI 유전자 ID: 3106을 갖고, HLA-C 유전자는 NCBI 유전자 ID: 3107을 갖고, B2M 유전자는 NCBI 유전자 ID: 567 및 NCBI 참조 서열: NC_000015.10을 갖는다. 유전자 서열은 키워드를 사용하여 공개 데이터베이스를 검색하여 찾을 수도 있다. 예를 들어, HLA-A 대립유전자는 키워드, "HLA-A*02", "HLA-A*02:01", "HLA-A*02:01:01" 또는 "HLA-A*02:01:01:01"을 검색하여 NCBI 뉴클레오티드 데이터베이스에서 찾을 수 있다. 이들 서열은 당업계에 공지된 다양한 유전자 편집 기술에서 표적화를 위해 사용될 수 있다. 표 8은 본원에 기재된 변형을 위해 표적화된 HLA-A 대립유전자 및 B2M 유전자 서열의 비제한적 예시적 서열을 제공한다.
표 8. 예시적인 표적 유전자 서열
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당업자는 T가 U를 대체하여 서열을 DNA 서열로 또는 그 반대로 전환할 수 있고, 둘 다 본 개시내용의 표적 유전자 서열로 간주됨을 인식할 것이다.
일부 구현예에서, 표적 유전자는 유도된 엔도뉴클레아제를 사용하여 본원에 기술된 면역 세포에서 편집된다. 예시적인 핵산 유도된 엔도뉴클레아제는 CRISPR/Cas9와 같은 클래스 II를 포함한다.
본원에 사용된 "CRISPR" 또는 "CRISPR 유전자 편집"은 군집된 규칙적으로 간격을 둔 짧은 회문 반복 세트 또는 이러한 반복 세트를 포함하는 시스템을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "Cas"는 CRISPR-연관 단백질을 지칭한다. "CRISPR/Cas" 시스템은 표적 유전자를 침묵시키거나 녹아웃시키거나 돌연변이시키는 데 사용될 수 있는 CRISPR 및 Cas에서 유래한 시스템을 지칭한다. 이 시스템은 플라스미드 및 파지와 같은 외래 유전 요소에 대한 저항성을 부여하고 일종의 획득 면역을 제공하는 일종의 원핵 면역 시스템이다. CRISPR/Cas 시스템은 유전자 편집에 사용하기 위해 변형되었다. 이는 하나 이상의 특별히 설계된 가이드 핵산 (gNA), 일반적으로 가이드 RNA (gRNA), 및 gNA와 리보핵단백질 복합체를 형성하는 적절한 Cas 엔도뉴클레아제를 진핵 세포에 도입함으로써 달성된다. gNA는 gNA-엔도뉴클레아제 단백질 복합체를 표적 게놈 위치로 유도하고, 엔도뉴클레아제는 표적 게놈 위치에서 가닥 파손(breakage)을 도입한다. 이러한 가닥 파손은 비-상동 말단 접합 (결실을 야기함) 또는 상동 수리 (삽입을 생성할 수 있음)와 같은 세포 메커니즘에 의해 수리될 수 있으며, 이에 따라 숙주 세포 게놈에 유전적 변형을 도입한다.
CRISPR/Cas 시스템은 클래스 및 유형별로 분류된다. 클래스 2 시스템은 현재 세 가지 유형 (유형 II, V 및 VI)으로 분류되는 단일 간섭 단백질을 나타낸다. 유전자 편집에 적합한 임의의 클래스 2 CRISPR/Cas 시스템, 예를 들어 유형 II, 유형 V 또는 유형 VI 시스템은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 생각된다. 예시적인 클래스 2 유형 II CRISPR 시스템은 Cas9, Csn2 및 Cas4를 포함한다. 예시적인 클래스 2, 유형 V CRISPR 시스템은 Cas12, Cas12a (Cpf1), Cas12b (C2c1), Cas12c (C2c3), Cas12d (CasY), Cas12e (CasX), Cas12f, Cas12g, Cas12h, Cas12i 및 Cas12k (C2c5)를 포함한다. 예시적인 클래스 2 유형 VI 시스템은 Cas13, Cas13a (C2c2) Cas13b, Cas13c 및 Cas13d를 포함한다.
CRISPR 유전자좌라고도 하는, CRISPR 서열은 교대 반복과 스페이서를 포함한다. 자연 발생 CRISPR에서, 스페이서는 일반적으로 플라스미드 또는 파지 서열과 같은 박테리아 외래 서열을 포함한다. 본원에 기재된 바와 같이, 스페이서 서열은 또한 "표적화 서열"로 지칭될 수 있다. 유전 공학을 위한 CRISPR/Cas 시스템에서, 스페이서는 표적 유전자 서열 (gNA)에서 유래된다.
예시적인 클래스 2 유형 II CRISPR 시스템은 이중 나선의 각 가닥에 대해 하나씩 2개의 활성 절단 부위를 갖는 뉴클레아제인 단백질 Cas9에 의존한다. Cas9과 변형된 CRISPR 유전자좌 RNA를 조합하면 유전자 편집 시스템에서 사용할 수 있다. Pennisi (2013) Science 341: 833-836. 일부 구현예에서, 면역 세포를 변형시키는 데 사용되는 Cas 단백질은 Cas9이다.
따라서 CRISPR/Cas 시스템은 염기쌍을 추가 또는 삭제하거나 표적의 발현을 감소시키는 조기 중단을 도입함으로써 본원에 기술된 면역 세포에서 편집을 위해 표적화된 유전자와 같은 표적 유전자를 편집하는 데 사용될 수 있다. CRISPR/Cas 시스템은 RNA 간섭처럼 대안적으로 사용되어 가역적인 방식으로 표적 유전자를 차단할 수 있다. 포유류 세포에서, 예를 들어, RNA는 Cas 단백질을 표적 유전자 프로모터로 안내하여 RNA 중합효소를 입체적으로 차단할 수 있다.
Cas 단백질은 임의의 박테리아 또는 고세균 Cas 단백질에서 유래될 수 있다. 임의의 적합한 CRISPR/Cas 시스템은 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 생각된다. 다른 양태에서, Cas 단백질은 Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9, Cas10, Cas12a (Cpf1), Cas13, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, CasX, CasY, 이의 상동체, 또는 이의 변형된 버전 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, Cas 단백질은 Cas9 단백질, Cpf1 단백질, C2c1 단백질, C2c2 단백질, C2c3 단백질, Cas3, Cas3-HD, Cas 5, Cas7, Cas8, Cas10, 또는 이들의 조합 또는 복합체이다. 일부 구현예에서, Cas 단백질은 Cas9 단백질이다.
예를 들어, 미국 공개 번호 20140068797, 및 Cong (2013) Science 339: 819-823에 기술된 당업계에 알려진 기술을 사용하여 표적 유전자를 억제하는 인공 CRISPR/Cas 시스템을 생성할 수 있다. 예를 들어, Tsai (2014) Nature Biotechnol., 32:6 569-576, 미국 특허 번호 8,871,445; 8,865,406; 8,795,965; 8,771,945; 및 8,697,359에 기술된 표적 유전자를 억제하는 당업계에 알려진 다른 인공 CRISPR/Cas 시스템을 또한 생성할 수 있다. 특정 Cas 단백질에 적합한 gNA를 설계하는 방법은 당업자에게 공지될 것이다.
본 개시내용은 표적 핵산 게놈 내의 특정 표적 유전자 서열에 대한 관련 폴리펩티드 (예를 들어, 핵산 유도된 엔도뉴클레아제)의 활성을 지시할 수 있는 유전자-표적화 가이드 핵산 (gNA)을 제공한다. 게놈-표적화 핵산은 RNA일 수 있다. 게놈-표적화 RNA는 본원에서 "가이드 RNA" 또는 "gRNA"로 지칭된다. 가이드 RNA는 적어도 관심 표적 핵산 서열에 혼성화하는 표적화 서열, 및 CRISPR 반복 서열을 포함할 수 있다. 일부 유형 II 시스템에서, gRNA는 또한 본원에서 "스캐폴드" 서열로도 지칭되는, tracrRNA 서열로 불리는 제2 RNA를 포함한다. 유형 II 가이드 RNA (gRNA)에서, CRISPR 반복 서열 및 스캐폴드 서열은 서로 혼성화하여 듀플렉스를 형성한다. 유형 V 가이드 RNA (gRNA)에서, crRNA는 듀플렉스를 형성한다. 두 시스템 모두에서, 듀플렉스는 가이드 RNA와 부위 지정 폴리펩티드가 복합체를 형성하도록 부위 지정 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 유전자-표적화 핵산은 부위 지정 폴리펩티드와의 회합에 의해 복합체에 표적 특이성을 제공할 수 있다. 따라서 유전자-표적화 핵산은 부위 지정 폴리펩티드의 활성을 지시할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 표적화 서열 및 가이드 RNA 스캐폴드 서열을 포함하는 가이드 RNA를 제공하고, 여기서 표적화 서열은 표적 유전자의 서열에 상보적이다.
예시적인 가이드 RNA는 약 15-20개 염기의 표적화 서열을 포함한다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 각각의 gRNA는 그의 게놈 표적 서열에 상보적인 표적 서열을 포함하도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 각각의 표적화 서열, 예를 들어, PAM 부위를 나타내는 3개의 3' 뉴클레오티드를 제외한 표 9에 제시된 DNA 서열의 RNA 버전은 단일 RNA 키메라 또는 crRNA에 넣을 수 있다.
유전자 표적화 핵산은 이중-분자 가이드 RNA일 수 있다. 유전자 표적화 핵산은 단일-분자 가이드 RNA일 수 있다. 유전자 표적화 핵산은 예를 들어, 쌍을 이룬 gRNA, 또는 단일 단계에서 사용되는 다중 gRNA를 포함하는 것과 같이 당업계에 알려진 가이드 RNA의 임의의 알려진 구성일 수 있다. 코딩 서열과 스플라이스 접합부가 있는 게놈 서열에서는 분명하지만, 유전자 발현에 필요한 다른 특징은 특이하고 불분명할 수 있다.
이중-분자 가이드 RNA는 RNA의 두 가닥을 포함할 수 있다. 제1 가닥은 5'에서 3' 방향의 서열, 선택적인 스페이서 연장 서열, 표적화 서열 및 최소 CRISPR 반복 서열을 포함한다. 제2 가닥은 최소 tracrRNA 서열 (최소 CRISPR 반복 서열에 상보적), 3' 서열 및 선택적인 tracrRNA 연장 서열을 포함할 수 있다.
유형 II 시스템에서 단일-분자 가이드 RNA (sgRNA)는 5'에서 3' 방향으로, 선택적인 스페이서 연장 서열, 표적화 서열, 최소 CRISPR 반복 서열, 단일-분자 가이드 링커, 최소 tracrRNA 서열, 3' 서열 및 선택적인 tracrRNA 연장 서열을 포함할 수 있다. 선택적 tracrRNA 연장은 가이드 RNA에 대한 추가 기능성 (예를 들어, 안정성)을 제공하는 요소를 포함할 수 있다. 단일-분자 가이드 링커는 최소 CRISPR 반복과 최소 tracrRNA 서열을 연결하여 헤어핀 구조를 형성할 수 있다. 선택적 tracrRNA 연장은 하나 이상의 헤어핀을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 가이드 RNA 또는 단일-분자 가이드 RNA (sgRNA)는 표적화 서열 및 스캐폴드 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 스캐폴드 서열은 Cas9 gRNA 서열이다. 일부 구현예에서, 스캐폴드 서열은 GTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTTTTT　(서열 번호 497)과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%,　또는 적어도 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함하는 DNA 서열에 의해 암호화된다.　일부 구현예에서, 스캐폴드　서열은 GTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTTTTT　(서열 번호 497)를 포함하는 DNA　서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 예를 들어 CRISPR/Cas 시스템이 Cas9 시스템인 구현예에서, sgRNA는 sgRNA 서열의 5' 말단에 20개 뉴클레오티드 표적화 서열을 포함할 수 있다. sgRNA 서열의 5' 말단에 20개 미만의 뉴클레오티드 표적화 서열을 포함할 수 있다. sgRNA는 sgRNA 서열의 5' 말단에 20개 초과의 뉴클레오티드 표적화 서열을 포함할 수 있다. sgRNA는 sgRNA 서열의 5' 말단에 17-30개 뉴클레오티드를 갖는 가변 길이 표적화 서열을 포함할 수 있다.
적합한 스캐폴드 서열, 및 스캐폴드 표적화 서열의 배열은 엔도뉴클레아제의 선택에 따라 달라지며 당업자에게 공지될 것이다.
유형 II 시스템, 예를 들어 Cas9의 단일-분자 가이드 RNA (sgRNA)는 5'에서 3' 방향으로 최소 CRISPR 반복 서열 및 표적화 서열을 포함할 수 있다.
예시로서, CRISPR/Cas9 또는 CRISPR/Cpf1 시스템에서 사용되는 가이드 RNA, 또는 다른 더 작은 RNA는 하기 예시되고 당업계에 기재된 바와 같이 화학적 수단에 의해 쉽게 합성될 수 있다. 화학적 합성 절차가 지속적으로 확장되는 동안, 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC, PAGE와 같은 젤의 사용을 피함)와 같은 절차에 의한 그러한 RNA의 정제는 폴리뉴클레오티드 길이가 100개 정도의 뉴클레오티드 이상으로 유의하게 증가함에 따라 더욱 어려워지는 경향이 있다. 더 긴 길이의 RNA를 생성하는 데 사용되는 한 가지 접근 방식은 함께 결찰되는 두 개 이상의 분자를 생성하는 것이다. Cas9 또는 Cpf1 엔도뉴클레아제를 암호화하는 것과 같은 훨씬 더 긴 RNA는 효소적으로 더 쉽게 생성된다. 다양한 유형의 RNA 변형은 RNA의 화학적 합성 및/또는 효소적 생성 동안 또는 후에 도입될 수 있으며, 예를 들어, 당업계에 기술된 바와 같이 안정성을 강화하고, 선천적 면역 반응의 가능성 또는 정도를 감소시키고/시키거나 다른 속성을 강화하는 변형을 들 수 있다.
gRNA의 표적화 서열은 관심 표적 핵산의 서열에 혼성화한다. 게놈-표적화 핵산의 표적화 서열은 혼성화 (즉, 염기쌍 형성)를 통해 서열 특이적 방식으로 표적 핵산과 상호작용할 수 있다. 표적화 서열의 뉴클레오티드 서열은 관심 표적 핵산의 서열에 따라 다를 수 있다.
본원에 기재된 Cas9 시스템에서, 표적화 서열은 시스템에서 사용되는 Cas9 효소의 PAM의 역 상보체의 5'에 위치하는 표적 핵산에 혼성화하도록 설계될 수 있다. 표적화 서열은 표적 서열과 완벽하게 일치하거나 불일치할 수 있다. 각각의 CRISPR/Cas 시스템 단백질은 표적 DNA에서 인식하는 특정 방향과 위치에 특정 PAM 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, S. 피오게네스 Cas9은 표적 핵산에서 서열 5'을 포함하는 PAM을 인식하며, 여기서 R은 A 또는 G를 포함하고, 여기서 N은 임의의 뉴클레오티드이고 N은 표적화 서열에 의해 표적화된 표적 핵산 서열의 바로 3'이다. 적절한 PAM 서열의 선택은 당업자에게 명백할 것이다.
표적 서열은 gRNA의 표적화 서열에 상보적이며, 혼성화한다. 표적 핵산 서열은 20개 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 표적 핵산은 20개 미만의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 표적 핵산은 20개 초과의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 표적 핵산은 적어도 5, 10, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30개 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어 CRISPR/Cas 시스템이 Cas9 시스템인 구현예에서, 표적 핵산 서열은 PAM 서열의 역 상보체의 첫 번째 뉴클레오티드의 5' 바로 옆에 있는 20개의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 이러한 표적 핵산 서열은 PAM 가닥 또는 표적 가닥으로 종종 지칭되며, 상보적 핵산 서열은 종종 비-PAM 가닥 또는 비-표적 가닥으로 지칭된다. 당업자는 표적화 서열이 표적 핵산의 비-PAM 가닥에 혼성화하는 것을 인식할 것이다, 예를 들어, US20190185849A1 참조한다.
일부 예에서, 표적화 서열과 표적 핵산 사이의 퍼센트 상보성은 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100%이다. 일부 예에서, 표적화 서열과 표적 핵산 사이의 퍼센트 상보성은 최대 약 30%, 최대 약 40%, 최대 약 50%, 최대 약 60%, 최대 약 65%, 최대 약 70%, 최대 약 75%, 최대 약 80%, 최대 약 85%, 최대 약 90%, 최대 약 95%, 최대 약 97%, 최대 약 98%, 최대 약 99%, 또는 100%이다. 일부 예에서, 표적화 서열과 표적 핵산 사이의 퍼센트 상보성은 표적 핵산의 상보성 가닥의 표적 서열의 6개의 인접한 5' 대부분 뉴클레오티드에 걸쳐 100%이다. 표적화 서열과 표적 핵산 사이 퍼센트 상보성은 약 20개의 연속 뉴클레오티드에 걸쳐 적어도 60%일 수 있다. 표적화 서열 및 표적 핵산의 길이는 1 내지 6개의 뉴클레오티드만큼 다를 수 있으며, 이는 벌지 또는 벌지들로 생각할 수 있다.
표적화 서열은 당업자에게 공지된 컴퓨터 프로그램을 사용하여 설계되거나 선택될 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 예측된 용융 온도, 2차 구조 형성, 예측된 어닐링 온도, 서열 동일성, 게놈 맥락, 염색질 접근성, % GC, 게놈 발생 빈도 (예를 들어, 불일치, 삽입 또는 결실의 결과로 하나 이상의 지점에서 동일하거나 유사하지만 다양한 서열의), 메틸화 상태, SNP의 존재 등과 같은 변수를 사용할 수 있다. 사용 가능한 컴퓨터 프로그램은 NCBI 유전자 ID, 공식 유전자 기호, Ensembl 유전자 ID, 게놈 좌표, 또는 DNA 서열을 입력으로 사용할 수 있으며, 입력으로 지정된 적절한 게놈 영역을 표적으로 하는 sgRNA를 포함하는 출력 파일을 생성할 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 또한 표적 유전자에 대한 sgRNA의 온- 및 오프-표적 결합을 나타내는 통계 및 스코어의 요약을 제공할 수 있다 (Doench 등 Nat Biotechnol. 34:184-191 (2016)). 본 개시내용은 표적화 서열을 포함하는 가이드 RNA를 제공한다. 일부 구현예에서, 가이드 RNA는 가이드 RNA 스캐폴드 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 서열은 HLA-A, HLA-B, HLA-C, B2M 또는 이의 대립유전자로 이루어진 그룹으로부터 선택된 표적 유전자의 서열에 상보적이다. 일부 구현예에서, 표적 유전자는 HLA-A 유전자이다. 일부 구현예에서, 표적 유전자는 HLA-B 유전자이다. 일부 구현예에서, 표적 유전자는 HLA-C 유전자이다. 일부 구현예에서 표적 유전자는 HLA-A, HLA-B, HLA-C, 또는 이의 조합이다. 일부 구현예에서, 표적화 서열은 표 8에 개시된 서열과 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 동일성을 공유하거나 동일한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, gNA는 내인성 HLA-A 유전자좌의 서열을 특이적으로 표적화한다. 일부 구현예에서, HLA-A 유전자좌의 서열을 특이적으로 표적화하는 gNA는 표 9에 개시된 서열로부터 선택된 서열과 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A 유전자좌의 서열을 특이적으로 표적화하는 gNA는 표 9에 개시된 서열로부터 선택된 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, gNA는 HLA-A*02 대립유전자의 서열을 특이적으로 표적화한다. 예를 들어, gRNA는 모든 HLA-A*02 대립유전자에 의해 공유되지만, HLA-A*02 및 HLA-A*03 대립유전자에 의해 공유되지 않는 서열을 특이적으로 표적화하고, 혼성화한다. 일부 구현예에서, gNA는 HLA-A*02:01 대립유전자의 서열을 특이적으로 표적화한다. 일부 구현예에서, gNA는 HLA-A*02:01:01 대립유전자의 서열을 특이적으로 표적화한다. 일부 구현예에서, gNA는 HLA-A*02:01:01:01 대립유전자의 서열을 특이적으로 표적화한다. 일부 구현예에서, gNA는 HLA-A*02:01:01:01 대립유전자의 서열을 특이적으로 표적화한다.
일부 구현예에서, gNA는 HLA-A*02의 코딩 DNA 서열을 특이적으로 표적화한다.
일부 구현예에서, gNA는 1000 초과 HLA-A*02 대립유전자에 의해 공유되는 코딩 DNA 서열을 특이적으로 표적화한다. 일부 구현예에서, 1000개 초과 HLA-A*02 대립유전자에서 코딩 DNA 서열을 특이적으로 표적화하는 gNA는 서열 번호 400-465로부터 선택된 서열과 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 동일성을 공유하거나 동일한 서열을 포함한다.
표 9-12의 서열은 DNA 서열로서 제시된다. 당업자는 티민 (T)이 표 9-12에 제시된 것을 포함하는 임의의 DNA 서열에서 우라실 (U)로 대체되어 상응하는 RNA 서열에 도달할 수 있음을 이해할 것이다.
표 9. HLA-A 및 HLA-A 대립유전자를 표적으로 하는 예시적인 서열
Figure pct00068
Figure pct00069
표 9에 개시된 서열은 PAM 서열을 포함하는 상응하는 게놈 서열을 포함한다. 당업자는 gRNA의 표적화 서열이 gRNA에 상응하는 PAM 부위를 나타내는, 표 9의 서열의 3개의 3' 말단 뉴클레오티드를 포함하지 않는다는 것을 이해할 것이다.
본 개시내용은 B2M 유전자에 특이적인 표적화 서열을 포함하는 gNA를 제공한다. 일부 구현예에서, gNA는 B2M 유전자의 코딩 서열 (CDS) 서열을 특이적으로 표적화한다. 일부 구현예에서, gNA는 B2M 유전자 프로모터 서열을 표적화하는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서 gNA는 표적화 서열 및 gNA 스캐폴드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 서열은 표 10에 제시된 서열, 또는 이에 대해 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함하는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 표적화 서열은 B2M 유전자의 서열에 대해 상보적이다. 일부 구현예에서, B2M 유전자는 표 8에 제시된 B2M 서열과 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 동일성을 공유하는 서열을 포함한다.
표 10. B2M을 표적화하는 예시적인 서열
Figure pct00070
Figure pct00071
일부 구현예에서, 본원에 기재된 면역 세포는 TALEN 유전자 편집을 사용하여 편집된다.
"TALEN" 또는 "TALEN 유전자 편집"은 표적 유전자를 편집하는 데 사용되는 인공 뉴클레아제인, 전사 활성화제-유사 효과기 뉴클레아제를 지칭한다.
TALEN은 TAL 효과기 DNA 결합 도메인을 DNA 절단 도메인에 융합하여 인공적으로 생성된다. 크산토모나스 박테리아에서 유래된 전사 활성화제-유사 효과기 (TALE)는 TCR 서브유닛, MHC 클래스 I 복합체 구성성분, 또는 CD52와 같은 표적 유전자의 일부를 포함하여, 원하는 DNA 서열에 결합하도록 조작될 수 있다. 조작된 TALE을 DNA 절단 도메인과 조합함으로써, 표적 유전자 서열을 포함하는 임의의 원하는 DNA 서열에 특이적인 제한 효소를 생산할 수 있다. 그런 다음 이들은 세포에 도입되어 게놈 편집에 사용될 수 있다.
TALEN을 생산하기 위해, TALE 단백질은 야생형 또는 돌연변이 Fold 엔도뉴클레아제인, 뉴클레아제 (N)에 융합된다. FokI에 대한 여러 돌연변이가 TALEN에서 사용하기 위해 만들어졌고; 예를 들어, 이들은 절단 특이성 또는 활성을 개선한다.
FokI 도메인은 적절한 방향과 간격을 가진 표적 게놈의 부위에 대해 고유한 DNA 결합 도메인이 있는 두 개의 작제물을 필요로 하는 이량체로 기능한다. TALE DNA 결합 도메인과 FokI 절단 도메인 사이의 아미노산 잔기의 수 및 2개의 개별 TALEN 결합 부위 사이의 염기의 수 모두 높은 수준의 활성을 달성하기 위한 중요한 매개변수인 것으로 보인다.
표적 유전자의 서열에 특이적인 TALEN은 모듈 구성 요소를 사용하는 다양한 계획을 포함하여 당업계에 알려진 임의의 방법을 사용하여 구성될 수 있다.
일부 구현예에서, 표적 유전자는 ZFN 유전자 편집을 사용하여 본원에 기재된 면역 세포에서 편집된다.
"ZFN" 또는 "징크 핑거 뉴클레아제" 또는 "ZFN 유전자 편집"은 표적 유전자를 편집하는 데 사용될 수 있는 인공 뉴클레아제인, 징크 핑거 뉴클레아제를 지칭한다.
TALEN과 마찬가지로, ZFN은 DNA-결합 도메인에 융합된 Fold 뉴클레아제 도메인 (또는 이의 유도체)을 포함한다. ZFN의 경우에, DNA-결합 도메인은 하나 이상의 징크 핑거를 포함한다.
징크 핑거는 하나 이상의 아연 이온에 의해 안정화된 작은 단백질 구조 모티프이다. 징크 핑거는 예를 들어, Cys2His2를 포함할 수 있고, 대략 3-bp 서열을 인식할 수 있다. 특이성이 알려진 다양한 징크 핑거를 조합하여 약 6, 9, 12, 15 또는 18-bp 서열을 인식하는 멀티핑거 폴리펩티드를 생산할 수 있다. 파지 디스플레이, 효모 1-하이브리드 시스템, 박테리아 1-하이브리드 및 2-하이브리드 시스템, 포유동물 세포를 포함하는 특정 서열을 인식하는 징크 핑거 (및 이들의 조합)를 생성하기 위해 다양한 선택 및 모듈 조립 기술을 사용할 수 있다.
TALEN과 마찬가지로, ZFN은 DNA를 절단하기 위해 이량체화되어야 한다. 따라서, 비-회문 DNA 부위를 표적으로 삼기 위해서는 한 쌍의 ZFN이 필요하다. 2개의 개별 ZFN은 적절한 간격으로 떨어져 있는 뉴클레아제를 사용하여 DNA의 반대쪽 가닥에 결합해야 한다.
또한 TALEN과 마찬가지로, ZFN은 DNA에 이중-가닥 절단을 생성할 수 있고, 이는 부적절하게 복구될 경우 프레임시프트 돌연변이를 생성하여, 세포의 표적 유전자 또는 유전자 생성물의 발현 및 양을 감소시킨다. ZFN은 또한, 상동 재조합과 함께 사용되어 표적 유전자에서 돌연변이를 일으킬 수 있다.
표적 유전자의 서열에 특이적인 ZFN은 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 구축할 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 MCH-I 구성성분의 발현 및 기능은 RNA 간섭을 사용하여 감소된다. "RNAi" 또는 "RNA 간섭"은 이중-가닥 RNA (dsRNA)에 의해 매개되는 서열 특이적 전사 후 유전자 침묵 과정을 지칭한다. siRNA (소 간섭 RNA), miRNA (마이크로 RNA), shRNA (짧은 헤어핀 RNA), ddRNA (DNA-지정 RNA), piRNA (Piwi-상호작용 RNA), 또는 rasiRNA (반복 관련 siRNA) 및 이들의 변형된 형태와 같은 듀플렉스 RNA는 모두 RNA 간섭을 매개할 수 있다. 이러한 dsRNA 분자는 상업적으로 이용 가능하거나 알려진 서열 정보를 기반으로 설계 및 제조될 수 있다. 이들 분자의 안티-센스 가닥은 RNA, DNA, PNA, 또는 이의 조합을 포함할 수 있다. DNA/RNA 키메라 폴리뉴클레오티드는 표적 유전자의 발현을 억제하는 DNA 및 RNA로 구성된 이중-가닥 폴리뉴클레오티드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. dsRNA 분자는 또한 본원에 기재된 바와 같이, 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있으며, 이는 가닥 중 하나 또는 둘 다에 통합될 수 있다.
RNAi 유전자 침묵 또는 녹다운에서, 표적 유전자의 일부에 상보적인 제1 (안티-센스) 가닥 및 제1 안티-센스 가닥에 완전히 또는 부분적으로 상보적인 제2 (센스) 가닥을 포함하는 dsRNA는 유기체 내로 도입된다. 유기체에 도입된 후, 표적 유전자 특이적 dsRNA는 상대적으로 작은 단편 (siRNA)으로 처리되고 이후 유기체 전체에 분포될 수 있으며, 표적 유전자의 메신저 RNA를 감소시켜, 표적 유전자의 완전한 또는 부분적인 결실로부터 발생하는 표현형과 매우 유사하게 될 수 있는 표현형을 유도한다.
세포의 특정 dsRNA는 다이서(Dicer) 효소, 리보뉴클레아제 III 효소의 작용을 받을 수 있다. 다이서는 dsRNA를 dsRNA의 더 짧은 조각, 즉 siRNA로 처리할 수 있다. RNAi는 또한 RNA 유도 침묵 복합체 (RISC)로 알려진 엔도뉴클레아제 복합체를 포함한다. 다이서에 의한 절단 후, siRNA는 RISC 복합체에 들어가고 siRNA 듀플렉스의 안티센스 가닥에 상보적인 서열을 갖는 단일 가닥 RNA 표적의 절단을 지시한다. siRNA의 다른 가닥은 패신저 가닥이다. 표적 RNA의 절단은 siRNA 듀플렉스의 안티센스 가닥에 상보적인 영역의 중간에서 일어난다. 따라서 siRNA는 서열 특이적 방식으로 RNA 간섭을 매개함으로써 유전자 발현을 하향 조절하거나 녹다운 시킬 수 있다.
RNA 간섭과 관련하여 사용되는 바와 같이, "표적 유전자" 또는 "표적 서열"은 상응하는 RNA가 본원에 기재된 바와 같은 dsRNA 또는 siRNA를 사용하여 RNAi 경로를 통한 분해를 위해 표적화되는 유전자 또는 유전자 서열을 지칭한다. 예시적인 표적 유전자 서열은 표 8에 나타낸다. 예를 들어 siRNA를 사용하여 유전자를 표적화하기 위해, siRNA는 표적 유전자 또는 서열의 적어도 일부에 상보적이거나 실질적으로 상보적인 안티센스 영역, 및 안티-센스 가닥에 상보적인 센스 가닥을 포함한다. 일단 세포에 도입되면, siRNA는 표적 서열을 포함하는 RNA를 절단하도록 RISC 복합체를 지시하여 RNA를 분해한다. 본 개시내용은 간섭 RNA를 제공한다. 본 개시내용의 이중 가닥 RNA 분자는 당업계에 공지된 임의의 유형의 RNA 간섭 분자의 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 RNA 분자는 소 간섭 RNA (siRNA)이다. 다른 구현예에서, 이중 가닥 RNA 분자는 짧은 헤어핀 RNA (shRNA) 분자이다. 다른 구현예에서, 이중 가닥 RNA 분자는 siRNA를 생성하기 위해 세포에서 처리되는 다이서 기질이다. 다른 구현예에서 이중 가닥 RNA 분자는 마이크로RNA 전구체 분자의 부분이다.
일부 구현예에서, shRNA는 RISC 활성 siRNA 분자를 생성하기 위해 처리될 수 있는 다이서 기질로서 적합한 길이이다. 예를 들어, Rossi 등, US2005/0244858 참조.
다이서 기질 이중 가닥 RNA (예를 들어 shRNA)는 활성 siRNA를 생산하기 위해 다이서에 의해 처리되기에 충분한 길이일 수 있으며 다음 특성 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다: (i) 다이서 기질 shRNA는 예를 들어, 안티-센스 가닥에 3' 오버행을 갖는 비대칭일 수 있다, (ii) 다이서 기질 shRNA는 센스 가닥에서 변형된 3' 말단을 가질 수 있어 활성 siRNA에 대한 다이서 결합 및 dsRNA의 방향을 지시할 수 있다, 예를 들어 하나 이상의 DNA 뉴클레오티드의 통합, 및 (iii) 다이서 기질 ds RNA의 제1 및 제2 가닥은 21-30 bp 길이일 수 있다.
일부 구현예에서, 간섭 RNA는 B2M mRNA의 서열에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 간섭 RNA는 B2M mRNA의 RNAi-매개 분해를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, B2M mRNA 서열은 코딩 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, B2M mRNA 서열은 비번역 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 간섭 RNA는 HLA-A*02 mRNA의 서열에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 간섭 RNA는 HLA-A*02 mRNA의 RNAi-매개 분해를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, HLA-A*02 mRNA 서열은 코딩 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*02 mRNA 서열은 비번역 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 간섭 RNA는 짧은 헤어핀 RNA (shRNA)이다. 일부 구현예에서, shRNA는 5'에서 3' 말단으로 B2M mRNA에 상보적인 서열을 갖는 제1 서열; 및, 5'에서 3' 말단으로 제1 서열에 상보적인 서열을 갖는 제2 서열을 포함하고, 여기서 제1 서열 및 제2 서열은 shRNA를 형성한다.
일부 구현예에서, 제1 서열은 18, 19, 20, 21, 또는 22개 뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서, 제1 서열은 표 11 및 12에 제시된 서열로부터 선택된 서열에 상보적이다. 일부 구현예에서, 제1 서열은 25% 이상 60% 미만의 GC 함량을 갖는다. 일부 구현예에서, 제1 서열은 표 11 및 12에 제시된 서열로부터 선택된 서열에 상보적이다. 일부 구현예에서, 제1 서열은 동일한 염기의 4개의 뉴클레오티드 또는 7개의 C 또는 G 뉴클레오티드 염기의 런을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제1 서열은 21개 뉴클레오티드이다.
제1 서열에 상보적인 예시적인 표적 B2M 서열은 표 11에 나타나 있다.
일부 경우에, 제1 서열은 표적 핵산 서열에 대해 100% 동일성, 즉 완전 동일성, 상동성, 상보성을 가질 수 있다. 다른 경우에, 제1 서열과 표적 핵산 서열 사이에 하나 이상의 불일치가 있을 수 있다. 예를 들어, 센스 영역과 표적 핵산 서열 사이에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개의 불일치가 있을 수 있다.
표 11에 제시된 서열은 DNA 서열로 제시된다. 표 11에 제시된 모든 서열에서, 티민 (T)은 우라실 (U)로 대체되어 표적 mRNA 서열의 서열에 도달할 수 있다.
표 11. 제1 서열에 상보적인 예시적인 표적 B2M 서열.
Figure pct00072
Figure pct00073
B2M shRNA를 암호화하는 예시적인 서열은 GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC (서열 번호 179)의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. B2M shRNA를 암호화하는 추가 예시적인 서열은 GTTAACTTCCAATTTACATACCGAAGTATGTAAATTGGAAGTTAAC (서열 번호 180)의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 간섭 RNA는 HLA-A*02 mRNA의 서열에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 간섭 RNA는 HLA-A*02 mRNA의 RNAi-매개 분해를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, HLA-A*02 mRNA 서열은 코딩 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA-A*02 mRNA 서열은 비번역 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 간섭 RNA는 짧은 헤어핀 RNA (shRNA)이다. 일부 구현예에서, shRNA는 5'에서 3' 말단으로 HLA-A*02 mRNA에 상보적인 서열을 갖는 제1 서열; 및 5'에서 3' 말단으로 제1 서열에 상보적인 서열을 갖는 제2 서열, 여기서 제1 서열 및 제2 서열은 shRNA를 형성한다.
제1 서열에 상보적인 예시적인 표적 HLA 서열은 표 12에 나타나 있다.
표 12. 제1 서열에 상보적인 예시적인 표적 HLA 서열
Figure pct00074
Figure pct00075
일부 구현예에서, 제1 서열 및 제2 서열은 때때로 루프로 지칭되는 링커에 의해 분리된다. 일부 구현예에서, 제1 서열 및 제2 서열 모두 하나의 단일-가닥 RNA 또는 DNA 벡터에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 루프는 제1 서열과 제2 서열 사이에 있다. 이들 구현예에서, 제1 서열 및 제2 서열은 혼성화하여 듀플렉스 영역을 형성한다. 제1 서열 및 제2 서열은 링커 서열에 의해 결합되어, "헤어핀" 또는 "스템-루프" 구조를 형성한다. shRNA는 단일 가닥 분자의 반대쪽 끝에 상보적인 제1 서열 및 제2 서열을 가질 수 있으므로, 분자는 상보적인 서열 부분과 듀플렉스 영역을 형성할 수 있고, 가닥은 링커에 의해 듀플렉스 영역의 한쪽 끝에서 연결된다 (즉 루프 서열). 링커, 또는 루프 서열은 뉴클레오티드 또는 비-뉴클레오티드 링커일 수 있다. 링커는 공유 결합 또는 비공유 상호작용을 통해 제1 서열, 선택적으로 제2 서열과 상호작용할 수 있다.
임의의 적합한 뉴클레오티드 루프 서열은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 생각된다. 본 개시내용의 shRNA는 shRNA의 제1 서열을 shRNA의 제2 서열에 결합시키는 뉴클레오티드, 비-뉴클레오티드, 또는 혼합된 뉴클레오티드/비-뉴클레오티드 링커를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드 루프 서열은 2개 이상의 뉴클레오티드 길이, 예를 들어 약 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 예시적인 루프 서열은 표 14에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, shRNA는 5' 플랭크 서열 및 3' 플랭크 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 플랭크 서열은 제1 서열의 5' 말단에 연결되고, 3' 플랭크 서열은 제2 서열의 3' 말단에 연결된다.
이론에 얽매이지 않고, 마이크로RNA에서 발견되는 것과 유사한 5' 및 3' 서열을 갖는 플랭킹 shRNA 스템 루프 서열은 shRNA 처리의 효율성을 증가시키면서 내인성 마이크로RNA 처리 기계에 의한 처리를 위해 shRNA를 표적으로 할 수 있다고 생각된다. 대안적으로, 또는 추가로, 플랭킹 서열은 중합효소 II 또는 중합효소 III 프로모터와의 shRNA 호환성을 증가시켜, shRNA 발현의 더욱 효과적인 조절을 유도할 수 있다.
일부 구현예에서, 5' 플랭크 서열은 표 13에 제시된 서열로부터 선택된다. 예시적인 플랭크 서열은 표 13에 나타낸다.
표 13. 예시적인 플랭크 서열
Figure pct00076
일부 구현예에서, 제1 및 제2 서열은 단일 가닥 폴리뉴클레오티드 상에 존재하고, 여기서 제1 서열 및 제2 서열은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 뉴클레오티드에 의해 분리되고, 여기서 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 뉴클레오티드는 shRNA에서 루프 영역을 형성한다. 일부 구현예에서, 루프 영역은 표 14에 제시된 서열로부터 선택된 서열을 포함한다.
표 14. 예시적인 루프 영역 서열
Figure pct00077
본 개시내용의 shRNA는 화학적 합성에 의해, 시험관 내 전사에 의해, 또는 다이서 또는 유사한 활성을 갖는 또 다른 적절한 뉴클레아제를 사용한 더 긴 이중 가닥 RNA의 절단에 의해 외인성으로 생성될 수 있다. 통상적인 DNA/RNA 합성기를 사용하여 보호된 리보뉴클레오시드 포스포르아미다이트로부터 생성된, 화학적으로 합성된 siRNA는 Millipore Sigma (Houston, Tex.), Ambion Inc. (Austin, Tex.). Invitrogen (Carlsbad, Calif.), 또는 Dharmacon (Lafayette, Colo.)과 같은 상업적 공급자로부터 얻을 수 있다. siRNA는 예를 들어 용매 또는 수지를 사용한 추출, 침전, 전기영동, 크로마토그래피 또는 이들의 조합에 의해 정제될 수 있다. 대안적으로, siRNA는 시료 처리로 인한 소실을 피하기 위해 정제가 거의 없는 경우에 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 shRNA는 이중 가닥 RNA를 암호화하는 핵산이 클로닝된 발현 벡터를 사용하여, 예를 들어 적합한 프로모터의 제어 하에 생성될 수 있다.
약학 조성물
본 개시내용은 본 개시내용의 제1 및 제2 수용체 및 약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 면역 세포를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
이러한 조성물은 중성 완충 식염수, 인산염 완충 식염수 등과 같은 완충제; 글루코스, 만노스, 수크로즈 또는 덱스트란, 만니톨과 같은 탄수화물; 단백질; 폴리펩티드 또는 글리신과 같은 아미노산; 항산화제; EDTA 또는 글루타티온과 같은 킬레이트제; 및 방부제를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 면역 세포는 제1 수용체 및 제2 수용체 모두를 발현한다. 일부 구현예에서, 적어도 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 면역 세포가 제1 수용체 및 제2 수용체 모두를 발현한다. 일부 구현예에서, 적어도 90%의 면역 세포가 제1 수용체 및 제2 수용체 모두를 발현한다.
암 치료
본 개시내용의 제1 및 제2 수용체를 포함하는 면역 세포를 포함하는 치료적 유효량의 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 복수의 암 세포를 사멸시키거나 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 면역 세포는 동일한 세포에서 두 수용체를 모두 발현한다.
암은 비정상 세포가 통제 없이 분열하여 주변 조직으로 전이되는 질환이다. 일부 구현예에서, 암은 액상 종양 또는 고형 종양을 포함한다. 예시적인 액상 종양은 백혈병 및 림프종을 포함한다. 암은 상피 조직을 포함하여 사실상 신체의 한 기관에서 발생할 수 있다. 복수의 암 세포가 제1, 활성화제, 리간드를 발현하고 제2, 억제제 리간드를 발현하지 않는 임의의 암은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 간주된다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법을 사용하여 치료될 수 있는 CEA 양성 암은 결장직장암, 췌장암, 식도암, 위암, 폐 선암종, 두경부암, 담낭암, 미만성 거대 B 세포 암 또는 급성 골수성 백혈병 암을 포함한다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 표적 항원을 발현한다. 일부 구현예에서, 대상체의 복수의 암 세포는 CEA를 발현한다. 세포가 CEA를 발현하는, 즉 CEA-양성인 임의의 암은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 간주된다. 예시적인 CEA-양성 암은 전립선암, 난소암, 폐암, 갑상선암, 위장관암, 유방암 및 간암을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 추가의 CEA-양성 암은 결장직장암, 췌장암, 식도암, 위암, 폐암, 두경부암, 담낭암, 미만성 거대 B 세포 암 또는 급성 골수성 백혈병 암을 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 결장암, 폐암 또는 췌장암을 포함한다. 일부 구현예에서, CEA-양성 암은 폐암, 결장직장암을 포함한다. 일부 구현예에서, 폐암은 폐 선암종, 소세포 폐암(SCLC), 또는 비-소세포 폐암(NSCLC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폐암은 폐 선암종을 포함한다. 본원에 개시된 조성물 및 방법은 재발성, 불응성 및/또는 전이성인 CEA-양성 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
본원에는 MHC 클래스 I 유전자좌에서 이형접합성의 소실을 갖는 종양인, CEA+ 종양을 갖는 대상체에서 CEA+ 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체에게 유효량의 본원에 기재된 면역 세포 또는 약학 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 (a) 대상체의 정상 세포 및 복수의 암 세포의 HLA-A, HLA-B 또는 HLA-C 유전자형 또는 발현을 결정하는 단계; (b) 대상체의 복수의 암 세포에서 CEA의 발현을 결정하는 단계; 및 (c) 정상 세포가 HLA-A, HLA-B 또는 HLA-C 비-표적 항원 2를 발현하고 복수의 암 세포가 HLA-A, HLA-B 또는 HLA-C 비-표적 항원을 발현하지 않고, 복수의 암 세포가 또한 CEA-양성인 경우, 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 면역 세포 또는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 암이 CEA+인 것으로 알려진 구현예에서, 방법은 (a) 대상체의 정상 세포 및 복수의 암 세포의 HLA-A, HLA-B 또는 HLA-C 유전자형 또는 발현을 결정하는 단계; 및 (b) 정상 세포가 HLA-A, HLA-B 또는 HLA-C 비-표적 항원을 발현하고 복수의 암 세포가 비-표적 항원을 발현하지 않는 경우 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 면역 세포 또는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-표적 항원은 HLA-A*02, HLA-A*01, HLA-A*03, HLA-A*11, HLA-B*07 또는 HLA-C*07을 포함한다.
본원에 기재된 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체에서 종양의 크기를 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 종양의 크기는 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여 전 종양의 크기와 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100% 감소한다. 일부 구현예에서, 종양은 제거된다.
본원에 기재된 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체에서 종양의 성장을 정지시킬 수 있다. 예를 들어, 면역 세포 또는 약학 조성물은 종양 세포를 죽일 수 있어 종양이 성장을 멈추거나 크기가 감소한다. 일부 경우에, 면역 세포 또는 약학 조성물은 추가 종양의 형성을 방지하거나 대상체에서 종양의 총 수를 감소시킬 수 있다.
본원에 기재된 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체에서 야생형이 아닌 암 세포의 선택적인 사멸을 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 사멸된 세포의 약 60%는 암세포이고, 사멸된 세포의 약 65%는 암세포이고, 사멸된 세포의 약 70%는 암세포이고, 사멸된 세포의 약 75%는 암세포이고, 사멸된 세포의 약 80%는 암세포이고, 사멸된 세포의 약 85%는 암세포이고, 사멸된 세포의 약 90%는 암세포이고, 사멸된 세포의 약 95%는 암세포이고, 또는 사멸된 세포의 약 100%는 암세포이다.
본원에 기재된 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체의 암 세포의 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 전부의 사멸을 초래할 수 있다.
본원에 기재된 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 제1 활성화제 수용체를 포함하지만 제2 억제 수용체는 포함하지 않는 등가의 면역 세포를 투여하는 것보다 대상체에 대해 더 적은 부작용을 초래할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 제2 억제 수용체 없이 투여된 CEA CAR, 또는 CEA TCR에 비해 용량 제한 독성을 감소시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 TNFRSF11, ACHRB, ITGAE, TRPV1, 또는 SREC의 다형성 대립유전자를 발현하지 않는다. 예를 들어, 암 세포는 그 유전자좌에서의 이형접합성의 소실을 통해 TNFRSF11, ACHRB, ITGAE, TRPV1, 또는 SREC의 대립유전자를 소실하였다.
본 개시내용은 다음을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다: (a) rs1716 (ITGAE R950W), rs2976230 (ITGAE V1019A/V1019G), rs1805034 (TNFRSF11A V192A) 및 rs35211496 (TNFRSF11A H141Y)로 이루어진 군으로부터 선택된 다형성 유전자좌에서 대상체의 정상 세포 및 복수의 암 세포의 유전형을 결정하는 단계; (b) 복수의 암 세포에서 CEA의 발현을 결정하는 단계; 및 (c) 야생형 세포가 다형성 유전자좌에 대해 이형접합성이고 복수의 암 세포가 다형성 유전자좌에 대해 반접합성이고 복수의 암 세포가 CEA-양성인 경우, 다수의 면역 세포를 대상체에 투여하는 단계로서, 여기서 다수의 면역 세포는 다음을 포함하는, 단계: (i) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에 CEA 세포 부착 분자 5 (CEA) 또는 이의 펩티드 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제1 수용체, 임의로 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR); 및 (ii) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에 TNFRSF11, ACHRB, ITGAE, TRPV1, 및 SREC로부터 선택된 비-표적 항원 또는 이의 항원 펩티드에 특이적인 세포외 리간드 결합을 포함하는, 제2 수용체, 임의로 억제 수용체, 여기서 비-표적 항원은 다형성을 포함함.
SNP의 존재 또는 부재에 대해 대상체로부터 암 세포 및 정상 세포를 유전자형 분석하는 방법은 당업자에게 쉽게 자명할 것이다. SNP 유전자형 분석 방법은 특히, 이중 프로브 TaqMan 분석, 어레이 기반 혼성화 방법 및 시퀀싱과 같은 PCR 기반 방법을 포함한다.
암 또는 야생형 세포에서 표적 항원의 발현을 측정하는 방법은 당업자에게 쉽게 자명할 것이다. 여기에는 특히 RNA 시퀀싱 및 역전사 중합효소 연쇄 반응 (RT-PCR)과 같은 RNA 발현을 측정하는 방법뿐만 아니라 면역조직화학 기반 방법과 같은 단백질 발현을 측정하는 방법이 포함된다. 복수의 암 세포에서 이형접합성의 소실을 측정하는 방법은 특히 당업계에 공지된 방법을 사용하여 암 세포로부터 추출된 게놈 DNA의 고처리량 시퀀싱을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 리간드는 IMIGVLVGV (서열 번호2)를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 리간드는 인간 백혈구 항원 A*02 대립유전자 (HLA-A*02)를 포함하는 주요 조직적합성 복합체와 복합체화된다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 rs1805034에 TNFRSF11A 192A 대립유전자를 포함하고, 제2 수용체의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 13의 위치 192에 A를 갖는 TNFRSF11A 리간드보다 서열 번호 13의 위치 192에 V를 갖는 TNFRSF11A 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 rs1805034에 TNFRSF11A 192V 대립유전자를 포함하고, 제2 수용체의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 13의 위치 192에 V를 갖는 TNFRSF11A 리간드보다 서열 번호 13의 위치 192에 A를 갖는 TNFRSF11A 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 rs35211496에 TNFRSF11A 141H 대립유전자를 포함하고, 제2 수용체의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 13의 위치 141에 H를 갖는 TNFRSF11A 리간드보다 서열 번호 13의 위치 141에 Y를 갖는 TNFRSF11A 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 rs35211496에 TNFRSF11A 141Y 대립유전자를 포함하고, 여기서 제2 수용체의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 13의 위치 141에 Y를 갖는 TNFRSF11A 리간드보다 서열 번호 13의 위치 141에 H를 갖는 TNFRSF11A 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 rs1716에 ITGAE 950R 대립유전자를 포함하고, 제2 수용체의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 14의 위치 950에 R을 갖는 ITGAE 리간드보다 서열 번호 14의 위치 950에 W를 갖는 ITGAE 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 rs1716에 ITGAE 950W를 포함하고, 제2 수용체의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 14의 위치 950에 W를 갖는 ITGAE 리간드보다 서열 번호 14의 위치 950에 R을 갖는 ITGAE 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 rs2976230에 ITGAE 1019V 대립유전자를 포함하고, 제2 수용체의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 14의 위치 1019에 W를 갖는 ITGAE 리간드보다 서열 번호 14의 위치 1019에 A 또는 G를 갖는 ITGAE 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 rs2976230에 ITGAE 1019A 대립유전자를 포함하고, 제2 수용체의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 14의 위치 1019에 A를 갖는 ITGAE 리간드보다 서열 번호 14의 위치 1019에 V 또는 G를 갖는 ITGAE 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, 복수의 암 세포는 rs2976230에 ITGAE 1019G 대립유전자를 포함하고, 제2 수용체의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 14의 위치 1019에 G를 갖는 ITGAE 리간드보다 서열 번호 14의 위치 1019에 V 또는 A를 갖는 ITGAE 리간드에 대해 더 높은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, 면역 세포는 T 세포이다.
일부 구현예에서, 면역 세포는 동종이계 또는 자가유래이다.
일부 구현예에서, 제2 수용체는 제1 수용체는 발현하지만 제2 수용체는 발현하지 않는 면역 세포와 비교하여 CEA-양성 암 세포에 대한 면역 세포의 특이성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 제1 수용체는 발현하지만 제2 수용체는 발현하지 않는 면역 세포와 비교하여 감소된 부작용을 갖는다.
암을 치료하면 종양의 크기가 감소할 수 있다. 종양 크기의 감소는 "종양 퇴행"이라고도 한다. 바람직하게는, 치료 후, 종양 크기는 치료 전 크기에 비해 5% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 종양 크기는 10% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 20% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 30% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 40% 이상 감소되고; 더욱 바람직하게는, 50% 이상 감소되고; 가장 바람직하게는, 75% 또는 그 이상 감소된다. 종양의 크기는 재현 가능한 측정 수단으로 측정할 수 있다. 종양의 크기는 종양의 직경으로 측정할 수 있다.
암을 치료하면 종양 부피가 감소할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후 종양 부피는 치료 전 크기에 비해 5% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 종양 부피는 10% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 20% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 30% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 40% 이상 감소되고; 더욱 바람직하게는, 50% 이상 감소되고; 가장 바람직하게는, 75% 또는 그 이상 감소된다. 종양 부피는 재현 가능한 측정 수단으로 측정할 수 있다.
암을 치료하면 종양의 수가 감소한다. 바람직하게는, 치료 후, 종양 수는 치료 전의 수에 비해 5% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 종양 수는 10% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 20% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 30% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 40% 이상 감소되고; 더욱 바람직하게는, 50% 이상 감소되고; 가장 바람직하게는, 75% 초과 만큼 감소된다. 종양의 수는 재현 가능한 측정 수단으로 측정할 수 있다. 종양의 수는 육안으로 또는 특정 배율로 볼 수 있는 종양을 세어 측정할 수 있다. 바람직하게는, 지정된 배율은 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, 또는 50x이다.
암을 치료하면 원발성 종양 부위에서 멀리 떨어진 다른 조직이나 기관의 전이성 병변 수가 감소할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후, 전이성 병변의 수는 치료 전 수에 비해 5% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 전이성 병변의 수는 10% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 20% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 30% 이상 감소되고; 보다 바람직하게는, 40% 이상 감소되고; 더욱 바람직하게는, 50% 이상 감소되고; 가장 바람직하게는, 75% 초과 만큼 감소된다. 전이성 병변의 수는 재현 가능한 측정 수단으로 측정할 수 있다. 전이성 병변의 수는 육안으로 또는 특정 배율로 볼 수 있는 전이성 병변을 세어 측정할 수 있다. 바람직하게는, 지정된 배율은 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, 또는 50x이다.
암을 치료하면 보인자만 받는 집단과 비교하여 치료 대상 집단의 평균 생존 시간이 증가할 수 있다. 바람직하게는, 평균 생존 시간은 30일 초과; 보다 바람직하게는, 60일 초과; 보다 바람직하게는, 90일 초과; 가장 바람직하게는, 120일 초과 만큼 증가한다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 재현 가능한 모든 수단으로 측정할 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 예를 들어, 집단에 대해 활성 화합물로 치료를 시작한 후 평균 생존 기간을 계산하여 측정할 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 또한 예를 들어, 집단에 대해 활성 화합물로 치료의 1차 라운드를 완료한 후 평균 생존 기간을 계산함으로써 측정될 수 있다.
암을 치료하면 치료받지 않은 대상 집단과 비교하여 치료 대상 집단의 평균 생존 시간이 증가할 수 있다. 바람직하게는, 평균 생존 시간은 30일 초과; 보다 바람직하게는, 60일 초과; 보다 바람직하게는, 90일 초과; 가장 바람직하게는, 120일 초과 만큼 증가한다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 재현 가능한 모든 수단으로 측정할 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 예를 들어, 집단에 대해 활성 화합물로 치료를 시작한 후 평균 생존 기간을 계산하여 측정할 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 또한 예를 들어, 집단에 대해 활성 화합물로 치료의 1차 라운드를 완료한 후 평균 생존 기간을 계산함으로써 측정될 수 있다.
암을 치료하면 본 개시내용의 화합물이 아닌 약물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 전구약물, 대사산물, 유사체 또는 이의 유도체로 단일요법을 받는 집단과 비교하여 치료받는 대상 집단의 평균 생존 시간을 증가시킬 수 있다. 바람직하게는, 평균 생존 시간은 30일 초과; 보다 바람직하게는, 60일 초과; 보다 바람직하게는, 90일 초과; 가장 바람직하게는, 120일 초과 만큼 증가한다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 재현 가능한 모든 수단으로 측정할 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 예를 들어, 집단에 대해 활성 화합물로 치료를 시작한 후 평균 생존 기간을 계산하여 측정할 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 또한 예를 들어, 집단에 대해 활성 화합물로 치료의 1차 라운드를 완료한 후 평균 생존 기간을 계산함으로써 측정될 수 있다.
암을 치료하면 보인자만을 수용하는 집단과 비교하여 치료 대상 집단의 사망률 감소를 초래할 수 있다. 암을 치료하면 치료되지 않은 집단과 비교하여 치료 대상 집단의 사망률이 감소할 수 있다. 암을 치료하면 본 개시내용의 화합물이 아닌 약물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 전구약물, 대사산물, 유사체 또는 이의 유도체로 단일요법을 받는 집단과 비교하여 치료 대상 집단의 사망률 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게는, 사망률이 2% 초과; 보다 바람직하게는, 5% 초과; 보다 바람직하게는, 10% 초과; 가장 바람직하게는, 25% 초과 만큼 감소한다. 치료 대상 집단의 사망률 감소는 임의의 재현 가능한 수단으로 측정할 수 있다. 집단의 사망률 감소는 예를 들어, 집단에 대해 활성 화합물로 치료를 시작한 후 단위 시간당 평균 질환 관련 사망 수를 계산하여 측정할 수 있다. 집단의 사망률 감소는 또한 예를 들어, 집단에 대해 활성 화합물로 치료의 1차 라운드를 완료한 후 단위 시간당 평균 질환 관련 사망 수를 계산하여 측정할 수 있다.
암을 치료하면 종양 성장 속도가 감소할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후, 종양 성장 속도가 치료 전의 수에 비해 적어도 5% 감소되고; 보다 바람직하게는, 종양 성장 속도가 적어도 10% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 20% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 30% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 40% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 50% 감소되고; 더욱 바람직하게는, 적어도 50% 감소되고; 가장 바람직하게는, 적어도 75% 감소된다. 종양 성장 속도는 재현 가능한 측정 수단으로 측정할 수 있다. 단위 시간당 종양 직경의 변화에 따라 종양 성장 속도를 측정할 수 있다.
암을 치료하면 종양 재성장이 감소할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후, 종양 재성장은 5% 미만이고; 보다 바람직하게는, 종양 재성장은 10% 미만이고; 보다 바람직하게는, 20% 미만이고; 보다 바람직하게는, 30% 미만이고; 보다 바람직하게는, 바람직하게는 40% 미만이고; 보다 바람직하게는, 50% 미만이고; 더욱 바람직하게는, 50% 미만이고; 가장 바람직하게는, 75% 미만이다. 종양 재성장은 임의의 재현 가능한 측정 수단으로 측정할 수 있다. 종양 재성장은 예를 들어, 치료 후 선행 종양 수축 후 종양 직경의 증가를 측정함으로써 측정된다. 종양 재성장의 감소는 치료가 중단된 후 종양이 재발하지 않는 것으로 나타난다.
암을 치료하거나 예방하면 세포 증식 속도가 감소할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후, 세포 증식률은 적어도 5%까지; 보다 바람직하게는, 적어도 10%까지; 보다 바람직하게는, 적어도 20%까지; 보다 바람직하게는, 적어도 30%까지; 보다 바람직하게는, 적어도 40%까지; 보다 바람직하게는, 적어도 50%까지; 더욱 바람직하게는, 적어도 50%까지; 가장 바람직하게는, 적어도 75%까지 감소된다. 세포 증식 속도는 재현 가능한 측정 수단으로 측정할 수 있다. 세포 증식 속도는 예를 들어, 단위 시간당 조직 샘플에서 분열하는 세포의 수를 측정함으로써 측정된다.
암을 치료하거나 예방하면 증식하는 세포의 비율이 감소할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후, 증식하는 세포의 비율은 적어도 5%까지; 보다 바람직하게는, 적어도 10%까지; 보다 바람직하게는, 적어도 20%까지; 보다 바람직하게는, 적어도 30%까지; 보다 바람직하게는, 적어도 40%까지; 보다 바람직하게는, 적어도 50%까지; 더욱 바람직하게는, 적어도 50%까지; 가장 바람직하게는, 적어도 75%까지 감소된다. 증식 세포의 비율은 재현 가능한 측정 수단으로 측정할 수 있다. 바람직하게는, 증식 세포의 비율은 예를 들어, 조직 샘플에서 분열하지 않는 세포의 수에 대해 분열하는 세포의 수를 정량화함으로써 측정된다. 증식하는 세포의 비율은 유사분열 지수와 동일할 수 있다.
암을 치료하거나 예방하면 세포 증식 영역 또는 영역의 크기가 감소할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후, 세포 증식 영역 또는 구역의 크기는 치료 전 크기에 비해 적어도 5% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 10% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 20% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 30% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 40% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 50% 감소되고; 더욱 바람직하게는, 적어도 50% 감소되고; 가장 바람직하게는, 적어도 75% 감소된다. 세포 증식 영역 또는 영역의 크기는 재현 가능한 측정 수단으로 측정할 수 있다. 세포 증식 영역 또는 영역의 크기는 세포 증식 영역 또는 영역의 직경 또는 폭으로 측정될 수 있다.
암을 치료하거나 예방하면 비정상적인 모양이나 형태를 가진 세포의 수나 비율이 감소할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후, 비정상적인 형태를 갖는 세포의 수는 치료 전 크기에 비해 적어도 5% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 10% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 20% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 30% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 40% 감소되고; 보다 바람직하게는, 적어도 50% 감소되고; 더욱 바람직하게는, 적어도 50% 감소되고; 가장 바람직하게는, 적어도 75% 감소된다. 비정상적인 세포 외관 또는 형태는 재현 가능한 측정 수단으로 측정할 수 있다. 비정상적인 세포 형태는 현미경, 예를 들어 거꾸로 된 조직 배양 현미경을 사용하여 측정할 수 있다. 비정상적인 세포 형태는 핵 다형성의 형태를 취할 수 있다.
용량 및 투여
본 개시내용의 면역 세포는 국소 또는 전신 치료가 필요한지에 따라 다양한 방식으로 투여될 수 있다.
일반적으로, 투여는 비경구적일 수 있다.
입양 세포 요법을 위한 세포 투여 방법은 공지되어 있으며 제공된 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법 방법은 예를 들어, Gruenberg 등의 미국 특허 출원 공개 번호 2003/0170238 및 Rosenberg의 미국 특허 번호 4,690,915에 기술되어 있다.
본 개시내용의 조성물은 비경구 투여에 적합하다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 약학 조성물의 "비경구 투여"는 대상체의 조직을 물리적으로 파괴하는 것을 특징으로 하는 임의의 투여 경로 및 조직의 파괴를 통한 약학 조성물의 투여를 포함하며, 따라서 일반적으로 혈류, 근육 또는 내부 장기로의 직접 투여를 야기한다. 비경구 투여는 조성물의 주사, 외과적 절개를 통한 조성물의 적용, 조직 관통 비-외과적 상처를 통한 조성물의 적용 등에 의한 약학 조성물의 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특히, 비경구 투여는 피하, 복강 내, 근육 내, 흉골 내, 정맥 내, 동맥 내, 척수강 내, 심실 내, 요도 내, 두개 내, 종양 내, 활막 내 주사 또는 주입; 및 신장 투석 주입 기술을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물의 비경구 투여는 정맥 내 또는 동맥 내 투여를 포함한다.
본 개시내용은 본 개시내용의 복수의 면역 세포, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
비경구 투여에 적합한 약학 조성물의 제형은 전형적으로 일반적으로 멸균수 또는 멸균 등장 식염수와 같은 약학적으로 허용 가능한 담체와 조합된 면역 세포를 포함한다. 이러한 제형은 일시 투여 또는 연속 투여에 적합한 형태로 제조, 포장 또는 판매될 수 있다. 주사용 제형은 방부제를 함유하는 앰플 또는 다중 용량 용기와 같은 단위 용량 형태로 제조, 포장 또는 판매될 수 있다. 비경구 투여용 제형은 현탁액, 용액, 유성 또는 수성 비히클 중의 에멀젼, 페이스트 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 제형은 현탁제, 안정화제 또는 분산제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 추가 성분을 추가로 포함할 수 있다. 비경구 제형은 또한, 염, 탄수화물 및 완충제와 같은 부형제를 함유할 수 있는 수용액을 포함한다. 예시적인 비경구 투여 형태는 멸균 수용액, 예를 들어 수성 프로필렌 글리콜 또는 덱스트로스 용액 중의 용액 또는 현탁액을 포함한다. 이러한 제형은 필요에 따라 적합하게 완충될 수 있다. 비경구 투여용 제제는 즉시 및/또는 변형 방출되도록 제제화될 수 있다. 변형 방출 제형에는 지연, 지속, 펄스, 제어, 표적 및 프로그램 방출이 포함된다.
일부 구현예에서, 면역 세포를 포함하는 제형화된 조성물은 주사를 통한 투여에 적합하다. 일부 구현예에서, 면역 세포를 포함하는 제형화된 조성물은 주입을 통한 투여에 적합하다.
편리하게 단위 투여 형태로 제공될 수 있는 본 개시내용의 약학 조성물은 제약 산업에서 잘 알려진 통상적인 기술에 따라 제조될 수 있다. 이러한 기술은 약학적 담체(들) 또는 액체 담체와 같은 부형제(들)와 면역 세포를 회합시키는 단계를 포함한다.
수성 현탁액은 예를 들어 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 소르비톨 및/또는 덱스트란을 비롯한 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 추가로 함유할 수 있다. 현탁액에는 안정제가 포함될 수도 있다.
본 개시내용의 조성물은 약학 조성물에서 통상적으로 발견되는 다른 보조 성분을 추가로 함유할 수 있다. 따라서, 예를 들어, 조성물은 예를 들어 항소양제, 수렴제, 국소 마취제 또는 항염증제와 같은 추가의 상용성 약학적 활성 물질을 함유할 수 있거나, 염료, 방부제, 항산화제, 불투명화제, 증점제 및 안정화제와 같은 본 개시내용의 조성물의 다양한 투여 형태를 물리적으로 제형화하는데 유용한 추가 물질을 함유할 수 있다. 그러나 그러한 물질이 첨가될 때 본 개시내용의 조성물의 면역 세포의 생물학적 활성을 부당하게 방해하지 않아야 한다.
제형 또는 조성물은 또한 면역 세포로 치료되는 특정 적응증, 질환 또는 병태에 유용한 하나 이상의 활성 성분을 함유할 수 있으며, 여기서 각각의 활성은 서로 불리하게 영향을 미치지 않는다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 적합하게 조합되어 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 약학 조성물은 화학요법제와 같은 다른 약학 활성제 또는 약물을 추가로 포함한다.
일부 양태에서 약학 조성물은 조성물의 전달이 치료될 부위의 민감화를 유발하기에 충분한 시간과 이전에 발생하도록 시간 방출, 지연 방출 및 지속 방출 전달 시스템을 사용할 수 있다. 많은 유형의 방출 전달 시스템이 사용 가능하고 알려졌다. 이러한 시스템은 조성물의 반복 투여를 피할 수 있어 대상체와 의사의 편의성을 높일 수 있다.
투여는 치료 과정 전반에 걸쳐 지속적으로 또는 간헐적으로 1회 용량으로 수행될 수 있다. 단일 또는 다중 투여는 치료 의사에 의해 선택되는 용량 수준 및 패턴으로 수행될 수 있다.
일부 구현예에서 약학 조성물은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량과 같이 암을 치료 또는 예방하는데 효과적인 양으로 면역 세포를 함유한다. 일부 구현예에서 치료적 또는 예방적 효능은 치료 대상의 주기적인 평가에 의해 모니터링된다. 수일, 수주 또는 수개월에 걸친 반복 투여의 경우, 상태에 따라 원하는 암 징후 또는 증상 억제가 발생할 때까지 치료를 반복할 수 있다. 그러나 다른 투여 요법이 유용할 수 있고 결정할 수 있다. 원하는 투여량은 조성물의 단일 일시 투여 또는 주입에 의해 또는 조성물의 다중 일시 투여 또는 주입에 의해 전달될 수 있다.
세포 또는 세포 집단은 1회 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 유효량의 세포가 단일 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 유효량의 세포가 일정 기간에 걸쳐 1회 초과 용량으로 투여될 수 있다. 투여 시기는 주치의의 판단 범위 내에 있으며 환자의 임상 상태에 따라 다르다.
세포 또는 세포 집단은 혈액은행, 기증자 또는 환자 자신과 같은 모든 출처에서 얻을 수 있다.
유효량은 치료적 또는 예방적 이점을 제공하는 양을 의미한다. 투여되는 투여량은 수용자의 연령, 건강 및 체중, 동시 치료의 종류 (있는 경우), 치료 빈도 및 원하는 효과의 특성에 따라 달라질 것이다. 일부 구현예에서, 유효량의 세포 또는 이들 세포를 포함하는 조성물은 비경구적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 투여는 정맥 내 투여일 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 종양 내 주사에 의해 직접 수행될 수 있다.
본 개시내용의 목적을 위해, 예를 들어 표적 세포가 용해되는 정도 또는 하나 이상의 사이토카인이 수용체를 발현하는 면역 세포에 의해 분비되는 정도를 비교하는 것을 포함하는 검정은 이러한 면역 세포의 주어진 용량을 대상에게 투여시 포유동물 세트 중에서 각각 상이한 용량의 면역 세포가 제공된 포유동물은 포유동물에게 투여될 시작 용량을 결정하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 제제, 예를 들어 세포독성 제제 또는 치료제와 같은 임의의 순서로 동시에 또는 순차적으로 조합 치료의 일부로서 투여된다. 일부 구현예에서 본 개시내용의 면역 세포는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 또는 다른 치료적 개입과 관련하여 임의의 순서로 동시에 또는 순차적으로 공동-투여된다. 일부 상황에서, 면역 세포는 면역 세포 집단이 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 향상시키거나 그 반대가 되도록 시간상으로 충분히 가까운 또 다른 치료법과 공동 투여된다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 하나 이상의 추가 치료제 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 하나 이상의 추가 치료제 이후에 투여된다.
구현예에서, 림프구 고갈 화학요법은 입양 면역 세포의 투여 (예를 들어, 주입) 전에, 그와 동시에, 또는 그 후에 대상체에게 투여된다. 예에서, 림프구 고갈 화학요법은 면역 세포의 투여 전에 대상체에게 투여된다. 예를 들어, 림프구 고갈 화학요법은 입양 세포 주입 전 1-4일 (예를 들어, 1, 2, 3 또는 4일)에 종료된다. 구현예에서, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이, 입양 세포의 다중 용량이 투여된다. 구현예에서, 림프구 고갈 화학요법은 본원에 기재된 면역 세포의 투여 (예를 들어, 주입) 전에, 그와 동시에, 또는 그 후에 대상체에게 투여된다. 림프구 고갈의 예는 비골수 림프구 고갈 화학 요법, 골수 파괴 림프구 고갈 화학 요법, 전신 방사선 조사 등을 포함하지만 이에 국한되지 않을 수 있다. 림프구 고갈제의 예는 항흉선 세포 글로불린, 항-CD3 항체, 항-CD4 항체, 항-CD8 항체, 항-CD52 항체, 항-CD2 항체, TCRαβ 차단제, 항-CD20 항체, 항-CD19 항체, 보르테조밉, 리툭시맙, 항-CD 154 항체, 라파마이신, CD3 면역독소, 플루다라빈, 시클로포스파미드, 부설판, 멜팔란, 마브테라, 타크로리무스, 알레파셉트, 알렘투주맙, OKT3, OKT4, OKT8, OKT11, 핑골리모드, 항-CD40 항체, 항-BR3 항체, 캄파트-1H, 항-CD25 항체, 칼시뉴린 억제제, 마이코페놀레이트, 및 스테로이드를 포함하지만, 이에 제한되지 않고, 이는 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 추가의 예로서, 림프구 고갈 요법은 알렘투주맙, 시클로포스파미드, 벤두아무스틴, 리툭시맙, 펜토스타틴 및/또는 플루다라빈의 투여를 포함할 수 있다. 림프구 고갈 요법은 감소된 순환 면역 세포의 원하는 결과가 나올 때까지 하나 이상의 주기로 시행될 수 있다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈은 대상체에서 CD52+ 세포를 특이적으로 표적화하고 감소 또는 제거하는 작용제를 투여하는 것을 포함하며, 면역 세포는 CD52 발현을 감소 또는 제거하도록 변형된다.
일부 구현예에서, 면역 자극 요법은 투여 (예를 들어, 주입) 전에, 그와 동시에, 또는 그 후에 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 면역 자극 요법은 항상성 사이토카인을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 자극 요법은 면역 자극 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 자극 요법은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, IL-9, 또는 이의 기능적 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 자극 요법은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, IL-9, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 자극 요법은 IL-2, 또는 이의 기능적 단편을 포함한다.
자가 세포를 사용하는 입양 세포 치료 방법은 환자 혈액으로부터 면역 세포를 단리하는 것, 본원에 기술된 이중 수용체 시스템을 암호화하는 하나 이상의 벡터로 세포를 형질도입하는 것을 포함하는 단리된 세포에 일련의 변형을 수행하는 것, 및 세포를 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 암 또는 혈액학적 악성종양을 앓고 있거나 위험에 처한 대상체로부터 면역 세포를 제공하는 것은 환자의 혈액으로부터 면역 세포를 분리하는 것이 필요하고, 예를 들어, 백혈구 성분채집술에 의해 당업계에 공지된 방법을 통해 달성될 수 있다. 백혈구 성분채집술 동안, 대상체로부터 혈액을 추출하고 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 분리하고 나머지 혈액은 대상체의 순환계로 복귀시킨다. PBMC는 면역 세포의 샘플로서 동결 또는 동결보존되어 저장되며 예를 들어 본원에 기재된 변형과 같은 추가 처리 단계를 위해 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 대상체를 치료하는 방법은 농축 및/또는 고갈, 활성화, 유전적 변형, 확장, 제형화 및 동결보존을 포함하는 일련의 변형을 포함하는 대상체로부터의 면역 세포에 대한 변형을 포함한다.
본 개시내용은 다운스트림 절차, 예를 들어 본원에 기재된 변형을 위한 대상체 PBMC의 제조를 위해 당업계에 공지된 세척 및 분별 방법일 수 있는 강화 및/또는 고갈 단계를 제공한다. 예를 들어, 제한 없이, 방법은 전체 적혈구 및 혈소판 오염물을 제거하는 장치, 단핵구 고갈 및 림프구 분리를 위한 크기 기반 세포 분획 시스템, 및/또는, 예를 들어 CD4+, CD8+, CD25+, 또는 CD62L+ T 세포와 같은 특정 세포의 농축을 허용하는 시스템을 포함할 수 있다. 농축 단계 후, 면역 세포의 표적 하위 집단이 추가 처리를 위해 대상 PMBC로부터 분리된다. 당업자는 본원에 제공된 농축 단계가 또한 임의의 새롭게 발견된 방법, 장치, 시약 또는 이들의 조합을 포함할 수 있음을 이해할 것이다.
본 개시내용은 생체 외 확장에 필요한 면역 세포, 예를 들어 T 세포의 활성화를 유도하기 위해 당업계에 공지된 임의의 방법일 수 있는 활성화 단계를 제공한다. 예를 들어, 수지상 세포의 존재 하에 대상 면역 세포를 배양하거나, 인공 항원-제시 세포 (AAPC)의 존재 하에 대상 면역 세포를 배양하거나, 조사된 K562-유래 AAPC의 존재 하에 면역 세포를 배양한다. 대상 면역 세포를 활성화하기 위한 다른 방법은 예를 들어, 단리된 활성화 인자 및 조성물, 예를 들어 활성화 인자로 기능화된 비드, 표면, 또는 입자의 존재 하에 면역 세포를 배양하는 것일 수 있다. 활성화 인자는 예를 들어, 항체, 예를 들어 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 포함할 수 있다. 활성화 인자는 또한 예를 들어, 사이토카인, 예를 들어 인터루킨 (IL)-2 또는 IL-21일 수 있다. 활성화 인자는 예를 들어, CD40, CD40L, CD70, CD80, CD83, CD86, CD137L, ICOSL, GITRL, 및 CD134L과 같은 공동자극 분자일 수 있다. 당업자는 본원에 제공된 활성화 인자가 또한 면역 세포를 활성화할 수 있는 임의의 새롭게 발견된 활성화 인자, 시약, 조성물 또는 이들의 조합을 포함할 수 있음을 이해할 것이다.
본 개시내용은 면역 세포를 변형시키기 위한 유전적 변형 단계를 제공한다. 일부 구현예에서, 유전적 변형은 B2M 또는 HLA-A에 상보적인 본원에 기재된 shRNA를 포함하는 벡터로 면역 세포를 형질도입하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 유전적 변형은 CRISPR/Cas 매개 게놈 공학을 사용하여 B2M 또는 HLA-A에서 돌연변이를 유도하기 위해 면역 세포의 게놈을 변형하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 활성화제 및 억제 수용체를 암호화하는 하나 이상의 벡터로 면역 세포를 형질도입함으로써, 활성화제 및 억제 수용체를 발현하는 면역 세포를 생산하는 것을 포함한다.
본 개시내용은 유전적으로 변형된 대상 면역 세포에 대해 확장 단계를 제공한다. 유전적으로 변형된 대상체 면역 세포는 투여를 위한 치료 용량의 면역 세포를 생성하기 위해 당업계에 공지된 임의의 면역 세포 확장 시스템에서 확장될 수 있다. 예를 들어, 컨트롤러 펌프와 자동 공급 및 폐기물 제거를 허용하는 프로브를 포함하는 시스템에서 사용하기 위한 생물반응기 백을 면역 세포 확장에 사용할 수 있다. 바닥에 기체 투과성 막이 있는 세포 배양 플라스크는 면역 세포 확장에 사용할 수 있다. 있다. 임상적 사용을 위한 면역 세포의 확장을 가능하게 하는 당해 분야에 공지된 임의의 이러한 시스템은 본원에 제공된 확장 단계에 포함된다. 면역 세포는 확장을 위해 특별히 제조된 배지의 배양 시스템에서 확장된다. 확장은 또한 본원에 기술된 바와 같은 활성화 인자의 존재 하에 개시내용의 면역 세포를 배양함으로써 촉진될 수 있다. 당업자는 본원에 제공된 확장 단계가 또한 임의의 새롭게 발견된 배양 시스템, 배지 또는 면역 세포를 확장시키는 데 사용될 수 있는 활성화 인자를 포함할 수 있음을 이해할 것이다.
본 개시내용은 확장된 유전적으로 변형된 대상 면역 세포에 대한 제형 및 동결보존 단계를 제공한다. 제공된 제제화 단계는 예를 들어 본원에 기술된 치료 방법의 면역 세포의 준비 및 확장에 사용된 과잉 성분을 씻어내는 것을 포함한다. 당업계에 공지된 면역 세포와 호환되는 임의의 약학적으로 허용되는 제형 배지 또는 세척 완충액을 사용하여 면역 세포를 세척, 희석/농축하고 투여 용량을 준비할 수 있다. 제형 배지는 예를 들어 정맥 내 주입을 위한 결정질 용액과 같이 면역 세포의 투여에 허용될 수 있다.
동결 보존은 선택적으로 면역 세포를 장기간 보관하는 데 사용할 수 있다. 동결 보존은 예를 들어 동결 보존 성분을 함유하는 동결 보존 배지에 세포를 저장하는 것을 포함하는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 동결 보존 성분은 예를 들어 디메틸 설폭사이드 또는 글리세롤을 포함할 수 있다. 동결보존 배지에 보관된 면역세포는 보관온도를 -80℃ 내지 -196℃로 낮추어 동결보존 가능하다.
일부 구현예에서, 치료 방법은 대상체의 HLA 생식계열 유형을 결정하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, HLA 생식계열 유형은 골수에서 결정된다.
일부 구현예에서, 치료 방법은 CEA의 발현 수준을 결정하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, CEA의 발현 수준은 대상체로부터의 종양 조직 샘플에서 결정된다. 일부 구현예에서, CEA의 발현 수준은 차세대 시퀀싱을 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, CEA의 발현 수준은 RNA 시퀀싱을 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, CEA의 수준은 면역조직화학을 사용하여 결정된다.
일부 구현예에서, 치료 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 HLA-A*02 억제 수용체를 포함하는 치료 유효량의 면역 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 HLA 생식계열 HLA-A*02 이형접합성이고 HLA-A*02가 소실된 암 세포를 갖는 것으로 결정된다. 일부 구현예에서, 치료 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 HLA-A*01 억제 수용체를 포함하는 치료 유효량의 면역 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 HLA 생식계열 HLA-A*01 이형접합성이고 HLA-A*01이 소실된 암 세포를 갖는 것으로 결정된다. 일부 구현예에서, 치료 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 HLA-A*03을 포함하는 치료 유효량의 면역 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 HLA 생식계열 HLA-A*03 이형접합성이고 HLA-A*03이 소실된 암 세포를 갖는 것으로 결정된다. 일부 구현예에서, 치료 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 HLA-A*07 억제 수용체를 포함하는 치료 유효량의 면역 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 HLA 생식계열 HLA-A*07 이형접합성이고 HLA-A*07이 소실된 암 세포를 갖는 것으로 결정된다. 일부 구현예에서, 치료 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 HLA-C*07 억제 수용체를 포함하는 치료 유효량의 면역 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 HLA 생식계열 HLA-C*07 이형접합성이고 HLA-C*07이 소실된 암 세포를 갖는 것으로 결정된다. 일부 구현예에서, 치료 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 HLA-B*07 억제 수용체를 포함하는 치료 유효량의 면역 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 HLA 생식계열 HLA-B*07 이형접합성이고 HLA-B*07이 소실된 암 세포를 갖는 것으로 결정된다.
다양한 구현예에서, 본 개시내용은 CEA를 발현하고 HLA-A*02 발현을 상실한 악성종양을 갖는 이형접합성 HLA-A*02 환자의 치료; 및/또는 CEA를 발현하고 HLA-A*02 발현을 상실한 재발성 절제 불가능 또는 전이성 고형 종양을 갖는 이형접합성 HLA-A*02 성인 환자의 치료 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 면역 세포의 치료 유효 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 면역 세포는 정맥 내 주사에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 면역 세포는 복강 내 주사에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х106 세포, 약 1Х106 세포, 약 2Х106 세포, 약 3Х106 세포, 4Х106 세포, 약 5Х106 세포, 약 6Х106 세포, 약 7Х106 세포, 약 8Х106 세포, 약 9Х106 세포, 약 1Х107, 약 2Х107, 약 3Х107, 약 4Х107, 약 5Х107, 약 6Х107, 약 7Х107, 약 8Х107, 약 9Х107, 약 1Х108 세포, 약 2Х108 세포, 약 3Х108 세포, 약 4Х108 세포, 약 5Х108 세포, 약 6Х108 세포, 약 7Х108 세포, 약 8Х108 세포, 약 9Х108 세포, 약 1Х109 세포, 약 2Х109 세포, 약 3Х109 세포, 약 3Х109 세포, 약 4Х109 세포, 약 5Х109 세포, 약 5Х109 세포, 약 6Х109 세포, 약 7Х109 세포, 약 8Х109 세포, 약 9Х109 세포, 약 1Х1010 세포, 약 2Х1010 세포, 약 3Х1010 세포, 약 4Х1010 세포, 약 5Х1010 세포, 약 6Х1010 세포, 약 7Х1010 세포, 약 8Х1010 세포, 또는 약 9Х1010 세포를 포함한다.
일부 구현예에서 치료 유효 용량은 약 0.5Х106 세포 내지 약 9Х1010 세포, 약 1Х106 세포 내지 약 5Х1010 세포, 약 2Х106 세포 내지 약 5Х109 세포, 약 3Х106 세포 내지 약 5Х109 세포, 약 4Х106 세포 내지 약 3Х109 세포, 약 5Х106 세포 내지 약 2Х109 세포, 약 6Х106 세포 내지 약 1Х109 세포, 0.5Х106 세포 내지 약 6Х109 세포, 약 1Х106 세포 내지 약 5Х109 세포, 약 2Х106 세포 내지 약 5Х109 세포, 약 3Х106 세포 내지 약 4Х109 세포, 약 4Х106 세포 내지 약 3Х109 세포, 약 5Х106 세포 내지 약 2Х109 세포, 약 6Х106 세포 내지 약 1Х109 세포, 0.5Х106 세포 내지 약 6Х108 세포, 약 1Х106 세포 내지 약 5Х108 세포, 약 2Х106 세포 내지 약 5Х108 세포, 약 3Х106 세포 내지 약 4Х108 세포, 약 4Х106 세포 내지 약 3Х108 세포, 약 5Х106 세포 내지 약 2Х108 세포, 약 6Х106 세포 내지 약 1Х108 세포, 약 7Х106 세포 내지 약 9Х108 세포, 약 8Х106 세포 내지 약 8Х108 세포, 약 9Х106 세포 내지 약 7Х108 세포, 약 1Х107 세포 내지 약 6Х108 세포, 약 2Х107 세포 내지 약 5Х108 세포, 약 7Х106 세포 내지 약 9Х107 세포, 약 8Х106 세포 내지 약 8Х107 세포, 약 9Х106 세포 내지 약 7Х107 세포, 약 1Х107 세포 내지 약 6Х107 세포, 또는 약 2Х107 세포 내지 약 5Х107 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х105 세포 내지 약 9Х1010 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х106 세포 내지 약 1Х1010 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х106 세포 내지 약 5Х109 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х106 세포 내지 약 1Х109 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х106 세포 내지 약 6Х108 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х106 세포 내지 약 9Х1010 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х107 세포 내지 약 1Х1010 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х107 세포 내지 약 5Х109 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х107 세포 내지 약 1Х109 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х107 세포 내지 약 6Х108 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х108 세포 내지 약 9Х1010 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х108 세포 내지 약 1Х1010 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х108 세포 내지 약 5Х109 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 0.5Х108 세포 내지 약 1Х109 세포를 포함한다. 치료 용량에서 언급되는 용어 "약"은 예를 들어, ± 0.5Х106 세포, ± 0.5Х107 세포, 또는 ± 0.5Х108 세포일 수 있다.
키트 및 제조 물품
본 개시내용은 본원에 기재된 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 및 벡터, 및 본원에 기재된 수용체를 포함하는 면역 세포를 포함하는 키트 및 제조 물품을 제공한다. 일부 구현예에서, 키트는 바이알, 주사기 및 사용 설명서와 같은 물품을 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 본 개시내용의 하나 이상의 수용체를 암호화하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 본원에 기재된 바와 같은 제1 및 제2 수용체를 포함하는 다수의 면역 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 다수의 면역 세포는 다수의 T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 사용 설명서를 추가로 포함한다.
열거된 구현예
본 개시내용은 다음의 예시적인, 열거된 구현예를 참조하여 이해될 수 있다:
1. 암 세포에서 이형접합성의 소실에 반응하는 면역 세포로서, (a) (i) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 암 세포-특이적 항원 또는 이의 펩티드 항원; 또는 (ii) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 CEA 세포 부착 분자 5 (CEA), 또는 이의 펩티드 항원으로부터 선택되는 표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제1 수용체, 임의로 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR); 및 (b) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 TNFRSF11A, ACHRB, ITGAE, TRPV1, SREC, CXCL16, COLEC12 및 APCDD1, 또는 이의 항원 펩티드로부터 선택되는 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제2 수용체, 임의로 억제 수용체를 포함하며, 비-표적 항원은 다형성을 포함하는, 면역 세포.
2. 구현예 1에 있어서, 표적 항원이 암 세포-특이적 항원인, 면역 세포.
3. 구현예 1에 있어서, 표적 항원이 주요 조직적합성 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 암세포 특이적 항원의 펩티드 항원인, 면역 세포.
4. 구현예 2 또는 구현예 3에 있어서, 암세포는 대장암 세포인, 면역 세포.
5. 구현예 2 또는 구현예 3에 있어서, 암 세포는 췌장암 세포, 식도암 세포, 위암 세포, 폐 선암종 세포, 두경부암 세포, 미만성 거대 B 세포암 세포, 또는 급성 골수성 백혈병 암 세포인, 면역 세포.
6. 구현예 1에 있어서, 암 세포는 CEA를 발현하는, 면역세포.
7. 구현예 6에 있어서, 표적 항원은 CEA인, 면역 세포.
8. 구현예 1에 있어서, 표적 항원은 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서의 CEA의 펩티드 항원인, 면역 세포.
9. 구현예 1 내지 8 중 어느 한 구현예에 있어서, 표적 항원은 표적 세포에 의해 발현되는 것인, 면역 세포.
10. 구현예 1 내지 9 중 어느 한 구현예에 있어서, 비-표적 항원은 표적 세포에 의해 발현되지 않는 것인, 면역 세포.
11. 구현예 1 내지 9 중 어느 한 구현예에 있어서, 비-표적 항원은 건강한 세포에 의해 발현되는 것인, 면역 세포.
12. 구현예 1 내지 11 중 어느 한 구현예에 있어서, 건강한 세포는 표적 항원 및 비-표적 항원 둘 모두를 발현하는, 면역 세포.
13. 구현예 1 내지 12 중 어느 한 구현예에 있어서, 제1 수용체 및 제2 수용체가 함께 표적 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화시키는, 면역 세포.
14. 구현예 13에 있어서, 면역 세포는 T 세포인, 면역 세포.
15. 구현예 14에 있어서, T 세포는 CD8+ CD4- T 세포인, 면역 세포.
16. 구현예 9 내지 15 중 어느 한 구현예에 있어서, 표적 세포는 결장직장암 세포, 췌장암 세포, 식도암 세포, 위암 세포, 폐 선암종 세포, 두경부암 세포, 미만성 거대 B 세포암 세포 또는 급성 골수성 백혈병 암 세포를 포함하는, 면역 세포.
17. 구현예 1 내지 16 중 어느 한 구현예에 있어서, CEA는 서열 번호 1에 대해 적어도 95% 동일성을 공유하는 서열을 포함하는, 면역 세포.
18. 구현예 1 내지 16 중 어느 한 구현예에 있어서, CEA의 펩티드 항원은 IMIGVLVGV (서열 번호 2)인, 면역 세포.
19. 구현예 1 내지 18 중 어느 한 구현예에 있어서, MHC-I은 인간 백혈구 항원 A*02 대립유전자 (HLA-A*02)를 포함하는, 면역 세포.
20. 구현예 1 내지 19 중 어느 한 구현예에 있어서, 제1 수용체가 T 세포 수용체 (TCR)인, 면역 세포.
21. 구현예 1 내지 19 중 어느 한 구현예에 있어서, 제1 수용체가 키메라 항원 수용체 (CAR)인, 면역 세포.
22. 구현예 20 또는 21에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 항체 단편, 단일 사슬 Fv 항체 단편 (scFv), 또는 β 사슬 가변 도메인 (Vβ)을 포함하는, 면역 세포.
23. 구현예 20 또는 21에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 TCR α 사슬 가변 도메인 및 TCR β 사슬 가변 도메인을 포함하는, 면역 세포.
24. 구현예 22 또는 23에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 3-12로부터 선택된 보체 결정 영역 (CDR)을 포함하는, 면역 세포.
25. 구현예 23에 있어서, (a) TCR α 사슬 가변 도메인은 TSITA (서열 번호 3)의 CDR-1, IRSNER (서열 번호 4)의 CDR-2 및 ATDLTSGGNYK (서열 번호 5), ATDFTSGGNYK (서열 번호 6), ATDLTTGGNYK (서열 번호 7) 또는 ATDFTTGGNYK (서열 번호 8)을 포함하는 CDR-3을 포함하고; (b) TCR β 사슬 가변 도메인은 KGHPV (서열 번호 9)의 CDR-1, FQNQEV (서열 번호 10)의 CDR-2, 및 ASSLGLGDYEQ (서열 번호 11) 또는 ASSLGTGDYEQ (서열 번호 12)의 CDR-3을 포함하는, 면역세포.
구현예 23에 있어서, (a) TCR α 사슬 가변 도메인은 서열 번호 9의 CDR-1, 서열 번호 10의 CDR-2 및 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 CDR-3을 포함하고; (b) TCR β 사슬 가변 도메인은 서열 번호 3의 CDR-1, 서열 번호 4의 CDR-2 및 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7 또는 서열 번호 8을 포함하는 CDR-3을 포함하는, 면역 세포.
구현예 1 내지 26 중 어느 한 구현예에 있어서, 비-표적 항원은 서열 번호 13과 적어도 95% 동일성을 공유하는 TNFRSF11A 항원이고, 다형성은 (a) 서열 번호 13의 위치 192에서의 A 또는 V, 또는 (b) 서열 번호 13의 위치 141에서의 H 또는 Y로부터 선택되는 것인, 면역 세포.
구현예 1 내지 26 중 어느 한 구현예에 있어서, 비-표적 항원은 서열 번호 14와 적어도 95% 동일성을 공유하는 ITGAE 항원이고, 다형성은 (a) 서열 번호 14의 위치 950에서의 R 또는 W; 또는 (b) 서열 번호 14의 위치 1019에서의 V, A 또는 G로부터 선택되는 것인, 면역 세포.
29. 암 세포에서 이형접합성의 소실에 반응하는 면역 세포로서, (a) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 CEA 세포 부착 분자 5 (CEA) 또는 이의 펩티드 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제1 수용체, 임의로 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR); 및 (b) 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제2 수용체, 임의로 억제 수용체를 포함하며, 비-표적 항원은 HLA-A*02를 포함하는, 면역 세포.
30. 구현예 29에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*02를 포함하는 MHC-I 복합체에서 CEA 펩티드 항원을 인식하지 않는, 면역 세포.
31. 구현예 29 또는 30에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 항체 단편, 단일 사슬 Fv 항체 단편 (scFv), β 사슬 가변 도메인 (Vβ), 또는 TCR α 사슬 가변 도메인 및 TCR β 사슬 가변 도메인을 포함하는, 면역 세포.
32. 구현예 29 또는 30에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 scFv를 포함하는, 면역 세포.
33. 구현예 32에 있어서, scFv는 서열 번호 64-70 중 어느 하나에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
34. 구현예 32에 있어서, scFv는 서열 번호 64-70 중 어느 하나의 서열을 포함하는, 면역 세포.
35. 구현예 29 내지 33에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 55-63으로 이루어진 군으로부터 선택된 CDR을 포함하는, 면역 세포.
36. 구현예 29 내지 35 중 어느 한 구현예에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 항체 단편, 단일 사슬 Fv 항체 단편 (scFv), β 사슬 가변 도메인 (Vβ), 또는 TCR α 사슬 가변 도메인 및 TCR β 사슬 가변 도메인을 포함하는, 면역 세포.
37. 구현예 29 내지 35 중 어느 한 구현예에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 scFv를 포함하는, 면역 세포.
38. 구현예 37에 있어서, scFv는 서열 번호 91-102 중 어느 하나에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
39. 구현예 37에 있어서, scFv는 서열 번호 91-102 중 어느 하나의 서열을 포함하는, 면역 세포.
40. 구현예 29 내지 39 중 어느 한 구현예에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 103-114로 이루어진 군으로부터 선택된 CDR을 포함하는, 면역 세포.
41. 구현예 29 내지 40 중 어느 한 구현예에 있어서, 제2 수용체는 LILRB1 세포내 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, 면역 세포.
42. 구현예 41에 있어서, LILRB1 세포내 도메인은 서열 번호 126과 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
43. 구현예 29 내지 42 중 어느 한 구현예에 있어서, 제2 수용체는 LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, 면역 세포.
44. 구현예 43에 있어서, LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체는 서열 번호 135와 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
45. 구현예 29 내지 44 중 어느 한 구현예에 있어서, 제2 수용체는 LILRB1 힌지 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, 면역 세포.
46. 구현예 45에 있어서, LILRB1 힌지 도메인은 서열 번호 134, 서열 번호 127 또는 서열 번호 128과 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
47. 구현예 29 내지 46 중 어느 한 구현예에 있어서, 제2 수용체는 LILRB1 세포내 도메인 및 LILRB1 막관통 도메인 또는 이들의 기능적 변이체를 포함하는, 면역 세포.
48. 구현예 47에 있어서, LILRB1 세포내 도메인 및 LILRB1 막관통 도메인은 서열 번호 130 또는 서열 번호 130과 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 면역 세포.
49. 구현예 29 내지 48 중 어느 한 구현예에 있어서, 암 세포는 결장직장암 세포인, 면역 세포.
50. 구현예 29 내지 48 중 어느 한 구현예에 있어서, 암 세포는 췌장암 세포, 식도암 세포, 위암 세포, 폐 선암종 세포, 두경부암 세포, 미만성 거대 B 세포암 세포, 또는 급성 골수성 백혈병 암 세포인, 면역 세포.
51. 구현예 29 내지 50 중 어느 한 구현예에 있어서, 표적 항원은 표적 세포에 의해 발현되는 것인, 면역 세포.
52. 구현예 29 내지 51 중 어느 한 구현예에 있어서, 비-표적 항원은 표적 세포에 의해 발현되지 않는 것인, 면역 세포.
53. 구현예 51 또는 52에 있어서, 표적 세포는 결장직장암 세포, 췌장암 세포, 식도암 세포, 위암 세포, 폐 선암종 세포, 두경부암 세포, 미만성 거대 B 세포 암 세포, 또는 급성 골수성 백혈병 암 세포인, 면역 세포.
54. 구현예 29 내지 53 중 어느 한 구현예에 있어서, 비-표적 항원은 건강한 세포에 의해 발현되는 것인, 면역 세포.
55. 구현예 29 내지 54 중 어느 한 구현예에 있어서, 건강한 세포는 표적 항원 및 비-표적 항원 둘 모두를 발현하는, 면역 세포.
56. 구현예 29 내지 55 중 어느 한 구현예에 있어서, 제1 수용체 및 제2 수용체가 함께 표적 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화시키는, 면역 세포.
57. 구현예 56에 있어서, 면역 세포는 T 세포인, 면역 세포.
58. 구현예 57에 있어서, T 세포는 CD8+ CD4- T 세포인, 면역 세포.
59. 구현예 29 내지 58 중 어느 한 구현예에 있어서, CEA는 서열 번호 1에 대해 적어도 95% 동일성을 공유하는 서열을 포함하는, 면역 세포.
60. 구현예 29 내지 59 중 어느 한 구현예에 있어서, 제1 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)인, 면역 세포.
61. 치료적 유효량의 구현예 1 내지 60 중 어느 한 구현예의 면역 세포를 포함하는, 약학 조성물.
62. 구현예 61에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함하는, 약학 조성물.
63. 구현예 61 또는 62에 있어서, 암 치료에 약제로서 사용하기 위한, 약학 조성물.
64. 폴리뉴클레오티드 시스템으로서, (a) (i) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 암 세포-특이적 항원 또는 이의 펩티드 항원; 또는 (ii) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 CEA 세포 부착 분자 5 (CEA), 또는 이의 펩티드 항원으로부터 선택되는 표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제1 수용체, 임의로 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR); 및 (b) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 TNFRSF11A, ACHRB, ITGAE, TRPV1,SREC, CXCL16, COLEC12 및 APCDD1, 또는 이의 항원 펩티드로부터 선택되는 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제2 수용체, 임의로 억제 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하며, 여기서 비-표적 항원은 다형성을 포함하는, 폴리뉴클레오티드 시스템.
65. 폴리뉴클레오티드 시스템으로서, (a) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 CEA 세포 부착 분자 5 (CEA) 또는 이의 펩티드 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제1 수용체, 임의로 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR); 및 (b) 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제2 수용체, 임의로 억제 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하며, 여기서 비-표적 항원은 HLA-A*02를 포함하는, 폴리뉴클레오티드 시스템.
66. 구현예 64 또는 65의 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 벡터.
67. 대상체에서 복수의 암 세포를 사멸시키고/시키거나 암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 구현예 1 내지 60 중 어느 한 구현예의 면역 세포 또는 구현예 61 내지 63 중 어느 한 구현예의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
68. 구현예 67에 있어서, 복수의 암 세포는 표적 항원을 발현하는, 방법.
69. 구현예 67 또는 68에 있어서, 복수의 암 세포는 비-표적 항원을 발현하지 않는, 방법.
70. 구현예 69에 있어서, 복수의 암 세포는 이형접합성의 소실(LOH)로 인해 비-표적 항원을 소실한, 방법.
71. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, (a) rs1716 (ITGAE R950W), rs2976230 (ITGAE V1019A/V1019G), rs1805034 (TNFRSF11A V192A) 및 rs35211496 (TNFRSF11A H141Y)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 다형성 유전자좌에서 대상체의 정상 세포 및 복수의 암 세포의 유전자형을 결정하는 단계; (b) 복수의 암 세포에서 CEACAM5의 발현을 결정하는 단계; 및 (c) 정상 세포가 다형성 유전자좌에 대해 이형접합성이고 복수의 암 세포가 다형성 유전자좌에 대해 반접합성이면, 복수의 암 세포가 CEA-양성인 경우, 대상체에게 복수의 면역 세포를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 복수의 면역 세포는 (i) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 CEA 세포 부착 분자 6 (CEA) 또는 이의 펩티드 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제1 수용체, 임의로 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR); 및 (ii) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 TNFRSF11A, ACHRB, ITGAE, TRPV1, 및 SREC 또는 이의 항원 펩티드로부터 선택되는 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제2 수용체, 임의로 억제 수용체를 포함하며, 여기서 상기 비-표적 항원은 다형성을 포함하는 것인, 방법.
72. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, (a) 대상체의 정상 세포 및 복수의 암 세포에 대한 HLA-A 유전자형 또는 발현을 결정하는 단계; (b) 복수의 암 세포에서 CEA의 발현을 결정하는 단계; 및 (c) 정상 세포가 HLA-A*02를 발현하고 복수의 암 세포가 HLA-A*02를 발현하지 않고 복수의 암 세포가 CEA-양성인 경우, 대상체에게 복수의 면역 세포를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 복수의 면역 세포는 (i) 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)와의 복합체에서 CEA 세포 부착 분자 5 (CEA) 또는 이의 펩티드 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제1 수용체, 임의로 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR); 및 (ii) 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제2 수용체, 임의로 억제 수용체를 포함하며, 여기서 비-표적 항원은 HLA-A*02를 포함하는 것인, 방법.
73. 복수의 면역 세포를 제조하는 방법으로서, (a) 복수의 면역 세포를 제공하는 단계, 및 (b) 복수의 면역 세포를 구현예 64 또는 65의 폴리뉴클레오티드 시스템 또는 구현예 66의 벡터로 형질전환시키는 단계를 포함하는, 방법.
74. 구현예 1 내지 60 중 어느 한 구현예의 면역 세포 또는 구현예 61 내지 63 중 어느 한 구현예의 약학 조성물을 포함하는, 키트.
75. 구현예 74에 있어서, 사용 설명서를 추가로 포함하는, 키트.
76. (1) 서열 번호 16-31 중 어느 하나의 아미노산 1-270, 또는 이에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진 TCR 알파 사슬; 및 (2) 서열 번호 16-31 중 어느 하나의 아미노산 293-598, 또는 이에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진 TCR 베타 사슬을 포함하는, TCR.
77. (a) 서열 번호 16의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 16의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (b) 서열 번호 17의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 17의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (c) 서열 번호 18의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 18의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (d) 서열 번호 19의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 19의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (e) 서열 번호 20의 아미노산 1-270을 포함하는 TCA 알파 사슬 및 서열 번호 20의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (f) 서열 번호 21의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 21의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (g) 서열 번호 22의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 22의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (h) 서열 번호 23의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 23의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (i) 서열 번호 24의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 24의 아미노산 293-598을 포함하는 베타 사슬; (j) 서열 번호 25의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 25의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (k) 서열 번호 26의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 26의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (l) 서열 번호 27의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 27의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (m) 서열 번호 28의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 28의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (n) 서열 번호 29의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 29의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; (o) 서열 번호 30의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 30의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬; 또는 (p) 서열 번호 31의 아미노산 1-270을 포함하는 TCR 알파 사슬 및 서열 번호 31의 아미노산 293-598을 포함하는 TCR 베타 사슬을 포함하는, TCR.
78. 구현예 76 또는 77의 TCR을 포함하는, 면역 세포.
79. 구현예 78에 있어서, 주요 조직적합성 복합체 클래스 I (MHC-I)과의 복합체에서 TNFRSF11A, ACHRB, ITGAE, TRPV1, SREC, CXCL16, COLEC12 및 APCDD1 또는 이의 항원 펩티드로부터 선택되는 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제2 수용체, 임의로 억제 수용체를 추가로 포함하며, 여기서 비-표적 항원은 다형성을 포함하는 것인, 면역 세포.
실시예
다음 실시예는 단지 예시를 위한 것이며 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 실시예 전체에서, 용어 "차단제 항원"은 비-표적 항원의 구현예를 기술하기 위해 사용된다.
실시예 1: 차단제로서 TNFRS11A의 식별
GISTIC TCGA 데이터베이스를 검색하여 결장직장암에서 이형접합성의 소실로 인해 소실된 영역을 식별하였다. Chr18q: 35,237,593 - 37,208,54는 결장직장암에서 이형접합성의 소실로 인해 가장 많이 소실된 영역으로 식별되었다. Chr. 18q 상에서 암호화된 표면 단백질을 정상 결장 세포에 의해 발현된 것에 대해 여과하였다.
이들 표면 단백질은 다음의 과정을 사용하여 단백질의 세포외 도메인에서 비동의적 SNPS에 대해 검색되었다:
- 공통 변이체에 대한 NCBI dbSNP 데이터베이스를 다운로드하였다 (참고, NCBI의 경우, "공통" 카테고리는 생식계열 기원 및 적어도 하나의 주요 집단에서 > = 0.01의 마이너 대립유전자 빈도 (minor allele frequency, MAF)에 기반하며, 적어도 2개의 관련되지 않은 개체는 마이너 대립유전자를 가짐)
- 이 데이터베이스는 염색체 18 및 염색체 17의 변이체만을 분석하였다
- MAF<0.1인 변이체를 제거하였다
- VEP(변이체 효과 예측기(Variant Effect Predictor))를 실행하였고, 단백질 코딩 영역에 있는 미스센스 변이체만을 유지하였다
- 다음 유전자를 제거하였다:
o 막관통 도메인이 없는 유전자
o 골지, ER, 미토콘드리아, 엔도솜, 핵막에 위치한 유전자
o 결장에서 고도로 발현되지 않는 유전자 (GTEx 발현 수준 < 5 TPM)
o 삭제된 것과 반대로 증폭되는 유전자
- 후보 유전자의 이형접합성의 소실을 TCGA 카피 수 포탈(Copy Number Portal)에서 확인하였다
- 후보 유전자를 Ensembl 게놈 브라우저에서 다른 변이체에 대해 확인하였다
o 변이체가 있는 경우, 변이체의 위치를 확인하였다 (이것이 세포외 도메인에 있는가?)
필터링 파이프라인의 개요는 아래 표 15에 나타나 있다.
표 15. 염색체 17 및 18 상의 후보 차단제 표적의 식별.
Figure pct00078
CNA: 카피 수 증폭
TPM: 킬로베이스 100만 당 전사체 (유전자형-조직 발현, GTEx project, gtexportal.org/home)
5개의 후보 유전자가 모든 필터를 통과하였다. 이들 5개의 유전자에 대한 요약은 하기 표 16-19에 나타나 있다.
표 16. 발현
Figure pct00079
표 17. 위치, 특징 및 변형
Figure pct00080
MS: 미스센스 변이체
Mod.: 중등
PC: 단백질 코딩
Pos.: 위치
(*)는 표시된 아미노산 및 코돈을 갖는 단백질 위치를 나타낸다
MAF: 마이너 대립유전자 빈도
표 18. 카피 수
Figure pct00081
표 18의 결과는 TCGA 카피 수 포탈에서 얻은 것이다.
세포외 도메인 SNP의 항체에 대한 접근성을 검증하기 위해 결정 구조를 조사하였다.
이들 방법을 사용하여, TNFRS11A (RANK)가 CEA TCR 또는 CAR 활성화제와 쌍을 이루는 차단제 수용체에 대한 표적으로서 확인되었다. TNFRSF11A (RANK) 수용체는 소화관을 포함한 광범위한 정상 조직에서 발현된다. 소화관 발현은 결장에서의 발현을 포함하며, 여기서 중간 값 정상 TNFRSF11A 결장 발현은 23개의 전사체/세포이다. 결장에서 최대 CRC CEA 발현은 8,780개의 전사체/세포이다. 식도에서도 TNFRSF11A가 발현된다. 중간 값 정상 식도 TNFRSF11A 발현은 2개의 전사체/세포이다. 식도에서의 최대 EsCa CEA 발현은 6,208개의 전사체/세포이다. TNFRSF11A는 RANKL(데노수맙의 표적)에 결합하는 616-잔기 단백질을 암호화한다. 이는 28개 아미노산 신호 펩티드, 184개 아미노산 세포외 도메인, 21개 아미노산 막횡단 도메인 및 383개 아미노산 세포내 도메인을 포함한다. TNFRSF11A는 2개의 공통적인 비동의 변이체, 즉 0.4의 MAF를 갖는 rs1805034 (V192A), 및 약 0.2의 MAF를 갖는 rs35211496 (H141Y)를 함유한다.
실시예 2: 저캇 세포의 CEA CAR 매개 활성화는 HLA-A*2 억제 수용체에 의해 차단된다
세포 배양
NFAT 루시퍼라제 리포터를 암호화하는 저캇 세포는 BPS Bioscience로부터 수득하였다. 배양물에서, 저캇 세포를 10% FBS, 1% Pen/Strep 및 0.4mg/mL G418/제네티신이 보충된 RPMI 배지에서 유지하였다. HeLa 세포는 ATCC에 의해 제안된 바와 같이 유지하였다.
저캇 세포 형질감염
저캇 세포를 저캇 세포에 대한 세팅을 사용하여 제조자의 프로토콜에 따라 100uL 포맷 4D-Nucleofactor™(Lonza)를 통해 일시적으로 형질감염시켰다. 1e6 세포 당 1-3 ug의 활성화제 작제물 및 1-3 ug의 차단제 작제물 또는 빈 벡터로 공동 형질감염을 수행하고, 20% 열-불활성화된 FBS 및 0.1% Pen/Strep로 보충된 RPMI 배지에서 회수하였다.
저캇-NFAT-루시퍼라제 활성화 연구
HLA-A*02, CEA 또는 둘 모두를 발현하는 HeLa 세포를 저캇 세포와 공동-배양하고, NFAT-루시퍼라제 리포터 시스템을 사용하여 저캇 세포 활성화를 분석하였다. HLA-A*02 항원 결합 도메인 및 LIR-1 ICD (C1765)를 갖는 차단제 수용체가 활성화제 CAR을 발현하는 저캇 세포의 활성화를 CEA scFv (CT618)로 차단하는 능력을 분석하였다. HeLa 세포를 HLA-A*02+ 및/또는 CEA+를 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 형질도입하여 HLA-A*02+/CEA- HeLa 세포, HLA-A*02-/CEA+ HeLa 세포 및 CEA+ /HLA-A*02+ HeLa 세포를 생성하여 저캇 세포 활성화 검정을 위한 표적 세포로서 사용하였다. 이들 HeLa 세포를 저캇 세포와 공동-배양하고, NFAT 루시퍼라제 리포터 시스템을 사용하여 저캇 세포 활성화를 분석하였다. 그 결과를 도 10에 나타내었다. 도 10에서 볼 수 있는 바와 같이, 저캇 세포를 CEA+ /HLA-A*02+ 표적 세포와 함께 배양하는 경우, HLA-A*02 LIR1 차단제는 CEA scFv CAR에 의한 저캇 세포 활성화를 억제할 수 있다.
실시예 3: 추가적인 차단제 표적 항원의 식별
실시예 1에서 TNFRSF11A를 식별하기 위해 사용된 것과 유사한 생물정보학 파이프라인을 추가적인 후보 차단제 표적을 식별하기 위해 사용하였다. 결장직장암에서 높은 이형접합성 소실 (0.5 초과)을 갖는 세포외 도메인에서 공통의 비동의 변이체를 갖는 유전자 세트를 인간 유전자 세트에서 검색하였다. 비동의 변이체를 갖는 유전자는 출판, 집단 빈도, 분자 결과 및 게놈 매핑과 함께 소규모 삽입 및 결실을 포함하는 단일 뉴클레오티드 다형성 데이터베이스인 dbSNP에서 검색되었다. 공통 변이는 적어도 하나의 주요 모집단에서 0.01 이상의 마이너 대립유전자 빈도 (MAF)를 갖고 NCBI에서 마이너 대립유전자를 갖는 적어도 두 명의 무관한 개체로 정의되었다. 공통 변이에 대한 기준으로 0.1 이상의 MAF. 17번과 18번 염색체는 결장직장암에서 LOH가 높기 때문에 초점이 맞춰졌다. 위에서 기술한 바와 같이, 세포외 도메인에서 막 단백질, 결장 발현 및 일반적인 비동의 변이체에 대해 유전자를 필터링하였다. 검색 프로세스의 요약은 도 11에 나타나 있다.
이 분석에 사용된 추가 데이터베이스는 다음과 같다: EMBL-EBI, SIB 및 PIR에서 호스팅하는 단백질 서열 및 주석 데이터에 대한 리소스로 사용되는, Uniprot (The Universal Protein Resource). GTEx (The Genotype-Tissue Expression)는 조직 특이적 유전자 발현 및 조절을 위한 공공 자원으로 사용되었다. 여기에는 거의 1000명의 개체에 걸쳐 54개의 질환이 없는 조직 부위의 샘플이 포함되어 있다. TCGA (The Cancer Genome Atlas)는 20,000개 이상의 원발성 암에 대한 자원으로 사용되었으며 33개 암 유형에 걸친 정상 샘플과 일치했다. TCGA-COADREAD 데이터 세트는 결장 선암종 및 직장 선암종 데이터 세트이다. CCLE (Cancer cell line Encyclopedia)는 57개의 결장직장암 (CRC) 세포주에 대한 정보를 포함한다.
RNASeqDB는 메모리얼 슬론 케터링 암 센터의 비교 연구를 허용하는 동일한 파이프라인을 사용하여 GTEx 및 TCGA에서 처리된 데이터의 데이터베이스이다. GTEx의 372개 TCGA-COADREAD 샘플 및 339개 정상 결장 샘플을 분석했다.
잠재력 차단제 표적으로서 이들 방법을 사용하여 COLEC12, CXCL16 및 APCDD1을 식별하였다. 표 19는 결장직장암에서 이들 유전자에 대한 발현 데이터를 요약한 것이다. UCSC Xena 브라우저 (TCGA의 경우) 및 CCLE 샘플의 발현 데이터.
표 19. 발현
Figure pct00082
표 20은 변이체 및 마이너 대립유전자 빈도를 요약한 것이다.
표 20. 위치, 특징 및 변형
Figure pct00083
표 21. 다양한 암의 LOH 빈도
Figure pct00084
실시예 4: 차단제 표적 항원에 특이적인 항원 결합 도메인의 식별
후보 차단제 항원에 대한 공개적으로 이용 가능한 항체는 CDR 서열이 알려지지 않은 경우 시퀀싱된다. 후보 차단제 표적에 대한 항체가 없는 경우, 정제된 단백질 (예를 들어, COLEC12, CXCL16, TNFRS11A 및 실시예에 설명된 다른 표적)로 마우스, 랫트 또는 토끼를 면역화하여 이러한 항체를 생성한다. 면역화된 동물의 혈청은 차단제 표적에 결합하기 위해 mAb를 스크리닝하는 데 사용된다. 차단제 표적에 대한 항체도 huTARG 시스템을 사용하여 생성된다. 그런 다음 원하는 특이성을 가진 항체를 분리하고 시퀀싱하여 CDR 서열을 결정한다.
차단제 표적에 대한 항체의 CDR 서열은 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 scFv를 생성하는 데 사용된다. 후보 scFv는 억제 수용체 힌지 또는 막관통 도메인에 융합되어 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 억제 수용체를 생성한다. 후보 scFv는 또한 활성화제 수용체 힌지 또는 막관통 도메인 (예를 들어, CAR)에 융합되어 표적 항원에 결합하는 scFv에 대한 양성 대조군으로서 사용하기 위한 전장 활성화제 수용체를 생성한다. 억제 수용체와 관련하여 작동하는 후보 scFv의 능력은 NFAT-루시퍼라제 리포터 분석을 사용하여 저캇 세포에서 분석된다.
실시예 5: 실시예 6-11의 방법
세포주 생성
표적 세포주를 판매자 지침에 따라 성장시켰다. 표 25에 나타낸 바와 같은 작제물 CEA(-) HLA-A*02(-) 세포주에 대한 유전자 변형은 CRIPSR/Cas9를 사용하였다. 가이드 RNA는 Synthego 및/또는 IDT(Integrated DNA Technologies)로부터 구입하였고, 표적화 서열은 표 22에 열거하였다. RNP 복합체를 형성하기 위한, S.p. HiFi Cas9 단백질 (IDT)을 sgRNA와 1:3 몰비로 혼합한 후, 4D Nucleofector (Lonza)를 사용하여 각각의 세포주에 맞춘 세팅으로 전기천공하였다.
CEA(+) HLA-A*02(+) 및 CEA(+) HLA-A*02(-) HeLa 세포주를 생성하기 위해, HLA-A*02를 암호화하는 플라스미드가 있거나 없는 CEA를 암호화하는 pLenti 플라스미드를 HeLa 세포 내로 형질감염시켰다. CEA 및/또는 HLA-A*02를 발현하는 안정한 풀을 FACS에 의해 풍부하게 하고, 그 후에 확장하였다.
HLA-A*02(+) K562 및 Colo668 주를 확립하기 위해, HLA-A*02 중쇄를 암호화하는 렌티바이러스를 형질도입하여 안정한 풀을 생성하였다. CEA(+) 표적 세포를 생성하기 위해, Colo668 및 H508을 제외한 모든 CEA(-) 표적 세포를 4D Nucleofector를 사용하여 CEA mRNA(하기 참조)로 형질감염시키고, 형질감염 후 1-3일 내에 검정하였다. 레닐라(Renilla) 루시퍼라제 및 RFP를 암호화하는 렌티바이러스(시스의)를 Biosettia로부터 구입하여 RFP-발현 표적 세포의 안정한 풀을 확립하도록 형질도입하였다. 표적 녹아웃 또는 과발현 세포주는 HLA-A*02 항체 (BV421, BioLegend, Cat#343326), 또는 CEA 항체 (R&D systems, MAB41281)를 사용하여 FACS에 의해 표적-음성 또는 -양성 풀에 대해 풍부화되었다. 표적 세포주의 RFP-발현 풀을 FACS에 의해 선별하였다.
A*02 차단제가 있거나 없는 CEA CAR은 렌티바이러스 형질도입에 의해 루시퍼라제-리포터 저캇 세포에서 안정하게 발현되었다.
mRNA의 시험관내 전사
mRNA는 40 mM Tris-HCL, 10 mM 디티오트레이톨, 2 mM 스페르미딘, 0.002% 트리톤 X-100, 27 mM 마그네슘 아세테이트, 5 mM CleanCap 1 AG 트리머(trimer) (TriLink) 및 각각 5 mM의 ATP, CTP, GTP 및 슈도-우리딘 트리포스페이트 (NEB)를 함유하는 25 ul의 1X 반응 완충액에서 합성하였다. 반응은 37℃에서 2시간 동안 8 U/μL T7 RNA 폴리머라제 (NEB, M0460T), 0.002 U/μL 무기 피로포스파타제 (NEB, M2403L), 1 U/μL 뮤린 RNase 억제제 (NEB, M0314L), 및 0.025 μg/μL 선형화된-T7-주형의 최종 농도로 진행되었다. 0.4 U/μL DNase I (NEB, M0303L)를 37℃에서 15분간 1X DNase I 완충액에서 첨가하여 주형을 제거하였다. E.coli 폴리 (A) 폴리머라제 (NEB, M0276)를 사용하여 제조자의 프로토콜에 따라 RNA의 폴리(A) 테일링을 수행하고, RNA를 공급자의 세정 키트 (NEB, T2040L)에 의해 정제하였다. RNA를 1Х의 안타틱 포스파타제(antarctic phosphatase) 완충액 중의 0.2 U/μg의 안타틱 포스파타제 (NEB, M0289L)로 1시간 동안 처리하고, (NEB, T2040L)에 의해 재정제하였다. RNA 농도를 Nanodrop으로 측정하고 1% 아가로스 겔 상에서 조사하였다.
프로브 결합 및 수용체 발현을 위한 유세포 분석법
CAR 및 TCR의 발현은 비오틴화된 단백질 L (ThermoFisher #29997), 잇달아 (CAR의 경우) 형광적으로 표지된 스트렙타비딘, 또는 (TCR의 경우; Biolegend Cl:H57-597) 형광적으로 표지된 항-뮤린 TRBV 항체를 사용하는 유세포 분석법을 통해 평가하였다. 차단제-항원 결합은 Tmod-발현 저캇 세포를 비오틴화된-pMHCs 프로브로 염색하고, 사량체화하고, 적절한 형광색소에 접합된 스트렙타비딘 (Biolegend)으로 사전표지하여 결정하였다. 4℃에서 염색 후, 중간 값의 형광 강도(MFI)를 FACS Canto II 유동 세포측정기(BD Biosciences)를 사용하여 결정하였다.
저캇 세포 기능적 검정
mRNA 형질감염에 의해 천연적으로, 재조합적으로, 또는 일시적으로 활성화제 및 차단제 항원을 발현하는 표적 세포를 본 연구에 사용하였다. mRNA 형질감염을 사용하는 경우, 각각의 표적 세포 쌍 (HLA-A*02(-) 및 HLA-A*02(+))을 총 6-16개의 포인트에 대해 2 μg mRNA에서 시작하여 9-배 희석 시리즈로, 다양한 양의 CEA mRNA와 함께 4D Nucleofactor (Lonza)를 사용하여 전기천공하였다. 전기천공된 세포 또는 표적 항원을 천연적으로/안정적으로 발현하는 세포를 384-웰 플레이트(Corning, Cat#3570)에 10,000 세포/웰의 밀도로 18-20시간 동안 정상 조직 배양 조건 하에서 시딩(seed)하고 성장시켰다. 야생형 또는 CEA CAR 또는 CEA Tmod 작제물을 발현하는 12,000개의 저캇 세포를 표적 세포 웰에 첨가하고, 6시간 동안 공동 배양시킨 후, 루시페린 기질을 첨가하여 Tecan Infinite M1000을 사용하여 루시퍼라제 신호를 측정하였다.
CEA 발현을 정량화하기 위해, 각각의 CEA mRNA 적정 포인트로부터의 표적 세포를 96-웰 플레이트 (Corning, Cat#3610)에 시딩하고, 세포 수집 전에 18-20시간 동안 성장시켰다. CEA 발현은 표면 CEA 분자 수를 결정하기 위해 제조자의 프로토콜에 따라 CEA 항체 (R&D systems, MAB41281) 및 QIFIKIT (Agilent, K007811-8)를 사용하여 정량화하였다. 표준 곡선은 세포 표면 수 대 mRNA에 대해 생성되었다 (하기 참조).
EC50 및 IC50 분자/세포 값의 TPM으로의 변환
단백질 분자/세포 대 TPM 표준 곡선을 생성하기 위해, 복수의 세포주 상의 CEA 또는 HLA-A*02의 표면 발현을 상기 기재된 바와 같이 내부(in-house)에서 결정하거나 또는 이전에 공개된 결과로부터 취득하였다. TPM 값은 DepMap 포털(depmap.org/portal/)에서 얻었다. 기울기 (k)는 분자/세포 = k*TPM을 피팅(fitting)함으로써 결정하였고, 조직 및 세포주 항원 발현 값과의 비교를 위해 분자/세포의 EC50 및 IC50을 TPM으로 변환시키는데 사용하였다.
1차 T 세포 생성 및 특징규명
1차 T 세포 및 공여자 수집 프로토콜에 대한 사전 동의(informed-consent)는 Allcells®의 Institutional Review Board(IRB)에 의해 승인되었다. Allcells®는 HIPAA 규정 준수 및 승인된 프로토콜(www.allcells.com/cell-tissue-procurement/donor-facilities/)을 따랐다. PBMC는 Allcells®로부터 구입한 Leukopak로부터 정제하였다. LymphoONE™ 배지 (Takara WK552)는 달리 언급되지 않는 한 1% 인간 AB 혈청(GeminiBio 100-512)으로 보충되었다. 인간 PBMC를 LymphoONE™에서 성장시키고, CEA CAR-단독 및 CEA Tmod-암호화 렌티바이러스를 사용한 형질도입 전에 24시간 동안 제조자의 가이드라인 (1:100 희석)에 따라 TransAct™ (Miltenyi 130-111-160)로 보충하였다. 24-웰 G-Rex 플레이트 (Wilson Wolf 80192M)로 옮기기 전에 3일 동안 배양한 형질도입된 세포에 형질도입 24시간 후에 IL-2 (300 IU/ml)가 보충된 추가적인 LymphoONE™을 첨가하였다. G-Rex 플레이트에서 확장 동안 7일마다 배지 변화를 수반하여 신선한 IL-2 (300 IU/ml)를 48시간마다 첨가하였다. 1차 T 세포에서 형질도입된 CAR 또는 Tmod 성분의 발현 및 항원 결합을 상기 기재된 바와 같이 유세포 분석법에 의해 확인하였다.
생체내 연구를 위해, CEA CAR 및 CEA Tmod를 상기 기재된 바와 같이 G-Rex10 (Wilson Wolf 80040S) 또는 G-Rex100 (Wilson Wolf 80500)을 사용해 생성하여 3일 차에 시작하는 더 많은 양의 세포를 수용하였다. T 세포를 계수하고, 3일 차부터 격일로 배지를 교환하였다. CAR- 및 Tmod-발현 세포의 풍부화를 9일 차에 수행하였다.
CAR- 또는 Tmod 이중 수용체-발현 집단을 풍부하게 하기 위해, 제조자의 프로토콜에 따라 세포를 단백질 L-비오틴 (Thermo Scientific Cat# 29997) 스트렙타비딘-PE 또는 프로브-비오틴/스트렙타비딘-PE, 잇달아 항-PE 마이크로비드 (Miltenyi 130-048-801)로 표지한 후, 이어서 AutoMACS® Pro Separator (Miltenyi)를 사용하여 풍부하게 하였다. 풍부화된 세포를 수확 전과 같이 G-Rex 플레이트에서 성장시켰다.
1차 T 세포 기능적 검정 (급성)
GFP 또는 RFP 중 하나를 발현하는 표적 세포주 쌍 (HLA-A*02(-) 및 HLA-A*02(+))을 4D Nucleofector를 사용하여 명시된 양으로 CEA mRNA로 전기천공하고, 384-웰 PDL-코팅된 플레이트 (Griner bio-one, Cat# 781091)를 세포 영상화에 사용한 것을 제외하고, 상기 기재된 바와 같이 배양하였다. 필요한 경우, 동일한 세포 수를 세포 밀도 결정을 위해 또 다른 384-웰 플레이트 (Corning, Cat#3570)에 병렬로 시딩하였다. 다음날, 표적 세포 시딩 밀도를 제조사의 지침에 따라 세포-역가 성장(cell-titer glow) (Promega, G7570)로 측정하였다. CEA CAR-양성 및 CEA CAR/A*02 차단제 이중-양성 T 세포의 백분율을 공동 배양 전에 유세포 분석법으로 결정하였다. 필요한 경우, 형질도입되지 않은 T 세포를 CEA CAR-양성 풀과 혼합하여 이중-양성 집단에 대해 양성 CEA CAR 세포의 백분율을 일치시켰다. 표적 세포와 T 세포를 48시간까지 공동 배양하였다. 전체 웰 형광 신호를 공동 배양 동안 4x 대물렌즈로 IncuCyte S3 또는 ImageXpress® 마이크로 공초점 영상기 (Micro Confocal imager) (Molecule Device Corporation)에서 모니터링하고, 시간에 따른 총 형광 면적 또는 강도를 기록하였다. T 세포가 없는 웰 또는 형질도입되지 않은 T 세포와 공동 배양된 웰과 비교하여 CAR 또는 Tmod 공동 배양물에서 형광 신호의 감소는 CEA 활성화제 및 CEA Tmod 작제물의 세포독성의 비교를 허용하였다. 표적 세포 상의 CEA 발현을 상기 기재된 바와 같이 QIFIKIT를 사용하여 결정하였다.
혼합된 표적 세포가 사용되는 경우, GFP-레닐라 루시퍼라제를 갖는 정상 CEA(+)A*02(+) 표적 세포 및 RFP-반딧불이 루시퍼라제로 조작된 종양 CEA(+)A*02(-) 표적 세포를 1:1 비율로 혼합하고, 상기 기재된 바와 같이 풍부화된 1차 T 세포와 공동 배양하였다. 세포독성은 IncuCyte S3 상에서 GFP 및 RFP 신호 소실을 모니터링함으로써 측정하였다.
가역성 세포독성 검정
표적 세포주를 LymphoneONE™ 플러스 1% 인간 혈청 및 1X P/S에서 T 세포와 공동 배양하였다. 간략하게, 표적 세포를 연속-전달 실험을 위해 의도된 벌크 공동 배양을 위해 6-웰 플레이트에 500,000 세포/웰로 플레이팅하였다. 384-웰 영상화 플레이트에서, 표적 세포를 5,000 세포/웰로 시딩하고, 밤새 배양하였다. 다음날, T 세포를 3:1의 명목(nominal) 효과기-대-표적(E:T) 비율로 공동 배양 웰에 첨가하였다(6-웰 포맷에서 1,500,000개 세포/웰; 384-웰 포맷에서 15,000개 세포/웰). 배양/영상화를 IncuCyte® S3 플랫폼(Sartorius) 상에서 48시간 동안 매 2시간 마다 영상화하고(각 회차의 연속 공동 배양물에 걸침); 6-웰 플레이트를 37℃에서 오프라인으로 배양하였다. 각각의 48시간 사이클의 말기에, T 세포를 표적 세포로부터 분리하고 6-웰 공동-배양물로부터 수집하였으며; 이들 T 세포를 계수하고, (i) 표시된 시리즈에서 다음 공동 배양을 위한 벌크 표적 세포의 새로운 웰, 및 (ii) 시리즈에서 다음 공동 배양을 위한 데이터를 수집하기 위한 새로운 세트의 영상화 웰 (384-웰 포맷)로의 전달을 위해 새로운 배지에서 균일한 밀도로 재현탁하였다. 제2 회차에서, 12-웰 플레이트를 750,000개의 T 세포 및 250,000개의 표적 세포를 함유하는 벌크 공동 배양물을 위해 사용하였다(E:T 비율은 시리즈 전체에 걸쳐 일정하게 유지되었으며; 영상화 플레이트 공동 배양물을 384-웰 포맷에서 명목 15,000:5,000 E:T 비율로 연구 전체에 걸쳐 사용하였다). 결과는 풍부화된 1차 T 세포를 정상 (CEA(+) HLA-A*02(+)) 및 이어서 종양 (CEA(+) HLA-A*02(-)) 표적 세포, 또는 그 반대로 교대로 배양하는 공동 배양물의 시리즈였다. 데이터는 공여자-매칭된 형질도입되지 않은 T 세포와 비교하여 형질도입된 집단에서 표적-세포 GFP 신호의 백분율 소실을 반영하는 특이적 사멸 (%)로서 제시되었다.
이종이식 연구
생체 내 실험은 실험동물 운영 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee) (IACUC)-승인된 프로토콜 하에 Explora BioLabs에 의해 수행되었다. 5-6주령 암컷 NSG (NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ), JAX 스톡 번호 005557 마우스를 The Jackson Labs로부터 구입하였다. 동물을 연구 개시 적어도 3일 전에 하우징 환경에 순응시켰다.
하우징 환경에 순응시킨 후, 동물에게 적합한 세포 수를 확립한 파일럿 연구(pilot study)에서 결정된 바와 같이 종양 세포를 주사하였다. H508 이종이식 모델은 반딧불이 루시퍼라제 리포터로 조작된 야생형 또는 동종유전자 HLA-A*02(-) 세포주를 사용하여 확립되었다 (상기 참조). 50%의 2E7 H508 세포를 NSG 마우스의 측면에 피하 주사하였다. "정상" 세포를 각각의 마우스의 우측에 피하 주사하고, 종양 세포를 좌측에 주사하였다. 종양 성장을 캘리퍼 측정(caliper measurement)을 통해 모니터링하였다. 종양의 평균 크기가 ~100-200 mm3에 도달하면, 동물을 그룹으로 무작위화하고, 꼬리 정맥을 통해 T 세포를 투여하였다. T-세포 주사 후, 마우스에서의 총 종양 부담이 2,000 mm3에 도달할 때까지 주 3회 종양 측정을 수행하였다. 생물발광 정량화를 각 코호트 7로부터 5마리 마우스의 서브세트 상에서 수행하였다. 간략히, 각 마우스를 100 ul의 XenoLight D-루시페린 포타슘 염 (PerkinElmer 122799)을 피하 주사한 후, 15분 후 IVIS® 스펙트럼 생체내 영상화 시스템 (Perkin Elmer)을 사용하여 배측(dorsal side)에서 영상화하였다. 연구 전반에 걸쳐 동물을 임상 관찰 통해 일반적인 건강 및 일정한 간격으로 체중에 대한 영향에 대해 모니터링하였다.
혈액 및 혈청을 T 세포 주사 후 -1, 2, 9, 16, 30일 및 연구 종료시에 수집하였다. 혈액 및 비장 중의 T 세포에 대한 염색을 적혈구 용해 후 BD FACSCanto II 상에서 수행하였다. 마우스 세포는 마우스 CD45 및 Ter119에 대한 항체로 염색함으로써 배제하였다. 인간 T 세포를 인간 CD3, CD4 및 CD8에 대한 항체로 염색하였다. 모든 항체의 공급원은 보충 표 23에 열거되어 있다.
표 22. CEA 및 HLA-A의 녹아웃을 생성한 CRISPR/Cas9에 사용된 gRNA 표적화 서열
Figure pct00085
표 23. 실시예 7-11에서 사용된 항체 및 재조합 단백질의 요약
Figure pct00086
실시예 6: CEA 키메라 항원 수용체 및 LILRB1 억제 수용체 쌍의 설계 및 활성
막-근위 CEA B3 도메인의 세포외 에피토프에 결합하는 마우스 mAb에 기반한 인간화 scFv를 생성하였다. 원래의 mAb는 단백질의 쉐드 형태(shed form)로부터 부재하는 에피토프에 결합하여 가용성 CEA에 의한 수용체 억제의 위험을 회피하는 것으로 생각되었다. CEA scFv는 CD8α 힌지, CD28 막관통 도메인, 및 4-1BB, 및 CD3ξ 세포내 도메인을 포함하는 3세대 CAR에 융합되었다(도 13). 서열은 하기 표 24에 나타나 있다.
CAR 활성화제 단독의 활성을 확인한 후, CEA CAR을 LILRB1 유전자 생성물 (LIR-1)의 힌지, 막관통 및 신호전달 도메인에 융합된 HLA-A*02-특이적 scFv를 함유하는 작제물인 HLA-A*02 억제성 수용체와 공동 발현시켰다. LIR-1은 면역 억제 수용체 패밀리의 구성원이며, 그 신호 도메인에 4개의 ITIM을 함유한다. CAR 및 LIR-1 억제 수용체는 저캇 및 1차 T 세포의 표면 상에서 잘 발현되었고, 두 수용체모두 CEA, HLA-A*02 또는 둘 모두를 발현하도록 조작된 HeLa 표적 세포를 사용하여 주로 리간드-의존적 방식으로 기능하였다 (도 14-17). CEA 및 HLA-A*02는 HeLa 세포에서 안정하게 발현되었고, 이는 표지된 mAb로 염색되고 유세포 분석법에 의해 분석되었다. 각 항원의 표면 항원 밀도는 QIFIKIT을 사용하여 결정하였다(도 14). 형질감염된 저캇 세포 및 형질도입된 1차 T 효과기 세포에서 두 수용체 모두의 발현 및 풍부화를 형광 활성화 유세포 분석법(FACS)을 사용하여 확인하였다.
언급된 경우를 제외하고, β2 마이크로글로불린 (B2M) 발현을 감소시키기 위해 절단가능한 T2A 링커 및 shRNA 발현 카세트를 함유하는 단일 융합 유전자에 의해 암호화되는 두 수용체 모듈 모두를 갖는 단일 벡터 작제물을 사용하여 저캇 세포를 형질감염하거나, 1차 효과기 T 세포를 형질도입하였다
도 15에서, CEA CAR은 CEA 및 HLA-A*02 둘 모두를 발현하는 HeLa 표적 세포와 공동 배양된 저캇 세포에서 특이적으로 차단된다. NFAT-루시페라아제 리포터를 함유하는 저캇 세포는 두 개의 분리된 작제물로부터 활성화제 및 차단제를 안정적으로 발현하도록 조작되었다.
도 16 및 17에서, 두 수용체를 모두 발현하는 1차 T 세포에서의 세포독성을 조작된 HeLa 세포 표적으로 검정하였다. 도 16에서, 두 수용체를 모두 암호화하는 단일 렌티바이러스 벡터를 검정 전에 차단제-양성 세포에 대해 풍부화된 HLA-A*02(+) 공여자 T 세포의 형질도입에 사용하였다. (HL-A*02(+) 인) 하나의 공여자가 도 16에 나타나 있는 반면, 4개의 공여자가 도 17에 나타나 있다.
추가적인 공여자로부터의 T 세포에 대한 결과를 도 17에 나타내었다. 조작된 HeLa 세포는 다시 세포독성의 표적으로 사용되었고, 1차 T 세포는 두 수용체 모두를 암호화하는 단일 렌티바이러스 벡터로 형질도입되었다. 검정 전에 차단제 리간드(HLAA*02 pMHC) 및 단백질 L을 사용하여 풍부화를 수행하였다. 공여자는 D183534를 제외하고, HLA-A*02(-)인 A*02(+)였다.
표 24. CEA CAR 및 LILRB1 억제 수용체의 서열
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
Figure pct00091
Figure pct00092
실시예 7: CEA CAR 및 LILRB1 억제 수용체 쌍의 민감도 및 선택성
CEA 활성화제의 EC50 및 HLA-A*02 LILRB1 차단제 수용체의 IC50을 정량화하였다. 이들 값은 인간 종양 및 정상 조직의 표적 항원 발현 값과 비교될 수 있다.
합성 mRNA는 저캇 세포에서 기능적 측정과 결합하여 HeLa 표적 세포 및 변이체 상의 CEA 및 HLA-A*02 항원의 표면 수준을 제어하기 위한 것이었다 (도 18-19). 1차 T 세포 세포독성 검정을 사용하는 유사한 실험을 수행하였고, 비교를 위해 HLA-A*02-제한된 CEA TCR을 포함하였다 (도 20). CEA TCR은 Parkhurst 등 (2009). Clin Cancer Res 15, 169-180에 기재되어 있다. 이 TCR은 Rosenberg와 동료들에 의해 임상에서 활성인 것으로 나타났으나, 대장염으로 종결되었다(Parkhurst 등, 2011, Mol Ther 19, 620-626).
도 20에서, 두 수용체를 모두 갖는 HLA-A*02(+) 공여자 T 세포를 HeLa 표적 세포와 공동 배양하였다. EC50 추정을 위해, 상이한 양의 CEA mRNA를 공동 배양 전에 CEA(-) HLA-A*02(-) 또는 CEA(-) HLA-A*02(+) HeLa 세포 내로 형질감염시켰다. 매칭된 대용 "정상" 세포를 생성하기 위해, 1 μg A*02 mRNA를 공동 형질감염시켰다. 최대 사멸 (Kmax; 총 표적 세포 수에 대해 정규화됨)을 CEA mRNA 양에 대해 플롯팅하였다. mRNA 양 및 분자/세포로서 계산된 EC50은 표 25에 열거되어 있다. TCR EC50은 CEA 표면 항원/세포에 제공되지만, 실제 표적은 CEA pMHC이다. IC50의 경우, 상이한 양의 HLA-A*02 mRNA를 공동 배양 전에 125 ng CEA mRNA로 세포 내로 공동 형질감염시켰다. 사멸을 48시간 동안 모니터링하였다. Kmax로 정규화된 사멸의 감소를 A*02 mRNA 양에 대해 플롯팅하였다. CEA Tmod를 차단하는 HLA-A*02의 IC50은 도 22의 표준 곡선을 사용하는 ~6.8 ng의 mRNA 및 ~ 100K 분자/세포이다. 표준 곡선을 사용하여 mRNA 수준을(도 18 참조) 표면 단백질 분자에 관련시켰고, 그 결과를 도 19에 나타내었다. 이들 실험은 저캇 세포 검정에서 측정된 EC50 및 IC50이 T 세포 세포독성 검정으로부터 유래한 동등한 민감성 파라미터와 비슷하다는 것을 입증하였다.
도 21은 CEA 및 A*02 항원에 대한 종양 및 정상 발현 값을 갖는 그래프 상의 CEA CAR 및 HLA-A*02 억제 수용체 EC50 및 IC50을 나타낸다. 도 21에서, Bacac, M. 등 (2016) Clin Cancer Res 22, 3286-3297로부터 CEA 표준 곡선의 데이터를 재플롯팅하였다. EC50 및 IC50 값을 결정하였다. 종양 유형은 LOH에 의한 HLA-A*02(-) 종양의 선택성을 설명하기 위해 0 TPM에서 세팅된 HLA-A 발현을 가졌다. 종양 데이터는 TCGA 데이터베이스에서, 정상 조직 데이터는 GTEx 데이터베이스에서 얻었다.
대부분의 정상 조직은 2-수용체 조합의 EC50 훨씬 미만으로 CEA를 발현한다. 예외는 결장 및 식도이며, 이는 도 21에서 CEA EC50 위의 사분면에 해당한다. 그러나, 결장 및 식도를 포함하는 모든 정상 조직은 차단제 수용체 IC50 훨씬 초과로 HL-A*02의 발현 수준을 갖고, 수용체 조합을 발현하는 면역 세포에 의한 CEA-유도 사멸로부터 안전한 것으로 생각된다. 많은 고형 종양, 특히 결장직장, 췌장 및 폐는 EC50 초과의 CEA 수준을 발현한다. 이들 악성 조직은 HLA-A*02 발현의 부재 하에 (즉, LOH에 대해 선택될 때) 두 수용체를 발현하는 면역 세포에서 CEA CAR을 활성화시킬 것으로 예상된다.
다양한 결장암 세포주를 특징규명하여 정상 결장에서 항원 발현의 천연 수준을 나타내는 주를 식별하였다. 결장암 세포주 H508 및 SW1463을 선택하였다 (표 26). 둘 다 HLA-A*02에 대해 이형접합성이고 CEA를 발현한다. RNA-Seq 데이터세트의 비교는 이들 주가 정상 결장에서 이들 유전자의 발현을 반영하는 수준으로 CEA 및 HLA-A를 발현한다는 것을 보여주었다. 표적-관련 대조군으로 사용하기 위한 표적 세포주를 생성하기 위해, HLA-A*02 또는 CEA 발현이 결여된 H508 및 SW1463의 유전자 녹아웃 버전을 생성하였다 (도 23). 도 23에 나타낸 바와 같이, 유전자 조작 전의 H508 및 SW1463 세포주는 정상 결장 조직과 유사한 항원 수 및 HLA-A*02:CEA 발현 비율을 갖는다. 시험을 위한 변이체를 제조하기 위해, HLA-A*02-결핍 세포의 안정한 풀은 CRISPR 녹아웃으로부터 유래하고, 여기서 CEA 또는 HLA-A*02 mAb로 염색한 후 유세포 분석법에 의해 분석하였다. 모든 세포주는 초기 계대 바이알의 신선한 해빙(thaw)으로부터 얻은 것이었다.
내인성 항원 발현을 갖는 H508 및 SW1463 결장직장암 세포주에 대한 CEA CAR Tmod 세포 (이중 CEA CAR 및 HLA-A*02 scFv LILRB1 억제 수용체 시스템을 발현하는 세포)의 선택적 반응을 1차 T 세포 세포독성 검정에서 확인하였다 (도 24). 도 24에서, 미가공 데이터(raw data)는 배경 감산 없이 플롯팅되었다. 배경(CEA(-) HLA-A*02(+) 세포, 삼각형)을 이용한 시간 코스를 또한 수행하였다. 종양 및 정상 표적 세포는 오른쪽에 있는 키에서 보여지는 바와 같이, 유전적 변형이 있거나 없는 H508 및 SW1463이었다. 두 개의 분리된 벡터(활성화제 수용체에 대해 하나 및 차단자 수용체에 대해 하나)를 사용하여 B2M을 녹다운하기 위한 shRNA 없이 공여자 T 세포를 형질도입하였다. 모든 공여자는 HLA-A*02(-)였다.
도 24는 Tmod 이중 수용체 시스템이 어떻게 H508 표적 세포의 선택적 사멸을 가능하게 하는지에 대한 예를 나타낸다. 도 24에서, 3개의 NCI-H508-RFP 표적 세포주를 사용하였다: CEA+ HLA-A*02(+) (정상, 채워진 원), CEA- HLA-A*02(+) (정상, 삼각형) 및 CEA+ HLA-A*02(-) (종양, 사각형). 세포독성 검정은 3:1의 효과기 대 표적 비율로 수행되었다. 특이적 사멸은 형질도입된 T-세포 공동 배양물에 존재하는 RFP 또는 GFP 신호의 총 픽셀 면적을 기반으로 결정하였고, 형질도입되지 않은 T-세포 공동 배양 대조군에 대한 백분율로 표현하였다.
CEA CAR Tmod 발현 세포 및 벤치마크 TCR 둘 모두는 낮은 E:T 비율에서 유사한 표적-선택적 세포독성을 입증하였다 (도 25). 도 25에서, 특이적 사멸로부터 CEA(-) HLA-A*02(+) 표적 세포의 배경 사멸을 차감하였다. 기능적 HLA-A*02 유전자의 부재하에, TCR은 심지어 E:T = 9:1에서도 불활성이었다. 이 비율에서, CEA CAR Tmod 발현 세포는 HLA-A*02(-) 표적 세포에 대한 감소된 선택성을 입증하였다. Tmod 발현 세포와 TCR 발현 세포 사이의 이러한 차이는 HLA-A*02(-) 공여자에서 관찰되지 않은 바와 같이(도 32-34), 공여자 일배체형(haplotype) 및/또는 이들 각각의 표적의 절대 항원인, TCR에 대한 pMHC 및 CEA CAR 작제물에 대한 CEA 표면 항원의 수준의 극도의 차이와 부분적으로 관련될 수 있다.
TCR 발현 세포와 달리, CEA CAR Tmod 발현 세포는 차단제 항원의 발현에만 기반하여 CEA(+) HLA-A*02(+) 정상 세포로부터 CEA(+) HLA-A*02(-) 종양 세포를 구별할 수 있었으며, 이는 반응 대 E:T 비율에서 ~70x 이동을 나타냈다 (도 26). 대조적으로, TCR은 정상 세포에 대해 비선택적이었으며, 이는 이의 임상 프로파일과 일치한다.
표 25. CEA 및 A*02 항원의 정상 결장 발현과 비교한 CEA(+) 표적 세포주
Figure pct00093
표 25에서, H508 및 SW1463은 천연 CEA 및 HLA-A*02 발현을 갖는 결장직장암 세포주이다. HeLa는 CEA(-) 및 HLA-A*02(-)인 자궁경부암 세포주이다. HeLa 세포는 CEA 및 HLA-A*02를 발현하도록 유전자 조작되었다. 세포는 염색되었고 분자/세포는 상기 기재된 바와 같이 계산되었다. TPM은 HLA-A에 대한 것이다. MFI, 중간 값 형광 강도; TPM, 100만당 전사체; NA: 해당 없음; ND, 완료되지 않음.
표 26. 14개 세포주에서 CEA 및 A*02 (TPM)의 발현
Figure pct00094
유전자 발현 정보는 DepMap으로부터 수득하였다. 14개의 세포주를 상업적 공급원으로부터 수득하였다. CRISPR 유전자-편집을 사용하여 CEA 및/또는 HL-A*02의 녹아웃(KO)에 의해 CEA(-) HLA-A*02(-) 및 CEA(-) HLA-A*02(+) 동종 세포주를 생성하고, A*02가 결여된 세포주에서, 세포를 A*02를 발현하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입하였다.
실시예 8: 혼합 및 연속 배양물에서의 종양 판별 및 가역적 활성화
시험관내 기능적 검정에서 더욱 어려운, CEA CAR Tmod 이중 수용체 시스템(CEA CAR 및 HLA-A*02 scFv LILRB1 억제 수용체)을 발현하는 세포의 기능을 시험하기 위한 일련의 실험. 먼저, 혼합된 세포 배양물에서 정상 세포와 종양을 구별하기 위한 두 수용체를 발현하는 세포의 능력을 시험하였다. 야생형 H508 세포를 RFP로 표지하여 정상 세포를 시뮬레이션하였고, HLA-A*02 녹아웃(KO) 동종 세포를 GFP로 표지하고 종양 세포를 시뮬레이션하는데 사용하였다. 착색된 단백질은 시험관 내에서 세포 생존을 위한 편리한 판독을 제공하였다. 2개의 표지된 세포주를 1:1 비율로 혼합하고, 2개의 Tmod 수용체를 발현하는 효과기 T 세포와 공동 배양하였다. 그 후, 표적 세포를 현미경으로 시각화하였다. CEA CAR을 단독으로 발현하는 T 세포는 종양 및 정상 주 둘 모두를 완전히 사멸시킨 반면, CEA CAR 및 억제 수용체를 발현하는 T 세포는 종양 세포만을 사멸시켰다 (도 27-28).
다음으로, 고형-종양 세포 요법의 또 다른 특성인 가역 활성화를 매개하는 CEA CAR Tmod 이중 수용체의 능력을 검정하였다. CEA CAR Tmod 수용체를 발현하는 효과기 T 세포를 상이한 표적 세포의 존재 하에, 연속적으로 배양, 즉 종양에서 정상으로 또는 정상에서 종양으로 배양하여, 비균질 환경을 통해 이동하는 체내 T 세포의 경험을 시뮬레이션하였다. Tmod 이중 수용체를 발현하는 효과기 T 세포는 두 방향에서 활성화 (온) 상태와 차단 (오프) 상태 사이에서 순차적으로 전환될 수 있었다 (도 29-30, 도 35).
마지막으로, 두 수용체를 발현하는 이펙터 T 세포의 민감도는 환자의 혈액에서 검출된 최고 수준에서도 외인성 가용성 CEA(sCEA)에 의해 영향을 받지 않았다(도 31). 하나의 HLA-A*02(+) 공여자(D12333)로부터의 대표적인 데이터를 도 31에 나타내고, 4개의 공여자로부터의 T 세포를 시험하였다. sCEA는 더 긴 시점에서 모든 4명의 기증자로부터 T 세포에서 CEA CAR를 활성화시켰다. sCEA는 더 긴 시점에서 모든 4개의 공여자로부터의 T 세포에서 CEA CAR를 활성화시켰다. sCEA (10 ug/mL)의 존재는 복수의 공여자에 걸쳐 Tmod 수용체 둘 모두를 발현하는 효과기 T 세포의 세포독성에 유의하게 영향을 미치지 않았다. 흥미롭게도, CEA CAR은 더 긴 시점에서 sCEA에 반응하는 것으로 나타났다. 아마도 세포 표면 상에 응집된 CEA로부터 유래된 이러한 활성화는 Tmod 수용체 둘 모두를 발현하는 세포에서 검출되지 않았다.
실시예 9: CEA를 발현하지 않는 세포주에 대한 오프 표적 반응성
이를 포함하는 모든 세포 치료제에 대한 한가지 고려사항은 오프-표적 반응성이다. 따라서, 활성화제- 및 차단제-항원 발현으로부터 발생하는 표적 특이적 세포 선택성을 넘어서는 기능적 오프-표적 반응성을 시험하는 과정이 확립되었다. 본원에 기재된 이중 수용체 시스템의 경우, 임상적 온-표적 안전성 (종양 대 정상 세포)은 주로 활성화제 수용체에 의해 달성되는 것이 아니라, 이의 동족 차단제 항원의 존재 또는 부재에 응답하는 차단제 수용체에 의해 달성된다는 것에 주목할 필요가 있다. 차단제 항원, HLA-A*02를 편재하여 발현하는 정상 세포는 세포독성으로부터 보호되어, 온-표적, 오프-종양 위험을 감소시킨다. 이러한 안전성 메커니즘은 또한 오프-표적 반응성으로부터 환자를 보호한다. 활성화제 수용체와 오프-표적 분자의 임의의 잠재적인 결합에 의한 활성화는 차단제 수용체와 결합하는 HLA-A*02 단백질의 편재하는 존재에 의해 억제될 것이다.
인간 세포주를 체내 정상 조직에 대한 대용품으로 사용하고, >0.5 전사체/세포 수준에서 성인 유전자 발현의 ~90%를 나타내는 다양한 세포주 패널을 집합하였다(표 26). 형질전환 및 유전자-녹아웃 주의 조합을 사용하여 양성 및 음성 대조군 둘 모두를 생성하였다. CEA-인 표적 세포주 중 어느 것도 (CEA CAR Tmod 수용체 작제물을 발현한) 저캇 효과기 세포에서 배경 수준을 초과하는 유의한 반응을 유발하지 않았다 (도 36). COLO 668 세포는 저캇 세포를 발현하는 CEA CAR에서는 반응을 자극하였지만, 두 수용체 모두를 발현하는 CEA CAR Tmod 저캇 세포에서는 반응을 자극하지 않았다. 그러나, 이러한 반응은 1차 T 세포에서 CAR 단독, 또는 억제 수용체와 조합된 CAR에 대해서는 관찰되지 않았다. 이러한 발견은 CEA CAR Tmod 발현 세포가 저캇 세포 검정에 기반하여 오프-표적 기능적 활성의 낮은 확률을 가짐을 시사한다.
동일한 접근법을 사용하여 CEA CAR Tmod 수용체를 발현하는 1차 T 세포의 세포독성을 시험하였다. CEA CAR Tmod 발현 세포가 CEA mRNA-형질감염된 양성-대조군 세포주의 ~50%를 사멸시킨 시점을 선택하였다 (K50; 도 37-38). 도 37에서, T 세포를 표 26에 기재된 세포주 패널에 대해 시험하였다. 하나의 HLA-A*02(-) 공여자를 A375 및 MS751 세포에 대해 시험하였다. 사용된 E:T 비율은 3:1이었다. Tmod 이중 수용체 발현 세포가 종양 세포 상에서 50% 이상의 사멸에 도달하는 시간 (tK50)은 CEA CAR 단독, 두 CEA CAR Tmod 수용체 모두를 발현하는 T세포, 및 형질도입되지 않은 T 세포에 의한 % 사멸을 비교하기 위해 선택되었다. 음성 대조군으로서, CEA(-) 세포주를 형질도입되지 않은 T 세포와 공동 배양하였다. 종양 세포를 표적으로 하는 CEA CAR Tmod 이중 수용체를 발현하는 T 세포, 즉 CEA(+) HLA-A*02(-) 표적 세포의 평균 50% 표적-세포 사멸 (K50)은 형질도입되지 않은 T 세포 공동 배양물의 배경 평균보다 ~6x 높았다.
도 38에서, 모든 사멸 (%)은 표적 세포만의 성장 (T 세포 없음)에 대해 표준화되었다. 한 세포주(A375)으로부터의 운동 데이터의 예를 좌측에 나타내었다. 세포주를 1 ug의 CEA mRNA로 형질감염시켰다. 모든 데이터는 E:T 3:1 실험으로부터 얻은 것이다. Tmod 세포가 종양 세포 상에서 50% 이상의 사멸에 도달하는 시간을 선택하여 CEA CAR, CEA CAR Tmod 및 형질도입되지 않은 T 세포에 의한 % 사멸을 비교하였다. 12개의 상이한 표적 세포주에 대한 모든 공여자 측정 (3-4 공여자)을 우측 그래프에 대해 풀링하였다. K50에서 종양 표적 세포 [CEA(+)A*02(-)]를 갖는 Tmod T 세포에서의 동적 범위 (양성 대조군)의 하이 엔드(high end)를 가장 높은 형질감염된 CAR mRNA 수준을 사용하여 추정하였다. 배경은 CEA(-) 표적 세포를 갖는 형질도입되지 않은 T 세포로부터 추정하였다. 교차 반응성은 표적 세포(시험군)와 함께 저캇 세포를 발현하는 Tmod 및 CAR로부터의 개별 세포주 수단으로부터 추정되었다.
야생형 CEA(+) H508은 CEA CAR-T 세포로부터 강한 반응을 촉발시켰다. 유의한 오프-표적 반응이 CEA CAR Tmod 세포 및 CEA(-) 표적 세포로 검출되지 않았다. 따라서, 1차 T 세포 세포독성 검정은 CEA CAR Tmod 작제물에 의한 오프-표적 활성화의 증거를 생성하지 않았다. 특히, 저캇 및 1차 T 세포 검정 둘 모두는 < 100개 분자/세포 수준에서 기능적 표적 상호작용을 검출할 수 있고, CEA보다 적어도 1,000x 더 낮게 H508 세포 및 정상 결장 상피의 표면 상에 존재하는 것으로 추정된다.
실시예 10: 마우스 모델에서의 종양-특이적 효능
생체내 실험을 사용하여 마우스 이종이식편에서 CEA CAR Tmod 이중 수용체를 발현하는 T 세포의 기능을 확인하였다(도 39). CEA CAR 또는 이중 수용체 시스템을 암호화하는 단일 렌티바이러스 벡터를 사용하여 B2M shRNA 없이 HLA-A*02(-) 공여자로부터 T 세포를 형질도입하였다. 공여자 T 세포는 HLA-A*02(-) (D4809)였다. 이종이식편 연구를 위해 선택된 세포주 H508은 CEA 및 HLA-A*02의 정상 발현 수준을 반영한다. (HLA-A*02(-) 공여자로부터의) CEA CAR T 또는 CEA CAR Tmod 세포의 두가지 용량 수준을 사용하였다: 마우스 당 5E6 및 2E7 세포. IL-2로 T 세포 생산을 증가시킨 후, 풍부화된 렌티바이러스-형질도입된 1차 T 세포를 다음의 두가지 유형의 H508 종양을 각각의 측면에 보유하는 마우스의 꼬리 정맥을 통해 주입하였다: 하나는 CEA(+) HLA-A*02(+) 정상 세포로부터 정상 결장 상피를 모델링하기 위한 것이고, 하나는 CEA(+) HLA-A*02(-) 세포로부터 종양을 모델링하기 위한 것이다.
5E6 용량은 CAR 및 Tmod 작제물에 대해 작고 일관되지 않은 효과를 입증하였다 (도 42). 그러나, 2E7 용량은 극적인 차이를 나타내었다 (도 40-41). 도 40에서, 7마리의 마우스/그룹이 사용되었다 (5마리가 식염수 및 UTD, 또는 형질도입되지 않은 그룹인 것을 제외). 이종이식편은 반딧불이 루시퍼라제를 발현하도록 조작된 H508 결장암 세포주로부터 유래되었다. 마우스에 꼬리 정맥 주사를 통해 마우스당 2E7 인간 T 세포의 용량으로 CEA CAR 또는 CEA CAR Tmod 이중 수용체 발현 세포를 주사하였다. 도 40의 데이터 포인트는 코호트 내의 개별 마우스가 큰 종양 부피 (>2000 mm3 총 부피)를 가질 때까지의 각 코호트에 대해 나타낸다. 과밀을 피하기 위해 일부 곡선에 대해 단방향(one-direction) 오차 막대가 사용되었다. 오차 막대는 평균의 표준 오차이다. Tmod 이중 수용체를 발현하는 T 세포를 주사한 코호트의 모든 마우스는 추가적인 ~20일 동안 종양 성장을 나타내지 않았으며, 이는 치유 효과를 시사한다. CAR/정상 이식편 코호트에 있는 마우스 한 마리가 탈출하고 성장하여 평균이 증가하였다.
도 42-43은 개별 종양 데이터에 대한 것이다. 도 43에 나타낸 바와 같이, 하나의 CAR-T-치료된 동물에서, 종양은 반응하였지만, 이후 성장을 재개하였다. 이는 T 세포 주입시 그 동물에서 더 큰 종양 부피에 기인할 수 있다. 정상 이식편은 평균적으로 종양 이식편보다 약간 더 크며, CAR-T 세포는 종양을 완전히 근절하지 않았다. HLA-A*02 억제 수용체 (Tmod 세포)와 조합하여 CEA CAR 및 CEA CAR을 발현하는 세포로 치료된 두 동물은 모두 CD3+ T 세포의 감소를 나타냈다. 그러나, Tmod 세포로 치료된 동물은 더 이른 시점에서 CD3+ T 세포의 수준을 감소시키기 시작하였다. Tmod 이중 수용체를 발현하는 T 세포가 주사된 코호트에서 검정의 말미에 T 세포 수치의 감소는 하나의 측면에서 종양의 완전한 제거 및 다른 측면에서 이식편에 의한 항원의 효과적인 차단에 기인할 수 있으며, 이는 효과적인 활성화제 신호전달의 중단을 초래한다.
CEA CAR 만을 발현하는 세포는 종양 및 정상 이식편 둘 모두를 사멸시킨 반면, Tmod-조작된 T 세포는 HLA-A*02(-) 종양만을 사멸시켰다. 정상 HLA-A*02 (+) H508 세포는 식염수-처리된 대조군과 유사하게 마우스에서 성장하였다. 종양 크기의 캘리퍼 측정은 종양을 갖는 Tmod-처리된 마우스의 측면에서 검출된 신호 없이, 생물발광에 의해 확인하였다 (도 40-41). 알 수 없는 이유로, 우측의 이종이식편은 좌측의 종양보다 평균적으로 약간 더 컸다. 이는 종양과 CEA CAR을 발현하는 T 세포 및 Tmod 이중 수용체를 발현하는 T 세포에 의해 치료된 정상 H508 세포 사이의 미묘한 명백한 효능 차이를 초래하였다. CAR 및 Tmod 치료된 마우스는 좌측에서 매우 유사한 활성을 나타내었다. Tmod T 세포 치료된 코호트는 종양이 없는 것으로 보였으나, CAR-T 코호트는 초기에 반응한 후 성장을 재개한 하나의 탈출자를 포함하여 정상 이식편을 갖는 우측에 잔여 평균 종양 부피를 가졌다(도 43-44). Tmod T 세포 주사된 코호트에서 하나의 종양은 코호트에서의 다른 종양과 같이 제거되기 전에 거의 1 cc였다. 이들 결과는 CEA CAR Tmod T 세포가 시험관내에서와 동일한 강력한 종양-선택적 방식으로 생체내에서 기능함을 시사한다.
주입된 T 세포의 혈액 수치를 포함하는 다양한 다른 파라미터가 또한 측정되었다. 주입 2일 후, 모든 코호트로부터의 T 세포는 이들이 생존하고 혈액 내에 남아있을 경우에 예상되는 농도의 1/10,000의 수준으로 존재하였다 (도 40). 그러나, CEA CAR 및 CEA CAR Tmod T 세포로 치료된 코호트에서는, 시간이 지남에 따라 T 세포 수치가 증가하였다. 궁극적으로, CEA CAR Tmod T 세포는 종양 제거와 유사하게 감소하였다. CAR-T 세포는 더 오래 유지되었는데, 이는 아마도 잔류 CEA(+) HLA-A*02(+) 이식편 세포가 항원 자극을 제공하기 위해 존재했기 때문이다. 주입 후 30일까지, 이들은 기준선까지 감소하였다. Tmod T 세포 코호트에서, 이종이식편은 마우스의 우측에서 계속 성장하였지만, 이들은 HLA-A*02 차단제 항원을 발현하여, Tmod 세포의 활성화제-항원 자극을 효과적으로 방지하였다. 마우스의 세포, 조직 및 기관에 대해 여러 가지 다른 분석을 수행하였다 (도 45). 도 45는 대다수의 마우스가 CD8 수치보다 더 높은 CD4 수치를 가졌음을 보여준다. CD3(+) 인간 T 세포의 존재는 T 세포 주사 30일 후에 CEA Tmod 그룹에서 2마리 마우스의 비장에서 관찰되었다. 마우스는 일반적으로 건강하고, 식염수 및 대조군 형질도입되지 않은 T 세포 그룹과 유사한 체중을 유지하였다.
실시예 11: HLA-A*02 시스 결합 및 자가유래 요법
HLA-A*02 차단제 수용체는 원칙적으로 자가유래 T 세포에서 내인성 A*02에 의해 시스에서 영향을 받을 수 있었다 (도 46). 따라서, 모(parental) 저캇 세포에서의 반응은 HLA-A*02를 발현하도록 조작된 저캇 주와 비교되었다. 야생형 HLA-A*02(-) 모 주(parental line)와 비교하여 HLA-A*02(+) 형질전환된 저캇 주 사이에서 검출된 차단제 수용체 표면 발현 수준은 거의 차이가 없었다 (도 50). 차단제의 IC50은 또한 HLA-A*02(+) 및 HLA-A*02(-) 저캇 세포에서 유사하였다.
그러나, 결과는 1차 T 세포에서 상이하였다. HLA-A*02(+) 공여자로부터의 T 세포는 HLA-A*02(-) 공여자에 비해 더 적은 차단제 수용체를 이의 표면에서 발현하였다 (도 47). 이러한 차이를 해결하기 위해, B2M을 표적화하는 shRNA 모듈이 개발되었다. B2M은 HLA 클래스 I 분자의 공통 경쇄이고, 세포 표면 상에서 이들의 발현에 요구된다. CEA CAR Tmod 수용체로 형질도입된 HLA-A*02(+) 및 HLA-A*02(-) 공여자 세포 사이의 HLA-A*02 사량체 결합 차이는 CRISPR-처리된 T 세포로 나타난 것에 근접한 결합 수준으로 실질적으로 감소되었다 (도 47 및 51). 도 47에서 나타난 바와 같이, B2M shRNA는 프로브 결합을 부분적으로 회복하였다. CRISPR/Cas9를 통한 B2M 녹아웃은 유사하게 HLA-A*02(-) 세포에서 나타난 바와 동일한 수준으로 프로브 결합을 복원하였다. HLA 클래스 I은 범(pan) HLA-I mAb W6/32에 의해 검출되었고, 차단제 수용체 발현은 A*02 사량체에 의해 검출되었다. 도 47의 개별 점들은 상이한 공여자를 나타낸다. 총 8개의 공여자를 사용하였다: 6개의 공여자는 HLA-A*02(+)였고, 2개의 공여자는 HLA-A*02(-)였다. 모두 삼중으로 시험하고 평균을 단일 점으로서 플롯팅하였다. Tmod_A2 음성으로 표지된 그룹은 3개의 조건/작제물을 갖는 2개의 HLA-A*02(-) 공여자로부터의 데이터를 이의 바로 좌측 (Tmod 단독, Tmod + CRISPR, Tmod + shRNA가 함께 플롯팅됨)에 함유한다. 이 실험으로부터의 1개의 T 세포 집단이 죽었으며, 여기에서 그리고 도 48에서 제외되었다.
3개의 공여자로부터의 T 세포 중 B2M의 수준을 하기 표 27에 나타내었다. 형질도입되지 않은 T 세포 및 Tmod 형질도입된 T 세포 (B2M shRNA 포함)의 3개의 공여자로부터의 총 RNA를 추출하고, 상보성 DNA로 역전사하였다. 형질도입되지 않은 T 세포 및 A2B530에서의 B2M 발현 수준을 평가하기 위해 액적 디지털 중합효소 연쇄 반응 반응을 설정하였다. B2M mRNA 발현 수준을 베타 액틴 유전자 발현으로 정규화하였다.
표 27. Tmod 형질도입된 T 세포와 형질도입되지 않은 T 세포 사이의 B2M의 상대적인 mRNA 발현 수준
Figure pct00095
H508 표적 세포를 사용하는 세포독성 검정에서, CEA CAR Tmod 작제물은 A*02(-) 공여자 (n=2)에서와 같이 A*02(+) 공여자 (n=6)에서 효과적으로 사멸되고 차단되었다 (도 48). 이들 데이터는 사이토카인 방출과 상관관계가 있다 (도 49 및 52). 따라서, B2M shRNA 모듈을 함유하는 CEA CAR Tmod 작제물은 종양이 HLA-A LOH를 함유하는 A*02 이형접합성 고형-종양 환자의 서브세트에 대하 자가유래 T 세포 요법로서 적합할 수 있다.
도 48에서, HLA-A*02(+) 공여자에서 B2M shRNA 모듈을 갖는 Tmod의 기능은 HLA-A*02(-) 공여자에서 그 기능과 구별할 수 없다. 정상은 천연 CEA 및 HLA-A*02 발현을 갖는 H508 표적 세포를 나타내는 반면; 종양은 HLA-A*02가 결실된 H508 표적 세포를 나타낸다. 검정은 48시간 후에 3:1의 E:T로 수행되었다. 우측 그래프는 좌측 그래프의 점선 박스에서 재플롯팅된 정상 표적 세포 데이터만을 함유한다.
도 49에서, CEA CAR Tmod 발현 세포로부터의 사이토카인 발현을 CEA CAR 발현 세포 및 벤치마크 TCR을 발현하는 세포와 비교하였다. 공여자 D123333 및 D205586은 HLA-A*02(+)인 반면, 공여자 D4809는 HLA-A*02(-)이었다. 이 데이터세트는 B2M shRNA가 있거나 없는 CEA Tmod 수용체의 테스트를 포함하였다. IFN-g 검정은 10K pg/mL로 포화되었다.
추가적인 사이토카인을 도 52에 나타내었다. CEA CAR Tmod 수용체를 발현하는 세포를 CEA CAR 발현 세포 및 벤치마크 TCR을 발현하는 세포에 대해 비교하였다. 공여자 1 및 2는 HLA-A*02(+)이었고; 공여자 3은 HLA-A*02(-)이었다. 데이터는 B2M shRNA가 없는 CEA Tmod 수용체의 시험을 포함한다.
SEQUENCE LISTING <110> A2 BIOTHERAPEUTICS, INC. <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CEACAM POSITIVE CANCERS <130> A2BI-022/01WO 331656-2074 <150> US 63/068,244 <151> 2020-08-20 <160> 984 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 702 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Glu Ser Pro Ser Ala Pro Pro His Arg Trp Cys Ile Pro Trp Gln 1 5 10 15 Arg Leu Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Thr Phe Trp Asn Pro Pro Thr 20 25 30 Thr Ala Lys Leu Thr Ile Glu Ser Thr Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly 35 40 45 Lys Glu Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gln His Leu Phe Gly 50 55 60 Tyr Ser Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Arg Gln Ile Ile 65 70 75 80 Gly Tyr Val Ile Gly Thr Gln Gln Ala Thr Pro Gly Pro Ala Tyr Ser 85 90 95 Gly Arg Glu Ile Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Ile 100 105 110 Ile Gln Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu His Val Ile Lys Ser Asp 115 120 125 Leu Val Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe Arg Val Tyr Pro Glu Leu 130 135 140 Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro Val 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120 gtgaattgta gttacaagac atccataact gccctacagt ggtacagaca gaagtcaggc 180 gaaggccctg cccagctaat cttaatacgt tcaaatgaga gagagaagcg caatggaaga 240 ctcagagcca cccttgacac ctccagccag agcagctcct tgtccatcac tgctactcgg 300 tgtgaagaca ccgctgtgta cttctgtgct actgatctaa ccaccggagg aaactacaaa 360 tttgggaaag ggaccagcct cgtggttcat ccagacattc agaaccccga accagccgta 420 tatcagttga aggacccaag atctcaggat agtacactct gtttgtttac ggactttgac 480 tcacaaatca acgtcccgaa gactatggaa agtggtacgt tcatcacaga taagacggtt 540 ctggacatga aggctatgga ctcaaagagc aacggggcaa ttgcttggtc caaccagaca 600 agctttacct gtcaggacat ttttaaggag actaatgcta cttatccctc cagcgacgtt 660 ccgtgtgatg cgactcttac cgagaagtct tttgagaccg atatgaatct caacttccag 720 aatctgtcag tgatgggtct gcggatcctg cttctgaagg ttgcaggatt caatcttctt 780 atgactctcc ggctctggtc ttcaggttct ggcgcgacga attttagttt gcttaagcaa 840 gccggagatg tggaggaaaa tcctggaccg atggctacaa ggctcctctg ttacacagta 900 ctttgtctcc tgggtgcaag aattttgaac tcaaaagtca ttcagactcc aagatatctg 960 gtgaaagggc 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<220> <223> CT 547: pLenti 1 CEA TCR TRAV8-1*01 L110F & S112T TRBV26*01 L117T with murine constant region <400> 218 atgcacagcc tcctggggtt gttgatggtg tcactgtggc tgcaactgac aagggtgaat 60 agtcaactag cagaagagaa tccgtgggcc ctgagcgtcc acgagggtga aagtgtcacg 120 gtgaattgta gttacaagac atccataact gccctacagt ggtacagaca gaagtcaggc 180 gaaggccctg cccagctaat cttaatacgt tcaaatgaga gagagaagcg caatggaaga 240 ctcagagcca cccttgacac ctccagccag agcagctcct tgtccatcac tgctactcgg 300 tgtgaagaca ccgctgtgta cttctgtgct actgatttca ccaccggagg aaactacaaa 360 tttgggaaag ggaccagcct cgtggttcat ccaaatattc agaaccccga accagccgta 420 tatcagttga aggacccaag atctcaggat agtacactct gtttgtttac ggactttgac 480 tcacaaatca acgtcccgaa gactatggaa agtggtacgt tcatcacaga taagtgcgtt 540 ctggacatga aggctatgga ctcaaagagc aacggggcaa ttgcttggtc caaccagaca 600 agctttacct gtcaggacat ttttaaggag actaatgcta cttatccctc cagcgacgtt 660 ccgtgtgatg cgactcttac cgagaagtct tttgagaccg atatgaatct caacttccag 720 aatctgctgg tgatcgttct gcggatcctg cttctgaagg 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tcaaaacata 1620 agcgccgagg catggggtag agccgattgt gggattacta gcgcttcata ccaacaaggg 1680 gtattgagcg ctacaattct ttacgaaatt ctcctcggca aggcgacgct ctacgccgta 1740 ctggtgtcta ctctcgtggt tatggcaatg gtgaaacgga aaaacagcta atag 1794 <210> 219 <211> 1608 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CT618: CAR with scFv that target CEA <400> 219 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc 60 agatgtcagg tgcagctggt gcaatctggg tctgagttga agaagcctgg ggcctcagtg 120 aaggtttcct gcaaggcttc tggatacacc ttcactgagt ttggaatgaa ctgggtgcga 180 caggcccctg gacaagggct tgagtggatg ggatggataa acaccaaaac tggagaggca 240 acatatgttg aagagtttaa gggacggttt gtcttctcct tggacacctc tgtcagcacg 300 gcatatctgc agatcagcag cctaaaggct gaagacactg ccgtgtatta ctgtgcgaga 360 tgggacttcg cttattacgt ggaggctatg gactactggg gccaagggac cacggtgacc 420 gtgtcatccg gcggaggtgg aagcggaggg ggaggatctg gcggcggagg aagcggaggc 480 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 540 atcacttgca aggccagtca gaatgtgggt 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ggaagaaccc tcaggaaggc 1440 ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa 1500 ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggactcag tacagccacc 1560 aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgctaa 1608 <210> 220 <211> 1614 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CT619: CAR with scFv that target CEA <400> 220 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc 60 agatgtcagg tgcagctggt gcagtctggc gccgaagtga agaaacctgg agctagtgtg 120 aaggtgtcct gcaaggccag cggctacacc ttcaccgagt tcggcatgaa ctgggtccga 180 caggctccag gccagggcct cgaatggatg ggctggatca acaccaagac cggcgaggcc 240 acctacgtgg aagagttcaa gggcagagtg accttcacca cggacaccag caccagcacc 300 gcctacatgg aactgcggag cctgagaagc gacgacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 360 tgggacttcg cttattacgt ggaagccatg gactactggg gccagggcac caccgtgacc 420 gtgtctagcg gcggaggtgg aagcggaggg ggaggatctg gcggcggagg aagcggaggc 480 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 540 atcacttgca aggccagtgc 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cgtctggggc aaagggacca cggtcaccgt gtcctcaggc 360 ggaggtggaa gcggaggggg aggatctggc ggcggaggaa gcggaggcga catccagatg 420 acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgccgg 480 gcaagtcaga gcattagcag ctatttaaat tggtatcagc agaaaccagg gaaagcccct 540 aagctcctga tctatgctgc atccagtttg caaagtgggg tcccatcaag gttcagtggc 600 agtggatctg ggacagattt cactctcacc atcagcagtc tgcaacctga agattttgca 660 acttactact gtcaacagag ttacagtacc cctctcactt tcggcggcgg aacaaaggtg 720 gagatcaag 729 <210> 262 <211> 244 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HLA-A*11 antigen binding domain <400> 262 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Asp Lys Arg Tyr Ser Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val 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auaagauuca uauuuacuuc uuauacauuu gauaaaguaa ggcaugguug ugguuaaucu 900 gguuuauuuu uguuccacaa guuaaauaaa ucauaaaacu uga 943 <210> 494 <211> 6654 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 494 aagtggaggc gtcgcgctgg cgggcattcc tgaagctgac agcattcggg ccgagatgtc 60 tcgctccgtg gccttagctg tgctcgcgct actctctctt tctggcctgg aggctatcca 120 gcgtgagtct ctcctaccct cccgctctgg tccttcctct cccgctctgc accctctgtg 180 gccctcgctg tgctctctcg ctccgtgact tcccttctcc aagttctcct tggtggcccg 240 ccgtggggct agtccagggc tggatctcgg ggaagcggcg gggtggcctg ggagtgggga 300 agggggtgcg cacccgggac gcgcgctact tgcccctttc ggcggggagc aggggagacc 360 tttggcctac ggcgacggga gggtcgggac aaagtttagg gcgtcgataa gcgtcagagc 420 gccgaggttg ggggagggtt tctcttccgc tctttcgcgg ggcctctggc tcccccagcg 480 cagctggagt gggggacggg taggctcgtc ccaaaggcgc ggcgctgagg tttgtgaacg 540 cgtggagggg cgcttggggt ctgggggagg cgtcgcccgg gtaagcctgt ctgctgcggc 600 tctgcttccc ttagactgga gagctgtgga cttcgtctag gcgcccgcta agttcgcatg 660 tcctagcacc tctgggtcta tgtggggcca caccgtgggg aggaaacagc acgcgacgtt 720 tgtagaatgc ttggctgtga tacaaagcgg tttcgaataa ttaacttatt tgttcccatc 780 acatgtcact tttaaaaaat tataagaact acccgttatt gacatctttc tgtgtgccaa 840 ggactttatg tgctttgcgt catttaattt tgaaaacagt tatcttccgc catagataac 900 tactatggtt atcttctgcc tctcacagat gaagaaacta aggcaccgag attttaagaa 960 acttaattac acaggggata aatggcagca atcgagattg aagtcaagcc taaccagggc 1020 ttttgcggga gcgcatgcct tttggctgta attcgtgcat ttttttttaa gaaaaacgcc 1080 tgccttctgc gtgagattct ccagagcaaa ctgggcggca tgggccctgt ggtcttttcg 1140 tacagagggc ttcctctttg gctctttgcc tggttgtttc caagatgtac tgtgcctctt 1200 actttcggtt ttgaaaacat gagggggttg ggcgtggtag cttacgcctg taatcccagc 1260 acttagggag gccgaggcgg gaggatggct tgaggtccgt agttgagacc agcctggcca 1320 acatggtgaa gcctggtctc tacaaaaaat aataacaaaa attagccggg tgtggtggct 1380 cgtgcctgtg gtcccagctg ctccggtggc tgaggcggga ggatctcttg agcttaggct 1440 tttgagctat catggcgcca gtgcactcca gcgtgggcaa cagagcgaga ccctgtctct 1500 caaaaaagaa aaaaaaaaaa aaagaaagag aaaagaaaag aaagaaagaa gtgaaggttt 1560 gtcagtcagg ggagctgtaa aaccattaat aaagataatc caagatggtt accaagactg 1620 ttgaggacgc cagagatctt gagcactttc taagtacctg gcaatacact aagcgcgctc 1680 accttttcct ctggcaaaac atgatcgaaa gcagaatgtt ttgatcatga gaaaattgca 1740 tttaatttga atacaattta tttacaacat aaaggataat gtatatatca ccaccattac 1800 tggtatttgc tggttatgtt agatgtcatt ttaaaaaata acaatctgat atttaaaaaa 1860 aaatcttatt ttgaaaattt ccaaagtaat acatgccatg catagaccat ttctggaaga 1920 taccacaaga aacatgtaat gatgattgcc tctgaaggtc tattttcctc ctctgacctg 1980 tgtgtgggtt ttgtttttgt tttactgtgg gcataaatta atttttcagt taagttttgg 2040 aagcttaaat aactctccaa aagtcataaa gccagtaact ggttgagccc aaattcaaac 2100 ccagcctgtc tgatacttgt cctcttctta gaaaagatta cagtgatgct ctcacaaaat 2160 cttgccgcct tccctcaaac agagagttcc aggcaggatg aatctgtgct ctgatccctg 2220 aggcatttaa tatgttctta ttattagaag ctcagatgca aagagctctc ttagctttta 2280 atgttatgaa aaaaatcagg tcttcattag attccccaat ccacctcttg atggggctag 2340 tagcctttcc ttaatgatag ggtgtttcta gagagatata tctggtcaag 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ggagcattca 4080 gacttgtctt tcagcaagga ctggtctttc tatctcttgt actacactga attcaccccc 4140 actgaaaaag atgagtatgc ctgccgtgtg aaccatgtga ctttgtcaca gcccaagata 4200 gttaagtggg gtaagtctta cattcttttg taagctgctg aaagttgtgt atgagtagtc 4260 atatcataaa gctgctttga tataaaaaag gtctatggcc atactaccct gaatgagtcc 4320 catcccatct gatataaaca atctgcatat tgggattgtc agggaatgtt cttaaagatc 4380 agattagtgg cacctgctga gatactgatg cacagcatgg tttctgaacc agtagtttcc 4440 ctgcagttga gcagggagca gcagcagcac ttgcacaaat acatatacac tcttaacact 4500 tcttacctac tggcttcctc tagcttttgt ggcagcttca ggtatattta gcactgaacg 4560 aacatctcaa gaaggtatag gcctttgttt gtaagtcctg ctgtcctagc atcctataat 4620 cctggacttc tccagtactt tctggctgga ttggtatctg aggctagtag gaagggcttg 4680 ttcctgctgg gtagctctaa acaatgtatt catgggtagg aacagcagcc tattctgcca 4740 gccttatttc taaccatttt agacatttgt tagtacatgg tattttaaaa gtaaaactta 4800 atgtcttcct tttttttctc cactgtcttt ttcatagatc gagacatgta agcagcatca 4860 tggaggtaag tttttgacct tgagaaaatg tttttgtttc actgtcctga 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<213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 510 cggctccatc ctctggctcg cgg 23 <210> 511 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 511 gatgtaatcc ttgccgtcgt agg 23 <210> 512 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 512 acagcgacgc cgcgagccag agg 23 <210> 513 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 513 ggatggagcc gcgggcgccg tgg 23 <210> 514 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 514 ggcgccgtgg atagagcagg agg 23 <210> 515 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 515 gcgccgtgga tagagcagga ggg 23 <210> 516 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 516 cggctactac aaccagagcg agg 23 <210> 517 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 517 ctggttgtag tagccgcgca ggg 23 <210> 518 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 518 tactacaacc agagcgaggc cgg 23 <210> 519 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 519 ctacctggag ggcacgtgcg tgg 23 <210> 520 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 520 cacgcacgtg ccctccaggt agg 23 <210> 521 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 521 gcagggtccc caggtccact cgg 23 <210> 522 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 522 gtggacctgg ggaccctgcg cgg 23 <210> 523 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 523 tggagggcac gtgcgtggag tgg 23 <210> 524 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 524 gtatggctgc gacgtggggt cgg 23 <210> 525 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 525 ctgagctgcc atgtccgccg cgg 23 <210> 526 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 526 ggattacatc gccctgaaag agg 23 <210> 527 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 527 caagtgggag gcggcccatg tgg 23 <210> 528 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 528 gtgggaggcg gcccatgtgg cgg 23 <210> 529 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 529 cagttgagag cctacctgga ggg 23 <210> 530 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 530 gcagttgaga gcctacctgg agg 23 <210> 531 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 531 taccaccagt acgcctacga cgg 23 <210> 532 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 532 tgccgtcgta ggcgtactgg tgg 23 <210> 533 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 533 ccagtacgcc tacgacggca agg 23 <210> 534 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 534 ggatgtgaag aaatacctca tgg 23 <210> 535 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 535 atttcttcac atccgtgtcc cgg 23 <210> 536 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 536 aggcgtactg gtggtacccg cgg 23 <210> 537 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 537 cgtactggtg gtacccgcgg agg 23 <210> 538 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 538 gaggatgtat ggctgcgacg tgg 23 <210> 539 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 539 ggatgtatgg ctgcgacgtg ggg 23 <210> 540 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 540 ctcagaccac caagcacaag tgg 23 <210> 541 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 541 tcagaccacc aagcacaagt ggg 23 <210> 542 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 542 caccaagcac aagtgggagg cgg 23 <210> 543 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 543 gaccaccaag cacaagtggg agg 23 <210> 544 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 544 gagccccgct tcatcgcagt ggg 23 <210> 545 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 545 gtagcccact gcgatgaagc ggg 23 <210> 546 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 546 tagcccactg cgatgaagcg ggg 23 <210> 547 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 547 cgtagcccac tgcgatgaag cgg 23 <210> 548 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 548 cttcatcgca gtgggctacg tgg 23 <210> 549 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 549 ggagccccgc ttcatcgcag tgg 23 <210> 550 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 550 cggggagaca cggaaagtga agg 23 <210> 551 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 551 agtattggga cggggagaca cgg 23 <210> 552 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 552 agggtccgga gtattgggac ggg 23 <210> 553 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 553 gagggtccgg agtattggga cgg 23 <210> 554 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 554 ggaccctcct gctctatcca cgg 23 <210> 555 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 555 gtggatagag caggagggtc cgg 23 <210> 556 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 556 agactcaccg agtggacctg ggg 23 <210> 557 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 557 cactcggtga gtctgtgagt ggg 23 <210> 558 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 558 cagactcacc gagtggacct ggg 23 <210> 559 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 559 ccactcacag actcaccgag tgg 23 <210> 560 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 560 ccactcggtg agtctgtgag tgg 23 <210> 561 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 561 tcggactggc gcttcctccg cgg 23 <210> 562 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 562 gcagccatac atcctctgga cgg 23 <210> 563 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 563 tctcaactgc tccgccacat ggg 23 <210> 564 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 564 accctcatgc tgcacatggc agg 23 <210> 565 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 565 acctgccatg tgcagcatga ggg 23 <210> 566 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 566 cacctgccat gtgcagcatg agg 23 <210> 567 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 567 ggaggaccag acccaggaca cgg 23 <210> 568 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 568 ggatggggag gaccagaccc agg 23 <210> 569 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 569 gacctggcag cgggatgggg agg 23 <210> 570 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 570 agatcacact gacctggcag cgg 23 <210> 571 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 571 gatcacactg acctggcagc ggg 23 <210> 572 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 572 aggtcagtgt gatctccgca ggg 23 <210> 573 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 573 aagcccctca ccctgagatg ggg 23 <210> 574 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 574 ctgcggagat cacactgacc tgg 23 <210> 575 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 575 cagcaatgat gcccacgatg ggg 23 <210> 576 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 576 ccagcaatga tgcccacgat ggg 23 <210> 577 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 577 gccagcaatg atgcccacga tgg 23 <210> 578 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 578 ggatggaacc ttccagaagt ggg 23 <210> 579 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 579 gggatggaac cttccagaag tgg 23 <210> 580 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 580 atgcccacga tggggatggt ggg 23 <210> 581 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 581 cagcccacca tccccatcgt ggg 23 <210> 582 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 582 ccagcccacc atccccatcg tgg 23 <210> 583 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 583 gatgcccacg atggggatgg tgg 23 <210> 584 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 584 cagggcccag cacctcaggg tgg 23 <210> 585 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 585 aatgatgccc acgatgggga tgg 23 <210> 586 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 586 ggccctgacc cagacctggg cgg 23 <210> 587 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 587 gacccaggac acggagctcg tgg 23 <210> 588 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 588 acacggagct cgtggagacc agg 23 <210> 589 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 589 cgtggagacc aggcctgcag ggg 23 <210> 590 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 590 tcgtggagac caggcctgca ggg 23 <210> 591 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 591 agctgtgatc actggagctg tgg 23 <210> 592 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 592 aaaaggaggg agctactctc agg 23 <210> 593 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 593 atgtggagga ggaagagctc agg 23 <210> 594 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 594 gtgtctctca cagcttgtaa agg 23 <210> 595 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 595 gagagacaca tcagagccct ggg 23 <210> 596 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 596 ctccgcaggg tagaagctca ggg 23 <210> 597 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 597 ggccctgagc ttctaccctg cgg 23 <210> 598 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 598 gctcagggcc cagcacctca ggg 23 <210> 599 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 599 tatctctgct cctgtccaga agg 23 <210> 600 <211> 23 <212> DNA <213> 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DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 607 cacagccgcc cacttctgga agg 23 <210> 608 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 608 ccagaagtgg gcggctgtgg tgg 23 <210> 609 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 609 tggaaccttc cagaagtggg cgg 23 <210> 610 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 610 tcacagctcc aaagagaacc agg 23 <210> 611 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 611 ctgaccatga agccaccctg agg 23 <210> 612 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 612 gcaaaccctc atgctgcaca tgg 23 <210> 613 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Guide Nucleic Acid Targeting Sequence <400> 613 tgaagccacc ctgaggtgct ggg 23 <210> 614 <211> 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<400> 925 gggtccttct tcctggatac t 21 <210> 926 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 926 ggtccttctt cctggatact c 21 <210> 927 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 927 gtccttcttc ctggatactc a 21 <210> 928 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 928 aagccaatca gtgtcgtcgc g 21 <210> 929 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 929 aagaggacct gcgctcttgg a 21 <210> 930 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 930 aagtgtgaga cagctgcctt g 21 <210> 931 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 931 aaggcacctg catgtgtctg t 21 <210> 932 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 932 aatcatcttt cctgttccag a 21 <210> 933 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 933 aaaggcacct gcatgtgtct g 21 <210> 934 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 934 aaagaggacc tgcgctcttg g 21 <210> 935 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 935 aaacgcatat gactcaccac g 21 <210> 936 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 936 ggaagagctc agatagaaa 19 <210> 937 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 937 gggagacacg gaaagtgaa 19 <210> 938 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 938 cacctgccat gtgcagcatg a 21 <210> 939 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 939 ggagatcaca ctgacctggc a 21 <210> 940 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 940 ggattacatc gccctgaaag 20 <210> 941 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 941 gcaggagggt ccggagtatt 20 <210> 942 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 942 ggacggggag acacggaaag 20 <210> 943 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 943 gaaagtgaag gcccactca 19 <210> 944 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 944 gatacctgga gaacgggaag 20 <210> 945 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 945 gctgtggtgg tgccttctgg 20 <210> 946 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 946 gctactacaa ccagagcgag 20 <210> 947 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 947 gtggctccgc agatacctg 19 <210> 948 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 948 gccaatcagt gtcgtcgcg 19 <210> 949 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 949 gaggacctgc gctcttgga 19 <210> 950 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 950 gtgtgagaca gctgccttg 19 <210> 951 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 951 ggcacctgca tgtgtctgt 19 <210> 952 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 952 tcatctttcc tgttccaga 19 <210> 953 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 953 aggcacctgc atgtgtctg 19 <210> 954 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 954 agaggacctg cgctcttgg 19 <210> 955 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> target HLA sequence complement <400> 955 acgcatatga ctcaccacg 19 <210> 956 <211> 2 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 5' Flank Sequence <400> 956 gg 2 <210> 957 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 5' Flank Sequence <400> 957 acaccauguu gccagucucu agg 23 <210> 958 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 5' Flank Sequence <400> 958 ugauagcaau gucagcagug ccu 23 <210> 959 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 5' Flank Sequence <400> 959 uauugcuguu gacagugagc gac 23 <210> 960 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 3' Flank Sequence <400> 960 uggcgucugg cccaaccaca c 21 <210> 961 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 3' Flank Sequence <400> 961 guaagguuga ccauacucua c 21 <210> 962 <211> 4 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 962 cgaa 4 <210> 963 <211> 7 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 963 uucaaga 7 <210> 964 <211> 7 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 964 auauuca 7 <210> 965 <211> 9 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 965 ugugcuguc 9 <210> 966 <211> 6 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 966 cucgag 6 <210> 967 <211> 12 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 967 cuuccuguca ga 12 <210> 968 <211> 15 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 968 cuucccuuug ucaga 15 <210> 969 <211> 12 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 969 guguuauucu ug 12 <210> 970 <211> 12 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 970 gugucuuaau ug 12 <210> 971 <211> 12 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 971 guguuagucu ug 12 <210> 972 <211> 7 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 972 ucaagag 7 <210> 973 <211> 12 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 973 ggacauccag gg 12 <210> 974 <211> 15 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 974 gugaagccac agaug 15 <210> 975 <211> 10 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Loop Region Sequence <400> 975 gauucuaaaa 10 <210> 976 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gRNA targeting sequence <400> 976 gatctgactt tatgacgtgt 20 <210> 977 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gRNA targeting sequence <400> 977 ccttcacatt ccgtgtctcc 20 <210> 978 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gRNA targeting sequence <400> 978 acagcgacgc cgcgagccag 20 <210> 979 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gRNA targeting sequence <400> 979 ttcacatccg tgtcccggcc 20 <210> 980 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> linker <400> 980 ggaggtggcg gctctggagg cggaggtagc ggaggtggag gctctggtgg c 51 <210> 981 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-HLA-A*02 scFv - LILRB1 VH <400> 981 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 His Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Glu Ile Thr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 982 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-HLA-A*02 scFv - LILRB1 VH <400> 982 caggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc caggggcttc agtgaggata 60 tcctgtaagg cctctggcta cacctttaca agttaccata tacattgggt gaagcagagg 120 cctggacagg gactcgaatg gattggatgg atttatcctg gaaatgttaa tactgagtac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca aatcgtccag cacagcctac 240 atgcacctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct atttctgtgc cagagaggag 300 attacctatg ctatggatta ttggggtcaa ggaacctcag tcaccgtgtc ctca 354 <210> 983 <211> 4 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> immunoreceptor tyrosine-based activation motif <220> <221> SITE <222> (2)..(3) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> SITE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Leu or Ile <400> 983 Tyr Xaa Xaa Xaa 1 <210> 984 <211> 6 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> immunoreceptor tyrosine-based activation motif <220> <221> SITE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Ser, Ile, Val or Leu <220> <221> SITE <222> (2)..(2) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> SITE <222> (4)..(5) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> SITE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Ile, Val or Leu <400> 984 Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa 1 5

Claims (99)

  1. a. CEA 세포 부착 분자 5 (CEA)에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제1 수용체; 및
    b. CEA+ 암세포에서 소실된 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는 제2 수용체
    를 포함하는 면역 세포로서,
    상기 제1 수용체는 CEA에 반응하는 활성화제 수용체이고; 상기 제2 수용체는 비-표적 항원에 반응하는 억제 수용체인, 면역 세포.
  2. 제1항에 있어서, 비-표적 항원의 발현이 CEA+ 암 세포에서 소실되는, 면역 세포.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인이 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 단백질의 대립형질 변이체에 특이적으로 결합하는, 면역 세포.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인이 HLA-A, HLA-B, 또는 HLA-C 단백질의 대립형질 변이체에 특이적으로 결합하는, 면역 세포.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인이 HLA-A*01, HLA-A*02, HLA-A*03, HLA-A*11, HLA-B*07, 또는 HLA-C*07에 특이적으로 결합하는, 면역 세포.
  6. 제5항에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 HLA-A*02에 특이적으로 결합하는, 면역 세포.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 표 6에 개시된 바와 같은 상보성 결정 영역(CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 표 6의 CDR에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함하는, 면역 세포.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 103-108 또는 서열 번호 109-114의 상보성 결정 영역(CDR) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3; 또는 서열 번호 103-108 또는 서열 번호 109-114의 CDR에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함하는, 면역 세포.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 표 5에 개시된 폴리펩티드 서열로부터 선택된 폴리펩티드 서열; 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  10. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인이 서열 번호 91-102 중 어느 하나, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)인, 면역 세포.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 55-58로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 상보성 결정 영역(HC-CDR)의 세트를 포함하는 가변 중쇄(VH) 부분 및 서열 번호 59-63으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 상보성 결정 영역의 세트를 포함하는 가변 경쇄(VL) 부분; 또는 서열 번호 55-58 또는 서열 번호 59-63에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함하는, 면역 세포.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 55-57을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 (HC-CDR)의 세트를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 부분 및 서열 번호 59, 61 및 63을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역의 세트를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 부분; 또는 서열 번호 55-57 또는 서열 번호 59, 61 및 63에 비해 최대 1, 2, 또는 3개의 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 CDR 서열을 포함하는, 면역 세포.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 144 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 부분, 및 서열 번호 148 또는 이에 대해 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 부분을 포함하는, 면역 세포.
  15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 66-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  16. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체의 세포외 리간드 결합 도메인은 서열 번호 68의 scFv 서열; 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체는 힌지 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인을 포함하는, 면역 세포.
  18. 제17항에 있어서, 힌지 도메인은 CD8α 힌지 도메인을 포함하는, 면역 세포.
  19. 제18항에 있어서, CD8α 힌지 도메인은 서열 번호 71의 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  20. 제11항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인을 포함하는, 면역 세포.
  21. 제20항에 있어서, CD28 막관통 도메인은 서열 번호 75의 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  22. 제11항 내지 제210항 중 어느 한 항에 있어서, 세포내 도메인은 CD28 공동 자극 도메인, 4-1BB 공동 자극 도메인, 및 CD3ζ 활성화제 도메인을 포함하는, 면역 세포.
  23. 제22항에 있어서, 세포내 도메인은 서열 번호 158의 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체는 서열 번호 52의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체는 LILRB1 세포내 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, 면역 세포.
  26. 제25항에 있어서, LILRB1 세포내 도메인은 서열 번호 131과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 99% 동일한 서열을 포함하거나 또는 이와 동일한 것인, 면역 세포.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체가 LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, 면역 세포.
  28. 제27항에 있어서, LILRB1 막관통 도메인 또는 이의 기능적 변이체는 서열 번호 135와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 99% 동일한 서열을 포함하거나 또는 이와 동일한 것인, 면역 세포.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체는 LILRB1 힌지 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는, 면역 세포.
  30. 제29항에 있어서, LILRB1 힌지 도메인은 서열 번호 134와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 99% 동일한 서열을 포함하거나 또는 이와 동일한 것인, 면역 세포.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체는 LILRB1 세포내 도메인, LILRB1 막관통 도메인, LILRB1 힌지 도메인, 이들 중 임의의 것의 기능적 변이체, 또는 이들의 조합을 포함하는, 면역 세포.
  32. 제31항에 있어서, LILRB1 힌지 도메인, LILRB1 세포내 도메인 및 LILRB1 막관통 도메인은 서열 번호 132, 또는 서열번호 132와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 99% 동일한 서열을 포함하거나 또는 이와 동일한 것인, 면역 세포.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 수용체는 서열 번호 164의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, CEA+ 암 세포는 췌장암 세포, 결장직장암 세포, 폐암 세포, 식도암 세포, 위암 세포, 두경부암 세포, 담낭암 세포, 미만성 거대 B 세포암 세포, 또는 급성 골수성 백혈병 암 세포인, 면역 세포.
  35. 제34항에 있어서, CEA+ 암 세포가 폐암 세포, 결장직장암 세포 또는 췌장암 세포인, 면역 세포.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, CEA+ 암 세포가 HLA-A*02를 발현하지 않는 CEA+/HLA-A*02- 암 세포인, 면역 세포.
  37. 제36항에 있어서, CEA+/HLA-A*02- 암 세포는 HLA-A*02의 소실을 야기하는 HLA-A에서의 이형접합성(heterozygosity)의 소실에 의해 CEA+/HLA-A*02+ 세포로부터 유래되는, 면역 세포.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 함께 이형접합성의 소실을 갖는 CEA+/HLA-A*02- 암 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화시키는, 면역 세포.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 함께 이형접합성의 소실에 의해 HLA-A*02를 소실하지 않은 CEA+ 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화시키지 않는, 면역 세포.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 세포는 T 세포, NK 세포 또는 대식세포인, 면역 세포.
  41. 제40항에 있어서, T 세포는 CD8+ CD4- T 세포인, 면역 세포.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, MHC 클래스 I 유전자의 발현 및/또는 기능이 감소되거나 제거된, 면역 세포.
  43. 제42항에 있어서, MHC 클래스 I 유전자는 베타-2-마이크로글로불린(B2M)인, 면역 세포.
  44. 제43항에 있어서, 간섭 RNA를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함하며, 간섭 RNA는 B2M mRNA의 서열에 상보적인 서열을 포함하는, 면역 세포.
  45. 제44항에 있어서, 간섭 RNA는 표 11에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 최대 1, 2, 3, 또는 4개의 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, 간섭 RNA는 B2M mRNA의 RNAi-매개 분해를 유도할 수 있는, 면역 세포.
  47. 제46항에 있어서, 간섭 RNA는 짧은 헤어핀 RNA (shRNA)인, 면역 세포.
  48. 제47항에 있어서, shRNA는
    a. 5' 말단에서 3' 말단으로 B2M mRNA의 서열에 상보적인 서열을 갖는 제1 서열; 및
    b. 5' 말단에서 3' 말단으로 제1 서열에 상보적인 서열을 갖는 제2 서열
    을 포함하며,
    상기 제1 서열 및 제2 서열은 shRNA를 형성하는, 면역 세포.
  49. 제47항 또는 제48항에 있어서, shRNA는
    GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC (서열 번호 179) 또는
    GTTAACTTCCAATTTACATACACCGAAGTATGTAAATTGGAAGTTAAC (서열 번호 180)의 서열, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 서열에 의해 암호화되는, 면역 세포.
  50. 제43항에 있어서, B2M을 암호화하는 서열에 대해 하나 이상의 변형을 포함하며, 하나 이상의 변형은 B2M의 발현을 감소시키고/시키거나 이의 기능을 제거하는, 면역 세포.
  51. 제50항에 있어서, 하나 이상의 변형은 B2M을 암호화하는 내인성 유전자의 하나 이상의 불활성화 돌연변이를 포함하는, 면역 세포.
  52. 제51항에 있어서, 하나 이상의 불활성화 돌연변이는 결실, 삽입, 치환, 또는 프레임시프트 돌연변이를 포함하는, 면역 세포.
  53. 제51항 또는 제52항에 있어서, 하나 이상의 불활성화 돌연변이는 B2M을 암호화하는 내인성 유전자의 서열을 특이적으로 표적화하는 적어도 하나의 가이드 핵산 (gNA)과의 복합체에서 핵산 가이드된 엔도뉴클레아제와 함께 도입되는, 면역 세포.
  54. 제53항에 있어서, gNA가 표 10에 제시된 서열의 군으로부터 선택된 서열, 또는 이에 대해 최대 1, 2, 3, 또는 4개의 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  55. 제42항에 있어서, MHC 클래스 I 유전자는 HLA-A*02인, 면역 세포.
  56. 제55항에 있어서, HLA-A*02 mRNA의 서열에 상보적인 서열을 포함하는 간섭 RNA를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함하는, 면역 세포.
  57. 제56항에 있어서, 간섭 RNA는 HLA-A*02 mRNA의 RNA 간섭(RNAi)-매개 분해를 유도할 수 있는, 면역 세포.
  58. 제57항에 있어서, 간섭 RNA는
    a. 5' 말단에서 3' 말단으로 HLA-A*02 mRNA의 서열에 상보적인 서열을 갖는, 제1 서열; 및
    b. 5' 말단에서 3' 말단으로 제1 서열에 상보적인 서열을 갖는, 제2 서열
    을 포함하는 짧은 헤어핀 RNA (shRNA)이며,
    상기 제1 서열 및 제2 서열은 shRNA를 형성하는, 면역 세포.
  59. 제55항에 있어서, HLA-A*02를 암호화하는 내인성 유전자의 서열에 대한 하나 이상의 변형을 포함하며, 하나 이상의 변형은 HLA-A*02의 발현을 감소시키고/시키거나 이의 기능을 제거하는, 면역 세포.
  60. 제59항에 있어서, 하나 이상의 변형은 HLA-A*02를 암호화하는 내인성 유전자의 하나 이상의 불활성화 돌연변이를 포함하는, 면역 세포.
  61. 제59항 또는 제60항에 있어서, 하나 이상의 불활성화 돌연변이가 HLA-A*02를 암호화하는 내인성 유전자의 서열을 특이적으로 표적화하는 적어도 하나의 가이드 핵산(gNA)과의 복합체에서 핵산 가이드된 엔도뉴클레아제와 함께 도입되는, 면역 세포.
  62. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체는 서열 번호 52의 서열을 포함하고, 제2 수용체는 서열 번호 164의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 면역 세포.
  63. 제62항에 있어서, GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC (서열 번호 179)를 포함하는 서열 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열에 의해 암호화된 shRNA를 포함하는, 면역 세포.
  64. 제62항 또는 제63항에 있어서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 단일 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되고, 제1 및 제2 수용체를 암호화하는 서열은 자가-절단 폴리펩티드를 암호화하는 서열에 의해 분리되는, 면역 세포.
  65. 제63항에 있어서, 자가-절단 폴리펩티드는 GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 번호 181)의 서열을 포함하는 T2A 자가-절단 폴리펩티드를 포함하는, 면역 세포.
  66. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 세포는 자가유래(autologous)인, 면역 세포.
  67. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 세포는 동종이계(allogeneic)인, 면역 세포.
  68. 치료적 유효량의 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 면역 세포를 포함하는, 약학 조성물.
  69. 제68항에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함하는, 약학 조성물.
  70. 제68항 또는 제69항에 있어서, CEA+ 암의 치료에 약제로서 사용하기 위한, 약학 조성물.
  71. a. CEA 세포 부착 분자 5 양성 (CEA)에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제1 수용체; 및
    b. CEA+ 암 세포에서 소실된 비-표적 항원에 특이적인 세포외 리간드 결합 도메인을 포함하는, 제2 수용체
    를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템으로서,
    상기 제1 수용체는 CEA+ 암 세포 상의 CEA에 반응하는 활성화제 수용체이고; 제2 수용체는 비-표적 항원에 반응하는 억제 수용체인, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템.
  72. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 면역 세포를 생성하는데 사용하기 위한, 제1 수용체 및 제2 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템.
  73. 제71항 또는 제72항에 있어서, B2M에 특이적인 shRNA를 암호화하는 서열을 포함하는, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템.
  74. 제73항에 있어서, 제1 수용체, 제2 수용체 및 B2M에 특이적인 shRNA를 암호화하는 서열은 동일한 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템.
  75. 제73항 또는 제74항에 있어서,
    a. B2M에 특이적인 shRNA를 암호화하는 서열은
    GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC (서열 번호 179) 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하고;
    b. 제1 수용체를 암호화하는 서열은 서열 번호 143, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하고;
    c. 제2 수용체를 암호화하는 서열은 서열 번호 165, 또는 이에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 시스템.
  76. 제71항 내지 제75항 중 어느 한 항의 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 벡터.
  77. MHC 클래스 I 유전자좌에서 이형접합성의 소실을 갖는 CEA+ 암 세포를 사멸시키는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제68항 내지 제70항 중 어느 한 항의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  78. MHC 클래스 I 유전자좌에서 이형접합성의 소실을 갖는 CEA+ 종양을 갖는 대상체에서 CEA+ 암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제68항 내지 제70항 중 어느 한 항의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  79. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서,
    a. 대상체의 정상 세포 및 복수의 암 세포의 HLA-A 유전자형 또는 발현을 결정하는 단계;
    b. 임의로, 대상체의 복수의 암 세포에서 CEA의 발현을 결정하는 단계; 및
    c. 정상 세포가 HLA-A*02를 발현하고 복수의 암 세포가 HLA-A*02를 발현하지 않고, 복수의 암 세포가 CEA-양성인 경우, 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제66항 내지 제68항 중 어느 한 항의 약학 조성물을 투여하는 단계
    를 포함하는, 방법.
  80. 제79항에 있어서, 대상체는 CEA(CEA+)를 발현하고 HLA-A*02 발현을 상실한 악성종양을 갖는 이형접합성 HLA-A*02 환자인, 방법.
  81. 제79항에 있어서, 대상체는 CEA를 발현하고 HLA-A*02 발현을 상실한 재발성 절제 불가능 또는 전이성 고형 종양을 갖는 이형접합성 HLA-A*02 환자인, 방법.
  82. 제79항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 췌장암, 결장직장암, 폐암, 식도암, 위암, 담낭암, 두경부암, 미만성 거대 B 세포암, 또는 급성 골수성 백혈병을 포함하는, 방법.
  83. 제79항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 폐암, 결장직장암 또는 췌장암을 포함하는, 방법.
  84. 제79항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 암 세포는 HLA-A*02를 발현하지 않는 CEA+/HLA-A*02- 암 세포를 포함하는, 방법.
  85. 제84항에 있어서, CEA+/HLA-A*02- 암 세포는 HLA-A*02의 소실을 야기하는 HLA-A에서의 이형접합성의 소실에 의해 CEA+/HLA-A*02+ 세포로부터 유래되는, 방법.
  86. 제79항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 함께 CEA+/HLA-A*02- 암 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화시키는, 방법.
  87. 제79항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 수용체 및 제2 수용체는 함께 HLA-A*02를 소실하지 않은 CEA+ 세포의 존재 하에 면역 세포를 특이적으로 활성화시키지 않는, 방법.
  88. 제79항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제59항 내지 제61항 중 어느 한 항의 약학 조성물의 투여가 대상체에서 종양의 크기를 감소시키는, 방법.
  89. 제88항에 있어서, 종양은 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100% 감소되는, 방법.
  90. 제88항에 있어서, 종양이 제거되는, 방법.
  91. 제88항 또는 제89항에 있어서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체에서 종양의 성장을 정지시키는, 방법.
  92. 제79항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체에서 종양의 수를 감소시키는, 방법.
  93. 제79항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 대상체에서 정상 세포가 아닌 암 세포의 선택적 사멸을 초래하는, 방법.
  94. 제93항에 있어서, 사멸된 세포의 적어도 약 60%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 약 65%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 약 70%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 약 75%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 약 80%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 약 85%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 약 90%가 암 세포이거나, 사멸된 세포의 약 95%가 암 세포이거나, 또는 사멸된 세포의 약 100%가 암 세포인, 방법.
  95. 제93항에 있어서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여가 대상체의 적어도 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 모든 암 세포의 사멸을 초래하는, 방법.
  96. 제79항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 세포 또는 약학 조성물의 투여는 제1 활성화제 수용체를 포함하지만 제2 억제 수용체를 포함하지 않는 다른 동등한 면역 세포의 투여보다 대상체에 대한 부작용을 덜 초래하는, 방법.
  97. 복수의 면역 세포를 제조하는 방법으로서,
    a. 복수의 면역세포를 제공하는 단계, 및
    b. 복수의 면역 세포를 제71항 내지 제75항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 시스템 또는 제76항의 벡터로 형질전환시키는 단계
    를 포함하는, 방법.
  98. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제68항 내지 제708항 중 어느 한 항의 약학 조성물을 포함하는, 키트.
  99. 제98항에 있어서, 사용 설명서를 추가로 포함하는, 키트.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2021329375A1 (en) 2020-08-20 2023-04-20 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ceacam positive cancers
EP4100028A4 (en) 2020-08-20 2023-07-26 A2 Biotherapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF MESOTHELIN-POSITIVE CANCERS
WO2024036148A1 (en) * 2022-08-08 2024-02-15 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating blood cancers
CN115925923B (zh) * 2022-09-26 2023-09-15 吉林大学 一种催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体、单链抗体基因及其应用

Family Cites Families (93)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4690915A (en) 1985-08-08 1987-09-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US5585362A (en) 1989-08-22 1996-12-17 The Regents Of The University Of Michigan Adenovirus vectors for gene therapy
US5350674A (en) 1992-09-04 1994-09-27 Becton, Dickinson And Company Intrinsic factor - horse peroxidase conjugates and a method for increasing the stability thereof
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5874540A (en) 1994-10-05 1999-02-23 Immunomedics, Inc. CDR-grafted type III anti-CEA humanized mouse monoclonal antibodies
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
CA2321947A1 (en) 1998-02-25 1999-09-02 The Dow Chemical Company High affinity humanized anti-cea monoclonal antibodies
KR20060067983A (ko) 1999-01-15 2006-06-20 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
WO2001029058A1 (en) 1999-10-15 2001-04-26 University Of Massachusetts Rna interference pathway genes as tools for targeted genetic interference
US6326193B1 (en) 1999-11-05 2001-12-04 Cambria Biosciences, Llc Insect control agent
IL151287A0 (en) 2000-02-24 2003-04-10 Xcyte Therapies Inc A method for stimulation and concentrating cells
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
WO2001096584A2 (en) 2000-06-12 2001-12-20 Akkadix Corporation Materials and methods for the control of nematodes
CN1966525A (zh) 2001-06-13 2007-05-23 根马布股份公司 表皮生长因子受体(egfr)的人单克隆抗体
US7745140B2 (en) 2002-01-03 2010-06-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Activation and expansion of T-cells using an engineered multivalent signaling platform as a research tool
US20030170238A1 (en) 2002-03-07 2003-09-11 Gruenberg Micheal L. Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy
CA2559955C (en) 2004-03-15 2016-02-16 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded rna
WO2005118788A2 (en) 2004-05-27 2005-12-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel artificial antigen presenting cells and uses therefor
WO2006031221A1 (en) 2004-09-13 2006-03-23 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Compositions comprising t cell receptors and methods of use thereof
JPWO2010114129A1 (ja) 2009-04-03 2012-10-11 国立大学法人愛媛大学 Ｔ細胞レセプター及び該レセプターをコードする核酸
CA2770174A1 (en) 2009-08-31 2011-03-03 Roche Glycart Ag Affinity-matured humanized anti cea monoclonal antibodies
SG190997A1 (en) 2010-12-09 2013-07-31 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
LT2681244T (lt) 2011-03-02 2018-02-12 Roche Glycart Ag Cea antikūnai
WO2013054320A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam)
MX2014010183A (es) 2012-02-22 2015-03-20 Univ Pennsylvania Composiciones y metodos para generar una poblacion persistente de celulas t utiles para el tratamiento de cancer.
WO2013142034A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-mesothelin chimeric antigen receptors
DK2800811T3 (en) 2012-05-25 2017-07-17 Univ Vienna METHODS AND COMPOSITIONS FOR RNA DIRECTIVE TARGET DNA MODIFICATION AND FOR RNA DIRECTIVE MODULATION OF TRANSCRIPTION
DK3199552T3 (da) 2012-11-20 2020-03-30 Sanofi Sa Anti-ceacam5-antistoffer og anvendelser heraf
EP4286402A3 (en) 2012-12-12 2024-02-14 The Broad Institute, Inc. Crispr-cas component systems, methods and compositions for sequence manipulation
DK3064585T3 (da) 2012-12-12 2020-04-27 Broad Inst Inc Konstruering og optimering af forbedrede systemer, fremgangsmåder og enzymsammensætninger til sekvensmanipulation
US8697359B1 (en) 2012-12-12 2014-04-15 The Broad Institute, Inc. CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products
JP6499087B2 (ja) 2013-02-26 2019-04-10 ロシュ グリクアート アーゲー 二重特異性ｔ細胞活性化抗原結合分子
EP2968492B1 (en) 2013-03-15 2021-12-15 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Compositions and methods for immunotherapy
WO2014145252A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Milone Michael C Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
WO2015017214A1 (en) 2013-07-29 2015-02-05 Bluebird Bio, Inc. Multipartite signaling proteins and uses thereof
ES2832586T3 (es) 2013-11-21 2021-06-10 Autolus Ltd Célula
IL290744B2 (en) 2014-02-04 2024-10-01 Kite Pharma Inc Methods for the production of autologous T cells used in the treatment of B-cell malignancies and other types of cancer and preparations thereof
CA2967222C (en) 2014-11-12 2023-10-31 Rinat Neuroscience Corp. Inhibitory chimeric antigen receptors
WO2016097231A2 (en) 2014-12-17 2016-06-23 Cellectis INHIBITORY CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (iCAR OR N-CAR) EXPRESSING NON-T CELL TRANSDUCTION DOMAIN
US11161907B2 (en) 2015-02-02 2021-11-02 Novartis Ag Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof
JP6784687B2 (ja) 2015-02-24 2020-11-11 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 結合誘発型転写スイッチ及びその使用方法
US11186824B2 (en) 2015-03-11 2021-11-30 Cellectis Methods for engineering allogeneic T cell to increase their persistence and/or engraftment into patients
CN107533051B (zh) 2015-03-27 2020-11-13 南加利福尼亚大学 Hla-g作为car t细胞免疫疗法的新靶标
GB201509413D0 (en) 2015-06-01 2015-07-15 Ucl Business Plc Fusion protein
MA42895A (fr) 2015-07-15 2018-05-23 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
MA44314A (fr) 2015-11-05 2018-09-12 Juno Therapeutics Inc Récepteurs chimériques contenant des domaines induisant traf, et compositions et méthodes associées
EP3377523A4 (en) 2015-11-19 2019-06-19 The Regents of The University of California IMMUNITY CELL RECEIVERS REPRESSIBLE UNDER CONDITIONS AND METHODS OF USING THE SAME
US11530252B2 (en) 2015-11-23 2022-12-20 Trustees Of Boston University Methods and compositions relating to chimeric antigen receptors
AU2016363696B2 (en) 2015-12-02 2021-05-20 Innovative Targeting Solutions Inc. Single variable domain T-cell receptors
AU2017230011A1 (en) 2016-03-11 2018-09-27 2Seventy Bio, Inc. Genome edited immune effector cells
US20190185849A1 (en) 2016-06-29 2019-06-20 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for gene editing
SG10201913583QA (en) 2016-08-23 2020-02-27 Univ California Proteolytically cleavable chimeric polypeptides and methods of use thereof
BR112019005633A8 (pt) 2016-09-23 2023-04-11 Hutchinson Fred Cancer Res Tcrs específicos para antigênio ha-1 de histocompatibilidade (h) menor e usos dos mesmos
BR112019006006A2 (pt) 2016-09-28 2019-06-25 Gavish Galilee Bio Appl Ltd molécula de ácido nucleico, vetor, métodos para preparação de um receptor de antígeno quimérico inibidor, para preparar uma célula imune efetora segura, para selecionar um biomarcador personalizado e para tratar o câncer em um paciente com um tumor, célula imune efetora segura, e, combinação de duas ou mais moléculas de ácido nucleico.
CN110582509A (zh) 2017-01-31 2019-12-17 诺华股份有限公司 使用具有多特异性的嵌合t细胞受体蛋白治疗癌症
WO2018148454A1 (en) 2017-02-09 2018-08-16 The Regents Of The University Of California Chimeric t cell antigen receptors and methods of use thereof
RU2019133199A (ru) 2017-03-27 2021-04-28 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Улучшенные форматы антигенсвязывающего рецептора
US20200113940A1 (en) 2017-04-14 2020-04-16 The General Hospital Corporation Chimeric antigen receptor t cells targeting the tumor microenvironment
GB201707783D0 (en) 2017-05-15 2017-06-28 Autolus Ltd Cell
JP7132249B2 (ja) 2017-05-15 2022-09-06 オートラス リミテッド キメラ抗原受容体（ｃａｒ）を含む細胞
GB201707779D0 (en) 2017-05-15 2017-06-28 Autolus Ltd Cell
TWI795415B (zh) 2017-07-07 2023-03-11 日商安斯泰來製藥股份有限公司 新穎的抗人類ＣＥＡＣＡＭ５抗體Ｆａｂ片段
EP3684821A4 (en) 2017-09-19 2021-06-16 The University Of British Columbia ANTI-HLA-A2 ANTIBODIES AND METHOD OF USING THEREOF
WO2019068007A1 (en) 2017-09-28 2019-04-04 Immpact-Bio Ltd. UNIVERSAL PLATFORM FOR PREPARING AN INHIBITORY CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (ICAR)
WO2019084055A1 (en) 2017-10-23 2019-05-02 Massachusetts Institute Of Technology CLASSIFICATION OF GENETIC VARIATION FROM UNICELLULAR TRANSCRIPTOMS
EP3707166A4 (en) 2017-11-06 2021-11-24 Daniel J. Monticello CHIMERA ANTIGEN RECEPTOR SYSTEMS WITH DOMINANT NEGATIVE LIGAND
JP2021520209A (ja) * 2018-04-04 2021-08-19 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 癌患者における腫瘍抗原を検出するための診断アッセイ
WO2019241549A1 (en) 2018-06-15 2019-12-19 A2 Biotherapeutics, Inc. Foxp3-expressing car-t regulatory cells
US20200316120A1 (en) 2018-09-28 2020-10-08 Immpact-Bio Ltd. METHODS FOR IDENTIFYING ACTIVATING ANTIGEN RECEPTOR (aCAR)/INHIBITORY CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (iCAR) PAIRS FOR USE IN CANCER THERAPIES
EP3632461A1 (en) 2018-10-05 2020-04-08 St. Anna Kinderkrebsforschung A group of chimeric antigen receptors (cars)
CN113164576A (zh) 2018-10-05 2021-07-23 圣安娜儿童癌症研究中心 嵌合抗原受体(car)组
WO2020172177A1 (en) * 2019-02-18 2020-08-27 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Combinations of multiple chimeric antigen receptors for immunotherapy
WO2020259550A1 (zh) 2019-06-26 2020-12-30 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗cea抗体及其应用
WO2021030153A2 (en) 2019-08-09 2021-02-18 A2 Biotherapeutics, Inc. Engineered t cell receptors and uses thereof
AU2020329881A1 (en) 2019-08-09 2022-03-24 A2 Biotherapeutics, Inc. Cell-surface receptors responsive to loss of heterozygosity
WO2021030182A1 (en) 2019-08-09 2021-02-18 A2 Biotherapeutics, Inc. Bifunctional single variable domain t cell receptors and uses thereof
WO2021053587A1 (en) 2019-09-18 2021-03-25 Klaus Strein Bispecific antibodies against ceacam5 and cd3
EP4058561A1 (en) 2019-11-12 2022-09-21 A2 Biotherapeutics, Inc. Engineered t cell receptors and uses thereof
EP3831849A1 (en) 2019-12-02 2021-06-09 LamKap Bio beta AG Bispecific antibodies against ceacam5 and cd47
JP2023506184A (ja) 2019-12-11 2023-02-15 エイ２・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド Ｌｉｌｒｂ１ベースのキメラ抗原受容体
WO2021222576A1 (en) 2020-05-01 2021-11-04 A2 Biotherapeutics, Inc. Pag1 fusion proteins and methods of making and using same
WO2021252635A1 (en) 2020-06-11 2021-12-16 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating cancers
WO2022036065A2 (en) 2020-08-13 2022-02-17 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating cancers
AU2021329375A1 (en) 2020-08-20 2023-04-20 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ceacam positive cancers
WO2022040470A1 (en) 2020-08-20 2022-02-24 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ceacam positive cancers
AU2021386366A1 (en) * 2020-11-24 2023-06-29 A2 Biotherapeutics, Inc. Adoptive cell therapy for treatment of cancer associated with loss of heterozygosity

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