CN115925923B - 一种催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体、单链抗体基因及其应用 - Google Patents

Abstract

一种催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体、单链抗体基因及其应用，属于基因工程抗体技术领域。本发明提供了一种包括重链可变区、轻链可变区的人源性抗Aβ42寡聚体的催化性单链抗体HS72，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。同时提供了一种核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的编码催化性单链抗体HS72的基因，以及该基因与pET‑28a、pET‑41b、pMA5、pPZW103等载体构建的基因工程表达载体。该催化性单链抗体能特异性识别、结合并降解Aβ42寡聚体，从而降低Aβ42寡聚体的水平，有效降低Aβ42寡聚体的细胞毒性，可应用于制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或制备抗阿尔茨海默氏病的药物。

Description

一种催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体、单链抗体基因及其 应用

技术领域

本发明属于基因工程抗体技术领域，具体涉及一种特异性催化β-淀粉样蛋白(Aβ42)寡聚体降解的催化性单链抗体和编码该单链抗体的基因，及其在制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或在制备抗阿尔茨海默氏病的药物中的应用。

背景技术

阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease,AD)是一种神经退行性疾病，其主要的和始发的病理特征是渐进性的Aβ42的聚集与沉积。对于AD的发病机理有多种观点，其中普遍认同的是Aβ42聚集体毒性学说。现已证明，由Aβ42单体聚集形成的Aβ42寡聚体最具有神经毒性，是导致AD发生、发展的主要致病因子。然而，目前国际上报道的抗毒性Aβ42的抗体大多是针对Aβ42的一级序列的，这些抗体与Aβ42的聚集体(Aβ42的寡聚体、原纤维或纤维统称为Aβ42聚集体)均能结合，无法特异地(或专一地)结合Aβ42寡聚体并抑制它们的毒性，因而在AD的治疗中易引起较大的副作用。另外，已报道的特异性靶向Aβ42寡聚体或原纤维的抗体虽然可特异性识别并结合特定的Aβ42聚集体，但不能同时有效地催化Aβ42寡聚体的降解，无法彻底根除Aβ42寡聚体的毒性。

有关AD的被动免疫治疗报道中，很多是采用人源化的单克隆抗体，但这些抗体因分子大不易穿过血脑屏障或特异性差易引起副作用而限制了其在临床上的应用。为克服这些限制，从构建小分子的人源性单链抗体出发，筛选特异性靶向神经毒性Aβ42寡聚体并催化其降解的催化性单链抗体将会成为治疗AD的热点。

单链抗体(single chain Fv,scFv)是一种小分子的基因工程抗体，它是在DNA水平上利用基因工程方法将天然抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一段链接肽(Linker)连接而成的小分子重组抗体。与完整抗体分子相比，它具有以下特点：含有完整的抗体可变区，具有较完整的抗原结合位点；不含有抗体分子的Fc段，因而免疫原性弱，用于人体不易产生免疫反应；分子量小，穿透力强，易穿过血脑屏障，适用于AD的诊断或治疗；体内循环半衰期短，易从血循环中排除；不需要进行糖基化修饰即可形成有功能的抗体分子，所以利于进行基因工程操作和可以利于原核表达系统大量生产。因此，单链抗体是目前报道最多、也最有发展前景的抗AD的基因工程抗体。

催化性抗体，又称抗体酶，是一类具有催化能力的免疫球蛋白。它既具有相应的免疫活性，又能像酶那样催化某种化学反应。催化性抗体可催化水解反应、脱羧反应、氧化还原反应、金属螯合反应、光诱导反应等。催化性抗体甚至可以使热力学上无法进行的反应得以实现。催化性抗体在患有自身免疫病的患者体内尤其多，目前多种从人体内提取的天然有催化活性的抗体已有报道。随着对催化性抗体研究的深入进行，抗体酶越来越显示出其在医学领域中的潜在应用价值。Hifumi等人(Hifumi,Emi等，2019，FASEB bioAdvancesvol.1,2 93-104)构建的#7TR抗体便显示出了针对Aβ的催化活性。Taguchi等人(Taguchi H等，2008，J Biol Chem.2；283(8):4714-22)的研究结果表明，人自身催化性抗体IgM可以清除Aβ40，这也预示着Aβ特异性水解似乎是一种先天免疫功能，可用于阿尔茨海默氏病的研究。

催化性单链抗体兼具单链抗体和抗体酶的优点，在阿尔茨海默氏病领域有更实际的应用价值。虽然目前国际上已有抗Aβ42的催化性单链抗体的报道(Planque SA等,2015,JBiol Chem,290(16):10229-10241)，但这种催化性单链抗体对Aβ42寡聚体的特异性差，亲和性低，而且未显示出明显的可催化Aβ42寡聚体降解的功效。迄今为止，国内尚未见有特异性结合Aβ42寡聚体、并可催化其降解的催化性单链抗体的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性识别并结合Aβ42寡聚体，并可有效催化Aβ42寡聚体降解的催化性单链抗体以及编码这种单链抗体的基因。

本发明不但解决了现有抗Aβ42抗体无特异性地与包括Aβ42单体在内的所有Aβ42形式均可结合的技术问题，而且解决了现有抗Aβ42寡聚体的单链抗体不能快速根除Aβ42寡聚体的技术问题。本发明利用基因工程抗体技术成功筛选出特异性与Aβ42寡聚体结合，并同时可催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体。本发明所述的单链抗体与Aβ42寡聚体特异性结合的特性与Aβ42寡聚体所特有的构象有关，是构象依赖型的催化性单链抗体。

本发明所述的Aβ42寡聚体是由2个到几十个不等的Aβ42单体聚集形成的，分子间主要以氢键、疏水键和范德华力相结合，分子量从9kDa至70kDa不等。

本发明提供了一种包括重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)的人源性抗Aβ42寡聚体的催化性单链抗体HS72，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其中VH具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，VL具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，HS72的分子量约为29kDa。

本发明还提供了一种编码前面所述的人源性抗Aβ42寡聚体的催化性单链抗体HS72的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

进一步，本发明所述的催化性单链抗体HS72能够明显降低Aβ42寡聚体的数量，在制备抗Aβ42寡聚体的药物或在制备抗阿尔茨海默氏病的药物中具有广泛应用。

再进一步，本发明所述的编码上述人源性抗Aβ42寡聚体的催化性单链抗体HS72的基因可与pET-28a、pET-41b、pMA5或pPZW103重组，构建成单链抗体HS72基因工程表达载体，该HS72基因工程表达载体在制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或在制备抗阿尔茨海默氏病的药物中具有广泛应用。

附图说明

图1：单链抗体HS72的催化效应分析图，其中A图为斑点印迹图(a行为单链抗体HS72作用0天的对照组，b行为单链抗体HS72作用20天的实验组)，B图为A图的定量分析(灰度扫描)图。分别以A图中a行的Aβ42M、Aβ42O和Aβ42F为100％计获得B图中的定量数据。A、B图中：Aβ42M、Aβ42O和Aβ42F分别为Aβ42单体、寡聚体和纤维中；

图2：pET28a-HS72重组表达载体的测序谱图；

图3：纯化的单链抗体HS72的SDS-PAGE谱图，其中M为蛋白质Marker，1为对照组，2为表达的HS72，3为纯化后的HS72；

图4：催化性单链抗体HS72催化Aβ42降解的Western blot分析谱图；

其中0d、4d、8d分别表示催化性单链抗体HS72与Aβ42孵育0天、4天、8天，HS72表示HS72对照。

具体实施方式

实施例1 Aβ42寡聚体和Aβ42纤维的制备

Aβ42单体(购自美国Sigma公司)用冰预冷的六氟异丙醇(HFIP)溶解至浓度为1mg/mL，冰水浴超声10min，真空干燥，-20℃冻存。使用时，先将上述得到的Aβ42单体用二甲基亚砜(DMSO)溶解至浓度为1mg/mL，再将Aβ42稀释到浓度为10μM的磷酸盐缓冲液(pH 7.4，50mM)中，Aβ42的终浓度为10μM，在37℃分别孵育3小时形成Aβ42寡聚体，孵育36小时形成Aβ42成熟纤维的聚集状态。所有Aβ42聚集状态均通过电镜确认。由于Aβ42形成聚集体的不可逆性，Aβ42的各种聚集体均为现用现制备。

实施例2阳性克隆的筛选

(1)外周血淋巴细胞RNA提取及反转录合成cDNA

外周血淋巴细胞分离提取：用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-2K)抗凝管采集阿尔茨海默氏病人的外周血血样10mL，用无钙、镁离子的平衡盐缓冲液(D’Hanks)(购自碧云天生物技术研究所)以1：1体积稀释，以稀释血样与淋巴细胞分离液＝2：1(体积比)的比例加入聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分离液(购自美国sigma公司)。室温下，以2000rpm/min离心20min。离心后，吸取单个核细胞层。再用D’Hanks洗涤细胞，1000rpm/min离心10min，获得外周血淋巴细胞。

外周血淋巴细胞RNA提取：在1×10⁷个外周血淋巴细胞中加入1mL苯酚-异硫氰酸胍总RNA抽提试剂(购自Invitrogen公司)，4℃静置5min。加入200μL氯仿，上下颠倒至溶液出现浆白色。置于冰上5min。在4℃条件下，12000rpm/min离心15min。将上层水相移入另一离心管，加等体积异丙醇，冰上孵育10min。以4℃条件下，12000rpm/min，离心10min。弃上清，在沉淀(含RNA)中加1mL 75％(体积分数)乙醇洗涤。在4℃条件下，12000rpm/min离心5min，得到RNA沉淀。空气干燥后，用适量三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸缓冲液(TE)或无RNA酶的去离子水溶解备用。

反转录合成cDNA：在反转录酶的作用下用上述提取的RNA合成cDNA的方法如下，取上述制备的RNA溶液4μL(1000μg/μL)加入到0.1mL离心管中，加入寡聚胸腺嘧啶脱氧核苷酸引物(Oligo dT Primer)1μL和脱氧核糖核苷三磷酸混合物(dNTP)1μL，最后以无RNA酶的去离子水补充至10μL，65℃保温5min后，于冰浴中迅速冷却。在上述离心管中加入反转录缓冲液(PrimerScriptⅡBuffer)4μL、RNA酶抑制剂(RNase Inhibitor)0.5μL、反转录酶(PrimerScriptⅡRTase)1μL，最后以无RNA酶的去离子水补充到20μL，缓慢混匀。以42℃45min，95℃5min的条件进行反转录反应后，冰上冷却，得到cDNA。

(2)编码VH与VL的DNA片段扩增

依据VH和VL的保守序列，设计并合成了扩增编码VH和VL的DNA片段的引物，其序列如下：

VHS1 5′GGAATTCCATATGCAGGTGCAGCTGGTG 3′

5′CCTGAGCCACCTCCGCCAGAACCGCCTCCACCTGAAGAGACGGT

VHA1

GACCGTTGTCC 3′

5′TGGCGGAGGTGGCTCAGGCGGTGGAGGATCGGATATCCAGATGA

VLS1

CTCAGTCTCC 3′

VLA1 5′ATAAGAATGCGGCCGCACGTTTGATCTCCACTTTGGTCC 3′

VHS1中5’的下划线部分CATATG序列是内切酶NdeⅠ识别位点，VLA1中3’端的下划线部分GCGGCCGC序列是内切酶NotⅠ识别位点。

扩增过程如下：

上述步骤(1)中制备的cDNA用无RNA酶的去离子水稀释50倍后，取1μL分别加入如下扩增编码VH、VL的DNA片段的PCR体系中，编码VH的DNA片段扩增体系：VHS1(25μmol/L)0.4μL，VHA1(25μmol/L)0.4μL；编码VL的DNA片段扩增体系：VLS1(25μmol/L)0.4μL，VLA1(25μmol/L)0.4μL；两体系再各加入DNA聚合酶(r-Taq)0.1μL，dNTPs 0.8μL，10×buffer 1μL，无RNA酶的去离子水6.3μL，分别进行目的片段的扩增：94℃5min，94℃30s，55℃30s，72℃1min作用30个循环，72℃10min。最后分别用胶回收试剂盒(购自上海生工生物工程有限公司)回收编码VH、VL的DNA片段。

(3)编码scFv的DNA片段的拼接和扩增

拼接体系如下：编码VH的DNA片段2μL[来自步骤(2)]、编码VL的DNA片段1μL[来自步骤(2)]，dNTPs 0.8μL，10×buffer 1μL，r-Taq DNA聚合酶0.1μL，无RNA酶的去离子水5.1μL，在如下条件下实现编码scFv的DNA片段的拼接：94℃5min，94℃50s，55℃50s，72℃1min，作用30个循环，72℃10min，4℃保存。

编码scFv的DNA片段的扩增：将拼接后的编码scFv的DNA片段用去离子水稀释50倍，取5μL加入如下扩增体系中：VHS1 2.5μL，VLA1 2.5μL，r-Taq DNA聚合酶0.5μL，dNTPs 4μL，10×buffer 5μL，无RNA酶的去离子水30.5μL，扩增条件为：94℃5min，94℃30s，55℃30s，72℃1min，作用30个循环，72℃10min。取1μL扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳鉴定，其余部分凝胶电泳后用胶回收试剂盒回收(购自上海生工生物工程有限公司)。

(4)阳性克隆的筛选

引物中所设计的NdeⅠ和NotⅠ酶切位点与本发明所用的原核表达载体pET28a(通用的大肠杆菌表达载体，含有T7强启动子、C-末端组氨酸标签以及卡那霉素抗性基因等，Novagen、Invitrogen等公司有售)的NdeⅠ和NotⅠ相匹配，适合于在大肠杆菌中高效表达。利用NdeⅠ和NotⅠ切割位点将此人源scFv基因片段克隆进表达载体pET28a中NdeⅠ和NotⅠ酶切位点之间，连接便得到重组表达载体。

上述表达载体的构建步骤具体如下：

双酶切反应：将1.0μg pET28a载体和上述获得的scFv基因片段分别与适量去离子水混匀，使其总体积分别为18μL，各加入2单位的限制性内切酶NdeⅠ和2单位的NotⅠ及2μL相应的10×H缓冲液，混匀，置37℃水浴保温2小时后，分别采用凝胶电泳后用胶回收试剂盒回收目的DNA(购自上海生工生物工程有限公司)。

编码scFv的DNA片段与pET28a载体的连接：取0.5μg上述步骤回收的pET28a载体DNA，加入6倍摩尔量的上述步骤得到的编码scFv基因片段、2μL10×T4 DNA连接酶缓冲液，加入去离子水定容置20μL，最后加入1单位的T4 DNA连接酶，混匀并瞬间离心以使液滴聚集管底，置16℃水浴过夜，得到连接好的重组表达载体pET28a-scFv。

重组表达载体pET28a-scFv转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞【E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备方法参照“分子克隆实验指南”(第二版，科学出版社)49页】中，冰浴30分钟后置入42℃水浴保温1分钟，立即取出并置冰浴中冷却2分钟。加入200μL 37℃预热的LB液体培养基，37℃150rpm振摇培养60分钟后，取出100μL培养液涂布于含卡那霉素(Kan)的LB琼脂培养平板上，37℃培养12h后，出现转化菌落。

挑取单克隆到96孔细菌培养板上(购自美国Corning公司)，每孔加入LB液体培养基200μL，培养基中含有100μg/mL卡那霉素(Kan)。37℃200rpm振摇培养过夜。每孔吸取2μL菌液，加入到另外一块新的96孔细菌培养板中，每孔添加LB培养基200μL，培养基含有100μg/mL Kan，37℃200rpm振摇培养至OD₆₀₀＝0.8～1.0。再向第一块板加入一定体积的甘油，甘油终浓度为15％，-80℃保存。向第二块96孔板中每孔加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(购自美国sigma公司)至终浓度为0.05mM，20℃，160rpm振荡诱导12h后，用96孔板离心机以4000rpm离心10分钟，弃去培养基收集菌体。再向96孔板中加入菌体裂解液冰浴裂解1小时，4000rpm离心10分钟，收集裂解后的总蛋白。

用10μg/mL的Aβ42寡聚体(来自实施例1)以100μL/孔包被96孔酶标板(购自美国Corning公司)，4℃，16-18h。弃抗原液，每孔加入100μL 1％(体积比)的牛血清白蛋白(BSA)，于37℃封闭1h。磷酸盐缓冲液(PBS)[含有0.1％(体积比)Tween-20]洗板三次，每孔加入100μL上述收集到的总蛋白，37℃孵育2h。阳性对照孔加商品化Aβ抗体B4(购自美国Santa cruz公司)，阴性对照孔加BSA。PBS[含有0.1％(体积比)Tween-20]洗板六次。加入100μL 1:2000(体积比)稀释的anti-His单抗(购自美国Santa cruz公司)，37℃孵育1h。PBS[含有0.1％(体积比)Tween-20]洗板六次。加入100μL 1:4000(体积比)稀释辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG抗体(购自中国博士德公司)，37℃孵育1h。PBS[含有0.1％(体积比)Tween-20]洗板六次。加入3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)(购自美国Amresco公司)50μL/孔，室温避光反应15min，每孔加30μL 2mol/L H₂SO₄终止反应，酶标仪测OD值(波长为450nm)。结果判定：以OD值超过阴性对照3倍为阳性，空白对照的OD值应小于0.2。经结果鉴定，筛选出多株与抗原结合力强的单克隆菌株进行后续催化性单链抗体克隆的筛选。

实施例3催化性单链抗体克隆的筛选

将上述筛选出的阳性克隆蛋白分别与Aβ42M(单体)、Aβ42O(寡聚体)、Aβ42F(纤维)(终浓度均为2.0μM)混合，于37℃、pH7.4的环境中孵育20天。取合适尺寸的硝酸纤维素膜(NC膜)(Cat.No.66485，颇尔公司，中国上海)，用1mL移液枪头压出点样圈，将等体积的孵育产物点样于各个圈内。以5％(质量体积比)脱脂奶粉封闭膜，置室温(22℃)2h。再加入抗Aβ42的Ⅰ抗(sc-28365,Santa Cruz生物技术有限公司，中国上海)[1：10000(体积比)]，37℃孵育1h。用PBST[含有0.1％(体积比)Tween-20的PBS]洗涤膜3次，每次10min。将膜加入到HRP标记的羊抗鼠Ⅱ抗(bs-0296G-HRP,北京博奥森生物技术有限公司，中国北京)[1:5000(体积比)]中，37℃孵育1h。PBST[含有0.1％(体积比)Tween-20的PBS]洗涤膜3次，每次10min。PBS洗膜1次，10min。ddH2O洗膜1次，10min。将膜经底物发光显色试剂(ECL)(Cat.No.P0018M,碧云天生物技术有限公司，中国上海)显影，置于化学发光成像系统(SH-Focus523,杭州申花科技有限公司，中国杭州)中拍照。经斑点印迹以及斑点的定量分析(灰度扫描)结果鉴定，筛选出的单克隆菌株HS72表达的单链抗体能够特异性催化Aβ42寡聚体降解，结果如图1所示。图1证明，单链抗体HS72对Aβ42寡聚体作用20天后(在37℃条件下)，其斑点(A图b行中的Aβ42O斑点)明显变浅，表明Aβ42O的数量明显减少，相应的定量分析结果(B图)证明，Aβ42O的降解率约15％。相比之下，单链抗体HS72对Aβ42纤维的降解效果较差，降解率低于5％(B图)，而在单链抗体HS72与Aβ42单体的孵育体系中，Aβ42的数量降低9％，这是由于Aβ42单体在37℃孵育过程中会缓慢形成Aβ42寡聚体，这些新形成的Aβ42寡聚体进而被体系中的单链抗体HS72催化降解的缘故。图1所示结果证明了，单链抗体HS72催化Aβ42寡聚体的降解效果最好，表现出对Aβ42寡聚体催化的特异性。催化性单链抗体HS72经纯化后用于进行后续实验。

实施例4催化性单链抗体HS72基因的DNA序列测定

提取质粒pET28a-HS72，交由上海生工测序部进行序列测定，结果如图2(pET28a-HS72载体测序谱图，其中编码HS72的基因为核苷酸112～894号)所示。将所测得的HS72基因序列与GeneBank中的免疫球蛋白基因序列进行比对分析，结果证明：所获得的HS72克隆为一编码scFv的DNA序列，起始密码子为ATG，终止密码子为TGA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，它包含了编码抗体重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)的DNA序列，推导得到的相应氨基酸序列(SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2)具有典型的抗体可变区结构。

实施例5催化性单链抗体HS72的表达与制备

将含有pET28a-HS72质粒的E.coli BL21(DE3)37℃振摇培养过夜。以1:100(体积比)的比例接种，37℃振荡培养OD₆₀₀＝0.8～1.0后加入IPTG诱导HS72的表达，20℃，160rpm振荡诱导12h后，4℃5000rpm离心5min收集菌体。以PBS(pH7.4)重悬菌体，经超声破碎后离心收集上清。对收集的上清使用Ni²⁺-NTA柱纯化本发明的人源性单链抗体HS72：将上清液缓慢流过Ni²⁺-NTA柱，然后用8倍柱体积缓冲液(20mM磷酸缓冲液，500mM氯化钠，20mM咪唑)洗柱，最后用洗脱缓冲液(20mM磷酸缓冲液，500mM氯化钠，250mM咪唑)洗脱本发明的人源性单链抗体HS72。图3示出了所制备的人源性单链抗体HS72的SDS-PAGE鉴定结果，纯化得到的人源性单链抗体HS72分子量约为29.0kDa。

实施例6Western blot检测催化性单链抗体HS72催化Aβ42寡集体的降解

将单链抗体HS72与Aβ42寡聚体(实施例1得到)等摩尔比混合(终浓度2.0μM)，于37℃孵育0、1、4、7、10天后待用。将孵育样品与2×Loading Buffer等体积混合，100℃变性10分钟后，立即至于冰中冷却。孵育样品经SDS-PAGE后，转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Cat.No.IPVH00010，默克密理博公司，中国上海)上，5％(体积比)脱脂牛奶封闭1h。用PBS[含有0.1％(体积比)Tween-20]洗膜3次，每次10min。将膜置于杂交袋中，加入抗Aβ42抗体(B4)(购自Santa Cruz公司)[1:1000(体积比)]，室温杂交2h后，PBS[含有0.1％(体积比)Tween-20]洗膜3次，每次10min。再加入HRP标记的IgG(bs-0296G-HRP，北京博奥森生物技术有限公司，中国北京)[1:5000(体积比)]，室温杂交1h。PBS[含有0.1％(体积比)Tween-20]洗膜3次，每次10min。加入ECL显色，将膜置于化学发光成像系统(SH-Focus523，杭州申花科技有限公司，中国杭州)中拍照，结果如图4所示：位于35kDa附近的HS72与Aβ42M复合物随着孵育时间的延长逐渐减少，位于10kDa附近的Aβ42二聚体呈现先增多后减少的趋势。图4结果表明，Aβ42寡聚体在与单链抗体HS72孵育过程中，单链抗体HS72催化了Aβ42寡聚体中的Aβ42肽链降解，产生的Aβ片段不被抗Aβ42抗体(B4)杂交，因而不显色。这也再次证明了单链抗体HS72属于催化性单链抗体，它能够催化Aβ42寡聚体的降解。

Claims (6)

1.一种催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体HS72，其特征在于：单链抗体HS72的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1所述的催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体HS72在制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或在制备抗阿尔茨海默氏病的药物中的应用。

3.一种编码权利要求1所述的催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体HS72的基因，其特征在于：基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.权利要求3所述的基因在制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或在制备抗阿尔茨海默氏病的药物中的应用。

5.一种基因工程表达载体，其特征在于：是由核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的基因与pET-28a、pET-41b、pMA5或pPZW103载体构建的催化性单链抗体HS72的表达载体。

6.权利要求5所述的基因工程表达载体在制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或在制备抗阿尔茨海默氏病的药物中的应用。