KR20220130126A - Sos1 억제제 - Google Patents

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KR20220130126A
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methyl
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매튜 아르놀드 막스
존 마이클 켓참
크리스토퍼 로날드 스미스
존 다비드 로우슨
아론 크레이그 번스
시아오룬 왕
스비틀라나 컬리크
안토니 이베탁
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미라티 테라퓨틱스, 인크.
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Abstract

본 발명은 SOS1(Son of sevenless homolog 1) 활성을 억제하는 화합물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 화합물, 제약 조성물, 및 사용 방법, 예컨대 본 발명의 화합물 및 제약 조성물을 사용하여 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

SOS1 억제제
본 발명은 SOS1(Son of sevenless homolog 1) GTP-매개 뉴클레오티드 교환을 억제하는 화합물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 화합물, 화합물을 포함하는 제약 조성물 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.
Ras류(Ras family)는 v-Ki-ras2 Kirsten 랫트 육종 바이러스 종양 유전자 동족체(KRAS), 신경모세포종 RAS 바이러스 종양 유전자 동족체(NRAS) 및 Harvey 뮤린 육종 바이러스 종양 유전자(HRAS)를 포함하며 암을 포함하는 정상 및 변경된 상태에서 세포 분열, 성장 및 기능을 결정적으로 조절한다(예를 들어, 문헌[Simanshu et al. Cell, 2017. 170(1): p. 17-33]; 문헌[Matikas et al., Crit Rev Oncol Hematol, 2017. 110: p. 1-12] 참조). RAS 단백질은 수용체 티로신 키나제(RTK)를 포함하는 업스트림 신호에 의해 활성화되고, 미토겐-활성화 단백질 키나제(MAPK)/세포외 신호-조절 키나제(ERK) 경로와 같은 여러 다운스트림 시그널링 경로로 신호를 형질도입(transduce)한다. RAS 시그널링의 과활성화는 RAS 경로에서의 RAS 유전자 또는 기타 유전자의 돌연변이 또는 변경의 결과로서 암에서 자주 관찰된다. RAS 및 RAS 시그널링을 억제하는 전략의 확인은 암 및 RAS-조절 질환 상태의 치료에 유용할 것으로 예상된다.
RAS 단백질은 비활성 구아노신 이인산(GDP) 결합 상태와 활성 구아노신 삼인산(GTP) 결합 상태 사이를 순환하는 구아노신 삼인산효소(GTPase)이다. SOS1(Son of Sevenless homolog 1)은 GTP에 대한 GDP의 교환을 매개하여 RAS 단백질을 활성화하는 구아닌 뉴클레오티드 교환 인자(GEF: guanine nucleotide exchange factor)이다. RAS 단백질은 GTPase-활성화 단백질(GAP: GTPase-activating protein)에 의해 크게 향상되는 고유의 GTPase 활성을 통해 GTP를 GDP로 가수분해한다. GAP 및 GEF를 통한 이러한 조절은 활성화 및 비활성화가 정상 조건에서 엄격하게 조절되게 하는 메커니즘이다. 세 가지 RAS 단백질 모두의 여러 잔기에서의 돌연변이는 암에서 자주 관찰되며 RAS가 주로 활성화된 상태로 남아 있게 한다(문헌[Sanchez-Vega et al., Cell, 2018. 173: p. 321-337 Li et al., Nature Reviews Cancer, 2018. 18: p. 767-777]). 코돈 12 및 13에서의 돌연변이는 가장 빈번하게 돌연변이된 RAS 잔기이며 GAP 단백질과 RAS의 상호작용을 차단함으로써 GAP-자극된 GTP 가수분해를 방지한다. 그러나, 최근의 생화학적 분석은 이러한 돌연변이 단백질이 고유한 GTPase 활성 및/또는 외래적 GTPase에 대한 부분적 민감도를 기반으로 하는 활성화를 위해 뉴클레오티드 순환을 여전히 필요로 함을 보여주었다. 이와 같이, 돌연변이 RAS 단백질은 RAS 활성화에 필요한 다른 업스트림 시그널링 분자인 SOS1 또는 SHP2와 같은 업스트림 인자의 억제에 민감하다(문헌[Hillig, 2019; Patricelli, 2016; Lito, 2016; Nichols, 2018]).
포유류 세포에서 확인된 세 가지 주요 RAS-GEF류는 SOS, RAS-GRF 및 RAS-GRP이다(문헌[Rojas, 2011]). RAS-GRF 및 RAS-GRP는 각각 중추 신경계의 세포 및 조혈 세포에서 발현되는 한편, SOS류는 도처에서 발현되고 RTK 시그널링 형질도입을 담당한다. SOS류는 SOS1 및 SOS2를 포함하며 이들 단백질은 약 70량%의 서열 동일성을 공유한다. SOS1은 SOS2의 급격한 분해로 인해 SOS2보다 훨씬 더 활성인 것으로 보인다. 마우스 SOS2 녹아웃(knockout)은 실행 가능하지만 SOS1 녹아웃은 태아에 치명적이다. 타목시펜-유도성 SOS1 녹아웃 마우스 모델은 성체 마우스에서 SOS1 및 SOS2의 역할을 조사하는 데 사용되었고 SOS1 녹아웃은 실행 가능했지만 SOS1/2 이중 녹아웃은 실행 가능하지 않았음을 보여 주었으며(문헌[Baltanas, 2013]), 이는 기능적 중복성(redundancy), 및 SOS1의 선택적 억제가 SOS1 - RAS 활성화 질환의 치료에 충분한 치료 지수를 가질 수 있음을 시사한다.
SOS 단백질은 성장 인자 수용체 결합 단백질 2(GRB2)와의 상호작용을 통해 인산화된 RTK로 모집된다. 원형질막으로의 모집은 SOS를 RAS에 근접하게 배치하고 SOS-매개 RAS 활성화를 가능하게 한다. SOS 단백질은 뉴클레오티드 교환을 촉진하는 결합 부위뿐만 아니라 GTP-결합 RAS류 단백질을 결합하고 SOS의 기능을 증가시키는 알로스테릭(allosteric) 부위를 통해 RAS에 결합한다(문헌[Freedman et al., Proc. Natl. Acad. Sci, USA 2006. 103(45): p. 16692-97]). 알로스테릭 부위에 대한 결합은 RAS 기질 결합 부위의 입체 폐색을 완화하므로 뉴클레오티드 교환에 필요하다. 알로스테릭 부위와의 상호작용 후 촉매 부위에서 활성 형태의 유지는 활성화된 상태에서 핵심 도메인의 강화된 상호작용으로 인해 분리되어 유지된다. SOS1 돌연변이는 누난 증후군, 및 폐 선암종, 배아 횡문근육종, 세르톨리 세포 고환 종양 및 피부의 과립 세포 종양을 비롯한 여러 암에서 발견된다(예를 들어, 문헌[Denayer, E., et al, Genes Chromosomes Cancer, 2010. 49(3): p. 242-52] 참조).
GTPase-활성화 단백질(GAP)은 RAS류 구성원의 낮은 고유 GTPase 활성을 자극하여 활성 GTP-결합 RAS 단백질을 비활성 GDP-결합 RAS 단백질로 전환하는 단백질이다(예를 들어, 문헌[Simanshu, D.K., Cell, 2017, Ras Proteins and their Regulators in Human Disease] 참조). GEF SOS1의 활성화 변경이 암에서 발생하는 한편, GAP 뉴로피브로민 1(NF-1) 또는 뉴로피브로민 2(NF-2)의 비활성화 돌연변이 및 기능-상실 변경이 또한 발생하여, SOS1 활성이 반대되지 않고 RAS 단백질을 통한 경로 다운스트림의 활성이 상승되는 상태를 생성한다.
따라서, SOS1과 Ras류 구성원 사이의 상호작용을 차단하는 본 발명의 화합물은 KRas가 활성 GTP-결합 형태로 재순환되는 것을 방지하며, 따라서 광범위한 암, 특히 Ras류 구성원 관련 암에 대한 치료 이점을 제공할 수 있다. 본 발명의 화합물은 Ras 관련 암, SOS1 관련 암 및 NF1/NF2 관련 암을 비롯한 다양한 형태의 암을 치료하기 위한 세포에서 SOS1-KRas 상호작용을 차단함으로써 KRas의 활성을 음성으로 조절하는데 유용할 수 있는 SOS1-KRas 상호작용의 억제제로서 잠재적인 치료 이점을 제공한다.
SOS1과 Ras류 구성원 사이의 상호작용을 차단할 수 있고 활성 GTP-결합 형태로의 KRas의 재순환을 방지하여, 특히 Ras 관련 암, SOS1 관련 암 및 NF1/NF2 관련 암을 포함하는 광범위한 암에 대한 치료 이점을 제공할 수 있는 새로운 SOS1 억제제를 개발할 필요가 있다.
본 발명의 일 양태에서, 화학식 (I)에 의해 표시되는 화합물:
Figure pct00001
화학식 (I)
또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공되며, 상기 식에서
R1은 수소, 하이드록실, C1 ― C6 알킬, 알콕시, -N(R6)2, -NR6C(O)R6, -C(O)N(R6)2, -SO2알킬, -SO2NR6알킬, 사이클로알킬, -Q-헤테로사이클릴, aryl, 또는 헤테로아릴이며, 여기서 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 각각 하나 이상의 R2 또는 L-R2로 선택적으로 치환되고;
각각의 Q는 독립적으로 결합, O 또는 NR6이고;
X는 N 또는 CR7이고;
각각의 R2는 독립적으로 C1-C3 알킬, 옥소(즉, C=O), 하이드록시, 할로겐, 시아노, 하이드록시알킬, 할로알킬, 알콕시, -C(O)N(R6)2, -N(R6)2, -SO2알킬, -NR6C(O)C1―C3 알킬, -C(O)사이클로알킬, -C(O)C1-C3알킬, -C(O)헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴이며, 여기서 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R11로 선택적으로 치환되고;
R3은 수소, C1-C6 알킬, 알콕시, -N(R10)2, -L-N(R10)2, 사이클로알킬, 할로알킬 또는 헤테로사이클릴이며, 여기서 C1-C6 알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환되고;
Y는 결합 또는 헤테로아릴렌이고;
R4는 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이들 각각은 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환되고;
각각의 R5는 독립적으로 하이드록시, 할로겐, 시아노, 하이드록시알킬, 알콕시, C1-C3 알킬, 할로알킬, 할로알킬-OH, -N(R6)2, -L-N(R6)2 또는 -SO2알킬이고;
L은 C1-C3 알킬렌이고;
각각의 R6은 독립적으로 수소, C1-C3 알킬, 할로알킬 또는 사이클로알킬이고;
R7은 수소, 시아노 또는 알콕시이고;
R8은 C1-C2 알킬 또는 할로C1-C2 알킬이고;
각각의 R9는 독립적으로 하이드록시, 할로겐, 아미노, 시아노, 알콕시, 또는 C1-C3 알킬이고;
각각의 R10은 독립적으로 수소, C1-C3 알킬 또는 사이클로알킬이고;
각각의 R11은 독립적으로 C1-C3 알킬, 할로겐 또는 할로알킬이고;
R12는 수소, 할로겐 또는 C1-C3 알킬이다.
본 발명의 다른 양태에서, 치료 유효량의 본 발명의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염 및 제약상 허용가능한 부형제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 세포에서 Ras류 구성원과 SOS1 사이의 회합을 억제함으로써 Ras류 구성원의 활성을 억제하는 방법으로서, 세포를 화학식 (I)의 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 상기 접촉은 시험관내에서 한다. 일 실시형태에서, 상기 접촉은 생체내에서 한다.
또한, 시험관내에서 또는 생체내에서 세포 증식을 억제하는 방법으로서, 세포를 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 또는 그의 제약 조성물의 유효량과 접촉시키는 것을 포함하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, (a) (예를 들어, 규제 기관-승인된, 예를 들어 FDA-승인된 검정(assay) 또는 키트(kit)를 사용하여 결정할 때) 암이 Ras류 구성원 돌연변이(예를 들어, KRas G12C 관련 암)와 관련됨을 결정하는 단계; 및 (b) 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용가능한 염 또는 제약 조성물의 치료 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, (a) (예를 들어, 규제 기관-승인된, 예를 들어 FDA-승인된 검정 또는 키트를 사용하여 결정할 때) 암이 SOS1 돌연변이(예를 들어, SOS1 관련 암)와 관련됨을 결정하는 단계; 및 (b) 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용가능한 염 또는 제약 조성물의 치료 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, (a) (예를 들어, 규제 기관-승인된, 예를 들어 FDA-승인된 검정 또는 키트를 사용하여 결정할 때) 암이 NF-1 또는 NF-2 기능-상실 돌연변이(예를 들어, NF1/NF2 관련 암)와 관련됨을 결정하는 단계; 및 (b) 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용가능한 염 또는 제약 조성물의 치료 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, SOS1의 활성 억제용 약제의 제조에 있어서, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물의 용도가 본원에 제공된다.
또한, SOS1 관련 질환 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물의 용도가 본원에 제공된다.
본 발명은 SOS1 억제제에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 SOS1 활성을 억제하는 화합물, 치료 유효량의 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에게 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 언급된 모든 특허, 특허 출원 및 간행물은 본 개시내용과 일치하는 범위 내에서 참조로 포함된다. 용어 및 범위는 달리 명시적으로 정의되지 않는 한 일반적으로 정의된 정의를 갖는다.
간단하게 하기 위해, 화학적 모이어티는 전체에 걸쳐 주로 1가 화학적 모이어티(예를 들어, 알킬, 아릴 등)로 정의되고 언급된다. 그럼에도 불구하고, 이러한 용어는 또한 당업자에게 분명한 적절한 구조적 상황 하에 상응하는 다가 모이어티를 전달하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, "알킬" 모이어티는 일반적으로 1가 라디칼(예를 들어, CH3-CH2-)을 지칭하지만, 특정 상황에서 2가 연결 모이어티는 "알킬"일 수 있으며, 이 경우 당업자는 알킬이 2가 라디칼(예를 들어, -CH2-CH2-)이며, 이는 용어 "알킬렌"과 동등한 것으로 이해할 것이다. (유사하게, 2가 모이어티가 요구되고 "아릴"로서 언급되는 상황에서, 당업자는 "아릴"이라는 용어가 상응하는 2가 모이어티인 아릴렌을 지칭함을 이해할 것이다.) 모든 원자는 결합 형성을 위한 정상적인 원자가 수를 갖는 것으로 이해된다(즉, S의 산화 상태에 따라, 탄소의 경우 4, N의 경우 3, O의 경우 2, S의 경우 2, 4 또는 6).
본원에서, "KRas G12C"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 시스테인의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당(assignment)은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Gly12Cys에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "KRas G12D"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 아스파르트산의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Gly12Asp에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "KRas G12S"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 tpfls의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Gly12Ser에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "KRas G12A"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 알라닌의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Gly12Ala에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "KRas G13D"는 아미노산 위치 13의 글리신에 대한 아스파르트산의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Gly13Asp에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "KRas G13C"는 아미노산 위치 13의 글리신에 대한 시스테인의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Gly13Cys에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "KRas Q61L"은 아미노산 위치 41의 글루타민에 대한 류신의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Gln61Leu에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "KRas A146T"는 아미노산 위치 146의 알라닌에 대한 트레오닌의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Ala146Thr에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "KRas A146V"는 아미노산 위치 146의 알라닌에 대한 발린의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Ala146Val에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "KRas A146P"는 아미노산 위치 146의 알라닌에 대한 프롤린의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Ala146Pro에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas G12C"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 시스테인의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 HRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Gly12Cys에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas G12D"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 아스파르트산의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 HRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Gly12Asp에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas G12S"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 세린의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 HRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Gly12Ser에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas G12A"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 알라닌의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Gly12Ala에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas G13D"는 아미노산 위치 13의 글리신에 대한 아스파르트산의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 HRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Gly13Asp에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas G13C"는 아미노산 위치 13의 글리신에 대한 시스테인의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 HRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Gly13Cys에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas Q61L"은 아미노산 위치 41의 글루타민에 대한 류신의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 HRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Gln61Leu에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas A146T"는 아미노산 위치 146의 알라닌에 대한 트레오닌의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Ala146Thr에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas A146V"는 아미노산 위치 146의 알라닌에 대한 발린의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Ala146Val에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas A146P"는 아미노산 위치 146의 알라닌에 대한 프롤린의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Ala146Pro에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "NRas G12C"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 시스테인의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 NRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01111: 변이체 p.Gly12Cys에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "NRas G12D"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 아스파르트산의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 NRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01111: 변이체 p.Gly12Asp에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "NRas G12S"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 세린의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 NRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01111: 변이체 p.Gly12Ser에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "NRas G12A"는 아미노산 위치 12의 글리신에 대한 알라닌의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 NRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 KRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01111: 변이체 p.Gly12Ala에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "NRas G13D"는 아미노산 위치 13의 글리신에 대한 아스파르트산의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 NRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01111: 변이체 p.Gly13Asp에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HNRas G13C"는 아미노산 위치 13의 글리신에 대한 시스테인의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 NRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01111: 변이체 p.Gly13Cys에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "HRas Q61L"은 아미노산 위치 41의 글루타민에 대한 류신의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 HRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 HRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01112: 변이체 p.Gln61Leu에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "NRas A146T"는 아미노산 위치 146의 알라닌에 대한 트레오닌의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 NRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01111: 변이체 p.Ala146Thr에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "NRas A146V"는 아미노산 위치 146의 알라닌에 대한 발린의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 NRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01111: 변이체 p.Ala146Val에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "NRas A146P"는 아미노산 위치 146의 알라닌에 대한 프롤린의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 NRas 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 NRas에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot P01111: 변이체 p.Ala146Pro에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "Ras류 구성원" 또는 "Ras류"는 위치 G12, G13, Q61 및 A146을 포함하는 KRas, HRas, NRas 및 이들의 활성화 돌연변이를 지칭한다.
본원에서, "Ras류 관련 질환 또는 장애"는 위치 G12, G13, Q61 또는 A146의 것과 같은 활성화 Ras 돌연변이와 관련되거나 이에 의해 매개되거나 이를 갖는 질환 또는 장애를 지칭한다. Ras류 관련 질환 또는 장애의 비제한적 예는 KRas, HRas 또는 NRas G12C 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas G12D 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas G12S 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas G12A 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas G13D 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas G13C 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas Q61X 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas A146T 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas A146V 관련 암 또는 KRas, HRas 또는 NRas A146P 관련 암이다.
본원에서, "SOS1"은 포유동물 SOS1(Son of sevenless homolog 1) 효소를 지칭한다.
본원에서, "SOS1 관련 질환 또는 장애"는 활성화 SOS1 돌연변이와 관련되거나 이에 의해 매개되거나 이를 갖는 질환 또는 장애를 지칭한다. 활성화 SOS1 돌연변이의 예는 SOS1 N233S 및 SOS1 N233Y 돌연변이를 포함한다.
본원에서, "SOS1 N233S"는 아미노산 위치 233의 글루타민에 대한 세린의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 SOS1 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 SOS1에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot Q07889: 변이체 p.Gln233Ser에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "SOS1 N233Y"는 아미노산 위치 233의 글루타민에 대한 티로신의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 SOS1 단백질의 돌연변이 형태를 지칭한다. 인간 SOS1에 대한 아미노산 코돈 및 잔기 위치의 할당은 UniProtKB/Swiss-Prot Q07889: 변이체 p.Gln233Tyr에 의해 확인된 아미노산 서열을 기반으로 한다.
본원에서, "SOS1 억제제"는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 (I)에 의해 표시되는 본 발명의 화합물을 지칭한다. 이들 화합물은 SOS1과 Ras류 돌연변이 또는 SOS1 활성화 돌연변이와의 상호작용의 전부 또는 일부를 음성으로 억제할 수 있어 Ras류 구성원 - SOS1 복합체 -의 뉴클레오티드 교환 활성을 감소 및/또는 조절할 수 있다.
본원에서, "NF-1/NF-2 관련 질환 또는 장애"는 뉴로피브로민(NF-1) 유전자 또는 뉴로피브로민 2(NF-2) 유전자에서 기능-상실 돌연변이와 관련되거나 이에 의해 매개되거나 이를 갖는 질환 또는 장애를 지칭한다.
본원에서, "기능-상실 돌연변이"는 임의의 점 돌연변이(들), 스플라이스 부위 돌연변이(들), 융합, 넌센스 돌연변이(아미노산이 정지 코돈으로 돌연변이됨), 삽입 및 결실을 포함하는 인-프레임 또는 프레임-이동 돌연변이, 및 암호화된 단백질의 존재, 활성 및/또는 기능의 부분적 또는 완전한 손실을 초래하는 표적 세포 또는 암 세포에서 단백질을 암호화하는 유전자의 동형(homozygous) 결실을 지칭한다.
용어 "아미노"는 -NH2를 지칭한다.
용어 "아세틸"은 -C(O)CH3를 지칭한다.
본원에서, 용어 "아실"은 알킬 및 아릴 부분이 본원에 정의된 바와 같은 알킬카르보닐 또는 아릴카르보닐 치환기를 지칭한다.
본원에서, 용어 "알킬"은 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 및 분지쇄 지방족 기를 지칭한다. 이와 같이, "알킬"은 C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 및 C12 기를 포함한다. 알킬기의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸 및 헥실을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본원에서, 용어 "알케닐"은 2 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 불포화 직쇄 또는 분지쇄 지방족 기를 의미한다. 이와 같이, "알케닐"은 C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 및 C12 기를 포함한다. 알케닐기의 예는 에테닐, 프로페닐, 부테닐, 펜테닐 및 헥세닐을 비제한적으로 포함한다.
본원에서, 용어 "알키닐"은 2 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 불포화 직쇄 또는 분지쇄 지방족 기를 의미한다. 이와 같이, "알키닐"은 C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 및 C12 기를 포함한다. 알키닐 기의 예는 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐 및 헥시닐을 비제한적으로 포함한다.
"알킬렌", "알케닐렌" 또는 "알키닐렌"기는 2개의 상이한 화학 기들 사이에 배치되고 이들을 연결하는 역할을 하는 상기 정의된 바와 같은 알킬, 알케닐 또는 알키닐 기이다. 알킬렌기의 예는 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌 및 부틸렌을 비제한적으로 포함한다. 예시적인 알케닐렌기는 에테닐렌, 프로페닐렌 및 부테닐렌을 비제한적으로 포함한다. 예시적인 알키닐렌기는 에티닐렌, 프로피닐렌 및 부티닐렌을 비제한적으로 포함한다.
용어 "알콕시"는 ―OC1―C6 알킬을 지칭한다.
본원에서, 용어 "사이클로알킬"은 3 내지 12개의 탄소를 갖는 포화 또는 부분적 불포화 환식 탄화수소 기이다. 이와 같이, "사이클로알킬"은 C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 및 C12 환식 탄화수소 기를 포함한다. 사이클로알킬기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로헵틸 및 사이클로옥틸을 비제한적으로 포함한다.
용어 "헤테로알킬"은 사슬에서 하나 이상의 탄소 원자가 독립적으로 O, S 또는 NRx(여기서 Rx은 수소 또는 C1-C3알킬임)로 치환된, 상기 정의된 바와 같은 알킬기를 지칭한다. 헤테로알킬기의 예는 메톡시메틸, 메톡시에틸 및 메톡시프로필을 포함한다.
"아릴"기는 1 내지 3개의 방향족 고리를 포함하는 C6-C14 방향족 모이어티이다. 이와 같이, "아릴"은 C6, C10, C13, 및 C14 환식 탄화수소 기를 포함한다. 예시적인 아릴기는 C6-C10 아릴기이다. 특정 아릴기는 제한 없이 페닐, 나프틸, 안트라세닐 및 플루오레닐을 포함한다. "아릴"기는 또한 융합된 고리들 중 하나 이상이 비-방향족이지만 적어도 하나의 고리는 인데닐과 같은 방향족인 융합된 다환식(예를 들어, 이환식) 고리 시스템을 포함한다.
"아르알킬" 또는 "아릴알킬"기는 알킬기에 공유 결합된 아릴기를 포함하며, 여기서 모이어티는 알킬 모이어티를 통해 다른 기에 결합된다. 예시적인 아르알킬기는 제한 없이 벤질, 페네틸 및 나프틸메틸을 포함하는 -(C1-C6)알킬(C6-C10)아릴이다.
"헤테로사이클릴" 또는 "헤테로사이클릭"기는 3 내지 12개의 원자(3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개 원자), 또는 3 내지 12개의 원자(3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 원자), 예를 들어 4 내지 8개의 원자를 갖는 단환식 또는 이환식(융합, 스피로 또는 가교된) 고리 구조이며, 여기서 하나 이상의 고리 원자는 독립적으로 ―C(O)-, N, NR4, O, S 또는 S(O)2이고, 나머지 고리 원자는 4차 또는 카르보닐 탄소이다. 헤테로사이클릭 기의 예는 에폭시, 옥시라닐, 옥세타닐, 아제티디닐, 아지리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로티오페닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 이미다졸리디닐, 티아졸리디닐, 티아타닐, 디티아닐, 트리티아닐, 아자티아닐, 옥사티아닐, 디옥솔라닐, 옥사졸리디닐, 옥사졸리디노닐, 데카하이드로퀴놀리닐, 피페리도닐, 4-피페리도닐, 티오모르폴리닐, 디메틸-모르폴리닐 및 모르폴리닐을 비제한적으로 포함한다.
본원에서, "헤테로사이클릴"은 결합을 통해 다른 기에 공유 결합된 헤테로사이클릴기를 지칭한다.
본원에서, 용어 "헤테로아릴"은 5 내지 14개의 고리 원자, 바람직하게는 5, 6, 10, 13 또는 14개의 고리 원자를 가지고; 1, 2 또는 3개의 고리를 포함할 수 있는 고리형 배열에서 공유되는 6, 10 또는 14개의 π 전자를 가지며; 탄소 원자 외에도 각각 독립적으로 N, O 또는 S인 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 기를 지칭한다. "헤테로아릴"은 또한 융합된 고리들 중 하나 이상이 비-방향족이지만(어느 고리가 부착되는 지와 무관함) 적어도 하나의 고리는 방향족이고 적어도 하나의 고리는 N, O 또는 S 고리 원자를 포함하는 융합된 다환식(예를 들어, 이환식, 삼환식) 고리 시스템을 포함한다.
헤테로아릴기의 예는 아크리디닐, 아조시닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 벤조[d]옥사졸-2(3H)-온, 2H-벤조[b][1,4]옥사진-3(4H)-온, 벤조티오푸라닐, 벤조티오페닐, 벤즈옥사졸릴, 벤즈티아졸릴, 벤즈트리아졸릴, 벤즈테트라졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤즈이소티아졸릴, 벤즈이미다졸리닐, 카르바졸릴, 4aH-카르바졸릴, 카르볼리닐, 크로마닐, 크로메닐, 신놀리닐, 푸라닐, 푸라자닐, 이미다졸리닐, 이미다졸릴, 1H-인다졸릴, 인돌레닐, 인돌리닐, 인돌리지닐, 인돌릴, 3H-인돌릴, 이소벤조푸라닐, 이소크로마닐, 이소인다졸릴, 이소인돌리닐, 이소인돌릴, 이소퀴놀리닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 나프티리디닐, 옥타하이드로이소퀴놀리닐, 옥사디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 옥사졸리디닐, 옥사졸릴, 옥사졸리디닐, 피리미디닐, 페난트리디닐, 페난트롤리닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사티이닐, 페녹사지닐, 프탈라지닐, 피페로닐, 프테리디닐, 퓨리닐, 피라닐, 피라지닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리도옥사졸, 피리도이미다졸, 피리도티아졸, 피리디닐, 피리딜, 피리미디닐, 피롤리닐, 2H-피롤릴, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀리닐, 4H-퀴놀리지닐, 퀴녹살리닐, 퀴누클리디닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 테트라졸릴, 6H-1,2,5-티아디아지닐, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,5-티아디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 티안트레닐, 티아졸릴, 티에닐, 티에노티아졸릴, 티에노옥사졸릴, 티에노이미다졸릴, 티오페닐, 트리아지닐, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,5-트리아졸릴, 1,3,4-트리아졸릴, 및 크산테닐을 포함한다.
"헤테로아르알킬" 또는 "헤테로아릴알킬"기는 결합을 통해 다른 기에 공유 결합된 헤테로아릴기를 포함한다. 헤테로알킬기의 예는 C1-C6 알킬기 및 5, 6, 9 또는 10개의 고리 원자를 갖는 헤테로아릴기를 포함한다. 헤테로아르알킬기의 예는 피리딜메틸, 피리딜에틸, 피롤릴메틸, 피롤릴에틸, 이미다졸릴메틸, 이미다졸릴에틸, 티아졸릴메틸, 티아졸릴에틸, 벤즈이미다졸릴메틸, 벤즈이미다졸릴에틸 퀴나졸리닐메틸, 퀴놀리닐메틸, 퀴놀리닐에틸, 벤조푸라닐메틸, 인돌리닐에틸 이소퀴놀리닐메틸, 이소이노딜메틸, 신놀리닐메틸 및 벤조티오페닐에틸을 포함한다. 구체적으로, 인접한 고리 O 및/또는 S 원자를 갖는 화합물은 이 용어의 범위에서 제외된다.
"아릴렌", "헤테로아릴렌" 또는 "헤테로사이클릴렌"기는 각각 2개의 다른 화학기 사이에 배치되고 이들을 연결하는 역할을 하는, 상기 정의된 바와 같은 2가 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴 기이다.
본원에서, 모이어티(예를 들어, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클릴, 우레아 등)가 치환기를 명시적으로 언급하지 않고 "선택적으로 치환된" 것으로 기술되는 경우, 이는 기가 선택적으로 1 내지 4개, 바람직하게는 1 내지 3개, 보다 바람직하게는 1 또는 2개의 비-수소 치환기를 갖는 것을 의미한다.
본원에서, 용어 "할로겐" 또는 "할로"는 염소, 브롬, 불소 또는 요오드를 지칭한다.
용어 "할로알킬"은 하나 이상의 수소가 할로겐으로 대체된 알킬 사슬을 지칭한다. 할로알킬의 예는 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 플루오로클로로메틸, 클로로메틸 및 플루오로메틸이다.
용어 "하이드록시알킬"은 -알킬렌-OH를 지칭한다.
본원에서, 용어 "대상체", "개체" 또는 "환자"는 상호 교환적으로 사용되며, 마우스(mice), 랫트(rats), 다른 설치류(rodents), 토끼, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말, 영장류 및 인간과 같은 포유동물을 포함하는 임의의 동물을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 환자는 인간이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 치료되고/되거나 예방될 질환 또는 장애의 적어도 하나의 증상을 경험했고/했거나 나타냈다. 일부 실시형태에서, 대상체는 (예를 들어, 규제 기관-승인된, 예를 들어, FDA-승인된 검정 또는 키트를 사용하여 결정할 경우) KRas G12 또는 G13 돌연변이를 갖는 암을 앓는 것으로 확인되거나 진단되었다. 일부 실시형태에서, 대상체는 (예를 들어, 규제 기관-승인된 검정 또는 키트를 사용하여 결정할 경우) KRas G12C 돌연변이, KRas G12D 돌연변이, KRas G12S 돌연변이, KRas G12A 돌연변이, KRas G13D 돌연변이 또는 KRas G13C 돌연변이에 대해 양성인 종양을 갖는다. 대상체는 KRas G12C 돌연변이, KRas G12D 돌연변이, KRas G12S 돌연변이, KRas G12A 돌연변이, KRas G13D 돌연변이 또는 KRas G13C 돌연변이에 대해 양성인(예를 들어, 규제 기관-승인된, 예를 들어 FDA-승인된 검정 또는 키트를 사용하여 양성으로 확인됨) 종양을 갖는 대상체일 수 있다. 대상체는 그의 종양이 KRas G12C 돌연변이, KRas G12D 돌연변이, KRas G12S 돌연변이, KRas G12A 돌연변이, KRas G13D 돌연변이 또는 KRas G13C 돌연변이를 갖는(예를 들어, 종양이 규제 기관-승인된, 예를 들어 FDA-승인된 키트 또는 검정을 사용하여 그와 같이 확인되는 경우) 대상체일 수 있다. 일부 실시형태에서, 대상체는 KRas G12 또는 G13 유전자 관련 암을 앓는 것으로 의심된다. 일부 실시형태에서, 대상체는 대상체가 KRas G12C 돌연변이를 갖는 종양을 갖는다는 것을 표시하는 임상 기록(및 선택적으로, 대상체가 본원에 제공된 임의의 조성물로 치료되어야 함을 나타내는 임상 기록)을 갖는다.
본원에서, 용어 "소아 환자"는 진단 또는 치료 시점에서 만 16세 미만인 환자를 지칭한다. 용어 "소아"는 신생아(출생부터 생후 1개월까지); 유아(만 1개월부터 2세까지); 어린이(만 2세부터 12세까지); 및 청소년(만 12세부터 21세까지(스물 두 번째 생일까지이나 이를 포함하지는 않음))을 포함하는 다양한 하위 집단으로 더 나눌 수 있다. 문헌[Berhman RE, Kliegman R, Arvin AM, Nelson WE. Nelson Textbook of Pediatrics, 15th Ed. Philadelphia: W.B. Saunders Company, 1996]; 문헌[Rudolph AM, et al. Rudolph's Pediatrics, 21st Ed. New York: McGraw-Hill, 2002]; 및 문헌[Avery MD, First LR. Pediatric Medicine, 2nd Ed. Baltimore: Williams & Wilkins; 1994].
본원에서, 화합물의 "유효량"은 SOS1 효소의 활성을 음성으로 조절하거나 억제하기에 충분한 양이다.
본원에서, 화합물의 "치료 유효량"은 증상을 개선하거나 일부 방식으로 감소시키거나 병태의 진행을 중지 또는 반전시키거나 SOS1의 활성을 음성으로 조절 또는 억제하기에 충분한 양이다. 그러한 양은 단일 용량으로 투여될 수 있거나 이를 효과적으로 만드는 요법에 따라 투여될 수 있다.
본원에서, 치료는 병태, 장애 또는 질환의 증상 또는 병리가 개선되거나 달리 유익하게 변경되는 임의의 방식을 의미한다.
본원에서, 특정 화합물 또는 제약 조성물의 투여에 의한 특정 장애의 증상의 개선은 조성물의 투여에 기인하거나 이와 관련될 수 있는 임의의 완화(영구적 또는 일시적인지, 지속적 또는 과도적인지 여부에 관계없음)을 지칭한다.
화합물
본 발명의 일 양태에서, 화학식 (I)에 의해 표시되는 화합물:
Figure pct00002
화학식 (I)
또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공되며,
상기 식에서,
R1은 수소, 하이드록실, C1 ― C6 알킬, 알콕시, -N(R6)2, -NR6C(O)R6, -C(O)N(R6)2, -SO2알킬, -SO2NR6알킬, 사이클로알킬, -Q-헤테로사이클릴, aryl, 또는 헤테로아릴이며, 여기서 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 각각 하나 이상의 R2 또는 L-R2로 선택적으로 치환되고;
각각의 Q는 독립적으로 결합, O 또는 NR6이고;
X는 N 또는 CR7이고;
각각의 R2는 독립적으로 C1-C3 알킬, 옥소(즉, C=O), 하이드록시, 할로겐, 시아노, 하이드록시알킬, 할로알킬, 알콕시, -C(O)N(R6)2, -N(R6)2, -SO2알킬, -NR6C(O)C1―C3 알킬, -C(O)사이클로알킬, -C(O)C1-C3알킬, -C(O)헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴이며, 여기서 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R11로 선택적으로 치환되고;
R3은 수소, C1-C6 알킬, 알콕시, -N(R10)2, -L-N(R10)2, 사이클로알킬, 할로알킬 또는 헤테로사이클릴이며, 여기서 C1-C6 알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환되고;
Y는 결합 또는 헤테로아릴렌이고;
R4는 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이들 각각은 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환되고;
각각의 R5는 독립적으로 하이드록시, 할로겐, 시아노, 하이드록시알킬, 알콕시, C1-C3 알킬, 할로알킬, 할로알킬-OH, -N(R6)2, -L-N(R6)2 또는 -SO2알킬이고;
L은 C1-C3 알킬렌이고;
각각의 R6은 독립적으로 수소, C1-C3 알킬, 할로알킬 또는 사이클로알킬이고;
R7은 수소, 시아노 또는 알콕시이고;
R8은 C1-C2 알킬 또는 할로C1-C2 알킬이고;
각각의 R9는 독립적으로 하이드록시, 할로겐, 아미노, 시아노, 알콕시, 또는 C1-C3 알킬이고;
각각의 R10은 독립적으로 수소, C1-C3 알킬 또는 사이클로알킬이고;
각각의 R11은 독립적으로 C1-C3 알킬, 할로겐 또는 할로알킬이고;
R12는 수소, 할로겐 또는 C1-C3 알킬이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 일 실시형태에서, X는 N이다. X가 N인 특정 실시형태에서, R1은 알콕시이다. 일 실시형태에서, 알콕시는 메톡시이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 일 실시형태에서, X는 N이다. X가 N인 특정 실시형태에서, R1은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 -Q-헤테로사이클릴이다. 특정 실시형태에서, R1은 -Q-헤테로사이클릴이며, 여기서 Q는 결합이고 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 모르폴리닐, 피페라지닐 또는 피페라지논이다. 특정 실시형태에서, 헤테로사이클릴은 모르폴리닐 또는 피페라지닐이고, Y는 결합이고, R4는 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환된 아릴이다. 일 실시형태에서, 헤테로사이클릴은 모르폴리닐, 피페라지닐 또는 피페라지논이고, Y는 헤테로아릴렌이고, R4는 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환된 아릴이다.
본 발명의 특정 실시형태에서, R1은 -Q-헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 가교된 모르폴리닐, 가교된 피페라지닐 또는 가교된 피페라지논이다.
본 발명의 특정 실시형태에서, R1은 -Q-헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 2개 이상의 고리를 함유하는 스피로사이클릭 고리 시스템이다. 이들 중 특정 실시형태에서, 스피로사이클릭 고리 시스템은 각각 헤테로원자를 함유하는 2개의 고리를 포함한다. 이들 중 다른 특정 실시형태에서, 스피로사이클릭 고리 시스템은 헤테로원자가 없는 고리(즉, 헤테로원자를 갖는 하나의 고리, 및 헤테로원자를 갖지 않는 하나의 고리)를 함유한다.
본 발명의 특정 실시형태에서, R1은 헤테로아릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R2 또는 L-R2로 선택적으로 치환된다. 이들 중 특정 실시형태에서, 헤테로아릴은 하나 이상의 방향족 고리 이외에도, 비-방향족 고리, 예를 들어 이환식 또는 삼환식 고리 시스템, 예컨대 5,6,7,8-테트라하이드로-[1,2,4]트리아졸로피라지닐, 5,6,7,8-테트라하이드로이미다조피라지닐, 2,4,5,6-테트라하이드로피롤로피라졸릴, 1,2,3,4-테트라하이드로벤조[4,5]이미다조피라지닐 또는 4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로피라지닐을 포함하는 이환식 또는 삼환식 고리 시스템이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 일 실시형태에서, X는 CR7이다. X가 CR7인 일 실시형태에서, R7은 시아노이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 일 실시형태에서, X는 CR7이다. X가 CR7인 일 실시형태에서, R7은 수소이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 일 실시형태에서, X는 CR7이고, R7은 수소이고, R1은 수소이다. 다른 실시형태에서, R1은 하이드록실이다. 특정 실시형태에서, R1은 -N(R6)2이다. 일 실시형태에서, R1은 -N(R6)2이고 각각의 R6은 C1-C3 알킬이다. 일 실시형태에서, 각각의 C1-C3 알킬기는 메틸이다. 다른 실시형태에서, R1은 -NR6C(O)R6이다. 일 실시형태에서, 각각의 C1-C3 알킬은 메틸이다. 일 실시형태에서, NR6의 R6은 수소이고 C(O)R6의 R6은 C1-C3 알킬이다.
X가 CR7이고 R7이 수소인 다른 실시형태에서, R1은 -C(O)N(R6)2이다. 일 실시형태에서, 각각의 C1-C3 알킬은 메틸이다. 일 실시형태에서, 각각의 C1-C3 알킬은 수소이다. 특정 실시형태에서, R1은 -SO2알킬 또는 -SO2NR6알킬이다. 일 실시형태에서, R1은 -SO2NR6알킬이고 R6은 수소이다. 다른 실시형태에서, R1은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 사이클로알킬이다. 일 실시형태에서, 사이클로알킬은 각각 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실이다. 일 실시형태에서, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실은 1개의 R2로 치환되며, 여기서 R2는 C1-C3 알킬, 알콕시, 하이드록실 또는 -N(R6)2이다. 일 실시형태에서, R2는 -N(R6)2이고 각각의 R6은 C1-C3 알킬이다. 일 실시형태에서, 각각의 C1-C3 알킬은 메틸이다.
X가 CR7이고 R7이 수소인 다른 실시형태에서, R1은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 -Q-헤테로사이클릴이다. 일 실시형태에서, Q는 결합이고 헤테로사이클릴은 모르폴리닐, 피페르디닐, 피페라지닐, N-메틸 피페라지닐, 피페라지논, 1-메틸-피페라진-2-온, 디아제파닐, 6,6-디플루오로-1,4-디아제판-1-일 또는 4-메틸티오모르폴린 1,1-디옥사이드이다. 다른 실시형태에서, Q는 결합이고 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 피롤리디닐 또는 테트라하이드로피라닐이다. 일 실시형태에서, 피롤리디닐 또는 테트라하이드로피라닐은 1개의 R2로 치환되며, 여기서 R2는 C1-C3 알킬, 알콕시, 하이드록실 또는 -N(R6)2이다.
X가 CR7이고 R7이 수소인 다른 실시형태에서, R1은 -Q-헤테로사이클릴이고, Q는 결합이고 헤테로사이클릴은 1개의 R2로 치환된 피페라지닐이며, 여기서 R2는 하나 이상의 R11로 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 일 실시형태에서, 헤테로아릴은 2개의 R11로 치환된 피라졸릴이며, 여기서 각각의 R11은 C1-C3 알킬이다.
X가 CR7이고 R7이 수소인 다른 실시형태에서, R1은 -Q-헤테로사이클릴이고, Q는 결합이고 헤테로사이클릴은 1개의 R2로 치환된 피페라지닐이며, 여기서 R2는 -C(O)사이클로알킬 또는 -C(O)헤테로사이클릴이며, 여기서 -C(O)사이클로알킬 또는 -C(O)헤테로사이클릴의 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴 부분은 각각 하나 이상의 R11로 선택적으로 치환된다. 일 실시형태에서, R2는 -C(O)사이클로알킬이고, 사이클로알킬은 1개의 R11로 치환된 사이클로프로필이며, 여기서 R11은 C1-C3 알킬 또는 할로알킬이다. 일 실시형태에서, R2는 -C(O)헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 옥세타닐, 테트라하이드로푸라닐 또는 테트라하이드로피라닐이다.
일 실시형태에서, Q는 결합이고 헤테로사이클릴은 이환식 헤테로사이클릴이다. 특정 실시형태에서, 이환식 헤테로사이클릴은 디아자비사이클로[3.2.0]헵탄-2-일, (1R,5R)-2,6-디아자비사이클로[3.2.0]헵탄-2-일, 디아자비사이클로[3.2.0]헵탄- 6-일, (1R,5R)-2,6-디아자비사이클로[3.2.0]헵탄-6-일, 6,7-디하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-일, 5,6 - 디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일, 1,3-디메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일 또는 (R)-2-메틸헥사하이드로피롤로[1,2-a]피라진-6(2H)-온이다.
또 다른 실시형태에서, Q는 O이고 헤테로사이클릴은 아제티디닐, 테트라하이드로푸라닐, 피롤리디닐 또는 피페르디닐이다.
X가 CR7이고 R7이 수소인 다른 실시형태에서, R1은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 아릴이다. 일 실시형태에서, 아릴은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 페닐이다. 특정 실시형태에서, 페닐은 1개의 R2로 치환되며, 여기서 R2는 C1-C3 알킬, 알콕시, 하이드록실 또는 -N(R6)2이다. 일 실시형태에서, R2는 -N(R6)2이고 각각의 R6은 C1-C3 알킬이다. 일 실시형태에서, 각각의 C1-C3 알킬은 메틸이다. 다른 실시형태에서, R1은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 일 실시형태에서, 헤테로아릴은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 피라졸릴이다. 일 실시형태에서, 피라졸릴은 1개의 R2로 치환되며, 여기서 R2는 C1-C3 알킬, 알콕시, 하이드록실 또는 -N(R6)2이다. 일 실시형태에서, R2는 -N(R6)2이고 각각의 R6은 C1-C3 알킬이다. 일 실시형태에서, 각각의 C1-C3 알킬은 메틸이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 일 실시형태에서, X는 CR7이고 R7은 알콕시이다. 일 실시형태에서, 알콕시는 메톡시이다. X가 CR7이고 R7이 알콕시인 특정 실시형태에서, R1은 알콕시이다. 일 실시형태에서, R7 알콕시는 메톡시이고 R1 알콕시는 메톡시이다.
X가 N 또는 CR7인 화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, Y는 헤테로아릴렌이다. 일 실시형태에서, 헤테로아릴렌은 티오페닐렌이다.
X가 N 또는 CR7인 화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, Y는 결합이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, R4는 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이들 각각은 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환된다. 일 실시형태에서, R4는 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환된 아릴이다. 일 실시형태에서, 아릴은 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환된 페닐이다. 특정 실시형태에서, 페닐은 1개의 R5로 치환되며, 여기서 R5는 C1-C4 알킬, 할로알킬 또는 -L-N(R6)2이다.
일 실시형태에서, R5는 -L-N(R6)2이며, 여기서 L은 메틸렌이고 하나의 R6은 수소이고 제2 R6은 C1-C3 알킬이다. 일 실시형태에서, C1-C3 알킬은 메틸이다. 다른 실시형태에서, R5는 -L-N(R6)2이며, 여기서 L은 메틸렌이고 각각의 R6은 C1-C3 알킬이다. 일 실시형태에서, 각각의 C1-C3 알킬은 메틸이다.
R4가 아릴인 특정 실시형태에서, R4는 2개의 R5로 치환된 페닐이고, 여기서 하나의 R5는 C1-C4 알킬이고 제2 R5는 할로알킬이다. 일 실시형태에서, C1-C4알킬은 메틸이고 할로알킬은 트리플루오로메틸이다. 특정 실시형태에서, R4는 2개의 R5로 치환된 페닐이고, 여기서 하나의 R5는 C1-C4 알킬이고 제2 R5는 -L-N(R6)2이다. 일 실시형태에서, L은 메틸렌이고 각각의 R6은 C1-C3 알킬이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 일 실시형태에서, R3은 수소이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, R3은 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이다. 일 실시형태에서, C1-C6 알킬은 메틸, 에틸 또는 이소프로필이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, R3은 알콕시이다. 일 실시형태에서, 알콕시는 메톡시이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, R3은 할로알킬이다. 일 실시형태에서, 할로알킬은 트리플루오로메틸이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, R3은 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환된 사이클로 알킬이다. 일 실시형태에서, 사이클로알킬은 사이클로프로필이다. 일 실시형태에서, 사이클로알킬은 1개의 R9로 치환되고, 여기서 1개의 R9는 할로겐 아미노, 하이드록실 또는 알콕시이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, R3은 -N(R10)2이다. 일 실시형태에서, 각각의 R10은 C1-C3 알킬이다. 특정 실시형태에서, 각각의 C1-C3 알킬은 메틸이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, R3은 -L-N(R10)2이다. 일 실시형태에서, 각각의 R10은 C1-C3 알킬이다. 특정 실시형태에서, 각각의 C1-C3 알킬은 메틸이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, R3은 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고, 여기서 헤테로사이클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환된다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, R8은 C1-C2 알킬이다. 일 실시형태에서, C1-C2 알킬은 메틸이다.
화학식 (I)의 화합물에 대한 특정 실시형태에서, R8은 할로C1-C2 알킬이다. 일 실시형태에서, 할로C1-C2 알킬은 플루오로메틸, 디플루오로메틸 또는 트리플루오로메틸이다.
일 실시형태에서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물:
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Figure pct00021
및 상기 화합물의 제약상 허용가능한 염이다.
화학식 (I)의 화합물은 제약 조성물로 제제화될 수 있다.
제약 조성물
다른 양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 SOS1 억제제 및 제약상 허용가능한 담체, 부형제, 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명의 화합물은 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해 제제화될 수 있고 비경구, 경구, 설하, 경피, 국소, 비강내, 기관내 또는 직장내를 비제한적으로 포함하는 임의의 경로에 의해 투여하기 위해 제조될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 화합물은 병원 환경에서 정맥내로 투여된다. 다른 특정 실시형태에서, 투여는 바람직하게는 경구 경로에 의해 이루어질 수 있다.
담체의 특징은 투여 경로에 따라 달라질 것이다. 본원에서, 용어 "제약상 허용가능한"은 세포, 세포 배양물, 조직 또는 유기체와 같은 생물학적 시스템과 양립할 수 있고 활성 성분(들)의 생물학적 활성의 효과를 방해하지 않는 무독성 물질을 의미한다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물은, 상기 억제제 외에, 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정화제, 가용화제, 및 당업계에서 잘 알려진 다른 물질을 함유할 수 있다. 제약상 허용가능한 제제의 제조는 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, ed. A. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990]에 설명되어 있다.
본원에서, "제약상 허용가능한 염"이라는 용어는 상기 화합물의 원하는 생물학적 활성을 유지하면서 원치 않는 독물학적 효과를 최소한으로 또는 전혀 나타내지 않는 염을 지칭한다. 그러한 염의 예는 무기산(예를 들어, 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산 등)으로 형성된 산 부가염, 및 유기산, 예컨대 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 석신산, 말산, 아스코르브산, 벤조산, 탄닌산, 파모산, 알긴산, 폴리글루탐산, 나프탈렌설폰산, 나프탈렌디설폰산 및 폴리갈락투론산으로 형성된 염을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또한, 화합물은 통상의 기술자에게 알려진 제약상 허용가능한 4차 염으로서 투여될 수 있고, 이는 구체적으로 화학식 --NR+Z-의 4차 암모늄 염을 포함하며, 여기서 R는 수소, 알킬, 또는 벤질이고, Z는 반대이온이며, 이는 염화물, 브로마이드, 요오다이드, --O-알킬, 톨루엔설포네이트, 메틸설포네이트, 설포네이트, 포스페이트 또는 카르복실레이트(예컨대, 벤조에이트, 석시네이트, 아세테이트, 글리콜레이트, 말레에이트, 말레이트, 시트레이트, 타르트레이트, 아스코르베이트, 벤조에이트, 신나모에이트, 만델로에이트, 벤질로에이트 및 디페닐아세테이트)를 포함한다.
활성 화합물은, 치료되는 환자에서 심각한 독성 효과를 야기하지 않으면서 환자에게 치료적 유효량을 전달하는 데 충분한 양으로 상기 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제에 포함된다. 전술된 모든 병태에 대한 활성 화합물의 용량은 약 0.01 내지 300 mg/kg/일, 바람직하게는 0.1 내지 100 mg/kg/일, 보다 일반적으로 0.5 내지 약 25 mg/수령체의 체중 킬로그램/일의 범위이다. 전형적인 국소 용량은 적합한 담체에서 0.01 내지 3% wt/wt의 범위일 것이다. 제약상 허용가능한 유도체의 효과적인 용량 범위는 전달될 모 화합물의 중량을 기준으로 계산될 수 있다. 유도체가 그 자체로 활성을 나타내는 경우, 효과적인 용량은 유도체의 중량을 사용하여 상기와 같이 또는 통상의 기술자에게 알려진 다른 수단에 의해 추정될 수 있다.
본 발명의 화합물을 포함하는 제약 조성물은 본원에 기재된 방법에서 사용될 수 있다.
사용 방법
또 다른 양태에서, 본 발명은 세포에서 SOS1 활성을 억제하는 방법으로서, SOS1 활성의 억제가 요구되는 세포를 화학식 (I)의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 상기 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 함유하는 제약 조성물의 유효량과 시험관내에서 접촉시키는 것을 포함한다.
본원에 제공된 조성물 및 방법은 세포에서 SOS1 활성을 억제하는데 특히 유용한 것으로 간주된다. 일 실시형태에서, SOS1 활성의 억제가 요구되는 세포는 SOS1의 활성을 음성으로 조절하기 위해 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물과 생체내에서 접촉된다. 다른 실시형태에서, 치료 유효량의 제약상 허용가능한 염 또는 화학식 (I)의 화합물을 함유하는 제약 조성물이 사용될 수 있다. 일 실시형태에서, 세포는 KRas, HRas 또는 NRas와 같은 Ras류 구성원에서 활성화 돌연변이를 보유한다. 일 실시형태에서, 세포는 비정상적인 SOS1 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 비정상적인 SOS1 활성은 SOS1 활성화 돌연변이의 결과이다. 일 실시형태에서, SOS1 활성화 돌연변이는 N233S 또는 N233Y 돌연변이이다. 일 실시형태에서, 세포는 비정상적인 NF-1 또는 NF-2 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 비정상적인 NF-1 또는 NF-2 활성은 NF-1 또는 NF-2 활성화 돌연변이의 결과이다.
SOS1의 활성을 음성으로 조절함으로써, 방법은 SOS1과 Ras류 구성원 사이의 상호작용을 차단하고 RAS 단백질의 GTP-로딩을 증가시켜 GTP 뉴클레오티드 교환을 감소 또는 억제하고 Ras류 구성원을 GDP-결합된 비활성 형태로 고정하여 다운스트림 Ras-매개 시그널링을 억제하도록 설계된다. 세포는 특정 치료 요법에 따라 단일 용량 또는 다중 용량으로 접촉되어 SOS1의 원하는 음성적 조절에 영향을 미칠 수 있다.
다른 양태에서, 암을 치료하는 방법으로서, 암에 걸린 환자에게 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물, 그의 제약상 허용가능한 염, 또는 상기 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일 실시형태에서, 암은 Ras류 관련 암이다. 일 실시형태에서, 암은 SOS-1 관련 암이다. 일 실시형태에서, 암은 NF-1/NF-2 관련 암이다.
본원에 제공된 조성물 및 방법은 전립선, 유방, 뇌, 피부, 자궁경부암, 고환암 등과 같은 종양을 포함하는 다양한 암의 치료에 사용될 수 있다. 보다 구체적으로, 본 발명의 조성물 및 방법에 의해 치료될 수 있는 암은 성상 세포, 유방, 자궁경부, 결장직장, 자궁내막, 식도, 위, 두경부, 간세포, 후두, 폐, 구강, 난소, 전립선 및 갑상선 암종 및 육종과 같은 종양 유형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 보다 구체적으로, 이러한 화합물은 다음을 치료하는 데 사용될 수 있다: 심장: 육종(혈관육종, 섬유육종, 횡문근육종, 지방육종), 점액종, 횡문근종, 섬유종, 지방종 및 기형종; 폐: 기관지 암종(편평 세포, 미분화 소세포, 미분화 대세포, 선암종), 폐포(세기관지) 암종, 기관지 선종, 육종, 림프종, 연골종 과오종, 중피종; 위장관: 식도(편평상피세포암, 선암, 평활근육종, 림프종), 위(암, 림프종, 평활근육종), 췌장(관샘암, 인슐린종, 글루카곤종, 가스트린종, 카르시노이드 종양, 비포마(vipoma)), 소장(선암, 림프종, 유암종, 카포시 육종, 평활근종, 혈관종, 지방종, 신경섬유종, 섬유종), 대장(선암종, 관상 선종, 융모 선종, 과오종, 평활근종); 비뇨생식기: 신장(선암종, 윌름종양(신모세포종), 림프종, 백혈병), 방광 및 요도(편평상피세포암종, 이행세포암종, 선암종), 전립선(선암종, 육종), 고환(정소종, 기형종, 배아암종, 융모막암종, 육종, 간질 세포 암종, 섬유종, 섬유선종, 선종 종양, 지방종); 간: 간암(간세포 암종), 담관암종, 간모세포종, 혈관육종, 간세포 선종, 혈관종; 담도: 담낭 암종, 팽대부 암종, 담관암종; 뼈: 골원성 육종(골육종), 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 연골육종, 유잉 육종, 골연골종(골연골성 외골), 양성 연골종, 연골모세포종, 연골점액섬유종, 유골 골종 및 거대 세포 종양; 신경계: 두개골(골종, 혈관종, 육아종, 황색종, 기형 골염), 수막(수막종, 수막육종, 신경교종증), 뇌(성상세포종, 수모세포종, 신경교종, 뇌실막종, 생식세포종(송과종), 다형성 교모세포종, 선천성 종양), 척수 신경섬유종, 수막종, 신경교종, 육종); 부인과: 자궁(자궁내막암), 자궁경부(자궁경부암, 전종양 자궁경부 이형성증), 난소(난소암(장액성 낭선암, 점액성 낭선암, 미분류 암종), 육아막 세포 종양, 세르톨리-레이디히(Sertoli-Leydig) 세포 종양, 생식 이상종, 악성 기형종), 외음부(편평 세포 암종, 상피내 암종, 선암종, 섬유육종, 흑색종), 질(투명 세포 암종, 편평 세포 암종, 보트로이드 육종(배아 횡문근 육종), 나팔관(암종); 혈액학: 혈액(골수성 백혈병(급성 및 만성), 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 골수증식성 질환, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군), 호지킨병, 비-호지킨 림프종(악성 림프종); 피부: 악성 흑색종, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 카포시 육종, 두더지 이형성 모반, 지방종, 혈관종, 피부 섬유종, 켈로이드, 건선; 및 부신: 신경모세포종. 특정 실시형태에서, 암은 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL: diffuse large B-cell lymphoma)이다.
일 실시형태에서, 암은 Ras류 관련 암, 예컨대 KRas, NRas 또는 HRas 관련 암이다. 특정 실시형태에서, Ras류 관련 암은 비-소세포 폐암 또는 췌장암이다. 일 실시형태에서, 암은 SOS1 관련 암이다. 특정 실시형태에서, SOS1 관련 암은 폐 선암종, 배아 횡문근육종, 세르톨리 세포 고환 종양 및 피부의 과립 세포 종양이다. 일 실시형태에서, 암은 NF-1 관련 암이다.
환자에 대한 투여 농도 및 경로는 치료될 암에 따라 변할 것이다. 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염 및 이러한 화합물 및 염을 포함하는 제약 조성물은 또한 다른 항-신생물성 화합물, 예를 들어 화학요법과 함께 공-투여될 수 있거나, 또는 수술 전 또는 수술 후 보조제로서 다른 치료, 예컨대 방사선 또는 외과적 개입과 함께 사용될 수 있다.
일반 반응 도식, 중간체 및 실시예
일반 반응 도식
본 발명의 화합물은 본원에 기재된 합성 방법 및 반응 도식에서 상업적으로 입수가능한 시약 및 중간체를 사용하여 제조될 수 있거나, 또는 당업자에게 널리 공지된 다른 시약 및 통상적인 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 화학식 (I)의 화합물 및 화합물을 제조하기 위한 중간체는 일반 반응 도식 I - VI에 따라 제조될 수 있다:
일반 반응 도식 I
Figure pct00022
일반 반응 도식 I의 경우, 화합물 5는 화학식 (I)의 예이다. 이 일반 반응 도식 I에서, 1은 중간체 2와 같은 아민과 반응하여 - 이 반응은 예를 들어 친핵성 치환 또는 금속 촉매 반응일 수 있음 - 화합물 3을 생성한다. 그 다음, 화합물 3은 적절한 염기, 예를 들어 탄산나트륨의 존재 하에 붕소산 유도체 Y-R3 4와 같은 커플링 파트너와 금속 촉매 반응을 거쳐 표제 화합물 5를 형성할 수 있다.
일반 반응 도식 II
Figure pct00023
일반 반응 도식 II의 경우, 화합물 5는 화학식 (I)의 예이다. 이 일반 반응 도식 II에서, 6은 중간체 2와 같은 아민과 반응하여 - 이 반응은 예를 들어 친핵성 치환 또는 금속 촉매 반응일 수 있음 - 화합물 7을 생성한다. 그 다음, 화합물 7은 적절한 염기, 예를 들어 탄산나트륨의 존재 하에 붕소산 유도체 Y-R1 8과 같은 커플링 파트너와 금속 촉매 반응을 거쳐 표제 화합물 5를 형성할 수 있다.
일반 반응 도식 III
Figure pct00024
일반 반응 도식 III의 경우, 화합물 5는 화학식 (I)의 예이다. 이 일반 반응 도식 III에서, 화합물 7은 적절한 염기, 예를 들어 탄산세슘의 존재 하에 알코올 또는 아민 H-R1 9와 같은 커플링 파트너와 금속 촉매 반응 또는 친핵성 치환을 거쳐 표제 화합물 5를 형성할 수 있다.
일반 반응 도식 IV
Figure pct00025
일반 반응 도식 IV의 경우, 화합물 5는 화학식 (I)의 예이다. 이 일반 반응 도식 IV에서, 10은 중간체 2와 같은 아민과 반응하여 - 이 반응은 예를 들어 친핵성 치환 또는 금속 촉매 반응일 수 있음 - 화합물 5를 생성한다.
일반 반응 도식 V
Figure pct00026
일반 반응 도식 V의 경우, 화합물 5는 화학식 (I)의 예이다. 이 일반 반응 도식 V에서, 11은 중간체 2와 같은 아민과 반응하여 - 이 반응은 예를 들어 친핵성 치환 또는 금속 촉매 반응일 수 있음 - 화합물 12를 생성한다. 그 다음, 화합물 12는 적절한 염기, 예를 들어 탄산나트륨의 존재 하에 붕소산 유도체 Y-R3 4와 같은 커플링 파트너와 금속 촉매 반응을 거쳐 화합물 7을 형성할 수 있다. 그 다음, 화합물 7은 적절한 염기, 예를 들어 탄산나트륨의 존재 하에 붕소산 유도체 Y-R1 8과 같은 커플링 파트너와 금속 촉매 반응을 거쳐 표제 화합물 5를 형성할 수 있다.
일반 반응 도식 VI
Figure pct00027
일반 반응 도식 VI의 경우, 화합물 5는 화학식 (I)의 예이다. 이 일반 반응 도식 VI에서, 화합물 13은 적절한 염기 또는 커플링 파트너, 예를 들어 탄산세슘 또는 디에틸 아조디카르복실레이트의 존재 하에 알코올, 할라이드, 토실레이트 또는 메실레이트 X-R1 14와 같은 커플링 파트너와의 치환 반응에 참여하여 표제 화합물 5를 형성할 수 있다.
하기 중간체를 사용하여 본 발명의 화합물을 제조할 수 있다.
중간체 A
Figure pct00028
단계 A: THF(70.0 mL) 중 1-(2-브로모페닐)-N-메틸메탄아민(6.50 g, 32.5 mmol, 1 당량)의 혼합물에 Boc2O(7.80 g, 35.7 mmol, 8.21 mL, 1.10 당량)를 25℃에서 적가하고, 그 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 직접 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2-브로모벤질)(메틸)카르바메이트(7.50 g, 25.0 mmol, 76.9% 수율)를 무색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.55 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 1H), 7.22 - 7.08 (m, 2H), 4.61 - 4.42 (m, 2H), 2.94 - 2.78 (m, 3H), 1.60 - 1.33 (m, 9H).
단계 B: 디옥산(80.0 mL) 중 tert-부틸 (2-브로모벤질)(메틸)카르바메이트(7.00 g, 23.3 mmol, 1.00 당량), 비스(피나콜라토)디보론(8.88 g, 35.0 mmol, 1.50 당량), Pd(dppf)Cl2(1.71 g, 2.33 mmol, 0.10 당량) 및 칼륨 아세테이트(5.72 g, 58.3 mmol, 2.50 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 메틸(2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)카르바메이트(8.00 g, 23.0 mmol, 98.8% 수율)를 무색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.82 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.48 - 7.37 (m, 1H), 7.27 - 7.21 (m, 2H), 4.85 - 4.63 (m, 2H), 2.92 - 2.73 (m 3H), 1.54 - 1.41 (m, 9H), 1.35 (s, 12H).
중간체 B
Figure pct00029
단계 A: THF(56.0 mL) 중 1-(4-브로모티오펜-2-일)에탄-1-온(4.00 g, 19.5 mmol, 1.10 당량) 및 2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.15 g, 17.7 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Ti(OEt)4(8.09 g, 35.5 mmol, 7.35 mL, 2.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 물(15.0 mL)에 붓고 5분 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 여액을 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1(10 mL)로 세척하고, 여과하고, 필터 케이크를 수집하고 진공에서 건조하여 N-(1-(4-브로모티오펜-2-일)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(3.00 g, 9.73 mmol, 54.9% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.43 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 1.30 (s, 9H).
단계 B: THF(40.0 mL) 중 N-(1-(4-브로모티오펜-2-일)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(3.70 g, 12.0 mmol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 수소화붕소나트륨(1.36 g, 36.0 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃로 천천히 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 얼음물(15.0 mL)에 붓고 0℃에서 5분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(30.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(30.0 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하여 N-(1-(4-브로모티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(3.60 g, 9.51 mmol, 79.3% 수율, 82.0% 순도)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.15 (s, 1H), 6.98 - 6.96 (s, 1H), 4.81 - 4.75 (m, 1H), 3.55 (br d, J = 3.6 Hz, 1H), 1.59 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.24 (s, 9H).
단계 C: 디옥산(35.0 mL) 및 물(8.00 mL) 중 N-(1-(4-브로모티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(3.00 g, 9.67 mmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 메틸(2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)카르바메이트(5.04 g, 14.5 mmol, 1.50 당량)의 용액에 Pd(PPh3)4(1.12 g, 967 μmol, 0.10 당량) 및 탄산세슘(9.45 g, 29.01 mmol, 3.00 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 tert-부틸(2-(5-(1-((tert-부틸설피닐)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(1.40 g, 3.11 mmol, 32.1% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 451.2.
단계 D: THF(15.0 mL) 및 물(5.00 mL) 중 tert-부틸(2-(5-(1-((tert-부틸설피닐)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(1.40 g, 4.88 mmol, 1.00 당량)에 요오드(232 mg, 1.46 mmol, 295 μL, 0.30 당량)를 첨가했다. 혼합물을 50℃에서 30분 동안 교반하였다. 잔류물을 포화 아황산나트륨 수용액(30.0 mL)에 붓고 5분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(15.0 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(30.0 mL x 2)로 세척하고 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고 진공에서 농축하여 tert-부틸 (2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(1.20 g, 미정제(crude))를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 - 7.28 (m, 3H), 7.26 - 7.22 (m, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.91 (br s, 1H), 4.49 (br d, J = 19.2 Hz, 2H), 4.40 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 2.72 (br d, J = 19.2 Hz, 3H), 1.53 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.51 - 1.40 (m, 9H).
중간체 C & D
Figure pct00030
단계 A: THF(200 mL) 중 4-브로모티오펜-2-카브알데히드(20.0 g, 104 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(12.1 g, 99.5 mmol, 0.95 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(47.8 g, 209 mmol, 43.4 mL, 2.00 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 물(20.0 mL)에 붓고 5분 동안 교반하여 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 여과하고 여과된 액을 진공에서 농축하여 (R,E)-N-((4-브로모티오펜-2-일)메틸렌)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(20.0 g, 미정제)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 295.8.
단계 B: THF(200 mL) 중 (R,E)-N-((4-브로모티오펜-2-일)메틸렌)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(600 mg, 2.04 mmol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 메틸 마그네슘 브로마이드(3.00 M, 2.04 mL, 3.00 당량)를 적가하였다. 그 다음 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 염화암모늄 수용액(3.00 mL)을 첨가하고 5분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(3.00 mL x 2)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(3.00 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 황색 오일로서 (R)-N-((S)-1-(4-브로모티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1차 용리, 중간체 C)(120 mg, 19.0% 수율) 및 황색 오일로서 (R)-N-((R)-1-(4-브로모티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2차 용리, 중간체 D)(150 mg, 483 μmol, 23.7% 수율)를 제공하였다.
중간체 C: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.15 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.81 - 4.75 (m, 1H), 3.51 (br d, J = 3.2 Hz, 1H), 1.59 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.24 (s, 9H).
중간체 D: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.14 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 4.81 - 4.74 (m, 1H), 3.39 (br d, J = 5.6 Hz, 1H), 1.65 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.25 (s, 9H).
중간체 E
Figure pct00031
단계 A: 디옥산(1.00 mL) 및 물(0.20 mL) 중 (R)-N-((R)-1-(4-브로모티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(150 mg, 483 μmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 메틸(2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)카르바메이트(168 mg, 483 μmol, 1.00 당량)의 용액에 질소 분위기 하에 Pd(PPh3)4(55.9 mg, 48.3 μmol, 0.10 당량) 및 탄산세슘(473 mg, 1.45 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 25℃로 하고 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 tert-부틸(2-(5-((R)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(120 mg, 266 μmol, 55.1% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] = 451.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 - 7.29 (m, 3H), 7.25 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.95 (br s, 1H), 4.88 - 4.81 (m, 1H), 4.48 (br d, J = 16.0 Hz, 2H), 3.44 (br d, J = 6.0 Hz, 1H), 2.73 (br d, J = 12.8 Hz, 3H), 1.71 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.27 (s, 9H), 1.25 (s, 9H).
단계 B: THF(1.00 mL) 및 물(0.20 mL) 중 tert-부틸 (2-(5-((R)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(120 mg, 266 μmol, 1.00 당량)의 용액에 요오드(20.3 mg, 79.9 μmol, 16.1 μL, 0.30 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 포화 아황산나트륨 수용액(2.00 mL)에 붓고 5분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(3.00 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(3.00 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75 x 30 mm x 3 um; 이동 상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 28% - 38%)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(40.0 mg, 113 μmol, 42.3% 수율, 97.5% 순도)를 백색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.41 - 7.23 (m, 6H), 4.84 - 4.79 (m, 1H), 4.48 (s, 2H), 2.73 (s, 3H), 1.76 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.51 - 1.36 (m, 9H).
중간체 F
Figure pct00032
단계 A: 디옥산(1.00 mL) 및 물(0.20 mL) 중 (R)-N-((S)-1-(4-브로모티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(100 mg, 322 μmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 메틸(2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)카르바메이트(112 mg, 322 μmol, 1.00 당량)의 용액에 질소 분위기 하에 Pd(PPh3)4(37.2 mg, 32.2 μmol, 0.10 당량) 및 탄산세슘(315 mg, 967 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각하고 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 tert-부틸(2-(5-((S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(100 mg, 266 μmol, 68.9% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] = 451.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 - 7.28 (m, 3H), 7.26 - 7.22 (m, 1H), 7.07 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.03 (br s, 1H), 4.90 - 4.83 (m, 1H), 4.55 - 4.41 (m, 2H), 3.71 - 3.55 (m, 1H), 2.80 - 2.65 (m, 3H), 1.64 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.52 - 1.41 (m, 9H), 1.26 (s, 9H).
단계 B: THF(1.00 mL) 및 물(0.20 mL) 중 tert-부틸 (2-(5-((S)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(100 mg, 266 μmol, 1.00 당량)의 용액에 요오드(16.9 mg, 66.6 μmol, 13.4 μL, 0.30 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각하고, 포화 아황산나트륨 수용액(2.00 mL)에 붓고, 5분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(3.00 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(3.00 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex Luna C18 150 × 25 mm × 10 um; 이동 상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 24%-54%)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-(2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(45.0 mg, 97.7 μmol, 44.0% 수율, TFA 염)를 백색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] = 347.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.40 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.38 - 7.22 (m, 5H), 4.82 - 4.80 (br s, 1H), 4.48 (s, 2H), 2.73 (s, 3H), 1.75 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.50 - 1.35 (m, 9H).
중간체 G
Figure pct00033
단계 A: THF(5.00 mL) 중 2-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드(300 mg, 1.59 mmol, 1.00 당량) 및 2-메틸프로판-2-설핀아미드(213 mg, 1.75 mmol, 1.10 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(727 mg, 3.19 mmol, 661 μL, 2.00 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물(2.00 mL)에 붓고 5분 동안 교반하여 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 여과하고 진공에서 농축하여 2-메틸-N-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤질리덴)프로판-2-설핀아미드(360 mg, 1.24 mmol, 77.5% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.98 (s, 1H), 8.13 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.70 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 1.29 (s, 9H).
단계 B: THF(5.00 mL) 중 2-메틸-N-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤질리덴)프로판-2-설핀아미드(185 mg, 635 μmol, 1.00 당량)의 용액에 메틸 마그네슘 브로마이드(227 mg, 3.00 M, 635 μL, 3.00 당량)를 질소 분위기 하에 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 포화 염화암모늄 용액(10.0 mL)으로 천천히 처리하였다. 유기 층과 수 상을 분리하고, 수 상을 에틸 아세테이트(5.00 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(10.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 2-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프로판-2-설핀아미드(150 mg, 488.0 μmol, 76.8% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.65 - 7.54 (m, 4H), 7.35 - 7.28 (m, 2H), 5.00 - 4.87 (m, 2H), 2.49 (s, 6H), 1.54 - 1.50 (m, 6H), 1.26 - 1.24 (m, 9H), 1.22 (s, 9H).
단계 C: HCl(디옥산 중 4.0 M, 1.00 mL) 중 2-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프로판-2-설핀아미드(150 mg, 488.0 μmol, 1.00 당량)의 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 진공에서 농축하여 1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(45.0 mg, 38.5% 수율)을 적색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] = 204.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.78 - 7.65 (m, 2H), 7.56 - 7.48 (m, 1H), 4.93 - 4.89 (m, 1H), 2.52 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 1.63 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
중간체 H
Figure pct00034
단계 A: THF(80.0 mL) 중 1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(8.00 g, 39.6 mmol, 1.00 당량) 및 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(5.28 g, 43.5 mmol, 1.10 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(18.1 g, 79.1 mmol, 16.4 mL, 2.00 당량)를 첨가했다. 반응 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 25℃에서 냉각시키고 얼음물(w/w = 1/1)(80.0 mL)에 붓고 15분 동안 교반하여 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(50.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(30.0 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트= 20/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 (S)-2-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)프로판-2-설핀아미드(8.00 g, 26.2 mmol, 66.2% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 306.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.74 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.46 (br t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.54 (J = 6.8 Hz, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.40 (br d, J = 16.0 Hz, 3H), 1.31 (s, 9H), 1.24 (br d, J = 12.4 Hz, 9H).
단계 B: THF(80.0 mL) 중 (S)-2-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)프로판-2-설핀아미드(8.00 g, 26.2 mmol, 1.00 당량)의 용액에 -78℃에서 L-셀렉트라이드(7.47 g, 39.3 mmol, 8.59 mL, 1.50 당량)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반했다. 물을 0℃에서 반응 혼합물(10.0 mL)에 적가하고 생성된 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(30.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(30.0 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 (S)-2-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프로판-2-설핀아미드(3.50 g, 11.4 mmol, 43.5% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 308.0.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J =7.6 Hz, 1H), 7.39 - 7.33 (m, 1H), 4.94 - 4.88 (m, 1H), 2.48 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 1.54 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.20 (s, 9H).
단계 C: HCl(디옥산 중 4 M, 15.0 mL) 중 S)-2-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프로판-2-설핀아미드(1.30 g, 4.23 mmol, 1.00 당량)의 용액을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 진공에서 건조하여 (R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(700 mg, 2.89 mmol, 68.4% 수율, 99.1% 순도, 염산염)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+H]: 204.0.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.73 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 4.92 - 4.88 (m, 1H), 2.52 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 1.62 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
중간체 I
Figure pct00035
단계 A: THF(120 mL) 중 1-(5-브로모티오펜-2-일)에탄-1-온(11.0 g, 53.6 mmol, 1.00 당량)의 용액에 2-메틸프로판-2-설핀아미드(8.45 g, 69.7 mmol, 1.30 당량) 및 티타늄(IV) 에톡시드(24.5 g, 107 mmol, 22.3 mL, 2.00 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 75℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하고, 잔류물을 물(200 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하고, 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(300 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 N-(1-(5-브로모티오펜-2-일)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(16.0 g, 미정제)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 308.0.
단계 B: THF(150 mL) 중 N-(1-(5-브로모티오펜-2-일)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(16.0 g, 51.9 mmol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 수소화붕소나트륨(3.93 g, 104 mmol, 2.00 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 수용액(20.0 mL)을 반응 혼합물에 적가한 다음, 혼합물을 물(200 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 2/1)에 의해 정제하여 N-(1-(5-브로모티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(12.0 g, 38.7 mmol, 74.5% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 309.9.
중간체 J
Figure pct00036
단계 A: THF(120 mL) 중 1-(5-브로모티오펜-2-일)에탄-1-온(10.0 g, 48.8 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(7.68 g, 63.4 mmol, 1.30 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(22.3 g, 97.5 mmol, 20.2 mL, 2.00 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고, 물(200 mL) 및 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석하여 현탁액을 제공하고, 현탁액을 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 (R, E)-N-(1-(5-브로모티오펜-2-일)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(13.0 g, 미정제)를 갈색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 308.2.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.23 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.67 (s, 3H), 1.28 (s, 9H).
단계 B: THF(150 mL) 중 (R, E)-N-(1-(5-브로모티오펜-2-일)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(13.0 g, 42.2 mmol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 수소화붕소나트륨(4.79 g, 127 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 포화 탄산수소나트륨 수용액(20.0 mL)을 혼합물에 적가하고 물(200 mL)로 희석하고, 생성된 수용액을 에틸 아세테이트(100 mL X 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 2/1)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-1-(5-브로모티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(6.00 g, 17.4 mmol, 41.3% 수율, 90.0% 순도)를 갈색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 309.9.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.90 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.84 - 4.66 (m, 1H), 3.50 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 1.57 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.23 (s, 9H).
단계 C: 디옥산(20.0 mL) 및 물(2.00 mL) 중 (R)-N-((R)-1-(5-브로모티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.00 g, 6.45 mmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 메틸(2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)카르바메이트(2.69 g, 7.74 mmol, 1.20 당량)의 용액에 탄산세슘(6.30 g, 19.3 mmol, 3.00 당량) 및 Pd(PPh3)4(745 mg, 645 μmol, 0.10 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 그 다음, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(100 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL× 3)로 추출했다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 tert-부틸(2-(5-((R)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(2.60 g, 5.19 mmol, 80.6% 수율, 90.0% 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 451.4.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.31 - 7.27 (m, 1H), 7.26 - 7.22 (m, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 4.95 - 4.79 (m, 1H), 4.67 - 4.44 (m, 2H), 3.56 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 2.93 - 2.56 (m, 3H), 1.64 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.56 - 1.36 (m, 9H), 1.26 (s, 9H).
단계 D: THF(20.0 mL) 및 물(4.00 mL) 중 tert-부틸 (2-(5-((R)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(2.60 g, 5.77 mmol, 1.00 당량)의 용액에 요오드(439 mg, 1.73 mmol, 349 μL, 0.30 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨(50.0 mL)으로 희석하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출했다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 0/1)에 의해 정제하여 (R)- tert-부틸(R)-(2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(1.50 g, 3.68 mmol, 63.8% 수율, 85.0% 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [2M+1]: 693.3.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.30 - 7.20 (m, 2H), 7.01 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.61 - 4.48 (m, 3H), 4.04 (s, 2H), 2.73 (s, 3H), 1.64 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.57 - 1.33 (m, 9H).
중간체 K
Figure pct00037
단계 A: 디옥산(5.00 mL) 및 물(0.50 mL) 중 N-(1-(5-브로모티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(0.50 g, 1.61 mmol, 1.00 당량) 및 N,N-디메틸-1-(2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)메탄아민(505 mg, 1.93 mmol, 1.20 당량)의 용액에 탄산세슘(1.58 g, 4.83 mmol, 3.00 당량) 및 Pd(PPh3)4(186 mg, 161 μmol, 0.10 당량)을 첨가한 다음, 탈기하고 질소로 3회 퍼징했다. 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(50.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출했다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 0/1)에 의해 정제하여 N-(1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(450 mg, 1.15 mmol, 71.3% 수율, 93.0% 순도)를 갈색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 365.2.
단계 B: THF(4.00 mL) 중 N-(1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(410 mg, 1.12 mmol, 1.00 당량)의 용액에 염산(3.00 M, 375 μL, 1.00 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 완료 시, 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨(50.0 mL)으로 희석하고 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 디클로로메탄/메탄올 = 10/1)에 의해 정제하여 1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에탄아민(200 mg, 691 μmol, 61.5% 수율, 90.0% 순도)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.48 - 7.42 (m, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 2H), 7.13 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.96 - 6.92 (m, 1H), 4.29 - 4.21 (m, 1H), 3.39 (s, 2H), 2.14 (s, 6H), 1.38 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
중간체 L
Figure pct00038
단계 A: 사염화탄소(10.0 mL) 중 6-클로로푸로[3,4-c]피리딘-1(3H)-온(1.50 g, 8.85 mmol, 1.00 당량)의 용액에 AIBN(145 mg, 884 μmol, 0.10 당량) 및 NBS(1.42 g, 7.96 mmol, 0.9 당량)을 첨가했다. 반응 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응물을 여과하고 여액을 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 3-브로모-6-클로로푸로[3,4-c]피리딘-1(3H)-온(1.20 g, 4.83 mmol, 54.6% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+3]: 249.8.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.84 - 8.80 (m, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.47 (s, 1H).
단계 B: 에탄올(20.0 mL) 중 3-브로모-6-클로로푸로[3,4-c]피리딘-1(3H)-온(1.20 g, 4.83 mmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(370 mg, 7.24 mmol, 359 μL, 1.50 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 30분 동안 교반했다. 반응물을 25℃로 냉각시키고, 얼음물(1.00 mL)에 부어 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 수집하고 진공 하에 건조하여 7-클로로피리도[3,4-d]피리다진-1-올(800 mg, 4.41 mmol, 91.2% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 182.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 13.08 (br s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.10 (s, 1H).
단계 C: 아세토니트릴(2.00 mL) 중 7-클로로피리도[3,4-d]피리다진-1-올(78.0 mg, 430 μmol, 1.00 당량)의 용액에 인(V) 옥시클로라이드(231 mg, 1.50 mmol, 139 μL, 3.50 당량)를 25℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 25℃에서 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2.00 mL)에 붓고, 0℃에서 5분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(3.00 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(2.00 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 1,7-디클로로피리도[3,4-d]피리다진(65.0 mg, 미정제)를 적색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 199.8.
중간체 M
Figure pct00039
단계 A: 아세트산(50.0 mL) 중 메틸 3,4-디메톡시벤조에이트(10.0 g, 51.0 mmol, 1.00 당량)의 혼합물에 아세트산(50.0 mL) 중 브롬(8.96 g, 56.1 mmol, 2.89 mL, 1.10 당량)을 0℃에서 1.5시간에 걸쳐 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 서서히 실온으로 되게 하고 45분 동안 교반하였다. 완료 시, 물(700 mL)에 부어 반응물을 켄칭하고 30분 동안 교반한 다음, 교반을 중지하고 1시간의 정치 후 혼합물을 여과하였다. 수집된 고체를 물(100 mL)로 세척하고 아황산나트륨 수용액(100 mL)으로 세척하였다. 고체를 부분적으로 건조시키고, 뜨거운 메탄올(300 mL)에 용해시키고, 생성된 용액을 냉각시켰다. 차가운 메탄올 용액을 물(200 mL)로 처리하여 현탁액을 제공하고, 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 수집하고 진공에서 건조하여 메틸 2-브로모-4,5-디메톡시벤조에이트(9.00 g, 32.7 mmol, 64.2% 수율)를 백색 분말로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 275.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.36 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.79 (s, 3H).
단계 B: 아세토니트릴(60.0 mL) 중 메틸 2-브로모-4,5-디메톡시-벤조에이트(6.00 g, 21.8 mmol, 1.00 당량), 1-(비닐옥시)부탄(10.9 g, 109 mmol, 14.0 mL, 5.00 당량), Pd(OAc)2(490 mg, 2.18 mmol, 0.10 당량), 트리페닐포스핀(1.14 g, 4.36 mmol, 0.20 당량) 및 트리에틸아민(2.65 g, 26.2 mmol, 3.64 mL, 1.20 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 메틸 메틸 2-(1-부톡시비닐)-4,5-디메톡시벤조에이트(6.00 g, 미정제)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 C: 염산(물 중 10%, 61.2 g, 168 mmol, 60.0 mL, 8.23 당량) 및 THF(60.0 mL) 중 메틸 2-(1-부톡시비닐)-4,5-디메톡시벤조에이트(6.00 g, 20.4 mmol, 1.00 당량)의 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출했다. 합한 유기 층을 포화 중탄산나트륨 수용액으로 pH = 7이 되게 한 다음, 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 20℃에서 20분 동안 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1(50.0 mL)로 분쇄하여 현탁액을 제공하고, 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 수집하고 진공에서 건조하여 메틸 2-아세틸-4,5-디메톡시벤조에이트(3.00 g, 12.6 mmol, 61.8% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.26 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 2.46 (s, 3H).
단계 D: 에탄올(30.0 mL) 중 메틸 2-아세틸-4,5-디메톡시벤조에이트(3.00 g, 12.6 mmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(2.22 g, 37.8 mmol, 2.16 mL, 3.00 당량)을 실온에서 첨가한 다음, 반응 혼합물을 95℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트로 여러 번 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 20℃에서 20분 동안 에틸 아세테이트(50.0 mL)로 분쇄하여 현탁액을 제공하고, 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 수집하고 진공에서 건조하여 6,7-디메톡시-4-메틸프탈라진-1(2H)-온(2.00 g, 9.08 mmol, 72.1% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 221.4.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.25 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 2.48 (s, 3H).
단계 E: 인(V) 옥시클로라이드(13.0 mL) 중 6,7-디메톡시-4-메틸프탈라진-1(2H)-온(1.30 g, 5.90 mmol, 1.00 당량)의 혼합물을 120℃에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 1-클로로-6,7-디메톡시-4-메틸프탈라진(1.20 g, 미정제)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 239.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.80 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 4.13 (s, 3H), 4.12 (s, 3H), 3.08 (s, 3H).
중간체 N
Figure pct00040
단계 A: 테트라하이드로푸란(10.0 mL) 중 1-(3-(디플루오로메틸)-2-메틸페닐)에탄-1-온(0.37 g, 1.99 mmol, 1.00 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(2.27 g, 9.95 mmol, 2.06 mL, 5.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(724 mg, 5.97 mmol, 3.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 75℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 25℃에서 포화 수성 중탄산나트륨 20.0 mL를 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트 45.0 mL(15.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 20.0 mL(20.0 mL x 1)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피(0~12% 에틸 아세테이트/석유 에테르)에 의해 정제하여 (R,E)-N-(1-(3-(디플루오로메틸)-2-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(0.36 g, 1.19 mmol, 59.8% 수율, 95.0% 순도)를 무색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.55 - 7.62 (m, 1H), 7.16 - 7.51 (m, 2H), 6.79 - 7.13 (m, 1H), 2.48 - 2.73 (m, 3H), 2.27 - 2.47 (m, 3H), 1.19 - 1.30 (m, 9H).
단계 B: 테트라하이드로푸란(5.00 mL) 중 (R,E)-N-(1-(3-(디플루오로메틸)-2-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(340 mg, 1.18 mmol, 1.00 당량)의 용액에 수소화붕소나트륨(89.5 mg, 2.37 mmol, 2.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 25℃에서 물 10.0 mL를 첨가하여 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 30.0 mL(10.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(10.0 mL x 1)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피(0~13% 에틸 아세테이트/석유 에테르)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-1-(3-(디플루오로메틸)-2-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(190 mg, 643 μmol, 54.4% 수율, 98.0% 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] + = 290.1.
단계 C: 디옥산 하이드로클로라이드(4.00 M, 7.00 mL, 57.9 당량) 중 (R)-N-((R)-1-(3-(디플루오로메틸)-2-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(140 mg, 484 μmol, 1.00 당량)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 미정제 생성물 (R)-1-(3-(디플루오로메틸)-2-메틸페닐)에탄-1-아민(110 mg, 475 μmol, 98.2% 수율, 80.0% 순도)을 백색 고체로서 제공하였으며, 이는 추가 정제 없이 사용되었다. LCMS [M+1] + = 186.0.
중간체 O
Figure pct00041
단계 A: DMF(1000 mL) 중 3-브로모-2-메틸벤조산(100 g, 465 mmol, 1.00 당량) 및 N,O-디메틸하이드록실아민 염산염(68.6 g, 512 mmol, 1.10 당량, HCl)의 용액에 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(195 g, 512 mmol, 1.10 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(180 g, 1.40 mol, 243 mL, 3.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 물(1000 mL)에 붓고 15분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(1000 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(1000 mL x 5)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 3 3-브로모-N'-메톡시-N,2-디메틸벤즈아미드(120 g, 미정제)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 258.0.
단계 B: THF(100 mL) 중 33-브로모-N-메톡시-N,2-디메틸벤즈아미드(120 g, 465 mmol, 1.00 당량)의 용액에 메틸 마그네슘 브로마이드(3.0 M, 180 mL, 1.16 당량)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0 내지 40℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 0℃로 냉각시키고 염산(6.0 N)(450 mL)을 적가하고, 40 내지 45℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 25℃로 냉각시키고 포화 염화암모늄 용액(9000 mL)에 부었다. 수성 상을 에틸 아세테이트(1500 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(1000 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 1-(3-브로모-2-메틸페닐)에탄-1-온(90.0 g, 422 mmol, 90.9% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.70 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.62 (dd, J = 0.8, 7.6 Hz, 1H), 7.19 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.46 (s, 3H).
단계 C: THF(100 mL) 중 1-(3-브로모-2-메틸페닐)에탄-1-온(88.0 g, 413 mmol, 1.00 당량) 및 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(60.1 g, 496 mmol, 1.20 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(471 g, 2.07 mol, 428 mL, 5.00 당량) 및 디글라임(55.4 g, 413 mmol, 59.1 mL, 1.00 당량)을 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 물(300 mL)에 붓고 15분 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 여과하고 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 40/1)에 의해 정제하여 (S)-N-(1-(3-브로모-2-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(110 g, 348 mmol, 84.2% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.63 (br t, J = 6.8 Hz, 2H), 7.28 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.14 - 7.02 (m, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.50 (br d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.31 (br d, J = 17.2 Hz, 3H), 1.31 - 1.26 (m, 9H), 1.24 - 1.16 (m, 9H)
단계 D: THF(1100 mL) 중 (S)-N-(1-(3-브로모-2-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(109 g, 345 mmol, 1.00 당량)의 용액에 -78℃에서 L-셀렉트라이드(1.0 M, 689 mL, 2.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 염화암모늄의 포화 수용액(1000 mL)에 붓고, 25℃에서 60분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(1000 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(500 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 2/1)에 의해 정제하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 석유 에테르로 추가 세척하여 (S)-N-((R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(70.0 g, 220 mmol, 63.8% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 318.1.
단계 E: HCl/디옥산 용액(300 mL) 및 MeOH(300 mL) 중 (S)-N-((R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(71.0 g, 223 mmol, 1.00 당량)의 용액을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하여 (R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)에탄-1-아민(55.0 g, 미정제, HCl)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 214.1.
단계 F: 디클로로메탄(500 mL) 중 (R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)에탄-1-아민(55.0 g, 220 mmol, 1.00 당량, HCl) 및 Boc2O(48.4 g, 222 mmol, 50.9 mL, 1.01 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(56.7 g, 439 mmol, 76.5 mL, 2.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 0 내지 25℃에서 30분 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 100/1)에 의해 정제하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 석유 에테르로 추가 세척하여 tert-부틸 (R)-(1-(3-브로모-2-메틸페닐)에틸)카르바메이트(51.0 g, 162 mmol, 73.9% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M-55] +: 258.0.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.43 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 4.93 (br d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H), 1.41 (br s, 9H), 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 G: DMF(540 mL) 중 tert-부틸 (R)-(1-(3-브로모-2-메틸페닐)에틸)카르바메이트(51.0 g, 162 mmol, 1.00 당량)의 용액에 시안화아연(22.9 g, 195 mmol, 12.4 mL, 1.20 당량) 및 Pd(PPh3)4(18.8 g, 16.2 mmol, 0.10 당량)를 첨가했다. 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시키고 물(500 mL)에 부었다. 수성 상을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(1000 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 5/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(1-(3-시아노-2-메틸페닐)에틸)카르바메이트(37.0 g, 142.1 mmol, 87.6% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M-55] +: 205.0.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.63 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.39 - 7.30 (m, 1H), 4.93 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.58 (s, 3H), 1.40 (br s, 9H), 1.34 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 H: 디클로로메탄(400 mL) 중 tert-부틸 (R)-(1-(3-시아노-2-메틸페닐)에틸)카르바메이트(49.0 g, 188 mmol, 1.00 당량)의 용액에 TFA(133 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 포화 중탄산나트륨 용액(200 mL)에 붓고, 추가로 30분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(1000 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(200 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 (R)-3-(1-아미노에틸)-2-메틸벤조니트릴(26.0 g, 162 mmol, 86.2% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M-16] +: 144.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.36 (br s, 2H), 7.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 0.8, 7.6 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.68 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 1.48 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
SFC 조건: 컬럼: Chiralpak IC-3 50 x 4.6 mm I.D., 3 μm 이동 상: CO2의 경우 상 A, MeOH(0.05% DEA)의 경우 상 B; 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% DEA) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar.
중간체 P
Figure pct00042
DMSO(130 mL) 중 (R)-3-(1-아미노에틸)-2-메틸벤조니트릴(16.0 g, 99.9 mmol, 1.00 당량) 및 1,7-디클로로-4-메틸피리도[3,4-]피리다진(21.4 g, 99.9 mmol, 1.00 당량)의 용액에 세슘 플루오라이드(22.8 g, 150 mmol, 5.52 mL, 1.50 당량)를 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(200 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(100 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Kromasil Eternity XT 250 x 80 mm x 10 um; 이동 상: 상 A: 물(0.1% TFA), 상 B: 아세토니트릴; B%: 25%-55%]에 의해 정제하였다. 합한 분획을 합하고 수성 중탄산나트륨을 사용하여 pH를 pH = 8로 조정하였다. 현탁액을 에틸 아세테이트(1000 mL × 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(100 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 (R)-3-(1-((7-클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(14.5 g, 42.9 mmol, 43.0% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.19 (d, J = 0.4 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.72 (quin, J = 6.8 Hz, 1H), 5.40 (br d, J = 6.0 Hz, 1H), 2.86 (s, 3H), 2.69 (s, 3H), 1.63 (s, 3H).
중간체 Q
Figure pct00043
DMSO(30.0 mL) 중 (R)-3-(1-아미노에틸)-2-메틸벤조니트릴(5.32 g, 19.4 mmol, 1.00 당량, TFA) 및 6-브로모-4-클로로-1-메틸프탈라진(5.00 g, 19.4 mmol, 1.00 당량)의 용액에 세슘 플루오라이드(5.90 g, 38.8 mmol, 1.43 mL, 2.00 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(5.02 g, 38.8 mmol, 6.76 mL, 2.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(10.0 mL)로 희석하고, 수성 상을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(100 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 2/1)에 의해 정제하여 (R)-3-(1-((7-브로모-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(5.20 g, 13.6 mmol, 70.2% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 381.1.
중간체 R
Figure pct00044
단계 A: THF(90.0 mL) 중 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(5.12 g, 42.2 mmol, 1.00 당량), 1-(3-브로모-2-메틸페닐)에탄-1-온(9.00 g, 42.2 mmol, 1.00 당량), 티타늄(IV) 이소프로폭시드(60.0 g, 211 mmol, 62.3 mL, 5.00 당량)의 혼합물dmf 탈기하고 질소로 3회 퍼징하고, 80℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(100 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(300 mL)와 물(300 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 5/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-브로모-2-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2 -설핀아미드(7.23 g, 22.8 mmol, 54.1% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+3] +: 318.0.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.67 - 7.58 (m, 2H), 7.28 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.14 - 7.01 (m, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.50 (br d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.31 (br d, J = 17.2 Hz, 3H), 1.28 (s, 9H), 1.21 (br d, J = 11.2 Hz, 9H). (E/Z 이성질체의 비는 ~1/1이었다).
단계 B: THF(5.00 mL) 중 (R)-N-(1-(3-브로모-2-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(400 mg, 1.26 mmol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 수소화붕소나트륨(239 mg, 6.32 mmol, 5.00 당량)을 조금씩 첨가한 다음, 반응물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(30.0 mL)에 붓고 5분 동안 교반하였다. 생성된 수성 상을 에틸 아세테이트(150 mL × 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(150 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(200 mg, 628 μmol, 49.7% 수율)를 갈색 오일로서 제공하였다.
단계 C: 디메틸 설폭시드(3.00 mL) 중 (R)-N-((R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(250 mg, 786 μmol, 1.00 당량), 나트륨 메탄설페이트(176 mg, 1.73 mmol, 2.20 당량), 탄산칼륨(326 mg, 2.36 mmol, 3.00 당량) 및 L-프롤린(18.1 mg, 157 μmol, 0.20 당량)의 혼합물에 20℃에서 요오드화구리(I)(15.0 mg, 78.6 μmol, 0.10 당량)를 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 130℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물에 물(15.0 mL)을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(30.0 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(실리카 겔 플레이트, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 (R)-2-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(메틸설포닐)페닐)에틸)프로판-2-설핀아미드(120 mg, 378 μmol, 48.1% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 318.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.85 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 8.0 Hz, 1 H), 5.42-5.50 (m, 1H), 4.71-4.80 (m, 1H), 3.22 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 1.46 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 1.09 (s, 9H).
단계 D: 염산(디옥산 중 4.0 M, 2.00 mL, 21.2 당량) 중 (R)-2-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(메틸설포닐)페닐)에틸)프로판-2-설핀아미드(120 mg, 378 μmol, 1.00 당량)의 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하여 (R)-1-(2-메틸-3-(메틸설포닐)페닐)에탄-1-아민(91.0 mg, 미정제, HCl)을 백색 고체로서 제공하였다.
중간체 S
Figure pct00045
단계 A: THF(1.00 L) 중 메틸 아민 용액(100 g, 1.48 mol, 3.01 당량 HCl 염)의 용액에 N, N-디이소프로필에틸아민(237 g, 1.84 mol, 3.73 당량), 2-브로모-6-플루오로벤즈알데히드(100 g, 493 mmol, 1.00 당량), 아세트산(9.00 g, 150 mmol, 0.30 당량) 및 시아노수소화붕소나트륨(62.0 g, 987 mmol, 2.00 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 물(500 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(1.00 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(500 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 1-(2-브로모-6-플루오로페닐)-N-메틸메탄아민(120 g, 484 mmol, 88% 순도)을 회백색 고체로서 제공하였으며, 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다. LCMS [M+1]+: 218.0.
단계 B: THF(1.00 L) 중 1-(2-브로모-6-플루오로페닐)-N-메틸메탄아민(120 g, 484 mmol, 88% 순도, 1.00 당량)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트(211 g, 968 mmol, 2.00 당량)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 100/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 N-[(2-브로모-6-플루오로-페닐)메틸]-N-메틸-카르바메이트(70.0 g, 220 mmol)를 갈색 오일로서 제공하였다. LCMS [M-55]+: 261.9
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.49 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 - 7.26 (m, 2H), 4.57 (s, 2H), 2.64 (s, 3H), 1.38 (s, 9H).
단계 C: 디옥산(600 mL) 중 tert-부틸(2-브로모-6-플루오로벤질)(메틸)카르바메이트(60.0 g, 189 mmol, 1.00 당량) 및 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란)(60.0 g, 236 mmol, 1.25 당량)의 용액에 Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(15.0 g, 18.4 mmol, 0.10 당량) 및 칼륨 아세테이트(72.0 g, 734 mmol, 3.89 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 탈기(3회)시키고 질소 분위기 하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각하고 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 100/1)에 의해 정제하여 tert-부틸(2-플루오로-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(80.0 g, 160 mmol, 73% 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M-55]+: 266.1.
단계 D: 디옥산(500 mL) 및 물(100 mL) 중 tert-부틸 (2-플루오로-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(80.0 g, 160 mmol, 73% 순도, 1.00 당량) 및 (R)-N-[(1R)-1-(5-브로모-2-티에닐)에틸]-2-메틸-프로판-2-설핀아미드(56.0 g, 180 mmol, 1.13 당량)의 용액에 탄산세슘(150 g, 460 mmol, 2.88 당량) 및 Pd(PPh3)4(20.0 g, 17.3 mmol, 0.10 당량)를 질소 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(500 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(1.00 L × 2)로 추출하고, 유기 상을 염수(200 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 0/1 내지 5/1)에 의해 정제하여 tert-부틸(2-(5-((R)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)티오펜-2-일)-6- 플루오로벤질)(메틸)카르바메이트(84.0 g, 152 mmol, 85% 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M-100]+: 369.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.44 - 7.36 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 7.08 (br d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.88 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.65 (quin, J = 6.4 Hz, 1H), 4.56 (s, 2H), 2.48 (s, 3H), 1.55 (br d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.33 (br s, 9H), 1.13 (s, 9H).
단계 E: THF(240 mL) 및 물(48.0 mL) 중 tert-부틸 (2-(5-((R)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)티오펜-2-일)-6-플루오로벤질)(메틸)카르바메이트(80.0 g, 145 mmol, 85% 순도, 1.00 당량)의 용액에 요오드(6.80 g, 26.8 mmol, 0.19 당량)를 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 2시간 동안 가열한 다음, 물(500 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(500 mL × 2)로 추출하였다. 유기 상을 염수(200 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 300/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-2-일)-6-플루오로벤질)(메틸)카르바메이트(40.0 g, 110 mmol)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M-16]+: 348.1.
중간체 T
Figure pct00046
단계 A: 디옥산(50.0 mL) 중 1-(벤질옥시)-3-브로모-5-(트리플루오로메틸)벤젠(3.00 g, 9.06 mmol, 1.00 당량) 및 Pd(dppf)Cl2(663 mg, 906 μmol, 0.10 당량)의 혼합물에 트리부틸(1-에톡시비닐)주석(5.00 g, 13.8 mmol, 4.67 mL, 1.53 당량)을 20℃에서 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 이 혼합물에 포화 불화칼륨 용액(100 mL)을 첨가하고 용액을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(100 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 미정제 1-(벤질옥시)-3-(1-에톡시비닐)-5-(트리플루오로메틸)벤젠(2.90 g, 미정제)을 황색 오일로서 제공하였다. 이 미정제 오일은 다음 단계에서 추가 정제없이 사용되었다.
단계 B: 테트라하이드로푸란(30.0 mL) 중 1-(벤질옥시)-3-(1-에톡시비닐)-5-(트리플루오로메틸)벤젠(2.90 g, 9.00 mmol, 미정제, 1.00 당량)의 용액에 염산(THF 중 3.0 M, 10.0 mL, 3.33 당량)을 첨가하고, 용액을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(60.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(2.60 g, 8.84 mmol, 98.2% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.79 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.45 - 7.39 (m, 6H), 5.16 (s, 2H), 2.63 (s, 3H).
단계 C: 테트라하이드로푸란(40.0 mL) 중 1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(2.60 g, 8.84 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.39 g, 11.5 mmol, 1.30 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(5.02 g, 17.7 mmol, 5.22 mL, 2.00 당량)를 질소 분위기 하에 첨가하고, 용액을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.20 g, 5.03 mmol, 57.0% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.45 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 6H), 4.94 (s, 2H), 2.56 (s, 3H), 1.10 (s, 9H).
단계 D: 테트라하이드로푸란(30.0 mL) 중 (R)-N-(1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.20 g, 5.54 mmol, 1.00 당량)의 혼합물에 수소화붕소나트륨(270 mg, 7.14 mmol, 1.29 당량)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물에 포화 염화암모늄 수용액(80.0 mL)을 첨가하고 생성된 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트(80.0 mL × 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(80.0 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.20 g, 3.00 mmol, 54.3% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.53 - 7.32 (m, 5H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 5.12 (s, 2H), 4.62 - 4.53 (m, 1H), 3.43 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 1.53 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.25 (s, 9H).
단계 E: (R)-N-((R)-1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.20 g, 3.00 mmol, 1.00 당량)의 용액에 염산(디옥산 중 4.0 M, 751 μL, 1.00 당량)을 첨가하고, 용액을 20℃에서 20분 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하여 (R)-1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(1.20 g, 미정제, HCl)을 백색 고체로서 제공하였으며, 이는 추가 정제 없이 사용되었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.82 (s, 2H), 7.44 - 7.31 (m, 8H), 5.09 (s, 2H), 4.42 (s, 1H), 1.43 (s, 3H).
중간체 U
Figure pct00047
단계 A: 테트라하이드로푸란(20.0 mL) 중 3-아세틸-5-플루오로벤조니트릴(2.00 g, 12.3 mmol, 1.00 당량)의 용액에 티타늄 에톡시드(5.59 g, 24.5 mmol, 5.08 mL, 2.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.93 mg, 15.9 mmol, 1.30 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 질소 분위기 하에 70℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 물(20.0 mL)로 희석하고 여과하였다. 여액을 에틸 아세테이트(30.0 mL x 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R,E)-N-(1-(3-시아노-5-플루오로페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.01 g, 3.68 mmol, 30.0% 수율, 97.5% 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 267.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.93 (s, 1H), 7.82 - 7.79 (m, 1H), 7.45 - 7.52 (m, 1H), 2.79 (s, 3H), 1.35 (s, 9H).
단계 B: 테트라하이드로푸란(10.0 mL) 중 (R,E)-N-(1-(3-시아노-5-플루오로페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(900 mg, 3.38 mmol, 1.00 당량)의 용액에 수소화붕소나트륨(383 mg, 10.1 mmol, 3.00 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 20℃로 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃에서 포화 염화암모늄 수용액(20.0 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 0/1)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-1-(3-시아노-5-플루오로페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(711 mg, 2.52 mmol, 74.5% 수율, 95.3% 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 269.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.46 (t, J = 1.2 Hz, 1H), 7.46 - 7.33 (m, 1H), 7.31 - 7.29 (m, 1H), 4.60 - 4.55 (m, 1H), 3.47 (d, J = 3.6 Hz, 1 H), 1.54 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 1.25 (s, 9 H).
단계 C: 디옥산(3.00 mL) 중 (R)-N-((R)-1-(3-시아노-5-플루오로페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(711 mg, 2.65 mmol, 1.00 당량)의 용액에 에틸 아세테이트 중 염산(4.0 M, 9.94 mL, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액(10.0 mL)으로 중화하고, 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 (R)-3-(1-아미노에틸)-5-플루오로벤조니트릴(330 mg, 미정제)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.72 - 7.71 (m, 1 H), 7.67 - 7.66 (m, 1 H), 7.65 - 7.62 (m, 1 H), 4.59 (q, J = 6.8 Hz, 1 H), 1.65 (d, J = 6.8 Hz, 3 H).
중간체 V
Figure pct00048
단계 A: 1-브로모-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤젠(10.0 g, 41.8 mmol, 1.00 당량)을 빙냉된 농축 황산(100 mL)에 첨가한 다음, 질산칼륨(12.7 g, 125 mmol, 3.00 당량)을 0℃에서 천천히 첨가하고, 그 다음 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 얼음물(500 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(300 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(400 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 1/1)에 의해 정제하여 1-브로모-2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)벤젠(5.20 g, 16.9 mmol, 40.4% 수율)을 백색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.72 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.40 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 2.58 - 2.62 (m, 3H).
단계 B: 디옥산(60.0 mL) 중 1-브로모-2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)벤젠(5.20 g, 18.3 mmol, 1.00 당량), 트리부틸(1-에톡시비닐)주석(8.60 g, 23.8 mmol, 8.03 mL, 1.30 당량) 및 Pd(PPh3)2Cl2(385 mg, 549 μmol, 0.03 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 불화칼륨 용액(300 mL)으로 켄칭하고 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음 현탁액을 에틸 아세테이트(180 mL x 3)로 추출했다. 합한 유기 층을 염수(200 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 1-(1-에톡시비닐)-2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)벤젠(6.00 g, 미정제)을 흑색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.47 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.58 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.00 - 3.95 (m, 2H), 2.56 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 C: THF(80.0 mL) 중 1-(1-에톡시비닐)-2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)벤젠(6.00 g, 21.8 mmol, 1.00 당량) 및 염산(3.0 M, 20.7 mL, 2.85 당량)의 혼합물을 질소 분위기 하에 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(100 mL)을 첨가하여 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(60.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(70.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)에 의해 정제하여 1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(4.10 g, 16.5 mmol, 76.0% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ = 8.67 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 2.66 (s, 3H), 2.60 (s, 3H).
단계 D: THF(20.0 mL) 중 1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(2.00 g, 8.09 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.27 g, 10.5 mmol, 1.30 당량)의 용액에 Ti(OEt)4(3.69 g, 16.1 mmol, 3.36 mL, 2.00 당량)를 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(70.0 mL) 및 에틸 아세테이트(60.0 mL)로 희석하고, 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(50.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 5/1)에 의해 정제하여 (R,E)-2-메틸-N-(1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)프로판-2-설핀아미드(2.00 g, 5.71 mmol, 70.5% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.43 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 2.75 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 1.30 (m, 9H).
단계 E: THF(23.0 mL) 중 (R,E)-2-메틸-N-(1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)프로판-2-설핀아미드(2.00 g, 5.71 mmol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 수소화붕소나트륨(647 mg, 17.1 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하고, 포화 중탄산나트륨을 첨가한 다음, 물(100 mL)로 희석하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(60.0 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 0/1)에 의해 정제하여 (R)-2-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프로판-2-설핀아미드(700 mg, 1.75 mmol, 30.6% 수율)를 갈색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 353.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.67 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.83 - 4.79 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 1.43 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 1.11 (m, 9H).
단계 F: 테트라하이드로푸란(8.00 mL) 및 물(2.00 mL) 중(R)-2-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프로판-2-설핀아미드(700 mg, 1.99 mmol, 1.00 당량) 및 요오드(151 mg, 595 μmol, 120 μL, 0.30 당량)를 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 중탄산나트륨(50.0 mL)으로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(30.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(20.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 0/1)에 의해 정제하여 (R)-1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(250 mg, 1.01 mmol, 50.7% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.76 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.54 - 4.49 (m, 1H), 2.57 (s, 3H), 1.46 (d, J = 6.4 Hz, 1H).
중간체 W
Figure pct00049
단계 A: 테트라하이드로푸란(30.0 mL) 중 1-(3-클로로-2-메틸페닐)에탄-1-온(1.50 g, 8.90 mmol, 1.00 당량)의 용액에 티타늄 에톡시드(6.09 g, 26.7 mmol, 5.53 mL, 3.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.40 mg, 11.6 mmol, 1.30 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 10시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 20℃에서 중탄산나트륨(50.0 mL)으로 켄칭한 다음, 10분 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(20.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 (R,E)-N-(1-(3-클로로-2-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.40 g 미정제) 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 272.0.
단계 B: 테트라하이드로푸란(30.0 mL) 중 (R,E)-N-(1-(3-클로로-2-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.30 g, 8.46 mmol, 1.00 당량)의 용액에 -40℃에서 수소화붕소나트륨(850 mg, 22.5 mmol, 2.66 당량)을 첨가하고, 혼합물을 -40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 포화 염화암모늄 용액(50.0 mL)으로 켄칭한 다음, 10분 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-1-(3-클로로-2-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.50 g, 5.48 mmol, 64.7% 수율)를 무색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 274.1.
단계 C: 에틸 아세테이트(20.0 mL) 중 (R)-N-((R)-1-(3-클로로-2-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.10 g, 4.02 mmol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 에틸 아세테이트(4.0 M, 30.0 mL) 중 염산염을 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 (R)-1-(3-클로로-2-메틸페닐)에탄-1-아민(700 mg, 미정제)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS [M+1]+: 170.1.
중간체 X
Figure pct00050
단계 A: THF(7.00 mL) 중 1-(3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(500 mg, 2.47 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(689 mg, 5.69 mmol, 2.30 당량)의 용액에 Ti(OEt)4(1.30 g, 5.69 mmol, 1.18 mL, 2.30 당량)를 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(30.0 mL) 및 에틸 아세테이트(20.0 mL)로 희석하고, 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(3 × 20.0 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1)에 의해 정제하여 (R,E)-2-메틸-N-(1-(3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)프로판-2-설핀아미드(750 mg, 2.46 mmol, 99.3% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 306.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.99 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 2.76 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 1.22 (s, 9H).
단계 B: THF(15.0 mL) 중 (R,E)-2-메틸-N-(1-(3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)프로판-2-설핀아미드(650 mg, 2.13 mmol, 1.00 당량)의 용액에 -40℃에서 수소화붕소나트륨(253 mg, 6.69 mmol, 3.14 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 -40℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액에 첨가하고 물(50.0 mL)로 희석하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 × 50.0 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 2/1)에 의해 정제하여 (R)-2-메틸-N-((R)-1-(3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프로판-2-설핀아미드(320 mg, 1.04 mmol, 48.9% 수율)를 연한 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 308.1.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.52 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 4.56 -4.51 (m, 1H), 2.44 (s, 1H), 1.54 - 1.53 (d, 3H), 1.25 (s, 9H).
단계 C: 염산(에틸 아세테이트 중 4.0 M, 10.0 mL) 중 (R)-2-메틸-N-((R)-1-(3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프로판-2-설핀아미드(305 mg, 992 μmol, 1.00 당량)의 용액, 생성된 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 감압 하에 농축하여 (R)-1-(3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(200 mg, 미정제)을 연한 황색 고체로서 제공하였다. 미정제 물질을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [M+1]+: 204.0.
중간체 Y
Figure pct00051
단계 A: THF(350 mL) 중1-(4-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-온(35.6 g, 175 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(25.4 g, 209 mmol, 1.20 당량)의 용액에 티타늄(IV) 이소프로폭시드(149 g, 524 mmol, 155 mL, 3.00 당량) 및 1,2-디메톡시에탄(15.7 g, 175 mmol, 18.1 mL, 1.00 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하고, 그 후 물(50.0 mL)을 첨가하여 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(4-아미노-6-(트리플루오로에틸)피리딘-2-일)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(44.0 g, 143 mmol, 82.0% 수율)를 갈색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.45 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.56 (br s, 2H), 2.82 (s, 3H), 1.33 (s, 9H).
단계 B: THF(400 mL) 중 (R)-N-(1-(4-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(44.0 g, 143 mmol, 1.00 당량)의 용액에 수소화붕소나트륨(16.3 g, 430 mmol, 3.00 당량)을 0℃에서 조금씩 첨가한 다음, 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(200 mL)에 천천히 붓고 5분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(300 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(200 mL X 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-N-((R-1-(4-아미노-6- 트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(24.0 g, 76.2 mmol, 53.2% 수율, 98.2% 순도)를 갈색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.63 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.06 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.69 (s, 2H), 4.46 - 4.39 (m, 1H), 1.45 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.27 (s, 9H).
단계 C: HCl/디옥산(200 mL) 중 (R)-N-((R)-1-(4-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(23.5 g, 76.0 mmol, 1.00 당량)의 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(100 mL)로 세척한 다음, 필터 케이크를 수집하고 진공 하에 건조하여 (R)-2-(1-아미노에틸)-6-(트리플루오로메틸)피리딘-4-아민(염산염)을 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.43 (br s, 3H), 6.93 (br d, J = 2.0 Hz, 2H), 6.74 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 1.45 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
중간체 Z
Figure pct00052
단계 A: 테트라하이드로푸란(8.00 mL) 중 1-(2-메틸피리딘-3-일)에탄-1-온(800 mg, 5.92 mmol, 1.00 당량) 및 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(933 mg, 7.69 mmol, 1.30 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(2.70 g, 11.8 mmol, 2.45 mL, 2.00 당량) 및 1,2-디메톡시에탄(533 mg, 5.92 mmol, 615 μL, 1.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 25℃로 냉각한 후 혼합물을 감압 하에 농축하고 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (S)-2-메틸-N-(1-(2-메틸피리딘-3-일)에틸리덴)프로판-2-설핀아미드(1.25 g, 5.24 mmol, 88.6% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 239.2.
단계 B: 테트라하이드로푸란(7.00 mL) 중 (S)-2-메틸-N-(1-(2-메틸피리딘-3-일)에틸리덴)프로판-2-설핀아미드(1.25 g, 5.24 mmol, 1.00 당량)의 용액에 L-셀렉트라이드(THF 중 1.0 M, 7.87 mL, 1.50 당량)를 -78℃에서 30분에 걸쳐 적가한 다음, -78℃에서 추가 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 0℃에서 포화 염화암모늄 용액(물 중, 30.0 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 25℃에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 그 다음 용액을 에틸 아세테이트(50.0 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(30.0 mL ×2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 0/1)로 2회 정제하여 (S)-2-메틸-N-((R)-1-(2-메틸피리딘-3 -일)에틸)프로판-2-설핀아미드(600 mg, 2.50 mmol, 47.6% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 432.3.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.36 (dd, J =1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.64 (dd, J =1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.12 (dd, J =4.8, 7.6 Hz, 1H), 4.81 - 4.70 (m, 1H), 2.58 (s, 3H), 1.47 (d, J =6.8 Hz, 3H), 1.14 (s, 9H).
SFC 조건: 컬럼: Chiralpak AD-3 50 x 4.6 mm I.D., 3 um 이동 상: 상 A: CO2, 및 상 B: MeOH(0.05% 디에틸아민)의 경우; 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% 디에틸아민) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar.
단계 C: HClㆍ디옥산(3.00 mL) 중 (S)-2-메틸-N-((R)-1-(2-메틸피리딘-3-일)에틸)프로판-2-설핀아미드(600 mg, 2.50 mmol, 1.00 당량)의 혼합물을 질소 분위기 하에 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이 시간 후, 백색 침전물이 형성되었고, 현탁액을 여과하였다. 케이크를 수집하고 진공 하에 건조하고, 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 um; 이동 상: 상 A: 물(0.05% 수산화암모늄 v/v), 상 B: MeCN; B%: 3%-33%]에 의해 추가로 정제하여 (R)-1-(2-메틸피리딘-3-일)에탄-1-아민(370 mg, 2.23 mmol, 89.2% 수율, 82% 순도)을 무색 오일로서 제공하였다. LCMS [M-16]+: 120.3.
중간체 AA
Figure pct00053
단계 A: 1,4-디옥산(50.0 mL) 중 1-브로모-3-(디플루오로메틸)-2-플루오로벤젠(상업적으로 입수 가능, 4.50 g, 20.0 mmol, 1.00 당량)의 용액에 PdCl2(PPh3)2(1.40 g, 2.00 mmol, 0.10 당량) 및 트리부틸(1-에톡시비닐)주석(21.7 g, 60.0 mmol, 20.3 mL, 3.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)한 다음, 질소 분위기 하에 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 감압 하에 농축하고, 불화칼륨 수용액(2.0 M, 100 mL)을 잔류물에 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 1-(디플루오로메틸)-3-(1-에톡시비닐)-2-플루오로벤젠(7.50 g, 미정제)을 갈색 오일로서 제공하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 B: 테트라하이드로푸란(50.0 mL) 중 1-(디플루오로메틸)-3-(1-에톡시비닐)-2-플루오로벤젠(7.50 g, 34.7 mmol, 1.00 당량)의 용액에 염산 수용액(30.0 mL, 10% 순도)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 시간 후, 중탄산나트륨 수용액으로 혼합물의 pH를 ~pH 6-8로 조정하고 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 5/1)에 의해 정제하여 1-(3-(디플루오로메틸)-2-플루오로페닐)에탄-1-온(6.01 g, 31.3 mmol, 90.2% 수율, 98.0% 순도)을 무색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 189.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.02 - 7.97 (m, 1H), 7.80 - 7.76 (m, 1H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.94 (t, J = 14.8 Hz, 1H), 2.66 (d, J = 5.2 Hz, 3H).
단계 C: 2-메틸 테트라하이드로푸란(30.0 mL) 중 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.32 g, 19.1 mmol, 1.20 당량), 1-(3-(디플루오로메틸)-2-플루오로페닐)에탄-1-온(3.00 g, 16.0 mmol, 1.00 당량) 및 티타늄(IV) 에톡시드(7.27 g, 31.9 mmol, 6.60 mL, 2.00 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)한 다음, 질소 분위기 하에 75℃에서 4시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 냉각하고, 물(50.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(100 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (S)-N-(1-(3-(디플루오로메틸)-2-플루오로페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.80 g, 6.18 mmol, 38.8% 수율)를 제공하였다. LCMS [M+1]+: 292.2.
단계 D: 2-메틸 테트라하이드로푸란(30.0 mL) 중 (S)-N-(1-(3-(디플루오로메틸)-2-플루오로페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.80 g, 6.18 mmol, 1.00 당량)의 혼합물에 질소 분위기 하에 -78℃에서 L-셀렉트라이드(3.52 g, 18.5 mmol, 4.10 mL, 3.00 당량)를 첨가한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 -78℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이 시간 후, 추가 L-셀렉트라이드(1.76 g, 9.30 mmol, 2.00 mL, 1.50 당량)를 첨가하고 용액을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)하고 질소 분위기 하에 -78℃에서 9시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 물(30.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(30.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30.0 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (S)-N-((R)-1-(3-(디플루오로메틸)-2-플루오로페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.30 g, 4.34 mmol, 70.3% 수율, 98% 순도)를 무색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 294.2.
단계 E: (S)-N-((R)-1-(3-(디플루오로에틸)-2-플루오로페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.29 g, 4.43 mmol, 1.00 당량)의 용액에 염산(1,4-디옥산 중 4.00 M, 15.0 mL, 14.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 물(30.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(30.0 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(30.0 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 (R)-1-(3-(디플루오로메틸)-2-플루오로페닐)에탄-1-아민(480 mg, 2.13 mmol, 48.0% 수율, HCl 염)을 황색 오일로서 제공하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용했다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.52-7.47 (m, 2H), 7.24-7.19 (m, 1H), 6.88 (t, J = 14.8 Hz, 1H), 4.85-4.92 (m, 1H), 1.57 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 F: 디메틸 설폭시드(6.00 mL) 중 (R)-1-(3-(디플루오로메틸)-2-플루오로페닐)에탄-1-아민(300 mg, 1.59 mmol, 1.00 당량), 1,7-디클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진(339 mg, 1.59 mmol, 1.00 당량) 및 불화칼륨(461 mg, 7.93 mmol, 186 μL, 5.00 당량)을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 130℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(30.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30.0 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1) 및 prep-HPLC[컬럼: Phenomenex luna C18 150 × 25 mm × 10 um; 이동 상: 상 A: 물(0.225% 포름산), 상 B: 아세토니트릴; B%: 20%-50%]에 의해 정제하여 (R)-7-클로로-N-(1-(3-(디플루오로메틸)-2-플루오로페닐)에틸)-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(250 mg, 629 μmol, 39.7% 수율, 92.3% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 367.2.
중간체 AB
Figure pct00054
단계 A: DMF(50.0 mL) 중 3-브로모-5-플루오로-2-메틸벤조산(4.00 g, 17.2 mmol, 1.00 당량) 및 N,O-디메틸하이드록실아민(1.84 g, 18.9 mmol, 1.10 당량, HCl 염)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(6.66 g, 51.5 mmol, 8.97 mL, 3.00 당량) 및 HATU(7.83 g, 20.6 mmol, 1.20 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(50.0 mL)로 희석하고, 염수(30.0 mL x 3)로 세척하고, 합한 유기 상을 수집하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 2/1)에 의해 정제하여 3-브로모-5-플루오로-N-에톡시-N,2-디메틸벤즈아미드(4.70 g, 17.0 mmol, 99.2% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
단계 B: THF(100 mL) 중 3-브로모-5-플루오로-N-메톡시-N,2-디메틸-벤즈아미드(4.70 g, 17.0 mmol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 메틸 마그네슘 브로마이드(3.0 M, 34.1 mL, 6.00 당량)를 적가하였다. 적가가 완료된 후, 반응 혼합물을 45℃로 가온하고 5시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(20.0 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)에 의해 정제하여 1-(3-브로모-5-플루오로-2-메틸페닐)에탄-1-온(3.80 g, 16.5 mmol, 96.6% 수율)을 연한 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.43 (dd, J = 2.8, 7.6 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 2.8, 8.4 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.45 (d, J = 0.4 Hz, 3H).
단계 C: THF(60.0 mL) 중 1-(3-브로모-5-플루오로-2-메틸페닐)에탄-1-온(3.80 g, 16.5 mmol, 1.00 당량) 및 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.79 g, 23.0 mmol, 1.40 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(7.50 g, 32.9 mmol, 6.82 mL, 2.00 당량) 및 1,2-디메톡시에탄(1.48 g, 16.5 mmol, 1.71 mL, 1.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(100 mL) 및 물(10.0 mL)로 희석하여 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 모든 휘발성 물질을 제거하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 20/1)에 의해 정제하여 (S)-N-(1-(3-브로모-5-플루오로-2-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(4.70 g, 14.1 mmol, 85.5% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+3] +: 336.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.35 (br dd, J = 2.4, 7.6 Hz, 1H), 6.92 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 2.66 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 1.30 (s, 9H).
단계 D: THF(80.0 mL) 중 (S)-N-(1-(3-브로모-5-플루오로-2-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(5.50 g, 16.5 mmol, 1.00 당량)의 용액에 L-셀렉트라이드(1.0 M, 24.7 mL, 1.50 당량)를 -78℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 0℃로 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 염화암모늄 수용액(30.0 mL)으로 희석하고, 생성된 용액을 에틸 아세테이트(50.0 mL × 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르(20.0 mL)로 분쇄하고, 여과하고, 필터 케이크를 진공 하에 건조하여 (S)-N-((R)-1-(3-브로모-5-플루오로-2-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(3.20 g, 9.52 mmol, 57.8% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.24 (dd, J = 2.4, 7.6 Hz, 1H), 7.10 (dd, J = 2.8, 10.0 Hz, 1H), 4.90 - 4.82 (m, 1H), 3.30 (br d, J = 2.8 Hz, 1H), 2.42 (s, 3H), 1.48 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.23 (s, 9H).
단계 E: THF(20.0 mL) 및 물(5.00 mL) 중 (S)-N-((R)-1-(3-브로모-5-플루오로-2-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.60 g, 4.76 mmol, 1.00 당량)의 용액에 요오드(362 mg, 1.43 mmol, 288 μL, 0.30 당량)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 중탄산나트륨 수용액으로 pH를 pH=7로 조정하였다. 생성된 용액을 DCM(20.0 mL x 3)으로 추출하고, 합한 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 (R)-1-(3-브로모-5-플루오로-2-메틸페닐)에탄-1-아민(1.20 g, 미정제)을 연한 황색 오일로서 제공하였다. 이 미정제 오일은 추가 정제없이 사용되었다.
단계 F: THF(20.0 mL) 중 (R)-1-(3-브로모-5-플루오로-2-메틸페닐)에탄-1-아민(1.20 g, 5.17 mmol, 1.00 당량)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트(1.35 g, 6.20 mmol, 1.43 mL, 1.20 당량)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 150/1 내지 70/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(1-(3-브로모-5-플루오로-2-메틸페닐)에틸)카르바메이트(1.45 g, 4.36 mmol, 84.4% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
단계 G: 디메틸아세트아미드(20.0 mL) 중 tert-부틸(R)-(1-(3-브로모-5-플루오로-2-메틸페닐)에틸)카르바메이트(1.35 g, 4.06 mmol, 1.00 당량), 시안화아연(954 mg, 8.13 mmol, 516 μL, 2.00 당량), DPPF(451 mg, 813 μmol, 0.20 당량), 아연 분말(26.6 mg, 406 μmol, 0.10 당량) 및 Pd2(dba)3(372 mg, 406 μmol, 0.10 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 6시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트(60.0 mL)로 희석하고, 여과하고, 여액을 염수(30.0 mL × 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 30/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(1-(3-시아노-5-플루오로-2- 메틸페닐)에틸)카르바메이트(1.10 g, 3.95 mmol, 97.3% 수율)를 연한 황색 고체로서 제공하였다.
단계 H: DCM(5.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-(1-(3-시아노-5-플루오로-2-메틸페닐)에틸)카르바메이트(1.10 g, 3.95 mmol, 1.00 당량)의 용액에 TFA(1.88 g, 16.5 mmol, 1.22 mL, 4.18 당량)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 포화 중탄산나트륨 수용액으로 pH = 7로 조정하였다. 생성된 용액을 DCM(50.0 mL)으로 추출하고, 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공에서 농축하여 (R)-3-(1-아미노에틸)-5-플루오로-2-메틸벤조니트릴(0.80 g, 미정제)을 갈색 오일로서 제공하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용했다.
중간체 AC
Figure pct00055
단계 A: 디옥산(20.0 mL) 중 2-브로모-4-플루오로-6-(트리플루오로메틸)아닐린(2.00 g, 7.75 mmol, 1.00 당량) 및 트리부틸(1-에톡시비닐)주석(2.80 g, 7.75 mmol, 2.62 mL, 1.00 당량)의 용액에 질소 분위기 하에 PdCl2(PPh3)2(544 mg, 775 μmol, 0.10 당량)를 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 불화칼륨 수용액(100 mL)으로 희석한 다음, 에틸 아세테이트(100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 화합물 2-(1-에톡시비닐)-4-플루오로-6-(트리플루오로메틸)아닐린(4.00 g, 미정제)을 황색 오일로서 제공하였다. 테트라하이드로푸란(50.0 mL) 중 2-(1-에톡시비닐)-4-플루오로-6-(트리플루오로메틸)아닐린(4.00 g, 미정제)의 용액에 염산 수용액(4.00 M, 20.0 mL, 1.33 당량)을 적가하였다. 그 다음 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하고, 물(100 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(300 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 화합물 1-(2-아미노-5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(5.60 g, 25.3 mmol, 42.0% 수율, 99.9% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.99 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.65 - 7.61 (m, 1H), 7.33 (s, 2H), 2.59 (s, 3H).
단계 B: 염산(50.0 mL) 및 물(100 mL) 중 1-(2-아미노-5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(5.60 g, 25.3 mmol, 1.00 당량)의 용액에 아질산나트륨(2.27 g, 32.9 mmol, 1.30 당량)을 조금씩 첨가한 다음, 요오드화칼륨(8.41 g, 50.6 mmol, 2.00 당량)을 0℃에서 혼합물에 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 물(100 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(200 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 아황산나트륨(200 mL x 3)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 화합물 1-(5-플루오로-2-요오도-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(5.60 g, 10.3 mmol, 40.8% 수율, 61.2% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.83 - 7.76 (m, 1H), 7.74 - 7.71 (m, 1H), 2.56 (s, 3H).
단계 C: 디옥산(20.0 mL) 중 메틸보론산(1.62 g, 27.1 mmol, 2.50 당량) 및 1-(5-플루오로-2-요오도-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(3.60 g, 10.8 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Pd(dppf)Cl2(400 mg, 542 μmol, 0.05 당량) 및 탄산칼륨(7.49 g, 54.2 mmol, 5.00 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(50.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 화합물 1-(5-플루오로-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(1.70 g, 7.72 mmol, 71.2% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.47 (dd, J = 2.8, 8.8 Hz, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 1H), 2.58 (s, 3H), 2.47 (s, 3H).
단계 D: 테트라하이드로푸란(15.0 mL) 중1-(5-플루오로-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(2.20 g, 9.99 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.42 g, 20.0 mmol, 2.00 당량)의 용액에 티타늄(IV) 이소프로폭시드(5.68 g, 20.0 mmol, 5.90 mL, 2.00 당량) 및 1-메톡시-2-(2-메톡시에톡시)에탄(4.12 g, 30.7 mmol, 4.40 mL, 3.08 당량)을 첨가하고, 혼합물을 75℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(50.0 mL)로 희석하여 현탁액을 제공하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 희석하였다. 합한 유기 층을 염수(50.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 화합물 (R)-N-(1-(5-플루오로-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.50 g, 4.64 mmol, 46.4% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.39 (dd, J = 2.2, 8.8 Hz, 1H), 7.10 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 2.68 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.30 (s, 9H).
단계 E: 테트라하이드로푸란(20.0 mL) 중 (R)-N-(1-(5-플루오로-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.90 g, 5.88 mmol, 1.00 당량)에 수소화붕소나트륨(667 mg, 17.6 mmol, 3.00 당량)을 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 염화암모늄(50.0 mL)으로 천천히 희석하고 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-1-(5-플루오로-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.30 g, 4.00 mmol, 68.0% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.40 - 7.28 (m, 2H), 4.95 - 4.84 (m, 1H), 3.40 - 3.32(m, 1H), 2.43 (s, 3H), 1.49 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.23 (s, 9H).
단계 F: 디클로로메탄(5.00 mL) 중 (R)-N-((R)-1-(5-플루오로-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.30 g, 4.00 mmol, 1.00 당량)에 염산(1,4-디옥산 중 4.00 M, 5.00 mL, 5.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 감압 하에 농축하여 화합물 (R)-1-(5-플루오로-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(700 mg, 2.81 mmol, 70.4% 수율, 88.9% 순도, HCl 염)을 황색 오일로서 제공하였으며, 이를 추가 정제 없이 직접 사용했다.
중간체 AD
Figure pct00056
단계 A: THF(50.0 mL) 중 3-브로모-2,5-디플루오로벤즈알데히드(4.00 g, 18.1 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(3.07 g, 25.3 mmol, 1.40 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(8.26 g, 36.2 mmol, 7.51 mL, 2.00 당량) 및 1,2-디메톡시에탄(1.63 g, 18.1 mmol, 1.88 mL, 1.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(50.0 mL) 및 물(5.00 mL)로 천천히 희석하여 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 여과하고, 여액을 감압 하에 농축한 다음 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 (S)-N-(3-브로모-2,5-디플루오로벤질리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(5.70 g, 17.6 mmol, 97.1% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 6.0, 8.4 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 5.2, 8.8 Hz, 1H), 1.28 (s, 9H).
단계 B: DCM(60.0 mL) 중 (S)-N-(3-브로모-2,5-디플루오로벤질리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(5.50 g, 17.0 mmol, 1.00 당량)의 용액에 -60℃에서 메틸마그네슘 브로마이드(3.0 M, 17.0 mL, 3.00 당량)를 적가한 다음, 혼합물을 0℃로 가온하고 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 염화암모늄 수용액(50.0 mL)으로 희석하고, 생성된 수용액을 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 2/1)에 의해 정제하여 (S)-N-((R)-1-(3-브로모-2,5-디플루오로페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(3.50 g, 10.3 mmol, 60.6% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.31 - 7.26 (m, 1H), 7.16 (dd, J = 6.4, 8.8 Hz, 1H), 4.89 - 4.78 (m, 1H), 3.35 (br d, J = 4.0 Hz, 1H), 1.56 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.23 (s, 9H).
단계 C: THF(20.0 mL) 및 물(5.00 mL) 중 (S)-N-((R)-1-(3-브로모-2,5-디플루오로페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.50 g, 4.41 mmol, 1.00 당량)의 용액에 요오드(336 mg, 1.32 mmol, 266 μL, 0.30 당량)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 중탄산나트륨 수용액으로 pH를 pH = 7로 조정하였다. 생성된 수용액을 DCM(20.0 mL x 3)으로 추출하고, 합한 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 (R)-1-(3-브로모-2,5-디플루오로페닐)에탄-1-아민(1.20 g, 미정제)을 연한 황색 오일로서 제공하였다. 이 미정제 오일을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
단계 D: THF(20.0 mL) 중 (R)-1-(3-브로모-2,5-디플루오로페닐)에탄-1-아민(1.20 g, 5.08 mmol, 1.00 당량)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트(1.22 g, 5.59 mmol, 1.28 mL, 1.10 당량)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 150/1 내지 80/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(1-(3-브로모-2,5-디플루오로페닐)에틸)카르바메이트(1.30 g, 3.87 mmol, 76.1% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
단계 E: 디메틸아세트아미드(20.0 mL) 중 tert-부틸 (R)-(1-(3-브로모-2,5-디플루오로페닐)에틸)카르바메이트(1.20 g, 3.57 mmol, 1.00 당량), 시안화아연(838 mg, 7.14 mmol, 453 μL, 2.00 당량), 아연(23.3 mg, 357 μmol, 0.10 당량), DPPF(396 mg, 714 μmol, 0.20 당량) 및 Pd2(dba)3(327 mg, 357 μmol, 0.10 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 115℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석하고, 유기 상을 염수(50.0 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 30/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(1-(3-시아노-2,5-디플루오로페닐)에틸)카르바메이트(0.90 g, 3.19 mmol, 89.3% 수율)를 연한 황색 고체로서 제공하였다.
단계 F: DCM(10.0 mL) 중 tert-부틸 (R)-(1-(3-시아노-2,5-디플루오로페닐)에틸)카르바메이트(0.90 g, 3.19 mmol, 1.00 당량)의 용액에 TFA(4.62 g, 40.5 mmol, 3.00 mL, 12.7 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 물(10.0 mL)로 희석하였다. 용액의 pH를 중탄산나트륨 수용액으로 pH=7로 조정하고, 생성된 수용액을 DCM(20.0 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 (R)-3--(1-아미노에틸)-2,5-디플루오로벤조니트릴(700 mg, 미정제)을 연한 황색 오일로서 제공하였다. 이 화합물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
중간체 AE
Figure pct00057
단계 A: 디메틸설폭시드(200 mL) 중 1-브로모-3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠(39.0 g, 160 mmol, 1.00 당량)의 용액에 시안화아연(11.5 g, 176 mmol, 7.56 mL, 1.10 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(1.00L)로 희석하고, 유기 상을 분리하고, 물(500 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 2/1)에 의해 정제하여 3-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(29.0 g, 116 mmol, 72.3% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 8.0 Hz, 1H).
단계 B: 톨루엔(250 mL) 중 3-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(29.0 g, 116 mmol, 1.00 당량) 및 트리부틸(1-에톡시비닐)주석(50.3 g, 139 mmol, 47.0 mL, 1.20 당량)의 용액에 질소 분위기 하에 Pd(PPh3)4(6.70 g, 5.80 mmol, 0.05 당량)를 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고, 물(500 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석한 후, 마지막으로 불화칼륨(50.0 g) 고체를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반한 다음, 유기 층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 5/1)에 의해 정제하여 미정제 생성물을 제공하였다. 미정제 생성물을 석유 에테르(50.0 mL)로 분쇄하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 3-(1-에톡시비닐)-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(8.00 g, 33.2 mmol, 23.0% 수율)을 연한 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.65 - 7.59 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.37 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.25 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.90 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.36 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 C: 테트라하이드로푸란(10.0 mL) 중 3-(1-에톡시비닐)-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(7.00 g, 29.0 mmol, 1.00 당량)의 용액에 염산(2.00 M, 29.0 mL, 2.00 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물의 pH를 중탄산나트륨 수용액으로 pH = 8로 조정하고, 물(100 mL)로 추가 희석하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 5/1)에 의해 정제하여 3-아세틸-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(5.30 g, 24.8 mmol, 85.6% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.25 (dd, J = 0.8, 7.6 Hz, 1H), 8.07 - 7.94 (m, 2H), 2.60 (s, 3H).
단계 D: 테트라하이드로푸란(2.00 mL) 중 3-아세틸-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(1.00 g, 4.69 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(625 mg, 5.16 mmol, 1.10 당량)의 용액에 1,2-디메톡시에탄(423 mg, 4.69 mmol, 488 μL, 1.00 당량) 및 티타늄(IV) 에톡시드(3.21 g, 14.1 mmol, 2.92 mL, 3.00 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석하고, 물(100 mL) 중 셀라톰(20.0 g) 및 포화 중탄산나트륨(10.0 g)의 혼합물에 부었다. 혼합물을 교반한 다음 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(30.0 mL)와 함께 교반하고 여과하고, 생성물 케이크가 세척될 때까지 절차를 3회 반복하였다. 합한 여액을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피(에틸 아세테이트/석유 에테르, 0-30%)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-시아노-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(950 mg, 2.99 mmol, 63.7% 수율, 99.5% 순도)를 연한 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 317.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.92 - 7.80 (m, 1H), 7.77 - 7.65 (m, 1H), 7.61 - 7.37 (m, 1H), 2.74 - 2.38 (m, 3H), 1.29 - 1.24 (m, 9H).
단계 E: 테트라하이드로푸란(20.0 mL) 중 (R)-N-(1-(3-시아노-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.70 g, 5.37 mmol, 1.00 당량)에 0℃에서 질소 분위기 하에 수소화붕소나트륨(610 mg, 16.0 mmol, 3.00 당량)을 조금씩 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반한 다음, 25℃로 가온하고 추가로 3시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃에서 교반하면서 질소 분위기 하에 포화 수성 염화암모늄(100 mL)으로 한 방울씩 희석한 다음, 에틸 아세테이트(150 mL × 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-시아노-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.50 g, 4.71 mmol, 87.7% 수율, 부분입체이성질체의 혼합물)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 319.1.
단계 F: HClㆍ디옥산(10.0 mL) 중 (R)-N-(1-(3-시아노-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.4 g, 4.40 mmol, 1.00 당량)의 혼합물을 5℃에서 30분 동안 교반하였다. 이 시간 후, 백색 침전물이 형성되었고, 현탁액을 여과하였다. 필터 케이크를 수집하고 진공 하에 건조하여 3-(1-아미노에틸)-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(850 mg, 3.39 mmol, 77.1% 수율, HCl 염)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 215.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.84 (s, 3H), 8.38 (br d, J =8.0 Hz, 1H), 8.19 (d, J =7.6 Hz, 1H), 8.12 - 7.95 (m, 1H), 4.64 (br d, J =6.0 Hz, 1H), 1.56 (d, J =6.4 Hz, 3H).
단계 G: 디메틸 설폭시드(1.50 mL) 중 3-(1-아미노에틸)-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(300 mg, 1.40 mmol, 1.00 당량, HCl 염), 1,7-디클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진(300 mg, 1.40 mmol, 1.00 당량), 디이소프로필에틸아민(499 mg, 3.86 mmol, 673 μL, 2.76 당량) 및 세슘 플루오라이드(400 mg, 2.63 mmol, 97.0 μL, 1.88 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 130℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(60.0 mL)를 첨가하고, 유기 용액을 염수(30.0 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 3-(1-((7-클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(160 mg, 408 μmol, 29.2% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 392.1.
3-(1-((7-클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(160 mg)을 SFC[컬럼: DAICEL CHIRALPAK AD(250 mm × 30 mm,10 um); 이동 상: 상 A: MeOH 중 (0.1% NH4OH), 상 B: CO2; B%: 20%-20%]를 사용하여 추가로 정제하여 (R)-3-(1-((7-클로로-4-메틸피리도[3,4-dt]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴(62.0 mg, 158 μmol, 39.0% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 392.1.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.24 (d, J =0.8 Hz, 1H), 8.46 (d, J =0.8 Hz, 1H), 8.05 (d, J =8.4 Hz, 1H), 7.80 (d, J =7.2 Hz, 1H), 7.71 - 7.57 (m, 1H), 5.74 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.74 (s, 3H), 1.68 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
중간체 AF
Figure pct00058
단계 A: 테트라하이드로푸란(15.0 mL) 중 4-플루오로-3-니트로-5-(트리플루오로메틸)벤조산(2.00 g, 7.90 mmol, 1.00 당량)의 용액에 탄소 상의 팔라듐(7.90 mmol, 10% 순도, 1.00 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 수소 분위기(15 Psi) 하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축하여 화합물 3-아미노-4-플루오로-5-(트리플루오로메틸)벤조산(1.60 g, 7.17 mmol, 90.8% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.68 - 7.64 (m, 1H), 7.32 - 7.29 (m, 1H), 5.95 - 5.89 (m, 2H).
단계 B: N,N-디메틸포름아미드(10.0 mL) 중 3-아미노-4-플루오로-5-(트리플루오로메틸)벤조산(1.50 g, 6.72 mmol, 1.00 당량) 및 N,O-디메틸하이드록실아민(830 mg, 13.45 mmol, 2.00 당량)의 용액에 HATU(5.11 g, 13.5 mmol, 2.00 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(2.61 g, 20.2 mmol, 3.50 mL, 3.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(50.0 mL)로 희석한 다음 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출했다. 합한 유기 층을 염수(50.0 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 화합물 3-아미노-4-플루오로-N-메톡시-N-메틸-5-(트리플루오로메틸)벤즈아미드(1.50 g, 5.64 mmol, 83.9% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.38 - 7.34 (m, 2H), 3.57 (s, 3H), 3.36 (s, 3H)
단계 C: 디클로로메탄(10.0 mL) 중 3-아미노-4-플루오로-N-메톡시-N-메틸-5-(트리플루오로메틸)벤즈아미드(1.50 g, 5.64 mmol, 1.00 당량)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트(3.69 g, 16.9 mmol, 3.88 mL, 3.00 당량) 및 4-디메틸아미노피리딘(688 mg, 5.64 mmol, 1.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50.0 mL)로 희석한 다음 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출했다. 합한 유기 층을 염수(50.0 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 화합물 tert-부틸(tert-부톡시카르보닐)(2-플루오로-5-(메톡시(메틸)카르바모일)-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트(2.00 g, 4.29 mmol, 76.1% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.05 - 8.01 (m, 1H), 7.87 - 7.84 (m, 1H), 3.55 (s, 3H), 3.39 (s, 3H), 1.42 (s, 18H).
단계 D: 테트라하이드로푸란(20.0 mL) 중 tert-부틸(tert-부톡시카르보닐)(2-플루오로-5-(메톡시(메틸)카르바모일)-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트(1.80 g, 3.86 mmol, 1.00 당량)의 용액에 메틸마그네슘 브로마이드 용액(3.00 M, 3.86 mL, 3.00 당량)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 물(100 mL)로 희석하고, 용액을 에틸 아세테이트(100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(100 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 화합물 tert-부틸(5-아세틸-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트(1.10 g, 3.42 mmol, 88.7% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.98 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.90 - 7.87 (m, 1H), 6.86 (s, 1H), 2.65 (s, 3H), 1.56 (s, 9H).
단계 E: 테트라하이드로푸란(10.0 mL) 중 tert-부틸(5-아세틸-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트(1.10 g, 2.61 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(950 mg, 7.83 mmol, 3.00 당량)의 용액에 티타늄(IV) 이소프로폭시드(1.48 g, 5.22 mmol, 1.54 mL, 2.00 당량) 및 1-메톡시-2-(2-메톡시에톡시)에탄(1.87 g, 13.97 mmol, 2.00 mL, 5.35 당량)을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 물(50.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50.0 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 화합물 tert-부틸 (R)-(5-(1-((tert-부틸설피닐)이미노)에틸)-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트(1.00 g, 2.36 mmol, 90.1% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.86 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 2.79 (s, 3H), 1.54 (s, 9H), 1.33 (s, 9H).
단계 F: 테트라하이드로푸란(10.0 mL) 중 tert-부틸 (R)-(5-(1-((tert-부틸설피닐)아미노)에틸)-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트(1.00 g, 2.36 mmol, 1.00 당량)의 용액에 수소화붕소나트륨(268 mg, 7.07 mmol, 3.00 당량)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 물(50.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하였다. 조합된 유기 층을 염수(50.0 mL × 3)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 화합물 tert-부틸 (5-((R)-1-(((R)- tert-부틸설피닐)아미노)에틸)-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트(620 mg, 1.45 mmol, 61.7% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.34 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.23 - 7.20 (m, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.56 - 5.53 (m, 1H), 1.54-1.52 (m, 12H), 1.24 (s, 9H).
단계 G: 디클로로메탄(5.00 mL) 중 tert-부틸 (5-((R)-1-(((R)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트(620 mg, 1.45 mmol, 1.00 당량)의 용액에 염산염(1,4-디옥산 중 4.00 M, 5.00 mL, 13.76 당량)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 감압 하에 농축하여 화합물 (R)-5-(1-아미노에틸)-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)아닐린(280 mg, 1.24 mmol, 85.5% 수율, 98.6% 순도, HCl 염)을 황색 오일로서 제공하였다. 이 화합물은 추가 정제 없이 직접 사용되었다.
중간체 AG
Figure pct00059
단계 A: 디클로로메탄(40.0 mL) 중 메틸 4,6-디클로로피콜리네이트(4.50 g, 21.8 mmol, 1.00 당량)의 용액에 DIBAL-H(1.0 M, 65.5 mL, 3.00 당량)를 -78℃에서 10분에 걸쳐 적가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 0℃에서 물(2.50 mL)로 한 방울씩 희석하고, 이어서 수산화나트륨 수용액(2.50 mL, w/w = 15%) 및 물(6.26 mL)을 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하여 현탁액을 제공하고, 현탁액을 여과하고, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 (4,6-디클로로피리딘-2-일)메탄올(2.40 g, 13.5 mmol, 61.7% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.65 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 5.69 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 6.0 Hz, 2H).
단계 B: 디클로로메탄(20.0 mL) 중 (4,6-디클로로피리딘-2-일)메탄올(2.40 g, 13.5 mmol, 1.00 당량)의 용액에 데스-마틴 페리오디난(11.4 g, 27.0 mmol, 8.35 mL, 2.00 당량)를 0℃에서 조금씩 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 물(10.0 mL)에 붓고 15분 동안 교반한 다음, 포화 티오황산나트륨 수용액(20.0 mL)을 천천히 첨가하고, 혼합물을 추가 15분 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 층을 분리하고, 수성 상을 DCM(20.0 mL X 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 4,6-디클로로피콜린알데히드(1.60 g, 9.09 mmol, 67.4% 수율)를 적색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 9.87 (s, 1H), 8.14 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 1.6 Hz, 1H).
단계 C: 디클로로메탄(10.0 mL) 중 4,6-디클로로피콜린알데히드(1.10 g, 6.25 mmol, 1.00 당량)의 용액에 디에틸아미노황 트리플루오라이드(2.01 g, 12.5 mmol, 1.65 mL, 2.00 당량)를 -20℃에서 적가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃에서 포화 중탄산나트륨 수용액(10.0 mL)에 천천히 붓고, 생성된 용액을 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(5.00 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 20/1)에 의해 정제하여 2,4-디클로로-6-(디플루오로메틸)피리딘(1.00 g, 5.05 mmol, 80.8% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.75 (s, 1H), 7.74(s, 1H), 6.82 - 6.55 (m, 1H).
단계 D: 디옥산(10.0 mL) 중 트리부틸(1-에톡시비닐)주석(2.01 g, 5.56 mmol, 1.88 mL, 1.00 당량) 및 2,4-디클로로-6-(디플루오로메틸)피리딘(1.10 g, 5.56 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Pd(PPh3)2Cl2(390 mg, 556 μmol, 0.10 당량)를 질소 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고 포화 불화칼륨 수용액(20.0 mL)에 천천히 부었다. 생성된 수용액을 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(30.0 mL x 2)로 세척하고, 무수 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 20/1)에 의해 정제하여 4-클로로-2-(디플루오로메틸)-6-(1-에톡시비닐)피리딘(1.20 g, 5.14 mmol, 92.5% 수율)을 황색 오일로서 제공하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
디옥산(5.00 mL) 중 4-클로로-2-(디플루오로메틸)-6-(1-에톡시비닐)피리딘(1.00 g, 4.28 mmol, 1.00 당량)의 용액에 염산 수용액(2.00 M, 4.28 mL, 2.00 당량)을 20℃에서 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 포화 중탄산나트륨(15.0 mL)을 첨가하여 혼합물의 pH를 pH = 8로 조정하고, 에틸 아세테이트(30.0 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(10.0 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 1-(4-클로로-6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-온(800 mg, 3.89 mmol, 90.9% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.10 - 8.16 (m, 1H), 7.95 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.67 - 6.95 (m, 1H), 2.69 (s, 3H).
단계 E: 디옥산(6.00 mL) 중 1-(4-클로로-6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-온(0.85 g, 4.13 mmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 카르바메이트(1.45 g, 12.4 mmol, 3.00 당량)의 용액에 탄산세슘(2.69 g, 8.27 mmol, 2.00 당량), XPhos(394 mg, 827 μmol, 0.20 당량) 및 팔라듐 아세테이트(92.8 mg, 413 μmol, 0.10 당량)를 질소 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각하고 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 tert-부틸(2-아세틸- 6-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)카르바메이트(1.00 g, 3.49 mmol, 84.5% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 287.1.
단계 F: THF(10.0 mL) 중 tert-부틸(2-아세틸-6-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)카르바메이트(1.00 g, 3.49 mmol, 1.00 당량) 및 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(508 mg, 4.19 mmol, 1.20 당량)의 용액에 티타늄(IV) 에톡시드(7.97 g, 34.9 mmol, 7.24 mL, 10.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 75℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(5.00 mL)에 부은 다음, 현탁액을 여과하고, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 5/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (S)-(2-(1-((tert-부틸설피닐)이미노)에틸)-6-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)카르바메이트(1.00 g, 2.57 mmol, 73.5% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.30 (s, 1H), 7.94 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.52 - 6.82 (m, 1H), 2.81 (s, 3H), 1.54 (s, 9H), 1.35 (s, 9H).
단계 G: THF(10.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-(2-(1-((tert-부틸설피닐)이미노)에틸)-6-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)카르바메이트(1.00 g, 2.57 mmol, 1.00 당량)의 용액에 L-셀렉트라이드(1.0 M, 976 mg, 5.14 mmol, 1.12 mL, 2.00 당량)를 0℃에서 적가하고, 혼합물을 0 내지 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(15.0 mL)에 붓고 10분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(15.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(15.0 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 5/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2-((R)-1-(((S)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)-6-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)카르바메이트(550 mg, 1.26 mmol, 49.0% 수율, 89.5% 순도)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.70 (s, 1H), 7.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.41 - 6.77 (m, 1H), 4.55 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 1.58 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.53 (s, 9H), 1.23 (s, 9H).
SFC: 컬럼: Chiralcel OD-3 50 x 4.6 mm I.D., 3 μm 이동 상: CO2의 경우 상 A, MeOH(0.05% DEA)의 경우 상 B; 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% DEA) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar.
단계 H: 염산/디옥산(2.00 mL) 중 tert-부틸 (2-((R)-1-(((S)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)-6-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)카르바메이트(450 mg, 1.15 mmol, 1.00 당량)의 용액을 0 내지 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 감압 하에 농축하여 (R)-2-(1-아미노에틸)-6-(디플루오로메틸)피리딘-4-아민 및 tert-부틸 (2-((R)-1-(((S)-tert-부틸설피닐)아미노)에틸)-6-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)카르바메이트를 백색 고체로서 제공하고, 이를 정제 없이 직접 다음 단계에서 직접 사용하였다. LCMS [M+1]+: 288.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.74 (s, 1H), 7.65 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.82 - 6.51 (m, 1H), 4.60 - 4.45 (m, 2 H), 1.61 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.54 (s, 9H).
중간체 AH
Figure pct00060
단계 A: 테트라하이드로푸란(20.0 mL) 중 1-(2-플루오로-3-메틸페닐)에탄-1-온(1.00 g, 6.57 mmol, 1.00 당량) 및 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.04 g, 8.54 mmol, 1.30 당량)의 용액에 티타늄 테트리소프로필옥사이드(3.73 g, 13.1 mmol, 3.88 mL, 2.00 당량)를 질소 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고 물(40.0 mL)에 부어서 10분 동안 교반한 후 현탁액을 제공하고, 현탁액을 여과하고, 생성된 수용액을 에틸 아세테이트(40.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 2/1)에 의해 정제하여 (S)-N-(1-(2-플루오로-3-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.50 g, 5.87 mmol, 89.4% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 256.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.46 (br t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.30 - 7.24 (m, 1H), 7.09 - 7.04 (m, 1H), 2.76 (br d, J = 2.8 Hz, 3H), 2.31 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 1.31 (s, 9H).
단계 B: 테트라하이드로푸란(20.0 mL) 중 (S)-N-(1-(2-플루오로-3-메틸 페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.50 g, 5.87 mmol, 1.00 당량)의 용액에 L-셀렉트라이드(1.0 M, 11.7 mmol, 11.8 mL, 2.00 당량)를 질소 분위기 하에 -78℃에서 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(10.0 mL)에 천천히 붓고 10분 동안 교반한 후, 생성된 혼합 용액을 에틸 아세테이트(10.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(10.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (S)-N-(1-(2-플루오로-3-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(900 mg, 3.50 mmol, 59.5% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 258.4.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.16 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.13 - 7.08 (m, 1H), 7.04 - 6.99 (m, 1H), 4.85 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.28 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 1.58 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.20 (s, 9H).
단계 C: 디클로로메탄(5.00 mL) 중 (S)-N-(1-(2-플루오로-3-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(900 mg, 3.50 mmol, 1.00 당량)의 용액에 HCl(1,4-디옥산 중 4.00 M, 5.00 mL, 5.72 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 1-(2-플루오로-3-메틸페닐)에탄-1-아민(390 mg, 미정제, 염산염)을 황색 고체로서 제공하고, 이를 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
디메틸 설폭시드(5.00 mL) 중 1-(2-플루오로-3-메틸페닐)에탄-1-아민(300 mg, 1.96 mmol, 1.00 당량, 염산염), 1,7-디클로로-4-메틸피리도[3,4-d] 피리다진(419 mg, 1.96 mmol, 1.00 당량), N,N-디이소프로필에틸아민(506 mg, 3.92 mmol, 2.00 당량) 및 불화칼륨(341 mg, 5.87 mmol, 0.14 mL, 3.00 당량)의 용액에 질소 분위기 하에 130℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(20.0 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(20.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Welch Xtimate C18 150 × 25 mm × 5 um; 이동 상: 상 A: 물(0.05% HCl), 상 B: 아세토니트릴; B%: 14%-44%]에 의해 정제하여 7-클로로-N-(1-(2-플루오로-3-메틸페닐)에틸)-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(100 mg, 0.30 mmol, 23.2% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 331.2.
라세미 7-클로로-N-(1-(2-플루오로-3-메틸페닐)에틸)-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(200 mg, 0.60 mmol, 1.00 당량)을 SFC(컬럼: DAICEL CHIRALPAK IG(250 mm×30 mm,10 um); 이동 상: 상 A: MeOH 중 0.1% NH4OH, 상 B: CO2; B%: 30%-30%]에 의해 정제하여 제1 용리 이성질체(80.0 mg, 0.24 mmol, 40.0% 수율)로서 (R)-7-클로로-N-(1-(2-플루오로-3-메틸페닐)에틸)-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-아민을 황색 고체로서 제공하였다.
하기 실시예는 본 발명의 특정 실시형태들을 추가로 예시하기 위함이고 본 발명의 범위를 한정하고자 함은 아니다.
실시예 1-1
6,7-디메톡시-N-(1-(4-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)프탈라진-1-아민
Figure pct00061
단계 A: 톨루엔(3.00 mL) 중 1-클로로-6,7-디메톡시프탈라진(120 mg, 534 μmol, 1.00 당량), tert-부틸(2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(130 mg, 374 μmol, 0.70 당량), BrettPhos Pd G3(48.4 mg, 53.4 μmol, 0.10 당량) 및 칼륨 tert-부톡시드(150 mg, 1.34 mmol, 2.50 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 10/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2-(5-(1-((6,7-디메톡시프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(70.0 mg, 24.5% 수율)를 갈색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 535.5.
단계 B: 아세토니트릴(1.00 mL) 중 tert-부틸 (2-(5-(1-((6,7-디메톡시프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(60.0 mg, 112 μmol, 1.00 당량)의 용액에 HCl(디옥산 중 4.0 M, 0.20 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 10분 동안 교반한 다음, 혼합물을 여과하고 감압 하에 25℃에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 메탄올(2.00 mL)에 용해시키고 고체 중탄산나트륨(약 30.0 mg)을 사용하여 pH = 7로 조정하여 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 여과하고, 여액을 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm × 5 um; 이동 상: [물(10 mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 19% - 49%, 9분) 및 동결건조에 의해 정제하여 6,7-디메톡시-N-(1-(4-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)프탈라진-1-아민(16.6 mg, 33.8% 수율, 99.6% 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 435.1.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.73 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.51 - 7.46 (m, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 3H), 7.35 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 5.93 - 5.81 (m, 1H), 4.10 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.83 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 1-2
(R)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-N-(1-(4-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸) 프탈라진-1-아민
Figure pct00062
단계 A: 아세토니트릴(19.0 mL) 중 7-브로모프탈라진-1-올(950 mg, 4.22 mmol, 1.00 당량)의 용액에 인(V) 옥시클로라이드(2.27 g, 14.8 mmol, 1.37 mL, 3.50 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고 진공에서 농축하여 용매를 제거하였다. 나머지 잔류물을 0℃로 냉각된 DCM(50.0 mL)으로 희석하고, 유기 층을 포화 중탄산나트륨 수용액(30.0 mL)으로 pH = 7로 조정하였다. 유기 상을 분리하고, 염수(30.0 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 7-브로모-1-클로로프탈라진(900 mg, 3.70 mmol, 87.6% 수율)을 갈색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+3]: 244.8.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.44 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.52 - 8.49 (m, 1H), 8.10 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H).
단계 B: DMSO(2.00 mL) 중 7-브로모-1-클로로프탈라진(100 mg, 411 μmol, 1.00 당량)의 용액에 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(129 mg, 370 μmol, 0.90 당량), 불화칼륨(71.6 mg, 1.23 mmol, 28.8 μL, 3.00 당량) 및 디이소프로필에틸아민(106 mg, 821 μmol, 143 μL, 2.00 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 130℃에서 4시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 이 시간 후, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시켰다. 에틸 아세테이트(10.0 mL) 및 물(8.00 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고 층을 분리한 다음, 수성 상을 에틸 아세테이트(10.0 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(10.0 mL x 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-((7-브로모프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(80.0 mg, 35.2% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 553.0.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.80 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.12 - 8.07 (m, 2H), 7.91 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 3H), 7.19 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.15 - 7.03 (m, 2H), 5.90-5.97 (m, 1H), 4.45 (br d, J = 14.8 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.66 (s, 3H), 1.84 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.46 - 1.29 (m, 9H).
단계 D: DCM(1.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-메틸(2-(5-(1-((7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-3-일) 벤질)카르바메이트(18.0 mg, 32.5 μmol, 1.00 당량)의 용액에 TFA(770 mg, 6.75 mmol, 0.50 mL, 208 당량)을 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex Luna C18 75 x 30 mm x 3 um; 이동 상: [물(0.05% HCl) - ACN]; B%: 13% - 33%) 및 동결건조에 의해 정제하여 (R)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-N-(1-(4-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)프탈라진-1-아민(9.02 mg, 55.7% 수율, 91.1% 순도)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 455.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.10 (br s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.39 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.23 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.60 - 7.57 (m, 1H), 7.50 - 7.45 (m, 2H), 7.44 - 7.40 (m, 1H), 7.39 - 7.34 (m, 2H), 5.78 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 4.30 (s, 2H), 4.04 (s, 2H), 4.01 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 1.98 (br d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 1-3
(R)-N-(1-(4-(2-((에틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민
Figure pct00063
단계 A: 톨루엔(3.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-((7-브로모프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)(메틸)카르바메이트(45.0 mg, 81.3 μmol, 1.00 당량), 모르폴린(10.6 mg, 122 μmol, 10.7 μL, 1.50 당량), Pd2(dba)3(7.44 mg, 8.13 μmol, 0.10 mg), RuPhos(7.59 mg, 16.3 μmol, 0.20 당량) 및 칼륨 tert-부톡시드(THF 중 1.00 M, 163 μL, 2.00 당량)를 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 100/1 내지 20/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-메틸(2-(5-(1-((7-모르폴리노프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)카르바메이트(40.0 mg, 57.2 μmol, 70.3% 수율, 80.0% 순도)를 황색 고체로서 제공했다. LCMS [M+1]: 560.2.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.81 (s, 1H), 7.72 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.46 - 7.41 (m, 1H), 7.35 - 7.28 (m, 3H), 7.26 - 7.06 (m, 3H), 7.03 (d, J =1.2 Hz, 1H), 6.15 - 5.95 (m, 1H), 4.80 - 4.40 (m, 2H), 3.96 - 3.86 (m, 4H), 3.46 - 3.28 (m, 4H), 2.80 - 2.52 (m, 3H), 1.83 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.42 (s, 9H).
단계 B: 아세토니트릴(1.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-메틸(2-(5-(1-((7-모르폴리노프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-3-일)벤질)카르바메이트(37.0 mg, 52.9 μmol, 1.00 당량)의 혼합물에 HCl(디옥산 중 4.00 M, 0.50 mL)을 0℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물에 메탄올(2.00 mL)을 첨가하고, 고체 중탄산나트륨(약 30.0 mg)으로 pH = 7로 조정하여 현탁액을 제공하고, 현탁액을 여과하고, 여액을 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 × 25 mm × 5 um; 이동 상: [A: 물(10 mM NH4HCO3) ― B: ACN]; B%: 22% - 52%]에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(4-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(18.3 mg, 38.5 μmol, 72.7% 수율, 96.6% 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 460.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.66 (s, 1H), 7.82 (dd, J = 1.2, 8.8 Hz, 1H), 7.65 - 7.60 (m, 1H), 7.55 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.46 - 7.41 (m, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 3H), 7.18 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.94 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.93 - 3.87 (m, 4H), 3.81 (s, 2H), 3.49 - 3.43 (m, 4H), 2.28 (s, 3H), 1.84 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 1-4
(R)-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민
Figure pct00064
단계 A: DMSO(3.00 mL) 중 7-브로모-1-클로로프탈라진(244 mg, 1.00 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(242 mg, 1.00 mmol, 1.00 당량, 염산염)의 용액에 칼륨 플루오라이드(175 mg, 3.00 mmol, 70.4 μL, 3.00 당량) 및 DIEA(259 mg, 2.00 mmol, 349 μL, 2.00 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 130℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(20.0 mL)로 희석하고, 유기 층을 염수(20.0 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-7-브로모-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(280 mg, 683 μmol, 68.2% 수율)을 갈색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 409.9.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.92 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.91 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.32 - 7.28 (m, 1H), 6.02-5.94 (m, 1H), 5.14 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.58 (s, 3H), 1.70 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 B: 디옥산(1.00 mL) 중 (R)-7-브로모-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(30.0 mg, 73.1 μmol, 1.00 당량) 및 모르폴린(12.7 mg, 146 μmol, 12.9 μL, 2.00 당량)의 용액에 Pd2(dba)3(6.70 mg, 7.31 μmol, 0.10 당량), RuPhos(6.82 mg, 14.6 μmol, 0.20 당량) 및 탄산세슘(47.7 mg, 146 μmol, 2.00 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(디클로로메탄/메탄올 = 10/1)에 의해 정제하여 미정제 생성물을 제공하고, 미정제 생성물을 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge C18 150 x 50 mm x 10 um; 이동 상: [A: 물(10 mM NH4HCO3), B: ACN], B%: 40% - 70%)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)- 7-모르폴리노프탈라진-1-아민(11.0 mg, 26.2 μmol, 35.8% 수율, 99.2% 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 417.1.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.56 (s, 1H), 7.79 - 7.75 (m, 1H), 7.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 - 7.57 (m, 2H), 7.49 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.77 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.94 - 3.84 (m, 4H), 3.51 - 3.42 (m, 4H), 2.61 (s, 3H), 1.64 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 1-1 내지 1-4의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 1에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 1-5 내지 1-50의 화합물을 제조하였다:
Figure pct00065
Figure pct00066
Figure pct00067
Figure pct00068
Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
Figure pct00076
실시예 2-1
(R)-N-(1-(4-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민
Figure pct00077
디메틸포름아미드(0.50 mL) 중 (R)-N-(1-(4-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(15.0 mg, 32.6 μmol, 1.00 당량)의 용액에 수산화칼륨(2.75 mg, 49.0 μmol, 1.50 당량)을 15℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 디메틸포름아미드(0.20 mL) 중 메틸 4-메틸벤젠설포네이트(7.90 mg, 42.4 μmol, 1.3 당량)의 용액을 반응 혼합물에 적가하였다. 적가가 완료된 후, 반응 혼합물을 50℃로 가열하고 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(3.00 mL) 및 물(3.00 mL)을 혼합물에 첨가하였다. 층을 분리하고, 유기 상을 합하고, 물(3.00 mL)로 2회 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 × 25 mm × 5 um; 이동 상: [물(0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 32% - 62%, 10분)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(4-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(1.61 mg, 3.39 μmol, 10.4% 수율, 99.7% 순도)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 474.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.65 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 3H), 7.21 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.18 - 7.12 (m, 1H), 5.91 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.90 - 3.85 (m, 4H), 3.60 (s, 2H), 3.48 - 3.42 (m, 4H), 2.17 (s, 6H), 1.82 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 2-2
N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(((S)-피롤리딘-3-일)옥시)프탈라진-1-아민
Figure pct00078
단계 A: 톨루엔(2.00 mL) 중 (R)-7-브로모-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(80.0 mg, 195 μmol, 1.00 당량)의 용액에 수소화나트륨(15.6 mg, 390 μmol, 60.0% 순도, 2.00 당량)을 질소 분위기 하에 0℃에서 첨가하였다. 그 다음 tert-부틸 (S)-3-하이드록시피롤리딘-1-카르복실레이트(110 mg, 585 μmol, 3.00 당량), Pd2(dba)3(17.9 mg, 19.5 μmol, 0.10 당량) 및 Tol-BINAP(132 mg, 195 μmol, 1.00 당량)을 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 100℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(20.0 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(20.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 역상 HPLC[물(0.1% TFA) - ACN]에 의해 정제하여 ert-부틸 (S)-3-((4-(((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-일)옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트(35.0 mg, 44.0 μmol, 23.0% 수율, 65.0% 순도)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 517.0.
단계 B: 아세토니트릴(1.00 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-((4-(((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-일)옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트(35.0 mg, 44.0 μmol, 1.00 당량)의 용액에 HCl(디옥산 중 4.00 M, 11.0 μL, 1.00 당량)을 질소 분위기 하에 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 역상 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini -NX C18 75 X 30 mm X 3 um; 이동 상: [물(0.1% TFA) - ACN]; B%: 25% - 35%)에 의해 정제하여 N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(((S)-피롤리딘-3-일)옥시)프탈라진-1-아민(8.01 mg, 18.2 μmol, 41.0% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 417.1.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.15 (s, 1H), 8.28 - 8.21 (m, 2H), 7.80 - 7.72 (m, 2H), 7.59 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.37 - 7.27 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.67 - 5.57 (m, 2H), 3.80 - 3.67 (m, 2H), 3.64 - 3.47 (m, 2H), 2.63 (s, 3H), 2.55 - 2.46 (m, 2H), 1.73 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 2-2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 2에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 2-3 내지 2-12의 화합물을 제조하였다:
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
실시예 3-1
(R)-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(피페라진-1-일)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민
Figure pct00082
단계 A: DMSO(1.00 mL) 중 1,7-디클로로피리도[3,4-d]피리다진(40.0 mg, 200 μmol, 1.00 당량) 및 (R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(40.6 mg, 200 μmol, 1.00 당량)의 용액에 디이소프로필에틸아민(77.5 mg, 600 μmol, 105 μL, 3.00 당량) 및 불화칼륨(34.8 mg, 600 μmol, 14.05 μL, 3.00 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 130℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시키고, 물(3.00 mL)에 붓고 5분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(5.00 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(3.00 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 (R)-7-클로로-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(30.0 mg, 81.8 μmol, 40.9% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 367.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.14 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.69 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.76 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.63 (s, 3H), 1.64 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 B: 디옥산(0.50 mL) 중 (R)-7-클로로-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(18.0 mg, 49.1 μmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트(13.7 mg, 73.6 μmol, 1.50 당량)에 칼륨 tert-부톡시드(1.00 M, 98.2 μL, 2.00 당량) 및 RuPhos-Pd-G3(4.10 mg, 4.91 μmol, 0.10 당량)를 질소 분위기 하에 첨가했다. 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시키고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)4-(1-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)피리도[3,4-d]피리다진-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(18.0 mg, 미정제)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 517.3.
단계 C: 아세토니트릴(1.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(1-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)피리도[3,4-d]피리다진-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(11.0 g, 21.3 mol, 1.00 량)의 용액 디옥산(3 M, 0.50 mL) 중 HCl을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 150 × 25 mm × 10 um; 이동 상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 10%-40%)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(피페라진-1-일)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(4.50 mg, 8.48 μmol, 39.8% 수율, 트리플루오로아세트산 염) 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] = 417.1.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.18 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.71 (d, J =8.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.36 - 7.27 (m, 1H), 5.58 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 4.30 - 4.21 (m, 4H), 3.50 - 3.38 (m, 4H), 2.61 (s, 3H), 1.69 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
SFC: Chiralpak OJ-3(50 × 4.6 mm I.D., 3 um); 이동 상: CO2의 경우 상 A, MeOH(0.05% DEA)의 경우 상 B; 구배 용리: CO2 중 50% MeOH(0.05% DEA) 5%에서 40%로. 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar.
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 3-1의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 3에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 3-2 내지 3-6의 화합물을 제조하였다:
Figure pct00083
Figure pct00084
실시예 4-1
(R)-6,7-디메톡시-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민
Figure pct00085
톨루엔(2.00 mL) 중 1-클로로-6,7-디메톡시-4-메틸프탈라진(100 mg, 419 μmol, 1.00 당량), (R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(85.1 mg, 419 μmol, 1.00 당량), BrettPhos Pd G3(38.0 mg, 41.9 μmol, 0.10 당량) 및 칼륨tert-부톡시드(1.00 M, 1.26 mL, 3.00 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시키고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge BEH C18 100 X 25 mm X 5 um; 이동 상: [물(10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 35% - 65%)에 의해 정제하여 (R)-6,7-디메톡시-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(8.24 mg, 20.3 μmol, 4.84% 수율, 99.8% 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 406.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 7.83 (s, 1H), 7.76 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.33 - 7.27 (m, 1H), 7.22 (s, 1H), 5.73 - 5.64 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 2.58 (s, 6H), 1.55 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
일반 반응 도식 IV의 교시 및 실시예 4-1의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 4에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 4-2 내지 4-4의 화합물을 제조하였다:
Figure pct00086
실시예 5-1
(R)-N-(1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-4-이소프로필-6,7-디메톡시프탈라진-1-아민
Figure pct00087
단계 A: DMSO(3.00 mL) 중 (R)-1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에탄-1-아민(200 mg, 768 μmol, 0.90 당량), 1,4-디클로로-6,7-디메톡시-프탈라진(221 mg, 853 μmol, 1.00 당량), N,N-디이소프로필에틸아민(331 mg, 2.56 mmol, 446 μL, 3.00 당량) 및 불화칼륨(149 mg, 2.56 mmol, 60.0 μL, 3.00 당량)을 130℃에서 12시간 동안 교반했다. 그 다음, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시킨 다음, 에틸 아세테이트(5.00 mL) 및 물(8.00 mL)을 첨가하고 층을 분리하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(10.0 mL × 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(10.0 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 (R)-4-클로로-N-(1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-6,7-디메톡시프탈라진-1-아민(100 mg, 24.3% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 483.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.53 - 7.49 (m, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.44 - 7.40 (m, 1H), 7.34 - 7.29 (m, 2H), 7.13 - 7.05 (m, 2H), 6.99 (s, 1H), 6.06 - 5.96 (m, 1H), 4.09 (s, 3H), 4.07 (s, 3H), 3.60 (s, 2H), 2.27 (s, 6H), 1.84 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
단계 B: THF(1.00 mL) 및 1-메틸-2-피롤리디논(0.01 mL) 중 (R)-4-클로로-N-(1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-6,7-디메톡시프탈라진-1-아민(40.0 mg, 82.8 μmol, 1.00 당량) 및 철(III) 아세틸아세토네이트(80.0 mg, 226 μmol, 2.74 당량)의 용액에 이소프로필마그네슘 클로라이드(THF 중 3.00 M, 600 μL, 21.7 당량)를 0℃에서 적가하였다. 첨가 후, 혼합물 반응물을 25℃에서 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액(5.00 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 에틸 아세테이트(1.00 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(2.00 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 um; 이동 상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 16% - 46%) 및 동결건조에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-4-이소프로필-6,7-디메톡시프탈라진-1-아민(10.3 mg, 20.4% 수율, 99.0% 순도, 트리플루오로아세트산 염)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]: 491.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.11 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.66 - 7.63 (m, 1H), 7.56 - 7.47 (m, 3H), 7.26 - 7.21 (m, 1H), 7.04 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.73 - 5.60 (m, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.12 (s, 3H), 4.11 (s, 3H), 3.97 - 3.88 (m, 1H), 2.73 (s, 6H), 1.91 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.53 - 1.42 (m, 6H).
SFC 조건: 컬럼: Chiralcel OD-3 50 x 4.6 mm I.D., 3 um 이동 상: CO2의 경우 상 A, MeOH(0.05% DEA)의 경우 상 B; 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% DEA) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar.
일반 반응 도식 I의 교시 및 실시예 5-1의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 5에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 5-2 내지 5-3의 화합물을 제조하였다:
Figure pct00088
실시예 5-4
(R)-N-(1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-6,7-디메톡시-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-아민
Figure pct00089
Figure pct00090
단계 A: 테트라하이드로푸란(20.0 mL) 중 2-브로모-4,5-디메톡시벤조산(0.30 g, 1.15 mmol, 1.00 당량)의 용액에 n-BuLi(1.60 M, 1.72 mL, 2.40 당량)를 질소 분위기 하에 -78 ℃에서 첨가했다. -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, 에틸 2,2,2-트리플루오로아세테이트(163 mg, 1.15 mmol, 159 uL, 1.00 당량)를 동일한 온도에서 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하고, 20℃로 가온하고, 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물(20.0 mL)에 붓고 에틸 아세테이트(20.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(20.0 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 0/1)에 의해 정제하여 4,5-디메톡시-2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)벤조산(0.10 g, 30.9% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] + = 279.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.30 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.98 (s, 3H).
단계 B: 에탄올(10.0 mL) 중 4,5-디메톡시-2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)벤조산(0.10 g, 359 μmol, 1.00 당량)의 현탁액에 NH2NH2·H2O(180 mg, 3.59 mmol, 175 μL, 10.0 당량)를 20℃에서 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응물을 감압 하에 농축하여 6,7-디메톡시-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1(2H)-온(80.0 mg, 미정제)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] + = 316.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.70 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.96 (s, 3H).
단계 C: POCl3(4.95 g, 32.3 mmol, 3.00 mL, 29.5 당량) 중 6,7-디메톡시-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1(2H)-온(300 mg, 1.09 mmol, 1.00 당량)의 용액에 25℃에서 N, N-디이소프로필에틸아민(707 mg, 5.47 mmol, 953 μL, 5.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 그 다음 에틸 아세테이트(10.0 mL)로 희석하고 얼음물(10.0 mL)에 붓고 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 1-클로로-6,7-디메톡시-4-(트리플루오로메틸)프탈라진(50.2 mg, 171 nmol, 15.7% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] + = 293.0.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ = 7.60 (s, 1H), 7.44 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 4.15 (s, 3H), 4.12 (s, 3H).
단계 D: DMSO(1.00 mL) 중 (R)-1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에탄-1-아민(50.0 mg, 168 μmol, 1.00 당량, HCl) 및 1-클로로-6,7-디메톡시-4-(트리플루오로메틸)프탈라진(49.3 mg, 168 μmol, 1.00 당량)의 용액에 N, N-디이소프로필에틸아민(87.1 mg, 674 μmol, 117 μL, 4.00 당량) 및 불화칼륨(2.94 mg, 50.5 μmol, 1.18 μL, 0.30 당량)을 첨가하였다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하고 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Agela DuraShell C18 150 x 25 mm x 5 um; 이동 상: 상 A: [물(0.05% NH3H2O+10 mM NH4HCO3)], 상 B: 아세토니트릴, B%: 60%-90%)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(5-(2-((디메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-6,7-디메톡시-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-아민(4.51 mg, 8.72 μmol, 5.18% 수율, 99.9% 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] + = 517.1.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ = 7.51 - 7.46 (m, 1H), 7.43 (dd, J = 1.5, 7.0 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.35 - 7.28 (m, 2H), 7.13 (s, 2H), 6.99 (br s, 1H), 6.20-6.13 (m, 1H), 5.39 (br s, 1H), 4.08 (s, 3H), 4.07 (s, 3H), 3.53 (br s, 2H), 2.25 (br s, 6H), 1.87 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
실시예 6-1
(R)-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(4-메틸피페라진-1-일)프탈라진-1-아민
Figure pct00091
Figure pct00092
단계 A: 디옥산(50.0 mL) 중 메틸 5-브로모-2-요오도벤조에이트(5.00 g, 14.7 mmol, 1.00 당량), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(5.60 g, 15.4 mmol, 5.20 mL, 1.05 당량) 및 Pd(PPh3)2Cl2(309 mg, 440 μmol, 0.03 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고, 물(50.0 mL)을 첨가하여 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL × 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 메틸 5-브로모-2-(1-에톡시비닐)벤조에이트(6.00 g, 미정제)를 황색 오일로서 제공하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 B: THF(50.0 mL) 중 메틸 5-브로모-2-(1-에톡시비닐)벤조에이트(6.00 g, 미정제)의 용액에 염산 수용액(10%, 25.0 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물(50.0 mL)을 첨가하고, 수성 층을 에틸 아세테이트(100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30.0 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 50/1)에 의해 정제하여 메틸 2-아세틸-5-브로모벤조에이트(2.50 g, 67.0% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 2.0, 8.2 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.53 (s, 3H).
단계 C: 에탄올(30.0 mL) 중 메틸 2-아세틸-5-브로모벤조에이트(1.50 g, 5.83 mmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(876 mg, 17.5 mmol, 851 μL, 3.00 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 95℃에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 에탄올로 10분 동안 분쇄하여 현탁액을 제공하고, 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 수집하고 진공 하에 건조하여 7-브로모-4-메틸프탈라진-1(2H)-온(0.70 g, 2.93 mmol, 50.2% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 239.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.57 (br s, 1H), 8.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.50 (s, 3H).
단계 D: 디옥산(10.0 mL) 중 7-브로모-4-메틸-프탈라진-1-올(1.00 g, 4.18 mmol, 1.00 당량), 1-메틸피페라진(628 mg, 6.27 mmol, 696 μL, 1.50 당량), RuPhos(195 mg, 418 μmol, 0.10 당량), Pd2(dba)3(192 mg, 209 μmol, 0.05 당량) 및 -BuOK(THF 중 1 M, 8.37 mL, 2.00 당량)를 탈기하고 N2로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 N2 분위기 하에 110℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)을 첨가하여 켄칭한 다음, EtOAc(10 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(5 mL × 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 미정제 생성물을 EtOAc(3 mL)로 10분 동안 분쇄하여 4-메틸-7-(4-메틸피페라진-1-일)프탈라진-1(2H)-온(800 mg, 3.10 mmol, 74.0% 수율)을 황색 고체로서 제공했다. LCMS [M+1]+: 259.1.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 12.13 (s, 1H), 7.74 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 2.8, 9.0 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 3.40 - 3.34 (m, 4H), 2.49 - 2.45 (m, 4H), 2.43 (s, 3H), 2.23 (s, 3H).
단계 E: 옥시염화인(1.61 g, 10.5 mmol, 976 μL, 27.1 당량) 중 4-메틸-7-(4-메틸피페라진-1-일)프탈라진-1(2H)-온(100 mg, 387 μmol, 1.00 당량)의 용액에. 혼합물을 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 물(10.0 mL)에 용해시키고 포화 황산나트륨으로 pH=9로 조정하고 에틸 아세테이트(5.00 mL × 2)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공 하에 농축하여 4-클로로-1-메틸-6-(4-메틸피페라진-1-일)프탈라진(70.0 mg, 미정제)을 갈색 고체로서 제공하고, 이를 정제 없이 직접 사용하였다. LCMS [M+1]+: 277.1.
단계 F: 디메틸 설폭시드(3.00 mL) 중 -클로로-1-메틸-6-(4-메틸피페라진-1-일)프탈라진(60.0 mg, 217 μmol, 1.00 당량) 및 (R)-1-(2-메틸- 3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(48.5 mg, 238 μmol, 1.10 당량)의 용액에 세슘 플루오라이드(98.8 mg, 650 μmol, 24.0 μL, 3.00 당량) 및 N, N-디이소프로필에틸아민(140 mg, 1.08 mmol, 189 μL, 5.00 당량)을 첨가하였다. 그 다음 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 물(1.50 ml)에 붓고 prep-HPLC(컬럼: Boston Green ODS 150 x 30 mm x 5 um; 이동 상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-45%, 10분)에 의해 정제하였다. 생성물을 prep-HPLC(컬럼: Agela DuraShell C18 150 × 25 mm × 5 um; 이동 상: [물(0.05% NH3H2O+10 mM NH4HCO3)-ACN], B%: 38%-68%, 10분)로 추가 정제하여 (R)-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(4-메틸피페라진-1-일)프탈라진-1-아민(17.0 mg, 3.83 μmol, 17.6% 수율, 99.9% 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 444.1.
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ = 7.91 (d, J = 9.50 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.50 Hz, 1H), 7.55 - 7.63 (m, 2H), 7.48 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 7.50 Hz, 1H), 5.75 ― 5.70 (m, 1H), 3.55 (br s, 4H), 2.68 (br t, J = 5.00 Hz, 4H), 2.59 - 2.63 (m, 6H), 2.40 (s, 3H), 1.63 (d, J = 7.00 Hz, 3H).
실시예 6-2
(R)-4-메틸-N-(1-(5-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-아민
Figure pct00093
Figure pct00094
단계 A: MeOH(100 mL) 중 5-브로모-2-클로로이소니코틴산(12.0 g, 50.6 mmol, 1.00 당량)의 용액에 SOCl2(7.25 g, 60.9 mmol, 4.42 mL, 1.20 당량)를 적가한 다음, 혼합물을 75℃로 가열하고 8시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 EtOAc(100 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 메틸 5-브로모-2-클로로이소니코티네이트(12.0 g, 미정제)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 252.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ =8.78 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 3.91 (s, 3H).
단계 B: 디옥산(110 mL) 중 메틸 5-브로모-2-클로로이소니코티네이트(11.0 g, 43.92 mmol, 1.00 당량), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(16.7 g, 46.1 mmol, 15.6 mL, 1.05 당량) 및 Pd(PPh3)2Cl2(1.23 g, 1.76 mmol, 0.04 당량)를 탈기하고 N2로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 N2 분위기 하에 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 그 다음, 물(400 mL)을 첨가하여 반응 혼합물을 켄칭한 다음, EtOAc(150 mL X 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 메틸 2-클로로-5-(1-에톡시비닐)이소니코티네이트(10.6 g, 미정제)를 황색 오일로서 제공하였다.
단계 C: THF(100 mL) 중 메틸 2-클로로-5-(1-에톡시비닐)이소니코티네이트(10.6 g, 43.9 mmol, 1.00 당량)의 용액에 HCl(102 g, 280 mmol, 100 mL, 물 중 10% 순도, 6.38 당량)을 적가하고, 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 0℃에서 NaHCO3(300 mL)를 첨가하여 켄칭한 다음, EtOAc(100 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 3/1)에 의해 정제하여 메틸 5-아세틸-2-클로로이소니코티네이트(4.50 g, 21.1 mmol, 48.0% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.98 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 3.84 (s, 3H), 2.61 (s, 3H).
단계 D: EtOH(15.0 mL) 중 메틸 5-아세틸-2-클로로이소니코티네이트(1.00 g, 4.68 mmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(703 mg, 14.0 mmol, 683 μL, 3.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 95℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하여 7-클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1(2H)-온(0.85 g, 미정제)을 백색 고체로 얻었다. LCMS [M+1]+: 196.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 9.20 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 2.58 (s, 3H).
단계 E: 디옥산(10.0 mL) 중 7-클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1(2H)-온(750 mg, 3.83 mmol, 1.00 당량), 모르폴린(668 mg, 7.67 mmol, 675 μL, 2.00 당량), tBuOK(THF 중 1.00 M, 11.5 mL, 3.00 당량), RuPhos(179 mg, 383 μmol, 0.10 당량), Pd2(dba)3(176 mg, 192 μmol, 0.05 당량)의 용액을 탈기하고 질소로 3회 퍼징하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여액을 감압 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18(250*70 mm, 15 um); 이동 상: [물(0.05% HCl)-ACN]; B%: 10%-40%)에 의해 정제하여 4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1(2H)-온(500 mg, 2.03 mmol, 49.2% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. LCMS [M+1]+: 247.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.26 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 3.75 - 3.70 (m, 4H), 3.68 - 3.63 (m, 4H), 2.46 (s, 3H).
단계 F: POCl3(6.23 g, 40.6 mmol, 3.77 mL, 20.0 당량) 중 -메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1(2H)-온(500 mg, 2.03 mmol, 1.00 당량)의 용액을 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 POCl3를 제거하였다. 잔류물을 H2O(100 mL)로 희석한 후, NaHCO3고체를 사용하여 pH = 8로 조정한 다음, 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 4-(1-클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-7-일)모르폴린(500 mg, 미정제)를 황색 고체로서 얻었다. LCMS [M+1] +: 264.9.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.13 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 3.92 - 3.86 (m, 4H), 3.81 - 3.75 (m, 4H), 2.91 (s, 3H).
단계 G: 디메틸 설폭시드(2.00 mL) 중 4-(1-클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-7-일)모르폴린(50.0 mg, 189 μmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(65.5 mg, 189 μmol, 1.00 당량)의 혼합물에 세슘 플루오라이드(57.4 mg, 378 μmol, 13.9 μL, 2.00 당량) 및 N, N-디이소프로필에틸아민(48.8 mg, 378 mmol, 65.8 μL, 2.00 당량)을 글로브 박스에서 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 반응 혼합물에 물(30.0 mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트(3 × 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Agela DuraShell C18 150 × 25 mm × 5 um, 용리액으로서 물(0.04% NH4OH + 10 mM NH4HCO3) 및 아세토니트릴을 사용. 이동 상 A: 물(0.04% NH3H2O + 10 mM NH4HCO3)-ACN, 이동 상 B: 아세토니트릴. 구배: 24%-54% B)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-메틸(2-(5-(1-((4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)카르바메이트(20.0 mg, 34.8 μmol, 18.4% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 575.4.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.25 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.17-7.37 (m, 5H), 7.10 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.86 (br s, 1H), 5.59-5.68 (m, 1H), 4.46-4.52 (m, 2H), 3.92 (br s, 4H), 3.76-3.84 (m, 4H), 2.84 (s, 3H), 2.70 (s, 3H), 1.80 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.45 (br s, 9H).
단계 H: 디클로로메탄(1.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-메틸(2-(5-(1-((4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)카르바메이트(20.0 mg, 34.8 μmol, 1.00 당량)의 혼합물에 트리플루오로아세트산(0.20 mL)을 첨가하였다. 완료 후, 혼합물을 농축하고 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Agela DuraShell C18 150 × 25 mm × 5 um, 용리액으로서 물(0.04% NH3H2O+10 mM NH4HCO3) 및 아세토니트릴을 사용. 이동 상 A: 물(0.04% NH4OH + 10 mM NH4HCO3), 이동 상 B: 아세토니트릴. 구배: 35%-65% B)에 의해 정제하여 (R)-4-메틸-N-(1-(5-(2--((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(4 mg, 8.43 μmol, 24.2% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 475.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.04 (s, 1H), 7.43 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.25-7.36 (m, 4H), 7.08 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.83 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.80-3.86 (m, 6H), 3.70-3.77 (m, 4H), 2.69 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.79 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
일반 반응 도식 II & IV의 교시 및 실시예 6-1, 6-2, 10-1 & 10-2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 6에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 6-3 내지 6-19의 화합물을 제조하였다:
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
실시예 7-1
4-메틸-N-((R)-1-(5-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프탈라진-1-아민
Figure pct00100
Figure pct00101
단계 A: DCM(100 mL) 중 1-(4-(벤질옥시)-2-하이드록시페닐)에탄-1-온(5.00 g, 20.6 mmol, 1.00 당량) 및 피리딘(4.90 g, 61.9 mmol, 5.00 mL, 3.00 당량)의 혼합물에 트리플루오로메틸설포닐 트리플루오로메탄설포네이트(11.7 g, 41.3 mmol, 6.81 mL, 2.00 당량)를 질소 분위기 하에 0℃에서 천천히 적가하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(100 mL)에 붓고 5분 동안 교반하였다. 수성 상을 DCM(50.0 mL× 3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(50.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 2-아세틸-5-(벤질옥시)페닐 트리플루오로메탄설포네이트(7.40 g, 17.8 mmol, 86.2% 수율, 90% 순도)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 374.8.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.44 - 7.36 (m, 5H), 7.03 (dd, J = 2.4, 8.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.14 (s, 2H), 2.60 (s, 3H).
단계 B: DMF(100 mL) 및 메탄올(10.0 mL) 중 2-아세틸-5-(벤질옥시)페닐 트리플루오로메탄설포네이트(13.0 g, 34.7 mmol, 1.00 당량) 및 1,1-비스(디페닐포스피노)페로센(1.93 g, 3.47 mmol, 0.10 당량)의 혼합물에 트리에틸아민(17.6 g, 174 mmol, 24.2 mL, 5.00 당량) 및 팔라듐(II) 아세테이트(780 mg, 3.47 mmol, 0.10 당량)를 한 부분으로 질소 분위기 하에 20℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 일산화탄소(50 Psi) 분위기 하에 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 15℃로 냉각시키고 40℃에서 감압 하에 농축하여 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 물(100 mL)에 붓고 5분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(50.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 4/1)에 의해 정제하여 2-아세틸-5-(벤질옥시)벤조에이트(5.60 g, 16.9 mmol, 48.8% 수율, 86% 순도)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 285.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.58 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.44 - 7.35 (m, 5H), 7.26 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 5.14 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.53 (s, 3H).
단계 C: 에탄올(50.0 mL) 중 메틸 2-아세틸-5-(벤질옥시)벤조에이트(4.60 g, 16.2 mmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(2.48 g, 48.5 mmol, 2.41 mL, 98% 순도, 3.00 당량)을 25℃에서 천천히 적가한 다음, 반응 혼합물을 95℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 15℃로 냉각시키고 얼음물(w/w = 1/1)(100 mL)에 붓고 5분 동안 교반하여 현탁액을 제공하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 수집하고 감압 하에 건조하여 7-(벤질옥시)-4-메틸프탈라진-1(2H)-온(4.00 g, 미정제)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 267.0.
단계 D: 7-(벤질옥시)-4-메틸프탈라진-1(2H)-온(860 mg, 3.23 mmol, 1.00 당량)을 옥시염화인(14.2 g, 92.6 mmol, 8.60 mL, 28.7 당량)에 25℃에서 부분적으로 첨가한 다음, 반응 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 얼음물(50.0 mL)에 천천히 붓고 포화 중탄산나트륨 수용액(50.0 mL)으로 pH = 8로 조정하고 5분 동안 교반했다. 수성 상을 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(50.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 6 6-(벤질옥시)-4-클로로-1-메틸프탈라진(740 mg, 미정제)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 284.9.
단계 E: 디메틸 설폭시드(1.00 mL) 중 6-(벤질옥시)-4-클로로-1-메틸프탈라진(120 mg, 421 μmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(102 mg, 295 μmol, 0.70 당량)의 용액에 세슘 플루오라이드(192 mg, 1.26 mmol, 46.6 μL, 3.00 당량)를 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 130℃에서 16시간 동안 교반하고 혼합물을 에틸 아세테이트(30.0 mL)로 희석하였다. 합한 유기 분획을 염수(3 × 8 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 0-100%로 용리하는 실리카 겔 컬럼 플래시 크로마토그래피 12 g에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-((7-(벤질옥시)-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(60.0 mg, 44.2 μmol, 10.5% 수율, 43.8% 순도)를 갈색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 595.3.
단계 F: 메탄올(3.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-((7-(벤질옥시)-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(60.0 mg, 100 μmol, 1.00 당량)의 용액에 Pd/C(10.7 mg, 10.1 μmol, 10% 순도, 0.10 당량)를 첨가했다. 그 다음, 혼합물을 30℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 메탄올(5.00 mL) 및 디클로로메탄(10.0 ml)으로 세척했다. 여액을 감압 하에 농축하였다. 미정제 생성물을 역상 HPLC(컬럼: Phenomenex Synergi C18 150× 30 mm x 4 um; 이동 상: 상 A: [물(0.1% TFA)], 상 B: 아세토니트릴; B%: 42%-62%)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-((7-하이드록시-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(15.0 mg, 29.7 μmol, 29.5% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 505.3.
단계 G: DMF(0.10 mL) 중 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-((7-하이드록시-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(13.0 mg, 25.8 μmol, 1.00 당량) 및 (R)-테트라하이드로푸란-3-일 4-메틸벤젠설포네이트(9.16 mg, 30.9 μmol, 1.20 당량)의 용액에 불화세슘(15.0 mg, 98.8 μmol, 3.64 μL, 3.83 당량)을 첨가했다. 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 물(5.00 mL)에 붓고 여과하였다. 여액을 에틸 아세테이트(10 mL × 2)로 추출하고 합한 유기 층을 염수(10.0 mL)로 세척하고 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 진공 하에 농축하여 잔류물 tert-부틸 메틸(2-(5-((R)-1-((4-메틸-7-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)카르바메이트(14.8 mg, 25.8 μmol, 100% 수율)을 황색 오일로서 얻고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+1]+: 575.3.
단계 H: 디클로로메탄(0.50 mL) 중 tert-부틸 메틸(2-(5-((R)-1-((4-메틸-7-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)카르바메이트(10.0 mg, 17.4 μmol, 1.00 당량)의 용액에 2,6-루티딘(18.6 mg, 173 μmol, 20.3 μL, 10.0 당량)을 첨가한 후, TMSOTf(19.3 mg, 87.0 μmol, 15.7 μL, 5.00 당량)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 용매를 질소 분위기 하에 증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 HPLC(컬럼: Agela DuraShell C18 150 x 25 mm x 5 um; 이동 상: 상 A: [물(0.05% NH3H2O + 10 mM NH4HCO3)], 상 B: 아세토니트릴; B%: 36%-66%)에 의해 정제하여 4-메틸-N-((R)-1-(5-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-(((S')-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프탈라진-1-아민(2.20 mg, 4.64 μmol, 26.6% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 475.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.39-7.52 (m, 2H), 7.25-7.38 (m, 3H), 7.09 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.90 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 5.30 (br s, 1H), 3.88-4.09 (m, 4H), 3.81 (s, 2H), 2.72 (s, 3H), 2.29-2.44 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.18 (br dd, J = 5.6, 12.0 Hz, 1H), 1.81 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
일반 반응 도식 VI의 교시 및 실시예 7-1의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 7에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 7-2 내지 7-7의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00102
Figure pct00103
일반 반응 도식 IV의 교시 및 실시예 8-3(아래)의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 8에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 8-1 및 8-2의 화합물을 제조하였다:
실시예 8-1
(R)-4,7-디메틸-N-(1-(5-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)프탈라진-1-아민
Figure pct00104
Figure pct00105
실시예 8-3
Figure pct00106
(R)-7-메톡시-4-메틸-N-(1-(5-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)프탈라진-1-아민
Figure pct00107
단계 A: 디옥산(30.0 mL) 중 메틸 2-브로모-5-메톡시벤조에이트(3.00 g, 12.2 mmol, 1.00 당량) 및 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(4.64 g, 12.9 mmol, 4.34 mL, 1.05 당량)의 용액에 Pd(PPh3)2Cl2(258 mg, 367 μmol, 0.03 당량)를 첨가하였다. 그 다음 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 물(30.0 mL)에 붓고 에틸 아세테이트(30.0 mL × 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(30.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 혼합물을 추가 정제 없이 직접 사용하여 메틸 2-(1-에톡시비닐)-5-메톡시벤조에이트(2.80 g, 11.9 mmol, 96.8% 수율, 100% 순도를 가정함)를 갈색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 237.1.
단계 B: THF(20.0 mL) 중 메틸 2-(1-에톡시비닐)-5-메톡시벤조에이트(2.50 g, 10.6 mmol, 1.00 당량) 및 10% 수성 염화수소(386 mg, 10.6 mmol, 378 μL, 1.00 당량)의 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 물(20.0 mL)에 붓고 에틸 아세테이트(25.0 mL × 3)로 추출하였다. 유기 층을 염수(50.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피(0 내지 20% 에틸 아세테이트/석유 에테르)에 의해 정제하여 메틸 2-아세틸-5-메톡시벤조에이트(1.40 g, 5.72 mmol, 54.1% 수율, 85.1% 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 209.0.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 2.51 (s, 3 H) 3.86 (d, J = 10.0 Hz, 6 H) 7.06 - 7.15 (m, 2 H) 7.70 - 7.79 (m, 1 H).
단계 C: 에탄올(15.0 mL) 중 메틸 2-아세틸-5-메톡시벤조에이트(1.30 g, 6.24 mmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(938 mg, 18.7 mmol, 910 μL, 98% 순도, 3.00 당량)을 첨가하였다. 그 다음 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 물(20.0 mL)에 붓고 에틸 아세테이트(30.0 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(30.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 미정제 생성물을 정제 없이 다음 단계에 사용하여 7-메톡시-4-메틸프탈라진-1(2H)-온(1.10 g, 5.74 mmol, 91.9% 수율, 99.3% 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 191.0.
단계 D: 7-메톡시-4-메틸프탈라진-1(2H)-온(0.90 g, 4.73 mmol, 1.00 당량) 및 옥시염화인(15.2 g, 99.4 mmol, 9.23 mL, 21.0 당량)의 혼합물을 115℃에서 18시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 물(25.0 mL)에 부었다. 포화 탄산나트륨 용액을 pH = 9가 될 때까지 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 25.0 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(포화, 20.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 디클로로메탄:메틸 알코올 = 10:1)에 의한 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 4-클로로-6-메톡시-1-메틸프탈라진(240 mg, 1.14 mmol, 24.0% 수율, 98.8% 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 209.0.
단계 E: 디메틸 설폭시드(1.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(49.3 mg, 142 μmol, 0.99 당량), 4 -클로로-6-메톡시-1-메틸프탈라진(30.0 mg, 144 μmol, 1.00 당량) 및 세슘 플루오라이드(66.0 mg, 435 μmol, 16.0 μL, 3.02 당량)의 혼합물을 130℃에서 18시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(5.00 mL)로 희석하고, 염수(3.00 x 5 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Boston Green ODS 150 × 30 mm × 5 um; 이동 상: 상 A: [물(0.1% TFA)], 상 B: 아세토니트릴; B%: 38%-68%)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-((7-메톡시-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(10.0 mg, 18.7 μmol, 13.0% 수율, 96.8% 순도)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 519.2.
단계 F: 디클로로메탄(2.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-((7-메톡시-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(8.00 mg, 15.4 μmol, 1.00 당량) 및 2,6-루티딘(16.5 mg, 154 μmol, 18.0 μL, 10.0 당량)의 혼합물에 TMSOTf(24.0 mg, 108 μmol, 19.5 μL, 7.00 당량)를 첨가한 다음, 질소 분위기 하에 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물에 N, N-디이소프로필에틸아민(0.10 ml)을 첨가하고 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Agela DuraShell C18 150 × 25 mm × 5 um; 이동 상: 상 A: [물(0.05% NH3H2O +10 mM NH4HCO3)], 상 B: 아세토니트릴; B%: 38%-68%)에 의해 정제하여 (R)-7-메톡시-4-메틸-N-(1-(5-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)프탈라진-1-아민(3.00 mg, 7.10 μmol, 46.0% 수율, 99.0% 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 419.2.
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ = 8.01 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.33 - 7.37 (m, 2H), 7.26 - 7.34 (m, 1H), 7.10 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 5.85 - 5.96 (m, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.82 (d, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 9-1
(R)-4-메톡시-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(피페라진-1-일)프탈라진-1-아민
Figure pct00108
Figure pct00109
단계 A: 옥시염화인(40.0 mL) 중 6-브로모-2,3-디하이드로프탈라진-1,4-디온(3.00 g, 12.4 mmol, 1.00 당량)의 용액에 N, N-디이소프로필에틸아민(4.02 g, 31.1 mmol, 5.42 mL, 2.50 당량)을 25℃에서 적가하였다. 그 다음, 반응물을 120℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각하고 진공에서 농축하여 대부분의 옥시염화인을 제거하고 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 얼음물(100 mL)에 붓고, 생성된 수용액을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 pH = 7로 조정한 다음, 디클로로메탄(50.0 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(30.0 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 6-브로모-1,4-디클로로프탈라진(1.20 g, 4.32 mmol, 미정제)을 황색 고체로서 추가 정제 없이 제공하였다. LCMS [M+3]+: 279.0.
단계 B: DMSO(10.0 mL) 중 6-브로모-1,4-디클로로프탈라진(500 mg, 1.80 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(365 mg, 1.80 mmol, 1.00 당량)의 혼합물에 불화칼륨(313 mg, 5.40 mmol, 126 μL, 3.00 당량), N, N-디이소프로필에틸아민(465 mg, 3.60 mmol, 627 μL, 2.00 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 130℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이 시간 후, 반응물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(20.0 mL)로 희석하고, 염수(5.00 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 분취용 TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)에 의해 정제하여 (R)-7-브로모-4-클로로-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(360 mg, 769 μmol, 42.7% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+3] +: 446.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.15 - 8.01 (m, 2H), 7.99 - 7.79 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 7.23 (s, 1H), 5.91 - 5.77 (m, 1H), 5.45 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 1.65 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 C: 메탄올(5.00 mL) 중 (R)-7-브로모-4-클로로-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(330 mg, 742 μmol, 1.00 당량)의 혼합물에 나트륨 메톡시드(200 mg, 3.71 mmol, 5.00 당량)를 질소 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로파 반응기에서 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-7-브로모-4-메톡시-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(281 mg, 638 μmol, 86.0% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
단계 D: 디옥산(5.00 mL) 중 (R)-7-브로모-4-메톡시-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(240 mg, 545 μmol, 4.00 당량) 및 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트(25.4 mg, 136 μmol, 1.00 당량)의 혼합물에 RuPhos Pd G3(5.70 mg, 6.81 μmol, 0.05 당량) 및 탄산세슘(178 mg, 545 μmol, 4.00 당량)을 한 부분으로 질소 분위기 하에 20℃에서 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반했다. LCMS는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 현탁액을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 필터 케이크를 에틸 아세테이트(30.0 mL)로 세척했다. 합한 여액을 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex Synergi C18 150 × 30 mm x 4 um, 이동 상 A: 물(0.1% TFA), 이동 상 B: 아세토니트릴. 구배: 49%~69% B)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-4-(1-메톡시-4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-일)피페라진-1-카르복실레이트(70.0 mg, 128 μmol, 94.1% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 546.3.
단계 E: 디클로로메탄(1.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(1-메톡시-4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-일)피페라진-1-카르복실레이트(50.0 mg, 91.6 μmol, 1.00 당량)의 혼합물에 트리플루오로아세트산(0.20 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. LCMS는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(column: Phenomenex Synergi C18 100 × 21.2 mm × 4 um, 용리액으로서 TFA 물 및 아세토니트릴을 사용함. 이동 상 A: 물(0.1% TFA), 이동 상 B: 아세토니트릴. 구배: 14%~44% B)에 의해 정제하여 (R)-4-메톡시-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(피페라진-1-일) 프탈라진-1-아민(35.0 mg, 78.6 μmol, 85.7% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 446.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.18 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 7.64-7.77 (m, 2H), 7.36-7.46 (m, 1H), 5.42 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.75-3.86 (m, 4H), 3.38-3.47 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 1.80 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 9-1의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 9에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 9-2의 화합물을 제조하였다:
Figure pct00110
실시예 10-1
(R)-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(피페리딘-4-일)프탈라진-1-아민
Figure pct00111
Figure pct00112
단계 A: POCl3(75.54 g, 492.66 mmol, 45.78 mL, 29.44 당량) 중 7-브로모-4-메틸프탈라진-1(2H)-온(4 g, 16.73 mmol, 1.00 당량)의 혼합물을 N2 분위기 하에 20℃에서 교반한 다음, 100℃로 가열하고 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 20℃로 냉각시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물에 천천히 붓고 pH = 8이 될 때까지 포화 NaHCO3로 중화시켰다. 그 다음, 에틸 아세테이트(100 mL)를 혼합물에 첨가하고 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 수집하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼(0-55% 석유 에테르/EtOAc)을 사용하여 정제하여 6-브로모-4-클로로-1-메틸프탈라진(2.2 g, 8.54 mmol, 51.06% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.41 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.29-8.34 (m, 1H), 8.24-8.28 (m, 1H), 2.89-2.93 (m, 3H).
단계 B: DMSO(4 mL) 중 6-브로모-4-클로로-1-메틸프탈라진(0.6 g, 2.32 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(472 mg, 2.32 mmol, 1.00 당량)의 혼합물에N, N-디이소프로필에틸아민(602 mg, 2.33 mmol, 810 μL, 2.00 당량) 및 CsF(706 mg, 4.66 mmol, 2.00 당량)를 한 부분으로 N2 분위기 하에 20℃에서 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 3시간 동안 교반했다. 이 시간 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 에틸 아세테이트(3x30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(포화, 20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 50% EtOAc/석유 에테르로 용리하는 분취용 TLC 플레이트를 사용하여 정제하여 (R)-7-브로모-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(0.6 g, 1414 μmol, 60.70% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
주석: 반응은 습기를 피하기 위해 N2 분위기 하에 글로브 박스에서 설정될 필요가 있다. 용매(DMSO)를 포함한 모든 시약은 건조될 필요가 있다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.97 (s, 1H), 7.87-7.93 (m, 1H), 7.79-7.85 (m, 1H), 7.66 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26-7.29 (m, 1H), 5.88 (quint, J = 6.4 Hz, 1H), 5.12 (br s, 1H), 2.78 (s, 3H), 2.57 (s, 3H), 1.66 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 C: 테트라하이드로푸란(3.00 mL) 및 물(0.60 mL) 중 (R)-7-브로모-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(35.0 mg, 82.5 μmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3,6-디하이드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트(38.3 mg, 124 μmol, 1.50 당량)의 혼합물에 탄산나트륨(26.2 mg, 247 μmol, 3.00 당량) 및 Pd(dppf)Cl2(6.04 mg, 8.25 μmol, 0.10 당량)를 한 부분으로 질소 분위기 하에 20℃에서 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 혼합물을 에틸 아세테이트(30.0 mL)로 희석하고, 물(10.0 mL× 3)로 세척하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 미정제 생성물을 황색 오일로서 제공하였다. 황색 오일을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1)에 의해 정제하여 (R)-4-(1-메틸-4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-일)-3,6-디하이드로피리딘-1(2H) -카르복실레이트(32.0 mg, 60.8 μmol, 73.7% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 527.3.
단계 D: 메탄올(3.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(1-메틸-4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-일)-3,6-디하이드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트(14.0 mg, 26.6 μmol, 1.00 당량)의 용액에 Pd/C(3.62 mg, 3.41 μmol, 10% 순도, 0.13 당량)를 질소 분위기 하에 첨가했다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 수소로 여러 번 퍼징하였다. 혼합물을 수소(15.0 psi) 하에 2시간 동안 25℃에서 교반한 다음, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(30.0 mL)로 세척하였다. 합한 여액을 농축하여 tert-부틸 (R)-4-(1-메틸-4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-일)피페리딘-1-카르복실레이트(14.0 mg, 26.5 μmol, 99.6% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. 미정제 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [M+1] +: 529.3.
단계 E: 디클로로메탄(2.00 mL) 및 트리플루오로아세트산(0.40 mL) 중 tert-부틸 (R)-4-(1-메틸-4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-일)피페리딘-1-카르복실레이트(14 mg, 26.5 μmol, 1.00 당량)의 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반한 다음 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(column: Phenomenex Synergi C18 150 × 30 mm × 4 um, 용리액으로서 TFA 물 및 아세토니트릴을 사용함. 이동 상 A: 물(0.1% TFA), 이동 상 B: 아세토니트릴. 구배: 20%~50% B)에 의해 정제하여 (R)-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(피페리딘-4-일)프탈라진-1-아민(9.00 mg, 21.0 μmol, 79.3% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 429.1.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.67 (s, 1H), 8.37 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.57 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.61 (br d, J = 12.8 Hz, 2H), 3.20-3.30 (m, 3H), 2.87 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.21-2.32 (m, 2H), 2.05-2.20 (m, 2H), 1.71 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 10-2
(R)-N-(1-(5-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-모르폴리노-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-아민
Figure pct00113
Figure pct00114
단계 A: 1,2-디메톡시에탄(25.0 mL) 중 디메틸 4-브로모프탈레이트(2.00 g, 7.32 mmol, 1.00 당량)의 용액에 CsF(223 mg, 1.46 mmol, 54.0 μL, 0.20 당량) 및 TMSCF3(1.25 g, 8.79 mmol, 1.20 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0 내지 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트(1.00 mL)와 물(15.0 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 분리하고, 염수(15.0 mL× 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 6-브로모-3-메톡시-3-(트리플루오로메틸)이소벤조푸란-1(3H)-온 및 5-브로모-3-메톡시-3-(트리플루오로메틸)이소벤조푸란-1(3H)-온(2.20 g, 미정제)의 혼합물을 무색 오일로서 제공하였다.
단계 B: THF(25.0 mL) 중 6-브로모-3-메톡시-3-(트리플루오로메틸)이소벤조푸란-1(3H)-온 및 5-브로모-3-메톡시-3-(트리플루오로메틸)이소벤조푸란-1(3H)-온(2.20 g, 7.07 mmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(708 mg, 14.6 mmol, 688 μL, 2.00 당량)을 첨가했다. 혼합물을 75℃에서 18시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축하여 용매를 제거하였다. 잔류물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 8/1)에 의해 정제하여 7-브로모-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1(2H)-온(680 mg, 2.32 mmol, 32.8% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.54 (d, J = 1.71 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 8.68, 2.08 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 8.80, 1.47 Hz, 1H).
단계 C: POCl3(3.30 g, 21.5 mmol, 2.00 mL, 31.5 당량) 중 7-브로모-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1(2H)-온(200 mg, 683 μmol, 1.00 당량)의 용액에 피리딘(108 mg, 1.37 mmol, 110 μL, 2.00 당량)을 20℃에서 첨가하였다. 혼합물을 105℃에서 1.5시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축하여 6-브로모-4-클로로-1-(트리플루오로메틸)프탈라진(210 mg, 미정제)을 백색 고체로서 제공하였다.
단계 D: DMSO(2.00 mL) 중 6-브로모-4-클로로-1-(트리플루오로메틸)프탈라진(135 mg, 433 μmol, 1.50 당량)의 용액에 N, N-디이소프로필에틸아민(112 mg, 866 μmol, 151 μL, 3.00 당량), KF(1.68 mg, 28.8 μmol, 6.76 μL, 0.10 당량) 및 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-아미노에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(0.10 g, 289 μmol, 100 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 마이크로웨이브에서 45분 동안 130℃에서 교반하였다. 혼합물을 물(2.00 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2.00 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물(2.00 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-((7-브로모-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(46.0 mg, 74.0 μmol, 25.6% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
단계 E: 디옥산(0.10 mL) 중 tert-부틸 (R)-(2-(5-(1-((7-브로모-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)(메틸)카르바메이트(0.046 g, 74.0 μmol, 1.00 당량), 모르폴린(7.74 mg, 88.8 μmol, 7.82 μL, 1.20 당량), Cs2CO3(72.3 mg, 222 μmol, 3.00 당량), Pd2(dba)3(6.78 mg, 7.40 μmol, 0.100 당량) 및 RuPhos(6.91 mg, 14.8 μmol, 0.20 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 시간 후, 혼합물을 물(2.00 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2.00 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(2.00 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-메틸(2-(5-(1-((7-모르폴리노-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)카르바메이트(43.0 mg, 68.5 μmol, 92.6% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
단계 F: 디클로로메탄(1.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-메틸(2-(5-(1-((7-모르폴리노-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)티오펜-2-일)벤질)카르바메이트(50.0 mg, 79.7 μmol, 1.00 당량)의 용액에 트리플루오로아세트산(770 mg, 6.75 mmol, 0.50 mL, 84.8 당량)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 20분 동안 교반한 다음, 여과하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex Synergi C18 100 x 21.2 mm x 4 um; 이동 상: 상 A: [물(0.1% TFA)], 상 B: ACN; B%: 17%-47%)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(5-(2-((메틸아미노)메틸)페닐)티오펜-2-일)에틸)-7-모르폴리노-4-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-아민(17.5 mg, 33.1 μmol, 41.6% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 8.87 (s, 2H), 8.50 (s, 1H), 7.89 ― 7.39 (m, 6H), 7.19 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.07 ― 5.96 (m, 1H), 4.23 (s, 2H), 3.80 (s, 4H), 3.46 (s, 4H), 2.56 (s, 3H), 1.80 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 10-1 및 10-2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 10에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 10-3 내지 10-87의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00115
Figure pct00116
Figure pct00117
Figure pct00118
Figure pct00119
Figure pct00120
Figure pct00121
Figure pct00122
Figure pct00123
Figure pct00124
Figure pct00125
Figure pct00126
Figure pct00127
Figure pct00128
Figure pct00129
Figure pct00130
Figure pct00131
Figure pct00132
Figure pct00133
Figure pct00134
Figure pct00135
Figure pct00136
Figure pct00137
Figure pct00138
Figure pct00139
실시예 11-1
(R)-(4-(1-메틸-4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-일)피페라진-1-일)(옥세탄-3-일)메탄온
Figure pct00140
Figure pct00141
DMF(0.50 mL) 중 (R)-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(피페라진-1-일)프탈라진-1-아민(20.0 mg, 46.6 μmol, 1.00 당량) 및 옥세탄-3-카르복실산(5.70 mg, 55.9 μmol, 1.20 당량)의 용액에 HATU(21.3 mg, 55.9 μmol, 1.20 당량) 및 N, N-디이소프로필에틸아민(18.1 mg, 140 μmol, 24.3 μL, 3.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반한 다음 prep-HPLC(Waters Xbridge 150 25 mm x 5 um; 이동 상: 이동 상 A: [물(10 mM NH4HCO3), 이동 상 B: 아세토니트릴]; B%: 27%-57%)에 의해 정제하여 (R)-(4-(1-메틸-4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-일)피페라진-1-일)(옥세탄-3-일)메탄온(9.00 mg, 17.4 μmol, 37.4% 수율, 99.4% 순도)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 514.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.02 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.73 - 7.63 (m, 3H), 7.50 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.63 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 4.89 (br s, 4H), 4.33 - 4.22 (m, 1H), 3.89 - 3.78 (m, 2H), 3.69 - 3.58 (m, 4H), 3.55 - 3.47 (m, 2H), 2.67 (s, 3H), 2.61 (s, 3H), 1.64 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 11-1의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 11에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 11-2 내지 11-6의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00142
Figure pct00143
실시예 12-1
(R)-4-메틸-7-(4-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피페라진-1-일)-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민
Figure pct00144
단계 A: POCl3(137 g, 893 mmol, 83.0 mL, 34.9 당량) 중 7-클로로-4-메틸피리도[3.4--d]피리다진-1(2H)-온(5.00 g, 25.6 mmol, 1.00 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(9.91 g, 76.7 mmol, 13.4 mL, 3 당량)을 25℃에서 적가한 다음, 반응물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 시간 후, 혼합물을 25℃로 냉각시키고 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하고, 잔류물을 0℃에서 에틸 아세테이트(300 mL)로 희석하고, 중탄산나트륨 포화 수용액을 천천히 첨가하여 pH=7로 조정하였다. 합한 유기 상을 염수(200 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 1,7-디클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진(4.10 g, 19.2 mmol, 74.9% 수율)을 분홍색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 9.65 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 3.02 (s, 3H).
단계 B: DMSO(5.00 mL) 중 1,7-디클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진(300 mg, 1.40 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(285 mg, 1.40 mmol, 1.00 당량)의 용액에 불화칼륨(244 mg, 4.20 mmol, 98.5 μL, 3.00 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(543 mg, 4.20 mmol, 732 μL, 3.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고 물(20.0 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(5.00 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 5/1)에 의해 정제하여 (R)-7-클로로-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(320 mg, 840 μmol, 60.0% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 381.0.
단계 C: 디옥산(1.00 mL) 중 (R)-7-chloro-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(40.0 mg, 105 μmol, 1.00 당량), 1-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피페라진(58.9 mg, 210 μmol, 2.00 당량, TFA 염), 탄산세슘(171 mg, 525 μmol, 5.00 당량), RuPhos Pd G3(8.79 mg, 10.5 μmol, 0.10 당량)을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 물(15.0 mL)을 첨가하여 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(5.00 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(5.00 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼:Phenomenex Gemini-NX C18 75 × 30 mm × 3 um; 이동 상: 상 A: 물(0.04% HCl), 상 B: 아세토니트릴; 구배: B%: 30%-60%)에 의해 정제하여 (R)-4-메틸-7-(4-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피페라진-1-일)-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(9.51 mg, 15.1% 수율, HCl 염)을 연한 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 511.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 9.00 (s, 1H), 7.72 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.35 - 7.29 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 5.63 (quin, J = 6.8 Hz, 1H), 3.88 - 3.83 (m, 4H), 3.75 (s, 2H), 3.78 - 3.72 (m, 1H), 3.04 - 2.98 (m, 4H), 2.56 (s, 6H), 1.55 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 12-2
7-(6-옥사-3-아자비사이클로[3.1.1]헵탄-3-일)-4-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민
Figure pct00145
디옥산(2.00 mL) 중 (R)-7-클로로-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(50.0 mg, 131 μmol, 1.00 당량) 및 6-옥사-3-아자비사이클로[3.1.1]헵탄(35.6 mg, 263 μmol, 2.00 당량, HCl)의 용액에 탄산세슘(171 mg, 525 μmol, 4.00 당량), RuPhos(6.10 mg, 13.1 μmol, 0.10 당량) 및 Pd2(dba)3(6.00 mg, 6.60 μmol, 0.05 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시키고, 여과하고, 여액을 물(10.0 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(30.0 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(10.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼:Waters Xbridge BEH C18 100 × 25 mm × 5 um; 이동 상: 상 A: 물(10 mM NH4HCO3), 상 B: 아세토니트릴. 구배: B%: 30%-60%)에 의해 정제하여 7-(6-옥사-3-아자비사이클로[3.1.1]헵탄-3-일)-4-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(8.64 mg, 18.9 μmol, 14.4% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 444.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.03 (s, 1H), 7.74 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.66 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.80 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.91 - 3.90 (m, 2H), 3.75 - 3.68 (m, 2H), 3.23 - 3.16 (m, 1H), 2.57 (s, 6H), 1.95 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 1.55 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
SFC 조건: Chiralcel OD-3 3μm, 0.46 cm id x 5 cm L; 이동 상: SFC CO2의 경우 A 및 MeOH(0.05% 이소프로필아민)의 경우 B; 구배: A중 B 3분 내에 10%에서 40%로; 유량: 4.0 mL/분; 컬럼 온도: 35℃; 파장: 220 nm; 시스템 배압: 100 bar.
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 12-1 및 12-2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 12에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 12-3 내지 12-134의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00146
Figure pct00147
Figure pct00148
Figure pct00149
Figure pct00150
Figure pct00151
Figure pct00152
Figure pct00153
Figure pct00154
Figure pct00155
Figure pct00156
Figure pct00157
Figure pct00158
Figure pct00159
Figure pct00160
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
Figure pct00164
Figure pct00165
Figure pct00166
Figure pct00167
Figure pct00168
Figure pct00169
Figure pct00170
Figure pct00171
Figure pct00172
Figure pct00173
Figure pct00174
Figure pct00175
Figure pct00176
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
Figure pct00180
실시예 13-1
4-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프탈라진-1-아민
Figure pct00181
톨루엔(1.00 mL) 중 (R)-7-브로모-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(70.0 mg, 164 μmol, 1.00 당량)의 용액에 수소화나트륨(13.2 mg, 329 μmol, 미네랄 오일 중 60.0%, 2.00 당량)을 질소 분위기 하에 0℃에서 첨가한 다음, (S)-테트라하이드로푸란-3-올(43.6 mg, 494 μmol, 3.00 당량), Pd2(dba)3(15.1 mg, 16.5 μmol, 0.10 당량) 및 Tol-BINAP(22.4 mg, 33.0 μmol, 0.20 당량)을 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃로 가온하고 질소 분위기 하에 1시간 교반하였다. 이 시간 후, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 포화 염화암모늄 수용액(30.0 mL)으로 천천히 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(30.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 80 × 40 mm × 3 μm; 이동 상: 상 A: 0.04% HCl을 갖는 물, 상 B: 아세토니트릴; B%의 구배: 30%-52%)에 의해 정제하여 4-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프탈라진-1-아민(6.31 mg, 14.0 μmol, 8.5% 수율, HCl 염) 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 432.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 15.31 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.90 - 8.34 (m, 2H), 7.82 - 7.77 (m, 2H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.52 - 5.47 (m, 1H), 4.05 - 4.03 (m, 1H), 3.93 - 3.84 (m, 3H), 2.79 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 2.45 - 2.43 (m, 1H), 2.08 - 2.06 (m, 1H), 1.63 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
SFC 조건: Chiralcel OD-3 3 μm, 0.46 cm id × 5 cm L; 이동 상: MeOH(0.05% 이소프로필아민); 구배: A중 B 3분 내에 10%에서 40%로; 유량: 4.0 mL/분; 컬럼 온도: 35℃; 파장: 220 nm
실시예 13-2
(R)-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(옥세탄-3-일옥시)프탈라진-1-아민
Figure pct00182
디옥산(2.00 mL) 중 (R)-7-브로모-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(100 mg, 236 μmol, 1.00 당량), 옥세탄-3-올(26.2 mg, 354 μmol, 1.50 당량), 나트륨 tert-부톡시드(68.0 mg, 707 μmol, 3.00 당량) 및 [2-(2-아미노페닐)페닐]-메틸설포닐옥시-팔라듐; 디-tert-부틸-[2-(2,4,6-트리이소프로필페닐)페닐]포스판(18.7 mg, 23.6 μmol, 0.10 당량)을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 혼합물을 여과하고 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 20/1)에 의해 정제한 다음, prep-HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 150 × 25 mm × 10 um; 이동 상: 상 A: 물(0.225% TFA), 상 B: 아세토니트릴; 상 B 구배: 17%-47%)를 정제하여 (R)-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(옥세탄-3-일옥시)프탈라진-1-아민(5.20 mg, 12.4 μmol, 5.25% 수율, 99.4% 순도)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 418.0.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.19 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.78 - 7.73 (m, 1H), 7.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 - 7.56 (m, 1H), 7.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.69 - 5.59 (m, 2H), 5.21 - 5.12 (m, 2H), 4.81 - 4.75 (m, 2H), 2.75 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 1.67 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 13-1 및 13-2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 13에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 13-3의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00183
실시예 14-1
Figure pct00184
단계 A: 클로로포름(8.00 mL) 중 66-브로모-4-클로로-1-메틸프탈라진(500 mg, 1.94 mmol, 1.00 당량)의 용액에 NBS(380 mg, 2.14 mmol, 1.10 당량) 및 AIBN(48.0 mg, 0.29 mmol, 0.15 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(20.0 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(30.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(25.0 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 6-브로모-1-(브로모메틸)-4-클로로프탈라진(180 mg, 535 μmol, 27.6% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+3] +: 336.6.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.52 - 8.50 (m, 1H), 8.41 (dd, J = 1.2, 3.6 Hz, 2H), 5.42 (s, 1H), 5.31 (s, 1H).
단계 B: 테트라하이드로푸란(10.0 mL) 중 디메틸아민(48.2 mg, 1.07 mmol, 0.05 mL, 2.00 당량, HCl 염)의 용액에 N, N-디이소프로필에틸아민(207 mg, 1.61 mmol, 0.28 mL, 3.00 당량)을 첨가란 다음, 6-브로모-1-(브로모메틸)-4-클로로프탈라진(180 mg, 0.54 mmol, 1.00 당량)을 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(30.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(30.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30.0 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1, Rf = 0.4)에 의해 정제하여 1-(6-브로모-4-클로로프탈라진-1-일)-N,N-디메틸메탄아민(80.0 mg, 266 μmol, 49.7% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+3] +: 301.9
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.51 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.30 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 4.02 (s, 2H), 2.22 (s, 6H).
단계 C: 디메틸설폭시드(3.00 mL) 중 1-(6-브로모-4-클로로프탈라진-1-일)-N,N-디메틸메탄아민(120 mg, 0.40 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(89.2 mg, 0.44 mmol, 1.10 당량)에 불화칼륨(69.6 mg, 1.20 mmol, 0.03 mL, 3.00 당량)을 첨가한 다음, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 25℃로 냉각시키고, 물(20.0 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1, Rf = 0.2)에 의해 정제하여 (R)-7-브로모-4-((디메틸아미노)메틸)-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(90.0 mg, 192 μmol, 48.2% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 467.0.
단계 D: 디옥산(8.00 mL) 중 (R)-7-브로모-4-((디메틸아미노)메틸)-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(60.0 mg, 0.13 mmol, 1.00 당량), 모르폴린(28.0 mg, 0.32 mmol, 0.03 mL, 2.50 당량), 탄산세슘(125 mg, 0.39 mmol, 3.00 당량) 및 RuPhos(12.0 mg, 0.03 mmol, 0.20 당량)의 용액에 Pd2(dba)3(11.8 mg, 0.02 mmol, 0.10 당량)를 첨가한 다음, 탈기하고 질소로 3회 퍼징하고, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 25℃로 냉각시키고, 물(20.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(30.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(25.0 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 (R)-4-((디메틸아미노)메틸)-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(5.75 mg, 12.1 μmol, 9.45% 수율, 99.9% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 474.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.58 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 7.52 (br d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.32 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.77 - 5.67 (m, 1H), 3.86 - 3.80 (m, 4H), 3.45 - 3.40 (m, 4H), 3.31 (br s, 2H), 2.58 (s, 3H), 2.16 (br s, 6H), 1.56 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
SFC 조건: 컬럼: Chiralcel OD-3 50×4.6 mm I.D., 3 μm 이동 상: CO2의 경우 상 A, MeOH(0.05% DEA)의 경우 상 B, 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% DEA) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar.
실시예 14-2
Figure pct00185
단계 A: 디메틸포름아미드(15.0 mL) 중 6-브로모-1-(브로모메틸)-4-클로로프탈라진(150 mg, 446 μmol, 1.00 당량)의 혼합물에 칼륨 프탈이미드(116 mg, 624 μmol, 1.40 당량)를 질소 분위기 하에 25℃에서 첨가했다. 혼합물을 85℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시켰다. 그 다음 혼합물을 물(50.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(50.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)에 의해 정제하여 2-((6-브로모-4-chloro프탈라진-1-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온(150 mg, 373 μmol, 83.6% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 404.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.55 (m, 2H), 8.40 (m, 1H), 7.95 (m, 2H), 7.90 (m, 2H), 5.60 (s, 2H).
단계 B: 디메틸 설폭시드(7.00 mL) 중 2-((6-브로모-4-chloro프탈라진-1-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온(130 mg, 323 μmol, 1.00 당량) 및 (R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(65.6 mg, 323 μmol, 1.00 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(125 mg, 969 μmol, 169 μL, 3.00 당량) 및 불화칼륨(56.3 mg, 969 μmol, 22.7 μL, 3.00 당량)을 밀봉된 튜브에서 130℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 25℃로 냉각시키고 물(50.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)에 의해 정제하여 (R)-2-((6-브로모-4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-1-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온(130 mg, 228 μmol, 70.7% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 472.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.91 (s, 1H), 8.20 - 8.07 (m, 2H), 7.97 - 7.80 (m, 5H), 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.72 - 5.60 (m, 1H), 5.25 (s, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.50 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 C: 메틸벤젠(10.0 mL) 중 (R)-2-((6-브로모-4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-1-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온(100 mg, 176 μmol, 1.00 당량) 및 모르폴린(61.2 mg, 703 μmol, 61.8 μL, 4.00 당량)의 용액에 BINAP(21.9 mg, 35.1 μmol, 0.20 당량), 탄산세슘(172 mg, 527 μmol, 3.00 당량) 및 Pd2(dba)3(16.1 mg, 17.6 μmol, 0.10 당량)을 질소 분위기 하에 25℃에서 첨가했다. 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 완료하고 25℃로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 물(50.0 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트(50.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 (R)-2-((4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)-6-모르폴리노프탈라진-1-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온(65.0 mg, 113 μmol, 64.3% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 576.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.03 (br d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.94 - 7.85 (m, 4H), 7.74 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.65 (br s, 2H), 7.51 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 (br t, J = 6.8 Hz, 1H), 5.72 - 5.67 (m, 1H), 5.18 (s, 2H), 3.83 (m, 4H), 3.45 (m, 4H), 2.44 (s, 3H), 1.51 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 D: 에탄올(6.00 mL) 중 (R)-2-((4-((1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)-6-모르폴리노프탈라진-1-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온(60.0 mg, 104 μmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(47.0 mg, 938 μmol, 45.6 μL, 9.00 당량)을 질소 분위기 하에 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 물(10.0 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(10.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 미정제 생성물을 역상 HPLC(물(0.04% HCl)/CH3CN)에 의해 정제하여 (R)-4-(아미노메틸)-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(5.81 mg, 13.0 μmol, 12.5% 수율, 염산염)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 446.1.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 8.62 (br s, 3H), 8.12 (br s, 2H), 7.79 (br d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.61 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38 (br t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.66 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.56 (br s, 2H), 3.81 (br t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.62 (br s, 4H), 2.53 (m, 3H), 1.70 (br d, J = 5.6 Hz, 3H).
실시예 14-3
3-((R)-1-((7-((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)-4-((메틸아미노)메틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴
Figure pct00186
단계 A: 디옥산(1.00 mL) 중 (R)-3-(1-((7-chloro-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(30.0 mg, 88.8 μmol, 1.00 당량)의 용액에 셀레늄 디옥사이드(19.7 mg, 178 μmol, 19.3 μL, 2.00 당량)를 첨가하고 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 5/1)에 의해 정제하여 (R)-3-(1-((7-chloro-4-포르밀피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(16.0 mg, 45.5 μmol, 51.2% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.06 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 9.09 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.76 (s, 1H), 7.78 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.36 (br t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.81 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.69 (s, 3H), 1.63 (br d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 B: THF(3.00 mL) 중 (R)-3-(1-((7-chloro-4-formyl피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(106 mg, 301 μmol, 1.00 당량) 및 메틸아민 테트라하이드로푸란 용액(2.0 M, 360 μL, 2.39 당량)의 용액에 아세트산(1.81 mg, 30.1 nmol, 1.72 μL, 0.10 당량)을 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 50℃에서 교반하였다. 이 시간 후에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(192 mg, 904 μmol, 3.00 당량)를 첨가하고, 그 직후에 혼합물을 물(5.00 mL)에 부었다. 수성 상을 에틸 아세테이트(10.0 mL× 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(10.0 mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 (R)-3-(1-((7-chloro-4-((메틸아미노)메틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(65.0 mg, 177 μmol, 58.8% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 367.2.
단계 C: DCM(0.50 mL) 중 (R)-3-(1-((7-chloro-4-((메틸아미노)메틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(34.0 mg, 92.7 μmol, 1.00 당량) 및 (Boc)2O(22.3 mg, 102 μmol, 23.4 μL, 1.10 당량)의 용액에 DMAP(1.13 mg, 9.27 μmol,0.10 당량)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2:1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-((7-chloro-1-((1-(3-시아노-2-메틸페닐)에틸)아미노)피리도[3,4-d]피리다진-4-일)메틸)(메틸)카르바메이트(35.0 mg, 75.0 μmol, 80.9% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.43 (br s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.29 - 7.24 (m, 1H), 5.68 - 5.62 (m, 1H), 2.78 - 2.75 (m, 5H), 1.63 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.49 - 1.41 (m, 9H), 1.22 (s, 3H).
단계 D: DMSO(0.10 mL) 중 ert-부틸 (R)-((7-chloro-1-((1-(3-시아노-2-메틸페닐)에틸)아미노)피리도[3,4-d]피리다진-4-일)메틸)(메틸)카르바메이트(30.0 mg, 64.3 μmol, 1.00 당량) 및 ((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄(7.01 mg, 51.7 μmol, 0.8 당량, HCl)의 용액에 세슘 플루오라이드(19.5 mg, 128 μmol, 4.74 μL, 2.00 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(16.6 mg, 128 μmol, 22.4 μL, 2.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 용액을 25℃로 냉각시키고, 물(10.0 mL)에 붓고, 수성 상을 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(10.0 mL× 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 tert-부틸 ((7-((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)-1-(((R)-1-(3-시아노-2-메틸페닐)에틸)아미노)피리도[3,4-d]피리다진-4-일)메틸)(메틸)카르바메이트(30.0 mg, 미정제)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 530.2.
단계 E: 아세토니트릴(1.50 mL) 중 tert-부틸 ((7-((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)-1-(((R)-1-(3-시아노-2-메틸페닐)에틸)아미노)피리도[3,4-d]피리다진-4-일)메틸)(메틸)카르바메이트(18.0 mg, 34.0 μmol, 1.00 당량)의 용액에 염산/디옥산(0.50 mL)을 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 물(5.00 mL)에 붓고, 수성 상을 에틸 아세테이트(5.00 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(5.00 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75× 30 mm× 3 um; 이동 상: 상 A: 물(0.05% HCl), 상 B: 아세토니트릴; B%: 7%-27%]에 의해 정제하여 3-((R)-1-((7-((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)-4-((메틸아미노)메틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(7.00 mg, 14.9 μmol, 43.8% 수율, 99.1% 순도, 염산염)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 430.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.09 (s, 1H), 7.83 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.63 - 7.40 (m, 2H), 5.56 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 5.41 (br s, 1H), 4.83 (s, 3H), 3.96 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.84 (br s, 1H), 3.69 (br d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.49 (br d, J = 3.2 Hz, 1H), 2.93 (s, 3H), 2.64 (s, 3H), 2.09 (br s, 2H), 1.84 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 14-4
3-((R)-1-((7-((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)-4-((디메틸아미노)메틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴
Figure pct00187
메탄올(1.00 mL) 중 3-((R)-1-((7-((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)-4-((메틸아미노)메틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(12.0 mg, 27.9 μmol, 1.00 당량) 및 파라포름알데히드(1.68 mg)의 용액에 아세트산(168 ug, 2.79 μmol, 0.16 μL, 0.10 당량) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(3.51 mg, 55.9 μmol, 2.00 당량)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 물(5.00 mL)에 붓고, 수성 상을 에틸 아세테이트(5.00 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(5.00 mL x 3)로 세척하고, 무수 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75× 30 mm× 3 um; 이동 상: 상 A: 물(0.05% HCl), 상 B: 아세토니트릴; B%: 9%-29%]에 의해 정제하여 3-((R)-1-((7-((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)-4-((디메틸아미노)메틸)피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(5.20 mg, 11.4 μmol, 40.8% 수율, 97.2% 순도, 염산염)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 444.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.11 (s, 1H), 7.83 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.58 - 7.29 (m, 2H), 5.56 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 5.42 (br s, 1H), 5.04 - 4.93 (m, 2H), 4.83 - 4.81 (m, 1H), 3.95 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.82 (br s, 1H), 3.67 (br s, 1H), 3.48 (br s, 1H), 3.11 (s, 6H), 2.64 (s, 3H), 2.08 (br s, 2H), 1.84 (br d, J = 6.8 Hz, 3H).
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 14-3 내지 14-4의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 14에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 14-5 내지 14-6의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00188
실시예 15-1
N-((R)-1-(3-아미노-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-4-메틸-7-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프탈라진-1-아민
Figure pct00189
단계 A: DMSO(1.50 mL) 중 6-브로모-4-클로로-1-메틸프탈라진(605 mg, 2.35 mmol, 1.10 당량)의 용액에 불화칼륨(372 mg, 6.41 mmol, 150 μL, 3.00 당량) 및 (R)-1-(3-니트로-5-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(상업적으로 입수 가능, 500 mg, 2.14 mmol, 1.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 20℃에서 물(3.00 mL)을 첨가하여 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(5.00 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(5.00 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(5.00 mL × 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르:에틸 아세테이트, 1:1)에 의해 정제하여 (R)-7-브로모-4-메틸-N-(1-(3-니트로-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(260 mg, 571 μmol, 26.8% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 455.0.
단계 B: 디옥산(0.50 mL) 및 물(0.30 mL) 중 (R)-7-브로모-4-메틸-N-(1-(3-니트로-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(20.0 mg, 43.9 μmol, 1.00 당량)의 용액에 수산화칼륨(4.93 mg, 87.9 μmol, 2.00 당량) 및 t-BuXPhos Pd G3(3.49 mg, 4.39 μmol, 0.10 당량)를 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 물(3.00 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(3.00 mL × 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(3.00 mL× 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 미정제 생성물 (R)-1-메틸-4-((1-(3-니트로-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-올(16.0 mg, 40.8 umol)을 갈색 오일로서 제공하고 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LCMS [M+1] +: 393.1.
단계 C: DMF(1.50 mL) 중 (R)-1-메틸-4-((1-(3-니트로-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)프탈라진-6-올(16.0 mg, 40.8 μmol, 1.00 당량)의 용액에 탄산세슘(39.9 mg, 122 μmol, 3.00 당량) 및 (R)-테트라하이드로푸란-3-일 4-메틸벤젠설포네이트(14.8 mg, 61.2 μmol, 1.50 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반했다. 잔류물을 물(2.00 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(3.00 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(5.00 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 갈색 오일로서 미정제 생성물 4-메틸-N-((R)-1-(3-니트로-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프탈라진-1-아민(18.0 mg, 38.93 μmol, 미정제)을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용했다. LCMS [M+1] +: 463.1.
단계 D: 에탄올(1.00 mL) 및 물(0.20 mL) 중 -메틸-N-((R)-1-(3-니트로-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프탈라진-1-아민(18.0 mg, 38.9 μmol, 1.00 당량)의 용액에 철 분말(10.9 mg, 195 μmol, 5.00 당량) 및 염화암모늄(10.4 mg, 195 μmol, 5.00 당량)을 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반했다. 잔류물을 메탄올(3.00 mL)로 희석하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC[Phenomenex Gemini-NX C18 75 × 30 mm × 3 um; 이동 상: 상 A: 물(10 mM NH4HCO3), 상 B: MeCN; B%: 25%-55%]에 의해 정제하여 N-((R)-1-(3-아미노-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-4-메틸-7-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프탈라진-1-아민(7.00 mg, 16.2 μmol, 41.6% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 433.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 6.98 (br d, J = 2.4 Hz, 2H), 6.76 (s, 1H), 5.42 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 5.34 (br dd, J = 4.4, 6.0 Hz, 1H), 4.13 - 3.90 (m, 4H), 2.67 (s, 3H), 2.46 - 2.32 (m, 1H), 2.26 - 2.15 (m, 1H), 1.64 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 15-2
Figure pct00190
단계 A: 디메틸 설폭시드(3.00 mL) 중 (R)-1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(250 mg, 1.01 mmol, 1.00 당량) 및 6-브로모-4-chloro-1-메틸프탈라진(259 mg, 1.01 mmol, 1.00 당량)의 용액, N,N-디이소프로필에틸아민(390 mg, 3.02 mmol, 526 μL, 3.00 당량) 및 불화칼륨(175 mg, 3.02 mmol, 70.7 μL, 3.00 당량)을 밀봉된 튜브에서 질소 분위기 하에 130℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 25℃로 냉각시키고 반응물을 물(50.0 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(30.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(20.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 0/1)에 의해 정제하여 (R)-7-브로모-4-메틸-N-(1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(200 mg, 426 μmol, 42.3% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 469.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.81 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.07 - 8.04 (m, 1H), 7.96 - 7.92 (m, 2H), 5.68 - 5.64 (m, 1H), 2.74 (s, 3H), 2.60 (s, 3H), 1.58 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 B: 디옥산(2.00 mL) 중 모르폴린 용액(44.5 mg, 511 μmol, 45.0 μL, 3.00 당량), (R)-7-브로모-4-메틸-N-(1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(80.0 mg, 170 μmol, 1.00 당량) 및 탄산세슘(166 mg, 511 μmol, 3.00 당량)의 용액에 RuPhos(15.9 mg, 34.1 μmol, 0.20 당량) 및 Pd2(dba)3(15.6 mg, 17.0 μmol, 0.10 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시키고, 물(40.0 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(20.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수(40.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 디클로로메탄:메탄올 = 10/1)에 의해 정제하여 (R)-4-메틸-N-(1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(50.0 mg, 105 μmol, 61.6% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.57 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.62 - 7.58 (m, 2H), 5.67 - 5.64 (m, 1H), 3.85 - 3.82 (m, 4H), 3.44 - 3.43 (m, 4H), 2.74 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 1.59 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 C: 에탄올(1.20 mL) 및 물(0.40 mL) 중 (R)-4-메틸-N-(1-(2-메틸-5-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(45.0 mg, 94.6 μmol, 1.00 당량) 및 염화암모늄(50.6 mg, 946 μmol, 10.0 당량)의 용액에 철 분말(52.8 mg, 946.4 μmol, 10.0 당량)을 질소 분위기 하에 90℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시켰다. 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하고 이를 prep-HPLC[컬럼: Phenomenex luna C18 80 × 40 mm × 3 um; 이동 상: 상 A: 물(0.04% HCl), 상 B: 아세토니트릴; B%: 12%-38%]에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(5-아미노-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(20.0 mg, 44.8 μmol, 47.3% 수율, 염산염)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 446.1.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 14.85 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.16 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.77 - 7.74 (m, 1H), 7.23 - 7.22 (m, 1H), 7.08 (s, 1H), 5.37 - 5.34 (m, 1H), 3.83 - 3.81 (m, 4H), 3.70 - 3.68 (m, 4H), 2.73 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 1.59 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
SFC 조건: Chiralcel OD-3 3μm, 0.46 cm id x 5 cm L; 이동 상: SFC CO2의 경우 A 및 MeOH(0.05% 이소프로필아민)의 경우 B; 구배: A중 B 3분 내에 10%에서 40%로; 유량: 4.0 mL/분; 컬럼 온도: 35℃; 파장: 220 nm; 시스템 배압: 100 bar.
일반 반응 도식 VI의 교시 및 실시예 15-1 내지 15-2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 15에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 15-3의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00191
실시예 16-1
(R)-N-(1-(4-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-아민
Figure pct00192
단계 A: DMSO(1.00 mL) 중 (R)-2-(1-아미노에틸)-6-(트리플루오로메틸)피리딘-4-아민(6.00 g, 24.8 mmol, 1.00 당량, 염산염), 6-브로모-4-chloro-1-메틸프탈라진(7.03 g, 27.3 mmol, 1.10 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(12.8 g, 99.3 mmol, 17.3 mL, 4.00 당량)의 용액에 세슘 플루오라이드(5.66 g, 37.3 mmol, 1.37 mL, 1.50 당량)을 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(300 mL)로 희석하고, 염수(200 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 내지 디클로로메탄/메탄올=10/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(4-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-7-브로모-4-메틸프탈라진-1-아민(9.00 g, 21.1 mmol, 85.0% 수율)을 갈색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ = 8.11 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.89 (dd, J = 1.6, 8.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.87 (br s, 1H), 6.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.58 - 5.49 (m, 1H), 4.89 (br s, 2H), 2.77 (s, 3H), 1.68 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
단계 B: THF(100 mL) 중 (R)-N-(1-(4-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-7-브로모-4-메틸프탈라진-1-아민(10.0 g, 23.5 mmol, 1.00 당량) 및 DMAP(287 mg, 2.35 mmol, 0.10 당량)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트(10.5 g, 48.1 mmol, 11.1 mL, 2.05 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 30분 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(2-(1-((7-브로모-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-6-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)(tert-부톡시카르보닐)카르바메이트(7.45 g, 11.9 mmol, 50.7% 수율)를 갈색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+3]+: 628.0.
단계 C: 디옥산(100 mL) 중 모르폴린(4.09 g, 46.9 mmol, 4.13 mL, 4.00 당량) 및 tert-부틸 (R)-(2-(1-((7-브로모-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-6-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)(tert-부톡시카르보닐)카르바메이트(7.35 g, 11.7 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Pd2(dba)3(1.07 g, 1.17 mmol, 0.10 당량), RuPhos(1.09 g, 2.35 mmol, 0.20 당량) 및 탄산세슘(11.5 g, 35.2 mmol, 3.00 당량)을 질소 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 105℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 여과하고, 필터 케이크를 메탄올(200 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하고 이를 실리카 겔 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 DCM/메탄올 = 10/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(2-(1-((4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-일)아미노)에틸)-6-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)카르바메이트(4.75 g, 8.92 mmol, 76.0% 수율)를 갈색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 433.3.
단계 D: 아세토니트릴(20.0 mL) 중 tert-부틸 (R)-(2-(1-((4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-일)아미노)에틸)-6-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)카르바메이트(4.75 g, 8.92 mmol, 1.00 당량)의 용액에 HCl/디옥산(20.0 mL)을 0℃에서 첨가하고, 반응물을 0 내지 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이 시점 이후, 고체 중탄산나트륨을 조금씩 첨가하여 혼합물의 pH를 pH=7로 조정하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하고, 이를 물(200 mL)로 분쇄한 다음 여과하였다. 필터 케이크를 물(30.0 mL× 3)로 세척하고, 수집하고, 아세토니트릴(100 mL)로 추가로 분쇄했다. 생성된 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 수집하고 진공 하에 건조하여 생성물 (R)-N-(1-(4-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(3.64 g, 7.99 mmol, 89.6% 수율, 94.9% 순도)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 433.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.84 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.40 (s, 2H), 5.32 - 5.23 (m, 1H), 3.82 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.44 - 3.39 (m, 4H), 2.56 (s, 3H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 16-2
Figure pct00193
단계 A: DMSO(40.0 mL) 중 1,7-디클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진(4.87 g, 22.8 mmol, 1.10 당량) 및 (R)-2-(1-아미노에틸)-6-(트리플루오로메틸)피리딘-4-아민(5.00 g, 20.7 mmol, 1.00 당량, 염산염)의 용액에 세슘 플루오라이드(9.43 g, 62.1 mmol, 2.29 mL, 3.00 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(8.02 g, 62.1 mmol, 10.8 mL, 3.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 시간 후, 혼합물을 물(50.0 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(150 mL× 3)로 추출했다. 합한 유기 상을 염수(150 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1로 세척하여 (R)-N-(1-(4-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-7-chloro-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(5.00 g, 13.1 mmol, 63.1%수율)을 회색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 383.2.
단계 B: DMSO(0.20 mL) 중 (R)-N-(1-(4-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-7-chloro-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(115 mg, 300 μmol, 1.00 당량) 및 (1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄(61.1 mg, 451 μmol, 1.50 당량, 염산염)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(77.7 mg, 601 μmol, 105 μL, 2.00 당량) 및 세슘 플루오라이드(274 mg, 1.80 mmol, 66.5 μL, 6.00 당량)를 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(10.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(10.0 mL× 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(20.0 mL× 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75× 30 mm× 3 um; 이동 상: 상 A: 물(0.05% HCl), 상 B: 아세토니트릴; B%: 14%-34%]에 의해 정제하여 N-((R)-1-(4-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-7-((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(93.9 mg, 211 μmol, 70.2% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 446.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 15.19 - 14.58 (m, 1H), 9.29 (s, 1H), 8.92 - 8.62 (m, 1H), 8.12 - 7.37 (m, 1H), 6.83 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.71 (br s, 1H), 5.41 - 5.18 (m, 1H), 5.15 - 5.03 (m, 1H), 4.94 - 4.76 (m, 1H), 4.02 - 3.81 (m, 2H), 3.80 - 3.65 (m, 3H), 2.05 (br d, J = 4.8 Hz, 2H), 1.65 (br d, J = 6.4 Hz, 3H).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.29 (s, 1H), 7.80 - 7.22 (m, 1H), 7.12 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.05 (br s, 1H), 5.53 (br s, 1H), 5.21 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 5.17 - 4.97 (m, 1H), 4.11 - 3.83 (m, 2H), 3.82 - 3.55 (m, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.24 - 2.05 (m, 2H), 1.80 (br d, J = 6.8 Hz, 3H).
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 16-1 내지 16-2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 16에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 16-3 내지 16-14의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00194
Figure pct00195
Figure pct00196
Figure pct00197
실시예 17-1
(R)-2-메톡시-3-(1-((4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)벤조니트릴
Figure pct00198
단계 A: THF(15.0 mL) 중 1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에탄-1-온(1.00 g, 4.37 mmol, 1.00 당량) 및 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(688 mg, 5.68 mmol, 1.30 당량)의 용액에 티타늄(IV) 부톡시드(1.99 g, 8.73 mmol, 1.81 mL, 2.00 당량) 및 1,2-디메톡시에탄(393 mg, 4.37 mmol, 454 μL, 1.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트(50.0 mL) 및 물(5.00 mL)로 희석하고 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 (S,E)-N-(1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.25 g, 3.76 mmol, 86.2% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
단계 B: THF(15.0 mL) 중 (S,E)-N-(1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.25 g, 3.76 mmol, 1.00 당량)의 용액에 L-셀렉트라이드(THF 중 1.0 M, 5.64 mL, 1.50 당량)를 -60℃에서 적가하였다. 첨가가 완료된 후, 혼합물을 30℃로 가온하고 30분 동안 교반한 다음, 물(5.00 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(30.0 mL × 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 (S)-N-((R)-1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(900 mg, 2.69 mmol, 71.6% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.52 - 7.44 (m, 1H), 7.34 - 7.29 (m, 1H), 7.01 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.05 - 4.95 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 1.50 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.21 (s, 9H).
단계 C: THF(12.0 mL) 및 H2O(3.00 mL) 중 (S)-N-((R)-1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(900 mg, 2.69 mmol, 1.00 당량)의 용액에 요오드(205 mg, 808 μmol, 163 μL, 0.30 당량)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트(30.0 mL)로 희석하고, 아황산나트륨 수용액(20.0 mL)으로 세척하고, 염수(20.0 mL)로 추가로 세척하였다. 유기 상을 건조하고 감압 하에 농축한 다음, 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 1/0 내지 40/1)에 의해 정제하여 (R)-1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에탄-1-아민(500 mg, 2.17 mmol, 80.7% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
단계 D: DMSO(5.00 mL) 중 1,7-디클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진(300 mg, 1.40 mmol, 1.00 당량)의 용액에 세슘 플루오라이드(319 mg, 2.10 mmol, 77.5 μL, 1.50 당량) 및 (R)-1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에탄-1-아민(322 mg, 1.40 mmol, 1.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트(50.0 mL)로 희석하고 염수(30.0 mL × 3)로 세척하였다. 분리된 유기 상을 건조하고 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 4/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에틸)-7-chloro-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(250 mg, 613 μmol, 43.8% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
단계 E: DMSO(0.80 mL) 중 (R)-N-(1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에틸)-7-chloro-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(200 mg, 491 μmol, 1.00 당량)의 용액에 세슘 플루오라이드(112 mg, 736 μmol, 27.1 μL, 1.50 당량) 및 모르폴린(192 mg, 2.21 mmol, 194 μL, 4.50 당량)을 첨가했다. 혼합물을 130℃에서 30분 동안 교반한 다음, 물(20.0 mL)로 희석하고 여과하였다. 침전물을 진공에서 건조하여 (R)-N-(1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(200 mg, 436 μmol, 89.0% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 460.1.
단계 F: N,N-디메틸아세트아미드(4.00 mL) 중 (R)-N-(1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(180 mg, 393 μmol, 1.00 당량), 시안화아연(92.2 mg, 785 μmol, 49.9 μL, 2.00 당량), DPPF(43.5 mg, 78.5 μmol, 0.20 당량), 아연 더스트(2.57 mg, 39.3 μmol, 0.10 당량) 및 Pd2(dba)3(36.0 mg, 39.3 μmol, 0.10 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 6시간 동안 120℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석하고 여과하였다. 여액을 염수(50.0 mL × 3)로 세척하고, 건조하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 um; 이동 상: 상 A: 물(0.225% 포름산), 상 B: 아세토니트릴; B%: 11%-41%]에 의해 정제하여 (R)-2-메톡시-3-(1-((4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)벤조니트릴(93.0 mg, 226 μmol, 57.5% 수율, 98.2% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 405.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.11 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.70 - 7.64 (m, 1H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.15 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.66 - 5.55 (m, 1H), 4.20 (s, 3H), 3.85 (s, 8H), 2.69 (s, 3H), 1.62 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 17-2
3-((R)-1-((7-((S)-헥사하이드로피라지노[2,1-c][1,4]옥사진-8(1H)-일)-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메톡시벤조니트릴
Figure pct00199
단계 A: THF(20.0 mL) 중 (R)-1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에탄-1-아민(1.20 g, 5.22 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Boc2O(1.48 g, 6.78 mmol, 1.56 mL, 1.30 당량)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 200/1 내지 30/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에틸)카르바메이트(1.50 g, 4.54 mmol, 87.1% 수율)를 연한 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.45 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.10 - 4.90 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 1.46 - 1.35 (m, 12H).
단계 B: N,N-디메틸아세트아미드(15.0 mL) 중 tert-부틸 (R)-(1-(3-브로모-2-메톡시페닐)에틸)카르바메이트(1.30 g, 3.94 mmol, 1.00 당량), 시안화아연(925 mg, 7.87 mmol, 500 μL, 2.00 당량), 아연 더스트(25.7 mg, 394 μmol, 0.10 당량), DPPF(437 mg, 787 μmol, 0.20 당량) 및 Pd2(dba)3(361 mg, 394 μmol, 0.10 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 130℃에서 5시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석하고, 여과하고, 여액을 염수(50.0 mL× 3)로 세척하고, 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 20/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(1-(3-시아노-2-메톡시페닐)에틸)카르바메이트(0.90 g, 3.26 mmol, 82.7% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.14 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.09 - 4.91 (m, 2H), 4.15 (s, 3H), 1.54 - 1.32 (m, 12H).
단계 C: DCM(2.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-(1-(3-시아노-2-메톡시페닐)에틸)카르바메이트(0.90 g, 3.26 mmol, 1.00 당량)의 용액에 TFA(6.93 g, 60.8 mmol, 4.50 mL, 18.7 당량)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 감압 하에 농축하고, pH를 포화 중탄산나트륨 수용액으로 pH = 7로 조절하였다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄/메탄올의 10:1 용액(50.0 mL)으로 추출하고, 유기 상을 건조하고 농축하여 (R)-3-(1-아미노에틸)-2-메톡시벤조니트릴(600 mg, 미정제)을 갈색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.66 (dd, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.52 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 4.13 (s, 3H), 1.46 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
단계 D: DMSO(5.00 mL) 중 1,7-디클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진(300 mg, 1.40 mmol, 1.00 당량)의 용액에 세슘 플루오라이드(319 mg, 2.10 mmol, 77.5 μL, 1.50 당량) 및 (R)-3-(1-아미노에틸)-2-메톡시벤조니트릴(247 mg, 1.40 mmol, 1.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(50.0 mL)로 희석하고, 염수(20.0 mL × 3)로 세척하고, 분리된 유기 상을 건조하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Phenomenex luna C18 150 × 40 mm × 15 um; 이동 상: 상 A: 물(0.1% TFA), 상 B: 아세토니트릴; B%: 14%-44%]에 의해 정제하여 (R)-3-(1-((7-chloro-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메톡시벤조니트릴(200 mg, 565 μmol, 40.3% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 354.1.
단계 E: DMSO(0.40 mL) 중 (R)-3-(1-((7-chloro-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메톡시벤조니트릴(30.0 mg, 84.8 μmol, 1.00 당량), (S)-옥타하이드로피라지노[2,1-c][1,4]옥사진(27.4 mg, 127 μmol, 1.50 당량, 염산염), N,N-디이소프로필에틸아민(32.9 mg, 254 μmol, 44.3 μL, 3.00 당량) 및 세슘 플루오라이드(19.3 mg, 127 μmol, 4.69 μL, 1.50 당량)의 혼합물을 질소 분위기 하에 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트(30.0 mL)로 희석하고, 염수(10.0 mL× 3)로 세척하고, 분리된 유기 상을 건조하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75× 30 mm× 3 um; 이동 상: 상 A: 물(0.05% HCl), 상 B: 아세토니트릴; B%: 10%-30%]에 의해 정제하여 3-((R)-1-((7-((S)-헥사하이드로피라지노[2,1-c][1,4]옥사진-8(1H)-일)-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-메톡시벤조니트릴(13.9 mg, 27.8 μmol, 32.8% 수율, 99.3% 순도, HCl 염)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 460.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.35 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.79 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.65 - 7.53 (m, 1H), 7.21 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.66 - 5.54 (m, 1H), 5.25 - 5.05 (m, 2H), 4.29 - 4.14 (m, 5H), 4.08 - 3.97 (m, 1H), 3.86 - 3.62 (m, 4H), 3.58 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.52 - 3.35 (m, 3H), 2.86 (s, 3H), 1.71 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 17-1 내지 17-2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 17에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 17-3 내지 17-4의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00200
실시예 18-1
(R)-6-플루오로-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(피페라진-1-일)프탈라진-1-아민
Figure pct00201
단계 A: 디옥산(20.0 mL) 중 메틸 5-브로모-4-플루오로-2-요오도벤조에이트(1.50 g, 4.18 mmol, 1.00 당량) 및 트리부틸(1-에톡시비닐)주석(1.52 g, 4.22 mmol, 1.42 mL, 1.01 당량)의 용액에 Pd(PPh3)2Cl2(60.0 mg, 0.08 mmol, 0.02 당량)를 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 포화 수성 불화칼륨(100 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 에틸 아세테이트(200 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL× 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 화합물 메틸 5-브로모-2-(1-에톡시비닐)-4-플루오로벤조에이트(2.00 g, 미정제) 갈색 오일로서 제공하고 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
THF(50.0 mL) 중 메틸 5-브로모-2-(1-에톡시비닐)-4-플루오로벤조에이트(2.00 g, 미정제)의 용액에 염산 수용액(4.00 M, 10.0 mL, 6.06 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 물(50.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(50.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 화합물 메틸 2-아세틸-5-브로모-4-플루오로벤조에이트(700 mg, 2.54 mmol, 38.6% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.14 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.52 (s, 3H).
단계 B: 에탄올(10.0 mL) 중 메틸 2-아세틸-5-브로모-4-플루오로벤조에이트(700 mg, 2.54 mmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(130 mg, 2.54 mmol, 98% 순도, 1.00 당량)을 적가했다. 반응 혼합물을 95℃에서 30분 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각하고 감압 하에 농축하여 7-브로모-6-플루오로-4-메틸프탈라진-1-올(460 mg, 1.79 mmol, 70.3% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 12.62 (s, 1H), 8.46 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 2.48 (s, 3H).
단계 C: 인(V) 옥시클로라이드(9.52 g, 62.1 mmol, 5.77 mL, 63.8 당량) 중 7-브로모-6-플루오로-4-메틸프탈라진-1-올(250 mg, 0.97 mmol, 1.00 당량)의 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트(30.0 mL)로 희석하고, 포화 중탄산나트륨(수용액)을 천천히 첨가하여 pH를 pH=7로 조정하였다. 유기 상을 염수(20.0 mL X 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 prep-TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)에 의해 정제하여 6-브로모-4-클로로-7-플루오로-1-메틸프탈라진(170 mg, 617 μmol, 63.5% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+3] +: 276.7.
단계 D: DMSO(5.00 mL) 중 6-브로모-4-chloro-7-플루오로-1-메틸프탈라진(170 mg, 0.62 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(126 mg, 0.62 mmol, 1.00 당량)의 용액에 불화칼륨(180 mg, 3.09 mmol, 5.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시키고, 물(10.0 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL × 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(디클로로메탄/메탄올 = 20/1)에 의해 정제하여 화합물 (R)-7-브로모-6-플루오로-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(80.0 mg, 0.18 mmol, 29.3% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+3] +: 444.0.
단계 E: 디옥산(3.00 mL) 중 (R)-7-브로모-6-플루오로-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(80.0 mg, 0.18 mmol, 1.00 당량) 및 피페라진(32.0 mg, 0.36 mmol, 2.00 당량)의 용액에 Pd2(dba)3(16.0 mg, 0.02 mmol, 0.10 당량), RuPhos(16.0 mg, 0.04 mmol, 0.20 당량) 및 탄산세슘(300 mg, 0.90 mmol, 5.00 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 25℃로 냉각시키고, 물(10.0 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 prep-TLC(디클로로메탄/메탄올 = 10/1)에 의해 정제한 다음 prep-HPLC[컬럼: Phenomenex luna C18 150 X 25 mm X 10 um; 이동 상: 상 A: 물(0.225% 포름산), 상 B: 아세토니트릴; B%: 3% - 33%]에 의해 정제하여 (R)-6-플루오로-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-(피페라진-1-일)프탈라진-1-아민(8.97 mg, 0.02 mmol, 9.15% 수율, 91.1% 순도, 포름산염)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 448.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.30 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.70 - 5.65 (m, 1H), 3.21 (s, 4H), 3.00 (s, 4H), 2.57 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 1.55 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
SFC 조건: 컬럼: Chiralcel OD-3 50×4.6 mm I D., 3 um 이동 상: 상 A: CO2, 상 B: MeOH(0.05% 디에틸아민); 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% 디에틸아민) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분; 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 Bar.
실시예 18-2
(R)-6-플루오로-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민
Figure pct00202
디옥산(3.00 mL) 중 (R)-7-브로모-6-플루오로-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(60.0 mg, 136 μmol, 1.00 당량)의 용액에 모르폴린(23.6 mg, 271 μmol, 23.9 μL, 2.00 당량), RuPhos(12.7 mg, 27.1 μmol, 0.20 당량), Pd2(dba)3(12.4 mg, 13.6 μmol, 0.10 당량) 및 탄산세슘(88.4 mg, 271 μmol, 2.00 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 두었다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(10.0 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(10.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(10.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-TLC(실리카 겔 플레이트, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1)에 의해 정제하고 prep-HPLC[컬럼: Phenomenex luna C18 150 X 25 mm X 10 um; 이동 상: 상 A: 물(0.225% 포름산), 상 B: 아세토니트릴, B%: 20% - 50%]로 추가 정제하여 (R)-6-플루오로-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(4.92 mg, 10.7 μmol, 7.89% 수율, 97.6% 순도, 포름산염)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 449.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.27 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.76 - 5.61 (m, 1H), 3.86 - 3.81 (m, 4H), 3.27 - 3.23 (m, 4H), 2.58 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 1.56 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
SFC 조건: Chiralcel OD-3 50 × 4.6 mm I D., 3 um 이동 상: 상 A: CO2, 및 상 B: MeOH(0.05% 디에틸아민); 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% 디에틸아민) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분; 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 Bar.
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 18-1 내지 18-2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 18에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 18-3 내지 18-5의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00203
실시예 19-1
(R)-3-(1-((7-(3-(디메틸아미노)-3-메틸아제티딘-1-일)-4-메틸-6-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴
Figure pct00204
단계 A: N,N-디메틸포름아미드(50.0 mL) 중 메틸 2-아미노-4-(트리플루오로메틸)벤조에이트(3.00 g, 13.7 mmol, 1.00 당량)의 용액에 N-브로모숙신이미드(2.68 g, 15.1 mmol, 1.10 당량)를 첨가하고 혼합물을 질소 분위기 하에 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50.0 mL)에 부은 다음, 에틸 아세테이트(50.0 mL× 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(40.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 메틸 2-아미노-5-브로모-4-(트리플루오로메틸)벤조에이트(3.30 g, 11.1 mmol, 80.9% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ = 8.06 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.86 (s, 2H), 3.84 (s, 3H).
단계 B: 염산(4.00 M, 100 mL, 36.1 당량) 중 2-아미노-5-브로모-4-(트리플루오로메틸)벤조에이트(3.30 g, 11.1 mmol, 1.00 당량)의 용액에 아질산나트륨(917 mg, 13.3 mmol, 1.20 당량)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 0℃에서 반응 혼합물에 요오드화칼륨(3.68 g, 22.1 mmol, 2.00 당량)을 조금씩 첨가하고, 혼합물을 90℃로 천천히 가열하고 질소 분위기 하에 11시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(100 mL× 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(50.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 20/1)에 의해 정제하여 메틸 5-브로모-2-요오도-4-(트리플루오로메틸)벤조에이트(4.10 g, 10.0 mmol, 90.5% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.16 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 3.90 (s, 3H).
단계 C: N,N-디메틸포름아미드(10.0 mL) 중 메틸 5-브로모-2-요오도-4-(트리플루오로메틸)벤조에이트(3.60 g, 8.80 mmol, 1.00 당량) 및 1-(비닐옥시)부탄(1.06 g, 10.6 mmol, 1.36 mL, 1.20 당량)의 용액에 DPPF(244 mg, 440 μmol, 0.05 당량), N,N-디에틸에탄아민(2.67 g, 26.4 mmol, 3.68 mL, 3.00 당량) 및 팔라듐(II) 아세테이트(59.3 mg, 264 μmol, 0.03 당량)를 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 테트라하이드로푸란(17.8 g, 247 mmol, 20.0 mL, 14.9 당량)에 이어 염산(4.00 M, 20.0 mL, 4.82 당량)으로 희석하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(30.0 mL)에 부은 다음, 에틸 아세테이트(30.0 mL× 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(30.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 10/1)에 의해 정제하여 메틸 2-아세틸-5-브로모-4-(트리플루오로메틸)벤조에이트(250 mg, 769 μmol, 8.74% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.08 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 2.49 (s, 3H).
단계 D: 에탄올(5.00 mL) 중 메틸 2-아세틸-5-브로모-4-(트리플루오로메틸)벤조에이트(250 mg, 769 μmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(46.2 mg, 923 μmol, 44.8 μL, 98%, 1.20 당량)을 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 95℃에서 030분 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각하고 감압 하에 농축하여 7-브로모-4-메틸-6-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-올(170 mg, 미정제)을 황색 고체로서 제공하고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+3] +: 309.1.
단계 E: POCl3(4.95 g, 32.3 mmol, 3.00 mL, 198 당량) 중 7-브로모-4-메틸-6-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-올(50.0 mg, 162.8 μmol, 1.00 당량)의 용액을 질소 분위기 하에 110℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(50.0 mL)로 희석한 다음, 포화 중탄산나트륨(수용액, 50.0 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 용액을 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(40.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(실리카 겔 플레이트, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 6-브로모-4-클로로-1-메틸-7-(트리플루오로메틸)프탈라진(20.0 mg, 61.4 μmol, 37.7% 수율)을 갈색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+3]+: 326.7.
단계 F: 디메틸 설폭시드(3.00 mL) 중-브로모-4-클로로-1-메틸-7-(트리플루오로메틸)프탈라진(120 mg, 369 μmol, 1.00 당량) 및 (R)-3-(1-아미노에틸)-2-메틸벤조니트릴(59.0 mg, 369 μmol, 1.00 당량)의 용액에 불화칼륨(107 mg, 1.84 mmol, 43.2 μL, 5.00 당량)을 첨가하고, 반응물을 질소 분위기 하에 130℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(10.0 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(10.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(10.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-TLC(실리카 겔 플레이트, 디클로로메탄/메틸 알코올 = 10/1)에 의해 정제하여 (R)-3-(1-((7-브로모-4-메틸-6-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(110 mg, 244 μmol, 66.4% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+3]+: 451.2.
단계 G: 디옥산(2.00 mL) 중 R)-3-(1-((7-브로모-4-메틸-6-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(30.0 mg, 0.07 mmol, 1.00 당량) 및 N,N,3-트리메틸아제티딘-3-아민(20.0 mg, 0.13 mmol, 2.00 당량, HCl 염)의 용액에 Pd2(dba)3(6.00 mg, 0.10 당량), RuPhos(6.00 mg, 0.20 당량) 및 탄산세슘(108 mg, 0.33 mmol, 5.00 당량)을 첨가하고, 질소 분위기 하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고, 물(20.0 mL)을 첨가하여 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Waters xbridge 150 × 25 mm × 10 um; 이동 상: 상 A: 물(10 mM NH4HCO3), 상 B: 아세토니트릴; B%: 38% - 68%]에 의해 정제하여 (R)-3-(1-((7-(3-(디메틸아미노)-3-메틸아제티딘-1-일)-4-메틸-6-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(3.28 mg, 9.91% 수율, 97.4% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 483.4.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.06 (s, 1H), 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 5.58 - 5.53 (m, 1H), 4.00 - 3.95 (m, 2H), 3.90 - 3.86 (m, 2H), 2.66 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 2.16 (s, 6H), 1.56 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.33 (s, 3H).
SFC 조건: 컬럼: Chiralpak AS-3 50×4.6 mm I.D, 3 um 이동 상: 상 A: CO2, 및 상 B: MeOH(0.05% 디에틸아민); 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% 디에틸아민) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분; 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 Bar.
실시예 19-2
(R)-2-메틸-3-(1-((4-메틸-7-모르폴리노-6-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)벤조니트릴
Figure pct00205
디옥산(3.00 mL) 중 (R)-3-(1-((7-브로모-4-메틸-6-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(40.0 mg, 89.0 μmol, 1.00 당량) 및 모르폴린(22.0 mg, 178 μmol, 22.2 μL, 2.00 당량)의 용액에 탄산세슘(58.0 mg, 178 μmol, 2.00 당량), Pd2(dba)3(8.15 mg, 8.90 μmol, 0.10 당량) 및 RuPhos(8.31 mg, 17.8 μmol, 0.20 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 105℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(30.0 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(30.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물(20.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Waters xbridge 150 × 25 mm 10 um; 이동 상: 상 A: 물(10 mM NH4HCO3), 상 B: 아세토니트릴; B%: 37% - 67%]에 의해 정제하여 (R)-2-메틸-3-(1-((4-메틸-7-모르폴리노-6-(트리플루오로메틸)프탈라진-1-일)아미노)에틸)벤조니트릴(2.57 mg, 5.33 μmol, 5.99% 수율, 94.5% 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 456.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.58 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.83 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 5.63 - 5.54 (m, 1H), 3.83 - 3.78 (m, 4H), 3.10 - 3.05 (m, 4H), 2.68 (s, 3H), 2.66 (s, 3H), 1.58 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
SFC 조건: 컬럼: Chiralpak AS-3 50 × 4.6 mm I.D., 3 um 이동 상: 상 A: CO2, 및 상 B: MeOH(0.05% 디에틸아민); 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% 디에틸아민) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분; 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 Bar.
일반 반응 도식 IV의 교시 및 실시예 19-1 내지 19-2의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 19에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 19-3의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00206
실시예 20-1
1-(3-((R)-1-((7-((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올
Figure pct00207
단계 A: 디메틸 설폭시드(50.0 mL) 중 1-브로모-2-플루오로-3-요오도벤젠(4.00 g, 13.3 mmol, 1.00 당량) 및 에틸 2-브로모-2,2-디플루오로아세테이트(3.80 g, 18.6 mmol, 2.40 mL, 1.40 당량)의 용액에 구리(2.53 g, 39.9 mmol, 3.00 당량)를 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(100 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 에틸 아세테이트(200 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(100 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 5/1)에 의해 정제하여 에틸 2-(3-브로모-2-플루오로페닐)-2,2-디플루오로아세테이트(2.00 g, 6.73 mmol, 50.6% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.72 - 7.69 (m, 1H), 7.61 - 7.57 (m, 1H), 7.15 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.39 - 4.34 (m, 2H), 1.35-1.32 (m, 3H).
단계 B: 테트라하이드로푸란(30.0 mL) 중 에틸 2-(3-브로모-2-플루오로페닐)-2,2-디플루오로아세테이트(2.00 g, 6.73 mmol, 1.00 당량)의 용액에 메틸마그네슘 브로마이드 용액(3.00 M, 6.75 mL, 3.00 당량)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 가온하고, 물(10.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 1-(3-브로모-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올(1.70 g, 6.01 mmol, 89.2% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.67-7.65 (m, 1H), 7.43 - 7.39 (m, 1H), 7.12 - 7.09 (m, 1H), 1.35 (d, J = 0.8 Hz, 6H).
단계 C: 1,4-디옥산(15.0 mL) 중 1-(3-브로모-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올(1.50 g, 5.30 mmol, 1.00 당량) 및 트리부틸(1-에톡시 비닐)주석(3.83 g, 10.6 mmol, 3.58 mL, 2.00 당량)의 용액에 PdCl2(PPh3)2(380 mg, 0.53 mmol, 0.10 당량)를 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 포화 불화칼륨 용액(100 mL)으로 희석하고, 에틸 아세테이트(200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 1-(3-(1-에톡시비닐)-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올(2.00 g, 미정제)을 흑색 오일로서 제공하였다. 테트라하이드로푸란(20.0 mL) 중 1-(3-(1-에톡시비닐)-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올(2.00 g, 7.29 mmol, 1.00 당량)의 용액에 염산염(4.00 M, 10.0 mL)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(100 mL)을 첨가하여 켄칭하고 에틸 아세테이트(200 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 1-(3-(1,1-디플루오로-2-하이드록시-2-메틸propyl)-2-플루오로페닐)에탄-1-온(1.50 g, 6.09 mmol, 83.5% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.97 - 7.91 (m, 1H), 7.66 - 7.61 (m, 1H), 7.31 - 7.27 (m, 1H), 2.66 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 1.37 (d, J = 1.2 Hz, 6H).
단계 D: 테트라하이드로푸란(10.0 mL) 중 1-(3-(1,1-디플루오로-2-하이드록시-2-메틸프로필)-2-플루오로페닐)에탄-1-온(1.50 g, 6.09 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(2.22 g, 18.3 mmol, 3.00 당량)의 용액에 티타늄(IV) 이소프로폭시드(3.46 g, 12.2 mmol, 3.60 mL, 2.00 당량) 및 1-메톡시-2-(2-메톡시에톡시)에탄(1.63 g, 12.2 mmol, 1.74 mL, 2.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 70℃에서 6시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(50.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(50.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50.0 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-(1,1-디플루오로-2-하이드록시-2-메틸propyl)-2-플루오로페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.50 g, 4.29 mmol, 70.1% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.73-7.68 (m, 1H), 7.60-7.52 (m, 1H), 7.26-7.22 (m, 1H), 1.37-1.35 (m, 3H), 1.32 (s, 6H), 1.24 (s, 9H)
단계 E: 테트라하이드로푸란(10.0 mL) 중 (R)-N-(1-(3-(1,1-디플루오로-2-하이드록시-2-메틸propyl)-2-플루오로페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.50 g, 4.29 mmol, 1.00 당량)의 용액에 나트륨 붕소 탄화수소(488 mg, 12.9 mmol, 3.00 당량)를 0℃에서 천천히 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 물(50.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50.0 mL x 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-(1,1-디플루오로-2-하이드록시-2-메틸propyl)-2-플루오로페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.30 g, 3.70 mmol, 86.2% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ = 7.45 - 7.27 (m, 2H), 7.16 - 7.10 (m, 1H), 4.60 -4.55 (m, 1H), 3.66 - 3.58 (m, 1H), 1.30 - 1.26 (m, 3H), 1.16 (s, 6H), 1.14 - 1.10 (m, 9H).
단계 F: 디클로로메탄(5.00 mL) 중 (R)-N-(1-(3-(1,1-디플루오로-2-하이드록시-2-메틸propyl)-2-플루오로페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(600 mg, 1.71 mmol, 1.00 당량)의 용액에 염산염(4.00 M, 5.00 mL)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 감압 하에 농축하여 1-(3-(1-아미노에틸)-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올(400 mg, 1.41 mmol, 82.3% 수율, 염산염)을 황색 오일로서 제공하였다.
단계 G: 디메틸 설폭시드(2.00 mL) 중 1-(3-(1-아미노에틸)-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올(200 mg, 0.81 mmol, 1.00 당량) 및 1,7-디클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진(175 mg, 0.81 mmol, 1.00 당량)의 용액에 불화칼륨(235 mg, 4.04 mmol, 5.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(10.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(10.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(10.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Welch Xtimate C18 150 × 25 mm × 5 um; 이동 상: 상 A: 물(0.05% HCl), 상 B: 아세토니트릴; B%: 14%-44%]에 의해 정제하여 1-(3-(1-((7-chloro-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올(140 mg, 321 μmol, 39.7% 수율, 97.5% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 425.0.
단계 H: 고체 1-[3-[1-[(7-chloro-4-메틸-피리도[3,4-d] 피리다진-1-일)아미노]에틸]-2-플루오로-페닐]-1,1-디플루오로-2-메틸-프로판-2-올(140 mg, 330 μmol, 1.00 당량)을 SFC 정제[컬럼: REGIS(S,S)WHELK-O1(250 mm × 25 mm, 10 um); 이동 상: 상 A: IPA 중 0.1% NH4OH, 상 B: CO2; B%: 55%-55%]를 통해 2개의 거울상 이성질체로 분리하여 (R)-1-(3-(1-((7-클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올(제1 용리 이성질체, 70.0 mg, 0.16 mmol, 50.0% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
SFC 특성화: 컬럼: (S,S)Whelk-O1 50 × 4.6 mm I.D., 1.8 um 이동 상: 상 A: CO2의 경우, 및 상 B: IPA(0.05% 디에틸아민);구배 용리: CO2 중 40% IPA(0.05% 디에틸아민) 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar.
단계 I: 1,4-디옥산(1.50 mL) 중 (R)-1-(3-(1-((7-chloro-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올(20.0 mg, 0.05 mmol, 1.00 당량) 및 (1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄(12.8 mg, 0.09 mmol, 2.00 당량, 염산염)의 용액에 Pd2(dba)3(4.31 mg, 4.71 μmol, 0.10 당량), RuPhos(4.39 mg, 9.42 μmol, 0.20 당량) 및 탄산세슘(76.8 mg, 0.24 mmol, 5.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(10.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Waters xbridge 150 × 25 mm × 10 um; 이동 상: 상 A: 물(10 mM NH4HCO3), 상 B: 아세토니트릴; B%: 20% - 50%]에 의해 정제하여 1-(3-((R)-1-((7-((1R,4R)-2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-2-플루오로페닐)-1,1-디플루오로-2-메틸프로판-2-올(11.4 mg, 0.02 mmol, 48.6% 수율, 97.6% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 488.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.97 (s, 1H), 7.51-7.46 (m, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30-7.26 (m, 1H), 7.20-7.14 (m, 2H), 5.72-5.63 (m, 1H), 5.34 (s, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.78 (s, 1H), 3.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.62 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.40 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.02-1.93 (m, 2H), 1.58 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 1.22 (d, J = 4.0 Hz, 6H).
SFC 조건: 컬럼: Chiralpak AS-3 50 × 4.6 mm I.D., 3 um 이동 상: 상 A: CO2, 및 상 B: MeOH(0.05% 디에틸아민); 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% 디에틸아민) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분; 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 Bar.
일반 반응 도식 III의 교시 및 실시예 20-1의 제조에 대해 기재된 절차에 따라, 표 20에 나타낸 하기 화학식 (I), 실시예 20-2 내지 20-3의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00208
실시예 21-1
(R)-3-(1-((4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-5-(트리플루오로메틸)페놀
Figure pct00209
단계 A: 디메틸 설폭시드(3.00 mL) 중 (R)-1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(120 mg, 359 μmol, 0.95 당량, HCl) 및 4-(1-chloro-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-7-일)모르폴린(100 mg, 378 μmol, 1.00 당량)의 용액에 불화칼륨(87.8 mg, 1.51 mmol, 35.4 μL, 4.00 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하고, 용액을 130℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(15.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(10.0 mL× 3)로 추출하고, 염수(5.00 mL× 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(디클로로메탄/메탄올 = 10/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(65.0 mg, 121 μmol, 32.1% 수율, 97.8% 순도)을 황색 고체로 제공하였다. LCMS [M+1] +: 524.3.
메탄올(5.00 mL) 중 (R)-N-(1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-아민(65.0 mg, 124 μmol, 1.00 당량), Pd/C(20.0 mg, 10% 순도) 및 팔라듐 하이드록사이드(20.0 mg)의 용액을 25℃에서 수소 분위기(15 Psi) 하에 20℃에서 30분 동안. 용액을 여과하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC[(Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 um; 이동 상: 상 A: 물(0.225% 포름산), 상 B: MeCN; B%: 12%-42%)]에 의해 정제하여 (R)-3-(1-((4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)-5-(트리플루오로메틸)페놀(12.2 mg, 25.2 μmol, 20.3% 수율, 99.4% 순도, 포름산염)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 434.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.06-9.94 (m, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.46 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.39 (m, 1H), 3.78-3.77 (m, 4H), 3.70 - 3.69 (m, 4H), 2.58 (s, 3H), 1.56 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
SFC 조건: "컬럼: Chiralcel OD-3 50 x 4.6 mm I.D., 3 μm 이동 상: CO2의 경우 상 A, 메탄올(0.05% DEA)의 경우 상 B; 구배 용리: CO2 중 메탄올(0.05% DEA) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar".
실시예 21-2
Figure pct00210
단계 A: 디메틸 설폭시드(5.00 mL) 중 6-브로모-4-클로로-1-메틸프탈라진(279 mg, 1.09 mmol, 1.20 당량) 및 (R)-1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-아민(300 mg, 0.90 mmol, 1.00 당량, HCl)의 용액에 불화칼륨(263 mg, 4.52 mmol, 106 μL, 5.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(20.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(실리카 겔 플레이트, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1, Rf = 0.2)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-브로모-4-메틸프탈라진-1-아민(300 mg, 581 μmol, 64.3% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 516.0.
단계 B: 디옥산(10.0 mL) 중 (R)-N-(1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-브로모-4-메틸프탈라진-1-아민(150 mg, 0.29 mmol, 1.00 당량), 모르폴린(50.6 mg, 0.58 mmol, 51.1 μL, 2.00 당량), RuPhos(13.6 mg, 0.03 mmol, 0.10 당량) 및 탄산세슘(284 mg, 872 μmol, 3.00 당량)의 용액에 Pd2(dba)3(26.6 mg, 0.03 mmol, 0.10 당량)를 첨가한 다음, 반응물을 질소 분위기 하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(15.0 mL)로 켄칭하고 혼합물을 에틸 아세테이트(15.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(15.0 mL × 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(실리카 겔 플레이트, 디클로로메탄: 메틸 알코올 = 10:1, Rf = 0.3)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(120 mg, 230 μmol, 79.1% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 523.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.98 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 2.8, 9.2 Hz, 1H), 7.61 - 7.57 (m, 2H), 7.35 - 7.29 (m, 5H), 7.17 - 7.13 (m, 2H), 5.50 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 5.14 (s, 2H), 3.85 (m, 4H), 3.44 - 3.39 (m, 4H), 2.55 (s, 3H), 1.59 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 C: 메탄올(10.0 mL) 중 (R)-N-(1-(3-(벤질옥시)-5-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(120 mg, 0.03 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Pd/C(80.0 mg, 0.03 mmol, 10% 순도, 1.00 당량) 및 수산화팔라듐(80.0 mg, 0.03 mmol, 1.00 당량)을 첨가한 다음, 반응물을 수소 분위기(15 psi) 하에 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC[(컬럼: Waters Xbridge 150 × 25 mm 10 um; 이동 상: 상 A: 물(10 mM NH4HCO3), 상 B: MeCN; B%: 28%-58%)]에 의해 정제하여 (R)-3-(1-((4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-일)아미노)에틸)-5-(트리플루오로메틸)페놀(34.0 mg, 78.6 μmol, 34.2% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 433.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ = 9.95 (s, 1H), 7.78 - 7.76 (m, 1H), 7.60 - 7.58 (m, 2H), 7.29 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.48 - 5.41 (m, 1H), 3.84 - 3.82 (m, 4H), 3.43 - 3.40 (m, 4H), 2.55 (s, 3H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
SFC 조건: Chiralcel OD-3 50 x 4.6 mm I.D., 3 μm 이동 상: CO2의 경우 상 A, MeOH(0.05% DEA)의 경우 상 B; 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% DEA) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar.
실시예 21-3
(R)-3-메틸-5-(1-((4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)벤조니트릴
Figure pct00211
단계 A: 테트라하이드로푸란(5.00 mL) 중 3-아세틸-5-메틸벤조니트릴(0.50 g, 3.14 mmol, 1.00 당량), (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(495 mg, 4.08 mmol, 1.30 당량) 및 티타늄 에톡시드(1.43 g, 6.28 mmol, 1.30 mL, 2.00 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 25℃에서 물(10.0 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R,E)-N-(1-(3-시아노-5-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(730 mg, 2.78 mmol, 88.6% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 263.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.10 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.86 (d, J = 0.4 Hz, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 1.23 (s, 9H).
단계 B: 테트라하이드로푸란(3.00 mL) 중 (R,E)-N-(1-(3-시아노-5-메틸페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(0.30 g, 1.14 mmol, 1.00 당량)의 용액에 수소화붕소나트륨(130 mg, 3.43 mmol, 3.00 당량)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 염화암모늄 용액(10.0 mL)으로 켄칭하고 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트(60.0 ml)로 희석하고, 유기 층을 염수(20.0 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(3-시아노-5-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(280 mg, 1.06 mmol, 92.6% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 265.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.67 (s, 1H), 7.56 - 7.52 (m, 2H), 5.76 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.35 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.38 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.12 (s, 9H).
단계 C: 염산/에틸 아세테이트(4.0 M, 2.60 mL, 11.0 당량) 중 (R)-N-(1-(3-시아노-5-메틸페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(250 mg, 946 μmol, 1.00 당량)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액(5.00 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(10.0 mL× 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 3-(1-아미노에틸)-5-메틸벤조니트릴(130 mg, 811 μmol, 85.8% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.62 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.48 (d, J = 0.4 Hz, 1H), 4.01 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.24 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 D: 디메틸 설폭시드(0.20 mL) 중 3-(1-아미노에틸)-5-메틸벤조니트릴(100 mg, 624 μmol, 1.00 당량), 4-(1-클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-7-일)모르폴린(165 mg, 624 μmol, 1.00 당량) 및 불화칼륨(109 mg, 1.87 mmol, 3.00 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 130℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 물(10.0 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC[(컬럼: Waters Xbridge 150 × 25 mm 10 um; 이동 상: 상 A: 물(10 mM NH4HCO3), 상 B: MeCN; B%: 24%-54%)]에 의해 정제하여 3-메틸-5-(1-((4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)벤조니트릴(80.0 mg, 206 μmol, 32.9% 수율, 99.9% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. 거울상 이성질체는 SFC[컬럼: DAICEL CHIRALPAK AD(250 mm × 30 mm, 10 um); 이동 상: 상 A: MeOH 중 0.1% NH4OH, 상 B: CO2; B%: 25%]로 분리되었다.
실시예 21-3, (R)-3-메틸-5-(1-((4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)벤조니트릴(제1 용리 이성질체):
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.97 (s, 1H), 7.56 (s, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.37 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.85 - 3.80 (m, 4H), 3.76 - 3.72 (m, 4H), 2.62 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 1.63 (d, J = 6.8 Hz, 3H)
LCMS [M+1] +: 389.2.
SFC 조건: "컬럼: Chiralpak AD-3 50 × 4.6 mm I.D., 3 μm 이동 상: CO2의 경우 상 A, 및 MeOH(0.05% DEA)의 경우 상 B; 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% DEA) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar"
실시예 21-4
(R)-3-메틸-5-(1-((4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-일)아미노)에틸)벤조니트릴
Figure pct00212
단계 A: 디메틸설폭시드(0.20 mL) 중 3-(1-아미노에틸)-5-메틸벤조니트릴(100 mg, 624 μmol, 1.00 당량), 6-브로모-4-클로로-1-메틸프탈라진(161 mg, 624 μmol, 1.00 당량) 및 불화세슘(284 mg, 1.87 mmol, 69.0 μL, 3.00 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 130℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 물(10.0 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-TLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트, 1:1)에 의해 정제하여 3-(1-((7-브로모-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-5-메틸벤조니트릴(50.0 mg, 131 μmol, 21.0% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 382.9.
디옥산(1.00 mL) 중 3-(1-((7-브로모-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-5-메틸벤조니트릴(40.0 mg, 105 μmol, 1.00 당량), 모르폴린(36.6 mg, 420 μmol, 36.9 μL, 4.00 당량), 탄산세슘(103 mg, 315 μmol, 3.00 당량) 및 RuPhos Pd G3(87.8 mg, 105 μmol, 1.00 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 물(10.0 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 에틸 아세테이트(10.0 mL × 3)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 분취용 HPLC[컬럼: Waters Xbridge 150 × 25 mm 10 um; 이동 상: 상 A: 물(10 mM NH4HCO3), 상 B: MeCN; B%: 25%-55%]에 의해 정제하여 3-메틸-5-(1-((4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-일)아미노)에틸)벤조니트릴(20.0 mg, 51.5 μmol, 49.0% 수율, 99.7% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. 순수한 (R)-거울상 이성질체는 SFC(컬럼: DAICEL CHIRALPAK AD(250 mm × 30 mm, 10 um); 이동 상: 상 A: MeOH 중 NH4OH, 상 B: CO2; B%: 30%]를 사용하여 얻었고 (R)-3-메틸-5-(1-((4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-일)아미노)에틸)벤조니트릴(4.51 mg)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 388.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.88 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.59 - 7.52 (m, 4H), 7.32 (s, 1H), 5.41 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.91 - 3.84 (m, 4H), 3.46 - 3.40 (m, 4H), 2.61 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 1.64 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
SFC 조건: 컬럼: Chiralpak AD-3 50 × 4.6 mm I.D., 3 μm 이동 상: CO2의 경우 상 A, 및 MeOH(0.05% DEA)의 경우 상 B; 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% DEA) 5%에서 40%로 유량: 3 mL/분; 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar.
실시예 21-5 및 실시예 21-6
7-((R)-4-(디메틸아미노)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-4-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민
7-((S)-4-(디메틸아미노)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-4-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민
Figure pct00213
단계 A: 메탄올(10.0 mL) 중 tert-부틸 4-아미노-3,3-디플루오로피페리딘-1-카르복실레이트(300 mg, 1.27 mmol, 1.00 당량)의 용액에 파라포름알데히드(1.00 g, 1.27 mmol, 1.00 당량) 및 아세트산(7.63 mg, 127 μmol, 7.26 μL, 0.10 당량)을 첨가하고, 반응물을 50℃에서 30분 동안 교반한 다음, 나트륨 시아노보로하이드라이드(479 mg, 7.62 mmol, 6.00 당량)를 한 부분으로 반응물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 물(50.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(30.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50.0 mL × 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 화합물 tert-부틸 4-(디메틸아미노)-3,3-디플루오로피페리딘-1-카르복실레이트(320 mg, 1.21 mmol, 95.4% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 265.1.
단계 B: 아세토니트릴(1.00 mL) 중 tert-부틸 4-(디메틸아미노)-3,3-디플루오로피페리딘-1-카르복실레이트(320 mg, 1.21 mmol, 1.00 당량)의 용액에 디옥산 중 HCl(4.00 M, 5.33 mL, 17.6 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축하여 화합물 3,3-디플루오로-N,N-디메틸피페리딘-4-아민(190 mg, 1.16 mmol, 95.6% 수율)을 백색 고체로서 제공하고 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 C: 디옥산(5.00 mL) 중 (R)-7-브로모-4-메틸-N-(1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민(220 mg, 519 μmol, 1.00 당량), 3,3-3,3-디플루오로-N,N-디메틸피페리딘-4-아민(128 mg, 778 μmol, 1.50 당량), 나트륨 tert-부톡시드(199 mg, 2.07 mmol, 4.00 당량) 및 RuPhos Pd G3(43.4 mg, 51.9 μmol, 0.10 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(30.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(30.0 mL × 3)로 추출했다. 합한 유기 층을 염수(40.0 mL × 3)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 먼저 prep-TLC(디클로로메탄:메탄올 = 10:1)에 의해 정제하여 백색 고체를 제공하였다. LCMS [M+1] +: 508.3.
화합물을 추가로 정제하고 부분입체 이성질체를 SFC(컬럼: DAICEL CHIRALCEL OD-H(250 mm × 30 mm, 5 pm); 이동 상: H2O 중 0.1% NH3, 상 B: MeOH; B%: 20%)를 사용하여 분리하여 분리된 이성질체 7-((R)-4-(디메틸아미노)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-4-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민 및 7-((S)-4-(디메틸아미노)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-4-메틸-N-((R)-1-(2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)프탈라진-1-아민을 제공하였다.
실시예 21-5(제1 용리 이성질체)에 대한 스펙트럼 데이터:
LCMS [M+1] +:508.2
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.24 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 7.78 - 7.72 (m, 1H), 7.55 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 1H), 5.62 - 5.51 (m, 1H), 5.01 - 4.95 (m, 1H), 4.77 - 4.64 (m, 1H), 4.38 - 4.20 (m, 1H), 3.78 - 3.63 (m, 1H), 3.44 (br t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.10 (s, 6H), 2.80 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 2.27 - 2.13 (m, 1H), 1.71 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 21-6(제2 용리 이성질체)에 대한 스펙트럼 데이터:
LCMS [M+1] +:508.2
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.24 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 - 7.24 (m, 1H), 5.62 - 5.52 (m, 1H), 5.01 - 4.95 (m, 1H), 4.76 - 4.66 (m, 1H), 4.38 - 4.20 (m, 1H), 3.81 - 3.62 (m, 1H), 3.44 (br t, J = 12.4 Hz, 1H), 3.15 (s, 6H), 2.80 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.61 - 2.52 (m, 1H), 2.28 - 2.13 (m, 1H), 1.72 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 21-7
Figure pct00214
단계 A: DMSO(50.0 mL) 중 1-(3-요오도페닐)에탄-1-온(4.60 g, 18.7 mmol, 1.00 당량), 에틸 2-브로모-2,2-디플루오로아세테이트(4.17 g, 20.6 mmol, 2.64 mL, 1.10 당량) 및 구리 분말(3.56 g, 56.1 mmol, 398 μL, 3.00 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석하고, 여과하고, 여액을 염수(50.0 mL× 3)로 세척하고, 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 80/1 내지 30/1)에 의해 정제하여 에틸 2-(3-아세틸페닐)-2,2-디플루오로아세테이트(3.80 g, 15.7 mmol, 83.9% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.20 (s, 1H), 8.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.84 - 7.80 (m, 1H), 7.59 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.37 - 4.29 (m, 2H), 2.65 (s, 3H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 B: THF(40.0 mL) 중 에틸 2-(3-아세틸페닐)-2,2-디플루오로아세테이트(2.00 g, 8.26 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.30 g, 10.8 mmol, 1.30 당량)의 용액에 티타늄(IV) 부톡시드(3.77 g, 16.5 mmol, 3.42 mL, 2.00 당량) 및 1,2-디메톡시에탄(744 mg, 8.26 mmol, 858 μL, 1.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL) 및 물(5.00 mL)로 희석하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 5/1)에 의해 정제하여 (R)-2-(3-(1-((tert-부틸설피닐)이미노)에틸)페닐)-2,2-디플루오로아세테이트(2.40 g, 6.95 mmol, 84.2% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
단계 C: 메탄올(20.0 mL) 중 에틸 (R)-2-(3-(1-((tert-부틸설피닐)이미노)에틸)페닐)-2,2-디플루오로아세테이트(2.20 g, 6.37 mmol, 1.00 당량)의 용액에 수소화붕소나트륨(964 mg, 25.5 mmol, 4.00 당량)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 28℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(20.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(50.0 mL × 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 건조하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 황색 오일로서 (R)-N-((R)-1-(3-(1,1-디플루오로-2-하이드록시에틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(0.90 g, 2.95 mmol, 46.3% 수율) 및 황색 오일로서 (R)-N-((S)-1-(3-(1,1-디플루오로-2-하이드록시에틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(0.90 g, 2.95 mmol, 46.3% 수율)를 제공하였다. LCMS [M+1]+: 306.1.
단계 D: THF(8.00 mL) 및 물(2.00 mL) 중 (R)-N-((R)-1-(3-(1,1-디플루오로-2-하이드록시에틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(0.90 g, 2.95 mmol, 1.00 당량)의 용액에 요오드(224 mg, 884 mmol, 178 μL, 0.30 당량)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 포화 아황산나트륨 수용액(10.0 ml) 및 중탄산나트륨 수용액(10.0 mL)으로 희석하고, 생성된 혼합물을 디클로로메탄/메탄올(10:1, 10.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 건조하고 감압 하에 농축하여 (R)-2-(3-(1-아미노에틸)페닐)-2,2-디플루오로에탄-1-올(450 mg, 미정제)을 황색 오일로서 제공하였다.
단계 E: 디옥산(3.00 mL) 중 4-(1-클로로-4-메틸피리도[3,4-d]피리다진-7-일)모르폴린(200 mg, 756 μmol, 1.00 당량), (R)-2-(3-(1-아미노에틸)페닐)-2,2-디플루오로에탄-1-올(152 mg, 756 μmol, 1.00 당량), BrettPhos Pd G3(68.5 mg, 75.6 μmol, 0.10 당량) 및 나트륨 tert-부톡시드(218 mg, 2.27 mmol, 3.00 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Phenomenex Luna C18 150 x 25 mm x 10 um; 이동 상: 상 A: 물(0.225% 포름산), 상 B: 아세토니트릴; B%: 9%-39%]에 의해 정제하여 (R)-2,2-디플루오로-2-(3-(1-((4-메틸-7-모르폴리노피리도[3,4-d]피리다진-1-일)아미노)에틸)페닐)에탄-1-올(73.0 mg, 170 μmol, 22.5% 수율, 99.9% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 430.1.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.11 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.56 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.46 - 7.35 (m, 3H), 5.44 - 5.34 (m, 1H), 3.95 - 3.81 (m, 10H), 2.71 (s, 3H), 1.69 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 21-8
Figure pct00215
단계 A: 물(0.60 mL) 중 아질산나트륨(20.1 mg, 292 μmol, 1.30 당량)을 물(3.00 mL) 중 (R)-N-(1-(5-아미노-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(100 mg, 224 μmol, 1.00 당량) 및 테트라플루오로붕산(253 mg, 1.15 mmol, 179 μL, 40.0% 순도, 5.13 당량)의 혼합물에 0℃에서 적가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 감압 하에 농축하여 (R)-4-메틸-3-(1-((4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-일)아미노)에틸)-5-(트리플루오로메틸)벤젠디아조늄 테트라플루오로보레이트(100 mg, 미정제)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M-28]+: 429.0.
단계 B: 톨루엔(1.00 mL) 중 (R)-4-메틸-3-(1-((4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-일)아미노)에틸)-5-(트리플루오로메틸)벤젠디아조늄 테트라플루오로보레이트(100 mg, 184 μmol, 1.00 당량)의 용액을 110℃로 가열하고, 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Phenomenex luna C18 80 × 40 mm × 3 um; 이동 상: 상 A: 물(0.04% HCl), 상 B: 아세토니트릴; B%: 28%-52%]에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(5-플루오로-2-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-4-메틸-7-모르폴리노프탈라진-1-아민(13.1 mg, 28.9 μmol, 15.8% 수율, 99.3% 순도, 염산염)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 449.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 14.75 (br s, 1H), 8.58 - 8.41 (m, 1H), 8.22 - 8.15 (m, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.79 - 7.74 (m, 1H), 7.62 - 7.56 (m, 1H), 7.48 - 7.43 (m, 1H), 5.50 - 5.37 (m, 1H), 3.85 - 3.80 (m, 4H), 3.72 - 3.65 (m, 4H), 2.73 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 1.64 - 1.58 (m, 3H).
SFC 조건: Chiralcel OD-3 3μm, 0.46 cm id x 5 cm L; 이동 상: SFC CO2의 경우 A 및 MeOH(0.05% 이소프로필아민)의 경우 B; 구배 용리: A중 B 3분 내에 10%에서 40%로; 유량: 4.0 mL/분; 컬럼 온도: 35℃; 배압: 100 Bar.
실시예 21-9
3-((R)-1-((5-플루오로-7-((R)-헥사하이드로-2H,6H-피라지노[1,2-c][1,3]옥사진-2-일)-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴
Figure pct00216
단계 A: 염산(4.0 M, 21.4 mL, 10.0 당량) 및 물(10.0 mL) 중 2-아미노-5-브로모-3-플루오로벤조산(2.00 g, 8.55 mmol, 1.00 당량)의 용액에 아질산나트륨(708 mg, 10.3 mmol, 1.20 당량)을 0℃에서 첨가한 다음, 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반하였다. 이 시간 후, 요오드화칼륨 용액(2.13 g, 12.8 mmol, 1.50 당량)을 적가한 다음, 혼합물을 90℃로 가열하고 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 탄산칼륨으로 pH를 pH=9로 조정한 다음 여과하였다. 여액을 HCl(물 중 4.0 M)로 pH=4로 조정하고, 여과하고, 침전물을 진공 하에 건조하여 5-브로모-3-플루오로-2-요오도벤조산(2.40 g, 6.96 mmol, 81.4% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 14.06 - 13.55 (m, 1H), 7.79 - 7.72 (m, 1H), 7.69 - 7.64 (m, 1H).
단계 B: 톨루엔(24.0 mL) 및 메탄올(8.00 mL) 중 5-브로모-3-플루오로-2-요오도벤조산(2.40 g, 6.96 mmol, 1.00 당량)의 용액에 트리메틸실릴디아조메탄(2.0 M, 6.96 mL, 2.00 당량)을 0℃에서 적가하고, 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)에 의해 정제하여 메틸 5-브로모-3-플루오로-2-요오도벤조에이트(2.47 g, 6.88 mmol, 98.9% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 3.96 (s, 3H).
단계 C: 디옥산(30.0 mL) 중 메틸 5-브로모-3-플루오로-2-요오도벤조에이트(2.47 g, 6.88 mmol, 1.00 당량), 트리부틸(1-에톡시비닐)주석(2.73 g, 7.57 mmol, 2.55 mL, 1.10 당량) 및 Pd(PPh3)2Cl2(483 mg, 688 μmol, 0.10 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 불화칼륨의 포화 용액(물 중, 50.0 mL)에 붓고 30분 동안 교반하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(100 mL × 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(50.0 mL × 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 20/1)에 의해 정제하여 메틸 5-브로모-2-(1-에톡시비닐)-3-플루오로벤조에이트(1.80 g, 5.94 mmol, 86.3% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.69 - 7.65 (m, 1H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 4.50 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.38 - 4.34 (m, 1H), 3.90 - 3.85 (m, 5H), 1.32 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 D: THF(20.0 mL) 중 메틸 5-브로모-2-(1-에톡시비닐)-3-플루오로벤조에이트(1.80 g, 5.94 mmol, 1.00 당량)의 용액에 염산(2.0 M, 8.91 mL, 3.00 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물의 pH를 포화 중탄산나트륨 수용액으로 pH=7로 조정하고, 용액을 에틸 아세테이트(30.0 mL × 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 30/1)에 의해 정제하여 메틸 2-아세틸-5-브로모-3-플루오로벤조에이트(1.40 g, 5.09 mmol, 85.7% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.91 (s, 1H), 7.54 - 7.41 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.59 (s, 3H).
단계 E: 에탄올(10.0 mL) 중 메틸 2-아세틸-5-브로모-3-플루오로벤조에이트(1.20 g, 4.36 mmol, 1.00 당량)의 용액에 히드라진 수화물(334 mg, 6.54 mmol, 325 μL, 98% 순도, 1.50 당량)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 여과하고, 침전물을 진공 하에 건조하여 7-브로모-5-플루오로-4-메틸프탈라진-1-올(580 mg, 2.26 mmol, 51.7% 수율)을 백색으로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.7 (br s, 1H), 8.17 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.15 - 8.08 (m, 1H), 2.56 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 F: 옥시염화인(6.00 mL) 중 7-브로모-5-플루오로-4-메틸프탈라진-1-올(300 mg, 1.17 mmol, 1.00 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(453 mg, 3.50 mmol, 10.0 μL, 3.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 중탄산나트륨 수용액으로 켄칭하고 에틸 아세테이트(10.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)에 의해 정제하여 7-브로모-1-클로로-5-플루오로-4- 메틸프탈라진(150 mg, 544 μmol, 46.7% 수율)을 주황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 276.8.
단계 G: DMSO(1.00 mL) 중 7-브로모-1-클로로-5-플루오로-4-메틸프탈라진(150 mg, 544 μmol, 1.00 당량)의 용액에 불화세슘(124 mg, 817 μmol, 30.1 μL, 1.50 당량) 및 (R)-3-(1-아미노에틸)-2-메틸벤조니트릴(87.2 mg, 544 μmol, 1.00 당량)을 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(20.0 mL)로 희석하고, 염수(10.0 mL × 3)로 세척하고, 분리된 유기 상을 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 2/1)에 의해 정제하여 (R)-3-(1-((7-브로모-5-플루오로-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(160 mg, 401 μmol, 73.6% 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 399.1.
단계 H: 디옥산(1.00 mL) 중 (R)-3-(1-((7-브로모-5-플루오로-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(15.0 mg, 37.6 μmol, 1.00 당량), (R)-헥사하이드로-2H,6H-피라지노[1,2-c][1,3]옥사진(10.5 mg, 48.8 μmol, 1.30 당량, 2 HCl), 탄산세슘(61.2 mg, 188 μmol, 5.00 당량), RuPhos(3.51 mg, 7.51 μmol, 0.20 당량) 및 Pd2(dba)3(3.44 mg, 3.76 μmol, 0.10 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 105℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 그 다음 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 um; 이동 상: 상 A: 물(0.225% 포름산), 상 B: 아세토니트릴; B%: 2%-32%]에 의해 정제하여 3-((R)-1-((5-플루오로-7-((R)-헥사하이드로-2H,6H-피라지노[1,2-c][1,3]옥사진-2-일)-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(7.70 mg, 15.2 μmol, 40.5% 수율, 99.9% 순도, 포름산염)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 461.2.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.52 (br s, 1H), 7.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.39 - 7.33 (m, 1H), 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.59 - 5.51 (m, 1H), 4.11 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.96 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.92 - 3.84 (m, 2H), 3.77 - 3.68 (m, 1H), 3.39 - 3.33 (m, 1H), 3.21 - 3.11 (m, 1H), 2.97 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.80 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.75 - 2.63 (m, 7H), 2.51 - 2.35 (m, 3H), 1.62 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 21-10
(R)-3-(1-((5-플루오로-7-(3-하이드록시-3-메틸아제티딘-1-일)-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴
Figure pct00217
디옥산(1.00 mL) 중 (R)-3-(1-((7-브로모-5-플루오로-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(60.0 mg, 150 μmol, 1.00 당량), 3-메틸아제티딘-3-올(27.9 mg, 225 μmol, 1.50 당량, HCl), 탄산세슘(245 mg, 751 μmol, 5.00 당량), RuPhos(14.0 mg, 30.1 μmol, 0.20 당량) 및 Pd2(dba)3(13.8 mg, 15.0 μmol, 0.10 당량)의 혼합물을 탈기하고 질소로 퍼징(3회)한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축하고, 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 um; 이동 상: 상 A: 물(0.225% 포름산, 상 B: 아세토니트릴; B%: 10%-40%]에 의해 정제하여 (R)-3-(1-((5-플루오로-7-(3-하이드록시-3-메틸아제티딘-1-일)-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-2-메틸벤조니트릴(39.0 mg, 86.0 μmol, 57.3% 수율, 99.6% 순도, 포름산염)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 406.1.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.51 (s, 1H), 7.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 1H), 7.27 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.87 - 6.77 (m, 1H), 5.54 - 5.37 (m, 1H), 4.14 - 4.07 (m, 2H), 4.07 - 4.00 (m, 2H), 2.79 - 2.65 (m, 6H), 1.68 - 1.55 (m, 6H).
실시예 21-11
Figure pct00218
단계 A: 1,4-디옥산(10.0 mL) 중 3-브로모-4-플루오로-5-(트리플루오로메틸)아닐린(4.00 g, 15.5 mmol, 1.00 당량), 트리부틸(1-에톡시비닐)주석(5.60 g, 15.5 mmol, 5.23 mL, 1.00 당량), 및 PdCl2(PPh)3(326 mg, 0.47 mmol, 0.03 당량)의 용액을 질소 분위기 하에 80℃에서 10시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각하고, 포화 불화칼륨 수용액(200 mL)에 붓고, 30분 동안 교반하여 현탁액을 제공하고, 현탁액을 여과한 다음, 여액을 에틸 아세테이트(200 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 미정제 생성물 3-(1-에톡시비닐)-4-플루오로-5-(트리플루오로메틸)아닐린(6.00 g, 24.1 mmol, 1.00 당량, 미정제)을 제공하고 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 B: 테트라하이드로푸란(20.0 mL) 중 3-(1-에톡시비닐)-4-플루오로-5-(트리플루오로메틸)아닐린(6.00 g, 24.1 mmol, 1.00 당량, 미정제)의 용액에 염산(3.00 M, 8.03 mL, 1.00 당량)을 질소 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(40.0 mL)에 부은 다음, 에틸 아세테이트(40.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(40.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 3/1)에 의해 정제하여 1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(2.00 g, 9.04 mmol)을 황색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.18 (dd, J = 3.0, 5.6 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 3.2, 5.6 Hz, 1H), 5.67 (s, 2H), 2.54 (d, J = 4.4 Hz, 3H).
단계 C: 테트라하이드로푸란(20.0 mL) 중 1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(2.00 g, 9.04 mmol, 1.00 당량) 및 (R)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.42 g, 11.8 mmol, 1.30 당량)의 용액에 티타늄 (IV) 이소프로폭시드(5.14 g, 18.1 mmol, 5.34 mL, 2.00 당량) 및 1-메톡시-2-(2-메톡시에톡시)에탄(4.69 g, 34.9 mmol, 5.00 mL, 3.86 당량)을 첨가하고, 혼합물을 질소 분위기 하에 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(500 mg, 1.54 mmol, 17.1% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.07 (br s, 1H), 6.95 (br s, 1H), 3.83 (br s, 2H), 2.74 (br d, J = 2.4 Hz, 3H), 1.31 (s, 9H).
단계 D: 테트라하이드로푸란(15.0 mL) 중 (R)-N-(1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(1.10 g, 3.39 mmol, 1.00 당량)의 용액에 수소화붕소나트륨(385 mg, 10.2 mmol, 3.00 당량)을 질소 분위기 하에 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 포화 염화암모늄 수용액(40.0 mL)으로 천천히 희석하고, 생성된 혼합 용액을 에틸 아세테이트(30.0 mLx 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 (R)-N-(1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(600 mg, 1.84 mmol, 54.2% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 327.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.97 - 6.83 (m, 1H), 6.82 - 6.76 (m, 1H), 4.83 - 4.69 (m, 1H), 3.71 - 3.44 (m, 2H), 1.59 - 1.50 (m, 3H), 1.25 - 1.19 (m, 9H). (부분입체 이성질체의 비는 ~2:1이었다).
단계 E: 디클로로메탄(5.00 mL) 중 (R)-N-(1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(600 mg, 1.84 mmol, 1.00 당량)의 용액에 HCl(디옥산 중 4.00 M, 5.00 mL, 10.9 당량)을 적가한 다음, 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 포화 중탄산나트륨 수용액을 천천히 첨가하여 잔류물의 pH를 pH=8로 조정하였다. 수용액을 DCM:메탄올(10:1, 20.0 mL × 5)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수(10.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 3-(1-아미노에틸)-4-플루오로-5-(트리플루오로메틸)아닐린(350 mg, 1.58 mmol, 85.7% 수율)을 황색 고체로서 제공하고, 이를 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
단계 F: DMSO(3.00 mL) 중 3-(1-아미노에틸)-4-플루오로-5-(트리플루오로메틸)아닐린(140 mg, 630 μmol, 1.00 당량), 6-브로모-4-클로로-1-메틸프탈라진(162 mg, 0.63 mmol, 1.00 당량) 및 불화칼륨(183 mg, 3.15 mmol, 73.8 μL, 5.00 당량)을 질소 분위기 하에 130℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(20.0 mL)에 붓고 생성된 수용액을 에틸 아세테이트(20.0 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: Welch Xtimate C18 150×25 mm×5 um; 이동 상: 상 A: 물(0.05% HCl), 상 B: 아세토니트릴; B%: 14%-44%]에 의해 정제하여 N-(1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-브로모-4-메틸프탈라진-1-아민(10.0 mg, 18.1 μmol, 2.86% 수율, 80.0% 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 443.1.
그 다음 라세미 N-(1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-브로모-4-메틸프탈라진-1-아민(100 mg, 226 μmol, 1.00 당량)을 SFC[컬럼: DAICEL CHIRALPAK AS(250 mm×30 mm, 10 um); 이동 상: 상 A: MeOH 중 (0.1% NH4OH), 상 B: CO2; B%: 25%-25%]에 의해 정제하여 제1 용리 이성질체로서 (R)-N-(1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-브로모-4-메틸프탈라진-1-아민(20.0 mg, 45.1 μmol, 20.0% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다.
단계 G: 디클로로메탄(1.00 mL) 중 (R)-N-(1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-7-브로모-4-메틸프탈라진-1-아민(20.0 mg, 45.1 μmol, 1.00 당량), 디-tert-부틸 디카르보네이트(11.8 mg, 54.2 μmol, 12.4 μL, 1.20 당량) 및 N,N-디메틸피리딘-4-아민(5.51 mg, 45.1 μmol, 1.00 당량)의 용액을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(20.0 mL)에 부은 다음, 에틸 아세테이트(20.0 mL× 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(20.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-TLC(실리카 겔, 디클로로메탄/메틸 알코올 = 20/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 (R)-(3-(1-((7-브로모-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-4-플루오로-5-(트리플루오로메틸)페닐)(tert-부톡시카르보닐)카르바메이트(15.0 mg, 23.3 μmol, 51.7% 수율)을 회색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+3] +: 644.9.
단계 H: 1,4-디옥산(2.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-(3-(1-((7-브로모-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-4-플루오로-5-(트리플루오로메틸)페닐)(tert-부톡시카르보닐)카르바메이트(15.0 mg, 23.3 μmol, 1.00 당량), 3-메틸아제티딘-3-올(7.46 mg, 46.6 μmol, 2.00 당량, HCl 염), RuPhos(2.18 mg, 4.66 μmol, 0.20 당량), Pd2(dba)3(2.13 mg, 2.33 μmol, 0.10 당량) 및 탄산세슘(38.0 mg, 0.12 mmol, 5.00 당량)의 용액을 질소 분위기 하에 100℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 물(10.0 mL)에 붓고, 생성된 수용액을 에틸 아세테이트(10.0 mL× 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(10.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 prep-TLC(이산화규소, 디클로로메탄:메틸 알코올 = 10:1)에 의해 정제하여(R)-(4-플루오로-3-(1-((7-(3-하이드록시-3-메틸아제티딘-1-일)-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-5-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트(10.0 mg, 15.3 μmol, 66.0% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1] +: 550.1.
디클로로메탄(1.00 mL) 중 tert-부틸 (R)-(4-플루오로-3-(1-((7-(3-하이드록시-3-메틸아제티딘-1-일)-4-메틸프탈라진-1-일)아미노)에틸)-5-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트(10.0 mg, 15.4 μmol, 1.00 당량)의 용액에 20℃에서 TFA(308 mg, 2.70 mmol, 0.20 mL 175 당량)를 적가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 prep-HPLC[컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75x30 mmx3 um; 이동 상: 상 A: 물(10 mM NH4HCO3), 상 B: 아세토니트릴; B%: 20% - 50%]에 의해 정제하여 (R)-1-(4-((1-(5-아미노-2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)아미노)-1-메틸프탈라진-6-일)-3-메틸아제티딘-3-올(1.12 mg, 2.41 μmol, 15.6% 수율, 96.6% 순도)을 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS [M+1]+: 450.4.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 6.83 - 6.80 (m, 1H), 6.67 - 6.64 (m, 1H), 5.51 - 5.45 (m, 1H), 3.99 - 3.95 (m, 2H), 3.89 - 3.84 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 1.55 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.51(s, 3H).
SFC: 컬럼: Chiralcel OD-3 50×4.6 mm I.D., 3 um 이동 상: CO2의 경우 상 A, 및 MeOH(0.05% 디에틸아민)의 경우 상 B; 구배 용리: CO2 중 MeOH(0.05% 디에틸아민) 5%에서 40%로; 유량: 3 mL/분, 검출기: PDA; 컬럼 온도: 35℃, 배압: 100 Bar.
실시예 A
이 실시예는 본 발명의 예시적인 화합물이 SOS1에 결합하고 표지된 추적자 리간드가 SOS1 결합 부위를 점유하는 것을 방지함을 예시한다.
SOS1에 결합하는 화학식 (I)의 화합물의 능력은 HTRF 치환 검정을 사용하여 측정되었다. 재조합 인간 SOS1 폴리펩티드(N-말단 StrepII-TEV, C-말단 His-태그를 갖는 E. Coli에서 발현된 아미노산 564-1049에 대응함. MW=60.59 kDa)를 (DMSO 스톡 용액 중) 예시적인 화학식 (I)의 화합물과 함께 완충제(25 mM HEPES pH 7.5, 25 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.01% Brij 35, 0.02% BSA, 0.1% DMSO)에서 인큐베이션하였다. 실온에서 15분 인큐베이션 후, 완충제 중 맞춤형 Cy5 표지된 추적자 및 MAb Anti-6HIS Tb 크립테이트 골드(Cisbio 61HI2TLA)로 이루어진 용액을, SOS1 폴리펩티드 및 예시적인 화학식 (I)의 화합물을 함유하는 용액에 첨가하였다. 실온에서 1시간 인큐베이션한 후, HTRF 신호는 제조업자의 지침에 따라 Envision 플레이트 리더(Perkin Elmer)를 사용하여 측정되었다. 여기(excitation)는 245 내지 395 nm의 범위 초과이었고, 방출 1은 (657.5-672.5) nm에서 검출되었고, 방출 2는 (606.5-623.5) nm에서 검출되었다. HTRF 비는 다음 공식을 사용하여 계산되었다: [방출 1/방출 2]*10000.
배경 신호는 단백질이 첨가되지 않은 웰에서 계산되었다. 배경 차감된 신호는 DMSO 대조군에 대한 % 결합으로 변환되었다. 데이터는 다음의 설정으로 GraphPad Prism 4 소프트웨어를 사용하여 분석되었다: "S자형 용량-반응(가변 기울기)"; 경사(Hill) 기울기(제약조건: 하단 = 0과 동일한 상수; 상단 = 120보다 작아야 함)를 갖는 4개의 파라미터.
결과를 표 21에 나타낸다. 약어: N.D. = 측정되지 않음(not determined).
Figure pct00219
실시예 B
이 실시예는 본 발명의 예시적인 화합물이 SOS1에 결합하고 표지된 추적자 리간드가 SOS1 결합 부위를 점유하는 것을 방지함을 예시한다.
SOS1에 결합하는 화학식 (I)의 화합물의 능력은 HTRF 치환 검정을 사용하여 측정되었다. 재조합 인간 SOS1 폴리펩티드(N-말단 His-TEV-AviTag-SOS1(MW=59.4 kDa) 및 란타나이드 표지된 스트렙타비딘(CisBio)을 갖는 E. Coli에서 발현된 아미노산 560-1049에 대응함)를 (DMSO 스톡 용액 중) 예시적인 화학식 (I)의 화합물과 함께 완충제(25 mM HEPES pH 7.5, 25 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.01% Brij 35, 0.02% BSA, 0.1% DMSO)에서 인큐베이션하였다. 실온에서 10 내지 15분 인큐베이션 후, 완충제 중 맞춤형 Cy5 표지된 추적자 및 MAb Anti-6HIS Tb 크립테이트 골드(Cisbio 61HI2TLA)로 이루어진 용액을, SOS1 폴리펩티드 및 예시적인 화학식 (I)의 화합물을 함유하는 용액에 첨가하였다. 실온에서 1시간 인큐베이션한 후, HTRF 신호는 제조업자의 지침에 따라 Clairostar 플레이트 리더(BMG Labtech)를 사용하여 측정되었다. 여기 필터 EX-TR이 사용되었으며, 방출 1은 650-610 nm에서 검출되었고, 방출 2는 620-610 nm에서 검출되었다. HTRF 비는 다음 공식을 사용하여 계산되었다: [방출 1/방출 2]*10000.
배경 신호는 해당 농도에서 100% 억제하는 것으로 알려진 10 μM 억제제를 갖는 웰에서 계산되었다. 배경 차감된 신호는 DMSO 대조군에 대한 % 결합으로 변환되었다. 데이터는 경쟁 결합에 대한 Morrison 방정식을 사용하는 XLFIT 소프트웨어(IDBS)를 사용하여 분석되었으며 Ki들은 화학식 (I)의 생성된 화합물이었다.
결과를 표 22에 나타낸다.
Figure pct00220
Figure pct00221
Figure pct00222
Figure pct00223
Figure pct00224
Figure pct00225
표 22에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 예시적인 화합물은 SOS1 단백질에 대한 SOS1 표지된 추적자의 결합을 강력하게 억제하였다.
실시예 C
이 실시예는 본 발명의 예시적인 화합물이 SOS1에 결합하고 재조합 인간 KRAS 내에서 GTP와 mantGDP(인간 KRAS에 사전 로딩됨)의 SOS1-매개 뉴클레오티드 교환을 억제함을 예시한다.
SOS1에 결합하고 재조합 인간 KRAS 내에서 GTP와 mantGDP의 뉴클레오티드 교환을 억제하는 예시적인 화학식 (I)의 화합물의 능력은 형광 검정을 사용하여 측정되었다. 완충제(40 mM HEPES 7.4, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.002% Triton X100, 0.1% DMSO)에서 재조합 인간 SOS1 폴리펩티드(C-말단 StrepII 태그를 갖는 E. Coli에서 발현된 아미노산 564-1049에 대응함. MW=60.59 kDa)를 (DMSO 스톡 용액 중) 예시적인 화학식 (I)의 화합물과 함께 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 사전 로딩된 mantGDP 재조합 인간 KRAS 폴리펩티드(N-말단 TEV 절단 가능한 his-태그를 갖는 E. Coli에서 발현된 아미노산 2-169에 대응함. MW=21.4 kDa)와 GTP의 혼합물을 실온에서 완충제(40 mM HEPES 7.4, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT 0.002%, Triton X100, 0.1% DMSO)에서 5분 동안 인큐베이션한 다음, SOS1/화합물 혼합물에 첨가하였다. 제조업자의 지침에 따라 Clariostar 플레이트 리더(여기 370±15 nm, 방출 450±20 nm)를 사용하여 실온에서 60분 동안 반응 진행을 모니터링했다. 진행 곡선의 선형 부분의 기울기는 Clariostar 소프트웨어를 사용하여 계산되었다. 전형적인 분석 간격은 8 내지 30분이었다. 배경 신호는 단백질이 첨가되지 않은 웰에서 계산되었다. 배경 차감된 신호는 DMSO 대조군에 대한 % 활성으로 변환되었다. 데이터는 다음의 설정으로 GraphPad Prism 4 소프트웨어를 사용하여 분석되었다: "S자형 용량-반응(가변 기울기)"; 경사 기울기(제약조건: 하단 = 0과 동일한 상수; 상단 = 120보다 작아야 함)를 갖는 4개의 파라미터.
예시적인 화학식 (I)의 화합물에 대한 형광 판독 IC50은 표 23에 나타낸다.
Figure pct00226
표 23에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 예시적인 화합물은 mant-GDP 교환을 차단함으로써 SOS1-매개 GTP 뉴클레오티드 교환을 강력하게 억제할 수 있었다.
실시예 D
이 실시예는 본 발명의 예시적인 화합물이 SOS1에 의해 매개되는 KRas-매개 GTP 뉴클레오티드 교환을 방지하여 KRas 활성을 억제함으로써 다운스트림 이펙터 pERK의 생성을 억제함을 예시한다.
MKN1 세포(15,000/w) 또는 H358(30,000/w)을 흑색의 투명하고 평평한 바닥 96-웰 세포 배양 플레이트(Corning, #3904)에 시딩하고 37℃에서 밤새 인큐베이션했다. 검정 1일차에, 세포에 10 μm 시작 농도의 화학식 (I)의 화합물을 투여하고 총 9개 농도에 대해 3x 연속 희석하였다. 세포를 37℃에서 DMSO에 가용화된 화합물과 함께 대략 0.5 내지 1시간 동안 인큐베이션하였다. 흄 후드에서의 모든 웰에 50 μL의 4% 포름알데히드를 첨가함으로써 세포를 즉시 고정하고 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 포름알데히드를 플레이트로부터 버리고 150 μL의 얼음처럼 차가운 메탄올을 첨가하여 -20 ℃에서 10분 동안 세포를 투과시켰다. 플레이트를 종이 타월에 두드림으로써 각 플레이트 및 플레이트에 남아 있는 임의의 액체로부터 메탄올을 버렸다. 그 다음 셰이커(shaker)에서 실온에서 1시간 동안 0.05% Tween을 사용하여 150 μL의 Odyssey 차단 완충제(LI-COR Biosciences #927-50010)로 세포를 차단했다. 차단 완충제를 버리고 Odyssey 차단 완충제에 희석된 50 μL의 1차 항체 pERK(세포 시그널링 기술 #9101L; 토끼, 1:500) 및 GapDH(Millipore #MAB34; 마우스, 1:5000)를 첨가했다. 플레이트를 셰이커에서 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다.
검정 2일차에, 1차 항체 용액을 제거했다. 각 플레이트를 150 μL의 1x PBST(PBS + 0.1% Tween 20)로 3회 세척하고, 2시간 동안 셰이커에서 실온에서 Tween를 갖는 Odyssey 차단 완충제에서 1:800 희석으로 50 μL의 이차 항체: Anti-Rabbit(LI-COR Biosciences #926-32211) 및 Anti-Mouse(LI-COR Biosciences #68070)와 함께 인큐베이션하였다(빛으로부터 보호됨). 이차 항체 용액을 제거하고 각 플레이트를 PBST로 3x 회 세척했다. 임의의 남은 액체는 버리고, 3 mm의 설정 초점 길이 및 800 nm와 700 nm 모두의 필터를 사용하여 제조업자의 지침에 따라 Licor Odyssey 기계를 사용하여 플레이트를 이미지화했다. 각 웰에 대한 GAPDH 정규화 스캔 값을 비히클 웰의 평균으로 나누어 pERK 억제율(%)을 얻었다. 그 다음 IC50 값을 Graph pad Prism 소프트웨어로 계산하였다.
결과를 표 24에 나타낸다. 약어: N.D. = 측정되지 않음.
Figure pct00227
Figure pct00228
Figure pct00229
Figure pct00230
Figure pct00231
Figure pct00232
Figure pct00233
표 24의 결과는 본 발명의 화합물이 KRas-매개 활성화 및 pERK의 형성을 강력하게 억제함으로써 세포내 KRas-매개 시그널링을 차단할 수 있음을 예시한다.
실시예 E
이 실시예는 본 발명의 예시적인 화합물이 SOS1 N233Y 돌연변이 세포주에서 SOS1에 의해 매개되는 KRas-매개 GTP 뉴클레오티드 교환을 방지하여 KRas 활성을 억제함으로써 다운스트림 이펙터 Perk의 생성을 억제함을 예시한다.
SOS1 N233Y 활성화 돌연변이를 보유하는 3개의 세포주인 LXF289(DSMZ, 독일 라이프니츠 연구소) RL95-2(ATCC CRL-1671); 및 OCI AML-5(DSMZ, 독일 라이프니츠 연구소)가 연구에 사용되었다. SOS1 N233Y 돌연변이 세포(15,000/w)를 흑색의 투명하고 평평한 바닥 96-웰 세포 배양 플레이트(Corning, #3904)에 시딩하고 37℃에서 밤새 인큐베이션했다. 검정 1일차에, 세포에 10 μm 시작 농도의 화학식 (I)의 화합물을 투여하고 총 9개 농도에 대해 3x 연속 희석하였다. 세포를 37℃에서 DMSO에 가용화된 화합물과 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 흄 후드에서의 모든 웰에 50 μL의 4% 포름알데히드를 첨가함으로써 세포를 즉시 고정하고 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 포름알데히드를 플레이트로부터 버리고 150 μL의 얼음처럼 차가운 메탄올을 첨가하여 -20 ℃에서 10분 동안 세포를 투과시켰다. 플레이트를 종이 타월에 두드림으로써 각 플레이트 및 플레이트에 남아 있는 임의의 액체로부터 메탄올을 버렸다. 그 다음 셰이커(shaker)에서 실온에서 1시간 동안 0.05% Tween을 사용하여 150 μL의 Odyssey 차단 완충제(LI-COR Biosciences #927-50010)로 세포를 차단했다. 차단 완충제를 버리고 Odyssey 차단 완충제에 희석된 50 μL의 1차 항체 pERK(세포 시그널링 기술 #9101L; 토끼, 1:500) 및 GapDH(Millipore #MAB34; 마우스, 1:5000)를 첨가했다. 플레이트를 셰이커에서 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다.
검정 2일차에, 1차 항체 용액을 제거했다. 각 플레이트를 150 μL의 1x PBST(PBS + 0.1% Tween 20)로 3회 세척하고, 2시간 동안 셰이커에서 실온에서 Tween를 갖는 Odyssey 차단 완충제에서 1:800 희석으로 50 μL의 이차 항체: Anti-Rabbit(LI-COR Biosciences #926-32211) 및 Anti-Mouse(LI-COR Biosciences #68070)와 함께 인큐베이션하였다(빛으로부터 보호됨). 이차 항체 용액을 제거하고 각 플레이트를 PBST로 3x 회 세척했다. 임의의 남은 액체는 버리고, 3 mm의 설정 초점 길이 및 800 nm와 700 nm 모두의 필터를 사용하여 제조업자의 지침에 따라 Licor Odyssey 기계를 사용하여 플레이트를 이미지화했다. 각 웰에 대한 GAPDH 정규화 스캔 값을 비히클 웰의 평균으로 나누어 pERK 억제율(%)을 얻었다. 그 다음 IC50 값을 Graph pad Prism 소프트웨어로 계산하였다.
결과를 표 25에 나타낸다.
Figure pct00234
표 25의 결과는 본 발명의 화합물이 SOS1 활성화 돌연변이를 보유하는 세포에서 KRas-매개 활성화 및 pERK 형성을 강력하게 억제하여 SOS1 활성 증가에 의해 유도되는 세포내 KRas-매개 시그널링을 차단할 수 있음을 예시한다.
실시예 F
이 실시예는 본 발명의 예시적인 화합물이 NF-1 돌연변이 세포주에서 SOS1에 의해 매개되는 증가된 KRas-매개 GTP 뉴클레오티드 교환을 방지하여 KRas 활성을 억제함으로써 다운스트림 이펙터 pERK의 생성을 억제함을 예시한다.
NF-1 유전자에 활성화 돌연변이를 보유하는 2개의 세포주인 Kasuma-1(ATCC CRL-2724); 및 NCI-H1435(ATCC CRL-5870)가 이 연구에 사용되었다. NF-1 돌연변이 세포(15,000/w)를 흑색의 투명하고 평평한 바닥 96-웰 세포 배양 플레이트(Corning, #3904)에 시딩하고 37℃에서 밤새 인큐베이션했다. 검정 1일차에, 세포에 10 μm 시작 농도의 화학식 (I)의 화합물을 투여하고 총 9개 농도에 대해 3x 연속 희석하였다. 세포를 37℃에서 DMSO에 가용화된 화합물과 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 흄 후드에서의 모든 웰에 50 μL의 4% 포름알데히드를 첨가함으로써 세포를 즉시 고정하고 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 포름알데히드를 플레이트로부터 버리고 150 μL의 얼음처럼 차가운 메탄올을 첨가하여 -20 ℃에서 10분 동안 세포를 투과시켰다. 플레이트를 종이 타월에 두드림으로써 각 플레이트 및 플레이트에 남아 있는 임의의 액체로부터 메탄올을 버렸다. 그 다음 셰이커(shaker)에서 실온에서 1시간 동안 0.05% Tween을 사용하여 150 μL의 Odyssey 차단 완충제(LI-COR Biosciences #927-50010)로 세포를 차단했다. 차단 완충제를 버리고 Odyssey 차단 완충제에 희석된 50 μL의 1차 항체 pERK(세포 시그널링 기술 #9101L; 토끼, 1:500) 및 GapDH(Millipore #MAB34; 마우스, 1:5000)를 첨가했다. 플레이트를 셰이커에서 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다.
검정 2일차에, 1차 항체 용액을 제거했다. 각 플레이트를 150 μL의 1x PBST(PBS + 0.1% Tween 20)로 3회 세척하고, 2시간 동안 셰이커에서 실온에서 Tween를 갖는 Odyssey 차단 완충제에서 1:800 희석으로 50 μL의 이차 항체: Anti-Rabbit(LI-COR Biosciences #926-32211) 및 Anti-Mouse(LI-COR Biosciences #68070)와 함께 인큐베이션하였다(빛으로부터 보호됨). 이차 항체 용액을 제거하고 각 플레이트를 PBST로 3x 회 세척했다. 임의의 남은 액체는 버리고, 3 mm의 설정 초점 길이 및 800 nm와 700 nm 모두의 필터를 사용하여 제조업자의 지침에 따라 Licor Odyssey 기계를 사용하여 플레이트를 이미지화했다. 각 웰에 대한 GAPDH 정규화 스캔 값을 비히클 웰의 평균으로 나누어 pERK 억제율(%)을 얻었다. 그 다음 IC50 값을 Graph pad Prism 소프트웨어로 계산하였다.
결과를 표 26에 나타낸다.
Figure pct00235
표 26의 결과는 본 발명의 화합물이 NF-1 활성화 돌연변이를 보유하는 세포에서 KRas-매개 활성화 및 pERK 형성을 강력하게 억제하여 NF-1 유도된 SOS1 활성 증가에 의해 유도되는 세포내 KRas-매개 시그널링을 차단할 수 있음을 예시한다.
본 발명은 그의 특정 실시형태들과 관련하여 설명되었지만, 추가적인 변형이 가능하며, 본원은 일반적으로 본 발명의 원리를 따르고 본 발명이 속하는 당업계 내의 공지된 또는 관례적 실시에 속하는 본 개시내용으로부터의 이탈을 포함하며 상기에 제시된 필수적인 특징들에 적용될 수 있는 바와 같으며 첨부된 청구범위의 범위 내에서와 같은 본 발명의 임의의 변화, 사용 또는 적응을 포함하도록 의도됨이 이해될 것이다.

Claims (88)

  1. 화학식 (I)의 화합물:
    Figure pct00236

    화학식 (I)
    또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
    상기 식에서,
    R1은 수소, 하이드록실, C1 ― C6 알킬, 알콕시, -N(R6)2, -NR6C(O)R6, -C(O)N(R6)2, -SO2알킬, -SO2NR6알킬, 사이클로알킬, -Q-헤테로사이클릴, aryl, 또는 헤테로아릴이며, 여기서 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 각각 하나 이상의 R2 또는 L-R2로 선택적으로 치환되고;
    각각의 Q는 독립적으로 결합, O, 또는 NR6이고;
    X는 N 또는 CR7이고;
    각각의 R2는 독립적으로 C1-C3 알킬, 옥소, 하이드록시, 할로겐, 시아노, 하이드록시알킬, 할로알킬, 알콕시, -C(O)N(R6)2, -N(R6)2, -SO2알킬, -NR6C(O)C1―C3 알킬, -C(O)사이클로알킬, -C(O)C1-C3알킬, -C(O)헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴이며, 여기서 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R11로 선택적으로 치환되고;
    R3은 수소, C1-C6 알킬, 알콕시, -N(R10)2, -L-N(R10)2, 사이클로알킬, 할로알킬 또는 헤테로사이클릴이며, 여기서 C1-C6 알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환되고;
    Y는 결합 또는 헤테로아릴렌이고;
    R4는 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이들 각각은 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R5는 독립적으로 하이드록시, 할로겐, 시아노, 하이드록시알킬, 알콕시, C1-C3 알킬, 할로알킬, 할로알킬-OH, -N(R6)2, -L-N(R6)2 또는 -SO2알킬이고;
    L은 C1-C3 알킬렌이고;
    각각의 R6은 독립적으로 수소, C1-C3 알킬, 할로알킬 또는 사이클로알킬이고;
    R7은 수소, 시아노, CF3, F 또는 알콕시이고;
    R8은 C1-C2 알킬 또는 할로-C1-C2 알킬이고;
    각각의 R9는 독립적으로 하이드록시, 할로겐, 아미노, 시아노, 알콕시, 또는 C1-C3 알킬이고;
    각각의 R10은 독립적으로 수소, C1-C3 알킬 또는 사이클로알킬이고;
    각각의 R11은 독립적으로 C1-C3 알킬, 할로겐 또는 할로알킬이고;
    R12는 수소, 할로겐 또는 C1-C3 알킬인, 화합물.
  2. 제1항에 있어서, X는 N인, 화합물.
  3. 제1항에 있어서, X는 CR7인, 화합물.
  4. 제1항에 있어서, R1은 헤테로아릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R2 또는 L-R2로 선택적으로 치환된, 화합물.
  5. 제4항에 있어서, R1은 -Q-헤테로사이클릴이며, 여기서 Q는 결합 또는 -O-이고 헤테로사이클릴은 모르폴리닐, 피페라지닐 또는 피페라지논인, 화합물.
  6. 제5항에 있어서, R1은 -Q-헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 가교된 모르폴리닐, 가교된 피페라지닐 또는 가교된 피페라지논인, 화합물.
  7. 제4항에 있어서, R1은 -Q-헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 2개 이상의 고리를 함유하는 스피로사이클릭 고리 시스템인, 화합물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 스피로사이클릭 고리 시스템은 각각 헤테로원자를 함유하는 2개의 고리를 포함하는, 화합물.
  9. 제7항에 있어서, 상기 스피로사이클릭 고리 시스템은 헤테로원자를 갖지 않는 고리를 함유하는, 화합물.
  10. 제1항에 있어서, R1은 헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 하나 이상의 R2 또는 L-R2로 선택적으로 치환된, 화합물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 헤테로아릴은 비-방향족 고리를 포함하는 이환식 또는 삼환식 고리 시스템인, 화합물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 이환식 또는 삼환식 고리 시스템은 5,6,7,8-테트라하이드로-[1,2,4]트리아졸로피라지닐, 5,6,7,8-테트라하이드로이미다조피라지닐, 2,4,5,6-테트라하이드로피롤로피라졸릴, 1,2,3,4-테트라하이드로벤조[4,5]이미다조피라지닐 또는 4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로피라지닐인, 화합물.
  13. 제3항에 있어서, R7은 수소인, 화합물.
  14. 제1항에 있어서, R1은 수소인, 화합물.
  15. 제1항에 있어서, R1은 하이드록실인, 화합물.
  16. 제1항에 있어서, R1은 -N(R6)2인, 화합물.
  17. 제1항에 있어서, R1은 -NR6C(O)R6인, 화합물.
  18. 제1항에 있어서, R1은 -C(O)N(R6)2인, 화합물.
  19. 제1항에 있어서, R1은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 사이클로알킬인, 화합물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 사이클로알킬은 각각 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실인, 화합물.
  21. 제20항에 있어서, 상기 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실은 1개의 R2로 치환되며, 여기서 R2는 C1-C3 알킬, 알콕시, 할로겐, 하이드록실 또는 -N(R6)2인, 화합물.
  22. 제1항에 있어서, R1은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 -Q-헤테로사이클릴인, 화합물.
  23. 제22항에 있어서, Q는 결합이고 상기 헤테로사이클릴은 모르폴리닐, 피페르디닐, 피페라지닐, N-메틸 피페라지닐, 피페라진-2-온, 1-메틸-피페라진-2-온, 디아제파닐, 6,6-디플루오로-1,4-디아제판-1-일 또는 4-메틸티오모르폴린 1,1-디옥사이드인, 화합물.
  24. 제22항에 있어서, Q는 결합이고 상기 헤테로사이클릴은 각각 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 피롤리디닐 또는 테트라하이드로피라닐인, 화합물.
  25. 제24항에 있어서, 상기 피롤리디닐 또는 테트라하이드로피라닐은 1개의 R2로 치환되며, 여기서 R2는 C1-C3 알킬, 알콕시, 하이드록실 또는 -N(R6)2인, 화합물.
  26. 제23항에 있어서, Q는 결합이고 상기 헤테로사이클릴은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 피페라지닐인, 화합물.
  27. 제26항에 있어서, 상기 피페라지닐은 하나의 R2로 치환되고, 여기서 R2는 헤테로아릴, -C(O)사이클로알킬 또는 -C(O)헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로아릴, 또는 -C(O)사이클로알킬 또는 -C(O)헤테로사이클릴의 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴 부분은 각각 하나 이상의 R11로 선택적으로 치환된, 화합물.
  28. 제27항에 있어서, R2는 -C(O)사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬은 1개의 R11로 치환된 사이클로프로필이며, 여기서 R11은 C1-C3 알킬인, 화합물.
  29. 제27항에 있어서, R2는 -C(O)사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬은 1개의 R11로 치환된 사이클로프로필이며, 여기서 R11은 할로알킬인, 화합물.
  30. 제27항에 있어서, R2는 -C(O)헤테로사이클릴이고, 여기서 헤테로사이클릴은 옥세타닐, 테트라하이드로푸라닐 또는 테트라하이드로피라닐인, 화합물.
  31. 제22항에 있어서, Q는 결합이고 상기 헤테로사이클릴은 이환식 헤테로사이클릴인, 화합물.
  32. 제31항에 있어서, 상기 이환식 헤테로사이클릴은 디아자비사이클로[3.2.0]헵탄-2-일, (1R,5R)-2,6-디아자비사이클로[3.2.0]헵탄-2-일, 디아자비사이클로[3.2.0]헵탄- 6-일, (1R,5R)-2,6-디아자비사이클로[3.2.0]헵탄-6-일, 6,7-디하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-일, 5,6 - 디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일, 1,3-디메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일 또는 (R)-2-메틸헥사하이드로피롤로[1,2-a]피라진-6(2H)-온인, 화합물.
  33. 제22항에 있어서, Q는 O이고 상기 헤테로사이클릴은 아제티디닐, 테트라하이드로푸라닐, 피롤리디닐 또는 피페르디닐인, 화합물.
  34. 제1항에 있어서, R1은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 아릴인, 화합물.
  35. 제34항에 있어서, 상기 아릴은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 페닐인, 화합물.
  36. 제35항에 있어서, 상기 페닐은 1개의 R2로 치환되며, 여기서 R2는 C1-C3 알킬, 알콕시, 하이드록실 또는 -N(R6)2인, 화합물.
  37. 제1항에 있어서, R1은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 헤테로아릴인, 화합물.
  38. 제37항에 있어서, 상기 헤테로아릴은 하나 이상의 R2로 선택적으로 치환된 피라졸릴인, 화합물.
  39. 제38항에 있어서, 상기 피라졸릴은 1개의 R2로 치환되며, 여기서 R2는 C1-C3 알킬, 알콕시, 하이드록실 또는 -N(R6)2인, 화합물.
  40. 제1항에 있어서, R7은 시아노 또는 알콕시인, 화합물.
  41. 제40항에 있어서, R7은 알콕시이고, 상기 알콕시는 메톡시인, 화합물.
  42. 제41항에 있어서, R1은 알콕시인, 화합물.
  43. 제42항에 있어서, 상기 알콕시는 메톡시인, 화합물.
  44. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 헤테로아릴렌인, 화합물.
  45. 제44항에 있어서, 상기 헤테로아릴렌은 티오페닐렌인, 화합물.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 결합인, 화합물.
  47. 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 각각 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴인, 화합물.
  48. 제47항에 있어서, R4는 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환된 아릴인, 화합물.
  49. 제48항에 있어서, 상기 아릴은 하나 이상의 R5로 선택적으로 치환된 페닐인, 화합물.
  50. 제49항에 있어서, 상기 페닐은 1개의 R5로 치환되며, 여기서 R5는 C1-C4 알킬, 할로알콜, 또는 -L-N(R6)2인, 화합물.
  51. 제50항에 있어서, R5는 -L-N(R6)2이며, 여기서 L은 메틸렌이고 하나의 R6은 수소이고 제2 R6은 C1-C3 알킬인, 화합물.
  52. 제51항에 있어서, 제2 R6은 메틸인, 화합물.
  53. 제52항에 있어서, R5는 -L-N(R6)2이며, 여기서 L은 메틸렌이고 각각의 R6은 C1-C3 알킬인, 화합물.
  54. 제53항에 있어서, 각각의 C1-C3 알킬은 메틸인, 화합물.
  55. 제49항에 있어서, 상기 페닐은 2개의 R5로 치환되며, 여기서 R5는 C1-C3 알킬이고, 제2 R5는 할로알콜인, 화합물.
  56. 제55항에 있어서, C1-C3 알킬은 메틸이고 상기 할로알킬은 트리플루오로메틸인, 화합물.
  57. 제49항에 있어서, 상기 페닐은 2개의 R5로 치환되며, 여기서 R5는 C1-C3 알킬이고, 제2 R5는 -L-N(R6)2인, 화합물.
  58. 제51항에 있어서, C1-C3알킬은 메틸이고, L은 메틸렌이며 각각의 R6은 C1-C3 알킬인, 화합물.
  59. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C1-C6 알킬인, 화합물.
  60. 제59항에 있어서, C1-C6 알킬은 메틸, 에틸 또는 이소프로필인, 화합물.
  61. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 할로알킬인, 화합물.
  62. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 할로겐 아미노, 하이드록시 또는 알콕시로 선택적으로 치환된 사이클로알킬인, 화합물.
  63. 제62항에 있어서, 상기 사이클로알킬은 사이클로프로필인, 화합물.
  64. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 알콕시인, 화합물.
  65. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 -N(R10)2인, 화합물.
  66. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 수소인, 화합물.
  67. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, R8은 C1-C2 알킬인, 화합물.
  68. 제67항에 있어서, 상기 C1-C2 알킬은 메틸인, 화합물.
  69. 제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, R8은 할로C1-C2 알킬인, 화합물.
  70. 제69항에 있어서, 상기 할로C1-C2 알킬은 플루오로메틸, 디플루오로메틸 또는 트리플루오로메틸인, 화합물.
  71. 제1항에 있어서, 상기 화합물은
    Figure pct00237

    Figure pct00238

    Figure pct00239

    Figure pct00240

    Figure pct00241

    Figure pct00242

    Figure pct00243

    Figure pct00244

    Figure pct00245

    Figure pct00246

    Figure pct00247

    Figure pct00248

    Figure pct00249

    Figure pct00250

    Figure pct00251

    Figure pct00252

    Figure pct00253

    Figure pct00254

    Figure pct00255

    및 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물.
  72. 치료 유효량의 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물, 및 제약상 허용가능한 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  73. 세포에서 SOS1 활성을 억제하는 방법으로서, SOS1 활성의 억제가 요구되는 세포를 유효량의 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물, 또는 제72항에 따른 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
  74. 제73항에 있어서, 상기 세포는 RAS류 구성원 유전자에 활성화 돌연변이를 보유하는, 방법.
  75. 제73항에 있어서, 상기 세포는 SOS1 유전자에 활성화 돌연변이를 보유하는, 방법.
  76. 제73항에 있어서, 상기 세포는 NF-1 또는 NF-2 유전자에 활성화 돌연변이를 보유하는, 방법.
  77. 암을 치료하는 방법으로서, 치료 유효량의 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물, 또는 그의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물을 단독으로 또는 제약상 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제와 조합하여 암에 걸린 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  78. 제77항에 있어서, 상기 화합물의 치료 유효량은 하루당 약 0.01 내지 300 mg/kg인, 방법.
  79. 제78항에 있어서, 상기 화합물의 치료 유효량은 하루당 약 0.1 내지 100 mg/kg인, 방법.
  80. 제77항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 심장: 육종(혈관육종, 섬유육종, 횡문근육종, 지방육종), 점액종, 횡문근종, 섬유종, 지방종 및 기형종; 폐: 기관지 암종(편평 세포, 미분화 소세포, 미분화 대세포, 선암종), 폐포(세기관지) 암종, 기관지 선종, 육종, 림프종, 연골종 과오종, 중피종; 위장관: 식도(편평상피세포암, 선암, 평활근육종, 림프종), 위(암, 림프종, 평활근육종), 췌장(관샘암, 인슐린종, 글루카곤종, 가스트린종, 카르시노이드 종양, 비포마(vipoma)), 소장(선암, 림프종, 유암종, 카포시 육종, 평활근종, 혈관종, 지방종, 신경섬유종, 섬유종), 대장(선암종, 관상 선종, 융모 선종, 과오종, 평활근종); 비뇨생식기: 신장(선암종, 윌름종양(신모세포종), 림프종, 백혈병), 방광 및 요도(편평상피세포암종, 이행세포암종, 선암종), 전립선(선암종, 육종), 고환(정소종, 기형종, 배아암종, 융모막암종, 육종, 간질 세포 암종, 섬유종, 섬유선종, 선종 종양, 지방종); 간: 간암(간세포 암종), 담관암종, 간모세포종, 혈관육종, 간세포 선종, 혈관종; 담도: 담낭 암종, 팽대부 암종, 담관암종; 뼈: 골원성 육종(골육종), 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 연골육종, 유잉 육종(Ewing's sarcoma), 골연골종(골연골성 외골), 양성 연골종, 연골모세포종, 연골점액섬유종, 유골 골종 및 거대 세포 종양; 신경계: 두개골(골종, 혈관종, 육아종, 황색종, 기형 골염), 수막(수막종, 수막육종, 신경교종증), 뇌(성상세포종, 수모세포종, 신경교종, 뇌실막종, 생식세포종(송과종), 다형성 교모세포종, 선천성 종양), 척수 신경섬유종, 수막종, 신경교종, 육종); 부인과: 자궁(자궁내막 암종(endometrial wcarcinoma) (장액성 낭선암, 점액성 낭선암, 미분류 암종), 육아막 세포 종양, 세르톨리-레이디히(Sertoli-Leydig) 세포 종양, 생식 이상종, 악성 기형종), 외음부(편평 세포 암종, 상피내 암종, 선암종, 섬유육종, 흑색종), 질(투명 세포 암종, 편평 세포 암종, 보트로이드 육종(배아 횡문근 육종), 나팔관(암종); 혈액학: 혈액(골수성 백혈병(급성 및 만성), 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 골수증식성 질환, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군), 호지킨병, 비-호지킨(non-Hodgkin) 림프종(악성 림프종); 피부: 악성 흑색종, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 카포시 육종, 두더지 이형성 모반, 지방종, 혈관종, 피부 섬유종, 켈로이드, 건선; 및 부신: 신경모세포종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  81. 제77항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 Ras류 관련 암인, 방법.
  82. 제81항에 있어서, 상기 Ras류 관련 암은 KRas, HRas 또는 NRas G12C 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas G12D 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas G12S 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas G12A 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas G13D 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas G13C 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas Q61X 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas A146T 관련 암, KRas, HRas 또는 NRas A146V 관련 암 또는 KRas, HRas 또는 NRas A146P 관련 암인, 방법.
  83. 제82항에 있어서, 상기 Ras류 관련 암은 KRas G12C 관련 암인, 방법.
  84. 제83항에 있어서, 상기 Ras류 관련 암은 비-소세포 폐암 또는 췌장암인, 방법.
  85. 제77항 내지 제803항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 SOS1 관련 암인, 방법.
  86. 제85항에 있어서, 상기 SOS1 관련 암은 SOS1 N233S 관련 암 또는 SOS1 N233Y 관련 암인, 방법.
  87. 제85항 또는 제86항에 있어서, 상기 SOS1 관련 암은 폐 선암종, 배아 횡문근육종, 세르톨리 세포 고환 종양 또는 피부의 과립 세포 종양인, 방법.
  88. 제77항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 NF-1/NF-2 관련 암인, 방법.
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