KR20220124762A - 펩티드 함유 링커를 갖는 부위 특이적 항체-약물 접합체 - Google Patents

펩티드 함유 링커를 갖는 부위 특이적 항체-약물 접합체 Download PDF

Info

Publication number
KR20220124762A
KR20220124762A KR1020227027101A KR20227027101A KR20220124762A KR 20220124762 A KR20220124762 A KR 20220124762A KR 1020227027101 A KR1020227027101 A KR 1020227027101A KR 20227027101 A KR20227027101 A KR 20227027101A KR 20220124762 A KR20220124762 A KR 20220124762A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
conjugate
amino acid
moiety
cancer
Prior art date
Application number
KR1020227027101A
Other languages
English (en)
Inventor
티모시 비 로윈저
마크 아이 다멜린
도린 토더
Original Assignee
메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 filed Critical 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드
Publication of KR20220124762A publication Critical patent/KR20220124762A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6843—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

본 개시내용은 일반적으로 펩티드 함유 링커를 포함하는 항체-약물 접합체 및 치료제 및/또는 진단제로 이들 접합체를 사용하는 방법에 관한 것이다. 항체-약물 접합체를 생성하기 위해 표적화 모이어티(예컨대, 항체), 약물, 또는 둘 모두와 접합하는 데 유용한 펩티드 함유 스캐폴드가 또한 본원에 개시된다.

Description

펩티드 함유 링커를 갖는 부위 특이적 항체-약물 접합체
관련 출원
본 출원은 2020년 1월 9일에 출원된 미국 가출원 제62/958,916호 및 2020년 6월 18일에 출원된 미국 가출원 제63/040,735호에 대한 우선권 및 이의 이익을 주장하며, 이들 출원 각각의 내용은 전체가 참조로 본원에 포함된다.
서열 목록의 참조에 의한 포함
2021년 1월 6일에 생성되고 크기가 49 KB인 명칭 "MRSN-029_001WO_SeqList.txt"의 텍스트 파일의 내용은 전체가 참조로 본원에 포함된다.
배경
전통적으로, 약제는 주로 (고형 환제 및 액체로서) 경구로 또는 주사제로 조제되는 소분자로 이루어져 왔다. 지난 30년 동안, 제형(즉, 약물 전달의 경로 및/또는 속도를 제어하고 필요한 부위에서 치료제의 전달을 허용하는 조성물)은 점점 일반화되고 복잡해졌다. 그럼에도 불구하고, 새로운 치료법의 개발 뿐만 아니라 이를 투여하는 메커니즘에 관한 많은 질문 및 문제가 해결되어야 한다. 예컨대, 많은 약물은 일반적으로 신체에서 원하는 표적에 도달하기 전에 부분적으로 분해되고/되거나, 표적이 아닌 조직에 축적되고/되거나, 짧은 반감기를 가지기 때문에 제한적이거나 감소된 효능 및 치료 효과를 나타낸다.
따라서, 약물 전달 시스템 분야의 하나의 목적은 약물을 안정화할 수 있고/있거나 반감기를 연장하고 생리학적 또는 화학적 메커니즘, 또는 둘 다를 활용하는 치료제의 생체내 전달을 제어할 수 있는 시스템을 통해 신체의 특정 표적 영역에 손상되지 않은 상태로 약을 전달하는 것이다.
항체-약물 접합체는 표적 특이적 치료제로 개발되었다. 다양한 암 세포 표면 항원에 대한 항체는 마이크로튜불린 억제제(예컨대, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 및 탁산, 예컨대 미국 특허 번호 5,208,020; 5,416,064; 6,333,410; 6,441,163; 6,340,701; 6,372,738; 6,436,931; 6,596,757; 및 7,276,497 참조) 및 DNA 상호작용 치료제(예컨대, 칼리케아미신, 독소루비신, 및 CC-1065 유사체; 예컨대, 미국 특허 번호 5,475,092; 5,585,499; 5,846,545; 6,534,660; 6,756,397; 및 6,630,579 참조)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 상이한 세포독성제와 접합되었다. 이들 세포독성 약물 중 일부와의 항체-약물 접합체는 암 요법을 위한 클리닉에서 활발히 연구되고 있다(예컨대, 문헌(Ricart, A. D., and Tolcher, A. W., 2007, Nature Clinical Practice, 4, 245-255; Krop et al., 2010, J. Clin. Oncol., 28, 2698-2704) 참조). 그러나, 기존의 항체-약물 접합체는 한계를 나타내었다. 주요 한계는 표적 항원의 제한된 수 및/또는 아우리스타틴, 메토트렉세이트, 다우노루비신, 메이탄시노이드, 탁산, 및 빈크리스틴과 같은 암 약물의 비교적 온건한 세포독성으로 인해 표적 부위에 충분한 농도의 약물을 전달할 수 없다는 것이다. 상당한 세포독성을 달성하기 위한 하나의 접근법은 많은 수의 약물 분자를 항체에 직접 또는 간접적으로 연결하는 것이다. 그러나, 이러한 심하게 변형된 항체는 종종 표적 항원에 대한 손상된 결합 및/또는 혈류로부터의 빠른 생체내 청소를 나타낸다. 따라서, 약물에 대한 최대 세포독성이 달성될 수 있도록 충분한 농도의 약물을 표적에 전달하는 능력을 개선시킬 필요가 있다.
공유 결합을 통해 항체에 약물 모이어티를 접합하면 일반적으로 약물 모이어티가 항체의 여러 부위에 부착되는 불균질한 분자 혼합물이 생성된다. 일부 실시양태에서, 세포독성 약물은 전형적으로 항체의 라이신 또는 시스테인 잔기를 통해 항체에 접합되어 불균질 항체-약물 접합체 혼합물을 생성한다. 반응 조건에 따라, 불균질 혼합물은 전형적으로 항체의 다양한 부위에 부착된 0 내지 약 8개의 약물 모이어티 분포를 함유한다. 분석 및 제조 방법은 접합 반응으로 인한 불균질 혼합물 내에서 이들 항체-약물 접합 종 분자를 분리하고 특성화하기에 부적절하다. 또한, 접합 공정은 반응 조건 제어의 어려움으로 인해 재현할 수 없다. 따라서, (항체의 접합 부위에 관한) 부위 특이성 및/또는 (항체와 약물 사이의 비율에 관한) 화학량론을 갖는 항체-약물 접합체를 재현 가능하게 생성할 필요가 있다.
요약
본 개시내용은 부위 특이성을 갖는 항체-약물 접합체를 특징으로 한다. 이들 부위 특이적 표적화 모이어티-약물 접합체는 제어된 약물 로드 뿐만 아니라 표적 항원에 대한 강한 결합을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 단백질 기반 인식 분자(PBRM)이다. 본 개시내용은 또한 표적화 모이어티-약물 접합체를 수득하기 위해 PBRM, 약물 또는 둘 모두와 접합하는 데 유용한 펩티드 함유 스캐폴드를 특징으로 한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 화학식 (I')의 항체-약물 접합체를 제공한다:
Figure pct00001
상기 식에서,
a2는 1 내지 3의 정수이고;
a3은 0 내지 1의 정수이고;
a4는 1 내지 약 5의 정수이고;
a5는 1 내지 3의 정수이고;
d13은 1 내지 약 12의 정수이고;
항체는 변형된 항체이고;
LP'는 변형된 항체를 MP에 연결하는 2가 링커 모이어티이고; 이 중 상응하는 1가 모이어티 LP는 변형된 항체의 작용기와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기 WP를 포함하고;
MP는 스트레처(Stretcher) 단위이고;
LM은 결합, 또는 3가 또는 4가 링커이고, LM이 결합인 경우 a2는 1이거나, LM이 3가 링커인 경우 a2는 2이거나, LM이 4가 링커인 경우 a2는 3이고;
L3은 카르보닐 함유 모이어티이고;
MA는 적어도 2개의 아미노산을 포함하는 펩티드 모이어티를 포함하고;
T1은 친수성 기이고, T1과 MA 사이의
Figure pct00002
는 T1 및 MA의 직접적 또는 간접적 부착을 나타내고;
D의 각각의 존재는 독립적으로 ≤ 약 5 kDa의 분자량을 갖는 치료제이고;
LD의 각각의 존재는 독립적으로 D를 MA에 연결하는 2가 링커 모이어티이고, 결합이 끊어질 때 D가 이의 의도된 치료 효과를 위해 활성 형태로 방출되도록 적어도 하나의 절단 가능한 결합을 포함한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (XXX)를 갖는 항체-약물 접합체를 제공한다:
Figure pct00003
상기 식에서,
각각의 RA는
Figure pct00004
Figure pct00005
이고;
d13은 2이고; 항체는 접합체의 나머지 부분에 연결된 N297에서 하나 이상의 아스파라긴 기를 포함한다.
본 개시내용은 또한 접합체를 포함하는 조성물, 이의 제조 방법, 및 암을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 장애의 치료에서 이의 사용 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 추가로 본원에 기재된 스캐폴드 또는 접합체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 항체-약물 접합체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 하나 이상의 단계를 포함하는 항체-약물 접합체의 제조 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 접합체 또는 방법에 관한 것이며, 유효량의 접합체는 치료 제1일 및 그 후 3주 또는 4주마다 약 7 mg/m2 내지 162 mg/m2의 용량으로 대상체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 장애(예컨대, 암)를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 NaPi2b 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 NaPi2b 발현 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 장애(예컨대, 암)를 치료하기 위한 약제의 제조에서 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 NaPi2b 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 NaPi2b 발현 암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 장애(예컨대, 암)를 치료하기 위한 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 NaPi2b 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 NaPi2b 발현 암을 치료하기 위한 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 장애(예컨대, 암)을 치료하는 데 사용하기 위한 접합체를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 NaPi2b 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 NaPi2b 발현 암을 치료하는 데 사용하기 위한 접합체를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 장애를 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 장애를 진단하는 방법에 관한 것이다. 방법은 본원에 기재된 유효량의 접합체를 장애를 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 투여하거나 대상체로부터의 샘플에서 표적 항원/수용체를 검출하는 검정을 수행하여 대상체가 표적 항원 또는 수용체를 발현하는지를 결정하는 단계를 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에서, 단수 형태는 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수형도 포함한다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 하기에 기재된다. 본원에 언급된 모든 공개문, 특허 출원, 특허 및 다른 참조 문헌은 참조로 포함된다. 본원에 인용된 참조 문헌은 청구된 발명에 대한 선행 기술로 인정되지 않는다. 충돌하는 경우 정의를 포함한 본 명세서가 우선한다. 또한, 재료, 방법 및 예는 예시일 뿐이며 제한하려는 의도가 아니다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기의 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다.
도 1은 항체 글리칸의 상이한 당형태(G0, G1, G2, G0F, GIF, G2F, 및 M5)를 나타내는 그래프이다.
도 2는 엔도글리코시다제의 존재 하에서 당형태 G0, G1, G2, G0F, GIF, G2F, 및 M5)의 혼합물의 탈글리코실화를 나타내는 도식이다.
도 3은 글리코실트랜스퍼라제의 존재 하에서 말단-GlcNAc 모이어티를 포함하는 중간체 항체를 아지도 변형된 UDP-GalNAc 유도체 분자와 반응시키는 아지도 변형 항체의 제조 공정을 나타내는 도식이다.
도 4는 아지도 변형된 항체를 제조하는 공정의 일 실시양태를 나타내는 도식이다.
도 5는 아지도 변형된 항체가 스트레인드(strained) 사이클로알키닐 기를 포함하는 링커-약물 모이어티에 접합된, 항체-약물 접합체의 제조 공정의 실시양태를 나타내는 도식이다.
도 6은 변형된 항체를 나타내는 그래프이다.
도 7은 OVCAR3 종양 보유 마우스 모델에서 0.05 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 페이로드의 XMT-1535 항체-약물 접합체인 접합체 11, 0.025 mg/kg, 0.05 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 페이로드의 접합체 7, 및 0.1 mg/kg 페이로드의 비결합 대조군 접합체 10의 항종양 효능을 나타내는 그래프이다.
도 8은 NSCLC PDX CTG-0852 마우스 모델에서 0.025 mg/kg, 0.05 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 페이로드의 XMT-1535 항체-약물 접합체인 접합체 7, 및 0.05 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 페이로드의 비결합 대조군 접합체 10의 항종양 효능을 나타내는 그래프이다.
도 9는 JIMT-1 종양 보유 마우스 모델에서 0.067 mg/kg 및 0.199 mg/kg 페이로드의 HER2 항체-약물 접합체인 접합체 9 및 접합체 13의 항종양 효능을 나타내는 그래프이다.
도 10은 JIMT-1 종양 보유 마우스 모델에서 0.017 mg/kg, 0.033 mg/kg 또는 0.067 mg/kg 페이로드의 HER2 항체-약물 접합체인 접합체 8 및 접합체 12 각각 및 0.067 mg/kg 페이로드의 비결합 대조군 항체-약물 접합체인 접합체 10의 항종양 효능을 나타내는 그래프이다.
도 11-18은 접합체 11 또는 접합체 7의 노출에 대한 반응으로 래트에서 독성학 파라미터(각각 AST, ALT, ALP, RBC, WBC, 호중구, 림프구, 및 헤모글로빈)의 상승을 나타낸다.
도 19-21은 접합체 8 또는 접합체 12의 노출에 대한 반응으로 래트에서 주요 독성학 파라미터(각각 AST, ALT 및 ALP)의 상승을 나타낸다.
본 개시내용은 신규한 표적화 모이어티-약물 접합체, 접합체를 제조하기 위한 스캐폴드, 접합체 또는 스캐폴드를 제조하기 위한 합성 방법, 스캐폴드 및/또는 접합체를 함유하는 약제학적 조성물, 및 이의 다양한 용도를 제공한다.
정의
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 화합물 및 특정 작용기의 정의가 또한 본원에서 더욱 상세하게 기재된다. 본 개시내용의 목적상, 화학 원소는 원소 주기율표, CAS 버전, 문헌(Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed.), 내부 표지에 따라 확인되며, 특정 작용기는 일반적으로 본원에 기재된 바와 같이 정의된다. 추가로, 유기 화학의 일반 원리 뿐만 아니라 특정 기능 모이어티 및 반응성은 문헌("Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, 이의 전체 내용은 참조로 본원에 포함됨)에 기재되어 있다. 또한, 본원에 기재된 합성 방법이 다양한 보호기를 활용한다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다.
하기 설명 및 청구범위 둘 다에서 단수 형태의 사용은 본원에 달리 나타내지 않거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한 단수 및 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 용어 "포함하는", "갖는", "인", "화학식을 갖는", 및 "함유하는"은 달리 명시되지 않는 한 개방 용어로 해석되어야 하며(즉, "포함하지만 이에 제한되지 않는"을 의미함), 추가 요소 또는 단계의 포함을 허용하지만 요구하지는 않는다. 일부 실시양태에서, 특정 화학식의 스캐폴드는 화학식에 표시된 모든 성분을 포함하고 화학식에 표시되지 않은 추가의 성분도 포함할 수 있다. 추가로, "포함하는" 또는 다른 개방형 용어가 실시양태에서 사용될 때마다, 동일한 실시양태가 중간 용어 "본질적으로 ~로 이루어지는" 또는 폐쇄 용어 "~로 이루어진"을 사용하여 더 좁게 청구될 수 있음을 이해해야 한다.
본원에 사용된 표현 "A, B, 또는 C 중 하나 이상", "하나 이상의 A, B, 또는 C", "A, B, 및 C 중 하나 이상", "하나 이상의 A, B, 및 C" 등은 상호교환적으로 사용되며 모두 A, B, 및/또는 C로부터의 선택, 즉 하나 이상의 A, 하나 이상의 B, 하나 이상의 C, 또는 이들의 임의의 조합을 지칭한다.
용어 "약", "대략" 또는 "대략적인"은 수치와 관련하여 사용될 때 값의 집합 또는 범위가 포함됨을 의미한다. 예컨대 "약 X"는 X(X는 수치임)의 ±25%, ±20%, ±15%, ±10%, ±5%, ±2%, ±1%, ±0.5%, ±0.2%, 또는 ±0.1%인 값의 범위를 포함한다.
값의 범위에 대한 언급은 본원에 달리 표시되지 않는 한 범위 내에 속하는 각각의 개별 값을 개별적으로 참조하는 약식 방법으로서 역할을 하기 위한 것일 뿐이며, 각각의 개별 값은 마치 개별적으로 본원에 인용되는 것처럼 본 명세서에 포함된다. 본원에서 사용되는 범위는 달리 명시되지 않는 한 범위의 두 한계를 포함한다. 예컨대, 표현 "x는 1에서 6 사이의 정수임" 및 "x는 1 내지 6의 정수임"은 모두 "x는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6임"을 의미하고, 즉 용어 "X 내지 Y" 및 "X 내지 Y의 범위"는 X 및 Y 및 그 사이의 정수를 포함한다.
보호기: 본원에 사용된 용어 보호기는 특정 작용 모이어티, 예컨대 O, S 또는 N이 일시적으로 차단되어 반응이 다작용성 화합물의 또 다른 반응성 부위에서 선택적으로 수행될 수 있음을 의미한다. 본원에 상세히 기술된 바와 같이, 산소, 황, 질소 및 탄소 보호기가 활용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 예시적인 산소 보호기가 활용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 질소 보호기가 활용된다. 일부 실시양태에서, 예시적인 황 보호기가 활용될 수 있다. 추가로, 다양한 보호기가 문헌("Protective Groups in Organic Synthesis" Third Ed. Greene, T.W. and Wuts, P.G., Eds., John Wiley & Sons, New York: 1999, 이의 전체 내용이 참조로 본원에 포함됨)에 기재되어 있다
"이탈기"는 이종용해 결합 절단에서 한 쌍의 전자와 함께 떠나는 분자 단편을 지칭한다. 이탈기는 음이온 또는 중성 분자일 수 있다. 이탈기는 할라이드, 예컨대 Cl-, Br-, 및 I-, 술포네이트 에스테르, 예컨대 파라-톨루엔술포네이트("토실레이트", TsO-), 및 RC(O)O-(여기서 R은 H, 지방족, 헤테로지방족, 카르보사이클릭, 또는 헤테로사이클로알킬 모이어티임)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"슈가"는 단당류, 예컨대 글루코스(Glc), 갈락토스(Gal), 만노스(Man) 및 푸코스(Fuc)를 지칭한다. 용어 "슈가 유도체"는 단당류 슈가의 유도체, 즉 치환기 및/또는 작용기를 포함하는 단당류 슈가를 지칭한다. 슈가 유도체의 예는 아미노 슈가 및 슈가 산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 슈가 유도체의 예는 또한 S'(F')X1로 표시되는 화합물(여기서 S'는 슈가 또는 슈가 유도체이고, F'는 작용기이고, x1은 작용기의 수를 나타냄)을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "코어-GlcNAc 모이어티"는 (예컨대, GlcNAc의 C1 위치를 통해) 항체에 부착된 GlcNAc(예컨대, 코어-GlcNAc)를 포함하는 단당류, 다당류 또는 올리고당류 모이어티를 지칭한다. 일부 실시양태에서, GlcNAc는 항체의 아스파라긴 아미노산 측쇄에 있는 아미드 질소 원자에 대해 N-글리코시드 결합을 통해 항체에 부착된다. 일부 실시양태에서, 코어-GlcNAc 모이어티는 항체의 천연 글리코실화 부위에 존재하거나 항체 상의 상이한 부위에 도입된다. 일부 실시양태에서, 코어-GlcNAc 모이어티는 단당류이다(예컨대, 코어-GlcNAc 모이어티는 또한 말단-GlcNAc 모이어티임). 일부 실시양태에서, 코어-GlcNAc 모이어티는 푸코스를 추가로 포함하고, 예컨대 코어-GlcNAc 모이어티는 이당류 코어-GlcNAc-(α1-6-Fuc) 모이어티(GlcNAc(Fuc)로 지칭될 수 있음)이다. 따라서, 항체가 코어-GlcNAc 모이어티를 포함하는 경우, 항체는 단당류 또는 이당류 코어-GlcNAc 모이어티를 포함할 수 있고, 코어-GlcNAc 모이어티는 푸코스(예컨대, 이당류 코어-GlcNAc(Fuc) 모이어티)를 추가로 포함할 수 있다. 코어-GlcNAc 모이어티가 푸코스를 추가로 포함하는 경우, 푸코스는 코어-GlcNAc 모이어티의 O-6에 α-1,6 연결될 수 있다. 푸코스를 추가로 포함하는 코어-GlcNAc 모이어티는 코어-GlcNAc(Fuc)로 지칭될 수 있다.
용어 "코어-GlcNAc"는 다당류 또는 올리고당류의 일부인 내부 GlcNAc를 지칭하고, 다당류 또는 올리고당류는 내부 GlcNAc를 통해 항체에 부착된다.
본원에 사용된 용어 "말단-GlcNAc 모이어티"는 항체에 부착되고 추가 변형에 이용 가능한 말단 작용기를 갖는(예컨대, P"- S"-A"의 화합물을 갖는) GlcNAc를 포함하는 모이어티를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 말단-GlcNAc 모이어티는 푸코스를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 말단-GlcNAc 모이어티는 당단백질(예컨대, 항체 글리칸)의 코어-GlcNAc 모이어티를 엔도글리코시다제와 반응시켜 형성된다.
"뉴클레오티드"는 일반적인 과학적 의미로 사용되며, 핵염기, 5탄당(리보스 또는 2-데옥시리보스), 및 1개, 2개 또는 3개의 포스페이트로 구성된 분자를 지칭한다. 포스페이트 기가 없으면 핵염기 및 슈가가 뉴클레오시드를 구성한다. 따라서, 뉴클레오티드는 또한 뉴클레오시드 모노포스페이트, 뉴클레오시드 디포스페이트 또는 뉴클레오시드 트리포스페이트로 지칭될 수 있다. 핵염기는 아데닌, 구아닌, 시토신, 우라실 또는 티민일 수 있다.
"단백질"은 일반적인 과학적 의미로 사용되며, 약 10개 이상의 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 단백질은 천연 또는 비천연 아미노산을 포함할 수 있다.
"당단백질"은 본원에서 일반적인 과학적 의미로 사용되며, 단백질에 공유 결합된 하나 이상의 단당류 또는 올리고당류 쇄("글리칸")를 포함하는 단백질을 지칭한다. 글리칸은 단백질 상의 히드록실 기(O-연결된-글리칸), 단백질 상의 아미드 작용기(N-당단백질), 또는 단백질 상의 탄소(C-당단백질)에 부착될 수 있다. 당단백질은 하나 초과의 글리칸을 포함할 수 있고, 하나 이상의 단당류 및 하나 이상의 올리고당류 글리칸의 조합을 포함할 수 있고, N-연결, O-연결 및 C-연결된 글리칸의 조합을 포함할 수 있다. 모든 단백질 중 50% 초과가 어떤 형태의 글리코실화를 가지고 있으므로 당단백질로 자격이 있는 것으로 추정된다.
"글리칸"은 본원에서 일반적인 과학적 의미로 사용되며, 단백질에 연결된 단당류 또는 올리고당류 쇄를 지칭한다. 따라서, 글리칸은 당단백질의 탄수화물 부분을 지칭한다. 글리칸은 하나의 슈가의 C-1 탄소를 통해 단백질에 부착되며, 이는 추가 치환이 없을 수 있거나(단당류) 또는 하나 이상의 히드록실 기에서 추가로 치환될 수 있다(올리고당류). 자연 발생 글리칸은 전형적으로 1 내지 약 10개의 당류 모이어티를 포함한다. 그러나, 더 긴 당류 쇄가 단백질에 연결되어 있는 경우, 상기 당류 쇄도 글리칸으로 간주된다. 당단백질의 글리칸은 단당류일 수 있다. 글리칸은 또한 올리고당류일 수 있다. 당단백질의 올리고당류 쇄는 선형 또는 분지형일 수 있다. 올리고당류에서 단백질에 직접적으로 부착된 슈가는 코어 슈가로 불린다. 올리고당류에서 단백질에 직접적으로 부착되지 않고 적어도 2개의 다른 슈가에 부착된 슈가를 내부 슈가라고 한다. 올리고당에서 단백질에 직접적으로 부착되지 않고 단일 다른 슈가에 부착된 슈가, 즉 다른 히드록실 기 중 하나 이상에 추가 슈가 치환기를 보유하지 않는 슈가를 말단 슈가라고 한다. 의심의 여지를 피하기 위해, 당단백질의 올리고당류에는 다수의 말단 슈가가 존재할 수 있지만 코어 슈가는 하나만 있을 수 있다. 글리칸은 O-연결된 글리칸, N-연결된 글리칸, 또는 C-연결된 글리칸일 수 있다. 탈연결된 글리칸에서, 단당류 또는 올리고당류 글리칸은 단백질의 아미노산에 있는 C-원자에 결합된다.
"글리코실트랜스퍼라제"는 당단백질 및 당지질에 존재하는 복합 탄수화물의 합성에 관여하는 효소의 슈퍼패밀리를 지칭한다.
"N-아세틸갈락토사미닐 트랜스퍼라제"(GalNAc-T)는 단백질에 N-아세틸-D-갈락토사민의 첨가를 촉매하는 N-아세틸-D-갈락토사민 트랜스퍼라제 효소이다.
본원에 사용된 "생체적합성"은 체액 또는 살아있는 세포 또는 조직과 접촉하는 동안 최소의 파괴 또는 숙주 반응 효과를 발휘하는 화합물을 설명하기 위한 것이다. 따라서, 본원에 사용된 생체적합성 기는 지방족, 사이클로알킬, 헤테로지방족, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 모이어티를 지칭하며, 이는 상기 및 본원에서 정의되는 생체적합성이라는 용어의 정의에 속한다. 본원에 사용된 용어 "생체적합성"은 또한, 이러한 상호작용이 구체적으로 바람직하지 않는 한, 화합물이 인식 단백질, 예컨대 자연 발생 항체, 세포 단백질, 세포 및 생물학적 시스템의 다른 성분과의 최소 상호작용을 나타낸다는 것을 의미하는 것으로 간주된다. 따라서, 약물 및 전구약물과 같이 상기한 최소 상호작용을 일으키도록 특별히 의도된 물질 및 작용기는 생체적합성으로 간주된다. 일부 실시양태에서(예컨대, 항신생물제와 같은 세포독성으로 의도된 화합물을 제외하고), 화합물은 의도된 전신 생체내 농도와 유사한 농도로 시험관내에서 정상 세포에 첨가 시 생체내에서 화합물의 반감기(예컨대, 생체내 투여된 화합물의 50%가 제거/청소되는데 필요한 시간의 기간)와 동등한 시간 동안 1% 이하의 세포 사멸을 유도하는 경우 "생체적합성"이고, 생체내에서 이들의 투여는 최소한의 의학적으로 허용 가능한 염증, 이물질 반응, 면역독성, 화학적 독성 및/또는 다른 이러한 부작용을 유발한다. 상기 문장에서, 용어 "정상 세포"는 시험되는 화합물에 의해 파괴되거나 크게 영향을 받는 것으로 의도되지 않은 세포를 지칭한다.
"생분해성": 본원에 사용된 "생분해성" 화합물 또는 모이어티는 세포에 의해 흡수될 때 리소좀 또는 다른 화학적 기계에류 의해 또는 가수분해에 의해 세포에 대한 유의한 독성 효과 없이 재사용하거나 처분할 수 있는 성분으로 분해될 수 있는 것이다. 본원에 사용된 용어 "생절단성"은 "생분해성"과 동일한 의미를 갖는다. 일부 접합체 (또는 이들의 성분, 예컨대 펩티드 함유 스캐폴드 및 스캐폴드와 항체 또는 약물 분자 사이의 링커)의 생분해는 또한, 예컨대 동물 신체의 낮은 pH 영역, 예컨대 활성화된 대식세포 또는 분해 촉진 인자를 방출하는 다른 세포와 가까운 염증 부위에서 세포외로 강화될 수 있다. 본원에 개시된 접합체 또는 스캐폴드의 무결성은, 예컨대 크기 배제 HPLC 또는 LC/MS에 의해 측정될 수 있다. 일부 경우에는 더 빠른 분해가 바람직할 수 있지만, 일반적으로 본원에 개시된 접합체 또는 스캐폴드가 세포에 의한 단편의 대사 또는 배설 속도를 초과하지 않는 속도로 세포에서 분해되는 것이 더 바람직할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 접합체 또는 스캐폴드의 생분해 부산물은 생체적합성이다.
"친수성": 용어 "친수성"은 당업계에서 이 용어의 일반적인 의미와 본질적으로 상이하지 않으며, 이온화 가능한, 극성, 또는 극성화 가능한 원자를 함유하거나 물 분자에 의해 용매화될 수 있는 화학적 모이어티를 나타낸다. 따라서, 본원에 사용된 친수성 모이어티 또는 기는 상기 정의된 친수성이라는 용어의 정의에 속하는 지방족, 사이클로알킬, 헤테로지방족, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 모이어티를 지칭한다. 본원에 개시된 화합물(약물, 접합체 및 스캐폴드를 포함)의 친수성은 수화 에너지의 측정을 통해 직접적으로 측정되고, 2개의 액체상 사이의 조사를 통해, HIC 크로마토그래피에 의해, 또는 공지된 소수성을 갖는 고체상에서의 크로마토그래피에 의해 결정될 수 있다.
"다당류", "탄수화물" 또는 "올리고당류": 용어 "다당류", "탄수화물" 또는 "올리고당류"는 당업계에 공지되어 있으며, 일반적으로 화학식 (CH2O)n(일반적으로 n>2)을 갖는 물질 및 이들의 유도체를 지칭한다. 탄수화물은 폴리히드록시알데히드 또는 폴리히드록시케톤이거나 가수분해, 산화 또는 환원과 같은 단순한 화학적 변형에서 이러한 물질로 변경된다. 이들 사이클릭 단위(단당류)는 서로 연결되어 소수(올리고당) 또는 여러(다당) 단당류 단위를 갖는 분자를 형성할 수 있다. 종종, 단당류 단위의 수, 유형 및 위치가 잘 정의된 탄수화물을 올리고당이라고 하는 반면, 단당류 단위의 다양한 수 및/또는 위치를 갖는 분자의 혼합물로 이루어진 탄수화물은 다당류라고 한다. 용어 "다당류", "탄수화물" 및 "올리고당류"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 다당류는 천연 슈가 및/또는 자연 발생 슈가의 유도체를 포함할 수 있다.
"약물": 본원에 사용된 용어 "약물"은 생물학적으로 활성이고 이를 필요로 하는 대상체에게 투여 후 원하는 생리학적 효과를 제공하는 화합물(예컨대, 활성 약제학적 성분)을 지칭한다.
"전구약물": 본원에 사용된 용어 "전구약물"은 활성 약물의 전구체, 즉 활성 약물로 전환될 수 있는 화합물을 지칭한다. 전형적으로 이러한 전구약물은 생체내에서 처리되며, 이는 약물을 생리학적으로 활성인 형태로 전환시킨다. 일부 경우에는, 전구약물 자체가 원하는 생리학적 효과를 가질 수 있다. 원하는 생리학적 효과는, 예컨대 치료, 세포독성, 면역조절 등일 수 있다.
"세포독성": 본원에 사용된 용어 "세포독성"은 세포 또는 선택된 세포 집단(예컨대, 암세포)에 대한 독성을 의미한다. 독성 효과로 인해 세포 사멸 및/또는 용해가 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 독성 효과는, 예컨대 세포 성장을 늦추거나 저지시키는 세포에 대한 준치사적 파괴 효과일 수 있다. 세포독성 효과를 달성하기 위해, 약물 또는 전구약물은 특히 DNA 손상제, 미세소관 파괴제, 또는 세포독성 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다.
"세포증식억제제": 본원에 사용된 용어 "세포증식억제제"는 세포 성장 및/또는 증식을 억제하거나 정지시키는 약물 또는 다른 화합물을 지칭한다.
"소분자": 본원에 사용된 용어 "소분자"는 자연 발생이든 (예컨대, 화학적 합성을 통한) 인공적으로 생성되든 비교적 낮은 분자량을 갖는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 소분자는 동물(예컨대, 포유동물, 인간)에서 국소 또는 전신 효과를 생성한다는 점에서 생물학적으로 활성이다. 일부 실시양태에서, 소분자는 약물이고, 소분자는 "약물 분자" 또는 "약물" 또는 "치료제"로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 약물 분자는 약 5 kDa 이하(예컨대, 약 1.5 kDa 이하)의 MW를 갖는다. 일부 실시양태에서, 약물 분자는 문헌("Pharmaceutical Substances: Syntheses, Patents, Applications" by Axel Kleemann and Jurgen Engel, Thieme Medical Publishing, 1999 및 "Merck Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals", Edited by Susan Budavari et al., CRC Press, 1996, 둘 다 참조로 본원에 포함됨)에서 발견되는 화합물로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 사용된 약물은 표적 세포 또는 경로에 대해 항증식성(세포증식억제 및/또는 세포독성) 활성을 갖는 치료제이다.
본원에 사용된 "활성 형태"는 생체내 또는 시험관내에서 의도된 약제학적 효능을 나타내는 화합물의 형태를 지칭한다. 특히, 본 개시내용의 접합체에 의해 전달되도록 의도된 약물 분자가 접합체로부터 방출되는 경우, 활성 형태는 의도된 치료 특성을 나타내는 약물 자체 또는 이의 유도체일 수 있다. 접합체로부터의 약물의 방출은 약물을 본 개시내용의 스캐폴드 또는 접합체에 부착시키는 링커의 생분해성 결합의 절단에 의해 달성될 수 있다.
"진단 표지물": 본원에 사용된 용어 진단 표지물은 생체내 또는 생체외에서 당업계에 공지된 분석 방법을 이용하여 검출될 수 있는 원자, 원자의 그룹, 모이어티 또는 작용기, 나노결정, 또는 물질의 조성의 다른 개별 요소를 지칭한다. 본 개시내용의 접합체와 관련될 때, 이러한 진단 표지물은 생체내에서 접합체의 모니터링을 허용한다. 대안적으로 또는 추가로, 진단 표지물을 포함하는 구축물 및 조성물을 사용하여 생물학적 기능 또는 구조를 모니터링할 수 있다.
"동물": 본원에 사용된 용어 동물은, 예컨대 포유동물, 조류, 파충류, 양서류, 어류, 벌레 및 단일 세포를 포함하는 발달의 임의의 단계에 있는 인간 뿐만 아니라 비인간 동물을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 비인간 동물은 포유동물(예컨대, 설치류, 마우스, 래트, 토끼, 원숭이, 개, 고양이, 영장류, 또는 돼지)이다. 동물은 트랜스제닉 동물 또는 인간 클론일 수 있다. 용어 "대상체"는 동물을 포괄한다.
"유효량": 일반적으로, 활성제 또는 약물 전달 디바이스를 지칭할 때, 용어 "유효량"은 원하는 생물학적 반응을 유도하는 데 필요한 양을 지칭한다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 작용제 또는 디바이스의 효율적인 양은 원하는 생물학적 종점, 전달될 작용제, 캡슐화 매트릭스의 조성, 표적 조직 등과 같은 인자에 따라 다양할 수 있다.
본원에 사용된 "천연 아미노산"은 자연 발생 단백질 또는 이의 입체이성질체에서 발견되는 통상적인 자연 발생 L-아미노산 중 임의의 하나를 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한, 아미노산에 대한 언급은 아미노산 자체 및 이의 입체이성질체를 포함한다.
본원에 사용된 "비천연 아미노산"은 천연 아미노산이 아닌 임의의 아미노산을 지칭한다. 이것은, 예컨대 α-, β-, γ-, D-, L-아미노 아실 잔기를 포함하는 아미노산을 포함한다. 보다 일반적으로, 비천연 아미노산은 일반식
Figure pct00006
의 잔기를 포함하고, 측쇄 R은 자연에서 발생하는 아미노산 측쇄 이외의 것이다.
본원에 사용된 "알킬"은 그 자체로 또는 또 다른 용어의 일부로서 표시된 수의 탄소 원자를 갖는 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지된 포화 또는 불포화된 탄화수소를 지칭한다(예컨대, "-C1-8 알킬" 또는 "- C1-10 알킬"은 각각 1 내지 8 또는 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 알킬 기를 지칭함). 탄소 원자의 수가 표시되지 않은 경우, 알킬 기는 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다. 일부 실시양태에서, 알킬 기는 비치환된다. 알킬 기는 하나 이상의 기로 치환될 수 있다. 일부 실시양태에서, 알킬 기는 포화될 것이다.
본원에 사용된 "알킬렌"은 그 자체로 또는 또 다른 용어의 일부로서 언급된 탄소 원자 수, 전형적으로 2-10개의 탄소 원자의 치환 또는 비치환된 포화 또는 불포화된 분지쇄 또는 직쇄 또는 사이클릭 탄화수소 라디칼을 지칭하며, 모 알칸의 동일하거나 2개의 상이한 탄소 원자에서 2개의 수소 원자를 제거하여 유도된 2개의 1가 라디칼 센터를 갖는다. 일부 실시양태에서, 알킬렌은 분지쇄 또는 직쇄 탄화수소이다(즉, 사이클릭 탄화수소가 아님). 본원에 제공된 임의의 실시양태에서, 알킬렌은 포화된 알킬렌일 수 있다.
본원에 사용된 "아릴"은 그 자체로 또는 또 다른 용어의 일부로서 모 방향족 고리 시스템의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 6-20개의 탄소(예컨대, 6-14개의 탄소) 원자의 치환 또는 비치환된 1가 카르보사이클릭 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴 기는 예시적인 구조에서 "Ar"로 표시된다.
본원에 사용된 "아릴렌"은 그 자체로 또는 또 다른 용어의 일부로서 아릴 기의 수소 원자 중 하나가 결합으로 대체된 상기 정의된 바와 같은 아릴 기이며(즉, 2가임) 오르토, 메타 또는 파라 배향일 수 있다.
일부 실시양태에서, 예컨대 다작용성 링커 또는 약물 단위가 아릴렌을 포함하는 경우, 아릴렌은 아릴 기의 수소 원자 중 1개 또는 2개가 결합으로 대체된 상기 정의된 아릴 기이다(즉, 아릴렌은 2가 또는 3가일 수 있음).
본원에 사용된 "헤테로사이클"은 그 자체로 또는 또 다른 용어의 일부로서 특정 수(예컨대, 3 내지 8 또는 C3-8)의 탄소 원자(고리 구성원으로도 지칭됨) 및 독립적으로 N, O, P 또는 S로부터 선택되고 모 고리 시스템의 고리 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도되는 1 내지 4개의 헤테로원자 고리 구성원을 갖는 1가의 치환 또는 비치환된 방향족("헤테로아릴") 또는 비방향족("헤테로사이클로알킬") 모노사이클릭, 바이사이클릭, 트리사이클릭, 또는 테트라사이클릭 고리 시스템을 지칭한다. 헤테로사이클에 있는 하나 이상의 N, C 또는 S 원자는 산화될 수 있다. 헤테로원자를 포함하는 고리는 방향족 또는 비방향족일 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, 헤테로사이클은 안정한 구조를 유도하는 임의의 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 이의 펜던트 기에 부착된다.
본원에 사용된 "헤테로사이클로" 또는 "헤테로사이클로-"는 헤테로사이클의 추가 수소 원자 중 하나 이상이 결합으로 대체된(즉, 다가, 예컨대 2가 또는 3가임) 상기 정의된 헤테로사이클 기(예컨대, C3-8 헤테로사이클)을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 친수성 기, 다작용성 링커 또는 링커-약물 모이어티가 헤테로사이클로를 포함하는 경우, 헤테로사이클로는 헤테로사이클 기의 수소 원자 중 1개 또는 2개가 결합으로 대체된(즉, 헤테로사이클로는 2가 또는 3가일 수 있음) 상기 정의된 헤테로사이클 기이다.
본원에 사용된 "카르보사이클"은 그 자체로 또는 또 다른 용어의 일부로서, 모 고리 시스템의 고리 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 특정 수(예컨대, 3 내지 8 또는 C3-8)의 탄소 원자(고리 구성원으로도 지칭됨)를 갖는, 1가의 치환 또는 비치환된 방향족("아릴") 또는 포화 또는 불포화된 비방향족("사이클로알킬")의 모노사이클릭, 바이사이클릭, 트리사이클릭 또는 테트라사이클릭 고리 시스템이다. 카르보사이클은 3, 4, 5, 6, 7 또는 8원일 수 있다.
본원에 사용된 "카르보사이클로" 또는 "카르보사이클로-"는 그 자체로 또는 또 다른 용어의 일부로서 카르보사이클 기의 수소 원자 중 다른 하나가 결합으로 대체된(즉, 2가임) 상기 정의된 C3-8 카르보사이클 기를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 예컨대 친수성 기, 다작용성 링커, 또는 링커-약물 모이어티가 카르보사이클로를 포함하는 경우, 카르보사이클로는 카르보사이클 기의 수소 원자 중 1개 또는 2개가 결합으로 대체된(즉, 카르보사이클로는 2가 또는 3가일 수 있음) 상기 정의된 카르보사이클 기이다.
본원에 사용된 "헤테로알킬"은 그 자체로 또는 또 다른 용어와 조합하여, 달리 언급되지 않는 한, 언급된 탄소 원자 수 및 1 내지 10개의(예컨대, 1 내지 3개의) 헤테로원자 O, N, Si 또는 S로 이루어진, 완전히 포화되거나 1 내지 3도의 불포화도를 함유하는 안정한 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 또는 이들의 조합을 의미하며, 질소 및 황 원자는 임의적으로 산화될 수 있고 질소 헤테로원자는 임의적으로 4차화될 수 있다. 헤테로원자(들) O, N 및 S는 헤테로알킬 기의 임의의 내부 위치 또는 알킬 기가 분자의 나머지 부분에 부착되는 위치에 위치될 수 있다. 헤테로원자 Si는 알킬 기가 분자의 나머지 부분에 부착되는 위치를 포함하여 헤테로알킬 기의 임의의 위치에 위치될 수 있다. 일부 실시양태에서, 최대 2개의 헤테로원자가 연속적일 수 있다. 일부 실시양태에서, C1-4 헤테로알킬 또는 헤테로알킬렌은 1 내지 4개의 탄소 원자 및 1 또는 2개의 헤테로원자를 갖고, C1-3 헤테로알킬 또는 헤테로알킬렌은 1 내지 3개의 탄소 원자 및 1 또는 2개의 헤테로원자를 갖는다. 일부 실시양태에서, 헤테로알킬 또는 헤테로알킬렌은 포화된다.
본원에 사용된 "헤테로알킬렌"은 그 자체로 또는 또 다른 치환기의 일부로서 -CH2-CH2-S-CH2-CH2- 및 -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-로 예시되는 바와 같이 (상기 논의된 바와 같은) 헤테로알킬로부터 유도된 2가 기를 의미한다. 헤테로알킬렌 기의 경우, 헤테로원자는 쇄 말단 중 하나 또는 둘 모두를 차지할 수도 있다. 또한, 알킬렌 및 헤테로알킬렌 연결기의 경우, 연결기의 배향이 암시되지 않는다. 선택된 실시양태에서, 예컨대 친수성 기, 다작용성 링커 또는 링커-약물 모이어티가 헤테로알킬렌을 포함하는 경우, 헤테로알킬렌은 헤테로알킬 기의 수소 원자 중 1개 또는 2개가 결합으로 대체된(즉, 헤테로알킬렌은 2가 또는 3가일 수 있음) 상기 정의된 헤테로알킬 기이다.
본원에 사용된 "임의로 치환된"은 화학적 모이어티(예컨대, 알킬, 헤테로알킬, 카르보사이클 및 헤테로사이클 등)가 치환 또는 비치환됨을 의미한다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 개시된 화학적 모이어티는 임의로 치환된다. 화학적 모이어티가 치환될 때, 하나 이상의 수소 원자는 각각 독립적으로 치환기로 대체된다. 전형적인 치환기는 -X', -R', -O, -OR', -SR', -S-, -N(R')2, -N(R')3, =NR', -C(X')3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO2, =N2, -N3, -NR'C(=O)R', -C(=O)R', -C(=O)N(R')2, -SO3 -, -SO3H, -S(=O)2R', -OS(=O)2OR', -S(=O)2NR', -S(=O)R',-OP(=O)(OR')2, -P(=O)(OR')2, -PO3 -, -PO3H2, -AsO2H2, -C(=O)R', -C(=O)X', -C(=S)R', -CO2R', -CO2 -, -C(=S)OR', -C(=O)SR', -C(=S)SR', -C(=O)N(R')2, -C(=S)N(R')2, 또는 -C(=NR')N(R')2를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 각각의 X'는 독립적으로 할로겐: -F, -Cl, -Br, 또는 -I이고; 각각의 R'는 독립적으로 -H, -C1-20 알킬, -C6-20 아릴, -C3-C14 헤테로사이클, 보호기 또는 전구약물 모이어티이다. 전형적인 치환기는 옥소(=O)도 포함한다.
본원에 사용된 "링커-약물 모이어티"는 본원에 개시된 접합체의 비표적화(예컨대, 비항체) 모이어티 부분을 지칭한다. 링커-약물 모이어티의 링커 성분은 다작용성 링커와 약물 단위 사이에 개재된 방출 가능한 어셈블리 단위로 지칭되는 방출 메커니즘을 갖는다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티는 접합체의 비항체(예컨대, 비표적화) 부분이다.
본원에 사용된 "다작용성 링커"는 하나 이상의 친수성 기, 하나 이상의 약물 단위, 및 표적화 모이어티(예컨대, 항체)를 연결하여 본원에 개시된 접합체 또는 스캐폴드를 형성하는 링커를 지칭한다. 다작용성 링커에 대한 이러한 성분의 연결은 병렬 또는 직렬일 수 있다. 일부 실시양태에서, 다작용성 링커는 표적화 모이어티와 친수성 기 사이에 펩티드 모이어티를 포함하고, 펩티드 모이어티는 적어도 2개의 아미노산을 포함한다. 다른 실시양태에서, 다작용성 링커는 친수성 기가 다가알콜 또는 이들의 유도체인 경우 적어도 2개의 아미노산의 펩티드 모이어티를 포함할 필요가 없다. 다른 실시양태에서, 다작용성 링커는 친수성 기가 글루코실-아민, 디-글루코실-아민, 트리-글루코실-아민 또는 이들의 유도체인 경우 적어도 2개의 아미노산의 펩티드 모이어티를 포함할 필요가 없다.
본원에 사용된 "유리 약물"은 친수성 기 또는 리간드 단위의 분해 생성물에 직접 또는 간접적으로 공유 부착되지 않은 생물학적 활성 형태의 약물 모이어티를 지칭한다. 유리 약물은 링커-약물 모이어티의 방출 가능한 어셈블리 단위에 의해 제공되는 방출 메커니즘을 통해 다작용성 링커로부터 절단 시 또는 후속 세포내 전환 또는 대사에 즉시 존재 하기 때문에 약물을 지칭할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유리 약물은 H-D 형태를 갖거나 하전된 모이어티로서 존재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 약리학적 활성 종은 모 약물이 아닐 수 있고, 약물이 후속 세포내 대사를 겪지 않은 표적화 모이어티에 연결되는 링커의 성분을 포함할 수 있다.
소수성은 clogP를 사용하여 측정될 수 있거나 clogP는 옥탄올/물 분배 계수의 로그(암시적 수소를 포함)로 정의되며, 화학적 컴퓨팅 그룹으로부터의 프로그램 MOETM를 사용하여 계산될 수 있다(clogP 값은 문헌(Wildman, S.A., Crippen, G.M.; Prediction of Physiochemical Parameters by Atomic Contributions; J. Chem. Inf. Comput. Sci. 39 No. 5 (1999) 868-873)을 이용하여 계산됨).
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 표적화 모이어티-약물 접합체의 집단을 포함하는 표적화 모이어티-약물 접합체 조성물을 제공한다. 표적화 모이어티-약물 접합체는 표적화 모이어티 단위 및 이에 부착된 다중 링커-약물 모이어티를 포함한다. 일부 실시양태에서, 접합체에서 표적화 모이어티당 평균 약 2 내지 약 12, 약 2 내지 약 10, 약 2 내지 약 8, 약 2 내지 약 6, 약 2 내지 약 4 또는 약 1 내지 약 2개의 링커-약물 모이어티(예컨대, 화학식 (I')의 d13)가 있다. 표적화 모이어티 상의 특정 부위에 대한 예시적인 부착은 아지도 기, 케토 기 또는 알키닐 기를 함유하도록 표적화 모이어티 N-글리칸의 변형을 통한 것이다.
본 개시내용은 본 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소(예컨대, 수소의 동위원소 및 탄소의 동위원소)를 포함하도록 의도된다.
본 개시내용의 화합물, 스캐폴드, 또는 접합체는 하나 초과의 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 화합물, 스캐폴드 또는 접합체가 본원에 기재될 때, 본 개시내용은 화합물, 스캐폴드 또는 접합체의 모든 이성질체를 지칭하는 것으로 이해된다. 이러한 개시내용은 적용 가능한 경우 위치이성질체 광학 이성질체 및 호변이성질체의 이성질체를 지칭한다. 광학 이성질체는 거울상이성질체 및 부분입체이성질체, 키랄 이성질체 및 비키랄 이성질체를 포함한다. 광학 이성질체는 단리된 광학 이성질체 뿐만 아니라 라세미 및 비라세미 혼합물을 포함하는 광학 이성질체의 혼합물을 포함한다. 이성질체는 단리된 형태 또는 하나 이상의 다른 이성질체와의 혼합물일 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, 본원에 기재된 임의의 화합물, 스캐폴드 또는 접합체는 화합물, 스캐폴드 또는 접합체의 각각의 이성질체, 또는 이들의 임의의 혼합물을 지칭하는 것을 의미한다. 화합물, 스캐폴드 또는 접합체가 특정 이성질체로 묘사될 때, 본 개시내용은 그 특정 이성질체에 제한되지 않고 임의의 실시양태로서 특정 이성질체를 지칭할 수 있는 것으로 이해된다.
본 개시내용의 화합물, 스캐폴드 또는 접합체는 시스 및/또는 트랜스 이성질체로 존재할 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, 본원에 기재된 임의의 화합물, 스캐폴드 또는 접합체는 화합물, 스캐폴드 또는 접합체의 시스 이성질체 또는 트랜스 이성질체 뿐만 아니라 이들의 임의의 혼합물을 지칭하는 것을 의미한다. 화합물, 스캐폴드, 또는 접합체가 시스 또는 트랜스 이성질체로 묘사될 때, 본 개시내용은 특정 시스 또는 트랜스 이성질체에 제한되지 않고 임의적 실시양태로서 특정 시스 또는 트랜스 이성질체를 지칭할 수 있는 것으로 이해된다.
본 개시내용의 화합물, 스캐폴드 또는 접합체는 위치이성질체로서 존재할 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, 본원에 기재된 임의의 화합물, 스캐폴드 또는 접합체는 화합물, 스캐폴드 또는 접합체의 각각의 위치이성질체, 또는 이들의 임의의 혼합물을 지칭하는 것을 의미한다. 화합물, 스캐폴드, 또는 접합체가 특정 위치이성질체로 묘사되는 경우, 본 개시내용은 특정 위치이성질체로 제한되지 않고 임의적 실시양태로서 특정 위치이성질체를 지칭할 수 있는 것으로 이해된다. 특정 입체배열 지정이 없는 또는 모든 키랄 중심보다 적은 키랄 중심에 대해 이러한 지정을 갖는 본 개시내용의 화합물, 스캐폴드 또는 접합체의 인용 또는 묘사는, 이러한 지정되지 않은 키랄 중심에 대해, 화합물의 라세미체, 라세미 혼합물, 각각의 개별 거울상이성질체, 부분입체이성질체 혼합물 및 각각의 개별 부분입체이성질체를 포괄하는 것으로 의도되며, 이러한 형태는 하나 이상의 비대칭 중심의 존재로 인해 가능하다.
항체-약물 접합체 및 스캐폴드
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 부위 특이성을 갖는 항체-약물 접합체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 접합체는 생분해성 및 생체적합성이고/거나 높은 약물 로드 및 표적 항원에 대한 강한 결합을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 표적화 모이어티(예컨대, 항체) 및 하나 이상의 링커-약물 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체를 제공하며, 표적화 모이어티는 하나 이상의 링커-약물 모이어티에 공유적으로 연결된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 표적화 모이어티(예컨대, 항체)와 접합하여 본원에 개시된 접합체를 형성하는 데 유용한 스캐폴드를 제공한다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 항체이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 표적화 모이어티(예컨대, 항체) 및 표적화 모이어티에 공유적으로 연결된 하나 이상의 링커-약물 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체를 제공하며,
각각의 링커-약물 모이어티는 표적화 모이어티를 각각의 약물 단위에 대한 방출 가능한 어셈블리 단위의 중재를 통해 하나 이상의 약물 단위(예컨대, 하나 이상의 치료제(D))에 연결하고 친수성 기를 각각의 링커-약물 모이어티의 약물 단위에 연결하는 다작용성 링커를 포함하고;
방출 가능한 어셈블리 단위는 표적화 모이어티에 의해 표적화되는 표적 부위에 근접하여 유리 약물을 방출할 수 있고;
다작용성 링커는 표적화 모이어티와 친수성 기 사이에 펩티드 모이어티를 포함하고, 펩티드 모이어티는 적어도 2개의 아미노산을 포함한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 표적화 모이어티(예컨대, 항체) 및 표적화 모이어티에 공유적으로 연결된 하나 이상의 링커-약물 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체를 제공하며,
각각의 링커-약물 모이어티는 표적화 모이어티를 각각의 약물 단위에 대한 방출 가능한 어셈블리 단위의 중재를 통해 하나 이상의 약물 단위(예컨대, 하나 이상의 치료제(D))에 연결하고 친수성 기를 각각의 링커-약물 모이어티의 약물 단위에 연결하는 다작용성 링커를 포함하고;
방출 가능한 어셈블리 단위는 표적화 모이어티에 의해 표적화된 표적 부위에 근접하여 유리 약물을 방출할 수 있다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (I')의 항체-약물 접합체를 제공한다:
Figure pct00007
상기 식에서,
a2는 1 내지 3의 정수이고;
a3은 0 내지 1의 정수이고;
a4는 1 내지 약 5의 정수이고;
a5는 1 내지 3의 정수이고;
d13은 1 내지 약 12의 정수이고;
항체는 변형된 항체이고;
LP'는 변형된 항체를 MP에 연결하는 2가 링커 모이어티이고; 이 중 상응하는 1가 모이어티 LP는 변형된 항체의 작용기와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기 WP를 포함하고;
MP는 스트레처 단위이고;
LM은 결합, 또는 3가 또는 4가 링커이고, LM이 결합인 경우(즉, 2가 링커) a2는 1이거나, LM이 3가 링커인 경우 a2는 2이거나, LM이 4가 링커인 경우 a2는 3이고;
L3은 카르보닐 함유 모이어티이고;
MA는 적어도 2개의 아미노산을 포함하는 펩티드 모이어티를 포함하고;
T1은 친수성 기이고, T1과 MA 사이의
Figure pct00008
는 T1 및 MA의 직접적 또는 간접적 부착을 나타내고;
D의 각각의 존재는 독립적으로 ≤ 약 5 kDa의 분자량을 갖는 치료제이고;
LD의 각각의 존재는 독립적으로 D를 MA에 연결하는 2가 링커 모이어티이고, 결합이 끊어질 때 D가 이의 의도된 치료 효과를 위해 활성 형태로 방출되도록 적어도 하나의 절단 가능한 결합을 포함한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (IV)의 항체-약물 접합체 또는 화학식 (II)-(III) 및 (V)-(VI) 중 어느 하나의 스캐폴드를 제공한다:
Figure pct00009
Figure pct00010
상기 식에서,
a2는 1 내지 3의 정수이고;
a3은 0 내지 1의 정수이고;
a4는 1 내지 약 5의 정수이고;
a5는 1 내지 3의 정수이고;
d13은 1 내지 약 12의 정수이고;
항체는 변형된 항체이고;
LP'는 변형된 항체를 MP에 연결하는 2가 링커 모이어티이고; 이 중 상응하는 1가 모이어티 LP는 변형된 항체의 반응성 모이어티와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기 WP를 포함하고;
MP는 스트레처 단위이고;
LM은 존재하는 경우 결합, 또는 3가 또는 4가 링커이고, LM이 결합인 경우(즉, 2가 링커) a2는 1이거나, LM이 3가 링커인 경우 a2는 2이거나, LM이 4가 링커인 경우 a2는 3이고;
L3은 카르보닐 함유 모이어티이고;
MA는 적어도 2개의 아미노산을 포함하는 펩티드 모이어티를 포함하고;
T1은 친수성 기이고, T1과 MA 사이의
Figure pct00011
는 T1 및 MA의 직접적 또는 간접적 부착을 나타내고;
WD의 각각의 존재는 존재하는 경우 독립적으로 ≤ 약 5 kDa의 분자량을 갖는 치료제("D")의 작용기와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기이고;
LD의 각각의 존재는 독립적으로 WD 또는 D를 MA에 연결하는 2가 링커 모이어티이고, LD는 결합이 끊어질 때 D가 이의 의도된 치료 효과를 위해 활성 형태로 방출되도록 적어도 하나의 절단 가능한 결합을 포함한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (IV')의 항체-약물 접합체 또는 화학식 (II')-(III') 및 (V')-(VI') 중 어느 하나의 스캐폴드를 제공한다:
Figure pct00012
상기 식에서,
a2는 1 내지 3의 정수이고;
a3은 0 내지 1의 정수이고;
a4는 1 내지 약 5의 정수이고;
a5는 1 내지 3의 정수이고;
d13은 1 내지 약 12의 정수이고;
항체는 변형된 항체이고;
LP'는 변형된 항체를 MP에 연결하는 2가 링커 모이어티이고; 이 중 상응하는 1가 모이어티 LP는 변형된 항체의 작용기와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기 WP를 포함하고;
MP는 스트레처 단위이고;
LM은 존재하는 경우 결합, 또는 3가 또는 4가 링커이고, LM이 결합인 경우(즉, 2가 링커) a2는 1이거나, LM이 3가 링커인 경우 a2는 2이거나, LM이 4가 링커인 경우 a2는 3이고;
L3은 카르보닐 함유 모이어티이고;
MA는 적어도 2개의 아미노산을 포함하는 펩티드 모이어티를 포함하고;
T1은 친수성 기이고, T1과 MA 사이의
Figure pct00013
는 T1 및 MA의 직접적 또는 간접적 부착을 나타내고;
WD의 각각의 존재는 존재하는 경우 독립적으로 ≤ 약 5 kDa의 분자량을 갖는 치료제("D")의 작용기와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기이고;
LD의 각각의 존재는 독립적으로 WD 또는 D를 MA에 연결하는 2가 링커 모이어티이고, LD는 결합이 끊어질 때 D가 이의 의도된 치료 효과를 위해 활성 형태로 방출되도록 적어도 하나의 절단 가능한 결합을 포함한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (VII)-(XII) 중 어느 하나의 펩티드 함유 스캐폴드를 제공한다:
Figure pct00014
상기 식에서,
a2는 1 내지 3의 정수이고;
a3은 0 내지 1의 정수이고;
a4는 1 내지 약 5의 정수이고;
a5는 1 내지 3의 정수이고;
LP는 변형된 항체의 반응성 모이어티와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기 WP를 포함하는 1가 링커 모이어티이고;
MP는 스트레처 단위이고;
LM은 존재하는 경우 결합, 또는 3가 또는 4가 링커이고, LM이 결합인 경우(즉, 2가 링커) a2는 1이거나, LM이 3가 링커인 경우 a2는 2이거나, LM이 4가 링커인 경우 a2는 3이고;
L3은 존재하는 경우 카르보닐 함유 모이어티이고;
MA는 적어도 2개의 아미노산을 포함하는 펩티드 모이어티를 포함하고;
T1은 친수성 기이고, T1과 MA 사이의
Figure pct00015
는 T1 및 MA의 직접적 또는 간접적 부착을 나타내고;
WD의 각각의 존재는 독립적으로 ≤ 약 5 kDa의 분자량을 갖는 치료제("D")의 작용기와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기이고;
LD의 각각의 존재는 독립적으로 WD 또는 D를 MA에 연결하는 2가 링커 모이어티이고, LD는 결합이 끊어질 때 D가 이의 의도된 치료 효과를 위해 활성 형태로 방출되도록 적어도 하나의 절단 가능한 결합을 포함한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (VII')-(XII') 중 어느 하나의 펩티드 함유 스캐폴드를 제공한다:
Figure pct00016
Figure pct00017
상기 식에서,
a2는 1 내지 3의 정수이고;
a3은 0 내지 1의 정수이고;
a4는 1 내지 약 5의 정수이고;
a5는 1 내지 3의 정수이고;
LP는 변형된 항체의 반응성 모이어티와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기 WP를 포함하는 1가 링커 모이어티이고;
MP는 스트레처 단위이고;
LM은 존재하는 경우 결합, 또는 3가 또는 4가 링커이고, LM이 결합인 경우 a2는 1이거나, LM이 3가 링커인 경우 a2는 2이거나, LM이 4가 링커인 경우 a2는 3이고;
L3은 존재하는 경우 카르보닐 함유 모이어티이고;
MA는 적어도 2개의 아미노산을 포함하는 펩티드 모이어티를 포함하고;
T1은 친수성 기이고, T1과 MA 사이의
Figure pct00018
는 T1 및 MA의 직접적 또는 간접적 부착을 나타내고;
WD의 각각의 존재는 독립적으로 ≤ 약 5 kDa의 분자량을 갖는 치료제("D")의 작용기와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기이고;
LD의 각각의 존재는 독립적으로 WD 또는 D를 MA에 연결하는 2가 링커 모이어티이고, LD는 결합이 끊어질 때 D가 이의 의도된 치료 효과를 위해 활성 형태로 방출되도록 적어도 하나의 절단 가능한 결합을 포함한다.
본 개시내용의 접합체 및 스캐폴드는 적용 가능한 경우 하기 특징 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, d13은 2 내지 12, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6, 2 내지 4, 1 내지 2, 4 내지 10, 4 내지 8, 4 내지 6, 6 내지 12, 6 내지 10, 6 내지 8, 8 내지 14, 8 내지 12, 또는 8 내지 10의 정수이다.
일부 실시양태에서, d13은 1 내지 2 범위의 정수이다(예컨대, d13은 1 또는 2임). 일부 실시양태에서, d13은 2 내지 4 범위의 정수이다(예컨대, d13은 2, 3, 또는 4임). 일부 실시양태에서, d13은 4 내지 6 범위의 정수이다(예컨대, d13은 4, 5, 또는 6임). 일부 실시양태에서, d13은 6 내지 8 범위의 정수이다(예컨대, d13은 6, 7 또는 8임). 일부 실시양태에서, d13은 6 내지 10 범위의 정수이다(예컨대, d13은 6, 7, 8, 9 또는 10임). 일부 실시양태에서, d13은 1 또는 2이다. 일부 실시양태에서, d13은 1이다. 일부 실시양태에서, d13은 2이다.
일부 실시양태에서, 각각의 L3은 존재하는 경우 독립적으로 *-C1-12 알킬-C(O)-**, *-NH-C1-12 알킬-C(O)-**, 또는 *-C1-12 알킬-C(O)-NH-C1-12 알킬-C(O)-**를 나타내고, *는 존재하는 경우 또 다른 L3, 또는 LM에 대한 부착을 나타내고; **는 존재하는 경우 또 다른 L3 또는 MA에 대한 부착을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 L3은 *-CH2CH2-C(O)-**이거나 *-NH-CH2CH2-C(O)-**이고, *는 존재하는 경우 또 다른 L3, 또는 LM에 대한 부착을 나타내고; **는 존재하는 경우 또 다른 L3 또는 MA에 대한 부착을 나타낸다.
일부 실시양태에서, a3은 2 이상이고, 적어도 하나의 L3은 *-C1-12 알킬-C(O)-**이고, 적어도 하나의 L3은 *-NH-C1-12 알킬-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, (L3)a3은 *-CH2CH2-C(O)-NH-CH2CH2-C(O)-** 또는 *NH-CH2CH2-C(O)-CH2CH2-C(O)-**이고, *는 LM에 대한 부착을 나타내고; **는 MA에 대한 부착을 나타낸다.
일부 실시양태에서, a4는 1이다. 일부 실시양태에서, a4는 2이다. 일부 실시양태에서, a4는 3이다.
변수 L P 및 L P'
일부 실시양태에서, LP'는 LP의 작용기(예컨대, WP)와 변형된 항체의 반응성 모이어티(예컨대, *-GlcNAc-S"-A"의 변형된 GlcNAc 모이어티) 사이의 반응에 의해 형성된다.
일부 실시양태에서, LP'는 LP의 작용기(예컨대, WP)와 변형된 항체의 반응성 모이어티(예컨대, *-GlcNAc-S"-A"의 변형된 GlcNAc 모이어티) 사이에 형성된 트리아졸릴을 포함한다.
일부 실시양태에서, 각각의 LP는 항체에 연결되지 않은 경우 말단 기 WP를 포함한다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP는
Figure pct00019
이며,
상기 식에서,
R8j는 수소, 할로겐, C1-24 알킬(예컨대, C1-6 알킬), C6-24 사이클로알킬, 6 내지 24원 헤테로사이클로알킬, C6-24 아릴, 6 내지 24원 헤테로아릴, -(C1-24 알킬)-(C6-24 사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(C6-24 아릴), 또는 -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로아릴)이고,
C1-24 알킬은 하나 이상의 O, N 또는 S에 의해 임의로 중단되고, C1-24 알킬(예컨대, C1-6 알킬), C6-24 사이클로알킬, 6 내지 24원 헤테로사이클로알킬, C6-24 아릴, 6 내지 24원 헤테로아릴, -(C1-24 알킬)-(C6-24 사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(C6-24 아릴), 또는 -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로아릴)은 하나 이상의 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, C3-C12 사이클로알킬, -O(C1-C12 알킬), -O(C2-C12 알케닐), -O(C2-C12 알키닐), -O(C3-C12 사이클로알킬), 할로겐, 아미노, 옥소, 또는 실릴로 임의로 치환되고,
C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, C3-C12 사이클로알킬, -O(C1-C12 알킬), -O(C2-C12 알케닐), -O(C2-C12 알키닐), -O(C3-C12 사이클로알킬)은 임의로 치환되고, C1-C12 알킬, C3-C12 사이클로알킬, -O(C1-C12 알킬), 또는 -O(C3-C12 사이클로알킬)은 하나 이상의 O, N, 또는 S에 의해 임의로 중단되고;
R10j는 수소, 할로겐, C1-24 알킬(예컨대, C1-6 알킬), C6-24 사이클로알킬, 6 내지 24원 헤테로사이클로알킬, C6-24 아릴, 6 내지 24원 헤테로아릴, -(C1-24 알킬)-(C6-24 사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(C6-24 아릴), 또는 -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로아릴)이고,
C1-24 알킬(예컨대, C1-6 알킬), C6-24 사이클로알킬, 6 내지 24원 헤테로사이클로알킬, C6-24 아릴, 6 내지 24원 헤테로아릴, -(C1-24 알킬)-(C6-24 사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(C6-24 아릴), 또는 -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로아릴)은 임의로 치환되고;
각각의 R11j는 독립적으로 수소, C1-24 알킬(예컨대, C1-6 알킬), C6-24 사이클로알킬, 6 내지 24원 헤테로사이클로알킬, C6-24 아릴, 6 내지 24원 헤테로아릴, -(C1-24 알킬)-(C6-24 사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(C6-24 아릴), 또는 -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로아릴)이고;
각각의 R12j는 독립적으로 할로겐, -OR10j, -NO2, -CN, -S(O)2R10j, C1-24 알킬(예컨대, C1-6 알킬), C6-24 사이클로알킬, 6 내지 24원 헤테로사이클로알킬, C6-24 아릴, 6 내지 24원 헤테로아릴, -(C1-24 알킬)-(C6-24 사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로사이클로알킬), -(C1-24 알킬)-(C6-24 아릴), 또는 -(C1-24 알킬)-(6 내지 24원 헤테로아릴)이고;
u2는 0 내지 8 범위의 정수이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP는
Figure pct00020
이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP는
Figure pct00021
이다.
일부 실시양태에서, 각각의 R11j는 수소이다. 일부 실시양태에서, u2는 0이다. 일부 실시양태에서, R8j는 수소이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP는
Figure pct00022
이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP는
Figure pct00023
이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 R12j는 전자 구인 기, 예컨대 하메트(Hammett) 치환 상수 δ에 대해 양의 값을 갖는 기이다. 일부 실시양태에서, 적합한 전자 구인 기는 당업계에 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 R12j는 할로겐(예컨대, F 또는 Cl), -OR10j, -NO2, -CN, -S(O)2R7j, 치환된 C1-C12 알킬, 또는 치환된 C6-C12 아릴이고, 치환기 중 적어도 하나는 전자 구인 기이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 R12j는 플루오르화 C1-C12 알킬(예컨대, -CF3), 플루오르화 C5-C12 아릴(예컨대, -C6F5), 또는 할로알킬화 C5-C12 아릴(예컨대, -[3,5-(CF3)2(C6H3)])이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP는
Figure pct00024
이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP는
Figure pct00025
Figure pct00026
이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP는
Figure pct00027
이다.
일부 실시양태에서, 각각의 R11j는 수소이다. 일부 실시양태에서, u2는 0이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP는
Figure pct00028
이다.
일부 실시양태에서, 각각의 WP는 존재하는 경우 독립적으로
Figure pct00029
이다.
일부 실시양태에서, 각각의 WP는
Figure pct00030
이다.
일부 실시양태에서, 각각의 LP'는 항체에 연결되는 경우 연결기 WP'를 포함한다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP'는
Figure pct00031
이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP'는
Figure pct00032
이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP'는
Figure pct00033
이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP'는
Figure pct00034
이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 WP'는
Figure pct00035
이다.
스트레처 단위 M P
일부 실시양태에서, MP는
Figure pct00036
이며,
상기 식에서, *는 LP' 또는 LP에 대한 부착을 나타내고, **는 LM 또는 MA에 대한 부착을 나타내고;
각각의 R66은 독립적으로 NH 또는 O이고; 각각의 R3은 독립적으로 -C(O)-NR5- 또는 -NR5-C(O)-이고;
각각의 R5는 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴, C3-8 사이클로알킬, COOH, 또는 COO-C1-6 알킬이고;
R4는 결합 또는 -NR5-(CR20R21)-C(O)-이고;
각각의 R20 및 R21은 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴, 히드록실화 C6-10 아릴, 폴리히드록실화 C6-10 아릴, 5 내지 12원 헤테로사이클, C3-8 사이클로알킬, 히드록실화 C3-8 사이클로알킬, 폴리히드록실화 C3-8 사이클로알킬, 또는 천연 또는 비천연 아미노산의 측쇄이고;
각각의 b1은 독립적으로 0 내지 6 범위의 정수이고;
각각의 e1은 독립적으로 0 내지 8 범위의 정수이고;
각각의 f1은 독립적으로 1 내지 6 범위의 정수이고;
각각의 g2는 독립적으로 1 내지 4 범위의 정수이다.
일부 실시양태에서, b1은 0이다. 일부 실시양태에서, b1은 1이다.
일부 실시양태에서, 각각의 f1은 독립적으로 1 또는 2이다. 일부 실시양태에서, f1은 1이다. 일부 실시양태에서, f1은 2이다.
일부 실시양태에서, g2는 1 또는 2이다. 일부 실시양태에서, g2는 1이다. 일부 실시양태에서, g2는 2이다.
MP의 실시양태에 대해, *는 LP' 또는 LP에 대한 부착을 나타내고 **는 LM 또는 MA에 대한 부착을 나타내는 것으로 이해된다.
일부 실시양태에서, MP는
Figure pct00037
Figure pct00038
이다.
일부 실시양태에서, MP는
Figure pct00039
이다.
일부 실시양태에서, MP는
Figure pct00040
이다.
일부 실시양태에서, MP는
Figure pct00041
이다.
일부 실시양태에서, MP는
Figure pct00042
이다.
일부 실시양태에서, MP는
Figure pct00043
이다.
일부 실시양태에서, MP는
Figure pct00044
이다.
일부 실시양태에서, MP는
Figure pct00045
이다.
변수 L M 및 W M
일부 실시양태에서, LM은 결합(즉, 2가 링커 또는 2개의 아암을 가짐), 또는 다중 아암 링커(예컨대, 3가 또는 4가 또는 3개 또는 4개의 아암을 가짐)이고, 각각의 아암은 동일하거나 상이할 수 있다.
일부 실시양태에서, LM은 결합(즉, 2가 링커 또는 2개의 아암을 가짐) 또는 다중 아암 링커(예컨대, 4가 또는 4개의 아암을 가짐; 또는 3가 또는 3개의 아암을 가짐)이고, 각각의 암은 동일하거나 상이할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아암"은 (1) MP에 부착되거나 (2) 존재하는 경우 L3에 부착되거나 L3이 부재하는 경우 MA에 부착되는 LM의 일부를 지칭하는 것으로 이해된다.
일부 실시양태에서, LM은 결합(즉, 2가 링커 또는 2개의 아암을 가짐)이다.
일부 실시양태에서, LM은 다중 아암 링커(예컨대, 3가 또는 4가 또는 3개 또는 4개의 아암을 가짐)이고, 각각의 아암은 동일하거나 상이할 수 있다. 일부 실시양태에서, LM은 다중 아암 링커(예컨대, 3가 또는 4가 또는 3 또는 4개의 아암을 가짐)이다.
일부 실시양태에서, LM은 3개의 아암을 갖는 3가 링커이고, 각각의 아암은 동일하거나 상이할 수 있다.
일부 실시양태에서, LM은 4개의 아암을 갖는 4가 링커이고, 각각의 아암은 동일하거나 상이할 수 있다.
일부 실시양태에서, a2는 2이고 LM은
Figure pct00046
이며, 상기 식에서,
Figure pct00047
는 MP에 대한 부착을 나타내고;
Y1은 존재하는 경우 L3에 대한 부착, 또는 L3이 부재하는 경우 MA에 대한 부착을 나타내고;
R2 및 R'2는 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C3-19 치환된 알킬, 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 임의로 치환된 C6-10 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 C1-6 헤테로알킬, C1-6 알콕시, 아릴옥시, C1-6 헤테로알콕시, C2-6 알카노일, 임의로 치환된 아릴카르보닐, C2-6 알콕시카르보닐, C2-6 알카노일옥시, 아릴카르보닐옥시, 임의로 치환된 C2-6 알카노일, 임의로 치환된 C2-6 알카노일옥시, 임의로 치환된 C2-6 치환된 알카노일옥시, -COOH, 또는 -COO-C1-6 알킬이고;
c1, c2, c3, c4, c5, c7, 및 c8은 각각 존재하는 경우 독립적으로 0 내지 10 범위의 정수이고;
d1, d2, d3, d4, d5, 및 d7은 각각 존재하는 경우 독립적으로 0 내지 10 범위의 정수이다.
일부 실시양태에서, a2는 2이고 LM은
Figure pct00048
이며, 상기 식에서,
Figure pct00049
는 MP에 대한 부착을 나타내고;
Y1은 존재하는 경우 L3에 대한 부착, 또는 L3이 부재하는 경우 MA에 대한 부착을 나타내고;
R2 및 R'2는 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C3-19 치환된 알킬, 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 임의로 치환된 C6-10 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 C1-6 헤테로알킬, C1-6 알콕시, 아릴옥시, C1-6 헤테로알콕시, C2-6 알카노일, 임의로 치환된 아릴카르보닐, C2-6 알콕시카르보닐, C2-6 알카노일옥시, 아릴카르보닐옥시, 임의로 치환된 C2-6 알카노일, 임의로 치환된 C2-6 알카노일옥시, 임의로 치환된 C2-6 치환된 알카노일옥시, -COOH, 또는 -COO-C1-6 알킬이고;
c1, c2, c3, c4, c5, c7, 및 c8은 각각 존재하는 경우 독립적으로 0 내지 10 범위의 정수이고;
d1, d2, d3, d4, d5, 및 d7은 각각 존재하는 경우 독립적으로 0 내지 10 범위의 정수이다.
일부 실시양태에서, a2는 2이고 LM은
Figure pct00050
이다.
일부 실시양태에서, a2는 2이고 LM은
Figure pct00051
이다.
일부 실시양태에서, c1, c2, c3, c4, c5, c7, 및 c8은 존재하는 경우 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다. 일부 실시양태에서, c1, c2, c3, c4, c5, c7, 및 c8은 각각 독립적으로 0 또는 1이다. 일부 실시양태에서, c1, c2, c3, c4, c5, c7, 및 c8은 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이다. 일부 실시양태에서, c1, c2, c3, c4, c5, c7, 및 c8은 각각 독립적으로 0, 1 또는 2이다. 일부 실시양태에서, c1, c2, c3, c4, c5, c7, 및 c8은 각각 독립적으로 0이다. 일부 실시양태에서, c1, c2, c3, c4, c5, c7, 및 c8은 각각 독립적으로 1이다. 일부 실시양태에서, c1, c2, c3, c4, c5, c7, 및 c8은 각각 독립적으로 2이다.
일부 실시양태에서, d1, d2, d3, d4, d5, 및 d7은 존재하는 경우 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다. 일부 실시양태에서, d1, d2, d3, d4, d5, 및 d7은 각각 독립적으로 0 또는 1이다. 일부 실시양태에서, d1, d2, d3, d4, d5, 및 d7은 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다. 일부 실시양태에서, d1, d2, d3, d4, d5, 및 d7은 각각 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4이다. 일부 실시양태에서, d1, d2, d3, d4, d5, 및 d7은 각각 독립적으로 1이다. 일부 실시양태에서, d1, d2, d3, d4, d5, 및 d7은 각각 독립적으로 2이다. 일부 실시양태에서, d1, d2, d3, d4, d5, 및 d7은 각각 독립적으로 3이다. 일부 실시양태에서, d1, d2, d3, d4, d5, 및 d7은 각각 독립적으로 4이다.
일부 실시양태에서, R2 및 R'2는 각각 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴, C3-8 사이클로알킬, -COOH, 또는 -COO-C1-6 알킬이다. 일부 실시양태에서, R2 및 R'2는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-6 알킬이다. 일부 실시양태에서, R2 및 R'2는 각각 독립적으로 수소이다. 일부 실시양태에서, R2 및 R'2는 각각 독립적으로 C1-6 알킬이다.
일부 실시양태에서, LM은
Figure pct00052
Figure pct00053
이다.
일부 실시양태에서, a2은 3이고 LM은
Figure pct00054
Figure pct00055
이며, 상기 식에서,
Figure pct00056
는 MP에 대한 부착을 나타내고;
Y1은 존재하는 경우 L3에 대한 부착, 또는 L3이 부재하는 경우 MA에 대한 부착을 나타내고;
R2 및 R'2는 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C3-19 치환된 알킬, 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 임의로 치환된 C6-10 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 C1-6 헤테로알킬, C1-6 알콕시, 아릴옥시, C1-6 헤테로알콕시, C2-6 알카노일, 임의로 치환된 아릴카르보닐, C2-6 알콕시카르보닐, C2-6 알카노일옥시, 아릴카르보닐옥시, 임의로 치환된 C2-6 알카노일, 임의로 치환된 C2-6 알카노일옥시, 임의로 치환된 C2-6 치환된 알카노일옥시, -COOH, 또는 -COO-C1-6 알킬이고;
c1, c2, c3, c4, c5, c6, c7, 및 c8은 각각 독립적으로 0 내지 10 범위의 정수이고;
d1, d2, d3, d4, d5, d6, d7 및 d8은 각각 독립적으로 0 내지 10 범위의 정수이고;
e1, e2, e3, e4, e5, e6, e7, 및 e8은 각각 독립적으로 0 내지 10 범위의 정수이다.
일부 실시양태에서, a2는 3이고 LM은
Figure pct00057
_
Figure pct00058
이며, 상기 식에서,
Figure pct00059
는 MP에 대한 부착을 나타내고;
Y1은 존재하는 경우 L3에 대한 부착, 또는 L3이 부재하는 경우 MA에 대한 부착을 나타내고;
R2 및 R'2는 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C3-19 치환된 알킬, 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 임의로 치환된 C6-10 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 C1-6 헤테로알킬, C1-6 알콕시, 아릴옥시, C1-6 헤테로알콕시, C2-6 알카노일, 임의로 치환된 아릴카르보닐, C2-6 알콕시카르보닐, C2-6 알카노일옥시, 아릴카르보닐옥시, 임의로 치환된 C2-6 알카노일, 임의로 치환된 C2-6 알카노일옥시, 임의로 치환된 C2-6 치환된 알카노일옥시, -COOH, 또는 -COO-C1-6 알킬이고;
c1, c2, c3, c4, c5, c6, c7, 및 c8은 각각 독립적으로 0 내지 10 범위의 정수이고;
d1, d2, d3, d4, d5, d6, d7 및 d8은 각각 독립적으로 0 내지 10 범위의 정수이고;
e1, e2, e3, e4, e5, e6, e7, 및 e8은 각각 독립적으로 0 내지 10 범위의 정수이다.
일부 실시양태에서, a2는 3이고 LM은
Figure pct00060
이다.
일부 실시양태에서, a2는 3이고 LM은
Figure pct00061
이다.
일부 실시양태에서, -LM-(L3)a2-는
Figure pct00062
이다.
아미노산 단위가 2개의 부착 부위(즉, 말단 약물 단위)를 갖는 일부 실시양태에서, 상기 제시된 부착 부위 중 하나는, 예컨대 H, OH, 또는 C1-3 비치환된 알킬 기로 대체될 수 있다.
일부 실시양태에서, LM이 다중 아암 링커이고 스트레처 단위 MP에 아직 연결되지 않은 경우, WM은 LM의 말단이고 WM의 각각의 존재는 독립적으로 수소, 보호기, 이탈기, 또는 공유 결합을 형성함으로써 LM을 MP에 연결할 수 있는 작용기이다.
일부 실시양태에서, WM은 아민 보호기이다. 일부 실시양태에서, WM은 BOC이다.
일부 실시양태에서, WM은 아민 보호기이고 LM은
Figure pct00063
이다.
일부 실시양태에서, WM은 아민 보호기이고 LM은
Figure pct00064
이다.
일부 실시양태에서, WM은 BOC이고, LM은
Figure pct00065
이다.
일부 실시양태에서, WM은 아민 보호기이고 LM은
Figure pct00066
이다.
일부 실시양태에서, WM은 BOC이고, LM은
Figure pct00067
이다.
일부 실시양태에서, WM은 아민 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, WM은 -C(O)-(CH2)w-NH2를 포함하고, w는 1 내지 6의 정수이다. 일부 실시양태에서, WM은 -C(O)-CH2-NH2이다.
일부 실시양태에서, WM은 -C(O)-CH2-NH2이고 LM은
Figure pct00068
이다.
일부 실시양태에서, WM은 -C(O)-CH2-NH2이고 LM은
Figure pct00069
이다.
일부 실시양태에서, WM은 H이다.
변수 L 3
일부 실시양태에서, 각각의 L3은 존재하는 경우 카르보닐 함유 모이어티이다.
L3의 실시양태에 대해, *는 존재하는 경우 또 다른 L3, 또는 LM에 대한 부착을 나타내고; **는 존재하는 경우 또 다른 L3, 또는 MA에 대한 부착을 나타내는 것으로 이해된다.
일부 실시양태에서, 각각의 L3은 존재하는 경우 독립적으로 *-C1-12 알킬-C(O)-**, *-NH-C1-12 알킬-C(O)-**, 또는 *-C1-12 알킬-C(O)-NH-C1-12 알킬-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 L3은 *-C1-12 알킬-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 L3은 *-CH2CH2-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, L3은 *-CH2CH2-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, (L3)a3은 *-CH2CH2-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 L3은 *-NH-C1-12 알킬-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 L3은 *-NH-CH2CH2-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, L3은 *-NH-CH2CH2-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, (L3)a3은 *-NH-CH2CH2-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 L3은 *-C1-12 알킬-C(O)-NH-C1-12 알킬-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 L3은 *-CH2CH2-C(O)-NH-CH2CH2-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, L3은 *-CH2CH2-C(O)-NH-CH2CH2-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, (L3)a3은 *-CH2CH2-C(O)-NH-CH2CH2-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, a3은 2 이상이고, 적어도 하나의 L3은 *-C1-12 알킬-C(O)-**이고, 적어도 하나의 L3은 *-NH-C1-12 알킬-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, (L3)a3은 *-CH2CH2-C(O)-NH-CH2CH2-C(O)-**이다.
일부 실시양태에서, (L3)a3은 *NH-CH2CH2-C(O)-CH2CH2-C(O)-**이다.
변수 M A
일부 실시양태에서, MA는 하나 이상의 약물 및 하나 이상의 친수성 기를 LP 또는 LP'에 연결할 수 있는 링커 모이어티이다. 일부 실시양태에서, MA는 적어도 2개의 아미노산의 펩티드 모이어티를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산은 본원에서 "AA"로 지칭되고 아미노산들은 "AA's"로 지칭된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 -LD-D 단위와 공유 결합을 형성할 수 있고 다중 약물의 부착을 허용하는 모이어티이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 단일 AA 단위를 포함하거나 2개 이상의 AA 단위(예컨대, 2 내지 10개, 2 내지 6개, 또는 2, 3, 4, 5 또는 6개)를 가지며, AA 단위는 각각 독립적으로 천연 또는 비천연 아미노산, 아미노 알콜, 아미노 알데히드, 디아민, 폴리아민, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 필요한 수의 부착을 갖기 위해, AA 단위 중 적어도 하나는 -LD-D 단위의 부착을 제공하기 위해 작용화된 측쇄를 가질 것이다. 일부 실시양태에서, 예시적인 작용화된 AA 단위(예컨대, 아미노산, 아미노 알콜, 또는 아미노 알데히드)는, 예컨대 아지도 또는 알킨 작용화된 AA 단위(예컨대, 아지드 기 또는 알킨 기를 갖도록 변형된 아미노산, 아미노 알콜, 또는 아미노 알데히드)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아지드 기 또는 알킨 기는 클릭 화학을 이용하는 부착을 위한 것이다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 2 내지 12개의 AA 단위를 갖는다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 2 내지 10개의 AA 단위를 갖는다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 2 내지 6개의 AA 단위를 갖는다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 2, 3, 4, 5 또는 6개의 AA 단위를 갖는다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 2개의 AA 단위를 갖는다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 3개의 AA 단위를 갖는다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 4개의 AA 단위를 갖는다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 5개의 AA 단위를 갖는다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 6개의 AA 단위를 갖는다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티 내에서 또는 접합체, 이의 중간체, 또는 스캐폴드의 다른 성분과의 부착은, 예컨대 아미노, 카르복시 또는 다른 작용기를 통해 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티의 각각의 아미노산은 독립적으로 티올 함유 아미노산의 D 또는 L 이성질체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티의 각각의 아미노산은 독립적으로 티올 함유 아미노산의 D 이성질체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티의 각각의 아미노산은 독립적으로 티올 함유 아미노산의 L 이성질체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 티올 함유 아미노산은, 예컨대 시스테인, 호모시스테인, 또는 페니실라민일 수 있다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티를 포함하는 각각의 아미노산은 독립적으로 하기 아미노산의 L 또는 D 이성질체일 수 있다: 알라닌(β-알라닌을 포함), 아르기닌, 아스파르트산, 아스파라긴, 시스테인, 히스티딘, 글리신, 글루탐산, 글루타민, 페닐알라닌, 라이신, 류신, 메티오닌, 세린, 티로신, 트레오닌, 트립토판, 프롤린, 오르니틴, 페니실라민, 아미노알키노산, 아미노알칸디오산, 헤테로사이클로-카르복실산, 시트룰린, 스타틴, 디아미노알카노산, 이들의 입체이성질체, 또는 이들의 유도체.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티를 포함하는 각각의 아미노산은 독립적으로 시스테인, 호모시스테인, 페니실라민, 오르니틴, 라이신, 세린, 트레오닌, 글리신, 글루타민, 알라닌, 아스파르트산, 글루탐산, 셀레노시스테인, 프롤린, 글리신, 이소류신, 류신, 메티오닌, 발린, 알라닌, 또는 이의 입체이성질체이다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 모노펩티드, 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드, 또는 펜타펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 펜타펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 적어도 약 5개의 아미노산(예컨대, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 최대 약 10개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티를 포함하는 각각의 아미노산은 독립적으로 글리신, 세린, 글루탐산, 라이신, 아스파르트산 및 시스테인이다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 적어도 4개의 글리신 및 적어도 하나의 세린, 예컨대 (글리신)4 및 세린을 포함하며, 세린은, 예컨대 (세린)-(글리신)4; (글리신)-(세린)-(글리신)3; (글리신)2-(세린)-(글리신)2; (글리신)3-(세린)-(글리신); 또는 (글리신)4-(세린)과 같이 펩티드 쇄를 따라 임의의 위치에 있다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글리신)4-(세린) 또는 (세린)-(글리신)4를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글리신)4-(세린)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (세린)-(글리신)4를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 적어도 4개의 글리신 및 적어도 하나의 글루탐산, 예컨대 (글리신)4 및 글루탐산을 포함하고, 글루탐산은 펩티드 쇄를 따라 임의의 위치에 있다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글루탐산)-(글리신)4 또는 (글리신)4-(글루탐산)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (β-알라닌)-(글리신)4-(세린)을 포함하며, 세린은 펩티드 쇄를 따라 임의의 위치에 있다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글리신)4-(세린)-(글루탐산)을 포함하며, 세린은 펩티드 쇄를 따라 임의의 위치에 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (β-알라닌)-(글리신)4-(세린)-(글루탐산)을 포함하며, 세린은 펩티드 쇄를 따라 임의의 위치에 있다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글리신)1-4-(세린)을 포함하고,
펩티드 모이어티는 글리신 중 하나를 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (세린)-(글리신)1-4를 포함하며,
펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글리신을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
펩티드 모이어티의 실시양태에 대해, *는 존재하는 경우 L3에 대한 부착, 또는 L3이 부재하는 경우 LM에 부착을 나타내는 것으로 이해된다. 일부 실시양태에서, **는 존재하는 경우 T1에 대한 부착, 또는 T1이 부재하는 경우 -OH를 나타낸다. 일부 실시양태에서, ***는 존재하는 경우 LD에 대한 부착, 또는 LD가 부재하는 경우 수소를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00070
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글리신)-(세린)을 포함하며,
펩티드 모이어티는 글리신을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글리신)-(세린)을 포함하며,
펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글리신을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00071
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글리신)4-(세린)을 포함하고,
펩티드 모이어티는 글리신 중 하나를 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다. 일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00072
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (세린)-(글리신)1-4를 포함하며,
펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글리신 중 하나를 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00073
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (세린)-(글리신)-4를 포함하며,
펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글리신 중 하나를 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00074
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (β-알라닌)-(글리신)1-4-(세린)을 포함하고,
펩티드 모이어티는 β-알라닌을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00075
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (β-알라닌)-(글리신)4-(세린)을 포함하며,
펩티드 모이어티는 β-알라닌을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 세린을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00076
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글리신)1-4-(글루탐산)을 포함하고,
펩티드 모이어티는 글리신 중 하나를 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00077
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글리신)-(글루탐산)을 포함하고,
펩티드 모이어티는 글리신을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00078
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글리신)4-(글루탐산)을 포함하고,
펩티드 모이어티는 글리신 중 하나를 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00079
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글루탐산)-(글리신)1-4를 포함하며,
펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글리신을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00080
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글루탐산)-(글리신)4를 포함하며,
펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글리신 중 하나를 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00081
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (글루탐산)-(글리신)을 포함하고,
펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글리신 중 하나를 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00082
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (β-알라닌)-(글리신)1-4-(글루탐산)을 포함하고,
펩티드 모이어티는 β-알라닌을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00083
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (β-알라닌)-(글리신)4-(글루탐산)을 포함하고,
펩티드 모이어티는 β-알라닌을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00084
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는 (β-알라닌)-(글리신)-(글루탐산)을 포함하고,
펩티드 모이어티는 β-알라닌을 통해 존재하는 경우 L3에 부착되거나, L3이 부재하는 경우 LM에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 T1에 부착되고; 펩티드 모이어티는 글루탐산을 통해 존재하는 경우 LD에 부착된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 모이어티는
Figure pct00085
를 포함한다.
변수 L D 및 W D
일부 실시양태에서, LD의 각각의 존재는 독립적으로 D를 MA에 연결하는 2가 링커 모이어티이고, 결합이 절단될 때 D가 이의 의도된 치료 효과를 위해 활성 형태로 방출되도록 적어도 하나의 절단 가능한 결합을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 방출 가능한 어셈블리 단위의 성분이다. 일부 실시양태에서, LD는 방출 가능한 어셈블리 단위이다. 일부 실시양태에서, LD는 하나의 절단 가능한 결합을 포함한다. 일부 실시양태에서, LD는 다중 절단 부위 또는 결합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 절단 가능한 결합을 형성하기 위한 작용기는, 예컨대 디술파이드 결합을 형성하기 위한 술프히드릴 기, 히드라존 결합을 형성하기 위한 알데히드, 케톤 또는 히드라진 기, 옥심 결합을 형성하기 위한 히드록실아민 기, 펩티드 결합을 형성하기 위한 카르복실 또는 아미노 기, 에스테르 결합을 형성하기 위한 카르복실 또는 히드록시 기, 및 글리코시드 결합을 형성하기 위한 슈가를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, LD는 디술파이드 교환을 통해 절단 가능한 디술파이드 결합, 산성 pH에서 절단 가능한 산-불안정 결합, 및/또는 히드롤라제에 의해 절단 가능한 결합을 포함한다. 일부 실시양태에서, LD는 카르바메이트 결합(즉, -O-C(O)-NR-, 여기서 R은 수소 또는 알킬 등임)을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD에서 절단 가능한 결합의 구조 및 서열은 결합이 표적 부위에 존재하는 효소의 작용에 의해 절단되도록 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 절단 가능한 결합은 다른 메카니즘에 의해 절단 가능할 수 있다.
일부 실시양태에서, LD에서 절단 가능한 결합의 구조 및 서열은 결합이 표적 부위에 존재하는 효소의 작용에 의해 절단되도록 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 절단 가능한 결합은 다른 메카니즘에 의해 절단 가능할 수 있다.
일부 실시양태에서, 절단 가능한 결합(들)은 종양 관련 프로테아제를 포함하는 하나 이상의 효소에 의해 효소적으로 절단되어 약물 단위 또는 D를 유리시킬 수 있으며, 본 개시내용의 접합체, 또는 이의 중간체, 또는 스캐폴드는 약물 단위 또는 D를 제공하기 위해 방출 시 생체내에서 양성자화된다.
일부 실시양태에서, LD는 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, LD의 각각의 아미노산은 절단 가능한 결합이 존재한다면 천연 또는 비천연 및/또는 D 또는 L 이성질체일 수 있다. 일부 실시양태에서, LD는 천연 또는 비천연일 수 있는 알파, 베타, 또는 감마 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, LD는 인접 서열에 1 내지 12개(예컨대, 1 내지 6개, 또는 1 내지 4개, 또는 1 내지 3개, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11개, 또는 12개)의 아미노산을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 천연 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, LD는 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, LD는 천연 아미노산을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, LD는 비천연 아미노산을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, LD는 비천연 아미노산에 연결된 천연 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, LD는 천연 아미노산의 D-이성질체에 연결된 천연 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, LD는 -Val-Cit-, -Phe-Lys-, 또는 -Val-Ala-와 같은 디펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 모노펩티드, 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드, 펜타펩티드, 헥사펩티드, 헵타펩티드, 옥타펩티드, 노나펩티드, 데카펩티드, 운데카펩티드, 또는 도데카펩티드 단위를 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 약물 단위에 직접 접합된 펩티드(예컨대, 1 내지 12개의 아미노산)를 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, 펩티드는 단일 아미노산이다. 일부 이러한 실시양태에서, 펩티드는 디펩티드이다.
일부 실시양태에서, LD의 각각의 아미노산은 독립적으로 알라닌, β-알라닌, 아르기닌, 아스파르트산, 아스파라긴, 히스티딘, 글리신, 글루탐산, 글루타민, 페닐알라닌, 라이신, 류신, 세린, 티로신, 트레오닌, 이소류신, 프롤린, 트립토판, 발린, 시스테인, 메티오닌, 셀레노시스테인, 오르니틴, 페니실라민, 아미노알카노산, 아미노알키노산, 아미노알칸디오산, 아미노벤조산, 아미노-헤테로사이클로-알카노산, 헤테로사이클로-카르복실산, 시트룰린, 스타틴, 디아미노알카노산, 및 이들의 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 각각의 아미노산은 알라닌, β-알라닌, 아르기닌, 아스파르트산, 아스파라긴, 히스티딘, 글리신, 글루탐산, 글루타민, 페닐알라닌, 라이신, 류신, 세린, 티로신, 트레오닌, 이소류신, 프롤린, 트립토판, 발린, 시트룰린, 및 이들의 유도체으로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 각각의 아미노산은 단백질생성 및 비단백질생성 아미노산으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, LD의 각각의 아미노산은 독립적으로 하기 아미노산의 L 또는 D 이성질체로부터 선택될 수 있다: 알라닌, β-알라닌, 아르기닌, 아스파르트산, 아스파라긴, 시스테인, 히스티딘, 글리신, 글루탐산, 글루타민, 페닐알라닌, 라이신, 류신, 메티오닌, 세린, 티로신, 트레오닌, 트립토판, 프롤린, 오르니틴, 페니실라민, 아미노알키노산, 아미노알칸디오산, 헤테로사이클로-카르복실산, 시트룰린, 스타틴, 디아미노알카노산, 발린, 시트룰린, 및 이들의 유도체.
일부 실시양태에서, LD의 각각의 아미노산은 독립적으로 시스테인, 호모시스테인, 페니실라민, 오르니틴, 라이신, 세린, 트레오닌, 글리신, 글루타민, 알라닌, 아스파르트산, 글루탐산, 셀레노시스테인, 프롤린, 글리신, 이소류신, 류신, 메티오닌, 발린, 시트룰린, 또는 알라닌이다.
일부 실시양태에서, LD의 각각의 아미노산은 독립적으로 하기 아미노산의 L-이성질체로부터 선택된다: 알라닌, β-알라닌, 아르기닌, 아스파르트산, 아스파라긴, 히스티딘, 글리신, 글루탐산, 글루타민, 페닐알라닌, 라이신, 류신, 세린, 티로신, 트레오닌, 이소류신, 트립토판, 시트룰린 및 발린.
일부 실시양태에서, LD의 각각의 아미노산은 독립적으로 하기 아미노산의 D-이성질체로부터 선택된다: 알라닌, β-알라닌, 아르기닌, 아스파르트산, 아스파라긴, 히스티딘, 글리신, 글루탐산, 글루타민, 페닐알라닌, 라이신, 류신, 세린, 티로신, 트레오닌, 이소류신, 트립토판, 시트룰린 및 발린.
일부 실시양태에서, LD의 각각의 아미노산은 알라닌, β-알라닌, 글루타민, 글루탐산, 이소글루탐산, 이소아스파르트산, 발린, 시트룰린, 또는 아스파르트산이다.
일부 실시양태에서, LD는 β-알라닌을 포함한다. 일부 실시양태에서, LD는 (β-알라닌)-(알라닌)을 포함한다. 일부 실시양태에서, LD는 (β-알라닌) 및 임의로 알라닌, 글루탐산, 글루타민, 이소글루탐산, 아스파르트산, 이소아스파르트산, 발린, (발린)-(알라닌), (알라닌)-(알라닌), 또는 (발린)-(시트룰린)을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 (글루탐산)-(알라닌)을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 (β-알라닌)-(글루타민)을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 (β-알라닌)-(글루타민)-(알라닌)을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 글루탐산 및 임의로 알라닌, 글리신, 이소글루탐산, 아스파르트산, 이소아스파르트산, 발린, (발린)-(알라닌), (알라닌)-(알라닌), 또는 (발린)-(시트룰린)을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 2,3-디아미노프로판산을 포함한다. 일부 실시양태에서, Ww는 (R)-2,3-디아미노프로판산을 포함한다. 일부 실시양태에서, Ww는 글루탐산을 포함한다. 일부 실시양태에서, Ww는 (글루탐산)-(알라닌)을 포함한다. 일부 실시양태에서, LD는 (글루탐산)-(글리신)-(알라닌)을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 L-글루탐산, D-글루탐산, (L-글루탐산)-(L-알라닌), (L-글루탐산)-(D-알라닌), (D-글루탐산)-(L-알라닌), (D-글루탐산)-(D-알라닌), (L-글루탐산)-(글리신)-(L-알라닌), D-글루탐산)-(글리신)-(D-알라닌), (L-글루탐산)-(글리신)-(D-알라닌), 또는 (D-글루탐산)-(글리신)-(L-알라닌)을 포함한다. 일부 실시양태에서, LD는 하나 이상의 아미노산에 추가하여 카르바메이트 결합을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 특정 효소에 의한 효소적 절단에 대한 선택성으로 설계 및 최적화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 특정 효소는 종양 관련된 프로테아제이다. 일부 실시양태에서, LD는 절단이 카텝신 B, C 및 D, 또는 플라스민 프로테아제에 의해 촉매되는 결합을 포함한다.
일부 실시양태에서, LD는 슈가 절단 부위를 포함한다. 일부 실시양태에서, LD는 산소 글리코시드 결합을 통해 자기 희생 기에 연결된 슈가 모이어티(Su)를 포함한다. 일부 실시양태에서, "자기 희생 기"는 3개의 이격된 화학적 모이어티(즉, 슈가 모이어티(글리코시드 결합을 통함), 약물 단위(직접적으로 또는 간접적으로), 및 MA(직접적으로 또는 간접적으로))를 함께 공유적으로 연결할 수 있는 삼작용성 화학적 모이어티일 수 있다. 일부 실시양태에서, 글리코시드 결합은 표적 부위에서 절단되어 약물의 방출을 유도하는 자기 희생 반응 시퀀스를 개시할 수 있다.
치료제, 약물 단위, 또는 D
일부 실시양태에서, 치료제는 ≤ 약 5 kDa의 분자량을 갖는 소분자이다(예컨대, ≤ 약 4 kDa, ≤ 약 3 kDa, ≤ 약 1.5 kDa, 또는 ≤ 약 1 kDa의 분자량을 가짐).
일부 실시양태에서, 치료제는 약 1 nM 미만의 IC50을 갖는다. 일부 실시양태에서, 치료제는 1 nM 미만의 IC50을 갖는다.
일부 실시양태에서, 치료제는 약 1 nM 초과의 IC50을 갖는다(예컨대, 치료제는 약 1 내지 50 nM의 IC50을 가짐). 일부 실시양태에서, 치료제는 약 1 nM 초과의 IC50을 갖는다. 일부 실시양태에서, 치료제는 1 nM 초과의 IC50을 갖는다(예컨대, 치료제는 1 내지 50 nM의 IC50을 가짐). 일부 실시양태에서, 치료제는 1 nM 초과의 IC50을 갖는다.
일부 실시양태에서, 약 1 nM 초과의 IC50을 갖는 일부 치료제(예컨대, "덜 강력한 약물")는 당업계에서 인정된 접합 기술을 이용하는 항체와의 접합에 부적합하다. 이론에 구애됨이 없이, 이러한 치료제는 감소된 약동학 및 물리화학적 특성 없이는 약물의 충분한 카피(즉, 8 초과)가 접합체의 당업계에서 인정된 기술을 이용하여 접합될 수 없기 때문에 통상적인 기술을 이용하여 표적화된 항체-약물 접합체에 사용하기에 불충분한 효능을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 접합 전략을 이용하여 이들 덜 강력한 약물의 충분히 높은 로딩이 달성될 수 있고, 이에 의해 바람직한 약동학 및 물리화학적 특성을 유지하면서 치료제의 높은 로딩을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 항체, 스캐폴드, 및 적어도 8개의 치료제 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체에 관한 것이며, 치료제는 약 1 nM 초과의 IC50을 갖는다.
일부 실시양태에서, 약물은 (a) 아우리스타틴 화합물; (b) 칼리케아미신 화합물; (c) 두오카르마이신 화합물; (d) SN38, (e) 피롤로벤조디아제핀; (f) 빈카 화합물; (g) 투빌리신 화합물; (h) 비천연 캄토테신 화합물; (i) 메이탄시노이드 화합물; (j) DNA 결합 약물; (k) 키나제 억제제; (l) MEK 억제제; (m) KSP 억제제; (n) 토포이소머라제 억제제; (o) DNA 알킬화 약물; (p) RNA 폴리머라제; (q) PARP 억제제; (r) NAMPT 억제제; (s) 토포이소머라제 억제제; (t) 단백질 합성 억제제; (u) DNA 결합 약물; (v) DNA 삽입 약물; 또는 (w) US 2018/0154018(이의 내용은 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 면역조절 화합물의 유도체이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 사용된 약물은 아우리스타틴 F-히드록시프로필아미드-L-알라닌이다.
일부 실시양태에서 아우리스타틴은 하기 화학식 (X)의 화합물이다:
Figure pct00086
상기 식에서,
R31 및 R32는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-8 알킬이고, R31 및 R32 중 최대 하나는 H이고;
R33은 수소, C1-8 알킬, C3-8 카르보사이클, C6-10 아릴, C1-8 알킬-C6-10 아릴, X1-(C3-8 카르보사이클), C3-8 헤테로사이클, 또는 X1-(C3-8 헤테로사이클)이고;
R34는 수소, C1-8 알킬, C3-8 카르보사이클, C6-10 아릴, X1-C6-10 아릴, X1-(C3-8 카르보사이클), C3-8 헤테로사이클, 또는 X1-(C3-8 헤테로사이클)이고;
R35는 수소 또는 메틸이거나;
R34 및 R35는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 화학식 -(CR55R41)b-을 갖는 카르보사이클릭 고리를 형성하고, R55 및 R41는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-8 알킬이고, b는 3 내지 7의 정수이고;
R36은 수소 또는 C1-8 알킬이고;
R37은 수소, C1-8 알킬, C3-8 카르보사이클, C6-10 아릴, -X1-C6-10 아릴, -X1-(C3-8 카르보사이클), C3-8 헤테로사이클 또는 -X1-(C3-8 헤테로사이클)이고;
R38은 각각 독립적으로 수소, OH, C1-8 알킬, C3-8 카르보사이클 또는 O-(C1-8 알킬)이고;
R53은
Figure pct00087
또는 R54이고;
R39는 수소, C1-8 알킬, C6-10 아릴, -X1-C6-10 아릴, C3-8 카르보사이클, C3-8 헤테로사이클, -X1-C3-8 헤테로사이클, -C1-8 알킬렌-NH2, 또는 (CH2)2SCH3이고;
X1은 각각 독립적으로 C1-10 알킬렌 또는 C3-10 사이클로알킬렌이고;
R44는 수소 또는 C1-8 알킬이고;
R45는 X3-R42 또는 NH-R19이고;
X3은 O 또는 S이고;
R19는 수소, OH, 아미노 기, C1-8 알킬 아미노, 또는 -[C(R20R21)]a-R22이고;
R42는 아미노 기, C1-6 알킬 아미노, 또는 -[C(R20R21)]a-R22이고;
R20 및 R21은 각각 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴, 히드록실화 C6-10 아릴, 폴리히드록실화 C6-10 아릴, 5 내지 12원 헤테로사이클, C3-8 사이클로알킬, 히드록실화 C3-8 사이클로알킬, 폴리히드록실화 C3-8 사이클로알킬, 또는 천연 또는 비천연 아미노산의 측쇄이고;
R22는 -OH, -NHR23, -COOH, -R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23), -R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f -N(H)(R23) 또는 -R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77이고;
R23은 각각 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴, C3-8 사이클로알킬, -COOH, 또는 -COO-C1-6 알킬이고;
X2는 천연 또는 비천연 아미노산의 측쇄이고;
R77은 수소 또는 X2이고 NR77은 질소 함유 사이클릭 화합물을 형성하고;
R82는 -NR23 또는 산소이고;
R54는 -C(R56)2--C(R56)2-C6-10 아릴, -C(R56)2--C(R56)2-C3-8 헤테로사이클, 또는 -C(R56)2--C(R56)2-C3-8 카르보사이클이고;
R56은 독립적으로 H, OH, C1-8 알킬, C3-8 카르보사이클, -O-C1-8 알킬, -O-C(O)-R29, 또는 -O-R23-O-C1-6 알킬-NH2이고;
R29는 아미노 기, 5 내지 12원 헤테로사이클로알킬, -R28-C1-6 알킬-R22, R28-C5-12 헤테로사이클로알킬-C1-6 알킬-R22, -[C(R20R21)]a-R22, 또는 -R28-C1-6 알킬-C6-12 아릴-C1-6 알킬-R22이거나; R29는 상기 정의된 R47이고;
R28은 부재하거나, NR23 또는 산소이고;
a는 1 내지 6의 정수이고; c는 0 내지 3의 정수이고; d는 1 내지 3의 정수이고; f는 1 내지 12의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (X)의 아우리스타틴 화합물에서,
R39는 벤질 또는
Figure pct00088
이고; R44는 수소이다.
일부 실시양태에서, 아우리스타틴은 하기 화학식 (Xa)의 화합물이다:
Figure pct00089
상기 식에서,
R33 내지 R38, 및 R44는 본원에서 정의된 바와 같고,
R31 및 R32 중 하나는 수소 또는 C1-8 알킬이고 다른 하나는
Figure pct00090
이고;
R83은 수소 또는 CH3이고;
R84는 C1-6 알킬 또는 C6-10 아릴이고;
각각의 R12'는 독립적으로 할로겐, -C1-8 알킬, -O-C1-8 알킬, 니트로, 또는 시아노이고;
h는 0 내지 4의 정수이고;
u는 0 또는 1의 정수이고;
R53은
Figure pct00091
또는 R54이고;
R39는 수소, C1-8 알킬, C6-10 아릴, -X1-C6-10 아릴, C3-8 카르보사이클, C3-8 헤테로사이클, -X1-C3-8 헤테로사이클, -C1-8 알킬렌-NH2, 또는 (CH2)2SCH3이고;
각각의 X1은 독립적으로 C1-10 알킬렌 또는 C3-10 사이클로알킬렌이고;
R45는 X3-R42 또는 NH-R19이고;
X3은 O 또는 S이고;
R19는 수소, OH, 아미노 기, C1-8 알킬 아미노, 또는 -[C(R20R21)]a-R22이고;
R42는 수소, 아미노 기, C1-6 알킬 아미노, 또는 -[C(R20R21)]a-R22이고;
각각의 R20 및 R21은 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴, 히드록실화 C6-10 아릴, 폴리히드록실화 C6-10 아릴, 5 내지 12원 헤테로사이클, C3-8 사이클로알킬, 히드록실화 C3-8 사이클로알킬, 폴리히드록실화 C3-8 사이클로알킬, 또는 천연 또는 비천연 아미노산의 측쇄이고;
R22는 -OH, -NHR23, -COOH, -R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23), -R82-C(O)(CH2)d-(O-CH2-CH2)f -N(H)(R23), 또는 -R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77이고;
각각의 R23은 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴, C3-8 사이클로알킬, -COOH, 또는 -COO-C1-6 알킬이고;
X2는 천연 또는 비천연 아미노산의 측쇄이고;
R77은 수소 또는 X2이고 NR77은 질소 함유 사이클릭 화합물을 형성하고;
R82는 -NR23 또는 산소이고;
R54는 -C(R56)2--C(R56)2-C6-10 아릴, -C(R56)2--C(R56)2-C3-8 헤테로사이클, 또는 -C(R56)2--C(R56)2-C3-8 카르보사이클이고;
R56은 독립적으로 수소, OH, C1-8 알킬, C3-8 카르보사이클, -O-C1-8 알킬, -O-C(O)-R29, 또는-O-R23-O-C1-6 알킬-NH2이고;
R29는 아미노 기, 5 내지 12원 헤테로사이클로알킬, -R28-C1-6 알킬-R22, R28-C5-12 헤테로사이클로알킬-C1-6 알킬-R22, -[C(R20R21)]a-R22, 또는 -R28-C1-6 알킬-C6-12 아릴-C1-6 알킬-R22이거나; R29는 상기 정의된 R47이고;
R28은 부재하거나, NR23 또는 산소이고;
a는 1 내지 6의 정수이고; c는 0 내지 3의 정수이고; d는 1 내지 3의 정수이고; f는 1 내지 12의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (Xa)의 아우리스타틴 화합물은 하기 화학식 (XIa) 또는 화학식 (XIb)의 화합물이다:
Figure pct00092
또는
Figure pct00093
상기 식에서,
R92는
Figure pct00094
이고,
R83은 수소 또는 CH3이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (X)의 아우리스타틴은 하기 화학식 (XI), 화학식 (XII), 또는 화학식 (XIII)의 화합물이다:
하기 화학식 (XI)의 화합물에서:
Figure pct00095
R31은 수소 또는 CH3이고, R42는 -CH3 또는 하기 구조 중 임의의 하나이고:
Figure pct00096
Figure pct00097
;
a는 1 내지 6의 정수이고; c는 0 내지 3의 정수이고; g는 2 내지 6의 정수이고;
하기 화학식 (XII)의 화합물에서:
Figure pct00098
R31은 수소 또는 CH3이고, R40은 수소, -OH, -NH2, 또는 하기 구조 중 임의의 것이고:
Figure pct00099
Figure pct00100
;
a는 1 내지 6의 정수이고; g는 2 내지 6의 정수이고; c는 0 내지 3의 정수이고;
하기 화학식 (XIII)의 화합물에서:
Figure pct00101
R31은 수소 또는 CH3이고;
R29는 아미노 기, 5 내지 12원 헤테로사이클로알킬, -R28-C1-6 알킬-R22, R28-C5-12 헤테로사이클로알킬-C1-6 알킬-R22, -R28-[C(R20R21)]a-R22, 또는 -R28-C1-6 알킬-C6-12 아릴-C1-6 알킬-R22이거나; R29는 상기 정의된 R47이고;
R20 및 R21은 각각 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴, 히드록실화 C6-10 아릴, 폴리히드록실화 C6-10 아릴, 5 내지 12원 헤테로사이클, C3-8 사이클로알킬, 히드록실화 C3-8 사이클로알킬, 폴리히드록실화 C3-8 사이클로알킬, 또는 천연 또는 비천연 아미노산의 측쇄이고;
R22는 -OH, -NHR23, -COOH, -R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23), -R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f -N(H)(R23), 또는 -R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77이고;
각각의 R23은 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴, C3-8 사이클로알킬, -COOH, 또는 -COO-C1-6 알킬이고;
X2는 천연 또는 비천연 아미노산의 측쇄이고;
R77은 수소 또는 X2이고 NR77은 질소 함유 사이클릭 화합물을 형성하고;
R82는 - NR23 또는 산소이고;
R28은 부재하거나, NR23 또는 산소이고;
a는 1 내지 6의 정수이고; c는 0 내지 3의 정수이고; d는 1 내지 3의 정수이고; f는 1 내지 12의 정수이다.
화학식 (XII)의 일부 실시양태에서, R40은
Figure pct00102
Figure pct00103
이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (XII)의 화합물은 하기 화학식 (XIIa), (XIIb), (XIIc), (XIId), (XIIe), (XIIf), (XIIg) 또는 (XIIh)의 화합물이다:
Figure pct00104
Figure pct00105
Figure pct00106
.
화학식 (XIII)의 화합물의 일부 실시양태에서, R29는 -NH2, 5원 헤테로사이클로알킬, -R28-C1-6 알킬-R22, R28-C5-12 헤테로사이클로알킬-C1-6 알킬-R22, 또는 -R28-C1-6 알킬-C6-12 아릴-C1-6 알킬-R22이거나; R29는 상기 정의된 R47이고;
R28은 부재하거나, NR23, 또는 산소이고;
R22는 -OH, -NHR23, -COOH, -R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23), -R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f -N(H)(R23) 또는 -R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77이고;
각각의 R23는 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴, C3-8 사이클로알킬, -COOH, 또는 -COO-C1-6 알킬이고;
X2는 천연 또는 비천연 아미노산의 측쇄이고;
R77는 수소 또는 X2이고 NR77은 질소 함유 사이클릭 화합물을 형성하고;
R82는 -NR23 또는 산소이고;
c는 0 내지 3의 정수이고; d는 1 내지 3의 정수이고; f는 1 내지 12의 정수이다.
일부 실시양태에서, R29는 하기 구조 중 임의의 하나이다:
Figure pct00107
Figure pct00108
상기 식에서,
a는 1 내지 6의 정수이고; c는 0 내지 3의 정수이고; g는 2 내지 6의 정수이다.
Figure pct00109
(여기서, R42 는
Figure pct00110
임);
Figure pct00111
(여기서, R40은
Figure pct00112
_
Figure pct00113
임); 또는
Figure pct00114
(여기서, -C(O)-R29 는
Figure pct00115
임).
일부 실시양태에서, D는
Figure pct00116
이다.
일부 실시양태에서, D는
Figure pct00117
이다.
친수성 기 또는 T 1
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 접합체 또는 스캐폴드에 포함된 친수성 기는 수용성 및 실질적으로 비항원성 중합체이다. 일부 실시양태에서, 친수성 기의 예는 폴리알콜, 폴리에테르, 폴리음이온, 폴리양이온, 폴리인산, 폴리아민, 다당류, 폴리히드록시 화합물, 폴리라이신, 및 이들의 유도체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 친수성 기의 하나의 말단은 비절단성 연결에 의해 또는 절단 가능한 연결에 의해 다작용성 링커 또는 MA 링커에(예컨대, MA 링커의 아미노산에) 공유적으로 부착될 수 있도록 작용화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 작용화는, 예컨대 아민, 티올, NHS 에스테르, 말레이미드, 알킨, 아지드, 카르보닐, 또는 다른 작용기를 통한 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 친수성 기의 다른 말단 (또는 말단들)은 유리되고 테더링되지 않을 것이다. 일부 실시양태에서, "테더링되지 않은"은 친수성 기가 D 또는 약물 단위, 방출 가능한 어셈블리 단위, 또는 본 개시내용의 접합체 또는 스캐폴드의 다른 성분과 같은 또 다른 모이어티에 부착되지 않을 것임을 의미한다. 일부 실시양태에서, 친수성 기의 유리 및 테더링되지 않은 말단은 메톡시, 카르복실산, 알콜, 또는 다른 적합한 작용기를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 메톡시, 카르복실산, 알콜, 또는 다른 적합한 작용기는 친수성 기의 말단 또는 말단들에 대한 캡으로서 작용한다.
일부 실시양태에서, 절단 가능한 연결은 혈장에서 순환하는 동안 절단에 실질적으로 민감하지 않지만 세포내 또는 종양내 환경에서의 절단에 민감한 연결을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 비절단성 연결은 임의의 생물학적 환경에서의 절단에 실질적으로 민감하지 않다. 일부 실시양태에서, 히드라존의 화학적 가수분해, 디술파이드물의 환원, 및 펩티드 결합 또는 글리코시드 연결의 효소적 절단은 절단 가능한 연결의 예이다. 일부 실시양태에서, 친수성 기의 예시적인 부착은 아미드 연결, 에테르 연결, 에스테르 연결, 히드라존 연결, 옥심 연결, 디술파이드 연결, 펩티드 연결, 또는 트리아졸 연결을 통한 것이다. 일부 실시양태에서, 다작용성 링커 또는 MA 링커에 대한(예컨대, MA 링커의 아미노산에 대한) 친수성 기의 부착은 아미드 연결을 통한 것이다.
본 개시내용의 접합체 또는 스캐폴드가 하나 초과의 친수성 기를 포함하는 일부 실시양태에서, 다중 친수성 기는 동일하거나 상이한 화학적 모이어티일 수 있다. 일부 실시양태에서, 다중 친수성 기는 단일 부착 부위 또는 상이한 부위에서 다작용성 링커 또는 MA 링커에 부착될 수 있다.
일부 실시양태에서, 친수성 기의 첨가는 생성된 접합체의 약동학에 2가지의 잠재적인 영향을 미칠 수 있다. 일부 실시양태에서, 원하는 영향은 약물 또는 약물-링커의 노출된 소수성 요소에 의해 유도되는 비특이적 상호작용의 감소로부터 발생하는 청소율의 감소 (및 결과적으로 노출의 증가)이다. 일부 실시양태에서, 바람직하지 않은 영향은 접합체의 분자량 증가로부터 발생할 수 있는 부피 및 분배율의 감소이다. 일부 실시양태에서, 친수성 기의 분자량 증가는 접합체의 유체역학적 반경을 증가시켜, 종양으로 침투하는 접합체의 능력을 감소시킬 수 있는 감소된 확산성을 유도한다. 일부 실시양태에서, 충분히 큰 친수성 기는 접합체 청소율을 감소시켜 혈장 노출을 증가시키기 위해 사용되지만, 이의 확산성을 크게 감소시킬 정도로 크지 않으며, 이는 의도된 표적 세포 집단에 도달하는 접합체의 능력을 감소시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는 슈가 알콜 (또한 폴리알콜, 다가 알콜, 알디톨 또는 글리시톨로도 공지됨) 또는 이의 유도체(예컨대, 아미노 폴리알콜), 탄수화물(예컨대, 당류), 폴리비닐 알콜, 탄수화물계 중합체(예컨대, 덱스트란), 히드록시프로필메타크릴아미드(HPMA), 폴리알킬렌 옥사이드, 및/또는 이들의 공중합체을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는 단당류, 올리고당류, 다당류 등을 포함하는 모이어티와 같은 복수의 히드록실 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 친수성 기는 복수의 -(CR58OH)- 기를 포함하고, R58은 -H 또는 C1-8 알킬이다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는 화학식
Figure pct00118
의 단편 중 하나 이상을 포함하며, 상기 화학식에서 n1은 0 내지 약 6의 정수이고; 각각의 R58은 독립적으로 수소 또는 C1-8 알킬이고; R60은 결합, C1-6 알킬 링커, 또는 -CHR59-이고, R59는 수소, 알킬, 사이클로알킬, 또는 아릴알킬이고; R61은 CH2OR62, COOR62, -(CH2)n2COOR62, 또는 하나 이상의 히드록실로 치환된 헤테로사이클로알킬이고; R62는 수소 또는 C1-8 알킬이고; n2는 1 내지 약 5의 정수이다.
일부 실시양태에서, R58은 수소이고; R60은 결합 또는 C1-6 알킬 링커이고; n1은 1 내지 약 6의 정수이고; R61은 CH2OH 또는 COOH이다. 일부 실시양태에서, R58은 수소이고; R60은 -CHR59-이고; n1은 0이고; R61은 하나 이상의 히드록실, 예컨대 단당류로 치환된 헤테로사이클로알킬이다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는 글루코실-아민, 디-아민, 또는 트리-아민을 포함한다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는 하기 단편 또는 이의 입체이성질체 중 하나 이상을 포함한다:
Figure pct00119
Figure pct00120
상기 식에서,
R59는 수소, C1-8 알킬, 사이클로알킬, 또는 아릴알킬이고;
n1은 1 내지 약 6의 정수이고; n2는 1 내지 약 5의 정수이고; n3은 약 1 내지 약 3의 정수이다.
친수성 기의 모든 입체화학적 형태가 본원에서 고려되는 것으로 이해된다. 상기 화학식에서, 친수성 기는 리보스, 자일로스, 글루코스, 만노스, 갈락토스, 또는 다른 슈가로부터 유도될 수 있고 이들 분자에 존재하는 펜던트 히드록실 및 알킬 기의 입체화학적 배열을 보유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 화학식에서 다양한 데옥시 화합물이 또한 고려되는 것으로 이해되어야 한다. 예시적으로, 적용 가능한 경우 친수성 기에 대해 하기 특징 중 하나 이상이 고려된다:
일부 실시양태에서, n3은 2 또는 3이다. 일부 실시양태에서, n3은 2이다. 일부 실시양태에서, n3은 3이다. 일부 실시양태에서, n1은 1, 2, 또는 3이다. 일부 실시양태에서, n1은 1이다. 일부 실시양태에서, n1은 2이다. 일부 실시양태에서, n1은 3이다. 일부 실시양태에서, n2는 1이다.
일부 실시양태에서, R59는 H이다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는
Figure pct00121
을 포함한다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는
Figure pct00122
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는
Figure pct00123
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는
Figure pct00124
를 포함하며,
n4는 1 내지 약 25의 정수이고;
각각의 R63은 독립적으로 수소 또는 C1-8 알킬이고;
R64는 결합 또는 C1-8 알킬 링커이고;
R65는 수소, C1-8 알킬, 또는 -(CH2)n2COOR62이고;
R62는 수소 또는 C1-8 알킬이고;
n2는 1 내지 약 5의 정수이다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는
Figure pct00125
를 포함한다.
일부 실시양태에서, n4는 약 2 내지 약 20, 약 4 내지 약 16, 약 6 내지 약 12, 또는 약 8 내지 약 12의 정수이다.
일부 실시양태에서, n4는 약 2 내지 약 20의 정수이다. 일부 실시양태에서, n4는 약 4 내지 약 16의 정수이다. 일부 실시양태에서, n4는 약 6 내지 약 12의 정수이다. 일부 실시양태에서, n4는 약 8 내지 약 12의 정수이다.
일부 실시양태에서, n4는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12이다.
일부 실시양태에서, n4는 8 또는 12이다.
일부 실시양태에서, n4는 8이다.
일부 실시양태에서, T'는
Figure pct00126
를 포함하며, 상기 식에서, n4는 약 2 내지 약 20, 약 4 내지 약 16, 약 6 내지 약 12, 또는 약 8 내지 약 12의 정수이다.
일부 실시양태에서, n4는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12이다.
일부 실시양태에서, n4는 8 또는 12이다.
일부 실시양태에서, n4는 8이다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는 폴리에테르, 예컨대 폴리알킬렌 글리콜(PAO)을 포함한다. 일부 실시양태에서, PAO는 C1-6 알킬렌 옥사이드의 중합체, 특히 에틸렌 옥사이드의 중합체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 폴리알킬렌 글리콜은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. 일부 실시양태에서, 폴리에틸렌 글리콜은 mPEG이다.
일부 실시양태에서, 친수성 기는 하나 또는 다수의 PEG 쇄를 포함하는 PEG 단위를 포함한다. 일부 실시양태에서, PEG 쇄는, 예컨대 선형, 분지형 또는 별 모양 구성으로 함께 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, PEG 단위는 반복되는 PEG 서브단위를 포함하는 것 외에 (예컨대, 서로에 대한 다중 PEG 쇄의 커플링을 용이하게 하거나 아미노산에 대한 커플링을 용이하게 하기 위해) 비PEG 물질을 또한 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 반응성 기를 통해 다작용성 링커 또는 MA 링커에(예컨대, MA 링커의 아미노산에) 공유적으로 결합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 반응성 기는 활성화된 PEG 분자가 결합될 수 있는 기(예컨대, 유리 아미노 또는 카르복실 기)이다. 일부 실시양태에서, N-말단 아미노산 및 라이신(K)은 유리 아미노 기를 가지며; C-말단 아미노산 잔기는 유리 카르복실 기를 갖는다. (예컨대, 시스테인 잔기에서 발견되는 것과 같은) 술프히드릴 기는 PEG 부착을 위한 반응성 기로도 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 숙신이미딜 숙시네이트(SS), 숙신이미딜 카르보네이트(SC), mPEG-이미데이트, 파라-니트로페닐카르보네이트(NPC), 숙신이미딜 프로피오네이트(SPA), 및 염화시아누르산을 포함하지만 이에 제한되지 않는 상이한 반응성 모이어티를 갖는 메톡실화 PEG("mPEG")를 사용함으로써 다작용성 링커 또는 MA 링커에(예컨대, MA 링커의 아미노산에)에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 다양한 PEG 종이 사용될 수 있고, 실질적으로 임의의 적합한 반응성 PEG 시약이 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 반응성 PEG 시약은 다작용성 링커 또는 MA 링커에(예컨대, MA 링커의 아미노산에) 부착 시 카르바메이트 또는 아미드 결합의 형성을 유도할 것이다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 적어도 6개의 서브단위, 적어도 7개의 서브단위, 적어도 8개의 서브단위, 적어도 9개의 서브단위, 적어도 10개의 서브단위, 적어도 11개의 서브단위, 적어도 12개의 서브단위, 적어도 13개의 서브단위, 적어도 14개의 서브단위, 적어도 15개의 서브단위, 적어도 16개의 서브단위, 적어도 17개의 서브단위, 적어도 18개의 서브단위, 적어도 19개의 서브단위, 적어도 20개의 서브단위, 적어도 21개의 서브단위, 적어도 22개의 서브단위, 적어도 23개의 서브단위, 또는 적어도 24개의 서브단위를 포함한다. 일부 실시양태에서, PEG 단위는 약 72개 이하의 서브단위를 포함한다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 적어도 6개의 서브단위, 적어도 7개의 서브단위, 적어도 8개의 서브단위, 적어도 9개의 서브단위, 적어도 10개의 서브단위, 적어도 11개의 서브단위, 또는 적어도 12개의 서브단위를 포함한다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 적어도 8개의 서브단위, 적어도 9개의 서브단위, 적어도 10개의 서브단위, 적어도 11개의 서브단위, 또는 적어도 12개의 서브단위를 포함한다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 적어도 6개의 서브단위, 적어도 7개의 서브단위, 또는 적어도 8개의 서브단위를 포함한다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 적어도 6개의 서브단위를 포함한다. 일부 실시양태에서, PEG 단위는 적어도 7개의 서브단위를 포함한다. 일부 실시양태에서, PEG 단위는 적어도 8개의 서브단위를 포함한다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 각각 적어도 2개의 서브단위, 적어도 3개의 서브단위, 적어도 4개의 서브단위, 적어도 5개의 서브단위, 적어도 6개의 서브단위, 적어도 7개의 서브단위, 적어도 8개의 서브단위, 적어도 9개의 서브단위, 적어도 10개의 서브단위, 적어도 11개의 서브단위, 적어도 12개의 서브단위, 적어도 13개의 서브단위, 적어도 14개의 서브단위, 적어도 15개의 서브단위, 적어도 16개의 서브단위, 적어도 17개의 서브단위, 적어도 18개의 서브단위, 적어도 19개의 서브단위, 적어도 20개의 서브단위, 적어도 21개의 서브단위, 적어도 22개의 서브단위, 적어도 23개의 서브단위, 또는 적어도 24개의 서브단위를 갖는 하나 이상의 선형 PEG 쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, PEG 단위는 조합된 총 적어도 6개의 서브단위, 적어도 8개, 적어도 10개의 서브단위, 또는 적어도 12개의 서브단위를 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, PEG 단위는 조합된 총 약 72개 이하의 서브단위를 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, PEG 단위는 조합된 총 약 36개 이하의 서브단위를 포함한다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 조합된 총 4 내지 72, 4 내지 60, 4 내지 48, 4 내지 36, 또는 4 내지 24개의 서브단위; 5 내지 72, 5 내지 60, 5 내지 48, 5 내지 36, 또는 5 내지 24개의 서브단위; 6 내지 72, 6 내지 60, 6 내지 48, 6 내지 36, 또는 6 내지 24개의 서브단위; 7 내지 72, 7 내지 60, 7 내지 48, 7 내지 36, 또는 7 내지 24개의 서브단위; 8 내지 72, 8 내지 60, 8 내지 48, 8 내지 36, 또는 8 내지 24개의 서브단위; 9 내지 72, 9 내지 60, 9 내지 48, 9 내지 36, 또는 9 내지 24개의 서브단위; 10 내지 72, 10 내지 60, 10 내지 48, 10 내지 36, 또는 10 내지 24개의 서브단위; 11 내지 72, 11 내지 60, 11 내지 48, 11 내지 36, 또는 11 내지 24개의 서브단위; 12 내지 72, 12 내지 60, 12 내지 48, 12 내지 36, 또는 12 내지 24개의 서브단위; 13 내지 72, 13 내지 60, 13 내지 48, 13 내지 36, 또는 13 내지 24개의 서브단위; 14 내지 72, 14 내지 60, 14 내지 48, 14 내지 36, 또는 14 내지 24개의 서브단위; 15 내지 72, 15 내지 60, 15 내지 48, 15 내지 36, 또는 15 내지 24개의 서브단위; 16 내지 72, 16 내지 60, 16 내지 48, 16 내지 36, 또는 16 내지 24개의 서브단위; 17 내지 72, 17 내지 60, 17 내지 48, 17 내지 36, 또는 17 내지 24개의 서브단위; 18 내지 72, 18 내지 60, 18 내지 48, 18 내지 36, 또는 18 내지 24개의 서브단위; 19 내지 72, 19 내지 60, 19 내지 48, 19 내지 36, 또는 19 내지 24개의 서브단위; 20 내지 72, 20 내지 60, 20 내지 48, 20 내지 36, 또는 20 내지 24개의 서브단위; 21 내지 72, 21 내지 60, 21 내지 48, 21 내지 36, 또는 21 내지 24개의 서브단위; 22 내지 72, 22 내지 60, 22 내지 48, 22 내지 36, 또는 22 내지 24개의 서브단위; 23 내지 72, 23 내지 60, 23 내지 48, 23 내지 36, 또는 23 내지 24개의 서브단위; 또는 24 내지 72, 24 내지 60, 24 내지 48, 24 내지 36개의 서브단위를 포함한다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 조합된 총 4 내지 72, 4 내지 60, 4 내지 48, 4 내지 36, 또는 4 내지 24개의 서브단위; 5 내지 72, 5 내지 60, 5 내지 48, 5 내지 36, 또는 5 내지 24개의 서브단위; 6 내지 72, 6 내지 60, 6 내지 48, 6 내지 36, 또는 6 내지 24개의 서브단위; 7 내지 72, 7 내지 60, 7 내지 48, 7 내지 36, 또는 7 내지 24개의 서브단위; 8 내지 72, 8 내지 60, 8 내지 48, 8 내지 36, 또는 8 내지 24개의 서브단위; 9 내지 72, 9 내지 60, 9 내지 48, 9 내지 36, 또는 9 내지 24개의 서브단위; 10 내지 72, 10 내지 60, 10 내지 48, 10 내지 36, 또는 10 내지 24개의 서브단위; 11 내지 72, 11 내지 60, 11 내지 48, 11 내지 36, 또는 11 내지 24개의 서브단위; 12 내지 72, 12 내지 60, 12 내지 48, 12 내지 36, 또는 12 내지 24개의 서브단위; 13 내지 72, 13 내지 60, 13 내지 48, 13 내지 36, 또는 13 내지 24개의 서브단위; 14 내지 72, 14 내지 60, 14 내지 48, 14 내지 36, 또는 14 내지 24개의 서브단위; 15 내지 72, 15 내지 60, 15 내지 48, 15 내지 36, 또는 15 내지 24개의 서브단위; 16 내지 72, 16 내지 60, 16 내지 48, 16 내지 36, 또는 16 내지 24개의 서브단위; 17 내지 72, 17 내지 60, 17 내지 48, 17 내지 36, 또는 17 내지 24개의 서브단위; 18 내지 72, 18 내지 60, 18 내지 48, 18 내지 36, 또는 18 내지 24개의 서브단위; 19 내지 72, 19 내지 60, 19 내지 48, 19 내지 36, 또는 19 내지 24개의 서브단위; 20 내지 72, 20 내지 60, 20 내지 48, 20 내지 36, 또는 20 내지 24개의 서브단위; 21 내지 72, 21 내지 60, 21 내지 48, 21 내지 36, 또는 21 내지 24개의 서브단위; 22 내지 72, 22 내지 60, 22 내지 48, 22 내지 36, 또는 22 내지 24개의 서브단위; 23 내지 72, 23 내지 60, 23 내지 48, 23 내지 36, 또는 23 내지 24개의 서브단위; 또는 24 내지 72, 24 내지 60, 24 내지 48, 24 내지 36개의 서브단위를 갖는 하나 이상의 선형 PEG 쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 적어도 2개의 서브단위, 적어도 3개의 서브단위, 적어도 4개의 서브단위, 적어도 5개의 서브단위, 적어도 6개의 서브단위, 적어도 7개의 서브단위, 적어도 8개의 서브단위, 적어도 9개의 서브단위, 적어도 10개의 서브단위, 적어도 11개의 서브단위, 적어도 12개의 서브단위, 적어도 13개의 서브단위, 적어도 14개의 서브단위, 적어도 15개의 서브단위, 적어도 16개의 서브단위, 적어도 17개의 서브단위, 적어도 18개의 서브단위, 적어도 19개의 서브단위, 적어도 20개의 서브단위, 적어도 21개의 서브단위, 적어도 22개의 서브단위, 적어도 23개의 서브단위, 또는 적어도 24개의 서브단위를 갖는 유도체화된 선형 단일 PEG 쇄이다.
일부 실시양태에서, PEG 단위는 6 내지 72, 6 내지 60, 6 내지 48, 6 내지 36, 또는 6 내지 24개의 서브단위; 7 내지 72, 7 내지 60, 7 내지 48, 7 내지 36, 또는 7 내지 24개의 서브단위; 8 내지 72, 8 내지 60, 8 내지 48, 8 내지 36, 또는 8 내지 24개의 서브단위; 9 내지 72, 9 내지 60, 9 내지 48, 9 내지 36, 또는 9 내지 24개의 서브단위; 10 내지 72, 10 내지 60, 10 내지 48, 10 내지 36, 또는 10 내지 24개의 서브단위; 11 내지 72, 11 내지 60, 11 내지 48, 11 내지 36, 또는 11 내지 24개의 서브단위; 12 내지 72, 12 내지 60, 12 내지 48, 12 내지 36, 또는 12 내지 24개의 서브단위; 13 내지 72, 13 내지 60, 13 내지 48, 13 내지 36, 또는 13 내지 24개의 서브단위; 14 내지 72, 14 내지 60, 14 내지 48, 14 내지 36, 또는 14 내지 24개의 서브단위; 15 내지 72, 15 내지 60, 15 내지 48, 15 내지 36, 또는 15 내지 24개의 서브단위; 16 내지 72, 16 내지 60, 16 내지 48, 16 내지 36, 또는 16 내지 24개의 서브단위; 17 내지 72, 17 내지 60, 17 내지 48, 17 내지 36, 또는 17 내지 24개의 서브단위; 18 내지 72, 18 내지 60, 18 내지 48, 18 내지 36, 또는 18 내지 24개의 서브단위; 19 내지 72, 19 내지 60, 19 내지 48, 19 내지 36, 또는 19 내지 24개의 서브단위; 20 내지 72, 20 내지 60, 20 내지 48, 20 내지 36, 또는 20 내지 24개의 서브단위; 21 내지 72, 21 내지 60, 21 내지 48, 21 내지 36, 또는 21 내지 24개의 서브단위; 22 내지 72, 22 내지 60, 22 내지 48, 22 내지 36, 또는 22 내지 24개의 서브단위; 23 내지 72, 23 내지 60, 23 내지 48, 23 내지 36, 또는 23 내지 24개의 서브단위; 또는 24 내지 72, 24 내지 60, 24 내지 48, 24 내지 36개의 서브단위를 갖는 유도체화된 선형 단일 PEG 쇄이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 접합체, 스캐폴드, 및 방법에 적합한 친수성 기의 예는, 예컨대 문헌(US 8,367,065 column 13; US 8524696 column 6; WO2015/057699 및 WO 2014/062697, 이들 각각의 내용은 전체가 참조로 본원에 포함됨)에서 찾을 수 있다.
항체
본원에 사용된 용어 "항체"는 특정 항원을 인식하고 결합할 수 있는 면역계에 의해 생성되는 단백질을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 항체는 당단백질이다. 일부 실시양태에서, 항체는, 예컨대 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 낙타류 단일 도메인 항체, 세포내 항체("인트라바디"), 재조합 항체, 항-이디오타입 항체, 도메인 항체, 선형 항체, 다중특이적 항체, 항체 단편(예컨대, Fv, Fab, F(ab)2, F(ab)3, Fab', Fab'-SH, F(ab')2), 단일 쇄 가변 단편 항체(scFv), 탠덤/비스-scFv, Fc, pFc', scFvFc (또는 scFv-Fc), 디술파이드 Fv(dsfv), 이중특이적 항체(bc-scFv), 예컨대 BiTE 항체; 낙타류 항체, 재표면화 항체, 인간화 항체, 완전 인간 항체, 단일 도메인 항체(sdAb, NANOBODY®로도 공지됨), 키메라 항체, 적어도 하나의 인간 불변 영역을 포함하는 키메라 항체, 이중 친화성 항체, 예컨대 이중 친화성 재표적화 단백질(DARTTM), 미니바디, 디아바디, 트리아바디 또는 트리바디, 테트라바디 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 2가(divalent 또는 bivalent) 단일 쇄 가변 단편(di-scFv, bi-scFv), 및 다가 항체를 포함한 다양한 형태로 존재할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항체 단편"은 이의 표적, 즉 항원 결합 영역에 결합하는 면역글로불린 분자의 가변 영역의 적어도 일부를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "항체"는 달리 명시되지 않는 한 전장 항체 및 항체 단편 둘 다를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 상기 용어는 유전적으로 조작된 항체, 항체의 유도체, 항체의 단편을 포함하고, 당업계에 공지된 방법에 의해 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 적어도 하나의 화학적 반응성 기를 포함하도록 조작될 수 있다.
일부 실시양태에서, 코어-N-아세틸글루코사민 치환기(코어-GlcNAc 모이어티)을 포함하는 당단백질은 코어-N-아세틸글루코사민 치환기(코어-GlcNAc 모이어티)을 포함하는 항체이다. 일부 실시양태에서, 당단백질은 모노클로날 항체(mAb) IgA, IgD, IgE, IgG, 또는 IgM 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG1 항체이다. 일부 실시양태에서, 상기 항체가 전체 항체인 경우, 항체는 각각의 중쇄 상에 하나 이상의(예컨대, 하나의) 코어-GlcNAc 모이어티를 포함하고, 상기 코어-GlcNAc 모이어티는 임의로 푸코실화된다. 일부 실시양태에서, 전체 항체는 2개 이상의(예컨대, 2개의) 임의로 푸코실화된 코어-GlcNAc 모이어티를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체가 단일 쇄 항체 또는 항체 단편, 예컨대 Fab 또는 Fc 단편인 경우, 항체는 임의로 푸코실화된 하나 이상의 코어-GlcNAc 모이어티를 포함한다. 코어-GlcNAc 모이어티를 포함하는 항체의 일부 실시양태에서, 상기 코어-GlcNAc 모이어티는 상기 치환기가 항체의 항원 결합 부위를 방해하지 않는다면 항체 상의 임의의 위치에 위치될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 코어-GlcNAc 모이어티는 항체의 천연 N-글리코실화 부위에 존재한다. 일부 실시양태에서, 항체는 적어도 하나의 화학적 반응성 기 또는 화학적 반응성 아미노산 모이어티 또는 측쇄를 포함하거나 이를 포함하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 항체는 접합체를 특정 조직, 세포, 또는 세포 내의 위치로 지시할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 배양물 또는 전체 유기체, 또는 둘 모두에서 접합체를 지시할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 효과적인 특이성, 친화성 및 결합력으로 결합하는 표적 세포(들)의 세포 표면 상에 존재하는 리간드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 접합체를 간 이외의 조직으로 지시한다. 일부 실시양태에서, 항체는 접합체를 간, 신장, 폐 또는 췌장과 같은 특정 조직으로 지시한다. 일부 실시양태에서, 항체는 접합체를 표적 세포(예컨대, 암세포), 세포(예컨대, 암 세포) 상에서 발현된 수용체, 기질 조직, 또는 암과 관련된 단백질(예컨대, 종양 항원)로 지시한다. 일부 실시양태에서, 종양 혈관계를 포함하는 세포가 표적화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 접합체를 특정 유형의 세포로 지시, 예컨대 쿠퍼(Kupffer) 세포와 대조적으로 간에서 간세포에 특이적인 표적화를 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 접합체를 망상 내피 또는 림프계의 세포, 또는 전문적인 식세포, 예컨대 대식세포 또는 호산구로 지시할 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합체 자체는 특정 표적화에 대한 필요 없이 효과적인 전달 시스템이다.
일부 실시양태에서, 항체는 접합체를 세포 내의 위치(예컨대, 핵, 세포질, 또는 엔도솜)로 지시할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 수용체에 대한 세포 결합, 또는 핵으로의 세포질 수송 및 엔도솜 또는 다른 세포내 소포로부터의 핵 진입 또는 방출을 향상시킨다.
일부 실시양태에서, 접합체는 Her-2 또는 NaPi2b 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 접합체에 적합한 Her-2 항체는 트라스투주맙이다. 일부 실시양태에서, 접합체에 적합한 Her-2 항체는 WO 2015/195917 및 PCT/US2018/019873에 기재된 것들을 포함하며, 이들 각각은 전체가 참조로 본원에 포함된다.
NaPi2b 항체
일부 실시양태에서, 접합에 적합한 NaPi2b 항체는 SLC34A2의 세포외 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 나트륨 의존성 포스페이트 수송 단백질 2B로도 공지된 NaPi2b를 특이적으로 인식하는 NaPi2b 표적화된 모노클로날 항체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 접합체에 사용된 NaPi2b 항체는 NaPi2b의 적어도 하나의 생물학적 활성을 조절, 예컨대 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 간섭할 수 있고 이에 유용하다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 또한 가용성 NaPi2b에 결합하는 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, NaPi2b 항체는 인간 NaPi2b의 세포외 도메인(ECD) 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 이들 항체는 전체적으로 본원에서 "NaPi2b" 항체로 지칭된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 NaPi2b 항체-약물 접합체는 ≤1　μM(예컨대, ≤ 100 nM; ≤ 10 nM; 및 ≤ 1 nM)의 평형 해리 상수(Kd 또는 KD)로 NaPi2b 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체-약물 접합체에 사용된 NaPi2b 항체는 대략 ≤ 1 nM 내지 약 1 pM 범위의 Kd를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 NaPi2b 항체-약물 접합체는 NaPi2b의 기능적 활성을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 방해하는 역할을 하는 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, NaPi2b의 기능적 활성은, 예컨대 세포횡단 무기 포스페이트(Pi) 흡수에 참여함으로써 신체의 포스페이트 항상성의 유지에 기여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, NaPi2b 항체는 세포횡단 무기 포스페이트 흡수를 부분적으로 또는 완전히 조절, 차단, 억제, 길항, 중화, 또는 방해함으로써 NaPi2b 기능적 활성을 완전히 또는 부분적으로 억제한다.
일부 실시양태에서, NaPi2b 항체의 존재 하에 NaPi2b 기능적 활성의 수준이 본원에 기재된 NaPi2b 항체와의 결합의 부재 하에서의 NaPi2b 기능적 활성의 수준과 비교하여 적어도 95%, 예컨대 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 감소될 때, NaPi2b 항체는 NaPi2b 기능적 활성을 완전히 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화, 또는 방해하는 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, NaPi2b 항체는 NaPi2b 항체의 존재 하에 NaPi2b 활성의 수준이 본원에 기재된 NaPi2b 항체와의 결합의 부재 하에서의 NaPi2b 활성의 수준과 비교하여 95% 미만, 예컨대 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 85% 또는 90%로 감소될 때 NaPi2b 기능적 활성을 부분적으로 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화, 또는 방해하는 것으로 간주된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 예시적인 항체는 XMT-1535 항체를 포함한다. 이들 항체는 인간 NaPi2b에 대한 특이성을 나타내며 NaPi2b 활성을 억제하는 것으로 나타났다.
NaPi2b 인간 또는 인간화 모노클로날 항체인 XMT-1535는 하기 표 1에 제시된 아미노산 및 상응하는 핵산 서열에 나타난 바와 같이 중쇄(HC), 중쇄 가변 영역(VH), 경쇄(LC), 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 각각의 항체에 대한 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역은 하기 아미노산 서열에서 음영 처리되어 있다. 중쇄 및 경쇄의 상보성 결정 영역(CDR)은 하기에 제시된 아미노산 서열에 밑줄이 그어져 있다. XMT-1535 항체에 대한 상보성 결정 영역(CDR)을 포괄하는 아미노산은 문헌(Kabat, E.A., et al., Sequences of Protein of immunological interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office (1991))에 의해 정의되는 바와 같고, 미국 특허 8,603,474에 개시되어 있다.
Figure pct00127
본원에 개시된 항체는 인간 NaPi2b의 세포외 도메인(ECD) 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 당업자는 과도한 실험 없이 본원에 개시된 모노클로날 항체가 천연 결합 파트너 또는 NaPi2b와 관련된 것으로 공지된 다른 분자에 결합하는 것을 모노클로날 항체가 방지하는지를 확인함으로써 모노클로날 항체가 본원에 개시된 모노클로날 항체(예컨대, XMT-1535, 10H1.11.4B)와 동일한 특이성을 갖는지를 결정할 수 있음을 인식할 것이다. 본원에 개시된 모노클로날 항체에 의한 결합 감소에 의해 나타나는 바와 같이, 시험되는 모노클로날 항체가 본원에 개시된 모노클로날 항체와 경쟁하는 경우, 2개의 모노클로날 항체는 동일하거나 밀접하게 관련된 에피토프에 결합한다.
모노클로날 항체가 본원에 개시된 모노클로날 항체의 특이성을 갖는지를 결정하기 위한 대안적인 방법은 본원에 개시된 모노클로날 항체를 가용성 NaPi2b(일반적으로 이와 반응성임)와 함께 사전 인큐베이션한 다음 시험되는 모노클로날 항체를 첨가하여 시험되는 모노클로날 항체가 NaPi2b에 결합하는 능력이 억제되는 지를 결정하는 것이다. 시험되는 모노클로날 항체가 억제된다면, 아마도 이것은 본원에 개시된 모노클로날 항체와 동일하거나 기능적으로 동등한 에피토프 특이성을 갖는다.
본원에 개시된 모노클로날 항체의 스크리닝은 또한, 예컨대 NaPi2b 매개된 활성을 측정하고 시험 모노클로날 항체가 NaPi2b 활성을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 방해할 수 있는지를 결정함으로써 수행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 3으로부터 선택되는 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4로부터 선택되는 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 2의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 3의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열번호 4의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 1의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 2의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 5의 CDRH1 아미노산 서열, 서열번호 6의 CDRH2 아미노산 서열, 서열번호 7의 CDRH3 아미노산 서열, 서열번호 8의 CDRL1 아미노산 서열, 서열번호 9의 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열번호 10의 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1; 서열번호 6의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRH2; 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRH3; 서열번호 8의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1; 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRL2; 및 서열번호 10의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 가변 도메인 서열에 하나 이상의 보존적 아미노산 치환, 예컨대 가변 도메인 서열에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 보존적 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 보존적 아미노산 치환은 CDR 영역에 있으며, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 보존적 치환이 모든 CDR에 걸쳐 누적적으로 이루어지며, 일부 특정 실시양태에서 최대 1, 2, 3, 또는 4개의 보존적 아미노산 치환이 각각의 CDR 서열, 예컨대 서열번호 5-10에 존재할 수 있다.
일부 실시양태에서, 당업자는 과도한 실험 없이 모노클로날 항체 XMT-1535가 천연 결합 파트너 또는 NaPi2b와 관련된 것으로 공지된 다른 분자에 결합하는 것을 모노클로날 항체가 방지하는지를 확인함으로써 모노클로날 항체가 모노클로날 항체 XMT-1535와 동일한 특이성을 갖는지를 결정할 수 있음을 인식할 것이다. 본원에 개시된 모노클로날 항체에 의한 결합 감소에 의해 나타나는 바와 같이, 시험되는 모노클로날 항체가 본원에 개시된 모노클로날 항체와 경쟁하는 경우, 2개의 모노클로날 항체는 동일하거나 밀접하게 관련된 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 모노클로날 항체가 본원에 개시된 모노클로날 항체의 특이성을 갖는지를 결정하기 위한 대안적인 방법은 본원에 개시된 모노클로날 항체를 가용성 NaPi2b(일반적으로 이와 반응성임)와 함께 사전 인큐베이션한 다음 시험되는 모노클로날 항체를 첨가하여 시험되는 모노클로날 항체가 NaPi2b에 결합하는 능력이 억제되는 지를 결정하는 것이다. 일부 실시양태에서, 시험되는 모노클로날 항체가 억제된다면, 이것은 본원에 개시된 모노클로날 항체와 동일하거나 기능적으로 동등한 에피토프 특이성을 갖는다.
본원에 개시된 모노클로날 항체의 스크리닝은 또한, 예컨대 NaPi2b 매개된 활성을 측정하고 시험 모노클로날 항체가 NaPi2b 활성을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 방해할 수 있는지를 결정함으로써 수행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 접합에 적합한 NaPi2b 항체는 널리 공지된 기술, 예컨대 WO 2009/097128, WO 2017/160754 및 US 16/136,706에 의해 생성 및 정제될 수 있으며, 이들 각각은 전체가 참조로 본원에 포함된다.
HER2 항체
일부 실시양태에서, 접합에 적합한 HER2 항체는 가용성 형태의, 또는 막에 결합된(즉, 세포 표면에 발현되는 경우) 인간 HER2에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 HER2에 결합하고 인간화되거나 완전한 인간인 모노클로날 항체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 HER2에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체를 제공한다. 이들 항체는 전체적으로 본원에서 "HER2" 항체로 지칭된다.
일부 실시양태에서, 접합에 적합한 HER2 항체는 ≤ 1 μM(예컨대, ≤ 100 nM; ≤ 10 nM; ≤ 1 nM)의 평형 해리 상수(Kd 또는 KD)로 HER2 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 HER2에 결합하고 인간화되거나 완전한 인간인 모노클로날 항체를 제공한다. 예컨대, 본원에서 제공되는 HER2 항체는 대략 ≤ 1 nM 내지 약 1 pM 범위의 Kd를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 HER2 항체는 HER2의 기능적 활성을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화, 또는 방해하는 역할을 한다. 일부 실시양태에서, HER2의 기능적 활성은, 예컨대 PI3K-Akt 경로 활성의 조절을 포함한다. 일부 실시양태에서, HER2 항체는 PI3K-Akt 경로 활성을 부분적으로 또는 완전히 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화, 또는 방해함으로써 HER2 기능적 활성을 완전히 또는 부분적으로 억제한다. PI3K-Akt 경로 활성은 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편의 존재 및 부재 하에 포스포릴화된 Akt의 수준을 검출하는 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는 PI3K-Akt 경로 활성을 검출하기 위한 임의의 당업계에서 인정된 방법을 이용하여 평가된다.
일부 실시양태에서, HER2 항체의 존재 하에 HER2 기능적 활성의 수준이 본원에 기재된 HER2 항체와의 결합의 부재 하에서의 HER2 기능적 활성의 수준과 비교하여 적어도 80%, 예컨대 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 감소될 때, HER2 항체는 HER2 기능적 활성을 완전히 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화, 또는 방해하는 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, HER2 항체는 HER2 항체의 존재 하에 HER2 활성의 수준이 본원에 기재된 HER2 항체와의 결합의 부재 하에서의 HER2 활성의 수준과 비교하여 95% 미만, 예컨대 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 85% 또는 90%로 감소될 때 HER2 기능적 활성을 부분적으로 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화, 또는 방해하는 것으로 간주된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 예시적인 항체는 XMT-1519 항체를 포함한다. 이 항체는 인간 HER2에 대해 특이성을 나타내며 시험관내에서 HER2의 기능적 활성을 억제하는 것으로 나타났다.
HER-2 모노클로날 항체 XMT-1519는 하기 표 2에 제시된 아미노산 및 상응하는 핵산 서열에 나타난 바와 같이 중쇄(HC), 중쇄 가변 영역(VH), 경쇄(LC), 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 각각의 항체에 대한 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역은 하기 아미노산 서열에서 음영 처리되어 있다. 중쇄 및 경쇄의 상보성 결정 영역(CDR)은 하기에 제시된 아미노산 서열에 밑줄이 그어져 있다. 상보성 결정 영역(CDR)을 포괄하는 아미노산은 문헌(Kabat, E.A., et al., Sequences of Protein of immunological interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office (1991))에 의해 정의되는 바와 같다.
Figure pct00128
본원에 개시된 항체 및 항원 결합 단편은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 전장 인간 HER2 수용체 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다.
본원에 개시된 항체 및 항원 결합 단편은 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인(ECD) 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 당업계에 기재된 항체와 상이한 HER2 결합 특성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 HER2에 대한 결합으로부터 서로 교차-차단한다는 점에서(트라스투주맙, 페르투주맙, Fab37, 또는 chA21은 아님) HER2의 상이한 에피토프에 결합한다. 또한, 공지된 항체와 달리, 본원에 개시된 항체는 세포 증식을 촉진하지 않고 HER2 발현 세포 내로 효율적으로 내재화할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 신규한 에피토프에 결합하고/하거나 치료 용도에 대해 다른 유리한 특성을 갖는 완전한 인간 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 예시적인 특성은 인간 HER2를 높은 수준 또는 낮은 수준으로 발현하는 암 세포에 대한 유리한 결합 특성, 재조합 인간 및 시노몰구스 원숭이 HER2에 대한 특이적 결합, HER2에 대한 결합 시 효율적인 내재화, 항체 약물 접합체(ADC)로 투여될 때 높거나 낮은 수준의 HER2를 발현하는 암세포를 사멸하는 높은 능력, HER2 발현 암세포의 증식에 대한 실질적인 효능 효과 없음, 및/또는 HER2 발현 세포의 효과적인 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC) 매개된 사멸 뿐만 아니라 전술된 특성의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 잔기 452 내지 531, 서열번호 16의 잔기 474 내지 553 또는 서열번호 31의 잔기 452 내지 531을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 인간 HER2 수용체의 도메인 IV의 N-말단의 적어도 일부에 결합하지만 인간 HER2 수용체의 에피토프 4D5에 결합하는 항체와는 교차 경쟁하지 않는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 트라스투주맙이 인간 HER2 수용체의 에피토프 4D5에 결합하는 것으로 공지되어 있기 때문에, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체에 대한 결합에 대해 트라스투주맙과 교차 경쟁하지 않는다. 본원에 사용된 바와 같이, 인간 HER2 수용체의 에피토프 4D5라는 용어는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 529 내지 627, 서열번호 16의 잔기 551 내지 649 또는 서열번호 31의 잔기 529 내지 627을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 시노몰구스 원숭이 HER2 수용체 상의 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 잔기 452 내지 500, 서열번호 16의 잔기 474 내지 522 또는 서열번호 31의 잔기 452 내지 500을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 E521, L525 및 R530로부터 선택되는 아미노산 잔기 중 적어도 하나, 예컨대 서열번호 16의 잔기 543, 547, 및 552, 및 서열번호 31의 잔기 521, 525, 및 530을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 E521, L525 및 R530으로부터 선택되는 적어도 2개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 적어도 아미노산 잔기 E521, L525 및 R530을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 임의의 것 또는 전부는 또한 시노몰구스 원숭이 HER2 수용체 상의 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 또한 인간 HER2 수용체의 도메인 III의 적어도 일부 및 도메인 IV의 N-말단의 적어도 일부에 결합하지만 Fab37 모노클로날 항체 또는 인간 HER2 수용체의 에피토프 4D5에 결합하는 항체와 교차 경쟁하지 않는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체에 대한 결합에 대해 Fab37 모노클로날 항체 및/또는 트라스투주맙과 교차 경쟁하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 시노몰구스 원숭이 HER2 수용체 상의 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 잔기 520 내지 531, 서열번호 16의 잔기 542 내지 553 또는 서열번호 31의 잔기 520 내지 531을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 잔기 C453, H456, H473, N476, R495, G496, H497, 및 W499로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 잔기, 예컨대 서열번호 16의 잔기 475, 478, 495, 498, 517, 518, 519, 및 521 또는 서열번호 31의 잔기 453, 456, 473, 476, 495, 496, 497 및 499를 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H456, H473, N476, R495, G496, H497, 및 W499로부터 선택되는 적어도 2개의 아미노산 잔기, 적어도 3개의 아미노산 잔기, 적어도 4개의 아미노산 잔기, 적어도 5개의 아미노산 잔기, 또는 적어도 6개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 적어도 아미노산 잔기 C453, H456, H473, N476, R495, G496, H497, 및 W499를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 임의의 것 또는 전부는 또한 시노몰구스 원숭이 HER2 수용체 상의 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 잔기 C453, H473, N476, R495, H497, 및 W499로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 잔기, 예컨대 서열번호 16의 잔기 475, 495, 498, 517, 519, 및 521 또는 서열번호 31의 잔기 453, 473, 476, 495, 497 및 499를 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H473, N476, R495, H497, 및 W499로부터 선택되는 적어도 2개의 아미노산 잔기, 적어도 3개의 아미노산 잔기, 적어도 4개의 아미노산 잔기, 적어도 5개의 아미노산 잔기, 또는 적어도 6개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 적어도 아미노산 잔기 C453, H473, N476, R495, H497, 및 W499를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 임의의 것 또는 전부는 또한 시노몰구스 원숭이 HER2 수용체 상의 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 이들 항체는 인간 HER2에 대한 특이성을 나타내며, 이들은 포스포릴화된 AKT의 수준을 감소시켜 세포 생존을 촉진하는 PI3K-Akt 경로를 조절, 예컨대 차단, 억제, 감소, 길항, 중화, 또는 방해하는 것으로 나타났다. 일부 실시양태에서, 이들 항체는 트라스투주맙 또는 이의 바이오시밀러가 내재화하는 속도와 동일하거나 실질적으로 유사한 속도로 HER2 발현 세포의 세포 표면으로부터 내재화한다. 일부 실시양태에서, 이들 항체 및 항원 결합 단편은 4시간까지 내재화되는 시간 0에 결합된 총 표면의 약 50%인 내재화 속도를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 17로부터 선택되는 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 24로부터 선택되는 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 19의 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 26의 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열번호 24의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 19의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 26의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 서열번호 20의 CDRH1 아미노산 서열, 서열번호 21의 CDRH2 아미노산 서열, 서열번호 22의 CDRH3 아미노산 서열, 서열번호 27의 CDRL1 아미노산 서열, 서열번호 28의 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열번호 29의 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 가변 도메인 서열에 하나 이상의 보존적 아미노산 치환, 예컨대 가변 도메인 서열에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 보존적 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 보존적 아미노산 치환은 CDR 영역에 있으며, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개 또는 그 초과의 보존적 치환이 모든 CDR에 걸쳐 누적적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 최대 1, 2, 3, 또는 4개의 보존적 아미노산 치환이 각각의 CDR 서열, 예컨대 서열번호 20-22 및 27-29에 존재할 수 있다.
당업자는 과도한 실험 없이 모노클로날 항체 XMT-1519가 천연 결합 파트너 또는 HER2와 관련된 것으로 공지된 다른 분자에 결합하는 것을 모노클로날 항체가 방지하는지를 확인함으로써 모노클로날 항체가 본원에 개시된 모노클로날 항체 XMT-1519와 동일한 특이성을 갖는지를 결정할 수 있음을 인식할 것이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 모노클로날 항체에 의한 결합 감소에 의해 나타나는 바와 같이, 시험되는 모노클로날 항체가 본원에 개시된 모노클로날 항체와 경쟁하는 경우, 2개의 모노클로날 항체는 동일하거나 밀접하게 관련된 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 모노클로날 항체가 본원에 개시된 모노클로날 항체의 특이성을 갖는지를 결정하기 위한 대안적인 방법은 본원에 개시된 모노클로날 항체를 가용성 HER2(일반적으로 이와 반응성임)와 함께 사전 인큐베이션한 다음 시험되는 모노클로날 항체를 첨가하여 시험되는 모노클로날 항체가 HER2에 결합하는 능력이 억제되는 지를 결정하는 것이다. 시험되는 모노클로날 항체가 억제된다면, 아마도 이것은 본원에 개시된 모노클로날 항체와 동일하거나 기능적으로 동등한 에피토프 특이성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 모노클로날 항체의 스크리닝은 또한, 예컨대 HER2 매개된 PI3K-Akt 경로 활성을 측정하고 시험 모노클로날 항체가 PI3K-Akt 경로 활성을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 방해할 수 있는지를 결정함으로써 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합에 적합한 HER2 항체는 널리 공지된 기술, 예컨대 WO 2015/195917　및 PCT/US2018/019873(이들 각각은 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 의해 생성 및 정제될 수 있다.
변형된 항체
일부 실시양태에서, 항체는 변형된 항체이다.
변형된 항체의 일부 실시양태에서, *는 변형된 항체의 나머지 부분에 대한 직접적 또는 간접적 부착을 나타낸다. 일부 실시양태에서, S"는 슈가 또는 유도체화된 슈가이다. 일부 실시양태에서, A"는 링커-약물 모이어티의 작용기와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기이다.
일부 실시양태에서, 접합 전에 변형된 항체는
Figure pct00129
의 슈가 유도체 모이어티를 포함한다.
일부 실시양태에서, 변형된 항체는 영역 290-305(예컨대, N297에서)에 아스파라긴 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 슈가 유도체 모이어티는 (예컨대, N297에서) 아스파라긴 기에 직접 또는 간접적으로 부착된다.
일부 실시양태에서, 접합 전에 변형된 항체는 변형된 GlcNAc 모이어티,
Figure pct00130
를 포함하고, GlcNAc는 N-아세틸글루코사민이다.
일부 실시양태에서, 변형된 GlcNAc 모이어티는 GlcNAc의 C1 위치를 통해 변형된 항체의 나머지 부분에 연결된다. 일부 실시양태에서, 변형된 GlcNAc 모이어티는 푸코스를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 변형된 GlcNAc 모이어티는 (예컨대, N297에서) 아스파라긴 기에 직접 또는 간접적으로 부착된다.
일부 실시양태에서, 변형된 항체는 A"와 링커-약물 모이어티의 작용기 사이에 형성된 공유 결합을 통해 링커-약물 모이어티에 접합된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 변형된 항체는
(a) 항체 및 코어-GlcNAc 모이어티를 포함하는 당단백질(예컨대, 항체 글리칸)을 엔도글리코시다제와 접촉시켜 항체 및 말단-GlcNAc 모이어티(임의로 말단-GlcNAc 모이어티는 푸코스를 추가로 포함함)를 포함하는 중간체 항체를 형성하는 단계; 및
(b) 중간체 항체를 글리코실트랜스퍼라제의 존재 하에
Figure pct00131
의 구조를 갖는 화합물과 접촉시켜 항체 및 변형된 GlcNAc 모이어티,
Figure pct00132
(임의로 변형된 GlcNAc 모이어티는 GlcNAc의 C1 위치에서 변형된 항체의 나머지 부분에 부착됨)를 포함하는 변형된 항체를 형성하는 단계
를 포함하는 공정에 의해 수득되며, 여기에서
GlcNAc는 N-아세틸글루코사민이고;
S"는 슈가 또는 유도체화된 슈가이고;
A"는 아지도, 케토, 또는 알키닐이고;
P"는 우리딘 디포스페이트(UDP), 구아노신 디포스페이트(GDP) 또는 시티딘 디포스페이트(CDP)이다.
일부 실시양태에서, 단계 (a) 및 (b)는 순차적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 단계 (a) 및 (b)는 동시에 수행된다.
일부 실시양태에서, 항체 글리칸은 당형태 G0, G1, G2, G0F, GIF, G2F, 및 M5의 혼합물을 포함한다(예컨대, 도 1에 나타낸 당형태).
일부 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체(mAb)이다.
일부 실시양태에서, 항체는 IgA, IgD, IgE, IgG, 또는 IgM 항체이다.
일부 실시양태에서, 항체는 IgG 항체, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG1 항체이다.
일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체이고, 항체 글리칸은 하나 이상의 코어-GlcNAc 모이어티를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체이고, 항체 글리칸은 항체의 각각의 중쇄에 연결된 하나 이상의 코어-GlcNAc 모이어티를 포함한다.
일부 실시양태에서, 코어-GlcNAc 모이어티는 푸코스를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체이고, 항체 글리칸은 전장 항체에 연결된 2개 이상의 코어-GlcNAc 모이어티를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체이고, 항체 글리칸은 전장 항체에 연결된 2개의 코어-GlcNAc 모이어티를 포함한다.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 코어-GlcNAc 모이어티 중 적어도 하나는 푸코스를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 코어-GlcNAc 모이어티 각각은 푸코스를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 단일 쇄 항체 또는 항체 단편(예컨대, Fab 또는 Fc 단편)이고, 항체 글리칸은 항체에 연결된 하나 이상의 코어-GlcNAc 모이어티(임의로 푸코스를 추가로 포함함)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 코어-GlcNAc 모이어티는 항체의 위치에 연결되며, 코어-GlcNAc 모이어티는 항체의 항원 결합 부위를 실질적으로 방해하지 않는다.
일부 실시양태에서, 코어-GlcNAc 모이어티는 항체의 Fc 단편에 연결된다. 일부 실시양태에서, 코어-GlcNAc 모이어티는 CH 도메인에 연결된다. 일부 실시양태에서, 코어-GlcNAc 모이어티는 항체의 Fab 또는 Fc 단편에 연결된다. 일부 실시양태에서, 코어-GlcNAc 모이어티는 항체의 아스파라긴 아미노산 측쇄에 있는 아미드 질소 원자에 대한 N-글리코시드 결합을 통해 항체에 연결된다. 일부 실시양태에서, 코어-GlcNAc 모이어티는 항체의 천연 N-글리코실화 부위에 연결된다.
일부 실시양태에서, 항체는 IgG이고, 코어-GlcNAc 모이어티는 IgG의 천연 N-글리코실화 부위에 연결된다.
일부 실시양태에서, 항체는 IgG 항체이고, 코어-GlcNAc 모이어티는 IgG의 천연 N-글리코실화 부위(예컨대, IgG의 N297 N-글리코실화 부위)에 연결된다. 일부 실시양태에서, N297 N-글리코실화 부위는 영역 290-305의 아스파라긴(예컨대, N297)에서 IgG 항체의 중쇄의 보존된 Fc 영역에 존재한다.
일부 실시양태에서, 중간체 항체는 하기 화학식 (XXII)이다:
Figure pct00133
상기 식에서,
Ab는 항체이고; GlcNAc는 N-아세틸글루코사민이고; Fuc는 푸코스이고; u3은 0 또는 1이고; u4는 1에서 16 범위의 정수이다.
일부 실시양태에서, u4는 1 내지 10 범위의 정수이다. 일부 실시양태에서, u4는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다. 일부 실시양태에서, u4는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 일부 실시양태에서, u4는 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 실시양태에서, u4는 2 또는 4이다. 일부 실시양태에서, u4는 1 또는 2이다. 일부 실시양태에서, u4는 1이다. 일부 실시양태에서, u4는 2이다.
일부 실시양태에서, 항체는 하나의 코어-GlcNAc 모이어티를 포함한다(예컨대, u4는 1임). 일부 실시양태에서, 항체는 2개의 코어-GlcNAc 모이어티를 포함한다(예컨대, u4는 2임).
일부 실시양태에서, 변형된 항체는 반응식 1에 개략된 공정에 의해 수득된다. 하기에 나타난 바와 같이, 하나의 말단-GlcNAc 모이어티를 포함하는 화학식 (XXIII)의 중간체 항체를 글리코실트랜스퍼라제의 존재 하에서
Figure pct00134
의 구조를 갖는 화합물과 접촉시켜 하나의 변형된 GlcNAc 모이어티를 포함하는 변형된 항체(예컨대, 화학식 (XXIIIa)의 변형된 항체)를 제공한다.
일부 실시양태에서, 변형된 항체는 2개의 말단-GlcNAc 모이어티를 포함하는 화학식 (XXIV)의 중간체 항체를 글리코실트랜스퍼라제의 존재 하에서
Figure pct00135
의 구조를 갖는 화합물과 접촉시켜 수득되며, 2개의 변형된 GlcNAc 모이어티를 포함하는 변형된 항체(예컨대, 화학식 (XXIVa)의 변형된 항체)를 제공한다.
Figure pct00136
상기 식에서, u3, Ab, S", A", 및 P"는 본원에서 정의되는 바와 같다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 방법에서 변형될 항체 글리칸은 글리칸을 포함하고, 상기 글리칸은 코어-GlcNAc 모이어티, 즉 글리칸의 비환원 말단에 존재하는 GlcNAc 모이어티를 포함한다. 일부 실시양태에서, 글리칸은 하나 이상의 당류 모이어티를 포함하고 선형 또는 분지형일 수 있다.
일부 실시양태에서, 엔도글리코시다제와 반응할 때, 말단 GlcNAc 모이어티를 포함하는 중간체 항체(예컨대, 화학식 (XXIII) 또는 (XXIV)의 중간체 항체)가 형성될 수 있다.
일부 실시양태에서, 공정(탈글리코실화 또는 트리밍)의 단계 (a)는 도 2에 도시된 바와 같고, 항체 당형태 G2F, GIF, G0F, G2, G1, G0, 및 M5의 혼합물(예컨대, 도 1 참조), 및 가능하게는 추가의 당형태(예컨대, 트리안테나 글리칸)는 임의로 푸코스를 포함하는 말단 GlcNAc 모이어티를 포함하는 중간체 항체로 전환된다(예컨대, u3은 0 또는 1임).
일부 실시양태에서, 엔도글리코시다제는 엔도글리코시다제 Endo S, Endo SH, Endo S2, Endo S49, Endo F1, Endo F2, Endo F3, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시양태에서, 엔도글리코시다제는 Endo S, Endo SH, Endo S2, Endo S49, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시양태에서, 엔도글리코시다제는 Endo S 또는 Endo SH, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서 엔도글리코시다제는 Endo SH이다.
일부 실시양태에서, 공정의 단계 (b)(변형된 항체의 형성)는 도 3에 도시된 바와 같고, 중간체 항체는 모노클로날 항체(mAb) 및 모노클로날 항체(mAb)의 각각의 중쇄 상의 말단 GlcNAc 모이어티(임의로 푸코스를 포함함(예컨대, u3은 0 또는 1임))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단계 (b)에서, 말단-GlcNAc 모이어티는 변형된 GlcNAc 모이어티로 전환된다. 일부 실시양태에서, 상기 전환은 글리코실트랜스퍼라제의 존재 하에 말단 GlcNAc 모이어티와
Figure pct00137
의 화합물의 반응을 통해 실행될 수 있다
일부 실시양태에서,
Figure pct00138
의 화합물은 GalNAz-UDP(예컨대, 4-AzGalNAc-UDP)이다. 일부 실시양태에서, 말단-GlcNAc 모이어티는 *-GlcNAc-GalNAz 또는 *-GlcNAc(Fuc)-GalNAz이고, *는 변형된 항체의 나머지 부분에 대한 부착을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 탈글리코실화/트리밍 단계 및 변형된 항체의 형성의 단계는 순차적으로 수행된다.
일부 실시양태에서, 탈글리코실화/트리밍 단계 및 변형된 항체의 형성의 단계는 동시에 수행된다.
일부 실시양태에서, 변형된 항체의 제조 공정은 적합한 완충 용액, 예컨대 완충 식염수(예컨대, 포스페이트 완충 염수, 트리스 완충 염수), 시트레이트, HEPES, 트리스 및 글리신 중에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 완충 용액은 포스페이트 완충 식염수(PBS) 또는 트리스 완충 식염수이다. 일부 실시양태에서, 완충 용액은 포스페이트 완충 식염수(PBS)이다.
일부 실시양태에서, 공정은 약 4 내지 약 50℃ 범위의 온도에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 공정은 약 10 내지 약 45℃ 범위의 온도에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 공정은 약 20 내지 약 40℃ 범위의 온도에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 공정은 약 30 내지 약 37℃ 범위의 온도에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 공정은 약 30℃의 온도에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 공정은 30℃의 온도에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 공정은 약 5 내지 약 9(예컨대, 약 5.5 내지 약 8.5, 약 6 내지 약 8, 또는 약 7 내지 약 8) 범위의 pH 값에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 공정은 약 7.4의 pH 값에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 변형된 항체의 제조 공정은 도 4에 도시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 변형된 항체의 제조 공정은
항체 및 항체의 부위 N297에 연결된 코어-GlcNAc 모이어티를 포함하는 당단백질(예컨대, 항체 글리칸)을 엔도글리코시다제 Endo SH와 접촉시켜 말단 GlcNAc 모이어티를 포함하는 중간체 항체를 형성하는 단계; 및
중간체 항체를 β-(1,4)-GalNAcT 효소의 존재 하에 4-AzGalNAc-UDP와 접촉시켜 변형된 GlcNAc 모이어티를 포함하는 변형된 항체를 형성하는 단계
를 포함하고, 단계 (a) 및 (b)는 동시에 수행된다.
일부 실시양태에서, 엔도글리코시다제는 내부 6xHis 태그를 포함하는 Gly-풍부 스페이서에 의해 연결된 2개의 엔도글리코시다제인 Endo S 및 Endo H 사이의 융합물인 Endo SH이며, 139 kDa의 전체 분자량을 형성한다.
일부 실시양태에서, β-(1,4)-GalNAcT 효소는 N-말단 6xHis 태그를 포함하고 45.7 kDa의 전체 분자량을 갖는다. 일부 실시양태에서, N-말단 6xHis 태그를 함유하는 β-(1,4)-GalNAcT 효소는 트리코풀시아 니(Trichopulsia ni)로부터 유래된다.
일부 실시양태에서, 공정은 약 7.4의 pH 값 및 약 30℃의 온도에서 PBS 완충액 중에서 수행된다.
엔도글리코시다제
엔도글리코시다제는 글리칸 구조에서 내부 글리코시드 결합을 절단하여 글리칸 구조를 리모델링하거나 트리밍할 수 있는 효소이다. 예컨대, 엔도글리코시다제는 보존된 글리칸 영역 내의 예측 가능한 위치에서 절단될 때 불균질 글리칸 집단의 쉬운 균질화에 사용될 수 있다. 엔도글리코시다제의 한 부류는 N,N'-디아세틸키토비오스 코어(문헌(Wong et al. Chem. Rev. 2011, 111, 4259, 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재됨)에서 1,4-글리코시드 결합을 가수분해시켜 단일 코어 N-연결된 GlcNAc 잔기를 남김으로써 당단백질로부터 N-글리칸을 제거하는 한 부류의 가수분해 효소인 엔도-β-N-아세틸글루코사미니다제(EC 3.2.1.96, 일반적으로 Endo S 또는 ENGase로 공지됨)를 포함한다. 엔도-β-N-아세틸글루코사미니다제는 파우시만노스에 특이적인 Endo D; 높은 만노스에 특이적인 Endo A 및 Endo H; 높은 만노스에서 바이안테나 복합체에 이르는 Endo F 서브타입; 및 푸코실화된 글리칸을 제외한 대부분의 N-글리칸 구조(높은 만노스/복합체 유형/하이브리드 유형)를 절단할 수 있는 Endo M을 포함한 일반적인 화학효소 변이체와 함께 자연에서 널리 발견되며, 높은 만노스 유형의 올리고당류에 대한 가수분해 활성은 복합체 유형 및 하이브리드 유형 올리고당류에 대한 것보다 상당히 더 높다. 일부 실시양태에서, 이러한 ENGase는 이를 디스플레이하는 단백질이 아닌 원위 N-글리칸 구조에 대해 특이성을 나타내므로, 천연 조건 하에 당단백질로부터 대부분의 N-연결된 글리칸을 절단하는 데 유용하다.
일부 실시양태에서, 엔도글리코시다제 F1, F2, 및 F3은 천연 단백질의 탈글리코실화에 적합하다. Endo F1, F2 및 F3의 연결 특이성은 단백질을 변성시키지 않고 모든 부류의 N-연결된 올리고당류를 제거할 수 있는 단백질의 탈글리코실화를 위한 일반적인 전략을 제시한다. 일부 실시양태에서, 바이안테나 및 트리안테나 구조는 각각 엔도글리코시다제 F2 및 F3에 의해 즉시 제거될 수 있다. 일부 실시양태에서, 올리고-만노스 및 하이브리드 구조는 Endo F1에 의해 제거될 수 있다.
Endo S는 스트렙토코쿠스 피오게네스(Streptococcus pyogenes)로부터의 분비된 엔도글리코시다제이며, 또한 문헌(Collin et al. (EMBO J., 2001, 20, 3046, 전체가 참조로 본원에 포함됨))에 의해 개시되는 바와 같이 글리코시드 히드롤라제 패밀리 18에 속한다. 상기에서 언급된 ENGase와 대조적으로, Endo S는 더 정의된 특이성을 가지며 인간 IgG의 Fc 도메인에서 보존된 N-글리칸만을 절단하는 데 특이적이며(현재까지 다른 기질이 확인되지 않음), 이는 효소와 IgG 사이의 단백질-단백질 상호작용이 이 특이성을 제공한다는 것을 시사한다.
Endo S2로도 공지되어 있는 Endo S49는 WO 2013/037824(전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재되어 있으며, 스트렙토코쿠스 피오게네스 NZ131로부터 단리되며, Endo S의 상동체이다. Endo S49는 천연 IgG에 대한 특이적 엔도글리코시다제 활성을 가지며, Endo S보다 더 다양한 Fc 글리칸을 절단한다.
Endo SH는 Gly-풍부 스페이서에 의해 연결된 2개의 엔도글리코시다제인 Endo S와 Endo H 사이의 융합물이다. Endo SH는 글리칸 쇄의 코어 영역에 있는 2개의 N-아세틸글루코스아민(GluNAc) 모이어티 사이에서 N-연결된 글리칸을 특이적으로 절단한다.
일부 실시양태에서, 항체를 탈글리코실화하기 위한 엔도글리코시다제는 Endo S, Endo SH, Endo S2, Endo S49, Endo F1, Endo F2, Endo F3, Endo H, Endo M, Endo A, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 항체를 탈글리코실화하기 위한 엔도글리코시다제는 Endo S, Endo SH, Endo S2, Endo S49, Endo F1, Endo F2, Endo F3, Endo H, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 엔도글리코시다제는 Endo S, Endo SH, Endo S2, 또는 Endo S49이다.
일부 실시양태에서, 트리밍될 글리칸이 복합체 유형의 다이안테나 구조인 경우, 엔도글리코시다제는 Endo S, Endo SH, Endo S2, Endo S49, Endo F1, Endo F2, Endo F3, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시양태에서, 당단백질이 항체이고 트리밍될 올리고당류가 복합체 유형의 다이안테나 구조이고 N297에서 IgG 보존된 N-글리코실화 부위에 존재하는 경우, 엔도글리코시다제는 Endo S, Endo SH, Endo S2, Endo S49, Endo F1, Endo F2, Endo F3, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 엔도글리코시다제는 Endo S, Endo SH, Endo S2, Endo S49, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시양태에서, 당단백질이 항체이고 트리밍될 글리칸이 복합체 유형의 다이안테나 구조이고 N297에서 IgG 보존된 N-글리코실화 부위에 존재 하지 않는 경우, 엔도글리코시다제는 Endo F1, Endo F2, Endo F3, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시양태에서, 트리밍될 글리칸이 높은 만노스인 경우, 엔도글리코시다제는 Endo H, Endo M, Endo A, Endo F1, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시양태에서, 당단백질이 항체이고 트리밍될 올리고당류가 복합체 유형의 다이안테나 구조를 갖는 것에 더하여 높은 만노스이고 N297에서 IgG 보존된 N-글리코실화 부위에 존재하는 경우, 엔도글리코시다제는 Endo S, Endo SH, Endo S2, Endo S49, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 엔도글리코시다제는 Endo S 또는 Endo SH이다. 일부 실시양태에서, 엔도글리코시다제는 Endo SH이다.
일부 실시양태에서, 본원에서 정의되는 엔도글리코시다제 효소는 정제의 용이성을 위한 태그를 코딩하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 태그는 FLAG-태그, 폴리(His)-태그, HA-태그, Myc-태그, SUMO-태그, GST-태그, MBP-태그, 또는 CBP-태그를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 태그는 6xHis 태그이다. 일부 실시양태에서, 상기 태그는 효소의 C-말단 또는 내부 잔기에서 엔도글리코시드 효소에 공유적으로 연결된다. 일부 실시양태에서, 상기 태그는 효소의 N-말단에서 엔도글리코시드 효소에 공유적으로 연결된다.
일부 실시양태에서, Endo SH는 139 kDa의 전체 분자량을 형성하는 내부 6xHis 태그를 포함하는 Gly-풍부 스페이서에 의해 연결된 2개의 엔도글리코시다제인 Endo S 및 Endo H 사이의 융합물이다.
글리코실트랜스퍼라제
변형된 항체를 형성하는 공정은 임의로 푸코실화된 말단 N-아세틸글루코사민(Gal-NAc) 모이어티를 갖는 탈글리코실화된/트리밍된 항체를 글리코실트랜스퍼라제의 존재 하에 화학식 S"(A")-P"의 화합물로 처리하여 β-1,4-O-글리코시드 결합을 통해 GalNAc 모이어티의 C1에서 항체에 결합된 GlcNAc-S"(A") 치환기를 갖는 변형된 항체를 형성하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 글리코실트랜스퍼라제는 β-1,4-갈락토실트랜스퍼라제(4Gal-T), β-(1,4)-아세틸갈락토사미닐트랜스퍼라제(β-(1,4)-GalNAcT 또는 GalNAcT) 또는 이의 돌연변이체이다.
β-(1,4)-아세틸갈락토사미닐트랜스퍼라제(β-(1,4)-GalNAcTs 또는 GalNAcTs)는 인간, 카에노르하브디티스 엘레간스(Caenorhabditis elegans)(Kawar et al, J. Biol. Chem. 2002, 277, 34924, 전체가 참조로 본원에 포함됨), 드로소필라 멜라노가스테르(Drosophila melanogaster)(Hoskins et al. Science 2007, 316, 1625, 전체가 참조로 본원에 포함됨) 및 트리코플루시아 니(Trichoplusia ni)(Vadaie et al, J. Biol. Chem. 2004, 279, 33501, 전체가 참조로 본원에 포함됨)를 포함한 많은 유기체에서 확인되었다.
β-(1,4)-N-아세틸갈락토사미닐트랜스퍼라제(β-(1,4)-GalNAcTs)는 당업계에 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, β-(1,4)-GalNAcT는 우리딘 디포스페이트-GalNAc(UDP-GalNAc, GalNAc-UDP로도 지칭됨)로부터 당단백질 글리칸의 말단 GlcNAc 모이어티로의 N-아세틸갈락토사민(GalNAc)의 전달을 촉매하는 효소이며, GalNAc 모이어티의 C1은 β-1,4-O-글리코시드 결합을 통해 항체에 부착된다. 일부 실시양태에서, 말단 GlcNAc 모이어티는 푸코실화된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 공정에 사용되는 β-(1,4)-GalNAcT 효소는 무척추동물 β-(1,4)-GalNAcT 효소이거나 또는 이로부터 유도되며, 예컨대 무척추동물 종으로부터 유래하는 β-(1,4)-GalNAcT이거나 이로부터 유도된다. β-(1,4)-GalNAcT 효소는 당업자에게 공지된 임의의 무척추동물 β-(1,4)-GalNAcT 효소이거나 이로부터 유도될 수 있다. 일부 실시양태에서, β-(1,4)-GalNAcT 효소는, 예컨대 크로마도레아(Chromadorea) 또는 세세르넨테아(Secernentea) 강의 네마토다(Nematoda) 문, 또는 예컨대 인섹타(Insecta) 강의 아르트로포다(Arthropoda) 문으로부터 유래하는 β-(1,4)-GalNAcT 효소이거나 이로부터 유도된다. 일부 실시양태에서, β-(1,4)-GalNAcT 효소는 카에노르하브디티스 엘레간스, 카에노르하브디티스 레마네이(Caenorhabditis remanei), 카에노르하브디티스 브리그사에(Caenorhabditis briggsae), 아스카리스 수움(Ascaris suum), 트리코플루시아 니, 드로소필라 멜라노가스테르, 우체레리아 반크로프티(Wuchereria bancrofti), 로아 로아(Loa loa), 세라파키스 비로이(Cerapachys biroi), 주테르모프시스 네바덴시스(Zootermopsis nevadensis), 캄포노투스 플로리다누스(Camponotus floridanus), 크라소스트레아 기가스(Crassostrea gigas) 또는 다나우스 플렉시푸스(Danaus plexippus)(예컨대, 카에노르하브디티스 엘레간스, 아스카리스 수움, 트리코플루시아 니 또는 드로소필라 멜라노가스테르)로부터 유래하는 β-(1,4)-GalNAcT 효소이거나 이로부터 유도된다. 일부 실시양태에서, β-(1,4)-GalNAcT 효소는 카에노르하브디티스 엘레간스, 아스카리스 수움 또는 트리코플루시아 니로부터 유래하는 β-(1,4)-GalNAcT 효소이거나 이로부터 유도된다. 다른 실시양태에서, β-(1,4)-GalNAcT 효소는 트리코플루시아 니로부터 유래하는 β-(1,4)-GalNAcT 효소이거나 이로부터 유도된다.
용어 "~로부터 유도된"은, 예컨대 말단절단된 효소, 돌연변이 효소, 용이한 정제를 위한 태그를 포함하는 효소 또는 이들 변형의 조합을 포함한다. 따라서, ~로부터 유도된 것은 자연 발생 β-(1,4)-GalNAcT 효소로부터 하나 이상의(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20개 또는 그 초과의) 아미노산을 각각 치환, 삽입, 결실 또는 부가함으로써 변경된 아미노산 서열을 갖는 것을 지칭한다. β-(1,4)-GalNAcT 효소로부터 유래된 β-(1,4)-GalNAcT 효소는 또한 본원에서 유도된 β-(1,4)-GalNAcT 효소 또는 변형된 β-(1,4)-GalNAcT 효소 또는 β-(1,4)-GalNAcT 돌연변이 효소로 지칭된다.
일부 실시양태에서, 유도된 β-(1,4)-GalNAcT 효소는 안정성, 용해도, 활성 및/또는 정제 용이성을 증가시키기 위해 추가의 N- 또는 C-말단 아미노산 또는 화학적 모이어티를 부가하거나 N- 또는 C-말단 아미노산을 결실시킴으로써 변형된다.
일부 실시양태에서, β-(1,4)-GalNAcT 효소는 말단절단된 효소로 지칭되는 N-말단 세포질 도메인 및 막횡단 도메인을 결실시킴으로써 변형된다.
하나 이상의 아미노산이 치환, 부가 또는 결실된 β-(1,4)-GalNAcT 효소는 본원에서 돌연변이 β-(1,4)-GalNAcT 효소 또는 유도된 β-(1, 4)-GalNAcT 효소로 지칭된다. 일부 실시양태에서, β-(1,4)-GalNAcT 효소는 N-말단 세포질 도메인 및 막횡단 도메인을 결실시킴으로써 변형되고 하나 이상의 아미노산을 치환함으로써 돌연변이된다. 하나 이상의 아미노산의 치환은 본원에서 또한 돌연변이로 지칭된다. 하나 이상의 치환된 아미노산을 포함하는 효소는 또한 돌연변이 효소로 지칭된다.
일부 실시양태에서, 글리코실트랜스퍼라제가 β-(1,4)-GalNAcT 효소 또는 말단절단된 β-(1,4)-GalNAcT 효소인 경우, 효소는 하나 이상의 돌연변이를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 돌연변이는 위치 257에서 이소류신(He, I로도 지칭됨)의 류신(Leu, L로도 지칭됨), 메티오닌(Met, M으로도 지칭됨), 또는 알라닌(Ala, A로도 지칭됨)으로의 치환을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 위치 312에서 메티오닌(Met, M으로도 지칭됨)의 히스티딘(His, H로도 지칭됨)으로의 치환이 또한 포함된다. 아미노산 위치의 넘버링은 본원에서 야생형 β-(1,4)-GalNAcT 효소에서 아미노산 위치의 넘버링을 기초로 한다는 것에 주목해야 한다. β-(1,4)-GalNAcT 효소가, 예컨대 말단절단된 효소인 경우, 아미노산 치환의 위치를 나타내기 위해 본원에서 사용된 번호는 상응하는 야생형 β- (1,4)-GalNAcT 효소에서 아미노산 위치의 넘버링에 상응한다.
일부 실시양태에서, 글리코실트랜스퍼라제는 돌연변이 촉매 도메인을 포함하는 β(1,4)-GalT 효소이다.
촉매 도메인은 야생형 효소에서 발견되는 아미노산 서열을 가질 수 있거나 야생형 서열과 상이한 아미노산 서열을 가질 수 있다. 야생형 서열과 상이한 아미노산 서열을 갖는 촉매 도메인은 본원에서 돌연변이 촉매 도메인으로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 돌연변이는 단일 아미노산 변화(예컨대, 점 돌연변이), 또는 다중 아미노산 변화(예컨대, 1 내지 10개, 또는 1 내지 6개, 또는 1, 2, 3 또는 4개, 또는 1 또는 2개의 아미노산), 또는 하나 이상의 아미노산(예컨대, 1 내지 10개, 또는 1 내지 6개, 또는 1, 2, 3 또는 4개, 또는 1 또는 2개)의 아미노산의 결실 또는 삽입을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 돌연변이 촉매 도메인은 전장 효소, 예컨대 β(1,4)-갈락토실트랜스퍼라제 또는 α(1,3)-N-갈락토실트랜스퍼라제 뿐만 아니라 임의로 추가 아미노산에 연결된 상기 돌연변이 촉매 도메인을 포함하는 재조합 폴리펩티드에도 존재할 수 있다.
β(1,4)-갈락토실트랜스퍼라제 I은 본원에서 GalT로 지칭된다. 이러한 돌연변이 GalT 촉매 도메인은, 예컨대 WO 2004/063344(전체가 참조로 본원에 포함됨)에 개시되어 있다. WO 2004/063344는 또한 GalT의 Tyr-289 돌연변이체 및 이의 제조 방법을 개시하고 있다. 이들 돌연변이체는 Y289L, Y289N 또는 Y289I로 지칭된다.
일부 실시양태에서, GalT 돌연변이 촉매 도메인은 Y289L, Y289N, Y289I, Y284L, 또는 R228K이다. 일부 실시양태에서, GalT 돌연변이 촉매 도메인은 Y289L이다.
일부 실시양태에서, GalT Y289F, GalT Y289M, GalT Y289V, GalT Y289G, GalT Y289I, GalT Y289A, GalT Y289N, 및 GalT Y289L 돌연변이체는, 예컨대 문헌(WO2004063344, Qasba et al, Prot. Expr. Pur. 2003, 30, 219 및 Qasba et al, J. Biol. Chem. 2002, 277, 20833, 모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 부위 지정된 돌연변이유발 과정을 통해 생성될 수 있다. GalT Y289F에서 위치 289의 티로신 아미노산(Y)은 페닐 알라닌(F) 아미노산으로 대체되고, GalT Y289M에서 상기 티로신은 메티오닌(M) 아미노산으로, GalT Y289V에서는 발린(V) 아미노산으로, GalT Y289G에서는 글리신(G) 아미노산으로, GalT Y289I에서는 이소류신(I) 아미노산으로, Y289A에서는 아날린(A) 아미노산으로 대체된다.
일부 실시양태에서, β-(1,4)-GalNAcT 효소는 용이한 정제를 위한 태그를 코딩하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 태그는 FLAG-태그, poly(His)-태그, HA-태그, Myc-태그, SUMO-태그, GST-태그, MBP-태그, 또는 CBP-태그를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다른 실시양태에서, 상기 태그는 6xHis 태그이다. 일부 실시양태에서, 상기 태그는 효소의 C-말단에서 β-(1,4)-GalNAcT 효소에 공유적으로 연결된다. 일부 실시양태에서, 상기 태그는 효소의 N-말단에서 β-(1,4)-GalNAcT 효소에 공유적으로 연결된다.
일부 실시양태에서, β-(1,4)-GalNAcT 효소는 N-말단 6xHis 태그를 포함하고, 45.7 kDa의 전체 분자량을 갖는다. 일부 실시양태에서, N-말단 6xHis를 함유하는 β-(1,4)-GalNAcT 효소는 트리코풀시아 니로부터 유래된다.
P"-S"-A"의 분자
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 변형된 항체를 제조하는 방법에 사용하기 위한 P"-S"-A"의 분자는 적합한 갈락토실트랜스퍼라제 촉매에 대한 기질인 임의의 슈가 유도체 뉴클레오티드일 수 있다.
일부 실시양태에서, S"-A"는 슈가 유도체 모이어티이고,
S"는 슈가 또는 유도체화된 슈가이고, A"는 링커-약물 모이어티의 작용기와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기이다.
일부 실시양태에서, A"는 아지도, 케토, 또는 알키닐 모이어티이다. 일부 실시양태에서, A"는 아지도 또는 케토 모이어티이다. 일부 실시양태에서, A"는 아지도 모이어티이다. 일부 실시양태에서, A"는 -N3이다. 일부 실시양태에서, A"는 케토 모이어티이다.
일부 실시양태에서, A"는 -[C(R8k)2]x2C(O)R9k이고,
R9k는 메틸 또는 임의로 치환된 C2-24 알킬이고;
각각의 R8k는 독립적으로 수소, 할로겐, 또는 R9k이고;
x2는 0 내지 24 범위의 정수이다.
일부 실시양태에서, x2는 0 내지 10 범위의 정수이다. 일부 실시양태에서, x2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이다.
일부 실시양태에서, 각각의 R8k는 수소이다.
일부 실시양태에서, A"는 알키닐 모이어티이다. 일부 실시양태에서, A"는 말단 알키닐, 사이클로알키닐, 또는 헤테로사이클로알키닐 모이어티이다. 일부 실시양태에서, A"는 말단 알키닐 모이어티이다. 일부 실시양태에서, A"는 사이클로알키닐 모이어티이다. 일부 실시양태에서, A"는 헤테로사이클로알키닐 모이어티이다.
일부 실시양태에서, A"는 -[C(R8k)2]x2-C≡C8k 기이고, R8k 및 x2는 본원에서 정의되는 바와 같다. 일부 실시양태에서, A"는 -[CH2]x2-C≡CH이다.
일부 실시양태에서, S"-A"는 슈가 또는 유도체화된 슈가, 예컨대 아미노 슈가 또는 유도체화된 슈가로부터 유도된다. 일부 실시양태에서, 슈가 및 유도체화된 슈가 예는 갈락토스(Gal), 만노스(Man), 글루코스(Glc), 글루쿠론산(Gcu), 및 푸코스(Fuc)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 아미노 슈가는 히드록실(OH) 기가 아민 기로 대체된 슈가로 이해된다. 아미노 슈가의 예는 N-아세틸글루코사민(GlcNAc) 및 N-아세틸갈락토사민(GalNAc)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 유도체화된 슈가의 예는 글루쿠론산(Gcu) 및 N-아세틸뉴라민산(시알산)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, S"-A"는 갈락토스(Gal), 만노스(Man), N-아세틸글루코사민(GlcNAc), 글루코스(Glc), N-아세틸갈락토사민(GalNAc), 글루쿠론산(Gcu), 푸코스(Fuc), 또는 N-아세틸뉴라민산(시알산)으로부터 유도된다. 일부 실시양태에서, S"-A"는 GlcNAc, Glc, Gal, 또는 GalNAc로부터 유도된다. 일부 실시양태에서, S"-A"는 GlcNAc로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, S"-A"는 Glc로부터 유도된다. 일부 실시양태에서, S"-A"는 Gal 또는 GalNAc로부터 유도된다. 일부 실시양태에서, S"-A"는 Gal로부터 유도된다. 일부 실시양태에서, S"-A"는 GalNAc로부터 유도된다.
일부 실시양태에서, 작용기 A"는 다양한 방식으로 S"에 부착될 수 있다.
일부 실시양태에서, A"는 (예컨대, 상응하는 위치에서 히드록실 대신) S"의 슈가 또는 유도체화된 슈가의 C2, C3, C4, 또는 C6 위치에서 탄소 원자에 직접적으로 부착된다.
일부 실시양태에서, S"는 푸코스 또는 유도체화된 푸코스이며, 이는 임의의 히드록실 C6 위치가 없다. 일부 실시양태에서, A"가 푸코스 또는 유도체화된 푸코스의 C6 위치에 부착될 때, A"는 C6 위치에서 탄소 원자에 직접적으로 부착된다.
일부 실시양태에서, A"는 아지도 모이어티이고, A"는 S"의 슈가 또는 유도체화된 슈가의 C2, C4, 또는 C6 위치에 부착된다.
일부 실시양태에서, A"는 아지도 모이어티이고, A"는 (예컨대, 상응하는 위치에서 히드록실 대신) S"의 슈가 또는 유도체화된 슈가의 C2, C3, C4 또는 C6 위치에서 탄소 원자에 직접적으로 부착된다. 일부 실시양태에서, S"-A"는 6-아지도푸코스(6-AzFuc)이다. 일부 실시양태에서, A"는 아지도 모이어티이고, A"는 (예컨대, 아세틸 모이어티를 아지도아세틸 모이어티로 대체함으로서) 아미노 슈가 또는 유도체화된 아미노 슈가의 N-아세틸 모이어티에 부착된다. 일부 실시양태에서, S"-A"는 2-아지도아세트아미도갈락토스(GalNAz), 6-아지도-6-데옥시갈락토스(6-AzGal), 6-아지도-6-데옥시-2-아세트아미도갈락토스(6-AzGalNAc), 4-아지도-4-데옥시-2-아세트아미도갈락토스(4-AzGalNAc), 6-아지도-6-데옥시-2-아지도아세트아미도갈락토스(6-AzGalNAz), 2-아지도아세트아미도글루코스(GlcNAz), 6-아지도-6-데옥시글루코스(6-AzGlc), 6-아지도-6-데옥시-2-아세트아미도글루코스(6-AzGlcNAc), 4-아지도-4-데옥시-2- 아세트아미도글루코스(4-AzGlcNAc), 또는 6-아지도-6-데옥시-2-아지도아세트아미도글루코스(6-AzGlcNAz)이다. 일부 실시양태에서, S"-A"는 GalNAz, 4-AzGalNAc, GlcNAz, 또는 6-AzGlcNAc이다.
일부 실시양태에서, P"-S"-A"는 화학식 (XXIVb), (XXXIVc), 또는 (XXIVd)의 화합물, 또는 이의 염이다.
일부 실시양태에서, A" 케토 및 A"는 (예컨대, 상응하는 위치에서 히드록실 대신) S"의 슈가 또는 유도체화된 슈가의 C2 위치에서 탄소 원자에 직접적으로 부착된다.
일부 실시양태에서, A"는 아미노 슈가 또는 유도체화된 아미노 슈가, 예컨대 C2-유도체화된 아미노 슈가의 질소 원자에 부착된다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 아미노 슈가는 -NC(O)-R9k의 모이어티를 포함하며, R9k는 메틸 또는 임의로 치환된 C2-24 알킬(예컨대, 에틸)이다.
일부 실시양태에서, R9k는 에틸이다.
일부 실시양태에서, S"-A"는 2-데옥시-(2-옥소프로필)-갈락토스 (2-케토-Gal), 2-N-프로피오닐-갈락토사민(2-N-프로피오닐Gal-NAc), 2-N-(4-옥소펜타노일)-갈락토사민(2-N-Lev-Gal), 또는 2-N-부티릴-갈락토사민(2-N-부티릴-GalNAc)이다. 일부 실시양태에서, S"-A"는 2-케토GalNAc 또는 2-N-프로피오닐-GalNAc이다.
일부 실시양태에서, P"-S"-A"는 화학식 (XXIVe) 또는 (XXIVf)의 화합물, 또는 이의 염이다.
일부 실시양태에서, A"는 말단 알키닐, 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐이다. 일부 실시양태에서, A"는 S"의 C2-유도체화된 아미노 슈가에 부착된다.
일부 실시양태에서, S"-A"는 2-(부트-3-이노산 아미도)-2-데옥시-갈락토스이다.
일부 실시양태에서, P"-S"-A"는 화학식 (XXIVg)의 화합물 또는 이의 염이다. 일부 실시양태에서, P"-S"-A"는 화학식 (XXIVd)의 화합물 또는 이의 염이다.
일부 실시양태에서, P"-S"-A"의 화합물은 당업계에 공지된 다양한 방법에 따라 합성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화합물은,예컨대 문헌 (Wang et al., Chem. Eur. J. 16:13343-13345 (2010), Piller et al., ACS Chem. Biol. 7:753 (2012), Piller et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 15:5459-5462 (2005), 및 PCT Appl'n Pub. No. WO/2009/102820, 이들 각각은 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 개시되는 바와 같이, 뉴클레오시드 모노포스페이트 또는 뉴클레오시드 디포스페이트 P"를 슈가 유도체
Figure pct00139
에 연결함으로써 합성된다.
일부 실시양태에서, P"는 뉴클레오시드 모노- 또는 디포스페이트이다. 일부 실시양태에서, P"는 우리딘 디포스페이트(UDP), 구아노신 디포스페이트(GDP), 티미딘 디포스페이트(TDP), 시티딘 디포스페이트(CDP), 또는 시티딘 모노포스페이트(CMP)이다. 일부 실시양태에서, P"는 우리딘 디포스페이트(UDP)이다.
일부 실시양태에서, P"-S"-A"는 하기 화학식 (XXIVb), (XXIVc), (XXIVd), (XXIVe), (XXIVf), 또는 (XXIVg)의 화합물 또는 이의 염이다:
Figure pct00140
상기 식에서, R9k는 C2-24 알킬 기이다.
일부 실시양태에서, P"-S"-A"는 GalNAz-UDP(예컨대, 화학식 (XXIVb)), 6-AzGal-UDP(예컨대, 화학식 (XXIVc)), 6-AzGalNAc-UDP(예컨대, 화학식 (XXIVd)), 4-AzGalNAz-UDP, 6-AzGalNAz-UDP, 6-AzGlc-UDP, 6-AzGlcNAz-UDP, 2-케토Gal-UDP(예컨대, 화학식 (XXIVe)), 2-N-프로피오닐GalNAc-UDP(예컨대, 화학식 (XXIVf), 여기서 R9k은 에틸임), 또는 2-(부트-3-이노산 아미도)-2-데옥시-갈락토스-UDP(예컨대, 화학식 (XXIVg))이다.
일부 실시양태에서, P"-S"-A"는 GalNAz-UDP 또는 4-AzGalNAc-UDP이다. 일부 실시양태에서, P"-S"-A"는 화학식 (XXIVb) 또는 (XXIVd)의 화합물이다. GalNAz-UDP(예컨대, 화학식 (XXIVb)) 및 6-AzGalNAc-UDP(예컨대, 화학식 (XXIVd))의 합성은 문헌(Piller et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 15:5459-5462 (2005) 및 Wang et al., Chem. Eur. J. 16:13343-13345 (2010), 이들 각각은 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 개시되어 있다.
일부 실시양태에서, P"-S"-A"는 4-AzGalNAc-UDP이다. 일부 실시양태에서, P"-S"-A"는 화학식 (XXIVd)의 화합물 또는 이의 염이다. 일부 실시양태에서, 2-케토Gal-UDP(XXIVe)의 합성은 문헌(Qasba et al., J. Am. Chem. Soc. 125:16162 (2003)), 및 이의 지원 정보에 개시되어 있으며, 이들 모두는 전체가 참조로 본원에 포함된다.
2-(부트-3-이노산 아미도)-2-데옥시-갈락토스-UDP의 합성은 PCT 출원 공개 번호 WO/2009/102820(전체가 참조로 본원에 포함됨)에 개시되어 있다.
항체 약물 접합체
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 본 개시내용의 변형된 항체를 변형된 항체에서 변형된 GlcNAc 모이어티,
Figure pct00141
의 작용기 A"와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기(예컨대, WP)를 포함하는 링커-약물 모이어티와 반응시킴으로써 수득될 수 있다.
일부 실시양태에서, WP는 알키닐, 예컨대 사이클로알키닐, 헤테로사이클로알키닐, 또는 말단 알키닐을 포함한다.
일부 실시양태에서, 변형된 항체의 작용기 A"는 아지도, 케토 또는 알키닐이다. 일부 실시양태에서, 변형된 항체의 작용기 A"는 아지도이다. 일부 실시양태에서, 변형된 항체의 아지도 작용기 A"는 링커-약물 모이어티의 WP의 알키닐(예컨대, 사이클로알키닐, 헤테로사이클로알키닐, 또는 말단 알키닐)과 반응하여 (예컨대, 고리화첨가 반응을 통해) 트리아졸 모이어티를 형성한다. 아지도 기와 알키닐 기의 고리화첨가 반응은 당업계에 "클릭 화학"으로 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티의 WP는 말단 알키닐을 포함하고, 고리화첨가 반응은 촉매(예컨대, Cu(I) 촉매)의 존재 하에 수행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티의 WP는 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐(예컨대, 스트레인드 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티의 WP는 스트레인드 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐을 포함하고, 고리화첨가 반응은 촉매의 존재 또는 부재 하에 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 고리화첨가 반응은 당업계에서 "금속-유리 클릭 화학"으로 공지된 스트레인 촉진된 아지드-알킨 고리화첨가(SPAAC)로 불리는 반응에 의해 자발적으로 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 스트레인드 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐은 본원에 기재된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 접합 시, 변형된 항체의 작용기 A" 및 링커-약물 모이어티의 WP는 트리아졸 모이어티를 형성한다.
일부 실시양태에서, 접합 시, 변형된 항체의 작용기 A" 및 링커-약물 모이어티의 WP는 하기 화학식 (XXXV)의 트리아졸 모이어티를 형성한다:
Figure pct00142
상기 식에서, *는 변형된 항체의 나머지 부분에 대한 직접적 또는 간접적 부착을 나타내고; **는 Mp에 대한 부착을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 아지드 변형된 항체가 알키닐 기를 포함하는 링커-약물 모이어티와 반응하여 고리화첨가 반응을 통해 항체-약물 접합체를 형성하는 경우, 항체-약물 접합체에서 형성된 트리아졸 모이어티는 가수분해 및/또는 다른 분해 경로에 대해 내성일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 알데히드 또는 케톤 변형된 항체가 히드록실아민 또는 히드라진을 포함하는 링커-약물 모이어티와 반응될 때, 항체-약물 접합체에서 생성된 옥심 또는 히드라존 모이어티는 중성 조건에서 비교적 불활성일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 안정성이 높을 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 변형된 항체 및 항체-약물 접합체는 작용기 A"(예컨대, 아지도, 케토, 또는 알키닐)를 항체에 도입하는 과정이 간단하고 일반적으로 적용 가능할 수 있으므로, 실용적인 합성 경로에 의해 합성될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 부위 특이적 항체-약물 접합체는 변형된 항체를 링커-약물 모이어티와 반응시키는 단계를 포함하는 공정에 의해 수득되며,
링커-약물 모이어티는 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐을 포함하고,
접합 전의 변형된 항체는 항체 및 GlcNAc의 C1 위치를 통해 항체에 부착된
Figure pct00143
의 변형된 GlcNAc 모이어티를 포함하고; GlcNAc는 N-아세틸글루코사민이고; S"는 슈가 또는 유도체화된 슈가이고; A"는 아지도이다.
일부 실시양태에서, A"는 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐이다. 일부 실시양태에서, A"는 사이클로알키닐이다. 일부 실시양태에서, A"는 헤테로사이클로알키닐이다.
일부 실시양태에서, A"는 스트레인드 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐이다. 일부 실시양태에서, A"는 스트레인드 사이클로알키닐이다. 일부 실시양태에서, A"는 스트레인드 헤테로사이클로알키닐이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 부위 특이적 항체-약물 접합체는 하기 단계를 포함하는 공정에 의해 수득된다:
(a) 하기 화학식 (XXII)의 중간체 항체:
Figure pct00144
(여기서, Ab는 항체이고; GlcNAc는 N-아세틸글루코사민이고; Fuc는 푸코스이고; u3는 0 또는 1이고; d13 은 1 내지 12 범위의 정수임)
를 갈락토실트랜스퍼라제의 존재 하에서 화합물
Figure pct00145
(여기서, S"는 슈가 또는 유도체화된 슈가이고; A"는 아지도이고; P는 우리딘 디포스페이트(UDP), 구아노신 디포스페이트(GDP), 또는 시티딘 디포스페이트(CDP)임)과 접촉시켜 변형된 GlcNAc 모이어티
Figure pct00146
(임의로 변형된 GlcNAc 모이어티는 GlcNAc의 C1 위치에서 변형된 항체의 나머지 부분에 부착됨)를 포함하는 변형된 항체를 형성하는 단계; 및
(b) 변형된 항체를 스트레인드 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐을 포함하는 링커-약물 모이어티와 반응시켜 항체-약물 접합체를 형성하는 단계.
일부 실시양태에서, 부위 특이적 항체-약물 접합체의 제조 방법은 도 5에 도시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 항체의 각각의 아미노산 N297에 아지도를 포함하는 변형된 항체는 금속-유리 클릭 화학에 의해 스트레인드 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐을 포함하는 링커-약물 모이어티와 접합되어 본 개시내용의 부위 특이적 항체-약물 접합체를 형성한다.
일부 실시양태에서, 변형된 항체가 적어도 하나의 아지도 모이어티를 포함하고 링커-약물 모이어티가 스트레인드 사이클로알키닐을 포함하는 경우, 구리 촉매의 존재는 변형된 항체 내의 아지도와 링커-약물 모이어티의 스트레인드 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐 사이의 고리화첨가 반응에 필요하지 않다. 일부 실시양태에서, 고리화첨가 반응은 구리 촉매의 부재 하에 진행되며, 이는 공정에서 구리 촉매를 사용하는 몇 가지 가능한 단점을 완화할 수 있다.
일부 실시양태에서, Cu(I) 촉매는 일반적으로 항체의 아지도 모이어티와 말단 알킨 모이어티의 고리화첨가에 필요하다. 일부 실시양태에서, 효율적인 전환을 위한 최적의 파라미터를 찾기 위해 조건의 광범위한 최적화 및 미세 조정이 필요할 수 있다. 그럼에도 불구하고, 이러한 조건 하에서도 수반되는 반응성 산소 종의 형성을 항상 완전히 피할 수는 없으며, 이는 차례로 항체/단백질에 대한 산화적 손상(예컨대, 메티오닌, 히스티딘, 시스테인 또는 디술파이드 결합의 산화)을 유발할 수 있다. 다른 프로토콜은 고정 세포를 표지하고 당단백질을 합성하기 위해 CuBr과 같은 Cu(I) 공급원을 사용하였다. 이러한 경우에서, 공기 중 Cu(I)의 불안정성은 효율적인 반응을 위해 과량의 Cu(예컨대, 4 mm 초과) 및 리간드에 대한 요구 사항을 부과하며, 이는 또한 항체/단백질 손상 또는 침전, 및 정제 후 잔류 금속의 존재의 위험을 증가시킬 수 있다. 따라서, 구리 촉매의 존재 하에 말단 알킨에 대한 아지도 함유 항체의 접합은 원하지 않는 아미노산 산화에 의한 광범위한 부산물 형성을 유도할 수 있다.
일부 실시양태에서, (예컨대, 항체의 각각의 아미노산 N297에서) 아지도를 포함하는 변형된 항체는 (예컨대, 금속-유리 클릭 화학에 의해) 스트레인드 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐을 포함하는 링커-약물 모이어티와 접합된다.
일부 실시양태에서, 접합 시, 변형된 항체의 아지도 모이어티 및 링커-약물 모이어티의 스트레인드 사이클로알키닐 또는 헤테로사이클로알키닐은 하기 화학식 (XXXV)의 트리아졸 모이어티를 형성한다:
Figure pct00147
상기 식에서, *는 변형된 항체의 나머지 부분에 대한 직접적 또는 간접적 부착을 나타내고; **는 Mp에 대한 부착을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 D의 하나 이상의 존재를 포함하고, 각각의 D는 독립적으로 치료제(예컨대, 약물)이고, D의 하나 이상의 존재는 동일하거나 상이할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체의 하나 이상의 특이적 부위는 링커-약물 모이어티에 부착되고, 하나 이상의 특이적 부위에 부착된 링커-약물 모이어티는 동일하거나 상이할 수 있다. 일부 실시양태에서, D의 하나 이상의 존재를 포함하는 하나 이상의 링커-약물 모이어티는 하나의 항체에 부착된다.
일부 실시양태에서, D는 (a) 아우리스타틴 화합물; (b) 칼리케아미신 화합물; (c) 두오카르마이신 화합물; (d) SN38, (e) 피롤로벤조디아제핀; (f) 빈카 화합물; (g) 투빌리신 화합물; (h) 비천연 캄토테신 화합물; (i) 메이탄시노이드 화합물; (j) DNA 결합 약물; (k) 키나제 억제제; (l) MEK 억제제; (m) KSP 억제제; (n) 토포이소머라제 억제제; (o) DNA 알킬화 약물; (p) RNA 폴리머라제; (q) PARP 억제제; (r) NAMPT 억제제; (s) 토포이소머라제 억제제; (t) 단백질 합성 억제제; (u) DNA 결합 약물; (v) DNA 삽입 약물; 또는 (w) 면역조절 화합물이다.
일부 실시양태에서, D는 (a) 아우리스타틴 화합물; (b) 칼리케아미신 화합물; (c) 두오카르마이신 화합물; (d) 캄프토테신 화합물, (e) 피롤로벤조디아제핀 화합물; (f) 빈카 화합물; 또는 이의 유사체이다.
일부 실시양태에서, 아우리스타틴 화합물은 아우리스타틴, 돌라스타틴, 모노메틸아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸아우리스타틴 F(MMAF), 아우리스타틴 F, AF-HPA, MMAF-HPA, 또는 페닐렌디아민(AFP)이다.
일부 실시양태에서, 두오카르마이신 또는 이의 유사체는 두오카르마이신 A, 두오카르마이신 B1, 두오카르마이신 B2, 두오카르마이신 C1, 두오카르마이신 C2, 두오카르마이신 D, 두오카르마이신 SA, CC-1065, 아도젤레신, 비젤레신, 또는 카르젤레신이다.
일부 실시양태에서, 캄프토테신 화합물은 캄프토테신, CPT-11(이리노테칸), SN-38, 또는 토포테칸이다.
일부 실시양태에서, 피롤로벤조디아제핀 화합물은 피롤로벤조디아제핀 단량체, 대칭 피롤로벤조디아제핀 이량체, 또는 비대칭 피롤로벤조디아제핀 이량체이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 분자량이 약 40 kDa 이상(예컨대, 약 60 kDa 이상; 약 80 kDa 이상; 약 100 kDa 이상; 약 120 kDa 이상; 약 140 kDa 이상; 약 160 kDa 이상; 약 180 kDa 이상; 또는 약 200 kDa 이상, 또는 약 40-200 kDa, 약 40-180 kDa, 약 40-140 kDa, 약 60-200 kDa, 약 60-180 kDa, 약 60-140 kDa, 약 80-200 kDa, 약 80-180 kDa, 약 80-140 kDa, 약 100-200 kDa, 약 100-180 kDa, 또는 약 100-140 kDa)인 변형된 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 변형된 항체는 약 40 kDa 이상(예컨대, 약 60 kDa 이상; 약 80 kDa 이상; 약 100 kDa 이상; 약 120 kDa 이상; 약 140 kDa 이상; 약 160 kDa 이상; 약 180 kDa 이상; 또는 약 200 kDa 이상; 또는 약 40-200 kDa, 약 40-180 kDa, 약 40-140 kDa, 약 60-200 kDa, 약 60-180 kDa, 약 60-140 kDa, 약 80-200 kDa, 약 약 80-180 kDa, 약 80-140 kDa, 약 100-200 kDa, 약 100-180 kDa, 또는 약 100-140 kDa)인 분자량을 갖고, 아미노산 N297에서 변형된다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 항체 사이에 형성된 특이적 결합의 총 수 (또는 부착점의 총 수)는 12개 이하이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 항체 사이에 형성된 특이적 결합의 총 수 (또는 부착점의 총 수)는 10개 이하이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 항체 사이에 형성된 특이적 결합의 총 수 (또는 부착점의 총 수)는 8개 이하이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 항체 사이에 형성된 특이적 결합의 총 수 (또는 부착점의 총 수)는 6개 이하이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 항체 사이에 형성된 특이적 결합의 총 수 (또는 부착점의 총 수)는 4개 이하이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 항체 사이에 형성된 특이적 결합의 총 수 (또는 부착점의 총 수)는 2개 이하이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 항체 사이에 형성된 특이적 결합의 총 수 (또는 부착점의 총 수)는 2개이다.
(예컨대, 하나 이상의 링커-약물 모이어티와의 접합을 위한) 일부 실시양태에서, 변형된 항체는 약 140 kDa 내지 약 180 kDa의 분자량을 갖는다. 하나 이상의 링커-약물 모이어티와의 접합을 위한 일부 실시양태에서, 변형된 항체는 140 kDa 내지 180 kDa의 분자량을 갖는다.
일부 실시양태에서, 이 분자량 범위의 항체는, 예컨대 IgG 또는 IgM과 같은 전장 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 변형된 항체, 링커, 또는 치료제는 당업계에 공지된 다양한 기술 및 방법에 따라 본 개시내용의 접합체 또는 스캐폴드로 조립될 수 있다. 본 개시내용의 접합체, 및 접합체의 제조 방법은 (예컨대, 비제한적인 실시양태 및 실시예에 의해) 본원에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이에 형성된 결합의 총 수 (또는 부착점의 총 수)는 12개 이하이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 1:1 초과 12:1 이하이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 약 12:1, 약 11:1, 약 10;1, 약 9:1, 약 8:1, 약 7:1, 약 6:1, 약 5:1, 약 4:1, 약 3:1, 약 2:1, 또는 약 1:1이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1 내지 10:1이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 약 10:1, 약 9:1, 약 8:1, 약 7:1, 약 6:1, 약 5:1, 약 4:1, 약 3:1, 또는 약 2:1이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 약 2:1 내지 약 4:1이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 약 4:1, 약 3:1, 또는 약 2:1이다. 일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 약 2:1, 또는 1:1이다.
일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 8:1, 약 7:1, 약 6:1, 약 5:1, 약 4:1, 약 3:1, 약 2:1 또는 약 1:1이다. 일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 6:1, 약 5:1, 약 4:1, 약 3:1, 약 2:1 또는 약 1:1이다. 일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 6:1, 약 5:1, 약 4:1 또는 약 3:1이다. 일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 1:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 3:1, 약 2:1 또는 약 1:1이다.
일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 8:1이다. 일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 6:1이다. 일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 5:1이다. 일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 4:1이다. 일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 3:1이다. 일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 2:1이다. 일부 실시양태에서, a2는 3이고, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 2:1이고, 치료제(D)와 변형된 항체 사이의 비는 약 1:1이다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티와 변형된 항체 사이의 비는 약 2:1이다.
일부 실시양태에서, 항체는 작용기 A를 포함하는 슈가 유도체 모이어티에 부착된 영역 290-305에(예컨대, N297에) 아스파라긴 기를 포함하고, 변형된 항체는 A"와 링커-약물 모이어티의 작용기 사이에 형성된 공유 결합에 의해 링커-약물 모이어티에 접합된다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티는 적어도 2개의 작용기를 포함하고, 이들 각각은 (예컨대, 항체의 아미노산 N297에서) 변형된 항체의 슈가 유도체 모이어티의 작용기 A"와 공유 결합을 형성하여 항체-약물 접합체를 형성할 수 있다.
(예컨대, 링커-약물 모이어티에 접합하기 위한) 일부 실시양태에서, 변형된 항체는 분자량이 40 kDa 이상(예컨대, 60 kDa 이상; 80 kDa 이상; 또는 100 kDa 이상; 120 kDa 이상; 140 kDa 이상; 160 kDa 이상 또는 180 kDa 이상)이다. 일부 실시양태에서, 변형된 항체와 링커-약물 모이어티 사이의 비는 약 1:1 내지 약 1:2이다.
일부 실시양태에서, 이 분자량 범위의 항체는 전장 항체(예컨대, IgG 및 IgM)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
(예컨대, 하나 이상의 링커-약물 모이어티와의 접합을 위한) 일부 실시양태에서, 변형된 항체는 60 kDa 내지 120 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 실시양태에서, 변형된 항체와 링커-약물 모이어티 사이의 비는 약 1:1 내지 약 1:2이다.
일부 실시양태에서, 이 분자량 범위의 항체는 항체 단편(예컨대, Fab2, scFcFv 및 낙타류 항체)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
(예컨대, 하나 이상의 링커-약물 모이어티와의 접합을 위한) 일부 실시양태에서, 변형된 항체는 40 kDa 내지 80 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 실시양태에서, 변형된 항체와 링커-약물 모이어티 사이의 비는 약 1:1 내지 약 1:2이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 약물 접합체 및 스캐폴드는 (예컨대, 임의의 출발 물질을 제거하기 위해) 광범위한 투석여과에 의해 정제될 수 있다. 필요한 경우, 크기 배제 크로마토그래피에 의한 추가 정제를 수행하여 임의의 응집된 접합체의 제거를 수행할 수 있다. 일부 실시양태에서, 정제된 접합체 또는 스캐폴드는 SEC에 의해 결정되는 바와 같이 5% w/w 미만(예컨대, <2% w/w)의 응집된 접합체; RP-HPLC에 의해 결정되는 바와 같이 0.5% w/w 미만(예컨대, <0.1% w/w)의 유리(비접합된) 약물; SEC에 의해 결정되는 바와 같이 1% w/w 미만의 약물 운반 펩티드 함유 스캐폴드; 및/또는 HIC-HPLC에 의해 결정되는 바와 같이 2% w/w 미만(예컨대, <1% w/w)의 비접합된 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 링커-약물 모이어티는 하기 표 B에 기재된 스캐폴드로부터 선택된다.
표 B
Figure pct00148
Figure pct00149
Figure pct00150
Figure pct00151
Figure pct00152
Figure pct00153
Figure pct00154
Figure pct00155
Figure pct00156
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 하기 표 C에 기재된 접합체로부터 선택된다.
표 C
Figure pct00157
Figure pct00158
Figure pct00159
Figure pct00160
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
Figure pct00164
Figure pct00165
상기 식에서,
Figure pct00166
는 GlcNac이고;
Figure pct00167
는 Fuc이고;
Figure pct00168
는 GalNAc이고; d13은 본원에서 정의되는 바와 같다.
달리 명시되지 않는 한,
Figure pct00169
의 기호는 본 개시내용에서 GlcNAc를 지칭하는 것으로 이해된다. 달리 명시되지 않는 한,
Figure pct00170
의 기호는 본 개시내용에서 푸코스를 지칭하는 것으로 이해된다. 달리 명시되지 않는 한,
Figure pct00171
의 기호는 본 개시내용에서 GalNAc를 지칭하는 것으로 이해된다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 하기 화학식 (XXX)를 갖는다:
Figure pct00172
상기 식에서,
각각의 RA는
Figure pct00173
이고;
d13은 2이고; 하나 이상의 링커-약물 모이어티는 항체의 N297에서 아스파라긴 기에 부착된다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 하기 화학식 (XXX)를 갖는다:
Figure pct00174
상기 식에서, 각각의 RA는
Figure pct00175
Figure pct00176
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
이고;
d13은 2이고; 항체는 접합체의 나머지 부분에 연결된 N297에서 하나 이상의 아스파라긴 기를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXX)를 갖고, 각각의 RA는
Figure pct00180
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXX)를 갖고, 각각의 RA는
Figure pct00181
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXX)를 갖고, 각각의 RA는
Figure pct00182
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXX)를 갖고, 각각의 RA는
Figure pct00183
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXX)를 갖고, 각각의 RA는
Figure pct00184
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXX)를 갖고, 각각의 RA는
Figure pct00185
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXX)를 갖고, 각각의 RA는
Figure pct00186
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXX)를 갖고, 각각의 RA는
Figure pct00187
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXX)를 갖고, 각각의 RA는
Figure pct00188
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 하기 화학식 (XXXII-1), (XXXII-2), (XXXII-3), 또는 (XXXII-4)를 갖는다:
Figure pct00189
.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 하기 화학식 (XXXIII)를 갖는다:
Figure pct00190
상기 식에서, 각각의 RB는
Figure pct00191
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXXII-1), (XXXII-2), (XXXII-3), (XXXII-4), 또는 (XXXIII)를 갖고, -LD-D의 모이어티는
Figure pct00192
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXXII-1), (XXXII-2), (XXXII-3), (XXXII-4), 또는 (XXXIII)를 갖고, -LD-D의 모이어티는
Figure pct00193
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 하기 화학식 (XXXIV)를 갖는다:
Figure pct00194
상기 식에서, 각각의 RA는
Figure pct00195
Figure pct00196
Figure pct00197
이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 화학식 (XXXIV)의 접합체이고, 각각의 RA는
Figure pct00198
이고;
임의로, 항체는 접합체의 나머지 부분에 연결된 N297에서 하나 이상의 아스파라긴 기를 포함하고; 임의로, 변형 전 항체는 NaPi2b 항체 XMT-1535이고 이는 미국 출원 번호 15/457,574에 개시되어 있다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 하기 화학식 (XXXV)의 접합체이다:
Figure pct00199
상기 식에서,
d13은 2이고;
항체는 아미노산 서열 GYTFTGYNIH(서열번호 5)를 포함하는 CDRH1; 아미노산 서열 AIYPGNGDTSYKQKFRG(서열번호 6)를 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 GETARATFAY(서열번호 7)를 포함하는 CDRH3; 아미노산 서열 SASQDIGNFLN(서열번호 8)을 포함하는 CDRL1; 아미노산 서열 YTSSLYS(서열번호 9)를 포함하는 CDRL2; 아미노산 서열 QQYSKLPLT(서열번호 10)를 포함하는 CDRL3; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 NaPi2b 항체이고;
링커-약물 모이어티는 항체의 N297에서 아스파라긴 기에 부착되고;
Figure pct00200
는 GlcNAc이고;
Figure pct00201
는 Fuc이고;
Figure pct00202
는 GalNAc이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 하기 화학식 (XXXVI)의 접합체이다:
Figure pct00203
상기 식에서,
d13은 정수 2이고;
항체는 아미노산 서열 GYTFTGYNIH(서열번호 5)를 포함하는 CDRH1; 아미노산 서열 AIYPGNGDTSYKQKFRG(서열번호 6)를 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 GETARATFAY(서열번호 7)를 포함하는 CDRH3; 아미노산 서열 SASQDIGNFLN(서열번호 8)을 포함하는 CDRL1; 아미노산 서열 YTSSLYS(서열번호 9)를 포함하는 CDRL2; 아미노산 서열 QQYSKLPLT(서열번호 10)를 포함하는 CDRL3; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 NaPi2b 항체이고;
링커-약물 모이어티는 항체의 N297에서 아스파라긴 기에 부착되고;
Figure pct00204
는 GlcNAc이고;
Figure pct00205
는 Fuc이고;
Figure pct00206
는 GalNAc이다.
약제학적 조성물
본 개시내용의 일부 실시양태에는 안정화제, 완충제 등과 같은 허용 가능한 담체 중에 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 접합체를 포함하는 약제학적 조성물이 포함된다. 일부 실시양태에서, 접합체는 약제학적 조성물을 형성하기 위해 안정화제, 완충제 등과 함께 또는 없이 표준 수단에 의해 대상체에 투여 및 도입될 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내, 또는 근육내 주사 또는 주입 또는 두개내, 예컨대 척추강내 또는 뇌실내 투여를 포함하는 비경구 투여일 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합체는 주사 가능한 투여를 위한 멸균 용액 및/또는 현탁액; 주사/주입 전 재구성을 위한 동결건조 분말; 국소 조성물; 경구 투여를 위한 정제, 캡슐 또는 엘릭시르로서; 또는 직장 투여용 좌약, 및 당업계에 공지된 다른 조성물로 제형화 및 사용될 수 있다.
약리학적 조성물 또는 제형은 세포 또는, 예컨대 인간을 포함하는 대상체로의 투여, 예컨대 전신 투여에 적합한 형태의 조성물 또는 제형을 지칭한다. 적절한 형태는 부분적으로 사용 또는 진입 경로, 예컨대 경구, 흡입, 경피 또는 주사/주입에 따라 다르다. 이러한 형태는 조성물 또는 제형이 표적 세포(즉, 약물 전달에 바람직한 세포)에 도달하는 것을 방해해서는 안된다.
"전신 투여"는 생체내 전신 흡수 또는 혈류에서 접합체의 축적에 이어 전신에 분포하는 것을 의미한다. 전신 흡수를 유도하는 투여 경로는 정맥내, 피하, 복강내, 흡입, 경구, 폐내 및 근육내를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본 개시내용의 접합체의 사용은 항체의 특이성을 통해 암 세포와 같은 특정 세포에서 약물 전달을 국소화할 수 있다.
"약제학적으로 허용되는 제형"은 원하는 활성에 가장 적합한 물리적 위치에서 접합체의 효과적인 분포를 허용하는 조성물 또는 제형을 의미한다. 일부 실시양태에서, 효과적인 전달은 세망내피계에 의한 청소 또는 감소된 효능 또는 독성을 유도할 수 있는 표적외 결합의 생성 전에 발생한다. 접합체와의 제형화에 적합한 작용제의 비제한적 예는 하기를 포함한다: 활성제의 CNS로의 진입을 향상시킬 수 있는 P-당단백질 억제제(예컨대, 플루로닉(Pluronic) P85); 뇌내 이식 후 지속 방출 전달을 위한 폴리(DL-락티드-코글리콜리드) 미소구체와 같은 생분해성 중합체; 및 혈액 뇌 장벽을 가로질러 활성제를 전달할 수 있고 신경원 흡수 메커니즘을 변경할 수 있는 폴리부틸시아노아크릴레이트로 만들어진 것과 같은 로딩된 나노입자.
본 개시내용의 일부 실시양태에는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제 중에 약제학적 유효량의 원하는 접합체를 포함하는, 저장 또는 투여를 위해 제조된 약제학적 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 치료 용도를 위한 허용되는 담체, 희석제 및/또는 부형제는 약제학적 분야에 널리 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 완충제, 보존제, 증량제, 분산제, 안정화제 또는 염료가 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항산화제 및 현탁제가 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "약제학적 유효량"은 확인된 질환 또는 병태를 치료, 개선 또는 예방하거나 검출 가능한 치료 또는 억제 효과를 나타내기 위한 약제의 양을 지칭한다. 효과는 당업계에 공지된 임의의 검정 방법에 의해 검출될 수 있다. 대상체에 대한 정확한 유효량은 대상체의 체중, 크기 및 건강; 병태의 특성 및 정도; 및 투여를 위해 선택되는 치료제 또는 치료제의 조합에 따라 다를 것이다.
일부 실시양태에서, 임의의 접합체에 대해, 약제학적 유효량은, 예컨대 신생물 세포의 세포 배양 검정에서, 또는 동물 모델, 일반적으로 래트, 마우스, 토끼, 개 또는 돼지에서 초기에 추정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 동물 모델은 또한 적절한 농도 범위 및 투여 경로를 결정하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 정보는 이어서 인간에게 투여하기 위한 유용한 용량 및 경로를 결정하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료 및/또는 예방 효능 및 독성은 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 절차, 예컨대 ED50(집단의 50%에서 치료학적으로 유효한 용량) 및 LD50(집단의 50%에 치명적인 용량)에 의해 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 독성과 치료 및/또는 예방 효과 사이의 용량 비율은 치료 지수이고, 이는 LD50/ED50 비율로 표현될 수 있다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 큰 치료 지수를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 용량은 사용된 제형, 환자의 민감도, 및 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 변할 수 있다.
일부 실시양태에서, 약물 또는 이의 유도체, 약물-접합체 또는 PBRM-약물 접합체는 셀 타이터 글리오(Cell titer Glo)를 사용하여 여러 세포주에서 종양 성장을 억제하는 능력에 대해 평가될 수 있다. 용량 반응 곡선은 소프트막스 프로(SoftMax Pro) 소프트웨어를 사용하여 생성할 수 있으며, IC50 값은 4개 파라미터 곡선 피팅으로부터 결정될 수 있다. 사용된 세포주는 PBRM의 표적인 세포주 및 시험 접합체에 함유된 PBRM의 표적이 아닌 대조군 세포주를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 접합체는 통상적인 카테터화 기술 또는 주입을 이용하는 것을 포함하는 주사에 의한 비경구 투여용으로 제형화된다. 일부 실시양태에서, 주사용 제형은 보존제가 첨가된 단위 제형, 예컨대 앰플 또는 다중 용량 용기로 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합체는 멸균 매질에서 비경구적으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 사용된 비히클 및 농도에 따라 접합체는 비히클에 현탁되거나 용해될 수 있다. 일부 실시양태에서, 국소 마취제, 보존제 및 완충제와 같은 애주번트가 비히클에 용해될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "비경구"는 경피, 피하, 혈관내(예컨대, 정맥내), 근육내, 또는 척추강내 주사 또는 주입 기술 등을 포함한다. 또한, 접합체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 제형이 제공된다. 하나 이상의 접합체는 하나 이상의 무독성의 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 희석제 및/또는 애주번트, 및 원하는 경우 다른 활성 성분과 함께 존재할 수 있다.
일부 실시양태에서, 멸균 주사 가능한 제제는 또한 무독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사 가능한 용액 또는 현탁액일 수 있다. 일부 실시양태에서, 사용될 수 있는 허용 가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거 용액, 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 일부 실시양태에서, 멸균 비휘발성 오일이 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함하는 완하성 지방유가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 올레산과 같은 지방산은 주사제의 제조에 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 접합체 및 조성물은 적절한 형태로(예컨대, 비경구적으로 또는 정맥내로) 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 접합체는 6주 이상 동안 주 1회 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합체는 2주, 3주 또는 4주마다 1회 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 일시 용량은 약 5 내지 약 10 mL의 인간 혈청 알부민이 첨가될 수 있는 약 50 내지 약 400 mL의 생리 식염수로 제공된다. 일부 실시양태에서, 연속 주입은 24시간의 기간당 약 250 내지 약 500 mL의 생리 식염수로 제공되며, 여기에 약 25 내지 약 50 mL의 인간 혈청 알부민이 첨가될 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료 후 약 1 내지 약 4주에, 환자는 제2 치료 과정(예컨대, 치료 후 약 3주 또는 치료 후 약 4주)을 받을 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료학적 유효량은 또 다른 규칙적인 일정, 즉 매일, 매주, 매월 또는 매년 기준으로 또는 다양한 투여 일, 주, 월 등을 갖는 불규칙한 일정으로 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여될 치료학적 유효량은 다양할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 용량에 대한 치료학적 유효량은 하나 이상의 후속 용량에 대한 치료학적 유효량보다 더 높다. 일부 실시양태에서, 제1 용량에 대한 치료학적 유효량은 하나 이상의 후속 용량에 대한 치료학적 유효량보다 더 낮다. 일부 실시양태에서, 등가 용량은 약 2시간마다, 약 6시간마다, 약 8시간마다, 약 12시간마다, 약 24시간마다, 약 36시간마다, 약 48시간마다, 약 72시간마다, 약 매주, 약 2주마다, 약 3주마다, 약 매월, 약 2개월마다를 포함한 다양한 기간에 걸쳐 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 요법의 완료된 과정에 상응하는 용량의 수 및 빈도는 관련 규제 기관의 권고 및 의료 종사자의 판단에 따라 결정될 것이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료학적 유효량은 주어진 기간 동안 투여된 총량을 지칭하고; 즉, 본원에 기재된 하나 초과의 상이한 접합체가 투여되는 경우, 치료학적 유효량은 투여된 총량에 상응한다. 특정 대상체에 대한 특정 용량 수준은 특정 접합체의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 배설 속도, 다른 활성제와의 조합, 치료 중인 특정 질환의 중증도에 의존한다는 것이 이해된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 접합체의 치료학적 유효량은 일반적으로 치료 목적을 달성하는 데 필요한 양에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 이는 항체와 특정 경우에 표적의 기능화를 방해하는 이의 표적 항원 사이의 결합 상호작용일 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여에 필요한 양은 특정 항원에 대한 항체의 결합 친화도에 더 의존할 것이고, 또한 투여된 항체가 투여되는 다른 대상체로부터 자유 부피가 고갈되는 속도에 의존할 것이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 접합체의 치료학적 유효 투여 범위는 비제한적인 예로서 약 0.1 mg/kg 체중 내지 약 50 mg/kg 체중, 약 0.1 mg/kg 체중 내지 약 100 mg/kg 체중 또는 약 0.1 mg/kg 체중 내지 약 150 mg/kg 체중일 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여 빈도는, 예컨대 1일 2회 내지 1개월 1회(예컨대, 1일 1회, 매주 1회; 격주 1회; 3주 1회 또는 매월)의 범위일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 접합체는 약 0.1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg(예컨대, 0.2 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.67 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg, 또는 20 mg/kg)으로 주입에 의해 정맥내 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 접합체는 암을 치료하기 위해 약 0.1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg(예컨대, 0.2 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.67 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg, 19 mg/kg, 또는 20 mg/kg)으로 (예컨대, 매주, 2주마다, 3주마다, 또는 매월 단일 용량으로) 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 접합체는 약 7 mg/m2 내지 약 162 mg/m2(예컨대, 7 mg/m2, 14 mg/m2, 28 mg/m2, 56 mg/m2, 84 mg/m2, 112 mg/m2, 135 mg/m2, 또는 162 mg/m2)로 (예컨대, 매주, 2주마다, 3주마다, 또는 4주마다 단일 용량으로) 주입에 의해 정맥내 투여될 수 있다. 정기적인 경구 사용을 위한 약제를 분배하기 위한 다수의 패키지 또는 키트가 당업계에 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 패키지는 각각의 기간에 대한 지표를 갖는다. 일부 실시양태에서, 패키지는 표지된 블리스터 패키지, 다이얼 디스펜서 패키지 또는 병이다. 일부 실시양태에서, 키트의 패키징 수단은 그 자체로 주사기, 피펫, 점안기 또는 기타 장치와 같이 투여를 위해 맞춰질 수 있으며, 이로부터 제형은 신체의 환부에 적용되거나, 대상체에게 주사되거나, 심지어 키트의 다른 성분에 적용되고 혼합될 수 있다.
사용 방법
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 접합체의 치료학적 유효량을 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 접합체의 치료학적 유효량을 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 NaPi2b 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 NaPi2b 발현 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 본원에 개시된 접합체를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 본원에 개시된 접합체를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 NaPi2b 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 NaPi2b 발현 암을 치료하기 위한 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하기 위한 약제의 제조에서 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에서 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 NaPi2b 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 NaPi2b 발현 암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 접합체를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 접합체를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 데 사용하기 위한 접합체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 NaPi2b 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 NaPi2b 발현 암을 치료하는 데 사용하기 위한 접합체를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 본 개시내용의 적어도 하나의 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공하며, 상기 접합체는 생분해 시 하나 이상의 치료제를 방출한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 개시내용의 하나 이상의 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 접합체는 생분해 시 하나 이상의 치료제를 방출한다.
일부 실시양태에서, 질환은 암이다.
일부 실시양태에서, NaPi2b 표적화된 항체-약물 접합체를 함유하는 본원에서 제공되는 암 요법은 치료학적으로 유용한 효과를 발휘하기에 충분한 양으로 투여된다. 전형적으로, 활성제는 치료되는 환자의 바람직하지 않은 부작용을 일으키지 않거나 관찰된 부작용을 최소화 또는 감소시키는 양으로 투여된다. NaPi2b 발현 암은, 예컨대 난소암, 비소세포 폐암(NSCLC), 자궁내막암, 유두상 신세포암, 타액관암, 유두상 갑상선암, 투명세포 신장암, 유방암, 신장암, 자궁경부암 및 담관암종을 포함한다,
대상체에게 투여될 NaPi2b 표적화된 중합체 항체-약물 접합체를 포함하는 활성제의 정확한 양을 결정하는 것은 당업자의 수준 내에 있다. 예컨대, 암 및 고형 종양을 치료하기 위한 이러한 제제 및 용도는 당업계에 널리 공지되어 있다. 따라서, 이러한 작용제의 용량은 주어진 투여 경로 하에 해당 작용제에 대한 표준 투여 레지먼(regimen)에 기초하여 선택될 수 있다.
정확한 용량 및 치료 기간은 치료되는 조직 또는 종양의 함수이며 공지된 시험 프로토콜을 이용하여 경험적으로 결정될 수 있거나 생체내 또는 시험관내 시험 데이터로부터 외삽에 의해 결정될 수 있고/있거나 특정 작용제의 공지된 투여 레지먼으로부터 결정될 수 있는 것으로 이해된다. 농도 및 용량 값은 또는 치료되는 개체의 연령, 개체의 체중, 투여 경로 및/또는 질환의 정도 또는 중증도 및 고려해야 할 숙련된 의료 종사자의 수준 내에 있는 다른 요인에 따라 달라질 수 있다는 것에 유의해야 한다. 일반적으로, 투여 레지먼은 독성을 제한하기 위해 선택된다. 주치의는 독성, 골수, 간 또는 신장 또는 다른 조직 기능 장애로 인해 용량을 낮추기 위해 요법을 종료, 중단 또는 조정하는 방법 및 시기를 알 것임을 유의해야 한다. 반대로, 주치의는 또한 임상 반응이 적절하지 않은 경우(독성 부작용 제외) 치료를 더 높은 수준으로 조정하는 방법 및 시기를 알 것이다. 임의의 특정 대상체에 대해 특정 투여 레지먼은 개체의 필요 및 제형을 투여하거나 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간 경과에 따라 조정되어야 하며, 본원에 기재된 농도 범위는 예시일 뿐 이의 범위를 제한하려는 것이 아니라는 것이 추가로 이해되어야 한다.
예컨대, NaPi2b 표적화된 중합체 항체-약물 접합체는 종양 부피를 감소시키기 위한 치료학적 유효량으로 투여된다.
NaPi2b 표적화된 중합체 항체-약물 접합체의 양은 질환 또는 병태의 치료를 위해 투여되며, 예컨대 암 또는 고형 종양은 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다. 또한, 시험관내 검정 및 동물 모델을 사용하여 최적의 용량 범위를 확인할 수 있다. 경험적으로 결정될 수 있는 정확한 용량은 투여 경로, 치료될 질환의 유형 및 질환의 중중도에 따라 달라질 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 접합체는 정맥내 투여된다. 정맥내 투여를 위한 일부 실시양태에서, 접합체는 푸시(push) 또는 볼루스(bolus)에 의해, 주입에 의해, 또는 이들의 조합을 통해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 주입 시간은 약 1분 내지 3시간, 예컨대 약 1분 내지 약 2시간, 또는 약 1분 내지 약 60분, 또는 적어도 10분, 40분, 또는 60분일 수 있다.
일부 실시양태에서, 용량은 약 7 mg/m2 내지 162 mg/m2(예컨대, 7 mg/m2, 14 mg/m2, 28 mg/m2, 56 mg/m2, 84 mg/m2, 112 mg/m2, 135 mg/m2 또는 162 mg/m2)이다. 일부 실시양태에서, 용량은 약 6.5 mg/m2 내지 약 7.5 mg/m2, 약 13.5 mg/m2 내지 약 14.5 mg/m2, 약 27.5 mg/m2 내지 약 28.5 mg/m2, 약 55.5 mg/m2 내지 약 56.5 mg/m2, 약 83,5 mg/m2 내지 약 84.5 mg/m2, 약 111.5 mg/m2 내지 약 112.5 mg/m2, 약 134.5 mg/m2 내지 약 135.5 mg/m2, 또는 약 161.5 mg/m2 내지 약 162 mg/m2이다. 일부 실시양태에서, 용량은 3주마다 1회(즉, 21일 주기) 또는 4주마다 1회(즉, 28일 주기) 정맥내 투여된다.
투여 빈도 및 타이밍, 및 용량은 원하는 시간 길이 동안 활성제의 연속적 및/또는 장기간 효과를 유지하기 위해 투여 주기에 걸쳐 주기적으로 투여될 수 있다. NaPi2b 표적화된 항체-약물 접합체의 제공된 조성물은 매시간, 매일, 매주, 매월, 매년 또는 1회 투여될 수 있다. 투여 주기의 기간은 경험적으로 결정될 수 있으며, 치료될 질환, 질환의 중증도, 특정 환자 및 치료하는 의사의 기술 수준 내에서 다른 고려 사항에 따라 다르다. 본원에서 제공되는 조합 요법으로의 치료 기간은 1주, 2주, 1개월, 수개월, 1년, 수년 또는 그 초과가 될 수 있다.
일부 실시양태에서, NaPi2b 표적화된 항체-약물 접합체의 투여 빈도는 1일 1회, 격일, 주 2회, 주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회 또는 4주마다 1회이다. 용량은 치료 과정 동안 복수의 투여 주기로 분할될 수 있다. 예컨대, NaPi2b 표적화된 항체-약물 접합체는 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 1년 또는 그 초과의 기간에 걸친 빈도로 투여될 수 있다. 투여 빈도는 주기 기간 동안 동일하거나 다를 수 있다. 일부 실시양태에서, NaPi2b 표적화된 항체-약물 접합체는 투여 주기의 첫 주 동안 적어도 주 2회 투여된다. 제1주 이후에 빈도를 주 2회로 계속하거나 주 2회 초과로 늘리거나 주 1회 이하로 줄일 수 있다. 투여되는 특정 용량, 치료되는 질환 또는 병태, 질환 또는 병태의 중증도, 대상체의 연령 및 다른 유사한 인자를 기반으로 특정 투여 빈도 및 투여 주기를 결정하는 것은 숙련가의 수준 내이다.
일부 실시양태에서, 중단된 치료의 부재 하에서 질환 증상이 지속되는 경우, 치료는 추가 기간 동안 계속될 수 있다. 치료 과정에서 질환 및/또는 치료 관련된 독성 또는 부작용의 증거를 모니터링할 수 있다.
NaPi2b 표적화된 항체-약물 접합체의 투여 주기는 작용제에 대한 노출로부터 휴식 기간을 제공하기 위해 중단된 치료 기간을 추가하도록 맞춤화될 수 있다. 치료 중단을 위한 기간은 미리 결정된 시간 동안일 수 있거나, 환자의 반응이나 관찰된 부작용에 따라 경험적으로 결정될 수 있다. 예컨대, 치료는 1주, 2주, 3주, 1개월 또는 수개월 동안 중단될 수 있다. 일부 실시양태에서, 중단된 치료 기간은 환자에 대한 투여 레지먼의 주기로 구성된다.
예시적인 투여 레지먼은 21일 또는 28일의 치료 주기 또는 투여 주기이다. 일부 실시양태에서, 투여 레지먼은 치료 주기이거나 투여 주기는 28일이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 NaPi2b 표적화된 항체-약물 접합체는 제1일에 투여된 후 투여 없이 20일이거나 제1일에 투여된 후 투여 없이 27일이다. 정확한 투여 주기 및 투여 일정을 결정하는 것은 당업자의 수준 이내이다.
일부 실시양태에서, 투여 주기는 임의의 원하는 기간 동안일 수 있다(예컨대, 21일 투여 주기 또는 28일 투여 주기는 임의의 기간 동안 반복될 수 있음). 예컨대, 21일 투여 주기 또는 28일 투여 주기는 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 1.5년, 2년, 2.5년, 3년 또는 그 초과 동안 반복될 수 있다.
일부 실시양태에서, NaPi2b 발현 암은, 예컨대 난소암, 비소세포 폐암(NSCLC), 자궁내막암, 유두상 신세포암, 타액관암, 유두상 갑상선암, 투명세포 신장암, 유방암, 신장암, 자궁경부암, 및 담관암종을 포함한다.
일부 실시양태에서, NaPi2b 발현 암은, 예컨대 난소암, 비소세포 폐암(NSCLC), 자궁내막암, 유두상 신세포암, 타액관암, 및 유두상 갑상선암을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 난소암 또는 비소세포 폐암(NSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 난소암 또는 비소세포 폐암(NSCLC)을 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 난소암 또는 비소세포 폐암(NSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 난소암 또는 비소세포 폐암(NSCLC)을 치료하기 위한 약제의 제조에서 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 난소암 또는 비소세포 폐암(NSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 난소암 또는 비소세포 폐암(NSCLC)을 치료하기 위한 본원에 개시된 접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 난소암 또는 비소세포 폐암(NSCLC)의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 유효량의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 난소암 또는 비소세포 폐암(NSCLC)을 치료하는 데 사용하기 위한 접합체를 제공한다.
일부 실시양태에서, 암은 비소세포 폐암(NSCLC)이다. 일부 실시양태에서, NSCLC는 선암종으로서 하위 유형 분류된다.
일부 실시양태에서, 난소암은 백금 내성 난소암이다. 일부 실시양태에서, 난소암은 고등급 장액성 난소 암종이다. 일부 실시양태에서, 난소암은 백금 내성, 고등급 장액성 난소암이다.
일부 실시양태에서, 암은 자궁내막암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유두상 신세포암이다. 일부 실시양태에서, 암은 타액관암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유두상 갑상선암이다.
일부 실시양태에서, 대상체는 상피성 난소암, 자궁관암, 원발성 복막암, 백금 내성 난소암, 비편평 NSCLC 암, 진행성, 방사성 요오드 불응성, 국소 부위 재발성 또는 전이성 질환 유두상 갑상선암, 또는 상피성 자궁내막암을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상피성 난소암을 갖는 대상체는 고등급 난소암, 저등급 장액성 난소암 또는 투명세포 난소암으로서 하위 유형 분류된다.
일부 실시양태에서, 난소암을 갖는 대상체는 화학요법제, 예컨대 도세탁셀, 독소루비신, 사이클로포스파미드, 카르보플라틴, 파클리탁셀, nab-파클리탁셀, 젬시타빈 및 시스플라틴; 혈관신생 억제제, 예컨대 베바시주맙(아바스틴); PARP 억제제, 예컨대 니라파립(제줄라), 올라파립(린파자) 및 벨리파립(벨리파립); 베바시주맙과 조합된 올라파립(린파자); 또는 이들의 조합으로 이전에 치료를 받았다.
일부 실시양태에서, 난소암을 갖는 대상체는, 예컨대 페길화된 리포솜 독소루비신과 같은 이전의 단일 작용제 화학요법, 파클리탁셀 토포테칸 젬시타빈, PARP 억제제 등으로의 주간 치료를 받았다.
일부 실시양태에서, 난소암을 갖는 대상체는, 이전에 예컨대 화학요법 조합, 예컨대 카르보플라틴 + 파클리탁셀, 페길화된 리포솜 독소루비신, 파클리탁셀, 도세탁셀, 토포테칸, 젬시타빈, PARP 억제제 등으로의 주간 치료와 같은 3차 이하의 차수의 요법을 받았다.
일부 실시양태에서, 난소암을 갖는 대상체는 이전에 하나 이상의 차수의 백금 함유 레지먼을 포함하는 3차 이하의 차수의 요법을 받았다. 일부 실시양태에서, 난소암을 갖는 대상체는 이전에 하나 이상의 차수의 백금 함유 레지먼을 포함하거나 포함하지 않는 4차 이하의 차수의 요법을 받았다.
일부 실시양태에서, NSCLC 암을 갖는 대상체는 선암종으로서 하위 유형 분류된다. 일부 실시양태에서, 선암종 NSCLC 암을 갖는 대상체는 전이성 또는 재발성일 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상체는 NSCLC를 갖고, 예컨대 백금 기반 화학요법(시스플라틴 또는 카르보플라틴) 및 PD-1 또는 PD-L1 단일클론 항체로 이전에 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 대상체는 NSCLC를 갖고 카르보플라틴/파클리탁셀, 아브락산 nab-파클리탁셀, 도세탁셀, 프리메트렉시드, 젬시타빈 또는 도세탁셀과 라무시루맙의 조합으로 이전에 치료를 받았다.
일부 실시양태에서, 대상체는 NSCLC를 갖고 이전에 2차 이하의 화학요법을 받았다.
일부 실시양태에서, 대상체는 NSCLC를 갖고 세포독성제로의 추가의 이전 치료를 받지 않았거나 면역요법을 받지 않았다. 또 다른 실시양태에서, NSCLC를 갖는 대상체는 승인된 요법이 있는 공지된 발암성 돌연변이(예컨대, ALK 전위, EGFR 돌연변이 또는 KRAS 돌연변이)를 갖는 문서화된 불내성 또는 질환 진행을 갖는다.
일부 실시양태에서, NSCLC 암을 갖는 대상체는 NaPi2b 항체-약물 접합체 및 PD-1 또는 PD-L1 모노클로날 항체, 예컨대 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙 또는 아벨루맙으로 치료된다.
일부 실시양태에서, NSCLC 암을 갖는 대상체는 NaPi2b 항체-약물 접합체 및 PD-1 또는 PD-L1 모노클로날 항체, 펨브롤리주맙으로 치료된다.
일부 실시양태에서, 대상체는 PARP 억제제, 예컨대 올라파립, 니라파립, 루카파립, 탈라조파립 등; PD1/PDL-1 억제제, 예컨대 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙 등; 화학요법, 예컨대 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독실, 사이클로포스파미드, 젬시타빈, 토포테칸, 프리메트렉스 등; VEGF 억제제, 예컨대 베바시주맙, 라무시루맙 등; 티로신 키나제 억제제, 예컨대 게피티닙, 아파티닙, 에를로티닙, 다코미티닙, 오시머티닙, 파조파닙 등; ALK 억제제. 예컨대 알렉티닙, 크리조티닙, 세르티닙, 브리가티닙 등; 또는 BRAF 억제제, 예컨대 다브라페닙, 트라메티닙 등과 조합된 NaPi2b 항체-약물 접합체로 치료된다.
일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 펨브롤리주맙이다.
일부 실시양태에서, 대상체는 펨브롤리주맙, 카르보플라틴, 독실, 베바시주맙 또는 PARP 억제제와 조합된 NaPi2b 항체-약물 접합체로 치료된다.
일부 실시양태에서, 대상체는 이전의 키나제 억제제 요법에 대한 내성 또는 불내성을 갖는 유두상 갑상선암을 갖거나 저등급의 호르몬 수용체-양성 자궁내막양 선암종에 대한 이전 치료를 받았다.
일부 실시양태에서, 자궁내막암은 기질 종양 또는 암육종이 아니다. 일부 실시양태에서, 대상체는 자궁내막암을 갖고 카르보플라틴/파클리탁셀 또는 유사한 레지먼으로 이전에 치료를 받았다.
일부 실시양태에서, 대상체는 유두상 성장 패턴이 우세한 유두상 신세포암 또는 투명세포 신장암을 갖는다. 한 실시양태에서, 대상체는 표준 전신 요법 후에 진행된 타액관 암의 조직학적 진단을 갖는다.
일부 실시양태에서, 대상체는 표준 최전선 화학요법제를 포함한 화학요법에 대해 불응성이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에서, 단수 형태는 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수형도 포함한다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 하기에 기재되어 있다. 충돌하는 경우, 정의를 포함한 본 명세서가 우선한다. 또한, 재료, 방법 및 실시예는 예시일 뿐이며 제한하려는 의도가 아니다.
화합물, 스캐폴드, 및 조성물이 특정 성분을 갖거나 포함하는 것으로 설명되는 설명 전반에 걸쳐, 조성물은 또한 인용된 성분으로 본질적으로 이루어지거나 이로 이루어지는 것으로 고려된다. 유사하게, 방법 또는 공정이 특정 공정 단계를 갖거나 포함하는 것으로 기재되는 경우, 공정은 또한 인용된 처리 단계로 본질적으로 이루어지거나 이로 이루어진다. 또한, 본 발명이 작동 가능한 상태로 유지되는 한 특정 동작을 수행하기 위한 단계의 순서 또는 순서는 중요하지 않음을 이해해야 한다. 또한, 2개 이상의 단계 또는 동작을 동시에 수행할 수 있다.
본원에 기재된 모든 방법은 본원에 달리 나타내거나 달리 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 언어(예컨대, "~와 같은")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것이며 명시적으로 달리 청구되지 않는 한 청구범위의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 명세서의 어떤 언어도 청구되지 않은 요소가 청구된 내용에 필수적임을 나타내는 것으로 해석되어서는 안 된다.
합성 방법
임의의 이용 가능한 기술을 이용하여 접합체 또는 이의 조성물, 및 이를 제조하는 데 유용한 중간체 및 성분(예컨대, 스캐폴드)을 제조할 수 있다. 일부 실시양태에서, 반합성 및 완전 합성 방법이 이용될 수 있다.
본원에 개시된 접합체 또는 스캐폴드를 생성하는 일반적인 방법은 하기 반응식 2 및 3 및 공동 계류 중인 US 15/819,650(이의 개시내용은 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 예시되어 있다. 이들 반응식에서 변수(예컨대, 예컨대, MP, MA, L3, WD, WM, LD, 및 LP' 등)는 달리 명시되지 않는 한 본원에 기재된 것과 동일한 정의를 갖는다.
Figure pct00207
Figure pct00208
상기 식에서, 항체는 본 개시내용의 변형된 항체이다.
본 개시내용의 합성 공정은 다양한 작용기를 견딜 수 있으므로; 다양한 대체 출발 물질을 사용할 수 있다. 공정은 특정 경우에는 화합물을 이의 약제학적으로 허용되는 염, 에스테르 또는 전구약물로 추가로 전환시키는 것이 바람직할 수 있지만, 일반적으로 전체 공정의 마지막에 또는 그 근처에서 원하는 최종 화합물을 제공한다.
본 개시내용의 접합체에 사용되는 약물 화합물은 상업적으로 입수 가능한 출발 물질, 문헌에 공지된 화합물을 사용하여 다양한 방식으로, 또는 당업자에게 공지된 또는 본원에서의 교시에 비추어 당업자에게 명백할 표준 합성 방법 및 절차를 이용하여 쉽게 제조되는 중간체로부터 제조될 수 있다. 유기 분자 및 작용기 변환 및 조작의 제조를 위한 표준 합성 방법 및 절차는 관련 과학 문헌 또는 당업계의 표준 교과서에서 얻을 수 있다. 임의의 하나 또는 여러 출처에 제한되지 않지만, 문헌(Smith, M. B., March, J., March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th edition, John Wiley & Sons: New York, 2001; 및 Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999, 참조로 본원에 포함됨)과 같은 고전적 텍스트는 당업자에게 공지된 유기 합성의 유용하고 인정된 참조 교과서이다. 합성 방법에 대한 하기 설명은 본 개시내용의 화합물의 제조를 위한 일반적인 절차를 예시하기 위해 설계되었지만 이에 제한되지 않는다.
본 개시내용의 접합체 및 이에 포함된 약물 화합물은 당업자에게 친숙한 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 본원에 기재된 각각의 화학식을 갖는 본 개시내용의 접합체 또는 화합물은 상업적으로 입수 가능한 출발 물질 또는 문헌 절차를 이용하여 제조될 수 있는 출발 물질로부터 하기 절차에 따라 제조될 수 있다. 이들 절차는 본 개시내용의 대표적인 접합체의 제조를 나타낸다.
상기 기재된 방법에 의해 설계, 선택 및/또는 최적화된 접합체는 일단 생성되면 접합체가 생물학적 활성을 갖는지를 결정하기 위해 당업자에게 공지된 다양한 검정을 이용하여 특성화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합체는 예측된 활성, 결합 활성 및/또는 결합 특이성을 갖는지를 결정하기 위해 하기에 기재된 검정을 포함하지만 이에 제한되지 않는 통상적인 검정에 의해 특성화될 수 있다.
또한, 고처리량 스크리닝을 이러한 검정을 이용하여 분석 속도를 높이는 데 이용할 수 있다. 고처리량 스크리닝을 수행하기 위한 일반적인 방법론은, 예컨대 문헌(Devlin (1998) High Throughput Screening, Marcel Dekker; 및 U.S. Patent No. 5,763,263)에 기재되어 있다. 고처리량 검정은 하기에 기재된 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 상이한 검정 기술을 이용할 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 본 개시내용의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 하기에 기재되어 있다. 본원에 언급된 모든 공개문, 특허 출원, 특허 및 다른 참조 문헌은 전체가 참조로 포함된다. 충돌하는 경우 정의를 포함한 본 명세서가 우선한다. 또한, 재료, 방법 및 예는 예시일 뿐이며 제한하려는 의도가 아니다.
실시예
하기 작업 실시예는 링커, 약물 분자 및 항체 또는 항체 단편, 및 이를 제조하는 방법을 예시한다. 이는 제한하려는 것이 아니며 다른 시약 또는 방법이 이용될 수 있다는 것이 당업자에 의해 용이하게 이해될 것이다.
약어
하기 약어는 하기 반응식 및 합성 실시예에서 사용된다. 유기 합성 분야의 숙련자에 의해 쉽게 이해되는 추가 표준 약어가 합성 도식 및 실시예에서도 사용될 수 있으므로, 이 목록은 본원에 사용된 약어의 모든 것을 포함하는 목록을 의미하지 않는다.
약어:
ACN 아세토니트릴
AF 아우리스타틴 F
AF-HPA 아우리스타틴 F 히드록시프로필 아미드
ALP 알칼리 포스파타제
ALT 알라닌 아미노트랜스퍼라제
AST 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제
aq 수성
CE 모세관 전기영동
CR 완전한 회귀
DAD 다이오드 어레이 검출기
DAR 약물 대 항체 비율
DCM 디클로로메탄
DIPEA N,N-디이소프로필에틸아민
DMEM 둘베코의 변형된 이글 배지
DMF 디메틸포름아미드
EDC 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카르보디이미드
EDTA 에틸렌디아민테트라아세트산
ELISA 효소 연결된 면역흡착 검정
Endo SH 엔도글리코시다제 SH
FBS 태아 소 혈청
Fuc 푸코스
GalNAcT 글리코실트랜스퍼라제
HIC 소수성 상호작용 크로마토그래피
HOAt 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸
HRP 서양 고추냉이 퍼옥시다제
IV 정맥내
LC 액체 크로마토그래피
MS 질량 분광측정
MTV 중앙 종양 부피
nMP N-메틸-2-피롤리돈
nMR 핵 자기 공명
PBS 포스페이트 완충 식염수
PBST 트윈 함유 포스페이트 완충 식염수
PR 부분 회귀
RBC 적혈구
RP-HPLC 역상 고성능 액체 크로마토그래피
SDS 나트륨 도데실 술페이트
SEC 크기 배제 크로마토그래피
TBS 트리스 완충 식염수
TFS 종양이 없는 생존
TGI 종양 성장 억제
TCEP 트리스[2-카르복시에틸] 포스핀
TEAA 트리에틸암모늄 아세테이트
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라히드로푸란
TMB 테트라메틸벤지딘
UDP 우리딘 디포스페이트
UF/DF 한외여과/투석여과
WBC 백혈구
WCX 약한 양이온 교환 크로마토그래피
일반 정보
달리 명시되지 않는 한 모든 시약은 관련 공급자로부터 구입되었다.
XMT-1535(항-NaPi2b 항체)는 2017년 3월 13일에 출원된 공동 계류 중인 출원 US 15/457,574에 개시되어 있으며, 이의 전체 내용은 참조로 본원에 포함된다. XMT-1519(항-Her2 항체)는 2017년 1월 31일자로 허여된 US 9,555,112 및 2017년 8월 22일에 허여된 US 9,738,720에 개시되어 있으며, 이들의 전체 내용은 참조로 본원에 포함된다.
Endo SH는 PCT 출원 번호 WO 2017137459(이의 전체 내용은 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 바와 같이 제조되었다. UDP-아지도 슈가 및 GalNAcT는 US 9,988,662(이의 전체 내용은 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 바와 같이 제조되었다.
종양 성장 억제(TGI%)는 처리군과 대조군 사이의 중앙 종양 부피(MTV)의 백분율 차이로 정의되었다. 종양 성장 억제(TGI)를 결정하기 위해 각각의 효능 연구 전반에 걸쳐 종양 크기를 측정하였다.
HPLC 정제를 페노메넥스 게미니(Phenomenex Gemini) 5 μm C18 110 Å, 250 x 10 mm, 반-분취 컬럼 상에서 수행하였다. 적용 가능한 경우, 접합체의 약물 함량을 분광광도계로 측정하고, 그렇지 않은 경우 약물 함량의 정량적 측정을 위해 RP-HPLC, LC/MS 또는 1H-NMR을 수행하였다.
항체-약물 접합체의 단백질 함량은 280 nM에서 분광광도계로 또는 ELISA에 의해 결정되었다.
항체-약물 접합체, 약물 운반 스캐폴드 또는 항체 스캐폴드를 필요에 따라 광범위한 투석여과, HIC 또는 단백질 A에 의해 정제(즉, 잔류 미반응 약물, 비접합 항체, 효소 또는 출발 물질의 제거)하였다. 필요한 경우, SEC 또는 HIC에 의한 추가 정제를 수행하여 응집된 항체-약물 접합체를 제거하였다. 일반적으로, 정제된 항체-약물 접합체는 SEC에 의해 결정 시 <5% (w/w)(예컨대, <2% (w/w)) 응집된 항체-약물 접합체; RP-HPLC 및/또는 LC-MS/MS에 의해 결정 시 <0.5% (w/w)(예컨대, <0.1% (w/w)) 유리(비접합) 약물; SEC 및/또는 RP-HPLC에 의해 결정 시 <1% (w/w) 유리 약물 접합체; 및 HIC-HPLC 및/또는 RP-HPLC에 의해 결정 시 <2% (w/w)(예컨대, <1% (w/w)) 비접합 항체 또는 항체 단편을 함유하였다. 환원되거나 부분적으로 환원된 항체는 문헌에 기재된 절차를 이용하여 제조되었다(예컨대, 문헌(Francisco et al., Blood 102 (4): 1458-1465 (2003)) 참조). 총 약물(접합 및 비접합) 농도는 RP-HPLC 또는 CE-SDS에 의해 측정된 DAR로부터의 역계산에 의해 결정되었다.
생물학적 샘플에서 유리 AF-HPA 약물의 농도를 결정하기 위해 산성화된 샘플을 ACN으로 처리하였다. 유리 약물을 추출하고 ACN 상청액을 분석하였다. 비임상 샘플에서 접합된 AF-HPA의 농도를 결정하기 위해, 항-IgG1 항체 코팅된 자기 비드를 사용하여 샘플을 면역포획한 후 철저한 염기성 가수분해를 수행하였다. 방출된 AF-HPA 약물을 함유하는 ACN 상청액을 LC-MS/MS로 분석하였다. 비임상 샘플의 총 항체 농도는 트립신 분해 후 항체에 고유한 펩티드 서열의 검출을 통해 항-IgG1 항체를 사용한 면역포획 후 LC-MS/MS에 의해 측정되었다. 임상 샘플의 경우, 내인성 항체의 방해를 피하기 위해 항-이디오타입 항체를 면역 포획에 사용한다는 점을 제외하고 동일한 절차를 따를 수 있다.
유리 AF 및 AF-HPA의 분석은 C4 컬럼, ACN 구배 및 UV 검출을 이용하는 RP-HPLC에 의해 수행되었다. 피크 영역이 통합되어 AF 및 AF-HPA 표준과 비교된다. 이 방법은 혈장 및 조직 균질액에서 AF 및 AF-HPA에 대해 정량적이며 0.1 ng/mL 내지 150 ng/mL의 농도 범위에 걸쳐 선형이다. NaOH(aq)로 가수분해한 후 방출된 총 약물(AF-HPA)은 1 ng/mL 내지 5,000 ng/mL의 동적 범위로 동일한 조건 하에 측정되었다. 총 항체 표준 범위는 0.1 μg/mL 내지 100 μg/mL이다.
항체-약물 접합체의 소수성은 다이오드 어레이 검출기(DAD)가 장착된 시마주 프로미넌스(Shimadzu Prominence) HPLC 시스템에서 HIC-HPLC에 의해 결정되었다. 이들 분석을 위해 TSK 겔 부틸-NPR 컬럼(2.5 μm 입자 크기)을 35℃에서 유지하였다. 이동상 A는 1.5 M 황산암모늄, 25 mM 인산나트륨, pH 7.0이었고 이동상 B는 25 mM 인산나트륨, 10% 이소프로필 알콜 및 pH 7.0이었다. 25분에 걸쳐 이동상 B의 0-100% 선형 구배를 사용하여 분리를 수행하였다. 유속은 1 mL/분이었다. 샘플 주입 범위는 ~10 μg 내지 100 μg이었다.
약물 대 항체 비율(DAR)은 항체-약물 접합체를 철저한 염기 가수분해에 적용하여 결정되었다. 이어서, 방출된 AF-HPA를 RP-HPLC로 표준 곡선으로부터 정량화하였다. 측정된 AF-HPA 농도를 항체 함량과 관련시켜 DAR을 결정하였다.
실시예 1: 스캐폴드 6의 합성
Figure pct00209
단계 1. 화합물 3
Figure pct00210
화합물 1(548 mg, 0.165 mmol, US 15/819,650(이의 전체 내용은 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 바와 같이 제조됨), 물(14 mL), NMP(1.4 mL), EDC(158mg, 0.824 mmol) 및 HOAt(112 mg, 0.824 mmol)를 빙조에서 교반하고, pH를 1 N NaHCO3(aq)로 ~6.5로 조정하였다. 화합물 2(696 mg, 0.577 mmol)를 첨가한 다음, pH를 ~6.5로 조정하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 냉각 교반하였다. 추가의 EDC, HOAt 및 화합물 2(198 mg, 0.164 mmol)를 첨가하고, 교반을 밤새 계속하였다. 반응 혼합물을 10% v/v에서 50% v/v 이어서 90% v/v ACN/H2O(0.1% TFA)의 단계 구배로 C18 카트리지(275 g)에서 정제하였다. 원하는 분획을 동결건조하여 화합물 3을 백색 무정형 고체(825 mg, 76% 수율)로서 수득하였다. MS: 2120.04 (3+), 1590.27 (4+), 1272.41 (5+).
단계 2. 화합물 4
Figure pct00211
유리 파르(Parr) 병 내의 화합물 3(825 mg, 0.126 mmol), EtOH(90 mL) 및 물(9.00 mL)의 혼합물에 아세트산(0.288 mL, 5.04 mmol)을 첨가하였다. 아르곤을 혼합물을 통해 버블링시킨 다음, Pd/C(134 mg, 0.126 mmol)를 첨가하였다. 병을 수소화 장비에 부착한 다음 연속적으로 진공 펌핑하고, 아르곤으로 채운 후, 수소(0.762 mg, 0.378 mmol)로 30 psi까지 채우고, 혼합물을 밤새 격렬하게 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카 겔의 플러그를 통해 여과하고 오일로 농축시켰다. 오일을 ACN/H2O(0.1% TFA)에 용해시키고, 동결건조하여 화합물 4를 백색 무정형 고체(790 mg, 100% 수율)로서 수득하였다. MS: 2094.65 (3+), 1570.98 (4+), 1257.18 (5+).
단계 3. 화합물 5
Figure pct00212
THF(1.5 mL) 및 물(1.5 mL)에 용해된 화합물 4(100 mg, 0.016 mmol)의 빙냉각된 용액에 포름산(4.5 mL, 117 mmol)을 첨가하였다. 용액을 15분 동안 냉각 교반한 다음, 실온에서 밤새 교반하였다. THF를 제거하고, 생성된 혼합물을 물로 희석하고, ACN/H2O(0.1% TFA)를 이동상으로 사용하여 C18 카트리지(150 g)에서 정제하였다. 원하는 분획을 동결건조하여 화합물 5를 백색 무정형 고체(71 mg, 72% 수율)로서 수득하였다. MS: 2060.97 (3+), 1545.98 (4+), 1236.99 (5+).
단계 4. 스캐폴드 6
Figure pct00213
DCM(5 mL) 및 DMF(0.500 mL) 중의 화합물 5(71 mg, 0.011 mmol)의 빙냉각된 용액에 ((1R,8S,9s)-비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일)메틸 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카르보네이트(5.02 mg, 0.017 mmol) 및 DIPEA(0.018 mL, 0.103 mmol)을 첨가하였다(최종 pH ~8-9). 18시간 후, DMF(1.5 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 농축하고 ACN/H2O(0.1% AcOH)를 이동상으로 사용하는 분취용 HPLC에서 정제하였다. 원하는 분획을 동결건조하여 스캐폴드 6을 백색 무정형 고체(34 mg, 47% 수율)로서 수득하였다. MS: 2120.04 (3+), 1590.27 (4+), 1272.41 (5+).
실시예 2: 스캐폴드 6의 XMT-1535 약물 접합체의 합성(접합체 7, DAR 6.0)
Figure pct00214
상기 식에서,
Figure pct00215
는 GlcNac이고;
Figure pct00216
는 Fuc이고;
Figure pct00217
는 GalNac이다.
단계 1. 아지도 변형된 XMT-1535 항체
TBS, pH 7.6 중의 XMT-1535 항체(910.6 mg, 6.22 μmole)에 TBS(249 μL, pH 7.6), Endo SH(9.10 mg, 0.065 μmole), GalNAcT(77.9 mg, 1.69 μmole), UDP-아지도 슈가(144 mg, 227 μmole)를 순서대로 첨가하여 15 g/L의 최종 항체 농도를 달성하였다. 반응물을 30℃에서 밤새 30 rpm으로 교반하였다. 미정제 아지도 변형된 XMT-1535 항체를 단백질 A 크로마토그래피 및 투석으로 정제하여 아지도 변형 XMT-1535 항체(880 mg, 97% 수율)를 수득하였다.
단계 2. 스캐폴드 6의 XMT-1535 약물 접합체(접합체 7, DAR 6.0)
PBS, pH 7.4(5.5 mL) 중의 아지도 변형된 XMT-1535 항체(300 mg, 2.05 μmole) 및 물 중의 스캐폴드 6(127.2 mg, 20.0 μmole)을 부드럽게 혼합한 후, 진탕하거나 흔들지 않고 30℃에서 20시간 동안 방치하였다. 미정제 생성물을 UF/DF 및 HIC에 의해 정제하여 접합체 7(132 mg, 44% 수율)을 수득하였으며, 가수분해에 이어 RP-HPLC에 의해 결정 시 6.6의 DAR을 가졌다.
실시예 3: 스캐폴드 6의 XMT-1519 접합체의 합성(접합체 8, DAR 7.3)
Figure pct00218
상기 식에서,
Figure pct00219
는 GlcNac이고;
Figure pct00220
는 Fuc이고;
Figure pct00221
는 GalNac이다.
접합체 8은 아지도 변형된 XMT-1519(400 mg, 2.78 μmole)를 단계 2에서 아지도 변형된 XMT-1535 항체 대신 사용하는 것을 제외하고는 실시예 2에 기재된 바와 같이 합성하였다. 정제된 접합체 8(163 mg, 41% 수율)은 가수분해에 이어 RP-HPLC에 의해 결정 시 약물을 7.3의 DAR로 가졌다.
실시예 4: 스캐폴드 6의 트라스투주맙 접합체의 합성(접합체 9, DAR 7.3)
Figure pct00222
상기 식에서,
Figure pct00223
는 GlcNac이고;
Figure pct00224
는 Fuc이고;
Figure pct00225
는 GalNac이다.
접합체 9는 아지도 변형된 트라스투주맙(35 mg, 0.239 μmol)을 단계 2에서 아지도 변형된 XMT-1535 항체 대신 사용하는 것을 제외하고는 실시예 2에 기재된 바와 같이 합성하였다. 정제된 접합체 9는 가수분해에 이어 RP-HPLC에 의해 결정 시 7.3의 DAR로 가졌다.
실시예 5: 스캐폴드 6의 리툭시맙 접합체의 합성(접합체 10, DAR 6.8)
Figure pct00226
상기 식에서,
Figure pct00227
는 GlcNac이고;
Figure pct00228
는 Fuc이고;
Figure pct00229
는 GalNac이다.
접합체 10은 아지도 변형된 리툭시맙(40 mg, 0.28 μmole)을 단계 2에서 아지도 변형된 XMT-1535 항체 대신 사용하는 것을 제외하고는 실시예 2에 기재된 바와 같이 합성하였다. 정제된 접합체 10은 가수분해에 이어 RP-HPLC에 의해 결정 시 6.8의 DAR로 가졌다.
실시예 6: XMT-1535 접합체 11의 합성(DAR 6.5)
Figure pct00230
+4℃에서 나트륨 아세테이트 완충액(25 mM, pH 5.5, 21.1 mL) 중의 XMT-1535(200 mg, 1.37 μmol) 용액에 TEAA(aq, 50 mM) 및 EDTA(1 mM, pH 7.0, 18.95 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물의 pH를 NaHCO3(aq, 1.0 M)를 사용하여 pH 7.0으로 조정한 다음, TEAA(aq, 50 mM) 및 EDTA(1 mM, pH 7.0) 중의 TCEP(1.37 mg, 4.77 μmole)를 첨가하였다. 90분 후, 반응 혼합물의 pH를 아세트산(aq, 1.0M)을 사용하여 pH 6.0으로 조정하였다. TEAA(aq, 50 mM, 9.5 mL) 및 EDTA(1 mM, pH 7.0) 중의 스캐폴드 6의 말레이미도 스캐폴드(79.8 mg, 12.3 μmol, US 15/819,650(이의 전체 내용은 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 바와 같이 제조됨)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 +4℃에서 2시간 동안 교반하였다. 2시간 후, L-시스테인(8.28 mg, 68.3 μmole)을 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 미정제 생성물을 UF/DF 및 HIC(75.2 mg, 38% 수율)에 의해 정제하여 확률적 접합체 11을 수득하였다. 정제된 접합체 11은 가수분해에 이어 RP-HPLC에 의해 결정 시 6.5의 DAR을 가졌다.
실시예 7: XMT-1519 접합체 12의 합성(DAR 6.6)
Figure pct00231
접합체 12는 XMT-1519 항체(500 mg, 3.47 μmole)를 XMT-1535 항체 대신 사용하는 것을 제외하고는 실시예 6에 기재된 바와 같이 합성하였다. 정제된 접합체 12는 가수분해에 이어 RP-HPLC에 의해 결정 시 6.6의 DAR로 가졌다.
실시예 8: 트라스투주맙 접합체 13의 합성(DAR 6.4)
Figure pct00232
접합체 13은 트라스투주맙(40 mg, 0.273 μmole)을 XMT-1535 항체 대신 사용하고 환원을 실온에서 수행하는 것을 제외하고는 실시예 6에 기재된 바와 같이 합성하였다. 정제된 접합체 13은 가수분해에 이어 RP-HPLC에 의해 결정 시 6.4의 DAR로 가졌다.
실시예 9: ELISA에 의한 NaPi2b 펩티드에 대한 NaPi2b 항체-약물 접합체의 결합
인간 NaPi2b 유래된 펩티드(QINVTVPSTANCTSPSLCWTDGIQNWTMKN)를 96 웰 플레이트의 각각의 웰 표면에 펩티드(PBS 중 1 μg/mL)와 함께 +4℃에서 밤새 인큐베이션하여 코팅하였다. 이어서, 웰을 실온에서 1시간 동안 BSA(PBS 중 3%, 0.1% 트윈 20(PBST) 함유)와 함께 인큐베이션하여 차단하였다. 이어서, 시험 항목(XMT-1535, 접합체 7 또는 접합체 11)의 다양한 희석액(0.017 nM 내지 1 μM; PBS 중 3% BSA의 3배 연속 희석액)을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 부드럽게 흔들면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 비결합된 시험 항목을 PBST(3x)로 세척하여 제거하였다. HRP에 접합된 2차 항-인간 IgG(PBST 중 0.16 μg/mL)를 각각의 웰에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 비결합된 2차 항체는 PBST(3x)로 세척하여 제거하였다. HRP 기질인 TMB를 각각의 웰에 첨가하고, 청색이 보일 때까지 인큐베이션하였다. 황산(0.2 N, 100 μL)을 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 플레이트 판독기(Molecular Devices, Spectramax M5)에서 450 nM에서의 흡광도를 측정하였다. 값은 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 소프트웨어를 사용하여 플로팅되었다. EC50 값은 4-파라미터 곡선 피팅에 의해 결정되었다. 표 I는 결합 값(EC50)을 요약한다.
Figure pct00233
표 I에 나타난 바와 같이, XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11은 유사한 EC50 값을 나타낸다. 표시된 결과는 접합체 7 및 접합체 11에 대해서는 3회 반복 실험의 평균 EC50 값 및 표준편차이고, XMT-1535에 대해서는 2회 반복 실험의 평균 EC50 값이다.
실시예 9A: ELISA에 의한 NaPi2b 펩티드에 대한 NaPi2b 항체-약물 접합체의 결합
NaPi2b 유래된 펩티드에 대한 NaPi2b 항체-약물 접합체의 결합은 인간([Cyc(12,18)]Ac-QINVTVPSTANCTSPSLCWTDGIQNWTMKN-아미드), 시노몰구스 원숭이([Cyc(12,18)]Ac-QMNVTVPSMANCTSPSLCWTDGIQIWTMKN-아미드), 래트([Cyc(12,18)]Ac-EENVTVPSPDNCTSPSYCWTDGIQTWTIQN-아미드) 또는 마우스([Cyc(12,18)]Ac-EMNVTVPSTDNCTSPSYCWTDGIQTWTIQN-아미드)로부터 유래된 NaPi2b 유래된 펩티드가 사용되는 것을 제외하고는 실시예 9에 기재된 바와 같이 수행되었다. 표 IA는 결합 값(EC50)을 요약한다.
Figure pct00234
표 IA에 나타난 바와 같이, XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11은 인간, 시놀모구스 원숭이, 래트 및 마우스로부터의 NaPi2b 펩티드에 대한 결합에 대해 유사한 EC50 값을 나타낸다. 표시된 결과는 각각의 시험 항목에 대한 2회 반복 실험의 평균 EC50 값이다.
실시예 10: ELISA에 의한 재조합 HER2 단백질에 대한 Her2 표적화된 항체-약물 접합체의 결합
재조합 인간 HER2(Acro Biosystems)를 +4℃에서 밤새 PBS에서 1 μg/mL로 인큐베이션하여 96 웰 플레이트의 각각의 웰 표면에 코팅하였다. 이어서, 웰을 실온에서 1시간 동안 PBST와 함께 인큐베이션함으로써 차단하였다. 그 다음, 시험 항목(XMT-1519, 접합체 8, 또는 접합체 12)의 다양한 희석액(9.54 Х 10-5 nM 내지 100 nM, PBS 중 1% BSA의 4배 연속 희석)을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 부드럽게 흔들면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 비결합된 시험 항목을 PBST(3x)로 세척하여 제거하였다. HRP에 접합된 2차 항-인간 IgG(PBST 중 0.16 μg/ml)를 각각의 웰에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 비결합된 2차 항체를 PBST(3x)로 세척하여 제거하였다. HRP 기질인 TMB를 각각의 웰에 첨가하고, 청색이 보일 때까지 인큐베이션하였다. 황산(0.2 N, 100 μL)을 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 플레이트 판독기(Molecular Devices, Spectramax M5)에서 450 nM에서의 흡광도를 측정하였다. 값은 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용하여 플로팅되었다. EC50 값은 4-파라미터 곡선 피팅에 의해 결정되었다. 표 II는 평균 결합 값(EC50)을 요약한다.
Figure pct00235
표 II에 나타난 바와 같이, XMT-1519, 접합체 8, 및 접합체 12는 유사한 EC50 값을 나타낸다. 결과는 각각의 시험 항목에 대한 2회 반복 실험의 평균 EC50 값이다.
실시예 11: 항체-약물 접합체의 NaPi2b 유래된 펩티드에 대한 결합 친화성
고정화된 NaPi2b 유래된 펩티드 항원에 대한 XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11의 결합 동역학은 생물층 간섭계(Biolayer Interferometry: BLI; Octet; ForteBio)로 측정되었다. XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11에 대한 결합 상수는 표준 옥테트 절차(ForteBio)를 이용하여 결정되었다. 바이오티닐화된 NaPi2b 유래된 펩티드(QINVTVPSTANCTSPSLCWTDGIQNWTMKN-바이오틴; Genscript)는 동역학 완충액(10x)에서 스트렙타비딘 옥테트 센서에 고정되었다. 이어서, 센서를 바이오시틴(50 μg/mL)을 갖는 동역학 완충액(10x)에서 차단하였다. 이어서, XMT-1535, 접합체 7, 또는 접합체 11의 농도를 증가시키면 동역학 완충액(10x)에서 고정된 펩티드와 회합되었다.
표 III은 NaPi2b 유래된 펩티드에 대한 XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11에 대한 25℃에서의 Kd(평형 해리 상수), kon(회합 속도), 및 koff(해리 속도)를 요약한다.
Figure pct00236
표 Ⅲ에 나타난 바와 같이, XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11은 NaPi2b 유래된 펩티드에 대한 결합에 대해 유사한 Kd 값을 나타낸다. 표시된 결과는 각각의 시험 항목에 대한 4회 반복 실험의 평균 및 표준편차 값이다.
실시예 12: Fc 수용체에 대한 항체-약물 접합체의 결합 친화성
XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11의 Fc 수용체(FcRn, FcγRI, FcγRIIA(H167), 및 FcγRIIIA(V176)에 대한 결합 동역학은 25℃에서 생물층 간섭계(BLI; ForteBio Octet QKe)에 의해 결정되었다. Fcγ 수용체에 대한 결합을 시험하기 위해, XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11을 동역학 완충액(1x)에서 1 μg/mL로 희석하고, 10분 동안 항-인간 Fab-CH1(FAB2G) 바이오센서에 포획하였다. 희석 및 기준선 측정은 동역학 완충액(1x)에서 수행되었다. 기준선 측정은 각각의 포획 단계 전후 61분에 수행되었다. 다양한 Fc 수용체에 대한 회합 측정은 7가지의 농도(1 μM 내지 100 nM, 2배 연속 희석)에서 5분 동안 수행되었다. 15분 동안 해리를 수행하였다. 결합 상수는 1:1 모델을 사용하여 트레이스의 전역 적합 평균으로 계산되었다. Fc 수용체에 대한 XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11에 대한 결합 상수는 표준 옥테트 절차(ForteBio)를 이용하여 결정되었다. 동역학 파라미터는 옥테트 소프트웨어(ForteBio)를 사용하여 계산되었다.
FcRn 수용체에 대한 결합을 시험하기 위해, Fab-CH1(FAB2G) 바이오센서에 대한 XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11의 회합을 상기와 같이 수행하였다. 회합 후, 센서를 FcRn 결합 완충액(Boston Bioproducts; 100 mM NaH2PO4, 0.05% Tween 20, pH 6.0으로 희석됨)에서 5분 동안 세척하였다. 회합 및 해리 단계를 FcRn 결합 완충액에서 수행하였다. FcRn 단백질(Immunitrack)에 대한 회합 측정은 5분 동안 7가지 농도(1 μM 내지 100 nM, 2배 연속 희석)에서 측정되었다. 해리는 15분 동안 수행되었다. 결합 상수는 1:1 모델을 사용하여 트레이스의 전역 적합 평균으로 계산되었다.
표 IV-VII는 각각의 시험 항목에 대한 인간 FcRn(표 IV), FcγRI(표 V), FcγRIIA H167(표 VI), 및 FcγRIIIA V167(표 VII)에 대한 Kd(평형 해리 상수), kon(회합 속도), 및 koff(해리 속도)를 요약한다.
Figure pct00237
표 IV에 나타난 바와 같이, XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11은 유사한 FcRn Kd 값을 나타낸다. 표시된 결과는 접합체 7 및 접합체 11에 대한 5회 반복 실험의 평균 및 표준편차 값, 및 XMT-1535 항체에 대한 2회 반복 실험의 평균 값이다.
Figure pct00238
표 V에 나타난 바와 같이, 접합체 7은 접합체 11 및 XMT-1535에 비해 더 큰 FcγRI Kd 및 더 높은 koff 값을 나타낸다. 표시된 결과는 접합체 7 및 XMT-1535에 대한 3회 반복 실험의 평균 및 표준편차 값이고, 접합체 11에 대한 2회 반복 실험에 대한 평균 친화도 값이다.
Figure pct00239
표 VI에 나타난 바와 같이, 접합체 7은 FcγRIIA에 결합하지 않는 반면, 접합체 11 및 XMT-1535는 FcγRIIA에 대한 결합에 대해 유사한 Kd를 갖는다. 표시된 결과는 접합체 7 및 XMT-1535에 대한 3회 반복 실험의 평균 및 표준편차 값이고, 접합체 11에 대한 2회 반복 실험의 평균 값이다.
Figure pct00240
표 VII에 나타난 바와 같이, 접합체 7은 FcγRIIIA에 결합하지 않는 반면, 접합체 11 및 XMT-1535는 FcγRIIIA에 대한 결합에 대해 유사한 Kd를 갖는다. 표시된 결과는 각각의 시험 항목에 대한 2회 반복 실험의 평균 값이다.
실시예 13: NaPi2b 항체-약물 접합체에 대한 세포 결합 검정
배양된 OVCAR3 인간 난소 암종 세포에 대한 XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11의 세포 표면 결합을 MACSQuant 유동 세포측정기(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)를 사용하여 평가하였다. FBS(20%, ATCC) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(1%)을 갖는 RPMI-1640 배지(ATCC)에서 성장된 OVCAR3 세포를 아쿠타제(Accutase) 세포 분리 용액(Innovative Cell Technologies)으로 처리하여 분리하였다. 분리된 세포를 배지에서 분쇄하고, 배지(75 μL)에서 50,000개 세포의 밀도로 96 웰 U 바닥 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 6% 염소 혈청을 갖는 총 부피 100 μL의 RPMI-1640에서 다양한 농도(1 μM 내지 0.5 nM, 3배 연속 희석)의 시험 항목(XMT-1535, 접합체 7, 또는 접합체 11)과 함께 얼음 상에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 빙냉각된 PBS(3x)로 세척하고, 각각의 세척 단계 사이에 1,000 Х RCF에서 펠렛화하고, 2% 염소 혈청(100 μL) 및 2차 형광 표지된 항체, Alexa Fluor® 647-표지된 염소 항-인간 IgG(5 μg/mL, Life Technologies)를 갖는 RPMI-1640에 1시간 동안 얼음 상에서 재현탁하였다. 세포를 빙냉각된 PBS(3x)로 세척하고, 1% 파라포름알데히드(100 μL)를 갖는 빙냉각된 PBS에 재현탁하였다. 세포당 형광은 유세포 세포측정기에서 각각의 처리에 대해 5,000개 세포를 분석하여 결정되었다. 각각의 처리에 대한 중앙 형광 값을 플로팅하고, EC50 값을 4-파라미터 곡선 피팅에 의해 그래프패드 프리즘 소프트웨어로 계산하였다.
표 VIII는 OVCAR3 세포의 세포 표면 상의 NaPi2b에 대한 결합에 대한 XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11의 EC50 값을 요약한다.
Figure pct00241
표 VIII에 나타난 바와 같이, XMT-1535, 접합체 7, 및 접합체 11은 유사한 EC50 값을 나타낸다. 결과는 각각의 시험 항목에 대한 2회 반복 실험에 대한 평균 값이다.
실시예 14: HER2 항체-약물 접합체에 대한 세포 결합 검정
JIMT-1 세포에 대한 항체-약물 접합체의 세포 표면 결합을 MACSQuant 유동 세포측정기(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)를 사용하여 평가하였다. FBS(10%, ATCC)를 갖는 DMEM 배지(ATCC)에서 성장된 JIMT-1 세포를 아쿠타제 세포 분리 용액(Innovative Cell Technologies, San Diego, CA)으로 처리하여 분리하였다. 분리된 세포를 배지에서 분쇄하고, 75 μL 배지에서 50,000개 세포의 밀도로 96 웰 U 바닥 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 6% 염소 혈청(100 μL)을 갖는 DMEM에서 다양한 농도(1 μM 내지 0.5 nM; 3배 연속 희석)의 시험 항목(XMT-1519, 접합체 8, 접합체 9, 접합체 12, 또는 접합체 13)과 함께 얼음 상에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 빙냉각된 PBS로 3회 세척하고, 각각의 세척 단계 사이에 1,000 Х RCF에서 펠렛화하고, 2% 염소 혈청(100 μL) 및 2차 형광 표지된 항체, Alexa Fluor® 647-표지된 염소 항-인간 IgG(5 μg/mL, Life Technologies)를 갖는 DMEM에 1시간 동안 얼음 상에서 재현탁하였다. 세포를 빙냉각된 PBS(3x)로 세척하고, 1% 파라포름알데히드(100 μL)를 갖는 빙냉각된 PBS에 재현탁하였다. 세포당 형광의 양은 유동 세포측정기에서 각각의 처리에 대해 5,000개 세포를 분석하여 결정되었다. 각각의 처리에 대한 중앙 형광 값을 플로팅하고, EC50 값을 4-파라미터 곡선 피팅에 의해 그래프패드 프리즘 소프트웨어로 계산하였다.
표 IX는 JIMT-1 세포의 세포 표면 상의 HER2에 대한 결합에 대한 항체-약물 접합체 및 XMT-1519 항체의 EC50 값을 요약한 것이다.
Figure pct00242
표 IX에 나타난 바와 같이, XMT-1519, 접합체 8, 접합체 9, 접합체 12, 및 접합체 13은 좁은 범위 내에서 EC50 값을 나타낸다. 표시된 결과는 XMT-1519, 접합체 8, 및 접합체 12에 대한 2회 반복 실험의 평균 값 및 접합체 9 및 접합체 13에 대한 단일 실험으로부터의 EC50 값이다.
실시예 15: NaPi2b-항체-약물 접합체에 대한 세포독성 검정
접합체 7 및 접합체 11은 CellTiter-Glo®(Promega Corp)를 사용하여 시험관내에서 종양 세포주 OVCAR3에서의 항증식 특성에 대해 평가되었다. 세포를 백색벽(부피) 96 웰 플레이트에 웰당 5,000개 세포의 밀도로 플레이팅하고, 5% CO2의 가습 분위기에서 37℃에서 밤새 부착되도록 하였다. 세포를 시험 항목(접합체 7 또는 접합체 11, 또는 대조군 접합체 10)의 농도를 증가시키면서 인큐베이션하였다. 3일 후 CellTiter-Glo® 시약을 실온에서 웰에 첨가하였다. 스펙트라막스(SpectraMax) M5 플레이트 판독기(Molecular Devices)를 사용하여 10분 후에 발광 신호를 측정하였다. 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용하여 용량-반응 곡선을 생성하였다. EC50 값은 4-파라미터 곡선 피팅으로부터 결정되었다. 표 X는 처리 6일 후 접합체 7, 접합체 11, 및 대조군 접합체 10의 EC50 값을 요약한다.
Figure pct00243
표 X에 나타난 바와 같이, 접합체 7 및 접합체 11은 유사한 효능을 나타내는 반면, 대조군 항체-약물 접합체인 접합체 10은 접합체 7 및 접합체 11보다 200배 덜 강력하였다. 나타낸 결과는 각각의 시험 항목에 대한 2회 반복 실험에 대한 평균 값이다.
실시예 16: HER2-항체-약물 접합체에 대한 세포 생존력 검정
CellTiter-Glo®(Promega Corp)를 사용하여 시험관내에서 접합체 8, 접합체 10 및 접합체 12는 종양 세포주 JIMT-1에서 항증식 특성에 대해 평가되었고, 접합체 9 및 접합체 13은 종양 세포주 JIMT-1 및 SKBR3에서 항증식 특성에 대해 평가되었다. 세포를 백색벽(부피) 96 웰 플레이트에 웰당 5,000개 세포의 밀도로 플레이팅하고, 5% CO2의 가습 분위기에서 37℃에서 밤새 부착되도록 하였다. 세포를 증가하는 농도의 시험 항목(접합체 8, 접합체 9, 접합체 10, 접합체 12, 또는 접합체 13)과 함께 인큐베이션하였다. 접합체 9 및 접합체 13에 대해 3일 또는 접합체 8, 접합체 12 및 대조군 항체-약물 접합체인 접합체 10에 대해 6일 후, CellTiter-Glo® 시약을 실온에서 웰에 첨가하였다. 스펙트라막스 M5 플레이트 판독기(Molecular Devices)를 사용하여 10분 후에 발광 신호를 측정하였다. 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용하여 용량 반응 곡선을 생성하였다. EC50 값은 4-파라미터 곡선 피팅으로부터 결정되었다.
표 XI는 처리 6일 후 접합체 8, 접합체 12, 및 대조군 항체-약물 접합체, 접합체 10의 EC50 값을 요약한다.
Figure pct00244
표 XI에 나타난 바와 같이, 접합체 8 및 접합체 12는 유사한 효능을 나타내었다. 접합체 8 및 접합체 12 둘 모두는 대조군 항체-약물 접합체인 접합체 10보다 25배 초과로 강력하였다. 결과는 각각의 시험 항목에 대한 3회 반복 실험의 평균이다.
표 XII는 처리 3일 후 접합체 9 및 접합체 13의 EC50 값을 요약한 것이다.
Figure pct00245
표 XII에 나타난 바와 같이, 접합체 9 및 접합체 13은 JIMT-1 및 SKBR3 세포주 둘 다에서 유사한 효능을 나타내었다. 결과는 각각의 시험 항목에 대한 단일 실험의 값이다.
실시예 17: NaPi2b 항체-약물 접합체 투여 후 마우스에서 혈장 노출
암컷 무흉선 누드 마우스에 OVCAR3 세포를 피하 접종하였다(각각의 그룹에 대해 n=4). 접합체 7, 접합체 11, 또는 비히클은 0.05 mg/kg 용량 페이로드로 제1일에(그룹당 평균 종양 크기 174-176 mm3, 범위 126-257 mm3) 단일 용량으로 정맥내 투여되었다. 혈장을 투여 후 10분, 24시간, 96시간, 168시간, 336시간 및 504시간에 수집하였다. 혈장에서 접합된 AF-HPA 농도는 표 XIII에 요약된 바와 같이 LC-MS/MS 분석에 의해 결정되었다.
Figure pct00246
표 XIII에 나타난 바와 같이, 접합체 7은 접합체 11에 비해 접합체 AF-HPA의 더 높은 AUC 및 더 짧은 t½, 및 더 낮은 Clobs 및 Volss(분포 부피)를 나타내었다. Cmax 및 t½ 값은 접합체 7 및 접합체 11에 대해 거의 동등하였다.
실시예 18: NaPi2b 항체-약물 접합체 투여 후 마우스에서 조직 분포
암컷 무흉선 누드 마우스에 OVCAR3 세포를 피하 접종하였다. 37마리의 종양 보유 마우스(418.5 mm3의 평균 종양 부피; 204-698 mm3의 범위)에 0.05 mg/kg 페이로드로 단일 용량의 접합체 7을 투여하였다. 1, 24, 48, 72, 96, 168, 336, 504시간(그룹당 4마리 마우스) 및 672시간(5마리 마우스) 후에, 혈장, 종양 조직, 비장, 폐, 간 및 신장을 수거하였다. 또한, 4마리의 종양 보유 마우스(653.7 mm3의 평균 종양 부피; 589-687 mm3의 범위)에 비히클 대조군을 투여하고, 1시간 후에 수거하였다. 조직을 균질화한 다음, 총 약물의 농도, 유리 AF-HPA 및 유리 AF 농도를 LC-MS/MS 분석에 의해 결정하였고; 접합된 약물의 농도를 [총 약물 - (유리 AF-HPA + 유리 AF)]에 의해 계산하였다. 조직 분포에 대한 결과는 표 XIV에 요약되어 있다.
Figure pct00247
실시예 19: NaPi2b 항체-약물 접합체 투여 후 래트에서 혈장 노출
암컷 스프래그-다우리(Sprague-Dawley) 래트에 0.34 mg/kg 용량 페이로드로 접합체 7 또는 접합체 11을 꼬리 정맥에 IV 볼루스로 접종하였다(각각의 그룹에 대해 n=4). 혈장을 투여 후 10분, 24시간, 96시간, 168시간, 336시간 및 504시간에 수집하였다. 혈장 중 접합된 AF-HPA 농도는 표 XV에 요약된 바와 같이 LC-MS/MS 분석에 의해 결정되었다.
Figure pct00248
표 XV에 나타난 바와 같이, 접합체 7은 접합체 11에 비해 더 높은 AUC inf , 더 낮은 Cmax, 더 짧은 t½, 더 낮은 Clobs, 및 더 낮은 Volss의 접합된 AF-HPA를 나타내었다.
실시예 20: NaPi2b 항체-약물 접합체 투여 후 시노몰구스 원숭이에서 혈장 노출
암컷 시노몰구스 원숭이에게 30분에 걸쳐 IV 주입에 의해 항체에 의해 1 mg/kg의 접합체 7 또는 접합체 11을 정맥내 주사하였다(각각의 그룹에 대해 n=2). 투여 후 1시간, 8시간, 24시간, 48시간, 96시간, 168시간, 240시간, 288시간, 336시간, 456시간 및 504시간에 혈장을 수집하였다. 혈장에서 접합된 AF-HPA 농도는 표 XVI에 요약된 바와 같이 LC-MS/MS 분석에 의해 결정되었다.
Figure pct00249
표 XVI에 나타난 바와 같이, 접합체 7은 접합체 11에 비해 더 긴 t½, 더 큰 AUCinf, 더 낮은 Clobs 및 Volss의 접합된 AF-HPA를 가졌다. Cmax 값은 2개의 접합체에 대해 거의 동등하였다.
실시예 21: NaPi2b 항체-약물 접합체 투여 후 시노몰구스 원숭이에서 혈장 노출
시노몰구스 원숭이(n=3 수컷; n=3 암컷)에게 45분에 걸쳐 IV 주입에 의해 항체에 의해 1.86, 3.72 또는 5.60 mg/kg의 접합체 7을 정맥내 주사하였다. 투여 전 및 투여 후 1시간, 6시간, 24시간, 96시간, 168시간, 240시간, 336시간 및 504시간에 혈장을 수집하였다. 혈장 내 접합된 AF-HPA 농도는 표 XVII에 요약된 바와 같이 LC-MS/MS 분석에 의해 결정되었다.
Figure pct00250
표 XVII는 접합체 7에 대한 청소율, 반감기 및 AUCinf를 요약한다.
실시예 22: OVCAR3에서 NaPi2b 항체-약물 접합체의 투여에 대한 종양 성장 반응
암컷 무흉선 누드 마우스에 OVCAR3 세포를 피하 접종하였다(각각의 그룹에 대해 n=8). 접합체 7, 접합체 11, 대조군 접합체 10, 또는 비히클을 제1일에 단일 용량으로 정맥내 투여하였다(그룹당 167-168 mm3의 평균 종양 크기; 85-297 mm3의 범위). 종양 크기를 디지털 캘리퍼스를 사용하여 도 7에 표시된 시간에 측정하였다. 종양 부피를 계산하고, 종양 성장의 지연을 결정하는 데 사용하였다. 종양이 ≥1500 mm3의 크기에 도달했을 때 마우스를 희생시켰다. 종양 부피는 각각의 그룹에 대해 평균 ± SEM으로 보고된다.
도 7은 0.025 mg/kg, 0.05 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 페이로드의 접합체 7, 접합체 11, 또는 대조군 접합체 10, 또는 비히클을 제1일에 단일 용량으로 IV 투여한 후 OVCAR3 세포로 피하 접종된 마우스에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다(각각의 그룹에 대해 n=8).
접합체 10을 제외한 모든 시험 항목은 제33일에 60% 이상의 종양 성장 억제(TGI)를 유도하였다. 접합체 10 처리는 43%의 TGI를 유도하였다. 0.1 mg/kg 및 0.05 mg/kg의 접합체 7 및 0.1 mg/kg의 접합체 11로의 처리는 100 mm3 미만의 그룹 평균 종양 부피를 유도하고 대부분의 종양이 제33일까지 퇴행함으로써 가장 심오한 효능을 입증하였다. 완전한 퇴행을 달성하는 3개의 종양을 포함하여 연구의 마지막 날인 제102일까지 연장된 종양 성장 억제에 의해 입증되는 바와 같이 0.1 mg/kg의 접합체 7로의 처리는 OVCAR3 종양에 대해 가장 큰 효능을 나타내었다. 다른 모든 그룹은 연구가 진행됨에 따라 종양 재성장을 경험하였다.
실시예 23: CTG-0852에서 NaPi2b 항체-약물 접합체의 투여에 대한 종양 성장 반응
무흉선 마우스에 CTG-0852 폐 선암종 세포를 피하 접종하였다(각각의 그룹에 대해 n=8). 접합체 7(0.025 mg/kg, 0.05 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 페이로드), 대조군 접합체 10(0.05 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 페이로드), 또는 비히클을 제1일에 단일 용량으로 정맥내 투여하였다(그룹당 150-300 mm3의 평균 종양 크기; 85-297 mm3의 범위). 종양 부피를 계산하고 종양 성장의 지연을 결정하는 데 사용하였다. 종양이 ≥1500 mm3의 크기에 도달하면 마우스를 희생시켰다. 도 8은 종양 부피가 각각의 그룹에 대해 평균 ± SEM으로 보고된다는 것을 나타낸다.
도 8은 접합체 7(0.025 mg/kg, 0.05 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 페이로드), 대조군 접합체 10(0.05 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 페이로드), 또는 비히클을 제1일에 단일 용량으로 IV 투여한 후 CTG-0852 폐 선암종 세포로 피하 접종된 마우스에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다(각각의 그룹에 대해 n=8).
접합체 7은 모든 용량 수준에서 용량 의존적, 표적 의존적 종양 성장 억제(TGI)를 나타내었다(도 8). 0.1 mg/kg 페이로드의 용량에서, 접합체 7은 118%의 TGI를 나타내었고, 제49일까지 지속적인 종양 퇴행을 유도한 후, 평균 종양 부피가 천천히 증가하였다. 0.05 mg/kg 페이로드에서, 접합체 7은 102%의 TGI를 나타내었고, 제28일까지 종양 퇴행을 유도하였으며, 그 후 평균 종양 부피가 증가하였다. 접합체 7은 0.025 mg/kg 페이로드에서 종양 성장 억제를 유도하였다(TGI 77%). 접합체 10 처리는 0.1 mg/kg 용량 페이로드의 용량에서 28%의 TGI 및 0.05 mg/kg 페이로드에서 51%의 TGI를 유도하였다.
실시예 24: HER2 항체-약물 접합체의 투여에 대한 종양 성장 반응
암컷 CB.17 SCID 마우스에 JIMT-1 세포를 피하 접종하였다. 접합체 8, 접합체 9, 접합체 12, 접합체 13, 접합체 10, 또는 비히클을 제1일에 단일 용량으로 정맥내 투여하였다(종양 부피 = 150-200 mm3). 종양 크기를 디지털 캘리퍼스를 사용하여 도 9 및 도 10에 표시된 시간에 측정하였다. 종양 부피를 계산하고 종양 성장의 지연을 결정하는 데 사용하였다. 종양이 ≥1000 mm3의 크기에 도달하면 마우스를 희생시켰다. 종양 부피는 각각의 그룹에 대해 평균 ± SEM으로 보고된다.
도 9는 접합체 9 또는 접합체 13이 투여된 JIMT-1 종양 보유 마우스에서의 종양 반응에 대한 결과를 제공한다(각각의 그룹에 대해 n=10). 접합체 9 및 접합체 13으로 처리된 모든 마우스는 시험된 두 용량(0.067 mg/kg 및 0.199 mg/kg 페이로드)에서 항체-약물 접합체 둘 모두로 연장된 종양 성장 억제를 나타내고 종양 재성장을 나타내지 않았다.
도 10은 0.017 mg/kg, 0.033 mg/kg, 또는 0.067 mg/kg 페이로드의 비히클 또는 접합체 8, 접합체 12, 또는 대조군 접합체 10(각각의 그룹에 대해 n=8)을 제1일에 단일 용량으로 IV 투여한 후 JIMT-1 세포로 피하 접종된 마우스에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다(각각의 그룹에 대해 n=8). 0.033 mg/kg 및 0.067 mg/kg의 접합체 8 및 0.067 mg/kg의 접합체 12로의 처리는 50 mm3 미만의 그룹 평균 종양 부피를 유도하고 대부분의 종양이 제19일까지 퇴행함으로써 가장 심오한 효능을 입증하였다. 퇴행이 모든 종양에 대해 나타났으므로, 연구의 마지막 날인 제109일까지 연장된 종양 성장 억제에 의해 입증되는 바와 같이, 0.067 mg/kg의 접합체 8로의 처리는 JIMT-1에 대해 가장 큰 효능을 나타내었다. 다른 모든 그룹은 연구가 진행됨에 따라 종양 재성장을 경험하였다.
실시예 25: 래트에서 항체-약물 접합체의 독성 평가
항체-약물 접합체의 독성은 래트 연구에서 평가되었다. 페이로드를 기준으로 0.17 mg/kg, 0.34 mg/kg, 또는 0.51 mg/kg의 항-NaPi2b 항체-약물 접합체(접합체 7 또는 접합체 11) 또는 항-HER2 항체-약물 접합체(접합체 8 또는 접합체 12) , 또는 비히클을 암컷 스프래그-다우리 래트의 꼬리 정맥에 투여하였다(각각의 그룹에 대해 n=5). 투여 8일 후, 혈액학 및 독성학 분석을 위해 각각의 동물로부터 혈액을 수집하였다.
도 11-18은 실시예 18에 기재된 연구로부터 계산된 결과에 기초하여 접합체 7 또는 접합체 11에 대한 노출에 대응한 주요 독성학 파라미터의 상승을 나타낸다. 접합체 7은 접합체 11과 비교하여 주요 독성학 파라미터 AST, ALT, ALP, WBC, 호중구, 림프구, 독성학 파라미터 RBC 및 헤모글로빈의 더 낮은 노출 의존적 상승을 나타내었다.
도 19 내지 21은 실시예 18에 기재된 연구로부터 계산된 결과에 기초하여, 접합체 8 또는 접합체 12의 노출에 대응한 주요 독성학 파라미터의 상승을 나타낸다. 접합체 8은 접합체 12와 비교하여 주요 독성학 파라미터 AST, ALT, 및 ALP의 더 낮은 노출 의존적 상승을 나타내었다.
등가물
본 발명의 하나 이상의 실시양태의 세부사항은 상기 첨부된 설명에 기재되어 있다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 개시내용의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 방법 및 재료가 이제 기재된다. 본 개시내용의 다른 특색, 목적 및 이점은 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다. 본 명세서 및 첨부된 특허청구범위에서, 단수 형태는 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 인용된 모든 특허 및 공개문은 참조로 포함된다.
전술된 설명은 예시의 목적으로만 제시되었으며 본 발명을 개시된 정확한 형태로 제한하려는 것이 아니라 본원에 첨부된 청구범위에 의해 설명된다.
SEQUENCE LISTING <110> Mersana Therapeutics, Inc. <120> SITE SPECIFIC ANTIBODY-DRUG CONJUGATES WITH PEPTIDE-CONTAINING LINKERS <130> MRSN-029/001WO (322140-2414) <150> US 62/958,916 <151> 2020-01-09 <150> US 63/040,735 <151> 2020-06-18 <160> 31 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Asn Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Lys Gln Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Glu Thr Ala Arg Ala Thr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 2 <211> 215 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Val Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 3 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Asn Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Lys Gln Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Glu Thr Ala Arg Ala Thr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly 115 120 <210> 4 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Val Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 100 105 <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Asn Ile His 1 5 10 <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Lys Gln Lys Phe Arg 1 5 10 15 Gly <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Gly Glu Thr Ala Arg Ala Thr Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Phe Leu Asn 1 5 10 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Tyr Thr Ser Ser Leu Tyr Ser 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 11 <211> 329 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 12 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 13 <211> 357 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 13 caagttcagc tggttcagtc tggcgccgag gttgtgaaac ctggcgcctc tgtgaagatg 60 agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacaaca tccactgggt caagcaggcc 120 cctggacagg gactcgaatg gatcggagcc atctatcccg gcaacggcga caccagctac 180 aagcagaagt tccggggcag agccacactg accgccgata caagcaccag caccgtgtac 240 atggaactga gcagcctgag aagcgaggac agcgccgtgt actattgcgc cagaggcgaa 300 acagccagag ccacctttgc ctattggggc cagggaaccc tggtcaccgt tagctct 357 <210> 14 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 14 gatattcaga tgacacagag ccccagcagc ctgtctgcct ctgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gcgccagcca ggatatcggc aacttcctga actggtatca gcagaaaccc 120 ggcaagaccg tgaaggtgct gatctactac acctccagcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac tacaccctga ccatatctag cctgcagcct 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacagcaagc tgcccctgac atttggccag 300 ggcaccaagc tggaactgaa g 321 <210> 15 <211> 690 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Met Ala Pro Trp Pro Glu Leu Gly Asp Ala Gln Pro Asn Pro Asp Lys 1 5 10 15 Tyr Leu Glu Gly Ala Ala Gly Gln Gln Pro Thr Ala Pro Asp Lys Ser 20 25 30 Lys Glu Thr Asn Lys Thr Asp Asn Thr Glu Ala Pro Val Thr Lys Ile 35 40 45 Glu Leu Leu Pro Ser Tyr Ser Thr Ala Thr Leu Ile Asp Glu Pro Thr 50 55 60 Glu Val Asp Asp Pro Trp Asn Leu Pro Thr Leu Gln Asp Ser Gly Ile 65 70 75 80 Lys Trp Ser Glu Arg Asp Thr Lys Gly Lys Ile Leu Cys Phe Phe Gln 85 90 95 Gly Ile Gly Arg Leu Ile Leu Leu Leu Gly Phe Leu Tyr Phe Phe Val 100 105 110 Cys Ser Leu Asp Ile Leu Ser Ser Ala Phe Gln Leu Val Gly Gly Lys 115 120 125 Met Ala Gly Gln Phe Phe Ser Asn Ser Ser Ile Met Ser Asn Pro Leu 130 135 140 Leu Gly Leu Val Ile Gly Val Leu Val Thr Val Leu Val Gln Ser Ser 145 150 155 160 Ser Thr Ser Thr Ser Ile Val Val Ser Met Val Ser Ser Ser Leu Leu 165 170 175 Thr Val Arg Ala Ala Ile Pro Ile Ile Met Gly Ala Asn Ile Gly Thr 180 185 190 Ser Ile Thr Asn Thr Ile Val Ala Leu Met Gln Val Gly Asp Arg Ser 195 200 205 Glu Phe Arg Arg Ala Phe Ala Gly Ala Thr Val His Asp Phe Phe Asn 210 215 220 Trp Leu Ser Val Leu Val Leu Leu Pro Val Glu Val Ala Thr His Tyr 225 230 235 240 Leu Glu Ile Ile Thr Gln Leu Ile Val Glu Ser Phe His Phe Lys Asn 245 250 255 Gly Glu Asp Ala Pro Asp Leu Leu Lys Val Ile Thr Lys Pro Phe Thr 260 265 270 Lys Leu Ile Val Gln Leu Asp Lys Lys Val Ile Ser Gln Ile Ala Met 275 280 285 Asn Asp Glu Lys Ala Lys Asn Lys Ser Leu Val Lys Ile Trp Cys Lys 290 295 300 Thr Phe Thr Asn Lys Thr Gln Ile Asn Val Thr Val Pro Ser Thr Ala 305 310 315 320 Asn Cys Thr Ser Pro Ser Leu Cys Trp Thr Asp Gly Ile Gln Asn Trp 325 330 335 Thr Met Lys Asn Val Thr Tyr Lys Glu Asn Ile Ala Lys Cys Gln His 340 345 350 Ile Phe Val Asn Phe His Leu Pro Asp Leu Ala Val Gly Thr Ile Leu 355 360 365 Leu Ile Leu Ser Leu Leu Val Leu Cys Gly Cys Leu Ile Met Ile Val 370 375 380 Lys Ile Leu Gly Ser Val Leu Lys Gly Gln Val Ala Thr Val Ile Lys 385 390 395 400 Lys Thr Ile Asn Thr Asp Phe Pro Phe Pro Phe Ala Trp Leu Thr Gly 405 410 415 Tyr Leu Ala Ile Leu Val Gly Ala Gly Met Thr Phe Ile Val Gln Ser 420 425 430 Ser Ser Val Phe Thr Ser Ala Leu Thr Pro Leu Ile Gly Ile Gly Val 435 440 445 Ile Thr Ile Glu Arg Ala Tyr Pro Leu Thr Leu Gly Ser Asn Ile Gly 450 455 460 Thr Thr Thr Thr Ala Ile Leu Ala Ala Leu Ala Ser Pro Gly Asn Ala 465 470 475 480 Leu Arg Ser Ser Leu Gln Ile Ala Leu Cys His Phe Phe Phe Asn Ile 485 490 495 Ser Gly Ile Leu Leu Trp Tyr Pro Ile Pro Phe Thr Arg Leu Pro Ile 500 505 510 Arg Met Ala Lys Gly Leu Gly Asn Ile Ser Ala Lys Tyr Arg Trp Phe 515 520 525 Ala Val Phe Tyr Leu Ile Ile Phe Phe Phe Leu Ile Pro Leu Thr Val 530 535 540 Phe Gly Leu Ser Leu Ala Gly Trp Arg Val Leu Val Gly Val Gly Val 545 550 555 560 Pro Val Val Phe Ile Ile Ile Leu Val Leu Cys Leu Arg Leu Leu Gln 565 570 575 Ser Arg Cys Pro Arg Val Leu Pro Lys Lys Leu Gln Asn Trp Asn Phe 580 585 590 Leu Pro Leu Trp Met Arg Ser Leu Lys Pro Trp Asp Ala Val Val Ser 595 600 605 Lys Phe Thr Gly Cys Phe Gln Met Arg Cys Cys Cys Cys Cys Arg Val 610 615 620 Cys Cys Arg Ala Cys Cys Leu Leu Cys Asp Cys Pro Lys Cys Cys Arg 625 630 635 640 Cys Ser Lys Cys Cys Glu Asp Leu Glu Glu Ala Gln Glu Gly Gln Asp 645 650 655 Val Pro Val Lys Ala Pro Glu Thr Phe Asp Asn Ile Thr Ile Ser Arg 660 665 670 Glu Ala Gln Gly Glu Val Pro Ala Ser Asp Ser Lys Thr Glu Cys Thr 675 680 685 Ala Leu 690 <210> 16 <211> 1255 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Met Glu Leu Ala Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu Ala Leu Leu 1 5 10 15 Pro Pro Gly Ala Ala Ser Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys 20 25 30 Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His 35 40 45 Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr 50 55 60 Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val 65 70 75 80 Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu 85 90 95 Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr 100 105 110 Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro 115 120 125 Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser 130 135 140 Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln 145 150 155 160 Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn 165 170 175 Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys 180 185 190 His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser 195 200 205 Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys 210 215 220 Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys 225 230 235 240 Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu 245 250 255 His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val 260 265 270 Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg 275 280 285 Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu 290 295 300 Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln 305 310 315 320 Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys 325 330 335 Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu 340 345 350 Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys 355 360 365 Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp 370 375 380 Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe 385 390 395 400 Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro 405 410 415 Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg 420 425 430 Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu 435 440 445 Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly 450 455 460 Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val 465 470 475 480 Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr 485 490 495 Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His 500 505 510 Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys 515 520 525 Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys 530 535 540 Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys 545 550 555 560 Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys 565 570 575 Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp 580 585 590 Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu 595 600 605 Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln 610 615 620 Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys 625 630 635 640 Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser 645 650 655 Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly 660 665 670 Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg 675 680 685 Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly 690 695 700 Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Leu 705 710 715 720 Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys 725 730 735 Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala Ile 740 745 750 Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu 755 760 765 Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser Arg 770 775 780 Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln Leu 785 790 795 800 Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly Arg 805 810 815 Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys Gly 820 825 830 Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala 835 840 845 Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp Phe 850 855 860 Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala Asp 865 870 875 880 Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu Arg 885 890 895 Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val 900 905 910 Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala 915 920 925 Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro 930 935 940 Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met 945 950 955 960 Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu Phe 965 970 975 Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn Glu 980 985 990 Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg Ser Leu 995 1000 1005 Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu Tyr 1010 1015 1020 Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp Pro Ala Pro Gly 1025 1030 1035 Ala Gly Gly Met Val His His Arg His Arg Ser Ser Ser Thr Arg 1040 1045 1050 Ser Gly Gly Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu Pro Ser Glu Glu 1055 1060 1065 Glu Ala Pro Arg Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu Gly Ala Gly Ser 1070 1075 1080 Asp Val Phe Asp Gly Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu 1085 1090 1095 Gln Ser Leu Pro Thr His Asp Pro Ser Pro Leu Gln Arg Tyr Ser 1100 1105 1110 Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu Pro Ser Glu Thr Asp Gly Tyr Val 1115 1120 1125 Ala Pro Leu Thr Cys Ser Pro Gln Pro Glu Tyr Val Asn Gln Pro 1130 1135 1140 Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro Arg Glu Gly Pro Leu Pro 1145 1150 1155 Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu Arg Pro Lys Thr Leu 1160 1165 1170 Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val Phe Ala Phe Gly 1175 1180 1185 Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln Gly Gly Ala 1190 1195 1200 Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala Phe Asp 1205 1210 1215 Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala Pro 1220 1225 1230 Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr 1235 1240 1245 Leu Gly Leu Asp Val Pro Val 1250 1255 <210> 17 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 329 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 19 <211> 446 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn 1 5 <210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 22 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gly Gly His Gly Tyr Phe Asp Leu 1 5 <210> 23 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 23 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtagtac catatactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggtgga 300 cacggatatt tcgacctatg ggggagaggt accttggtca ccgtctcctc a 351 <210> 24 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His His Ser Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 25 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 1 5 10 15 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 20 25 30 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 35 40 45 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 50 55 60 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 65 70 75 80 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 85 90 95 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 26 <211> 215 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His His Ser Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 27 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Gln Gln Tyr His His Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 30 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 30 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtaccacc acagtcctct cacttttggc 300 ggagggacca aggttgagat caaa 324 <210> 31 <211> 630 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser 1 5 10 15 Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln 20 25 30 Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser 35 40 45 Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile 50 55 60 Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val 65 70 75 80 Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp 85 90 95 Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro 100 105 110 Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys 115 120 125 Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr 130 135 140 Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr 145 150 155 160 Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met 165 170 175 Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser 180 185 190 Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro 195 200 205 Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly 210 215 220 Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly 225 230 235 240 Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr 245 250 255 Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser 260 265 270 Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser 275 280 285 Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp 290 295 300 Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys 305 310 315 320 Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser 325 330 335 Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu 340 345 350 Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala 355 360 365 Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile 370 375 380 Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu 385 390 395 400 Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn 405 410 415 Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly 420 425 430 Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His 435 440 445 Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe 450 455 460 Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp 465 470 475 480 Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly 485 490 495 His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe 500 505 510 Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu 515 520 525 Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu 530 535 540 Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp 545 550 555 560 Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala 565 570 575 Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp 580 585 590 Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys 595 600 605 Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln 610 615 620 Arg Ala Ser Pro Leu Thr 625 630

Claims (33)

  1. 하기 화학식 (XXX)를 갖는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00251

    상기 식에서, 각각의 RA는
    Figure pct00252
    이고;
    d13은 2이고; 항체는 접합체의 나머지 부분에 연결된 N297에서 하나 이상의 아스파라긴 기를 포함한다.
  2. 제1항에 있어서, 하기 화학식 (XXX)를 갖는 접합체:
    Figure pct00253

    상기 식에서, 각각의 RA는
    Figure pct00254

    Figure pct00255

    Figure pct00256

    Figure pct00257

    Figure pct00258
    이고;
    d13은 2이고; 항체는 접합체의 나머지 부분에 연결된 N297에서 하나 이상의 아스파라긴 기를 포함한다.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 각각의 RA가
    Figure pct00259

    인 접합체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RA가
    Figure pct00260

    인 접합체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RA가
    Figure pct00261

    인 접합체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RA가
    Figure pct00262

    인 접합체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RA가
    Figure pct00263

    인 접합체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RA가
    Figure pct00264

    인 접합체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RA가
    Figure pct00265

    인 접합체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RA가
    Figure pct00266

    인 접합체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RA가
    Figure pct00267

    인 접합체.
  12. 하기 화학식을 갖는 접합체:
    Figure pct00268

    상기 식에서,
    d13은 2이고;
    항체는 아미노산 서열 GYTFTGYNIH(서열번호 5)를 포함하는 CDRH1; 아미노산 서열 AIYPGNGDTSYKQKFRG(서열번호 6)를 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 GETARATFAY(서열번호 7)를 포함하는 CDRH3; 아미노산 서열 SASQDIGNFLN(서열번호 8)을 포함하는 CDRL1; 아미노산 서열 YTSSLYS(서열번호 9)를 포함하는 CDRL2; 및 아미노산 서열 QQYSKLPLT(서열번호 10)를 포함하는 CDRL3을 포함하는 NaPi2b 항체이고;
    항체는 접합체의 나머지 부분에 연결된 N297에서 하나 이상의 아스파라긴 기를 포함하고;
    Figure pct00269
    은 GlcNAc이고;
    Figure pct00270
    는 Fuc이고;
    Figure pct00271
    는 GalNAc이다.
  13. 제12항에 있어서, NaPi2b 항체가 서열번호 1의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 2의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인 접합체.
  14. 하기 화학식을 갖는 접합체:
    Figure pct00272

    상기 식에서,
    d13은 2이고;
    항체는 아미노산 서열 GYTFTGYNIH(서열번호 5)를 포함하는 CDRH1; 아미노산 서열 AIYPGNGDTSYKQKFRG(서열번호 6)를 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 GETARATFAY(서열번호 7)를 포함하는 CDRH3; 아미노산 서열 SASQDIGNFLN(서열번호 8)을 포함하는 CDRL1; 아미노산 서열 YTSSLYS(서열번호 9)를 포함하는 CDRL2; 및 아미노산 서열 QQYSKLPLT(서열번호 10)를 포함하는 CDRL3을 포함하는 NaPi2b 항체이고;
    항체는 접합체의 나머지 부분에 연결된 N297에서 하나 이상의 아스파라긴 기를 포함하고;
    Figure pct00273
    은 GlcNAc이고;
    Figure pct00274
    는 Fuc이고;
    Figure pct00275
    는 GalNAc이다.
  15. 제14항에 있어서, NaPi2b 항체가 서열번호 1의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 2의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인 접합체.
  16. 변형된 항체를 표 B에 기재된 스캐폴드로부터 선택되는 스캐폴드와 반응시켜 부위 특이적 항체-약물 접합체를 형성하는 단계를 포함하는 항체-약물 접합체의 제조 방법으로서, 변형된 항체는 항체 및 항체의 부위 N297에 연결된 코어-GlcNAc 모이어티를 포함하는 당단백질을 엔도글리코시다제 Endo SH와 접촉시켜 말단 GlcNAc 모이어티를 포함하는 중간체 항체를 형성하는 단계; 및 중간체 항체를 β-(1,4)-GalNAcT 효소의 존재 하에서 4-AzGalNAc-UDP와 접촉시켜 변형된 GlcNAc 모이어티를 포함하는 변형된 항체를 형성하는 단계에 의해 수득되고; 단계 (a) 및 단계 (b)는 동시에 수행되는 것인, 항체-약물 접합체의 제조 방법.
  17. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 접합체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  18. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 접합체로서, 유효량의 접합체가 대상체에게 투여되는 것인 접합체.
  19. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제15항 및 제18항 중 어느 한 항의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  20. 제19항에 있어서, 암이 난소암, 비소세포 폐암(NSCLC), 자궁내막암, 유두상 신세포암, 타액관암, 유두상 갑상선암, 투명세포 신장암, 유방암, 신장암, 자궁경부암 및 담관암종으로부터 선택되는 NaPi2b 발현 암인 방법.
  21. 제20항에 있어서, NaPi2b 발현 암이 난소암, 비소세포 폐암(NSCLC), 자궁내막암, 유두상 신세포암, 타액관암, 또는 유두상 갑상선암인 방법.
  22. 제20항에 있어서, NaPi2b 발현 암이 난소암 또는 비소세포 폐암(NSCLC)인 방법.
  23. 제20항에 있어서, 유효량의 접합체를 치료 제1일 및 그 후 3주 또는 4주마다 약 7 mg/m2 내지 162 mg/m2의 용량으로 대상체에게 투여하는 것인 방법.
  24. 제20항에 있어서, 용량이 약 7 mg/m2 내지 약 162 mg/m2(예컨대, 7 mg/m2, 14 mg/m2, 28 mg/m2, 56 mg/m2, 84 mg/m2, 112 mg/m2, 135 mg/m2 또는 162 mg/m2)인 방법.
  25. 제20항에 있어서, 난소암이 백금 내성 난소암인 방법.
  26. 제20항에 있어서, 난소암이 고등급 장액성 난소 암종인 방법.
  27. 제20항에 있어서, 난소암이 백금 내성, 고등급 장액성 난소암인 방법.
  28. 제20항에 있어서, 난소암이 이전에 단일 작용제 화학요법을 받은 것인 방법.
  29. 제20항에 있어서, 난소암을 갖는 대상체가 이전에 3차 이하의 차수의 요법을 받은 것인 방법.
  30. 제20항에 있어서, 난소암을 갖는 대상체가 이전에 하나 이상의 차수의 백금 함유 레지먼을 포함하는 3차 이하의 차수의 요법을 받은 것인 방법.
  31. 제20항에 있어서, 난소암을 갖는 대상체가 이전에 하나 이상의 차수의 백금 함유 레지먼을 포함하거나 포함하지 않는 4차 이하의 차수의 요법을 받은 것인 방법.
  32. 제20항에 있어서, NSCLC가 선암종으로서 하위 유형 분류되는 것인 방법.
  33. 제20항에 있어서, 대상체가 NSCLC를 갖고, 백금 기반 화학요법(시스플라틴 또는 카르보플라틴) 및 PD-1 또는 PD-L1 모노클로날 항체로 이전에 치료를 받은 것인 방법.
KR1020227027101A 2020-01-09 2021-01-08 펩티드 함유 링커를 갖는 부위 특이적 항체-약물 접합체 KR20220124762A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202062958916P 2020-01-09 2020-01-09
US62/958,916 2020-01-09
US202063040735P 2020-06-18 2020-06-18
US63/040,735 2020-06-18
PCT/US2021/012611 WO2021142199A1 (en) 2020-01-09 2021-01-08 Site specific antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220124762A true KR20220124762A (ko) 2022-09-14

Family

ID=74495099

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227027101A KR20220124762A (ko) 2020-01-09 2021-01-08 펩티드 함유 링커를 갖는 부위 특이적 항체-약물 접합체

Country Status (12)

Country Link
US (2) US11786605B2 (ko)
EP (1) EP4087614A1 (ko)
JP (1) JP2023510349A (ko)
KR (1) KR20220124762A (ko)
CN (1) CN115884793A (ko)
AU (1) AU2021205312A1 (ko)
BR (1) BR112022013255A2 (ko)
CA (1) CA3163833A1 (ko)
IL (1) IL294321A (ko)
MX (1) MX2022008437A (ko)
TW (1) TW202140075A (ko)
WO (1) WO2021142199A1 (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11786605B2 (en) 2020-01-09 2023-10-17 Mersana Therapeutics, Inc. Site specific antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers
MX2023008000A (es) 2021-01-04 2023-07-13 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de anticuerpo dirigido a b7-h4 y farmaco, y metodos de uso de los mismos.
WO2023141856A1 (zh) * 2022-01-27 2023-08-03 岩唐生物科技(杭州)有限责任公司 靶向cd3的多特异性抗体及其应用
WO2024083926A1 (en) * 2022-10-18 2024-04-25 Tubulis Gmbh Novel antibody drug conjugates with novel napi2b antibodies, therapeutic methods and uses thereof

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5763263A (en) 1995-11-27 1998-06-09 Dehlinger; Peter J. Method and apparatus for producing position addressable combinatorial libraries
US20080070981A1 (en) 2000-02-23 2008-03-20 Henryk Borowy-Borowski Water-soluble compositions of bioactive lipophilic compounds
ATE349438T1 (de) 1999-11-24 2007-01-15 Immunogen Inc Cytotoxische wirkstoffe enthaltend taxane und deren therapeutische anwendung
WO2001049698A1 (en) 1999-12-29 2001-07-12 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
US6534660B1 (en) 2002-04-05 2003-03-18 Immunogen, Inc. CC-1065 analog synthesis
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
AU2004204463B2 (en) 2003-01-10 2009-02-12 Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services National Institutes Of Health Catalytic domains of beta(1,4)-galactosyltransferase I having altered donor and acceptor specificities, domains that promote in vitro protein folding, and methods for their use
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
DK1812031T3 (en) 2004-11-01 2015-09-14 Univ California Compositions and methods for the modification of biomolecules
US8431558B2 (en) 2004-11-01 2013-04-30 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modification of biomolecules
US8367065B2 (en) 2006-09-15 2013-02-05 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Targeted polymeric prodrugs containing multifunctional linkers
TW200902708A (en) 2007-04-23 2009-01-16 Wyeth Corp Methods of protein production using anti-senescence compounds
EP2250201B1 (en) 2008-01-29 2014-04-30 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Membrane transporter napi2b (slc34a2) epitope for antibody therapy, antibodies directed thereto, and target for cancer therapy
WO2009102820A2 (en) 2008-02-11 2009-08-20 Government Of The U.S A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Modified sugar substrates and methods of use
EP2563753B9 (en) 2010-04-27 2016-07-06 SynAffix B.V. Fused cyclooctyne compounds and their use in metal-free click reactions
GB201115841D0 (en) 2011-09-13 2011-10-26 Genovis Ab Protein and method
US9199237B2 (en) * 2012-09-04 2015-12-01 Michael Baumgartner Automated well plate
IN2015DN04147A (ko) 2012-10-16 2015-10-16 Endocyte Inc
CN110201186A (zh) 2012-10-23 2019-09-06 西纳福克斯股份有限公司 经修饰的抗体、抗体-缀合物及其制备方法
WO2014189370A1 (en) 2013-05-24 2014-11-27 Stichting Katholieke Universiteit Substituted azadibenzocyclooctyne compounds and their use in metal-free click reactions
EP3057618B1 (en) 2013-10-14 2022-12-14 SynAffix B.V. Glycoengineered antibody, antibody-conjugate and methods for their preparation
HUE051389T2 (hu) 2013-10-15 2021-03-01 Seagen Inc Pegilezett gyógyszer-linkerek ligandum-gyógyszer konjugátum javított farmakokinetikájához
GB2544878B (en) * 2014-06-12 2021-03-10 Halliburton Energy Services Inc Determination of substance presence, identity and/or level in vessels
TWI695011B (zh) 2014-06-18 2020-06-01 美商梅爾莎納醫療公司 抗ｈｅｒ２表位之單株抗體及其使用之方法
JP2017528124A (ja) 2014-08-04 2017-09-28 シンアフィックス ビー．ブイ． ベータ−（１，４）−ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ又はその突然変異体を用いる糖タンパク質の改変方法
JP6966162B2 (ja) 2015-04-23 2021-11-10 シンアフィックス ビー．ブイ． β（１，４）−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼであるか又はそれに由来するグリコシルトランスフェラーゼを用いる糖タンパク質の改変方法
WO2017137458A1 (en) 2016-02-08 2017-08-17 Synaffix B.V. Antibody-conjugates with improved therapeutic index for targeting cd30 tumours and method for improving therapeutic index of antibody-conjugates
WO2017137457A1 (en) 2016-02-08 2017-08-17 Synaffix B.V. Antibody-conjugates with improved therapeutic index for targeting cd30 tumours and method for improving therapeutic index of antibody-conjugates
US10858641B2 (en) 2016-02-08 2020-12-08 Synaffix B.V. Enzymes for trimming of glycoproteins
MX2018011204A (es) 2016-03-15 2019-03-07 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de anticuerpo-farmaco dirigidos a napi2b y sus metodos de uso.
EP3449669B1 (en) * 2016-04-25 2020-09-02 Telefonaktiebolaget LM Ericsson (publ) System information configuration update in a wireless communication network
US11135307B2 (en) * 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
TW201834697A (zh) 2017-02-28 2018-10-01 美商梅爾莎納醫療公司 Her2標靶抗體－藥物結合物之組合療法
WO2019060542A2 (en) 2017-09-20 2019-03-28 Mersana Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR PREDICTING RESPONSE TO NAPI2B TARGETING THERAPY
US11786605B2 (en) 2020-01-09 2023-10-17 Mersana Therapeutics, Inc. Site specific antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers

Also Published As

Publication number Publication date
US11786605B2 (en) 2023-10-17
US20210220477A1 (en) 2021-07-22
BR112022013255A2 (pt) 2022-09-06
WO2021142199A1 (en) 2021-07-15
JP2023510349A (ja) 2023-03-13
IL294321A (en) 2022-08-01
TW202140075A (zh) 2021-11-01
AU2021205312A1 (en) 2022-07-14
CN115884793A (zh) 2023-03-31
US20240148887A1 (en) 2024-05-09
CA3163833A1 (en) 2021-07-15
MX2022008437A (es) 2022-08-19
EP4087614A1 (en) 2022-11-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7423513B2 (ja) 抗葉酸受容体α抗体コンジュゲート及びその使用
JP6629837B2 (ja) 抗ｐｔｋ７抗体−薬物コンジュゲート
KR20220124762A (ko) 펩티드 함유 링커를 갖는 부위 특이적 항체-약물 접합체
TWI614265B (zh) 抗－Ｌｙ６Ｅ抗體及免疫結合物及其使用方法
KR20210038904A (ko) 항체-약물 콘쥬게이트의 효과적인 제조 방법
JP2017500007A (ja) 抗Ｌｙ６Ｅ抗体及び使用方法
US11964024B2 (en) B7H4-targeted antibody-drug conjugates and methods of use thereof
JP2022512778A (ja) 抗－ｃｄ４５抗体及びそのコンジュゲート
JP2023527962A (ja) 抗ｔｒｏｐ２抗体を含む抗体薬物複合体（ａｄｃ）、かかるａｄｃを含む組成物、ならびにそれらを作製および使用する方法
CA3043277A1 (en) Anti-cd46 antibodies and methods of use
KR20230062600A (ko) 항-ceacam5 항체 및 접합체 및 이의 용도
CN114269389A (zh) 靶向紧密连接蛋白18.2的抗体药物偶联物
CN114026127A (zh) 条件活性抗epcam抗体、抗体片段、其免疫缀合物以及其用途
CN116917323A (zh) 靶向b7h4的抗体-药物缀合物及其使用方法
TW202345907A (zh) 抗gd2抗體、其免疫結合物及治療用途
KR20220148235A (ko) 최적화된 약물 접합을 위한 변형된 결합 폴리펩티드
JP2023554215A (ja) 糖共役体
TW202400644A (zh) 針對ＦＲα之結合分子
KR20220082846A (ko) B-림프구 특이적 아마톡신 항체 접합체
WO2024083926A1 (en) Novel antibody drug conjugates with novel napi2b antibodies, therapeutic methods and uses thereof
CN115943164A (zh) 条件性活性抗her2抗体、抗体片段、其免疫结合物及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination