JP2023554215A - 糖共役体 - Google Patents

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Abstract

本明細書では、抗体等の細胞結合剤を備え、かつ、薬物等のペイロードに結合する、複合糖質が提供される。当該薬物は、オリゴ糖リンカーを介して細胞結合剤に結合される。本明細書に記載されたオリゴ糖リンカーを介して結合された複合糖質は、従来技術の複合糖質よりも特性が改善された。【選択図】 図１

Description

従前の適用
本出願は、２０２０年１０月１６日に出願された米国仮出願番号第６３／０９２６４０号による優先権を主張する。優先権出願は、本契約に完全に規定されているかのように、その全体及びあらゆる目的において、参照により本明細書に援用される。
発明の分野
本発明は、薬物等のペイロードに結合する抗体等の細胞結合剤を有する複合糖質に関する。当該薬物は、オリゴ糖リンカーを介して細胞結合剤に結合される。
抗体療法は、がん、免疫学的及び血管新生障害（非特許文献１）がある被験者の標的治療のために確立されている。細胞毒性又は細胞増殖抑制剤、すなわちがんの治療において腫瘍細胞を殺傷又は阻害する薬物の局所送達のための抗体薬物共役体（ＡＤＣ）、すなわち免疫共役体の使用は、腫瘍への薬物部分の送達及びそこへの細胞内蓄積を標的とするが、これらの非複合化薬物の全身投与は、正常細胞に対して許容できないレベルの毒性をもたらす可能性がある。（非特許文献２～１０）
この分野は、タキサン、カリケアミシン、マイタンシン、デュオカルマイシン、アウリスタチン等の新しいクラスの強力な毒素の出現によって進歩してきた。これらの物質のナノモルからピコモルの低い毒性は、以前の世代の毒素よりも大きな利点を提供してきた。もう一つの技術的進歩は、細胞質で加水分解可能で、プロテアーゼに耐性又は感受性であるか、高度に細胞毒性のある薬物に関連する多剤耐性排出ポンプに耐性のある最適化されたリンカーの使用を含む。
ＡＤＣを調製するための一般的なモードは、ペイロード（例えば、薬物リンカー分子）の抗体アミノ酸リジン又はシステインの側鎖への結合である。リジン付加の速度論は、この残基での結合が、高い立体アクセシビリティと低いｐＫａを持つリジン側鎖で優先的に行われることを意味し、反応の部位特異性の制御が困難になる。通常の条件下では、ネイティブ型抗体には通常、遊離のシステインスルフヒドリル基が存在しないため、システインに結合することによって、より多くの部位特異性が提供される。これにより、例えば、既存のシステインを選択的に還元したり、タンパク質工学によってさらなるのシステインを導入したりすることによって、遊離のスルフヒドリル基を抗体分子に導入することができる方法が可能になる。いずれの場合も、例えば、マレイミド付加に基づく求電子的アルキル化を使用して、ペイロードを遊離のスルフヒドリル基に効果的に共役させることができる。この方法により、効率的かつサイト選択的に共役体を生成することができる。しかし、高い生成物の均一性と、ペイロードのオフターゲット放出に対する高い抵抗性を持つ共役体の利点を考慮して、スルフヒドリルアルキル化よりもさらに改善された共役方法を特定する研究が続けられている。
代替共役技術の１つにアジド化学（アジド基ともいうＮ３基）を利用するものがある。特に、アジド基は末端アルキン（銅触媒）又は環状アルキン（銅を含まず、環ひずみによって反応が促進される）と選択的に環状付加することができる。アルキンとの反応によって生じるトリアゾールは、加水分解やその他の分解経路に特に抵抗性を示す。この反応は、ＡＤＣ（例えば、特許文献１、非特許文献１１を参照）の生産に有用であることが示されている。ＡＤＣ生産での使用の可能性は、ケトンとヒドロキシルアミン又はヒドラジンのいずれかについても議論されている（特許文献１参照）。
共役前駆体に上記の官能基を導入するための多くの戦略が議論されている。安全で効果的なＡＤＣを生成することが実証されている１つの戦略は、抗体（例えば特許文献２を参照）のようなグリコシル化細胞結合剤のグリカン部分へのペイロードの共役を含む。
グリカンを介した共役は、ＡＤＣ生成のための潜在的に汎用的な戦略である。例えば、哺乳類又は酵母細胞培養で発現されるすべてのＩｇＧ抗体は、各重鎖のＦｃ部分にＮ結合グリカン部分を持っている。しかし、この方法論には多くの課題がある。例えば、グリカンは典型的にはイソ型の複雑な混合物として存在し、それは異なるレベルのガラクトシル化（Ｇ０、Ｇ１、Ｇ２）とフコシル化（Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ２Ｆ）を含む可能性があり、その結果、共役化学量論において望ましくない不均一性をもたらす可能性がある。したがって、既存の方法では、ペイロードとの抱合（特許文献１及び３，非特許文献１１）の前に可能な限りグリカン構造を均一化するために、酵素を使用して炭水化物部分をトリミング及び／又はさらなるする１つ以上の「グリカンリモデリング」段階を採用することが多い。しかし、利用可能な可能性のある糖部分、結合、分岐、鎖長、及び修飾酵素の膨大な多様性は、グリカン部分の可能な最終構造の膨大な属が存在することを意味する。グリカンの最終的なサイズと構造は、最終的な複合糖質（例えば、薬物－抗体比、共役親水性、共役流体力学等である。）の多くの重要な特性に影響を与えるが、その多くは事前に確実に予測することはできない。したがって、有利なグリカン配置の研究が進行中である。
一度糖タンパク質がリモデリングされると、ペイロードへの抱合にはいくつかの戦略が考えられる。例えば、ホモジナイズされた糖タンパク質をアジド又はアルキンで官能化された糖類と１回又は複数回縮合させて活性化された糖タンパク質中間体を生成させ、それを上記の化学反応（詳細については、例えば特許文献１、非特許文献１１の議論及びそこに引用されている参考文献を参照のこと。）を用いてペイロードに抱合させる方法が数多く報告されている。
上記の方法により、インビボで抗がん効果を有する複合糖質が得られることが証明されている（例えば特許文献２を参照）。それにもかかわらず、一連の細胞結合剤及びペイロードにわたって、このような複合糖質の特性をさらに改善する研究が進行中である。
国際公開第２０１４／０６５６６１号 国際公開第２０１８／１４６１８９号 国際公開第２００７／１３３８５５号
Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：３４３－３５７ Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．６（３）：２８１－２９１ Ｋｏｖｔｕｎ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（６）：３２１４－３１２１ Ｌａｗ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（４）：２３２８－２３３７ Ｗｕ ｅｔ ａｌ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１３７－１１４５ Ｌａｍｂｅｒｔ Ｊ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：５４３－５４９ Ｈａｍａｎｎ Ｐ．（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ １５（９）：１０８７－１１０３ Ｐａｙｎｅ，Ｇ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ３：２０７－２１２ Ｔｒａｉｌ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：３２８－３３７ Ｓｙｒｉｇｏｓ ａｎｄ Ｅｐｅｎｅｔｏｓ（１９９９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９：６０５－６１４ Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，２０１４，Ｊｕｌ７；５３（２８）：７１７９－８２
本発明者は、（１）有利な複合糖質の特性を可能にし、（２）商業規模の製造に容易に適合するオリゴ糖構造を特定することを目的として、一連のオリゴ糖構造の特性を調査した。
研究の過程で、発明者らは、細胞結合剤とペイロードの間に比較的短い三糖部分－ＧｌｃＮＡｃ－Ｇａｌ－Ｓｉａ－を持つ複合糖質が、一連の有利な特性を持つことを発見した。例えば、より大きなオリゴ糖リンカーを持つ他の類似の複合糖質と比較して、このクラスの複合糖質は、予想外に高い親水性と溶解性を持つことがわかった。著しく速い共役の速度論；著しくより効果的なインビボ（同様のインビトロ活性にもかかわらず）；薬物抗体比（「ＤＡＲ」）＝２を達成するためのより良い制御／一貫性；と被験者による治療の忍容性を有意に改善した。理論に拘束されることを望まないが、本発明者らは、これらの特性は、負に帯電したシアル残基の存在と位置によって部分的に生じると考えている。いくつかのペイロードでは、これは同じ位置にある非荷電の糖部分と比較して、複合糖質の有効性の改善と関連することがわかった。
本発明者はさらに、容易に入手できる酵素触媒を使用して、有利な－ＧｌｃＮＡｃ－Ｇａｌ－Ｓｉａ－複合糖質を製造できることを決定した。特に、ある種のガラクトシルトランスフェラーゼは、この酵素が存在する天然系ではこの反応が起こらないにもかかわらず、ＧｌｃＮＡｃ残基、好ましくは、ペプチド主鎖のＡｓｎ残基にα結合した（任意でα１～６フコースを持つ）にガラクトースを効率的に転移できることが予想外にわかった。その反応から生じるガラクトシル化オリゴ糖は、ＳＴ６Ｇａｌ１シアリルトランスフェラーゼによる修飾シアル酸の付加にも容易に感受性であった。その後、修飾シアル酸残基は、例えば細胞毒性薬物や他の治療薬等の幅広いペイロードに効率的に結合することができる。
１つ以上の実施形態の詳細は、以下の説明に記載されている。他の特徴、対象、及び利点は、説明及びクレームから明らかになる。
アプローチ１によるグリコシル化リモデリングと共役を示す。ＧｌｃＮＡｃ＝Ａ－アセチル－グルコサミン、Ｍａｎ＝マンノース、Ｇａｌ＝ガラクトース、Ｆｕｃ＝フコース、Ｓｉａ＝シアル酸、ＷＨ＝弾頭分子。反応条件：（ｉ）ＵＤＰ－ガラクトース、ガラクトシルトランスフェラーゼ、ＭＯＰＳ緩衝液（５０ｍＭ、２０ｍＭＭｎＣｌ２、ｐＨ７．２）、２４時間；（ｉｉ）ＣＭＰ－Ｎｅｕ５Ｎ３、ＳＴ６Ｇａｌ１シアリルトランスフェラーゼ、１％ ＢＳＡ、アルカリホスファターゼ、カコジル酸緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ ７．６）、２４時間；（ｉｉｉ）ＷＨ－ＤＩＢＯ。 アプローチ２によるグリコシル化リモデリングと共役を示す。ＧｌｃＮＡｃ＝Ａ－アセチル－グルコサミン、Ｍａｎ＝マンノース、Ｇａｌ＝ガラクトース、Ｆｕｃ＝フコース、Ｓｉａ＝シアル酸、ＷＨ＝弾頭分子。反応条件：（ｉ－１）ＥｎｄｏＳ；（ｉ－２）ＥｎｄｏＳ／ＢｔＦｕｃｈＨ；（ｉｉ）ＵＤＰ－ガラクトース、β４ ＧａｌＴ １、ＭＯＰＳバッファー（５０ｍＭ、２０ｍＭＭｎＣｌ２、ｐＨ ７．２）、１％ ＢＳＡ、１．３％アルカリホスファターゼ；（ｉｉｉ）ＣＭＰ－Ｎｅｕ５Ｎ３、カコジル酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ ７．６）、１％ ＢＳＡ、１．３％アルカリホスファターゼ；（ｉｖ）ＷＨ－ＤＩＢＯ、ＣｕＳＯ４、アスコルビン酸ナトリウム。 Ｈｅｒ－ＷＨ－Ａｐｐ１とＨｅｒ－ＷＨ－Ａｐｐ２のＨＩＣプロファイルを示す。 ベンチマークＨｅｒ２ｘＡＤＣに対するＨｅｒ－ＷＨ－Ａｐｐ１とＨｅｒ－ＷＨ－Ａｐｐ２のインビボにおける効能を示す。 ラットにおけるＨｅｒ－ＷＨ－Ａｐｐ１とＨｅｒ－ＷＨ－Ａｐｐ２の薬物動態（ＰＫ）を示す。
現在の方法とシステムが開示され説明される前に、方法とシステムは特定の合成方法、特定の成分、又は特定の組成に限定されないことを理解すべきである。本明細書で用いられる用語は、特定の実施形態を説明する目的のみであり、限定することを意図していないことも理解すべきである。
明細書及び添付の特許請求の範囲で用いられているように、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別の指示をしない限り、複数の指示を含む。範囲は、本明細書では、ある特定の値についての「ａｂｏｕｔ」及び／又は別の特定の値についての「（約）ａｂｏｕｔ」として表すことができる。そのような範囲を表す場合、別の実施形態は、ある特定の値からの¬及び／又は別の特定の値への¬を含む。同様に、値を近似値として表す場合、先行する「ａｂｏｕｔ」を使用することで、特定の値が別の実施形態を形成することが理解される。さらに、各範囲の端点は、他方の端点との関係においても、他方の端点とは独立しても重要であることが理解される。
「場合により」又は「場合によっては」とは、その後に記述される事象又は状況が発生する可能性があること、又は発生しない可能性があることを意味し、記述には、当該事象又は状況が発生する場合と発生しない場合が含まれる。
本明細書で用いられる用語記述及びクレーム全体を通して、用語「含む」及びその変形は、「含むが限定されない」ことを意味し、例えば、他の添加剤、成分、整数又は工程を除外することを意図していない。「例示」とは、「の一例」を意味し、好ましい又は理想的な実施形態を示すものではない。「等」は、限定的な意味で用いられるのではなく、説明の目的で用いられる。
本明細書で用いられる用語「クリック可能な基」とは、タンパク質又は他の生体高分子を変性させない温和な条件下で、別のクリック可能な基と環状付加反応を行うことができる官能基をいう。
本明細書で用いられる用語「薬物－抗体比」又は「ＤＡＲ」とは、個々の抗体に結合された薬物の数、より一般的にはペイロード、又はより一般的には細胞結合剤をいう。ＤＡＲが１の場合は抗体に結合された薬物が１つ存在することを示し、ＤＡＲが２の場合は抗体に結合された薬物が２つ存在することを示す等、特定の生体結合技術では、特定の試料の各抗体に均一な数の薬物がインストールされないことを当業者は理解している。このような場合は、整数ではないＤＡＲ、例えば１．５と特定することができ、これは特定の試料について、各抗体に結合された薬物が平均１．５個存在することを示す。
本明細書で用いられる用語「アルキル」は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル等の分岐又は非分岐炭化水素基である。アルキル基は置換又は非置換でもよい。特に明記しない限り、「アルキル」という用語は置換及び非置換の両方のアルキル基を意味する。アルキル基は、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホオキソ、又はチオールを含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。二重又は三重の炭素－炭素結合を含まないアルキル基を飽和アルキル基といい、そのような結合を１つ以上持つアルキル基を不飽和アルキル基という。二重結合を持つ不飽和アルキル基をアルケニル基、三重結合を持つ不飽和アルキル基をアルキニル基ということができる。特に明記しない限り、アルキルという用語は飽和基と不飽和基の両方を含む。
本明細書で用いられる用語「シクロアルキル」は、少なくとも３つの炭素原子で構成される非芳香族炭素系の環である。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等があるが、これらに限定されない。用語「ヘテロシクロアルキル」は、環の炭素原子の少なくとも１つが窒素、酸素、硫黄、セレン又はリン等のヘテロ原子で置換された、上記で定義されたシクロアルキル基である。シクロアルキル基及びヘテロシクロアルキル基は置換及び非置換でありうる。特に明記しない限り、用語「シクロアルキル」及び「ヘテロシクロアルキル」は、置換及び非置換の両方のシクロアルキル基及びヘテロシクロアルキル基を意味する。シクロアルキル基及びヘテロシクロアルキル基は、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホオキソ、又はチオールを含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。二重又は三重の炭素－炭素結合を含まないシクロアルキル基は飽和シクロアルキル基というが、このような結合を１つ以上持つ（まだ芳香族ではない）シクロアルキル基は不飽和シクロアルキル基という。特に明記しない限り、シクロアルキルという用語は飽和及び不飽和の非芳香族環系の両方を含む。
本明細書の「アリール」とは、炭素原子からなる芳香環である。アリール基の例としては、フェニルやナフチル等があるが、これらに限定されない。「ヘテロアリール」とは、環の炭素原子の少なくとも１つが窒素、酸素、硫黄、セレン、リン等のヘテロ原子に置換された、上記で定義されたアリール基である。アリール基とヘテロアリール基は置換及び非置換でありうる。特に明記しない限り、「アリール」及び「ヘテロアリール」という用語は、置換された及び置換されていないアリール基とヘテロアリール基の両方を意味する。アリール基及びヘテロアリール基は、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホオキソ、又はチオールを含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換することができる。
例示的なヘテロアリールおよびヘテロシクリル環としては、以下の：ベンズイミダゾリール、ベンゾフラニル、ベンゾチオフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾキサゾリール、ベンゾキサゾリニル、ベンゼンチアゾリール、ベンズトリアゾリール、ベンズテトラゾリール、ベンズイソキサゾリール、ベンズイソチアゾリール、ベンズイミダゾリール、カルバゾリール、４ａＨカルバゾリール、カルボリニル、クロマニル、クロメニル、サーノリニル、デカヒドロキノリニル、２Ｈ，６Ｈ－１，５，２－ジチアジニル、ジヒドロフロ［２，３ｂ］テトラヒドロフラン、フラニル、フラザニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリール、ｌＨ－インダゾリール、インドレニル、インドリニル、インドリニル、３Ｈ－インドリル、イサチノイル、イソベンゾフラニル、イソクロマニル、イソインダゾリール、イソインドリニル、イソキノリニル、イソチアゾリール、イソオキサゾリール、メチレンジオキシフェニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オクタヒドロイソキノリニル、オキサジアゾリール、１，２，３－オキサジアゾリール、１，２，４－オキサジアゾリール、１，２，５－オキサジアゾリール、１，３，４－オキサジアゾリール、オキサゾリジニル、オキサゾリール、オキシンドリル、ピリミジニル、フェナントリジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサチニル、フェノキサジニル、フタルアジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリドニル、４－ピペリドニル、ピペロニル、プテリジニル、プリニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリール、ピリダジニル、ピリドオキサゾール、ピリドイミダゾール、ピリドチアゾール、ピリジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、２Ｈ－ピロリル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、４Ｈ－キノリジニル、キノキサリニル、キヌクリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラゾリール、６Ｈ－１，２，５－チアジアジニル、１，２，３－チアジアゾリール、１，２，４－チアジアゾリール、１，２，５－チアジアゾリール、１，３，４－チアジアゾリール、チアンスリニル、チアゾリール、チエニル、チエノチアゾリール、チエノオキサゾリール、チエノイミダゾリール、チオフェニル、及びキサンテニルがあげられる。
用語「アルコキシ」、「シクロアルコキシ」、「ヘテロシクロアルコキシ」、「シクロアルコキシ」、「アリールオキシ」、「ヘテロアリールオキシ」は、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリールに対して上記の意味を持ち、さらに、当該基が酸素原子を介して接続されていることを条件とする。
本明細書で用いられる用語「なし」は、化学部分の可能な同一性に言及する場合、基が存在せず、隣接する２つの基が互いに直接結合していることを示す。例えば、ＣＨ３－Ｘ－ＣＨ３という式を持つ化合物の属の場合、Ｘがなしであれば、生成する化合物はＣＨ３－ＣＨ３という式を持つ。
用語「ヌクレオチド」は、核酸塩基、５炭素の糖（リボース又は２－デオキシリボース）、及び１つ、２つ、又は３つのリン酸基から構成される分子をいう。リン酸基がない場合、核酸塩基と糖はヌクレオシドを構成する。したがって、ヌクレオチドはヌクレオシド一リン酸、ヌクレオシド二リン酸、ヌクレオシド三リン酸ともいう。核酸塩基にはアデニン、グアニン、シトシン、ウラシル、チミン等がある。ヌクレオチドの例としては、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、グアノシン二リン酸（ＧＤＰ）、チミジン二リン酸（ＴＤＰ）、シチジン二リン酸（ＣＤＰ）、シチジン一リン酸（ＣＭＰ）等がある。
本明細書で用いられる
Figure 2023554215000002
 のように、記号を介して接続された２つの原子は、単結合又は二重結合を介して接続されてもよい。
本明細書で用いられる用語「Ｃ（ｘ）アルキレン（ｘは数字）」は、－（ＣＨ２）ｘ－を有する非置換炭素鎖スペーサーをいう。用語アリレンは芳香環スペーサーをいい、ヘテロシクレンは複素環スペーサーをいう。置換パターンはさらに指定することができ、例えばフェニレン、ナフタレン、イミダゾイレン等であり、スペーサーの位置化学はさらに指定することができ、例えばオルト－フェニレン、ｏ－フェニル、１，２－フェニレンはいずれも隣接する炭素に他の基が結合したフェニル環スペーサーを表す。ヘテロシクレン・スペーサーの結合配置は環の番号付けにＩＵＰＡＣ規則を用いて指定することができる。例として、Ｘ－［１，４－フェニレン］－Ｙは以下の式：
Figure 2023554215000003
 を有する化合物をいう。
本明細書で用いられる用語「置換された」は、有機化合物の許容されるすべての置換基を含むと考えられる。広い観点では、許容される置換基としては、有機化合物の非環状及び環状、分岐及び非分岐、炭素環及び複素環、芳香族及び非芳香族置換基があげられる。例示的な置換基としては、例えば以下に述べるものがある。許容される置換基は、適当な有機化合物については１つ以上であり、同じであっても異なっていてもよい。本開示の目的において、窒素のようなヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たす水素置換基及び／又はここに記載された有機化合物の許容される置換基を有することができる。本開示は、有機化合物の許容される置換基によっていかなる方法でも制限されることを意図していない。また、用語「置換」又は「で置換された」には、そのような置換が置換された原子及び置換基の許容される原子価に従っており、その置換により安定な化合物、例えば、転位、環化、脱離等によって自発的に変換を受けない化合物が生じるという暗黙の条件が含まれる。特に明記されていない限り、「置換された」と言われる置換基は、置換基がアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホオキソ、又はチオールの１つ以上で置換できることを意味する。具体例では、置換されたと言われる基は、ｐＨに応じてプロトン化又は脱プロトン化できる基であるプロトン性基で置換される。
本発明による特定の化合物は、１つ以上の不斉中心を含むことができ、したがって、ラセミ体又はジアステレオマー混合物のような異性体の混合物として、又はエナンチオマー的又はジアステレオマー的に純粋な形で調製及び単離することができることが認められる。ここに示す構造では、特定のキラル原子の立体化学が特定されていない場合、すべての立体異性体が本発明の化合物として考えられ、含まれる。立体化学が特定の立体配置を表す実線のくさび形又は破線で指定されている場合、その立体異性体はそのように指定され定義される。しかし、不斉中心の絶対配置を指定せずに化合物を記述することは、可能なすべての異性体がすべての実施形態に必ず存在することを必要とすると考えるべきではない。
本発明の特定の化合物は、カルボン酸、スルホン酸、ホスホン酸、アミン等を含むイオン化可能な官能基を含む。当業者は、そのような基がｐＨに応じてイオン化可能な水素原子を含むか含まないかを理解するであろう。あるイオン化状態（例えばプロトン化された）における特定の化合物の描写は、異なるｐＨで存在するであろう他の状態（例えば脱プロトン化）を排除しない。
特に明記されない限り、用語「患者」は、ヒトを含むがこれに限定されないあらゆる哺乳類動物をいう。
薬学的に許容される塩は、親化合物の望ましい生物活性を保持し、望ましくない毒性学的影響を与えない塩である。このような塩の例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸等の無機酸で形成される酸付加塩があげられ；酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ポリガラクツロン酸等の有機酸で形成される塩；塩化物、臭化物、ヨウ化物等の元素アニオンから形成される塩；金属水酸化物から形成される塩、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化リチウム、水酸化マグネシウム；金属炭酸塩から形成される塩、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム；金属炭酸水素塩から形成される塩、例えば炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム；金属硫酸塩から形成される塩、例えば硫酸ナトリウム、硫酸カリウム；金属硝酸塩から形成される塩、例えば硝酸ナトリウム、硝酸カリウムがあげられる。薬学的に許容される塩及び薬学的に許容されない塩は、例えばアミンのような十分に塩基性の化合物と生理学的に許容されるアニオンを含む適当な酸とを反応させることにより、当業界で公知の手順を用いて調製することができる。カルボン酸のアルカリ金属（たとえば、ナトリウム、カリウム、リチウム等）又はアルカリ土類金属（例えばカルシウム）塩を作ることもできる。
開示された方法及びシステムを実行するために使用できる成分が開示されている。これら及びその他の構成要素は、ここに開示されており、これらの構成要素の組み合わせ、サブセット、相互作用、基等が開示されている場合、各様々な個別及び集合的な組み合わせの特定の参照及びこれらの順列は明示的に開示されていない可能性があるが、すべての方法及びシステムについて、各々が具体的に検討され、ここに記述されていることが理解される。これは、開示された方法の工程を含むが、それに限定されない、本出願のすべての側面に適用される。したがって、実行できる様々なさらなる工程がある場合、これらのさらなる工程の各々は、開示された方法のいかなる特定の実施形態又は実施形態の組み合わせで実行できることが理解される。
本明細書で開示されるのは、細胞結合剤（「ＣＢＡ」）に結合された少なくとも１つのペイロードを有する複合糖質である。複合反応からの製剤におけるＣＢＡあたりの平均ペイロード数は、ＵＶ、逆相ＨＰＬＣ、ＨＩＣ、質量分析、ＥＬＩＳＡ分析、及び電気泳動のような通常の手段によって特徴づけられるかもしれない。ｐによるＣＢＡの定量的分布も決定されるかもしれない。ＥＬＩＳＡによって、ＣＢＡの特定の製剤におけるｐの平均値が決定されるかもしれない（Ｈａｍｂｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３－７０７０；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１１：８４３－８５２）。
本明細書に記載される複合糖質組成物は均質であり得る、すなわち、各細胞結合剤が同じ数のペイロードに結合していることを意味する。他の実施形態では、複合糖質組成物は、共役体の分布、すなわち、１つのペイロードに結合されたいくつかの細胞結合剤、２つのペイロードに結合されたいくつかの細胞結合剤、３つのペイロードに結合されたいくつかの細胞結合剤等を含むことができる。反対に指定されない限り、特定の数のペイロードに結合された細胞結合剤の描写は、他の共役体も存在する可能性を排除しない。
ある実施形態では、本明細書に記載される複合糖質は以下の式：
［ペイロード］ｘ－シアロシド－Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ］ｙ－ＣＢＡ
（式中、
ＣＢＡは細胞結合剤を表す；
ＧｌｃＮＡｃはＮ－アセチルグルコサミン残基を表し、Ｃ－６位のフコースで場合によっては、グリコシル化される；
Ｇａｌはガラクトシル残基を表す；
シアロシドは修飾シアル酸残基を表す；
ペイロードは修飾シアル酸残基に共有結合された１つ以上の治療薬を表す；
各々、同じであっても異なっていてもよく、薬物又は診断マーカーを表す；
ペイロードには、ピロロベンゾジアゼピンは含まれない；
ｘは１～１００、５０－１００、２５－５０、１～５０、１～２５、１～１６、１～１２、１～８、又は１～４から選択された整数を表す；及び
Ｙは１、２、３、４、５、６、７、又は８から選択される整数）
を備える複合糖質である。
特定の実施形態では、ｘは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０であってよい。
修飾されたシアル酸残基（又はシアロシド）は、以下の一般式：
Figure 2023554215000004
 （式中、
ＱＱは水素又は共役ペイロードである；
ＺＺは水酸基又は共役ペイロードである；
ＹＹは水酸基又は共役ペイロードである；；
ＸＸは水酸基又は共役ペイロードである；及び
本明細書で、ＱＱ、ＺＺ、ＹＹ、及びＸＸの少なくとも１つは共役ペイロードである）で表される。
ある実施形態では、ＱＱは共役ペイロードであり、ＸＸ、ＹＹ、及びＺＺの各々はヒドロキシルである。他の実施形態では、ＺＺは共役ペイロード、ＱＱは水素、ＸＸとＹＹは各々のヒドロキシル基である。さらに別の実施形態では、ＺＺとＱＱは各々の共役ペイロード、ＸＸとＹＹは各々のヒドロキシル基である。このような場合、ＺＺとＱＱは同じであっても異なっていてもよい。
一実施形態では、ＣＢＡあたりの平均ペイロード数は１～４の範囲である。ある実施形態では、範囲は１～２、１～３、２から４、３から６又は４から８まで選択される。
本発明のある側面では、複合糖質には以下の式：
Figure 2023554215000005
 （式中、
ＣＢＡは細胞結合剤、例えば抗体のようなペプチド、好ましくは、モノクローナル抗体である；
ＤＡＲの尺度であるｙは０．５～６から；０．８～４が好ましく、０．８～２．２がより好ましく、０．９～２．１がさらに好ましい；
ある実施形態では、ｙは０．８～１．２、０．９～１．１、１．８～２．２、又は１．９～２．１である；
Ｒｆａは水素又はフコース部分である；
ＱＱは水素、又は少なくとも１つの共役ペイロードである；
ＺＺは水酸基、又は少なくとも１つの共役ペイロードである；
ＹＹは水酸基、又は少なくとも１つの共役ペイロードである；
ＸＸは水酸基、又は少なくとも１つの共役ペイロードである；及び
本明細書で、ＱＱ、ＺＺ、ＹＹ、及びＸＸの少なくとも１つは、又は少なくとも１つの共役ペイロード）があってよい。
特定の場合、複合糖質には、上記の２，６及び２，３結合オリゴ糖の混合物を含めてよい。他の実施形態では、複合糖質は実質的に２，６結合オリゴ糖のみ、又は実質的に２，３結合オリゴ糖上にあってよい。ある実施形態では、複合糖質は２，６結合オリゴ糖の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％であってよく、他の実施形態では、複合糖質は２，３結合オリゴ糖の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％であってよい。
好ましい実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ残基はβ－Ｎ－グリコシド結合でＣＢＡに結合することができる。
Figure 2023554215000006
 他の実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ残基はα－Ｎ－グリコシド結合でＣＢＡに結合することができる。
Ｒｆａがフコース部分である場合、以下の式：
Figure 2023554215000007
 を有するフコース残基であってよい。
特定の実施形態では、Ｒｆａは水素であるが、他の実施形態ではＲｆａはフコースである。ある実施形態では、組成物は、複合糖質の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％がＲｆａの水素原子を持つ複合糖質を持つことができるが、他の実施形態では、複合糖質の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％がＲｆａのフコース残基を持つことができる。
特定の実施形態では、細胞結合剤は抗体であり、オリゴ糖はβ－Ｎ－グリコシド結合を介してアスパラギン側鎖を介して抗体に結合される。
Figure 2023554215000008
 場合によっては、ＧｌｃＮＡｃ部分は、Ｋａｂａｔで示されているＥＵインデックスに従って、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７）残基で抗体に結合される。ｙが２である特定の実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ部分はＦｃドメインの両方のＡｓｎ２９７残基に結合することができる。ｙが１である実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ部分はＦｃドメインのいずれかのＡｓｎ２９７残基に結合することができる。抗体が鎖伸長又は切断のいずれかによって修飾されている場合、オリゴ糖は未修飾抗体のＡｓｎ２９７に対応するアスパラギン残基に結合することができる。
本明細書で提供されるのは、非常に均一な複合糖質であり、個々のＣＢＡがＣＢＡにグリコシル化された同じグリカン構造を持つことを意味する。例えば、抗体の場合、組成中の個々の抗体分子の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、又は少なくとも９９％が同一のグリカン構造を持つことができる。オリゴ糖がＡｓｎ２９７にグリコシル化されている実施形態では、抗体の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、又は少なくとも９９％がＡｓｎ２９７に同じグリカンを持つことによって特徴づけることができる。
本明細書で用いられる用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、望ましい生物学的活性を示す限りにおいて、モノクローナル抗体、ポリクローン抗体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントを具体的にカバーする（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｊｏｕｒ，ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７０：４８５４－４８６１）。抗体には、マウス、ヒト、ヒト化、キメラ、又は他の種に由来するものがある。抗体は、特定の抗原を認識して結合することができる免疫系によって生成されるタンパク質である。（Ｊａｎｅｗａｙ，ＣＴｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）ＩｍｍｕｎｏＢｉｏｌｏｇｙ，第五版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ）。標的抗原は一般にエピトープともいう多数の結合部位を持ち、複数の抗体上のＣＤＲによって認識される。異なるエピトープに特異的に結合する抗体は各々異なる構造を持つ。したがって、１つの抗原が複数の対応する抗体を持つ場合がある。抗体は、完全長免疫グロブリン分子又は完全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、がん細胞又は自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生する細胞を含むがこれらに限定されない、目的の標的又はその一部の抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を含む。免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子のいかなる型／クラス（例：ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ）又はサブタイプ／サブクラス（ｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、ｌｇＧ４、ｌｇＡ１、ｌｇＡ２等）であり得る。免疫グロブリンは、ヒト、マウス、ウサギ由来を含む、あらゆる種に由来することができる。
「抗体断片」は、全長抗体の一部、一般的にはその抗原結合又は可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びｓｃＦｖフラグメント、ダイアボディ；線状抗体；Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、がん細胞抗原、ウイルス抗原又は微生物抗原に免疫特異的に結合する上記のいずれかのエピトープ結合断片、一本鎖抗体分子；及び抗体断片から形成される多特異的抗体があげられる。
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体をいい、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在する可能性のある自然に発生する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に向けられる非常に特異的である。さらに、異なる決定因子（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローン抗体製剤とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定因子に対するものである。モノクローナル抗体は、その特異性に加えて、他の抗体によって汚染されることなく合成される可能性があるという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体の性質を示し、いかなる特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本開示に従って用いられるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５によって最初に記述されたハイブリドーマ法によって作成されるか、又は組換えＤＮＡ法（参照：米国特許第４８１６５６７号）によって作成される。モノクローナル抗体は、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８に記述された技術又はＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ。Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７又は完全ヒト免疫グロブリン系（Ｌｏｎｂｅｒｇ （２００８）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ２０（４）：４５０－４５９）を持つトランスジェニックマウス由来を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離されることもできる。
本明細書におけるモノクローナル抗体は、特に、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来する、又は特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である一方で、鎖の残りの部分が、別の種に由来する、又は別の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体、及びそのような抗体の断片を、それらが望ましい生物学的活性を示す限り（米国特許第４８１６５６７号；とＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５）含む。キメラ抗体には、非ヒト霊長類（例：Ｏｌｄ ＷｏｒｌｄＭｏｎｋｅｙやＡｐｅ）に由来する可変ドメイン抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含む「プリマ化」抗体があげられる。
本明細書における「インタクト抗体」は、ＶＬドメイン及びＶＨドメイン、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。定常ドメインは、ネイティブ配列定常ドメイン（例えば、人間のネイティブシーケンス定数ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体であり得る。インタクト抗体は、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に起因する生物活性をいう１つ以上の「エフェクター機能」を持つことができる。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ ｑ結合が含まれる。補体依存性細胞毒性；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；Ｂ細胞受容体やＢＣＲ等の細胞表面受容体の下方制御を引き起こす。
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、無傷の抗体を異なる「クラス」に割り当てることができる。無傷の抗体には、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭの５つの主要なクラスがあり、これらのいくつかは、例えばｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、ｌｇＧ４、ＩｇＡ、ｌｇＡ２のように、さらに「サブクラス」に分けられる。ＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ １サブタイプが好まれる。異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、各々α、δ、ε、γ、μという。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造と三次元配置は公知である。
ヒト以外の抗体又は抗体フラグメントのインビボ免疫原性を低下させる技術には、「ヒト化」とがある。
「ヒト化抗体」とは、ヒト抗体の修飾された可変領域の少なくとも一部を含むポリペプチドであって、可変領域の一部、好ましくは、無傷のヒト可変領域よりも実質的に小さい部分が、非ヒト種由来の対応する配列によって置換されており、修飾された可変領域が別のタンパク質の少なくとも別の部分、好ましくは、ヒト抗体の定常領域に結合しているものをいう。「ヒト化抗体」という表現は、１つ以上の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）アミノ酸残基及び／又は１つ以上のフレームワーク領域（「ＦＷ」又は「ＦＲ」）アミノ酸残基が、げっ歯類又は他の非ヒト抗体の類似部位由来のアミノ酸残基によって置換されているヒト抗体を含む。「ヒト化抗体」という表現には、実質的にヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有するＦＲと実質的に非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む免疫グロブリンアミノ酸配列変異体又はその断片も含まれる。
非ヒト（例えばネズミ）抗体の「ヒト化」された形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。又は、別の見方をすると、ヒト化抗体は、ヒト配列の代わりに非ヒト（例えばネズミ）抗体から選択された配列も含むヒト抗体である。ヒト化抗体には、その結合及び／又は生物活性を大きく変化させない、保存的なアミノ酸置換又は同種又は異種の非天然残基を含めることができる。このような抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。
「ＣＤＲ移植」、「ガイド付き選択」、「脱免疫」、「再表面化」（「ベニアリング」ともいう）、「複合抗体」、「ヒト文字列内容最適化」、フレームワークシャッフル等、様々なヒト化技術がある。
抗体は、無傷の抗体である場合がある。抗体は、ヒト化、免疫解除、又は再表面化される場合がある。抗体は、完全ヒトモノクローナルＩｇＧ１抗体、好ましくは、ＩｇＧ１、κである場合がある。
本明細書で使用するアミノ酸の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１、ＮＩＨ刊行物９１～３２４２、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ、バージニア州スプリングフィールド、以下「Ｋａｂａｔ」）に記載されているＥＵインデックスの番号付けシステムによる。「Ｋａｂａｔに記載されているＥＵ指数」とは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．ｓｕｐｒａに記載されているヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号をいう。
例えば、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４（又はｌｇＡ１、ｌｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ等の。）で置換された場合、当業者は、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ （登録商標）（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）等の配列アラインメントプログラムを容易に使用して、配列をＩｇＧ１にアラインメントし、本明細書に記載されるＫａｂａｔの位置に対応する目的のアイソフォームのどの残基かを決定することができる。
ある実施形態では、ペイロードは、Ｋａｂａｔに記載されているＥＵインデックスに従って、ＩｇＧ１の２９７に対応する位置にあるアスパラギン残基に結合したＮ結合グリカンに結合される。
ある実施形態では、抗体は、Ｓｄ（Ａ）ｘ部分（すなわち。ｙ＝２）を持つ２つのＮ結合グリカンを持つ無傷の抗体である。ある実施形態では、抗体は、Ｓｄ（Ａ）ｘ部分を持つ正確に２つのＮ結合グリカンを持つ。
ある側面では、本明細書で開示されている共役体及び方法で使用できるモノクローナル抗体として適するモノクローナル抗体としては、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アビツズマブ、アブレゼキマブ、アブリルマブ、アクトキシマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アファセビクマブ、アフェリモマブ、アラキズマブ、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブ・マフェナトックス、アンデカリキシマブ、アネツマブ、アニフロルマブ、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アプルトゥマブ、アーキツモマブ、アスリンバクマブ、アセリズマブ、アテゾリズマブ、アチドルトクスマブ、アティヌマブ、アトロリムマブ、アベルマブ、アジントキシズマブ、バピヌズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、BCD-100、ベクツモマブ、ベベロマブ、ベランタマブ、ベリムマブ、ベマリツズマブ、ベンラリズマブ、ファゼンラマブ、ベルリマトクスマブ、ベルメキマブ、ベルサンリマブ、ベルチリムマブ、ベシレゾマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグラマブ、ビメキズマブ、ビルタミマブ、ビバツズマブ、ブレゼルマブ、ブリナツモマブ、ブロントベツマブ、ブロスゾーマブ、ボコシズマブ、ブラジクマブ、ブレンツキシマブ、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロントツズマブ、ブロスマブ、クリスビタマブ、カビラリズマブ、カミダンルマブ、カムレリズマブ、カナキヌマブ、カンタズマブメルタンシン、カンタズマブ、カプラシズマブ、カプロマブ、カルルマブ、カロツキシマブ、カトゥマキソマブ、CBR96、セデリズマブ、セミピリマブ、セルグツズマブ、セルトリズマブ、セトレリマブ、セツキシマブ、シビサタマブ、シルムツズマブ、シタツズマブ・ボガトックス、シクツズマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブ、コドリツズマブ、コフェツズマブ、コルツキシマブ、コナッツマブ、コンシズマブ、コスフロビキシマブ、CR6261、クレネズマブ、クリザンリズマブ、クロツマブ、クサツズマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツマブ、ダピロリズマブ、ダラツムマブ、デクトレクマブ、デムシズマブ、デニンツズマブ・マフォドチン、デノスマブ、デパツキシズマブ、デルロツキシマブ、デツモマブ、デサミズマブ、ジヌツキシマブ、ディリダブマブ、ドマグロスマブ、ドルリモマブ、ドスタルリマブ、ドロジツマブ、ds-8201、デュリゴツズマブ、デュピルマブ、デュルバルマブ、デュシギツマブ、デュボルチズマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エルデルマブ、エレザヌマブ、エルゲムツマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エマクトツズマブ、エマパルマブ、エミベツズマブ、エミシズマブ、ヘムリブラ、エナポタマ、エナバツズマブ、エンフォルツマブ、エンリモマブ、エノブリツズマブ、エノキズマブ、エノキツマブ、アンシツキシマブ、エピツモマブ、エプラツズマブ、エプチネスマブ、エレヌマブ、エルリズマブ、エルツマクソマブ、エタラシズマブ、エチギリマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノールソマブ、ファラリモマブ、ファリシモブ、ファレツズマブ、ファシヌマブ、fbta05、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィバツズマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ、フランボツマブ、フレチクマブ、フロテツズマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレマネズマブ、フレソリムマブ、フロボシマブ、フルネベットマブ、フルランマブ、フツキシマブ、ガーカネスマブ、ガリックスマブ、ガンコタマブ、ガニタム、ガンテネマブ、ガティポツマブ、ガビリモマブ、ゲディブマブ、ゲムツズマブ、ゲボキズマブ、ギルベツマブ、ギムシルマブ、ギレントキシマブ、グレムバツマブ、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ゴスラネマブ、グセルクマブ、イアナルマブ、イバルズマブ、IBI308、イブリツモマブ、イクルクマブ、イダルシズマブ、イファボツズマブ、イゴヴォマブ、イラダツズマブ、IMAB362、イマルマブ、イマプレリマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブ・ラブタンシン、インドサツマブ・ベドチン、イネビリズマブ、インフリキシマブ、イノリモマブ、イノツズマブ、インテツムマブ
、IOMAB-B、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イカリムアム、イシラツマブ、イトリズマブ、イセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ラクノツズマブ、ラディラツズマブ、ランパリズマブ、ラナデルマブ、ランドグロツマブ、ラプリツキシマブ、ラルカビキシマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンダリズマブ、レンベルビマブ、レンジルマブ、レルデリムマブ、レロンリマブ、レゾファブマブ、レトリズマブ、レクサツムマブ、リビビルマブ、リファストズマブ、リゲリズマブ、リロトマブ・サテトラキセタン、リントズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロキベツマブ、ロンカスタキシマブ、ロルボツズマブ、ロサツキシズマブ、ルカツマブ、ルリズマブ、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、ルパルトマブ・アマドチン、ルチキズマブ、マパツムマブ、マルゲツキシマブ、マースタシマブ、マスリムマブ、マツズマブ、メブリムマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラトツマブ、ミンレツモマブ、ミリキズマブ、ミルベツキシマブ・ソラブタンシン、ミツモマブ、モドツキシマブ、モガムリズマブ、モナリザブ、モロリムスマブ、モズネツズマブ、モタビズマブ、モキセツモマブ、ムロモナブ-CD3、ナコロマブ・タフェナトックス、ナミルマブ、ナプトモマブ、ナラツキシマブ、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ナビシキズマブ、ナビブマブ、ナキシタマブ、ネバクマブ、ネシツマブ、ネモリズマブ、NEOD001、ネレリモマブ、ネズバクマブ、ネタキマブ、ニモツズマブ、ニルセビマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブ、オビルトキサキシマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オクタツムマブ、オララツマブ、オレクルマブ、オレンダリズマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オンブルタマブ、OMS721、オナルツズマブ、オントキシズマブ、オンバティリマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリクスズマブ、オティリマブ、オトラルツズマブ、オクセルマブ、オザネツマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パムレブルマブ、パニツムマブ、パンコマブ、パノバクマブ、パサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ、パテクリツズマブ、パトリツマブ、PDR001、ペムブロリズマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペクセリズマブ、ピディリズマブ、ピナツズマブ、ピントツモマブ、プラクルマブ、プロザリズマブ、ポガリズマブ、ポラツズマブ、ポネスマブ、ポルガビキシマブ、プラシネスマブ、プレザリズマブ、プリリキシマブ、プリトキシマブ、プリツムマブ、PRO140、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラネベツマブ、ラニビスマブ、ラバガリマブ、ラブリズマブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ、レガビルマブ、アレリマブ、レムトルマブ、レスリズマブ、リロトマブ、リヌクマブ、リサンキズマブ、リツキシマブ、リババズマブ、ロバツムマブ、ロレツマブ、ロミルキマブ、ロモソズマブ、ロンタルリズマブ、ロズマントズマブ、ロバルピツズマブテシリン、ロベリズマブ、ロザノリキシズマブ、ルプリズマブ、SA237、サシツズマブ、サマリズマブ、サムロタマブ、サリルマブ、サトラリズマブ、サツママブ、セクキヌマブ、セリクレルマブ、セリバントマブ、セトキサキシマブ、セトルズマブ、セビルマブ、SGN-CD19a、SHP647、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルトキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルトラツマブ、シルクマブ、ソフィツズマブ、ソラネツマブ、ソリトマブ、ソネプチズマブ、ソンツズマブ、スパルタリズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スプタブマブ、スティムリマブ、スビズマブ、スブラトックスマブ、タバルマブ、タカツズマブ、タドシズマブ、タラコツズマブ、タリズマブ、タムツベツマブ、タネツマブ、タプリツモマブ、タレクストマブ、タボリマブ、テフィバズマブ、テリモマブ、テリソツマブ、テナトモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テポジタマブ、テプロツマブ、テシドルマブ、テツロマブ、テゼペルマブ、TGN1412、チブリズマブ、チブリスマブ、ティガツズマブ、ティルドラキズマブ、ティミグツズマブ、ティモルマブ、ティラゴツマブ、ティスリズマブ、ティソツマブ、TNX-650、トシリズマブ、トムゾツキシマブ、トラルイズマブ、トサトックスマブ、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、TRBS07、トレガリズマブ、トレメリマブ、トレボグルマブ、トゥコツズマブ、トゥビルマブ、ユブリツキマブ、ウロコプルマブ、ウレルマブ、ウルトラキサズマブ、アウステキニマブ、オートミルマブ、バスタキシマブ、バナリズマブ、バナロマブ、バンドルツズマブ、バンティツズマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バリサクマブ、バリルマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベーパリモマブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ、ボバリズマブ、ボロシキシマブ、ボンレロリズマブ、ボプラテリマブ、ボルセツズマブ・マフォドチン、ボツマブ、ブナキスマブ、ゼントズマブ、XMAB-5574 5574、ザルツマブ、ザノルマブ、ザツキシマブ、ゼノクタツズマブ、ジラルマブ、ゾルベツキシマブ、及びゾリモーマがあげられる。
本明細書に記載される共役化学により、本明細書に記載されるグリコシル化細胞結合剤を広範なペイロードに共役させることができる。例えば、ある実施形態では、ペイロードは、治療薬（治療用タンパク質、脂質、核酸等）、マーカー又はイメージング剤（放射性核種、蛍光体、染料等）、薬物、抗生物質、ワクチン、免疫抑制剤、アジュバント又は保護剤であるか、それらを含む。
好ましいクラスのペイロードは、薬物（本明細書では、「薬物部分」ともいう）で構成され、細胞結合剤に薬物を結合させることにより、薬物を高い精度で標的細胞に送達することができる。
薬物分子は、薬物又はプロドラッグである。ある実施形態では、薬物は、医薬活性化合物、特に低～中分子量化合物（例えば、約２００～約２５００Ｄａ、好ましくは、約３００～約１７５０Ｄａ）からなる基から選択される。ある実施形態では、薬物は、細胞毒、免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、ペプチド及びオリゴヌクレオチドの１つ以上であり得る。代表的な薬物には、コルヒチン、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、カンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、タキサン、ピリジノベンゾジアゼピン（ＰＤＤｓ）、カリケアミシン及び他のエン－ジイン化合物、チューブリシン、エキサテカン、イリノテカン、阻害ペプチド、アマニチン、デブーガニン、デュオカルマイシン、メイタンシン又はオーリスタチン、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、タキサン、アマニチン、特にビンカアルカロイド、アントラサイクリン、カンプトテシン、タキサン、チューブリシン、アマニチン、メイタンシン及びオーリスタチンがあげられる。
疑いを避けるために、この薬物はピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、すなわち以下の下部構造：
Figure 2023554215000009
 を含む化合物であってはならない。
本明細書で、いかなる原子もさらにいかなる官能基で置換されてよい。
好ましい実施形態では、薬物部分は、リンカー部分（いわゆる「薬物リンカー」ペイロード）を介して、本明細書に記載されるグリコシル化細胞結合剤に結合され、１つ以上の薬物が同じシアロシドに結合した共役体を生成する。
［［薬物リンカー］ｚ－シアロシド－Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ］ｚ－ＣＢＡ、
本明細書で、上記で定義されたシアロシド上のＱＱ、ＸＸ、ＹＹ、ＺＺの１つ以上の位置がリンカーペイロードであり、ｚは各々１、２、３、４、５、６、７、又は８から独立して選択される。ある実施形態では、複数の薬物をシアロシドに結合された同じリンカーに結合させることができ、以下の式を有する。
［薬物］ｚ－リンカー－シアロシド－Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ］ｚ－ＣＢＡ。
他の実施形態では、複数の薬物を同じリンカーに結合させることができ、複数のリンカーを以下の式でシアロシドに結合させることができる。
［［薬物］ｚ－リンカー］ｚ－シアロシド－Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ］ｚ－ＣＢＡ。
特定の実施形態では、リンカーは１，３双極子とひずみのあるシクロアルキン又はひずみのあるｔｒａｎｓシクロアルケンとの間の環状付加反応から得られる環系を含むことができる。
したがって、いくつかの例示的な実施形態では、ペイロードはＱＱ位置でシアロシドに結合しているため、以下のようになる。
Figure 2023554215000010
 本明細書で、Ｌはリンカーである。いくつかの例示的な実施形態では、ペイロードはＺＺ位置でシアロシドに結合されており、したがって以下のようになる：
Figure 2023554215000011
 さらに別の実施形態では、ペイロード（例：薬物）はＱＱ位置とＺＺ位置でシアロシドに結合されている。ペイロードとリンカーは同じでも異なっていてもよい。
様々な細胞毒性化合物がペイロードとして機能する。ある実施形態では、ペイロードには、ＤＮＡ損傷剤、チューブリン重合阻害剤（微小管阻害剤又は微小管不安定化剤ともいう）、トポイソメラーゼ阻害剤、ＲＮＡスプライシング阻害剤、又はＲＮＡポリメラーゼ阻害剤が含まれる。本明細書で用いられる用語「ＤＮＡ損傷剤」は、上記で定義されたピロロベンゾジアゼピン化合物を含まない。ある実施形態では、共役体は、上記のクラスから抽出された少なくとも２つの異なる薬物を含むことができる。例えば、共役体は、複数のＤＮＡ損傷剤又は複数の微小管阻害剤を含むことができる。場合によっては、共役体は、少なくとも１つのＤＮＡ損傷剤及び少なくとも１つの微小管阻害剤を含むことができる。他の実施形態では、共役体は少なくとも１つのＤＮＡ損傷剤と少なくとも１つのトポイソメラーゼ阻害剤を含むことができる。更なる実施形態では、共役体は少なくとも１つの微小管阻害剤と少なくとも１つのトポイソメラーゼ阻害剤を含むことができる。さらに他の実施形態では、共役体は少なくとも１つの微小管阻害剤、少なくとも１つのＤＮＡ損傷剤、及び少なくとも１つのトポイソメラーゼ阻害剤を含むことができる。
適当なＤＮＡ損傷剤には、エンジイン化合物、ドキソルビシン化合物、デュオカルマイシン化合物、適当な微小管阻害剤には、ドラスタチン化合物、タキサン、ビンカアルカロイド、メイタンシン化合物、ツブリシン化合物、エリブリン化合物、及びクリトフィシン化合物が含まれる。適当なトポイソメラーゼ阻害剤にはカンプトテシン化合物やラメラリン化合物がある。
免疫刺激薬等、他の種類のペイロードが共役されることもある。
ある実施形態では、ペイロードは、カリケアマイシン類、シシジミシン類、ウンシアラマイシン類、ネオカルジノスタチン類、エスペラマイシン類、ダイネマイシン類、及びゴルフォマイシン類を含む、エンジイン系抗腫瘍抗生物質を含むことができる。
いくつかの例では、ペイロードは、以下の式：
Figure 2023554215000012
 （式中、
Ｒｃｈ １又はＲｃｈ ２の１つは、末端シアロシドに結合したリンカーである。リンカーでない場合、Ｒｃｈ １はＨ、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、又は遊離のチオールを与えるために切断することができる十分に不安定な基であり得る。リンカーでない場合、Ｒｃｈ ２はＨ、Ｃ１～４アルキル、又はＣ（Ｏ）Ｃ１～４アルキルであり得る）を有するカリケアマイシン化合物を含むことができる。
場合によっては、ペイロードに以下の式：
Figure 2023554215000013
 （式中、Ｒｓｈ １、Ｒｓｈ ２、又はＲｓｈ ３のいずれかが末端シアロシドに共役したリンカーである
リンカーでない場合、Ｒｓｈ １はＨ、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、又は遊離のチオールを与えるために切断することができる十分に不安定な基であり得る。リンカーでない場合、Ｒｓｈ ２はＨ、Ｃ１～４アルキル、又はＣ（Ｏ）Ｃ１～４アルキルであり得る。リンカーでない場合、Ｒｓｈ ３はＨであり得る）
を備えるシシジミシン化合物を含めることができる。
場合によっては、ペイロードに以下の式：
Figure 2023554215000014
 （式中、
Ｒｕｎ１、Ｒｕｎ２、Ｒｕｎ３、Ｒｕｎ４、Ｒｕ ５のうち１つは末端シアロシドに共役したリンカーであり、残りはＨである）
を持つウンシアラマイシン化合物を含めることができる。

いくつかの例では、ペイロードは以下の式：
Figure 2023554215000015
 （式中、
Ｒｕｎ１、Ｒｕｎ２、Ｒｕｎ３、Ｒｕｎ４、Ｒｕ ５のうち１つは末端シアロシドに共役したリンカーであり、残りは独立してＨ又はＣ１～４アルキルである）
を持つネオカルジノスタチン化合物を含むことができる。
いくつかの例では、ペイロードは以下の式：
Figure 2023554215000016
 （式中、
Ｒｅｓ １、Ｒｅｓ ２、Ｒｅｓ ３、Ｒｅｓ ４、Ｒｅｓ ４、Ｒｅｓ ５、Ｒｅｓ ６、Ｒｅｓ ７、Ｒｅｓ ８のいずれかが末端シアロシドに結合したリンカーである。リンカーでない場合、Ｒｅｓ １はＨ、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ３、Ｃ１～４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、又は遊離のチオールを与えるために切断することができる十分に不安定な基であり得る。リンカーでない場合、Ｒｅｓ ２、Ｒｅｓ ３、Ｒｅｓ ４、Ｒｅｓ ４、Ｒｅｓ ５、Ｒｅｓ ６、Ｒｅｓ ７及びＲｅｓ ８は独立してＨ、Ｃ１～４アルキル、又はＣ（Ｏ）Ｃ１～４アルキルである）を持つエスパラマイシン化合物を含むことができる。
場合によっては、ペイロードは以下の式：
Figure 2023554215000017
 （式中、Ｒｄｙ １、Ｒｄｙ ２、Ｒｄｙ ３、Ｒｄｙ ４、Ｒｄｙ ４、Ｒｄｙ ５、Ｒｄｙ ６のうち１つは末端シアロシドに結合したリンカーであり、残りは独立してＨ又はＣ１～４アルキルである）
を持つダイネマイシン化合物であってよい。
他の例では、ペイロードは以下の式：
Figure 2023554215000018
 （式中、Ｒｇｏは末端シアロシドに結合したリンカーである）
を有するゴルフォマイシン化合物を含むことができる。
ある実施形態では、ペイロードはドラスタチン化合物、例えば、ドラスタチン１０又はドラスタチン１５類似体であってよい。特定の実施形態では、ドラスタチン化合物は、例えば以下の式：
Figure 2023554215000019
 （式中、Ｒａｕ １及びＲａｕ ２の一方は末端シアロシドに共役したリンカーであり、もう一方はＨ、及びＣ１～４アルキルから選択される）
を有するアウリスタチンであってよい。
他の実施形態では、ペイロードには以下の式：
Figure 2023554215000020
 （式中、ＲｄｏｘはＨ又はＯＲｄ ７、ＸはＯ又はＮＲｄ ８のいずれかであり、Ｒｄ １、Ｒｄ ２、Ｒｄ ３、Ｒｄ ４、Ｒｄ ４、Ｒｄ ５、Ｒｄ ６、Ｒｄ ７、又はＲｄ ８のいずれかが末端シアロシドに共役したリンカーであり、残りはＨ及びＣ１～４アルキルから独立して選択される）
を有するダウノルビシン又はドキソルビシン化合物を含めることができる。
その他の場合、ペイロードにはアンサミトシン誘導体、例えば以下の式：
Figure 2023554215000021
 （式中、Ｒｍｅは末端シアロシドに結合したリンカーである）
を有するメルタンシン化合物を含めることができる。
さらなる実施形態では、ペイロードにはビンカアルカロイド、例えば以下の式：
Figure 2023554215000022
 （式中、ＲｖはＣＨ３又はＣ（Ｏ）Ｈである；
Ｒｖ １はＯＨ、ＯＡｃ、又は末端シアロシドに結合したリンカーである；
Ｒｖ ２はＯＨ、ＯＣＨ３、又は末端シアロシドに結合したリンカーである；及び
Ｒｖ ３は存在しないか、又は末端シアロシドに結合したリンカーである）
を有するビンクリスチン／ビンブラスチン化合物を含めることができる。
他の実施形態では、ペイロードには以下の式：
Figure 2023554215000023
 （式中、Ｒｅｒは末端シアロシドに結合したリンカーである）を有するエリブリン化合物を含めることができる。
他の実施形態では、ペイロードは以下の式：
Figure 2023554215000024
 （式中、Ｒｃ １はＨ又は末端シアロシドへのリンカーである；
Ｒｃ ２はＨ、ＣＨ２ＣＨ３又は末端シアロシドへのリンカーである；
Ｒｃ ３はＨ、ＯＨ、ＣＨ３である；又は末端シアロシドへのリンカー；
Ｒｃ ４はＨ又はＦ；と
Ｒｃ ５はＮＨ２又は末端シアロシドへのリンカーである）
を有するカンプトテシン化合物を含むことができる。
ペイロードに含めることができる他の化合物は、以下の式：
Figure 2023554215000025
 （式中、Ｒｄｕ １はＨ又は末端シアロシドへのリンカーである；及び
Ｒｄｕ ２はＣ１～８アルキル、ＯＣ１～８アルキルフェニル、４－ヒドロキシフェニル、又は末端シアロシドへのリンカーである）を有するデュオカルマイシン化合物である。
ある実施形態では、ペイロードは以下の式：
Figure 2023554215000026
 （式中、Ｒｔｘ１は－Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、－－Ｃ（Ｏ）ＯｔＢｕ、又は末端シアロシドへのリンカーである；
Ｒｔｘ２はＨ、又は末端シアロシドへのリンカーである；
Ｒｔｘ３は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、ＯＭｅ、又は末端シアロシドへのリンカーである；
Ｒｔ ４はフェニル又は－ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２である）を持つタキサン化合物を含む。
ある実施形態では、ペイロードは式：
Figure 2023554215000027
 （式中、ＸｃｒはＯ又はＮＨである；
ＲＣＲ２はＨ又はＣＨ３である；と
Ｒｃｒ ３は末端シアロシドへのリンカーである）
を有するクリプトフィシン化合物を含む。
場合によっては、ヘミアスタリン、ＨＴＩ－２８６）、コルヒチン、ジスコデルモリド、タカロノリドＡ、タカロノリドＢ、タカロノリドＡＦ、等の他のチューブリン阻害薬をペイロードに含めることができる。
タカロノリドＡＪ、タカロノリドＡＩ－エポキシド、ラウリマリド、エポチロンＡ又はエポチロンＢ。
リンカーは、ペイロードを末端シアロシドと結合させるが、ある実施形態では、シアロシドを以下のように表すことができる。
Figure 2023554215000028
 （式中、ペイロードは上記の定義のとおり、Ｈｅｔは複素環系を表し、Ｌ１はＨｅｔからペイロードへのなし又はサブリンカーから選択され、Ｌ２はＨｅｔからｓｉａｌｏｓｉｄｅへのなし又はサブリンカーから選択され、ｘ１は１、２、３、４、５、６、７、又は８から選択された整数；ｘ２は１、２、３、４、５、６、７、又は８から選択された整数；ｘ３は１、２、３、４、５、６、７、又は８から選択された整数。１つのリンカーが複数のペイロード（つまり、ｘ１、ｘ２、又はｘ３＞１の少なくとも１つ）を含む実施形態では、ペイロードは同じであっても異なっていてもよい）
同じシアロシド（つまり、ＱＱ、ＸＸ、ＹＹ、ＺＺのうち少なくとも２つは共役ペイロードである）に結合した複数のリンカ－ペイロード部分を特徴とする実施形態では、ペイロード、Ｈｅｔ、Ｌ１、Ｌ２、ｘ１、ｘ２、ｘ３の同一性は同じであっても異なっていてもよい。
典型的な複素環系には、縮合多環複素環系が含まれる。
Figure 2023554215000029
 （式中本明細書で、Ｈ１は複素環を表し、Ａは炭素環又は複素環、好ましくは環骨格に８個の原子を持つ環を表す。典型的な８個の原子からなる環には、シクロオクタン、シクロオクテン、アザ－シクロオクタン、アザ－シクロオクテン、２－アザシクロオクタノン及びそれらの不飽和誘導体が含まれる）。ある実施形態では、８個の原子からなる環を１つ以上の芳香環に縮合させることができる。
Ｈ １で表される複素環は、（ａ）１，３双極子又は１，２，４，５テトラジンと（ｂ）ひずみアルキン又はひずみアルケンのいずれかとの間の環状付加反応から生成することができる。好ましいひずみアルキンはシクロオクチンを含み、好ましいひずみアルケンはトランス－シクロオクテンを含む。複素環には、トリアゾール類、１，２－ピリダジン類、オキサゾール類、イソオキサゾール類、オキサジアゾール類、及びそのような環の飽和及び部分不飽和類似体が含まれるが、これらに限定されない。
ある実施形態、例えば（ｘ２及びｘ３＝１）では、複素環系は以下の式：
Figure 2023554215000030
Figure 2023554215000031
 （式中、ｘは上記の定義のとおり、ＲＨ １はＨ、Ｃ１～４アルキル、アリール、Ｃ１～４アルカリルから選択され、Ｌ１又はＬ ２と共に環を形成してもよい；
ＲＨ ２はＨ、Ｃ１～４アルキル、アリール、Ｃ１～４アルカリルから選択され、
Figure 2023554215000032
 は単結合又は二重結合を表す）
を持つことができる。
特定の実施例では、Ａリングは以下の式：
Figure 2023554215000033
 （式中、ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’は各々独立して、なし、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルコキシ、アリールから選択される；かつ、
ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’はのいずれか１つはＬ１又はＬ２であってよく；ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれか２つ以上がともにリングを形成しうる；たとえばＲＡ１とＲＡ２、及びＲＡ３とＲＡ４はともに芳香環を形成できるが、ＲＡ１’、ＲＡ２’、ＲＡ３’、及びＲＡ４’は各々なしである；
ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれかがＬ１又はＬ２の場合、ＷはＣＨ２ＣＨ２であってよい；ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれもＬ１及びＬ２でない場合、Ｗは以下の式：
Figure 2023554215000034
 （式中、Ｌ１／２はＬ１又はＬ２のいずれかを表す）
を持つ基であってよい；本明細書で、Ｗ、ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれかにＬ１が含まれる場合、Ｗ、ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれもＬ２を含まず；かつ、Ｗ、ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれかにＬ２が含まれる場合、Ｗ、ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれもＬ１を含まない）を持つことができる。
ある実施形態では、Ａリングは以下の式：
Figure 2023554215000035
 を持つことができる。
上には示されていないが、Ｌ１が８原子環に結合している場合、Ｌ２は複素環に結合し、その逆もまた同様であることが理解されている。
ある実施形態では、Ｌ２はなくてもよく、又は以下の式：
－Ｌ２１－Ｌ２２－Ｌ２３－Ｌ２４－Ｌ２５－Ｌ２６－
（式中、Ｌ２１は複素環系に結合しており、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ２１、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２１、ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２１、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２１は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
Ｌ２２は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ２２、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２２、ＮＲ２２Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２２Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２２は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
Ｌ２３は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、Ｓ、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）；ポリ（グリセロール）、Ｏ、ＮＲ２３、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２３、ＮＲ２３Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２３Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２３Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２３Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２３、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２３は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
Ｌ２４は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ２４、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２４、ＮＲ２４Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２４Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２４Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２４Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２４、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２４は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
Ｌ２５は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ２５、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２５、ＮＲ２５Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２５Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２５Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２５Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２５、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２５は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
Ｌ２６はシアロシドに結合し、かつ、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ２６、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２６、ＮＲ２６Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２６Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２６Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２６Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２６は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである）を持つ基であってもよい。
特定の実施形態では、Ｌ２１、Ｌ２２、Ｌ２３、Ｌ２４、Ｌ２５、Ｌ２６のうちいかなる２つ以上が一緒にリングを形成することができる。
当業者は、Ｌ２１、Ｌ２２、Ｌ２３、Ｌ２４、Ｌ２５、及びＬ２６の各々についてなしを選択すると、Ｌ２がなしである実施形態が生成されることを理解する。
特定の実施形態では、Ｌ２６はＮＨＣ（Ｏ）ＮＨであるが、他の実施形態では、Ｌ２６は、例えばトリアゾール、１，２ピリダジン、オキサゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、及びそれらの飽和及び部分不飽和アナログであるヘテロシクリル又はヘテロアリールである。
特定の実施形態では、Ｌ２１はアリレン、例えば１，４－フェニレンである。
ある実施形態ではＬ２１は、なし、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ１～８アルキレン、好ましくはＣ１～３アルキレン又はアリレン、例えば１，４－フェニレンである；Ｌ２２は、なし又はＣ１～８アルキレン、好ましくはＣ１～３アルキレンである；Ｌ２３は、なし、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、ＮＨＣ（＝Ｏ）、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ、又はＯＣ（＝Ｏ）ＮＨである；Ｌ２４は、なし又はポリ（エチレン）である；Ｌ２５は、なし又はＣ１～８アルキレン、好ましくは、Ｃ１～３アルキレンである；Ｌ２６は、なし又はヘテロシクリル又はヘテロアリール、例えばトリアゾール、１，２ピリダジン、オキサゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、及びそれらの飽和類似体及び部分不飽和類似体である。
特定の実施形態では、Ｌ２１はＯＣ（Ｏ）ＮＨであり、Ｌ２２、Ｌ２３、Ｌ２４、Ｌ２５、及びＬ２６は各々なしである。
例として、ｘ、Ｌ２１、Ｌ２２、Ｌ２３、Ｌ２４、Ｌ２５、及びＬ２６に対して特定の選択を行うと、以下の部分構造：
Figure 2023554215000036
Figure 2023554215000037
Figure 2023554215000038
Figure 2023554215000039
 （式中、Ｌ１、ペイロード、Ｒｈ２、Ａ、ＱＱ、ＺＺ、ＹＹ、ＸＸは上記の定義のとおりである。上記のように、ＱＱ、ＺＺ、ＹＹ、ＸＸのうち複数のペイロードを共役ペイロードにすることができ、同じペイロードを持ち、同じリンカー又は異なるリンカーを持つことができる）を持つ実施形態が生成される。
ある実施形態では、Ｌ１をなしにすることも、以下の式：
－Ｌ１１－Ｌ１２－Ｌ１３－Ｌ１４－Ｌ１５－Ｌ１６－
（式中、
Ｌ１１は複素環系に結合しており、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ１１、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１１、ＮＲ１１Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１１Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１１Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１１、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１１は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
Ｌ１２は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ１２、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１２、ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１２は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
Ｌ１３は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、Ｓ、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）；ポリ（グリセロール）、Ｏ、ＮＲ１３、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１３、ＮＲ１３Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１３Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１３Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１３Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１３は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
Ｌ１４は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ１４、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１４、ＮＲ１４Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１４Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１４Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１４Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１４、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１４は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
Ｌ１５は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ１５、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１５、ＮＲ１５Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１５Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１５Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１５Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１５、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１５は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
Ｌ１６はペイロードに結合し、かつ、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ１６、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１６、ＮＲ１６Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１６Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１６Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１６Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１６は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである）
を持つ基にすることもできる。
特定の実施形態では、Ｌ１１、Ｌ１２、Ｌ１３、Ｌ１４、Ｌ１５、及びＬ１６のいかなる２つ以上が一緒にリングを形成することができる。
Ｌ１３は、分岐したＣ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、又はヘテロシクリル基であり得る。例として、Ｌ１３は以下の式：
Figure 2023554215000040
 （式中、ｙ１は原子価で許されるいかなる置換数である）
を有するフェニル基であり得る。上記の例示的な式では、ｘ１は１、２、３、４、又は５であってよい。熟練者は、他の可能なＬ１３基が異なるｘ１の可能性を生じることを認識している。他の例では、Ｌ１３は分岐したアルキレン、例えば以下の式：
Figure 2023554215000041
 （式中、）
を持つメチレンであり得るか、又は、以下の式：
Figure 2023554215000042
 か
を持つメチンである。
ある実施形態では、Ｌ１３は高分子基、例えば以下の式：
Figure 2023554215000043
 を持つポリ（グリセロール）を含むことができるか、又は以下の式：
Figure 2023554215000044
 （式中、ｙは１～１，０００；であり、
Ｒ４５６は水素又は式（４５６）：
Figure 2023554215000045
 であり、Ｒ４５６が式４５６の部分である回数は３０未満である）式を有するポリアセタールの部分から選択される。
切断可能なＬ１基には、環境条件下で結合切断を受ける官能基が少なくとも一つ含まれる。切断可能な基には、酸感受性基、酸化還元感受性基、酵素切断可能基、例えばプロテアーゼ切断可能基等がある。代表的な酸感受性基には、シッフ塩基／イミン、ヒドラゾン、ボロン酸エステル、アセタール等がある。代表的な酸化還元感受性基には、チオアセタール、シュウ酸エステル、ジスルフィド、ペプチド、ジセレニド基等がある。酵素切断可能な基の例としては、ペプチドフラグメントＶａｌ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、及びＶａｌ－Ｃｉｔが挙げられる。
場合によっては、Ｌ１に自己固定性スペーサーを含めることができる。自己固定性スペーサーは、選択的に切断可能な基に結合した化学部分をいい、切断可能な基の活性化は、最終的にスペーサーからペイロードを解放する反応のカスケードをもたらす。代表的な自己固定性スペーサーには、ｐ－アミノベンジルアルコール、ｐ－ヒドロキシベンジルアルコール、２－アミノイミダゾール－５－メタノール部分、オルト－又はパラアミノベンジルアセタール、アミノ酪酸アミド、１，２－ジアミノエチレン、１，３－ジアミノプロピレンが含まれる
ある実施形態では、Ｌ１は、自己固定性スペーサー、切断可能な基、及びいかなるさらなるリンカー、例えば以下の式：
Figure 2023554215000046
 （式中、
ＲＳＩＰは１つ以上の自己固定性スペーサーである；
ＲＣＬは切断可能な基である；
ＲＬ１が存在する場合は、さらなるリンカーである；
ｘ１．５は１、２、３、４、５、６、７、及び８から選択される整数である；かつ、
ｘ１．６は１、２、３、４、５、６、７、及び８から選択される整数である）
を有する共役体を含むことができる。
ペイロードが官能基化可能なアミンまたはアルコール基を含む場合、ペイロードは、例えば、カルバメート、カーボネート、ホスホネートまたはスルホネート基を介してＬ１またはＲＳＩＰに結合され得る：すなわち、
Figure 2023554215000047
 以下に示す実施形態では、ｘ１．５、ｘ１．６、及びｘ３はすべて１になるように選択される。また、本発明の範囲内で、これらの変数が１より大きい実施形態も考えられる。
Figure 2023554215000048
 Ｘはペイロード内の酸素又は窒素原子であり、ＸｚはＯ、ＮＨ、又はＮＣ１～４アルキルである。上に示したベンジル自己固定スペーサーは、ニトロ、フルオロ、トリフルオロメチル等のような電子吸引基によってさらに１回以上置換されてもよい。Ｒｅａ １及びＲｅａ ２は、Ｈ、Ｃ１～４アルキル、又は（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＨ（ｎは０、１、２、又は３から）から独立して選択することができる。
例として、ペイロードのアウリスタチンファミリーは、二級アミン官能基（つまり、Ｒａｕ １はリンカーを形成し、Ｒａｕ ２は水素である）を介して共役させることができる：
Figure 2023554215000049
 ＲＣＬがペプチジル残基である場合もある。
Figure 2023554215000050
 （式中、ｚは１又は０、ｚ１は１又は０、ＲＣＣはＨ、ペプチジル、Ｃ１～６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリル、Ｒａａ １、Ｒａａ ２、及びＲａａ ３は、フェニル、ＣＯＯＨ、ＮＨ２、ＣＯＨＮＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２で場合によっては、置換されたＨ、Ｃ１～６アルキルから独立して選択される）。
特定の実施形態では、ｚ１は０であり、Ｒａａ １はイソプロピルであり、Ｒａａ ２は（－ＣＨ２）４ＮＨ２、（－ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、（－ＣＨ２）３ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、又はＣＨ３である。他の場合では、ｚ１は０であり、Ｒａａ １はベンジルであり、Ｒａａ ２は（－ＣＨ２）４ＮＨ２である。さらに別の実施形態では、ｚ１は１、Ｒａａ １はイソプロピル、Ｒａａ ２は（－ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、Ｒａａ ３は（－ＣＨ２）ＣＯＯＨである。
ペプチジル残基は以下の式：
Figure 2023554215000051
 又は
Figure 2023554215000052
 （式中、Ｒｃｃ，ｚ，ｚ１，Ｒａａ １，Ｒａａ ２，Ｒａａ ３，ＲＳＩＰは上記の定義のとおりである）を持つことができる。
いくつかの例では、ＲＳＩＰは以下の式：を持つ４－アミノベンジルアルコールとすることができ、ｚ１が０の場合を以下に例示する
Figure 2023554215000053
 （式中、ｚ１が１の場合、ＲＳＩＰは４－アミノベンジルアルコールであってよい）。
場合によっては、ＲＣＬは以下の式：
Figure 2023554215000054
 を持つペプチド基である。
他の実施形態では、ＲＣＬはグルコン酸残基であり得る、例えば：
Figure 2023554215000055
 他の実施形態では、切断可能な基はジスルフィドであり得る。
Figure 2023554215000056
 （式中、Ｒｄｓ １及びＲｄｓ ２は独立してＨ又はＣ１～４アルキルである）
場合によっては、Ｒｄｓ １及びＲｄｓ ２は両方とも水素であるか、又はＲｄｓ １及びＲｄｓ ２は両方ともメチルである。他の例では、Ｒｄｓ １は水素であり、Ｒｄｓ ２はＣ１～４アルキルである。
ペイロードにケトン又はアルデヒドが含まれる場合、切断可能な基にはヒドラゾンを含めることができる。
Figure 2023554215000057
 ヒドラゾンの加水分解は、元のカルボニルでペイロードを解放すると考えられている。例として、ヒドラゾンに結合したドキソルビシンペイロードを使用することができる。
Figure 2023554215000058
 カルボン酸官能基を含むペイロードをヒドラゾンで結合することもできる。
Figure 2023554215000059
 （式中、ＲｈｙはＨ又はＣ１～４アルキル、好ましくは、メチルを表す、）。
例として、ビンクリスチン型ペイロードはヒドラゾンと共役させることができる。
Figure 2023554215000060
 ＲＬ１は以下の式：
Figure 2023554215000061
 （式中、
ＲＬ１ Ａは、なし、Ｃ１～１０アルキレン、アリール、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ－から選択される。
ＲＬ１ Ｂは、なし、ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｏ、ＮＲｚｚから選択される（本明細書で、ＲｚｚはＨ又はＣ１～４アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ１～１０アルキレン、アリール、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ－である）。
ＲＬ１Ｃは、なし、Ｃ１～１０アルキレン、アリール、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ－から選択される；
ＲＬ１ Ｄは、なし、ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｏ、ＮＲｚｚ（本明細書で、ＲｚｚはＨ又はＣ１～４アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ１～１０アルキレン、アリール、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ－から選択される；
ＲＬ１ Ｅは、なしＮＨＣ（Ｏ）Ｏ、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｏ、ＮＲｚｚ（本明細書で、ＲｚｚはＨ又はＣ１～４アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ１～１０アルキレン）から選択される；アリール、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ－；
本明細書で、ａは各々１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０から独立して選択される。他の実施形態では、ａは１～５０、１０～１００、５～１０、５～２５、２５～５０、又は５０～１００のいずれかであってよい。
ａ１は１、２、３、又は４から選択される；及び
ａ２は１，２，３，４，５，６，７，８から選択する）で表すことができる。
場合によっては、ＲＬ１は以下の式：
Figure 2023554215000062
Figure 2023554215000063
 （式中、ＲＬ１ Ａ、ＲＬ１ Ｂ、ＲＬ１Ｃ、ＲＬ１ Ｄ、及びａ１は上記の定義のとおりである）
を持つことができる。
場合によっては、ＲＬ１は以下の式：
Figure 2023554215000064
 （式中、ＲＬ１ Ａとａ１は上記の定義のとおりである）
を持つことができる。
作製方法
本明細書で開示されている複合糖質は、以下の式：
Figure 2023554215000065
 又は
Figure 2023554215000066
 （式中、Ｒｆａ、ｙ、及びＣＢＡは上記の定義のとおりである；
ＱはＨ又はＬ２－Ａｑ；
ＺはＯＨ又はＬ２－Ａｚ；
ＹはＯＨ又はＬ２：Ａｙ；及び
ＸはＯＨ又はＬ２：Ａｘ；本明細書で
Ｌ２は上記の定義のとおりであり、Ａｑ、Ａｘ、Ａｙ、Ａｚは各々クリック可能な基であり、Ａｑ、Ａｘ、Ａｙ、Ａｚのうち少なくとも１つはＡｚが存在する場合には、以下の式：
Figure 2023554215000067
 （式中、ペイロードとＬ１は上記の定義のとおりであり、Ａｐは複合糖質前駆体のＡｑ、Ａｘ、Ａｙ、Ａｚのいずれかに対して相補的なクリック可能基である）
がある、ペイロード前駆体を持つ）
を有する複合糖質前駆体間で環状付加反応を行うことによって調製することができる。
本明細書の「クリック可能基」とは、細胞結合剤に適合する条件下で環状付加反応を起こす、すなわち、ポリマー鎖を変性又はその他の方法で分解しない官能基をいう。相補性とは、複合糖質前駆体とペイロード前駆体のクリック可能基間の関係をいう。相補的なクリック可能基のペアには、ひずみのある環状系と１，３双極子又はテトラジンが含まれる。ひずみのある環状系には、以下の式：
Figure 2023554215000068
 （式中、Ｗ１はアルキン又はトランス二重結合のいずれかであり、例えば、以下の式：
Figure 2023554215000069
 又は、
（式中、式中、ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’は各々独立して、なし、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルコキシ、アリールから選択される；かつ、
ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’はのいずれか１つはＬ１又はＬ２であってよく、
ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’はのいずれか１つはＬ１又はＬ２である場合、残りのＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’はのいずれか１つはＬ１又はＬ２でない；
ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれか２つ以上がともにリングを形成しうる；たとえばＲＡ１とＲＡ２、及びＲＡ３とＲＡ４はともに芳香環を形成できるが、その場合はＲＡ１’、ＲＡ２’、ＲＡ３’、及びＲＡ４’は各々なしである
ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれかがＬ１又はＬ２の場合、ＷはＣＨ２ＣＨ２であってよい；ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれもＬ１及びＬ２でない場合、Ｗは以下の式：
Figure 2023554215000070
 （式中、Ｌ１／２はＬ１又はＬ２のいずれかを表す）
を持つ基であってよい））
を持つシクロオクチンとｔｒａｎｓ－シクロオクテンが含まれる。
場合によっては、ひずみのある循環系は以下の式：
Figure 2023554215000071
 を持つ。
場合によっては、ひずみのある環状系は以下の式：
適当な１，３の双極子及びテトラジンには以下の：
Figure 2023554215000072
 （式中、ＲＨ １及びＲＨ ２は上記の定義のとおりである）
を持つｔｒａｎｓ－シクロオクテンである。
ある実施形態では、複合糖質前駆体がテトラジンを含み、ペイロード前駆体がｔｒａｎｓ－シクロオクテンを含み、その逆、すなわち複合糖質前駆体がｔｒａｎｓ－シクロオクテンを含み、ペイロード前駆体がテトラジンを含む。複合糖質前駆体がアジド、ジアゾ、ニトロン、アゾキシ、ニトリルオキシド、又はシドノンを含む場合、ペイロード前駆体はシクロオクチンを含み、その逆もまた同様である。Ａｑ、Ａｘ、Ａｙ、Ａｚ、及びＡｐ基の異なる対の間の異なる反応性を利用することにより、１つのシアロシドが存在し、高度に制御されて複数のペイロードに結合することができる。
複合糖質前駆体とペイロード前駆体との間の反応は、例えばリン酸塩、緩衝食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水）、クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ、トリス及びグリシンのような緩衝水溶液中で行うことが望ましい。緩衝液はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）又はトリス緩衝液であることが望ましい。
反応は約４℃～約５０℃、より好ましくは約１０℃～約４５℃、さらにより好ましくは約２０℃～約４０℃、最も好ましくは約３０℃～約３７℃の範囲で行うことができる。この反応は、ｐＨが約５～約９、好ましくは約５．５～約８．５、より好ましくは約６～約８の範囲で行うことができる。最も好ましくは、約７～約８の範囲のｐＨで反応を行う。
場合によっては、最初の化合物は、上に示した２，６及び２，３結合糖共役体前駆体の混合物を含むことができる。他の実施形態では、糖共役体前駆体は実質的に２，６結合オリゴ糖のみであってもよく、実質的に２，３結合オリゴ糖上であってもよい。ある実施形態では、糖共役体前駆体は２，６結合オリゴ糖の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％であってもよいが、他の実施形態では、糖共役体前駆体は２，３結合オリゴ糖の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％であってもよい。
好ましい実施形態では、糖共役体前駆体のオリゴ糖はβ－Ｎ－グリコシド結合でＣＢＡに結合することができる：
Figure 2023554215000073
 特定の実施形態では、細胞結合剤は抗体であり、オリゴ糖はβ－Ｎ－グリコシド結合を介してアスパラギン側鎖を介して抗体に結合される：
Figure 2023554215000074
 場合によっては、ＧｌｃＮＡｃ部分は、Ｋａｂａｔに記載されているＥＵインデックスに従って、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７）残基で抗体に結合される。ｙが２である特定の実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ部分はＦｃドメインの両方のＡｓｎ２９７残基に共役させることができる。ｙが１である実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ部分はＦｃドメインのいずれかのＡｓｎ２９７残基に共役させることができる。抗体が鎖伸長又は切断のいずれかによって修飾されている場合、オリゴ糖は未修飾抗体のＡｓｎ２９７に対応するアスパラギン残基に共役させることができる。
特定の実施形態では、複合糖質前駆体はＱ＝Ｌ２－Ａｑによって特徴付けられ、Ｘ、Ｙ、Ｚの各々はＯＨである。特定の実施形態では、複合糖質前駆体はＱ＝Ｈ、Ｚ＝Ｌ２－Ａｚによって特徴付けられ、ＸとＹは両方ともＯＨである。さらに別の実施形態では、複合糖質前駆体はＱ＝Ｌ２－Ａｑ、Ｚ＝Ｌ２－Ａｚによって特徴付けられ、ＸとＹは両方ともＯＨである。このような場合、ＡｑとＡｚは同じであっても異なっていてもよい。例えば、Ａｑはテトラジンを含むことができるが、Ａｚは１，３双極子、例えばアジドを含むことができ、その逆もまた同様である。他の例では、Ａｑはｔｒａｎｓ－シクロオクテンを含むことができるが、Ａｚはシクロオクチンを含むことができる。
複合糖質前駆体は、以下の式：
Figure 2023554215000075
 （式中、Ｒｆａ、ｙ、及びＣＢＡは上記の定義のとおりであり、シアロシド供与体は以下の式：
Figure 2023554215000076
 （式中、Ｑ、Ｚ、Ｙ、Ｘは上記の定義のとおりであり、Ｐ＊はヌクレオチド、例えばリン酸ウリジン、リン酸グアノシン、又はリン酸シチジンである）を持つ）
を持つ二糖受容体をグリコシル化することによって得られる。
特に明記されていない限り、用語「リン酸塩」は、例えば、一リン酸塩、二リン酸塩、三リン酸塩等の、いかなる数の連続したリン酸エステル結合を含む。好ましい実施形態では、シアロシド供与体は以下の式：
Figure 2023554215000077
 を有する。
二糖受容体とシアロシド供与体は、糖共役体前駆体を形成するのに十分な条件下で十分な時間、少なくとも１つのシアリルトランスフェラーゼによって接触することができる。シアリルトランスフェラーゼは、哺乳類、魚類、両生類、鳥類、無脊椎動物、又は細菌に由来する場合がある。一実施形態では、シアリルトランスフェラーゼはα－（２、３、）－シアリルトランスフェラーゼである。別の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼはα－（２、６、）－シアリルトランスフェラーゼである。さらに別の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼはα－（２、８、）－シアリルトランスフェラーゼである。好ましい実施形態では、シアリルトランスフェラーゼはα－（２、６、）－シアリルトランスフェラーゼであり、好ましくは、β－ガラクトシドα－（２、６、）－シアリルトランスフェラーゼ１（ＳＴ６Ｇａｌ１）である。好ましい実施形態では、シアリルトランスフェラーゼは哺乳類のシアリルトランスフェラーゼである。他の実施形態では、シアリルトランスフェラーゼラットβ－ガラクトシドα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ１（ＳＴ６Ｇａｌ１）；Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａα－（２、３、）－シアリルトランスフェラーゼ；又はＣＭＰ－Ｎ－アセチルノイラミン酸－β－ガラクトサミド－α－２，３－シアリルトランスフェラーゼ（ＳＴ３Ｇａｌ ＩＶ）。
シアロシドドナーとのグリコシル化は、例えばリン酸塩、緩衝食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水）、クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ、トリス、グリシン等の適当な緩衝液中で行うことができる。当該技術分野では適当な緩衝液が知られており、緩衝液はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）又はトリス緩衝液であることが望ましい。グリコシル化は、４℃～約５０℃の範囲の温度で行うのが好ましく、１０℃～約４５℃の範囲の温度がより好ましく、２０℃～約４０℃の範囲の温度がより好ましく、３０℃～約３７℃の範囲の温度が最も好ましい。グリコシル化はｐＨ約５～約９、好ましくは約５．５～約８．５、より好ましくは約６～約８の範囲で行うことができる。最も好ましくは、グリコシル化はｐＨ約７～約８の範囲で行うことができる。
ある実施形態では、二糖受容体はβ－Ｎ－グリコシド結合を介してＣＢＡに接続することができる：
Figure 2023554215000078
 特定の実施形態では、細胞結合剤は抗体であり、二糖受容体はβ－Ｎ－グリコシド結合を介してアスパラギン側鎖を介して抗体に結合される：
Figure 2023554215000079
 場合によっては、ＧｌｃＮＡｃ部分は、Ｋａｂａｔで示されているＥＵインデックスに従って、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７）残基で抗体に結合される。ｙが２である特定の実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ部分はＦｃドメインの両方のＡｓｎ２９７残基に結合することができる。ｙが１である実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ部分はＦｃドメインのＡｓｎ２９７残基の１つに共役させることができる。抗体が鎖伸長又は切断のいずれかによって修飾されている場合、オリゴ糖は未修飾抗体のＡｓｎ２９７に対応するアスパラギン残基に共役させることができる。
二糖受容体は、以下の式：
Figure 2023554215000080
 （式中、Ｒｆａ、ｙ、及びＣＢＡは上記の定義により、切断されたＮ－グリカン受容体をガラクトース供与体でグリコシル化する段階である）
を持つ切断されたＮ－グリカン受容体を与えるために、抗体のリモデリングの段階を含むプロセスによって調製することができる。
ある実施形態では、切断されたＮ－グリカン受容体はβ－Ｎ－グリコシド結合を介してＣＢＡに結合することができる：
Figure 2023554215000081
 特定の実施形態では、細胞結合剤は抗体であり、ＧｌｃＮＡｃ残基（Ｃ－６フコースの有無にかかわらず）はβ－Ｎ－グリコシド結合を介してアスパラギン側鎖を介して抗体に結合される：
Figure 2023554215000082
 ある好ましい実施形態では、Ｒｆａがフコース、好ましくはＬ－フコース、さらに好ましくはα－Ｌ－フコースである場合に、ＧｌｃＮＡｃ受容体が特徴づけられる。
ある実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ残基は、Ｋａｂａｔで示されているＥＵインデックスに従って、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７）残基で抗体に結合される。ｙが２である特定の実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ残基はＦｃドメインの両方のＡｓｎ２９７残基に共役させることができる。ｙが１である実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ残基はＦｃドメインのいずれかのＡｓｎ２９７残基に共役させることができる。抗体が鎖伸長又は切断のいずれかによって修飾されている場合、オリゴ糖は未修飾抗体のＡｓｎ２９７に対応するアスパラギン残基に共役させることができる。
切断されたＮ－グリカンアクセプターは、本明細書で開示されているようにいかなる適当な抗体を改変することによって得ることができる。ある実施形態では、改変はエンドグリコシダーゼ、例えばＥＣ３．２．１．９６に分類されるエンドグリコシダーゼを用いて行われる。ある実施形態では、エンドグリコシダーゼとしては、エンド－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼＤ（エンドグリコシダーゼＤ、エンド－Ｄ又はエンド－Ｄ）、エンド－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼＨ（エンドグリコシダーゼＨ、エンド－Ｈ、又はエンド－Ｈ）、エンドグリコシダーゼＳ（ＥｎｄｏＳ、Ｅｎｄｏ－Ｓ、又はｅｎｄ－Ｓ）、エンド－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼＭ（エンドグリコシダーゼＭ、エンド－Ｍ、又はエンド－Ｍ）、エンド－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼＬＬ（エンドグリコシダーゼＬＬ、ＥｎｄｏＬＬ、Ｅｎｄｏ－ＬＬ又はｅｎｄｏ－ＬＬ）、エンド－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼＦ１（エンドグリコシダーゼＦ１、エンド－Ｆ１、又はエンド－Ｆ１）、エンド－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼＦ２（エンドグリコシダーゼＦ２、エンド－Ｆ２、又はエンド－Ｆ２）、及びエンド－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼＦ３（エンドグリコシダーゼＦ３、エンド－Ｆ３、又はエンド－Ｆ３）があげられる。
ある実施形態では、２種類以上のエンドグリコシダーゼの組み合わせをリモデリング段階で使用することができる。例えば、いくつかのエンドグリコシダーゼは、ＥＣ３．２．１．９６に分類される異なる基質特異性を持つエンドグリコシダーゼの組み合わせであることができる。典型的な組み合わせとしては、エンドグリコシダーゼＤとエンドグリコシダーゼＳ；エンドグリコシダーゼＳとエンドグリコシダーゼＬＬ；エンドグリコシダーゼＤとエンドグリコシダーゼＬＬ；エンドグリコシダーゼＤとエンドグリコシダーゼＨ；エンドグリコシダーゼＳとエンドグリコシダーゼＨ；エンドグリコシダーゼＦ１とエンドグリコシダーゼＦ２；エンドグリコシダーゼＦ１とエンドグリコシダーゼＦ３；エンドグリコシダーゼＦ２とエンドグリコシダーゼＦ３；エンドグリコシダーゼＤとエンドグリコシダーゼＳとエンドグリコシダーゼＬＬ；エンドグリコシダーゼＤとエンドグリコシダーゼＳとエンドグリコシダーゼＨ、エンドグリコシダーゼＤとエンドグリコシダーゼＳとエンドグリコシダーゼＦ１があげられる。
リモデリングは、リン酸塩、緩衝食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水）、クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ、トリス、グリシン等の適当な緩衝液中で行うことができる。当業界では適当な緩衝液が公知であり、緩衝液はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又はトリス緩衝液であることが望ましい。リモデリングは、４℃～約５０℃の範囲の温度で行うのが好ましく、１０℃～約４５℃の範囲の温度がより好ましく、２０℃～約４０℃の範囲の温度がさらに好ましく、３０℃～約３７℃の範囲の温度が最も好ましい。リモデリングは、ｐＨが約５～約９、好ましくは約５．５～約８．５、より好ましくは約６～約８の範囲で行うことができる。最も好ましくは、ｐＨが約７～約８の範囲で行う。
ある実施形態では、ＧｌｃＮＡｃ残基（Ｃ－６フコースの有無にかかわらず）がＡｓｎ２９７（一方又は両方の重鎖のいずれか）に結合し、他のグリカン構造が抗体上に存在しないように抗体を再構築することができる。
切断されたＮ－グリカンアクセプターは、従来の技術に従って精製することも、ガラクトシル化に直接使用することもできる。上記のような二糖アクセプターは、切断されたＮ－グリカンアクセプター、ガラクトシルドナー、ガラクトシルトランスフェラーゼを組み合わせて調製することもできる。適当なガラクトシルドナーには、ＵＤＰ－ガラクトースを含むガラクトシルヌクレオチドが含まれる。
本明細書で開示されている複合糖質は、その複合糖質と薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物で、それを必要とする患者に提供することができる。薬学的に許容されるキャリアは、いかなる適当な薬学的に許容されるキャリアであり得る。それは、１つ以上の互換性のある固体又は液体の充填剤、希釈剤、他の賦形剤、又はヒト患者又は動物被検体への投与に適したカプセル化物質であり得る（例えば、生理学的に許容されるキャリア又は薬理学的に許容されるキャリア）。
この組成物は、薬学的に許容される添加剤を加えることができる。例えば、塩に含まれる酢酸、塩に含まれるクエン酸、塩に含まれるホウ酸、塩に含まれるリン酸等の緩衝剤、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベン、チメロサール等の防腐剤があげられる。
非経口投与に適した組成物は、本発明の組成物の滅菌水性製剤を簡便に含み、これはレシピエントの血液と等張であることが望ましい。この水性製剤は、適当な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用する既知の方法に従って製剤化することができる。また、無菌の注射用製剤は、例えば１，３－ブタンジオール中の溶液として、毒性のない非経口的に許容される希釈剤又は溶媒中の無菌の注射用溶液又は懸濁液であってよい。使用できる許容される溶媒及び溶媒には、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、溶媒又は懸濁媒体として、滅菌された固定油が通常用いられる。この目的のために、合成モノ－又はジ－グリセリドのよう等のような薄味の固定油も使用することができる。さらに、オレイン酸のような脂肪酸を注射剤の調製に使用することができる。経口、皮下、静脈内、筋肉内等の投与に適したキャリア製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに記載されている。本発明の医薬組成物及びその様々な投与経路の調製は、当該技術分野でよく知られた方法に従って実施することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，２０ｔｈ ｅｄ．，２０００；及びＳｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８があげられる。本発明の文脈において有用な送達システムには、時間的解放、遅延放出、及び徐放性送達システムが含まれ、本発明の組成物の送達は、治療されるべき部位の感作に先立って、かつ十分な時間をかけて行われる。本発明の組成物は、他の治療薬又は治療法と併用できる。このようなシステムは、本発明の組成物の反復投与を回避することができ、それによって被験者及び医師の利便性を高めることができ、本発明の特定の組成物に特に適している場合がある。
多くの種類の放出送達システムが利用可能であり、当業者に公知である。適当な放出送達システムには、ポリ（ラクチド－グリコリド）、コポリオキサレート、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸、及びポリ無水物等のポリマー塩基システムが含まれる。薬物を含む上記ポリマーのマイクロカプセルは、例えば米国特許第５，０７５，１０９号に記載されている。送達システムには、コレステロール、コレステロールエステル、脂肪酸等のステロールを含む脂質又はモノ－ジ－やトリグリセリド等の中性脂肪である非ポリマー系；ヒドロゲル放出システム；シラスティックシステム；ペプチドベースのシステム；ワックスコーティング；従来のバインダーと賦形剤を使用した圧縮錠剤；部分融合インプラント；等があげられる。具体的な例としては、（ａ）米国特許第４，４５２，７７５号、第４，６６７，０１４号、第４７４８０３４号、及び５，２３９，６６０に記載されているようなマトリックス内の形で活性組成が含まれている侵食系及び（ｂ）米国特許第３，８３２，２５３号、第３，８５４，４８０号に記載されているようなポリマーから制御された速度で活性成分が浸透する拡散系が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、ポンプベースのハードウェア送達システムを使用することができ、その一部は埋め込み用に適応されている。
一般に、本明細書で開示されている複合糖質は、適当なパッケージ、例えば、治療法又は検出法に適したバイアル、パウチ、アンプル、及び／又はいかなる容器で提供される。キット成分は、濃縮物（凍結乾燥された組成物を含む）として提供することができ、使用前にさらに希釈することも、使用濃度で提供することもできる。
［実施例］
以下の例は、発明の例示のみを目的としたものであり、いかなる方法においても本発明の範囲を制限することを意図したものではない。
試薬・材料
特記のないものはすべてシグマ社から入手した。以前ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ａｎｉｅ．２０１３０７０９５の報告（５－アセトアミド－９－アジド－３，５，９－トリデオキシ－β－Ｄ－グリセロ－Ｄ－ガラクト－２－ノヌロピラノシロン酸一リン酸）に従って、シチジン－５’－（ＣＭＰ－Ｎｅｕ５Ａｃ９Ｎ３）と組換えラットα－（２、６、）－シアリルトランスフェラーゼ（ＧＦＰ－ＳＴ６ＧａｌＩ）を調製した。
エンド－ＢＣＮ－ＰＥＧ４－ａｃｉｄは、国際公報第２０１６／０５３１０７号の１４２ページに記載されている手順に従って調製することができ、多くの商業サプライヤーからも入手可能である。
Figure 2023554215000083
 エンド－ＢＣＮ－ＰＥＧ４
クリック可能なペイロードの合成
単一の第一級アミン基（本明細書ではＷＨ－ＮＨ２と命名）を含む細胞毒性弾頭を、以下のようにしてＥｎｄ－ＢＣＮ－ＰＥＧ４に結合させた。
ＷＨ－ＮＨ２（６００ｍｇ、１．０ｅｑ）、Ｅｎｄｏ－ＢＣＮ－ＰＧＥ４－ａｃｉｄ（１．２ｅｑ）及びＥＤＣｌ－ＨＣｌ（１．２ｅｑ）をＤＣＭ（１５ｖｏｌ，２％ＭｅＯＨ）に取り込み、０～５℃で撹拌した。反応が完了すると、精製水（１０ｖｏｌ）で反応を急冷した。水層を分離し、有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して粗ＷＨ－ＮＨ－Ｅｎｄｏ－ＢＣＮ－ＰＥＧ４（６５０ｍｇ、９３．２％、７３．５７％ ＨＰＬＣ純度）を得た。
粗ＷＨ－ＮＨ－Ｅｎｄｏ－ＢＣＮ－ＰＥＧ４（４００ｍｇ）をＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ）で精製し、画分を含む生成物を組み合わせて凍結乾燥し、ＷＨ－ＮＨ－Ｅｎｄｏ－ＢＣＮ－ＰＥＧ４を白色固体（１３０ｍｇ、３３％、９４．６１％ ＨＰＬＣ純度）として得た。
Figure 2023554215000084
 ＷＨ－ＮＨ－Ｅｎｄｏ－ＢＣＮ－ＰＥＧ４
ＣＭＰ－Ｎｅｕ５Ｎ ３ とＣＭＰ－Ｎｅｕ９Ｎ ３ の合成
ピルビン酸ナトリウム（１０．５ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）とＣＴＰ（１０ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を含むトリス－ＨＣｌ緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ ８．９、２０ｍＭＭｇＣｌ２、１．９ｍＬ）中のＮ－アジドアセチル－Ｄ－マンノサミン（５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）の混合物にシアル酸アルドラーゼ（０．２Ｕ／μＬ、５μＬ）とＣＭＰ－シアル酸合成酵素（０．２Ｕ／μＬ、５μＬ）を加えた。チューブを３７℃でインキュベートし、反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＨ：ａｑ。ＮＨ４ＨＣＯ３（１Ｍ）７：３、ｖ：ｖ）で監視し、５時間後に反応の完了を示した。ＥｔＯＨ（３ｍＬ）を加え、遠心分離で沈殿を除去し、上清を減圧濃縮した。残留物を蒸留水（５００μＬ）に再溶解した後、凍結乾燥して粗物質を得、バイオゲル細粒Ｐ－２カラム（５０＊１ｃｍ、暗所４℃、０．１Ｍ ＮＨ４ＨＣＯ３で溶出。）に塗布した。生成物をＴＬＣで検出し、適当な画分を組み合わせて凍結乾燥し、ＣＭＰ－Ｎｅｕ５Ｎ３を非晶質白色固体（１０．１ｍｇ、８１％）として得た。
Figure 2023554215000085
 報告された手順に従ってＣＭＰ－Ｎｅｕ９Ｎ３を調製した。ＣＴＰ（１２６ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を、ＭｇＣｌ２（２０ｍＭ）を含むトリス－ＨＣｌ緩衝液（０．１Ｍ、９ｍＬ、ｐＨ ８．９）中の５－アセトアミド－９－アジド－３，５，９－トリデオキシ－Ｄ－グリセロ－Ｄ－ガラクトー－２－ノヌロソン酸（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓからの組換えＣＭＰ－シアル酸合成酵素（４．０Ｕ）とＳ．ｃｅｒｅｒｅｒｉｓｉａｅからの無機ピロホスファターゼ（２．０Ｕ）を加え、反応混合物を振とうしながら３７℃でインキュベートした。反応の進行をＴＬＣ（イソプロパノール：２０ｍＭ ＮＨ４ＯＨ，４：１，ｖ：ｖ）で監視し、３時間後に反応の完了を示した。エタノール（８０ｍＬ）を加え、混合物を遠心分離の前に２時間氷上に保持した。上清をデカンティングし、ペレット（ほとんどが無機塩）をＥｔＯＨ（３０ｍＬ）に再懸濁し、氷上で１時間冷却し、遠心分離した。合わせたエタノール抽出物を真空中で濃縮し、粗物質（１６８ｍｇ）を得た。Ｈ２Ｏ（０．２ｍＬ）に溶解した物質にエタノール（１．８ｍＬ）をゆっくりと加えると、すぐに沈殿が生じた。混合物を２時間氷の上に置いた。次に、遠心分離後に上清を除去し、白色ペレットを４℃で０．１Ｍ ＮＨ４ＨＣＯ３で溶出した超微細バイオゲルＰ－２のカラムで乾燥精製した。適当な画分をＵＶ及びＴＬＣによって検出し（上記と同様）、収集し、真空中で濃縮し（浴温度＜２５℃）、凍結乾燥してＣＭＰ－Ｎｅｕ９Ｎ３（６０ｍｇ、６２％）を得た。
Figure 2023554215000086
グリカンリモデリング
抗体のトリプシン消化による糖ペプチドの分析
ＩｇＧ抗体のアリコートをＳｐｅｅｄ Ｖａｃ（Ｓａｖａｎｔ ＳＣ１１０）で乾燥し、炭酸水素アンモニウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ ８．４）に再溶解し、糖タンパク質を変性させるために１００℃で５分間加熱した。混合物を室温に冷却した後、トリプシン（トリプシン／ＩｇＧ＝１／３０、ｗ／ｗ）を加え、溶液を３７℃で２２時間インキュベートし、その後、トリプシンを不活性化するために１００℃で５分間加熱した。この溶液をＣ１８逆相カートリッジに通し、５％酢酸水溶液で洗浄し、２－プロパノール／５％酢酸（２０－１００％）の勾配で溶出させてグリコペプチドを得て、ＸＢｒｉｄｇｅ－ＢＥＨアミド－ＨＩＬＩＣカラム（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ，ＵＳＡ；２．１×１５０ｍｍ、粒子径３．５μｍ）を備えたＬＣＭＳ－ＩＴ－ＴＯＦ質量分析計（島津製作所）にかけた。これらの分離は、水中の１００ｍＭのギ酸アンモニウム（ギ酸でｐＨ ３．４～３．６に調整）からなる移動相Ａと、純粋なＡＣＮとしての移動相Ｂを用いて、２０℃、０．１６ｍｌ／分の流量で行われた。
ネイティブの無傷ＩｇＧ分析
事前の分析では、試料はＺＥＢＡスピンカラムを使用して脱塩され、２ｍｇ／ｍｌに希釈され、注射０．５ ｕＬ（＝１ｕｇ）。試料は、Ａｃｑｕｉｔｙ １２９０オングストロームＣ１８ ２．１ｘ５０ｍｍに搭載されたＡｇｉｌｅｎｔ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＬＣを用いて、７０℃で１０分間、２０－４０％Ｂ（＝７０％ ＩＰＡ／２０％ ＡＣＮ／１０％ Ｈ２Ｏ／０、１％ ＦＡ）対Ａ（０、Ｈ２Ｏで１％ ＦＡ）の勾配で実行／注入された。検出器はＡｇｉｌｅｎｔ ６５６０ ＩｏｎＭｏｂｉｌｉｔｙ Ｑ－ＴＯＦ ＬＣ／ＭＳであり、この目的のためにＱ－ＴＯＦ機能のみが用いられた。実行後の分析とデコンボリューションは、ＡｇｉｌｅｎｔのＢｉｏｃｏｎｆｉｒｍソフトウェアを使用して実行された。
Ａｐｐ２を使用したＩｇＧの修正の一般的な手順（図２）
Ｅｎｄｏ Ｓ．治療
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓからクローン化したＥｎｄｏ Ｓを用いてＩｇＧグリカンのトリミングを行い、大腸菌のキチン結合ドメインとの融合として過剰発現させた。（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ）である。３０ｍＭヒスチジン、２００ｍＭソルビトール、０．０２％トゥイーン－２０中のＩｇＧ抗体（１０ｍｇ／ｍＬ）に、１０ｍＭトリス、２５ｍＭ ＮａＣｌ、２．５ｍＭ ＥＤＴＡ、２．５ｍＭＣａＣｌ２、２５ｍＭ酢酸ナトリウム中のＥｎｄｏ Ｓ（０．１３ｍＬ、１００ ｋＵ／ｍＬ）を加えた。得られた溶液を３７℃で約４８時間インキュベートした後、プロテインＡセファロースカラム（ＧＥヘルスケア）精製、緩衝液交換を行い、２０ｍＭＭｎＣｌ２を含む５０ｍＭＭＯＰＳ １．２ｍＬに濃縮した。
ＩｇＧのガラクトシル化
Ｅｎｄｏ Ｓ処理の結果得られた物質にβ－１， ４－ガラクトシルトランスフェラーゼ（２００μｇ／ｍＬ）を５０ｍＭＭＯＰＳ、２０ｍＭＭｎＣｌ２、１０ｍＭＵＤＰ－ガラクトース、ｐＨ ７．２、８０μｇ／ｍＬ ＢＳＡ、８５Ｕ／ｍＬ子牛腸アルカリホスファターゼで添加し、３７℃で７０時間インキュベートすることによって、切断型Ｎ－グリカンを含むＩｇＧのガラクトシル化が達成された。完全なガラクトシル化を確実にするために、ＵＤＰ－ガラクトースとガラクトシルトランスフェラーゼの別のアリコートを反応物に加え、さらに３７℃で２４時間インキュベートした。ガラクトシル化されたＩｇＧはプロテインＡセファロースカラムを使用して精製され、溶液はアミコン１０ ｋＤａカットオフスピン濃縮器（ミリポア）を使用してｐＨ ７．６の５０ｍＭカコジル酸塩で交換された。
ＩｇＧのシアリル化
ガラクトシル化ＩｇＧのシアリル化は、ｐＨ ７．６で５０ｍＭのカコジル酸、１４ｍｇ／ｍＬのＩｇＧ、８ｍＭのＣＭＰ－Ｎｅｕ５Ｎ３、９０μｇ／ｍｌのＢＳＡ、９０Ｕ／ｍＬの子牛腸アルカリホスファターゼ、０．４ｍｇ／ｍＬのＧＦＰ－ＳＴ６ＧａｌＩで行い、３７℃で４日間インキュベートした後、プロテインＡセファロースカラムで精製し、５０ｍＭのカコジル酸に緩衝液を交換した。シアリル化の程度は、前に説明したように、島津ＬＣＭＳ－ＩＴ－ＴＯＦ質量分析計を使用してＬＣ－ＭＳによって監視された。４８時間ごとのインキュベーションの後、試料をアミコン１０ｋＤａカットオフスピン濃縮器を使用してｐＨ ７．６の５０ｍＭカコジル酸塩とバッファー交換してＣＭＰ、ＳＴ６ＧａｌＩの阻害剤を除去し、ＣＭＰ－Ｎｅｕ５Ｎ３とα２－６シアリルトランスフェラーゼのさらなるのアリコートをこの洗浄された製剤に戻した。
鍵となる発見は、野生型ヒトβ４ＧａｌＴ１ガラクトシルトランスフェラーゼがガラクトース残基をα１～６フコシル化ＧｌｃＮＡｃ残基に転移するという予想外の能力であった。この反応は自然界では起こらない。さらに、生成した二糖類は、ＳＴ６Ｇａｌ１シアリルトランスフェラーゼによってアジド修飾シアル酸を加えることで、さらに修飾されることがわかった。
クリック可能なペイロードとの共役
実施例３のＨｅｒ２１０ｍｇ／ｍｌを５０ｍＭのカコジル酸緩衝液ｐＨ ７．６中で、７．５モル当量のＷＨ－ＮＨ－Ｅｎｄｏ－ＢＣＮ－ＰＥＧ４（実施例１）（ＤＭＡに１０ｍＭストック）とＤＭＡを添加して、最終的な共溶媒レベルである２０％ ｖ／ｖに抱合させ、２０℃の水浴中で一晩インキュベートした後、ＰＬＲＰによって精製した。ＰＬＲＰによる１．８のＤＡＲを達成した。
得られた複合糖質を本明細書では「Ｈｅｒ－Ａｐｐ２」という。
二触角抗体薬物共役体の調製
ハーセプチン抗体上のＮ結合オリゴ糖は、非特許文献１１に記載されている方法に従ってリモデリングされた。図１を参照。５０ｍＭのカコジル酸緩衝液ｐＨ ７．６中で９．２ｍｇ／ｍｌの改変Ｈｅｒ２（例３）を、２０モル当量のＷＨ－ＮＨ－Ｅｎｄｏ－ＢＣＮ－ＰＥＧ４（実施例１）（ＤＭＡの１０ｍＭストック、図１に示す構造）とＤＭＡを添加することによって、２０％ ｖ／ｖの最終的なＣｏ溶媒レベルに抱合し、２０℃の水浴中で６６時間、抱合反応をインキュベートした。１．４のＰＬＲＰによるＤＡＲを達成した。
得られた複合糖質を本明細書では「Ｈｅｒ－Ａｐｐ１」という。
組換えシアリルトランスフェラーゼＳＴ６Ｇａｌ１の抗体のＦｃ領域の二触角Ｎ－グリカンのα（１、３、）－及びα（１、６、）－アームに対する活性は、ＣＭＰ－シアル酸と抗体の比率を制御することによって差をつけることができる。これにより、ＡＤＣはＤＡＲ２又はＤＡＲ４を持つことができる。しかし、必要とされる反応化学量論の慎重な制御は、ロット間の製品再現性に影響を与える。
複合糖質の性質
物理的性質
Ｈｅｒ－Ａｐｐ１とＨｅｒ－Ａｐｐ２を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）で分析した。これは、カラムにＭａｂＰａｃ ＨＩＣ－Ｂｕｔｙｌ、５μｍ、４．６×１００ｍｍのカラム（サーモ＃８８２５５８ロット０１４２５１３８製造番号００１３０３）を使用し、ＭａｂＰａｃ ＨＩＣ－Ｂｕｔｙｌ、５μｍ、４．６×１０ｍｍのガードカートリッジを使用して行われた：（サーモ＃８８２５５９ロット１４２５０１１）。移動相Ａは１．５Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４、２５ｍＭ ＮａＰＯ４（ｐＨ ７．４）、移動相Ｂは８０％ ２５ｍＭ ＮａＰＯ４（ｐＨ ７．４）、２０％ＣＨ３ＣＮである。アッセイは毎分０．８ｍｌ、カラム温度は２５℃で行った。分析には１ｍｇ／ｍｌの１０μｌの試料負荷を用いた。
ＨＩＣは２つのＡＤＣ間で明確な違いを示し、Ｈｅｒ－Ａｐｐ１は複数の疎水性種に分離したが、Ｈｅｒ－Ａｐｐ２は１つの親水性ピークとして溶出した（図４参照）。
Ｈｅｒ－Ａｐｐ２のＨｅｒ－Ａｐｐ１に対する親水性の増加は、Ｈｅｒ－Ａｐｐ２がＨｅｒ－Ａｐｐ１よりも糖残基がかなり少ないという事実を考えると、一見して驚くべきことである（図２と図３を比較）。糖残基は非常に親水性の部分であり、糖残基の数が多い共役体ほど親水性が高いことを示唆している。これが当てはまらないという事実は、ＡＤＣの抗体、オリゴ糖、薬物リンカー要素の間でより複雑な相互作用が起こっていることを示唆している。
インビトロでのＨｅｒ２への結合
Ｈｅｒ２はハーセプチン抗体の同族抗原である。Ｈｅｒ－Ａｐｐ１とＨｅｒ－Ａｐｐ２の結合はＥＬＩＳＡによって決定された。ＭａｘｉｓｏｒｐのＥＬＩＳＡプレートを室温で０．５μｇ／ｍＬの組換えヒトＨｅｒ２でコーティングした後、３％ ＢＳＡでブロックした。試料滴定は、定量用緩衝液（０．１％ ＢＳＡ／０．０５％ ｔｗｅｅｎ）中で６６．６から０．０１６ ｎＭの間の四分円希釈で調製した。その後、試料を抗原被覆プレート上で１時間インキュベートした。ＨＲＰに結合させたマウス抗ヒト抗体を検出に使用し（ＳａｎｑｕｉｎＭ １３２８）、１時間インキュベートした後、洗浄し、検出剤ＴＭＢを１０分間加え、ＨＣｌで反応を停止した。結合吸光度データは４５０ ｎｍのＳｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダーで取得した。
比較のために、Ｈｅｒ－Ｃ２２０ ［ＨＩＶ－１タンパク質に対する非抱合型モノクローナル抗体；本明細書でコントロールとして用いられる］とＢ１２についてもＨｅｒ２結合を評価した。
Figure 2023554215000087
 ２つのＡＤＣはＨｅｒ２に同様の親和性で結合した。
インビトロでの細胞毒性
Ｈｅｒ２＋ｖｅ Ｎ ８７細胞に対するＨｅｒ－Ａｐｐ１とＨｅｒ－Ａｐｐ２のインビトロ細胞毒性を測定した。細胞毒性を決定するために「解凍と移動」細胞毒性試験が用いられ、Ｎ８７細胞が極低温貯蔵から採取され、ＥＤＧＥプレート上に５ｘ１０４細胞／ｍＬ（５ｘ１０３細胞／ウェル）まで播種され、その後３７℃／５％ＣＯ２／絶対湿度で最低２時間インキュベートされた。試験試料と対照試料の１１ポイント、４回に１回の連続滴定が５００ ｎＭから０．４７６８ ｐＭまで２回に分けて準備され、最終的に陰性対照とされた。滴定された試料は細胞を含むＥＤＧＥプレートに加えられ、３７℃／５％ＣＯ２／絶対湿度で５日間インキュベートされた。Ｃｅｌｌｔｉｔｅｒ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ溶液を加え、プレートを３７℃／５％ＣＯ２／絶対湿度で最後にインキュベートした後、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダーを使用して４９０ｎｍで吸光度を測定した。
比較のために、「Ｈｅｒ２ｘＡＤＣ」（Ｃ２２０残基でテシリンに結合したＨｅｒ２－Ｃ２２０）とＢ１２－Ｃ２２０－ＳＧ３２４９（Ｃ２２０残基でテシリンに結合したＢ１２抗体）についても細胞毒性を評価した。
Figure 2023554215000088
 Ｈｅｒ－Ａｐｐ１とＨｅｒ－Ａｐｐ２は互いに類似した細胞毒性を持ち、ベンチマークのＨｅｒ２ｘＡＤＣに対しても同様の細胞毒性を持つことがわかった。非Ｈｅｒ２結合Ｂ １２コントロールＡＤＣでは、有意に少ない細胞殺傷が観察された。
インビボでの効能
乳がんＨｅｒ２＋ｖｅ ＢＴ ４７４異種移植モデルにおいて、Ｈｅｒ－Ａｐｐ１及びＨｅｒ－Ａｐｐ２共役体のインビボでの効能が測定された。比較のため、インビボでの効能は「Ｈｅｒ２ｘＡＤＣ」についても評価された。
雌の重症複合免疫不全マウス（ＦｏｘＣｈａｓｅ ＳＣＩＤ（登録商標）、ＣＢ １７／Ｉｃｒ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＩｃｒＩｃｏＣｒｌ、チャールズ川）は１０週齢であり、試験の１日目に体重（ＢＷ）の範囲は１６．１ｇから２１．８ｇであった。腫瘍を移植した日に、各テストマウスに１ｍｍ３のＢＴ ４７４フラグメントを右脇腹の皮下に移植し、平均サイズが目標範囲の１００ｍｍ３から１５０ｍｍ３に近づくにつれて腫瘍の増殖を監視した。腫瘍はノギスを使用して２次元で測定され、体積は以下の式を使用して計算された。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝ｗ２ｘｌ／２
本明細書で、ｗ＝幅、ｌ＝長さ、単位はｍｍ。腫瘍重量は、１ｍｇが腫瘍体積１ｍｍ３に相当すると仮定して推定することができる。
腫瘍の移植から３６日後（試験の第１日目）に、動物を１０匹のマウスからなる基に分け、各々の基の腫瘍体積を７５から１７２ｍｍ３、基平均腫瘍体積を１１９から１２１ｍｍ３とした。試験の第１日目に、薬物を尾静脈注射により単回注射（ｑｄ×１）で静脈内（静注）投与した。投与量は体重２０ｇ（１０ｍＬ／ｋｇ）あたり０．２ｍＬであり、各動物の体重に比例した。カリパスを用いて週に二回腫瘍を測定し、各動物の腫瘍がエンドポイントの体積１０００ｍｍ３に達した時点、又は試験終了時（５９日目）のいずれか早い時点で安楽死させた。結果を図４に示す。
Ｈｅｒ２ｘＡＤＣとＨｅｒ－Ａｐｐ１の最小有効（用）量（ＭＥＤ）は＞０．６ｍｇ／ｋｇであったが、Ｈｅｒ－Ａｐｐ２のＭＥＤは０．３ｍｇ／ｋｇと決定された。
忍容性：ラット毒性試験
Ｈｅｒ２ｘＡＤＣ、Ｈｅｒ－Ａｐｐ１、Ｈｅｒ－Ａｐｐ２を単回静脈内投与したラットの忍容性試験で評価した。
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（各基３匹）にＨｅｒ－Ａｐｐ１を４ｍｇ／ｋｇ、Ｈｅｒ－Ａｐｐ２を２ｍｇ／ｋｇ、Ｈｅｒ－Ａｐｐ１を４ｍｇ／ｋｇを１日目に投与し、投与後２１日目に剖検を行った。臨床病理学的検査（８日目と２１日目の血液）のための生体試料採取と薬物動態学的検査のための反復試料採取により、体重と摂餌量を頻繁にモニターした。剖検では、選択された臓器の重量を測定し、病理組織学的検査の可能性があるために保存した状態で肉眼的観察を行った。
Ｈｅｒ２ｘＡＤＣは１．５ｍｇ／ｋｇで評価され、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットへの単回静脈内注射は、摂餌量の減少に関連して、全体的な体重増加の減少と関連していた（全体的な体重増加は３９％低かった）。白血球数は８日目に減少し（－６１％）、２１日目までに回復の証拠が得られた。剖検では、胸腺、脾臓、精巣及び前立腺／精嚢重量の減少と副腎重量の増加が認められた。
Ｈｅｒ－Ａｐｐ１は４ｍｇ／ｋｇでは忍容性が低く、３匹中２匹で投与１１日後に早期安楽死となった。これらの動物では体重増加が著しく減少し、投与後に予想される体重増加はなかった。いくつかの血液学的パラメーターは８日目に著しく減少し（網状赤血球（－９３％）、白血球（－８６％）、血小板（－６６％））、回復の証拠はなかった。
Ｈｅｒ－Ａｐｐ２は２＆４ｍｇ／ｋｇで臨床的に良好な忍容性を示した。体重増加は用量依存的に減少し（全体的な体重増加は４ｍｇ／ｋｇで５５％低かった）、摂餌量の減少と一致した。いくつかの血液学的パラメーターは８日目に減少し（網状赤血球（－５２％）、白血球（－６８％）、血小板（－２２％））、２１日目までに回復の証拠が得られた。剖検では、用量依存的な胸腺、肝臓及び脾臓の重量の減少と肺重量の増加が認められ、２匹の動物は４ｍｇ／ｋｇで腎臓が青白くなった。
Ｈｅｒ２ｘＡＤＣの最大耐用量（ＭＴＤ）は１．５ｍｇ／ｋｇ（試験された最高用量）であった。
Ｈｅｒ－Ａｐｐ１の最大耐用量（ＭＴＤ）は４ｍｇ／ｋｇ未満であった。
Ｈｅｒ－Ａｐｐ２の最大耐用量（ＭＴＤ）は４ｍｇ／ｋｇであった。
治療指数
ＡＤＣの治療指数（ＴＩ）は、以下に示すように、まずＭＥＤとＭＴＤのヒト等価線量を求め、次にＭＴＤのＨＥＤをＭＥＤのＨＥＤで割ることによって算出することができる。
Figure 2023554215000089
 ＭＥＤ： マウスにおける最小有効量
ＭＴＤ： 最大耐用量
ＨＥＤ： ヒト等価線量
ＴＩ： 治療指数
Ｈｅｒ－Ａｐｐ２はＨｅｒ－ＰＬ１６０３－Ａｐｐ１の２倍以上の治療指数を示す。
Ｈｅｒ－Ａｐｐ２はＨｅｒ２ｘＡＤＣの約６倍の治療指数を示す。
ラットにおけるＨｅｒ－Ａｐｐ１及びＨｅｒ－Ａｐｐ２の薬物動態（ＰＫ）
Ｈｅｒ－Ａｐｐ１及びＨｅｒ－Ａｐｐ２を２ｍｇ／ｋｇ又は４ｍｇ／ｋｇ単回投与したラットの血漿試料及び試料を、投与１、３、６、４８、７２，１６８，３３６、４８０時間後に採取した。試料は、Ｚａｍｍａｒｃｈｉ Ｂｌｏｏｄ ｖｏｌ １３１（１０）１０９４－１１０５ ２０１８に記載されているように、総ヒトＩｇＧ及びＷＨ抱合ＩｇＧについて分析した。
図５ Ａは、４ｍｇの総ＩｇＧ及びＷＨ－ＩｇＧ（すなわち、弾頭結合ＩｇＧ）に対するＨｅｒ２－Ａｐｐ１の同等のＰＫプロファイルを示しており、共役体が非常に安定であることを示す。
図５ Ｂは、２ｍｇ及び４ｍｇの両方の総ＩｇＧ及びＷＨ－ＩｇＧに対するＨｅｒ２－Ａｐｐ２の同等のＰＫプロファイルを示しており、共役体が非常に安定であることを示す。
プロパティに関するその他のコメント
実施例１～４で説明した「アプローチ２」のさらなる利点は、２でＤＡＲを制御しやすいことである。無傷のグリカンを使用する以前のアプローチでは、２でＤＡＲを制御することはより困難であり、反応条件の慎重な制御が必要であった。
さらに、アプローチ２は、多くのＡＤＣ用途の利点であるＦｃ（ガンマ）受容体活性を廃止する。
さらなる共役体
Figure 2023554215000090
 実施例３のリモデリング抗体をｐＨ ７．６のカコジル酸緩衝液中でＤＭＦ中のメイタンシンＤＩＢＯ又はビンブラスチンＤＩＢＯを添加する。この混合物を室温で２時間シェーカーに入れ、カコジル酸緩衝液又はＰＢＳ緩衝液で７ ＫＤａのカットオフＺｅｂａスピンカラム（サーモサイエンティフィック）で洗浄することによって過剰なＤＩＢＯ試薬を除去する。
共役
上記のマイタンシンとビンブラスチンの薬物リンカーの各々を、上記の例４で説明した一般的な手順に従ってＨｅｒ２抗体に結合させた。いずれの場合も、修飾の完全な変換がネイティブのインタクトＩｇＧ分析（すなわち。ＤＡＲ＝２）によって観察された。
Figure 2023554215000091
 ４－（（（１Ｓ，２Ｒ）－１－ベンズアミド－３－（（（４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ１２ｂＳ）－６，１２ｂ－ジアセトキシ－１２－（ベンゾイルオキシ）－４，１１－ジヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－２ａ，３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ａ，１２ｂ－ドデカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３，４］ベンゾ［１，２－ｂ］オキソ－９－イル）オキシ）－３－オキソ－１－フェニルプロパン－２－イル）オキシ）－４－オキソブタン酸（８－２）
Figure 2023554215000092
 ピリジン１．２ｍＬ中の８－１（０．０５ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）と無水コハク酸（０．０７６ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）の反応混合物を室温で３時間撹拌した。３時間後、ピリジンを真空中で蒸発乾固させた。その後、残留物を２ｍｌの水で処理し、２０分間かき混ぜ、ろ過した。得られた沈殿物をアセトンに溶かし、水をゆっくり加え、生成物の微細な結晶を集めた。これにより０．０４８ｇ（８６％）の８－２が得られた。
Figure 2023554215000093
 ビシクロ［６．１．０］ノン４－イン－９－イルメチル（４－ニトロフェニル）カーボネート（８－３）
Figure 2023554215000094
 （（１Ｒ、８Ｓ、９ｒ）－ビシクロ［６．１．０］ノン４－イン－９－イルメタノール（１００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１０ｍＬ）にピリジン（１３４．７０μＬ、１．６６ｍｍｏｌ）とクロロギ酸４－ニトロフェニル（２００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で３時間かき混ぜた後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液（１０ｍＬ）で急冷し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ４を用いて乾燥し、真空中で濃縮した。残留物をさらにシリカゲル（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：５）上のカラムクロマトグラフィーによって精製し、目的の生成物８－３（１６２ｍｇ、７７％）を白色固体として得た。
Figure 2023554215000095
 （（１Ｒ、８Ｓ、９ｒ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イルメチル（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（８－４）
Figure 2023554215000096
 Ｅｔ３Ｎ（３３９μＬ、１．９４５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の８－３（１５０ｍｇ、０．３８９ｍｍｏｌ）とトリス（エチレングリコール）－１，８－ジアミン（５６９μＬ、３．８９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。反応混合物を３時間撹拌し、その後溶媒を減圧下で除去した。残留物をラトロビーズ（ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２、５から２５％、ｖ／ｖ）上のフラッシュクロマトグラフィーで精製し、化合物８－４を淡黄色の液体（１１６ｍｇ、９２％）として得た。
Figure 2023554215000097
 （４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ１２ｂＳ）－９－（（（１９Ｒ）－１９－（（Ｓ）－ベンズアミド（フェニル）メチル）－１－（ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）－３，１４，１７トリオキソ－２，７，１０，１８テトラオキサ－４，１３ジアザイコサン－２０－オイル）オキシ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－４，１１－ジヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（８－５）
Figure 2023554215000098
 ８－２（５ｍｇ、０．００５２ｍｍｏｌ）と８－４（２．１ｍｇ、０．００６２ｍｍｏｌ）の混合物を無水ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．７３μＬ、０．０１５７ｍｍｏｌ）と１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４、５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、３ｍｇ、０．００７８６ｍｍｏｌ）を順次加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。室温で２時間撹拌するとＴＬＣは完全な反応を示した。溶媒を減圧下で蒸発させ、移動相としてＥｔＯＡｃ：ヘキサン（５から１５％、ｖ／ｖ）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーによって粗生成物を精製し、純粋な８～５を白色固体（６．５ｍｇ、９８％）として得た。
Figure 2023554215000099
Figure 2023554215000100
 共役
上記のクリック可能な薬物リンカー（化合物８－５）を、上記の例４で説明した一般的な手順に従ってＨｅｒ２抗体に結合させた。 修飾の完全な変換は、ネイティブインタクトＩｇＧ分析（すなわち。ＤＡＲ＝２）によって観察された。
Figure 2023554215000101
 １－（４－メトキシフェニル）－２－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－４－オキソアゼチジン－３－イル酢酸エステル（９－１）
Figure 2023554215000102
 乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）中の４－メトキシアニリン（６．１４ｇ、５０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ ２下で３－メチルブト－２－エナール（４．６２ｇ、５５ｍｍｏｌ）と４オングストロームモレキュラーシーブ（５ｇ）を加えた。その後、混合物を室温で４時間撹拌した。完全に反応させた後、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、溶媒を真空下で除去した。残留物を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）にＴＥＡ（７．５８ｇ ７５ｍｍｏｌ）と共に－７８℃で溶解した。溶媒に１０分かけて酢酸二－クロロ－二－オキソエチル（８．１６ｇ、６０ｍｍｏｌ）を加える。その後、反応を室温までゆっくりと温めた。１２時間後、溶媒を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶媒で洗浄し、次に水相をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ＊３）で抽出した。合わせた有機相をかん水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、濃縮した後、ＥＡ：Ｈｅｘ（２０：１～４：１）を用いてシリカゲルカラムで精製し、収率６９％で淡黄色の固体を得た。
（２Ｓ，３Ｒ）－１－（４－メトキシフェニル）－２－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－４－オキソアゼチジン－３－イル酢酸（９－１（＋））
Figure 2023554215000103
 酢酸（９－１）－１－（４－メトキシフェニル）－２－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－４－オキソアゼチジン－３－イル（９－１）（１４．５０ｇ、５０ｍｍｏｌ）の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．４）１８０ｍｌ溶液に、２０ｍｌのアセトニトリルを加えた後、「ＰＳ Ａｍａｎｏ」リパーゼ１０ｇを加え、５０℃で激しく撹拌した。４８時間後、１Ｈ ＮＭＲにより、出発物質の変換率は５０％であることが示された。反応混合物をセライトを通してろ過し、ＥＡ（２５０ｍｌ＊３）で抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。粗生成物をＥＡ：Ｈｅｘ（２０：１－４：１）を用いてシリカゲルカラムで精製し、（２Ｓ，３Ｒ）－１－（４－メトキシフェニル）－２－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－４－オキソアゼチジン－３－イル酢酸塩（１（＋））を白色固体として収率４８％（９７％ ｅｅ）で得た。「ＰＳアマノ」（ハーフ５ｇ）と再び同条件で反応させ、４３％（９８．９％ ｅｅ）の２段階収率でさらに精製した。

（３Ｒ４Ｓ）－３－ヒドロキシ－１－（４－メトキシフェニル）－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）アゼチジン－２－オン（９－２）
Figure 2023554215000104
 水酸化カリウム（０．０９ｇ、１．６ｍｍｏｌ）の水１ｍｌとＴＨＦ３ｍｌの溶液に、０℃で（２Ｓ，３Ｒ）－１－（４－メトキシフェニル）－２－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－４－オキソアゼチジン－３－イル酢酸（９－１（＋））（０．２８９ｇ、１ｍｍｏｌ）を加えた。その後、混合物を室温まで温め、３時間かき混ぜた。終了後、溶媒をかん水で洗浄し、ＥＡ（５ｍｌ＊２）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮してＥＡ：Ｈｅｘ（４：１～１：１）を用いてシリカゲルカラムで精製すると、（３Ｒ４Ｓ）－３－ヒドロキシ－１－（４－メトキシフェニル）－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）アゼチジン－２－オン（９－２）が白色固体として得られた（収率９８％）。
（３Ｒ４Ｓ）－１－（４－メトキシフェニル）－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－２－オン（９－３）
Figure 2023554215000105
 （３Ｒ４Ｓ）－３－ヒドロキシ－１－（４－メトキシフェニル）－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）アゼチジン－２－オン（９－２）（２．４７ｇ、１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１０ｍｌ）にＥｔ３Ｎ（１．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）４－ジメチルアミノピリジン（１．２２ｇ、１ｍｍｏｌ）を加えた。次に１０分かけてＴＩＰＳＣｌ（２．１２ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で３時間撹拌した。終了後、ＥＡ（５０ｍｌ）を加え、溶剤を水（１０ｍｌ＊３）と塩水で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮してＥＡ：Ｈｅｘ（３０：１～８：１）を用いてシリカゲルカラムで精製すると、（３Ｒ４Ｓ）－１－（４－メトキシフェニル）－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－２－オン（９－３）が白色固体として得られた（収率９７％）。
（３Ｒ４Ｓ）－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－２－オン（９－４）
Figure 2023554215000106
 （３Ｒ４Ｓ）－１－（４－メトキシフェニル）－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－２－オン（９－３）（２．１９ｇ、６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍｌ）溶液に、０℃で３０分かけて硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）水（１０．１５ｇ、１８．５ｍｍｏｌ）を滴加した。その後さらにＨ２Ｏ（３５ｍｌ）を１時間かけて加えた。終了後、混合物を２００ｍｌのＨ２Ｏで希釈し、ＥＡ（２００ｍｌ）で抽出した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍｌ）、飽和ＮａＨＳＯ３（１００ｍｌ）で処理し、再び飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍｌ）で処理した。塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空下で濃縮した。次に粗生成物をＥＡ：Ｈｅｘ（１０：１～３：１）を用いてシリカゲルカラムで精製し、（３Ｒ４Ｓ）－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－２－オン（９－４）を無色の固体として収率６３％で得た。
（３Ｒ４Ｓ）－１－アクリロイル－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－２－オン（９－５）
Figure 2023554215000107
 乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）中の（３Ｒ４Ｓ）－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－２－オン（９－４）（２９．７ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃の窒素雰囲気下でＥｔ３Ｎ（０．０７ｍｌ、０．５ｍｍｏｌ）と４－ジメチルアミノピリジン（１２．２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加えた。次に、塩化アクリロイル（２７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。１６時間かき混ぜた。終了後、１０ｍｌのＥＡを加え、溶媒を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶媒、水、そして塩水で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空下で濃縮した。次にＥＡ：Ｈｅｘ（３０：１～６：１）を用いてシリカゲルカラムで粗生成物を精製し、（３Ｒ４Ｓ）－１－アクリロイル－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－２－オン（９－５）を無色の油として収率６２％で得た。
４－メチルベンゼンスルホン酸ペント－４－エン－１－イル（６）
Figure 2023554215000108
 ４－エン－１－オール（０．８６ｇ、１０ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（５ｍｌ）に、０℃で４－トルエンスルホニルクロリド（４．１９ｇ、２２ｍｍｏｌ）を加えた。６時間かき混ぜた。終了後、１０ｍｌのＥＡを加え、混合物を１Ｍ ＨＣｌと５％ ＮａＨＣＯ３で洗浄してピリジンを除去した。次に、有機相を塩水で処理し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空下で濃縮した。次に、ＥＡ：Ｈｅｘ（２０：１～４：１）を使用してシリカゲルカラムによって粗生成物を精製し、ペント－４－エン－１－イル４－メチルベンゼンスルホン酸塩（９－６）を無色の油として８８％の収率で得た。
５－アジドペント－１－エン（９－７）
Figure 2023554215000109
 ペント－４－エン－１－イル４－メチルベンゼンスルホン酸塩（９－６）（２．４０ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液に、室温でアジ化ナトリウム（１．０５ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加えた。２４時間かき混ぜた。終了後、Ｈ２Ｏ（３０ｍｌ）で溶液を急冷し、次にエーテル（１０ｍｌ＊３）で抽出した。合わせた有機相を塩水で処理し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ゆっくり濃縮してエーテルを除去した。その後、以下の段階で粗生成物を直接使用した。
ペント－４－エン－１－アミン（９－８）
Figure 2023554215000110
 ５－アジドペンテン－１－エン（９－７）（１．１１ｇ、１０ｍｍｏｌ）のエーテル（１０ｍｌ）溶液に、０℃でＰＰｈ３（２．６２ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。１時間かき混ぜる。次にＨ２Ｏ（２ｍｌ）を加え、溶液を室温まで温め、さらに１２時間かき混ぜた。終了後、氷水（１０ｍｌ）で溶液を急冷し、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ＊２）で抽出した。合わせた有機相を塩水で処理し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ゆっくり濃縮してＣＨ２Ｃｌ２を除去した。その後、以下の工程で粗生成物を直接使用した。
ｔｅｒｔ－ブチルペント－４－エン－１－イルカルバミン酸塩（９－９）
Figure 2023554215000111
 ペント－４－エン－１－アミン（９－８）（０．８５ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）溶液に、室温でＥｔ３Ｎ（２．５ｇ、２５ｍｍｏｌ）とＢｏｃ－無水物（３．２７ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加えた。６時間かき混ぜた。終了後、溶媒を飽和ＮＨ４Ｃｌ、水、そして塩水で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空下で濃縮した。次にＥＡ：Ｈｅｘ（１６：１～４：１）を用いてシリカゲルカラムで粗生成物を精製し、ｔｅｒｔ－ブチルペント－４－エン－１－イルカルバミン酸塩（９－９）を無色油として全３段階で５１％の収率で得た。
ｔｅｒｔ－ブチル（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（ペント－４－エン－１－イル）カルバミン酸塩（９－１０）
Figure 2023554215000112
 ｔｅｒｔ－ブチルペント－４－エン－１－イルカルバミン酸塩（９－９）（１．８５ｇ、１０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１５ｍｌ）に４－ジメチルアミノピリジン（０．２４ｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた。次にＢｏｃ－ａｎｈｙｄｒｉｄｅ（２．４ｇ、１１ｍｍｏｌ）を５０℃で加えた。２４時間かき混ぜた。さらにＢｏｃ－無水物（１．２ｇ、５．５ｍｍｏｌ）を加え、さらに２４時間反応させた。終了後、溶媒を真空下で除去し、ＥＡ：Ｈｅｘ（２０：１～５：１）を用いてシリカゲルカラムで直接精製すると、ｔｅｒｔ－ブチル（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（ペント－４－エン－１－イル）カルバメート（９－１０）が無色の油として８２％の収率で得られた。
ｔｅｒｔ－ブチル（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（（Ｅ）－６－（（２Ｓ，３Ｒ）－２－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－４－オキソ－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－１－イル）－６－オキソヘキサ－４－エン－１－イル）カルバメート（９－１１）
Figure 2023554215000113
 （３Ｒ４Ｓ）－１－アクリロイル－４－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－２－オン（９－５）（２５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３ｍｌ）溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（ペント－４－エン－１－イル）カルバメート（９－１０）（６０．８９ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）とグラブス触媒Ｍ７２０（２ｍｇ、４％＊０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。その後、溶媒を５０℃に温めてＣＨ２Ｃｌ２を還流させた。４８時間かき混ぜた。終了後、溶媒を真空下で除去し、ＥＡ：Ｈｅｘ（１５：１～３：１）を用いてシリカゲルカラムで直接精製し、ｔｅｒｔ－ブチル（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（（Ｅ）－６－（（２Ｓ，３Ｒ）－２－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－４－オキソ－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－１－イル）－６－オキソヘキサ－４－エン－１－イル）カルバメート（９－１１）を無色の油として９１％の収率で得た。
（２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ１２ｂＳ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－４，９，１１－トリヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１２）
Figure 2023554215000114
 １０－デアセチルバッカチン（５４．５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍｌ）溶液に塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（１．８６ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を加えた後、０℃で無水酢酸（１ｍｌ、１ｍｍｏｌ）を加えた。反応はゆっくりと室温に戻った。４時間かき混ぜた。終了後、氷水（１０ｍｌ）で急冷し、酢酸エチル（２ｍｌ＊２）で抽出した。合わせた有機相を塩水で処理し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空下で濃縮した。次にＥＡ：Ｈｅｘ（３０：１～６：１）を用いてシリカゲルカラムで粗生成物を精製し、（２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ１２ｂＳ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－４，９，１－１トリヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３テトラメチル－５－オキソ－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１２）を白色固体として９１％の収率で得た。
（２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９，１１－ジヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－４－（（（トリエチルシリル）オキシ）－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１３）
Figure 2023554215000115
 （２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ１２ｂＳ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－４，９，１１－トリヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１２）（０．２９３ｇ、０．５ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）溶液に、窒素雰囲気下で４－ジメチルアミノピリジン（０．１８４ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。次にクロロトリエチルシラン（０．１５１ｇ、１ｍｍｏｌ）を滴下した。室温で２時間撹拌した。終了後、水と１Ｍ ＨＣｌで処理する。次に、有機相を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空下で濃縮した。次に、ＥＡ：Ｈｅｘ（４：１～１：１）を用いてシリカゲルカラムで粗生成物を精製し、（２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９，１１－ジヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－４－（（（トリエチルシリル）オキシ）－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１３）を白色固体として７７％の収率で得た。
（２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２ａＲ，１２ｂＳ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９－（（（２Ｒ３Ｓ）－３－（（Ｅ）－６－（ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘクス－２－エナミド）－５－メチル－２－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）ヘクス－４－エノイル）オキシ）－１１－ヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－４－（（（トリエチルシリル）オキシ）－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１４）
Figure 2023554215000116
 （２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９，１１－ジヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－４－（（（トリエチルシリル）オキシ）－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１３）（５０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（（Ｅ）－６－（（２Ｓ，３Ｒ）－２－（２－メチルプロプ－１－エン－１－イル）－４－オキソ－３－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）アゼチジン－１－イル）－６－オキソヘキサ－４－エン－１－イル）カルバメート（９－１１）（４３３ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）の混合物に乾燥ＴＨＦ（１ｍｌ）を加えた。その後、溶媒を－７８℃に冷却した。１．０ ＴＨＦ（０．７ｍｌ、７ｍｍｏｌ）中のＭ ＬｉＨＭＤＳをシステムに滴下し、１時間撹拌した。終了後、溶媒を飽和ＮＨ４Ｃｌ（５ｍｌ）で直接急冷し、次に水、かん水で洗浄した。次にＥＡ：Ｈｅｘ（４：１～１：１）を用いてシリカゲルカラムで粗生成物を精製し、（２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２ａＲ，１２ｂＳ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９－（（（２Ｒ３Ｓ）－３－（（Ｅ）－６－（ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘクス－２－エナミド）－５－メチル－２－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）ヘクス－４－エノイル）オキシ）－１１－ヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－４－（（（トリエチルシリル）オキシ）－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１４）を白色固体として８９％の収率で得た。
（２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２ａＲ，１２ｂＳ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９－（（（２Ｒ３Ｓ）－３－（（Ｅ）－６－（ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘクス－２－エナミド）－２－ヒドロキシ－５－メチルヘクス－４－エノイル）オキシ）－４，１１－ジヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１５）
Figure 2023554215000117
 （２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２ａＲ，１２ｂＳ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９－（（（２Ｒ３Ｓ）－３－（（Ｅ）－６－（ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘクス－２－エナミド）－５－メチル－２－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）ヘクス－４－エノイル）オキシ）－１１－ヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－４－（（（トリエチルシリル）オキシ）－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１４）（５０ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）の溶液に１：１（ｖ／ｖ、ピリジン：アセトニトリル）の２ｍｌのＨＦ／ｐｙを加えた。０℃以下の（７：３の場合）。その後、反応物を室温まで温め、２４時間かき混ぜた。終了後、溶媒を飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍｌ）で直接急冷した後、酢酸エチル（１０ｍｌ＊２）で抽出した。合わせた有機相を飽和硫酸銅（５ｍｌ）と塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。次に粗生成物をＥＡ：Ｈｅｘ（４：１～１：１）を用いてシリカゲルカラムで精製し、（２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２ａＲ，１２ｂＳ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９－（（（２Ｒ３Ｓ）－３－（（Ｅ）－６－（ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘクス－２－エナミド）－２－ヒドロキシ－５－メチルヘクス－４－エノイル）オキシ）－４，１１－ジヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１５）を白色固体として９０％の収率で得た。
（２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９－（（（２Ｒ３Ｓ）－３－（（Ｅ）－６－（（（（（１Ｒ８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサ－２－エナミド）－２－ヒドロキシ－５－メチルヘクス－４－エノイル）オキシ）－４，１１－ジヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１６）
Figure 2023554215000118
 （２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２ａＲ，１２ｂＳ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９－（（（２Ｒ３Ｓ）－３－（（Ｅ）－６－（ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘクス－２－エナミド）－２－ヒドロキシ－５－メチルヘクス－４－エノイル）オキシ）－４，１１－ジヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１５）（５ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（０．２ｍｌ）溶液に、窒素雰囲気下で０．２ｍｌのＴＦＡを加えた。その後、溶媒を１５分間かき混ぜた。ＥＳＩはすべての化合物１５がジ脱保護Ｂｏｃ基であることを示した。次にＣＨ２Ｃｌ２とＴＦＡを真空下で除去した。残留物を０．５ｍｌのＤＭＦに溶解し、Ｅｔ３Ｎ（０．１ｍｌ）を加えてｐＨ＝８～９とした。（（１Ｒ８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート（３ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を加えた。２４時間かき混ぜた。終了後、酢酸エチル２ｍｌを加え、水（２ｍｌ＊３）、かん水で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空下で濃縮した。次にＥＡ：Ｈｅｘ（３：１～１：１）を用いてシリカゲルカラムで粗生成物を精製し、（２ａＲ４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ）－１２－（ベンゾイルオキシ）－９－（（（２Ｒ３Ｓ）－３－（（Ｅ）－６－（（（（（１Ｒ８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサ－２－エナミド）－２－ヒドロキシ－５－メチルヘクス－４－エノイル）オキシ）－４，１１－ジヒドロキシ－４ａ，８，１３，１３－テトラメチル－５－オキソ－３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２ａ－デカヒドロ－１Ｈ－７，１１－メタノシクロデカ［３、４、］ベンゾ［１、２－ｂ］オキセット－６，１２ｂ（２ａＨ）－ジイルジアセテート（９－１６）を白色固体として得た。
共役
上記のクリック可能な薬物リンカー（化合物９－１６）を、上記の例４で説明した一般的な手順に従ってＨｅｒ２抗体に結合させた。修飾の完全な変換は、ネイティブのインタクトＩｇＧ分析（すなわち。ＤＡＲ＝２）によって観察された。
添付の特許請求の範囲の組成及び方法は、本明細書に記載される特定の組成及び方法によって範囲が限定されるものではなく、これらは、特許請求の範囲のいくつかの側面の例示として意図されており、機能的に同等な組成及び方法は、特許請求の範囲に含まれることを意図している。ここに示され、記載されているものに加えて、組成及び方法の様々な修正は、添付の特許請求の範囲に含まれることを意図している。さらに、本明細書で開示されている特定の代表的な組成及び方法工程のみが具体的に記載されているが、組成及び方法工程の他の組み合わせも、特に記載されていなくても、添付の特許請求の範囲に含まれることを意図している。したがって、工程、要素、構成要素又は構成要素の組み合わせは、ここに明示的に記載されているか又は記載されていないが、工程、要素、構成要素及び構成要素の他の組み合わせが含まれる。本明細書で用いられる用語「含む」及びその変形は、「包含する」及びその変形と同義で用いられ、限定されないオープンな用語である。本明細書では、「含む」及び「包含する」という用語は、様々な実施形態を説明するために用いられてきたが、「含む」及び「包含する」の代わりに、「本質的にからなる」及び「からなる」という用語を使用して、本発明のより具体的な実施形態を提供することができ、また開示される。実施例において、又は別に記載されている場合を除き、明細書及び特許請求の範囲において用いられている成分の量、反応条件等を表すすべての数字は、少なくとも理解されるべきものであり、有効桁数及び通常の丸め方法に照らして解釈されるように、特許請求の範囲に相当するものの法理の適用を制限しようとするものではない。
本明細書の一部である配列表
Figure 2023554215000119
Figure 2023554215000120
Figure 2023554215000121
Figure 2023554215000122

Claims (36)

  1. 以下の式：
    ［ペイロード］ｘ－シアロシド－Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ］ｙ－ＣＢＡ
    （式中、
    ＣＢＡは細胞結合剤を表す；
    ＧｌｃＮＡｃはＮ－アセチルグルコサミンを表し、場合によっては、フコースで置換される；
    Ｇａｌはガラクトースを表す；
    シアロシドは修飾シアル酸を表す；
    ペイロードは各々、同じであっても異なっていてもよく、薬物又は診断マーカーを表す；
    ペイロードには、ピロロベンゾジアゼピンは含まれない；
    ｘは１～８の整数；及び
    ｙは１～８の整数か、１又は２である）
    を備える複合糖質。
  2. 以下の式：
    Figure 2023554215000123
     （式中、
    Ｒｆａは水素又はフコース部分である；
    ＱＱは水素、又は少なくとも１つの共役ペイロードである；
    ＺＺは水酸基、又は少なくとも１つの共役ペイロードである；
    ＹＹは水酸基、又は少なくとも１つの共役ペイロードである；
    ＸＸは水酸基、又は少なくとも１つの共役ペイロードである；及び
    本明細書で、ＱＱ、ＺＺ、ＹＹ、及びＸＸの少なくとも１つは、少なくとも１つの共役ペイロードである）
    で表される、請求項１に記載の複合糖質。
  3. Ｒｆａがフコース部分である、請求項１又は２に記載の複合糖質。
  4. Ｒｆａが以下の構造：
    Figure 2023554215000124
     を有するフコース部分である、請求項１～３のいずれか一項に記載の複合糖質。
  5. ＣＢＡはタンパク質である、請求項１～４のいずれか一項に記載の複合糖質。
  6. ＣＢＡは抗体である、請求項１～５のいずれか一項に記載の複合糖質。
  7. ＣＢＡはモノクローナル抗体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の複合糖質。
  8. 以下の構造：
    Figure 2023554215000125
     を備え、かつ、ＣＢＡはタンパク質である、請求項１～７のいずれか一項に記載の複合糖質。
  9. ＣＢＡは抗体であり、ＧｌｃＮＡｃはアスパラギン側鎖を介して抗体に結合している、請求項１～８のいずれか一項に記載の複合糖質。
  10. ＣＢＡは抗体であり、ＧｌｃＮＡｃはＦｃドメインのＡｓｎ２９７残基の少なくとも１つに結合している、請求項１～９のいずれか一項に記載の複合糖質。
  11. ＣＢＡは抗体であり、ＧｌｃＮＡｃはＦｃドメインのＡｓｎ２９７残基の両方に結合している、請求項１～１０のいずれか一項に記載の複合糖質。
  12. ペイロードは少なくとも１つのサイトトキシン、免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、ペプチド又はオリゴヌクレオチドを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の複合糖質。
  13. ペイロードは、２３℃における水溶性が、２０ｍｇ／ｍｌ未満、１０ｍｇ／ｍｌ未満、５ｍｇ／ｍｌ未満、２．５ｍｇ／ｍｌ未満、１ｍｇ／ｍｌ未満、０．５ｍｇ／ｍｌ未満、０．１ｍｇ／ｍｌ未満、０．０５ｍｇ／ｍｌ未満、又は０．０１ｍｇ／ｍｌ未満である、少なくとも１つの薬物を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の複合糖質。
  14. ペイロードはＤＮＡ損傷剤、チューブリン重合阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＲＮＡスプライシング阻害剤、ＲＮＥポリメラーゼ阻害剤、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の複合糖質。
  15. ペイロードは、コルヒチン、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、カンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、タキサン、ドラスタチン、アンサミトシン、ピリジノベンゾジアゼピン、エリブリン、クリトフィシン、エン－ジイン抗生物質、ツブリシン、エキサテカン、イリノテカン、阻害ペプチド、アマニチン、デブーガニン、デュオカルマイシン、マイタンシン、アウリスタチン、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の複合糖質。
  16. ＱＱ、ＸＸ、ＹＹ、及びＺＺの少なくとも１つが以下の式：
    Figure 2023554215000126
     （式中、Ｈｅｔは複素環系を表し、各々同じであっても異なっていてもよい；
    Ｌ１はなし又はサブリンカーから選択され、各々同じであっても異なっていてもよい；
    Ｌ２はなし又はサブリンカーから選択される；
    ｘ１は１、２、３、４、５、６、７、又は８から選択される；
    ｘ２は１、２、３、４、５、６、７、又は８から選択される；かつ、
    ｘ３は１、２、３、４、５、６、７、又は８から選択される）
    で表される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の複合糖質。
  17. a）ＸＸ、ＹＹ、ＺＺは各々ＯＨ；
    ｂ）ＸＸ、ＹＹはＯＨ、及びＱＱはＨ；
    ｃ）ＸＸ、ＹＹはＯＨ
    である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の複合糖質。
  18. ＱＱには以下の式：
    Figure 2023554215000127
     がある、請求項１～１７のいずれか一項に記載の複合糖質。
  19. ＺＺには以下の式：
    Figure 2023554215000128
     がある、請求項１～１８のいずれか一項に記載の複合糖質。
  20. Ｈｅｔには以下の式：
    Figure 2023554215000129
     （式中、Ｈ１は複素環を表し、Ａは炭素環又は複素環を表す）
    がある、請求項１～１９のいずれか一項に記載の複合糖質。
  21. Ａは８原子の炭素環又は複素環である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の複合糖質。
  22. Ｈ１は、（ａ）１，３双極子又は１，２，４，５テトラジンと、（ｂ）ひずみシクロアルキン又はひずみシクロアルケンと、の間の環状付加反応から生成する複素環である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の複合糖質。
  23. Ｈ１は、トリアゾール、１，２ピリダジン、オキサゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、及びそれらの飽和類似体及び部分不飽和類似体を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の複合糖質。
  24. Ａには以下の式：
    Figure 2023554215000130
     （式中、
    ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’は各々独立して、なし、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルコキシ、アリールから選択される；かつ、
    ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’はのいずれか１つはＬ１又はＬ２であってよく；ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれか２つ以上がともにリングを形成しうる；かつ、
    Ｗには、以下の式：
    Figure 2023554215000131
     （式中、
    Ｌ１／２はＨ、Ｌ１、Ｌ２のいずれかを表し、
    Ｗ、ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれかにＬ１が含まれる場合、Ｗ、ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれもＬ２を含まず、並びに、Ｌ２はＨ１に結合する、かつ、
    Ｗ、ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれかにＬ２が含まれる場合、Ｗ、ＲＡ１、ＲＡ１’、ＲＡ２、ＲＡ２’、ＲＡ３、ＲＡ３’、ＲＡ４、及びＲＡ４’のいずれもＬ１を含まず、並びに、Ｌ１はＨ１に結合する）があってよい）
    がある、請求項１～２３のいずれか一項に記載の複合糖質。
  25. Ａ環には以下の式：
    Figure 2023554215000132
    Figure 2023554215000133
     がある、請求項１～２４のいずれか一項に記載の複合糖質。
  26. Ｌ２には以下の式：
    －Ｌ２１－Ｌ２２－Ｌ２３－Ｌ２４－Ｌ２５－Ｌ２６－
    （式中、
    Ｌ２１は複素環系に結合しており、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ２１、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２１、ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２１、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２１は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
    Ｌ２２は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ２２、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２２、ＮＲ２２Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２２Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２２は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
    Ｌ２３は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、Ｓ、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）；ポリ（グリセロール）、Ｏ、ＮＲ２３、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２３、ＮＲ２３Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２３Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２３Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２３Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２３、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２３は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
    Ｌ２４は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ２４、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２４、ＮＲ２４Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２４Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２４Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２４Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２４、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２４は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
    Ｌ２５は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ２５、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２５、ＮＲ２５Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２５Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２５Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２５Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２５、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２５は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
    Ｌ２６はシアロシドに結合し、かつ、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ２６、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２６、ＮＲ２６Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２６Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ２６Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ２６Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ２６は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである）
    がある、請求項１～２５のいずれか一項に記載の複合糖質。
  27. Ｌ２１は、なし、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ１～８アルキレン、好ましくはＣ１～３アルキレン又はアリレン、例えば１，４－フェニレンである；
    Ｌ２２は、なし又はＣ１～８アルキレン、好ましくはＣ１～３アルキレンである；
    Ｌ２３は、なし、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、ＮＨＣ（＝Ｏ）、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ、又はＯＣ（＝Ｏ）ＮＨである；
    Ｌ２４は、なし又はポリ（エチレン）である；、
    Ｌ２５は、なし又はＣ１～８アルキレン、好ましくは、Ｃ１～３アルキレンである；
    Ｌ２６は、なし又はヘテロシクリル又はヘテロアリール、例えばトリアゾール、１，２ピリダジン、オキサゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、及びそれらの飽和類似体及び部分不飽和類似体である、
    請求項１～２６のいずれか一項に記載の複合糖質。
  28. Ｌ１がなしであるか、又は以下の式：
    －Ｌ１１－Ｌ１２－Ｌ１３－（Ｌ１４－Ｌ１５－Ｌ１６）ｘ－
    （式中、
    ｘは、１、２、３、４、５、６、７、又は８から選択される；
    Ｌ１１は複素環系に結合しており、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ１１、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１１、ＮＲ１１Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１１Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１１Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１１、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１１は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
    Ｌ１２は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ１２、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１２、ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１２は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
    Ｌ１３は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、Ｓ、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）；ポリ（グリセロール）、Ｏ、ＮＲ１３、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１３、ＮＲ１３Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１３Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１３Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１３Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１３は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
    Ｌ１４は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ１４、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１４、ＮＲ１４Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１４Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１４Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１４Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１４、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１４は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
    Ｌ１５は、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ１５、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１５、ＮＲ１５Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１５Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１５Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１５Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１５、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１５は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである；
    Ｌ１６はペイロードに結合し、かつ、なし、Ｃ１～８アルキレン、アリレン、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ポリ（エチレン）、ポリ（アセタール）、ポリ（グリセロール）、Ｓ、Ｏ、ＮＲ１６、ＯＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１６、ＮＲ１６Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１６Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ１６Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ１６Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏから選択され、本明細書で、Ｒ１６は各々、Ｈ又はＣ１～４アルキルである）
    がある基である、請求項１～２７のいずれか一項に記載の複合糖質。
  29. Ｌ１には、以下の式：
    Figure 2023554215000134
     （式中、本明細書で、ｙ１は１、２、３、４、及び５から選択される；
    ｙは１～１，０００；であり、かつ、
    Ｒ４５６は水素又は以下の式（４５６）：
    Figure 2023554215000135
     である）
    がある、請求項１～２８のいずれか一項に記載の複合糖質。
  30. Ｌ１には、以下の式：
    Figure 2023554215000136
     （式中、
    ＲＳＩＰは１つ以上の自己固定スペーサーである；
    ＲＣＬは切断可能な基である；
    ＲＬ１が存在する場合は、さらなるリンカーである；
    ｘ１．５は１、２、３、４、５、６、７、及び８から選択される整数である；かつ、
    ｘ１．６は１、２、３、４、５、６、７、及び８から選択される整数である）
    がある、請求項１～２９のいずれか一項に記載の複合糖質。
  31. ＲＳＩＰには以下の式：
    Figure 2023554215000137
     （式中、
    本明細書で、ＸｚはＯ、ＮＨ、又はＮＣ１～４アルキルである；
    Ｒｃｏはペイロード中のヘテロ原子に結合しており、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ２、Ｐ（＝Ｏ）ＯＨ、又は以下の式：
    Figure 2023554215000138
     （式中、Ｒｅａ１及びＲｅａ２は各々独立して、Ｈ又はＣ１～４アルキルである）
    から選択され、さらに、以下の：
    ａ）Ｘｚ１は水素、Ｘｚ２はＲＣＬであり、ＲＣＬはＲＬ１に結合しているか、又は
    ｂ）Ｘｚ１はＲＬ１、Ｘｚ２はＲＣＬである
    のいずれか、であり、
    Figure 2023554215000139
     （式中、
    ｚは１又は０であり、ｚ１は１又は０であり、Ｒａａ１、Ｒａａ２、及びＲａａ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～６アルキル、場合によっては、フェニル置換された、ＣＯＯＨ、ＮＨ２、ＣＯＨＮＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２から選択される；かつ、
    ａ）ＲＣＣはＨ、ペプチジル、Ｃ１～６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであり、ＲＣＣ１はＲＳＩＰであり、本明細書で、前記ＲＳＩＰは、さらに、ＲＬ１とペイロードの両方に結合しているか；又は
    ｂ）ＲＣＣはＲＬ１、ＲＣＣ１はＲＳＩＰであり、前記ＲＳＩＰはペイロードに結合されている）である）
    がある、請求項１～３０のいずれか一項に記載の複合糖質。
  32. ＲＣＬには以下の式：
    Figure 2023554215000140
     がある、請求項１～３１のいずれか一項に記載の複合糖質。
  33. ＲＣＬには以下の式：
    Figure 2023554215000141
     （式中、
    ＲＣＣ１はＲＳＩＰであり、前記ＲＳＩＰはさらにＲＬ１とペイロードの両方に結合する）
    がある、請求項１～３２のいずれか一項に記載の複合糖質。
  34. ＲＣＬには以下の式：
    Figure 2023554215000142
     （式中、
    ＲＣＣ２はＲＳＩＰであるか、又はペイロード内のヘテロ原子であり、かつ、ＲＣＣはＬ１である）
    がある、請求項１～３３のいずれか一項に記載の複合糖質。
  35. ＲＣＬには以下の式：
    Figure 2023554215000143
     がある、請求項１～３４のいずれか一項に記載の複合糖質。
  36. ＱＱ、ＸＸ、ＹＹ、及びＺＺのうちの少なくとも１つは、以下の式：
    又は
    がある少なくとも１つの複合ペイロードである、請求項２～３５のいずれか一項に記載の複合糖質。
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