KR20220068984A - 항-bcma 항체, 이의 항원-결합 단편 및 이의 의학적 용도 - Google Patents

항-bcma 항체, 이의 항원-결합 단편 및 이의 의학적 용도 Download PDF

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하이칭 후아
루디 바오
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상하이 한서 바이오메디컬 컴퍼니 리미티드
장쑤 한서 파마슈티칼 그룹 캄파니 리미티드
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Abstract

본 발명은 항-BCMA 항체, 이의 항원 결합 단편, 및 이의 의학적 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 항-BCMA 항체의 CDR 영역을 함유하는 키메라 항체 및 인간화 항체, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 함유하는 의약 조성물, 및 항암 약물로서 및 자가면역 질환을 치료하기 위한 그의 용도를 추가로 제공한다. 특히, 인간화 항-BCMA 항체, BCMA-매개 질환 또는 병태를 치료하기 위한 약물의 제조에서의 그의 용도 및 질병 검출, 진단 또는 예후에서의 그의 용도가 제공된다.

Description

항-BCMA 항체, 이의 항원-결합 단편 및 이의 의학적 용도
본 발명은 항-BCMA 항체, 그의 항원-결합 단편 및 그의 의학적 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 항-BCMA 항체, 그의 항원-결합 단편, 및 BCMA-매개 질환 또는 병태를 검출 또는 치료하는데 사용하기 위한, 이들을 포함하는 의약 조성물에 관한 것이다.
B 세포는 적응 체액성 면역 및 항원을 특이적으로 인식하는 항체 생성에 중요한 역할을 하는 림프구이다. B 세포의 세 가지 하위 유형은 나이브 B 세포, 기억 B 세포 및 형질 세포이다. VDJ 재조합 과정에서, 게놈 라이브러리로부터 선택된 2개 또는 3개의 DNA 단편이 재조합되어 항체 가변 도메인의 조합 어레이를 생성하고, 그에 의해 최대 109개의 고유한 B 세포 계통이 상이한 계통의 B 세포에 의해 인코딩된 가변 도메인을 추가로 변경하여 생성되어 고유 표적에 특이적인 항체가 생성된다. B 세포는 많은 질병에 관여한다. B 세포의 악성 형질전환은 다발성 골수종 및 호지킨(Hodgkin) 림프종과 같은 일부 림프종을 비롯한 암을 유발한다. B 세포는 또한 전신성 홍반성 루푸스(SLE, systemic lupus erythematosus) 및 IgA 신병증을 비롯한 자가면역 질병에 관여한다. B 세포 관련 암 및 자가면역 질환은 B 세포 기능의 이상으로 간주될 수 있으므로, 이러한 질병을 제어하기 위한 가능한 전략은 병리학적 B 세포를 표적으로 하는 항체를 사용하는 것이다.
BCMA(CD269 또는 TNFRSF17)는 리간드 BAFF(B-세포 활성화제) 및 APRIL(증식 유도 리간드)에 대한 글리코실화되지 않은 내인성 멤브레인 수용체인 TNF 수용체 슈퍼패밀리의 구성원이다. BCMA 및 해당 리간드는 체액성 면역, B 세포 발달 및 항상성의 다양한 기능을 조절할 수 있다. BCMA는 비장, 림프절, 흉선, 부신 및 간에서 검출된다. 인간 형질모세포, 편도선, 비장, 골수의 형질세포, 편도 기억 B 세포 및 배중심 B 세포에 의해 발현되며, B 세포 계통에 대한 다양한 분석은 BCMA의 발현 수준이 성숙 후에 증가함을 보여준다. BCMA는 B 세포 림프종 및 다발성 골수종에서 고도로 발현된다.
BCMA에 대한 항체는 예를 들어 Gras M-P 등의 Int Immunol. 7 (1995) 1093-1106, WO200124811, WO200124812, WO2010104949 및 WO2012163805에 기재되어 있다. BCMA에 대한 항체 및 림프종 및 다발성 골수종을 치료하기 위한 그의 용도는 예를 들어 WO2002066516 및 WO2010104949에 기재되어 있다. WO2013154760은 BCMA를 인식하는 모이어티 및 T-세포를 활성화하는 모이어티를 포함하는 키메라 항원 수용체에 관한 것이다.
US9273141은 BCMA에 특이적으로 결합하고 BCMA에 대한 BAFF 및/또는 APRIL의 결합을 억제하는 내재화될 수 있는 항원-결합 단백질을 제공하고, 또한 항원-결합 단백질 및 세포독성제를 포함하는 콘주게이트를 제공한다.
본 발명은 높은 친화성, 높은 특이성, 낮은 면역원성, 높은 생물학적 활성, 상당한 항종양 효과 및 향상된 세포내이입(endocytosis)을 갖는 항-BCMA 항체, 뿐만 아니라 항체를 포함하는 세포독성 콘주게이트, 및 종양 억제를 위한 그의 용도를 제공한다.
본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 다음을 포함하는 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염이 제공된다:
SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, 및 SEQ ID NO:5로 이루어진 군으로부터 선택된 서열로 나타낸 바와 같은 적어도 하나의 HCDR을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역; 및
SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 및 SEQ ID NO: 8로 이루어진 군으로부터 선택된 서열로 나타낸 적어도 하나의 LCDR을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 3으로 나타낸 HCDR1,
SEQ ID NO: 4로 나타낸 HCDR2, 및
SEQ ID NO: 5로 나타낸 바와 같은 HCDR3.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 6으로 나타낸 LCDR1,
SEQ ID NO: 7로 나타낸 LCDR2, 및
SEQ ID NO: 8로 나타난 LCDR3.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함하고:
SEQ ID NO: 3으로 나타낸 HCDR1,
SEQ ID NO: 4로 나타낸 HCDR2, 및
SEQ ID NO: 5로 나타낸 HCDR3; 그리고
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 6으로 나타낸 LCDR1,
SEQ ID NO: 7로 나타낸 LCDR2, 및
SEQ ID NO: 8로 나타난 LCDR3.
본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염을 제공하며, 그의 항-BCMA 항체 또는 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5, 또는 그의 돌연변이 서열로부터 선택된 적어도 하나의 HCDR을 포함한다.
본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염이 제공되며, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 및 SEQ ID NO: 8, 또는 이들의 돌연변이 서열로부터 선택된 적어도 하나의 LCDR을 포함한다:
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 다음을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다:
SEQ ID NO: 3 또는 이의 돌연변이 서열로 나타낸 HCDR1,
SEQ ID NO: 4 또는 이의 돌연변이 서열로 나타낸 HCDR2, 및
SEQ ID NO: 5 또는 이의 돌연변이 서열로 나타낸 HCDR3.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 6으로 나타낸 LCDR1 또는 이의 돌연변이 서열,
SEQ ID NO: 7로 나타낸 LCDR2 또는 이의 돌연변이 서열, 및
SEQ ID NO: 8로 나타낸 LCDR3 또는 이의 돌연변이체 서열.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 제약상 허용되는 염의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 항체 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함하고:
SEQ ID NO: 3의 돌연변이 서열로 나타낸 HCDR1,
SEQ ID NO: 4의 돌연변이 서열로 나타낸 HCDR2, 및
SEQ ID NO: 5의 돌연변이 서열로 나타낸 HCDR3; 그리고
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 6의 돌연변이 서열로 나타낸 LCDR1,
SEQ ID NO: 7의 돌연변이 서열로 나타낸 LCDR2, 및
SEQ ID NO: 8의 돌연변이 서열로 나타난 LCDR3.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 상기 기재된 바와 같은 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염이 제공되고, 돌연변이 서열이 항체 활성, 항체 안정성을 최적화하거나 면역원성을 감소시키는 CDR 영역에서 1 내지 3개의 아미노산 돌연변이를 갖는다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 뮤린 항체이다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 키메라 항체이다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 항체이다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간화 항체이다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하고, 이는 인간 IgG1 또는 그의 변이체, IgG2 또는 그의 변이체, IgG3 또는 그의 변이체 또는 IgG4 또는 그의 변이체로부터 유래된다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4로부터 유래된 중쇄 불변 영역을 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 아미노산 돌연변이 후에 증강된 ADCC 독성을 갖는 IgG1의 중쇄 불변 영역을 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 22로 나타낸 바와 같은 중쇄 불변 영역을 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 κ 사슬 또는 그의 변이체, λ 사슬 또는 그의 변이체로부터 유래된 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 바람직한 실시양태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 23으로 나타낸 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 추가적인 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염은 SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 및 SEQ ID NO: 11로 이루어진 군으로부터 선택된 서열로 나타낸 중쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 추가적인 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 추가적인 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13 및 SEQ ID NO:14로 이루어진 군으로부터 선택된 서열로 나타낸 바와 같은 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 추가적인 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 또는 SEQ ID NO: 14와 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 추가적인 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 또는 SEQ ID NO: 17로 나타낸 바와 같은 중쇄를 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 추가적인 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 또는 SEQ ID NO: 17과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄를 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 추가적인 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 또는 SEQ ID NO: 20으로 나타낸 바와 같은 경쇄를 포함한다.
본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그 염의 추가적인 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 또는 SEQ ID NO: 20과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄를 포함한다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 9로 나타낸 바와 같은 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 12나타낸 바와 같은 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖고, 그리고 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 12로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 10으로 나타낸 바와 같은 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 13으로 나타낸 바와 같은 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 10으로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖고, 그리고 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 13으로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 11로 나타낸 바와 같은 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 14로 나타낸 바와 같은 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 11로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖고, 그리고 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 14로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 15로 나타낸 바와 같은 중쇄 및 SEQ ID NO: 18로 나타낸 바와 같은 경쇄를 포함한다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 15로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖고, 그리고 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 18로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 16으로 나타낸 바와 같은 중쇄 및 SEQ ID NO: 19로 나타낸 바와 같은 경쇄를 포함한다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 16으로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 가지며, 그리고 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 19로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 17로 나타낸 바와 같은 중쇄 및 SEQ ID NO: 20으로 나타낸 바와 같은 경쇄를 포함한다.
본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 17로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖고, 그리고 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 20으로부터 선택되거나 또는 그와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터가 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 발현 벡터가 도입되거나 이를 함유하는 숙주 세포가 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포가 제공된다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 숙주 세포는 박테리아, 바람직하게는 대장균(Escherichia coli)이다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 숙주 세포는 효모, 바람직하게는 피치아 파스토리스(Pichia pastoris)이다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 숙주 세포는 포유동물 세포, 바람직하게는 CHO 세포 또는 HEK293 세포이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 항-BCMA 항체를 제조하는 방법을 제공한다:
본 발명에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계;
배양물로부터 항체를 분리하는 단계; 및
항체를 정제하는 단계.
본 발명에 의해 제공된 항-BCMA 항체의 제조 방법은 다음 단계를 포함한다:
본 발명에 따른 숙주 세포, 바람직하게는 HEK293 세포를 배양하는 단계;
배양물, 바람직하게는 세포 배양액으로부터 항체를 분리하는 단계; 및
친화성 크로마토그래피, 바람직하게는 크로마토그래피 방법에 의해 항체를 정제하는 단계.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염뿐만 아니라 제약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 함유하는 의약 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염을 함유하는 검출 또는 진단 시약이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염뿐만 아니라 표지된 2차 항체, 완충제 및 검출 또는 진단에 유용한 기질을 함유하는 검출 또는 진단용 키트가 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염, 및 BCMA에 대한 BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합을 검출할 수 있는 하나 이상의 시약을 포함하는 검출 또는 진단 키트를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 BCMA-매개 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염, 또는 이들을 포함하는 의약 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 BCMA-매개 질환 또는 병태의 치료 또는 예방용 약제를 제조하는데 있어서, 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염, 또는 이를 포함하는 의약 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 BCMA 매개 질환 또는 병태의 검출, 진단 및 예후에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염, 또는 이를 포함하는 검출 또는 진단 시약을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 BCMA 매개 질병 또는 병태의 검출, 진단 및 예후에 사용하기 위한 키트를 제조함에 있어, 본 발명에 따른, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염, 또는 이를 포함하는 검출 또는 진단 시약의 용도에 관한 것이다.
특정 실시형태에서, BCMA-매개 질환 또는 병태는 암, 바람직하게는 BCMA-발현 암, 보다 바람직하게는 림프종, 백혈병 또는 골수종, 가장 바람직하게는 다발성 골수종이다.
특정 실시형태에서, BCMA-매개 질환 또는 병태는 자가면역 질환, 바람직하게는 홍반성 루푸스, IgA 신병증 및 류마티스 관절염이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 세포독성제, 바람직하게는 MMAF, SN-38 및 엑사테칸(Exatecan)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포독성제에 결합된, 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 콘주게이트를 제공한다. 더욱 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체-약물 콘주게이트는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 구조식을 갖는다:
Figure pct00001
Figure pct00002
상기 식에서, Ab는 본 발명에 따라 상기 설명된 바와 같은 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
또한, 본 발명은 BCMA-매개 질환 또는 병태를 치료하기 위한 약제를 제조하는데 있어서 본 발명에 따른 항체-약물 콘주게이트의 용도를 제공하고, 상기 BCMA-매개 질환 또는 병태는 암 및 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는, 암은 BCMA-발현 암, 보다 바람직하게는 림프종, 백혈병 또는 골수종, 가장 바람직하게는 다발성 골수종이다. 바람직하게는, 자가면역 질환은 홍반성 루푸스, IgA 신병증 및 류마티스 관절염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상에서 BCMA-매개 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공하고, 이 치료 방법은 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약학적으로 허용되는 그의 염, 그의 의약 조성물 또는 본 발명의 항체-약물 콘주게이트의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 것을 포함한다.
본 발명에 의해 제공된 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 높은 친화성, 높은 특이성, 낮은 면역원성, 높은 생물학적 활성 및 상당한 항종양 효과를 갖는다. 한편, 본 발명의 항체는 BCMA 항원에 결합한 후 신속하게 내재화될 수 있어, 치료 용도 또는 신속한 내재화를 필요로 하는 다른 용도를 위해 ADC의 형태로 사용하는데 적합함을 시사한다. ADC 형태를 갖는 본 발명의 항체는 BCMA를 발현하는 종양 세포를 효율적으로 사멸시킬 수 있다.
용어
본 발명을 보다 쉽게 이해할 수 있도록, 특정 기술 및 과학 용어를 아래에서 구체적으로 정의한다. 명세서에서 달리 명확하게 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 다른 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다.
본 명세서에서 사용되는 아미노산의 세 글자 코드 및 한 글자 코드는 J. Biol. Chem, 243, p3558(1968)에 기재된 바와 같다.
본 명세서에서 용어 "항체"는 사슬간 이황화 결합으로 연결된 2개의 동일한 중쇄 및 2개의 동일한 경쇄로 이루어진 테트라펩타이드 사슬 구조인 면역글로불린을 지칭한다. 면역 글로불린 중쇄 불변 영역의 아미노산 조성과 배열 순서가 다르므로 항원성도 다르다. 이에 따르면, 면역글로불린은 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE의 5가지 유형으로 분류되거나, 면역글로불린의 이소형(isoform)으로 알려져 있으며, 그 해당 중쇄는 각각 μ 사슬, δ 사슬, γ 사슬, α 사슬 및 ε 사슬이다. 동일한 유형의 Ig는 힌지 영역의 아미노산 조성과 중쇄 이황화 결합의 수 및 위치의 차이에 따라 다른 서브클래스로 분류될 수 있다. 예를 들어, IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 분류될 수 있다. 경쇄는 불변 영역의 차이에 따라 κ 사슬 또는 λ 사슬로 분류된다. 5가지 유형의 Ig는 각각 κ 사슬 또는 λ 사슬을 가질 수 있다.
본 발명에서, 본 발명에 따른 항체 경쇄는 인간 또는 뮤린 κ, λ 사슬 또는 그의 변이체를 포함하는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에서, 본 발명에 따른 항체 중쇄는 인간 또는 뮤린 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 그들의 변이체를 포함하는 중쇄 불변 영역을 추가로 포함할 수 있다.
항체 중쇄 및 경쇄의 N-말단 근처에 있는 약 110개 아미노산의 서열은 매우 다양하며 가변 영역(V 영역)이고; C-말단 근처의 나머지 아미노산 서열은 상대적으로 안정하고 불변 영역(C 영역)이다. 가변 영역은 비교적 보존적인 서열을 갖는 3개의 초가변 영역(HVR) 및 4개의 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 3개의 초가변 영역은 항체의 특이성을 결정하며 상보성 결정 영역(CDR)으로도 알려져 있다. 경쇄 가변 영역(VL) 및 중쇄 가변 영역(VH) 각각은 3개의 CDR 영역 및 4개의 FR 영역으로 구성된다. 아미노 말단으로부터 카르복실 말단까지의 배열 순서는 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4이다. 경쇄의 3개의 CDR 영역은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 나타내고; 중쇄의 3개 CDR 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 나타낸다. 본 발명에 따른 항체 또는 항원-결합 단편의 VL 영역 및 VH 영역의 CDR 아미노산 잔기의 수 및 위치는 공지된 Kabat 넘버링 기준 및 Kabat, AbM 또는 IMGT 정의 기준(http:// bioinf.org.uk/abs/)을 준수한다.
"항원 제시 세포" 또는 "APC"라는 용어는 표면에 MHC와 복합체를 형성한 외래 항원을 제시하는 세포이다. T 세포는 이러한 복합체를 인식하기 위해 T 세포 수용체(TCR)를 사용한다. APC의 예는 수지상 세포(DC), 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 단핵구, B 림프모세포 및 단핵구 유래 수지상 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"항원 제시"라는 용어는 APC에 의해 항원을 캡처하고 T 세포에 의해 예를 들어 MHC-I/MHC-II 콘주게이트의 성분으로서 이들이 항원을 인식할 수 있게 하는 과정을 지칭한다.
용어 "BCMA"는 세포에 의해 자연적으로 발현되는 BCMA의 임의의 변이체 또는 이소형을 포함한다. 본 발명의 항체는 비-인간 종으로부터 유래된 BCMA와 가교 반응할 수 있다. 대안적으로, 항체는 또한 인간 BCMA에 특이적일 수 있고 다른 종과 가교 반응성을 나타내지 않을 수 있다. BCMA 또는 이의 임의의 변이체 또는 이소형은 이를 자연적으로 발현하는 세포 또는 조직으로부터 단리되거나, 또는 당업계 및 본 명세서에 기재된 기술을 이용하여 재조합 기술에 의해 제조될 수 있다. 바람직하게는, 항-BCMA 항체는 정상적인 글리코실화 패턴을 갖는 인간 BCMA를 표적으로 한다.
용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 방법에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 인간 항체를 포함하며, 관련된 기술 및 방법은 다음과 같이 당업계에 잘 알려져 있다:
1. 인간 면역글로불린 유전자를 가진 형질전환 및 트랜스-염색체 동물(예를 들어, 마우스) 또는 이로부터 제조된 하이브리도마로부터 단리된 항체;
2. 트랜스펙토마(transfectoma)와 같은 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포로부터 단리된 항체;
3. 재조합 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체; 그리고
4. 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 접합하는 것과 같은 방법에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체.
이러한 재조합 인간 항체는 가변 영역 및 불변 영역을 포함하며, 이는 생식세포 계열(germline) 유전자에 의해 인코딩된 특이적 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열을 활용하지만, 항체 성숙 동안 발생하는 것과 같은 후속 재배열 및 돌연변이도 포함한다.
본 발명에서 용어 "뮤린 항체"는 당업계의 지식 및 기술에 따라 제조된 인간 BCMA에 대한 모노클로날 항체이다. 제조 과정에서, 피검체에 BCMA 항원을 주입한 후 원하는 서열이나 기능적 특성을 갖는 항체를 발현하는 하이브리도마를 단리한다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 뮤린 BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 뮤린 κ, λ 사슬 또는 그의 변이체의 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하거나, 뮤린 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 또는 이들 변이체의 중쇄 불변 영역을 추가로 포함할 수 있다.
"인간 항체"라는 용어는 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열의 가변 영역 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 본 발명의 인간 항체는 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열에 의해 인코딩되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다(예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이). 그러나, 용어 "인간 항체"에는 다른 포유동물 종(예를 들어, 마우스)의 생식선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열(즉, "인간화 항체")에 이식된 항체는 포함되지 않는다.
CDR-이식된 항체로도 공지된 용어 "인간화 항체"는 뮤린 CDR 서열을 인간 항체 가변 영역의 프레임워크에 이식함으로써 생성된 항체를 지칭한다. 인간화 항체는 다량의 뮤린 단백질 성분을 운반하는 키메라 항체에 의해 유도되는 강한 면역 반응의 단점을 극복할 수 있다. 면역원성의 감소로 인한 활성의 감소를 피하기 위해, 인간 항체 가변 영역은 활성을 유지하기 위해 최소 역 돌연변이를 겪을 수 있다.
"키메라 항체"라는 용어는 뮤린 항체의 가변영역과 인간 항체의 불변영역을 융합시켜 형성된 항체로서, 뮤린 항체에 의해 유도된 면역반응을 완화시킬 수 있다. 키메라 항체를 확립하려면 먼저 뮤린 특이적 모노클로날 항체를 분비하는 하이브리도마를 확립한 후, 뮤린 하이브리도마 세포로부터 가변 영역 유전자를 클로닝한 다음, 필요에 따라 인간 항체의 불변 영역 유전자를 클로닝하여 뮤린 가변 영역 유전자를 인간 불변 영역 유전자와 연결하여 키메라 유전자를 형성하여 인간 발현 벡터에 삽입하고, 최종적으로는 진핵 산업 시스템 또는 원핵 산업 시스템에서 키메라 항체 분자를 발현한다. 인간 항체 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 또는 이들 변이체의 중쇄 불변 영역, 바람직하게는 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4 중쇄 불변 영역, 또는 아미노산 돌연변이 후 ADCC(항체 의존적 세포매개 세포독성)가 강화된 IgG1 중쇄 불변 영역으로부터 선택될 수 있다.
용어 "항원-결합 단편"은 일반적으로 모 항체의 항원-결합 영역 또는 가변 영역(예를 들어, 하나 이상의 CDR)의 적어도 일부를 포함하는 항체 및 항체 유사체의 항원-결합 단편을 지칭한다. 항체 단편은 모 항체의 결합 특이성의 적어도 일부를 유지한다. 일반적으로 활성이 몰 기준으로 표시되는 경우, 항체 단편은 모체 결합 활성의 적어도 10%를 유지한다. 바람직하게는, 항체 단편은 표적에 대한 모 항체의 결합 친화도의 적어도 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 이상을 유지한다. 항원-결합 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 선형 항체, 단일-사슬 항체, 나노바디, 도메인 항체 및 다중특이적 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 조작된 항체 변이체는 Holliger and Hudson, 2005, Nat. Biotechnol. 23:1126-1136에서 검토되고 있다.
"Fab 단편"은 하나의 경쇄와 하나의 중쇄의 CH1 및 가변 영역으로 구성된다. Fab 분자의 중쇄는 다른 중쇄 분자와 이황화 결합을 형성할 수 없다.
"Fc" 영역은 CH1 및 CH2 도메인을 포함하는 2개의 항체 중쇄 단편을 포함한다. 2개의 중쇄 단편은 2개 이상의 이황화 결합에 의해 그리고 CH3 도메인의 소수성 상호작용을 통해 함께 유지된다.
"Fab' 단편"은 VH 도메인, CH1 도메인 및 CH1과 CH2 도메인 사이의 영역을 포함하는 경쇄 및 중쇄의 일부를 포함하여, 사슬간 이황화 결합은 2개의 Fab' 단편의 2개의 중쇄 사이에 형성되어 F(ab')2 분자를 형성할 수 있다.
"F(ab')2 단편"은 2개의 경쇄, 및 CH1 및 CH2 도메인 사이의 불변 영역의 일부를 포함하는 2개의 중쇄를 포함함으로써, 2개의 중쇄 사이에 사슬간 이황화 결합을 형성한다. 따라서, F(ab')2 단편은 2개의 중쇄 사이의 이황화 결합에 의해 함께 고정된 2개의 Fab' 단편으로 구성된다.
"Fv 영역"은 중쇄 및 경쇄 둘 모두로부터의 가변 영역을 포함하지만 불변 영역이 없다.
용어 "다중특이성 항체"는 다중 에피토프에 대한 특이성을 갖는 항체를 포함하는 가장 넓은 의미로 사용된다. 이러한 다중특이성 항체는, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함(그러나 이에 제한 받지 않으며, 여기서 VH-VL 단위는 다중 에피토프에 대한 특이성을 가짐)하는 항체; 2개 이상의 VL 및 VH 영역을 갖고, 각 VH-VL 단위는 동일한 표적의 상이한 표적 또는 상이한 에피토프에 결합하는 항체; 2개 이상의 단일 가변 영역을 갖고, 각 단일 가변 영역은 상이한 표적 또는 동일한 표적의 상이한 에피토프에 결합하는 항체; 전장(full-length) 항체, 항체 단편, 디아바디, 이중특이적 디아바디 및 트리아바디, 공유 또는 비공유 연결된 항체 단편 등을 포함한다.
"단쇄 항체"라는 용어는 항체의 중쇄 가변영역(VH)과 경쇄 가변영역(VL)을 링커 펩타이드를 통해 연결함으로써 형성된 단일 사슬 재조합 단백질이다. 완전한 항원 결합 부위를 가진 최소 항체 단편이다.
용어 "도메인 항체 단편"은 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 면역학적 기능을 갖는 면역글로불린 단편이다. 일부 경우에, 2개 이상의 VH 영역은 펩티드 링커에 의해 공유 연결되어 2가 도메인 항체 단편을 형성한다. 2가 도메인 항체 단편의 2개의 VH 영역은 동일한 항원 또는 상이한 항원을 표적으로 할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "BCMA에 대한 결합"은 인간 BCMA와 상호작용할 수 있는 것을 지칭한다.
본 명세서에서 용어 "항원-결합 부위"는 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편이 인식된 3차원적 부위를 지칭한다.
용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 항체에 특이적으로 결합하는 항원 상의 부위를 지칭한다. 에피토프는 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치된 인접 아미노산 또는 비인접 아미노산에 의해 형성될 수 있다. 인접 아미노산에 의해 형성된 에피토프는 일반적으로 변성 용매에 노출된 후에 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 일반적으로 변성 용매 처리 후에 손실된다. 에피토프는 일반적으로 독특한 공간적 형태로 적어도 3 내지 15개의 아미노산을 포함한다. 면역블롯팅, 면역침전 검출 분석 등을 비롯하여, 주어진 항체에 어떤 에피토프가 결합되어 있는지를 결정하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 에피토프의 공간적 형태를 결정하는 방법은 당업계의 기술 및 예를 들어 X선 결정 분석, 2차원 핵 자기 공명 등에 기재된 기술을 포함한다.
본 명세서에서 용어 "특이적으로 결합한다" 및 "선택적으로 결합한다"는 소정의 항원 상의 에피토프에 대한 항체의 결합을 지칭한다. 일반적으로 재조합 인간 BCMA를 분석물질로 사용하고 항체를 리간드로 사용하는 경우, 기구에서 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기술로 측정했을 때, 항체는 약 10-7 M 이하의 평형 해리 상수(KD)에서 소정의 항원에 결합하고, 미리 결정된 항원에 대한 그의 결합 친화도는 미리 결정된 항원 또는 밀접하게 관련된 항원 이외의 비 특이적 항원(예를 들어, BSA 등)에 대한 그의 결합 친화도의 적어도 2배이다. "항원을 인식하는 항체"라는 용어는 "∼에 특이적으로 결합하는 항체"라는 용어와 상호교환적으로 사용될 수 있다.
용어 "가교 반응"은 상이한 종으로부터 유래된 BCMA에 결합하는 본 발명에 따른 항체의 능력을 지칭한다. 예를 들어, 인간 BCMA에 결합하는 본 발명의 항체는 또한 다른 종의 BCMA에 결합할 수 있다. 가교 반응성은 정제된 항원과의 특이적 반응성 또는 BCMA를 생리학적으로 발현하는 세포와의 결합 또는 기능적 상호작용을 검출함으로써 결합 분석(예를들어, SPR 및 ELISA)에서 측정된다. 가교 반응성을 결정하기 위한 방법은 예를 들어 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분석 또는 유세포 분석에 기술된 바와 같은 표준 결합 분석을 포함한다.
"억제" 또는 "차단"이라는 용어는 상호교환적으로 사용될 수 있고 부분적 및 완전한 억제/차단을 모두 포함하는 의미이다. 리간드의 억제/차단은 바람직하게는 억제 또는 차단 없이 리간드 결합이 일어날 때 발생하는 활성의 정상 수준 또는 유형을 감소시키거나 변경한다. 억제 및 차단은 또한 항-BCMA 항체와 접촉하지 않는 리간드와 비교하여 항-BCMA 항체와 접촉할 때 리간드의 결합 친화도에서 측정 가능한 감소를 포함하도록 의도된다.
"성장 억제"(예를 들어, 세포의 성정 억제)라는 용어는 세포 성장의 측정 가능한 감소를 포함하는 것으로 의도된다.
"유도된 면역 반응" 및 "향상된 면역 반응"이라는 용어는 상호교환적으로 사용될 수 있고, 특정 항원에 의해 자극된(즉, 수동적 또는 적응적) 면역 반응을 지칭한다. CDC 또는 ADCC를 유도하기 위한 "유도"라는 용어는 특정 직접 세포 사멸 메커니즘을 자극하는 것을 지칭한다.
본 발명에서 "ADCC", 즉. 항체 의존성 세포 매개 세포독성이란 Fc 수용체를 발현하는 세포가 항체의 Fc 단편을 인식함으로써 항체로 코팅된 표적 세포를 직접 사멸시키는 것을 의미한다. 항체의 ADCC 기능은 IgG의 Fc 세그먼트를 변형함으로써 향상, 감소 또는 제거될 수 있다. 변형은 항체의 중쇄 불변 영역에서의 돌연변이를 지칭한다.
항체 및 항원-결합 단편을 생성 및 정제하는 방법은 잘 알려져 있으며 Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, 5-8 및 15장과 같은 선행 기술에서 확인할 수 있다. 예를 들어, 마우스는 인간 BCMA 또는 그의 단편으로 면역화될 수 있고, 수득된 항체는 재생 및 정제될 수 있고, 통상적인 방법을 이용함으로써 아미노산 서열화될 수 있다. 항원-결합 단편은 또한 통상적인 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편은 하나 이상의 인간 FR 영역(들)을 비-인간 CDR 영역에 부가하도록 유전적으로 조작된다. 인간 FR 생식세포 계열 서열은 ImmunoGeneTics (IMGT) 웹사이트 http://imgt.cines.fr 또는 The Immunoglobulin FactsBook, 2001ISBN012441351으로부터 얻어질 수 있다.
본 발명의 조작된 항체 또는 항원-결합 단편은 통상적인 방법에 의해 제조 및 정제될 수 있다. 상응하는 항체의 cDNA 서열은 클로닝되고 GS 발현 벡터로 재 조합될 수 있다. 재조합 면역글로불린 발현 벡터는 CHO 세포를 안정적으로 형질감염시킬 수 있다. 보다 권장되는 선행 기술로서, 포유동물 발현 시스템은 특히 Fc 영역의 고도로 보존된 N-말단에서 항체의 글리코실화를 유발할 수 있다. 인간 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 발현함으로써 안정한 클론을 얻는다. 양성 클론은 항체를 생성하기 위해 생물반응기(bioreactor)의 무혈청 배지에서 증식된다. 항체가 분비되는 배양액은 통상적인 기술에 의해 정제 및 수집될 수 있다. 항체는 통상적인 방법에 의해 여과되고 농축될 수 있다. 가용성 혼합물 및 다량체는 또한 분자체 및 이온 교환과 같은 통상적인 방법으로 제거될 수 있다. 생성된 생성물은 예를 들어 -70℃에서 즉시 냉동하거나 동결건조해야 한다.
본 발명의 항체는 모노클로날 항체를 지칭한다. 본 발명에서 모노클로날 항체(mAb)는 단일 클로닝된 세포주로부터 수득한 항체를 지칭하며, 이는 진핵, 원핵 또는 파지 클로닝된 세포주에 한정되지 않는다. 모노클로날 항체 또는 항원 결합 단편은 예를 들어 하이브리도마 기술, 재조합 기술, 파지(phage) 디스플레이 기술, 합성 기술(예를 들어 CDR 이식) 또는 기타 기존 기술을 이용하여 재조합에 의해 얻어질 수 있다.
동물, 인간, 실험 대상, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체에 적용될 때 "투여하는", "제공하는" 및 "치료하는"은 외인성 약제, 치료제, 진단제 또는 조성물을 동물, 인간, 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체와 접촉시키는 것을 지칭한다. "투여하는", "제공하는" 및 "치료하는"은 예를 들어 치료, 약동학, 진단, 연구 및 실험 방법을 나타낼 수 있다. 세포를 치료하는 것은 시약을 세포와 접촉시키는 것, 및 시약을 유체와 접촉시키는 것을 포함하며, 여기서 유체는 세포와 접촉한다. "투여하는", "제공하는" 및 "치료하는"은 또한 예를 들어 세포를 시약, 진단제, 결합 조성물로 또는 시험관내 및 생체외에서 또 다른 세포로 치료하는 것을 지칭한다. "치료"는 인간, 수의학 또는 연구 대상에 적용될 때 치료, 예방 또는 예방 조치, 연구 및 진단 적용을 지칭한다.
"치료"는 예를 들어 본 발명의 항체 중 어느 하나를 포함하는 내부 또는 외부 치료제를, 치료제가 치료 효과를 갖는 것으로 알려진 하나 이상의 질병 증상(들)을 갖는 환자에게 제공하는 것을 지칭한다. 일반적으로, 치료제는 치료 대상 또는 집단에서 하나 이상의 질병 증상(들)을 경감시키는데 효과적인 양으로 제공되어, 이러한 증상의 퇴행을 유도하거나 이러한 증상의 발달을 임의의 임상적으로 측정 가능한 정도로 억제한다. 특정 질병 증상을 완화시키는 데 효과적인 치료제의 양("치료 유효량"이라고도 함)은 다양한 요인, 예를 들어 질병 상태, 환자의 연령 및 체중, 그리고 환자에게 원하는 치료 효과를 생성하는 약물의 능력에 따라 달라질 수 있다. 질병 증상이 완화되었는지 여부는 증상의 중증도 또는 진행을 평가하기 위해 의사 또는 기타 의료 전문가가 일반적으로 사용하는 임상 시험 방법에 의해 평가될 수 있다. 본 발명의 실시형태(예를 들어, 치료 방법 또는 생성물)는 관심 있는 각 질병 증상을 완화시키는 데 효과적이지 않을 수 있지만, 당업계에 공지된 임의의 통계적 시험 방법에 의해 결정된 바와 같이, 통계적으로 유의한 수의 환자에서 관심 질병 증상을 감소시켜야 하며, 스튜던트 t-시험, 카이-제곱(chi-square) 시험, Mann 및 Whitney의 U 시험, Kruskal-Wallis 시험(H 시험), Jonckheere-Terpstra 시험 및 Wilcoxon 시험과 같이, 공지된 임의의 통계적 시험 방법에 의해 결정된 바와 같이, 통계적으로 유의한 수의 환자에서 관심 있는 질병 증상을 감소시켜야 한다.
명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 용어 "본질적으로 ∼로 구성된" 또는 그의 변형은 설명된 모든 요소 또는 요소 그룹을 포함하고, 선택적으로 설명된 요소와 본질적으로 유사하거나 상이한 다른 요소를 포함하는 것을 의미하며, 주어진 투여 요법, 방법 또는 조성의 기본 또는 새로운 특성을 크게 변경하지 않아야 한다.
본 명세서에서 어떤 물체에 적용되는 "자연 발생"이라는 용어는 물체가 자연에서 발견될 수 있다는 사실을 의미한다. 예를 들어, 천연 공급원으로부터 단리할 수 있고, 실험실에서 인위적으로 그리고 의도적으로 변형되지 않은 유기체(바이러스 포함)에 존재하는 폴리펩티드 서열 또는 폴리뉴클레오티드 서열은 자연적으로 발생하는 것이다.
"유효량"은 의학적 상태의 증상 또는 병태를 경감하거나 예방하기에 충분한 양을 포함한다. 유효량은 또한 진단을 가능하게 하거나 용이하게 하기에 충분한 양을 지칭한다. 특정 환자 또는 수의사 대상에 대한 유효량은 치료할 병태, 환자의 일반적인 건강 상태, 약물 투여 방법, 경로 및 용량, 부작용의 중증도와 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 심각한 부작용이나 독성 효과를 피하는 최대 용량 또는 투여 요법일 수 있다.
"외인성"은 배경에 따라 유기체, 세포 또는 인체 외부에서 생성되는 물질을 지칭한다.
"내인성"은 배경에 따라 달라지는 세포, 유기체 또는 인체 내부에서 생성된 물질을 지칭한다.
"동일성"은 2개의 폴리뉴클레오티드 서열 사이 또는 2개의 폴리펩티드 사이의 서열 유사성을 지칭한다. 정렬된 두 서열의 위치가 동일한 염기 또는 아미노산 단량체 서브유닛에 의해 점유될 때, 예를 들어 두 DNA 분자의 각 위치가 아데닌에 의해 점유되면 분자는 해당 위치에서 상동이다. 2개의 서열 사이의 동일성 백분율은 2개의 서열이 공유하는 일치 또는 상동 위치의 수를 비교할 위치의 수로 나눈 값 x 100%의 함수이다. 예를 들어, 최적의 서열 정렬에서, 두 서열의 10개 위치 중 6개가 일치하거나 상동이면 두 서열은 60% 상동이다. 일반적으로 최대 동일성 백분율을 얻기 위해 두 개의 서열을 정렬할 때 정렬이 이루어진다.
본 명세서에 기재된 "세포", "세포주" 및 "세포 배양물"이라는 표현은 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 이러한 모든 명칭은 이들의 자손을 포함한다. 따라서, "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"라는 단어는 계대 수에 관계없이 1차 시험 세포 및 이로부터 유래된 배양물을 포함하는 의미이다. 또한 고의적이거나 의도하지 않은 돌연변이로 인해, 모든 자손이 DNA 함량 측면에서 정확히 동일할 수는 없음을 이해해야 한다. 원래의 형질전환된 세포에서 스크리닝된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 포함된다. 다른 명칭이 언급될 때 문맥에서 분명히 알 수 있다.
"선택적" 또는 "선택적으로"라는 용어는 이후에 기술된 사실 또는 상황이 발생할 수 있지만 반드시 발생할 수는 없음을 의미하며, 설명에는 사실 또는 상황이 발생하거나 발생하지 않는 경우가 포함된다. 예를 들어, "선택적으로 1 내지 3개의 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는"이라는 표현은 특정 서열의 항체 중쇄 가변 영역이 존재할 수 있지만 존재할 필요는 없음을 의미한다.
"약제학적 조성물"은 생리학적/제약학적으로 허용되는 담체 및 부형제와 같은 다른 성분뿐만 아니라 본 명세서에 기재된 항체(항체들) 또는 항원 결합 단편(들) 중 하나 이상을 포함하는 의미이다. 약제학적 조성물의 목적은 생물학적 활성을 나타내기 위해 활성 성분의 흡수에 도움이 되는 유기체에 대한 화합물의 투여를 용이하게 하는 것이다.
"약물 부하"(DAR)는 항체-약물 콘주게이트에서 항체당 세포독성 약물의 평균 수인 y로 표시된다. 결합 반응으로부터 생성된 항체-약물 콘주게이트의 약물 부하(DAR)는 질량 분석, HPLC 및 ELISA와 같은 통상적인 수단에 의해 특성화될 수 있다. 이러한 수단에 의해 y값에 대한 항체-약물 콘주게이트의 정량적 분포를 결정할 수 있다.
본 발명은 하기 실시예를 참조하여 추가로 기재될 것이지만, 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예에서 특정 조건이 없는 실험 방법은 일반적으로 Antibodies: A Laboratory Manual 및 Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor; 또는 원료 또는 제품 제조업체가 권장하는 조건을 따른다. 출처가 명시되지 않은 시약은 시중에서 구입한 기존 시약이다.
실시예 1: 항원의 제조
인간 BCMA의 His 태그가 붙은 세포외 도메인(BCMA-His)을 인코딩하는 단백질은 SinoBiologics(카탈로그 번호: 10620-H08H)에 의해 합성되었다.
BCMA His의 서열:
MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAHHHHHHHHHHH
SEQ ID NO: 21
실시예 2: 뮤린 하이브리도마 및 항체 서열 획득
총 5마리의 Balb/c 및 5마리의 A/J 암컷 10주령 마우스를 인간 항원 BCMA-His로 면역화시켰다. Sigma 완전 프로인트 보조제(CFA, Complete Freund's Adjuvant) 및 Sigma 불완전 프로인트 보조제(IFA, Incomplete Freund's Adjuvant)를 사용하였다. 면역원과 면역 보조제는 1:1의 비율로 완전히 혼합되고 유화되어 안정적인 "기름속 물(water-in-oil)" 액체를 제조하였다. 주사 용량은 25㎍/200㎕/마우스이었다.
표 1. 면역화 계획
1일째 제1 면역화, 완전 프로인트 보조제
21일째 제2 면역화, 불완전 프로인트 보조제
35일째 제3 면역화, 불완전 프로인트 보조제
42일째 혈액 샘플링 및 혈청 역가 검사 (3 면역화 후의 혈액)
49일째 제4 면역화, 불완전 프로인트 보조제
56일째 혈액 샘플링 및 혈청 역가 검사 (4 면역화 후의 혈액)
면역화된 마우스 혈청의 혈청 역가 및 세포 표면 항원에 대한 결합능을 실시예 3에 따른 간접 ELISA 방법을 이용하여 평가하였다. 세포 융합의 시작은 역가(100,000배 이상 희석)의 검출 결과에 따라 결정되었다. 높은 혈청 역가, 친화도 및 FACS 결합을 갖는 면역화된 마우스를 1회의 최종 면역화를 위해 선택하여 희생시켰다. 비장 세포를 SP2/0 골수종 세포에 융합하고 접종(plate)하여 하이브리도마를 얻었다. 관심 하이브리도마를 간접 ELISA로 스크리닝하고 제한 희석법에 의해 단일 클론 세포 균주로 확립하였다. 생성된 항체-양성 균주를 간접 ELISA로 추가 스크리닝하여 재조합 단백질에 결합하는 하이브리도마를 선택하였다. 대수(logarithmic) 성장기의 하이브리도마 세포를 수집하였다. RNA를 Trizol(Invitrogen, 15596-018)로 추출한 후, 역전사(PrimeScript™ Reverse Transcriptase, Takara #2680A)를 수행하였다. 역전사에 의해 얻어진 cDNA를 마우스 Ig 프라이머 세트(Novagen, TB326 Rev.B 0503)를 사용하여 PCR로 증폭시켰다. 마지막으로, 뮤린 항체(M1)의 서열을 얻었다.
뮤린 모노클로날 항체(M1)의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열은 다음과 같다:
M1 HCVR
QVQLQQSGAELVRPGASVKLSCKALGYSFSDYEMHWVRQTPVHGLEWIGGIHPGSGGSAYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTRLDYGYSWAWFPYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO: 1
M1 LCVR
EILLTQSPAIIVTSPGEKVTITCSASSSVIYMNWYQQKPGSSPKIWIYGISNLASGVPARFSGSGSGTSFSFTINSMEAEDVATYYCQQRSSYPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO: 2
표 2. 뮤린 모노클로날 항체(M1)의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 CDR 서열
명칭 서열 번호
HCDR1 GYSFSDYEMH SEQ ID NO: 3
HCDR2 GIHPGSGGSAYNQKFKG SEQ ID NO: 4
HCDR3 TRLDYGYSWAWFPY SEQ ID NO: 5
LCDR1 SASSSVIYMN SEQ ID NO: 6
LCDR2 GISNLAS SEQ ID NO: 7
LCDR3 QQRSSYPLT SEQ ID NO: 8
실시예 3: 항체의 시험관 내 결합 활성 검출 방법
(1) 시험관내 간접 ELISA 결합 분석:
BCMA His 단백질(Sino Biological Inc., cat# 10620-H08H)을 pH 7.4 PBS로 1㎍/ml의 농도로 희석하고, 96-웰 고 친화성 ELISA 플레이트에 100㎕/웰로 첨가하고, 4℃ 냉장고에서 하룻밤(16 내지 20시간) 배양하였다. 플레이트를 PBST(0.05% Tween-20을 포함하는 pH 7.4 PBS)로 4회 세척한 후, PBST로 희석한 3% BSA(bovine serum albumin) 차단 용액을 150㎕/well로 첨가하고, 차단을 위해 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 블로킹이 완료된 후, 블로킹 용액을 버리고, PBST 완충액으로 플레이트를 4회 세척하였다.
시험할 항체는 초기 농도가 1μM인 3% BSA를 함유하는 PBST로 10배 구배 희석하여 10회 희석하고, 100 μl/웰로 미세역가 플레이트에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 배양 완료 후, 플레이트를 PBST로 4회 세척하였다. 3% BSA를 함유하는 PBST로 희석된 HRP 표지 염소-항-인간 2차 항체(Abcam, cat# ab97225)를 100 ㎕/웰로 첨가하고 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 플레이트를 PBST로 4회 세척한 후, TMB 발색 기질(Cell Signaling Technology, cat#7004S)을 100 ㎕/웰로 첨가하고, 암실에서 1분 동안 실온에서 배양하였다. 정지 용액(Cell Signaling Technology, cat#7002S)을 100 ㎕/웰로 첨가하여 반응을 종결시켰다. 450 nm에서의 흡광도 값은 마이크로플레이트 판독기(BioTek, 모델 Synergy H1)로 판독되었다. 데이터를 분석하였다. 그 결과는 다음 표에 나타낸 바와 같이, 농도-신호 곡선을 작도하여 분석되었다.
표 3. 인간 BCMA 항원에 대한 뮤린 항체의 친화도(EC50 값)
뮤린 항체 인간 BCMA His 항원에 대한 결합의 EC50 (nM)
M1 0.53
(2) 시험관내 세포 결합 분석:
BCMA 발현이 높은 배양 세포(BCMA를 과발현하는 HEK-293T 세포; BCMA를 발현하는 종양 세포, NCI-H929, ATCC 기탁 번호 CRL-9068)를 수집하였다. 세포 밀도를 조정하고 세포를 96-웰 U-바닥 플레이트에 웰당 1×105 내지 2×105 세포로 접종하였다. 플레이트를 1,200g에서 5분 동안 원심분리하고 상층액을 제거하였다. 100㎕의 구배 희석 항체 용액 또는 마우스 면역화된 혈청을 첨가하고 4℃에서 60분 동안 배양하였다. 플레이트를 1,200g에서 5분 동안 원심분리하고 상층액을 제거하였다. 세포를 PBS로 2회 세척하였다. 형광 표지된 이차 항체(PE-GAM 또는 PE-GAH)를 웰당 100㎕로 첨가하고 4℃에서 60분 동안 배양하였다. 플레이트를 1,200g에서 5분 동안 원심분리하고 상층액을 제거하였다. 세포를 PBS로 2회 세척한 다음 PBS에 재현탁시켰다. 신호는 유세포 분석기를 사용하여 검출되고, 결과 분석을 위해 농도 곡선을 작도하였다.
표 4. BCMA를 발현하는 세포에 대한 뮤린 항체의 친화도(EC50 값)
뮤린 항체 HEK-293T/BCMA 세포에 대한 결합의 EC50 (nM) NCI-H929 세포에 대한 결합의 EC50 (nM)
실시예 4: 뮤린 항체의 인간화 실험
뮤린 항-인간 BCMA 모노클로날 항체의 인간화는 당업계의 많은 문헌에 공개된 방법에 따라 수행하였다. 간단히 말해서, 모(뮤린 항체) 불변 도메인은 인간 불변 도메인으로 대체되었다. 인간 생식세포 계열 항체 서열은 뮤린 항체와 인간 항체 간의 동일성에 따라 선택되었다. 뮤린 항체(M1)는 본 발명에서 인간화되었다.
얻어진 뮤린 항체의 VH/VL CDR의 전형적인 구조에 기초하여, 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열을 인간 항체 생식세포 계열 데이터베이스와 정렬하여 높은 동일성을 갖는 인간 생식세포 계열 템플레이트를 얻었다.
뮤린 항체(M1)의 CDR 영역을 선택된 상응하는 인간화 템플레이트에 이식하였다. 그 다음, 뮤린 항체의 3차원 구조를 기반으로, 내장된 잔기, CDR 영역과 직접 상호작용하는 잔기 및 VL 및 VH의 형태에 중대한 영향을 미치는 잔기에 대해 역 돌연변이를 일으키고, 화학적으로 불안정한 아미노산 CDR 영역의 잔기는 최적화되었다. 발현 시험 및 역 돌연변이 수의 비교 후, 인간화 중쇄 가변영역 HCVR의 서열을 선택하고 설계하였으며, 이는 다음과 같다:
HCVR1
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSDYEMHWVRQAPGQGLEWMGGIHPGSGGSAYNQKFKGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRLDYGYSWAWFPYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO: 9
HCVR2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSDYEMHWVRQAPGQGLEWIGGIHPGSGGSAYNQKFKGRVTLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRLDYGYSWAWFPYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO: 10
HCVR3
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSDYEMHWVRQAPGQGLEWIGGIHPGSGGSAYNQKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRLDYGYSWAWFPYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO: 11
[128] 인간화 경쇄 가변 영역(LCVR)의 서열은 다음과 같이 선택되고 설계되었다:
LCVR1
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVIYMNWYQQKPGQAPRLLIYGISNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 12
LCVR2
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVIYMNWYQQKPGQSPKIWIYGISNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 13
LCVR3
EILLTQSPATLSLSPGERATLTCSASSSVIYMNWYQQKPGSSPKIWIYGISNLASGVPARFSGSGSGTSFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 14
설계된 중쇄 및 경쇄 가변영역 서열은 각각 IgG1 중쇄 및 경쇄 불변영역 서열에 연결되었다. 예시적인 중쇄 및 경쇄 불변 영역 서열은 각각 다음과 같다:
IgG1 C
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 22
Ig kappa C
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 23
연결 후 수득된 예시적인 중쇄 및 경쇄 서열은 다음과 같다:
Ab1 HC
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSDYEMHWVRQAPGQGLEWMGGIHPGSGGSAYNQKFKGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTRLDYGYSWAWFPYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 15
Ab2 HC
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSDYEMHWVRQAPGQGLEWIGGIHPGSGGSAYNQKFKGRVTLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRLDYGYSWAWFPYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 16
Ab3 HC
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSDYEMHWVRQAPGQGLEWIGGIHPGSGGSAYNQKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRLDYGYSWAWFPYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 17
Ab1 LC
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVIYMNWYQQKPGQAPRLLIYGISNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 18
Ab2 LC
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVIYMNWYQQKPGQSPKIWIYGISNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 19
Ab3 LC
EILLTQSPATLSLSPGERATLTCSASSSVIYMNWYQQKPGSSPKIWIYGISNLASGVPARFSGSGSGTSFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 20
표 5. 항체 및 중쇄, 경쇄 및 이의 가변 영역의 SEQ ID NOs
인간화
항체 번호		 중쇄/경쇄 번호 중쇄/경쇄 가변 영역 번호
Ab1 SEQ ID NO: 15 SEQ ID NO: 9
SEQ ID NO: 18 SEQ ID NO: 12
Ab2 SEQ ID NO: 16 SEQ ID NO: 10
SEQ ID NO: 19 SEQ ID NO: 13
Ab3 SEQ ID NO: 17 SEQ ID NO: 11
SEQ ID NO: 20 SEQ ID NO: 14
상기 각 인간화 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열에 따라 DNA 단편을 합성하고, pcDNA3.1 발현 벡터(Life Technologies Cat. No. V790-20)에 삽입하였다. 발현 벡터는 형질감염 시약 PEI(Polysciences, Inc. 카탈로그 번호 23966)와 함께 HEK293 세포(Life Technologies 카탈로그 번호 11625019)를 형질 감염시키기 위해 1:2의 비율로 사용하였다. 세포를 CO2 인큐베이터에서 4 내지 5일 동안 배양하였다. 세포 배양액을 수집하고, 원심분리한 후 여과하였다. 그 다음 샘플을 항체 정제 친화성 컬럼에 로딩하였다. 컬럼을 인산염 완충액으로 세척하였다. 샘플을 글리신-염산 완충액(pH 2.7, 0.1M Gly-HCl)으로 용출하고, 1M Tris 염산 pH 9.0으로 중화하고, 인산 완충액으로 투석하여 본 발명의 인간화 항체 단백질을 얻었다.
실시예 5: 시험관내 결합 친화도 및 동역학 분석
각 인간화 항체의 인간 BCMA 항원에 대한 친화도(EC50)는 실시예 3(1)에 따른 시험관 내 간접 ELISA 결합 분석법을 사용하여 결정하였으며, 이는 하기 표 6에 나타낸 바와 같다:
표 6. 인간 BCMA 항원(EC50)에 대한 각 인간화 항체의 친화도
인간화 항체 항원 친화도 EC50 (nM)
Ab1 BCMA-His 0.022
Ab2 0.033
Ab3 0.034
NCI-H929 종양 세포에 대한 각 인간화 항체의 친화도(EC50)는 실시예 3(2)에 따른 시험관내 세포 결합 분석법을 이용하여 결정하였으며, 그 결과는 하기 표 7에 나타낸 바와 같다:
표 7 NCI-H929 종양 세포에 대한 각 인간화 항체의 친화도(EC50)
인간화 항체 세포 친화도 EC50 (nM)
Ab1 NCI-H929 4.6
Ab2 3.5
Ab3 3.9
실시예 6: 항체의 세포내이입
NCI-H929(ATCC 기탁 번호 CRL-9068)를 사용하여 본 발명의 항체가 BCMA에 결합한 후 인간 BCMA와 함께 세포 내로 세포내이입될 수 있는지 여부를 평가하였다. NCI-H929 세포를 트립신으로 분해하고(약 2분 동안 37℃에서 PBS로 1회 세척한 후), 수집하고 미리 냉각된 FACS 완충액에 재현탁시켰다. 세포 농도를 1 x 106 세포/mL로 조정하였다. 1mL의 세포 현탁액을 EP 튜브에 넣고, 1,500 rpm에서 5분간 원심분리한 후, 상층액을 제거하였다. 시험하고자 하는 제조된 항체 1mL를 첨가하여 세포를 재현탁시켰으며, 항체의 최종 농도는 20 ㎍/mL이었다. 세포를 4℃에서 1시간 동안 진탕기에서 배양하고, 원심분리(4℃, 1,500rpm x 5분)하고, 상층액을 버렸다. 세포를 FACS 완충액으로 2회 세척하고 상층액을 제거하였다. 100 μL의 형광 2차 항체 작업 용액을 각 튜브에 첨가하여 세포를 재현탁시켰다. 세포를 4℃에서 30분 동안 진탕기에서 배양하고, 원심분리(4℃, 1,500 rpm x 5분)하고, 상층액을 버렸다. 세포를 FACS 완충액으로 2회 세척하고 상층액을 제거하였다. 미리 가온된 NCI-H929 세포 완전 배지 1.0mL를 각 튜브에 첨가하여 세포를 재현탁하고 완전히 혼합하였다. 세포 현탁액을 4개의 튜브에 분취하고, 튜브 당 200μL씩, 각각 0분 그룹, 블랭크 그룹, 30분 그룹 및 2시간 그룹으로 사용하였다. 0분 그룹과 블랭크 그룹은 얼음 위에 놓고, 나머지 그룹들은 세포내이입을 위해 37℃의 인큐베이터에 각각 30분과 2시간 동안 두었다. 해당 시점에서, EP 튜브를 꺼내 얼음 위에 놓아 5분 동안 미리 냉각시켰다. 모든 처리 그룹을 원심분리하고(4℃, 1,500rpm x 5분) 상층액을 버렸다. 세포를 FACS 완충액으로 1회 세척하고 상층액을 제거하였다. 250 μL 스트립 완충액을 0분 그룹을 제외한 모든 처리 그룹의 EP 튜브에 첨가하였다. 세포를 실온에서 8분 동안 배양한 후 원심분리(4℃, 1,500rpm x 5분)하여 상층액을 버렸다. 세포를 FACS 완충액으로 2회 세척하고 상층액을 제거하였다. 모든 처리군에 100 μL 고정 용액을 첨가하고, 면역염색을 위해 4℃에서 30분 이상 방치한 후 유세포 분석기 DxFlex로 검출하였다. BCMA 항체 세포내이입의 백분율(%) = (각 시점에서의 형광 강도 값 - 블랭크 그룹의 평균 형광 강도 값)/0점에서의 평균 형광 강도 값 - 블랭크 그룹의 평균 형광 강도 값. 그 결과를 하기 표 8에 나타냈다:
표 8. NCI-H929 종양 세포로의 항체의 세포내이입(EC50)
인간화 항체 세포 세포내이입 효율 %
0.5 시간 2 시간
Ab1 NCI-H929 36.6 49.5
Ab2 36.7 48
Ab3 35.5 45.7
J6M0 ND 38.9
ND = 미정
결과는 항-BCMA 항체 J6M0(미국 특허 9,273,141에 기재됨)과 비교하여, 본 발명의 항체가 더 높은 세포내이입 효율을 갖는다는 것을 보여준다.
실시예 7: MC- MMAF에 대한 항체의 콘주게이션
본 발명의 항체는 세포 친화 활성 및 세포내이입 활성을 가지므로, 약물과 결합하여 BCMA-매개 질환을 치료하기 위한 항체-약물 콘주게이트를 형성하기에 적합하다. 본 발명의 항체는 MC-MMAF와 결합되어 항체-약물 콘주게이트를 형성하였다. 결합 공정은 다음 반응식으로 표시되며, 여기서 Ab는 Ab2 또는 Ab3 항체를 나타낸다:
Figure pct00003
제1 단계에서, S-(3-히드록시프로필)티오아세테이트(0.7mg, 5.3mol)를 후에 사용하기 위해 0.9 mL 아세토니트릴 용액에 용해하였다. S-(3-히드록시프로필)티오아세테이트를 함유하는 상기 미리 제조된 아세토니트릴 용액을 항체를 함유하는 아세트산/나트륨 아세테이트 완충액, pH=4.3 (10.35 mg/mL, 9.0 mL, 0.97 mol)에 첨가하였다. 이어서, 시아노수소화붕소 나트륨(14.1mg, 224mol)을 함유하는 수용액 1.0mL를 적가하고, 25℃에서 2시간 동안 진탕 하에 반응시켰다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 탈염하고, Sephadex G25 겔 컬럼(용출 상: 0.05M PBS 용액, pH 6.5)을 사용하여 정제하여 생성물(1f)을 포함하는 용액을 얻었다. 용액을 10 mg/mL로 농축하고 다음 반응에 직접 사용하였다.
제2 단계에서는, 용액 1f(11.0mL)에 2.0M 카르복사미드 염산염 용액 0.35 mL를 첨가하고 25℃에서 30분 동안 진탕시키면서 반응시켰다. 이후 반응 용액을 탈염하고, Sephadex G25 겔 컬럼(용출 상: 0.05 M PBS 용액, pH 6.5)을 사용하여 정제하여 생성물 2f(농도 6.17 mg/mL, 14.7 mL)를 포함하는 용액을 얻었다.
제3 단계에서는, 화합물 MC-MMAF(1.1 mg, 1.2 mol, PCT 특허 WO2005081711에 개시된 방법으로 제조됨)를 0.3 mL 아세토니트릴에 용해시키고, 용액 2f(농도 6.17 mg/mL, 3.0 mL)에 첨가하여 25℃에서 4시간 동안 진탕하면서 반응시켰다. 이후, 반응 용액을 Sephadex G25 겔 컬럼(용출 상: 0.05 M PBS 용액, pH 6.5)을 사용하여 탈염 및 정제하고, 필터를 이용하여 멸균 조건에서 여과하여 생성물 Ab2-MC-MMAF를 얻었다. HIC-HPLC에 의해 결정된 생성물 Ab2-MC-MMAF의 DAR, y의 평균값은 4이었고, PBS 완충액(3.7 mg/mL, 4.7 mL) 중 항체-약물 콘주게이트는 4℃에서 냉장되었다. 상기 방법으로 Ab3-MC-MMAF 생성물을 제조하였다. HIC-HPLC에 의해 결정된 생성물 Ab3-MC-MMAF의 DAR, y의 평균값은 4.1이었고, PBS 완충액(3.5 mg/mL, 5.0 mL) 중 항체-약물 콘주게이트는 4℃에서 냉장되었다.
실시예 8: SN -38에 대한 항체의 콘주게이션
항체-콘주게이트 약물은 다음 결합 공정을 통해 제조되었으며, 여기서 Ab는 Ab2를 나타낸다:
Figure pct00004
제1 단계에서, S-(3-히드록시프로필)티오아세테이트(0.7mg, 5.3mol)를 후에 사용하기 위해 0.9mL 아세토니트릴 용액에 용해하였다. S-(3-히드록시프로필)티오아세테이트를 함유하는 상기 미리 제조된 아세토니트릴 용액을 항체를 함유하는 아세트산/나트륨 아세테이트 완충액, pH=4.3 (10.35 mg/mL, 9.0 mL, 0.97 mol)에 첨가하였다. 이어서, 시아노수소화붕소나트륨(14.1mg, 224 mol)을 함유하는 수용액 1.0 mL를 적가하고, 25℃에서 2시간 동안 진탕 하에 반응시켰다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 탈염하고, Sephadex G25 겔 컬럼(용출 상: 0.05M PBS 용액, pH 6.5)을 사용하여 정제하여 생성물(1h)을 함유하는 용액을 얻었다. 용액을 10 mg/mL로 농축하고 다음 반응에 직접 사용하였다.
제2 단계에서는, 용액 1h(11.0mL)에 2.0M 카르복사미드 염산염 용액 0.35mL를 첨가하고, 25℃에서 30분 동안 진탕하면서 반응시켰다. 이후, 반응 용액을 탈염하고 Sephadex G25 겔 컬럼(용출 상: 0.05M PBS 용액, pH 6.5)을 사용하여 정제하여 생성물(2h)(농도 6.2 mg/mL, 15.0 mL)를 함유하는 용액을 얻었다. 용액을 약 10 mg/mL로 농축하고 다음 반응에 사용하였다.
제3 단계에서는, 화합물 MC-SN-38(1.3 mg, 1.2 mol)을 0.3 mL 아세토니트릴에 용해하고, 2h 용액(농도 6.2 mg/mL, 3.0 mL)에 첨가하고, 25℃에서 4시간 동안 진탕 하에 반응시켰다. 이후, 반응 용액을 Sephadex G25 겔 컬럼(용출상: 0.05 M PBS 용액, pH 6.5)을 사용하여 탈염 및 정제하고, 멸균 조건에서 필터로 여과하여 PBS 완충액(3.7 mg/mL, 4.7 mL)에서 생성물 Ab-SN-38 항체-약물 콘주게이트를 얻은 후, 이를 4℃에서 냉장 보관하였다. 평균값 y는 자외선법으로 결정되었다. 숙신산 나트륨 완충액이 채워진 큐벳을 기준 흡수 셀과 시료측정용 흡수셀에 각각 넣고, 용매 블랭크를 공제한 후 시험용액이 채워진 큐벳을 시료측정 흡수 셀에 넣었다. 280 nm 및 370 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
데이터 처리:
항체 함량(Cmab)은 표준 곡선을 설정하고 280 nm 파장에서 흡광도를 측정함으로써 결정되었고, 소분자 함량(CDrug)는 370 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 결정되었다. 약물 부하 y의 평균 값 = CDrug/Cmab.
상기 방법으로 결정된 항체-약물 콘주게이트 Ab2-SN-38의 DAR y의 평균값은 3.9이었다.
실시예 9: 엑사테칸에 대한 항체의 콘주게이션
Figure pct00005
제1 단계에서, 2a(2g, 17.2mmol)를 75 mL 아세토니트릴에 용해시키고, 탄산칼륨(9.27g, 67.2 mmol), 벤질 브로마이드(20mL, 167.2 mmol) 및 테트라부틸암모늄 요오다이드(620mg, 1.68 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 48시간 동안 교반하고 규조토를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트(20ml)로 린스하였다. 여액을 모으고 감압하에 농축하였다. 얻어진 잔류물을 전개 용매계(C)로 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물 5a(3.2g, 수율 90.1%)를 얻었다.
제2 단계에서, 5a(181.3mg, 0.879mmol) 및 4b(270mg, 0.733mmol)를 반응 플라스크에 첨가하였다. 6 mL 테트라히드로푸란을 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 3회 교체하고, 얼음 물 욕에서 0 내지 5℃로 냉각시켰다. 칼륨 tert-부톡사이드(164 mg, 1.46 mmol)를 첨가하였다. 얼음 욕을 제거하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 40분 동안 교반하였다. 15 mL 얼음물을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(40 mL x 2) 및 클로로포름(20 mL x 5)으로 추출하였다. 유기상을 모으고 농축하였다. 얻어진 잔류물을 디옥산 6 mL에 용해하고, 물 3 mL, 중탄산나트륨(73.8 mg, 0.879 mmol), 9-플루오레닐메틸 클로로포르메이트(190 mg, 0.734 mmol)를 가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 30 mL 물을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL x 3)로 추출하였다. 유기 상을 포화 염화나트륨 용액(30 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과하였다. 여액을 감압하에 농축하였다. 얻어진 잔류물을 전개 용매계(C)를 사용한 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물 5b로서 벤질 10-시클로프로필-1-(9H-플루오렌-9-일)-3,6-디옥소-2,9-디옥사-4,7-디아자운덱-11-카르복실레이트(73 mg, 수율: 19.4%)를 얻었다.
MS m/z(ESI): 515.0 [M+1].
제3 단계에서는, 5b(30mg, 0.058mmol)를 테트라하이드로푸란과 에틸아세테이트의 혼합 용매(V:V=2:1) 6.75mL에 용해하였다. 탄소상 팔라듐(18 mg, 함량 10%, 건조)을 첨가하고, 반응 혼합물을 수소로 3회 교체하고, 실온에서 1시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응 용액을 규조토로 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 린스하였다. 여액을 농축하여 조 생성물 5c, 10-시클로프로필-1-(9H-플루오렌-9-일)-3,6-디옥소-2,9-디옥사-4,7-디아자운덱-11-산(20 mg)을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 반응에 직접 사용하였다.
MS m/z(ESI): 424.9 [M+1].
제4 단계에서, 1b(15mg, 28.2μmol)를 반응 플라스크에 첨가하였다. N,N-디메틸포름아미드 1.5mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 3회 교체하고, 얼음 물 욕에서 0 내지 5℃로 냉각시켰다. 트리에틸아민 한 방울을 첨가하고, 조 생성물 5c(20 mg, 47.1 μmol)를 첨가하고, 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸클로로모르폴린(25.4 mg, 86.2 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 얼음 욕에서 40분 동안 교반하면서 반응시켰다. 15mL 물을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20mL x 3)로 추출하였다. 유기 상을 수집하였다. 유기 상을 포화 염화나트륨 용액(20mL x 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압하에 농축하였다. 수득된 잔류물을 전개 용매계(B)로 박층 크로마토그래피로 정제하여 표제 생성물 5d로서 (9H-플루오렌-9-일)메틸(2-(((1-시클로프로필-2-(((1S,9S))-9-에틸-5-플루오로-9-히드록실-4-메틸-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사히드로-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌로지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-2-옥소에톡시)메틸)아미노)-2-옥소에틸)카바메이트(23.7 mg, 수율: 78.9%)를 얻었다.
MS m/z(ESI): 842.1[M+1].
제5 단계에서는, 5d(30mg, 35.7μmol)를 3mL 디클로로메탄에 용해시켰다. 1.5mL 디에틸아민을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압하에 농축하였다. 1.5mL 톨루엔을 첨가하고 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 이를 2회 반복하였다. 4.5 mL n-헥산을 잔류물에 첨가하고 균질화하였다. 방치한 후, 상층액을 버리고 고체를 유지하였다. 고체 잔류물을 감압 하에 농축하고, 펌핑에 의해 건조하여 조 생성물 5e로서 2-((2-아미노아세트아미도)메톡시)-2-시클로프로필-N-((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록실-4-메틸-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사히드로-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌로지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아세트아미드(23 mg)를 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 반응에 직접 사용하였다.
MS m/z(ESI): 638.0[M+18].
제6 단계에서, 조 생성물 5e(20 mg, 32.3 μmol)를 1 mL N,N-디메틸포름아미드에 용해시키고 아르곤으로 3회 교체하였다. 반응 혼합물을 빙수조에서 0 내지 5℃로 냉각시켰다. 0.5 mL의 4g N,N-디메틸포름아미드 용액(31.8 mg, 67.3 μmol)을 첨가하고, 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸클로로모르폴린(27.8 mg, 94.3 μmol)을 첨가하고 얼음 욕에서 10분 동안 교반하면서 반응시켰다. 얼음 욕을 제거하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반 하에 반응시켜 화합물 5를 생성하였다. 반응 용액을 고성능 액체 크로마토그래피(분리 조건: 컬럼: XBridge Prep C18 OBD 5 at 19*250 mm; 이동 상: A-물(10mmol NH4OAc): B-아세토니트릴, 구배 용리, 유속: 18 ㎖/분)에 의해 정제하였다. 해당 성분을 수집하고, 감압 농축하여 생성물 5-A 및 5-B(3.6 mg, 2.6 mg)를 얻었다.
MS m/z(ESI): 1074.4 [M+1].
단일 구성 화합물 5-A(더 짧은 체류 시간 포함):
UPLC 분석: 체류 시간: 1.14분, 순도: 85%(칼럼: ACQUITY UPLC BEHC18 1.7 um 2.1*50 mm, 이동 상: A-물(5mmol NH4OAc), B-아세토니트릴).
Figure pct00006
단일 구성 화합물 5-B(더 긴 체류 시간 포함):
UPLC 분석: 체류 시간: 1.16분, 순도: 89%(컬럼: ACQUITY UPLC BEHC18 1.7 um 2.1*50 mm, 이동 상: A-물(5mmol NH4OAc), B-아세토니트릴).
Figure pct00007
다른 중간체의 제조방법은 중간체 5를 참고하였다.
트리스(2-카르복시에틸)포스핀(10mM, 0.347mL, 3.47μmol)을 함유하는 제조된 수용액을 37℃에서 항체 Ab2(pH=6.5 0.05M PBS 완충 수용액; 7.3ml, 13.8mg/ml, 0.681 μmol)를 함유하는 PBS 완충 수용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 수조 진탕기에 넣고 37℃에서 3시간 동안 진탕 하에 반응시켰다. 반응을 종료하고, 반응 용액을 수조에서 25℃로 냉각하고, 14.0 ml로 희석한 다음, 후속 반응을 위해 3.3ml의 용액을 취하였다.
화합물 5-A(3.0 mg, 3.72 μmol)를 0.15 mL DMSO에 용해시키고, 상기 용액 3.3 mL에 첨가하였다. 반응 혼합물을 수조 진탕기에 넣고, 25℃에서 3시간 동안 진탕시키면서 반응시켰다. 반응이 종료되었다. 반응 용액을 Sephadex G25 겔 컬럼(용출 상: pH 6.5, 0.05M PBS 완충 수용액, 0.001M EDTA 함유)을 사용하여 탈염 및 정제하여 Ab-Exatecan, Ab2-Exatecan의 PBS 완충액(1.35 mg/mL, 13 mL)을 얻었고, 이를 4℃에서 냉장 보관하였다.
평균값 y는 자외선법으로 결정되었다. 숙신산나트륨 완충액으로 채워진 큐벳을 기준 흡수 셀과 시료 측정용 흡수셀에 각각 넣고, 용매 블랭크를 공제한 후, 시험 용액이 채워진 큐벳을 시료측정 흡수셀에 넣었다. 280 nm 및 370 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
데이터 처리:
항체 함량(Cmab)은 표준 곡선을 설정하고 280 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 결정하였다. 소분자 함량(CDrug)은 370 nm 파장에서 흡광도를 측정함으로써 결정되었다. 약물 부하 y의 평균 값 = CDrug/Cmab.
예시적인 생성물 Ab2-Exatecan에 대해서, 위의 방법으로 7.6으로 결정되었다. Ab2 Exatecan(y=8)의 샘플을 UV-HPLC 정제로 얻었다.
실시예 10: 항체-약물 콘주게이트의 종양 사멸 활성
생체내 형성된 종양에 대한 항체-약물 콘주게이트의 사멸 효과를 추가로 조사하기 위해, 마우스에서 NCI-H929 세포로 이식된 종양을 형성한 후 본 발명의 항체-약물 콘주게이트의 항종양 효과를 평가하였다.
(1) 9×106 NCI-H929 세포를 8주령 면역결핍 누드 마우스(NOD-SCID)에 피하 주사하였다. 항체-약물 콘주게이트 Ab2-MC-MMAF(실시예 7, y=4) 및 Ab2-Exatecan(실시예 9, y=8)의 정맥내 주사는 8일 후, 일주일에 한 번 1 mg/kg의 투여 용량으로 시작하였다. 인간 IgG1 단백질은 1 mg/kg의 투여량으로 대조군으로 사용되었다. 대조군과 투여군 각각에 5마리의 마우스가 있었다. 종양 억제율은 종양 부피를 측정함으로써 계산되었다. 종양 억제율 = 100% - (14일째 투여군의 종양 부피 - 0일째 투여군의 종양 부피) / (14일째 대조군의 종양 부피 - 0일째 대조군의 종양 부피). 실험 결과는 표 9와 같다. 항체-약물 콘주게이트 Ab2-MC-MMAF(실시예 7, y=4) 및 Ab2-Exatecan(실시예 9, y=8)은 둘 모두 종양 억제 효과를 나타낸다.
표 9. 항체-약물 콘주게이트의 종양 사멸 활성
투여 군 종양 억제율
Ab2-MC-MMAF (실시예 7, y=4) 1 mg/kg 29.9%
Ab2-Exatecan (실시예 9, y=8) 1 mg/kg 61.1%
(2) 9×106 NCI-H929 세포를 8주령 면역결핍 누드 마우스(NOD-SCID)에 피하 주사하였다. 항체-약물 콘주게이트 Ab2-MC-MMAF(실시예 7, y=4) 및 Ab3-MC-MMAF(실시예 7, y=4.1)의 정맥내 주사를 8일 후, 주 2회 및 3mg/kg의 투여 용량으로 시작하였다. 인간 IgG1 단백질은 3 mg/kg의 용량으로 대조군으로 사용되었다. 대조군과 투여군 각각에 5마리의 마우스가 있었다. 종양 억제율은 종양 부피를 측정함으로써 계산되었다. 종양 억제율 TGI = 100% - (14일째 투여군의 종양 부피 - 0일째 투여군의 종양 부피) / (14일째 대조군의 종양 부피 - 0일째 대조군의 종양 부피). 실험 결과는 표 10과 같다. Ab2-MC-MMAF(실시예 7, y=4) 및 Ab3-MC-MMAF(실시예 7, y=4.1)는 모두 종양에 대한 사멸 효과를 나타낸다.
표 10. 항체-약물 콘주게이트의 종양 사멸 활성
투여 군 종양 억제율 TGI
Ab2-MC-MMAF (실시예 7, y=4) 3 mg/kg 192%
Ab3-MC-MMAF (실시예 7, y=4.1) 3 mg/kg 175%
SEQUENCE LISTING <110> SHANGHAI HANSOH BIOMEDICAL CO., LTD., JIANGSU HANSOH PHARMACEUTICAL GROUP CO., LTD. <120> ANTI-BCMA ANTIBODY, ANTIGEN-BINDING FRAGMENT THEREOF AND MEDICAL USE THEREOF <130> 702071CPCT <150> CN 201910695597.9 <151> 2019-07-30 <160> 23 <170> SIPOSequenceListing 1.0 <210> 1 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> DOMAIN <222> (1)..(121) <223> Heavy chain variable region of murine mab M1 <400> 1 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Leu Gly Tyr Ser Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Arg Gln Thr Pro Val His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile His Pro Gly Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Leu Asp Tyr Gly Tyr Ser Trp Ala Trp Phe Pro Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 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Lys 450 <210> 16 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> CHAIN <222> (1)..(451) <223> Ab2 HC <400> 16 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile His Pro Gly Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Leu Asp Tyr Gly Tyr Ser Trp Ala Trp Phe Pro Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 17 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> CHAIN <222> (1)..(451) <223> Ab3 HC <400> 17 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile His Pro Gly Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Leu Asp Tyr Gly Tyr Ser Trp Ala Trp Phe Pro Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 18 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> CHAIN <222> (1)..(213) <223> Ab1 LC <400> 18 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ile Tyr Met 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Gly Ile Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 19 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> CHAIN <222> (1)..(213) <223> Ab2 LC <400> 19 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ile Tyr Met 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ile Trp Ile Tyr 35 40 45 Gly Ile Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 20 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> CHAIN <222> (1)..(213) <223> Ab3 LC <400> 20 Glu Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ile Tyr Met 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Ile Trp Ile Tyr 35 40 45 Gly Ile Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 21 <211> 65 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(65) <223> His-tagged human BCMA extracellular region <400> 21 Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15 Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala His His His His His His His His His His 50 55 60 His 65 <210> 22 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> DOMAIN <222> (1)..(330) <223> Heavy chain constant region <400> 22 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 23 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> DOMAIN <222> (1)..(107) <223> Light chain constant region <400> 23 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105

Claims (23)

  1. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로 이루어진 군으로부터 선택된 서열로 나타낸 바와 같은 적어도 하나의 HCDR을 포함하고; 그리고 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 및 SEQ ID NO: 8로 이루어진 군으로부터 선택된 서열로 나타낸 바와 같은 적어도 하나의 LCDR을 포함하는, 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3으로 나타낸 HCDR1, SEQ ID NO: 4로 나타낸 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 5로 나타낸 HCDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 경쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 6으로 나타낸 LCDR1, SEQ ID NO: 7로 나타낸 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 8로 나타낸 LCDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  4. 제1항에 있어서,
    중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3으로 나타낸 바와 같은 HCDR1, SEQ ID NO: 4로 나타낸 바와 같은 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 5로 나타낸 바와 같은 HCDR3를 포함하고; 그리고 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 6으로 나타낸 바와 같은 LCDR1, SEQ ID NO: 7로 나타낸 바와 같은 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 8로 나타낸 바와 같은 LCDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-BCMA 항체가 뮤린 항체, 키메라 항체, 인간 항체 또는 인간화 항체인 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 또는 그들의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하고;
    바람직하게는, 상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4로부터 유래된 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하고;
    보다 바람직하게는, 상기 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 돌연변이 후 ADCC 독성이 강화된 IgG1 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하고; 및
    대안적으로, 상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 22로 나타낸 바와 같은 IgG1 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 κ 사슬, λ 사슬 또는 그의 변이체로부터 유래된 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하고, 바람직하게는 상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23으로 나타낸 바와 같은 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 및 SEQ ID NO: 11로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역, 또는 이들과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 및 SEQ ID NO: 14로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역, 또는 이들과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서,
    상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 및 SEQ ID NO: 17로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄, 또는 이들과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  11. 제8항 또는 제9항에 있어서,
    상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 및 SEQ ID NO: 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄, 또는 이들과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 9로 나타낸 바와 같은 중쇄 가변 영역, 또는 이와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 12로 나타낸 바와 같은 경쇄 가변 영역, 또는 이와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 10으로 나타낸 바와 같은 중쇄 가변 영역, 또는 이와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 13으로 나타낸 바와 같은 경쇄 가변 영역, 또는 이와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    상기 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 11로 나타낸 바와 같은 중쇄 가변 영역, 또는 이와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 14로 나타낸 바와 같은 경쇄 가변 영역, 또는 이와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-BCMA 항체는 SEQ ID NO: 15로 나타낸 바와 같은 중쇄, 또는 이와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 18로 나타낸 바와 같은 경쇄, 또는 이와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄를 포함하거나; 또는
    상기 항-BCMA 항체는 SEQ ID NO: 16으로 나타낸 바와 같은 중쇄, 또는 이와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 19로 나타낸 바와 같은 경쇄, 또는 이와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄를 포함하거나; 또는
    상기 항-BCMA 항체는 SEQ ID NO: 17로 나타낸 바와 같은 중쇄, 또는 이와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 20으로 나타낸 바와 같은 경쇄, 또는 이와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  15. 제14항에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터.
  16. 제15항에 따른 발현 벡터가 도입되거나 발현 벡터를 함유하는 숙주 세포.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 숙주 세포가 박테리아, 효모 또는 포유동물 세포, 바람직하게는 대장균, 피치아 파스토리스, CHO 세포 또는 HEK293 세포인 것을 특징으로 하는 숙주 세포.
  18. 제16항 또는 제17항에 따른 숙주 세포, 바람직하게는 HEK293 세포를 배양하는 단계;
    배양물로부터, 바람직하게는 세포 배양액으로부터 항체를 단리하는 단계; 및
    항체를 정제하는 단계, 바람직하게는 크로마토그래피 방법에 의해 항체를 정제하는 단계를 포함하는 항-BCMA 항체의 제조 방법.
  19. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 뿐만 아니라 제약학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 함유하는 의약 조성물.
  20. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 선택적으로, BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 BCMA에 대한 결합을 검출할 수 있는 하나 이상의 시약을 포함하는 검출 또는 진단 키트.
  21. 세포독성제에 결합된 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하고, 바람직하게는 상기 세포독성제가 MMAF, SN-38 및 Exatecan으로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체-약물 콘주게이트.
  22. BCMA-매개 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 약제로서, 바람직하게는 BCMA-매개 질환 또는 병태가 암 또는 자가면역 질환이고, 상기 암은 바람직하게는 BCMA를 발현하는 암, 보다 바람직하게는 림프종, 백혈병 또는 골수종이고, 가장 바람직하게는 다발성 골수종이고, 자가면역 질환은 바람직하게는 홍반성 루푸스, IgA 신병증 및 류마티스 관절염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제를 제조함에 있어서, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항-BCVA 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제19항에 따른 의약 조성물, 또는 제21항에 따른 항체-약물 콘주게이트의 용도.
  23. BCMA-매개 질환 또는 병태의 검출, 진단 또는 예후를 위한 키트를 제조함에 있어, 바람직하게는 BCMA-매개 질환 또는 병태가 암 또는 자가면역 질환이고, 상기 암은 바람직하게는 BCMA를 발현하는 암, 보다 바람직하게는 림프종, 백혈병 또는 골수종이고, 가장 바람직하게는 다발성 골수종이고, 자가면역 질환은 바람직하게는 홍반성 루푸스, IgA 신병증 및 류마티스 관절염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항-BCVA 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 용도.
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