TW202144017A - 抗體藥物偶聯物及其醫藥用途 - Google Patents
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Abstract
本發明涉及一種抗體藥物偶聯物及其醫藥用途。具體地，涉及一種抗BCMA抗體-藥物偶聯物及其醫藥用途，進一步地，本發明涉及一種包含抗BCMA抗體和抗原結合片段的抗體-藥物偶聯物或其可藥用鹽或溶劑化合物，以及其在製備用於治療BCMA介導的疾病或病症的藥物中的用途和用於疾病檢測和診斷中的用途。
Description
本發明屬於生物醫藥領域，具體地說，本發明涉及抗BCMA抗體偶聯物及其醫藥用途。
B細胞是淋巴細胞，其在自適應體液免疫和特異性識別抗原的抗體的產生中發揮重要的作用。B細胞的三種亞類是幼稚B細胞、記憶B細胞和漿細胞。在VDJ重組的過程，其中DNA的兩種或三種片段選自基因組文庫，並且重組以產生抗體可變結構域的組合陣列，藉由其由不同譜系的B細胞編碼的可變結構域進一步的改變導致至多109種獨特的B細胞譜系，其產生和獨特靶具有特異性的抗體。多種疾病涉及B細胞，B細胞的惡性轉化導致癌症，包括一些淋巴瘤，如多發性骨髓瘤和霍奇金氏淋巴瘤。自身免疫性疾病也會涉及到B細胞，包括系統性紅斑狼瘡(SLE)和IgA腎病。涉及B細胞的癌症和自身免疫性疾病可被認為B細胞功能異常，因此控制這類疾病的可能的策略是使用靶向病理B細胞的抗體。
BCMA(CD269或TNFRSF17)是TNF受體超家族的成員，其是對配體BAFF(B細胞激活因子)和APRIL(增殖誘導配體)的非糖基化的內在膜受體。BCMA和它的相應配體具有調節體液免疫、B細胞發
育和穩態等的不同作用。BCMA由扁桃體記憶B細胞和由生髮中心B細胞表達，在脾臟、淋巴結、胸腺、腎上腺和肝臟均可以檢測到，並且多種B細胞系的分析表明在BCMA在成熟後的表達水平增加。
針對BCMA的抗體描述於例如Gras M-P.等Int Immunol.7(1995)1093-1106、WO200124811、WO200124812、WO2010104949和WO2012163805中。針對BCMA的抗體及其用於治療淋巴瘤和多發性骨髓瘤的用途例如敘述於WO2002066516和WO2010104949中。WO2013154760涉及包含BCMA識別部分和T-細胞激活部分的嵌合抗原受體。
在US9273141提供了一種能夠內化的特異性結合BCMA和抑制BAFF和/或APRIL對BCMA的結合的抗原結合蛋白，並提供了包含該抗原結合蛋白與細胞毒性劑的綴合物。
本發明的目的在於提供一種抗BCMA抗體藥物偶聯物，或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為通式(A)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，
Ab-(L
2
-L
1
-D)
y
(A)
其中，
D是細胞毒性藥物；
L1、L2是接頭單元；
y選自1至20的數；
Ab為抗BCMA抗體或其抗原結合片段，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和和抗體輕鏈可變區，其中抗體重鏈可變區包含至少1個選自以下序列所示的HCDR：SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；和抗體輕鏈可變區包含至少1個選自以下序列所述的LCDR：SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。
在本發明一個較佳方案中，該抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中抗BCMA抗體或其抗原結合片段的重鏈可變區包含：SEQ ID NO：3所示的HCDR1、SEQ ID NO：4所示的HCDR2和SEQ ID NO：5所示的HCDR3。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段的輕鏈可變區包含：SEQ ID NO：6所示的LCDR1、SEQ ID NO：7所示的LCDR2和SEQ ID NO：8所示的LCDR3。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段的重鏈可變區包含：SEQ ID NO：3所示的HCDR1、SEQ ID NO：4所示的HCDR2和SEQ ID NO：5所示的HCDR3；以及該輕鏈可變區包含：SEQ ID NO：6所示的LCDR1、SEQ ID NO：7所示的LCDR2和SEQ ID NO：8所示的LCDR3。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中抗BCMA抗體或其抗
原結合片段的CDR序列可以與原CDR序列相比，發生1至3個優化抗體活性、抗體穩定性或降低免疫原性的胺基酸突變。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段為鼠源抗體或其抗原結合片段、嵌合抗體或其抗原結合片段、人抗體或其抗原結合片段或人源化抗體或其抗原結合片段。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含人IgG1或其變體、IgG2或其變體、IgG3或其變體或IgG4或其變體的重鏈恆定區。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物，該Ab抗體或其抗原結合片段進一步包含人IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含胺基酸突變後具有增強的ADCC毒性的人IgG1重鏈恆定區。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含如SEQ ID NO：22所示的重鏈恆定區。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含源自人抗體κ鏈、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區，較佳地，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含源自人抗體κ鏈的輕鏈恆定區。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含如SEQ ID NO：23所示的輕鏈恆定區。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自以下序列所示的重鏈可變區：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含與以下序列相比具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈可變區：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11。
在本發明一個較佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自以下序列所示的輕鏈可變區：SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含與以下序列相比具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈可變區：SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14。
在本發明一個較佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段含有如下序列所示的重鏈：SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17。
在本發明一個較佳方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含與以下序列相比具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈：SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17。
在本發明一個較佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段含有選自如下序列所示的輕鏈：SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20。
本發明一個較佳方案中，如本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含與以下序列相比具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈：SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO：9所示的重鏈可變區和SEQ ID NO：12所示的輕鏈可變區。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區選自SEQ ID NO：9，或與SEQ ID NO：9相比具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性，該輕鏈可變區選自SEQ ID NO：12或與SEQ ID NO：12相比具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO：10所示的重鏈可變區和SEQ ID NO：13所示的輕鏈可變區。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區選自SEQ ID NO：10，
或與SEQ ID NO：10相比具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性，該輕鏈可變區選自SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13相比具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體包含SEQ ID NO：11所示的重鏈可變區和SEQ ID NO：14所示的輕鏈可變區。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區選自SEQ ID NO：11，或與SEQ ID NO：11相比具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性，該輕鏈可變區選自SEQ ID NO：14或與SEQ ID NO：14相比具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體包含SEQ ID NO：15所示的重鏈和SEQ ID NO：18所示的輕鏈。
包含SEQ ID NO：15所示的重鏈和SEQ ID NO：18所示的輕鏈的抗BCMA抗體，即為Ab1。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈和輕鏈，該重鏈選自SEQ ID NO：15，或與SEQ ID NO：15相比具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性，該輕鏈選自SEQ ID NO：18，或與SEQ ID NO：18相比具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體包含SEQ ID NO：16所示的重鏈和SEQ ID NO：19所示的輕鏈。
包含SEQ ID NO：16所示的重鏈和SEQ ID NO：19所示的輕鏈的抗BCMA抗體，即為Ab2。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈和輕鏈，該重鏈選自SEQ ID NO：16，或與SEQ ID NO：16相比具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性，該輕鏈選自SEQ ID NO：19，或與SEQ ID NO：19相比具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體包含SEQ ID NO：17所示的重鏈和SEQ ID NO：20所示的輕鏈。
包含SEQ ID NO：17所示的重鏈和SEQ ID NO：20所示的輕鏈的抗BCMA抗體，即為Ab3。
在本發明一個更佳方案中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈和輕鏈，該重鏈選自SEQ ID NO：17，或與SEQ ID NO：17相比具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性，該輕鏈選自SEQ ID NO：20，或與SEQ ID NO：20相比具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性。
在本發明一個實施方案中，該細胞毒性藥物選自毒素、化療藥物、抗生素、放射性同位素和核溶酶。
在本發明較佳的實施方案中，該細胞毒性藥物選自抑制細胞分裂的微管蛋白抑制劑或DNA拓撲異構酶抑制劑；較佳DM1、DM3、DM4、喜樹鹼、SN-38、MMAF或MMAE；更佳微管蛋白抑制劑MMAE或MMAF，或者DNA拓撲異構酶抑制劑SN-38。
在本發明進一步佳的實施方案中，該細胞毒性藥物選自：
在本發明一個較佳的實施方案中，該細胞毒性藥物選自喜樹鹼衍生物，較佳依喜替康：
在本發明一個更佳的實施方案中，該細胞毒性藥物為依喜替康衍生物，較佳地，該依喜替康衍生物為化合物2-A：
在本發明的一些實施方案中，該抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為通式(I)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，
其中，
L1、L2是接頭單元；
y為選自1至8的整數，較佳為2至4的數；
Ab選自如上述定義的抗BCMA抗體或其抗原結合片段。
在本發明的一些實施方案中，根據本發明抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，
其中，
L1、L2是接頭單元：
y為選自1至8的數，較佳為2至8的數，進一步為2至6的數，更佳3至6的數；
Ab選自如上述定義的抗BCMA抗體或其抗原結合片段。
在本發明較佳的實施方案中，根據本發明抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(I-A)所示的抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物：
在本發明較佳的實施方案中，根據本發明抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(I-B)所示的抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物：
根據本發明的抗BCMA抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(II)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物：
其中，
L1、L2是接頭單元；
y為選自1至8的數，較佳為2至4的數；
Ab選自如上述定義的BCMA抗體或其抗原結合片段。
在本發明較佳的實施方案中，根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(II-1)所示的抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物：
在本發明較佳的實施方案中，根據本發明抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(II-A)所示的抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物：
在本發明較佳的實施方案中，根據本發明抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(II-B)所示的抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物：
根據本發明的抗BCMA抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(III)所示的抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，
其中，
L1、L2是接頭單元；
y為選自1至10的數，較佳為2至8的數，更佳4至8的數；
Ab選自如上述定義的BCMA抗體或其抗原結合片段。
在本發明一些實施方案中，該L1如通式(B)所示：
其中，
M1為-CR1R2-；
R1和R2相同或不同，R1和R2各自獨立的選自氫、烷基、鹵素、羥基或胺基；
n選自0~5的整數，較佳1、2或3。
在本發明較佳的實施方案中，L1的雜環端與L2相連。
在本發明一些實施方案中，該L2如以下通式(C)所示：
其中，
M2為-CR4R5-；
R3選自氫、鹵素、羥基、胺基、烷基、烷氧基和環烷基：
R4和R5相同或不同，R4和R5各自獨立的選自氫、烷基、鹵素、羥基或胺基；
m選自0至5的整數，較佳1、2或3。
在本發明較佳的實施方案中，L2的S端與接頭單元L1相連。
在本發明進一步較佳的實施方案中，如通式(I)、通式(I-A)或通式(I-B)，所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其具有如上述通式(B)所定義的連接單元L1和上述通式(C)所定義的連接單元L2。
在本發明進一步較佳的實施方案中，如通式(II-A)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其具有如上述通式(C)所定義的連接單元L2。
在本發明的一些實施方案中，該L2如通式(D)所示：
-K1-K2-K3-K4- (D)
其中，
K1為
，s選自2至8的整數，進一步選為4至8的整數，更較佳為4至6的整數；
K2為-NR1(CH2CH2O)pCH2CH2C(O)-、-NR1(CH2CH2O)pCH2C(O)-、-S(CH2)pC(O)-或單鍵，p選自1至20的整數，較佳1至6的整數；
R1選自氫、氘、羥基、胺基、烷基、鹵素、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；
K3為四肽殘基，較佳地，該四肽殘基由選自兩個或多個的苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸、天冬胺酸中的胺基酸形成的肽殘基；更較佳為GGFG的四肽殘基；
K4為-NR2(CR3R4)t-，R2、R3或R4各自獨立地為氫、氘、羥基、胺基、烷基、鹵素、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基，t選自1或2，
接頭單元-L2-的K1端與Ab相連，K4端與L1相連。
在本發明更較佳的實施方案中，K1為
，s為5；
K2為鍵；
K3為GGFG的四肽殘基；
K4為-NR2(CR3R4)t-，R2、R3或R4各自獨立地為氫、氘、羥基、胺基、C1-6烷基、鹵素、C1-6鹵烷基、C1-6氘代烷基和C1-6羥烷基，t為1或2，
接頭單元-L2-，其K1端與Ab相連，K4端與L1相連。
在本發明一些實施方案中，L1選自鍵、-O-(CRaRb)m-CR5R6-C(O)-、-O-CR5R6-(CRaRb)m-、-O-CR5R6-、-NH-(CRaRb)m-CR5R6-C(O)-或-S-(CRaRb)m-CR5R6-C(O)-；
Ra和Rb各自獨立地選自氫、氘、鹵素或烷基；
R5為鹵烷基或環烷基；
R6選自氫、鹵烷基或環烷基；
或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成環烷基；
m選自0、1、2、3或4。
較佳地，L1的O端與接頭單元L2相連。
在本發明較佳的實施方案中，該L1如通式(E)所示：
其中，R5選自鹵烷基或環烷基，R6選自氫、鹵烷基或環烷基，或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成環烷基；
較佳地，R5選自C1-6鹵烷基或C3-6環烷基，R6選自氫、C1-6鹵烷基或環烷基，或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成C3-6環烷基；
m選自0至4的整數，
較佳地，通式(E)選自以下取代基：
在本發明較佳的實施方案中，該-L2-L1-選自以下結構：
K2為鍵；
K3為GGFG的四肽殘基；
R5為鹵烷基或C3-6環烷基；
R6選自氫、鹵烷基或C3-6環烷基；
或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成C3-6環烷基；
R2、R3或R4各自獨立地選自氫或烷基；
s選自2至8的整數；較佳地，s選自4、5或6的整數；
m選自0至4的整數；
較佳地，-L2-L1-選自以下結構：
在本發明較佳的實施方案中，根據本發明抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(IV)所示的抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物：
其中，
W選自C1-8烷基、C1-8烷基-環烷基或1至8個原子的直鏈雜烷基，該雜烷基包含1至3個選自N、O或S的雜原子，任選地，其中該C1-8烷基、環烷基和直鏈雜烷基各自獨立地進一步被鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；
K2選自-NR1(CH2CH2O)p1CH2CH2C(O)-、-NR1(CH2CH2O)p1CH2C(O)-、-S(CH2)p1C(O)-或鍵，R1選自氫、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基，p1選自1至20的整數；
K3為由2至7個胺基酸構成的肽殘基，胺基酸可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，該取代基為一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基；
R2選自氫、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；
R3和R4各自獨立地選自氫、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；
R5選自鹵素、鹵烷基、氘代烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基；
R6選自氫、鹵素、鹵烷基、氘代烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基；
或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成環烷基或雜環基；
m選自0至4的整數；
y為選自1至10的數，y是小數或整數；
Ab選自如上述定義的抗BCMA抗體或其抗原結合片段。
在本發明較佳的實施方案中，根據本發明抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(IV-A)所示的抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物：
在本發明較佳的實施方案中，根據本發明抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為如通式(IV-A)所示的抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中，
R5選自鹵烷基或C3-6環烷基；
R6選自氫、鹵烷基或C3-6環烷基；
或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成C3-6環烷基；
R2、R3或R4各自獨立地選自氫或烷基；
s選自2至8的整數；
m選自0至4的整數。
在本發明更佳的實施方案中，根據本發明的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，通式(IV-A)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物選自以下結構：
根據本發明的一些實施方案，該抗體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物選自以下化合物，
在本發明較佳的方案中，該抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其選自如下化合物：
其中，y選自2至10，較佳4至8，更佳6至8，進一步佳7至8，最佳6或8；或者y選自1至10的數，較佳為2至10的數，進一步為2至6的數，更佳3至6的數，最佳6。
在一個較佳的實施方案中，本發明涉及製備如通式(IV)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物的方法，其包括以下步驟：
Ab還原後，與通式(F)偶聯反應，得到通式(IV)所示的化合物；
其中，
Ab為如上述定義的抗BCMA抗體或其抗原結合片段；
W、K2、K3、R2~R6、m和y如通式(IV)中所定義。
在一個較佳的實施方案中，該通式(F)為通式(F-1)所示的化合物：
或其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式，或其可藥用的鹽，
其中，K2、K3、R2~R6、s和m如前述-L2-L1-中所定義。
在一個較佳的實施方案中，通式(F)或通式(F-1)所示的化合物選自：
另一方面，本發明提供一種醫藥組成物，其包含上述抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，和一種或多種可藥用的賦形劑、稀釋劑或載體。
另一方面，本發明提供一種醫藥用途，本發明涉及抗BCMA抗體-藥物偶聯物或該抗體-藥物偶聯物藥學上可接受的鹽或溶劑化合物或其醫藥組成物在用於治療或預防BCMA介導的疾病或病症的用途。
另一方面，本發明提供一種醫藥用途，本發明涉及抗BCMA抗體-藥物偶聯物或該抗體-藥物偶聯物藥學上可接受的鹽或溶劑化合物或其醫藥組成物在用於製備治療或預防BCMA介導的疾病或病症的藥物中的用途。
在本發明一個較佳的方案中，該BCMA介導的疾病或病症為癌症或自身免疫疾病，其中該癌症較佳為表達BCMA的癌症，更佳淋巴瘤、白血病或骨髓瘤，最佳多發性骨髓瘤；該自身免疫疾病選自紅斑狼瘡，IgA腎病和風濕性關節炎。
本發明的抗體藥物偶聯物及其可藥用鹽或溶劑化合物體外和體內腫瘤抑制作用明顯，對正常細胞或組織的毒性低，具有良好的安全性，對血清中相關配體及可溶性BCMA均具有較好的競爭抑制效果；體外具有較好的藥物穩定性，便於長時間保存和運輸；同時具有良好的體內代謝活性，體內藥效時間長，臨床應用前景廣闊。
發明詳述
一、術語
為了更容易理解本發明，以下具體定義了某些技術和科學術語。除顯而易見在本文件中的它處另有明確定義，否則本文使用的所有其
它技術和科學術語都具有本發明所屬領域的一般技術人員通常理解的含義。
本發明所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.Biol.Chem，243，p3558(1968)中所述。
本發明所述的術語“抗體”指免疫球蛋白，是由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈藉由鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結構。免疫球蛋白重鏈恆定區的胺基酸組成和排列順序不同，故其抗原性也不同。據此，可將免疫球蛋白分為五類，或稱為免疫球蛋白的同種型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相應的重鏈分別為μ鏈、δ鏈、γ鏈、α鏈和ε鏈。同一類Ig根據其鉸鏈區胺基酸組成和重鏈二硫鍵的數目和位置的差別，又可分為不同的亞類，如IgG可分為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。輕鏈藉由恆定區的不同分為κ鏈或λ鏈。五類Ig中第每類Ig都可以有κ鏈或λ鏈。
在本發明中，本發明所述的抗體輕鏈可變區可進一步包含輕鏈恆定區，該輕鏈恆定區包含人源或鼠源的κ、λ鏈或其變體。
在本發明中，本發明所述的抗體重鏈可變區可進一步包含重鏈恆定區，該重鏈恆定區包含人源或鼠源的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體。
抗體重鏈和輕鏈靠近N端的約110個胺基酸的序列變化很大，為可變區(V區)；靠近C端的其餘胺基酸序列相對穩定，為恆定區(C區)。可變區包括3個高變區(HVR)和4個序列相對保守的骨架區(FR)。3個高變區決定抗體的特異性，又稱為互補性決定區(CDR)。每條輕鏈可變區(VL)和重鏈可變區(VH)由3個CDR區4個FR區組成，從胺基端到羧基端依次排列的順序為：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。輕鏈的3個CDR區指LCDR1、LCDR2，和LCDR3；
重鏈的3個CDR區指HCDR1、HCDR2和HCDR3。本發明該抗體或抗原結合片段的VL區和VH區的CDR胺基酸殘基在數量和位置符合已知的Kabat編號規則和Kabat或ABM定義規則(http：//bioinf.org.uk/abs/)。
術語“抗原呈遞細胞”或“APC”是在其表面上展示與MHC複合的外來抗原的細胞。T細胞利用T細胞受體(TCR)識別這種複合物。APC的實例包括但不限於樹突細胞(DC)、外周血單個核細胞(PBMC)、單核細胞、B淋巴母細胞和單核細胞衍生的樹突細胞。
術語“抗原呈遞”是指APC捕獲抗原和使它們能夠被T細胞識別的過程，例如作為MHC-I/MHC-II偶聯物的組分。
術語“BCMA”包括由細胞天然表達的BCMA的任何變體或同種型。本發明的抗體可與得自非人物種的BCMA交叉反應。作為另一種選擇，該抗體也可以是人BCMA特異性的，可不表現出與其他物種的交叉反應性。BCMA或其任何變體或同種型可從天然表達它們的細胞或組織中分離而得，或使用本領域通用以及本文所述的那些技術藉由重組技術產生。較佳地，抗BCMA抗體靶向具有正常糖基化模式的人源BCMA。
術語“重組人抗體”包括藉由重組方法製備、表達、創建或分離的人抗體，所涉及的技術和方法在本領域中是熟知的，諸如：
1.從人免疫球蛋白基因的轉基因、轉染色體動物(例如小鼠)或由其製備的融合瘤中分離的抗體；
2.從經轉化以表達抗體的宿主細胞如轉染瘤中分離的抗體；
3.從重組組合人抗體文庫中分離的抗體；以及
4.藉由將人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列等方法製備、表達、創建或分離的抗體。
此類重組人抗體包含可變區和恆定區，這些區域利用特定的由種系基因編碼的人種系免疫球蛋白序列，但也包括隨後諸如在抗體成熟過程中發生的重排和突變。
術語“鼠源抗體”在本發明中為根據本領域知識和技能製備的對人BCMA的單株抗體。製備時用BCMA抗原注射試驗對象，然後分離表達具有所需序列或功能特性的抗體的融合瘤。在本發明一個較佳的實施方案中，該鼠源BCMA抗體或其抗原結合片段，可進一步包含鼠源κ、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區，或進一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其變體的重鏈恆定區。
術語“人抗體”包括具有人種系免疫球蛋白序列的可變和恆定區的抗體。本發明的人抗體可包括不由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基(如藉由體外隨機或位點特異性誘變或藉由體內體細胞突變所引入的突變)。然而，術語“人抗體”不包括這樣的抗體，即其中已將衍生自另一種哺乳動物物種(諸如小鼠)種系的CDR序列移植到人骨架序列上(即“人源化抗體”)。
術語“人源化抗體(humanized antibody)”，也稱為CDR移植抗體(CDR-grafted antibody)，是指將小鼠的CDR序列移植到人的抗體可變區框架中產生的抗體。人源化抗體可以克服嵌合抗體由於攜帶大量小鼠蛋白成分，從而誘導的強烈的免疫應答反應的缺點。為避免在免疫原性下降的同時引起活性的下降，可對該人抗體可變區可進行最少反向突變，以保持活性。
術語“嵌合抗體(chimeric antibody)”，是將鼠源性抗體的可變區與人抗體的恆定區融合而成的抗體，可以減輕鼠源性抗體誘發的免疫應答反應。建立嵌合抗體，要選建立分泌鼠源性特異性單抗的融合瘤，
然後從小鼠融合瘤細胞中選殖可變區基因，再要據需要選殖人抗體的恆定區基因，將小鼠可變區基因與人恆定區基因連接成嵌合基因後插入人載體中，最後在真核工業系統或原核工業系統中表達嵌合抗體分子。人抗體的恆定區可選自人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其變體的重鏈恆定區，較佳包含人源IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區，或者使用胺基酸突變後增強ADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用)毒性的IgG1重鏈恆定區。
術語“抗原結合片段”是指抗體的抗原結合片段及抗體類似物，其通常包括至少部分母體抗體(parental antibody)的抗原結合區或可變區(例如一個或多個CDR)。抗體片段保留母體抗體的至少某些結合特異性。通常，當基於莫耳來表示活性時，抗體片段保留至少10%的母體結合活性。較佳地，抗體片段保留至少20%、50%、70%、80%、90%、95%或100%或更多的母體抗體對靶標的結合親和力。抗原結合片段實例包括但不限於：Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、線性抗體(linear antibody)、單鏈抗體、奈米抗體、結構域抗體和多特異性抗體。工程改造的抗體變體綜述於Holliger和Hudson，2005，Nat.Biotechnol.23：1126-1136中。
“Fab片段”由一條輕鏈和一條重鏈的CH1及可變區組成。Fab分子的重鏈不能與另一個重鏈分子形成二硫鍵。
“Fc”區含有包含抗體的CH2和CH3結構域的兩個重鏈片段。兩個重鏈片段由兩個或多個二硫鍵並藉由CH3結構域的疏水作用保持在一起。
“Fab’片段”含有一條輕鏈和包含VH結構域和CH1結構域以及CH1和CH2結構域之間區域的一條重鏈的部分，由此可在兩個Fab’片段的兩條重鏈之間形成鏈間二硫鍵以形成F(ab’)2分子。
“F(ab’)2片段”含有兩條輕鏈和兩條包含CH1和CH2結構域之間的恆定區的部分的重鏈，由此在兩條重鏈間形成鏈間二硫鍵。因此，F(ab’)2片段由藉由兩條重鏈間的二硫鍵保持在一起的兩個Fab’片段組成。
“Fv區”包含來自重鏈和輕鏈二者的可變區，但缺少恆定區。
術語“多特異性抗體”按其最廣義使用，涵蓋具有多表位特異性的抗體。這些多特異性抗體包括但不限於：包含重鏈可變區VH和輕鏈可變區VL的抗體，其中該VH-VL單元具有多表位特異性；具有兩個或多個VL和VH區的抗體，每個VH-VL單元與不同的靶點或同一個靶點的不同表位結合；具有兩個或更多個單可變區的抗體，每個單可變區與不同的靶點或同一個靶點的不同的表位結合；全長抗體、抗體片段、雙抗體(diabodies)、雙特異性雙抗體和三抗體(triabodies)、己共價或非共價連接在一起的抗體片段等。
術語“單鏈抗體”是由抗體的重鏈可變區VH和輕鏈可變區VL藉由一段連接肽連接而成的單鏈重組蛋白，它是具有完全抗原結合位點的最小抗體片段。
術語“結構域抗體片段”是僅含有重鏈可變區或輕鏈可變區鏈的具有免疫學功能的免疫球蛋白片段。在某些情況下，兩個或多個VH區與肽接頭共價連接以形成二價結構域抗體片段。二價結構域抗體片段的兩個VH區可靶向相同或不同抗原。
本發明的術語“與BCMA結合”，指能與人BCMA相互作用。
本發明的術語“抗原結合位點”指本發明抗體或抗原結合片段識別的三維空間位點。
術語“表位”是指抗原上與免疫球蛋白或抗體特異性結合的位點。表位可以由相鄰的胺基酸、或藉由蛋白質的三級折疊而並列的不相鄰的胺基酸形成。由相鄰的胺基酸形成的表位通常在暴露於變性溶劑後保持，而藉由三級折疊形成的表位通常在變性溶劑處理後喪失。表位通常以獨特的空間構象包括至少3至15個胺基酸。確定什麼表位由給定的抗體結合的方法在本領域中是熟知的，包括免疫印跡和免疫沉澱檢測分析等。確定表位的空間構象的方法包括本領域中的技術和本文所述的技術，例如X射線晶體分析法和二維核磁共振等。
本發明所用的術語“特異性結合”、“選擇性結合”是指抗體與預定的抗原上的表位結合。通常，當使用人BCMA作為分析物並使用抗體作為配體，在儀器中藉由表面等離子體共振(SPR)技術測定時，抗體以大約低於10-7M或甚至更小的平衡解離常數(KD)與預定的抗原結合，並且其與預定抗原結合的親和力是其與預定抗原或緊密相關的抗原之外的非特異性抗原(如BSA等)結合的親和力的至少兩倍。術語“識別抗原的抗體”在本文中可以與術語“特異性結合的抗體”互換使用。
術語“交叉反應”是指本發明的抗體與來自不同物種的BCMA結合的能力。例如，結合人BCMA的本發明的抗體也可以結合另一物種的BCMA。交叉反應性是藉由在結合測定(例如SPR和ELISA)中檢測與純化抗原的特異性反應性，或與生理表達BCMA的細胞的結合或功能性相互作用來測量。確定交叉反應性的方法包括如本文所述的標準結合測定，例如表面等離子體共振(SPR)分析，或流式細胞術。
術語“抑制”或“阻斷”可互換使用，並涵蓋部分和完全抑制/阻斷這兩者。配體的抑制/阻斷較佳地降低或改變無抑制或阻斷的情況下發生配體結合時出現活性的正常水平或類型。抑制和阻斷也旨在包括與抗
BCMA抗體接觸時，與未與抗BCMA抗體接觸的配體相比，任何可測量的配體結合親和力降低。
術語“抑制生長”(例如涉及細胞)旨在包括細胞生長任何可測量的降低。
術語“誘導免疫應答”和“增強免疫應答”可互換使用，並指免疫應答對特定抗原的剌激(即，被動或適應性的)。針對誘導CDC或ADCC的術語“誘導”是指剌激特定的直接細胞殺傷機制。
本發明中所述的“ADCC”，即antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用，是指表達Fc受體的細胞藉由識別抗體的Fc段直接殺傷被抗體包被的靶細胞。可藉由對IgG上Fc段的修飾，增強或降低降低或消除抗體的ADCC效應功能。該修飾指在抗體的重鏈恆定區進行突變。
生產和純化抗體和抗原結合片段的方法在現有技術中熟知和能找到，如冷泉港的抗體實驗技術指南，5-8章和15章。如，小鼠可以用人BCMA或其片段免疫，所得到的抗體能被覆性、純化，並且可以用一般的方法進行胺基酸測序。抗原結合片段同樣可以用一般方法製備。發明所述的抗體或抗原結合片段用基因工程方法在非人源的CDR區加上一個或多個人FR區。人FR種系序列可以從ImMunoGeneTics(IMGT)的網站http：//imgt.cines.fr得到，或者從免疫球蛋白雜誌，2001ISBN012441351上獲得。
本發明工程化的抗體或抗原結合片段可用一般方法製備和純化。相應抗體的cDNA序列可以選殖並重組至GS表達載體。重組的免疫球蛋白表達載體可以穩定地轉染CHO細胞。作為一種更推薦的現有技術，哺乳動物類表達系統會導致抗體的糖基化，特別是在FC區的高度保
守N端。藉由表達與人源抗原特異性結合的抗體得到穩定的純株。陽性的純株在生物反應器的無血清培養基中擴大培養以生產抗體。分泌了抗體的培養液可以用一般技術純化、收集。抗體可用一般方法進行過濾濃縮。可溶的混合物和多聚體，也可以用一般方法去除，比如分子篩、離子交換。得到的產物需立即冷凍，如-70℃，或者凍乾。
本發明的抗體指單株抗體。本發明所述的單株抗體(mAb)，指由單一的純株細胞株得到的抗體，該細胞株不限於真核的，原核的或噬菌體的純株細胞株。單株抗體或抗原結合片段可以用如融合瘤技術、重組技術、噬菌體展示技術、合成技術(如CDR-grafting)、或其它現有技術進行重組得到。
“施用”、“給予”和“處理”當應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組合物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。“施用”、“給予”和“處理”可以指例如治療、藥物代謝動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸，以及試劑與流體的接觸，其中該流體與細胞接觸。“施用”、“給予”和“處理”還意指藉由試劑、診斷、結合組合物或藉由另一種細胞體外和離體處理例如細胞。“處理”當應用於人、獸醫學或研究受試者時，是指治療處理、預防或預防性措施，研究和診斷應用。
“治療”意指給予患者內用或外用治療劑，諸如包含本發明的任一種抗體，該患者具有一種或多種疾病症狀，而已知該治療劑對這些症狀具有治療作用。通常，在受治療患者或群體中以有效緩解一種或多種疾病症狀的量給予治療劑，無論是藉由誘導這類症狀退化還是抑制這類症狀發展到任何臨床右測量的程度。有效緩解任何具體疾病症狀的治療劑的量
(也稱作“治療有效量”)可如多種因素變化，例如患者的疾病狀態、年齡和體重，以及藥物在患者產生需要療效的能力。藉由醫生或其它專業衛生保健人士通常用於評價該症狀的嚴重性或進展狀況的任何臨床檢測方法，可評價疾病症狀是否已被減輕。盡本發明的實施方案(例如治療方法或製品)在緩解每個患都有的目標疾病症狀方面可能無效，但是根據本領域已知的任何統計學檢驗方法如Student t檢驗、卡方檢驗、依據Mann和Whitney的U檢驗、Kruskal-Wallis檢驗(H檢驗)、Jonckheere-Terpstra檢驗和Wilcoxon檢驗確定，其在統計學顯著數目的患者中應當減輕目標疾病症狀。
整個說明書和申請專利範圍中使用的術語“基本上由……組成”或其變形表示包括所有所述元件或元件組，並且任選包括與該元件類似或不同性質的其它元件，該其它元件非顯著改變指定給藥方案、方法或組合物的基本性質或新性質。
本發明所述的應用於某個對象的術語“天然存在的”是指這樣的事實，即該對象可在自然界中發現。例如存在於可從自然界來源分離得到的生物體(包括病毒)、且未經人工在實驗室中有意修飾的多肽序列或多核苷酸序列即是天然存在的。
“有效量”包含足以改善或預防醫字病症的症狀或病症的量。有效量還意指足以允許或促進診斷的量。用於特定患者或獸醫學受試者的有效量可依據以下因素而變化：如待治療的病症、患者的總體健康情況、給藥的方法途徑和劑量以及副作用嚴重性。有效量可以是避免顯著副作用或毒性作用的最大劑量或給藥方案。
“外源性”指要據背景在生物、細胞或人體外產生的物質。
“內源性”指根據背景在細胞、生物或人體內產生的物質。
“同一性”是指兩個多核苷酸序列之間或兩個多肽之間的序列相似性。當兩個比較序列中的位置均被相同鹼基或胺基酸單體亞基佔據時，例如如果兩個DNA分子的每一個位置都被腺嘌呤佔據時，那麼該分子在該位置是同源的。兩個序列之間的同一性百分率是兩個序列共有的匹配或同源位置數除以比較的位置數×100%的函數。例如，在序列最佳比對時，如果兩個序列中的10個位置有6個匹配或同源，那麼兩個序列為60%同源。一般而言，當比對兩個序列而得到最大的同一性百分率時進行比較。
本文使用的表述“細胞”、“細胞系”和“細胞培養物”可互換使用，並且所有這類名稱都包括其後代。因此，單詞“轉化體”和“轉化細胞”包括原代受試細胞和由其衍生的培養物，而不考慮轉移數目。還應當理解的是，由於故意或非有意的突變，所有後代在DNA含量方面不可能精確相同。包括具有與最初轉化細胞中篩選的相同的功能或生物學活性的突變後代。“任選”或“任選地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。例如，“任選包含1至3個抗體重鏈可變區”意味著特定序列的抗體重鏈可變區可以但不必須存在。
“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文該抗體或其抗原結合片段，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
“可藥用鹽”是指本發明抗體-藥物偶聯物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，其具有應有的生物活性。本發明抗體-藥物偶聯物至少含有一個胺基，因此可以與酸形成鹽，可藥用鹽的非限制性實例包括：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、琥珀酸鹽、抗壞血酸鹽、草酸鹽、硝酸鹽、梨酸鹽、磷酸氫
鹽、磷酸二氫鹽、水楊酸鹽、檸檬酸氫鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、甲酸鹽、苯酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽。
“溶劑化合物”指本發明的抗體-藥物偶聯物化合物與一種或多種溶劑分子形成可藥用的溶劑化合物，溶劑分子的非限制性實例包括：水、乙醇、乙腈、異丙醇、乙酸乙酯。
“細胞毒性藥物”在用於本發明時指抑制細胞的功能和/或引起細胞死亡或破壞的物質。
“微管蛋白抑制劑”是指藉由抑制微管蛋白的聚合或促進微管蛋白的集合而干擾細胞有絲分裂過程，從而發揮抗腫瘤效果的一類化合物。其非限制性實例包括：美登素類、卡利奇黴素、紫杉烷類、長春新鹼、秋水仙鹼、尾海兔素/奧瑞他汀/單甲基奧瑞他汀E(MMAE)/單甲基奧瑞他汀F(MMAF)。
“接頭”指包含是抗體共價附著於藥物的共價鍵或原子鏈的化學模塊。接頭的非限制性實例包括：亞芳基、亞雜芳基、PEG、聚亞甲基氧基、琥珀酸酯、琥珀醯胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯和己醯胺。
“藥物載荷”(DAR)由y表示，即通式(A)中每個抗體的平均細胞毒性藥物數。本發明中的藥物荷載範圍可以為每個抗體1至20個細胞毒性藥物(D)。通式(A)的抗體-藥物偶聯物為偶聯有一定範圍(1至20個)細胞毒性藥物的抗體的集合。來自偶聯反應的抗體-藥物偶聯物中的藥物載荷(DAR)可藉由一般手段表徵，諸如質譜，HPLC和ELISA等。藉由這些手段可以測定抗體-藥物偶聯物在y值上的定量分佈。
二、縮寫
MC為6-馬來醯亞胺基己醯基
MMAF為單甲基奧瑞他汀E的變體，其在分子的C-末端處有苯丙胺酸(MW 731.5)
以下結合實施例用於進一步描述本發明，但這些實施例並非限制著本發明的範圍。本發明實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照一般條件，如冷泉港的抗體技術實驗手冊，分子選殖手冊；或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑，為市場購買的一般試劑。
實施例1抗原準備
編碼帶His標簽的人BCMA胞外區(BCMA-His)蛋白由SinoBiologics公司合成(Cat No.：10620-H08H)。
BCMA-His序列：
實施例2鼠融合瘤及抗體序列的獲得
用人抗原BCMA-His進行動物免疫，共5隻Balb/c和5隻A/J小鼠，雌性，10週齡，使用Sigma完全弗氏佐劑(CFA)和Sigma不完全弗氏佐劑(IFA)，免疫原和免疫佐劑以1：1的比例充分混合乳化，製成穩定“油包水”液體；注射劑量25μg/200μL/小鼠。
表1.免疫方案
對免疫小鼠血清使用如實施例3所述的間接ELISA法評估血清效價及結合細胞表面抗原的能力，對照效價檢測情況(大於10萬倍稀釋度)決定啟動細胞融合。選擇血清效價、親和力和FACS結合強的免疫小鼠進行一次終免疫後處死小鼠，取脾細胞和SP2/0骨髓瘤細胞融合後鋪板獲得融合瘤，藉由間接ELISA篩選到目標融合瘤，並藉由有限稀釋法建株為單純株細胞株。得到的陽性抗體株進一步使用間接ELISA進行篩選，從而選定結合重組蛋白的融合瘤。收集對數生長期融合瘤細胞，用Trizol(Invitrogen,15596-018)提取RNA並反轉錄(PrimeScriptTM Reverse Transcriptase，Takara #2680A)。將反轉錄得到的cDNA採用小鼠Ig-引子組(Novagen，TB326 Rev.B 0503)進行PCR擴增後測序，最終得到鼠源抗體M1的序列。
鼠單抗M1的重鏈和輕鏈可變區序列如下：
M1 HCVR
M1 LCVR
表2.鼠單抗M1的重鏈和輕鏈可變區CDR序列
實施例3抗體的體外結合活性檢測方法
(1)體外間接ELISA結合實驗：
用pH7.4的PBS將BCMA His蛋白(Sino Biological Inc.，cat# 10620-H08H稀釋至1μg/ml濃度，以100μl/孔的體積加入96孔高親和力酶標板中，於4℃冰箱孵育過夜(16-20小時)。用PBST(pH7.4 PBS
含0.05%Tween-20)洗板4次後，加入用PBST稀釋的3%牛血清白蛋白(BSA)封閉液150μl/孔，室溫孵育1小時進行封閉。封閉結束後，棄去封閉液，並用PBST緩衝液洗板4次。
用含3%BSA的PBST稀釋待測抗體，1μM起始，10倍梯度，10個劑量，以100μl/孔加到酶標板中，放於室溫孵育1小時。孵育結束後用PBST洗板4次，加入100μl/孔用含3%BSA的PBST稀釋的HRP標記羊抗人二抗(Abcam，cat#ab97225)，室溫孵育1小時。用PBST洗板4次後，加入100μl/孔TMB顯色底物(Cell Signaling Technology，cat#7004S)，於室溫避光孵育1分鐘，加入100μl/孔終止溶液(Cell Signaling Technology，cat#7002S)終止反應，用酶標儀(BioTek，型號Synergy H1)在450nm處讀取吸收值，分析數據。做濃度信號值曲線分析結果，如下表所示：
表3.鼠抗體對人BCMA抗原的親和力(EC50值)
(2)體外細胞結合實驗：
收集培養好的BCMA高表達細胞(過表達BCMA的HEK-293T細胞和表達BCMA的腫瘤細胞，NCI-H929)，調節細胞密度後分鋪於96孔U底板，每孔1×105至2×105個細胞。1200g，5min離心，去上清，添加100ul已梯度稀釋的抗體溶液或小鼠免疫血清，4℃度孵育60min；
1200g，5min離心，去上清，PBS洗細胞2次後，添加螢光標記二抗(PE-GAM：山羊抗鼠單抗；或PE-GAH：山羊抗人單抗)100ul每孔，4℃度孵育60min。1200g，5min離心去上清。PBS洗細胞2次後，再重新懸浮於PBS，使用流式細胞計數儀檢測信號，並作濃度曲線分析結果。
表4.鼠抗體對表達BCMA的細胞的親和力(EC50值)
實施例4小鼠抗體人源化實驗
鼠源抗人BCMA單株抗體人源化如本領域許多文獻公示的方法進行。簡言之，使用人恆定結構域替代親本(鼠源抗體)恆定結構域，根據鼠源抗體和人抗體的同一性選擇人種抗體序列，本發明將鼠源抗體M1進行人源化。
在所獲得的鼠源抗體VH/VL CDR典型結構的基礎上，將重、輕鏈可變區序列與人源抗體種系數據庫比較，獲得同一性高的人種系模板。
將鼠源抗體M1的CDR區移植到選擇好的相應人源化模板上。然後，以鼠源抗體的三維結構為基礎，對包埋殘基、與CDR區有直接相互作用的殘基，以及對VL和VH的構象有重要影響的殘基進行回復突變，並對CDR區化學不穩定胺基酸殘基優化，經表達測試和回復突變數量對比，選擇和設計了人源化重鏈可變區HCVR的序列，序列如下：
HCVR1
HCVR2
HCVR3
選擇和設計了人源化輕鏈可變區LCVR的序列，序列如下：
LCVR1
LCVR2
LCVR3
將設計的重鏈和輕鏈可變區序列分別與人IgG1重鏈和人抗體輕鏈恆定區序列連接，示例性的重鏈和輕鏈恆定區序列分別如下所示：
IgG1 C
Ig kappa C
得到重鏈和輕鏈序列如下：
Ab1 HC
Ab2 HC
Ab3 HC
Ab1 LC
Ab2 LC
Ab3 LC
表5.抗體及其重鏈、輕鏈、可變區的序列編號
根據以上各人源化抗體輕鏈和重鏈的胺基酸序列合成cDNA片段，插入到pcDNA3.1表達載體(Life Technologies Cat.No.V790-20)中。將表達載體和轉染試劑PEI(Polysciences，Inc.Cat.No.23966)以1：2的比例轉染HEK293細胞(Life Technologies Cat.No.11625019)，並置於CO2孵育箱中孵育4至5天。收取細胞培養液，離心過濾後上樣到抗體純化親和管柱，經磷酸緩衝液洗管柱、甘胺酸鹽酸緩衝液(pH2.7 0.1M Gly-HCl)沖提、1M Tris鹽酸pH 9.0中和、以及磷酸緩衝液透析，得到本發明的人源化抗體蛋白。
實施例5體外結合親和力和動力學實驗
使用實施例3(1)中所述的體外間接ELISA結合實驗測定的各人源化抗體對人BCMA抗原的親和力(EC50)如下表所示：
表6.各人源化抗體對人BCMA抗原的親和力(EC50)
使用實施例3(2)中所述的體外細胞結合實驗測定的各人源化抗體對NCI-H929腫瘤細胞的親和力(EC50)如下表所示：
表7.各人源化抗體對NCI-H929腫瘤細胞的親和力(EC50)
實施例6抗體的內吞作用
檢測本發明抗體結合BCMA後是否能夠和人BCMA共同內吞入細胞內，用NCI-H929(ATCC保藏號CRL-9068)進行評估。NCI-H929細胞使用胰酶消化(先用PBS清洗一遍，37℃、2min左右)，收集細胞並用預冷的FACS緩衝液重新懸浮，調整細胞濃度為1×106個/mL。取EP管，加入1mL細胞懸液，1500rpm離心5分鐘後去上清，加入1mL已經配製好的待測抗體重新懸浮細胞，抗體的終濃度均為20μg/ml，4度搖床孵育1h，離心棄上清(4℃、1500rpm×5min)，FACS緩衝液洗滌兩次，
去上清。每管加入100μL螢光二抗工作液重新懸浮細胞，4℃搖床孵育30min，離心棄上清(4℃、1500rpm×5min)，FACS緩衝液洗滌兩次，去上清。每管加入1.0mL預熱的NCI-H929細胞完全培養基重新懸浮細胞並混勻，分裝為4管，每管200μL，分別為0min組，空白組，30min組和2h組，取出0min及blank置於冰上，其餘放置於37℃培養箱，分別內吞30min、2h，在相應時間點取出EP管，置於冰上預冷5min，所有處理組離心棄上清(4℃、1500rpm×5min)，用FACS緩衝液洗滌一次，去上清。去除0min組外所有處理組EP管中加入250μL剝離緩衝液(strip buffer)，室溫孵育8min，離心棄上清(4℃、1500rpm×5min)，FACS緩衝液洗滌兩次，去上清。所有處理組加入100μL免疫染色固定液，4℃放置30min以上，用流式細胞儀DxFlex進行檢測。BCMA抗體內吞百分比=(各個時間點螢光強度值-空白組平均螢光強度值)/零點時的平均螢光輕度值-空白組平均螢光強度值。結果見下表：
表8.抗體在NCI-H929腫瘤細胞中的內吞作用(EC50)
結果顯示，與抗BCMA抗體J6M0(描述於美國專利9,273,141)相比，本發明抗體具有更高的內吞效率，能夠快速內化。
實施例7抗體偶聯MC-MMAF
本發明抗體具有細胞親和活性且具有細胞內吞活性，使得本發明抗體適合與藥物偶聯形成抗體-藥物偶聯物用於治療BCMA介導的疾病。偶聯過程見下式，其中Ab代表Ab2或Ab3抗體：
第一步將硫代乙酸S-(3-醛丙基)酯(0.7mg，5.3mol)溶解於0.9mL乙腈溶液備用。向抗體pH=4.3的乙酸/乙酸鈉緩衝液(10.35mg/mL,9.0mL，0.97mol)加入上述預製的硫代乙酸S-(3-羥基丙基)酯的乙腈溶液，然後滴加1.0mL的氰基硼氫化鈉(14.1mg，224mol)的水溶液，於25℃下振盪反應2小時。反應結束後，用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH6.5的0.05M的PBS溶液)後，得產物1f溶液，濃縮到10mg/mL後直接進行下一步反應。
第二步，向1f溶液(11.0mL)中加入0.35mL的2.0M鹽酸羧胺溶液，於25℃下振盪反應30分鐘後，將反應液用Sephadex G25凝膠
管柱脫鹽純化(沖提相：pH6.5的0.05M的PBS溶液)後，得到產物2f溶液(濃度6.17mg/mL，14.7mL)。
第三步，將化合物MC-MMAF(1.1mg，1.2mol，採用PCT專利W02005081711公開的方法製備得到)溶解於0.3mL乙腈中，加入2f溶液(濃度6.17mg/mL，3.0mL)中，於25℃下振盪反應4小時後，將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH6.5的0.05M的PBS溶液)後，在無菌條件下用濾器過濾後得到產物Ab-MC-MMAF。使用HIC-HPLC測定產物ADC2(Ab2-MC-MMAF)的DAR平均值y為4，將抗體-藥物偶聯物的PBS緩衝液(3.7mg/mL，4.7mL)於4℃冷藏。採用上述方法製備得到產物ADC3(Ab3-MC-MMAF)。使用HIC-HPLC測定產物ADC3(Ab3-MC-MMAF)的DAR平均值y為4.1，將抗體-藥物偶聯物的PBS緩衝液(3.5mg/mL，5.0mL)於4℃冷藏。
實施例8抗體偶聯SN-38
藉由以下偶聯過程製備抗體偶聯藥物，其中Ab代表Ab2：
第一步將硫代乙酸S-(3-醛丙基)酯(0.7mg，5.3mol)溶解於0.9mL乙腈溶液備用。向抗體pH=4.3的乙酸/乙酸鈉緩衝液(10.35mg/mL,9.0mL，0.97mol)加入上述預製的硫代乙酸S-(3-羥基丙基)酯的乙腈溶液，然後滴加1.0mL的氰基硼氫化鈉(14.1mg，224mol)的水溶液，於25℃下振盪反應2小時。反應結束後，用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH6.5的0.05M的PBS溶液)後，得產物1h溶液，濃縮到10mg/mL後直接進行下一步反應。
第二步，向1h溶液(11.0mL)中加入0.35mL的2.0M鹽酸羧胺溶液，於25℃下振盪反應30分鐘後，將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH6.5的0.05M的PBS溶液)後，得到產物2h溶液(濃度6.2mg/mL，15.0mL)，濃縮到約10mg/mL後用於下一步反應。
第三步，將化合物MC-SN-38(1.3mg，1.2moL)溶解於0.3ml的乙腈中，加入2h溶液(濃度6.2mg/mL，3.0mL)中，於25℃下振盪反應4小時後，將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH6.5的0.05M的PBS溶液)後，在無菌條件下用濾器過濾後得到產物Ab-SN-38抗體-藥物偶聯物的PBS緩衝液(3.7mg/mL，4.7mL)，於4℃冷藏。採用紫外法測定平均值y。將裝有琥珀酸鈉緩衝液的比色皿分別置於參比吸收池和樣品測定吸收池中後，扣除溶劑空白後，再將裝有供試品溶液的比色皿置於樣品測定吸收池中，測定280nm和370nm處吸光度。
數據處理：
藉由建立標準曲線，測定280nm波長下的吸收，確定抗體含量Cmab，測定370nm波長下的吸收，確定小分子含量CDrug。
藥物載量平均值y=CDrug/Cmab。
藉由上述方法測定Ab2-SN-38抗體-藥物偶聯物的DAR平均值y為3.9。
實施例9抗體偶聯依喜替康衍生物
第一步，將2a(2g，17.2mmol溶於75mL乙腈中，依次加入碳酸鉀(9.27g，67.2mmol)、溴化苄(20mL，167.2mmol)和四丁基碘化銨(620mg，1.68mmol)。將反應液室溫攪拌48小時，藉由矽藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯(20ml)淋洗，合併濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以展開劑體系C純化所得殘餘物，得到產物5a(3.2g，產率：90.1%)。
第二步，將5a(181.3mg,0.879mmol)和4b(270mg，0.733mmol)加入反應瓶，加入6mL四氫呋喃，氬氣置換三次，冰水浴降溫至0至5℃，加入叔丁醇鉀(164mg，1.46mmol)，撤去冰浴，升至室溫攪拌40分鐘，加入15mL冰水，用乙酸乙酯(40mL×2)和氯仿(20mL×5)萃取，合併有機相並濃縮。所得殘餘物溶於6mL二氧六環中，加入3mL水，加入碳酸氫鈉(73.8mg，0.879mmol)和氯甲酸-9-芴甲酯(190mg，0.734
mmol)，室溫攪拌2小時。加入30mL水，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有機相用飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用矽膠管柱色譜法以展開劑體系C純化所得殘餘物，得到產物5b 10-環丙基-1-(9H-芴-9-基)-3,6-二側氧-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一-11-酸苄酯(73mg，產率：19.4%)。
MS m/z(ESI)：515.0[M+1]。
第三步，將5b(30mg，0.058mmol)溶於6.75mL四氫呋喃和乙酸乙酯(V：V=2：1)混合溶劑中，加入鈀碳(18mg，含量10%，乾型)，氫氣置換三次，室溫攪拌反應1小時。反應液用矽藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯淋洗，濾液濃縮，得到粗品產物5c 10-環丙基-1-(9H-芴-9-基)-3,6-二側氧-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一-11-酸(20mg)，產品不經純化直接進行下一步反應。
MS m/z(ESI)：424.9[M+1]。
第四步，將1b(15mg，28.2μmol)加入反應瓶，加入1.5mL N,N-二甲基甲醯胺，氬氣置換三次，冰水浴降溫至0至5℃，滴加一滴三乙胺，加入粗品5c(20mg，47.1μmol)，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(25.4mg，86.2μmol)，冰浴攪拌反應40分鐘。加入15mL水，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合併有機相。有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL×2)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用薄層層析以展開劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物5d(9H-芴-9-基)甲基(2-(((1-環丙基-2-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4'：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧乙基)胺基甲酸酯(23.7mg，產率：78.9%)。
MS m/z(ESI)：842.1[M+1]。
第五步，將5d(30mg，35.7μmol)溶於3mL二氯甲烷中，加入1.5mL二乙胺，室溫攪拌2小時。反應液減壓濃縮，加入1.5mL甲苯並減壓濃縮，重複兩次。向殘餘物中加入4.5mL正己烷打漿，靜置後傾倒出上層清液，保留固體。將固體殘餘物減壓濃縮，油泵拉幹得到粗品產物5e 2-((2-胺基乙醯胺基)甲氧基)-2-環丙基-N-((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4'：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)乙醯胺(23mg)，產品不經純化直接用於下一步反應。
MS m/z(ESI)：638.0[M+18]。
第六步，將粗品5e(20mg，32.3μmol)溶於1mL N,N-二甲基甲醯胺，氬氣置換三次，冰水浴降溫至0至5℃，加入4g(31.8mg，67.3μmol)的0.5mL N,N-二甲基甲醯胺溶液，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(27.8mg，94.3μmol)，冰浴攪拌反應10分鐘，撤去冰浴，升至室溫攪拌1小時，反應生成化合物5。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH4OAc)：B-乙腈，梯度沖提，流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到產物5-A和5-B(3.6mg，2.6mg)。
MS m/z(ESI)：1074.4[M+1]。
單一構型化合物5-A(較短保留時間)：
UPLC分析：保留時間1.14分鐘，純度：85%(色譜管柱：ACQUITY UPLC BEHC18 1.7um 2.1*50mm，流動相：A-水(5mmol NH4OAc)，B-乙腈)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.60(t,1H),8.51-8.49(d,1H),8.32-8.24(m,1H),8.13-8.02(m,2H),8.02-7.96(m,1H),7.82-7.75(m,1H),7.31(s,1H),7.26-7.15(m,4H),6.99(s,1H),6.55-6.48(m,1H),5.65-5.54(m,1H),5.41(s,2H),5.35-5.15(m,3H),4.74-4.62(m,2H),4.54-4.40(m,2H),3.76-3.64(m，4H),3.62-3.48(m,2H),3.20-3.07(m,2H),3.04-2.94(m,2H),2.80-2.62(m,2H),2.45-2.30(m,3H),2.25-2.15(m,2H),2.15-2.04(m,2H),1.93-1.78(m,2H),1.52-1.39(m,3H),1.34-1.12(m,5H),0.87(t,3H),0.64-0.38(m,4H)。
單一構型化合物5-B(較長保留時間)：
UPLC分析：保留時間1.16分鐘，純度：89%(色譜管柱：ACQUITY UPLC BEHC18 1.7um 2.1*50mm，流動相：A-水(5mmol NH4OAc)，B-乙腈)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.68-8.60(m,1H),8.58-8.50(m,1H),8.32-8.24(m,1H),8.13-8.02(m,2H),8.02-7.94(m,1H),7.82-7.75(m,1H),7.31(s,1H),7.26-7.13(m,4H),6.99(s,1H),6.55-6.48(m,1H),5.60-5.50(m,1H),5.41(s,2H),5.35-5.15(m,3H),4.78-4.68(m,1H),4.60-4.40(m,2H),3.76-3.58(m,4H),3.58-3.48(m,1H),3.20-3.10(m,2H),3.08-2.97(m,2H),2.80-2.72(m,2H),2.45-2.30(m,3H),2.25-2.13(m,2H),2.13-2.04(m,2H),2.03-1.94(m,2H),1.91-1.78(m,2H),1.52-1.39(m,3H),1.34-1.12(m,5H),0.91-0.79(m,3H),0.53-0.34(m,4H)。
其他中間體的製備方法參考中間體5。
在37℃條件下，向抗體Ab2的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；7.3ml，13.8mg/ml，0.681μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(10mM，0.347mL，3.47μmol)，置於水
浴振盪器，於37℃振盪反應3小時，停止反應；將反應液用水浴降溫至25℃，稀釋至14.0ml，並取出3.3ml溶液往下反應。
將化合物5-A(3.0mg，3.72μmol)溶解於0.15mL DMSO中，加入到上述3.3ml溶液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到Ab-依喜替康衍生物的示例性產物ADC1(化合物26)的PBS緩衝液(1.35mg/mL，13mL)，於4℃冷凍儲存。
採用紫外法測定平均值y。將裝有琥珀酸鈉緩衝液的比色皿分別置於參比吸收池和樣品測定吸收池中後，扣除溶劑空白後，再將裝有供試品溶液的比色皿置於樣品測定吸收池中，測定280nm和370nm處吸光度。
數據處理：
藉由建立標準曲線，測定280nm波長下的吸收，確定抗體含量Cmab，測定370nm波長下的吸收，確定小分子含量CDrug。
藥物載量平均值y=CDrug/Cmab。
藉由以上方法測定示例性產物ADC1(化合物26，為7.6)。藉由UV-HPLC純化獲得ADC1-1(y=4)、ADC1-2(y=6)、ADC1-3(y=8)的樣品。
其他抗體藥物偶聯物的製備方法參考ADC1。
實施例10抗體藥物偶聯物對NCI-H929腫瘤細胞的殺傷作用
為檢測本發明的抗體-藥物偶聯物對腫瘤細胞的殺傷作用，用NCI-H929細胞(ATCC保藏號CRL-9068)進行評估。收集NCI-H929細胞，離心計數後用完全培養基調整細胞密度為0.44×106個/mL，鋪於白
色96孔板中間60個孔，每孔90μL，細胞數為40000，其餘邊孔加入100μL PBS，細胞板放入37℃，5%CO2培養箱培養過夜。實驗第二天，用PBS在96孔V型底板中配製抗體-藥物偶聯物溶液，濃度為15μg/mL起始，3倍稀釋，9個濃度，配製完成後加入到白色96孔板中，每孔10μL，兩複孔，將細胞板放入37℃，5%CO2培養箱中繼續培養72小時。實驗第五天，檢測讀數：取出細胞培養板，平衡至室溫後，每孔加入50μL CTG溶液(Promega G7573)，振盪混勻後放於暗處靜置10分鐘後，使用酶標儀的發光程序進行檢測。使用GraphPad Prims軟體計算EC50值。實驗結果如下表所示：
表9.抗體偶聯藥物對NCI-H929腫瘤細胞的殺傷活性(EC50)
實施例11抗體藥物偶聯物的抑瘤效果
為進一步研究抗體-藥物偶聯物對體內形成的腫瘤的殺傷作用，在小鼠體內用NCI-H929細胞形成移植瘤後，評估本發明抗體-藥物偶聯物的抗腫瘤效果。將9x106個NCI-929細胞注射到8週齡的免疫缺陷的
裸鼠(NOD-SCID)皮下，8天後開始藉由靜脈注射注射抗體-藥物偶聯物ADC2(Ab2-MC-MMAF，實施例7，y=4)和ADC1-3(實施例9，y=8)，每1週注射一次，劑量為1mg/kg。對照採用人IgG1蛋白，劑量為1mg/kg。對照組或給藥組每組5隻小鼠。藉由測量腫瘤體積計算抑瘤率。抑瘤率=100%-(第14天給藥組腫瘤體積-第0天給藥組腫瘤體積)/(第14天對照組腫瘤體積-第0天對照組腫瘤體積)。實驗結果如表10所示。抗體-藥物偶聯物ADC2(Ab2-MC-MMAF，實施例7，y=4)和ADC1-3(實施例9，y=8)均顯示抑瘤活性。
表10.抗體-藥物偶聯物的抑瘤作用
實施例12抗體藥物偶聯物的體內腫瘤殺傷作用
為進一步研究抗體-藥物偶聯物對體內形成的腫瘤的殺傷作用，在小鼠體內用NCI-H929細胞形成移植瘤後，評估本發明抗體-藥物偶聯物的抗腫瘤效果。將9x106個NCI-929細胞注射到8週齡的免疫缺陷的裸鼠(NOD-SCID)皮下，8天後開始藉由靜脈注射抗體-藥物偶聯物ADC2(實施例7，y=4)和ADC3(實施例7，y=4.1)，每1週註射2次，劑量為3mg/kg。對照採用人IgG1蛋白，劑量為3mg/kg。對照組或給藥組每組5隻小鼠。藉由測量腫瘤體積計算抑瘤率。抑瘤率TGI=100%-(第14天給藥組腫瘤體積-第0天給藥組腫瘤體積)/(第14天對照組腫瘤體積-第0天對照組腫瘤體積)。實驗結果如表11所示，ADC2(實施例7，y=4)和ADC3(實施例7，y=4.1)均顯示對腫瘤的殺傷作用。
表11.抗體-藥物偶聯物對體內腫瘤的殺傷活性
實施例13抗體藥物偶聯物腫瘤細胞殺傷活性
為檢測本發明的抗體-藥物偶聯物對腫瘤細胞的殺傷作用，採用BCMA高表達水平細胞株NCI-H929(ATCC保藏號CRL-9068)和BCMA低表達水平細胞株RPMI-8226(ATCC，cat：CCL-155)進行評估。收集NCI-H929、RPMI-8226細胞，離心計數後用完全培養基調整細胞密度為1×105個/mL，鋪於白色96孔板中間60個孔，每孔100μl，細胞數為10000細胞/孔，邊緣孔加入100μl/孔DPBS，細胞板放入37℃，5% CO2培養箱培養過夜。次日，用完全培養基在96孔V型底板中配製抗體-藥物偶聯物工作溶液，濃度為133uM起始，5倍稀釋，9個濃度，配製完成後加入到白色96孔板中，每孔80μl，兩複孔，將細胞板放入37℃，5% CO2培養箱中繼續培養72小時。實驗第五天，檢測讀數：取出細胞培養板，平衡至室溫後，每孔加入90μl CellTiter-Glo®細胞活力檢測試劑(Promega，Cat#：G7573)，振盪混勻後放於暗處靜置10分鐘後，使用酶標儀的發光程序進行檢測。使用GraphPad Prims軟體計算IC50值。實驗結果如下表所示：
表12.抗體偶聯藥物對腫瘤細胞的殺傷作用
實驗結果表明BCMA-ADC對腫瘤細胞的體外殺傷活性與BCMA在細胞表面的表達水平成正相關，對NCI-H929殺傷效果明顯強於對RPMI-8226殺傷；隨著偶聯小分子毒素的數量增加，對腫瘤細胞的殺傷活性隨之提高。
實施例14抗體藥物偶聯物PK研究
利用BALB/c小鼠模型評價抗BCMA體藥物偶聯物BCMA-ADC在小鼠體內的藥物代謝情況。將平均體重為18至22g，18至22週齡的人BALB/c轉基因小鼠(上海西普爾-必凱實驗動物有限公司)隨機分為2組，每組3隻動物，受試BCMA體藥物偶聯物均以10mpk，IV，單次的方式給藥，PBS溶媒作為陰性對照組，分別在1、2、4、8、24、48、96、144、240、小時採血分離血漿，凍存於-20℃冰箱，之後利用重組人BCMA蛋白包被高親和力96孔瓶底板，加入稀釋的待測血漿樣品，再利用HRP標記二抗檢測小鼠血漿中BCMA-ADC濃度，並利用WinNonlin軟體非房室模型，血管內給藥的公式分析其PK參數。實驗結果詳見下表：
表13.抗體偶聯藥物在小鼠體內的藥物代謝動力學參數
綜合半衰期t1/2、暴露量、血藥最高濃度達峰時間等參數，ADC1-2顯示出良好的體內代謝活性。
實施例15抗體藥物偶聯物的細胞殺傷活性
為檢測本公開的抗體-藥物偶聯物(ADC)及依喜替康衍生物(實施例9，化合物(5-A))對腫瘤細胞的細胞毒作用，採用BCMA高表達水平細胞株NCI-H929(ATCC保藏號CRL-9068)進行評估。
收集NCI-H929細胞，離心計數後，用完全培養基調整細胞密度為2×105個/mL，鋪於白色96孔板中間60個孔，每孔50μL，細胞數為10000細胞/孔，邊緣孔加入100μL/孔DPBS，細胞板放入37℃，5% CO2培養箱培養過夜。次日，用完全培養基在96孔V型底板中配製抗體-藥物偶聯物工作溶液，使依喜替康衍生物化合物(5-A)與ADC按相等莫耳量進行稀釋，最高工作濃度為300nM，5倍稀釋，9個濃度，配製完成後加入到白色96孔板中，每孔100μL，兩複孔，將細胞板放入37℃，5% CO2
培養箱中繼續培養72小時。實驗第五天，檢測讀數：取出細胞培養板，平衡至室溫後，每孔加入75μL CellTiter-Glo®細胞活力檢測試劑(Promega，Cat#：G7573)，振盪混勻後放於暗處靜置10分鐘後，使用酶標儀的發光程序進行檢測。使用GraphPad Prims軟體計算IC50值。使用陰性抗體IgG1與依喜替康衍生物化合物(5-A)的抗體藥物偶聯物(ADC1-4，y=4)作為陰性對照。實驗結果如下表所示：
表14.測試化合物對腫瘤細胞毒殺傷作用
藉由比較細胞毒細胞殺傷IC50，ADC1-1(y=4)與化合物(5-A)相比，約為1/115(0.88/101)倍，實驗結果表明：本發明抗體藥物偶聯物對腫瘤細胞的體外細胞毒殺傷活性對NCI-H929殺傷效果明顯強於小分子毒素化合物(5-A)的殺傷效果。
實施例16依喜替康衍生物的製備
向2e(4mg，7.53μmol)中加入2mL乙醇和0.4mL N,N-二甲基甲醯胺，氬氣置換三次，冰水浴冷卻至0至5℃，滴加0.3mL N-甲基嗎啉，攪拌至反應液變澄清。向反應液中依次加入2-環丙基-2-羥基乙酸1e(2.3mg，19.8μmol，採用專利申請“WO2013106717”公開的方法製備而得)、1-羥基苯并三唑(3mg，22.4μmol)和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(4.3mg，22.4μmol)，加畢，在0至5℃攪拌反應1小時。撤去冰水浴，加熱至30℃攪拌2小時。反應液減壓濃縮，所得到的粗品化合物2-C用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH4OAc)，B-乙腈，梯度沖提，流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物(2-A：1.5mg，2-B：1.5mg)。
MS m/z(ESI)：534.0[M+1]。
單一構型化合物2-B(較短保留時間)
UPLC分析：保留時間1.06分鐘，純度：88%(色譜管柱：ACQUITY UPLC BEHC18 1.7um 2.1*50mm，流動相：A-水(5mmol NH4OAc),B-乙腈)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 8.37(d,1H),7.76(d,1H),7.30(s,1H),6.51(s,1H),5.58-5.56(m,1H),5.48(d,1H),5.41(s,2H),5.32-5.29(m,2H),3.60(t,1H),3.19-3.13(m,1H),2.38(s,3H),2.20-2.14(m,1H),1.98(q,2H),1.87-1.83(m,1H),1.50-1.40(m,1H),1.34-1.28(m,1H),0.86(t,3H),0.50-0.39(m,4H)。
單一構型化合物2-A(較長保留時間)
UPLC分析：保留時間1.10分鐘，純度：86%(色譜管柱：ACQUITY UPLC BEHC18 1.7um 2.1*50mm，流動相：A-水(5mmol NH4OAc),B-乙腈)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.35(d,1H),7.78(d,1H),7.31(s,1H),6.52(s,1H),5.58-5.53(m,1H),5.42(s,2H),5.37(d,1H),5.32(t,1H),3.62(t,1H),3.20-3.15(m,2H),2.40(s,3H),2.25-2.16(m,1H),1.98(q,2H),1.87-1.82(m,1H),1.50-1.40(m,1H),1.21-1.14(m,1H),0.87(t,3H),0.47-0.35(m,4H)。
實施例17依喜替康衍生物對腫瘤細胞體外增殖抑制測試
檢測化合物2-A和2-B，對U87MG細胞(中科院細胞庫，Catalog#TCHu138)和SK-BR-3腫瘤細胞(人乳腺癌細胞，ATCC，貨號HTB-30)體外增殖的抑制活性。以不同濃度的化合物體外處理細胞，經6天培養後，採用CTG(Luminescent Cell Viability Assay，Promega，貨號：
G7573)試劑對細胞的增值進行檢測，根據IC50值評價該化合物的體外活性。
U87MG和SK-BR-3細胞分別用10%FBS的EMEM培養基(GE，貨號SH30024.01)和含10%FBS的McCoy's 5A培養基(Gibco，貨號16600-108)培養。
取對數生長期的U87MG和SK-BR-3細胞，用PBS(磷酸鹽緩衝液，上海源培生物科技股份有限公司)洗滌1次之後，加入2-3ml胰蛋白酶(0.25%Trypsin-EDTA(1x)，Gibico,Life Technologies公司)消化2至3min，待細胞消化完全後，加入10至15ml細胞培養液，將經過消化的細胞沖提下來，1000rpm離心5min，棄上清，接著加入10至20ml細胞培養液將細胞重新懸浮，製成單細胞懸液。
將U87MG和SK-BR-3單細胞懸液混勻，用細胞培養液分別調整活細胞密度至2.75×103cells/ml和8.25×103cells/ml，將密度調整過後的細胞懸液混勻，以180μl/孔加入96孔細胞培養板。96孔板外周孔只加入200ul培養基。將培養板在培養箱培養24小時(37℃，5%CO2)。
用DMSO(二甲基亞碸，上海泰坦科技股份有限公司)溶解化合物，配製成初始濃度為10mM的存儲液。
小分子化合物的起始濃度為500nM，配藥方法如下：
在96孔U型底配藥板第一列中分別加入30μl不同待測樣品，樣品濃度為100uM；第2列至第11列每孔中加入20ul DMSO。取第一列樣品10ul至第二列20ul DMSO中，混勻，取10ul至第三列中，以此
類推至第10列。將配藥板中的藥每孔取5ul至95ul EMEM培養基中，混勻，待用。
加樣：向培養板中加入20μl配置的不同濃度的待測樣品，每個樣品兩複孔。將培養板在培養箱孵育6天(37℃，5%CO2)。
顯色：取出96孔細胞培養板，向每孔加入90μl CTG溶液，室溫孵育10分鐘。
讀板：取出96孔細胞培養板，置於酶標儀(BMG labtech，PHERAstar FS)中，用酶標儀測定化學發光。
數據分析：用Microsoft Excel，Graphpad Prism 5對數據進行處理分析。實驗結果參見表15。
表15.依喜替康衍生物對腫瘤細胞對腫瘤細胞的殺傷作用
<110> 上海翰森生物醫藥科技有限公司(SHANGHAI HANSOH BIOMEDICAL CO.,LTD) 江蘇豪森藥業集團有限公司(JIANGSU HANSOH PHARMACEUTICAL GROUP CO.,LTD.)
<120> 抗體藥物偶聯物及其醫藥用途(ANTIBODY-DRUG CONJUGATES AND MEDICAL USE THEREOF)
<130> 721030CPCT
<150> CN 202010224992.1
<151> 2020-03-26
<150> CN 202010743217.7
<151> 2020-07-29
<150> CN 202110123953.7
<151> 2021-01-29
<160> 23
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(121)
<223> 鼠單抗M1的重鏈可變區
<400> 1
<210> 2
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(106)
<223> 鼠單抗M1的輕鏈可變結構域
<400> 2
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(10)
<223> 鼠單抗M1的HCDR1
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<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(17)
<223> 鼠單抗M1的HCDR2
<400> 4
<210> 5
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(14)
<223> 鼠單抗M1的HCDR3
<400> 5
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(10)
<223> 鼠單抗M1的LCDR1
<400> 6
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(7)
<223> 鼠單抗M1的LCDR2
<400> 7
<210> 8
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(9)
<223> 鼠單抗M1的LCDR3
<400> 8
<210> 9
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(121)
<223> 人源化重鏈可變區HCVR1
<400> 9
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(121)
<223> 人源化重鏈可變區HCVR2
<400> 10
<210> 11
<211> 121
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
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<223> 人源化重鏈可變區HCVR3
<400> 11
<210> 12
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(106)
<223> 人源化輕鏈可變區LCVR1
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(106)
<223> 人源化輕鏈可變區LCVR2
<400> 13
<210> 14
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(106)
<223> 人源化輕鏈可變區LCVR3
<400> 14
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<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<222> (1)..(451)
<223> Ab1 HC
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<210> 16
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<222> (1)..(451)
<223> Ab2 HC
<400> 16
<210> 17
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<222> (1)..(451)
<223> Ab3 HC
<400> 17
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<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<222> (1)..(213)
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<221> 鏈
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(65)
<223> 帶His標簽的人BCMA胞外區
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<210> 22
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
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<223> 重鏈恆定區
<400> 22
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<212> PRT
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<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(107)
<223> 輕鏈恆定區
<400> 23
Claims (23)
- 一種通式(A)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，
其中，D是細胞毒性藥物；L1、L2是接頭單元；y選自1至20的數；Ab為抗BCMA抗體或其抗原結合片段，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：3所示的HCDR1、SEQ ID NO：4所示的HCDR2和SEQ ID NO：5所示的HCDR3；以及輕鏈可變區包含SEQ ID NO：6所示的LCDR1、SEQ ID NO：7所示的LCDR2和SEQ ID NO：8所示的LCDR3。 - 如請求項1所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段選自鼠源抗體或其抗原結合片段，嵌合抗體或其抗原結合片段，人抗體或其抗原結合片段或人源化抗體或其抗原結合片段。
- 如請求項2所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其變體的重鏈恆定區，較佳地，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含胺基酸突變後具有增強的ADCC毒性的IgG1重鏈恆定區；或者，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含如SEQ ID NO：22所示的重鏈恆定區。
- 如請求項2所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含人抗體κ鏈、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區；較佳地，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含人抗體κ鏈的輕鏈恆定區；進一步較佳地，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含如SEQ ID NO：23所示的輕鏈恆定區。
- 如請求項2所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自以下序列所示的重鏈可變區，或與以下序列相比具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈可變區：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11；和/或，選自以下序列所示的輕鏈可變區，或與以下序列相比具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈可變區：SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14。
- 如請求項5所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中，該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO：9所示的重鏈可變區和SEQ ID NO：12所示的輕鏈可變區；或，SEQ ID NO：10所示的重鏈可變區和SEQ ID NO：13所示的輕鏈可變區；或，SEQ ID NO：11所示的重鏈可變區和SEQ ID NO：14所示的輕鏈可變區。
- 如請求項5所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自如下序列 所示的重鏈，或與以下序列相比具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈：SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；和/或，選自以下序列所示的輕鏈，或與以下序列相比具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈：SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20。
- 如請求項7所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO：15所示的重鏈和SEQ ID NO：18所示的輕鏈；或，SEQ ID NO：16所示的重鏈和SEQ ID NO：19所示的輕鏈；或，SEQ ID NO：17所示的重鏈和SEQ ID NO：20所示的輕鏈。
- 如請求項1至8中任一項所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該細胞毒性藥物選自毒素、化療藥物、抗生素、放射性同位素和核溶酶；較佳抑制細胞分裂的微管蛋白抑制劑或DNA拓撲異構酶抑制劑；進一步佳DM1、DM3、DM4、喜樹鹼、SN-38、MMAF或MMAE；更佳MMAE或MMAF，或SN-38：
或者，該細胞毒性藥物選自喜樹鹼衍生物，較佳依喜替康或依喜替康衍生物：
- 如請求項9所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為通式(III)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物：
其中，L1、L2是接頭單元；y為選自1至10的數，較佳為2至8的數，更佳4至8的數；Ab選自請求項1至8中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段。 - 如請求項10所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該L2如通式(D)所示：-K1-K2-K3-K4- (D)其中，K1為，s選自2至8的整數；
K2選自-NR1(CH2CH2O)pCH2CH2C(O)-、-NR1(CH2CH2O)pCH2C(O)-、-S(CH2)pC(O)-或單鍵，p選自1至20的整數，較佳1至6的整數；R1選自氫、氘、羥基、胺基、烷基、鹵素、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；K3為四肽殘基，較佳地，該四肽殘基由選自兩個或多個的苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸、天冬胺酸中的胺基酸形成的肽殘基；更佳為GGFG的四肽殘基；K4為-NR2(CR3R4)t-，R2、R3或R4各自獨立地為氫、氘、羥基、胺基、烷基、鹵素、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基，t選自1或2，接頭單元L2的K1端與Ab相連，K4端與L1相連。 - 如請求項11所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該L1選自鍵、-O-(CRaRb)m-CR5R6-C(O)-、-O-CR5R6-(CRaRb)m-、-O-CR5R6-、-NH-(CRaRb)m-CR5R6-C(O)-或-S-(CRaRb)m-CR5R6-C(O)-，其中，Ra和Rb各自獨立地選自氫、氘、鹵素或烷基；R5為鹵烷基或環烷基；R6選自氫、鹵烷基或環烷基；或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成環烷基；m選自0、1、2、3或4，L1的O端與接頭單元L2相連。
- 如請求項12所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該L1如通式(E)所示：
其中，R5選自鹵烷基或環烷基，R6選自氫、鹵烷基或環烷基，或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成環烷基；較佳地，R5選自C1-6鹵烷基或C3-6環烷基，R6選自氫、C1-6鹵烷基或C3-6環烷基，或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成C3-6環烷基，m選自0至4的整數，較佳地，通式(E)選自以下取代基：
- 如請求項1至13中任一項所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中-L2-L1-選自以下結構：
K2為鍵；K3為GGFG的四肽殘基；R5為鹵烷基或C3-6環烷基；R6選自氫、鹵烷基或C3-6環烷基；或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成C3-6環烷基；R2、R3或R4各自獨立地選自氫或烷基；s選自2至8的整數；m選自0至4的整數，較佳地，-L2-L1-選自以下結構：
- 如請求項10所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其為通式(IV)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物：
其中，W選自C1-8烷基、C1-8烷基-環烷基或1至8個原子的直鏈雜烷基，該雜烷基包含1至3個選自N、O或S的雜原子，任選地，該C1-8烷基、環烷基和直鏈雜烷基各自獨立地進一步被鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；K2選自-NR1(CH2CH2O)p1CH2CH2C(O)-、-NR1(CH2CH2O)p1CH2C(O)-、-S(CH2)p1C(O)-或鍵，R1選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基，p1選自1至20的整數；K3為由2至7個胺基酸構成的肽殘基，胺基酸可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，該取代基為一個或多個獨立地選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基；R2選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；R3和R4各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；R5選自鹵素、鹵烷基、氘代烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基；R6選自氫原子、鹵素、鹵烷基、氘代烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基；或者，R5和R6與其相連接的碳原子一起形成環烷基或雜環基；m選自0至4的整數；y選自1至10的數，y是小數或整數；Ab為抗BCMA抗體或其抗原結合片段。 - 如請求項15所述的抗體藥物偶聯物，其為通式(IV-A)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物：
較佳地，通式(IV-A)選自以下結構：
- 如請求項1所述的通式(A)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，其中該抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化合物選自如下結構：
其中，y選自2至10，較佳4至8，更佳6至8，最佳6或8。 - 一種製備如通式(IV)所示的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物的方法，其包括以下步驟：
Ab還原後，與通式(F)偶聯反應，得到通式(IV)所示的化合物；其中，Ab為抗BCMA抗體或其抗原結合片段；W、K2、K3、R2~R6、m和y如請求項15中所定義。 - 如請求項18所述的方法，其中該通式(F)為通式(F-1)所示的化合物：
或其互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式，或其可藥用的鹽，其中K2、K3、R2~R6、s和m如請求項14中所定義。 - 一種通式(F)或通式(F-1)所示的化合物，其選自：
- 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至17中任一項所述的抗體藥物偶聯物或該抗體藥物偶聯物藥學上可接受的鹽或溶劑化合物，和一種或多種可藥用的賦形劑、稀釋劑或載體。
- 一種如請求項1至17中任一項所述的抗體藥物偶聯物或如請求項21所述的醫藥組成物在製備用於治療或預防BCMA介導的疾病或病症的藥物中的用途。
- 如請求項22所述的用途，其中，該BCMA介導的疾病或病症為癌症或自身免疫疾病，其中該癌症較佳為表達BCMA的癌症，更佳淋巴瘤、白血病或骨髓瘤，最佳多發性骨髓瘤；該自身免疫疾病選自紅斑狼瘡、IgA腎病和風濕性關節炎。
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