TW202115118A - 抗bcma抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途 - Google Patents
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Abstract
本公開涉及抗BCMA抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途。進一步地,本公開涉及包含所述抗BCMA抗體CDR區的嵌合抗體、人源化抗體,以及包含抗BCMA抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物,以及其作為抗癌藥物和治療自身免疫疾病的用途。尤其地,本公開涉及一種人源化的抗BCMA抗體,及其在製備用於治療BCMA介導的疾病或病症的藥物中的用途和用於疾病檢測和診斷中的用途。
Description
本公開涉及抗BCMA抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途。進一步地,本公開涉及使用抗BCMA抗體、其抗原結合片段以及包含抗BCMA抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物來檢測或治療BCMA介導的疾病或病症。
B細胞是淋巴細胞,其在自適應體液免疫和特異性識別抗原的抗體的產生中發揮重要的作用。B細胞的三種亞類是幼稚B細胞、記憶B細胞和漿細胞。在VDJ重組的過程中,其中DNA的兩種或三種片段選自基因組文庫,並且重組以產生抗體可變結構域的組合陣列,藉由其由不同譜系的B細胞編碼的可變結構域進一步的改變導致至多109種獨特的B細胞譜系,其產生和獨特靶向具有特異性的抗體。多種疾病涉及B細胞。B細胞的惡性轉化導致癌症,包括一些淋巴瘤,如多發性骨髓瘤和霍奇金氏淋巴瘤。自身免疫性疾病也會涉及到B細胞,包括系統性紅斑狼瘡(SLE)和IgA腎病。涉及B細胞的癌症和自家免疫性疾病可被認為B細胞功能異常,因此控制這類疾病的可能的策略是使用靶向病理B細胞的抗體。
BCMA(CD269或TNFRSF17)是TNF受體超家族的成員,其是配體BAFF(B細胞激活因子)和APRIL(增殖誘導配體)的非糖基化的內在膜受體。BCMA和它的相應配體可以調節體液免疫、B細胞發育和穩態的不同作用。BCMA在脾臟、淋巴結、胸腺、腎上腺和肝臟檢測到,由人漿母細胞、來自扁桃體,脾和骨髓的漿細胞,還由扁桃體記憶B細胞和由生髮中心B細胞表達,並且多種B細胞系的分析表明在BCMA在成熟後的表達水平增加。BCMA在B細胞淋巴瘤和多發性骨髓瘤中高度表達。
針對BCMA的抗體描述於例如Gras M-P.等Int Immunol.7(1995)1093-1106、WO200124811、WO200124812、WO2010104949和WO2012163805中。針對BCMA的抗體及其用於治療淋巴瘤和多發性骨髓瘤的用途例如敘述於WO2002066516和WO2010104949中。WO2013154760涉及包含BCMA識別部分和T-細胞激活部分的嵌合抗原受體。
在US9273141提供了一種能夠內化的特異性結合BCMA和抑制BAFF和/或APRIL對BCMA的結合的抗原結合蛋白,並提供了包含該抗原結合蛋白與細胞毒性劑的綴合物。
本公開提供了具有高親和力、高特異性、低免疫原性、高生物活性、顯著抗腫瘤效果、增強的內吞作用的抗BCMA抗體,以及包含該抗體的細胞毒性偶聯物以及其在抑制腫瘤方面的用途。
根據本公開的一些實施方案,提供了一種抗BCMA抗體或其抗原結合片段,或其藥學上可接受的鹽,其包含:
抗體重鏈可變區,該抗體重鏈可變區包含至少1個選自以下序列所示的HCDR:SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5;和
抗體輕鏈可變區,該抗體輕鏈可變區包含至少1個選自以下序列所示的LCDR:SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
在本公開一個較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段的重鏈可變區包含:
SEQ ID NO:3所示的HCDR1、
SEQ ID NO:4所示的HCDR2和
SEQ ID NO:5所示的HCDR3。
在本公開一個較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段的輕鏈可變區包含:
SEQ ID NO:6所示的LCDR1、
SEQ ID NO:7所示的LCDR2和
SEQ ID NO:8所示的LCDR3。
在本公開一個較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區,該重鏈可變區包含:
SEQ ID NO:3所示的HCDR1、
SEQ ID NO:4所示的HCDR2和
SEQ ID NO:5所示的HCDR3;以及
該輕鏈可變區包含:
SEQ ID NO:6所示的LCDR1、
SEQ ID NO:7所示的LCDR2和
SEQ ID NO:8所示的LCDR3。
根據本公開的一些實施方案,提供了一種抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含至少1個選自以下序列或其突變序列的HCDR:
SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5;
根據本公開的一些實施方案,提供了一種抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含至少1個選自以下序列或其突變序列的LCDR:SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8。
在本公開的一個較佳方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區,該重鏈可變區包含:
SEQ ID NO:3的序列或其突變序列所示的HCDR1、
SEQ ID NO:4的序列或其突變序列所示的HCDR2和
SEQ ID NO:5的序列或其突變序列所示的HCDR3。
在本公開的一個較佳方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段的輕鏈可變區包含:
SEQ ID NO:6的序列或其突變序列所示的LCDR1、
SEQ ID NO:7的序列或其突變序列所示的LCDR2和
SEQ ID NO:8的序列或其突變序列所示的LCDR3。
在本公開的一個較佳實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含抗體重鏈可變區和輕鏈可變區,該重鏈可變區包含:
SEQ ID NO:3的突變序列所示的HCDR1、
SEQ ID NO:4的突變序列所示的HCDR2和
SEQ ID NO:5的突變序列所示的HCDR3;以及
該輕鏈可變區包含:
SEQ ID NO:6的突變序列所示的LCDR1、
SEQ ID NO:7的突變序列所示的LCDR2和
SEQ ID NO:8的突變序列所示的LCDR3。
在本公開的一個較佳實施方案中,提供一種如上所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,或其藥學上可接受的鹽,其中該突變序列為在CDR區發生1-3個優化抗體活性、抗體穩定性或降低免疫原性的胺基酸突變。
在本公開的一個較佳實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段為鼠源抗體。
在本公開的一個較佳實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段為嵌合抗體。
在本公開的一個較佳實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段為人抗體。
在本公開的一個較佳實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段為人源化抗體。
在本公開的一個較佳實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含源自人IgG1或其變體、IgG2或其變體、IgG3或其變體,或IgG4或其變體的重鏈恆定區。
在本公開的一個較佳實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段及其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含源自人IgG1、IgG2或IgG4的重鏈恆定區。
在本公開的一個較佳實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段及其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含胺基酸突變後具有增強的ADCC毒性的IgG1重鏈恆定區。
在本公開的一個較佳實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段及其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含如SEQ ID NO:22所示的重鏈恆定區。
在本公開的一個較佳實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含源自人κ鏈或其變體,λ鏈或其變體的輕鏈恆定區。
在本公開的一個較佳實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含如SEQ ID NO:23所示的輕鏈恆定區。
在本公開的一個進一步較佳的實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗
原結合片段或其藥學上可接受的鹽包含選自以下序列所示的重鏈可變區:SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11。
在本公開的一個進一步較佳的實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自與SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈可變區。
在本公開的一個進一步較佳的實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自以下序列所示的輕鏈可變區:SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14。
在本公開的一個進一步較佳的實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自與SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈可變區。
在本公開的一個進一步較佳的實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段含有如下序列的重鏈:SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17。
在本公開的一個進一步較佳的實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自與SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈。
在本公開的一個進一步較佳的實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段含有如下序列的輕鏈:SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20。
在本公開的一個進一步較佳的實施方案中,根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自與SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈。
在本公開的一個更較佳實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:9所示的重鏈可變區和SEQ ID NO:12所示的輕鏈可變區。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區,該重鏈可變區選自SEQ ID NO:9,或與SEQ ID NO:9具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%的同一性,該輕鏈可變區選自SEQ ID NO:12或與SEQ ID NO:12具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%的同一性。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:10所示的重鏈可變區和SEQ ID NO:13所示的輕鏈可變區。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區,該重鏈可變區選自SEQ ID NO:10,或與SEQ ID NO:10具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%的
同一性,該輕鏈可變區選自SEQ ID NO:13或與SEQ ID NO:13具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%的同一性。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:11所示的重鏈可變區和SEQ ID NO:14所示的輕鏈可變區。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區,該重鏈可變區選自SEQ ID NO:11,或與SEQ ID NO:11具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈可變區,該輕鏈可變區選自SEQ ID NO:14或與SEQ ID NO:14具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:15所示的重鏈和SEQ ID NO:18所示的輕鏈。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈和輕鏈,該重鏈選自SEQ ID NO:15,或與SEQ ID NO:15具有至少80%、85%、90%、95%或99%的同一性,該輕鏈選自SEQ ID NO:18,或與SEQ ID NO:18具有至少80%、85%、90%、95%或99%的同一性。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:16所示的重鏈和SEQ ID NO:19所示的輕鏈。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈和輕鏈,該重鏈選自SEQ ID NO:16,或與SEQ ID NO:16具有至少80%、85%、90%、95%或99%的同一性,該輕鏈選自SEQ ID NO:19,或與SEQ ID NO:19具有至少80%、85%、90%、95%或99%的同一性。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:17所示的重鏈和SEQ ID NO:20所示的輕鏈。
在本公開的一個更較佳的實施方案中,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含重鏈和輕鏈,該重鏈選自SEQ ID NO:17,或與SEQ ID NO:17具有至少80%、85%、90%、95%或99%的同一性,該輕鏈選自SEQ ID NO:20,或與SEQ ID NO:20具有至少80%、85%、90%、95%或99%的同一性。
在本公開的又一個實施方案中,提供了一種多核苷酸,其編碼本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段。
在本公開的又一個實施方案中,提供了一種表達載體,其含有本公開所述的多核苷酸。
在本公開的又一個實施方案中,提供了一種宿主細胞,其導入或含有本公開所述的表達載體。
在本公開的又一個實施方案中,提供了一種宿主細胞,其轉化有本公開所述的表達載體。
在本公開一個較佳的方案中,該宿主細胞為細菌,較佳為大腸桿菌。
在本公開一個較佳的方案中,該宿主細胞為酵母菌,較佳為畢赤酵母。
在本公開一個較佳的方案中,該宿主細胞為哺乳動物細胞,較佳為CHO細胞或HEK293細胞。
另一方面,本公開提供了一種生產抗BCMA抗體的方法,包括步驟:
培養本公開所述的宿主細胞;
從培養物中分離抗體;以及
對該抗體進行純化。
根據本公開提供的生產抗BCMA抗體的方法,其中:
該培養本公開所述的宿主細胞,較佳HEK293細胞;
該從培養物中分離抗體,較佳細胞培養液;以及
該對該抗體進行親和層析純化,較佳以層析方法純化抗體。
在本公開的又一個實施方案中,提供了一種醫藥組成物,其含有本公開所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,以及可藥用的賦形劑、稀釋劑或載體。
在本公開的又一個實施方案中,提供了一種檢測或診斷試劑,其含有本公開所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽。
在本公開的又一個實施方案中,提供了一種檢測或診斷試劑盒,其含有本公開所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽、以及可用於檢測或診斷的標記的第二抗體、緩衝液和受質。
在本公開的進一步的實施方案中,提供了一種檢測或診斷試劑盒,其含有本公開所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,和一種或多種能檢測該BCMA抗體或其抗原結合片段與BCMA結合的試劑。
另一方面,本公開提供了本公開所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,或包含其的醫藥組成物在用於治療或預防BCMA介導的疾病或病症的用途。
另一方面,本公開提供了本公開所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,或包含其的醫藥組成物在製備用於治療或預防BCMA介導的疾病或病症的藥物中的用途。
另一方面,本公開提供了一種本公開所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,或包含其的檢測或診斷試劑在用於檢測、診斷、預後BCMA介導的疾病或病症。
另一方面,本公開提供了本公開所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽,或包含其的檢測或診斷試劑在用於製備檢測、診斷、預後BCMA介導的疾病或病症的試劑盒中的用途。
在具體的實施方案中,該BCMA介導的疾病或病症為癌症;較佳為表達BCMA的癌症;更佳為淋巴瘤、白血病或骨髓瘤,最佳為多發性骨髓瘤。
在具體的實施方案中,該BCMA介導的疾病或病症為自身免疫疾病;較佳紅斑狼瘡,IgA腎病和風濕性關節炎。
在另一方面,本公開提供了一種包含與細胞毒性劑偶聯的本公開所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段的抗體藥物偶聯物;較佳地,該細胞毒性劑選自MMAF、SN-38和依喜替康。進一步較佳地,根據本公開的抗體藥物偶聯物具有選自以下的結構式:
其中該Ab為本公開如上該的抗BCMA抗體或其抗原結合片段。
進一步地,本公開提供了根據本公開所述的抗體藥物偶聯物在製備用於治療BCMA介導的疾病或病症的藥物中的用途,該BCMA介導的疾病或病症選自癌症和自身免疫疾病,較佳地,該癌症為表達BCMA的癌症;更佳為淋巴瘤、白血病或骨髓瘤,最佳為多發性骨髓瘤。較佳地,該自身免疫疾病選自紅斑狼瘡、IgA腎病和風濕性關節炎。
在另一方面,本公開提供了在有需要的受試者中治療BCMA介導的疾病或病症的方法,該方法包括向該受試者施用治療有效量的根據本公開的抗BCMA抗體或其抗原結合片段或其藥學上可接受的鹽、其醫藥組成物或本公開的抗體藥物偶聯物。
本公開提供的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,具有高親和力,高特異性,低免疫原性,高生物活性,抗腫瘤效果顯著,同時,本公開抗體與
BCMA抗原結合後能被快速內化,表明它們適合以ADC的形式用於治療應用,或快速內化的其它應用,本公開抗體ADC的形式可以高效殺傷表達BCMA的腫瘤細胞。
[發明詳述]
術語
為了更容易理解本公開,以下具體定義了某些技術和科學術語。除顯而易見在本文中的它處另有明確定義,否則本文使用的所有其它技術和科學術語都具有本公開所屬領域的一般技術人員通常理解的含義。
本公開所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.Biol.Chem,243,p3558(1968)中所述。
本公開所述的術語“抗體”指免疫球蛋白,其是由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈藉由鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結構。免疫球蛋白重鏈恆定區的胺基酸組成和排列順序不同,故其抗原性也不同。據此,可將免疫球蛋白分為五類,或稱為免疫球蛋白的同種型,即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE,其相應的重鏈分別為μ鏈、δ鏈、γ鏈、α鏈和ε鏈。同一類Ig根據其鉸鏈區胺基酸組成和重鏈二硫鍵的數目和位置的差別,又可分為不同的亞類,如IgG可分為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。輕鏈藉由恆定區的不同分為κ鏈或λ鏈。五類Ig中第每類Ig都可以有κ鏈或λ鏈。
在本公開中,本公開所述的抗體輕鏈可進一步包含輕鏈恆定區,該輕鏈恆定區包含人源或鼠源的κ、λ鏈或其變體。
在本公開中,本公開所述的抗體重鏈可進一步包含重鏈恆定區,該重鏈恆定區包含人源或鼠源的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體。
抗體重鏈和輕鏈靠近N端的約110個胺基酸的序列變化很大,為可變區(V區);靠近C端的其餘胺基酸序列相對穩定,為恆定區(C區)。可變區包括3個高變區(HVR)和4個序列相對保守的框架區(FR)。3個高變區決定抗體的特異性,又稱為互補決定區(CDR)。每條輕鏈可變區(VL)和重鏈可變區(VH)由3個CDR區和4個FR區組成,從胺基端到羧基端依次排列的順序為:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。輕鏈的3個CDR區指LCDR1、LCDR2,和LCDR3;重鏈的3個CDR區指HCDR1、HCDR2和HCDR3。本公開所述的抗體或抗原結合片段的VL區和VH區的CDR胺基酸殘基在數量和位置符合已知的Kabat編號規則和Kabat或AbM或IMGT定義規則(http://bioinf.org.uk/abs/)。
術語“抗原呈遞細胞”或“APC”是在其表面上展示與MHC複合的外來抗原的細胞。T細胞利用T細胞受體(TCR)識別這種複合物。APC的實例包括但不限於樹突細胞(DC)、外周血單個核細胞(PBMC)、單核細胞、B淋巴母細胞和單核細胞衍生的樹突細胞。
術語“抗原呈遞”是指APC捕獲抗原和使它們能夠被T細胞識別的過程,例如作為MHC-I/MHC-II偶聯物的組分。
術語“BCMA”包括由細胞天然表達的BCMA的任何變體或同種型。本公開的抗體可與得自非人物種的BCMA交叉反應。作為另一種選擇,該抗體也可以是人BCMA特異性的,可不表現出與其他物種的交叉反應性。BCMA或其任何變體或同種型可從天然表達它們的細胞或組織中分離而得,或使用本領域通用以及本文所述的那些技術藉由重組技術產生。較佳地,抗BCMA抗體靶向具有正常糖基化模式的人源BCMA。
術語“重組人抗體”包括藉由重組方法製備、表達、創建或分離的人抗體,所涉及的技術和方法在本領域中是熟知的,諸如:
1.從人免疫球蛋白基因的轉基因、轉染色體動物(例如小鼠)或由其製備的融合瘤中分離的抗體;
2.從經轉化以表達抗體的宿主細胞如轉染瘤中分離的抗體;
3.從重組組合人抗體文庫中分離的抗體;以及
4.藉由將人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列等方法製備、表達、創建或分離的抗體。
此類重組人抗體包含可變區和恆定區,這些區域利用特定的由種系基因編碼的人種系免疫球蛋白序列,但也包括隨後諸如在抗體成熟過程中發生的重排和突變。
術語“鼠源抗體”在本公開中為根據本領域知識和技能製備的對人BCMA的單株抗體。製備時用BCMA抗原注射試驗對象,然後分離表達具有所需序列或功能特性的抗體的融合瘤。在本公開一個較佳的實施方案中,該鼠源BCMA抗體或其抗原結合片段,可進一步包含鼠源κ、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區,或進一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其變體的重鏈恆定區。
術語“人抗體”包括具有人種系免疫球蛋白序列的可變區和恆定區的抗體。本公開的人抗體可包括不由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基(如藉由體外隨機或位點特異性誘變或藉由體內體細胞突變所引入的突變)。然而,術語“人抗體”不包括這樣的抗體,即其中已將衍生自另一種哺乳動物物種(諸如小鼠)種系的CDR序列移植到人骨架序列上(即“人源化抗體”)。
術語“人源化抗體(humanized antibody)”,也稱為CDR移植抗體(CDR-grafted antibody),是指將小鼠的CDR序列移植到人的抗體可變區框架中產生的抗體。人源化抗體可以克服嵌合抗體由於攜帶大量小鼠蛋白成分,從而誘導的強烈的免疫應答的缺點。為避免在免疫原性下降的同時引起活性的下降,可對該人抗體可變區可進行最少反向突變,以保持活性。
術語“嵌合抗體(chimeric antibody)”,是將鼠源性抗體的可變區與人抗體的恆定區融合而成的抗體,可以減輕鼠源性抗體誘發的免疫應答。建立嵌合抗體,要先建立分泌鼠源性特異性單抗的融合瘤,然後從小鼠融合瘤細胞中選殖可變區基因,再要據需要選殖人抗體的恆定區基因,將小鼠可變區基因與人恆定區基因連接成嵌合基因後插入人載體中,最後在真核工業系統或原核工業系統中表達嵌合抗體分子。人抗體的恆定區可選自人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其變體的重鏈恆定區,較佳包含人源IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區,或者使用胺基酸突變後增強ADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用)毒性的IgG1重鏈恆定區。
術語“抗原結合片段”是指抗體的抗原結合片段及抗體類似物,其通常包括至少部分母體抗體(parental antibody)的抗原結合區或可變區(例如一個或多個CDR)。抗體片段保留母體抗體的至少某些結合特異性。通常,當基於莫耳來表示活性時,抗體片段保留至少10%的母體結合活性。較佳地,抗體片段保留至少20%、50%、70%、80%、90%、95%或100%或更多的母體抗體對靶標的結合親和力。抗原結合片段實例包括但不限於:Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、線性抗體(linear antibody)、單鏈抗體、奈米抗體、結構域抗體和多特異性抗
體。工程改造的抗體變體綜述於Holliger和Hudson,2005,Nat.Biotechnol.23:1126-1136中。
“Fab片段”由一條輕鏈和一條重鏈的CH1及可變區組成。Fab分子的重鏈不能與另一個重鏈分子形成二硫鍵。
“Fc”區含有包含抗體的CH1和CH2結構域的兩個重鏈片段。兩個重鏈片段由兩個或多個二硫鍵並藉由CH3結構域的疏水作用保持在一起。
“Fab’片段”含有一條輕鏈和包含VH結構域和CH1結構域以及CH1和CH2結構域之間區域的一條重鏈的部分,由此可在兩個Fab’片段的兩條重鏈之間形成鏈間二硫鍵以形成F(ab’)2分子。
“F(ab’)2片段”含有兩條輕鏈和兩條包含CH1和CH2結構域之間的恆定區的部分的重鏈,由此在兩條重鏈間形成鏈間二硫鍵。因此,F(ab’)2片段由藉由兩條重鏈間的二硫鍵保持在一起的兩個Fab’片段組成。
“Fv區”包含來自重鏈和輕鏈二者的可變區,但缺少恆定區。
術語“多特異性抗體”按其最廣義使用,涵蓋具有多表位特異性的抗體。這些多特異性抗體包括但不限於:包含重鏈可變區VH和輕鏈可變區VL的抗體,其中該VH-VL單元具有多表位特異性;具有兩個或多個VL和VH區的抗體,每個VH-VL單元與不同的靶點或同一個靶點的不同表位結合;具有兩個或更多個單可變區的抗體,每個單可變區與不同的靶點或同一個靶點的不同的表位結合;全長抗體、抗體片段、雙抗體(diabodies)、雙特異性雙抗體和三抗體(triabodies)、己共價或非共價連接在一起的抗體片段等。
術語“單鏈抗體”是由抗體的重鏈可變區VH和輕鏈可變區VL藉由一段連接肽連接而成的單鏈重組蛋白,它是具有完全抗原結合位點的最小抗體片段。
術語“結構域抗體片段”是僅含有重鏈可變區或輕鏈可變區鏈的具有免疫學功能的免疫球蛋白片段。在某些情況下,兩個或多個VH區與肽接頭共價連接以形成二價結構域抗體片段。二價結構域抗體片段的兩個VH區可靶向相同或不同抗原。
本公開的術語“與BCMA結合”,指能與人BCMA相互作用。
本公開的術語“抗原結合位點”指本公開抗體或抗原結合片段識別的三維空間位點。
術語“表位”是指抗原上與免疫球蛋白或抗體特異性結合的位點。表位可以由相鄰的胺基酸、或藉由蛋白質的三級折疊而並列的不相鄰的胺基酸形成。由相鄰的胺基酸形成的表位通常在暴露於變性溶劑後保持,而藉由三級折疊形成的表位通常在變性溶劑處理後喪失。表位通常以獨特的空間構象包括至少3-15個胺基酸。確定什麼表位由給定的抗體結合的方法在本領域中是熟知的,包括免疫印跡和免疫沉澱檢測分析等。確定表位的空間構象的方法包括本領域中的技術和本文所述的技術,例如X射線晶體分析法和二維核磁共振等。
本公開所用的術語“特異性結合”、“選擇性結合”是指抗體與預定的抗原上的表位結合。通常,當使用人BCMA作為分析物並使用抗體作為配體,在儀器中藉由表面等離子體共振(SPR)技術測定時,抗體以大約低於10-7M或甚至更小的平衡解離常數(KD)與預定的抗原結合,並且其與預定抗原結合的親和力是其與預定抗原或緊密相關的抗原之外的非特異性抗原(如BSA等)結合的親和
力的至少兩倍。術語“識別抗原的抗體”在本文中可以與術語“特異性結合的抗體”互換使用。
術語“交叉反應”是指本公開的抗體與來自不同物種的BCMA結合的能力。例如,結合人BCMA的本公開的抗體也可以結合另一物種的BCMA。交叉反應性是藉由在結合測定(例如SPR和ELISA)中檢測與純化抗原的特異性反應性,或與生理表達BCMA的細胞的結合或功能性相互作用來測量。確定交叉反應性的方法包括如本文所述的標準結合測定,例如表面等離子體共振(SPR)分析,或流式細胞術。
術語“抑制”或“阻斷”可互換使用,並涵蓋部分和完全抑制/阻斷這兩者。配體的抑制/阻斷較佳地降低或改變無抑制或阻斷的情況下發生配體結合時出現活性的正常水平或類型。抑制和阻斷也旨在包括與抗BCMA抗體接觸時,與未與抗BCMA抗體接觸的配體相比,任何可測量的配體結合親和力降低。
術語“抑制生長”(例如涉及細胞)旨在包括細胞生長任何可測量的降低。
術語“誘導免疫應答”和“增強免疫應答”可互換使用,並指免疫應答對特定抗原的剌激(即,被動或適應性的)。針對誘導CDC或ADCC的術語“誘導”是指剌激特定的直接細胞殺傷機制。
本公開中所述的“ADCC”,即抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity),是指表達Fc受體的細胞藉由識別抗體的Fc段直接殺傷被抗體包被的靶細胞。可藉由對IgG上Fc段的修飾,增強或降低或消除抗體的ADCC效應功能。該修飾指在抗體的重鏈恆定區進行突變。
生產和純化抗體和抗原結合片段的方法在現有技術中熟知且能找到,如冷泉港的抗體實驗技術指南,5-8章和15章。如,小鼠可以用人BCMA或其片段免疫,所得到的抗體能被覆性、純化,並且可以用常規的方法進行胺基酸測序。抗原結合片段同樣可以用常規方法製備。發明該的抗體或抗原結合片段用基因工程方法在非人源的CDR區加上一個或多個人FR區。人FR種系序列可以從ImMunoGeneTics(IMGT)的網站http://imgt.cines.fr得到,或者從免疫球蛋白雜誌,2001ISBN012441351上獲得。
本公開工程化的抗體或抗原結合片段可用常規方法製備和純化。相應抗體的cDNA序列可以選殖並重組至GS表達載體。重組的免疫球蛋白表達載體可以穩定地轉染CHO細胞。作為一種更推薦的現有技術,哺乳動物類表達系統會導致抗體的糖基化,特別是在Fc區的高度保守N端。藉由表達與人源抗原特異性結合的抗體得到穩定的純株。陽性的純株在生物反應器的無血清培養基中擴大培養以生產抗體。分泌了抗體的培養液可以用常規技術純化、收集。抗體可用常規方法進行過濾濃縮。可溶的混合物和多聚體,也可以用常規方法去除,比如分子篩、離子交換。得到的產物需立即冷凍,如-70℃,或者凍幹。
本公開的抗體指單株抗體。本公開所述的單株抗體(mAb),指由單一的純株細胞株得到的抗體,該細胞株不限於真核的、原核的或噬菌體的純株細胞株。單株抗體或抗原結合片段可以用如融合瘤技術、重組技術、噬菌體展示技術、合成技術(如CDR-grafting)、或其它現有技術進行重組得到。
“施用”、“給予”和“處理”當應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時,是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組合物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。“施用”、“給予”和“處理”可
以指例如治療、藥物代謝動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸,以及試劑與流體的接觸,其中該流體與細胞接觸。“施用”、“給予”和“處理”還意指藉由試劑、診斷劑、結合組合物或藉由另一種細胞體外和離體處理例如細胞。“處理”當應用於人、獸醫學或研究受試者時,是指治療、預防或預防性措施,研究和診斷應用。
“治療”意指給予患者內用或外用治療劑,諸如包含本公開的任一種抗體,該患者具有一種或多種疾病症狀,而已知該治療劑對這些症狀具有治療作用。通常,在受治療患者或群體中以有效緩解一種或多種疾病症狀的量給予治療劑,無論是藉由誘導這類症狀退化還是抑制這類症狀發展到任何臨床右測量的程度。有效緩解任何具體疾病症狀的治療劑的量(也稱作“治療有效量”)可根據多種因素變化,例如患者的疾病狀態、年齡和體重,以及藥物在患者產生需要療效的能力。藉由醫生或其它專業衛生保健人士通常用於評價該症狀的嚴重性或進展狀況的任何臨床檢測方法,可評價疾病症狀是否已被減輕。盡本公開的實施方案(例如治療方法或製品)在緩解每個患都有的目標疾病症狀方面可能無效,但是根據本領域已知的任何統計學檢驗方法如Student t檢驗、卡方檢驗、依據Mann和Whitney的U檢驗、Kruskal-Wallis檢驗(H檢驗)、Jonckheere-Terpstra檢驗和Wilcoxon檢驗確定,其在統計學顯著數目的患者中應當減輕目標疾病症狀。
整個說明書和申請專利範圍中使用的術語“基本上由......組成”或其變形表示包括所有該元件或元件組,並且視需要包括與該元件類似或不同性質的其它元件,該其它元件非顯著改變指定給藥方案、方法或組合物的基本性質或新性質。
本公開所述的應用於某個對象的術語“天然存在的”是指這樣的事實,即該對象可在自然界中發現。例如存在於可從自然界來源分離得到的生物體(包括病毒)、且未經人工在實驗室中有意修飾的多肽序列或多核苷酸序列即是天然存在的。
“有效量”包含足以改善或預防醫治病症的症狀或病症的量。有效量還意指足以允許或促進診斷的量。用於特定患者或獸醫學受試者的有效量可依據以下因素而變化:如待治療的病症、患者的總體健康情況、給藥的方法途徑和劑量以及副作用嚴重性。有效量可以是避免顯著副作用或毒性作用的最大劑量或給藥方案。
“外源性”指要據背景在生物、細胞或人體外產生的物質。
“內源性”指根據背景在細胞、生物或人體內產生的物質。
“同一性”是指兩個多核苷酸序列之間或兩個多肽之間的序列相似性。當兩個比較序列中的位置均被相同堿基或胺基酸單體亞基佔據時,例如如果兩個DNA分子的每一個位置都被腺嘌呤佔據時,那麼該分子在該位置是同源的。兩個序列之間的同一性百分率是兩個序列共有的匹配或同源位置數除以比較的位置數×100%的函數。例如,在序列最佳比對時,如果兩個序列中的10個位置有6個匹配或同源,那麼兩個序列為60%同源。一般而言,當比對兩個序列而得到最大的同一性百分率時進行比較。
本文使用的表述“細胞”、“細胞系”和“細胞培養物”可互換使用,並且所有這類名稱都包括其後代。因此,單詞“轉化體”和“轉化細胞”包括原代受試細胞和由其衍生的培養物,而不考慮轉移數目。還應當理解的是,由於故意或非有意的突變,所有後代在DNA含量方面不可能精確相同。包括具有與最初轉化
細胞中篩選的相同的功能或生物學活性的突變後代。在意指不同名稱的情況下,其由上下文清楚可見。
“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生,該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。例如,“視需要包含1-3個抗體重鏈可變區”意味著特定序列的抗體重鏈可變區可以但不必須存在。
“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述抗體或其抗原結合片段,以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥,利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
“藥物載荷”(DAR)由y表示,即抗體-藥物偶聯物中每個抗體的平均細胞毒性藥物數。來自偶聯反應的抗體-藥物偶聯物中的藥物載荷(DAR)可藉由常規手段表徵,諸如質譜,HPLC和ELISA等,藉由這些手段可以測定抗體-藥物偶聯物在y值上的定量分佈。
以下結合實施例用於進一步描述本公開,但這些實施例並非限制著本公開的範圍。本公開實施例中未注明具體條件的實驗方法,通常按照常規條件,如冷泉港的抗體技術實驗手冊,分子選殖手冊;或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未注明具體來源的試劑,為市場購買的常規試劑。
實施例1:抗原準備
編碼帶His標簽的人BCMA胞外區(BCMA-His)蛋白由SinoBiologics公司合成(Cat No.:10620-H08H)。
BCMA-His序列:
SEQ ID NO:21
實施例2:鼠融合瘤及抗體序列的獲得
用人抗原BCMA-His進行動物免疫,共5隻Balb/c和5隻A/J小鼠,雌性,10週齡,使用Sigma完全弗氏佐劑(CFA)和Sigma不完全弗氏佐劑(IFA),免疫原和免疫佐劑以1:1的比例充分混合乳化,製成穩定“油包水”液體;注射劑量25μg/200μL/小鼠。
對免疫小鼠血清使用如實施例3所述的間接ELISA法評估血清效價及結合細胞表面抗原的能力,對照效價檢測情況(大於10萬倍稀釋度)決定啟動細胞融合。選擇血清效價、親和力和FACS結合強的免疫小鼠進行一次終免疫後處死小鼠,取脾細胞和SP2/0骨髓瘤細胞融合後鋪板獲得融合瘤,藉由間接ELISA篩選到目標融合瘤,並藉由有限稀釋法建株為單純株細胞株。得到的陽性抗體株進一步使用間接ELISA進行篩選,從而選定結合重組蛋白的融合瘤。收
集對數生長期融合瘤細胞,用Trizol(Invitrogen,15596-018)提取RNA並反轉錄(PrimeScriptTM Reverse Transcriptase,Takara #2680A)。將反轉錄得到的cDNA採用小鼠Ig-引子組(Novagen,TB326 Rev.B 0503)進行PCR擴增後測序,最終得到鼠源抗體M1的序列。
鼠單抗M1的重鏈和輕鏈可變區序列如下:
M1 HCVR
SEQ ID NO:1
M1 LCVR
SEQ ID NO:2
實施例3:抗體的體外結合活性檢測方法
(1)體外間接ELISA結合實驗:
用pH7.4的PBS將BCMA His蛋白(Sino Biological Inc.,cat# 10620-H08H)稀釋至1μg/ml濃度,以100μl/孔的體積加入96孔高親和力酶標板中,於4℃冰箱孵育過夜(16-20小時)。用PBST(pH7.4 PBS含0.05%Tween-20)洗板4次後,加入用PBST稀釋的3%牛血清白蛋白(BSA)封閉液150μl/孔,室溫孵育1小時進行封閉。封閉結束後,棄去封閉液,並用PBST緩衝液洗板4次。
用含3%BSA的PBST稀釋待測抗體,1μM起始,10倍梯度,10個劑量,以100μl/孔加到酶標板中,放於室溫孵育1小時。孵育結束後用PBST洗板4次,加入100μl/孔用含3%BSA的PBST稀釋的HRP標記羊抗人二抗(Abcam,cat#ab97225),室溫孵育1小時。用PBST洗板4次後,加入100μl/孔TMB顯色受質(Cell Signaling Technology,cat#7004S),於室溫避光孵育1分鐘,加入100μl/孔終止溶液(Cell Signaling Technology,cat#7002S)終止反應,用酶標儀(BioTek,型號Synergy H1)在450nm處讀取吸收值,分析數據。做濃度信號值曲線分析結果,如下表所示:
(2)體外細胞結合實驗:
收集培養好的BCMA高表達細胞(過表達BCMA的HEK-293T細胞;表達BCMA的腫瘤細胞,NCI-H929,ATCC保藏號CRL-9068),調節細胞密度後分鋪
於96孔U底板,每孔1×105至2×105個細胞。1200g,5min離心,去上清,添加100ul已梯度稀釋的抗體溶液或小鼠免疫血清,4℃度孵育60min;1200g,5min離心,去上清,PBS洗細胞2次後,添加螢光標記二抗(PE-GAM或PE-GAH)100ul每孔,4℃度孵育60min。1200g,5min離心去上清。PBS洗細胞2次後,再重新懸浮於PBS,使用流式細胞儀檢測信號,並作濃度曲線分析結果。
實施例4:小鼠抗體人源化實驗
鼠源抗人BCMA單株抗體人源化如本領域許多文獻公示的方法進行。簡言之,使用人恆定結構域替代親本(鼠源抗體)恆定結構域,根據鼠源抗體和人抗體的同一性選擇人種抗體序列,本公開將鼠源抗體M1進行人源化。
在所獲得的鼠源抗體VH/VL CDR典型結構的基礎上,將重、輕鏈可變區序列與人源抗體種系數據庫比較,獲得同一性高的人種系模板。
將鼠源抗體M1的CDR區移植到選擇好的相應人源化模板上。然後,以鼠源抗體的三維結構為基礎,對包埋殘基、與CDR區有直接相互作用的殘基,以及對VL和VH的構象有重要影響的殘基進行回復突變,並對CDR區化學不穩定胺基酸殘基優化,經表達測試和回復突變數量對比,選擇和設計了人源化重鏈可變區HCVR的序列,序列如下:
HCVR1
SEQ ID NO:9
HCVR2
SEQ ID NO:10
HCVR3
SEQ ID NO:11
選擇和設計了人源化輕鏈可變區LCVR的序列,序列如下:
LCVR1
SEQ ID NO:12
LCVR2
SEQ ID NO:13
LCVR3
SEQ ID NO:14
將設計的重鏈和輕鏈可變區序列分別與IgG1重鏈和輕鏈恆定區序列連接,示例性的重鏈和輕鏈恆定區序列分別如下所示:
IgG1 C
SEQ ID NO:22
Ig kappa C
SEQ ID NO:23
連接後,得到的示例性重鏈和輕鏈序列如下:
Ab1 HC
SEQ ID NO:15
Ab2 HC
SEQ ID NO:16
Ab3 HC
SEQ ID NO:17
Ab1 LC
SEQ ID NO:18
Ab2 LC
SEQ ID NO:19
Ab3 LC
SEQ ID NO:20
根據以上各人源化抗體輕鏈和重鏈的胺基酸序列合成cDNA片段,插入到pcDNA3.1表達載體(Life Technologies Cat.No.V790-20)中。將表達載體和轉染試劑PEI(Polysciences,Inc.Cat.No.23966)以1:2的比例轉染HEK293細胞(Life Technologies Cat.No.11625019),並置於CO2孵育箱中孵育4-5天。收取細胞培養液,離心過濾後上樣到抗體純化親和管柱,經磷酸緩衝液洗管柱、甘胺酸鹽酸緩衝液(pH2.7 0.1M Gly-HCl)沖提、1M Tris鹽酸pH 9.0中和、以及磷酸緩衝液透析,得到本公開的人源化抗體蛋白。
實施例5:體外結合親和力和動力學實驗
使用實施例3(1)中該的體外間接ELISA結合實驗測定的各人源化抗體對人BCMA抗原的親和力(EC50)如下表6所示:
使用實施例3(2)中該的體外細胞結合實驗測定的各人源化抗體對NCI-H929腫瘤細胞的親和力(EC50)如下表7所示:
實施例6:抗體的內吞作用
檢測本公開抗體結合BCMA後是否能夠和人BCMA共同內吞入細胞內,用NCI-H929(ATCC保藏號CRL-9068)進行評估。NCI-H929細胞使用胰酶消化(先用PBS清洗一遍,37℃、2min左右),收集細胞並用預冷的FACS緩衝液重新懸浮,調整細胞濃度為1×106個/mL。取EP管,加入1mL細胞懸液,1500rpm離
心5分鐘後去上清,加入1mL已經配製好的待測抗體重新懸浮細胞,抗體的終濃度均為20μg/ml,4度搖床孵育1h,離心棄上清(4℃、1500rpm×5min),FACS緩衝液洗滌兩次,去上清。每管加入100μL螢光二抗工作液重新懸浮細胞,4℃搖床孵育30min,離心棄上清(4℃、1500rpm×5min),FACS緩衝液洗滌兩次,去上清。每管加入1.0mL預熱的NCI-H929細胞完全培養基重新懸浮細胞並混勻,分裝為4管,每管200μL,分別為0min組,空白組,30min組和2h組,取出0min及空白組置於冰上,其餘放置於37℃培養箱,分別內吞30min、2h,在相應時間點取出EP管,置於冰上預冷5min,所有處理組離心棄上清(4℃、1500rpm×5min),用FACS緩衝液洗滌一次,去上清。除0min組外所有處理組EP管中加入250μL剝離緩衝液(strip buffer),室溫孵育8min,離心棄上清(4℃、1500rpm×5min),FACS緩衝液洗滌兩次,去上清。所有處理組加入100μL免疫染色固定液,4℃放置30min以上,用流式細胞儀DxFlex進行檢測。BCMA抗體內吞百分比=(各個時間點螢光強度值-空白組平均螢光強度值)/零點時的平均螢光輕度值-空白組平均螢光強度值。結果見下表8:
ND=未確定
結果顯示,與抗BCMA抗體J6M0(描述於美國專利9,273,141)相比,本公開抗體具有更高的內吞效率。
實施例7:抗體偶聯MC-MMAF
本公開抗體具有細胞親和活性且具有細胞內吞活性,使得本公開抗體適合與藥物偶聯形成抗體-藥物偶聯物用於治療BCMA介導的疾病。將本公開的抗體與MC-MMAF偶聯,形成抗體-藥物偶聯物。偶聯過程見下式,其中Ab代表Ab2或Ab3抗體:
第一步,將硫代乙酸S-(3-羥基丙基)酯(0.7mg,5.3mol)溶解於0.9mL乙腈溶液備用。向抗體pH=4.3的乙酸/乙酸鈉緩衝液(10.35mg/mL,9.0mL,0.97mol)加入上述預製的硫代乙酸S-(3-羥基丙基)酯的乙腈溶液,然後滴加1.0mL的氰基硼氫化鈉(14.1mg,224mol)的水溶液,於25℃下振盪反應2小時。反應結束後,用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH6.5的0.05M的PBS溶液)後,得產物1f溶液,濃縮到10mg/mL後直接進行下一步反應。
第二步,向1f溶液(11.0mL)中加入0.35mL的2.0M鹽酸羧胺溶液,於25℃下振盪反應30分鐘後,將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH6.5的0.05M的PBS溶液)後,得到產物2f溶液(濃度6.17mg/mL,14.7mL)。
第三步,將化合物MC-MMAF(1.1mg,1.2mol,採用PCT專利WO2005081711公開的方法製備得到)溶解於0.3mL乙腈中,加入2f溶液(濃度6.17mg/mL,3.0mL)中,於25℃下振盪反應4小時後,將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH6.5的0.05M的PBS溶液)後,在無菌條件下用濾器過濾後得到產物Ab2-MC-MMAF。使用HIC-HPLC測定產物Ab2-MC-MMAF的DAR平均值y為4,將抗體-藥物偶聯物的PBS緩衝液(3.7mg/mL,4.7mL)於4℃冷藏。採用上述方法製備得到產物Ab3-MC-MMAF,使用HIC-HPLC測定產物Ab3-MC-MMAF的DAR平均值y為4.1,將抗體-藥物偶聯物的PBS緩衝液(3.5mg/mL,5.0mL)於4℃冷藏。
實施例8:抗體偶聯SN-38
藉由以下偶聯過程製備抗體偶聯藥物,其中Ab代表Ab2:
第一步,將硫代乙酸S-(3-羥基丙基)酯(0.7mg,5.3mol)溶解於0.9mL乙腈溶液備用。向抗體pH=4.3的乙酸/乙酸鈉緩衝液(10.35mg/mL,9.0mL,0.97mol)加入上述預製的硫代乙酸S-(3-經基丙基)酯的乙腈溶液,然後滴加1.0mL的氰基硼氫化鈉(14.1mg,224mol)的水溶液,於25℃下振盪反應2小時。反應結束後,用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH6.5的0.05M的PBS溶液)後,得產物1h溶液,濃縮到10mg/mL後直接進行下一步反應。
第二步,向1h溶液(11.0mL)中加入0.35mL的2.0M鹽酸羧胺溶液,於25℃下振盪反應30分鐘後,將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH6.5的0.05M的PBS溶液)後,得到產物2h溶液(濃度6.2mg/mL,15.0mL),濃縮到約10mg/ml後用於下一步反應。
第三步,將化合物MC-SN-38(1.3mg,1.2mol)溶解於0.3ml的乙腈中,加入2h溶液(濃度6.2mg/mL,3.0mL)中,於25℃下振盪反應4小時後,將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH6.5的0.05M的PBS溶液)
後,在無菌條件下用濾器過濾後得到產物Ab-SN-38抗體-藥物偶聯物的PBS緩衝液(3.7mg/mL,4.7mL),於4℃冷藏。採用紫外法測定平均值y。將裝有琥珀酸鈉緩衝液的比色皿分別置於參比吸收池和樣品測定吸收池中後,扣除溶劑空白後,再將裝有供試品溶液的比色皿置於樣品測定吸收池中,測定280nm和370nm處吸光度。
數據處理:
藉由建立標準曲線,測定280nm波長下的吸收,確定抗體含量Cmab,測定370nm波長下的吸收,確定小分子含量CDrug。
藥物載量平均值y=CDrug/Cmab。
藉由上述方法測定Ab2-SN-38抗體-藥物偶聯物的DAR平均值y為3.9。
實施例9:抗體偶聯依喜替康
第一步,將2a(2g,17.2mmol溶於75mL乙腈中,依次加入碳酸鉀(9.27g,67.2mmol)、溴化苄(20mL,167.2mmol)和四丁基碘化銨(620mg,1.68mmol)。將反應液室溫攪拌48小時,藉由矽藻土過濾,濾餅用乙酸乙酯(20ml)淋洗,合併濾液減壓濃縮,用矽膠管柱色譜法以展開劑體系C純化所得殘餘物,得到產物5a(3.2g,產率:90.1%)。
第二步,將5a(181.3mg,0.879mmol)和4b(270mg,0.733mmol)加入反應瓶,加入6mL四氫呋喃,氬氣置換三次,冰水浴降溫至0-5℃,加入第三丁醇鉀(164mg,1.46mmol),撤去冰浴,升至室溫攪拌40分鐘,加入15mL冰水,用乙酸乙酯(40mL×2)和氯仿(20mL×5)萃取,合併有機相並濃縮。所得殘餘物溶於6mL二噁烷中,加入3mL水,加入碳酸氫鈉(73.8mg,0.879mmol)和氯甲酸-9-芴甲酯(190mg,0.734mmol),室溫攪拌2小時。加入30mL水,用乙酸乙酯(20mL×3)萃取,有機相用飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濾液減壓濃縮。用矽膠管柱色譜法以展開劑體系C純化所得殘餘物,得到產物5b 10-環丙基-1-(9H-芴-9-基)-3,6-二側氧基-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一-11-酸苄酯(73mg,產率:19.4%)。
MS m/z(ESI):515.0[M+1]。
第三步,將5b(30mg,0.058mmol)溶於6.75mL四氫呋喃和乙酸乙酯(V:V=2:1)混合溶劑中,加入鈀碳(18mg,含量10%,乾型),氫氣置換三次,室溫攪拌反應1小時。反應液用矽藻土過濾,濾餅用乙酸乙酯淋洗,濾液濃縮,得到粗品產物5c 10-環丙基-1-(9H-芴-9-基)-3,6-二側氧基-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一-11-酸(20mg),產品不經純化直接進行下一步反應。
MS m/z(ESI):424.9[M+1]。
第四步,將1b(15mg,28.2μmol)加入反應瓶,加入1.5mL N,N-二甲基甲醯胺,氬氣置換三次,冰水浴降溫至0-5℃,滴加一滴三乙胺,加入粗品5c(20mg,47.1μmol),加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(25.4mg,86.2μmol),冰浴攪拌反應40分鐘。加入15mL水,用乙酸乙酯(20mL×3)萃取,合併有機相。有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL×2)洗滌,用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濾液減壓濃縮。用薄層層析以展開劑體系B純化所得殘餘物,得到標題產物5d(9H-芴-9-基)甲基(2-(((1-環丙基-2-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸酯(23.7mg,產率:78.9%)。
MS m/z(ESI):842.1[M+1]。
第五步,將5d(30mg,35.7μmol)溶於3mL二氯甲烷中,加入1.5mL二乙胺,室溫攪拌2小時。反應液減壓濃縮,加入1.5mL甲苯並減壓濃縮,重複兩次。向殘餘物中加入4.5mL正己烷打漿,靜置後傾倒出上層清液,保留固體。將固體殘餘物減壓濃縮,油泵拉乾得到粗品產物5e 2-((2-胺基乙醯胺基)甲氧基)-2-環丙基-N-((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)乙醯胺(23mg),產品不經純化直接用於下一步反應。
MS m/z(ESI):638.0[M+18]。
第六步,將粗品5e(20mg,32.3μmol)溶於1mL N,N-二甲基甲醯胺,氬氣置換三次,冰水浴降溫至0-5℃,加入4g(31.8mg,67.3μmol)的0.5mL N,N-二甲基甲醯胺溶液,加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉
鹽(27.8mg,94.3μmol),冰浴攪拌反應10分鐘,撤去冰浴,升至室溫攪拌1小時,反應生成化合物5。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件:色譜管柱:XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm;流動相:A-水(10mmol NH4OAc):B-乙腈,梯度沖提,流速:18mL/min),收集其相應組分,減壓濃縮,得到產物5-A和5-B(3.6mg,2.6mg)。
MS m/z(ESI):1074.4[M+1]。
單一構型化合物5-A(較短保留時間):UPLC分析:保留時間1.14分鐘,純度:85%(色譜管柱:ACQUITY UPLC BEHC18 1.7um 2.1*50mm,流動相:A-水(5mmol NH4OAc),B-乙腈)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ 8.60(t,1H),8.51-8.49(d,1H),8.32-8.24(m,1H),8.13-8.02(m,2H),8.02-7.96(m,1H),7.82-7.75(m,1H),7.31(s,1H),7.26-7.15(m,4H),6.99(s,1H),6.55-6.48(m,1H),5.65-5.54(m,1H),5.41(s,2H),5.35-5.15(m,3H),4.74-4.62(m,2H),4.54-4.40(m,2H),3.76-3.64(m,4H),3.62-3.48(m,2H),3.20-3.07(m,2H),3.04-2.94(m,2H),2.80-2.62(m,2H),2.45-2.30(m,3H),2.25-2.15(m,2H),2.15-2.04(m,2H),1.93-1.78(m,2H),1.52-1.39(m,3H),1.34-1.12(m,5H),0.87(t,3H),0.64-0.38(m,4H)。
單一構型化合物5-B(較長保留時間):
UPLC分析:保留時間1.16分鐘,純度:89%(色譜管柱:ACQUITY UPLC BEHC18 1.7um 2.1*50mm,流動相:A-水(5mmol NH4OAc),B-乙腈)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ 8.68-8.60(m,1H),8.58-8.50(m,1H),8.32-8.24(m,1H),8.13-8.02(m,2H),8.02-7.94(m,1H),7.82-7.75(m,1H),7.31(s,1H),7.26-7.13(m,4H),6.99(s,1H),6.55-6.48(m,1H),5.60-5.50(m,1H),5.41(s,2H),5.35-
5.15(m,3H),4.78-4.68(m,1H),4.60-4.40(m,2H),3.76-3.58(m,4H),3.58-3.48(m,1H),3.20-3.10(m,2H),3.08-2.97(m,2H),2.80-2.72(m,2H),2.45-2.30(m,3H),2.25-2.13(m,2H),2.13-2.04(m,2H),2.03-1.94(m,2H),1.91-1.78(m,2H),1.52-1.39(m,3H),1.34-1.12(m,5H),0.91-0.79(m,3H),0.53-0.34(m,4H)。
其他中間體的製備方法參考中間體5。
在37℃條件下,向抗體Ab2的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液;7.3ml,13.8mg/ml,0.681μmol)加入配置好的三(2-羧乙基)膦的水溶液(10mM,0.347mL,3.47μmol),置於水浴振盪器,於37℃振盪反應3小時,停止反應;將反應液用水浴降溫至25℃,稀釋至14.0ml,並取出3.3ml溶液往下反應。
將化合物5-A(3.0mg,3.72μmol)溶解於0.15mL DMSO中,加入到上述3.3ml溶液中,置於水浴振盪器,於25℃下振盪反應3小時,停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相:pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液,含0.001M的EDTA),得到Ab-依喜替康的示例性產物Ab2-依喜替康的PBS緩衝液(1.35mg/mL,13mL),於4℃冷凍儲存。
採用紫外法測定平均值y。將裝有琥珀酸鈉緩衝液的比色皿分別置於參比吸收池和樣品測定吸收池中後,扣除溶劑空白後,再將裝有供試品溶液的比色皿置於樣品測定吸收池中,測定280nm和370nm處吸光度。
數據處理:
藉由建立標準曲線,測定280nm波長下的吸收,確定抗體含量Cmab,測定370nm波長下的吸收,確定小分子含量CDrug。
藥物載量平均值y=CDrug/Cmab。
藉由以上方法測定示例性產物Ab2-依喜替康為7.6。藉由UV-HPLC純化獲得Ab2-依喜替康(y=8)樣品。
實施例10:抗體藥物偶聯物的腫瘤殺傷活性
為進一步研究抗體-藥物偶聯物對體內形成的腫瘤的殺傷作用,在小鼠體內用NCI-H929細胞形成移植瘤後,評估本公開抗體-藥物偶聯物的抗腫瘤效果。
(1)將9x106個NCI-929細胞注射到8週齡的免疫缺陷的裸鼠(NOD-SCID)皮下,8天後開始藉由靜脈注射注射抗體-藥物偶聯物Ab2-MC-MMAF(實施例7,y=4)和Ab2-依喜替康(實施例9,y=8),每1週注射一次,劑量為1mg/kg。對照採用人IgG1蛋白,劑量為1mg/kg。對照組或給藥組每組5隻小鼠。藉由測量腫瘤體積計算抑瘤率。抑瘤率=100%-(第14天給藥組腫瘤體積-第0天給藥組腫瘤體積)/(第14天對照組腫瘤體積-第0天對照組腫瘤體積)。實驗結果如表9所示。抗體-藥物偶聯物Ab2-MC-MMAF(實施例7,y=4)和Ab2-依喜替康(實施例9,y=8)均顯示抑瘤活性。
(2)將9x106個NCI-929細胞注射到8週齡的免疫缺陷的裸鼠(NOD-SCID)皮下,8天後開始藉由靜脈注射抗體-藥物偶聯物Ab2-MC-MMAF(實施例7,y=4)和Ab3-MC-MMAF(實施例7,y=4.1),每1週注射2次,劑量為3mg/kg。對照採用人IgG1蛋白,劑量為3mg/kg。對照組或給藥組每組5隻小
鼠。藉由測量腫瘤體積計算抑瘤率。抑瘤率TGI=100%-(第14天給藥組腫瘤體積-第0天給藥組腫瘤體積)/(第14天對照組腫瘤體積-第0天對照組腫瘤體積)。實驗結果如表10所示,Ab2-MC-MMAF(實施例7,y=4)和Ab3-MC-MMAF(實施例7,y=4.1)均顯示對腫瘤的殺傷作用。
<110> 上海翰森生物醫藥科技有限公司,江蘇豪森藥業集團有限公司 (SHANGHAI HANSOH BIOMEDICAL CO.,LTD/JIANGSU HANSOH PHARMACEUTIAL GROUP CO.,LTD)
<120> 抗BCMA抗體、其抗原结合片段及其醫藥用途
<130> 702071CPCT
<150> CN 201910695597.9
<151> 2019-07-30
<160> 23
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(121)
<223> 鼠單抗M1的重鏈可變區
<400> 1
<210> 2
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(106)
<223> 鼠單抗M1的輕鏈可變結構域
<400> 2
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(10)
<223> 鼠單抗M1的HCDR1
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<212> PRT
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<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(17)
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
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<211> 7
<212> PRT
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<223> 鼠單抗M1的LCDR2
<400> 7
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(9)
<223> 鼠單抗M1的LCDR3
<400> 8
<210> 9
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(121)
<223> 人源化重鏈可變區HCVR1
<400> 9
<210> 10
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(121)
<223> 人源化重鏈可變區HCVR2
<400> 10
<210> 11
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(121)
<223> 人源化重鏈可變區HCVR3
<400> 11
<210> 12
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(106)
<223> 人源化輕鏈可變區LCVR1
<400> 12
<210> 13
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(106)
<223> 人源化輕鏈可變區LCVR2
<400> 13
<210> 14
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(106)
<223> 人源化輕鏈可變區LCVR3
<400> 14
<210> 15
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<222> (1)..(451)
<223> Ab1 HC
<400> 15
<210> 16
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<222> (1)..(451)
<223> Ab2 HC
<400> 16
<210> 17
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<222> (1)..(451)
<223> Ab3 HC
<400> 17
<210> 18
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<222> (1)..(213)
<223> Ab1 LC
<400> 18
<210> 19
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<222> (1)..(213)
<223> Ab2 LC
<400> 19
<210> 20
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 鏈
<222> (1)..(213)
<223> Ab3 LC
<400> 20
<210> 21
<211> 65
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(65)
<223> 帶His標簽的人BCMA胞外區
<400> 21
<210> 22
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(330)
<223> 重鏈恆定區
<400> 22
<210> 23
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(107)
<223> 輕鏈恆定區
<400> 23
Claims (23)
- 一種抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其包含重鏈可變區和輕鏈可變區,其中,該重鏈可變區包含至少1個選自以下序列所示的HCDR:SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5;和該輕鏈可變區包含至少1個選自以下序列所示的LCDR:SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
- 如請求項1所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:3所示的HCDR1、SEQ ID NO:4所示的HCDR2和SEQ ID NO:5所示的HCDR3。
- 如請求項1所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:6所示的LCDR1、SEQ ID NO:7所示的LCDR2和SEQ ID NO:8所示的LCDR3。
- 如請求項1所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其包含重鏈可變區和輕鏈可變區,其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:3所示的HCDR1、SEQ ID NO:4所示的HCDR2和SEQ ID NO:5所示的HCDR3;該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:6所示的LCDR1、SEQ ID NO:7所示的LCDR2和SEQ ID NO:8所示的LCDR3。
- 如請求項1至4中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中該抗BCMA抗體為鼠源抗體,嵌合抗體,人抗體或人源化抗體。
- 如請求項1至5中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含源自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其變體的重鏈恆定區;較佳地,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含源自人IgG1、IgG2或IgG4的重鏈恆定區;更佳地,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含胺基酸突變後具有增強的ADCC毒性的IgG1重鏈恆定區;或者,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含如SEQ ID NO:22所示的IgG1重鏈恆定區。
- 如請求項1至6中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含源自人κ鏈、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區,較佳地,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段進一步包含如SEQ ID NO:23所示的輕鏈恆定區。
- 如請求項1至7中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自以下序列的重鏈可變區:SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11,或與其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈可變區。
- 如請求項1至8中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自以下序列的輕鏈可變區:SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14,或與其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈可變區。
- 如請求項8或9所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自如下序列的重鏈:SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17,或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈。
- 如請求項8或9所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含選自如下序列的輕鏈:SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20,或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈。
- 如請求項1至11中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中:該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:9所示的重鏈可變區、或與其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈可變區,和SEQ ID NO:12所示的輕鏈可變區、或與其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈可變區;或,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:10所示的重鏈可變區、或與其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈可變區,和SEQ ID NO:13所示的輕鏈可變區、或與其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈可變區;或,該抗BCMA抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:11所示的重鏈可變區、或與其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈可變區,和SEQ ID NO:14所示的輕鏈可變區、或與其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈可變區。
- 如請求項1至12中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,其中,該抗BCMA抗體包含SEQ ID NO:15所示的重鏈、或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈,和SEQ ID NO:18所示的輕鏈、或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈;或,該抗BCMA抗體包含SEQ ID NO:16所示的重鏈、或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈,和SEQ ID NO:19所示的輕鏈、或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈;或,該抗BCMA抗體包含SEQ ID NO:17所示的重鏈、或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的重鏈,和SEQ ID NO:20所示的輕鏈;或與其具有至少80%、85%、90%、95%或99%同一性的輕鏈。
- 一種多核苷酸,其編碼請求項1至13中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段。
- 一種表達載體,其含有請求項14所述的多核苷酸。
- 一種宿主細胞,其導入或含有請求項15所述的表達載體。
- 如請求項16所述的宿主細胞,其中該宿主細胞為細菌、酵母菌或哺乳動物細胞,較佳為大腸桿菌、畢赤酵母、CHO細胞或HEK293細胞。
- 一種生產抗BCMA抗體的方法,包括步驟:培養請求項16或17所述的宿主細胞,較佳HEK293細胞;從培養物中分離抗體,較佳細胞培養液;以及對所述抗體進行純化,較佳地,以層析方法純化抗體。
- 一種醫藥組成物,其含有如請求項1至13中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,以及可藥用的賦形劑或載體。
- 一種檢測或診斷試劑盒,其含有如請求項1至13中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,視需要地,該檢測或診斷試劑盒還包含一種或多種能檢測該BCMA抗體或其抗原結合片段與BCMA結合的試劑。
- 一種抗體藥物偶聯物,其包含與細胞毒性劑偶聯的如請求項1至13中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段,較佳地,該細胞毒性劑選自MMAF、SN-38和依喜替康。
- 一種如請求項1至13中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段、或如請求項19所述的醫藥組成物、或如請求項21所述的抗體藥物偶聯物在製備用於治療或預防BCMA介導的疾病或病症的藥物中的用途,較佳地,該BCMA介導的疾病或病症為癌症或自身免疫疾病,其中該癌症較佳為表達BCMA的癌症,更佳為淋巴瘤、白血病或骨髓瘤,最佳為多發性骨髓瘤,該自身免疫疾病較佳選自紅斑狼瘡、IgA腎病和風濕性關節炎。
- 一種如請求項1至13中任一項所述的抗BCMA抗體或其抗原結合片段在用於製備檢測、診斷、或預後BCMA介導的疾病或病症的試劑盒中的用途,較佳地,該BCMA介導的疾病或病症為癌症或自身免疫疾病,其中該癌症較佳為表達BCMA的癌症,更佳為淋巴瘤、白血病或骨髓瘤,最佳為多發性骨髓瘤,該自身免疫疾病較佳選自紅斑狼瘡、IgA腎病和風濕性關節炎。
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