KR20210141794A

KR20210141794A - 항포도플라닌 항체

Info

Publication number: KR20210141794A
Application number: KR1020197037963A
Authority: KR
Inventors: 노부히코 교부; 나오야 후지타; 마모루 가키노; 아이 가와시마; 신야 후지하라; 나오키 고다
Original assignee: 고에키자이단호진 간겐큐카이; 아피 가부시키가이샤
Priority date: 2019-03-15
Filing date: 2019-06-14
Publication date: 2021-11-23
Also published as: SG11201913540VA; WO2020188836A1; JP2020150947A; CN113646332A; TW202034953A

Abstract

본 발명은, 인간화 항체 혹은 마우스-인간 키메라 항체인 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 제공을 과제로 하여, 해당 과제를, 소정의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 인간화 항체 혹은 마우스-인간 키메라 항체인 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편으로 해결한다.

Description

항포도플라닌 항체

본 발명은 항포도플라닌 항체에 관한 것이다. 상세하게는, 인간화 항체 혹은 마우스-인간 키메라 항체인 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편에 관한 것이다.

혈소판은, 응집되어 암세포막을 덮음으로써, 혈류의 전단 응력에 대한 저항성이나 면역 세포로부터의 공격 회피를 촉진시키고, 전이암 세포의 생존을 촉진시킴과 함께, 종양 덩어리의 형성과 색전 형성을 촉진하며, 나아가 종양 증식, 상피 간엽 전환(EMT), 혈관 신생을 촉진시키는 등의 기구로 전이소의 형성을 조장하는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 1, 2).

한편, 암세포 상에는, 혈소판 응집을 유도하는 단백질인 포도플라닌이 동정되어 있으며, 포도플라닌은, 그의 PLAG 도메인, 바람직하게는 PLAG4 도메인을 통해 혈소판 상의 리셉터인 CLEC-2와 결합하는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 1 내지 4).

포도플라닌은 중피종, 뇌종양, 정소 종양, 카포시 육종, 임파관종, 해면상 혈관종, 혈관 육종, 폐편평 상피암, 난소암 미분화 배세포종, 신경 교종, 배세포 종양, 두경부암, 폐암, 방광암, 골연부 종양(원발성 골종양(골육종, 연골 육종), 연부 육종)), 식도암 등의 암에 고발현되고 있으며, 암세포의 침윤능이나 전이능을 항진하는 것도 보고되어 있다(비특허문헌 5 내지 17).

따라서, 암세포 상의 포도플라닌과 혈소판 상의 CLEC-2의 결합을 저해함으로써, 종양 덩어리의 형성이나 색전의 형성이 억제되고, 나아가 종양 증식, 상피 간엽 전환(EMT), 혈관 신생의 억제에 의한 전이소의 형성을 억제할 수 있어, 암 관련의 혈전증을 예방할 수 있는 것이 시사되고 있다(비특허문헌 1, 4). 정맥 혈전증에서는 혈관벽에 있어서 포도플라닌의 발현이 촉진되는 것이 알려져 있고, 혈전의 존재는 염증을 야기하는 것도 보고되어 있는 점에서, 혈전의 예방에 의해 염증의 예방을 기대할 수 있다(비특허문헌 4, 18). 나아가, 상기 암의 침윤이나 전이를 억제할 수 있는 것이 기대된다.

이러한 상황 하에, 암세포 상의 포도플라닌과 혈소판 상의 CLEC-2의 결합을 저해하는 새로운 치료약의 개발이 진행되고 있다. 그의 하나로, PLAG4 도메인을 표적으로 한 항인간 포도플라닌 항체인 PG4D2 항체(IgG2a 서브클래스)가 수립되어 있다(비특허문헌 1, 특허문헌 1). 당해 항체는, 평형 해리 상수(K_D)가 0.3nM 이하로 결합 활성이 매우 강한 항체이며, 또한 당해 항체에는, 포도플라닌 양성 종양 세포 의존적인 혈소판 응집이나 전이의 발생 빈도를 억제하는 활성도 확인되고 있다.

그러나, 당해 PG4D2 항체는 마우스에 면역하여 얻어진 마우스 PG4D2 항체이며, 인간화 항체 및 마우스-인간 키메라 항체는 확립되어 있지 않다. 마우스 항체는 인간의 생체내(in vivo)에서의 반감기가 비교적 짧다. 또한, 마우스 항체는 인간에 대하여 면역원성이 높고, 그 때문에 인간에 있어서의 치료적 가치가 한정된다. 마우스 항체는 장기간 또는 수회나 투여하면, 환자에게 바람직하지 않은 알레르기성 반응의 리스크를 초래하는 면역 응답을 야기할 것이 염려된다. 따라서, 당해 기술 분야에서는 인간화 항체 혹은 마우스-인간 키메라 항체의 필요성이 존재한다.

국제 공개 제2017/010463호

의학의 흐름, 265(1), 60-65(2018) 일본 혈전 지혈 학회지, 27(1), 3-10(2016) 일본 혈전 지혈 학회지, 27(1), 11-17(2016) 일본 혈전 지혈 학회지, 28(4), 518-526(2017) 「30골육종에 대한 고감도 항포도플라닌 항체의 수립」, [2019년 1월 21일 검색], 인터넷 <URL: https://www.jstage.jst.go.jp/article/jsmtmr/30/0/30_70/_pdf> Histopathology, Apr; 46(4):396-402 (2005) Hum. Pathol., Apr; 36(4):372-80 (2005) Tumour Biol., Jul-Aug; 26(4):195-200 (2005) Am. J. Pathol., Mar; 166(3):913-21 (2005) Acta Neuropathol., May; 111(5):483-8 (2006) Cancer Cell, Apr; 9(4):261-72 (2006) Acta Neuropathol., Jan; 113(1):87-94 (2007) Int. J. Cancer, Jun1; 134(11):2605-14 (2014) Pathol. Int., Mar; 60(3):193-202 (2010) Oncol. Rep., Mar; 25(3):599-607 (2011) Am. J. Pathol., Aug; 179(2):1041-9 (2011) Monoclon. Antib. Immunodiagn. Immunother., Jun; 34(3):154-61 (2015) Blood, Apr 6; 129(14):1896-1898 (2017)

본 발명은, 인간화 항체 혹은 마우스-인간 키메라 항체인 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 제공을 과제로 한다.

본 발명자들은 예의 검토한 결과, 소정의 서열을 사용하여 마우스 PG4D2 항체를 인간화 또는 마우스-인간 키메라화함으로써 상기 과제를 해결할 수 있음을 발견하고, 본 발명을 완성시켰다.

본 발명은, 이하에 나타내는 바와 같다.

본 발명은, 하기 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 인간화 항체 혹은 마우스-인간 키메라 항체인 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편이다.

단, 하기 중쇄의 CDR1 내지 CDR3 및 경쇄의 CDR1 내지 CDR3의 아미노산 서열은, 각각 하기 서열 번호 1 내지 6으로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다.

중쇄의 CDR1의 아미노산 서열이 서열 번호 1의 아미노산 서열이고,

중쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 2의 아미노산 서열이고,

중쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 3의 아미노산 서열이고,

경쇄의 CDR1의 아미노산 서열이 서열 번호 4의 아미노산 서열이고,

경쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 5의 아미노산 서열이고, 그리고

경쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 6의 아미노산 서열이다.

상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편은, 인간화 항체이며, 가변 영역이 하기 (I) 또는 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 것을 바람직한 양태로 하고 있다.

단, 하기 (I)에 있어서, 하기 중쇄의 FR1 내지 FR4 및 경쇄의 FR1 내지 FR4의 아미노산 서열은, 각각 하기 서열 번호 7 내지 14로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 되고,

하기 (II)에 있어서, 하기 중쇄의 FR1 내지 FR4 및 경쇄의 FR1 내지 FR4의 아미노산 서열은, 각각 하기 서열 번호 7, 15, 16, 10 내지 14로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다.

(I):

경쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 5의 아미노산 서열이고,

경쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 6의 아미노산 서열이고,

중쇄의 FR1의 아미노산 서열이 서열 번호 7의 아미노산 서열이고,

중쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 8의 아미노산 서열이고,

중쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 9의 아미노산 서열이고,

중쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 10의 아미노산 서열이고,

경쇄의 FR1의 아미노산 서열이 서열 번호 11의 아미노산 서열이고,

경쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 12의 아미노산 서열이고,

경쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 13의 아미노산 서열이고, 그리고

경쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 14의 아미노산 서열이다;

(II):

중쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 15의 아미노산 서열이고,

중쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 16의 아미노산 서열이고,

경쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 14의 아미노산 서열이다.

상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편은, 마우스-인간 키메라 항체이며, 가변 영역이 하기 아미노산 서열을 포함하는 것을 바람직한 양태로 하고 있다.

단, 하기 중쇄의 FR1 내지 FR4 및 경쇄의 FR1 내지 FR4의 아미노산 서열은, 각각 하기 서열 번호 17 내지 24로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다.

중쇄의 FR1의 아미노산 서열이 서열 번호 17의 아미노산 서열이고,

중쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 18의 아미노산 서열이고,

중쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 19의 아미노산 서열이고,

중쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 20의 아미노산 서열이고,

경쇄의 FR1의 아미노산 서열이 서열 번호 21의 아미노산 서열이고,

경쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 22의 아미노산 서열이고,

경쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 23의 아미노산 서열이고, 그리고

경쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 24의 아미노산 서열이다.

상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편은, 상기 항포도플라닌 항체가 인간 IgG 항체의 정상 영역을 포함하는 것을 바람직한 양태로 하고 있다.

또한, 본 발명은, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을 포함하는, 포도플라닌과 CLEC-2의 결합 저해제를 제공한다.

또한, 본 발명은, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을 포함하는, 의약 조성물을 제공한다.

상기 의약 조성물은, 암세포의 증식 또는 전이의 억제를 위한 것인 것을 바람직한 양태로 하고 있다.

또한, 상기 의약 조성물은, 혈소판 응집 억제, 항혈전 또는 항염증을 위한 것인 것을 바람직한 양태로 하고 있다.

또한, 상기 의약 조성물은, 상기 암세포가 포도플라닌 양성의 종양 세포인 것을 바람직한 양태로 하고 있다.

또한, 본 발명은, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 단백질 부분을 코딩하는 DNA를 제공한다.

또한, 본 발명은, 상기 DNA를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.

또한, 본 발명은, 상기 DNA 또는 상기 재조합 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.

본 발명에 따르면, 인간화 항체 혹은 마우스-인간 키메라 항체인 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을 제공할 수 있다. 당해 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편은, 암세포 상의 포도플라닌과 혈소판 상의 CLEC-2의 결합을 저해하는 작용을 갖기 때문에, 예를 들어 암세포의 증식 혹은 전이의 억제, 혈소판 응집 억제, 항혈전 또는 항염증을 위한 의약 조성물로서 유용하다.

도 1은 본 발명의 실시예에 있어서의, 마우스 PG4D2 항체에 의한 시험관내(in vitro)에서의 혈소판 응집 억제 효과를 나타내는 그래프.
도 2는 본 발명의 실시예에 있어서의, 인간화 항체 K4에 의한 시험관내에서의 혈소판 응집 억제 효과를 나타내는 그래프.
도 3은 본 발명의 실시예에 있어서의, 인간화 항체 K5에 의한 시험관내에서의 혈소판 응집 억제 효과를 나타내는 그래프.
도 4는 본 발명의 실시예에 있어서의, 인간화 항체 K4 또는 K5에 의한 폐로의 혈행성 전이 억제 효과를 나타내는 그래프.
도 5는 본 발명의 실시예에 있어서의, 인간화 항체 K4 또는 K5에 의한 항종양 효과를 나타내는 그래프.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

또한, 본 명세서에 있어서의 항체의 아미노산 서열은, Kabat 정의에 의한 것이다.

본 발명은 하기 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 인간화 항체(완전 인간 항체를 포함한다.) 혹은 마우스-인간 키메라 항체인 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편이다.

상기 중쇄의 CDR1 내지 CDR3 및 경쇄의 CDR1 내지 CDR3의 아미노산 서열은, 각각 상기 서열 번호 1 내지 6으로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상, 바람직하게는 95％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다.

즉, 상기 중쇄의 CDR1 내지 CDR3 및 경쇄의 CDR1 내지 CDR3의 아미노산 서열은, 그들이 구성하는 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 항원 결합 활성이, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편과 실질적으로 동일한 한, 각각 상기 서열 번호 1 내지 6으로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상, 바람직하게는 95％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다.

또한, 상기 중쇄의 CDR1 내지 CDR3 및 경쇄의 CDR1 내지 CDR3의 아미노산 서열은, 그들이 구성하는 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편이, 포도플라닌과 혈소판 상에 존재하는 CLEC-2의 결합을 저해하는 활성을 갖는 한, 각각 상기 서열 번호 1 내지 6으로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상, 바람직하게는 95％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다.

소정의 아미노산 서열과 소정의 동일성을 갖는 아미노산 서열이란, 해당 소정의 아미노산 서열에 있어서 치환, 결실, 삽입 또는 부가가 이루어진 것에 의한 것이다.

해당 치환은 보존적 치환이 바람직하다. 「보존적 치환」이란, 펩티드의 활성을 실질적으로 개변하지 않도록, 아미노산 잔기를, 다른 화학적으로 유사한 아미노산 잔기로 치환하는 것이다. 예를 들어, 어떤 소수성 잔기를 다른 소수성 잔기에 의해 치환하는 경우, 어떤 극성 잔기를 동일한 전하를 갖는 다른 극성 잔기에 의해 치환하는 경우 등을 들 수 있다. 이러한 치환을 행할 수 있는 기능적으로 유사한 아미노산의 예로서, 비극성(소수성) 아미노산으로서는, 알라닌, 발린, 이소류신, 류신, 프롤린, 트립토판, 페닐알라닌, 메티오닌 등을 들 수 있다. 극성(중성) 아미노산으로서는, 글리신, 세린, 트레오닌, 티로신, 글루타민, 아스파라긴, 시스테인 등을 들 수 있다. 양전하를 갖는 (염기성) 아미노산으로서는, 아르기닌, 히스티딘, 리신 등을 들 수 있다. 또한, 음전하를 갖는 (산성) 아미노산으로서는, 아스파르트산, 글루탐산 등을 들 수 있다.

본 발명의 「단리된」이란, 생체 내에 존재하는 것이 아닌 것을 의미한다. 예를 들어, 어떤 개체에서 산생되어, 해당 개체 내에 존재하는 상태의 항체는 포함되지 않는다.

본 발명의 「인간화 항체」는, 가변 영역이 공지된 마우스 PG4D2 항체 유래의 상보성 결정 영역과 인간 항체 유래의 프레임워크 영역을 포함하고, 정상 영역이 인간 항체 유래의 정상 영역을 포함하는 항체이다. 상기 인간 항체의 서브타입은, 본 발명의 효과가 발휘되는 한 특별히 제한되지 않지만, 바람직하게는 IgG이며, 보다 바람직하게는 IgG4이다. 정상 영역의 아미노산 서열로서는, 예를 들어 해당 IgG4 항체의 정상 영역의 아미노산 서열이고, 그의 중쇄의 아미노산 서열로서 서열 번호 25의 아미노산 서열, 경쇄의 아미노산 서열로서 서열 번호 26의 아미노산 서열을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 「인간화 항체」는 「완전 인간 항체」여도 된다.

본 발명의 「마우스-인간 키메라 항체」는, 가변 영역이 공지된 마우스 PG4D2 항체 유래의 가변 영역이며, 정상 영역이 인간 항체 유래의 정상 영역이다. 상기 인간 항체의 서브타입은, 본 발명의 효과가 발휘되는 한 특별히 제한되지 않지만, 바람직하게는 IgG이며, 보다 바람직하게는 IgG4이다. 정상 영역의 아미노산 서열로서는, 예를 들어 해당 IgG4 항체의 정상 영역의 아미노산 서열이고, 상기와 같은, 중쇄의 아미노산 서열로서 서열 번호 25의 아미노산 서열, 경쇄의 아미노산 서열로서 서열 번호 26의 아미노산 서열을 들 수 있다.

본 발명에 있어서 「항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편」이란, 항체의 일부분을 포함하는 단백질이며, 항원에 결합할 수 있는 것을 말한다. 항체 단편의 예로서는, F(ab')₂, Fab', Fab, Fv(항체의 가변 단편(variable fragment of antibody)), 디술피드 결합 Fv, 단일쇄 항체(scFv) 및 이들의 중합체 등을 들 수 있다. 당해 항체 단편은, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 등의 비펩티드성 폴리머, 방사성 물질, 독소, 저분자 화합물, 사이토카인, 성장 인자, 알부민, 효소, 다른 항체 등의 기능 분자를 화학적 또는 유전자 공학적으로 결합하고 있어도 된다.

상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편은, 본 발명의 효과가 발휘되는 한, 인간화 항체인 것이 바람직하고, 가변 영역이 하기 (I) 또는 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 것이 바람직하다.

(I):

(II):

상기 (I)에 있어서, 상기 중쇄의 FR1 내지 FR4 및 경쇄의 FR1 내지 FR4의 아미노산 서열은, 각각 상기 서열 번호 7 내지 14로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상, 바람직하게는 95％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 되고, 상기 (II)에 있어서, 상기 중쇄의 FR1 내지 FR4 및 경쇄의 FR1 내지 FR4의 아미노산 서열은, 각각 상기 서열 번호 7, 15, 16, 10 내지 14로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상, 바람직하게는 95％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다. 그의 상세한 것은 앞서 서술한 내용과 동일하다.

또한, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편은, 이미 설명한 대로, 본 발명의 효과가 발휘되는 한, 마우스-인간 키메라 항체인 것도 바람직하고, 가변 영역이 하기 아미노산 서열을 포함하는 것도 바람직하다.

상기 중쇄의 FR1 내지 FR4 및 경쇄의 FR1 내지 FR4의 아미노산 서열은, 각각 상기 서열 번호 17 내지 24로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상, 바람직하게는 95％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다. 그의 상세한 것은 앞서 서술한 내용과 동일하다.

본 발명의 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편은, 해당 구조를 구성하는 아미노산 서열에 기초하여 공지된 유전자 공학적 방법을 사용하여 제조할 수 있다.

또한, 그의 제조에 있어서는, 얻어진 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을 회수하는 공정을 포함해도 된다. 당해 회수 공정은 정제 공정, 농축 공정 등이면 된다. 당해 정제 공정에서는, 공지된 정제 기술을 사용할 수 있고, 본 발명의 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편이 균일해질 때까지 정제해도 된다.

본 발명의 항포도플라닌 항체는, 다중특이적 항체, 기능 개변 항체 및 접합체 항체를 포함한다. 그의 제조 방법으로서는, 공지된 방법을 들 수 있다.

본 발명의 다른 양태는, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을 포함하는, 포도플라닌과 CLEC-2의 결합 저해제(이하, 「본 형태의 결합 저해제」 등이라 칭하는 경우가 있음)이다.

또한, 본 형태의 결합 저해제는 결합 저해용 조성물이어도 된다. 또한, 본 형태의 결합 저해제 및 결합 저해용 조성물은 혼합물이면 되고, 그의 성분은 균일해도 불균일해도 된다.

본 형태의 결합 저해제는, 포도플라닌과 CLEC-2의 결합을 저해하는 작용을 갖고 있기 때문에, 포도플라닌과 CLEC-2의 결합이 저해됨으로써 얻어지는 효과를 갖는다.

본 형태의 결합 저해제는, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편 중 1종을 함유해도 되고, 복수종을 함유해도 된다.

본 형태의 결합 저해제 전체량에 대한 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 함유량은, 포도플라닌과 CLEC-2의 결합이 저해되는 한 특별히 한정되지 않지만, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 총량으로서, 통상 0.5mg/mL 이상, 바람직하게는 1mg/mL 이상, 보다 바람직하게는 10mg/mL 이상이며, 또한 통상 500mg/mL 이하, 바람직하게는 200mg/mL 이하, 보다 바람직하게는 100mg/mL 이하이다.

본 형태의 결합 저해제의 기타 상세한 것은, 후술하는 「상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을 포함하는 의약 조성물」에 관한 기재를 원용한다.

본 발명의 다른 양태는, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을 포함하는 의약 조성물(이하, 「본 형태의 의약 조성물」 등이라 칭하는 경우가 있음)이다.

본 형태의 의약 조성물은, 포도플라닌과 CLEC-2의 결합을 저해하는 작용을 갖고 있기 때문에, 포도플라닌과 CLEC-2의 결합이 저해됨으로써 얻어지는 효과를 갖는다. 예를 들어, 암세포의 증식 혹은 전이의 억제 효과, 혈소판 응집 억제 효과, 항혈전 효과, 항염증 효과 등을 들 수 있다. 따라서, 본 형태의 의약 조성물은, 암세포의 증식 혹은 전이의 억제를 위한, 혈소판 응집 억제를 위한, 항혈전을 위한, 또는 항염증을 위한 의약 조성물 등으로서 이용할 수 있다.

상기 암세포는, 바람직하게는 포도플라닌 양성의 종양 세포이다. 포도플라닌 양성의 종양 세포란, 예를 들어 중피종, 뇌종양, 정소 종양, 카포시 육종, 임파관종, 해면상 혈관종, 혈관 육종, 폐편평 상피암, 난소암 미분화 배세포종, 신경 교종, 배세포 종양, 두경부암, 폐암, 방광암, 골연부 종양(원발성 골종양(골육종, 연골 육종), 연부 육종)), 식도암의 세포 등을 들 수 있다.

따라서, 본 형태의 의약 조성물은, 암세포의 증식 혹은 전이의 억제, 혈소판 응집 억제, 항혈전, 항염증 등에 의해 예방 또는 치료될 수 있는 질환의 예방 또는 치료에 사용할 수 있다. 「치료」는 개선을 포함한다. 해당 질환으로서는, 예를 들어 중피종, 뇌종양, 정소 종양, 카포시 육종, 임파관종, 해면상 혈관종, 혈관 육종, 폐편평 상피암, 난소암 미분화 배세포종, 신경 교종, 배세포 종양, 두경부암, 폐암, 방광암, 골연부 종양(원발성 골종양(골육종, 연골 육종), 연부 육종)), 식도암 등을 들 수 있다.

본 형태의 의약 조성물은, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을 함유한다. 즉, 본 형태의 의약 조성물은, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편 중 1종을 함유해도 되고, 복수종을 함유해도 된다.

본 형태의 의약 조성물의 투여 형태는 특별히 제한되지 않고, 경구 투여 또는 비경구 투여로 투여할 수 있다. 비경구 투여로서는, 예를 들어 정맥 주사, 근육 주사, 피하 투여, 직장 투여, 경피 투여, 뇌내 투여, 척수내 투여, 기타 국소 투여를 들 수 있다.

경구 투여 및 비경구 투여를 위한 제형 및 그의 조제 방법은 당업자에게 주지되어 있고, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을, 약학적으로 허용되는 담체 등과 배합함으로써 의약 조성물을 제조할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제형은, 주사용 제제, 외용제, 좌제 흡입제, 안제, 안연고제, 점비제, 점이제, 리포솜제 등을 들 수 있다.

주사용 제제로서는, 예를 들어 점적 주사제, 정맥 주사제, 근육 주사제, 피하 주사제, 피내 주사제, 뇌내 투여 제제, 척수내 투여 제제 등을 들 수 있다.

외용제로서는, 예를 들어 연고제, 퍼프제, 로션제 등을 들 수 있다.

특히 중추 신경 조직에 직접 작용시키고자 하는 경우에는 침투압 펌프의 의료용 마이크로 펌프를 이용하여 지속적으로 주입할 수도 있고, 피브린 풀(糊) 등과 혼합하여 서방 제제로 한 후에 환부 조직에 유치할 수도 있다.

이 중, 예를 들어 주사용 제제는, 통상적으로 항체를 주사용 증류수에 용해시켜 조제하지만, 필요에 따라서 용해 보조제, 완충제, pH 조정제, 등장화제, 무통화제, 보존제, 안정화제 등을 첨가할 수 있다. 또한, 사전 조제용의 동결 건조 제제로 할 수도 있다.

경구 투여를 위한 제형은, 고체 또는 액체의 제형, 구체적으로는 정제, 피복 정제, 환제, 세립제, 과립제, 산제, 캡슐제, 시럽제, 유제, 현탁제, 주사제, 트로키제 등을 들 수 있다.

본 형태의 의약 조성물은, 치료상 유효한 다른 약제를 더 함유하고 있어도 되고, 또한 필요에 따라 살균제, 소염제, 비타민류, 아미노산 등의 성분을 배합할 수도 있다.

약리학적으로 허용되는 담체로서는, 예를 들어 고형 제제에 있어서의 부형제, 활택제, 결합제 및 붕괴제, 또는 액상 제제에 있어서의 용제, 용해 보조제, 현탁화제, 등장화제, 완충제 및 무통화제 등을 들 수 있다. 추가로 필요에 따라 통상의 방부제, 항산화제, 착색제, 감미제, 흡착제, 습윤제 등의 첨가물을 적절히 적량으로 사용할 수도 있다.

본 형태의 의약 조성물의 투여량은, 예를 들어 투여 경로, 질환의 종류, 증상의 정도, 환자의 연령, 성별, 체중, 질환의 중증도, 약물 동태 및 독물학적 특징 등의 약리학적 지견, 약물 송달계의 이용의 유무, 그리고 다른 약물의 조합의 일부로서 투여되거나 하는 다양한 인자를 기초로, 의사에 의해 결정된다.

본 형태의 의약 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있다. 비경구 투여인 경우에는, 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 내피 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여 및 직장내 투여 등으로 투여할 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 투여량은 특별히 제한되지 않지만, 통상 1일당 약 0.01μg/kg 내지 약 1000mg/kg이며, 바람직하게는 1일당 약 0.01mg/kg 내지 약 100mg/kg이며, 더욱 바람직하게는 1일당 약 0.1mg/kg 내지 약 20mg/kg이다. 의약 조성물은 매일, 매주 1회, 매월 1 내지 4회 또는 매년 1 내지 7회 등의 간격으로 투여할 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.

본 형태의 의약 조성물은 단독으로 투여해도 되고, 다른 의약 조성물 또는 의약, 예를 들어 피종, 뇌종양, 정소 종양, 카포시 육종, 임파관종, 해면상 혈관종, 혈관 육종, 폐편평 상피암, 난소암 미분화 배세포종, 신경 교종, 배세포 종양, 두경부암, 폐암, 방광암, 골연부 종양(원발성 골종양(골육종, 연골 육종), 연부 육종)), 식도암의 예방 혹은 치료를 위한 의약 조성물 또는 의약 등과 병용해도 된다.

또한, 본 발명은 하기 양태를 포함한다.

[1] 포도플라닌과 CLEC-2의 결합 저해제 또는 포도플라닌과 CLEC-2의 결합을 저해하기 위한 조성물을 제조하기 위한, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 사용.

[2] 포도플라닌과 CLEC-2의 결합 저해에 의해 예방 또는 치료될 수 있는 질환의 예방 또는 치료에 있어서의 사용을 위한, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편.

[3] 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 예방적 또는 치료적 유효량을, 예방 또는 치료를 필요로 하는 인간 또는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 포도플라닌과 CLEC-2의 결합 저해에 의해 예방 또는 치료될 수 있는 질환의 예방 방법 또는 치료 방법.

[4] 포도플라닌과 CLEC-2의 결합 저해를 위한, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 사용.

[5] 포도플라닌과 CLEC-2의 결합 저해에 사용되는, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편.

[6] (i) 상기 항포도플라닌 항체 혹은 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편, (ii) 포도플라닌과 CLEC-2의 결합 저해제, 또는 (iii) 포도플라닌과 CLEC-2의 결합을 저해하기 위한 조성물을 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 포도플라닌과 CLEC-2의 결합을 저해하는 방법.

본 발명의 다른 양태는, 상기 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 단백질 부분을 코딩하는 DNA이다. 상기 항포도플라닌 항체의 단백질 부분을 코딩하는 DNA의 염기 서열은, 당해 단백질의 아미노산 서열에 기초하여 당업자라면 용이하게 설계할 수 있다. 구체예로서는, 실시예에 기재한 뉴클레오티드 서열(서열 번호 27 내지 52)을 들 수 있다.

또한, 본 형태의 DNA에는, 시그널 펩티드를 코딩하는 서열이나 코작 서열을 부가해도 된다.

본 형태의 DNA는, 공지된 유전자 공학적 방법을 사용하여 제조할 수 있다.

본 발명의 다른 양태는, 상기 DNA를 포함하는 재조합 벡터이다.

본 형태의 재조합 벡터로서는 공지된 벡터이면 되고, 플라스미드 벡터, 바이러스 벡터를 들 수 있다. 대장균과 같은 원핵 세포에 있어서 발현 가능한 벡터여도 되지만, 진핵 세포에 있어서 발현 가능한 벡터가 바람직하고, 포유 동물 유래의 세포에 있어서 발현 가능한 벡터가 보다 바람직하다.

본 발명의 다른 양태는, 상기 DNA 또는 상기 재조합 벡터를 포함하는 숙주 세포(형질 전환체)이다.

본 형태의 숙주 세포는, 상기 DNA 또는 상기 재조합 벡터가 도입되어, 형질 전환하는 것이다. 본 형태의 숙주 세포로서는 공지된 세포이면 되고, 예를 들어 대장균, 고초균과 같은 원핵 세포여도 되지만, 진핵 세포가 바람직하고, 포유 동물 유래의 세포가 보다 바람직하다.

상기 숙주 세포로서는, 예를 들어 CHO 세포(그의 계통으로서 CHO-S 세포 등) 등을 들 수 있고, 당해 세포에서 발현하는 벡터로서는, 예를 들어 Freedom(등록 상표) pCHO 1.0(Thermo Fisher Scientific) 등을 들 수 있다.

실시예

이하에 실시예를 사용하여 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1]

(항포도플라닌 항체인 인간화 항체의 아미노산 서열의 결정)

마우스 PG4D2 항체를 개변하여 인간화 항체를 제작하기 위해서, 항체 데이터베이스인 IMGT 및 Abysis database를 사용하여, Kabat 넘버링에 의해, 마우스 PG4D2 항체의 중쇄 및 경쇄의 각 CDR 및 각 FR 영역을 결정하였다. 이어서, IMGT 데이터베이스를 사용하여, 중쇄 및 경쇄의 FR 영역의 서열로부터, 당해 아미노산 서열과 동일성이 높은 인간 생식 세포 계열(germline, GL)의 FR 영역을 각각 선정하였다. FR 셔플링의 방법을 사용하여, FR1 내지 4의 각각에 대하여 가장 아미노산 동일성이 높은 FR 서열을 선정하고, FR1 내지 4의 조합을 결정하였다. 중쇄 및 경쇄 각각에 대하여, 선정한 인간 생식 세포 계열의 FR 영역에 마우스 PG4D2 항체의 상보성 결정 영역을 이식하고, 인간화 항체의 후보 서열을 설계하였다. 또한, 소정의 아미노산 잔기가 모두 완전히 보존되어 있는지; FR 영역의 등전점(pI)이 현저하게 높지 않은지; 선정한 GL의 FR 서열의 사용 빈도가 현저하게 낮지 않는지; 화학 수식 부위를 갖지 않는지; 마우스 PG4D2 항체와 비교하여 보존되지 않은 아미노산 잔기에 대하여, 아미노산 측쇄의 소수성, 체적 및 물리 화학적 성질의 3가지 관점에서, 2개 이상 성질이 다른 잔기를 갖는지; 아미노산 서열의 동일성이 큰지 하는 검토에 기초하여, 2종류의 인간화 항체 K4, K5의 아미노산 서열을 결정하였다. 즉, 인간화 항체 K4, K5는, 마우스 PG4D2 항체의 중쇄 및 경쇄의 각 FR 영역의 아미노산 서열을 단순하게 치환하여 얻어진 것은 아니다.

[제조예 1] 항포도플라닌 항체인 인간화 항체의 제조

제조한 인간화 항체 K4, K5의 각 아미노산 서열을 하기에 나타낸다.

인간화 항체 K4의 아미노산 서열은, 가변 영역은, 중쇄의 CDR1: 서열 번호 1의 아미노산 서열, 중쇄의 CDR2: 서열 번호 2의 아미노산 서열, 중쇄의 CDR3: 서열 번호 3의 아미노산 서열, 경쇄의 CDR1: 서열 번호 4의 아미노산 서열, 경쇄의 CDR2: 서열 번호 5의 아미노산 서열, 경쇄의 CDR3: 서열 번호 6의 아미노산 서열, 중쇄의 FR1: 서열 번호 7의 아미노산 서열, 중쇄의 FR2: 서열 번호 8의 아미노산 서열, 중쇄의 FR3: 서열 번호 9의 아미노산 서열, 중쇄의 FR4: 서열 번호 10의 아미노산 서열, 경쇄의 FR1: 서열 번호 11의 아미노산 서열, 경쇄의 FR2: 서열 번호 12의 아미노산 서열, 경쇄의 FR3: 서열 번호 13의 아미노산 서열, 경쇄의 FR4: 서열 번호 14의 아미노산 서열이고, 정상 영역은 인간 IgG4 항체의 아미노산 서열이고, 그의 중쇄의 아미노산 서열은 서열 번호 25의 아미노산 서열이고, 그의 경쇄의 아미노산 서열은 서열 번호 26의 아미노산 서열이다.

인간화 항체 K5의 아미노산 서열은, 가변 영역은, 중쇄의 CDR1: 서열 번호 1의 아미노산 서열, 중쇄의 CDR2: 서열 번호 2의 아미노산 서열, 중쇄의 CDR3: 서열 번호 3의 아미노산 서열, 경쇄의 CDR1: 서열 번호 4의 아미노산 서열, 경쇄의 CDR2: 서열 번호 5의 아미노산 서열, 경쇄의 CDR3: 서열 번호 6의 아미노산 서열, 중쇄의 FR1: 서열 번호 7의 아미노산 서열, 중쇄의 FR2: 서열 번호 15의 아미노산 서열, 중쇄의 FR3: 서열 번호 16의 아미노산 서열, 중쇄의 FR4: 서열 번호 10의 아미노산 서열, 경쇄의 FR1: 서열 번호 11의 아미노산 서열, 경쇄의 FR2: 서열 번호 12의 아미노산 서열, 경쇄의 FR3: 서열 번호 13의 아미노산 서열, 경쇄의 FR4: 서열 번호 14의 아미노산 서열이고, 정상 영역은, 상기 인간화 항체 K4의 정상 영역의 아미노산 서열과 동일하다.

또한, 상기 각 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열로서, 하기 서열의 뉴클레오티드 서열을 사용하였다.

서열 번호 1 내지 16의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열로서, 각각 서열 번호 27 내지 42의 뉴클레오티드 서열을 사용하였다.

서열 번호 25(중쇄의 정상 영역)의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열로서, 서열 번호 43의 뉴클레오티드 서열, 및

서열 번호 26(경쇄의 정상 영역)의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열로서 서열 번호 44의 뉴클레오티드 서열을 사용하였다.

CHO 세포(Thermo Fisher Scientific)에서의 발현을 위해서, 발현 벡터로서 Freedom(등록 상표) pCHO 1.0(Thermo Fisher Scientific)을 채용하였다.

인간화 항체 K4 및 K5를 발현하는 CHO 세포 각각을 융해 후, 확대 배양하고, 교반형 세포 배양조에서 10L 스케일의 유가식 배양을 행하였다. 배양 조건은, 교반 속도 100rpm, 배양 온도 37℃, pH 7.0으로 하고, 6 내지 8일간 배양 후, 배양액을 회수하였다.

회수한 배양액을 정제하여, 인간화 항체 K4 및 K5를 얻었다. 또한, 회수한 배양액의 상청은, 후술하는 실시예 2, 실시예 3의 측정에 사용하였다.

[제조예 2] 항포도플라닌 항체인 마우스-인간 키메라 항체의 제조

마우스-인간 키메라 항체 chPG4D2의 각 아미노산 서열을 하기에 나타낸다.

마우스-인간 키메라 항체 chPG4D2의 아미노산 서열은, 가변 영역은, 중쇄의 CDR1: 서열 번호 1의 아미노산 서열, 중쇄의 CDR2: 서열 번호 2의 아미노산 서열, 중쇄의 CDR3: 서열 번호 3의 아미노산 서열, 경쇄의 CDR1: 서열 번호 4의 아미노산 서열, 경쇄의 CDR2: 서열 번호 5의 아미노산 서열, 경쇄의 CDR3: 서열 번호 6의 아미노산 서열, 중쇄의 FR1: 서열 번호 17의 아미노산 서열, 중쇄의 FR2: 서열 번호 18의 아미노산 서열, 중쇄의 FR3: 서열 번호 19의 아미노산 서열, 중쇄의 FR4: 서열 번호 20의 아미노산 서열, 경쇄의 FR1: 서열 번호 21의 아미노산 서열, 경쇄의 FR2: 서열 번호 22의 아미노산 서열, 경쇄의 FR3: 서열 번호 23의 아미노산 서열, 경쇄의 FR4: 서열 번호 24의 아미노산 서열이고, 정상 영역은, 상기 인간화 항체 K4의 정상 영역의 아미노산 서열과 동일하다.

마우스-인간 키메라 항체 chPG4D2는, 상기 서열 번호 1 내지 6 및 17 내지 24의 각 아미노산 서열 및 상기 인간화 항체 K1의 정상 영역의 각 아미노산 서열을 코딩하는 각 뉴클레오티드를 설계하면, 제조예 1과 동일하게 하여 제조할 수 있는 것은, 당업자라면 용이하게 이해할 수 있다.

이 때, 상기 각 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열로서, 예를 들어 하기 서열의 뉴클레오티드 서열을 사용할 수 있다.

서열 번호 1 내지 6, 17 내지 24의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열로서, 각각 서열 번호 27 내지 32, 45 내지 52의 뉴클레오티드 서열을 사용할 수 있다.

또한, 정상 영역의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은, 제조예 1에 기재한 것과 동일한 것을 사용할 수 있다.

마우스-인간 키메라 항체 chPG4D2를 발현하는 CHO 세포를 융해 후, 확대 배양하고, 교반형 세포 배양조에서 5L 스케일의 배치 배양을 행하였다. 배양 조건은, 교반 속도 100rpm, 배양 온도 37℃, pH 7.0으로 하고, 7일간 배양 후, 배양액을 회수하였다.

회수한 배양액을 정제하여, 마우스-인간 키메라 항체 chPG4D2를 얻었다. 또한, 회수한 배양액의 상청은, 후술하는 실시예 2, 실시예 3의 측정에 사용하였다.

[실시예 2] 각 항체의 포도플라닌 결합 활성

제조예 1 및 제조예 2에서 회수한 배양액의 상청을 사용하여, 포도플라닌 PLAG4 도메인에 대한 결합 활성을, 특허문헌 1에 기재된 ELISA법에 준하는 방법에 의해 측정하였다. 항원 펩티드로서 인간 포도플라닌 PLAG4 도메인 펩티드(WT-hPLAG4(Genscript, 788349-1))를 고상화하고, 검출에는, 예비흡착된 염소 항-인간 IgG Fc(Biotin)(Goat Anti-Human IgG Fc(Biotin) preadsorbed)(Abcam, ab98618)와, 스트렙타비딘(Streptavidin) β-Gal 접합체(로슈·다이어그노스틱, 11112481001)를 사용하였다.

결과를 표 1에 나타낸다. 또한, 결합 활성(항체 역가)은 마우스-인간 키메라 항체 chPG4D2의 경우를 100％로 하여 나타내었다.

[실시예 3] 각 항체의 CLEC-2와 포도플라닌의 결합 저해 활성

제조예 1 및 제조예 2에서 얻어진 각 배양 상청을 사용하여, CLEC-2와 포도플라닌의 결합 저해 활성을, 특허문헌 1에 기재된 ELISA법에 준하는 방법에 의해 측정하였다. 항원 펩티드로서 재조합 인간(Recombinant Human) CLEC-2(R&D, 1718-CL-050)를 고상화하고, 이것과 결합하는 단백질로서 재조합 인간 포도플라닌 Fc 키메라(R&D, 3670-PL)를 사용하고, 검출에는, 예비흡착된 염소 항-인간 IgG Fc(Biotin)(Abcam, ab98618)와, 스트렙타비딘-β-갈락토시다제(galactosidase) 접합체(SIGMA, S3887, Roche, 11112481001)를 사용하였다.

또한, 양성 컨트롤로서, 마우스 PG4D2 항체(PG4D2)를 사용하였다. 마우스 PG4D2 항체는, NITE P-02071(PG4D2)의 하이브리도마로부터 얻어지는 모노클로날 항체이다.

결과를 표 2에 나타낸다.

[실시예 4] 각 항체의 시험관내에서의 혈소판 응집 억제 효과

혈소판 응집을 야기하지 않는 세포주인 CHO 세포에 인간 포도플라닌 유전자를 도입하면, 혈소판 응집을 야기하게 되는 것이 알려져 있다(J. Biol. Chem., Dec 19; 278(51):51599-605 (2003)).

인간 포도플라닌 양성의 골육종 세포주 SJSA-1(ATCC CRL-2098)을 인간 전혈에 첨가하고, 유도되는 혈소판 응집을 각 항체가 억제하는지를 전혈 혈소판 응집 측정 장치 WBA CARNA(타이요)를 사용하여 해석하였다. 골육종 세포주 SJSA-1(ATCC CRL-2098)은 아메리칸·타입·컬쳐·콜렉션(주소: 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, United States of America)으로부터 입수 할 수 있다.

또한, 인간화 항체 K4 및 K5를 사용한 계에 있어서의 음성 컨트롤로서, 인간 IgG4 항체(CrownBio, C0004)를 사용하였다.

또한, 이 시험관내 해석계는, 세포가 유도한 응집 덩어리를 포함하는 전혈을 마이크로메쉬 필터 너머로 흡인하고, 응집 덩어리에 의한 눈막힘으로 상승한 흡인 압력을 측정함으로써 응집율을 산출하는 것이다.

양성 컨트롤로서 마우스 PG4D2 항체(PG4D2)를 사용하였다. 또한, 마우스 PG4D2 항체를 사용한 계에 있어서의 음성 컨트롤로서, 마우스 IgG2a 항체(Sigma, M9144)를 사용하였다.

결과를 도 1 내지 도 3에 도시한다. 인간화 항체 K4 및 K5는, 양성 컨트롤과 동일하게 농도 의존적으로 혈소판 응집을 억제하였다.

[실시예 5] 각 항체의 폐로의 혈행성 전이 억제 효과

인간 포도플라닌 양성의 골육종 세포주 SJSA-1(ATCC CRL-2098)을, 중증 복합 면역 부전 마우스 SCID-Beige(CB17.Cg-Prkdc^scidLyst^bg-J/CrlCrlj)(니혼 찰스리버, 자성, 6주령)의 꼬리 정맥으로부터 주사를 놓고, 20일 후에 폐 표면에 형성된 전이 결절수를 계측하는 혈행성 전이 모델을 사용하여, 각 항체의 혈행성 전이 억제 효과를 해석하였다.

SJSA-1 세포 주사의 전날에 컨트롤 항체(인간 IgG4 항체(CrownBio)), 인간화 항체 K4 또는 K5를, 꼬리 정맥 경로로 각 군 6마리의 마우스에 투여하고, 포도플라닌 의존적인 실험적 폐 전이에 끼치는 영향을 검토하였다.

결과를 도 4에 도시한다. 인간화 항체 K4 또는 K5를 사전에 투여함으로써, SJSA-1 세포주의 폐 전이가 현저하게 억제되었다.

[실시예 6] 각 항체의 항종양 효과

인간 포도플라닌 양성의 5×10⁶개의 골육종 세포주 SJSA-1(ATCC CRL-2098)을 중증 복합 면역 부전 마우스 SCID-Beige(CB17.Cg-Prkdc^scidLyst^bg-J/CrlCrlj)(니혼 찰스리버, 자성, 5주령)의 피하에 이식하여 이종이식 마우스를 제작하고, 인간화 항체 K4, K5의 생체내에 있어서의 항종양 효과를 평가하였다.

K4 투여군, K5 투여군에는, 각각 인간화 항체 K4, K5를 이식 제1일부터 주 2회(제1일, 제4일, 제8일, 제11일, 제15일), 5mg/kg으로 투여하였다. 주 2회, 종양 사이즈(1/2 긴 직경×(짧은 직경)²)와 체중의 측정을 행하였다(n=6). 엔드 포인트(20일 경과 후)에서, 사진 촬영과, 적출한 종양의 중량 측정을 행하였다.

또한, 음성 컨트롤로서, 인간 IgG4 항체(Sino Biological, HG4K)를 사용하였다.

결과(이식 후의 일수와 종양 사이즈의 평균의 관계)를 도 5에 도시한다(Kruskal-Wallis 검정에 의해, *p<0.05, **p<0.01). K4 투여군, K5 투여군에 있어서, 종양 증식 억제 효과가 확인되었다. 또한, 이 시험 시에 있어서의 마우스의 유의한 체중 감소는 어느 것에 있어서도 확인되지 않았다.

SEQUENCE LISTING <110> Japanese Foundation For Cancer Research API Co., Ltd. <120> Anti-podoplanin antibody <130> C4701-19231 <150> JP 2019-048861 <151> 2019-03-15 <160> 52 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Gly Phe Gly Met Leu 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Tyr Ile Ser Ser Val Ser Ser Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Glu Ser Tyr Gly Pro Ala Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Arg Ser Ser Gln His Ile Val His Ile Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 25 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 8 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 9 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 11 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 12 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 13 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 14 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 15 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 <210> 16 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 17 <211> 25 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 17 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 18 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 18 Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 19 <211> 32 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 19 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln 1 5 10 15 Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 20 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 1 5 10 <210> 21 <211> 23 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 21 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 22 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22 Trp Tyr Leu Gln Gln Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 23 <211> 32 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 23 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 24 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys 1 5 10 <210> 25 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 26 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 27 <211> 30 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 27 ggattcactt tcagtggctt tggaatgctc 30 <210> 28 <211> 51 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 28 tacattagta gtgtcagtag tagaatctac tatgcagaca cagtgaaggg t 51 <210> 29 <211> 30 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 29 gaatcctacg gccccgcctg gtttgcttac 30 <210> 30 <211> 48 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 30 agatctagtc agcacattgt acatattgat ggaaacacct atttagaa 48 <210> 31 <211> 21 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 31 aaagtttcca accgattttc t 21 <210> 32 <211> 27 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 32 tttcaaggtt cacatgttcc gtacacg 27 <210> 33 <211> 75 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 33 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctct 75 <210> 34 <211> 42 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 34 tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gagtgggtgg cc 42 <210> 35 <211> 96 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 35 cgattcacca tctccagaga caacgccaag aactcactgt atctgcaaat gaacagcctg 60 agagccgagg acacggctgt gtattactgt gcgaga 96 <210> 36 <211> 33 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 36 tggggccagg gcaccctggt caccgtctcc tca 33 <210> 37 <211> 69 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 37 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgc 69 <210> 38 <211> 45 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 38 tggtacctgc agaagccagg gcagtctcca cagctcctga tctat 45 <210> 39 <211> 96 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 39 ggagtcccag acaggttcag tggcagtggg tcaggcactg atttcacact gaaaatcagc 60 agggtggagg ctgaggatgt tggagtttat tactgc 96 <210> 40 <211> 30 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 40 ttcggcggag ggaccaaggt ggagatcaaa 30 <210> 41 <211> 42 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 41 tgggtccgcc aggctccagg gaaggggctg gagtgggtct ca 42 <210> 42 <211> 96 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 42 agattcacca tctccagaga caattccaag aacacgctgt atcttcaaat gaacagcctg 60 agagccgagg acacggctgt gtattactgt gcgaga 96 <210> 43 <211> 981 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 43 gcttccacca agggaccatc cgtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60 agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctcc 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 240 tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 300 aaatatggtc ccccatgccc accatgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 360 ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 420 tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 480 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 540 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 600 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 660 gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 720 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 780 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 840 gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg 900 aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 960 ctctccctgt ctctgggtaa a 981 <210> 44 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 44 cgaactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60 ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120 tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180 agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300 agcttcaaca ggggagagtg t 321 <210> 45 <211> 75 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 45 gatgtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ttggtgcagc ctggagggtc ccggaaactc 60 tcctgtgcag cctct 75 <210> 46 <211> 42 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 46 tgggttcgtc aggctccaga gaaggggctg gagtgggtcg ca 42 <210> 47 <211> 96 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 47 cgattcacca tctccagaga caatcccaag aacaccctgt tcctgcaaat gaccagtctg 60 aggtctgagg acacggccat gtattactgt gcaaga 96 <210> 48 <211> 33 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 48 tggggccaag ggactctggt cactgtctct gca 33 <210> 49 <211> 69 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 49 gatgtcttga tgacccaaac tccactctcc ctgccggtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgc 69 <210> 50 <211> 45 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 50 tggtacctgc agcaaccagg ccagtctcca aagctcctga tctac 45 <210> 51 <211> 96 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 51 ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caggatcagc 60 agagtggagg ctgaggatct gggagtttat tactgc 96 <210> 52 <211> 30 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 52 ttcggagggg ggaccaagct ggaaatgaaa 30

Claims

하기 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 인간화 항체 혹은 마우스-인간 키메라 항체인, 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편.
단, 하기 중쇄의 CDR1 내지 CDR3 및 경쇄의 CDR1 내지 CDR3의 아미노산 서열은, 각각 하기 서열 번호 1 내지 6으로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다.
중쇄의 CDR1의 아미노산 서열이 서열 번호 1의 아미노산 서열이고,
중쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 2의 아미노산 서열이고,
중쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 3의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR1의 아미노산 서열이 서열 번호 4의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 5의 아미노산 서열이고, 그리고
경쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 6의 아미노산 서열이다.
제1항에 있어서, 인간화 항체이며, 가변 영역이 하기 (I) 또는 (II)의 아미노산 서열을 포함하는, 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편.
단, 하기 (I)에 있어서, 하기 중쇄의 FR1 내지 FR4 및 경쇄의 FR1 내지 FR4의 아미노산 서열은, 각각 하기 서열 번호 7 내지 14로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 되고,
하기 (II)에 있어서, 하기 중쇄의 FR1 내지 FR4 및 경쇄의 FR1 내지 FR4의 아미노산 서열은, 각각 하기 서열 번호 7, 15, 16, 10 내지 14로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다.
(I):
중쇄의 CDR1의 아미노산 서열이 서열 번호 1의 아미노산 서열이고,
중쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 2의 아미노산 서열이고,
중쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 3의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR1의 아미노산 서열이 서열 번호 4의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 5의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 6의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR1의 아미노산 서열이 서열 번호 7의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 8의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 9의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 10의 아미노산 서열이고,
경쇄의 FR1의 아미노산 서열이 서열 번호 11의 아미노산 서열이고,
경쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 12의 아미노산 서열이고,
경쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 13의 아미노산 서열이고, 그리고
경쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 14의 아미노산 서열이다;
(II):
중쇄의 CDR1의 아미노산 서열이 서열 번호 1의 아미노산 서열이고,
중쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 2의 아미노산 서열이고,
중쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 3의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR1의 아미노산 서열이 서열 번호 4의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 5의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 6의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR1의 아미노산 서열이 서열 번호 7의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 15의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 16의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 10의 아미노산 서열이고,
경쇄의 FR1의 아미노산 서열이 서열 번호 11의 아미노산 서열이고,
경쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 12의 아미노산 서열이고,
경쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 13의 아미노산 서열이고, 그리고
경쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 14의 아미노산 서열이다.
제1항에 있어서, 마우스-인간 키메라 항체이며, 가변 영역이 하기 아미노산 서열을 포함하는, 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편.
단, 하기 중쇄의 FR1 내지 FR4 및 경쇄의 FR1 내지 FR4의 아미노산 서열은, 각각 하기 서열 번호 17 내지 24로 표시되는 아미노산 서열과 90％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이어도 된다.
중쇄의 CDR1의 아미노산 서열이 서열 번호 1의 아미노산 서열이고,
중쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 2의 아미노산 서열이고,
중쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 3의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR1의 아미노산 서열이 서열 번호 4의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR2의 아미노산 서열이 서열 번호 5의 아미노산 서열이고,
경쇄의 CDR3의 아미노산 서열이 서열 번호 6의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR1의 아미노산 서열이 서열 번호 17의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 18의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 19의 아미노산 서열이고,
중쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 20의 아미노산 서열이고,
경쇄의 FR1의 아미노산 서열이 서열 번호 21의 아미노산 서열이고,
경쇄의 FR2의 아미노산 서열이 서열 번호 22의 아미노산 서열이고,
경쇄의 FR3의 아미노산 서열이 서열 번호 23의 아미노산 서열이고, 그리고
경쇄의 FR4의 아미노산 서열이 서열 번호 24의 아미노산 서열이다.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항포도플라닌 항체가 인간 IgG 항체의 정상 영역을 포함하는, 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 기재된 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을 포함하는, 포도플라닌과 CLEC-2의 결합 저해제.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 기재된 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편을 포함하는, 의약 조성물.
제6항에 있어서, 암세포의 증식 또는 전이의 억제를 위한, 의약 조성물.
제6항에 있어서, 혈소판 응집 억제, 항혈전 또는 항염증을 위한, 의약 조성물.
제7항에 있어서, 상기 암세포가 포도플라닌 양성의 종양 세포인, 의약 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 기재된 항포도플라닌 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 단편의 단백질 부분을 코딩하는, DNA.
제10항에 기재된 DNA를 포함하는, 재조합 벡터.
제10항에 기재된 DNA 또는 제11항에 기재된 재조합 벡터를 포함하는, 숙주 세포.