CN116813769A - 一种靶向cd47的单克隆抗体及其应用 - Google Patents

一种靶向cd47的单克隆抗体及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116813769A
CN116813769A CN202210281540.6A CN202210281540A CN116813769A CN 116813769 A CN116813769 A CN 116813769A CN 202210281540 A CN202210281540 A CN 202210281540A CN 116813769 A CN116813769 A CN 116813769A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
amino acid
ser
acid sequences
thr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210281540.6A
Other languages
English (en)
Inventor
林基祯
方树彬
翁焕娇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fuzhou Cremab Pharmaceutical Inc
Original Assignee
Fuzhou Cremab Pharmaceutical Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fuzhou Cremab Pharmaceutical Inc filed Critical Fuzhou Cremab Pharmaceutical Inc
Priority to CN202210281540.6A priority Critical patent/CN116813769A/zh
Publication of CN116813769A publication Critical patent/CN116813769A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明为一种靶向CD47的单克隆抗体及其应用，提供了以高亲和力与人CD47特异性结合的分离的单克隆抗体。还提供了编码本发明抗体的核酸分子、用于表达本发明抗体的表达载体、宿主细胞和方法，以及包含本发明抗体的药用组合物。本发明还公开了所述的抗体用于治疗肿瘤疾病的用途。

Description

一种靶向CD47的单克隆抗体及其应用
技术领域
本发明涉及生物制药领域，具体而言，涉及针对人CD47的单克隆抗体及其在疾病治疗中的应用。
背景技术
自免疫检查点如PD1/PDL1发现以来,免疫检查点抗体迅速转化成为临床治疗方案， 成为肿瘤治疗领域中最重要的进展之一(Sharpe AH.Immunological reviews. 2017；276(1):5-8)。近年来研究表明，CD47-SIRPα信号轴是巨噬细胞和其他先天免疫 细胞的吞噬免疫检查点(Logtenberg et al.,Immunity 2020；52,742–752).Matlung HL,etal.Immunological reviews.2017；276(1):145-164)。CD47(整合素相关蛋白) 属于免疫球蛋白超家族，含有一个胞外V区、五次跨膜结构域和一个可变剪接的短的胞 内结构域。CD47在正常细胞表面广泛表达，通过与巨噬细胞表面的SIRPα (signal-regulatory proteinα)结合，释放“别吃我”的信号，从而保护健康细胞 不被巨噬细胞“吃掉”(Chao,M.P.etal.Cell 2010；142,699)。老化的红细胞、 血小板和淋巴造血细胞缺乏CD47会导致巨噬细胞快速清除这些细胞。然而，多种肿瘤 细胞表面过量表达CD47，可以通过与吞噬细胞上表达的SIRPα结合而抑制吞噬作用。 大量临床前研究数据表明，单克隆抗体或Fc融合蛋白能有效阻断CD47-SIRPα轴，激活 巨噬细胞的吞噬功能，对多种肿瘤有显著的杀伤作用(ZhangM.et al.PloS one. 2016；11(4):e01535509,Ring NG.et al.PNAS 2017；114(49):E10578-E10585)。CD47 抗体已在人类淋巴瘤、膀胱癌、结肠癌、胶质细胞瘤和乳腺癌等的各种临床前模型中显 示出功效(Advani R.et al.NEJM.2018；379(18):1711-1721)。目前处于临床研究中的 抗CD47药物主要如表1中所列。
表1 CD47抗体研发情况
尽管抗CD47抗体在部分癌种中的治疗进展令人鼓舞，但单药治疗效果有限，临床实验中也观察到抗CD47抗体治疗的有效性因癌症类型和不同的研究而不同，近期也爆 出由于毒性问题美国药监局FDA暂停magrolimab多项临床试验的新闻，给CD47单抗开 发蒙上阴影。因此联合用药以及在除血液肿瘤之外的实体瘤中的治疗仍亟待探索,开发 更有效的抗CD47抗体将具有重大意义。
发明概述
本发明提供了以高亲和力与人CD47特异性结合的分离的单克隆抗体。还提供了编码 本发明抗体的核酸分子、用于表达本发明抗体的表达载体、宿主细胞和方法，以及包含本发明抗体的药用组合物。
在一方面，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)重链可变区CDR1，其包含与选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO： 14或SEQ ID NO：20所示一致的氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包含与选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO： 15或SEQ ID NO：21所示一致的氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包含与选自SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO： 16或SEQ ID NO：22所示一致的氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包含与选自SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO： 12、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：23所示一致的氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包含与选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：18、或SEQ ID NO：24所示一致的氨基酸序列；和
(f)轻链可变区CDR3，其包含与选自SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO： 13、SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：25所示一致的氨基酸序列；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其重链可 变区和轻链可变区的CDR序列同源性至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％， 99％或100％。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨 基酸序列分别与SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列一致； 或
(b)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨 基酸序列分别与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列一 致；或
(c)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨 基酸序列分别与SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列一 致；或
(d)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3 的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：19所示的氨基酸 序列一致；或
(e)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3 的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：25所示的氨基酸 序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
在又一个实施方案中，本发明提供分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重 链和轻链可变区序列：
(a)重链可变区，其包含与选自SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：42、 SEQID NO：50或SEQ ID NO：58所示一致的氨基酸序列；
(b)轻链可变区，其包含与选自SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：46、 SEQID NO：54或SEQ ID NO：62所示一致的氨基酸序列；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其重链可 变区与选自SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：50或SEQ ID NO：58的氨基酸序列具有至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性；其轻链可变区与选自SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：46、 SEQ IDNO：54或SEQ ID NO：62的氨基酸序列具有至少为91％，92％，93％，94％，95％， 96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列一致；或
(b)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列一致；或
(c)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列一致；以及 轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：46所示的氨基酸序列一致；或
(d)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：50所示的氨基酸序列一致；以及 轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：54所示的氨基酸序列一致；或
(e)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列一致；以及 轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
在另一实施方案中，所述抗体为包含人或鼠恒定区的全长抗体。又一方面，所述人恒定区选自由IgGl、IgG2、IgG3、IgG4组成的组。在又一个具体方面中，所述人恒定 区是IgG1。又一方面，所述鼠恒定区选自由IgGl、IgG2A、IgG2B、IgG3组成的组。在 又一个具体方面中，所述抗体具有正常的或增强的效应子功能。在又一个具体方面中， 所述增强的效应子功能由Fc区域突变产生。
在另一实施方案中，本发明抗体或抗体片段为嵌合抗体或嵌合抗体片段。
在另一实施方案中，本发明抗体或抗体片段为人抗体或人抗体片段。
在另一实施方案中，本发明抗体或抗体片段为人源化抗体或人源化抗体片段。
在另一实施方案中，本发明抗体片段为Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv或F(ab’)2 抗体片段。
在另一实施方案中，本发明抗体片段为双抗体。
本发明还包括包含上述结合人CD47的抗体或抗体片段中的任一种的双特异性抗体。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体，其包含：
(a)重链，其序列与SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO： 52或SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列一致；以及
(b)轻链，其序列与SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO： 56或SEQ ID NO：64所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
在本发明特别优选的实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体，其包含：
(a)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列一致；或
(b)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列一致；或
(c)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：44所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：48所示的氨基酸序列一致；或
(d)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列一致；或
(e)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：64所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体与人CD47特异性结合。
本发明提供了编码所述抗体或抗体片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，编 码抗体重链或重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:35、 SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:59、或SEQ ID NO:61所示，或者具有与上述的核苷酸至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性；编码抗体轻链或轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:47、 SEQID NO:49、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:65所示， 或者具有与上述的核苷酸至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％ 的序列同源性。
本发明提供了包含所述分离的多核苷酸的表达载体，以及包含所述表达载体的宿主 细胞。
本发明提供了药物组合物，包含所述抗体或抗体片段以及可药用载体。
在一些实施方案中，利用本发明所述的抗体具有交叉结合人CD47或鼠CD47的功能， 并在小鼠肿瘤模型中显示出良好治疗效果。
本发明提供了治疗疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的本发明的抗体或抗体 片段给予需要治疗的受试者，用于治疗、延缓癌症进展，预防癌症复发或缓解癌症或其它增殖性病症的症状。在一些实施方案中，其中所述疾病为癌症。本发明的人源化或嵌 合单克隆抗体可用于调节吞噬作用，可以施用抗体组合物以增加表达CD47的癌细胞的 吞噬作用，因此适用于通过施用有效量的本发明的人源化或嵌合单克隆抗体来治疗受试 者中的癌症。
在一些实施方案中，本发明提供了所述的靶向CD47的单克隆抗体或抗体片段联合替尼类产品在制备治疗肿瘤疾病的药物中的用途。
附图说明
图1：流式细胞术测定抗人CD47抗体与表达人CD47的人肺癌A549细胞的结合活性。
图2：流式细胞术测定抗人CD47抗体与表达鼠CD47的小鼠结肠癌MC38细胞的结合活性。
图3：Octet测定亲和常数KD。横轴表示时间，纵轴表示结合高度。其中， 图3.A7DC2(SA传感器)，图3.B 7DC4(SA传感器)，图3.C 7DC2(HIS1K传感 器)，图3.D 7DC4(HIS1K传感器)。
图4：小鼠结肠癌MC38模型鼠检测消除肿瘤效果。(A)横轴为天数，纵轴为肿瘤体积(B)横轴为天数，纵轴为小鼠体重(C)实验终点小鼠肿瘤组织。
发明详述
在一方面，本发明涉及分离的单克隆抗体，其与人CD47特异性结合。在某些实施方式中，本发明的抗体展现出一种或多种优良的功能特性，诸如与人CD47高亲和力结 合，刺激抗体免疫调节的能力和/或抑制体内肿瘤细胞生长的能力。
本发明提供了例如分离的抗体、制备此类抗体的方法及含有本发明的抗体分子的药 用组合物。
在另一方面，本发明涉及使用抗人CD47抗体抑制受试者中肿瘤细胞生长的方法。如本文所证明的，抗人CD47抗体能够抑制体内肿瘤细胞生长。本发明还涉及使用所述 抗体调节免疫应答以及治疗诸如癌症疾病，或者刺激保护性自身免疫应答或刺激抗原特 异性免疫应答(例如通过共施用抗人CD47和目标抗原)的方法。
为使本发明更易于理解，首先定义某些术语。别的定义将在整个详述中阐明。
除非另有说明，本发明的实施将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些都在本领域的技术范围内，这些技术在本 领域的技术文献和通用教科书中有充分解释，诸如Mo l e cu l ar C l on i n g： A L a bo r a t o r y M a n u a l(分子克隆：实验室手册)等。
术语“整合素相关蛋白”、“IAP”、“Antigenic surface determinant proteinOA3”、“CD47”、“CD-47”、“hCD47”可互换使用，包括人CD47的变体、同种型 (isoform)、物种同系物，及与CD47具有至少一个共同表位的类似物。完整的CD47序 列可以根据GenBank编号BT006907查到。
“抗体”是指表现出所需生物学活性(例如抑制配体与其受体的结合或通过抑制配体诱导的受体信号转导)的抗体的任何形式。因此，“抗体”以其最广泛的意义来使用， 并明确包括但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体和多特异性抗体 (例如双特异性抗体)。
“抗体片段”和“抗体结合片段”意即抗体的抗原结合片段及抗体类似物，包括但不限于：Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；双抗体；线性抗体(linear antibody)； 单链抗体分子，例如scFv、单抗体；纳米抗体；结构域抗体(Nanobody)；和由抗体片段 形成的多特异性抗体等。工程改造的抗体变体综述于Holliger和 Hudson(2005)Nat.Biotechnol.23：1126-1136中。
“Fab片段”由一条轻链和一条重链的CH1及可变区组成。Fab分子的重链不能与 另一个重链分子形成二硫键。
“Fc”区含有包含抗体的CH1和CH2结构域的两个重链片段。两个重链片段由两个或多个二硫键并通过CH3结构域的疏水作用保持在一起。
“Fab′片段”含有一条轻链和包含VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域 之间区域的一条重链的部分，由此可在两个Fab′片段的两条重链之间形成链间二硫键 以形成F(ab′)2分子。
“F(ab′)2片段”含有两条轻链和两条包含CH1和CH2结构域之间的恒定区的部分的重链，由此在两条重链间形成链间二硫键。因此，F(ab′)2片段由通过两条重链间的 二硫键保持在一起的两个Fab′片段组成。
“Fv区”包含来自重链和轻链二者的可变区，但缺少恒定区。
“单链Fv抗体”(或“scFv抗体”)是指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段， 其中这些结构域存在于单个多肽链中。一般而言，Fv多肽另外在VH和VL结构域之间包 含多肽接头，该接头使得scFv能形成用于抗原结合的所需结构。
“双抗体”为具有两个抗原结合位点的小抗体片段。所述片段包含在相同的多肽链中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)(VH-VL或VL-VH)。通过使用短 至不能在同一链的两个结构域之间配对的接头，迫使所述结构域与另一条链的互补结构 域配对并形成两个抗原结合位点。
“嵌合抗体”意图指可变区序列源自一种物种而恒定区序列源自另一种物种的抗体，诸如可变区序列源自小鼠抗体而恒定区序列源自人抗体的抗体。
非人类(例如鼠)抗体的“人源化”形式为含有最小限度的来源于非人类免疫球蛋白序列的嵌合抗体。人源化抗体的大部分为人免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体抗体的 高变区残基被具有所需特异性、亲和力和能力的非人类物种(供体抗体)高变区的残基置 换，非人类物种例如有小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类。在某些情况下，人免疫球蛋白 的Fv构架区(FR)残基被相应的非人类残基取代。此外，人源化抗体可包含不在受体抗 体或供体抗体中存在的残基。进行这些修饰以进一步改进抗体性能。一般而言，人源化 抗体包含至少一个且通常为两个可变结构域的几乎全部，其中全部或几乎全部超变环对 应于非人类免疫球蛋白的超变环，全部或几乎全部FR区为人免疫球蛋白序列的FR区。 人源化抗体还任选包含至少部分免疫球蛋白(通常为人免疫球蛋白)恒定区(Fc)。
“分离的”抗体为业已被鉴定并与其天然环境组分相分离的抗体(例如与人CD47特异性结合的分离的抗体基本没有与人CD47以外的其它抗原特异性结合的抗体)，其天 然环境的污染组分是会干扰所述抗体的诊断性或治疗性应用的物质，可包括酶、激素和 其它蛋白质溶质或非蛋白质溶质。在一些实施方案中，将所述抗体纯化到超过95％纯度， 更优选超过99％纯度，其由Lowry法测定。分离的抗体通常由至少一个纯化步骤制备。
“分离的”核酸分子为被鉴定并与至少一种污染性核酸分子(通常在抗体核酸的天然来源中与其缔合)分离的核酸分子。分离的核酸分子不同于其天然存在的形式或环境。
术语“单克隆抗体””或“单克隆抗体组合物”在用于本文时指单一分子组合物 的抗体分子的制备物。单克隆抗体组合物展现出对特定表位的单一结合特异性和亲和 力。用于本发明的单克隆抗体可通过由Kohler等(1975，Nature 256：495)首先阐述 的杂交瘤方法制备，或可通过重组DNA方法制备。本文单克隆抗体明确包括“嵌合”抗 体或人源化。
本文所用术语“免疫细胞”包括具有造血的起源并在免疫应答中起作用的细胞。免疫细胞包括：淋巴细胞，例如B细胞和T细胞；天然杀伤细胞；髓样细胞，例如单核细 胞、巨噬细胞、嗜曙红细胞、肥大细胞、嗜碱细胞和粒细胞。
本文所用序列“变体”是指在一个或多个氨基酸残基处不同于所示的序列但保留所得到的分子的生物学活性的序列。
本文所用术语“约”是指数值在由本领域一般技术人员所测定的具体值的可接受误差范围内，所述数值部分取决于怎样测量或测定(即测量体系的限度)。例如，“约” 或“基本上包含”可意味着至多20％的范围。此外，特别对于生物学系统或过程而言， 该术语可意味着至多一个数量级或数值的至多5倍。除非另外说明，否则当具体值在本 申请和权利要求中出现时，“约”或“基本上包含”的含义应该假定为在该具体值的可 接受误差范围内。
当用“给予”和“治疗”提及动物、人、实验对象、细胞、组织、器官或生物液时， 是指将外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受治疗者、细胞、组织、器 官或生物液接触。“给予”和“治疗”可指例如治疗方法、药动学方法、诊断方法、研 究方法和实验方法。治疗细胞包括让试剂与细胞接触以及让试剂与流液接触，其中所述 流液与细胞接触。“给予”和“治疗”还意味着例如通过试剂、诊断剂、结合组合物或 通过其他细胞对细胞进行体外和离体治疗。
“有效量”包括足以改善或防止医学疾病的症状或病症的量。有效量还意指足以使得可以诊断或促进诊断的量。对具体受治疗者的有效量可视多种因素而变化，例如待治 疗的疾病、患者的整体健康状况、给药的方法途径和剂量及副作用的严重性。有效量可 为避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。
本发明的各个方面将在下述分部中进一步详细描述。
抗人CD47抗体
本发明抗体的特征在于抗体的特定功能特征或特性。例如，所述抗体与人CD47特异性结合。优选的是，本发明的抗体以高亲和力，例如以1×10-9M或更小的KD与人CD47 结合。评估抗体对人CD47的结合能力的标准测定法是本领域公知的，包括例如ELISA、Western印迹和RIA。抗体的结合动力学(例如结合亲和力)也可以通过本领域已知的标 准测定法来评估，诸如通过Biacore或Octet分析。实施例中详细描述了适于评估任何 上述特征的测定法。
在一方面，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)重链可变区CDR1，其包含与选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO： 14或SEQ ID NO：20所示一致的氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包含与选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO： 15或SEQ ID NO：21所示一致的氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包含与选自SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO： 16或SEQ ID NO：22所示一致的氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包含与选自SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO： 12、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：23所示一致的氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包含与选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：18、或SEQ ID NO：24所示一致的氨基酸序列；和
(f)轻链可变区CDR3，其包含与选自SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO： 13、SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：25所示一致的氨基酸序列；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其重链可 变区和轻链可变区的CDR序列同源性至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％， 99％或100％。在本发明工程改造抗体的方法的某些实施方式中，可以向整个或部分抗人CD47抗体编码序列中随机或者有选择的引入突变，所产生的经修饰的抗人CD47抗体可如本文所述的进行结合活性和/或其它功能特性的筛选。本领域已经记载了突变的方法。例如，Short的PCT公开文本WO02/09278中描述了通过饱和诱变、合成的连接装配或其 组合来创造和筛选抗体突变的方法。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨 基酸序列分别与SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列一致； 或
(b)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨 基酸序列分别与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列一 致；或
(c)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨 基酸序列分别与SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列一 致；或
(d)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3 的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：19所示的氨基酸 序列一致；或
(e)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3 的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：25所示的氨基酸 序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
在本发明另一实施方案中，通过收集经人CD47抗原免疫小鼠的脾细胞，建立噬菌体 抗体库，经多轮淘选并测序获得能与人CD47抗原结合的人CD47抗体。其中，特别优选的5株阳性克隆7DC2、7DC4、7DC15、7DC1和7DC80所表达的抗体CDR区序列如下表所示:
/>
在又一个实施方案中，本发明提供分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重 链和轻链可变区序列：
(a)重链可变区，其包含与选自SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：42、 SEQID NO：50或SEQ ID NO：58所示一致的氨基酸序列；
(b)轻链可变区，其包含与选自SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：46、 SEQID NO：54或SEQ ID NO：62所示一致的氨基酸序列；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其重链可 变区与选自SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：50或SEQ ID NO：58的氨基酸序列具有至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性；其轻链可变区与选自SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：46、 SEQ IDNO：54或SEQ ID NO：62的氨基酸序列具有至少为91％，92％，93％，94％，95％， 96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性。重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)与上 述序列的VH和VL区具有高(即90％或更高)同源性的抗体通过保守序列修饰获得，包括 氨基酸的取代、添加和缺失等。术语“保守序列修饰”意图指氨基酸修饰不会显著影响 或改变含有该氨基酸序列的抗体的结合特征。修饰可以通过本领域已知的标准技术，例 如定点诱变和PCR介导的诱变编码可变区序列的核酸分子。保守氨基酸取代指氨基酸残 基用具有类似侧链的氨基酸残基替换。本领域中对具有类似侧链的氨基酸残基家族已有 详细说明。这些家族包括具有碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例 如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、丝氨酸、 苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异 亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨 酸)和芳香侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，可以用来 自同一侧链家族的其它氨基酸残基替换本发明抗体CDR区域外的一个或多个氨基酸残 基，并使用本文所述的功能测定法对改变后的抗体测试保留的功能。优选的定点诱变或 PCR介导的诱变位点位于重链可变区CDR1-CDR3和轻链可变区CDR1-CDR3之外的位点。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列一致；或
(b)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列一致；或
(c)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列一致；以及 轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：46所示的氨基酸序列一致；或
(d)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：50所示的氨基酸序列一致；以及 轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：54所示的氨基酸序列一致；或
(e)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列一致；以及 轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
在另一实施方案中，所述抗体为包含人或鼠恒定区的全长抗体。又一方面，所述人恒定区选自由IgGl、IgG2、IgG3、IgG4组成的组。在又一个具体方面中，所述人恒定 区是IgG1。又一方面，所述鼠恒定区选自由IgGl、IgG2A、IgG2B、IgG3组成的组。在 又一个具体方面中，所述抗体具有正常的或增强的效应子功能。在又一个具体方面中， 所述增强的效应子功能由Fc区域突变产生。
在另一实施方案中，本发明抗体或抗体片段为嵌合抗体或嵌合抗体片段。
在另一实施方案中，本发明抗体或抗体片段为人抗体或人抗体片段。
在另一实施方案中，本发明抗体或抗体片段为人源化抗体或人源化抗体片段。
在另一实施方案中，本发明抗体片段为Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv或F(ab’)2 抗体片段。
在另一实施方案中，本发明抗体片段为双抗体。
本发明还包括包含上述结合人CD47的抗体或抗体片段中的任一种的双特异性抗体。 在另一实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体，其包含：
(a)重链，其序列与SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO： 52或SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列一致；以及
(b)轻链，其序列与SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO： 56或SEQ ID NO：64所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体，其重链(HC)与选自SEQID NO：28、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：52或SEQ ID NO：60的氨基酸 序列具有至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性； 其轻链(LC)与选自SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：56 或SEQ ID NO：64的氨基酸序列具有至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性。与上述序列的重链和轻链具有高(即90％或更高)同源性的抗 体可以通过诱变(例如定点诱变或PCR介导的诱变)编码重链和轻链氨基酸的核酸分子， 然后使用本文所述的功能测定法对所编码的改变后的抗体测试所保留的功能获得。优选 的定点诱变或PCR介导的诱变位点位于重链可变区CDR1-CDR3和轻链可变区CDR1-CDR3 之外的位点。
在特别优选的实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体，其包含：
(a)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列一致；或
(b)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列一致；或
(c)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：44所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：48所示的氨基酸序列一致；或
(d)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列一致；或
(e)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：64所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体与人CD47特异性结合。
优选的，其中所述抗体或其抗原结合部分优选与人CD47或鼠CD47特异性结合，更优选的与人CD47特异性结合。本发明的抗人CD47抗体优选展现出一种或多种下列特 征：
(a)以1×10-9M或更小的KD与人CD47结合；
(b)刺激抗体应答；
(c)抑制体内肿瘤细胞生长。
优选的是，所述抗体以1×10-10M或更小的KD与人CD47结合，更优选以1×10-11M 或更小的KD与人CD47结合。
编码本发明抗体的核酸分子
本发明的另一方面涉及编码本发明抗体或其抗原结合部分的核酸分子。本发明的核 酸可以是例如DNA或RNA，而且可以含有或不含内含子序列。在一优选的实施方式中， 核酸是cDNA分子。
可以使用标准分子生物学技术来获得本发明的核酸。对于由杂交瘤表达的抗体，可 以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得编码杂交瘤所制备的抗体轻链和重链的cDNAs。对于从免疫球蛋白基因库(例如使用噬菌体展示技术)中获得的抗体，可以从文 库中回收编码抗体的核酸。
本发明优选的核酸分子是那些编码本发明中所示抗CD47抗体CDR区、可变区或者全长抗体的氨基酸序列的核酸分子。在获得编码本发明所述的抗CD47抗体的VH和VL 区段的DNA片段后，进一步通过标准重组DNA技术操作这些DNA片段，例如将可变区基 因转变为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，将编码VL或VH 的DNA片段可操作的连接至编码另一蛋白质，诸如抗体恒定区或柔性接头的另一DNA片 段。术语“可操作的连接”在用于本文时意图表示连接两DNA片段从而使得这两个DNA 片段所编码的氨基酸序列保持在同一读码框中。
通过将编码VH的DNA可操作的连接至编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一DNA分子可以将编码VH区的分离的DNA转变为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是 本领域已知的(参见例如Kabat，E.A.等人(1991)，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，Fifth Edition，U.S.Department of Health and Human Services，NIHPublication No.91-3242)，包含这些区的DNA片段可以通过 标准PCR扩增获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD 恒定区，但是最优选为IgG1恒定区。为获得Fab片段重链基因，可以将编码VH的DNA 可操作的连接至仅编码重链CH1恒定区的另一DNA分子。
通过将编码VL的DNA可操作的连接至编码轻链恒定区CL另一DNA分子可以将编码VL区的分离的DNA转变为全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列 是本领域已知的(参见例如Kabat，E.A.等人(1991)，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health and HumanServices，NIH Publication No.91-3242)，包含这些区的DNA片段可以通过 标准PCR扩增获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区，但最优选为κ恒定区。
为创造scFv基因，将编码VH和VL的DNA片段可操作的连接至编码柔性接头，例 如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一片段，从而使得VH和VL序列可以表达成相邻的 单链蛋白质，其中VL和VH区通过柔性接头连接(参见例如Bird等人(1988)，Science 242：423-426；Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883；McCafferty 等人(1990)Nature 348：552-554)。
本发明提供了编码所述抗体或抗体片段的分离的多核苷酸。在一些实施方案中，编 码抗体重链或重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:35、 SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:59、或SEQ ID NO:61所示，或者具有与上述的核苷酸至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性；编码抗体轻链或轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:47、 SEQID NO:49、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:65所示， 或者具有与上述的核苷酸至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％ 的序列同源性。
表达载体及宿主细胞
本发明提供了包含所述分离的多核苷酸的表达载体，以及包含所述表达载体的宿主 细胞。
适宜载体的选择将主要取决于将要插入载体的核酸的大小和将要用载体转化的具 体宿主细胞。为表达抗体或其抗体片段，可以通过标准分子生物学技术(例如PCR扩增或使用表达目标抗体的杂交瘤的cDNA克隆)获得编码部分或全长轻链和重链的DNA，并且可以将DNA插入到表达载体中，从而使得基因与转录和翻译调控序列可操作的连接。
选择适合所用表达宿主细胞的表达载体和表达调控序列。可将抗体轻链基因和抗体 重链基因插入到不同的载体中，或者更通常的，将两个基因插入到同一表达载体中。通过标准方法将抗体基因插入到表达载体中。可以使用本文所述抗体的轻链和重链可变区来创造任何抗体同种型的全长抗体基因，其通过将它们插入已编码期望同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中，从而使得VH区段与载体中的CH区段可操作的连接， VK区段与载体中的CL区段可操作的连接。或者，重组表达载体可以编码信号肽，其利 于宿主细胞中抗体链的分泌。可将抗体链基因克隆到载体中以使信号肽与抗体链基因的 氨基末端连接于同一读码框中。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即来自 非免疫球蛋白的信号肽)。
除了抗体链基因，本发明的重组表达载体还携带调控序列，诸如源自巨细胞病毒(CMV)、猿病毒40(SV40)、腺病毒(例如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))和多瘤病毒的启 动子和/或增强子，其调控抗体链基因在宿主细胞中的表达。术语“调控序列”意图包 括启动子、增强子和其它表达调控元件(例如聚腺苷酸化信号)，其调控抗体链基因的转 录或翻译。此类调控序列记载于例如Goeddel， Gene Expression Technology.MethodsinEnzymology 185，Academic Press， San Diego，CA(1990)中。
为表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染到宿主细胞中。各种形式的术语“转染”意图涵盖多种通常用于将外源DNA导入原核或真核宿主细 胞的技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-右旋糖苷转染等。虽然理论上在原核或真 核宿主细胞中都有可能表达本发明的抗体，但是最优选在真核细胞中(最优选在哺乳动 物宿主细胞中)表达抗体。用于表达本发明重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括中国 仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞等，优选CHO细胞。
当将编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞时，通过培养宿主细胞一 段足以使宿主细胞中抗体表达的时间生产抗体，或者更优选的是，将抗体分泌到培养宿主细胞的培养基中。可以使用标准蛋白质纯化方法从培养物的培养液中回收抗体。
药物组合物
本发明提供了药物组合物，包含所述的靶向CD47的单克隆抗体或其抗体片段以及药学可接受的载体。
一方面，本发明提供了一种药用组合物，其包含一种或一组本发明的抗CD47单克隆抗体或其抗原结合部分，与药学可接受载体配制在一起。药剂学可接受载体包括任何 和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等生理学相容的 载体。优选的是，载体适于静脉内、肌肉内、皮下、胃肠外、脊髓或表皮施用(例如通 过注射或输注)。
药物组合物在生产和贮存条件下通常必须是无菌的和稳定的。可以将组合物配制成 溶液、微乳液、脂质体或冻干粉针等剂型。本发明药物组合物的优选给药途径包括静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内、皮下、脊髓/脊柱或其它胃肠外施用路径，例如通过注射 或输注。
本发明的抗体的给药剂量的范围为大约0.01-100mg/kg，更加通常的为 0.5mg/kg-50mg/kg，或1mg/kg-25mg/kg，或5mg/kg-20mg/kg，或10mg/kg-20mg/kg的 剂量。例如，剂量可以是0.3mg/kg体重、1mg/kg体重、3mg/kg体重、5mg/kg体重、10mg/kg 体重、20mg/kg体重或在1-20mg/kg的范围内。例示性的治疗方案要求每周施用一次、 每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每3个月一次或每3-6个月一次。
本发明药用组合物中的活性成分的实际剂量水平可以变化，从而获得对于特定患者、组合物和施用模式有效实现期望治疗性应答而对患者是无毒的活性成分量。“治疗 有效量”的本发明抗CD47抗体优选导致疾病症状严重性降低、无疾病症状期的频率和 持续时间提高、或对患病所造成的损害或残疾的预防。例如，对于肿瘤的治疗而言，“治 疗有效量”优选相对于未治疗受试者抑制细胞生长或肿瘤生长达至少大约20％、更优选 达至少大约40％、甚至更优选达至少大约60％、且仍更优选达至少大约80％。可以在 动物模型系统中评估化合物抑制肿瘤生长的能力，所述动物模型系统可以预测在人肿瘤 中的功效。本领域普通技术人员将会能够基于诸如受试者体型大小、受试者症状的严重 性、及所选择的特定组合物或施用路径的因素来确定此类量。
本发明的用途和方法
本发明提供了治疗疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的本发明的抗体或抗体 片段给予需要治疗的受试者。
本发明的抗体、抗体组合物和方法具有众多体外和体内用途，包括例如检测CD47或通过阻断CD47来用于调节吞噬作用。在一些实施方案中，利用本发明所述的抗体具 有交叉结合人CD47或鼠CD47的功能，并在小鼠肿瘤模型中显示出良好治疗效果。在另 一个优选的实施方案中，本发明的抗体是人源化或嵌合单克隆抗体抗体。例如，可以将 这些分子施用于体外或离体培养的细胞，或者施用于人受试者，例如在体内，用以在多 种情况中用于调节吞噬作用。本发明的人源化或嵌合单克隆抗体可用于调节吞噬作用， 可以施用抗体组合物以增加表达CD47的癌细胞的吞噬作用，因此适用于通过施用有效 量的本发明的人源化或嵌合单克隆抗体来治疗受试者中的癌症。
本发明提供了治疗疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的本发明的抗体或抗体 片段给予需要治疗的受试者，用于治疗、延缓癌症进展，预防癌症复发或缓解癌症或其它增殖性病症的症状。如本文所用，术语“癌症”、“增殖性”和“肿瘤”是可互换的。在一 些实施方案中，其中所述疾病为癌症。一方面，本发明涉及使用抗CD47抗体治疗受试 者，使得受试者中肿瘤细胞的生长得到抑制。可以单独使用抗CD47抗体来抑制癌性肿 瘤的生长。或者，可以联合所述其它免疫原性剂、标准癌症治疗、或其它抗体来使用抗 CD47抗体。在一个实施方案中，可以序贯施用治疗性抗体的组合。例如，可以序贯施用 抗PD-1抗体和抗CD47抗体，诸如先施用抗PD-1后施用抗CD47，或者先施用抗CD47 后施用抗PD-1。
在另一实施方案中，本发明提供了将靶向CD47的单克隆抗体或抗体片段用于治疗癌症或用于抑制肿瘤生长的用途。可以使用本发明的抗体来进行治疗的优选癌症的非限制性例子包括黑色素瘤(例如转移性恶性黑色素瘤)、肾癌(例如透明细胞癌)、前列腺癌(例如激素不应性前列腺腺癌)、乳癌、结肠癌和肺癌(例如非小细胞肺癌)。此外，可以 使用本发明的方法来治疗的其它癌症的例子包括骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮 肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃肠、睾丸癌、子宫癌、输 卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤、食 道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、 尿道癌、阴茎癌、骨髓增生异常综合征、慢性或急性白血病(包括急性髓细胞样白血病、 慢性髓细胞样白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病)、儿童期实 体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)的赘 生物/肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管发生、脊髓轴(spinal axis)肿瘤、脑干胶 质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏(Kaposi)肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环 境诱发的癌症(包括由石棉诱发的那些癌症)、及所述癌症的组合。本发明还可用于治疗 转移性癌症，尤其是表达CD47的转移性癌症(Iwai等人，Int.Immunol.17：133-144)。
优选的，为提高临床疗效，本发明的抗CD47抗体还可以联合替尼类产品用于癌症的治疗。目前替尼类药物有RAF/MEK、ALK、c-Met、JAK等靶点，可以与本发明的抗CD47 抗体联合用于癌症治疗的替尼类药物包括Gefitinib(吉非替尼)，Osimertinib(奥希 替尼)，Icotinib(埃克替尼)，Afatinib(阿法替尼)，Erlotinib(厄洛替尼)， Crizotinib(克唑替尼)，Alectinib(阿来替尼盐)，Ceritinib(色瑞替尼)， Trametinib(曲莫替尼)，Cobimetinib(可美替尼)，Axitinib(阿西替尼)， Lenvatinib(乐伐替尼)，Cabozantinib(卡博替尼)，Sunitinib(舒尼替尼)， Bosutinib(伯舒替尼)，Nilotinib(尼洛替尼)，Radotinib(拉多替尼)，Dasatinib (达沙替尼)，Apatinib(阿帕替尼)，Ponatinib(泊那替尼)，Ruxolitinib(芦可替 尼)，Neratinib(来那替尼)，Lapatinib(拉帕替尼)，Ibrutinib(依鲁替尼)， Tofacitinib(托法替尼)，Baricitinib(巴瑞克替尼)和Olmutinib(奥莫替尼)等或 其组合。优选的替尼类药物有依鲁替尼、厄洛替尼、阿西替尼、卡博替尼和曲美替尼。
本发明的靶向CD47的单克隆抗体或抗体片段的最优剂量将取决于治疗中的疾病、疾病的严重程度，和副作用的存在与否。最优剂量可通过常规实验确定。对于胃肠外给 予，给予0.1mg/kg-100mg/kg，或0.5mg/kg-50mg/kg，或1mg/kg-25mg/kg，或 2mg/kg-10mg/kg，或5mg/kg-10mg/kg的剂量。例示性的治疗方案可以每周施用一次、 每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每3个月一次或每3-6个月一次。
综上，本发明提供了一种靶向CD47的单克隆抗体或抗体片段及其医疗用途，兹将本 发明的技术方案总结如下：
1、分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)重链可变区CDR1，其包含与选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO： 14或SEQ ID NO：20所示一致的氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包含与选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO： 15或SEQ ID NO：21所示一致的氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包含与选自SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO： 16或SEQ ID NO：22所示一致的氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包含与选自SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO： 12、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：23所示一致的氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包含与选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：18、或SEQ ID NO：24所示一致的氨基酸序列；和
(f)轻链可变区CDR3，其包含与选自SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO： 13、SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：25所示一致的氨基酸序列；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
2、根据技术方案1所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其与重链可变 区和轻链可变区的CDR序列同源性至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％， 99％或100％。
3、根据技术方案1所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其包含：
(a)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨 基酸序列分别与SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列一致； 或
(b)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨 基酸序列分别与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列一 致；或
(c)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨 基酸序列分别与SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列一 致；或
(d)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3 的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：19所示的氨基酸 序列一致；或
(e)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3 的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：25所示的氨基酸 序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
4、根据技术方案1所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链和轻链可变区序 列：
(a)重链可变区，其包含与选自SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：42、 SEQID NO：50或SEQ ID NO：58所示一致的氨基酸序列；
(b)轻链可变区，其包含与选自SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：46、 SEQID NO：54或SEQ ID NO：62所示一致的氨基酸序列；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
5、根据技术方案4所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其重链可变区 与选自SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：50或SEQ ID NO： 58的氨基酸序列具有至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％ 的序列同源性；其轻链可变区与选自SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：46、 SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：62的氨基酸序列具有至少为91％，92％，93％，94％，95％， 96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性。
6、根据技术方案4所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其包含：
(a)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列一致；或
(b)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列一致；或
(c)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列一致；以及 轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：46所示的氨基酸序列一致；或
(d)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：50所示的氨基酸序列一致；以及 轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：54所示的氨基酸序列一致；或
(e)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列一致；以及 轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
8、根据技术方案1所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述的抗体为 包含人或鼠恒定区的全长抗体。
9、根据技术方案8所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述的抗体的 人恒定区选自由IgGl、IgG2、IgG3、IgG4组成的组。
10、根据技术方案9所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述抗体的人 恒定区是IgG1。
11、根据技术方案8所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述的抗体的 鼠恒定区选自由IgGl、IgG2A、IgG2B、IgG3组成的组。
12、根据技术方案8所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述的抗体具 有正常的或增强的效应子功能。
13、根据技术方案12所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述的增强 的效应子功能由Fc区域突变产生。
14、根据技术方案8所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述的抗体或 抗体片段为嵌合抗体或嵌合抗体片段。
15、根据技术方案8所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述的抗体或 抗体片段为人抗体或人抗体片段。
16、根据技术方案15所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述的抗体 或抗体片段为人源化抗体或人源化抗体片段。
17、根据技术方案14-16任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所 述的抗体片段为Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv或F(ab’)2抗体片段。
18、根据技术方案14-16任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所 述的抗体片段为双抗体。
19、分离的单克隆抗体，其包含：
(a)重链，其序列与SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO： 52或SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列一致；以及
(b)轻链，其序列与SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO： 56或SEQ ID NO：64所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
20、根据技术方案19所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的抗体重链(HC)与选自SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：52或SEQ ID NO：60 的氨基酸序列具有至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序 列同源性；其轻链(LC)与选自SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：56或SEQ IDNO：64的氨基酸序列具有至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％， 97％，98％，99％或100％的序列同源性。
21、根据技术方案20所述的单克隆抗体，其包含：
(a)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列一致；或
(b)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列一致；或
(c)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：44所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：48所示的氨基酸序列一致；或
(d)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列一致；或
(e)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其 氨基酸序列与SEQ ID NO：64所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体与人CD47特异性结合。
22、编码技术方案1-21任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合部分的核酸分子。23、 根据技术方案23所述的核酸分子，其为DNA或RNA，而且可以含有或不含内含子序列。
24、根据技术方案23所述的核酸分子，其为cDNA分子。
25、根据技术方案22所述的核酸分子，编码抗体重链或重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、 SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:59、或SEQ ID NO:61所示，或者具有与上 述的核苷酸至少为91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性；编码抗体轻链或轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、 SEQ IDNO:63或SEQ ID NO:65所示，或者具有与上述的核苷酸至少为91％，92％，93％， 94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同源性。
26、一种表达载体，其含有如技术方案22-25任一项所述的核酸分子。
27、一种宿主细胞，其由技术方案26所述的载体经转化或转染原核生物或真核生物宿 主细胞得到。
28、根据技术方案27所述的宿主细胞，其为细菌、酵母或哺乳动物细胞。
29、根据技术方案28所述的宿主细胞，其为哺乳动物细胞，选自中国仓鼠卵巢细胞(CHO 细胞)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。
30、根据技术方案29所述的宿主细胞，其为CHO细胞。
31、一种药物组合物，其包含技术方案1-21任一项所述的靶向CD47的单克隆抗体或其 抗体片段以及药学上可接受载体。
32、根据技术方案31所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物的给药途径包 括静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内、皮下、脊髓/脊柱或其它胃肠外施用路径。
33、技术方案1-21任一项所述的靶向CD47的单克隆抗体或抗体片段在制备治疗肿瘤疾 病的药物中的用途。
34、根据技术方案33所述的用途，其特征在于，所述用途为用于治疗癌症或用于抑制 肿瘤生长。
35、根据技术方案34所述的用途，其特征在于，所述的癌症包括黑色素瘤、肾癌、前列腺癌、乳癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑 素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃肠、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内 膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤、食道癌、小肠癌、 内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、 骨髓增生异常综合征、慢性或急性白血病、儿童期实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、 肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)的赘生物/肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤 血管发生、脊髓轴(spinal axis)肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏(Kaposi)肉 瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症及所述癌症的组合。
36、根据技术方案35所述的用途，其特征在于，所述慢性或急性白血病包括急性髓细 胞样白血病、慢性髓细胞样白血病、急性成淋巴细胞性白血病和慢性淋巴细胞性白血病。
37、技术方案1-21任一项所述的靶向CD47的单克隆抗体或抗体片段联合替尼类产品在 制备治疗肿瘤疾病的药物中的用途，所述的替尼类药物包括Gefitinib(吉非替尼)，Osimertinib(奥希替尼)，Icotinib(埃克替尼)，Afatinib(阿法替尼)，Erlotinib (厄洛替尼)，Crizotinib(克唑替尼)，Alectinib(阿来替尼盐)，Ceritinib(色瑞 替尼)，Trametinib(曲莫替尼)，Cobimetinib(可美替尼)，Axitinib(阿西替尼)， Lenvatinib(乐伐替尼)，Cabozantinib(卡博替尼)，Sunitinib(舒尼替尼)， Bosutinib(伯舒替尼)，Nilotinib(尼洛替尼)，Radotinib(拉多替尼)，Dasatinib (达沙替尼)，Apatinib(阿帕替尼)，Ponatinib(泊那替尼)，Ruxolitinib(芦可替 尼)，Neratinib(来那替尼)，Lapatinib(拉帕替尼)，Ibrutinib(依鲁替尼)， Tofacitinib(托法替尼)，Baricitinib(巴瑞克替尼)和Olmutinib(奥莫替尼)或其 组合。
38、根据技术方案37所述的用途，其特征在于，所述的替尼类药物选自依鲁替尼、厄 洛替尼、阿西替尼、卡博替尼和曲美替尼。
39、根据技术方案33-38任一项所述的用途，其特征在于，所述抗体的给药剂量的范围 为0.1mg/kg-100mg/kg。
40、根据技术方案39所述的用途，其特征在于，所述抗体的给药剂量的范围为0.5mg/kg-50mg/kg。
41、根据技术方案40所述的用途，其特征在于，所述抗体的给药剂量的范围为1mg/kg-25mg/kg。
42、根据技术方案41所述的用途，其特征在于，所述抗体的给药剂量的范围为2mg/kg-10mg/kg。
43、根据技术方案42所述的用途，其特征在于，所述抗体的给药剂量的范围为5mg/kg-10mg/kg。
44、根据技术方案33-38任一项所述的用途，其特征在于，所述抗体的治疗方案为每周 施用一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每3个月一次或每3-6 个月一次。
通过下列实施例进一步说明本发明的技术方案，所述实施例不应解释为进一步限制。在此将整篇申请中引用的所有附图和所有参考文献、专利和已公开专利申请的内容 明确收入本文作为参考。
具体实施方式
一、抗人CD47单抗的产生
1.1免疫小鼠
取8周龄大小的雌性Balb/c小鼠，用人CD47胞外段-His tag重组蛋白(购自义翘神州SinoBiological，货号为12283-H08H)与弗氏完全佐剂(CFA,Sigma)混合乳化液 皮下多点接种免疫，每只小鼠80-100μg蛋白，3周后用人CD47胞外段-His tag重组蛋 白与不完全佐剂(IFA,Sigma)乳化液进行加强免疫，共免疫3次。每次在小鼠免疫2周 左右取血清测定抗体效价，血清效价用ELISA方法通过酶标仪SpectraMax i3测定。当 血清效价达到足够高时，用100μg人CD47胞外段-His tag重组蛋白溶于PBS中，腹腔 注射加强免疫一次，3天后取出脾脏。
1.2制备和筛选噬菌体抗体库
取1.1中获得的脾脏细胞，用TRIzol提取细胞总RNA并经反转录获得cDNA。使用 重链可变区引物和轻链可变区引物以cDNA为模板，PCR分别扩增抗体重链、轻链可变区， 再次经重叠延申PCR将抗体轻链和重链可变区基因用(G4S)3Linker连接组装为单链 抗体(scFv)库,轻链可变区基因位于5’端，重链可变区基因位于3’端。将组装的scFv 单链抗体基因和pCANTAB-5E载体分别双酶切，连接后将连接产物电转化大肠杆菌TG1 感受态，经培养后加入M13KO7辅助噬菌体获得噬菌体抗体库。噬菌体库淘选使用人CD47 胞外段-Histag重组蛋白(购自义翘神州SinoBiological，货号为12283-H08H)作为 筛选靶分子。进行3轮亲和淘选，测定每一轮洗脱产物的噬菌体滴度，计算富集因子。 从成功亲和淘选的洗脱产物中，挑选两块96孔板的单克隆进行鉴定。包被人CD47胞外 段-His tag重组蛋白作为靶分子，进行噬菌体ELISA检测。阳性克隆经测序分析和序列 进化树分组，挑选克隆转换分子形式为全长抗体，其中全长抗体Fc段引入M428L和N434S (EU numbering)突变，目的是在保留ADCC效应子功能的同时延长体内半衰期。利用 IGBLAST分析工具(KABAT)对抗体可变区序列进行分析，确定轻、重链CDR区域，如下表 所示。
/>
相对应的，7DC2抗体的重链可变区序列(7DC2-mVH)为：
QVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYFMHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTKGGRYSMDYWGQGTTLTVSS(Seq ID No：26)
编码7DC2-mVH的DNA序列为：
caggtccagctgcagcagtctggacctgagctggtaaagcctggggcttcagtgaagatgtcctgcaaggcttctggatacacattca ctaactattttatgcactgggtgaagcagaagcctgggcagggccttgagtggattggatatattaatccttacaatgatggtactaagt acaatgagaagttcaaaggcaaggccacactgacttcagacaaatcctccagcacagcctacatggagctcagcagcctcacctctg aggactctgcggtctattactgtacaaagggtggccgctattctatggactactggggtcagggaaccacactcaccgtctcctca (Seq ID No：27)
7DC2抗体的重链序列为：
QVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYFMHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTKGGRYSMDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK(Seq ID No：28)
编码7DC2重链的DNA序列为：
7DC2抗体的轻链可变区序列(7DC2-mVL)为：
DVVMTQTPLSLPVRLGDEVSISCRSSQTIVFTNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGS GTDFTLTISRVEAEDLGIYYCFQGSHVPYTFGGGTKLELKRT(Seq ID No：30)
编码7DC2-mVL的DNA序列为：
gatgttgtgatgacccaaactccactctccctgcctgtccgtcttggagatgaagtgtccatctcttgtagatctagtcagaccattgtatt tactaatggaaatacctatttagaatggtacctgcagaaaccgggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattttc tggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcacgatcagcagagtggaggctgaggatctgggaat ttattactgctttcaaggttcacatgttccgtacacgttcggaggggggaccaagctggagctgaaacgtacg(Seq ID No：31)
7DC2抗体的轻链序列为：
DVVMTQTPLSLPVRLGDEVSISCRSSQTIVFTNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGS GTDFTLTISRVEAEDLGIYYCFQGSHVPYTFGGGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(Seq ID No：32)
编码7DC2轻链的DNA序列为：
gatgttgtgatgacccaaactccactctccctgcctgtccgtcttggagatgaagtgtccatctcttgtagatctagtcagaccattgtatt tactaatggaaatacctatttagaatggtacctgcagaaaccgggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattttc tggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcacgatcagcagagtggaggctgaggatctgggaat ttattactgctttcaaggttcacatgttccgtacacgttcggaggggggaccaagctggagctgaaacgtacggtggctgcaccatctg tcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaa agtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctaca gcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagc tcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(Seq ID No：33)
7DC4抗体的重链可变区序列(7DC4-mVH)为：
QVQLKQSGAELVQPGASVKLSCKASGYTFTNYYMYWLRQRPGQGLEWIGEINPSNGGTDFNEKFKSKATLTVDKSSSTAFMQLSSLTSDDSAVYYCARGGFTMDYWGQGTTVTVSS(Seq ID No：34)
编码7DC4-mVH的DNA序列为：
caggtgcagctgaagcagtctggggctgaactggtgcagcctggggcttcagtgaagttgtcctgcaaggcttctggctacaccttcac caactactatatgtactggctgagacagaggcctggacaaggccttgagtggattggagagattaatcctagcaatggtggtactgac ttcaatgagaagttcaagagcaaggccacactgactgtagacaaatcctccagcacagcattcatgcaactcagcagcctgacatctg acgactctgcggtctattactgtgcgagagggggatttactatggactactggggccaaggcaccactgtcaccgtctcctca(Seq ID No：35)
7DC4抗体的重链序列为：
QVQLKQSGAELVQPGASVKLSCKASGYTFTNYYMYWLRQRPGQGLEWIGEINPSNGGTDFNEKFKSKATLTVDKSSSTAFMQLSSLTSDDSAVYYCARGGFTMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAA LGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK KVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK(Seq ID No：36)
编码7DC4重链的DNA序列为：
/>
7DC4抗体的轻链可变区序列(7DC4-mVL)为：
DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSG SGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPLTFGAGTKLELKRT(Seq ID No：38)
编码7DC4-mVL的DNA序列为：
gatgttgtgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagccttgtac acagtaatggaaacacctatttacattggtacctgcagaagccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattt tctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctggga gtttatttctgctctcaaagtacacatgttccgctcacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaacgtacg(Seq ID No：39)
7DC4抗体的轻链序列为：
DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSG SGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(Seq ID No：40)
编码7DC4轻链的DNA序列为：
gatgttgtgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagccttgtac acagtaatggaaacacctatttacattggtacctgcagaagccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattt tctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctggga gtttatttctgctctcaaagtacacatgttccgctcacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaacgtacggtggctgcaccatct gtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggcca aagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctac agcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgag ctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(Seq ID No：41)
7DC15抗体的重链可变区序列(7DC15-mVH)为： QVQLKQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYFMHWVKQKPGQGLEWVGYINPYNDGTKYNEKFKGKA TLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTKGGRYSMDYWGQGTTVTVSS(Seq ID No：42)
编码7DC15-mVH的DNA序列为：
caggtgcagctgaagcagtctggacctgagctggtaaagcctggggcttcagtgaagatgtcctgcaaggcttctggatacacattca ctaactattttatgcactgggtgaagcagaagcctgggcagggccttgagtgggttggatatattaatccttacaatgatggtactaagt acaatgagaagttcaaaggcaaggccacactgacttcagacaaatcctccagcacagcctacatggagctcagcagcctcacctctg aggactctgcggtctattactgtacaaagggtggccgctattctatggactactggggtcaaggaaccactgtcaccgtctcctca (Seq ID No：43)
7DC15抗体的重链序列为：
QVQLKQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYFMHWVKQKPGQGLEWVGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTKGGRYSMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK(Seq ID No：44)
编码7DC15重链的DNA序列为：
/>
7DC15抗体的轻链可变区序列(7DC15-mVL)为：
DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSG SGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGSGTKLELKRT(Seq ID No：46)
编码7DC15-mVL的DNA序列为：
gatgttgtgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagcattgtac atagtaatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattt tctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctggga gtttattactgctttcaaggttcacatgttccattcacgttcggctcggggaccaagctggagctgaaacgtacg(Seq ID No：47)
7DC15抗体的轻链序列为：
DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSG SGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGSGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC(Seq ID No：48)
编码7DC15轻链的DNA序列为：
gatgttgtgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagcattgtac atagtaatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattt tctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctggga gtttattactgctttcaaggttcacatgttccattcacgttcggctcggggaccaagctggagctgaaacgtacggtggctgcaccatct gtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggcca aagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctac agcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgag ctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(Seq ID No：49)
7DC1抗体的重链可变区序列(7DC1-mVH)为：
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTEYIMHWVKQSHGKSLEWIGGINPNIGYTTYNQKFKDKATLT VDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARRGKFDFWGQGTTLTVSS(Seq ID No：50)
编码7DC1-mVH的DNA序列为：
gaggtccagctgcaacaatctggacctgagctggtgaagcctggggcttcagtgaagatatcctgcaagacttctggatacacattca ctgaatacatcatgcactgggtgaagcagagccatggaaagagccttgagtggattggaggtattaatcctaacattggttatactacc tacaaccagaagttcaaggacaaggccacattgactgtagacaagtcctccagcacagcctacatggagctccgcagcctgacatct gaggattctgcagtctattactgtgcaagaagggggaaatttgacttctggggccaaggcaccacactcacagtctcctca(Seq ID No：51)
7DC1抗体的重链序列为：
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTEYIMHWVKQSHGKSLEWIGGINPNIGYTTYNQKFKDKATLT VDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARRGKFDFWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEP KSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK(Seq ID No：52)
编码7DC1重链的DNA序列为：
7DC1抗体的轻链可变区序列(7DC1-mVL)为：
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNSYPLTFGAGTKLELKRT(Seq ID No：54)
编码7DC1-mVL的DNA序列为：
gacattgtgatgacccagtctcaaaaattcatgtccacatcagtaggagacagggtcagcgtcacctgcaaggccagtcagaatgtgg gtactaatgtagcctggtatcaacagaaaccagggcaatctcctaaagcactgatttactcggcatcctaccggtacagtggagtccct gatcgcttcacaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcaatgtgcagtctgaagacttggcagagtatttctgtcag caatataacagctatccgctcacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaacgtacg(Seq ID No：55)
7DC1抗体的轻链序列为：
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNSYPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE C(SeqID No：56)
编码7DC1轻链的DNA序列为：
gacattgtgatgacccagtctcaaaaattcatgtccacatcagtaggagacagggtcagcgtcacctgcaaggccagtcagaatgtgg gtactaatgtagcctggtatcaacagaaaccagggcaatctcctaaagcactgatttactcggcatcctaccggtacagtggagtccct gatcgcttcacaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcaatgtgcagtctgaagacttggcagagtatttctgtcag caatataacagctatccgctcacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttccc gccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagc accctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcac aaagagcttcaacaggggagagtgt(Seq ID No：57)
7DC80抗体的重链可变区序列(7DC80-mVH)为：
QVQLKQSGAELMKPGASVKISCRATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDNNKYSEKFKGKATIT AETSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGLRRFDFWGQGTTLTVSS(Seq ID No：58)
编码7DC80-mVH的DNA序列为：
caggtgcagctgaagcagtctggagctgagctgatgaagcctggggcctcagtgaagatatcctgcagggctactggctacacattca gtaggtactggatagagtgggtaaagcagaggcctggacatggccttgagtggattggagagattttacctggaagtgataataataa gtacagtgagaagttcaagggcaaggccacaatcactgcagaaacatcctccaacacagcctacatgcaactcagcagcctgacatc tgaggactctgccgtctattactgtgcaagagggggattacgacggtttgacttctggggccaaggcaccacgctcaccgtctcctca (Seq ID No：59)
7DC80抗体的重链序列为：
QVQLKQSGAELMKPGASVKISCRATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDNNKYSEKFKGKATIT AETSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGLRRFDFWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK(Seq ID No：60)
编码7DC80重链的DNA序列为：
/>
7DC80抗体的轻链可变区序列(7DC80-mVL)为：
QIVLTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSTYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPTRFSGSGSGTSY SLTISSMEAEDAATYYCHQYHRSPPTFGAGTKLELKRT(Seq ID No：62)
编码7DC80-mVL的DNA序列为：
caaattgttcttacccagtctccagcaatcatgtctgcatctctaggggaacgggtcaccatgacctgcactgccagctcaagtgtaagt tccacttacttgcactggtaccagcagaagccaggatcctcccccaaactctggatttatagcacatccaacctggcttctggagtccc aactcgcttcagtggcagtgggtctgggacctcttactctctcacaatcagcagcatggaggctgaagatgctgccacttattactgcc accagtatcatcgttccccacccacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaacgtacg(Seq ID No：63)
7DC80抗体的轻链序列为：
QIVLTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSTYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPTRFSGSGSGTSY SLTISSMEAEDAATYYCHQYHRSPPTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(Seq ID No：64)
编码7DC80轻链的DNA序列为：caaattgttcttacccagtctccagcaatcatgtctgcatctctaggggaacgggtcaccatgacctgcactgccagctcaagtgtaagt tccacttacttgcactggtaccagcagaagccaggatcctcccccaaactctggatttatagcacatccaacctggcttctggagtccc aactcgcttcagtggcagtgggtctgggacctcttactctctcacaatcagcagcatggaggctgaagatgctgccacttattactgccaccagtatcatcgttccccacccacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcc cgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtgg aaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcag caccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtca caaagagcttcaacaggggagagtgt(Seq ID No：65)
1.3抗人CD47单抗的表达和纯化
取正常传代的Expi293在含有30mL OPM-293 CD03培养基(上海奥浦迈OPMBiosciences)的125mL摇瓶中悬浮培养至4-5×10E6细胞/mL。转染前，将20μg轻链 质粒和10μg重链质粒(无内毒素)与PEI转染试剂混合，然后在摇瓶中加入DNA-PEI 复合物转染细胞。转染后每2天添加补料培养基并适量加入葡萄糖使残余葡萄糖浓度维 持1g/L。细胞培养条件为37℃，CO2浓度5％，摇床转速130rpm，摇床振幅19mm。当细 胞活率低于75％时，收获细胞并离心得到培养上清。培养上清经HiTrap MabSelect SuRe (Cytiva，货号为11003493)捕获后，以0.1M甘氨酸(pH 3.0)洗脱，收集洗脱峰， 再以HiTrap Desalting(Cytiva，货号为29048684)柱脱盐，置换缓冲液为 1×PBS(pH7.4)。于-20度保存待用。
二、抗人CD47单抗的特性
2.1抗人CD47单抗结合人CD47的特性(结合活性)
采用表达人CD47的人肺癌A549细胞株，每管1-5*10E5个细胞置于流式管中，加不同 浓度的抗人CD47待测抗体，并设置同型对照、阳性对照，4度静置20-30 Min。离心机2000rpm离心3分钟，弃上层培养基，每管添加1ug的APC Anti-Human IgG(Biolegend， 货号409306)，4度，避光静置20-30Min。1*PBS洗涤3次，加适量1*PBS调整细胞浓度， 使用FACSVerse(BD Biosciences)检测。结果显示7DC2,7DC4,7DC15,7DC1,7DC80均能 结合细胞膜表面的人CD47抗原(图1)。
2.2抗人CD47单抗结合鼠CD47的特性(结合活性)
取适量的小鼠结肠癌MC38细胞离心后，每管1-5*10E5个细胞置于流式管中，将待测 抗体7DC2,7DC4,7DC15及阴性对照Mock分别加入MC38细胞中，4度静置20-30Min。离心机2000rpm离心3分钟，弃上层培养基，每管添加1ug的BB515 Mouse Anti-Human IgG(BDBiosciences，货号564581)，4度，避光静置2h。1*PBS洗涤3次，加适量1*PBS调整细 胞浓度，使用FACSVerse检测待测抗体与MC38细胞膜表面鼠CD47的结合情况，结果显示 7DC2几乎不结合鼠CD47,7DC4中等程度结合鼠CD47,7DC15与鼠CD47结合能力较强(图 2)。
2.3 Octet测定亲和力
用生物膜干涉技术BLI测定抗人CD47抗体与抗原的亲和常数KD。具体方法为使用Fortebio公司Octet K2系统，SA传感器，第一步结合经生物素标记的CD47-hFc蛋白(自 行表达)。另使用HIS1K传感器，第一步结合CD47-his tag蛋白(义翘神州 SinoBiological，货号12283-H08H)。固化高度约0.5nm，基线平衡后与1:1梯度稀释 的共6个浓度的纯化抗体样品结合。结合时间300秒，解离时间600秒，解离缓冲液PBST (PBS pH7.4+0.02％Tween-20)。数据用Octet数据分析软件V11.0分析，1:1模型拟 合，使用SA传感器测定7DC2的亲和力KD值为1.92×10-10M(图3.A),7DC4的亲和力 KD值为2.76×10-11M(图3.B)。使用HIS1K传感器测定7DC2的亲和力KD值为2.21×10-10M (图3.C),7DC4的亲和力KD值为2.02×10-11M(图3.D)。
2.4抗人CD47单抗(鼠源)在肿瘤模型鼠中的治疗效果
将小鼠结肠癌MC38细胞注射到已进行剃毛处理的8周龄的C57BL/6雌鼠后背侧部，每只注射1×10E6细胞/100μl，观察成瘤情况。当肿瘤长到约40-60mm3时，随机 分配至不同的实验组中。入组后，根据组别给予实验抗体(7DC15，记为Anti-CD47)及对 照抗体(大鼠IgG，记为Mock)，每隔2天进行抗体的注射，抗体剂量为50ug/只/次。 测量记录肿瘤大小(图4.A)及小鼠体重(图4.B)，实验结束后处死小鼠取肿瘤组织拍 照(图4.C)。结果表明，7DC15抗体可以显著的抑制肿瘤的生长且对体重无显著影响。
序列表
<110> 福州创方医药科技有限公司
<120> 一种靶向CD47的单克隆抗体及其应用
<160> 65
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 1
Asn Tyr Phe Met His
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 2
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 3
Gly Gly Arg Tyr Ser Met Asp Tyr
1 5
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 4
Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val Phe Thr Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 5
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 6
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 7
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 7
Asn Tyr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 8
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 8
Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asp Phe Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 9
Gly Gly Phe Thr Met Asp Tyr
1 5
<210> 10
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 10
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 11
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Leu Thr
1 5
<210> 12
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 12
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 13
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 14
Glu Tyr Ile Met His
1 5
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 15
Gly Ile Asn Pro Asn Ile Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 16
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 16
Arg Gly Lys Phe Asp Phe
1 5
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 17
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 18
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 18
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 19
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 20
Arg Tyr Trp Ile Glu
1 5
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 21
Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Asn Asn Lys Tyr Ser Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 22
Gly Gly Leu Arg Arg Phe Asp Phe
1 5
<210> 23
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 23
Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Thr Tyr Leu His
1 5 10
<210> 24
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 24
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 25
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 25
His Gln Tyr His Arg Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 26
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 26
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Gly Gly Arg Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 27
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 27
caggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact aactatttta tgcactgggt gaagcagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg tactaagtac 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctcac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac aaagggtggc 300
cgctattcta tggactactg gggtcaggga accacactca ccgtctcctc a 351
<210> 28
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 28
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Gly Gly Arg Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu
420 425 430
His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 29
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 29
caggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact aactatttta tgcactgggt gaagcagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg tactaagtac 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctcac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac aaagggtggc 300
cgctattcta tggactactg gggtcaggga accacactca ccgtctcctc agctagcacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcctccat ctcgggatga gctgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gttgcatgag gctctgcact ctcactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa a 1341
<210> 30
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 30
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Arg Leu Gly
1 5 10 15
Asp Glu Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val Phe Thr
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Thr
<210> 31
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 31
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtcc gtcttggaga tgaagtgtcc 60
atctcttgta gatctagtca gaccattgta tttactaatg gaaataccta tttagaatgg 120
tacctgcaga aaccgggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcacgatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggaatt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggag ctgaaacgta cg 342
<210> 32
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 32
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Arg Leu Gly
1 5 10 15
Asp Glu Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val Phe Thr
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 33
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 33
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtcc gtcttggaga tgaagtgtcc 60
atctcttgta gatctagtca gaccattgta tttactaatg gaaataccta tttagaatgg 120
tacctgcaga aaccgggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcacgatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggaatt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggag ctgaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657
<210> 34
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 34
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Leu Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asp Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 35
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 35
caggtgcagc tgaagcagtc tggggctgaa ctggtgcagc ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc aactactata tgtactggct gagacagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggagag attaatccta gcaatggtgg tactgacttc 180
aatgagaagt tcaagagcaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcattc 240
atgcaactca gcagcctgac atctgacgac tctgcggtct attactgtgc gagaggggga 300
tttactatgg actactgggg ccaaggcacc actgtcaccg tctcctca 348
<210> 36
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 36
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Leu Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asp Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
420 425 430
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 37
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 37
caggtgcagc tgaagcagtc tggggctgaa ctggtgcagc ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc aactactata tgtactggct gagacagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggagag attaatccta gcaatggtgg tactgacttc 180
aatgagaagt tcaagagcaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcattc 240
atgcaactca gcagcctgac atctgacgac tctgcggtct attactgtgc gagaggggga 300
tttactatgg actactgggg ccaaggcacc actgtcaccg tctcctcagc tagcaccaag 360
ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420
ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480
gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540
ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cctccatctc gggatgagct gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctatag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgtt gcatgaggct ctgcactctc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtctc cgggtaaa 1338
<210> 38
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 38
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Thr
<210> 39
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 39
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaacgta cg 342
<210> 40
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 40
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 41
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 41
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657
<210> 42
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 42
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Gly Gly Arg Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 43
caggtgcagc tgaagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact aactatttta tgcactgggt gaagcagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg ggttggatat attaatcctt acaatgatgg tactaagtac 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctcac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac aaagggtggc 300
cgctattcta tggactactg gggtcaagga accactgtca ccgtctcctc a 351
<210> 44
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 44
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Gly Gly Arg Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu
420 425 430
His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 45
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 45
caggtgcagc tgaagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact aactatttta tgcactgggt gaagcagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg ggttggatat attaatcctt acaatgatgg tactaagtac 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctcac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac aaagggtggc 300
cgctattcta tggactactg gggtcaagga accactgtca ccgtctcctc agctagcacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcctccat ctcgggatga gctgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gttgcatgag gctctgcact ctcactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa a 1341
<210> 46
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 46
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Thr
<210> 47
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 47
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagcattgta catagtaatg gaaacaccta tttagaatgg 120
tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttcca 300
ttcacgttcg gctcggggac caagctggag ctgaaacgta cg 342
<210> 48
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 48
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 49
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 49
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagcattgta catagtaatg gaaacaccta tttagaatgg 120
tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttcca 300
ttcacgttcg gctcggggac caagctggag ctgaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657
<210> 50
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 50
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Asn Ile Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Lys Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 51
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 51
gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
tcctgcaaga cttctggata cacattcact gaatacatca tgcactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggaggt attaatccta acattggtta tactacctac 180
aaccagaagt tcaaggacaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240
atggagctcc gcagcctgac atctgaggat tctgcagtct attactgtgc aagaaggggg 300
aaatttgact tctggggcca aggcaccaca ctcacagtct cctca 345
<210> 52
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 52
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Asn Ile Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Lys Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 53
<211> 1335
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 53
gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
tcctgcaaga cttctggata cacattcact gaatacatca tgcactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggaggt attaatccta acattggtta tactacctac 180
aaccagaagt tcaaggacaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240
atggagctcc gcagcctgac atctgaggat tctgcagtct attactgtgc aagaaggggg 300
aaatttgact tctggggcca aggcaccaca ctcacagtct cctcagctag caccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgcct ccatctcggg atgagctgac caagaaccag 1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgttgca tgaggctctg cactctcact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtaaa 1335
<210> 54
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 54
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr
100 105
<210> 55
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 55
gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgtacg 327
<210> 56
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 56
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 57
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 57
gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct atccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 58
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 58
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Arg Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Asn Asn Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Glu Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Arg Arg Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 59
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 59
caggtgcagc tgaagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60
tcctgcaggg ctactggcta cacattcagt aggtactgga tagagtgggt aaagcagagg 120
cctggacatg gccttgagtg gattggagag attttacctg gaagtgataa taataagtac 180
agtgagaagt tcaagggcaa ggccacaatc actgcagaaa catcctccaa cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtgc aagaggggga 300
ttacgacggt ttgacttctg gggccaaggc accacgctca ccgtctcctc a 351
<210> 60
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 60
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Arg Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Asn Asn Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Glu Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Arg Arg Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu
420 425 430
His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 61
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 61
caggtgcagc tgaagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60
tcctgcaggg ctactggcta cacattcagt aggtactgga tagagtgggt aaagcagagg 120
cctggacatg gccttgagtg gattggagag attttacctg gaagtgataa taataagtac 180
agtgagaagt tcaagggcaa ggccacaatc actgcagaaa catcctccaa cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtgc aagaggggga 300
ttacgacggt ttgacttctg gggccaaggc accacgctca ccgtctcctc agctagcacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcctccat ctcgggatga gctgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gttgcatgag gctctgcact ctcactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa a 1341
<210> 62
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 62
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Thr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr
100 105 110
<210> 63
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 63
caaattgttc ttacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctctagggga acgggtcacc 60
atgacctgca ctgccagctc aagtgtaagt tccacttact tgcactggta ccagcagaag 120
ccaggatcct cccccaaact ctggatttat agcacatcca acctggcttc tggagtccca 180
actcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag 240
gctgaagatg ctgccactta ttactgccac cagtatcatc gttccccacc cacgttcggt 300
gctgggacca agctggagct gaaacgtacg 330
<210> 64
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 64
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Thr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 65
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 65
caaattgttc ttacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctctagggga acgggtcacc 60
atgacctgca ctgccagctc aagtgtaagt tccacttact tgcactggta ccagcagaag 120
ccaggatcct cccccaaact ctggatttat agcacatcca acctggcttc tggagtccca 180
actcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag 240
gctgaagatg ctgccactta ttactgccac cagtatcatc gttccccacc cacgttcggt 300
gctgggacca agctggagct gaaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360
ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420
tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480
caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645

Claims (10)

1.分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)重链可变区CDR1，其包含与选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：14或SEQID NO：20所示一致的氨基酸序列；
(b)重链可变区CDR2，其包含与选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：15或SEQID NO：21所示一致的氨基酸序列；
(c)重链可变区CDR3，其包含与选自SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：16或SEQID NO：22所示一致的氨基酸序列；
(d)轻链可变区CDR1，其包含与选自SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQID NO：17或SEQ ID NO：23所示一致的氨基酸序列；
(e)轻链可变区CDR2，其包含与选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：18、或SEQ ID NO：24所示一致的氨基酸序列；和
(f)轻链可变区CDR3，其包含与选自SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQID NO：19或SEQ ID NO：25所示一致的氨基酸序列；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其包含：
(a)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列一致；或
(b)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列一致；或
(c)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列一致；或
(d)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列一致；或
(e)重链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列一致，以及轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其包含：
(a)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列一致；或
(b)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列一致；或
(c)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：46所示的氨基酸序列一致；或
(d)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：50所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：54所示的氨基酸序列一致；或
(e)重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列一致；以及轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体或其抗原结合部分与人CD47特异性结合。
4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其包含：
(a)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列一致；或
(b)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列一致；或
(c)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：44所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：48所示的氨基酸序列一致；或
(d)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列一致；或
(e)重链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列一致；以及轻链，其氨基酸序列与SEQ ID NO：64所示的氨基酸序列一致；
其中所述抗体与人CD47特异性结合。
5.编码权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合部分的核酸分子。
6.一种表达载体，其含有如权利要求5所述的核酸分子。
7.一种药物组合物，其包含权利要求1-4任一项所述的靶向CD47的单克隆抗体或其抗体片段以及药学上可接受载体。
8.权利要求1-4任一项所述的靶向CD47的单克隆抗体或抗体片段在制备治疗肿瘤疾病的药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的癌症包括黑色素瘤、肾癌、前列腺癌、乳癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃肠、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、骨髓增生异常综合征、慢性或急性白血病、儿童期实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)的赘生物/肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管发生、脊髓轴(spinal axis)肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏(Kaposi)肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症及所述癌症的组合。
10.权利要求1-4任一项所述的靶向CD47的单克隆抗体或抗体片段联合替尼类产品在制备治疗肿瘤疾病的药物中的用途，所述的替尼类药物包括Gefitinib(吉非替尼)，Osimertinib(奥希替尼)，Icotinib(埃克替尼)，Afatinib(阿法替尼)，Erlotinib(厄洛替尼)，Crizotinib(克唑替尼)，Alectinib(阿来替尼盐)，Ceritinib(色瑞替尼)，Trametinib(曲莫替尼)，Cobimetinib(可美替尼)，Axitinib(阿西替尼)，Lenvatinib(乐伐替尼)，Cabozantinib(卡博替尼)，Sunitinib(舒尼替尼)，Bosutinib(伯舒替尼)，Nilotinib(尼洛替尼)，Radotinib(拉多替尼)，Dasatinib(达沙替尼)，Apatinib(阿帕替尼)，Ponatinib(泊那替尼)，Ruxolitinib(芦可替尼)，Neratinib(来那替尼)，Lapatinib(拉帕替尼)，Ibrutinib(依鲁替尼)，Tofacitinib(托法替尼)，Baricitinib(巴瑞克替尼)和Olmutinib(奥莫替尼)或其组合。
CN202210281540.6A 2022-03-21 2022-03-21 一种靶向cd47的单克隆抗体及其应用 Pending CN116813769A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210281540.6A CN116813769A (zh) 2022-03-21 2022-03-21 一种靶向cd47的单克隆抗体及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210281540.6A CN116813769A (zh) 2022-03-21 2022-03-21 一种靶向cd47的单克隆抗体及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116813769A true CN116813769A (zh) 2023-09-29

Family

ID=88139715

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210281540.6A Pending CN116813769A (zh) 2022-03-21 2022-03-21 一种靶向cd47的单克隆抗体及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116813769A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109563172B (zh) 抗tim-3抗体
KR102132100B1 (ko) Pd-1 항체
KR102476226B1 (ko) 항-pd-l1 항체
KR20190076029A (ko) 항-pd-1 항체와의 조합을 위한 항-tim-3 항체
CN112175073B (zh) 冠状病毒的中和抗体或其抗原结合片段
CN106573052A (zh) 抗pd‑1抗体
KR20220113353A (ko) Ceacam5 및 cd3에 대한 이중특이적 항체
CN110724198A (zh) 长效纤连蛋白iii型结构域融合蛋白
CN112010982B (zh) 一种抗gpc3/cd3双特异性抗体及其应用
CN114835802B (zh) 针对呼吸道合胞病毒的蛋白结合分子
CN113583127A (zh) 一种靶向nkg2a和pd-l1的双特异性抗体及应用
CA3156983A1 (en) Antibodies against the poliovirus receptor (pvr) and uses thereof
CN108026167B (zh) 特异性结合分离的衍生自波形蛋白的肽的抗体或该肽的结合片段
JP2023546508A (ja) 抗ｔｉｇｉｔ抗体、その医薬組成物及び用途
CN112225809B (zh) 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用
KR20220040474A (ko) 항-hK2 키메라 항원 수용체(CAR)
CN112204143B (zh) 抗人tlr7抗体
CN109666073B (zh) 一种抗人dll4和抗人vegf双特异性抗体及其制备与应用
CN112778417B (zh) 一种分离的结合抗原bcma的蛋白及其用途
CN116813769A (zh) 一种靶向cd47的单克隆抗体及其应用
CN114591988A (zh) 一种激活肿瘤免疫的基因修饰干细胞制备方法
KR20220131279A (ko) 항lag3단일 클론 항체 및 그 제조 방법과 응용
KR20210019535A (ko) Apj 항체 및 이와 엘라벨라의 융합 단백질, 및 그의 약학 조성물 및 적용
RU2802960C2 (ru) Fab ФРАГМЕНТ ГУМАНИЗИРОВАННОГО АНТИТЕЛА ПРОТИВ VEGF И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
KR20210141794A (ko) 항포도플라닌 항체

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication