KR20200040881A

KR20200040881A - 항-pacap 항체

Info

Publication number: KR20200040881A
Application number: KR1020207008789A
Authority: KR
Inventors: 카테린 브라우티감 바이들러; 마이클 파빈 존슨; 체탄쿠마르 나트바를랄 파텔
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2017-09-29
Filing date: 2018-09-20
Publication date: 2020-04-20
Also published as: JP6952888B2; US20190100579A1; AU2018341959B2; US20200131256A1; US10519225B2; CA3077304A1; IL273529A; JOP20200069A1; EA202090563A1; KR102453573B1; CN111164105B; CO2020002170A2; WO2019067293A1; NZ762312A; US10954292B2; SG11202002572YA; CR20200127A; AU2018341959A1; JP2022000049A; CA3077304C

Abstract

인간 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제-활성화 펩티드에 대한 항체, 상기 항체를 포함하는 조성물, 및 두통 및/또는 편두통을 포함한 통증의 치료를 위해 상기 항체를 사용하는 방법.

Description

항-PACAP 항체

본 발명은 의약 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제-활성화 펩티드 (PACAP)에 대한 항체, 상기 항-PACAP 항체를 포함하는 조성물, 및 원발성 두통 (삼차 자율신경성 두통 포함), 속발성 두통 및 편두통 (만성 편두통 포함)을 포함한 통증의 치료를 위해 상기 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.

뇌하수체 아데닐레이트 시클라제-활성화 펩티드 (PACAP)는 삼차신경혈관계, 삼차 신경절, 척수, 시상하부, 및 뇌하수체를 포함한 신경계 전역에 걸쳐 분포되어 있는 뉴로펩티드이다. PACAP는 적어도 2개의 α-아미드화된 활성 형태: 38개의 아미노산을 포함하고, 더욱 일반적인 활성 형태이며, 전형적으로 포유동물 조직에서 PACAP의 최대 90%를 차지하는 것인 PACAP38 (서열식별번호(SEQ ID NO): 13); 및 PACAP38과 동일한 27개의 N-말단 아미노산을 포함하는 PACAP27 (서열식별번호: 14)로 존재한다. PACAP는 신경보호, 신경조정, 신경원성 염증 및 통각에서, 및 두통 및 편두통을 포함한 통증을 유발하는데 중요한 역할을 하는 것으로 간주된다.

두통 및 편두통은 연간 3천7백만명의 환자에 영향을 주는 것으로 추정되며, 상기 환자 중 2/3는 치료를 받지 않고 있다. 원발성 두통(들)은 상이하거나, 또는 별개의 질환 또는 장애로부터 발생하는 것인 아닌 두통으로 분류되는 반면, 속발성 두통(들)은 상이하거나, 또는 별개의 기저 원인 (예를 들어, 외상, 질병, 또는 다른 장애)으로부터 발생하는 두통으로 분류된다. 삼차 자율신경성 두통 ("TAC")은, 삽화성 및 만성 군발 두통, 돌발성 반두통, 지속성 반두통, 및 편측 신경통형 두통 발작을 포함하는 원발성 두통으로 분류된다. 편두통(들)은 "무조짐" 편두통 (이전에는 "일반적 편두통"으로 명명됨), 및 "조짐" 편두통 (이전에는 "고전적 편두통"으로 명명됨)을 지칭한다. 만성 편두통(들)은 1개월당 15일 이상 두통이 지속되며, 그 중 적어도 8일은 편두통인 것으로 분류된다. 편두통 발병률이 1개월당 2회 이상의 삽화를 보일 때, 또는 편두통이 환자의 일상 일과를 방해하고/거나, 급성 약물 투여가 효과가 없을 때, 의사는 예방적 치료 옵션을 고려하도록 권장된다. 그러나, 현재까지는 편두통 예방을 위한 치료 옵션은 대개 효과가 없으며, 현행 예방적 및 급성 치료 옵션 (예를 들어, 항고혈압제, 항경련제, 항우울제)은 효능이 낮고, 장애를 초래하는 연관된 부작용이 있다.

항-PACAP 항체와 같이, PACAP의 구조는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [A. Miyata, A. et al., Biochem Biophys Res Commun 170: 643-648 (1990)] 참조). 예를 들어, 미국 특허 번호 5,486,472A, 국제 특허 출원 공개 번호 WO/2012/106407 A3, 및 미국 특허 출원 공개 번호 2016-304604에 모두 다양한 항-PACAP 항체 및 그의 잠재적 용도가 개시되어 있다. 그러나, 현재까지는 치료적 용도로 승인받은 PACAP를 표적화하는 항체는 없다. 따라서, 대안적 항-PACAP 항체가 여전히 요구되고 있다. 특히, 높은 효력으로 PACAP를 중화시키고, 지속적인 작용 기간을 제공하고, 원발성 및 속발성 두통, 및 만성 편두통을 포함하는 편두통을 포함한 통증을 치료할 수 있는 대안적 항-PACAP 항체가 여전히 요구되고 있다. 모든 치유적 치료와 같이, 안전성 및 독성은 여전히 제한으로 남아 있으며, 대안적 항-PACAP 항체는 허용되지 않는 면역원성을 수반하지 않아야 한다. 따라서, 인간에서의 면역원성의 감소된 위험을 제시하는 대안적 항-PACAP 항체가 요구되고 있다. 상기 항-PACAP 항체는 또한 바람직하게, 개발, 제조 및 제제화를 촉진시키는 우수한 물리화학적 특성도 갖게 될 것이다.

본 발명은 인간 PACAP에 결합하고 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하는 항체로서, 여기서 HCVR은 상보성 결정 영역 (CDR)인 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, LCVR은 CDR인 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 여기서 HCDR1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 3이고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 4이고, HCDR3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5이고, LCDR1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 6이고, LCDR2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 7이고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 8인 항체를 제공한다. 특정한 실시양태에서, HCDR2는 잔기 13에서의 아스파르트산을 포함하고, HCDR3은 잔기 8에서의 아스파라긴을 포함하고, LCDR1은 잔기 7에서의 세린을 포함하고, LCDR2는 잔기 7에서의 류신을 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, HCDR2는 잔기 13에서의 알라닌을 포함하고, HCDR3은 잔기 8에서의 트레오닌을 포함하고, LCDR1은 잔기 7에서의 트립토판을 포함하고, LCDR2는 잔기 7에서의 페닐알라닌을 포함한다. 추가의 특정한 실시양태에서, HCDR2는 잔기 13에서의 글루탐산을 포함하고, HCDR3은 잔기 8에서의 트레오닌을 포함하고, LCDR1은 잔기 7에서의 트립토판을 포함하고, LCDR2는 잔기 7에서의 페닐알라닌을 포함한다. 추가의 또 다른 특정한 실시양태에서, HCDR2는 잔기 13에서의 글루타민을 포함하고, HCDR3은 잔기 8에서의 트레오닌을 포함하고, LCDR1은 잔기 7에서의 트립토판을 포함하고, LCDR2는 잔기 7에서의 페닐알라닌을 포함한다.

본 발명의 실시양태는 인간 PACAP에 결합하고, HCVR 및 LCVR을 포함하며, 여기서 HCVR의 아미노산 서열은 서열식별번호: 9이고, LCVR의 아미노산 서열은 서열식별번호: 10인 항체를 제공한다. 특정한 실시양태에서, HCVR은 잔기 62에서의 아스파르트산 및 잔기 104에서의 아스파라긴을 포함하고, LCVR은 잔기 30에서의 세린 및 잔기 55에서의 류신을 포함한다. 다른 특정한 실시양태에서, HCVR은 잔기 62에서의 알라닌 및 잔기 104에서의 트레오닌을 포함하고, LCVR은 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함한다. 일부 실시양태에서, HCVR은 잔기 62에서의 글루탐산 및 잔기 104에서의 트레오닌을 포함하고, LCVR은 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함한다. 일부 실시양태에서, HCVR은 잔기 62에서의 글루타민 및 잔기 104에서의 트레오닌을 포함하고, LCVR은 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함한다.

추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 PACAP에 결합하고, 중쇄 (HC) 및 경쇄 (LC)를 포함하며, 여기서 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 1이고, LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 2인 항체를 제공한다. 특정한 실시양태에서, HC는 잔기 62에서의 아스파르트산, 잔기 104에서의 아스파라긴, 잔기 231에서의 프롤린, 잔기 237에서의 알라닌 및 잔기 238에서의 알라닌을 포함하고, LC는 잔기 30에서의 세린 및 잔기 55에서의 류신을 포함한다. 다른 특정한 실시양태에서, HC는 잔기 62에서의 알라닌, 잔기 104에서의 트레오닌, 잔기 231에서의 프롤린, 잔기 237에서의 알라닌 및 잔기 238에서의 알라닌을 포함하고, LC는 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함한다. 다른 특정한 실시양태에서, HC는 잔기 62에서의 글루탐산, 잔기 104에서의 트레오닌, 잔기 231에서의 프롤린, 잔기 237에서의 알라닌 및 잔기 238에서의 알라닌을 포함하고, LC는 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함한다. 일부 특정한 실시양태에서, HC는 잔기 62에서의 글루타민, 잔기 104에서의 트레오닌, 잔기 231에서의 프롤린, 잔기 237에서의 알라닌 및 잔기 238에서의 알라닌을 포함하고, LC는 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함한다.

본 발명은 추가로 본 발명의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 추가로, 본 발명은 통증의 치료를 필요로 하는 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 통증, 예컨대, 원발성 및 속발성 두통을 포함한 두통을 치료하는 방법을 제공한다. 추가의 다른 실시양태에서, 원발성 두통은 TAC이다. 추가의 다른 실시양태에서, 본 발명은 편두통의 치료를 필요로 하는 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 편두통을 치료하는 방법을 제공한다. 상기의 일부 실시양태에서, 편두통은 만성 편두통이다. 추가로, 본 발명은 비만 세포 탈과립 관련 통증의 치료를 필요로 하는 환자에게 본 발명의 항체 또는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 비만 세포 탈과립 관련 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 상기의 일부 실시양태에 따라, 비만 세포 탈과립 관련 통증은 원발성 또는 속발성 두통 및 편두통 중 하나이다.

추가로, 본 발명은 통증의 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 본 발명의 항체를 투여하는 것을 포함하는, 통증, 예컨대, 원발성 두통, 속발성 두통 및/또는 편두통을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에 따라, 원발성 두통은 TAC이다. 일부 실시양태에 따라, 편두통은 만성 편두통이다.

본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다. 더욱 특히, 본 발명은 통증의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다. 특정한 실시양태에서, 본 발명은 원발성 두통, 속발성 두통 및/또는 편두통의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다.

추가로, 본 발명은 통증, 예컨대, 원발성 두통, 속발성 두통 및/또는 편두통의 치료를 위한 의약의 제조에서의 본 발명의 항체의 용도를 제공한다. 더욱 더 특정한 실시양태에서, 원발성 두통은 TAC이다. 일부 특정한 실시양태에서, 편두통은 만성 편두통이다.

본 발명은 또한 본 발명의 항체를 코딩하는 핵산 분자 및 발현 벡터에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자로서, 여기서 잔기 62는 아스파르트산이고, 잔기 104는 아스파라긴이고, 잔기 231은 프롤린이고, 잔기 237은 알라닌이고, 잔기 238은 알라닌인 DNA 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 잔기 62는 알라닌이고, 잔기 104는 트레오닌이고, 잔기 231은 프롤린이고, 잔기 237은 알라닌이고, 잔기 238은 알라닌이다. 일부 실시양태에서, 잔기 62는 글루탐산이고, 잔기 104는 트레오닌이고, 잔기 231은 프롤린이고, 잔기 237은 알라닌이고, 잔기 238은 알라닌이다. 추가 실시양태에서, 잔기 62는 글루타민이고, 잔기 104는 트레오닌이고, 잔기 231은 프롤린이고, 잔기 237은 알라닌이고, 잔기 238은 알라닌이다.

본 발명의 실시양태는 또한 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자로서, 여기서 잔기 30은 세린이고, 잔기 55는 류신인 DNA 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 잔기 30은 트립토판이고, 잔기 55는 페닐알라닌이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 DNA 분자는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열로서, 여기서 잔기 62는 아스파르트산이고, 잔기 104는 아스파라긴이고, 잔기 231은 프롤린이고, 잔기 237은 알라닌이고, 잔기 238은 알라닌인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열로서, 여기서 잔기 30은 세린이고, 잔기 55는 류신인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 DNA 분자는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열로서, 여기서 잔기 62는 알라닌이고, 잔기 104는 트레오닌이고, 잔기 231은 프롤린이고, 잔기 237은 알라닌이고, 잔기 238은 알라닌인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열로서, 여기서 잔기 30은 트립토판이고, 잔기 55는 페닐알라닌인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 DNA 분자는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열로서, 여기서 잔기 62는 글루탐산이고, 잔기 104는 트레오닌이고, 잔기 231은 프롤린이고, 잔기 237은 알라닌이고, 잔기 238은 알라닌인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열로서, 여기서 잔기 30은 트립토판이고, 잔기 55는 페닐알라닌인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 본 발명의 DNA 분자는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열로서, 여기서 잔기 62는 글루타민이고, 잔기 104는 트레오닌이고, 잔기 231은 프롤린이고, 잔기 237은 알라닌이고, 잔기 238은 알라닌인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열로서, 여기서 잔기 30은 트립토판이고, 잔기 55는 페닐알라닌인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 추가로, 본 발명은 항체가 발현되도록 하는 조건 하에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 상기 숙주 세포로부터 본 발명의 항체를 회수하는 단계를 포함하는 방법에 따라 제조된 항체를 제공한다.

본원에 사용된 바와 같이, "항체"는 디술피드 결합에 의해 상호연결된 2개의 HC 및 2개의 LC를 포함하는 이뮤노글로불린 분자이다. 각 LC 및 HC의 아미노 말단부는 그 안에 함유되어 있는 CDR을 통해 주로 항원 인식을 담당하는 약 100-120개의 아미노산으로 이루어진 가변 영역을 포함한다. CDR은 프레임워크 영역 ("FR")으로 명명되는, 보존성이 더욱 큰 영역 사이에 산재되어 있다. 각 LCVR 및 HCVR은 아미노 말단에서부터 카르복시 말단까지 하기 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 배열된, 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. LC의 3개의 CDR은 "LCDR1, LCDR2 및 LCDR3"으로 지칭되고, HC의 3개의 CDR은 "HCDR1, HCDR2 및 HCDR3"으로 지칭된다. CDR은 항원과 특이적인 상호작용을 형성하는 잔기 대부분을 포함한다. 특정 항원에 결합할 수 있는 항체의 기능적 능력은 6개의 CDR에 의해 크게 영향을 받는다. 본 발명의 항체의 LCVR 및 HCVR 영역 내의 CDR 도메인에의 아미노산 지정은 널리 공지된 카바트(Kabat) 넘버링 협약 (Kabat, et al., Ann. NY Acad . Sci. 190:382-93 (1971); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)), 및 노스(North) 넘버링 협약 (North et al., A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations, Journal of Molecular Biology, 406:228-256 (2011))에 기초한다.

LC는 카파 또는 람다로 분류되며, 이는 각각 관련 기술분야에 공지된 바와 같이 특정한 불변 영역을 특징으로 한다. 본 발명의 항체는 카파 LC를 포함한다. HC는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로 분류되며, 이는 각각 IgG, IgM, IgA, IgD, 또는 IgE로서 항체의 이소타입을 정의한다. 본 발명의 항체는 IgG HC를 포함한다. IgG 항체는 하위부류, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4로 추가로 분류될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 IgG4이다. 각 HC의 카르복시 말단부는 주로 이펙터 기능을 담당하는 불변 영역을 정의한다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 각 HC의 불변 영역에 이펙터 기능을 감소시키는 하나 이상의 변형을 갖는다. 더욱 특정한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 IgG4이고, HC 둘 다의 불변 영역에, 잔기 237 및 238 (잔기 넘버링은 선형이고, 서열식별번호: 1의 예시된 HC에 기초함) 둘 다에서의 아미노산 알라닌을 포함하는, 이펙터 기능을 감소시키는 변형을 갖는다. 더욱 더 특정한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 IgG4이고, HC 둘 다의 불변 영역에, 잔기 237 및 238 둘 다에서의 아미노산 알라닌을 포함하는, 이펙터 기능을 감소시키는 변형을 갖고, HC 둘 다의 불변 영역에, 잔기 231 (잔기 넘버링은 선형이고, 서열식별번호: 1의 예시된 HC에 기초함)에서 아미노산 프롤린을 포함하는, 안정성을 촉진시키는 추가의 변형을 갖는다.

본 발명의 항체는 모노클로날 항체 ("mAb")이다. mAb는 예를 들어, 하이브리도마 기술, 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술, 예를 들어, CDR-그라프팅, 또는 상기 기술 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 기술의 조합에 의해 제조될 수 있다. 본원에서 지칭되는 바와 같이, mAb는 그를 제조하는 방법이 아닌, 예를 들어, 임의의 진행성, 원핵성, 또는 파지 클론을 포함한 단일 카피 또는 클론으로부터 유래된 항체이다.

항체를 제조 및 정제하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 파지 라이브러리를 스크리닝할 수 있고, 이로써, 수천개의 Fab 단편을 재조합 인간 PACAP와의 상호작용에 대해 스크리닝한다. 생성된 상호작용은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있는 통상의 방법을 사용하여 회수되고, 정제되고, 아미노산 서열이 결정될 수 있으며, 이로써, 초기의 리드 항체를 구축할 수 있다. 본 발명의 항체는 하나 이상의 인간 프레임워크 영역을 함유하도록 함유하도록 조작된다. 인간 프레임워크 배선 서열은 이뮤노진틱스(INGT: ImMunoGeneTics)로부터 그의 웹사이트, http://imgt.cines.fr을 통해, 또는 문헌 [The Immunoglobulin FactsBook by Marie-Paule Lefranc and Gerard Lefranc, Academic Press, 2001, ISBN 012441351]로부터 입수할 수 있다. 특정한 실시양태에 따라, 본 발명의 항체에 사용하기 위한 배선 HC 및 LC 프레임워크 영역은 각각 3-23 및 O18을 포함한다.

본 발명의 특정한 실시양태에서, 항체, 또는 그를 코딩하는 핵산은 단리된 형태로 제공된다. 본원에 사용된 바와 같이, "단리된"이라는 용어는 세포 환경에서 발견되는 다른 거대분자 종이 없거나, 또는 실질적으로 없는 단백질, 펩티드 또는 핵산을 지칭한다.

본 발명의 항체는 공지된 방법을 사용하여 제조 및 정제될 수 있다. 예를 들어, HC (예를 들어, 서열식별번호: 1에 의해 주어진 아미노산 서열) 및 LC (예를 들어, 서열식별번호: 2에 의해 주어진 아미노산 서열)를 코딩하는 cDNA 서열을 클로닝하고, GS (글루타민 신테타제) 발현 벡터로 조작할 수 있다. 이어서, 조작된 이뮤노글로불린 발현 벡터를 CHO 세포 내로 안정적으로 형질감염시킬 수 있다. 통상의 기술자가 이해하는 바와 같이, 항체의 포유동물 발현은 전형적으로 Fc 영역 중 고도로 보존되는 N-글리코실화 부위에서 글리코실화를 초래할 것이다. 안정적인 클론은 인간 PACAP에 특이적으로 결합하는 항체의 발현으로 확인할 수 있다. 생물반응기에서 항체 제조를 위해 무혈청 배양 배지로 양성 클론을 확장시킬 수 있다. 항체가 그 안으로 분비된 것인 배지를 통상의 기술에 의해 정제할 수 있다. 예를 들어, 배지를 편리하게, 상용성 완충제, 예컨대, 포스페이트 완충처리된 염수로 평형화된 단백질 A 또는 G 세파로스 FF 칼럼에 적용시킬 수 있다. 칼럼을 세척하여 비특이적인 결합 성분을 제거한다. 결합된 항체를 예를 들어, pH 구배에 의해 용출시키고, 항체 분획을, 예컨대, SDS-PAGE에 의해 검출한 후, 풀링한다. 일반적인 기술을 사용하여 항체를 농축시키고/거나, 멸균 여과할 수 있다. 크기 배제, 소수성 상호작용, 이온 교환, 또는 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 포함한 일반적인 기술에 의해 가용성 응집체 및 다량체를 효과적으로 제거할 수 있다. 생성물을 즉시 예를 들어, -70℃에서 냉동시킬 수 있거나, 또는 동결건조시킬 수 있다.

본 발명의 항체는 환자의 치료에 사용될 수 있다. 더욱 특히, 본 발명의 항체는, 구체적으로, 원발성 및 속발성 두통 둘 다, 및 만성 편두통을 포함한 편두통을 포함하는, 통증 부류를 치료할 것으로 예상된다. 비록 본 발명의 항체가 원발성 및 속발성 두통 및 편두통을 포함한 통증의 치료에 유용할 것으로 예상되지만, 상기 항체는 또한 다른 통증의 치료에도 유용할 수 있다. 본원에서 상호교환적으로 사용된 바와 같이, "치료" 및/또는 "치료하는" 및/또는 "치료하다"라는 것은 본원에 기재된 장애 진행의 저속화, 방해, 정지, 제어, 중단 또는 역전이 이루어질 수 있는 모든 프로세스를 지칭하는 것으로 의도되지만, 반드시 장애 증상 모두를 전체적으로 제거한다는 것을 나타내는 것은 아니다. 치료는 PACAP 활성 감소가 도움이 되는 인간에서의 질환 또는 장애를 치료하기 위해 본 발명의 항체를 투여하는 것을 포함하고; (a) 질환의 추가 진행을 억제시키는 것, 즉, 그의 발생을 정지시키는 것; (b) 질환을 완화시키는 것, 즉, 질환 또는 장애를 퇴행시키거나, 또는 그의 증상 또는 합병증을 완화시키는 것; 및 (c) 증상의 질환의 발병을 예방하는 것을 포함한다.

본원에서 상호교환적으로 사용된 바와 같이, "환자," "대상체," 및 "개체"라는 용어는 인간을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 환자는 추가로 PACAP 활성을 감소시키는 것이 도움이 되는 질환, 장애, 또는 병태 (예를 들어, 통증, 예를 들어 원발성 또는 속발성 두통 및/또는 만성 편두통을 비롯한, 편두통)를 앓는 것을 특징으로 한다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 추가로 상기 기재된 병태, 또는 PACAP 활성을 감소시키는 것이 도움이 되는 병태의 발생 위험이 있는 것을 특징으로 한다.

본원에 사용된 바와 같이, "결합한다 (또는 ~에 결합한다)"라는 용어는 인간 PACAP의 에피토프와 항체의 상호작용을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, "에피토프"라는 용어는 본 발명의 항체에 의해 인식되는 항원의 별개의 삼차원 부위를 지칭한다.

본 발명의 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 제조될 수 있고 본 발명의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체(들) 및/또는 희석제(들)를 포함하는 제약 조성물로 도입될 수 있다 (예를 들어, 일반적으로 의사에게 공지되어 있는 것과 같은 제제화 기술의 개요를 제공하는, 문헌 [Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 22^nd Edition, Loyd V., Ed., Pharmaceutical Press, 2012]). 제약 조성물에 대해 적합한 담체로는, 본 발명의 항체와 조합되었을 때, 분자의 활성을 유지시키고, 환자의 면역계와 비반응성인 임의의 물질을 포함한다.

본 발명의 항체를 포함하는 제약 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 질환 또는 장애의 위험이 있거나, 또는 그를 보이는 환자에게 비경구적 경로 (예를 들어, 피하, 정맥내, 복강내, 근육내, 또는 경피)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 제약 조성물은 본원에서 상호교환적으로 사용된 바와 같이, "유효량" 또는 "치료상 유효량"으로 본 발명의 항체를 함유한다. 유효량은 원하는 치료학적 결과를 달성하는데 필요한 (투여 수단에 대한 및 기간 동안 및 투여량의) 양을 지칭한다. 본 항체의 유효량은 인자, 예컨대, 질환 상태, 개체의 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 유도할 수 있는 항체의 능력에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 또한 본 발명의 항체의 임의의 독성 또는 유해한 효과를 치료상 유익한 효과가 능가하는 양이다.

실시예

실시예 1. 예시된 항- PACAP 항체의 조작 및 발현

본 발명의 항-PACAP 항체를 구축할 때, 화학적 및 물리적 안정성과 연관된 중요한 문제에 직면하게 되었다. 예를 들어, 초기 인간화 구축물과 직면한 문제로는 낮은 결합 친화도, 허용불가능한 면역원성, 가변 영역 탈아미드화, 산화, 이성질체화 및 낮은 효력을 포함한다.

그러므로, 본 발명의 항체의 결합 친화도를 개선시키고, HC 이량체화를 제거 또는 감소시키고, 면역원성을 감소시키고, 화학적 및 물리적 안정성을 개선시키기 위해 화학적 및 물리적 변형을 조작하였다. 아미노산 변형은 중쇄 및 경쇄 둘 다의 전역에 걸쳐 조작하였다. 광범위한 단백질 안정성 연구 또한 수행하였고, 구축된 항체를 발현 및 열안정성 특성 뿐만 아니라, 결합 친화도를 포함한 다른 특성에 대해서도 스크리닝하였다. 원래의 구축물로부터 다수의 변형을 포함하는 하기 항체가 높은 결합 친화도를 갖고, 화학적으로 및 물리적으로 안정적이고, 낮은 면역원성을 갖고, 매월 투여와 일치하는 약동학적 특성을 갖는 것으로 확인된다. 본 발명의 항체를 구성하는 변형 중 어느 것도 초기 인간화 구축물에서는 확인되지 않았다.

본 발명의 예시된 항-PACAP 항체는 하기 표 1에 제시되어 있다. 예시된 항체는 서열식별번호: 1의 중쇄 및 서열식별번호: 2의 경쇄 뿐만 아니라, 인간 HC 프레임워크 3-23 및 프레임워크 O18과 함께 인간 카파 LC를 포함한다. 추가로, 항체의 화학적 및 물리적 안정성 뿐만 아니라, 기능적 특성도 개선시키는, 경쇄 및 중쇄 둘 다 내의 조작된 변형된 표 1에 제시되어 있다. 예시된 항-PACAP 항체의 다양한 영역의 관계는 하기와 같다 (아미노산의 넘버링은 선형 넘버링을 준용하고; 아미노산의 가변 도메인으로의 지정은 www.imgt.org에서 이용가능한 인터내셔널 이뮤노제네틱스 인포메이션 시스템(International Immunogenetics Information System)^®에 기초하고; 아미노산의 CDR 도메인으로의 지정은 널리 공지된 노스 넘버링 협약에 기초하며, 단, 예외적으로, HCDR2는 널리 공지된 카바트 넘버링 협약에 기초함):

표 1: 본 발명의 예시된 항- PACAP 항체의 아미노산 영역

하기 실시예 및 검정법은 본 발명의 항체가 원발성 및 속발성 두통 및 편두통을 포함한 통증의 치료에 유용하다는 것을 입증하는 것이다. 그러나, 하기 실시예는 제한하는 것이 아니라, 예시로 제시된 것이며, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 다양한 변형이 이루어질 수 있다는 것을 이해하여야 한다.

본 발명의 예시된 항-PACAP 항체를 본질적으로 하기와 같이 발현하고, 정제할 수 있다. 표 1에 따른 HC 아미노산 서열을 코딩하는 DNA 서열 (예를 들어, 표 1에 제시된 예시된 항체 B의 HC를 코딩하는 서열식별번호: 11의 DNA 서열), 및 표 1에 따른 LC 아미노산 서열을 코딩하는 DNA 서열 (예를 들어, 표 1에 제시된 예시된 항체 B의 LC를 코딩하는 서열식별번호: 12의 DNA 서열)을 함유하는 글루타민 신테타제 (GS) 발현 벡터를 사용하여 전기천공에 의해 차이니즈 햄스터 난소 세포주 (CHO)를 형질감염시킨다. 발현 벡터는 SV 조기 (시미안 바이러스 40E) 프로모터 및 GS에 대한 유전자를 코딩한다. GS의 발현을 통해 CHO 세포가 필요로 하는 아미노산인 글루타민을 생화학적으로 합성할 수 있다. 형질감염후, 세포에 대하여 50μM L-메티오닌 술폭시민 (MSX)을 이용한 벌크 선택을 수행한다. MSX에 의한 GS 억제를 사용하여 선택 엄격도를 증가시킨다. 발현 벡터 cDNA가 숙주 세포 게놈의 전사 활성 영역 내로 통합되어 있는 세포를 내인성 수준의 GS를 발현하는 CHO 야생형 세포로부터 선택할 수 있다. 형질감염된 풀을 저밀도로 플레이팅하여 안정적인 발현 세포의 클론 증식에 가까운 증식이 일어날 수 있도록 허용한다. 마스터웰을 항체 발현에 대해 스크리닝한 후, 무혈청 현탁 배양물 중에서 규모를 확장하여 제조하는데 사용한다. 항체가 그 안으로 분비되었던, 정화된 배지를, 상용성 완충제, 예컨대, 포스페이트 완충처리된 염수 (pH 7.4)로 평형화된 단백질 A 친화성 칼럼에 적용시킨다. 칼럼을 1 M NaCl로 세척하여 비특이적 결합 성분을 제거한다. 결합된 항체를 예를 들어, pH (대략) 3.5의 시트르산 나트륨으로 용출시키고, 분획을 1 M 트리스 완충제로 중화시킨다. 항체 분획을, 예컨대, SDS-PAGE 또는 분석적 크기-배제에 의해 검출한 후, 이어서, 풀링한다. 가용성 응집체 및 다량체는 크기 배제, 소수성 상호작용, 이온 교환 또는 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 포함한 일반 기술에 의해 효과적으로 제거될 수 있다. 일반 기술을 사용하여 본 발명의 예시된 항-PACAP 항체를 농축시키고/거나, 멸균 여과한다. 상기 크로마토그래피 단계 이후 예시된 항체의 순도는 95% 초과이다. 본 발명의 예시된 항-PACAP 항체를 -70℃에서 즉시 냉동시키거나, 또는 수개월 동안 4℃에서 보관할 수 있다.

실시예 2. 결합 친화도

동적 배제 96-웰 플레이트-기반 검정법 (문헌 [Estep et al., mAbs, 2013, 5:270-278]으로부터 개조됨)을 이용하여 각 항체-항원 복합체에 대한 결합 친화도 (K_D)를 결정한다. 간략하면, 각 예시된 Ab (표 1에 제시됨)에 대한 3배 희석액 시리즈를 7290 pM의 출발 농도로부터 41 fM으로 제조하고; 각 시리즈는 항체-블랭크 대조군을 포함한다. 샘플을 3% (w/v) 블로커(Blocker) A 용액 (MSD, #R93AA-1) 중에서 제조하고, 고정된 최종 항원 농도 30 pM의 N-말단 비오티닐화된 PACAP27 (주문형 합성, CPC 사이언티픽(CPC Scientific)) 또는 N-말단 비오티닐화된 PACAP38 (아나스펙(Anaspec), #23590)을 각 샘플에 첨가한다. 100 μl 부피의 각 항원-항체 샘플을 이중으로 96-웰 마이크로타이터 플레이트 (그라이너(Greiner), EK-20101)의 개별 웰에 첨가한다. 플레이트를 광학 접착 필름 (써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific), #4311971)으로 실링하고, 샘플 평형화가 이루어질 수 있도록 하기 위해 37℃에서 3 내지 4일 동안 인큐베이션한다. 분석 전날, 96-웰 MSD 표준 플레이트 (MSD, #L15XA)의 각 행을 포스페이트 완충처리된 염수 (PBS) 중 3 μg/ml 농도의 30 μl의 상응하는 항체 (적정 시리즈에 사용된 바와 같음)로 코팅한다. 실험 당일, MSD 표준 플레이트를 150 μl PBS로 1회 세척하고, MaxQ 4450 벤치탑 진탕기 (써모 피셔 사이언티픽) 상에서 300 rpm으로 진탕시키면서, 30℃에서 45 min 동안 150 μl의 3% 블로커 A 용액으로 차단시킨다. PBS로 3회 세척한 후, 50 μl의 각 항원-항체 샘플 (상기 기재된 바와 같이 제조되고, 인큐베이션됨)을 MSD 표준 플레이트에 첨가하고, 300 rpm으로 진탕시키면서, 30℃에서 150초 동안 인큐베이션한다. PBS로 1회 세척한 후, 1% (w/v) 블로커 A 용액 중에서 제조된 50 μl의 1 μg/ml SULFO-TAG 표지된 스트렙트아비딘 (MSD, #R32AD-5)을 첨가하고, MSD 표준 플레이트 및 플레이트를 300 rpm으로 진탕시키면서, 30℃에서 3분 동안 인큐베이션한다. 플레이트를 PBS로 3회 더 세척한 후, 150 μl/웰의 1X 판독(Read) 완충제 (MSD, #R92TC-2)를 첨가한다. MSD 표준 플레이트를 MESO 퀵플렉스(MESO Quickplex) SQ 120/1300 장치 (메조 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery))를 이용하여 판독한다. 시그마플롯(SigmaPlot) (버전 12.5, 시스타트 소프트웨어(Systat Software))을 이용하여 데이터를 분석하고, 시그마플롯의 적분된 4 파라미터 로지스틱 곡선 모델(SigmaPlot's integrated Four Parameter Logistic Curve Model)을 이용하여 결합 친화도 (K_D)를 결정한다. 결과는 하기 표 2에 제시되어 있다.

표 2: 37℃에서의 항체-항원 복합체의 결합 친화도 (K _D )

실시예 3. 생체내 PACAP 분해

래트에서의 생체내 순환 PACAP38의 분해를 사정한다. 대조군 IgG4 항체 (10 mg/kg) 또는 예시된 항체 A (10 mg/kg) 중 하나를 래트에 정맥내로 주사한다. 각 래트에 대해 혈장 중 기준선 PACAP38을 사정한 후, 래트에 6 μg/kg PACAP38을 정맥내로 주사한다. PACAP38 주사 후, 120분 기간 동안에 걸쳐 혈장 샘플을 수집하고, PACAP38의 전체 수준 (항체에 결합 또는 비결합된 것)을 변형된 ELISA 포맷으로 결정한다. 간략하면, 96 웰 MSD 플레이트 (MSD, 카탈로그 번호 L15xA-1)를 PBS 중 30 μl/웰의 1 ug/ml 항-PACAP38 항체 (US 바이오로지칼(US Biological) 카탈로그 번호 P1775-03C)로 코팅하고, 40℃에서 밤새 인큐베이션한다. 플레이트를 200 μl/웰 PBST로 3회 세척한 후, 650 rpm으로 회전시키면서, 실온에서 1시간 동안 PBS 중 150 μl/웰 3% 블로커 A (MSD 카탈로그 번호 R93BA-2)로 차단시킨다. 이어서, 플레이트를 200 μl/웰 PBST로 3회 세척한다. 200 μg/ml HBR1 (스칸디바디 인크(Scantibodies Inc), 카탈로그 번호 3KC533) 및 10 μg/ml의 비오틴-예시된 항체 A로 보충된, 1부 희석제 2 (MSD 카탈로그 번호 R51-BB-3) 및 39부 희석제 3 (MSD 카탈로그 번호 R51BA-3)을 함유하는 검정 완충제를 이용하여 PACAP38의 캘리브레이터 (바켐(Bachem) 카탈로그 번호 H430-0500)를 1000 pg/mL로 희석한다. 검정 완충제를 이용한 1000 pg/mL 캘리브레이터의 3배 연속 희석액에 의해 캘리브레이터 표준 곡선을 작성한다. 혈장 샘플을, 200 μg/mL HBR1 및 10 μg/mL의 비오틴-예시된 항체 A로 보충된 희석제 3 중에서 40배로 희석한다. 25 μl의 상이한 농도의 캘리브레이터 및 희석된 혈장 샘플을 검정 플레이트의 개별 웰에 첨가하고, 650 rpm으로 회전시키면서, 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한다. 200 μl/웰 PBST로 플레이트를 3회 세척한 후, 희석제 3 중 25 μl의 0.5 μg/ml 술포-태그 표지된 염소 항-인간 IgG (MSD 카탈로그 번호 R32AJ-1)를 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 이어서, 플레이트를 200 μl/웰 PBST로 3회 세척하고, 150 μl의 2X 판독 완충제 T (MSD, 카탈로그 번호 R92TC-3)를 각 웰에 첨가하고, MSD 플레이트 판독기를 이용하여 신호를 판독한다 (결과는 검출가능한 PACAP38 수준으로 제시됨, 평균 ± SEM (n=2-3)). 결과는 하기 표 3에 제시되어 있다.

표 3: PACAP38 혈장 수준

표 3의 결과는 예시된 항체 A가 PACAP38 생체내 분해를 막는 것이 아니라, 정맥내 주사 시 PACAP38 분포를 막는다는 것을 입증한다.

실시예 4. PACAP27 , PACAP38 , 또는 VIP-유도된 cAMP의 억제

인간 PAC 1 (NP_001186564.1) 또는 인간 VPAC2 (NP_003373.2)를 발현하는 벡터로 형질감염된 CHO-K1 세포 (ATCC, 카탈로그 번호 CCL-61)에서 본 발명의 항체에 의한, PACAP27, PACAP38, 및 VIP 유도된 cAMP 자극의 중화를 사정한다. CHO-K1 세포를 비효소적 세포 해리 완충제 (깁코(Gibco) #313131-014)를 이용하여 수확하고, 계수하고, 원심분리하고, 검정 완충제 중에 10,000개의 세포/25 μl로 재현탁시킨다. 농축된 세포 (25 μl 중 10,000개)를 96-웰 플레이트의 웰에 첨가한다.

예시된 항체 (표 1에 제시됨)를 100 μl 검정 완충제 (칼슘 및 마그네슘을 포함하는 HBSS (하이클론(Hyclone), 써모사이언티픽(ThermoScientific), SH30268), 0.1% BSA (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), #A7888), 500 μM IBMX (시그마-알드리치, I5879)) 중에서 4배 원하는 최종 농도로 연속 희석시킨다. 희석된 예시된 항체를 효능제와 함께 (2X 최종 농도로) 실온에서 15분 동안 인큐베이션한다. 효능제의 최종 농도: 인간 PAC1에서 PACAP27 및 PACAP38의 경우 100 pM, 인간 VPAC2에서 PACAP27 및 PACAP38의 경우 800 pM, 인간 VPAC2 검정에서 VIP의 경우 800 pM. 이후, 25 μl의 예시된 항체-효능제 용액을 (세포를 함유하는) 96-웰 플레이트의 개별 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. cAMP 펨토 2 (시스바이오(Cisbio), 62AM5PEC)를 이용하여 각 웰 중 cAMP 형성을 결정한다. 25 μl cAMP-d2 실험 용액 (시스바이오, 62AM5PEC)을 각 웰에 첨가한 후, 25 μl 안티 cAMP-크립테이트 실험 용액을 첨가하고, 플레이트를 암실에서 실온 하에 1 hr 동안 인큐베이션한다. 엔비젼 12(Envision 12) (퍼킨 엘머(Perkin Elmer), 여기 330 nm) 장치를 이용하여 665 및 620 nm에서 생성된 HTRF 신호를 측정하고, 665/620 비를 플롯팅하여 cAMP를 정량화한다 (그래프패드 프리즘 7을 이용하여 데이터를 플롯팅하고, 적분된 4 파라미터 로지스틱 곡선 모델 피팅 루틴을 이용하여 IC50 값을 결정한다. 결과는 하기 표 4에 평균 ± SEM로 제시되어 있다.

표 4: PACAP27 및 PACAP38 유도된 cAMP 증가의 시험관내 중화

실시예 5. 면역원성 분석

트레지토프-조정된 에피매트릭스 점수(Tregitope-adjusted Epimatrix Scores)를 포함한, 에피매트릭스 T 세포 에피토프 예측 소프트웨어 (인터렉티브 스크리닝 앤드 프로테인 리엔지니어링 인터페이스(Interactive Screening and Protein Reengineering Interface: ISPRI) 웹 기반 포털 (에피백스, 인크.(Epivax, Inc.) 내)를 이용하여 인실리코 면역원성 사정을 수행한다. 각 항체와 연관된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR) 단백질 서열을 별개로 분석한다. 에피백스에 따르면, 트레지토프-조정된 에피매트릭스 점수가 0 초과인 단백질 서열은 더 높은 전체 면역원성 잠재능을 갖는다. 각 LCVR 및 HCVR에 대한 에피매트릭스 클러스터 면역원성(EpiMatrix Cluster Immunogenicity) 사정을 또한 수행하여 각 항체의 CDR 내의 T 세포 에피토프 클러스터를 확인한다. 2개 이상의 인접한 에피바(EpiBar)의 존재에 의해 정의되는, T 세포 에피토프 클러스터의 존재는 더 높은 전체 면역원성 잠재능과 연관이 있다. 노스 CDR 정의를 사용한 경우, 예시된 항체 A, B, 또는 C에서 어떤 CDR 관련 T 세포 에피토프 클러스터가 확인되지 않는다. 비교 항체 ALD 1.H (미국 특허 공개 번호 US 2016/0304604에 "Ab 1.H"로 기재됨)의 LCVR의 CDR2에서 4개의 인접한 에피바로 이루어진 T 세포 에피토프 클러스터가 확인되며, 이는 비교 항체가 더 높은 면역원성 잠재능을 갖는다는 것을 시사한다. 결과는 하기 표 5A, 5B 및 5C에 제시되어 있다.

표 5A: 에피매트릭스 T 세포 에피토프 예측을 통한 인실리코 면역원성 위험 사정

표 5B: 트레지토프-조정된 에피매트릭스 사정

표 5C: 에피매트릭스 클러스터 면역원성 사정을 통한 인실리코 면역원성 위험 사정

실시예 6. 비만 세포 탈과립- 유도된 PACAP 방출의 중화

스템스판 미디어(StemSpan Media) (스템셀(StemCell)) 및 SCF/IL-6을 이용하여 인간 제대혈 줄기 세포로부터 배양물 중에서 인간 비만 세포를 분화시킨다. 검정 당일, 비만 세포를 타이로드 완충제 (130 mM NaCl, 5 mM KCl, 1.4 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 5.6 mM 글루코스, 10 mM HEPES 및 0.1% BSA, pH 7.4) 중 96-웰 조직 배양 플레이트의 웰에 50 μl당 100,000개의 세포로 플레이팅한다. 세포를 하기 기재된 예시된 항체의 존재 또는 부재 하에서 PACAP38 또는 PACAP27로 처리한다.

웰당 25 μl의 4X-농축된 예시된 항체 (최종 농도 153 μM의 예시된 항체)를 첨가하여 단일 포인트 시험을 수행한다. 0 내지 153 μM (3배 희석)의 최종 용량 범위에 대해 웰당 25 μl의 4X-농축된 항체를 첨가하여 용량 곡선 시험을 수행한다. 25 μl의 4X-농축된 PACAP38 또는 PACAP27을 최종 농도 1 μM의 PACAP (38 또는 27)로 각 웰에 첨가한다. 검정 배지 단독인 것은 비처리 대조군으로서 사용하고, IgG4 mAb는 음성 대조군으로서 사용한다. 시험은 삼중으로 수행한다. 96-웰 플레이트를 30분 동안 인큐베이터 (37℃)에 배치한다. 인큐베이션 후, 30 μl/웰의 상청액을 수집하고, 상업적 검정법 (밀리포어(Millipore))에 의해 트립타제 활성을 측정한다. 상청액 중 트립타제 방출 퍼센트 (%)는 하기 공식으로 계산한다: ((실험 트립타제 방출 - 비히클 대조군 트립타제 방출) / (전체 트립타제 방출 - 비히클 대조군 트립타제 방출) x 100 (여기서 전체 트립타제 방출은 냉동/해동 비만 세포에 의해 수득됨). 결과는 하기 표 6A, 6B 및 6C에 제시되어 있다.

표 6A: 인간 비만 세포에서의 PACAP (27 및 38) 유도된 트립타제 방출의 단일 포인트 억제

표 6B: 인간 비만 세포에서의 PACAP27 유도된 트립타제 방출의 용량 곡선 억제

표 6C: 인간 비만 세포에서의 PACAP38 유도된 트립타제 방출의 용량 곡선 억제

실시예 7. 생체내 PACAP- 유도된 cAMP 중화

CD-1 뮤린 모델 (엔비고(Envigo))에서의 생체내 PACAP-유도된 혈장 cAMP 증가의 중화를 사정한다. 간략하면, 수컷 CD-1 마우스에 대조군 IgG4 항체 (N=6); 대조군 IgG4 항체 플러스 PBS/롤리프람 단독 (N=5); 예시된 항체 B (N=5); 예시된 항체 C (N=5); 또는 예시된 항체 D (N=6) 중 하나를 10 mg/kg으로 피하 투여한다. 항체 처리 후 3일 경과하였을 때, 마우스에 PACAP38 (13 nmol/kg) 플러스 롤리프람 (100 ug/mL)을 정맥내 투여하고; 앞서 IgG4 대조군 항체로 처리된 일부 마우스는 PBS (0.2% 에탄올, 1% BSA, 5 ml/kg, 및 롤리프람 (100 μg/ml) 함유)를 단독으로 정맥내 투여한다. PACAP38 처리후 10분에, EDTA를 함유하는 튜브에 혈액을 수집하고, 원심분리에 의해 혈장을 분리한다. 상업적으로 이용가능한 cAMP ELISA (셀 바이오스, 인크.(Cell Bios, Inc.))를 이용하여 제조사의 설명서에 따라 cAMP의 혈장 수준을 결정한다. 통계학적 분석을 일원 ANOVA (그래프패드 프리즘 7)로 로그 변환된 cAMP 농도에 적용한 후, 이어서, 던네트 사후 분석을 수행한다. 결과는 하기 표 7에 평균 ± SE로 제시되어 있다.

표 7: PACAP -유도된 혈장 cAMP 수준

*p<0.0001 vs. IgG4 대조군 Ab (PACAP38)

실시예 8. 생체내 삼차 신경절 자극-유도된 경막 혈장 단백질 혈관외유출의 중화

래트를 이용하여 생체내에서의, 삼차 신경절 자극 이후의 PACAP의 방출에 의해 유도된 혈장 단백질 혈관외유출을 차단할 수 있는 본 발명의 항-PACAP 항체의 능력에 대해 연구한다. 간략하면, 스프라그-돌리 래트 (엔비고, 수컷, 250-350 g)에 1-10 mg/kg의 예시된 항체 A; 3-30 mg/kg의 예시된 항체 B; 또는 3 또는 10 mg/kg의 대조군 IgG4 Ab 중 하나를 피하로 투여한다. 72시간 경과 후, 래트를 넴부탈(Nembutal) (65 mg/kg, ip.)로 마취시키고, -2.5 mm로 세팅된 인시저 바가 있는 정위 프레임 (데이비드 코프 인스트루먼츠(David Kopf Instruments))에 배치한다. 두개골의 시상면 정중선을 절개한 후, 두개골을 통해 드릴링하여 2쌍의 양측 홀을 만든다 (후방으로 3.2 mm, 측방으로 1.8 및 3.8 mm, 모두 좌표는 브레그마를 참조로 함). 스테인리스 스틸 자극 전극 쌍 (로데스 메디칼 시스템즈, 인크.(Rhodes Medical Systems, Inc.))을 두 반구체 모두에서 홀을 통해 경막으로부터 9.2 mm 깊이로 하강시킨다. 삼차 신경절 자극 2분 전, 단백질 혈관외유출의 마커인 플루오레세인 이소티오시아네이트-표지된 소 혈청 알부민 (FITC-BSA) (20 mg/kg, iv.)을 대퇴 정맥 내로 주사한다. 남은 삼차 신경절은 PSIU6 광전자 아이솔레이션 유닛이 장착된 모델 S48 그래스 인스트루먼트 스티뮬레이터(Model S48 Grass Instrument Stimulator) (그래스-텔레팩터(Grass-Telefactor))를 이용하여 1.0 mA의 전류 세기 (5 Hz, 5 msec 펄스 지속 기간)로 5분 동안 자극시킨다. 자극 후 5분 경과하였을 때, 40 ml 염수를 이용하여 방혈시켜 희생시킨다.

래트 희생 후, 두개골 상단부를 제거하고, 경막을 수집한다. 두 반구체 모두에서 막 샘플을 제거하고, 물로 세정하고, 현미경 슬라이드 상에 평평하게 스프레드한다. 슬라이드 워머 상에서 슬라이드를 15분 동안 건조시키고, 70% 글리세롤/물 용액으로 조직을 커버 슬립한다. 격자 단색화 장치 및 분광광도계가 장착된 형광 현미경 (자이스(Zeiss))을 사용하여 각 경막 샘플 중의 FITC-BSA 염료를 정량화한다. 삼차 신경절의 전기 자극에 의해 유도된 혈관외유출은 동측성 효과이며 (즉, 자극을 받은 삼차 신경절이 있는 경막 쪽에서만 오직 발생하고), 따라서, 자극을 받지 않은 절반의 경막은 대조군으로서의 역할을 한다. 자극을 받지 않은 쪽 대비의 자극을 받은 쪽으로부터의 경막 중 혈관외유출의 비를 계산한다. 결과는 하기 표 8에 제시되어 있다 (평균 ± SE).

표 8: 삼차 신경절 자극-유도된 경막 혈장 단백질 혈관외유출

실시예 9. 예시된 항- PACAP 항체의 약동학적 성질

단일 SC 투여 후 수컷 시노몰구스 원숭이 (n=2)에서 본 발명의 예시된 항체의 혈청약동학적 성질을 전체 IgG 검정법에 의해 특징화한다. 동물에 예시된 항체 B (10mg/kg)를 피하 주사하고, 주사 후 1, 3, 6, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 240, 336, 504 및 672시간째에 혈청 샘플을 수집한다. 일반적으로 본원에 기재된 바와 같이 전체 IgG 검정법을 수행한다. 간략하면, 100 uL/웰의 1 ug/mL 염소 항-인간 IgG F(ab')₂ 항체 (잭슨 이뮤노리서치 래보러토리즈, 인크.(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.), 카탈로그 번호 109-006-097)를 임뮬론(Immulon) 4HBX 플레이트 상에서 코팅한다. 검출을 위해, 웰을 표준 (예시된 항체 B에 대한 표군 곡선은 15.63-1,000 ng/mL로부터 작성), 대조군 또는 혈청 샘플 중 하나와 함께 인큐베이션한 후, 이어서, 100 ul/웰의 1:10,000 희석된 마우스 항-인간 IgG Fc-호스래디쉬 퍼옥시다제 (HRP; 서던바이오테크(SouthernBiotech), 카탈로그 번호 9040-05)와 함께 인큐베이션한다. 비결합 검출 시약을 세척하여 제거한다. 이후, 100 ul/웰 TMB 마이크로웰 퍼옥시다제 섭스트레이트 시스템(TMB Microwell Peroxidase Substrate System)을 웰에 첨가한다. 100 ul/웰 TMB 정지액을 첨가하여 발색을 정지시키고, 630 nm로 세팅된 파장 보정을 이용하여 450 nm에서 광학 밀도를 측정한다. 100% 시노몰구스 원숭이 혈청 중 기지의 양의 예시된 항체 B로부터 면역반응성을 결정한 후, 이어서, 5-파라미터 알고리즘 (스타트리아(StatLia); 버전 3.2)을 이용하여 PBS 중 블로커(Blocker)™ 카세인 중의 1:10의 최소 필요 희석액에 의해 수행한다. 본질적으로 상기 기재된 바와 같은 방법에 따라, 예시된 항체 B에 대해 겉보기 클리어런스는 (CL/F) 0.49 mL/hr/kg이고, 겉보기 분포 용적 (V/F)은 114.0 mL/kg이고, 비구획 분석에 의해 계산된 최종 반감기는 171시간인 것으로 계산된다. 수득된 약동학적 성질에 관한 결과는 연장된 작용 기간이 가능한 치료 항체와 일치한다.

서열

예시된 HC (서열식별번호: 1)

여기서 잔기 62의 X는 D, A, E 및 Q 중 하나이고; 잔기 104의 X는 N 및 T 중 하나이고; 잔기 231의 X는 P 및 S 중 하나이고; 잔기 237의 X는 A 및 F 중 하나이고; 잔기 238의 X는 A 및 L 중 하나이다.

예시된 LC (서열식별번호: 2)

여기서 잔기 30의 X는 S 및 W 중 하나이고; 잔기 55의 X는 L 및 F 중 하나이다.

예시된 HCDR1 (서열식별번호: 3)

예시된 HCDR2 (서열식별번호: 4)

여기서 잔기 13의 X는 D, A, E 및 Q 중 하나이다.

예시된 HCDR3 (서열식별번호: 5)

여기서 잔기 8의 X는 N 및 T 중 하나이다.

예시된 LCDR1 (서열식별번호: 6)

여기서 잔기 7의 X는 S 및 W 중 하나이다.

예시된 LCDR2 (서열식별번호: 7)

여기서 잔기 7의 X는 L 및 F 중 하나이다.

예시된 LCDR3 (서열식별번호: 8)

예시된 HCVR (서열식별번호: 9)

여기서 잔기 62의 X는 D, A, E 및 Q 중 하나이고; 잔기 104의 X는 N 및 T 중 하나이다.

예시된 LCVR (서열식별번호: 10)

예시된 Ab B의 HC를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 11)

예시된 Ab B의 LC를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 12)

재조합 인간 PACAP 38의 아미노산 서열 (서열식별번호: 13)

여기서 잔기 38의 K는 C-말단 아미드화에 의해 번역후 변형된다.

재조합 인간 PACAP 27의 아미노산 서열 (서열식별번호: 14)

여기서 잔기 27의 L은 C-말단 아미드화에 의해 번역후 변형된다.

SEQUENCE LISTING <110> ELI LILLY AND COMPANY <120> ANTI-PACAP ANTIBODY <130> X21602 <150> 62/565,278 <151> 2017-09-29 <160> 14 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplified HC <220> <221> MISC_FEATURE <222> (62)..(62) <223> Xaa at residue 62 is one of Asp, Ala, Glu, and Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (104)..(104) <223> Xaa at residue 104 is one of Asn and Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (231)..(231) <223> Xaa at residue 231 is one of Pro and Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (237)..(237) <223> Xaa at residue 237 is one of Ala and Phe <220> <221> MISC_FEATURE <222> (238)..(238) <223> Xaa at residue 238 is one of Ala and Leu <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Leu Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Xaa Ser His 50 55 60 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Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Gly <210> 2 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplified LC <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> Xaa at residue 30 is one of Ser and Trp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (55)..(55) <223> Xaa at residue 55 is one of Leu and Phe <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Xaa Arg Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 His Asp Ala Ser Gln Leu Xaa Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Leu Leu Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplified HCDR1 <400> 3 Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Tyr Met Ser 1 5 10 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplified HCDR2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa at residue 13 is one of Asp, Ala, Glu and Gln <400> 4 Ala Ile Ser Leu Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Xaa Ser His Lys 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplified HCDR3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa at residue 8 is one of Asn and Thr <400> 5 Val Arg Glu Val Gly Ala Ser Xaa His Asn Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplified LCDR1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa at residue 7 is one Ser and Trp <400> 6 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Xaa Arg Trp Leu Ala 1 5 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Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Glu Val Gly Ala Ser Xaa His Asn Tyr Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplified LCVR <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> Xaa at residue 30 is one of Ser and Trp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (55)..(55) <223> Xaa at residue 55 is one of Leu and Phe <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Xaa Arg Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 His Asp Ala Ser Gln Leu Xaa Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Leu Leu Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 11 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide Sequence Encoding HC of Exemplified Ab B <400> 11 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctattaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtctga gtggtggtag cacatactac 180 gcagcgtccc acaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgt ccgggaggtg 300 ggagctagca ctcacaacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac catggtcacc 360 gtctcttcag cttctaccaa gggcccatcg gtcttcccgc tagcgccctg ctccaggagc 420 acctccgaga gcacagccgc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480 acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600 acgaagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660 gttgagtcca aatatggtcc cccatgccca ccctgcccag cacctgaggc cgccggggga 720 ccatcagtct tcctgttccc cccaaaaccc aaggacactc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840 tacgtggatg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac 900 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agagccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccaggaggag 1080 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggaaagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaggctaa ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 caggagggga atgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacaca 1320 cagaagagcc tctccctgtc tctgggt 1347 <210> 12 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide Sequence Encoding LC of Exemplified Ab B <400> 12 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcgagtca gagtatttgg aggtggttgg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatccacgat gcatcccaat tgttcgaagg ggtcccatca 180 aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagatattg caacatatta ctgtcaacag tttgatttgc tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acggaccgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gc 642 <210> 13 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Recombinant Human PACAP 38 <220> <221> MOD_RES <222> (38)..(38) <223> Lys at residue 38 is post-translationally modified by C-terminal amidation <400> 13 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys 20 25 30 Gln Arg Val Lys Asn Lys 35 <210> 14 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Recombinant Human PACAP27 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Leu at residue 27 is post-translationally modified by C-terminal amidation <400> 14 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu 20 25

Claims

인간 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제-활성화 펩티드에 결합하고 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하는 항체로서, 여기서 HCVR은 상보성 결정 영역 (CDR)인 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, LCVR은 CDR인 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 여기서 HCDR1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 3이고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 4이고, HCDR3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5이고, LCDR1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 6이고, LCDR2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 7이고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 8인 항체.
제1항에 있어서, HCDR2가 잔기 13에서의 아스파르트산을 포함하고; HCDR3이 잔기 8에서의 아스파라긴을 포함하고; LCDR1이 잔기 7에서의 세린을 포함하고; LCDR2가 잔기 7에서의 류신을 포함하는 것인 항체.
제1항에 있어서, HCDR2가 잔기 13에서의 알라닌을 포함하고; HCDR3이 잔기 8에서의 트레오닌을 포함하고; LCDR1이 잔기 7에서의 트립토판을 포함하고; LCDR2가 잔기 7에서의 페닐알라닌을 포함하는 것인 항체.
제1항에 있어서, HCDR2가 잔기 13에서의 글루탐산을 포함하고; HCDR3이 잔기 8에서의 트레오닌을 포함하고; LCDR1이 잔기 7에서의 트립토판을 포함하고; LCDR2가 잔기 7에서의 페닐알라닌을 포함하는 것인 항체.
제1항에 있어서, HCDR2가 잔기 13에서의 글루타민을 포함하고; HCDR3이 잔기 8에서의 트레오닌을 포함하고; LCDR1이 잔기 7에서의 트립토판을 포함하고; LCDR2가 잔기 7에서의 페닐알라닌을 포함하는 것인 항체.
제1항에 있어서, 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하며, 여기서 HCVR의 아미노산 서열이 서열식별번호: 9이고, LCVR의 아미노산 서열이 서열식별번호: 10인 항체.
제6항에 있어서, HCVR이 잔기 62에서의 아스파르트산 및 잔기 104에서의 아스파라긴을 포함하고, LCVR이 잔기 30에서의 세린 및 잔기 55에서의 류신을 포함하는 것인 항체.
제6항에 있어서, HCVR이 잔기 62에서의 알라닌 및 잔기 104에서의 트레오닌을 포함하고, LCVR이 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함하는 것인 항체.
제6항에 있어서, HCVR이 잔기 62에서의 글루탐산 및 잔기 104에서의 트레오닌을 포함하고, LCVR이 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함하는 것인 항체.
제6항에 있어서, HCVR이 잔기 62에서의 글루타민 및 잔기 104에서의 트레오닌을 포함하고, LCVR이 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함하는 것인 항체.
인간 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제-활성화 펩티드에 결합하고 중쇄 (HC) 및 경쇄 (LC)를 포함하는 항체로서, 여기서 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 1이고, LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 2인 항체.
제11항에 있어서, HC가 잔기 62에서의 아스파르트산, 잔기 104에서의 아스파라긴, 잔기 231에서의 프롤린, 잔기 237에서의 알라닌 및 잔기 238에서의 알라닌을 포함하고, LC가 잔기 30에서의 세린 및 잔기 55에서의 류신을 포함하는 것인 항체.
제11항에 있어서, HC가 잔기 62에서의 알라닌, 잔기 104에서의 트레오닌, 잔기 231에서의 프롤린, 잔기 237에서의 알라닌 및 잔기 238에서의 알라닌을 포함하고, LC가 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함하는 것인 항체.
제11항에 있어서, HC가 잔기 62에서의 글루탐산, 잔기 104에서의 트레오닌, 잔기 231에서의 프롤린, 잔기 237에서의 알라닌 및 잔기 238에서의 알라닌을 포함하고, LC가 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함하는 것인 항체.
제11항에 있어서, HC가 잔기 62에서의 글루타민, 잔기 104에서의 트레오닌, 잔기 231에서의 프롤린, 잔기 237에서의 알라닌 및 잔기 238에서의 알라닌을 포함하고, LC가 잔기 30에서의 트립토판 및 잔기 55에서의 페닐알라닌을 포함하는 것인 항체.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
원발성 두통, 속발성 두통 및 편두통 중 하나의 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 항체를 투여하는 것을 포함하는, 원발성 두통, 속발성 두통 및 편두통 중 하나를 치료하는 방법.
제17항에 있어서, 원발성 두통이 삼차 자율신경성 두통인 방법.
제18항에 있어서, 삼차 자율신경성 두통이 삽화성 군발 두통, 만성 군발 두통, 돌발성 반두통 및 편측 신경통형 두통 발작 중 하나인 방법.
원발성 두통, 속발성 두통 및 편두통 중 하나의 치료를 필요로 하는 환자에게 제16항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 원발성 두통, 속발성 두통 및 편두통 중 하나를 치료하는 방법.
제20항에 있어서, 원발성 두통이 삼차 자율신경성 두통인 방법.
제21항에 있어서, 삼차 자율신경성 두통이 삽화성 군발 두통, 만성 군발 두통, 돌발성 반두통 및 편측 신경통형 두통 발작 중 하나인 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 원발성 두통, 속발성 두통 및 편두통 중 하나의 치료에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 삼차 자율신경성 두통의 치료에 사용하기 위한 항체.
제25항에 있어서, 삼차 자율신경성 두통이 삽화성 군발 두통, 만성 군발 두통, 돌발성 반두통 및 편측 신경통형 두통 발작 중 하나인 항체.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 원발성 두통, 속발성 두통 및 편두통 중 하나의 치료를 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 삼차 자율신경성 두통의 치료를 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 항체.
제28항에 있어서, 삼차 자율신경성 두통이 삽화성 군발 두통, 만성 군발 두통, 돌발성 반두통 및 편측 신경통형 두통 발작 중 하나인 항체.