KR20200007905A - 사이클로덱스트린 단백질 약물 접합체 - Google Patents

사이클로덱스트린 단백질 약물 접합체 Download PDF

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에이미 한
윌리엄 올슨
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리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드
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Abstract

질환, 및/또는 상태, 예를 들면, 이에 한정되지 않는 증식성 질환의 치료를 위한 화합물, 조성물, 접합체 및 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 화합물, 조성물, 및 접합체, 및/또는 다른 제제와 함께 화합물, 조성물, 및 접합체가 제공되며, 이는 사이클로덱스트린계 링커-페이로드 및 이의 단백질 접합체를 포함한다. 본원에 기술된 바와 같은 이러한 화합물, 조성물, 및 접합체를 구체적인 표적 세포에 투여함으로써, 비-특이적인 결합 현상으로 인한 부작용, 예를 들면, 비-표적 세포에 대한 부작용이 감소된다.

Description

사이클로덱스트린 단백질 약물 접합체
전후-참고
본 출원은 2017년 5월 18일자로 출원된 미국 가특허원 제62/508,315호의 이익을 청구하며, 이의 내용은 이의 전문으로 본원에 포함된다.
분야
신규한, 사이클로덱스트린을 포함하는 단백질-약물 접합체(protein-drug conjugate), 및 사이클로덱스트린을 포함하는 단백질-약물 접합체를 투여함을 포함하여, 다양한 질환, 장애, 및 상태를 치료하기 위한 방법이 본원에 제공된다. 또한 사이클로덱스트린을 포함하는 단백질-약물 접합체를 제조하는 방법이 또한 본원에 제시되어 있다.
배경
항체-약물 접합체(ADC)는 항체를 사용하여 표적을 발현하는 세포에 강력한 약물을 선택적으로 전달함으로써, 오프-표적(off-target) 부작용 및/또는 독성의 강력한 감소를 초래함으로써, 치료학적 지수를 증가시킨다.
많은 페이로드(payload)(즉, 약물)의 친지성 특성은 ADC의 특성에 페이로드가 표적 세포에 효과적으로 전달되지 않을 정도로 부정적으로 영향을 미칠 수 있다. 링커내에 극성 그룹을 고정시킴에 의한 ADC 특성의 조절은 접합 동안 응집을 감소시킬 수 있으며, ADC의 물리화학적 특성을 개선시켜 ADC의 개선된 약물동력학(PK) 및 개선된 치료학적 지수를 생성시킨다(참고: 예를 들면, Nature Biotechnology, 2015, 33,733-735). 최종 대사산물의 극성 또는 전하에 있어서의 변화를 가져오는 링커(linker)의 조절은 세포 내부의 페이로드의 보다 우수한 보유로 인하여 다중약물 내성(MDR) 세포에 대한 활성을 증진시킬 수 있다(참고: 예를 들면, Cancer Res; 70(6) March 15, 2010, p2528). 링커, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 당(sugar), 또는 황산 그룹에서의 화학적 모이어티(참고: 예를 들면, 제WO2014062697호, 제US20100323973호)는 ADC의 접합 효과 및 생산 용이성에 영향을 미칠 뿐만 아니라, 대사산물의 일부로서 잔존하므로 ADC의 활성 및 안전성에 영향을 미친다. 다양한 전략을 사용하여 ADC를 증진시켰다(참고: 예를 들면, Bioconjugate Chem.,　2008,　19　(10), pp 1960-1963).
사이클로덱스트린(CD)은 생분해가능한 가용성 식이 섬유 및 식품 성분이며, 또한 약물 담체로서 사용된다. 이들의 안전성은 문서화되었다. CD는 PEG보다 더 가용성이며, 이들은 설포네이트와 같은 전하를 가지지 않으며, 설포네이트는 이들을 가공 동안 용이하게 취급되도록 한다. 또한, 글루코즈 단위(glucose unit)는 α-1,4 연결을 통해 말단-대-말단(end-to-end)으로 공유결합으로 부착되므로, 모든 단위가 동일한 화학적 특성을 가질 수 있으며 또한 독특한 친수성 외부 표면 및 소수성 내부 코어(core)를 형성한다.
친지성 페이로드의 낮은 생체이용률(bioavailability)은 ADC 처리를 위한 치료학적 윈도우(therapeutic window)를 악화시킬 수 있다. 사이클로덱스트린을 포함하는 단백질 접합체, 예컨대, ADC의 개발은 생물학적 표적의 증진된 조절, 증진된 생체이용률, 및 특히 친지성 페이로드가 ADC에 포함된 경우 증진된 치료학적 윈도우를 허용할 수 있다. 따라서, 예를 들면, 사이클로덱스트린 단백질 약물 접합체 중 제제를 사용하는 질환의 효과적인 치료에 대한 지속적인 요구가 존재한다.
요약
예를 들면, 대사 질환, 증식성 질환, 및 다른 질환 및 상태를 포함하나, 이에 한정되지 않는 질환, 상태, 및 장애의 치료에 유용한 화합물이 본원에 제공된다.
일 구현예에서, 적어도 하나의 페이로드 모이어티(moiety)에 연결되고 공유결합성 링커를 통해 적어도 하나의 사이클로덱스트린 모이어티에 연결된 단백질을 포함하는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 본원에 제시되어 있으며, 여기서 상기 공유결합성 링커는 결합제, 페이로드 모이어티, 및 사이클로덱스트린 모이어티각각에 직접 또는 간접적으로 결합되어 있다.
일 구현예에서, 적어도 하나의 페이로드 모이어티에 연결되고 공유결합성 링커를 통해 적어도 하나의 사이클로덱스트린에 연결된 결합제를 포함하는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 본원에 제시되어 있으며, 여기서 상기 공유결합성 링커는 결합제, 페이로드 모이어티, 및 사이클로덱스트린 모이어티 각각에 직접 또는 간접적으로 결합된다.
다른 구현예에서, 적어도 하나의 페이로드 모이어티에 연결되고 공유결합성 링커를 통해 적어도 하나의 사이클로덱스트린 모이어티에 연결된 반응성 그룹을 포함하는 화합물이 본원에 제시되어 있으며, 여기서 상기 공유결합성 링커는 반응성 그룹, 페이로드 모이어티, 및 사이클로덱스트린 모이어티 각각에 직접 또는 간접적으로 결합된다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 결합된, 상기한, 화합물을 갖는 항체-약물 접합체가 본원에 제시되어 있다.
다른 구현예에서, 본원에 제시된 화합물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하여, 상기 환자에서 질환, 상태, 또는 장애를 치료하는 방법이 본원에 제시된다.
다른 구현예에서, 결합제와 링커-페이로드 화합물 사이에 결합을 형성하기에 적합한 조건 하에서, 본원에 제시된 링커-페이로드 화합물과 결합제를 접촉시키는 단계를 포함하는, 항체-약물 접합체를 제조하는 방법이 본원에 제시된다.
도 1a는 3개의 상이한 유형의 페이로드 화합물을 나타낸다.
도 1b는 페이로드 화합물 1h 또는 1i를 제조하기 위한 합성 공정을 나타낸다.
도 1c는 페이로드 화합물 1d를 제조하기 위한 합성 공정을 나타낸다.
도 2는 중간체 화합물 5a 내지 5c를 제조하기 위한 합성 공정을 나타낸다.
도 3은 중간체 화합물 6b를 제조하기 위한 합성 공정을 나타낸다.
도 4는 중간체 화합물 7a 및 7b를 제조하기 위한 합성 공정을 나타낸다.
도 5는 화합물 2a로부터 화합물 3(3e, 3f, 및 3g)을 제조하기 위한 과정 A를 기술하기 위한 일반적인 합성 공정을 나타낸다.
도 6은 화합물 2로부터 화합물 3을 제조하고 또한 화합물 3으로부터 화합물 8을 제조하기 위한 과정 B를 기술하는 일반적인 합성 공정을 나타낸다.
도 7은 화합물 9a-L을 제조하기 위한 과정 C를 기술하는 일반적인 합성 공정을 나타낸다.
도 8은 링커-페이로드를 제조하기 위한 과정 D를 기술하는 일반적인 합성 공정을 나타낸다.
도 9는 링커-페이로드를 제조하기 위한 과정을 기술하는 합성 공정을 나타낸다.
도 10은 실시예 38에서 링커-페이로드를 제조하기 위한 과정을 기술하는 합성 공정을 나타낸다.
도 11은 실시예 39에서 링커-페이로드를 제조하기 위한 과정을 기술하는 합성 공정을 나타낸다.
도 12는 실시예 49에 대한 용해도 플롯(solubility plot)을 나타낸다.
도 13은 미카엘 부가반응(Michael addition)을 통한 접합을 위한 일반적인 합성 공정을 나타낸다.
도 14는 Ab-Ex49에 의해 나타난 [2+3] 클릭 반응을 통한 ADC 접합을 위한 일반적인 합성 공정을 나타낸다.
도 15는 항-Her2 항체, 항-Her2-PEG3-N3, 및 항-Her2-Ex49의 꼬마지에-염색된 Coomassie-stained) SDS-PAGE 겔을 나타낸다.
도 16은 항-Her2 Ab, 항-Her2-PEG3-N3, 및 항-Her2-Ex49의 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 나타낸다.
도 17은 실시예 72에서 시험한 특정 화합물의 세포 생존능 % 대 Log10 [M]의 플롯을 나타낸다.
도 18은 상대적인 광 단위(RLU) 대 Log10 [M]의 플롯에 있어서 사이클로덱스트린 링커의 존재 및 부재하에서 LXR 효능제 ADC의 생체활성을 나타낸다.
도 19는 상대적인 광 단위(RLU) 대 Log10 [M]의 플롯에 있어서 사이클로덱스트린의 존재 및 부재하에서 LXR 효능제 ADC의 생체활성을 나타낸다.
도 20은 본원에 제시된 방법에서 d-Lys 대신 사용될 수 있는 시약을 나타낸다.
예시적인 구현예의 설명
예를 들면, 대상체(subject) 내에서 이상지질혈증, 대사 질환, 염증, 또는 신경변성 질환을 치료하는데 유용한 화합물, 조성물, 및 방법이 본원에 제공된다.
정의
본원에 제공된 화합물을 지칭하는 경우, 다음의 용어는 달리 나타내지 않는 한 다음의 의미를 갖는다. 달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어 모두는 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해된 바와 동일한 의미를 갖는다.본원에 제공된 용어에 대해 다수의 정의가 존재하는 경우, 달리 기술하지 않는 한 이러한 정의가 우선한다.
본원에 사용된 바와 같이, "알킬"은 1가 및 포화된 탄화수소 라디칼 모이어티를 지칭한다. 알킬은 임의 치환되며 직쇄, 측쇄, 또는 사이클릭, 즉, 사이클로알킬일 수 있다. 알킬은 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C1-20 알킬; 1 내지 12개의 탄소 원자, 즉, C1-12 알킬; 1 내지 8개의 탄소 원자, 즉, C1-8 알킬; 1 내지 6개의 탄소 원자, 즉, C1-6 알킬; 및 1 내지 3개의 탄소 원자, 즉, C1-3 알킬을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 알킬 모이어티의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, i-부틸, 펜틸 모이어티, 헥실 모이어티, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 및 사이클로헥실을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 펜틸 모이어티는 n-펜틸 및 i-펜틸을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 헥실 모이어티는 n-헥실을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "알킬렌"은 2가 알킬 그룹을 지칭한다. 달리 명시하지 않는 한, 알킬렌은 1 내지 20개의 탄소 원자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 알킬렌 그룹은 알킬에 대해 본원에 기술된 바와 같이 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 알킬렌은 비치환된다.
이의 입체화학을 명시하지 않고 아미노산 또는 아미노산 잔기의 정의는 아미노산의 L형, 아미노산의 D형, 또는 이의 라세믹 혼합물을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 바와 같이, "할로알킬"은 상기 정의된 바와 같은 알킬을 지칭하며, 여기서 알킬은 할로겐, 예를 들면, 불소(F), 염소(Cl), 브롬(Br), 또는 요오드(I)로부터 선택된 적어도 하나의 치환체를 포함한다. 할로알킬의 예는 -CF3, -CH2CF3, -CCl2F, 및 -CCl3를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "알케닐"은 적어도 2개의 탄소 원자 및 하나 이상의 비-방향족 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 1가 탄화수소 라디칼 모이어티를 지칭한다. 알케닐은 임의 치환되며 직쇄, 측쇄, 또는 사이클릭일 수 있다. 알케닐은 2 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C2-20 알케닐; 2 내지 12개의 탄소 원자, 즉, C2-12 알케닐; 2 내지 8개의 탄소 원자의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C2-8 알케닐; 2 내지 6개의 탄소 원자의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C2-6 알케닐; 및 2 내지 4개의 탄소 원자의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C2-4 알케닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 알케닐 모이어티의 예는 비닐, 프로페닐, 부테닐, 및 사이클로헥세닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "알키닐"은 적어도 2개의 탄소 원자 및 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 1가 탄화수소 라디칼 모이어티를 지칭한다. 알키닐은 임의 치환되며 직쇄, 측쇄, 또는 사이클릭일 수 있다. 알키닐은 2 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C2-20 알키닐; 2 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C2-12 알키닐; 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C2-8 알키닐; 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C2-6 알키닐; 및 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C2-4 알키닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 알키닐 모이어티의 예는 에티닐, 프로피닐, 및 부티닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "알콕시"는 1가 및 포화된 탄화수소 라디칼 모이어티를 지칭하며 여기서 탄화수소는 산소 원자에 대한 단일 결합을 포함하며 여기서 라디칼은 산소 원자 상에 위치하며, 예컨대, 에톡시의 경우 CH3CH2-O이다. 알콕시 치환체는 이들이 알콕시 치환체의 이러한 산소 원자를 통해 치환하는 화합물에 결합한다. 알콕시는 임의로 치환되며 직쇄, 측쇄, 또는 사이클릭, 즉, 사이클로알콕시일 수 있다. 알콕시는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C1-20 알콕시; 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C1-12 알콕시; 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C1-8 알콕시; 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C1-6 알콕시; 및 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 라디칼, 즉, C1-3 알콕시를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 알콕시 모이어티의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, i-프로폭시, n-부톡시, s-부톡시, t­부톡시, i-부톡시, 펜톡시 모이어티, 헥속시 모이어티, 사이클로프로폭시, 사이클로부톡시, 사이클로펜톡시, 및 사이클로헥소시를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "할로알콕시"는, 상기 정의된 바와 같이, 알콕시를 지칭하며, 여기서 알콕시는 할로겐, 예컨대, F, Cl, Br, 또는 I로부터 선택된 적어도 하나의 치환체를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "아릴"은 방향족 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며 여기서 환 원자는 탄소 원자이다. 아릴은 임의 치환되며 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭, 예컨대, 비사이클릭 또는 트리사이클릭일 수 있다. 아릴 모이어티의 예는 6 내지 20개의 환 탄소 원자를 갖는 것, 즉, C6-20 아릴; 6 내지 15개의 환 탄소 원자를 갖는 것, 즉, C6-15 아릴, 및 6 내지 10개의 환 탄소 원자를 갖는 것, 즉, C6-10 아릴을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 아릴 모이어티의 예는 페닐, 나프틸, 플루오레닐, 아줄레닐, 안트릴, 페난트릴, 및 피레닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "아릴알킬"은 알킬 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며, 여기서 알킬 화합물은 방향족 치환체로 치환되는데, 즉, 방향족 화합물은 알킬 그룹에 대한 단일 결합을 포함하고 여기서 라디칼은 알킬 그룹에 국재화된다. 아릴알킬 그룹은 알킬 그룹을 통해 나타낸 화학 구조에 결합한다. 아릴알킬은 구조식, 예컨대,
Figure pct00001
또는
Figure pct00002
로 나타낼 수 있으며, 여기서 B는 방향족 모이어티, 예컨대, 페닐이다. 아릴알킬은 임의로 치환되는데, 즉, 아릴 그룹 및/또는 알킬 그룹은 본원에 개시된 바와 같이 치환될 수 있다. 아릴알킬의 예는 벤질을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "알킬아릴"은 아릴 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며, 여기서 아릴 화합물은 알킬 치환체로 치환되는데, 즉, 아릴 화합물은 알킬 그룹에 대한 단일 결합을 포함하고 여기서 라디칼은 아릴 그룹에 국재화된다. 알킬아릴 그룹은 아릴 그룹을 통해 나타낸 화학적 구조에 결합한다. 알킬아릴은 구조식, 예컨대,
Figure pct00003
또는
Figure pct00004
로 나타낼 수 있으며, 여기서 B는 방향족 모이어티, 예컨대, 페닐이다. 알킬아릴은 임의로 치환되는데, 즉, 아릴 그룹 및/또는 알킬 그룹은 본원에 개시된 바와 같이 치환될 수 있다. 알킬아릴의 예는 톨루일을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "아릴옥시"는 방향족 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며 여기서 환 원자는 탄소 원자이고 여기서 환은 산소 라디칼로 치환되는데, 즉, 방향족 화합물은 산소 원자에 대한 단일 결합을 포함하고 여기서 라디칼은 산소 원자 상에 국재화되는데, 예컨대, 페닐옥시의 경우,
Figure pct00005
이다. 아릴옥시 치환체는 이들이 이러한 산소 원자를 통해 치환하는 화합물에 결합한다. 아릴옥시는 임의로 치환된다. 아릴옥시는 6 내지 20개의 환 탄소 원자를 가진 라디칼, 즉, C6-20 아릴옥시; 6 내지 15개의 환 탄소 원자를 지닌 라디칼, 즉, C6-15 아릴옥시, 및 6 내지 10개의 환 탄소원자를 가진 라디칼, 즉, C6-10 아릴옥시를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 아릴옥시 모이어티의 예는 페녹시, 나프톡시, 및 안트록시를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "R a R b N-아릴옥시"는 방향족 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며, 여기서 환 원자는 탄소 원자이고 여기서 환은 적어도 하나의 RaRbN- 치환체 및 적어도 하나의 산소 라디칼로 치환되는데, 즉, 방향족 화합물은 RaRbN- 치환체에 대한 단일 경합 및 산소 원자에 대한 단일 결합을 포함하고 여기서 라디칼은 산소 원자 상에 국재화되며, 예컨대,
Figure pct00006
이다. RaRbN-아릴옥시 치환체는 이들이 이러한 산소 원자를 통해 치환하는 화합물에 결합한다. RaRbN-아릴옥시는 임의로 치환된다. RaRbN-아릴옥시는 6 내지 20개의 환 탄소 원자를 갖는 것, 예를 들면, C6-20 (RaRbN)n-아릴옥시, 6 내지 15개의 환 탄소 원자를 갖는 것, 예를 들면, C6-15 (RaRbN)n-아릴옥시, 및 6 내지 10개의 환 탄소 원자를 갖는 것, 예를 들면, C6-10 (RaRbN)n-아릴옥시를 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 여기서 n은 RaRbN- 치환체의 수이다. RaRbN-아릴옥시 모이어티의 예는 4-(디메틸아미노)-페녹시,
Figure pct00007
를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "아릴렌"은 방향족 화합물의 2가 모이어티를 지칭하며 여기서 환 원자는 탄소 원자 만이다. 아릴렌은 임의로 치환되며 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭, 예컨대, 비사이클릭 또는 트리사이클릭일 수 있다. 아릴렌 모이어티의 예는 6 내지 20개의 환 탄소 원자를 갖는 것, 즉, C6-20 아릴렌; 6 내지 15개의 환 탄소 원자를 갖는 것, 즉, C6-15 아릴렌, 및 6 내지 10개의 환 탄소 원자를 갖는 것, 즉, C6-10 아릴렌일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "헤테로알킬"은 하나 이상의 탄소 원자가 헤테로원자로 대체된 알킬을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, "헤테로알케닐"은 하나 이상의 탄소 원자가 헤테로원자로 대체된 알케닐을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, "헤테로알키닐"은 하나 이상의 탄소 원자가 헤테로원자로 대체된 알키닐을 지칭한다. 적합한 헤테로원자는 질소, 산소, 및 황 원자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 헤테로알킬은 임의로 치환된다. 헤테로알킬 모이어티의 예는 아미노알킬, 설포닐알킬, 및 설피닐알킬을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 헤테로알킬 모이어티의 예는 메틸아미노, 메틸설포닐, 및 메틸설피닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "헤테로아릴"은 방향족 화합물의 라디칼인 1가 모이어티를 지칭하며 여기서 환 원자는 탄소 원자 및 적어도 하나의 산소, 황, 질소, 또는 인 원자를 함유한다. 헤테로아릴 모이어티의 예는 5 내지 20개의 환 원자; 5 내지 15개의 환 원자; 및 5 내지 10개의 환 원자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 헤테로아릴은 임의로 치환된다.
본원에 사용된 바와 같이, "헤테로아릴렌"은 방향족 환의 하나 이상의 환 원자가 산소, 황, 질소, 또는 인 원자로 대체된 아릴렌을 지칭한다. 헤테로아릴렌은 임의로 치환된다.
본원에 사용된 바와 같이, "헤테로사이클로알킬"은 하나 이상의 탄소 원자가 헤테로원자로 대체된 사이클로알킬을 지칭한다. 적합한 헤테로원자는 질소, 산소, 및 황 원자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 헤테로사이클로알킬은 임의로 치환된다. 헤테로사이클로알킬 모이어티의 예는 모르폴리닐, 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 옥사졸리디닐, 티아졸리디닐, 디옥솔라닐, 디티올라닐, 옥사닐, 또는 티아닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "루이스산(Lewis acid)"은 고립 전자쌍(electron lone pair)을 수용하는 분자 또는 이온을 지칭한다.　본원에 기술된 방법에 사용된 루이스산은 양성자 이외의 것이다. 루이스산은 비-금속산, 금속산, 경질 루이스산, 및 연질 루이스산을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 루이스산은 알루미늄, 붕소, 철, 주석, 티탄, 망간, 구리, 안티몬, 인, 은, 이테르븀, 스칸듐, 니켈, 및 아연의 루이스산을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 예시적인 루이스산은 AlBr3, AlCl3, BCl3, 보론 트리클로라이드 메틸 설파이드, BF3, 보론 트리플루오라이드 메틸 에테레이트, 보론 트리플루오라이드 메틸 설파이드, 보론 트리플루오라이드 테트라하이드로푸란, 디사이클로헥실보론 트리플루오로메탄설포네이트, 브롬화철(III), 염화철(III), 염화주석(IV), 염화티탄(IV), 티탄(IV) 이소프로폭사이드, Cu(OTf)2, CuCl2, CuBr2, 염화아연, 알킬암모늄 할라이드(RnAlX3-n, 여기서 R은 하이드로카빌이고, X는 할라이드이며, 첨자 n은 0 내지 3의 정수이다),　 Zn(OTf)2, ZnCl2, Yb(OTf)3, Sc(OTf)3, MgBr2, NiCl2, Sn(OTf)2, Ni(OTf)2, 및 Mg(OTf)2를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "N-함유 헤테로사이클로알킬"은 하나 이상의 탄소 원자가 헤테로원자로 대체되고 적어도 하나의 헤테로원자가 질소 원자인 사이클로알킬을 지칭한다. 질소 원자 이외의 적합한 헤테로원자는 산소 및 황 원자를 포함하나 이에 제한되지 않는다. N-함유 헤테로사이클로알킬은 임의로 치환된다. N-함유 헤테로사이클로알킬 모이어티의 예는 모르폴리닐, 피페리디닐, 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 옥사졸리디닐, 또는 티아졸리디닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "임의 치환된"은, 라디칼 모이어티를 기술하는데 사용된 경우, 예를 들면, 임의 치환된 알킬은, 이러한 모이어티가 하나 이상의 치환체에 임의 결합됨을 의미한다. 이러한 치환체의 예는 할로, 시아노, 니트로, 임의 치환된 할로알킬, 아지도, 에폭시, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 헤테로사이클로알킬,
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
또는
Figure pct00011
를 포함하나, 이에 한정되지 않고, 여기서 RA, RB, 및 RC는, 각각 존재시 독립적으로 수소 원자, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬이거나, RA 및 RB은 이들이 결합된 원자와 함께, 포화되거나 불포화된 카보사이클릭 환을 형성하고, 여기서 환은 임의로 치환되며, 여기서 하나 이상의 환 원자는 헤테로원자로 임의로 대체된다. 특정의 구현예에서, 라디칼 모이어티가 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 헤테로사이클로알킬, 또는 임의 치환된 포화되거나 불포화된 카보사이클릭 환으로 임의로 치환된 경우, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 헤테로사이클로알킬, 또는 임의 치환된 포화되거나 불포화된 카보사이클릭 환 상의 치환체는, 이들이 치환된 경우, 추가의 치환체로 추가로 임의 치환된 치환체로 치환되지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 그룹이 임의로 치환된 경우, 그룹에 결합된 치환체는 달리 정의하지 않는 한 치환되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "결합제"는 임의의 분자, 예컨대, 제공된 결합 파트너, 예컨대, 항원에 대해 특이성으로 결합할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "링커"는 본원에 기술된 하나 이상의 화합물, 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 페이로드 화합물 및 사이클로덱스트린 그룹에 결합제를 공유결합으로 연결하는 2가, 3가, 또는 다가 모이어티를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, "아미드 합성 조건"은 예컨대, 카복실산, 활성화된 카복실산, 또는 아실 할라이드와 아민의 반응에 의해, 아미드의 형성에 영향을 미치기에 적합한 반응 조건을 지칭한다. 일부 예에서, 아미드 합성 조건은 카복실산과 아민 사이의 아미드 결합의 형성에 영향을 미치기에 적합한 반응 조건을 지칭한다. 일부 이러한 예에서, 카복실산은 먼저 활성화된 카복실산으로 전환된 후에 활성화된 카복실산은 아민과 반응하여 아미드를 형성한다. 아미드의 형성에 영향을 미치기에 적합한 조건은 시약을 이용하여 카복실산과 아민 사이의 반응에 영향을 미치는 것, 예를 들면, 이에 한정되지 않는 디사이클로헥실카보디이미드(DCC), 디이소프로필카보디이미드(DIC), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리딘포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), (7-아자벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyAOP), 브로모트리피롤리딘포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBrOP), O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-트리메탈우로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU), O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(HATU), N-에톡시카보닐-2-에톡시-1,2-디하이드로퀴놀린(EEDQ), N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드(EDC), 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸리늄 헥사플루오로포스페이트(CIP), 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진(CDMT), 및 카보닐디이미다졸(CDI)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 예에서, 카복실산은 활성화된 카복실성 에스테르를 아민으로 처리하여 아미드 결합을 형성하기 전에 활성화된 카복실성 에스테르로 전환된다. 특정의 구현예에서, 카복실산은 시약으로 처리된다. 시약은 카복실산을 탈양성자화시킨 후 양성자화된 시약 상에 탈양성자화된 카복실산에 의한 친핵성 공격의 결과로서 탈양성자화된 카복실산을 지닌 생성물 복합체를 형성함으로써 카복실산을 활성화시킨다. 특정의 카복실산에 대한 활성화된 카복실산 에스테르는 후속적으로 카복실산이 활성화되기 전에 이보다 아민에 의한 친핵성 공격에 보다 민감하다. 이는 아미드 결합 형성을 생성한다. 따라서, 카복실산은 활성화된 바와 같이 기술된다. 예시적인 시약은 DCC 및 DIC를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "레지오이성체(regioisomer)", "레지오이성체들", 또는 "레지오이성체들의 혼합물"은 적합한 알킨으로 처리된 적합한 아지드(예컨대, -N3, 또는 PEG-N3 유도체화된 항체)로부터 유래되는 - 달리는 클릭 반응(click reaction)으로 공지된 - 1,3-사이클로부가반응(1,3-cycloaddition) 또는 변형률(strain)-촉진된 알킨-아지드 사이클로부가반응(SPAAC)의 생성물(들)을 지칭한다. 특정의 구현예에서, 예를 들면, 레지오이성체 및 레지오이성체들의 혼합물은 하기 나타낸 클릭 반응 생성물에 의해 특징화된다:
Figure pct00012

특정의 구현예에서, 하나 이상의 적합한 아지드 및 하나 이상의 적합한 알킨은 생성물로의 도중에 합성 경로 내에서 이용될 수 있고, 여기서 아지드-알킨의 각각의 쌍은 하나 이상의 독립된 클릭 반응에 참여하여 레지오이성체 클릭 반응 생성물의 혼합물을 생성할 수 있다. 예를 들면, 기술자는 제1의 적합한 아지드가 생성물로의 도중에, 제2의 적합한 알킨과 독립적으로 반응하여 4개의 가능한 클릭 반응 레지오이성체 또는 4개의 가능한 클릭 반응 레지오이성체의 혼합물의 생성을 야기할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "잔기"는 화학 반응 후 잔존하는 화합물 내의 화학적 모이어티를 지칭한다. 예를 들면, 용어 "아미노산 잔기" 또는 " N -알킬 아미노산 잔기"는 적합한 커플링 파트너에 대한 아미노산 또는 N-알킬 아미노산의 아미드 커플링 또는 펩타이드 커플링의 생성물을 지칭하며; 여기서, 예를 들면, 물 분자는 아미노산 또는 N-알킬아미노산의 아미드 또는 펩타이드 커플링 후에 배출되어, 이에 포함된 아미노산 잔기 또는 N-알킬 아미노산 잔기를 갖는 생성물을 생성시킨다.
본원에 사용된 바와 같이, "치료학적 유효량"은 질환 또는 장애의 치료 또는 관리시 환자에게 치료학적 이점을 제공하거나, 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 지연시키거나 최소화시키는데 충분한 양(예컨대, 화합물의)을 지칭한다.
특정의 그룹, 모이어티, 치환체, 및 원자는 이를 통해 그룹, 모이어티, 치환체, 원자가 결합되는 원자를 나타내기 위해 결합 또는 결합들을 교차하는 물결 선(wiggly line)으로 나타낸다. 예를 들면,
Figure pct00013
또는
Figure pct00014
로서 나타낸 프로필 그룹으로 치환된 페닐 그룹은 다음 구조를 갖는다:
Figure pct00015
. 본원에 사용된 바와 같이, 환 원자들 사이의 결합을 통해 사이클릭 그룹(예컨대, 방향족, 헤테로방향족, 융합된 환, 및 포화되거나 불포화된 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬)에 결합된 치환체를 나타내는 삽화는, 달리 정의하지 않는 한, 본원에 제시되거나 본 개시내용이 속한 분야에 공지된 기술에 따라, 사이클릭 그룹이 사이클릭 그룹내 임의의 환 위치에서 또는 융합된 환 그룹내 임의의 환 상에서 이러한 치환체로 치환될 수 있음을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들면, 그룹,
Figure pct00016
또는
Figure pct00017
(여기서, 첨자 q는 0 내지 4의 정수이고 여기서 치환체 R1의 위치는 일반적으로 기술되는데, 즉, 결합 라인 구조, 즉, 특정 환 탄소 원자의 임의의 정점에 직접 부착되지 않는다)는 치환체 R1이 특정 환 탄소 원자에 결합된 그룹의 다음의, 비-제한적 예를 포함한다:
Figure pct00018

Figure pct00019

본원에 사용된 바와 같이, 어구 "반응성 링커"는 예를 들면,
Figure pct00020
(여기서 RG'는 반응성 그룹이고 SP는 스페이서 그룹(spacer group)이다)로서 나타낸, 반응성 그룹 및 스페이서 그룹을포함하는 1가 그룹을 지칭한다. 본원에 기술된 바와 같이, 반응성 링커는 하나 이상의 반응성 그룹 및 하나 이상의 스페이서 그룹을 포함할 수 있다. 스페이서 그룹은 다른 그룹, 예를 들면, 페이로드 또는 또한 결합제에 반응성 그룹을 브릿지(bridge)하는 임의의 2가 또는 3가 모이어티이다. 반응성 링커(RL)는, 이들이 결합된 페이로드와 함께, 본원에 기술된 항체 접합체의 제조를 위한 합성 전구체로서 유용한 중간체("링커-페이로드")를 제공한다. 반응성 링커는 반응성 그룹(RG')을 함유하며, 이는 본원에 기술된 바와 같은, 다른 그룹, 예를 들면 항체, 변형된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 사이클로덱스트린 그룹의 반응성 부위와 반응할 수 있는 작용 그룹 또는 모이어티이다. 반응성 그룹과 항체, 변형된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편과 함께, 링커 그룹의 반응으로부터 생성된 모이어티는 본원에 기술된, 접합체의 "결합제 링커"("BL") 부분을 포함한다. 특정의 구현예에서, "반응성 그룹"은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 시스테인 또는 라이신 잔기와 반응하는 작용 그룹 또는 모이어티(예컨대, 말레이미드 또는 N-하이드록시석신이미드(NHS) 에스테르)이다. 특정의 구현예에서, "반응성 그룹"은 클릭 화학 반응을 겪을 수 있는 작용 그룹 또는 모이어티이다(참고: 예컨대, click chemistry, Huisgen Proc. Chem. Soc. 1961, Wang et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 및 Agard et al. J. Am. Chem. Soc. 2004). 상기 클릭 화학 반응의 일부 구현예에서, 반응성 그룹은 아지드와의 1,3-사이클로부가반응을 겪을 수 있는 알킨이다. 이러한 적합한 반응성 그룹은 변형된 알킨(strained alkyne), 예컨대, 변형-촉진된 알킬-아지드 사이클로부가반응(SPAAC), 사이클로알킨, 예컨대, 사이클로옥틴, 벤자뉼화된(benzanulated) 알킨, 및 구리 촉매의 존재하에서 알킨과의 1,3-사이클로부가반응을 겪을 수 있는 알킨을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 알킨을 또한 디벤조아자사이클로옥틴 또는
Figure pct00021
(DIBAC), 예를 들면,
Figure pct00022
, 디벤조사이클로옥틴 또는
Figure pct00023
(DIBO), 예를 들면,
Figure pct00024
, 비아릴아자사이클로옥티논 또는
Figure pct00025
(BARAC), 예를 들면,
Figure pct00026
, 이불소화된 사이클로옥틴 또는
Figure pct00027
또는
Figure pct00028
또는
Figure pct00029

Figure pct00030

Figure pct00031
치환된, 예컨대, 불소화된 알킨, 아자-사이클로알킬, 비사이클[6.1.0]노닌 또는
Figure pct00032
(여기서 R은 알킬, 알콕시, 또는 아실이다), 및 이의 유도체, 예를 들면,
Figure pct00033
를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 특히 유용한 알킨은
Figure pct00034
를 포함한다.
이러한 반응성 그룹을 포함하는 링커-페이로드는 아지드 그룹으로 작용화된 항체를 접합시키는데 유용하다. 이러한 작용화된 항체는 아지도-폴리에틸렌 글리콜 그룹으로 작용화된 항체를 포함한다. 특정의 구현예에서, 이러한 작용화된 항체는 적어도 하나의 글루타민 잔기를 가진 항체, 예컨대, Gln295, Asn297Gln, 및/또는 Gln55를 효소 트랜스글루타미나제의 존재하에서, 아미노 및 아지드 그룹을 지니는 화합물로 처리함으로써 유도된다.
일부 예에서, 생체접합 반응에 사용된 알킨은 Cu(I) 클릭-화학 접합 반응에 유용하다. 일부 실시예에서, 접합 반응에 사용된 알킨은 CBT 반응에서 1,2 아미노티올과 반응한다. 일부 실시예에서, 사용된 알킨은 BCN, BCN의 유도체, 또는 역 전자 요구 디엘스 앨더 반응(inverse electron demand Diels Alder reaction)에서 트랜스-사이클로옥텐(TCO)이다. 참고: 예를 들면, J. Am. Chem. Soc.; (Article), 2012, 134 (6), 2950-2953.
일부 실시예에서, 반응성 그룹은 알킨, 예컨대,
Figure pct00035
이고, 이는 클릭 화학을 통해 아지드, 예컨대,
Figure pct00036
와 반응하여, 클릭 화학 생성물, 예컨대,
Figure pct00037
를 형성할 수 있다. 일부 예에서, 그룹은 변형된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서 아지드와 반응한다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 알킨, 예컨대,
Figure pct00038
이며, 이는 클릭 화학을 통해 아지드, 예컨대,
Figure pct00039
와 반응하여 클릭 화학 생성물, 예컨대,
Figure pct00040
를 형성할 수 있다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 알킨, 예컨대,
Figure pct00041
이며, 이는 클릭 화학을 통해 아지드, 예컨대,
Figure pct00042
와 반응하여, 클릭 화학 생성물, 예컨대,
Figure pct00043
를 형성할 수 있다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 작용 그룹, 예컨대,
Figure pct00044
이며, 이는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 상에서 시스테인 잔기와 반응하여, 이에 대한 결합, 예컨대,
Figure pct00045
를 형성하며, 여기서 Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭하고 S는 이를 통해 작용 그룹이 Ab에 결합하는 시스테인 잔기 상에서의 S 원자를 지칭한다. 일부 예에서, 반응성 그룹은 작용 그룹, 예컨대,
Figure pct00046
이며, 이는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 상에서 라이신 잔기와 반응하여, 이에 대한 결합, 예컨대,
Figure pct00047
을 형성하고, 여기서 Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭하며 NH는 이를 통해 작용 그룹이 Ab에 결합하는 라이신 측쇄 잔기 상의 NH 원자를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "결합제 링커" 또는 "BL"은 결합제(예컨대, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)를 본원에 제시된 페이로드 화합물(예컨대, MMAE, 비스-옥타하이드로페난트렌 카복스아미드) 및, 임의로, 하나 이상의 측쇄 화합물과 연결하거나, 접속하거나 결합하는 임의의 2가, 3가, 또는 다가 그룹 또는 모이어티를 지칭한다. 일반적으로, 본원에 기술된 항체 접합체에 대해 적합한 결합제 링커는 항체의 순환하는 반감기를 이용하기에 충분히 안정하고, 동시에, 접합체의 항원-매개된 내재화 후 이의 페이로드를 방출할 수 있는 것이다. 링커는 절단가능하거나 절단불가능하다. 절단가능한 링커는 세포내 물질대사에 이은 내재화에 의해 절단되는, 예컨대, 가수분해, 환원, 또는 효소 반응을 통한 절단에 의한 링커이다. 절단불가능한 링커는 항체의 라이소좀 분해에 이은 내재화를 통한 부착된 페이로드를 방출하는 링커이다. 적합한 링커는 산-불안전성 링커, 가수분해-불안전성 링커, 효소적으로 절단가능한 링커, 환원 불안전성 링커, 자가-희생불가능한(self-immolative) 링커, 및 절단가능하지 않은 링커를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 링커는 또한 펩타이드, 글루쿠로니드, 석신이미드-티오에테르, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 단위, 하이드라존, 말(mal)-카프로일 단위, 디펩타이드 단위, 발린-시트룰린 단위, 및 파라-아미노벤질(PAB) 단위이거나 이를 포함하는 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 결합제 링커(BL)는 반응성 링커(RL)의 반응성 그룹(RG) 및 결합제, 예컨대, 항체, 변형된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편의 반응성 부위의 반응으로 형성된 모이어티를 포함한다.
일부 예에서, BL은 다음의 모이어티:
Figure pct00048
를 포함하고, 여기서
Figure pct00049
는 결합제에 대한 결합이다. 일부 예에서, BL은 다음의 모이어티:
Figure pct00050
를 포함하고, 여기서
Figure pct00051
는 결합제에 대한 결합이다. 일부 예에서, BL은 다음의 모이어티:
Figure pct00052
를 포함하고, 여기서
Figure pct00053
는 결합제에 대한 결합이다. 일부 예에서, BL은 다음의 모이어티:
Figure pct00054
를 포함하고, 여기서
Figure pct00055
는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 시스테인에 대한 결합이다. 일부 예에서, BL은 다음의 모이어티:
Figure pct00056
를 포함하고, 여기서
Figure pct00057
는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 라이신에 대한 결합이다.
화합물 및 페이로드
일부 예에서, 적어도 하나의 모이어티에 연결되고 공유결합성 링커를 통해 적어도 하나의 사이클로덱스트린 모이어티에 연결된 결합제를 포함하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 본원에 제시되어 있으며, 여기서 상기 공유결합성 링커는 각각의 결합제, 페이로드 모이어티, 및 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합된다.
일부 다른 예에서, 적어도 하나의 페이로드 모이어티에 연결되고 공유결합성 링커를 통해 적어도 하나의 사이클로덱스트린에 연결된 단백질을 포함하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 본원에 제시되어 있으며, 여기서 상기 공유결합성 링커는 각각의 결합제, 페이로드 모이어티, 및 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합된다.
본원에 나타낸 바와 같이, 일부 예에서, 결합제는 공유결합성 링커, 예를 들면, 라이신 아미노산에 직접 결합된다. 이는 결합제가 라이신 아미노산 공유결합성 링커와는 떨어진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 또한 페이로드 모이어티에 직접 결합된다. 이는 공유결합성 링커가 MMAE, 스테로이드, 또는 본원에 제시된 임의의 페이로드와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 페이로드로부터 떨어진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 또한 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 결합된다. 이는 공유결합성 링커가 사이클로덱스트린, 예를 들면, 본원에 제시된 사이클로덱스트린으로부터 떨어진 하나의 결합 위치이다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 라이신 아미노산 또는 이의 유도체이다.
다른 예에서, 결합제는 공유결합성 링커에 간접적으로 결합된다. 이는 결합제가 공유결합성 링커로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치에 있음을 의미한다. 이는 또한 결합제가 다른 모이어티를 통해 공유결합성 링커에 결합됨을 의미한다. 예를 들면, 결합제는 공유결합성 링커에 결합된 폴리에틸렌 글리콜 그룹에 결합된 말레이미드 그룹에 결합될 수 있다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 또한 페이로드 모이어티에 간접적으로 결합된다. 이는 공유결합성 링커가 페이로드, 예를 들면, 그러나 한정되지 않는 MMAE, 또는 스테로이드, 또는 본원에 제시된 임의의 페이로드로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 공유결합성 링커가 다른 모이어티를 통해 페이로드에 결합됨을 의미한다. 예를 들면, 공유결합성 링커는 디펩타이드, 예를 들면, 이에 한정되지 않는 Val-Ala 또는 Val-Cit에 결합될 수 있으며, 이는 페이로드에 결합될 수 있는 PAB에 결합될 수 있다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 또한 사이클로덱스트린 모이어티에 간접적으로 결합된다. 이는 공유결합성 링커가 사이클로덱스트린, 예를 들면, 본원에 제시된 사이클로덱스트린으로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 공유결합성 링커가 다른 모이어티를 통해 사이클로덱스트린에 결합됨을 의미한다. 예를 들면, 공유결합성 링커는 사이클로덱스트린에 결합할 수 있는 반응성 그룹에 결합할 수 있는 폴리에틸렌 글리콜 그룹에 결합될 수 있다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 라이신 아미노산 또는 이의 유도체이다.
하나의 예에서, 화학식 (I)에 따르는 화합물이 본원에 제시된다:
Figure pct00058

화학식 (I)에서, BA는 결합제이고, L은 3가 링커이며, CD는 사이클로덱스트린 잔기이고, 첨자 n은 1 내지 30의 정수이며, PA는 페이로드 잔기이다. 일부 예에서, 하나 이상의 3가 링커, L이 존재할 수 있다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 4이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다. 특정의 구현예에서, n은 1이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ia)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00059

화학식 (Ia)에서, BA는 결합제이고, LL은 3가 링커이며, RG는 반응성 링커 잔기이고, SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹이고, 첨자 n은 1 내지 30의 정수이며; PA는 페이로드이다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 4이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다. 특정의 구현예에서, n은 1이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ib) 또는 (Ic)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00060

화학식 (Ib) 또는 (Ic)에서, BA는 결합제이고, LL은 3가 링커이다. SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서이고, 환 A는 트리아졸에 융합되며 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클로알킬, 및 헤테로사이클로알케닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클로알킬, 및 헤테로사이클로알케닐은 알킬, OH, 또는 NR a R b 로 임의 치환되며, 여기서 각각의 R a 및 R b 는 알킬 또는 H이고, n은 1 내지 30의 정수이며, PA는 페이로드이다. 일부 예에서, 환 A는 임의 치환된 사이클로알킬이다. 일부 예에서, 환 A는 임의 치환된 사이클로알케닐이다. 일부 예에서, 환 A는 임의 치환된 사이클로알키닐이다. 일부 예에서, 환 A는 임의 치환된 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, 환 A는 임의 치환된 헤테로사이클로알키닐이다. 일부 예에서, 화학식 (Ib) 또는 (Ic)에 화학식 (Ib) 또는 (Ic)의 화합물의 레지오이성체, 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (I)에 따르는 화합물은 화학식 (Ib)에 따르는 화합물이다. 특정의 이러한 예에서, 화학식 (Ib)에 따르는 화합물은 화학식 (Ib1), (Ib2), (Ib3), (Ib4), (Ib5), 또는 (Ib6)에 따르는 화합물이다. 일부 이러한 예에서, 화학식 (Ib)에 따르는 화합물은 화학식 (Ib1)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00061
.
화학식 (Ib1)에서, BA는 결합제이고, LL은 3가 링커이며, SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서이며, n은 1 내지 30의 정수이며, PA는 페이로드이다. 또한 화학식 (Ib1)에 이의 레지오이성체(예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 4이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다. 특정의 구현예에서, n은 1이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다.
일부 이러한 예에서, 화학식 (Ib)에 대한 화합물은 화학식 (Ib2)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00062
.
화학식 (Ib2)에서, BA는 결합제이고, LL은 3가 링커이며, SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서이며, n은 내지 30의 정수이며, PA는 페이로드이다. 또한 화학식 (Ib2)의 화합물에는 이의 레지오이성체(예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 4이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다. 특정의 구현예에서, n은 1이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다.
일부 이러한 예에서, 화학식 (Ib)에 대한 화합물은 화학식 (Ib3)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00063
.
화학식 (Ib3)에서, BA는 결합제이고, LL은 3가 링커이며, n은 1 내지 30의 정수이며, PA는 페이로드이다. 또한 화학식 (Ib3)의 화합물에 레지오이성체(예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 4이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다. 특정의 구현예에서, n은 1이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다.
일부 이러한 예에서, 화학식 (Ib)의 화합물에 화학식　(Ib4)의 화합물이 포함된다:
Figure pct00064
.
화학식 (Ib4)에서, BA는 결합제이고, LL은 3가 링커이며, n은 1 내지 30의 정수이며, PA는 페이로드이다. 또한 화학식 (Ib4)에 레지오이성체(예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 4이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다. 특정의 구현예에서, n은 1이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다.
일부 이러한 예에서, 화학식 (Ib)은, 화학식 (Ib5)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00065
.
화학식 (Ib5)에서, BA는 결합제이고, LL은 3가 링커이며, e는 0 내지 4의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이며, PA는 페이로드이다. 또한 화학식 (Ib5)의 화합물에는 레지오이성체(예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 4이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다. 특정의 구현예에서, n은 1이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다.
일부 이러한 예에서, 화학식 (Ib)에 대한 화합물은 화학식　(Ib6)에 대한 화합물이다:
Figure pct00066
.
화학식 (Ib6)에서, BA는 결합제이고, LL은 3가 링커이고, e는 0 내지 4의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이며, PA는 페이로드이다. 또한 화학식 (Ib6)의 화합물에 레지오이성체(예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 4이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다. 특정의 구현예에서, n은 1이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다.
일부 예에서, 화학식 (I)에 따르는 화합물은 화학식 (Ic)에 따르는 화합물이다. 일부 이러한 예에서, 화학식 (Ic)에 따르는 화합물은 화학식 (Ic1)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00067
.
화학식 (Ic1)에서, BA는 결합제이고, LL은 3가 링커이며, n은 1 내지 30의 정수이며, PA는 페이로드이다. 또한 화학식 (Ic1)의 화합물에는 레지오이성체, 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 4이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다. 특정의 구현예에서, n은 1이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다.
일부 예에서, 화학식 (Id)에 따르는 화합물이 본원에 제시되어 있다:
Figure pct00068

화학식 (Id)에서, BA는 결합제이고; RG는 반응성 그룹 잔기이며; SP 1 및 SP 2 는 각각, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이며, 여기서 SP 1 은 3가 링커를 포함하고; AA 1 은 아미노산 잔기를 포함하는 3가 링커이며; AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고; PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며; PAB는
Figure pct00069
이고, 여기서
Figure pct00070
는 이를 통해 PAB가 화학식내에서 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내고, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 사이클로덱스트린 잔기이고, 여기서 적어도 하나의 CD는 존재하며, 첨자 n은 1 내지 30의 정수이며; 첨자 m은 0 내지 5의 정수이고; 첨자 p는 0 또는 1이며; PA는 페이로드 모이어티이다. 이러한 예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m 은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, 첨자 p는 0이다. 일부 예에서, 첨자 p는 1이다. 일부 예에서, AA 1 또는 AA 2 중 임의의 하나는, 각각의 예에서 독립적으로, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합으로부터 선택된 아미노산을 포함한다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합으로부터 선택된 아미노산이다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 라이신이다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 라이신 또는 라이신의 유도체이다. 특정의 구현예에서, AA 2 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글리신-발린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 라이신-발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 라이신-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 특정의 구현예에서, 라이신은 L-라이신이다. 특정의 구현예에서, 라이신은 D-라이신이다. 일부 예에서, SP 1 은 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로부터 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다. 일부 예에서, SP 2 는 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이며, 첨자 v은 1 내지 8의 정수이다.
화학식 (Id)의 일부 예에서, CD는 다음 구조식에 따른 변형된-CD 그룹이다:
Figure pct00071

여기서 RG는, 각각의 예에서 독립적으로; 반응성 링커 잔기이고, SP 3 은, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹 잔기이며, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이고; q는 0 내지 5의 정수이며,
Figure pct00072
는 이를 통해 변형된-CD 그룹이 SP 1 또는 AA 1 에 부착된 원자를 나타낸다.
일부 예에서, 화학식 (Ie)에 따르는 화합물이 본원에 제시되어 있다:
Figure pct00073

화학식 (Ie)에서, BA는 결합제이고; RG는, 각각의 예에서 독립적으로, 반응성 링커 잔기이고; SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이며; AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고; PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며; PAB는
Figure pct00074
이고, 여기서
Figure pct00075
는 이를 통해 PAB가 화학식에서 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내고, CD는 사이클로덱스트린 잔기이며; 첨자 n은 1 내지 30의 정수이며; 첨자 m은 0 내지 5의 정수이고; 첨자 p는 0 또는 1의 정수이며; PA는 페이로드 모이어티이다. 이러한 예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, 첨자 p는 0이다. 일부 예에서, 첨자 p는 1이다. 일부 예에서, AA 1 또는 AA 2 중 임의의 하나는, 각각의 예에서 독립적으로, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합으로부터 선택된 아미노산을 포함한다. 특정의 구현예에서, AA 2 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글리신-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 라이신-발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 라이신-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 예에서, SP 2 는 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8로부터의 정수이다.
일부 예에서, 화학식 (1e)에 따르는 화합물은 화학식 (Ie1)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00076

화학식 (1e1)에서 BA는 결합제이고; RG는 반응성 링커 잔기이며; SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고; AA 2 는 디-펩타이드 잔기이며; PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고; PAB는
Figure pct00077
이며, 여기서
Figure pct00078
는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내고; CD는 사이클로덱스트린 잔기이며; 첨자 n은 1 내지 30의 정수이며, 첨자 m은 0 내지 5의 정수이고, 첨자 p는 0 또는 1이며, PA는 페이로드 모이어티이다. 이러한 예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, 첨자 p는 0이다. 일부 예에서, 첨자 p는 1이다. 일부 예에서, AA 2 는 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합으로부터 선택된 아미노산을 포함한다. 특정의 구현예에서, AA 2 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글리신-발린이다.
일부 예에서, 화학식 (1e)에 따르는 화합물은 화학식 화학식 (Ie2)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00079

화학식 (1e2)에서, BA는 결합제이고; RG는 반응성 링커 잔기이며; SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고; AA 2는 디-펩타이드 잔기이며; PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고; PAB는
Figure pct00080
이며, 여기서
Figure pct00081
는 이를 통해 PAB가 화학식 내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내고; CD는 사이클로덱스트린 잔기이고; 첨자 n은 1 내지 30의 정수이며; 첨자 m은 0 내지 5의 정수이고; 첨자 p는 0 또는 1이며; PA는 페이로드 모이어티이다. 이러한 예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, 첨자 p는 0이다. 일부 예에서, 첨자 p는 1이다. 일부 예에서, AA 2 는 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합으로부터 선택된 아미노산이다. 특정의 구현예에서, AA 2 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글리신-발린이다.
일부 예에서, 화학식 (If)의 화합물이 본원에 제시된다:
Figure pct00082

화학식 (If)에서, BA는 결합제이고; RG는, 각각의 예에서 독립적으로; 반응성 링커 잔기이며, SP 1 , SP 2 , 및 SP 3 는 각각, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고; AA 2 는 디-펩타이드 잔기이며; PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고; PAB는
Figure pct00083
이며, 여기서
Figure pct00084
는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내고; CD는 사이클로덱스트린 잔기이며; 첨자 n은 1 내지 30의 정수이며, 첨자 m은 0 내지 5의 정수이고, 첨자 p는 0 또는 1이며, 첨자 q는 0 내지 5의 정수이고; PA는 페이로드 모이어티이다. 화학식 (If)의 일부 예에서, SP 1 은 부재하고, SP 2 는 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다. 일부 예에서, AA 2 는 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합으로부터 선택된 아미노산을 포함한다. 특정의 구현예에서, AA 2 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글리신-발린이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물은 적어도 하나의 CD 그룹을 포함한다. 구체적인 예에서, 화학식 (I)의 화합물은 본원에 기술된 바와 같은 화학식 (Ie), 화학식 (Ie1) 또는 화학식 (Ie2)의 화합물이고 하나의 CD 그룹을 포함한다. 다른 구체적인 예에서, 화학식 (I)의 화합물은 본원에 기술된 바와 같은 화학식 (If)의 화합물이며 하나의 CD 그룹을 포함한다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 α-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 β-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 γ-사이클로덱스트린이다. 임의의 이러한 예에서, α-, β-, 또는 γ-사이클로덱스트린은 임의로 치환된다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린, 및 γ-사이클로덱스트린으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 예에서, CD는 α-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 β-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 γ-사이클로덱스트린이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00085
로부터 선택되고, 여기서
Figure pct00086
는 이를 통해 CD가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타낸다. 특정의 예에서 CD는
Figure pct00087
이다. 특정의 예에서, CD는
Figure pct00088
이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00089

Figure pct00090
로부터 선택된다. 일부 예에서, CD는
Figure pct00091
이다. 일부 예에서, CD는
Figure pct00092
이다. 일부 예에서, CD는
Figure pct00093
이다. 일부 예에서, CD는
Figure pct00094
이다. 일부 예에서, CD는
Figure pct00095
이다. 일부 예에서, CD는
Figure pct00096
이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로, 클릭 화학 잔기이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로, 트리아졸 또는 융합된 트리아졸을 포함한다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서
Figure pct00100
는 이를 통해 RG가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타낸다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00101
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00102
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00103
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00104
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00105
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00106
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00107
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00108
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00109
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00110
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00111
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00112
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00113
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00114
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00115
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00116
이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물은 그룹,
Figure pct00117
를 포함하며, 이는
Figure pct00118

Figure pct00119

Figure pct00120

Figure pct00121

Figure pct00122
로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기서
Figure pct00123
는 결합제, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 결합을 나타내고, 여기서 R 9 는 -CH3, 또는 -(CH2)3N(H)C(O)NH2이다.
Figure pct00124
는 사이클로덱스트린에 대한 결합을 나타낸다.
Figure pct00125
는 페이로드에 대한 결합을 나타낸다. 특정의 예에서, R 9 는-CH3이다. 특정의 예에서, R 9 는 -(CH2)3N(H)C(O)NH2이다. 이러한 예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
Figure pct00126
이 결합하는 그룹에 직접 또는 간접적으로 결합할 수 있다. 일부 예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
Figure pct00127
이 결합된 그룹에 간접적으로 결합된다. 일부 예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
Figure pct00128
이 결합된 그룹에 간접적으로 결합되는 경우,
Figure pct00129
는
Figure pct00130
이며, 여기서 첨자 x는 1 내지 4이다. 일부 예에서, 첨자 x는 1이다. 일부 예에서, 첨자 x는 2이다. 일부 예에서, 첨자 x는 3이다. 일부 예에서, 첨자 x는 4이다. 여기서, Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 예에서, 나타낸 PEG 그룹, 즉,
Figure pct00131
는 Ab 상에서 글루타민에 결합된다. 본 단락에 나타고, 본원의 다른 구현예에서 기술되거나 묘사된 일부 예에서, 링커내 라이신 측쇄는 L-라이신 또는 D-라이신으로부터 유래된다. 본 단락에 나타내고, 본원의 다른 구현예에서 기술되거나 묘사된 일부 예에서, 링커내 라이신 측쇄의 입체화학은 (R)이다. 본 단락에 나타내고, 본원의 다른 구현예에서 기술되거나 묘사된 일부 예에서, 링커내 라이신 측쇄의 입체화학은 (S)이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물은 그룹,
Figure pct00132
를 포함하며, 이는
Figure pct00133

Figure pct00134

Figure pct00135

Figure pct00136

Figure pct00137

Figure pct00138
로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
또한, 이러한 예에는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체, 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물이 포함되며, 여기서 각각의
Figure pct00139
는 결합제에 결합되고; 각각의
Figure pct00140
는 페이로드에 결합되고; R 9 는 -CH3 또는 -(CH2)3N(H)C(O)NH2이다. 특정의 예에서 R 9 는 -CH3이다. 특정의 예에서 R 9 는 -(CH2)3N(H)C(O)NH2이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00141
는
Figure pct00142
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00143
는
Figure pct00144
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00145
는
Figure pct00146
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00147
는
Figure pct00148
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00149
는
Figure pct00150
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00151
는
Figure pct00152
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00153
는
Figure pct00154
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00155
는
Figure pct00156
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00157
는
Figure pct00158
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00159
는
Figure pct00160
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00161
은
Figure pct00162
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00163
은
Figure pct00164
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00165
는
Figure pct00166
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00167
는
Figure pct00168
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00169
는
Figure pct00170
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00171
는
Figure pct00172
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00173
는
Figure pct00174
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00175
는
Figure pct00176
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00177
는
Figure pct00178
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00179
는
Figure pct00180
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00181
는
Figure pct00182
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00183
는
Figure pct00184
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00185
는
Figure pct00186
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00187
는
Figure pct00188
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00189
는
Figure pct00190
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00191
는
Figure pct00192
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00193
는
Figure pct00194
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00195
는
Figure pct00196
이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00197
는
Figure pct00198
이다. 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서,
Figure pct00199
는
Figure pct00200
이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 α-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 β-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 γ-사이클로덱스트린이다. 임의의 이러한 예에서, α-, β-, 또는 γ-사이클로덱스트린은 임의로 치환된다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린, 및 γ-사이클로덱스트린으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 예에서, CD는 α-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 β-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 γ-사이클로덱스트린이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00201
로부터 선택되고, 여기서
Figure pct00202
는 이를 통해 CD가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타낸다. 특정의 예에서, CD는
Figure pct00203
이다. 특정의 예에서 CD는
Figure pct00204
이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물은
Figure pct00205

Figure pct00206

Figure pct00207

Figure pct00208

Figure pct00209

Figure pct00210

Figure pct00211

Figure pct00212

Figure pct00213

Figure pct00214
로 이루어진 그룹을 포함한다.
이러한 예에서, 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체이성체 형태, 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물이 또한 포함되며, 여기서 각각의
Figure pct00215
은 결합제에 결합되고; 각각의
Figure pct00216
은 페리로드에 대한 결합이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 -LL-은 화학식 (LL1)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00217
.
화학식 (LL1)에서, R AA1 , R AA2 , 및 R AA3 은 각각 독립적으로, 아미노산 측쇄이고, 이중 적어도 하나는 -SP-RG-SP-CD에 직접 또는 간접적으로 결합된다. 일부 예에서, SP는 부재할 수 있다. 일부 예에서, SP는 부재하지 않는다. 일부 예에서, 화학식 (LL1)에서, R AA1 , R AA2 , 및 R AA3 는 각각, 독립적으로, 아미노산 측쇄이고, 이중 적어도 하나는 -RG-CD에 직접 또는 간접적으로 결합된다. 일부 예에서, R AA1 는 라이신 아미노산 측쇄이다. 일부 예에서, R AA1 은 L-라이신 아미노산 측쇄이다. 일부 예에서, R AA1 은 D-라이신 아미노산 측쇄이다. 일부 예에서, R AA2 는 발린 아미노산 측쇄이다. 일부 예에서, R AA3 은 알라닌 아미노산 측쇄이다. 일부 예에서, R AA3 은 시트룰린 아미노산 측쇄이다. 특정의 예에서, R AA1 은 CD에 직접 또는 간접적으로 결합된 라이신 아미노산 측쇄이고 R AA2 및 R AA3 은 독립적으로, 발린 및 알라닌 아미노산 측쇄이다. 특정의 예에서, R AA1 은 CD에 직접 또는 간접적으로 결합된 라이신 아미노산 측쇄이고 R AA2 및 R AA3 은, 독립적으로, 발린 및 시트룰린 아미노산 측쇄이다.
일부 예에서, LL은
Figure pct00218
를 포함한다. 일부 예에서, LL은
Figure pct00219
을 포함한다.
일부 예에서, LL은
Figure pct00220
을 포함한다. 일부 예에서, LL은
Figure pct00221
을 포함한다.
일부 예에서, SP, SP 1 , SP 2 , 또는 이의 조합은 스페이서 그룹이다. 일부 예에서, SP는 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다. 일부 예에서, SP 1 은 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4로부터의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8로부터의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8로부터의 정수이다. 일부 예에서, SP 2 는 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4로부터의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8로부터의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8로부터의 정수이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m, q, 또는 e는 1이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 q는 1이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 e는 1이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m, q, 또는 e는 2이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 q는 2이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 e는 2이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m, q, 또는 e는 3이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 q는 3이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 e는 3이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m, q, 또는 e는 4이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m은 4이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 q는 4이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 e는 4이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 p는 1이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 2 내지 4이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 2이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 3이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 4이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 결합제 (BA)는 임의의 폴리펩타이드로부터 선택된다. 폴리펩타이드 예는 천연 폴리펩타이드 및 비천연 폴리펩타이드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 폴리펩타이드 예는 유전적으로 변형된 유기체로부터 생산된 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원의 폴리펩타이드는 수용체, 단백질, 효소, 결합제, 우유 펩타이드, 리보소옴 펩타이드, 비리보소옴 펩타이드, 펩톤, 및 펩타이드 단편을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본원의 폴리펩타이드는 항미생물 펩타이드, 타키키닌 펩타이드, 혈관활성 장 펩타이드, 췌장 폴리펩타이드-관련 펩타이드, 아편유사제(opiod) 펩타이드, 및 칼시토닌 펩타이드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본 개시내용에 포함된 다른 펩타이드는 B-형 나트륨뇨배설 펩타이드 (BNP), 락토트리펩타이드, 신경펩타이드, 리포펩타이드, 프로테아제, 또는 호르몬을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
폴리펩타이드는 또한 함께 결합된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 짧은 아미노산을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 폴리펩타이드는 각각 함께 결합된 2, 3, 또는 4개의 아미노산을 갖는 디펩타이드(Val-Cit), 트리펩타이드, 및 테트라펩타이드(예컨대, Val-Gly-Ser-Ala)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 폴리펩타이드는 5개 이상의 아미노산을 포함하는 보다 긴 쇄를 포함한다. 폴리펩타이드는 50개 이상의 아미노산(예컨대, 단백질)을 포함하는 장쇄를 포함한다. 일부 예에서, 본원의 폴리펩타이드는 디펩타이드, 트리펩타이드, 테트라펩타이드, 펩타펩타이드, 헥사펩타이드, 헵타펩타이드, 옥타펩타이드, 노나펩타이드, 데카펩타이드, 운데카펩타이드, 및 이코사펩타이드로부터 선택된다.
폴리펩타이드는 단백질을 포함한다. 일부 예에서, 단백질은 천연 아미노산 만을 포함한다. 일부 예에서, 단백질은 비-천연 아미노산을 추가로 포함한다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 결합제 (BA)는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 특정의 예에서, 결합제는 AXL, BAFFR, BCMA, BCR-목록 성분, BDCA2, BDCA4, BTLA, BTNL2, BTNL3, BTNL8, BTNL9, C10 또는 f54, CCR1, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR9, CCR10, CD11c, CD137, CD138, CD14, CD168, CD177, CD19, CD20, CD209, CD209L, CD22, CD226, CD248, CD25, CD27, CD274, CD276, CD28, CD30, CD300A, CD33, CD37, CD38, CD4, CD40, CD44, CD45, CD46, CD48, CD5, CD52, CD55, CD56, CD59, CD62E, CD68, CD69, CD70, CD74, CD79a, CD79b, CD8, CD80, CD86, CD90.2, CD96, CLEC12A, CLEC12B, CLEC7A, CLEC9A, CR1, CR3, CRTAM, CSF1R, CTLA4, CXCR1/2, CXCR4, CXCR5, DDR1, DDR2, DEC-205, DLL4, DR6, FAP, FCamR, FCMR, FcR의 것(FcR's), FELD1, 화이어(Fire), GITR, HER2, HHLA2, HLA 제II 부류, HVEM, ICOSLG, IFNLR1, IL10R1, IL10R2, IL12R, IL13RA1, IL13RA2, IL15R, IL17RA, IL17RB, IL17RC, IL17RE, IL20R1, IL20R2, IL21R, IL22R1, IL22RA, IL23R, IL27R, IL29R, IL2Rg, IL31R, IL36R, IL3RA, IL4R, IL6R, IL5R, IL7R, IL9R, 인테그린, LAG3, LIFR, MAG/Siglec-4, MMR, MSR1, NCR3LG1, NKG2D, NKp30, NKp46, PDCD1, PRLR, PROKR1, PVR, PVRIG, PVRL2, PVRL3, RELT, SIGIRR, Siglec-1, Siglec-10, Siglec-5, Siglec-6, Siglec-7, Siglec-8, Siglec-9, SIRPA, SLAMF7, TACI, TCR-목록 성분/회합체, PTCRA, TCRb, CD3z, CD3, TEK, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, TIGIT, TLR2, TLR4, TROY, TSLPR, TYRO, VLDLR, VSIG4, 및 VTCN1로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항원에 대해 선택적인 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, PA는 돌라스타틴, 아우리스타틴, 마이탄시노이드, 식풀 알칼로이드, 탁산, 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid), 스테로이드, 및 LXR 조절인자로 이루어진 그룹으로부터 선택된 그룹의 잔기이다. 일부 경우에, PA는 돌라스타틴이다. 일부 경우에, PA는 아우리스타틴이다. 일부 경우에, PA는 마이탄시노이드이다. 일부 경우에, PA는 식물 알칼로이드이다. 일부 경우에, PA는 탁산이다. 일부 경우에, PA는 빈카 알칼로이드이다. 일부 경우에, PA는 스테로이드이다. 일부 경우에, PA는 LXR 조절인자이다. 일부 경우에, LXR 조절인자는 LXR 효능제이다. 일부 구현예에서, LXR 조절인자는 LXR 길항제이다. 다른 적합한 페이로드는 고도로 소수성인 것, 예컨대, 이들의 소수성 특성으로 인하여 Ab 접합 조건에 대해 수정될 수 없는 것, 예컨대, 페이로드, 예를 들면, 피롤로벤조디아제핀(PBD), SN38 (7-에틸-10-하이드록시-캄프토테신) 등을 포함한다. 특정의 구현예에서, 항체-약물 접합체가 본원에 제공되며, 여기서 PA는 소수성 페이로드 모이어티이다.
일부 예에서, PA는 도 1 중 임의의 하나에 제시된 임의의 화합물이다.
특정의 구현예에서, PA는 아우스타틴이다. 특정의 구현예에서, PA는 아우리스타틴 E, 아우리스타틴 F, 모노메틸 아우리스타틴-D(MMAD), 모노메틸 아우리스타틴-E(MMAE), 또는 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF)이다.
Figure pct00222

특정의 구현예에서, PA는 마이탄시노이드이다. 마이탄시노이드는 기술자에게 적합한 것으로 여겨진 임의의 마이탄시노이드 페이로드일 수 있다. 미국 특허원 공보 제2016/0375147호로서 공개된 "마이탄시노이드 유도체, 이의 접합체, 및 이의 사용 방법"이라는 명칭의 2016년 3월 25일자로 출원된, 미국 가특허원 제15/081,759호, 및 미국 특허 제9,950,076호로 허여된 "마이탄시노이드 유도체, 이의 접합체, 및 사용 방법"이라는 명칭의, 2017년 1월 24일자로 출원된 미국 가특허원 제15/414,537호에 개시된 마이탄시노이드 페이로드가 본원에 참고로 포함된다. 특정의 구현예에서, PA는 DM1, DM3, 또는 DM4이다. 특정의 구현예에서, PA는
Figure pct00223
이다. 특정의 구현예에서, PA는
Figure pct00224
이고, 여기서 A는 임의 치환된 아릴렌 또는 헤테로아릴렌이다. 특정의 구현예에서, PA는
Figure pct00225
이다. 특수한 구현예에서, 파선(wavy line)은 LL에 대한 결합을 나타낸다.
특정의 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물내 페이로드는 화학식 (A)의 구조식을 갖는 글루코코르티코이드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 입체이성체, 또는 유도체이다:
Figure pct00226

여기서:
R 1 및 R 2 는, 독립적으로, -H, 알킬, 알킬-C(O)-O-, -OH, 또는 할로이거나; R 1 및 R 2 는 함께
Figure pct00227
를 형성하고,
여기서 R 4 는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이며,
여기서 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 N-함유 헤테로사이클로알킬은, 각각의 예에서 독립적으로, -NR Aa R Ab 로 임의 치환되고;
R 3 은 -OH, R Z -C(O)-X-, 헤테로알킬, 피페리디닐, -NR Aa R Ab , -옥시아릴-NR Aa R Ab 또는 -Z-A'(R P ) t이며;
R 5 는, 각각의 예에서 독립적으로, -OH, 할로, 알킬, 또는 아릴알킬이고;
R Z 는 알킬이며;
X는 O 또는 NRAa이고;
Z는 S, S(O), S(O)2, SO2NR Aa , O, C(O)NRAa, C(O), 또는 NRAa이며;
A'는 아릴, 아릴알킬, 또는 헤테로아릴이고;
R P 는, 각각의 예에서 독립적으로, 할로, 임의 치환된 알킬, -OH, 또는 -NR Aa R Ab 이며;
R Aa 및 R Ab 는, 각각의 예에서 독립적으로, -H, 임의 치환된 알킬, 또는 임의 치환된 아릴이고;
첨자 a는 0 내지 19의 정수이며;
t는 1 내지 3의 정수이고;
단:
(1) (a) R 1 이 -OH이거나 (b) R 1 및 R 2 가 함께
Figure pct00228
(여기서 R 4 는 C1-9알킬 또는
Figure pct00229
이다)를 형성하는 경우 R 3 은 -OH가 아니며
(2) R 3 은
Figure pct00230
가 아니다.
일부 구현예에서, R3은 NH2이다. 일부 이러한 구현예에서, R 3 은
Figure pct00231
이고 여기서
Figure pct00232
는 이를 통해 R 3 이 화학식 (I)내 인접한 그룹에 부착된 원자를 나타낸다.
특정의 구현예에서, PA는 스테로이드이다. 특정의 구현예에서, PA는
Figure pct00233

Figure pct00234
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체로부터 선택된다. 임의의 화학식 1110 내지 1140에 따른 특정의 구현예에서, R 3 은 -O-아릴, -NR Aa R Ab , -알킬렌-NR Aa R Ab , -X-아릴렌-Y-NR Aa R Ab , -X-헤테로아릴렌-Y-NR Aa R Ab , 또는 N-함유 헤테로사이클로알킬이고; 여기서 X는 부재하거나, -N-, -CH2-, 또는 -O-이며; 여기서 Y는 부재하거나 -CH2-이고; R 4 는 알킬, 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이다. 특정의 구현예에서, R 3 은 -O-아릴렌-NR Aa R Ab , -O-헤테로아릴렌-NR Aa R Ab 이고; 여기서 아릴 또는 헤테로아릴은 할로겐, 중수소, 하이드록실, 또는 메톡실로 임의 치환된다. 특정의 구현예에서, R 3 은 -O-페닐-NR Aa R Ab , -O-헤테로아릴렌-NR Aa R Ab 이고; 여기서 페닐 또는 헤테로아릴은 할로겐 또는 중수소로 임의 치환된다. 특정의 구현예에서, R 4 는 n-프로필이다. 특정의 구현예에서, R Aa 및 R Ab 는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이다. 특수한 구현예에서, R Aa 및 R Ab 중 하나는 LL에 대한 결합으로 치환되다. 특정의 구현예에서, PA는
Figure pct00235
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체이다. 특정의 구현예에서, PA는
Figure pct00236
, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체이다. 특정의 구현예에서, PA는
Figure pct00237
, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체이다. 특정의 구현예에서, PA는
Figure pct00238
, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체이다. 특정의 구현예에서, PA는
Figure pct00239
, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체이다. 특정의 구현예에서, PA는
Figure pct00240
, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체이다. 이러한 구현예에서, 파선은 LL에 대한 결합을 나타낸다.
다음 구조식을 갖는 화학식 (A)의 페이로드, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 입체이성체가 또한 본원에 제시되어 있다:
Figure pct00241

Figure pct00242

Figure pct00243
. 특정의 구현예에서, 접합체는 페이로드의 1차 또는 2차 아민의 잔기에 대한 결합을 통해 링커에 연결된 상기 페이로드를 포함한다. 2017년 11월 7일자로 출원된 "스테로이드 및 이의 단백질-접합체"라는 명칭의 미국 가특허원 제15/806,197호에 개시된 스테로이드 페이로드가 본원에 참고로 포함된다.
특정의 구현예에서, PA는 간 X 수용체(LXR) 조절인자이다. 특정의 구현예에서, PA는 화학식 B 또는 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체에 따른다:
Figure pct00244
화학식 B
여기서
W는 -CH2-, -N(H)-, 또는 -O-이고;
R B1 은 -H, -OH, -NH2, 알킬, 또는 -OP(O)(OR 6 )2이며;
R B2 는 -H, -OH, -CH2NH2, R B3 , R B4 , R B5 , 또는 -O-R B5 이고, 여기서 R B1 및 R B2 는 동시에 -H가 아니고;
R B3 은 -N(R 6 )2이며;
R B4 는 -X-Y-Z이고;
X는 -O- 및 -N(H)-로 이루어진 그룹으로부터 선택되며;
Y는 알킬렌, 치환된 알킬렌(옥소 치환, 즉, =O)을 포함하나, 이에 한정되지 않음), 헤테로알킬렌, 및 치환된 헤테로알킬렌(옥소 치환(즉, =O)을 포함하나, 이에 한정되지 않음)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
Z는 -OH 및 -NH2로 이루어진 그룹으로부터 선택되며;
R B5 는 알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 치환된 헤테로사이클로알킬이며, 여기서 각각의 헤테로사이클로알킬 또는 치환된 헤테로사이클로알킬은 질소 및 산소로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 포함하고, 적어도 하나의 -OH 및 -CH2OH 치환체, 또는 적어도 하나의 1차 또는 2차 질소, 예를 들면, O-글루코즈를 포함하고;
각각의 R 6 은 각각의 예에서, -H, 아미노산 잔기, N-알킬 아미노산 잔기, 펩타이드, 또는 알킬이며;
각각의 R 7 은, 독립적으로, 할로, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, -CN, O-글루코즈, O-아미노산 잔기, 및 O-PEGb이고, 여기서 각각의 첨자 b는 0 내지 3의 정수이다. 특수한 구현예에서, R B1 또는 R B2 는 LL에 대한 결합으로 치환된다. 특정의 구현예에서, PA는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00245

특수한 구현예에서, 파선은 LL에 대한 결합을 나타낸다.
특정의 구현예에서, 화학식 (B)의 페이로드는:
Figure pct00246

Figure pct00247

Figure pct00248
또는 이의 약제학적으로 허용되는 입체이성체 형태로부터 선택된다. 특정의 구현예에서, 접합체는 페이로드에 대한 1차 또는 2차 아민의 잔기에 대한 결합을 통해 링커에 결합된 상기 페이로드를 포함한다. 2017년 5월 18일자로 출원된, "비스-옥타하이드로페난트렌 카복스아미드 및 이의 단백질 접합체"라는 명칭의 미국 가특허원 제62/508,327호에 개시된 LXR 모듈러 페이로드는 본원에 참고로 포함된다.
또한 미국 특허원 공보 제2016/0030591호에 발표된, "생리학적으로 활성인 분자, 이의 접합체, 및 치료학적 용도"라는 명칭의, 2015년 9월 14일자로 출원된 미국 가특허원 제14/776,668호, 및 미국 특허원 공보 제2016/0354482호로 발표된 "마크롤라이드 부분입체이성체를 포함하는 약제학적 조성물, 이의 합성 방법 및 치료학적 용도"라는 명칭의, 2016년 2월 23일자로 출원된 미국 가특허원 제14/913,965호에 개시된 페이로드가 또한 본원에 나타낸 구현예의 영역내에서 고려되며, 상기 페이로드의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물은:
Figure pct00249

Figure pct00250

Figure pct00251

Figure pct00252

Figure pct00253

Figure pct00254

Figure pct00255

Figure pct00256

Figure pct00257

Figure pct00258
또는 이의 레지오이성체, 입체이성체 형태, 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 이의 혼합물로부터 선택되며, 여기서 Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 이러한 예에서, Ab는 연결된-페이로드에 직접 또는 간접적으로 결합될 수 있다. 일부 예에서, Ab가 링커-페이로드에 간접적으로 결합되는 경우,
Figure pct00259
는
Figure pct00260
이고, 여기서 첨자 x는 1 내지 4로부터의 정수이다. 일부 예에서, 첨자 x는 1이다. 일부 예에서, 첨자 x는 2이다. 일부 예에서, 첨자 x는 3이다. 일부 예에서, 첨자 x는 4이다. 여기서, Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 예에서, 나타낸 PEG 그룹은, 즉,
Figure pct00261
는 Ab 상의 글루타민에 결합된다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4, 예를 들면, 1, 2, 3, 또는 4이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물은:
Figure pct00262

Figure pct00263

Figure pct00264

Figure pct00265

Figure pct00266

Figure pct00267

Figure pct00268

Figure pct00269

Figure pct00270

Figure pct00271

Figure pct00272

Figure pct00273

Figure pct00274

Figure pct00275

Figure pct00276
또는 이의 레지오이성체, 입체이성체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 이의 혼합물로부터 선택되며, 여기서 Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 이러한 예에서, Ab는 연결된-페이로드에 직접 또는 간접적으로 결합된다. 일부 예에서, Ab가 링커-페이로드에 간접적으로 결합되는 경우,
Figure pct00277
는
Figure pct00278
이고, 여기서 첨자 x는 1 내지 4의 정수이다. 일부 예에서, 첨자 x는 1이다. 일부 예에서, 첨자 x는 2이다. 일부 예에서, 첨자 x는 3이다. 일부 예에서, 첨자 x는 4이다. 여기서, Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 예에서, 나타낸 PEG 그룹, 즉
Figure pct00279
은, Ab 상의 글루타민에 결합된다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4, 예를 들면 1, 2, 3, 또는 4이다.
일부 예에서, 화학식 (I)의 화합물은:
Figure pct00280

Figure pct00281

Figure pct00282

Figure pct00283

Figure pct00284

Figure pct00285

Figure pct00286

Figure pct00287

Figure pct00288

Figure pct00289

Figure pct00290

Figure pct00291

Figure pct00292

Figure pct00293
또는 이의 레지오이성체, 또는 입체이성체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 용매화물로부터 선택되고, 여기서 Ab는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
일부 예에서, 본원에 제시된 화합물, 상기 화합물 중 임의의 것을 포함하는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 제시된다.
기술자는 아미노산 잔기가 아키랄(achiral) 또는 키랄, 예를 들면, L-아미노산 또는 D-아미노산일 수 있음을 인식할 것이다. 아미노산은 일반적으로 아미노산 측쇄를 포함한다. 측쇄는 기술자에게 공지된 임의의 아미노산의 측쇄일 수 있다. 특정의 구현예에서, 측쇄는 히스티딘, 알라닌, 이소루이신, 아르기닌, 루이신, 아스파라긴, 라이신, 아스파르트산, 메티오닌, 시스테인, 페닐알라닌, 글루탐산, 트레오닌, 글루타민, 트립토판, 발린, 오르니틴, 셀레노시스테인, 세린, 글리신, 호모글리신 (예컨대, β-호모글리신), 또는 타이로신의 측쇄이다. 당해 분야의 기술자는 펩타이드가 예를 들면, 라세미 DL-아미노산 또는 비-라세미 D- 또는 L-아미노산 및 이의 부분입체이성체성 혼합물을 포함하는, 아키랄 또는 키랄일 수 있음을 인식할 것이다. 펩타이드의 측쇄는 상기 아미노산의 내용에 기술된 바와 같다. 당해 분야의 기술자는 N-알킬 아미노산 잔기가 아미노산의 말단 아미노 그룹 또는 펩타이드의 말단 아미노 그룹에서, 본원에 정의된 바와 같은 알킬 치환체를 포함함을 인지할 것이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 0 내지 30의 정수이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 0이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 1이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 2이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 3이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 4이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 5이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 6이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 7이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 8이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 9이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 10이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 11이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 12이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 13이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 14이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 15이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 16이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 17이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 18이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 19이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 20이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 21이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 22이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 23이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 24이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 25이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 26이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 27이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 28이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 29이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 n은 30이다.
결합제
본 개시내용에 제공된 임의의 접합체에 적합한 결합제는 항체, 림포킨, 호르몬, 성장 인자, 바이러스 수용체, 인터루킨, 또는 임의의 다른 세포 결합 또는 펩타이드 결합 분자 또는 물질을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 결합제는 또한 폴리펩타이드를 포함한다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 결합제 (BA)는 임의의 폴리펩타이드로부터 선택된다. 폴리펩타이드 예는 천연 폴리펩타이드 및 비천연 폴리펩타이드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 폴리펩타이드의 예는 유전적으로 변형된 유기체로부터 생산된 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, BA는 수용체, 사이토킨, 단백질, 효소, 결합제, 우유 펩타이드, 리보소옴 펩타이드, 비리보소옴(nonribosomal) 펩타이드, 펩톤, 및 펩타이드 단편을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, BA는 항미생물 펩타이드, 타키키닌 펩타이드, 혈관활성 장 펩타이드, 췌장 폴리펩타이드-관련 펩타이드, 아편유사제 펩타이드, 및 칼시토닌 펩타이드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, BA는 B-유형 나트륨뇨배설 펩타이드(BNP), 락토트리펩타이드, 신경펩타이드, 리포펩타이드, 프로테오즈, 또는 호르몬으로부터 선택된다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, BA는 서로 결합된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 짧은 아미노산 쇄로부터 선택된다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, BA는 각각 서로 결합된 2, 3, 4개의 아미노산을 갖는 디펩타이드(Val-Cit), 트리펩타이드, 및 테트라펩타이드(예컨대, Val-Gly-Ser-Ala)로부터 선택된다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, BA는 디펩타이드, 트리펩타이드, 테트라펩타이드, 펜타펩타이드, 헥사펩타이드, 헵타펩타이드, 옥타펩타이드, 노나펩타이드, 데카펩타이드, 운데카펩타이드, 및 아이코사펩타이드로부터 선택된다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, BA는 임의의 단백질로부터 선택된다. 일부 예에서, 단백질은 천연 아미노산 만을 포함한다. 일부 예에서, 단백질은 비-천연 아미노산을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제는 이의 항원-결합 단편의 항체이다. 항체는 당해 분야의 기술자에게 공지된 임의의 형태일 수 있다. 용어 "항체"는, 본원에 사용된 바와 같이, 특수한 항원에 특이적으로 결합하거나 이와 상호작용하는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 임의의 항원-결합 분자 또는 분자 복합체를 의미한다. 용어 "항체"는 4개의 폴리펩타이드 쇄, 이황화물 결합에 의해 상호-연결된 2개의 중(H) 쇄 및 2개의 경(L) 쇄를 포함하는 면역글로불린 분자, 뿐만 아니라 이의 다량체(예컨대, IgM)를 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 VH로 요약됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3를 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 VL로 약술됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인(CL1)을 포함한다. VH 및 VL 영역은 보다 보존된, 골격 영역(FR)으로 명명된 영역으로 배치된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 명명된 초가변성의 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되며, 이는 아미노-말단으로부터 카복시-말단까지 다음의 순서로 정렬된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 상이한 구현예에서, 본원의 화합물(또는 이의 항원-결합 부위)에 적합한 항체의 FR은 사람 배선 서열에 대해 동일할 수 있거나 천연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 컨센서스 서열(consensus sequence)은 2개 이상의 CDR의 나란한 분석(side-by-side analysis)을 기반으로 정의될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는, 완전한 항체 분자의 항원-결합 단편을 또한 포함한다. 용어 항체의 "항원-결합 부위", 항체의 "항원-결합 단편" 등은, 본원에 사용된 바와 같이, 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 임의의 천연적으로 발생하는, 효소적으로 수득가능한, 합성, 또는 유전적으로 가공된 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은, 예컨대, 완전한 항체 분자로부터 임의의 적합한 표준 기술, 예를 들면, 단백질분해적 소화 또는 항체 가변 및 임의로 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현을 포함하는 재조합 유전 가공 기술을 사용하여 완전한 항체 분자로부터 유래할 수 있다. 이러한 DNA는 공지되어 있고/있거나 예컨대, 상업적인 공급원, DNA 라이브러리(예컨대, 파아지-항체 라이브러리 포함)로부터 용이하게 이용가능하거나, 합성될 수 있다. DNA는 서열분석되고 화학적으로 또는 분자 생물학 기술에 의해 조작되어, 예를 들면, 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 구조내로 정렬하거나, 코돈을 도입하거나, 시스테인 잔기를 생성하거나, 아미노산 등을 변형시키거나, 가하거나 결실시킬 수 있다. 항원-결합 단편의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: (i) Fab 단편; (ii) 　F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 　단일-쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체(예컨대, 단리된 상보성 결정 영역(CDR), 예를 들면, CDR3 펩타이드), 또는 구속된 FR3-CDR3-FR4 펩타이드의 초가변 영역을 모사(mimic)하는 아미노산 잔기로 이루어진 최소의 인식 단위. 다른 가공된 분자, 예를 들면, 도메인-특이적인　항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라 　항체, CDR-이식된 항체, 디아보디(diabody), 트리아보디, 테트라보디, 미니보디(minibody), 나노보디(nanobody)(예컨대, 1가 나노보디, 2가 나노보디 등), 작은 모듈러 면역약제(SMIP), 및 상어 가변 IgNAR 도메인이 또한 본원에 사용된 바와 같은 표현 "항원-결합 단편"내에 포함된다. 항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 하나의 가변 도메인을 포함한다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성일 수 있으며 일반적으로 하나 이상의 골격 서열에 인접하거나 이와 프레임내(in frame) 내에 있는 적어도 하나의 CDR을 포함할 것이다. VL 도메인과 관련된 VH 도메인을 가진 항원-결합 단편에서, VH 및 VL 도메인은 임의의 적합한 정렬로 서로에 대해 상대적으로 위치할 수 있다. 예를 들면, 가변 영역은 이량체일 수 있으며 VH-VH, VH-VL 또는 VL-VL 이량체를 포함할 수 있다. 대안적으로, 항체의 항원-결합 단편은 단량체성 VH 또는 VL 도메인을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 항체의 항원-결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유결합으로 연결된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 단편내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비-제한적인, 예시적인 구조는 다음을 포함한다: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; 및 (xiv) VL-CL. 상기 나타낸 임의의 예시적인 구조를 포함하는, 가변 및 불변 도메인의 임의의 구조에서, 가변 및 불변 도메인은 서로 직접 연결되거나 완전한 또는 부분적인 힌지(hinge) 또는 링커 영역에 의해 연결될 수 있다. 힌지 영역은 단일 폴리펩타이드 분자내 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이의 가요성 또는 반-가요성 연결을 생성하는 적어도 2개(예컨대, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 완전한 항체 분자를 사용함으로써, 항원-결합 단편은 일특이적이거나 다특이적(예컨대, 이특이적)일 수 있다. 항체의 다특이적 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 2개의 상이한 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기서 각각의 가변 도메인은 별개의 항원 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 본원에 개시된 예시적인 이특이적 항체 양식을 포함하는, 임의의 다특이적 항체 양식은 당해 분야에 이용가능한 통상의 기술을 사용하여 본 발명의 항체이 항원-결합 단편의 맥락에서 사용하기 위해 조정될 수 있다. 본 발명의 특정의 구현예에서, 본 발명의 항체는 사람 항체이다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "사람 항체"는 사람 베선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 본 발명의 사람 항체는 예를 들면, CDR내 및 특히 CDR3내에 사람 배선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기(예컨대, 시험관내(in vitro)에서 무작위 또는 부위-특이적인 돌연변이유발에 의해 또는 생체내(in vivo)에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "사람 항체"는 다른 포유동물 종, 예를 들면, 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 사람 골격 서열로 이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다. 용어 "사람 항체"는 천연적으로 존재하는, 변형되지 않은 살아있는 유기체내에서 변형 또는 사람 개입/조작없이 일반적으로 존재하는 천연적으로 발생하는 분자를 포함하지 않는다. 본 발명의 항체는, 일부 구현예에서, 재조합 사람 항체일 수 있다. 용어 "재조합 사람 항체"는, 본원에 사용된 바와 같이, 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 단리된 모든 사람 항체, 예를 들면, 숙주 세포내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체(하기 추가로 기술됨), 재조합, 조합 사람 항체 라이브러리로부터 단리된 항체(하기 추가로 기술됨), 사람 면역글로불린 유전자에 대해 이식유전자인 동물(예컨대, 마우스)로부터 단리된 항체(참고: 예컨대, Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) 또는 사람 면역글로불린 유전자 서열의 다른 DNA 서열로의 스플라이싱(splicing)을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 단리된 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 재조합 사람 항체는 사람 배선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 특정의 구현예에서, 이러한 재조합 사람 항체는 시험관내 돌연변이유발에 적용되며(또는 사람 Ig 서열에 대해 이식유전자성인 동물이 사용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이유발), 따라서, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 사람 배선 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되지만, 생체내에서 사람 항체 배선 레퍼토리내에 천연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다. 사람 항체는 힌지 이종성(hinge heterogeneity)과 관련된 2개의 형태로 존재할 수 있다. 하나의 형태에서, 면역글로불린 분자는 대략 150 내지 160 kDa의 안정한 4개의 쇄 작제물(construct)을 포함하며 여기서 이량체는 쇄간 중쇄 이황화물 결합에 의해 함께 유지된다. 제2 형태에서, 이량체는 쇄-간 이황화물 결합을 통해 연결되지 않으며, 공유결합으로 커플링된 중쇄 및 경쇄로 구성된 약 75-80 kDa의 분자가 형성되다(반-항체). 이러한 형태는 친화성 정제 후에도, 분리하기가 극도로 어려웠다. 다양한 완전한 IgG 동형의 제2 형태의 출현 빈도는 항체의 힌지 영역 동형과 관련된 구조에 기인하나, 이에 한정되지 않는다. 사람 IgG4 힌지의 힌지 영역내 단일 아미노산 치환은 제2 형태의 외형(Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105)을 사람 IgG1 힌지를 사용하여 전형적으로 관찰된 수준까지 전형적으로 감소시킬 수 있다. 본 발명은 예를 들면, 목적한 항체형의 수득을 증진시키기 위해 생산시 바람직할 수 있는 힌지, CH2 또는 CH3 영역내 하나 이상의 돌연변이를 갖는 항체를 포함한다. 본 발명의 항체는 단리된 항체일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "단리된 항체"는 이의 천연 환경의 적어도 하나의 성분으로부터 확인되고 분리되며/되거나 회수된 항체를 의미한다. 예를 들면, 유기체의 적어도 하나의 성분, 또는 항체가 천연적으로 존재하거나 천연적으로 생산된 조직 또는 세포로부터 분리되거나 제거된 항체는 본 발명의 목적을 위한 "단리된 항체"이다. 단리된 항체는 또한 재조합체 세포내에서 동일 반응계내(in situ) 항체를 포함한다. 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 또는 단리 단계에 적용된 항체이다. 특정의 구현예에 따라서, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질을 실질적으로 함유하지 않을 수 있다. 본원에 사용된 항체는 이로부터 항체가 유래되는 상응하는 배선 서열과 비교하여 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 골격 및/또는 CDR 영역내에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이는 본원에 개시된 아미노산 서열을 예를 들면, 공공의 항체 서열 데이타베이스로부터 이용가능한 배선 서열과 비교함으로써 용이하게 확인할 수 있다. 본 발명은 항체, 및 이의 항원-결합 단편을 포함하며, 이는 본원에 개시된 임의의 아미노산 서열로부터 유래되고, 여기서 하나 이상의 골격 및/또는 CDR 영역내 하나 이상의 아미노산은 이로부터 항체가 유래된 배선 서열의 상응하는 잔기(들), 또는 다른 사람 배선 서열의 상응하는 잔기(들), 또는 상응하는 배선 잔기(들)의 보존적 아미노산 치환에 대해 돌연변이된다(이러한 서열 변화는 본원에서 총괄적으로 "배선 돌연변이"로서 지칭된다). 당해 분야의 통상의 기술자는 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로 출발하여, 하나 이상의 개개 배선 돌연변이 또는 이의 조합물을 포함하는 다수의 항체 및 항원-결합 단편을 용이하게 생산할 수 있다. 특정의 구현예에서, V H 및/또는 V L 도메인내 모든 골격 및/또는 CDR 잔기는 이로부터 항체가 유래되는 원래의 배선 서열에서 발견된 잔기로 역으로 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 특정의 잔기 만이, 예컨대, FR1의 처음 8개 아미노산내 또는 FR4의 마지막 8개 아미노산 내에서 발견된 돌연변이된 잔기만이, 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견된 돌연변이된 잔기만이 원래의 배선 서열로 역 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 골격 및/또는 CDR 잔기(들) 중 하나 이상이 상이한 배선 서열(즉, 이로부터 항체가 원래 유래된 배선 서열과는 상이한 배선 서열)의 상응하는 잔기(들)로 돌연변이된다. 또한, 본 발명의 항체는 골격 및/또는 CDR 영역내에서 2개 이상의 배선 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있는데, 예컨대, 여기서 특정의 개개 잔기는 특수한 배선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이되지만 원래의 배선 서열과는 상이한 특정의 다른 잔기는 유지되거나 상이한 배선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이된다. 일단 수득되면, 하나 이상의 배선 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 단편은 하나 이상의 목적한 특성, 예를 들면, 증진된 결합 특이성, 증가된 결합 친화성, 증진되거나 향상된 길항 또는 효능적 생물학적 특성(존재하는 경우), 감소된 면역원성 등에 대해 용이하게 시험될 수 있다. 이러한 일반적인 방식으로 수득된 항체 및 항원-결합 단편은 본 발명내에 포함된다. 본원의 화합물에 유용한 항체는 또한 하나 이상의 보존적 치환을 갖는 본원에 개시된 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열 중 임의의 것의 변이체를 포함하는 항체를 포함한다. 용어 "에피토프"는 파라토프(paratope)로 공지된 항체 분자의 가변 영역내 특이적인 항원-결합 부위와 상호작용하는 항원성 결정인자를 지칭한다. 단일 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체가 항원상의 상이한 부위에 결합할 수 있으며 상이한 생물학적 효과를 가질 수 있다. 에피토프는 구조적이거나 선형일 수 있다. 구조적 에피토프는 선형 폴리펩타이드 쇄의 상이한 분절(segment)로부터 공간적으로 나란히놓인 아미노산에 의해 생산된다. 선형 에피토프는 폴리펩타이드 쇄내 인접한 아미노산 잔기에 의해 생산된 것이다. 특정의 상황에서, 에피토프는 항원 상의 당류(saccharides), 포스포릴 그룹, 또는 설포닐 그룹의 모이어티를 포함할 수 있다.
특정의 구현예에서, 항체는 경쇄를 포함한다. 특정의 구현예에서, 경쇄는 카파 경쇄이다. 특정의 구현예에서, 경쇄는 람다 경쇄이다. 특정의 구현예에서, 항체는 중쇄를 포함한다. 일부 국면에서, 중쇄는 IgA이다. 일부 양태에서, 중쇄는 IgD이다. 일부 양태에서, 중쇄는 IgE이다. 일부 양태에서, 중쇄는 IgG이다. 일부 양태에서, 중쇄는 IgM이다. 일부 양태에서, 중쇄는 IgG1이다. 일부 양태에서, 중쇄는 IgG2이다. 일부 양태에서, 중쇄는 IgG3이다. 일부 양태에서, 중쇄는 IgG4이다. 일부 양태에서, 중쇄는 IgA1이다. 일부 양태에서, 중쇄는 IgA2이다.
일부 구현예에서, 항체는 항체 단편이다. 일부 양태에서, 항체 단편은 Fv 단편이다. 일부 양태에서, 항체 단편은 Fab 단편이다. 일부 양태에서, 항체 단편은 a F(ab')2 단편이다. 일부 양태에서, 항체 단편은 Fab'이다. 일부 양태에서, 항체 단편은 scFv (sFv) 단편이다. 일부 양태에서, 항체 단편은 scFv-Fc 단편이다.
일부 구현예에서, 항체는 모노클로날 항체(monoclonal antibody)이다. 일부 구현예에서, 항체는 폴리클로날 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 키메라 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 사람화된 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 사람 항체이다.
항체는 당해 분야의 기술자에게 적합한 것으로 고려된 임의의 항원에 대한 결합 특이성을 가질 수 있다. 특정의 구현예에서, 항원은 막횡단 분자(transmembrane molecule)(예컨대, 수용체) 또는 성장 인자이다. 예시적인 항원은 분자, 예를 들면, 레닌; 성장 호르몬, 예를 들면, 사람 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬; 성장 호르몬 방출 인자; 부갑상선 호르몬; 갑상선 자극 호르몬; 리포단백질; 알파1-안티트립신; 인슐린 A-쇄; 인슐린 B-쇄; 프로인슐린; 여포 자극 호르몬; 칼시토닌; 황체형성 호르몬; 글루카곤; 응고 인자, 예를 들면, 인자 vmc, 인자 IX, 조직 인자(TF), 및 폰 빌레브란트(von Willebrand) 인자; 항-응괴 인자, 예를 들면, 단백질 C; 동맥 나트륨뇨배설 인자; 폐 표면; 플라스미노겐 활성인자, 예를 들면, 우로키나제 또는 사람 뇨 또는 조직형 플라스미노겐 활성인자(t-PA); 봄베신; 트롬빈; 조혈 성장 인자; 종양 괴사 인자-알파 및 -베타; 엔케팔리나제; RANTES(활성화시 조절되고 일반적으로 T-세포 발현되고 분비됨); 사람 대식구 염증 단백질(MIP-I-alpha); 혈청 알부민, 예를 들면, 사람 혈청 알부민; 뮬레리안(Muellerian)-억제 물질; 렐락신 A-쇄; 렐락신 B-쇄; 프로렐락신; 마우스 고나도트로핀-관련 펩타이드; 미생물 단백질, 예를 들면, 베타락타마제; DNase; 19E; 세포독성 T-림프구 관련 항원(CTLA), 예를 들면, CTLA-4; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자(VEGF); 호르몬 또는 성장 인자에 대한 수용체; 단백질 A 또는 D; 류마티스성 인자; 신경영양성 인자, 예를 들면 골-유래된 신경영양성 인자(BDNF), 뉴로트로핀-3, -4, -5, 또는 -6(NT-3, NT4, NT-5, 또는 NT-6), 또는 신경 성장 인자, 예를 들면, NGF-β; 혈소판-유래된 성장 인자(PDGF); 섬유아세포 성장 인자, 예를 들면, aFGF 및 bFGF; 섬유아세포 성장 인자 수용체 2(FGFR2), 표피 성장 인자(EGF); 형질전환 성장 인자(TGF), 예를 들면, TGF-알파 및 TGF-베타, 예를 들면, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, TGF-β4, 또는 TGF-β5; 인슐린-유사 성장 인자-l 및 -II(IGF-l 및 IGF-II); des(I-3)-IGF-l(뇌 IGF-l), 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질, EpCAM, GD3, FLT3, PSMA, PSCA, MUCI, MUCI6, STEAP, CEA, TENB2, EphA 수용체, EphB 수용체, 엽산 수용체, FOLRI, 메소텔린, 크립토, 알파v베타6, 인테그린, VEGF, VEGFR, EGFR, 트랜스페린 수용체, IRTA1, IRTA2, IRTA3, IRTA4, IRTA5; CD 단백질, 예를 들면, CD2, CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CD11, CD14, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD26, CD28, CD30, CD33, CD36, CD37, CD38, CD40, CD44, CD52, CD55, CD56, CD59, CD70, CD79, CD80. CD81, CD103, CD105, CD134, CD137, CD138, CDI52, 또는 미국 공보 제2008/0171040호 또는 미국 공보 제2008/0305044호에 개시되고 이의 전문이 참고로 포함된 하나 이상의 종양-관련 항원 또는 세포-표면 수용체에 결합하는 항체; 에리트로포이에틴; 골유도 인자; 면역독소; 골 형태발생 단백질(BMP); 인터페론, 예를 들면, 인터페론-알파, -베타, 및 -감마; 콜로니 자극 인자(CSF), 예컨대, M-CSF, GM-CSF, 및 G-CSF; 인터루킨(IL), 예컨대, IL-1 내지 IL-10; 슈퍼옥사이드 디스뮤타제; T-세포 수용체; 표면 막 단백질; 붕괴(decay) 가속화 인자; 바이러스 항원, 예를 들면, HIV 엔벨로프의 부위; 수송 단백질; 호밍 수용체(homing receptor); 애드레신; 조절 단백질; 인테그린, 예를 들면, CDlla, CDllb, CDllc, CDI8, ICAM, VLA-4 및 VCAM; 종양 관련 항원, 예를 들면, AFP, ALK, B7H4, BAGE 단백질, β-카테닌, brc-abl, BRCA1, BORIS, CA9(카보닉 안하이드라제 IX), 카스파제-8, CD20, CD40, CD123, CDK4, CEA, CLEC12A, c-키트, cMET, CTLA4, 사이클린-B1, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, 엔도글린, 엡캄, EphA2, ErbB2/Her2, ErbB3/Her3, ErbB4/Her4, ETV6-AML, Fra-1, FOLR1, GAGE 단백질(예컨대, GAGE-1, -2), GD2, GD3, GloboH, 글리피칸-3, GM3, gp100, Her2, HLA/B-raf, HLA/EBNA1, HLA/k-ras, HLA/MAGE-A3, hTERT, IGF1R, LGR5, LMP2, MAGE 단백질(예컨대, MAGE-1, -2, -3, -4, -6, 및 -12), MART-1, 메소텔린, ML-IAP, Muc1, Muc16(CA-125), MUM1, NA17, NGEP, NY-BR1, NY-BR62, NY-BR85, NY-ESO1, OX40, p15, p53, PAP, PAX3, PAX5, PCTA-1, PDGFR-α, PDGFR-β, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D, PLAC1, PRLR, PRAME, PSCA, PSGR, PSMA (FOLH1), RAGE 단백질, Ras, RGS5, Rho, SART-1, SART-3, Steap-1, Steap-2, STn, 수르비빈, TAG-72, TGF-β, TMPRSS2, Tn, TNFRSF17, TRP-1, TRP-2, 타이로시나제, 및 우로플라킨-3, 및 상기 나타낸 폴리펩타이드 중 임의의 것의 단편을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 항원은 종양 항원, 예를 들면, 특수한 유형의 종양에서 공유되거나, 과발현되거나 변형된 종양 또는 항원의 유형에 대해 특이적인 항원이다. 예는 폐암과의 알파-악티닌-4, 흑색종과의 ARTC1, 만성 골수종 백혈병과의 BCR-ABL 융합 단백질, 흑색종과의 B-RAF, CLPP 또는 Cdc27, 편평 세포 암종과의 CASP-8, 및 신장 세포 암종과의 hsp70-2뿐만 아니라 다음의 공유된 종양-특이적인 항원, 예를 들면: BAGE-1, GAGE, GnTV, KK-LC-1, MAGE-A2, NA88-A, TRP2-INT2를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 항원은 PRLR 또는 HER2이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-PRLR 또는 항 HER2 항체이다.
결합제 링커는 항체 또는 항원-결합 분자내 특수한 아미노산에서의 부착을 통해, 결합제, 예컨대, 항체 또는 항원-결합 분자에 결합될 수 있다. 본 개시내용의 이러한 양태의 맥락에서 사용될 수 있는 예시적인 아미노산 부착은, 예컨대, 라이신(참고: 예컨대, 미국 제5,208,020호; 미국 제2010/0129314호; Hollander et al., Bioconjugate Chem., 2008, 19:358-361; 제WO 2005/089808호; 미국 제5,714,586호; 미국 제2013/0101546호; 및 미국 제2012/0585592호), 시스테인(참고: 예컨대, 미국 제2007/0258987호; 제WO 2013/055993호; 제WO 2013/055990호; 제WO 2013/053873호; 제WO 2013/053872호; 제WO 2011/130598호; 미국 제2013/0101546호; 및 미국 제7,750,116호), 셀레노시스테인(참고: 예컨대, 제WO 2008/122039호; 및 Hofer et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 105:12451-12456), 포르밀 글리신(참고: 예컨대, Carrico et al., Nat. Chem. Biol., 2007, 3:321-322; Agarwal et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2013, 110:46-51, 및 Rabuka et al., Nat. Protocols, 2012, 10:1052-1067), 비-천연 아미노산(참고: 예컨대, 제WO 2013/068874호, 및 제WO 2012/166559호), 및 산성 아미노산(참고: 예컨대, 제WO 2012/05982호)을 포함한다. 링커는 또한 탄수화물에 대한 부착을 통해 항원-결합 단백질에 부착될 수 있다(참고: 예컨대, 미국 제2008/0305497호, 제WO 2014/065661호, 및 Ryan et al., Food & Agriculture Immunol., 2001, 13:127-130).
일부 예에서, 결합제는 항체 또는 항원 결합 분자이고, 항체는 라이신 잔기를 통해 링커에 결합된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 분자는 시스테인 잔기를 통해 링커에 결합된다.
링커는 또한 트랜스글루타미나제-계 화학-효소적 접합을 통해 하나 이상의 글루타민 잔기에 접합될 수 있다(참고: 예컨대, Dennler et al., Bioconjugate Chem. 2014, 25, 569-578). 예를 들면, 트랜스글루타미나제의 존재하에서, 항체의 하나 이상의 글루타민 잔기는 1차 아민 화합물에 커플링될 수 있다. 1차 아민 화합물은 페이로드 또는 링커-페이로드를 포함하며, 이는 트랜스글루타미나제-매개된 커플링을 통해 항체 약물 접합체를 직접 제공한다. 1차 아민 화합물은 또한 항체 약물 접합체의 합성을 위해 추가의 화합물과 후속적으로 반응할 수 있는 반응성 그룹으로 작용화된 스페이서 및 링커를 포함한다. 글루타민 잔기를 포함하는 항체는 천연 공급원으로부터 단리될 수 있거나 하나 이상의 글루타민 잔기를 포함하도록 가공된다. 글루타민 잔기를 항체 폴리펩타이드 쇄(글루타미닐-변형된 항체 또는 항원 결합 분자)로 가공하기 위한 기술은 당해 분야의 숙련가의 기술내에 있다. 특정의 구현예에서, 항체는 아글리코실화(aglycosylating)된다.
특정의 구현예에서, 항체 또는 글루타미닐-변형된 항체 또는 항원 결합 분자는 적어도 하나의 폴리펩타이드 쇄 서열내에 적어도 하나의 글루타민 잔기를 포함한다. 특정의 구현예에서, 항체 또는 글루타미닐-변형된 항체 또는 항원 결합 분자는 2개의 중쇄 폴리펩타이드를 포함하며, 각각은 하나의 Gln295 잔기를 지닌다. 추가의 구현예에서, 항체 또는 글루타미닐-변형된 항체 또는 항원 결합 분자는 중쇄 Gln 295 이외의 부위에서 하나 이상의 글루타민 잔기를 포함한다. 본원에 기술된 N297Q 돌연변이(들)을 지닌 항체가 본원에 포함된다. 요약하면, 일부 구현예에서, 글루타민 잔기를 포함하는 항체는 하기 보다 상세히 기술된 1차 아민 화합물로 효소 트랜스글루타미나제의 존재하에서 처리된다. 일부 구현예에서, Asn297Gln(N297Q) 돌연변이를 포함하는 항체는 하기 상세히 기술된 1차 아민 화합물로, 효소 트랜스글루타미나제의 존재하에서 처리된다. 일부 구현예에서, Gln295(Q295) 잔기를 포함하는 항체는 하기 상세히 기술된 1차 아민 화합물로, 효소 트랜스글루타미나제의 존재하에서 처리된다. 일부 구현예에서, Gln55 (Q55) 잔기를 포함하는 항체는 하기 상세히 기술된 1차 아민 화합물로, 효소 트랜스글루타미나제의 존재하에서 처리된다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 이러한 항체는 임의의 간섭하는 구조로부터 떨어진 부위에서 서열을 제거하거나 무능화시시키거나 글루타민 잔기를 삽입시키기 위해 부위-지시된 돌연변이유발에 의해 제조할 수 있다. 이러한 항체는 또한 천연 또는 인공 공급원으로부터 단리될 수 있다.
1차 아민 화합물
글루타민을 포함하는 항체(또는 항원 결합 화합물)의 트랜스글루타미나제 매개된 커플링에 유용한 1차 아민 화합물은 통상의 기술의 숙련자에 의해 유용한 것으로 고려된 임의의 1차 아민 화합물일 수 있다. 일반적으로, 1차 아민 화합물은 화학식 H2N-R를 가지며, 여기서 R은 항체 및 반응 조건과 양립될 수 있는 임의의 그룹일 수 있다. 특정의 구현예에서, R은 알킬, 치환된 알킬, 헤테로알킬, 또는 치환된 헤테로알킬이다.
일부 구현예에서, 1차 아민 화합물은 반응성 그룹 또는 보호된 반응성 그룹을 포함한다. 유용한 반응성 그룹은 아지드, 알킨, 사이클로알킨, 티올, 알코올, 케톤, 알데하이드, 산, 에스테르, 하이드로지드, 아날린, 및 아민을 포함한다. 특정의 구현예에서, 반응성 그룹은 아지드, 알킨, 설프하이드릴, 사이클로알킨, 알데하이드, 및 카복실로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정의 구현예에서, 1차 아민 화합물은 화학식 H2N-LL-X에 따르며, 여기서 LL은 2가 스페이서이고 X는 반응성 그룹 또는 보호된 반응성 그룹이다. 특수한 구현예에서, LL은 2가 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 그룹이다. 특정의 구현예에서, X는 -SH, -N3, 알킨, 알데하이드, 및 테트라졸로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특수한 구현예에서, X는 -N3이다.
특정의 구현예에서, 1차 아민 화합물은 다음의 화학식 중 하나에 따른다:
H2N-(CH2)n-X;
H2N-(CH2CH2O)n-(CH2)p-X;
H2N-(CH2)n-N(H)C(O)-(CH2)m-X;
H2N-(CH2CH2O)n-N(H)C(O)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X;
H2N-(CH2)n-C(O)N(H)-(CH2)m-X;
H2N-(CH2CH2O)n-C(O)N(H)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X;
H2N-(CH2)n-N(H)C(O)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X;
H2N-(CH2CH2O)n-N(H)C(O)-(CH2)m-X;
H2N-(CH2)n-C(O)N(H)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X; 및
H2N-(CH2CH2O)n-C(O)N(H)-(CH2)m-X;
여기서, n은 1 내지 12로부터 선택된 정수이고;
m은 0 내지 12로부터 선택된 정수이며;
p는 0 내지 2로부터 선택된 정수이고;
X는 -SH, -N3, -C≡CH, -C(O)H, 테트라졸, 및
Figure pct00294
중 임의의 것으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
상기에서, 임의의 알킬 또는 알킬렌(즉, -CH2-) 그룹은 예를 들면 C1-8알킬, 메틸포르밀, 또는 -SO3H로 임의 치환될 수 있다. 특정의 구현예에서, 알킬 그룹은 비치환된다.
특정의 구현예에서, 1차 아민 화합물은:
Figure pct00295
및
Figure pct00296
로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특수한 구현예에서, 1차 아민 화합물은
Figure pct00297
이다.
상기 반응을 위한 예시적인 상태는 하기 실시예에서 제공되다.
링커
본원에 기술된 접합체의 링커 LL 부위는 결합제를 본원에 기술된 페이로드 화합물에 공유결합으로 연결시킨, 모이어티, 예를 들면 2가 모이어티이다. 다른 예에서, 링커 LL은 결합제를 본원에 기술된 페이로드 화합물에 공유결합으로 연결하는 3가 또는 다가 모이어티이다. 적합한 링커는, 예를 들면, 문헌: Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins; Phillips, G. L., Ed.; Springer Verlag: New York, 2013; Antibody-Drug Conjugates; Ducry, L., Ed.; Humana Press, 2013; Antibody-Drug Conjugates; Wang, J., Shen, W.-C., and Zaro, J. L., Eds.; Springer International Publishing, 2015에서 찾을 수 있으며, 이의 각각의 내용은 이의 전문으로 본원에 참고로 포함된다. 페이로드 화합물은 도 1의 화합물, 및 링커 LL과의 결합 또는 혼입 후 이들의 잔기를 포함한다. 당해 분야의 기술자는 페이로드 모이어티의 특정의 작용 그룹이 링커 및/또는 결합제에 연결하거나 결합시키기에 편리함을 인식할 것이다. 이러한 그룹은 아민, 하이드록실, 포스페이트, 및 당을 포함한다.
특정의 구현예에서, 링커는 생리학적 조건에서 안정하다. 특정의 구현예에서, 링커는 절단가능한데, 예를 들면, 효소의 존재하에서 또는 특수한 pH 범위 또는 값에서 적어도 페이로드 부위를 방출시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 효소-절단가능한 모이어티를 포함한다. 예시적인 효소-절단가능한 모이어티는 펩타이드 결합, 에스테르 연결, 하이드라존, 및 이황화물 연결을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 링커는 카텝신-절단가능한 링커를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 절단불가능한 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단불가능한 링커는
Figure pct00298
또는 이의 잔기로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 절단불가능한 링커-페이로드는
Figure pct00299
, 또는 이의 레지오이성체이다. 일부 구현예에서, 절단불가능한 링커는
Figure pct00300
또는 이의 잔기로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 절단불가능한 링커-페이로드는
Figure pct00301
, 또는 이의 레지오이성체이다. 일 구현예에서, 링커는 말레이미드 사이클로헥산 카복실레이트 또는 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산카복실산(MCC)이다. 구조식에서,
Figure pct00302
는 결합제에 대한 결합을 나타낸다. 구조식에서, 일부 예에서,
Figure pct00303
는 예를 들면, 결합제 및 링커 페이로드의 반응으로부터 생성되는 클릭 화학 잔기를 나타낸다.
일부 구현예에서, 적합한 링커는 단일 결합제, 예컨대, 항체의 2개의 시스테인 잔기에 화학적으로 결합된 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 링커는 접합 공정의 결과로서 파괴된 항체의 이황화물 결합을 모사하도록 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 하나 이상의 아미노산을 포함한다. 적합한 아미노산은 천연, 비-천연, 표준, 비-표준, 단백질생성, 비-단백질생성, 및 L-, 또는 D-α-아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합을 포함한다. 특정의 구현예에서, 아미노산의 하나 이상의 측쇄는 하기 기술된 측쇄 그룹에 연결된다. 일부 구현예에서, 링커는 발린 및 시트룰린을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 라이신, 발린, 및 시트룰린을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 라이신, 발린, 및 알라닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 발린 및 알라닌을 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 자가-희생(self-immolative) 그룹을 포함한다. 자가-희생 그룹은 기술자에게 공지된 임의의 이러한 그룹일 수 있다. 특수한 구현예에서, 자가-희생 그룹은 p-아미노벤질(PAB), 또는 이의 유도체이다. 유용한 유도체는 p-아미노벤질옥시카보닐(PABC)이다. 기술자는 자가-희생 그룹이 페이로드로부터 링커의 나머지 원자를 방출하는 화학 반응을 수행할 수 있음을 인식할 것이다.
일부 구현예에서, 반응성 그룹 RG'는 당해 분야의 기술자에게 결합제에 대한 하나 이상의 결합을 형성할 수 있는 것으로 공지된 임의의 반응성 그룹일 수 있다. 반응성 그룹 RG'는 결합제와 반응하여(예컨대, 이의 시스테인 또는 라이신 잔기에서의, 또는 아지드 모이어티에서의 항체, 예를 들면, 하나 이상의 글루타민 잔기에서의 PEG-N3 작용화된 항체와 반응하여) 화학식 A, Aa, 또는 Ab의 화합물을 형성할 수 있는 이의 구조내 부위를 포함하는 모이어티이다. 결합제에 대한 접합에 이어서, 반응성 그룹은 반응성 그룹(RG) 또는 링커 잔기가 된다. 예시적인 반응성 그룹은 할로아세틸, 이소티오시아네이트, 석신이미드, N-하이드록시석신이미드, 또는 결합제와 반응할 수 있는 말레이미드 부위를 포함하는 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
특정의 구현예에서, 반응성 그룹은 알킨을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 특정의 구현예에서, 알킨은 변형된 알킨과 같은 구리 촉매의 부재하에서 알킨과 1,3-사이클로부가 반응을 겪을 수 있는 알킨이다. 변형된 알킨은 변형-증진된 알킨-아지드 사이클로부가반응(SPAAC), 사이클로알킨, 예컨대, 사이클로옥틴, 및 벤자뉼화된(benzannulated) 알킨에 적합하다. 적합한 알킨은 디벤조아자사이클로옥틴 또는
Figure pct00304
(DIBAC), 디벤조사이클로옥틴 또는
Figure pct00305
(DIBO), 비아릴아자사이클로옥티논 또는
Figure pct00306
(BARAC), 디플루오르화된 사이클로옥틴 또는
Figure pct00307
, 또는
Figure pct00308
, 또는
Figure pct00309
(DIFO), 치환된, 예컨대, 불소화된 알킨, 아자-사이클로알킨, 비사이클로[6.1.0]노닌 또는
Figure pct00310
(BCN), 및 이의 유도체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 특히 유용한 알킨은
Figure pct00311
를 포함한다.
특정의 구현예에서, 결합제는 RG에 직접 결합된다. 특정의 구현예에서, 결합제는 RG에 스페이서를 통해 결합된다. 특수한 구현예에서, 결합제는 RG에 PEG 스페이서를 통해 결합된다. 특정의 구현예에서, 결합제는 하나 이상의 아지도 그룹을 작용화함으로써 제조된다. 각각의 아지도 그룹은 RG'와 반응하여 RG를 형성할 수 있다. 특수한 구현예에서, 결합제는 글루타민 잔기에 연결된 -PEG-N3로 유도체화된다. 예시적인 -N3 유도체화된 결합제, 이의 제조 방법, 및 RG'와의 반응시 이들의 사용 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, RG'는 1,3-사이클로부가반응시 참여하기에 적합한 알킨이며, RG'는 RG'와 아지도-작용화된 결합제의 반응으로부터 형성된 1,2,3-트리아졸릴 모이어티이다. 추가의 예로서, 특정의 구현예에서, RG는
Figure pct00312
, 또는 각각의 레지오이성체의 혼합물로서 나타낸 바와 같이 결합제에 연결된다. 각각의 R 및 R'는 본원에 기술된 바와 같다.
본원의 화학식에서, 각각의 AA 1 은 아미노산이다. 본원의 화학식내 일부 예에서, 각각의 AA 2 는 아미노산이다. 본원의 화학식내 일부 예에서, 각각의 AA 2 는 디-펩타이드이다. 본원의 화학식내 일부 예에서, 각각의 AA 2 는 트리-펩타이드이다. 각각의 AA 1 또는 AA 2 에 대한 적합한 아미노산은 천연, 비-천연, 표준, 비-표준, 단백질생성, 비-단백질생성, 및 L-, 또는 D-아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합물을 포함한다. 특정의 구현예에서, 아미노산의 하나 이상의 측쇄는 하기 기술된 측쇄 그룹에 연결된다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글리신-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글루타메이트-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 라이신-발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 라이신-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글루타메이트-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린-PABC이다.
기술자는 PABC를 다음의 구조식을 지닌 p-아미노벤질옥시카보닐의 잔기로 인식할 것이다:
Figure pct00313

PABC 잔기는 시험관내 및 생체내에서 특정의 링커의 절단을 촉진하는 것으로 밝혀졌다.
일부 예에서, 링커는 MC-Suc-PEGm-vc-PAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEGm-vc-PAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 MAL-PEGm-Lys(COT-CD)-vc-PAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.일부 예에서, 링커는 MAL-PEGm-N(suc-DIBAC-CD)Lys-vc-PAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-Lys(mc-pip-CD)-vc-PAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-Suc-PEGm-N(CD-COT)Lys-vc-PAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 BCN-PEGm-Lys(COT-CD)-vc-PAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-Suc-PEGm-d-Lys(PEG4-COT-CD)-vc-PAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 BCN-PEG4-d-Lys-(PEGm-COT-CD)-vc-PAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEGm-Val-Ala이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 PEGm-d-Lys-Val-Ala이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEGm-d-Lys(PEGm)-vcPAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 BCN-PEGm-d-Lys(PEGm)-Val-Ala이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 BCN-PEGm-d-Lys(PEGm)-vcPAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 BCN-PEG4-d-Lys-Val-Ala이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEGm-d-Lys-vcPAB이다. 첨자 m은 0 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 첨자 m은 0이다. 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 일부 예에서 첨자 m은 4이다.
일부 예에서, 링커는 MC-Suc-PEG4-vc-PAB이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEG4-vc-PAB이다.
일부 예에서, 링커는 MAL-Lys(suc-DIBAC-CD)-vc-PAB이다.
일부 예에서, 링커는 MAL-PEG4-Lys(COT-CD)-vc-PAB이다.
일부 예에서, 링커는 MAL-PEG4-N(suc-DIBAC-CD)Lys-vc-PAB이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-Lys(mc-pip-CD)-vc-PAB이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-Suc-PEG4-N(CD-COT)Lys-vc-PAB이다.
일부 예에서, 링커는 BCN-PEG4-Lys(COT-CD)-vc-PAB이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-Suc-PEG4-D-Lys(PEG4-COT-CD)-vc-PAB이다.
일부 예에서, 링커는 BCN-PEG4-D-Lys(PEG4-COT-CD)-vc-PAB이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEG4-Val-Ala이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEG4-D-Lys(COT-CD)-Val-Ala이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEG4-D-Lys(COT-CD)-Val-Ala이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEG4-Val-Ala이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEG4-D-Lys(COT-CD)-Val-Ala이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEG4-D-Lys(PEG4-COT-CD)-vcPAB이다.
일부 예에서, 링커는 BCN-PEG4-D-Lys(PEG4-COT-CD)-Val-Ala이다.
일부 예에서, 링커는 BCN-PEG4-D-Lys(PEG4-COT-CD)-vcPAB이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEG4-D-Lys(PEG4-COT-CD)-Val-Ala이다.
일부 예에서, 링커는 BCN-PEG4-D-Lys(COT-CD)-Val-Ala이다.
일부 예에서, 링커는 DIBAC-suc-PEG4-D-Lys(COT-CD)-vc-PAB이다.
반응성 링커-페이로드
본원에 제공된 접합체는 상술한 바와 같은 반응성 그룹 RG'를 지닌 반응성 링커-페이로드로부터 제조할 수 있다. 반응성 링커 페이로드는 본원에 기술된 바와 같은, 사이클로덱스트린 그룹, 및/또는 결합제에 하기 기술된 방법에 따라 연결시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 페이로드 모이어티에 연결되고 공유결합성 링커를 통해 적어도 하나의 사이클로덱스트린에 연결된 반응성 그룹을 포함하는 반응성 링커-페이로드가 본원에 제시되어 있으며, 상기 공유결합성 링커는 각각의 반응성 그룹, 페이로드 모이어티, 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합된다.
본원에 나타낸 바와 같이, 일부 예에서, 반응성 그룹은 공유결합성 링커, 예를 들면, 라이신 아미노산에 직접 결합된다. 이는 반응성 그룹이 공유결합성 링커로부터 떨어진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 또한 페이로드 모이어티에 직접 결합된다. 이는 공유결합성 링커가 페이로드, 예를 들면, 제한없이, MMAE, 스테로이드, 또는 본원에 제시된 임의의 페이로드와 떨어진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 또한 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 결합된다. 이는 공유결합성 링커가 사이클로덱스트린, 예를 들면, 본원에 제시된 사이클로덱스트린와는 떨어진 하나의 결합 위치임을 의미한다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 라이신 아미노산 또는 이의 유도체이다.
다른 예에서, 반응성 그룹은 공유결합성 링커에 간접적으로 결합된다. 이는 반응성 그룹이 공유결합성 링커로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 반응성 그룹이 다른 모이어티를 통해 공유결합성 링커에 결합됨을 의미한다. 예를 들면, 반응성 그룹은 공유결합성 링커에 결합된 폴리에틸렌 글리콜 그룹에 결합될 수 있다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 또한 페이로드 모이어티에 간접적으로 결합된다. 이는 공유결합성 링커가 페이로드, 예를 들면, 제한없이, MMAE, 또는 스테로이드, 또는 본원에 제시된 임의의 페이로드와 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 공유결합성 링커가 다른 모이어티를 통해 페이로드에 결합함을 의미한다. 예를 들면, 공유결합성 링커는 디펩타이드, 예를 들면, 제한없이, Val-Ala 또는 Val-Cit에 결합될 수 있으며, 이는 페이로드에 결합될 수 있는 PAB에 결합될 수 있다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 또한 사이클로덱스트린 모이어티에 간접적으로 결합된다. 이는 공유결합성 링커가 사이클로덱스트린, 예를 들면, 본원에 제시된 사이클로덱스트린으로부터 떨어진 하나 이상의 결합 위치임을 의미한다. 이는 또한 공유결합성 링커가 다른 모이어티를 통해 사이클로덱스트린에 결합됨을 의미한다. 예를 들면, 공유결합성 링커는 사이클로덱스트린에 결합될 수 있는 반응성 그룹에 결합될 수 있는 폴리에틸렌 글리콜 그룹에 결합될 수 있다. 일부 이러한 예에서, 공유결합성 링커는 라이신 아미노산 또는 이의 유도체이다.
일부 구현예에서, 화학식 (II)에 따른 반응성 링커-페이로드가 본원에 제시되어 있다:
Figure pct00314

화학식 (II)에서, RG'는 반응성 그룹이고, L은 3가 링커이며, CD 는 사이클로덱스트린 잔기이고; PA는 페이로드 잔기이다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIa)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00315

화학식 (IIa)에서, RG'는 반응성 그룹이고, RG는 반응성 링커 잔기이며, LL은 3가 링커이며, SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹이고; PA는 페이로드이다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIb) 또는 (IIc)에 따르는 화합물이다. 일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIb)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00316

화학식 (IIb) 또는 (IIc)에서, RG'는 반응성 그룹이고, LL은 3가 링커이다. SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서이며, 환 A는 트리아졸에 융합되고 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알케닐, 및 헤테로사이클로알키닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기서 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알케닐, 및 헤테로사이클로알키닐은 알킬, OH, 또는 NRaRb로 임의 치환되고, 여기서 각각의 Ra 및 Rb는 알킬 또는 H이고, PA는 페이로드이다. 일부 예에서, 환 A는 임의 치환된 사이클로알킬이다. 일부 예에서, 환 A는 임의 치환된 사이클로알케닐이다. 일부 예에서, 환 A는 임의 치환된 사이클로알키닐이다. 일부 예에서, 환 A는 임의 치환된 헤테로사이클로알킬이다. 일부 예에서, 환 A는 임의 치환된 헤테로사이클로알키닐이다. 일부 예에서, 화학식 (IIb) 또는 (IIc)에는 화학식 (IIb) 또는 (IIc)의 화합물의 레지오이성체(예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIc)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00317
.
화학식 (IIc)에서, RG'는 반응성 그룹이고, LL은 3가 링커이며. SP는 부재하거나 스페이서이며, PA는 페이로드이다. 일부 예에서, 화학식 (IIb) (IIc)에는 화학식 (IIc)의 화합물의 레지오이성체(예컨대, 석신이미드 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIb1), (IIb2), (IIb3), (IIb4), (IIb5), 또는 (IIb6)에 따르는 화합물이다. 일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIb1)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00318

화학식 (IIb1)에서, RG'는 반응성 그룹이고, LL은 3가 링커이다. SP는 부재하거나 스페이서이며, PA는 페이로드이다. 일부 예에서, 화학식 (IIb1)의 화합물에는 화학식 (IIb1)의 화합물의 레지오이성체(예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIb2)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00319

화학식 (IIb2)에서, RG'는 반응성 그룹이고, LL은 3가 링커이며, SP는 부재하거나 스페이서이며, PA는 페이로드이다. 일부 예에서, 화학식 (IIb2)의 화합물에는 화학식 (IIb2)의 화합물의 레지오이성체 (예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIb3)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00320
.
화학식 (IIb3)에서, RG'는 반응성 그룹이고, LL은 3가 링커이며, PA는 페이로드이다. 일부 예에서, 화학식 (IIb3)의 화합물에는 화학식 (IIb3)의 화합물의 레지오이성체 (예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIb4)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00321
.
화학식 (IIb4)에서, RG'는 반응성 그룹이고, LL은 3가 링커이며, PA는 페이로드이다. 일부 예에서, 화학식 (IIb4)의 화합물에는 화학식 (IIb4)의 화합물의 레지오이성체 (예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIb5)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00322
.
화학식 (IIb5)에서, RG'는 반응성 그룹이고, LL은 3가 링커이며, ne 는 0 내지 4의 정수이고, PA는 페이로드이다. 일부 예에서, e는 0이다. 일부 예에서, e는 1이다. 일부 예에서, e는 2이다. 일부 예에서, e는 3이다. 일부 예에서, e는 4이다. 일부 예에서, 화학식 (IIb5)의 화합물에는 화학식 (IIb5)의 화합물의 레지오이성체 (예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIb6)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00323
.
화학식 (IIb6)에서, RG'는 반응성 그룹이고, LL은 3가 링커이며, ne는 0 내지 4의 정수이고, PA는 페이로드이다. 일부 예에서, e는 0이다. 일부 예에서, e는 1이다. 일부 예에서, e는 2 일부 예에서, e는 3이다. 일부 예에서, e는 4이다. 일부 예에서, 화학식 (IIb6)의 화합물에는 화학식 (IIb6)의 화합물의 레지오이성체 (예컨대, 트리아졸 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIc1)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00324
.
화학식 (IIc1)에서, RG'는 결합제이고, LL은 3가 링커이며, PA는 페이로드이다. 또한 화학식 (IIc1)의 화합물에는 레지오이성체(예컨대, 석신이미드 연결과 관련하여), 입체이성체, 및 이의 혼합물이 포함된다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IId)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00325
.
화학식 (IId)에서, RG'는 반응성 그룹이고, SP 1 및 SP 2 는 각각, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고, 여기서 SP 1 은 3가 링커를 포함하며, AA 1 은 아미노산 잔기를 포함하는 3가 링커이고; AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며, PAB는
Figure pct00326
이고, 여기서
Figure pct00327
는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내며, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 사이클로덱스트린 잔기이고, 여기서 적어도 하나의 CD는 존재하며, 첨자 m은 0 내지 5의 정수이고, 첨자 p는 0 또는 1이며; PA는 페이로드 모이어티이다. 이러한 예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, 첨자 p는 0이다. 일부 예에서, 첨자 p는 1이다.
화학식 (IId)의 일부 예에서, CD는 다음 구조식에 따른 변형된-CD 그룹이다:
Figure pct00328

여기서 RG는, 각각의 예에서 독립적으로　반응성 링커 잔기이고, SP 3 은, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합물로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹 잔기이고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이며, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이며; q는 0 내지 5의 정수이고,
Figure pct00329
는 이를 통해 변형된-CD 그룹이 SP 1 또는 AA 1 에 결합된 원자를 나타낸다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIe)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00330

화학식 (IIe)에서, RG'는 반응성 그룹이고, RG는 반응성 그룹 잔기이며; SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고, 여기서 AA 2 는 디-펩타이드 잔기이며, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고, PAB는
Figure pct00331
이고, 여기서
Figure pct00332
는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내며, CD는 부재하거나 사이클로덱스트린 잔기이고, 첨자 m은 0 내지 5의 정수이며, 첨자 p는 0 또는 1이고; PA는 페이로드 모이어티이다. 이러한 예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, 첨자 p는 0이다. 일부 예에서, 첨자 p는 1이다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIe1)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00333

화학식 (IIe1)에서, RG'는 반응성 그룹이고, SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이며, 여기서 AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며, PAB는
Figure pct00334
이고, 여기서
Figure pct00335
는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내며, CD는 부재하거나 사이클로덱스트린 잔기이고, 첨자 m은 0 내지 5의 정수이며, 첨자 p는 0 또는 1이며; PA는 페이로드 모이어티이다. 이러한 예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, 첨자 p은 0이다. 일부 예에서, 첨자 p는 1이다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIe2)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00336

화학식 (IIe)에서, RG'는 반응성 그룹이고, SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이며, AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며, PAB는
Figure pct00337
이고, 여기서
Figure pct00338
는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내며, CD는 사이클로덱스트린 잔기이고, 첨자 m은 0 내지 5의 정수이며, 첨자 p는 0 또는 1이며, PA는 페이로드 모이어티이다. 이러한 예에서, 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, 첨자 p는 0이다. 일부 예에서, 첨자 p는 1이다.
일부 예에서, 화학식 (II)에 따르는 화합물은 화학식 (IIf)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00339

화학식 (IIf)에서, RG'는 결합제이고, RG는 반응성 그룹 잔기이며, SP 1 , SP 2 , 및 SP 3 은, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고, AA 2 는 디-펩타이드 잔기이며, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고, PAB는
Figure pct00340
이며, 여기서
Figure pct00341
는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자이고, CD는 사이클로덱스트린 잔기이며, 첨자 q는 0 내지 5의 정수이며, 첨자 m은 0 내지 5의 정수이며, 첨자 p는 0 또는 1이며; PA는 페이로드 모이어티이다. 일부 예에서, m은 0이다. 일부 예에서, m은 1이다. 일부 예에서, m은 2이다. 일부 예에서, m은 3이다. 일부 예에서, m은 4이다. 일부 예에서, m은 5이다. 일부 예에서, p는 0이다. 일부 예에서, p는 1이다. 일부 예에서, q는 0이다. 일부 예에서, q는 1이다. 일부 예에서, q는 2이다. 일부 예에서, q는 3이다. 일부 예에서, q는 4이다. 일부 예에서, q는 5이다. 화학식 (IIf)의 일부 예에서, SP 1 는 부재하며, SP 2 는 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, 화학식 (II)의 화합물은 적어도 하나의 CD 그룹을 포함한다. 구체적인 예에서, 화학식 (I)의 화합물은 본원에 기술된 바와 같은 화학식 (IIe), 화학식 (IIe1) 또는 화학식 (IIe2)의 화합물이고 하나의 CD 그룹을 포함한다. 다른 구체적인 예에서, 화학식 (II)의 화합물은 본원에 기술된 바와 같은 화학식 (IIf)의 화합물이고 하나의 CD 그룹을 포함한다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 α-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 β-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 γ-사이클로덱스트린이다. 임의의 이러한 예에서, α-, β-, 또는 γ-사이클로덱스트린은 임의로 치환된다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 다음으로부터 선택되고:
Figure pct00342

여기서
Figure pct00343
는 이를 통해 CD가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타낸다. 특정의 예에서, CD는
Figure pct00344
이다. 특정의 예에서, CD는
Figure pct00345
이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로, 클릭 화학 반응으로부터의 잔기이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로, 트리아졸 또는 융합된 트리아졸을 포함한다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 RG'는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00346
로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서
Figure pct00347
는 이를 통해 RG'가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타낸다. 특정의 이러한 예에서, RG'는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00348
이다. 특정의 이러한 예에서, RG'는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00349
이다. 특정의 이러한 예에서, RG'는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00350
이다. 특정의 이러한 예에서, RG'는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00351
이다. 특정의 이러한 예에서, RG'는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00352
이다. 특정의 이러한 예에서, RG'는 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00353
이다. 특정의 이러한 예에서, RG'는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00354
이다. 특정의 이러한 예에서, RG'는 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00355
이다. 특정의 이러한 예에서, RG'는 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00356
이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00357

Figure pct00358

Figure pct00359
로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서
Figure pct00360
는 이를 통해 RG가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타낸다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00361
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00362
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00363
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00364
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00365
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00366
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00367
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00368
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00369
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00370
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00371
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00372
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00373
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00374
이다. 특정의 이러한 예에서, RG는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00375
이다.
일부 예에서,
Figure pct00376
는
Figure pct00377

Figure pct00378

Figure pct00379
로부터 선택된다.
또한 이의 염, 용매화물, 입체이성체성 형태, 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물이 포함되며, 여기서 각각의
Figure pct00380
는 페이로드에 대한 결합이며; R 9 는 -CH3 또는 -(CH2)3N(H)C(O)NH2이다. 일부 예에서, R 9 는 -CH3이다. 일부 예에서, R 9 는 -(CH2)3N(H)C(O)NH2이다.
일부 예에서, 화학식 (II)의 화합물은:
Figure pct00381

Figure pct00382

Figure pct00383

Figure pct00384

Figure pct00385
또는 이의 염, 용매화물, 입체이성체성 형태, 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물로부터 선택된 그룹을 포함하고, 여기서 각각의
Figure pct00386
는 페이로드에 대한 결합이다.
일부 예에서, -LL-은 화학식 (LL1)에 따른다
Figure pct00387

여기서 R AA1 , R AA2 , 및 R AA3 은 각각, 독립적으로, 아미노산 측쇄이고, 이중 적어도 하나는 -SP-RG-SP-CD에 직접 또는 간접적으로 결합된다. 일부 예에서, R AA1 은 라이신 아미노산 측쇄이다. 일부 예에서, R AA2 는 발린 아미노산 측쇄이다. 일부 예에서, R AA3 은 알라닌 아미노산 측쇄이다. 일부 예에서, R AA3 은 시트룰린 아미노산 측쇄이다. 특정의 예에서, R AA1 은 CD에 직접 또는 간접적으로 결합된 라이신 아미노산 측쇄이고 R AA2 및 R AA3 은, 독립적으로, 발린 및 알라닌 아미노산 측쇄이다. 특정의 예에서, R AA1 은 CD에 직접 또는 간접적으로 결합된 라이신 아미노산 측쇄이고 R AA2 및 R AA3 은, 독립적으로, 발린 및 시트룰린 아미노산 측쇄이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 R AA1 는 CD에 직접 또는 간접적으로 결합된 라이신 측쇄이고 R AA2 및 R AA3 은 각각 라이신 및 발린 또는 발린 및 라이신 측쇄이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 α-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 β-사이클로덱스트린이다. 일부 예에서, CD는 γ-사이클로덱스트린이다. 임의의 이러한 예에서, α-, β-, 또는 γ-사이클로덱스트린은 임의로 치환된다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로,
Figure pct00388
로부터 선택되고, 여기서
Figure pct00389
는 이를 통해 CD가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자이다. 특정의 예에서, CD는
Figure pct00390
이다. 특정의 예에서, CD는
Figure pct00391
이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 -AA 2 -는
Figure pct00392
이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 스페이서 그룹은, 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m, q, 또는 e는 1이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m은 1이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 q는 1이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 e는 1이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m, q, 또는 e는 2이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m은 2이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 q는 2이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 e는 2이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m, q, 또는 e는 3이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m은 3이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 q는 3이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 e는 3이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m, q, 또는 e는 4이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 m은 4이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 q는 4이다. 상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 e는 4이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 첨자 p는 1이다.
상기한 것 중 임의의 것을 포함하는, 일부 예에서 PA는 돌라스타틴, 아우리스타틴, 마이탄시노이드, 식물 알칼로이드, 탁산, 및 빈카 알칼로이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된 그룹의 잔기이다. 일부 예에서, PA는 도 1에 제시된 임의의 화합물이다.
일부 예에서, 화학식 (II)의 화합물은:
Figure pct00393

Figure pct00394

Figure pct00395

Figure pct00396

Figure pct00397

Figure pct00398

Figure pct00399
, 또는 이의 입체이성체성 형태, 또는 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물로부터 선택된다.
일부 예에서, 본원에 제시된 화합물을 포함하는 링커-페이로드가 본원에 제시된다.
일부 예에서, 본원에 기술된 임의의 화합물의 산소 또는 1차 또는 2차 질소에 결합된 본원에 제시된 화합물을 포함하는 링커-페이로드가 본원에 제시된다.
일부 예에서, 항체, 또는 이의 항원 결합 단편에 결합된 본원에 제시된 화합물 또는 링커-페이로드를 포함하는 항체-약물-접합체가 본원에 제시된다.
화합물의 제조 방법
본원에 제공된 화합물은 당해 분야의 기술자에게 명백한 임의의 방법에 의해 제조하거나, 단리하거나, 수득될 수 있다. 예시적인 제조 방법은 하기 실시예에 상세히 기술되어 있다. 특정의 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 도 1 내지 11, 및 13 및 14에 따라 제조될 수 있다.
본원에 기술된 접합체는 본원에 기술된 링커-페이로드를 결합제, 예를 들면 항체와 표준 접합 조건하에서 커플링시킴으로써 합성할 수 있다(참고: 예컨대, Doronina et al. Nature Biotechnology 2003, 21, 7, 778, 이는 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다). 결합제가 항체인 경우, 항체는 항체의 하나 이상의 시스테인 또는 라이신 잔기를 통해 링커-페이로드에 커플링될 수 있다. 링커-페이로드는 예를 들면, 항체를 환원제, 예를 들면, 디티오트레이톨에 적용시켜, 항체의 이황화물 결합을 제거하고, 환원된 항체를 예를 들면, 겔 여과에 의해 정제하며, 후속적으로 항체를 적합한 반응성 모이어티, 예를 들면, 말레이미도 그룹을 함유하는 링커-페이로드로 처리함으로써 시스테인 잔기에 커플링시킬 수 있다. 적합한 용매는 물, DMA, DMF, 및 DMSO를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 반응성 그룹, 예를 들면, 활성화된 에스테르 또는 산 할라이드 그룹을 함유하는 링커-페이로드는 항체의 라이신 잔기에 커플링시킬 수 있다. 적합한 용매는 물, DMA, DMF, 및 DMSO를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 접합체는 공지된 단백질 기술, 예를 들면, 크기 배제 크로마토그래피, 투석, 및 초미세여과(ultrafiltration)/한외여과(diafiltration)를 사용하여 정제할 수 있다.
결합제, 예를 들면 항체는, 또한 클릭 화학 반응을 통해 접합될 수 있다. 상기 클릭 화학 반응의 일부 구현예에서, 링커-페이로드는 반응성 그룹, 예를 들면, 알킨을 포함하며, 이는 아지드와 함께 1,3-사이클로부가 반응을 겪을 수 있다. 이러한 적합한 반응성 그룹은 상기 기술되어 있다. 항체는 하나 이상의 아지드 그룹을 포함한다. 이러한 항체는 예를 들면, 아지도-폴리에틸렌 글리콜 그룹으로 작용화된 항체를 포함한다. 특정의 구현예에서, 이러한 작용화된 항체는 적어도 하나의 글루타민 잔기, 예를 들면, 중쇄 Gln295 및/또는 Gln55를 가진 항체를 효소 트랜스글루타미나제의 존재하에서 1차 아민 화합물로 처리함으로써 유래된다. 이러한 항체는 또한 Asn297Gln(N297Q) 돌연변이체를 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 이러한 작용화된 항체는 적어도 2개의 글루타민 잔기, 예를 들면, 중쇄 Gln295 및 중쇄 Gln297을 가진 항체를 효소 트랜스글루타미나제의 존재하에서 1급 아민 화합물로 처리함으로써 유래된다. 이러한 항체는 Asn297Gln(N297Q) 돌연변이체를 포함한다. 특정의 구현예에서, 항체는 총 2개 또는 총 4개의 글루타민 잔기에 대해 이러한 단락에 기술된 바와 같은 2개의 중쇄를 갖는다. 특정의 예에서, 접합될 항체는 이들의 다양한 영역내에서 하나 이상의 추가의 천연적으로 존재하는 글루타민 잔기를 포함하며, 이는 트랜스글루타미나제에 접근가능할 수 있으므로 예를 들면, Gln55에접합될 수 있다. 이러한 예에서, 트랜스글루타미나제를 통한 접합 후 항체는 4보다 더 큰 DAR 값을 가질 수 있다. 이러한 항체는 Asn297Gln(N297Q) 돌연변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 총 2개 또는 총 4개 또는 총 5개 또는 6개의 글루타민 잔기에 대해 본 단락에서 기술된 바와 같은 2개의 중쇄를 갖는다.
특정의 구현예에서, 항체는 EU 번호매김 시스템에서 295번의 하나 이상의 중쇄 위치에서 글루타민 잔기를 포함한다. 본 개시내용에서, 이러한 위치는 글루타민 295로서, 또는 Gln295로서, 또는 Q295로서 지칭된다. 기술자는 이것이 많은 항체의 야생형 서열내 보존된 글루타민 잔기임을 인식할 것이다. 다른 유용한 구현예에서, 항체는 글루타민 잔기를 포함하도록 가공될 수 있다. 글루타민 잔기를 포함하도록 항체 서열을 변형시키는 기술은 당해 분야의 기술자의 기술내에 있다(참고: 예컨대, Ausubel et al. Current Protoc. Mol. Biol.).
특정의 구현예에서, 항체는 각각의 중쇄내 하나에, 2개의 글루타민 잔기를 포함한다. 특수한 구현예에서, 항체는 각각의 중쇄내 Q295 잔기를 포함한다. 추가의 구현예에서, 항체는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8개 이상의 글루타민 잔기를 포함한다. 이러한 글루타민 잔기는 중쇄, 경쇄, 또는 중쇄 및 경쇄 둘 다내에 존재할 수 있다. 이러한 글루타민 잔기는 야생형 잔기, 또는 가공된 잔기일 수 있다. 항체는 표준 기술에 따라 제조할 수 있다. 특정의 구현예에서, 항체는 Q55 잔기를 포함하거나 추가로 포함한다.
기술자는 항체가 중쇄 서열내 잔기 Q295 근처의 잔기 N297에서 흔히 글리코실화됨을 인식할 것이다. 잔기 N297에서 글리코실화는 잔기 Q295에서 트랜스글루타미나제로 방해될 수 있다(Dennler et al., 상기 참조). 따라서, 유리한 구현예에서, 항체는 글리코실화되지 않는다. 특정의 구현예에서, 항체는 탈글리코실화되거나 아글리코실화된다. 특수한 구현예에서, 항체 중쇄는 N297 돌연변이를 갖는다. 대안적으로 기술된, 항체는 297번 위치에서 아스파라긴 잔기를 더 이상 가지지 않도록 돌연변이된다. 특수한 구현예에서, 항체 중쇄는 N297Q 돌연변이를 갖는다. 이러한 항체는 부위-지시된 돌연변이유발에 의해 글리코실화 서열을 제거하거나 불능시킴으로써 또는 부위-지시된 돌연변이 유발에 의해 임의의 방해하는 글리코실화 부위 또는 임의의 다른 방해 구조로부터 떨어진 위치에서 글루타민 잔기를 삽입시킴으로써 제조할 수 있다. 이러한 항체는 또한 천연 또는 인공 공급원으로부터 단리할 수 있다.
글리코실화를 방해하지 않는 항체는 이후에 1차 아민 화합물로 처리된다. 특정의 구현예에서, 아글리코실화된 항체는 1차 아민 화합물으로 처리함으로써 글루타미닐-변형된 항체를 생산한다. 특정의 구현예에서, 데글리코실화된 항체는 1차 아민 화합물과 반응시켜 글루타미닐-변형된 항체를 생산한다.
1차 아민은 트랜스글루타미나제의 존재하에서 글루타민 잔기와의 공유 결합을 형성할 수 있는 임의의 1차 아민일 수 있다. 유용한 1차 아민은 본원에 기술되어 있다. 트랜스글루타미나제는 당해 분야의 기술자에게 적합한 것으로 고려된 임의의 트랜스글루타미나제일 수 있다. 특정의 구현예에서, 트랜스글루타미나제는 1차 아민 화합물 상의 유리 아민 그룹과 글루타민 잔기의 측쇄 상의 아실 그룹 사이의 이소펩타이드 결합의 형성을 촉매하는 효소이다. 트랜스글루타미나제는 또한 단백질-글루타민-γ-글루타밀트랜스퍼라제로 공지되어 있다. 특수한 구현예에서, 트랜스글루타미나제는 EC 2.3.2.13으로 분류된다. 트랜스글루타미나제는 적합한 것으로 고려된 임의의 공급원으로부터 유래될 수 있다. 특정의 구현예에서, 트랜스글루타미나제는 미생물성이다. 유용한 트랜스글루타미나제는 스트렙토마이세스 모바라엔세((Streptomyces mobaraense), 스트렙토마이세스 신나모네움(Streptomyces cinnamoneum), 스트렙토마이세스 그리세오-카르네움(Streptomyces griseo-carneum), 스트렙토마이세스 라벤둘라에(Streptomyces lavendulae), 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로부터 단리된다. 비-미생물 트랜스글루타미나제, 예를 들면, 포유동물 트랜스글루타미나제를 또한 사용할 수 있다. 특정의 구현예에서, 트랜스글루타미나제는 기술의 숙련의에게 적합한 것으로 고려된 임의의 기술에 의해 생산될 수 있거나 임의의 공급원으로부터 수득될 수 있다. 특수한 구현예에서, 트랜스글루타미나제는 상업적 공급원으로부터 수득된다.
특수한 구현예에서, 1차 아민 화합물은 트랜스글루타민화 후 추가로 반응할 수 있는 반응성 그룹을 포함한다. 이러한 구현예에서, 글루타미닐-변형된 항체는 반응성 페이로드 화합물 또는 반응성 링커-페이로드 화합물과 반응시키거나 이로 처리함으로써 항체-페이로드 접합체를 형성할 수 있다. 특정의 구현예에서, 1차 아민 화합물은 본원에 기술된 바와 같은 아지드를 포함한다.
특정의 구현예에서, 글루타미닐-변형된 항체는 반응성 링커-페이로드와 반응시키거나 이로 처리함으로써 항체-페이로드 접합체를 형성한다. 반응은 당해 분야의 기술자에게 적합한 것으로 고려된 조건 하에서 진행시킬 수 있다. 특정의 구현예에서, 글루타미닐-변형된 항체는 반응성 링커-페이로드 화합물과 글루타미닐-변형된 항체와 링커-페이로드 화합물 사이에 결합을 형성하기에 적합한 조건 하에서 접촉시킨다. 적합한 반응 조건은 당해 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있다.
예시적인 반응은 하기 실시예에 제공된다.
일부 예에서, 커플링 조건 하에서 화합물을 결합제로 처리하거나 이와 접촉시킴을 포함하는 접합체의 제조 방법이 본원에 제시되어 있으며, 여기서 화합물은 적어도 하나의 페이로드 모이어티에 결합되고 공유결합성 링커를 통해 적어도 하나의 사이클로덱스트린에 연결된 반응성 링커를 포함하며, 여기서 상기 공유결합성 링커는 반응성 링커, 페이로드 모이어티, 사이클로덱스트린 모이어티 각각에 직접 또는 간접적으로 결합된다. 일부 예에서, 결합제와 반응하는 화합물은 화학식 (II)에 따르는 화합물이다:
Figure pct00400

화학식 (II)에서, RG'는 반응성 그룹이고, L은 3가 링커이며, CD는 사이클로덱스트린 잔기이고; PA는 페이로드 잔기이다.
일부 예에서, 화학식 (II)의 화합물과 반응하는 결합제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
본원의 일부 예에서, D-Lys는 도 20에 제시된 시약으로 대체될 수 있다.
일부 예에서, 사이클로덱스트린-함유 모이어티는 [3+2] 클릭 반응, 디엘스-알더 반응(Diels-Alder reaction), 환원성-아민화, 광클릭 반응(photoclick reaction), 또는 다른 반응으로부터 선택된 생물직교 반응에서 반응할 수 있다.
본원의 방법에서 사용하기에 적합한 다른 유용한 반응직교 반응은 스타우딩거 연결(Staudinger ligation), 클릭 반응, 테트라진 연결, 및 광-클릭 반응을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
다음의 참고 문헌은 본원에 제시된 생물직교 반응에 사용될 수 있는 예시적인 반응 및 시약을 나타낸다: Zheng, Mengmeng, et al., Molecules 2015, 20, 3190-3205, 이의 내용은 모든 목적을 위해 이의 전문이 참고로 본원에 포함된다.
약제학적 조성물 및 치료 방법
치료학적 또는 예방학적 유효량의 본원에 개시된 하나 이상의 화합물을 투여함을 포함하여, 질환, 상태, 또는 장애를 치료하고 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 기술자는 질환, 장애, 및/또는 상태가 본원에 나타낸 항원과 관련된 것을 포함하나, 이에 한정되지 않음을 인지할 것이다.
본원에 기술된 화합물은 단독으로 또는 하나 이상의 추가의 치료제와 함께 투여될 수 있다. 하나 이상의 추가의 치료제는 본원에 기술된 화합물의 투여 직전, 이와 동시에, 또는 이의 투여 직후에 투여될 수 있다. 본 개시내용은 또한 본원에 기술된 임의의 화합물을 하나 이상의 추가의 치료제와 함께 포함하는 약제학적 조성물, 및 이를 필요로 하는 대상체에게 이러한 조합물을 투여함을 포함하는 치료 방법을 포함한다.
적합한 추가의 치료제는 제2의 글루코코르티코이드, 자가면역 치료제, 호르몬, 생물학적, 또는 모노클로날 항체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 치료제는 또한 본원에 제시된 화합물의 임의의 약제학적으로 허용되는 염, 산, 또는 유도체를 포함한다.
본원에 기술된 방법의 일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물(또는 본원에 기술된 화합물 및 본원에 언급된 임의의 추가의 치료제를 포함하는 약제학적 조성물)의 다중 용량을 정의된 기간에 걸쳐 대상체에게 투여할 수 있다. 본 개시내용의 이러한 양태에 따른 방법은 대상체에게 본원에 기술된 화합물의 다수 용량을 연속적으로 투여함을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, "연속적으로 투여하는"은 화합물의 각각의 용량이 상이한 시점, 예컨대, 예정된 간격으로 분리된 상이한 날(예컨대, 시간, 일, 주 또는 달)에 대상체에게 투여됨을 의미한다. 본 개시내용은 환자에게 본원에 기술된 화합물의 단일 초기 용량에 이어, 화합물의 하나 이상의 제2 용량, 및 임의로 이후 화합물의 하나 이상의 제3 용량을 연속적으로 투여함을 포함하는 방법을 포함한다.
용어 "초기 용량", "제2 용량", 및 "제3 용량"은 본원에 기술된 화합물의 투여의 일시적인 순서를 지칭한다. 따라서, "초기 용량"은 치료 요법의 개시 시에 투여된 용량이며(또한 "기본선 용량"으로 지칭됨); "제2 용량"은 초기 용량 후 투여된 용량이고; "제3 용량"은 제2 용량 후 투여된 용량이다. 초기, 제2, 및 제3 용량은 모두 본원에 기술된 화합물의 동일한 양을 함유할 수 있으나, 일반적으로 투여 빈도의 측면에서 서로 상이할 수 있다. 특정의 구현예에서, 초기, 제2 및/또는 제3 용량에 함유된 화합물의 양은 치료 과정 동안 서로 변한다(예컨대, 적절하게 상향 또는 하향 조절된다). 특정의 구현예에서, 2개 이상(예컨대, 2, 3, 4, 또는 5)의 용량은 "로딩 용량(loading dose)"에 이어서 흔하지 않은 기준으로 투여된 후속적인 용량(예컨대, "유지 용량(maintenance dose)")으로서 치료요법의 개시 시에 투여된다.
본 개시내용의 특정의 예시적인 구현예에서, 각각의 제2 및/또는 제3 용량은 선행 용량 직후 1 내지 26주(예컨대, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½ 주 이상) 투여된다. 본원에 사용된 바와 같이, 어구 "선행 용량 직후"는 다수의 투여의 순서에서 개입되는 용량없이 순서에서 바로 다음 용량의 투여 전에 환자에게 투여된 화합물의 용량을 의미한다.
본 개시내용의 이러한 양태에 따른 방법은 환자에게 임의의 수의 제2 및/또는 제3 용량의 화합물을 투여함을 포함할 수 있다. 예를 들면, 특정의 구현예에서, 단일의 제2 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 구현예에서, 2회 이상(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회 이상)의 제2 용량이 환자에게 투여된다. 유사하게, 특정의 구현예에서, 단일의 제3 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 구현예에서, 2회 이상(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회 이상)의 제3 용량이 환자에게 투여된다. 투여 요법은 특정 대상체의 생애에 걸쳐, 또는 이러한 치료가 더 이상 치료학적으로 요구되거나 유리할 때까지 무한으로 수행될 수 있다.
다수의 제2 용량을 포함하는 구현예에서, 각각의 제2 용량은 다른 제2 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 제2 용량은 환자에게 선행 투여 직후 1 내지 2주 또는 1 내지 2개월 후 투여될 수 있다. 유사하게, 다수의 제3 용량을 포함하는 구현예에서, 각각의 제3 용량은 다른 제3 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 제3 용량은 환자에게 선행의 투여 직후 2 내지 12주에 투여될 수 있다. 본 개시내용의 특정의 구현예에서, 제2 및/또는 제3 용량이 환자에게 투여된 빈도는 치료 요법의 과정에 걸쳐 변할 수 있다. 투여 빈도는 또한 임상 실험 후 개개 환자의 필요성에 따라 주치의에 의한 치료 과정 동안 조절될 수 있다.
본 개시내용은 2 내지 6회의 로딩 용량이 환자에게 제1 빈도(예컨대, 주당 1회, 2주당 1회, 3주당 1회, 1개월당 1회, 2개월당 1회 등)에서 환자에게 투여하는 투여 섭생(regimen) 후, 2회 이상의 유지 용량을 환자에게 빈번하지 않은 기준으로 투여하는 투여를 포함한다. 예를 들면, 본 개시내용의 이러한 양태에 따라서, 로딩 용량이 1개월당 1회의 빈도로 투여되는 경우, 유지 용량은 환자에게 6주당 1회, 2개월당 1회, 3개월당 1회 등으로 투여될 수 있다.
본 개시내용은 본원에 기술된 화합물 및/또는 접합체, 예컨대, 화학식 I, Ia, Ib의 화합물의 약제학적 조성물, 예컨대, 본원에 기술된 화합물, 이의 염, 입체이성체, 다형체, 및 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 및/또는 부형제를 포함하는 조성물을 포함한다. 적합한 담체, 희석제 및 부형제의 예는 적절한 조성물 pH를 유지하기 위한 완충제(예컨대, 시트레이트 완충제, 석시네이트 완충제, 아세테이트 완충제, 포스페이트 완충제, 락테이트 완충제, 옥살레이트 완충제 등), 담체 단백질(예컨대, 사람 혈청 알부민, 염수, 폴리올(예컨대, 트레할로즈, 슈크로즈, 크실리톨, 소르비톨 등), 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴리옥살레이트 등), 항미생물제, 및 항산화제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 예에서, 상기 장애를 가진 환자에게 치료학적 유효량의 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ib1), (Ib2), (Ib3), (Ib4), (Ib5), (Ib6), (Ic), (Ic1), (Id), (Ie), (Ie1), (1e2), (If)의 화합물 또는 이의 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 질환, 장애 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에 제시된다.
일부 예에서, 상기 장애를 가진 환자에게 치료학적 유효량의 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ib1), (Ib2), (Ib3), (Ib4), (Ib5), (Ib6), (Ic), (Ic1), (Id), (Ie), (Ie1), (1e2), (If)의 화합물 또는 이의 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 질환, 장애 또는 상태를 예방하는 방법이 본원에 제시되어 있다.
일부 예에서, 증식성 장애, 신경변성 장애, 면역학적 장애, 자가면역 질환, 염증 장애, 피부 질환, 대사 질환, 심혈관 질환, 및 위장 질환으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 질환, 장애, 또는 상태를 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제시되어 있다.
상기 세포를 항체 약물 접합체(ADC)와 접촉시킴을 포함하여 세포내에서 LDLR(저-밀도 지단백질 수용체) 단백질 발현 또는 콜레스테롤 유출을 조절하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 ADC는 상기 세포를 표적화하는 항체, 사이클로덱스트린, 및 LXR 효능제를 포함한다.
증식성 장애는 기술자에게 공지된 임의의 증식성 장애일 수 있다. 특정의 구현예에서, 증식성 장애는 제한없이, 종양학 장애를 포함하며, 여기서 종양학 장애는 기술자에게 공지된 임의의 암 장애일 수 있다. 특정의 구현예에서, 흑색종을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 전이성 흑색종을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 폐암을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, EGFR-타이로신 키나제 억제제 내성 폐암을 치료하거나 에방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 구강 암을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 구강 편평세포 암종을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 전립선 암을 치료하거나 에방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 호지킨 임프종(Hodgkin's lymphoma)을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 유방암을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다.
신경변성 장애는 기술자에게 공지된 임의의 신경변성 장애일 수 있다. 특정의 구현예에서, 알츠하이머 질환을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 파킨슨 질환(Parkinson's disease)을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 헌팅톤 질환(Huntington's disease)을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 근위축성 측색 경화증의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 수초(myelin) 유전자 발현을 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 수초화 및 재수초화(remyelination) 상태, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다.
면역학적 장애는 기술자에게 공지된 임의의 면역학적 장애일 수 있다. 특정의 구현예에서, 염증성 창자병을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 궤양성 결장염을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 크론병(Crohn's disease)을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다.
염증성 장애는 기술자에게 공지된 임의의 염증성 장애일 수 있ㄷ. 특정의 구현예에서, 관절염의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 류마티스 관절염을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다.
대사 질환은 기술자에게 공지된 임의의 대사 장애일 수 있다. 특정의 구현예에서, 이상지질혈증은 고지질혈증, 고콜레스테롤혈증, 고트리글리세라이드혈증, 고지단백질혈증, HDL 결핍증, ApoA-I 결핍증, 및 심혈관 질환, 예를 들면, 관상 동맥 질환(예를 들면, 협심증, 심근 경색 및 급성 심장사를 포함함); 죽상경화증(예를 들면, 죽상경화증의 치료 및 예방); 및 재협착증(예를 들면, 기구 혈관 형성술(balloon angioplasty)과 같은 의학적 수술의 결과로서 발달되는 죽상경화성 플라크의 예방 또는 치료를 포함함)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정의 구현예에서, 당뇨병의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다.
심혈관 질환은 기술자에게 공지된 임의의 심혈관 질환일 수 있다. 특정의 구현예에서, 죽상경화증의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 비정상적인 대식세포 프로세싱으로부터 유래된 죽상경화증의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 산화된 저-밀도 지단백질(oxLDL)의 형성으로부터 유래된 죽상경화증의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공되며, 여기서 대식세포는 oxLDL로 프로세싱되지 않는다. 특정의 구현예에서, 허혈성 심장 질환의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 뇌졸중의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 고혈압성 심장 질환의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 대동맥류의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 심장내막염의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 말초 동맥 질환의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다. 특정의 구현예에서, 이러한 단락에 제공된 임의의 질환의 조합의 치료 또는 예방 방법이 본원에 제공된다.
일부 예에서, 핵 수용체의 기능을 조절하는 방법이 본원에 제시된다. 비-제한적 예로서, 기능은 염증성 조절인자(예컨대, 사이토킨, 케모킨)의 발현/분비, 콜레스테롤 조절, 콜레스테롤 흡수, 콜레스테롤 유출, 콜레스테롤 산화, 이주, 화학주성, 세포자멸사 및 괴사, 염증 활성, 지질 조절, 세포자멸사, 이주, 화학주성, 유전자 전사, 및 단백질 발현으로부터 선택될 수 있다.
일부 예에서, 이를 필요로 하는 환자에게 본원에 제시된 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 환자에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법이 본원에 제시된다. 일부 예에서, 투여된 화합물은 본원에 제시된 항체-약물 접합체이다.
일부 예에서, 결합제를 결합제와 화합물 사이의 결합을 형성하기에 적합한 조건 하에서 링커-페이로드 화합물을 접촉시키는 단계를 포함하는 항체-약물 접합 방법이 본원에 제시된다.
일부 예에서, 대상체에게 유효 치료량의 본원에 제시된 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 증식성 질환, 대사 질환, 염증, 또는 신경변성 질환을 치료하는 방법이 본원에 제시된다. 일부 예에서, 투여된 화합물은 본원에 제시된 항체-약물 접합체이다.
일부 예에서, 대상체에게 유효 치료량의 본원에 제시된 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에 제시된다. 일부 예에서, 투여된 화합물은 본원에 제시된 항체-약물 접합체이다.
일부 예에서, 대상체에게 유효 치료량의 본원에 제시된 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 증식 질환을 치료하는 방법이 본원에 제시된다. 일부 예에서, 투여된 화합물은 본원에 제시된 항체-약물 접합체이다.
일부 예에서, 대상체에게 유효 치료량의 본원에 제시된 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 대사 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 예에서, 투여된 화합물은 본원에 제시된 항체-약물 접합체이다.
일부 예에서, 대상체에게 유효 치료량의 본원에 제시된 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 염증을 치료하는 방법이 본원에 제시된다. 일부 예에서, 투여된 화합물은 본원에 제시된 항체-약물 접합체이다.
일부 예에서, 대상체에게 유효 치료량의 본원에 제시된 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 신경변성 질환을 치료하는 방법이 본원에 제시된다. 일부 예에서, 투여된 화합물은 본원에 제시된 항체-약물 접합체이다.
실시예
항체를 적어도 3개 유형의 페이로드와 연결시키는 사이클로덱스트린-(PEG)n 링커가 실시예에 제시되어 있다(참고: 도 1). 2개의 항체, 항-HER2 항체 및 항-PRLR(항-PRLR Ab) 항체를 접합시 사용하였다. 항체는 말레이미도-링커-페이로드(참고: 도 13)에 직접적으로 또는 아지도 작용 그룹을 통해 DIBAC-링커-페이로드에 [3+2] 클릭 반응을 통해 결합되었다(참고: 도 14).
사이클로덱스트린 모이어티가 없는 것과 비교하여, 사이클로덱스트린-(PEG)n 링커를 지닌 접합체는 보다 낮은 계산된 LogP/LogD 값, 역 HPLC에 있어서 보다 짭은 보유 시간, 및 보다 우수한 친수성을 나타내는, 보다 우수한 수 용해도를 나타내었다(표 8). 이러한 새로운 링커-페이로드는 또한 카텝신 B 검정에서 절단가능하였다(표 8). 또한, 이러한 ADC는 시험관내 검정에서 CD-모이어티가 없는 것에 대해 비교가능한 생물-활성을 나타내었다(표 10, 11, 12).
본원에 사용된 바와 같이, 본원의 공정, 및 실시예에 사용된 기호 및 관례는 현대의 과학 문헌, 예를 들면, 달리 정의하지 않는 한, Journal of the American Chemical Society 또는 the Journal of Biological Chemistry에서 사용된 것과 일치한다. 구체적으로, 제한없이, 다음의 약어가 실시예 및 명세서 전체에서 사용될 수 있다:
Figure pct00401
Figure pct00402
Figure pct00403
Figure pct00404
Figure pct00405
본 발명의 특정의 구현예가 다음의 비-제한적 실시예에 의해 나열되어 있다.
시약 및 용매는 달리 표현하여 기술하지 않는 한, 상업적 공급원, 예를 들면, Sinopharm Chemical Reagent Co. (SCRC), Sigma-Aldrich, Alfa, 또는 다른 판매회사로부터 입수하였다.
1H NMR 및 다른 NMR 스펙트럼은 Bruker AVIII 400 또는 Bruker AVIII 500에 기록하였다. 데이타는 내부 표준(예컨대, 테트라메틸실란(TMS))로부터의 다운필드(downfield)로 백만당 부의 양성자 이동을 측정하는, Nuts 소프트웨어 또는 MestReNova 소프트웨어로 가공하였다.
HPLC-MS 측정은 다음 조건을 사용하여 Agilent 1200 HPLC/6100 SQ 시스템에서 진행하였다.
HPLC-MS 측정을 위한 방법 A는 이동 상으로서: A: 물(0.01% 트리플루오로아세트산(TFA)), B: 아세토니트릴(0.01% TFA); 구배 상: 5%의 B는 15분(min) 내에 95%의 B로 증가하였다; 유동 속도: 1.0 mL/min; 컬럼: SunFire C18, 4.6x50 mm, 3.5 μm; 컬럼 온도: 50℃. 검출기: 아날로그 대 디지탈 전환기(Analog to Digital Converter: ADC) 증발 광-산란 검출기(ELSD), 다이오드 배열 검출기(DAD)(214 nm 및 254 nm), 전자분무 이온화-대기 이온화(ES-API)를 포함하였다.
HPLC-MS 측정을 위한 방법 B는 이동상으로서: A: 물(10 mM NH4HCO3), B: 아세토니트릴; 구배 상: 15분 내에 5%에서 95%의 B로; 유동 속도: 1.0 mL/min; 컬럼: XBridge C18, 4.6x50 mm, 3.5 μm; 컬럼 온도: 50℃. 검출기: ADC ELSD, DAD (214 nm 및 254 nm), 질량 선택적 검출기(MSD)(ES-API)를 포함하였다.
LC-MS 측정은 다음의 조건을 사용하여 Agilent 1200 HPLC/6100 SQ 시스템에서 수행하였다.
LC-MS 측정을 위한 방법 A는 장치로서: WATERS 2767; 컬럼: Shimadzu Shim-Pack, PRC-ODS, 20x250mm, 15 μm, 2개는 직렬로 연결되어 있다; 이동 상: A: 물(0.01% TFA), B: 아세토니트릴(0.01% TFA); 구배 상: 3분내에 5%의 B가 95%의 B로 증가함; 유동 속도: 1.8 내지 2.3 mL/min; 컬럼: SunFire C18, 4.6x50 mm, 3.5 μm; 컬럼 온도: 50℃. 검출기: ADC ELSD, DAD(214 nm 및 254 nm), ES-API를 포함하였다.
LC-MS 측정을 위한 방법 B는, 장치로서: Gilson GX-281; 컬럼: Xbridge Prep C18 10 μm OBD, 19x250 mm; 이동 상: A: 물(10 mM NH4HCO3), B: 아세토니트릴; 구배 상: 3분내에 5%에서 95%의 B; 유동 속도: 1.8 내지 2.3 mL/min; 컬럼: XBridge C18, 4.6x50 mm, 3.5 μm; 컬럼 온도: 50℃. 검출기: ADC ELSD, DAD(214 nm 및 254 nm), MSD (ES-API).
산성(방법 A) 또는 염기성(방법 B) 용매 시스템 중 제조 고-압 액체 크로마토그래피(Prep-HPLC)를 Gilson GX-281 장치에서 이용하였다. 산성 용매 시스템은 Waters SunFire 10 μm C18 컬럼(100 Å, 250 x 19 mm)을 사용하였고, 제조-HPLC에 대한 용매 A는 물/0.05% TFA이었고 용매 B는 아세토니트릴이었다. 용출 조건은 30mL/min의 유동 속도에서 20분의 기간에 걸쳐 5% 내지 100%의 용매 B의 선형 구배 증가이었다. 염기성 용매 시스템은 Waters Xbridge 10 μm C18 컬럼(100 Å, 250 x 19 mm)을 포함하였고, 제조-HPLC에 사용된 용매 A는 물/10 mM 중탄산암모늄(NH4HCO3)이었고 용매 B는 아세토니트릴이었다. 용출 조건은 30 mL/min의 유동 속도에서 20분의 기간에 걸쳐 5% 내지 100%의 용매 B의 선형 구배 증가이었다.
섬광 크로마토그래피는 아젤라 플래쉬 컬럼 실리카(Agela Flash Column silica)-CS 카트릿지가 장착된 Biotage 장치이었고; 역상 섬광 크로마토그래피는 보스톤(Boston) ODS 또는 아젤라(Agela) C18 카트릿지가 장착된 Biotage 장치에서 수행하였다.
[표 1]
Figure pct00406
[표 2A]
Figure pct00407
Figure pct00408
Figure pct00409
Figure pct00410
Figure pct00411
Figure pct00412
Figure pct00413
Figure pct00414
Figure pct00415
[표 2B]
Figure pct00416
[표 3A]
Figure pct00417
[표 3B]
Figure pct00418
Figure pct00419
실시예 1 내지 6은 다른 것들 중에서 본원에 기술된 링커, 링커-페이로드, 및/또는 접합체의 합성에 대한 합성 중간체용으로 유용한 특정 화합물의 제조를 기술한다.
실시예 1
중간체 5a의 제조(참고: 도 2)
(2 R )-6-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4,6,8,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1 H -피롤-1-일)헥산아미도]헥산산(5a)
DMF(10 mL) 중 H-D-Lys(Boc)-OH(11a, 0.25 g, 1.0 mmol)의 혼합물에 6-말레이미도카프로산-NHS(10a, 0.31 g, 1.0 mmol) 및 DIPEA(0.26 g, 2.0 mmol)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 화합물 11a가 완전히 소비될 때까지 교반하고, 이를 LCMS로 모니터링하였다. 혼합물을 역상 섬광 크로마토그래피(수중 0 내지 100% 아세토니트릴(0.05% TFA))로 분리하여 중간체 Boc-12a(ESI m/z: 440 (M + H)+)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 DCM(5 mL) 속에 용해하였다. 이 용액에 TFA(0.5 mL)를 0℃에서 적가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응은 중간체 Boc-12a가 완전히 소비될 때까지 LCMS로 모니터링하였다. 휘발물을 진공하에 제거하여 조 화합물 12a(ESI m/z: 340 (M/2 + H)+)를 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. DMF(5 mL) 중 조 화합물 12a(0.21 g, 0.62 mmol)의 혼합물에 활성화된 에스테르 10b(0.20 g, 0.50 mmol) 및 DIPEA(50 mg, 0.39 mmol)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 화합물 12a를 완전히 소비시키고, 이를 LCMS로 모니터링하였다. 이후에, 반응 혼합물을 역상 섬광 크로마토그래피(수중 0 내지 100% 아세토니트릴)로 직접 분리하여 화합물 5a(0.10 g, 10a로부터 3 단계로 20% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 627 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 400 MHz): δ 7.89 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 7.69-7.62 (m, 3H), 7.48-7.47 (m, 3H), 7.36-7.28 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 5.03 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.09-4.04 (m, 1H), 3.60 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.38-3.34 (m, 1H), 2.90-2.87 (m, 2H), 2.61-2.55 (m, 1H), 2.25-2.17 (m, 1H), 2.08-1.51 (m, 5H), 1.46-1.15 (m, 12H) ppm.
실시예 2
중간체 5b의 제조(참고: 도 2).
(2 S )-6-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4,6,8,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1 H -피롤-1-일)헥산아미도]헥산산(5b)
H-d-Lys(Boc)-OH(11a)를 H-L-Lys(Boc)-OH(11b)로 대체시키는 것을 제외하고는, 중간체 5a에 대해 실시예 1에서의 과정에 따라, 중간체 5b를(0.16 g, 11b로부터 19%의 수율) 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 627 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 400 MHz) δ 7.94-7.15 (m, 10H), 6.99 (s, 2H), 5.02 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.09-4.04 (m, 1H), 3.60 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.38-3.34 (m, 1H), 2.91-2.86 (m, 2H), 2.58-2.54 (m, 1H), 2.23-2.18 (m, 1H), 2.07-2.04 (m, 2H), 1.98-1.92 (m, 1H), 1.77-1.73 (m, 1H), 1.63-1.58 (m, 1H), 1.47-1.12 (m, 12H) ppm.
실시예 3
중간체 5c의 제조(참고: 도 2).
(2 R )-2-아미노-6-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4,6,8,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)헥산산(12c)
무수 DMF(3.0 mL) 중 상업적으로 이용가능한 H-D-Lys(Fmoc)-OH(11c, 0.55 g, 1.5 mmol)의 혼합물에 DIPEA(0.38 g, 3.0 mmol) 및 화합물 10b(참고: Accounts of Chemical Research, 2011, 805-815)(0.60 g, 1.5 mmol)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 수득되는 용액을 실온에서 2시간 동안 LCMS에 의해 모니터링되는 바와 같이, 화합물 11c가 완전히 소비될 때까지 교반하였다. 이후에, 혼합물을 역상 섬광 크로마토그래피(수중 0 내지 80% 아세토니트릴)로 정제하여 중간체 Fmoc-12c(0.48 g, 49% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 656.3(M + H)+. DMF(3 mL) 중 중간체 Fmoc-12c(0.15 g, 0.23 mmol)의 혼합물에 디에틸아민(0.1 mL)을 가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하면 LCMS는 Fmoc-12c가 완전히 소비되었음을 나타내었다. 혼합물을 여과하고 여액을 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 화합물 12c(42 mg, 42% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 434 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 400 MHz) δ 7.71-7.60 (m, 3H), 7.50-7.42 (m, 3H), 7.39-7.27 (m, 3H), 5.02 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.60 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.08-3.07 (m, 1H), 2.89-2.88 (m, 2H), 2.61-2.52 (m, 1H), 2.25-2.17 (m, 1H), 2.00-1.96 (m, 1H), 1.80-1.72 (m, 1H), 1.65-1.62 (m, 1H), 1.52-1.44 (m, 1H), 1.23-1.21 (m, 5H) ppm.
(2 R )-6-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4,6,8,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-2-[1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1 H -피롤-1-일)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]헥산산(5c)
DMF(2 mL) 중 화합물 12c(40 mg, 92 μmol)의 혼합물에 DMF 중 화합물 4d(41 mg, 0.11 mmol) 및 TEA(18 mg, 0.18 mmol)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, LCMS에 의해 모니터링된 바와 같이, 대부분의 화합물 4d가 소비되었다. 이후에 수득되는 혼합물을 역상 섬광 크로마토그래피(수중 0 내지 100% 아세토니트릴)로 직접 분리하여 중간체 5c(33 mg, 47% 수율)를 담황색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 761 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.96 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 7.69-7.62 (m, 3H), 7.51-7.30 (m, 6H), 7.02 (s, 2H), 5.04 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 4.06 (m, 1H), 3.62-3.46 (m, 18H), 2.89 (m, 2H), 2.63-2.57 (m, 4H), 2.39-2.19 (m, 3H), 2.01-1.20 (m, 6H) ppm.
실시예 4
중간체 6b의 제조(참고: 도 3).
[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,1 6.2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸-4-메틸벤젠-1-설포네이트(14) 2 .
무수 피리딘(Py)(0.32 L) 중 α-사이클로덱스트린(13, 10 g, 10 mmol)의 용액에 4-톨루엔설포닐 클로라이드(TsCl)(20 g, 0.10 mol)를 실온에서 가하였다. 혼합물을 당해 온도에서 15분 동안 교반하고 물(60 mL)로 즉시 퀀칭(quenching)시켰다. 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 휘발물(피리딘 및 물)을 제거하였다. 잔사를 역상 섬광 크로마토그래피(수중 0 내지 25%의 아세토니트릴)로 정제하여 생성물 14(1.1 g, 10% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1127 (M + H)+.
5,10,15,20,25-펜타키스(하이드록시메틸)-30-(피페라진-1-일메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .28 ,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데콜(6b)
피페라진(1.7 g, 20 mmol) 중 화합물 14(1.2 g, 1.0 mmol)의 혼합물을 밀봉하고 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 DMF(3 mL) 및 아세토니트릴(30 mL)로 희석시켰다. 침전물을 여과로 수집하고, 조 생성물(crude product)을 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 중간체 6b(0.32 g, 30% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1041 (M + H)+.
실시예 5
중간체 7a의 제조(참고: 도 4).
(2 R )-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]-2-{[(9 H -플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노}헥산산(7a)
DMF(2 mL) 중 시판되는 화합물 17(65 mg, 0.23 mmol, CAS: 1425803-45-7)의 혼합물에 Fmoc-D-Lys-OH(15a, 85 mg, 0.23 mmol) 및 트리에틸아민(52 mg, 0.51 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 역상 섬광 크로마토그래피(수중 0 내지 100% 아세토니트릴(0.05% TFA))로 직접 분리하여 중간체 7a(85 mg, 70% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 533 (M + H)+. 1H NMR (MeOD d4 , 500 MHz): δ 7.70 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.59 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.30 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.22 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 4.35-4.22 (m, 2H), 4.22-4.09 (m, 2H), 4.09-3.99 (m, 1H), 3.94-3.81 (m, 1H), 3.79-3.67 (m, 1H), 3.15 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.17-1.96 (m, 3H), 1.96-1.86 (m, 1H), 1.85-1.66 (m, 4H), 1.66-1.41 (m, 5H), 1.41-1.25 (m, 3H) ppm.
실시예 6
중간체 7b의 제조(참고: 도 4).
( R )-26-(((9 H -플루오렌-9-일)메톡시)카보닐아미노)-2,2-디메틸-4,20-디옥소-3,8,11,14,17-펜타옥사-5,21-디아자헵타코산-27-오산(oic acid)(16)
DMF(10 mL) 중 화합물 10c(4.6 g, 10 mmol, CAS: 859230-20-9)의 혼합물에 15a(3.6 g, 10 mmol) 및 트리에틸아민(2.0 g, 20 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 TLC에 의해 모니터링된 화합물 15a가 완전히 소비될 때까지 1시간 동안 밤새 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 희석시키고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 5% 메탄올)로 정제하여 16(5.5 g, 77% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 716.2 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 500 MHz) δ 7.89 (d, J =7.5 Hz, 2H), 7.84-7.80 (m, 1H), 7.74-7.72 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.61-7.59 (m, 1H), 7.42 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.33 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 6.76-6.74 (m, 1H), 4.28-4.21 (m, 3H), 3.93-3.85 (m, 1H), 3.58 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.48-3.47 (m, 12H), 3.16 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 3.07-2.97 (m, 3H), 2.28 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.02-1.94 (m, 1H), 1.71-1.56 (m, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.23-1.15 (m, 6H) ppm.
(24 R )-24-(((9 H -플루오렌-9-일)메톡시)카보닐아미노)-1-(사이클로옥트-2-인일옥시)-2,18-디옥소-6,9,12,15-테트라옥사-3,19-디아자펜타코산-25-오산(7b)
DCM(10 mL) 중 화합물 16(0.60 g, 0.84 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산(2.0 mL)을 0℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 가온시키고 25℃에서 밤새 화합물 16이 완전히 소비될 때까지 교반하고, 이를 LCMS(ESI m/z: 616.3 (M + H)+)로 모니터링하였다. 휘발물을 진공하에 제거하여 조 화합물 15b를 수득하고 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.
15a를 15b로 대체시키는 것을 제외하고는 중간체 7a를 제조하기 위한 실시예 5에서의 과정에 따라서 표제 화합물 7b를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 5% 메탄올)에 의한 정제 후 무색 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 780.3 (M + H)+. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.75 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.61 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.39 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.32-7.27 (m, 2H), 7.05-7.01 (m, 1H), 6.86-6.83 (m, 1H), 5.85 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.38 -4.37 (m, 3H), 4.27-4.15 (m, 2H), 4.11-4.05 (m, 1H), 3.91-3.87 (m, 1H), 3.69 (t, J = 5.6 Hz, 2H),3.62-3.47 (m, 17 H), 3.28-3.19 (m, 2H), 2.46 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.27-2.01 (m, 3H), 1.91-1.72 (m, 5H), 1.66-1.55 (m, 4H), 1.42-1.34 (m, 3H) ppm.
실시예 7
일반적인 과정 A(참고: 도 5):
DMF 중 Fmoc-vc-PAB-PNP(2a, 0.68-1.0 당량) 및 화합물 1(1e, 1f, 1g, 1h, 1i 또는 1m, 1.0 당량)의 용액에 DIPEA(5 당량)를 실온에서 주사기로 가하였다. 혼합물을 25℃에서 16 내지 24시간 동안 교반하고 대부분의 2a를 LCMS에 따라 소비시켰다. 수득되는 혼합물에 피페리딘(0.1 내지 1 mL, 과량)을 가하고 이를 25℃에서 2시간 동안 Fmoc가 완전히 제거될 때까지 교반하고, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 막을 통해 여과한 후, 여액을 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 화합물 3(32 내지 73% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 표 4는 화합물 3e-3g, 3H 및 3I를 제조하기 위한 특정 반응 조건을 제공한다.
[표 4]
Figure pct00420
실시예 8
일반적인 과정 B(참고; 도 6):
DMF(또는 8a의 경우 DCM/THF) 중 산(Fmoc-Val-Ala-OH(2b), Fmoc-dLys(COT)-OH(7a) 또는 Fmoc-dLys(PEG4-COT)-OH(7b), 1.0-1.8 당량)의 용액에 HATU(1.0-2.8 당량) 및 DIPEA 또는 TEA(2.0 내지 5.0 당량)를 25℃에서 가하였다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반한 후, DMF(1 mL) 중 아민(1b-d, 1i 또는 3a-I, 1.0 당량)의 용액을 주사기로 가하였다. 수득되는 혼합물을 25℃에서 2 내지 24시간 동안 아민이 LCMS에 따라서 대부분 소비될 때까지 교반하였다. 이어서 혼합물에 피페리딘 또는 디에틸아민(과량)을 가하고, 혼합물을 25℃에서 1 내지 20 시간 동안 Fmoc가 완전히 제거될 때까지 교반하고, 이를 LCMS로 모니터링하였다. 반응 혼합물을 막을 통해 여과하고 여액을 제조-HPLC(방법 B) 또는 역상 섬광 크로마토그래피로 정제하여 화합물 3b-d 또는 8a-J(23 내지 80% 수율)을 무색 고체로서 수득하였다.
[표 5]
Figure pct00421
실시예 9
화합물 3a의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트(3a)
(참고: 본원에 이의 전문이 참고로 포함된, 제WO2012/166560호)
25 mL의 환저 플라스크에 Fmoc-vc-PAB-PNP(2a)(0.33 g, 0.43 mmol) 및 무수 DMF(5 mL)를 가하였다. 당해 용액에 MMAE(1a, 0.21 g, 0.21 mmol)를 가하고, HOBt(38 mg, 0.28 mmol) 및 DIPEA(74 mg, 0.57 mmol)를 25℃에서 연속적으로 가하였다. 혼합물을 25 내지 30℃에서 16시간 동안 MMAE가 LCMS에 따라 완전히 소비될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 막을 통해 여과하고 여액을 제조-HPLC(방법 A)로 정제하여 Fmoc-3a를 백색 고체로서 수득하고, 이를 DMF(5 mL) 속에 용해하였다. 당해 용액에 디에틸아민(0.3 mL)을 가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 Fmoc가 LCMS에 따라 제거될 때까지 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 막을 통해 여과하고 여액을 제조-HPLC(방법 A)로 정제하여 vcPAB-MMAE(3a)(0.20 g, 58% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 562.5 (M/2 + H)+.
실시예 10
화합물 3b의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
(2 S )-2-아미노- N -[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]-3-메틸부탄아미드(3b)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 3b(60 mg, 23% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 692 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.90-8.77 (m, 1H), 7.87 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.48-7.36 (m, 2H), 7.26-7.20 (m, 1H), 6.88-6.81 (m, 2H), 6.30-6.25 (m, 1H), 6.05-6.00 (m, 1H), 5.21-5.17 (m, 1H), 5.06-5.00 (m, 0.5H), 4.96-4.90 (m, 1H), 4.73-4.54 (m, 2.5H), 4.53-4.46 (m, 1H), 3.33-3.28 (m, 1H), 2.95-2.90 (m, 1H), 2.62-2.52 (m, 1H), 2.39-2.28 (m, 2H), 2.22-2.03 (m, 4H), 1.85-1.51 (m, 10H), 1.48-1.34 (m, 5H), 1.21-1.10 (m, 2H), 1.03-0.89 (m, 9H), 0.86-0.75 (m, 3H) ppm.
실시예 11
화합물 3c의 제조(참고: 도 6 및 표 5)
(2 S )-2-아미노- N -[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]-3-메틸부탄아미드(3c)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 3c(36 mg, 28% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 692 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.94-8.83 (m, 1H), 7.93-7.84 (m, 1H), 7.49-7.38 (m, 2H), 7.24 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.89-6.80 (m, 2H), 6.30-6.24 (m, 1H), 6.03 (s, 1H), 4.99-4.88 (m, 2H), 4.74-4.55 (m, 3H), 4.51 (s, 1H), 3.31 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 3.02-2.96 (m, 1H), 2.62-2.52 (m, 1H), 2.38-2.28 (m, 2H), 2.21-2.03 (m, 4 H), 1.80-1.55 (m, 10H), 1.48-1.38 (m, 5 H), 1.21-1.09 (m, 2H), 1.03-0.92 (m, 9H), 0.86-0.76 (m, 3H) ppm.
실시예 12
화합물 3d의 제조 (참고: 도 6 및 표 5).
(1 S ,4a S ,10a R )-6-(( S )-2-(( S )-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)- N -((1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐)-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복스아미드(3d)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 3d(0.88 g, 67% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 699 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 8.40 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 8.3, 2.4 Hz, 1H), 4.60-4.48 (m, 1H), 3.22-3.11 (m, 1H), 3.02-2.93 (m, 1H), 2.92-2.76 (m, 3H), 2.74-2.70 (m, 1H), 2.43-2.31 (m, 3H), 2.28 (d, J = 14.1 Hz, 3H), 2.16-1.96 (m, 3H), 1.81 (s, 1H), 1.78-1.65 (m, 4H), 1.53-1.42 (m, 4H), 1.38 (d, J = 5.3 Hz, 6H), 1.33-1.22 (m, 2H), 1.14 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 1.09 (d, J = 18.6 Hz, 6H) ppm.
실시예 13
화합물 3e의 제조(참고: 도 5 및 표 4).
4-(( S )-2-(( S )-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 2-((4b S ,8 S ,8a R )-8-((1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐카바모일)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일옥시)에틸카바메이트(3e)
일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 3e(14 mg, 68% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 978 (M + 1)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 10.22 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.71 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.12 (s, 2H), 7.59 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.42 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.84-6.76 (m, 2H), 6.67 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.51 (dd, J = 8.1, 2.0 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.52 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.51 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 3.92 (s, 2H), 3.66 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 3.32 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.13-2.63 (m, 6H), 2.26 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.22-2.03 (m, 4H), 1.89-1.82 (m, 4H), 1.79-1.69 (m, 1H), 1.68-1.53 (m, 4H), 1.46-1.40 (m, 2H), 1.27 (d, J = 3.3 Hz, 8H), 1.19-1.08 (m, 4H), 1.03-0.89 (m, 12H) ppm.
실시예 14
화합물 3f의 제조(참고: 도 5 및 표 4).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -({[(4b S ,8 S ,8a R )-8-{[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐]카바모일}-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}메틸)카바메이트(3f)
일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 3f(85 mg, 32% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 991 (M + 1)+. 1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 8.40 (s, 1H, NH of imidine), 7.58 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.37 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.30 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 8.2, 2.5 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.66-4.52 (m, 1H), 3.92 (s, 2H), 3.75 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 3.26-2.75 (m, 6H), 2.42-2.22 (m, 7H), 2.14-1.59 (m, 11H), 1.40 (t, J = 15.9 Hz, 8H), 1.34-1.27 (m, 3H), 1.16-1.12 (m, 6H), 1.10 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.07 (d, J = 6.9 Hz, 3H) ppm.
실시예 15
화합물 3g의 제조(참고: 도 5 및 표 4).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}-2-하이드록시에틸]카바메이트(3g)
일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 3g(22 mg, 40% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1021 (M + 1)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 10.02 (s, 1H), 9.82 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.69-8.65 (m, 1H), 8.11-8.00 (m, 4H), 7.65-7.53 (m, 3H), 7.40-7.30 (m, 3H), 7.30-7.20 (m, 1H), 6.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.65-6.61 (m, 1H), 6.50 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.00-5.95 (m, 1H), 5.48 (s, 2H), 5.00-4.95 (m, 3H), 4.60-4.40 (m, 1H), 4.25-4.20 (m, 1H), 3.65-3.55 (m, 4H), 3.15-2.55 (m, 10H), 2.40-2.20 (m, 3H), 2.20-2.00 (m, 5H), 2.00-1.80 (m, 4H), 1.86-1.55 (m, 6H), 1.27 (d, J = 4.8 Hz, 9H), 1.20-1.10 (m, 2H), 0.97-0.90 (m, 6H) ppm.
실시예 15-A
화합물 3H의 제조 - 참고: 도 5 및 표 4
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바메이트(3H)
Figure pct00422
실시예 7에 기술된 일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 3H(127 mg, 73% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 871 (M + 1)+.
실시예 15-B
화합물 3I의 제조 - 참고: 도 5 및 표 4.
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-아미노-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트 (3I)
Figure pct00423
실시예 7에 기술된 일반적인 과정에 따라서, 화합물 3I(80 mg, 64% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 963 (M + 1)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 10.22 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 8.69 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.08 (s, 3H), 7.61 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.22-7.00 (m, 1H), 6.84 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 6.30 (dd, J = 8.0 Hz, 1.6Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.10-6.00 (m, 1H), 5.72-5.55 (m, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.16-5.05 (m, 3H), 4.88-4.80 (m, 1H), 4.80-4.76 (m, 1H), 4.75-4.70 (m, 1H), 4.55-4.48 (m, 1H), 4.25-4.20 (m, 1H), 3.70-3.60 (m, 1H), 3.12-2.90 (m, 2H), 2.70-2.55 (m, 1H), 2.40-2.20 (m, 1H), 2.15-2.00 (m, 3H), 1.86-1.75 (m, 1H), 1.75-1.65 (m, 1H), 1.64-1.54 (m, 5H), 1.49 (s, 4H), 1.46-1.34 (m, 4H), 0.97-0.91 (m,5H), 0.90-0.85 (m, 4H), 0.85-0.80 (m, 3H) ppm.
실시예 15-C
화합물 3J의 제조 - 참고: 도 6
(2 S )-2-아미노- N -[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]-3-메틸부탄아미드 TFA 염(3J)
Figure pct00424
DMF(15 mL) 중 Boc-Val-Ala-OH(2d, 0.31 g, 1.1 mmol)의 용액에 HATU(0.48 g, 1.3 mmol) 및 DIPEA(0.35 g, 2.7 mmol)를 10℃에서 가하였다. 혼합물을 10℃에서 30분 동안 교반한 후, 아민(1i, 0.50 g, 0.90 mmol)을 혼합물에 가하였다. 반응 혼합물을 아민이 완전히 소비될 때까지 10℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 퀀칭시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 용액을 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 중 50% 에틸 아세테이트)로 정제하여 Boc-3J를 수득하고, 이를 DCM(9 mL) 속에 용해하였다. 용액에 TFA(3 mL)를 10℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 10℃에서 2시간 동안 교반한 후 진공하에 농축시켜 화합물 3J(0.53 g, 84% 수율)를 TFA 염으로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 728 (M + 1)+.
실시예 16
화합물 8a의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트 (8a)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 8a(17 mg, 35% 수율)를 역상 섬광 크로마토그래피(수 중 0 내지 100% 아세토니트릴(0.05% TFA))로 정제한 후 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1415 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 400 MHz) δ 10.09-10.02 (m, 1H), 8.54 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.38 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.35-8.26 (m, 0.5H), 8.12-8.02 (m, 3H), 7.94-7.85 (m, 0.5H), 7.66-7.54 (m, 3H), 7.34-7.23 (m, 6H), 7.20-7.13 (m, 1H), 6.08-5.97 (m, 1H), 5.54-5.37 (m, 3H), 5.13-4.94 (m, 2H), 4.52-4.21 (m, 6H), 4.03-3.70 (m, 4H), 3.63-3.51 (m, 1H), 3.25-3.17 (m, 8H), 3.13-2.82 (m, 10H), 2.31-1.91 (m, 10H), 1.85-1.64 (m, 9H), 1.64-1.25 (m, 15H), 1.07-0.96 (m, 6H), 0.90-0.74 (m, 26H) ppm.
실시예 17
화합물 8b의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
(2 R )-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]헥산아미드(8b)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 8b(50 mg, 49% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 984 (M + 1)+.
실시예 18
화합물 8c의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
(2 R )-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]헥산아미드 (8c)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 8c(80 mg, 56% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 984 (M + 1)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 10.08 (s, 0.5H), 9.46 (s, 0.5H), 8.43 (d, J = 7.5 Hz, 0.5H), 8.22 (d, J = 7.0 Hz, 0.5H), 8.07-7.91 (m, 1H), 7.61 (dd, J = 13.1, 6.2 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 6.18 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.10 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 4.85-4.66 (m, 4H), 4.46-4.08 (m, 4H), 3.85-3.17 (m, 3H), 3.09-3.00 (m, 2H), 2.40-1.69 (m, 15H), 1.66-1.48 (m, 8H), 1.45-1.15 (m, 15H), 1.05-0.94 (m, 2H), 0.91-0.79 (m, 12H) ppm.
실시예 19
화합물 8d의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
(1 S ,4a S ,10a R )-6-((2 S )-2-((2 S )-2-((2 R )-2-아미노-6-(2-(사이클로옥트-2-인일옥시)아세트아미도)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)- N -((1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐)-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복스아미드(8d)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 8d(30 mg, 47% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 991 (M + 1)+. 1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 7.51 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 8.3, 2.5 Hz, 1H), 4.64-4.57 (m, 1H), 4.48 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.33-4.27 (m, 1H), 4.20 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.93 (m, 2H), 3.43 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.24 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.02-2.93 (m, 2H), 2.92-2.76 (m, 3H), 2.40-2.32 (m, 2H), 2.33-2.23 (m, 4H), 2.22-2.12 (m, 3H), 2.12-2.00 (m, 5H), 1.99-1.91 (m, 1H), 1.91-1.81 (m, 2H), 1.78-1.66 (m, 6H), 1.66-1.58 (m, 1H), 1.58-1.49 (m, 2H), 1.45 (d, J = 7.1 Hz, 6H), 1.38 (d, J = 4.0 Hz, 6H), 1.34-1.22 (m, 4H), 1.14 (d, J = 7.0 Hz, 6H), 1.06-0.98 (m, 6H) ppm.
실시예 20
화합물 8e의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -({[(4b S ,8 S ,8a R )-8-{[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐]카바모일}-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}메틸)카바메이트 (8e)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 8e(65 mg, 62% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1283 (M + 1)+. 1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 7.53-7.33 (m, 3H), 7.28-7.14 (m, 3H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 8.3, 2.5 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.53-4.46 (m, 2H), 4.41 (dd, J = 8.9, 5.0 Hz, 1H), 4.18 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.09 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 3.92-3.72 (m, 4H), 3.31 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.16-3.05 (m, 3H), 3.06-2.97 (m, 1H), 2.90-2.62 (m, 4H), 2.27-2.09 (m, 7H), 2.09-1.87 (m, 7H), 1.86-1.68 (m, 4H), 1.66-1.40 (m, 12H), 1.36-1.22 (m, 10H), 1.20-1.09 (m, 3H), 1.01 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 6H) ppm.
실시예 21
화합물 8f의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}-2-하이드록시에틸]카바메이트 (8f)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 8f (15 mg, 33% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1313.6 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 7.59 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.36-7.26 (m, 3H), 7.01 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.72-6.71 (m, 1H), 6.57-6.54 (m, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.64-4.52 (m, 1H), 4.35-4.28 (m, 2H), 4.21 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.01-3.98 (m, 1H), 3.88-3.84 (m, 3H), 3.43 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 3.26-3.10 (m, 4H), 3.00-2.76 (m, 3H), 2.38-2.24 (m, 7H), 2.19-2.02 (m, 9H), 1.98-1.78 (m, 4H), 1.74-1.54 (m, 12H), 1.45-1.26 (m, 14H), 1.13 (s, 6H), 1.00 (t, J = 7.5 Hz, 6H) ppm.
실시예 22
화합물 8g의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-{1-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트 (8g)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 8g(17 mg, 43% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 832.2 (M/2 + H)+. 1H NMR (메탄올 d4 , 500 MHz): δ 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.41-7.30 (m, 6H), 7.25-7.22 (m, 1H), 5.23-5.08 (m, 2H), 4.78-4.50 (m, 3H), 4.33-4.10 (m, 5H), 4.04-3.88 (m, 2H), 3.74 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 3.65-3.57 (m, 15H), 3.46-3.29 (m, 9H), 3.24-3.12 (m, 6H), 3.01-2.88 (m, 3H), 2.56-2.44 (m, 4H), 2.30-2.10 (m, 6H), 2.07-1.67 (m, 14H), 1.63-1.32 (m, 13H), 1.21-1.13 (m, 6H), 1.07 -0.78 (m, 26H) ppm.
실시예 23
화합물 8h의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
N -[(5 R )-5-아미노-5-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-{[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐]카바모일}-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}펜틸]-1-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드(8h)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 8h(54 mg, 50% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 620 (M/2 + 1)+. 1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 7.61-7.48 (m, 1H), 7.35-7.29 (m, 1H), 7.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 4.52-4.44 (m, 1H), 4.27 (dd, J = 21.9, 7.2 Hz, 2H), 4.03 (dd, J = 15.1, 2.4 Hz, 1H), 3.96 (dt, J = 22.5, 6.5 Hz, 1H), 3.89 (dd, J = 15.1, 3.1 Hz, 1H), 3.75 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.64 (t, J = 8.6 Hz, 12H), 3.60-3.54 (m, 3H), 3.44 (dd, J = 11.7, 5.9 Hz, 2H), 3.23 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.02-2.91 (m, 1H), 2.91-2.74 (m, 3H), 2.46 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.40-2.31 (m, 3H), 2.26-2.22 (m, 5H), 2.21-1.79 (m, 12H), 1.77-1.65 (m, 6H), 1.62-1.53 (m, 3H), 1.47-1.43 (m, 5H), 1.38 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.33-1.22 (m, 3H), 1.14 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.06-0.95 (m, 6H) ppm.
실시예 24
화합물 8i의 제조(참고: 도 6 및 표 5).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-{1-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(2-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]옥시}에틸)카바메이트 (8i)
일반적인 과정 B에 따라서, 화합물 8i (40 mg, 30% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 759 (M/2 + 1)+, 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 10.01 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.24-8.09 (m, 1H), 8.06-7.74 (m, 1H), 7.64-7.36 (m, 3H), 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.68 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.51 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 6.00 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.39 (s, 1H), 4.28-2.21 (m, 2H), 4.05 (s, 2H), 3.93 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.86-3.79 (m, 2H), 3.59 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.53-3.47 (m, 11H), 3.43 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.36 (s, 6H), 3.24 (dt, J = 12.8, 6.1 Hz, 3H), 3.10-2.91 (m, 4H), 2.85 (t, J = 17.2 Hz, 2H), 2.75-2.69 (m, 2H), 2.34-2.10 (m, 10H), 2.10-1.66 (m, 12H), 1.67-1.54 (m, 8H), 1.47-1.24 (m, 16H), 1.14 (t, J = 13.3 Hz, 2H), 1.01 (d, J = 11.8 Hz, 6H), 0.88(s, 3H) 0.84 (s, 3H) ppm.
실시예 24A
화합물 8J의 제조 - (참고: 도 6 및 표 5)
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바메이트 (8J)
Figure pct00425
실시예 8에 기술된 일반적인 과정에 따라서, 화합물 8J(120 mg, 52% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1163 (M + 1)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 7.65-7.55 (m, 2H), 7.40-7.26 (m, 3H), 6.39-6.27 (m, 2H), 5.65-5.45 (m, 1H), 5.13-5.01 (m, 2H), 4.71-4.50 (m, 2H), 4.40-4.14 (m, 4H), 4.11-3.82 (m, 3H), 3.46-3.39 (m, 1H), 3.29-3.09 (m, 4H), 2.76-2.54 (m, 1H), 2.41-2.10 (m, 7H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.96-1.80 (m, 5H), 1.78-1.21 (m, 23H), 1.06-0.82 (m, 12H) ppm.
실시예 24B
화합물 8K의 제조 - (참고: 도 6 및 표 5)
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트(8K)
Figure pct00426
실시예 8에 기술된 일반적인 과정에 따라서, 화합물 8K(192 mg, 80% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1256 (M + 1)+.
실시예 24C
화합물 8L의 제조 - 참고(도 6 및 표 5)
(2 R )-2-아미노-6-[2-(사이클로옥트-2-인-1-일옥시)아세트아미도]- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]헥산아미드 (8L)
Figure pct00427
실시예 8에 기술된 일반적인 과정에 따라서, 화합물 8L(0.21 g, 46% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1021 (M + 1)+. ESI m/z: 1021.5 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 7.33-7.60 (m, 3H), 6.87-6.91 (m ,2H), 6.32-6.37 (m, 2H), 5.47-5.65 (m, 1H), 5.07-5.30 (m, 1H), 4.72-4.86 (m, 3H), 4.34-4.51 (m, 3H), 3.83-4.20 (m, 3H), 3.33-3.49 (m, 1H), 3.14-3.27 (m, 3H), 2.59-2.75 (m, 1H), 1.31-2.39 (m, 33 H), 0.93-1.05 (m, 12H) ppm.
실시예 25
화합물 9a-i 및 J-L의 제조를 위한 일반적인 과정.(참고: 도 7).
상응하는 용매(들) 중 알킨 8a-i, J-L(1.0 당량)의 용액에 α-사이클로덱스트린-아지드 6a(참조: Synth. Commun., 2002, 32(21), 3367-3372; J. Am. Chem. Soc., 2012, 134(46), 19108-19117; J. Med. Chem., 1997, 40(17), 2755-2761; J. Am. Chem. Soc., 1993, 115(12), 5035-5040)(1.5 내지 3.0 당량)를 가하였다. 이후에, 수득되는 혼합물을 20 내지 30℃에서 16시간 내지 3일 동안 화합물 8이 거의 소비될 때까지 교반하고 LCMS로 모니터링한 바와 같이, 목적한 중간체 질량을 검출하였다. 여과 후, 수득되는 혼합물을 제조-HPLC에 의해 직접(또는 직접 사용하여) 정제함으로써 화합물 9(9a-i, J-L)(16-78% 수율)를 백색 고체(트리아졸 레지오이성체 지님)로서 수득하였다.
[표 6]
Figure pct00428
실시예 26
화합물 9a의 제조(참고: 도 7 및 표 6).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트 (9a)
일반 과정 C에 따라서, 화합물 9a(9.6 mg, 25% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1207 (M/2 + H)+. 1H NMR (메탄올 d4 , 500 MHz): δ 7.64-7.55 (m, 2H), 7.50-7.39 (m, 3H), 7.39-7.29 (m, 3H), 7.26-7.20 (m, 1H), 5.22-4.93 (m, 11H), 4.70-4.54 (m, 6H), 4.25-4.20 (m, 4H), 4.09-3.78 (m, 21H), 3.69-3.42 (m, 18H), 3.38-3.36 (s, 6H), 3.28 (s, 4H), 3.24-3.12 (m, 5H), 2.97-2.94 (m, 6H), 2.73-2.47 (m, 3H), 2.28-1.77 (m, 12H), 1.71-1.37 (m, 12H), 1.35-1.28 (m, 1H), 1.21-1.14 (m, 6H), 1.03-0.78 (m, 24H) ppm.
실시예 27
화합물 9b의 제조(참고: 도 7 및 표 6).
(2 R )-2-아미노-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]헥산아미드(9b)
일반 과정 C에 따라서, 트리아졸 레지오이성체 9bA(LCMS에서 제1 피크, 13 mg, 22% 수율) 및 9bB(LCMS에서 제2 피크, 19 mg, 32% 수율)를 분리하고 백색 고체로서 수득하였다. 화합물 둘 다에 대한 ESI m/z: 991 (M + H)+.
실시예 28
화합물 9c의 제조(참고: 도 7 및 표 6).
(2 R )-2-아미노-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18.21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로 [10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]헥산아미드(9c)
일반 과정 C에 따라서, 화합물 9c(80 mg, 40% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 991 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.92-9.73 (m, 1H), 8.52-8.19 (m, 2H), 8.11-7.93 (m, 1H), 7.90-7.76 (m, 1H), 7.70-7.47 (m, 3H), 7.32 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.03-6.77 (m, 3H), 6.49-6.29 (m, 1H), 6.18 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.71-5.53 (m, 5H), 5.51-5.33 (m, 5H), 5.21-3.51 (m, 42H), 3.50-2.64 (m, 19H), 2.43-2.26 (m, 3H), 2.16-1.93 (m, 4H), 1.90-1.78 (m, 3H), 1.74-1.11 (m, 24H), 1.07-0.72 (m, 16H) ppm.
실시예 29
화합물 9d의 제조(참고: 도 7 및 표 6).
(1 S ,4a S ,10a R )- N -{[(1 S ,4a S ,10a R )-6-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]프로판아미도]-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]카보닐}-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복스아미드(9d)
일반 과정 C에 따라서, 화합물 9d (0.38 g, 60% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 995 (M/2 + 1)+. 1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 8.40 (s, 1H, imidine-H), 7.56-7.52 (m, 1H), 7.32 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 5.24-5.16 (m, 1H), 5.01-4.95 (m, 6H), 4.65-3.43 (m, 40H), 3.14-2.72 (m, 7H), 2.55-1.26 (m, 44H), 1.16 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.09-0.93 (m, 6H) ppm.
실시예 30
화합물 9e의 제조(참고: 도 7 및 표 6).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,2 H ,3 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -({[(4b S ,8 S ,8a R )-8-{[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐]카바모일}-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}메틸)카바메이트(9e)
일반 과정 C에 따라서, 화합물 9e(67 mg, 64% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1141 (M/2 + 1)+. 1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 8.40 (s, 1H), 7.65-7.45 (m, 3H), 7.40-7.26 (m, 3H), 7.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 8.3, 2.4 Hz, 1H), 5.24-5.16 (m, 1H), 5.10 (s, 2H), 5.02-4.93 (m, 4H), 4.66-4.51 (m, 2H), 4.43-4.22 (m, 2H), 4.15-3.73 (m, 22H), 3.64-3.42 (m, 12H), 3.37 (s, 3H), 3.24-3.03 (m, 4H), 3.01-2.75 (m, 6H), 2.42-2.25 (m, 6H), 2.18-1.98 (m, 8H), 1.94-1.58 (m, 15H), 1.56-1.50 (m, 3H), 1.47-1.40 (m, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.34-1.25 (m, 4H), 1.16-1.10 (m, 6H), 1.09-0.93 (m, 7H) ppm.
실시예 31
화합물 9f의 제조(참고: 도 7 및 표 6).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}-2-하이드록시에틸]카바메이트(9f)
일반 과정 C에 따라서, 화합물 9f (20 mg, 57% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1156.0 (M/2 + 1)+.
실시예 32
화합물 9g의 제조(참고: 도 7 및 표 6).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-(1-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도)헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트(9g)
일반 과정 C에 따라서, 화합물 9g (46 mg, 58% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 887.9 (M/3 + H)+. 1H NMR (메탄올 d4 , 500 MHz) δ 7.61 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 7.46-7.27 (m, 6H), 7.23 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 5.38-5.02 (m, 3H), 5.00-4.91 (m, 6H), 4.72-4.50 (m, 5H), 4.44-4.15 (m, 5H), 4.12-3.78 (m, 21H), 3.77-3.69 (m, 5H), 3.68-3.41 (m, 30H), 3.39-3.35 (m, 4H), 3.30-3.26 (m, 3H), 3.24-2.84 (m, 12H), 2.59-2.40 (m, 4H), 2.31-1.86 (m, 11H), 1.84-1.69 (m, 5H), 1.67-1.50 (m, 8H), 1.48-1.37 (m, 4H), 1.36-1.29 (m, 3H), 1.22-1.11 (m, 6H), 1.06-0.76 (m, 24H) ppm.
실시예 33
화합물 9h의 제조(참고: 도 7 및 표 6).
N -[(5 R )-5-아미노-5-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-{[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐]카바모일}-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}펜틸]-1-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-9-일)옥시]아세트아미도}-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드(9h)
일반 과정 C에 따라서, 화합물 9h(30 mg, 72% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1118 (M/2 + 1)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.91-9.85 (m, 1H), 9.13-8.90 (m, 1H), 8.58 (t, J = 9.3 Hz, 2H), 8.50-8.47 (m, 1H), 8.17-8.00 (m, 6H), 7.88-7.78 (m, 2H), 7.53-7.49 (m, 1H), 7.36-7.30 (m, 1H), 6.97 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.51 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.52-5.50 (m, 11H), 5.14 (s, 1H), 4.86-4.67 (m, 10H), 4.54 (d, J = 12.9 Hz, 2H), 4.46-4.32 (m, 5H), 4.06-3.94 (m, 3H), 3.89-3.76 (m, 4H), 3.73-3.61 (m, 5H), 3.57 (t, J = 6.5 Hz, 3H), 3.53-3.34 (m, 12H), 3.33-3.19 (m, 4H), 3.17-3.08 (m, 3H), 3.00 (dd, J = 12.6, 6.2 Hz, 3H), 2.91-2.68 (m, 8H), 2.31-2.22 (m, 5H), 2.18-2.07 (m, 6H), 1.93-1.78 (m, 6H), 1.74-1.35 (m, 15H), 1.28 (d, J = 6.6 Hz, 17H), 1.19-1.06 (m, 5H), 1.01-0.94 (m, 9H), 0.89-0.79 (m, 6H) ppm.
실시예 34
화합물 9i의 제조(참고: 도 7 및 표 6).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-(1-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-9-일)옥시]아세트아미도}-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도)헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(2-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]옥시}에틸)카바메이트(9i)
일반 과정 C에 따라서, 화합물 9i(51 mg, 78% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1258 (M/2 + 1)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 10.08 (s, 1H), 9.09-8.91 (m, 1H), 8.56 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.85-7.78 (m, 2H), 7.58 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.29 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.85-6.78 (m, 2H), 6.68 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.51 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.50 (br s, 25H), 5.15 (s, 1H), 4.96 (s, 3H), 4.85-4.78 (m, 12H), 4.70 (s, 3H), 4.56 (s, 3H), 4.39 (s, 5H), 3.89-3.75(m, 14H), 3.74-3.56 (m, 8H), 3.54-3.39 (m, 8H), 3.38-3.29 (m, 7H), 3.14 (s, 2H), 3.01 (d, J = 5.5 Hz, 5H), 2.86-2.8 (m, 2H), 2.74 (s, 4H), 2.32-2.23 (m, 5H), 2.16 (d, J = 11.2 Hz, 3H), 2.00 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 1.93-1.86 (m, 5H), 1.77-1.54 (m, 10H), 1.46-1.42 (m, 6H), 1.30-1.27 (m 11H), 1.14 (s, 3H), 1.00 (d, J = 12.5 Hz, 6H), 0.88(s, 3H) 0.84 (s, 3H) ppm.
실시예 34A
화합물 9J의 제조 - (참고: 도 7 및 표 6)
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3 , 6 .2 8 , 11 .2 13 , 16 .2 18 , 21 .2 23 , 26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바메이트(9J)
Figure pct00429
실시예 25에 기술된 일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 9J (0.11 g, 51% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1081 (M/2 + 1)+. 1H NMR (500MHz, DMSO d6 ) δ 10.05 (s, 1H), 8.30-7.80 (m, 3H), 7.80-7.55 (m, 2H), 7.50-7.40 (m, 1H), 7.40-7.25 (m, 3H), 6.30 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.00 (s, 1H), 5.80-5.35 (m, 16H), 5.25-5.05 (m, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.90-4.50 (m, 13H), 4.50-4.00 (m, 5H), 3.95-3.55 (m, 22H), 3.30-3.20 (m, 8H), 3.20-3.00 (m, 4H), 3.00-2.85 (m, 5H), 2.25-2.20 (m, 2H), 2.10-1.95 (m, 4H), 1.80-1.00 (m, 30H), 1.00-0.90 (m, 4H),0.90-0.80 (m, 14H) ppm.
실시예 34B
화합물 9K의 제조 - (참고: 도 7 및 표 6).
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-아미노-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3 , 6 .2 8 , 11 .2 13 , 16 .2 18 , 21 .2 23 , 26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트(9K)
Figure pct00430
실시예 25에 기술된 일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 9K(0.11 g, 58% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 751 (M/3 + 1)+.
실시예 34C
화합물 9L의 제조 - (참고: 도 7 및 표 6).
(2 R )-2-아미노- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로 [26.2.2.2 3 , 6 .2 8 , 11 .2 13 , 16 .2 18 , 21 .2 23 , 26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미드(9L)
Figure pct00431
실시예 25에 기술된 일반적인 과정 A에 따라서, 화합물 9L(40 mg, 34% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1009.5 (M/2 + 1)+.
실시예 35
특정의 링커-페이로드를 다음의 과정(일반적인 과정 D(참고: 도 8))에 따라 합성하였다.
일반적인 과정 D: DMF(또는 DCM/DMF) 중 산 4a 또는 4c(1.0-2.5 당량)의 용액에 DIPEA(1.5-10 당량) 및 HATU(2.5-4.0 당량)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 수득되는 혼합물을 당해 온도에서 0.5 내지 1 시간 동안 교반한 후 아민(3a, 3c, 3d, 3H, 3I 또는 9a-i, 9J-L)(1.0 당량)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 내지 16시간 동안 LCMS에 의해 모니터링된 바와 같이, 아민이 완전히 소비될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 막을 통해 여과한 다음 여액을 제조-HPLC로 분리하여 실시예 화합물(20-69% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
[표 7]
Figure pct00432
Figure pct00433
Figure pct00434
실시예 36
링커-MMAE의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트
Figure pct00435
ESI m/z: 829.7 (M/2 + H)+ (100%), 1659.7 (M + H)+ (20%).
1H NMR (DMSO d6 , 500 MHz): δ 9.98 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.11 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.92-7.82 (m, 2H), 7.75 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.65-7.53 (m, 3H), 7.53-7.42 (m, 3H), 7.41-7.22 (m, 9H), 7.22-7.10 (m, 1H), 6.06-5.91 (m, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.33 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.15-4.91 (m, 3H), 4.79-4.57 (m, 1H), 4.54-4.17 (m, 5H), 4.08-3.88 (m, 2H), 3.67-3.40 (m, 16H), 3.27-2.80 (m, 18H), 2.62-2.53 (m, 1H), 2.41-1.27 (m, 21H), 1.07-0.95 (m, 6H), 0.90-0.67 (m, 26H) ppm.
분석 HPLC: 98%, 체류 시간: 8.25 min (방법 B).
용해도: < 0.1 mg/mL의 물.
실시예 37
본 실시예는 특정의 링커-페이로드를 제조하기 위한 대표적인 합성 경로를 제공한다(참고: 도 9).
{4-[(2 S )-5-(카바모일아미노)-2-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1 H -피롤-1-일)헥산아미도]-6-[4-(3-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-3,4,5,13-테트라아자테트라사이클로[13.4.0.0 2,6 .0 7,12 ]노나데카-1(19),2(6),4,7(12),8,10,15,17-옥타엔-13-일)-4-옥소부탄아미도]헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트
무수 THF(1 mL) 중 Mc-(L) d-Lys(suc-DIBAC)-OH (5b, 2.0 mg, 3.1 μmol)의 용액에 HATU(1.8 mg, 4.7 μmol) 및 DIPEA(0.8 mg, 6.2 μmol)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후 무수 THF(1 mL) 중 화합물 3a(3.6 mg, 3.1 μmol)의 용액을 반응 혼합물에 가하였다. 수득되는 혼합물을 실온에서 16시간 동안 반응이 LCMS에 의해 완료된 것으로 고려될 때까지 교반하였다. 휘발물을 진공하에 제거하고 잔기 8j(ESI m/z: 866.3 (M/2 + H)+)를 아세토니트릴(1 mL) 속에 용해하였다. 당해 용액에 수(1 mL) 중 αCD-아지드 6a (4.6 mg, 4.7 μmol)의 용액을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, LCMS로 모니터링하였다. 혼합물을 제조-HPLC(방법 A)로 직접 정제하여 당해 실시예 2에 기술된 링커 페이로드 화합물(2 mg, 25% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
ESI m/z: 910.8 (M/3 + H)+ (100%), 1365.4 (M/2 + H)+ (20%).
분석 HPLC: > 99.9%, 체류 시간: 6.97 min (방법 B).
실시예 38
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-6-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4,6,8,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-2-{6-[3-(4-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로 [26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}피페라진-1-일)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일]헥산아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트의 제조(참고: 도 10).
THF(1 mL) 중 중간체 5a(15 mg, 24 μmol) 및 HATU(15 mg, 39 μmol)의 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 이후에 DMF(2 mL) 및 DIPEA(8.9 mg, 69 μmol) 중 vc-PAB-MMAE(I, 26 mg, 23 μmol)의 용액을 연속적으로 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응을 LCMS에 의해 vc-PAB-MMAE가 소비될 때까지 모니터링하고 목적한 화합물을 검출하였다. 휘발물을 진공하에 제거하고 잔사를 역상 섬광 크로마토그래피(수중 0 내지 100% 아세토니트릴)로 정제하여 Ex38-Int(18 mg, 26% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 1732 (M + H)+. 1H NMR (DMSO d6 , 400 MHz): δ 9.61 (s, 1H), 8.31-7.87 (m, 6H), 7.68-7.61 (m, 5H), 7.49-7.37 (m, 4H), 7.30-7.12 (m, 13H), 6.98 (s, 2H), 5.95 (m, 1H), 5.38-5.33 (m, 4H), 5.12-5.02 (m, 2H), 4.76-4.26 (m, 7H), 4.16-4.14 (m, 2H), 4.04-3.94 (m, 3H), 3.79-3.43 (m, 5H), 3.3 (s, 6H), 3.24-3.23 (m, 5H), 3.20 (s, 3H), 3.17 (s, 2H), 3.11 (m, 2H), 3.04-2.84 (m, 8H), 2.64-2.57 (m, 2H), 2.43-2.36 (m, 2H), 2.29-2.14 (m, 2H), 2.04-1.94 (m, 5H), 1.80-1.72 (m, 3H), 1.57-1.24 (m, 5H), 1.11-0.97 (m, 6H), 0.89-0.75 (m, 24H) ppm. 상기 중간체를 DMF(0.7 mL) 속에 용해하였다. 당해 용액에 TEA(0.5 mg, 5.0 μmol) 및 αCD-pip 6b(9.6 mg, 9.4 μmol)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 수득되는 혼합물을 실온에서 16시간 동안 반응이 LCMS에 따라 완료될 때까지 교반하였다. 혼합물을 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 당해 실시예에 언급된 링커 페이로드 화합물(3 mg, 23% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
ESI m/z: 925.1 (M/3 + H)+ (100%), 1387 (M/2 + H)+ (10%).
1H NMR (DMSO d6 , 500 MHz): δ 9.68 (s, 1H), 8.34-7.83 (m, 4H), 7.72-7.56 (m, 5H), 7.55-7.24 (m, 12H), 7.21-7.12 (m, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.69-5.26 (m, 14H), 5.25-4.70 (m, 9H), 4.69-4.38 (m, 7H), 4.36-4.21 (m, 3H), 4.17 (s, 1H), 4.06-3.88 (m, 2H), 3.87-3.53 (m, 25H), 3.52-3.35 (m, 14H), 3.32-3.08 (m, 21H), 3.08-2.80 (m, 7H), 2.79-2.52 (m, 9H), 2.46-1.88 (m, 11H), 1.87-1.10 (m, 21H), 1.07-0.96 (m, 6H), 0.90-0.74 (m, 24H) ppm.
분석 HPLC: 96%, 체류 시간: 7.22 min (방법 B).
용해도: 0.25 mg/mL의 물.
실시예 39
본 실시예는 특정의 링커-페이로드를 제조하기 위한 대표적인 합성 경로를 제공한다(참고: 도 11).
{4-[(2 S )-5-(카바모일아미노)-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-[1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1 H -피롤-1-일)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트
DMF(0.5 mL) 중 화합물 8a(10 mg, 7.1 μmol) 및 화합물 4d(6.2 mg, 14 μmol)의 혼합물에 TEA(2.1 mg, 21 μmol)를 25℃에서 주사기로 가하였다. 혼합물을 20 내지 25℃에서 16시간 동안 LCMS에 의해 모니터링된 바와 같이, 대부분의 8a가 소비될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 역상 섬광 크로마토그래피(수중 0 내지 100% 아세토니트릴(0.03% TFA를 지님))로 정제하여 백색 고체(ESI m/z: 1743 (M + H)+)를 수득하고, 이를 DMF(1 mL) 및 물(1 mL) 속에 용해하였다. 당해 용액에 아지드 6a(3.0 mg, 3.0 μmol)를 25℃에서 가하고 혼합물을 당해 온도에서 3일 동안 교반하였다. 반응은 LCMS에 의해 완료된 것으로 고려되었다. 휘발물을 진공하에 제거하고 잔사를 제조-HPLC(방법 A)로 정제하여 당해 실시예에 기술된 링커 페이로드 화합물(1.5 mg, 9% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
ESI m/z: 1371 (M/2 + H)+.
1H NMR (DMSO d6 , 500 MHz): δ 9.70 (s, 1H), 8.36-7.54 (m, 8H), 7.37-7.09 (m, 8H), 7.01 (s, 2H), 6.55 (s, 1H), 6.05-5.94 (m, 1H), 5.76 (s, 3H), 5.64-5.29 (m, 16H), 5.24-4.91 (m, 3H), 4.89-4.67 (m, 8H), 4.62-4.14 (m, 13H), 4.07-3.89 (m, 3H), 3.87-3.53 (m, 28H), 3.53-3.15 (m, 15H), 3.15-3.03 (m, 9H), 3.01-2.80 (m, 10H), 2.43-2.35 (m, 3H), 2.31-2.22 (m, 2H), 2.16-1.94 (m, 5H), 1.90-1.11 (m, 23H), 1.07-0.94 (m, 8H), 0.92-0.68 (m, 28H) ppm.
분석 HPLC: > 99.9%, 체류 시간: 5.78 min (방법 A).
실시예 40
{4-[(2 S )-5-(카바모일아미노)-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-[1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1 H -피롤-1-일)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-6-[4-(3-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-3,4,5,13-테트라아자테트라사이클로[13.4.0.0 2,6 .0 7,12 ]노나데카-1(19),2(6),4,7(12),8,10,15,17-옥타엔-13-일)-4-옥소부탄아미도]헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트의 제조(참고: 도 9)
Figure pct00436
실시예 37에서의 합성 경로를 참고한다. 화합물 5b를 5c로 대체시키는 것을 제외하고는, 실시예 37의 과정에 따라서, 본 실시예에 기술된 링커 페이로드 화합물(8.0 mg, 36% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
ESI m/z: 1432 (M/2 + H)+.
1H NMR (DMSO d6 , 500 MHz): δ 9.68 (s, 1H), 8.10-8.07 (m, 4H), 7.89-7.81 (m, 1H), 7.67-7.39 (m, 10H), 7.31-7.10 (m, 12H), 7.01 (s, 2H), 5.98-5.87 (m, 1H), 5.67-5.22 (m, 14H), 5.05-4.67 (m, 11H), 4.49-4.16 (m, 13H), 4.04-3.69 (m, 12H), 3.68-2.85 (m, 54H), 2.71-1.29 (m, 28H), 1.05-0.97 (m, 7H), 0.89-0.68 (m, 29H) ppm.
분석 HPLC: > 99.9%, 체류 시간: 6.84 min (방법 B).
용해도: 0.33 mg/mL의 물
실시예 41
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00437
ESI m/z: 983.4 (M/3 + H)+ (100%), 1475 (M/2 + H)+ (5%).
1H NMR (DMSO d6 , 500 MHz): δ 9.70 (s, 1H), 8.39-7.09 (m, 24H), 5.97 (s, 1H), 5.79-5.30 (m, 15H), 5.22-4.92 (m, 4H), 4.90-4.64 (m, 8H), 4.64-4.14 (m, 13H), 4.06-3.90 (m, 4H), 3.90-2.81 (m, 77H), 2.65-2.55 (m, 2H), 2.44-1.93 (m, 9H), 1.89-1.59 (m, 8H), 1.57-1.40 (m, 8H), 1.35-1.18 (m, 7H), 1.07-0.95 (m, 6H), 0.90-0.67 (m, 24H) ppm.
분석 HPLC: > 99.9%, 체류 시간: 7.29 min (방법 B).
용해도: 0.25 mg/mL의 물.
실시예 42
(1 R ,8 S ,9 S )-비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 N -(14-{[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-4-(카바모일아미노)-1-({4-[({[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필](메틸)카바모일}옥시)메틸]페닐}카바모일)부틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}펜틸]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00438
ESI m/z: 946.3 (M/3 + H)+ (100%), 1418.9 (M/2 + H)+ (20%).
1H NMR (메탄올 d4 , 500MHz): δ 7.59-7.58 (m, 2H), 7.29-7.10 (m, 7H), 5.25-4.98 (m, 4H), 4.86-4.81 (m, 5H), 4.58-4.31 (m, 4H), 4.22-4.03 (m, 6H), 3.92-3.61 (m, 21H), 3.53-3.32 (m, 36H), 3.26-3.25 (m, 5H), 3.18-2.83 (m, 13H), 2.56-2.54 (m, 1H), 2.44-1.43 (m, 33H), 1.35-1.01 (m, 15H), 0.91-0.69 (m, 29H) ppm.
분석 HPLC: > 99.9%, 체류 시간: 7.33 min (방법 B).
용해도: 1.0 mg/mL의 물.
실시예 43
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-6-(1-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도)헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필]- N -메틸카바메이트의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00439
ESI m/z: 1065.9 (M/3 + H)+ (100%), 1598.4 (M/2 + H)+ (20%).
1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 7.67-7.04 (m, 17H), 5.24 (t, J = 4.7 Hz, 1H), 5.13-4.82 (m, 10H), 4.60-4.41 (m, 5H), 4.37-4.31 (m, 1H), 4.22-4.04 (m, 5H), 3.99-3.66 (m, 18H), 3.65-3.57 (m, 4H), 3.55-3.29 (m, 40H), 3.29-2.65 (m, 24H), 2.64-2.55 (m, 1H), 2.45-1.12 (m, 46H), 1.09-1.00 (m, 6H), 0.94-0.66 (m, 24H) ppm.
분석 HPLC: 98.2%, 체류 시간: 5.79 min (방법 B).
용해도: 0.5 mg/mL의 물.
실시예 44
[(1 R ,8 S ,9 S )-비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일]메틸 N -(14-{[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-4-(카바모일아미노)-1-({4-[({[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(3 R ,4 S ,5 S )-1-[(2 S )-2-[(1 R ,2 R )-2-{[(1 S ,2 R )-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]카바모일}-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-2-메틸프로필](메틸)카바모일}옥시)메틸]페닐}카바모일)부틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-(1-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도)펜틸]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00440
ESI m/z: 1028.7 (M/3 + H)+ (100%), 1541.5 (M/2 + H)+ (5%).
1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ): δ 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.29-7.09 (m, 7H), 5.26-4.98 (m, 4H), 4.87-4.85 (m, 3H), 4.54-4.43 (m, 3H), 4.35-4.32 (m, 1H), 4.19-4.03 (m, 10H), 3.93-3.71 (m, 19H), 3.65-3.47 (m, 30H), 3.39-3.25 (m, 32H), 3.24-3.17 (m, 5H), 3.10-2.90 (m, 5H), 2.89-2.69 (m, 4H), 2.50-2.34 (m, 7H), 2.23-1.97 (m, 13H), 1.97-1.34 (m, 16H), 1.22-1.20 (m, 7H), 1.08-0.91 (m, 7H), 0.82 -0.67 (m, 26H) ppm.
분석 HPLC: > 99.9%, 체류 시간: 7.02 min (방법 B).
용해도: 1.0 mg/mL의 물.
실시예 45
본 실시예는 링커-글루코코르티코이드(GC) 스테로이드의 합성을 제공한다(참고: 도 8 및 표 7).
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드
Figure pct00441
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 )(회전이성체) δ 9.79 (s, 0.5H), 9.70 (s, 0.5H), 8.41 (d, J = 7.5 Hz, 0.5H), 8.17 (d, J = 7.0 Hz, 0.5H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 7.89 (d, J = 8.6 Hz, 0.5H), 7.77 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.53-7.43 (m, 4H), 7.40-7.28 (m, 4H), 6.88-6.82 (m, 2H), 6.18 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.10 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.83-4.67 (m, 4H), 4.45-4.29 (m, 2H), 4.23-4.17 (m, 0.5H), 4.11 (t, J = 7.7 Hz, 0.5H), 3.64-3.40 (m, 15H), 3.31-3.26 (m, 2H), 3.13-3.03 (m, 2H), 2.65-2.52 (m, 2H), 2.47-1.26 (m, 24H), 1.06-0.93 (m, 2H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm.
분석 HPLC: 99%, 체류 시간: 8.55 min (방법 B).
용해도: <0.1 mg/mL의 물; 수중 0.06 mg/mL의 20% DMSO; 수중 0.07 mg/mL의 30% DMSO.
실시예 46
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 R )-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}펜틸]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00442
ESI m/z: 1259 (M/2 + H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 )(회전이성체) δ 9.84 (s, 1H), 8.34 (s, 0.5H), 8.15 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.90-7.84 (m, 1H), 7.81-7.74 (m, 1.5H), 7.72-7.56 (m, 4H), 7.56-7.27 (m, 11H), 6.89-6.79 (m, 2H), 6.17 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.64-5.44 (m, 12H), 5.24-5.00 (m, 5H), 4.86-4.51 (m, 16H), 4.40-4.16 (m, 5H), 4.05-3.96 (m, 1H), 3.86-3.73 (m, 10H), 3.67-2.88 (m, 35H), 2.80-2.69 (m, 1H), 2.62-2.55 (m, 1H), 2.41-2.20 (m, 6H), 2.10-1.71 (m, 10H), 1.66-1.07 (m, 26H), 1.05-0.79 (m, 17H) ppm.
분석 HPLC: 97%, 체류 시간: 6.62 및 6.67 min (방법 B).
실시예 47
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 R )-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 S ,13 R )-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}펜틸]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00443
ESI m/z: 839.5 (M/3 + H)+, 1259 (M/2 + H)+ (60%).
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 )(트리아졸 레지오이성체를 지님) δ 9.77-9.42 (m, 1H), 8.27-8.20 (m, 0.5H), 8.17-8.01 (m, 2H), 7.86-7.74 (m, 2.5H), 7.70-7.60 (m, 4H), 7.57-7.43 (m, 7H), 7.39-7.28 (m, 6H), 6.88-6.81 (m, 2H), 6.21-6.14 (m, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.61-5.42 (m, 10H), 5.16-4.97 (m, 4H), 4.89-4.48 (m, 17H), 4.40-4.28 (m, 4H), 4.16-4.10 (m, 1H), 4.04-3.94 (m, 1H), 3.83-3.74 (m, 7H), 3.65-3.56 (m, 9H), 3.48-3.21 (m, 23H), 3.15-3.06 (m, 4H), 2.97-2.89 (m, 1H), 2.81-2.69 (m, 1H), 2.61-2.53 (m, 2H), 2.40-2.20 (m, 6H), 2.14-2.06 (m, 2H), 2.03-1.95 (m, 4H), 1.91-1.70 (m, 5H), 1.64-1.52 (m, 9H), 1.49-1.25 (m, 14H), 1.13-0.81 (m, 19H) ppm.
분석 HPLC: 98%, 체류 시간: 6.61(59%) 및 6.73 (39%) min (방법 B).
용해도: 수중 0.1 mg/mL의 10% DMSO.
실시예 48
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-{[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐]카바모일}-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}에틸]카바모일}-2-메틸프로필]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00444
ESI m/z: 1234 (M + H)+.
1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 7.65 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.62-7.51 (m, 2H), 7.48-7.28 (m, 6H), 7.27-7.21 (m, 1H), 7.00 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 8.3, 2.4 Hz, 1H), 5.15-5.10 (m, 1H), 4.52-4.43 (m, 1H), 4.20 (d, J = 6.5 Hz, 0.5H), 4.04 (d, J = 7.9 Hz, 0.5H), 3.77-3.64 (m, 3H), 3.63-3.49 (m, 12H), 3.47-3.39 (m, 2H), 3.24 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.99-2.66 (m, 5H), 2.57-2.42 (m, 2H), 2.42-1.94 (m, 14H), 1.76-1.63 (m, 4H), 1.48-1.21 (m, 13H), 1.14-1.10 (m, 6H), 1.05-0.97 (m, 6H) ppm.
분석 HPLC: >99%, 체류 시간: 9.21 min (방법 B).
용해도: <0.1 mg/mL의 물.
실시예 49
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}펜틸]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00445
ESI m/z: 1261 (M/2 + H)+.
1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 7.69-7.44 (m, 6H), 7.41-7.30 (m, 3H), 7.26 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.04-6.96 (m, 1H), 6.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 1.9 Hz, 1H) 6.56 (dd, J = 8.3, 2.4 Hz, 1H), 5.25-4.94 (m, 6H), 4.75-4.55 (m, 16H), 4.53-3.41 (m, 49H), 3.33-1.20 (m, 53H), 1.18-1.10 (m, 6H), 1.06-0.94 (m, 6H) ppm.
분석 HPLC: 99%, 체류 시간: 6.55 min (방법 B).
용해도: 0.05 mg/mL의 물.
실시예 50
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-6-(1-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-9-일)옥시]아세트아미도}-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도)헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(2-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]옥시}에틸)카바메이트의 제조(참고: 도 8 및 표 7).
Figure pct00446
DMF(1 mL) 중 화합물 9i(25 mg, 9.9 μmol) 및 DIBAC-Suc-PEG4-OSu 4b(6.8 mg, 12 μmol)의 용액에 트리에틸아민(2.0 mg, 20 μmol)을 가하고 혼합물을 20 내지 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이후에, 반응은 LCMS에 따라 완료된 것으로 고려하였다. 대부분의 휘발물을 진공하에 제거하고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 (12 mg, 39% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
ESI m/z: 1017 (M/3 + H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.68 (s, 1H), 8.21-8.04 (m, 3H), 7.88-7.74 (m, 2H), 7.71-7.56 (m, 3H), 7.52-7.21 (m, 8H), 6.93 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.84-6.77 (m, 1H), 6.70-6.58 (m, 2H), 6.51 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.78-5.33 (m, 12H), 5.22-4.51 (m, 14H), 4.43-4.12 (m, 4H), 4.07-3.55 (m, 35H), 3.53-3.33 (m, 38H), 3.33-2.52 (m, 32H), 2.43-1.21 (m, 41H), 1.20-0.77 (m, 14H) ppm.
분석 HPLC: 96%, 체류 시간: 6.68 min (방법 B).
용해도: 0.33 mg/mL의 물.
실시예 51
{비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일}메틸 N -(14-{[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-{[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐]카바모일}-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-(1-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-9-일)옥시]아세트아미도}-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도)펜틸]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00447
ESI m/z: 1330 (M/2 + H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.70 (br s, 0.6H), 9.28 (br s, 0.4H), 9.00 (s, 1H), 8.26-7.75 (m, 5H), 7.56-7.35 (m, 2H), 7.16-7.03 (m, 1H), 7.01-6.86 (m, 1H), 6.81 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.50 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.71-5.32 (m, 12H), 4.87-4.49 (m, 12H), 4.42-3.93 (m, 8H), 3.90-3.54 (m, 25H), 3.52-3.33 (m, 28H), 3.33-2.66 (m, 17H), 2.33-1.20 (m, 58H), 1.19-0.77 (m, 21H) ppm.
분석 HPLC: >99%, 체류 시간: 6.33 min (방법 B).
용해도: 0.33 mg/mL의 물.
실시예 52
도 8 및 표 7에 따라 제조하였다.
{비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일}메틸 N -(14-{[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[4-({[(2-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]옥시}에틸)카바모일]옥시}메틸)페닐]카바모일}-4-(카바모일아미노)부틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-(1-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-9-일)옥시]아세트아미도}-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도)펜틸]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00448
ESI m/z: 1470 (M/2 + H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.68 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.21-8.03 (m, 2H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 8.3 Hz, 2H) 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 1H) 6.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.67 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.50 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.64-5.37 (m, 12H), 5.14 (s, 1H), 5.00-4.50 (m, 13H), 4.38-4.29 (m, 3H), 4.20-4.13 (m, 1H), 4.09-3.97 (m, 10H), 3.95-3.89 (m, 2H), 3.86-3.54 (m, 23H), 3.52-3.33 (m, 28H), 3.16-2.61 (m, 17H), 2.45-1.20 (m, 66H), 1.18-0.80 (m, 21H) ppm.
분석 HPLC: >99%, 체류 시간: 6.62 min (방법 B).
용해도: 0.29 mg/mL의 물.
실시예 53
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-{[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐]카바모일}-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-(1-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-9-일)옥시]아세트아미도}-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도)펜틸]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00449
ESI m/z: 1385.9 (M/2 + H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.71 (br s, 0.6H), 9.30 (brs, 0.4H), 9.01 (s, 1H), 8.29-7.99 (m, 4H), 7.89-7.76 (m, 3H), 7.74-7.60 (m, 2H), 7.58-7.27 (m, 7H), 7.01-6.92 (m, 1H), 6.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.68-6.48 (m, 2H), 5.71-5.45 (m, 12H), 5.17-4.69 (m, 2H), 4.90-4.50 (m, 12H), 4.44-3.54 (m, 33H), 3.54-3.41 (m, 38H), 3.33-2.54 (m, 15H), 2.43-1.19 (m, 44H), 1.18-0.66 (m, 18H) ppm.
분석 HPLC: 98%, 체류 시간: 6.42 min (방법 B).
용해도: 0.18 mg/mL의 물.
실시예 54
{비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일}메틸 N -(14-{[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-{[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐]카바모일}-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}펜틸]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00450
ESI m/z: 1207 (M/2 + H)+.
1H NMR (500 MHz, 메탄올 d4 ) δ 7.62 (s, 1H) 7.39 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 8.2, 2.4 Hz, 1H), 5.21 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 4.99-4.95 (m, 4H), 4.65-3.43 (m, 57H), 3.31-2.74 (m, 11H), 2.55-1.22 (m, 55H), 1.16 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.06-0.87 (m, 9H) ppm.
분석 HPLC: >99%, 체류 시간: 6.37 min (방법 B).
실시예 55
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}펜틸]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00451
ESI m/z: 1409 (M/2 + H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.79 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.24-8.05 (m, 3H), 7.86-7.73 (m, 2H), 7.71-7.58 (m, 3H), 7.54-7.42 (m, 4H), 7.42-7.25 (m, 5H), 6.96 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.57-6.45 (m, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.69-5.31 (m, 12H), 5.17-4.49 (m, 14H), 4.39-3.95 (m, 5H), 3.90-3.51 (m, 25H), 3.50-3.33 (m, 32H), 3.33-2.53 (m, 21H), 2.44-1.20 (m, 41H), 1.21-0.77 (m, 16H) ppm.
분석 HPLC: 99%, 체류 시간: 6.33 및 6.44 min (방법 B).
실시예 56
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4,9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}-2-하이드록시에틸]카바메이트의 제조(참고: 도 8 및 표 7)
Figure pct00452
ESI m/z: 1424.3 (M/2 + H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.81 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.28-8.04 (m, 3H), 7.91-7.73 (m, 2H), 7.73-7.16 (m, 12H), 6.95 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.73-6.59 (m, 1H), 6.59-6.44 (m, 1H), 5.98 (s, 1H), 5.71-5.27 (m, 12H), 5.23-4.48 (m, 14H), 4.43-3.93 (m, 5H), 4.09-3.50 (m, 24H), 3.51-3.33 (m, 31H), 3.33-2.53 (m, 17H), 2.42-1.08 (m, 51H), 1.06-0.67 (m, 14H) ppm.
분석 HPLC: >99%, 체류 시간: 6.11 및 6.21 min (방법 B).
용해도: <0.1 mg/mL의 물.
실시예 57
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0+]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-{[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바모일}에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-{2-[(1-{[41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56-헥사데카하이드록시-10,15,20,25,30,35,40-heptakis(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29,32,34,37,39-헥사데카옥사노나사이클로[36.2.2.2 3,6 .2 8,11 .2 13,16 .2 18,21 .2 23,26 .2 28,31 .2 33,36 ]헥사펜타콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}펜틸]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드의 제조(참고: 도 9 및 표 7)
Figure pct00453
C136H195N11O54, 정확한 질량: 2846.3
ESI m/z: 1424.2 (M/2 + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.26 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.24-7.98 (m, 4H), 7.81 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.53-7.25 (m, 7H), 6.95 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 8.2, 2.1 Hz, 1H), 5.94-5.58 (m, 15H), 5.39-4.43 (m, 17H), 4.37-4.24 (m, 3H), 4.13-4.08 (m, 1H), 3.98-3.33 (m, 52H), 3.26-2.52 (m, 18H), 2.40-1.18 (m, 48H), 1.18-0.63 (m, 19H) ppm.
실시예 58
도 8 및 표 7에 따라 제조하였다.
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4 , 9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바메이트의 제조
Figure pct00454
C74H94F2N8O17, 정확한 질량: 1404.7
ESI m/z: 1406 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.99 (s, 1H), 8.11 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.80-7.75 (m, 1H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.65-7.60 (m, 3H), 7.53-7.33 (m, 6H), 7.33-7.28 (m, 3H), 6.30 (dd, J = 10.0 Hz, 1.5 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H),6.10-6.00 (m, 1H), 5.72-5.55 (m, 2H), 5.41 (s, 2H), 5.05-5.01 (m, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.80-4.72 (m, 1H), 4.60-4.58 (m, 1H), 4.43-4.33 (m, 1H), 4.25-4.10 (m,3H), 3.88-3.80 (m,1H), 3.65-3.55 (m, 3H), 3.50-3.40 (m, 12H), 3.30-3.25 (m, 2H), 3.12-2.90 (m, 4H), 2.70-2.55 (m, 2H), 2.48-2.35 (m, 2H), 2.30-2.20 (m, 2H),2.15-1.95 (m, 4H), 1.86-1.65 (m, 3H), 1.64-1.54 (m, 5H), 1.49 (s, 4H), 1.46-1.34 (m, 5H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm.
분석 HPLC: 100%, 체류 시간: 7.40 min (방법 B).
용해도: 0.02 mg/mL의 물.
실시예 59
도 8 및 표 7에 따라 제조하였다.
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4 , 9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3 , 6 .2 8 , 11 .2 13 , 16 .2 18 , 21 .2 23 , 26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바메이트
Figure pct00455
C126H177F2N13O49, 정확한 질량: 2694.2
ESI m/z: 1349 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.71 (s, 1H), 8.30-8.00 (m, 3H), 8.00-7.74 (m, 2H), 7.70-7.58 (m, 5H), 7.52-7.20 (m, 12H), 6.35-6.20 (m, 2H), 6.15-5.85 (m, 3H), 5.80-5.35 (m, 18H), 5.25-4.90 (m, 6H), 4.90-4.50 (m, 14H), 4.40-4.25 (m, 4H), 4.25-4.10 (m, 3H), 4.10-3.95 (m, 2H), 3.95-3.55 (m, 22H), 3.55-3.40 (m, 22H), 3.20-3.00 (m, 6H), 3.00-2.85 (m, 3H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.25-2.20 (m, 4H), 2.10-1.95 (m, 6H), 1.80-1.70 (m, 5H), 1.70-1.50 (m, 10H), 1.50-1.45 (m, 9H), 0.90-0.80 (m, 14H) ppm.
분석 HPLC: 100%, 체류 시간: 6.23 min (방법 B).
용해도: 0.026 mg/mL의 물.
실시예 60
도 8 및 표 7에 따라 제조하였다.
(1 R ,8 S ,9 S )-비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 N -(14-{[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-4-(카바모일아미노)-1-[(4-{[({2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸}카바모일)옥시]메틸}페닐)카바모일]부틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3 , 6 .2 8 , 11 .2 13 , 16 .2 18 , 21 .2 23 , 26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}펜틸]카바모일}-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)카바메이트
Figure pct00456
C118H176F2N12O49, 정확한 질량: 2583.2
ESI m/z: 1292.8 (M/2 + 1)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.68 (s, 1H), 8.14-7.08 (m, 11H), 6.30 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.67-5.31 (m, 15H), 5.21-3.33 (m, 61H), 3.13-2.60 (m, 22H), 2.30-1.96 (m, 46H), 0.95-0.80 (m, 17H) ppm.
분석 HPLC(트리아졸 영역-이성체를 지님): 48%, 체류 시간: 7.31 min 및 52%, 체류 시간: 7.41 min (방법 B).
실시예 61
도 8 및 표 7에 따라 제조하였다.
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4 , 9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 ,8.0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트
Figure pct00457
C80H98F2N8O18, 정확한 질량: 1496.7
ESI m/z: 1499 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 10.02 (s, 1H), 9.59 (s, 1H), 8.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.80-7.75 (m, 1H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.65-7.60 (m, 3H), 7.53-7.45 (m, 3H), 7.40-7.28 (m, 7H), 6.84 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.30 (dd, J = 10.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.10-6.00 (m, 1H), 5.72-5.55 (m,1H), 5.52 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.16-5.05 (m, 4H), 4.88-4.70 (m, 3H), 4.43-4.33 (m, 1H), 4.25-4.20 (m, 2H), 3.65-3.55 (m, 3H), 3.50-3.40 (m, 12H), 3.30-3.25 (m, 2H), 3.12-2.90 (m, 4H), 2.70-2.55 (m, 2H), 2.48-2.43 (m, 1H), 2.40-2.35 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 2H), 2.15-1.95 (m, 4H), 1.86-1.75 (m, 2H), 1.64-1.54 (m, 5H), 1.49 (s, 4H), 1.46-1.34 (m, 4H), 1.23 (s, 2H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm.
분석 HPLC: 100%, 체류 시간: 7.99 min (방법 B).
용해도: <0.01 mg/mL의 물.
실시예 62
도 8 및 표 7에 따라 제조하였다.
{4-[(2 S )-2-[(2 S )-2-[(2 R )-2-[1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4 , 9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미도]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3 , 6 .2 8 , 11 .2 13 , 16 .2 18 , 21 .2 23 , 26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]-5-(카바모일아미노)펜탄아미도]페닐}메틸 N -(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바메이트
Figure pct00458
C132H181F2N13O50, 정확한 질량: 2786.2
ESI m/z: 1394 (M/2 + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d4 ) δ 9.67 (s, 1H), 9.56 (s, 1H), 8.20-8.05 (m, 2H), 7.85-7.70 (m, 2H), 7.70-7.60 (m, 4H), 7.50-7.25 (m, 12H), 6.90-6.80 (m, 2H), 6.30 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.0 (s, 1H), 5.80-5.35 (m, 16H), 5.25-5.00 (m, 6H), 4.90-4.65 (m, 10H), 4.65-4.45 (m, 4H), 4.40-4.00 (m, 6H), 3.95-3.55 (m, 22H), 3.50-3.30 (m, 22H), 3.20-2.85 (m, 12H), 2.65-2.55 (m, 2H), 2.45-2.35 (m, 2H), 2.35-2.20 (m, 3H), 2.15-1.95 (m,5H), 1.90-1.70 (m, 4H), 1.70-1.50 (m, 10H),1.50-1.00 (m, 18H), 0.90-0.80 (m, 12H) ppm.
분석 HPLC(트리아졸 영역-이성체를 지님): 82%, 체류 시간: 7.93 min; 18%, 체류 시간: 8.02 min (방법 B).
용해도: 0.02 mg/mL의 물.
실시예 63
도 8 및 표 7에 따라 제조하였다.
1-(4-{2-아자트리사이클로[10.4.0.0 4 , 9 ]헥사데카-1(12),4(9),5,7,13,15-헥사엔-10-인-2-일}-4-옥소부탄아미도)- N -[(1 R )-1-{[(1 S )-1-{[(1 S )-1-[(4-{2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2 , 9 .0 4 , 8 .0 13 , 18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에톡시}페닐)카바모일]에틸]카바모일}-2-메틸프로필]카바모일}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-도데카하이드록시-10,15,20,25,30-펜타키스(하이드록시메틸)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-도데카옥사헵타사이클로[26.2.2.2 3 , 6 .2 8 , 11 .2 13 , 16 .2 18 , 21 .2 23 , 26 ]도테트라콘탄-5-일]메틸}-1 H ,4 H ,5 H ,6 H ,7 H ,8 H ,9 H -사이클로옥타[d][1,2,3]트리아졸-4-일)옥시]아세트아미도}펜틸]-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드
Figure pct00459
DMF(2 mL) 중 화합물 9L(19 mg, 9.4 μmol)의 용액에 DIBAC-Suc-PEG4-OSu 4b(7.0 mg, 11 μmol) 및 DIPEA(2.3 mg, 18 μmol)를 가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 수득되는 혼합물을 제조-HPLC(방법 B)로 직접 정제하여 Ex105(7 mg, 29% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
C121H168F2N10O47, 정확한 질량: 2551.1
ESI m/z: 1276.8 (M/2 + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 9.80-9.47 (m, 1H), 8.23-7.91 (m, 3H), 7.83-7.11 (m, 13H), 6.87-6.66 (m, 2H), 6.32-6.11 (m, 2H), 5.85-5.23 (m, 14H), 5.14-5.01 (m, 3H), 4.86-3.99 (m, 19H), 3.85-3.40 (m, 38H), 3.27-2.87 (m, 13H), 2.76-2.55 (m, 3H), 2.33-2.20 (m, 4H), 2.12-1.91 (m, 6H), 1.83-1.72 (m, 4H), 1.59-0.98 (m, 31H), 0.89-0.84 (m, 12H) ppm.
분석 HPLC: 100%, 체류 시간: 7.76 min (방법 B).
실시예 64
페이로드s 1h 및 1i의 합성, 도 1b 참고
스테로이드성 페이로드 1h 및 1i를 시판되는 플루오시놀론 아세토니드 P2 (CAS: 67-73-2)로부터 출발하여 반응식 1에 따라 제조하였다. P2로부터 과염산의 존재하에서 부티르알데하이드와의 케탈-교환에 의해 수득한, 화합물 P3을 메실레이트 P4로 전환시킨 후 메실레이트 그룹을 아지드 모이어티로 대체시켜 P5를 형성하고 이를 아민 1h으로 추가로 환원시켰다. 다른 방법으로, P4 중 메실레이트 모이어티를 또한 4-아미노-페놀로 대체하여 아닐린 1i를 수득하였다.
(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온(P3)
Figure pct00460
헵탄(90 mL) 중 플루오시놀론 아세토니드(P2, 0.90 g, 2.0 mmol) 및 실리카 겔(18 g)의 혼합물에 부티르알데하이드(0.27 mL, 3.0 mmol)를 10℃에서 가하고 현탁액을 10 내지 20℃에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물에 과염산(70%, 0.68 mL, 8.3 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 이후에, 반응 혼합물을 10 내지 20℃에서 밤새 교반하였다. 대부분의 플루오시놀론 아세토니드 P2는 TLC 및 LCMS에 따라 소비되었다. 반응 혼합물을 석유 에테르로 희석시키고 포화된 수성 Na2CO3로 퀀칭시켰다. 현탁액을 여과하고 고체를 DCM/메탄올(v/v = 1)로 세척하였다. 합한 여액을 진공하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔(석유 에테르 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트) 상에서 실리카 섬광 크로마토그래피로 정제하여 화합물 P3(0.15 g, 16% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 467.1 (M + H)+.
2-[(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-16-옥소-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-8-일]-2-옥소에틸 메탄설포네이트(P4)
Figure pct00461
DCM(3 mL) 중 화합물 P3(0.28 g, 0.65 mmol)) 및 트리에틸아민(0.13 g, 1.3 mmol)의 용액에 메탄설포닐 클로라이드(89 mg, 0.78 mmol)를 0℃에서 가하였다. 0℃에서 0.5 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 DCM(20 mL)으로 희석시켰다. 혼합물을 H2O(20 mLХ2)로 세척하고, 무수 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과하며 진공하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔(석유 에테르 중 0 내지 50% 에틸 아세테이트) 상에서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 P4(0.26 g, >99% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 545 (M + H)+.
(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-8-(2-아지도아세틸)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온(P5)
Figure pct00462
아세톤(15 mL) 중 화합물 P4(1.0 g, 1.8 mmol) 및 나트륨 아지드(1.2 g, 18 mmol)의 현탁액을 50℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물(80 mL)에 부었다. 수성 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과하며 진공하에 농축시켜 조 화합물 P5(0.90 g, > 99% 수율)를 황색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. ESI m/z: 492 (M + H)+.
페이로드 1h,
(1 S ,2 S ,4 R ,6 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-8-(2-아미노아세틸)-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온; 트리플루오로아세트산 염(1h)
Figure pct00463
THF(20 mL) 중 화합물 P5(0.85 g, 1.7 mmol)의 용액에 수성 하이드로클로라이드(1 N, 10 mL)를 가하였다. 혼합물을 28 내지 32℃에서 이것이 선명해질 때까지 교반한 다음, 혼합물에 트리페닐포스핀(0.68 g, 2.6 mmol)을 가하였다. 수득되는 황색 선명한 용액을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공하에 농축시키고 잔사를 역상 섬광 크로마토그래피(수성 TFA(0.05%) 중 0 내지 50% 아세토니트릴)로 정제하여 화합물 1h(0.56 g, 57% 수율, TFA 염)를 회백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 466 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, MeOD d4 ) δ 7.33 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.40-6.29 (m, 2H), 5.69-5.45 (m, 1H), 4.93-4.92 (m, 1H), 4.71 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.35-4.27 (m, 2H), 3.90-3.84 (m, 1H), 2.81-2.54 (m, 1H), 2.42-2.06 (m, 3H), 1.82-1.32 (m, 11H), 1.09-0.87 (m, 6H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ -77.01, -166.24, -166.92, -188.81, -188.83 ppm. Anal. HPLC: 100%, 체류 시간: 6.86 min (방법 A).
페이로드 1i,
(1 S ,2 S ,4 R ,8 S ,9 S ,11 S ,12 R ,13 S ,19 S )-8-[2-(4-아미노페녹시)아세틸]-12,19-디플루오로-11-하이드록시-9,13-디메틸-6-프로필-5,7-디옥사펜타사이클로[10.8.0.0 2,9 .0 4,8 .0 13,18 ]이코사-14,17-디엔-16-온(1i)
Figure pct00464
아세톤(0.5 mL) 중 화합물 P4(93 mg, 0.17 mmol), 4-아미노페놀(37 mg, 0.34 mmol) 및 탄산세슘(0.11 g, 0.34 mmol)의 혼합물을 2시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 H2O(10 mL)로 희석시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mLХ3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과하며 진공하에 농축시켰다. 잔사를 제조-HPLC로 정제하여 페이로드 1i(6.0 mg, 6.3% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 298 (M/2 + H)+, 558 (M + H)+ (10%). 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.34 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.78-6.71 (m, 4H), 6.37-6.33 (m, 2H), 5.63-5.49 (m, 1H), 5.10-4.99 (m, 1H), 4.77-4.63 (m, 2H), 4.33 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 2.74-2.57 (m, 1H), 2.39-2.13 (m, 3H), 1.98-1.31 (m, 12H), 1.03-0.93 (m, 6H) ppm. Anal. HPLC: purity 97.4%, 체류 시간: 7.55 min (방법 B).
페이로드 1d의 합성, 도 1c 참고
메틸 (1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복실레이트(P7)
Figure pct00465
메탄올(200 mL) 및 톨루엔(600 mL) 중 포도카르프산(P6, 90 g, 0.33 mol)의 용액에 (트리메틸실릴)디아조메탄(헥산 중 2 M, 200 mL)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이후에 포도카르프산은 LCMS에 따라 완전히 소비되었다. 휘발물을 진공하에 제거하고 잔사를 석유 에테르(2 L)로부터 연마하여 화합물 P7(91 g, 96% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 289 (M + H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 8.95 (s, 1H), 6.79 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.48 (dd, J = 8.2, 2.4 Hz, 1H), 3.58 (s, 3H), 2.80-2.55 (m, 2H), 2.20-2.02 (m, 3H), 1.96-1.71 (m, 2H), 1.56-1.45 (m, 2H), 1.27 (t, J = 13.5 Hz, 1H), 1.21 (s, 3H), 1.09 (td, J = 13.5, 4.1 Hz, 1H), 0.91 (s, 3H) ppm.
메틸 (1 S ,4a S ,10a R )-1,4a-디메틸-6-(트리플루오로메탄설포닐옥시)-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복실레이트(P8)
Figure pct00466
메틸렌 클로라이드(200 mL) 중 화합물 P7(10 g, 35 mmol)의 용액에 피리딘(3.3 g, 42 mmol) 및 DMAP(0.84 g, 6.9 mmol)를 질소 대기 하에 가하였다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고 트리플릭 무수물(12 g, 42 mmol)을 가하고, 수득되는 혼합물을 25℃로 가온되도록 하고 25℃에서 다른 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(500 mL)으로 희석시키고, 물(100 mL), 수성 하이드로클로라이드(1N, 150 mL) 및 염수(100 mL)로 희석시키고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켜 조 화합물 P8(14 g, 97% 조 수율)을 점성 오일로서 수득하였으며, 이는 다음 단계를 위해 충분히 순수하였다. 조 화합물 P8은 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 10% 에틸 아세테이트)로 정제하여 순수한 생성물을 점성 오일로서 수득하였다. ESI m/z: 421.2 (M + 1)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.12 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 3.67 (s, J = 3.4 Hz, 3H), 2.93 (dd, J = 17.2, 4.4 Hz, 1H), 2.85-2.71 (m, 1H), 2.29 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.25-2.14 (m, 2H), 2.03-1.89 (m, 2H), 1.71-1.61 (m, 1H), 1.56-1.48 (m, 1H), 1.40 (td, J = 13.4, 4.2 Hz, 1H), 1.30-1.22 (m, 3H), 1.09 (td, J = 13.6, 4.2 Hz, 1H), 1.02 (s, 3H) ppm.
메틸 (1 S ,4a S ,10a R )-6-(( 3급 -부톡시카보닐)아미노)-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복실레이트(P9)
Figure pct00467
3급-부탄올(100 mL) 중 화합물 P8(14 g, 34 mmol) 및 3급-부틸 카바메이트(BocNH2, 7.9 g, 68 mmol)의 용액에 탄산세슘(22 g, 68 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(Pd2(dba)3, 1.8 g, 2.0 mmol) 및 X-Phos(1.8 g, 4.0 mmol)를 실온에서 연속적으로 가하였다. 혼합물을 탈기시키고 아르곤으로 3회 완전 충전시킨 다음 80℃에서 아르곤 보호(풍선) 하에 밤새 화합물 P8가 완전히 소비될 때까지 교반하였으며, 이는 TLC로 모니터링하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고 셀라이트를 통해 여과하였다. 고체를 에틸 아세테이트로 3회 세척하였다. 합한 여액을 진공하에 농축시키고 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 6.25% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 P9(11 g, 82% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 410 (M + 23)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.07 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.13 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 2.76 (dd, J = 16.4, 4.5 Hz, 1H), 2.70-2.61 (m, 1H), 2.16-2.05 (m, 3H), 2.00-1.75 (m, 2H), 1.65-1.50 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.31-1.25 (m, 1H), 1.21 (s, 3H), 1.10 (td, J = 13.5, 4.1 Hz, 1H), 0.92 (s, 3H) ppm.
(1 S ,4a S ,10a R )-6-{[( 3급- 부톡시)카보닐]아미노}-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복실산(P10)
Figure pct00468
DMSO 중 화합물 P9(4.9 g, 13 mmol)의 용액에 칼륨 3급-부톡사이드(15 g, 0.13 mol)를 실온에서 한번에 가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 아르곤 보호 하에서 반응이 LCMS에 따라 완료될 때까지 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 얼음 속에 붓고 수성 하이드로클로라이드(0.5 M)를 사용하여 pH 5로 서서히 산성화시키고, 이 동안 온도는 25℃보다 더 높도록 하지 않았다. 침전물을 여과로 수집하고 물로 수회 세척하였다. 조 생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 20% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 P10(4.5 g, 93% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 318 (M - 55)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 12.08 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.87 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.79-2.68 (m, 1H), 2.65 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 2.17-2.03 (m, 4H), 1.94-1.76 (m, 2H), 1.53 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 1.46 (d, J = 7.4 Hz, 9H), 1.29-1.14 (m, 5H), 1.04 (s, 3H) ppm.
3급-부틸 N -[(4b S ,8 S ,8a R )-8-카바모일-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바메이트(P11)
Figure pct00469
DMF(50 mL) 중 P10(4.5 g, 12 mmol) 및 HATU(4.9 g, 13 mmol)의 용액에 디이소프로필에틸아민(20 mL, 0.12 mol)을 가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물에 염화암모늄(16 g, 0.30 mol)을 가하고 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 수득되는 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 잔사를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 20% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 P11(4.2 g, 94% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 373.3 (M + 1)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.20 (s, 1H), 6.97 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.77-2.68 (m, 2H), 2.66-2.55 (m, 1H), 2.20 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 2.13 (dd, J = 13.2, 5.3 Hz, 1H), 2.08 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 2.03-1.86 (m, 2H), 1.54 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.26 (t, J = 26.7Hz, 1H), 1.18 (s, 3H), 1.14-1.03 (m, 4H) ppm.
메틸 (1 S ,4a S ,10a R )-6-(벤질옥시)-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복실레이트(P13)
Figure pct00470
DMF(100 mL) 중 화합물 P7(12 g, 40 mmol) 및 탄산세슘(14 g, 44 mmol)의 혼합물을 20 내지 25℃에서 15분 동안 교반하였다. 당해 혼합물에 벤질 브로마이드(7.1 mL, 60 mmol)를 실온에서 가하였다. 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 수득되는 혼합물을 냉수에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 용액을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 10% 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물 P13(13 g, 89% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 379 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.60-7.20 (m, 5H), 7.00-6.82 (m, 2H), 6.73 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.03 (s, 2H), 3.66 (s, 3H), 2.95-2.58 (m, 2H), 2.36-2.10 (m, 3H), 2.10-1.85 (m, 2H), 1.70-1.48 (m, 2H), 1.44-1.21 (m, 4H), 1.15 (t, J = 17.2 Hz, 1H), 1.01 (s, 3H) ppm.
(1 S ,4a S ,10a R )-6-(벤질옥시)-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복실산 (P14)
Figure pct00471
DMSO(0.19 L) 중 화합물 P13(11 g, 29 mmol) 및 칼륨 3급-부톡사이드(33 g, 0.29 mol)의 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 메틸 그룹이 완전히 제거될 때까지 교반하고, 이는 LCMS 및 TLC로 모니터링하였다. 25℃로 냉각시킨 후, 혼합물을 수성 하이드로클로라이드(1N)로 퀀칭시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 용액을 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 24% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 P14(7.5 g, 71% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 365 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, MeOD d4 ) δ 7.42 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.36 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.30 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.72 (dd, J = 8.4, 2.5 Hz, 1H), 5.02 (s, 2H), 2.82 (dd, J = 16.3, 4.4 Hz, 1H), 2.77-2.65 (m, 1H), 2.24 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 2.19 (dd, J = 13.8, 6.0 Hz, 1H), 2.11-1.96 (m, 2H), 1.64-1.56 (m, 1H), 1.53 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 1.35 (td, J = 13.3, 3.7 Hz, 1H), 1.30 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.11-1.05 (m, 1H) ppm.
펜타플루오로페닐(1 S ,4a S ,10a R )-6-(벤질옥시)-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복실레이트(P15)
Figure pct00472
DMF(100 mL) 중 P14(9.6 g, 26 mmol)의 용액에 DIPEA(14 mL, 79 mmol), 및 퍼플루오로페닐 2,2,2-트리플루오로아세테이트(15 g, 53 mmol)를 가하였다. 당해 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이를 LCMS로 모니터링하였다. 이후에, 반응 혼합물을 에테르(200 mL)로 희석시키고 물(300 mL) 및 염수(200 mL)로 세척하였다. 유기 용액을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 진공하에 농축시켰다. 잔사를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 10% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 P15(12 g, 88% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 531 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 7.43 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.31 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 10.2, 5.5 Hz, 2H), 6.76 (dd, J = 8.4, 2.5 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 2.81 (dd, J = 16.3, 4.5 Hz, 1H), 2.77-2.68 (m, 1H), 2.28-2.19 (m, 2H), 2.18 (dd, J = 13.4, 5.6 Hz, 1H), 2.00-1.83 (m, 2H), 1.74 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 1.65 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.38-1.27 (m, 2H), 1.08 (s, 3H) ppm.
3급-부틸 N -[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-(벤질옥시)-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바메이트(P16)
Figure pct00473
THF(20 mL) 중 화합물 P11(2.3 g, 6.2 mmol)의 용액에 n-BuLi(헥산 중 2.5 M, 5.5 mL, 14 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 반응물을 당해 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 당해 혼합물에 THF(20 mL) 중 P15(3.0 g, 5.6 mmol)의 용액을 가한 다음, 수득되는 혼합물을 10 내지 20℃에서 밤새 화합물 P15가 소비될 때까지 교반하고, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 반응물을 포화된 수성 염화암모늄으로 퀀칭시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 용액을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 잔사를 섬광 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 30% 에틸 아세테이트)로 정제하여 화합물 P16(1.59 g, 51% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 719 (M + 1)+.
3급 -부틸 N -[(4b S ,8 S ,8a R )-8-({[(1 S ,4a S ,10a R )-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-일]포름아미도}카보닐)-4b,8-디메틸-4b,5,6,7,8,8a,9,10-옥타하이드로페난트렌-3-일]카바메이트(P17)
Figure pct00474
에틸 아세테이트(40 mL) 중 P16(2.0 g, 2.78 mmol)의 용액에 습윤된 탄소상 팔라듐(10% Pd, 0.9 g)을 질소 보호하에 가하였다. 혼합물을 탈기시키고 수소로 완전 충전시키고 실온에서 수소 풍선 하에 밤새 P16이 완전히 소비될 때까지 교반하였으며, 이는 LCMS로 모니터링하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 여액을 진공하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 중 0 내지 55% 에틸 아세테이트)로 정제하여 P17(1.06 g, 61% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI m/z: 629 (M + H)+. 1H NMR (500 MHz, DMSO d6 ) δ 9.10 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.15 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 8.2, 2.4 Hz, 1H), 2.84 (td, J = 16.3, 3.8 Hz, 2H), 2.77-2.64 (m, 2H), 2.30-2.22 (m, 2H), 2.14 (t, J = 10.9 Hz, 4H), 2.00-1.80 (m, 4H), 1.65-1.54 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.34-1.28 (m, 2H), 1.27 (d, J = 2.5 Hz, 6H), 1.15-1.08 (m, 2H), 0.99 (s, 6H) ppm.
페이로드 1d,
(1 S ,4a S ,10a R )- N -[(1 S ,4a S ,10a R )-6-아미노-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카보닐]-6-하이드록시-1,4a-디메틸-1,2,3,4,4a,9,10,10a-옥타하이드로페난트렌-1-카복스아미드 (1d)
Figure pct00475
DCM(10 mL) 중 화합물 P17(0.17 g, 0.27 mmol)의 용액에 TFA(3 mL)를 실온에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 Boc가 LCMS에 따라 제거될 때까지 교반하였다. 휘발물을 진공하에 제거하고 잔사를 제조-HPLC(방법 B)로 정제하여 1d(0.10 g, 70% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
ESI m/z: 529.3 (M + 1)+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (s, 1H), 6.92 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.65-6.57 (m, 2H), 6.50 (dd, J = 8.1, 2.3 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 3.49 (s, 1H), 2.99-2.85 (m, 2H), 2.79 (tt, J = 11.6, 5.8 Hz, 2H), 2.34-2.14 (m, 6H), 2.15-1.95 (m, 4H), 1.74-1.51 (m, 5H), 1.46-1.34 (m, 2H), 1.30 (s, 6H), 1.21-1.06 (m, 8H) ppm.
1H NMR (400 MHz, DMSO d6 ) δ 8.99 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 8.0, 2.5 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.34 (dd, J = 8.0, 2.5 Hz, 1H), 4.69 (s, 2H), 2.86-2.60 (m, 4H), 2.28-2.10 (m, 6H), 1.94-1.75 (m, 4H), 1.65-1.53 (m, 4H), 1.35-1.20 (m, 8H), 1.20-1.06 (m, 2H), 0.98 (s, 6H) ppm.
13C NMR (100 MHz, DMSO d6 ) δ 174.03, 173.92, 155.34, 148.39, 147.63, 146.43, 129.56, 129.09, 124.60, 121.65, 113.23, 112.58, 111.81, 110.77, 52.32, 52.09, 45.56, 45.52, 39.20, 39.36, 38.23, 38.17, 37.18, 37.12, 31.08, 31.00, 27.65, 27.64, 23.08, 23.03, 21.43, 21.27, 19.64, 19.61 ppm.
HPLC (방법 B): 체류 시간: 8.92 min, 순도: 99.4%. 키랄 HPLC: >99.9%(컬럼 AD, AS, OD 및 OJ에서).
선광도(optical rotation)(α): +2.53o (1.7 g/100 mL THF, 25 oC).
실시예 65
본 실시예는 특정의 링커-페이로드의 분석을 기술한다.
링커-페이로드는 항체와 접합시켜 사이크롤덱스트린 모이어티의 존재하에서의 링커-페이로드를 사이클로덱스트린 모이어티의 부재하에서의 링커-페이로드와 비교하기 전에 수개의 물리화학적 검정 및 효소 검정으로 평가하였다.
다음의 시험은 사이클로덱스트린 모이어티를 지닌 링커-페이로드 및 사이클로덱스트린 모이어티를 지니지 않은 링커-페이로드의 용해도를 검정한다.
시험 화합물을 DMSO 속에 용해하여 LC-MS 방법 A 또는 B를 사용한 표준 곡선을 구축하였다. 시험 샘플을 물 속에 용해시키고 10분 동안 초음파처리한 다음, 원심분리하였다. 상부의 선명한 용액을 동일한 방법 A 또는 B를 사용하여 분석하고 용해도를 이의 피크 부위를 기반으로 하여 계산하였다. 도 12에 실시예 49의 용해도 결과를 나타낸다. 상응하는 링커-페이로드(실시예 47)는 검출가능한 수준 이하의 수 용해도를 가졌다.
참고: 도 12. 실시예 49 화합물의 용해도.
Figure pct00476
상세한 시험 과정은 다음과 같았다:
1. 0.5 mg의 시험 화합물을 0.5 mL의 DMSO내로 용해하였다.
·DMSO 용액(1 mg/mL, 0.5 mL, 0.5 mg)을 물(4.5 mL)로 희석하여 용액 A(0.1 mg/mL, 5 mL, 0.5 mg)를 수득하였다.
· 0.5 mL의 용액 A(0.1 mg/mL, 0.5 mL, 0.05 mg)를 물(0.5 mL)로 희석하여 용액 B(0.05 mg/mL, 2 mL, 0.05 mg)를 수득하였다.
· 0.5 mL의 용액 A(0.1 mg/mL, 0.5 mL, 0.05 mg)를 물(1.5 mL)로 희석하여 용액 C(0.025 mg/mL, 2 mL, 0.05 mg)를 수득하였다.
· 0.5 mL의 용액 A(0.1 mg/mL, 0.5 mL, 0.05 mg)를 물(4.5 mL)로 희석하여 용액 D(0.01 mg/mL, 5 mL, 0.05 mg)를 수득하였다.
· 0.5 mL의 용액 D(0.01 mg/mL, 0.5 mL, 5 μg)를 물(4.5 mL)로 희석하여 용액 E(1 μg/mL, 5 mL, 0.5 μg)를 수득하였다.
2. 0.05 mg의 화합물을 물(1 mL) 속에 현탁시키고 10분 동안 초음파처리하였다. 원심분리 후, 상기 선명한 용액을 수집하여 포화된 샘플 용액을 제공하였다.
3. 모든 표준 용액 A, B, C, D, E 및 샘플 용액을 LCMS(동일한 방법 및 동일한 주입 용적 사용)로 초음파처리하여 피크 부위를 수득하였다.
4. 표준 곡선을 A-D(X = 농도, Y = 피크 부위)에 따라 계산한다.
5. 계산하여 상기 수득된 함수에 따라 포화된 샘플 용액의 농도를 수득한다.
실시예 66
사이클로덱스트린의 존재 대 부재하에서의 링커-페이로드의 카텝신 B 절단 속도
카텝신 B 검정을 위한 과정을 따르고, 시험 결과를 표 8에 요약하였다.
단계 1: 카텝신 B 완충액: 0.1 M NaOAc/0.01M DTT (pH5.0)
8.3g/L NaOAc, 1.54 g/L DTT를 탈이온수에 용해한다. pH를 HCl/수산화나트륨으로 5.0으로 조절한다.
단계 2: 절단 속도 시험
1. 25 μM의 시험 샘플을 제조한다: 2-mL의 튜브에 0.5 mg의 시험 샘플을 가한 후, 0.2 mL의 DMSO를 가하였다. 용액을 0.8 mL의 0.1 M NaOAc/0.01 M DTT 완충액에 적가하였다. 수득된 혼합물을 5분 동안 초음파처리함으로써 선명한 무색 용액을 수득하였다. 용액의 pH 값은 pH 시험 스트립(test strip)에 따라 대략 5이었다.
2. 검정 완충액을 예비가열한다: 0.1 M NaOAc/0.01 M DTT (pH 5.0)
3. 시험 화합물용 스파이킹 용액(spiking solution): 시험 화합물용 25 μM 스파이킹 용액: 2 μL의 5 mM 스톡 용액(stock solution)을 398 μL의 0.1 M NaOAc/0.01 M DTT 완충액(pH 5.0)에 가한다.
4. 50 mM NaOAc/1 mM EDTA(pH 5.0) 중 0.47 μg/μL 카텝신 B를 제조한다. 얼음 위에 둔다.
5. CA074 샘플의 부재하에서: 4 μL의 0.47 μg/μL 카텝신 B를 196 μL의 25 μM 스파이킹 용액(단계 2로부터)내로 가하고, 튜브를 37℃에서 항온처리한다.
6. CA074 샘플의 사용시: 4 μL의 0.47 μg/μL 카텝신 B와 4 μL의 10 mM 억제제(CA074)를 196 μL의 25 μM 스파이킹 용액(단계 2로부터)에 가하고, 튜브를 항온처리한다.
7. 퀀칭 후, 플레이트를 진탕시키고 이들을 14000 rpm에서 원심분리한다.
8. 각각의 웰로부터의 50 μL의 상층액을 50 μL의 LC/MS 분석용 초 순수한 물(Millipore, ZMQS50F01)을 함유하는 96-웰 샘플 플레이트내로 이전시킨다.
단계 3: 시험 참고 화합물:
9. 검정 완충액: 100 mM Na/K 포스페이트, pH 6.0을, 1.33 mM EDTA 및 2 mM DTT와 함께 예비가열한다.
10. 0.024 μg/μL 카텝신 B를 제조하고: 1 μL의 0.47 μg/μL 카텝신 B 스톡을 19 μL의 검정 완충액(단계 11로부터)내로 가한다.
11. 2 μL의 0.024 μg/μL 카텝신 B(단계 12로부터)를 불투명한 96-웰 플레이트에 가한다.
12. 96 μL의 검정 완충액을 각각의 샘플에 가한다.
13. 2 μL의 10 mM 기질 Z-RR-MNA(200 μM의 최종 농도)를 가한다.
14. 음성 대조군(억제제 존재)의 경우, 2 μL의 10 mM 억제제(CA074): 340 nm의 여기/425 nm의 방출에서 역학적 방식으로 샘플을 즉시 판독한다(플레이트를 3분 동안 30초마다 판독한다).
단계 4: 항온처리 샘플 속에서 카텝신 B의 안전성:
15. 5 μL의 항온처리 샘플을 93 μL의 검정 완충액(단계 11로부터)으로 넣은 다음, 2 μL의 10 mM 기질(Z-RR-MNA)을 가한다.
16. 샘플을 37℃에서 2분 동안 항온처리한다.
17. 샘플을 340 nm의 여기/425 nm의 방출에서 판독한다.
일반적으로, vcPAB-모이어티를 지닌 대부분의 접합체를 capB에 의해 > 50%의 절단율로 절단할 수 있다.
일반적으로, 사이클로덱스트린의 링커내로의 삽입은 카텝신 B 절단율을, 14%(Ex47)로부터 62%(Ex48)로 증가시켰다.
다른 샘플을 시험하여 표 8에 요약하였다. 일반적으로, 대부분의 시험 화합물은 HPLC에서 6 내지 7분 범위의 체류 시간(RT)을 갖는다. RT > 7 min인 경우, cLogP는 5 보다 크며 이들의 수 용해도는 불량하였다.
[표 8]
Figure pct00477
Figure pct00478
[표 8A]
Figure pct00479
Figure pct00480
실시예 67
상이한 pH 완충액 하에서 사이클로덱스트린의 존재 대 부재하에서의 링커-페이로드의 안전성
시험 샘플을 0.5 mg/mL의 20% DMSO + 80% PBS 완충액 속에 pH 5.0, 7.4 또는 8.0에서 용해하였다. 완충액은 다음과 같이 제조하였다:
1. 0.05 M 인산나트륨 및 0.07 M NaCl 완충액, pH 7.4:
· 탈이온수 중 14.505 g/L Na2HPO4_12H2O, 1.483 g/L NaH2PO4_2H2O 및 4.095 g/L NaCl. pH를 인산/수산화나트륨으로 7.40으로 조절한다.
2. 0.5% BSA가 들어있는 PBS:
· 0.5 g의 BSA를 100 mL의 완충액 1에 용해한다.
결과는 DIBAC-친수성 링커-페이로드가 pH 6-8에서 매우 안정하며, >95%이 시험 시간에 남아있음을 나타내었다. 링커의 증가된 친수성은 시간에 걸쳐 링커-페이로드의 수성 안전성을 증가시켰다.
실시예 68
ADC 접합
말레이미드-링커-페이로드의 항체(도 13)에 대한 및 DIBAC-링커-페이로드의 아지도-작용화된 항체에 대한 [3+2] 클릭 반응(도 14)을 통한 접합을 각각 도 13 및 14에 요약하였다.
항체에 접합된 비 부위-특이적인 말레이미드-링커-페이로드에 대한 일반적인 과정 E
본 실시예는 미카엘 부가반응(Michael addition) 또는 티올-말레이미드 결합 형성을 통한 항체 또는 항원-결합 단편에 대한 링커-페이로드 비-부위 특이성의 접합 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 13에 묘사된 화합물을 지칭한다. 항체-시스테인을 통한 접합은 Adcetris®-like ADC를 제조하기 위한 것과 유사한 방법을 사용하여 2 단계로 수행하였다(참고: See, Mol. Pharm. 2015, 12(6), 1863-71). pH 7-8에서 모노클로날 항체(mAb)(50 mM HEPES 중 10 mg/mL, 150 mM NaCl)를 1 mM 디티오트레이톨(항체 mg당 0.006 mg) 또는 TCEP(항체 대해 2.5 몰 당량)로 37℃에서 30분 동안 환원시켰다. 겔 여과(G-25, pH 4.5 아세트산나트륨) 후, 1 내지 10 mg/mL의 농도에서 DMSO 중 실시예 38 화합물을 환원된 항체에 가하고, 반응물을 3 내지 14시간 동안 교반하였다. 수득되는 혼합물을 SEC로 정제하여 순수한 접합체를 생성하였다. DAR(UV) 값은 ADC의 측정된 흡광도 및 항체와 실시예 38 화합물의 여기 효과를 사용하여 측정하였다. 접합 결과는 다음의 표 9에 요약하였다.
미카엘 부가반응을 통한 접합은 Ab-실시예 38로 나타내었다. 참고: 도 13
[표 9]
Figure pct00481
실시예 69
항체에 접합된 알킨-링커-페이로드의 부위-특이적인 접합에 대한 일반적인 과정 F
본 실시예는 부위-특이적인 접합, 일반적으로 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 링커-페이로드에 대한 방법을 입증한다. 본 실시예는 도 14에 묘사된 화합물을 지칭한다.
본 실시예에서, 부위-특이적인 접합체를 2개의 단계로 생산하였다. 제1 단계는 작은 분자, 예를 들면, 소 분자, 예를 들면, 아지드-PEG3-아민(상기 참고)의 Q-tag(Qtag에 대한 참고)를 가진 항체에 대한 미생물 트랜스글루타미나제(MTG)-계 효소 부착(이후 "MTG-계" 접합)이다. 제2 단계는 링커-페이로드의 아지도-작용화된 항체에 대한 [2+3] 사이클로부가반응, 예를 들면, 아지드와 사이클로옥틴 사이의 1,3-이극성 사이클로부가반응을 통한 부착을 사용하였다(aka 구리-유리된 클릭 화학). 참고: Baskin, J. M.; Prescher, J. A.; Laughlin, S. T.; Agard, N. J.; Chang, P. V.; Miller, I. A.; Lo, A.; Codelli, J. A.; Bertozzi, C. R. PNAS 2007 , 104 (43), 16793-7. 도 14에 [2+3] 사이클로부가 반응을 통한 아지도-작용화된 항체로 접합된 DIBAC 모이어티를 가진 링커-페이로드의 예를 나타낸다. 이러한 과정은 부위-특이적인 및 화학량론적 접합체를 약 50 내지 80%의 단리된 수율로 제공하였다.
반응식 10. [2+3] 클릭 반응을 통한 ADC 접합은 도 14에서 Ab-실시예 49로 나타내었다.
단계 1: 아지도-작용화된 항체의 제조.
PBS(pH 6.5 내지 8.0) 중 아글리코실화된 사람 항체 IgG(IgG1, IgG4 등) 또는 N297Q 돌연변이를 지닌 사람 IgG1 동형을 ≥200 몰 당량의 아지도-dPEG3-아민(MW= 218.26 g/mol)과 혼합하였다. 수득되는 용액을 MTG(독일 다름슈타트 소재의 Zedira로부터의 EC 2.3.2.13, 또는 Modernist Pantry [L# 210115A] - ACTIVA TI는 일본의 Ajinomoto로부터의 말토덱스트린을 함유한다)(25 U/mL; mg의 항체당 5U MTG)와 혼합하여 0.5 내지 5 mg/mL의 항체의 최종 농도를 생성하였고, 용액을 이후에 37℃에서 4 내지 24시간 동안 온화하게 진탕하면서 항온처리하였다. 반응을 ESI-MS로 모니터링하였다. 반응 완료 시, 과량의 아민 및 MTG를 SEC 또는 단백질 A 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 아지도-작용화된 항체를 생성하였다. 이러한 생성물은 SDS-PAGE(도 15) 및 ESI-MS(도 16)로 특성화하여다. 아지도-dPEG3-아민을 항체의 2개 부위에 가하여 2DAR 항체-PEG3-아지드 접합체에 대해 204 Da 증가를 생성하였다.
구체적인 실험에서, 7 mL의 칼륨-유리된 PBS 완충액(pH 7.3) 중 N-말단 Q tag 항체(24 mg)를 > 200 몰 당량의 아지도-PEG3-아민(MW 218.26)과 함께 MTG(0.350 mL, 35 U, mTGase, Zedira, 독일 다름슈타트 소재)의 존재하에서 항온처리하였다. 반응물을 37℃에서 온화하게 혼합하면서 밤새 항온처리하였다. 과량의 아지도-PEG3-아민 및 mTGase를 크기 배제 크로마토그래피(SEC, Superdex 200 PG, GE Healthcare)로 제거하였다.
단계 2: 클릭 화학 반응을 사용한 약물의 항체에 대한 부위-특이적인 접합체의 제조.
표 10에서 사람 IgG(IgG1, IgG4, 등)와의 부위-특이적인 항체 약물 접합체를 아지도-작용화된 항체와 알킨 함유 링커-페이로드 사이의 [2+3] 클릭 반응에 의해 제조하였다. 상세한 접합 과정은 다음과 같다. 링커-페이로드(LP)를 지닌 부위-특이적인 항체 접합체는 mAb-PEG 3 -N 3 (1-3 mg/mL)를 적합한 유기 용매, 예를 들면, DMSO, DMF 또는 DMA(즉, 5 내지 20%의 유기 용매를 함유하는 반응 혼합물, v/v) 속에 용해된 ≥6 몰 당량의 LP가 들어있는 수성 매질(예컨대, PBS, 5% 글리세롤을 함유하는 PBS, HBS) 속에서 항온처리함으로써 제조하였다. 반응의 진행은 ESI-MS에 의해 모니터링하고 mAb-PEG 3 -N 3 의 존재는 접합의 완료를 나타내었다. 과량의 LP 및 유기 용매를 SEC에 의해 PBS를 사용한 용출, 또는 산성 완충액을 사용한 용출을 통한 단백질 A 컬럼 크로마토그래피에 이은 트리스(pH8.0)를 사용한 중화로 제거하였다.
구체적인 예에서, 0.800 mL의 PBSg(PBS, 5% 글리세롤, pH 7.4) 중 아지도-작용화된 항체(1 mg)를 6 몰 당량의 DIBAC-PEG4-d-Lys(COT-μ-CD)-VC-PABC-페이로드(DMSO 중 농도 10 mg/mL)로 6 내지 12시간 동안 실온에서 처리하고 과량의 링커 페이로드(LP)를 크기 배제 크로마토그래피(SEC, Superdex 200 HR, GE Healthcare)로 제거하였다.
최종 생성물을 초원심분리로 농축시키고 UV, SEC, SDS-PAGE 및 ESI-MS로 특성화하였다.
표 10에 상응하는 LP로부터의 비-세포독성 스테로이드 항체 접합체(ncADC)의 목록, 네이키드 항체(naked antibody)의 분자량, 아지도-작용화된 항체, LP, 및 ncADC 뿐만 아니라 ESI-DAR 값의 목록을 나타낸다. 표에서, Ab는 항체를 지칭하고, Ab-N3는 아지도-작용화된 항체를 지칭하며, ncADC는 비-세포독성 항체 약물 접합체를 지칭한다.
[표 10]
Figure pct00482
Figure pct00483
Figure pct00484
실시예 70
항체 및 항체-약물-접합체의 특성화를 위한 일반적인 과정 G
정제된 접합체를 SEC, SDS-PAGE, 및 ESI-MS로 분석하였다. 표 10에서 항-Her2-LP 접합체를 항-Her2 항체로부터 표 10에서 LP를 지닌 아지도-작용화된 항체 (항-Her2-PEG3-N3)의 클릭 반응을 통해 생성시켰다. ADC를 SEC(도 15), ESI-MS, 및 SEC(도 16)로 특성화하였다.
SDS-PAGE에 의한 ADC의 특성화
하나의 방법에서, 환원되지 않은 및 환원된 샘플(2 내지 4 μg)을 BenchMark 예비-염색된 단백질 래더(Invitrogen, 제품 번호 10748-010; L# 1671922.)와 함께 포함한 SDS-PAGE 조건을 (1.0 mm x 10 well) Novex 4-20% 트리신-글리신 겔 속에서 레인당 로딩하고 180 V, 300 mA에서 80분 동안 수행하였다. 분석 샘플은 Novex Tris-글리신 SDS 완충액(2X)(Invitrogen, 제품 번호 LC2676)을 사용하여 제조하고 환원 샘플을 10% 2-머캅토에탄올을 함유하는 SDS 샘플 완충액(2X)으로 제조하였다.
도 15에서 대표적인 겔을 나타내며, 이는 환원 조건 하에서 수행된 SDS-PAGE에서 항체 및 ADC의 분자량의 약간의 이동을 나타낸다. 이러한 질량 이동은 경쇄에서는 관측되지 않았다. 그러나, ADC 중쇄의 질량은 네이키드 항체의 것과 비교하여 증가하였다. 검출가능하지 않은 가교-결합된 물질 및 검출가능하지 않은 응집은 존재하지 않았다.
도 15. 항-Her2 항체, 항-Her2-PEG3-N3, 및 항-Her2-EX49의 꼬마지에-염색된 SDS-PAGE 겔. 도 15에서, 레인은 다음의 범례에 따라 표지한다:
Figure pct00485
LC-ESI-MS에 의한 ADC의 특성화.
LC-ESI-MS에 의한 ncADC 샘플에 대한 완전한 질량의 측정을 수행하여 약물-페이로드 분포 프로파일을 측정하고 평균 DAR을 계산하였다. 각각의 시험 샘플(20-50 ng, 5uL)을 Acquity UPLC 단백질 BEH C4 컬럼(10K psi, 300 β, 1.7 μm, 75μm Х 100 mm; 제품 번호 186003810) 위에 로딩시켰다. 3분 탈염 후, 단백질을 용출시키고 질량 스펙트럼을 Waters Synapt G2-Si 질량 분광기를 사용하여 획득하였다.
분리된(deconvoluted) 질량 스펙트럼은 분자량이 145126.0Da인 아글리코실화된 항-Her2 항체에 대한 우세한 피크, 및 분자량이 145932.0Da인 아지도 작용화된 항-Her2 항체에 대한 우세한 피크를 나타내었으며, 이는 806 Da가 이의 아글리코실화된 모 항체(즉, 각각의 아글리코실화된 항체에 대한 4개의 아미노-PEG3-아지드 접합체에 상응함)와 비교하여 증가함을 나타낸다. 또한, 항-Her2-LP 접합체에 대한 우세한 피크는 152166.0Da의 분자량을 가졌으며, 이는 6234Da가 이의 아글리코실화된 모 항체(즉, 각각의 아글리코실화된 항체에 대한 4개의 LP(MW = 1558.5Da) 접합체에 상응함)와 비교하여 증가함을 나타낸다. 표 3에 요약된 바와 같이, 본 문서에서 대부분의 부위-특이적인 ADC는 4DAR를 가진다.
실시예 71
본 실시예는 SEC에 의한 ADC의 특성화를 나타낸다.
분석적 SEC 실험을 Waters 600 장치를 사용하여, Superdex 200(1.0 x30cm) 컬럼 위에서, PBS pH 7.4를 사용하는 0.80 mL/min의 유동 속도로 수행하고, λ = 280 nm에서 Waters 2998 PDA를 사용하여 모니터링하였다. 분석 샘플은 30 내지 100 μL의 시험 샘플이 들어있는 200 μL PBS(pH 7.4)로 구성되었다. 제조 SEC 정제를 GE Healthcare로부터 AKTA를 사용하여, Superdex 200 PG(2.6x60 cm) 컬럼 상에서, PBS pH 7.4로 용출시키는 2 mL/min의 유동 속도에서 수행하고, λ = 280 nm에서 모니터링하였다. 도 16에서의 SEC 결과는 단량체성 mAb 및 이의 접합체에 대한 대표적인 체류 시간을 나타내며 검출가능한 응집 또는 분해가 없었다.
도 16. 항-Her2 Ab, 항-Her2-PEG3-N3, 및 항-Her2-Ex49의 SEC.
실시예 72
본 실시예는 사이클로덱스트린 링커의 존재 및 부재하에서 세포독성 ADC의 생물활성을 나타낸다(도 17).
세포독성 페이로드를 함유하는 CD의 존재 및 부재하에서 ADC의 비교능을 평가하기 위하여, 세포독성 검정은 SKBR3 세포를 사용하였다. SKBR3 세포를 일반적으로 사용하여 aHer2 ADC 활성을 평가하였다. aPRLR ADC를 SKBR3 세포독성 검정에서 대조군 mAb ADC로서 사용하였다. 검정을 위해, 항-Her2 ADC 또는 PRLR ADC의 시험관내 세포독성을 CellTiter-Glo 검정 키트(Promega, 제품 번호 G7573)를 사용하여 평가하였으며, 여기서 존재하는 ATP의 양을 사용하여 배양물 속에 살아있는 세포의 수를 측정한다. 검정을 위해, SKBR3 세포를 6000 세포/웰에서 Nunclon white 96 웰 플레이트에 완전 성장 배지 속에서 씨딩(seeding)하고 37℃에서 5% CO2 속에서 밤새 성장시켰다. 세포 생존능 곡선을 위해, 1:4 일련 희석된 ADC 또는 유리된 페이로드 MMAE를 세포에 비 처리 대조군을 포함하는 100 nM에서 출발하는 농도에서 가한 다음 5일 동안 항온처리하였다. 5일 항온처리 후, 세포를 실온에서 100 μL의 CellTiter-Glo 시약을 5분 동안 항온처리하였다. 상대적인 발광성 단위(RLU)를 Victor 플레이트 판독기(PerkinElmer) 상에서 측정하였다. IC50 값을 10-점 반응 곡선(GraphPad Prism)에 걸쳐 4개의 매개변수 로지스틱 방정식으로부터 측정하였다. 모든 곡선 및 EC50 값을 페이로드 등가물에 대해 교정하였다. 모든 IC50은 nM 농도로 나타내고 사멸된 세포의 퍼센트(사멸%)를 시험한 최대 농도에 대해 보고한다.
표 11 및 도 17에 나타낸 바와 같이, CD(Ex38, Ex40, Ex41, Ex48, Ex42, Ex39)를 함유하는 항-Her2 Ab ADC는 CD를 함유하지 않는 항-Her2 Ab ADC(항-Her2 Ab-Ex36)와 같이 SKBR3 세포를 사멸시키는 데 있어서 유사한 효과 및 효능을 가진다. 항-HER2 ADC의 세트 둘 다는 시험한 최대 농도에서 90% 이상의 사멸을 나타내었다. 본 검정에서, 접합되지 않은 항체는 임의의 효과를 입증하지 않았다. 이들이 CD를 함유하는지 여부에 상관없이, 동형 대조군 ADC는 본 검정에서 임의의 효과를 입증하지 않는다.
[표 11]
Figure pct00486
사이클로덱스트린 링커의 존재 및 부재하에서 스테로이드 ADC의 생물활성을 도 18에 나타낸다.
스테로이드 페이로드를 함유하는 CD의 존재 및 부재하에서 ADC의 비교능을 시험하기 위하여, 293/PRLR/GRE-Luc 세포에서 이들의 활성을 72시간의 항온처리에서 연구하였다. 본 검정을 위해, 20,000개의 세포를 96-웰 플레이트 속에 10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 DMEM을 함유하는 배지(완전 배지) 속에 씨딩하고 37℃에서 5% CO2 속에서 밤새 성장시켰다. 유리 약물 또는 ADC 용량 반응 곡선을 위해, 100 nM 내지 5.1 pM 범위의 일련 희석된 시약을 세포에 가하고 72시간 동안 37℃에서 항온처리하였다. 루시퍼라제 활성을 One-GloTM 시약(Promega, 제품 번호 E6130)을 첨가하여 측정하고 상대적인 광 단위(RLU)를 Victor 광도계(luminometer: Perkin Elmer)에서 측정하였다.　EC50 값은 10-점 반응 곡선 위에서 4개-매개변수 로지스틱 방정식으로부터 GraphPad Prism을 사용하여 측정하였다. 스테로이드의 전달은 293/PRLR/GRE-Luc 세포에서 Luc 리포터의 활성화를 야기할 것이다. 본 검정에서 완전한 활성화는 유리된 페이로드를 사용하여 측정된 최대 활성화의 90 내지 100%로 정의된다. 본 검정의 부분 활성화는 유리 페이로드로 측정한 최대 활성화의 10% 내지 90% 사이의 활성화로 정의된다. 본 검정에서 최소의 활성화는 유리 페이로드로 측정한 최대 활성화의 10% 미만으로 정의된다.
표 12 및 도 18에 나타낸 바와 같이, CD를 함유하는 항-PRLR Ab ADC(항-PRLR Ab-Ex46, 항-PRLR Ab-Ex47)는 CD를 함유하지 않는 항-PRLR Ab ADC(항-PRLR Ab-Ex45)와 같이, 293/PRLR/GRE-Luc 세포내에서 GRE-Luc 리포터를 활성화시키는데 있어서 유사한 효과 및 효능을 갖는다. 본 검정에서, CD를 함유하는지의 여부에 상관없이, 동형 대조군 ADC 뿐만 아니라, 접합되지 않는 항체는 본 검정에서 임의의 유의적인 효과를 입증하지 않았다.
[표 12]
Figure pct00487
사이크로덱스트린의 존재 및 부재하에서 LXR 효능제 ADC의 생체활성. 참고: 도 19.
CD의 존재 및 부재하의 ADC의 비교능을 시험하기 위하여, CD의 존재 및 부재하의 LXR 효능제 항-HER2 Ab ADC를 THP1/LXR-Luc/Her2 생물검정에서 LXR를 활성화시키는 이들의 능력에 대해 시험하였다. 당해 검정에서, THP1/LXR-Luc 세포 또는 THP1/LXR-Luc/Her2 세포를 백색 96 웰 플에이트에 30,000 세포/웰에서 10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 RPMI를 함유하는 배지(완전 배지) 속에서 씨딩하였다. 후속적으로 항체 약물 접합체, 접합되지 않은 항체, 또는 유리된 페이로드의 3배의 일련 희석물을 세포에 100 nM 내지 0.01 nM 범위의 최종 농도에서 가하였다. 48시간 항온처리 후, 루시퍼라제 활성을 One-GloTM 시약(Promega, E6130)을 세포의 각각의 웰에 가한 후 측정하였다. 상대적인 광 단위(RLU)를 Victor 광도계(PerkinElmer)에서 측정하고 EC50 값은 10-점 반응 곡선 위에서 4개-매개변수 로지스틱 방정식(GraphPad Prism)을 사용하여 측정하였다. 본 발명의 LXR 효능제 및 참고 화합물의 EC50 값은 표 13에 나타낸다. ncADC 및 상응하는 LXR 효능제의 EC50 값은 표 13에 나타낸다. 본 검정에서 완전환 활성화는 유리된 페이로드 1d를 사용하여 측정된 최대 활성화의 95% 내지 100% 이상으로 정의된다. 본 검정의 부분 활성화는 유리 페이로드 1d로 측정한 최대 활성화의 10% 내지 94.9% 사이로 정의된다. 본 검정에서 최소의 활성화는 유리 페이로드 1d로 측정한 최대 활성화의 10% 미만으로 정의된다.
표 13 및 도 19에 나타낸 바와 같이, CD를 함유하고 페이로드 1d를 방출하는 항-Her2 Ab ADC(항-HER2 Ab-Ex49)는 CD를 함유하지 않고 페이로드 1d를 방출하는 항-Her2 Ab ADC(항-Her2 Ab-Ex48)와 같이, THP1/Her2/LXR-Luc 세포내에서 LXR을 활성화시키는데 있어서 유사한 효과 및 효능을 갖는다. 페이로드 1f를 방출하는 CD를 함유하는 다른 항-Her2 Ab ADC는 또한 유리 페이로드 1d와 비교하여 완전한 활성화를 입증한다. 본 검정에서, 접합되지 않은 항체는 임의의 효과를 입증하지 않았다. 동형 대조군 ADC는, 이들이 CD를 함유하는지의 여부에 상관없이, 시험한 대부분의 농도에서 유의적인 효과를 나타내지 않았다. 일부 동형 대조군은 시험한 최대 농도에서 일부 부분적인 활성화를 나타내지 않았다.
[표 13]
Figure pct00488
참고: 또한, J. Am. Chem. Soc., 2012, 134(46), 19108-19117; Org. Biomol. Chem., 2009, 7(8), 1680-1688　and US2015/284416A1; Angew. Chem. Int. Ed., 2011, 50(47), 11117-11120; J. Am. Chem. Soc., 2012, 134 (46), 18886-18888; Synthesis (Germany), 2014 46(5), 669-677.
실시예 73
사이클로덱스트린 모이어티를 링커내에 가하는 경우 스테로이드 또는 LXR 효능제 페이로드에 대한 절단 효능의 효과를 시험하기 위하여, 카텝신 B 절단 검정을 수행하였다. 검정을 위해, 링커-페이로드 스톡 용액(DMSO 중 10 mM의 링커-페이로드)을 100 mM NaOAc, 10 mM 디티오트레이톨의 용액에, pH 5에서 가하여 50 μM 기질 용액을 수득하였다. 50 mM NaOAc, 1 mM EDTA 중 사람 간 카텝신 B(Athens Research & Technology, 제품 번호 16-12-030102)를 pH 5에서 기질 용액에 가하였다. 카텝신 B 및 기질 용액을 10 mM의 카텝신 B 억제제(CA074; APE Bio, 제품 번호 A1926)의 존재 및 부재하에 혼합하고, 37℃에서 4시간 동안 항온처리하였다. 4시간 항온처리 후, 아세트산 및 이어서 아세토니트릴을 가하여 반응을 중지시켰다. 퀀칭된 샘플을 이어서 14,000 rpm에서 원심분리하였다. 이어서 수득되는 상층액의 분취량(aliquot)을 동일한 용적의 물로 희석시키고 LC/MS로 분석하여 방출된 페이로드의 양을 측정하였다. 카텝신 B의 안전성 및 활성은 카텝신 B에 대한 200 μM 형광발생소 기질(Santa Cruz Biotechnology, 제품 번호 207975)(340 nm의 여기/425 nm의 방출에서 형광성)과 함께 항온처리함으로써 확인하였다.
표 14에 나타낸 바와 같이, 사이클로덱스트린의 부재하에서 LXR 효능제 링커 페이로드는 카텝신 B로 4시간 동안 처리한 경우 13.6%의 유리된 페이로드 방출을 가졌지만, 사이클로덱스트린의 존재하에서 LXR 효능제 링커 페이로드는 카텝신 B로 4시간 동안 처리하는 경우 38.5%의 유리 페이로드 방출을 가졌다. 사이클로덱스트린의 부재하에서 스테로이드 링커 페이로드는 카텝신 B로 4시간 동안 처리하는 경우 7.5 내지 17.2%의 유리 페이로드 방출을 가졌지만, 사이클로덱스트린의 존재하에서 스테로이드 링커 페이로드는 카텝신 B로 4시간 동안 처리하는 경우 28.9%의 유리 페이로드 방출을 가졌다.
[표 14]
Figure pct00489
실시예 74
항-MSR1 항체 LXR 효능제 비-세포독성 ADC에 대한 사이클로덱스트린 링커의 첨가의 효과를 측정하기 위해, 시험관내에서, 세포계 LXR 반응성 루시퍼라제 리포터 검정을 개발하였다. 검정 세포주를 생성하기 위해, LXR 조절된 루시퍼라제 리포터 유전자[Cignal Lenti LXR Reporter(luc) 키트(Qiagen, 제품 번호 CLS-001L)]를 THP1 세포내로 형질도입하고 세포를 푸로마이신 속에서 2주 동안 선택하였다. 렌티바이러스는 최소의 CMV 프로모터 및 LXR 전사 반응 요소의 탄뎀 반복체(tandem repeat)의 조절하에서 개똥벌레 루시퍼라제 유전자를 발현한다. 수득되는 세포주는 THP1/LXR-Luc 세포로 지칭된다.
검정을 위해, THP1/LXR-Luc 세포를 96 웰 플레이트에 40,000 세포/웰에서10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 RPMI를 함유하는 배지 속에서 씨딩하고, 후속적으로 200 nM 포르볼 미리스테이트 아세테이트로 3일 동안 분화시켰다. 3일 분화시킨 후, 신선한 배지 속에서 항체 약물 접합체의 3배 일련 희석물을 세포에 100 nM 내지 0.01 nM 범위의 농도에서 가하였다. 플레이트 속의 마지막 웰은 배지만을 함유하는 블랭크 대조군으로서 제공하였다. 48시간 후, 루시퍼라제 활성을One-GloTM 시약(Promega, 제품 번호 E6130)을 각각의 웰에 첨가한 후 측정하였다. 상대적인 광 단위(RLU)를 Victor 광도계(PerkinElmer)에서 측정하고 EC50 값을 10-점 용량 반응 곡선에 걸쳐 4개-매개변수 로지스틱 방정식(GraphPad Prism)을 사용하여 측정하였다. 시험한 각각의 분자의 EC50 값은 표 15에 나타낸다. 신호 대 노이즈(signal to noise: S/N)는 각각의 항-MSR1 항체에 대한 표준 8개의 RLU에 걸쳐 표준 1개의 RLU를 계산함으로써 측정하였다.
표 15에 나타낸 바와 같이, 사이클로덱스트린의 부재하에서 LXR 효능제 링커 페이로드와 접합된 H1H21234N-N297Q(H1H21234N-N297Q-Ex48)는 1.77 nM의 EC50 값 및 16의 S/N 값으로 THP1/LXR-Luc 세포의 자극을 입증하였다. 사이클로덱스트린의 존재하에서 LXR 효능제 링커 페이로드와 접합된 H1H21234N-N297Q(H1H21234N-N297Q-실시예 49)는 1.99 nM의 EC50 값 및 17의 S/N 값으로 THP1/LXR-Luc 세포의 자극을 입증하였다.
[표 15]
Figure pct00490
실시예 75
항-MSR1 항체 스테로이드 비-세포독성 ADC의 활성에 대한 사이클로덱스트린 링커의 첨가의 임의의 효능이 존재하는지를 측정하기 위하여, 시험관내 지다당류(LPS) 매개된 IL-1β 방출 검정을 수행하였다. 검정을 위해, THP-1 세포를 96 웰 플레이트에 40,000 세포/웰에서 10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 RPMI를 함유하는 배지 속에서 씨딩하고, 200 nM 포르볼(Phorbol) 미리스테이트 아세테이트(PMA)로 3일 동안 분화시켰다. 3일 분화 후, 신선한 배지 속에서, 항체 약물 접합체의 3배 일련 희석물을 세포에 100 nM 내지 0.01 nM 범위의 최종 농도로 가하였다. 마지막 웰은 배지만을 함유하는 블랭크 대조군으로 두었다. 72 시간 후, 세포를 5 μg/mL의 LPS(InVivoGen, 제품 번호 tlrl-eklps)로 5시간 동안 처리하였다. 세포 배지를 이후 수집하고 IL-1β를 V-PLEX 전염증성 패널 1 사람 키트(Meso Scale Diagnostics, 제품 번호 15049D-2)를 사용하여 제조업자의 지시에 따라 측정하였다. 후속적으로, 플레이트를 MSD 플레이트 판독기(Meso Scale Discovery) 상에서 판독하였다. IC50 값은 10-점 반응 공선에 걸쳐 4개-매개변수 로지스틱 방정식(GraphPad Prism)으로부터 측정하였다. 모든 IC50 값은 몰(M) 농도로 나타낸다.
표 16에 나타낸 바와 같이, 사이클로덱스트린의 부재하에서 스테로이드 링커 페이로드로 접합된 H1H21234N-N297Q (H1H21234N-N297Q-Ex 58)는 1.73 nM의 IC50 값으로 THP1 세포로부터 LPS 매개된 IL-1β 방출의 억제 및 97.2 pg/mL 아래로 방출된 IL-1β의 감소를 가짐을 입증하였다. 사이클로덱스트린의 부재하에서 스테로이드 링커 페이로드로 접합된 H1H21234N-N297Q(H1H21234N-N297Q-Ex 59)는 1.33 nM의 IC50 값으로 THP1 세포로부터 LPS 매개된 IL-1β 방출의 억제 및 126.46 pg/mL 아래로 방출된 IL-1β의 감소를 가짐을 입증하였다. 접합되지 않은 항체는 22.9 nM의 IC50 값으로 THP1 세포로부터 LPS 매개된 IL-1β 방출의 억제 및 343.7 pg/mL 아래로 방출된 IL-1β의 감소를 가짐을 입증하였으며 접합된 항체와 비교하여 효과의 결여를 나타내었다.
[표 16]
Figure pct00491
상기 기술된 구현예 및 실시예는단지 설명하기 위한 것이며 비-제한적이다. 당해 분야의 기술자는 단지 통상의 실험, 특정 화합물의 다수의 등가물, 물질 및 과정을 사용하여 인지할 수 있거나 확인할 수 있을 것이다. 모든 이러한 등가물은 이러한 범위 내에 있는 것으로 고려되며 첨부된 청구범위에 포함된다.

Claims (69)

  1. 적어도 하나의 페이로드 모이어티(payload moiety)에 연결되고 공유결합성 링커(covalent linker)를 통해 적어도 하나의 사이클로덱스트린에 연결된 결합제(binding agent)를 포함하는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서, 여기서 상기 공유결합성 링커는 각각의 결합제, 페이로드 모이어티, 및 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합되는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  2. 제1항에 있어서, 화학식 (I)에 따르는 화합물:
    Figure pct00492

    상기 화학식 (I)에서,
    BA는 결합제이고;
    L은 3가 링커이며;
    CD는 사이클로덱스트린 잔기이고;
    첨자 n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4의 정수이며;
    PA는 페이로드 잔기이다.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 화학식 (Ia)에 따르는 화합물:
    Figure pct00493

    화학식 (Ia)에서,
    BA는 결합제이고;
    LL은 3가 링커이며;
    RG는 반응성 링커 잔기이고;
    SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹(spacer group)이고;
    첨자 n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4의 정수이며;
    PA는 페이로드이다.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ib) 또는 (Ic)에 따르는 화합물; 및 이의 레지오이성체(regioisomer) 및 입체이성체:
    Figure pct00494

    화학식 (Ib) 또는 (Ic)에서,
    BA는 결합제이고;
    LL은 3가 링커이며;
    SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서이고;
    환 A는 트리아졸에 융합되며 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클로알킬, 및 헤테로사이클로알케닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; 여기서 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클로알킬, 및 헤테로사이클로알케닐은 알킬, OH, 또는 NR a R b 로 임의 치환되며, 여기서 각각의 R a 및 R b 는 알킬 또는 H이고;
    n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4의 정수이며;
    PA는 페이로드이다.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ib1) 또는 (Ib2)에 따르는 화합물; 및 이의 레지오이성체 및 입체이성체:
    Figure pct00495

    화학식 (Ib1) 및 (Ib2)에서,
    BA는 결합제이고;
    LL은 3가 링커이며;
    SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서이며;
    n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4의 정수이며;
    PA는 페이로드이다.
  6. 제1항에 있어서, 화학식 (Ib3), (Ib4), (Ib5), 또는 (Ib6)의 화합물:
    Figure pct00496
    .
  7. 제1항에 있어서, 화학식 (Ic)에 따르는 화합물:
    Figure pct00497
    .
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 화학식 (Id)에 따르는 화합물:
    Figure pct00498

    화학식 (Id)에서,
    BA는 결합제이고;
    RG는 반응성 그룹 잔기이며;
    SP 1 및 SP 2 는 각각, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이며, 여기서 SP 1 은 3가 링커를 포함하고;
    AA 1 은 아미노산 잔기를 포함하는 3가 링커이며;
    AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고;
    PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며;
    PAB는
    Figure pct00499
    이고, 여기서
    Figure pct00500
    는 이를 통해 PAB가 화학식내에서 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내고;
    CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 사이클로덱스트린 잔기이고, 여기서 적어도 하나의 CD는 존재하며;
    첨자 n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4의 정수이며;
    첨자 m은 0 내지 5의 정수이고;
    첨자 p는 0 또는 1이며;
    PA는 페이로드 모이어티이다.
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ie)에 따르는 화합물:
    Figure pct00501

    화학식 (Ie)에서,
    BA는 결합제이고;
    RG는, 각각의 예에서 독립적으로, 반응성 그룹 잔기이고;
    SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이며;
    AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고;
    PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며;
    PAB는
    Figure pct00502
    이고, 여기서
    Figure pct00503
    는 이를 통해 PAB가 화학식에서 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내고;
    CD는 사이클로덱스트린 잔기이며;
    첨자 n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4의 정수이며;
    첨자 m은 0 내지 5의 정수이고;
    첨자 p는 0 또는 1의 정수이며;
    PA는 페이로드 모이어티이다.
  10. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ie1)에 따르는 화합물:
    Figure pct00504

    화학식 (1e1)에서
    BA는 결합제이고;
    RG는 반응성 그룹 잔기이며;
    SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고;
    AA 2 는 디-펩타이드 잔기이며;
    PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고;
    PAB는
    Figure pct00505
    이며, 여기서
    Figure pct00506
    는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내고;
    CD는 사이클로덱스트린 잔기이며;
    첨자 n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4의 정수이며;
    첨자 m은 0 내지 5의 정수이고;
    첨자 p는 0 또는 1이며;
    PA는 페이로드 모이어티이다.
  11. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ie2)에 따르는 화합물:
    Figure pct00507

    화학식 (1e2)에서,
    BA는 결합제이고;
    RG는 반응성 그룹 잔기이며;
    SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고;
    AA 2는 디-펩타이드 잔기이며;
    PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고;
    PAB는
    Figure pct00508
    이며, 여기서
    Figure pct00509
    는 이를 통해 PAB가 화학식 내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내고;
    CD는 사이클로덱스트린 잔기이고;
    첨자 n은 1 내지 30의 정수이며;
    첨자 m은 0 내지 5의 정수이고;
    첨자 p는 0 또는 1이며;
    PA는 페이로드 모이어티이다.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (If)에 따르는 화합물:
    Figure pct00510

    화학식 (If)에서,
    BA는 결합제이고;
    RG는, 각각의 예에서 독립적으로, 반응성 링커 잔기이며;
    SP 1 , SP 2 , 및 SP 3 는 각각, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고;
    AA 2 는 디-펩타이드 잔기이며;
    PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고;
    PAB는
    Figure pct00511
    이며, 여기서
    Figure pct00512
    는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내고;
    CD는 사이클로덱스트린 잔기이며;
    첨자 n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4의 정수이며;
    첨자 m은 0 내지 5의 정수이고;
    첨자 p는 0 또는 1이며;
    첨자 q는 0 내지 5의 정수이고;
    PA는 페이로드 모이어티이다.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, CD는, 각각의 예에서 독립적으로, α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린, 및 γ-사이클로덱스트린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, CD가, 각각의 예에서 독립적으로, 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00513

    Figure pct00514

    여기서,
    Figure pct00515
    는 이를 통해 CD가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타낸다.
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, RG가, 각각의 예에서 독립적으로, 클릭 화학 잔기(click chemistry residue)인 화합물.
  16. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, RG가, 각각의 예에서 독립적으로, 트리아졸 또는 융합된 트리아졸을 포함하는 화합물.
  17. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, RG가, 각각의 예에서 독립적으로,
    Figure pct00516

    Figure pct00517

    Figure pct00518
    및
    Figure pct00519
    로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서
    Figure pct00520
    가 이를 통해 RG가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내는 화합물.
  18. 제8항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00521
    가
    Figure pct00522

    Figure pct00523

    Figure pct00524

    Figure pct00525

    Figure pct00526

    Figure pct00527
    로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체 형태, 또는 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물로서, 여기서:
    각각의
    Figure pct00528
    가 결합제에 대한 결합이고;
    각각의
    Figure pct00529
    가 페이로드에 대한 결합이고;
    R 9 가 -CH3 또는 -(CH2)3N(H)C(O)NH2인 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체 형태, 또는 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물.
  19. 제8항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00530

    Figure pct00531

    Figure pct00532

    Figure pct00533

    Figure pct00534

    Figure pct00535

    Figure pct00536

    Figure pct00537

    Figure pct00538

    Figure pct00539

    Figure pct00540
    로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체 형태, 또는 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물로서, 여기서:
    각각의
    Figure pct00541
    는 결합제에 대한 결합이고;
    각각의
    Figure pct00542
    은 페이로드에 대한 결합인 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체 형태, 또는 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물.
  20. 제3항에 있어서,
    -LL-이 화학식 (LL1)에 따르는 화합물:
    Figure pct00543

    화학식 (LL1)에서,
    R AA1 , R AA2 , 및 R AA3 은 각각 독립적으로, 아미노산 측쇄이고, 이중 적어도 하나는 -SP-RG-SP-CD에 직접 또는 간접적으로 결합되고, 여기서 하나 또는 둘 다의 SP는 부재할 수 있다.
  21. 제20항에 있어서, R AA1 가 CD에 직접 또는 간접적으로 결합된 라이신 측쇄이고 R AA2 및 R AA3 가 각각 발린 및 시트룰린 측쇄 또는 발린 및 알라닌 측쇄 중 어느 하나인 화합물.
  22. 제8항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, LL이
    Figure pct00544
    또는
    Figure pct00545
    인 화합물.
  23. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 스페이서 그룹이 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기서 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 첨자 u는 1 내지 8의 정수이며, 첨자 v는 1 내지 8의 정수인 화합물.
  24. 제8항 내지 제12항 및 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 첨자 m, q 또는 e가 4인 화합물.
  25. 제8항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 첨자 p가 1인 화합물.
  26. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 첨자 n이 2 내지 4인 화합물.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제(BA)가 항체 또는 이의 항원-결합 단편인 화합물.
  28. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 AXL, BAFFR, BCMA, BCR-목록 성분, BDCA2, BDCA4, BTLA, BTNL2, BTNL3, BTNL8, BTNL9, C10 또는 f54, CCR1, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR9, CCR10, CD11c, CD137, CD138, CD14, CD168, CD177, CD19, CD20, CD209, CD209L, CD22, CD226, CD248, CD25, CD27, CD274, CD276, CD28, CD30, CD300A, CD33, CD37, CD38, CD4, CD40, CD44, CD45, CD46, CD48, CD5, CD52, CD55, CD56, CD59, CD62E, CD68, CD69, CD70, CD74, CD79a, CD79b, CD8, CD80, CD86, CD90.2, CD96, CLEC12A, CLEC12B, CLEC7A, CLEC9A, CR1, CR3, CRTAM, CSF1R, CTLA4, CXCR1/2, CXCR4, CXCR5, DDR1, DDR2, DEC-205, DLL4, DR6, FAP, FCamR, FCMR, FcR의 것(FcR's), 화이어(Fire), GITR, HHLA2, HLA 제II 부류, HVEM, ICOSLG, IFNLR1, IL10R1, IL10R2, IL12R, IL13RA1, IL13RA2, IL15R, IL17RA, IL17RB, IL17RC, IL17RE, IL20R1, IL20R2, IL21R, IL22R1, IL22RA, IL23R, IL27R, IL29R, IL2Rg, IL31R, IL36R, IL3RA, IL4R, IL6R, IL5R, IL7R, IL9R, 인테그린, LAG3, LIFR, MAG/Siglec-4, MMR, MSR1, NCR3LG1, NKG2D, NKp30, NKp46, PDCD1, PROKR1, PVR, PVRIG, PVRL2, PVRL3, RELT, SIGIRR, Siglec-1, Siglec-10, Siglec-5, Siglec-6, Siglec-7, Siglec-8, Siglec-9, SIRPA, SLAMF7, TACI, TCR-목록 성분/assoc, PTCRA, TCRb, CD3z, CD3, TEK, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, TIGIT, TLR2, TLR4, TROY, TSLPR, TYRO, VLDLR, VSIG4, 및 VTCN1로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항원에 대해 선택적인 항체, 또는 이의 항원-결합 단편인 화합물.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, PA가 돌라스타틴, 아우리스타틴, 마이탄시노이드, 식품 알칼로이드, 탁산, 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid), 스테로이드, LXR 조절인자, 및 이의 조합물로 이루어진 그룹으로부터 선택된 그룹의 잔기인 화합물.
  30. 제1항에 있어서, 화합물이
    Figure pct00546

    Figure pct00547

    Figure pct00548

    Figure pct00549

    Figure pct00550

    Figure pct00551

    Figure pct00552

    Figure pct00553

    Figure pct00554

    Figure pct00555
    로부터 선택되는 화합물, 또는 이의 입체이성체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 용매화물로서, 여기서 Ab가 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고; PA가 페이로드 모이어티이며; n이 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4의 정수인 화합물, 또는 이의 입체이성체 형태, 이의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 용매화물.
  31. 제1항에 있어서, 화합물이
    Figure pct00556

    Figure pct00557

    Figure pct00558

    Figure pct00559

    Figure pct00560

    Figure pct00561

    Figure pct00562

    Figure pct00563

    Figure pct00564

    Figure pct00565

    Figure pct00566

    Figure pct00567

    Figure pct00568
    로부터 선택된 화합물, 또는 이의 입체이성체 형태, 이의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 용매화물로서, 여기서 Ab가 항체 또는 이의 항체-결합 단편인 화합물, 또는 이의 입체이성체 형태, 이의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 용매화물.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  33. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따르는 화합물 또는 제32항에 따른 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하여, 상기 환자에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법.
  34. 적어도 하나의 페이로드 모이어티에 결합되고 적어도 하나의 사이클로덱스트린 모이어티에 공유결합성 링커를 통해 결합된 반응성 링커를 포함하는 화합물로서, 여기서 상기 공유결합성 링커가 각각의 반응성 링커, 페이로드 모이어티, 및 사이클로덱스트린 모이어티에 직접 또는 간접적으로 결합되는 화합물.
  35. 제34항에 있어서, 화학식 (II)에 따르는 화합물:
    Figure pct00569

    상기 화학식 (II)에서,
    RG'는 반응성 그룹이고;
    L은 3가 링커이며;
    CD 는 사이클로덱스트린 잔기이고;
    PA는 페이로드 잔기이다.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, 화학식 (IIa)에 따르는 화합물:
    Figure pct00570

    상기 화학식 (IIa)에서,
    RG'는 반응성 그룹이고;
    RG는 반응성 링커 잔기이며;
    LL은 3가 링커이며;
    SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹이고;
    PA는 페이로드이다.
  37. 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIb) 또는 (IIc)에 따르는 화합물; 및 이의 레지오이성체, 입체이성체, 및 혼합물:
    Figure pct00571

    상기 화학식 (IIb) 또는 (IIc)에서,
    RG'는 반응성 그룹이고;
    LL은 3가 링커이며;
    SP는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서이며;
    환 A는 트리아졸에 융합되고 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알케닐, 및 헤테로사이클로알키닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되며;
    여기서 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알케닐, 및 헤테로사이클로알키닐은 알킬, OH, 또는 NRaRb로 임의 치환되고, 여기서 각각의 Ra 및 Rb는 알킬 또는 H이고;
    PA는 페이로드이다.
  38. 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIb1) 또는 (IIb2)에 따르는 화합물; 및 이의 레지오이성체, 입체이성체, 및 혼합물:
    Figure pct00572

    상기 화학식 (IIb1) 또는 (IIb2)에서,
    RG'는 반응성 그룹이고;
    LL은 3가 링커이며;
    SP는, 각각의 경우 독립적으로, 부재하거나 스페이서이며;
    PA는 페이로드이다.
  39. 제36항에 있어서, 화학식 (IIb3), (IIb4), (IIb5) 또는 (IIb6)에 따르는 화합물:
    Figure pct00573

    상기 화학식 (IIb3), (IIb4), (IIb5) 또는 (IIb6)에서,
    첨자 e는 0 내지 4의 정수이다.
  40. 제36항에 있어서, 화학식 (IIc1)에 따르는 화합물:
    Figure pct00574
    .
  41. 제34항 또는 제35항에 있어서, 화학식 (IId)에 따르는 화합물:
    Figure pct00575

    상기 화학식 (IId)에서,
    RG'는 반응성 그룹 잔기이고;
    SP 1 및 SP 2 는 각각, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고;
    AA 1 은 아미노산 잔기를 포함하는 3가 링커이고;
    AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고;
    PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며;
    PAB는
    Figure pct00576
    이고, 여기서
    Figure pct00577
    는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내며;
    CD는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 사이클로덱스트린 잔기이고, 여기서 적어도 하나의 CD는 존재하며;
    첨자 m은 0 내지 5의 정수이고;
    첨자 p는 0 또는 1이며;
    PA는 페이로드 모이어티이다.
  42. 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIe)에 따르는 화합물:
    Figure pct00578

    상기 화학식 (IIe)에서,
    RG'는 반응성 그룹이고;
    RG는, 각각의 예에서 독립적으로, 반응성 그룹 잔기이며;
    SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고;
    AA 2 는 디-펩타이드 잔기이며;
    PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고;
    PAB는
    Figure pct00579
    이고, 여기서
    Figure pct00580
    는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내며;
    CD는 사이클로덱스트린 잔기이고;
    첨자 m은 0 내지 5의 정수이며;
    첨자 p는 0 또는 1이고;
    PA는 페이로드 모이어티이다.
  43. 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIe1)에 따르는 화합물:
    Figure pct00581

    상기 화학식 (IIe1)에서,
    RG'는 반응성 그룹이고;
    SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이며;
    AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고;
    PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며;
    PAB는
    Figure pct00582
    이고, 여기서
    Figure pct00583
    는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내며;
    CD는 사이클로덱스트린 잔기이고;
    첨자 m은 0 내지 5의 정수이며;
    첨자 p는 0 또는 1이며;
    PA는 페이로드 모이어티이다.
  44. 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIe2)에 따르는 화합물:
    Figure pct00584

    상기 화학식 (IIe)에서,
    RG'는 반응성 그룹이고;
    SP 2 는, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이며;
    AA 2 는 디-펩타이드 잔기이고;
    PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이며;
    PAB는
    Figure pct00585
    이고, 여기서
    Figure pct00586
    는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내며;
    CD는 사이클로덱스트린 잔기이고;
    첨자 m은 0 내지 5의 정수이며;
    첨자 p는 0 또는 1이며;
    PA는 페이로드 모이어티이다.
  45. 제34항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIf)에 따르는 화합물:
    Figure pct00587

    상기 화학식 (IIf)에서,
    RG'는 반응성 그룹 잔기이고;
    RG는 반응성 그룹 잔기이며;
    SP 1 , SP 2 , 및 SP 3 은, 각각의 예에서 독립적으로, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고;
    AA 2 는 디-펩타이드 잔기이며;
    PEG는 폴리에틸렌 글리콜 잔기이고;
    PAB는
    Figure pct00588
    이며, 여기서
    Figure pct00589
    는 이를 통해 PAB가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자이고;
    CD는 사이클로덱스트린 잔기이며;
    첨자 m은 0 내지 5의 정수이며;
    첨자 p는 0 또는 1이며;
    첨자 q는 0 내지 5의 정수이며;
    PA는 페이로드 모이어티이다.
  46. 제34항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, CD가, 각각의 예에서 독립적으로, α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린, 및 γ-사이클로덱스트린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물.
  47. 제34항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, CD가 각각의 예에서 독립적으로, 다음으로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00590

    Figure pct00591

    여기서,
    Figure pct00592
    는 이를 통해 CD가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타낸다.
  48. 제34항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, RG'가 각각의 예에서 독립적으로, 클릭 화학 반응성 그룹인 화합물.
  49. 제34항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, RG'가 각각의 예에서 독립적으로,
    Figure pct00593

    Figure pct00594
    및
    Figure pct00595
    로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물로서, 여기서
    Figure pct00596
    가 이를 통해 RG'가 화학식내 인접한 그룹에 결합되는 원자를 나타내는 화합물.
  50. 제41항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00597
    가
    Figure pct00598

    Figure pct00599

    Figure pct00600
    로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체, 또는 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물로서, 여기서:
    각각의
    Figure pct00601
    가 결합제에 대한 결합이고;
    각각의
    Figure pct00602
    가 페이로드에 대한 결합이며;
    R 9 가 -CH3 또는 -(CH2)3N(H)C(O)NH2인 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체, 또는 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물.
  51. 제41항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00603

    Figure pct00604

    Figure pct00605

    Figure pct00606

    Figure pct00607

    Figure pct00608
    로부터 선택된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체 형태, 또는 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물로서, 여기서:
    각각의
    Figure pct00609
    가 페이로드에 대한 결합인 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 입체이성체 형태, 또는 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물.
  52. 제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    -LL-이 화학식
    Figure pct00610
    에 따르는 화합물로서, 여기서 R AA1 , R AA2 , 및 R AA3 이 각각 독립적으로, 아미노산 측쇄이고, 이중 적어도 하나는 -SP-RG-SP-CD에 직접 또는 간접적으로 결합되는 화합물.
  53. 제53항에 있어서, R AA1 이 CD에 직접 또는 간접적으로 결합된 라이신 측쇄이고 R AA2 및 R AA3 이 각각 발린 및 알라닌 측쇄 또는 발린 및 알라닌 측쇄 중 어느 하나인 화합물.
  54. 제41항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, -AA 2 -가
    Figure pct00611
    인 화합물.
  55. 제36항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 스페이서 그룹이, 각각의 예에서 독립적으로, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물.
  56. 제41항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 첨자 m 또는 q 중 어느 하나가 4인 화합물.
  57. 제41항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, p가 1인 화합물.
  58. 제34항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, PA가 돌라스타틴, 아우리스타틴, 마이탄시노이드, 식물 알칼로이드, 탁산, 및 빈카 알칼로이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된 그룹의 잔기인 화합물.
  59. 제34항에 있어서, 화합물이:
    Figure pct00612

    Figure pct00613

    Figure pct00614

    Figure pct00615

    Figure pct00616

    Figure pct00617

    Figure pct00618

    Figure pct00619
    인 화합물, 또는 이의 입체이성체, 또는 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물.
  60. 결합제를 제34항 내지 제60항 중 어느 한 항에 따르는 화합물과, 결합제와 화합물 사이에 결합을 형성하기에 적합한 조건 하에서 접촉시키는 단계를 포함하는, 제1항에 따르는 화합물의 제조 방법.
  61. 링커에 결합된, 제34항 내지 제60항 중 어느 한 항에 따르는 화합물을 포함하는 링커-페이로드.
  62. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 따르는 화합물의 1차 또는 2차 질소 또는 산소에 결합된, 제34항 내지 제60항 중 어느 한 항에 따르는 화합물을 포함하는 링커-페이로드.
  63. 항체, 또는 이의 항원 결합 단편에 결합된, 제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 따르는 화합물 또는 링커-페이로드를 포함하는 항체-약물-접합체.
  64. 대상체에게 유효 치료량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따르는 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 증식성 질환, 대사 질환, 염증, 또는 신경변성 질환을 치료하는 방법.
  65. 대상체에게 유효 치료량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따르는 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 방법.
  66. 대상체에게 유효 치료량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따르는 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 증식성 질환을 치료하는 방법.
  67. 대상체에게 유효 치료량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따르는 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 대사 질환을 치료하는 방법.
  68. 대상체에게 유효 치료량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따르는 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 염증을 치료하는 방법.
  69. 대상체에게 유효 치료량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따르는 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 신경변성 질환을 치료하는 방법.
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