KR20190137108A

KR20190137108A - 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌린 유도체

Info

Publication number: KR20190137108A
Application number: KR1020197031207A
Authority: KR
Inventors: 바르트 루돌프 로마니에 케스텔레인; 쟝-프랑수아 봉팡티; 어윈 코에쎄맨스; 피에르 쟝-마리 베르나르 라보이송; 아르누 디디에 엠 마르샹; 도로테 앨리스 마리에-이브 바르디오트
Original assignee: 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드; 카톨리에케 유니버시테이트 루벤
Priority date: 2017-03-31
Filing date: 2018-03-29
Publication date: 2019-12-10
Also published as: PH12019502201A1; ZA201906395B; ES2884151T3; AR111314A1; EP3601266B1; UA126288C2; SG11201908786VA; CA3055867C; CN110461831A; ECSP19070369A; SI3601266T1; TW201900635A; CA3055867A1; KR102530832B1; US20200121647A1; HUE054678T2; UY37645A; PE20191650A1; CR20190446A; MX2019011606A

Abstract

본 발명은 치환 인돌린 유도체, 이 화합물을 사용하는 것에 의해 뎅기 바이러스 감염을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이고, 또한 약으로서 사용하기 위한, 더 바람직하게는 뎅기 바이러스 감염을 치료 또는 예방하기 위한 약으로서 사용하기 위한 이 화합물에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 이 화합물의 제약 조성물 또는 복합 제제(combination preparation), 약으로서 사용하기 위한, 더 바람직하게는 뎅기 바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한 조성물 또는 제제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌린 유도체

모기 또는 진드기에 의해 전염되는 플라비바이러스(flavivirus)는 인간에서 생명을 위협하는 감염, 예컨대 뇌염 및 출혈열을 야기한다. 플라비바이러스 뎅기의 4가지의 특유한, 그러나 밀접하게 관련된 혈청형, 소위 DENV-1, -2, -3, 및 -4가 공지되어 있다. 뎅기는 전 세계적으로 대부분의 열대 및 아열대 지방에서, 주로 도시 및 준도시 지역에서 풍토성이다. 세계 보건 기구 (World Health Organization; WHO)에 따르면, 25억명의 사람들 (이중 10억명은 아동임)이 DENV 감염의 위험이 있다 (WHO, 2002). 뎅기열 [dengue fever; DF]의 추정된 5000만 내지 1억의 사례, 중증 뎅기 질환 (즉, 뎅기 출혈열 [dengue hemorrhagic fever; DHF] 및 뎅기 쇽 증후군 [dengue shock syndrome; DSS])의 50만의 사례, 및 20,000명 초과의 사망이 매해 전 세계적으로 일어난다. DHF는 풍토성 지역에서 아동 사이에서의 입원 및 사망의 주된 원인이 되었다. 대체로, 뎅기는 아르보바이러스 질환의 가장 일반적인 원인을 대표한다. 최근 라틴 아메리카, 동남아시아 및 서태평양에 위치하는 국가(브라질, 푸에르토리코, 베네수엘라, 캄보디아, 인도네시아, 베트남, 타일랜드를 포함함)에서의 대규모 발생 때문에 뎅기 사례의 수는 지난 몇 년간 극적으로 상승하였다. 상기 질환이 새로운 지역으로 확산되고 있음에 따라 뎅기 사례의 수가 증가하고 있을 뿐만 아니라, 그 발생도 더 심각해지는 경향이 있다.

뎅그박시아(Dengvaxia)^® 백신의 이용가능성과 함께 뎅기에 대한 백신의 개발에 있어서 진전이 이루어지고 있지만, 많은 어려움에 부딪히고 있다. 이들은 항체-의존성 강화(antibody-dependent enhancement; ADE)로 언급되는 현상의 존재를 포함한다. 하나의 혈청형에 의한 감염으로부터의 회복은 그 혈청형에 대한 평생 면역을 제공하지만 다른 3가지 혈청형 중 하나에 의한 후속 감염에 대해서는 단지 부분적이고 일시적인 보호를 부여한다.

또 다른 혈청형에 의한 감염 후, 기존의 이종 항체는 신규 감염 뎅기 바이러스 혈청형과 복합체를 형성하지만 그 병원체를 중화시키지 못한다. 대신, 세포 내로의 바이러스 침입이 촉진되어, 제어되지 않은 바이러스 복제 및 더 높은 피크 바이러스 역가를 야기하는 것으로 생각된다. 1차 및 2차 감염 둘 다에서, 더 높은 바이러스 역가는 더 중증의 뎅기 질환과 연관된다. 모체 항체는 모유 수유에 의해 유아에게 용이하게 전달될 수 있기 때문에, 이것은 아동이 성인보다 더 많이 중증 뎅기 질환에 걸리는 이유 중 하나일 수 있다.

고토착병성(hyper endemic) 지역으로도 칭해지는, 2가지 이상의 혈청형이 동시에 돌고 있는 장소에서는, 더 중증의 2차 감염을 경험할 위험의 증가로 인해 심각한 뎅기 질환의 위험이 유의하게 더 높다. 게다가, 고풍토성(hyper-endemicity)의 상황에서, 전염성이 더 강한 주(strain)의 출현 확률이 증가되며, 이는 다시 뎅기 출혈열(DHF) 또는 뎅기 쇽 증후군의 확률을 증대시킨다.

아에데스 아에깁티(Aedes aegypti) 및 아에데스 알보픽투스(Aedes albopictus) (외줄모기(tiger mosquito))를 포함하는 뎅기 매개 모기는 지구 상에서 북쪽으로 이동하고 있다. 미국 질병 통제 예방 센터(United States (US) Centers for Disease Control and Prevention; CDC)에 따르면, 상기 둘 다의 모기는 현재 미국 남부 텍사스에 편재한다. 뎅기-매개 모기의 북쪽으로의 확산은 미국에 국한되지 않고, 유럽에서도 관찰되었다.

사노피 파스퇴르(Sanofi Pasteur)에 의해 생산된 뎅기 백신인 뎅그박시아^®는 먼저 멕시코에서 승인되었으며, 그 사이에 더 많은 국가에서 승인을 받았다. 그럼에도 불구하고, 상기 백신은, 특히 DENV-1 및 -2에 대한 제한된 효능, 플라비바이러스-나이브(

) 대상체에서의 낮은 효능 및 너무 긴 투약 일정으로 인하여 상당한 개선의 여지가 남아있다.

이러한 결점에도 불구하고, 상기 백신은 풍토성 환경(endemic setting)에서 게임 체인저(game changer)이며, 그 이유는 이것이 대부분의 인구에게 보호를 제공하지만 가장 큰 뎅기 부담을 갖고 있는 매우 어린 유아에게는 보호를 제공하지 않을 가능성이 있기 때문이다. 게다가, 플라비바이러스-나이브 대상체에서의 매우 제한된 효능 및 투약 일정은 비-풍토성 지역으로부터 뎅기-풍토성 지역으로 여행하는 자에게 있어서 이것이 부적당해지게 하고 가치 있는 것이 아니게/비용 효율적이지 않게 만들 가능성이 있다. 뎅기 백신의 상기 결점은 노출 전 예방적 뎅기 항바이러스제가 필요한 이유이다.

더욱이, 오늘날, 뎅기열 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 특이적인 항바이러스 약물은 이용 가능하지 않다. 명백히, 동물에서, 더욱 구체적으로는 인간에서 바이러스 감염, 그리고 특별히 플라비바이러스, 더욱 구체적으로는 뎅기 바이러스에 의해 야기되는 바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한 치료제에 대한 충족되지 못한 의학적 요구는 여전히 크다. 우수한 항바이러스 효력을 가지며, 부작용이 전혀 없거나 부작용 수준이 낮고, 다수의 뎅기 바이러스 혈청형에 대한 광범위한 스펙트럼의 활성을 가지며, 저 독성 및/또는 우수한 약동학적 또는 약력학적 특성을 갖는 화합물이 고도로 필요하다.

국제 공개 제2010/021878호에는 염증성 및 중추성 질환의 치료를 위한 냉 멘톨 수용체 길항제로서의 2-페닐피롤리딘 및 인돌린 유도체가 개시되어 있다. 국제 공개 제2013/045516호에는 뎅기 바이러스 감염의 치료에서 사용하기 위한 인돌 및 인돌린 유도체가 개시되어 있다.

이제 본 발명은 뎅기 바이러스의 모든 네 가지(4가지) 혈청형에 대하여 높고 효력 있는 활성을 나타내는 화합물인 치환 인돌린 유도체를 제공한다.

본 발명은 위에 언급된 문제 중 적어도 하나가 본 발명의 현 화합물에 의해 해결될 수 있다는 예상치 못한 발견을 기반으로 한다.

본 발명은 현재 공지된 모든 네 가지(4가지) 혈청형에 대하여 효력 있는 항바이러스 활성을 보유하는 것으로 밝혀진 화합물을 제공한다. 더욱이, 본 발명은 이들 화합물이 뎅기 바이러스(DENV)의 증식을 효율적으로 억제하는 것을 입증한다. 따라서, 이러한 화합물은 동물, 포유류 및 인간에서 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에서, 더 구체적으로, 뎅기 바이러스에 의한 감염의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있는 유용한 부류의 효력 있는 화합물을 구성한다.

더욱이, 본 발명은 그러한 화합물의 약으로서의 용도 및 동물 또는 포유류에서, 더욱 특히는 인간에서 바이러스 감염, 특히 뎅기 바이러스 패밀리(family)에 속하는 바이러스에 의한 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 약의 제조에 있어서의 그의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이러한 모든 화합물의 제조 방법 및 이를 유효량으로 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

또한 본 발명은 인간에서의 뎅기 바이러스 감염의 치료 또는 예방 방법에 관한 것으로서, 본 방법은 이를 필요로 하는 환자에게 1가지 이상의 다른 약, 예컨대 또 다른 항바이러스제와 선택적으로 조합된 유효량의 1가지 이상의 그러한 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 투여함에 의한 것이다.

본 발명의 일 양태는 임의의 입체화학적 이성질체 형태를 포함하는 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체를 제공하는 것이다:

[화학식 I]

여기서,

R¹은 클로로 또는 플루오로이며,

R²는 -CH₂CH₂OH, 또는 C₃-₅알킬COOH이며;

R³은 트리플루오로메틸, 또는 트리플루오로메톡시이며;

R⁴는 수소, 플루오로, 또는 메톡시이며;

R⁵는 수소 또는 메틸이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C_3-5알킬"은 탄소 원자수가 3 내지 5인 직쇄 및 분지쇄 포화 탄화수소 라디칼, 예를 들어, 프로필, 부틸, 펜틸, 1,1-디메틸프로필, 2-메틸프로필, 2-메틸부틸 등으로 정의된다.

구체적으로, 상기에 언급된 화합물은 다음을 포함하는 군으로부터 선택된다:

.

본 발명의 일부는 또한 상기에 언급된 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체를 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물이다.

상기 화합물의 제약상 허용가능한 염은 이의 산 부가염 및 염기 염을 포함한다. 적합한 산 부가염은 비독성 염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 적합한 염기 염은 무독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다.

위에 언급된 바와 같은 제약상 허용가능한 산 염은 화학식 I의 화합물이 형성할 수 있는 치료적으로 활성이 있는 비-독성 산 부가염 형태를 포함하고자 한 것이다. 이들 제약상 허용가능한 산 부가염은 편리하게는 염기 형태를 그러한 적절한 산으로 처리함으로써 수득될 수 있다. 적절한 산은 예를 들어 무기 산, 예컨대 할로겐화수소산, 예를 들어 염화수소산 또는 브롬화수소산, 황산, 질산 및 인산 등의 산; 또는 유기 산, 예를 들어 아세트산, 프로판산, 히드록시아세트산, 락트산, 피루브산, 옥살산 (즉, 에탄디오익산), 말론산, 숙신산 (즉, 부탄디오익산), 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 시클람산, 살리실산, p-아미노살리실산, 팜산 등의 산을 포함한다.

본 발명의 화합물은 또한, 비용매화된 형태 및 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 본원에서 "용매화물"이라는 용어는, 본 발명의 화합물과 하나 이상의 제약상 허용가능한 용매 분자, 예를 들어, 에탄올을 포함하는 분자 복합체를 기술하는 데 사용된다.

"다형체"라는 용어는, 하나 초과의 형태 또는 결정 구조로 존재하는 본 발명의 화합물의 능력을 나타낸다.

본 발명의 화합물은 결정질 생성물 또는 비정질 생성물로서 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 침전, 결정화, 동결 건조, 분무 건조 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해, 예를 들어 고체 플러그, 분말 또는 필름으로서 얻어질 수 있다. 본 발명의 화합물은 단독으로 투여될 수 있거나, 본 발명의 하나 이상의 다른 화합물과 조합되어 또는 하나 이상의 다른 약물과 조합되어 투여될 수 있다. 일반적으로 본 발명의 화합물은 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제와 결부되어 제형으로서 투여될 것이다. 본원에서 "부형제"라는 용어는 본 발명의 화합물(들) 이외의 임의의 성분을 기술하는 데 사용된다. 부형제의 선택은 주로 특정 투여 방식, 용해도와 안정성에 대한 부형제의 영향, 및 투여 형태의 성질과 같은 요인에 의존한다.

본 발명의 화합물 또는 이의 임의의 하위군(subgroup)은 투여 목적에 따라 다양한 제약적 형태로 제형화될 수 있다. 적절한 조성물로는, 전신 투여 약물용으로 통상적으로 사용되는 모든 조성물이 언급될 수 있다. 본 발명의 제약 조성물을 제조하기 위하여, 활성 성분으로서의 특정 화합물(선택적으로 부가염 형태)의 유효량이 제약상 허용가능한 담체와의 친밀한 혼합물로 조합되며, 이러한 담체는 투여에 요망되는 제제의 형태에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 이러한 제약 조성물은 바람직하게는 예를 들어 경구 또는 직장 투여에 적합한 일원화된 투여 형태(unitary dosage form)로 존재한다. 예를 들어, 경구 투여 형태로 조성물을 제조하는데 있어서, 현탁액, 시럽, 엘릭시르, 에멀젼 및 용액과 같은 경구 액체 제제의 경우 예컨대 물, 글리콜, 오일, 알코올 등; 또는 산제, 환제, 캡슐, 및 정제의 경우 전분, 당, 카올린, 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제 등과 같은 고체 담체와 같은 임의의 통상적인 약학적 매질이 이용될 수 있다. 정제와 캡슐은 투여가 용이하기 때문에 가장 유리한 경구 투여 단위 형태를 대표하며, 이러한 경우, 약학적 고체 담체가 명백히 이용된다. 사용 직전에 액체 형태로 전환될 수 있는 고체 형태 제제가 또한 포함된다.

투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 전술한 제약 조성물을 단위 투여 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 단위 투여 형태는 일원화 투여형으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 말하는데, 각각의 단위는 필요한 제약적 담체와 결부되어 원하는 치료적 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 활성 성분을 포함한다. 그러한 단위 투여 형태의 예로는 정제(분할정(scored tablet) 또는 코팅정을 포함함), 캡슐, 환제, 분말 패킷(powder packet), 웨이퍼(wafer), 좌제(suppository), 주사 가능한 용액 또는 현탁액 등, 그리고 이의 분리된 멀티플(segregated multiple)이 있다.

감염성 질환의 치료 분야의 숙련자라면 이하에 제시되는 테스트 결과로부터 유효량을 결정할 수 있을 것이다. 일반적으로 일일 유효량은 체중 1 ㎏당 0.01 ㎎ 내지 50 ㎎, 더 바람직하게는 체중 1 ㎏당 0.1 ㎎ 내지 10 ㎎일 것으로 생각된다. 요구되는 용량을 하루 동안 2, 3, 또는 4회 또는 이보다 더 많은 횟수의 하위-용량(sub-dose)으로서 적절한 간격으로 투여하는 것이 적절할 수 있다. 상기 하위-용량은, 예를 들어 단위 투여 형태당 1 내지 1000 mg, 그리고 특히 5 내지 200 mg의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로서 제형화될 수 있다.

당업자에게 잘 알려진 바와 같이, 정확한 투여량 및 투여 빈도는 사용되는 본 발명의 특정 화합물, 치료되는 특정 병태, 치료되는 병태의 중증도, 특정 환자의 연령, 체중 및 종합적인 건강 상태뿐만 아니라 개체가 복약 중일 수 있는 다른 약에도 의존한다. 더욱이, 유효량은 치료받는 대상체의 반응에 따라, 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 평가에 따라 감소 또는 증가될 수 있음이 명백하다. 따라서, 위에 언급된 유효량 범위는 단지 지침일 뿐이고, 본 발명의 범주 또는 용도를 임의의 정도로 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물에 존재하는 원자의 임의의 동위원소를 포함하도록 의도된다. 예를 들어, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함하고 탄소의 동위원소는 C-13 및 C-14를 포함한다.

본 발명에서 사용되는 본 발명의 화합물은 또한 동일한 시퀀스(sequence)의 결합으로 결합된 동일 원자들로 구성되지만 호환가능하지 않은 상이한 3차원 구조를 갖는 모든 가능한 화합물을 규정하는 그의 입체화학적 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 달리 언급되지 않거나 표시되지 않으면, 화합물의 화학적 표기는 상기 화합물이 가질 수 있는 모든 가능한 입체화학적 이성질체 형태들의 혼합물을 포함한다.

상기 혼합물은 상기 화합물의 기본적인 분자 구조의 모든 부분입체 이성질체 및/또는 거울상 이성질체를 포함할 수 있다. 임의의 라세미 혼합물 또는 라세미체를 비롯하여 순수한 형태의 또는 서로와의 혼합물 형태의 본 발명에서 사용되는 화합물의 모든 입체화학적 이성질체 형태는 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

본 명세서에 언급된 화합물 및 중간체의 순수한 입체 이성질체 형태는 상기 화합물 또는 중간체와 동일한 기본 분자 구조의 다른 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체 형태가 실질적으로 없는 이성질체로서 정의된다. 특히, '입체이성질체로서 순수한’이라는 용어는 80% 이상의 입체이성질체 과잉률(즉, 최소 90%의 하나의 이성질체 및 최대 10%의 다른 가능한 이성질체) 내지 100% 이하의 입체이성질체 과잉률(즉, 다른 이성질체가 전혀 없고, 100%의 하나의 이성질체)을 갖는 화합물 또는 중간체, 더욱 특히는 90% 내지 100%의 입체이성질체 과잉률을 갖는, 더욱 더 특히는 94% 내지 100%의 입체이성질체 과잉률을 갖는, 가장 특히는 97% 내지 100%의 입체이성질체 과잉률을 갖는 화합물 또는 중간체와 관련된다. '거울상 이성질체로서 순수한' 및 '부분입체 이성질체로서 순수한'이라는 용어는 유사한 방식으로, 그러나 각각 당해 혼합물의 거울상 이성질체 과잉률, 부분입체 이성질체 과잉률과 관련된 것으로 이해되어야 할 것이다.

본 발명에서 사용되는 화합물 및 중간체의 순수 입체이성질체 형태는 본 기술 분야에 공지된 절차의 적용에 의해 수득될 수 있다. 예를 들어, 거울상 이성질체는 광학 활성 산 또는 염기로 이들의 부분입체 이성질체 염을 선택적으로 결정화하는 것에 의해 서로 분리될 수 있다. 이의 예로는 타르타르 산, 디벤조일타르타르 산, 디톨루오일타르타르 산 및 캄포술폰산이 있다. 대안적으로, 거울상 이성질체는 키랄 고정상을 사용하여 크로마토그래피 기술에 의해 분리될 수 있다. 상기 순수한 입체화학적 이성질체 형태는 또한, 반응이 입체특이적으로 일어난다면, 적절한 출발 물질의 상응하는 순수한 입체화학적 이성질체 형태로부터 유도될 수 있다. 바람직하게는, 특정 입체이성질체가 요망될 경우, 상기 화합물은 입체특이적 제조 방법에 의해 합성될 것이다. 이들 방법은 유리하게는 거울상 이성질체로서 순수한 출발 재료를 사용할 것이다.

본 발명의 화학식 I의 화합물 전부는 하기 화학식에서 *로 라벨링된 탄소 원자로 나타낸 바와 같이 적어도 하나의 키랄 탄소 원자를 갖는다:

[화학식 I]

상기 키랄 탄소 원자의 존재로 인하여, "화학식 I의 화합물"은 (R)-거울상 이성질체, (S)-거울상 이성질체, 라세미 형태, 또는 임의의 비의 상기 두 개별 거울상 이성질체의 임의의 가능한 조합일 수 있다. 거울상 이성질체의 절대 (R)- 또는 (S)-배열이 공지되어 있지 않은 경우, 이 거울상 이성질체는 또한, 상기 특정 거울상 이성질체의 비선광도의 측정 후 거울상 이성질체가 우선성 (+)-거울상 이성질체인지 좌선성 (-)-거울상 이성질체인지를 표시함으로써 확인될 수 있다.

일 태양에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물이 (+) 비선광도를 갖는 화학식 I의 화합물의 제1 군에 관한 것이다.

추가의 태양에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물이 (-) 비선광도를 갖는 화학식 I의 화합물의 제2 그라운드에 관한 것이다.

실시예

LC/MS 방법

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 측정은 LC 펌프, 다이오드-어레이(DAD) 또는 UV 검출기 및 각각의 방법에 명시된 컬럼을 사용하여 수행하였다. 필요할 경우, 추가의 검출기를 포함시켰다(하기의 방법에 대한 표를 참조).

컬럼으로부터의 유동물을 대기압 이온 공급원과 함께 구성된 질량 분광계(MS)로 가져왔다. 화합물의 명목상 단일 동위 원소 분자량(MW)의 확인을 허용하는 이온을 얻기 위하여 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰(dwell) 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 이내이다. 데이터 획득을 적절한 소프트웨어를 이용하여 수행하였다.

화합물은 그의 실험적 체류 시간(R_t) 및 이온에 의해 기술된다. 데이터의 표에 상이하게 명시되어 있지 않다면, 보고된 분자 이온은 [M+H]⁺(양성자화된 분자) 및/또는 [M-H]^-(탈양성자화된 분자)에 상응한다. 화합물이 직접 이온화될 수 없었을 경우, 부가물의 유형이 특정되어 있다(즉, [M+NH₄]⁺, [M+HCOO]^- 등 …). 다수의 동위 원소 패턴을 갖는 분자 (Br, Cl)에 있어서, 보고된 값은 최저 동위 원소 질량에 대하여 얻어진 것이다. 모든 결과는 사용된 방법과 일반적으로 연관되어 있는 실험적 불확실성을 가지고서 얻어졌다.

이하, "SQD"는 단일 사중극자 검출기를 의미하며, "MSD"는 질량 선택 검출기를 의미하며, "RT"는 실온을 의미하며, "BEH"는 가교된 에틸실록산/실리카 하이브리드를 의미하며, "DAD"는 다이오드 어레이 검출기를 의미하며, "HSS"는 고강도 실리카를 의미한다.

LC/MS 방법 코드(유량은 mL/분 단위로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분 단위로 표현됨).

SFC/MS 방법

이산화탄소(CO₂) 전달용의 이원 펌프 및 모디파이어(modifier), 오토샘플러(autosampler), 컬럼 오븐, 400 bar까지 견디는 고압 유동 셀을 갖춘 다이오드 어레이 검출기로 구성되는 분석용 초임계 유체 크로마토그래피(Supercritical fluid chromatography; SFC)를 사용하여 SFC 측정을 수행하였다. 질량 분광계(MS)와 함께 구성되어 있다면, 컬럼으로부터의 유동물은 (MS)로 갔다. 화합물의 명목상 단일 동위 원소 분자량(MW)의 확인을 허용하는 이온을 얻기 위하여 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 이내이다. 데이터 획득을 적절한 소프트웨어를 이용하여 수행하였다.

분석적 SFC/MS 방법(유량은 mL/분 단위로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분 단위로 표현되며; 배압(backpressure; BPR)은 bar 단위로 표현됨).

융점

값들은 피크 값 또는 융점 범위 중 어느 하나이며, 이 분석 방법과 일반적으로 연관되어 있는 실험적

불확실성을 가지고서 얻어진다.

DSC823e(DSC로 표시됨)

다수의 화합물에 대하여, 융점을 DSC823e (메틀러-톨레도(Mettler-Toledo))로 측정하였다. 융점을 10℃/분의 온도 구배를 이용하여 측정하였다. 최대 온도는 300℃였다.

선광도:

선광도는 나트륨 램프를 갖춘 퍼킨-엘머(Perkin-Elmer) 341 편광계에서 측정하였고 다음과 같이 보고하였다: [α]°(λ, c g/100ml, 용매, T℃).

[α]_λ ^T = (100α) / (l x c) :여기서, ℓ은 dm 단위의 경로 길이이며, c는 온도 T(℃) 및 파장 λ(nm 단위)에서 샘플의 g/100 ml 단위의 농도이다. 사용되는 광의 파장이 589 nm(나트륨 D 라인)라면, 부호 D가 대신 사용될 수 있다. 선광도 부호(+ 또는 -)를 항상 제공하여야 한다. 이러한 등식을 사용할 때, 농도 및 용매는 항상 선광도 뒤의 괄호 안에 제공된다. 선광도는 도를 사용하여 보고되고 농도 단위는 주어지지 않는다(이는 g/100 mL인 것으로 추정된다).

실험 파트에서 사용한 약어

실시예 1 : 2-(4-플루오로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 (화합물 1)의 합성 및 거울상 이성질체 1A 및 1B로의 키랄 분리.

중간체 1a의 합성:

EtOH (200 mL) 및 H₂SO₄ (2 mL) 중 4-플루오로-2-메톡시페닐아세트산 [CAS 886498-61-9] (10 g, 54.3 mmol)의 용액을 환류 하에 12시간 동안 가열하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 감압 하에 원래 부피의 절반까지 농축시켰다. 얼음을 첨가하였다. 상기 용액을 K₂CO₃으로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 에틸 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세테이트 1a (11.6 g)를 제공하였다. 상기 화합물을 다음 단계에서 직접 사용하였다.

중간체 1b의 합성:

CH₂Cl₂ 중 삼브롬화붕소의 1 M 용액 (109.3 mL, 109.3 mmol)을 -30℃에서 CH₂Cl₂ (300 mL) 중 에틸 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세테이트 1a (11.6 g, 54.7 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응물을 -20℃에서 1시간 동안 교반시키고, 그 후 CH₃OH로 켄칭하였다. NaHCO₃의 포화 수용액을 첨가하여 pH를 8까지 조정하였다. 상기 용액을 CH₂Cl₂로 추출하고, 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 에틸 2-(4-플루오로-2-히드록시페닐)아세테이트 1b (10.8 g)를 제공하였다. 상기 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.

중간체 1c의 합성:

10℃에서 DMF (200 mL) 중 에틸 2-(4-플루오로-2-히드록시페닐)아세테이트 1b (10.6 g, 53.5 mmol) 및 탄산세슘 (34.8 g, 106.9 mmol)의 혼합물에 (2-브로모에톡시)(tert-부틸)디메틸실란 [CAS 86864-60-0] (13.8 mL, 64.2 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. H₂O를 첨가하고 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μM, 40 g, 헵탄/EtOAc (80/20))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 제거하여 에틸 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)아세테이트 1c (17.7 g)를 제공하였다.

중간체 1d의 합성:

-78℃에서 냉각시킨, THF 중 1 M 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 용액 (28.05 mL, 28.05 mmol)에, THF (30 mL) 중 에틸 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)아세테이트 1c (5 g, 14.03 mmol)의 용액을 첨가하였다. -78℃에서 1시간 동안 교반시킨 후, 클로로트리메틸실란 (2.85 mL, 22.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반시켰다. THF (30 mL) 중 N-브로모숙신이미드 (3 g, 16.8 mmol)를 첨가하고, 교반을 -55℃에서 2시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 H₂O에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 상을 합하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 에틸 2-브로모-2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)아세테이트 1d (6.57 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 1e의 합성:

CH₃CN (60 mL) 중 에틸 2-브로모-2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)아세테이트 1d (3.1 g, 7.12 mmol), 3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)아닐린 [CAS 1220630-56-7] (2.03 g, 10.7 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (2.45 mL, 14.2 mmol)의 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc로 녹이고, 0.5 N HCl, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 120 g, 헵탄/EtOAc 구배: 80/20에서 60/40까지)에 의해 정제하여 에틸 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세테이트 1e (2.5 g)를 제공하였다.

중간체 1f의 합성:

물 (25 mL) 중 수산화리튬 일수화물 (226 mg, 5.397 mmol)의 용액을 10℃에서 THF/CH₃OH (1/1)의 용매 혼합물 (50 mL) 중 에틸 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세테이트 1e (2.45 g, 4.498 mmol)의 용액에 일부씩 첨가하였다. 반응물을 실온에서 6시간 동안 교반시키고, 물로 희석시키고, 0℃까지 냉각시켰다. 상기 용액을 0.5 N HCl로 pH 6까지 서서히 산성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 1f (2.05 g)를 제공하였다. 상기 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.

중간체 1g의 합성:

DMF (20 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 1f (1.58 g, 3.06 mmol)의 용액에 HATU (1.74 g, 4.60 mmol), 디이소프로필에틸아민 (1.5 mL, 9.17 mmol) 및 6-(트리플루오로메틸)인돌린 [CAS 181513-29-1] (572 mg, 3.06 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 물로 희석시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, EtOAc로 녹였다. 유기 층을 물 중 K₂CO₃의 10% 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 1g (2.1 g)를 제공하였다. 조 화합물을 다음 단계에서 직접 사용하였다.

화합물 1의 합성 및 거울상 이성질체 1A 및 1B로의 키랄 분리:

N₂ 유동 하에, 5℃에서, 디옥산 중 4 M HCl (7.65 mL, 30.6 mmol)을 MeOH (40 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 1g (2.1 g, 3.06 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 CH₃CN/디이소프로필 에테르로부터 결정화하여 2-(4-플루오로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 1 (800 mg)을 라세미체로서 제공하였다.

화합물 1 (720 mg)의 거울상 이성질체를 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® IA 5 μm 250 x 20 mm, 이동상: 70% CO₂, 30% EtOH (+0.3% iPrNH₂))를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (303 mg)를 Et₂O로부터 결정화하여 거울상 이성질체 1A (270 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (320 mg)를 Et₂O로부터 결정화하여 거울상 이성질체 1B (274 mg)를 제공하였다.

화합물 1:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.15 - 3.30 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.74 - 3.85 (m, 2 H) 4.06 - 4.17 (m, 3 H) 4.45 (td, J=10.3, 6.1 Hz, 1 H) 4.98 (t, J=5.4 Hz, 1 H) 5.83 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.66 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.76 - 6.82 (m, 2 H) 6.84 (s, 1 H) 6.98 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.37 - 7.42 (m, 2 H) 7.44 - 7.49 (m, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.06분, MH⁺572

융점: 151℃

거울상 이성질체 1A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.15 - 3.29 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.74 - 3.86 (m, 2 H) 4.06 - 4.19 (m, 3 H) 4.45 (td, J=10.2, 6.3 Hz, 1 H) 4.97 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.83 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 6.36 (s, 1 H) 6.66 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.76 - 6.82 (m, 2 H) 6.84 (s, 1 H) 6.98 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.37 - 7.42 (m, 2 H) 7.46 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.06분, MH⁺ 572

[α]_D ²⁰:-44.8° (c 0.2525, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-A): R_t 2.59분, MH⁺ 572, 키랄 순도 100%.

융점: 163℃

거울상 이성질체 1B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.15 - 3.30 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.74 - 3.85 (m, 2 H) 4.06 - 4.19 (m, 3 H) 4.45 (td, J=10.3, 6.1 Hz, 1 H) 4.97 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.83 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.36 (s, 1 H) 6.66 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.76 - 6.82 (m, 2 H) 6.84 (s, 1 H) 6.98 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.36 - 7.43 (m, 2 H) 7.46 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.06분, MH⁺572

[α]_D ²⁰:+36.2° (c 0.2567, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-A): R_t 3.15분, MH⁺572, 키랄 순도 98.07%.

융점: 162℃

실시예 2 : 2-(4-플루오로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 (화합물 2)의 합성 및 거울상 이성질체 2A 및 2B로의 키랄 분리.

중간체 2a의 합성:

DMF (100 mL) 중 1-메톡시-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤젠 [CAS 654-76-2] (24.5 g, 110.8 mmol) 및 4-클로로페녹시아세토니트릴 [CAS 3598-13-8] (20.4 g, 121.9　mmol)의 혼합물을 -10℃에서 DMF (100 mL) 중 tBuOK (27.35 g, 243.7 mmol)의 교반 용액에 30분에 걸쳐 적가하였다. 첨가 후, 자주색 용액을 -10℃에서 1시간 동안 유지하였다. 500 mL의 얼음-물 및 500 mL의 6 N HCl을 첨가하고, 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, 감압 하에 건조시켜 40.4 g의 2-(5-메톡시-2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐)아세토니트릴 2a를 생성하였다 (다음 단계에서 그대로 사용함).

중간체 2b의 합성:

에탄올/물 (9/1) (500 mL) 및 AcOH (5.2 mL) 중 2-(5-메톡시-2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐)아세토니트릴 2a (26 g , 99.9 mmol)의 용액을 촉매로서 10% Pd/C (15.3 g)를 이용하여 3.5 Bar의 압력에서 1시간 동안 수소화하였다. 반응 혼합물을 셀라이트(celite)^® 패드를 통하여 여과시키고, 필터 케이크를 CH₂Cl₂와 CH₃OH의 용매 혼합물로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 용출제로서 헵탄/EtOAc (80/20)를 사용하여 실리카 (60 내지 200 μm)가 충전된 유리 필터를 통하여 잔사를 여과시켰다. 예상되는 화합물을 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜 5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 2b (15.6 g)를 제공하였다.

중간체 2c의 합성:

0℃에서, BH₃-피리딘 (23.5 mL, 232.4 mmol)을 EtOH (60 mL) 중 5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 2b (10 g, 46.5 mmol)의 용액에 적가하였다. 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 6 N HCl (140 mL)을 서서히 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 물 (200 mL)을 첨가하고, 진한 NaOH 수용액을 이용하여 pH 8 내지 9까지 상기 혼합물을 염기성화하였다 (반응물 온도를 20℃ 미만으로 유지하였다). 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고 (2회), 감압 하에 톨루엔과 함께 공동 증발시켜 5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린 2c (9 g)를 제공하였다.

중간체 2d의 합성:

DMF (10 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 1f (1.02 g, 1.97 mmol)의 용액에 HATU (1.13 g, 2.96 mmol), 디이소프로필에틸아민 (979 μL, 5.92 mmol) 및 5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린 2c (429 mg, 1.97 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 물로 희석시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, EtOAc로 녹였다. 유기 층을 물 중 K₂CO₃의 10% 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 2d (1.36 g)를 제공하였다. 상기 화합물을 다음 반응 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 2의 합성 및 거울상 이성질체 2A 및 2B로의 키랄 분리:

N₂ 유동 하에, 5℃에서, 디옥산 중 4 M HCl (4.75 mL, 18.99 mmol)을 MeOH (25 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 2d (1.36 g, 1.9 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 MeOH로부터 결정화하여 2-(4-플루오로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 2 (850 mg)를 라세미체로서 제공하였다.

화합물 2 (800 mg)의 거울상 이성질체를 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® IA 5 μm 250 x 20 mm, 이동상: 6% CH₂Cl₂, 70% CO₂, 24% EtOH (+0.3% iPrNH₂))를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (370 mg)를 디이소프로필 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 2A (329 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (400 mg)를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 24 g, CH₂Cl₂/MeOH (99/1))에 의해 추가로 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사 (320 mg)를 디이소프로필 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 2B (262 mg)를 제공하였다.

화합물 2:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.15 - 3.30 (m, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 3.74 - 3.83 (m, 2 H) 3.84 (s, 3 H) 4.04 - 4.18 (m, 3 H) 4.43 (td, J=10.4, 6.3 Hz, 1 H) 4.99 (t, J=5.7 Hz, 1 H) 5.81 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.65 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.75 - 6.81 (m, 2 H) 6.83 (s, 1 H) 6.98 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.24 (s, 1 H) 7.39 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.35 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.99분, MH⁺602

융점: 192℃

거울상 이성질체 2A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.16 - 3.28 (m, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 3.74 - 3.83 (m, 2 H) 3.84 (s, 3 H) 4.03 - 4.18 (m, 3 H) 4.37 - 4.49 (m, 1 H) 4.97 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.81 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.65 (s, 1 H) 6.73 - 6.81 (m, 2 H) 6.83 (s, 1 H) 6.97 (dd, J=11.1, 2.0 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.39 (t, J=7.6 Hz, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 8.35 (s, 1 H) 9.12 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.97분, MH⁺ 602

[α]_D ²⁰:-45.0° (c 0.2425, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-A):R_t 4.14분, MH⁺ 602, 키랄순도 100%.

거울상 이성질체 2B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.16 - 3.28 (m, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 3.74 - 3.83 (m, 2 H) 3.84 (s, 3 H) 4.02 - 4.20 (m, 3 H) 4.42 (td, J=10.2, 6.3 Hz, 1 H) 4.97 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.81 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.65 (s, 1 H) 6.73 - 6.81 (m, 2 H) 6.83 (s, 1 H) 6.97 (dd, J=11.4, 2.3 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.36 - 7.43 (m, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 8.35 (s, 1 H) 9.12 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.97분, MH⁺602

[α]_D ²⁰:+43.4° (c 0.2007, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-A):R_t 5.08분, MH⁺602, 키랄순도 100%.

실시예 3 : 2-(4-플루오로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 (화합물 3)의 합성 및 거울상 이성질체 3A 및 3B로의 키랄 분리.

중간체 3a의 합성:

DMF (10 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 1f (1.02 g, 1.974 mmol)의 용액에 HATU (1.13 g, 2.96 mmol), 디이소프로필에틸아민 (979 μL, 5.92 mmol) 및 6-(트리플루오로메톡시)인돌린 [CAS 959235-95-1] (401 mg, 1.97 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 물로 희석시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, EtOAc로 녹였다. 유기 층을 물 중 K₂CO₃의 10% 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)-옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 3a (1.34 g)를 제공하였다. 조 화합물을 다음 반응 단계에서 직접 사용하였다.

화합물 3의 합성 및 거울상 이성질체 3A 및 3B로의 키랄 분리:

N₂ 유동 하에, 5℃에서, 디옥산 중 4 M HCl (4.27 mL, 17.1 mmol)을 MeOH (25 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-플루오로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 3a (1.2 g, 1.71 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 40 g, CH₂Cl₂/MeOH 구배: 99.5/0.5에서 99/1까지)에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 감압 하에 건조상태까지 농축시켜 2-(4-플루오로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 3 (550 mg)을 라세미체로서 제공하였다. 이 분획의 일부를 MeOH로부터 결정화하여 화합물 3 (36 mg)을 제공하였다.

남아 있는 물질을 이용하여, 화합물 3의 거울상 이성질체를 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® AD-H 5 μm 250 x 20 mm, 이동상:65% CO₂, 35% EtOH (+0.3% iPrNH₂))를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (210 mg)를 디이소프로필 에테르/헵탄을 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 3A (182 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (230 mg)를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 24 g, CH₂Cl₂/MeOH (99/1))에 의해 추가로 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사 (180 mg)를 디이소프로필 에테르/헵탄을 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 3B (137 mg)를 제공하였다.

화합물 3:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.06 - 3.25 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.75 - 3.86 (m, 2 H) 4.06 - 4.17 (m, 3 H) 4.38 - 4.50 (m, 1 H) 4.95 (br s, 1 H) 5.81 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.65 (s, 1 H) 6.75 - 6.81 (m, 2 H) 6.83 (s, 1 H) 6.94 - 7.04 (m, 2 H) 7.33 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.36 - 7.43 (m, 1 H) 8.04 (s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.11 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.13분, MH⁺588

융점: 178℃

거울상 이성질체 3A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.06 - 3.26 (m, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 3.74 - 3.86 (m, 2 H) 4.05 - 4.18 (m, 3 H) 4.38 - 4.50 (m, 1 H) 4.97 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 5.82 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.65 (s, 1 H) 6.74 - 6.86 (m, 3 H) 6.94 - 7.04 (m, 2 H) 7.34 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.36 - 7.42 (m, 1 H) 8.04 (s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.12 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.11분, MH⁺ 588

[α]_D ²⁰:-38.2° (c 0.28, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-B):R_t 3.38분, MH⁺ 588, 키랄순도 100%.

거울상 이성질체 3B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.07 - 3.26 (m, 2H) 3.72 (s, 3 H) 3.74 - 3.86 (m, 2 H) 4.04 - 4.20 (m, 3 H) 4.38 - 4.50 (m, 1 H) 4.97 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.81 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.65 (s, 1 H) 6.74 - 6.87 (m, 3 H) 6.94 - 7.03 (m, 2 H) 7.34 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.36 - 7.42 (m, 1 H) 8.04 (s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.12 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.11분, MH⁺588

[α]_D ²⁰:+40.9° (c 0.23, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-B):R_t 5.31분, MH⁺588, 키랄순도 100%.

실시예 4 : 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 (화합물 4)의 합성 및 거울상 이성질체 4A 및 4B로의 키랄 분리.

중간체 4a의 합성:

건조 THF (300 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세트산 [CAS 170737-95-8] (20 g, 101 mmol)의 용액을 0℃에서 냉각시켰다. 옥살릴 클로라이드 (18 mL, 202 mmol) 및 두 드롭의 DMF를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 에탄올 (300 mL)에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 에틸 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세테이트 4a (23 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 4b의 합성:

-30℃에서 냉각시킨, CH₂Cl₂ (350 mL) 중 에틸 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세테이트 4a (10 g, 44 mmol)의 용액에, 온도를 -20℃ 미만으로 유지하면서 CH₂Cl₂ (87.5 mL, 87.5 mmol) 중 1 M BBr₃ 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 -30℃에서 1시간 동안 교반시킨 후 메탄올로 켄칭하였다. pH를 NaHCO₃의 포화 수용액을 첨가하여 8까지 조정하였다. 상을 분리시켰다. 수성 상을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 상을 합하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 에틸 2-(4-클로로-2-히드록시페닐)아세테이트 4b (9.5 g)를 생성하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 4c의 합성:

DMF (50 mL) 중 에틸 2-(4-클로로-2-히드록시페닐)아세테이트 4b [CAS 1261826-30-5] (2.82 g, 13.1 mmol) 및 탄산세슘 (8.56 g, 26.3 mmol)의 혼합물에 벤질 2-브로모에틸 에테르 [CAS 1462-37-9] (2.29 g, 14.5 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반시켰다. H₂O를 첨가하고 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 헵탄 중 EtOAc의 구배 (2%에서 20%까지)를 사용하여 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 에틸 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)아세테이트 4c (4.17 g)를 제공하였다.

중간체 4d의 합성:

EtOH (80 mL)와 THF (40 mL)의 혼합물 중 에틸 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)아세테이트 4c (4.17 g, 12.0 mmol)의 용액에 0.5 N NaOH (72 mL, 36.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 부분적으로 농축시켜 유기 용매를 제거하였다. 잔사를 1 N HCl로 pH 2 내지 3까지 산성화하고 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)아세트산 4d (3.83 g)를 제공하였다.

중간체 4e의 합성:

티오닐 클로라이드 (50 mL, 689 mmol) 중 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)아세트산 4d (7.12 g, 22.2 mmol)의 용액을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 톨루엔과 함께 공동 증발시켜 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)아세틸 클로라이드 4e (7.53 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 4f의 합성:

CH₃CN (50 mL) 중 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)아세틸 클로라이드 4e (5.29 g, 15.6 mmol)의 용액을 N₂-분위기 하에 CH₃CN (50 mL) 중 6-(트리플루오로메틸)인돌린 [CAS 181513-29-1] (2.92 g, 15.6 mmol) 및 중탄산나트륨 (1.44 g, 17.1 mmol)의 교반 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 65시간 동안 교반시키고, 물 (500 mL)에 부었다. 생성물을 Et₂O로 추출하였다 (2회). 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사는 정치시에 고체화되었다. 생성물을 디이소프로필 에테르 (25 mL)에서 교반시키고, 여과 제거하고, 디이소프로필 에테르로 세척하고 (3회), 진공 하에 45℃에서 건조시켜 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 4f (6.97 g)를 제공하였다.

중간체 4g의 합성:

2-Me-THF (125 mL) 중 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 4f (1.5 g, 3.06 mmol)의 용액을 N₂-유동 하에 교반시키고, -78℃까지 냉각시켰다. THF 중 1 M 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드의 용액 (6.12 mL, 6.12 mmol)을 적가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 20분 동안 교반시켰다. 클로로트리메틸실란 (626 μL, 4.90 mmol)을 적가하고, 혼합물을 -78℃에서 25분 동안 교반시켰다. 2-Me-THF (50 mL) 중 N-브로모숙신이미드 (599 mg, 3.37 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반시켰다. NH₄Cl의 포화 수용액 (60 mL)을 한꺼번에 첨가하고, 생성된 혼합물을 온도가 0℃에 도달할 때까지 냉각 없이 교반시켰다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 30분 동안 교반시킨 후, 층들을 분리하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시키고, CH₃CN과 함께 공동 증발시켜 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-브로모-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 4g (1.16 g)를 제공하였다. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

중간체 4h의 합성:

N₂-분위기 하에 CH₃CN (100 mL) 중 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-브로모-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 4g (1.74 g, 3.06 mmol)의 교반 용액에 3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)아닐린 [CAS 1220630-56-7] (874 mg, 4.59 mmol), 및 디이소프로필에틸아민 (1.06 mL, 6.12 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안, 그 후 50℃에서 7시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 교반 H₂O (400 mL)에 부었다. 생성물을 Et₂O로 추출하였다 (2회). 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 100/0/0에서 40/45/15까지의 헵탄/EtOAc/EtOH의 구배를 사용하여 실리카 겔 (40 g)에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시키고, 톨루엔과 함께 공동 증발시켰다. 잔사를 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 4h (1.43 g)를 제공하였다.

화합물 4의 합성 및 거울상 이성질체 4A 및 4B로의 키랄 분리:

EtOAc (75 mL) 중 THF (15 mL)의 용매 혼합물 중 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 4h (1.43 g, 2.11 mmol)의 용액을, 촉매로서 Pd/C (0.5 g)를 사용하여 대기압의 H₂ 하에 실온에서 5시간 동안 수소화하였다. 촉매를 디칼라이트®에서의 여과에 의해 제거하였다. 필터 케이크를 THF로 수 회 세척하고, 합한 여과액을 감압 하에 증발시켰다. 고형 잔사를 CH₂Cl₂/EtOAc/MeOH (1/2/1)의 용매 혼합물에서 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, EtOAc로 세척하고 (2회), 진공 하에 45℃에서 건조시켜 라세미 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 (화합물 4,600 mg)을 제공하였다.

화합물 4 (700 mg)의 거울상 이성질체를 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩® 디아셀(Diacel) AD 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, MeOH/iPrOH (50/50) + 0.4% iPrNH₂)를 통하여 분리하였다. 생성물 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켜 거울상 이성질체 4A를 첫 번째로 용출된 생성물로서, 그리고 거울상 이성질체 4B를 두 번째로 용출된 생성물로서 제공하였다. 상기 둘 다의 거울상 이성질체를 100/0/0에서 40/45/15까지의 헵탄/EtOAc/EtOH의 구배를 사용하여 실리카 겔 (40 g)에서 플래시 크로마토그래피에 의해 추가로 정제하였다. 원하는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 물 (3 mL) 및 MeOH (0.75 mL)에서 교반시켰다. 고형물을 여과 제거하고, 물로 세척하고 (3회), 진공 하에 50℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 4A (81 mg) 및 거울상 이성질체 4B (132 mg)를 제공하였다.

거울상 이성질체 4A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.18 - 3.28 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.74 - 3.84 (m, 2 H) 4.08 - 4.19 (m, 3 H) 4.44 (td, J=10.2, 6.7 Hz, 1 H) 4.96 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.84 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.35 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 6.66 (t, J=1.7 Hz, 1 H) 6.79 - 6.87 (m, 2 H) 7.02 (dd, J=8.3, 1.9 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.34 - 7.43 (m, 2 H) 7.43 - 7.51 (m, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 8.38 (br s, 1 H) 9.12 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 1.16분, MH⁺588

[α]_D ²⁰:-42.9° (c 0.515, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-K):R_t 2.91분, MH⁺ 588, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 4B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.15 - 3.28 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.74 - 3.84 (m, 2 H) 4.07 - 4.22 (m, 3 H) 4.44 (td, J=10.1, 6.6 Hz, 1 H) 4.96 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.84 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.35 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 6.67 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.79 - 6.87 (m, 2 H) 7.03 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.34 - 7.42 (m, 2 H) 7.43 - 7.49 (m, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.38 (br s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 1.15분, MH⁺588

[α]_D ²⁰:+39.5° (c 0.595, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-K):R_t 2.78분, MH⁺ 588, 키랄 순도 100%.

실시예 5 : 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 (화합물 5)의 합성 및 거울상 이성질체 5A 및 5B로의 키랄 분리.

중간체 5a의 합성:

10℃에서 DMF (90 mL) 중 에틸 2-(4-클로로-2-히드록시페닐)아세테이트 4b (5.2 g, 24.2 mmol) 및 탄산세슘 (15.8 g, 48.5 mmol)의 혼합물에 (2-브로모에톡시)(tert-부틸)디메틸실란 [CAS 86864-60-0] (6.26 mL, 29.1 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. H₂O를 첨가하고 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 80 g, 헵탄/EtOAc (80/20))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 제거하여 에틸 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)아세테이트 5a (7.8 g)를 제공하였다.

중간체 5b의 합성:

-70℃까지 냉각시킨, THF 중 1 M 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 용액 (41.8 mL,41.8 mmol)에, THF (45 mL) 중 에틸 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)아세테이트 5a (7.8 g, 20.9 mmol)의 용액을 첨가하였다. -70℃에서 1시간 후, 클로로트리메틸실란 (4.24 mL, 33.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -70℃에서 15분 동안 교반시켰다. THF (45 mL) 중 N-브로모숙신이미드 (4.46 g, 25.1 mmol)를 첨가하고, 교반을 -55℃에서 2시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 H₂O에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 상을 합하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 에틸 2-브로모-2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)아세테이트 5b (10.1 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 5c의 합성:

CH₃CN (90 mL) 중 에틸 2-브로모-2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)아세테이트 5b (4.75 g, 10.5 mmol), 3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)아닐린 [CAS 1220630-56-7] (3 g, 15.8 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (3.62 mL, 21.0 mmol)의 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc로 녹이고, 0.5 N HCl, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 120 g, 헵탄/EtOAc 구배: 80/20에서 70/30까지)에 의해 정제하여 에틸 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세테이트 5c (3.7 g)를 제공하였다.

중간체 5d의 합성:

물 (25 mL) 중 수산화리튬 일수화물 (523 mg, 12.5 mmol)을 10℃에서 THF/CH₃OH (1/1) (50 mL) 중 에틸 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세테이트 5c (3.5 g, 6.24 mmol)의 용액에 일부씩 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 물로 희석시키고, 0℃까지 냉각시켰다. 상기 용액을 0.5 N HCl로 pH 6까지 서서히 산성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 5d (3.1 g)를 제공하였다. 상기 화합물을 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

중간체 5e의 합성:

DMF (10 mL) 중 5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린 2c (400 mg, 1.84 mmol), 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 5d (982 mg, 1.84 mmol), HATU (1.05 g, 2.76 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (913 μL, 5.53 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하였다. 침전물을 EtOAc로 녹이고, 물 중 K₂CO₃의 10% 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 5e (1.35 g)를 제공하였다. 상기 화합물을 다음 반응 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 5의 합성 및 거울상 이성질체 5A 및 5B로의 키랄 분리:

N₂ 유동 하에, 5℃에서, 디옥산 중 4 M HCl (4.6 mL, 18.4 mmol)을 MeOH (25 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 5e (1.35 g, 1.84 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 40 g, CH₂Cl₂/MeOH (98.5/1.5))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 감압 하에 건조상태까지 농축시켰다. 잔사 (980 mg)를 MeOH로부터 결정화하여 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에타논 5 (805 mg)을 라세미체로서 생성하였다.

화합물 5 (771 mg)의 거울상 이성질체를 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® IA 5 μm 250x20 mm, 이동상: 6% CH₂Cl₂, 70% CO₂, 24% EtOH (+0.3% iPrNH₂))를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (375 mg)를 디이소프로필 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 5A (308 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (400 mg)를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 24 g, CH₂Cl₂/MeOH (99/1))에 의해 추가로 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사 (340 mg)를 디이소프로필 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 5B (291 mg)를 제공하였다.

화합물 5:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.15 - 3.30 (m, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 3.74 - 3.83 (m, 2 H) 3.85 (s, 3 H) 4.06 - 4.20 (m, 3 H) 4.41 (td, J=10.2, 6.3 Hz, 1 H) 4.99 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.82 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.65 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.80 - 6.85 (m, 2 H) 7.02 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=2.2 Hz, 1 H) 7.24 (s, 1 H) 7.37 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.13분, MH⁺618

융점: 228℃

거울상 이성질체 5A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.16 - 3.28 (m, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 3.74 - 3.83 (m, 2 H) 3.84 (s, 3 H) 4.06 - 4.21 (m, 3 H) 4.35 - 4.46 (m, 1 H) 4.97 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.81 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.65 (s, 1 H) 6.77 - 6.86 (m, 2 H) 7.02 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.14 (d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.24 (s, 1 H) 7.38 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 9.12 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.11분, MH⁺ 618

[α]_D ²⁰:-40.3° (c 0.2383, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-C): R_t 2.75분, MH⁺ 618, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 5B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.16 - 3.28 (m, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 3.74 - 3.83 (m, 2 H) 3.84 (s, 3 H) 4.06 - 4.20 (m, 3 H) 4.36 - 4.46 (m, 1 H) 4.97 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.81 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.65 (s, 1 H) 6.78 - 6.85 (m, 2 H) 7.01 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.14 (d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.24 (s, 1 H) 7.38 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 9.12 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.11분, MH⁺618

[α]_D ²⁰:+40.0° (c 0.22, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-C):R_t 3.60분, MH⁺618, 키랄 순도 98.47%.

실시예 6 (방법 1) : 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 (화합물 6)의 합성 및 거울상 이성질체 6A 및 6B로의 키랄 분리.

중간체 6a의 합성:

DMF (20 mL) 중 6-(트리플루오로메톡시)인돌린 [CAS 959235-95-1] (837 mg, 4.12 mmol), 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 5d (2.196 g, 4.12 mmol), HATU (2.35 g, 6.18 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (2 mL, 12.36 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 생성된 고무질 물질을 EtOAc로 녹이고, 물 중 10% K₂CO₃ 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 80 g, 헵탄/EtOAc 구배: 70/30에서 60/40까지)에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 6a (1.65 g)를 제공하였다.

화합물 6의 합성 및 거울상 이성질체 6A 및 6B로의 키랄 분리:

N₂ 유동 하에, 5℃에서, 디옥산 중 4 M HCl (6.5 mL, 21.6 mmol)을 MeOH (40 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 6a (1.85 g, 2.58 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 화합물을 CH₂Cl₂로부터 결정화하여 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 6 (1.47 g)을 라세미체로서 생성하였다.

화합물 6의 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® IC 5 μm 250 x 30 mm, 이동상: 70% CO₂, 30% iPrOH (+0.3% iPrNH₂))를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (585 mg)를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 24 g, CH₂Cl₂/MeOH (99/1))에 의해 추가로 증제하여, MeOH/디이소프로필 에테르/헵탄에서 고체화한 후, 거울상 이성질체 6A (491 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (400 mg)를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 24 g, CH₂Cl₂/MeOH (99/1))에 의해 추가로 증제하여, MeOH/디이소프로필 에테르/헵탄에서 고체화한 후, 거울상 이성질체 6B (467 mg)를 제공하였다.

화합물 6:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.08 - 3.23 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.75 - 3.84 (m, 2 H) 4.07 - 4.22 (m, 3 H) 4.37 - 4.49 (m, 1 H) 4.94 (br s, 1 H) 5.82 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.64 - 6.68 (m, 1 H) 6.79 - 6.86 (m, 2 H) 6.98 - 7.05 (m, 2 H) 7.15 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 8.04 (s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.11 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.27분, MH⁺604

융점: 161℃

거울상 이성질체 6A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.10 - 3.25 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.74 - 3.84 (m, 2 H) 4.06 - 4.23 (m, 3 H) 4.39 - 4.48 (m, 1 H) 4.99 (br t, J=5.4 Hz, 1 H) 5.83 (br d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.36 (br s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.84 (s, 1 H) 6.88 (br d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.03 (br t, J=7.6 Hz, 2 H) 7.16 (s, 1 H) 7.36 (dd, J=11.8, 8.4 Hz, 2 H) 8.04 (br s, 1 H) 8.17 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.25분, MH⁺ 604

[α]_D ²⁰:+45.9° (c 0.29, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D):R_t 4.20분, MH⁺ 604, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 6B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.09 - 3.25 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.74 - 3.83 (m, 2 H) 4.06 - 4.21 (m, 3 H) 4.43 (td, J=10.2, 6.6 Hz, 1 H) 4.98 (t, J=5.4 Hz, 1 H) 5.83 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.66 (s, 1 H) 6.83 (s, 1 H) 6.88 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 6.99 - 7.06 (m, 2 H) 7.15 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=12.6, 8.2 Hz, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.31분, MH⁺604

[α]_D ²⁰:-46.3° (c 0.3, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D):R_t 5.30분, MH⁺604, 키랄순도 100%.

실시예 6 (방법 2) : 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 (화합물 6)의 합성.

중간체 6b의 합성:

N₂ 유동 하에 -70℃에서 냉각시킨 THF 중 1.5 M 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 용액 (23 mL, 34.4 mmol)에 THF (35 mL) 중 에틸 2-(4-클로로-2-히드록시페닐)아세테이트 4c (6 g, 17.2 mmol)의 용액을 첨가하였다. -70℃에서 1시간 후, 클로로트리메틸실란 (3.5 mL, 27.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -70℃에서 15분 동안 교반시켰다. THF (35 mL) 중 N-브로모숙신이미드 (3.7 g, 20.6 mmol)를 첨가하고, 교반을 -70℃에서 2시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 H₂O에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 합하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 에틸 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-브로모아세테이트 6b (8.2 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 6c의 합성:

CH₃CN (130 mL) 중 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-브로모아세테이트 6b (6.5 g, 15.2 mmol), 3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)아닐린 [CAS 1220630-56-7] (4.6 g, 24.1 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (5.3 mL, 30.4 mmol)의 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc로 희석시켰다. 상기 용액을 여과하여 고형 입자(잔존 아닐린)를 제거하였다. 유기 층을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 120 g, 헵탄/EtOAc 구배: 80/20에서 70/30까지)에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 제거하여 에틸 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세테이트 6c (4.8 g)를 제공하였다.

중간체 6d의 합성:

10℃에서, 수산화리튬 일수화물 (500 mg, 11.9 mmol)을 MeOH/THF/물 (1/1/1) (50 mL) 중 에틸 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세테이트 6c (3.2 g, 5.96 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 얼음물로 희석시키고, 0℃까지 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 0.5 N HCl로 pH 6~7까지 산성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 합하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 6d (2.75 g)를 제공하였다. 상기 화합물을 추가 정제 없이 다음 반응 단계에서 사용하였다.

중간체 6e의 합성:

DMF (18 mL) 중 6-(트리플루오로메톡시)인돌린 [CAS 959235-95-1] (1.2 g, 5.89 mmol), 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 6d (2.5 g, 4.91 mmol), HATU (2.29 g, 6.01 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.99 mL, 12.0 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하였다. 침전물을 EtOAc로 녹이고, 물 중 10% K₂CO₃ 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 상기 화합물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 220 g, 헵탄/EtOAc (50/50))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 6e (2.5 g)를 제공하였다.

화합물 6의 합성:

EtOAc/MeOH/THF (1/1/1) (100 mL) 중 2-(2-(2-(벤질옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 6e (2 g, 2.88 mmol)의 혼합물을, 촉매로서 Pd/C (10%) (3.07 g, 2.88 mmol)를 이용하여 대기압의 H₂ 하에 50분 동안 수소화하였다. 상기 반응물을 MeOH로 희석시키고, 셀라이트^® 패드를 통하여 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사 (1.42 g)를 또 다른 배치와 합하고 (총 양: 1.65 g), 비키랄 SFC (고정상: NH₂ 5 μm 150 x 30 mm, 이동상: 70% CO₂, 30% iPrOH (+0.3% iPrNH₂))를 통하여 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 6 (1.36 g)을 라세미체로서 제공하였다.

실시예 7 : 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-1-(5-플루오로-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)에타논 (화합물 7)의 합성 및 거울상 이성질체 7A 및 7B로의 키랄 분리.

중간체 7a의 합성:

0℃에서, BH₃-피리딘 (10.45 mL, 103.4 mmol)을 EtOH (45 mL) 중 5-플루오로-6-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 [CAS 1493800-10-4] (7 g, 34.5 mmol)의 용액에 적가하였다. 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 6 N HCl (105 mL)을 서서히 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 물 (210 mL)을 첨가하고, 진한 NaOH 수용액을 이용하여 pH 8 내지 9까지 상기 혼합물을 염기성화하였다 (반응물 온도를 20℃ 미만으로 유지하였다). EtOAc를 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 감압 하에 톨루엔과 함께 공동 증발시켰다. 조 물질을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (20 내지 45 μm, 120 g, CH₂Cl₂/MeOH (98.5/1.5))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 제거하여 5-플루오로-6-(트리플루오로메틸)인돌린 7a (3.5 g)를 제공하였다.

중간체 7b의 합성:

DMF (10 mL) 중 5-플루오로-6-(트리플루오로메틸)인돌린 7a (385 mg, 1.88 mmol), 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 5d (1 g, 1.88 mmol), HATU (1.07 g, 2.814 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (930 μL, 5.63 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 생성된 고무질 물질을 EtOAc로 녹였다. 유기 층을 물 중 10% K₂CO₃ 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-1-(5-플루오로-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)에타논 7b (1.4 g)를 제공하였다.

화합물 7의 합성 및 거울상 이성질체 7A 및 7B로의 키랄 분리:

N₂ 유동 하에, 5℃에서, 디옥산 중 4 M HCl (4.9 mL, 19.4 mmol)을 MeOH (25 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-1-(5-플루오로-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)에타논 7b (1.4 g, 1.94 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 40 g, CH₂Cl₂/MeOH (98/2))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-1-(5-플루오로-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)에타논 7 (737 mg)을 라세미체로서 제공하였다.

화합물 7의 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® AD-H 5 μm 250 x 30 mm, 이동상: 60% CO₂, 40% EtOH (+0.3% iPrNH₂))를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (325 mg)를 디이소프로필 에테르/석유 에테르로부터 결정화하여 거울상 이성질체 7A (244 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (310 mg)를 디이소프로필 에테르/석유 에테르로부터 결정화하여 거울상 이성질체 7B (220 mg)를 제공하였다.

화합물 7:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.19 - 3.30 (m, 2 H) 3.63 - 3.87 (m, 5 H) 4.05 - 4.24 (m, 3 H) 4.40 - 4.49 (m, 1 H) 4.97 (br s, 1 H) 5.83 (br d, J=6.9 Hz, 1 H) 6.35 (br s, 1 H) 6.67 (br s, 1 H) 6.80 - 6.89 (m, 2 H) 7.03 (br d, J=7.3 Hz, 1 H) 7.15 (br s, 1 H) 7.37 (br d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.47 (br d, J=9.5 Hz, 1 H) 8.16 (br s, 1 H) 8.39 (br d, J=4.4 Hz, 1 H) 9.14 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 3.14분, MH⁺606

융점: 140℃

거울상 이성질체 7A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.20 - 3.30 (m, 2 H) 3.69 - 3.86 (m, 5 H) 4.06 - 4.23 (m, 3 H) 4.40 - 4.50 (m, 1 H) 4.98 (br t, J=5.2 Hz, 1 H) 5.83 (br d, J=8.8 Hz, 1 H) 6.35 (br s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.82 - 6.89 (m, 2 H) 7.03 (br d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.16 (s, 1 H) 7.37 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.47 (br d, J=10.1 Hz, 1 H) 8.17 (s, 1 H) 8.39 (br d, J=6.3 Hz, 1 H) 9.14 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.27분, MH⁺ 606

[α]_D ²⁰:-44.3° (c 0.282, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-B):R_t 2.89분, MH⁺ 606, 키랄순도 100%.

융점: 166℃

거울상 이성질체 7B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.18 - 3.30 (m, 2 H) 3.69 - 3.86 (m, 5 H) 4.07 - 4.22 (m, 3 H) 4.40 - 4.50 (m, 1 H) 4.97 (br t, J=5.2 Hz, 1 H) 5.83 (br d, J=8.8 Hz, 1 H) 6.35 (br s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.81 - 6.89 (m, 2 H) 7.03 (br d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.16 (s, 1 H) 7.37 (br d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.47 (br d, J=10.1 Hz, 1 H) 8.17 (s, 1 H) 8.39 (br d, J=6.3 Hz, 1 H) 9.14 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.27분, MH⁺606

[α]_D ²⁰:+35.6° (c 0.281, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-B):R_t 4.92분, MH⁺606, 키랄순도 100%.

융점: 100℃

실시예 8 : 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 (화합물 8)의 합성 및 거울상 이성질체 8A 및 8B로의 키랄 분리.

중간체 8a의 합성:

톨루엔 (50 mL) 중 4-메톡시-3-(트리플루오로메톡시)아닐린 [CAS 647855-21-8] (3.1 g, 15.0 mmol)의 용액을 5℃에서 N-브로모숙신이미드 (2.8 g, 15.7 mmol)로 처리하고, 생성된 혼합물을 5 내지 10℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시키고, EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 정제를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 24 g, 헵탄/EtOAc 구배: 95/5에서 90/10까지)에 의해 수행하였다. 순수 분획을 합하고, 건조상태까지 증발시켜 2-브로모-4-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)아닐린 8a (2.5 g)를 제공하였다.

중간체 8b의 합성:

DMF (30 mL) 중 2-브로모-4-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)아닐린 8a (2.72 g, 9.51　mmol)의 용액을 N₂를 이용하여 15분 동안 탈기시켰다. 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) (667 mg, 0.95 mmol), 요오드화구리(I) (362 mg, 1.90 mmol), 트리에틸아민 (3.96 mL, 28.53 mmol) 및 트리메틸실릴아세틸렌 (3.95 mL, 28.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N₂ 유동 하에 70℃에서 12시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 H₂O로 희석시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 합하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 80 g, 헵탄/EtOAc (85/15))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조상태까지 증발시켜 4-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-2-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린 8b (1.4 g)를 제공하였다.

중간체 8c의 합성:

N₂ 유동 하에 NMP (11 mL) 중 4-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-2-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린 8b (1.2 g, 3.96 mmol)의 용액에 tBuOK (1.33 g, 11.9 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 가열하고, 얼음/물에 붓고, 3 N HCl로 pH 4~5까지 산성화하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 합하고, H₂O로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 40 g, 헵탄/EtOAc (85/15))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조상태까지 증발시켜 5-메톡시-6-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 8c (490 mg)를 제공하였다.

중간체 8d의 합성:

0℃에서, BH₃-피리딘 (10.5 mL, 103.8 mmol)을 EtOH (45 mL) 중 5-메톡시-6-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 8c (8 g, 34.6 mmol)의 용액에 적가하였다. 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 6 N HCl (6 mL)을 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 물 (210 mL)을 첨가하고, 물 중 NaOH의 진한 용액을 이용하여 pH 8~9까지 상기 혼합물을 염기성화하였다 (반응물 온도를 20℃ 미만으로 유지하였다). 상기 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 톨루엔을 첨가하고, 상기 용액을 감압 하에 농축시켜 5-메톡시-6-(트리플루오로메톡시)인돌린 8d (7.5 g)를 제공하였다.

중간체 8e의 합성:

DMF (10 mL) 중 5-메톡시-6-(트리플루오로메톡시)인돌린 8d (437 mg, 1.88 mmol), 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 5d (1 g, 1.88 mmol), HATU (1.07 g, 2.81 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (930 μL, 5.63 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 생성된 고무질 물질을 EtOAc로 녹였다. 유기 용액을 물 중 10% K₂CO₃ 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 8e (1.5 g)를 제공하였다. 상기 화합물을 다음 반응 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 8의 합성 및 거울상 이성질체 8A 및 8B로의 키랄 분리:

N₂ 유동 하에, 5℃에서, 디옥산 중 4 M HCl (4.9 mL, 19.4 mmol)을 MeOH (25 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 8e (1.4 g, 1.94 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 40 g, CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH (98.4/1.5/0.1))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜, CH₂Cl₂로부터의 결정화 후, 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(5-메톡시-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 8 (850 mg)을 라세미체로서 제공하였다.

화합물 8의 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® IC 5 μm 250 x 30 mm, 이동상: 60% CO₂, 40% iPrOH)를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (410 mg)를 디이소프로필 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 8A (314 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (388 mg)를 디이소프로필 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 8B (300 mg)를 제공하였다.

화합물 8:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.07 - 3.27 (m, 2 H) 3.70 - 3.85 (m, 8 H) 4.07 - 4.19 (m, 3 H) 4.35 - 4.45 (m, 1 H) 4.97 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.80 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.63 - 6.67 (m, 1 H) 6.80 - 6.87 (m, 2 H) 7.02 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1 H) 7.14 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.20 (s, 1 H) 7.37 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.06 (s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.12 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.20분, MH⁺634

융점: 181℃

거울상 이성질체 8A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.09 - 3.26 (m, 2 H) 3.70 - 3.85 (m, 8 H) 4.08 - 4.20 (m, 3 H) 4.40 (td, J=10.3, 6.5 Hz, 1 H) 4.99 (br t, J=5.4 Hz, 1 H) 5.81 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.66 (s, 1 H) 6.83 (s, 1 H) 6.86 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.03 (dd, J=8.2, 1.3 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.38 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.07 (s, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 3.09분, MH⁺ 634

[α]_D ²⁰:+39.3° (c 0.3, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-E):R_t 3.39분, MH⁺ 634, 키랄순도 100%.

거울상 이성질체 8B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.09 - 3.27 (m, 2 H) 3.70 - 3.85 (m, 8 H) 4.06 - 4.19 (m, 3 H) 4.40 (td, J=10.2, 6.6 Hz, 1 H) 4.99 (br t, J=5.2 Hz, 1 H) 5.81 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.66 (s, 1 H) 6.83 (s, 1 H) 6.86 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.03 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.38 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.07 (s, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.07분, MH⁺634

[α]_D ²⁰:-44.4° (c 0.295, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-E):R_t 5.69분, MH⁺634, 키랄순도 100%.

실시예 9 : 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-1-(5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)에타논 (화합물 9)의 합성 및 거울상 이성질체 9A 및 9B로의 키랄 분리.

중간체 9a의 합성:

진한 H₂SO₄ (98%, 200 mL) 중 4-브로모-2-플루오로-1-(트리플루오로메톡시)벤젠 [CAS 105529-58-6] (98.7 g, 381.1 mmol)의 용액을 빙조를 이용하여 0℃까지 냉각시켰다. KNO₃ (43.0 g, 425.3 mmol)을 일부씩 첨가하였다. 첨가 후, 빙조를 제거하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 교반하면서 얼음물 (2 L)에 부었다. 상기 혼합물을 CH₂Cl₂ (3x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 NaHCO₃ 수용액 (2x 500 mL), 염수 (500 mL)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 1-브로모-5-플루오로-2-니트로-4-(트리플루오로메톡시)벤젠 9a (117.2 g)를 생성하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 9b의 합성:

N₂-분위기 하에 iPrOH (1 L) 및 물 (330 mL) 중 1-브로모-5-플루오로-2-니트로-4-(트리플루오로메톡시)벤젠 9a (70.0 g, 230 mmol) 및 NH₄Cl (123.2 g, 2.30 mol)의 교반 현탁물에 환원성 철 분말 (64.3 g, 1.15 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (1 L)로 희석시키고, 셀라이트®를 통하여 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc (1 L)와 물 (800 mL) 사이에 분배시켰다. 층들을 분리하고, 유기 상을 염수 (1 L)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 감압 (오일 펌프, b.p. 64℃) 하에 증류에 의해 정제하였다. 2-브로모-4-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)아닐린 9b (47.3 g)를 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 9c의 합성:

Et₃N (300 mL) 중 2-브로모-4-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)아닐린 9b (18.4 g, 67.2 mmol), 에티닐(트리메틸)실란 (19.9 g, 202.4 mmol, 28.00 mL)의 혼합물에 CuI (1.28 g, 6.72 mmol) 및 Pd(PPh₃)₂Cl₂ (2.40 g, 3.42 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N₂-분위기 하에 90℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 혼합물을 MTBE (300 mL)로 희석시키고, 셀라이트®를 통하여 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (ISCO®, 220 g 세파플래시(SepaFlash)® 실리카 플래시 컬럼(Silica Flash Column), 용출제: 석유 에테르 중 0%에서 5%까지의 EtOAc의 구배, 100 mL/분)에 의해 정제하였다. 4-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-2-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린 9c (16.1 g, 90%의 순도)를 갈색 오일로서 수득하였다.

중간체 9d의 합성:

NMP (220.00 mL) 중 4-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-2-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린 9c (16.1 g, 55.3 mmol) 및 tBuOK (18.6 g, 165.8 mmol)의 혼합물을 N₂-분위기 하에 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 얼음물 (1 L)에 붓고, MTBE (3x 300mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 물 (2x 200 mL), 염수 (300 mL)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (ISCO®, 120 g 세파플래시® 실리카 플래시 컬럼, 용출제: 석유 에테르 중 0%에서 5%까지의 EtOAc의 구배, 85 mL/분)에 의해 정제하여 5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 9d (11 g) 생성물을 짙은 녹색의 오일로서 생성하였다. 잔사를 또 다른 분획과 합하고 (총 양 = 17.2 g), 감압 (오일 펌프, b.p. 60~64℃) 하에서의 증류에 의해 추가로 정제하여 5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 9d (14.7 g, 95%의 순도)을 무색 오일로서 제공하였다.

중간체 9e의 합성:

0℃에서, BH₃-피리딘 (13.8 mL, 136.9 mmol)을 EtOH (40 mL) 중 5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 9d (6 g, 27.4 mmol)의 용액에 적가하였다. 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 6 N HCl (90 mL)을 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 물 (100 mL)을 첨가하고, 물 중 NaOH의 진한 용액을 이용하여 pH 8~9가 될 때까지 상기 혼합물을 염기성화하였다 (반응물 온도를 20℃ 미만으로 유지하였다). 상기 혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 톨루엔을 첨가하고, 상기 용액을 감압 하에 농축시켜 5.52 g의 5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린 9e를 제공하였다. 상기 화합물을 추가 정제 없이 다음 반응 단계에서 사용하였다.

중간체 9f의 합성:

DMF (3.9 mL) 중 5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린 9e (169 mg, 0.76 mmol), 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 5d (407 mg, 0.76 mmol), HATU (435 mg, 1.15 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (379 μL, 2.29 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 생성된 고무질 물질을 EtOAc로 녹였다. 유기 용액을 물 중 10% K₂CO₃ 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 24 g, 헵탄/EtOAc (70/30))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-1-(5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)에타논 9f (257 mg)를 제공하였다.

화합물 9의 합성 및 거울상 이성질체 9A 및 9B로의 키랄 분리:

N₂ 유동 하에, 5℃에서, 디옥산 중 4 M HCl (873 μL, 3.49 mmol)을 MeOH (4 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-1-(5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)에타논 9f (257 mg, 0.35 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 12 g, CH₂Cl₂/MeOH (98.5/1.5))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-1-(5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)에타논 9 (210 mg)를 라세미체로서 제공하였다. 작은 분획 (17 mg)을 역상 크로마토그래피 (고정상: YMC-악투스(actus) 트리아트(Triart)-C18 10 μm 30 x 150 mm, 이동상: 50%의 0.2% NH₄HCO₃, 50%의 CH₃CN으로부터 0%의 0.2% NH₄HCO₃, 100%의 CH₃CN까지의 구배)를 통하여 추가로 정제하여 7 mg을 생성하였다. 잔사를 CH₃CN (1 ml)과 물 (4 mL)의 용매 혼합물로부터의 동결건조에 의해 고체화하였다.

화합물 9 (190 mg)의 거울상 이성질체를 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® AD-H 5 μm 250 x 30 mm, 이동상: 65% CO₂, 35% EtOH (+0.3% iPrNH₂))를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (58 mg)를 CH₃CN (2 ml)에 용해시키고, 물 (8 mL)을 첨가하고, 혼합물을 동결건조시켜 거울상 이성질체 9A (58 mg)를 분말로서 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (59 mg)를 CH₃CN (2 ml)에 용해시키고, 물 (8 mL)을 첨가하고, 혼합물을 동결건조시켜 거울상 이성질체 9B (59 mg)를 분말로서 제공하였다.

화합물 9:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.13 - 3.30 (m, 2 H) 3.72 (s, 3H) 3.70 - 3.80 (m, 2 H) 4.06 - 4.22 (m, 3 H) 4.42 (td, J=10.4, 6.3 Hz, 1 H) 4.97 (br s, 1 H) 5.82 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.66 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.82 (s, 1 H) 6.87 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.03 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=2.2 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.45 (d, J=9.8 Hz, 1 H) 8.14 - 8.18 (m, 2 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 3.32분, MH⁺622

거울상 이성질체 9A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 3.12 - 3.28 (m, 2 H) 3.72 (s, 3H) 3.69 - 3.82 (m, 2 H) 3.99 - 4.22 (m, 3 H) 4.42 (td, J=10.0, 6.8 Hz, 1 H) 4.96 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 5.81 (d, J=9.1 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.66 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 6.80 - 6.88 (m, 2 H) 7.02 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.45 (d, J=10.1 Hz, 1 H) 8.13 - 8.18 (m, 2 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 3.17분, MH⁺ 622

[α]_D ²⁰:-35.1° (c 0.276, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-B):R_t 2.75분, MH⁺ 622, 키랄순도 100%.

거울상 이성질체 9B:

LC/MS (방법 LC-B): R_t 3.17분, MH⁺622

[α]_D ²⁰:+32.3° (c 0.254, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-B):R_t 3.75분, MH⁺622, 키랄 순도 100%.

실시예 10 : 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 (화합물 10)의 합성 및 거울상 이성질체 10A 및 10B로의 키랄 분리.

중간체 10a의 합성:

디옥산 (20 mL) 중 2-메틸-4-(트리플루오로메톡시)아닐린 [CAS 86256-59-9] (10.0 g, 52.3 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 무수물 (8 mL, 57.2　mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc와 1 N HCl 사이에 분배시켰다. 상들을 분리하였다. 유기 상을 물 중 포화 NaHCO₃ 용액, H₂O 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 14.7 g의 2,2,2-트리플루오로-N-(2-메틸-4-(트리플루오로메톡시)페닐)아세트아미드 10a를 백색 분말로서 생성하였다. 상기 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 10c의 합성:

0℃에서 냉각시킨 아세트산 무수물 (11.4 mL, 61.1 mmol)에 70% 질산 (3.9 mL)을 적가하였다. 2,2,2-트리플루오로-N-(2-메틸-4-(트리플루오로메톡시)페닐)아세트아미드 10a (5 g, 17.4 mmol)를 일부씩 첨가하고, 반응 혼합물을 55℃에서 12시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, H₂O로 세척하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 메탄올 (46 mL)에 용해시켰다. 2 M K₂CO₃ (23 mL, 46　mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 가열하였다. 추가의 2 M K₂CO₃ (10 mL, 20 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 부분적으로 농축시켜 메탄올을 제거하였다. 잔사를 EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 H₂O 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 헵탄 중 EtOAc의 구배 (20%에서 50%까지)를 이용하여 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 3.6 g의 2-메틸-6-니트로-4-(트리플루오로메톡시)아닐린 10c를 황색 고형물로서 생성하였다.

중간체 10d의 합성:

아세트산 (10.9 mL) 중 2-메틸-6-니트로-4-(트리플루오로메톡시)아닐린 10c (1.8 g, 7.69 mmol)의 용액에 H₂SO₄/H₂O (2 mL, 1/1) 중 아질산나트륨 (0.806 g, 11.7 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. H₂O (22 mL) 및 우레아 (0.802 g, 13.4 mmol)를 첨가하였다. 실온에서의 10분 후, H₂O (11 mL) 중 요오드화칼륨 (1.7 g, 10.2 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 황색 고형물을 여과 제거하고, H₂O로 세척하고, 건조시켜 2.4 g의 2-요오도-1-메틸-3-니트로-5-(트리플루오로메톡시)벤젠 10d를 제공하였다.

중간체 10e의 합성:

EtOH (30 mL) 중 2-요오도-1-메틸-3-니트로-5-(트리플루오로메톡시)벤젠 10d (3.5 g, 10.0 mmol)의 용액에 H₂O (30 mL) 중 NH₄Cl (2.7 g, 49.9 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 가열하였다. 철 (2.6 g, 46.9 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 환류 하에 40분 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 셀라이트^®를 통하여 여과시켰다. 고형물을 EtOH로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 부분적으로 농축시켜 EtOH를 제거하였다. 잔사를 EtOAc와 물 중 포화 NaHCO₃ 용액 사이에 분배시켰다. 상들을 분리하였다. 유기 상을 H₂O 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 헵탄 중 EtOAc의 구배 (0%에서 25%까지)를 이용하여 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 2.9 g의 2-요오도-3-메틸-5-(트리플루오로메톡시)아닐린 10e를 황색 오일로서 생성하였다.

중간체 10f의 합성:

트리에틸아민 (23 mL) 중 2-요오도-3-메틸-5-(트리플루오로메톡시)아닐린 10e (2.9 g, 9.1 mmol)의 용액을 아르곤을 이용하여 15분 동안 탈기시켰다. 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) (0.327 g, 0.47 mmol), 요오드화구리(I) (0.164 g, 0.86 mmol) 및 트리메틸실릴아세틸렌 (1.8 mL, 13.1 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 12시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 H₂O로 희석시키고, EtOAc (3회)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, H₂O 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 헵탄 중 EtOAc의 구배 (0%에서 20%까지)를 이용하여 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 2.6 g의 3-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-2-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린 10f를 주황색 오일로서 생성하였다.

중간체 10g의 합성:

NMP (27 mL) 중 3-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-2-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린 10f (2.7 g, 9.3 mmol)의 용액에 tBuOK (3.1 g, 27.8 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 H₂O로 희석시키고, EtOAc (2회)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, H₂O 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 헵탄 중 EtOAc의 구배 (0%에서 20%까지)를 이용하여 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 1.7 g의 4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 10g를 주황색 오일로서 생성하였다.

중간체 10h의 합성:

0℃에서, BH₃-피리딘 (1.2 mL, 11.6 mmol)을 EtOH (3 mL) 중 4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 10g (0.5 g, 2.32 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응물 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 6 N HCl (6 mL)을 서서히 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 물 (12 mL)을 첨가하고, 물 중 NaOH의 진한 용액을 이용하여 pH 8~9가 될 때까지 상기 혼합물을 염기성화하였다 (반응물 온도를 20℃ 미만으로 유지하였다). 상기 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 톨루엔을 첨가하고, 상기 용액을 감압 하에 농축시켜 450 mg의 4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린 10h를 제공하였다.

중간체 10i의 합성:

DMF (3.8 mL) 중 4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린 10h (163 mg, 0.75 mmol), 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 5d (400 mg, 0.75 mmol), HATU (428 mg, 1.13 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (372 μL, 2.25 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 생성된 고무질 물질을 EtOAc로 녹였다. 유기 층을 물 중 10% K₂CO₃ 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 화합물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 24 g, 헵탄/EtOAc 구배: 80/20에서 70/30까지)에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 10i (226 mg)를 제공하였다.

화합물 10의 합성 및 거울상 이성질체 10A 및 10B로의 키랄 분리:

N₂ 유동 하에, 5℃에서, 디옥산 중 4 M HCl (772 μL, 3.1 mmol)을 MeOH (4 mL) 중 2-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 10i (226 mg, 0.31 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 12 g, CH₂Cl₂/MeOH (98.5/1.5))에 의해 정제하였다. 두 번째 정제를 역상 크로마토그래피 (고정상: YMC-악투스 트리아트-C18 10 μm 30 x 150 mm, 이동상: 55%의 0.2% NH₄HCO₃, 45%의 CH₃CN으로부터 0%의 0.2% NH₄HCO₃, 100%의 CH₃CN까지의 구배)를 통하여 수행하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(4-클로로-2-(2-히드록시에톡시)페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-1-(4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에타논 10 (78 mg)을 라세미체로서 제공하였다. 작은 분획을 CH₃CN/디이소프로필 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 화합물 10 (9 mg)을 제공하였다. 남아 있는 양을 이용하여, 화합물 10의 거울상 이성질체를 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® AD-H 5 μm 250 x 30 mm, 이동상: 60% CO₂, 40% iPrOH)를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (27 mg)를 CH₃CN (2 ml)에 용해시키고, 물 (8 mL)을 첨가하고, 혼합물을 동결건조시켜 거울상 이성질체 10A (25 mg)를 분말로서 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (28 mg)를 CH₃CN (2 ml)에 용해시키고, 물 (8 mL)을 첨가하고, 혼합물을 동결건조시켜 거울상 이성질체 10B (22 mg)를 분말로서 제공하였다.

화합물 10:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.21 (s, 3 H) 3.01 - 3.13 (m, 2 H) 3.72 (s, 3H) 3.70 - 3.82 (m, 2 H) 4.08 - 4.22 (m, 3 H) 4.40 - 4.48 (m, 1 H) 4.98 (t, J=5.4 Hz, 1 H) 5.82 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (br s, 1 H) 6.66 (s, 1 H) 6.82 - 6.90 (m, 3 H) 7.02 (dd, J=8.4, 1.7 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.89 (s, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 3.26분, MH⁺618

거울상 이성질체 10A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 2.21 (s, 3 H) 3.01 - 3.14 (m, 2 H) 3.72 (s, 3H) 3.71 - 3.83 (m, 2 H) 4.07 - 4.22 (m, 3 H) 4.44 (td, J=10.2, 6.5 Hz, 1 H) 4.98 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.82 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.66 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.81 - 6.90 (m, 3 H) 7.02 (dd, J=8.4, 2.1 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.89 (s, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 3.26분, MH⁺ 618

[α]_D ²⁰:-38.4° (c 0.279, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-F):R_t 1.41분, MH⁺ 618, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 10B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 2.21 (s, 3 H) 3.00 - 3.14 (m, 2 H) 3.72 (s, 3H) 3.71 - 3.82 (m, 2 H) 4.06 - 4.23 (m, 3 H) 4.44 (td, J=10.1, 6.9 Hz, 1 H) 4.95 - 5.02 (m, 1 H) 5.82 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.66 (t, J=1.7 Hz, 1 H) 6.82 - 6.90 (m, 3 H) 7.02 (dd, J=8.5, 1.9 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.89 (s, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 3.26분, MH⁺618

[α]_D ²⁰:+37.5° (c 0.299, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-F):R_t 1.82분, MH⁺618, 키랄순도 100%.

실시예 11 : 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에틸)페녹시)부탄산 (화합물 11)의 합성 및 거울상 이성질체 11A 및 11B로의 키랄 분리.

중간체 11a의 합성:

10℃에서 DMF (130 mL) 중 에틸 2-(4-클로로-2-히드록시페닐)아세테이트 4b (8.5 g, 39.6 mmol) 및 Cs₂CO₃ (25.8 g, 79.2 mmol)의 현탁물에 tert-부틸 4-브로모부타노에이트 [CAS 110611-91-1] (7 mL, 39.6 mmol)를 적가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석시켰다. 층들을 경사분리하였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 120 g, 헵탄/EtOAc (90/10))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조상태까지 농축시켜 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(2-에톡시-2-옥소에틸)페녹시)부타노에이트 11a (12.7 g)를 제공하였다.

중간체 11b의 합성:

N₂ 유동 하에 플라스크를 THF 중 1.5 M LiHMDS (23.5 mL, 35.3 mmol)로 충전시키고, 상기 용액을 -78℃까지 냉각시켰다. THF (60 mL) 중 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(2-에톡시-2-옥소에틸)페녹시)부타노에이트 11a (6.3 g, 17.6 mmol)의 용액을 적가하고, 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반시켰다. 클로로트리메틸실란 (3.6 mL, 28.3 mmol)을 첨가하였다. -78℃에서 15분 후, THF (40 mL) 중 N-브로모숙신이미드 (3.77 g, 21.2 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 tert-부틸 4-(2-(1-브로모-2-에톡시-2-옥소에틸)-5-클로로페녹시)부타노에이트 11b (7.6 g)를 생성하였다. 상기 화합물을 추가 정제 없이 다음 반응 단계에서 직접 사용하였다.

중간체 11c의 합성:

실온에서 CH₃CN (140 mL) 중 tert-부틸 4-(2-(1-브로모-2-에톡시-2-옥소에틸)-5-클로로페녹시)부타노에이트 11b (7.6 g, 17.4 mmol)의 용액에 디이소프로필에틸아민 (4.8 mL, 27.9 mmol) 및 3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)아닐린 [CAS 1220630-56-7] (4 g, 20.9 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 65℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 0.5 N HCl (2회) 및 물로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 120 g, 헵탄/EtOAc: 85/15에서 70/30까지)에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조상태까지 농축시켜 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(2-에톡시-1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)페녹시)부타노에이트 11c (6.6 g)를 제공하였다.

중간체 11d의 합성:

THF/물 (1/1) (160 mL) 중 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(2-에톡시-1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)페녹시)부타노에이트 11c (6.6 g, 12.1 mmol) 및 수산화리튬 일수화물 (1.52 g, 36.3 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 수성 층을 서서히 3 N HCl로 산성화하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켜 2-(2-(4-(tert-부톡시)-4-옥소부톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 11d (6.2 g)를 제공하였다. 조 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 11e의 합성:

DMF (30 mL) 중 6-(트리플루오로메틸)인돌린 [CAS 181513-29-1] (290 mg, 1.55 mmol), 2-(2-(4-(tert-부톡시)-4-옥소부톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 11d (800 mg, 1.55 mmol), HATU (880 mg, 2.32 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (770 μL, 4.64 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, EtOAc로 녹였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 디이소프로필 에테르로부터 결정화하여 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에틸)페녹시)부타노에이트 11e (500 mg)를 제공하였다.

화합물 11의 합성 및 거울상 이성질체 11A 및 11B로의 키랄 분리:

디옥산 (5 mL) 중 4 M HCl 중 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에틸)페녹시)부타노에이트 11e (500 mg, 0.729 mmol)의 용액을 5℃에서 3시간 동안, 및 실온에서 8시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 디옥산/디이소프로필 에테르로 세척하고, 건조시켜 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)에틸)페녹시)부탄산 11 (430 mg, 0.4 H₂O (적정에 의해 결정됨))를 라세미체로서 제공하였다.

화합물 11의 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® AD-H 5 μm 250 x 30 mm, 이동상: 65% CO₂, 35% EtOH)를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (80 mg)를 석유 에테르/디이소프로필 에테르를 이용한 적정에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 11A (65 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (126 mg)를 석유 에테르/디이소프로필 에테르를 이용한 적정에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 11B (110 mg)를 제공하였다.

화합물 11:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.94 - 2.02 (m, 2 H) 2.31 - 2.42 (m, 2 H) 3.15 - 3.35 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.01 - 4.24 (m, 3 H) 4.22 - 4.49 (m, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.82 (s, 1 H) 7.02 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1 H) 7.13 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.0 Hz, 1 H) 7.38 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.45 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.38 (s, 1 H) 9.15 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.70분, MH⁺630

거울상 이성질체 11A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.98 (br s, 2 H) 2.28 - 2.45 (m, 2 H) 3.13 - 3.29 (m, 2 H) 3.74 (s, 3 H) 4.02 - 4.17 (m, 3 H) 4.36 - 4.44 (m, 1 H) 5.74 (br d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (br s, 1 H) 6.68 (s, 1 H) 6.80 - 6.88 (m, 2 H) 7.03 (br d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.14 (s, 1 H) 7.33 (d, J=7.8 Hz, 1 H) 7.37 - 7.40 (m, 1 H) 7.46 (br d, J=7.6 Hz, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 9.16 (s, 1 H) 12.13 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.79분, MH⁺ 630

[α]_D ²⁰:-28.9° (c 0.26, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-G):R_t 3.31분, MH⁺ 630, 키랄순도 100%.

거울상 이성질체 11B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.91 - 2.04 (m, 2 H) 2.28 - 2.46 (m, 2 H) 3.16 - 3.30 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.02 - 4.18 (m, 3 H) 4.35 - 4.44 (m, 1 H) 5.73 (br d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.34 (br s, 1 H) 6.68 (s, 1 H) 6.80 - 6.87 (m, 2 H) 7.02 (br d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.13 (s, 1 H) 7.31 - 7.41 (m, 2 H) 7.45 (br d, J=7.9 Hz, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.38 (s, 1 H) 9.16 (s, 1 H) 12.13 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.79분, MH⁺630

[α]_D ²⁰:+23.8° (c 0.29, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-G):R_t 4.32분, MH⁺630, 키랄순도 100%.

실시예 12 : 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)-2-옥소에틸)페녹시)부탄산 (화합물 12)의 합성 및 거울상 이성질체 12A 및 12B로의 키랄 분리.

중간체 12a의 합성:

DMF (30 mL) 중 5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린 2c (630 mg, 2.9 mmol), 2-(2-(4-(tert-부톡시)-4-옥소부톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 11d (1.5 g, 2.9 mmol), HATU (1.65 g, 4.35 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.45 mL, 8.7 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, EtOAc로 녹였다. 유기 용액을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 120 g, 헵탄/EtOAc (60/40))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조상태까지 농축시켜, 에테르/디이소프로필 에테르로부터의 결정화 후, tert-부틸 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)-2-옥소에틸)페녹시)부타노에이트 12a (1.45 g)를 제공하였다.

화합물 12의 합성 및 거울상 이성질체 12A 및 12B로의 키랄 분리:

디옥산 (12 mL) 중 4 M HCl 중 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)-2-옥소에틸)페녹시)부타노에이트 12a (1.45 g, 2.03 mmol)의 용액을 5℃에서 3시간 동안, 및 실온에서 12시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 디옥산/디이소프로필 에테르로 세척하고, 건조시켜 조 화합물 12 (1.02 g)를 제공하였다. 작은 부분 (90 mg)을 비키랄 SFC (고정상: 2-에틸피리딘 6 μm 150 x 21.2 mm, 이동상: 60% CO₂, 40% iPrOH)에 의해 추가로 정제하여, CH₃CN/디이소프로필 에테르를 이용한 미분화에 의한 고체화 후, 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-(5-메톡시-6-(트리플루오로메틸)인돌린-1-일)-2-옥소에틸)페녹시)부탄산 12 (70 mg,)를 라세미체로서 제공하였다. 남아 있는 양을 이용하여 거울상 이성질체들을 분리하였다.

화합물 12의 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® AS-H 5 μm 250 x 20 mm, 이동상: 63% CO₂, 37% iPrOH)를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (458 mg)를 1 N HCl과 EtOAc의 혼합물에서 교반시켰다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 디이소프로필 에테르/석유 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 12A (270 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (405 mg)를 1 N HCl과 EtOAc의 혼합물에서 교반시켰다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 디이소프로필 에테르/석유 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 12B (272 mg)를 제공하였다.

화합물 12:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.95 - 2.04 (m, 2 H) 2.31 - 2.45 (m, 2 H) 3.15 - 3.28 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.84 (s, 3 H) 3.98 - 4.17 (m, 3 H) 4.33 - 4.41 (m, 1 H) 5.70 (br d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.33 (s, 1 H) 6.66 (s, 1 H) 6.77 - 6.83 (m, 2 H) 7.01 (br d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.12 (s, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.33 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 9.13 (s, 1 H) 12.07 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.72분, MH⁺660

거울상 이성질체 12A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.94 - 2.05 (m, 2 H) 2.31 - 2.46 (m, 2 H) 3.16 - 3.31 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.85 (s, 3 H) 3.99 - 4.18 (m, 3 H) 4.38 (td, J=10.2, 6.5 Hz, 1 H) 5.71 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.82 (s, 1 H) 6.83 (d, J=9.5 Hz, 1 H) 7.02 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.13 (s, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 9.15 (s, 1 H) 12.11 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.70분, MH⁺ 660

[α]_D ²⁰:+30.4° (c 0.257, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-H):R_t 3.71분, MH⁺ 660, 키랄순도 100%.

거울상 이성질체 12B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.91 - 2.08 (m, 2 H) 2.32 - 2.44 (m, 2 H) 3.16 - 3.31 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.85 (s, 3 H) 3.99 - 4.17 (m, 3 H) 4.38 (td, J=10.3, 6.6 Hz, 1 H) 5.71 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.79 - 6.85 (m, 2 H) 7.02 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.13 (s, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 9.15 (s, 1 H) 12.12 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.70분, MH⁺630

[α]_D ²⁰:-36.9° (c 0.287, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-H):R_t 5.91분, MH⁺660, 키랄순도 100%.

실시예 13 : 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)페녹시)부탄산 (화합물 13)의 합성 및 거울상 이성질체 13A 및 13B로의 키랄 분리.

중간체 13a의 합성:

DMF (60 mL) 중 6-(트리플루오로메톡시)인돌린 [CAS 959235-95-1] (590 mg, 2.9 mmol), 2-(2-(4-(tert-부톡시)-4-옥소부톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 11d (1.5 g, 2.9 mmol), HATU (1.65 g, 4.35 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.45 mL, 8.7 mmol)의 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, EtOAc로 녹였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 120 g, 헵탄/EtOAc (60/40))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조상태까지 농축시켜, 에테르/디이소프로필 에테르로부터의 결정화 후, tert-부틸 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)페녹시)-부타노에이트 13a (1.05 g)를 제공하였다.

화합물 13의 합성 및 거울상 이성질체 13A 및 13B로의 키랄 분리:

디옥산 (9.5 mL) 중 4 M HCl 중 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)페녹시)부타노에이트 13a (1.05 g ,1.50 mmol)의 용액을 5℃에서 3시간 동안, 및 실온에서 12시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 디옥산/디이소프로필 에테르로 세척하고, 건조시켜 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)페녹시)부탄산 13 (965 mg, 0.23 H₂O (적정에 의해 결정됨))을 라세미체로서 제공하였다.

화합물 13의 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® AS-H 5 μm 250 x 20 mm, 이동상: 80% CO₂, 20% EtOH)를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (390 mg)를 석유 에테르/디이소프로필 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 13A (260 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (350 mg)를 석유 에테르/디이소프로필 에테르를 이용한 미분화에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 13B (188 mg)를 제공하였다.

화합물 13:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.94 - 2.03 (m, 2 H) 2.33 - 2.41 (m, 2 H) 3.10 - 3.24 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.04 - 4.26 (m, 3 H) 4.39 (td, J=10.2, 6.5 Hz, 1 H) 5.71 (s, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.81 (s, 1 H) 6.99 - 7.07 (m, 2 H) 7.13 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 7.27-7.39 (m, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 9.15 (s, 1 H) 12.08 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 2.73분, MH⁺646

거울상 이성질체 13A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.93 - 2.03 (m, 2 H) 2.34 - 2.47 (m, 2 H) 3.13 - 3.21 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.03 - 4.17 (m, 3 H) 4.39 (td, J=10.1, 6.6 Hz, 1 H) 5.72 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.68 (s, 1 H) 6.82 (s, 1 H) 6.87 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.02 (t, J=8.4 Hz, 1 H) 7.13 (s, 1 H) 7.27 - 7.39 (m, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 9.15 (s, 1 H) 12.10 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.83분, MH⁺ 646

[α]_D ²⁰:+38.4° (c 0.276, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-I):R_t 4.96분, MH⁺ 646, 키랄순도 100%.

거울상 이성질체 13B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.91 - 2.02 (m, 2 H) 2.33 - 2.41 (m, 2 H) 3.10 - 3.24 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.04 - 4.17 (m, 3 H) 4.39 (td, J=10.1, 6.6 Hz, 1 H) 5.72 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.68 (s, 1 H) 6.81 - 6.89 (m, 2 H) 6.99 - 7.05 (m, 2 H) 7.12 - 7.15 (m, 1 H) 7.27-7.40 (m, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 9.16 (s, 1 H) 12.11 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.83분, MH⁺646

[α]_D ²⁰:-43.2° (c 0.273, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-I):R_t 6.56분, MH⁺646, 키랄순도 100%.

실시예 14 : 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)페녹시)-2,2-디메틸부탄산 (화합물 14)의 합성 및 거울상 이성질체 14A 및 14B로의 키랄 분리.

중간체 14a의 합성:

DMF (30 mL) 중 메틸 2-(4-클로로-2-히드록시페닐)아세테이트 [CAS 518979-09-4] (1 g, 4.99 mmol) 및 탄산세슘 (3.25 g, 9.97 mmol)의 혼합물에 메틸 4-브로모-2,2-디메틸부타노에이트 [CAS 4833-99-2] (1.09 g, 5.23 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 교반수 (150 mL)에 붓고, 생성물을 Et₂O로 추출하였다 (2회). 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 생성물은 실온에서 정치시에 결정화되었다. 고형 잔사를 5 mL의 디이소프로필 에테르에서 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 디이소프로필 에테르로 세척하고 (3회), 진공 하에 45℃에서 건조시켜 메틸 4-(5-클로로-2-(2-메톡시-2-옥소에틸)페녹시)-2,2-디메틸부타노에이트 14a (0.897 g)를 제공하였다.

중간체 14b의 합성:

MeOH (10 mL)와 디옥산 (5 mL)의 용매 혼합물 중 메틸 4-(5-클로로-2-(2-메톡시-2-옥소에틸)페녹시)-2,2-디메틸부타노에이트 14a (0.897 g, 2.73 mmol)의 용액을 빙조에서 냉각시켰다. 0℃에서, 1 M NaOH (2.73 mL, 2.73 mmol)를 조심스럽게 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 및 실온에서 14시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고, 15분 동안 교반시키고, 30분 동안 정치시켰다. 고형 분획 (미반응 중간체 14a)을 여과 제거하고, 물로 세척하였다 (3회). 합한 여과액은 교반하면서 1 N HCl (2.8 mL)을 적가하여 산성화하였다. 10분 후, 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고 (3회), 진공 하에 45℃에서 건조시켜 2-(4-클로로-2-(4-메톡시-3,3-디메틸-4-옥소부톡시)페닐)아세트산 14b (0.576 g)를 제공하였다.

중간체 14c의 합성:

N₂-분위기 하에 DMF (7.5 mL) 중 2-(4-클로로-2-(4-메톡시-3,3-디메틸-4-옥소부톡시)페닐)아세트산 14b (576 mg, 1.83 mmol), 6-(트리플루오로메톡시)인돌린 [CAS 959235-95-1] (409 mg, 2.01 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (907 μL, 5.49 mmol)의 교반 용액에 HATU (1.07 g, 2.75 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반시켰다. 물 (30 mL)을 첨가하고, 생성물을 Et₂O로 추출하였다 (2회). 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 100/0에서 0/100까지의 헵탄/EtOAc의 구배를 사용하여 실리카 겔 (40 g)에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 합하여 감압 하에 증발시키고, 톨루엔과 함께 공동 증발시켰다. 잔사를 진공 하에 45℃에서 건조시켜 메틸 4-(5-클로로-2-(2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)페녹시)-2,2-디메틸부타노에이트 14c (790 mg)를 분말로서 제공하였다.

중간체 14d의 합성:

2-Me-THF (30 mL) 중 메틸 4-(5-클로로-2-(2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)페녹시)-2,2-디메틸부타노에이트 14c (790 mg, 1.58 mmol)의 용액을 N₂-유동 하에 교반시키고, -78℃까지 냉각시켰다. THF 중 1 M 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드의 용액 (3.16 mL, 3.16 mmol)을 적가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반시켰다. 클로로트리메틸실란 (323 μL, 2.53 mmol)을 적가하고, 혼합물을 -78℃에서 25분 동안 교반시켰다. 2-Me-THF (7.5 mL) 및 THF (2.5 mL) 중 N-브로모숙신이미드 (352 mg, 1.98 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 45분 동안 교반시켰다. NH₄Cl의 포화 수용액 (50 mL)을 서서히 첨가하고, 생성된 혼합물을 온도가 0℃에 도달할 때까지 냉각 없이 교반시켰다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 30분 동안 교반시킨 후, 층들을 분리하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시키고, CH₃CN과 함께 공동 증발시켜 메틸 4-(2-(1-브로모-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)-5-클로로페녹시)-2,2-디메틸부타노에이트 14d (915 mg)를 제공하였다. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 14e의 합성:

N₂-분위기 하에 CH₃CN (40 mL) 중 메틸 4-(2-(1-브로모-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)-5-클로로페녹시)-2,2-디메틸부타노에이트 14d (915 mg, 1.58 mmol)의 교반 용액에 3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)아닐린 [CAS 1220630-56-7] (301 mg, 1.58 mmol), 및 디이소프로필에틸아민 (545 μL, 3.16 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 18시간 동안, 및 70℃에서 6시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 교반 H₂O (200 mL)에 부었다. 생성물을 Et₂O로 추출하였다 (2회). 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 100/0/0에서 40/45/15까지의 헵탄/EtOAc/EtOH의 구배를 사용하여 실리카 겔 (40 g)에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시키고, 디옥산과 함께 공동 증발시켜 메틸 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)페녹시)-2,2-디메틸부타노에이트 14e (1.09 g)를 제공하였다. 생성물을 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

화합물 14의 합성 및 거울상 이성질체 14A 및 14B로의 키랄 분리:

1 M NaOH (3.95 mL, 3.95 mmol)를 디옥산 (6.5 mL) 중 메틸 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)페녹시)-2,2-디메틸부타노에이트 14e (1.09 g, 1.58 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 40시간 동안 교반시켰다. 물 (21 mL) 및 1 N HCl (4.1 mL)을 첨가하고, 10분 동안 교반시킨 후, 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하였다 (3회). 고형 잔사 (0.9 g)를 CH₂Cl₂ (7.5 mL)에서 45분 동안 교반시키고, 여과 제거하고, CH₂Cl₂로 세척하고 (3회), 진공 하에 45℃에서 건조시켜 라세미 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소-2-(6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)에틸)페녹시)-2,2-디메틸부탄산 (화합물 14,590 mg)을 제공하였다.

화합물 14 (557 mg)의 거울상 이성질체를 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩® 디아셀 AD 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% iPrNH₂)를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시키고, CH₃CN과 함께 공동 증발시켰다. 잔사를 Et₂O/헵탄 (3/1)으로부터 결정화하고, 여과 제거하고, Et₂O로 세척하고 (3회), 진공 하에 50℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 14A (96 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시키고, CH₃CN과 함께 공동 증발시켰다. 잔사를 Et₂O로부터 결정화하고, 여과 제거하고, Et₂O로 세척하고 (3회), 진공 하에 50℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 14B (35 mg + 106 mg (제2 크롭(crop))를 제공하였다.

화합물 14:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.11 (d, J=5.1 Hz, 6 H) 1.86 - 2.03 (m, 2 H) 3.09 - 3.28 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.01 - 4.18 (m, 3 H) 4.38 (td, J=10.2, 6.6 Hz, 1 H) 5.69 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.33 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 6.67 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.79 - 6.86 (m, 2 H) 6.97 - 7.05 (m, 2 H) 7.18 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 8.03 (br s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 12.25 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 1.12분, MH⁺674

거울상 이성질체 14A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.11 (d, J=5.1 Hz, 6 H) 1.87 - 2.02 (m, 2 H) 3.09 - 3.26 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.02 - 4.18 (m, 3 H) 4.37 (td, J=10.2, 6.6 Hz, 1 H) 5.69 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 6.33 (t, J=2.2 Hz, 1 H) 6.67 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 6.79 - 6.86 (m, 2 H) 6.99 - 7.04 (m, 2 H) 7.18 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 8.03 (br s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 12.25 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-D): R_t 2.09분, MH⁺674

[α]_D ²⁰:-32.8° (c 0.528, DMF)

키랄SFC (방법 SFC-K):R_t 3.63분, MH⁺ 674, 키랄순도 100%.

융점: 111℃

거울상 이성질체 14B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.11 (d, J=5.1 Hz, 6 H) 1.87 - 2.02 (m, 2 H) 3.10 - 3.27 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.03 - 4.18 (m, 3 H) 4.38 (td, J=10.2, 6.5 Hz, 1 H) 5.69 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.33 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.67 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 6.79 - 6.86 (m, 2 H) 6.98 - 7.05 (m, 2 H) 7.18 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 8.03 (br s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 12.25 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-D): R_t 2.08분, MH⁺674

[α]_D ²⁰:+32.8° (c 0.515, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-K):R_t 4.22분, MH⁺ 674, 키랄순도 100%.

융점: 177℃

실시예 15 : 4-(5-클로로-2-(2-(5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)페녹시)부탄산 (화합물 15)의 합성 및 거울상 이성질체 15A 및 15B로의 키랄 분리.

중간체 15a의 합성:

DMF (30 mL) 중 5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린 9e (321 mg, 1.45 mmol), 2-(2-(4-(tert-부톡시)-4-옥소부톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 11d (750 mg, 1.45 mmol), HATU (827 mg, 2.18 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (719 μL, 4.35 mmol)의 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, EtOAc로 녹였다. 유기 용액을 물 중 10% K₂CO₃ 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 40 g, CH₂Cl₂/MeOH (98/2))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조상태까지 농축시켜 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(2-(5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)페녹시)부타노에이트 15a (1.05 g)를 제공하였다.

화합물 15의 합성 및 거울상 이성질체 15A 및 15B로의 키랄 분리:

디옥산 (8 mL) 중 4 M HCl 중 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(2-(5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)페녹시)부타노에이트 15a (1.05 g , 1.46 mmol)의 용액을 5℃에서 3시간 동안, 및 실온에서 12시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 디옥산/디이소프로필 에테르로 세척하고, 건조시켰다. 잔사 (580 mg)를 THF (2.5 mL)에 용해시키고, 물 (2.5 mL) 중 수산화리튬 일수화물 (180 mg, 4.277 mmol)의 용액을 적가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 상기 반응물을 0℃까지 냉각시키고, 물 및 얼음을 첨가하였다. pH를 3 N HCl의 첨가에 의해 6까지 조정하였다. 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사의 작은 분획을 CH₂Cl₂로부터 결정화하여 4-(5-클로로-2-(2-(5-플루오로-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)페녹시)부탄산 15 (24 mg)를 라세미체로서 제공하였다. 남아 있는 양을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (20 내지 45 μm, 24 g, CH₂Cl₂/MeOH 구배: 99.5/0.5에서 90/10까지)에 의해 추가로 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조상태까지 농축시켜 화합물 15의 제2 분획 (382 mg)을 제공하였다.

화합물 15 (382 mg)의 거울상 이성질체를 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄셀^® OD-H 5 μm 250 x 30 mm, 이동상: 75% CO₂, 25% MeOH (+0.3% iPrNH₂))를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (178 mg)를 헵탄/디이소프로필 에테르를 이용한 적정에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 15A (140 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (187 mg)를 헵탄/디이소프로필 에테르를 이용한 적정에 의해 고체화하여 거울상 이성질체 15B (136 mg)를 제공하였다.

화합물 15:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.90 - 2.04 (m, 2 H) 2.28 - 2.46 (m, 2 H) 3.11 - 3.28 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.03 - 4.18 (m, 3 H) 4.33 - 4.42 (m, 1 H) 5.71 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.81 (s, 1 H) 6.87 (br d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.02 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.12 (s, 1 H) 7.31 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=9.8 Hz, 1 H) 8.12 -8.20 (m, 2 H) 9.16 (s, 1 H) 12.12 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 2.72분, MH⁺664

융점: 188℃

거울상 이성질체 15A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.88 - 2.12 (m, 2 H) 2.19 - 2.42 (m, 2 H) 2.96 - 3.24 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 3.89 - 4.16 (m, 3 H) 4.25 - 4.43 (m, 1 H) 5.72 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.66 (s, 1 H) 6.79 - 6.86 (m, 2 H) 7.01 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.09 - 7.14 (m, 1 H) 7.32 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.41 (d, J=9.6 Hz, 1 H) 8.12 - 8.17 (m, 2 H) 9.16 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 2.75분, MH⁺ 664

[α]_D ²⁰:-31.5° (c 0.267, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-J):R_t 2.66분, MH⁺ 664, 키랄 순도 99.69%.

거울상 이성질체 15B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.88 - 2.04 (m, 2 H) 2.22 - 2.43 (m, 2 H) 3.12 - 3.40 (m, 2 H) 3.72 (s, 3H) 4.03 - 4.17 (m, 3 H) 4.33 - 4.43 (m, 1 H) 5.72 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.78 - 6.87 (m, 2 H) 7.01 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.09 - 7.13 (m, 1 H) 7.32 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.41 (d, J=9.6 Hz, 1 H) 8.12 - 8.18 (m, 2 H) 9.16 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 2.73분, MH⁺664

[α]_D ²⁰:+28.2° (c 0.262, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-J):R_t 3.53분, MH⁺664, 키랄순도 98.93%.

실시예 16 : 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-(4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-2-옥소에틸)페녹시)부탄산 (화합물 16)의 합성 및 거울상 이성질체 16A 및 16B로의 키랄 분리.

중간체 16a의 합성:

DMF (30 mL) 중 4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린 10h (336 mg, 1.55 mmol), 2-(2-(4-(tert-부톡시)-4-옥소부톡시)-4-클로로페닐)-2-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)아세트산 11d (800 mg, 1.55 mmol), HATU (883 mg, 2.32 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (767 μL, 4.64 mmol)의 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, EtOAc로 녹였다. 유기 용액을 물 중 10% K₂CO₃ 용액, 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 μm, 40 g, 헵탄/EtAOc 구배: 90/10에서 70/30까지)에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조상태까지 농축시켜 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-(4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-2-옥소에틸)페녹시)부타노에이트 16a (816 mg)를 제공하였다.

화합물 16의 합성 및 거울상 이성질체 16A 및 16B로의 키랄 분리:

디옥산 (7 mL) 중 4 M HCl 중 tert-부틸 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-(4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-2-옥소에틸)페녹시)부타노에이트 16a (816 mg ,1.14 mmol)의 용액을 5℃에서 2시간 동안, 및 실온에서 12시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 디옥산/디이소프로필 에테르로 세척하고, 건조시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (20 내지 45 μm, 40 g, CH₂Cl₂/MeOH 구배: 100/0에서 95/5까지)에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켜, CH₃CN/디이소프로필 에테르로부터의 결정화 후, 4-(5-클로로-2-(1-((3-메톡시-5-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)페닐)아미노)-2-(4-메틸-6-(트리플루오로메톡시)인돌린-1-일)-2-옥소에틸)페녹시)부탄산 16 (495 mg)을 제공하였다.

화합물 16의 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® AD-H 5 μm 250 x 30 mm, 이동상: 65% CO₂, 35% iPrOH (+0.3% iPrNH₂))를 통하여 분리하였다. 첫 번째로 용출된 거울상 이성질체 (145 mg)를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (10 내지 40 μm, 24 g, CH₂Cl₂/MeOH (98/2))에 의해 추가로 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜, 디이소프로필 에테르/펜탄을 이용한 미분화에 의해 고체화한 후, 거울상 이성질체 16A (99 mg)를 제공하였다. 두 번째로 용출된 거울상 이성질체 (149 mg)를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (10 내지 40 μm, 24 g, CH₂Cl₂/MeOH (98/2))에 의해 추가로 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 농축시켜, 디이소프로필 에테르/펜탄을 이용한 미분화에 의해 고체화한 후, 거울상 이성질체 16B (95 mg)를 제공하였다.

화합물 16:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.91 - 2.05 (m, 2 H) 2.20 (s, 3 H) 2.29 - 2.43 (m, 2 H) 3.01 - 3.27 (m, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 4.02 - 4.18 (m, 3 H) 4.35 - 4.44 (m, 1 H) 5.71 (br d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.34 (br s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.78 - 6.90 (m, 3 H) 7.01 (br d, J=7.1 Hz, 1 H) 7.12 (s, 1 H) 7.31 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.88 (br s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 12.07 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.93분, MH⁺660

융점: 214℃

거울상 이성질체 16A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.92 - 2.04 (m, 2 H) 2.20 (s, 3 H) 2.30 - 2.44 (m, 2 H) 2.99 - 3.16 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.04 - 4.17 (m, 3 H) 4.35 - 4.44 (m, 1 H) 5.71 (br d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.34 (br s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.79 - 6.89 (m, 3 H) 7.02 (br d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.12 (s, 1 H) 7.32 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.89 (s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 12.09 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.94분, MH⁺ 660

[α]_D ²⁰:-35.4° (c 0.263, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-F):R_t 1.61분, MH⁺ 660, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 16B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.91 - 2.04 (m, 2 H) 2.20 (s, 3 H) 2.30 - 2.44 (m, 2 H) 3.00 - 3.15 (m, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 4.03 - 4.17 (m, 3 H) 4.35 - 4.44 (m, 1 H) 5.71 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 6.79 - 6.89 (m, 3 H) 7.02 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.10 - 7.14 (m, 1 H) 7.32 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 7.89 (s, 1 H) 8.15 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 12.10 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 2.94분, MH⁺660

[α]_D ²⁰:+34.3° (c 0.274, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-F):R_t 2.22분, MH⁺660, 키랄순도 99.47%.

[표]

본 발명의 화합물의 항바이러스 활성

DENV-2 항바이러스 분석

본 발명의 모든 화합물의 항바이러스 활성을 강화 녹색 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein; eGPF)로 표지된 DENV-2 16681 주에 대하여 테스트하였다. 배양 배지는 2%의 열-불활성화 송아지 태아 혈청, 0.04%의 겐타마이신 (50 mg/mL) 및 2 mM의 L-글루타민이 보충된 최소 필수 배지로 이루어졌다. ECACC로부터 획득한 베로(Vero) 세포를 배양 배지에 현탁시키고, 25 μL를 384웰 플레이트에 첨가하였는데(2500개의 세포/웰), 상기 플레이트는 항바이러스 화합물을 이미 포함하고 있다. 전형적으로, 이러한 플레이트는 100% DMSO (200 nL) 중 최종 농도의 200배의 테스트 화합물의 9개의 희석 단계의 5배 연속 희석물을 포함한다. 게다가, 각각의 화합물 농도를 사중으로 테스트한다 (최종 농도 범위: 25 μM ~ 0.000064 μM 또는 2.5 μM ~ 0.0000064 μM (가장 활성이 큰 화합물의 경우)). 최종적으로, 각각의 플레이트는 바이러스 대조구(화합물 없이 세포 및 바이러스를 포함함), 세포 대조구(바이러스 및 화합물 없이 세포를 포함함) 및 배지 대조구(세포, 바이러스 및 화합물 없이 배지를 포함함)로서 할당되는 웰을 포함한다. 배지 대조구로 할당된 웰에 25 μL의 배양 배지를 베로 세포 대신 첨가하였다. 일단 세포를 플레이트에 첨가하였으면, 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하여 세포가 웰 내에 고르게 분포되도록 하였다. 다음, 플레이트를 충분히 가습된 인큐베이터(37℃, 5% CO₂)에서 다음날까지 인큐베이션하였다. 그 후, eGFP로 표지한 DENV-2 주 16681을 0.5의 감염 다중도(multiplicity of infection; MOI)로 첨가하였다. 이에 따라, 15 μL의 바이러스 현탁물을 테스트 화합물을 포함하는 모든 웰 및 바이러스 대조구로 할당된 웰에 첨가하였다. 이와 병행하여, 15 μL의 배양 배지를 배지 대조구 및 세포 대조구에 첨가하였다. 다음, 플레이트를 충분히 가습된 인큐베이터(37℃, 5% CO₂)에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 판독일에, eGFP 형광을 488 nm에서 (청색 레이저) 자동 형광 현미경을 이용하여 측정하였다. 내부 LIMS 시스템을 이용하여, 각각의 화합물에 있어서의 억제 용량 반응 곡선을 계산하고, 반치 최대 유효 농도(EC₅₀)를 결정하였다. 따라서, 모든 테스트 농도에 있어서의 억제 퍼센트 (I)는 하기 식을 이용하여 계산한다: I = 100*(S_T-S_CC)/(S_VC-S_CC); S_T, S_CC 및 S_VC는 각각 테스트 화합물 웰, 세포 대조 웰 및 바이러스 대조 웰에서의 eGFP 시그널(signal)의 양이다. EC₅₀은 바이러스 대조구와 비교하여 eGFP 형광 강도가 50% 감소되는 것에 의해 측정되는 바와 같이, 바이러스 복제가 50% 억제되는 화합물의 농도를 나타낸다. EC₅₀을 선형 내삽을 이용하여 계산한다(표 1).

이와 병행하여, 화합물의 독성을 동일 플레이트에서 평가하였다. 일단 eGFP 시그널의 판독이 행해졌으면, 40 μL의 ATPlite(세포 생존성에 대한 염색제(cell viability stain))를 384웰 플레이트의 모든 웰에 첨가하였다. ATP는 모든 대사적 활성 세포에 존재하며, 그 농도는 세포가 괴사 또는 아폽토시스(apoptosis)를 겪을 때 매우 빠르게 감소한다. ATPLite 분석 시스템은 ATP와 첨가된 루시퍼라아제 및 D-루시페린의 반응에 의해 야기되는 광의 생성을 기반으로 한다. 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 다음, 플레이트를 뷰룩스(ViewLux)에서 측정하였다. 발광 시그널을 세포 대조 웰의 것과 비교하여 50%만큼 감소시키는 데 요구되는 농도로서 정의되는 반치 최대 세포독성 농도(CC₅₀)를 또한 결정하였다. 마지막으로, 선택도 지수(selectivity index; SI)를 화합물에 대하여 결정하였으며, 이를 하기와 같이 계산하였다: SI = CC₅₀/EC₅₀.

[표 1]

정량적 4가 역전사효소-PCR (reverse transcriptase quantitative-PCR; RT-qPCR) 분석:프로토콜 A.

본 발명의 화합물의 항바이러스 활성을 RT-qPCR 분석에서 DENV-1 주 TC974#666 (NCPV), DENV-2 주 16681, DENV-3 주 H87 (NCPV) 및 DENV-4 주 H241 (NCPV)에 대하여 테스트하였다. 이에 따라, 베로 세포를 테스트 화합물의 존재 또는 부재 하에 DENV-1, 또는 -2, 또는 -3, 또는 -4 중 어느 하나로 감염시켰다. 감염 후 제3일에, 상기 세포를 용해시키고, 세포 용해물을 이용하여 바이러스 표적 (DENV의 3'UTR; 표 2) 및 세포 기준 유전자 (β-액틴, 표 2) 둘 모두의 cDNA를 제조하였다. 후속적으로, 듀플렉스(duplex) 실시간 PCR을 라이트사이클러480 (Lightcycler480) 기기에서 수행하였다. 생성된 Cp 값은 이들 표적의 RNA 발현의 양에 반비례한다. 테스트 화합물에 의한 DENV 복제의 억제는 3'UTR 유전자에 있어서 Cp의 이동(shift)으로 이어진다. 반면에, 테스트 화합물이 세포에 유독한 경우, β-액틴 발현에 대한 유사한 영향이 관찰될 것이다. 비교용 ΔΔCp 방법을 이용하여 EC₅₀을 계산하는데, 이는 세포 항존 유전자 (housekeeping gene) (β-액틴)를 이용하여 정규화한 표적 유전자 (3'UTR)의 상대적인 유전자 발현을 기반으로 한다. 게다가, 항존 유전자 β-액틴에 대하여 얻어진 C_p 값을 기반으로 하여 CC₅₀ 값을 결정한다.

[표 2]

배양 배지는 2%의 열-불활성화 송아지 태아 혈청, 0.04%의 겐타마이신 (50 mg/mL) 및 2 mM의 L-글루타민이 보충된 최소 필수 배지로 이루어졌다. ECACC로부터 획득한 베로 세포를 배양 배지에 현탁시키고, 웰당 75 μL를 96웰 플레이트에 첨가하였는데(10000개의 세포/웰), 상기 플레이트는 항바이러스 화합물을 이미 포함하고 있다. 전형적으로, 이러한 플레이트는 100% DMSO 중 최종 농도의 200배의 테스트 화합물의 9개의 희석 단계의 5배 연속 희석물을 포함한다 (500 nL; 최종 농도 범위: 25 μM ~ 0.000064 μM 또는 2.5 μM ~ 0.0000064 μM (가장 활성이 큰 화합물의 경우)). 또한, 각각의 플레이트는 바이러스 대조구(화합물 없이 세포 및 바이러스를 포함함) 및 세포 대조구(바이러스 및 화합물 없이 세포를 포함함)로서 할당되는 웰을 포함한다. 일단 세포를 플레이트에 첨가하였으면, 플레이트를 충분히 가습된 인큐베이터(37℃, 5% CO₂)에서 다음날까지 인큐베이션하였다. 뎅기 바이러스 혈청형-1, 2, 3 및 4를 분석에서 약 22 내지 24의 Cp를 얻도록 희석하였다. 따라서, 25 μL의 바이러스 현탁물을 테스트 화합물을 포함하는 모든 웰 및 바이러스 대조구로 할당된 웰에 첨가하였다. 이와 병행하여, 25 μL의 배양 배지를 세포 대조구에 첨가하였다. 다음, 플레이트를 충분히 가습된 인큐베이터(37℃, 5% CO₂)에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 3일 후, 상청액을 웰로부터 제거하고, 세포를 빙냉 PBS (대략 100 μL)로 2회 세척하였다. 96웰 플레이트 내의 세포 펠렛을 1일 이상 동안 -80℃에서 보관하였다. 다음, RNA를 제조업자의 지침 (라이프 테크놀로지즈 (Life Technologies))에 따라 셀즈-투-씨티 (Cells-to-CT)^TM 용해 키트를 이용하여 추출하였다. 세포 용해물을 -80℃에서 보관하거나 역전사 단계에서 즉시 사용할 수 있다.

역전사 단계의 준비에서, 믹스(mix) A(표 3A)를 제조하고, 웰당 7.57 μL를 96웰 플레이트 내에 분배하였다. 5 μL의 세포 용해물의 첨가 후, 75℃에서의 5분 변성 단계를 수행하였다 (표 3B). 그 후 7.43 μL의 믹스 B를 첨가하고(표 3C), 역전사 단계를 개시하여(표 3D) cDNA를 생성하였다.

마지막으로, RT-qPCR 믹스를 제조하고, 믹스 C(표 4A), 및 22.02 μL/웰을 96웰 라이트사이클러 qPCR용 플레이트 내에 분배하고, 여기에 3 μL의 cDNA를 첨가하고, qPCR을 표 4B의 조건에 따라 라이트사이클러 480에서 수행하였다.

라이트사이클러 소프트웨어 및 내부 LIMS 시스템을 이용하여, 각각의 화합물의 용량 반응 곡선을 계산하고, 반치 최대 유효 농도(EC₅₀) 및 반치 최대 세포독성 농도(CC₅₀)를 결정하였다(표 5 내지 표 8).

[표 3]

[표 4]

[표 5]

[표 6]

[표 7]

[표 8]

SEQUENCE LISTING <110> Janssen Pharmaceuticals, Inc Katholieke Universiteit Leuven <120> SUBSTITUTED INDOLINE DERIVATIVES AS DENGUE VIRAL REPLICATION INHIBITORS <130> TIP 358 <150> EP17164048.5 <151> 2017-03-31 <160> 6 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Dengue virus group <400> 1 cggttagagg agacccctc 19 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Dengue virus group <400> 2 gagacagcag gatctctggt c 21 <210> 3 <211> 28 <212> DNA <213> Dengue virus group <400> 3 aaggactaga ggttagagga gacccccc 28 <210> 4 <211> 18 <212> DNA <213> Dengue virus group <400> 4 ggccaggtca tcaccatt 18 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Dengue virus group <400> 5 atgtccacgt cacacttcat g 21 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Dengue virus group <400> 6 ttccgctgcc ctgaggctct c 21

Claims

하기 화학식 I을 갖는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체:
[화학식 I]

(여기서,
R¹은 클로로 또는 플루오로이며,
R²는 -CH₂CH₂OH, 또는 C_3-5알킬COOH이며;
R³은 트리플루오로메틸, 또는 트리플루오로메톡시이며;
R⁴는 수소, 플루오로, 또는 메톡시이며;
R⁵는 수소 또는 메틸임).
제1항에 있어서, 하기 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 이들의 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체:

.
제1항에 있어서, (+) 비선광도를 갖는 화합물.
제1항에 있어서, 하기로부터 선택되는 화합물:
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물.
제5항에 있어서, 제2 또는 추가 활성 성분을 포함하는 제약 조성물.
제6항에 있어서, 제2 또는 추가 활성 성분은 항바이러스제인 제약 조성물.
약으로 사용하기 위한 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물.
뎅기(Dengue) 감염의 치료 및 뎅기 감염과 관련된 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물.
제9항에 있어서, 뎅기 감염은 DENV-1, DENV-2, DENV-3 또는 DENV-4 주의 바이러스에 의한 감염인 화학식 I의 화합물.