KR20190065433A - 인간화된 표적화 모이어티 및/또는 최적화된 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 용도 - Google Patents

인간화된 표적화 모이어티 및/또는 최적화된 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20190065433A
KR20190065433A KR1020197014306A KR20197014306A KR20190065433A KR 20190065433 A KR20190065433 A KR 20190065433A KR 1020197014306 A KR1020197014306 A KR 1020197014306A KR 20197014306 A KR20197014306 A KR 20197014306A KR 20190065433 A KR20190065433 A KR 20190065433A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
car
switch
seq
antibody
targeting moiety
Prior art date
Application number
KR1020197014306A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102613430B1 (ko
Inventor
트레비스 에스. 영
레오나르드 프레스타
데이비드 로저스
에릭 햄튼
티모시 라이트
피터 지. 슐츠
에두아르두 라보르다
엘비라 키아리에바
소피 비아우드
Original Assignee
더 스크립스 리서치 인스티튜트
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 더 스크립스 리서치 인스티튜트 filed Critical 더 스크립스 리서치 인스티튜트
Priority to KR1020237042617A priority Critical patent/KR20230172612A/ko
Publication of KR20190065433A publication Critical patent/KR20190065433A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102613430B1 publication Critical patent/KR102613430B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
    • C07K14/39—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts
    • C07K14/395—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts from Saccharomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Abstract

본 개시내용은 표적 세포 상의 CD19에 결합하는 인간화된 표적화 모이어티 및 키메라 수용체 효과기 세포에 결합하는 키메라 수용체-상호작용 도메인을 포함하는 인간화된 키메라 수용체 효과기 세포 스위치 및/또는 최적화된 키메라 수용체-상호작용 도메인을 포함하는 키메라 수용체 효과기 세포 스위치를 사용하여 키메라 수용체 효과기 세포를 선택적으로 활성화 및 비활성화시키기 위한 조성물, 상기 방법, 키트 및 플랫폼을 제공한다. 이러한 키메라 수용체 효과기 세포 및 키메라 수용체 효과기 세포 스위치에 의해 질환 및 병태를 치료하는 방법이 또한 개시되어 있다.

Description

인간화된 표적화 모이어티 및/또는 최적화된 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 용도
관련 출원
본 출원은 2016년 10월 19일자에 출원된 미국 가출원 제62/410,315호(이의 출원은 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 대한 우선권을 주장한다.
서열 목록에 관한 성명
본 출원과 연관된 서열 목록은 페이퍼 카피 대신에 텍스트 파일로 제공되고, 본 명세서로 참고로 본 명세서에 의해 포함된다. 서열 목록을 함유하는 텍스트 파일의 명칭은 CIBR_011_01WO_ST25.txt이다. 텍스트 파일은 717KB이고, 2017년 10월 18에 생성되고, EFS-Web를 통해 전자로 제출된다.
정부 관심의 성명
본 발명은 미국 국립보건원(National Institute of Health)이 부여한 허가 번호 1R01CA208398 하에 정부 지원에 의해 이루어졌다. 정부는 본 발명에서 소정의 권한을 갖는다.
면역요법은 악성 종양 세포를 인식하고 제거하도록 면역계를 "재교육"시키도록 유전자 변형된 T 세포의 입양 전달을 이용하는 면역요법을 포함하는 화학요법에 대한 매력적인 대안이 된다. 유전자 변형된 T 세포는, 표적 악성 세포 상의 종양 연관된 항원에 대한 수용체 특이성을 생성시키는 단일클론 항체로부터 유래된, 일반적으로 CD3-제타 신호전달 엔도도메인, 막관통 도메인 및 세포외 단쇄 가변 단편(scFv)으로 이루어진 키메라 항원 수용체를 발현한다. 키메라 항원 수용체를 통한 종양 연관된 항원에 결합 시, T 세포를 발현하는 키메라 항원 수용체(CAR T 세포)는 악성 세포에 세포독성인 면역 반응을 개시시킨다. 이러한 치료는 화학요법 내성을 피할 수 있고, 재발성/불응성 질환에 활성인 것으로 나타나서, 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia: CLL) 및 급성 림프아구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia: ALL) 환자에 대한 지속된 관해를 생성한다. 그러나, 이 치료는 바람직하지 않은 효과, 예컨대 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome: CRS), 독성 림프구감소증, 고형 종양 표적에 대한 오프 타깃 종양 세포용해에 치명적인 혈액학적 표적에 대한 만성 저감마글로불린혈증, 대뇌 부종, CAR T 세포를 발현하는 항-CD19 항체의 사용에 의한 지속적 B 세포 무형성증, 및 몇몇 경우에 사망을 야기하므로 추가의 조사 및 최적화를 요한다.
본 개시내용은, 치료에 대한 제어를 제공함으로써 임상 실험에서 현재 시험되는 관습적인 CAR-T 세포 설계보다 더 안전하고 더 다목적인 면역요법을 제공할 수 있는, 키메라 수용체 효과기 세포(예를 들어, 키메라 항원 수용체 T 세포)를 선택적으로 활성화 및 비활성화시키기 위한 조성물 및 방법을 제공한다.
본 개시내용은 인간화된 스위치를 포함하는 키메라 수용체 효과기 세포 스위치(본 명세서에서 "스위치"라 칭함) 및 스위치 가능한 키메라 수용체 효과기 세포를 제공한다. 본 개시내용은 또한 인간화된 스위치 가능한 키메라 수용체를 포함하는 키메라 수용체 효과기 세포를 제공한다. 본 개시내용은 또한 하나 이상의 인간화된 키메라 수용체 효과기 세포 스위치 및 인간화된 스위치 가능한 키메라 수용체를 포함하는 하나 이상의 키메라 수용체 효과기 세포를 포함하는 인간화된 CAR-EC 플랫폼을 제공한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR-EC 상의 키메라 항원 수용체와 상호작용하는 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID); 및 표적 세포 상의 CD19에 결합하는 인간화된 표적화 모이어티를 포함하는 인간화된 키메라 항원 수용체-효과기 세포(CAR-EC) 스위치를 제공한다.
표적화 모이어티는 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합할 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 인간화된 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor: CAR)를 제공하고; 여기서 세포외 도메인은 서열 번호 290 내지 388 및 423으로부터 선택된 서열을 포함하는 인간화된 항-GCN4 scFv를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, scFv는 서열 번호 322인 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, scFv는 서열 번호 322와 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 도 22A에서의 구조 A-H로부터 선택된 구조를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 도 22A에서의 구조 E에 따른 구조를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 서열 번호 411인 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 서열 번호 411인 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열 번호 93 내지 103 및 165 내지 168로부터 선택된 서열을 포함하는 힌지 도메인을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 세포외 도메인인 ESKYGPPCPPCPD인 아미노산 서열을 포함하는 힌지 도메인을 포함하고; 몇몇 실시형태에서, 막관통 도메인은 서열 번호 398 및 417로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 세포내 신호전달 도메인은 몇몇 실시형태에서 (a) CD3-제타를 포함하고, CD28 도메인은 서열 번호 418인 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CD28 도메인은 서열 번호 418인 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 4-1BB 도메인은 서열 번호 419인 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 4-1BB 도메인은 서열 번호 419인 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CD3-제타 도메인은 서열 번호 420인 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CD3-제타 도메인은 서열 번호 420인 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 막관통 도메인은 서열 번호 417인 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 막관통 도메인은 서열 번호 417인 아미노산 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 인간화된 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공하고, 여기서 세포외 도메인은
a. 키메라 항원 수용체 스위치와 상호작용하는 인간화된 영역; 및
b. 힌지 도메인을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 힌지 도메인은 약 1개 내지 약 20개의 아미노산 길이이다. 몇몇 실시형태에서, 힌지 도메인은 약 20개 초과의 아미노산 길이이다. 몇몇 실시형태에서, 힌지 도메인은 가요성이다. 몇몇 실시형태에서, 힌지 도메인은 경질이다. 몇몇 실시형태에서, 힌지 도메인은 IgG4 힌지, IgG4m 힌지, CD28 힌지 및 CD8 힌지로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열 번호 93 내지 103 및 165 내지 168로부터 선택된 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 힌지 도메인은 서열 번호 93 내지 103 및 165 내지 168로부터 선택된 서열에 적어도 50% 상동성인 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 세포외 도메인은 인간화된 항-GCN4 scFv를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 세포외 도메인은 인간화된 52SR4 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항-GCN4 scFv는 서열 번호 290 내지 388 및 423으로부터 선택된 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항-GCN4 scFv는 서열 번호 290 내지 388 및 423으로부터 선택된 서열과 적어도 50% 동일한 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항-GCN4 scFv는 서열 번호 322와 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 CD8 막관통 도메인 또는 CD28 막관통 도메인으로부터 선택된 막관통 도메인을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 막관통 도메인은 서열 번호 398 및 417로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 세포내 신호전달 도메인은 (a) CD3-제타 도메인 및 (b) CD28 도메인; 4-1BB 도메인; 또는 CD28 도메인 및 4-1BB 도메인을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CD28 도메인은 서열 번호 418을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 4-1BB 도메인은 서열 번호 419를 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, CD3-제타 도메인은 서열 번호 420을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 항원 수용체 스위치와 상호작용하는 영역은 키메라 항원 수용체 스위치의 키메라 항원 수용체 결합 펩타이드와 상호작용하고, 여기서 키메라 항원 수용체 스위치는 표적 상의 세포 표면 분자와 상호작용하는 표적화 모이어티를 추가로 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호 400, 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414 및 416으로부터 선택된 서열에 의해 암호화된다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호 400, 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414 및 416과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열에 의해 암호화된다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 322를 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 힌지 도메인은 ESKYGPPCPPCPD의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 막관통 도메인은 서열 번호 417을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 세포내 도메인은 서열 번호 420을 포함하거나 이것으로 이루어진 CD3-제타 신호전달 도메인을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 세포내 도메인은 서열 번호 418 또는 419를 포함하거나 이것으로 이루어진 동시자극 도메인을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 세포내 도메인은 서열 번호 418을 포함하거나 이것으로 이루어진 제1 동시자극 도메인 및 서열 번호 419를 포함하거나 이것으로 이루어진 제2 동시자극 도메인을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호 411의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호 411의 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은
a. CAR-EC 상의 항-GCN4 키메라 항원 수용체와 상호작용하는 GCN4 유도체 펩타이드를 포함하는 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID); 및
b. 표적화 모이어티를 포함하는 인간화된 키메라 항원 수용체-효과기 세포(CAR-EC) 스위치를 제공하고;
여기서 표적화 모이어티는 서열 번호 17 내지 25, 27 내지 35, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은
a. CAR-EC 상의 항-GCN4 키메라 항원 수용체와 상호작용하는 GCN4 유도체 펩타이드를 포함하는 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID); 및
b. 표적화 모이어티를 포함하는 키메라 항원 수용체-효과기 세포(CAR-EC) 스위치를 제공하고;
여기서 표적화 모이어티는 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 17 내지 25, 27 내지 35, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 scFv이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 30의 경쇄 서열 및 서열 번호 7의 중쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 7과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 30과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 (i) 서열 번호 30/서열 번호 7; (ii) 서열 번호 30/서열 번호 6; (iii) 서열 번호 34/서열 번호 6; 및 (iv) 서열 번호 34/서열 번호 7로부터 선택된 경쇄/중쇄 서열 쌍을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄를 포함하고; 여기서 CAR-EC 스위치는 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245 중 어느 하나로부터 선택된 GCN4 펩타이드인 CAR-ID를 포함하고; CAR-EC 스위치는 LCNT 스위치이다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR-EC 상의 항-GCN4 키메라 항원 수용체와 상호작용하는 GCN4 유도체 펩타이드를 포함하는 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID); 및 표적화 모이어티를 포함하는 키메라 항원 수용체-효과기 세포(CAR-EC) 스위치를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, X1은 K이거나 또는 존재하지 않는다. 몇몇 실시형태에서, X2는 K, A 및 G로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, X3은 L, A 및 G로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139, 145 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139, 145 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된 서열로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245 중 어느 하나로부터 선택된 서열로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 표적화 폴리펩타이드이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 폴리펩타이드는 표적 세포 상의 항원에 결합하는 표적화 항체 또는 항체 단편이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간화된다.
몇몇 실시형태에서, 세포 표면 분자는 CD19이다. 몇몇 실시형태에서, 세포 표면 분자는 Her2, CLL1, CD33, CD123, EGFR, EGFRvIII, CD20, CD22, CS1, BCMA, CEA 또는 이의 단편이다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 CD19에 특이적으로 결합한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 Her2, CLL1, CD33, CD123, EGFR, EGFRvIII, CD20, CD22, CS1, BCMA, CEA 또는 이의 단편에 특이적으로 결합한다.
몇몇 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분 중 임의의 하나 이상)을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 FMC63 항체 또는 인간화된 FMC63 항체의 항원 결합 부분을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD22 항체, 항-EGFR 항체, 항-EGFRvIII 항체, 항-Her2 항체, 항-CS1 항체, 항-BCMA 항체, 항-CEA 항체, 항-CLL1 항체, 항-CD123 항체 또는 항-CD33 항체를 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD20 항체, 인간화된 항-CD22 항체, 인간화된 항-EGFR 항체, 인간화된 항-EGFRvIII 항체, 인간화된 항-Her2 항체, 인간화된 항-CS1 항체, 인간화된 항-BCMA 항체, 인간화된 항-CEA 항체, 인간화된 항-CLL1 항체, 인간화된 항-CD123 항체 또는 인간화된 항-CD33 항체를 포함하거나 이것으로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티(예를 들어, 인간화된 표적화 모이어티)는 면역글로불린, Fc 눌 면역글로불린 및 Fab, 및 이들의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 인간화된 표적화 모이어티는 서열 번호 16 내지 25로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 표적화 모이어티는 서열 번호 27 내지 35로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 표적화 모이어티는 서열 번호 1 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 표적화 모이어티는 서열 번호 17 내지 25, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 서열 번호 30의 경쇄 서열 및 서열 번호 7의 중쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC는 서열 번호 30과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 서열 및 서열 번호 7과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 서열을 스위치시킨다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC는 (i) 서열 번호 30/서열 번호 6; (ii) 서열 번호 34/서열 번호 6; 및 (iii) 서열 번호 34/서열 번호 7로부터 선택된 경쇄/중쇄 서열 쌍을 스위치시킨다.
몇몇 실시형태에서, 인간화된 표적화 모이어티는 약 1개 내지 약 20개의 아미노산에서 서열 번호 35와 다른 경쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 표적화 모이어티는 T7, T8, L15, S22, D41, G42, T43, V44, Y71, S72, N77, E79, Q80, I83, F87 및 G100으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 아미노산 잔기인 서열 번호 35 중 하나 이상의 치환을 포함하는 것을 제외하고는, 서열 번호 35와 동일한 경쇄 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 인간화된 표적화 모이어티는 약 1개 내지 약 30개의 아미노산에서 서열 번호 15와 다른 중쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 표적화 모이어티는 E1, K3, A13, Q16, S17, V20, R42, L48, S61, A62, L67, I70, K71, N73, S76, V78, F79, M82, N83, L85, Q86, T87, D88, I92, K97 및 S115로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 아미노산 잔기인 서열 번호 15 중 하나 이상의 치환을 포함하는 것을 제외하고는, 서열 번호 15와 동일한 중쇄 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 본 명세서에 개시된 경쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 본 명세서에 개시된 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인 표적화 모이어티를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 본 명세서에 개시된 경쇄 서열 및 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 17 내지 25, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, CAR-ID는 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR-ID는 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드, 이합체화되지 않는 변이체 GCN4 펩타이드; flag 태그 펩타이드; 비천연 발생 펩타이드, 천연 발생 펩타이드, 합성 펩타이드 태그, 알파 나선-형성 펩타이드, K4 펩타이드 및 E4 펩타이드로부터 선택된 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, X1은 K이거나 또는 존재하지 않는다. 몇몇 실시형태에서, X2는 K, A 및 G로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, X3은 L, A 및 G로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245 중 어느 하나로부터 선택된 서열로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, CAR-ID는 소분자를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 소분자는 합텐이다. 몇몇 실시형태에서, 합텐은 FITC이다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치 및 CAR-EC 상에 발현된 "상보성" 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함하는 키트를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 키트는 (i) CAR-EC 상의 키메라 항원 수용체와 상호작용하는 CAR-ID 및 표적 세포 상의 CD19에 결합하는 인간화된 표적화 모이어티를 포함하는 인간화된 CAR-EC 스위치 및 (ii) CAR-EC 상에 발현된 상보성 CAR을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 키트는 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드 또는 이의 유도체, 이합체화되지 않는 변이체 GCN4 펩타이드; flag 태그 펩타이드; 비천연 발생 펩타이드, 천연 발생 펩타이드, 합성 펩타이드 태그, 알파 나선-형성 펩타이드, K4 펩타이드 및 E4 펩타이드로부터 선택된 CAR-ID를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR-ID는 FITC이다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치 중 어느 하나로부터 선택된 제1 인간화된 CAR-EC 스위치 및 제1 CAR-EC를 포함하는 키트를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 제1 CAR-EC는 인간화된 CAR을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 CAR은 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR 중 어느 하나로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 CAR은 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 서열 번호 17 내지 25, 27 내지 35, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 항-GCN4 세포외 영역(예를 들어, 본 명세서에 개시된 항-GCN4 항체 또는 이의 GCN4 결합 부분)을 포함하는 CAR을 발현하는 CAR-EC 및 (ii) CAR-EC 상의 항-GCN4 CAR과 상호작용하는 GCN4 유도체 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 표적화 모이어티를 포함하는 CAR-EC 스위치를 포함하는 키트를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 유도체는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체 중 어느 하나로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 유도체는 이합체화되지 않는다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 본 명세서에 개시된 표적화 모이어티로부터 선택된 표적화 모이어티를 포함한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분 중 임의의 하나 이상)을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 FMC63 항체 또는 인간화된 FMC63 항체의 항원 결합 부분을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD22 항체, 항-CD23 항체 항-EGFR 항체, 항-EGFRvIII 항체, 항-Her2 항체, 항-CS1 항체, 항-BCMA 항체, 항-CEA 항체, 항-CLL1 항체, 항-CD123 항체 또는 항-CD33 항체를 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD20 항체, 인간화된 항-CD22 항체, 인간화된 항-EGFR 항체, 인간화된 항-EGFRvIII 항체, 인간화된 항-Her2 항체, 인간화된 항-CS1 항체, 인간화된 항-BCMA 항체, 인간화된 항-CEA 항체, 인간화된 항-CLL1 항체, 인간화된 항-CD123 항체 또는 인간화된 항-CD33 항체를 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, 키트는, (i) 서열 번호 16 내지 25로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열 및 (ii) 서열 번호 1 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는, FMC63 항체 또는 이의 CD19 결합 부분인 표적화 모이어티를 포함하는 CAR-EC 스위치를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 본 명세서에 개시된 경쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는, 본 명세서에 개시된 중쇄 서열을 포함하는, 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인 표적화 모이어티를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는, 본 명세서에 개시된 경쇄 서열 및 중쇄 서열을 포함하는, 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는, 서열 번호 17 내지 25, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는, 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는, 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는, 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는, 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는, 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 키트는 이를 요하는 대상체를 치료하기 위해 사용된다. 몇몇 실시형태에서, 대상체는 CD19+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 키트에 의해 치료된다. 몇몇 실시형태에서, 키트는 이질적 종양 및 혈액 세포 악성종양으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해 사용된다. 몇몇 실시형태에서, 대상체는 급성 림프아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 치료된다. 몇몇 실시형태에서, 대상체는 다발성 골수종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종(non-hodgkins lymphoma: NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma: DLBCL), 여포성 림프종, 맨틀 세포 림프종(mantle cell lymphoma: MCL), 버킷 림프종 및 모발 세포 백혈병(hairy cell leukemia: HCL)으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 치료된다. 몇몇 실시형태에서, 대상체는, 항-CD19 CAR-EC 스위치 및 상보성 CAR을 발현하는 CAR-EC를 투여하는 것을 포함하는, CD19+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 치료된다. 몇몇 실시형태에서, 키트는 (i) CD20+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해; (ii) CD22+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해; (iii) CD33+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해; (iv) CEA+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해; (v) CLL1+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해; (vi) BCMA+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해; (vii) CS1+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해; (viii) CD123+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해; Her2+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해; 또는 (ix) 특정한 표적 항원(예를 들어, 종양 연관된 항원)이 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하기 위해 사용된다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 스위치 및 CAR-EC 상에 발현된 상보적 CAR에 의해 이를 요하는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) CAR-EC 상의 키메라 항원 수용체와 상호작용하는 CAR-ID 및 표적 세포 상의 CD19에 결합하는 인간화된 표적화 모이어티를 포함하는 인간화된 CAR-EC 스위치 및 (ii) CAR-EC 상에 발현된 상보성 CAR에 의해 이를 요하는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법에서 사용된 CAR-EC 스위치는 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드 또는 이의 유도체, 이합체화되지 않는 GCN4 펩타이드; flag 태그 펩타이드; 비천연 발생 펩타이드, 천연 발생 펩타이드, 합성 펩타이드 태그, 알파 나선-형성 펩타이드, K4 펩타이드 및 E4 펩타이드로부터 선택된 CAR-ID를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 유도체는 이합체화되지 않는다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 유도체는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체 중 어느 하나로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, X1은 K이거나 또는 존재하지 않는다. 몇몇 실시형태에서, X2는 K, A 및 G로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, X3은 L, A 및 G로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139, 145 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139, 145 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된 서열로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245 중 어느 하나로부터 선택된 서열로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, CAR-ID는 FITC이다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 항-GCN4 세포외 영역(예를 들어, 본 명세서에 개시된 항-GCN4 항체 또는 이의 GCN4 결합 부분)을 포함하는 CAR을 발현하는 CAR-EC 및 (ii) CAR-EC 상의 항-GCN4 CAR과 상호작용하는 GCN4 유도체 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 표적화 모이어티를 포함하는 CAR-EC 스위치에 의해 이를 요하는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 유도체는 이합체화되지 않는다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 유도체는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체 중 어느 하나로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, X1은 K이거나 또는 존재하지 않는다. 몇몇 실시형태에서, X2는 K, A 및 G로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, X3은 L, A 및 G로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139, 145 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139, 145 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된 서열로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, 이를 요하는 대상체를 치료하는 방법에서 사용된 CAR-EC 스위치로 구성된 표적화 모이어티는 본 명세서에 개시된 표적화 모이어티로부터 선택된 표적화 모이어티를 포함한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분 중 임의의 하나 이상)을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 FMC63 항체 또는 인간화된 FMC63 항체의 항원 결합 부분을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD22 항체, 항-EGFR 항체, 항-EGFRvIII 항체, 항-Her2 항체, 항-CS1 항체, 항-BCMA 항체, 항-CEA 항체, 항-CLL1 항체, 항-CD123 항체 또는 항-CD33 항체를 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD20 항체, 인간화된 항-CD22 항체, 인간화된 항-EGFR 항체, 인간화된 항-EGFRvIII 항체, 인간화된 항-Her2 항체, 인간화된 항-CS1 항체, 인간화된 항-BCMA 항체, 인간화된 항-CEA 항체, 인간화된 항-CLL1 항체, 인간화된 항-CD123 항체 또는 인간화된 항-CD33 항체를 포함하거나 이것으로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, 이를 요하는 대상체를 치료하는 방법에서 사용된 CAR-EC 스위치로 구성된 표적화 모이어티는 (i) 서열 번호 16 내지 25로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열 또는 서열 번호 27 내지 35로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열; 및 (ii) 서열 번호 1 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는, FMC63 항체 또는 이의 CD19 결합 부분인 표적화 모이어티를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 상기 방법은, 항-CD19 CAR-EC 스위치 및 상보성 CAR을 발현하는 CAR-EC를 투여하는 것을 포함하는, CD19+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 a. CD20+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함하고; 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 b. CD22+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함하고; 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 c. CD33+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함하고; 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 d. CEA+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함하고; 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 e. CLL1+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함하고; 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 f. BCMA+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함하고; 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 g. CS1+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함하고; 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 h. CD123+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함하고; 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 Her2+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함하고; 또는 특정한 표적 항원(예를 들어, 종양 항원)이 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 a. 이질적 종양 및 혈액 세포 악성종양으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 급성 림프아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 다발성 골수종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종(NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종, 맨틀 세포 림프종(MCL), 버킷 림프종 및 모발 세포 백혈병(HCL)으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 적어도 하나의 본 명세서에 개시된 스위치 및 상보적 CAR-EC를 투여하는 것을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 개시된 CAR-EC 스위치 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 염, 부형제 및/또는 비히클을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 약제학적 조성물은 담체, 부형제, 희석제, 항산화제, 보존제, 착색제, 향료 및 희석제, 유화제, 현탁제, 용매, 충전제, 벌크화제, 완충제, 전달 비히클, 등장화제, 공용매, 습윤제, 착화제, 완충제, 항균제, 및/또는 계면활성제 및 하나 이상의 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 약제학적 조성물은 적어도 2개의 CAR-EC 스위치, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 염, 부형제 또는 비히클을 포함하고, 여기서 스위치 중 적어도 하나는 본 명세서에 개시된 스위치이다. 몇몇 실시형태에서, 약제학적 조성물은 2개 이상의 본 명세서에 개시된 스위치를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 CAR 중 어느 하나로부터 선택된 CAR을 발현하는 CAR-EC를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하고; 여기서 세포외 도메인은 서열 번호 290 내지 388 및 423로부터 선택된 서열을 포함하는 인간화된 항-GCN4 scFv를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, scFv는 서열 번호 322의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, scFv는 서열 번호 322와 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 도 22A에서의 구조 A-H로부터 선택된 구조를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 도 22A에서의 구조 E에 따른 구조를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 서열 번호 411의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 서열 번호 411의 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC는 T 세포이다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 제1 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치; CAR-ID 및 표적화 모이어티를 포함하는 제2 CAR-EC 스위치; 및 제1 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID 및 제2 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 결합하는 CAR-EC를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 재발된 암을 치료하는 방법을 제공하고, 여기서 제1 CAR-EC는 대상체의 재발 전에 투여되고, 제2 CAR-EC 스위치는 대상체의 재발 후에 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 제2 CAR-EC 스위치는 항-CD20 표적화 모이어티를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 제1 CAR-EC 스위치의 표적화 모이어티는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR-ID 및 표적화 모이어티를 포함하는 제1 CAR-EC 스위치; 본 명세서에 개시된 스위치 중 어느 하나로부터 선택된 제2 CAR-EC 스위치; 및 제1 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID 및 제2 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 결합하는 CAR-EC를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 재발된 암을 치료하는 방법을 제공하고, 여기서 제1 CAR-EC는 대상체의 재발 전에 투여되고, 제2 CAR-EC 스위치는 대상체의 재발 후에 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 제2 CAR-EC 스위치의 표적화 모이어티는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 표적 세포를 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계 및 CAR-EC 스위치를 상보성 CAR-EC와 접촉시키는 단계를 포함하는 표적 세포를 용해시키는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 표적 세포를 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계 및 CAR-EC 스위치를 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC와 접촉시키는 단계를 포함하는 표적 세포를 용해시키는 방법을 제공한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 표적 세포를 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계 및 CAR-EC 스위치를 상보성 CAR-EC와 접촉시키는 단계를 포함하는 표적 세포를 사멸하는 방법을 제공한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 표적 세포를 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계 및 CAR-EC 스위치를 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC와 접촉시키는 단계를 포함하는 표적 세포를 사멸하는 방법을 제공한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR-EC 상에 발현된 CAR을 제21항 내지 제68항에 기재된 CAR-EC 스위치 중 어느 하나로부터 선택된 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계를 포함하는 CAR-EC를 활성화하는 방법을 제공하고, 여기서 CAR-EC는 CAR-EC 스위치 상의 표적화 모이어티가 표적 세포 상의 이의 표적 둘 다 및 CAR-EC 상의 CAR의 세포외 도메인에 결합할 때 활성화되고, CAR은 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 결합한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에게 CAR-EC 스위치 투여의 투약 섭생을 조정함으로써 T 세포 반응의 규모를 조절하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 제1 투약 섭생은 제1 짧은 투약 스케줄에서 제1 고용량으로 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하고, 제2 투약 섭생은 제1 투약 스케줄보다 더 긴 제2 투약 스케줄에서 제2 저용량으로 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 제1 투약 스케줄은 적어도 격일 1회로 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 제1 투약 스케줄은 격일로 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 제1 투약 스케줄은 전체 4회 투여 동안 격일로 CAR-EC 스위치의 제1 고용량을 투여하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 제1 투약 스케줄은 전체 4회 투여 또는 전체 약 4회 투여 동안 격일로 또는 대략 격일로 CAR-EC 스위치의 제1 고용량을 투여하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 제2 투약 스케줄은 전체 12회 투여 동안 격일로 제2 저용량을 투여하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 제2 투약 스케줄은 전체 12회 투여 또는 약 12회 투여 동안 격일로 또는 대략 격일로 제2 저용량을 투여하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 고용량은 저용량의 것의 적어도 5배, 10배, 또는 적어도 15배이다. 몇몇 실시형태에서, 제1 투약 섭생은 저용량이 투여된 대상체에서의 T 세포 증식과 비교하여 고용량이 투여된 대상체에서의 T 세포 증식의 증가를 발생시킨다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치이다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, T 세포는 본 명세서에 기재된 CAR을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, T 세포는 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 인간화된 CAR을 포함하고; 여기서 세포외 도메인은 서열 번호 290 내지 388 및 423으로부터 선택된 서열을 포함하는 인간화된 항-GCN4 scFv를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, scFv는 서열 번호 322의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, scFv는 서열 번호 322와 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 도 22A에서의 구조 A-H로부터 선택된 구조를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 도 22A에서의 구조 E에 따른 구조를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 서열 번호 411의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR은 서열 번호 411의 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열 번호 93 내지 103 및 165 내지 168로부터 선택된 서열을 포함하는 힌지 도메인을 포함한다.
도 1은 본 개시내용의 CAR-EC 스위치로서 사용될 수 있는 다양한 예시적인 huFMC Fab의 중쇄 서열의 정렬을 보여준다.
도 2는 본 개시내용의 CAR-EC 스위치로서 사용될 수 있는 다양한 예시적인 huFMC Fab의 경쇄 서열의 정렬을 보여준다.
도 3은 LCNT 스위치 포맷에서 발현된 huFMC CAR-EC 스위치를 도시하는 SDS PAGE 겔을 보여준다. 겔의 왼쪽 측은 환원되지 않는다. 겔의 오른쪽 측은 DTT에 의해 환원된다.
도 4는 LCNT 스위치 포맷에서 발현된 huFMC CAR-EC 스위치를 도시하는 SDS PAGE 겔을 보여준다. 겔의 왼쪽 측은 환원되지 않는다. 겔의 오른쪽 측은 DTT에 의해 환원된다.
도 5는 CD19+ RS4;11 세포에서 huFMC63 Fab의 유세포분석법 기반 결합 검정을 보여준다. nM(나노몰) 단위로 기재된 EC50.
도 6은 CD19+ RS4;11 세포에서 huFMC63 Fab의 유세포분석법 기반 결합 검정을 보여준다. nM(나노몰) 단위로 기재된 EC50.
도 7은 CD19+ RS4;11 세포에서 huFMC63 Fab의 유세포분석법 기반 결합 검정을 보여준다. FMC63 WT는 키메라 FMC63 Fab(EC50 표에서 LC, HC로 주석화)를 의미한다. nM(나노몰) 단위로 기재된 EC50.
도 8은 CD19+ RS4;11 세포에서 huFMC63 Fab의 유세포분석법 기반 결합 검정을 보여준다. FMC63 wt는 키메라 FMC63 Fab(EC50 표에서 LC, HC로 주석화)를 의미한다. nM(나노몰) 단위로 기재된 EC50.
도 9는 CD19+ RS4;11 세포에서 huFMC63 Fab의 유세포분석법 기반 결합 검정을 보여준다. FMC63 wt는 키메라 FMC63 Fab(EC50 표에서 LC, HC로 주석화)를 의미한다. nM(나노몰) 단위로 기재된 EC50.
도 10은 CD19+ RS4;11 세포에 대한 스위치 가능한 CAR-T(sCAR-T) 세포에 의한 huFMC63 기반 스위치의 세포독성을 보여준다. 이 실험에 대한 EC50 값은 이 실험의 3회 반복에 따라 표 8에 기재되어 있다. 80% CAR+는 이 검정에서 사용된 T 세포 집단의 80%가 스위치 가능한 CAR에 양성이라는 것을 나타낸다. FMC63 LCNT는 경쇄의 N 말단 상의 GCN4 펩타이드를 갖는 키메라 FMC63 Fab를 의미한다.
도 11은 CD19- K562 세포에 대해 스위치 가능한 CAR-T 세포에 의한 huFMC63 기반 스위치의 세포독성을 보여준다. 발견된 세포독성의 낮은 수준으로 인해 K562에서 세포독성으로부터 EC50 값이 계산되지 않았다. 80% CAR+는 이 검정에서 사용된 T 세포 집단의 80%가 스위치 가능한 CAR에 대해 양성이라는 것을 나타낸다. FMC63 LCNT는 경쇄의 N 말단 상의 GCN4 펩타이드를 갖는 키메라 FMC63 Fab를 의미한다.
도 12는 인실리코 분석에 의해 항체의 면역원성을 예측하기 위해 이용된 다항 회귀를 보여준다. T 세포 의존적 HAHA 반응을 예측하기 위해 사용된 다항 회귀를 구성하는 22개의 허가받은 항체.
도 13은 전체 면역원성 잠재적인 hFMC2b-LCNT(LC1로 표지)/hFMCH4c(HC로 표지) 서열에 의해 EpiMatrix Protein Immunogenicity Scale을 보여준다.
도 14는 본 명세서에 개시된 스위치 가능한 키메라 수용체-T 세포 치료의 일반적인 개관을 보여준다. 림프구는 대상체로부터 단리되고, 키메라 수용체를 암호화하는 발현 벡터는 후속하여 림프구로 도입되어 키메라 수용체 효과기 세포를 생성한다. 키메라 수용체 효과기 세포는 스위치와 함께 대상체로 투여된다.
도 15는 긴 것(왼쪽)에서 중간 것(중간)에서 짧은 것(오른쪽)의 면역학적 시냅스의 다양한 길이에 의한 스위치 가능한 CAR-T 세포에 대한 스위치 최적화를 예시하고, 활성은 왼쪽에서 오른쪽으로 증가한다.
도 16은, 중간 시냅스 또는 매우 짧은 시냅스에 의해 생성된 스위치 활성에 대해, 짧은 시냅스를 갖는 스위치 활성 최적에 의해, 중간 것(왼쪽)에서 짧은 것(중간)에서 매우 짧은 것(오른쪽)의 면역학적 시냅스의 다양한 길이에 의한 스위치 가능한 CAR-T 세포에 대한 스위치 최적화를 예시한다.
도 17은 CAR 힌지 및 CAR 스위치 최적화를 예시한다. 도 17a는 스위치 가능한 CAR-T 세포의 예 및 1가 스위치 및 1가 CAR로부터 1가 면역학적 시냅스의 형성을 보여준다. 도 17b는 스위치 가능한 CAR-T 세포의 예 및 2가 스위치 및 1가 CAR로부터의 2가 면역학적 시냅스의 형성을 보여준다. 도 17c는 스위치 가능한 CAR-T 세포의 예 및 1가 스위치 및 2가 CAR로부터의 2가 면역학적 시냅스의 형성을 보여준다. 도 17D는 스위치 가능한 CAR-T 세포의 예 및 2가 스위치 및 2가 CAR로부터의 2가 면역학적 시냅스의 형성을 보여준다. 스위치 가능한 CAR-T 세포의 상대 활성은 각각의 도 17a-D 아래에 (+) 신호로 표시된다.
도 18은 DDD-모듈이 키메라 수용체 세포외 도메인 상에 있고 AD-모듈이 스위치 상에 있는 도크(dock) 및 락(lock) 스위치 가능한 키메라 수용체-T 세포 플랫폼의 예를 예시한다.
도 19는 실시예 6에 참조하기 위한 GCN4 펩타이드 유도체에 대한 잔기 넘버링을 보여준다. 표적화에 사용된 원래의 펩타이드는 알라닌 스캐닝의 결과에 의해 색상에 의해 하부에 도시되어 있다. 적색은 알라닌 돌연변이에 불관용성인 잔기(항-GCN4 scFv 52SR4에 대한 결합의 완전한 소실)를 나타내고, 오렌지색은 알라닌 돌연변이에 다소 불관용성인 잔기(항-GCN4 scFv 52SR4에 결합의 약간의 소실, 그러나 여전히 결합의 약간의 수준)를 나타내고, 녹색은 알라닌 돌연변이에 완전히 불관용성인 잔기(원래의 펩타이드 서열과 비교하여 항-GCN4 scFv 52SR4에 대한 결합의 소실 무)를 나타낸다. 서열에 대한 잠재적인 변형은 상부에 기재되어 있다. 잔기 1 내지 4는 52SR4 항체의 이전에 보고된 발생에 포함된 네이티브 GCN4 서열의 일부이다. 황색은 CAR-EC의 표적으로서 전에 조사되지 않은 새로운 잔기를 나타낸다. 청색은 연장된 잔기 및 알라닌 스캐닝 둘 다에 기초한 바람직한 잔기 부가 또는 변형을 나타낸다. 이 도식은 변형된 펩타이드 A-O를 설계하도록 사용되었다.
도 20은 스위치 가능한 CAR-T 세포(52SR4 및 인간화된 변이체 sCAR)에 의한 GCN4 펩타이드 유도체 CAR-ID를 포함하는 CAR-EC 스위치의 결합을 보여준다.
도 21은 CD19+ RS4;11 세포에 대해 스위치 가능한 CAR-T 세포(52SR4 sCAR)에 의한 GCN4 펩타이드 유도체 CAR-ID를 포함하는 FMC63 기반 CAR-EC 스위치를 사용한 LDH 세포독성 검정을 보여준다.
도 22는 항-CD19 스위치의 인간화를 보여준다. 도 22A는 RS4;11 세포에 대한 인간화된 스위치 변이체에 의한 세포독성의 EC50을 보여준다. N=4, 1방향 ANOVA에 의해 측정된 유의도. 도 22B는 사이토카인 생성, 결합 친화도 및 세포독성의 EC50 사이의 상관관계를 보여준다. 도 22C는 NALM-6 이종이식 모델을 보여준다. 종양 부담은 0.5x106개의 NALM-6 세포에 의해 NSG 마우스를 i.v. 주사함으로써 확립되었다. 6일 후, 20x106개의 sCAR-T 세포가 주사된 후, 인간화된 스위치의 8 용량은 14일의 기간에 걸쳐 격일로 투여되었다(실험 1: 0.5㎎/㎏, 실선; 실험 2: 0.05㎎/㎏, 파선). N=3. 도 22D는 열 안정성(N=4), 쥣과 스위치 및 인간화된 스위치 후보 L2b/H4c의 분석용 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 및 정제 수율(N=8-12)을 보여준다.
도 23은 인간화된 프레임워크 영역 및 쥣과 FMC63 서열에 의한 인간화된 후보 L2b/H4c의 중쇄 및 경쇄의 서열 정렬을 보여준다.
도 24는 sCAR-T 세포 작제물 및 서열을 보여준다. 도 24a는 sCAR-T 세포 작제물의 도식을 보여준다. 도 24b는 예시적인 sCAR-T 서열을 보여준다. 도 24c는 sCAR-T 세포 작제물의 다양한 성분의 서열 번호를 보여준다.
도 25는 상이한 동시자극 도메인의 비교를 보여준다. 도 25A는 표지된 GCN4 펩타이드에 대한 유세포분석법 결합에 의한 1차 인간 T 세포에서의 sCAR의 발현을 보여준다. 도 25B는 RS4;11에 대한 항-CD19 스위치에 의한 세포독성의 EC50을 보여준다. 작제물은 CAR+ 클론을 농후화시키도록 분류되고 세포독성 전에 8일 내지 12일로 증식되었다. N=5-6. 도 25C 및 도 25D는 작제물 힌지, 막관통 도메인 및 동시자극 도메인에 의한 EC50의 표 및 산란도를 보여준다(3개의 독립 도너에 걸친 N=6). 도 25D에서의 유의도는 쌍별 T 시험에 의한다. 도 25E는 NALM-6 이종이식 모델을 보여준다. 종양 부담은 0.5x106개의 NALM-6 세포에 의해 NSG 마우스를 i.v. 주사함으로써 확립되었다. 6일 후, 20x106개의 sCAR-T 또는 CART19 세포가 주사된 후, 스위치의 8 용량(0.5㎎/㎏)이 격일로 투여되었다. 도 25F는 NALM-6 모델에서의 스위치의 제1 용량 후 24시간에 마우스 혈청으로부터 측정된 사이토카인을 보여준다, 1방향 ANOVA에 의한 유의도. 도 25G는 NALM-6 모델에서의 스위치의 마지막 용량 후 24시간에 sCAR-T 세포의 증식을 보여준다. 1방향 ANOVA에 의한 유의도. 도 25E, 도 25F 및 도 25G는 3개의 독립 도너로부터의 누적 데이터를 보여준다.
도 26은 도 25D에 도시된 NALM-6 모델로부터의 CD28-힌지 기반 sCAR-T 세포의 생체내 효율을 보여준다.
도 27은 가장 잘 인간화된 스위치 가능한 CAR 작제물의 선택을 보여준다. 도 27A는 쥣과, 생식선 및 인간화된 경쇄 및 중쇄 서열의 정렬을 보여준다. 경쇄 및 중쇄에 대한 청색 정사각형 점 돌연변이 V12S, L109D, E6Q 및 A87, 및 CDR 1, 2 및 3. 도 27B는 인간화된 CAR 변이체를 비교하는 다수의 생체내 검정에 걸친 장기간(50일 초과) 항종양 효율을 보여준다. 적색 선은 50일에 104 미만의 라디언스로 적어도 1마리의 마우스에 의한 인간화된 변이체를 나타낸다. 도 27C 상부 박스는 경쇄 및 중쇄 인간화된 변이체의 도식을 보여준다. 도 27 하부 부분은 도 27D 및 도 27E에 작도된 A-G에 상응하는 인간화된 CAR그룹 배정을 보여준다. 도 27D는 CD19+ RS411 세포주에서의 쥣과 및 인간화된 CAR 변이체의 41BB, CD28 및 제3세대 28BB 동시자극 도메인에 걸친 시험관내 용량-반응 세포독성 비교를 보여준다. 도 27E는 CD19+ Nalm6 이종이식 모델에서 쥣과 및 인간화된 CAR 변이체의 41BB, CD28 및 제3세대 28BB 동시자극 도메인에 걸친 생체내 항종양 효율 비교를 보여준다.
도 28은 중쇄 가변 영역의 쥣과(52SR4) 및 잠재적인 인간화된 서열의 정렬을 보여준다.
도 29는 경쇄 가변 영역의 쥣과(52SR4) 및 잠재적인 인간화된 서열의 정렬을 보여준다.
도 30은 GCN4 펩타이드(어두운 청색)와 복합체화된 항-GCN4 scFv 변이체(C11L34; 녹색: 중쇄; 밝은 청색: 경쇄)의 결정 구조의 모델을 보여준다. 인간화된 잔기는 적색으로 표지된다.
도 31은 인간화된 쥣과 스위치 가능한 CAR의 실험 결과를 보여준다. 상부 3개의 왼쪽 그래프는 생체내 효율 이종이식 모델로부터의 쥣과 및 인간화된 CAR 변이체의 41BB, CD28 및 제3세대 28BB 동시자극 도메인에 걸친 CAR-T 세포 증식의 비교를 보여준다. 21일에, Nalm6 주사 후, 혈액을 수집하고, CAR-T에 대해 염색하고, 유세포분석법에 의해 분석하였다. 상부 오른쪽 그래프는 항종양 효율 생체내 검정의 정규화된 CAR-T 세포 수를 보여준다. 값은 L5H4 작제물로 정규화되었다. 유의도는 1방향 Anova에 의한다. 하부 패널은 순위화된 인간화된 CAR 작제물을 보여준다. 종양 부담, 재발의 빈도 및 시간, 및 생체내 모델로부터의 T 세포 증식 값은 각각의 작제물에 대해 순위화되고 따라서 평균되었다.
도 32는 생체내 사이토카인 생성 비교를 보여준다. 효율 이종이식 모델로부터의 마우스 혈청을 CAR-T 및 스위치 주사 후 24시간에 수집하고, 사이토카인을 정량화하였다. 그래프는 L5H4 CAR-T 그룹에 정규화된 값을 보여준다. 1방향 Anova에 의한 유의도.
도 33은 인간화된 CAR 작제물의 시험관내 규명을 보여준다. 상부 패널: 41BB, CD28 및 제3세대 28BB 인간화된 작제물에 걸친 T 세포 증식 비교. 하부 패널: 시간에 걸친 41BB, CD28 및 제3세대 28BB 인간화된 CAR 작제물의 형질도입 효율.
도 34는 시간에 걸친 인간화된 CAR 작제물의 시험관내 세포독성을 보여준다. 왼쪽, 중간 및 오른쪽 행은 각각 41BB, CD28 및 제3세대 28BB CAR 작제물을 나타낸다. 열은 각각 상부로부터 하부로 T 세포 형질도입 후 19일, 26일 및 33일에 용량-반응 세포독성을 보여준다.
도 35는 시간에 걸친 인간화된 CAR 작제물의 시험관내 세포독성을 보여준다. 상부 열은 T 세포 형질도입 후 시간에 걸친 세포독성 검정으로부터의 EC50 값을 보여준다. 하부 열은 T 세포 형질도입 후 시간에 걸친 각각의 작제물의 최대 사멸을 보여준다.
도 36은 인간화된 스위치 및 인간화된 CAR의 조합을 이용한 NALM-6 이종이식 모델을 보여준다. 종양 부담은 0.5x106개의 NALM-6 세포에 의해 NSG 마우스를 i.v. 주사함으로써 확립되었다. 6일 후, 5x106개의 sCAR-T 또는 CART19 세포가 주사된 후, 인간화된 L2b/H4c 스위치의 8 용량은 14일의 기간에 걸쳐 격일로 투여되었다(0.5㎎/㎏). N=6.
도 37은 불균일 Raji CD19+/CD19- 이종이식 모델을 보여준다. 종양 부담은 Raji CD19+ 및 Raji CD19- 세포의 혼합물(마우스의 0.5x106개의 전체 세포)에 의해 NSG 마우스를 주사함으로써 확립되었다. 3일 후, 10x106개의 sCAR-T 또는 CART19 세포가 주사된 후, 14일의 기간에 걸쳐 항-CD19 스위치의 8 용량(0.5㎎/㎏)이 이어졌다. 항-CD20 스위치의 8 용량(0.5㎎/㎏)은 평균 ROI가 105를 초과한 후 투여되어서, CD19- Raji 세포의 재발을 나타낸다. 도 37A는 CD19+: CD19- Raji 세포의 1:1 비율에 의해 주사되고, 동시에 항-CD19 및 항-CD20 스위치에 의해 치료된 마우스에서의 종양 진행을 보여준다. 항-CD20 스위치의 추가적인 8 용량은 64일 내지 78일에 격일로 투여되었다. N=3. 도 37B는 CD19+:CD19- Raji 세포의 4:1 비율에 의해 주사된 마우스에서의 종양 진행을 보여준다. 마우스를 10일 내지 24일에 격일로 항-CD20 스위치의 8 용량에 의해 치료되고, 항-CD20 스위치의 추가적인 8 용량은 64일 내지 78일에 투여되었다. N=3. 도 37C는 CD19+:CD19- Raji 세포의 49:1 비율에 의해 주사된 마우스에서의 종양 진행을 보여준다. 마우스는 18일 내지 32일에 격일로 항-CD20 스위치의 8 용량에 의해 치료되었다. N=3-6.
도 38은 IgG4 짧은 힌지, 마우스 CD8 힌지 또는 마우스 CD28 힌지를 사용함으로써 상이한 힌지 길이에 의해 작제된 쥣과 sCAR의 다양한 작제물을 도시하는 도식을 보여준다.
도 39는 동계 시스템을 보여준다. 도 39a는 면역적격 마우스에서 sCAR-T 세포에 의한 종양 성장의 제어를 보여준다: IgG4(SV-319-092)와 mCD8(SV-319-089) 힌지 사이의 CAR 효율 비교. 도 39b 및 도 39c는 2 독립 실험에서 유세포분석법에 의한 표현형분석을 통한 말초 혈액에서의 세포 동역학(절대 수)를 보여준다: 도 39b는 CD45+ 대 4-1BB(SV-319-091)/28BB(SV-319-092) sCAR-T 세포를 보여주고; 도 39c는 B 세포 대 28BB SV-319-092 sCAR-T 세포를 보여준다. 종양 부담은 1x106개의 38C13 종양 세포에 의해 C3H 면역적격 마우스를 s.c. 주사함으로써 0일에 확립되었다. 7일 후, 마우스를 100㎎/㎏의 사이클로포스파마이드(CTX) i.p.에 의해 예비 조건화하였다(종양은 측정 가능하고, 마우스를 무작위함). 24시간 후, 10x106개의 sCAR-T 세포가 i.v. 주사된 후, 스위치의 8 용량은 sCAR-T 세포 주사 후 4시간에 시작하여 1㎎/㎏에 14일의 기간에 걸쳐 격일로 i.v. 투여되었다. 2주 휴지 기간 후, 스위치 투약은 36일 및 64일에 격일로 1㎎/㎏에서 또 다른 8 용량에 대해 재개되었다. 말초 혈액으로부터의 면역 세포를 종양 이식 후 15일, 25일, 35일, 53일, 63일, 81일 및 99일에 분석하였다(N=5/6). 도 39d 및 도 39e는 sCAR-T 세포 증식(도 39d) 및 표현형(도 39e)에 대한 상이한 스위치 투약 섭생의 영향을 보여준다. 나이브 C3H 면역적격 마우스를 100㎎/㎏의 사이클로포스파마이드(CTX) i.p.(-1일)에 의해 예비 조건화하고, 10x106 SV-319-092 sCAR-T 세포에 의해 24시간 후 i.v. 주사된 후, 스위치의 4, 8 또는 12 용량은 sCAR-T 세포 주사 후 4시간에 시작하여 0.2, 1 또는 5㎎/㎏에서 6일, 14일 또는 22일의 기간에 걸쳐 격일로 i.v. 투여되었다. sCAR-T 세포 증식 및 표현형을 유세포분석법에 의한 sCAR-T 주사 후 7일, 25일, 35일 및 53일에 말초 혈액에서 시간에 걸쳐 모니터링되었다(N=5).
정의:
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 당해 분야의 당업자가 흔히 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실행 또는 시험에서 이용될 수 있지만, 몇몇 잠재적인 및 바람직한 방법 및 재료가 이제 기재되어 있다. 본 명세서에 언급된 모든 공보는 공보가 인용된 것과 연결된 방법 및/또는 재료를 개시하고 기재하도록 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 개시내용이 상충이 있는 정도로 포함된 공보의 임의의 개시내용을 대체하는 것으로 이해된다(그리고 특히, 본 출원에 구체적으로 기재된 임의의 용어 정의는 참고로 포함된 공보에 개시된 그 용어의 임의의 상충하는 정의를 대체한다).
본 개시내용을 읽을 때 당업자에게 명확한 것처럼, 본 명세서에 기재되고 예시된 개별 실시형태의 각각은 본 발명의 범위 또는 정신으로부터 벗어나지 않으면서 임의의 다른 몇몇 실시형태의 특징으로부터 용이하게 분리되거나 이것과 조합될 수 있는 별개의 성분 및 특징을 갖는다. 임의의 인용된 방법은 인용된 사건의 순서로 또는 논리적으로 가능한 임의의 다른 순서로 수행될 수 있다.
본 명세서 및 첨부된 청구항에 사용된 바대로, 단수 형태 "일", "하나" 및 "이"가, 문맥이 명확히 달리 기재하지 않는 한, 복수 지시어를 포함한다는 것에 주목해야 한다. 따라서, 예를 들어 "세포"의 언급은 복수의 이러한 세포를 포함하고, "펩타이드"의 언급은 하나 이상의 펩타이드 및 이의 균등물, 예를 들어 당업자에게 공지된 폴리펩타이드 등의 언급을 포함한다.
본 명세서에 기재된 공보는 본 출원의 출원일 전에 오로지 본 개시내용에 대해 제공된다. 본 명세서에서 어떤 것도 본 발명이 선행 발명 덕분에 이러한 공보를 선원주의하도록 권한 부여되지 않는다는 인정으로서 해석되지 않는다. 추가로, 제공된 공보의 날짜는 독립적으로 확인될 필요가 있을 수 있는 실제 공보 일자와 상이할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "항체 단편" 및 "면역글로불린 단편"은 전장 형태 이외의 임의의 항체의 형태를 의미하도록 상호 교환되어 사용된다. 본 명세서에서 항체 단편은 전장 항체 내에 존재하는 더 작은 성분인 항체 및 조작된 항체를 포함한다. 항체 단편은 Fv, Fc, Fab, 및 (Fab')2, 단일 사슬 Fv(scFv), 다이아바디, 트라이아바디, 테트라바디, 이작용성 하이브리드 항체, CDRl, CDR2, CDR3, CDR의 조합, 가변 영역, 프레임워크 영역, 불변 영역, 중쇄, 경쇄, 대안적인 스캐폴드 비항체 분자 및 이중특이적 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 구체적으로 달리 기재되지 않는 한, 용어 "항체" 또는 "항체"를 사용하는 서술 및 청구항은 구체적으로 "항체 단편" 및 "항체 단편"을 포함할 수 있다. 항체 또는 면역글로불린의 언급에서 사용된 용어 "항원 결합 단편"은 표적(예를 들어, 표적 단백질, 펩타이드, 소분자, 종양 항원 등)에 대한 결합 친화도를 보유하는 임의의 항체 단편을 의미한다. 항체 "단편" 및 항체 "부분"은, 용어 "항원 결합 단편" 및 "항원 결합 부분"인 것처럼, 본 명세서에서 또한 상호 교환되어 사용된다.
용어 "항-CD19 항체"는 CD19에 결합하는 항체를 의미한다. "분화 19의 클러스터"로도 공지된 CD19는 B 세포의 표면에서 발현된 단백질인 것으로 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
용어 "키메라 수용체", "키메라 항원 수용체" 및 "CAR"은, 본 명세서에 기재된 바대로 CAR-ID에 결합할 수 있는, 적합한 효과기 세포(예를 들어, T 세포) 상에 발현된 수용체를 의미하도록 본 명세서에서 상호 교환되어 사용된다.
"CAR-EC"의 언급은 "키메라 항원 수용체 효과기 세포"를 의미하고, CAR-EC는 일반적으로 키메라 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체 등)를 발현하는 효과기 세포를 의미한다. 그러나, 몇몇 실시형태에서, CAR-EC는 단순히 키메라 항원 수용체를 발현하는(즉, 항체 또는 항체의 항원 결합 단편을 발현하는) 효과기 세포로 제한되지 않고, 상기 용어는 본 명세서에 개시된 바대로 CAR-EC 스위치에 포함된 표적(예를 들어, "키메라 항원 수용체-상호작용 도메인"(CAR-ID)에 결합할 수 있는 다른 키메라 수용체를 발현하는 효과기 세포를 또한 포함할 수 있다. (예를 들어, CAR-EC로서) 본 발명에서 사용하기 위한 적합한 효과기 세포는 네이티브 T 세포, 기억 줄기 세포 T 세포, 중앙 기억 T 세포, 효과기 기억 T 세포, 헬퍼 T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD8/CD4+ T 세포, α베타베타 T 세포, γδ T 세포, 세포독성 T 세포, 천연 살해 T 세포, 천연 살해 세포, 마크로파지로부터 선택된 효과기 세포를 포함한다.
CAR 및 이의 "상보성" CAR-EC 스위치(예를 들어, 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 항-CD19 CAR-EC 스위치)의 언급 또는 유사하게 CAR-EC 스위치 및 이의 "상보성 CAR"의 언급은 특정한 CAR-ID를 포함하는 한 쌍의 CAR-EC 스위치 및 그 특정한 CAR-ID에 대해 결합 친화도를 포함하는 세포외 도메인을 포함하는 CAR을 의미한다. 그래서, 비제한적인 예로서, 당해 분야의 당업자는 (예를 들어, 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는) GCN4 펩타이드 CAR-ID를 포함하는 CAR-EC 스위치가 그 GCN4 펩타이드(예를 들어, 항-GCN4 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 예컨대 scFv)에 대한 결합 친화도를 갖는 항-GCN4 세포외 도메인을 포함하는 CAR에 의해 결합된다는 것을 이해할 것이다. 따라서, CAR이 CAR-EC 스위치에 결합하므로, 이러한 항-GCN4 CAR 및 GCN4 CAR-ID를 포함하는 CAR-EC는 "상보성"이다. 유사하게, FITC, FLAG, K4 및 E4 CAR-ID를 포함하는 스위치는 각각 FITC, FLAG, K4(예를 들어, E4 펩타이드), E4(예를 들어, K4 펩타이드)에 대한 결합 친화도를 포함하는 CAR에 상보성이다.
용어 "내독소 비함유" 또는 "실질적으로 내독소 비함유"는 일반적으로 기껏해야 미량(예를 들어, 대상체에게 임상적으로 불리하지 않는 생리학적 효과를 갖는 양)의 내독소 및 바람직하게는 검출 불가능한 양의 내독소를 함유하는 조성물, 용매, 및/또는 용기에 관한 것이다. 내독소는 소정의 미생물, 예컨대 박테리아, 통상적으로 그람 음성 박테리아와 연관된 독소이지만, 내독소는 그람 양성 박테리아, 예컨대 리스테리아 모노사이토게네스에서 발견될 수 있다. 가장 만연한 내독소는 다양한 그람 음성 박테리아의 외부 막에서 발견되고, 질환을 일으키는 이 박테리아의 능력에서 주요한 병원성 특징을 나타내는 지질다당류(lipopolysaccharide: LPS) 또는 지질-올리고당(lipo-oligo-saccharide: LOS)이다. 인간에서의 내독소의 소량은 다른 불리한 생리학적 효과 중에서 열(혈압을 낮춤), 및 염증의 활성화 및 응고를 생성할 수 있다.
따라서, 약제학적 제조에서, 심지어 적은 양이 인간에서 불리한 효과를 야기할 수 있으므로, 약물 생성물 및/또는 약물 용기로부터 내독소의 대부분의 또는 모든 미량을 제거하는 것이 대개 바람직하다. 대부분의 내독소를 파괴하는 데 300℃ 초과의 온도가 통상적으로 필요하므로, 이 목적에 탈고열반응 오븐을 사용할 수 있다. 예를 들어, 주요 패키징 재료, 예컨대 주사기 또는 바이알에 기초하여, 내독소 수준에서 3 로그 감소를 달성하는 데 대개 250℃의 유리 온도 및 30분의 홀딩 시간의 조합이 충분하다. 본 명세서에 기재되고 당해 분야에 공지된 바대로 예를 들어 크로마토그래피 및 여과 방법을 포함하는 내독소를 제거하는 다른 방법이 고안된다. 본 발명의 조성물에 존재하는 내독소의 위험이 제거되지 않는 경우 감소시키도록 진핵세포 세포, 예컨대 포유류 세포에서 CAR-EC 스위치를 생성하고 이 세포로부터 이를 단리시키는 방법이 또한 포함된다. 혈청 비함유 세포에서 CAR-EC 스위치를 생성하고 이 세포로부터 이를 단리시키는 방법이 바람직하다.
내독소는 당해 분야에 공지된 일상 기법을 이용하여 검출될 수 있다. 예를 들어, 호스슈 크랩(horseshoe crab)으로부터 혈액을 이용하는 Limulus Ameobocyte Lysate 검정은 내독소의 존재를 검출하기 위한 매우 민감한 검정이다. 이 시험에서, LPS의 매우 낮은 수준은 이 반응을 증폭시키는 강력한 효소 캐스케이드로 인해 리물루스 용해물의 검출 가능한 응고를 발생시킬 수 있다. 내독소는 또한 효소 연결 면역흡착 검정(enzyme-linked immunosorbent assay: ELISA)에 의해 정량화될 수 있다. 실질적으로 내독소 비함유이도록, 내독소 수준은 약 0.001 미만, 0.005, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.08, 0.09, 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 EU/㎎의 단백질일 수 있다. 통상적으로, 1ng의 지질다당류(LPS)는 약 1 내지 10 EU에 상응한다.
"FMC63"의 언급은 Carl June 및 동료(2-4)로부터의 가장 잘 연구된 관습적인 CAR-T 세포에서 사용된 H. Zola 및 동료(1)가 1991년에 원래 기재한 항-CD19 마우스 단일클론 항체 클론을 의미한다. 이 참고문헌("참고문헌" 부문에서 하기 기재된 1, 2, 3 및 4)은 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함된다. 용어 "FMC63", "FMC", "huFMC" 및 "hFMC"는 본 명세서에서 상호 교환되어 사용된다.
"FMC63 VH"에 대한 언급은 FMC63 항체의 중쇄의 가변 부분을 의미한다.
"FMC63 VL"에 대한 언급은 FMC63 항체의 경쇄의 가변 부분을 의미한다.
비인간(예를 들어, 쥣과) 항체의 "인간화된" 형태는, 가변 도메인의 비인간(예를 들어, 쥣과) 프레임워크 영역이 인간 프레임워크 영역 서열로 변하는, 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편(예를 들어, Fv, Fab, (Fab')2, 단일 사슬 Fv(scFv) 또는 항체의 다른 항원 결합 허위서열 등)이다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항체는 인간에 면역원성을 감소시키도록 인간화된다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항체는 모 비인간 항체의 특이성 및/또는 친화도를 보유한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항체는 모 비인간 항체의 실질적으로 모든 특이성 및/또는 친화도를 보유한다.
본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "또는 이의 인간화된 변이체"는 변이체가 기준 서열과 비교하여 인간 생식선 서열에 증가한 동일성을 갖는 변이체 서열을 발생시키는 적어도 하나의 아미노산 변화(즉, 치환, 결실, 또는 부가)를 포함하는 기준 서열의 임의의 서열 변이체를 의미한다. 몇몇 실시형태에서, "또는 이의 인간화된 변이체"는 서열이 "더 인간화"되게 하는, 즉 서열이 인간 기준 서열과 더 큰 동일성을 갖게 하는 적어도 하나의 아미노산 변화를 포함하는 서열을 의미한다. 예를 들어, FMC63 VH 또는 FMC63 VL 서열의 인간화된 변이체는 각각 서열 번호 15 및 25로서 제공된 쥣과 모 FMC63VH 및 VL 서열과 비교하여 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 이것 초과)의 돌연변이를 포함하는 서열이다. 실시형태에서, 기준 항체 서열 또는 이의 일부(예를 들어, FMC63 VH 또는 FMC63 VL 서열)의 인간화된 변이체는 예를 들어 임의의 방식으로 제한되지 않지만 기준 항체의 표적에 대한 결합 친화도를 유지하고, 인간화된 FMC63 서열은 CD19에 대한 결합을 유지할 수 있다.
용어 "인간화된 항-CD19 스위치"는 일반적으로 (i) CD19에 결합할 수 있고; (ii) 기준 CD19 항체의 인간화된 변이체인 표적화 모이어티를 포함하는 임의의 CAR-EC 스위치를 의미한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항-CD19 스위치는 기준 항체 FMC63의 인간화된 형태를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항-CD19 스위치는 기준 항체 FMC63의 인간화된 부분(예를 들어, (i) 인간화된 FMC63 VH, (ii) 인간화된 FMC63 VL, 또는 (iii) 인간화된 FMC63 VH 및 인간화된 FMC63 VL)을 포함한다.
용어 "인간화된 스위치"는 일반적으로 (i) 표적에 결합할 수 있고; (ii) 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 인간화된 변이체인 표적화 모이어티를 포함하는 임의의 CAR-EC 스위치를 의미한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 스위치는 기준 항체의 인간화된 형태를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 스위치는 기준 항체의 인간화된 부분(예를 들어, (i) 인간화된 VH, (ii) 인간화된 VL, 또는 (iii) 인간화된 VH 및 인간화된 VL)을 포함한다.
본 명세서에 개시된 쿼리 아미노산 서열과 적어도, 예를 들어 95% "동일한" 아미노산 서열을 갖는 해당 폴리펩타이드 서열에 의해, 해당 폴리펩타이드 서열이 쿼리 아미노산 서열의 각각의 100개의 아미노산당 5개 이하의 아미노산 변경을 포함할 수 있다는 것을 제외하고는 해당 폴리펩타이드의 아미노산 서열이 쿼리 서열과 동일한 것으로 의도된다. 다른 말로, 쿼리 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 해당 폴리펩타이드를 얻기 위해, 해당 서열에서의 5% 이하의 아미노산 잔기는 삽입, 결실 또는 또 다른 아미노산에 의해 치환될 수 있다. 기준 서열과 비교하여 이 변경은 기준 아미노산 서열의 아미노- 또는 카복시 말단 위치, 또는 기준 서열에서의 잔기 중에서 또는 기준 서열 내의 하나 이상의 인접한 기에서 개별적으로 삽입된, 이 말단 위치에서의 어느 곳에서 발생할 수 있다. 2개 이상의 서열(예를 들어, 아미노산 서열)의 동일성은 문헌[Johnson M, et al., (2008) NCBI BLAST: a better web interface. Nucleic Acids Res. 36:W5-W9](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재된 Basic Local Alignment Search Tool 또는 "BLAST" 알고리즘을 이용하여 서로와 또는 공개된 서열과 비교될 수 있다. 유사하게, 동일성은 동일한 방식으로 2개의 뉴클레오타이드 서열 사이에 결정될 수 있다. 따라서, 쿼리 뉴클레오타이드 서열과 적어도 95% 동일한 해당 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, RNA 또는 DNA 서열, 예컨대 cDNA 서열)을 얻기 위해, 해당 서열에서의 5% 이하의 뉴클레오타이드 잔기는 삽입, 결실 또는 또 다른 뉴클레오타이드에 의해 치환될 수 있다.
용어 "스위치" 및 "CAR-EC 스위치"는 본 명세서에서 상호 교환되어 사용된다.
"VH"의 언급은 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 가변 부분을 의미한다.
"VL"의 언급은 항체 또는 항체 단편의 경쇄의 가변 부분을 의미한다.
폴리펩타이드 또는 다른 표적(예를 들어, CD19)에 "특이적으로 결합한다" 또는 "우선적으로 결합한다"(본 명세서에서 상호 교환되어 사용됨)고 말해지는 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 언급은 당해 분야에 널리 이해되는 용어이고, 이러한 특이적 또는 우선적 결합을 결정하는 방법은 또한 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 분자는 대안적인 세포 또는 물질과 반응하는 것보다 특정한 세포 또는 물질과 더 자주, 더 신속히, 더 긴 기간으로 및/또는 더 높은 친화도로 반응하거나 회합하는 경우 "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"을 나타낸다고 말해진다. 항체는 다른 물질에 결합하는 것보다 더 높은 친화도, 결합도로, 더 용이하게, 및/또는 더 긴 기간으로 결합하는 경우 표적에 "특이적으로 결합한다" 또는 "우선적으로 결합한다". 예를 들어, CD19에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체는 다른 비-CD19 폴리펩타이드에 결합하는 것보다 더 높은 친화도, 결합도로, 더 용이하게, 및/또는 더 긴 기간으로 CD19에 결합하는 항체이다. 제1 표적(예를 들어, CD19)에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 예를 들어 항체(또는 이의 항원 결합 부분)가 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하거나 결합하지 않을 수 있는 것으로 본 정의를 읽음으로써 또한 이해된다. 그러므로, "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"은 배타적인 결합을 (이것이 포함할 수는 있지만) 반드시 요하는 것은 아니다. 반드시는 아니지만 일반적으로, 결합의 언급은 우선적 결합을 의미한다.
"실질적으로" 또는 "본질적으로"는 충분한 또는 상당한 양, 분량, 크기; 거의 전부 또는 완전히; 예를 들어, 약간의 소정의 분량의 95% 이상을 의미한다.
"실질적으로 유사한" 서열은 서로와 서열(예를 들어, 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열)에서 적어도 약 90%의 동일성, 또는 서로와 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 약 99% 초과의 동일성을 포함하는 서열이다.
개관:
치료에 걸쳐 대조군을 제공함으로써 임상 실험에서 현재 시험되는 관습적인 CAR-T 세포 설계보다 더 안전하고 더 다양한 면역요법을 제공할 수 있는 키메라 수용체 효과기 세포(예를 들어, 키메라 항원 수용체 T 세포)를 선택적으로 활성화 및 비활성화시키기 위한 조성물 및 방법이 본 명세서에 개시된다.
스위치 가능한 키메라 수용체 효과기 세포(CAR-EC) 및 인간화된 스위치 및 인간화된 CAR-EC를 포함하는 키메라 수용체 효과기 세포 스위치(본 명세서에서 "스위치"라 칭함)가 본 명세서에 개시되어 있다.
하나 이상의 본 명세서에 개시된 스위치(예를 들어, 인간화된 스위치) 및 하나 이상의 CAR-EC(예를 들어, 본 명세서에 개시된 CAR-EC, 예컨대 인간화된 CAR-EC)를 포함하는 플랫폼이 본 명세서에 개시되어 있고, 여기서 플랫폼에 포함된 CAR-EC 상에 발현된 CAR은 플랫폼에 포함된 스위치와 상보성이다. 몇몇 실시형태에서, 플랫폼은 복수의 스위치를 포함하고, 이들의 각각은 상이한 표적에 결합하고(즉, 각각의 스위치는 상이한 표적화 모이어티를 가짐), 이들의 각각은 플랫폼에 포함된 단일 CAR-EC에 상보성이다. 몇몇 실시형태에서, 플랫폼은 복수의 스위치를 포함하고, 이들의 각각은 상이한 표적에 결합하고(즉, 각각의 스위치는 상이한 표적화 모이어티를 가짐), 이들의 각각은 플랫폼에 포함된 복수의 CAR-EC 중 적어도 하나에 상보성이다.
본 명세서에 개시된 스위치는 효과기 세포 키메라 수용체에 의해 결합된 제1 영역 및 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합하는 제2 영역을 포함한다. 제1 영역은 본 명세서에서 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID)이라 칭해진다. 제2 영역은 본 명세서에서 "표적화 모이어티"라 칭해진다. 표적화 모이어티는 표적화 폴리펩타이드일 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 표적 세포 상의 항원에 결합하는 표적화 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간화될 수 있다. 본 명세서에 개시된 인간화된 스위치는 인간화된 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 세포 표면 분자는 CD19이다. 몇몇 실시형태에서, 세포 표면 분자는 Her2, CLL1, CD33, CD123, EGFR, EGFRvIII, CD20, CD22, CS1, BCMA, CEA 또는 이의 단편이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 CD19에 결합한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 Her2, CLL1, CD33, CD123, EGFR, EGFRvIII, CD20, CD22, CS1, BCMA, CEA 또는 이의 단편에 결합한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 CD19에 특이적으로 결합한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 Her2, CLL1, CD33, CD123, EGFR, EGFRvIII, CD20, CD22, CS1, BCMA, CEA 또는 이의 단편에 특이적으로 결합한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 의 of 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분 중 임의의 하나 이상)을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하거나 이것으로 이루어진다.
스위치의 키메라 수용체 결합은 결합된 표적 세포에 세포독성인 효과기 세포로부터의 면역 반응을 자극할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 효과기 세포는 T 세포이다. 스위치는 효과기 세포 활성화를 촉발(또는 증가)시키는 "온-스위치"로서 작용할 수 있다. 스위치는 효과기 세포 활성화를 차단(또는 감소)시키는 "오프-스위치"로서 작용할 수 있다. 효과기 세포 활성은 스위치의 투여를 감소 또는 중지시킴으로써 "끊어질 수 있다". 본 명세서에 개시된 인간화된 스위치는 질환 또는 병태, 예컨대 암의 치료를 위해 본 명세서에 개시된 효과기 세포, 및 기존의 CAR T 세포와 사용될 수 있고, 여기서 표적 세포는 악성 세포이다. 이러한 치료는 본 명세서에서 스위치 가능한 면역요법이라 칭해질 수 있고, 이에 대해 예시적인 도식적 개관이 도 14에 도시되어 있다.
방법, 키트 및 조성물은, 대상체에서 효과기 세포를 표적(예를 들어, 표적 세포, 예컨대 종양)과 함께 있도록 사용된, CAR-EC 세포, CAR-EC 플랫폼 및 인간화된 CAR-EC 스위치를 제조하기 위해 제공된다. 이 방법, 키트 및 조성물은 다수의 질환 및 조건에서 치료학적 용도가 발견된다. 예를 들어, 항-CD19 표적화 모이어티를 갖는 CAR-EC 스위치를 포함하는 상기 방법, 키트 및 조성물은 CD19+ 세포가 병인학에 연루된 임의의 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 임의의 방식으로 제한되는 것이 아니라, 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 이질적 종양 및 혈액 세포 악성종양(예를 들어, 급성 림프아구성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병)은 본 명세서에 개시된 CAR-EC 세포, CAR-EC 스위치, 및/또는 CAR-EC 플랫폼에 의해 효과적으로 치료될 수 있다. 몇몇 비제한적인 실시형태에서, CAR-EC 세포, CAR-EC 플랫폼 및/또는 인간화된 CAR-EC 스위치는 예를 들어 다발성 골수종, 급성 골수성 백혈병, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종(NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종, 맨틀 세포 림프종(MCL), 버킷 림프종 및 모발 세포 백혈병(HCL)으로부터 선택된 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
유사하게, 항-Her2 표적화 모이어티를 갖는 CAR-EC 스위치를 포함하는 상기 방법, 키트 및 조성물은 Her2+ 세포가 병인학에 연루된 임의의 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있고; 항-CLL1 표적화 모이어티를 갖는 CAR-EC 스위치를 포함하는 방법, 키트 및 조성물은 CLL1+ 세포가 병인학에 연루된 임의의 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있고, 유사하게, 특정한 표적 항원(예를 들어, 종양 항원)에 대한 특이성을 갖는 임의의 표적화 모이어티를 갖는 CAR-EC 스위치를 포함하는 상기 방법, 키트 및 조성물은 표적 항원(예를 들어, 종양 항원)이 병인학에 연루된 임의의 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
몇몇 실시형태에서, CAR-EC 스위치 연결, 및 CAR-EC 스위치 세포 표적화 모이어티의 길이, 원자가 및/또는 배향은 최적화된다. 이질적 종양은 하나 초과의 종양 항원을 표적화하는 다수의 스위치에 의해 더 효과적으로 치료될 수 있다. 본 발명의 이점 및 특징은 하기 더 자세히 기재된 것처럼 조성물 및 방법의 세부사항을 읽을 때 당업자에게 명확해질 것이다.
본 발명의 바람직한 실시형태가 본 명세서에 도시되고 기재되어 있지만, 이러한 실시형태가 오직 예에 의해 제공된다는 것이 당업자에게 명확할 것이다. 다양한 변형, 변경 및 치환은 본 발명으로부터 벗어나지 않으면서 당업자에게 이제 발생할 것이다. 본 명세서에 기재된 발명의 실시형태에 대한 다양한 대안은 본 발명을 실행 시 이용될 수 있다고 이해되어야 한다. 하기 청구항이 본 발명의 범위를 한정하고, 이 청구항의 범위 내의 방법 및 구조 및 이의 균등물이 이로써 포괄되는 것으로 의도된다.
I. CAR-EC 스위치
(i) 효과기 세포 상의 키메라 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체)가 결합할 수 있는 제1 영역(CAR-ID) 및 (ii) 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합하는 제2 영역(표적화 모이어티)을 포함하는 키메라 수용체-효과기 세포 스위치가 본 명세서에 개시된다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드 유도체(예를 들어, 서열 번호 139, 154 내지 163으로부터 선택된 GCN4 펩타이드 유도체)를 포함하는 제1 영역(CAR-ID) 및 (ii) 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합하는 제2 영역(표적화 모이어티)을 포함하는 키메라 수용체-효과기 세포 스위치를 제공하고; 여기서 CAR-ID는 효과기 세포 상의 키메라 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체)가 결합할 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 효과기 세포 상의 키메라 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체)가 결합할 수 있는 제1 영역(CAR-ID) 및 (ii) 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합하는 제2 영역(표적화 모이어티)을 포함하는 인간화된 키메라 수용체-효과기 세포 스위치를 제공하고; 여기서 표적화 모이어티는 인간화된다.
몇몇 특정한 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 효과기 세포 상의 키메라 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체)가 결합할 수 있는 제1 영역(CAR-ID) 및 (ii) 표적 세포 상의 CD19에 결합하는 제2 영역(표적화 모이어티)을 포함하는 인간화된 키메라 수용체-효과기 세포 스위치를 제공하고; 여기서 표적화 모이어티는 인간화된다.
몇몇 특정한 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드 유도체(예를 들어, 서열 번호 139, 154 내지 163으로부터 선택된 GCN4 펩타이드 유도체)를 포함하는 제1 영역(CAR-ID) 및 (ii) 표적 세포 상의 CD19에 결합하는 제2 영역(표적화 모이어티)을 포함하는 인간화된 키메라 수용체-효과기 세포 스위치를 제공하고; 여기서 표적화 모이어티는 인간화된다.
몇몇 실시형태에서, 제1 및 제2 영역은 링커에 의해 연결된다.
몇몇 실시형태에서, 제1 영역 및 제2 영역은 함께 융합된다. 본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "융합된"은 CAR-ID의 말단을 폴리펩타이드 표적화 모이어티(예를 들어, 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 말단과 인접시키는 것을 의미할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 제1 영역 및 제2 영역은 링커를 통해 함께 융합된다.
몇몇 실시형태에서, 제1 영역은 제2 영역에 그래프팅된다. 본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "그래프팅된"은 표적화 폴리펩타이드 내의(예를 들어, 표적화 폴리펩타이드의 2개의 아미노산 사이) CAR-ID를 삽입하는 것을 의미할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 제2 영역은 제1 영역에 그래프팅된다. 몇몇 실시형태에서, 제1 영역은 제2 영역에 그래프팅되어서, 제1 및 제2 영역은 적어도 하나의 링커에 의해 연결된다. 몇몇 실시형태에서, 제2 영역은 제1 영역에 그래프팅되어서, 제1 및 제2 영역은 적어도 하나의 링커에 의해 연결된다.
몇몇 실시형태에서, 제1 영역은 제2 영역에 부착된다. 몇몇 실시형태에서, 제1 영역은 링커를 통해 제2 영역에 부착된다. 링커는 CAR-ID에 부착될 수 있다. 링커는 표적화 모이어티에 부착될 수 있다. 링커는 CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시킬 수 있다. 하나 이상의 링커는 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티에 부착시킬 수 있다. 하나 이상의 링커는 부위 특이적 방식으로 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티에 부착시킬 수 있다. 부위 특이적 방식의 부착은 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티 상의 미리 결정된 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 부위 특이적 방식의 부착은 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티에서의 비천연 아미노산에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커는 부위 독립적 방식으로 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티에 부착시킬 수 있다. 부위 독립적 방식의 부착은 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티 상의 랜덤 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. CAR-ID는 부위 특이적 방식으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 표적화 모이어티에 부착될 수 있다. CAR-ID는 부위 독립적 방식으로1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 표적화 모이어티에 부착될 수 있다. 대안적으로, 표적화 모이어티는 부위 특이적 방식으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 CAR-ID에 부착될 수 있다. 부위 특이적 방식의 부착은 하나 이상의 표적화 모이어티를 하나 이상의 CAR-ID 상의 미리 결정된 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 부위 독립적 방식으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 CAR-ID에 부착될 수 있다. 부위 독립적 방식의 부착은 하나 이상의 표적화 모이어티를 하나 이상의 CAR-ID 상의 랜덤 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다.
CAR-EC 스위치는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, 이것은 경쇄 및 중쇄를 포함할 수 있고, 여기서 경쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 경쇄 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어지고, 중쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 중쇄 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 이러한 중쇄 및/또는 경쇄 서열은 인간화될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 인간화되고, 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하고, 여기서 중쇄 및 경쇄의 하나 또는 둘 다는 본 명세서에 개시된 CAR-ID(예를 들어, GCN4 CAR-ID)를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 인간화되고, 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 서열과 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 서열과 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 서열을 포함하고, 여기서 중쇄 및 경쇄의 하나 또는 둘 다는 본 명세서에 개시된 CAR-ID(예를 들어, GCN4 CAR-ID)를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 경쇄 서열은 (N 말단 GCN4 CAR-ID를 포함하는) 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 경쇄 서열은 (N 말단 GCN4 CAR-ID를 포함하는) 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 서열과 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 인간화된 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 서열과 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 서열을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 스위치는 본 명세서에 개시된 몇몇 스위치에 포함된 중쇄/경쇄 조합을 제시하는 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치이다. 몇몇 실시형태에서, 스위치는 스위치에 포함된 CAR-ID가 구조 I의 서열을 갖도록 변형된다는 것을 제외하고는 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치와 동일하다. 몇몇 실시형태에서, 구조 I의 서열은 서열 번호 26, 36, 139, 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된다. 소정의 특정한 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 L2b-LCNT(서열 번호 30) 경쇄 및 H4c(서열 번호 7) 중쇄를 포함한다.
소정의 특정한 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 (i) L2b-LCNT(서열 번호 30) 경쇄와 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열 및 (ii) H4c(서열 번호 7) 중쇄와 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다.
소정의 특정한 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 L2b-LCNT(서열 번호 30) 경쇄 및 H4b(서열 번호 6) 중쇄를 포함한다. 소정의 특정한 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 (i) L2b-LCNT(서열 번호 30) 경쇄와 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열 및 (ii) H4b(서열 번호 6) 중쇄와 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다.
소정의 특정한 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 (i) L2c-LCNT(서열 번호 34) 경쇄와 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열 및 (ii) H4b(서열 번호 6) 중쇄와 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다.
소정의 특정한 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 (i) L2c-LCNT(서열 번호 34) 경쇄와 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열 및 (i) H4c(서열 번호 7) 중쇄와 적어도 80%, 85%, 80%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은, 스위치가 이의 표적화 모이어티로서 인간화된 항체를 포함하거나, 스위치가 이의 표적화 모이어티로서 인간화된 항체의 항원 결합 부분을 포함하는 것을 제외하고는, 하기 출원 중 어느 하나에 개시된 어느 하나의 스위치와 동일한 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 CAR-EC 스위치를 제공한다: 제PCT/US2014/060713호, 제PCT/US2014/060684호, 제PCT/US2016/024524호, 제PCT/US2016/027997호 및 PCT/US2016/027990호(이들은 각각 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨). 몇몇 특정한 실시형태에서, 본 개시내용은, 스위치가 이의 표적화 모이어티로서 본 명세서에 개시된 인간화된 FMC63 항체를 포함하거나, 스위치가 이의 표적화 모이어티로서 인간화된 FMC63 항체의 항원 결합 부분을 포함하는 것을 제외하고는, 하기 출원 중 어느 하나에 개시된 어느 하나의 스위치와 동일한 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 CAR-EC 스위치를 제공한다: 제PCT/US2014/060713호, 제PCT/US2014/060684호, 제PCT/US2016/024524호, 제PCT/US2016/027997호 및 제PCT/US2016/027990호(이들은 각각 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨). 따라서, 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 하기 출원 중 어느 하나에 개시된 어느 하나의 CAR-ID에 결합되거나 융한된 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 스위치를 제공한다: 제PCT/US2014/060713호, 제PCT/US2014/060684호, 제PCT/US2016/024524호, 제PCT/US2016/027997호 및 제PCT/US2016/027990호. 제PCT/US2014/060684호 및 제PCT/US2016/027997호가 "CAR-BP"로서 CAR-ID를 의미하고, 임의의 이러한 CAR-BP가 본 발명에서 사용하기 위한 CAR-ID로서 적합하다는 것이 당업자에게 명확할 것이다. 유사하게, 제PCT/US2016/024524호는 "키메라 수용체 결합 파트너"로서 CAR-ID를 의미하고, 임의의 이러한 키메라 수용체 결합 파트너는 본 발명에서 사용하기 위한 CAR-ID로서 적합하다. 제PCT/US2016/027990호는 CAR-ID로서 CAR-ID를 의미하고, 제PCT/US2016/027990호에 개시된 임의의 이러한 CAR-ID는 본 발명에서 CAR-ID로서 사용하기에 적합하다. 추가로, 본 출원은 스위치 상의 CAR-ID에 결합할 수 있는 키메라 수용체 및 이러한 키메라 수용체를 발현하는 효과기 세포를 제공한다. 따라서, 따라서, 제PCT/US2014/060713호, 제PCT/US2014/060684호, 제PCT/US2016/024524호, 제PCT/US2016/027997호 및 제PCT/US2016/027990호의 출원 중 어느 하나에 개시된 임의의 키메라 수용체(예를 들어, CAR)는 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치와 조합되어 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치 및 제PCT/US2014/060713호, 제PCT/US2014/060684호, 제PCT/US2016/024524호, 제PCT/US2016/027997호 및 제PCT/US2016/027990호의 출원 중 어느 하나에 개시된 CAR에 의해 이러한 치료를 요하는 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
CAR-EC 스위치의 제1 영역: CAR-상호작용 도메인.
본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치에 포함된 CAR-상호작용 도메인(CAR-ID)은 본 명세서에 기재된 표적화 모이어티(예를 들어, 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분)에 융합, 접합 또는 달리 부착될 수 있는 어느 것일 수 있어서, CAR-ID는 효과기 세포(예를 들어, T 세포) 상의 키메라 수용체(예를 들어, CAR)에 의해 결합될 수 있다. 예를 들어, 비제한적인 실시형태에서, CAR-ID는 키메라 수용체 결합 단백질(예를 들어, CAR 결합 단백질)일 수 있다. 비제한적인 실시형태에서, CAR-ID는 키메라 수용체 결합 펩타이드(예를 들어, CAR 결합 펩타이드)일 수 있다. 비제한적인 실시형태에서, CAR-ID는 키메라 수용체 결합 소분자(예를 들어, CAR 결합 소분자)일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 스위치 상의 CAR-ID에 대한 CAR의 결합은 CAR을 활성화한다. 몇몇 실시형태에서, 스위치 상의 CAR-ID에 대한 CAR의 결합은 스위치 상의 표적화 모이어티가 이의 표적에 또한 동시에 결합된 경우 CAR을 활성화한다. 몇몇 실시형태에서, 스위치 상의 CAR-ID에 대한 CAR의 결합은 스위치 상의 인간화된 항-CD19 항체(예를 들어, 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 항체 중 어느 하나)가 표적 세포 상의 CD19에 또한 동시에 결합된 경우 오직 CAR을 활성화한다. 이러한 실시형태에서, CAR은 효과기 세포 상에 발현될 수 있다. 이러한 실시형태에서, 스위치 상의 인간화된 항-CD19 항체(예를 들어, 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 항체 중 어느 하나)가 표적 세포 상의 CD19에 또한 동시에 결합되면서, 스위치 상의 CAR-ID에 대한 효과기 세포 상에 발현된 CAR의 결합은 표적 세포 세포독성을 발생시킨다.
키메라 수용체 결합 단백질
몇몇 실시형태에서, CAR-ID는 키메라 수용체에 의해 결합된 키메라 수용체 결합 단백질을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 키메라 수용체 결합 단백질은 일반적으로 단백질에 비해 인간에서 높은 단백질분해 안정성 및 낮은 면역원성을 가질 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 외래 단백질 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 외래 단백질 또는 이의 일부를 포함하지 않을 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 호르몬, 사이토카인, 케모카인, 성장 인자, 세포 부착 분자, 신호전달 펩타이드, 수용체, 세포 표면 펩타이드 및 이의 단편으로부터 선택될 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 리간드 또는 이의 단편일 수 있다. 리간드는 호르몬 리간드일 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 약 100개 초과의 아미노산, 약 200개 초과의 아미노산, 약 300개 초과의 아미노산, 약 400개 초과의 아미노산, 약 500개 초과의 아미노산, 약 600개 초과의 아미노산, 약 700개 초과의 아미노산, 약 800개 초과의 아미노산, 약 900개 초과의 아미노산, 또는 약 1000개 초과의 아미노산의 길이를 가질 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 약 100개의 아미노산, 약 200개의 아미노산, 약 300개의 아미노산, 약 400개의 아미노산, 약 500개의 아미노산, 약 600개의 아미노산, 약 700개의 아미노산, 약 800개의 아미노산, 약 900개의 아미노산, 또는 약 1000개의 아미노산의 길이를 가질 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 항원일 수 있다.
키메라 수용체 결합 단백질은 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 항체 또는 항체 단편을 포함하지 않을 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 항체 또는 항체 단편의 적어도 약 100개, 적어도 약 200개, 적어도 약 300개, 적어도 약 400개, 또는 적어도 약 500개의 아미노산을 포함할 수 있다. 항체 또는 항체 단편은 가변 도메인 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 항체 또는 항체 단편은 불변 도메인 또는 이의 일부를 포함할 수 있다.
키메라 수용체 결합 단백질은 비천연 발생 단백질을 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 합성 단백질을 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 비동물 단백질(예를 들어, 동물에서 발현되지 않은 단백질)을 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 비포유류 단백질을 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 비인간 단백질을 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 임의의 6개의 계(동물계, 식물계, 균류, 원생동물, 고세균/고세균 박테리아 및 박테리아/진정세균)로부터의 임의의 생물, 바이러스 및 프리온으로부터 유래된 단백질을 포함할 수 있다.
키메라 수용체 결합 단백질은 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 당해 분야에 공지된 임의의 프로테아제 절단 부위는 키메라 수용체 결합 단백질에 포함될 수 있다. 프로테아제 절단 부위는 예를 들어 트롬빈, Xa 인자, TEV 프로테아제, 인간 리노바이러스 3C 프로테아제(Human Rhinovirus 3C protease: HRV3C), 유비퀴틴양 특이적 프로테아제 1(ubiquitin-like-specific protease 1: Ulp1), 매트릭스 금속단백분해효소(matrix metalloprotease: MMP) 또는 엔테로키나제에 의해 인식될 수 있다. MMP는 MMP8일 수 있다. MMP는 MMP9일 수 있다.
키메라 수용체 결합 단백질은 천연 발생 단백질에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 펩타이드는 인간 단백질에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 침팬지, 원숭이, 래트, 마우스, 조류, 어류, 돼지, 말, 소, 염소, 닭, 토끼 및 기니아 피그로부터 선택된 동물에서 발현된 단백질에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 포유류 단백질에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 비포유류 단백질에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 식물에서 발현된 단백질에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 원핵세포 단백질에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 진핵세포 단백질에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 효모에 의해 발현된 단백질에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다.
따라서, 다양한 비제한적인 실시형태에서, 키메라 수용체 결합 단백질은 효소를 포함할 수 있다. 효소는 뉴클레아제일 수 있다. 뉴클레아제는 리보뉴클레아제일 수 있다. 리보뉴클레아제는 원핵세포일 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 기질을 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 바스타를 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 바르나제를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 수용체 결합 단백질은 섬유성 단백질, 접착 분자 단백질 및 막 단백질로부터 선택된 단백질일 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 스트렙토코커스 피요게네스 필린 단백질을 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 스트렙토코커스 피요게네스 피브로넥틴 결합 단백질(SpyCatcher)을 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 단백질 또는 시냅토브레빈, SNAP25 및 신탁신으로부터 선택된 단백질의 일부, 및 이의 일부(예를 들어, 알파 나선)를 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 RNAseI를 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 단백질은 HuS 어댑터 단백질을 포함할 수 있다.
키메라 수용체 결합 펩타이드
몇몇 실시형태에서, CAR-ID는 펩타이드, 예를 들어 CAR 결합 펩타이드를 포함하거나 이것으로 이루어진다. CAR-ID는 키메라 항원 수용체(CAR)에 의해 결합될 수 있는 펩타이드일 수 있다. CAR-ID는 예를 들어 제PCT/US2014/060684호 또는 제PCT/US2016/027997호(이들은 각각 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 개시된 임의의 "펩타이드 항원", "펩타이드 네오-에피토프(PNE)" 또는 "키메라 항원 결합 펩타이드 항원(CAR-BP)"일 수 있다.
CAR-ID는 일반적으로 펩타이드에 비해 인간에서 높은 단백질분해 안정성 및 낮은 면역원성을 가질 수 있다. CAR-ID는 호르몬, 사이토카인, 케모카인, 성장 인자, 세포 부착 분자, 신호전달 펩타이드, 수용체, 세포 표면 펩타이드 및 이의 단편으로부터 선택될 수 있다. CAR-ID는 펩토이드일 수 있다. CAR-ID는 펩타이드 핵산(PNA)일 수 있다. CAR-ID는 리간드 또는 이의 단편일 수 있다. 리간드는 호르몬 리간드일 수 있다. 리간드는 펩타이드 리간드일 수 있다. CAR-ID는 환형 펩타이드일 수 있다. CAR-ID는 선형 펩타이드일 수 있다.
CAR-ID는 약 2개 내지 약 10개, 약 10개 내지 약 20개, 약 20개 내지 약 30개, 약 30개 내지 약 40개, 약 40개 내지 약 50개, 약 50개 내지 약 60개, 약 60개 내지 약 70개, 약 70개 내지 약 80개, 및 약 80개 내지 약 90개의 아미노산의 길이를 가질 수 있다. CAR-ID는 항원일 수 있다. CAR-ID는 에피토프일 수 있다. CAR-ID는 비선형 에피토프일 수 있다. CAR-ID는 제2 펩타이드를 추가로 포함할 수 있다.
CAR-ID는 항체 또는 항체 단편을 포함하지 않을 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 항체 단편의 10개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 항체 단편의 12개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 항체 단편의 15개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 항체 단편의 20개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 항체 단편의 22개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 항체 단편의 30개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 항체 단편의 파라토프를 포함하지 않을 수 있다.
CAR-ID는 비천연 발생 펩타이드를 포함할 수 있다. CAR-ID는 합성 펩타이드를 포함할 수 있다. CAR-ID는 비동물 펩타이드(예를 들어, 동물에서 발현되지 않는 펩타이드)를 포함할 수 있다. CAR-ID는 비포유류 펩타이드를 포함할 수 있다. CAR-ID는 비인간 펩타이드를 포함할 수 있다. 펩타이드는 임의의 6개의 계(동물계, 식물계, 균류, 원생동물, 고세균/고세균 박테리아 및 박테리아/진정세균)로부터의 임의의 생물, 바이러스 및 프리온으로부터 유래될 수 있다. 따라서, 펩타이드는 인간, 포유류, 비포유류, 식물, 효모, 박테리아, 파충류, 조류 곤충, 진핵생물 또는 원핵생물로부터 유래되거나 이들로 이루어지거나 이들을 포함할 수 있다. 용어 특정한 생물학적 유기체(예를 들어, 포유류, 효모 등)"로부터 유래된 펩타이드"는, 서열이 변형, 즉 아미노산의 하나 이상의 부가, 결실, 삽입 또는 치환을 포함하도록 변형된다는 것을 제외하고는, 이러한 생물학적 유기체에 존재하는 것으로 공지된 네이티브 펩타이드의 서열과 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 펩타이드를 기재하도록 의도된다. 몇몇 실시형태에서, 서열은 예를 들어 인간에 대한 펩타이드의 면역원성을 감소시키도록 인간화에 의해 변형된다. 몇몇 실시형태에서, 생물학적 유기체(예를 들어, 진핵생물, 원핵생물, 포유류, 인간, 효모 등)로부터 유래된 펩타이드는 그 생물학적 유기체에 네이티브인 펩타이드에 적어도 약 80% 동일하거나, 그 생물학적 유기체에 네이티브인 펩타이드에 적어도 약 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99% 초과 동일한 비천연 서열을 포함한다.
CAR-ID는 myc 태그를 포함할 수 있다. CAR-ID는 His 태그를 포함할 수 있다. CAR-ID는 HA 태그를 포함할 수 있다. CAR-ID는 페리디닌 엽록소 단백질 복합체를 포함할 수 있다. CAR-ID는 녹색 형광 단백질(green fluorescent protein: GFP)을 포함할 수 있다. CAR-ID 적색 형광 단백질(red fluorescent protein: RFP)을 포함할 수 있다. CAR-ID는 피코에리트린(phycoerythrin: PE)을 포함할 수 있다. CAR-ID는 스트렙타비딘을 포함할 수 있다. CAR-ID는 아비딘을 포함할 수 있다. CAR-ID는 겨자무 과산화효소(HRP)를 포함할 수 있다. CAR-ID는 알칼리 포스파타제를 포함할 수 있다. CAR-ID는 글루코스 산화효소를 포함할 수 있다. CAR-ID는 글루타티온-S-전환효소(GST)를 포함할 수 있다. CAR-ID는 말토스 결합 단백질을 포함할 수 있다. CAR-ID는, 비제한적인 예로서, c-myc 태그, 폴리히스티딘 태그, V5, VSVG, softag 1, softag 3, 익스프레스 태그, S 태그, 팔미토일화, 나이트록실화, SUMO 태그, 티오레독신, 폴리(NANP), 폴리-Arg, 칼모듈린 결합 단백질, PurF 단편, 케토스테로이드 이성질체효소, PaP3.30, TAF12 히스톤 폴드 도메인, FKBP-태그, SNAP 태그, Halo-태그, RNAse I로부터의 펩타이드일 수 있다. CAR-ID는 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 프로테아제 절단 부위는 트롬빈, Xa 인자, TEV 프로테아제 또는 엔테로키나제에 의해 인식될 수 있다.
CAR-ID는 작은 선형 친수성 펩타이드일 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 링커를 포함할 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 친수성 표적 펩타이드(HTP)일 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 GGGGSDYKDDDDK(서열 번호 38)의 서열을 포함할 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 GGGGSDYKDDDDKP(서열 번호 39)의 서열을 포함할 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 본질적으로 GGGGSDYKDDDDK(서열 번호 38)의 서열로 이루어질 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 본질적으로 GGGGSDYKDDDDKP(서열 번호 39)의 서열로 이루어질 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 서열 번호 38 또는 39와 적어도 약 50% 동일할 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 서열 번호 38 또는 39와 적어도 약 60% 동일할 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 서열 번호 38 또는 39와 적어도 약 70% 동일할 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 서열 번호 38 또는 39와 적어도 약 80% 동일할 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 서열 번호 38 또는 39와 적어도 약 85% 동일할 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 서열 번호 38 또는 39와 적어도 약 90% 동일할 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 당해 분야에 공지된 다른 펩타이드에 비해 환원된 비특이적 결합을 가질 수 있다. 작은 선형 친수성 펩타이드는 본 명세서에 개시된 다른 펩타이드에 비해 비특이적 결합 및 감소된 융합 단백질 불안정성을 가질 수 있다. CAR-ID는 FLAG(등록상표) 태그(DYKDDDDK 서열 번호 40) 또는 유도체 또는 이의 동족체를 포함할 수 있다.
CAR-ID는 천연 발생 펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 펩타이드는 인간 펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. CAR-ID는 내인성 펩타이드 또는 네이티브 펩타이드에 반대로 비내인성 펩타이드 또는 비네이티브 펩타이드일 수 있다. 내인성 펩타이드는 인간 몸에 천연으로 또는 보통 존재하는(예를 들어, 바이오틴, 단일클론 항체의 Fc) 또는 인간 몸이 통상적으로 마주치는 어떤 것일 수 있다. 따라서, 비내인성 펩타이드는 외래 또는 인간 몸에 천연으로 존재하지 않는 어떤 것일 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 스위치는 생체내 보통 마주치는 CAR-ID로서 GCN4 펩타이드를 사용할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 이러한 비천연 펩타이드는 sCAR-스위치 상호작용의 직각도를 유지한다. CAR-ID는 비면역원성 펩타이드(예를 들어, 인간 몸에서 면역 반응을 발생시키지 않거나 무시할만한 면역 반응을 발생시키는 것으로 공지된 펩타이드)일 수 있다.
CAR-ID는 침팬지, 원숭이, 래트, 마우스, 조류, 어류, 돼지, 말, 소, 염소, 닭, 토끼 및 기니아 피그로부터 선택된 동물에서 발현된 펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. CAR-ID는 포유류 펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. CAR-ID는 비포유류 펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. CAR-ID는 식물에서 발현된 펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. CAR-ID는 박테리아에서 발현된 펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. CAR-ID는 원핵세포 펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. CAR-ID는 진핵세포 펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. CAR-ID는 효모에 의해 발현된 펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다.
CAR-ID는 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드 또는 유도체 또는 이의 동족체를 포함할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 (문헌[Berger et al. FEBS Letters 450 (1999) 149-153](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 정의된) GCN4(7P14P) 펩타이드 서열을 포함할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 RMKQLEPKVEELLPKNYHLENEVARLKKLVGER(서열 번호 36)의 서열을 포함할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 NYHLENEVARLKKL(서열 번호 26)의 서열을 포함할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 RMKQLEPKVEELLPKNYHLENEVARLKKLVGER(서열 번호 36)의 서열로 이루어질 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 NYHLENEVARLKKL(서열 번호 26)의 서열로 이루어질 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 서열 번호 36의 부분을 포함할 수 있다. 서열 번호 36의 부분은 적어도 4개의 아미노산 길이일 수 있다. 서열 번호 36의 부분은 약 4개, 약 5개, 약 6개, 약 7개, 약 8개, 약 9개, 약 10개, 약 11개, 약 12개 또는 약 13개의 아미노산 길이일 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 4개의 아미노산 길이인 서열 번호 36의 부분, 또는 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 또는 13개의 아미노산 길이인 서열 번호 36의 부분을 포함할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 NYHLENEVARLKK(서열 번호 245)의 서열을 포함할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 NYHLENEVARLK(서열 번호 145)의 서열을 포함할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 서열 번호 26 또는 36의 하나 또는 둘 다와 적어도 약 50% 동일할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 서열 번호 26 또는 36의 하나 또는 둘 다와 적어도 약 60% 동일할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 서열 번호 26 또는 36의 하나 또는 둘 다와 적어도 약 70% 동일할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 서열 번호 26 또는 36의 하나 또는 둘 다와 적어도 약 80% 동일할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 서열 번호 26 또는 36의 하나 또는 둘 다와 적어도 약 85% 동일할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 서열 번호 26 또는 36과 하나 또는 둘 다와 적어도 약 90% 동일할 수 있다. CAR-EC 스위치는 효모 GCN4 펩타이드 및 하나 이상의 링커를 포함할 수 있다. CAR-EC 스위치는 서열 번호 37을 포함할 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 항-GCN4 항체에 대한 최소 결합 에피토프를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드는 항-GCN4 항체 scFv 52SR4(문헌[Zahnd , C., et al., (2004), The Journal of Biological Chemistry 279, 18870-18877](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재된), 또는 여기서 포함된 CDR 서열의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개를 포함하는 항체(CDR1 VL: RSSTGAVTTSNYAS; CDR2 VL: GTNNRAP; CDR3 VL: ALWYSNHWV; CDR1 VH: DYGVN; CDR2 VH: VIWGDGITDYNSALKS; CDR3 VH: GLFDY)에 대한 결합 에피토프(예를 들어, 최소 결합 에피토프)를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. CAR-ID는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, X1은 K이거나 또는 존재하지 않는다. 몇몇 실시형태에서, X2는 K, A 및 G로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, X3은 L, A 및 G로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, CAR-ID는 서열 번호 139, 154-163. KNYHLENEVARLKKL(서열 번호 154); KNYHLENEVARLKAL(서열 번호 155); KNYHLENEVARLKGL(서열 번호 156); KNYHLENEVARLKAA(서열 번호 157); KNYHLENEVARLKGG(서열 번호 158); NYHLENEVARLKKL(서열 번호 159); NYHLENEVARLKAL(서열 번호 160); NYHLENEVARLKGL(서열 번호 161); NYHLENEVARLKAA(서열 번호 162); NYHLENEVARLKGG(서열 번호 163); 및 LLPKNYHLENEVARLKKL(서열 번호 139) 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, 비제한적인 예로서, CAR-ID는 아이소펩태그(TDKDMTITFTNKKDAE; 서열 번호 41)를 포함할 수 있다. CAR-ID는 SpyTag(AHIVMVDAYKPTK; 서열 번호 42)를 포함할 수 있다. CAR-ID는 SNARE를 포함할 수 있다. CAR-ID는 Hu-tag를 포함할 수 있다. 키메라 수용체 결합 파트너는 제2 알파 나선 펩타이드에 결합하는 제1 알파 나선 펩타이드를 포함할 수 있어서, 제1 알파 나선 및 제2 알파 나선이 결합될 때 꼬인 코일 구조를 형성할 수 있다. CAR-ID는 E4 펩타이드(EVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEK; 서열 번호 44)를 포함할 수 있다. CAR-ID는 K4 펩타이드(KVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE; 서열 번호 43)를 포함할 수 있다. CAR-ID는 변형된 E4 펩타이드를 포함할 수 있다. CAR-ID는 변형된 K4 펩타이드를 포함할 수 있다. CAR-ID는 서열 번호 44의 서열을 갖는 펩타이드로 이루어질 수 있다. CAR-ID는 서열 번호 43의 서열을 갖는 펩타이드로 이루어질 수 있다. CAR-ID는 서열 번호 43과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 이것 초과의 동일성을 갖는 서열을 갖는 펩타이드를 포함할 수 있다. CAR-ID는 서열 번호 44와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 이것 초과의 동일성을 갖는 서열을 갖는 펩타이드를 포함할 수 있다. CAR-ID는 하기 K4 또는 E4 펩타이드(서열 번호 45 내지 58) 중 어느 하나와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 이것 초과의 동일성을 갖는 펩타이드를 포함할 수 있다:
Figure pct00001
.
CAR-ID는 서열 번호 45 내지 58의 어느 하나의 서열을 갖는 펩타이드를 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 표적화 모이어티 및 서열 번호 45, 47, 48, 51, 52, 55 및 57 중 어느 하나의 서열을 갖는 펩타이드를 포함하는 CAR-ID를 포함하는 스위치는 본 발명에 따른 용도를 위해 서열 번호 65의 서열을 갖는 CAR과 쌍을 지을 수 있다(예를 들어, 이러한 스위치는 본 명세서에 기재된 치료를 실행하도록 이러한 CAR을 발현하는 효과기 세포와 조합되어 사용될 수 있다). 본 명세서에 기재된 표적화 모이어티 및 서열 번호 46, 49, 50, 53, 54, 56 및 58 중 어느 하나의 서열을 갖는 펩타이드를 포함하는 CAR-ID를 포함하는 스위치는 본 발명에 따른 용도를 위해 서열 번호 64의 서열을 갖는 CAR과 쌍을 지을 수 있다(예를 들어, 이러한 스위치는 본 명세서에 기재된 치료를 실행하도록 이러한 CAR을 발현하는 효과기 세포와 조합되어 사용될 수 있다).
또한, 비제한적인 예로서, CAR-ID는 마우스 코로닌 1A 단백질의 알파 나선을 포함할 수 있다. 또한, 비제한적인 예로서, CAR-ID는 cAMP 의존적 단백질 키나제 A의 이합체화 및 도킹 도메인(dimerization and docking domain: DDD)을 포함할 수 있다. CAR-ID는 A-키나제 앵커링 단백질(A-kinase anchoring protein: AKAP)의 앵커링 도메인(anchoring domain: AD)을 포함할 수 있다. CAR-ID는 DDD1(서열 번호 60)을 포함할 수 있다. CAR-ID는 AD1(서열 번호 59)을 포함할 수 있다. CAR-ID는 DDD2(서열 번호 62)를 포함할 수 있다. CAR-ID는 AD2(서열 번호 61)를 포함할 수 있다.
또한, 비제한적인 예로서, CAR-ID는 cAMP 의존적 단백질 키나제 A의 이합체화 및 도킹 도메인(예를 들어, DDD1 또는 DDD2)을 포함할 수 있고, 여기서 DDD는 DDD와 키메라 수용체(예를 들어, 비-항체 세포외 도메인) 상의 AD 파트너 사이의 다이설파이드(즉, 이황화) 결합을 형성하는 시스테인에 의해 변형된다. CAR-ID는 AD(예를 들어, AD1 또는 AD2)를 포함할 수 있고, 여기서 AD는 AD와 키메라 수용체(예를 들어, 비-항체 세포외 도메인) 상의 DDD 파트너 사이의 이황화 결합을 형성하는 시스테인에 의해 변형된다. 이 이황화 결합은 AD1과 DDD1 또는 AD2와 DDD2 사이의 공유 상호작용을 형성할 수 있다. 이는 CAR-ID에 대한 비-항체 펩타이드의 친화도의 증가, 또는 그 반대에 유리할 수 있다.
키메라 수용체 결합 소분자 .
몇몇 실시형태에서, CAR-ID는 소분자를 포함하거나 이것으로 이루어진다. 소분자는 펩타이드를 포함하지 않을 수 있다. 소분자는 아마이드 결합에 의해 연결된 2개 이상의 아미노산을 포함하지 않을 수 있다. 소분자는 단백질 또는 펩타이드에 의해 결합된 소분자일 수 있다. 소분자는 단백질 또는 펩타이드에 의해 결합된 소분자일 수 있고, 여기서 단백질 또는 펩타이드는 키메라 수용체의 비항체 세포외 도메인에 존재한다. 소분자는 높은 친화도로 단백질 또는 펩타이드에 의해 결합된 소분자일 수 있다. 소분자는 약물일 수 있다. 소분자는 무기 화합물일 수 있다. 소분자는 유기 화합물일 수 있다. 소분자는 천연 발생일 수 있다. 소분자는 천연 발생이 아닐 수 있다. 소분자는 합성일 수 있다. 소분자는 스테로이드, 비타민, 비타머, 리간드, 수용체 작용제, 수용체 길항제, 효소 저해제, DNA 압타머, 펩타이드 핵산(peptide nucleic acid: PNA), PNA 압타머, 펩토이드, 기질, 기질 유사체, 대사물질, 항생제, 단당류, 이당류, 지질, 지방산, 핵산, 알칼로이드, 글라이코사이드, 펜진, 폴리케타이드, 터펜 및 테트라피롤, 및 이의 일부로부터 선택될 수 있다. 비제한적인 예로서, 소분자는 DOTA, 다이나이트로페놀, 퀴논, 바이오틴, 아닐린, 아트라진, 아닐린-유도체, o-아미노벤조산, p-아미노벤조산, m-아미노벤조산, 하이드랄라진, 할로탄, 다이곡시게닌, 벤젠 아르소네이트, 락토스, 트라이나이트로페놀, 바이오틴 또는 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
소분자는 비타민 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다. 비타민은, 비제한적인 예로서, 비타민 A, 비타민 B, 비타민 C, 비타민 D, 비타민 E 및 비타민 K로부터 선택될 수 있다. 비타민은 비타민 C일 수 있다. 비타민은 비타민 D일 수 있다. 비타민은 엽산 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다. 소분자는 비타머를 포함할 수 있다. 소분자는 비타민 대사물질 또는 비타민 전구체를 포함할 수 있다. 비타머, 비제한적인 예로서, 레티놀, 레티날, 베타 카로텐, 카로테노이드, 티아민, 리보플라빈, 니아신, 니아신아마이드, 판토텐산, 피리독신, 피리독사민, 피리독살, 바이오틴, 엽산, 폴린산, 사이아노코발라민, 하이드록시코발라민, 메틸코발라민, 아스코르브산, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤, 토코페롤, 토코트리엔올, 필로퀴논 및 메나퀴논 또는 이의 유도체로부터 선택될 수 있다. 소분자는 항산화제 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다.
소분자는 효소 저해제일 수 있다. 소분자는, 비제한적인 예로서, 타이로신 키나제 저해제, 프로테아제 저해제, 성장 인자 수용체 저해제, 호르몬 수용체 저해제, 야누스 키나제 저해제, 역형성 림프종 키나제(anaplastic lymphoma kinase: ALK) 저해제, Bcl-2 저해제, 폴리 ADP 리보스 중합효소(poly ADP ribose polymerase: PARP) 저해제, PI3K 저해제, Braf 저해제, MAP 키나제 저해제, 사이클린 의존적 키나제 저해제 및 열 충격 단백질 저해제로부터 선택될 수 있다. 효소 저해제는 아파티닙, 보르테조밉, 이마티닙, 이브루티닙, 셀릭시클립, 보수티닙, 카보잔티닙, 크리조티닙, 다브라페닙, 다사티닙, 독소루비신, 에를로티닙, 에버롤리무스, 게피티닙, 이마티닙, 이니파립, 라파티닙, LEE011, LGX818, 밀로티닙, 오바토클락스, 올라파립, 파조파닙, PD-0332991, 페리포신, 포나티닙, 레고라페닙, 룩솔리티닙, 살리노마이신, 소라페닙, 수니티닙, 타목시펜, 템시롤리무스, 토파시티닙, 트라메티닙, 반데타닙 및 베무라페닙 또는 이의 유도체로부터 선택될 수 있다.
소분자는 약 1000Da 미만, 1100Da, 1200Da, 1300Da, 1400Da, 1500Da, 1600Da, 1700Da, 1800Da, 1900,Da, 2000Da, 2100Da, 2200Da, 2300Da, 2400Da, 2500Da, 2600Da, 2700Da, 2800Da, 2900Da 또는 약 3000Da 미만일 수 있다. 스위치는 약 1200Da 미만일 수 있다. 스위치는 약 1500Da 미만일 수 있다. CAR-EC 스위치는 약 2000Da 미만일 수 있다.
소분자는 약 10-8m, 약 10-9m, 약 10-10m의 차수의 크기를 가질 수 있다. 소분자는 약 10-7m 미만의 크기를 가질 수 있다. 소분자는 약 10-8m 미만의 크기를 가질 수 있다. 소분자는 약 10-9m 미만의 크기를 가질 수 있다. 소분자는 약 10-10m 미만의 크기를 가질 수 있다. 소분자는 약 10-11m 미만의 크기를 가질 수 있다. 소분자는 이의 가장 넓은 치수에서 약 10㎚ 미만, 약 20㎚ 미만, 약 30㎚ 미만, 약 40㎚ 미만, 약 50㎚ 미만, 약 60㎚ 미만, 약 70㎚ 미만, 약 80㎚ 미만, 약 90㎚ 미만, 약 100㎚ 미만, 약 110㎚ 미만, 약 120㎚ 미만, 약 130㎚ 미만, 약 140㎚ 미만, 약 150㎚ 미만, 약 160㎚ 미만, 약 170㎚ 미만, 약 180㎚ 미만, 약 190㎚ 미만 또는 약 200㎚ 미만 넓이일 수 있다. 소분자는 이의 가장 넓은 치수에서 약 100㎚ 미만, 약 200㎚ 미만, 약 300㎚ 미만, 약 400㎚ 미만, 약 500㎚ 미만, 약 600㎚ 미만, 약 700㎚ 미만, 약 800㎚ 미만, 약 900㎚ 미만 또는 약 1000㎚ 미만 넓이일 수 있다.
CAR-ID는 합텐을 포함할 수 있다. CAR-ID는 더 큰 캐리어 분자, 예컨대 단백질, 항체 또는 항체 단편에 부착될 때 면역 반응을 유도할 수 있다. CAR-ID는 플루오레세인 아이소티오사이아네이트(FITC) 또는 이의 유도체일 수 있다. CAR-ID는 바이오틴을 포함할 수 있다. CAR-ID는 다이나이트로페놀을 포함할 수 있다.
대안적으로, CAR-ID는 합텐을 포함하지 않을 수 있다. CAR-ID는 스테로이드, 비타민, 비타머, 대사물질, 항생제, 단당류, 이당류, 지질, 지방산, 핵산, 알칼로이드, 글라이코사이드, 페나진, 폴리케타이드, 터펜, 및 테트라피롤, 및 이의 일부, 및 이의 조합으로부터 선택될 수 있다. CAR-ID는 페니실린 약물 또는 이의 유도체일 수 있다.
CAR-ID는 표적화 모이어티에 연결 및/또는 접합될 수 있다. 표적화 모이어티는 표적화 항체 또는 표적화 항체의 항원 결합 부분일 수 있고, CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분의 아미노산에 연결 및/또는 접합될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분의 아미노산은 비천연 아미노산일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 본 명세서에 개시된 임의의 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 서열 번호 17 내지 25로부터 선택된 경쇄를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 서열 번호 17 내지 25로부터 선택된 경쇄를 포함할 수 있고, 비천연 아미노산은 표 1에 기재된 각각의 부위에 위치할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 서열 번호 2 내지 15로부터 선택된 중쇄를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 서열 번호 2 내지 15로부터 선택된 중쇄를 포함할 수 있고, 비천연 아미노산은 표 1에 기재된 각각의 부위에 위치할 수 있다.
[표 1]
Figure pct00002
표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 항-CD20 항체 또는 항-CD20 항체 단편일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 항-CD22 항체 또는 항-CD22 항체 단편일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 항-CD33 항체 또는 항-CD33 항체 단편일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 항-CD123 항체 또는 항-CD123 항체 단편일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 항-CLL1 항체 또는 항-CLL1 항체 단편일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 항-CEA 항체 또는 항-CEA 항체 단편일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 항-Her2 항체 또는 항-Her2 항체 단편일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 항-BCMA 항체 또는 항-BCMA 항체 단편일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 항-CS1 항체 또는 항-CS1 항체 단편일 수 있다. 표적화 모이어티는 T 세포 수용체일 수 있다. 표적화 모이어티는 가용성 T 세포 수용체일 수 있다. 표적화 가용성 T 세포 수용체는 MHC 제한된 NY-ESO-1 펩타이드에 결합할 수 있다.
표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 서열 번호 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267로부터 선택된 경쇄를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 서열 번호 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267로부터 선택된 경쇄를 포함할 수 있고, 비천연 아미노산은 표 2에 기재된 각각의 부위에 위치할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 서열 번호 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 268로부터 선택된 중쇄를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 서열 번호 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 268로부터 선택된 중쇄를 포함할 수 있고, 비천연 아미노산은 표 2에 기재된 각각의 부위에 위치할 수 있다.
[표 2]
Figure pct00003
하나 이상의 비천연 아미노산은 20개의 천연 아미노산 중 1개에 대해 암호화하지 않는 코돈에 의해 암호화될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 논센스 코돈(중지 코돈)에 의해 암호화될 수 있다. 중지 코돈은 앰버 코돈일 수 있다. 앰버 코돈은 UAG 서열을 포함할 수 있다. 본 명세서에서, "UAG" 및 "TAG"는 앰버 코돈을 참조하여 상호 교환되어 사용될 수 있다. 중지 코돈은 오커 코돈일 수 있다. 오커 코돈은 UAA 서열을 포함할 수 있다. 중지 코돈은 오팔 또는 앰버 코돈일 수 있다. 오팔 또는 앰버 코돈은 UGA 서열을 포함할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 4개 염기 코돈에 의해 암호화될 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산은 p-아세틸페닐알라닌(pAcF 또는 pAcPhe)일 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 셀레노시스테인일 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 p-플루오로페닐알라닌(pFPhe)일 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 p-아지도페닐알라닌(pAzF), p-아지도메틸페닐알라닌(pAzCH2F), p-벤조일페닐알라닌(pBpF), p-프로파길옥시페닐알라닌(pPrF), p-요오도페닐알라닌(pIF), p-사이아노페닐알라닌(pCNF), p-카복실메틸페닐알라닌(pCmF), 3-(2-나프틸)알라닌(NapA), p-보로노페닐알라닌(pBoF), o-나이트로페닐알라닌(oNiF), (8-하이드록시퀴놀린-3-일)알라닌(HQA), 셀레노시스테인 및 (2,2'-바이피리딘-5-일)알라닌(BipyA)을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 4-(6-메틸-s-테트라진-3-일)아미노페닐알라닌일 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산은 베타베타-아미노산(베타베타3 및 베타베타2), 호모-아미노산, 프롤린 및 피류브산 유도체, 3-치환된 알라닌 유도체, 글라이신 유도체, 고리-치환된 페닐알라닌 및 타이로신 유도체, 선형 코어 아미노산, 다이아미노산, D-아미노산, N-메틸 아미노산, 또는 이들의 조합일 수 있다.
비천연 아미노산의 추가적인 예는 1) 다양한 치환된 타이로신 및 페닐알라닌 유사체, 예컨대 O-메틸-L-타이로신, p-아미노-L-페닐알라닌, 3-나이트로-L-타이로신, p-나이트로-L-페닐알라닌, m-메톡시-L-페닐알라닌 및 p-아이소프로필-L-페닐알라닌; 2) 광 가교결합될 수 있는 아릴 아자이드 및 벤조페논 기를 갖는 아미노산; 3) 아세틸-L-페닐알라닌 및 m-아세틸-L-페닐알라닌, O-알릴-L-타이로신, O-(2-프로피닐)-L-타이로신, p-에틸티오카보닐-L-페닐알라닌 및 p-(3-옥소뷰타노일)-L-페닐알라닌을 포함하는 고유한 화학 반응성을 갖는 아미노산; 4) p-요오도 및 p-브로모-L-페닐알라닌을 포함하는 X선 결정학에서 페이징(phasing)하기 위한 중-원자 함유 아미노산; 5) 레독스-활성 아미노산 다이하이드록시-L-페닐알라닌; 6) b-N-아세틸글루코사민-O-세린 및 a-N-아세틸갈락토사민-O-트레오닌을 포함하는 글라이코실화 아미노산; 7) 나프틸, 단실 및 7-아미노쿠마린 측쇄를 갖는 형광 아미노산; 8) 아조벤젠 및 나이트로벤질 Cys, Ser 및 Tyr 측쇄를 갖는 광 절단 가능한 및 광 이성질체화 가능한 아미노산; 9) 포스포타이로신 모방체 p-카복시메틸-L-페닐알라닌; 10) 글루타민 동족체 호노글루타민; 및 11) 2-아미노옥탄산을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 비천연 아미노산은 화학 기를 혼입하도록 변형될 수 있다. 비천연 아미노산은 케톤 기를 혼입하도록 변형될 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산은 적어도 하나의 옥심, 카보닐, 다이카보닐, 하이드록실아민 그룹 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 적어도 하나의 카보닐, 다이카보닐, 알콕시-아민, 하이드라진, 아크릴 알켄, 아크릴 알킨, 사이클로옥틴, 아릴/알킬 아자이드, 노르보르넨, 사이클로프로펜, 트랜스-사이클로옥텐, 또는 테트라진 작용기 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산은 당해 분야에 공지된 방법에 의해 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID로 혼입될 수 있다. 세포 기반 또는 세포 비함유 시스템은 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID의 유전자 서열을 변경하여서, 하나 이상의 비천연 아미노산을 갖는 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID를 생성하도록 사용될 수 있다. 영양요구성 균주는 조작된 tRNA 및 합성효소 대신에 사용될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 하나 이상의 천연 아미노산의 선택적 반응을 통해 생성될 수 있다. 선택적 반응은 하나 이상의 효소에 의해 매개될 수 있다. 하나의 비제한적인 예에서, 하나 이상의 시스테인과 폼일글라이신 생성 효소(FGE)의 선택적 반응은 하나 이상의 폼일글라이신을 생성할 수 있다(문헌[Rabuka et al., Nature Protocols 7:1052-1067 (2012)](그 전문이 참고로 포함됨)을 참조한다).
하나 이상의 비천연 아미노산은 링커를 형성하도록 화학 반응에 참여할 수 있다. 링커를 형성하기 위한 화학 반응은 생물직교 반응일 수 있다. 링커를 형성하기 위한 화학 반응은 클릭 화학일 수 있다.
추가적인 비천연 아미노산은 Liu 등의 문헌(Annu Rev Biochem, 79:413-44, 2010), Wang 등의 문헌(Angew Chem Int Ed, 44:34-66, 2005) 및 PCT 출원 제PCT/US2012/039472호, 제PCT/US2012/039468호, 제PCT/US2007/088009호, 제PCT/US2009/058668호, 제PCT/US2007/089142호, 제PCT/US2007/088011호, 제PCT/US2007/001485호, 제PCT/US2006/049397호, 제PCT/US2006/047822호 및 제PCT/US2006/044682호(이들은 모두 그 전문이 참고로 포함됨)에 개시되어 있다.
CAR-EC 스위치의 제2 영역: 표적화 모이어티.
CAR-EC 스위치는 CAR-ID 및 표적화 모이어티를 포함한다.
표적화 모이어티는 표적 상의 세포 표면 분자에 결합하지 않는다. 세포 표면 분자는 항원을 포함할 수 있다. 세포 표면 분자는 단백질, 지질 모이어티, 당단백질, 당지질, 탄수화물, 다당류, 핵산, MHC 결합된 펩타이드, 또는 이들의 조합으로부터 선택될 수 있다. 세포 표면 분자는 박테리아, 바이러스 및 다른 미생물의 부분(예를 들어, 코트, 캡슐, 세포벽, 편모, 섬모 및 독소)을 포함할 수 있다. 세포 표면 분자는 표적 세포에 의해 발현될 수 있다. 세포 표면 분자는 표적 세포에 의해 발현되지 않을 수 있다. 비제한적인 예로서, 세포 표면 분자는 표적 세포가 아니고 표적 세포 또는 표적 세포의 세포 표면 분자에 결합된 세포에 의해 발현된 리간드일 수 있다. 또한, 비제한적인 예로서, 세포 표면 분자는 세포 표면 또는 표적 세포의 세포 표면 수용체에 결합된 독소, 외인성 분자 또는 바이러스 단백질일 수 있다.
표적화 모이어티는 표적화 폴리펩타이드일 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 표적화 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항체 단편은 항체의 항원 결합 부분일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 면역글로불린(Ig)일 수 있다. 면역글로불린은 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, 이의 단편(예를 들어, 항원 결합 단편 또는 부분) 또는 이의 변형으로부터 선택될 수 있다. 면역글로불린은 IgG일 수 있다. IgG는 IgG1일 수 있다. IgG는 IgG2일 수 있다. IgG는 CAR-EC 스위치에 대한 내인성 T 세포 FcR 결합을 조정하기 위한 하나 이상의 Fc 돌연변이를 가질 수 있다. IgG는 FcR 양성 세포의 FcR에 대한 Fc 결합 역량을 제거하기 위한 하나 이상의 Fc 돌연변이를 가질 수 있다. Fc 결합 역량의 제거는 FcR 양성 세포에 대한 CAR-EC의 가교결합에 대한 기회를 감소시킬 수 있고, 여기서 FcR 양성 세포에 대한 CAR-EC의 가교결합은 표적 세포의 부재 하에 CAR-EC를 활성화할 것이다. 그러므로, CAR-EC 스위치에 대한 내인성 T 세포 FcR 결합의 조정은 비효과적인 또는 바람직하지 않은 면역 반응을 감소시킬 수 있다. 하나 이상의 Fc 돌연변이는 글라이코실화 부위를 제거할 수 있다. 하나 이상의 Fc 돌연변이는 E233P, L234V, L235A, delG236, A327G, A330S, P331S, N297Q 및 임의의 이들의 조합으로부터 선택될 수 있다. 하나 이상의 Fc 돌연변이는 IgG1에서일 수 있다. IgG1에서의 하나 이상의 Fc 돌연변이는 L234A, L235A, 또는 둘 다일 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, IgG1에서의 하나 이상의 Fc 돌연변이는 L234A, L235E, 또는 둘 다일 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, IgG1에서의 하나 이상의 Fc 돌연변이는 N297A일 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 하나 이상의 돌연변이는 IgG2에서일 수 있다. IgG2에서의 하나 이상의 Fc 돌연변이는 V234A, V237A, 또는 둘 다일 수 있다.
표적화 항체 또는 항체 단편은 Fc 눌 면역글로불린 또는 이의 단편일 수 있다.
표적화 항체 또는 항체의 항원 결합 부분은 Fab일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 sCAR-T 세포의 중앙 테난트는, 이것이 오직 표적 세포 및 sCAR과 상호작용하고 다른 면역 수용체 또는 세포 유형과 상호작용하지 않는다는 점에서, CAR-ID 그래프팅된 스위치의 직각성이다. 직각성의 결여는 오프 타깃 효과를 야기할 가능성을 갖는다. 따라서, 몇몇 실시형태에서, Fc 도메인의 이의 결여가 Fc 수용체 매개된 오프 타깃 결합의 가능성을 감소시키므로, Fab가 바람직할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 이의 더 작은 크기 및 더 짧은 반감기(IgG에 대한 10-20일대 Fab에 대한 대략 1-5시간)는 임상 번역에서 sCAR-T 세포 활성화에 비해 더 양호한 종양 침투 및 더 높은 일시적 제어를 제공한다. 또한, Fab는 원자가, 오프 속도 또는 조직 분포에서 IgG와 상이할 수 있다.
표적화 항체 단편은 인간, 완전 인간, 인간화된, 인간 조작된, 비인간, 및/또는 키메라 항체일 수 있다. 비인간 항체는 모 비인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지시키면서 인간에 대한 면역원성을 감소시키도록 인간화될 수 있다. 키메라 항체는 별개의 항체에 대해 원래 암호화된 2개 이상의 항체 유전자의 연결을 통해 생성된 항체를 의미할 수 있다. 키메라 항체는 제1 항체로부터의 적어도 하나의 아미노산 및 제2 항체로부터의 적어도 하나의 아미노산을 포함할 수 있고, 여기서 제1 및 제2 항체는 상이하다. 적어도 항체의 일부 또는 항체 단편은 소 종, 인간 종 또는 쥣과 종 기원일 수 있다. 적어도 항체의 일부 또는 항체 단편은 래트, 염소, 기니아 피그 또는 토끼 기원일 수 있다. 적어도 항체의 일부 또는 항체 단편은 인간 기원일 수 있다. 적어도 항체의 일부 또는 항체 단편 항체는 사이아노몰거스 원숭이 기원일 수 있다.
표적화 항체 또는 항체 단편은 포유류, 조류, 어류, 양서류 또는 파충류로부터의 항체 또는 항체 단편에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 포유류는 육식동물, 설치류, 코끼리, 유대목, 토끼, 박쥐, 영장류, 물개, 개미핥기, 고래목, 기제류 및 우제류를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 포유류는 인간, 비인간 영장류, 마우스, 양, 고양이, 개, 소, 말, 염소 또는 돼지일 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치에 포함된 표적화 모이어티는 인간화된다. 몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치에 포함된 표적화 모이어티는 인간화되고, 이것은 CD19에 결합한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 CD19에 특이적으로 결합한다(즉, 실질적인 오프 타깃 결합이 발생하지 않거나 관찰 가능하지 않음). 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항-CD19 항체 또는 항-CD19 항체의 항원 결합 단편이다. 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 항체 또는 인간화된 항-CD19 항체의 항원 결합 단편(예를 들어, 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나)을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항-CD19 쥣과 클론 FMC63 항체의 인간화된 형태를 포함한다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 포함한다.
표적화 항체 또는 항체 단편은, 비제한적인 예로서, CD19, Her2, CLL1, CD33, CD123, EGFR, EGFRvIII, CD20, CD22, CS1, BCMA, CEA 또는 이의 단편으로부터 선택된 표적 항원일 수 있다. 항원은 야생형 항원을 포함할 수 있다. 항원은 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 B 세포 표적화 모이어티일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CD19 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-CD19 항체 또는 항체 단편은 항체 클론 huB4(예를 들어, 서열 번호 223 내지 224 참조), FMC63(예를 들어, 서열 번호 2 내지 15, 17 내지 25, 184 내지 185 참조) 및 1D3(예를 들어, 서열 번호 207 내지 208 참조)으로부터 선택될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CLL1 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-CLL1 항체 또는 항체 단편은 항체 클론 1075.7(예를 들어, 서열 번호 193 내지 194 참조)일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CD123 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-CD123 항체 또는 항체 단편은 항체 클론 32716(예를 들어, 서열 번호 239 내지 240 참조) 및 26292(예를 들어, 서열 번호 241 내지 242 참조)로부터 선택될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CD22 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-CD22 항체 또는 항체 단편은 항체 클론 m972(예를 들어, 서열 번호 211 내지 212 참조) 및 m971(예를 들어, 서열 번호 209 내지 210 참조)로부터 선택될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CD20 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-CD20 항체 또는 항체 단편은 항체 클론 OFA(예를 들어, 서열 번호 219 내지 220 참조), RTX(예를 들어, 서열 번호 215 내지 216 참조) 및 GA101(예를 들어, 서열 번호 217 내지 218 참조)로부터 선택될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-BCMA 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-BCMA 항체 또는 항체 단편은 항체 클론 BCMA-98(예를 들어, 서열 번호 221 내지 222 참조)일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-Her2 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-Her2 항체 또는 항체 단편은 항체 클론 트라스투주맙(예를 들어, 서열 번호 187 내지 188 참조)으로부터 선택될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CS1 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-CS1 항체 또는 항체 단편은 항체 클론 엘로투주맙(예를 들어, 서열 번호 243 내지 244 참조)일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CD33 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-CD33 항체 또는 항체 단편은 항체 클론 hM195(예를 들어, 서열 번호 259 내지 260 참조) 및 HP67.6(예를 들어, 서열 번호 237 내지 238 참조)으로부터 선택될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-EGFR 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-EGFR 항체 또는 항체 단편은 클론 C225(예를 들어, 서열 번호 191 내지 192 참조)일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-EGFRvIII 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-EGFRvIII 항체 또는 항체 단편은 클론 Hu806(예를 들어, 서열 번호 199 내지 200 참조)일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CEA 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항-CEA 항체 또는 항체 단편은 항체 클론 A5B7(예를 들어, 서열 번호 225 내지 226 참조)일 수 있다. 각각의 스위치의 발현은 중쇄 및 경쇄를 요한다. 몇몇 실시형태에서, 각각의 스위치의 발현은 중쇄 및 경쇄 유전자가 하나 이상의 발현 세포(예를 들어, HEK)로 동시 형질주입될 것을 요한다. CAR-ID는 1가 스위치를 제공하도록 오직 중쇄에 위치할 수 있다. CAR-ID는 1가 스위치를 제공하도록 오직 경쇄에 위치할 수 있다. CAR-ID는 2가 스위치를 제공하도록 중쇄 및 경쇄 둘 다에 위치할 수 있다. CAR-ID는 다가 스위치를 제공하도록 중쇄 및 경쇄 둘 다에 위치할 수 있다.
표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CD19 항체 또는 이의 단편일 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-CD22 항체일 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-BCMA 항체 또는 이의 단편일 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-CS1 항체 또는 이의 단편일 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-EGFRvIII 항체 또는 이의 단편일 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-Her2 항체 또는 이의 단편일 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-CD20 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 리툭시맙을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-EGFR 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-CEA 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-CLL1 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-CD123 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-CD33 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 항-EpCAM 항체 또는 이의 단편을 포함하지 않을 수 있다.
표적화 항체 또는 항체 단편은 임의의 상업적으로 이용 가능한 항체로부터 선택될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 아도-트라스투주맙 엠탄신, 알렘투주맙, 베바시주맙, 브렌툭시맙, 베도틴, 겜투주맙, 오조가미신, 이필리무맙, 이브리투모맙, 티욱세탄, 파니투무맙, 세툭시맙, 얼비툭스, 리툭시맙, 트라스투주맙 및 이의 단편으로부터 선택될 수 있다.
표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CD19 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD19 항체의 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CD19 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 184에 기초하거나 이로부터 유래된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화될 수 있다. 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 184와 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD19 항체의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CD19 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 185에 기초하거나 이로부터 유래된 서열에 의해 암호화될 수 있다. 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 185와 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있다.
항-CD19 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 207 및 223으로부터 선택된 서열에 기초하거나 이로부터 유래된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화될 수 있다. 경쇄의 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 207 및 223으로부터 선택된 서열에 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD19 항체의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CD19 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 208 및 224로부터 선택된 서열에 기초하거나 이로부터 유래된 서열에 의해 암호화될 수 있다. 중쇄의 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 208 및 224로부터 선택된 서열과 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있다.
표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CD19 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD19 항체의 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CD19 항체의 경쇄 또는 단편은 서열 번호 25 및 203으로부터 선택된 서열에 기초하거나 이로부터 유래된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 아미노산 서열은 서열 번호 25 및 203과 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD19의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD19 IgG의 중쇄를 포함할 수 있다. 항-CD19 IgG의 중쇄는 서열 번호 15 및 204로부터 선택된 서열에 기초하거나 이로부터 유래된 서열을 포함할 수 있다. 아미노산 서열은 서열 번호 15 및 204로부터 선택된 서열에 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD19 Fab의 중쇄를 포함할 수 있다. 항-CD19 Fab의 중쇄는 서열 번호 205에 기초하거나 이로부터 유래된 서열을 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 205와 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 항-CD19 Fab의 중쇄를 포함할 수 있다.
표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CLL1 항체의 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CLL1 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 193에 의해 암호화될 수 있다. 항-CLL1 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 193과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CLL1 항체의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CLL1 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 194에 의해 암호화될 수 있다. 항-CLL1 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 194와 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다.
표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD22 항체의 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CD22 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 10, 12 및 14로부터 선택된 서열에 의해 암호화될 수 있다. 항-CD22 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 10, 12 및 14로부터 선택된 서열과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD22 항체의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CD22 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 211 및 213으로부터 선택된 서열일 수 있다. 항-CD22 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 211 및 213으로부터 선택된 서열과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다.
표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD20 항체의 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CD20 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 189, 216, 218 및 220으로부터 선택된 서열에 의해 암호화될 수 있다. 항-CD20 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 189, 216, 218 및 220으로부터 선택된 서열과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD20 항체의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CD20 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 190, 215, 217 및 219로부터 선택된 서열일 수 있다. 항-CD20 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 190, 215, 217 및 219로부터 선택된 서열과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치는 서열 번호 190, 215, 217 및 219의 중쇄 및 서열 번호 189, 216, 218 및 220의 경쇄, 또는 이의 동족체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
표적화 항체 또는 이의 단편은 항-Her2 항체의 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-Her2 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 187에 의해 암호화될 수 있다. 항-Her2 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 187과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-Her2 항체의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-Her2 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 188에 의해 암호화될 수 있다. 항-Her2 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 188과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치는 서열 번호 188의 중쇄 및 서열 번호 187의 경쇄, 또는 이의 동족체, 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
표적화 항체 또는 이의 단편은 항-BCMA 항체의 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-BCMA 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 222에 의해 암호화될 수 있다. 항-BCMA 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 222에 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-BCMA 항체의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-BCMA 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 221로부터 선택된 서열에 의해 암호화될 수 있다. 항-BCMA 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 221로부터 선택된 서열과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치는 서열 번호 221의 중쇄 및 서열 번호 222의 경쇄, 또는 이의 동족체, 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CEA 항체의 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CEA 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 226에 의해 암호화될 수 있다. 항-CEA 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 226과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CEA 항체의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CEA 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 225에 의해 암호화될 수 있다. 항-CEA 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 225과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치는 서열 번호 225의 중쇄 및 서열 번호 226의 경쇄, 또는 이의 동족체, 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CS1 항체의 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CS1 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 243에 의해 암호화될 수 있다. 항-CS1 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 243과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CS1 항체의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CS1 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 244에 의해 암호화될 수 있다. 항-CS1 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 244와 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치는 서열 번호 244의 중쇄 및 서열 번호 243의경쇄, 또는 이의 동족체, 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD33 항체의 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CD33 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 195에 의해 암호화될 수 있다. 항-CD33 항체의 경쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 195와 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 표적화 항체 또는 이의 단편은 항-CD33 항체의 중쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-CD33 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 196에 의해 암호화될 수 있다. 항-CD33 항체의 중쇄 또는 이의 단편은 서열 번호 196과 적어도 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치는 서열 번호 196의 중쇄 및 서열 번호 195의 경쇄, 또는 이의 동족체, 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
표적화 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 184 내지 196, 207 내지 236으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 서열 번호 184 내지 196, 207 내지 236으로부터 선택된 뉴클레오타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 184 내지 196, 207 내지 236으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열의 인간화된 형태를 포함할 수 있다.
표적화 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 2 내지 15, 17 내지 25, 27 내지 35, 197 내지 206, 237 내지 244, 246 내지 266으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 서열 번호 2 내지 15, 17 내지 25, 27 내지 35, 197 내지 206, 237 내지 244, 246 내지 266으로부터 선택된 아미노산 서열에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 2 내지 15, 17 내지 25, 27 내지 35, 197 내지 206, 237 내지 244, 246 내지 266으로부터 선택된 아미노산 서열의 인간화된 형태를 포함할 수 있다.
따라서, 표적화 모이어티는 예를 들어 CD19에 결합하는 면역글로불린(Ig)일 수 있다. 면역글로불린은 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, 이의 항원 결합 단편, 및 이의 변형으로부터 선택될 수 있다. 면역글로불린은 IgG일 수 있다. IgG는 IgG1일 수 있다. IgG는 IgG2일 수 있다. IgG는 스위치에 대한 내인성 T 세포 FcR 결합을 조정하기 위한 하나 이상의 Fc 돌연변이를 가질 수 있다. IgG는 FcR 양성 세포의 FcR에 대한 Fc 결합 역량을 제거하기 위한 하나 이상의 Fc 돌연변이를 가질 수 있다. Fc 결합 역량의 제거는 FcR 양성 세포에 대한 키메라 수용체-EC의 가교결합에 대한 기회를 감소시킬 수 있고, 여기서 FcR 양성 세포에 대한 키메라 수용체-EC의 가교결합은 표적 세포의 부재 하에 키메라 수용체-EC를 활성화할 것이다. 그러므로, 키메라 수용체-EC 스위치에 대한 내인성 T 세포 FcR 결합을 조정하는 것은 비효과적인 또는 바람직하지 않은 면역 반응을 감소시킬 수 있다. 하나 이상의 Fc 돌연변이는 글라이코실화 부위를 제거할 수 있다. 하나 이상의 Fc 돌연변이는 E233P, L234V, L235A, delG236, A327G, A330S, P331S, N297Q 및 임의의 이들의 조합으로부터 선택될 수 있다. 하나 이상의 Fc 돌연변이는 IgG1에서일 수 있다. IgG1에서의 하나 이상의 Fc 돌연변이는 L234A, L235A, 또는 둘 다일 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, IgG1에서의 하나 이상의 Fc 돌연변이는 L234A, L235E, 또는 둘 다일 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, IgG1에서의 하나 이상의 Fc 돌연변이는 N297A일 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 하나 이상의 돌연변이는 IgG2에서일 수 있다. IgG2에서의 하나 이상의 Fc 돌연변이는 V234A, V237A, 또는 둘 다일 수 있다.
표적화 모이어티는 CD19, 또는 이의 항원 결합 단편에 결합하는 Fc 눌 면역글로불린일 수 있다.
표적화 모이어티는 인간, 완전 인간, 인간화된, 인간 조작된, 비인간, 및/또는 키메라 항체일 수 있다. 비인간 항체는 모 비인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지시키면서 인간에 대한 면역원성을 감소시키도록 인간화될 수 있다. 키메라 항체는 별개의 항체에 대해 원래 암호화된 2개 이상의 항체 유전자의 연결을 통해 생성된 항체를 의미할 수 있다. 키메라 항체는 제1 항체로부터의 적어도 하나의 아미노산 및 제2 항체로부터의 적어도 하나의 아미노산을 포함할 수 있고, 여기서 제1 및 제2 항체는 상이하다. 표적화 모이어티의 적어도 일부는 소 종, 인간 종 또는 쥣과 종 기원일 수 있다. 표적화 모이어티의 적어도 일부는 래트, 염소, 기니아 피그 또는 토끼 기원일 수 있다. 표적화 모이어티의 적어도 일부는 인간 기원일 수 있다. 표적화 모이어티의 적어도 일부는 사이아노몰거스 원숭이 기원일 수 있다. 표적화 모이어티는 인간화된 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 인간화된 카멜리드일 수 있다.
표적화 모이어티는 예를 들어 포유류, 조류, 어류, 양서류, 파충류로부터의 항-CD19 항체 또는 CD19 결합 항체 단편에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 포유류는 육식동물, 설치류, 코끼리, 유대목, 토끼, 박쥐, 영장류, 물개, 개미핥기, 고래목, 기제류 및 우제류를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 포유류는 인간, 비인간 영장류, 마우스, 양, 고양이, 개, 소, 말, 염소 또는 돼지일 수 있다.
표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화된 항-CD19 항체의 경쇄 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 FMC63 항체의 인간화된 경쇄(서열 번호 25) 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 FMC63 항체의 인간화된 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 인간화된 항-CD19 항체의 경쇄 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 인간화된 항-CD19 항체의 경쇄 또는 항원 결합 단편의 아미노산 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나와 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있다. 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 항체의 중쇄 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화된 항-CD19 항체의 중쇄 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 FMC63 항체의 인간화된 중쇄(서열 번호 15) 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 FMC63 항체의 인간화된 중쇄, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 인간화된 항-CD19 항체의 중쇄 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 인간화된 항-CD19 항체의 중쇄 또는 항원 결합 단편의 아미노산 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나와 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있다. 표적화 모이어티는 FMC63 항체의 인간화된 경쇄 및 인간화된 중쇄(서열 번호 15)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 표적화 모이어티는 서열 번호 17 내지 24 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 34 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 인간화된 경쇄를 포함할 수 있고, 표적화 모이어티는 서열 번호 2 내지 14 중 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 인간화된 중쇄를 포함할 수 있다.
인간화
인간화를 위한 다양한 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치에 포함된 인간화된 항체(예를 들어, 인간화된 항-CD19 항체 또는 항원 결합 단편 또는 이의 일부)를 제조하기 위해 허용 가능하다. 단일클론 항체를 인간화하기 위한 4개의 일반적인 단계가 존재한다. 이것은 (1) 시작 항체 경쇄 및 중쇄 가변 도메인의 뉴클레오타이드 및 예측된 아미노산 서열의 결정; (2) 인간화된 항체의 설계, 즉 인간화 과정 동안 어떠한 항체 프레임워크 영역를 사용할지의 결정; (3) 실제 인간화 방법론/기법; 및 (4) 인간화된 항체의 형질주입 및 발현. 예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호; 제5,807,715호; 제5,866,692호; 제6,331,415호; 제5,530,101호; 제5,693,761호; 제5,693,762호; 제5,585,089호; 및 제6,180,370호를 참조한다.
설치류 또는 변형된 설치류 V 영역 및 인간 불변 도메인에 융합된 이의 연관된 CDR을 갖는 키메라 항체를 포함하는, 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 항원 결합 부위를 포함하는 다수의 "인간화된" 항체 분자가 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌[Winter et al., 1991, Nature 349:293-299; Lobuglio et al., 1989, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86:4220-4224; Shaw et al., 1987, J Immunol. 138:4534-4538; 및 Brown et al., 1987, Cancer Res. 47:3577-3583]을 참조한다. 다른 참고문헌은 적절한 인간 항체 불변 도메인과의 융합 전에 인간 지지 프레임워크 영역(framework region: FR)으로 그래프팅된 설치류 CDR을 기재한다. 예를 들어, 문헌[Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-327; Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-1536; and Jones et al., 1986, Nature 321:522-525]을 참조한다. 또 다른 참고문헌은 재조합으로 조작된 설치류 프레임워크 영역에 의해 지지된 설치류 CDR을 기재한다. 예를 들어, 유럽 특허 공보 제0519596호를 참조한다. 이 "인간화된" 분자는 인간 수혜자에서의 이 모이어티의 치료학적 적용의 기간 및 효과를 제한한 설치류 항-인간 항체 분자를 향한 원치 않는 면역학적 반응을 최소화하도록 설계된다. 예를 들어, 항체 불변 영역은 면역학적으로 불활성이도록(예를 들어, 보체 용해를 촉발하지 않도록) 조작될 수 있다. 예를 들어 PCT 공보 제WO99/58572호; UK 특허 출원 제9809951.8호를 참조한다. 또한 사용될 수 있는 항체를 인간화하는 다른 방법은 문헌[Daugherty et al., 1991, Nucl. Acids Res. 19:2471-2476]에 의해 및 미국 특허 제6,180,377; 제6,054,297; 제5,997,867; 제5,866,692; 제6,210,671; 및 제6,350,861; 및 PCT 공보 WO 제01/27160호에서 개시된다.
더욱 또 다른 대안에서, 완전 인간 항체는 특이적 인간 면역글로불린 단백질을 발현하도록 조작된 상업적으로 이용 가능한 마우스를 사용함으로써 얻어질 수 있다. 더 바람직한 또는 더 튼튼한 면역 반응을 생성하도록 설계된 형질전환 동물은 인간화된 또는 인간 항체의 생성을 위해 또한 사용될 수 있다. 이러한 기술의 예는 Abgenix, Inc.(캘리포니아주 프레몬트)로부터의 Xenomouse(상표명), Medarex, Inc.(뉴욕주 프린스톤)로부터의 HuMAb-Mouse(등록상표) 및 TC Mouse(상표명) 및 Regeneron Pharmaceuticals, Inc.(뉴욕주 타리타운)로부터의 VelocImmune(등록상표) 마우스이다.
대안에서, 항체는 재조합으로 제조되고, 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 이용하여 조작될 수 있다. 또 다른 대안에서, 항체는 파지 디스플레이 기술에 의해 재조합으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,565,332호; 제5,580,717호; 제5,733,743호; 및 제6,265,150호; 및 문헌[Winter et al., 1994, Annu. Rev. Immunol. 12:433-455]을 참조한다. 대안적으로, 파지 디스플레이 기술(McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-553)은 비면역화된 도너로부터의 면역글로불린 가변(V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 시험관내 인간 항체 및 항체 단편을 생성하도록 이용될 수 있다. 이 기법에 따라, 항체 V 도메인 유전자는 섬질 박테리오파지의 메이저 또는 마이너 코트 단백질 유전자, 예컨대 M13 또는 fd로 인프레임 클로닝되고, 파지 입자의 표면 상의 기능성 항체 단편으로서 디스플레이된다. 섬질 입자가 파지 게놈의 단일 가닥 DNA 카피를 함유하므로, 항체의 기능성 특성에 기초한 선택은 이들 특성을 나타내는 항체를 암호화하는 유전자의 선택을 또한 발생시킨다. 따라서, 파지는 B 세포의 특성 중 약간을 모방한다. 파지 디스플레이는 다양한 포맷에서 수행될 수 있다; 예를 들어, 문헌[Johnson, Kevin S, and Chiswell, David J., 1993, Current Opinion in Structural Biology 3:564-571]을 참조한다. V-유전자 분절의 몇몇 소스는 파지 디스플레이에 사용될 수 있다. 문헌[Clackson et al., 1991, Nature 352:624-628]은 면역화된 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 작은 랜덤 조합 라이브러리로부터 항-옥사졸론 항체의 다양한 어레이를 단리시켰다. 비면역화된 인간 도너로부터의 V 유전자의 레퍼토리는 작제될 수 있고, 항원(자가-항원 포함)의 다양한 어레이에 대한 항체는 본질적으로 문헌[Mark et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581-597, 또는 Griffith et al., 1993, EMBO J. 12:725-734]에 의해 기재된 기법에 따라 단리될 수 있다. 천연 면역 반응에서, 항체 유전자는 높은 속도로 돌연변이(체세포 과돌연변이)를 축적시킨다. 도입된 변화 중 일부는 더 높은 친화도를 부여할 것이고, 높은-친화도 표면 면역글로불린을 디스플레이하는 B 세포는 후속하는 항원 시험감염 동안 우선적으로 복제되고 분화된다. 이 천연 과정은 "사슬 셔플링"으로 공지된 기법을 이용함으로써 모방될 수 있다(Marks et al., 1992, Bio/Technol. 10:779-783). 이 방법에서, 파지 디스플레이에 의해 얻은 "1차" 인간 항체의 친화도는 비면역화된 도너로부터 얻은 V 도메인 유전자의 천연 발생 변이체의 레퍼토리(레퍼토리)에 의해 중쇄 및 경쇄 V 영역 유전자를 실질적으로 대체함으로써 개선될 수 있다. 이 기법은 pM-nM 범위에서의 친화도를 갖는 항체 및 항체 단편의 생성을 허용한다. 매우 큰 파지 항체 레퍼토리("모더-오브-올(mother-of-all) 라이브러리"로도 공지됨)를 제조하기 위한 전략은 문헌[Waterhouse et al., 1993, Nucl. Acids Res. 21:2265-2266]에 의해 기재된다. 유전자 셔플링은 또한 설치류 항체로부터 인간 항체를 유도화하도록 사용될 수 있고, 여기서 인간 항체는 시작 설치류 항체에 유사한 친화도 및 특이성을 갖는다. "에피토프 임프린팅"이라고도 칭하는 이 방법에 따라, 파지 디스플레이 기법에 의해 얻은 설치류 항체의 중쇄 또는 경쇄 V 도메인 유전자는 인간 V 도메인 유전자의 레퍼토리에 의해 대체되어서, 설치류-인간 키메라를 생성한다. 항원에 대한 선택은 작용성 항원 결합 부위를 복구할 수 있는 인간 가변 영역의 단리를 발생시키고, 즉 에피토프는 파트너의 선택을 지배(임프린트)한다. 남은 설치류 V 도메인을 대체하기 위해 과정이 반복될 때, 인간 항체가 얻어진다(PCT 공보 WO 제93/06213호 참조). CDR 그래프팅에 의한 설치류 항체의 전통적인 인간화와 달리, 이 기법은 설치류 기원의 프레임워크 또는 CDR 잔기를 갖지 않는 완전히 인간 항체를 제공한다.
특정한 실시형태에서, 항체(예를 들어, 항-CD19 항체)는 본 명세서에서 실시예 1에 기재된 방법에 따라 인간화된다. 간단히, 이 비제한적인 예에서, FMC63 아미노산 서열은 IgBLAST(NCBI)를 이용하여 쥣과 및 인간 생식선 서열과 비교되고, 인간 IGHV4-59에서의 VH 및 VL 도메인과 비교된 쥣과 FMC63 VH 및 VL 도메인 사이의 프레임워크 차이의 돌연변이는 서열이 인간 생식선 서열과 더 동일하게 만들도록 FMC63 서열에서 이루어졌다. 이 과정은 몇몇 인간화된 중쇄 서열(표 3) 및 경쇄 서열(표 4)의 제조를 발생시키고, 이들은 이후 VL에 대한 N 말단 융합으로서 CAR-ID의 부가를 통해 CAR-EC 스위치로 변형된다. 인간화된 중쇄 및 경쇄 서열의 다양한 쌍을 포함하는 인간화된 스위치는 각각 실시예 3 및 4에 기재된 바대로 CD19 발현 세포의 세포독성을 유도하기 위한 효율 및 CD19 결합 친화도에 대해 시험되었다.
링커
본 명세서에 개시된 스위치는 하나 이상의 링커를 포함할 수 있다. 링커는 표적 세포 상의 효과기 세포의 상호작용 또는 효과를 촉진하기에 최적인 스위치 가요성, 길이 또는 기하구조를 제공할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치는 2개 이상의 링커를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치는 3개 이상의 링커를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치는 4개 이상의 링커를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치는 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 링커를 포함할 수 있다. 2개 이상의 링커는 동일할 수 있다. 3개 이상의 링커 중 적어도 2개는 동일할 수 있다. 2개 이상의 링커는 상이할 수 있다. 3개 이상의 링커 중 적어도 2개는 상이할 수 있다.
링커는 펩타이드를 포함할 수 있다. 링커는 경질 펩타이드(예컨대, EAAAKEAAAKEAAAKA(서열 번호 163))를 포함할 수 있다. 링커는 가요성 펩타이드, 예컨대 GGGGS(서열 번호 93, n=1)를 포함할 수 있다. 링커는 서열 번호 93 내지 103, 116 내지 137 및 163으로부터 선택된 서열을 포함할 수 있다. 가요성 및 경질 링커는 당업자에 의해 이해되고, Chen 등에 의해 기재된다. (Adv Drug Deliv Rev. 2013 65: 1357-1369(본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)). 스위치 링커 설계는 스위치의 발현 수율 및 효력에 중요할 수 있다. 링커는 융합 및 그래프팅에 의해 CAR-ID를 표적화 항체 서열에 연결할 수 있다. 링커의 설계는 스위치의 안정성(예를 들어, 열 안정성, 단백질분해 안정성)에 직접적으로 영향을 미칠 수 있다. 링커는 펩타이드가 특히 스위치에 대한 거리 및 상대 배향에서 CAR에 어떻게 제시되는지를 더 기술할 수 있다. 예를 들어, 가요성 링커는 많은 상이한 배향을 제시할 수 있는 한편, 경질 링커는 알파 나선을 형성하고 항체에 대한 펩타이드 에피토프의 오직 하나의 배향을 제시할 수 있다.
링커는 적어도 약 1개, 적어도 약 2개, 적어도 약 3개, 적어도 약 4개, 적어도 약 5개, 적어도 약 6개, 적어도 약 7개, 적어도 약 8개, 적어도 약 9개 또는 적어도 약 10개의 아미노산 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 5개, 약 10개, 약 15개, 약 20개, 약 25개, 약 30개, 약 35개, 약 40개, 약 45개, 약 50개, 약 55개, 약 60개, 약 70개, 약 80개, 약 90개 또는 약 100개의 아미노산을 포함할 수 있다.
링커는 CAR-ID를 표적화 모이어티로 그래프팅시키도록 CAR-ID(예를 들어, 폴리펩타이드 CAR-ID)의 N 말단 또는 C 말단에 위치할 수 있다. 제1 링커는 CAR-ID(예를 들어, 폴리펩타이드 CAR-ID)의 N 말단에 융합될 수 있고, 제2 링커는 CAR-ID의 C 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 CAR-ID의 어느 한 말단에서 링커와 표적화 모이어티의 내부 부위로 그래프팅될 수 있다.
링커는 표적화 모이어티를 CAR-ID로 그래프팅시키도록 표적화 모이어티(예를 들어, 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분)의 N 말단 또는 C 말단에 위치할 수 있다. 제1 링커는 표적화 모이어티의 N 말단에 융합될 수 있고, 제2 링커는 표적화 모이어티의 C 말단에 융합될 수 있다. 표적화 모이어티는 표적화 모이어티의 어느 한 말단에서 링커와 CAR-ID의 내부 부위로 그래프팅될 수 있다.
링커는 서열 (GGGGS)n(서열 번호 93)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 5 또는 이것 초과일 수 있음)으로 이루어질 수 있다. 링커는 서열 (GGS)n(서열 번호 95)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 5 또는 이것 초과일 수 있음)으로 이루어질 수 있다. 링커는 서열 번호 93 내지 103으로부터 선택된 서열을 포함할 수 있다. 링커는 서열 GGGGS(서열 번호 93)를 포함할 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 링커는 표적화 모이어티에 융합된다. 몇몇 실시형태에서, 링커는 CAR-ID에 융합된다. 몇몇 실시형태에서, 링커는 CAR-ID 및 표적화 모이어티에 융합된다. 몇몇 실시형태에서, 링커는 서열 (GGGGS)n(서열 번호 93)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 5 또는 이것 초과일 수 있음), 링커는 CAR-ID에 융합되거나, 표적화 모이어티에 융합되거나, CAR-ID 및 표적화 모이어티 둘 다에 융합된다.
링커는 이작용성 링커일 수 있다. 링커는 헤테로이작용성 링커일 수 있다. 링커는 동종이작용성 링커일 수 있다. 링커는 하나 이상의 폴리에틸렌 글라이콜(polyethylene glycol: PEG) 아단위를 추가로 포함할 수 있다. 링커는 적어도 4개의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 적어도 10개의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 적어도 20개의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 적어도 30개의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 일 말단에서 아자이드를 포함할 수 있다. 링커는 일 말단에서 아미노옥시를 포함할 수 있다. 링커는 아자이드-PEG-아미노옥시 링커일 수 있다. 링커는 일 말단에서 사이클로옥틴을 포함할 수 있다. 링커는 PEG-사이클로옥틴 링커일 수 있다. 링커는 트라이아졸을 포함할 수 있다. 트라이아졸은 1,2,3-트라이아졸 또는 1,2,4-트라이아졸일 수 있다. 링커는 NHS-에스터 링커일 수 있다. 링커는 TriA 링커일 수 있다. 링커는 CAR-ID에 부착될 수 있다. 링커는 옥심 결찰에 의해 CAR-ID에 부착될 수 있다.
몇몇 추가적인 예시적인 링커 및 링커를 작제하는 방법은 WO 제2014/153002호(본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에서 발견될 수 있다.
링커는 CAR-ID에 부착될 수 있다. 링커는 표적화 모이어티에 부착될 수 있다. 링커는 CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시킬 수 있다. 하나 이상의 링커는 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티에 부착시킬 수 있다. 하나 이상의 링커는 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티에 부위 특이적 방식으로 부착시킬 수 있다. 부위 특이적 방식의 부착은 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티 상의 미리 결정된 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 부위 특이적 방식의 부착은 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티에서의 비천연 아미노산에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커는 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티에 부위 독립적 방식으로 부착시킬 수 있다. 부위 특이적 방식의 부착은 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티 상의 랜덤 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. CAR-ID는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 표적화 모이어티에 부위 특이적 방식으로 부착될 수 있다. CAR-ID는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 표적화 모이어티에 부위 독립적 방식으로 부착될 수 있다. 대안적으로, 표적화 모이어티는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 CAR-ID에 부위 특이적 방식으로 부착될 수 있다. 부위 특이적 방식의 부착은 하나 이상의 표적화 모이어티를 하나 이상의 CAR-ID 상의 미리 결정된 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 CAR-ID에 부위 독립적 방식으로 부착될 수 있다. 부위 특이적 방식의 부착은 하나 이상의 표적화 모이어티를 하나 이상의 CAR-ID 상의 랜덤 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다.
하나 이상의 링커는 CAR-ID, 표적화 모이어티, 또는 이들의 조합에 커플링될 수 있다. 하나 이상의 링커는 CAR-ID에 커플링되어서 화학식 IIA: L1-X 또는 화학식 II: X-L1(여기서, X는 CAR-ID이고, L1은 링커임)의 하나 이상의 스위치 중간체를 형성할 수 있다. 하나 이상의 링커는 옥심에 의해 CAR-ID에 커플링될 수 있다. 하나 이상의 링커는 사이클로옥틴, 사이클로프로펜, 아릴/알킬 아자이드, 트랜스-사이클로옥텐, 노보렌, 테트라진, 또는 이들의 조합에 의해 CAR-ID에 커플링될 수 있다. 하나 이상의 링커는 공유 결합, 비공유 결합, 이온 결합, 또는 이들의 조합에 의해 CAR-ID에 커플링될 수 있다. 하나 이상의 링커는 표적화 모이어티에 커플링되어서 화학식 IIIA: L1-Y 또는 화학식 III: Y-L1(여기서, Y는 표적화 모이어티이고, L1은 링커임)의 하나 이상의 스위치 중간체를 형성할 수 있다. 하나 이상의 링커는 옥심에 의해 표적화 모이어티에 커플링될 수 있다. 하나 이상의 링커는 사이클로옥틴, 사이클로프로펜, 아릴/알킬 아자이드, 트랜스-사이클로옥텐, 노보렌, 테트라진, 또는 이들의 조합에 의해 표적화 모이어티에 커플링될 수 있다. 하나 이상의 링커는 공유 결합, 비공유 결합, 이온 결합, 또는 이들의 조합에 의해 표적화 모이어티에 커플링될 수 있다.
표적화 모이어티는 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 하나 이상의 아미노산은 천연 아미노산을 포함할 수 있다. 링커는 표적화 모이어티 상의 하나 이상의 천연 아미노산과 커플링할 수 있다. 하나 이상의 아미노산은 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 링커는 표적화 모이어티 상의 하나 이상의 비천연 아미노산과 커플링할 수 있다. 링커는 부위 특이적 돌연변이유발의 생성물인 아미노산과 커플링할 수 있다. 링커는 부위 특이적 돌연변이유발의 생성물인 시스테인과 커플링할 수 있다. 링커(예를 들어, 치환된 말레이미드)는 부위 특이적 돌연변이유발의 생성물인 시스테인, 및 네이티브 시스테인 잔기와 커플링할 수 있다. 각각 상보성 반응성 작용기를 갖는 2개의 링커는 서로와 커플링할 수 있다.
하나 이상의 링커는 절단 가능한 링커일 수 있다. 하나 이상의 링커는 절단 불가능한 링커일 수 있다. 하나 이상의 링커는 가요성 링커일 수 있다. 하나 이상의 링커는 비가요성 링커일 수 있다. 링커는 이작용성 링커일 수 있다. 이작용성 링커는 일 말단에서 제1 작용기 및 제2 말단에서 제2 작용기를 포함할 수 있다. 이작용성 링커는 헤테로이작용성 링커일 수 있다. 헤테로이작용성 링커는 일 말단에서 제1 작용기 및 제2 말단에서 제2 작용기를 포함할 수 있고, 제1 작용기 및 제2 작용기는 상이하다. 이작용성 링커는 동종이작용성 링커일 수 있다. 동종이작용성 링커는 일 말단에서 제1 작용기 및 제2 말단에서 제2 작용기를 포함할 수 있고, 제1 작용기 및 제2 작용기는 동일하다.
링커는 화학 결합을 포함할 수 있다. 링커는 작용기를 포함할 수 있다. 링커는 중합체를 포함할 수 있다. 중합체는 폴리에틸렌 글라이콜일 수 있다. 링커는 아미노산을 포함할 수 있다.
링커는 하나 이상의 작용기를 포함할 수 있다. 링커는 2개 이상의 작용기를 포함할 수 있다. 링커는 3개 이상의 작용기를 포함할 수 있다. 링커는 4개 이상의 작용기를 포함할 수 있다. 링커는 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 작용기를 포함할 수 있다. 링커는 이작용성 에틸렌 글라이콜 링커일 수 있다.
링커는 에틸렌 글라이콜을 포함할 수 있다. 링커는 약 1개, 약 2개, 약 3개, 약 4개, 약 5개, 약 6개, 약 7개, 약 8개, 약 9개, 약 10개, 약 11개, 약 12개, 약 13개, 약 14개, 약 15개, 약 16개, 약 17개, 약 18개, 약 19개 또는 약 20개 또는 이것 초과의 에틸렌 글라이콜 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 4개 이상의 에틸렌 글라이콜 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 8개 이상의 에틸렌 글라이콜 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 10개 이상의 에틸렌 글라이콜 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 12개 이상의 에틸렌 글라이콜 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 15개 이상의 에틸렌 글라이콜 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 20개 이상의 에틸렌 글라이콜 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 25개 이상의 에틸렌 글라이콜 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 30개 이상의 에틸렌 글라이콜 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 35개 이상의 에틸렌 글라이콜 아단위를 포함할 수 있다.
링커는 PEG를 포함할 수 있다. 링커는 약 1개, 약 2개, 약 3개, 약 4개, 약 5개, 약 6개, 약 7개, 약 8개, 약 9개, 약 10개, 약 11개, 약 12개, 약 13개, 약 14개, 약 15개, 약 16개, 약 17개, 약 18개, 약 19개 또는 약 20개 또는 이것 초과의 폴리에틸렌 글라이콜(PEG) 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 4개 이상의 폴리에틸렌 글라이콜(PEG) 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 8개 이상의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 10개 이상의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 12개 이상의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 15개 이상의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 20개 이상의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 25개 이상의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 30개 이상의 PEG 아단위를 포함할 수 있다. 링커는 35개 이상의 PEG 아단위를 포함할 수 있다.
링커는 트라이아졸을 포함할 수 있다. 트라이아졸은 1,2,3-트라이아졸일 수 있다. 트라이아졸은 1,2,4-트라이아졸일 수 있다.
링커는 아릴 또는 헤테로아릴을 포함할 수 있다. 링커는 아릴을 포함할 수 있다. 아릴은 페닐일 수 있다. 페닐은 2치환될 수 있다. 2치환된 페닐은 1,4-2치환된 페닐일 수 있다. 2치환된 페닐은 1,3-2치환된 페닐일 수 있다. 페닐은 3치환될 수 있다. 페닐은 4치환될 수 있다. 치환된 페닐의 치환기 중 2개는 NO2일 수 있다. 몇몇 경우에, 링커는 벤질 치환기를 포함하지 않을 수 있다.
링커는 하나 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 다수의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 2개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 3개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 4개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 5개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 6개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 7개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 8개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 9개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 10개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 11개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 12개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 13개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다. 링커는 14개 이상의 PEG 단위를 포함할 수 있다.
링커는 일 말단에서 아마이드를 포함할 수 있다. 링커는 일 말단에서 아마이드 및 다른 말단에서 아민을 포함할 수 있다. 링커는 일 말단에서 아마이드 및 다른 말단에서 트라이아졸을 포함할 수 있다.
하나 이상의 링커는 1,4-다이카복실릭 모이어티를 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커는 1,3-다이나이트로 치환된 페닐 모이어티를 포함할 수 있다.
하나 이상의 링커는 하나 이상의 반응성 작용기를 포함할 수 있다. 반응성 작용기는 커플링 파트너 상의 상보성 반응성 작용기와 반응할 수 있다. 커플링 파트너 상의 상보성 반응성 작용기에 대한 링커 상의 반응성 작용기의 반응은 CAR-EC 스위치로의 링커의 도입 전에 발생할 수 있다.
링커는 알콕시-아민, 하이드라진, 아릴/알킬 아자이드, 알킨, 알켄, 테트라진, 다이클로로트라이아진, 트레실레이트, 숙신이미딜 카보네이트, 벤조트라이아졸 카보네이트, 나이트로페닐 카보네이트, 트라이클로로페닐 카보네이트, 카보닐이미다졸, 숙신이미딜 숙시네이트, 말레이미드, 비닐설폰, 할로아세트아마이드 및 다이설파이드로부터 선택된 적어도 하나의 반응성 작용기를 포함할 수 있다. 알켄은 노르보르넨, 트랜스-사이클로옥텐 및 사이클로프로펜으로부터 선택될 수 있다. 링커는 적어도 하나의 알콕시 아민을 포함할 수 있다. 링커는 적어도 하나의 아자이드를 포함할 수 있다. 링커는 적어도 하나의 사이클로옥틴을 포함할 수 있다. 링커는 적어도 하나의 테트라진을 포함할 수 있다.
하나 이상의 링커는 하나 이상의 말단에서 알콕시-아민(또는 아미노옥시)기, 아자이드기 및/또는 사이클로옥틴기를 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커는 일 말단에서 알콕시-아민 및 다른 말단에서 아자이드기를 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커는 일 말단에서 알콕시-아민 및 다른 말단에서 사이클로옥틴기를 포함할 수 있다. 알콕시-아민은 아미노산 상의 케톤기에 의해 안정한 옥심을 형성할 수 있다. 알콕시-아민은 비천연 아미노산 상의 케톤기에 의해 안정한 옥심을 형성할 수 있다. 케톤기는 p-아세틸 페닐알라닌(pAcF) 상에 있을 수 잇다.
하나 이상의 링커는 CAR-ID 상의 반응성 작용기와 표적화 모이어티에 부착된 링커의 상보성 반응성 작용기와의 반응에 의해 형성될 수 있다. 하나 이상의 링커는 표적화 모이어티 상의 아미노산 또는 또 다른 반응성 작용기와 CAR-ID에 부착된 링커의 상보성 반응성 작용기와의 반응에 의해 형성될 수 있다. 하나 이상의 링커는 CAR-ID에 부착된 링커와 표적화 모이어티에 부착된 또 다른 링커와의 반응에 의해 형성될 수 있다.
링커는 생물직교 반응의 생성물일 수 있다. 예를 들어, 케톤, 아자이드, 알킨, 알켄, 및 테트라진 측쇄를 함유하는 아미노산은 논센스 및 프레임쉬프트 코돈에 대한 반응에서 유전자 암호화될 수 있다. 이 측쇄는 생물직교 접합 반응의 화학 핸들로서 작용할 수 있다(Kim et al., Curr Opin Chem Bio 17:412-419 (2013)(그 전문이 참고로 포함됨)). 링커는 옥심, 테트라졸, 디엘스 앨더 부가물, 헤테로 디엘스 앨더 부가물, 방향족 치환 반응 생성물, 친핵 치환 반응 생성물, 에스터, 아마이드, 카바메이트, 에터, 티오에터, 또는 마이클(Michael) 반응 생성물을 포함할 수 있다. 링커는 중부가 생성물, 복분해 반응 생성물, 금속 매개된 크로스-커플링 반응 생성물, 라디칼 중합 생성물, 산화 커플링 생성물, 아실-전달 반응 생성물, 또는 광 클릭 반응 생성물일 수 있다. 중부가는 휴스겐(Huisgen)-중부가일 수 있다. 중부가는 구리 비함유 [3+2] 휴스겐-중부가일 수 있다. 중부가는 디엘스-앨더(Diels-Alder) 반응일 수 있다. 중부가는 헤테로 디엘스-앨더 반응일 수 있다. 링커는 효소 매개된 반응의 생성물일 수 있다. 링커는 트랜스글루타미나제 매개된 반응의 생성물일 수 있고, 이의 비제한적인 예는 문헌[Lin et al., J. Am. Chem. Soc. 128:4542-4543 (2006)] 및 WO 제2013/093809호에 기재되어 있다. 링커는 2개의 시스테인 잔기를 연결하는 이황화 브리지, 예컨대 PolyTherics에 의한 ThioBridge(상표명) 기술을 포함할 수 있다. 링커는 2개의 아미노산 잔기를 연결하는 말레이미드 브리지를 포함할 수 있다. 링커는 2개의 시스테인 잔기를 연결하는 말레이미드 브리지를 포함할 수 있다.
2개 이상의 링커는 연결될 수 있다. 2개 이상의 링커는 하나 이상의 구리 비함유 반응을 통해 연결될 수 있다. 2개 이상의 링커는 하나 이상의 중부가를 통해 연결될 수 있다. 2개 이상의 링커는 하나 이상의 휴스겐-중부가를 통해 연결될 수 있다. 2개 이상의 링커는 하나 이상의 구리 비함유 [3+2] 휴스겐-중부가를 통해 연결될 수 있다. 2개 이상의 링커는 하나 이상의 구리 함유 반응을 통해 연결될 수 있다. 2개 이상의 링커는 하나 이상의 디엘스 앨더 반응을 통해 연결될 수 있다. 2개 이상의 링커는 하나 이상의 헤테로 디엘스 앨더 반응을 통해 연결될 수 있다.
인간화된 CAR-EC 스위치는 제PCT/US2016/027997호 및 제PCT/US2016/027990호(이들은 각각 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 개시된 바대로 최적화될 수 있다. 예를 들어, 인간화된 CAR-EC 스위치는 링커 길이를 조정함으로써 최적화될 수 있다. 인간화된 CAR-EC 스위치는 상이한 길이의 링커를 포함할 수 있다. 링커는 비교적 짧을 수 있다. 링커는 비교적 길 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 1옹스트롬(Å) 내지 약 120Å의 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 5Å 내지 약 105Å 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 10Å 내지 약 100Å 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 10Å 내지 약 90Å 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 10Å 내지 약 80Å 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 10Å 내지 약 70Å 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 15Å 내지 약 45Å 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 4 이상, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 27, 30 또는 이것 초과의 Å 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 10Å 이상의 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 15옹스트롬 이상의 Å일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 20Å 이상의 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 110 이하, 100, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30 또는 이것 미만의 Å 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 100Å 이하 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 80Å 이하 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 60Å 이하 길이일 수 있다. 하나 이상의 링커는 약 40Å 이하 길이일 수 있다.
링커의 전체 길이는 약 1Å 내지 약 120Å일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 5Å 내지 약 105Å일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 10Å 내지 약 100Å일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 10Å 내지 약 90Å일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 10Å 내지 약 80Å일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 10Å 내지 약 70Å일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 15Å 내지 약 45Å일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 4 이상, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 27, 30 또는 이것 초과의 Å일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 10Å 이상일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 15Å 이상일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 20Å 이상일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 110 이하, 100, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30 또는 이것 미만의 Å일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 100Å 이하일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 80Å 이하일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 60Å 이하일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 40Å 이하일 수 있다. 링커의 전체 길이는 약 25Å 이하일 수 있다. CAR-ID와 표적화 모이어티 사이의 거리는 약 30Å일 수 있다.
그래프팅된 /융합된 스위치
CAR-ID가 표적화 모이어티에 그래프팅되거나 융합된 스위치가 본 명세서에 개시되어 있다. CAR-ID는 비-항체 단백질 또는 비-항체 펩타이드를 포함할 수 있고, 표적화 모이어티는 표적 상의 세포 표면 분자에 결합할 수 있다. 세포 표면 분자는 항원을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 표적화 폴리펩타이드일 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 표적화 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 항체 단편은 항체의 항원 결합 부분일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 면역글로불린(Ig)일 수 있다. 면역글로불린은 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, 이의 단편 또는 이의 변형으로부터 선택될 수 있다. 표적화 항체는 표적 세포의 세포 표면 상의 표적에 결합할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 표적은 CD19, Her2, CLL1, CD33, CD123, EGFR, EGFRvIII, CD20, CD22, CS1, BCMA 및 CEA로부터 선택될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR-ID에 의해 그래프팅된 인간화된 표적화 모이어티를 제시한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항-CD19 표적화 항체 또는 이의 CD19 결합 단편이다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 표적화 항체 또는 이의 CD19 결합 단편이다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 면역글로불린, Fab, Fab', F(ab')2 및 scFv로부터 선택될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 경쇄를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 중쇄를 포함할 수 있다.
CAR-ID는 (예를 들어, 표적화 항체 또는 항체 단편의 선택된 아미노산 사이의) 표적화 모이어티에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 말단에 융합될 수 있다. 대안적으로, 표적화 항체 또는 항체 단편은 CAR-ID에 그래프팅되거나 융합될 수 있다.
CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 경쇄의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 경쇄의 C 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 C 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 VL 도메인의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 VH 도메인의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 CL 도메인의 C 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 Fc 도메인의 C 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 IgG의 VL 도메인의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 IgG의 VH 도메인의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 IgG의 CL 도메인의 C 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 IgG의 Fc 도메인의 C 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 Fab의 VL 도메인의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 Fab의 VH 도메인의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 Fab의 CL 도메인의 C 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 Fab의 CH1 도메인의 C 말단에 융합될 수 있다.
CAR-ID는 표적화 모이어티(예를 들어, (예를 들어, 표적화 항체 또는 항체 단편의 선택된 아미노산 사이의) 항-CD19 표적화 항체 또는 CD19 결합 항체 단편)의 내부 부위에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 중쇄에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 경쇄에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 불변 도메인/영역에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 가변 도메인/영역에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 Fab의 내부 부위에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 면역글로불린(예를 들어, IgG)의 내부 부위에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 CL 도메인, CH1 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, VL 도메인, VH 도메인 및 힌지 도메인으로부터 선택된 표적화 항체 또는 이의 단편의 도메인에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 CL 도메인, CH1 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, VL 도메인, VH 도메인 및 힌지 도메인으로부터 선택된 항체 또는 이의 단편의 2개의 도메인 사이에 그래프팅될 수 있고, 여기서 2개의 도메인은 인접한다. CAR-ID는 항체 또는 이의 단편의 CL 도메인에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 이의 단편의 CH1 도메인에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 이의 단편의 힌지 도메인에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 이의 단편의 루프에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 이의 단편의 CL 도메인 루프에 그래프팅될 수 있다.
CAR-ID는 표적화 모이어티(예를 들어, 인간화된 항-CD19 표적화 항체 또는 CD19 결합 항체 단편)의 C 말단에 그래프팅될 수 있고, 따라서 키메라 수용체와 표적 사이의 거리는 키메라 수용체-EC 스위치의 크기(scFv에 대해 대략 40Å, Fab에 대해 70Å 및 IgG에 대해 120Å)에 따라 실질적으로 상이할 수 있다. 더 긴 거리가 시험관내 효율에 부정적으로 영향을 미칠 수 있지만, 전장 항체의 잔류 시간의 증가는 생체내 더 우수할 수 있다.
다가 스위치
CAR-ID 및 인간화된 CD19 결합 표적화 모이어티를 포함하는 스위치가 본 명세서에 예시되어 있다. GCN4 펩타이드 유도체 및 표적화 모이어티(예를 들어, CD19 표적화 모이어티)를 포함하는 스위치가 본 명세서에 또한 예시되어 있다. 그러나, 당업자는 본 개시내용으로부터 본 명세서에 개시된 스위치가 추가적인 또는 대안적인 표적화 모이어티 및/또는 추가적인 또는 대안적인 CAR-ID를 추가로 포함한다는 것을 이해할 것이다. 하나 이상의 CAR-ID는 표적화 모이어티의 하나 이상의 그래프팅 부위에 그래프팅되고, 그 반대일 수 있다. 하나 이상의 CAR-ID는 표적화 모이어티의 하나 이상의 말단에 융합되고, 그 반대일 수 있다. 하나 이상의 CAR-ID는 표적화 모이어티의 하나 이상의 말단에 접합되고, 그 반대일 수 있다. 몇몇 그래프팅/융합 부위가 키메라 수용체에 대한 CAR-ID의 최적 결합을 제공하는 것으로 예측될 수 있으므로, 이것은 유리할 수 있다. 예를 들어, 제1 CAR-ID는 표적화 모이어티의 제1 도메인에 그래프팅될 수 있고, 제2 CAR-ID는 표적화 모이어티의 제2 도메인에 그래프팅될 수 있다. 제1 도메인 및 제2 도메인은 동일할 수 있다. 제1 도메인 및 제2 도메인은 상이할 수 있다. 비제한적인 예로서, 제1 CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 경쇄에 그래프팅될 수 있고, 제2 CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 중쇄에 그래프팅될 수 있다. 제1 CAR-ID는 표적화 폴리펩타이드의 제1 말단에 융합될 수 있고, 제2 CAR-ID는 표적화 폴리펩타이드의 제2 말단에 융합될 수 있다. 비제한적인 예로서, 제1 CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 경쇄의 C 말단에 융합될 수 있고, 제2 CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 N 말단에 융합될 수 있다. 제1 CAR-ID는 표적화 폴리펩타이드의 말단에 융합될 수 있고, 제2 CAR-ID는 표적화 폴리펩타이드의 도메인 내에 그래프팅될 수 있다. 제1 CAR-ID 및 제2 CAR-ID는 동일하거나 유사할 수 있어서, 스위치는 하나의 키메라 수용체를 발현하는 효과기 세포와 사용될 수 있다. 제1 CAR-ID 및 제2 CAR-ID는 상이할 수 있어서, 스위치는 하나 이상의 키메라 수용체를 발현하는 효과기 세포 또는 상이한 키메라 수용체를 발현하는 다수의 효과기 세포와 사용될 수 있다.
본 명세서에 개시된 스위치는 하나 이상의 CAR-ID를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치는 2개 이상의 CAR-ID를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치는 3개 이상의 CAR-ID를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 이것 초과의 CAR-ID를 포함할 수 있다. 하나 이상의 CAR-ID는 하나 이상의 링커를 통해 표적화 모이어티에 융합되거나 그래프팅될 수 있다. 따라서, 본 명세서에 개시된 스위치는 하나 이상의 링커를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치는 2개 이상의 링커를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치는 3개 이상의 링커를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 이것 초과의 링커를 포함할 수 있다.
II. CAR-EC 스위치 제조 방법
인간화된 CAR-EC 스위치를 제조하는 방법이 본 명세서에 개시되어 있다.
몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치를 암호화하는 하나 이상의 서열 또는 이의 일부를 갖는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 하나 이상의 벡터로부터 하나 이상의 폴리펩타이드를 발현시키는 것을 포함하고, 여기서 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치는 CAR-ID 및 항-표적 표적화 모이어티를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치를 암호화하는 하나 이상의 서열 또는 이의 일부를 갖는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 하나 이상의 벡터로부터 하나 이상의 폴리펩타이드를 발현시키는 것을 포함하고, 여기서 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치는 CAR-ID 및 인간화된 항-CD19 표적화 모이어티를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치를 암호화하는 하나 이상의 서열 또는 이의 일부를 갖는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 하나 이상의 벡터로부터 하나 이상의 폴리펩타이드를 발현시키는 것을 포함하고, 여기서 키메라 항원 수용체-효과기 세포 스위치는 본 명세서에 개시된 GCN4 펩타이드 유도체 및 표적화 모이어티를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 CD19를 표적화한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 표적화 모이어티이다.
표적화 모이어티는 표적화 폴리펩타이드(예를 들어, 인간화된 항-CD19 항체 또는 인간화된 항-CD19 항체의 CD19 결합 단편)을 포함할 수 있다. 일반적으로, 이러한 방법은 표적화 모이어티(예를 들어, 인간화된 항-CD19 폴리펩타이드 표적화 모이어티(표적화 폴리펩타이드))를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 CAR-ID를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 융합 또는 그래프팅하는 것을 포함한다. 융합 또는 그래프팅은 당업자에게 공지된 임의의 표준 클로닝 방법에 의해 수행될 수 있다. CAR-ID를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, GCN4 펩타이드 유도체) 및 표적화 폴리펩타이드(예를 들어, 항체, 예컨대 CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분)의 융합 또는 그래프팅은 폴리뉴클레오타이드의 효소 분해, 폴리뉴클레오타이드의 결찰 및/또는 폴리뉴클레오타이드의 증폭을 포함할 수 있다.
CAR-ID는 표적화 폴리펩타이드의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 표적화 폴리펩타이드의 C 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 표적화 폴리펩타이드 내에 그래프팅될 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 표적화 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 C 말단에 융합될 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 스위치의 설계(예를 들어, 표적화 모이어티 상의 CAR-ID의 그래프팅 위치, CAR-ID를 표적화 모이어티에 연결시키는 링커의 길이 등)는 펩타이드 스위치 가능한 CAR-EC 세포의 사이토카인 방출, 활성화 및 세포독성에 중요하다. 스위치 그래프팅 위치는 CAR-EC와 표적 세포 사이의 최적 거리 및 기하구조(면역학적 시냅스)를 발견하기 위해 표적 상의 항-표적 항체(표적화 모이어티)의 에피토프 위치에 기초하여 표적에 대해 경험적으로 설계될 수 있다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 막으로부터 먼(막 원위) CD19 에피토프에 결합하는 항체에 대해, 항-CD19 표적화 모이어티(예를 들어, 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 예컨대 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 항체 중 어느 하나) 상의 CAR-ID의 N 말단 융합의 용도를 통해 전체 짧은 면역학적 시냅스를 제공하는 스위치 설계는 활성을 개선할 수 있다(도 15(중간)). C 말단 융합의 용도를 통해 표적 세포와 CAR-EC 사이의 너무 먼 거리를 제공하는 설계는 준최적 활성을 발생시킬 수 있다(도 15(왼쪽)). CAR은 힌지 영역을 짧게 하기 위해 또한 변형될 수 있다. 이것은 CAR-T 세포 및 표적 세포를 함께 더 가깝게 할 수 있고(도 15(오른쪽)), 이것은 추가로 유리하다. 또한, 비제한적인 예로서, 막에 가까운(막 근위) CD19의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, (C 말단 융합의 사용을 통해) 면역학적 시냅스가 형성하는 충분한 거리를 제공하는 스위치 설계는 최적이다(도 16(중간)). N 말단 융합의 사용을 통해 표적 세포와 CAR-EC 사이에 충분한 거리를 제공하지 않는 설계는 입체 장애로 인해 준최적 활성을 발생시키거나 활성을 발생시키지 않을 수 있다(도 16(오른쪽)). (더 긴 힌지 영역을 통해) 표적 세포와 CAR-EC 사이의 너무 먼 거리를 제공하는 설계는 준최적 활성을 발생시킬 수 있다(도 16(왼쪽)).
당업자에게 명확한 것처럼, 본 명세서에 개시된 서열은 리더 펩타이드(또는 상호 교환되어 "리더 서열")을 포함할 수 있고, 이것은 발현이 분비 경로를 포함하는 세포에 있는 경우 폴리펩타이드 발현 동안 절단될 것이다. 리더 펩타이드의 위치는 단백질의 N 말단에 있고, 리더 서열은 당업자에게 용이하게 명확하고, 예를 들어 SignalP 서버(월드 와이드 웹 주소: cbs.dtu.dk/services/SignalP/(본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에서 이용 가능)를 이용하여 용이하게 식별될 수 있다. 하나의 비제한적인 실시형태에서, 리더 펩타이드는 카파 리더 서열(예를 들어, 서열 번호 246)을 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다.
CAR-ID는 표적화 폴리펩타이드의 임의의 아미노산을 대체하거나 제거하지 않으면서 표적화 폴리펩타이드의 말단에 융합될 수 있다. 표적화 폴리펩타이드의 말단에 CAR-ID를 융합시키는 것은 표적화 폴리펩타이드의 말단에서 아미노산을 제거하거나 대체하는 것을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드의 말단에서 아미노산을 제거하거나 대체하는 것은 표적화 폴리펩타이드의 말단에서 약 1개 내지 약 20개의 아미노산을 제거하거나 대체하는 것을 포함할 수 있다. CAR-ID는 링커를 통해 표적화 폴리펩타이드의 말단에 융합될 수 있다. 링커는 CAR-ID-링커 중간체를 생성하도록 CAR-ID에 융합될 수 있다. 링커는 CAR-ID-링커 중간체를 생성하도록 CAR-ID N 말단에 융합될 수 있다. 링커는 CAR-ID-링커 중간체를 생성하도록 CAR-ID C 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID-링커 중간체는 표적화 폴리펩타이드에 융합될 수 있다. CAR-ID-링커 중간체는 표적화 폴리펩타이드의 N 말단에 융합될 수 있다. CAR-ID-링커 중간체는 표적화 폴리펩타이드의 C 말단에 융합될 수 있다. 제1 CAR-ID 링커 중간체는 표적화 폴리펩타이드의 N 말단에 융합될 수 있고, 제2 CAR-ID 링커 중간체는 표적화 폴리펩타이드의 C 말단에 융합될 수 있다. 제1 CAR-ID 링커 중간체의 CAR-ID는 제2 CAR-ID 링커 중간체의 CAR-ID와 동일하거나 유사할 수 있다. 제1 CAR-ID 링커 중간체의 CAR-ID는 제2 CAR-ID 링커 중간체의 CAR-ID와 상이할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바대로, N 말단 상의 경쇄 그래프트는 LCNT라 칭해질 수 있다. C 말단 상의 경쇄 그래프트는 LCCT라 칭해질 수 있다. C1 도메인에서의 경쇄 그래프트는 LCC1이라 칭해질 수 있다. N 말단 상의 중쇄 그래프트는 HCNT라 칭해질 수 있다. C 말단 상의 중쇄 그래프트는 HCCT라 칭해질 수 있다. C1 도메인에서의 중쇄 그래프트는 HCC1이라 칭해질 수 있다. 경쇄 및 중쇄 상의 N 말단 그래프트에 의해 발현된 스위치는 NTBV라 칭해질 수 있다. 경쇄 및 중쇄 상의 C 말단에 의해 발현된 스위치는 CTBV라 칭해질 수 있다. 경쇄 및 중쇄의 C1 도메인에서의 그래프트에 의해 발현된 스위치는 C1BV라 칭해질 수 있다.
본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "그래프팅된"은 표적화 폴리펩타이드 내에(예를 들어, 표적화 폴리펩타이드의 2개의 아미노산 사이에) CAR-ID를 삽입하는 것을 의미할 수 있다. CAR-ID는 표적화 폴리펩타이드의 임의의 아미노산을 대체하거나 제거함이 없이 표적화 폴리펩타이드 내에 그래프팅될 수 있다. 표적화 폴리펩타이드 내에 CAR-ID를 그래프팅하는 것은 표적화 폴리펩타이드 내에 아미노산을 제거하거나 대체하는 것을 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드 내에 아미노산을 제거하거나 대체하는 것은 표적화 폴리펩타이드 내에 약 1개 내지 약 20개의 아미노산을 제거하거나 대체하는 것을 포함할 수 있다. CAR-ID는 하나의 링커를 통해 표적화 폴리펩타이드 내에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 2개의 링커를 통해 표적화 폴리펩타이드 내에 그래프팅될 수 있다. 링커는 CAR-ID-링커 중간체를 생성하도록 CAR-ID N 말단에 융합될 수 있다. 링커는 CAR-ID-링커 중간체를 생성하도록 CAR-ID C 말단에 융합될 수 있다. 제1 링커는 CAR-ID N 말단에 융합될 수 있고, 제2 링커는 CAR-ID C 말단에 융합되어서 CAR-ID-링커 중간체를 생성할 수 있다. CAR-ID 링커 중간체는 표적화 폴리펩타이드 내에 그래프팅될 수 있다. 제1 CAR-ID 링커 중간체는 표적화 폴리펩타이드 내에 그래프팅될 수 있고, 제2 CAR-ID 링커 중간체는 표적화 폴리펩타이드 내에 그래프팅될 수 있다. 제1 CAR-ID 링커 중간체는 표적화 폴리펩타이드의 제1 도메인 내에 그래프팅될 수 있고, 제2 CAR-ID 링커 중간체는 표적화 폴리펩타이드의 제2 도메인 내에 그래프팅될 수 있다. 표적화 폴리펩타이드의 제1 도메인은 표적화 폴리펩타이드의 제2 도메인과 동일할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드의 제1 도메인은 표적화 폴리펩타이드의 제2 도메인과 상이할 수 있다. 제1 CAR-ID 링커 중간체의 CAR-ID는 제2 CAR-ID 링커 중간체의 CAR-ID와 동일하거나 유사할 수 있다. 제1 CAR-ID 링커 중간체의 CAR-ID는 제2 CAR-ID 링커 중간체의 CAR-ID와 상이할 수 있다. 달리 기재되지 않는 한, 용어 "그래프트" 및 "인서트"는, 본 명세서에 사용된 바대로, 상호 교환되어 사용된다.
표적화 모이어티는 표적 세포의 세포 표면 상의 표적에 결합할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 단편(예를 들어, 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 단편 중 임의의 하나 이상)을 포함할 수 있다. 항체 또는 항체 단편은 중쇄 및 경쇄 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 상기 방법은 중쇄를 발현하는 것을 포함할 수 있고, 여기서 CAR-ID는 중쇄의 말단에 융합된다. 상기 방법은 중쇄를 발현하는 것을 포함할 수 있고, 여기서 CAR-ID는 중쇄 내에 그래프팅된다. 상기 방법은 경쇄를 발현하는 것을 포함할 수 있고, 여기서 CAR-ID는 경쇄의 말단에 융합된다. 상기 방법은 경쇄를 발현하는 것을 포함할 수 있고, 여기서 CAR-ID는 경쇄 내에 그래프팅된다.
상기 방법은 표적화 폴리펩타이드 및/또는 CAR-ID를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 발현 벡터로 클로닝하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 표적화 폴리펩타이드 및/또는 CAR-ID를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 발현 벡터로 결찰하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 발현 벡터는 원핵세포 발현 벡터일 수 있다. 발현 벡터는 진핵세포 발현 벡터일 수 있다. 발현 벡터는 포유류 발현 벡터일 수 있다. 발현 벡터는 바이러스 발현 벡터일 수 있다. 발현 벡터는 pFUSE 벡터일 수 있다. 상기 방법은, 발현 벡터를 서열분석하는 것, 벡터의 겔 전기영동을 실행하는 것 및/또는 SDS 페이지 겔에서 표적화 폴리펩타이드 및/또는 CAR-ID를 보는 것을 포함하는, 발현 벡터로의 표적화 폴리펩타이드 및/또는 CAR-ID를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드의 클로닝을 검증하는 것을 추가로 포함할 수 있다.
상기 방법은 표적화 폴리펩타이드 및/또는 CAR-ID를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 증폭하는 것 및 표적화 폴리펩타이드 및/또는 CAR-ID를 발현 벡터로 클로닝하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 표적화 폴리펩타이드 및/또는 CAR-ID를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 증폭시키는 것은 유전자에 적어도 부분적으로 상보성인 올리고뉴클레오타이드를 합성하는 것을 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는 폴리뉴클레오타이드에 어닐링하기에 유전자에 충분히 상보성일 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는 링커 서열을 포함할 수 있다. 많은 적합한 링커는 당해 분야에 공지되어 있고, 본 발명에서 사용하기에 적합하다. 몇몇 실시형태에서, 링커는 본 명세서에 개시된 링커이다. 몇몇 실시형태에서, 링커 서열은 서열 번호 93 내지 103, 116 내지 137 및 164 내지 168로부터 선택될 수 있다.
상기 방법은 세포를 발현 벡터에 의해 형질주입 또는 감염시키는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 세포에서 표적화 폴리펩타이드 및/또는 CAR-ID를 발현시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 무세포 시스템에서 표적화 폴리펩타이드 및/또는 CAR-ID를 발현시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 발현 벡터를 포함하는 바이러스를 제조하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 바이러스를 전파시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 발현 벡터를 포함하는 바이러스에 의해 세포를 감염시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 세포를 전파시키는 것을 추가로 포함할 수 있다.
스위치는 항체의 중쇄에 대해 1개 및 항체의 경쇄에 대해 1개의 2개의 벡터로서 발현될 수 있다. 2개의 벡터는 발현 세포로 동시 형질주입될 수 있다. 발현 세포는 원핵세포 세포 및 진핵세포 세포로부터 선택될 수 있다. 발현 세포는 HEK 세포 및 CHO 세포로부터 선택될 수 있다. 발현은 관심 대상의 항체 스위치를 수집하고 단리시키기 위해 배지의 일상적인 수확에 의해 7일 이상에 걸쳐 HEK 세포에서 수행될 수 있다. 발현은 7일 미만에 수행될 수 있다. 스위치는 또한 동일한 플라스미드를 사용하여 유사한 방식으로 CHO 세포로부터 발현될 수 있다. 배지는 간격에서 수확되거나 수확되지 않을 수 있거나, 발현의 종료 시 수확될 수 있다. 간격에서의 수확은 스위치의 단백질분해 분해를 막는 것에 바람직할 수 있다.
스위치는 이. 콜라이에서 발현될 수 있다. 스위치는 비제한적인 예로서 벡터, 예컨대 pBAD 벡터로부터 이. 콜라이에서 발현될 수 있다. pBAD 벡터는 항체의 경쇄 및 중쇄 둘 다를 보유할 수 있다. 이것은 오직 하나의 플라스미드에 의해 이. 콜라이의 형질전환을 요할 수 있다. 이. 콜라이에서의 발현이 일반적으로 포유류 세포(예를 들어, HEK 세포)에서의 발현보다 덜 비싸고 더 빠르므로 이것은 유리할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 이. 콜라이에서 발현된 스위치는 다이라이신 모티프가 OmpT 프로테아제 의해 펩타이드의 절단을 피하도록 제거된 변형된 CAR-ID 및/또는 변형된 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 이. 콜라이에서의 스위치를 발현시키기 위해, 사용된 균주의 표현형에 조심스럽게 주의가 기울어진다. 몇몇 실시형태에서, 바람직한 표현형은 ompT 유전자가 파괴된 것(발현된 단백질을 단백분해할 수 있는 외부 막 단백질 프로테아제 VII)을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 이것은 BL21(이. 콜라이 B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)), OverExpress(tm)C41(DE3)(Lucigen)(F- ompT gal dcm hsdSB(rB- mB-)(DE3)) 및 기타를 포함한다. 발현에 비바람직한 균주는 DH10B(F- endA1 recA1 galE15 galK16 nupG rpsL ΔlacX74 φ80lacZΔM15 araD139 Δ(ara,leu)7697 mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) λ-), DH5알파(F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK- mK+), λ-) 또는 ompT 넉아웃을 포함하지 않는 다른 균주를 포함한다. DH10B 및 DH5알파와 같은 균주는 ompT 유전자의 파괴에 의해 바람직하게 제조될 수 있다. CAR-EC 스위치를 생성하기 위해 항체 또는 항체 단편, CAR-ID 또는 표적화 펩타이드를 그래프팅하는 방법이 본 명세서에 개시되어 있다. 상기 방법은 CAR-ID를 항체 또는 항체 단편에 그래프팅하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 CAR-ID를 항체 또는 항체 단편의 N 말단, C 말단 또는 내부 부위에 그래프팅하는 것을 포함할 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 항체 단편의 CL 도메인에 그래프팅될 수 있다. CAR-ID는 항체 또는 항체 단편의 CL 도메인의 루프에 그래프팅될 수 있다. 상기 방법은 항체 또는 항체 단편을 CAR-ID에 그래프팅하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 항체 또는 항체 단편을 CAR-ID의 N 말단, C 말단 또는 내부 부위에 그래프팅하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 CAR-ID를 표적화 펩타이드에 그래프팅하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 CAR-ID를 표적화 펩타이드의 N 말단, C 말단 또는 내부 부위에 그래프팅하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 표적화 펩타이드를 CAR-ID에 그래프팅하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 표적화 펩타이드를 CAR-ID의 N 말단, C 말단 또는 내부 부위에 그래프팅하는 것을 포함할 수 있다.
CAR-ID, 표적화 펩타이드, 항체 또는 항체 단편은 하나 이상의 링커를 포함할 수 있고, 여기서 링커는 CAR-ID, 표적화 펩타이드, 항체 또는 항체 단편의 N 말단 및/또는 C 말단에 위치한다. 상기 방법은 링커를 통해 항체 또는 항체 단편, CAR-ID 또는 표적화 펩타이드를 그래프팅하는 것을 포함할 수 있다. 링커는 (GSSSS)n을 포함할 수 있다. 링커는 서열 번호 93 내지 103, 116 내지 137 및 164 내지 168로부터 선택된 서열을 포함할 수 있다. 링커는 서열 번호 93 내지 103, 116 내지 137 및 164 내지 168로부터 선택된 서열과 적어도 약 50% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 링커는 서열 번호 93 내지 103, 116 내지 137, 및 164 내지 168로부터 선택된 서열을 포함할 수 있다.
그래프팅은 CAR-EC 스위치 암호화 핵산을 제조하는 것을 포함할 수 있다. CAR-EC 스위치 암호화 핵산을 제조하는 것은 하나 이상의 중합효소 연쇄 반응을 포함할 수 있다. CAR-EC 스위치 암호화 핵산을 제조하는 것은 하나 이상의 핵산 효소 분해를 포함할 수 있다. 효소 분해는 부위 특이적일 수 있다. CAR-EC 스위치 암호화 핵산을 제조하는 것은 하나 이상의 결찰을 포함할 수 있다. CAR-EC 스위치를 제조하는 방법은 CAR-EC 스위치 암호화 핵산을 CAR-EC 스위치 벡터로 도입하는 것을 포함할 수 있다. 벡터는 발현 벡터일 수 있다. 발현 벡터는 구성적 촉진자, 유도성 촉진자 및/또는 조건적 촉진자를 포함할 수 있다. CAR-EC 스위치 암호화 핵산 또는 CAR-EC 스위치 벡터는 세포에서 발현되고, 생성된 CAR-EC 스위치는 단리되고 정제될 수 있다. 세포는 원핵세포 세포일 수 있다. 세포는 이. 콜라이일 수 있다. 세포는 진핵세포 세포일 수 있다. 세포는 포유류 세포일 수 있다. CAR-EC 스위치 암호화 핵산 또는 CAR-EC 스위치 벡터는 무세포 시스템에서 발현될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, CAR-EC 스위치는 유리 아미노산으로부터 합성될 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 CAR-ID 및 링커를 포함하는 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 표적화 모이어티 및 링커를 포함하는 스위치 중간체를 CAR-ID에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 CAR-ID 및 제1 링커를 포함하는 제1 스위치 중간체를 표적화 모이어티 및 제2 링커를 포함하는 제2 스위치에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티에 대한 CAR-ID의 부착은 부위 특이적 방식으로 발생할 수 있다. 부위 특이적 방식의 부착은 CAR-ID를 표적화 모이어티 상의 미리 결정된 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 부위 특이적 방식의 부착은 표적화 모이어티를 CAR-ID 상의 미리 결정된 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티에 대한 CAR-ID의 부착은 부위 독립적 방식으로 발생할 수 있다. 부위 독립적 방식의 부착은 CAR-ID를 표적화 모이어티 상의 랜덤 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 부위 특이적 방식의 부착은 표적화 모이어티를 CAR-ID 상의 랜덤 부위에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 하나 이상의 추가적인 CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 하나 이상의 추가적인 표적화 모이어티를 CAR-ID에 부착시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 표적화 모이어티를 CAR-ID에 연결시키도록 하나 이상의 추가적인 링커를 사용하는 것을 추가로 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 화학 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다.
스위치를 제조하는 방법은, (a) 표적화 모이어티; (b) 하나 이상의 링커; 및 (c) CAR-ID를 포함하는 CAR-EC 스위치를 제조하기 위해, 항체 또는 항체 단편에 기초하거나 이로부터 유래된 표적화 모이어티를 CAR-ID 또는 CAR-ID를 포함하는 스위치 중간체에 연결시키는 것을 포함할 수 있고, 하나 이상의 링커는 표적화 모이어티를 CAR-ID에 연결시킬 수 있다. 표적화 모이어티를 CAR-ID에 연결시키는 것은 부위 특이적 방식으로 발생할 수 있다. CAR-ID는 하나 이상의 링커를 통해 표적화 모이어티 상의 미리 결정된 부위에 부착될 수 있다. 표적화 모이어티는 하나 이상의 링커를 통해 CAR-ID 상의 미리 결정된 부위에 부착될 수 있다.
본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 하나 이상의 CAR-ID는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 하나 이상의 표적화 모이어티는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티에 대한 CAR-ID의 부착은 하나 이상의 비천연 아미노산을 통해 발생할 수 있다. 하나 이상의 링커는 특이적으로 하나 이상의 비천연 아미노산을 통해 하나 이상의 CAR-ID를 하나 이상의 표적화 모이어티 부위에 연결할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 하나 이상의 링커는 특이적으로 하나 이상의 표적화 모이어티를 하나 이상의 표적화 모이어티 부위에 연결할 수 있고, 여기서 비천연 아미노산은 하나 이상의 표적화 모이어티를 하나 이상의 표적화 모이어티에 연결하는 데 필요하지 않다. 표적화 모이어티는 표적화 모이어티 상의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 비천연 아미노산에 연결될 수 있다. 표적화 모이어티는 표적화 모이어티 부위 상의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 비천연 아미노산에 특이적으로 연결될 수 있다. 대안적으로, 표적화 모이어티는 표적화 모이어티 상의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 비천연 아미노산에 연결될 수 있다. 표적화 모이어티는 표적화 모이어티 부위 상의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과의 비천연 아미노산에 특이적으로 연결될 수 있다.
CAR-ID는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 CAR-ID는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 표적화 항체 또는 항체 단편은 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 비천연 아미노산은 화학 결합을 생성하도록 링커와 반응할 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티에서 2개의 천연 발생 아미노산 사이에 삽입될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티에서 하나 이상의 천연 발생 아미노산을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티의 N 말단에서 도입될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티의 C 말단에서 도입될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티의 내부 부위에서 도입될 수 있다. 비천연 아미노산은 표적 상의 또는 표적으로부터의 분자와 상호작용하는 표적화 모이어티의 영역에 원위로 도입될 수 있다. 비천연 아미노산은 표적 상의 또는 표적으로부터의 분자와 상호작용하는 표적화 모이어티의 영역에 근위로 도입될 수 있다. 비천연 아미노산은 표적 상의 또는 표적으로부터의 분자와 상호작용하는 표적화 모이어티의 영역에 중간인 부위로 도입될 수 있다. 비천연 아미노산은 표적 상의 또는 표적으로부터의 분자와 상호작용하는 표적화 모이어티의 영역에서 도입될 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티에서의 하나 이상의 아미노산을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티에서의 임의의 천연 아미노산을 대체할 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 경쇄에서 도입될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 중쇄에서 도입될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄에서 도입될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 경쇄에서의 아미노산을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 중쇄에서의 아미노산을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄에서의 아미노산을 대체할 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 경쇄의 글라이신을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 경쇄의 아르기닌을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 경쇄의 세린을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 경쇄의 트레오닌을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 경쇄의 알라닌을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 중쇄의 알라닌을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 중쇄의 세린을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 중쇄의 라이신을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 면역글로불린의 중쇄의 프롤린을 대체할 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 하나 이상의 비천연 아미노산은 표적화 모이어티의 아미노산을 대체할 수 있고, 여기서 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 단편이다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 경쇄의 글라이신을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 경쇄의 트레오닌을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 경쇄의 세린을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 중쇄의 세린을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 중쇄의 알라닌을 대체할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 중쇄의 라이신을 대체할 수 있다. 항체 또는 항체 단편은 항-CD19 항체 또는 이의 단편일 수 있고, 여기서 하나 이상의 비천연 아미노산은 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 경쇄의 하나 이상의 아미노산을 대체할 수 있다. 항-CD19 항체의 경쇄 또는 이의 CD19 결합 부분은 서열 번호 17 내지 25; 27 내지 35 중 하나를 포함할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 서열 번호 17 내지 25; 27 내지 35 중 하나의 하나 이상의 아미노산을 대체할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 서열 번호 17 내지 25; 27 내지 35 중 하나의 하나 이상의 아미노산은 G68 및 K107로부터 선택될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 중쇄의 하나 이상의 아미노산을 대체할 수 있다. 항-CD19 항체 또는 이의 단편의 중쇄는 서열 번호 2 내지 15 중 하나를 포함할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 서열 번호 2 내지 15 중 하나의 하나 이상의 아미노산을 대체할 수 있다. 서열 번호 2 내지 15 중 하나의 하나 이상의 아미노산은 S74일 수 있다.
화학식 I: X-L1-Y 또는 화학식 IA: Y-L1-X(여기서, X는 CAR-ID이고, Y는 표적화 모이어티이고, L1은 링커임)의 스위치를 제조하는 방법이 본 명세서에 개시되어 있다. X는 CAR 결합 소분자일 수 있고, Y는 항체 또는 항체 단편일 수 있다. X는 펩타이드를 포함하지 않는 CAR 결합 소분자일 수 있고, Y는 항체 또는 항체 단편을 포함하지 않는 펩타이드일 수 있다. X는 펩타이드를 포함하지 않는 CAR 결합 소분자일 수 있고, Y는 펩타이드를 포함하지 않는 표적화 소분자일 수 있다. 상기 방법은 CAR-ID를 표적화 모이어티에서의 미리 결정된 부위에 부착시키기 위해 하나 이상의 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키기 위해 하나 이상의 반응을 수행하는 것은 복수의 CAR-ID를 복수의 표적화 모이어티와 혼합하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 링커의 일 말단을 표적화 모이어티에 부착시킨 후, 이후 링커의 다른 말단을 CAR-ID에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 링커의 일 말단을 CAR-ID에 부착시킨 후, 링커의 다른 말단을 표적화 모이어티에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티에 대한 링커의 부착은 부위 특이적 방식으로 발생할 수 있다. 링커는 표적화 모이어티의 미리 결정된 아미노산에 부착될 수 있다. 아미노산은 비천연 아미노산일 수 있다. 링커는 아미노산과 상호작용하는 작용기를 포함할 수 있다. 표적화 모이어티에 대한 링커의 부착은 부위 독립적 방식으로 발생할 수 있다. 링커는 표적화 모이어티에 랜덤으로 부착될 수 있다. 링커는 표적화 모이어티에서의 작용기와 반응하는 작용기를 포함할 수 있다. CAR-ID에 대한 링커의 부착은 부위 특이적 방식으로 발생할 수 있다. CAR-ID에 대한 링커의 부착은 부위 독립적 방식으로 발생할 수 있다. 링커는 CAR-ID에서의 작용기와 반응하는 작용기를 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키기 위해 하나 이상의 반응을 수행하는 것은 옥심 결찰을 수행하는 것을 포함할 수 있다.
대안적으로, 또는 추가적으로, 상기 방법은 CAR-ID에 접합된 링커를 포함하는 스위치 중간체를 제조하기 위해 링커 또는 링커의 전구체를 CAR-ID에 부착시키기 위해 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다. 스위치 중간체는 화학식 II: X-L1 또는 화학식 IIA: L1-X(여기서, X는 CAR-ID이고, L1은 링커 또는 링커의 전구체임)를 가질 수 있다. 링커는 부위 특이적 방식으로 CAR-ID에 접합될 수 있다. 링커는 부위 독립적 방식으로 CAR-ID에 접합될 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키기 위해 하나 이상의 반응을 수행하는 것은 스위치 중간체의 링커 부분을 표적화 모이어티에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키기 위해 하나 이상의 반응을 수행하는 것은 CAR-ID에 접합된 링커 또는 링커 전구체를 포함하는 복수의 스위치 중간체를 복수의 표적화 모이어티와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티에 대한 스위치 중간체의 링커 부분의 부착은 부위 특이적 방식으로 발생할 수 있다. 표적화 모이어티는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 스위치의 링커 부분은 하나 이상의 비천연 아미노산을 통해 표적화 모이어티에 부착될 수 있다. 스위치 중간체의 링커 부분의 부착은 부위 독립적 방식으로 발생할 수 있다.
대안적으로, 또는 추가적으로, 상기 방법은 표적화 모이어티에 접합된 링커 또는 링커의 전구체를 포함하는 스위치 중간체를 제조하기 위해 링커 또는 링커의 전구체를 표적화 모이어티에 부착시키기 위해 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다. 스위치 중간체는 화학식 III: Y-L1 또는 화학식 IIIA: L1-Y(여기서, Y는 표적화 모이어티이고, L1은 링커 또는 링커 전구체임)일 수 있다. 링커는 부위 특이적 방식으로 표적화 모이어티에 접합될 수 있다. 링커는 부위 독립적 방식으로 표적화 모이어티에 접합될 수 있다. 표적화 모이어티에 CAR-ID를 부착시키기 위해 하나 이상의 반응을 수행하는 것은 스위치 중간체의 링커 부분을 CAR-ID에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키기 위해 하나 이상의 반응을 수행하는 것은 표적화 모이어티에 접합된 링커 또는 링커 전구체를 포함하는 복수의 스위치 중간체를 복수의 CAR-ID와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. CAR-ID에 대한 스위치 중간체의 링커 부분의 부착은 부위 특이적 방식으로 발생할 수 있다. 스위치 중간체의 링커 부분의 부착은 부위 독립적 방식으로 발생할 수 있다.
상기 방법은 화학식 III: Y-L1 또는 화학식 IIIA: L1-Y(여기서, Y는 표적화 모이어티이고, L1은 링커임)의 스위치 중간체를 제조하기 위해 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티에 커플링시키는 것; 및 스위치 중간체를 CAR-ID에 접합시켜서, CAR-EC 스위치를 제조하는 것을 포함할 수 있다. 스위치 중간체는 부위 특이적 방식으로 CAR-ID에 접합될 수 있다. 스위치 중간체는 부위 독립적 방식으로 CAR-ID에 접합될 수 있다. 상기 방법은 하나 이상의 비천연 아미노산을 CAR-ID 및/또는 표적화 모이어티로 도입하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 스위치 중간체는 비천연 아미노산의 사용을 통해 부위 특이적 방식으로 CAR-ID에 접합될 수 있다.
상기 방법은 화학식 II: X-L1 또는 화학식 IIA: L1-X(여기서, X는 CAR-ID이고, L1은 링커임)의 스위치 중간체를 제조하기 위해 하나 이상의 링커를 CAR-ID에 커플링시키는 것; 및 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 접합시켜서, CAR-EC 스위치를 제조하는 것을 포함할 수 있다. 스위치 중간체는 부위 특이적 방식으로 표적화 모이어티에 접합될 수 있다. 스위치 중간체는 부위 독립적 방식으로 표적화 모이어티에 접합될 수 있다. 상기 방법은 하나 이상의 비천연 아미노산을 CAR-ID 및/또는 표적화 모이어티로 도입하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 스위치 중간체는 비천연 아미노산의 사용을 통해 부위 특이적 방식으로 표적화 모이어티에 접합될 수 있다.
화학식 II: X-L1 또는 화학식 IIA: L1-X(여기서, X는 CAR-ID이고, L1)의 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 접합시키는 것은 옥심을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 화학식 III: Y-L1 또는 화학식 IIIA: L1-Y(여기서, Y는 표적화 모이어티이고, L1)의 스위치 중간체를 CAR-ID에 접합시키는 것은 옥심을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 옥심을 형성하는 것은 산성 조건 하에 하나 이상의 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다. 옥심을 형성하는 것은 약간 산성인 조건 하에 하나 이상의 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다. 옥심을 형성하는 것은 약간 중성인 조건 하에 하나 이상의 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다.
스위치를 제조하는 방법은 (a) 비천연 아미노산을 포함하는 표적화 모이어티를 제조하는 것; (b) 표적화 모이어티 및 제1 링커를 포함하는 제1 스위치 중간체를 제조하기 위해 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것; (c) CAR-ID 및 제2 링커를 포함하는 제2 스위치 중간체를 제1 스위치 중간체에 부착하여서, 스위치를 제조하는 것을 포함할 수 있다. 비천연 아미노산은 p-아세틸펜알라닌(pAcF)일 수 있다. 비천연 아미노산은 p-아지도페닐알라닌(pAzF)일 수 있다. 표적화 모이어티는 항체 또는 항체 단편에 기초하거나 이로부터 유래된 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 항체는 항-CD19 항체일 수 있다. 표적화 모이어티는 항체 단편을 포함할 수 있다. 항체는 서열 번호 2 내지 15, 17 내지 25 및 27 내지 35 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 제1 링커는 이작용성 링커일 수 있다. 링커는 헤테로이작용성 링커일 수 있다. 링커는 하나 이상의 폴리에틸렌 글라이콜(PEG) 아단위를 포함할 수 있다. 제1 링커는 사이클로옥틴을 포함할 수 있다. 제1 링커는 PEG-사이클로옥틴 링커일 수 있다. 링커는 아자이드를 포함할 수 있다. 제1 링커는 트라이아졸을 포함할 수 있다. 트라이아졸은 1,2,3-트라이아졸일 수 있다. 트라이아졸은 1,2,4-트라이아졸일 수 있다. 제1 링커는 아자이드-PEG-아미녹시 링커를 포함할 수 있다. 제1 링커는 비천연 아미노산의 케톤에 부착될 수 있다. 제1 링커는 옥심 결찰을 통해 표적화 모이어티에 부착될 수 있다. CAR-ID는 소분자를 포함할 수 있다. CAR-ID는 FITC를 포함할 수 있다. 제2 링커는 이작용성 링커일 수 있다. 링커는 헤테로이작용성 링커일 수 있다. 링커는 하나 이상의 폴리에틸렌 글라이콜(PEG) 아단위를 포함할 수 있다. 제2 링커는 사이클로옥틴을 포함할 수 있다. 제2 링커는 PEG-사이클로옥틴 링커일 수 있다. 링커는 아자이드를 포함할 수 있다. 제2 링커는 트라이아졸을 포함할 수 있다. 트라이아졸은 1,2,3-트라이아졸일 수 있다. 트라이아졸은 1,2,4-트라이아졸일 수 있다. 제2 링커는 PEG-사이클로옥틴 링커일 수 있다. 제2 스위치 중간체는 클릭 화학 반응을 통해 제1 스위치 중간체에 부착될 수 있다. 제2 스위치 중간체는 중부가 반응을 통해 제1 스위치 중간체에 부착될 수 있다. 중부가 반응은 [3+2] 중부가 반응일 수 있다.
스위치를 제조하기 위해 링커를 CAR-ID에 접합시키는 것은 링커와 CAR-ID 사이에 하나 이상의 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 스위치를 제조하기 위해 링커를 표적화 모이어티에 접합시키는 것은 링커와 표적화 모이어티 사이에 하나 이상의 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 결합은 이온 결합, 공유 결합, 비공유 결합 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 링커를 CAR-ID 및 표적화 모이어티에 접합시키는 추가적인 방법은 문헌[Roberts et al., Advanced Drug Delivery Reviews 54:459-476 (2002)](그 전문이 참고로 포함됨)에 기재된 바대로 수행될 수 있다.
CAR-ID는 본 명세서에 개시된 임의의 CAR-ID를 포함할 수 있다. 예를 들어, CAR-ID는 소분자를 포함할 수 있다. CAR-ID는 FITC를 포함할 수 있다. CAR-ID는 DOTA, 다이나이트로페놀, 퀴논, 바이오틴, 아닐린, 아트라진, 아닐린-유도체, o-아미노벤조산, p-아미노벤조산, m-아미노벤조산, 하이드랄라진, 할로탄, 다이곡시게닌, 벤젠 아르소네이트, 락토스, 트라이나이트로페놀, 바이오틴 및 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
CAR-ID는 합텐을 포함할 수 있다. CAR-ID는 더 큰 캐리어 분자, 예컨대 단백질, 항체 또는 항체 단편에 부착될 때 면역 반응을 유도할 수 있다. CAR-ID는 FITC 또는 이의 유도체일 수 있다. CAR-ID는 바이오틴을 포함할 수 있다. CAR-ID는 다이나이트로페놀을 포함할 수 있다.
대안적으로, CAR-ID는 합텐을 포함하지 않는다. CAR-ID는 스테로이드, 비타민, 비타머, 대사물질, 항생제, 단당류, 이당류, 지질, 지방산, 핵산, 알칼로이드, 글라이코사이드, 페나진, 폴리케타이드, 터펜, 및 테트라피롤, 및 이의 일부, 및 이의 조합으로부터 선택될 수 있다. CAR-ID는 페니실린 약물 또는 이의 유도체일 수 있다.
CAR-ID는 표적 상호작용 도메인에 연결 및/또는 접합될 수 있다. 표적 상호작용 도메인은 표적화 항체 또는 항체 단편일 수 있고, CAR-ID는 표적화 항체 또는 항체 단편의 아미노산에 연결 및/또는 접합될 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편의 아미노산은 비천연 아미노산일 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 10-31로부터 선택된 경쇄 및/또는 중쇄를 포함할 수 있고, 비천연 아미노산은 표 1에 기재된 각각의 부위에 위치할 수 있다. 달리 기재되지 않는 한, 아미노산은 각각의 가변 영역의 N 말단의 아미노산으로부터 불변 영역의 C-말단으로 계수된다.
표적화 모이어티는 본 명세서에 개시된 임의의 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 링커는 본 명세서에 개시된 임의의 링커를 포함할 수 있다. 예를 들어, 링커는 하나 이상의 말단에서 아미노옥시기, 아자이드기, 사이클로옥틴기, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 링커는 이작용성 링커일 수 있다. 링커는 헤테로이작용성 링커일 수 있다. 링커는 하나 이상의 PEG 아단위를 포함할 수 있다.
화학식 IV: X- L1-L2-Y(여기서, X는 CAR-ID이고, L1은 제1 링커이고, L2는 제2 링커이고, Y는 표적화 모이어티임)의 스위치를 제조하는 방법이 본 명세서에 개시된다. 상기 방법은 (a) 화학식 II: X- L1의 제1 스위치 중간체를 제조하기 위해 L1을 X에 커플링하는 것; (b) 화학식 V: L2-Y의 제2 스위치 중간체를 제조하기 위해 L2를 Y에 커플링하는 것; 및 (c) 화학식 II의 제1 스위치 중간체를 화학식 V의 제2 스위치 중간체에 연결시켜서, 화학식 IV의 스위치를 제조하는 것을 포함할 수 있다.
화학식 IVA: Y-L2-L1-X(여기서, Y는 표적화 모이어티이고, L1은 제1 링커이고, L2는 제2 링커이고, X는 CAR-ID임)의 스위치를 제조하는 방법이 본 명세서에 개시되어 있다. 상기 방법은 (a) 화학식 IIA: L1-X의 제1 스위치 중간체를 제조하기 위해 L1을 X에 커플링하는 것; (b) 화학식 VA: Y-L2의 제2 스위치 중간체를 제조하기 위해 L2를 Y에 커플링하는 것; 및 (c) 화학식 IIA의 제1 중간체를 화학식 VA의 제2 중간체에 연결시켜서, 화학식 IVA의 CAR-EC 스위치를 제조하는 것을 포함할 수 있다.
상기 방법은 하나 이상의 비천연 아미노산을 X 및/또는 Y로 도입하는 것을 추가로 포함할 수 있다. L1은 부위 특이적 방식으로 X에 커플링될 수 있다. L1은 하나 이상의 비천연 아미노산을 통해 부위 특이적 방식으로 X에 커플링될 수 있다. L2는 부위 특이적 방식으로 Y에 커플링될 수 있다. L2는 하나 이상의 비천연 아미노산을 통해 부위 특이적 방식으로 Y에 커플링될 수 있다. 상기 방법은 X에서 하나 이상의 앰버 코돈을 제조하기 위해 X를 암호화하는 핵산을 변형시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 Y에서 하나 이상의 앰버 코돈을 제조하기 위해 Y를 암호화하는 핵산을 변형시키는 것을 추가로 포함할 수 있다.
제1 스위치 중간체를 제조하기 위해 링커를 CAR-ID에 접합하는 것은 링커와 CAR-ID 사이에 하나 이상의 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 제2 스위치 중간체를 제조하기 위해 링커를 표적화 모이어티에 접합하는 것은 링커와 표적화 모이어티 사이에 하나 이상의 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 결합은 이온 결합, 공유 결합, 비-공유 결합 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 링커를 CAR-ID 및 표적화 모이어티에 접합시키는 추가적인 방법은 문헌[Roberts et al., Advanced Drug Delivery Reviews 54:459-476 (2002)](그 전문이 참고로 포함됨)에 기재된 바대로 수행될 수 있다.
제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 연결시키는 것은 휴스겐-중부가, 디엘스 앨더 반응, 헤테로 디엘스-앨더 반응 또는 효소 매개된 반응을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 연결시키는 것은 옥심, 테트라졸, 디엘스 앨더 부가물, 헤테로 디엘스 앨더 부가물, 방향족 치환 반응 생성물, 친핵 치환 반응 생성물, 에스터, 아마이드, 카바메이트, 에터, 티오에터, 마이클 반응 생성물, 중부가 생성물, 복분해 반응 생성물, 금속 매개된 크로스-커플링 반응 생성물, 라디칼 중합 생성물, 산화 커플링 생성물, 아실-전달 반응 생성물, 또는 광 클릭 반응 생성물을 제조할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 연결시키는 것은 이황화 브리지 또는 말레이미드 브리지를 제조할 수 있다.
L1 및/또는 L2는 이작용성 링커, 절단 가능한 링커, 비-절단 가능한 링커, 에틸렌 글라이콜 링커, 이작용성 에틸렌 글라이콜 링커, 가요성 링커 또는 불가요성 링커로부터 선택된 링커를 포함할 수 있다. L1 및/또는 L2는 사이클로옥틴, 사이클로프로펜, 아릴/알킬 아자이드, 트랜스-사이클로옥텐, 노보렌 및 테트라진을 포함하는 군으로부터 선택된 링커를 포함할 수 있다. L1의 말단 및/또는 L2의 말단은 알콕시-아민을 포함할 수 있다. L1의 말단 및/또는 L2의 말단은 아자이드 또는 사이클로옥틴기를 포함할 수 있다. X는 사이클로옥틴, 사이클로프로펜, 아릴/알킬 아자이드, 트랜스-사이클로옥텐, 노보렌, 및 테트라진으로부터 선택된 화학 기에 의해 L1에 커플링될 수 있다. 제1 스위치 중간체(X-L1 또는 L1-X) 및 제2 스위치 중간체(Y-L2 또는 L2-Y)를 연결시키는 것은 하나 이상의 구리 비함유 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체(X-L1 또는 L1-X) 및 제2 스위치 중간체(Y-L2 또는 L2-Y)를 연결시키는 것은 하나 이상의 구리 함유 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체(X-L1 또는 L1-X) 및 제2 스위치 중간체(Y-L2 또는 L2-Y)를 연결시키는 것은 하나 이상의 중부가를 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체(X-L1 또는 L1-X) 및 제2 스위치 중간체(Y-L2 또는 L2-Y)를 연결시키는 것은 하나 이상의 휴스겐-중부가를 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체(X-L1 또는 L1-X) 및 제2 스위치 중간체(Y-L2 또는 L2-Y)를 연결시키는 것은 하나 이상의 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체(X-L1 또는 L1-X) 및 제2 스위치 중간체(Y-L2 또는 L2-Y)를 연결시키는 것은 하나 이상의 헤테로 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다.
본 명세서에 개시된 방법은 하나 이상의 스위치 중간체를 제조하기 위해 하나 이상의 링커를 하나 이상의 표적 상호작용 도메인, CAR-ID 또는 이들의 조합에 커플링시키는 것을 포함할 수 있다. 스위치 중간체는 링커에 부착된 표적화 모이어티(예를 들어, 표적화 모이어티 스위치 중간체)를 포함할 수 있다. 스위치 중간체는 링커에 부착된 CAR-ID(예를 들어, CAR-ID 스위치 중간체)를 포함할 수 있다. 상기 방법은 표적화 모이어티 스위치 중간체를 제조하기 위해 제1 링커를 표적화 모이어티에 커플링시키는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 CAR-ID 스위치 중간체를 제조하기 위해 링커를 CAR-ID에 커플링시키는 것을 포함할 수 있다.
하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및 CAR-ID에 커플링시키는 것은 동시에 발생할 수 있다. 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및 CAR-ID에 커플링시키는 것은 순차적으로 발생할 수 있다. 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및 CAR-ID에 커플링시키는 것은 단일 반응 용적에서 발생할 수 있다. 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및 CAR-ID에 커플링시키는 것은 2개 이상의 반응 용적에서 발생할 수 있다.
하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID에 커플링시키는 것은 링커와 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID 사이에 하나 이상의 옥심을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID에 커플링시키는 것은 링커와 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID 사이에 하나 이상의 안정한 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID에 커플링시키는 것은 링커와 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID 사이에 하나 이상의 공유 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID에 커플링시키는 것은 링커와 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID 사이에 하나 이상의 비-공유 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID에 커플링시키는 것은 링커와 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID 사이에 하나 이상의 이온 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다.
하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID에 커플링시키는 것은 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID에 부위 특이적으로 커플링시키는 것을 포함할 수 있다. 부위 특이적 커플링은 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID의 비천연 아미노산에 연결하는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID의 비천연 아미노산에 연결하는 것은 옥심의 형성을 포함할 수 있다. 하나 이상의 링커를 표적화 모이어티 및/또는 CAR-ID의 비천연 아미노산에 연결하는 것은, 비제한적인 예로서, 하나 이상의 링커의 하이드록실아민을 아미노산의 알데하이드 또는 케톤과 반응시키는 것을 포함할 수 있다. 아미노산은 비천연 아미노산일 수 있다.
CAR-ID를 표적화 모이어티에 부위 특이적으로 연결하거나, 링커 또는 링커의 전구체를 CAR-ID에 부위 특이적으로 부착시키거나, 링커 또는 링커의 전구체를 표적화 모이어티에 부위 특이적으로 부착시키거나, CAR-ID 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부위 특이적으로 부착시키거나, 표적화 모이어티 스위치 중간체를 CAR-ID에 부위 특이적으로 부착시키거나, 표적화 모이어티 스위치 중간체를 CAR-ID 스위치 중간체에 부위 특이적으로 부착시키기 위해 하나 이상의 반응을 수행하는 것은 구리 비함유 반응, 중부가, 휴스겐-중부가, 구리 비함유 [3+2] 휴스겐-중부가, 구리 함유 반응, 디엘스 앨더 반응, 헤테로 디엘스 앨더 반응, 복분해 반응, 금속 매개된 크로스-커플링 반응, 라디칼 중합, 산화 커플링, 아실-전달 반응, 광 클릭 반응, 효소 매개된 반응, 트랜스글루타미나제 매개된 반응으로부터 선택된 하나 이상의 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다.
본 명세서에 개시된 스위치는 FITC를 포함하는 CAR-ID 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다. 이러한 스위치를 제조하는 방법은 링커 또는 이의 전구체, 표적화 모이어티를 포함하는 스위치 중간체(예를 들어, 표적화 모이어티 스위치 중간체) 또는 표적화 모이어티를 CAR-ID에 커플링시키는 것을 포함할 수 있다. 링커 또는 이의 전구체, 표적화 모이어티 스위치 중간체를 CAR-ID에 커플링시키는 것은 FITC의 아이소티오사이아네이트를 링커 또는 이의 전구체, 표적화 모이어티 스위치 중간체 또는 표적화 모이어티에 접합시키는 것을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 폴리펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 폴리펩타이드는 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 표적화 모이어티를 CAR-ID에 커플링시키는 것은 FITC의 아이소티오사이아네이트를 표적화 모이어티의 아미노산에 접합시키는 것을 포함할 수 있다. 아미노산은 라이신일 수 있다. 상기 방법은 하나 이상의 CAR-ID를 표적화 모이어티에 커플링시키는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 2개 이상의 CAR-ID로부터의 FITC를 표적화 모이어티의 2개 이상의 아미노산에 접합시키는 것을 포함할 수 있다. 2개 이상의 아미노산은 라이신일 수 있다.
본 명세서에 개시된 스위치를 제조하는 것은 에스터 커플링을 포함할 수 있다. 에스터 커플링은 CAR-ID와 표적화 모이어티 사이에 아마이드 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 에스터 커플링은 스위치 중간체와 표적화 모이어티 사이에 아마이드 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 스위치 중간체는 링커에 부착된 CAR-ID를 포함할 수 있다. 아마이드 결합은 스위치 중간체의 링커와 표적화 모이어티 사이에 형성될 수 있다. 링커는 NHS-에스터 링커일 수 있다. 아마이드 결합은 스위치 중간체의 링커와 표적화 모이어티의 아미노산 사이에 형성될 수 있다. CAR-ID는 소분자를 포함할 수 있다. 소분자는 FITC일 수 있다. 표적화 모이어티는 폴리펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 폴리펩타이드는 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 표적화 모이어티는 소분자를 포함할 수 있다.
본 명세서에 개시된 스위치를 제조하는 방법은 (a) (i) CAR-ID; 및 (ii) 링커를 포함하는 스위치 중간체를 얻은 단계; 및 (b) 스위치 중간체를 표적화 모이어티와 접촉시켜서, 스위치를 제조하는 단계를 포함할 수 있다. 스위치 중간체를 표적화 모이어티와 접촉시키는 것은 에스터 커플링 반응을 수행하는 것을 포함할 수 있다. 링커는 NHS-에스터 링커를 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 에스터 커플링 반응을 수행하는 것은 스위치 중간체의 NHS-에스터 링커와 표적화 모이어티의 하나 이상의 아미노산 사이에 아마이드 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 복수의 스위치를 제조하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 복수의 스위치의 2개 이상의 스위치는 표적화 모이어티의 2개 이상의 상이한 아미노산에 부착된 2개 이상의 스위치 중간체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 제1 스위치 중간체는 제1 표적화 모이어티의 라이신 잔기에 부착될 수 있고, 제2 스위치 중간체는 제2 표적화 모이어티의 글라이신 잔기에 부착될 수 있다. 복수의 스위치의 2개 이상의 스위치는 표적화 모이어티의 동일한 아미노산에 부찰된 2개 이상의 스위치 중간체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 2개 이상의 스위치 중간체는 제1 및 제2 표적화 모이어티의 라이신 잔기에 부착될 수 있다. 복수의 스위치의 2개 이상의 스위치는 표적화 모이어티에서 2개 이상의 상이한 위치에 배치된 동일한 아미노산에 부착된 2개 이상의 스위치 중간체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 제1 스위치 중간체는 제1 표적화 모이어티의 10번 라이신에 부착될 수 있고, 제2 스위치 중간체는 제2 표적화 모이어티의 45번 라이신에 부착될 수 있다. 복수의 스위치의 2개 이상의 스위치는 표적화 모이어티에서 동일한 위치에 배치된 동일한 아미노산에 부착된 2개 이상의 스위치 중간체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 제1 스위치 중간체는 제1 표적화 모이어티의 10번 라이신에 부착될 수 있고, 제2 스위치 중간체는 제2 표적화 모이어티의 10번 라이신에 부착될 수 있다.
본 명세서에 개시된 스위치를 제조하는 방법은 하나 이상의 비천연 아미노산을 사용하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 하나 이상의 비천연 아미노산을 CAR-ID로 도입하는 것을 포함할 수 있다. CAR-ID는 효과기 세포 상의 CAR과 상호작용할 수 있는 폴리펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 폴리펩타이드는 비항체 기반 폴리펩타이드일 수 있다. 일반적으로, 비항체 기반 폴리펩타이드는 항체 또는 항체 단편을 포함하지 않는 폴리펩타이드이다. 비천연 아미노산은 비항체 기반 폴리펩타이드로 도입될 수 있다. 비천연 아미노산은 비항체 기반 폴리펩타이드의 아미노산을 대체할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 상기 방법은 하나 이상의 비천연 아미노산을 표적화 모이어티로 도입하는 것을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 폴리펩타이드에 기초하거나 이로부터 유래될 수 있다. 폴리펩타이드는 항체일 수 있다. 폴리펩타이드는 비항체 기반 폴리펩타이드일 수 있다. 비천연 아미노산은 폴리펩타이드로 도입될 수 있다. 비천연 아미노산은 폴리펩타이드의 아미노산을 대체할 수 있다.
스위치를 제조하는 방법은 CAR-ID가 기초하거나 유래된 폴리펩타이드에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 변형시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 스위치를 제조하는 방법은 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 폴리펩타이드에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 변형시키는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 잔기를 변형시키는 것은 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에서 하나 이상의 뉴클레오타이드를 돌연변이시키는 것을 포함할 수 있다. 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에서 하나 이상의 뉴클레오타이드를 돌연변이시키는 것은 아미노산을 암호화하는 코돈을 논센스 코돈에 변경하는 것을 포함할 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산을 CAR-ID가 기초하거나 유래된 폴리펩타이드로 도입하는 것은 항체 또는 항체 단편에서 하나 이상의 앰버 코돈을 제조하기 위해 폴리펩타이드에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 변형시키는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산을 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 폴리펩타이드로 도입하는 것은 항체 또는 항체 단편에서 하나 이상의 앰버 코돈을 제조하기 위해 폴리펩타이드에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 변형시키는 것을 포함할 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산은 앰버 코돈에 반응하여 폴리펩타이드로 도입될 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산은 폴리펩타이드로 부위 특이적으로 도입될 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산을 CAR-ID 및 표적화 모이어티가 기초하거나 유래된 폴리펩타이드로 도입하는 것은 항체, 항체 단편 또는 표적화 펩타이드를 부위 특이적으로 변형시키기 위해 정규 20개의 아미노산에 대해 직각 화학 반응성을 갖는 하나 이상의 유전자 암호화된 비천연 아미노산의 사용을 포함할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산을 도입하는 것은 하나 이상의 tRNA 합성효소의 사용을 포함할 수 있다. tRNA 합성효소는 아미노아실 tRNA 합성효소일 수 있다. tRNA 합성효소는 돌연변이체 tRNA 합성일 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산을 도입하는 것은 tRNA/tRNA 합성효소 쌍을 포함할 수 있다. tRNA/tRNA 합성효소 쌍은 tRNA/아미노아실-tRNA 합성효소 쌍을 포함할 수 있다. tRNA/tRNA 합성효소 쌍은 tRNATyr/타이로실-tRNA 합성효소 쌍을 포함할 수 있다. 하나 이상의 비천연 아미노산을 도입하는 것은 하나 이상의 앰버 논센스 코돈에 반응하여 폴리펩타이드에서 한정된 부위에서 하나 이상의 비천연 아미노산을 부위 특이적으로 도입하기 위해 전개된 tRNA/아미노아실-tRNA 합성효소 쌍의 사용을 포함할 수 있다.
비천연 아미노산을 도입하기 위한 추가적인 방법은 Chatterjee 등(A Versatile Platform for Single- and Multiple-Unnatural Amino Acid Mutagenesis in Escherichia coli, Biochemistry, 2013), Kazane et al. (J Am Chem Soc, 135(1):340-6, 2013), Kim et al. (J Am Chem Soc, 134(24):9918-21, 2012), Johnson et al. (Nat Chem Biol, 7(11):779-86, 2011) 및 Hutchins et al. (J Mol Biol, 406(4):595-603, 2011)에서 개시된 방법을 포함하지만, 이것으로 제한되지는 않는다.
키메라 항원 수용체-효과기 세포(CAR-EC)를 활성화하기 위한 스위치를 제조하는 방법은 (a) 비천연 아미노산을 포함하는 표적화 모이어티를 얻는 것; 및 (b) 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID)을 표적화 모이어티에 부착시켜서, 스위치를 제조하는 것을 포함할 수 있다. 따라서, 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 CAR-ID를 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 단편인 표적화 모이어티에 포함된 비천연 아미노산에 부착시키는 것을 포함한다.
CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 휴스겐 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 [3+2] 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 [3+2] 휴스겐 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 구리 비함유 중부가를 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 구리 비함유 반응을 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 구리 함유 반응을 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 헤테로 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 에스터 커플링을 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 아이소티오사이아네이트 커플링을 포함할 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 CAR-ID를 표적화 모이어티의 아미노산에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 아미노산은 비천연 아미노산일 수 있다. CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 생물직교 반응을 포함할 수 있다. CAR-ID는 표적화 모이어티에 부위 특이적 방식으로 부착될 수 있다. CAR-ID는 표적화 모이어티에서 미리 결정된 부위에 부착될 수 있다. CAR-ID는 표적화 모이어티에 부위 독립적 방식으로 부착될 수 있다.
상기 방법은 제1 스위치 중간체를 제조하기 위해 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 중부가를 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 구리 비함유 반응을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 구리 함유 반응을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 헤테로 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 에스터 커플링을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 옥심 결찰을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 제1 링커와 표적화 모이어티 사이에 하나 이상의 옥심을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 제1 링커와 표적화 모이어티 사이에 하나 이상의 안정한 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 제1 링커와 표적화 모이어티 사이에 하나 이상의 공유 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 제1 링커와 표적화 모이어티 사이에 하나 이상의 비공유 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 제1 링커와 표적화 모이어티 사이에 하나 이상의 이온 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 링커를 표적화 모이어티의 아미노산에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 아미노산은 비천연 아미노산일 수 있다. 제1 링커를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 생물직교 반응을 포함할 수 있다.
CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 제1 스위치 중간체를 CAR-ID에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 휴스겐 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 [3+2] 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 [3+2] 휴스겐 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 구리 비함유 중부가를 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 CAR-ID에 부착시키는 것은 구리 비함유 반응을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 내지 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 구리 함유 반응을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 헤테로 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 에스터 커플링을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 아이소티오사이아네이트 커플링을 포함할 수 있다.
상기 방법은 제2 스위치 중간체를 제조하기 위해 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 중부가를 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 구리 비함유 반응을 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 구리 함유 반응을 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 헤테로 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 하나 이상의 에스터 커플링을 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 옥심 결찰을 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 제2 링커와 CAR-ID 사이에 하나 이상의 옥심을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 제2 링커와 CAR-ID 사이에 하나 이상의 안정한 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 제2 링커와 CAR-ID 사이에 하나 이상의 공유 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 제2 링커와 CAR-ID 사이에 하나 이상의 비공유 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다. 제2 링커를 CAR-ID에 부착시키는 것은 제2 링커와 CAR-ID 사이에 하나 이상의 이온 결합을 형성하는 것을 포함할 수 있다.
CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 제2 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 제2 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 휴스겐 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 [3+2] 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 [3+2] 휴스겐 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 구리 비함유 중부가를 포함할 수 있다. 제2 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 구리 비함유 반응을 포함할 수 있다. 제2 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 구리 함유 반응을 포함할 수 있다. 제2 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제2 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 헤테로 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제2 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 에스터 커플링을 포함할 수 있다. 제2 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 아이소티오사이아네이트 커플링을 포함할 수 있다. 제2 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 링커를 CAR-ID의 아미노산에 부착시키는 것을 포함할 수 있다. 아미노산은 비천연 아미노산일 수 있다. 제2 스위치 중간체를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 하나 이상의 생물직교 반응을 포함할 수 있다.
CAR-ID를 표적화 모이어티에 부착시키는 것은 제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 부착하는 것을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 부착하는 것은 하나 이상의 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 휴스겐 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 [3+2] 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 [3+2] 휴스겐 중부가를 포함할 수 있다. 하나 이상의 중부가는 구리 비함유 중부가를 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 부착하는 것은 구리 비함유 반응을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 부착하는 것은 하나 이상의 구리 함유 반응을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 부착하는 것은 하나 이상의 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 부착하는 것은 하나 이상의 헤테로 디엘스 앨더 반응을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 부착하는 것은 하나 이상의 에스터 커플링을 포함할 수 있다. 제1 스위치 중간체를 제2 스위치 중간체에 부착하는 것은 하나 이상의 아이소티오사이아네이트 커플링을 포함할 수 있다.
(a) 효모 전사 인자 펩타이드로부터의 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치가 본 명세서에 개시되어 있다. 효모 전사 인자 펩타이드는 GCN4 펩타이드일 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 중쇄 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 전장 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-GCN4 CAR 및 항-GCN4 CAR을 발현하는 CAR-EC가 본 명세서에 또한 개시되어 있다. 몇몇 실시형태에서, (i) (a) 효모 전사 인자 펩타이드(예를 들어, 본 명세서에 개시된 GCN4 펩타이드)로부터의 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) 항-GCN4 CAR을 발현하는 CAR-EC에 의한 대상체의 동시치료는 CD19 발현 표적 세포의 스위치 매개된 세포독성을 발생시킨다.
(a) Flag 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치가 본 명세서에 개시되어 있다. Flag 펩타이드는 DYKDDDDK(서열 번호 40) 및 DYKDDDDKP(서열 번호 39)의 서열 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 중쇄 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 전장 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-Flag CAR 및 항-Flag CAR을 발현하는 CAR-EC가 본 명세서에 또한 개시되어 있다. 몇몇 실시형태에서, (i) (a) Flag 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) 항-Flag CAR을 발현하는 CAR-EC에 의한 대상체의 동시치료는 CD19 발현 표적 세포의 스위치 매개된 세포독성을 발생시킨다.
(a) FITC를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치가 본 명세서에 개시되어 있다. FITC는 인간화된 FMC63 항체에 비특이적으로 접합될 수 있다. FITC는 인간화된 FMC63 항체 부위에 특이적으로 접합될 수 있다. 부위 특이적 접합은 인간화된 FMC63 항체에 포함된 인공 아미노산에 대한 것일 수 있다. 접합은 인간화된 FMC63 항체를 FITC에 연결하는 링커를 통해서일 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 중쇄 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 전장 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항-FITC CAR 및 항-FITC CAR을 발현하는 CAR-EC가 본 명세서에 또한 개시되어 있다. 몇몇 실시형태에서, (i) (a) FITC를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) 항-FITC CAR을 발현하는 CAR-EC에 의한 대상체의 동시치료는 CD19 발현 표적 세포의 스위치 매개된 세포독성을 발생시킨다.
(a) K4 펩타이드를 포함하는 CAR-ID 또는 E4 펩타이드; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)를 포함하는 CAR-EC 스위치가 본 명세서에 개시되어 있다. K4 펩타이드는 KVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE(서열 번호 43)의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. E4 펩타이드는 EVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEK(서열 번호 44)의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 중쇄 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 전장 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. K4 세포외 도메인을 포함하는 CAR이 본 명세서에 또한 개시되어 있다. E4 세포외 도메인을 포함하는 CAR이 본 명세서에 또한 개시되어 있다. K4 세포외 도메인을 포함하는 CAR을 발현하는 CAR-EC가 본 명세서에 또한 개시되어 있다. E4 세포외 도메인을 포함하는 CAR을 발현하는 CAR-EC가 본 명세서에 또한 개시되어 있다.
몇몇 실시형태에서, (i) (a) K4 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) E4 세포외 도메인을 포함하는 CAR을 발현하는 CAR-EC에 의한 대상체의 동시치료는 CD19 발현 표적 세포의 스위치 매개된 세포독성을 발생시킨다. 몇몇 실시형태에서, (a) E4 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) K4 세포외 도메인을 포함하는 CAR을 발현하는 CAR-EC에 의한 대상체의 동시치료는 CD19 발현 표적 세포의 스위치 매개된 세포독성을 발생시킨다.
III. CAR-EC 스위치 및 이의 일부의 정제
CAR-EC 스위치 제조 시스템의 성분(예를 들어, 세포 부스러기, 유리 아미노산)으로부터 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치를 분리하는 단계를 포함하는 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치를 정제하는 방법이 본 명세서에 개시되어 있다. CAR-EC 스위치를 정제하는 것은 하나 이상의 농축기 칼럼, 전기영동, 여과, 원심분리, 크로마토그래피 또는 이들의 조합의 사용을 포함할 수 있다. 크로마토그래피는 크기 배제 크로마토그래피를 포함할 수 있다. 추가적인 크로마토그래피 방법은 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피, 금속 결합, 면역친화도 크로마토그래피 및 고성능 액체 크로마토그래피 또는 고압 액체 크로마토그래피를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 전기영동은 변성 전기영동 또는 비변성 전기영동을 포함할 수 있다.
인간화된 CAR-EC 스위치는 하나 이상의 펩타이드 태그를 포함할 수 있다. 인간화된 CAR-EC 스위치를 정제하는 방법은 인간화된 CAR-EC 스위치의 하나 이상의 펩타이드 태그를 포획제에 결합시키는 것을 포함할 수 있다. 포획제는 항체, 칼럼, 비드 및 이의 조합으로부터 선택될 수 있다. 하나 이상의 태그는 하나 이상의 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 태그의 예는 폴리히스티딘, FLAG(등록상표) 태그, HA, c-myc, V5, 키틴 결합 단백질(chitin binding protein: CBP), 말토스 결합 단백질(maltose binding protein: MBP) 및 글루타티온-S-전환효소(glutathione-S-transferase: GST)를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 펩타이드 태그는 CAR-ID일 수 있다. 펩타이드 태그는 HTP일 수 있다. 펩타이드 태그는 효모 전사 인자 GCN4일 수 있다.
상기 방법은 CAR-ID, 표적화 폴리펩타이드 및/또는 인간화된 CAR-EC 스위치의 동결건조 또는 초원심분리를 추가로 포함할 수 있다.
CAR-ID, 표적화 폴리펩타이드 및/또는 인간화된 CAR-EC 스위치의 순도는 50% 이상, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 이것 초과일 수 있다. CAR-ID, 표적화 폴리펩타이드 및/또는 인간화된 CAR-EC 스위치의 순도는 85% 이상일 수 있다. CAR-ID, 표적화 폴리펩타이드 및/또는 인간화된 CAR-EC 스위치의 순도는 90% 이상일 수 있다. CAR-ID, 표적화 폴리펩타이드 및/또는 인간화된 CAR-EC 스위치의 순도는 95% 이상일 수 있다. CAR-ID, 표적화 폴리펩타이드 및/또는 인간화된 CAR-EC 스위치의 순도는 97% 이상일 수 있다. 인간화된 CAR-EC 스위치를 정제하는 이러한 방법에 따라 정제된 인간화된 CAR-EC 스위치는 본 명세서에서 "정제된 CAR-EC 스위치" 또는 "정제된 인간화된 CAR-EC 스위치"라 칭해진다. 정제된 CAR-EC 스위치는 내독소 비함유 또는 실질적으로 내독소 비함유일 수 있다.
본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치를 제조하는 방법은 구조적으로 균일한 인간화된 CAR-EC 스위치를 제조하는 것을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드로부터 CAR-EC 스위치를 제조하는 방법은 동일한 또는 유사한 형태, 특징, (예를 들어, CAR 또는 표적에 대한) 결합 친화도, 기하구조 및/또는 크기를 갖는 하나 이상의 인간화된 CAR-EC 스위치를 생성시킬 수 있다. 인간화된 CAR-EC 스위치의 균질성은 50% 이상, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 이것 초과일 수 있다. 인간화된 CAR-EC 스위치의 균질성은 85% 이상일 수 있다. 인간화된 CAR-EC 스위치의 균질성은 90% 이상일 수 있다. 인간화된 CAR-EC 스위치의 균질성은 95% 이상일 수 있다. 인간화된 CAR-EC 스위치의 균질성은 97% 이상일 수 있다. 균질성은 구조 균질성일 수 있다. 균질성은 세포를 대상체에게 투여하기 전에 구조 균질성일 수 있다. 균질성은 세포 활성에 의해 CAR-EC 스위치에 대한 변형(메틸화, 아세틸화, 글라이코실화 등) 전에 구조 균질성을 가질 수 있다. 균질성의 이 높은 백분율은 CAR-EC 스위치의 더 예측 가능한 효과를 제공할 수 있다. 균질성의 이 높은 백분율은 대상체에서 병태를 치료하기 위해 CAR-EC와 조합될 때 CAR-EC 스위치의 더 적은 오프 타깃 효과를 제공할 수 있다.
IV. 약제학적 조성물
본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치 중 하나 이상을 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 개시되어 있다. CAR-EC 스위치 중 하나 이상은 정제된 CAR-EC 스위치일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 본 명세서에 개시된 정제된 인간화된 CAR-EC 스위치를 포함한다. 상기 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 염, 부형제 또는 비히클을 추가로 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 내독소 비함유 또는 실질적으로 내독소 비함유일 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 약제학적으로 허용 가능한 염, 부형제, 비히클, 또는 이들의 조합, 및 경쇄 및 중쇄를 포함하는 CAR-EC 스위치를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, 경쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 경쇄 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, 중쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 중쇄 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 이러한 중쇄 및/또는 경쇄 서열은 인간화될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 약제학적 조성물에 포함된 CAR-EC 스위치는 인간화되고, 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 중 하나 또는 둘 다는 본 명세서에 개시된 CAR-ID (예를 들어, GCN4 CAR-ID)를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 약제학적 조성물에 포함된 CAR-EC 스위치는 인간화되고, 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 서열을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 중 하나 또는 둘 다는 본 명세서에 개시된 CAR-ID(예를 들어, GCN4 CAR-ID)를 포함한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 경쇄 서열은 (N 말단 GCN4 CAR-ID를 포함하는) 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 경쇄 서열은 (N 말단 GCN4 CAR-ID를 포함하는) 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 인간화된 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 서열을 포함한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 스위치는 본 명세서에 개시된 스위치 중 몇몇에 포함된 중쇄/경쇄 조합을 제시하는 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치이다. 몇몇 실시형태에서, 스위치는, 스위치에 포함된 CAR-ID가 구조 I의 서열을 갖도록 변형된다는 것을 제외하고는, 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치와 동일하다. 몇몇 실시형태에서, 구조 I의 서열은 서열 번호 26, 36, 139, 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된다. 약제학적 조성물은 단일 스위치를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 복수의 스위치를 포함할 수 있다. 복수의 스위치는 각각 동일한 CAR-ID를 포함할 수 있다. 복수의 스위치의 2개 이상은 각각 상이한 CAR-ID를 포함할 수 있다. 복수의 스위치는 각각 CAR-EC 상의 동일한 CAR에 의해 결합될 수 있다. CAR-ID는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체일 수 있다.
본 약제학적 조성물에서 사용하기 위한 약제학적으로 허용 가능한 염, 부형제, 또는 비히클은 담체, 부형제, 희석제, 항산화제, 보존제, 착색제, 항료 및 희석제, 유화제, 현탁제, 용매, 충전제, 벌크화제, 완충제, 전달 비히클, 등장화제, 공용매, 습윤제, 착화제, 완충제, 항균제 및 계면활성제를 포함한다.
중성 완충 식염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 식염수는 예시적인 적절한 담체가다. 약제학적 조성물은 항산화제, 예컨대 아스코르브산; 저분자량 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산 예컨대 글라이신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당 알코올, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염 형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 Tween, 플루로닉(pluronic) 또는 폴리에틸렌 글라이콜(PEG)을 포함할 수 있다. 또한 예로서, 적합한 등장성 향상제는 알칼리 금속 할라이드(바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨), 만니톨, 소르비톨 등을 포함한다. 적합한 보존제는 벤즈알코늄 클로라이드, 티로메살, 펜에틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 등을 포함한다. 과산화수소는 또한 보존제로서 사용될 수 있다. 적합한 공용매는 글라이세린, 프로필렌 글라이콜 및 PEG를 포함한다. 적합한 착화제는 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-사이클로덱스트린 또는 하이드록시-프로필-베타-사이클로덱스트린을 포함한다. 적합한 계면활성제 또는 습윤제는 소르비탄 에스터, 폴리소르베이트 예컨대 폴리소르베이트 80, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔 등을 포함한다. 완충제는 관습적인 완충제, 예컨대 아세테이트, 보레이트, 시트레이트, 포스페이트, 바이카보네이트 또는 트리스-HCl일 수 있다. 아세테이트 완충제는 약 pH 4 내지 5.5일 수 있고, 트리스 완충제는 약 pH 7 내지 8.5일 수 있다. 추가적인 약제학적 물질은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company, 1990]에 기재되어 있다.
상기 조성물은 액체 형태 또는 동결건조된 또는 냉동 건조된 형태일 수 있고, 하나 이상의 동결건조보호제, 부형제, 계면활성제, 고분자량 구조 첨가제 및/또는 벌크화제를 포함할 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제6,685,940호, 제6,566,329호 및 제6,372,716호 참조). 일 실시형태에서, 비환원 당, 예컨대 수크로스, 락토스 또는 트레할로스인 동결건조보호제가 포함된다. 일반적으로 포함된 동결건조보호제의 양은 재구성 시 생성된 제제가 등장성이지만, 고장성 또는 약간 저장성 제제가 또한 적합할 수 있는 것이다. 또한, 동결건조보호제의 양은 동결건조 시 단백질의 분해 및/또는 응집의 허용 불가능한 양을 막기에 충분해야 한다. 예비 동결건조된 제제에서의 당(예를 들어, 수크로스, 락토스, 트레할로스)에 대한 예시적인 동결건조보호제 농도는 약 10mM 내지 약 400mM이다. 또 다른 실시형태에서, 예를 들어, 비이온성 계면활성제 및 이온 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트(예를 들어, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80); 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188); 폴리(에틸렌 글라이콜) 페닐 에터(예를 들어, Triton); 나트륨 도데실 설페이트(SDS); 나트륨 라우릴 설페이트; 나트륨 옥틸 글라이코사이드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사르코신; 리놀레일, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코크아미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필- 또는 아이소스테아르아미도프로필-베타인(예를 들어, 라우로아미도프로필); 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필- 또는 아이소스테아르아미도프로필-다이메틸아민; 나트륨 메틸 코코일- 또는 이나트륨 메틸 올레일-타우레이트; 및 MONAQUAT(상표명) 시리즈(Mona Industries, Inc.(뉴저지주 패터슨)), 폴리에틸 글라이콜, 폴리프로필 글라이콜, 및 에틸렌 및 프로필렌 글라이콜의 공중합체(예를 들어, Pluronics, PF68 등)과 같은 계면활성제가 포함된다. 예비 동결건조된 제제에 존재할 수 있는 계면활성제의 예시적인 양은 약 0.001% 내지 0.5%이다. 고분자량 구조 첨가제(예를 들어, 충전제, 결합제)는 예를 들어 아카시아, 알부민, 알긴산, 인산칼슘(이염기성), 셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스 나트륨, 하이드록시에틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 미결정질 셀룰로스, 덱스트란, 덱스트린, 덱스트레이트, 수크로스, 타일로스, 전호화분 전분, 칼슘 설페이트, 아밀로스, 글라이신, 벤토나이트, 말토스, 소르비톨, 에틸셀룰로스, 이나트륨 수소 포스페이트, 이나트륨 포스페이트, 이나트륨 피로설파이트, 폴리비닐 알코올, 젤라틴, 글루코스, 구아검, 액체 글루코스, 압축 가능 당, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 말토덱스트린, 폴리에틸렌 옥사이드, 폴리메타크릴레이트, 포비돈, 나트륨 알기네이트, 트래거캔스 미결정질 셀룰로스, 전분 및 제인을 포함할 수 있다. 고분자량 구조 첨가제의 예시적인 농도는 0.1% 내지 10중량%이다. 다른 실시형태에서, 벌크화제(예를 들어, 만니톨, 글라이신)가 포함될 수 있다.
조성물은 무균일 수 있다. 조성물은 발열원 비함유 또는 실질적으로 발열원 비함유일 수 있다. 조성물은 내독소 비함유 또는 실질적으로 내독소 비함유일 수 있다. 조성물은 등장성 수성 용액일 수 있다. 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 보존제를 함유할 수 있다.
조성물은 비경구 투여에 적합할 수 있다. 예시적인 조성물은 당업자에게 이용 가능한 임의의 경로, 예컨대 관절내, 피하, 정맥내, 근육내, 복강내, 대뇌내(조직질실내), 두개내, 근육내, 눈내, 동맥내 또는 병변내 경로에 의해 동물로의 주사 또는 점적주사에 적합하다. 비경구 제제는 통상적으로 선택적으로 약제학적으로 허용 가능한 보존제를 함유하는 무균, 발열원 비함유, 등장성 수성 용액일 것이다.
비수성 용매의 예는 프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일 및 주사용 유기 에스터, 예컨대 에틸 올레에이트이다. 수성 담체는 물, 알코올성/수성 용액, 에멀션 또는 현탁액, 예를 들어 식염수 및 완충 매질을 포함한다. 비경구 비히클은 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 락테이트화 링거 또는 고정유를 포함한다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양소 보충제, 전해질 보충제, 예컨대 링거 덱스트로스에 기초한 것 등을 포함한다. 예를 들어, 항균제, 항산화제, 킬레이트화제, 불활성 가스 등과 같은 보존제 및 다른 첨가제가 또한 존재할 수 있다. 일반적으로, 문헌[Remington's Pharmaceutical Science, 16th Ed., Mack Eds., 1980](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)을 참조한다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 생성물의 국소 농도(예를 들어, 볼루스, 데포 효과) 및/또는 특정한 국소 환경에서 증가된 안정성 또는 반감기를 제공하는 방식으로 제어 또는 지속 전달을 위해 제제화될 수 있다. 상기 조성물은 본 명세서에 개시된 스위치, 폴리펩타이드, 핵산 또는 벡터의 제제와 중합체 화합물, 예컨대 폴리락트산, 폴리글라이콜산 등의 미립자 제제, 및 활성 물질의 제어 또는 지속 방출을 제공하는(이후 데포 주사로서 전달될 수 있음), 물질, 예컨대 생체분해성 매트릭스, 주사용 마이크로구, 마이크로캡슐 입자, 마이크로캡슐, 생체흡수성 입자 비드, 리포솜, 및 이식형 전달 디바이스를 포함할 수 있다. 이러한 지속 또는 제어 전달 수단을 제제화하기 위한 기법은 공지되어 있고, 다양한 중합체가 약물의 제어 방출 및 전달을 위해 개발되고 사용된다. 이러한 중합체는 통상적으로 생체분해성 및 생체상용성이다. 중합체 하이드로겔, 예를 들어 거울상이성질체 중합체 또는 폴리펩타이드 분절의 복합체화에 의해 형성된 것, 및 온도 또는 pH 민감 특성을 갖는 하이드로겔은 생물활성 단백질 물질(예를 들어, 매우 긴 CDR3을 포함하는 항체)의 포획에 관여된 온화한 그리고 수성 조건 때문에 약물 데포 효과를 제공하는 데 바람직할 수 있다. 예를 들어, WO 제93/15722호에서 약제학적 조성물의 전달을 위한 제어 방출 다공성 중합체 마이크로입자의 설명을 참조한다. 이 목적에 적합한 재료는 폴리락타이드(예를 들어, 미국 특허 제3,773,919호 참조), 폴리-(a-하이드록시카복실산)의 중합체, 예컨대 폴리-D-(-)-3-하이드록시뷰티르산(EP 제133,988A호), L-글루탐산 및 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체(Sidman et al., Biopolymers, 22: 547-556 (1983)), 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트)(Langer et al., J. Biomed. Mater. Res., 15: 167-277 (1981), and Langer, Chem. Tech., 12: 98-105 (1982)), 에틸렌 비닐 아세테이트 또는 폴리-D(-)-3-하이드록시뷰티르산을 포함한다. 다른 생체분해성 중합체는 폴리(락톤), 폴리(아세탈), 폴리(오쏘에스터) 및 폴리(오쏘카보네이트)를 포함한다. 지속 방출 조성물은 또한 당해 분야에 공지된 임의의 몇몇 방법에 의해 제조될 수 있는 리포솜을 포함할 수 있다(예를 들어, 문헌[Eppstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688-92 (1985)]을 참조한다). 담체 자체 또는 이의 분해 생성물은 표적 조직에서 비독성이어야 하고, 병태를 더 악화시키지 않아야 한다. 이는 표적 장애의 동물 모델에서 또는, 이러한 모델이 이용 불가능한 경우, 일반 동물에서 일상적 스크리닝에 의해 결정될 수 있다. 지속 방출을 위한 재조합 단백질의 마이크로캡슐화는 인간 성장 호르몬(rhGH), 인터페론-(rhIFN-), 인터류킨-2 및 MN rgp120에 의해 성공적으로 수행되었다. Johnson et al., Nat. Med., 2:795-799 (1996); Yasuda, Biomed. Ther., 27:1221-1223 (1993); Hora et al., Bio/Technology. 8:755-758 (1990); Cleland, "Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polylactide Polyglycolide Microsphere Systems," in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach, Powell and Newman, eds, (Plenum Press: New York, 1995), pp. 439-462; WO 제97/03692호, WO 제96/40072호, WO 제96/07399호; 및 미국 특허 제5,654,010호. 이 단백질의 지속 방출 제제는 이의 생체적합성 및 넒은 범위의 생체분해성 특성으로 인해 폴리-락트산-코-글라이콜산(PLGA) 중합체를 사용하여 개발되었다. PLGA, 락트산 및 글라이콜산의 분해 생성물은 인간 신체 내에서 빨리 청소될 수 있다. 더구나, 이 중합체의 분해성은 이의 분자량 및 조성에 따라 달라질 수 있다. Lewis, "Controlled release of bioactive agents from lactide/glycolide polymer," in: M. Chasin and R. Langer (Eds.), Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems (Marcel Dekker: New York, 1990), pp. 1-41. 지속 방출 조성물의 추가적인 예는 예를 들어 EP 제58,481호 A, 미국 특허 제3,887,699호, EP 제158,277호 A, 캐나다 특허 제1176565호, 문헌[U. Sidman et al., Biopolymers 22, 547 [1983], R. Langer et al., Chem. Tech. 12, 98 [1982], Sinha et al., J. Control. Release 90, 261 [2003], Zhu et al., Nat. Biotechnol. 18, 24 [2000], and Dai et al., Colloids Surf B Biointerfaces 41, 117 [2005]]을 포함한다.
본 개시내용의 조성물에서의 또는 이것과 사용하기 위한 생체접착제 중합체가 또한 고안된다. 생체접착제는 연장된 시간 기간 동안 생물학적 기질에 부착할 수 있는 합성 및 천연 발생 재료이다. 예를 들어, 카보폴 및 폴리카보폴은 둘 다 폴리(아크릴산)의 합성 가교결합된 유도체이다. 천연 발생 물질에 기초한 생체접착제 전달 시스템은 예를 들어 히알우로난으로도 공지된 히알우론산을 포함한다. 히알우론산은 D-글루쿠론산 및 N-아세틸-D-글루코사민의 잔기로 이루어진 천연 발생 무코다당류이다. 히알우론산은 척추동물의 세포외 조직 매트릭스, 예를 들어 연결 조직, 및 활액 및 눈의 유리액 및 방수에서 발견된다. 히알우론산의 에스터화 유도체는 생체적합성 및 생체분해성인 전달에서 사용하기 위한 마이크로구를 제조하기 위해 사용된다(예를 들어, 문헌[Cortivo et al., Biomaterials (1991) 12:727-730; EP 제517,565호; WO 제96/29998호; Illum et al., J. Controlled Rel. (1994) 29:133-141]을 참조한다).
생체분해성 및 비생체분해성 둘 다의 중합체 매트릭스는 본 개시내용의 조성물을 전달하도록 사용될 수 있고, 이러한 중합체 매트릭스는 천연 또는 합성 중합체를 포함할 수 있다. 생체분해성 매트릭스가 바람직하다. 방출이 발생하는 시간의 기간은 중합체의 선택에 기초한다. 통상적으로, 몇 시간 내지 3개월 내지 12개월의 범위의 기간에 걸친 방출이 가장 바람직하다. 생체분해성 전달 시스템을 형성하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 합성 중합체는 락트산 및 글라이콜산의 중합체, 폴리아마이드, 폴리카보네이트, 폴리알킬렌, 폴리알킬렌 글라이콜, 폴리알킬렌 옥사이드, 폴리알킬렌 테레프탈레이트, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에터, 폴리비닐 에스터, 폴리-비닐 할라이드, 폴리비닐피롤리돈, 폴리글라이콜라이드, 폴리실록산, 폴리언하이드라이드, 폴리우레탄 및 이의 공중합체, 폴리(뷰트산), 폴리(발레르산), 알킬 셀룰로스, 하이드록시알킬 셀룰로스, 셀룰로스 에터, 셀룰로스 에스터, 나이트로 셀룰로스, 아크릴산 및 메타크릴산 에스터의 중합체, 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스, 하이드록시뷰틸 메틸 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 셀룰로스 프로피오네이트, 셀룰로스 아세테이트 뷰티레이트, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 카복실에틸 셀룰로스, 셀룰로스 트라이아세테이트, 셀룰로스 설페이트 나트륨염, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(뷰틸메타크릴레이트), 폴리(아이소뷰틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(아이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(아이소프로필 아크릴레이트), 폴리(아이소뷰틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트), 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리(에틸렌 글라이콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸렌 테레프탈레이트), 폴리(비닐 알코올), 폴리비닐 아세테이트, 폴리 비닐 클로라이드, 폴리스타이렌 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 예시적인 천연 중합체는 알기네이트 및 다른 다당류, 예를 들어 덱스트란 및 셀룰로스, 콜라겐, 화학 이의 유도체(화학 기, 예를 들어 알킬, 알킬렌의 치환, 부가, 하이드록실화, 산화 및 당업자에 의해 일상적으로 이루어진 다른 변형), 알부민 및 다른 친수성 단백질, 제인 및 다른 프롤라민 및 소수성 단백질, 이들의 공중합체 및 혼합물을 포함한다. 일반적으로, 이 재료는 효소 가수분해 또는 생체내 물에 대한 노출, 표면 또는 벌크 부식에 의해 분해된다. 중합체는 선택적으로 물 중의 이의 중량의 약 90% 이상을 흡수할 수 있고, 추가로, 선택적으로 다가 이온 또는 다른 중합체와 가교결합된 하이드로겔의 형태이다(예를 들어, WO 제04/009664호, WO 제05/087201호, Sawhney, et al., Macromolecules, 1993, 26, 581-587).
전달 시스템은 또한 지질, 예를 들어 스테롤, 예컨대 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스터 및 지방산 또는 천연 지방, 예컨대 모노-다이- 및 트라이-글라이세라이드; 하이드로겔 방출 시스템; 실라스틱 시스템; 펩타이드 기반 시스템; 왁스 코팅; 관습적인 결합제 및 부형제를 사용한 압축 정제; 부분적으로 융합된 임플란트; 등인 비중합체 시스템을 포함한다. 구체적인 예는 (a) 생성물이 매트릭스 내에 형태에 함유된 부식 시스템, 예컨대 미국 특허 제4,452,775호, 제4,675,189호 및 제5,736,152호에 기재된 것 및 (b) 생성물이 예컨대 미국 특허 제3,854,480호, 제5,133,974호 및 제5,407,686호에 기재된 중합체로부터 제어 속도로 침투하는 확산 시스템을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 생성물을 함유하는 리포솜은 방법 공지된 방법, 예를 들어(DE 제3,218,121호; Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688-3692 (1985); Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4030-4034 (1980); EP 제52,322호; EP 제36,676호; EP 제88,046호; EP 제143,949호; EP 제142,641호; JP 제83-118008호; 미국 특허 제4,485,045호 및 제4,544,545호; 및 EP 제102,324) 등에 의해 제조될 수 있다.
대안적으로 또는 추가적으로, 상기 조성물은 막의 이환 부위, 스펀지, 또는 본 명세서에 개시된 스위치가 흡수되거나 캡슐화되는 다른 적절한 재료로 이식을 통해 국소로 투여될 수 있다. 이식 디바이스가 사용되는 경우, 디바이스는 임의의 적합한 조직 또는 기관으로 이식될 수 있고, 본 명세서에 개시된 스위치, 핵산 또는 벡터의 전달은 볼루스를 통해 또는 연속 투여를 통해 또는 연속 점적주사를 사용하여 카테터를 통해 직접적으로 디바이스를 통해서 일 수 있다.
본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치(예를 들어, 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 단편을 포함하는 CAR-EC, 및/또는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체를 포함하는 CAR-EC)를 포함하는 약제학적 조성물은 예를 들어 건조 분말로서 흡입을 위해 제제화될 수 있다. 흡입 용액은 또한 에어로졸 전달을 위해 액화 압축가스에서 제제화될 수 있다. 훨씬 또 다른 제제에서, 용액은 분무화될 수 있다. 폐 투여를 위한 추가적인 약제학적 조성물은 화학적으로 변형된 단백질의 폐 전달을 개시하는 예를 들어 WO 제94/20069호에 기재된 것을 포함한다. 폐 전달을 위해, 입자 크기는 폐에 원위인 전달에 적합해야 한다. 예를 들어, 입자 크기는 1㎛ 내지 5㎛일 수 있지만; 예를 들어 각각의 입자가 쾌 다공성인 경우 더 큰 입자를 사용할 수 있다.
본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치(예를 들어, 인간화된 항-CD19 CAR-EC 스위치)를 함유하는 소정의 제제는 경구로 투여될 수 있다. 이 방식으로 투여되는 제제는 고체 투여형, 예컨대 정제 및 캡슐의 배함에서 통상 사용된 담체와 함께 또는 이것 없이 제제화될 수 있다. 예를 들어, 캡슐은 생체이용성이 최대화되고 예비 전신 분해가 최소화될 때 위장관에서의 지점에서 제제의 활성 부분을 방출시키도록 설계될 수 있다. 추가적인 물질은 선택적 결합제, 희석제, 항료, 저융점 왁스, 식물성 오일, 활택제, 현탁제, 정제 붕괴제의 흡수를 촉진하도록 포함될 수 있고, 결합제가 또한 사용될 수 있다.
또 다른 제제는 정제의 제조에 적합한 비독성 부형제와의 혼합물로 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치(예를 들어, 항-CD19 CAR-EC, 예컨대 인간화된 항-CD19 CAR-EC 및/또는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체를 포함하는 CAR-EC)의 유효 분량을 포함할 수 있다. 무균 물, 또는 또 다른 적절한 비히클 중에 정제를 용해시킴으로써, 용액은 단위 용량 형태로 제조될 수 있다. 적합한 부형제는 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 락토스, 또는 인산칼슘; 또는 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴, 또는 아카시아; 또는 활택제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 탤크를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
적합한 및/또는 바람직한 약제학적 제제는 의도된 투여 경로, 전달 포맷 및 원하는 투약량에 따라 본 개시내용의 검토 및 제제 기술의 일반 지식에서 결정될 수 있다. 투여의 방식과 무관하게, 유효 용량은 환자 체중, 신체 표면적 또는 장기 크기에 따라 계산될 수 있다. 본 명세서에 기재된 제제의 각각을 수반하는 치료를 위한 적절한 투약량을 결정하기 위한 계산의 추가의 개선은 당해 분야에서 일상적으로 만들어지고, 당해 분야에서 일상적으로 수행된 업무의 영역 내에 있다. 적절한 투약량은 적절한 용량-반응 데이터의 사용을 통해 확인될 수 있다.
V. 표적
표적 세포 상의 세포 표면 분자와 상호작용하는 키메라 수용체 및 키메라 수용체 스위치가 본 명세서에 개시되어 있다. 일반적으로, 스위치에 대한 효과기 세포 및 표적 세포의 결합은 표적 세포를 표적 세포에 대한 효과를 갖도록 효과기 세포의 활성에 대해 충분히 가까운 효과기 세포와의 근접성에 놓는다.
몇몇 실시형태에서, 표적 세포와 효과기 세포 사이의 근접성은 제PCT/US2016/027997호 또는 제PCT/US2016/027990호(이들은 각각 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 개시된 방법에 따라 최적화된다.
예를 들어, 몇몇 실시형태에서, CAR-ID를 표적화 모이어티에 연결시키는 임의의 링커의 크기는 표적 세포와 효과기 세포 사이의 근접성을 최적화하도록 이의 길이를 증가시키거나 감소시킴으로써 변형될 수 있다. 추가로, 표적화 모이어티 상의 CAR-ID의 위치는 표적 세포와 효과기 세포 사이의 근접성을 최적화하도록 변할 수 있다.
다양한 실시형태에서, 효과기 세포(예를 들어, T 세포) 및 표적 세포가 스위치에 결합될 때, T 세포는 표적 세포에 대한 세포독성 효과를 갖는 면역 반응을 생성할 수 있다.
스위치는 CD19를 발현하는 복수의 표적 세포와 상호작용할 수 있다. 표적 세포는 감염된 세포일 수 있다. 표적 세포는 병원성으로 감염된 세포일 수 있다. 표적 세포는 이환된 세포일 수 있다. 표적 세포는 유전자 변형된 세포일 수 있다. 표적 세포는 숙주 세포가 아닐 수 있다. 비세포 표적 상의 분자와 상호작용하는 CAR-EC 스위치가 본 명세서에 추가로 개시되어 있다. 비세포 표적은 바이러스 또는 이의 일부일 수 있다. 비세포 표적은 세포의 단편일 수 있다. 비세포 표적은 세포외 매트릭스 성분 또는 단백질일 수 있다.
표적 세포는 조직으로부터 유래될 수 있다. 조직은 뇌, 식도, 유방, 결장, 폐, 교세포, 난소, 자궁, 고환, 전립선, 위장관, 방광, 간, 흉선, 골 및 피부로부터 선택될 수 있다. 표적 세포는 하나 이상의 내분비선으로부터 유래될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 표적 세포는 나 이상의 내분비선으로부터 유래될 수 있다. 내분비선은 림프절, 뇌하수체, 갑상선, 부갑상선, 췌장, 생식선 또는 송과선일 수 있다.
표적 세포는 줄기 세포, 다능성 세포, 조혈 줄기 세포 또는 선조 세포로부터 선택될 수 있다. 표적 세포는 순환 세포일 수 있다. 표적 세포는 면역 세포일 수 있다.
표적 세포는 암 줄기 세포일 수 있다. 표적 세포는 암 세포일 수 있다. 암 세포는 조직으로부터 유래될 수 있다. 조직은, 비제한적인 예로서, 뇌, 식도, 유방, 결장, 폐, 교세포, 난소, 자궁, 고환, 전립선, 위장관, 방광, 간, 갑상선 및 피부로부터 선택될 수 있다. 암 세포는 골로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 혈액으로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 B 세포, T 세포, 단핵구, 혈소판, 백혈구, 호중구, 호산구, 호염기구, 림프구, 조혈 줄기 세포 또는 내피 세포 선조로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 CD19 양성 B 림프구로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 줄기 세포로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 다능성 세포로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 하나 이상의 내분비선으로부터 유래될 수 있다. 내분비선은 림프절, 뇌하수체, 갑상선, 부갑상선, 췌장, 생식선 또는 송과선일 수 있다.
표적 세포는 줄기 세포, 다능성 세포, 조혈 줄기 세포 또는 선조 세포로부터 선택될 수 있다. 표적 세포는 순환 세포일 수 있다. 표적 세포는 면역 세포일 수 있다.
표적 세포는 암 줄기 세포일 수 있다. 표적 세포는 암 세포일 수 있다. 암 세포는 조직으로부터 유래될 수 있다. 조직은, 비제한적인 예로서, 뇌, 식도, 유방, 결장, 폐, 교세포, 난소, 자궁, 고환, 전립선, 위장관, 방광, 간, 갑상선 및 피부로부터 선택될 수 있다. 암 세포는 골로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 혈액으로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 B 세포, T 세포, 단핵구, 혈소판, 백혈구, 호중구, 호산구, 호염기구, 림프구, 조혈 줄기 세포 또는 내피 세포 선조로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 CD19 양성 B 림프구로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 줄기 세포로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 다능성 세포로부터 유래될 수 있다. 암 세포는 하나 이상의 내분비선으로부터 유래될 수 있다. 내분비선은 림프절, 뇌하수체, 갑상선, 부갑상선, 췌장, 생식선 또는 송과선일 수 있다.
암 세포는 CD19 양성 세포일 수 있다. 암 세포는 CD19 양성 B 림프구일 수 있다. 암 세포는 Her2 양성 세포일 수 있다. Her2 양성 세포는 Her2 양성 유방암 세포일 수 있다. Her2 양성 세포는 Her2 양성 췌장암 세포일 수 있다. 암 세포는 BCMA 양성 세포일 수 있다. 암 세포는 BCMA 양성 다발성 골수종 세포일 수 있다. 암 세포는 CS1 양성 세포일 수 있다. CS1 양성 세포는 다발성 골수종 세포일 수 있다. 암 세포는 EGFRvIII 양성 세포일 수 있다. EGFRvIII 양성 세포는 교모세포종 세포일 수 있다. 암 세포는 CD20 양성 세포일 수 있다. 암 세포는 CD22 양성 세포일 수 있다. 암 세포는 CD33 양성 세포일 수 있다. CD33 양성 세포는 급성 골수성 백혈병 세포일 수 있다. 암 세포는 CD123 양성 세포일 수 있다. CD123 양성 세포는 급성 골수성 백혈병 세포일 수 있다. 암 세포는 CLL1 양성 세포일 수 있다. CD123 양성 세포는 급성 림프구 백혈병 세포일 수 있다. CLL1 양성 세포는 급성 골수성 백혈병 세포일 수 있다. 암 세포는 (i) CD33 양성, (ii) CD123 양성, (iii) CLL1 양성; 또는 (iv) (i), (ii) 및 (iii) 중 2개 이상의 조합인 급성 골수성 백혈병 세포일 수 있다.
세포 표면 분자는 항원일 수 있다. 항원은 세포 상의 표면 항원 또는 세포 표면 마커의 적어도 일부일 수 있다. 항원은 세포 상의 수용체 또는 동시-수용체일 수 있다. 항원은 주요 조직접합성 복합체(major histocompatibility complex: MHC)에 의해 결합되고 T 세포 수용체에 제시될 수 있는 분자 또는 분자 단편을 의미할 수 있다. 용어 "항원"은 면역원을 또한 의미할 수 있다. 면역원은 대상체로 저절로 주사되는 경우 후천성 면역 반응을 유발할 수 있다. 면역원은 홀로 면역 반응을 유도할 수 있다. 항원은 슈퍼항원, T 독립적 항원 또는 T 독립적 항원일 수 있다. 항원은 외인성 항원일 수 있다. 외인성 항원은 통상적으로 예를 들어 흡입, 섭취 또는 주사에 의해 밖으로부터 신체에 진입한 항원이다. 몇몇 항원은 외인성 항원으로서 시작할 수 있고, 후에 내인성(예를 들어, 세포내 바이러스)이 된다. 항원은 내인성 항원일 수 있다. 내인성 항원은 정상 세포 대사의 결과로서 또는 병원성 감염(예를 들어, 바이러스, 박테리아, 진균, 기생충) 때문에 세포 내에 생성된 항원일 수 있다. 항원은 자가항원일 수 있다. 자가항원은 특정한 자가면역 질환을 겪는 환자의 면역계에 의해 인식된 정상 단백질 또는 단백질의 복합체(및 때때로 DNA 또는 RNA)일 수 있다. 이 항원은, 정상 병태 하에, 면역계의 표적이 아니어야 하지만, 유전적 및/또는 환경적 인자로 인해, 이러한 항원에 대한 정상 면역학적 관용성은 이들 환자에 존재하지 않는다. 항원은 병태 또는 질환으로 인해 제시되거나 과발현될 수 있다. 병태 또는 질환은 암 또는 백혈병일 수 있다. 병태는 염증성 질환 또는 병태일 수 있다. 병태 또는 질환은 대사 질환일 수 있다. 병태는 유전자 장애일 수 있다.
세포 표면 분자는 종양 항원으로서 설계된 항원일 수 있다. 종양 항원 또는 신생항원은 종양 세포의 표면 상의 MHC I 또는 MHC II 분자에 의해 제시된 항원일 수 있다. 이 항원은 때때로 종양 세포에 의해 제시될 수 있고, 정상 세포에 의해서는 결코 아니다. 이 경우에, 이것은 종양 특이적 항원(tumor-specific antigen: TSA)이라 불리고, 일반적으로, 종양 특이적 돌연변이로부터 생긴다. 종양 세포 및 정상 세포에 의해 제시된 항원이 더 흔하고, 이것은 종양 연관된 항원(tumor-associated antigen: TAA)이라 칭해진다. 이 항원을 인식하는 세포독성 T 림프구는 증식하거나 전이되기 전에 종양 세포를 파괴할 수 있다. 종양 항원은 또한 예를 들어 돌연변이된 수용체의 형태로 종양의 표면 상에 있을 수 있고, 이 경우에 이것은 B 세포에 의해 인식될 수 있다. 달리 기재되지 않는 한, 용어 "종양 항원", "종양 특이적 항원" 및 "종양 연관된 항원"은 본 명세서에서 상호 교환되어 사용된다.
세포 표면 분자는 수용체일 수 있다. 수용체는 세포외 수용체일 수 있다. 수용체는 세포 표면 수용체일 수 있다. 비제한적인 예로서, 수용체는 호르몬, 신경전달물질, 사이토카인, 성장 인자 또는 세포 인식 분자에 결합할 수 있다. 수용체는 막관통 수용체일 수 있다. 수용체는 효소 연결된 수용체일 수 있다. 수용체는 G-단백질 커플 수용체(G-protein couple receptor: GPCR)일 수 있다. 수용체는 성장 인자 수용체일 수 있다. 비제한적인 예로서, 성장 인자 수용체는 표피 성장 인자 수용체, 섬유아세포 성장 인자 수용체, 혈소판 유래 성장 인자 수용체, 신경 성장 인자 수용체, 형질전환 성장 인자 수용체, 골 형성 단백질 성장 인자 수용체, 간세포 성장 인자 수용체, 혈관 내피 성장 인자 수용체, 줄기 세포 인자 수용체, 인슐린 성장 인자 수용체, 소마토메딘 수용체, 에리쓰로포이에틴 수용체 및 동족체 및 이의 단편으로부터 선택될 수 있다. 수용체는 호르몬 수용체일 수 있다. 수용체는 인슐린 수용체일 수 있다. 비제한적인 예로서, 수용체는 에이코사노이드 수용체, 프로스타글란딘 수용체, 에스트로겐 수용체, 난포 자극 호르몬 수용체, 프로게스테론 수용체, 성장 호르몬 수용체, 고나도트로핀 방출 호르몬 수용체, 이의 동족체 및 이의 단편으로부터 선택될 수 있다. 수용체는 아드레날린성 수용체일 수 있다. 수용체는 인테그린일 수 있다. 수용체는 Eph 수용체일 수 있다. 수용체는 황체 형성 호르몬 수용체일 수 있다. 세포 표면 분자는 황체 형성 호르몬 수용체와 적어도 약 50% 상동성일 수 있다. 수용체는 면역 수용체일 수 있다. 비제한적인 예로서, 면역 수용체는 패턴 인식 수용체, 톨형 수용체, NOD형 수용체, 살해 활성화 수용체, 살해 저해제 수용체, Fc 수용체, B 세포 수용체, 보체 수용체, 케모카인 수용체 및 사이토카인 수용체로부터 선택될 수 있다. 비제한적인 예로서, 사이토카인 수용체는 인터류킨 수용체, 인터페론 수용체, 형질전환 성장 인자 수용체, 종양 괴사 인자 수용체, 콜로니 자극 인자 수용체, 이의 동족체 및 이의 단편으로부터 선택될 수 있다. 수용체는 수용체 키나제일 수 있다. 수용체 키나제는 타이로신 키나제 수용체일 수 있다. 수용체 키나제는 세린 키나제 수용체일 수 있다. 수용체 키나제는 트레오닌 키나제 수용체일 수 있다. 비제한적인 예로서, 수용체 키나제는 Ras, Raf, PI3K, 단백질 키나제 A, 단백질 키나제 B, 단백질 키나제 C, AKT, AMPK, 포스포리파제, 이의 동족체 및 이의 단편으로부터 선택된 신호전달 단백질을 활성화할 수 있다. 수용체 키나제는 MAPK/ERK 신호전달 경로를 활성화할 수 있다. 수용체 키나제는 Jak, Stat 또는 Smad를 활성화할 수 있다.
세포 표면 분자는 비수용체 세포 표면 단백질일 수 있다. 세포 표면 분자는 분화 단백질의 클러스터일 수 있다. 비제한적인 예로서, 세포 표면 분자는 CD34, CD31, CD117, CD45, CD11b, CD15, CD24, CD114, CD182, CD14, CD11a, CD91, CD16, CD3, CD4, CD25, CD8, CD38, CD22, CD61, CD56, CD30, CD13, CLL1, CD33, CD123, CD19, CD20, 이의 단편, 및 이의 동족체로부터 선택될 수 있다.
세포 표면 분자는 펩타이드를 포함하지 않는 분자일 수 있다. 세포 표면 분자는 지질을 포함할 수 있다. 세포 표면 분자는 지질 모이어티 또는 지질 기를 포함할 수 있다. 지질 모이어티는 스테롤을 포함할 수 있다. 지질 모이어티는 지방산을 포함할 수 있다. 항원은 당지질을 포함할 수 있다. 세포 표면 분자는 탄수화물을 포함할 수 있다.
(a) 효모 전사 인자 펩타이드로부터의 펩타이드를 포함하는 키메라 항원 수용체 결합 펩타이드 항원; 및 (b) 표적화 폴리펩타이드를 포함하는 CAR-EC 스위치가 본 명세서에 개시된다. 효모 전사 인자 펩타이드는 GCN4 펩타이드일 수 있다. 표적화 폴리펩타이드는 표적화 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CD19 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-Her2 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CS1 항체, 항-BCMA 항체, 항-EGFRvIII 항체, 항-CD20 항체, 항-EGFR 항체, 항-CEA 항체, 항-CLL1 항체, 항-CD33 항체, 항-CD123 항체, 및 이의 단편으로부터 선택될 수 있다.
(a) 친수성 표적 펩타이드(HTP) 태그를 포함하는 CAR 결합 영역; 및 (b) 표적화 폴리펩타이드를 포함하는 CAR-EC 스위치가 본 명세서에 추가로 개시된다. 표적화 폴리펩타이드는 표적화 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CD19 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-Her2 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 표적화 항체 또는 항체 단편은 항-CS1 항체, 항-BCMA 항체, 항-EGFRvIII 항체, 항-CD20 항체, 항-EGFR 항체, 항-CEA 항체, 항-CLL1 항체, 항-CD33 항체, 및 항-CD123 항체, 및 이의 단편으로부터 선택될 수 있다.
표적(예를 들어, CD19)은 표적 세포의 세포 표면 상에 제시되거나 과발현될 수 있다. 표적(예를 들어, CD19)은 질환 또는 병태로 인해 제시되거나 과발현될 수 있다. 질환 또는 병태는 암 또는 백혈병일 수 있다. 질환 또는 병태는 염증성 질환 또는 병태일 수 있다. 질환 또는 병태는 대사 질환일 수 있다. 질환 또는 병태는 유전 장애일 수 있다.
VI. 키메라 수용체
키메라 수용체를 발현하는 세포의 활성을 조절하는 키메라 수용체 효과기 세포 스위치(CAR-EC) 스위치가 본 명세서에 개시되어 있다. 본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "키메라 수용체" 및 "키메라 항원 수용체"(CAR)는, 용어 "키메라 수용체 효과기 세포" 및 "키메라 항원 수용체 효과기 세포"처럼, 상호 교환되어 사용된다(용어 키메라 "항원" 수용체가 세포외 부분을 암시한다는 사실에도 불구하고 항체 또는 이의 항원 결합 일부임). 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인, 힌지, 막관통 도메인 및 세포내 도메인을 포함할 수 있다. 따라서, 용어 "키메라 항원 수용체" 및 "CAR"은 몇몇 실시형태에서 항체 세포외 도메인을 포함하지 않는 키메라 수용체를 포함할 수 있고, 상기 용어는 몇몇 실시형태에서 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 세포외 도메인을 포함하는 키메라 수용체를 포함할 수 있다.
키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포의 활성을 조절하는 CAR-EC 스위치가 본 명세서에 개시되어 있다. 본 개시내용은 활성이 CAR-EC 스위치에 의해 조절되는 키메라 항원 수용체를 제공한다. 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인을 포함할 수 있다. 세포외 도메인은 CAR-EC 스위치의 CAR-ID(예를 들어, GCN4, Flag, K4, 또는 E4 펩타이드 또는 소분자, 예컨대 FITC)에 결합할 수 있다.
CAR은 인간에 대한 면역원성을 감소시키도록 인간화될 수 있다. CAR은 인간화된 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 인간화는 CAR-EC 스위치에 대한 세포외 도메인의 특이성 및 친화도를 유지시키면서 인간에 대한 CAR의 면역원성을 감소시킬 수 있다. CAR은 표 13에 제공된 CAR 서열 중 어느 하나의 인간화된 버전일 수 있거나, 서열 번호 270 내지 289 중 어느 하나의 인간화된 버전일 수 있다. CAR은 표 13에 제공된 CAR 서열 중 어느 하나와 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 인간화된 서열을 포함할 수 있거나, 서열 번호 270 내지 289와 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 인간화된 서열을 포함할 수 있다.
[표 13]
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
세포외 도메인은 CAR-EC 스위치의 CAR-ID에 결합하는 항체 또는 항체 단편(CAR-항체)을 포함할 수 있다. 항체 또는 항체 단편은 인간화될 수 있다. CAR-항체는 항체의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 몇몇 경우에, CAR-항체는 전장 항체가 아니다. CAR-항체는 면역글로불린 또는 이의 단편의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 면역글로불린 또는 이의 단편은 scFv, di-scFv, bi-scFv, Fab, Fc, F(ab')2, pFc', 나노바디, 아피바디, DARPin, 다이아바디, 카멜리드, 조작된 T 세포 수용체 및 모노바디로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 면역글로불린은 IgA1, IgA2, IgD, IgM, IgE, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 이러한 면역글로불린 또는 이의 단편은 인간화될 수 있다. CAR-항체는 단일 사슬 가변 단편(scFv)의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 이 일부는 항원 결합 부분일 수 있다. scFv 또는 인간화된 scFv는 일반 구조 경쇄-링커-중쇄를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. scFv 또는 인간화된 scFv는 일반 구조 중쇄-링커-경쇄를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. 인간화된 scFv는 인간 면역글로불린 프레임워크로 이식된 비인간(예를 들어, 쥣과) CDR을 갖는 인간화된 VH(가변 중쇄) 서열을 포함할 수 있다. 프레임워크는 IGHJ4-59일 수 있다. 인간화된 VH 서열은 야생형 IGHJ4-59 프레임워크로 이식된 쥣과 CDR을 포함할 수 있다. 인간화된 VH 서열은 하나 이상의 프레임워크 변화(즉, 아미노산 변형, 예컨대 치환)를 포함하는 변형된 IGHJ4-59 프레임워크로 이식된 쥣과 CDR을 포함할 수 있다. 프레임워크 변화는 71번 위치(카밧 H71), 73번 위치(카밧 H73), 93번 위치(카밧 H90), 94번 위치(카밧 H91), 또는 이러한 위치의 조합에 있을 수 있다. 인간화된 scFV는 추가적으로 또는 대안적으로 인간 면역글로불린 경쇄 프레임워크로 이식된 비인간(예를 들어, 쥣과) CDR을 갖는 인간화된 VL(가변 경쇄) 서열을 포함할 수 있다. 경쇄 프레임워크는 IGLV7-46 프레임워크일 수 있다. 인간화된 VL 서열은 야생형 IGLV7-46 프레임워크로 이식된 쥣과 CDR을 포함할 수 있다. 인간화된 VL 서열은 하나 이상의 프레임워크 변화(즉, 아미노산 변형, 예컨대 치환)를 포함하는 변형된 IGLV7-46 프레임워크로 이식된 쥣과 CDR을 포함할 수 있다. CAR-항체는 인간, 완전 인간, 인간화된, 인간 조작된, 비인간, 및/또는 키메라 항체일 수 있다.
CAR의 세포외 도메인은 항-GCN4 항체 또는 이의 GCN4 결합 부분을 포함할 수 있다. 세포외 도메인은 인간화된 항-GCN4 scFv(예를 들어, 높은 친화도 돌연변이체 항-GCN4 scFv이고, 문헌[Zahnd, C., et al., (2004), The Journal of Biological Chemistry 279, 18870-18877](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재된 클론 52SR4)를 포함할 수 있다. 인간화된 항-GCN4 scFV(예를 들어, 클론 52SR4의 인간화된 버전)는 인간화된 경쇄, 인간화된 중쇄 또는 인간화된 경쇄 및 인간화된 중쇄를 포함할 수 있다. 인간화된 항-GCN4(예를 들어, 클론 52SR4의 인간화된 버전)는 인간 면역글로불린 프레임워크로 이식된 비인간(예를 들어, 쥣과) CDR을 갖는 인간화된 VH(가변 중쇄) 서열을 포함할 수 있다. 프레임워크는 IGHJ4-59 프레임워크일 수 있다. 인간화된 VH 서열은 야생형 IGHJ4-59 프레임워크로 이식된 항-GCN4 항체로부터의 쥣과 CDR을 포함할 수 있다. 인간화된 VH 서열은 야생형 IGHJ4-59 프레임워크로 이식된 52SR4로부터의 CDR을 포함할 수 있다. 인간화된 VH 서열은 하나 이상의 프레임워크 변화(즉, 아미노산 변형, 예컨대 치환, 결실 또는 부가)를 포함하는 변형된 IGHJ4-59 프레임워크로 이식된 52SR4 항체로부터의 CDR을 포함할 수 있다. 프레임워크 변화는 CDR-H2 입체형태, CDR-H3 입체형태에 영향을 미치고/미치거나, VH 도메인의 내부 패킹을 개선하고/하거나, 결합 친화도를 개선할 수 있다. 프레임워크 변화는 71번 위치(카밧 H71), 73번 위치(카밧 H73), 93번 위치(카밧 H90), 94번 위치(카밧 H91), 또는 이러한 위치의 조합에 있을 수 있다. 인간화된 항-GCN4(예를 들어, 클론 52SR4의 인간화된 버전)는 추가적으로 또는 대안적으로 인간 면역글로불린 경쇄 프레임워크로 이식된 비인간(예를 들어, 쥣과) CDR을 갖는 인간화된 VL(가변 경쇄) 서열을 포함할 수 있다. 경쇄 프레임워크는 IGLV7-46 프레임워크일 수 있다. 인간화된 VL 서열은 야생형 IGLV7-46 프레임워크로 이식된 항-GCN4 항체로부터의 쥣과 CDR을 포함할 수 있다. 인간화된 VH 서열은 야생형 IGLV7-46 프레임워크로 이식된 52SR4 항체로부터의 CDR을 포함할 수 있다. 인간화된 VH 서열은 하나 이상의 프레임워크 변화(즉, 아미노산 변형, 예컨대 치환, 결실 또는 부가)를 포함하는 변형된 IGLV7-46 프레임워크로 이식된 52SR4로부터의 CDR을 포함할 수 있다. 프레임워크 변화는 탈아미드화에 대해 낮은 경향을 갖는 서열을 발생시킬 수 있고, CDR 입체형태에 영향을 미치고/미치거나, 내부 패킹을 개선하고/하거나, 결합 친화도를 개선할 수 있다. 프레임워크 변화는 본 명세서에 기재된 위치를 포함하는 임의의 위치, 또는 이러한 위치의 조합에 있을 수 있다. 인간화된 항-GCN4 scFV는 서열 번호 169 내지 174로부터 선택된 아미노산 서열에 의해 암호화될 수 있다. 인간화된 항-GCN4 scFV는 서열 번호 175 내지 180으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화될 수 있다. 인간화된 항-GCN4 scFV는 서열 번호 169 내지 174 중 어느 하나로부터 선택된 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열에 의해 암호화될 수 있다. 인간화된 항-GCN4 scFV는 서열 번호 175 내지 180 중 어느 하나로부터 선택된 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화될 수 있다.
CAR의 세포외 도메인은 표 14 내지 16에 제공된 아미노산 서열 중 어느 하나 또는 서열 번호 290 내지 388 및 423으로부터 선택된 서열 중 어느 하나에 의해 암호화된 인간화된 scFv를 포함할 수 있다. CAR의 세포외 도메인은 표 14 내지 16의 어느 하나에 제공된 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열 또는 서열 번호 290 내지 388 및 423 중 어느 하나와 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열에 의해 암호화된 인간화된 scFv를 포함할 수 있다.
소정의 실시형태에서, CAR의 세포외 도메인은 서열 번호 322와 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다.
소정의 실시형태에서, CAR의 세포외 도메인은 서열 번호 322와 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열로 이루어진다.
소정의 실시형태에서, CAR의 세포외 도메인은 서열 번호 322를 포함한다. 소정의 실시형태에서, CAR의 세포외 도메인은 서열 번호 322로 이루어진다.
CAR은 표 17에 제공된 아미노산 서열 중 어느 하나에 의해 암호화될 수 있다. CAR은 서열 번호 389 내지 397 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 의해 암호화될 수 있다. CAR은 표 17에 제공된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열에 의해 암호화될 수 있다. CAR은 서열 번호 389 내지 397 중 어느 하나와 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열에 의해 암호화될 수 있다.
특정한 실시형태에서, CAR은 서열 번호 411의 아미노산 서열에 의해 암호화될 수 있다. 특정한 실시형태에서, CAR은 서열 번호 412의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화될 수 있다.
[표 14]
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
CAR-항체는 약 0.01pM 미만, 약 0.02pM, 약 0.03pM, 약 0.04pM, 0.05pM, 약 0.06pM, 약 0.07pM, 약 0.08pM, 약 0.09pM, 약 0.1pM, 약 0.2pM, 0.3pM, 약 0.4pM, 약 0.5pM, 약 0.6pM, 약 0.7pM, 약 0.8pM, 약 0.9 pM 또는 약 1pM, 약 2pM, 약 3pM, 약 4pM, 약 5pM, 약 6pM, 약 7pM, 약 8pM, 약 9pM, 약 10pM, 약 0.01nM, 약 0.02nM, 약 0.03nM, 약 0.04nM, 약 0.05nM, 약 0.06nM, 약 0.07nM, 약 0.08nM, 약 0.09nM, 약 0.1nM, 약 0.2nM, 약 0.3nM, 약 0.4nM, 약 0.5nM, 약 0.6nM, 약 0.7nM, 약 0.8nM, 약 0.9nM, 약 1nM, 약 2nM, 약 2.5nM, 약 3nM, 약 4nM, 약 5nM, 약 6nM, 약 7nM, 약 8nM, 약 9nM, 약 10nM, 약 12nM, 약 14nM, 약 16nM, 약 18nM, 약 20nM, 약 22nM, 약 24nM, 약 26nM, 약 28nM 또는 약 30nM의 CAR-ID에 대한 결합 친화도를 가질 수 있다.
세포외 도메인은 항-플루오레세인 아이소티오사이아네이트(FITC) 항체 또는 이의 FITC 결합 일부를 포함할 수 있다. 항-FITC 항체는 항-FITC scFv일 수 있다. 항-FITC scFv는 4-4-20, 4D5Flu, 4M5.3 및 FITC-E2로부터 선택될 수 있다. 항-FITC scFv는 서열 번호 87-90으로부터 선택된 서열에 의해 암호화될 수 있다.
CAR-항체는 합성 (비천연 발생) 펩타이드를 인식할 수 있다. CAR-항체는 FLAG(등록상표) 태그 또는 이의 단편을 인식하는 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. CAR-항체는 효모 전사 인자 GCN4 또는 이의 단편을 인식하는 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. CAR-항체는 항-HTP 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
막관통 도메인 및/또는 세포내 도메인은 세포질 신호전달 도메인의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 막관통 도메인은 CD8 막관통 서열을 포함할 수 있다. 막관통 도메인은 CD28 막관통 서열을 포함할 수 있다. 막관통 도메인은 서열 번호 398 또는 서열 번호 417과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 CD3ζ, CD28 및 4-1BB를 포함하는 군으로부터 선택된 신호전달 분자의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 (i) 서열 번호 420의 CD3ζ 서열, (ii) 서열 번호 418의 CD28 서열, (iii) 서열 번호 419의 4-1BB 서열, 또는 (i) 및 (ii), (i) 및 (iii), (ii) 및 (iii)의 조합, 또는 (i)-(iii)의 모두를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 서열 번호 420의 CD3ζ 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 서열 번호 418의 CD28 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 서열 번호 419의 4-1BB 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 Fc 수용체 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. Fc 수용체 또는 이의 일부는 CD16 또는 이의 일부일 수 있다. 신호전달 분자는 CD3ζ를 포함할 수 있다. 신호전달 분자는 CD28을 포함할 수 있다. 신호전달 분자는 4-1BB를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 CD3ζ의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 CD28의 적어도 일부를 포함할 수 있고, 세포내 도메인은 4-1BB의 적어도 일부를 포함할 수 있고, 세포내 도메인은 OX-40의 적어도 일부를 포함할 수 있고, 세포내 도메인은 CD30의 적어도 일부를 포함할 수 있고, 세포내 도메인은 CD40의 적어도 일부를 포함할 수 있고, 세포내 도메인은 CD2의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 CD27의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 PD-1의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 ICOS의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 림프구 기능 연관된 항원-1(lymphocyte function-associated antigen-1: LFA-1)의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 CD7의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 림프독소, 유도성 발현과 동일한 것의 적어도 일부를 포함할 수 있고, T 림프구에서 발현된 수용체(LIGHT)인 헤르페스 바이러스 진입 매개자에 대한 헤르페스 바이러스 당단백질 D와 경쟁한다. 세포내 도메인은 NKG2C의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 B7-H3의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 하나 이상의 신호전달 분자로부터의 세포질 신호전달 도메인의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 2개 이상의 세포질 신호전달 도메인의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 2개 이상의 세포질 신호전달 도메인은 2개 이상의 상이한 신호전달 분자 기원일 수 있다. 세포내 도메인은 3개 이상의 세포질 신호전달 도메인의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 4개 이상의 세포질 신호전달 도메인의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 하나 이상의 신호전달 분자에 결합하는 리간드의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 CD83에 결합하는 리간드의 적어도 일부를 포함할 수 있다.
CAR은 힌지를 포함할 수 있다. 힌지는 막관통 도메인과 세포외 도메인 사이에 위치할 수 있다. 힌지는 막관통 도메인의 일부를 포함할 수 있다. 힌지는 세포외 도메인의 일부를 포함할 수 있다. 힌지는 최적 면역학적 시냅스에 필요한 CAR에 대한 길이, 배향, 기하구조 또는 가요성을 제공할 수 있다. 최적 면역학적 시냅스는 CAR-EC와 표적 세포 사이에 최적 거리 및/또는 배향을 제공할 수 있다. 최적 면역학적 시냅스는 표적 세포에 대해 최적 및/또는 최대 세포독성을 제공할 수 있다. 제PCT/US2016/027990호(본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)의 실시예 15에 기재된 바대로, FITC가 FMC63 Fab의 항원 결합 계면에 근위로 그래프팅된 CD19 표적화 스위치는 FITC가 C-말단에서 그래프팅된 스위치보다 탁월할 수 있다. 항-CD19 항체 FMC63의 에피토프 및 CD19 항원의 상응하는 구조가 공지되어 있지 않지만, 이것은 표적 세포와 sCAR-T 세포 사이의 감소한 거리로 인할 수 있다. 네이티브 T 세포 수용체(TCR)에 의해 형성된 생리학적 면역학적 시냅스에서, T 세포와 항원 제시 세포 사이의 거리는 대략 150Å이다. 이 거리는 신호전달 분자를 탈인산화시키고 T 세포 활성화를 하향조절하도록 작용하는 시냅스로부터 저해 포스파타제, 예컨대 CD45 및 CD148을 입체적으로 배제하는 데 중요하다. C 말단 스위치에 의해 기여된 더 긴(Fab의 길이에 의해 N 말단 스위치보다 65Å 더 긴) 시냅스가 이 저해 분자를 입체적으로 배제할 수 없을 것이고, 덜 생산적인 sCAR 신호전달을 발생시킨다. 따라서, 본 명세서에 개시된 방법은 스위치 및/또는 CAR 세포외 도메인의 길이를 조정함으로써 면역학적 시냅스의 거리를 조정하는 것을 포함할 수 있고, 이로써 면역학적 시냅스의 거리가 약 100Å 이하, 약 150Å, 약 175Å 또는 약 200Å이다.
몇몇 실시형태에서, 최적 면역학적 시냅스는 예를 들어 약 100Å 이하, 약 150Å, 약 175Å 또는 약 200Å일 수 있다.
힌지는 T 세포에 특이적인 내인성 막관통 단백질의 세포외 도메인, 예컨대 CD28 또는 4-1BB 또는 CD3의 성분으로부터 유래될 수 있다. 힌지는 합성으로 유래된 서열(예컨대, 스위치 설계와 관련된 링커에 대해 기재된 것)로부터 유래될 수 있다. 힌지는 인간 단백질로부터 유래될 수 있다. 힌지는 막관통 도메인과 인접할 수 있다. 이 힌지는 scFv의 중쇄 불변 영역 1의 일부를 포함할 수 있다. 이 힌지는 scFv의 경쇄 불변 영역 1의 일부를 포함할 수 있다.
힌지 길이는 약 1개의 아미노산 내지 약 10개의 아미노산일 수 있다. 힌지 길이는 1개의 아미노산 내지 약 20개의 아미노산일 수 있다. 힌지 길이는 약 1개의 아미노산 내지 약 50개의 아미노산일 수 있다. 힌지 길이는 약 1개의 아미노산 내지 약 100개의 아미노산일 수 있다. 힌지 길이는 10개의 아미노산 내지 약 50개의 아미노산일 수 있다. 힌지 길이는 약 12개의 아미노산일 수 있다. 힌지 길이는 약 45개의 아미노산일 수 있다.
힌지는 긴 힌지일 수 있다. 긴 힌지는 약 20개 내지 약 200개의 아미노산, 약 20개 내지 약 100개의 아미노산, 약 30개 내지 약 100개의 아미노산, 약 40개 내지 약 100개의 아미노산, 또는 약 45개 내지 약 100개의 아미노산의 길이를 가질 수 있다.
힌지는 짧은 힌지일 수 있다. 짧은 힌지는 약 1개 내지 약 20개의 아미노산, 약 5개 내지 약 20개의 아미노산, 또는 약 10개 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 가질 수 있다.
힌지는 CD8 단백질의 일부를 포함할 수 있다. CD8 단백질의 일부는 약 4개의 아미노산 내지 약 100개의 아미노산일 수 있다. CD8 단백질의 일부는 약 45개의 아미노산일 수 있다. 힌지는 면역글로불린의 일부를 포함할 수 있다. 면역글로불린은 IgG일 수 있다. 면역글로불린은 IgG4일 수 있다. IgG4는 돌연변이될 수 있다(본 명세서에서 IgG4m이라 칭함). 면역글로불린의 일부는 약 1개의 아미노산 내지 약 20개의 아미노산일 수 있다. 면역글로불린의 일부는 약 12개의 아미노산일 수 있다.
힌지는 가요성일 수 있다. 힌지는 구조화될 수 있다.
펩타이드 서열(예를 들어, 본 명세서에 개시된 힌지 또는 링커)과 관련하여 본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "가요성"은 공지된 2차 구조가 없거나 거의 없는 아미노산의 선형 서열을 포함하는 펩타이드 서열을 의미한다. 이러한 가요성 서열은 폴리펩타이드 골격의 결합 주위에 비틀림 각 또는 회전이 많은 상이한 배향을 점유하기 위한 자유도를 가지는 아미노산의 선형 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, "가요성 힌지"의 언급은 CAR이 다양한 결합 배향을 통해 CAR-ID에 결합하게 하여서, 입체 장애를 경감시키는(그렇지 않으면 CAR 세포외 도메인에 대한 CAR-ID 결합에 치명적일 것임) 가요성 펩타이드 서열을 힌지가 포함한다는 것을 의미한다.
펩타이드 서열(예를 들어, 본 명세서에 개시된 힌지 또는 링커)과 관련하여 본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "구조화된"은 한정된 2차 구조를 형성하는 아미노산의 선형 서열을 포함하는 펩타이드 서열을 의미한다. 이러한 구조화된 서열은 폴리펩타이드 골격의 결합 주위에 비틀림 각 또는 회전이 제한된 수의 배향을 점유하기 위한 한정된 우선도를 가지는 아미노산의 선형 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 구조화된 힌지는 면역학적 시냅스를 한정하고, 더 생산적인 배향을 발견하는 것의 엔트로피 비용을 감소시키는 펩타이드 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 방식으로 말해서, 구조화된 힌지는, 몇몇 실시형태에서, 가요성이 아닌 힌지이다. 다양한 실시형태에서, 용어 "경질" 및 "구조화된"은 펩타이드 서열(예를 들어, 본 명세서에 개시된 힌지 또는 링커)과 관련하여 상호 교환되어 사용된다.
힌지는 서열 번호 93 내지 103으로부터 선택된 서열을 포함할 수 있다. 힌지는 서열 번호 93 내지 103으로부터 선택된 서열과 적어도 약 50% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 힌지는 서열 번호 165 번호 168로부터 선택된 서열을 포함할 수 있다. 힌지는 서열 번호 165 번호 168로부터 선택된 서열과 적어도 약 50% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 힌지는 서열 번호 421의 서열을 포함할 수 있다. 힌지는 서열 번호 421과 적어도 50% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 힌지는 서열 번호 165 번호 168 및 421로부터 선택된 서열 중 어느 하나와 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 힌지 영역을 갖는 CAR은 서열 번호 181 내지 183으로부터 선택된 서열에 의해 암호화될 수 있다. 힌지 영역을 갖는 CAR은 서열 번호 181 내지 183으로부터 선택된 서열과 적어도 약 50% 동일한 서열에 의해 암호화될 수 있다. 힌지는 서열 번호 165로 이루어질 수 있다. 힌지는 서열 번호 167을 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. 힌지는 서열 번호 168을 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. 서열 번호 168의 힌지는 C 말단 D 잔기를 추가로 포함할 수 있다. 힌지는 서열 번호 421을 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. 힌지는 서열 번호 165, 서열 번호 167, 서열 번호 168 또는 서열 번호 421과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도, 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다.
힌지는 서열 번호 165, 167, 168 또는 421 중 어느 하나와 동일한 서열을 포함할 수 있고, 힌지는 서열 번호 166의 서열을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열 번호 168의 IgG4m 힌지 서열은 C 말단 D 잔기(서열 번호 166)를 추가로 포함할 수 있다.
CAR은 CAR-EC 상에 비교적 낮은 수준으로 발현될 수 있다. CAR은 CAR-EC 상에 비교적 높은 수준으로 발현될 수 있다. CAR은 세포마다 약 2x106개 미만의 수용체의 세포 밀도로 발현될 수 있다. CAR은 세포마다 약 0.5x106개의 수용체의 세포 밀도로 발현될 수 있다. CAR은 세포마다 약 0.05x106개 초과의 세포 밀도로 발현될 수 있다. CAR은 EF1a, IL-2, CMV 및 CAR 발현을 증가시키거나 감소시키도록 설계된 합성 촉진자로부터 선택된 촉진자의 제어 하에 발현될 수 있다. 촉진자는 구성적일 수 있다. 촉진자는 유도성일 수 있다.
몇몇 특정한 실시형태에서, CAR은 (a) scFv를 포함하거나 이것으로 이루어진 세포외 도메인, (b) 힌지, (c) 막관통 도메인, 및 (d) 세포내 도메인을 포함하고, 여기서
a. scFv는
ⅰ. 표 14 내지 표 17에 제공된 아미노산 서열 중 어느 하나에 의해 암호화된 scFv;
ⅱ. 서열 번호 290 내지 388 및 423 중 어느 하나에 의해 암호화된 scFv로부터 선택되고;
b. 힌지는
ⅰ. IgG4 힌지, IgG4m 힌지, CD28 힌지 및 CD8 힌지;
ⅱ. 서열 번호 165, 167, 168, 및 421 중 어느 하나를 포함하는 힌지; 및
ⅲ. 서열 번호 165, 167,168, 및 421 중 어느 하나로 이루어진 힌지로부터 선택되고;
c. 막관통 도메인은
ⅰ. CD8 막관통 도메인 또는 이의 일부 또는 CD28 막관통 도메인 또는 이의 일부;
ⅱ. 서열 번호 398 및 417 중 어느 하나를 포함하는 막관통 도메인; 및
ⅲ. 서열 번호 398 및 417 중 어느 하나로 이루어진 막관통 도메인으로부터 선택되고;
d. 세포내 도메인은
ⅰ. CD3ζ 신호전달 분자를 포함하는 세포내 도메인;
ⅱ. CD3ζ 신호전달 분자 및 CD28 신호전달 분자를 포함하는 세포내 도메인;
ⅲ. CD3ζ 신호전달 분자 및 4-1BB 신호전달 분자를 포함하는 세포내 도메인; 및
ⅳ. CD3ζ 신호전달 분자, CD28 신호전달 분자 및 4-1BB 신호전달 분자를 포함하는 세포내 도메인으로부터 선택된다.
몇몇 특정한 실시형태에서, CAR은 도 24a에서의 작제물 A-H로부터 선택된 구조를 포함한다. 소정의 실시형태에서, CAR은 도 24a에서의 작제물 E에 따른 구조를 포함한다. 소정의 실시형태에서, CAR은 표 11에 기재된 CAR로부터 선택된다. 소정의 특정한 실시형태에서, CAR은 표 12에 기재된 CAR로부터 선택된다. 소정의 특정한 실시형태에서, CAR은 서열 번호 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 소정의 특정한 실시형태에서, CAR은 서열 번호 389 내지 397 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 소정의 특정한 실시형태에서, CAR은 서열 번호 389-397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열로 이루어진다. 소정의 특정한 실시형태에서, CAR 아미노산은 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진다. 소정의 특정한 실시형태에서, CAR은 서열 번호 400, 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414 및 416으로부터 선택된 서열에 의해 암호화된다.
다가 CAR
원자가는 CAR 힌지로 또한 조작될 수 있다(도 17c). 비제한적인 예로서, 1가 스위치는 CAR의 힌지 영역에서 형성하는 다이설파이드를 통해 2개의 CAR을 동원할 수 있다. 힌지는 1가인 것으로 예상된 CD8 유래된 힌지(서열 번호 165)일 수 있다. 힌지는 IgG 분자의 힌지 영역으로부터 유래될 수 있다. IgG 분자는 IgG1, IgG4 또는 IgG4m(돌연변이된)으로부터 선택될 수 있다. IgG4 힌지(서열 번호 167)는 사슬간 다이설파이드에 참여하지 않을 수 있고, 대신에 CAR을 이합체화시키지 않는 사슬내 다이설파이드 결합을 갖는다. 힌지는 작용기적으로 1가로 생각될 수 있다. IgG1 및 IgG4m 힌지(서열 번호 168)는 힌지 영역을 공유로 이합체화시키는 사슬간 다이설파이드 결합에 참여하게 하는 세린→프롤린 돌연변이를 함유할 수 있다(도 17). 이 힌지는 (짧은 IgG4 유래된 힌지에 대한 긴 CD8 유래된 힌지를 시험함으로써) 면역학적 시냅스의 거리 제약 및 (IgG4m 유래된 CAR에 대한 짧은 IgG4 유래된 힌지를 시험함으로써) CAR 및/또는 스위치의 원자가 효과 둘 다를 연구하도록 사용될 수 있다. 다른 힌지는 CH2 및/또는 CH3 of IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 분자, 또는 이의 일부, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 힌지는 CD28로부터 유래될 수 있다. 힌지는 이합체화할 수 있다.
코CARS / iCAR
본 명세서에 개시된 스위치 가능한 CAR 및 스위치는 특이적 세포(예를 들어, 이환된 세포)에 대한 면역 반응을 표적화하고 건강한 세포에 대한 면역 공격을 최소화하기 위해 저해 키메라 항원 수용체(iCAR)-T 세포 스위치 및 스위치 가능한 iCAR-T 세포를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 스위치 가능한 CAR 및 스위치는 표적 세포(예를 들어, 이환된 세포)에 대한 면역 반응을 표적화하고 이 세포에 대한 면역 공격을 최대화하기 위한 스위치 가능한 코CAR-T 세포와 사용하기 위한 동시자극 키메라 항원 수용체(코CAR)-T 세포 스위치를 또한 포함할 수 있다. iCAR-T 세포 스위치 및 코CAR-T 세포 스위치는 CAR 결합 도메인 및 표적 결합 도메인을 포함한다. 본 명세서에 개시된 조성물은 키메라 항원 수용체-효과기 세포(CAR-EC)를 조정하기 위한 복수의 스위치를 포함할 수 있고, 제1 스위치는 제1 표적 세포 상의 제1 항원 및 CAR-EC 상의 제1 키메라 항원 수용체(CAR)와 상호작용하고; 제2 스위치는 제2 표적 세포 상의 제2 항원 및 CAR-EC 상의 제2 키메라 항원 수용체(CAR)와 상호작용한다. 복수의 스위치는 기존의 CAR-T 세포 및 정규 CAR 및/또는 저해 CAR(iCAR)을 발현하는 CAR-EC와 사용될 수 있다. 복수의 스위치는 기존의 CAR-T 세포 및 정규 CAR 및/또는 동시자극 CAR(코CAR)을 발현하는 CAR-EC와 사용될 수 있다.
본 명세서에 개시된 스위치 가능한 CAR-EC 세포는 제1 스위치 가능한 CAR 및 제2 스위치 가능한 CAR을 포함할 수 있다. 제1 스위치 가능한 CAR은 정규 CAR일 수 있고, 제2 스위치 가능한 CAR은 iCAR일 수 있다. 제1 스위치 가능한 CAR은 정규 CAR일 수 있고, 제2 스위치 가능한 CAR은 코-CAR일 수 있다.
iCAR은 CAR-T 세포에 저해 신호를 제공하는 키메라 수용체를 포함할 수 있다. iCAR은 PD-1 또는 CTLA-4로부터 선택된 세포질 도메인을 포함할 수 있다. iCAR은 정규 (활성화) CAR과 동일한 세포에 의해 발현될 수 있다. iCAR의 활성화는 정규 CAR 신호 및/또는 활성을 감소 조정할 수 있다. iCAR의 특이성은 CAR-T 세포 활성이 바람직하지 않은 조직을 보호하도록 사용될 수 있다. iCAR 활성은 본 명세서에서 "iCAR 스위치"라 칭하는 스위치에 의해 제어될 수 있다. 유사하게, 정규 CAR 활성은 본 명세서에서 "aCAR 스위치"라 칭하는 제1 및/또는 제2 스위치에 의해 제어될 수 있다. 스위치 가능한 iCAR-T 세포는 정규 또는 CAR-T 세포에 의해 표적화하는 것이 불안전할 수 있는 항원의 표적화를 가능하게 한다.
면역 반응을 개시시키기 위해, aCAR 스위치는 양성, 또는 공격되는 표적 세포(예를 들어, 암 세포) 상의 "A" 항원 및 정규 CAR에 결합하여서, 정규 CAR의 활성화를 통해 표적 세포를 향해 세포독성 활성을 자극한다. 일반 조직을 보호하기 위해, iCAR 스위치는 음성, 또는 T 세포에 의해 회피되는 세포(예를 들어, 건강한 세포) 상의 "B" 항원 및 iCAR에 결합하여서, iCAR의 신호전달을 통해 면역 활성을 저해한다. "B" 항원은 정상 조직에서 편재하여 발현되지만, 대부분의 악성 세포에서 하향조절될 수 있다. "A" 항원은 정상 조직에 비해 악성 세포에서 과발현될 수 있다. B 항원은 오피오이드 결합 단백질/세포 부착 분자 유사 유전자(OPCML)일 수 있다. B 항원은 결장직장암(DCC) 및 SMAR1에서 결실된 히알루로니다제 2(HYAL2)로부터 선택될 수 있다.
코CAR은 CAR-T 세포에 동시자극 신호를 제공하는 키메라 수용체를 포함할 수 있다. 코CAR은 CD137 및/또는 CD28로부터 선택된 세포질 도메인을 포함할 수 있다. 코CAR은 정규 (활성화) CAR과 동일한 세포에 의해 발현될 수 있다. 코CAR의 활성화는 정규 CAR 신호 및/또는 활성을 증대 및/또는 상승작용시킬 수 있다. 코CAR은 정규 CAR-T 세포를 오직 발현하는 CAR-T 세포에 의해 생성된 표적 세포를 향한 세포독성에 비해 표적 세포를 향한 세포독성을 증가시킬 수 있다. 코CAR 활성은 본 명세서에서 "코CAR 스위치"라 칭하는 스위치에 의해 제어될 수 있다. 유사하게, 정규 CAR 활성은 본 명세서에서 "aCAR 스위치"라 칭하는 제1 및/또는 제2 스위치에 의해 제어될 수 있다.
비항체 CAR
몇몇 실시형태에서, 관습적인 CAR과 반대로, 본 명세서에 개시된 키메라 항원 수용체는 CAR-ID와 상호작용하는 비항체 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 즉, 세포외 도메인은 CAR-ID와 상호작용하는 비항체 단백질 또는 비항체 펩타이드를 포함할 수 있다. 따라서, 키메라 항원 수용체는 항원을 인식하는 항체 또는 항체 단편의 전통적인 의미에서 표적 상의 항원을 실제로 인식하지 않고 비항체 단백질 또는 펩타이드가 그런 방식으로 표적과 상호작용할 수 있다. 이 경우에, 키메라 항원 수용체는 더 정확히 "키메라 수용체"라 불릴 수 있다. 당업자는 본 개시내용에 걸친 많은 예 및 설명에서 키메라 항원 수용체가 키메라 수용체일 수 있다는 것을 이해할 것이다. 스위치의 키메라 수용체 결합 파트너는 비항체 단백질 또는 펩타이드일 수 있다. 따라서, 키메라 수용체 및 스위치는 단백질-단백질 상호작용 또는 단백질-펩타이드 상호작용을 가질 수 있다.
단백질-단백질 상호작용
CAR은 비항체 세포외 도메인을 포함할 수 있고, 여기서 세포외 도메인은 비항체 단백질을 포함한다. 비항체 단백질은 키메라 수용체 결합 파트너와 상호작용할 수 있고, 키메라 수용체 결합 파트너는 단백질-단백질 상호작용을 구성하는 키메라 수용체 결합 단백질을 포함한다. 단백질-단백질 상호작용은 헐거울 수 있다. 헐거운 상호작용은 키메라 수용체 결합 파트너 및 비항체 펩타이드가 약 10-4M, 약 10-3M, 약 10-2M, 약 10-1M의 KD로, 또는 약 10-1M보다 큰 KD로 결합하는 상호작용일 수 있다. 단백질-단백질 상호작용은 단단한 상호작용일 수 있다. 단단한 상호작용은 키메라 수용체 결합 파트너 및 비항체 펩타이드가 약 10-5M, 약 10-6M, 약 10-7M, 약 10-8M, 약 10-9M, 약 10-10M, 약 10-11M 또는 약 10-12M의 KD로 결합하는 상호작용일 수 있다. 단백질-단백질 상호작용은 공유 단백질-단백질 상호작용을 포함할 수 있다. 단백질-단백질 상호작용은 비공유 단백질-단백질 상호작용을 포함할 수 있다. 비항체 단백질 및/또는 키메라 수용체 결합 단백질은 효소를 포함할 수 있다. 효소는 뉴클레아제일 수 있다. 뉴클레아제는 리보뉴클레아제일 수 있다. 리보뉴클레아제는 원핵세포일 수 있다. 비항체 단백질 및/또는 키메라 수용체 결합 단백질은 기질을 포함할 수 있다. 비항체 단백질은 바르나제를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 바스타를 포함할 수 있다. 비항체 단백질은 바스타를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 바르나제를 포함할 수 있다. 바르나제는 바실러스 아밀로리쿼파시엔스로부터의 아미노산 리보뉴클레아제이다. 바스타는 바르나제의 천연 세포내 저해제이다. 바르나제는 10^8/초/M의 단백질-단백질 결합 온-속도를 가지며 높은 친화도로 바스타와 상호작용한다(Buckle AM, Schreiber G, Fersht AR; Biochemistry 33 (30): 8878-8 (August 1994)(본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)). 바르나제, 바스타 및 이의 상호작용은 문헌[Mossakowska DE, Nyberg K, Fersht AR;Biochemistry　28　(9): 3843-50 (May 1989)](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재되어 있다.
단백질-펩타이드 상호작용
비항체 단백질은 키메라 수용체 결합 파트너와 상호작용할 수 있고, 여기서 키메라 수용체 결합 파트너는 단백질-펩타이드 상호작용을 구성하는 CAR-ID를 포함한다. 대안적으로, 비항체 세포외 도메인은 키메라 수용체 결합 파트너와 상호작용하는 비항체 펩타이드를 포함할 수 있고, 여기서 키메라 수용체 결합 파트너는 단백질-펩타이드 상호작용을 구성하는 키메라 수용체 결합 단백질을 포함한다. 단백질-펩타이드 상호작용은 헐거운 상호작용일 수 있다. 헐거운 상호작용은 키메라 수용체 결합 파트너 및 비항체 펩타이드가 약 10-4M, 약 10-3M, 약 10-2M, 약 10-1M의 KD로, 또는 약 10-1M보다 큰 KD로 결합하는 상호작용일 수 있다. 단백질-단백질 상호작용은 단단한 상호작용일 수 있다. 단단한 상호작용은 키메라 수용체 결합 단백질 및 비항체 펩타이드(또는 CAR-ID 및 비항체 단백질)가 약 10-5M, 약 10-6M, 약 10-7M, 약 10-8M, 약 10-9M, 약 10-10M, 약 10-11M 또는 약 10-12M의 KD로 결합하는 상호작용일 수 있다. 비항체 단백질 및/또는 키메라 수용체 결합 단백질은 섬유성 단백질, 접착 분자 단백질 및 막 단백질로부터 선택될 수 있다.
단백질-펩타이드 상호작용은 공유 단백질-펩타이드 상호작용을 포함할 수 있다. 예를 들어, 비항체 단백질은 스트렙토코커스 피요게네스 필린 단백질을 포함할 수 있고, CAR-ID는 아이소펩태그를 포함할 수 있다. 대안적으로, 비항체 펩타이드는 아이소펩태그를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 스트렙토코커스 피요게네스 필린 단백질을 포함할 수 있다. 아이소펩태그와 스트렙토코커스 피요게네스 필린 단백질 사이의 상호작용은 문헌[Kang, H.J., Coulibaly,F., Clow,F., Proft,T., and Baker,E.N. Science 318, 1625-1628 (2007) 및 Zakeri, B. and Howarth,M.; J. Am. Chem. Soc. 132, 4526-4527 (2010)](이들은 각각 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재되어 있다. 아이소펩태그 서열은 서열 번호 41이다. 또한, 비제한적인 예로서, 비항체 단백질은 스트렙토코커스 피요게네스 피브로넥틴 결합 단백질(SpyCatcher)을 포함할 수 있고, CAR-ID는 SpyTag를 포함할 수 있다. 대안적으로, 비항체 펩타이드는 SpyTag를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 스트렙토코커스 피요게네스 피브로넥틴 결합 단백질(SpyCatcher)을 포함할 수 있다. SpyCatcher와 SpyTag 사이의 공유 상호작용은 문헌[Zakeri B, Howarth M, JACS, vol. 109 no. 12, (2012)](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재되어 있다.
단백질- 펩타이드 상호작용은 비-공유 단백질- 펩타이드 상호작용을 포함할 수 있다. 예를 들어, 비항체 단백질은 시냅토브레빈, SNAP25 및 신탁신, 및 이의 일부(예를 들어, 알파 나선)로부터 선택될 수 있고, CAR-ID는 SNARE를 포함할 수 있다. 대안적으로, 비항체 펩타이드는 SNARE를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 시냅토브레빈, SNAP25 및 신탁신, 및 이의 일부(예를 들어, 알파 나선)로부터 선택될 수 있다. SNARE와 시냅토브레빈, SNAP25와 신탁신 사이의 상호작용은 문헌[Sollner T, et al., Nature 362:318-324 (1993); Sutton RB, Fasshauer D, Jahn R, Brunger AT, Nature 395:347-353 (1998); 및 Darios, F, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 107, 18197-18201 (2010)](이들은 각각 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재되어 있다. 또한, 비제한적인 예로서, 비항체 단백질은 RNAseI를 포함할 수 있고, CAR-ID는 Hu-태그를 포함할 수 있다. 대안적으로, 비항체 펩타이드는 Hu-태그를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 RNAseI를 포함할 수 있다. 또한, 비제한적인 예로서, 비항체 단백질은 HuS 어댑터 단백질을 포함할 수 있고, CAR-ID는 Hu-태그를 포함할 수 있다. 대안적으로, 비항체 펩타이드는 Hu-태그를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 HuS 어댑터 단백질을 포함할 수 있다. Hu-태그와 RNase I 및 Hu-태그와 HuS 어댑터 단백질 사이의 상호작용은 문헌[Backer, M. V., et.al., Adapter protein for site-specific conjugation of payloads for targeted drug delivery. Bioconjugate Chem. 15, 1021-1029 (2004)](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재되어 있다.
펩타이드 - 펩타이드 상호작용
CAR은 비항체 세포외 도메인을 포함할 수 있고, 여기서 세포외 도메인은 비항체 펩타이드를 포함한다. 비항체 펩타이드는 키메라 수용체 결합 파트너와 상호작용할 수 있고, 여기서 키메라 수용체 결합 파트너는 펩타이드-펩타이드 상호작용을 구성하는 CAR-ID를 포함한다. 펩타이드-펩타이드 상호작용은 헐거운 상호작용일 수 있다. 헐거운 상호작용은 키메라 수용체 결합 파트너 및 비항체 펩타이드가 약 10-4M, 약 10-3M, 약 10-2M, 약 10-1M의 KD로, 또는 약 10-1M보다 큰 KD로 결합하는 상호작용일 수 있다. 펩타이드-펩타이드 상호작용은 단단한 상호작용일 수 있다. 단단한 상호작용은 CAR-ID 및 비항체 펩타이드(또는 CAR-ID 및 비항체 펩타이드)가 약 10-5M, 약 10-6M, 약 10-7M, 약 10-8M, 약 10-9M, 약 10-10M, 약 10-11M 또는 약 10-12M의 KD로 결합하는 상호작용일 수 있다. 비항체 펩타이드 및/또는 CAR-ID는 단백질의 2차 구조(예를 들어, 알파 나선, 베타 시트)로부터 선택된 것, 단백질 도메인, 효소 도메인, 이합체화 도메인 및 다합체화 도메인을 포함할 수 있다.
펩타이드-펩타이드 상호작용은 비공유 펩타이드-펩타이드 상호작용을 포함할 수 있다. 비항체 펩타이드는 단백질의 제1 알파 나선을 포함할 수 있고, CAR-ID는 단백질의 제2 알파 나선을 포함할 수 있다. 제1 알파 나선 및 제2 알파 나선은 꼬인 코일 구조를 형성할 수 있다. 예를 들어, 그러나 임의의 방식으로 제한되지 않으면서, 제1 펩타이드는 문헌[Litowski, J. R. (2002)]에 개시된 E/K 펩타이드 중 어느 하나(예를 들어, 서열 번호 46 내지 44, 및 45 내지 46, 47 내지 58 중 어느 하나)로부터 선택될 수 있고, 제2 펩타이드는 제1 펩타이드와 알파 나선을 형성할 수 있는 임의의 펩타이드로부터 선택될 수 있다. 제2 펩타이드는 문헌[Litowski (2002)]에 개시된 E/K 펩타이드(예를 들어, 서열 번호 43 번호 44, 45 내지 46, 47 내지 58 중 어느 하나)일 수 있다. 비항체 단백질은 K4 펩타이드(서열 번호 43)를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 E4 펩타이드(서열 번호 44)를 포함할 수 있다. 비항체 단백질은 E4 펩타이드(서열 번호 44)를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 K4 펩타이드(서열 번호 43)를 포함할 수 있다. K4와 E4 펩타이드 사이의 상호작용은 문헌[Litowski, J. R., and R. S. Hodges. J Biol Chem, 277: 37272-9 (2002) 및 Woolfson, D. N., Adv Protein Chem, 70: 79-112 (2005)](이들은 각각 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재되어 있다. 비항체 단백질은 변형된 K4 펩타이드를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 변형된 E4 펩타이드를 포함할 수 있다. 비항체 단백질은 변형된 E4 펩타이드를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 변형된 K4 펩타이드를 포함할 수 있다. 비항체 단백질은 변형된 K4 펩타이드를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 E4 펩타이드(서열 번호 44)를 포함할 수 있다. 비항체 단백질은 변형된 E4 펩타이드를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 K4 펩타이드(서열 번호 43)를 포함할 수 있다. 비항체 단백질은 K4 펩타이드(서열 번호 33)를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 변형된 E4 펩타이드를 포함할 수 있다. 비항체 단백질은 E4 펩타이드(서열 번호 44)를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 변형된 K4 펩타이드를 포함할 수 있다. 비항체 단백질은 서열 번호 43의 서열을 갖는 펩타이드로 이루어지거나 이것으로 본질적으로 이루어질 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 서열 번호 44의 서열을 갖는 펩타이드로 이루어지거나 이것으로 본질적으로 이루어질 수 있다. 비항체 단백질은 서열 번호 44의 서열을 갖는 펩타이드로 이루어지거나 이것으로 본질적으로 이루어질 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 서열 번호 43의 서열을 갖는 펩타이드로 이루어지거나 이것으로 본질적으로 이루어질 수 있다. 비항체 단백질은 서열 번호 43과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 이것 초과의 동일성을 갖는 서열을 갖는 펩타이드를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 서열 번호 44와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 이것 초과의 동일성을 갖는 서열을 갖는 펩타이드를 포함할 수 있다. 비항체 단백질은 서열 번호 44와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 이것 초과의 동일성을 갖는 펩타이드를 포함할 수 있고, 키메라 수용체 결합 단백질은 서열 번호 43과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 이것 초과의 동일성을 갖는 서열을 갖는 펩타이드를 포함할 수 있다.
또한, 비제한적인 예로서, 비항체 펩타이드는 마우스 코로닌 1A 단백질의 제1 알파 나선을 포함할 수 있고, CAR-ID는 마우스 코로닌 1A 단백질의 제2 알파 나선을 포함할 수 있다. 마우스 코로닌 1A 단백질의 꼬인 코일 상호작용은 문헌[Kammerer RA, et al., Proc Natl Acad Sci USA 102:13891-13896 (2005)](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재되어 있다.
또한, 비제한적인 예로서, 비항체 펩타이드는 A-키나제 앵커링 단백질(AKAP)의 앵커링 도메인(AD)을 포함할 수 있고, CAR-ID는 cAMP 의존적 단백질 키나제 A의 이합체화 및 도킹 도메인(DDD)을 포함할 수 있다. 도크 앤 락 시스템으로 공지된, AD와 DDD의 상호작용은 문헌[Rossi EA, Goldenberg DM, Chang CH, Bioconjug Chem. Mar 21;23(3):309-23 (2012); Rossi EA, et.al., Proc Natl Acad Sci U S A. May 2;103(18):6841-6 (2006); 및 Backer MV, Patel V, Jehning BT, Backer JM., Bioconjug Chem. Jul-Aug;17(4):912-9 (2006)](이들은 각각 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재되어 있다.
따라서, 비제한적인 예로서, 비항체 펩타이드는 A-키나제 앵커링 단백질의 앵커링 도메인(AD1)을 포함할 수 있고, CAR-ID는 cAMP 의존적 단백질 키나제 A의 이합체화 및 도킹 도메인(DDD1)을 포함할 수 있다. 대안적으로, 비항체 펩타이드는 DDD1을 포함할 수 있고, CAR-ID는 앵커링 도메인(AD1)을 포함할 수 있다.
펩타이드-펩타이드 상호작용은 공유 펩타이드-펩타이드 상호작용을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 비항체 펩타이드는 A-키나제 앵커링 단백질의 앵커링 도메인(AD2)을 포함할 수 있고, CAR-ID는 cAMP 의존적 단백질 키나제 A의 이합체화 및 도킹 도메인(DDD2)을 포함할 수 있고, 여기서 AD2 및 DDD2는 AD와 DDD 사이에 다이설파이드 결합을 형성하는 시스테인에 의해 변형된다. 대안적으로, 비항체 펩타이드는 DDD2를 포함할 수 있고, CAR-ID는 AD2를 포함할 수 있고, 여기서 AD2 및 DDD2는 AD2와 DDD2 사이에 다이설파이드 결합을 형성하는 시스테인에 의해 변형된다. 이 다이설파이드 결합은 AD2와 DDD2 사이에 공유 상호작용을 형성할 수 있다. 이것은 CAR-ID에 대한 비항체 펩타이드의 친화도를 증가시키거나 그 반대로 하기에 유리할 수 있다.
효과기 세포는 복수의 키메라 수용체를 포함할 수 있다. 복수의 키메라 수용체의 2개 이상은 동일할 수 있다. 복수의 키메라 수용체의 2개 이상은 상이할 수 있다. 복수의 키메라 수용체의 2개 이상은 각각 DDD(예를 들어, DDD1 또는 DDD2)를 형성하는 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 복수의 키메라 수용체의 2개 이상의 DDD는 다합체화된 DDD를 생성하도록 자가-호모-다합체화할 수 있다. DDD는 이합체화된 DDD를 생성하도록 자가-호모-이합체화할 수 있다. 다합체화된 또는 이합체화된 DDD는 하나 이상의 AD에 결합할 수 있다. 하나 이상의 AD에 결합된 다합체화된 또는 이합체화된 DDD는 하나 이상의 DDD를 포함하는 키메라 수용체에 비해 효과기 세포의 활성화 및/또는 신호 형질도입을 증가시킬 수 있다.
키메라 수용체는 세포외 도메인을 포함할 수 있고, 여기서 세포외 도메인은 AD를 포함한다. 스위치는 DDD를 포함할 수 있다. DDD가 AD에 결합 시 자가-호모-이합체화되므로, 스위치는 AD에 2가일 수 있다(예를 들어, 도 17 참조). AD에 결합 시 자가-호모-이합체화되는 DDD는 표적 세포에 대한 스위치의 결합도를 증가시킬 수 있고, 표적에 대한 스위치의 민감성을 개선할 수 있다. 이것은 세포 표면 분자의 낮은 표면 밀도(또는 발현)으로 표적 세포에 대해 관련될 수 있다.
스위치는 AD를 포함할 수 있고, 키메라 수용체는 DDD를 포함할 수 있거나(예를 들어, 도 18 참조), 스위치는 DDD를 포함할 수 있고, 키메라 수용체는 AD를 포함할 수 있어서, DDD/AD 쌍을 생성시킨다(예를 들어, 도 17 참조). DDD/AD 쌍은 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체 및 펩타이드를 포함하는 스위치로부터 생긴 scFcv/펩타이드 쌍보다 작을 수 있어서, 키메라 수용체 결합 파트너에 대한 키메라 수용체 결합 및 후속하는 키메라 수용체 활성화/신호전달에 최적인 쌍에 크기 및 기하구조를 제공한다.
키메라 효과기 수용체 세포는 다수의 스위치를 표적 세포 상의 다수의 항원에 가교결합시키는 것의 다합체화에 의해 활성화될 수 있다. 활성화를 발생시키는 스위치의 최소 수는 2개 초과일 수 있다. 다합체화된 또는 이합체화된 DDD는 활성화를 달성하기 위해 정규 키메라 항원 수용체(예를 들어, 이합체화된/다합체화된 세포외 도메인 또는 이의 일부 없음)보다 스위치와 더 적은 가교결합을 요하므로 일반적으로 강화된 신호전달을 가질 수 있다.
엡실론 CAR
스위치 상의 항-CD3 항체 또는 이의 단편과 상호작용하는 세포외 도메인; 막관통 도메인; 및 세포내 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체가 본 명세서에 추가로 개시되어 있고, 여기서 막관통 도메인의 적어도 일부 또는 세포내 도메인의 적어도 일부는 CD3 단백질에 기초하거나 이로부터 유래되지 않는다. 세포외 도메인은 CD3 세포외 도메인 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 세포외 도메인은 CD3 엡실론 세포외 도메인 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 세포외 도메인은 CD3 델타 세포외 도메인 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 세포외 도메인은 CD3 감마 세포외 도메인 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 세포외 도메인은 CD3 제타 세포외 도메인 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 세포외 도메인 TCR 세포외 도메인의 알파 사슬 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 세포외 도메인은 TCR 세포외 도메인의 프리-알파 사슬 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 세포외 도메인은 TCR 세포외 도메인의 베타 사슬 또는 이의 일부를 포함할 수 있다.
VII 키트, 벡터 및 폴리뉴클레오타이드
하나 이상의 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치를 포함하는 키트가 본 명세서에 개시되어 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR-ID를 포함하는 본 명세서에 개시된 항-CD19 스위치를 포함하는 키트를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR-ID를 포함하는 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 스위치를 포함하는 키트를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체를 포함하는 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치를 포함하는 키트를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체를 포함하는 본 명세서에 개시된 항-CD19 스위치를 포함하는 키트를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체를 포함하는 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 스위치를 포함하는 키트를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 키트는 항-CD19 항체, 항-CD20 항체, 항-CD22 항체, 항-EGFR 항체, 항-EGFRvIII 항체, 항-Her2 항체, 항-CS1 항체, 항-BCMA 항체, 항-CEA 항체, 항-CLL1 항체, 항-CD33 항체, 항-CD123 항체, 상기 언급된 항체의 항원 결합 부분, 및 선택적으로, 상기 언급된 항체(예컨대 예를 들어, 본 명세서에 개시된 인간화된 항-CD19 항체 중 어느 하나)의 인간화된 형태로부터 선택된 표적화 모이어티를 포함하는 CAR-EC 스위치를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 키트는 CAR-EC 스위치 또는 이러한 스위치를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하고, 여기서 CAR-EC 스위치는 경쇄 및 중쇄를 포함하고, 경쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 경쇄 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, 중쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 중쇄 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 이러한 중쇄 및/또는 경쇄 서열은 인간화될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키트에 포함된 CAR-EC 스위치는 인간화되고, 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하고, 중쇄 및 경쇄의 하나 또는 둘 다는 본 명세서에 개시된 CAR-ID(예를 들어, GCN4 CAR-ID)를 포함한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 경쇄 서열은 (N 말단 GCN4 CAR-ID를 포함하는) 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함한다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 스위치는, 본 명세서에 개시된 스위치 중 몇몇에 포함된 중쇄/경쇄 조합을 제시하는, 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치이다. 몇몇 실시형태에서, 스위치는 스위치에 포함된 CAR-ID가 구조 I의 서열을 갖도록 변형된다는 것을 제외하고는 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치와 동일하다. 몇몇 실시형태에서, 구조 I의 서열은 서열 번호 26, 36, 139 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된다. 키트는 단일 스위치 또는 단일 스위치를 포함하는 약제학적 조성물을 포함할 수 있다. 키트는 복수의 스위치 또는 복수의 스위치를 포함하는 약제학적 조성물을 포함할 수 있다.
키트는 2개 이상의 스위치를 포함할 수 있다. 키트는 3개의 스위치를 포함할 수 있다. 키트는 약 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 15개, 20개, 24개, 30개, 35개, 48개, 50개, 55개, 60개, 65개, 70개, 75개, 80개, 85개, 90개, 96개, 100개, 120개, 150개, 200개, 300개, 384개, 400개, 500개, 600개, 700개, 800개, 900개 또는 1000개의 스위치를 포함할 수 있다. 키트는 생물학적 조사에 사용될 수 있다. 키트는 질환 또는 병태를 진단하기 위해 사용될 수 있다. 키트는 질환 또는 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 키트의 스위치는 본 명세서에 개시된 효과기 세포(예를 들어, CAR-EC) 또는 임상적으로 사용되거나 시험된 기존의 CAR T 세포와 사용될 수 있다. 키트는 하나 이상의 효과기 세포를 포함할 수 있다. 효과기 세포는 CAR-EC일 수 있다. 효과기 세포는 T 세포일 수 있다. T 세포는 하나 이상의 키메라 수용체를 발현할 수 있다. T 세포는 CAR-T 세포일 수 있다. CAR-EC는 스위치 상의 CAR-ID에 결합할 수 있다. CAR-EC는 펩타이드(예를 들어, 본 명세서에 개시된 GCN4 펩타이드, 본 명세서에 개시된 flag 펩타이드, 본 명세서에 개시된 또 다른 알파 나선 펩타이드와 꼬인 코일 구조를 형성하는 알파 나선 펩타이드)인 스위치 상의 CAR-ID에 결합할 수 있다. CAR-EC는 소분자(예를 들어, FITC)인 CAR-ID에 결합할 수 있다. CAR-T 세포는 스위치 상의 CAR-ID에 결합할 수 있다. CAR-T 세포는 펩타이드(예를 들어, 본 명세서에 개시된 GCN4 펩타이드 또는 GCN4 유도체, 본 명세서에 개시된 flag 펩타이드, 본 명세서에 개시된 또 다른 알파 나선 펩타이드와 꼬인 코일 구조를 형성하는 알파 나선 펩타이드)인 스위치 상의 CAR-ID에 결합할 수 있다. CAR-T 세포는 소분자(예를 들어, FITC)인 CAR-ID에 결합할 수 있다.
키트는 하나 이상의 키메라 수용체(예를 들어, 하나 이상의 본 명세서에 기재된 키메라 수용체)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 키트는 하나 이상의 키메라 항원 수용체(예를 들어, 하나 이상의 본 명세서에 기재된 키메라 항원 수용체)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 키트는 하나 이상의 키메라 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 포함할 수 있다. 키메라 수용체는 본 명세서에 개시된 임의의 키메라 수용체로부터 선택될 수 있다. 키메라 수용체는 본 명세서에 개시된 임의의 키메라 항원 수용체로부터 선택될 수 있다. 키메라 수용체는 본 명세서에 개시된 임의의 CAR 서열일 수 있다. CAR은 인간에 대한 면역원성을 감소시키도록 인간화될 수 있다. CAR은 인간화된 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 인간화는 CAR-EC 스위치에 대한 세포외 도메인의 특이성 및 친화도를 보유하면서 인간에 대한 CAR의 면역원성을 감소시킬 수 있다. CAR은 표 13에 제공된 CAR 서열 중 어느 하나의 인간화된 버전일 수 있다. CAR은 서열 번호 270 내지 289 중 어느 하나의 인간화된 버전일 수 있다. CAR은 CAR-EC 스위치의 CAR-ID에 결합하는 항체 또는 항체 단편을 포함하는 세포외 도메인을 포함하는 인간화된 CAR일 수 있다. 항체 또는 항체 단편은 인간화될 수 있다. 항체 단편은 scFv(예를 들어, 인간화된 scFv)일 수 있다. scFv 또는 인간화된 scFv는 일반 구조 경쇄-링커-중쇄를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. scFv 또는 인간화된 scFv는 일반 구조 중쇄-링커-경쇄를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. 인간화된 scFv는 인간 면역글로불린 프레임워크로 이식된 비인간(예를 들어, 쥣과) CDR을 갖는 인간화된 VH(가변 중쇄) 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 특정한 실시형태에서, CAR은 도 24a에서의 작제물 A-H로부터 선택된 구조를 포함한다. 소정의 실시형태에서, CAR은 도 24에서의 작제물 A, 작제물 B 또는 작제물 C에 따른 구조를 포함한다. 소정의 실시형태에서, CAR은 표 11에 기재된 CAR로부터 선택된다. 소정의 특정한 실시형태에서, CAR은 표 12에 기재된 CAR로부터 선택된다. 키트는 본 명세서에 개시된 키메라 수용체-EC 스위치 또는 이의 일부(예를 들어, 항체, 항체 단편, 펩타이드)를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
벡터 및 스위치 및 이의 일부를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 개시되어 있고, 여기서 스위치는 GCN4 유도체 및 폴리펩타이드 표적화 모이어티(예를 들어, 표적화 단백질 또는 표적화 펩타이드)를 포함한다. 벡터 및 인간화된 스위치 및 이의 일부를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 개시되어 있고, 여기서 스위치는 CAR-ID 및 인간화된 폴리펩타이드 표적화 모이어티(예를 들어, 표적화 단백질 또는 표적화 펩타이드)를 포함한다. 벡터 및 스위치 및 이의 일부를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 개시되어 있고, 여기서 스위치는 CAR-ID 및 인간화된 폴리펩타이드 표적화 모이어티(예를 들어, 표적화 단백질 또는 표적화 펩타이드)를 포함하고, 여기서 폴리펩타이드 표적화 모이어티는 표적 세포 상의 CD19에 결합한다. 벡터 및 스위치 및 이의 일부를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 개시되어 있고, 여기서 스위치는 GCN4 유도체 및 인간화된 폴리펩타이드 표적화 모이어티(예를 들어, 표적화 단백질 또는 표적화 펩타이드)를 포함하고, 폴리펩타이드 표적화 모이어티는 표적 세포 상의 CD19에 결합한다. 폴리뉴클레오타이드는 DNA(예를 들어, cDNA)일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 RNA일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 표적화 폴리펩타이드는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 단편일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, CAR- ID는 본 명세서에 개시된 GCN4 펩타이드 유도체이다. 벡터는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 단편의 중쇄를 암호화하는 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 단편의 경쇄를 암호화하는 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 단편의 경쇄를 암호화하는 서열 및 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 단편의 중쇄를 암호화하는 서열을 포함할 수 있다. 경쇄 및 중쇄는 동일한 벡터로부터 발현될 수 있다. 경쇄 및 중쇄는 2개의 별개의 벡터로부터 발현될 수 있다. 중쇄는 인간화된 서열을 포함할 수 있다. 경쇄는 인간화된 서열을 포함할 수 있다. 중쇄 및 경쇄는 인간화된 서열을 포함할 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 키트는 벡터 및 키메라 수용체(예를 들어, CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 제공하고, 여기서 CAR은 CAR-EC 스위치의 펩타이드에 결합하는 세포외 도메인을 포함한다. 세포외 도메인은 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 항체 또는 항체 단편은 CAR-EC의 CAR-ID에 결합할 수 있다. CAR-ID는 소분자일 수 있다. CAR-ID는 합텐일 수 있다. CAR-ID는 FITC 또는 이의 유도체일 수 있다. CAR-ID는 펩타이드일 수 있다. CAR-ID는 GCN4 펩타이드일 수 있다. CAR-ID는 이합체화되지 않는 GCN4 펩타이드일 수 있다. CAR-ID는 본 명세서에 개시된 GCN4 펩타이드일 수 있다. CAR-ID는 GCN4 펩타이드 유도체일 수 있다. CAR-ID는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열을 포함할 수 있다. CAR-ID는 NYHLENEVARLK(서열 번호 145)의 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, CAR-ID는 서열 번호 139, 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다.
몇몇 실시형태에서, 키트는 벡터 및 키메라 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 제공하고, 여기서 키메라 수용체는 비-항체 세포외 도메인을 포함한다. 비-항체 세포외 도메인은 항체 또는 항체 단편을 포함하지 않을 수 있다. 비-항체 세포외 도메인은 비-항체 단백질을 포함할 수 있다. 비-항체 세포외 도메인은 비-항체 펩타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호 68 내지 84, 87 내지 90, 104 및 181 내지 183으로부터 선택된 서열을 가질 수 있다.
본 명세서에 개시된 키메라 수용체 및/또는 키메라 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 일부를 암호화하는 서열을 포함하는 벡터는 임의의 상업적으로 이용 가능한 발현 벡터로부터 선택될 수 있다. 발현 벡터는 원핵세포 발현 벡터일 수 있다. 발현 벡터는 진핵세포 발현 벡터일 수 있다. 발현 벡터는 포유류 발현 벡터일 수 있다. 발현 벡터는 바이러스 발현 벡터일 수 있다. 발현 벡터는 키메라 수용체 및/또는 스위치 암호화 서열의 구성적 발현을 위한 구성적 촉진자를 가질 수 있다. 발현 벡터는 키메라 수용체 및/또는 스위치 암호화 서열의 조건적 발현을 위한 유도성 촉진자를 가질 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 키트는 (i) (a) 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드로부터의 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) 항-GCN4 CAR을 발현하는 CAR-EC를 포함한다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 중쇄 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나를 포함할 수 있다. GCN4는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 모두 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열을 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 전장 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키트의 사용은 (i) (a) 효모 전사 인자 펩타이드(예를 들어, 본 명세서에 개시된 GCN4 펩타이드)로부터의 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) 항-GCN4 CAR을 발현하는 CAR-EC에 의한 대상체의 동시치료를 포함하고, 여기서 치료는 CD19 발현 표적 세포의 스위치 매개된 세포독성을 발생시킨다.
몇몇 실시형태에서, 키트는 (i) (a) Flag 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) 항-Flag 펩타이드 CAR을 발현하는 CAR-EC를 포함한다. Flag 펩타이드는 하기 서열 중 어느 하나를 포함할 수 있다: DYKDDDDK 및 DYKDDDDKP. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 중쇄 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 전장 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키트의 사용은 (i) (a) Flag 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) 항-Flag CAR을 발현하는 CAR-EC에 의한 대상체의 동시치료를 포함하고, 여기서 치료는 CD19 발현 표적 세포의 스위치 매개된 세포독성을 발생시킨다.
몇몇 실시형태에서, 키트는 (i) (a) FITC를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) 항-FITC 펩타이드 CAR을 발현하는 CAR-EC를 포함한다. FITC는 인간화된 FMC63 항체에 비특이적으로 접합될 수 있다. FITC는 인간화된 FMC63 항체 부위에 특이적으로 접합될 수 있다. 부위 특이적 접합은 인간화된 FMC63 항체에 포함된 인공 아미노산에 대한 것일 수 있다. 접합은 인간화된 FMC63 항체를 FITC에 연결하는 링커를 통해서일 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 중쇄 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 전장 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키트의 사용은 (i) (a) FITC를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) 항-FITC CAR을 발현하는 CAR-EC에 의한 대상체의 동시치료를 포함하고, 여기서 치료는 CD19 발현 표적 세포의 스위치 매개된 세포독성을 발생시킨다.
몇몇 실시형태에서, 키트는 (i) (a) K4 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) E4 세포외 도메인을 포함하는 CAR을 포함한다. K4 펩타이드는 KVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. E4 펩타이드는 EVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEK의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 중쇄 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 전장 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키트의 사용은 (i) (a) K4 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) E4 세포외 도메인을 포함하는 CAR을 발현하는 CAR-EC에 의한 대상체의 동시치료를 포함하고, 여기서 치료는 CD19 발현 표적 세포의 스위치 매개된 세포독성을 발생시킨다.
몇몇 실시형태에서, 키트는 (i) (a) E4 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) K4 세포외 도메인을 포함하는 CAR을 포함한다. K4 펩타이드는 KVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. E4 펩타이드는 EVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEK의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 중쇄를 포함할 수 있다. 중쇄 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 경쇄를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 인간화된 FMC63 항체의 Fab를 포함할 수 있다. 인간화된 FMC63 항체 또는 항체 단편은 전장 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키트의 사용은 (i) (a) E4 펩타이드를 포함하는 CAR-ID; 및 (b) 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 본 명세서에 기재된 인간화된 FMC63 항체 중 어느 하나)을 포함하는 CAR-EC 스위치 및 (ii) K4 세포외 도메인을 포함하는 CAR을 발현하는 CAR-EC에 의한 대상체의 동시치료를 포함하고, 여기서 치료는 CD19 발현 표적 세포의 스위치 매개된 세포독성을 발생시킨다.
VIII 치료학적 용도
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 방법, 플랫폼 및 키트가 본 명세서에 개시되어 있고, 상기 방법은 대상체에게 키메라 항원 수용체 효과기 세포(CAR-EC) 스위치를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 CAR-EC 스위치는 CAR-ID 및 표적화 모이어티를 포함한다. 이러한 방법은 CAR-EC 스위치와 상보성인 CAR을 발현하는 CAR-EC를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. CAR-EC 스위치는 인간화될 수 있다. CAR은 인간화될 수 있다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 방법, 플랫폼 및 키트가 본 명세서에 개시되어 있고, 상기 방법은 대상체에게 키메라 항원 수용체 효과기 세포(CAR-EC) 스위치를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 CAR-EC 스위치는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체 및 표적화 모이어티("GCN4-스위치")를 포함한다. 이러한 방법은 GCN4-스위치와 상보성인 CAR을 발현하는 CAR-EC를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. CAR-EC 스위치는 인간화될 수 있다. CAR은 인간화될 수 있다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 방법, 플랫폼 및 키트가 본 명세서에 개시되어 있고, 상기 방법은 대상체에게 키메라 항원 수용체 효과기 세포(CAR-EC) 스위치를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 CAR-EC 스위치는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체 및 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 부분을 포함하거나 이것으로 이루어진 표적화 모이어티("항-CD19 GCN4-스위치")를 포함한다. 항-CD19 항체의 CD19 결합 부분은 scFv일 수 있다. 항-CD19 GCN4-스위치는 LCNT 스위치일 수 있다. 항-CD19 GCN4-스위치는 경쇄 및 중쇄를 포함할 수 있고, 여기서 경쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 경쇄 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, 중쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 중쇄 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 이러한 중쇄 및/또는 경쇄 서열은 인간화될 수 있다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 방법, 플랫폼 및 키트가 본 명세서에 개시되어 있고, 상기 방법은 대상체에게 키메라 항원 수용체 효과기 세포(CAR-EC) 스위치를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 CAR-EC 스위치는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체 및 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 부분을 포함하거나 이것으로 이루어진 표적화 모이어티를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 인간화되고, 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하고, 여기서 중쇄 및 경쇄의 하나 또는 둘 다는 본 명세서에 개시된 CAR-ID(예를 들어, GCN4 CAR-ID)를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 경쇄 서열은 (N 말단 GCN4 CAR-ID를 포함하는) 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 스위치는 본 명세서에 개시된 몇몇 스위치에 포함된 중쇄/경쇄 조합을 제시하는 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치이다. 몇몇 실시형태에서, 스위치는 스위치에 포함된 CAR-ID가 구조 I의 서열을 갖도록 변형된다는 것을 제외하고는 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치와 동일하다. 몇몇 실시형태에서, 구조 I의 서열은 서열 번호 26, 36, 139 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된다. 이러한 방법은 항-CD19 GCN4-스위치와 상보성인 CAR을 발현하는 CAR-EC를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. CAR은 인간화될 수 있다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 방법, 플랫폼 및 키트가 본 명세서에 개시되어 있고, 상기 방법은 대상체에게 키메라 항원 수용체 효과기 세포(CAR-EC) 스위치를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 CAR-EC 스위치는 CAR-ID 및 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 부분을 포함하거나 이것으로 이루어진 표적화 모이어티("항-CD19 CAR-EC-스위치")를 포함한다. 항-CD19 항체의 CD19 결합 부분은 scFv일 수 있다. 항-CD19 CAR-EC 스위치는 N 말단 CAR-ID를 포함하는 LCNT 스위치일 수 있다. 항-CD19 CAR-EC-스위치는 경쇄 및 중쇄를 포함할 수 있고, 여기서 경쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 경쇄 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, 중쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 중쇄 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 이러한 중쇄 및/또는 경쇄 서열은 인간화될 수 있다. 이러한 방법은 항-CD19 CAR-EC-스위치와 상보성인 CAR을 발현하는 CAR-EC를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. CAR은 인간화될 수 있다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 방법, 플랫폼 및 키트가 본 명세서에 개시되어 있고, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치 중 어느 하나를 투여하는 것을 포함한다. 이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 방법, 플랫폼 및 키트가 본 명세서에 개시되어 있고, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치 중 어느 하나를 투여하고 CAR-EC 스위치와 상보성인 CAR을 포함하는 CAR-EC(즉, CAR은 상보성 CAR-EC 스위치에 포함된 CAR-ID에 대한 결합 친화도로 세포외 도메인을 포함함)를 추가로 투여하는 것을 포함한다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 본 명세서에 개시된 임의의 방법에서, CAR은 본 명세서에 개시된 CAR일 수 있다. CAR은 본 명세서에 개시된 임의의 CAR 서열을 가질 수 있다. CAR은 인간에 대한 면역원성을 감소시키도록 인간화될 수 있다. CAR은 인간화된 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 인간화는 CAR-EC 스위치에 대한 세포외 도메인의 특이성 및 친화도를 유지시키면서 인간에 대한 CAR의 면역원성을 감소시킬 수 있다. CAR은 표 13에 제공된 CAR 서열 중 어느 하나의 인간화된 버전일 수 있거나, 서열 번호 270 내지 289 중 어느 하나의 인간화된 버전일 수 있다. CAR은 CAR-EC 스위치의 CAR-ID에 결합하는 항체 또는 항체 단편을 포함하는 세포외 도메인을 포함하는 인간화된 CAR일 수 있다. 항체 단편은 scFv(예를 들어, 인간화된 scFv)일 수 있다. scFv 또는 인간화된 scFv는 일반 구조 경쇄-링커-중쇄를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. scFv 또는 인간화된 scFv는 일반 구조 중쇄-링커-경쇄를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. 인간화된 scFv는 인간 면역글로불린 프레임워크로 이식된 비인간(예를 들어, 쥣과) CDR을 갖는 인간화된 VH(가변 중쇄) 서열을 포함할 수 있다. 인간화된 scFv는 인간 면역글로불린 프레임워크로 이식된 비인간(예를 들어, 쥣과) CDR을 갖는 인간화된 VL(가변 경쇄) 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 특정한 실시형태에서, CAR은 도 24a에서의 작제물 A-H로부터 선택된 구조를 포함한다. 소정의 실시형태에서, CAR은 도 24에서의 작제물 A, 작제물 B 또는 작제물 C에 따른 구조를 포함한다. 소정의 실시형태에서, CAR은 표 11에 기재된 CAR로부터 선택된다. 소정의 특정한 실시형태에서, CAR은 표 12에 기재된 CAR로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, CAR의 세포외 도메인은 서열 번호 290 내지 388 및 423 중 어느 하나로부터 선택된 인간화된 scFv 서열을 포함한다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 본 명세서에 개시된 임의의 방법에서, 질환 또는 병태는 암일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 부분은 경쇄 서열 및 중쇄 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 부분은 인간화된 FMC63 항체 또는 이의 CD19 결합 부분을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 CD19 결합 부분의 경쇄 서열은 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나 또는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나를 포함할 수 있고, 대안적으로 또는 추가적으로, 중쇄 서열은 서열 번호 2 내지 15 중 어느 하나를 포함할 수 있다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 본 명세서에 개시된 방법은 CAR-EC 세포 및 하나 이상의 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 약 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 15개, 20개, 24개, 30개, 35개, 48개, 50개, 55개, 60개, 65개, 70개, 75개, 80개, 85개, 90개, 96개, 100개, 120개, 150개, 200개, 300개, 384개, 400개, 500개, 600개, 700개, 800개, 900개, 1000개 또는 이것 초과의 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 2개 이상의 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 2개 이상의 CAR-EC 스위치는 동일한 CAR-ID를 포함할 수 있다. 2개 이상의 CAR-EC 스위치는 동일한 인간화된 항-CD19 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 2개 이상의 CAR-EC 스위치는 하나 이상의 상이한 CAR-ID를 포함할 수 있다. 2개 이상의 CAR-EC 스위치는 하나 이상의 상이한 인간화된 항-CD19 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 상기 방법은 복수의 CAR-EC 세포 및 하나 이상의 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함할 수 있다. CAR-EC 세포의 투여는 정맥내 CAR-EC 전달을 포함할 수 있다. CAR-EC 세포의 투여는 복강내 CAR-EC 전달을 포함할 수 있다. CAR-EC 세포의 투여는 정맥내 CAR-EC 전달 및 복강내 CAR-EC 전달을 포함할 수 있다. CAR-EC 세포의 투여는 1회 발생할 수 있다. CAR-EC 세포의 투여는 1회 초과로 발생할 수 있다(예를 들어, 반복 주사). CAR-EC는 CAR-EC를 투여하기 전에 CAR-EC의 기억 집단을 농후화시키도록 분류될 수 있다. CAR-EC는 고갈을 촉진하는 재발적 자극과 반대로 기억 집단을 농후화시키고 장기간 지속적 표현형을 제공하도록 반복적 자극으로 처리될 수 있다. 이 이유는 시험감염이 없어진 후 생긴 1주 내지 2주 수축기를 통해 장기간 기억 세포를 농후화시키는 천연 급성 감염에 기초한다. 유사하게, 입양 전달된 세포가 자극 후 휴식하는 sCAR-T 세포 시스템이 T 세포 활성화의 생리학적 기간을 더 면밀히 확실하게 할 수 있다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 방법이 본 명세서에 개시되어 있고, 상기 방법은 대상체에게 키메라 항원 수용체 효과기 세포(CAR-EC) 스위치를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 CAR-EC 스위치는 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID); 및 표적 상의 CD19에 결합하는 인간화된 표적화 모이어티를 포함한다. CAR-ID는, 비제한적인 예로서, FLAG(등록상표) 태그, 효모 전사 인자 GCN4(예를 들어, 7p14p GCN4, 친수성 표적 펩타이드(HTP), 알파 나선을 형성하는 펩타이드로부터 선택될 수 있다. 표적화 모이어티는, 비제한적인 예로서 본 명세서에 개시된 임의의 인간화된 항-CD19 항체로부터 선택될 수 있다.
상기 방법은 이를 요하는 대상체에게 하나 이상의 키메라 항원 수용체 효과기 세포를 투여하고, 이후 이를 요하는 대상체에게 하나 이상의 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함할 수 있다. CAR-EC 스위치의 양 또는 용량은 표적 세포를 향한 키메라 항원 수용체 효과기 세포의 규모에 영향을 미칠 수 있고, 따라서 CAR-EC 스위치의 양 또는 용량은 원하는 효과에 대해 적정될 수 있다. 예를 들어, 종양은 적합한 치료학적 지수를 달성하도록 CAR-EC 스위치의 적정에 의해 표적화될 수 있다. 반응은 CRS(사이토카인 방출 증후군) 및 TLS(종양 용해 증후군) 사건을 피하도록 "온" 적정될 수 있어서, 개인화된 치료를 제공한다. 게다가, 스위치의 투여는 부작용, CAR-EC 세포 활성의 제어, 온 타깃 오프 종양 반응성 또는 오프 타깃 반응성의 적정, 종양 용해 증후군(tumor lysis syndrome: TLS)의 폐기 또는 사이토카인 방출 증후군(tumor lysis syndrome: CRS)의 악화의 경우에 종결될 수 있다. 양 또는 용량은 기재된 시간 기간 동안 하나의 수준에서 시작할 수 있고, 이후 양 또는 용량은 제2 기재된 시간 기간 동안 제2 수준으로 증가되거나 감소될 수 있다. 예를 들어, CAR-EC 스위치의 초기 양 또는 용량은 종양을 제거하는 데 필요한 가장 저용량일 수 있다. CAR-EC 스위치의 양 또는 용량은 이후 임의의 남은 종양 세포를 제거하기 위해 더 고용량으로 증가될 수 있다. 상기 방법은 종양 세포가 일단 제거되면 CAR-EC 스위치의 투여를 종결시키는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 종양 세포가 환자에서 재발생하는 경우 또는 환자가 재발하는 경우 CAR-EC 스위치를 재투여하는 것을 포함할 수 있다.
상기 방법은 원하는 효과를 위해 CAR-EC 스위치를 적정하는 것을 포함할 수 있다. CAR-EC 스위치를 적정하는 것은 항원 밀도 식별이 가능하게 할 수 있다. 예를 들어, 폐에서의 Her2 발현의 낮은 수준에 Her2 표적화된 CAR-T 세포에 대한 치명적인 온 타깃, 오프 종양 반응성은 임상에서 고형 종양에 대한 CAR-T 세포의 적용을 완화시켰다. 인간에서 대략 10시간의 반감기를 갖는 것으로 예상된 Fab 기반 스위치의 사용은 오래 살아 있는 IgG 기반 분자보다 더 신속한 활성 감소를 허용한다. 본 명세서에 기재된 방법은 최적 수준으로 스위치를 적정하는 것을 포함할 수 있고, 여기서 스위치 활성은 표적 세포 상의 표적 항원의 밀도에 의해 영향을 받을 수 있어서, 건강한 조직에서 표적 항원으로부터의 암 세포 상의 표적 항원(및 스위치 활성)을 식별 또는 구별한다. 임상에서, 이것은 적절한 치료학적 지수에 치료를 적정하도록 사용될 수 있다. 추가적으로, 오직 입양 전달된 sCAR-T 세포가 조직을 없앤 후에 스위치를 제거하고, 이로써 조직에 대한 잠재적인 독성을 완화시킴으로써 활성화로부터 sCAR-T 세포의 인퓨젼을 디커플링하는 것이 환자에서 가능할 수 있다. 예를 들어, 연구는 전달된 세포독성 T 세포가 폐에서 바로 축정하지만, 축적이 72시간에 걸쳐 없어진다는 것을 보여주었다. sCAR-T 세포의 하나의 이점은 이것이 전달될 수 있고, sCAR-T 세포가 폐에서 없어질 때까지(이때, sCAR-T 세포는 불활성임) 스위치 용량이 지연될 수 있다는 것이다. 없어지면, 스위치는 CAR 및 표적 항원에 대한 스위치의 결합 시 sCAR-T를 활성화하도록 투여될 수 있다. 당업자는 이 개념이 다양한 밀도로 세포 상에 발현된 Her2 이외에 다른 항원에 어떻게 적용되는지를 용이하게 이해할 것이다.
상기 방법은 하나 이상의 키메라 항원 수용체 효과기 세포를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 하나 이상의 T 세포를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 효과기 세포는 미경험 T 세포, 기억 줄기 세포 T 세포, 중앙 기억 T 세포, 효과기 기억 T 세포, 헬퍼 T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포(세포독성 T 세포), CD8/CD4+ T 세포, αβ T 세포, γδ T 세포, 천연 살해 T 세포, 천연 살해 세포, 마크로파지로부터 선택될 수 있다.
CAR-EC 스위치는 적어도 부분적으로 표적 세포의 근처에서 데려온 효과기 세포에 의존하는 치료학적 효과를 가질 수 있다. CAR-EC 스위치의 의도된 적응증에서의 치료학적 효과는 적어도 부분적으로 표적 세포에 효과기 세포를 동원하는 CAR-EC 스위치로 인할 수 있다. CAR-EC 스위치의 의도된 적응증에서의 치료학적 효과는 주로 표적 세포에 효과기 세포를 동원하는 CAR-EC 스위치로 인할 수 있다. CAR-EC 스위치의 치료학적 효과는 적어도 부분적으로 CAR-EC 세포에서 면역 반응을 자극하는 것에 의존할 수 있다.
CAR-EC 스위치를 투여하는 것은 효과기 세포를 추가로 투여하지 않으면서 임의의 치료학적 효과를 가지지 않을 수 있다. CAR-EC 스위치는 효과기 세포를 추가로 투여하지 않으면서 유의미한, 바람직한 및/또는 의도된 치료학적 효과를 가지지 않을 수 있다. CAR-EC 스위치는 효과기 세포를 추가로 투여하지 않으면서 CAR-EC 플랫폼의 의도된 적응증을 향해 임의의 치료학적 효과를 가지지 않을 수 있다. CAR-EC 스위치(예를 들어, CAR-ID 또는 표적화 모이어티)의 부분 또는 성분은 CAR-EC 스위치(예를 들어, CAR-ID 또는 표적화 모이어티)의 제2 부분 또는 성분에 접합되지 않으면서 CAR-EC 스위치의 의도된 적응증을 향해 치료학적 효과를 가지지 않을 수 있다. 치료학적 효과를 제공하기 위해 CAR-EC 플랫폼의 일부로서 투여될 때 CAR-EC 스위치(예를 들어, CAR-ID 또는 표적화 모이어티)의 부분 또는 성분의 용량은 CAR-EC 스위치의 부분 또는 성분이 그 용량에서 단독으로 투여될 때 치료학적 효과를 가지지 않을 수 있다. CAR-EC 스위치의 부분 또는 성분은 표적 세포에 T 세포를 동원하는 것 이외에 임의의 치료학적 효과를 갖도록 의도되지 않을 수 있다. CAR-EC 스위치의 부분 또는 성분을 단독으로 투여하는 것은 표적 세포에 치료학적 효과를 가질 수 있고, 여기서 치료학적 효과는 CAR-EC 스위치 및 CAR-EC 세포를 투여하는 것의 치료학적 효과에 비해 무시할만하다. CAR-EC 스위치의 부분 또는 성분을 투여하는 것은 표적 세포에 치료학적 효과를 가질 수 있고, 여기서 치료학적 효과는 CAR-EC 스위치 및 CAR-EC 세포를 투여하는 것의 치료학적 효과보다 적다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한, 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치의 용도가 본 명세서에 개시되어 있다. 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의, 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치의 용도가 본 명세서에 추가로 개시되어 있다.
이를 요하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한, 효과기 세포 상의 CAR에 결합하는 펩타이드 항원(CAR-ID); 및 표적 상의 항원에 결합하는 표적화 폴리펩타이드를 포함하는 스위치의 용도가 본 명세서에 개시되어 있다. 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의, 효과기 세포 상의 CAR에 결합하는 펩타이드 항원(CAR-ID); 및 표적 상의 항원에 결합하는 표적화 폴리펩타이드를 포함하는 스위치의 용도가 본 명세서에 추가로 개시되어 있다.
다발성 골수종을 치료하기 위한, CAR-ID(여기서, CAR-ID는 낮은 면역원성 펩타이드(예를 들어, FLAG) 또는 이의 유도체 및 표적화 폴리펩타이드를 포함하고, 표적화 폴리펩타이드는 항-CD19 항체 또는 이의 단편을 포함함); 및 CAR을 포함하는 효과기 세포(여기서, CAR은 항-낮은 면역원성 펩타이드 항체를 포함하고, 항-CD19 항체 또는 이의 단편은 B 세포 상의 CD19에 결합함)를 포함하는 CAR-EC 스위치의 용도가 본 명세서에 개시되어 있다. 특히, 이전에 보고된 항체 기반 제어 시스템은 생체내 CD19의 표적화를 보고하지 않았다. 본 명세서에 보고된 바대로, sCAR-T 세포 플랫폼은 관습적인 CART-19와 필적하는 효율로 생체내 Nalm-6Luc/GFP를 제거할 수 있었다. 효율은 최적 표적 세포 참여에 의존한다. 더 구체적으로, 일반적으로 EC50에서 10배 미만인 스위치/힌지 설계의 시험관내 용해 활성의 차이는 생체내 종양 제거에 결정적이었다.
급성 림프아구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 또는 B 세포 림프종을 치료하기 위한, CAR-ID(여기서, CAR-ID는 효모 전사 인자 GCN4 또는 이의 유도체 및 표적화 폴리펩타이드를 포함하고, 표적화 폴리펩타이드는 항-CD19 항체 또는 이의 단편을 포함함); 및 CAR을 포함하는 효과기 세포(여기서, CAR은 항-GCN4 항체를 포함하고, 항-CD19 항체 또는 이의 단편은 림프아구, 림프구 또는 B 세포 상의 CD19에 결합함)를 포함하는 CAR-EC 스위치의 용도가 본 명세서에 개시되어 있다.
질환 또는 병태는 세포 증식성 장애일 수 있다. 세포 증식성 장애는 고형 종양, 림프종, 백혈병 및 지방육종로부터 선택될 수 있다. 세포 증식성 장애는 급성, 만성, 재발성, 불응성, 촉진, 관해 중, I 병기, II 병기, III 병기, IV 병기, 연소성 또는 성인일 수 있다. 세포 증식성 장애는 골수성 백혈병, 림프아구성 백혈병, 골수성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수단핵구성 백혈병, 호중구성 백혈병, 골수이형성 증후군, B 세포 림프종, 버킷 림프종, 대형 세포 림프종, 혼합 세포 림프종, 여포성 림프종, 맨틀 세포 림프종, 호지킨 림프종, 재발성 소형 림프구성 림프종, 모발 세포 백혈병, 다발성 골수종, 호염기구성 백혈병, 호산구성 백혈병, 거핵아구성 백혈병, 단핵아구성 백혈병, 단핵구성 백혈병, 적백혈병, 적혈구백혈병 및 간세포 암종으로부터 선택될 수 있다. 세포 증식성 장애는 혈액학적 악성종양을 포함할 수 있다. 혈액학적 악성종양은 B 세포 악성종양을 포함할 수 있다. 세포 증식성 장애는 만성 림프구성 백혈병을 포함할 수 있다. 세포 증식성 장애는 급성 림프아구성 백혈병을 포함할 수 있다. 세포 증식성 장애는 CD19 양성 버킷 림프종을 포함할 수 있다.
질환 또는 병태는 암, 병원성 감염, 자가면역 질환, 염증성 질환, 또는 유전 장애일 수 있다.
몇몇 경우에, 하나 이상의 질환은 암을 포함한다. 암은 재발성 및/또는 불응성 암을 포함할 수 있다. 암의 예는 육종, 암종, 림프종 또는 백혈병을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
암은 신경내분비 암을 포함할 수 있다. 암은 췌장암을 포함할 수 있다. 암은 외분비 췌장암을 포함할 수 있다. 암은 갑상선암을 포함할 수 있다. 갑상선암은 갑상선 수질암을 포함할 수 있다. 암은 전립선암을 포함할 수 있다.
암은 상피 암을 포함할 수 있다. 암은 유방암을 포함할 수 있다. 암은 자궁내막암을 포함할 수 있다. 암은 난소암을 포함할 수 있다. 난소암은 기질 난소암을 포함할 수 있다. 암은 자궁경부암을 포함할 수 있다.
암은 피부암을 포함할 수 있다. 피부암은 신생혈관형성 피부암을 포함할 수 있다. 피부암은 흑색종을 포함할 수 있다.
암은 신장암을 포함할 수 있다.
암은 폐암을 포함할 수 있다. 폐암은 소세포 폐암을 포함할 수 있다. 폐암은 비소세포 폐암을 포함할 수 있다.
암은 결장직장암을 포함할 수 있다. 암은 위암을 포함할 수 있다. 암은 결장암을 포함할 수 있다.
암은 뇌암을 포함할 수 있다. 뇌암은 뇌 종양을 포함할 수 있다. 암은 교모세포종을 포함할 수 있다. 암은 성상세포종을 포함할 수 있다.
암은 혈액암을 포함할 수 있다. 혈액암은 백혈병을 포함할 수 있다. 백혈병은 골수성 백혈병을 포함할 수 있다. 암은 림프종을 포함할 수 있다. 림프종은 비호지킨 림프종을 포함할 수 있다.
암은 육종을 포함할 수 있다. 육종은 유잉 육종을 포함할 수 있다.
육종은 골, 연골, 지방, 근육, 혈관 또는 다른 연결 또는 지지 조직의 암이다. 육종은 골암, 섬유육종, 연골육종, 유잉 육종, 악성 혈관내피종, 악성 신경초종, 양측성 전정 신경초종, 골육종, 연조직 육종(예를 들어, 포상 연부 육종, 혈관육종, 엽상낭상 육종, 피부섬유육종, 데스모이드 종양, 상피양 육종, 연부조직 골육종, 섬유육종, 혈관주위세포종, 혈관육종, 카포시 육종, 평할근육종, 지방육종, 림프관육종, 림프육종, 악성 섬유성 조직구종, 신경섬유육종, 횡문근육종 및 활막 육종)을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
암종은 신체의 표면을 덮고, 호르몬을 생성하고, 선(gland)을 구성하는 세포인 상피 세포에서 시작하는 암이다. 비제한적인 예로서, 암종은 유방암, 췌장암, 폐암, 결장암, 결장직장암, 직장암, 신장암, 방광암, 위암, 전립선암, 간암, 난소암, 뇌암, 질암, 외음부암, 자궁암, 경구암, 음경암, 고환암, 식도암, 피부암, 나팔관의 암, 두경부암, 위장 기질 암, 선암, 피부 또는 눈내 흑색종, 항문부의 암, 소장의 암, 내분비계의 암, 갑상선의 암, 부갑상선의 암, 부신의 암, 요도의 암, 신우의 암, 자궁의 암, 자궁내막의 암, 자궁경부의 암, 뇌하수체의 암, 중추 신경계(central nervous system: CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 뇌간 신경교종 및 척추 축 종양을 포함한다. 몇몇 경우에, 암은 피부암, 예컨대 기저 세포 암종, 편평, 흑색종, 비흑색종 또는 광선(일광) 각화증이다.
몇몇 경우에, 암은 폐암이다. 폐암은 폐(기관지) 또는 폐의 작은 공기주머니(폐포)에 공급하도록 기관을 갈라지게 하는 기도에서 시작할 수 있다. 폐암은 비소세포 폐암종(non-small cell lung carcinoma: NSCLC), 소세포 폐암종 및 중피종을 포함한다. NSCLC의 예는 편평세포 암종, 선암 및 대형 세포 암종을 포함한다. 중피종은 폐의 라이닝 및 흉강(흉막) 또는 복부의 라이닝(복막)의 암성 종양일 수 있다. 중피종은 석면 노출로 인할 수 있다. 암은 뇌암, 예컨대 교모세포종일 수 있다.
대안적으로, 암은 중추 신경계(CNS) 종양일 수 있다. CNS 종양은 신경교종 또는 비신경교종으로 분류될 수 있다. 신경교종은 악성 신경교종, 고등급 신경교종, 산재성 내재성 뇌교종일 수 있다. 신경교종의 예는 성상세포종, 핍지교종(또는 핍지교종 및 상상세포종 요소의 혼합물) 및 뇌실막세포종을 포함한다. 성상세포종은 저등급 성상세포종, 역형성 성상세포종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 다형성 황색성상세포종 및 뇌실막밑 거대 세포 성상세포종을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 핍지교종은 저등급 핍지교종(또는 올리고성상세포종) 및 역형성 핍지교종을 포함한다. 비신경교종은 수막종, 뇌하수체 선종, 1차 CNS 림프종 및 수모세포종을 포함한다. 몇몇 경우에, 암은 수막종이다.
백혈병은 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 또는 만성 골수구성 백혈병일 수 있다. 백혈병의 추가적인 유형은 모발 세포 백혈병, 만성 골수단핵구성 백혈병 및 연소성 골수단핵구성 백혈병을 포함한다.
림프종은 림프구의 암이고, B 또는 T 림프구 중 어느 하나로 발생할 수 있다. 림프종의 2개의 주요 유형은 호지킨 질환으로 이전에 공지된 호지킨 림프종 및 비호지킨 림프종이다. 호지킨 림프종은 스턴버그-리드 세포(Reed-Sternberg cell)의 존재로 표시된다. 비호지킨 림프종 호지킨 림프종이 아닌 모든 림프종이다. 비호지킨 림프종은 지연형 림프종 및 공격적 림프종일 수 있다. 비호지킨 림프종은 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 점막 연관된 림프 조직 림프종(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma: MALT), 소세포 림프구성 림프종, 맨틀 세포 림프종, 버킷 림프종, 종격동 거대 B 세포 림프종, 발덴스트룀 거대글로불린혈증, 노드 가장자리 영역 B 세포 림프종(nodal marginal zone B cell lymphoma: NMZL), 비장 가장자리 영역 림프종(splenic marginal zone lymphoma: SMZL), 노드외 가장자리 영역 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 1차 삼출성 림프종 및 림프종모양 육아종증을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
암은 고형 종양을 포함할 수 있다. 암은 육종을 포함할 수 있다. 암은 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 폐암, 흑색종, 골수종, 갑상선암, 췌장암, 신경교종, 뇌의 악성 신경교종, 교모세포종, 난소암 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 암은 불균일한 항원 발현을 가질 수 있다. 암은 조정된 항원 발현을 가질 수 있다. 항원은 표면 항원일 수 있다. 암은 골수종을 포함하지 않을 수 있다. 암은 흑색종을 포함하지 않을 수 있다. 암은 결장암을 포함하지 않을 수 있다. 암은 급성 림프아구성 백혈병(ALL)일 수 있다. 암은 재발된 ALL일 수 있다. 암은 불응성 ALL일 수 있다. 암은 재발된 불응성 ALL일 수 있다. 암은 만성 림프구성 백혈병(CLL)일 수 있다. 암은 재발된 CLL일 수 있다. 암은 불응성 CLL일 수 있다. 암은 재발된 불응성 CLL일 수 있다.
암은 유방암을 포함할 수 있다. 유방암은 삼중 양성 유방암(에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 Her2 양성)일 수 있다. 유방암은 삼중 음성 유방암(에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 Her2 음성)일 수 있다. 유방암은 에스트로겐 수용체 양성일 수 있다. 유방암은 에스트로겐 수용체 음성일 수 있다. 유방암은 프로게스테론 수용체 양성일 수 있다. 유방암은 프로게스테론 수용체 음성일 수 있다. 유방암은 Her2 음성 유방암을 포함할 수 있다. 유방암은 저발현 Her2 유방암을 포함할 수 있다. 유방암은 Her2 양성 유방암을 포함할 수 있다. Her2를 발현하는 세포주는 항원 밀도에 잘 규명되어서, 악성종양을 0(세포마다 20,000개 미만의 Her2 항원), 1+(세포마다 100,000개의 Her2 항원), 2+(세포마다 500,000개의 Her2 항원) 및 3+(세포마다 2,000,000개 초과의 Her2 항원)로 분류하는 임상 면역조직화학 규명을 반영한다. 본 발명은 이러한 분류의 유방암을 치료하는 방법을 제공한다. 유방암은 Her2 0으로 분류된 유방암을 포함할 수 있다. 유방암은 Her2 1+로 분류된 유방암을 포함할 수 있다. 유방암은 Her2 2+로 분류된 유방암을 포함할 수 있다. 유방암은 Her2 3+로 분류된 유방암을 포함할 수 있다.
질환 또는 병태는 병원성 감염일 수 있다. 병원성 감염은 하나 이상의 병원균에 의해 생길 수 있다. 몇몇 경우에, 병원균은 박테리아, 균류, 바이러스 또는 원생동물이다.
예시적인 병원균은 보르데텔라(Bordetella), 보렐리아(Borrelia), 브루셀라(Brucella), 캄필로박터(Campylobacter), 클라미디아(Chlamydia), 클라미도필라(Chlamydophila), 클로스트리듐(Clostridium), 코리네박테륨(Corynebacterium), 엔테로코커스(Enterococcus), 에스체리치아(Escherichia), 프란시셀라(Francisella), 헤모필루스(Haemophilus), 헬리코박터(Helicobacter), 레지오넬라(Legionella), 렙토스피라(Leptospira), 리스테리아(Listeria), 마이코박테륨(Mycobacterium), 마이코플라스마(Mycoplasma), 나이세리아(Neisseria), 슈도모나스(Pseudomonas), 리케치아(Rickettsia), 살모넬라(Salmonella), 쉬겔라(Shigella), 스타필로코커스(Staphylococcus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 트레포네마(Treponema), 비브리오(Vibrio) 또는 예르시니아(Yersinia)를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 몇몇 경우에, 병원균에 의해 생긴 질환 또는 병태는 결핵이고, 불균일 샘플은 박테리아 마이코박테륨 튜베쿨로시스로부터 유래된 외래 분자 및 대상체로부터 유래된 분자를 포함한다. 몇몇 경우에, 박테리아에 의해 생긴 질환 또는 병태는 결핵, 스트렙토코커스 및 슈도모나스와 같은 박테리아에 의해 생길 수 있는 폐렴, 쉬겔라, 캄필로박터 및 살모넬라와 같은 박테리아에 의해 생길 수 있는 식품매개 질병, 및 감염 예컨대 파상풍, 장티푸스 열, 디프테리아, 매독 및 한센병이다. 질환 또는 병태는 천연 발생 세균총의 불균형에 의해 생긴 질의 질환인 세균성 질염일 수 있다. 대안적으로, 질환 또는 병태는 뇌막(예를 들어, 뇌 및 척수를 덮는 보호막)의 박테리아 염증인 세균성 수막염이다. 박테리아에 의해 생긴 다른 질환 또는 병태는 세균성 폐렴, 요로 감염, 세균성 위장염 및 세균성 피부 감염을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 세균성 피부 감염의 예는 스타필로코커스 아우레우스 또는 스트렙토코커스 피요게네스에 의해 생길 수 있는 농가진; 림프 분산에 의한 진피의 스트렙토코커스 세균성 감염에 의해 생길 수 있는 단독(erysipelas); 및 정상 피부 상재균 또는 외인성 박테리아에 의해 생길 수 있는 봉와직염을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
병원균은 진균, 예컨대 칸디다(Candida), 아스퍼질루스(Aspergillus), 크립토코커스(Cryptococcus), 히스토플라스마(Histoplasma), 뉴모사이스티스(Pneumocystis) 및 스타키보트리스(Stachybotrys)일 수 있다. 진균에 의해 생긴 질환 또는 병태의 예는 완선, 효모 감염, 백선 및 무좀을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
병원균은 바이러스일 수 있다. 바이러스의 예는 아데노바이러스, 콕사키바이러스, 엡스타인 바 바이러스, 간염 바이러스(예를 들어, A형, B형 및 C형 간염), 단순 포진 바이러스(1형 및 2형), 사이토메갈로바이러스, 포진 바이러스, HIV, 인플루엔자 바이러스, 홍역 바이러스, 볼거리 바이러스, 파필로마바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 폴리오바이러스, 호흡기 합포체 바이러스, 풍진 바이러스 및 바리셀라-조스터 바이러스를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 바이러스에 의해 생긴 질환 또는 병태의 예는 감기, 독감, 간염, AIDS, 수두, 풍진, 볼거리, 홍역, 사마귀 및 소아마비를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
병원균은 원생동물, 예컨대 아칸타모에바(Acanthamoeba)(예를 들어, 에이. 아스트로닉시스(A. astronyxis), 에이. 카스텔라니(A. castellanii), 에이. 쿨베르트소니(A. culbertsoni), 에이. 핫체티(A. hatchetti), 에이. 폴리파가(A. polyphaga), 에이. 리소데스(A. rhysodes), 에이. 헤알위(A. healyi), 에이. 디비오넨시스(A. divionensis)), 브라키올라(Brachiola)(예를 들어, 비. 콘노리(B connori), 비. 베시쿨라룸(B. vesicularum)), 크립토스포리듐(Cryptosporidium)(예를 들어, 씨. 파르붐(C. parvum)), 사이클로스포라(Cyclospora)(예를 들어, 씨. 카이에타넨시스(C. cayetanensis)), 엔세팔리토존(Encephalitozoon)(예를 들어, 이. 쿠니쿨리(E. cuniculi), 이. 헬렘(E. hellem), 이. 인테스티날리스(E. intestinalis)), 엔타모에바(Entamoeba)(예를 들어, 이. 히스톨리티카(E. histolytica)), 엔테로사이토존(Enterocytozoon)(예를 들어, 이. 비에네우시(E. bieneusi)), 기아르디아(Giardia)(예를 들어, 쥐. 람블리아(G. lamblia)), 이소스포라(Isospora)(예를 들어, 아이. 벨리(I. belli)), 마이크로스포리듐(Microsporidium)(예를 들어, 엠. 아프리카눔(M. africanum), 엠. 세일로넨시스(M. ceylonensis)), 나에젤리아(Naegleria)(예를 들어, 엔. 포울레리(N. fowleri)), 노세마(Nosema)(예를 들어, 엔. 알게라에(N. algerae), 엔. 에쿨라룸(N. ocularum)), 플레이스토포라(Pleistophora), 트라키플레이스토포라(Trachipleistophora)(예를 들어, 티. 안트로포프테라(T. anthropophthera), 티. 호미니스(T. hominis)) 및 비타포르마(Vittaforma)(예를 들어, 브이. 코리네아에(V. corneae))일 수 있다.
질환 또는 병태는 자가면역 질환 또는 자가면역 관련된 질환일 수 있다. 자가면역 장애는 신체가 그 자신의 조직을 공격하게 하는 신체의 면역계의 기능이상일 수 있다. 자가면역 질환 및 자가면역 관련된 질환의 예는 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척추염, 항인지질 증후군(antiphospholipid syndrome: APS), 자가면역성 재생불량성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역성 심근염, 베체트병, 비열대성 스프루, 크론씨병, 피부근육염, 호산구성 근막염, 결절 홍반, 거대 세포 동맥염(측두 동맥염), 굿패스쳐 증후군, 그레이브병, 하시모토병, 특발성 혈소판감소성 자반병(idiopathic thrombocytopenic purpura: ITP), IgA 신장병증, 연소성 관절염, 당뇨병, 연소성 당뇨병, 가와사키 증후군, 람베르트-이튼 증후군, 루푸스(SLE), 혼합 연결 조직 질환(mixed connective tissue disease: MCTD), 다발성 경화증, 중증 근무력증, 천포창, 결절성 다발동맥염, I형, II형 및 III형 자가면역 다선성 증후군, 류마티스성 다발근육통, 다발성 근염, 건선, 건선성 관절염, 레이터 증후군, 재발성 다발연골염, 류마티스성 관절염, 사이코이드증, 경피증, 쇼그렌 증후군, 정자 및 고환 자가면역, 강직 인간 증후군, 타까야수 동맥염, 측두 동맥염/거대 세포 동맥염, 궤양성 결장염, 포도막염, 혈관염, 백반증 및 베게너 육아종증을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
질환 또는 병태는 염증성 질환일 수 있다. 염증성 질환의 예는 폐포염, 아밀로이드증, 혈관염, 강직성 척추염, 무혈성 괴사, 바제도우씨병, 벨 마비, 활액낭염, 손목 터널 증후군, 셀리악병, 담관염, 무릎 연골연화증, 만성 활성 간염, 만성 피로 증후군, 코간 증후군, 고관절 선천성 이형성증, 늑연골염, 크론씨병, 낭성 섬유증, 드퀘르뱅 건염(De Quervain's tendinitis), 당뇨병 연관된 관절염, 산재성 특발성 골격 과골화증, 원판성 루푸스, 엘러스-단로스 증후군, 가족성 지중해 열, 근막염, 결합조직염/섬유근육통, 오십견, 결절 낭종, 거대 세포 동맥염, 통풍, 그레이브병, HIV 연관된 류마티스성 질환 증후군, 부갑상선 기능 항진증 연관된 관절염, 감염성 관절염, 염증성 장 증후군/자극성 장 증후군, 연소성 류마티스성 관절염, 라임병, 마르판 증후군, 미쿨리츠병, 혼합 연결 조직 질환, 다발성 경화증, 근막 통증 증후군, 골관절염, 골연화증, 골다공증 및 코티코스테로이드 유도된 골다공증, 파제트씨병, 회귀성 류머티즘, 파킨슨병, 플루머병, 류마티스성 다발근육통, 다발성 근염, 거짓 통풍, 건선성 관절염, 레이노 현상/증후군, 레이터 증후군, 류마티스성 열, 류마티스성 관절염, 사이코이드증, 좌골신경통(요추 신경근병), 경피증, 괴혈병, 겸상 세포 관절염, 쇼그렌 증후군, 척추관 협착증, 척추전방전위증, 스틸병, 전신 홍반 루푸스, 타까야수(무맥박) 질환, 건염, 테니스 엘보/골프 엘보, 갑상선 연관된 관절염, 방아쇠 수지, 궤양성 결장염, 베게너 육아종증 및 휘플씨병을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
본 명세서에 개시된 치료의 방법은 사이토카인 수준에 의해 측정된 바와 같은 오프 타깃 활성을 포함할 수 있다. 상기 방법은 다른 CAR-EC 치료와 비교할 때 사이토카인 수준에 의해 측정된 바와 같은 오프 타깃 활성을 감소시킬 수 있다. 상기 방법은 인터페론 감마 수준에 의해 측정된 바와 같은 오프 타깃 활성을 감소시킬 수 있다. 감소될 수 있는 다른 오프 타깃 활성은 독성 림프구감소증, 고형 종양 표적의 치명적인 세포용해 및 혈액학적 표적에 대한 만성 저감마글로불린혈증을 포함한다. 본 명세서에 개시된 치료 및 조성물의 방법은 CD19 매개된 B 세포 무형성증을 포함하는 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 상기 방법 및 조성물은 CD19 매개된 B 세포 무형성증을 최소화할 수 있다. 상기 방법은 장기간 B 세포 무형성증을 회피할 수 있다.
본 명세서에 개시된 CAR-EC 플랫폼, 방법 및 조성물은 이를 요하는 대상체에서 이질적 종양 또는 불균일 혈액 세포 악성종양을 치료하기 위해 사용될 수 있다. "pan-B 세포" 마커 CD20은 B 세포 신생물에 가장 널리 퍼져 표적화된 항원이고, FDA 승인된 항체 리툭시맙은 많은 백혈병 및 림프종의 치료에서 중요한 성분이다. 그러나, CD20 항원 발현의 조정과 관련된 내성 기전은 유의미한 수의 환자에서 발생한다. CD19 또는 CD20 항원 단독에 의한 표적화가 치유적 치료에 불충분한 것이 명확하다. 본 명세서에 개시된 방법은 상이한 특이을 갖는 2개 이상의 스위치(예를 들어, 항-CD19 항체 CAR-EC 스위치 및 항-CD20 항체 CAR-EC 스위치)의 작제 및 투여를 제공한다. 본 명세서에 개시된 방법은 상이한 특이성을 갖는 2개 이상의 스위치(예를 들어, 항-CD19 항체 CAR-EC 스위치 및 항-CD22 항체 CAR-EC 스위치)의 작제 및 투여를 제공한다. 이 방법론은 B 세포의 지속적 손실을 피하면서 임상에서 재발에 대한 경향에 대해 유의미한 이점을 제공할 수 있다. 이질적 종양 또는 불균일 혈액 세포 악성종양은 또한 항-CD19 항체 CAR-EC 스위치 및 항-CD22 항체 CAR-EC 스위치에 의해 치료될 수 있다. 하나 이상의 CAR-EC 스위치는 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 표적 세포 상의 제2 세포 표면 분자를 표적화하는 제2 스위치는 제1 스위치에 의해 표적화된 표적 세포 상의 제1 세포 표면 분자의 하향 조절 후 투여될 수 있다.
CAR-EC 스위치는 하나 이상의 추가적인 치료제와 투여될 수 있다. 하나 이상의 추가적인 치료제는 면역요법, 화학요법 및 스테로이드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 하나 이상의 추가적인 치료제는 화학요법 약물일 수 있다. 화학요법 약물은 알킬화제, 대사저해물질, 안트라사이클린, 토포아이소머라제 저해제, 유사분열 저해제, 코르티코스테로이드 또는 분화제일 수 있다. 화학요법 약물은 악티노마이신-D, 블레오마이신, 알트레타민, 보르테조밉, 부술판, 카르보플라틴, 카페시타빈, 카르무스틴, 클로르암부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 클로파라빈, 사이클로포스파마이드, 사이타라빈, 다카르바진, 다우노루비신, 독세탁셀, 독소루비신, 에피루비신, 에토포사이드, 에스트라무스틴, 플록수리딘, 플루다라빈, 플루오로우라실, 겜시타빈(Gemzar), 하이드록시우레아, 이다루비신, 이포스파마이드, 이리노테칸(Camptosar), 익사베필론, L-아스파라기나제, 로무스틴, 메클로르에타민, 멜팔란, 6-머캅토퓨린, 메토트렉세이트, 미토마이신-C, 파클리탁셀(Taxol), 페메트렉세드, 펜토스타틴, 스트렙토조신, 테모졸로마이드, 테니포사이드, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸(Hycamtin), 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 레티노이드, 트레티노인(ATRA 또는 Atralin(등록상표)), 벡사로텐(Targretin(등록상표)) 및 삼산화비소(Arsenox(등록상표))일 수 있다. 화학요법은 삼키는 환제로서, 근육 또는 지방 조직으로의 주사로서, 정맥내로, 국소로 또는 체강내로 직접적으로 투여될 수 있다.
하나 이상의 추가적인 치료제는 혈관신생 저해제를 포함할 수 있다. 혈관신생 저해제는 베바시주맙, 이트라코나졸, 카복시아미도트라이아졸, TNP-470, CM101, IFN 알파, IL-12, 혈소판 인자 4, 수라민, SU5416, 트롬보스폰딘, VEGFR 길항제, 헤어핀을 갖는 안지오스타틱 스테로이드, CAR-ECilage 유래된 혈관신생 저해 인자, 매트릭스 금속단백분해효소 저해제, 안지오스타틴, 엔도스타틴, 소라페닙, 수니티닙, 파조파닙, 에버롤리무스, 2-메톡시에스트라디올, 테코갈란, 테트라티오몰리브데이트, 탈리도마이드, 프로락틴, αvβ3 저해제, 리노마이드, 타스퀴니모드, 가용성 VEGFR-1, 가용성 NRP-1, 안지오포이에틴 2, 바소스타틴, 칼레티쿨린, TIMP, CDAI, Meth-1, Meth-2, 인터페론-알파, 인터페론-베타, 인터페론-감마, CXCL10, IL-4, IL-12, IL-18, 프로트롬빈, 항트롬빈 III 단편, 프로락틴, VEGI, SPARC, 오스테오폰틴, 마스핀, 칸스타틴, 프롤리페린 관련된 단백질 및 레스틴으로부터 선택될 수 있다.
하나 이상의 추가적인 치료제는 호르몬 치료를 포함할 수 있다. 호르몬 치료는 항-에스트로겐(예를 들어, 풀베스트란트(Faslodex(등록상표)), 타목시펜, 토레미펜(Fareston(등록상표))); 아로마타제 저해제(예를 들어, 아나스트로졸(Arimidex(등록상표)), 엑스메스탄(Aromasin(등록상표)), 레트로졸(Femara(등록상표))); 프로게스틴(예를 들어, 메게스트롤 아세테이트(Megace(등록상표))); 에스트로겐; 항-안드로겐(예를 들어, 비칼루타마이드(Casodex(등록상표)), 플루타마이드(Eulexin(등록상표)), 닐루타마이드(Nilandron(등록상표))); 고나도트로핀 방출 호르몬(GnRH) 또는 황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH) 작용제 또는 유사체(예를 들어, 류프롤라이드(Lupron(등록상표)), 고세렐린(Zoladex(등록상표)))으로부터 선택될 수 있다.
하나 이상의 추가적인 치료제는 스테로이드를 포함할 수 있다. 스테로이드는 코티코스테로이드일 수 있다. 스테로이드는 코티솔 또는 이의 유도체일 수 있다. 스테로이드는 프레드니손, 메틸프레드니솔론(Solumedrol(등록상표)) 또는 덱사메타손으로부터 선택될 수 있다.
CAR-EC 스위치는 하나 이상의 추가적인 치료와 투여될 수 있다. 하나 이상의 추가적인 치료는 레이저 치료를 포함할 수 있다. 하나 이상의 추가적인 치료는 방사선 치료를 포함할 수 있다. 하나 이상의 추가적인 치료는 수술을 포함할 수 있다.
대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 플랫폼, 키트 및 방법이 본 명세서에 개시되어 있다. 대상체는 건강한 대상체일 수 있다. 대상체는 질환 또는 병태를 겪을 수 있다. 대상체는 하나 초과의 질환 또는 병태를 겪을 수 있다. 대상체는 만성 림프구성 백혈병을 겪을 수 있다. 대상체는 급성 림프아구성 백혈병을 겪을 수 있다. 대상체는 동물일 수 있다. 대상체는 포유류일 수 있다. 포유류는 인간, 침팬지, 고릴라, 원숭이, 소, 말, 당나귀, 노새, 개, 고양이, 돼지, 토끼, 염소, 양, 래트, 햄스터, 기니아 피그 또는 마우스일 수 있다. 대상체는 조류 또는 닭일 수 있다. 대상체는 인간일 수 있다. 대상체는 어린이일 수 있다. 어린이는 급성 림프아구성 백혈병을 겪을 수 있다. 대상체는 6개월 미만일 수 있다. 대상체는 약 1세, 약 2세, 약 3세, 약 4세, 약 5세, 약 6세, 약 7세, 약 8세, 약 9세, 약 10세, 약 11세, 약 12세, 약 13세, 약 14세, 약 15세, 약 18세, 약 20세, 약 25세, 약 30세, 약 35세, 약 40세, 약 45세, 약 50세, 약 55세, 약 60세, 약 65세, 약 70세, 약 75세, 약 80세, 약 85세, 약 90세, 약 95세, 약 100세 또는 약 105세일 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 단계를 포함하는 본 명세서에 개시된 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 서열 번호 63 번호 92, 104, 115 및 181 내지 183으로부터 선택된 서열을 갖는 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 단계를 포함하는 본 명세서에 개시된 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공한다. 스위치는 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 본 명세서에 개시된 CAR-ID를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열을 포함할 수 있다. 스위치는 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 서열 번호 290 내지 388 및 423 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 갖는 scFv인 세포외 도메인을 갖는 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 단계를 포함하는 본 명세서에 개시된 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공한다. 스위치는 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 본 명세서에 개시된 CAR-ID를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열을 포함할 수 있다. 스위치는 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함할 수 있다. 투여는 임의의 순서일 수 있다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 세포는 CAR-EC 스위치 투여 전에 투여될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 CAR-EC 세포 투여 전에 투여될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 세포는 CAR-EC 스위치 투여와 동시에 투여될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 질환 또는 병태는 CD19+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태이다. 몇몇 실시형태에서, 질환 또는 병태는 이질적 종양 및 혈액 세포 악성종양으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, 질환 또는 병태는 급성 림프아구성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, 질환 또는 병태는 다발성 골수종, 급성 골수성 백혈병, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종(NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종, 맨틀 세포 림프종(MCL), 버킷 림프종 및 모발 세포 백혈병(HCL)으로부터 선택된다.
IX. 표적 세포를 사멸 또는 활성화하는 방법
본 명세서에 개시된 키메라 수용체-효과기 세포를 본 명세서에 개시된 키메라 수용체-효과기 세포 스위치와 접촉시키는 단계를 포함하는 표적 세포를 사멸하는 방법이 본 명세서에 추가로 개시되어 있고, 여기서 키메라 수용체-효과기 세포는 키메라 수용체 효과기 세포 스위치 상의 CAR-ID에 결합하는 비항체 세포외 도메인을 갖는 키메라 수용체를 발현하고, 키메라 수용체 효과기 세포 스위치는 키메라 수용체의 비항체 세포외 도메인에 결합하는 결합 도메인을 포함하고, 스위치는 표적 세포 상의 항원에 결합하는 표적화 모이어티를 포함한다.
본 명세서에 개시된 CAR-EC를 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계를 포함하는 표적 세포를 사멸하는 방법이 본 명세서에 추가로 개시되어 있고, 여기서 CAR-EC는 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 결합하는 세포외 도메인을 갖는 CAR을 발현하고, CAR-EC 스위치는 CAR의 세포외 도메인에 결합하는 CAR-를 포함하고, 스위치는 표적 세포 상의 항원(예를 들어, 종양 연관된 항원)에 결합하는 표적화 모이어티를 포함한다.
본 명세서에 개시된 CAR-EC를 본 명세서에 개시된 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계를 포함하는 표적 세포를 용해시키는 방법이 본 명세서에 추가로 개시되어 있고, 여기서 CAR-EC는 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 결합하는 세포외 도메인을 갖는 CAR을 발현하고, CAR-EC 스위치는 CAR의 세포외 도메인에 결합하는 CAR-를 포함하고, 스위치는 표적 세포 상의 항원(예를 들어, 종양 연관된 항원)에 결합하는 표적화 모이어티를 포함한다.
접촉은 시험관내 발생할 수 있다. 접촉은 대상체에서 생체내 발생할 수 있다. 대상체는 본 명세서에 개시된 임의의 대상체일 수 있다. 대상체는 질환을 가질 수 있다. 질환은 본 명세서에 개시된 질환 중 임의의 하나 이상일 수 있다. 질환은 암일 수 있다. 접촉은 본 명세서에 기재된 방법을 통해 투여를 통해서일 수 있다. 투여는 스위치에 결합하는 키메라 수용체를 발현하는 키메라 수용체-효과기 세포가 이미 투여된 대상체에게 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 투여는 대상체에 대한 CAR-EC 스위치의 투여 및 대상체에 대한 CAR-EC 스위치에 결합하는 키메라 수용체를 발현하는 CAR-EC의 추가의 투여를 포함할 수 있다.
접촉은 표적화된 세포의 용해를 유도할 수 있다. 접촉은 표적 세포를 사멸할 수 있다. 접촉은 약 1pM 내지 약 100pM의 범위인 살해에 대한 EC50으로 표적 세포를 사멸할 수 있다. 접촉은 1pM 미만인 살해에 대한 EC50으로 표적 세포를 사멸할 수 있다. 접촉은 질환을 갖는 세포를 사멸할 수 있다. 세포는 본 명세서에 개시된 임의의 질환을 가질 수 잇다. 질환은 암일 수 있다.
스위치는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치일 수 있다. 스위치는 표적화 모이어티에 융합되거나 그래프팅되거나 부착된 K4 펩타이드를 포함할 수 있다. 스위치는 표적화 모이어티에 융합되거나 그래프팅되거나 부착된 E4를 포함할 수 있다. 스위치는 표적화 모이어티에 융합되거나 그래프팅되거나 부착된 GCN4 펩타이드를 포함할 수 있다. GCN4 펩타이드는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 모두 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열을 포함할 수 있다. GCN4 펩타이드는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체(예를 들어, 서열 번호 139 내지 153 및 245 중 어느 하나)를 포함할 수 있다. 스위치는 표적화 모이어티에 융합되거나 그래프팅되거나 부착된 Flag 태그를 포함할 수 있다. 스위치는 표적화 모이어티에 부착된 FITC를 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 CD19에 결합할 수 있다. 표적화 모이어티는 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분일 수 있다. 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분일 수 있다. 표적화 모이어티는 CD20, CD22, EGFR, EGFRvIII, Her2, CS1, BCMA, CEA, CLL1, CD33 또는 CD123에 결합할 수 있다. 표적화 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD22 항체, 항-EGFR 항체, 항-EGFRvIII 항체, 항-Her2 항체, 항-CS1 항체, 항-BCMA 항체, 항-CEA 항체, 항-CLL1 항체, 항-CD123 항체 또는 항-CD33 항체일 수 있다. 표적화 모이어티는 인간화된 항-CD20 항체, 인간화된 항-CD22 항체, 인간화된 항-EGFR 항체, 인간화된 항-EGFRvIII 항체, 인간화된 항-Her2 항체, 인간화된 항-CS1 항체, 인간화된 항-BCMA 항체, 인간화된 항-CEA 항체, 인간화된 항-CLL1 항체, 인간화된 항-CD123 항체 또는 인간화된 항-CD33 항체일 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는 표적 세포를 살해하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 서열 번호 63 번호 92, 104, 115, 및 181 내지 183으로부터 선택된 서열을 갖는 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는 표적 세포를 살해하는 방법을 제공한다. 스위치는 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 본 명세서에 개시된 CAR-ID를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열을 포함할 수 있다. 스위치는 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 표 11 또는 표 12에 기재된 CAR 또는 서열 번호 290 내지 388 및 423 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 갖는 scFv인 인간화된 세포외 도메인을 갖는 CAR로부터 선택된 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는 표적 세포를 살해하는 방법을 제공한다. 스위치는 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 본 명세서에 개시된 CAR-ID를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열을 포함할 수 있다. 스위치는 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함할 수 있다.
본 명세서에 개시된 키메라 수용체-효과기 세포를 본 명세서에 개시된 키메라 수용체-효과기 세포 스위치와 접촉시키는 단계를 포함하는 표적 세포를 활성화하는 방법이 본 명세서에 추가로 개시되어 있고, 여기서 키메라 수용체-효과기 세포는 접촉이 (i) 키메라 수용체-효과기 세포 상에 발현된 키메라 수용체의 비항체 세포외 도메인에 대한 키메라 수용체 효과기 세포 스위치 상의 CAR-ID의 결합 및 (ii) 표적 항원에 대한 키메라 수용체 효과기 세포 스위치 상의 표적화 모이어티의 공존하는 결합 둘 다를 포함하는 경우 오직 활성화된다.
표적 세포를 용해시키는 방법이 추가로 개시되어 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는 표적 세포를 용해시키는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 서열 번호 63 내지 92, 104, 115 및 181 내지 183으로부터 선택된 서열을 갖는 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는 표적 세포를 용해시키는 방법을 제공한다. 스위치는 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 본 명세서에 개시된 CAR-ID를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열을 포함할 수 있다. 스위치는 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 표 11 또는 표 12에 기재된 CAR 또는 서열 번호 290 내지 388 및 423 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 갖는 scFv인 인간화된 세포외 도메인을 갖는 CAR로부터 선택된 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는 표적 세포를 용해시키는 방법을 제공한다. 스위치는 서열 번호 17-24로부터 선택된 경쇄 서열 및 본 명세서에 개시된 CAR-ID를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열을 포함할 수 있다. 스위치는 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함할 수 있다.
CAR-EC(예를 들어, 본 명세서에 개시된 CAR-EC)를 본 명세서에 개시된 상보성 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계를 포함하는 CAR-EC(예를 들어, 본 명세서에 개시된 CAR-EC)를 활성화하는 방법이 본 명세서에 추가로 개시되어 있고, 여기서CAR-EC는 접촉이 (i) CAR-EC 상에 발현된 키메라 수용체(예를 들어, CAR)의 세포외 도메인에 대한 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID의 결합 및 (ii) 표적 항원에 대한 CAR-EC 스위치 상의 표적화 모이어티의 공존하는 결합 둘 다를 포함하는 경우 오직 활성화된다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는 CAR-EC를 활성화하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 서열 번호 63 내지 92, 104, 115 및 181-183으로부터 선택된 서열을 갖는 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는 CAR-EC를 활성화하는 방법을 제공한다. 스위치는 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 본 명세서에 개시된 CAR-ID를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열을 포함할 수 있다. 스위치는 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 표 11 또는 표 12에 기재된 CAR 또는 서열 번호 290 내지 388 및 423 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 갖는 scFv인 인간화된 세포외 도메인을 갖는 CAR로부터 선택된 CAR을 포함하는 CAR-EC 및 (ii) 본 명세서에 개시된 상보성 인간화된 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는 표적 세포를 살해하는 방법을 제공한다. 스위치는 서열 번호 17-24로부터 선택된 경쇄 서열 및 본 명세서에 개시된 CAR-ID를 포함할 수 있다. 경쇄 서열은 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열을 포함할 수 있다. 스위치는 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함할 수 있다.
접촉은 시험관내 발생할 수 있다. 접촉은 대상체에서 생체내 발생할 수 있다. 대상체는 본 명세서에 개시된 임의의 대상체일 수 있다. 대상체는 인간일 수 있다. 대상체는 질환을 가질 수 있다. 질환은 본 명세서에 개시된 질환 중 임의의 하나 이상일 수 있다. 질환은 암일 수 있다. 접촉은 투여(또는 "투여하는 것")를 통해서일 수 있다. 투여는 본 명세서에 기재된 방법 중 임의의 하나 이상일 수 있다. 투여하는 것은 스위치에 결합하는 키메라 수용체를 발현하는 CAR-EC(즉, 상보성 CAR을 발현하는 CAR-EC)가 이미 투여된 대상체에게 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 투여하는 것은 CAR-EC 스위치를 대상체에게 투여하는 것 및 CAR-EC 스위치에 결합하는 CAR을 발현하는 CAR-EC를 대상체에게 추가로 투여하는 것을 포함할 수 있다.
접촉은 표적화된 세포의 용해를 유도할 수 있다. 접촉은 표적 세포를 사멸할 수 있다. 접촉은 약 1pM 내지 약 100pM의 범위인 살해에 대한 EC50으로 표적 세포를 사멸할 수 있다. 접촉은 1pM 미만인 살해에 대한 EC50으로 표적 세포를 사멸할 수 있다. 접촉은 질환을 갖는 세포를 사멸할 수 있다. 세포는 본 명세서에 개시된 임의의 질환을 가질 수 잇다. 질환은 암일 수 있다.
스위치는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치일 수 있다. 스위치는 표적화 모이어티에 융합되거나 그래프팅되거나 부착된 K4 펩타이드를 포함할 수 있다. 스위치는 표적화 모이어티에 융합되거나 그래프팅되거나 부착된 E4를 포함할 수 있다. 스위치는 표적화 모이어티에 융합되거나 그래프팅되거나 부착된 GCN4 펩타이드를 포함할 수 있다. GCN4 펩타이드는 X1NYHLENEVARLKX2X3 (서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 모두 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열을 포함할 수 있다. GCN4 펩타이드는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체(예를 들어, 서열 번호 139 내지 153 및 245 중 어느 하나)를 포함할 수 있다. 스위치는 표적화 모이어티에 융합되거나 그래프팅되거나 부착된 Flag 태그를 포함할 수 있다. 스위치는 표적화 모이어티에 부착된 FITC를 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 CD19에 결합할 수 있다. 표적화 모이어티는 항-CD19 항체 또는 이의 항원 결합 부분일 수 있다.
CAR-EC 스위치는 (i) 서열 번호 16 내지 25로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열 및 (ii) 서열 번호 1 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는 FMC63 항체 또는 이의 CD19 결합 부분인 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. CAR-EC 스위치는 (i) 서열 번호 16 내지 25로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열 및 (ii) 서열 번호 1 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는 FMC63 항체 또는 이의 CD19 결합 부분인 표적화 모이어티에 융합된 GCN4 펩타이드를 포함할 수 있고, 여기서 GCN4 펩타이드는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)(여기서, X1, X2 및 X3은 모두 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않음)의 구조 I의 서열을 포함한다. GCN4 펩타이드는 본 명세서에 개시된 GCN4 유도체를 포함할 수 있다. GCN4 펩타이드는 서열 번호 139 내지 153 및 245 중 어느 하나로부터 선택될 수 있다.
X. CAR-EC 플랫폼
(i) 효과기 세포(여기서, 효과기 세포는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함함); 및 (ii) 키메라 항원 수용체 효과기 세포(CAR-EC) 스위치(여기서, CAR-EC 스위치는 CAR-ID 및 표적화 모이어티를 포함하고, CAR-EC 스위치는 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합하고, CAR 및 CAR-EC 스위치의 하나 또는 둘 다는 인간화됨)를 포함하는 인간화된 키메라 항원 수용체 효과기 세포(CAR-EC) 플랫폼이 본 명세서에 개시되어 있다. (i) 효과기 세포(여기서, 효과기 세포는 CAR을 발현함); 및 (ii) CAR-EC 스위치(여기서, CAR-EC 스위치는 CAR-ID 및 표적화 모이어티를 포함하고, CAR-EC 스위치의 표적화 모이어티는 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합하고, CAR 및 CAR-EC 스위치의 하나 또는 둘 다는 인간화됨)를 포함하는 인간화된 CAR-EC 플랫폼이 본 명세서에 또한 개시되어 있다. CAR-EC 스위치는 본 명세서에 개시된 임의의 CAR-EC 스위치(예를 들어, 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치)로부터 선택될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "스위치 가능한 CAR 플랫폼", "CAR-EC 플랫폼", "sCAR-T 플랫폼", "sCAR-T 세포 플랫폼", "스위치 가능한 키메라 항원 수용체 플랫폼", "키메라 항원 수용체-효과기 세포 플랫폼", "CAR-T 스위치 플랫폼", "sCAR 플랫폼", "스위치 플랫폼" 및 "스위치 가능한 플랫폼"은 상호 교환되어 사용된다.
CAR-EC 플랫폼은 제1 CAR-EC 스위치를 포함할 수 있다. CAR-EC 플랫폼은 제1 CAR-EC 스위치 및 적어도 하나의 제2 CAR-EC 스위치를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 플랫폼은 적어도 2개의 인간화된 CAR-EC 스위치를 포함한다. CAR-EC 플랫폼은 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개 또는 이것 초과의 인간화된 CAR-EC 스위치를 포함할 수 있다. CAR-EC 플랫폼은 20개 초과, 25개 초과, 30개 초과, 35개 초과, 40개 초과, 45개 초과 또는 50개 초과의 인간화된 CAR-EC 스위치를 포함할 수 있다. 2개 이상의 스위치는 하나 이상의 본 명세서에 개시된 인간화된 CAR-EC 스위치 또는 이들의 조합으로부터 선택될 수 있다.
본 명세서에 개시된 CAR-EC 플랫폼은 제1 CAR-EC 스위치 및 제2 CAR-EC 스위치를 추가로 포함할 수 있고, 여기서 제1 CAR-EC 스위치는 제1 CAR-ID 및 제1 표적화 모이어티를 포함하고, 제2 CAR-EC 스위치는 제2 CAR-ID 및 제2 표적화 모이어티를 포함한다. 제1 CAR-ID 및 제2 CAR-ID는 동일할 수 있다. 제1 CAR-ID 및 제2 CAR-ID는 상이할 수 있다. 제1 CAR-ID 및 제2 CAR-ID는 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있다. 제1 표적화 모이어티 및 제2 표적화 모이어티는 동일할 수 있다. 제1 표적화 모이어티 및 제2 표적화 모이어티는 상이할 수 있다. 제1 표적화 모이어티 및 제2 표적화 모이어티는 약 99%, 약 98%, 약 97%, 약 96%, 약 95%, 약 92%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 2% 동일할 수 있다.
CAR-EC 스위치는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, 이것은 경쇄 및 중쇄를 포함할 수 있고, 여기서 경쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 경쇄 서열을 포함하거나 이것으로 이루어지고, 중쇄는 본 명세서에 개시된 임의의 스위치 중쇄 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 이러한 중쇄 및/또는 경쇄 서열은 인간화될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, CAR-EC 스위치는 인간화되고, 서열 번호 17 내지 24로부터 선택된 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하고, 여기서 중쇄 및 경쇄의 하나 또는 둘 다는 본 명세서에 개시된 CAR-ID(예를 들어, GCN4 CAR-ID)를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 경쇄 서열은 (N 말단 GCN4 CAR-ID를 포함하는) 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 스위치는 본 명세서에 개시된 몇몇 스위치에 포함된 중쇄/경쇄 조합을 제시하는 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치이다. 몇몇 실시형태에서, 스위치는 스위치에 포함된 CAR-ID가 구조 I의 서열을 갖도록 변형된다는 것을 제외하고는 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치와 동일하다. 몇몇 실시형태에서, 구조 I의 서열은 서열 번호 26, 36, 139 내지 163, 및 245 중 어느 하나로부터 선택된다.
본 명세서에 개시된 CAR-EC 플랫폼은 제1 CAR-EC를 추가로 포함할 수 있다. 제1 CAR-EC는 제1 CAR을 포함할 수 있다. 제1 CAR은 인간화될 수 있다. 제1 CAR은 본 명세서에 개시된 CAR일 수 있다. 제1 CAR은 임의의 CAR 서열 본 명세서에 개시된 임의의 CAR 서열을 가질 수 있다. 제1 CAR은 인간에 대한 면역원성을 감소시키도록 인간화될 수 있다. 제1 CAR은 인간화된 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 인간화는 CAR-EC 스위치에 대한 세포외 도메인의 특이성 및 친화도를 보유하면서 인간에 대한 CAR의 면역원성을 감소시킬 수 있다. 제1 CAR은 표 13에 제공된 CAR 서열 중 어느 하나의 인간화된 버전일 수 있거나, 서열 번호 270 내지 289 중 어느 하나의 인간화된 버전일 수 있다. 제1 CAR은 CAR-EC 스위치의 CAR-ID에 결합하는 항체 또는 항체 단편을 포함하는 세포외 도메인을 포함하는 인간화된 CAR일 수 있다. 항체 또는 항체 단편은 인간화될 수 있다. 항체 단편은 scFv(예를 들어, 인간화된 scFv)일 수 있다. scFv 또는 인간화된 scFv는 일반 구조 경쇄-링커-중쇄를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. scFv 또는 인간화된 scFv는 일반 구조 중쇄-링커-경쇄를 포함하거나 이것으로 이루어질 수 있다. 인간화된 scFv는 인간 면역글로불린 프레임워크로 이식된 비인간(예를 들어, 쥣과) CDR을 갖는 인간화된 VH(가변 중쇄) 서열을 포함할 수 있다. 인간화된 scFv는 인간 면역글로불린 프레임워크로 이식된 비인간(예를 들어, 쥣과) CDR을 갖는 인간화된 VL(가변 경쇄) 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 특정한 실시형태에서, 제1 CAR은 도 24a에서의 작제물 A-H로부터 선택된 구조를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 CAR은 도 24에서의 작제물 A, 작제물 B 또는 작제물 C에 따른 구조를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 CAR은 표 11에 기재된 CAR로부터 선택된다. 소정의 특정한 실시형태에서, 제1 CAR은 표 12에 기재된 CAR로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 제1 CAR의 세포외 도메인은 서열 번호 290 내지 388 및 423 중 어느 하나로부터 선택된 인간화된 scFv 서열을 포함한다.
소정의 실시형태에서, CAR-EC 플랫폼은
a. ⅰ. (N 말단 GCN4 CAR-ID를 포함하는) 서열 번호 27 내지 34로부터 선택된 인간화된 경쇄 서열 및 서열 번호 2 내지 14로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하거나;
ⅱ. 표 6 또는 표 8에 제시된 바대로, 본 명세서에 개시된 몇몇 스위치에 포함된 중쇄/경쇄 조합을 제시하거나;
ⅲ. 스위치에 포함된 CAR-ID가 서열 번호 26, 36, 139, 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 갖도록 변형된다는 것을 제외하고 표 6 또는 표 8에 기재된 스위치와 동일한, 제1 CAR-EC 스위치; 및
b. 상보성 제1 CAR을 발현하는 제1 CAR-EC(여기서, CAR은
ⅰ. 도 24a에서의 작제물 A-H로부터 선택된 구조를 포함하거나;
ⅱ. 도 24a에서의 작제물 E에 따른 구조를 포함하거나;
ⅲ. 표 11에 기재된 CAR로부터 선택되거나;
ⅳ. 표 12에 기재된 CAR로부터 선택되거나;
ⅴ. 세포외 도메인은 서열 번호 290 내지 388 및 423 중 어느 하나로부터 선택된 인간화된 scFv 서열을 포함함); 및 선택적으로
c. 하나 이상의 제2 CAR-EC 스위치(이들 중 적어도 하나는 제1 CAR-EC 스위치 상의 표적화 모이어티와 상이한 표적에 결합하는 상이한 표적화 모이어티를 포함하고; 각각의 제2 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID는 선택적으로 제1 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID와 동일한 또는 상이함)를 포함하되;
몇몇 실시형태에서, 제1 스위치 상의 CAR-ID가 제2 스위치 상의 CAR-ID와 상이하고, 제1 CAR이 제2 CAR-ID에 결합할 수 없을 때, 플랫폼은 제2 스위치 상의 CAR-ID에 결합하는 제2 CAR-EC를 또한 포함할 수 있다.
[표 3]
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
실시예
실시예 1
인간화된 CAR-EC 스위치의 설계
배경:
항-CD19 쥣과 클론 FMC63을 스위치 가능한 CAR-EC 프로그램에 대한 스위치로서 예비 연구에서의 개념 증명으로서 사용하였다. FMC63 클론은 원래 H. Zola 및 동료(1)에 의해 1991년에 기재되었고, Carl June 및 동료(2-4)로부터 가장 널리 연구된 관습적인 CAR-T 세포에서 사용되었다. 인간 적용에서 면역원성의 가능성을 감소시키기 위해, FMC63 항체의 쥣과 프레임워크 영역을 인간 서열에 의해 부분적으로 대체하였다.
일반 과정:
간단히, 인간화 과정을 하기와 같이 수행하였다: 가변 경쇄(VL) 및 가변 중쇄(VH) 도메인에 대한 쥣과 FMC63 서열을 NCBI 웹사이트에서 월드 와이드 웹 주소: ncbi.nlm.nih.gov/igblast/(본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에서 이용 가능한 IgBLAST 프로그램으로 처리하고; 또한, 문헌[Ye, et al., Nucleic Acids Res. 2013 Jul;41(웹 서버 이슈)](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)을 참조한다. 각각의 쥣과 서열을 쥣과 생식선 서열과 비교하고, 이후 인간 생식선 서열과 비교하였다.
중쇄 분석
쥣과 FMC63 VH를 인간 생식선 IGHV4-59와 정렬하였다(표 4). 상보적 결정 영역(CDR)은 일반적으로 AbM으로부터의 AbYsis를 이용하여 정의되고(월드 와이드 웹 주소 bioinf.org.uk/abs/(본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에서 이용 가능); AbM 넘버링은 이 보고서에서 이용될 것이다. 쥣과 FMC VH와 인간 IGHV4-59 사이의 다양한 프레임워크 차이 중에서, 본 발명자들은 VH 도메인 및 이의 CDR의 입체형태에 영향을 미칠 수 있는 9개를 확인하였고, 본 발명자들은 잠재적인 영향을 조사하도록 결정하였다.
설계 hFMCH2(표 4)는 약간의 변경으로 완전한 인간 IGHV4-59("h4-59_01") 프레임워크를 가졌다 -- 20번, 48번, 67번, 71번, 78번, 82번 및 82c번 위치에서의 쥣과 잔기.
설계 hFMCH3(표 4)은 hFMCH2에서의 모든 변화 이외에 마우스 Asn73으로 변화된 Thr73을 가졌다.
94번 위치에서의 추가적인 변화를 또한 조사하였다: 설계 hFMCH4a는 hFMCH2에 포함된 모든 변화 이외에 94번 위치 변화를 갖고; 설계 hFMCH4b는 hFMCH3에 포함된 모든 변화 이외에 94번 위치 변화를 가졌다.
또한, N 말단 잔기는 pyroGln 형성을 제거하면서 다양한 작제물에서 Gln 대신에 Glu로 돌연변이되었다. 다양한 예시적인 작제물의 중쇄 서열의 정렬은 도 1a 및 도 1b에 제공된다.
[표 4]
Figure pct00034
경쇄 분석
쥣과 FMC VL을 인간 생식선 IGKV1-39와 정렬하였다(표 5). 이용된 CDR 정의는 AbM으로부터의 것이다(월드 와이드 웹 주소 bioinf.org.uk/abs/(본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에서 이용 가능). 쥣과 FMC VL과 인간 IGKV1-39 사이의 다양한 프레임워크 차이 중에서, 오직 71번 위치가 아마도 VL 도메인 및 이의 CDR의 입체형태에 영향을 미칠 것이다.
설계 hFMCL2는 Phe71Tyr 변화를 포함한다.
FMC CDR-L3은 탈아미드화에 대해 낮은 경향을 갖는 Asn 잔기(Asn92)를 갖고, 따라서 이 잔기는 알라닌으로 변화될 수 있었다. 경쇄 서열의 정렬은 도 2a 및 도 2b에 제공된다.
[표 5]
Figure pct00035
스위치 제조
상기 인간화된 "FMC63 VH" 및/또는 "FMC63 VL" 서열을 함유하는 CAR-EC 스위치는 문헌[Rodgers DT, et al., PNAS, 2016;113(4):E459-68. doi: 10.1073/pnas.1524155113. PubMed PMID: 26759369; PMCID: PMC4743815](본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재된 바대로 GGGGS 링커에 의해 연결된 경쇄(LCNT)의 N 말단에 GCN4 펩타이드를 유전자 융합함으로써 생성되었다. 이 비제한적인 예에서, 서열 NYHLENEVARLKKL(서열 번호 26)을 포함하는 GCN4 펩타이드를 사용하였다. 따라서, LCNT 작제물은 NYHLENEVARLKKL-[GGGGS]-[FMC63 VL 서열 또는 이의 인간화된 변이체]의 구조를 포함하였다.
(5). 스위치는 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄(예를 들어, FMC63 VL 또는 GNC4 펩타이드 융합된 LCNT 변이체)에 의해 발현되고, 실시예 2에 기재된 바대로 정제되어서 균질성이 되었다.
표 6은 인간화된 CAR-EC 스위치 변이체의 21개의 비제한적인 예를 보여준다. 이 스위치를 제조하기 위해 사용된 중쇄/경쇄 조합은 표 6의 열에 기재되어 있다. 예를 들어, 조합 2로 하기 표지된 CAR-EC 스위치는 FMC63 인간화된 가변 중쇄 H2(즉, 도 1a 및 도 1b에 도시된 hFMCH2) 및 인간화된 가변 경쇄 L2(즉, 도 2a 및 도 2b에 도시된 hFMCL2)를 포함하였다. 상기 기재된 바대로, 이 실시예에 예시된 CAR-EC 스위치에 포함된 모든 경쇄는 GGGGS 링커에 의해 연결된 이의 N 말단에서 GCN4 펩타이드 융합을 추가로 포함하였다. 그래서, 조합 2는 hFMCH2 및 일반 구조(생략하여 N 말단→C 말단 또는 "N→C") NYHLENEVARLKKL-[GGGGS]-[hFMCL2]를 갖는 태그화된 경쇄를 포함하고; 조합 3은 hFMCH3 및 일반 구조 N→C NYHLENEVARLKKL-[GGGGS]-[hFMCL2]를 갖는 태그화된 경쇄를 포함하고; 조합 7은 hFMCH4b 및 일반 구조 NYHLENEVARLKKL-[GGGGS]-[hFMCL2b]를 갖는 태그화된 경쇄를 포함하고; 기타 등등이다. 이 경쇄 N 말단(LCNT) 스위치 서열은 하기 표 7에 기재되어 있다.
[표 6]
Figure pct00036
[표 7]
Figure pct00037
실시예 2
인간화된 CAR-EC 스위치의 발현 및 정제
간단히, 인간화된 CAR-EC 스위치를 발현하고 정제하기 위해, 표 4에 기재된 하나의 중쇄 변이체는 표 6에 기재된 도식에 따라 표 5에 기재된 하나의 경쇄 변이체와 쌍을 지었고, 여기서 경쇄는 표 7에 기재된 바대로 LCNT 포맷에서 GGGGS 링커를 통해 연결된 GCN4 펩타이드를 포함하고, 생성된 스위치는 하기 단백질 발현 방법에 따라 발현되고 정제되었다.
Expi293F 세포에서의 단백질 발현(30㎖ 배양 용적)
ExpiFectamine 293 형질주입 키트(ThermoFisher(매사추세츠주 월섬), 카탈로그 A14524호)에 의해 제공된 제조사의 프로토콜의 변형된 버전을 이용하여 Expi293F 세포(ThermoFisher(매사추세츠주 월섬), 카탈로그 A14527호)의 형질주입을 수행하였다.
간단히, 형질주입 전 24시간에, Expi293F 세포(ThermoFisher(매사추세츠주 월섬), 카탈로그 A14527호)를 예열된 Expi293 Expression Media(ThermoFisher(매사추세츠주 월섬), 카탈로그 A1435101호)에서 1.5x106개의 세포/㎖로 시딩하였다. 형질주입의 날짜에, 세포를 계수하고, 생존능력에 대해 확인하고, 이후 예열된 Expi293 Expression Media 중에 2.9x106개의 세포/㎖인 최종 밀도로 희석하였다. 플라스크를 최소 1시간 동안 37℃/5% CO2 항온처리기에서 오비탈 진탕기로 돌려보냈다.
CAR-EC 스위치 단백질을 암호화하는 DNA에 의한 형질주입을 1:1 중쇄 대 경쇄 비율(각각의 사슬에 대해 15㎍의 DNA)로 수행하였다. DNA를 OptiMEM I 환원 혈청 배지 중에 1.5㎖의 최종 용적으로 희석하였다. 80㎕의 ExpiFectamine을 1.5㎖의 OptiMEM I 환원 혈청 배지 중에 희석하고, 실온에서 5분 동안 항온처리하였다. ExpiFectamine/OptiMEM I 혼합물을 DNA를 함유하는 관에 첨가하고, 이후 피펫에 의해 온화하게 혼합하고, 실온에서 20분 동안 항온처리하였다. Expi293F 세포를 37℃/5% CO2 항온처리기로부터 제거하고, 3㎖의 DNA/ExpiFectamine 혼합물을 세포에 첨가하고, 37℃/5% CO2 항온처리기에서 약 120rpm에서 오비탈 진탕기에서 항온처리하였다. 형질주입 후 16 내지 18시간에, (ExpiFectamine 293 형질주입 키트에 제공된) 150㎕의 Enhancer 1 및 1.5㎖의 Enhancer 2를 각각의 웰에 첨가하였다. 최종 용적은 대략 30㎖이었다. 마지막으로, 형질주입 후 72시간에, 세포를 수확하고, 스위치를 하기 기재된 프로토콜에 따라 정제하였다.
단백질 G 정제(0.6㎖의 고정 베드 용적)
형질주입 후 72시간에, CAR-EC 스위치를 함유하는 30㎖의 세포 배양물을 수확하고, 세포/배지를 50㎖ 원뿔 관으로 옮기고, 400x g(약 1,000rpm)에서 5분 스피닝하고, 무균 여과시키고, 20x Protein G Binding Buffer(1M 아세트산나트륨)(pH 5.2)의 1/40번째 용적(0.75㎖)과 혼합하여 Protein G Sepharose에 대한 최적 결합에 대한 미정제 CAR-EC 스위치 용액의 pH를 낮췄다.
Protein G Fast Flow Sepharose(GE Healthcare, 제품 코드 17-0618-01)의 50% 슬러리를 1x Protein G Binding Buffer 중에 준비하고, 1.2㎖의 50% 슬러리를 12㎖의 Poly Prep 크로마토그래피 칼럼에 첨가하고, 이후 6㎖의 1x Protein G Binding Buffer에 의해 세척하였다. 발현된 CAR-EC 스위치 단백질을 함유하는 상청액을 칼럼 위로 통과시키고, 통과물(flow-through)을 50㎖ 원뿔 관에서 수집하였다. 칼럼을 12㎖(20 CV)의 1x Protein G Binding Buffer에 의해 세척하고, 이후 CAR-EC 스위치 단백질을 1.8㎖의 100mM 글라이신(pH 2.8) 중에 용해시키고, 이후 0.2㎖의 1M Tris-HCl(pH 8)을 용리물에 첨가하여 pH를 중화시켰다.
용리 후, 1x PBS(pH 7.4)를 용리 분획에 첨가하여 2.5㎖인 최종 용적을 생성시켰다. 완충제를 하기와 같이 PD10 탈염 칼럼을 사용하여 1x PBS(pH 7.4)로 교환하였다: PD10 칼럼을 25㎖의 1x PBS(pH 7.4)에 의해 평형화시켰다. 2.5㎖의 정제된 단백질 용액을 PD10 칼럼에 첨가하였다. 단백질을 3.5㎖의 1x PBS(pH 7.4) 중에 PD10 탈염 칼럼으로부터 용리시키고, 단백질 분획을 4㎖의 10K 컷오프 Amicon 스핀 농축기에서 대략 0.200㎖로 농축시켰다.
단백질 농도를 제조사의 프로토콜에 따라 NanoDrop(Thermo Scientific(매사추세츠주 월섬))에 의해 측정하고, 이후 2㎍의 단백질을 4% 내지 12% 비스-Tris 구배 겔에서 SDS-PAGE에 의해 가시화하였다. 도 3 및 도 4는 각각의 레인에서 로딩된 2㎍의 단백질을 갖는 겔의 사진을 보여주고, 2개의 조건에서 분석되었다: 비환원(좌측) 및 10mM DTT의 첨가에 의한 환원(우측).
모든 인간화된 CAR-EC 스위치 변이체는 잘 발현되었다.
실시예 3
CAR-EC 스위치 결합 효율의 결정
인간화된 변이체의 상대 결합 효율을 결정하기 위해, 유세포분석법 기반 결합을 하기한 바대로 수행하였다:
CAR-EC 스위치 결합 효율의 유세포분석법 분석을 위한 세포의 제조.
CD19+ RS4;11 세포(ATCC(등록상표) CRL-1873(상표명))를 수확하고, 4℃에서 5분 동안 300x g에서 원심분리하고, 이후 세포를 5 x 106개의 세포/㎖의 농도로 아주 차가운 FACs 완충제(PBS, 5% 소 태아 혈청, 1mM EDTA) 중에 재현탁시켰다. 100㎕의 세포 현탁액을 96웰 플레이트의 웰마다 분배하고, 이후 세포를 하기 세척 방법을 이용하여 세척하였다: a) 200㎕의 FAC 완충제를 플레이트의 각각의 웰에 첨가하고; b) 플레이트를 4℃에서 5분 동안 300x g에서 원심분리하고; c) 상청액을 '플리크(flick)' 모션에 의해 플레이트로부터 싱크로 제거하고; d) 세포 펠릿을 플레이트의 온화한 와류에 의해 풀고; e) 세포 펠릿을 (하기 기재된 바대로) 적절한 용적의 완충제 중에 재현탁시켰다.
초기 CAR-EC 스위치 결합을 위해, 세척 방법 단계 e)로부터의 세포 펠릿을 각각 FACS 완충제 중에 희석된 50㎕의 1차 "시험" CAR-EC 스위치 단백질에 의해 재현탁시켰다. CAR-EC 스위치 농도의 범위, 예를 들어 10-1 내지 103pM의 CAR-EC 스위치의 범위는 결합을 시험하도록 사용되었다.
세포를 30분 동안 암소에서 4℃에서 CAR-EC 스위치와 항온처리하고, 이후 세포를 상기 기재된 세척 방법을 이용하여 3회 세척하였다. 세척 방법 단계 e)로부터의 각각의 세포 펠릿을 FACS 완충제 중에 1/100 희석된 50㎕의 검출 항체에 의해 재현탁시켰다(검출 항체는 PE 접합된 염소 항-인간 카파이다: Southern Biotech, 카탈로그 2060-09호). 세포를 30분 동안 암소에서 4℃에서 항온처리하고, 상기 기재된 세척 방법을 이용하여 3회 세척하고, 이후 세척 방법 단계 e)로부터의 세포 펠릿을 100㎕의 FACS 완충제에 의해 재현탁시켰다.
데이터를 3 Blue 1 Red의 레이저 세팅으로 U-바닥 96웰 플레이트에 구성된 유세포 분석기에서 획득하였다. 관심 대상의 세포 집단, 단일 세포 및 PE 양성 세포를 확인하도록 게이트를 확립하고, 30,000개의 사건을 획득하였다.
데이터 분석
FlowJo Software V10(FlowJo, LLC(오레건주 애슐랜드))을 사용하여 유세포분석법 데이터를 분석하였다. 간단히, PE 신호의 평균 형광 강도(MFI)를 모든 사건에서 얻었지만, 본 발명자들은 PE 양성 세포에서 게이팅하지 않았다. XY 표를 GraphPad Prism(GraphPad Software, Inc.(캘리포니아주 라 졸라))에서 생성하고, 데이터를 입력하여 CAR-EC 스위치 농도에 대해 PE MFI를 작도하였다. 데이터는 X=log 함수를 이용하여 변환되고, 이후 "반응(3개의 매개변수)에 대한 "log(작용제) 함수를 이용하여 피팅되었다. 도 5, 도 6, 도 7, 도 8 및 도 9는 다양한 시험된 CAR-EC 스위치에 대한 데이터 선도를 보여준다. EC50 값은 다음에 선도로 표시된다.
실시예 4
표적 세포 세포독성을 유도하기 위한 CAR-EC 스위치 효율의 결정
스위치 가능한 CAR-T 세포 플랫폼에 대한 스위치로서 인간화된 FMC63 변이체의 효율을 결정하기 위해, 변이체는 상기 실시예 1에 기재된 바대로 GGGGS 링커에 의해 연결된 경쇄(LCNT)의 N 말단에서 GCN4 펩타이드에 의해 발현되고, 스위치는 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄-LCNT 변이체에 의해 발현되고 정제되고, 상기 실시예 1 및 2에 기재된 바대로 정제되어서 균질성이 되었다.
sCAR-T 세포를 이전에 상기 Rodgers DT (2016)에 기재된 바대로 작제하였다. 작제물은 간단히 항-GCN4 scFv - IgG4m 힌지 - CD8 막관통 도메인 - CD137(4-1BB로도 공지됨) 동시자극 도메인 - CD3z 활성화 도메인으로서 기재된다.
세포독성 검정 방법
세포독성 검정을 하기와 같이 수행하였다. 1일에, 각각의 스위치에 대해 1 칼럼을 사용하여 평평 바닥 96웰 플레이트에서 차가운 RPMI-5 중의 스위치의 6점 연속 희석을 준비하였다. 선택적으로, 스위치 플레이트를 1주 동안 4℃에서 저장하거나, 드라이아이스에서 급속 냉동하고 장기간 -80℃에서 저장하였다. 샘플을 2회 또는 3회 실행하였다. 추가적으로, 하기 대조군이 포함되었다:
ⅰ. 최대 사멸 - 최대 LDH 수준/100% 세포독성에 대한 값을 제공하도록 검정의 종료 전 45분에 용해된 표적 세포 단독. 최대 사멸은 또한 "최대 LDH 값"이라 칭해진다.
ⅱ. 자발적 사멸 - 배경 표적 세포 용해로서 작용하는 오직 표적 세포.
ⅲ. 효과기 세포 단독 - 이 대조군은 검정이 작동하지 않는 경우 진단에서 사용하기 위한 효과기 세포의 배경 LDH 신호를 나타낸다.
ⅳ. 효과기 및 표적 세포 단독 - 세포의 동시배양의 결과로서 배경 세포독성을 결정하기 위한 무 스위치 대조군.
ⅴ. 배지 단독 - 검정이 작동하지 않는 경우 진단에서 사용하기 위한 배지에 대한 그리고 관습적인 CAR-T 세포의 세포독성을 계산하기 위한 대조군.
세포를 실온에서 5분 동안 300x g에서 원심분리하고, CAR 효과기 세포에 대해 2x106/㎖ 및 표적 세포에 대해 2x105/㎖의 농도로 예열된 RPMI-5 배지 중에 시딩하였다. 표적 및 CAR 효과기 세포는 95% 초과의 생존능력을 가져서 배경을 감소시켰다. 표준 검정을 위해, 100,000개의 효과기 세포(E) 및 10,000개의 표적 세포(T)를 사용하여서, 10:1의 E:T 비율을 생성하였다. 검정은 각각의 웰에서 50㎕의 효과기 세포 및 50㎕의 표적 세포를 사용하고, 이후 웰은 모든 웰에서 동등한 용적을 보장하도록 배지에 의해 마무리되었다. 마지막으로, 2㎕의 CAR-EC 스위치 희석액을 관련 웰에 첨가하고, 이후 플레이트를 20 내지 24시간 동안 항온처리하였다.
LDH 검정 방법: 2일, LDH 검정의 실행:
제조사의 프로토콜에 따라 CytoTox 96(등록상표) Non-Radioactive Cytotoxicity Assay(Promega, G1780)을 사용하여 LDH 검정을 수행하였다. 이 검정에서 하기 기재된 모든 완충제 및 시약은 이 CytoTox 96(등록상표) 키트의 성분이다. 간단히, 2일에, 검정의 종료 전 45분에, 10㎕의 10x 용해 완충제를 '최대 사멸' 대조군 웰에 첨가하고, 세포를 다수의 피펫팅 작용에 의해 수동으로 용해하였다.
37℃ 물 욕에서 해동된 12㎖의 검정 완충제를 LDH 검정 워킹 시약의 1개의 바이알에 첨가함으로써 LDH 마스터 믹스를 제조하였다. 용해 완충제에 의한 최대 사멸 대조군 웰의 45분 항온처리 후, 플레이트를 5분 동안 400x g에서 원심분리하고, 30㎕의 상청액을 새로운 96웰 플레이트(평평 바닥)에서 동일한 웰로 옮겼다. 30㎕의 LDH 워킹 시약을 각각의 웰에 첨가하고, 암소에서 실온에서 30분 동안 항온처리하였다. 이후, 30㎕의 중지 용액을 각각의 웰에 첨가하고, OD495에서 흡광도를 판독하고, 데이터는 .txt 또는 .xlsx 파일로서 내보내기가 되었다.
LDH 검정 데이터 분석:
원데이터는 마이크로소프트 엑셀로 옮겨지고, 검정에 대한 100% 세포독성 값은 하기 식을 이용하여 계산되었다: OD 최대 사멸 - OD 자발적 사멸.
'효과기 및 표적 세포 단독' 값(즉, OD495 판독)은 모든 샘플 값으로부터 공제되었다.
퍼센트 세포독성은 하기 식을 이용하여 계산되었다:
100 x (샘플 OD495/최대 LDH 값)
값은 GraphPad Prism에 작도되었다. 데이터는 X=log 함수를 사용하여 변환되고, EC50 값은 "반응(3개의 매개변수)에 대한 log(작용제)" 피트 함수를 이용하여 계산되었다.
LDH 세포독성 검정 결과:
LDH 세포독성 검정 결과는 도 10 내지 도 11에 도시되어 있다. 구체적으로, 도 10은 CD19 양성인 RS4;11 세포에 대한 sCAR-EC 세포(예를 들어, sCAR-T 세포)의 LDH 세포독성을 보여주고, 도 11은 CD19 음성인 K562 세포에 대한 sCAR-EC 세포(예를 들어, sCAR-T 세포)의 LDH 세포독성을 보여준다. 경우 둘 다에서, sCAR-EC 세포(예를 들어, sCAR-T 세포)는 스위치 가능한 CAR의 발현에 80% 양성이고, 세포는 범례에 기재된 다양한 인간화된 CAR-EC 스위치 변이체 중 하나에 의해 치료되었다.
CD19 양성 RS4;11 세포 세포독성의 강한 용량 의존적 유도는 sCAR/인간화된 스위치 조합에 의한 치료에 의해 관찰되었다(도 10, 표 8). 표 8은 4 검정에 걸쳐 반복된 다양한 인간화된 스위치에 의한 LDH 세포독성 검정에 대한 EC50 값을 보여준다. 검정은 (도 10에 도시된) DTR-5-15, DTR-5-16, DTR-5-50, DTR-5-51 넘버링된다. 세포가 표지된 PBMC인 검정은 비분류된 PBMC의 형질도입으로부터 유래된 스위치 가능한 CAR-T 세포이고, 세포가 표지된 CD4:CD8인 검정은 분류된 CD4 및 CD8 T 세포로부터 유래되고 형질도입되고 세포독성 검정에서 동등한 비율로 사용되는 스위치 가능한 CAR-T 세포이다. muFMC63 LCNT는 쥣과 FMC63 기반 스위치를 나타낸다.
[표 8]
Figure pct00038
sCAR/인간화된 스위치 조합에 의한 치료에 의해 관찰된 CD19 양성 RS4;11 세포 세포독성의 강한 용량 의존적 유도와 반대로(도 10), CD19 음성 K562 세포에 대한 sCAR-EC 세포(예를 들어, sCAR-T 세포)의 LDH 세포독성이 sCAR/인간화된 스위치 조합에 의한 치료에 의해 관찰되지 않았거나 아주 적게 관찰되었다(도 11). 따라서, 세포독성 유도된 sCAR/인간화된 스위치 조합은 표적 항원(CD19)을 발현하는 세포에 특이적이고, 세포독성의 비특이적 활성화는 단지 sCAR-T 세포에 대한 스위치의 결합으로 인해 발생하지 않는다.
(유세포분석법에 의한) 결합 친화도와 (시험관내 세포독성에 의한) 활성 사이에 상관관계가 존재하는지를 결정하기 위해, 친화도는 각각의 후보에 대한 세포독성의 EC50 및 사이토카인 방출(도 22A에 도시된 세포독성의 폭포 선도, 도 22B에 도시된 상관관계)을 따라 작도되었다. 선형 관계식은 도면에 도시된 r2로 친화도와 EC50 사이에 및 시험관내 EC50과 사이토카인 방출 사이에 발견되었고: 더 높은 효력(더 낮은) EC50은 (스위치의 0.1nM에서 측정된) 더 높은 사이토카인 방출을 제공하고, 더 높은 효력(더 낮은) EC50은 더 높은 친화도 인간화된 후보와 상관되는 것으로 발견되었다.
이 후보가 생체내 어떻게 작용하는지를 평가하기 위해, 본 발명자들의 표준 조건을 이용하여 NALM-6 검정을 수행하였다(도 22C). 제1 실험에서, 원래의 4-1BB 기본 쥣과 52SR4 CAR-T 후보(TSY-2-193)를 사용하여 이 모델에서 L2b/H4b, L2b/H4c, L2c/H4b, L2c/H4c인 4개의 후보를 시험하였다. 제2 실험에서, 원래의 4-1BB 기반 쥣과 52SR4 CAR-T 후보를 반복하고, 제3세대 28BB L5H4 후보 sCAR-T 세포와 비교하였다. 전체적으로, 인간화된 스위치 후보 L2b/H4c는 9마리 중 5마리의 마우스에서 종양을 제거하였다. 이것은 다른 후보에 비해 탁월하였다. 이 후보와 인간화된 프레임워크 영역 및 원래의 쥣과 FMC63 서열의 정렬은 도 23에 제공된다.
인간화된 스위치 후보 L2b/H4c는 고해상 MS, 열 안정성, 인실리코 T 세포 에피토프 분석(면역원성) 및 CIC, SIC, HIC, SEC 크로마토그래피를 포함하는 성장성 분석을 통해 양호한 생물물리학적 특징을 가졌다. 구체적으로, L2b/H4c는 키메라 FMC63 기반 스위치에 비해 개선된 열 안정성 및 수율을 가졌다(도 22D). 분석용 크기 배제는 L2b/H4c 후보가 단량체라는 것을 보여주었다.
실시예 5
클론 hFMC2b-LCNT/hFMCH4c의 면역원성 분석
EpiMatrix 시스템(EpiVax, Inc(로드아일랜드주 프로비던스))을 사용하여, 경쇄 huFMCL2b-LCNT(주의, 몇몇 실시형태에서, "hu" "h"는 작제물이 적어도 부분적으로 인간화된다는 것을 지칭하도록 다양한 작제물, 예를 들어 huFMCL2b 및 hFMCL2b에서 상호 교환되어 사용됨) 및 중쇄 hFMCH4c 서열의 아미노산 서열을 전체 및 영역 면역원성 가능성 둘 다에 대해 분석하였다. 또한, 본 발명자들은, 월드 와이드 웹 주소: iedb.org/(이의 내용은 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에서 이용 가능한, MHC 클래스 II 에피토프에 대해 Genbank에서의 비중복 인간 단백질 데이터베이스 및 알레르기 및 면역학 라 졸라 연구소(La Jolla Institute for Allergy and Immunology)에서의 면역 에피토프 데이터베이스에 대해 이들 서열을 스크리닝하였다. 마지막으로, 본 발명자들은 완전한 huFMC 항체의 면역원성 가능성을 평가하도록 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 조합하였다.
모든 다른 인자가 동일하면, 더 많은 HLA 리간드(즉, 에피매트릭스 히트)가 소정의 단백질에 함유될수록, 단백질은 면역 반응을 더욱 유도할 것이다. 이 개념을 포착하도록, 본 발명자들은 에피매트릭스 단백질 점수를 사용하였다. 에피매트릭스 단백질 점수는 소정의 크기의 단백질에서 발견할 것으로 본 발명자들이 예상한 예측된 T 세포 에피토프의 수와 EpiMatrix System에 의해 예측된 추정상 에피토프의 수 사이의 차이이다. 에피매트릭스 단백질 점수는 관찰된 면역원성과 상관된다. 에피매트릭스 단백질 점수는 "정규화"되고, 표준화된 규모로 작도될 수 있다. "평균" 단백질의 에피매트릭스 단백질 점수는 0이다. 0보다 큰 에피매트릭스 단백질 점수는 과량의 MHC 리간드의 존재를 나타내고, 면역원성에 대한 더 높은 가능성을 나타내는 한편, 0 미만의 점수는 예상된 것보다 더 적은 가능한 MHC 리간드의 존재 및 면역원성에 대한 더 낮은 가능성을 나타낸다. +20 초과의 단백질 스코어링은 유의미한 면역원성 가능성을 가지는 것으로 고려된다.
조절 T 세포 에피토프의 존재를 조정하는 것. 항체는 이의 가변 도메인, 특히 이의 상보성 결정 영역(CDR)의 아미노산 서열이 대단한 정도로 변할 수 있다는 점에서 고유한 단백질이다. 항체가 매우 다양한 항원을 인식하게 하는 것은 이 가변성이다. 그러나, 이 가요성은 대가가 따른다. 항체 성숙을 제어하는 재조합 및 돌연변이 사건은 또한 새로운 또는 신생-T 세포 에피토프를 생성할 수 있다. 이 신생-에피토프는 순환 T 세포에 "외래"인 것으로 보일 수 있다. 항체 서열에서의 신생-에피토프의 존재는 인간-항-인간 항체 반응; 소위 HAHA 반응의 형성을 발생시킬 수 있다.
조절 T 세포는 돌연변이된 및/또는 매우 가변인 서열, 예컨대 항체 CDR을 함유하는 것을 포함하여 말초에서 완전 인간 단백질에 대한 면역 반응을 억제하는 데 중요한 역할을 한다. 조절 T 세포는 조절 T 세포 에피토프에 의해 관여되고 활성화된다. 본 발명자들은 항체 서열에서의 신생-에피토프의 존재와 연관된 본래의 위험이 천연 발생 조절 T 세포 에피토프의 존재와 균형을 이룬다고 믿는다.
많은 인간 항체 단리물의 서열을 스크리닝함으로써, 본 발명자들은 본 발명자들이 조절 가능성을 갖는다고 믿는 몇몇 매우 보존된 HLA 리간드를 확인하였다. 실험 증거는 많은 이들 펩타이드가 사실 대부분의 대상체에서 능동적으로 관용원성이라는 것을 제안한다. 본 발명자들은 이 매우 보존된 단편을 트레지토프라 부른다. 트레지토프 관찰은 혈액에서 공개되어 있고(De Groot, AS, et al., Blood (2008) Oct 15;112(8):3303-11(본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)), 많은 후보 트레지토프는 특허 계류중이다. 많은 경우에, 인간화된 항체에 함유된 신생-에피토프의 면역원성 가능성은 유의미한 수의 트레지토프의 존재 하에 효과적으로 제어될 수 있다. 항체 면역원성 분석의 목적을 위해, 본 발명자들은 트레지토프 조정된 에피매트릭스 점수 및 항-치료학적 항체 반응의 상응하는 예측을 개발하였다. 트레지토프 조정된 에피매트릭스 점수를 계산하기 위해, 본 발명자들은 항체의 조합된 가변 도메인의 에피매트릭스 단백질 점수로부터 트레지토프의 점수를 공제하였다. 본 발명자들의 경험에서, 트레지토프 조정된 점수는 관찰된 임상 면역 반응과 훌륭히 상관관된다.
트레지토프의 존재를 조정한 후, 항체 가변 도메인의 에피매트릭스 단백질 점수는 없어지는 경향이 있다. 22개의 허가받은 항체의 평균 트레지토프 조정된 에피매트릭스 단백질 점수는 -20.71이다. 물론, 모든 항체가 동일하게 생성되지 않는다. 몇몇은 많은 트레지토프를 함유하지만, 다른 것은 아주 적게 함유하거나 결코 함유하지 않는다. 노출된 대상체의 5% 초과에서 항-치료학적 항체를 유도하는 것으로 공지된 10개의 항체의 평균 트레지토프 조정된 에피매트릭스 단백질 점수는 -4.77이다. 노출된 대상체의 5% 미만에서 항-치료학적 항체를 유도하는 것으로 공지된 12개의 항체의 평균 트레지토프 조정된 에피매트릭스 단백질 점수는 -34.01이다. 유의미한 수의 트레지토프의 존재는 낮은 관찰된 면역원성과 훌륭히 상관된다. 본 발명자들의 샘플에서 모든 항체를 고려하면, 트레지토프 조정된 에피매트릭스 점수와 관찰된 면역원성 사이의 상관 계수는 .76이다(도 12 참조).
면역원성 항체의 비교적 낮은 트레지토프 조정된 평균 점수(-4.77)와 관찰된 항-치료학적 면역 반응의 비교적 높은 발생 사이의 분명한 모순을 주목하는 것이 흥미롭다. 본 발명자들은 항체의 CDR에 함유된 신생-에피토프가 달리 낮은 점수의 항체에서도 유의미한 위험 인자라는 것을 제안한다. 상기 제안된 바대로, 본 발명자들은 항체 CDR과 연관된 높은 위험이 아마도 인간 항체 생식선 내에 트레지토프의 발생 및 보유 뒤로 진화적인 드라이버라고 믿는다.
결과.
제출된 중쇄 및 경쇄 서열을 분석하는 데 있어서, 전체 3,520개의 프레임-바이-대립유전자 평가를 수행하였다. 발견의 요약은 하기 표 9에 제시되어 있다.
[표 9]
Figure pct00039
도 13은 그래프 스케일로 본 발명자들의 발견을 제시하고, 또한 일련의 표준 제어에 대해 제출된 서열이 평가되는지를 보여준다.
hFMCH4c는 전체 104개의 에피매트릭스 히트를 함유한다. 이의 트레지토프 조정된 에피매트릭스 단백질 점수는 -22.51이다. 이 점수는 본 발명자들의 스케일의 하단에 해당하고, 면역원성에 대한 제한된 가능성을 나타낸다. hFMC2b-LCNT는 전체 111개의 에피매트릭스 히트를 함유한다. 이의 트레지토프 조정된 에피매트릭스 단백질 점수는 -15.70이다. 이 점수는 본 발명자들의 스케일의 중성 범위에 해당하고, 면역원성에 대한 약간 감소한 가능성을 나타낸다. 조합된 huFMC 가변 도메인을 볼 때, 본 발명자들은 -13.73의 트레지토프 조정된 에피매트릭스 단백질 점수를 계산하고, 허가받은 단일클론 항체 생성물의 세트에서 관찰된 임상 면역원성에 대한 트레지토프 조정된 에피매트릭스 단백질 점수의 회귀에 기초하여, 5.7%의 항-약물 항체 속도를 예측한다. 비면역원성인 것으로 공지된 다른 허가받은 항체와 비교하여 이 점수는 약간 상승되어서, 항치료학적 반응에 대한 적어도 몇몇 가능성을 나타낸다.
실시예 6
GCN4 펩타이드 에피토프의 변형
52SR4(항-GCN4) CAR에 대한 결합에 대해 최적 에피토프를 결정하기 위해, 본 발명자들은 다양한 위치에서 GCN4 펩타이드 서열(서열 번호 138)을 변형시켜서, GCN4 펩타이드 유도체를 생성하였다.
서열 번호 139에서, GCN4 에피토프는 N 말단에서 3개 잔기 및 C 말단에서 1개 잔기가 연장되었다.
서열 번호 140에서, 잔기 L1은 D로 돌연변이되고, N5는 Q로 돌연변이되었다. 이것은 GCN4 펩타이드의 처음의 5개의 잔기가 DLPKQ인 문헌에서 발견된 GCN4 펩타이드의 대안적인 서열에 기초한다(Zahnd C, et al. Journal of Biological Chemistry, Vol. 279, No. 18, Issue of April 30, pp. 18870-18877, 2004).
서열 번호 141에서, 잔기 K 및 L은 C 말단으로부터 절두된 더 짧은 서열이 여전히 활성인지를 결정하도록 C 말단으로부터 제거되었다.
서열 번호 142에서, L1은 이 잔기가 활성에 관여되는지를 결정하도록 제거되었다.
서열 번호 143에서, L1 및 L2는 이 잔기가 활성에 관여되는지를 결정하고 프롤린에 의해 시작하는 서열에 대한 발현의 생존능력을 이해하도록 제거되었다.
서열 번호 144에서, L1, L2 및 P3은 활성에 대한 영향을 결정하도록 단백질을 추가로 절두시키도록 제거되었다.
서열 번호 145에서, L1, L2, P3 및 K4는 활성에 대한 영향을 결정하도록 단백질을 추가로 절두시키도록 제거되었다.
서열 번호 146에서, L1, L2, P3, K4 및 L18은 제거되고; K17은 원래의 펩타이드 서열에서 여기에 존재한 이중 라이신(KK) 모티프를 제거하면서 A에 의해 대체되어서 C 말단으로부터 펩타이드를 연장시킨다(펩타이드로부터 GGGGS 링커를 분리).
서열 번호 147에서, K17은 A에 의해 대체되어서 원래의 펩타이드 서열에서 여기에 존재한 이중 라이신(KK) 모티프를 제거한다.
서열 번호 148에서, L1, L2 및 P3은 제거되고; K17은 A에 의해 대체되어서 원래의 펩타이드 서열에서 여기에 존재한 이중 라이신(KK) 모티프를 제거하고, A에 표시된 연장된 펩타이드 모티프와 조합되어 이것을 시험한다.
서열 번호 149에서, L1, L2, P3 및 K4는 제거되고; K17은 A에 의해 대체되어서 원래의 펩타이드 서열에서 여기에 존재한 이중 라이신(KK) 모티프를 제거한다.
서열 번호 150에서, L1, L2, P3 및 K4는 제거되고; K17은 G에 의해 대체되어서 원래의 펩타이드 서열에서 여기에 존재한 이중 라이신(KK) 모티프를 제거한다.
서열 번호 151에서, L1, L2, P3 및 K4는 제거되고; K17은 A에 의해 대체되고, L18은 A에 의해 대체되어서 원래의 펩타이드 서열에서 여기에 존재한 이중 라이신(KK) 모티프를 제거한다.
서열 번호 152에서, L1, L2 및 P3은 제거되고; K17은 G에 의해 대체되어서 원래의 펩타이드 서열에서 여기에 존재한 이중 라이신(KK) 모티프를 제거한다.
서열 번호 153에서, L1, L2 및 P3은 제거되고; K17은 A에 의해 대체되고, L18은 A에 의해 대체되어서 원래의 펩타이드 서열에서 여기에 존재한 이중 라이신(KK) 모티프를 제거한다.
서열 번호 245에서, L1, L2, P3 및 K4는 제거되고, 에피토프는 C 말단에서 1개의 잔기로 연장된다.
표 10에 기재된 각각의 펩타이드를 함유하는 스위치는 FAB 포맷에서 쥣과 FMC63 항-CD19 항체 클론에서 LCNT 포맷에서 상기 펩타이드를 발현시킴으로써 생성되었다.
스위치 가능한 CAR-T 세포(52SR4 sCAR)에 대한 변형된 에피토프 스위치의 결합은 (실시예 3에서 상기 기재된) 동일한 결합 검정을 이용하여 시험되었다(도 20).
변형된 에피토프 스위치의 활성은 실시예 4에서 상기 기재된 바대로 LDH 세포독성 검정에서 시험되고, EC50 값은 상기 기재된 바대로 결정되었다(도 21).
[표 10]
Figure pct00040
실시예 7
동시자극 도메인의 비교
sCAR-T 세포 활성에 대한 동시자극 도메인의 효과를 결정하기 위해, 항-GCN4 펩타이드 sCAR scFv(클론 52SR4)를 본 발명자들의 이전에 보고된 제2세대 4-1BB 기반 작제물[Rodgers, D.T.(2016)]로부터 제2세대 CD28 동시자극(costim) 도메인 또는 제3세대 CD28/4-1BB(28BB) costim 도메인을 보유하는 벡터[Zhang (2007); Zhong (2010)]로 서브클로닝하였다. IgG4m 힌지(서열 번호 168) 및 CD8 막관통(TM)(IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC; 서열 번호 398) 도메인은 본 발명자들의 이전의 설계와 일치한 것에 관해 보유되었다. 건강한 도너 유래된 T 세포로 이 작제물의 형질도입은 scFv의 표면 발현을 입증하지 못했다(데이터 비기재). 제2세대 및 제3세대 작제물이 어디든 널리 사용되므로, 본 발명자들은 본 발명자들의 작제물의 실패가 CD8TM 또는 IgG4m 힌지 영역과 CD28 costim의 융합에서의 양립불가로 인한다고 가설하였다. 이 가설을 시험하기 위해, CD28 힌지를 갖는 CD28 TM 또는 CD28 TM을 사용하여 CD8 TM 및 IgG4m 힌지를 대체하여서 sCAR 작제물 A-F를 제조하였다(도 24a). 건강한 도너 유래된 세포로의 형질도입은 IgG4m 힌지/CD28TM/CD28 costim 및 CD28 힌지/CD28TM/CD28 costim 둘 다가 세포의 표면으로 scFv를 발현한다는 것을 입증하여서, 초기 작제물에서 CD8 TM과 CD28 costim의 양립불가를 확인시켜준다. CAR 작제물에 포함된 다양한 세포외, 막관통 및 세포내 도메인의 서열은 도 24c에 도시되어 있다.
(항-GCN4 scFv에 단단히 결합하고 이를 표지하는) Alexa Fluor 647 표지된 GCN4 펩타이드를 사용한 흐름 결합 실험은 28BB 작제물(E)이 CD28(C) 또는 4-1BB(A) 동시자극 도메인 단독을 보유하는 작제물과 비교하여 더 낮은 표면 발현을 제공한다는 것을 입증하였다(도 25A). 시험관내 세포독성 검정은 28BB 작제물(E)이 원래의 작제물(A)과 비교하여 CD19+ RS4;11 세포에 대해 항-CD19 스위치의 역가를 이용하여 세포독성의 미미하게 더 약한 EC50을 또한 갖는다는 것을 입증하였다(도 25B 내지 도 25D). 항원 음성 세포에 대한 활성이 힌지에 의해서도 막관통 변화에 의해서도 관찰되지 않아서, sCAR-T 세포의 특이성이 변경되지 않는다는 것을 나타낸다(데이터 비기재). 더 짧은 면역학적 시냅스가 더 강력한 세포독성을 발생시킨다는 본 발명자들의 이전의 가설과 일치하게, 짧은 12개의 아미노산 IgG4m 힌지를 갖는 작제물(A, B 및 C)은 상응하는 더 긴 39개의 아미노산 CD28 힌지 작제물(D 및 F)보다 이 검정에서 더 강력한 세포독성을 가졌다(도 25C 및 도 25D). 이 효과는 다수의 도너에 걸쳐 한결같았다. 반대로, 막관통 도메인에 기초하여 CD8(A)과 CD28(B) 사이에 세포독성의 EC50의 차이가 없다고 발견되었다.
작제물을 다음에 생체내 NALM-6 이종이식 모델에서 시험하였고, 여기서 sCAR-T 세포의 단일 용량(iv)을 확립된 종양 부담을 갖는 NSG 마우스에 제공한 후, 14일 동안 스위치를 격일로 투약하고(iv), 재발에 대해 마우스를 모니터링하였다. 이 모델은 작제물 사이의 차이를 강조하기 위해 더 도전적인 모델을 생성하기 위해 본 발명자들의 이전의 보고보다 CAR-T 세포의 수의 반을 사용하였다[Rodgers (2016)]. 비교의 튼튼함을 증가시키기 위해, 모델은 3개의 별개의 도너로부터 T 세포에 의해 실행되었다. 이 조건 하에, 원래의 4-1BB 기반 작제물(A)은 질환의 가변 제거를 제공하였다. 이 모델에서, 28BB 작제물(E)은 4-1BB(A)(7마리 중 3마리의 마우스는 투약 후 없어짐)보다 더 효과적으로 종양을 없앴다(9마리 중 7마리의 마우스는 투약 후 없어짐)(도 25E). CD28 기반 작제물(C)은 투약 기간 동안 재발을 입증하였고, 어떠한 마우스도 없애지 못했다(8마리 중 0마리의 마우스는 없어짐). 본 발명자들의 결과와 일치하여서, 각각 CD28 및 또는 BB28 costim 도메인과 함께 CD28 힌지를 사용하는 작제물(D) 및 (F)가 임의의 동물에서 종양 부담을 유의미하게 제어하지 못하면서, IgG4m 힌지는 생체내 활성에 대한 필요조건이었다(도 26).
스위치의 제1 용량 후 24시간에 측정된 급성 사이토카인 방출은 4-1BB(A), CD28(C)과 28BB(E) 작제물 사이에 유사하여서, 오직 CD28 작제물(C)이 원래의 4-1BB 작제물(A)보다 IFNg의 더 낮은 수준을 나타냈다(도 25F). 이것은 4-1BB 동시자극 도메인 및 CD8TM 및 힌지를 사용하는 최근에 허가된 Kymriah(CART19) 후 모델링된 관습적인 CAR-T 작제물과 비교되었다. CART19는 이 조건 하에 유의미하게 더 높은 IL-2 및 TNF 사이토카인 방출을 나타냈다. 주목할만하게, IgG4m 힌지(E)를 갖는 BB28 작제물은 원래의 4-1BB 기반 작제물(A)과 비교하여 바로 투약 기간 직후 CD8 세포 증식의 5배 증가 및 CD4의 24배 증가를 나타냈다(도 25G). 이 증식은 각각 CART19에서 CD4 및 CD8의 대략 41배 및 15배 초과였다. 4-1BB 동시자극 도메인과 비교된 CD8에 비해 CD4 세포의 더 큰 증식은 CD28 자극의 첨가가 CD4 증식을 증가시킬 수 있다는 이전의 보고와 일치한다[Kagoya (2017)]. 따라서, 제3세대 28BB 기반 작제물(E)은 유의미하게 더 높은 T 세포 증식을 생성시킬 수 있어서, 스위치 가능한 CAR-T 플랫폼에서의 더 높은 효율, 그러나 현저히 더 낮은 사이토카인 방출을 발생시켰다.
실시예 8
sCAR의 인간화
스위치의 PNE 펩타이드에 대한 sCAR의 특이성을 지시하는 52SR4 scFv는 쥣과 항체 라이브러리의 지시된 진화로부터 유래되었다[Hanes (1998); Zahnd (2004)]. 이 쥣과 서열은 인간에서 면역원성인 가능성을 갖는다. 조작된 T 세포에서의 전이유전자의 면역원성은 환자에서 아나필락시스를 야기하고, 환자로부터의 세포의 거부에 기여 인자인 것으로 나타났다[Berger (2006); Jensen (2010); Maus (2013)]. 이 이유로, 본 발명자들은 52SR4 scFv를 인간화하였다.
간단히, 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 도메인에 대한 쥣과 52SR4 서열은 NCBI 웹사이트(www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)에서 IgBLAST 프로그램에 제출되었다. 각각의 쥣과 서열은 쥣과 생식선 서열과 비교되고, 이후 인간 생식선 서열과 비교되었다. 쥣과 VH 서열은 쥣과 IGHV2-6-7 생식선으로부터 유래되고, 쥣과 VL 서열은 쥣과 IGLV1 생식선으로부터 유래되었다(도 27A). 쥣과 VH는 인간 VH 생식선 IGHV4-59와 가장 가깝고, 쥣과 VL은 인간 VL 카파 생식선 IGLV7-46과 가장 가깝다.
쥣과 VH 서열은 인간 IGHJ4-59VH와 정렬되고; CDR 정의는 도 27A에 제공된다(월드 와이드 웹 주소: bioinf.org.uk/abs/). 4개의 상이한 인간화된 VH 프레임워크는 인간화된 서열을 생성하도록 사용되었다: h52SR4H1-H4(도 28). h52SR4H1(작제물은 도처에서 H1, 2, 3, 4 … 등으로 칭해짐)은 쥣과 CDR이 인간 IGHJ4-59 프레임워크로 이식된(즉, 프레임워크 변화 없음) CDR-스왑이다. h52SR4H2는 71번 위치(순차적인 넘버링)(이는 CDR-H2 입체형태에 영향을 미침) 및 93-94번 위치(이는 CDR-H3 입체형태에 영향을 미침)에서 프레임워크 변화를 추가하였다. h52SR4H3은 VH 도메인의 내부 패킹을 개선하도록 추가적인 묻힌 프레임워크 변화를 추가하였다. h52SR42b/3b는 Asn73의 부가를 시험하였다. Zahnd 등[Zahnd (2004)]에 기초하여, LeuH28Ser(Zahnd 등의 AHo 항체 넘버링에서의 H30) 및 IleH56Ser/Thr(Zahnd 등의 AHo 항체 넘버링에서의 H67)은 결합 친화도를 개선하였다. 위치 둘 다에서, 소수성 측쇄는 용매에 완전히 노출된다. LeuH30은 결정 구조 PDB 1P4B에서 표적과의 직접적인 상호작용을 갖지 않지만, IleH56은 표적과 약간의 상호작용을 오직 가졌다.
쥣과 VL은 인간 IGLV-7-46과 정렬되고; CDR 정의는 도 27A에 제공된다(www.bioinf.org.uk/abs/). 몇몇 상이한 인간화된 VL 프레임워크는 인간화된 서열을 생성하도록 사용되었다: h52SR4VL1-3(작제물은 도처에서 L1, 2, 3 … 등으로 칭해짐)(도 29). CDR-L1 및 CDR-L2는 탈아미드화에 대해 낮은 경향을 갖는 서열을 포함한다(도 2AVL). 쥣과 및 인간화된 5F11의 VH:VL 쌍의 컴퓨터 그래픽 모델은 인간화를 돕도록 작제되었다. 이 정렬 및 분석으로부터, 고유한 인간화된 scFv 서열은 작제되고, 원래의 제2세대 4-1BB 기반 작제물에서 쥣과 52SR4 scFv 대신에 클로닝되었다(도 24에서 A; 서열 번호 389).
동시자극 도메인을 비교하는 본 발명자들의 초기 결과에 기초하여, CAR 발현의 수준도 시험관내 효율도 28BB 작제물의 탁월한 생체내 효율을 충분히 예측할 수 없다. 추가로, 동등한 시험관내 효율을 갖는 관습적인 CD19 및 GD2 CAR은 토닉 신호전달의 차이로 인해 매우 상이한 생체내 항종양 활성을 갖는 것으로 나타났다[Gargett (2016)]. 이 이유로, 추가의 조사를 위해 인간화된 후보를 확인하기 위해, 본 발명자들은 NALM-6 이종이식 마우스 모델에 생체내 스크린을 실행하였다.
4-1BB 벡터에서의 45개의 인간화된 후보(표 11)(작제물 A, 도 24a 참조)는 건강한 인간 도너 유래된 T 세포로 개별적으로 형질도입되고, 별개의 NSG 마우스(각각의 후보에 대해 최소 N=3)에 (iv) 주사되었다. 도 24
[표 11]
Figure pct00041
스위치에 의한 치료는 본 발명자들의 표준 프로토콜에 따라 14일 동안 격일로 수행되었다(도 27B). 완전한 종양 제거를 제공한 클론(IVIS에 의해 104 미만의 라디언스, 이 모델에서 대략 종양의 검출 한계, 스위치의 마지막 투약량 후 50일, 30일에)은 추가의 연구에 선택되었다(표 12).
[표 12]
Figure pct00042
이 클론은 V12S 또는 L109D에서 경쇄, 및 E6Q 또는 A87D에서 중쇄에서 돌연변이를 갖는 기본 클론 경쇄 서열 L5 및 중쇄 서열 H4로부터 유래되었다(도 30).
이 돌연변이가 펩타이드 결합과 직접적으로 상호작용하지 않지만, 이들은 긴 범위 입체형태 변화, 또는 scFv 구조 및 총체적으로 sCAR-T 세포 활성에 영향을 미칠 수 있는 단백질 폴딩에 대한 영향을 포함하여 다른 효과를 갖는 것으로 보고되거나 가정되었다. 게다가, 묻힌 HC E6Q 잔기를 예외로 하여, 잔기는 표면 노출되어서, 이들이 비특이적 소수성 상호작용을 통해 단백질-단백질 상호작용에서 또한 역할을 할 수 있다는 것을 제안한다. 이는 노출된 이전의 Fab 가변 영역/불변 영역 계면의 소정의 잔기를 갖는 scFv의 경우에 유의미할 수 있어서, Fab와 비교하여 scFv 분자에서 소수화도의 더 높은 빈도를 발생시킨다[Nieba (1997)].
LC V12S 돌연변이체는 모 C11L34 기본 클론으로부터 52SR4 scFv의 시험관내 진화로부터 생긴 돌연변이로서 Zahnd et al. (2004)에서 확인되었다(AHo 넘버링 계획을 이용하여 공보에서 LC T13S라 칭함). 이 돌연변이가 scFv의 친화도를 증가시킬 수 있지만; 기존의 데이터에 기초하여 본 발명자들은 이것이 52SR4 클론에서 높은 친화도의 진화에서 패신저라는 것을 배제할 수 없다. LC 109 잔기는 글라이신인 최종 아미노산을 갖는 경쇄의 끝에서 두 번째의 아미노산이고, 이어서 GGGGS 링커가 후행한다. 이 잔기가 이전의 시험관내 진화 연구를 통해 확인되지 않고 인간 및 마우스 프레임워크에 걸쳐 보존되지만, 이것은 구조로부터 돌출하여서, 다른 비특이적 단백질과의 상호작용을 증가시킬 수 있는 소수성 표면을 형성한다. 따라서, LC L109D 돌연변이는 표면 소수화도를 감소시키는 데 있어서 유리할 수 있다.
문헌[Zahnd et al. (2004)]에 따르면, HC "돌연변이 H6(Glu 내지 Gln)는 2의 인자로 클론 C11L34와 비교할 때 20pM로 친화도를 개선시키고", 이는 HC에서의 이 돌연변이의 연구를 지지한다. 이 돌연변이가 "긴 범위 상호작용 또는 '분자 쐐기'를 통해 효과를 발휘하여서, 루프 또는 도메인의 배향 또는 가요성에 영향을 미친다"는 것이 공보에서 가정되었다. 다른 참고문헌에서, 이 잔기는 중쇄의 N 말단 부분의 입체형태에 영향을 미치는 것으로 나타났다[Honegger (2001)]. 따라서, sCAR-T 세포 활성에 대한 이 잔기의 영향의 추가의 조사에 대한 양호한 지지가 존재한다. 마지막으로, 표면 노출된 HC 잔기 87은 4-4-20 항-FITC scFv의 개발에서 이전에 연구되었다[Nieba (1997)]. 이 연구에서, Nieba 등은 D에 대한 이 잔기의 돌연변이(Kabat 넘버링에서의 84D)가 scFv의 결합 친화도 또는 열 안정성을 유의미하게 변경하지 않으면서 단백질 폴딩에서 응집을 감소시켰다는 것을 발견하였다. 따라서, 이 돌연변이를 연구하는 데 양호한 지지가 존재하였다.
sCAR-T 세포 기능에 대한 이 돌연변이의 효과를 시험하기 위해, 상기 기재된 돌연변이와 함께 L5H4 기본 클론으로부터 7개의 인간화된 scFv 변이체를 생성하였다(도 27C). 상이한 동시자극 도메인 중에서 이의 활성을 시험하기 위해, CAR은 4-1BB, CD28 또는 28BB 기반 벡터(도 24에서 각각 A, C, 또는 E)로 서브클로닝되어서 21개의 전체 벡터를 생성하였다. 다수의 동시자극 도메인 배경에서 시험에 대한 이유는 CD28 기반 동시자극 도메인이 토닉 신호전달을 악화시키지만, 4-1BB가 토닉 신호전달을 마스킹할 수 있다는 것으로 나타났다는 맥락에 의해 sCAR을 압박 시험하는 것이다[Long (2015)]. 따라서, 단일 동시자극 도메인의 맥락에서 sCAR-T 세포 활성의 시험은 활성을 강화시키기에 충분하지 않을 수 있다. 시험관내 세포독성 검정은 변이체가 항-CD19 스위치의 역가에 의해 CD19+ RS4;11 세포에 대한 세포독성의 EC50의 무의미한 차이를 갖는다는 것을 입증하였다(도 27D).
후보를 다음에 생체내 NALM-6 종양을 제거하는 이의 능력에 대해 쥣과 52SR4 sCAR 작제물과 비교하였다(도 27E). 이 모델에 대한 세포의 증식 동안에, CAR+ T 세포는 scFv 변이체로부터 생긴 CAR 발현에서의 잠재적인 차이를 정규화하도록 친화도 칼럼에 의해 분류되었다. 상응하게, 이 모델에서의 종양 제거는 도 25에 도시된 이전의 모델과 비교하여 약간 개선된 것으로 발견되었다. 4-1BB 또는 CD28 기반 동시자극 도메인을 갖는 CAR 벡터는 가변 종양 제거를 갖지만, 분류는 본 발명자들의 초기 모델과 비교하여 종양 부담을 제어하는 CD28 기반 CAR의 능력을 개선하였다. 제3세대 28BB 동시자극 도메인의 효력으로 인해, 모든 후보 및 쥣과 CAR은 투약 기간 후 종양을 완전히 제거하였다. 이 모델을 더 압박 시험하도록, 마우스를 다시 30일에 NALM-6에 의해 재시험감염시켰다. 추가적인 CAR-T 세포가 제공되지 않고, 스위치 투약은 표준 프로토콜에 따라 시험감염 후 6일(36일)에 개시되었다. 36일에, 이 동물에서의 종양 부담은 초기 시험감염에 필적하여서, CAR-T 세포가 스위치 투약의 부재 하에 종양 성장에 효과를 갖지 않는다는 것을 제안한다. 제2 투약 기간은 14일 동안 격일로 처음에서처럼 수행되었고, 이후 종양은 다시 모든 그룹에서 제거되었다. 대부분의 마우스는 60일에 명확한 개별 마우스의 적은 수의 재발에 의해 연구의 종료에 걸쳐 깨끗하게 있었다.
이 실험에서의 모든 sCAR은 종양 제거의 유망한 수준을 나타냈다. 가장 유망한 후보를 분간하기 위해, 인간화된 scFv의 생체내 기능은 다수의 동시자극 도메인 포맷에 걸쳐 평균되어서(CD28+CD3z, 4-1BB+CD3z 및 CD28+41BB+CD3z), 각각의 작제물의 각각의 신호전달 특징에 의해 도입된 바이어스를 제거한다. 용어 "CD3z"; "CD3 제타"; 및 "CD3ζ"는 본 명세서에서 상호 교환되어 사용된다. 하기 생체내 매개변수는 각각의 CAR-T 작제물에 걸쳐 평균이 되었다: (A) 종양 시험감염 후 10일, 20일, 31일 및 45일에 종양 IVIS 값; (B) 스위치 투약의 종료 후 2일에 측정된 T 세포 증식, 및 (C) 종양 재발의 일(IVIS ROI>104). 각각의 매개변수 시리즈는 질환 관련성에 대해 순위화되었다: (a) 종양 청소/재발을 대표, 낮거나 높게 순위; (B) 활성화에 걸쳐 T 세포 증식을 대표, 높거나 낮게 순위; 및 (C) 초기 종양 청소의 수준을 대표, 낮거나 높게 순위. 따라서, 이 분석에 걸쳐, 최고의 CAR 작제물은 강한 T 세포 증식(B)에 의해 낮은 종양 부담(A)을 갖고, 드물게 재발한다(C). 각각의 매개변수는 각각의 동시자극 도메인 코호트 내에 순위화되고, 이후 평균이 되어 전체 순위 점수를 생성한다. 순위의 표준 편차는 순위 변량의 측정치로서 계산되었다. 이 순위 시스템을 이용하여, sCAR E(L5-L109D, H4-E6Q, A87D)는 가장 유망한 후보이다(도 31). L5H4 기본 클론에 대한 LC L109D, HC E6Q 및 HC A87D의 부가는 생체내 T 세포 증식을 유의미하게 증가시켰다. 사이토카인은 sCAR 후보 중에서 미미하게 상이하였다(도 32). 동시자극 도메인의 비교에 의해 이전에 발견된 것처럼, 24시간에 사이토카인 방출은 생체내 효율을 예측하지 않고, 이에 따라 sCAR 후보의 순위에 포함되지 않았다. 그러나, 28BB CAR이 비록 도 25에서 유의미하지 않지만 4-1BB 대응물보다 더 많은 TNF알파를 방출한다는 것에 주목해야 한다. 유사하게, sCAR E 후보는 다른 클론보다 더 많은 TNFa를 방출하여서, 이의 생체내 활성과 상관되었다.
본 발명자들은 추가로 연장된 생체외 증식을 이용하여 이 후보를 조사하였다(도 33). 간단히, 검정은 각각의 CAR 후보에 의해 개별적으로 건강한 도너 유래된 T 세포를 형질도입함으로써 수행되었다. 배양은 CD3/CD28 비드에 의해 0일에 활성화되고, IL-2는 배양 과정에 걸쳐 제공되지만, 세포는 재자극되지 않았다. 후보를 5일에 CAR+ 세포에 대해 분류하고, 주마다 세포의 수, 형질도입 효율(CAR+ 세포) 및 시험관내 세포독성의 분석에 의해 33일 동안 배양 플라스크에서 증식시켰다. 어딘가에 보고된 것처럼, 4-1BB 기반 동시자극 도메인을 갖는 CAR 후보는 분류 후 거의 103배 증식되는 한편, CD28 및 제3세대 CAR은 현저히 더 낮은 증식을 가졌다(도 33). 4-1BB 기반 CAR의 형질도입 효율은 일정하게 있는 한편, CD28 기반 CAR은 현저한 CAR+ 세포 손실을 가졌다. 이것이 CAR 발현의 손실로 인한지 또는 세포 배양에서 CAR+ 세포를 앞지르는 CAR 음성 세포의 증식으로 인한지 결정되지 않았다. 제3세대 28BB 기반 CAR은 분류 후 약간의 형질도입 효율을 손실하지만, 거의 50%로 정규화되는 것으로 보였다.
시험관내 세포독성은 각각의 후보에 대해 주마다 시험되었다(도 34 및 도 35). 연장된 생체외 증식 검정의 과정에 걸쳐, 4-1BB 기반 후보는 (스위치 분자의 포화 양을 사용하여 % 용해된 표적 세포에 의해 정의된) 세포독성의 유사한 EC50 및 세포독성의 최대 수준을 가졌다. 유사하게, BB-28 후보는 시간 과정에 걸쳐 유사한 EC50s 및 최대 표적 세포 용해를 가졌다. 흥미롭게도, CD28 기반 후보는 최대 표적 세포 용해의 감소와 함께 세포독성이 EC50의 증가로 나타난 효력을 소실하였다. 이것은 V12S 돌연변이를 보유하는 클론에 가장 명확하였다. 상응하게, 이 클론은 생체내 종양 부담을 제어하는 이의 능력에서 가장 약하게 점수매겨졌다.
실시예 8
인간화된 스위치 및 인간화된 CAR의 조합
인간화된 sCAR 후보 L5H4(도 27C-27E, 후보 A), L5H4-A87D(도 27C-27E, 후보 B), L5H4-E6Q,A87D(도 27C-27E, 후보 C) 및 L5-L109D-H4-E6Q,A87D(도 27C-27E, 후보 E)를 갖는 인간화된 스위치 후보 L2b/H4c의 효율을 결정하기 위해, 2000만개의 세포 대신에 500만개의 sCAR-T 세포가 사용된다는 것을 제외하고 NALM-6 모델을 이전에 기재된 바대로 수행하였다(도 36). 이 조건 하에, CAR-T 세포 효율을 시험감염시켜서, 종양의 제거가 아닌 감소를 발생시켰다. 이 조건은 따라서 인간화된 sCAR 후보 사이의 작은 차이의 해결을 허용한다. 이 모델에서 후보 E는 종양 부담의 가장 큰 제어를 제공하였다. L2b/H4c 인간화된 스위치와 쌍을 지을 때 이 sCAR의 활성은 관습적인 CART-19에 필적하였다.
실시예 9
이질적 종양
동일한 또는 상이한 시간에 하나 초과의 종양 항원을 표적화하는 sCAR-T 세포의 능력은 불균일 Raji 이종이식 종양 모델에서 시험되었다. CD19 및 CD20에 천연 양성인 Raji 세포는 CD19에 대한 유전자의 CRISPR 넉아웃에 의해 변형되어서, CD19- CD20+ Raji 세포주를 생성시킨다. 야생형 Raji 세포를 각각 1:1, 4:1 또는 49:1의 비율로 이 세포주와 혼합하고, NSG 마우스로 IV 주사하여서 파종된 종양을 확립하였다(도 37). 세포주 둘 다를 루시퍼라이즈화하여 IVIS에 의한 종양 부담이 따른다. 3일 후, 마우스를 sCAR-T 세포 또는 CART-19에 의해 치료하였다. 1:1 그룹에서, 혼합된 항-CD19 스위치 및 항-CD20 스위치에 의한 스위치 투약은 sCAR-T 세포의 전달 후 4시간에 3일에 시작하였다(도 37A). 이 모델에서, CART-19는 종양 부담을 약간 느리게 하지만, 종양을 완전히 제거할 수 없었다. 이것은 CD19 음성 Raji 세포의 성장에 해로운 효과를 가지지 않으면서 야생형 Raji 세포를 제거하는 CART-19의 능력으로 인한 것으로 가정된다. sCAR-T 세포 그룹은 항-CD19 및 항-CD20 스위치의 혼합물을 사용하여 3마리 중 3마리의 마우스에서 종양을 제거하였다. 종양의 재발이 관찰되었고, 항-CD20 스위치에 의해 치료되었다. 이 후속하는 스위치 치료는 3마리 중 2마리의 마우스에서 종양을 제거하였다. 이 실험은 동일한 sCAR-T 세포가 동시에 다수의 종양 항원에 재지향될 수 있다는 것을 입증하였다.
야생형 Raji 세포 대 CD19 음성 Raji 세포의 4:1 혼합물(도 37B)을 사용한 제2 모델은, 이 모델에서, 투약이 오직 항-CD19 스위치에 의해 서술된다는 것을 제외하고, 1:1 모델과 유사하게 수행되었다. (CD19 음성 집단 유래로 추정된) 종양 부담이 105(평균)의 라디언스로 상승할 때, 마우스를 14일 투약 섭생 동안 격일로 표준품을 이용하여 항-CD20 스위치에 의해 치료하였다. 이것은 모든 마우스에서 종양을 제거한다는 점에서 효과적이었다. 재발을 3마리 중 1마리의 마우스에서 종양을 제거한 추가적인 항-CD20 스위치에 의해 치료하였다. CART-19 그룹은 세포의 혼합물에 대해 미미한 활성을 갖고, 동물은 궁극적으로 모델 1에서처럼 CD19 음성 Raji 종양 부담에 처했다.
야생형 Raji 세포 대 CD19 음성 Raji 세포의 49:1 혼합물(도 37C)을 사용한 제3 모델은 4:1 모델과 유사하게 수행되었다. (CD19 음성 집단 유래로 추정된) 종양 부담이 105(평균)의 라디언스로 상승할 때, 마우스를 14일 투약 섭생 동안 격일로 표준품을 이용하여 항-CD20 스위치에 의해 치료하였다. 이 그룹에서, 항-CD20 스위치에 의한 투약은 항-CD19 투약량의 완료 후 1일에 시작하였다. 제1 및 제2 모델과 유사하게, CART19 세포는 CD19 음성 Raji 세포가 아니라 야생형 Raji 세포를 제거하고, 모든 종양은 이 그룹에서 재발하였다. 반대로, sCAR T 세포 및 항-CD19 및 항-CD20 스위치에 의해 치료된 6마리 중 5마리의 마우스는 투약 기간 후 종양을 제시하지 않았고, 하나의 재발은 모델의 종료와 가깝다. 종합하면, 제2 및 제3 모델은 동일한 sCAR-T 세포가 동시보다는 순차적으로 상이한 항원에 재지향될 수 있다는 것을 입증하였다.
실시예 10
동계 시스템
완전 쥣과, 동계 스위치 가능한 CAR-T 세포 플랫폼을 개발하여 면역적격 동물 모델의 맥락에서 sCAR-T 세포의 활성을 시험하였다. 이 모델에서, C3H 면역적격 마우스를 38c13 종양 세포주와 사용하였다. 간단히, 마우스를 0일에 종양 SC에 의해 접종하고, 종양은 500 내지 1000㎣을 확립하도록 허용되었다. 이후, 마우스를 사이클로포스파마이드에 의해 예비 컨디셔닝하고, 쥣과 sCAR-T 세포를 24시간 후 전달하고, 스위치 용량은 sCAR-T 세포 후 4시간에 시작하고, 14일 동안 격일로 지속하였다. 오직 sCAR-T 세포의 단일 용량이 동물에 제공되었다.
힌지 길이에 기초한 차등 활성은 인간 sCAR-T 세포에 대한 본 발명자들의 예비 보고서에서 발견되었다. 이 효과가 마우스 시스템에서 관찰되는지를 결정하기 위해, IgG4 짧은, 이합체 힌지(쥣과 sCAR SV-319-092) 또는 마우스 CD8 힌지(쥣과 sCAR SV-319-089)를 보유하는 쥣과 sCAR을 작제하였다. 작제물은 도 38에 기재되어 있다. 생체내 SV-319-092는 종양의 완전한 제거를 제공하는 한편, SV-319-089는 현저히 더 약한 제어를 가져서, 더 짧은 힌지가 더 짧은 면역학적 시냅스로 인해 sCAR-T 세포에서 더 높은 효율을 제공한다는 본 발명자들의 이전의 결론을 지지한다(도 39a). 따라서, 쥣과 시스템은 본 발명자들의 인간 시스템과 생리학적으로 유사한 플랫폼이고, sCAR-T 세포 활성을 연구하기 위해 잘 맞는다.
상이한 힌지 작제물을 다음에 시험하였다. 간단히, 쥣과 sCAR-T 세포를 CD28(SV-319-090), 4-1BB(SV-391-091) 또는 BB28(SV-319-092) 쥣과 동시자극 도메인(도 38에서 그룹 2)에 의해 작제하고, C3H 마우스에서 38c13 모델에서 시험하였다. 쥣과 동시자극 도메인을 갖는 SV-319-090 작제물은 종양 부담을 제어하지 못했고, 모든 마우스는 35일 전에 질환에 걸렸다(데이터 비기재). SV-391-091 및 SV-319-092 둘 다는 모든 마우스에서 종양을 제거하였다(데이터 비기재). 이 동물에서의 투약의 제2 및 제3 사이클은 도 39b에서처럼 종양 제거 후 제공되고, sCAR-T 세포 집단은 주기적으로 측정되었다. 이 실험에서, 쥣과 sCAR-T 세포는 각각의 투약 후 증식하였고, SV-319-092 28BB 기반 쥣과 sCAR-T 세포는 SV-391-091 4-1BB 기반 쥣과 sCAR-T 세포보다 미미하게 양호하게 증식하였다. 따라서, 이 실험은 28BB 기반 동시자극 도메인의 증식 가능성을 입증하였다. 쥣과 CD28 기반 동시자극 도메인 sCAR-T 세포는 35일 넘어 생존하지 못함으로 인해 이 분석으로부터 배제되었다.
SV-319-092 28BB 기반 쥣과 sCAR-T는 또한 B 세포를 효율적으로 제거할 수 있었다. B 세포 및 T 세포 둘 다가 측정되는 모델(도 39c)에서, 쥣과 sCAR-T 세포는 각각의 용량 후 증식되었고, B 세포 집단과 역전 관계되었다. 나머지 단계는 각각의 투약 기간 사이에 포함되었다. 나머지 단계는 B 세포가 도 39c에 도시된 바대로 마우스를 재증식하게 하였다.
스위치 투약이 쥣과 sCAR-T 세포 모델의 기억에 영향을 갖는지를 결정하기 위해, SV-319-092 세포를 종양이 없는 예비 컨디셔닝된 마우스에 주사하였다. 이후, 투약은 격일로 IV 주사를 사용하여 4개의 상이한 섭생에서 제공되었다(도 39d): 짧은(4 용량) 또는 긴(12 용량) 투약 기간 동안 높은(5㎎/㎏) 또는 낮은(0.2㎎/㎏). 이것은 격일의 8 용량의 기존의 투약 섭생과 비교되었다. 이 투약 기간에는 도 39d에 도시된 나머지 단계가 후행하였다. 나머지 단계 후, 투약은 이전의 여전히 격일의 투약과 동일한 섭생을 받은 각각의 그룹에 의해 재개되었다. 4 용량(전체 6일) 후, T 세포 수 및 표현형을 측정하였다. 현저히, 높은, 짧은 그룹은 다른 그룹과 비교하여 103배 증식을 입증하였다. 이 증식은 일시적이고, 투약이 중단된 후 감소하였다. 이 발견은 쥣과 sCAR-T 세포가 이의 이전의 투약 섭생의 기억을 갖고, 나머지 단계 후 재동기화될 때, 기억이 재회상될 수 있어서, 세포의 큰 증식을 생성한다는 것을 입증한다. 도 39e에서의 세포의 표현형분석은 증식이 35일에 지배적으로 효과기 기억 CD8 세포라는 것을 예시한다. 투약을 중단한 후, 53일에, 효과기 기억 집단의 수축이 관찰된 한편, 중앙 기억 집단은 35일에 비교적 유사하였다. 이 발견은 스위치에 의해 제공된 sCAR-T 세포 활성에 대한 일시적 제어의 이용성을 강조한다.
Figure pct00043
Figure pct00044
상기 기재된 다양한 실시형태는 추가의 실시형태를 제공하도록 조합될 수 있다. 본 명세서에 인용되고/되거나 출원 데이터 시트에 기재된 모든 미국 특허, 미국 특허 출원 공보, 미국 특허 출원, 외국 특허, 외국 특허 출원 및 비특허 공보는 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함된다. 더 추가의 실시형태를 제공하기 위해 다양한 특허, 출원 및 공보의 개념을 이용하는 것이 필요한 경우 실시형태의 양태는 변형될 수 있다.
상기 기재된 설명의 견지에서 이들 및 다른 변경이 실시형태에 이루어질 수 있다. 일반적으로, 하기 청구항에서, 사용된 용어는 본 명세서 및 청구항에 개시된 구체적인 실시형태에 대한 청구항을 제한하는 것으로 해석되지 않아야 하고, 이러한 청구항이 권한부여한 균등물의 완전한 범위와 함께 모든 가능한 실시형태를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, 청구항은 본 개시내용에 의해 제한되지 않는다.
SEQUENCE LISTING <110> THE SCRIPPS RESEARCH INSTITUTE <120> CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR EFFECTOR CELL SWITCHES WITH HUMANIZED TARGETING MOIETIES AND/OR OPTIMIZED CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR INTERACTING DOMAINS AND USES THEREOF <130> IPA190516-US <150> US 62/410,315 <151> 2016-10-19 <160> 423 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 97 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 1 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg <210> 2 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 2 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 3 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 4 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 4 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 5 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 5 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 6 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 6 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 7 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 7 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 8 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 9 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 9 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 10 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 11 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 11 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 12 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 12 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 13 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 13 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 14 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 14 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 15 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized heavy chain sequence <400> 15 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 16 <211> 96 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 16 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 <210> 17 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 17 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 18 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 18 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ala Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 19 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 19 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ala Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 20 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 20 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Ala Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 21 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 21 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Ala Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 22 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 22 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Leu Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Ala Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 23 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 23 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 24 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 24 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Ile Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Ala Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 25 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 25 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 26 <211> 14 <212> PRT <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 26 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu 1 5 10 <210> 27 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 27 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile 35 40 45 Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr 100 105 110 Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 28 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 28 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile 35 40 45 Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ala Thr 100 105 110 Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 29 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 29 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile 35 40 45 Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ala Thr 100 105 110 Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 30 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 30 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile 35 40 45 Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Ala Thr 100 105 110 Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 31 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 31 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile 35 40 45 Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Ala Thr 100 105 110 Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 32 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 32 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile 35 40 45 Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Leu Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Ala Thr 100 105 110 Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 33 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 33 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile 35 40 45 Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr 100 105 110 Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 34 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 34 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile 35 40 45 Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Ala Thr 100 105 110 Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 35 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized light chain sequence <400> 35 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile 35 40 45 Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn 85 90 95 Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr 100 105 110 Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 36 <211> 33 <212> PRT <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 36 Arg Met Lys Gln Leu Glu Pro Lys Val Glu Glu Leu Leu Pro Lys Asn 1 5 10 15 Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu Val Gly Glu 20 25 30 Arg <210> 37 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct - yeast transcription factor GCN4 truncated binding peptide with linkers <400> 37 Gly Gly Gly Gly Ser Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu 1 5 10 15 Lys Lys Leu Gly Gly Gly Gly Ser 20 <210> 38 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 38 Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 10 <210> 39 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 39 Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Pro 1 5 10 <210> 40 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 40 Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 41 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 41 Thr Asp Lys Asp Met Thr Ile Thr Phe Thr Asn Lys Lys Asp Ala Glu 1 5 10 15 <210> 42 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 42 Ala His Ile Val Met Val Asp Ala Tyr Lys Pro Thr Lys 1 5 10 <210> 43 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 43 Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 20 25 <210> 44 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 44 Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 20 25 <210> 45 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 45 Glu Val Ser Ala Leu Glu Lys Glu Val Ser Ala Leu Glu Lys Glu Val 1 5 10 15 Ser Ala Leu Glu Lys Glu Val Ser Ala Leu Glu Lys 20 25 <210> 46 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 46 Lys Val Ser Ala Leu Lys Glu Lys Val Ser Ala Leu Lys Glu Lys Val 1 5 10 15 Ser Ala Leu Lys Glu Lys Val Ser Ala Leu Lys Glu 20 25 <210> 47 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 47 Glu Ile Ala Ala Leu Glu Lys Glu Ile Ala Ala Leu Glu Lys Glu Ile 1 5 10 15 Ala Ala Leu Glu Lys 20 <210> 48 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 48 Glu Ile Ala Ala Leu Glu Lys Glu Ile Ala Ala Leu Glu Lys Glu Ile 1 5 10 15 Ala Ala Leu Glu Lys Glu Ile Ala Ala Leu Glu Lys 20 25 <210> 49 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 49 Lys Ile Ala Ala Leu Lys Glu Lys Ile Ala Ala Leu Lys Glu Lys Ile 1 5 10 15 Ala Ala Leu Lys Glu 20 <210> 50 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 50 Lys Ile Ala Ala Leu Lys Glu Lys Ile Ala Ala Leu Lys Glu Lys Ile 1 5 10 15 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Ile Ala Ala Leu Lys Glu 20 25 <210> 51 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 51 Glu Ile Ser Ala Leu Glu Lys Glu Ile Ser Ala Leu Glu Lys Glu Ile 1 5 10 15 Ser Ala Leu Glu Lys 20 <210> 52 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 52 Glu Ile Ser Ala Leu Glu Lys Glu Ile Ser Ala Leu Glu Lys Glu Ile 1 5 10 15 Ser Ala Leu Glu Lys Glu Ile Ser Ala Leu Glu Lys 20 25 <210> 53 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 53 Lys Ile Ser Ala Leu Lys Glu Lys Ile Ser Ala Leu Lys Glu Lys Ile 1 5 10 15 Ser Ala Leu Lys Glu 20 <210> 54 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 54 Lys Ile Ser Ala Leu Lys Glu Lys Ile Ser Ala Leu Lys Glu Lys Ile 1 5 10 15 Ser Ala Leu Lys Glu Lys Ile Ser Ala Leu Lys Glu 20 25 <210> 55 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 55 Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Glu Lys 20 <210> 56 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 56 Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Lys Glu 20 <210> 57 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 57 Glu Val Ser Ala Leu Glu Lys Glu Val Ser Ala Leu Glu Lys Glu Val 1 5 10 15 Ser Ala Leu Glu Lys 20 <210> 58 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 58 Lys Val Ser Ala Leu Lys Glu Lys Val Ser Ala Leu Lys Glu Lys Val 1 5 10 15 Ser Ala Leu Lys Glu 20 <210> 59 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 59 Gln Ile Glu Tyr Leu Ala Lys Gln Ile Val Asp Asn Ala Ile Gln Gln 1 5 10 15 Ala <210> 60 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 60 Ser His Ile Gln Ile Pro Pro Gly Leu Thr Glu Leu Leu Gln Gly Tyr 1 5 10 15 Thr Val Glu Val Leu Arg Gln Gln Pro Pro Asp Leu Val Glu Phe Ala 20 25 30 Val Glu Tyr Phe Thr Arg Leu Arg Glu Ala Arg Ala 35 40 <210> 61 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 61 Cys Gly Gln Ile Glu Tyr Leu Ala Lys Gln Ile Val Asp Asn Ala Ile 1 5 10 15 Gln Gln Ala Gly Cys 20 <210> 62 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 62 Cys Gly His Ile Gln Ile Pro Pro Gly Leu Thr Glu Leu Leu Gln Gly 1 5 10 15 Tyr Thr Val Glu Val Leu Arg Gln Gln Pro Pro Asp Leu Val Glu Phe 20 25 30 Ala Val Glu Tyr Phe Thr Arg Leu Arg Glu Ala Arg Ala 35 40 45 <210> 63 <211> 8835 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 63 caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac 60 attcaaatat gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa 120 aaaggaagag tatgagtatt caacatttcc gtgtcgccct tattcccttt tttgcggcat 180 tttgccttcc tgtttttgct cacccagaaa cgctggtgaa agtaaaagat gctgaagatc 240 agttgggtgc acgagtgggt tacatcgaac tggatctcaa cagcggtaag atccttgaga 300 gttttcgccc cgaagaacgt tttccaatga tgagcacttt taaagttctg ctatgtggcg 360 cggtattatc ccgtattgac gccgggcaag agcaactcgg tcgccgcata cactattctc 420 agaatgactt ggttgagtac tcaccagtca cagaaaagca tcttacggat ggcatgacag 480 taagagaatt atgcagtgct gccataacca tgagtgataa cactgcggcc aacttacttc 540 tgacaacgat cggaggaccg aaggagctaa ccgctttttt gcacaacatg ggggatcatg 600 taactcgcct tgatcgttgg gaaccggagc tgaatgaagc cataccaaac gacgagcgtg 660 acaccacgat gcctgtagca atggcaacaa cgttgcgcaa actattaact ggcgaactac 720 ttactctagc ttcccggcaa caattaatag actggatgga ggcggataaa gttgcaggac 780 cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct ggtttattgc tgataaatct ggagccggtg 840 agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga tggtaagccc tcccgtatcg 900 tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga acgaaataga cagatcgctg 960 agataggtgc ctcactgatt aagcattggt aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac 1020 tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg 1080 ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg 1140 tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc 1200 aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc 1260 tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt 1320 agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc 1380 taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact 1440 caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac 1500 agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag 1560 aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg 1620 gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg 1680 tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga 1740 gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt 1800 ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct 1860 ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg 1920 aggaagcgga agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt 1980 aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta 2040 atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta 2100 tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt 2160 acgccaagcg cgcaattaac cctcactaaa gggaacaaaa gctggagctg caagcttaat 2220 gtagtcttat gcaatactct tgtagtcttg caacatggta acgatgagtt agcaacatgc 2280 cttacaagga gagaaaaagc accgtgcatg ccgattggtg gaagtaaggt ggtacgatcg 2340 tgccttatta ggaaggcaac agacgggtct gacatggatt ggacgaacca ctgaattgcc 2400 gcattgcaga gatattgtat ttaagtgcct agctcgatac aataaacggg tctctctggt 2460 tagaccagat ctgagcctgg gagctctctg gctaactagg gaacccactg cttaagcctc 2520 aataaagctt gccttgagtg cttcaagtag tgtgtgcccg tctgttgtgt gactctggta 2580 actagagatc cctcagaccc ttttagtcag tgtggaaaat ctctagcagt ggcgcccgaa 2640 cagggacctg aaagcgaaag ggaaaccaga gctctctcga cgcaggactc ggcttgctga 2700 agcgcgcacg gcaagaggcg aggggcggcg actggtgagt acgccaaaaa ttttgactag 2760 cggaggctag aaggagagag atgggtgcga gagcgtcagt attaagcggg ggagaattag 2820 atcgcgatgg gaaaaaattc ggttaaggcc agggggaaag aaaaaatata aattaaaaca 2880 tatagtatgg gcaagcaggg agctagaacg attcgcagtt aatcctggcc tgttagaaac 2940 atcagaaggc tgtagacaaa tactgggaca gctacaacca tcccttcaga caggatcaga 3000 agaacttaga tcattatata atacagtagc aaccctctat tgtgtgcatc aaaggataga 3060 gataaaagac accaaggaag ctttagacaa gatagaggaa gagcaaaaca aaagtaagac 3120 caccgcacag caagcggccg ctgatcttca gacctggagg aggagatatg agggacaatt 3180 ggagaagtga attatataaa tataaagtag taaaaattga accattagga gtagcaccca 3240 ccaaggcaaa gagaagagtg gtgcagagag aaaaaagagc agtgggaata ggagctttgt 3300 tccttgggtt cttgggagca gcaggaagca ctatgggcgc agcctcaatg acgctgacgg 3360 tacaggccag acaattattg tctggtatag tgcagcagca gaacaatttg ctgagggcta 3420 ttgaggcgca acagcatctg ttgcaactca cagtctgggg catcaagcag ctccaggcaa 3480 gaatcctggc tgtggaaaga tacctaaagg atcaacagct cctggggatt tggggttgct 3540 ctggaaaact catttgcacc actgctgtgc cttggaatgc tagttggagt aataaatctc 3600 tggaacagat tggaatcaca cgacctggat ggagtgggac agagaaatta acaattacac 3660 aagcttaata cactccttaa ttgaagaatc gcaaaaccag caagaaaaga atgaacaaga 3720 attattggaa ttagataaat gggcaagttt gtggaattgg tttaacataa caaattggct 3780 gtggtatata aaattattca taatgatagt aggaggcttg gtaggtttaa gaatagtttt 3840 tgctgtactt tctatagtga atagagttag gcagggatat tcaccattat cgtttcagac 3900 ccacctccca accccgaggg gacccgacag gcccgaagga atagaagaag aaggtggaga 3960 gagagacaga gacagatcca ttcgattagt gaacggatct cgacggttaa cttttaaaag 4020 aaaagggggg attggggggt acagtgcagg ggaaagaata gtagacataa tagcaacaga 4080 catacaaact aaagaattac aaaaacaaat tacaaaaatt caaaatttta tcgagctttg 4140 caaagatgga taaagtttta aacagagagg aatctttgca gctaatggac cttctaggtc 4200 ttgaaaggag tgcctcgtga ggctccggtg cccgtcagtg ggcagagcgc acatcgccca 4260 cagtccccga gaagttgggg ggaggggtcg gcaattgaac cggtgcctag agaaggtggc 4320 gcggggtaaa ctgggaaagt gatgtcgtgt actggctccg cctttttccc gagggtgggg 4380 gagaaccgta tataagtgca gtagtcgccg tgaacgttct ttttcgcaac gggtttgccg 4440 ccagaacaca ggtaagtgcc gtgtgtggtt cccgcgggcc tggcctcttt acgggttatg 4500 gcccttgcgt gccttgaatt acttccacct ggctgcagta cgtgattctt gatcccgagc 4560 ttcgggttgg aagtgggtgg gagagttcga ggccttgcgc ttaaggagcc ccttcgcctc 4620 gtgcttgagt tgaggcctgg cctgggcgct ggggccgccg cgtgcgaatc tggtggcacc 4680 ttcgcgcctg tctcgctgct ttcgataagt ctctagccat ttaaaatttt tgatgacctg 4740 ctgcgacgct ttttttctgg caagatagtc ttgtaaatgc gggccaagat ctgcacactg 4800 gtatttcggt ttttggggcc gcgggcggcg acggggcccg tgcgtcccag cgcacatgtt 4860 cggcgaggcg gggcctgcga gcgcggccac cgagaatcgg acgggggtag tctcaagctg 4920 gccggcctgc tctggtgcct ggcctcgcgc cgccgtgtat cgccccgccc tgggcggcaa 4980 ggctggcccg gtcggcacca gttgcgtgag cggaaagatg gccgcttccc ggccctgctg 5040 cagggagctc aaaatggagg acgcggcgct cgggagagcg ggcgggtgag tcacccacac 5100 aaaggaaaag ggcctttccg tcctcagccg tcgcttcatg tgactccacg gagtaccggg 5160 cgccgtccag gcacctcgat tagttctcga gcttttggag tacgtcgtct ttaggttggg 5220 gggaggggtt ttatgcgatg gagtttcccc acactgagtg ggtggagact gaagttaggc 5280 cagcttggca cttgatgtaa ttctccttgg aatttgccct ttttgagttt ggatcttggt 5340 tcattctcaa gcctcagaca gtggttcaaa gtttttttct tccatttcag gtgtcgtgag 5400 gaattcggta ccgcggccgc ccggggatcc atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg 5460 ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg ccggacgccg ttgtgaccca ggaatccgct 5520 ctgacctctt ctccaggcga aaccgtgact ctgacttgcc gtagtagcac cggggctgtg 5580 accacatcta actatgccag ttgggtccag gaaaaaccgg atcacctgtt tactggcctg 5640 attggcggca ccaacaatcg cgcaccgggt gtgcccgctc gtttcagcgg ttccctgatt 5700 ggggacaagg cagcactgac tatcaccggc gcccagaccg aagatgaggc gatctatttt 5760 tgcgtcctgt ggtacagcga ccattgggtg ttcgggggag gcaccaaact gacagtgctg 5820 ggcggaggag gaggttcagg aggaggaggt agcgggggag gcggttccgg gggaggcggt 5880 tctgatgtgc agctgcaaga atccgggcca ggactggttg cgccttctca gagtctgtca 5940 attacatgta ctgttagtgg ctttctgctg accgactatg gtgtgaactg ggttcgtcag 6000 agcccaggca agggtctgga gtggctggga gtgatttggg gggatggaat cacagactac 6060 aatagcgcac tgaaatctcg gctgagtgtt accaaagata acagcaagtc ccaggtcttc 6120 ctgaagatga acagcctgca aagcggcgac tccgctcgct attactgcgt taccggactg 6180 tttgattatt gggggcaggg gacaactctg actgtttcct ccaccacgac gccagcgccg 6240 cgaccaccaa caccggcgcc caccatcgcg tcgcagcccc tgtccctgcg cccagaggcg 6300 tgccggccag cggcgggggg cgcagtgcac acgagggggc tggacttcgc ctgtgatatc 6360 tacatctggg cgcccttggc cgggacttgt ggggtccttc tcctgtcact ggttatcacc 6420 ctttactgca aacggggcag aaagaaactc ctgtatatat tcaaacaacc atttatgaga 6480 ccagtacaaa ctactcaaga ggaagatggc tgtagctgcc gatttccaga agaagaagaa 6540 ggaggatgtg aactgagagt gaagttcagc aggagcgcag acgcccccgc gtacaagcag 6600 ggccagaacc agctctataa cgagctcaat ctaggacgaa gagaggagta cgatgttttg 6660 gacaagagac gtggccggga ccctgagatg gggggaaagc cgagaaggaa gaaccctcag 6720 gaaggcctgt acaatgaact gcagaaagat aagatggcgg aggcctacag tgagattggg 6780 atgaaaggcg agcgccggag gggcaagggg cacgatggcc tttaccaggg tctcagtaca 6840 gccaccaagg acacctacga cgcccttcac atgcaggccc tgccccctcg ctaagtcgac 6900 aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 6960 ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 7020 atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 7080 tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 7140 ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 7200 attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 7260 ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaagctga cgtcctttcc atggctgctc 7320 gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 7380 aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 7440 cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgcc tggaattcga 7500 gctcggtacc tttaagacca atgacttaca aggcagctgt agatcttagc cactttttaa 7560 aagaaaaggg gggactggaa gggctaattc actcccaacg aagacaagat ctgctttttg 7620 cttgtactgg gtctctctgg ttagaccaga tctgagcctg ggagctctct ggctaactag 7680 ggaacccact gcttaagcct caataaagct tgccttgagt gcttcaagta gtgtgtgccc 7740 gtctgttgtg tgactctggt aactagagat ccctcagacc cttttagtca gtgtggaaaa 7800 tctctagcag tagtagttca tgtcatctta ttattcagta tttataactt gcaaagaaat 7860 gaatatcaga gagtgagagg aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca 7920 atagcatcac aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt 7980 ccaaactcat caatgtatct tatcatgtct ggctctagct atcccgcccc taactccgcc 8040 cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga 8100 ggccgcctcg gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg 8160 cttttgcgtc gagacgtacc caattcgccc tatagtgagt cgtattacgc gcgctcactg 8220 gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt 8280 gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct 8340 tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tggcgcgacg cgccctgtag cggcgcatta 8400 agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg 8460 cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa 8520 gctctaaatc gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc 8580 aaaaaacttg attagggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt 8640 cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca 8700 acactcaacc ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc 8760 tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattttaa caaaatatta 8820 acgtttacaa tttcc 8835 <210> 64 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 64 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccggaggttg ctgccctgga gaaggaggtg gctgcactgg agaaagaggt ggccgccctg 120 gaaaaagaag tggcagcctt ggagaaggaa agcaagtatg gcccaccttg tccaccttgt 180 cccgatatct acatctgggc gcccttggcc gggacttgtg gggtccttct cctgtcactg 240 gttatcaccc tttactgcaa acggggcaga aagaaactcc tgtatatatt caaacaacca 300 tttatgagac cagtacaaac tactcaagag gaagatggct gtagctgccg atttccagaa 360 gaagaagaag gaggatgtga actgagagtg aagttcagca ggagcgcaga cgcccccgcg 420 tacaagcagg gccagaacca gctctataac gagctcaatc taggacgaag agaggagtac 480 gatgttttgg acaagagacg tggccgggac cctgagatgg ggggaaagcc gagaaggaag 540 aaccctcagg aaggcctgta caatgaactg cagaaagata agatggcgga ggcctacagt 600 gagattggga tgaaaggcga gcgccggagg ggcaaggggc acgatggcct ttaccagggt 660 ctcagtacag ccaccaagga cacctacgac gcccttcaca tgcaggccct gccccctcgc 720 taa 723 <210> 65 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 65 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgaaagtgg cagccctgaa ggagaaagtt gcggctctca aagagaaagt ggctgcactg 120 aaagaaaagg ttgccgccct caaggaggaa agcaagtatg gcccaccttg tccaccttgt 180 cccgatatct acatctgggc gcccttggcc gggacttgtg gggtccttct cctgtcactg 240 gttatcaccc tttactgcaa acggggcaga aagaaactcc tgtatatatt caaacaacca 300 tttatgagac cagtacaaac tactcaagag gaagatggct gtagctgccg atttccagaa 360 gaagaagaag gaggatgtga actgagagtg aagttcagca ggagcgcaga cgcccccgcg 420 tacaagcagg gccagaacca gctctataac gagctcaatc taggacgaag agaggagtac 480 gatgttttgg acaagagacg tggccgggac cctgagatgg ggggaaagcc gagaaggaag 540 aaccctcagg aaggcctgta caatgaactg cagaaagata agatggcgga ggcctacagt 600 gagattggga tgaaaggcga gcgccggagg ggcaaggggc acgatggcct ttaccagggt 660 ctcagtacag ccaccaagga cacctacgac gcccttcaca tgcaggccct gccccctcgc 720 taa 723 <210> 66 <211> 464 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 66 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Phe Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Gln Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 115 120 125 Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser 130 135 140 Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr 145 150 155 160 Met His Trp Val Lys Gln Arg Thr Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly 165 170 175 Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln 180 185 190 Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Lys Thr Ala Tyr Leu 195 200 205 Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 210 215 220 Arg Leu Lys Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 225 230 235 240 Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile 245 250 255 Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala 260 265 270 Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 275 280 285 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 290 295 300 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile 305 310 315 320 Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp 325 330 335 Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 340 345 350 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 355 360 365 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 370 375 380 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 385 390 395 400 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 405 410 415 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 420 425 430 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 435 440 445 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 67 <211> 432 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 67 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Phe Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Gln Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 115 120 125 Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser 130 135 140 Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr 145 150 155 160 Met His Trp Val Lys Gln Arg Thr Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly 165 170 175 Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln 180 185 190 Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Lys Thr Ala Tyr Leu 195 200 205 Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 210 215 220 Arg Leu Lys Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 225 230 235 240 Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp Ile Tyr 245 250 255 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 260 265 270 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile 275 280 285 Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp 290 295 300 Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 305 310 315 320 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 325 330 335 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 340 345 350 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 355 360 365 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 370 375 380 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 385 390 395 400 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 405 410 415 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 420 425 430 <210> 68 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 68 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccggacgccg ttgtgaccca ggaatccgct ctgacctctt ctccaggcga aaccgtgact 120 ctgacttgcc gtagtagcac cggggctgtg accacatcta actatgccag ttgggtccag 180 gaaaaaccgg atcacctgtt tactggcctg attggcggca ccaacaatcg cgcaccgggt 240 gtgcccgctc gtttcagcgg ttccctgatt ggggacaagg cagcactgac tatcaccggc 300 gcccagaccg aagatgaggc gatctatttt tgcgtcctgt ggtacagcga ccattgggtg 360 ttcgggggag gcaccaaact gacagtgctg ggcggaggag gaggttcagg aggaggaggt 420 agcgggggag gcggttccgg gggaggcggt tctgatgtgc agctgcaaga atccgggcca 480 ggactggttg cgccttctca gagtctgtca attacatgta ctgttagtgg ctttctgctg 540 accgactatg gtgtgaactg ggttcgtcag agcccaggca agggtctgga gtggctggga 600 gtgatttggg gggatggaat cacagactac aatagcgcac tgaaatctcg gctgagtgtt 660 accaaagata acagcaagtc ccaggtcttc ctgaagatga acagcctgca aagcggcgac 720 tccgctcgct attactgcgt taccggactg tttgattatt gggggcaggg gacaactctg 780 actgtttcct ccgaaagcaa gtatggccca ccttgtccaa gctgtcccga tatctacatc 840 tgggcgccct tggccgggac ttgtggggtc cttctcctgt cactggttat caccctttac 900 tgcaaacggg gcagaaagaa actcctgtat atattcaaac aaccatttat gagaccagta 960 caaactactc aagaggaaga tggctgtagc tgccgatttc cagaagaaga agaaggagga 1020 tgtgaactga gagtgaagtt cagcaggagc gcagacgccc ccgcgtacaa gcagggccag 1080 aaccagctct ataacgagct caatctagga cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag 1140 agacgtggcc gggaccctga gatgggggga aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc 1200 ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa 1260 ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc 1320 aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgc 1365 <210> 69 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 69 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccggacgccg ttgtgaccca ggaatccgct ctgacctctt ctccaggcga aaccgtgact 120 ctgacttgcc gtagtagcac cggggctgtg accacatcta actatgccag ttgggtccag 180 gaaaaaccgg atcacctgtt tactggcctg attggcggca ccaacaatcg cgcaccgggt 240 gtgcccgctc gtttcagcgg ttccctgatt ggggacaagg cagcactgac tatcaccggc 300 gcccagaccg aagatgaggc gatctatttt tgcgtcctgt ggtacagcga ccattgggtg 360 ttcgggggag gcaccaaact gacagtgctg ggcggaggag gaggttcagg aggaggaggt 420 agcgggggag gcggttccgg gggaggcggt tctgatgtgc agctgcaaga atccgggcca 480 ggactggttg cgccttctca gagtctgtca attacatgta ctgttagtgg ctttctgctg 540 accgactatg gtgtgaactg ggttcgtcag agcccaggca agggtctgga gtggctggga 600 gtgatttggg gggatggaat cacagactac aatagcgcac tgaaatctcg gctgagtgtt 660 accaaagata acagcaagtc ccaggtcttc ctgaagatga acagcctgca aagcggcgac 720 tccgctcgct attactgcgt taccggactg tttgattatt gggggcaggg gacaactctg 780 actgtttcct ccgaaagcaa gtatggccca ccttgtccac cttgtcccga tatctacatc 840 tgggcgccct tggccgggac ttgtggggtc cttctcctgt cactggttat caccctttac 900 tgcaaacggg gcagaaagaa actcctgtat atattcaaac aaccatttat gagaccagta 960 caaactactc aagaggaaga tggctgtagc tgccgatttc cagaagaaga agaaggagga 1020 tgtgaactga gagtgaagtt cagcaggagc gcagacgccc ccgcgtacaa gcagggccag 1080 aaccagctct ataacgagct caatctagga cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag 1140 agacgtggcc gggaccctga gatgggggga aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc 1200 ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa 1260 ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc 1320 aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgc 1365 <210> 70 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 70 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg gtcaggctcc tcggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct ccctgacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tggatcaggc agccacccgg caagggcttg gagtggattg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cgggtgacca tttccaagga taccagtaag 660 aatcagttca gcctgaaact ttcatccgtg acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgg tgacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 71 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 71 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg gtcaggcgcc ccggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct ccataacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tgggttaggc agccacccgg caagggcttg gagtggctgg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cggcttaccg tctccaagga tacgagtaag 660 aatcaggtca gcctgaaaat gtcatccctc acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgc tcacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 72 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 72 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg gacaagcgtt ccggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct ccctcacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tggattaggc agccacccgg caagggcttg gagtggatcg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cgggtcacca tctccaagga taccagtaag 660 aatcagttca gcctgaaact gtcatccgtc acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgg taacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 73 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 73 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg gtcaggcatt ccggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct ccataacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tgggtcaggc agccacccgg caagggcttg gagtggctcg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cggttgaccg tgtccaagga taccagtaag 660 aatcaggtca gcctgaaaat gtcatccctg acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgt tgacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 74 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 74 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg atcacctgtt ccggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct cccttacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tggatcaggc agccacccgg caagggcttg gagtggatcg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cgggtcacca tctccaagga tacgagtaag 660 aatcagttca gcctgaaact ctcatccgtt acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgg taacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 75 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 75 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg accatctgtt tcggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct ccattacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tgggtgaggc agccacccgg caagggcttg gagtggctcg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cggttgaccg tgtccaagga taccagtaag 660 aatcaggtga gcctgaaaat gtcatccctg acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgc tgacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 76 <211> 1461 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 76 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccggacgccg ttgtgaccca ggaatccgct ctgacctctt ctccaggcga aaccgtgact 120 ctgacttgcc gtagtagcac cggggctgtg accacatcta actatgccag ttgggtccag 180 gaaaaaccgg atcacctgtt tactggcctg attggcggca ccaacaatcg cgcaccgggt 240 gtgcccgctc gtttcagcgg ttccctgatt ggggacaagg cagcactgac tatcaccggc 300 gcccagaccg aagatgaggc gatctatttt tgcgtcctgt ggtacagcga ccattgggtg 360 ttcgggggag gcaccaaact gacagtgctg ggcggaggag gaggttcagg aggaggaggt 420 agcgggggag gcggttccgg gggaggcggt tctgatgtgc agctgcaaga atccgggcca 480 ggactggttg cgccttctca gagtctgtca attacatgta ctgttagtgg ctttctgctg 540 accgactatg gtgtgaactg ggttcgtcag agcccaggca agggtctgga gtggctggga 600 gtgatttggg gggatggaat cacagactac aatagcgcac tgaaatctcg gctgagtgtt 660 accaaagata acagcaagtc ccaggtcttc ctgaagatga acagcctgca aagcggcgac 720 tccgctcgct attactgcgt taccggactg tttgattatt gggggcaggg gacaactctg 780 actgtttcct ccaccacgac gccagcgccg cgaccaccaa caccggcgcc caccatcgcg 840 tcgcagcccc tgtccctgcg cccagaggcg tgccggccag cggcgggggg cgcagtgcac 900 acgagggggc tggacttcgc ctgtgatatc tacatctggg cgcccttggc cgggacttgt 960 ggggtccttc tcctgtcact ggttatcacc ctttactgca aacggggcag aaagaaactc 1020 ctgtatatat tcaaacaacc atttatgaga ccagtacaaa ctactcaaga ggaagatggc 1080 tgtagctgcc gatttccaga agaagaagaa ggaggatgtg aactgagagt gaagttcagc 1140 aggagcgcag acgcccccgc gtacaagcag ggccagaacc agctctataa cgagctcaat 1200 ctaggacgaa gagaggagta cgatgttttg gacaagagac gtggccggga ccctgagatg 1260 gggggaaagc cgagaaggaa gaaccctcag gaaggcctgt acaatgaact gcagaaagat 1320 aagatggcgg aggcctacag tgagattggg atgaaaggcg agcgccggag gggcaagggg 1380 cacgatggcc tttaccaggg tctcagtaca gccaccaagg acacctacga cgcccttcac 1440 atgcaggccc tgccccctcg c 1461 <210> 77 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 77 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccggacgccg ttgtgaccca ggaatccgct ctgacctctt ctccaggcga aaccgtgact 120 ctgacttgcc gtagtagcac cggggctgtg accacatcta actatgccag ttgggtccag 180 gaaaaaccgg atcacctgtt tactggcctg attggcggca ccaacaatcg cgcaccgggt 240 gtgcccgctc gtttcagcgg ttccctgatt ggggacaagg cagcactgac tatcaccggc 300 gcccagaccg aagatgaggc gatctatttt tgcgtcctgt ggtacagcga ccattgggtg 360 ttcgggggag gcaccaaact gacagtgctg ggcggaggag gaggttcagg aggaggaggt 420 agcgggggag gcggttccgg gggaggcggt tctgatgtgc agctgcaaga atccgggcca 480 ggactggttg cgccttctca gagtctgtca attacatgta ctgttagtgg ctttctgctg 540 accgactatg gtgtgaactg ggttcgtcag agcccaggca agggtctgga gtggctggga 600 gtgatttggg gggatggaat cacagactac aatagcgcac tgaaatctcg gctgagtgtt 660 accaaagata acagcaagtc ccaggtcttc ctgaagatga acagcctgca aagcggcgac 720 tccgctcgct attactgcgt taccggactg tttgattatt gggggcaggg gacaactctg 780 actgtttcct ccgatatcta catctgggcg cccttggccg ggacttgtgg ggtccttctc 840 ctgtcactgg ttatcaccct ttactgcaaa cggggcagaa agaaactcct gtatatattc 900 aaacaaccat ttatgagacc agtacaaact actcaagagg aagatggctg tagctgccga 960 tttccagaag aagaagaagg aggatgtgaa ctgagagtga agttcagcag gagcgcagac 1020 gcccccgcgt acaagcaggg ccagaaccag ctctataacg agctcaatct aggacgaaga 1080 gaggagtacg atgttttgga caagagacgt ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg 1140 agaaggaaga accctcagga aggcctgtac aatgaactgc agaaagataa gatggcggag 1200 gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt 1260 taccagggtc tcagtacagc caccaaggac acctacgacg cccttcacat gcaggccctg 1320 ccccctcgc 1329 <210> 78 <211> 1374 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 78 atgggtgtcc ctacccagct cctgggactg ctcctgctgt ggatcaccga cgccatctgc 60 gacgccgttg tgacccagga atccgctctg acctcttctc caggcgaaac cgtgactctg 120 acttgccgta gtagcaccgg ggctgtgacc acatctaact atgccagttg ggtccaggaa 180 aaaccggatc acctgtttac tggcctgatt ggcggcacca acaatcgcgc accgggtgtg 240 cccgctcgtt tcagcggttc cctgattggg gacaaggcag cactgactat caccggcgcc 300 cagaccgaag atgaggcgat ctatttttgc gtcctgtggt acagcgacca ttgggtgttc 360 gggggaggca ccaaactgac agtgctgggc ggaggaggag gttcaggagg aggaggtagc 420 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct gatgtgcagc tgcaagaatc cgggccagga 480 ctggttgcgc cttctcagag tctgtcaatt acatgtactg ttagtggctt tctgctgacc 540 gactatggtg tgaactgggt tcgtcagagc ccaggcaagg gtctggagtg gctgggagtg 600 atttgggggg atggaatcac agactacaat agcgcactga aatctcggct gagtgttacc 660 aaagataaca gcaagtccca ggtcttcctg aagatgaatt ccctgcaaag cggcgactcc 720 gctcgctatt actgcgttac cggactgttt gattattggg ggcaggggac aactctgact 780 gtttcctccg aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccattta catctgggca 840 cccttggccg gaatctgcgt ggcccttctg ctgtccttga tcatcactct catctgcaaa 900 tggatcagga aaaaattccc ccacatattc aagcaaccat ttaagaagac cactggagca 960 gctcaagagg aagatgcttg tagctgccga tgtccacagg aagaagaagg aggaggagga 1020 ggctatgagc tgagagccaa gttcagcaga tccgccgaga cagccgccaa cctgcaggat 1080 cccaaccagc tgttcaacga gctgaacctg ggcagacggg aggaattcga cgtgctggaa 1140 aagaagagag ccagggaccc cgagatgggc ggcaagcagc agagaagaag aaaccctcag 1200 gaaggcgtct acaacgccct gcagaaagac aagatggccg aggcctacag cgagatcggc 1260 accaagggcg agagaagaag gggcaagggc cacgatggcc tgttccaggg cctgtccacc 1320 gccaccaagg acaccttcga cgccctgcac atgcagaccc tggcccccag atga 1374 <210> 79 <211> 1374 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 79 atgggtgtcc ctacccagct cctgggactg ctcctgctgt ggatcaccga cgccatctgc 60 gacgccgttg tgacccagga atccgctctg acctcttctc caggcgaaac cgtgactctg 120 acttgccgta gtagcaccgg ggctgtgacc acatctaact atgccagttg ggtccaggaa 180 aaaccggatc acctgtttac tggcctgatt ggcggcacca acaatcgcgc accgggtgtg 240 cccgctcgtt tcagcggttc cctgattggg gacaaggcag cactgactat caccggcgcc 300 cagaccgaag atgaggcgat ctatttttgc gtcctgtggt acagcgacca ttgggtgttc 360 gggggaggca ccaaactgac agtgctgggc ggaggaggag gttcaggagg aggaggtagc 420 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct gatgtgcagc tgcaagaatc cgggccagga 480 ctggttgcgc cttctcagag tctgtcaatt acatgtactg ttagtggctt tctgctgacc 540 gactatggtg tgaactgggt tcgtcagagc ccaggcaagg gtctggagtg gctgggagtg 600 atttgggggg atggaatcac agactacaat agcgcactga aatctcggct gagtgttacc 660 aaagataaca gcaagtccca ggtcttcctg aagatgaatt ccctgcaaag cggcgactcc 720 gctcgctatt actgcgttac cggactgttt gattattggg ggcaggggac aactctgact 780 gtttcctccg aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccattta catctgggca 840 cccttggccg gaatctgcgt ggcccttctg ctgtccttga tcatcactct catctgcaaa 900 tggatcagga aaaaattccc ccacatattc aagcaaccat ttaagaagac cactggagca 960 gctcaagagg aagatgcttg tagctgccga tgtccacagg aagaagaagg aggaggagga 1020 ggctatgagc tgagagcaaa attcagcagg agtgcagaga ctgctgccaa cctgcaggac 1080 cccaaccagc tctacaatga gctcaatcta gggcgaagag aggaatatga cgtcttggag 1140 aagaagcggg ctcgggatcc agagatggga ggcaaacagc agaggaggag gaacccccag 1200 gaaggcgtat acaatgcact gcagaaagac aagatggcag aagcctacag tgagatcggc 1260 acaaaaggcg agaggcggag aggcaagggg cacgatggcc tttaccaggg tctcagcact 1320 gccaccaagg acacctatga tgccctgcat atgcagaccc tggcccctcg ctaa 1374 <210> 80 <211> 1467 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 80 atgggtgtcc ctacccagct cctgggactg ctcctgctgt ggatcaccga cgccatctgc 60 gacgccgttg tgacccagga atccgctctg acctcttctc caggcgaaac cgtgactctg 120 acttgccgta gtagcaccgg ggctgtgacc acatctaact atgccagttg ggtccaggaa 180 aaaccggatc acctgtttac tggcctgatt ggcggcacca acaatcgcgc accgggtgtg 240 cccgctcgtt tcagcggttc cctgattggg gacaaggcag cactgactat caccggcgcc 300 cagaccgaag atgaggcgat ctatttttgc gtcctgtggt acagcgacca ttgggtgttc 360 gggggaggca ccaaactgac agtgctgggc ggaggaggag gttcaggagg aggaggtagc 420 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct gatgtgcagc tgcaagaatc cgggccagga 480 ctggttgcgc cttctcagag tctgtcaatt acatgtactg ttagtggctt tctgctgacc 540 gactatggtg tgaactgggt tcgtcagagc ccaggcaagg gtctggagtg gctgggagtg 600 atttgggggg atggaatcac agactacaat agcgcactga aatctcggct gagtgttacc 660 aaagataaca gcaagtccca ggtcttcctg aagatgaatt ccctgcaaag cggcgactcc 720 gctcgctatt actgcgttac cggactgttt gattattggg ggcaggggac aactctgact 780 gtttcctcca ctactaccaa gccagtgctg cgaactccct cacctgtgca ccctaccggg 840 acatctcagc cccagagacc agaagattgt cggccccgtg gctcagtgaa ggggaccgga 900 ttggacttcg cctgtgatat ttacatctgg gcacccttgg ccggaatctg cgtggccctt 960 ctgctgtcct tgatcatcac tctcatctgc aaatggatca ggaaaaaatt cccccacata 1020 ttcaagcaac catttaagaa gaccactgga gcagctcaag aggaagatgc ttgtagctgc 1080 cgatgtccac aggaagaaga aggaggagga ggaggctatg agctgagagc caagttcagc 1140 agatccgccg agacagccgc caacctgcag gatcccaacc agctgttcaa cgagctgaac 1200 ctgggcagac gggaggaatt cgacgtgctg gaaaagaaga gagccaggga ccccgagatg 1260 ggcggcaagc agcagagaag aagaaaccct caggaaggcg tctacaacgc cctgcagaaa 1320 gacaagatgg ccgaggccta cagcgagatc ggcaccaagg gcgagagaag aaggggcaag 1380 ggccacgatg gcctgttcca gggcctgtcc accgccacca aggacacctt cgacgccctg 1440 cacatgcaga ccctggcccc cagatga 1467 <210> 81 <211> 1467 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 81 atgggtgtcc ctacccagct cctgggactg ctcctgctgt ggatcaccga cgccatctgc 60 gacgccgttg tgacccagga atccgctctg acctcttctc caggcgaaac cgtgactctg 120 acttgccgta gtagcaccgg ggctgtgacc acatctaact atgccagttg ggtccaggaa 180 aaaccggatc acctgtttac tggcctgatt ggcggcacca acaatcgcgc accgggtgtg 240 cccgctcgtt tcagcggttc cctgattggg gacaaggcag cactgactat caccggcgcc 300 cagaccgaag atgaggcgat ctatttttgc gtcctgtggt acagcgacca ttgggtgttc 360 gggggaggca ccaaactgac agtgctgggc ggaggaggag gttcaggagg aggaggtagc 420 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct gatgtgcagc tgcaagaatc cgggccagga 480 ctggttgcgc cttctcagag tctgtcaatt acatgtactg ttagtggctt tctgctgacc 540 gactatggtg tgaactgggt tcgtcagagc ccaggcaagg gtctggagtg gctgggagtg 600 atttgggggg atggaatcac agactacaat agcgcactga aatctcggct gagtgttacc 660 aaagataaca gcaagtccca ggtcttcctg aagatgaatt ccctgcaaag cggcgactcc 720 gctcgctatt actgcgttac cggactgttt gattattggg ggcaggggac aactctgact 780 gtttcctcca ctactaccaa gccagtgctg cgaactccct cacctgtgca ccctaccggg 840 acatctcagc cccagagacc agaagattgt cggccccgtg gctcagtgaa ggggaccgga 900 ttggacttcg cctgtgatat ttacatctgg gcacccttgg ccggaatctg cgtggccctt 960 ctgctgtcct tgatcatcac tctcatctgc aaatggatca ggaaaaaatt cccccacata 1020 ttcaagcaac catttaagaa gaccactgga gcagctcaag aggaagatgc ttgtagctgc 1080 cgatgtccac aggaagaaga aggaggagga ggaggctatg agctgagagc aaaattcagc 1140 aggagtgcag agactgctgc caacctgcag gaccccaacc agctctacaa tgagctcaat 1200 ctagggcgaa gagaggaata tgacgtcttg gagaagaagc gggctcggga tccagagatg 1260 ggaggcaaac agcagaggag gaggaacccc caggaaggcg tatacaatgc actgcagaaa 1320 gacaagatgg cagaagccta cagtgagatc ggcacaaaag gcgagaggcg gagaggcaag 1380 gggcacgatg gcctttacca gggtctcagc actgccacca aggacaccta tgatgccctg 1440 catatgcaga ccctggcccc tcgctaa 1467 <210> 82 <211> 1371 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 82 atgggtgtcc ctacccagct cctgggactg ctcctgctgt ggatcaccga cgccatctgc 60 gacgccgttg tgacccagga atccgctctg acctcttctc caggcgaaac cgtgactctg 120 acttgccgta gtagcaccgg ggctgtgacc acatctaact atgccagttg ggtccaggaa 180 aaaccggatc acctgtttac tggcctgatt ggcggcacca acaatcgcgc accgggtgtg 240 cccgctcgtt tcagcggttc cctgattggg gacaaggcag cactgactat caccggcgcc 300 cagaccgaag atgaggcgat ctatttttgc gtcctgtggt acagcgacca ttgggtgttc 360 gggggaggca ccaaactgac agtgctgggc ggaggaggag gttcaggagg aggaggtagc 420 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct gatgtgcagc tgcaagaatc cgggccagga 480 ctggttgcgc cttctcagag tctgtcaatt acatgtactg ttagtggctt tctgctgacc 540 gactatggtg tgaactgggt tcgtcagagc ccaggcaagg gtctggagtg gctgggagtg 600 atttgggggg atggaatcac agactacaat agcgcactga aatctcggct gagtgttacc 660 aaagataaca gcaagtccca ggtcttcctg aagatgaaca gcctgcaaag cggcgactcc 720 gctcgctatt actgcgttac cggactgttt gattattggg ggcaggggac aactctgact 780 gtttcctccg aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccttctg ggccctggtg 840 gtggtggccg gcgtgctgtt ctgttacggc ctgctggtca cagtggccct gtgcgtgatc 900 tggaccaaca gcagaagaaa cagaggcggc cagagcgact acatgaacat gacccccaga 960 aggccaggcc tgaccagaaa gccctaccag ccctacgccc ctgccagaga cttcgccgcc 1020 tacagaccca gagccaagtt cagcagatcc gccgagacag ccgccaacct gcaggatccc 1080 aaccagctgt tcaacgagct gaacctgggc agacgggagg aattcgacgt gctggaaaag 1140 aagagagcca gggaccccga gatgggcggc aagcagcaga gaagaagaaa ccctcaggaa 1200 ggcgtctaca acgccctgca gaaagacaag atggccgagg cctacagcga gatcggcacc 1260 aagggcgaga gaagaagggg caagggccac gatggcctgt tccagggcct gtccaccgcc 1320 accaaggaca ccttcgacgc cctgcacatg cagaccctgg cccccagatg a 1371 <210> 83 <211> 1371 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 83 atgggtgtcc ctacccagct cctgggactg ctcctgctgt ggatcaccga cgccatctgc 60 gatgtgcagc tgcaagaatc cgggccagga ctggttgcgc cttctcagag tctgtcaatt 120 acatgtactg ttagtggctt tctgctgacc gactatggtg tgaactgggt tcgtcagagc 180 ccaggcaagg gtctggagtg gctgggagtg atttgggggg atggaatcac agactacaat 240 agcgcactga aatctcggct gagtgttacc aaagataaca gcaagtccca ggtcttcctg 300 aagatgaaca gcctgcaaag cggcgactcc gctcgctatt actgcgttac cggactgttt 360 gattattggg ggcaggggac aactctgact gtttcctccg gaggaggagg ttcaggagga 420 ggaggtagcg ggggaggcgg ttccggggga ggcggttctg acgccgttgt gacccaggaa 480 tccgctctga cctcttctcc aggcgaaacc gtgactctga cttgccgtag tagcaccggg 540 gctgtgacca catctaacta tgccagttgg gtccaggaaa aaccggatca cctgtttact 600 ggcctgattg gcggcaccaa caatcgcgca ccgggtgtgc ccgctcgttt cagcggttcc 660 ctgattgggg acaaggcagc actgactatc accggcgccc agaccgaaga tgaggcgatc 720 tatttttgcg tcctgtggta cagcgaccat tgggtgttcg ggggaggcac caaactgaca 780 gtgctgggcg aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccttctg ggccctggtg 840 gtggtggccg gcgtgctgtt ctgttacggc ctgctggtca cagtggccct gtgcgtgatc 900 tggaccaaca gcagaagaaa cagaggcggc cagagcgact acatgaacat gacccccaga 960 aggccaggcc tgaccagaaa gccctaccag ccctacgccc ctgccagaga cttcgccgcc 1020 tacagaccca gagccaagtt cagcagatcc gccgagacag ccgccaacct gcaggatccc 1080 aaccagctgt tcaacgagct gaacctgggc agacgggagg aattcgacgt gctggaaaag 1140 aagagagcca gggaccccga gatgggcggc aagcagcaga gaagaagaaa ccctcaggaa 1200 ggcgtctaca acgccctgca gaaagacaag atggccgagg cctacagcga gatcggcacc 1260 aagggcgaga gaagaagggg caagggccac gatggcctgt tccagggcct gtccaccgcc 1320 accaaggaca ccttcgacgc cctgcacatg cagaccctgg cccccagatg a 1371 <210> 84 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 84 atgggtgtcc ctacccagct cctgggactg ctcctgctgt ggatcaccga cgccatctgc 60 gacgccgttg tgacccagga atccgctctg acctcttctc caggcgaaac cgtgactctg 120 acttgccgta gtagcaccgg ggctgtgacc acatctaact atgccagttg ggtccaggaa 180 aaaccggatc acctgtttac tggcctgatt ggcggcacca acaatcgcgc accgggtgtg 240 cccgctcgtt tcagcggttc cctgattggg gacaaggcag cactgactat caccggcgcc 300 cagaccgaag atgaggcgat ctatttttgc gtcctgtggt acagcgacca ttgggtgttc 360 gggggaggca ccaaactgac agtgctgggc ggaggaggag gttcaggagg aggaggtagc 420 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct gatgtgcagc tgcaagaatc cgggccagga 480 ctggttgcgc cttctcagag tctgtcaatt acatgtactg ttagtggctt tctgctgacc 540 gactatggtg tgaactgggt tcgtcagagc ccaggcaagg gtctggagtg gctgggagtg 600 atttgggggg atggaatcac agactacaat agcgcactga aatctcggct gagtgttacc 660 aaagataaca gcaagtccca ggtcttcctg aagatgaaca gcctgcaaag cggcgactcc 720 gctcgctatt actgcgttac cggactgttt gattattggg ggcaggggac aactctgact 780 gtttcctccg aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccgatat ctacatctgg 840 gcgcccttgg ccgggacttg tggggtcctt ctcctgtcac tggttatcac cctttactgc 900 aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 960 actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 1020 gaactgagag tgaagttcag caggagcgca gacgcccccg cgtacaagca gggccagaac 1080 cagctctata acgagctcaa tctaggacga agagaggagt acgatgtttt ggacaagaga 1140 cgtggccggg accctgagat ggggggaaag ccgagaagga agaaccctca ggaaggcctg 1200 tacaatgaac tgcagaaaga taagatggcg gaggcctaca gtgagattgg gatgaaaggc 1260 gagcgccgga ggggcaaggg gcacgatggc ctttaccagg gtctcagtac agccaccaag 1320 gacacctacg acgcccttca catgcaggcc ctgccccctc gctaa 1365 <210> 85 <211> 326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (41)..(42) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (123)..(123) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (141)..(141) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (152)..(152) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (159)..(159) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (262)..(262) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (264)..(265) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (286)..(286) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (289)..(289) <223> n is a, c, g, or t <400> 85 davvtsatss gtvttcrsst gavttsnyas wvkdhtgggt nnragvarsg sgdkaattga 60 tdaycvwysd hwvgggtktv gggggsgggg sggggsgggg sdvsggvass stctvsgtdy 120 gvnwvrsgkg wgvwgdgtdy nsaksrsvtk dnsksvkmns sgdsaryycv tgdywggttt 180 vsstttarta tassracraa ggavhtrgda cdywaagtcg vsvtyckrgr kkykmrvttd 240 gcscrggcrv ksrsadaayk gnynngrryd vdkrrgrdmg gkrrkngynk dkmaaysgmk 300 grrrgkghdg ygstatkdty dahmar 326 <210> 86 <211> 304 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (41)..(42) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (123)..(123) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (141)..(141) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (152)..(152) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (159)..(159) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (240)..(240) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (242)..(243) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (264)..(264) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (267)..(267) <223> n is a, c, g, or t <400> 86 davvtsatss gtvttcrsst gavttsnyas wvkdhtgggt nnragvarsg sgdkaattga 60 tdaycvwysd hwvgggtktv gggggsgggg sggggsgggg sdvsggvass stctvsgtdy 120 gvnwvrsgkg wgvwgdgtdy nsaksrsvtk dnsksvkmns sgdsaryycv tgdywggttt 180 vssskygccd ywaagtcgvs vtyckrgrkk ykmrvttdgc scrggcrvks rsadaaykgn 240 ynngrrydvd krrgrdmggk rrkngynkdk maaysgmkgr rrgkghdgyg statkdtyda 300 hmar 304 <210> 87 <211> 8892 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 87 caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac 60 attcaaatat gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa 120 aaaggaagag tatgagtatt caacatttcc gtgtcgccct tattcccttt tttgcggcat 180 tttgccttcc tgtttttgct cacccagaaa cgctggtgaa agtaaaagat gctgaagatc 240 agttgggtgc acgagtgggt tacatcgaac tggatctcaa cagcggtaag atccttgaga 300 gttttcgccc cgaagaacgt tttccaatga tgagcacttt taaagttctg ctatgtggcg 360 cggtattatc ccgtattgac gccgggcaag agcaactcgg tcgccgcata cactattctc 420 agaatgactt ggttgagtac tcaccagtca cagaaaagca tcttacggat ggcatgacag 480 taagagaatt atgcagtgct gccataacca tgagtgataa cactgcggcc aacttacttc 540 tgacaacgat cggaggaccg aaggagctaa ccgctttttt gcacaacatg ggggatcatg 600 taactcgcct tgatcgttgg gaaccggagc tgaatgaagc cataccaaac gacgagcgtg 660 acaccacgat gcctgtagca atggcaacaa cgttgcgcaa actattaact ggcgaactac 720 ttactctagc ttcccggcaa caattaatag actggatgga ggcggataaa gttgcaggac 780 cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct ggtttattgc tgataaatct ggagccggtg 840 agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga tggtaagccc tcccgtatcg 900 tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga acgaaataga cagatcgctg 960 agataggtgc ctcactgatt aagcattggt aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac 1020 tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg 1080 ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg 1140 tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc 1200 aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc 1260 tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt 1320 agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc 1380 taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact 1440 caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac 1500 agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag 1560 aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg 1620 gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg 1680 tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga 1740 gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt 1800 ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct 1860 ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg 1920 aggaagcgga agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt 1980 aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta 2040 atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta 2100 tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt 2160 acgccaagcg cgcaattaac cctcactaaa gggaacaaaa gctggagctg caagcttaat 2220 gtagtcttat gcaatactct tgtagtcttg caacatggta acgatgagtt agcaacatgc 2280 cttacaagga gagaaaaagc accgtgcatg ccgattggtg gaagtaaggt ggtacgatcg 2340 tgccttatta ggaaggcaac agacgggtct gacatggatt ggacgaacca ctgaattgcc 2400 gcattgcaga gatattgtat ttaagtgcct agctcgatac aataaacggg tctctctggt 2460 tagaccagat ctgagcctgg gagctctctg gctaactagg gaacccactg cttaagcctc 2520 aataaagctt gccttgagtg cttcaagtag tgtgtgcccg tctgttgtgt gactctggta 2580 actagagatc cctcagaccc ttttagtcag tgtggaaaat ctctagcagt ggcgcccgaa 2640 cagggacctg aaagcgaaag ggaaaccaga gctctctcga cgcaggactc ggcttgctga 2700 agcgcgcacg gcaagaggcg aggggcggcg actggtgagt acgccaaaaa ttttgactag 2760 cggaggctag aaggagagag atgggtgcga gagcgtcagt attaagcggg ggagaattag 2820 atcgcgatgg gaaaaaattc ggttaaggcc agggggaaag aaaaaatata aattaaaaca 2880 tatagtatgg gcaagcaggg agctagaacg attcgcagtt aatcctggcc tgttagaaac 2940 atcagaaggc tgtagacaaa tactgggaca gctacaacca tcccttcaga caggatcaga 3000 agaacttaga tcattatata atacagtagc aaccctctat tgtgtgcatc aaaggataga 3060 gataaaagac accaaggaag ctttagacaa gatagaggaa gagcaaaaca aaagtaagac 3120 caccgcacag caagcggccg ctgatcttca gacctggagg aggagatatg agggacaatt 3180 ggagaagtga attatataaa tataaagtag taaaaattga accattagga gtagcaccca 3240 ccaaggcaaa gagaagagtg gtgcagagag aaaaaagagc agtgggaata ggagctttgt 3300 tccttgggtt cttgggagca gcaggaagca ctatgggcgc agcctcaatg acgctgacgg 3360 tacaggccag acaattattg tctggtatag tgcagcagca gaacaatttg ctgagggcta 3420 ttgaggcgca acagcatctg ttgcaactca cagtctgggg catcaagcag ctccaggcaa 3480 gaatcctggc tgtggaaaga tacctaaagg atcaacagct cctggggatt tggggttgct 3540 ctggaaaact catttgcacc actgctgtgc cttggaatgc tagttggagt aataaatctc 3600 tggaacagat tggaatcaca cgacctggat ggagtgggac agagaaatta acaattacac 3660 aagcttaata cactccttaa ttgaagaatc gcaaaaccag caagaaaaga atgaacaaga 3720 attattggaa ttagataaat gggcaagttt gtggaattgg tttaacataa caaattggct 3780 gtggtatata aaattattca taatgatagt aggaggcttg gtaggtttaa gaatagtttt 3840 tgctgtactt tctatagtga atagagttag gcagggatat tcaccattat cgtttcagac 3900 ccacctccca accccgaggg gacccgacag gcccgaagga atagaagaag aaggtggaga 3960 gagagacaga gacagatcca ttcgattagt gaacggatct cgacggttaa cttttaaaag 4020 aaaagggggg attggggggt acagtgcagg ggaaagaata gtagacataa tagcaacaga 4080 catacaaact aaagaattac aaaaacaaat tacaaaaatt caaaatttta tcgagctttg 4140 caaagatgga taaagtttta aacagagagg aatctttgca gctaatggac cttctaggtc 4200 ttgaaaggag tgcctcgtga ggctccggtg cccgtcagtg ggcagagcgc acatcgccca 4260 cagtccccga gaagttgggg ggaggggtcg gcaattgaac cggtgcctag agaaggtggc 4320 gcggggtaaa ctgggaaagt gatgtcgtgt actggctccg cctttttccc gagggtgggg 4380 gagaaccgta tataagtgca gtagtcgccg tgaacgttct ttttcgcaac gggtttgccg 4440 ccagaacaca ggtaagtgcc gtgtgtggtt cccgcgggcc tggcctcttt acgggttatg 4500 gcccttgcgt gccttgaatt acttccacct ggctgcagta cgtgattctt gatcccgagc 4560 ttcgggttgg aagtgggtgg gagagttcga ggccttgcgc ttaaggagcc ccttcgcctc 4620 gtgcttgagt tgaggcctgg cctgggcgct ggggccgccg cgtgcgaatc tggtggcacc 4680 ttcgcgcctg tctcgctgct ttcgataagt ctctagccat ttaaaatttt tgatgacctg 4740 ctgcgacgct ttttttctgg caagatagtc ttgtaaatgc gggccaagat ctgcacactg 4800 gtatttcggt ttttggggcc gcgggcggcg acggggcccg tgcgtcccag cgcacatgtt 4860 cggcgaggcg gggcctgcga gcgcggccac cgagaatcgg acgggggtag tctcaagctg 4920 gccggcctgc tctggtgcct ggcctcgcgc cgccgtgtat cgccccgccc tgggcggcaa 4980 ggctggcccg gtcggcacca gttgcgtgag cggaaagatg gccgcttccc ggccctgctg 5040 cagggagctc aaaatggagg acgcggcgct cgggagagcg ggcgggtgag tcacccacac 5100 aaaggaaaag ggcctttccg tcctcagccg tcgcttcatg tgactccacg gagtaccggg 5160 cgccgtccag gcacctcgat tagttctcga gcttttggag tacgtcgtct ttaggttggg 5220 gggaggggtt ttatgcgatg gagtttcccc acactgagtg ggtggagact gaagttaggc 5280 cagcttggca cttgatgtaa ttctccttgg aatttgccct ttttgagttt ggatcttggt 5340 tcattctcaa gcctcagaca gtggttcaaa gtttttttct tccatttcag gtgtcgtgag 5400 gaattcggta ccgcggccgc ccggggatcc atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg 5460 ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg ccggatgttg ttatgaccca gaccccgctg 5520 tccctgcccg tttccctggg tgaccaggcg agtatctctt gccgttcctc tcagtccctg 5580 gttcacagtc agggtaacac ctatctgcgc tggtatctgc aaaaaccagg ccagagccct 5640 aaagtgctga tttataaggt ttcaaatcgg tttagcggcg tcccggatcg cttctctggg 5700 agtggatcag ggaccgactt tacactgaaa attagccgcg tggaagcaga ggatctgggc 5760 gtgtactttt gcagccagtc cactcatgtg ccgtggacct tcggcggtgg gacaaaactg 5820 gaaattaagc gtgcaggagg cggtgggagc ggaggcggtg ggtccggagg cggtgggtct 5880 ggaggcggtg ggagtggagg cggtgggtca ggcggtggtg ggagcgaagt gaaactggat 5940 gagacaggag gaggtctggt tcagccaggt cggcccatga agctgtcctg tgtggcctct 6000 ggctttacct tctccgacta ttggatgaac tgggtccgtc agtctccgga aaaaggtctg 6060 gagtgggtgg cgcagattcg gaacaagccc tacaactacg aaacttacta ctctgatagt 6120 gttaaaggcc gcttcaccat cagtcgtgat gactcaaaaa gcagcgttta cctgcaaatg 6180 aacaatctgc gtgtcgagga catgggcatc tattactgca caggctccta ctatgggatg 6240 gattattggg ggcaggggac ttcagttaca gtttcctcaa ccacgacgcc agcgccgcga 6300 ccaccaacac cggcgcccac catcgcgtcg cagcccctgt ccctgcgccc agaggcgtgc 6360 cggccagcgg cggggggcgc agtgcacacg agggggctgg acttcgcctg tgatatctac 6420 atctgggcgc ccttggccgg gacttgtggg gtccttctcc tgtcactggt tatcaccctt 6480 tactgcaaac ggggcagaaa gaaactcctg tatatattca aacaaccatt tatgagacca 6540 gtacaaacta ctcaagagga agatggctgt agctgccgat ttccagaaga agaagaagga 6600 ggatgtgaac tgagagtgaa gttcagcagg agcgcagacg cccccgcgta caagcagggc 6660 cagaaccagc tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac 6720 aagagacgtg gccgggaccc tgagatgggg ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa 6780 ggcctgtaca atgaactgca gaaagataag atggcggagg cctacagtga gattgggatg 6840 aaaggcgagc gccggagggg caaggggcac gatggccttt accagggtct cagtacagcc 6900 accaaggaca cctacgacgc ccttcacatg caggccctgc cccctcgcta agtcgacaat 6960 caacctctgg attacaaaat ttgtgaaaga ttgactggta ttcttaacta tgttgctcct 7020 tttacgctat gtggatacgc tgctttaatg cctttgtatc atgctattgc ttcccgtatg 7080 gctttcattt tctcctcctt gtataaatcc tggttgctgt ctctttatga ggagttgtgg 7140 cccgttgtca ggcaacgtgg cgtggtgtgc actgtgtttg ctgacgcaac ccccactggt 7200 tggggcattg ccaccacctg tcagctcctt tccgggactt tcgctttccc cctccctatt 7260 gccacggcgg aactcatcgc cgcctgcctt gcccgctgct ggacaggggc tcggctgttg 7320 ggcactgaca attccgtggt gttgtcgggg aagctgacgt cctttccatg gctgctcgcc 7380 tgtgttgcca cctggattct gcgcgggacg tccttctgct acgtcccttc ggccctcaat 7440 ccagcggacc ttccttcccg cggcctgctg ccggctctgc ggcctcttcc gcgtcttcgc 7500 cttcgccctc agacgagtcg gatctccctt tgggccgcct ccccgcctgg aattcgagct 7560 cggtaccttt aagaccaatg acttacaagg cagctgtaga tcttagccac tttttaaaag 7620 aaaagggggg actggaaggg ctaattcact cccaacgaag acaagatctg ctttttgctt 7680 gtactgggtc tctctggtta gaccagatct gagcctggga gctctctggc taactaggga 7740 acccactgct taagcctcaa taaagcttgc cttgagtgct tcaagtagtg tgtgcccgtc 7800 tgttgtgtga ctctggtaac tagagatccc tcagaccctt ttagtcagtg tggaaaatct 7860 ctagcagtag tagttcatgt catcttatta ttcagtattt ataacttgca aagaaatgaa 7920 tatcagagag tgagaggaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata 7980 gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca 8040 aactcatcaa tgtatcttat catgtctggc tctagctatc ccgcccctaa ctccgcccag 8100 ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc 8160 cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt 8220 ttgcgtcgag acgtacccaa ttcgccctat agtgagtcgt attacgcgcg ctcactggcc 8280 gtcgttttac aacgtcgtga ctgggaaaac cctggcgtta cccaacttaa tcgccttgca 8340 gcacatcccc ctttcgccag ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc 8400 caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg cgcgacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc 8460 gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc 8520 gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct 8580 ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa 8640 aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc 8700 cctttgacgt tggagtccac gttctttaat agtggactct tgttccaaac tggaacaaca 8760 ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat ttataaggga ttttgccgat ttcggcctat 8820 tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa tttaacgcga attttaacaa aatattaacg 8880 tttacaattt cc 8892 <210> 88 <211> 8892 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 88 caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac 60 attcaaatat gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa 120 aaaggaagag tatgagtatt caacatttcc gtgtcgccct tattcccttt tttgcggcat 180 tttgccttcc tgtttttgct cacccagaaa cgctggtgaa agtaaaagat gctgaagatc 240 agttgggtgc acgagtgggt tacatcgaac tggatctcaa cagcggtaag atccttgaga 300 gttttcgccc cgaagaacgt tttccaatga tgagcacttt taaagttctg ctatgtggcg 360 cggtattatc ccgtattgac gccgggcaag agcaactcgg tcgccgcata cactattctc 420 agaatgactt ggttgagtac tcaccagtca cagaaaagca tcttacggat ggcatgacag 480 taagagaatt atgcagtgct gccataacca tgagtgataa cactgcggcc aacttacttc 540 tgacaacgat cggaggaccg aaggagctaa ccgctttttt gcacaacatg ggggatcatg 600 taactcgcct tgatcgttgg gaaccggagc tgaatgaagc cataccaaac gacgagcgtg 660 acaccacgat gcctgtagca atggcaacaa cgttgcgcaa actattaact ggcgaactac 720 ttactctagc ttcccggcaa caattaatag actggatgga ggcggataaa gttgcaggac 780 cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct ggtttattgc tgataaatct ggagccggtg 840 agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga tggtaagccc tcccgtatcg 900 tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga acgaaataga cagatcgctg 960 agataggtgc ctcactgatt aagcattggt aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac 1020 tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg 1080 ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg 1140 tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc 1200 aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc 1260 tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt 1320 agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc 1380 taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact 1440 caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac 1500 agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag 1560 aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg 1620 gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg 1680 tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga 1740 gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt 1800 ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct 1860 ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg 1920 aggaagcgga agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt 1980 aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta 2040 atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta 2100 tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt 2160 acgccaagcg cgcaattaac cctcactaaa gggaacaaaa gctggagctg caagcttaat 2220 gtagtcttat gcaatactct tgtagtcttg caacatggta acgatgagtt agcaacatgc 2280 cttacaagga gagaaaaagc accgtgcatg ccgattggtg gaagtaaggt ggtacgatcg 2340 tgccttatta ggaaggcaac agacgggtct gacatggatt ggacgaacca ctgaattgcc 2400 gcattgcaga gatattgtat ttaagtgcct agctcgatac aataaacggg tctctctggt 2460 tagaccagat ctgagcctgg gagctctctg gctaactagg gaacccactg cttaagcctc 2520 aataaagctt gccttgagtg cttcaagtag tgtgtgcccg tctgttgtgt gactctggta 2580 actagagatc cctcagaccc ttttagtcag tgtggaaaat ctctagcagt ggcgcccgaa 2640 cagggacctg aaagcgaaag ggaaaccaga gctctctcga cgcaggactc ggcttgctga 2700 agcgcgcacg gcaagaggcg aggggcggcg actggtgagt acgccaaaaa ttttgactag 2760 cggaggctag aaggagagag atgggtgcga gagcgtcagt attaagcggg ggagaattag 2820 atcgcgatgg gaaaaaattc ggttaaggcc agggggaaag aaaaaatata aattaaaaca 2880 tatagtatgg gcaagcaggg agctagaacg attcgcagtt aatcctggcc tgttagaaac 2940 atcagaaggc tgtagacaaa tactgggaca gctacaacca tcccttcaga caggatcaga 3000 agaacttaga tcattatata atacagtagc aaccctctat tgtgtgcatc aaaggataga 3060 gataaaagac accaaggaag ctttagacaa gatagaggaa gagcaaaaca aaagtaagac 3120 caccgcacag caagcggccg ctgatcttca gacctggagg aggagatatg agggacaatt 3180 ggagaagtga attatataaa tataaagtag taaaaattga accattagga gtagcaccca 3240 ccaaggcaaa gagaagagtg gtgcagagag aaaaaagagc agtgggaata ggagctttgt 3300 tccttgggtt cttgggagca gcaggaagca ctatgggcgc agcctcaatg acgctgacgg 3360 tacaggccag acaattattg tctggtatag tgcagcagca gaacaatttg ctgagggcta 3420 ttgaggcgca acagcatctg ttgcaactca cagtctgggg catcaagcag ctccaggcaa 3480 gaatcctggc tgtggaaaga tacctaaagg atcaacagct cctggggatt tggggttgct 3540 ctggaaaact catttgcacc actgctgtgc cttggaatgc tagttggagt aataaatctc 3600 tggaacagat tggaatcaca cgacctggat ggagtgggac agagaaatta acaattacac 3660 aagcttaata cactccttaa ttgaagaatc gcaaaaccag caagaaaaga atgaacaaga 3720 attattggaa ttagataaat gggcaagttt gtggaattgg tttaacataa caaattggct 3780 gtggtatata aaattattca taatgatagt aggaggcttg gtaggtttaa gaatagtttt 3840 tgctgtactt tctatagtga atagagttag gcagggatat tcaccattat cgtttcagac 3900 ccacctccca accccgaggg gacccgacag gcccgaagga atagaagaag aaggtggaga 3960 gagagacaga gacagatcca ttcgattagt gaacggatct cgacggttaa cttttaaaag 4020 aaaagggggg attggggggt acagtgcagg ggaaagaata gtagacataa tagcaacaga 4080 catacaaact aaagaattac aaaaacaaat tacaaaaatt caaaatttta tcgagctttg 4140 caaagatgga taaagtttta aacagagagg aatctttgca gctaatggac cttctaggtc 4200 ttgaaaggag tgcctcgtga ggctccggtg cccgtcagtg ggcagagcgc acatcgccca 4260 cagtccccga gaagttgggg ggaggggtcg gcaattgaac cggtgcctag agaaggtggc 4320 gcggggtaaa ctgggaaagt gatgtcgtgt actggctccg cctttttccc gagggtgggg 4380 gagaaccgta tataagtgca gtagtcgccg tgaacgttct ttttcgcaac gggtttgccg 4440 ccagaacaca ggtaagtgcc gtgtgtggtt cccgcgggcc tggcctcttt acgggttatg 4500 gcccttgcgt gccttgaatt acttccacct ggctgcagta cgtgattctt gatcccgagc 4560 ttcgggttgg aagtgggtgg gagagttcga ggccttgcgc ttaaggagcc ccttcgcctc 4620 gtgcttgagt tgaggcctgg cctgggcgct ggggccgccg cgtgcgaatc tggtggcacc 4680 ttcgcgcctg tctcgctgct ttcgataagt ctctagccat ttaaaatttt tgatgacctg 4740 ctgcgacgct ttttttctgg caagatagtc ttgtaaatgc gggccaagat ctgcacactg 4800 gtatttcggt ttttggggcc gcgggcggcg acggggcccg tgcgtcccag cgcacatgtt 4860 cggcgaggcg gggcctgcga gcgcggccac cgagaatcgg acgggggtag tctcaagctg 4920 gccggcctgc tctggtgcct ggcctcgcgc cgccgtgtat cgccccgccc tgggcggcaa 4980 ggctggcccg gtcggcacca gttgcgtgag cggaaagatg gccgcttccc ggccctgctg 5040 cagggagctc aaaatggagg acgcggcgct cgggagagcg ggcgggtgag tcacccacac 5100 aaaggaaaag ggcctttccg tcctcagccg tcgcttcatg tgactccacg gagtaccggg 5160 cgccgtccag gcacctcgat tagttctcga gcttttggag tacgtcgtct ttaggttggg 5220 gggaggggtt ttatgcgatg gagtttcccc acactgagtg ggtggagact gaagttaggc 5280 cagcttggca cttgatgtaa ttctccttgg aatttgccct ttttgagttt ggatcttggt 5340 tcattctcaa gcctcagaca gtggttcaaa gtttttttct tccatttcag gtgtcgtgag 5400 gaattcggta ccgcggccgc ccggggatcc atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg 5460 ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg ccggacattc agatgactca gagcccgtct 5520 tccctgtccg cttcagtggg tgaccgtgtt accattacct gccgtgcttc tcagagcctg 5580 gtgcactccc agggtaacac ctatctgcgg tggtatcagc agaaaccggg caaggccccc 5640 aaagttctga tttataaggt ctctaatcgg tttagtggcg ttccgtcacg cttctcaggt 5700 agcgggtccg gaacagattt taccctgaca attagcagcc tgcaaccgga agacttcgca 5760 acctattact gccagcagtc tacccatgtg ccctggacat ttggccaggg tactaaggtt 5820 gagctgaaac gtgctggagg tggaggaagc ggaggtggag gcagcggcgg tgggggatct 5880 ggcggtgggg gaagtggcgg tgggggatca ggcggtgggg gaagcgaagt ccagctggtg 5940 gagagtggag gtggactggt gcagccagga ggcagcctgc gtctgtcctg tgccgcgtct 6000 ggctttacct tcagcgatta ctggatgaac tgggtccgtc aggcaccagg aaagggcctg 6060 gaatgggtgg cgcagattcg gaacaagcct tacaactacg agacttacta cgcggatagc 6120 gtgaagggtc gcttcaccat cagtcgtgac acatcaaaga acactgttta cctgcaaatg 6180 aacagcctgc gtgcagaaga taccgctgtc tattactgca caggctctta ttacggcatg 6240 gactactggg gccagggtac tctggtgacc gtttctagta ccacgacgcc agcgccgcga 6300 ccaccaacac cggcgcccac catcgcgtcg cagcccctgt ccctgcgccc agaggcgtgc 6360 cggccagcgg cggggggcgc agtgcacacg agggggctgg acttcgcctg tgatatctac 6420 atctgggcgc ccttggccgg gacttgtggg gtccttctcc tgtcactggt tatcaccctt 6480 tactgcaaac ggggcagaaa gaaactcctg tatatattca aacaaccatt tatgagacca 6540 gtacaaacta ctcaagagga agatggctgt agctgccgat ttccagaaga agaagaagga 6600 ggatgtgaac tgagagtgaa gttcagcagg agcgcagacg cccccgcgta caagcagggc 6660 cagaaccagc tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac 6720 aagagacgtg gccgggaccc tgagatgggg ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa 6780 ggcctgtaca atgaactgca gaaagataag atggcggagg cctacagtga gattgggatg 6840 aaaggcgagc gccggagggg caaggggcac gatggccttt accagggtct cagtacagcc 6900 accaaggaca cctacgacgc ccttcacatg caggccctgc cccctcgcta agtcgacaat 6960 caacctctgg attacaaaat ttgtgaaaga ttgactggta ttcttaacta tgttgctcct 7020 tttacgctat gtggatacgc tgctttaatg cctttgtatc atgctattgc ttcccgtatg 7080 gctttcattt tctcctcctt gtataaatcc tggttgctgt ctctttatga ggagttgtgg 7140 cccgttgtca ggcaacgtgg cgtggtgtgc actgtgtttg ctgacgcaac ccccactggt 7200 tggggcattg ccaccacctg tcagctcctt tccgggactt tcgctttccc cctccctatt 7260 gccacggcgg aactcatcgc cgcctgcctt gcccgctgct ggacaggggc tcggctgttg 7320 ggcactgaca attccgtggt gttgtcgggg aagctgacgt cctttccatg gctgctcgcc 7380 tgtgttgcca cctggattct gcgcgggacg tccttctgct acgtcccttc ggccctcaat 7440 ccagcggacc ttccttcccg cggcctgctg ccggctctgc ggcctcttcc gcgtcttcgc 7500 cttcgccctc agacgagtcg gatctccctt tgggccgcct ccccgcctgg aattcgagct 7560 cggtaccttt aagaccaatg acttacaagg cagctgtaga tcttagccac tttttaaaag 7620 aaaagggggg actggaaggg ctaattcact cccaacgaag acaagatctg ctttttgctt 7680 gtactgggtc tctctggtta gaccagatct gagcctggga gctctctggc taactaggga 7740 acccactgct taagcctcaa taaagcttgc cttgagtgct tcaagtagtg tgtgcccgtc 7800 tgttgtgtga ctctggtaac tagagatccc tcagaccctt ttagtcagtg tggaaaatct 7860 ctagcagtag tagttcatgt catcttatta ttcagtattt ataacttgca aagaaatgaa 7920 tatcagagag tgagaggaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata 7980 gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca 8040 aactcatcaa tgtatcttat catgtctggc tctagctatc ccgcccctaa ctccgcccag 8100 ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc 8160 cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt 8220 ttgcgtcgag acgtacccaa ttcgccctat agtgagtcgt attacgcgcg ctcactggcc 8280 gtcgttttac aacgtcgtga ctgggaaaac cctggcgtta cccaacttaa tcgccttgca 8340 gcacatcccc ctttcgccag ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc 8400 caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg cgcgacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc 8460 gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc 8520 gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct 8580 ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa 8640 aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc 8700 cctttgacgt tggagtccac gttctttaat agtggactct tgttccaaac tggaacaaca 8760 ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat ttataaggga ttttgccgat ttcggcctat 8820 tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa tttaacgcga attttaacaa aatattaacg 8880 tttacaattt cc 8892 <210> 89 <211> 8868 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 89 caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac 60 attcaaatat gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa 120 aaaggaagag tatgagtatt caacatttcc gtgtcgccct tattcccttt tttgcggcat 180 tttgccttcc tgtttttgct cacccagaaa cgctggtgaa agtaaaagat gctgaagatc 240 agttgggtgc acgagtgggt tacatcgaac tggatctcaa cagcggtaag atccttgaga 300 gttttcgccc cgaagaacgt tttccaatga tgagcacttt taaagttctg ctatgtggcg 360 cggtattatc ccgtattgac gccgggcaag agcaactcgg tcgccgcata cactattctc 420 agaatgactt ggttgagtac tcaccagtca cagaaaagca tcttacggat ggcatgacag 480 taagagaatt atgcagtgct gccataacca tgagtgataa cactgcggcc aacttacttc 540 tgacaacgat cggaggaccg aaggagctaa ccgctttttt gcacaacatg ggggatcatg 600 taactcgcct tgatcgttgg gaaccggagc tgaatgaagc cataccaaac gacgagcgtg 660 acaccacgat gcctgtagca atggcaacaa cgttgcgcaa actattaact ggcgaactac 720 ttactctagc ttcccggcaa caattaatag actggatgga ggcggataaa gttgcaggac 780 cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct ggtttattgc tgataaatct ggagccggtg 840 agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga tggtaagccc tcccgtatcg 900 tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga acgaaataga cagatcgctg 960 agataggtgc ctcactgatt aagcattggt aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac 1020 tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg 1080 ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg 1140 tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc 1200 aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc 1260 tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt 1320 agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc 1380 taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact 1440 caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac 1500 agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag 1560 aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg 1620 gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg 1680 tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga 1740 gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt 1800 ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct 1860 ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg 1920 aggaagcgga agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt 1980 aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta 2040 atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta 2100 tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt 2160 acgccaagcg cgcaattaac cctcactaaa gggaacaaaa gctggagctg caagcttaat 2220 gtagtcttat gcaatactct tgtagtcttg caacatggta acgatgagtt agcaacatgc 2280 cttacaagga gagaaaaagc accgtgcatg ccgattggtg gaagtaaggt ggtacgatcg 2340 tgccttatta ggaaggcaac agacgggtct gacatggatt ggacgaacca ctgaattgcc 2400 gcattgcaga gatattgtat ttaagtgcct agctcgatac aataaacggg tctctctggt 2460 tagaccagat ctgagcctgg gagctctctg gctaactagg gaacccactg cttaagcctc 2520 aataaagctt gccttgagtg cttcaagtag tgtgtgcccg tctgttgtgt gactctggta 2580 actagagatc cctcagaccc ttttagtcag tgtggaaaat ctctagcagt ggcgcccgaa 2640 cagggacctg aaagcgaaag ggaaaccaga gctctctcga cgcaggactc ggcttgctga 2700 agcgcgcacg gcaagaggcg aggggcggcg actggtgagt acgccaaaaa ttttgactag 2760 cggaggctag aaggagagag atgggtgcga gagcgtcagt attaagcggg ggagaattag 2820 atcgcgatgg gaaaaaattc ggttaaggcc agggggaaag aaaaaatata aattaaaaca 2880 tatagtatgg gcaagcaggg agctagaacg attcgcagtt aatcctggcc tgttagaaac 2940 atcagaaggc tgtagacaaa tactgggaca gctacaacca tcccttcaga caggatcaga 3000 agaacttaga tcattatata atacagtagc aaccctctat tgtgtgcatc aaaggataga 3060 gataaaagac accaaggaag ctttagacaa gatagaggaa gagcaaaaca aaagtaagac 3120 caccgcacag caagcggccg ctgatcttca gacctggagg aggagatatg agggacaatt 3180 ggagaagtga attatataaa tataaagtag taaaaattga accattagga gtagcaccca 3240 ccaaggcaaa gagaagagtg gtgcagagag aaaaaagagc agtgggaata ggagctttgt 3300 tccttgggtt cttgggagca gcaggaagca ctatgggcgc agcctcaatg acgctgacgg 3360 tacaggccag acaattattg tctggtatag tgcagcagca gaacaatttg ctgagggcta 3420 ttgaggcgca acagcatctg ttgcaactca cagtctgggg catcaagcag ctccaggcaa 3480 gaatcctggc tgtggaaaga tacctaaagg atcaacagct cctggggatt tggggttgct 3540 ctggaaaact catttgcacc actgctgtgc cttggaatgc tagttggagt aataaatctc 3600 tggaacagat tggaatcaca cgacctggat ggagtgggac agagaaatta acaattacac 3660 aagcttaata cactccttaa ttgaagaatc gcaaaaccag caagaaaaga atgaacaaga 3720 attattggaa ttagataaat gggcaagttt gtggaattgg tttaacataa caaattggct 3780 gtggtatata aaattattca taatgatagt aggaggcttg gtaggtttaa gaatagtttt 3840 tgctgtactt tctatagtga atagagttag gcagggatat tcaccattat cgtttcagac 3900 ccacctccca accccgaggg gacccgacag gcccgaagga atagaagaag aaggtggaga 3960 gagagacaga gacagatcca ttcgattagt gaacggatct cgacggttaa cttttaaaag 4020 aaaagggggg attggggggt acagtgcagg ggaaagaata gtagacataa tagcaacaga 4080 catacaaact aaagaattac aaaaacaaat tacaaaaatt caaaatttta tcgagctttg 4140 caaagatgga taaagtttta aacagagagg aatctttgca gctaatggac cttctaggtc 4200 ttgaaaggag tgcctcgtga ggctccggtg cccgtcagtg ggcagagcgc acatcgccca 4260 cagtccccga gaagttgggg ggaggggtcg gcaattgaac cggtgcctag agaaggtggc 4320 gcggggtaaa ctgggaaagt gatgtcgtgt actggctccg cctttttccc gagggtgggg 4380 gagaaccgta tataagtgca gtagtcgccg tgaacgttct ttttcgcaac gggtttgccg 4440 ccagaacaca ggtaagtgcc gtgtgtggtt cccgcgggcc tggcctcttt acgggttatg 4500 gcccttgcgt gccttgaatt acttccacct ggctgcagta cgtgattctt gatcccgagc 4560 ttcgggttgg aagtgggtgg gagagttcga ggccttgcgc ttaaggagcc ccttcgcctc 4620 gtgcttgagt tgaggcctgg cctgggcgct ggggccgccg cgtgcgaatc tggtggcacc 4680 ttcgcgcctg tctcgctgct ttcgataagt ctctagccat ttaaaatttt tgatgacctg 4740 ctgcgacgct ttttttctgg caagatagtc ttgtaaatgc gggccaagat ctgcacactg 4800 gtatttcggt ttttggggcc gcgggcggcg acggggcccg tgcgtcccag cgcacatgtt 4860 cggcgaggcg gggcctgcga gcgcggccac cgagaatcgg acgggggtag tctcaagctg 4920 gccggcctgc tctggtgcct ggcctcgcgc cgccgtgtat cgccccgccc tgggcggcaa 4980 ggctggcccg gtcggcacca gttgcgtgag cggaaagatg gccgcttccc ggccctgctg 5040 cagggagctc aaaatggagg acgcggcgct cgggagagcg ggcgggtgag tcacccacac 5100 aaaggaaaag ggcctttccg tcctcagccg tcgcttcatg tgactccacg gagtaccggg 5160 cgccgtccag gcacctcgat tagttctcga gcttttggag tacgtcgtct ttaggttggg 5220 gggaggggtt ttatgcgatg gagtttcccc acactgagtg ggtggagact gaagttaggc 5280 cagcttggca cttgatgtaa ttctccttgg aatttgccct ttttgagttt ggatcttggt 5340 tcattctcaa gcctcagaca gtggttcaaa gtttttttct tccatttcag gtgtcgtgag 5400 gaattcggta ccgcggccgc ccggggatcc atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg 5460 ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg ccggatgttg ttatgacaca gaccccgctg 5520 agtctgcccg tctccctggg cgaccaggcc tccatttctt gccgtagttc acagtccctg 5580 gtgcactcta acggaaatac ctatctgcgc tggtacctgc agaaaccggg ccagagcccc 5640 aaagtcctga tctataaggt gtccaaccgg gtgtctggtg ttccggatcg cttttcaggg 5700 agcggcagcg gcaccgactt cacactgaag atcaatcgtg ttgaagcaga ggatctgggc 5760 gtctactttt gctctcagag tacacatgtg ccatggactt tcggcggtgg gaccaaactg 5820 gaaattaaga gctccgcaga tgacgctaaa aaggacgccg cgaaaaagga tgacgccaaa 5880 aaggatgacg cgaaaaagga tggaggcgtc aaactggacg agaccggtgg gggactggtg 5940 cagccgggcg gtgcaatgaa gctgagttgt gtgacttcag gttttacctt cgggcactat 6000 tggatgaact gggttcgtca gagtccagaa aaaggtctgg agtgggtcgc tcagtttcgg 6060 aacaagcctt acaactacga aacatactac tcagatagcg ttaaagggcg cttcactatt 6120 agccgtgatg actccaagtc tagtgtgtac ctgcagatga acaatctgcg ggttgaggac 6180 acaggcatct attactgcac aggggcgtcc tatggtatgg agtatctggg gcagggaaca 6240 agcgtcaccg tctcaaccac gacgccagcg ccgcgaccac caacaccggc gcccaccatc 6300 gcgtcgcagc ccctgtccct gcgcccagag gcgtgccggc cagcggcggg gggcgcagtg 6360 cacacgaggg ggctggactt cgcctgtgat atctacatct gggcgccctt ggccgggact 6420 tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc accctttact gcaaacgggg cagaaagaaa 6480 ctcctgtata tattcaaaca accatttatg agaccagtac aaactactca agaggaagat 6540 ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc 6600 agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag cagggccaga accagctcta taacgagctc 6660 aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag 6720 atggggggaa agccgagaag gaagaaccct caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa 6780 gataagatgg cggaggccta cagtgagatt gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag 6840 gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt acagccacca aggacaccta cgacgccctt 6900 cacatgcagg ccctgccccc tcgctaagtc gacaatcaac ctctggatta caaaatttgt 6960 gaaagattga ctggtattct taactatgtt gctcctttta cgctatgtgg atacgctgct 7020 ttaatgcctt tgtatcatgc tattgcttcc cgtatggctt tcattttctc ctccttgtat 7080 aaatcctggt tgctgtctct ttatgaggag ttgtggcccg ttgtcaggca acgtggcgtg 7140 gtgtgcactg tgtttgctga cgcaaccccc actggttggg gcattgccac cacctgtcag 7200 ctcctttccg ggactttcgc tttccccctc cctattgcca cggcggaact catcgccgcc 7260 tgccttgccc gctgctggac aggggctcgg ctgttgggca ctgacaattc cgtggtgttg 7320 tcggggaagc tgacgtcctt tccatggctg ctcgcctgtg ttgccacctg gattctgcgc 7380 gggacgtcct tctgctacgt cccttcggcc ctcaatccag cggaccttcc ttcccgcggc 7440 ctgctgccgg ctctgcggcc tcttccgcgt cttcgccttc gccctcagac gagtcggatc 7500 tccctttggg ccgcctcccc gcctggaatt cgagctcggt acctttaaga ccaatgactt 7560 acaaggcagc tgtagatctt agccactttt taaaagaaaa ggggggactg gaagggctaa 7620 ttcactccca acgaagacaa gatctgcttt ttgcttgtac tgggtctctc tggttagacc 7680 agatctgagc ctgggagctc tctggctaac tagggaaccc actgcttaag cctcaataaa 7740 gcttgccttg agtgcttcaa gtagtgtgtg cccgtctgtt gtgtgactct ggtaactaga 7800 gatccctcag acccttttag tcagtgtgga aaatctctag cagtagtagt tcatgtcatc 7860 ttattattca gtatttataa cttgcaaaga aatgaatatc agagagtgag aggaacttgt 7920 ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag 7980 catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg 8040 tctggctcta gctatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg 8100 ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca 8160 gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc gtcgagacgt acccaattcg 8220 ccctatagtg agtcgtatta cgcgcgctca ctggccgtcg ttttacaacg tcgtgactgg 8280 gaaaaccctg gcgttaccca acttaatcgc cttgcagcac atcccccttt cgccagctgg 8340 cgtaatagcg aagaggcccg caccgatcgc ccttcccaac agttgcgcag cctgaatggc 8400 gaatggcgcg acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc 8460 agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc 8520 tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa atcgggggct ccctttaggg 8580 ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca 8640 cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc 8700 tttaatagtg gactcttgtt ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct 8760 tttgatttat aagggatttt gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa 8820 caaaaattta acgcgaattt taacaaaata ttaacgttta caatttcc 8868 <210> 90 <211> 8859 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 90 caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac 60 attcaaatat gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa 120 aaaggaagag tatgagtatt caacatttcc gtgtcgccct tattcccttt tttgcggcat 180 tttgccttcc tgtttttgct cacccagaaa cgctggtgaa agtaaaagat gctgaagatc 240 agttgggtgc acgagtgggt tacatcgaac tggatctcaa cagcggtaag atccttgaga 300 gttttcgccc cgaagaacgt tttccaatga tgagcacttt taaagttctg ctatgtggcg 360 cggtattatc ccgtattgac gccgggcaag agcaactcgg tcgccgcata cactattctc 420 agaatgactt ggttgagtac tcaccagtca cagaaaagca tcttacggat ggcatgacag 480 taagagaatt atgcagtgct gccataacca tgagtgataa cactgcggcc aacttacttc 540 tgacaacgat cggaggaccg aaggagctaa ccgctttttt gcacaacatg ggggatcatg 600 taactcgcct tgatcgttgg gaaccggagc tgaatgaagc cataccaaac gacgagcgtg 660 acaccacgat gcctgtagca atggcaacaa cgttgcgcaa actattaact ggcgaactac 720 ttactctagc ttcccggcaa caattaatag actggatgga ggcggataaa gttgcaggac 780 cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct ggtttattgc tgataaatct ggagccggtg 840 agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga tggtaagccc tcccgtatcg 900 tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga acgaaataga cagatcgctg 960 agataggtgc ctcactgatt aagcattggt aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac 1020 tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg 1080 ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg 1140 tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc 1200 aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc 1260 tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt 1320 agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc 1380 taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact 1440 caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac 1500 agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag 1560 aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg 1620 gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg 1680 tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga 1740 gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt 1800 ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct 1860 ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg 1920 aggaagcgga agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt 1980 aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta 2040 atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta 2100 tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt 2160 acgccaagcg cgcaattaac cctcactaaa gggaacaaaa gctggagctg caagcttaat 2220 gtagtcttat gcaatactct tgtagtcttg caacatggta acgatgagtt agcaacatgc 2280 cttacaagga gagaaaaagc accgtgcatg ccgattggtg gaagtaaggt ggtacgatcg 2340 tgccttatta ggaaggcaac agacgggtct gacatggatt ggacgaacca ctgaattgcc 2400 gcattgcaga gatattgtat ttaagtgcct agctcgatac aataaacggg tctctctggt 2460 tagaccagat ctgagcctgg gagctctctg gctaactagg gaacccactg cttaagcctc 2520 aataaagctt gccttgagtg cttcaagtag tgtgtgcccg tctgttgtgt gactctggta 2580 actagagatc cctcagaccc ttttagtcag tgtggaaaat ctctagcagt ggcgcccgaa 2640 cagggacctg aaagcgaaag ggaaaccaga gctctctcga cgcaggactc ggcttgctga 2700 agcgcgcacg gcaagaggcg aggggcggcg actggtgagt acgccaaaaa ttttgactag 2760 cggaggctag aaggagagag atgggtgcga gagcgtcagt attaagcggg ggagaattag 2820 atcgcgatgg gaaaaaattc ggttaaggcc agggggaaag aaaaaatata aattaaaaca 2880 tatagtatgg gcaagcaggg agctagaacg attcgcagtt aatcctggcc tgttagaaac 2940 atcagaaggc tgtagacaaa tactgggaca gctacaacca tcccttcaga caggatcaga 3000 agaacttaga tcattatata atacagtagc aaccctctat tgtgtgcatc aaaggataga 3060 gataaaagac accaaggaag ctttagacaa gatagaggaa gagcaaaaca aaagtaagac 3120 caccgcacag caagcggccg ctgatcttca gacctggagg aggagatatg agggacaatt 3180 ggagaagtga attatataaa tataaagtag taaaaattga accattagga gtagcaccca 3240 ccaaggcaaa gagaagagtg gtgcagagag aaaaaagagc agtgggaata ggagctttgt 3300 tccttgggtt cttgggagca gcaggaagca ctatgggcgc agcctcaatg acgctgacgg 3360 tacaggccag acaattattg tctggtatag tgcagcagca gaacaatttg ctgagggcta 3420 ttgaggcgca acagcatctg ttgcaactca cagtctgggg catcaagcag ctccaggcaa 3480 gaatcctggc tgtggaaaga tacctaaagg atcaacagct cctggggatt tggggttgct 3540 ctggaaaact catttgcacc actgctgtgc cttggaatgc tagttggagt aataaatctc 3600 tggaacagat tggaatcaca cgacctggat ggagtgggac agagaaatta acaattacac 3660 aagcttaata cactccttaa ttgaagaatc gcaaaaccag caagaaaaga atgaacaaga 3720 attattggaa ttagataaat gggcaagttt gtggaattgg tttaacataa caaattggct 3780 gtggtatata aaattattca taatgatagt aggaggcttg gtaggtttaa gaatagtttt 3840 tgctgtactt tctatagtga atagagttag gcagggatat tcaccattat cgtttcagac 3900 ccacctccca accccgaggg gacccgacag gcccgaagga atagaagaag aaggtggaga 3960 gagagacaga gacagatcca ttcgattagt gaacggatct cgacggttaa cttttaaaag 4020 aaaagggggg attggggggt acagtgcagg ggaaagaata gtagacataa tagcaacaga 4080 catacaaact aaagaattac aaaaacaaat tacaaaaatt caaaatttta tcgagctttg 4140 caaagatgga taaagtttta aacagagagg aatctttgca gctaatggac cttctaggtc 4200 ttgaaaggag tgcctcgtga ggctccggtg cccgtcagtg ggcagagcgc acatcgccca 4260 cagtccccga gaagttgggg ggaggggtcg gcaattgaac cggtgcctag agaaggtggc 4320 gcggggtaaa ctgggaaagt gatgtcgtgt actggctccg cctttttccc gagggtgggg 4380 gagaaccgta tataagtgca gtagtcgccg tgaacgttct ttttcgcaac gggtttgccg 4440 ccagaacaca ggtaagtgcc gtgtgtggtt cccgcgggcc tggcctcttt acgggttatg 4500 gcccttgcgt gccttgaatt acttccacct ggctgcagta cgtgattctt gatcccgagc 4560 ttcgggttgg aagtgggtgg gagagttcga ggccttgcgc ttaaggagcc ccttcgcctc 4620 gtgcttgagt tgaggcctgg cctgggcgct ggggccgccg cgtgcgaatc tggtggcacc 4680 ttcgcgcctg tctcgctgct ttcgataagt ctctagccat ttaaaatttt tgatgacctg 4740 ctgcgacgct ttttttctgg caagatagtc ttgtaaatgc gggccaagat ctgcacactg 4800 gtatttcggt ttttggggcc gcgggcggcg acggggcccg tgcgtcccag cgcacatgtt 4860 cggcgaggcg gggcctgcga gcgcggccac cgagaatcgg acgggggtag tctcaagctg 4920 gccggcctgc tctggtgcct ggcctcgcgc cgccgtgtat cgccccgccc tgggcggcaa 4980 ggctggcccg gtcggcacca gttgcgtgag cggaaagatg gccgcttccc ggccctgctg 5040 cagggagctc aaaatggagg acgcggcgct cgggagagcg ggcgggtgag tcacccacac 5100 aaaggaaaag ggcctttccg tcctcagccg tcgcttcatg tgactccacg gagtaccggg 5160 cgccgtccag gcacctcgat tagttctcga gcttttggag tacgtcgtct ttaggttggg 5220 gggaggggtt ttatgcgatg gagtttcccc acactgagtg ggtggagact gaagttaggc 5280 cagcttggca cttgatgtaa ttctccttgg aatttgccct ttttgagttt ggatcttggt 5340 tcattctcaa gcctcagaca gtggttcaaa gtttttttct tccatttcag gtgtcgtgag 5400 gaattcggta ccgcggccgc ccggggatcc atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg 5460 ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg ccgcaggttc agctggttga gagcggaggc 5520 aatctggttc agcccggtgg tagtctgcgt ctgtcttgtg cggcgtcagg gttcactttc 5580 ggtagttttt caatgagctg ggtccgtcag gcaccaggcg gtgggctgga atgggtggca 5640 ggtctgtctg cacgtagctc cctgacccac tatgcagata gtgttaaagg gcggttcaca 5700 atttcacgcg acaacgctaa gaatagcgtc tacctgcaaa tgaactccct gcgggtcgag 5760 gataccgcag tgtattactg cgctcgccgt tcttatgact ctagtggata ctggggccat 5820 ttttatagct acatggatgt gtggggacag ggcactctgg tgaccgtttc cggaggcggt 5880 gggtctggag gcggtgggag tggaggcggt gggtcaagcg ttctgaccca gccgtcctct 5940 gtcagcgccg cgccaggcca gaaagtgaca atttcctgtt ctggaagtac ttcaaacatc 6000 ggcaacaatt atgtttcctg gtatcagcag cacccgggca aagcgcccaa gctgatgatt 6060 tatgatgtgt ctaaacgtcc aagtggtgtt cctgaccggt tcagcggttc caagtctggg 6120 aatagtgcct cactggacat ctcaggcctg caaagcgaag atgaggcgga ctattactgc 6180 gcagcttggg atgacagcct gtccgaattt ctgttcggca ccgggacaaa gctgaccgtg 6240 ctgggcacca cgacgccagc gccgcgacca ccaacaccgg cgcccaccat cgcgtcgcag 6300 cccctgtccc tgcgcccaga ggcgtgccgg ccagcggcgg ggggcgcagt gcacacgagg 6360 gggctggact tcgcctgtga tatctacatc tgggcgccct tggccgggac ttgtggggtc 6420 cttctcctgt cactggttat caccctttac tgcaaacggg gcagaaagaa actcctgtat 6480 atattcaaac aaccatttat gagaccagta caaactactc aagaggaaga tggctgtagc 6540 tgccgatttc cagaagaaga agaaggagga tgtgaactga gagtgaagtt cagcaggagc 6600 gcagacgccc ccgcgtacaa gcagggccag aaccagctct ataacgagct caatctagga 6660 cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag agacgtggcc gggaccctga gatgggggga 6720 aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg 6780 gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat 6840 ggcctttacc agggtctcag tacagccacc aaggacacct acgacgccct tcacatgcag 6900 gccctgcccc ctcgctaagt cgacaatcaa cctctggatt acaaaatttg tgaaagattg 6960 actggtattc ttaactatgt tgctcctttt acgctatgtg gatacgctgc tttaatgcct 7020 ttgtatcatg ctattgcttc ccgtatggct ttcattttct cctccttgta taaatcctgg 7080 ttgctgtctc tttatgagga gttgtggccc gttgtcaggc aacgtggcgt ggtgtgcact 7140 gtgtttgctg acgcaacccc cactggttgg ggcattgcca ccacctgtca gctcctttcc 7200 gggactttcg ctttccccct ccctattgcc acggcggaac tcatcgccgc ctgccttgcc 7260 cgctgctgga caggggctcg gctgttgggc actgacaatt ccgtggtgtt gtcggggaag 7320 ctgacgtcct ttccatggct gctcgcctgt gttgccacct ggattctgcg cgggacgtcc 7380 ttctgctacg tcccttcggc cctcaatcca gcggaccttc cttcccgcgg cctgctgccg 7440 gctctgcggc ctcttccgcg tcttcgcctt cgccctcaga cgagtcggat ctccctttgg 7500 gccgcctccc cgcctggaat tcgagctcgg tacctttaag accaatgact tacaaggcag 7560 ctgtagatct tagccacttt ttaaaagaaa aggggggact ggaagggcta attcactccc 7620 aacgaagaca agatctgctt tttgcttgta ctgggtctct ctggttagac cagatctgag 7680 cctgggagct ctctggctaa ctagggaacc cactgcttaa gcctcaataa agcttgcctt 7740 gagtgcttca agtagtgtgt gcccgtctgt tgtgtgactc tggtaactag agatccctca 7800 gaccctttta gtcagtgtgg aaaatctcta gcagtagtag ttcatgtcat cttattattc 7860 agtatttata acttgcaaag aaatgaatat cagagagtga gaggaacttg tttattgcag 7920 cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt 7980 cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctggctct 8040 agctatcccg cccctaactc cgcccagttc cgcccattct ccgccccatg gctgactaat 8100 tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc ctcggcctct gagctattcc agaagtagtg 8160 aggaggcttt tttggaggcc taggcttttg cgtcgagacg tacccaattc gccctatagt 8220 gagtcgtatt acgcgcgctc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct 8280 ggcgttaccc aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc 8340 gaagaggccc gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg cgaatggcgc 8400 gacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg cagcgtgacc 8460 gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc ctttctcgcc 8520 acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg gttccgattt 8580 agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc acgtagtggg 8640 ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt ctttaatagt 8700 ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc ttttgattta 8760 taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta acaaaaattt 8820 aacgcgaatt ttaacaaaat attaacgttt acaatttcc 8859 <210> 91 <211> 474 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 91 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Phe 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gly Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Gly Leu Ser Ala Arg Ser Ser Leu Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Ser Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Trp Gly His Phe Tyr Ser 100 105 110 Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Val Leu 130 135 140 Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln Lys Val Thr Ile 145 150 155 160 Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp 165 170 175 Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Asp Val 180 185 190 Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser 195 200 205 Gly Asn Ser Ala Ser Leu Asp Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu 210 215 220 Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Glu Phe Leu 225 230 235 240 Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Thr Thr Thr Pro Ala 245 250 255 Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser 260 265 270 Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr 275 280 285 Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala 290 295 300 Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 305 310 315 320 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 325 330 335 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 340 345 350 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 355 360 365 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 370 375 380 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 385 390 395 400 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 405 410 415 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 420 425 430 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 435 440 445 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 450 455 460 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 <210> 92 <211> 442 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 92 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Phe 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gly Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Gly Leu Ser Ala Arg Ser Ser Leu Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Ser Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Trp Gly His Phe Tyr Ser 100 105 110 Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Val Leu 130 135 140 Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln Lys Val Thr Ile 145 150 155 160 Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp 165 170 175 Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Asp Val 180 185 190 Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser 195 200 205 Gly Asn Ser Ala Ser Leu Asp Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu 210 215 220 Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Glu Phe Leu 225 230 235 240 Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Glu Ser Lys Tyr Gly 245 250 255 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala 260 265 270 Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 275 280 285 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 290 295 300 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 305 310 315 320 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 325 330 335 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 340 345 350 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 355 360 365 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 370 375 380 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 385 390 395 400 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 405 410 415 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 420 425 430 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 435 440 <210> 93 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 93 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 94 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 94 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 95 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 95 Gly Gly Ser 1 <210> 96 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 96 Gly Ser 1 <210> 97 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> any amino acid <400> 97 Xaa Ser 1 <210> 98 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 98 Leu Val Gly Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala 1 5 10 <210> 99 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 99 Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala 1 5 10 <210> 100 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 100 Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala 1 5 10 15 <210> 101 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 101 Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr 1 5 10 <210> 102 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 102 Gly Ser Ala Gly Ser Ala Ala Gly Ser Gly Glu Phe 1 5 10 <210> 103 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 103 Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro 1 5 10 <210> 104 <211> 7028 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 104 tcgagaagct tgccaccatg ggtgtcccta cccagctcct gggactgctc ctgctgtgga 60 tcaccgacgc catctgcgac gccgttgtga cccaggaatc cgctctgacc tcttctccag 120 gcgaaaccgt gactctgact tgccgtagta gcaccggggc tgtgaccaca tctaactatg 180 ccagttgggt ccaggaaaaa ccggatcacc tgtttactgg cctgattggc ggcaccaaca 240 atcgcgcacc gggtgtgccc gctcgtttca gcggttccct gattggggac aaggcagcac 300 tgactatcac cggcgcccag accgaagatg aggcgatcta tttttgcgtc ctgtggtaca 360 gcgaccattg ggtgttcggg ggaggcacca aactgacagt gctgggcgga ggaggaggtt 420 caggaggagg aggtagcggg ggaggcggtt ccgggggagg cggttctgat gtgcagctgc 480 aagaatccgg gccaggactg gttgcgcctt ctcagagtct gtcaattaca tgtactgtta 540 gtggctttct gctgaccgac tatggtgtga actgggttcg tcagagccca ggcaagggtc 600 tggagtggct gggagtgatt tggggggatg gaatcacaga ctacaatagc gcactgaaat 660 ctcggctgag tgttaccaaa gataacagca agtcccaggt cttcctgaag atgaacagcc 720 tgcaaagcgg cgactccgct cgctattact gcgttaccgg actgtttgat tattgggggc 780 aggggacaac tctgactgtt tcctccatcg agttcatgta cccccctccc tacctggaca 840 acgagagaag caacggcacc atcatccaca tcaaagaaaa gcacctgtgc cacacccaga 900 gcagccccaa gctgttctgg gccctggtgg tggtggccgg cgtgctgttc tgttacggcc 960 tgctggtcac agtggccctg tgcgtgatct ggaccaacag cagaagaaac agaggcggcc 1020 agagcgacta catgaacatg acccccagaa ggccaggcct gaccagaaag ccctaccagc 1080 cctacgcccc tgccagagac ttcgccgcct acagacccag agccaagttc agcagatccg 1140 ccgagacagc cgccaacctg caggatccca accagctgtt caacgagctg aacctgggca 1200 gacgggagga attcgacgtg ctggaaaaga agagagccag ggaccccgag atgggcggca 1260 agcagcagag aagaagaaac cctcaggaag gcgtctacaa cgccctgcag aaagacaaga 1320 tggccgaggc ctacagcgag atcggcacca agggcgagag aagaaggggc aagggccacg 1380 atggcctgtt ccagggcctg tccaccgcca ccaaggacac cttcgacgcc ctgcacatgc 1440 agaccctggc ccccagatga gtcgacggta ccgcgggccc gggatccgat aaaataaaag 1500 attttattta gtctccagaa aaagggggga atgaaagacc ccacctgtag gtttggcaag 1560 ctagcttaag taacgccatt ttgcaaggca tggaaaatac ataactgaga atagagaagt 1620 tcagatcaag gttaggaaca gagagacagc agaatatggg ccaaacagga tatctgtggt 1680 aagcagttcc tgccccggct cagggccaag aacagatggt ccccagatgc ggtcccgccc 1740 tcagcagttt ctagagaacc atcagatgtt tccagggtgc cccaaggacc tgaaaatgac 1800 cctgtgcctt atttgaacta accaatcagt tcgcttctcg cttctgttcg cgcgcttctg 1860 ctccccgagc tcaataaaag agcccacaac ccctcactcg gcgcgccagt cctccgatag 1920 actgcgtcgc ccgggtaccc gtgtatccaa taaaccctct tgcagttgca tccgacttgt 1980 ggtctcgctg ttccttggga gggtctcctc tgagtgattg actacccgtc agcgggggtc 2040 tttcatgggt aacagtttct tgaagttgga gaacaacatt ctgagggtag gagtcgaata 2100 ttaagtaatc ctgactcaat tagccactgt tttgaatcca catactccaa tactcctgaa 2160 atccatcgat ggagttcatt atggacagcg cagaaagagc tggggagaat tgtgaaattg 2220 ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg 2280 tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc 2340 gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt 2400 gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct 2460 gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga 2520 taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc 2580 cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg 2640 ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg 2700 aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt 2760 tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt 2820 gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg 2880 cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact 2940 ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt 3000 cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca gtatttggta tctgcgctct 3060 gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac 3120 cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc 3180 tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg 3240 ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta 3300 aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca 3360 atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc 3420 ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc 3480 tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc 3540 agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat 3600 taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt 3660 tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc 3720 cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag 3780 ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt 3840 tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac 3900 tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg 3960 cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat 4020 tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc 4080 gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc 4140 tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa 4200 atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg 4260 tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg 4320 cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc attattatca tgacattaac 4380 ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtctcgcg cgtttcggtg atgacggtga 4440 aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct tgtctgtaag cggatgccgg 4500 gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg gctggcttaa 4560 ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat atgcggtgtg aaataccgca 4620 cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcgccattcg ccattcaggc tgcgcaactg 4680 ttgggaaggg cgatcggtgc gggcctcttc gctattacgc cagctggcga aagggggatg 4740 tgctgcaagg cgattaagtt gggtaacgcc agggttttcc cagtcacgac gttgtaaaac 4800 gacggccagt gccacgctct cccttatgcg actcctgcat taggaagcag cccagtagta 4860 ggttgaggcc gttgagcacc gccgccgcaa ggaatggtgc atgcaaggag atggcgccca 4920 acagtccccc ggccacgggg cctgccacca tacccacgcc gaaacaagcg ctcatgagcc 4980 cgaagtggcg agcccgatct tccccatcgg tgatgtcggc gatataggcg ccagcaaccg 5040 cacctgtggc gccggtgatg ccggccacga tgcgtccggc gtagaggcga tttaaagaca 5100 ggatatcagt ggtccaggct ctagttttga ctcaacaata tcaccagctg aagcctatag 5160 agtacgagcc atagataaaa taaaagattt tatttagtct ccagaaaaag gggggaatga 5220 aagaccccac ctgtaggttt ggcaagctag cttaagtaac gccattttgc aaggcatgga 5280 aaatacataa ctgagaatag agaagttcag atcaaggtta ggaacagaga gacagcagaa 5340 tatgggccaa acaggatatc tgtggtaagc agttcctgcc ccggctcagg gccaagaaca 5400 gatggtcccc agatgcggtc ccgccctcag cagtttctag agaaccatca gatgtttcca 5460 gggtgcccca aggacctgaa aatgaccctg tgccttattt gaactaacca atcagttcgc 5520 ttctcgcttc tgttcgcgcg cttctgctcc ccgagctcaa taaaagagcc cacaacccct 5580 cactcggcgc gccagtcctc cgatagactg cgtcgcccgg gtacccgtat tcccaataaa 5640 gcctcttgct gtttgcatcc gaatcgtgga ctcgctgatc cttgggaggg tctcctcaga 5700 ttgattgact gcccacctcg ggggtctttc atttggaggt tccaccgaga tttggagacc 5760 cctgcctagg gaccaccgac ccccccgccg ggaggtaagc tggccagcgg tcgtttcgtg 5820 tctgtctctg tctttgtgcg tgtttgtgcc ggcatctaat gtttgcgcct gcgtctgtac 5880 tagttagcta actagctctg tatctggcgg acccgtggtg gaactgacga gttcggaaca 5940 cccggccgca accctgggag acgtcccagg gacttcgggg gccgtttttg tggcccgacc 6000 tgagtccaaa aatcccgatc gttttggact ctttggtgca ccccccttag aggagggata 6060 tgtggttctg gtaggagacg agaacctaaa acagttcccg cctccgtctg aatttttgct 6120 ttcggtttgg gaccgaagcc gcgccgcgcg tcttgtctgc tgcagcatcg ttctgtgttg 6180 tctctgtctg actgtgtttc tgtatttgtc tgagaatatg ggcccgggct agcctgttac 6240 cactccctta agtttgacct taggtcactg gaaagatgtc gagcggatcg ctcacaacca 6300 gtcggtagat gtcaagaaga gacgttgggt taccttctgc tctgcagaat ggccaacctt 6360 taacgtcgga tggccgcgag acggcacctt taaccgagac ctcatcaccc aggttaagat 6420 caaggtcttt tcacctggcc cgcatggaca cccagaccag gtcccctaca tcgtgacctg 6480 ggaagccttg gcttttgacc cccctccctg ggtcaagccc tttgtacacc ctaagcctcc 6540 gcctcctctt cctccatccg ccccgtctct cccccttgaa cctcctcgtt cgaccccgcc 6600 tcgatcctcc ctttatccag ccctcactcc ttctctaggc gcccccatat ggccatatga 6660 gatcttatat ggggcacccc cgccccttgt aaacttccct gaccctgaca tgacaagagt 6720 tactaacagc ccctctctcc aagctcactt acaggctctc tacttagtcc agcacgaagt 6780 ctggagacct ctggcggcag cctaccaaga acaactggac cgaccggtgg tacctcaccc 6840 ttaccgagtc ggcgacacag tgtgggtccg ccgacaccag actaagaacc tagaacctcg 6900 ctggaaagga ccttacacag tcctgctgac cacccccacc gccctcaaag tagacggcat 6960 cgcagcttgg atacacgccg cccacgtgaa ggctgccgac cccgggggtg gaccatcctc 7020 tagactgc 7028 <210> 105 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GCN4 mutant <400> 105 Ala Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu 1 5 10 <210> 106 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GCN4 mutant <400> 106 Ala Ala His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu 1 5 10 <210> 107 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GCN4 mutant <400> 107 Ala Ala Ala Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu 1 5 10 <210> 108 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GCN4 mutant <400> 108 Ala Ala Ala Ala Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu 1 5 10 <210> 109 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GCN4 mutant <400> 109 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Ala 1 5 10 <210> 110 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GCN4 mutant <400> 110 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Ala Ala 1 5 10 <210> 111 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GCN4 mutant <400> 111 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Ala Ala Ala 1 5 10 <210> 112 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GCN4 mutant <400> 112 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Ala Ala Ala Ala 1 5 10 <210> 113 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GCN4 mutant <400> 113 Leu Leu Pro Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 1 5 10 15 Lys Leu <210> 114 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GCN4 mutant <400> 114 Asp Leu Pro Gln Lys Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 1 5 10 15 Lys Leu <210> 115 <211> 487 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 115 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr 20 25 30 Ser Ser Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly 35 40 45 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 50 55 60 His Leu Phe Thr Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 65 70 75 80 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu 85 90 95 Thr Ile Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 100 105 110 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 115 120 125 Val Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro 145 150 155 160 Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser 165 170 175 Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro 180 185 190 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr 195 200 205 Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn 210 215 220 Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp 225 230 235 240 Ser Ala Arg Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 245 250 255 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro 260 265 270 Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro 275 280 285 Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu 290 295 300 Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys 305 310 315 320 Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly 325 330 335 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 340 345 350 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 355 360 365 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 370 375 380 Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 385 390 395 400 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 405 410 415 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 420 425 430 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 435 440 445 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 450 455 460 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 465 470 475 480 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 116 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 116 Leu Val Gly Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala 1 5 10 <210> 117 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 117 Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala 1 5 10 <210> 118 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 118 ggcgggggcg gaagt 15 <210> 119 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 119 ggtgggggag ggagcggtgg aggtggttct 30 <210> 120 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 120 Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala 1 5 10 <210> 121 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 121 gcggaagcag ccgccaaaga ggctgccgcg aaagcg 36 <210> 122 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 122 Gly Ser Ala Gly Ser Ala Ala Gly Ser Gly Glu Phe 1 5 10 <210> 123 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 123 ggttccgccg gttccgcagc cggctccgga gagttc 36 <210> 124 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 124 Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser 1 5 10 15 Leu Asp <210> 125 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 125 aaggaatccg ggagcgtgtc ttccgaacag ctggctcagt tccgcagcct ggat 54 <210> 126 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 126 Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr 1 5 10 <210> 127 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 127 gaggggaagt cctccggctc tgggtccgag tccaagtcca ca 42 <210> 128 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 128 Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro 1 5 10 <210> 129 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 129 gctcccgccc ctgccccagc tcctgccccc gcacccgcac cc 42 <210> 130 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 130 Gly Gly 1 <210> 131 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 131 ggcggg 6 <210> 132 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 132 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 133 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 133 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 134 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 134 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 1 5 10 <210> 135 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 135 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 1 5 10 <210> 136 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 136 Ala Ser Thr Lys Gly Pro 1 5 <210> 137 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 137 Thr Val Ala Ala Pro 1 5 <210> 138 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 138 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu 1 5 10 <210> 139 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 139 Leu Leu Pro Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 1 5 10 15 Lys Leu <210> 140 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 140 Asp Leu Pro Lys Gln Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 1 5 10 15 Lys Leu <210> 141 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 141 Leu Leu Pro Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 1 5 10 15 <210> 142 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 142 Leu Pro Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 1 5 10 15 <210> 143 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 143 Pro Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 1 5 10 <210> 144 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 144 Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 1 5 10 <210> 145 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 145 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 1 5 10 <210> 146 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 146 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Ala 1 5 10 <210> 147 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 147 Leu Leu Pro Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 1 5 10 15 Ala Leu <210> 148 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 148 Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Ala Leu 1 5 10 15 <210> 149 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 149 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Ala Leu 1 5 10 <210> 150 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 150 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Gly Leu 1 5 10 <210> 151 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 151 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Ala Ala 1 5 10 <210> 152 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 152 Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Gly Leu 1 5 10 15 <210> 153 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 153 Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Ala Ala 1 5 10 15 <210> 154 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 154 Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu 1 5 10 15 <210> 155 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 155 Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Ala Leu 1 5 10 15 <210> 156 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 156 Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Gly Leu 1 5 10 15 <210> 157 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 157 Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Ala Ala 1 5 10 15 <210> 158 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 158 Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Gly Gly 1 5 10 15 <210> 159 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 159 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu 1 5 10 <210> 160 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 160 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Ala Leu 1 5 10 <210> 161 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 161 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Gly Leu 1 5 10 <210> 162 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 162 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Ala Ala 1 5 10 <210> 163 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic GNC4 variant <400> 163 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Gly Gly 1 5 10 <210> 164 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic linker sequence <400> 164 Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala 1 5 10 15 <210> 165 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic hinge sequence <400> 165 Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 1 5 10 15 Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 20 25 30 Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 35 40 45 <210> 166 <211> 1 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic hinge sequence <400> 166 Asp 1 <210> 167 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic hinge sequence <400> 167 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 1 5 10 <210> 168 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic hinge sequence <400> 168 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 169 <211> 237 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 169 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu 115 120 125 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu 130 135 140 Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp 145 150 155 160 Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp 165 170 175 Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr 180 185 190 Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe 210 215 220 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 225 230 235 <210> 170 <211> 237 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 170 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu 115 120 125 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Ile 130 135 140 Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp 145 150 155 160 Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp 165 170 175 Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr 180 185 190 Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys Met Ser Ser 195 200 205 Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe 210 215 220 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser Ser 225 230 235 <210> 171 <211> 237 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 171 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu 115 120 125 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu 130 135 140 Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp 145 150 155 160 Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp 165 170 175 Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr 180 185 190 Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe 210 215 220 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 225 230 235 <210> 172 <211> 237 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 172 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu 115 120 125 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Ile 130 135 140 Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp 145 150 155 160 Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp 165 170 175 Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr 180 185 190 Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys Met Ser Ser 195 200 205 Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe 210 215 220 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser Ser 225 230 235 <210> 173 <211> 237 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 173 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu 115 120 125 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu 130 135 140 Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp 145 150 155 160 Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp 165 170 175 Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr 180 185 190 Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe 210 215 220 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 225 230 235 <210> 174 <211> 237 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 174 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu 115 120 125 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Ile 130 135 140 Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp 145 150 155 160 Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp 165 170 175 Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr 180 185 190 Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys Met Ser Ser 195 200 205 Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe 210 215 220 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser Ser 225 230 235 <210> 175 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 175 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg gtcaggctcc tcggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct ccctgacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tggatcaggc agccacccgg caagggcttg gagtggattg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cgggtgacca tttccaagga taccagtaag 660 aatcagttca gcctgaaact ttcatccgtg acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgg tgacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 176 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 176 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg gtcaggcgcc ccggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct ccataacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tgggttaggc agccacccgg caagggcttg gagtggctgg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cggcttaccg tctccaagga tacgagtaag 660 aatcaggtca gcctgaaaat gtcatccctc acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgc tcacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 177 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 177 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg gacaagcgtt ccggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct ccctcacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tggattaggc agccacccgg caagggcttg gagtggatcg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cgggtcacca tctccaagga taccagtaag 660 aatcagttca gcctgaaact gtcatccgtc acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgg taacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 178 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 178 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg gtcaggcatt ccggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct ccataacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tgggtcaggc agccacccgg caagggcttg gagtggctcg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cggttgaccg tgtccaagga taccagtaag 660 aatcaggtca gcctgaaaat gtcatccctg acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgt tgacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 179 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 179 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg atcacctgtt ccggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct cccttacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tggatcaggc agccacccgg caagggcttg gagtggatcg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cgggtcacca tctccaagga tacgagtaag 660 aatcagttca gcctgaaact ctcatccgtt acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgg taacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 180 <211> 1443 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in lab - humanized GCN4 scFv <400> 180 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccgcaggcgg tagtcaccca ggagccaagt ctcacggtga gccccggcgg taccgtcaca 120 cttacatgcg gaagctctac cggggctgtg accacaagca actacgcatc ctgggtccag 180 cagaaacccg accatctgtt tcggggcctc attggtggga caaataacag agccccgggt 240 gttcccgccc gattttctgg cagtcttctg ggaggaaagg ccgctctgac aatatctggc 300 gcacagcccg aagacgaggc cgagtactat tgcgtgttgt ggtatagcga ccactgggta 360 ttcggtggag gaacaaagct gacagtgctc ggcggtggag ggagtggtgg cggtggcagc 420 ggagggggcg gatcacaagt gcaattgcag gagagtggac ctggactcgt gaaaccatct 480 gaaacactct ccattacttg tacggtttca gggttcctgc tgacagacta tggagtaaac 540 tgggtgaggc agccacccgg caagggcttg gagtggctcg gcgtcatttg gggcgacgga 600 atcaccgact ataacccatc actcaaatct cggttgaccg tgtccaagga taccagtaag 660 aatcaggtga gcctgaaaat gtcatccctg acagctgcgg acaccgccgt gtactactgt 720 gtgacaggac tttttgacta ctggggccag gggaccctgc tgacagttag ctccaccacg 780 acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg 840 cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc 900 gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca 960 ctggttatca ccctttactg caaacggggc agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa 1020 ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca 1080 gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc 1140 gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca atctaggacg aagagaggag 1200 tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg 1260 aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac 1320 agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag 1380 ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct 1440 cgc 1443 <210> 181 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 181 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccggacgccg ttgtgaccca ggaatccgct ctgacctctt ctccaggcga aaccgtgact 120 ctgacttgcc gtagtagcac cggggctgtg accacatcta actatgccag ttgggtccag 180 gaaaaaccgg atcacctgtt tactggcctg attggcggca ccaacaatcg cgcaccgggt 240 gtgcccgctc gtttcagcgg ttccctgatt ggggacaagg cagcactgac tatcaccggc 300 gcccagaccg aagatgaggc gatctatttt tgcgtcctgt ggtacagcga ccattgggtg 360 ttcgggggag gcaccaaact gacagtgctg ggcggaggag gaggttcagg aggaggaggt 420 agcgggggag gcggttccgg gggaggcggt tctgatgtgc agctgcaaga atccgggcca 480 ggactggttg cgccttctca gagtctgtca attacatgta ctgttagtgg ctttctgctg 540 accgactatg gtgtgaactg ggttcgtcag agcccaggca agggtctgga gtggctggga 600 gtgatttggg gggatggaat cacagactac aatagcgcac tgaaatctcg gctgagtgtt 660 accaaagata acagcaagtc ccaggtcttc ctgaagatga acagcctgca aagcggcgac 720 tccgctcgct attactgcgt taccggactg tttgattatt gggggcaggg gacaactctg 780 actgtttcct ccgatatcta catctgggcg cccttggccg ggacttgtgg ggtccttctc 840 ctgtcactgg ttatcaccct ttactgcaaa cggggcagaa agaaactcct gtatatattc 900 aaacaaccat ttatgagacc agtacaaact actcaagagg aagatggctg tagctgccga 960 tttccagaag aagaagaagg aggatgtgaa ctgagagtga agttcagcag gagcgcagac 1020 gcccccgcgt acaagcaggg ccagaaccag ctctataacg agctcaatct aggacgaaga 1080 gaggagtacg atgttttgga caagagacgt ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg 1140 agaaggaaga accctcagga aggcctgtac aatgaactgc agaaagataa gatggcggag 1200 gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt 1260 taccagggtc tcagtacagc caccaaggac acctacgacg cccttcacat gcaggccctg 1320 ccccctcgc 1329 <210> 182 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 182 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccggacgccg ttgtgaccca ggaatccgct ctgacctctt ctccaggcga aaccgtgact 120 ctgacttgcc gtagtagcac cggggctgtg accacatcta actatgccag ttgggtccag 180 gaaaaaccgg atcacctgtt tactggcctg attggcggca ccaacaatcg cgcaccgggt 240 gtgcccgctc gtttcagcgg ttccctgatt ggggacaagg cagcactgac tatcaccggc 300 gcccagaccg aagatgaggc gatctatttt tgcgtcctgt ggtacagcga ccattgggtg 360 ttcgggggag gcaccaaact gacagtgctg ggcggaggag gaggttcagg aggaggaggt 420 agcgggggag gcggttccgg gggaggcggt tctgatgtgc agctgcaaga atccgggcca 480 ggactggttg cgccttctca gagtctgtca attacatgta ctgttagtgg ctttctgctg 540 accgactatg gtgtgaactg ggttcgtcag agcccaggca agggtctgga gtggctggga 600 gtgatttggg gggatggaat cacagactac aatagcgcac tgaaatctcg gctgagtgtt 660 accaaagata acagcaagtc ccaggtcttc ctgaagatga acagcctgca aagcggcgac 720 tccgctcgct attactgcgt taccggactg tttgattatt gggggcaggg gacaactctg 780 actgtttcct ccgaaagcaa gtatggccca ccttgtccaa gctgtcccga tatctacatc 840 tgggcgccct tggccgggac ttgtggggtc cttctcctgt cactggttat caccctttac 900 tgcaaacggg gcagaaagaa actcctgtat atattcaaac aaccatttat gagaccagta 960 caaactactc aagaggaaga tggctgtagc tgccgatttc cagaagaaga agaaggagga 1020 tgtgaactga gagtgaagtt cagcaggagc gcagacgccc ccgcgtacaa gcagggccag 1080 aaccagctct ataacgagct caatctagga cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag 1140 agacgtggcc gggaccctga gatgggggga aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc 1200 ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa 1260 ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc 1320 aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgc 1365 <210> 183 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic CAR construct <400> 183 atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60 ccggacgccg ttgtgaccca ggaatccgct ctgacctctt ctccaggcga aaccgtgact 120 ctgacttgcc gtagtagcac cggggctgtg accacatcta actatgccag ttgggtccag 180 gaaaaaccgg atcacctgtt tactggcctg attggcggca ccaacaatcg cgcaccgggt 240 gtgcccgctc gtttcagcgg ttccctgatt ggggacaagg cagcactgac tatcaccggc 300 gcccagaccg aagatgaggc gatctatttt tgcgtcctgt ggtacagcga ccattgggtg 360 ttcgggggag gcaccaaact gacagtgctg ggcggaggag gaggttcagg aggaggaggt 420 agcgggggag gcggttccgg gggaggcggt tctgatgtgc agctgcaaga atccgggcca 480 ggactggttg cgccttctca gagtctgtca attacatgta ctgttagtgg ctttctgctg 540 accgactatg gtgtgaactg ggttcgtcag agcccaggca agggtctgga gtggctggga 600 gtgatttggg gggatggaat cacagactac aatagcgcac tgaaatctcg gctgagtgtt 660 accaaagata acagcaagtc ccaggtcttc ctgaagatga acagcctgca aagcggcgac 720 tccgctcgct attactgcgt taccggactg tttgattatt gggggcaggg gacaactctg 780 actgtttcct ccgaaagcaa gtatggccca ccttgtccac cttgtcccga tatctacatc 840 tgggcgccct tggccgggac ttgtggggtc cttctcctgt cactggttat caccctttac 900 tgcaaacggg gcagaaagaa actcctgtat atattcaaac aaccatttat gagaccagta 960 caaactactc aagaggaaga tggctgtagc tgccgatttc cagaagaaga agaaggagga 1020 tgtgaactga gagtgaagtt cagcaggagc gcagacgccc ccgcgtacaa gcagggccag 1080 aaccagctct ataacgagct caatctagga cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag 1140 agacgtggcc gggaccctga gatgggggga aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc 1200 ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa 1260 ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc 1320 aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgc 1365 <210> 184 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequene <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 184 gacatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aaatatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gatggaactg ttaaactcct gatctaccat acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttccgtacac gttcggaggg 300 gggaccaagc ttgagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgtcgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgtcctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 185 <211> 669 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 185 gaggtgaaac tgcaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccgtc 60 acatgcactg tctcaggggt ctcattaccc gactatggtg taagctggat tcgccagcct 120 ccacgaaagg gtctggagtg gctgggagta atatggggta gtgaaaccac atactataat 180 tcagctctca aatccagact gaccatcatc aaggacaact ccaagagcca agttttctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccatttact actgtgccaa acattattac 300 tacggtggta gctatgctat ggactactgg ggccaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgact gtgccctcta gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660 aaatcttgt 669 <210> 186 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 186 gaggtgaaac tgcaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccgtc 60 acatgcactg tctcaggggt ctcattaccc gactatggtg taagctggat tcgccagcct 120 ccacgaaagg gtctggagtg gctgggagta atatggggta gtgaaaccac atactataat 180 tcagctctca aatccagact gaccatcatc aaggacaact ccaagagcca agttttctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccatttact actgtgccaa acattattac 300 tacggtggta gctatgctat ggactactgg ggccaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgact gtgccctcta gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctccagt cgccggaccg 720 tcagtcttcc tcttccctcc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccaagctcca tcgagaaaac catctccaaa 1020 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ctccatcccg ggatgagctg 1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347 <210> 187 <211> 711 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 187 atgaaaaaga atatcgcatt tcttcttgct agcatgttcg ttttttctat tgctacaaac 60 gcatacgctg acatccagat gacccagtct ccatcctccc tgtctgcatc tgtaggagac 120 agagtcacca tcacttgccg ggcaagtcag gatgtgaata ccgcggtcgc atggtatcag 180 cagaaaccag ggaaagcccc taagctcctg atctattctg catccttctt gtatagtggg 240 gtcccatcaa ggttcagtgg cagtagatct gggacagatt tcactctcac catcagcagt 300 ctgcaacctg aagattttgc aacttactac tgtcaacagc attacactac ccctccgacg 360 ttcggccaag gtaccaagct tgagatcaaa cgaactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 420 ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgtcgtgtg cctgctgaat 480 aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 540 aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 600 accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 660 catcagggcc tgtcctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 711 <210> 188 <211> 753 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 188 atgaaaaaga atatcgcatt tcttcttgca tctatgttcg ttttttctat tgctacaaac 60 gcgtacgctg aggtgcagct ggtggagtct ggaggaggct tggtccagcc tggggggtcc 120 ctgagactct cctgtgcagc ctctgggttc aatattaagg acacttacat ccactgggtc 180 cgccaggctc cagggaaggg gctggagtgg gtcgcacgta tttatcctac caatggttac 240 acacgctacg cagactccgt gaagggccga ttcaccatct ccgcagacac ttccaagaac 300 acggcgtatc ttcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggccgtgta ttactgttcg 360 agatggggcg gtgacggctt ctatgccatg gactactggg gccaaggaac cctggtcacc 420 gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 480 acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 540 acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 600 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgactg tgccctctag cagcttgggc 660 acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaaa 720 gttgagccca aatcttgtga caaaactcac aca 753 <210> 189 <211> 708 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 189 atgaaaaaga atatcgcatt tcttcttgct agcatgttcg ttttttctat tgctacaaac 60 gcatacgctc agattgtgct gagccagagc ccggcgattc tgagcgcgag cccgggcgaa 120 aaagtgacca tgacctgccg cgcgagcagc agcgtgagct atattcattg gtttcagcag 180 aaaccgggca gcagcccgaa accgtggatt tatgcgacca gcaacctggc gagcggcgtg 240 ccggtgcgct ttagcggcag cggcagcggc accagctata gcctgaccat tagccgcgtg 300 gaagcggaag atgcggcgac ctattattgc cagcagtgga ccagcaaccc gccgaccttt 360 ggcggcggca ccaagcttga gatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg tcgtgtgcct gctgaataac 480 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660 cagggcctgt cctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 708 <210> 190 <211> 756 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 190 atgaaaaaga atatcgcatt tcttcttgca tctatgttcg ttttttctat tgctacaaac 60 gcgtacgctc aggtgcagct gcagcagccg ggcgcggaac tggtgaaacc gggcgcgagc 120 gtgaaaatga gctgcaaagc gagcggctat acctttacca gctataacat gcattgggtg 180 aaacagaccc cgggccgcgg cctggaatgg attggcgcga tttatccggg caacggcgat 240 accagctata accagaaatt taaaggcaaa gcgaccctga ccgcggataa aagcagcagc 300 accgcgtata tgcagctgag cagcctgacc agcgaagata gcgcggtgta ttattgcgcg 360 cgcagcacct attatggcgg cgattggtat tttaacgtgt ggggcgcggg caccaccgtg 420 accgtgagcg cggcgagcac caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag 480 agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 600 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ctgtgccctc tagcagcttg 660 ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 720 aaagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact cacaca 756 <210> 191 <211> 708 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 191 atgagggtcc ccgctcagct cctggggctc ctgctgctct ggctcccagg tgcacgatgt 60 gacatcctgc tgacccagtc ccccgtgatc ctgtccgtgt cccctggcga gcgggtgtcc 120 ttctcctgcc gggcctccca gtccatcggc accaacatcc actggtatca gcagcggacc 180 aacggctccc ctcggctgct gatcaagtac gcctccgagt ctatctccgg catcccttcc 240 cggttctccg gctccggctc tggcaccgac ttcaccctgt ccatcaactc cgtggagtcc 300 gaggatatcg ccgactacta ctgccagcag aacaacaact ggcctaccac cttcggcgct 360 ggaaccaagc tggagctgaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttgatga 708 <210> 192 <211> 753 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 192 atgggttgga gcctcatctt gctcttcctt gtcgctgttg ctacgcgtgt ccactcccag 60 gtgcagctga agcagtccgg ccctggcctg gtgcagcctt cccagtccct gtccatcacc 120 tgcaccgtgt ccggcttctc cctgaccaac tacggcgtgc actgggtgcg ccagtccccc 180 ggcaagggcc tggagtggct gggcgtgatc tggtccggcg gcaacaccga ctacaacacc 240 cctttcacct cccggctgtc catcaacaag gacaactcca agtcccaggt gttcttcaag 300 atgaactccc tgcagtccaa cgacaccgcc atctactact gcgccagagc cctgacctac 360 tatgactacg agttcgccta ctggggccag ggcaccctgg tgaccgtgtc cgccgctagc 420 accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660 tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 720 tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc cca 753 <210> 193 <211> 678 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 193 gatatccagc tgcaggagtc cggaccaggt ctggtgaagc ccagccagtc cctgtctctg 60 acctgcagcg tcactggcta ttccatcacc agtgcatact attggaactg gatcagacag 120 ttccctggaa acaaactgga gtggatgggg tacatctctt acgacggtag aaacaactac 180 aaccccagcc tcaaaaacag gattagcatt acccgcgaca ctagtaagaa ccagtttttc 240 ctgaagctca acagtgtgac aactgaggac actgctactt attattgtgc caaggagggc 300 gactatgatg tcggcaatta ttacgctatg gactattggg gtcaggggac tagcgtgacc 360 gtcagttctg ccaggaccaa aggaccgtcc gtctttcctc tggccccttc ctctaagtcc 420 acaagcggtg ggaccgcagc actgggatgc ctggtgaagg attacttccc tgagccggtg 480 accgtgtcct ggaactccgg agctctcacc tccggtgtcc atacctttcc tgccgtcctg 540 cagtcctccg gcctgtacag cctctctagc gtcgtgactg tgccctccag ctccctgggc 600 acccaaactt atatctgcaa tgttaaccac aagccttcta ataccaaggt cgacaagaaa 660 gtggagccga agagctgt 678 <210> 194 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 194 gaaaacgtgc tcacccagag tcccgccatc atgagcgcca gtcccggcga gaaggtgacc 60 atgacctgta gggcctcttc caatgtgatc tctagctacg tgcattggta ccagcagcgt 120 agtggggcca gccctaagct ctggatttac tccacctcca acctggcctc cggggtcccc 180 gcccgtttct ctggcagtgg ctctggtacc tcttactccc tgactatcag cagcgtcgag 240 gccgaggatg ccgctacata ctactgtcag cagtacagtg gataccctct gaccttcggg 300 gctggcacca agctggagct gaagcgcgct gccgccgccc ccagtgtctt cattttcccc 360 ccttccgatg agcagctgaa gagcggtaca gcctctgttg tttgtctgct gaacaacttc 420 tatccacgcg aggccaaggt gcagtggaaa gttgataacg cgctgcagag tggcaactcc 480 caggagtctg tgacagagca ggacagtaaa gacagcacat attccctgtc tagcacactg 540 actctgtcca aggctgacta tgagaagcac aaggtgtacg cttgcgaggt cacccaccag 600 ggactgagtt ctcctgtgac caagtccttc aatcgcggcg agtgt 645 <210> 195 <211> 654 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 195 gatattcaga tgacccagag cccgagcagc ctgagcgcga gcgtgggcga tcgcgtgacc 60 attacctgcc gcgcgagcga aagcgtggat aactatggca ttagctttat gaactggttt 120 cagcagaaac cgggcaaagc gccgaaactg ctgatttatg cggcgagcaa ccagggcagc 180 ggcgtgccga gccgctttag cggcagcggc agcggcaccg attttaccct gaacattagc 240 agcctgcagc cggatgattt tgcgacctat tattgccagc agagcaaaga agtgccgtgg 300 acctttggcc agggcaccaa agtggaaatt aaacgaactg tggctgcacc atctgtcttc 360 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654 <210> 196 <211> 690 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 196 caggtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cgagcggcta tacctttacc gattataaca tgcattgggt gcgccaggcg 120 ccgggccagg gcctggaatg gattggctat atttatccgt ataacggcgg caccggctat 180 aaccagaaat ttaaaagcaa agcgaccatt accgcggatg aaagcaccaa caccgcgtat 240 atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat accgcggtgt attattgcgc gcgcggccgc 300 ccggcgatgg attattgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tcctagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtc gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtggt 660 ggcggtcacc atcaccatca tcaccaccac 690 <210> 197 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 197 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 198 <211> 222 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 198 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 <210> 199 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 199 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ser Ser Gln Asp Ile Asn Ser Asn 20 25 30 Ile Gly Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Phe Lys Gly Leu Ile 35 40 45 Tyr His Gly Thr Asn Leu Asp Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Gln Tyr Ala Gln Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 200 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 200 Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu 1 5 10 15 Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp Phe Ala 20 25 30 Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Arg Tyr Gln Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys 65 70 75 80 Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Thr 85 90 95 Ala Gly Arg Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser 115 120 125 Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140 Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160 Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190 Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 195 200 205 Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 <210> 201 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 201 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asn Gln Gly Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 202 <211> 224 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 202 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Thr Thr Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg His Gly Tyr Tyr Asp Gly Tyr His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 <210> 203 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 203 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 204 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 204 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 205 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 205 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 <210> 206 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 206 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Thr Thr Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg His Gly Tyr Tyr Asp Gly Tyr His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 207 <211> 4137 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 207 ggatctgcga tcgctccggt gcccgtcagt gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg 60 agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa cgggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa 120 actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt 180 atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac 240 agctgaagct tcgaggggct cgcatctctc cttcacgcgc ccgccgccct acctgaggcc 300 gccatccacg ccggttgagt cgcgttctgc cgcctcccgc ctgtggtgcc tcctgaactg 360 cgtccgccgt ctaggtaagt ttaaagctca ggtcgagacc gggcctttgt ccggcgctcc 420 cttggagcct acctagactc agccggctct ccacgctttg cctgaccctg cttgctcaac 480 tctacgtctt tgtttcgttt tctgttctgc gccgttacag atccaagctg tgaccggcgc 540 ctacctgaga tcaccggcga aggagggcca ccatgtacag gatgcaactc ctgtcttgca 600 ttgcactaag tcttgcactt gtcacgaatt cggacattca gctgacccag tctccagctt 660 ccctgtctac atctctggga gaaactgtca ccatccaatg tcaagcaagt gaggacattt 720 acagtggttt agcgtggtat cagcagaagc cagggaaatc tcctcagctc ctgatctatg 780 gtgcaagtga cttacaagac ggcgtcccat cacgattcag tggcagtgga tctggcacac 840 agtattctct caagatcacc agcatgcaaa ctgaagatga aggggtttat ttctgtcaac 900 agggtttaac gtatcctcgg acgttcggtg gcggcaccaa gctggaaatc aaacgaactg 960 tggctgcacc atctgtcttc atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg 1020 cctctgtcgt gtgcctgctg aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg 1080 tggataacgc cctccaatcg ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg 1140 acagcaccta cagcctcagc agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca 1200 aagtctacgc ctgcgaagtc acccatcagg gcctgtcctc gcccgtcaca aagagcttca 1260 acaggggaga gtgttgataa gtgctagctg gccagacatg ataagataca ttgatgagtt 1320 tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc 1380 tattgcttta tttgtaacca ttataagctg caataaacaa gttaacaaca acaattgcat 1440 tcattttatg tttcaggttc agggggaggt gtgggaggtt ttttaaagca agtaaaacct 1500 ctacaaatgt ggtatggaat taattctaaa atacagcata gcaaaacttt aacctccaaa 1560 tcaagcctct acttgaatcc ttttctgagg gatgaataag gcataggcat caggggctgt 1620 tgccaatgtg cattagctgt ttgcagcctc accttctttc atggagttta agatatagtg 1680 tattttccca aggtttgaac tagctcttca tttctttatg ttttaaatgc actgacctcc 1740 cacattccct ttttagtaaa atattcagaa ataatttaaa tacatcattg caatgaaaat 1800 aaatgttttt tattaggcag aatccagatg ctcaaggccc ttcataatat cccccagttt 1860 agtagttgga cttagggaac aaaggaacct ttaatagaaa ttggacagca agaaagcgag 1920 cttctagctt atcctcagtc ctgctcctct gccacaaagt gcacgcagtt gccggccggg 1980 tcgcgcaggg cgaactcccg cccccacggc tgctcgccga tctcggtcat ggccggcccg 2040 gaggcgtccc ggaagttcgt ggacacgacc tccgaccact cggcgtacag ctcgtccagg 2100 ccgcgcaccc acacccaggc cagggtgttg tccggcacca cctggtcctg gaccgcgctg 2160 atgaacaggg tcacgtcgtc ccggaccaca ccggcgaagt cgtcctccac gaagtcccgg 2220 gagaacccga gccggtcggt ccagaactcg accgctccgg cgacgtcgcg cgcggtgagc 2280 accggaacgg cactggtcaa cttggccatg atggctcctc ctgtcaggag aggaaagaga 2340 agaaggttag tacaattgct atagtgagtt gtattatact atgcagatat actatgccaa 2400 tgattaattg tcaaactagg gctgcagggt tcatagtgcc acttttcctg cactgcccca 2460 tctcctgccc accctttccc aggcatagac agtcagtgac ttaccaaact cacaggaggg 2520 agaaggcaga agcttgagac agacccgcgg gaccgccgaa ctgcgagggg acgtggctag 2580 ggcggcttct tttatggtgc gccggccctc ggaggcaggg cgctcgggga ggcctagcgg 2640 ccaatctgcg gtggcaggag gcggggccga aggccgtgcc tgaccaatcc ggagcacata 2700 ggagtctcag ccccccgccc caaagcaagg ggaagtcacg cgcctgtagc gccagcgtgt 2760 tgtgaaatgg gggcttgggg gggttggggc cctgactagt caaaacaaac tcccattgac 2820 gtcaatgggg tggagacttg gaaatccccg tgagtcaaac cgctatccac gcccattgat 2880 gtactgccaa aaccgcatca tcatggtaat agcgatgact aatacgtaga tgtactgcca 2940 agtaggaaag tcccataagg tcatgtactg ggcataatgc caggcgggcc atttaccgtc 3000 attgacgtca atagggggcg tacttggcat atgatacact tgatgtactg ccaagtgggc 3060 agtttaccgt aaatactcca cccattgacg tcaatggaaa gtccctattg gcgttactat 3120 gggaacatac gtcattattg acgtcaatgg gcgggggtcg ttgggcggtc agccaggcgg 3180 gccatttacc gtaagttatg taacgcctgc aggttaatta agaacatgtg agcaaaaggc 3240 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc 3300 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga 3360 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc 3420 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat 3480 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg 3540 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc 3600 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga 3660 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact 3720 agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt 3780 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag 3840 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg 3900 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatggc tagttaatta 3960 acatttaaat cagcggccgc aataaaatat ctttattttc attacatctg tgtgttggtt 4020 ttttgtgtga atcgtaacta acatacgctc tccatcaaaa caaaacgaaa caaaacaaac 4080 tagcaaaata ggctgtcccc agtgcaagtg caggtgccag aacatttctc tatcgaa 4137 <210> 208 <211> 4152 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 208 ggatctgcga tcgctccggt gcccgtcagt gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg 60 agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa cgggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa 120 actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt 180 atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac 240 agctgaagct tcgaggggct cgcatctctc cttcacgcgc ccgccgccct acctgaggcc 300 gccatccacg ccggttgagt cgcgttctgc cgcctcccgc ctgtggtgcc tcctgaactg 360 cgtccgccgt ctaggtaagt ttaaagctca ggtcgagacc gggcctttgt ccggcgctcc 420 cttggagcct acctagactc agccggctct ccacgctttg cctgaccctg cttgctcaac 480 tctacgtctt tgtttcgttt tctgttctgc gccgttacag atccaagctg tgaccggcgc 540 ctacctgaga tcaccggcga aggagggcca ccatgtacag gatgcaactc ctgtcttgca 600 ttgcactaag tcttgcactt gtcacgaatt cgcaagtgca gctggtgcag tctggggctg 660 agcttgtgag acctgggacc tctgtgaagt tatcttgcaa agtttctggc gataccatta 720 cattttacta catgcacttt gtgaagcaaa ggcctggaca gggtctggaa tggataggaa 780 ggattgatcc tgaggatgaa agtactaaat attctgagaa gttcaaaaac aaggcgacac 840 tcactgcaga tacatcttcc aacacagcct acctgaagct cagcagcctg acctctgagg 900 acactgcaac ctatttttgt atctacggag gatactactt tgattactgg ggcccaggaa 960 ccatggtcac cgtgtcctca gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct 1020 cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc 1080 ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc 1140 cggctgtcct acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgact gtgccctcta 1200 gcagcttggg cacccagacc tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg 1260 tggacaagaa agttgagccc aaatcttgtt gataagtgct agctggccag acatgataag 1320 atacattgat gagtttggac aaaccacaac tagaatgcag tgaaaaaaat gctttatttg 1380 tgaaatttgt gatgctattg ctttatttgt aaccattata agctgcaata aacaagttaa 1440 caacaacaat tgcattcatt ttatgtttca ggttcagggg gaggtgtggg aggtttttta 1500 aagcaagtaa aacctctaca aatgtggtat ggaattaatt ctaaaataca gcatagcaaa 1560 actttaacct ccaaatcaag cctctacttg aatccttttc tgagggatga ataaggcata 1620 ggcatcaggg gctgttgcca atgtgcatta gctgtttgca gcctcacctt ctttcatgga 1680 gtttaagata tagtgtattt tcccaaggtt tgaactagct cttcatttct ttatgtttta 1740 aatgcactga cctcccacat tcccttttta gtaaaatatt cagaaataat ttaaatacat 1800 cattgcaatg aaaataaatg ttttttatta ggcagaatcc agatgctcaa ggcccttcat 1860 aatatccccc agtttagtag ttggacttag ggaacaaagg aacctttaat agaaattgga 1920 cagcaagaaa gcgagcttct agcttatcct cagtcctgct cctctgccac aaagtgcacg 1980 cagttgccgg ccgggtcgcg cagggcgaac tcccgccccc acggctgctc gccgatctcg 2040 gtcatggccg gcccggaggc gtcccggaag ttcgtggaca cgacctccga ccactcggcg 2100 tacagctcgt ccaggccgcg cacccacacc caggccaggg tgttgtccgg caccacctgg 2160 tcctggaccg cgctgatgaa cagggtcacg tcgtcccgga ccacaccggc gaagtcgtcc 2220 tccacgaagt cccgggagaa cccgagccgg tcggtccaga actcgaccgc tccggcgacg 2280 tcgcgcgcgg tgagcaccgg aacggcactg gtcaacttgg ccatgatggc tcctcctgtc 2340 aggagaggaa agagaagaag gttagtacaa ttgctatagt gagttgtatt atactatgca 2400 gatatactat gccaatgatt aattgtcaaa ctagggctgc agggttcata gtgccacttt 2460 tcctgcactg ccccatctcc tgcccaccct ttcccaggca tagacagtca gtgacttacc 2520 aaactcacag gagggagaag gcagaagctt gagacagacc cgcgggaccg ccgaactgcg 2580 aggggacgtg gctagggcgg cttcttttat ggtgcgccgg ccctcggagg cagggcgctc 2640 ggggaggcct agcggccaat ctgcggtggc aggaggcggg gccgaaggcc gtgcctgacc 2700 aatccggagc acataggagt ctcagccccc cgccccaaag caaggggaag tcacgcgcct 2760 gtagcgccag cgtgttgtga aatgggggct tgggggggtt ggggccctga ctagtcaaaa 2820 caaactccca ttgacgtcaa tggggtggag acttggaaat ccccgtgagt caaaccgcta 2880 tccacgccca ttgatgtact gccaaaaccg catcatcatg gtaatagcga tgactaatac 2940 gtagatgtac tgccaagtag gaaagtccca taaggtcatg tactgggcat aatgccaggc 3000 gggccattta ccgtcattga cgtcaatagg gggcgtactt ggcatatgat acacttgatg 3060 tactgccaag tgggcagttt accgtaaata ctccacccat tgacgtcaat ggaaagtccc 3120 tattggcgtt actatgggaa catacgtcat tattgacgtc aatgggcggg ggtcgttggg 3180 cggtcagcca ggcgggccat ttaccgtaag ttatgtaacg cctgcaggtt aattaagaac 3240 atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt 3300 ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg 3360 cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc 3420 tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc 3480 gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc 3540 aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac 3600 tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt 3660 aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct 3720 aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc 3780 ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt 3840 ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg 3900 atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc 3960 atggctagtt aattaacatt taaatcagcg gccgcaataa aatatcttta ttttcattac 4020 atctgtgtgt tggttttttg tgtgaatcgt aactaacata cgctctccat caaaacaaaa 4080 cgaaacaaaa caaactagca aaataggctg tccccagtgc aagtgcaggt gccagaacat 4140 ttctctatcg aa 4152 <210> 209 <211> 681 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 209 caggtacagc tgcagcagtc aggtccagga ctggtgaagc cctcgcagac cctctcactc 60 acctgtgcca tctccgggga cagtgtctct agcaacagtg ctgcttggaa ctggatcagg 120 cagtccccat cgagaggcct tgagtggctg ggaaggacat actacaggtc caagtggtat 180 aatgattatg cagtatctgt gaaaagtcga ataaccatca acccagacac atccaagaac 240 cagttctccc tgcagctgaa ctctgtgact cccgaggaca cggctgtgta ttactgtgca 300 agagaagtga ctggggatct cgaggatgct tttgatatct ggggccaagg gacaatggtc 360 accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag 420 agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 540 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ctgtgccctc tagcagcttg 600 ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660 aaagttgagc ccaaatcttg t 681 <210> 210 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 210 gacatccaga tgacccagtc tccatcgtcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagcca gaccatttgg agctacttaa attggtatca gcagagacca 120 gggaaagccc ctaacctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcaggggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaagct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta tccctcagac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgtcgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgtcctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 211 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 211 gaggtgcaac tcgttcagag cgggggcggc gtcgtcaggc ctggcggctc cctccgtctg 60 ccttgtgctg cctccggctt taccttcgac gattacggaa tgtcctgggt tcgccaggct 120 cctggcaagg gtctggagtg ggtctctggc atcaactgga atggcggcag caccggttat 180 gctgacagtg tgaaggggag gttcacaatt agccgggaca atgccaagaa cagcctgtac 240 ctgcagatga actccctgcg tgctgaggac accgctctgt atcactgcgc gagaggcggt 300 gacgacgcct ttgacatttg gggccagggt accatggtta cagtgagctc tgctagcacc 360 aagggcccga gcgtcttccc tctggccccc agctctaaat ctacttccgg gggcaccgcc 420 gccctcgggt gcctggtgaa ggactatttc cctgagcctg tgacagtgag ctggaactcc 480 ggagcattga cttctggtgt gcacactttc cccgctgtgc tgcagtcctc tggactgtat 540 tccctgtcct ccgtggtgac tgtcccaagc tcctctctgg ggacacagac atacatctgt 600 aatgtgaacc acaaaccgtc caacactaag gtggacaaga aagtggaacc aaagtcttgt 660 <210> 212 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 212 cggatcgtta tgacacagtc cccgggcacc ctgagcgtca gccccggaga gaccgctaca 60 ctctcctgca gggcctccca gtcttttagc aacatgctcg cgtggtacca acagaagagc 120 ggacaaccac ctcgcctgct catttatggc gtttctaccc gggcagctgg ggtgcctgcg 180 cggttctctg gctccgggtc cggaactgag tttactctga caattagcaa cctccaatcc 240 gaggactttg ctgtctacta ctgtcaacaa tacggagact ggccgcgcta cacctttggc 300 caagggacta aagtggaaag aaagcgtaca gttgccgctc ctagcgtctt catcttcccc 360 ccctctgatg agcagttgaa gtccggaacc gcctccgtgg tgtgtctgct gaacaacttc 420 tacccccgcg aggctaaggt gcagtggaag gtcgataacg ccttgcaatc tgggaactct 480 caggaaagcg tgacagagca ggactccaaa gacagcacct atagcctgag ctctactctg 540 accctgagca aggctgacta cgagaaacat aaggtttacg catgcgaggt gacccaccag 600 ggactgagta gtcctgtcac caagagtttc aatcgtggcg aatgt 645 <210> 213 <211> 672 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 213 gaagtgcaac tgcagcagtc cgggactgtg ctggcccgtc ccggagcaag cgtcaagatg 60 agctgtaagg cgtctgggta caggttcacc aattactgga tccactgggt gaaacaaagg 120 ccaggtcagg gtctggaatg gattggtggc atcaacccag gaaataacta taccacttac 180 aaacgtaacc tgaaaggcaa ggccaccctg actgccgtta caagcgccag cactgcttat 240 atggatctga gcagtctcac ctccgaggat tccgctgtgt actactgcac acgcgaaggc 300 tacggtaact atggcgcctg gttcgcctac tggggccagg gcaccttggt taccgtgtcc 360 tctgcgtcca ccaagggacc aagcgtgttt cccctcgccc caagcagcaa gagcacttct 420 ggcggcactg cggctttggg ctgcctggtc aaagattact ttcccgagcc cgttaccgtg 480 agctggaact ccggagctct gacctccggc gttcatacct ttccggcggt gctgcagtcc 540 tctggcctgt attctctgtc ctctgtcgtc accgttcctt cctcctccct cggaacccaa 600 acctacatct gtaacgtgaa ccacaaaccc tctaacacaa aggttgacaa gaaggttgag 660 ccaaaatcct gt 672 <210> 214 <211> 657 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 214 gatgtggtcg tgacccagac tccactgtct ctgcctgtga gtttcggtga ccaagtcagc 60 atttcttgca gaagttctca atccctggct aactcttacg gtaacacctt tctgtcttgg 120 tatctggaca aacctggcga gagccctcag ctgctgatct acggcatcag caaccggttc 180 agcggtgtcc ccgaccgctt caccggttct ggctccggca ctgacttcac actgaagatc 240 tctactatca aaccagaaga cttgggcatg tactattgtt tggaaggcac ccaccagcca 300 tatactttcg gtggcggcac aaagctggag atcaaacgca ccgtcgccgc cccttccgtg 360 ttcatctttc ctccttccga cgaacagctg aagagtggca cagcatctgt ggtctgcctg 420 ctgaacaatt tctaccctag agaggccaag gtccagtgga aggtggacaa tgcactccag 480 tccgggaact ctcaggagag tgtgacagag caggattcta aggattccac ttactccctg 540 agctctacat tgactctgtc caaagccgac tacgaaaagc ataaggttta cgcgtgtgaa 600 gtgacccacc agggcctgtc cagccctgtg accaagagtt ttaaccgggg ggagtgc 657 <210> 215 <211> 672 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 215 caggtgcagc tgcagcagcc gggcgcggaa ctggtgaaac cgggcgcgag cgtgaaaatg 60 agctgcaaag cgagcggcta tacctttacc agctataaca tgcattgggt gaaacagacc 120 ccgggccgcg gcctggaatg gattggcgcg atttatccgg gcaacggcga taccagctat 180 aaccagaaat ttaaaggcaa agcgaccctg accgcggata aaagcagcag caccgcgtat 240 atgcagctga gcagcctgac cagcgaagat agcgcggtgt attattgcgc gcgcagcacc 300 tattatggcg gcgattggta ttttaacgtg tggggcgcgg gcaccaccgt gaccgtgagc 360 gcggcgagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420 gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg actgtgccct ctagcagctt gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660 cccaaatctt gt 672 <210> 216 <211> 639 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 216 cagattgtgc tgagccagag cccggcgatt ctgagcgcga gcccgggcga aaaagtgacc 60 atgacctgcc gcgcgagcag cagcgtgagc tatattcatt ggtttcagca gaaaccgggc 120 agcagcccga aaccgtggat ttatgcgacc agcaacctgg cgagcggcgt gccggtgcgc 180 tttagcggca gcggcagcgg caccagctat agcctgacca ttagccgcgt ggaagcggaa 240 gatgcggcga cctattattg ccagcagtgg accagcaacc cgccgacctt tggcggcggc 300 accaagcttg agatcaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gtcgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600 tcctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639 <210> 217 <211> 666 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 217 caagtgcagc tcgtgcagag tggcgcagag gtgaagaaac ctggctcaag tgttaaggtg 60 tcctgtaagg ctagtggcta cgctttttct tacagttgga tcaactgggt tcgccaagcc 120 cccgggcagg gattggaatg gatgggcagg atctttccag gcgatggaga cactgactat 180 aacggcaagt ttaagggcag ggtgacaatc acggcggaca aaagcacaag cactgcctac 240 atggagctga gctcactgcg gtcagaggac acggctgtat attactgcgc caggaacgtg 300 ttcgatggct actggctggt gtattggggg cagggcacgc ttgtgactgt tagcagcgca 360 agtactaagg gtccatcagt gttcccactg gctccatcct ctaagtcaac gtctggcggt 420 acagcagctc ttggctgtct cgttaaggac tattttccgg agcctgtgac cgtcagttgg 480 aattctggcg cactgacgtc aggagtgcat acttttcctg ccgtcctgca gagttccgga 540 ctgtacagcc tttcctccgt cgtgactgtt ccatccagca gcctgggaac ccagacctat 600 atttgtaacg tgaaccacaa gccctcaaac accaaggttg acaagaaggt ggagcctaag 660 agttgt 666 <210> 218 <211> 666 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 218 gatatagtaa tgacacaaac gcctctgtct cttcctgtca cgcccggcga accagcctcc 60 atatcctgca gatcatctaa aagtcttctc cactccaacg gaattacgta tttgtactgg 120 tatttgcaga agcctgggca gtctccccaa ctgctgattt atcagatgtc taacttggta 180 agcggggtgc ccgataggtt ttcagggtcc ggaagcggca cagatttcac gctgaagatc 240 agcagagtgg aagccgagga cgtgggcgtg tattattgcg cgcagaattt ggagctccca 300 tataccttcg gaggtgggac caaggtagaa atcaagcgaa ctgtcaggac tgtcgctgcc 360 ccgagcgttt tcatcttccc cccgtctgac gaacagctta aaagcggcac tgcaagcgtg 420 gtgtgcctgc ttaacaattt ctatcccaga gaagcgaagg ttcagtggaa ggtggataac 480 gccctgcaat ctggcaatag ccaggagtcc gttacagaac aagattcaaa agactcaacg 540 tactctctgt cctccacact gaccctgagc aaagctgatt acgaaaaaca taaggtttac 600 gcctgcgagg tcacacacca ggggctttct agtccggtga ctaaatcttt taaccgcggg 660 gaatgt 666 <210> 219 <211> 675 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 219 gaggtgcagc tggtcgagtc aggcggaggc ctggttcagc cagggagatc cctcaggctt 60 tcctgcgccg cctccggttt taccttcaac gactacgcta tgcactgggt tcgccaggct 120 cccggaaagg gacttgaatg ggtgagcact atcagctgga attctggaag cattgggtat 180 gccgactccg tcaagggccg ctttactatt tctcgggata atgcgaagaa gtctctgtac 240 ctgcagatga acagtcttcg ggcagaagac acggctcttt actattgcgc aaaagacatc 300 cagtacggaa actattatta cggaatggat gtgtggggtc agggcaccac tgtgacagta 360 agcagtgcta gtacaaaggg accttctgtg tttccacttg ctcctagctc caaatccacg 420 tccgggggca ctgccgctct gggctgcctc gttaaagatt acttcccaga gcctgtcact 480 gtgtcctgga attccggcgc ccttacgtca ggggtacaca catttcccgc ggtactccag 540 tcaagcggct tgtacagcct gtcctccgta gtgacagtgc cttcctcttc tctcggcact 600 caaacttaca tctgcaatgt caatcacaaa ccgagtaaca ctaaggttga caagaaagtt 660 gaacctaaga gctgt 675 <210> 220 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 220 gaaatcgtcc tgacgcagtc acctgcaacc ctgagtctca gccctggtga gcgggccacc 60 ctgagctgca gggccagcca gagtgtatct tcttacctgg cttggtatca gcagaaacca 120 ggacaggccc caagactgct gatctacgac gcttccaata gagccacggg catccctgcc 180 cgattttccg gatcagggtc cggtacagat ttcacgctga ccatcagctc cctcgagccc 240 gaagattttg ctgtgtatta ttgccagcag cggtccaatt ggcccattac cttcggtcag 300 gggaccaggc tggagattaa acggaccgtg gctgctccct cagttttcat ctttccccca 360 tctgatgagc agctgaagtc cgggaccgca agcgtcgtgt gcctccttaa caatttttac 420 ccacgagaag ctaaggttca gtggaaggtg gataatgctc tccagtccgg taattctcag 480 gaatcagtga ccgaacagga tagcaaagat tctacctata gcttgtcatc aactctgacc 540 ctctccaaag ccgactacga gaaacacaaa gtctacgcat gcgaggtgac tcaccaaggt 600 ctgagttcac ccgttactaa aagctttaac agaggagaat gt 642 <210> 221 <211> 672 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 221 gaagttcagc tggttgaatc tggtggtggt ctggttcagc cgggtggttc tctgcgtctg 60 tcttgcgctg cttctggttt caccttctct aacttcgaca tggcttgggt tcgtcaggct 120 ccgggtaaag gtctggtttg ggtttcttct atcaccaccg gtggtggtga cacctactac 180 gctgactctg ttaaaggtcg tttcaccatc tctcgtgaca acgctaaatc taccctgtac 240 ctgcagatgg actctctgcg ttctgaagac accgctgttt actactgcgt tcgtcacggt 300 tactacgacg gttaccacct gttcgactac tggggtcagg gtaccctggt taccgtttct 360 tctgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420 gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg actgtgccct ctagcagctt gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660 cccaaatctt gt 672 <210> 222 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 222 gacatccaga tgacccagtc tccgtcttct ctgtctgctt ctgttggtga ccgtgttacc 60 atcacctgcc gtgctaacca gggtatctct aacaacctga actggtacca gcagaaaccg 120 ggtaaagctc cgaaaccgct gatctactac acctctaacc tgcagtctgg tgttccgtct 180 cgtttctctg gttctggttc tggtaccgac tacaccctga ccatctcttc tctgcagccg 240 gaagacttcg ctacctacta ctgccagcag ttcacctctc tgccgtacac cttcggtcag 300 ggtaccaaac tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgtcgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaagac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgtcctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 223 <211> 633 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 223 gagattgtcc tgacccagtc ccctgctatt atgtctgctt cccccggcga aagagtgacc 60 atgacctgta gtgcctccag cggcgtcaac tacatgcact ggtatcagca gaagccaggg 120 acctctcccc ggagatggat ctacgacaca tcaaagctgg ccagcggagt gcctgcacgg 180 ttctccggat ctggcagtgg gactgactat agcctgacca tcagcagcat ggagccagaa 240 gatgccgcta cctactattg ccatcagagg ggctcctaca catttggcgg gggaactaag 300 ctggagatca aacgcacagt ggcagccccc agcgtcttca tttttccccc ttccgatgaa 360 cagctgaagt ccggcactgc ttctgtggtc tgtctgctga acaatttcta tcccagagag 420 gccaaggtgc agtggaaagt ggacaacgct ctgcagtccg gcaacagcca ggagagtgtg 480 accgaacagg atagtaagga cagcacatat tctctgtcta gtaccctgac actgagtaag 540 gcagattacg agaagcacaa agtgtatgcc tgcgaagtca ctcatcaggg actgtcaagc 600 cccgtgacca agagcttcaa ccggggcgag tgt 633 <210> 224 <211> 669 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 224 caggtgcagc tggtccagcc aggggcagag gtcgtcaagc caggagcatc cgtcaaactg 60 tcatgtaaaa caagcgggta tactttcacc agcaattgga tgcactgggt gaagcaggcc 120 cccggacagg gcctggagtg gatcggggaa attgacccta gtgattcata cactaactac 180 aaccagaact tccagggaaa ggccaaactg accgtggaca aaagcacctc cacagcttat 240 atggaggtga gcagcctgcg gtccgacgat actgcagtct actattgcgc cagaggctct 300 aacccttact attacgctat ggattactgg gggcagggaa caagcgtgac tgtctctagt 360 gcatcaacaa agggaccaag cgtgtttcca ctggccccct caagcaagag cacctccgga 420 gggacagccg ctctgggatg tctggtgaaa gactacttcc ccgagcctgt gactgtctct 480 tggaatagtg gcgctctgac ctccggggtg cacacatttc cagcagtcct gcagtcctct 540 ggactgtatt ctctgagttc agtggtcacc gtgcccagct cctctctggg cactcagacc 600 tacatctgca atgtcaacca taagcctagt aacacaaaag tggataagaa agtcgaacca 660 aagagctgt 669 <210> 225 <211> 672 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 225 caggtccaac tgcaggagtc aggaggaggc ttggtacagc ctgggggttc tctgagactc 60 tcctgtgcaa cttctgggtt caccttcact gattactaca tgaactgggt ccgccagcct 120 ccaggaaagg cacttgagtg gttgggtttt attggaaaca aagctaatgg ttacacaaca 180 gagtacagtg catctgtgaa gggtcggttc accatctcca gagataaatc ccaaagcatc 240 ctctatcttc aaatgaacac cctgagagct gaggacagtg ccacttatta ctgtaccaga 300 gatagggggc tacggttcta ctttgactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420 gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg actgtgccct ctagcagctt gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660 cccaaatctt gt 672 <210> 226 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 226 gacattgagc tcacccagtc tccagcaatc ctgtctgcat ctccagggga gaaggtcaca 60 atgacttgca gggccagctc aagtgtaact tacattcact ggtaccagca gaagccagga 120 tcctccccca aatcctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctgctcgc 180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagagt ggaggctgaa 240 gatgctgcca cttattactg ccaacattgg agtagtaaac caccgacgtt cggtggaggg 300 accaagctcg agatcaaaaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgtcgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgtcctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 227 <400> 227 000 <210> 228 <400> 228 000 <210> 229 <400> 229 000 <210> 230 <400> 230 000 <210> 231 <400> 231 000 <210> 232 <400> 232 000 <210> 233 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 233 gacatccagc tgacccagtc cccctcctcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60 atgagctgca agtcctccca gtccgtgctg tactccgcca accacaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaagcccgg caaggccccc aagctgctga tctactgggc cagcacccgc 180 gagagcggcg tgccctcccg gttctccggc tccggctccg gcaccgactt caccttcacc 240 atctcctccc tgcagcccga ggacatcgcc acctactact gccaccagta cctgtcctcc 300 tggaccttcg gcggcggcac caagctggag atcaagcgca cggtggccgc ccccagtgtc 360 ttcattttcc ccccttccga tgagcagctg aagagcggta cagcctctgt tgtttgtctg 420 ctgaacaact tctatccacg cgaggccaag gtgcagtgga aagttgataa cgcgctgcag 480 agtggcaact cccaggagtc tgtgacagag caggacagta aagacagcac atattccctg 540 tctagcacac tgactctgtc caaggctgac tatgagaagc acaaggtgta cgcttgcgag 600 gtcacccacc agggactgag ttctcctgtg accaagtcct tcaatcgcgg cgagtgttaa 660 <210> 234 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 234 caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggctcctc cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg cctccggcta caccttcacc tcctactggc tgcactgggt gcggcaggcc 120 cccggccagg gcctggagtg gatcggctac atcaaccccc ggaacgacta caccgagtac 180 aaccagaact tcaaggacaa ggccaccatc accgccgacg agtccaccaa caccgcctac 240 atggagctgt cctccctgcg gtccgaggac accgccttct acttctgcgc ccggcgggac 300 atcaccacct tctactgggg ccagggcacc actgtgaccg tgtcctccgc caggaccaaa 360 ggaccgtccg tctttcctct ggccccttcc tctaagtcca caagcggtgg gaccgcagca 420 ctgggatgcc tggtgaagga ttacttccct gagccggtga ccgtgtcctg gaactccgga 480 gctctcacct ccggtgtcca tacctttcct gccgtcctgc agtcctccgg cctgtacagc 540 ctctctagcg tcgtgactgt gccctccagc tccctgggca cccaaactta tatctgcaat 600 gttaaccaca agccttctaa taccaaggtc gacaagaaag tggagccgaa gagctgttaa 660 <210> 235 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 235 caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggctcctc cgtgaaggtg 60 tcctgcaagg cctccggcta caccttcacc tcctactggc tgcactgggt gcggcaggcc 120 cccggccagg gcctggagtg gatcggctac atcaaccccc ggaacgacta caccgagtac 180 aaccagaact tcaaggacaa ggccaccatc accgccgacg agtccaccaa caccgcctac 240 atggagctgt cctccctgcg gtccgaggac accgccttct acttctgcgc ccggcgggac 300 atcaccacct tctactgggg ccagggcacc actgtgaccg tgtcctccgc caggaccaaa 360 ggaccgtccg tctttcctct ggccccttcc tctaagtcca caagcggtgg gaccgcagca 420 ctgggatgcc tggtgaagga ttacttccct gagccggtga ccgtgtcctg gaactccgga 480 gctctcacct ccggtgtcca tacctttcct gccgtcctgc agtcctccgg cctgtacagc 540 ctctctagcg tcgtgactgt gccctccagc tccctgggca cccaaactta tatctgcaat 600 gttaaccaca agccttctaa taccaaggtc gacaagaaag tggagccgaa gagctgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctccagtcg ccggaccgtc agtcttcctc 720 ttccctccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960 gtctccaaca aaggcctccc aagctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020 ccccgagaac cacaggtgta caccctgcct ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1080 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320 ctgtctccgg gtaaataa 1338 <210> 236 <211> 1362 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 236 caggtacagc tgcagcagtc aggtccagga ctggtgaagc cctcgcagac cctctcactc 60 acctgtgcca tctccgggga cagtgtctct agcaacagtg ctgcttggaa ctggatcagg 120 cagtccccat cgagaggcct tgagtggctg ggaaggacat actacaggtc caagtggtat 180 aatgattatg cagtatctgt gaaaagtcga ataaccatca acccagacac atccaagaac 240 cagttctccc tgcagctgaa ctctgtgact cccgaggaca cggctgtgta ttactgtgca 300 agagaagtga ctggggatct cgaggatgct tttgatatct ggggccaagg gacaatggtc 360 accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag 420 agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 540 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ctgtgccctc tagcagcttg 600 ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660 aaagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctcca 720 gtcgccggac cgtcagtctt cctcttccct ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780 cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900 cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960 aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaaggcc tcccaagctc catcgagaaa 1020 accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcctccatcc 1080 cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140 agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200 cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1260 agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320 cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat aa 1362 <210> 237 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 237 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Leu Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Arg Phe Leu Thr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Met Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 238 <211> 224 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 238 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Ser 20 25 30 Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Pro Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Asn Gly Asn Pro Trp Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 <210> 239 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 239 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Thr Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg Thr 100 105 110 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 115 120 125 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135 140 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 145 150 155 160 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 180 185 190 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 195 200 205 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 240 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 240 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Ser Phe Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Thr Tyr Ser Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu His Ile Asn Asp Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Gly Tyr Asp Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Arg Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 <210> 241 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 241 Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Asp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Lys Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 242 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 242 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Asp Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asn Trp Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Arg Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 <210> 243 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 243 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 244 <211> 222 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 244 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 <210> 245 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 245 Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Lys 1 5 10 <210> 246 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 246 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly 20 <210> 247 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 247 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 248 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 248 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 249 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 249 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 250 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 250 Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu 1 5 10 15 Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp Phe Ala 20 25 30 Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 35 40 45 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Arg Tyr Gln Pro Ser Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys 65 70 75 80 Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Thr 85 90 95 Ala Gly Arg Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser <210> 251 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 251 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asn Gln Gly Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 252 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 252 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Thr Thr Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg His Gly Tyr Tyr Asp Gly Tyr His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 253 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 253 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 254 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 254 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 255 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 255 Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Asn Val Ile Ser Ser 20 25 30 Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu 65 70 75 80 Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 256 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 256 Asp Ile Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Ala 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Asp Val Gly Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 257 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 257 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Leu Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Arg Phe Leu Thr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Met Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys 100 105 110 <210> 258 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 258 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Ser 20 25 30 Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Pro Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Asn Gly Asn Pro Trp Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 259 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 259 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 260 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 260 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 261 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 261 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Thr Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 262 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 262 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Ser Phe Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Thr Tyr Ser Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu His Ile Asn Asp Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Gly Tyr Asp Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 263 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 263 Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Asp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Lys Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 264 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 264 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Asp Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asn Trp Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 265 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 265 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Trp Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Gln 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 266 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 266 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala 50 55 60 Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80 Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Thr Gly Asp Leu Glu Asp Ala Phe Asp 100 105 110 Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 267 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 267 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ala Asn His Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln 85 90 95 Tyr Leu Ser Ser Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 268 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - antibody fragment <400> 268 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Asn Asp Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Asn Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Ile Thr Thr Phe Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 269 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif of GNC4 peptide derivatives <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Any amino acid or absent <220> <221> MOD_RES <222> (14)..(15) <223> Any amino acid or absent <400> 269 Xaa Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 270 <211> 475 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 270 Met Gly Val Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Ile Thr 1 5 10 15 Asp Ala Ile Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser 20 25 30 Thr Ser Leu Gly Glu Thr Val Thr Ile Gln Cys Gln Ala Ser Glu Asp 35 40 45 Ile Tyr Ser Gly Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro 50 55 60 Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asp Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Thr 85 90 95 Ser Met Gln Thr Glu Asp Glu Gly Val Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Leu 100 105 110 Thr Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 130 135 140 Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val 145 150 155 160 Lys Leu Ser Cys Lys Val Ser Gly Asp Thr Ile Thr Phe Tyr Tyr Met 165 170 175 His Phe Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg 180 185 190 Ile Asp Pro Glu Asp Glu Ser Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe Lys Asn 195 200 205 Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Lys 210 215 220 Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ile Tyr 225 230 235 240 Gly Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val 245 250 255 Ser Ser Ile Glu Phe Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Arg 260 265 270 Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Ile Lys Glu Lys His Leu Cys His Thr 275 280 285 Gln Ser Ser Pro Lys Leu Phe Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val 290 295 300 Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp 305 310 315 320 Thr Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met 325 330 335 Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala 340 345 350 Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro Arg Ala Lys Phe Ser Arg 355 360 365 Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Phe Asn 370 375 380 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe Asp Val Leu Glu Lys Lys 385 390 395 400 Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn 405 410 415 Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 420 425 430 Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 435 440 445 His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Phe 450 455 460 Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg 465 470 475 <210> 271 <211> 460 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 271 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Ile Glu Phe Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu 245 250 255 Arg Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Ile Lys Glu Lys His Leu Cys His 260 265 270 Thr Gln Ser Ser Pro Lys Leu Phe Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly 275 280 285 Val Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile 290 295 300 Trp Thr Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln Ser Asp Tyr Met Asn 305 310 315 320 Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr 325 330 335 Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro Arg Ala Lys Phe Ser 340 345 350 Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Phe 355 360 365 Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe Asp Val Leu Glu Lys 370 375 380 Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg 385 390 395 400 Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 405 410 415 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 420 425 430 Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 435 440 445 Phe Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg 450 455 460 <210> 272 <211> 436 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 272 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Phe 245 250 255 Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu 260 265 270 Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr Asn Ser Arg Arg Asn Arg 275 280 285 Gly Gly Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu 290 295 300 Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala 305 310 315 320 Tyr Arg Pro Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn 325 330 335 Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 340 345 350 Glu Glu Phe Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met 355 360 365 Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn 370 375 380 Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr 385 390 395 400 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly 405 410 415 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Thr 420 425 430 Leu Ala Pro Arg 435 <210> 273 <211> 440 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 273 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Phe 245 250 255 Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu 260 265 270 Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr Lys Trp Ile Arg Lys Lys 275 280 285 Phe Pro His Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala 290 295 300 Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly 305 310 315 320 Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu 325 330 335 Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn 340 345 350 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg 355 360 365 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu 370 375 380 Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 385 390 395 400 Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 405 410 415 Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu 420 425 430 His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg 435 440 <210> 274 <211> 481 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 274 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Phe 245 250 255 Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu 260 265 270 Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr Asn Ser Arg Arg Asn Arg 275 280 285 Gly Gly Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu 290 295 300 Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala 305 310 315 320 Tyr Arg Pro Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln 325 330 335 Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser 340 345 350 Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu 355 360 365 Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp 370 375 380 Pro Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe 385 390 395 400 Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 405 410 415 Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln 420 425 430 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu 435 440 445 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr 450 455 460 Ala Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro 465 470 475 480 Arg <210> 275 <211> 436 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 275 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Phe 245 250 255 Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu 260 265 270 Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr Asn Ser Arg Arg Asn Arg 275 280 285 Gly Gly Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu 290 295 300 Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala 305 310 315 320 Tyr Arg Pro Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn 325 330 335 Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 340 345 350 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met 355 360 365 Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn 370 375 380 Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr 385 390 395 400 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 405 410 415 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr 420 425 430 Leu Ala Pro Arg 435 <210> 276 <211> 440 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 276 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Phe 245 250 255 Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu 260 265 270 Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr Lys Trp Ile Arg Lys Lys 275 280 285 Phe Pro His Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala 290 295 300 Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly 305 310 315 320 Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu 325 330 335 Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 340 345 350 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg 355 360 365 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu 370 375 380 Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 385 390 395 400 Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 405 410 415 Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 420 425 430 His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg 435 440 <210> 277 <211> 481 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 277 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Phe 245 250 255 Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu 260 265 270 Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr Asn Ser Arg Arg Asn Arg 275 280 285 Gly Gly Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu 290 295 300 Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala 305 310 315 320 Tyr Arg Pro Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln 325 330 335 Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser 340 345 350 Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu 355 360 365 Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp 370 375 380 Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 385 390 395 400 Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 405 410 415 Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln 420 425 430 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu 435 440 445 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 450 455 460 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro 465 470 475 480 Arg <210> 278 <211> 464 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 278 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Thr Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val 245 250 255 His Pro Thr Gly Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro 260 265 270 Arg Gly Ser Val Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 275 280 285 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu 290 295 300 Ile Ile Thr Leu Ile Cys Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln Ser 305 310 315 320 Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro 325 330 335 Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro Arg 340 345 350 Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro 355 360 365 Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe Asp 370 375 380 Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln 385 390 395 400 Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys 405 410 415 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg 420 425 430 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala 435 440 445 Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg 450 455 460 <210> 279 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 279 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Thr Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val 245 250 255 His Pro Thr Gly Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro 260 265 270 Arg Gly Ser Val Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 275 280 285 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu 290 295 300 Ile Ile Thr Leu Ile Cys Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile 305 310 315 320 Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp 325 330 335 Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly 340 345 350 Tyr Glu Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn 355 360 365 Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 370 375 380 Glu Glu Phe Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met 385 390 395 400 Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn 405 410 415 Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr 420 425 430 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly 435 440 445 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Thr 450 455 460 Leu Ala Pro Arg 465 <210> 280 <211> 509 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 280 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Thr Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val 245 250 255 His Pro Thr Gly Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro 260 265 270 Arg Gly Ser Val Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 275 280 285 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu 290 295 300 Ile Ile Thr Leu Ile Cys Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln Ser 305 310 315 320 Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro 325 330 335 Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro Lys 340 345 350 Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys 355 360 365 Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro 370 375 380 Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu Arg Ala Lys Phe 385 390 395 400 Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu 405 410 415 Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe Asp Val Leu Glu 420 425 430 Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg 435 440 445 Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met 450 455 460 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 465 470 475 480 Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 485 490 495 Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg 500 505 <210> 281 <211> 464 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 281 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Thr Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val 245 250 255 His Pro Thr Gly Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro 260 265 270 Arg Gly Ser Val Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 275 280 285 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu 290 295 300 Ile Ile Thr Leu Ile Cys Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln Ser 305 310 315 320 Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro 325 330 335 Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro Arg 340 345 350 Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro 355 360 365 Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 370 375 380 Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln 385 390 395 400 Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys 405 410 415 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg 420 425 430 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 435 440 445 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg 450 455 460 <210> 282 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 282 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Thr Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val 245 250 255 His Pro Thr Gly Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro 260 265 270 Arg Gly Ser Val Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 275 280 285 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu 290 295 300 Ile Ile Thr Leu Ile Cys Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile 305 310 315 320 Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp 325 330 335 Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly 340 345 350 Tyr Glu Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn 355 360 365 Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 370 375 380 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met 385 390 395 400 Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn 405 410 415 Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr 420 425 430 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 435 440 445 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr 450 455 460 Leu Ala Pro Arg 465 <210> 283 <211> 509 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 283 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Thr Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val 245 250 255 His Pro Thr Gly Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro 260 265 270 Arg Gly Ser Val Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr 275 280 285 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu 290 295 300 Ile Ile Thr Leu Ile Cys Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln Ser 305 310 315 320 Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro 325 330 335 Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro Lys 340 345 350 Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys 355 360 365 Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro 370 375 380 Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu Arg Ala Lys Phe 385 390 395 400 Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu 405 410 415 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu 420 425 430 Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg 435 440 445 Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met 450 455 460 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 465 470 475 480 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 485 490 495 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg 500 505 <210> 284 <211> 433 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 284 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ile 245 250 255 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser 260 265 270 Leu Ile Ile Thr Leu Ile Cys Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln 275 280 285 Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys 290 295 300 Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro 305 310 315 320 Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp 325 330 335 Pro Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe 340 345 350 Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 355 360 365 Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln 370 375 380 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu 385 390 395 400 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr 405 410 415 Ala Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro 420 425 430 Arg <210> 285 <211> 437 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 285 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ile 245 250 255 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser 260 265 270 Leu Ile Ile Thr Leu Ile Cys Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His 275 280 285 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu 290 295 300 Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly 305 310 315 320 Gly Tyr Glu Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala 325 330 335 Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 340 345 350 Arg Glu Glu Phe Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu 355 360 365 Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr 370 375 380 Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly 385 390 395 400 Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln 405 410 415 Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln 420 425 430 Thr Leu Ala Pro Arg 435 <210> 286 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 286 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ile 245 250 255 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser 260 265 270 Leu Ile Ile Thr Leu Ile Cys Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln 275 280 285 Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys 290 295 300 Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro 305 310 315 320 Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys 325 330 335 Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys 340 345 350 Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu Arg Ala Lys 355 360 365 Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln 370 375 380 Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe Asp Val Leu 385 390 395 400 Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg 405 410 415 Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg 465 470 475 <210> 287 <211> 433 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 287 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ile 245 250 255 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser 260 265 270 Leu Ile Ile Thr Leu Ile Cys Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln 275 280 285 Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys 290 295 300 Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro 305 310 315 320 Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp 325 330 335 Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 340 345 350 Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 355 360 365 Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln 370 375 380 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu 385 390 395 400 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 405 410 415 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro 420 425 430 Arg <210> 288 <211> 437 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 288 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ile 245 250 255 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser 260 265 270 Leu Ile Ile Thr Leu Ile Cys Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His 275 280 285 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu 290 295 300 Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly 305 310 315 320 Gly Tyr Glu Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala 325 330 335 Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 340 345 350 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu 355 360 365 Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr 370 375 380 Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly 385 390 395 400 Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln 405 410 415 Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln 420 425 430 Thr Leu Ala Pro Arg 435 <210> 289 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 289 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ile 245 250 255 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser 260 265 270 Leu Ile Ile Thr Leu Ile Cys Asn Ser Arg Arg Asn Arg Gly Gly Gln 275 280 285 Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys 290 295 300 Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro 305 310 315 320 Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys 325 330 335 Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys 340 345 350 Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu Arg Ala Lys 355 360 365 Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln 370 375 380 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 385 390 395 400 Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg 405 410 415 Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg 465 470 475 <210> 290 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 290 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 291 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 291 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 195 200 205 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Ala Arg Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 292 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 292 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 195 200 205 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 293 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 293 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Phe 195 200 205 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 294 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 294 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 295 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 295 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 296 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 296 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 297 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 297 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 298 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 298 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 299 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 299 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 300 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 300 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 301 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 301 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 302 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 302 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 303 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 303 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 195 200 205 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 304 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 304 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 305 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 305 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 306 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 306 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 195 200 205 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 307 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 307 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 308 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 308 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 309 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 309 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 310 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 310 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 311 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 311 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 312 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 312 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 313 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 313 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 314 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 314 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 315 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 315 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 316 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 316 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 317 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 317 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 318 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 318 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 319 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 319 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 320 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 320 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 321 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 321 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 322 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 322 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 323 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 323 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 324 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 324 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 325 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 325 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 326 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 326 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 327 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 327 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 328 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 328 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 329 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 329 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 330 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 330 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 331 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 331 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 332 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 332 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 333 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 333 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 334 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 334 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Asp Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Ser Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 335 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 335 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 336 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 336 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 337 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 337 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Asp Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 338 <211> 242 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 338 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser 130 135 140 Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp 145 150 155 160 Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 165 170 175 Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu 180 185 190 Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser 195 200 205 Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys 210 215 220 Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val 225 230 235 240 Ser Ser <210> 339 <211> 242 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 339 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser 130 135 140 Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp 145 150 155 160 Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 165 170 175 Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu 180 185 190 Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser 195 200 205 Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys 210 215 220 Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val 225 230 235 240 Ser Ser <210> 340 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 340 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Asp Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Ser Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 341 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 341 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 342 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 342 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 343 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 343 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Asp Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Ser Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ser Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 344 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 344 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Ser Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 345 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 345 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 346 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 346 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ser Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 347 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 347 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 348 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 348 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 349 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 349 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 350 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 350 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 351 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 351 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 352 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 352 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 353 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 353 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 354 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 354 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 355 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 355 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 356 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 356 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 357 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 357 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 358 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 358 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ser Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 359 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 359 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 360 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 360 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 361 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 361 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ser Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 362 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 362 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ser Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 363 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 363 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly 165 170 175 Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 364 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 364 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly 165 170 175 Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 365 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 365 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly 165 170 175 Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 366 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 366 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 367 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 367 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly 165 170 175 Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 368 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 368 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu 130 135 140 Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr 145 150 155 160 Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro 165 170 175 Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro 180 185 190 Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala 195 200 205 Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys 210 215 220 Val Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 225 230 235 240 Thr Val Leu <210> 369 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 369 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu 130 135 140 Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr 145 150 155 160 Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro 165 170 175 Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro 180 185 190 Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala 195 200 205 Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys 210 215 220 Val Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 225 230 235 240 Thr Val Leu <210> 370 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 370 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ser Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Ser Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Asp Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Gly <210> 371 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 371 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 372 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 372 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Asp Gly <210> 373 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 373 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr 130 135 140 Ser Ser Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Thr Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 374 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 374 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr 130 135 140 Ser Ser Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Thr Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 375 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 375 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly <210> 376 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 376 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Lys Leu Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Arg Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser 145 150 155 160 Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn 180 185 190 Ser Ala Leu Lys Asp Arg Phe Ile Ile Ser Lys Asp Asn Gly Lys Asn 195 200 205 Thr Val Tyr Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Asp Asp Thr Ala Leu 210 215 220 Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 377 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 377 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Lys Leu Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Arg Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser 145 150 155 160 Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn 180 185 190 Ser Ala Leu Lys Asp Arg Phe Ile Ile Ser Lys Asp Asp Cys Glu Asn 195 200 205 Thr Val Tyr Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Asp Asp Thr Ala Leu 210 215 220 Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 378 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 378 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Lys Leu Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Arg Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser 145 150 155 160 Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn 180 185 190 Ser Ala Leu Lys Asp Arg Phe Ile Ile Ser Lys Asp Asp Cys Glu Asn 195 200 205 Thr Val Tyr Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Asp Asp Thr Ala Leu 210 215 220 Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 379 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 379 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Lys Leu Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Arg Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser 145 150 155 160 Leu Thr Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn 180 185 190 Ser Ala Leu Lys Asp Arg Phe Ile Ile Ser Lys Asp Asp Ser Glu Asn 195 200 205 Thr Val Tyr Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Asp Asp Thr Ala Leu 210 215 220 Tyr Tyr Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 380 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 380 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 130 135 140 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser 180 185 190 Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asp Ser Lys Asn Thr Val 195 200 205 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Val Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 381 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 381 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 130 135 140 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser 180 185 190 Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asp Ser Lys Asn Thr Val 195 200 205 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Val Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 382 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 382 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 130 135 140 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser 180 185 190 Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asp Ser Lys Asn Thr Val 195 200 205 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Val Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 383 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 383 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 130 135 140 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser 180 185 190 Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asp Ser Lys Asn Thr Val 195 200 205 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Val Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 384 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 384 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 130 135 140 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser 180 185 190 Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val 195 200 205 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 385 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 385 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 130 135 140 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser 180 185 190 Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val 195 200 205 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 386 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 386 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 130 135 140 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser 180 185 190 Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val 195 200 205 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 387 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 387 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 20 25 30 Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Ser Gly Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 130 135 140 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser 180 185 190 Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val 195 200 205 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 388 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 388 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 130 135 140 Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Thr 145 150 155 160 Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 165 170 175 Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro 180 185 190 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 195 200 205 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 210 215 220 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val 225 230 235 240 Glu Ile Lys <210> 389 <211> 434 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 389 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 260 265 270 Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu 275 280 285 Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu 290 295 300 Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys 305 310 315 320 Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys 325 330 335 Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu 340 345 350 Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly 355 360 365 Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu 370 375 380 Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly 385 390 395 400 Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser 405 410 415 Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro 420 425 430 Pro Arg <210> 390 <211> 437 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 390 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys 275 280 285 Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr 290 295 300 Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu 305 310 315 320 Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro 325 330 335 Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly 340 345 350 Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro 355 360 365 Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr 370 375 380 Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly 385 390 395 400 Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln 405 410 415 Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln 420 425 430 Ala Leu Pro Pro Arg 435 <210> 391 <211> 436 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 391 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 325 330 335 Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 340 345 350 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 355 360 365 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 370 375 380 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 385 390 395 400 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 405 410 415 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 420 425 430 Leu Pro Pro Arg 435 <210> 392 <211> 462 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 392 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu 245 250 255 Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro 260 265 270 Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val 275 280 285 Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe 290 295 300 Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp 305 310 315 320 Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr 325 330 335 Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val 340 345 350 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 355 360 365 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 370 375 380 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 385 390 395 400 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 405 410 415 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 420 425 430 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 435 440 445 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 393 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 393 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 385 390 395 400 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 405 410 415 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 394 <211> 504 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 394 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu 245 250 255 Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro 260 265 270 Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val 275 280 285 Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe 290 295 300 Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp 305 310 315 320 Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr 325 330 335 Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Lys Arg 340 345 350 Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro 355 360 365 Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu 370 375 380 Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 385 390 395 400 Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 405 410 415 Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 420 425 430 Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 435 440 445 Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 450 455 460 Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 465 470 475 480 Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 485 490 495 His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 500 <210> 395 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 395 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu 115 120 125 Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys 130 135 140 Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg 145 150 155 160 Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser 165 170 175 Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile 180 185 190 Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln 195 200 205 Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly 210 215 220 Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val 225 230 235 240 Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 245 250 255 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala 260 265 270 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe 275 280 285 Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu 290 295 300 Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg 305 310 315 320 Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 325 330 335 Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 340 345 350 Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 355 360 365 Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 370 375 380 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 385 390 395 400 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 405 410 415 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 420 425 430 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 435 440 445 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 450 455 460 Pro Pro Arg 465 <210> 396 <211> 509 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 396 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu 115 120 125 Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys 130 135 140 Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg 145 150 155 160 Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser 165 170 175 Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile 180 185 190 Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln 195 200 205 Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly 210 215 220 Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val 225 230 235 240 Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 245 250 255 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala 260 265 270 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe 275 280 285 Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu 290 295 300 Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg 305 310 315 320 Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro 325 330 335 Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala 340 345 350 Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln 355 360 365 Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser 370 375 380 Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys 385 390 395 400 Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln 405 410 415 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 420 425 430 Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 435 440 445 Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 450 455 460 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 465 470 475 480 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 485 490 495 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 500 505 <210> 397 <211> 465 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 397 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu 115 120 125 Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys 130 135 140 Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg 145 150 155 160 Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser 165 170 175 Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile 180 185 190 Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln 195 200 205 Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly 210 215 220 Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val 225 230 235 240 Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 245 250 255 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala 260 265 270 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile 275 280 285 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser 290 295 300 Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 305 310 315 320 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 325 330 335 Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 340 345 350 Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln 355 360 365 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 370 375 380 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 385 390 395 400 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 405 410 415 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 420 425 430 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 435 440 445 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 450 455 460 Arg 465 <210> 398 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct fragment <400> 398 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 20 <210> 399 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 399 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 385 390 395 400 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 405 410 415 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 400 <211> 1434 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 400 gacgccgttg tgacccagga atccgctctg acctcttctc caggcgaaac cgtgactctg 60 acttgccgta gtagcaccgg ggctgtgacc acatctaact atgccagttg ggtccaggaa 120 aaaccggatc acctgtttac tggcctgatt ggcggcacca acaatcgcgc accgggtgtg 180 cccgctcgtt tcagcggttc cctgattggg gacaaggcag cactgactat caccggcgcc 240 cagaccgaag atgaggcgat ctatttttgc gtcctgtggt acagcgacca ttgggtgttc 300 gggggaggca ccaaactgac agtgctgggc ggaggaggag gttcaggagg aggaggtagc 360 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct gatgtgcagc tgcaagaatc cgggccagga 420 ctggttgcgc cttctcagag tctgtcaatt acatgtactg ttagtggctt tctgctgacc 480 gactatggtg tgaactgggt tcgtcagagc ccaggcaagg gtctggagtg gctgggagtg 540 atttgggggg atggaatcac agactacaat agcgcactga aatctcggct gagtgttacc 600 aaagataaca gcaagtccca ggtcttcctg aagatgaaca gcctgcaaag cggcgactcc 660 gctcgctatt actgcgttac cggactgttt gattattggg ggcaggggac aactctgact 720 gtttcctccg aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccgattt ttgggttctg 780 gtagttgtgg gaggtgttct cgcctgttat agtctcctcg ttactgtagc gttcatcatt 840 ttttgggtaa ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactccc 900 cgccgccccg ggcccacccg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 960 gcctatcgct ccaaacgggg cagaaagaaa ctcctgtata tattcaaaca accatttatg 1020 agaccagtac aaactactca agaggaagat ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa 1080 gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag 1140 cagggccaga accagctcta taacgagctc aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt 1200 ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag atggggggaa agccgagaag gaagaaccct 1260 caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 1320 gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt 1380 acagccacca aggacaccta cgacgccctt cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1434 <210> 401 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 401 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 385 390 395 400 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 405 410 415 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 402 <211> 1434 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 402 caggcggtag tcacccagga gccaagtctc acggtgagcc ccggcggtac cgtcacactt 60 acatgcggaa gctctaccgg ggctgtgacc acaagcaact acgcatcctg ggtccagcag 120 aaacccggtc aggcgccccg gggcctcatt ggtgggacaa ataacagagc cccgggtgtt 180 cccgcccgat tttctggcag tcttctggga ggaaaggccg ctctgacaat atctggcgca 240 cagcccgaag acgaggccga gtactattgc gtgttgtggt atagcgacca ctgggtattc 300 ggtggaggaa caaagctgac agtgctcggc ggaggaggag gttcaggagg aggaggtagc 360 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct caagtgcaat tgcaggagag tggacctgga 420 ctcgtgaaac catctgaaac actctccata acttgtacgg tttcagggtt cctgctgaca 480 gactatggag taaactgggt taggcagcca cccggcaagg gcttggagtg gctgggcgtc 540 atttggggcg acggaatcac cgactataac ccatcactca aatctcggct taccgtctcc 600 aaggatacga gtaagaatca ggtcagcctg aaaatgtcat ccctcacagc tgcggacacc 660 gccgtgtact actgtgtgac aggacttttt gactactggg gccaggggac cctgctcaca 720 gttagctccg aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccgattt ttgggttctg 780 gtagttgtgg gaggtgttct cgcctgttat agtctcctcg ttactgtagc gttcatcatt 840 ttttgggtaa ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactcca 900 cgccgcccag gtcctacacg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 960 gcctatcgct ccaaacgggg cagaaagaaa ctcctgtata tattcaaaca accatttatg 1020 agaccagtac aaactactca agaggaagat ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa 1080 gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag 1140 cagggccaga accagctcta taacgagctc aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt 1200 ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag atggggggaa agccgagaag gaagaaccct 1260 caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 1320 gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt 1380 acagccacca aggacaccta cgacgccctt cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1434 <210> 403 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 403 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 385 390 395 400 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 405 410 415 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 404 <211> 1434 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 404 caggctgtgg tgactcaaga gccctcactg actgtgtccc caggagggac agtcactctc 60 acctgtggct ccagcactgg agctgtcacc acttccaact atgcctcatg ggtgcaggag 120 aagcctgacc acctcttcag ggggctgatt ggtggcacaa acaacagggc tcctggggtg 180 cctgcccggt tctcaggctc cctccttggg ggcaaagctg ccctgaccat ttcgggtgcg 240 cagcctgagg atgaggctat ttatttctgc gtgctctggt atagtgacca ttgggtgttc 300 ggcggaggga ccaagctgac cgtcctaggc ggcggaggag gttcaggagg aggaggtagc 360 ggcggaggcg gttccggggg aggaggttct caggtgcaac tgcaggagtc gggcccagga 420 ctggtgaagc cttcggagac cctgtccatc acctgcactg tctctggttt cctgctgacc 480 gactacggcg taaactgggt gcggcagccc ccagggaagg gactggagtg gctgggggtg 540 atctggggtg acgggatcac cgactacaac ccctccctca agagtcgact gaccgtgtcc 600 aaggacacat ccaagaacca ggtgtccctg aagatgagct ctctgaccgc cgcagacacg 660 gcccggtatt actgtgtcac cggcctgttc gactactggg gccagggcac caccctgacc 720 gtctcctcag aaagcaagta tggcccgcct tgtccacctt gtcccgattt ttgggttctg 780 gtagttgtgg gaggtgttct cgcctgttat agtctcctcg ttactgtagc gttcatcatt 840 ttttgggtaa ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactcca 900 cgccgcccag gtcctacacg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 960 gcctatcgct ccaaacgggg cagaaagaaa ctcctgtata tattcaaaca accatttatg 1020 agaccagtac aaactactca agaggaagat ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa 1080 gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag 1140 cagggccaga accagctcta taacgagctc aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt 1200 ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag atggggggaa agccgagaag gaagaaccct 1260 caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 1320 gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt 1380 acagccacca aggacaccta cgacgccctt cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1434 <210> 405 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 405 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 385 390 395 400 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 405 410 415 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 406 <211> 1434 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 406 caggctgtgg tgactcagga gccctcactg actgtgtccc caggagggac agtcactctc 60 acctgtggct ccagcactgg agctgtcacc acttccaact atgcctcatg ggtgcaggag 120 aagcctgacc acctcttcag ggggctgatt ggtggcacaa acaacagggc tcctggggtg 180 cctgcccggt tctcaggctc cctccttggg ggcaaagctg ccctgaccat ttcgggtgcg 240 cagcctgagg atgaggctat ttatttctgc gtgctctggt atagtgacca ttgggtgttc 300 ggcggaggga ccaagctgac cgtcctaggc ggtggaggag gtagcggcgg tgggggatct 360 ggaggcgggg gttcaggtgg tggtgggtct caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga 420 ctggtgaagc cttcggagac cctgtccatc acctgcactg tctctggttt cctgctgacc 480 gactacggcg taaactgggt gcggcagccc ccagggaagg gactggagtg gctgggggtg 540 atctggggtg acgggatcac cgactacaac ccctccctca agagtcgact gaccgtgtcc 600 aaggacacat ccaagaacca ggtgtccctg aagatgagct ctctgaccga cgcagacacg 660 gcccggtatt actgtgtcac cggcctgttc gactactggg gccagggcac caccctgacc 720 gtctcctcag aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccgattt ttgggttctg 780 gtagttgtgg gaggtgttct cgcctgttat agtctcctcg ttactgtagc gttcatcatt 840 ttttgggtaa ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactcca 900 cgccgcccag gtcctacacg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 960 gcctatcgct ccaaacgggg cagaaagaaa ctcctgtata tattcaaaca accatttatg 1020 agaccagtac aaactactca agaggaagat ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa 1080 gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag 1140 cagggccaga accagctcta taacgagctc aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt 1200 ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag atggggggaa agccgagaag gaagaaccct 1260 caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 1320 gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt 1380 acagccacca aggacaccta cgacgccctt cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1434 <210> 407 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 407 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 385 390 395 400 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 405 410 415 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 408 <211> 1434 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 408 caggctgtgg tgactcagga gccctcactg actgtgtccc caggagggac agtcactctc 60 acctgtggct ccagcactgg agctgtcacc acttccaact atgcctcatg ggtgcaggag 120 aagcctgacc acctcttcag ggggctgatt ggtggcacaa acaacagggc tcctggggtg 180 cctgcccggt tctcaggctc cctccttggg ggcaaagctg ccctgaccat ttcgggtgcg 240 cagcctgagg atgaggctat ttatttctgc gtgctctggt atagtgacca ttgggtgttc 300 ggcggaggga ccaagctgac cgtcctaggc ggtggaggag gtagcggcgg tgggggatct 360 ggaggcgggg gttcaggtgg tggtgggtct caggtgcagc tgcagcagtc gggcccagga 420 ctggtgaagc cttcggagac cctgtccatc acctgcactg tctctggttt cctgctgacc 480 gactacggcg taaactgggt gcggcagccc ccagggaagg gactggagtg gctgggggtg 540 atctggggtg acgggatcac cgactacaac ccctccctca agagtcgact gaccgtgtcc 600 aaggacacat ccaagaacca ggtgtccctg aagatgagct ctctgaccga cgcagacacg 660 gcccggtatt actgtgtcac cggcctgttc gactactggg gccagggcac caccctgacc 720 gtctcctcag aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccgattt ttgggttctg 780 gtagttgtgg gaggtgttct cgcctgttat agtctcctcg ttactgtagc gttcatcatt 840 ttttgggtaa ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactcca 900 cgccgcccag gtcctacacg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 960 gcctatcgct ccaaacgggg cagaaagaaa ctcctgtata tattcaaaca accatttatg 1020 agaccagtac aaactactca agaggaagat ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa 1080 gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag 1140 cagggccaga accagctcta taacgagctc aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt 1200 ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag atggggggaa agccgagaag gaagaaccct 1260 caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 1320 gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt 1380 acagccacca aggacaccta cgacgccctt cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1434 <210> 409 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 409 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 385 390 395 400 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 405 410 415 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 410 <211> 1434 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 410 caggctgtgg tgactcagga gccctcactg actgtgtccc caggagggac agtcactctc 60 acctgtggct ccagcactgg agctgtcacc acttccaact atgcctcatg ggtgcaggag 120 aagcctgacc acctcttcag ggggctgatt ggtggcacaa acaacagggc tcctggggtg 180 cctgcccggt tctcaggctc cctccttggg ggcaaagctg ccctgaccat ttcgggtgcg 240 cagcctgagg atgaggctat ttatttctgc gtgctctggt atagtgacca ttgggtgttc 300 ggcggaggga ccaagctgac cgtcgacggc ggtggaggag gtagcggcgg tgggggatct 360 ggaggcgggg gttcaggtgg tggtgggtct caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga 420 ctggtgaagc cttcggagac cctgtccatc acctgcactg tctctggttt cctgctgacc 480 gactacggcg taaactgggt gcggcagccc ccagggaagg gactggagtg gctgggggtg 540 atctggggtg acgggatcac cgactacaac ccctccctca agagtcgact gaccgtgtcc 600 aaggacacat ccaagaacca ggtgtccctg aagatgagct ctctgaccga cgcagacacg 660 gcccggtatt actgtgtcac cggcctgttc gactactggg gccagggcac caccctgacc 720 gtctcctcag aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccgattt ttgggttctg 780 gtagttgtgg gaggtgttct cgcctgttat agtctcctcg ttactgtagc gttcatcatt 840 ttttgggtaa ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactcca 900 cgccgcccag gtcctacacg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 960 gcctatcgct ccaaacgggg cagaaagaaa ctcctgtata tattcaaaca accatttatg 1020 agaccagtac aaactactca agaggaagat ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa 1080 gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag 1140 cagggccaga accagctcta taacgagctc aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt 1200 ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag atggggggaa agccgagaag gaagaaccct 1260 caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 1320 gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt 1380 acagccacca aggacaccta cgacgccctt cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1434 <210> 411 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 411 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 385 390 395 400 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 405 410 415 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 412 <211> 1434 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 412 caggctgtgg tgactcagga gccctcactg actgtgtccc caggagggac agtcactctc 60 acctgtggct ccagcactgg agctgtcacc acttccaact atgcctcatg ggtgcaggag 120 aagcctgacc acctcttcag ggggctgatt ggtggcacaa acaacagggc tcctggggtg 180 cctgcccggt tctcaggctc cctccttggg ggcaaagctg ccctgaccat ttcgggtgcg 240 cagcctgagg atgaggctat ttatttctgc gtgctctggt atagtgacca ttgggtgttc 300 ggcggaggga ccaagctgac cgtcgacggc ggaggaggag gttcaggagg cggaggtagc 360 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct caggtgcagc tgcagcagtc gggcccagga 420 ctggtgaagc cttcggagac cctgtccatc acctgcactg tctctggttt cctgctgacc 480 gactacggcg taaactgggt gcggcagccc ccagggaagg gactggagtg gctgggggtg 540 atctggggtg acgggatcac cgactacaac ccctccctca agagtcgact gaccgtgtcc 600 aaggacacat ccaagaacca ggtgtccctg aagatgagct ctctgaccga tgcagacacg 660 gcccggtatt actgtgtcac cggcctgttc gactactggg gccagggcac caccctgacc 720 gtctcctcag aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccgattt ttgggttctg 780 gtagttgtgg gaggtgttct cgcctgttat agtctcctcg ttactgtagc gttcatcatt 840 ttttgggtaa ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactcca 900 cgccgcccag gtcctacacg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 960 gcctatcgct ccaaacgggg cagaaagaaa ctcctgtata tattcaaaca accatttatg 1020 agaccagtac aaactactca agaggaagat ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa 1080 gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag 1140 cagggccaga accagctcta taacgagctc aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt 1200 ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag atggggggaa agccgagaag gaagaaccct 1260 caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 1320 gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt 1380 acagccacca aggacaccta cgacgccctt cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1434 <210> 413 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 413 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 385 390 395 400 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 405 410 415 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 414 <211> 1434 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 414 caggctgtgg tgactcagga gccctcactg actagctccc caggagggac agtcactctc 60 acctgtggct ccagcactgg agctgtcacc acttccaact atgcctcatg ggtgcaggag 120 aagcctgacc acctcttcag ggggctgatt ggtggcacaa acaacagggc tcctggggtg 180 cctgcccggt tctcaggctc cctccttggg ggcaaagctg ccctgaccat ttcgggtgcg 240 cagcctgagg atgaggctat ttatttctgc gtgctctggt atagtgacca ttgggtgttc 300 ggcggaggga ccaagctgac cgtcgacggc ggaggaggag gttcaggagg cggaggtagc 360 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga 420 ctggtgaagc cttcggagac cctgtccatc acctgcactg tctctggttt cctgctgacc 480 gactacggcg taaactgggt gcggcagccc ccagggaagg gactggagtg gctgggggtg 540 atctggggtg acgggatcac cgactacaac ccctccctca agagtcgact gaccgtgtcc 600 aaggacacat ccaagaacca ggtgtccctg aagatgagct ctctgaccga tgcagacacg 660 gcccggtatt actgtgtcac cggcctgttc gactactggg gccagggcac caccctgacc 720 gtctcctcag aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccgattt ttgggttctg 780 gtagttgtgg gaggtgttct cgcctgttat agtctcctcg ttactgtagc gttcatcatt 840 ttttgggtaa ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactcca 900 cgccgcccag gtcctacacg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 960 gcctatcgct ccaaacgggg cagaaagaaa ctcctgtata tattcaaaca accatttatg 1020 agaccagtac aaactactca agaggaagat ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa 1080 gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag 1140 cagggccaga accagctcta taacgagctc aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt 1200 ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag atggggggaa agccgagaag gaagaaccct 1260 caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 1320 gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt 1380 acagccacca aggacaccta cgacgccctt cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1434 <210> 415 <211> 478 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 415 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Ser Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Asp Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 195 200 205 Ser Leu Lys Met Ser Ser Leu Thr Asp Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 245 250 255 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 260 265 270 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser 275 280 285 Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly 290 295 300 Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala 305 310 315 320 Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 325 330 335 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 340 345 350 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 355 360 365 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn 370 375 380 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 385 390 395 400 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 405 410 415 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 420 425 430 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 435 440 445 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 450 455 460 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 475 <210> 416 <211> 1434 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct <400> 416 caggctgtgg tgactcagga gccctcactg actagctccc caggagggac agtcactctc 60 acctgtggct ccagcactgg agctgtcacc acttccaact atgcctcatg ggtgcaggag 120 aagcctgacc acctcttcag ggggctgatt ggtggcacaa acaacagggc tcctggggtg 180 cctgcccggt tctcaggctc cctccttggg ggcaaagctg ccctgaccat ttcgggtgcg 240 cagcctgagg atgaggctat ttatttctgc gtgctctggt atagtgacca ttgggtgttc 300 ggcggaggga ccaagctgac cgtcgacggc ggaggaggag gttcaggagg cggaggtagc 360 gggggaggcg gttccggggg aggcggttct caggtgcagc tgcagcagtc gggcccagga 420 ctggtgaagc cttcggagac cctgtccatc acctgcactg tctctggttt cctgctgacc 480 gactacggcg taaactgggt gcggcagccc ccagggaagg gactggagtg gctgggggtg 540 atctggggtg acgggatcac cgactacaac ccctccctca agagtcgact gaccgtgtcc 600 aaggacacat ccaagaacca ggtgtccctg aagatgagct ctctgaccga tgcagacacg 660 gcccggtatt actgtgtcac cggcctgttc gactactggg gccagggcac caccctgacc 720 gtctcctcag aaagcaagta tggcccacct tgtccacctt gtcccgattt ttgggttctg 780 gtagttgtgg gaggtgttct cgcctgttat agtctcctcg ttactgtagc gttcatcatt 840 ttttgggtaa ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactcca 900 cgccgcccag gtcctacacg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 960 gcctatcgct ccaaacgggg cagaaagaaa ctcctgtata tattcaaaca accatttatg 1020 agaccagtac aaactactca agaggaagat ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa 1080 gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc agcaggagcg cagacgcccc cgcgtacaag 1140 cagggccaga accagctcta taacgagctc aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt 1200 ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag atggggggaa agccgagaag gaagaaccct 1260 caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 1320 gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt 1380 acagccacca aggacaccta cgacgccctt cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1434 <210> 417 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct fragment <400> 417 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 20 25 <210> 418 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct fragment <400> 418 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 419 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct fragment <400> 419 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 420 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct fragment <400> 420 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 421 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct fragment <400> 421 Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn 1 5 10 15 Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 20 25 30 Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro 35 <210> 422 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - CAR construct fragment <400> 422 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Asp 1 5 10 <210> 423 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - Humanized scFv fragments <400> 423 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr 130 135 140 Ser Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly 145 150 155 160 Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp 165 170 175 His Leu Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly 180 185 190 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu 195 200 205 Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val 210 215 220 Leu Trp Tyr Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly

Claims (199)

  1. 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 인간화된 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor: CAR)로서; 상기 세포외 도메인은 서열 번호 290 내지 388 및 423으로부터 선택된 서열을 포함하는 인간화된 항-GCN4 scFv를 포함하는, CAR.
  2. 제1항에 있어서, 상기 scFv는 서열 번호 322의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  3. 제1항에 있어서, 상기 scFv는 서열 번호 322와 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  4. 제1항에 있어서, 도 22a에서의 구조 A 내지 H로부터 선택된 구조를 포함하는, CAR.
  5. 제1항에 있어서, 도 22a에서의 구조 E에 따른 구조를 포함하는, CAR.
  6. 제1항에 있어서, 상기 CAR은 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열을 포함하는, CAR.
  7. 제1항에 있어서, 상기 CAR은 서열 번호 411의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  8. 제1항에 있어서, 상기 CAR은 서열 번호 411의 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  9. 제1항에 있어서, 상기 세포외 도메인은 서열 번호 93 내지 103 및 165 내지 168로부터 선택된 서열을 포함하는 힌지 도메인을 포함하는, CAR.
  10. 제1항에 있어서, 상기 세포외 도메인은 ESKYGPPCPPCPD의 아미노산 서열을 포함하는 힌지 도메인을 포함하는, CAR.
  11. 제1항, 제9항 및 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호 398 및 417로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  12. 제1항 및 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호전달 도메인은 (a) CD3-제타 도메인 및 (b) CD28 도메인; 4-1BB 도메인; 또는 CD28 도메인 및 4-1BB 도메인을 포함하는, CAR.
  13. 제12항에 있어서, 상기 CD28 도메인은 서열 번호 418의 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  14. 제12항에 있어서, 상기 CD28 도메인은 서열 번호 418의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4-1BB 도메인은 서열 번호 419의 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  16. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4-1BB 도메인은 서열 번호 419의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  17. 제11항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD3-제타 도메인은 서열 번호 420의 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  18. 제11항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD3-제타 도메인은 서열 번호 420의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  19. 제1항 및 제9항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호 417의 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  20. 제1항 및 제9항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호 417의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
  21. 키메라 항원 수용체-효과기 세포(CAR-EC) 스위치로서,
    a. 상기 CAR-EC 상의 항-GCN4 키메라 항원 수용체와 상호작용하는 GCN4 유도체 펩타이드를 포함하는 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID); 및
    b. 표적화 모이어티를 포함하되;
    상기 표적화 모이어티는 서열 번호 17 내지 25, 27 내지 35, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는, 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, CAR-EC 스위치.
  22. 제21항에 있어서, 상기 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  23. 키메라 항원 수용체-효과기 세포(CAR-EC) 스위치로서,
    a. 상기 CAR-EC 상의 항-GCN4 키메라 항원 수용체와 상호작용하는 GCN4 유도체 펩타이드를 포함하는 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID); 및
    b. 표적화 모이어티를 포함하되;
    상기 표적화 모이어티는 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는, 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, CAR-EC 스위치.
  24. 제23항에 있어서, 상기 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 17 내지 25, 27 내지 35, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  25. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 scFv인, CAR-EC 스위치.
  26. 제25항에 있어서, 서열 번호 30의 경쇄 서열 및 서열 번호 7의 중쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  27. 제21항에 있어서, 서열 번호 7과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  28. 제23항에 있어서, 서열 번호 30과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  29. 제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 서열 번호 30/서열 번호 7; (ii) 서열 번호 30/서열 번호 6; (iii) 서열 번호 34/서열 번호 6; 및 (iv) 서열 번호 34/서열 번호 7로부터 선택된 경쇄/중쇄 서열 쌍을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  30. 제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 17 내지 25 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄를 포함하되; 상기 CAR-EC 스위치는 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245 중 어느 하나로부터 선택된 GCN4 펩타이드인 CAR-ID를 포함하고; 상기 CAR-EC 스위치는 LCNT 스위치인, CAR-EC 스위치.
  31. 인간화된 키메라 항원 수용체-효과기 세포(CAR-EC) 스위치로서,
    a. 상기 CAR-EC 상의 키메라 항원 수용체와 상호작용하는 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID); 및
    b. 표적 세포 상의 CD19에 결합하는 인간화된 표적화 모이어티를 포함하는, CAR-EC 스위치.
  32. 제31항에 있어서, 상기 인간화된 표적화 모이어티는 CD19에 결합하는 인간화된 항체 및 CD19에 결합하는 인간화된 항체의 항원 결합 부분으로부터 선택되는, CAR-EC 스위치.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 상기 인간화된 표적화 모이어티는 면역글로불린, Fc 널(null) 면역글로불린 및 Fab, 및 이들의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는, CAR-EC 스위치.
  34. 제31항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화된 표적화 모이어티는 서열 번호 16 내지 25로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  35. 제31항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화된 표적화 모이어티는 서열 번호 27 내지 35로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  36. 제31항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화된 표적화 모이어티는 서열 번호 1 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  37. 제32항에 있어서, 상기 인간화된 표적화 모이어티는 인간화된 FMC63 항체 또는 인간화된 FMC63 항체의 항원 결합 부분으로부터 선택되는, CAR-EC 스위치.
  38. 제37항에 있어서, 서열 번호 35로부터 약 1개 내지 약 20개의 아미노산이 상이한 경쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  39. 제38항에 있어서, 상기 경쇄 서열은, T7, T8, L15, S22, D41, G42, T43, V44, Y71, S72, N77, E79, Q80, I83, F87 및 G100으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 번호 35 경쇄 아미노산 잔기 중 하나 이상의 치환을 포함하는 것을 제외하고는 서열 번호 35와 동일한, CAR-EC 스위치.
  40. 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 15로부터 약 1개 내지 약 30개의 아미노산이 상이한 중쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  41. 제40항에 있어서, 상기 중쇄 서열은 E1, K3, A13, Q16, S17, V20, R42, L48, S61, A62, L67, I70, K71, N73, S76, V78, F79, M82, N83, L85, Q86, T87, D88, I92, K97 및 S115로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 번호 15 중쇄 아미노산 잔기 중 하나 이상의 치환을 포함하는 것을 제외하고는 서열 번호 15와 동일한, CAR-EC 스위치.
  42. 제31항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR-ID는 펩타이드를 포함하되, 상기 펩타이드는 선택적으로 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드, 이합체화되지 않는 변이체 GCN4 펩타이드; flag 태그 펩타이드; 비천연 발생 펩타이드, 천연 발생 펩타이드, 합성 펩타이드 태그, 알파 나선-형성 펩타이드, K4 펩타이드 및 E4 펩타이드로부터 선택되는, CAR-EC 스위치.
  43. 제31항에 있어서, 서열 번호 30의 경쇄 서열 및 서열 번호 7의 중쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  44. 제42항에 있어서, 상기 GCN4 펩타이드는 구조 I의 서열, 표 10에 기재된 서열 및 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245로부터 선택된 서열로부터 선택되는, CAR-EC 스위치.
  45. 제31항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR-ID는 소분자를 포함하는, CAR-EC 스위치.
  46. 제45항에 있어서, 상기 소분자는 합텐인, CAR-EC 스위치.
  47. 제46항에 있어서, 상기 합텐은 FITC인, CAR-EC 스위치.
  48. 제31항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스위치는 LCNT 스위치인, CAR-EC 스위치.
  49. 키메라 항원 수용체-효과기 세포(CAR-EC) 스위치로서,
    a. 상기 CAR-EC 상의 항-GCN4 키메라 항원 수용체와 상호작용하는 GCN4 유도체 펩타이드를 포함하는 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인(CAR-ID); 및
    b. 표적화 모이어티를 포함하는, CAR-EC 스위치.
  50. 제49항에 있어서, 상기 GCN4 펩타이드 유도체는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)의 구조 I의 서열을 포함하되, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않는, CAR-EC 스위치.
  51. 제50항에 있어서, X1은 K이거나 또는 존재하지 않는, CAR-EC 스위치.
  52. 제50항 또는 제51항에 있어서, X2는 K, A 및 G로부터 선택되는, CAR-EC 스위치.
  53. 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, X3은 L, A 및 G로부터 선택되는, CAR-EC 스위치.
  54. 제50항에 있어서, 상기 GCN4 펩타이드 유도체는 서열 번호 26, 36, 139 내지 163 및 245 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  55. 제49항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 표적화 폴리펩타이드인, CAR-EC 스위치.
  56. 제29항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, CAR-EC 스위치.
  57. 제49항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 인간화된 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, CAR-EC 스위치.
  58. 제49항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 CD19, CD20, CD22, CD33, CEA, CLL1, BCMA, CS1, CD123 및 Her2로부터 선택된 세포 표면 분자에 결합하는, CAR-EC 스위치.
  59. 제49항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 본 명세서에 개시된 경쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, CAR-EC 스위치.
  60. 제49항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 본 명세서에 개시된 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, CAR-EC 스위치.
  61. 제49항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 본 명세서에 개시된 경쇄 서열 및 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, CAR-EC 스위치.
  62. 제49항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 서열 번호 17 내지 25, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265 및 267 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, CAR-EC 스위치.
  63. 제49항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, CAR-EC 스위치.
  64. 제49항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 서열 번호 27 내지 35 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는 표적화 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, CAR-EC 스위치.
  65. 제64항에 있어서, 서열 번호 2 내지 15, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266 및 268 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  66. 제49항에 있어서, 서열 번호 30의 경쇄 서열 및 서열 번호 7의 중쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  67. 제49항에 있어서, 서열 번호 30과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 서열 및 서열 번호 7과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 서열을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  68. 제49항에 있어서, (i) 서열 번호 30/서열 번호 6; (ii) 서열 번호 34/서열 번호 6; 및 (iii) 서열 번호 34/서열 번호 7로부터 선택된 경쇄/중쇄 서열 쌍을 포함하는, CAR-EC 스위치.
  69. 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 인간화된 키메라 항원 수용체로서, 상기 세포외 도메인은,
    a. 키메라 항원 수용체 스위치와 상호작용하는 인간화된 영역; 및
    b. 힌지 도메인을 포함하는, 키메라 항원 수용체.
  70. 제69항에 있어서, 상기 힌지 도메인은 약 1개 내지 약 20개의 아미노산 길이인, 키메라 항원 수용체.
  71. 제69항에 있어서, 상기 힌지 도메인은 약 20개 초과의 아미노산 길이인, 키메라 항원 수용체.
  72. 제69항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 힌지 도메인은 가요성인, 키메라 항원 수용체.
  73. 제69항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 힌지 도메인은 경질(rigid)인, 키메라 항원 수용체.
  74. 제69항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 키메라 항원 수용체의 제1 시스테인 및 제2 키메라 항원 수용체의 제2 시스테인이 이황화 결합을 형성하여서, 상기 제1 키메라 항원 수용체 및 상기 제2 키메라 항원 수용체의 다합체화를 발생시키는, 키메라 항원 수용체.
  75. 제69항에 있어서, 상기 힌지 도메인은 IgG4 힌지, IgG4m 힌지, CD28 힌지 및 CD8 힌지로부터 선택되는, 키메라 항원 수용체.
  76. 제69항에 있어서, 상기 힌지 도메인은 서열 번호 93 내지 103 및 165 내지 168로부터 선택된 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  77. 제69항에 있어서, 상기 힌지 도메인은 서열 번호 93 내지 103 및 165 내지 168로부터 선택된 서열과 적어도 50% 동일한 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  78. 제69항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포외 도메인은 인간화된 항-GCN4 scFv를 포함하는, 키메라 항원 수용체.
  79. 제69항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포외 도메인은 인간화된 52SR4 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는, 키메라 항원 수용체.
  80. 제78항에 있어서, 상기 인간화된 항-GCN4 scFv는 서열 번호 290 내지 388 및 423으로부터 선택된 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  81. 제78항에 있어서, 상기 인간화된 항-GCN4 scFv는 서열 번호 290 내지 388 및 423으로부터 선택된 서열과 적어도 50% 동일한 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  82. 제78항에 있어서, 상기 인간화된 항-GCN4 scFv는 서열 번호 322와 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  83. 제69항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR은 CD8 막관통 도메인 또는 CD28 막관통 도메인으로부터 선택된 막관통 도메인을 포함하는, 키메라 항원 수용체.
  84. 제83항에 있어서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호 398 및 417로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  85. 제69항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호전달 도메인은 (a) CD3-제타 도메인 및 (b) CD28 도메인; 4-1BB 도메인; 또는 CD28 도메인 및 4-1BB 도메인을 포함하는, 키메라 항원 수용체.
  86. 제85항에 있어서, 상기 CD28 도메인은 서열 번호 418을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  87. 제85항에 있어서, 상기 4-1BB 도메인은 서열 번호 419를 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  88. 제85항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD3-제타 도메인은 서열 번호 420을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  89. 제69항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체 스위치와 상호작용하는 영역은 상기 키메라 항원 수용체 스위치의 키메라 항원 수용체 결합 펩타이드와 상호작용하고, 상기 키메라 항원 수용체 스위치는 상기 표적 상의 세포 표면 분자와 상호작용하는 표적화 모이어티를 더 포함하는, 키메라 항원 수용체.
  90. 제69항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열을 포함하는, 키메라 항원 수용체.
  91. 제69항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  92. 제69항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택된 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  93. 제69항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호 400, 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414 및 416으로부터 선택된 서열에 의해 암호화된, 키메라 항원 수용체.
  94. 제69항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호 400, 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414 및 416과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열에 의해 암호화된, 키메라 항원 수용체.
  95. 제69항에 있어서, 상기 인간화된 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 322를 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  96. 제69항 또는 제95항에 있어서, 상기 힌지 도메인은 ESKYGPPCPPCPD의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  97. 제69항, 제95항 및 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호 417을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  98. 제69항 및 제95항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 도메인은 서열 번호 420을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 CD3-제타 신호전달 도메인을 포함하는, 키메라 항원 수용체.
  99. 제98항에 있어서, 상기 세포내 도메인은 서열 번호 418 또는 419를 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 동시자극 도메인을 포함하는, 키메라 항원 수용체.
  100. 제98항에 있어서, 상기 세포내 도메인은 서열 번호 418을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 제1 동시자극 도메인 및 서열 번호 419를 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 제2 동시자극 도메인을 포함하는, 키메라 항원 수용체.
  101. 제69항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호 411의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  102. 제69항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호 411의 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진, 키메라 항원 수용체.
  103. 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치 중 어느 하나로부터 선택된 제1 인간화된 CAR-EC 스위치 및 제1 CAR-EC를 포함하는, 키트.
  104. 제103항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC는 인간화된 CAR을 포함하는, 키트.
  105. 제104항에 있어서, 상기 인간화된 CAR은 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항에 기재된 인간화된 CAR 중 어느 하나로부터 선택되는, 키트.
  106. 제104항에 있어서, 상기 인간화된 CAR은 서열 번호 389 내지 397, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413 및 415로부터 선택되는, 키트.
  107. 제31항에 따른 제1 인간화된 CAR-EC 스위치를 포함하는 키트로서, 상기 CAR-ID는 효모 전사 인자 GCN4 펩타이드 또는 이의 유도체, 이합체화되지 않는 변이체 GCN4 펩타이드; flag 태그 펩타이드; 비천연 발생 펩타이드, 천연 발생 펩타이드, 합성 펩타이드 태그, 알파 나선-형성 펩타이드, K4 펩타이드 및 E4 펩타이드로부터 선택되고; 상기 표적화 모이어티는 인간화된 FMC63 항체 또는 인간화된 FMC63 항체의 항원 결합 부분으로부터 선택된 인간화된 표적화 모이어티를 포함하는, 키트.
  108. 제107항에 있어서, 상기 CAR-ID는 GCN4 펩타이드이고, 상기 표적화 모이어티는 인간화된 FMC63 항체 또는 인간화된 FMC63 항체의 항원 결합 부분으로부터 선택된 인간화된 표적화 모이어티를 포함하는, 키트.
  109. 제107항에 있어서, 상기 CAR-ID는 FITC이고, 상기 표적화 모이어티는 인간화된 FMC63 항체 또는 인간화된 FMC63 항체의 항원 결합 부분으로부터 선택된 인간화된 표적화 모이어티를 포함하는, 키트.
  110. 제107항 내지 109항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FMC63 항체 또는 이의 CD19 결합 부분은,
    a. 서열 번호 16 내지 25로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열; 또는
    b. 서열 번호 27 내지 35로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 서열; 및
    c. 서열 번호 1 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 서열을 포함하는, 키트.
  111. 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 제1 CAR-EC 스위치 및 제1 CAR-EC에 의해, 치료를 요하는 대상체를 치료하는 방법.
  112. 제111항에 있어서, 상기 CAR-ID는 X1NYHLENEVARLKX2X3(서열 번호 269)의 구조 I의 서열을 포함하되, X1, X2 및 X3은 선택적으로 임의의 아미노산이거나 또는 존재하지 않는, 방법.
  113. 제112항에 있어서, (i) X1은 K이거나 또는 존재하지 않거나; (ii) X2는 K, A 및 G로부터 선택되거나; (iii) X3은 L, A 및 G로부터 선택되거나; (iv) X1은 K이거나 또는 존재하지 않고, X2는 K, A 및 G로부터 선택되거나; (v) X1은 K이거나 또는 존재하지 않고, X3은 L, A 및 G로부터 선택되거나; (vi) X2는 K, A 및 G로부터 선택되고, X3은 L, A 및 G로부터 선택되거나; 또는 (vii) X1은 K이거나 또는 존재하지 않고; X2는 K, A 및 G로부터 선택되고; X3은 L, A 및 G로부터 선택되는, 방법.
  114. 제112항에 있어서, 상기 CAR-ID는 서열 번호 26, 26, 139, 145 및 154 내지 163 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는, 방법.
  115. 제111항에 있어서, 상기 CAR-ID는 FITC를 포함하는, 방법.
  116. 제111항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 CD19+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 치료되는, 방법.
  117. 제111항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 이질적(heterogeneous) 종양 및 혈액 세포 악성종양으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 치료되는, 방법.
  118. 제111항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 급성 림프아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 치료되는, 방법.
  119. 제11항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 다발성 골수종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종(Non-hodgkins lymphoma: NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(Diffuse large B cell lymphoma: DLBCL), 여포성 림프종, 맨틀 세포 림프종(Mantle cell lymphoma: MCL), 버킷 림프종 및 모발 세포 백혈병(Hairy cell leukemia: HCL)으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 치료되는, 방법.
  120. 제111항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC는 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항에 기재된 CAR 중 어느 하나로부터 선택된 CAR을 발현하는, 방법.
  121. 제120항에 있어서, 상기 CAR은 서열 번호 411의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  122. 제1033항 내지 제110항 중 어느 한 항의 키트에 의해, 치료를 요하는 대상체를 치료하는 방법.
  123. 제122항에 있어서, 상기 대상체는 CD19+ 세포가 병인학에 연루된 질환 또는 병태에 대해 치료되는, 방법.
  124. 제122항 또는 제123항에 있어서, 상기 대상체는 이질적 종양 및 혈액 세포 악성종양으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 치료되는, 방법.
  125. 제122항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 급성 림프아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 치료되는, 방법.
  126. 제111항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 다발성 골수종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종(NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종, 맨틀 세포 림프종(MCL), 버킷 림프종 및 모발 세포 백혈병(HCL)으로부터 선택된 질환 또는 병태에 대해 치료되는, 방법.
  127. 제111항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, (i) CAR-ID 및 인간화된 표적화 모이어티를 포함하는 제1 CAR-EC 스위치; (ii) CAR-ID 및 인간화된 표적화 모이어티를 포함하는 제2 CAR-EC 스위치; 및 (iii) 상기 제1 CAR-EC 스위치 및 상기 제2 CAR-EC 스위치의 각각에 상보성인 제1 CAR-EC를 투여하는 단계를 포함하되; 상기 제1 스위치 및 상기 제2 스위치 중 적어도 하나는 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항의 것인, 방법.
  128. 제111항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치로부터 선택된 제1 CAR-EC 스위치; (ii) CAR-ID 및 인간화된 표적화 모이어티를 포함하는 제2 CAR-EC 스위치; (iii) 상기 제1 CAR-EC 스위치와 상보성이지만, 상기 제2 CAR-EC 스위치와 상보성이 아닌 제1 CAR-EC; 및 (iv) 상기 제2 CAR-EC 스위치와 상보성인 제2 CAR-EC를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  129. 제127항 또는 제128항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC는 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 102항 중 어느 한 항에 기재된 CAR 중 어느 하나로부터 선택된 CAR을 발현하는, 방법.
  130. 제127항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC 스위치 및 상기 제2 CAR-EC 스위치는 상이한 표적화 모이어티에 결합하는, 방법.
  131. 제127항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC 스위치는 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치로부터 선택되는, 방법.
  132. 제127항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 CAR-EC 스위치는 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치로부터 선택되는, 방법.
  133. 제111항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 표적 세포에 대한 상기 제1 스위치의 표적화 모이어티의 결합 및 (ii) 상기 제1 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 대한 상기 제1 CAR-EC 상의 CAR의 결합은 모두 제1 CAR-EC 매개된 치료학적 효과를 유도하는, 방법.
  134. 제127항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 표적 세포에 대한 상기 제2 스위치의 표적화 모이어티의 결합 및 (ii) 상기 제2 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 대한 상기 제1 또는 제2 CAR-EC 중 어느 하나 상의 CAR의 결합은 모두 상기 제2 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 결합된 상기 제1 또는 제2 CAR-EC에 의해 생성된 CAR-EC 매개된 치료학적 효과를 유도하는, 방법.
  135. 제133항 또는 제134항에 있어서, 상기 치료학적 효과는 상기 표적 세포의 사멸을 포함하는, 방법.
  136. 제111항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC는 T 세포인, 방법.
  137. 제111항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포인 제2 CAR-EC를 포함하는, 방법.
  138. 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체가 발현된 CAR-EC는 T 세포인, CAR-EC 스위치.
  139. 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항에 기재된 CAR 중 어느 하나로부터 선택된 CAR을 발현하는 CAR-EC.
  140. 제139항에 있어서, 상기 CAR-EC는 T 세포인, CAR-EC.
  141. 제103항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC는 T 세포인, 키트.
  142. 제1033항 내지 제110항 및 제141항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포인 제2 CAR-EC를 포함하는, 키트.
  143. 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 스위치로부터 선택된 스위치 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 염, 부형제 또는 비히클을 포함하는, 약제학적 조성물.
  144. 제143항에 있어서, 담체, 부형제, 희석제, 항산화제, 보존제, 착색제, 항료 및 희석제, 유화제, 현탁제, 용매, 충전제, 벌크화제, 완충제, 전달 비히클, 등장화제, 공용매, 습윤제, 착화제, 완충제, 항균제 및/또는 계면활성제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  145. 적어도 2개의 CAR-EC 스위치 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 염, 부형제 또는 비히클을 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 적어도 2개의 CAR-EC 스위치 중 적어도 하나는 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 것으로부터 선택된 CAR-EC 스위치인, 약제학적 조성물.
  146. 제145항에 있어서, 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 것으로부터 선택된 적어도 2개의 CAR-EC 스위치를 포함하는, 약제학적 조성물.
  147. 제143항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 실질적으로 내독소 비함유인, 약제학적 조성물.
  148. 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치로부터 선택된 CAR-EC 스위치를 암호화하는, 폴리뉴클레오타이드.
  149. 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항의 CAR을 암호화하는, 폴리뉴클레오타이드.
  150. 제148항 또는 제149항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 벡터.
  151. 제148항 또는 제149항의 폴리뉴클레오타이드 또는 제130항의 벡터를 포함하는, 숙주 세포.
  152. 제149항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 T 세포 또는 제149항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터.
  153. 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치로부터 선택된 제1 CAR-EC 스위치 및 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항에 기재된 CAR로부터 선택된 CAR을 포함하는 제1 CAR-EC를 포함하는 CAR-EC 플랫폼.
  154. 제153항에 있어서, 하나 이상의 제2 CAR-EC 스위치를 더 포함하되, 각각의 제2 CAR-EC 스위치는,
    a. CAR-ID; 및
    b. 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합하는 제2 표적화 모이어티를 포함하고;
    상기 각각의 제2 CAR-EC 스위치의 제2 표적화 모이어티는 상기 제1 CAR-EC 스위치 상에 포함된 제1 표적화 모이어티와 상이하고;
    상기 제2 CAR-EC 스위치 상에 포함된 CAR-ID는 선택적으로
    (i) 상기 제1 CAR-EC 스위치 상에 포함된 제1 CAR-ID와 동일하거나,
    (ii) 상기 제1 CAR-EC 스위치 상에 포함된 제1 CAR-ID와는 상이한 제2 CAR-ID이되;
    단, 상기 제2 CAR-EC 스위치가 제2 CAR-ID를 포함하는 경우, 상기 CAR-EC 플랫폼은 상기 제2 CAR-EC 스위치의 제2 CAR-ID에 결합하는 CAR을 포함하는 제2 CAR-EC를 더 포함하는, CAR-EC 플랫폼.
  155. 재발된 암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게,
    a. 제21항 내지 제48항 중 어느 한 항에 기재된 스위치 중 어느 하나로부터 선택된 제1 CAR-EC 스위치;
    b. CAR-ID 및 표적화 모이어티를 포함하는 제2 CAR-EC 스위치; 및
    c. 상기 제1 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID 및 상기 제2 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 결합하는 CAR-EC를 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 제1 CAR-EC는 상기 대상체의 재발 전에 투여되고, 상기 제2 CAR-EC 스위치는 상기 대상체의 재발 후에 투여되는, 방법.
  156. 제155항에 있어서, 상기 제2 CAR-EC 스위치는 항-CD20 표적화 모이어티를 포함하는, 방법.
  157. 재발된 암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게,
    a. CAR-ID 및 표적화 모이어티를 포함하는 제1 CAR-EC 스위치;
    b. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 기재된 스위치 중 어느 하나로부터 선택된 제2 CAR-EC 스위치; 및
    c. 상기 제1 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID 및 상기 제2 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 결합하는 CAR-EC를 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 제1 CAR-EC는 상기 대상체의 재발 전에 투여되고, 상기 제2 CAR-EC 스위치는 상기 대상체의 재발 후에 투여되는, 방법.
  158. 제157항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC 스위치는 항-CD20 표적화 모이어티를 포함하는, 방법.
  159. 제155항 내지 제157항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC 스위치 상의 표적화 모이어티는 제1 세포 표면 분자에 결합하고, 상기 제2 CAR-EC 스위치 상의 표적화 모이어티는 상기 제1 세포 표면 분자와 상이한 제2 세포 표면 분자에 결합하고, 상기 제1 세포 표면 분자는 상기 재발 전에 암 세포 상에 발현되고, 상기 제2 세포 표면 분자는 상기 재발 후에 암 세포 상에 발현된, 방법.
  160. 제159항에 있어서, 상기 제1 세포 표면 분자는,
    a. 상기 재발 전과 비교하여 상기 재발 후에 더 낮은 수준에서 발현되거나; 또는
    b. 상기 재발 후에 발현되지 않는, 방법.
  161. 표적 세포를 용해시키는 방법으로서, 상기 표적 세포를 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치로부터 선택된 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계 및 상기 CAR-EC 스위치를 상보성 CAR-EC와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  162. 제161항에 있어서, 상기 CAR-EC는 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항에 기재된 CAR 중 어느 하나로부터 선택된 CAR을 발현하되, 단 상기 CAR은 상기 CAR-EC 상의 CAR-ID와 상보성인, 방법.
  163. 제161항 또는 제162항에 있어서, 상기 접촉은 생체내 발생하는, 방법.
  164. 표적 세포를 사멸시키는 방법으로서, 상기 표적 세포를 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치로부터 선택된 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계 및 상기 CAR-EC 스위치를 상보성 CAR-EC와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  165. 제164항에 있어서, 상기 CAR-EC는 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항에 기재된 CAR 중 어느 하나로부터 선택된 CAR을 발현하되, 단 상기 CAR은 상기 CAR-EC 상의 CAR-ID와 상보성인, 방법.
  166. CAR-EC를 활성화시키는 방법으로서, CAR-EC 상에 발현된 CAR을 제21항 내지 제68항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치 중 어느 하나로부터 선택된 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계를 포함하되, 상기 CAR-EC는 상기 CAR-EC 스위치 상의 표적화 모이어티가 상기 표적 세포 상의 이의 표적 및 상기 CAR-EC 상의 CAR의 세포외 도메인 둘 다에 결합될 때 활성화되고, 상기 CAR은 상기 CAR-EC 스위치 상의 CAR-ID에 결합하는, 방법.
  167. 제155항 내지 제166항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR-EC는 T 세포인, 방법.
  168. 제111항 내지 제116항, 제120항 내지 제123항 및 제127항 내지 제137항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 암인 질환 또는 병태에 대해 치료되는, 방법.
  169. 제111항 내지 137항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합하는, 방법.
  170. 제155항 내지 제160항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 표적화 모이어티는 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합하는, 방법.
  171. 제161항 내지 제170항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 세포는 암 세포인, 방법.
  172. 제171항에 있어서, 상기 암 세포는 CD19 양성 세포; CD19 양성 B 림프구; Her2 양성 세포; Her2 양성 유방암 세포; Her2 양성 췌장암 세포; BCMA 양성 세포; BCMA 양성 다발성 골수종 세포; CS1 양성 세포; CS1 양성 다발성 골수종 세포; EGFRvIII 양성 세포; EGFRvIII 양성 교모세포종 세포; CD20 양성 세포; CD22 양성 세포; CD33 양성 세포; CD33 양성 급성 골수성 백혈병 세포; CD123 양성 세포; CD123 양성 급성 골수성 백혈병 세포; CD123 양성 세포; CD123 양성 급성 림프구 백혈병 세포; CLL1 양성 세포; CLL1 양성 급성 골수성 백혈병 세포; 및 (i) CD33 양성, (ii) CD123 양성, (iii) CLL1 양성인 급성 골수성 백혈병 세포; 또는 (iv) 상기 (i), (ii) 및 (iii) 중 2개 이상의 조합으로부터 선택되는, 방법.
  173. 제111항 내지 제137항 및 제161항 내지 제172항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 상기 CAR-EC 및 상기 CAR-EC 스위치를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  174. CD20에 지향된 CAR을 발현하는 제1 CAR-EC에 의해 이전에 치료된 대상체에서 재발된 암을 치료하는 방법으로서, 상기 대상체는 상기 재발 전의 CD20의 발현과 비교하여 상기 재발 후의 암 세포 상의 CD20의 발현의 감소로 인해 재발된 암을 갖고, 상기 방법은 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치 중 어느 하나로부터 선택된 CAR-EC 스위치 및 CAR-EC 스위치와 상보성인 CAR을 발현하는 제2 CAR-EC를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  175. 제174항에 있어서, 상기 CAR은 제49항 내지 제82항 중 어느 한 항에 기재된 CAR 중 어느 하나로부터 선택되는, 방법.
  176. 제155항 내지 제158항 및 제174항 내지 제175항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 급성 림프아구성 백혈병 또는 만성 림프구성 백혈병인, 방법.
  177. 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항에 기재된 CAR 중 어느 하나를 발현하는 CAR-EC 및 표적화 모이어티 및 CAR-ID를 포함하는 제1 상보성 CAR-EC 스위치에 의해, 치료를 요하는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 표적화 모이어티는 표적 세포 상의 세포 표면 분자에 결합하는, 방법.
  178. 재발된 암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게,
    a. 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항에 기재된 CAR 중 어느 하나를 발현하는 제1 CAR-EC;
    b. 제1 CAR에 상보성인 제1 CAR-ID 및 표적화 모이어티를 포함하는 제1 CAR-EC 스위치; 및
    c. 상기 제1 CAR에 상보성인 제2 CAR-ID 및 표적화 모이어티를 포함하는 제2 CAR-EC 스위치를 투여하는 단계를 포함하되;
    상기 제1 CAR-EC 스위치는 상기 대상체의 재발 전에 투여되고, 상기 제2 CAR-EC 스위치는 상기 대상체의 재발 후에 투여되는, 방법.
  179. 제178항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC 스위치는 항-CD20 표적화 모이어티를 포함하는, 방법.
  180. 제178항 또는 제179항에 있어서, 상기 제2 CAR-EC 스위치는 항-CD19 표적화 모이어티를 포함하는, 방법.
  181. 제78항에 있어서, 상기 제1 CAR-EC 스위치는 항-CD19 표적화 모이어티를 포함하는, 방법.
  182. 제178항 또는 제181항에 있어서, 상기 제2 CAR-EC 스위치는 항-CD20 표적화 모이어티를 포함하는, 방법.
  183. 제159항에 있어서, 상기 제1 세포 표면 분자는,
    a. 상기 재발 전과 비교하여 상기 재발 후에 더 낮은 수준에서 발현되거나; 또는
    b. 상기 재발 후에 발현되지 않는, 방법.
  184. 표적 세포를 용해시키는 방법으로서, 상기 표적 세포를 표적화 모이어티 및 CAR-ID를 포함하는 제1 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계 및 상기 제1 CAR-EC 스위치를 상보성 CAR-EC와 접촉시키는 단계를 포함하되, 상기 CAR-EC는 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항에 기재된 CAR 중 어느 하나로부터 선택된 CAR을 발현하는, 방법.
  185. 표적 세포를 사멸시키는 방법으로서, 상기 표적 세포를 표적화 모이어티 및 CAR-ID를 포함하는 CAR-EC 스위치와 접촉시키는 단계 및 상기 제1 CAR-EC 스위치를 상보성 CAR-EC와 접촉시키는 단계를 포함하되, 상기 CAR-EC는 제1항 내지 제20항 및 제69항 내지 제102항 중 어느 한 항에 기재된 CAR 중 어느 하나로부터 선택된 CAR을 발현하는, 방법.
  186. 제177항 내지 제185항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR-EC는 T 세포인, 방법, 방법.
  187. 제177항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CAR-EC 스위치는 제21항 내지 제68항 및 제138항 내지 제140항 중 어느 한 항에 기재된 CAR-EC 스위치 중 어느 하나로부터 선택되는, 방법.
  188. 제177항 내지 제187항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 세포는 암 세포인, 방법.
  189. 제188항에 있어서, 상기 암 세포는 CD19 양성 세포; CD19 양성 B 림프구; Her2 양성 세포; Her2 양성 유방암 세포; Her2 양성 췌장암 세포; BCMA 양성 세포; BCMA 양성 다발성 골수종 세포; CS1 양성 세포; CS1 양성 다발성 골수종 세포; EGFRvIII 양성 세포; EGFRvIII 양성 교모세포종 세포; CD20 양성 세포; CD22 양성 세포; CD33 양성 세포; CD33 양성 급성 골수성 백혈병 세포; CD123 양성 세포; CD123 양성 급성 골수성 백혈병 세포; CD123 양성 세포; CD123 양성 급성 림프구 백혈병 세포; CLL1 양성 세포; CLL1 양성 급성 골수성 백혈병 세포; 및 (i) CD33 양성, (ii) CD123 양성, (iii) CLL1 양성인 급성 골수성 백혈병 세포; 또는 (iv) 상기 (i), (ii) 및 (iii) 중 2개 이상의 조합으로부터 선택되는, 방법.
  190. 대상체에 대한 CAR-EC 스위치 투여의 투약 섭생을 조정함으로써 T 세포 반응의 규모를 조절하는 방법.
  191. 제190항에 있어서, 제1 투약 섭생은 제1 짧은 투약 스케줄에서 제1 고용량으로 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하고, 제2 투약 섭생은 제1 투약 스케줄보다 더 긴 제2 투약 스케줄에서 제2 저용량으로 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  192. 제191항에 있어서, 상기 제1 투약 스케줄은 적어도 격일 1회로 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  193. 제191항에 있어서, 상기 제1 투약 스케줄은 격일로 CAR-EC 스위치를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  194. 제191항 내지 제193항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 투약 스케줄은 전체 4회 투여 동안 격일로 상기 CAR-EC 스위치의 제1 고용량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  195. 제191항 내지 제193항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 투약 스케줄은 전체 4회 투여 동안 또는 전체 약 4회 투여 동안 격일로 또는 거의 격일로 상기 CAR-EC 스위치의 제1 고용량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  196. 제191항 내지 제195항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 투약 스케줄은 전체 12회 투여 동안 격일로 상기 제2 저용량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  197. 제191항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 투약 스케줄은 전체 12회 투여 동안 또는 약 12회 투여 동안 격일로 또는 거의 격일로 상기 제2 저용량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  198. 제191항 내지 제197항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고용량은 상기 저용량의 적어도 5배, 10배 또는 적어도 15배인, 방법.
  199. 제191항 내지 제198항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 투약 섭생은 상기 저용량이 투여된 대상체에서의 T 세포 증식과 비교하여 상기 고용량이 투여된 대상체에서의 T 세포 증식을 증가시키는, 방법.
KR1020197014306A 2016-10-19 2017-10-19 인간화된 표적화 모이어티 및/또는 최적화된 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 용도 KR102613430B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020237042617A KR20230172612A (ko) 2016-10-19 2017-10-19 인간화된 표적화 모이어티 및/또는 최적화된 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 용도

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662410315P 2016-10-19 2016-10-19
US62/410,315 2016-10-19
PCT/US2017/057460 WO2018075807A1 (en) 2016-10-19 2017-10-19 Chimeric antigen receptor effector cell switches with humanized targeting moieties and/or optimized chimeric antigen receptor interacting domains and uses thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237042617A Division KR20230172612A (ko) 2016-10-19 2017-10-19 인간화된 표적화 모이어티 및/또는 최적화된 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 용도

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190065433A true KR20190065433A (ko) 2019-06-11
KR102613430B1 KR102613430B1 (ko) 2023-12-18

Family

ID=60263039

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197014306A KR102613430B1 (ko) 2016-10-19 2017-10-19 인간화된 표적화 모이어티 및/또는 최적화된 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 용도
KR1020237042617A KR20230172612A (ko) 2016-10-19 2017-10-19 인간화된 표적화 모이어티 및/또는 최적화된 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 용도

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237042617A KR20230172612A (ko) 2016-10-19 2017-10-19 인간화된 표적화 모이어티 및/또는 최적화된 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 용도

Country Status (8)

Country Link
US (2) US11174306B2 (ko)
EP (1) EP3529268A1 (ko)
JP (2) JP7149935B2 (ko)
KR (2) KR102613430B1 (ko)
CN (1) CN110267982B (ko)
AU (2) AU2017345479B2 (ko)
CA (1) CA3040343A1 (ko)
WO (1) WO2018075807A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021066420A1 (ko) * 2019-10-01 2021-04-08 충북대학교 산학협력단 Cd138에 특이적으로 결합하는 키메릭 항원 수용체, 이를 발현하는 면역세포 및 이의 항암 용도

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
LT2906251T (lt) * 2012-10-12 2017-12-11 Adc Therapeutics Sa Pirolobenzodiazepino-anti-cd22 antikūno konjugatai
US11225520B2 (en) 2016-02-16 2022-01-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Immunotherapy compositions and methods
JP7288402B2 (ja) * 2017-02-17 2023-06-07 パーデュー・リサーチ・ファウンデーション 細胞医療用の標的リガンド－ペイロードによる薬剤デリバリー
EP3589295A4 (en) 2017-02-28 2020-11-04 Endocyte, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS OF T CAR LYMPHOCYTE THERAPY
WO2019144095A1 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Methods of use for car t cells
CN110606893B (zh) * 2018-06-15 2022-11-15 北昊干细胞与再生医学研究院有限公司 一种靶向cd19和cd20双抗原的嵌合性抗原受体t细胞治疗肿瘤的方法
AU2019397033B2 (en) 2018-12-12 2023-06-29 Kite Pharma, Inc. Chimeric antigen receptors and CAR-T cells and methods of use
CN109609465A (zh) * 2018-12-29 2019-04-12 武汉波睿达生物科技有限公司 一种利用脐血来源的γδT细胞制备CAR-T细胞的方法及该CAR-T细胞和应用
JP2022525435A (ja) * 2019-04-08 2022-05-13 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター Ｃｄ１９抗体およびこれを使用する方法
CN110628797A (zh) * 2019-09-16 2019-12-31 广州艺得诺生物科技有限公司 一种犬红细胞抗原dea1.1的鉴定方法
EP4114861A4 (en) * 2020-03-02 2024-05-08 Univ California CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS AND RELATED METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING CANCER
EP4114368A1 (en) * 2020-03-03 2023-01-11 Active Biotech AB Tasquinimod or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in combination therapy
WO2022216906A1 (en) * 2021-04-08 2022-10-13 The Scripps Research Institute Novel therapies with engineered effector cells
WO2023107940A2 (en) * 2021-12-07 2023-06-15 The Scripps Research Institute Switchable car-t therapies for treating human cancers
CN115976035B (zh) * 2022-10-14 2024-01-09 武汉大学 可调控通用型car、car-t细胞及融合引导多肽
CN117487014A (zh) * 2023-03-07 2024-02-02 四川尚锐生物医药有限公司 一种单克隆抗体或其抗原结合片段及其抗肿瘤的用途
CN116444669B (zh) * 2023-04-04 2024-02-13 科弈(浙江)药业科技有限公司 靶向bcma car-t细胞人源化抗体
CN116462770B (zh) * 2023-04-18 2024-03-08 科弈(浙江)药业科技有限公司 Cd19的人源化抗体和一种表达双特异性嵌合抗原受体的car-t细胞及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015057834A1 (en) * 2013-10-15 2015-04-23 The California Institute For Biomedical Research Peptidic chimeric antigen receptor t cell switches and uses thereof
WO2016168773A2 (en) * 2015-04-15 2016-10-20 The California Institute For Biomedical Research Optimized pne-based chimeric receptor t cell switches and uses thereof

Family Cites Families (112)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3887699A (en) 1969-03-24 1975-06-03 Seymour Yolles Biodegradable polymeric article for dispensing drugs
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4263428A (en) 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
EP0052322B1 (de) 1980-11-10 1985-03-27 Gersonde, Klaus, Prof. Dr. Verfahren zur Herstellung von Lipid-Vesikeln durch Ultraschallbehandlung, Anwendung des Verfahrens und Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens
PH19942A (en) 1980-11-18 1986-08-14 Sintex Inc Microencapsulation of water soluble polypeptides
US4675189A (en) 1980-11-18 1987-06-23 Syntex (U.S.A.) Inc. Microencapsulation of water soluble active polypeptides
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
EP0088046B1 (de) 1982-02-17 1987-12-09 Ciba-Geigy Ag Lipide in wässriger Phase
DE3218121A1 (de) 1982-05-14 1983-11-17 Leskovar, Peter, Dr.-Ing., 8000 München Arzneimittel zur tumorbehandlung
EP0102324A3 (de) 1982-07-29 1984-11-07 Ciba-Geigy Ag Lipide und Tenside in wässriger Phase
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
DE3486459D1 (de) 1983-09-26 1997-12-11 Udo Dr Med Ehrenfeld Mittel und Erzeugnis für die Diagnose und Therapie von Tumoren sowie zur Behandlung von Schwächen der zelligen und humoralen Immunabwehr
DE3474511D1 (en) 1983-11-01 1988-11-17 Terumo Corp Pharmaceutical composition containing urokinase
DE3413608A1 (de) 1984-04-11 1985-10-24 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Implantierbare zubereitungen von regulatorischen peptiden mit gesteuerter freisetzung und verfahren zu ihrer herstellung
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5906936A (en) 1988-05-04 1999-05-25 Yeda Research And Development Co. Ltd. Endowing lymphocytes with antibody specificity
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5133974A (en) 1989-05-05 1992-07-28 Kv Pharmaceutical Company Extended release pharmaceutical formulations
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US6565841B1 (en) 1991-03-15 2003-05-20 Amgen, Inc. Pulmonary administration of granulocyte colony stimulating factor
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
IT1247472B (it) 1991-05-31 1994-12-17 Fidia Spa Processo per la preparazione di microsfere contenenti componenti biologicamente attivi.
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
AU669124B2 (en) 1991-09-18 1996-05-30 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing humanized chimera antibody
DE69229477T2 (de) 1991-09-23 1999-12-09 Cambridge Antibody Tech Methoden zur Herstellung humanisierter Antikörper
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5407686A (en) 1991-11-27 1995-04-18 Sidmak Laboratories, Inc. Sustained release composition for oral administration of active ingredient
WO1993015722A1 (en) 1992-02-07 1993-08-19 Syntex (Usa) Inc. Controlled delivery of pharmaceuticals from preformed porous microparticles
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US8211422B2 (en) 1992-03-18 2012-07-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric receptor genes and cells transformed therewith
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US5686072A (en) 1992-06-17 1997-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas Epitope-specific monoclonal antibodies and immunotoxins and uses thereof
US5372930A (en) 1992-09-16 1994-12-13 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Sensor for ultra-low concentration molecular recognition
US6210671B1 (en) 1992-12-01 2001-04-03 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with L-selectin
CA2150803C (en) 1992-12-02 2006-01-31 Henry Auer Controlled release growth hormone containing microspheres
US5861156A (en) 1993-01-08 1999-01-19 Creative Biomolecules Methods of delivering agents to target cells
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
US6372716B1 (en) 1994-04-26 2002-04-16 Genetics Institute, Inc. Formulations for factor IX
ATE197398T1 (de) 1994-09-09 2000-11-11 Takeda Chemical Industries Ltd Zubereitung mit verzögerter freigabe eines metallsalz eines peptids
CA2204183A1 (en) 1994-11-01 1996-05-09 Andrew Lawrence Feldhaus Chimeric receptors for the generation of selectively-activatable th-independent cytotoxic t cells
ES2170853T3 (es) 1995-03-28 2002-08-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Nanosferas que comprenden un polisacarido biocompatible.
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
CN1102854C (zh) 1995-06-07 2003-03-12 阿尔克姆斯控制治疗公司 人生长激素的延续释放组合物
ZA965368B (en) 1995-07-14 1997-01-14 Novo Nordisk As A pharmaceutical formulation
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
US5736152A (en) 1995-10-27 1998-04-07 Atrix Laboratories, Inc. Non-polymeric sustained release delivery system
US7122636B1 (en) 1997-02-21 2006-10-17 Genentech, Inc. Antibody fragment-polymer conjugates and uses of same
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6566329B1 (en) 1999-06-28 2003-05-20 Novo Nordisk A/S Freeze-dried preparation of human growth hormone
ES2256027T3 (es) 1999-08-09 2006-07-16 Emd Lexigen Research Center Corp. Complejos de anticuerpos que contienen multiples citoquinas.
US6849425B1 (en) 1999-10-14 2005-02-01 Ixsys, Inc. Methods of optimizing antibody variable region binding affinity
IL149809A0 (en) 1999-12-15 2002-11-10 Genentech Inc Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
EP1242457B1 (en) 1999-12-28 2004-08-11 Esbatech AG Intrabodies with defined framework that is stable in a reducing environment and applications thereof
US6686940B2 (en) 2000-11-16 2004-02-03 Minolta Co., Ltd. Reversible image display medium
US7514537B2 (en) 2001-04-30 2009-04-07 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human gliomas
US20080260731A1 (en) 2002-03-01 2008-10-23 Bernett Matthew J Optimized antibodies that target cd19
US7122622B2 (en) 2002-04-16 2006-10-17 Biosynthema Inc. Peptide compounds having improved binding affinity to somatostatin receptors
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
ES2601143T3 (es) 2002-07-19 2017-02-14 Omeros Corporation Copolímeros tribloque biodegradables, métodos de síntesis de los mismos, e hidrogeles y biomateriales preparados a partir de los mismos
US20050129671A1 (en) 2003-03-11 2005-06-16 City Of Hope Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells
US8784821B1 (en) 2003-05-31 2014-07-22 Amgen Research (Munich) Gmbh Human-anti-human cd3 binding molecules
US20050113564A1 (en) 2003-11-05 2005-05-26 St. Jude Children's Research Hospital Chimeric receptors with 4-1BB stimulatory signaling domain
EP1576952A1 (en) 2004-03-18 2005-09-21 OctoPlus Technologies B.V. Hydrogel microspheres with improved release profile
CN100376599C (zh) 2004-04-01 2008-03-26 北京安波特基因工程技术有限公司 基因工程重组抗cea抗cd3抗cd28线性单链三特异抗体
JP2009520949A (ja) 2005-11-16 2009-05-28 アンブルックス，インコーポレイテッド 非天然アミノ酸を含んでいる組成物および方法
CA2632682A1 (en) 2005-12-08 2007-06-14 University Of Louisville Research Foundation, Inc. In vivo cell surface engineering
EP1968635B1 (en) 2005-12-14 2014-09-17 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides
CN102702105A (zh) 2005-12-30 2012-10-03 Ambrx公司 含有非天然氨基酸和多肽的组合物、涉及非天然氨基酸和多肽的方法以及非天然氨基酸和多肽的用途
KR20080108416A (ko) 2006-01-19 2008-12-15 암브룩스, 인코포레이티드 조절된 면역원성을 갖는 비천연 아미노산 폴리펩티드
EP1894939A1 (en) 2006-09-01 2008-03-05 GSF-Forschungszentrum für Umwelt und Gesundheit GmbH Novel supertag and its use
JP4616237B2 (ja) 2006-11-07 2011-01-19 日本電信電話株式会社 シリコン化合物薄膜の形成方法
AU2007333737A1 (en) 2006-12-18 2008-06-26 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides
CA2671851A1 (en) 2006-12-28 2008-07-10 Ambrx, Inc. Phenazine and quinoxaline substituted amino acids and polypeptides
US8865169B2 (en) 2007-02-20 2014-10-21 Tufts University Methods and systems for multi-antibody therapies
HUE038506T2 (hu) 2007-03-30 2018-10-29 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Kostimuláló ligand konstitutív expressziója adoptív módon átvitt T-limfocitákon
PL2187965T3 (pl) 2007-08-17 2020-05-18 Purdue Research Foundation Koniugaty wiążący psma ligand-łącznik i sposoby ich zastosowania
KR101759460B1 (ko) 2007-09-21 2017-07-18 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 표적화된 인터페론이 강력한 아폽토시스 및 항-종양 활성을 발휘함
US9272029B2 (en) 2009-03-26 2016-03-01 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Interferon lambada-antibody complexes
AU2009296267B2 (en) 2008-09-26 2013-10-31 Ambrx, Inc. Non-natural amino acid replication-dependent microorganisms and vaccines
WO2010037838A2 (en) * 2008-10-01 2010-04-08 Micromet Ag Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody
EP2355849B1 (en) 2008-11-06 2018-05-02 University Of Guelph Methods of improving the therapeutic efficacy and utility of antibody fragments
CA2754906C (en) 2009-03-10 2021-02-09 Baylor Research Institute Antigen presenting cell targeted fusion proteins comprising a linker for increased stability
WO2011041093A1 (en) 2009-10-01 2011-04-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-vascular endothelial growth factor receptor-2 chimeric antigen receptors and use of same for the treatment of cancer
ES2717629T3 (es) 2009-11-03 2019-06-24 Hope City Receptor del factor de crecimiento epidérmico truncado (EGFRt) para selección de células T transducidas
US8802091B2 (en) 2010-03-04 2014-08-12 Macrogenics, Inc. Antibodies reactive with B7-H3 and uses thereof
ES2602743T3 (es) 2010-09-08 2017-02-22 Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus Receptores de antígenos quiméricos con una región bisagra optimizada
PT2632954E (pt) 2010-10-27 2016-02-03 Amgen Res Munich Gmbh Meios e métodos para tratar dlbcl
DK2649086T3 (en) 2010-12-09 2017-09-18 Univ Pennsylvania USING CHEMICAL ANTIGEN RECEPTOR-MODIFIED T-CELLS TO TREAT CANCER
ES2791716T3 (es) 2010-12-14 2020-11-05 Univ Maryland Células T que expresan al receptor de antígeno quimérico antietiqueta universal y métodos para el tratamiento del cáncer
MX371526B (es) 2011-05-27 2020-01-31 Ambrx Inc Composiciones que contienen, metodos que incluyen, y usos de derivados de dolastatina enlazados a aminoacidos no naturales.
EP3470413A3 (en) 2011-05-27 2019-08-07 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives
EP3549611B1 (en) 2011-07-29 2021-06-30 The Trustees of the University of Pennsylvania Switch costimulatory receptors
US9708384B2 (en) 2011-09-22 2017-07-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Universal immune receptor expressed by T cells for the targeting of diverse and multiple antigens
WO2013093809A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
EP3594245A1 (en) 2012-02-13 2020-01-15 Seattle Children's Hospital d/b/a Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
MX2014014894A (es) 2012-06-04 2015-02-20 Irm Llc Metodos de marcado especifico del sitio y moleculas producidas mediante los mismos.
US20150320799A1 (en) 2012-12-20 2015-11-12 Purdue Research Foundation Chimeric antigen receptor-expressing t cells as anti-cancer therapeutics
WO2014153002A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 The California Institute For Biomedical Research Bispecific antibodies and uses thereof
RS63152B1 (sr) * 2013-07-25 2022-05-31 Cytomx Therapeutics Inc Multispecifična antitela, multispecifična antitela koja mogu da se aktiviraju i postupci za njihovu upotrebu
AU2014337385B2 (en) 2013-10-15 2020-04-30 The Scripps Research Institute Chimeric antigen receptor T cell switches and uses thereof
CA2938821A1 (en) 2014-02-07 2015-08-13 Dong Wha Pharm. Co., Ltd. Anticancer adjuvant composition containing rip3 expression promoter as active ingredient, method for screening for anticancer adjuvant enhancing sensitivity of anticancer drug by promoting rip3 expression, and method for monitoring sensitivity of anticancer drug
EP3155018A4 (en) * 2014-06-06 2018-01-10 The California Institute for Biomedical Research Constant region antibody fusion proteins and compositions thereof
WO2016054520A2 (en) * 2014-10-03 2016-04-07 The California Institute For Biomedical Research Engineered cell surface proteins and uses thereof
CN108064283B (zh) * 2015-02-24 2024-01-09 加利福尼亚大学董事会 结合触发的转录开关及其使用方法
WO2016154621A1 (en) * 2015-03-26 2016-09-29 The California Institute For Biomedical Research SWITCHABLE NON-scFv CHIMERIC RECEPTORS, SWITCHES, AND USES THEREOF
US11492413B2 (en) * 2017-12-04 2022-11-08 Temple University—Of the Commonwealth System of Higher Education Switchable antibody conjugate

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015057834A1 (en) * 2013-10-15 2015-04-23 The California Institute For Biomedical Research Peptidic chimeric antigen receptor t cell switches and uses thereof
KR20160062760A (ko) * 2013-10-15 2016-06-02 더 캘리포니아 인스티튜트 포 바이오메디칼 리써치 펩타이드 키메라 항원 수용체 t 세포 스위치 및 이의 용도
WO2016168773A2 (en) * 2015-04-15 2016-10-20 The California Institute For Biomedical Research Optimized pne-based chimeric receptor t cell switches and uses thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Proceedings National Academy of Sciences 113(4):E459-E468(2016.01.26.) *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021066420A1 (ko) * 2019-10-01 2021-04-08 충북대학교 산학협력단 Cd138에 특이적으로 결합하는 키메릭 항원 수용체, 이를 발현하는 면역세포 및 이의 항암 용도
KR20210039126A (ko) * 2019-10-01 2021-04-09 충북대학교 산학협력단 Cd138에 특이적으로 결합하는 키메릭 항원 수용체, 이를 발현하는 면역세포 및 이의 항암 용도

Also Published As

Publication number Publication date
AU2024202046A1 (en) 2024-04-18
JP7149935B2 (ja) 2022-10-07
US20220073597A1 (en) 2022-03-10
KR20230172612A (ko) 2023-12-22
JP2022185016A (ja) 2022-12-13
CA3040343A1 (en) 2018-04-26
KR102613430B1 (ko) 2023-12-18
EP3529268A1 (en) 2019-08-28
CN110267982A (zh) 2019-09-20
JP2019535244A (ja) 2019-12-12
US11174306B2 (en) 2021-11-16
CN110267982B (zh) 2024-02-23
US20190359697A1 (en) 2019-11-28
WO2018075807A1 (en) 2018-04-26
AU2017345479A1 (en) 2019-05-09
AU2017345479B2 (en) 2024-03-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102613430B1 (ko) 인간화된 표적화 모이어티 및/또는 최적화된 키메라 항원 수용체-상호작용 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체 효과기 세포 스위치 및 이의 용도
KR102339240B1 (ko) 펩타이드 키메라 항원 수용체 t 세포 스위치 및 이의 용도
KR102591930B1 (ko) Bcma 결합 분자 및 그의 사용 방법
KR101228157B1 (ko) 광견병 바이러스를 중화시킬 수 있는 결합 분자 및 그 용도
JP3786695B2 (ja) 修飾した抗原性免疾グロブリンによるｔ細胞の活性化
KR20220157517A (ko) 키메라 수용체 및 그의 사용 방법
KR20210148154A (ko) 세이프 하버 좌위 내로의 항체 코딩 서열의 삽입을 위한 방법 및 조성물
CN114174325A (zh) 用于免疫疗法的工程化自然杀伤细胞和工程化t细胞的组合
TW202237826A (zh) 基因編輯的自然殺手細胞
CN114457044A (zh) 武装有异源基因的溶瘤腺病毒
KR20150023811A (ko) 암의 치료를 위한 lsr 항체 및 그의 용도
JP2002522063A (ja) 増加した血清半減期を有する改変された分子の生成
CN110035773A (zh) 新型抗ctla4抗体
TW200823235A (en) Prophylactic and therapeutic agent for cancers
KR20190141655A (ko) 종양 형질도입용 조성물 및 방법
KR20130066632A (ko) 치료적 저밀도 지단백질-관련 단백질 ６ （ｌｒｐ６） 항체에 대한 조성물 및 사용 방법
KR20210045985A (ko) 항-bcma 키메라 항원 수용체의 용도
SG175682A1 (en) Selection of human monoclonal antibodies by mammalian cell display
CN107074951B (zh) 拮抗性抗-ox40l抗体及其使用方法
CN111139233B (zh) 广谱中和抗EV71、CA16、CA10和CA6人-鼠嵌合IgM型单克隆抗体及应用
KR20200103774A (ko) 단일클론 항체 및 그 이용 방법
US20070207145A1 (en) Mouse/human chimeric anti-phencyclidine antibody and uses thereof
KR102102239B1 (ko) 유방암을 치료하기 위한 방법
US20230060376A1 (en) B cell receptor modification in b cells
KR20230002681A (ko) 대형 아데노바이러스 페이로드의 통합

Legal Events

Date Code Title Description
AMND Amendment
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
X091 Application refused [patent]
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)