JP2019535244A - ヒト化された標的化部分および／または最適化されたキメラ抗原受容体相互作用ドメインを有する、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチ、ならびにその使用 - Google Patents

ヒト化された標的化部分および／または最適化されたキメラ抗原受容体相互作用ドメインを有する、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチ、ならびにその使用 Download PDF

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Abstract

本開示は、標的細胞上のＣＤ１９に結合するヒト化された標的化部分と、キメラ受容体エフェクター細胞および／または最適化されたキメラ受容体相互作用ドメインを含むキメラ受容体エフェクター細胞スイッチに結合するキメラ受容体相互作用ドメインとを含むヒト化されたキメラ受容体エフェクター細胞スイッチを使用して、キメラ受容体エフェクター細胞を選択的に活性化および非活性化させるための組成物、方法、キット、およびプラットフォームを提供する。また、かかるキメラ受容体エフェクター細胞およびキメラ受容体エフェクター細胞スイッチを用いて、疾患および状態を治療する方法も開示される。【選択図】図３０

Description

相互参照
本出願は、２０１６年１０月１９日に出願された米国仮出願第６２／４１０，３１５号の優先権を主張し、その出願の全体が参照により本明細書に組込まれる。
配列一覧に関する記載
本出願に関連する配列一覧が、ハードコピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組込まれる。配列一覧を含むテキストファイルの名称は、ＣＩＢＲ＿０１１＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは７１７ＫＢであり、２０１７年１０月１８日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
政府の権利の記載
本発明は、アメリカ国立衛生研究所より与えられた認可番号１Ｒ０１ＣＡ２０８３９８下で、政府の支援と共に作成された。政府は、本発明の特定の権利を有する。
免疫療法は、化学療法への魅力的な代替法になっており、遺伝子修飾されたＴ細胞の養子性移行を使用して、免疫システムに悪性腫瘍細胞を認識し、かつ排除するように「再度教える」免疫療法を含む。遺伝子修飾されたＴ細胞は、キメラ抗原受容体を発現し、一般に、ＣＤ３−ζシグナル伝達エンドドメインと、膜貫通ドメインと、受容体に、標的悪性細胞上の腫瘍関連抗原に対する特異性を与えるモノクローナル抗体から誘導される細胞外一本鎖可変性断片（ｓｃＦｖ）とから成る。キメラ抗原受容体を介して腫瘍関連抗原に結合する際、Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ−細胞）を発現するキメラ抗原受容体は、悪性細胞に対して細胞傷害性である免疫応答を開始する。かかる療法は、化学療法耐性を回避することができ、再発／難治性疾患に対して活性であり、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）患者に対して持続的な寛解をもたらすことが示されている。しかしながら、これらの療法は、それらが、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、毒性リンパ球減少症、血液学的標的に対する慢性低ガンマグロブリン血症、固形腫瘍標的に対する腫瘍細胞溶解の致死的な非標的化、脳浮腫、ＣＡＲ Ｔ−細胞を発現する抗ＣＤ１９抗体の使用を伴う慢性Ｂ細胞赤芽球癆、およびいくつかの場合には死などの望まれない効果を引き起こすため、さらなる調査および最適化を必要とする。
本開示は、キメラ受容体エフェクター細胞（例えば、キメラ抗原受容体Ｔ細胞）を選択的に活性化および非活性化させる組成物および方法を提供し、これらは、療法の制御を提供することで、現在治験で試験されている従来のＣＡＲ−Ｔ細胞設計よりも安全かつ多用途の免疫療法を提供し得る。
本開示は、ヒト化されたスイッチおよびスイッチ可能なキメラ受容体エフェクター細胞を含む、キメラ受容体エフェクター細胞スイッチ（本明細書で「スイッチ」と称される）を提供する。本開示はまた、ヒト化されたスイッチ可能なキメラ受容体を含むキメラ受容体エフェクター細胞を提供する。本開示はまた、１つ以上のヒト化されたキメラ受容体エフェクター細胞スイッチを含むヒト化されたＣＡＲ−ＥＣプラットフォームと、ヒト化されたスイッチ可能なキメラ受容体を含む１つ以上のキメラ受容体エフェクター細胞とを提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、標的細胞上のＣＤ１９に結合するヒト化された標的化部分とを含む、ヒト化されたキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを提供する。
標的化部分は、標的細胞上の細胞表面分子に結合し得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含むヒト化されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供し、細胞外ドメインが、配列番号２９０〜３８８、および４２３から選択される配列を含むヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２２と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、図２２Ａの構造Ａ〜Ｈから選択される構造を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、図２２Ａの構造Ｅに従う構造を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４１１の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号９３〜１０３および１６５〜１６８から選択される配列を含むヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、アミノ酸配列：：ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＤを含むヒンジドメインを含み、いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号３９８および４１７から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、（ａ）ＣＤ３−ζを含むいくつかの実施形態では、ＣＤ２８ドメインは、配列番号４１８と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ドメインは、配列番号４１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、４−１ＢＢドメインは、配列番号４１９の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、４−１ＢＢドメインは、配列番号４１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３−ζドメインは、配列番号４２０の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３−ζドメインは、配列番号４２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号４１７の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号４１７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ヒト化されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供し、細胞外ドメインは、
ａ．キメラ抗原受容体スイッチと相互作用するヒト化された領域と、
ｂ．ヒンジドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、約１〜約２０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、約２０個超のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、可撓性である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、剛性である。いくつかの実施形態では、ヒンジｅドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＧ４ｍヒンジ、ＣＤ２８ヒンジ、およびＣＤ８ヒンジから選択される。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号９３〜１０３および１６５〜１６８から選択される配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号９３〜１０３および１６５〜１６８から選択される配列と、少なくとも５０％相同である配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ヒト化された５２ＳＲ４抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖは、配列番号２９０〜３８８、および４２３から選択される配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖは、配列番号２９０〜３８８、および４２３から選択される配列と、少なくとも５０％同一である配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖは、配列番号３２２と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８膜貫通ドメインまたはＣＤ２８膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号３９８および４１７から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、（ａ）ＣＤ３−ζドメイン、および（ｂ）ＣＤ２８ドメイン、４−１ＢＢドメイン、またはＣＤ２８ドメインおよび４−１ＢＢドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ドメインは、配列番号４１８を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、４−１ＢＢドメインは、配列番号４１９を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ＣＤ３−ζドメインは、配列番号４２０を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体スイッチと相互作用する領域は、キメラ抗原受容体スイッチのキメラ抗原受容体結合ペプチドと相互作用し、キメラ抗原受容体スイッチは、標的上の細胞表面分子と相互作用する標的化部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される配列から成る。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、配列番号４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、および４１６から選択される配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、配列番号４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、および４１６と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ヒト化された領域のアミノ酸配列は、配列番号３２２を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列：ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＤを含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号４１７を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号４２０を含むか、またはそれから成るＣＤ３−ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号４１８または４１９を含むか、またはそれから成る共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号４１８を含むか、またはそれから成る第１の共刺激ドメインと、配列番号４１９を含むか、またはそれから成る第２の共刺激ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、配列番号４１１のアミノ酸配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、配列番号４１１の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むか、またはそれから成る。
いくつかの実施形態では、本開示は、
ａ．ＣＡＲ−ＥＣ上の抗ＧＣＮ４キメラ抗原受容体と相互作用するＧＣＮ４誘導体ペプチドを含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、
ｂ．標的化部分と、を含む、ヒト化されたキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを提供し、
標的化部分は、標的化抗体またはその抗原結合部分であり、配列番号１７〜２５、２７〜３５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、
ａ．ＣＡＲ−ＥＣ上の抗ＧＣＮ４キメラ抗原受容体と相互作用するＧＣＮ４誘導体ペプチドを含む、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、
ｂ．標的化部分と、を含む、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを提供し、
標的化部分が、標的化抗体またはその抗原結合部分であり、配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１７〜２５、２７〜３５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号３０の軽鎖配列および配列番号７の重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号７と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号３０と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、（ｉ）配列番号３０／配列番号７、（ｉｉ）配列番号３０／配列番号６、（ｉｉｉ）配列番号３４／配列番号６、および（ｉｖ）配列番号３４／配列番号７から選択される軽鎖／重鎖配列対を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つから選択される軽鎖を含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、配列番号２６、３６、１３９〜１６３および２４５のうちのいずれか１つから選択されるＧＣＮ４ペプチドであるＣＡＲ−ＩＤを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＬＣＮＴスイッチである。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−ＥＣ上の抗ＧＣＮ４キメラ抗原受容体と相互作用するＧＣＮ４誘導体ペプチドを含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含む、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチと、標的化部分とを提供する。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、構造Ｉ：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）の配列を含み、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、構造Ｉ：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）の配列から成り、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、Ｋであるか、または不在である。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、Ｋ、Ａ、およびＧから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ３は、Ｌ、Ａ、およびＧから選択される。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９、１４５、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９〜１６３および２４５のうちのいずれか１つから選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９、１４５、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される配列から成る。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９〜１６３および２４５のうちのいずれか１つから選択される配列から成る。
いくつかの実施形態では、標的化部分は、標的化ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、標的化ポリペプチドは、標的細胞上の抗原に結合する標的化抗体または抗体断片である。いくつかの実施形態では、標的化抗体またはその抗原結合部分は、ヒト化される。
いくつかの実施形態では、細胞表面分子は、ＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、細胞表面分子は、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＳ１、ＢＣＭＡ、ＣＥＡ、またはそれらの断片である。いくつかの特定の実施形態では、標的化部分は、ＣＤ１９に特異的に結合する。いくつかの特定の実施形態では、標的化部分は、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＳ１、ＢＣＭＡ、ＣＥＡ、またはそれらの断片に特異的に結合する。
いくつかの特定の実施形態では、標的化部分は、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分のうちの任意の１つ以上）を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体、またはヒト化されたＦＭＣ６３抗体の抗原結合部分を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ１抗体、抗ＣＤ１２３抗体、または抗ＣＤ３３抗体を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ２０抗体、ヒト化された抗ＣＤ２２抗体、ヒト化された抗ＥＧＦＲ抗体、ヒト化された抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、ヒト化された抗Ｈｅｒ２抗体、ヒト化された抗ＣＳ１抗体、ヒト化された抗ＢＣＭＡ抗体、ヒト化された抗ＣＥＡ抗体、ヒト化された抗ＣＬＬ１抗体、ヒト化された抗ＣＤ１２３抗体、またはヒト化された抗ＣＤ３３抗体を含むか、またはそれから成る。
いくつかの実施形態では、標的化部分（例えば、ヒト化された標的化部分）は、免疫グロブリン、Ｆｃヌル免疫グロブリン、およびＦａｂ、ならびにそれらの断片から成る群から選択される。
いくつかの実施形態では、ヒト化された標的化部分は、配列番号１６〜２５から成る群から選択される軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化された標的化部分は、配列番号２７〜３５から成る群から選択される軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化された標的化部分は、配列番号１〜１５から成る群から選択される重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化された標的化部分は、配列番号１７〜２５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、標的化抗体またはその抗原結合部分であり、配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、標的化抗体またはその抗原結合部分であり、配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、配列番号３０の軽鎖配列および配列番号７の重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ配列番号３０と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である軽鎖配列と、配列番号７と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である重鎖配列と。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ（ｉ）配列番号３０／配列番号６、（ｉｉ）配列番号３４／配列番号６、および（ｉｉｉ）配列番号３４／配列番号７から選択される軽鎖／重鎖配列対。
いくつかの実施形態では、ヒト化された標的化部分は、配列番号３５と約１〜２０個のアミノ酸が異なる軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化された標的化部分は、それが、Ｔ７、Ｔ８、Ｌ１５、Ｓ２２、Ｄ４１、Ｇ４２、Ｔ４３、Ｖ４４、Ｙ７１、Ｓ７２、Ｎ７７、Ｅ７９、Ｑ８０、Ｉ８３、Ｆ８７、およびＧ１００から成る群から選択される配列番号３５軽鎖アミノ酸残基のうちの１つ以上の置換を含むことを除いて、配列番号３５と同一である軽鎖配列を含む。
いくつかの実施形態では、ヒト化された標的化部分は、配列番号１５と約１〜約３０個のアミノ酸が異なる重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化された標的化部分は、それが、Ｅ１、Ｋ３、Ａ１３、Ｑ１６、Ｓ１７、Ｖ２０、Ｒ４２、Ｌ４８、Ｓ６１、Ａ６２、Ｌ６７、Ｉ７０、Ｋ７１、Ｎ７３、Ｓ７６、Ｖ７８、Ｆ７９、Ｍ８２、Ｎ８３、Ｌ８５、Ｑ８６、Ｔ８７、Ｄ８８、Ｉ９２、Ｋ９７、およびＳ１１５から成る群から選択される配列番号１５重鎖アミノ酸残基のうちの１つ以上の置換を含むことを除いて、配列番号１５と同一である重鎖配列を含む。
いくつかの実施形態では、標的化部分は、標的化抗体またはその抗原結合部分を含み、本明細書で開示される軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書で開示される重鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分である標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書で開示される軽鎖配列および重鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号１７〜２５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチド、二量体化しないバリアントＧＣＮ４ペプチド、ＦＬＡＧタグペプチド、非天然発生ペプチド、天然発生ペプチド、合成ペプチドタグ、αヘリックス形成ペプチド、Ｋ４ペプチド、およびＥ４ペプチドから選択されるペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、構造Ｉの配列：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）を含み、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、構造Ｉ：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）の配列から成り、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、Ｋであるか、または不在である。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、Ｋ、Ａ、およびＧから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ３は、Ｌ、Ａ、およびＧから選択される。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９〜１６３および２４５のうちのいずれか１つから選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９〜１６３および２４５のうちのいずれか１つから選択される配列から成る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、小分子を含む。いくつかの実施形態では、小分子は、ハプテンである。いくつかの実施形態では、ハプテンは、ＦＩＴＣである。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチと、ＣＡＲ−ＥＣ上で発現される「相補的」キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）とを含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）ＣＡＲ−ＥＣ上でキメラ抗原受容体と相互作用するＣＡＲ−ＩＤと、標的細胞上のＣＤ１９に結合するヒト化された標的化部分とを含むヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチ、および（ｉｉ）ＣＡＲ−ＥＣ上で発現される相補的ＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、キットは、酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドまたはその誘導体、二量体化しないバリアントＧＣＮ４ペプチド、ＦＬＡＧタグペプチド、非天然発生ペプチド、天然発生ペプチド、合成ペプチドタグ、αヘリックス形成ペプチド、Ｋ４ペプチド、およびＥ４ペプチドから選択されるＣＡＲ−ＩＤを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣである。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび第１のＣＡＲ−ＥＣのうちのいずれか１つから選択される第１のヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、第１のＣＡＲ−ＥＣは、ヒト化されたＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、ヒト化されたＣＡＲは、本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲのうちのいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ヒト化されたＣＡＲは、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、配列番号１７〜２５、２７〜３５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列および配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）抗ＧＣＮ４細胞外領域（例えば、本明細書で開示される抗ＧＣＮ４抗体またはそのＧＣＮ４−結合部分）を含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣ、および（ｉｉ）ＣＡＲ−ＥＣ上の抗ＧＣＮ４ ＣＡＲと相互作用するＧＣＮ４誘導体ペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤと、標的化部分とを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチを含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４誘導体は、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体のうちのいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４誘導体は、二量体化しない。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書で開示される標的化部分から選択される標的化部分を含む。いくつかの特定の実施形態では、標的化部分は、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分のうちの任意の１つ以上）を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはヒト化されたＦＭＣ６３抗体の抗原結合部分を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２３抗体抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ１抗体、抗ＣＤ１２３抗体、または抗ＣＤ３３抗体を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ２０抗体、ヒト化された抗ＣＤ２２抗体、ヒト化された抗ＥＧＦＲ抗体、ヒト化された抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、ヒト化された抗Ｈｅｒ２抗体、ヒト化された抗ＣＳ１抗体、ヒト化された抗ＢＣＭＡ抗体、ヒト化された抗ＣＥＡ抗体、ヒト化された抗ＣＬＬ１抗体、ヒト化された抗ＣＤ１２３抗体、またはヒト化された抗ＣＤ３３抗体を含むか、またはそれから成る。
いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）配列番号１６〜２５から成る群から選択される軽鎖配列、および（ｉｉ）配列番号１〜１５から成る群から選択される重鎖配列を含むＦＭＣ６３抗体またはそのＣＤ１９結合部分である、標的化部分を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書で開示される軽鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書で開示される重鎖配列を含む標的化抗体またはその抗原結合部分である、標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書で開示される軽鎖配列および重鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号１７〜２５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む。
いくつかの実施形態では、キットは、治療を必要とする対象を治療するために使用される。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＤ１９＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のためにキットを用いて治療される。いくつかの実施形態では、キットは、異種の腫瘍および血球悪性腫瘍から選択される疾患または状態のために、対象を治療するのに使用される。いくつかの実施形態では、対象は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、および慢性リンパ性白血病から選択される疾患または状態のために治療される。いくつかの実施形態では、対象は、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、および有毛細胞白血病（ＨＣＬ）から選択される疾患または状態のために治療される。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＤ１９＋細胞が、相補的ＣＡＲを発現する抗ＣＤ１９ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよびＣＡＲ−ＥＣを投与することを含む病理学と関連付く、疾患または状態のために治療される。いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）ＣＤ２０＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療する、（ｉｉ）ＣＤ２２＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療する、（ｉｉｉ）ＣＤ３３＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療する、（ｉｖ）ＣＥＡ＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療する、（ｖ）ＣＬＬ１＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療する、（ｖｉ）ＢＣＭＡ＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療する、（ｖｉｉ）ＣＳ１＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療する、（ｖｉｉｉ）ＣＤ１２３＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療する、Ｈｅｒ２＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療する、または（ｉｘ）特定の標的抗原（例えば、腫瘍と関連する抗原）が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療するために使用される。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるスイッチおよびＣＡＲ−ＥＣ上で発現される相補的ＣＡＲを用いて、治療を必要とする対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するＣＡＲ−ＩＤと、標的細胞上のＣＤ１９に結合するヒト化された標的化部分とを含むヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチ、および（ｉｉ）ＣＡＲ−ＥＣ上で発現される相補的ＣＡＲを用いて治療を必要とする対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法で使用されるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドまたはその誘導体、二量体化しないＧＣＮ４ペプチド、ＦＬＡＧタグペプチド、非天然発生ペプチド、天然発生ペプチド、合成ペプチドタグ、αヘリックス形成ペプチド、Ｋ４ペプチド、およびＥ４ペプチドから選択されるＣＡＲ−ＩＤを含む。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４誘導体は二量体化しない。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４誘導体は、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体のうちのいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、構造Ｉ：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）の配列を含み、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、構造Ｉ：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）配列から成り、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、Ｋであるか、または不在である。いくつかの実施形態では、Ｘ２、Ｋ、Ａ、およびＧから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ３は、Ｌ、Ａ、およびＧから選択される。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９、１４５、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９〜１６３および２４５のうちのいずれか１つから選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、配列番号２６、３６、１３９、１４５、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される配列から成るＧＣＮ４ペプチド誘導体。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体、配列番号２６、３６、１３９〜１６３および２４５のうちのいずれか１つから選択される配列から成る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣである。
いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）抗ＧＣＮ４細胞外領域（例えば、本明細書で開示される抗ＧＣＮ４抗体またはそのＧＣＮ４−結合部分）を含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣ、および（ｉｉ）ＣＡＲ−ＥＣ上の抗ＧＣＮ４ ＣＡＲと相互作用するＧＣＮ４誘導体ペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤと、標的化部分とを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチを用いて、治療を必要とする対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４誘導体は、二量体化しない。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４誘導体は、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体のうちのいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、構造Ｉ：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）の配列を含み、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、構造Ｉ：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）の配列から成り、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、Ｋであるか、または不在である。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、Ｋ、Ａ、およびＧから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ３は、Ｌ、Ａ、およびＧから選択される。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９、１４５、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９〜１６３および２４５のうちのいずれか１つから選択される配列を含むか、またはそれから成る。
いくつかの実施形態では、ＧＣＮ４ペプチド誘導体は、配列番号２６、３６、１３９、１４５、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される配列から成る。
いくつかの実施形態では、治療を必要とする対象を治療する方法で使用されるＣＡＲ−ＥＣスイッチから成る標的化部分は、本明細書で開示される標的化部分から選択される標的化部分を含む。いくつかの特定の実施形態では、標的化部分は、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分任意の１つ以上）を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはヒト化されたＦＭＣ６３抗体の抗原結合部分を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ１抗体、抗ＣＤ１２３抗体、または抗ＣＤ３３抗体を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ２０抗体、ヒト化された抗ＣＤ２２抗体、ヒト化された抗ＥＧＦＲ抗体、ヒト化された抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、ヒト化された抗Ｈｅｒ２抗体、ヒト化された抗ＣＳ１抗体、ヒト化された抗ＢＣＭＡ抗体、ヒト化された抗ＣＥＡ抗体、ヒト化された抗ＣＬＬ１抗体、ヒト化された抗ＣＤ１２３抗体、またはヒト化された抗ＣＤ３３抗体を含むか、またはそれから成る。
いくつかの実施形態では、治療を必要とする対象を治療する方法で使用されるＣＡＲ−ＥＣスイッチから成る標的化部分は、（ｉ）配列番号１６〜２５から成る群から選択される軽鎖配列または配列番号２７〜３５から成る群から選択される軽鎖配列、および、（ｉｉ）配列番号１〜１５から成る群から選択される重鎖配列を含む、ＦＭＣ６３抗体またはそのＣＤ１９結合部分である標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、方法は、ＣＤ１９＋細胞が、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび相補的ＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣを投与することを含む病理学と関連付く、疾患または状態のために対象を治療することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ａ．ＣＤ２０＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療することを含み、いくつかの実施形態では、方法は、ｂ．ＣＤ２２＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療することを含み、いくつかの実施形態では、方法は、ｃ．ＣＤ３３＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療することを含み、いくつかの実施形態では、方法は、ｄ．ＣＥＡ＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療することを含み、いくつかの実施形態では、方法は、ｅ．ＣＬＬ１＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療することを含み、いくつかの実施形態では、方法は、ｆ．ＢＣＭＡ＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療することを含み、いくつかの実施形態では、方法は、ｇ．ＣＳ１＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療することを含み、いくつかの実施形態では、方法は、ｈ．ＣＤ１２３＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療することを含み、いくつかの実施形態では、方法は、Ｈｅｒ２＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療すること、あるいは特定の標的抗原（例えば、腫瘍抗原）が病理学と関連付く疾患または状態のために対象を治療することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ａ．異種の腫瘍および血球悪性腫瘍から選択される疾患または状態のために対象を治療することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、および慢性リンパ性白血病から選択される疾患または状態対象を治療することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、および有毛細胞白血病（ＨＣＬ）から選択される疾患または状態のために対象を治療することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書で開示される少なくとも１つのスイッチおよび相補的ＣＡＲ−ＥＣを投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチ、ならびに１つ以上の薬学的に許容される塩、賦形剤および／またはビヒクルを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、担体、賦形剤、希釈剤、抗酸化剤、保存剤、着色剤、着香希釈剤、乳化剤、懸濁剤、溶媒、注入剤、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、等張化剤、共溶媒、湿潤剤、錯化剤、緩衝薬、抗菌剤、および／または界面活性剤、ならびに本明細書で開示される１つ以上のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも２つのＣＡＲ−ＥＣスイッチを含み、スイッチのうち少なくとも１つは、本明細書で開示されるスイッチ、および１つ以上の薬学的に許容される塩、賦形剤またはビヒクルである。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書で開示される２つ以上のスイッチを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるＣＡＲのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣを提供する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン細胞内シグナル伝達ドメインを含み、細胞外ドメインは、配列番号２９０〜３８８、および４２３から選択される配列を含むヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２２と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、図２２Ａの構造Ａ〜Ｈから選択される構造を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、図２２Ａの構造Ｅに従う構造を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５．から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４１１の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣは、Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、本開示は、対象に、本明細書で開示される第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ、ＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含む第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ、ならびに第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤおよび第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合するＣＡＲ−ＥＣを投与することを含む、再発癌治療する方法を提供し、第１のＣＡＲ−ＥＣは、対象の再発前に投与され、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、対象の再発後に投与される。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、抗ＣＤ２０標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチの標的化部分は、配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列と、配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列とを含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、対象に、ＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含む第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ、本明細書で開示されるスイッチのうちのいずれか１つから選択される第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ、および第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤおよび第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合するＣＡＲ−ＥＣを投与することを含む、再発癌を治療する方法を提供し、第１のＣＡＲ−ＥＣは、対象の再発前に投与され、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、対象の再発後に投与される。いくつかの実施形態では、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチの標的化部分は、標的化抗体またはその抗原結合部分を含み、配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列および配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、標的細胞を、本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させること、かつＣＡＲ−ＥＣスイッチを、相補的ＣＡＲ−ＥＣと接触させることを含む、標的細胞を溶解する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、標的細胞を、ＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させること、かつＣＡＲ−ＥＣスイッチを、本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣと接触させることを含む、標的細胞を溶解する方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、標的細胞を、本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させること、かつＣＡＲ−ＥＣスイッチを、相補的ＣＡＲ−ＥＣを接触させることを含む、標的細胞を死滅させる方法を提供する
いくつかの実施形態では、本開示は、標的細胞を、ＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させること、かつＣＡＲ−ＥＣスイッチを、本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣ接触させることを含む、標的細胞を死滅させる方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−ＥＣ上で発現されるＣＡＲを、請求項２１〜６８のＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させることを含む、ＣＡＲ−ＥＣを活性化させる方法を提供し、ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の標的化部分が、標的細胞上のその標的およびＣＡＲ−ＥＣ上のＣＡＲの細胞外ドメインの両方に結合する際に、活性化され、ＣＡＲは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合する。
いくつかの実施形態では、本開示は、対象へのＣＡＲ−ＥＣスイッチ投与の投薬レジメンを調節することによって、Ｔ細胞応答の度合を制御する方法を提供する。いくつかの実施形態では、第１の投薬レジメンは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、第１の短期投薬スケジュールで、第１の高投薬量で投与することを含み、第２の投薬レジメンは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、第１の投薬スケジュールより長い第２の投薬スケジュールで、第２の低投薬量で投与することを含む。いくつかの実施形態では、第１の投薬スケジュールは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、少なくとも１日おきに１回投与することを含む。いくつかの実施形態では、第１の投薬スケジュールは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、１日おきに投与することを含む。いくつかの実施形態では、第１の投薬スケジュールは、第１の高投薬量のＣＡＲ−ＥＣスイッチを、１日おきに合計４回の投与で、投与することを含む。いくつかの実施形態では、第１の投薬スケジュールは、第１の高投薬量のＣＡＲ−ＥＣスイッチを、１日おきにまたは約１日おきに、合計４回の投与または合計約４回の投与で、投与することを含む。いくつかの実施形態では、第２の投薬スケジュールは、第２の低投薬量で、１日おきに合計１２回の投与で、投与することを含む。いくつかの実施形態では、第２の投薬スケジュールは、第２の低投薬量で、１日おきにまたは約１日おきに、合計１２回の投与または約１２回の投与で、投与することを含む。いくつかの実施形態では、高投薬量は、低投薬量の少なくとも５倍、１０倍、または少なくとも１５倍である。いくつかの実施形態では、第１の投薬レジメンは、低投薬量で投与される対照のＴ細胞拡大と比較して、高投薬量で投与される対象のＴ細胞拡大の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列および配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、本明細書で記載されるＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含むヒト化されたＣＡＲを含み、細胞外ドメインは、配列番号２９０〜３８８、および４２３から選択される配列を含むヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２２と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、図２２Ａの構造Ａ〜Ｈから選択される構造を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、図２２Ａの構造Ｅに従う構造を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５．から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４１１の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号９３〜１０３および１６５〜１６８から選択される配列を含むヒンジドメインを含む。
本開示のＣＡＲ−ＥＣスイッチとして使用され得る様々な例示的なｈｕＦＭＣ Ｆａｂの重鎖配列の整列を示す。 同上。 本開示のＣＡＲ−ＥＣスイッチとして使用され得る様々な例示的なｈｕＦＭＣ Ｆａｂの軽鎖配列の整列を示す。 同上。 ＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを示し、ＬＣＮＴスイッチ形式で発現されるｈｕＦＭＣ ＣＡＲ−ＥＣスイッチを描写している。ゲルの左側は、減少されていない。ゲルの右側は、ＤＴＴで減少されている。 ＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを示し、ＬＣＮＴスイッチ形式で発現されるｈｕＦＭＣ ＣＡＲ−ＥＣスイッチを描写している。ゲルの左側は、減少されていない。ゲルの右側は、ＤＴＴで減少されている。 ＣＤ１９＋ＲＳ４、１１細胞上のｈｕＦＭＣ６３ Ｆａｂのフローサイトメトリー系結合アッセイを示す。ｎＭ（ナノモル）で列挙されるＥＣ５０。 ＣＤ１９＋ＲＳ４、１１細胞上のｈｕＦＭＣ６３ Ｆａｂｓのフローサイトメトリー系結合アッセイを示す。ｎＭ（ナノモル）で列挙されるＥＣ５０。 ＣＤ１９＋ＲＳ４、１１細胞上のｈｕＦＭＣ６３ Ｆａｂのフローサイトメトリー系結合アッセイを示す。ＦＭＣ６３ ＷＴは、キメラＦＭＣ６３ Ｆａｂ（ＥＣ５０表でＬＣ、ＨＣとして注釈される）を表す。ｎＭ（ナノモル）で列挙されるＥＣ５０。 ＣＤ１９＋ＲＳ４、１１細胞上のｈｕＦＭＣ６３ Ｆａｂのフローサイトメトリー系結合アッセイを示す。ＦＭＣ６３ ｗｔは、キメラＦＭＣ６３ Ｆａｂ（ＥＣ５０表でＬＣ、ＨＣとして注釈される）を表す。ｎＭ（ナノモル）で列挙されるＥＣ５０。 ＣＤ１９＋ＲＳ４、１１細胞上のｈｕＦＭＣ６３ Ｆａｂのフローサイトメトリー系結合アッセイを示す。ＦＭＣ６３ ｗｔは、キメラＦＭＣ６３ Ｆａｂ（ＥＣ５０表でＬＣ、ＨＣとして注釈される）を表す。ｎＭ（ナノモル）で列挙されるＥＣ５０。 ＣＤ１９＋ＲＳ４、１１細胞に対して、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ（ｓＣＡＲ−Ｔ）細胞を有するｈｕＦＭＣ６３の系スイッチ細胞毒性を示す。この実験のためのＥＣ５０値は、この実験の３回の反復に沿って表８に列挙される。８０％のＣＡＲ＋は、このアッセイで使用されるＴ細胞集団の８０％が、スイッチ可能なＣＡＲに対して正であったことを示す。ＦＭＣ６３ ＬＣＮＴは、軽鎖のＧＣＮ４ペプチドＮ末端を有するキメラＦＭＣ６３ Ｆａｂを表す。 ＣＤ１９−Ｋ５６２細胞に対して、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞を有するｈｕＦＭＣ６３系スイッチの細胞毒性を示す。非ＥＣ５０値は、見出された低レベルの細胞毒性のため、Ｋ５６２上の細胞毒性から計算された。８０％のＣＡＲ＋は、このアッセイで使用されるＴ細胞集団の８０％が、スイッチ可能なＣＡＲに対して正であったことを示す。ＦＭＣ６３ ＬＣＮＴは、軽鎖のＮ末端上のＧＣＮ４ペプチドを有するキメラＦＭＣ６３ Ｆａｂを表す。 インシリコ分析によって抗体の免疫原性を予測するために使用される多項式回帰を示す。Ｔ−細胞依存性ＨＡＨＡ応答を予測するために使用される多項式回帰を成す２２個のライセンス化された抗体。 総合免疫原性潜在性ｈＦＭＣ２ｂ−ＬＣＮＴ（ＬＣ１として標識される）／ｈＦＭＣＨ４ｃ（ＨＣとして標識される）配列を用いた、ＥｐｉＭａｔｒｉｘタンパク質免疫原性スケールを示す。 本明細書で開示されるスイッチ可能なキメラ受容体Ｔ細胞療法の概観を示す。リンパ球は、対象から分離され、キメラ受容体をコードする発現ベクターはその後、リンパ球に導入され、キメラ受容体エフェクター細胞を産生する。キメラ受容体エフェクター細胞は、スイッチと共に対象に投与される。 長位（左）から中位（中央）、短位（右）までの様々な長さの免疫シナプス、左から右に増加する活性によって、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞のためのスイッチ最適化を例示する。 中位（左）から短位（中央）、非常に短位（右）までの様々な長さの免疫、中位シナプスまたは非常に短位のシナプスと共に生成されるスイッチ活性に対して、短位シナプスを有するスイッチ活性最適によって、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞のためのスイッチ最適化を例示する。 ＣＡＲヒンジおよびＣＡＲスイッチ最適化を例示する。図１７Ａは、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞の例、ならびに一価のスイッチおよび一価のＣＡＲからの一価の免疫シナプスの形成を示す。図１７Ｂは、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞の例、ならびに二価のスイッチおよび一価のＣＡＲからの二価の免疫シナプスの形成を示す。図１７Ｃは、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞の例、ならびに一価のスイッチおよび二価のＣＡＲからの二価の免疫シナプスの形成を示す。図１７Ｄは、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞の例、ならびに二価のスイッチおよび二価のＣＡＲからの二価の免疫シナプスの形成を示す。スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞の相対的な活性は、以下図１７Ａ〜Ｄのそれぞれに（＋）サインによって示される。 同上。 同上。 同上。 ＤＤＤモジュールがキメラ受容体細胞外ドメイン上にあり、ＡＤ−モジュールが、スイッチ上にある、ドックおよびロックスイッチ可能なキメラ受容体Ｔ細胞プラットフォームの例を例証する。 例６と共に参照のためのＧＣＮ４ペプチド誘導体の残基番号付けを示す。標的化のために使用された元のペプチドは、アラニンスキャニングの結果によって色付けされて、下部に示される。赤は、アラニン変異（抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖ ５２ＳＲ４への結合の完全な欠如）に不耐性である残基を示し、橙は、アラニン変異（抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖ ５２ＳＲ４への結合の幾分かの欠如であるが、なお幾分かのレベルの結合）に幾分か耐性のある残基を示し、緑は、アラニン変異（元のペプチド配列と比較して抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖ ５２ＳＲ４への結合の欠如がない）に完全に耐性のある残基を示す。配列への潜在性修飾を、上部に列挙する。残基１〜４は、天然のＧＣＮ４配列の部分であり、以前に報告された５２ＳＲ４抗体の発達に含まれる。黄色は、ＣＡＲ−ＥＣの標的として以前に探索されていない、新規の残基を示す。青は、延長された残基およびアラニンスキャニングの両方に基づく好ましい残基の付加または修飾を示す。この模式図は、修飾されたペプチドＡ〜Ｏを設計するために使用された。 ＧＣＮ４ペプチド誘導体ＣＡＲ−ＩＤを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチの、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞（５２ＳＲ４およびヒト化されたバリアントＣＡＲ）への結合を示す。 ＣＤ１９＋ＲＳ４、１１細胞に対して、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞（５２ＳＲ４ ｓＣＡＲ）と共に、ＧＣＮ４ペプチド誘導体ＣＡＲ−ＩＤｓを含むＦＭＣ６３系ＣＡＲ−ＥＣスイッチを使用した、ＬＤＨ細胞毒性アッセイを示す。 抗ＣＤ１９スイッチのヒト化を示す。図２２Ａは、ＲＳ４、１１細胞に対してヒト化されたスイッチバリアントを有する細胞毒性のＥＣ５０を示す。Ｎ＝４、一方向ＡＮＯＶＡによって測定された有意性。図２２Ｂは、サイトカイン産生、結合親和性、および細胞毒性のＥＣ５０の間の相関性を示す。図２２Ｃは、ＮＡＬＭ−６異種移植片モデルを示す。腫瘍量は、ＮＳＧマウスｉｖに、０．５ｘ１０６のＮＡＬＭ−６細胞を注射することによって確立された。６日後、２０ｘ１０６のｓＣＡＲ−Ｔ細胞を注射し、続いて８用量のヒト化されたスイッチが、１日おきに１４日の期間にわたって（実験１：０．５ｍｇ／ｋｇ、実線、実験２：０．０５ｍｇ／ｋｇ、破線）投与された。Ｎ＝３。図２２Ｄは、熱安定性（Ｎ＝４）、分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、およびマウススイッチおよびヒト化されたスイッチ候補Ｌ２ｂ／Ｈ４ｃの精製収率（Ｎ＝８〜１２）を示す。 同上。 同上。 同上。 ヒト化されたフレームワーク領域およびマウスＦＭＣ６３配列を有する、ヒト化された候補Ｌ２ｂ／Ｈ４ｃの重鎖および軽鎖の配列整列を示す。 ＣＡＲ−Ｔ細胞コンストラクトおよび配列を示す。図２４Ａは、ＣＡＲ−Ｔ細胞コンストラクトの概略図を示す。図２４Ｂは、例示的なＣＡＲ−Ｔ配列を示す。図２４Ｃは、ＣＡＲ−Ｔ細胞コンストラクトの様々な構成成分の配列番号を示す。 同上。 同上。 異なる共刺激分子の比較を示す。図２５Ａは、標識されたＧＣＮ４ペプチドに結合するフローサイトメトリーによる、一次ヒトＴ細胞上のＣＡＲの発現を示す。図２５Ｂは、ＲＳ４、１１に対して抗ＣＤ１９スイッチを有する細胞毒性のＥＣ５０を示す。ＣＡＲ＋クローンを濃縮するために選別され、かつ細胞毒性前８〜１２日に延長されたコンストラクト。Ｎ＝５〜６。図２５Ｃおよび図２５Ｄは、コンストラクトヒンジ、膜貫通ドメイン、および共刺激ドメイン（３回の依存性ドナーにわたってＮ＝６）によるＥＣ５０の表および散布図を示す。図２５Ｄの有意性は、対のＴ試験によるものである。図２５Ｅは、ＮＡＬＭ−６異種移植片モデルを示す。腫瘍量は、ＮＳＧマウスｉｖに、０．５ｘ１０６のＮＡＬＭ−６細胞を注射することによって確立される。６日後、２０ｘ１０６のｓＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲＴ１９細胞を注射し、続いて８用量のスイッチ（０．５ｍｇ／ｋｇ）を１日おきに投与した。図２５Ｆは、ＮＡＬＭ−６モデル内でのスイッチの第１の用量の２４時間後に、マウス血清から測定されるサイトカイン、一方向ＡＮＯＶＡによる有意性を示す。図２５Ｇ、ＮＡＬＭ−６モデル内でのスイッチの最後の用量の２４時間後のｓＣＡＲ−Ｔ細胞の拡大を示す。一方向ＡＮＯＶＡによる有意性。図２５Ｅ、図２５Ｆ、および図２５Ｇは、３回の依存性ドナーからの累積的なデータを示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 図２５Ｄに示されるＮＡＬＭ−６モデルからのＣＤ２８ヒンジ系ｓＣＡＲ−Ｔ細胞のインビボでの有効性を示す。 最良のヒト化されたスイッチ可能なＣＡＲコンストラクトの選択を示す。図２７Ａは、マウス、生殖系列、およびヒト化された軽鎖および重鎖配列の整列を示す。青い四角形は、軽鎖および重鎖に対する変異Ｖ１２Ｓ、Ｌ１０９Ｄ、Ｅ６Ｑ、およびＡ８７およびＣＤＲ１、２、および３を指す。図２７Ｂは、ヒト化されたＣＡＲバリアントと比較した、インビボでのアッセイでの複数回にわたる長期（＞５０日）抗腫瘍有効性を示す。赤線は、５０日目の＜１０４の放射輝度を有する少なくとも１匹のマウスと共にヒト化されたバリアントを示す。図２７Ｃの上部ボックスは、軽鎖および重鎖ヒト化されたバリアントの概略図を示す。図２７下部は、ＦＩＧＳ２７Ｄおよび２７Ｅ上にプロットされたＡ〜Ｇに対応する、ヒト化されたＣＡＲのグループ割り当てを示す。図２７Ｄは、ＣＤ１９＋ＲＳ４１１細胞株内のマウスおよびヒト化されたＣＡＲバリアントの４１ＢＢ、ＣＤ２８および３第目の２８ＢＢ共刺激ドメインにわたる、インビトロの用量応答細胞毒性比較を示す。図２７Ｅは、４１ＢＢ、ＣＤ２８、およびマウスの３代目２８ＢＢ共刺激ドメイン、ならびにＣＤ１９＋Ｎａｌｍ６異種移植片モデル内のヒト化されたＣＡＲバリアントにわたる、インビボの抗腫瘍有効性比較を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 マウス（５２ＳＲ４）および重鎖可変領域の潜在性ヒト化された配列の整列を示す。 マウス（５２ＳＲ４）および軽鎖可変領域の潜在性ヒト化された配列の整列を示す。 ＧＣＮ４ペプチド（紺）で複合化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖバリアント（Ｃ１１Ｌ３４、緑：重鎖、水色：軽鎖）の結晶構造のモデルを示す。ヒト化された残基は、赤で標識される。 ヒト化されたマウスのスイッチ可能なＣＡＲの実験の結果を示す。上部の３つの左のグラフは、４１ＢＢ、ＣＤ２８、およびマウスの３代目２８ＢＢ共刺激ドメイン、ならびにインビボの有効性異種移植片モデルからのヒト化されたＣＡＲバリアントにわたるＣＡＲ−Ｔ細胞拡大の比較を示す。２１日目、Ｎａｌｍ６注射後、血を収集し、ＣＡＲ−Ｔのために染色し、フローサイトメトリーによって分析した。上部右のグラフは、インビボアッセイの抗腫瘍有効性の正規化されたＣＡＲ−Ｔ細胞数を示す。値を、Ｌ５Ｈ４コンストラクトに正規化した。有意性は、一方向Ａｎｏｖａによるものである。下部パネルは、ランク付けされた、ヒト化されたＣＡＲコンストラクトを示す。腫瘍量、頻度、および再発の時間、ならびにインビボモデルからのＴ細胞拡大値を、それぞれのコンストラクトに対してランク付けし、適宜平均化した。 インビボのサイトカイン産生比較を示す。有効性異種移植片モデルからのマウス血清を、ＣＡＲ−Ｔ、およびスイッチ注射、およびサイトカインの定量化の２４時間に収集した。グラフは、Ｌ５Ｈ４ ＣＡＲ−Ｔ群に正規化された値を示す。一方向Ａｎｏｖａによる有意性。 ヒト化されたＣＡＲコンストラクトのインビトロの特徴付けを示す。上部パネル：４１ＢＢ、ＣＤ２８、および三代目２８ＢＢヒト化されたコンストラクトにわたるＴ細胞拡大比較。下部パネル：経時的な４１ＢＢ、ＣＤ２８、および三代目２８ＢＢヒト化されたＣＡＲコンストラクトの形質導入効率。 経時的なヒト化されたＣＡＲコンストラクトのインビトロの細胞毒性を示す。左、中央、および右のカラムは各々、４１ＢＢ、ＣＤ２８、および三代目２８ＢＢ ＣＡＲコンストラクトを表す。列は、各々上部から下部へ、Ｔ細胞形質導入の１９、２６、および３３日後の用量応答細胞毒性を示す。 経時的なヒト化されたＣＡＲコンストラクトのインビトロの細胞毒性を示す。上部列は、Ｔ細胞形質導入後の経時的な細胞毒性アッセイからのＥＣ５０値を示す。下部列は、Ｔ細胞形質導入後の経時的なそれぞれのコンストラクトの最大死滅を示す。 ヒト化されたスイッチおよびヒト化されたＣＡＲの組み合わせを使用した、ＮＡＬＭ−６異種移植片モデルを示す。腫瘍量を、ＮＳＧマウスｉｖに、０．５ｘ１０６のＮＡＬＭ−６細胞を注射することによって確立した。６日後、５ｘ１０６のｓＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲＴ１９細胞を注射し、続いて８用量のヒト化されたＬ２ｂ／Ｈ４ｃスイッチを、１日おきに１４日の期間投与した（０．５ｍｇ／ｋｇ）。Ｎ＝６。 不均一なＲａｊｉ ＣＤ１９＋／ＣＤ１９−異種移植片モデルを示す。腫瘍量を、ＮＳＧマウスに、Ｒａｊｉ ＣＤ１９＋およびＲａｊｉ ＣＤ１９−細胞（１匹のマウス毎に合計０．５ｘ１０６の細胞）の混合物を注射することによって確立した。３日後、１０ｘ１０６のｓＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲＴ１９細胞、続いて８用量の抗ＣＤ１９スイッチ（０．５ｍｇ／ｋｇ）を１４日の期間にわたってを注射した。８用量の抗ＣＤ２０スイッチ（０．５ｍｇ／ｋｇ）を、平均ＲＯＩが１０５を超えた際に（ＣＤ１９−Ｒａｊｉ細胞の再発を示す）、投与した。図３７Ａは、１：１比のＣＤ１９＋：ＣＤ１９−Ｒａｊｉ細胞を注射し、かつ同時に抗ＣＤ１９および抗ＣＤ２０スイッチで治療されたマウスにおける腫瘍の進行を示す。追加の８用量の抗ＣＤ２０スイッチを、６４〜７８日目の間に１日おきに投与した。Ｎ＝３。図３７Ｂは、４：１比のＣＤ１９＋：ＣＤ１９−Ｒａｊｉ細胞を注射したマウスにおける腫瘍進行を示す。マウスを、８用量の抗ＣＤ２０スイッチで、１日おきに１０〜２４日目に治療し、追加の８用量の抗ＣＤ２０スイッチを６４〜７８日目の間に投与した。Ｎ＝３。図３７Ｃは、４９：１比のＣＤ１９＋：ＣＤ１９−Ｒａｊｉ細胞を注射したマウスにおける腫瘍進行を示す。マウスを、８用量の抗ＣＤ２０スイッチで、１日おきに１８〜３２日目に治療した。Ｎ＝３〜６。 同上。 同上。 ＩｇＧ４短ヒンジ、マウスＣＤ８ヒンジ、またはマウスＣＤ２８ヒンジを利用して、異なるヒンジの長さでコンストラクトされたマウスｓＣＡＲの様々なコンストラクトを描写している概略図を示す。 同一遺伝子系を示す。図３９Ａは、ＩｇＧ４（ＳＶ−３１９−０９２）と、ｍＣＤ８（ＳＶ−３１９−０８９）ヒンジとの間の、免疫応答性マウス：ＣＡＲ有効性比較における、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞による腫瘍増殖の制御を示す。図３９Ｂおよび３９Ｃは、２つの非依存性実験におけるフローサイトメトリーによる表現型を通した、末梢血（絶対数）での細胞動力学を示す。図３９Ｂは、ＣＤ４５＋対４−１ＢＢ（ＳＶ−３１９−０９１）／２８ＢＢ（ＳＶ−３１９−０９２）ｓＣＡＲ−Ｔ細胞を示し、図３９Ｃは、Ｂ細胞対２８ＢＢ ＳＶ−３１９−０９２ ｓＣＡＲ−Ｔ細胞を示す。腫瘍量を、０日目に、Ｃ３Ｈ免疫応答性マウスに、１ｘ１０６の３８Ｃ１３腫瘍細胞を皮下注射することにより確立した。７日後、マウスを、１００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド（ＣＴＸ）を用いて腹腔内でプレコンディショニングする（腫瘍は測定可能であり、マウスはランダム化される）。２４時間後、１０ｘ１０６のｓＣＡＲ−Ｔ細胞を静脈内注射し、続いて８用量のスイッチの静脈内への、１日おき、１４日の期間にわたる１ｍｇ／ｋｇの投与を、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞注射の４時間後に始める。２週間の安静期間後、スイッチ投薬を、３６日目および６４日目で、１日おきの１ｍｇ／ｋｇで、別の８用量のために再開した。末梢血からの免疫細胞を、腫瘍移植（Ｎ＝５／６）後１５、２５、３５、５３、６３、８１および９９日目に分析した。図３９Ｄおよび３９Ｅは、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞拡大（図３９Ｄ）および表現型（図３９Ｅ）上での、異なるスイッチ投薬レジメンの影響を示す。未処理のＣ３Ｈ免疫応答性マウスを、１００ｍｇ／ｋｇシクロホスファミド（ＣＴＸ）で腹腔内でプレコンディショニングし（１日目）、２４時間後、１０ｘ１０６のＳＶ−３１９−０９２ ｓＣＡＲ−Ｔ細胞で静脈内注射し、続いて４、８または１２用量のスイッチを、１日おきに６、１４または２２日の期間にわたって、０．２、１、または５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞注射の４時間後に始めた。ｓＣＡＲ−Ｔ細胞拡大および表現型を、フローサイトメトリー（Ｎ＝５）によるｓＣＡＲ−Ｔ注射後、７、２５、３５、および５３日目に経時的に、末梢血内で監視した。 同上。 同上。 同上。 同上。
定義：
別様に定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術および化学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により通常理解されるものと同様の意味を有する。本明細書で記載されるものと同様または同等のいかなる方法および材料も、本発明の実施または試験で使用され得るにも関わらず、いくつかの潜在的かつ好ましい方法および材料が現在記載されている。本明細書で記述される全ての公開は、開示への参照により本明細書に組込まれ、公開が引用されるものと関連する方法および／または材料を記載する。本開示は、矛盾がある程度まで、組込まれる公開のあらゆる開示に取って代わる（かつ特に、本出願に具体的に記載されるあらゆる用語の定義は、参照により組込まれる公開に開示されるその用語のあらゆる相克的な定義に取って代わる）。
本開示を読むにあたり当業者には明らかであるように、本明細書で記載され、例証される個々の実施形態のそれぞれは、他のいくつかの実施形態のいずれかの特徴から容易に分離され、かつそれと組み合わされる、別々の構成要素および特徴を有する。あらゆる列挙される方法も、列挙される事象のために、あるいはあらゆる他の論理的に可能なもののために実行され得る。
本明細書かつ添付の特許請求の範囲で使用される、単数系、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別様に示さない限り、複数の参照対象を含むことに注意されなければならない。したがって、例えば、「細胞」に対する言及は、かかる細胞の複数を含み、かつ「ペプチド」への言及は１つ以上のペプチドおよびその同等物、例えば、当業者に知られるポリペプチドへの言及を含み、以下同様である。
本明細書で考察される公開は、本出願の出願日の前に、単にそれらの開示のために提供される。本明細書のいかなるものも、本開発が、先行発明のためにかかる公開に先行する権利がないことを認めるものとして解釈されない。さらに、提供される公開日は、独立して確認される必要があり得る、実際の公開日とは異なり得る。
本明細書で使用される、「抗体断片」および「免疫グロブリン断片」という用語は、全長形態以外の抗体の任意の形態を指すために交換可能に使用される。本明細書の抗体断片は、全長抗体内に存在する、より小さい構成成分である抗体、および操作されている抗体を含む。抗体断片は、Ｆｖ、Ｆｃ、Ｆａｂ、および（Ｆａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、二官能性ハイブリッド抗体、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲの組み合わせ、可変領域、フレームワーク領域、定常領域、重鎖、軽鎖、代替スキャフォールド非抗体分子、および二重特異性抗体を含むが、これらに限定されない。別様に具体的に記載されない限り、「抗体（抗体）」または「抗体（抗体）」という用語を使用する記述および特許請求の範囲は、具体的に「抗体断片（抗体ｆｒａｇｍｅｎｔ）」および「抗体断片（抗体ｆｒａｇｍｅｎｔｓ）」を含む。抗体または免疫グロブリンを参照して使用される、「抗原結合断片」という用語は、標的（例えば、標的タンパク質、ペプチド、小分子、腫瘍抗原など）への結合親和性を保有するあらゆる抗体断片を意味する。抗体「断片」および抗体「部分」はまた、「抗原結合断片」および「抗原結合部分」という用語として、本明細書で交換可能に使用される。
「抗ＣＤ１９抗体」という用語は、ＣＤ１９に結合する抗体を指す。「ＣＤ分類（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）１９」としても知られるＣＤ１９は、Ｂ細胞の表面上で発現されるタンパク質として当該技術分野では周知である。
「キメラ受容体」、「キメラ抗原受容体」、および「ＣＡＲ」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、好適なエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）上で発現される受容体（本明細書で記載されるＣＡＲ−ＩＤに結合することのできるかかる受容体）を指す。
「ＣＡＲ−ＥＣ」への参照は、「キメラ抗原受容体エフェクター細胞」を意味し、ＣＡＲ−ＥＣは、一般に、キメラ受容体（例えば、キメラ抗原受容体など）を発現するエフェクター細胞を指す。しかしながら、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣは単に、キメラ抗原受容体を発現するエフェクター細胞（すなわち、抗体またはその抗原結合断片を発現すること）に限定されないが、用語はまたは、標的（例えば、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチ上に含まれる「キメラ抗原受容体相互作用ドメイン」（ＣＡＲ−ＩＤ）に結合することができる他のキメラ受容体を発現するエフェクター細胞を包含し得る。本開示での使用のための好適なエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−ＥＣとして）は、未処理のＴ細胞、メモリー幹細胞Ｔ細胞、中央メモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ８／ＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージから選択されるエフェクター細胞を含む。
ＣＡＲおよびその「相補的」ＣＡＲ−ＥＣスイッチ（例えば、本明細書で開示される相補的なヒト化された抗ＣＤ１９ＣＡＲ−ＥＣスイッチ）への参照、またはＣＡＲ−ＥＣスイッチおよびその「相補的ＣＡＲ」への同様の参照は、特定のＣＡＲ−ＩＤ、およびその特定のＣＡＲ−ＩＤへの結合親和性を含む細胞外ドメインを含むＣＡＲを含む、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの一対を意味する。そのため、非限定的な例として、平均的な当業者は、ＧＣＮ４ペプチドＣＡＲ−ＩＤ（例えば、配列番号２６のアミノ酸配列）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが、そのＧＣＮ４ペプチド（例えば、ｓｃＦｖなどの抗ＧＣＮ４抗体またはその抗原結合部分）への結合親和性を有する抗ＧＣＮ４細胞外ドメインを含むＣＡＲにより、結合されるであろうことを理解するであろう。したがって、かかる抗ＧＣＮ４ ＣＡＲおよびＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤを含むＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲが、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合するため「相補的」である。同様に、ＦＩＴＣ、ＦＬＡＧ、Ｋ４、およびＥ４ ＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチは、各々、ＦＩＴＣ、ＦＬＡＧ、Ｋ４（例えば、Ｅ４ペプチド）、Ｅ４（例えば、Ｋ４ペプチド）への結合親和性を含むＣＡＲに対して相補的である。
「エンドトキシンフリー」または「実質的にエンドトキシンフリー」という用語は、一般に、最も微量（例えば、対照への臨床的に生理的悪影響を有さない量）のエンドトキシン、好ましくは検出不可能の量のエンドトキシンを含有する、組成物、溶媒、および／または血管に関する。エンドトキシンは、エンドトキシンがリステリア菌などのグラム陰性バクテリア内に見出されるにも関わらず、バクテリア、典型的にはグラム陰性バクテリアなどのある特定の微生物に関連する毒である。最も流行性のエンドトキシンは、様々なグラム陰性バクテリアの外膜に見出され、かつ疾患を引き起こすこれらのバクテリアの能力の中央病原性特徴を表す、リポ多糖（ＬＰＳ）またはリポオリゴ糖（ＬＯＳ）である。人間内の少量のエンドトキシンは、生理的悪影響の中でもとりわけ、熱、血圧の低下、ならびに炎症および凝固の活性を生じ得る。
したがって、薬学的生成においては、少量さえ、人間内で悪影響を引き起こすため、たびたび、医薬品および／または医薬容器からほとんどまたは全ての微量のエンドトキシンを除去するのが望ましい。３００°Ｃを超える温度が典型的にほとんどのエンドトキシンを破壊するために必要されるため、発熱物質除去オーブンが、この目的のために使用され得る。例えば、シリンジまたはバイアルなどの一次パッケージング物質に基づいて、２５０°Ｃのガラス温度および３０分の保持期間の組み合わせは、たびたび、エンドトキシンレベルの３ログ減少を達成するために十分である。例えば、本明細書で記載され、当該技術分野で知られているクロマトグラフィーおよび濾過方法を含む、エンドトキシンを除去する他の方法が企図される。哺乳動物細胞などの真核生物細胞内にＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成するか、または
減少させるために真核生物細胞からエンドトキシンを分離するもまた含まれ、もし排除されない場合、エンドトキシンのリスクは本発明の組成物内に存在するままである。無血清細胞内にＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成し、無血清細胞からエンドトキシンを単離する方法が好ましい。
エンドトキシンは、当該技術分野で知られているルーティン技術を使用して検出され得る。例えば、カブトガニからの血を利用するリムルスアメーバサイトライセートアッセイは、エンドトキシンの存在を検出するための非常に繊細なアッセイである。この試験では、非常に低レベルのＬＰＳは、この反応を増幅する強力な酵素カスケードのため、リムルスライセートの検出可能な凝固を引き起こし得る。エンドトキシンはまた、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって定量化され得る。実質的にエンドトキシンフリーにするためには、エンドトキシンレベルは、約０．００１、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０８、０．０９、０．１、０．５、１．０、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、または１０ＥＵ／ｍｇ以下のタンパク質であり得る。典型的には、１ｎｇのリポ多糖（ＬＰＳ）は、約１〜１０ＥＵに対応する。
「ＦＭＣ６３」への参照は、元々１９９１年にＨ．Ｚｏｌａおよび同僚（１）によってに記載される抗ＣＤ１９マウスモノクローナル抗体クローン（Ｃａｒｌ Ｊｕｎｅおよび同僚（２〜４）からの最も良く研究される従来のＣＡＲ−Ｔ細胞で使用され得る）を意味する。これらの参照（以下「参照」セクションに列挙される、１、２、３、および４）は、参照によりその全体が本明細書に組込まれる。「ＦＭＣ６３」、「ＦＭＣ」、「ｈｕＦＭＣ」、および「ｈＦＭＣ」という用語は、本明細書で交換可能に使用される。
「ＦＭＣ６３ ＶＨ」への参照は、ＦＭＣ６３抗体の重鎖の可変部分を意味する。
「ＦＭＣ６３ ＶＬ」への参照は、ＦＭＣ６３抗体の軽鎖の可変部分を意味する。
非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化された」形態は、可変ドメインの非ヒト（例えば、マウス）フレームワーク領域が、ヒトフレームワーク領域配列に変化する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらの断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）または抗体の後の他の抗原結合など）である。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗体は、ヒト化され、ヒトへの免疫原性を減少させる。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗体は、親非ヒト抗体の特異性および／または親和性を保持する。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗体は、親非ヒト抗体の実質的に全ての特異性および／または親和性を保持する。
本明細書で使用される、「またはそのヒト化されたバリアント」という用語は、バリアントが、基準配列と比較してヒト生殖系列配列への増加する同一性を有するバリアント配列をもたらす、少なくとも１個のアミノ酸変化（すなわち、置換、血管、または付加）を含む基準配列の任意の配列バリアントを指す。いくつかの実施形態では、「またはそのヒト化されたバリアント」は、配列を「よりヒト化」する、すなわち配列を、ヒト基準配列とのより大きい同一性を有するようにする、少なくとも一個のアミノ酸変化を含む配列を指す。例えば、ＦＭＣ６３ ＶＨまたはＦＭＣ６３ ＶＬ配列のヒト化されたバリアントは、各々配列番号１５および２５として提供される、マウス親ＦＭＣ６３ＶＨおよびＶＬ配列と比較して、１つ以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、またはそれ以上）変異を含む配列である。実施形態では、基準抗体配列のヒト化されたバリアントまたはその部分（例えば、ＦＭＣ６３ ＶＨまたはＦＭＣ６３ ＶＬ配列）は、基準抗体の標的への結合親和性を維持する。例えば、いかなる方法でも限定されないが、ヒト化されたＦＭＣ６３配列は、ＣＤ１９への結合を維持し得る。
「ヒト化された抗ＣＤ１９スイッチ」という用語は一般に、（ｉ）ＣＤ１９に結合することができ、かつ（ｉｉ）基準ＣＤ１９抗体のヒト化されたバリアントである標的化部分を含む、任意のＣＡＲ−ＥＣスイッチを指す。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗ＣＤ１９スイッチは、基準抗体ＦＭＣ６３のヒト化された形態を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗ＣＤ１９スイッチは、基準抗体ＦＭＣ６３（例えば、（ｉ）ヒト化されたＦＭＣ６３ ＶＨ、（ｉｉ）ヒト化されたＦＭＣ６３ ＶＬ、または（ｉｉｉ）ヒト化されたＦＭＣ６３ ＶＨおよびヒト化されたＦＭＣ６３ ＶＬのヒト化された部分を含む。
「ヒト化されたスイッチ」という用語は一般に、（ｉ）標的に結合することができ、かつ（ｉｉ）基準抗体のヒト化されたバリアントまたはその抗原結合部分である標的化部分を含む、任意のＣＡＲ−ＥＣスイッチを指す。いくつかの実施形態では、ヒト化されたスイッチは、基準抗体のヒト化された形態を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化されたスイッチは、基準抗体（例えば、（ｉ）ヒト化されたＶＨ、（ｉｉ）ヒト化されたＶＬ、または（ｉｉｉ）ヒト化されたＶＨおよびヒト化されたＶＬのヒト化された部分を含む。
少なくとも、例えば、本明細書で開示されるクエリアミノ酸配列と、９５％「同一」であるアミノ酸配列を有する対象のポリペプチド配列により、対象のポリペプチドのアミノ酸配列は、対象のポリペプチド配列が、クエリアミノ酸配列のそれぞれの１００個のアミノ酸毎に最大５個のアミノ酸変更を含み得ることを除いて、クエリ配列と同一であることが意図される。言い換えると、クエリアミノ酸配列と、少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する対象のポリペプチドを得るために、対象配列内の最大５％のアミノ酸残基が、挿入、欠失、または別のアミノ酸と置換され得る。基準配列と比較してこれらの変更は、基準アミノ酸配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、またはこれらの末端位置の間の任意の位置で、基準配列内の残基の間で、または基準配列内の１つ以上の近接群内で、個々に分散して、起こり得る。２つ以上の配列（例えば、アミノ酸配列）の同一性は、Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，（２００８）ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ：ａ ｂｅｔｔｅｒ ｗｅｂ ｉｎｔｅｒｆａｃｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３６：Ｗ５−Ｗ９（参照によりその全体が明細書に組込まれる）に記載される、Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌまたは「ＢＬＡＳＴ」アルゴリズムを使用して、互いに、または公開された配列と比較され得る。同様に、同一性は、同様の方法で２つのヌクレオチド配列間で決定され得る。したがって、クエリヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一である、対象のヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ配列、ｃＤＮＡ配列など）を得るために、対象配列内の最大５％のヌクレオチド残基が、挿入、欠失、または別のヌクレオチドと置換され得る。
「スイッチ」および「ＣＡＲ−ＥＣスイッチ」という用語は、本明細書で交換可能に使用される。
「ＶＨ」への参照は、抗体または抗体断片の重鎖の可変部分を意味する。
「ＶＬ」への参照は、抗体または抗体断片の軽鎖の可変部分を意味する。
ポリペプチドまたは他の標的に（例えば、ＣＤ１９に）「特異的に結合する」または「優先的に結合する」（本明細書で交換可能に使用される）と記載される、抗体またはその抗原結合部分への参照は、当該技術分野で良く理解される用語であり、かかる特異的な、または優先的な結合を決定する方法もまた、当該技術分野で周知である。分子は、それが特定の細胞または物質と、大体の細胞または物質より頻繁に、より長い期間および／またはより大きな親和性で、反応、または関連する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を呈すると記載される。抗体は、それが他の物質に結合するよりも、より大きな親和性、結合活性で、より容易に、および／またはより長い期間結合する場合、標的に「特異的に結合」するか、または「優先的に結合」する。例えば、それが他の非ＣＤ１９ポリペプチドに結合するよりも、より大きな親和性、結合活性で、より容易に、および／またはより長い期間ＣＤ１９に特異的にまたは優先的に結合する抗体は、ＣＤ１９に結合する抗体である。また、この定義を読むことで、例えば、特異的にまたは優先的に第１の標的（例えば、ＣＤ１９）に結合する抗体（またはその抗原結合部分）が、特異的にまたは優先的に第２の標的に結合しても、していなくてもよいことが理解されたい。このようにして、「特異的結合」または「優先的結合」は、必ずしも排他的結合を必要としない（それが含み得るにも関わらず）。一般に、必要ではないが、結合への参照は、優先的結合を意味する。
「実質的に」または「本質的に」は、ほぼ全体的に、または完全に十分な、または相当な量、数、サイズ、例えば、９５％以上のいくつかの所与の数を意味する。
「実質的に同様な」配列は、配列（例えば、アミノ酸またはヌクレオチド配列）内に、互いに少なくとも約９０％の同一性、または互いに少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは約９９％超の同一性を含む配列である。
概要：
両方への制御を提供することで、現在臨床試験で試験されている従来のＣＡＲ−Ｔ細胞設計より安全で、かつより多用途の免疫療法を提供し得る、キメラ受容体エフェクター細胞（例えば、キメラ抗原受容体Ｔ細胞）を選択的に活性化および非活性化させる組成物および方法が、本明細書で開示される。
ヒト化されたスイッチおよびヒト化されたＣＡＲ−ＥＣを含む、スイッチ可能なキメラ受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）およびキメラ受容体エフェクター細胞スイッチ（本明細書で「スイッチ」と称される）が、本明細書で開示される。
本明細書で開示される１つ以上のスイッチ（例えば、ヒト化されたスイッチ）および１つ以上のＣＡＲ−ＥＣ（例えば、ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣなどの、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣ）を含むプラットフォームが本明細書で開示され、プラットフォームに含まれるＣＡＲ−ＥＣ上で発現されるＣＡＲは、プラットフォームに含まれるスイッチに相補的である。いくつかの実施形態では、プラットフォームは、複数にスイッチを含み、そのそれぞれが異なる標的に結合し（すなわち、それぞれのスイッチが、異なる標的化部分を有し）、かつそのそれぞれがプラットフォームに含まれる単一のＣＡＲ−ＥＣに相補的である。いくつかの実施形態では、プラットフォーム、は複数のスイッチを含み、そのそれぞれが異なるに標的に結合し（すなわち、それぞれのスイッチが異なる標的化部分を有し）、かつそのそれぞれが、プラットフォームに含まれる複数のＣＡＲ−ＥＣのうちの少なくとも１つに相補的である。
本明細書で開示されるスイッチは、エフェクター細胞キメラ受容体によって結合される第１の領域、および標的細胞上の細胞表面分子に結合する第２の領域を含む。第１の領域は、本明細書で、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と称される。第２の領域は、本明細書で「標的化部分」と称される。標的化部分は、標的化ポリペプチドであり得る。標的化ポリペプチドは、標的細胞上の抗原に結合する標的化抗体または抗体断片であり得る。標的化抗体またはその抗原結合部分は、ヒト化され得る。本明細書で開示されるヒト化されたスイッチは、ヒト化された標的化部分を含み得る。いくつかの実施形態では、細胞表面分子は、ＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、細胞表面分子は、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＳ１、ＢＣＭＡ、ＣＥＡまたはそれらの断片である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＳ１、ＢＣＭＡ、ＣＥＡまたはそれらの断片に結合する。いくつかの特定の実施形態では、標的化部分は、ＣＤ１９に特異的に結合する。いくつかの特定の実施形態では、標的化部分は、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＳ１、ＢＣＭＡ、ＣＥＡまたはそれらの断片に特異的に結合する。いくつかの特定の実施形態では、標的化部分は、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分のうちの任意の１つ以上）を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分を含むか、またはそれから成る。
スイッチのキメラ受容体結合は、結合された標的細胞に対して細胞傷害性であるエフェクター細胞からの免疫応答を刺激し得る。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。スイッチは、エフェクター細胞活性を誘引する（または増加させる）「オンスイッチ」として作用し得る。スイッチは、エフェクター細胞活性を遮断する（または減少させる）「オフスイッチ」として作用し得る。エフェクター細胞活性は、スイッチの投与を減少させるか、または終えることで「オフになる」。本明細書で開示されるヒト化されたスイッチは、本明細書で開示されるエフェクター細胞、ならびに標的細胞が悪性細胞である、癌などの疾患または状態の治療のための既存のＣＡＲ Ｔ細胞と共に使用される。かかる治療は、本明細書で、例示的な概略図概要が、図１４で描写される、スイッチ可能な免疫療法と称される。
方法、キット、および組成物は、エフェクター細胞を、対象内で標的（例えば、腫瘍などの標的細胞）と一緒にするために使用されるＣＡＲ−ＥＣ細胞、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム、およびヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生するために提供される。これらの方法、キットおよび組成物は、多くの疾患および状態において療法的使用を見出す。例えば、抗ＣＤ１９標的化部分と共にＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む、方法、キット、および組成物は、ＣＤ１９＋細胞が病理学と関連付く任意の疾患を治療するのに使用され得る。例えば、いかなる方法でも限定されないが、いくつかの実施形態では、異種の腫瘍および血球悪性腫瘍（例えば、急性リンパ性白血病および慢性リンパ性白血病）は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣ細胞、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ、および／またはＣＡＲ−ＥＣプラットフォームを用いて効果的に治療され得る。いくつかの非限定的な実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣ細胞、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム、および／またはヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチは、例えば、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、および有毛細胞白血病（ＨＣＬ）から選択される疾患を治療するために使用され得る。
同様に、抗Ｈｅｒ２標的化部分と共にＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む方法、キット、および組成物は、Ｈｅｒ２＋細胞が病理学と関連付く任意の疾患を治療するために使用され得、抗ＣＬＬ１標的化部分と共にＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む方法、キット、および組成物は、ＣＬＬ１＋細胞が病理学と関連付く任意の疾患を治療するために使用され得、かつ同様に、特定の標的抗原（例えば、腫瘍抗原）に対して特異性を有する任意の標的化部分と共にＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む方法、キット、および組成物は、標的抗原（例えば、腫瘍抗原）が病理学と関連付く任意の疾患を治療するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、長さ、結合価および／またはＣＡＲ−ＥＣスイッチ連結ならびにＣＡＲ−ＥＣスイッチ細胞標的化部分の配向は、最適化される。異種の腫瘍は、１つ以上の腫瘍抗原を標的化する複数にスイッチを用いて、より効果的に治療され得る。発明の長所および特徴は、以下により完全に記載される組成物および方法の詳細を読む際には、当業者には明らかになるであろう。
本発明の好ましい実施形態は、本明細書で示され、かつ記載されるが、かかる実施形態が例としてのみ提供されることが、当業者には明瞭であろう。多数の変形、変更、および置換が、発明から逸脱することなく現在当業者に想到されるであろう。本明細書で記載される本発明の実施形態への様々な代替が、発明を実施するにあたり用いられることが理解されるはずである。続く特許請求の範囲が、発明の範囲を定義し、かつしたがって、これらの特許請求の範囲およびそれらの同等物内の方法および構造が包含されることが意図される。
Ｉ．ＣＡＲ−ＥＣスイッチ
（ｉ）エフェクター細胞（例えば、キメラ抗原受容体）上のキメラ受容体により結合可能である第１の領域（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｉｉ）標的細胞上の細胞表面分子に結合する第２の領域（標的化部分）とを含む、キメラ受容体エフェクター細胞スイッチが、本明細書で開示される
いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチド誘導体（例えば、配列番号１３９、１５４〜１６３から選択されるＧＣＮ４ペプチド誘導体）を含む第１の領域（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｉｉ）標的細胞上の細胞表面分子に結合する第２の領域（標的化部分）とを含む、キメラ受容体エフェクター細胞スイッチを提供する（ＣＡＲ−ＩＤが、エフェクター細胞（例えば、キメラ抗原受容体）上のキメラ受容体により結合可能である）。
いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）エフェクター細胞（例えば、キメラ抗原受容体）上のキメラ受容体によって結合可能である第１の領域（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｉｉ）標的化部分がヒト化される、標的細胞上の細胞表面分子に結合する第２の領域（標的化部分）と、を含むヒト化されたキメラ受容体エフェクター細胞スイッチを提供する。
いくつかの特定の実施形態では、本開示は、（ｉ）エフェクター細胞（例えば、キメラ抗原受容体）上のキメラ受容体によって結合可能である第１の領域（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｉｉ）標的化部分がヒト化される、標的細胞上のＣＤ１９に結合する第２の領域（標的化部分）と、を含む、ヒト化されたキメラ受容体エフェクター細胞スイッチを提供する。
いくつかの特定の実施形態では、本開示は、（ｉ）酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチド誘導体（例えば、配列番号１３９、１５４〜１６３から選択されるＧＣＮ４ペプチド誘導体）を含む第１の領域（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｉｉ）標的化部分がヒト化される、標的細胞上のＣＤ１９に結合する第２の領域（標的化部分）とを含む、ヒト化されたキメラ受容体エフェクター細胞スイッチを提供する。
いくつかの実施形態では、第１および第２の領域は、リンカーによって連結される。
いくつかの実施形態では、第１の領域および第２の領域は、一緒に融合される。本明細書で使用される、「融合される」という用語は、ＣＡＲ−ＩＤの末端を、ポリペプチド標的化部分（例えば、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片）の末端に隣接することを指し得る。いくつかの実施形態では、第１の領域および第２の領域は、リンカーを介して一緒に融合される。
いくつかの実施形態では、第１の領域は、第２の領域内に移植される。本明細書で使用される、「移植される」という用語は、ＣＡＲ−ＩＤを、標的化ポリペプチド内（例えば、標的化ポリペプチドの２つのアミノ酸間）に挿入することを指す。いくつかの実施形態では、第２の領域は、第１の領域内に移植される。いくつかの実施形態では、第１の領域は、第１および第２の領域が、少なくとも１つのリンカーによって連結されるように、第２の領域内に移植される。いくつかの実施形態では、第２の領域は、第１および第２の領域が、少なくとも１つのリンカーによって連結されるように、第１の領域内に移植される。
いくつかの実施形態では、第１の領域は、第２の領域に結合される。いくつかの実施形態では、第１の領域は、リンカーを介して第２の領域に結合される。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。リンカーは、標的化部分に結合され得る。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、標的化部分に結合し得る。１つ以上のリンカーは、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、１つ以上の標的化部分に結合し得る。１つ以上のリンカーは、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、部位特異的方法で、１つ以上の標的化部分に結合し得る。部位特異的方法での結合は、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、１つ以上の標的化部分上の予め決定された部位結合することを含み得る。代替的に、あるいは加えて、部位特異的方法での結合は、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、１つ以上の標的化部分内の非天然のアミノ酸に結合することを含み得る。１つ以上のリンカーは、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、部位非依存的方法で、１つ以上の標的化部分に結合し得る。部位非依存的方法での結合は、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、１つ以上の標的化部分上のランダムの部位に結合することを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、部位特異的方法で、１、２、３、４、５、またはそれ以上の標的化部分に結合され得る．ＣＡＲ−ＩＤは、部位非依存的方法で、１、２、３、４、５またはそれ以上の標的化部分に結合され得る。代替的に、標的化部分は、部位特異的方法で、１、２、３、４、５またはそれ以上のＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。部位特異的方法での結合は、１つ以上の標的化部分を、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤ上の予め決定された部位結合することを含み得る。標的化部分は、部位非依存的方法で、１、２、３、４、５またはそれ以上のＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。部位非依存的方法での結合は、１つ以上の標的化部分を、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤ上のランダムの部位に結合することを含み得る。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、本明細書で開示される任意のスイッチ配列を有し得る。例えば、それは、軽鎖および重鎖を含み得、軽鎖は、本明細書で開示される任意のスイッチ軽鎖配列を含むか、またはそれから成り、重鎖は、本明細書で開示される任意のスイッチ重鎖配列を含むか、またはそれから成る。かかる重鎖および／または軽鎖配列は、ヒト化され得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ヒト化され、かつ配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列、および配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み、重鎖および軽鎖のうちの１つまたは両方は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ヒト化され、かつ配列番号１７〜２４から選択される配列と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である軽鎖配列と、配列番号２〜１４から選択される配列と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である重鎖配列とを含み、重鎖および軽鎖のうちの１つまたは両方が、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤ）を含む。特定の実施形態では、軽鎖配列は、配列番号２７〜３４（Ｎ末端ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤを含む）から選択されるヒト化された配列と、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列とを含む。特定の実施形態では、軽鎖配列は、配列番号２７〜３４（Ｎ末端ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤを含む）から選択される配列と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一であるヒト化された配列と、配列番号２〜１４から選択される配列と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である重鎖配列とを含む。特定の実施形態では、スイッチは、表６または表８に記載されるスイッチであり、本明細書で開示されるいくつかのスイッチに含まれる重鎖／軽鎖の組み合わせを提示する。いくつかの実施形態では、スイッチは、スイッチに含まれるＣＡＲ−ＩＤが修飾され、構造Ｉの配列を有することを除いて、表６または表８に記載されるスイッチと同一である。いくつかの実施形態では、構造Ｉの配列は、配列番号２６、３６、１３９、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される。ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、Ｌ２ｂ−ＬＣＮＴ（配列番号３０）軽鎖およびＨ４ｃ（配列番号７）重鎖を含む。
ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、（ｉ）Ｌ２ｂ−ＬＣＮＴ（配列番号３０）軽鎖と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列、および（ｉｉ）Ｈ４ｃ（配列番号７）重鎖と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。
ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、Ｌ２ｂ−ＬＣＮＴ（配列番号３０）軽鎖およびＨ４ｂ（配列番号６）重鎖を含む。ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、（ｉ）Ｌ２ｂ−ＬＣＮＴ（配列番号３０）軽鎖と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列、および（ｉｉ）Ｈ４ｂ（配列番号６）重鎖と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。
ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、（ｉ）Ｌ２ｃ−ＬＣＮＴ（配列番号３４）軽鎖と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列、および（ｉｉ）Ｈ４ｂ（配列番号６）重鎖と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。
ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、（ｉ）Ｌ２ｃ−ＬＣＮＴ（配列番号３４）軽鎖と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列、および（ｉ）Ｈ４ｃ（配列番号７）重鎖と、少なくとも８０％、８５％、８０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、その標的化部分またはスイッチが、その標的化部分としてヒト化された抗体の抗原結合部分を含むため、スイッチが、ヒト化された抗体を含むことを除いて、以下の出願のうちのいずれか１つに開示される任意の１つのスイッチと同一である配列を含むか、またはそれから成るＣＡＲ−ＥＣスイッチを提供する。ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０７１３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０６８４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２４５２４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９７、およびＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０（それぞれはその全体が参照により本明細書に組込まれる）いくつかの特定の実施形態では、本開示は、その標的化部分またはスイッチが、その標的化部分としてヒト化されたＦＭＣ６３抗体の抗原結合部分を含むため、スイッチが、本明細書で開示されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体を含むことを除いて、以下の出願のうちのいずれか１つに開示される任意の１つのスイッチと同一である配列を含むか、またはそれから成るＣＡＲ−ＥＣスイッチを提供する。ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０７１３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０６８４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２４５２４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９７、およびＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０（それぞれはその全体が参照により本明細書に組込まれる）したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、以下の出願のうちのいずれか１つに開示されるＣＡＲ−ＩＤのうちのいずれか１つに連結されるか、または融合される、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分を含むスイッチを提供する。ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０７１３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０６８４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２４５２４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９７、およびＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０６８４およびＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９７が、ＣＡＲ−ＩＤを「ＣＡＲ−ＢＰｓ」と呼称し、かつあらゆるそのようなＣＡＲ−ＢＰも、本発明の使用のためにＣＡＲ−ＩＤとして好適であることが当業者には明らかになるであろう。同様に、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２４５２４が、ＣＡＲ−ＩＤを「キメラ受容体結合パートナー」と呼称し、かつあらゆるそのようなキメラ受容体結合パートナーが、本発明の使用のためにＣＡＲ−ＩＤとして好適である。ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０は、ＣＡＲ−ＩＤをＣＡＲ−ＩＤと呼称し、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０に開示されるあらゆるそのようなＣＡＲ−ＩＤが、本発明のＣＡＲ−ＩＤとしての使用のために好適である。さらに、本出願は、スイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合することが可能なキメラ受容体と、かかるキメラ受容体を発現するエフェクター細胞とを提供する。したがって、それに合うように、出願（ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０７１３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０６８４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２４５２４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９７、およびＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０）のうちのいずれか１つに開示されるキメラ受容体（例えば、ＣＡＲ）のうちのいずれも、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチと組み合わせて、本発明に従って使用され得る。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチ、ならびにＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０７１３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０６８４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２４５２４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９７、およびＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０のうちのいずれか１つに開示されるＣＡＲを用いて、かかる治療を必要とする患者を治療する方法を提供する。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチの第１の領域：ＣＡＲ相互作用ドメイン。
本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチ上に含まれるＣＡＲ相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）は、ＣＡＲ−ＩＤが、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）上のキメラ受容体（例えば、ＣＡＲ）によって結合可能になるように、本明細書で記載される標的化部分（例えば、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分）に融合され、共役され、あるいは別様に結合される、あらゆるものであり得る。例えば、非限定的な実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、キメラ受容体結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ結合タンパク質）であり得る。非限定的な実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、キメラ受容体結合ペプチド（例えば、ＣＡＲ結合ペプチド）であり得る。非限定的な実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、キメラ受容体結合小分子（例えば、ＣＡＲ結合小分子）であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲのスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤへの結合は、ＣＡＲを活性化する。いくつかの実施形態では、スイッチ上の標的化部分もまた、同時にその標的に結合される場合、ＣＡＲのスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤへの結合は、ＣＡＲのみを活性化する。いくつかの実施形態では、スイッチ上のヒト化された抗ＣＤ１９抗体（例えば、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９抗体のうちのいずれか１つ）もまた、同時に標的細胞上のＣＤ１９に結合される場合、ＣＡＲのスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤへの結合は、ＣＡＲのみを活性化する。かかる実施形態では、ＣＡＲは、エフェクター細胞上で発現され得る。かかる実施形態では、スイッチ上のヒト化された抗ＣＤ１９抗体（例えば、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９抗体のうちのいずれか１つ）もまた、同時に標的細胞上のＣＤ１９に結合されるが、一方、エフェクター細胞上で発現されるＣＡＲのスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤへの結合は標的細胞に細胞毒性をもたらす。
キメラ受容体結合タンパク質
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、キメラ受容体によって結合されるキメラ受容体結合タンパク質を含むか、またはそれから成る。キメラ受容体結合タンパク質は、一般のタンパク質に対して高タンパク質分解安定性および人間内の低免疫原性を有し得る。キメラ受容体結合タンパク質は、外来性タンパク質またはその部分を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、外来性タンパク質またはその部分を含み得ない。キメラ受容体結合タンパク質は、ホルモン、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、細胞接着分子、シグナル伝達ペプチド、受容体、細胞表面ペプチドおよびそれらの断片から選択され得る。キメラ受容体結合タンパク質は、リガンドまたはその断片であり得る。リガンドは、ホルモンのリガンドであり得る。キメラ受容体結合タンパク質は、約１００個超のアミノ酸、約２００個超のアミノ酸、約３００個超のアミノ酸、約４００個超のアミノ酸、約５００個超のアミノ酸、約６００個超のアミノ酸、約７００個超のアミノ酸、約８００個超のアミノ酸、約９００個超のアミノ酸、または約１０００個超のアミノ酸の長さを有し得る。キメラ受容体結合タンパク質は、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸、約７００個のアミノ酸、約８００個のアミノ酸、約９００個のアミノ酸、または約１０００個のアミノ酸の長さを有し得る。キメラ受容体結合タンパク質は、抗原であり得る。
キメラ受容体結合タンパク質は、抗体または抗体断片を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、抗体または抗体断片を含み得ない。キメラ受容体結合タンパク質は、抗体または抗体断片の、少なくとも約１００個、少なくとも約２００個、少なくとも約３００個、少なくとも約４００個、または少なくとも約５００個のアミノ酸を含み得る。抗体または抗体断片は、可変ドメインまたはその部分を含み得る。抗体または抗体断片は、定常ドメインまたはその部分を含み得る。
キメラ受容体結合タンパク質は、非天然発生タンパク質を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、合成タンパク質を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、非動物性タンパク質（例えば、動物内で発現されないタンパク質）を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、非哺乳類タンパク質を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、非ヒトタンパク質を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、六界（動物界、植物界、真菌界、原生生物界、古細菌／古細菌バクテリア界、およびバクテリア／真正細菌界）、ウィルス、ならびにプリオンのうちのいずれかからの任意の生物から誘導されるタンパク質を含み得る。
キメラ受容体結合タンパク質は、プロテアーゼ切断部位を含み得る。当該技術分野で知られる任意のプロテアーゼ切断部位は、キメラ受容体結合タンパク質に含まれ得る。プロテアーゼ切断部位は、例えば、トロンビン、第Ｘａ因子、ＴＥＶプロテアーゼ、ヒトライノウィルス３Ｃプロテアーゼ（ＨＲＶ３Ｃ）、ユビキチン様特異性プロテアーゼ１（Ｕｌｐ１）、マトリクスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）またはエンテロキナーゼによって認識され得る。ＭＭＰは、ＭＭＰ８であり得る。ＭＭＰは、ＭＭＰ９であり得る。
キメラ受容体結合タンパク質は、天然発生タンパク質に基づくか、またはそれから誘導され得る。ペプチドは、ヒトタンパク質に基づくか、またはそれから誘導され得る。キメラ受容体結合タンパク質は、チンパンジー、サル、ラット、マウス、トリ、魚、豚、馬、牛、ヤギ、チキン、ウサギ、およびモルモットから選択される動物内で発現されるタンパク質に基づくか、またはそれから誘導され得る。キメラ受容体結合タンパク質は、哺乳類タンパク質に基づくか、またはそれから誘導され得る。キメラ受容体結合タンパク質は、非哺乳類タンパク質に基づくか、またはそれから誘導され得る。キメラ受容体結合タンパク質は、植物内で発現されるタンパク質に基づくか、またはそれから誘導され得る。キメラ受容体結合タンパク質は、原核生物タンパク質に基づくか、またはそれから誘導され得る。キメラ受容体結合タンパク質は、真核生物タンパク質に基づくか、またはそれから誘導され得る。キメラ受容体結合タンパク質は、酵母菌によって発現されるタンパク質に基づくか、またはそれから誘導され得る。
したがって、様々な非限定的な実施形態では、キメラ受容体結合タンパク質は、酵素を含み得る。酵素は、ヌクレアーゼであり得る。ヌクレアーゼは、リボヌクレアーゼであり得る。リボヌクレアーゼは、原核生物であり得る。キメラ受容体結合タンパク質は、基質を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、バルスターを含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、バルナーゼを含み得る。いくつかの実施形態では、キメラ受容体結合タンパク質は、繊維状タンパク質、接着分子タンパク質、および膜タンパク質から選択されるタンパク質であり得る。キメラ受容体結合タンパク質は、化膿連鎖球菌ピリンタンパク質を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、化膿連鎖球菌フィブロネクチン結合タンパク質（スパイキャッチャー）を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、タンパク質、またはシナプトブレビン、ＳＮＡＰ２５およびシンタキシン、ならびにそれらの部分（例えば、αヘリックス）から選択されるタンパク質の部分を含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、ＲＮＡｓｅＩを含み得る。キメラ受容体結合タンパク質は、ＨｕＳアダプタータンパク質を含み得る。
キメラ受容体結合ペプチド
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、ペプチド、例えばＣＡＲ結合ペプチドを含むか、またはそれから成る。ＣＡＲ−ＩＤは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）によって結合可能であるペプチドであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、例えば、任意の「ペプチド性抗原」、「ペプチドネオエピトープ（ＰＮＥ）」、または「キメラ抗原結合ペプチド性抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）」であり得、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０６８４またはＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９７に開示され、それぞれは全体が参照により本明細書に組込まれる。
ＣＡＲ−ＩＤは、一般のペプチドに対して人間内で高タンパク質分解安定性および低免疫原性を有し得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ホルモン、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、細胞接着分子、シグナル伝達ペプチド、受容体、細胞表面ペプチドおよびそれらの断片から選択され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ペプトイドであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）であり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、リガンドまたはその断片であり得る。リガンドは、ホルモンのリガンドであり得る。リガンド、ペプチドリガンドであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、環状ペプチドであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、直鎖ペプチドであり得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、約２〜約１０個、約１０〜約２０個、約２０〜約３０個、約３０〜約４０個、約４０〜約５０個、約５０〜約６０個、約６０〜約７０個、約７０〜約８０個、および約８０〜約９０個のアミノ酸の長さを有し得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗原であり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、エピトープであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、非直鎖エピトープであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、第２のペプチドをさらに含み得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、抗体または抗体断片を含み得ない。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体または抗体断片の１０個未満のアミノ酸を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体または抗体断片の１２個未満のアミノ酸を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体または抗体断片の１５個未満のアミノ酸を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体または抗体断片の２０個未満のアミノ酸を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体または抗体断片の２２個未満のアミノ酸を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体または抗体断片の３０個未満のアミノ酸を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体または抗体断片のパラトープを含み得ない。
ＣＡＲ−ＩＤは、非天然発生ペプチドを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、合成ペプチドを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、非動物性ペプチド（例えば、動物内で発現されないペプチド）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、非哺乳類ペプチドを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、非ヒトペプチドを含み得る。ペプチドは、六界（動物界、植物界、真菌界、原生生物界、古細菌／古細菌バクテリア、およびバクテリア／真正細菌）、ウィルス、ならびにプリオンのいずれかからの任意の生物から誘導され得る。したがって、ペプチドは、ヒト、哺乳類、非哺乳類、植物、酵母菌、バクテリア、爬虫類、鳥、虫、真核生物、または原核生物から誘導され、それらから成り、あるいはそれらを含む。特定の生物学上の生命体（例えば、哺乳類、酵母など）「から誘導されるペプチド」という用語は、かかる生物学上の生命内体に存在すると知られている天然のペプチドの配列と実質的に同様（配列が、修飾されている、すなわち、アミノ酸１つ以上の付加、欠失、挿入、または置換を含むことを除く）の配列を含むペプチドを記載することを意味する。いくつかの実施形態では、配列は、ヒト化、例えば、人間へのペプチドの免疫原性を減少させることにより修飾される。いくつかの実施形態では、生物学上の生命体（例えば、真核生物、原核生物、哺乳類、ヒト、酵母など）から誘導されるペプチドは、その生物学上の生命体に対して天然であるペプチドと、少なくとも約８０％同一であるか、あるいは生物学上の生命体に対して天然であるペプチドと、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％を超えて同一である非天然配列を含む。
ＣＡＲ−ＩＤは、ｍｙｃタグを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、Ｈｉｓタグを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＨＡタグを含み得る．ＣＡＲ−ＩＤは、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、緑蛍光性タンパク質（ＧＦＰ）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、赤蛍光性タンパク質（ＲＦＰ）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、フィコエリトリン（ＰＥ）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ストレプトアビジンを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、アビジンを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、アルカリホスファターゼを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、グルコースオキシダーゼを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、マルトース結合タンパク質を含み得る。非限定的な例により、ＣＡＲ−ＩＤは、ｃ−ｍｙｃタグ、ポリヒスチジンタグ、Ｖ５、ＶＳＶＧ、ｓｏｆｔａｇ１、ｓｏｆｔａｇ３、発現タグ、Ｓタグ、パルミトイル化、ニトロシル化、ＳＵＭＯタグ、チオレドキシン、ポリ（ＮＡＮＰ）、ポリＡｒｇ、カルモジュリン結合タンパク質、ＰｕｒＦ断片、ケトステロイドイソメラーゼ、ＰａＰ３．３０、ＴＡＦ１２ヒストンフォールドドメイン、ＦＫＢＰタグ、ＳＮＡＰタグ、ハロタグ、ＲＮＡｓｅ Ｉからのペプチドであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、プロテアーゼ切断部位を含み得る。プロテアーゼ切断部位は、トロンビン、第Ｘａ因子、ＴＥＶプロテアーゼまたはエンテロキナーゼによって認識され得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、小直鎖親水性ペプチドであり得る。小直鎖親水性ペプチドは、リンカーを含み得る。小直鎖親水性ペプチドは、親水性標的ペプチド（ＨＴＰ）であり得る。小直鎖親水性ペプチドは、配列ＧＧＧＧＳＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号３８）を含み得る。小直鎖親水性ペプチドは、配列ＧＧＧＧＳＤＹＫＤＤＤＤＫＰ（配列番号３９）を含み得る。小直鎖親水性ペプチドは、配列ＧＧＧＧＳＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号３８）から本質的に成り得る。小直鎖親水性ペプチドは、配列ＧＧＧＧＳＤＹＫＤＤＤＤＫＰ（配列番号３９）から本質的になり得る。小直鎖親水性ペプチドは、配列番号３８または３９と、少なくとも約５０％同一であり得る。小直鎖親水性ペプチドは、配列番号３８または３９と、少なくとも約６０％同一であり得る。小直鎖親水性ペプチドは、配列番号３８または３９と少なくとも約７０％同一であり得る。小直鎖親水性ペプチドは、配列番号３８または３９と少なくとも約８０％同一であり得る。小直鎖親水性ペプチドは、配列番号３８または３９と少なくとも約８５％同一であり得る。小直鎖親水性ペプチドは、配列番号３８または３９と少なくとも約９０％同一であり得る。小直鎖親水性ペプチドは、当該技術分野で知られる他のペプチドに対して減少した非特異的結合を有し得る。小直鎖親水性ペプチドは、本明細書で開示される他のペプチドに対して減少した非特異的結合および減少した融合タンパク質不安定性を有し得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ配列番号４０）、または誘導体、またはそのホモログを含み得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、天然発生ペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ペプチドは、ヒトペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、内在性ペプチドまたは天然のペプチドとは対照的に非内在性ペプチドまたは非天然のペプチドであり得る。内在性ペプチドは、人間の体内に自然にまたは通常存在するか（例えば、ビオチン、モノクローナル抗体のＦｃ）、あるいは人間の体が、典型的に遭遇するものであり得る。したがって、非内在性ペプチドは、外来性または人間の体内に自然に存在しないものであろう。例えば、本明細書で開示されるスイッチは、通常インビボでは遭遇しない、ＣＡＲ−ＩＤとしてのＧＣＮ４ペプチドを用いる場合がある。いくつかの実施形態では、かかる非天然ペプチドは、ＣＡＲ−スイッチ相互作用の直行性を維持する。ＣＡＲ−ＩＤは、非免疫原性ペプチド（例えば、免疫応答を引き起こさないか、あるいは人間の体内で無視できる免疫応答を引き起こすことで知られるペプチド）であり得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、チンパンジー、猿、ラット、マウス、鳥、魚、豚、馬、牛、ヤギ、鶏、ウサギ、および、モルモットから選択される動物で発現されるペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、哺乳類ペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、非哺乳類ペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、植物内で発現されるペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、細菌内で発現されるペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、原核生物ペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、真核生物ペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、酵母によって発現されるペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチド、またはその誘導体もしくはホモログを含み得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、ＧＣＮ４（７Ｐ１４Ｐ）ペプチド配列（Ｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４５０（１９９９）１４９−１５３で定義され、参照によりその全体が本明細書に組込まれる）を含み得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列ＲＭＫＱＬＥＰＫＶＥＥＬＬＰＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＶＧＥＲ（配列番号３６）を含み得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号２６）を含み得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列ＲＭＫＱＬＥＰＫＶＥＥＬＬＰＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＶＧＥＲ（配列番号３６）から成り得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号２６）から成り得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号３６の部分を含み得る。配列番号３６の部分は、少なくとも４個のアミノ酸長であり得る。配列番号３６の部分は、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２または約１３アミノ酸長であり得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、４個のアミノ酸長である配列番号３６の部分、または５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３個のアミノ酸長である配列番号３６の部分を含み得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫ（配列番号２４５）を含み得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫ（配列番号１４５）を含み得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２６または３６の一方または両方と少なくとも約５０％同一であり得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２６または３６の一方または両方と少なくとも約６０％同一であり得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２６または３６の一方または両方と少なくとも約７０％同一であり得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２６または３６の一方または両方と少なくとも約８０％同一であり得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２６または３６の一方または両方と少なくとも約８５％同一であり得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２６または３６の一方または両方と少なくとも約９０％同一であり得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、酵母ＧＣＮ４ペプチドおよび１つ以上のリンカーを含み得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、配列番号３７を含み得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、抗ＧＣＮ４抗体に対する最小の結合エピトープを含むか、あるいはそれから成り得る。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、抗ＧＣＮ４抗体ｓｃＦｖ ５２ＳＲ４（Ｚａｈｎｄ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，（２００４），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ生物学的Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９，１８８７０−１８８７７（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載される。）に対する結合エピトープ（例えば、最小結合エピトープ）、または１、２、３、４、５、もしくは６の、それらに含まれるＣＤＲ配列（ＣＤＲ１ ＶＬ：ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＳ、ＣＤＲ２ ＶＬ：ＧＴＮＮＲＡＰ、ＣＤＲ３ ＶＬ：ＡＬＷＹＳＮＨＷＶ、ＣＤＲ１ ＶＨ：ＤＹＧＶＮ、ＣＤＲ２ ＶＨ：ＶＩＷＧＤＧＩＴＤＹＮＳＡＬＫＳ、ＣＤＲ３ ＶＨ：ＧＬＦＤＹ）を含む抗体を含むか、あるいはそれから成り得る。ＣＡＲ−ＩＤは、構造Ｉ：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）の配列を含み得、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、任意に任意のアミノ酸であるか、または不在である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、Ｋであるか、または不在である。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、Ｋ、Ａ、およびＧから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ３は、Ｌ、Ａ、およびＧから選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、配列番号１３９、１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される配列を含むか、またはそれから成る。ＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号１５４）、ＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＡＬ（配列番号１５５）、ＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＧＬ（配列番号１５６）、ＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＡＡ（配列番号１５７）、ＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＧＧ（配列番号１５８）、ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号１５９）、ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＡＬ（配列番号１６０）、ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＧＬ（配列番号１６１）、ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＡＡ（配列番号１６２）、ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＧＧ（配列番号１６３）、およびＬＬＰＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号１３９）。
いくつかの実施形態では、非限定的な例として、ＣＡＲ−ＩＤは、イソペプタグ（ＴＤＫＤＭＴＩＴＦＴＮＫＫＤＡＥ、配列番号４１）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＳｐｙＴａｇ（ＡＨＩＶＭＶＤＡＹＫＰＴＫ、配列番号４２）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＳＮＡＲＥを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、Ｈｕタグを含み得る。キメラ受容体結合パートナーは、第１のαヘリックスおよび第２のαヘリックスが、結合する際にコイルドコイル構造を形成し得るように、第２のαヘリックスペプチドに結合する第１のαヘリックスペプチドを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、Ｅ４ペプチド（ＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ、配列番号４４）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、Ｋ４ペプチド（ＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ、配列番号４３）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、修飾されたＥ４ペプチドを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、修飾されたＫ４ペプチドを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、配列番号４４の配列を有するペプチドから成り得る。ＣＡＲ−ＩＤは、配列番号４３の配列を有するペプチドから成り得る。ＣＡＲ−ＩＤは、配列番号４３と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれを超える同一性を有する配列を有するペプチドを含み得る。）ＣＡＲ−ＩＤは、配列番号４４と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％またはそれを超える同一性を有する配列を有するペプチドを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、以下のＫ４またはＥ４ペプチドのうちのいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％またはそれを超える同一性を有する配列を有するペプチドを含み得る（配列番号４５〜５８）：
ＣＡＲ−ＩＤは、配列番号４５〜５８のうちのいずれか１つの配列を有するペプチドを含み得る。本明細書で記載される標的化部分を含むスイッチおよび配列番号４５、４７、４８、５１、５２、５５、および５７のうちのいずれか１つの配列を有するペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤは、本発明に従う使用のための配列番号６５の配列を有するＣＡＲと対を成し得る（例えば、かかるスイッチは、かかるＣＡＲを発現して、本明細書で記載される治療に作用するエフェクター細胞と組み合わせて使用され得る）。本明細書で記載される標的化部分を含むスイッチおよび配列番号４６、４９、５０、５３、５４、５６、および５８のうちのいずれか１つの配列を有するペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤは、本発明に従う使用のための配列番号６４の配列を有するＣＡＲと対を成し得る（例えば、かかるスイッチは、かかるＣＡＲを発現して、本明細書で記載される治療に作用するエフェクター細胞と組み合わせて使用され得る）。
また、非限定的な例として、ＣＡＲ−ＩＤは、マウスコロニン１Ａタンパク質のαヘリックスを含み得る。または、非限定的な例として、ＣＡＲ−ＩＤは、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼＡの二量体化およびドッキングドメイン（ＤＤＤ）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、Ａキナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）のアンカードメイン（ＡＤ）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＤＤ１（配列番号６０）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＡＤ１（配列番号５９）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＤＤ２（配列番号６２）を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＡＤ２（配列番号６１）を含み得る。
または、非限定的な例として、ＣＡＲ−ＩＤは、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ（例えば、ＤＤＤ１またはＤＤＤ２）の二量体化およびドッキングドメインを含み得、ＤＤＤは、キメラ受容体上（例えば、非抗体細胞外ドメイン上）のＤＤＤとＡＤパートナーとの間のジスルフィド結合を形成するシステインで修飾されている。ＣＡＲ−ＩＤは、ＡＤ（例えば、ＡＤ１またはＡＤ２）を含み得、ＡＤは、キメラ受容体上（例えば、非抗体細胞外ドメイン上）のＡＤとＤＤＤパートナーとの間のジスルフィド結合を形成するシステインで修飾されている。これらのジスルフィド結合は、ＡＤ１とＤＤＤ１との間の、あるいはＡＤ２とＤＤＤ２との間の共有結合性相互作用を形成し得る。これは、ＣＡＲ−ＩＤのための非抗体ペプチドの親和性を増加するための利点であり得、その逆も同じである。
キメラ受容体結合小分子
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、小分子を含むか、またはそれから成る。小分子は、ペプチドを含み得ない。小分子は、アミド結合によって連結される２個以上のアミノ酸を含み得ない。小分子は、タンパク質またはペプチドにより結合される小分子であり得る。小分子は、タンパク質またはペプチドにより結合される小分子であり得、タンパク質またはペプチドは、キメラ受容体の非抗体細胞外ドメイン内に存在する。小分子は、高親和性を有するタンパク質またはペプチドにより結合される小分子であり得る。小分子は、薬物であり得る。小分子は、無機化合物であり得る。小分子は、有機化合物であり得る。小分子は、自然発生であり得る。小分子は、自然発生ではあり得ない。小分子は、合成であり得る。小分子は、ステロイド、ビタミン、ビタマー、リガンド、受容体アゴニスト、受容体アンタゴニスト、酵素阻害剤、ＤＮＡアプタマー、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ＰＮＡアプタマー、ペトイド、基質、基質アナログ、代謝産物、抗生物質、単糖、二糖、脂質、脂肪酸、核酸、アルカロイド、グリコシド、フェナジン、ポリケタイド、テルペンおよびテトラピロール、およびそれらの部分から選択され得る。非限定的な例として、小分子は、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体から成る群から選択され得る。
小分子は、ビタミンまたはその誘導体を含み得る。非限定的な例として、ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、およびビタミンＫから選択され得る。ビタミンは、ビタミンＣであり得る。ビタミンは、ビタミンＤであり得る。ビタミンは、葉酸またはその誘導体を含み得る。小分子は、ビタマーを含み得る。小分子は、ビタミン代謝産物またはビタミン前駆体を含み得る。非限定的な例として、ビタマーは、レチノール、レチナール、ベータカロチン、カロテノイド、チアミン、リボフラビン、ナイアシン、ナイアシンアミド、パントテン酸、ピリドキシン、イリドキサミン、ピリドキサール、ビオチン、葉酸、フォリン酸、シアノコバラミン、ヒドロキシコバラミン、メチルコバラミン、アスコルビン酸、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール、トコフェロール、トコトリエノール、フィロキノン、およびメナキノンまたはその誘導体から選択され得る。小分子は、抗酸化物質またはその誘導体を含み得る。
小分子は、酵素阻害剤であり得る。非限定的な例として、小分子は、シロシンキナーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、増殖因子受容体阻害剤、ホルモン受容体阻害剤、ヤヌスキナーゼ阻害剤、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｂｒａｆ阻害剤、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、およびヒートショックタンパク質阻害剤から選択され得る。酵素阻害剤は、アパチニブ、ボルテゾミブ、イマチニブ、イブルチニブ、セリシシリブ、ボスチニブ、カボザンチニブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、ダサチニブ、ドキソルビシン、エルロチニブ、エベロリムス、ゲフィチニブ、イマチニブ、イニパリブ、ラパチニブ、ＬＥＥ０１１、ＬＧＸ８１８、ミロチニブ、オバトクラックス、オラパリブ、パゾパニブ、ＰＤ−０３３２９９１、ペリフォシン、ポナチニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、サリノマイシン、ソラフェニブ、スニチニブ、タモキシフェン、テムシロリムス、トファシチニブ、トラメチニブ、バンデタニブおよびベムラフェニブ、またはその誘導体から選択され得る。
小分子は、約１０００Ｄａ、１１００Ｄａ、１２００Ｄａ、１３００Ｄａ、１４００Ｄａ、１５００Ｄａ、１６００Ｄａ、１７００Ｄａ、１８００Ｄａ、１９００Ｄａ、２０００Ｄａ、２１００Ｄａ、２２００Ｄａ、２３００Ｄａ、２４００Ｄａ、２５００Ｄａ、２６００Ｄａ、２７００Ｄａ、２８００Ｄａ、２９００Ｄａ未満であり得るか、あるいは約３０００Ｄａ未満であり得る。スイッチは、約１２００Ｄａ未満であり得る。スイッチは、約１５００Ｄａであり得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、約２０００Ｄａ未満であり得る。
小分子は、約１０−８ｍ、約１０−９ｍ、約１０−１０ｍほどのサイズを有し得る。小分子は、約１０−７ｍ未満のサイズを有し得る。小分子は、約１０−８ｍ未満のサイズを有し得る。小分子は、約１０−９ｍ未満のサイズを有し得る。小分子は、約１０−１０ｍ未満のサイズを有し得る。小分子は、約１０−１１ｍ未満のサイズを有し得る。小分子は、その最も広い寸法で、約１０ｎｍ未満、約２０ｎｍ未満、約３０ｎｍ未満、約４０ｎｍ未満、約５０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約１００ｎｍ未満、約１１０ｎｍ未満、約１２０ｎｍ未満、約１３０ｎｍ未満、約１４０ｎｍ未満、約１５０ｎｍ未満、約１６０ｎｍ未満、約１７０ｎｍ未満、約１８０ｎｍ未満、約１９０ｎｍ未満、または約２００ｎｍ未満の幅であり得る。小分子は、その最も広い寸法で、約１００ｎｍ未満、約２００ｎｍ未満の幅、約３００ｎｍ未満、約４００ｎｍ未満、約５００ｎｍ未満、約６００ｎｍ未満、約７００ｎｍ未満、約８００ｎｍ未満、約９００ｎｍ未満、または約１０００ｎｍ未満の幅であり得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、ハプテンを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、タンパク質、抗体、または抗体断片などのより大きな担体分子に結合する際、免疫応答を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）またはその誘導体であり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含み得る。
代替的に、ＣＡＲ−ＩＤは、ハプテンを含まない。ＣＡＲ−ＩＤは、ステロイド、ビタミン、ビタマー、代謝産物、抗生物質、単糖、二糖、脂質、脂肪酸、核酸、アルカロイド、グリコシド、フェナジン、ポリケタイド、テルペン、およびテトラピロール、ならびにそれらの部分、かつそれらの組み合わせから選択され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ペニシリン薬物またはその誘導体であり得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、標的化部分に連結、および／または共役され得る。標的化部分は、標的化抗体または標的化抗体の抗原結合部分であり得、ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体の抗原結合部分のアミノ酸に連結、および／または共役され得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分のアミノ酸は、非天然のアミノ酸であり得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、本明細書で開示される任意の標的化抗体または抗体の抗原結合部分であり得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、配列番号１７〜２５から選択される軽鎖を含み得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、配列番号１７〜２５から選択される軽鎖を含み得、非天然のアミノ酸は、表１に示される各々の部位に位置し得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、配列番号２〜１５から選択される重鎖を含み得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、配列番号２〜１５から選択される重鎖を含み得、非天然のアミノ酸は、表１に示される各々の部位に位置し得る。
標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、抗ＣＤ２０抗体または抗ＣＤ２０抗体断片であり得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、抗ＣＤ２２抗体または抗ＣＤ２２抗体断片であり得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、抗ＣＤ３３抗体または抗ＣＤ３３抗体断片であり得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、抗ＣＤ１２３抗体または抗ＣＤ１２３抗体断片であり得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、抗ＣＬＬ１抗体または抗ＣＬＬ１抗体断片であり得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、抗ＣＥＡ抗体または抗ＣＥＡ抗体断片であり得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、抗Ｈｅｒ２抗体または抗Ｈｅｒ２抗体断片であり得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、抗ＢＣＭＡ抗体または抗ＢＣＭＡ抗体断片であり得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、抗ＣＳ１抗体または抗ＣＳ１抗体断片であり得る。標的化部分は、Ｔ細胞受容体であり得る。標的化部分は、可溶性Ｔ細胞受容体であり得る。標的化可溶性Ｔ細胞受容体は、ＭＨＣ制限ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに結合し得る。
標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、配列番号２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７から選択される軽鎖を含み得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、配列番号２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７から選択される軽鎖を含み得、非天然のアミノ酸は、表２に示される各々の部位に位置し得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、配列番号２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８から選択される重鎖を含み得る。標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、配列番号２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８から選択される重鎖を含み得、非天然のアミノ酸は、表２に示される各々の部位に位置し得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、２０個の天然のアミノ酸のうちの１個に対してコードしないコドンによって、コードされ得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、ナンセンスコドン（終止コドン）によってコードされ得る。終止コドンは、アンバーコドンであり得る。アンバーコドンは、ＵＡＧ配列を含み得る。本明細書では、「ＵＡＧ」および「ＴＡＧ」は、アンバーコドンを参照して、交換可能に使用され得る。終止コドンは、オーカーコドンであり得る。オーカーコドンは、ＵＡＡ配列を含み得る。終止コドンは、オパールまたはアンバーコドンであり得る。オパールまたはアンバーコドンは、ＵＧＡ配列を含み得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、四塩基コドンによってコードされ得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦまたはｐＡｃＰｈｅ）であり得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、セレノシステインであり得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、ｐ−フルオロフェニルアラニン（ｐＦＰｈｅ）であり得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、（ｐＡｚＦ）、ｐ−アジドメチルフェニルアラニン（ｐＡｚＣＨ２Ｆ）、ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン（ｐＢｐＦ）、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン（ｐＰｒＦ）、ｐ−ヨードフェニルアラニン（ｐＩＦ）、ｐ−クロロフェニルアラニン（ｐＣＮＦ）、ｐ−カルボキシメチルフェニルアラニン（ｐＣｍＦ）、３−（２−ナフチル）アラニン（ＮａｐＡ）、ｐ−ボロノフェニルアラニン（ｐＢｏＦ）、ｏ−ニトロフェニルアラニン（ｏＮｉＦ）、（８−ヒドロキシキノリン−３−イル）アラニン（ＨＱＡ）、セレノシステイン、および（２，２’−ビピリジン−５−イル）アラニン（ＢｉｐｙＡ）を含む群から選択され得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、４−（６−メチル−ｓ−テトラジン−３−イル）アミノフェニルアラニンであり得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、β−アミノ酸（β３およびβ２）、ホモアミノ酸、プロリンおよびピルビン酸誘導体、３置換アラニン誘導体、グリシン誘導体、環置換フェニルアラニンおよびチロシン誘導体、直鎖核アミノ酸、ジアミノ酸、Ｄ−アミノ酸、Ｎ−メチルアミノ酸、またはそれらの組み合わせであり得る。
非天然のアミノ酸の追加の例は、１）Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、３−ニトロ−Ｌ−チロシン、ｐ−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−メトキシ−Ｌ−フェニルアラニンおよびｐ−イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニンなどの様々な置換されたチロシンおよびフェニルアラニン類似体、２）光架橋され得るアリールアジドおよびベンゾフェノン基を有するアミノ酸、３）アセチル−Ｌ−フェニルアラニンおよびｍ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−アリル−Ｌ−チロシン、Ｏ−（２−プロピニル）−Ｌ−チロシン、ｐ−エチルチオカルボニル−Ｌ−フェニルアラニンおよびｐ−（３−オキソブタノイル）−Ｌ−フェニルアラニンを含む、特有の化学反応性を有するアミノ酸、４）ｐ−ヨードおよびｐ−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニンを含む、Ｘ線結晶学での位相のための重原子含有アミノ酸、５）酸化還元活性アミノ酸ジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニン、６）ｂ−Ｎ−アセチルグルコサミン−Ｏ−セリンおよびａ−Ｎ−アセチルガラクトサミン−Ｏ−スレオニンを含むグリコシル化されたアミノ酸、７）ナフチル、ダンシル、および７−アミノクマリン側鎖を有する蛍光性アミノ酸、８）アゾベンゼンおよびニトロベンジルＣｙｓ、Ｓｅｒ、およびＴｙｒ側鎖を有する光開裂性および光異性化アミノ酸、９）ホスホチロシンミメティックｐ−カルボキシメチル−Ｌ−フェニルアラニン、１０）グルタミンホモログホモグルタミン、ならびに１１）２−アミノブタン酸を含むが、これらに限定されない。非天然のアミノ酸は、修飾され、化学基を組込み得る。非天然のアミノ酸は、修飾され、ケトン基を組込み得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、少なくとも１つのオキシム、カルボニル、ジカルボニル、ヒドロキシアミン基またはそれらの組み合わせを含み得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、少なくとも１つのカルボニル、ジカルボニル、アルコキシアミン、ヒドラジン、環状アルケン、環状アルキン、シクロオクチン、アリル／アルキルアジド、ノルボルネン、シクロプロペン、トランスシクロオクテン、もしくはテトラジン官能基、またはそれらの組み合わせを含み得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、当該技術分野で知られる方法によって、標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤに組込まれ得る。細胞ベースまたは無細胞系は、標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤの遺伝子配列を改変するのに使用され得、したがって１つ以上の非天然のアミノ酸と共に標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤを産生する。栄養要求性菌株は、操作されたｔＲＮＡおよびシンテターゼの代わりに使用され得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、１つ以上の天然のアミノ酸の選択的反応を通して生成され得る。選択的反応は、１つ以上の酵素によって媒介され得る。１つの非限定的な例として、酵素（ＦＧＥ）を生成するホルミルグリシンとの１つ以上のシステインの選択的反応は、１つ以上のホルミルグリシン（Ｒａｂｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ７：１０５２−１０６７（２０１２）を参照され、参照によりその全体が本明細書に組込まれる）を生成し得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、化学反応に参加し、リンカーを形成し得る。リンカーを形成する化学反応は、生体直交反応であり得る。リンカーを形成する化学反応は、クリックケミストリーであり得る。
追加の非天然のアミノ酸が、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ，７９：４１３−４４，２０１０）、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ，４４：３４−６６，２００５）およびＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０３９４７２、ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０３９４６８、ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８８００９、ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５８６６８、ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８９１４２、ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８８０１１、ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００１４８５、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４９３９７、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４７８２２、およびＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４４６８２に開示され、全ては参照によりその全体が本明細書に組込まれる。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチの第２の領域：標的化部分。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含む。
標的化部分は、標的上の細胞表面分子に結合し得る。細胞表面分子は、抗原を含み得る。細胞表面分子は、タンパク質、脂質部分、糖タンパク質、糖脂質、炭水化物、ポリサッカライド、核酸、ＭＨＣ結合ペプチド、またはその組み合わせから選択され得る。細胞表面分子は、バクテリア、ウィルス、および他の微生物の部分（例えば、コート、カプセル、細胞壁、鞭毛、線毛、および毒素）を含み得る。細胞表面分子は、標的細胞によって発現され得る。細胞表面分子は、標的細胞によって発現され得ない。非限定的な例として、細胞表面分子は、標的細胞ではなく、かつ標的細胞または標的細胞の細胞表面分子に結合される細胞によって発現される、リガンドであり得る。また、非限定的な例として、細胞表面分子は、標的細胞の細胞表面または細胞表面受容体に結合されるベトキシン、外来性分子、またはウィルス性タンパク質であり得る。
標的化部分は、標的化ポリペプチドであり得る。標的化ポリペプチドは、標的化抗体または抗体断片であり得る。抗体断片は、抗体の抗原結合部分であり得る。標的化抗体または抗体断片は、免疫グロブリン（Ｉｇ）であり得る。免疫グロブリンは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、その断片（例えば、抗原結合断片または部分）、またはその修飾から選択され得る。免疫グロブリンは、ＩｇＧであり得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ１であり得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ２であり得る。ＩｇＧは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合する内在性Ｔ細胞ＦｃＲを調節するための１つ以上のＦｃ変異を有し得る。ＩｇＧは、ＦｃＲ陽性細胞のＦｃＲへのＦｃ結合能力を除去するための１つ以上のＦｃ変異を有し得る。Ｆｃ結合能力の除去は、ＣＡＲ−ＥＣのＦｃＲ陽性細胞への架橋の機会を減少し得、ＣＡＲ−ＥＣのＦｃＲ陽性細胞への架橋は、標的細胞の非存在下でＣＡＲ−ＥＣを活性するであろう。そのようにして、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合する内在性Ｔ細胞ＦｃＲを調節することは、非効果的または望まれない免疫応答を減少し得る。１つ以上のＦｃ変異は、グリコシル化部位を除去し得る。１つ以上のＦｃ変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｎ２９７Ｑ、およびそれらの任意の組み合わせから選択され得る。１つ以上のＦｃ変異は、ＩｇＧ１であり得る。ＩｇＧ１での１つ以上のＦｃ変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、または両方であり得る。代替的に、または加えて、ＩｇＧ１での１つ以上のＦｃ変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、または両方であり得る。代替的に、または加えて、ＩｇＧ１での１つ以上のＦｃ変異は、Ｎ２９７Ａであり得る。代替的に、または加えて、１つ以上の変異は、ＩｇＧ２であり得る。ＩｇＧ２での１つ以上のＦｃ変異は、Ｖ２３４Ａ、Ｖ２３７Ａ、または両方であり得る。
標的化抗体または抗体断片は、Ｆｃヌル免疫グロブリンまたはその断片であり得る。
標的化抗体または抗体の抗原結合部分は、Ｆａｂであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるｓＣＡＲ−Ｔ細胞の中央テナントは、標的細胞およびｓＣＡＲとのみ相互作用し、いかなる他の免疫受容体または細胞型とも相互作用しない、ＣＡＲ−ＩＤ移植スイッチの直行性である。直行性の不足は、オフターゲット効果を引き起こす潜在性を有する。したがって、いくつかの実施形態では、Ｆａｂｓは、Ｆｃドメインのそれらの不足が、Ｆｃ受容体媒介のオフターゲット結合の可能性を除去するため所望であり得る。いくつかの実施形態では、それらの小型およびより短い半減期（Ｆａｂに対しておよそ１〜５時間対ＩｇＧに対して１０〜２０日は、臨床翻訳においてより良好な腫瘍浸透、およびｓＣＡＲ−Ｔ細胞活性へのより大きな時間的制御を提供する。加えて、Ｆａｂは、結合価、オフレート、または組織分布において、ＩｇＧとは異なり得る。
標的化抗体断片は、ヒト、完全にヒト、ヒト化され、ヒト操作された、非ヒト、および／またはキメラ抗体であり得る。非ヒト抗体は、ヒト化され、免疫原性をヒトに減少し得るが、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持する。キメラ抗体は、別個の抗体に対して元々コードされた２つ以上の抗体遺伝子の結合を通して産生される、抗体を指し得る。キメラ抗体は、第１の抗体からの少なくとも１つのアミノ酸と、第２の抗体からの少なくとも１つのアミノ酸とを含み得、第１および第２の抗体は異なる。抗体または抗体断片の少なくとも一部分は、牛種、ヒト種、またはマウス種からであり得る。抗体または抗体断片の少なくとも一部分は、ラット、ヤギ、モルモット、またはウサギからであり得る。抗体または抗体断片の少なくとも一部分は、ヒトからであり得る。抗体または抗体断片の少なくとも一部分は、カニクイザルからであり得る。
標的化抗体または抗体断片は、哺乳類、鳥、魚、両生類、または爬虫類からの抗体または抗体断片に基づくか、またはそれから誘導され得る。哺乳類は、肉食動物、げっ歯類、像、有袋類、ウサギ、コウモリ、霊長類、アシカ、アリクイ、クジラ、有蹄類および偶蹄類を含むが、これらに限定されない。哺乳類は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ヤギ、またはブタであり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチ上に含まれる標的化部分は、ヒト化される。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチ上に含まれる標的化部分は、ヒト化され、それはＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、特異的にＣＤ１９に結合する（すなわち、非実質的なオフターゲット結合が起こるか、または観察可能である）。いくつかの実施形態では、標的化部分は、抗ＣＤ１９抗体、または抗ＣＤ１９抗体の抗原結合断片である。特定の実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体、またはヒト化された抗ＣＤ１９抗体の抗原結合断片（例えば、本明細書で開示される、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片の超のうちのいずれか１つ）を含むか、またはそれから成る。特定の実施形態では、標的化部分は、抗ＣＤ１９マウスクローンＦＭＣ６３抗体のヒト化された形態を含む。例えば、いくつかの実施形態では、標的化部分は、ａを含む。
標的化抗体または抗体断片は、非限定的な例として、ＣＤ１９、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＳ１、ＢＣＭＡ、ＣＥＡ、またはその断片から選択される抗原を標的とする。抗原は、野生型抗原を含み得る。抗原は、１つ以上の変異を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、Ｂ細胞標的化部分であり得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体または抗体断片であり得る。抗ＣＤ１９抗体または抗体断片は、抗体クローンｈｕＢ４（例えば、配列番号２２３〜２２４を参照されたい）、ＦＭＣ６３（例えば、配列番号２〜１５、１７〜２５、１８４〜１８５を参照されたい）、および１Ｄ３（例えば、配列番号２０７〜２０８を参照されたい）から選択され得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＬＬ１抗体または抗体断片であり得る。抗ＣＬＬ１抗体または抗体断片は、抗体クローン１０７５．７（例えば、配列番号１９３〜１９４を参照されたい）であり得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１２３抗体または抗体断片であり得る。抗ＣＤ１２３抗体または抗体断片は、抗体クローン３２７１６（例えば、配列番号２３９〜２４０を参照されたい）、および２６２９２（例えば、配列番号２４１〜２４２を参照されたい）から選択され得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＤ２２抗体または抗体断片であり得る。抗ＣＤ２２抗体または抗体断片は、抗体クローンｍ９７２（例えば、配列番号２１１〜２１２を参照されたい）、およびｍ９７１（例えば、配列番号２０９〜２１０を参照されたい）から選択され得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＤ２０抗体または抗体断片であり得る。抗ＣＤ２０抗体または抗体断片は、抗体クローンＯＦＡ（例えば、配列番号２１９〜２２０を参照されたい）、ＲＴＸ（例えば、配列番号２１５〜２１６を参照されたい）、およびＧＡ１０１（例えば、配列番号２１７〜２１８を参照されたい）から選択され得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＢＣＭＡ抗体または抗体断片であり得る。抗ＢＣＭＡ抗体または抗体断片は、抗体クローンＢＣＭＡ−９８（例えば、配列番号２２１〜２２２を参照されたいであり得る。標的化抗体または抗体断片は、抗Ｈｅｒ２抗体または抗体断片であり得る。抗Ｈｅｒ２抗体または抗体断片は、抗体クローントラスツズマブ（例えば、配列番号１８７〜１８８を参照されたい）から選択され得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＳ１抗体または抗体断片であり得る。抗ＣＳ１抗体または抗体断片は、抗体クローンエロツズマブ（例えば、配列番号２４３〜２４４を参照されたい）であり得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＤ３３抗体または抗体断片であり得る。抗ＣＤ３３抗体または抗体断片は、抗体クローンｈＭ１９５（例えば、配列番号２５９〜２６０を参照されたい）、およびＨＰ６７．６（例えば、配列番号２３７〜２３８を参照されたいから選択され得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＥＧＦＲ抗体または抗体断片であり得る。抗ＥＧＦＲ抗体または抗体断片は、クローンＣ２２５（例えば、配列番号１９１〜１９２を参照されたい）であり得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体または抗体断片であり得る。抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体または抗体断片は、クローンＨｕ８０６（例えば、配列番号１９９〜２００を参照されたい）であり得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＥＡ抗体または抗体断片であり得る。抗ＣＥＡ抗体または抗体断片は、抗体クローンＡ５Ｂ７（例えば、配列番号２２５〜２２６を参照されたい）であり得る。それぞれスイッチの発現は、重鎖および軽鎖を必要とする。いくつかの実施形態では、それぞれスイッチの発現は、重鎖および軽鎖遺伝子を１つ以上の発現細胞（例えば、ＨＥＫ）に共トランスフェクトすることを必要とする。ＣＡＲ−ＩＤは、重鎖のみに位置し、一価のスイッチを提供し得る。ＣＡＲ−ＩＤは、軽鎖のみに位置し、一価のスイッチを提供し得る。ＣＡＲ−ＩＤは、重鎖および軽鎖の両方に位置し、二価のスイッチを提供し得る。ＣＡＲ−ＩＤは、重鎖および軽鎖の両方に位置し、多価のスイッチを提供し得る。
標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片であり得る。標的化ポリペプチドは、抗ＣＤ２２抗体であり得る。標的化ポリペプチドは、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片であり得る。標的化ポリペプチドは、抗ＣＳ１抗体またはその断片であり得る。標的化ポリペプチドは、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体またはその断片であり得る。標的化ポリペプチドは、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片であり得る。標的化ポリペプチドは、抗ＣＤ２０抗体または抗体断片を含み得る。標的化ポリペプチドは、リツキシマブを含み得る。標的化ポリペプチドは、抗ＥＧＦＲ抗体または抗体断片を含み得る。標的化ポリペプチドは、抗ＣＥＡ抗体または抗体断片を含み得る。標的化ポリペプチドは、抗ＣＬＬ１抗体または抗体断片を含み得る。標的化ポリペプチドは、抗ＣＤ１２３抗体または抗体断片を含み得る。標的化ポリペプチドは、抗ＣＤ３３抗体または抗体断片を含み得る。標的化ポリペプチドは、抗ＥｐＣＡＭ抗体またはその断片を含み得ない。
標的化抗体または抗体断片は、任意の市販の抗体から選択され得る。標的化抗体または抗体断片は、アドトラスツズマブエムタンシン、アレムツズマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、ベドチン、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、イピリムマブ、イブリツモマブ、チウセタン、パニツムマブ、セツキシマブ、アービタックス、リツキシマブ、トラスツズマブおよびそれらの断片から選択され得る。
標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含み得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖を含み得る。抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１８４に基づくか、またはそれから誘導されるヌクレオチド配列によってコードされ得る。ヌクレオチド配列は、配列番号１８４と、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖を含み得る。抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１８５に基づくか、またはそれから誘導される配列によってコードされ得る。ヌクレオチド配列は、配列番号１８５と、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得る
抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号２０７および２２３から選択される配列に基づくか、またはそれから誘導されるヌクレオチド配列によってコードされ得る。軽鎖のヌクレオチド配列は、配列番号２０７および２２３から選択される配列と、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖を含み得る。抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖は、配列番号２０８および２２４から選択される配列に基づくか、またはそれから誘導される配列によってコードされ得る。重鎖のヌクレオチド配列は、配列番号２０８および２２４から選択される配列と、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得る。
標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含み得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖を含み得る。抗ＣＤ１９抗体または断片の軽鎖は、配列番号２５および２０３から選択される配列に基づくか、またはそれから誘導されるアミノ酸配列を含み得る。アミノ酸配列は、配列番号２５および２０３と、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９またはその断片の重鎖を含み得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９ＩｇＧの重鎖を含み得る。抗ＣＤ１９ＩｇＧの重鎖は、配列番号１５および２０４から選択される配列に基づくか、またはそれから誘導される配列を含み得る。アミノ酸配列は、配列番号１５および２０４から選択される配列と、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９Ｆａｂの重鎖を含み得る。抗ＣＤ１９Ｆａｂの重鎖は、配列番号２０５に基づくか、またはそれから誘導される配列を含み得る。標的化抗体またはその断片は、配列番号２０５と、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得るアミノ酸配列を含むか、またはそれから成る抗ＣＤ１９Ｆａｂの重鎖を含み得る。
標的化抗体またはその断片は、抗ＣＬＬ１抗体またはその断片の軽鎖を含み得る。抗ＣＬＬ１抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１９３によってコードされ得る。抗ＣＬＬ１抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１９３と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＬＬ１抗体またはその断片の重鎖を含み得る。抗ＣＬＬ１抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１９４によってコードされ得る。抗ＣＬＬ１抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１９４と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。
標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ２２抗体またはその断片の軽鎖を含み得る。抗ＣＤ２２抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１０、１２、および１４から選択される配列によってコードされ得る。抗ＣＤ２２抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１０、１２、および１４から選択される配列と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ２２抗体またはその断片の重鎖を含み得る。抗ＣＤ２２抗体またはその断片の重鎖は、配列番号２１１および２１３から選択される配列であり得る。抗ＣＤ２２抗体またはその断片の重鎖は、配列番号２１１、２１３から選択される配列と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。
標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ２０抗体またはその断片の軽鎖を含み得る。抗ＣＤ２０抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１８９、２１６、２１８、および２２０から選択される配列によってコードされ得る。抗ＣＤ２０抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１８９、２１６、２１８、および２２０から選択される配列と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ２０抗体またはその断片の重鎖を含み得る。抗ＣＤ２０抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１９０、２１５、２１７、および２１９から選択される配列であり得る。抗ＣＤ２０抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１９０、２１５、２１７、および２１９から選択される配列と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチは、配列番号１９０、２１５、２１７、および２１９の重鎖、および配列番号１８９、２１６、２１８、および２２０の軽鎖、もしくはそれらのホモログ、またはそれらの断片を含み得る。
標的化抗体またはその断片は、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片の軽鎖を含み得る。抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１８７によってコードされ得る。抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１８７と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。標的化抗体またはその断片は、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片の重鎖を含み得る。抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１８８によってコードされ得る。抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１８８と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチは、配列番号１８８の重鎖、および配列番号１８７の軽鎖、もしくはそれらのホモログ、またはそれらの断片を含み得る。
標的化抗体またはその断片は、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片の軽鎖を含み得る。抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号２２２によってコードされ得る。抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号２２２と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片の重鎖を含み得る。抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片の重鎖は、配列番号２２１から選択される配列によってコードされ得る。抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片の重鎖は、配列番号２２１から選択される配列と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチは、配列番号２２１の重鎖、および配列番号２２２の軽鎖、もしくはそれらのホモログ、またはそれらの断片を含み得る。
標的化抗体またはその断片は、抗ＣＥＡ抗体またはその断片の軽鎖を含み得る。抗ＣＥＡ抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号２２６によってコードされ得る。抗ＣＥＡ抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号２２６と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＥＡ抗体またはその断片の重鎖を含み得る。抗ＣＥＡ抗体またはその断片の重鎖は、配列番号２２５によってコードされ得る。抗ＣＥＡ抗体またはその断片の重鎖は、配列番号２２５と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチは、配列番号２２５の重鎖、および配列番号２２６の軽鎖、もしくはそれらのホモログ、またはそれらの断片を含み得る。
標的化抗体またはその断片は、抗ＣＳ１抗体またはその断片の軽鎖を含み得る。抗ＣＳ１抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号２４３によってコードされ得る。抗ＣＳ１抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号２４３と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＳ１抗体またはその断片の重鎖を含み得る。抗ＣＳ１抗体またはその断片の重鎖は、配列番号２４４によってコードされ得る。抗ＣＳ１抗体またはその断片の重鎖は、配列番号２４４と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチは、配列番号２４４の重鎖、および配列番号２４３の軽鎖、もしくはそれらのホモログ、またはそれらの断片を含み得る。
標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ３３抗体またはその断片の軽鎖を含み得る。抗ＣＤ３３抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１９５によってコードされ得る。抗ＣＤ３３抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１９５と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。標的化抗体またはその断片は、抗ＣＤ３３抗体またはその断片の重鎖を含み得る。抗ＣＤ３３抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１９６によってコードされ得る。抗ＣＤ３３抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１９６と、少なくとも約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一である配列によってコードされ得る。キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチは、配列番号１９６の重鎖、および配列番号１９５の軽鎖、もしくはそれらのホモログ、またはそれらの断片を含み得る。
標的化抗体または抗体断片は、配列番号１８４〜１９６、２０７〜２３６から選択されるヌクレオチド配列を含み得る。標的化ポリペプチドは、配列番号１８４〜１９６、２０７〜２３６から選択されるヌクレオチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。標的化抗体または抗体断片は、配列番号１８４〜１９６、２０７〜２３６から選択されるヌクレオチド配列のヒト化された形態を含み得る。
標的化抗体または抗体断片は、配列番号２〜１５、１７〜２５、２７〜３５、１９７〜２０６、２３７〜２４４、２４６〜２６６から選択されるアミノ酸配列を含み得る。標的化ポリペプチドは、配列番号２〜１５、１７〜２５、２７〜３５、１９７〜２０６、２３７〜２４４、２４６〜２６６から選択されるアミノ酸配列に基づくか、またはそれから誘導され得る。標的化抗体または抗体断片は、配列番号２〜１５、１７〜２５、２７〜３５、１９７〜２０６、２３７〜２４４、２４６〜２６６から選択されるアミノ酸配列のヒト化された形態を含み得る。
したがって、標的化部分は、例えば、ＣＤ１９に結合する免疫グロブリン（Ｉｇ）であり得る。免疫グロブリンは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、その抗原結合断片、およびそれらの修飾から選択され得る。免疫グロブリンは、ＩｇＧであり得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ１であり得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ２であり得る。ＩｇＧは、スイッチに結合する内在性Ｔ細胞ＦｃＲを調節するための１つ以上のＦｃ変異を有し得る。ＩｇＧは、ＦｃＲ陽性細胞のＦｃＲへのＦｃ結合能力を除去するための１つ以上のＦｃ変異を有し得る。Ｆｃ結合能力の除去は、キメラ受容体ＥＣをＦｃＲ陽性細胞へ架橋する機会を減少し得、キメラ受容体ＥＣのＦｃＲ陽性細胞への架橋は、標的細胞の非存在下でキメラ受容体ＥＣを活性化するであろう。そのようにして、キメラ受容体ＥＣスイッチに結合する内在性Ｔ細胞ＦｃＲを調節することは、非効果的または望ましくない免疫応答を減少し得る。１つ以上のＦｃ変異は、グリコシル化部位を除去し得る。１つ以上のＦｃ変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｎ２９７Ｑおよびそれらの任意の組み合わせから選択され得る。１つ以上のＦｃ変異は、ＩｇＧ１であり得る。ＩｇＧ１での１つ以上のＦｃ変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、または両方であり得る。代替的に、または加えて、ＩｇＧ１での１つ以上のＦｃ変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、または両方であり得る。代替的に、または加えて、ＩｇＧ１での１つ以上のＦｃ変異は、Ｎ２９７Ａであり得る。代替的に、または加えて、１つ以上の変異は、ＩｇＧ２であり得る。ＩｇＧ２での１つ以上のＦｃ変異は、Ｖ２３４Ａ、Ｖ２３７Ａ、または両方であり得る。
標的化部分は、ＣＤ１９、またはその抗原結合断片に結合するＦｃヌル免疫グロブリンであり得る。
標的化部分は、ヒト、完全にヒト、ヒト化され、ヒト操作された、非ヒト、および／またはキメラ抗体であり得る。非ヒト抗体は、ヒト化され、免疫原性をヒトに減少し得るが、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持する。キメラ抗体は、別個の抗体に対して元々コードされた２つ以上の抗体遺伝子の結合を通して産生される抗体を指し得る。キメラ抗体は、第１の抗体からの少なくとも１つのアミノ酸、および第２の抗体からの少なくとも１つのアミノ酸を含み得、第１および第２の抗体は、異なる。標的化部分の少なくとも一部分は、ウシ種、ヒト種、またはマウス種からであり得る。標的化部分の少なくとも一部分は、ラット、ヤギ、モルモット、またはラビットからであり得る。標的化部分の少なくとも一部分は、ヒトからであり得る。標的化部分の少なくとも一部分は、カニクイザルからであり得る。標的化部分は、ヒト化された単一のドメイン抗体であり得る。単一のドメイン抗体は、ヒト化されたラクダ科であり得る。
標的化部分は、例えば、哺乳類、鳥、魚、両生類、爬虫類からの、抗ＣＤ１９抗体またはＣＤ１９結合抗体断片に基づくか、またはそれから誘導され得る。哺乳類は、肉食動物、げっ歯類、像、有袋類、ウサギ、コウモリ、霊長類、アシカ、アリクイ、クジラ、有蹄類および偶蹄類を含むが、これらに限定されない。哺乳類は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ヤギ、またはブタであり得る。
標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片を含み得る。標的化部分は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合断片を含み得る。抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片のヒト化された軽鎖を含み得る。標的化部分は、ＦＭＣ６３抗体（配列番号２５）またはその抗原結合断片のヒト化された軽鎖を含み得る。抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片は、ＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合断片のヒト化された軽鎖を含み得る。抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片のヒト化された軽鎖は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つ、または配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片のヒト化された軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つ、または配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つと、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得る。標的化部分は、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片のヒト化された重鎖を含み得る。抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片のヒト化された重鎖を含み得る。標的化部分は、ＦＭＣ６３抗体（配列番号１５）またはその抗原結合断片のヒト化された重鎖を含み得る。抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片は、ＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合断片のヒト化された重鎖を含み得る。抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片のヒト化された重鎖は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片のヒト化された重鎖のアミノ酸配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つと、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得る。標的化部分は、ＦＭＣ６３抗体（配列番号１５）のヒト化された軽鎖およびヒト化された重鎖を含み得る。例えば、標的化部分は、配列番号１７〜２４のうちの１つ、または配列番号２７〜３４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、またはそれから成るヒト化された軽鎖を含み得、標的化部分は、配列番号２〜１４のうちの１つのアミノ酸配列を含むか、またはそれから成るヒト化された重鎖を含み得る。
ヒト化
ヒト化のための多数の方法が、当該技術分野で知られ、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチに含まれるヒト化された抗体（例えば、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体もしくは抗原結合断片、またはそれらの部分）を産生するために許容可能である。モノクローナル抗体をヒト化する４つの一般工程がある。これらは、（１）開始抗体軽および重可変ドメインのヌクレオチドおよび予測されるアミノ酸配列を決定することと、（２）ヒト化された抗体を設計すること、すなわち、ヒト化プロセスの間でどの抗体フレームワーク領域を使用するかを決定することと、（３）実際のヒト化方法／技術と、（４）ヒト化された抗体のトランスフェクションおよび発現とである。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、同第５，８０７，７１５号、同第５，８６６，６９２号、同第６，３３１，４１５号、同第５，５３０，１０１号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５８５，０８９号、および同第６，１８０，３７０号を参照されたい。
非ヒト免疫グロブリンから誘導される抗原結合部位を含む、多くの「ヒト化された」抗体分子が記載されており、げっ歯類または修飾されたげっ歯類のＶ領域と、ヒト定常ドメインに融合されるそれらの関連するＣＤＲとを有するキメラ抗体を含む。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３４９：２９３−２９９、Ｌｏｂｕｇｌｉｏ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：４２２０−４２２４、Ｓｈａｗ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４−４５３８、およびＢｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，癌Ｒｅｓ．４７：３５７７−３５８３を産生参照されたい。他の参照は、適切なヒト抗体定常ドメインとの融合前に、フレームワーク領域（ＦＲ）をサポートするヒトに移植されたげっ歯類ＣＤＲを記載する。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−１５３６、およびＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５を参照されたい。別の参照は、組換え的に操作されたげっ歯類フレームワーク領域によってサポートされるげっ歯類ＣＤＲを記載する。例えば、ヨーロッパ特許公開Ｎｏ．０５１９５９６を参照されたい。これらの「ヒト化された」分子は、ヒト患者におけるそれらの部分の療法適用の期間および効果を限定するげっ歯類抗ヒト抗体分子に対して、望まれない免疫学的応答を最小化するように設計される。例えば、抗体定常領域は、それが免疫学的に不活性（例えば、補体溶解を誘引しない）になるように操作され得る。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５８５７２号、英国特許出願第９８０９９５１．８号を参照されたい。また、利用され得るヒト化抗体の他の方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：２４７１−２４７６、および米国特許第６，１８０，３７７号、同第６，０５４，２９７号、同第５，９９７，８６７号、同第５，８６６，６９２号、同第６，２１０，６７１号、および同第６，３５０，８６１号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ０１／２７１６０号によって開示される。
なお別の代替では、完全なヒト抗体は、特異性ヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作されている市販のマウスを使用することで、得られ得る。より所望か、またはより頑強な免疫応答を生成するように設計された遺伝子導入動物は、ヒト化された、またはヒト抗体の産生のために使用され得る。かかる技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州、フレモント）からのＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）、Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（ニュージャージー州、プリンストン）からのＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＴＣ Ｍｏｕｓｅ（商標）、ならびにＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（ニューヨーク州、タリータウン）からのＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウスである。
代替では、抗体は、組換え的に産生され、かつ当該技術分野で知られる任意の方法を使用して発現され得る。別の代替では、抗体は、ファージディスプレイ技術によって組換え的に産生され得る。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、同第５，５８０，７１７号、同第５，７３３，７４３号、および同第６，２６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９４、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１２：４３３−４５５を参照されたい。代替的に、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５３）は、未免疫のドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからヒト抗体および抗体断片をインビトロで産生するために使用され得る。この技術に従って、抗体Ｖドメイン遺伝子は、Ｍ１３またはｆｄなどの、糸状のバクテリオファージの主要な、またはマイナーなコートタンパク質遺伝子にインフレームでクローン化され、かつファージ粒子の表面上の機能的抗体断片として提示される。糸状の粒子はファージ遺伝子の一本鎖ＤＮＡコピーを含有するため、抗体の機能特性に基づく選択もまた、それらの特性を呈する抗体をコードする遺伝子の選択をもたらす。したがって、ファージは、Ｂ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、様々な形式で実施され得る（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ Ｓ，ａｎｄ Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ Ｊ．，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ構造的Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：５６４−５７１を参照されたい）。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの源は、ファージディスプレイのために使用され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８は、免疫化されたマウスの脾臓から誘導されるＶ遺伝子の小さなランダムの組み合わせのライブラリからの、多様なアレイの抗オキサゾロン抗体を単離した。未免疫ヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーは、コンストラクトされ得、多様なアレイの抗原（自己抗原を含む）への抗体は、Ｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７、またはＧｒｉｆｆｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９３，ＥＭＢＯＪ．１２：７２５−７３４によって記載される技術に従って本質的に単離され得る。天然の免疫応答では、抗体遺伝子は、高い割合で変異（体細胞超変異）を蓄積する。導入される変化のいくつかは、高親和性を与え、高親和性表面免疫グロブリンを提示するＢ細胞は、優先的に複製され、続く抗原課題の間に分化される。この天然プロセスは、「鎖シャフリング」として知られる技術を用いることによって模倣され得る（Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−７８３）。この方法では、ファージディスプレイによって得られる「一次」ヒト抗体の親和性は、重鎖および軽鎖Ｖ領域遺伝子を、未免疫ドナーから得られるＶドメイン遺伝子の天然発生のバリアント（レパートリー）のレパートリーと続いて入れ替えることによって改善され得る。この技術は、ｐＭ〜ｎＭの範囲の親和性を有する抗体および抗体断片の産生を可能にする。非常に大型のファージ抗体レパートリー（マザーオブオールライブラリーとしても知られる）を産生する戦略は、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６によって記載されている。遺伝子シャフリングもまた、ヒト抗体をげっ歯類抗体から誘導するために使用され得、ヒト抗体は、開始げっ歯類抗体と同様の親和性および特異性を有する。「エピトープインプリンティング」としても呼称されるこの方法に従って、ファージディスプレイ技術によって得られるげっ歯類抗体の重鎖または軽鎖Ｖドメイン遺伝子は、げっ歯類ヒトキメラを産生するヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで入れ替えられる。抗原上での選択は、機能的抗原結合部位を回復することができる可変領域の単離をもたらし、すなわちエピトープが、パートナーの選択を支配（インプリント）する。プロセスが、残りのげっ歯類Ｖドメインを入れ替えるために反復される際、ヒト抗体が得られる（ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／０６２１３号を参照されたい）。ＣＤＲ移植によるげっ歯類抗体の従来のヒト化とは異なり、この技術は、げっ歯類起源のフレームワークまたはＣＤＲ残基を有さない、完全なヒト抗体を提供する。
特定の実施形態では、抗体（例えば、抗ＣＤ１９抗体）は、実施例１で、本明細書で記載される方法に従ってヒト化される。手短に、この非限定的な例では、ＦＭＣ６３アミノ酸配列を、ＩｇＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩ）を使用して、マウスおよびヒト生殖系列配列と比較し、かつヒトＩＧＨＶ４−５９内のＶＨおよびＶＬドメインと比較した際のマウスＦＭＣ６３ＶＨおよびＶＬドメイン間のフレームワーク差異の変異を、ＦＭＣ６３配列において生成し、配列をヒト生殖系列配列とより同一にした。このプロセスは、いくつかのヒト化された重鎖配列（表３）および軽鎖配列（表４）の産生をもたらし、次いで、ＶＬへのＮ末端融合としてのＣＡＲ−ＩＤの付加を介して、ＣＡＲ−ＥＣスイッチへと修飾された。ヒト化された重鎖および軽鎖配列の様々な対を含むヒト化されたスイッチを、各々実施例３および４に記載されるように、ＣＤ１９結合親和性に関して、かつＣＤ１９発現細胞の細胞毒性を誘発する有効性に関して試験した。
リンカー
本明細書で開示されるスイッチは、１つ以上のリンカーを含み得る。リンカーは、標的細胞上のエフェクター細胞の相互作用または効果を促進するのに最適な、スイッチ柔軟性、長さ、または幾何学を提供し得る。本明細書で開示されるスイッチは、２つ以上のリンカーを含み得る。本明細書で開示されるスイッチは、３つ以上のリンカーを含み得る。本明細書で開示されるスイッチは、４つ以上のリンカーを含み得る。本明細書で開示されるスイッチは、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のリンカーを含み得る。２つ以上のリンカーは、同じであり得る。３つ以上のリンカーのうち少なくとも２つは、同じであり得る。２つ以上のリンカーは、異なり得る。３つ以上のリンカーのうちの少なくとも２つは、異なり得る。
リンカーは、ペプチドを含み得る。リンカーは、剛性ペプチド（ＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１６３）など）を含み得る。リンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号９３、ｎ＝１）などの柔軟性ペプチドを含み得る。リンカーは、配列番号９３〜１０３、１１６〜１３７、および１６３から選択される配列を含み得る。柔軟性および剛性リンカーは、当業者によって理解され、かつＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１３ ６５：１３５７−１３６９、参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載される。スイッチリンカー設計は、発現収率およびスイッチの効力に対して決定的である。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、融合および移植によって標的化抗体配列に接続し得る。リンカーの設計は、スイッチの安定性（例えば、熱安定性、タンパク分解性安定性）に直接影響し得る。リンカーはさらに、どのようにしてペプチドが、特にスイッチへの距離および相対的配向においてＣＡＲに表されるかを説明する。例えば、柔軟性リンカーは、多くの異なる配向を表し得るが、剛性リンカーは、αヘリックスを形成し、かつ抗体に対するペプチドエピトープの一配向のみを表し得る。
リンカーは、少なくとも約１、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、または少なくとも約１０個のアミノ酸の長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約７０、約８０、約９０または約１００個のアミノ酸を含み得る。
リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ポリペプチドＣＡＲ−ＩＤ）のＮ末端またはＣ末端に位置し、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に移植し得る。第１のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ポリペプチドＣＡＲ−ＩＤ）のＮ末端に融合され得、第２のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤのＣ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＣＡＲ−ＩＤの両端上のリンカーと共に、標的化部分の内部部位に移植され得る。
リンカーは、標的化部分（例えば、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分）のＮ末端またはＣ末端に位置し、標的化部分をＣＡＲ−ＩＤに移植し得る。第１のリンカーは、標的化部分のＮ末端に融合され得、かつ第２のリンカーは、標的化部分のＣ末端に融合され得る。標的化部分は、標的化部分の両端上のリンカーと共にＣＡＲ−ＩＤの内部部位に移植され得る。
リンカーは、配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ、（配列番号９３）から成り得、ｎは、１、２、３、４、５、またはそれ以上であり得る。リンカーは、配列（ＧＧＳ）ｎ、（配列番号９５）から成り得、ｎは、１、２、３、４、５、またはそれ以上であり得る。リンカーは、配列番号９３〜１０３から選択される配列を含み得る。リンカーは、配列ＧＧＧＧＳ（配列番号９３）を含み得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは、標的化部分に融合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに融合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分に融合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ、（配列番号９３）から成り得、ｎは、１、２、３、４、５、またはそれ以上であり得、かつリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに融合されるか、標的化部分に融合されるか、あるいはＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分の両方に融合される。
リンカーは、二官能性リンカーであり得る。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーであり得る。リンカーは、ホモ二官能性リンカーであり得る。リンカーは、１つ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットをさらに含む。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、少なくとも１０のＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、少なくとも２０のＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、少なくとも３０のＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、一端にアジドを含み得る。リンカーは、一端にアミノオキシを含み得る。リンカーは、アジドＰＥＧアミノオキシリンカーであり得る。リンカーは、一端にシクロオクチンを含み得る。リンカーは、ＰＥＧシクロオクチンリンカーであり得る。リンカーは、トリアゾールを含み得る。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールであり得る。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーであり得る。リンカーは、ＴｒｉＡリンカーであり得る。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。リンカーは、オキシム連結によってＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。
リンカーをコンストラクトするいくつかの追加の例示的なリンカーおよび方法は、ＷＯ２０１４／１５３００２に見出され得、参照によりその全体が本明細書に組込まれる。
リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。リンカーは、標的化部分に結合され得る。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合し得る。１つ以上のリンカーは、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを１つ以上の標的化部分に結合し得る。１つ以上のリンカーは、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、部位特異的方法で１つ以上の標的化部分に結合し得る。部位特異的方法での結合は、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、１つ以上の標的化部分上の予め決定された部位に結合することを含み得る。代替的に、または加えて、部位特異的方法での結合は、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、１つ以上の標的化部分内の非天然のアミノ酸に結合することを含み得る。１つ以上のリンカーは、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、部位非依存的方法で１つ以上の標的化部分に結合し得る。部位非依存的方法での結合は、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、１つ以上の標的化部分上のランダムの部位に結合することを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、部位特異的方法で、１、２、３、４、５またはそれ以上の標的化部分に結合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、部位非依存的方法で、１、２、３、４、５またはそれ以上の標的化部分に結合され得る。代替的に、標的化部分は、部位特異的方法で、１、２、３、４、５またはそれ以上のＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。部位特異的方法での結合は、１つ以上の標的化部分を、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤ上の予め決定された部位に結合することを含み得る。標的化部分は、部位非依存的方法で、１、２、３、４、５またはそれ以上のＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。部位非依存的方法での結合は、１つ以上の標的化部分を、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤ上のランダムの部位に結合することを含み得る。
１つ以上のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤ、標的化部分、またはそれらの組み合わせに結合され得る。１つ以上のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに結合され、式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘまたは式ＩＩ：Ｘ−Ｌ１の１つ以上スイッチ中間体を形成し得、式中、ＸがＣＡＲ−ＩＤであり、かつＬ１がリンカーである。１つ以上のリンカーは、オキシムによってＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。１つ以上のリンカーは、シクロオクチン、シクロプロペン、アリール／アルキルアジド、トランスシクロオクテン、ノルボルネン、テトラジン、またはそれらの組み合わせによってＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。１つ以上のリンカーは、共有結合性結合、非共有結合性結合、イオン結合、またはそれらの組み合わせによってＣＡＲ−ＩＤに結合され得る。１つ以上のリンカーは、標的化部分に結合され、式ＩＩＩＡ：Ｌ１−Ｙまたは式ＩＩＩ：Ｙ−Ｌ１の１つ以上スイッチ中間体を形成し得、式中、Ｙが標的化部分であり、かつＬ１がリンカーである。１つ以上のリンカーは、オキシムによって標的化部分に結合され得る。１つ以上のリンカーは、シクロオクチン、シクロプロペン、アリール／アルキルアジド、トランスシクロオクテン、ノルボルネン、テトラジン、またはそれらの組み合わせによって標的化部分に結合され得る。１つ以上のリンカーは、共有結合性結合、非共有結合性結合、イオン結合、またはそれらの組み合わせによって標的化部分に結合され得る。
標的化部分は、１個以上のアミノ酸を含み得る。１個以上のアミノ酸は、天然のアミノ酸を含み得る。リンカーは、標的化部分上の１個以上の天然のアミノ酸と結合し得る。１つ以上のアミノ酸は、１個以上の非天然のアミノ酸を含み得る。リンカーは、標的化部分上の１個以上の非天然のアミノ酸と結合し得る。リンカーは、部位特異的変異原性の生成物であるアミノ酸と結合し得る。リンカーは、部位特異的変異原性の生成物であるシステインと結合し得る。リンカー（例えば、置換されたマレイミド）は、部位特異的変異原性の生成物であるシステインならびに天然のシステイン残基と結合し得る。２つのリンカーは、それぞれ補完的な反応性官能基と共に、互いに結合し得る。
１個以上のリンカーは、切断可能リンカーであり得る。１個以上のリンカーは、非切断可能リンカーであり得る。１個以上のリンカーは、柔軟性リンカーであり得る。１個以上のリンカーは、非柔軟性リンカーであり得る。リンカーは、二官能性リンカーであり得る。二官能性リンカーは、一端に第１の官能基を、かつ第２の末端に第２の官能基を含み得る。二官能性リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーであり得る。ヘテロ二官能性リンカーは、一端に第１の官能基を、かつ第２の末端に第２の官能基を含み得、第１の官能基および第２の官能基は異なる。二官能性リンカーは、ホモ二官能性リンカーであり得る。ホモ二官能性リンカーは、一端に第１の官能基を、かつ第２の末端に第２の官能基を含み得、第１の官能基および第２の官能基は同じである。
リンカーは、化学結合を含み得る。リンカーは、官能基を含み得る。リンカーは、ポリマーを含み得る。ポリマーは、ポリエチレングリコールであり得る。リンカーは、アミノ酸を含み得る。
リンカーは、１個以上の官能基を含み得る。リンカーは、２個以上の官能基を含み得る。リンカーは、３個以上の官能基を含み得る。リンカーは、４個以上の官能基を含み得る。リンカーは、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の官能基を含み得る。リンカーは、二官能性エチレングリコールリンカーであり得る。
リンカーは、エチレングリコールを含み得る。リンカーは、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、もしくはは約２０個以上のエチレングリコールサブユニットを含み得る。リンカーは、４個以上のエチレングリコールサブユニットを含み得る。リンカーは、８個以上のエチレングリコールサブユニットを含み得る。リンカーは、１０個以上のエチレングリコールサブユニットを含み得る。リンカーは、１２個以上のエチレングリコールサブユニットを含み得る。リンカーは、１５個以上のエチレングリコールサブユニットを含み得る。リンカーは、２０個以上のエチレングリコールサブユニットを含み得る。リンカーは、２５個以上のエチレングリコールサブユニットを含み得る。リンカーは、３０個以上のエチレングリコールサブユニットを含み得る。リンカーは、３５個以上のエチレングリコールサブユニットを含み得る。
リンカーは、ＰＥＧを含み得る。リンカーは、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、または約２０個以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含み得る。リンカーは、４個以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含み得る。リンカーは、８個以上のＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、１０個以上のＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、１２個以上のＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、１５個以上のＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、２０個以上のＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、２５個以上のＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、３０個以上のＰＥＧサブユニットを含み得る。リンカーは、３５個以上のＰＥＧサブユニットを含み得る。
リンカーは、トリアゾールを含み得る。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールであり得る。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールであり得る。
リンカーは、アリールまたはヘテロアリールを含み得る。リンカーは、アリールを含み得る。アリールは、フェニルであり得る。フェニルは、二置換され得る。二置換されたフェニルは、１，４−二置換フェニルであり得る。二置換されたフェニルは、１，３−二置換フェニルであり得る。フェニルは、三置換され得る。フェニルは、四置換され得る。置換されたフェニルの置換基のうちの２個は、ＮＯ２であり得る。場合によっては、リンカーは、ベンジル置換基を含まない。
リンカーは、１個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、複数のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、２個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、３個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、４個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、５個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、６個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、７個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、８個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、９個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、１０個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、１１個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、１２個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、１３個以上のＰＥＧユニットを含み得る。リンカーは、１４個以上のＰＥＧユニットを含み得る。
リンカーは、一端にアミドを含み得る。リンカーは、一端にアミドを、かつ他方の末端にアミンを含み得る。リンカーは、一端にアミドを、かつ他方の末端にトリアゾールを含み得る。
１つ以上のリンカーは、１，４−ジカルボキシル部分を含み得る。１つ以上のリンカーは、１，３−ジニトロ置換フェニル部分を含み得る。
１つ以上のリンカーは、１つ以上の反応性官能基を含み得る。反応性官能基は、結合パートナー上で補完的な反応性官能基と反応し得る。結合パートナー上の補完的な反応性官能基への、リンカー上の反応性官能基の反応は、リンカーのＣＡＲ−ＥＣスイッチへの組込み前に起こり得る。
リンカーは、アルコキシ−アミン、ヒドラジン、アリール／アルキルアジド、アルキン、アルケン、テトラジン、ジクロロトリアジン、トレシレート、スクシンイミジルカルボネート、ベンゾトリアゾールカルボネート、ニトロフェニルカルボネート、トリクロロフェニルカルボネート、カルボニルイミダゾール、スクシンイミジルコハク酸、マレイミド、ビニルスルホン、ハロアセトアミド、およびジスルフィドから選択される少なくとも１つの反応性官能基を含み得る。アルケンは、ノルボルネン、トランスシクロオクテン、およびシクロプロペンから選択され得る。リンカーは、少なくとも１つのアルコキシアミンを含み得る。リンカーは、少なくとも１つのアジドを含み得る。リンカーは、少なくとも１つのシクロオクチンを含み得る。リンカーは、少なくとも１つのテトラジンを含み得る。
１つ以上のリンカーは、１つ以上の終端に、アルコキシアミン（またはアミノオキシ）基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含み得る。１つ以上のリンカーは、一端にアルコキシアミン、かつ他方の末端にアジド基を含み得る。１つ以上のリンカーは、一端にアルコキシアミン、かつ他方の末端にシクロオクチン基を含み得る。アルコキシ−アミンは、アミノ酸上のケトン基を有する、安定したオキシムを形成し得る。アルコキシアミンは、非天然のアミノ酸上のケトン基を有する安定したオキシムを形成し得る。ケトン基は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）上にあり得る。
１つ以上のリンカーは、標的化部分に結合されるリンカーの補完的な反応性官能基を有するＣＡＲ−ＩＤ上の反応性官能基の反応によって、形成され得る。１つ以上のリンカーは、アミノ酸、またはＣＡＲ−ＩＤに結合されるリンカーの補完的な反応性官能基を有する標的化部分上の別の反応性官能基の反応によって形成され得る。１つ以上のリンカーは、標的化部分に結合される別のリンカーを有するＣＡＲ−ＩＤに結合されるリンカーの反応によって、形成され得る。
リンカーは、生体直交反応の生成物であり得る。例えば、ケトン、アジド、アルキン、アルケン、およびテトラジン側鎖を有するアミノ酸は、ナンセンスおよびフレームシフトコドンに応答して遺伝子的にコードされ得る。これらの側鎖は、生体直交共役反応のための化学ハンドルとして作用し得る（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏ １７：４１２−４１９（２０１３）、参照によりその全体が本明細書に組込まれる）。リンカーは、オキシム、テトラゾール、ディールスアルダー付加物、ヘテロディールスアルダー付加物、芳香族置換反応生成物、求核性置換反応生成物、エステル、アミド、カルバミン酸、エーテル、チオエーテル、またはマイケル反応生成物を含み得る。リンカーは、環化付加生成物、メタセシス反応生成物、金属媒介のクロスカップリング反応生成物、ラジカル重合生成物、酸化的カップリング生成物、アシル転移反応生成物、またはフォトクリック反応生成物であり得る。環化付加は、ヒュスゲン環化付加であり得る。環化付加は、無銅［３＋２］ヒュスゲン−環化付加であり得る。環化付加は、ディールスアルダー反応であり得る。環化付加は、ヘテロディールスアルダー反応であり得る。リンカーは、酵素媒介の反応の生成物であり得る。リンカーは、トランスグルタミナーゼ媒介の反応の生成物であり得、非限定的な例は、Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２８：４５４２−４５４３（２００６）およびＷＯ２０１３／０９３８０９に記載される。リンカーは、ポリＴｈｅｒｉｃｓからのＴｈｉｏＢｒｉｄｇｅ（登録商標）技術などの２個のシステイン残基を接続するジスルフィド架橋を含み得る。リンカーは、２個のアミノ酸残基を接続するマレイミド架橋を含み得る。リンカーは、２個のシステイン残基を接続するマレイミド架橋を含み得る。
２個以上のリンカーは、連結され得る。２個以上のリンカーは、１つ以上の無銅反応を通して連結され得る。２個以上のリンカーは、１つ以上の環化付加を通して連結され得る。２個以上のリンカーは、１つ以上のヒュスゲン環化付加を通して連結され得る。２個以上のリンカーは、１つ以上の無銅［３＋２］ヒュスゲン環化付加を通して連結され得る。２個以上のリンカーは、１つ以上の銅含有反応を通して連結され得る。２個以上のリンカーは、１つ以上のディールスアルダー反応を通して連結され得る。２個以上のリンカーは、１つ以上のヘテロディールスアルダー反応を通して連結され得る。
ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９７およびＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０（それぞれは参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に開示されるように最適化され得る。例えば、ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチは、リンカーの長さを調製することによって最適化され得る。ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチは、リンカーの異なる長さを含み得る。リンカーは、相対的に短い場合がある。リンカーは、相対的に長い場合がある。１つ以上のリンカーは、約１オングストローム（Å）〜約１２０Åの長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約５Å〜約１０５Åの長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約１０Å〜約１００Åの長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約１０Å〜約９０Åの長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約１０Å〜約８０Åの長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約１０Å〜約７０Åの長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約１５Å〜約４５Åの長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、２７、３０オングストローム以上の長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約１０Å以上の長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約１５オングストローム以上のÅであり得る。１つ以上のリンカーは、約２０Å以上の長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約１１０、１００、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０Å以下の長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約１００Å以下の長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約８０Å以下の長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約６０Å以下の長さであり得る。１つ以上のリンカーは、約４０Å以下の長さであり得る。
リンカーの全長は、約１Å〜約１２０Åであり得る。リンカーの全長は、約５Å〜約１０５Åであり得る。リンカーの全長は、約１０Å〜約１００Åであり得る。リンカーの全長は、約１０Å〜約９０Åであり得る。リンカーの全長は、約１０Å〜約８０Åであり得る。リンカーの全長は、約１０Å〜約７０Åであり得る。リンカーの全長は、約１５Å〜約４５Åであり得る。リンカーの全長は、約４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、２７、３０Å以上であり得る。リンカーの全長は、約１０Å以上であり得る。リンカーの全長は、約１５Å以上であり得る。リンカーの全長は、約２０Å以上であり得る。リンカーの全長は、約１１０、１００、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０Å以下であり得る。リンカーの全長は、約１００Å以下であり得る。リンカーの全長は、約８０Å以下であり得る。リンカーの全長は、約６０Å以下であり得る。リンカーの全長は、約４０Å以下であり得る。リンカーの全長は、約２５Å以下であり得る。ＣＡＲ−ＩＤと標的化部分の間の距離は、約３０Åであり得る。
移植／融合スイッチ
ＣＡＲ−ＩＤが標的化部分に移植されるか、または融合されるスイッチが、本明細書で開示される。ＣＡＲ−ＩＤは、非抗体タンパク質または非抗体ペプチドを含み得、標的化部分は、標的上の細胞表面分子に結合し得る。細胞表面分子は、抗原を含み得る。標的化部分は、標的化ポリペプチドであり得る。標的化ポリペプチドは、標的化抗体または抗体断片であり得る。抗体断片は、抗体の抗原結合部分であり得る。標的化抗体または抗体断片は、免疫グロブリン（Ｉｇ）であり得る。免疫グロブリンは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、その断片またはそれらの修飾から選択され得る。標的化抗体は、標的細胞の細胞表面上の標的に結合し得る。いくつかの実施形態では、標的は、ＣＤ１９、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＳ１、ＢＣＭＡ、およびＣＥＡから選択され得る。いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−ＩＤで移植されたヒト化された標的化部分を提示する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、そこでは抗ＣＤ１９標的化抗体またはＣＤ１９結合断片である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９標的化抗体またはそのＣＤ１９結合断片である。標的化抗体または抗体断片は、免疫グロブリン、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびｓｃＦｖから選択され得る。標的化抗体または抗体断片は、軽鎖を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、重鎖を含み得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、標的化部分（例えば、標的化抗体または抗体断片の選択されたアミノ酸間）に移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の末端に融合され得る。代替的に、標的化抗体または抗体断片は、ＣＡＲ−ＩＤに移植されるか、または融合され得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の軽鎖のＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の軽鎖のＣ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の重鎖のＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の重鎖のＣ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片のＶＬドメインのＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片のＶＨドメインのＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片のＣＬドメインのＣ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片のＦｃドメインのＣ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＩｇＧのＶＬドメインのＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＩｇＧのＶＨドメインのＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＩｇＧのＣＬドメインのＣ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＩｇＧのＦｃドメインのＣ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦａｂのＶＬドメインのＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦａｂのＶＨドメインのＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦａｂのＣＬドメインのＣ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦａｂのＣＨ１ドメインのＣ末端に融合され得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、標的化部分の内部部位（例えば、抗ＣＤ１９標的化抗体またはＣＤ１９結合抗体断片（例えば、標的化抗体または抗体断片の選択されたアミノ酸間））に移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の重鎖に移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の軽鎖に移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の定常ドメイン／領域に移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の可変ドメイン／領域に移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、Ｆａｂの内部部位に移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）の内部部位に移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＣＬドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、およびヒンジドメインから選択される標的化抗体またはその断片のドメインに移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＣＬドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、およびヒンジドメインから選択される抗体またはその断片の２個のドメイン間に移植され得、２個ドメインは隣接している。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体またはその断片のＣＬドメインに移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体またはその断片のＣＨ１ドメインに移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体またはその断片のヒンジドメインに移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体またはその断片のループに移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体またはその断片のＣＬドメインループに移植され得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、標的化部分（例えば、ヒト化された抗ＣＤ１９標的化抗体またはＣＤ１９結合抗体断片）のＣ末端に移植され得、したがってキメラ受容体と標的の間の距離は、キメラ受容体−ＥＣスイッチのサイズ（ｓｃＦｖに対しておよそ４０Å、Ｆａｂに対して７０Å、およびＩｇＧに対して１２０Å）に依存して実質的に異なり得る。より長い距離は、インビトロでの有効性に悪影響を与える場合があり、全長抗体の滞在時間の増加は、インビボで優位であり得る。
多価のスイッチ
ＣＡＲ−ＩＤおよびヒト化されたＣＤ１９結合標的化部分を含むスイッチが、本明細書で例示される。ＧＣＮ４ペプチド誘導体および標的化部分（例えば、ＣＤ１９標的化部分）を含むスイッチもまた、本明細書で例示される。しかしながら、当業者は、本明細書から、本明細書で開示されるスイッチがさらに、追加もしくは代替の天然の標的化部分、および／または追加もしくは代替の天然のＣＡＲ−ＩＤｓを含むことを理解するであろう。１つ以上のＣＡＲ−ＩＤは、標的化部分の１つ以上の移植部位に移植され得、その逆も同じである。１つ以上のＣＡＲ−ＩＤは、標的化部分の１つ以上の終端に融合され得、その逆も同じである。１つ以上のＣＡＲ−ＩＤは、標的化部分の１つ以上の終端に共役され得、その逆も同じである。これは、いくつかの移植／融合部位が、ＣＡＲ−ＩＤのキメラ受容体への最適な結合を提供すると予測されるため、利点であり得る。例えば、第１のＣＡＲ−ＩＤは、標的化部分の第１のドメインに移植され得、第２のＣＡＲ−ＩＤは、標的化部分の第２のドメインに移植され得る。第１のドメインおよび第２のドメインは同じであり得る。第１のドメインおよび第２のドメインは、異なり得る。非限定的な例として、第１のＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の軽鎖に移植され得、第２のＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の重鎖に移植され得る。第１のＣＡＲ−ＩＤは、標的化ポリペプチドの第１の末端に融合され得、第２のＣＡＲ−ＩＤは、標的化ポリペプチドの第２の末端に融合され得る。非限定的な例として、第１のＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の軽鎖のＣ末端に融合され得、第２のＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片の重鎖のＮ末端に融合され得る。第１のＣＡＲ−ＩＤは、標的化ポリペプチドの末端に融合され得、第２のＣＡＲ−ＩＤは、標的化ポリペプチドのドメイン内に移植され得る。第１のＣＡＲ−ＩＤおよび第２のＣＡＲ−ＩＤは、スイッチが、１つのキメラ受容体を発現するエフェクター細胞と共に使用され得るように、同じであるか、または同様であり得。第１のＣＡＲ−ＩＤおよび第２のＣＡＲ−ＩＤは、スイッチが、１つ以上のキメラ受容体を発現するエフェクター細胞、または異なるキメラ受容体を発現する複数のエフェクター細胞と共に使用され得るように、異なり得る。
本明細書で開示されるスイッチは、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを含み得る。本明細書で開示されるスイッチは、２つ以上のＣＡＲ−ＩＤを含み得る。本明細書で開示されるスイッチは、３つ以上のＣＡＲ−ＩＤを含み得る。本明細書で開示されるスイッチは、１、２、３、４、５、６、７またはそれ以上のＣＡＲ−ＩＤを含み得る。１つ以上のＣＡＲ−ＩＤは、１つ以上のリンカーを介して標的化部分に融合されるか、または移植され得る。したがって、本明細書で開示されるスイッチは、１つ以上のリンカーを含み得る。本明細書で開示されるスイッチは、２個以上のリンカーを含み得る。本明細書で開示されるスイッチは、３つ以上のリンカーを含み得る。本明細書で開示されるスイッチは、１、２、３、４、５、６、７またはそれ以上のリンカーを含み得る。
ＩＩ．ＣＡＲ−ＥＣスイッチ産生方法
ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生する方法が、本明細書で開示される。
いくつかの実施形態では、方法は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチまたはその部分をコードする１つ以上の配列を有する１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上のベクターから、１つ以上のポリペプチドを発現することを含み、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチは、ＣＡＲ−ＩＤおよび抗標的標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、方法は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチまたはその部分をコードする１つ以上の配列を有する１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上のベクターから、１つ以上のポリペプチドを発現することを含み、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチは、ＣＡＲ−ＩＤおよびヒト化された抗ＣＤ１９標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、方法は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチまたはその部分をコードする１つ以上の配列を有する１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上のベクターから、１つ以上のポリペプチドを発現することを含み、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチは、本明細書で開示されるＧＣＮ４ペプチド誘導体および標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分がヒト化される。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＣＤ１９を標的とする。いくつかの特定の実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９標的化部分である。
標的化部分は、標的化ポリペプチド（例えば、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはヒト化された抗ＣＤ１９抗体のＣＤ１９結合断片）を含み得る。一般に、かかる方法は、ＣＡＲ−ＩＤをコードするポリヌクレオチドを、標的化部分（例えば、ヒト化された抗ＣＤ１９ポリペプチド標的化部分（標的化ポリペプチド））をコードするポリヌクレオチドに融合すること、または移植することを含む。融合すること、または移植することは、当業者に知られる任意の標準クローニング方法によって実行され得る。ＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ＧＣＮ４ペプチド誘導体）および標的化ポリペプチド（例えば、ＣＤ１９抗体などの抗体またはその抗原結合部分）をコードするポリヌクレオチドを融合すること、または移植することは、ポリヌクレオチドの酵素消化、ポリヌクレオチドの連結、および／またはポリヌクレオチドの増幅を含み得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、標的化ポリペプチドのＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化ポリペプチドのＣ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化ポリペプチド内に移植され得る。標的化ポリペプチドは、標的化抗体または抗体断片を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片のＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片のＣ末端に融合され得る。
いくつかの実施形態では、スイッチの設計（例えば、標的化部分上のＣＡＲ−ＩＤの移植位置、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に接続するリンカーの長さなど）は、ペプチドスイッチ可能ＣＡＲ−ＥＣ細胞の細胞毒性、活性、およびサイトカイン放出に対して決定的である。スイッチ移植位置は、ＣＡＲ−ＥＣと標的細胞の間の最適な距離および幾何学（免疫シナプス）を見出すために、標的上の抗標的抗体（標的化部分）のエピトープ位置に基づく標的に対して経験的に設計され得る。例えば、いくつかの実施形態では、膜（膜遠位）から離れているＣＤ１９エピトープに結合する抗体に対して、抗ＣＤ１９標的化部分（例えば、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９抗体のうちのいずれか１つなどの、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分）上のＣＡＲ−ＩＤのＮ末端融合の使用を通して総合短免疫シナプスを提供するスイッチ設計は、活性（図１５（中央））を改善し得る。Ｃ末端融合の使用を通してＣＡＲ−ＥＣと標的細胞の間の長すぎる距離を提供する設計は、最適以下の活性（図１５（左））をもたらし得る。ＣＡＲもまた、ヒンジ領域を短くするために修飾され得る。これは、ＣＡＲ−Ｔ細胞および標的細胞を一緒に近づける場合があり（図１５（右））、さらに利点である。また、非限定的な例として、膜（膜近位）に近いＣＤ１９のエピトープに結合する抗体に対して、形成する免疫シナプスに対して十分な距離（Ｃ末端融合の使用を通して）を提供するスイッチ設計は、最適である（図１６（中央））。Ｎ末端融合の使用を通してＣＡＲ−ＥＣと標的細胞の間に十分な距離を提供しない設計は、立体障害のため、最適以下の活性、または非活性をもたらし得る（図１６（右））。ＣＡＲ−ＥＣと標的細胞の間に長すぎる距離を提供する設計（より長いヒンジ領域を通して）は、最適以下の活性をもたらし得る（図１６（左））。
当業者には明らかであるように、本明細書で開示される配列は、リーダーペプチド（または交換可能に「リーダー配列」）を含み得、それは、発現が、分泌経路を含む細胞内である場合、ポリペプチド発現中に切断されるであろう。リーダーペプチドの位置は、タンパク質のＮ末端であり、リーダー配列は、容易に当業者に明らかであり、例えば、ＳｉｇｎａｌＰサーバー（ワールドワイドウェブアドレス：ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／で利用可能であり、参照によりその全体が本明細書に組込まれる）を使用して簡単に認識され得る。ある非限定的な実施形態では、リーダーペプチドは、Κリーダー配列（例えば、配列番号２４６）を含むか、またはそれから成り得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、標的化ポリペプチドの任意のアミノ酸を入れ替えるか、または除去することなく、標的化ポリペプチドの末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤを、標的化ポリペプチドの末端に融合することは、標的化ポリペプチドの末端で、アミノ酸を除去するか、または入れ替えることを含み得る。標的化ポリペプチドの末端でアミノ酸を除去するか、または入れ替えることは、標的化ポリペプチドの末端で、約１〜約２０個のアミノ酸を除去するか、または入れ替えることを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、リンカーを介して標的化ポリペプチドの末端に融合され得る。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに融合され、ＣＡＲ−ＩＤ−リンカー中間体を産生し得る。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤのＮ末端に融合され、ＣＡＲ−ＩＤ−リンカー中間体を産生し得る。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤのＣ末端に融合され、ＣＡＲ−ＩＤ−リンカー中間体を産生し得る。ＣＡＲ−ＩＤ−リンカー中間体は、標的化ポリペプチドに融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤ−リンカー中間体は、標的化ポリペプチドのＮ末端に融合され得る。ＣＡＲ−ＩＤ−リンカー中間体は、標的化ポリペプチドのＣ末端に融合され得る。第１のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体は、標的化ポリペプチドのＮ末端に融合され得、第２のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体は、標的化ポリペプチドのＣ末端に融合され得る。第１のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体のＣＡＲ−ＩＤは、第２のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体のＣＡＲ−ＩＤと同じであるか、または同様であり得る。第１のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体のＣＡＲ−ＩＤは、第２のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体ＣＡＲ−ＩＤとは異なり得る。
本明細書で使用されるように、Ｎ末端上での軽鎖移植は、ＬＣＮＴと称され得る。Ｃ末端上での軽鎖移植は、ＬＣＣＴと称され得る。Ｃ１ドメイン内での軽鎖移植は、ＬＣＣ１と称され得る。Ｎ末端上での重鎖移植は、ＨＣＮＴと称され得る。Ｃ末端上での重鎖移植は、ＨＣＣＴと称され得る。Ｃ１ドメイン内での重鎖移植は、ＨＣＣ１と称され得る。軽鎖および重鎖上でのＮ末端移植と共に発現されるスイッチは、ＮＴＢＶと称され得る。軽鎖および重鎖上でのＣ末端移植と共に発現されるスイッチは、ＣＴＢＶと称され得る。軽鎖および重鎖上のＣ１ドメイン内の移植と共に発現されるスイッチは、Ｃ１ＢＶと称され得る。
本明細書で使用される、「移植」という用語は、ＣＡＲ−ＩＤを標的化ポリペプチド（例えば、標的化ポリペプチドの２個のアミノ酸間）内に挿入することを指し得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化ポリペプチドの任意のアミノ酸を入れ替えるか、または除去することなく標的化ポリペプチド内に移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤを標的化ポリペプチド内に移植することは、標的化ポリペプチド内でアミノ酸を除去するか、または入れ替えることを含み得る。標的化ポリペプチド内でアミノ酸を除去するか、または入れ替えることは、標的化ポリペプチドで約１〜約２０個のアミノ酸を除去するか、または入れ替えることを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、１個のリンカーを介して標的化ポリペプチド内に移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、２個のリンカーを介して標的化ポリペプチド内に移植され得る。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤのＮ末端に融合され、ＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体を産生し得る。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤのＣ末端に融合され、ＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体を産生し得る。第１のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤのＮ末端に融合され得、第２のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤのＣ末端に融合され得、ＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体を産生し得る。ＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体は、標的化ポリペプチド内に移植され得る。第１のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体は、標的化ポリペプチド内に移植され得、第２のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体は、標的化ポリペプチド内に移植され得る。第１のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体は、標的化ポリペプチドの第１のドメイン内に移植され得、第２のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体は、標的化ポリペプチドの第２のドメイン内に移植され得る。標的化ポリペプチドの第１のドメインは、標的化ポリペプチドの第２のドメインと同じであり得る。標的化ポリペプチドの第１のドメインは、標的化ポリペプチドの第２のドメインとは異なり得る。第１のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体のＣＡＲ−ＩＤは、第２のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体のＣＡＲ−ＩＤと同じであるか、または同様であり得る。第１のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体のＣＡＲ−ＩＤは、第２のＣＡＲ−ＩＤリンカー中間体のＣＡＲ−ＩＤとは異なり得る。別様に特定されない限り、本明細書で使用される「移植」および「挿入」という用語は、交換可能に使用される。
標的化部分は、標的細胞の細胞表面上の標的に結合し得る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのするＣＤ１９結合断片（例えば、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそれらの断片のうち任意の１つ以上）を含み得る。抗体または抗体断片は、重鎖および軽鎖、またはそれらの断片を含み得る。方法は、重鎖を発現することを含み得、ＣＡＲ−ＩＤは、重鎖の末端に融合される。方法は、重鎖を発現することを含み得、ＣＡＲ−ＩＤは、重鎖内に移植される。方法は、軽鎖を発現することを含み得、ＣＡＲ−ＩＤは、軽鎖の末端に融合される。方法は、軽鎖を発現することを含み得、ＣＡＲ−ＩＤは、軽鎖内に移植される。
方法は、標的化ポリペプチドおよび／またはＣＡＲ−ＩＤを発現ベクターにコードする１つ以上のポリヌクレオチドをクローニングすることをさらに含み得る。方法は、標的化ポリペプチドおよび／またはＣＡＲ−ＩＤを発現ベクターにコードする１つ以上のポリヌクレオチドの連結をさらに含み得る。発現ベクターは、原核生物発現ベクターであり得る。発現ベクターは、真核生物発現ベクターであり得る。発現ベクターは、哺乳類発現ベクターであり得る。発現ベクターは、ウィルス性発現ベクターであり得る。発現ベクターは、ｐＦＵＳＥベクターであり得る。方法は、標的化ポリペプチドおよび／またはＣＡＲ−ＩＤを、発現ベクターを配列決定すること、ベクターのゲル電気泳動を実行すること、ならびに／またはＳＤＳペイジゲル上で標的化ポリペプチドおよび／もしくはＣＡＲ−ＩＤを見ることを含む発現ベクターにコードする、１つ以上のポリヌクレオチドのクローニングを検証することをさらに含み得る。
方法は、標的化ポリペプチドおよび／またはＣＡＲ−ＩＤをコードするポリヌクレオチドを増幅すること、ならびに標的化ポリペプチドおよび／またはＣＡＲ−ＩＤを発現ベクターにクローニングすることをさらに含み得る。標的化ポリペプチドおよび／またはＣＡＲ−ＩＤをコードするポリヌクレオチドを増幅することは、遺伝子に対して少なくとも部分的に相補的であるオリゴヌクレオチドを合成することを含み得る。オリゴヌクレオチドは、ポリヌクレオチドにアニールするために、遺伝子に対して十分に相補的であり得る。オリゴヌクレオチドは、リンカー配列を含み得る。多くの好適なリンカーは、当該技術分野で知られており、本発明での使用に対して好適である。いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書で開示されるリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、配列番号９３〜１０３、１１６〜１３７、および１６４〜１６８から選択され得る。
方法は、細胞を発現ベクターでトランスフェクトするか、または感染させることを含み得る。方法は、細胞内で標的化ポリペプチドおよび／またはＣＡＲ−ＩＤを発現することをさらに含み得る。方法は、無細胞系内で標的化ポリペプチドおよび／またはＣＡＲ−ＩＤを発現することをさらに含み得る。方法は、発現ベクターを含むウィルスを産生することをさらに含み得る。方法は、ウィルスを伝播することをさらに含み得る。方法は、発現ベクターを含むウィルスで細胞を感染させることをさらに含み得る。方法は、細胞を伝播することをさらに含み得る。
スイッチは、２個のベクター（抗体の重鎖のうちの１個および抗体の軽鎖のための１個）として、発現され得る。２個のベクターは、発現細胞に共トランスフェクトされ得る。発現細胞は、原核生物細胞および真核生物細胞から選択され得る。発現細胞は、ＨＥＫ細胞およびＣＨＯ細胞から選択され得る。発現は、ＨＥＫ細胞内で、７日以上にわたって、培地を回収するルーティンで実行され、目的の抗体スイッチを収集し、かつ単離し得る。発現は、７日未満で実行され得る。スイッチは、同じプラスミドを使用して類似性様式で、ＣＨＯ細胞から発現され得る。培地は、間隔を空けて回収されても、またはされなくても良いか、あるいは発現の最後に回収されても良い。間隔を空けて回収することは、スイッチのタンパク質分解を防ぐために好ましい。
スイッチは、大腸菌で発現され得る。スイッチは、非限定的な例として、ｐＢＡＤベクターなどのベクターから大腸菌で発現され得る。ｐＢＡＤベクターは、抗体の軽鎖および重鎖の両方を抱える場合がある。これは、１つのプラスミドを有する大腸菌の形質転換を必要とし得る。これは、大腸菌内の発現が一般に、哺乳類細胞（例えば、ＨＥＫ細胞）内での発現より安価かつ早いため、利点となり得る。いくつかの実施形態では、大腸菌で発現されるスイッチは、修飾されたＣＡＲ−ＩＤおよび／または修飾された標的化部分を含み得、ジリジンモチーフは、排除され、ＯｍｐＴプロテアーゼによるペプチドの切断を回避する。いくつかの実施形態では、大腸菌内でスイッチを発現するために、細心の注意が、使用される株の遺伝子型に払われる。いくつかの実施形態では、好ましい遺伝子型は、破壊されるｏｍｐＴ遺伝子（発現されるタンパク質をタンパク分解し得る、外膜タンパク質プロテアーゼＶＩＩ）を有するものを含むが、これらに限定されない。これは、ＢＬ２１（大腸菌Ｂ Ｆ−ｄｃｍ ｏｍｐＴ ｈｓｄＳ（ｒＢ−ｍＢ−）ｇａｌ［ｍａｌＢ＋］Ｋ−１２（λＳ））、ＯｖｅｒＥｘｐｒｅｓｓ（ｔｍ）Ｃ４１（ＤＥ３）（Ｌｕｃｉｇｅｎ）（Ｆ−ｏｍｐＴ ｇａｌ ｄｃｍ ｈｓｄＳＢ（ｒＢ−ｍＢ−）（ＤＥ３））、および他のものを含む。発現のために好ましくない株は、ＤＨ１０Ｂ（Ｆ−ｅｎｄＡ１ ｒｅｃＡ１ ｇａｌＥ１５ ｇａｌＫ１６ ｎｕｐＧ ｒｐｓＬ ΔｌａｃＸ７４ Φ８０ｌａｃＺΔＭ１５ ａｒａＤ１３９ Δ（ａｒａ、ｌｅｕ）７６９７ ｍｃｒＡ Δ（ｍｒｒ−ｈｓｄＲＭＳ−ｍｃｒＢＣ）λ−）、ＤＨ５α（Ｆ−ｅｎｄＡ１ ｇｌｎＶ４４ ｔｈｉ−１ ｒｅｃＡ１ ｒｅｌＡ１ ｇｙｒＡ９６ ｄｅｏＲ ｎｕｐＧ Φ８０ｄｌａｃＺΔＭ１５ Δ（ｌａｃＺＹＡ−ａｒｇＦ）Ｕ１６９、ｈｓｄＲ１７（ｒＫ−ｍＫ＋）、λ−）またはｏｍｐＴノックアウトを含まない他の株を含む。ＤＨ１０ＢおよびＤＨ５αなどの株は、ｏｍｐＴ遺伝子の破壊によって好ましく製造され得る。抗体または抗体断片、ＣＡＲ−ＩＤまたは標的化ペプチドを移植し、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生する方法が本明細書で開示される。方法は、ＣＡＲ−ＩＤを抗体または抗体断片に移植することを含み得る。方法は、ＣＡＲ−ＩＤを、抗体または抗体断片のＮ末端、Ｃ末端、または内部部位に移植することを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体または抗体断片のＣＬドメインに移植され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、抗体または抗体断片のＣＬドメインのループに移植され得る。方法は、抗体または抗体断片をＣＡＲ−ＩＤに移植することを含み得る。方法は、抗体または抗体断片を、ＣＡＲ−ＩＤのＮ末端、Ｃ末端、または内部部位に移植することを含み得る。方法は、ＣＡＲ−ＩＤを標的化ペプチドに移植することを含み得る。方法は、ＣＡＲ−ＩＤを標的化ペプチドのＮ末端、Ｃ末端、または内部部位に移植することを含み得る。方法は、標的化ペプチドをＣＡＲ−ＩＤに移植することを含み得る。方法は、標的化ペプチドをＣＡＲ−ＩＤのＮ末端、Ｃ末端、または内部部位に移植することを含み得る。
ＣＡＲ−ＩＤ、標的化ペプチド、抗体または抗体断片は、１つ以上のリンカーを含み得、リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤ、標的化ペプチド、抗体または抗体断片の、Ｎ末端および／またはＣ末端に位置する。方法は、リンカーを通して、抗体または抗体断片、ＣＡＲ−ＩＤまたは標的化ペプチドを移植することを含み得る。リンカーは、（ＧＳＳＳＳ）ｎを含み得る。リンカーは、配列番号９３〜１０３、１１６〜１３７、および１６４〜１６８から選択される配列を含み得る。リンカーは、配列番号９３〜１０３、１１６〜１３７、および１６４〜１６８から選択される配列と、少なくとも約５０％同一である配列を含み得る。リンカーは、配列番号９３〜１０３、１１６〜１３７、および１６４〜１６８から選択される配列を含み得る。
移植することは、核酸をコードするＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生することを含み得る。核酸をコードするＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生することは、１つ以上のポリメラーゼ鎖反応を含み得る。核酸をコードするＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生することは、１つ以上の核酸酵素消化を含み得る。酵素消化は、部位特異的であり得る。核酸をコードするＣＡＲ−ＥＣスイッチ産生することは、１つ以上の連結を含み得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生する方法は、核酸をコードするＣＡＲ−ＥＣスイッチを、ＣＡＲ−ＥＣスイッチベクターに組込むことを含み得る。ベクターは、発現ベクターであり得る。発現ベクターは、恒常的プロモーター、誘導性プロモーター、および／または条件的プロモーターを含み得る。核酸をコードするＣＡＲ−ＥＣスイッチまたはＣＡＲ−ＥＣスイッチベクターは、細胞内で発現され得、得られたＣＡＲ−ＥＣスイッチは単離され、かつ精製される。細胞は、原核生物細胞であり得る。細胞は、大腸菌であり得る。細胞は、真核生物細胞であり得る。細胞は、哺乳類細胞であり得る。核酸をコードするＣＡＲ−ＥＣスイッチまたはＣＡＲ−ＥＣスイッチベクターは、無細胞系内で発現され得る。代替的にまたは加えて、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、遊離アミノ酸から合成され得る。
いくつかの実施形態では、方法は、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＣＡＲ−ＩＤおよびリンカーを含むスイッチ中間体を、標的化部分に結合することを含み得る。方法は、標的化部分およびリンカーを含むスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合することを含み得る。方法は、ＣＡＲ−ＩＤおよび第１のリンカーを含む第１のスイッチ中間体を、標的化部分および第２のリンカーを含む第２のスイッチに結合することを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤの標的化部分への結合は、部位特異的方法で起こり得る。部位特異的方法での結合は、ＣＡＲ−ＩＤを、標的化部分上の予め決定された部位に結合することを含み得る。部位特異的方法での結合は、標的化部分をＣＡＲ−ＩＤ上の予め決定された部位に結合することを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤの標的化部分への結合は、部位非依存的方法で起こり得る。部位非依存的方法での結合は、ＣＡＲ−ＩＤを、標的化部分上のランダムの部位に結合することを含み得る。部位非依存的方法での結合は、標的化部分を、ＣＡＲ−ＩＤ上のランダムの部位に結合することを含み得る。方法は、１つ以上の追加のＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することをさらに含み得る。方法は、結合することか、またはＣＡＲ−ＩＤへのより追加の標的化部分をさらに含み得る。方法は、標的化部分をＣＡＲ−ＩＤに接続するために、１つ以上の追加のリンカーを使用することをさらに含み得る。ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、１つ以上の化学反応を行うことを含み得る。
スイッチを産生する方法は、抗体または抗体断片に基づくか、またはそれから誘導される標的化部分を、ＣＡＲ−ＩＤを含むＣＡＲ−ＩＤまたはスイッチ中間体に連結し、（ａ）標的化部分、（ｂ）１つ以上のリンカー、および（ｃ）ＣＡＲ−ＩＤを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生することを含み得、１つ以上のリンカーは、標的化部分をＣＡＲ−ＩＤに連結し得る。標的化部分をＣＡＲ−ＩＤに連結することは、部位特異的方法で起こり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、１つ以上のリンカーを介して、標的化部分上の予め決定された部位に結合され得る。標的化部分は、１つ以上のリンカーを介して、ＣＡＲ−ＩＤ上の予め決定された部位に結合され得る。
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つ以上の非天然のアミノ酸を含み得る。１つ以上のＣＡＲ−ＩＤは、１つ以上の非天然のアミノ酸を含み得る。１つ以上の標的化部分は、１つ以上の非天然のアミノ酸を含み得る。１つ以上のリンカーは、１つ以上の非天然のアミノ酸を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤの標的化部分への結合は、１つ以上の非天然のアミノ酸を介して起こり得る。１つ以上のリンカーは、１つ以上のＣＡＲ−ＩＤを、１つ以上の非天然のアミノ酸を通して１つ以上の標的化部分に部位特異的に連結し得る。代替的に、または加えて、１つ以上のリンカーは、１つ以上の標的化部分を、１つ以上の標的化部分に部位特異的に連結し得、非天然のアミノ酸は、１つ以上の標的化部分を１つ以上の標的化部分に連結することを必要としない。標的化部分は、標的化部分上の１、２、３、４、５個またはそれ以上の非天然のアミノ酸に連結され得る。標的化部分は、部位特異的に、標的化部分上の１、２、３、４、５個またはそれ以上の非天然のアミノ酸に連結され得る。代替的に、標的化部分は、標的化部分上の１、２、３、４、５個またはそれ以上の非天然のアミノ酸に連結され得る。標的化部分は、部位特異的に、標的化部分の１、２、３、４、５個またはそれ以上の非天然のアミノ酸に連結され得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、１つ以上の非天然のアミノ酸を含み得る。本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の非天然のアミノ酸を含み得る。標的化部分は、１つ以上の非天然のアミノ酸を含み得る。本明細書で開示される標的化抗体または抗体断片は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の非天然のアミノ酸を含み得る。非天然のアミノ酸は、リンカーと反応し、化学結合を生じ得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分内の２個の天然発生アミノ酸間に挿入され得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分内の１つ以上の天然発生アミノ酸を入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分のＮ末端で組込まれ得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分のＣ末端で組込まれ得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分の内部部位で組込まれ得る。非天然のアミノ酸は、標的上の、またはそれからの分子と相互作用する標的化部分の領域の遠位で組込まれ得る。非天然のアミノ酸は、標的上の、またはそれからの分子と相互作用する標的化部分の領域の近位で組込まれ得る。非天然のアミノ酸は、標的上の、またはそれからの分子と相互作用する標的化部分の領域の中間の部位で組込まれ得る。非天然のアミノ酸は、標的上の、またはそれからの分子と相互作用する標的化部分の領域で組込まれ得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分内の１つ以上のアミノ酸を入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分内の任意の天然のアミノ酸を入れ替え得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される免疫グロブリンの軽鎖に組込まれ得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される免疫グロブリンの重鎖に組込まれ得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される免疫グロブリンの重鎖および軽鎖に組込まれ得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される免疫グロブリンの軽鎖内のアミノ酸を入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される免疫グロブリンの重鎖内のアミノ酸を入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される免疫グロブリンの重鎖および軽鎖内のアミノ酸を入れ替え得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される、免疫グロブリンの軽鎖のグリシンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される、免疫グロブリンの軽鎖のアルギニンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される、免疫グロブリンの軽鎖のセリンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される、免疫グロブリンの軽鎖のスレオニンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される、免疫グロブリンの軽鎖のアラニンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される、免疫グロブリンの重鎖のアラニンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される、免疫グロブリンの重鎖のセリンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される、免疫グロブリンの重鎖のリジンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導される、免疫グロブリンの重鎖のプロリンを入れ替え得る。
いくつかの実施形態では、１つ以上の非天然のアミノ酸は、標的化部分のアミノ酸を入れ替え得、標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはＣＤ１９結合その断片である。１つ以上の非天然のアミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖のグリシンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖のスレオニンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖のセリンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖のセリンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖のアラニンを入れ替え得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖のリジンを入れ替え得る。抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片であり得、１つ以上の非天然のアミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖の１つ以上のアミノ酸を入れ替え得る。抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合部分の軽鎖は、配列番号１７〜２５、２７〜３５のうちの１つを含み得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、配列番号１７〜２５、２７〜３５のうちの１つの１つ以上のアミノ酸を入れ替え得る。いくつかの実施形態では、配列番号１７〜２５、２７〜３５のうちの１つの１つ以上のアミノ酸は、Ｇ６８およびＫ１０７から選択され得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖の１つ以上のアミノ酸を入れ替え得る。抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖は、配列番号２〜１５のうちの１つを含み得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、配列番号２〜１５のうちの１つの１つ以上のアミノ酸を入れ替え得る。配列番号２〜１５のうちの１つの１つ以上のアミノ酸は、Ｓ７４であり得る。
式Ｉ：Ｘ−Ｌ１−Ｙまたは式ＩＡ：Ｙ−Ｌ１−Ｘのスイッチを産生する方法が、本明細書で開示され、Ｘが、ＣＡＲ−ＩＤであり、Ｙが、標的化部分であり、かつＬ１が、リンカーである。Ｘが、ＣＡＲ結合小分子であり得、Ｙが、抗体または抗体断片であり得る。Ｘが、ペプチドを含まないＣＡＲ結合小分子であり得、Ｙが、抗体または抗体断片を含まないペプチドであり得る。Ｘが、ペプチドを含まないＣＡＲ結合小分子であり得、Ｙが、ペプチドを含まない標的化小分子であり得る。方法は、１つ以上の反応を実施し、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分内の予め決定された部位に結合することを含み得る。１つ以上の反応を実施し、ＣＡＲ−ＩＤを、標的化部分に結合することは、複数のＣＡＲ−ＩＤを、複数の標的化部分と混合することを含み得る。方法は、リンカーの一端を、標的化部分に結合すること、続いてリンカーの他方の末端のＣＡＲ−ＩＤへの結合を含み得る。方法は、リンカーの一端をＣＡＲ−ＩＤに結合すること、続いてリンカーの他方の末端の標的化部分への結合を含み得る。リンカーの標的化部分への結合は、部位特異的方法で起こり得る。リンカーは、標的化部分の予め決定されたアミノ酸に結合され得る。アミノ酸は、非天然のアミノ酸であり得る。リンカーは、アミノ酸と相互作用する官能基を含み得る。リンカーの標的化部分への結合は、部位非依存的方法で起こり得る。リンカーは、標的化部分にランダムに結合され得る。リンカーは、標的化部分内の官能基と反応する官能基を含み得る。リンカーのＣＡＲ−ＩＤへの結合は、部位特異的方法で起こり得る。リンカーのＣＡＲ−ＩＤへの結合は、部位非依存的方法で起こり得る。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤ内の官能基と反応する官能基を含み得る。１つ以上の反応を実施し、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、オキシム連結を実施することを含み得る。
代替的に、または加えて、方法は、反応を実施し、リンカーまたはリンカーの前駆体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合し、ＣＡＲ−ＩＤに共役されたリンカーを含むスイッチ中間体を産生することを含み得る。スイッチ中間体は、式ＩＩ：Ｘ−Ｌ１または式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘを有し得、Ｘが、ＣＡＲ−ＩＤであり、Ｌ１が、リンカーまたはリンカーの前駆体である。リンカーは、部位特異的方法でＣＡＲ−ＩＤに共役され得る。リンカーは、部位非依存的方法でＣＡＲ−ＩＤに共役され得る。１つ以上の反応を実施し、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、スイッチ中間体のリンカー部分を標的化部分に結合することを含み得る。１つ以上の反応を実施し、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、ＣＡＲ−ＩＤに共役されたリンカーまたはリンカー前駆体を含む複数のスイッチ中間体を、複数の標的化部分に接触させることを含み得る。スイッチ中間体のリンカー部分の標的化部分への結合は、部位特異的方法で起こり得る。標的化部分は、１つ以上の非天然のアミノ酸を含み得る。スイッチのリンカー部分は、１つ以上の非天然のアミノ酸を介して標的化部分に結合され得る。スイッチ中間体のリンカー部分の結合は、部位非依存的方法で起こり得る。
代替的に、または加えて、方法は、反応を実施し、リンカーまたはリンカーの前駆体を標的化部分に結合し、標的化部分に共役されたリンカーまたはリンカーの前駆体を含むスイッチ中間体を産生することを含み得る。スイッチ中間体は、式ＩＩＩ：Ｙ−Ｌ１または式ＩＩＩＡ：Ｌ１−Ｙであり得、Ｙが標的化部分であり、Ｌ１が、リンカーまたはリンカー前駆体である。リンカーは、部位特異的方法で標的化部分に共役され得る。リンカーは、非依存的方法で標的化部分部位に共役され得る。１つ以上の反応を実施し、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、スイッチ中間体のリンカー部分をＣＡＲ−ＩＤに結合することを含み得る。１つ以上の反応を実施し、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、標的化部分に共役されたリンカーまたはリンカー前駆体を含む複数のスイッチ中間体を、複数のＣＡＲ−ＩＤに接触させることを含み得る。スイッチ中間体のリンカー部分のＣＡＲ−ＩＤへの結合は、部位特異的方法で起こり得る。スイッチ中間体のリンカー部分の結合は、部位非依存的方法で起こり得る。
方法は、１つ以上のリンカーを標的化部分に結合し、式ＩＩＩ：Ｙ−Ｌ１または式ＩＩＩＡ：Ｌ１−Ｙのスイッチ中間体を産生することを含み得、Ｙが、標的化部分であり、Ｌ１が、リンカーであり、スイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに共役し、したがってＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生する。スイッチ中間体は、部位特異的方法でＣＡＲ−ＩＤに共役され得る。スイッチ中間体は、部位非依存的方法でＣＡＲ−ＩＤに共役され得る。方法は、１つ以上の非天然のアミノ酸をＣＡＲ−ＩＤおよび／または標的化部分に組込むことをさらに含み得る。スイッチ中間体は、非天然のアミノ酸の使用を通して部位特異的方法でＣＡＲ−ＩＤに共役され得る。
方法は、１つ以上のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合し、式ＩＩ：Ｘ−Ｌ１または式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘのスイッチ中間体を産生することを含み得、Ｘが、ＣＡＲ−ＩＤであり、Ｌ１がリンカーであり、スイッチ中間体を標的化部分に共役し、したがってＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生する。スイッチ中間体は、部位特異的方法で標的化部分に共役され得る。スイッチ中間体は、非依存的方法で標的化部分部位に共役され得る。方法は、１つ以上の非天然のアミノ酸をＣＡＲ−ＩＤおよび／または標的化部分に組込むことをさらに含み得る。スイッチ中間体は、非天然のアミノ酸の使用を通して部位特異的方法で標的化部分に共役され得る。
Ｘが、ＣＡＲ−ＩＤおよびＬ１である、式ＩＩ：Ｘ−Ｌ１または式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘのスイッチ中間体の標的化部分への共役は、オキシムを形成することを含み得る。Ｙが、標的化部分およびＬ１である、式ＩＩＩ：Ｙ−Ｌ１または式ＩＩＩＡ：Ｌ１−Ｙのスイッチ中間体のＣＡＲ−ＩＤへの共役は、オキシムを形成することを含み得る。オキシムを形成することは、酸性条件下で１つ以上の反応を実施することを含み得る。オキシムを形成することは、わずかな酸性条件下で１つ以上の反応を実施することを含み得る。オキシムを形成することは、わずかな中性条件で１つ以上の反応を実施することを含み得る。
スイッチを産生する方法は、（ａ）非天然のアミノ酸を含む標的化部分を産生することと、（ｂ）第１のリンカーを標的化部分に結合し、標的化部分および第１のリンカーを含む第１のスイッチ中間体を産生することと、（ｃ）ＣＡＲ−ＩＤおよび第２のリンカーを含む第２のスイッチ中間体を、第１のスイッチ中間体に結合し、したがってスイッチを産生することとを含み得る。非天然のアミノ酸は、ｐ−アセチルフェナラニン（ｐＡｃＦ）であり得る。非天然のアミノ酸は、
ｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）であり得る標的化部分は、抗体または抗体断片に基づくか、またはそれから誘導されるポリペプチドを含み得る。抗体は、抗ＣＤ１９抗体であり得る。標的化部分は、抗体断片を含み得る。抗体は、配列番号２〜１５、１７〜２５および２７〜３５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。第１のリンカーは、二官能性リンカーであり得る。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーであり得る。リンカーは、１つ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含み得る。第１のリンカーは、シクロオクチンを含み得る。第１のリンカーは、ＰＥＧシクロオクチンリンカーであり得る。リンカーは、アジドを含み得る。第１のリンカーは、トリアゾールを含み得る。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールであり得る。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールであり得る。第１のリンカーは、アジドＰＥＧアミノキシリンカーを含み得る。第１のリンカーは、非天然のアミノ酸のケトンに結合され得る。第１のリンカーは、オキシム連結を介して標的化部分に結合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、小分子を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含み得る。第２のリンカーは、二官能性リンカーであり得る。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーであり得る。リンカーは、１つ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含み得る。第２のリンカーは、シクロオクチンを含み得る。第２のリンカーは、ＰＥＧシクロオクチンリンカーであり得る。リンカーは、アジドを含み得る。第２のリンカーは、トリアゾールを含み得る。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールであり得る。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールであり得る。第２のリンカーは、ＰＥＧシクロオクチンリンカーであり得る。第２のスイッチ中間体は、クリックケミストリー反応を介して第１のスイッチ中間体に結合され得る。第２のスイッチ中間体は、環化付加反応を通して第１のスイッチ中間体に結合され得る。環化付加反応は、［３＋２］環化付加反応であり得る。
リンカーをＣＡＲ−ＩＤに共役し、スイッチを産生することは、リンカーとＣＡＲ−ＩＤとの間に１つ以上の結合を形成することを含み得る。リンカーを標的化部分に共役し、スイッチを産生することは、リンカーと標的化部分との間に１つ以上の結合を形成することを含み得る。１つ以上の結合は、イオン結合、共有結合性結合、非共有結合性結合、またはそれらの組み合わせを含み得る。リンカーをＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分に共役する追加の方法は、Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５４：４５９−４７６（２００２）（参照によりその全体が本明細書に含まれる）に記載される通りに実施され得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤのいずれかを含み得る。例えば、ＣＡＲ−ＩＤは、小分子を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチン、およびそれらの誘導体から選択される群から成り得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、ハプテンを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、タンパク質、抗体または抗体断片などのより大きな担体分子に結合される際、免疫応答を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣまたはその誘導体であり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含み得る。
代替的に、ＣＡＲ−ＩＤは、ハプテンを含まない。ＣＡＲ−ＩＤは、ステロイド、ビタミン、ビタマー、代謝産物、抗生物質、単糖、二糖、脂質、脂肪酸、核酸、アルカロイド、グリコシド、フェナジン、ポリケタイド、テルペン、およびテトラピロール、ならびにそれらの部分、かつそれらの組み合わせから選択され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ペニシリン薬物またはその誘導体であり得る。
ＣＡＲ−ＩＤは、標的相互作用ドメインに連結され、および／または共役され得る。標的相互作用ドメインは、標的化抗体または抗体断片であり得、ＣＡＲ−ＩＤは、標的化抗体または抗体断片のアミノ酸に連結され、および／または共役され得る。標的化抗体または抗体断片のアミノ酸は、非天然のアミノ酸であり得る。標的化抗体または抗体断片は、配列番号１０〜３１から選択される軽鎖および／または重鎖を含み得、非天然のアミノ酸は、表１に示される各々の部位に位置し得る。別様に記載されない限り、アミノ酸は、それぞれ可変領域のＮ末端から定常領域のＣ−末端までのアミノ酸から数えられる。
標的化部分は、本明細書で開示される標的化部分のいずれかを含み得る。リンカーは、本明細書で開示されるリンカーのいずれかを含み得る。例えば、リンカーは、１つ以上の終端にアミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはそれらの組み合わせを含み得る。リンカーは、二官能性リンカーであり得る。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーであり得る。リンカーは、１つ以上のＰＥＧサブユニットを含み得る。
式ＩＶ：Ｘ−Ｌ１−Ｌ２−Ｙのスイッチを産生する方法が本明細書で開示され、Ｘが、ＣＡＲ−ＩＤであり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｙが、標的化部分である。方法は、（ａ）Ｌ１をＸに結合し、式ＩＩ：Ｘ−Ｌ１の第１のスイッチ中間体を産生することと、（ｂ）Ｌ２をＹに結合し、式Ｖ：Ｌ２−Ｙの第２のスイッチ中間体を産生することと、（ｃ）式ＩＩの第１のスイッチ中間体を、式：Ｖの第２のスイッチ中間体に連結し、それにより式ＩＶのスイッチを産生することとを含み得る。
式ＩＶＡ：Ｙ−Ｌ２−Ｌ１−Ｘのスイッチを産生する方法が本明細書で開示され、Ｙが、標的化部分であり、Ｌ１が、第１のリンカーであり、Ｌ２が、第２のリンカーであり、Ｘが、ＣＡＲ−ＩＤである。方法は、（ａ）Ｌ１をＸに結合し、式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘの第１のスイッチ中間体を産生することと、（ｂ）Ｌ２をＹに結合し、式ＶＡ：Ｙ−Ｌ２の第２のスイッチ中間体を産生することと、（ｃ）式ＩＩＡの第１の中間体を、式ＶＡの第２の中間体に連結し、それにより式ＩＶＡのＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生することとを含み得る。
方法は、１つ以上の非天然のアミノ酸を、Ｘおよび／またはＹに組込むことをさらに含み得る。Ｌ１は、部位特異的方法でＸに結合され得る。Ｌ１は、１つ以上の非天然のアミノ酸を通して部位特異的方法でＸに結合され得る。Ｌ２は、部位特異的方法でＹに結合され得る。Ｌ２は、１つ以上の非天然のアミノ酸を通して部位特異的方法でＹに結合され得る。方法は、Ｘをコードする核酸を修飾し、Ｘ内の１つ以上のアンバーコドンを産生することをさらに含み得る。方法は、Ｙをコードする核酸を修飾し、Ｙ内の１つ以上のアンバーコドンを産生することをさらに含み得る。
リンカーをＣＡＲ−ＩＤに共役し、第１のスイッチ中間体を産生することは、リンカーとＣＡＲ−ＩＤとの間に１つ以上の結合を形成することを含み得る。リンカーを標的化部分に共役し、第２のスイッチ中間体を産生することは、リンカーと標的化部分との間に１つ以上の結合を形成することを含み得る。１つ以上の結合は、イオン結合、共有結合性結合、非共有結合性結合、またはそれらの組み合わせを含み得る。リンカーＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を共役する追加の方法は、Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５４：４５９−４７６（２００２）（参照によりその全体が本明細書に含まれる）に記載される通りに実施され得る。
第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に連結することは、ヒュスゲン環化付加、ディールスアルダー反応、ヘテロディールスアルダー反応、または酵素媒介の反応を含み得る。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に連結することは、オキシム、テトラゾール、ディールスアルダー付加物、ヘテロディールスアルダー付加物、芳香族置換反応生成物、求核性置換反応生成物、エステル、アミド、カルバミン酸、エーテル、チオエーテル、マイケル反応生成物、環化付加生成物、メタセシス反応生成物、金属媒介のクロスカップリング反応生成物、ラジカル重合生成物、酸化的結合生成物、アシル転移反応生成物、フォトクリック反応生成物を生成し得る。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に連結することは、ジスルフィド架橋またはマレイミド架橋を生成することを含み得る。
Ｌ１および／またはＬ２は、二官能性リンカー、切断可能リンカー、非切断可能リンカー、エチレングリコールリンカー、二官能性エチレングリコールリンカー、柔軟性リンカー、または非柔軟性リンカーから選択されるリンカーを含み得る。Ｌ１および／またはＬ２は、シクロオクチン、シクロプロペン、アリール／アルキルアジド、トランスシクロオクテン、ノルボルネン、およびテトラジンを含む群から選択されるリンカーを含み得る。Ｌ１の末端および／またはＬ２の末端は、アルコキシアミンを含み得る。Ｌ１の末端および／またはＬ２の末端は、アジドまたはシクロオクチン基を含み得る。Ｘは、シクロオクチン、シクロプロペン、アリール／アルキルアジド、トランスシクロオクテン、ノルボルネン、およびテトラジンから選択される化学基によるＬ１に結合され得る。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）および第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）を連結することは、１つ以上の無銅反応を実施することを含み得る。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）および第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）を連結することは、１つ以上の銅含有反応を実施することを含み得る。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）および第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）を連結することは、１つ以上の環化付加を含み得る。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）および第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）を連結することは、１つ以上のヒュスゲン環化付加を含み得る。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）および第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）を連結することは、１つ以上のディールスアルダー反応を含み得る。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）および第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）を連結することは、１つ以上のヘテロディールスアルダー反応を含み得る。
方法本明細書で開示されるものは、１つ以上のリンカーを１つ以上の標的相互作用ドメイン、ＣＡＲ−ＩＤ、またはそれらの組み合わせに結合し、１つ以上スイッチ中間体を産生することを含み得る。スイッチ中間体は、リンカーに結合された標的化部分（例えば、標的化部分スイッチ中間体）を含み得る。スイッチ中間体は、リンカーに結合されたＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ＣＡＲ−ＩＤスイッチ中間体）を含み得る。方法は、第１のリンカーを標的化部分に結合し、標的化部分スイッチ中間体賛成することを含み得る。方法は、リンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合し、ＣＡＲ−ＩＤスイッチ中間体を産生することを含み得る。
１つ以上のリンカーの標的化部分およびＣＡＲ−ＩＤへの結合は、同時に起こり得る。１つ以上のリンカーの標的化部分およびＣＡＲ−ＩＤへの結合は、連続的に起こり得る。１つ以上のリンカーの標的化部分およびＣＡＲ−ＩＤへの結合は、単一の反応ボリュームで起こり得る。１つ以上のリンカーの標的化部分およびＣＡＲ−ＩＤへの結合は、２つ以上の反応ボリュームで起こり得る。
１つ以上のリンカーを標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤに結合することは、リンカーと、標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤとの間に、１つ以上のオキシムを形成することを含み得る。１つ以上のリンカーを標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤに結合することは、リンカーと、標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤとの間に、１つ以上の安定した結合を生成することを含み得る。１つ以上のリンカーを標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤに結合することは、リンカーと、標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤとの間に、１つ以上の共有結合性結合を形成することを含み得る。１つ以上のリンカーを標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤに結合することは、リンカーと、標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤとの間に、１つ以上の非共有結合性結合を形成することを含み得る。１つ以上のリンカーを標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤに結合することは、リンカーと、標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤとの間に、１つ以上のイオン結合を形成することを含み得る。
１つ以上のリンカーを標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤに結合することは、部位特異的に１つ以上のリンカーを標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤに結合することを含み得る。部位特異的結合は、１つ以上のリンカーを、標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤの非天然のアミノ酸に連結することを含み得る。１つ以上のリンカーを、標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤの非天然のアミノ酸に連結することは、オキシムの形成を含み得る。１つ以上のリンカーを、標的化部分および／またはＣＡＲ−ＩＤの非天然のアミノ酸に連結することは、非限定的な例として、１つ以上のリンカーのヒドロキシアミンをアミノ酸のアルデヒドまたはケトンと反応させることを含み得る。アミノ酸は、非天然のアミノ酸であり得る。
部位特異的にＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に連結し、部位特異的にリンカーまたはリンカーの前駆体をＣＡＲ−ＩＤに結合し、部位特異的にリンカーまたはリンカーの前駆体を標的化部分に結合し、部位特異的にＣＡＲ−ＩＤスイッチ中間体を標的化部分に結合し、部位特異的に標的化部分スイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに結合するか、あるいは部位特異的に標的化部分スイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤスイッチ中間体に結合する１つ以上の反応を実施することは、無銅反応、環化付加、ヒュスゲン環化付加、無銅［３＋２］ヒュスゲン環化付加、銅含有反応、ディールスアルダー反応、ヘテロディールスアルダー反応、メタセシス反応、金属媒介のクロスカップリング反応、ラジカル重合、酸化的結合、アシル転移反応、フォトクリック反応、酵素媒介の反応、トランスグルタミナーゼ媒介の反応から選択される１つ以上の反応を実施することを含み得る。
本明細書で開示されるスイッチは、ＦＩＴＣまたはその誘導体を含むＣＡＲ−ＩＤを含み得る。かかるスイッチを産生する方法は、リンカーまたはそれらの前駆体、標的化部分を含むスイッチ中間体（例えば、標的化部分スイッチ中間体）または標的化部分を、ＣＡＲ−ＩＤに結合することを含み得る。リンカーまたはその前駆体、標的化部分スイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに結合することは、ＦＩＴＣのイソチオシアネートの、リンカーまたはその前駆体、標的化部分スイッチ中間体または標的化部分への共役を含み得る。標的化部分は、ポリペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ポリペプチドは、抗体または抗体断片であり得る。標的化部分をＣＡＲ−ＩＤに結合することは、ＦＩＴＣのイソチオシアネートを標的化部分のアミノ酸に共役することを含み得る。アミノ酸は、リジンであり得る。方法は、結合すること、または標的化部分へのより多くのＣＡＲ−ＩＤを含み得る。方法は、２つ以上のＣＡＲ−ＩＤからのＦＩＴＣを、標的化部分の２つ以上のアミノ酸に共役することを含み得る。２つ以上のアミノ酸は、リジンであり得る。
本明細書で開示されるスイッチを産生することは、エステル結合を含み得る。エステル結合は、ＣＡＲ−ＩＤと標的化部分との間にアミド結合を形成することを含み得る。エステル結合は、スイッチ中間体と標的化部分との間にアミド結合を形成することを含み得る。スイッチ中間体は、リンカーに結合されたＣＡＲ−ＩＤを含み得る。アミド結合は、スイッチ中間体のリンカーと標的化部分との間に形成され得る。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーであり得る。アミド結合は、スイッチ中間体のリンカーと標的化部分のアミノ酸との間に形成され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、小分子を含み得る。小分子は、ＦＩＴＣであり得る。標的化部分は、ポリペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ポリペプチドは、抗体または抗体断片であり得る。標的化部分は、小分子を含み得る。
本明細書で開示されるスイッチを産生する方法は、（ａ）（ｉ）ＣＡＲ−ＩＤおよび（ｉｉ）リンカーを含むスイッチ中間体を得ることと、（ｂ）スイッチ中間体を標的化部分と接触させ、それによってスイッチを産生することとを含み得る。スイッチ中間体を標的化部分と接触させることは、エステル結合反応を実施することを含み得る。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーを含み得る。標的化部分は、１つ以上のアミノ酸を含み得る。エステル結合反応を実施することは、スイッチ中間体のＮＨＳエステルリンカーと、標的化部分の１つ以上のアミノ酸との間に、アミド結合を形成することを含み得る。方法は、複数のスイッチを産生することをさらに含み得る。複数のスイッチのうち２つ以上のスイッチは、標的化部分の２つ以上の異なるアミノ酸に結合された２つ以上のスイッチ中間体を含み得る。例えば、第１のスイッチ中間体は、第１の標的化部分のリジン残基に結合され得、第２のスイッチ中間体は、第２の標的化部分のグリシン残基に結合され得る。複数のスイッチのうちの２つ以上のスイッチは、標的化部分の同じアミノ酸に結合された２つ以上のスイッチ中間体を含み得る。例えば、２つ以上のスイッチ中間体は、第１および第２の標的化部分のリジン残基に結合され得る。複数のスイッチのうちの２つ以上のスイッチは、標的化部分内の２つ以上の異なる位置に位置する同じアミノ酸に結合された２つ以上のスイッチ中間体を含み得る。例えば、第１のスイッチ中間体は、第１の標的化部分のリジン１０に結合され得、第２のスイッチ中間体は、第２の標的化部分のリジン４５に結合され得る。複数のスイッチの２つ以上のスイッチは、標的化部分内の同じ位置に位置する同じアミノ酸に結合された２つ以上のスイッチ中間体を含み得る。例えば、第１のスイッチ中間体は、第１の標的化部分のリジン１０に結合され得、第２のスイッチ中間体は、第２の標的化部分のリジン１０に結合され得る。
本明細書で開示されるスイッチを産生する方法は、１つ以上の非天然のアミノ酸を使用することを含み得る。方法は、１つ以上の非天然のアミノ酸をＣＡＲ−ＩＤに組込むことを含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、エフェクター細胞上のＣＡＲと相互作用することのできるポリペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ポリペプチドは、非抗体系ポリペプチドであり得る。一般に、非抗体系ポリペプチドは、抗体または抗体断片を含まないポリペプチドである。非天然のアミノ酸は、非抗体系ポリペプチドに組込まれ得る。非天然のアミノ酸は、非抗体系ポリペプチドのアミノ酸を入れ替え得る。代替的に、または加えて、方法は、１つ以上の非天然のアミノ酸を標的化部分に組込むことを含み得る。標的化部分は、ポリペプチドに基づくか、またはそれから誘導され得る。ポリペプチドは、抗体であり得る。ポリペプチドは、非抗体系ポリペプチドであり得る。非天然のアミノ酸は、ポリペプチドに組込まれ得る。非天然のアミノ酸は、ポリペプチドのアミノ酸を入れ替え得る。
スイッチを産生する方法は、ＣＡＲ−ＩＤが基づくか、またはそれから誘導されるポリペプチド内で１つ以上のアミノ酸残基を修飾することをさらに含み得る。スイッチを産生する方法は、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導されるポリペプチド内で１つ以上のアミノ酸残基を修飾することを含み得る。１つ以上のアミノ酸残基を修飾することは、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列内で１つ以上のヌクレオチドを変異させることを含み得る。コードするヌクレオチド配列内で１つ以上のヌクレオチドを変異させることは、アミノ酸をナンセンスコドンにコードするコドンを改変することを含み得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸を、ＣＡＲ−ＩＤが基づくか、またはそれから誘導されるポリペプチドに組込むことは、ポリペプチド内で１つ以上のアミノ酸残基を修飾し、抗体または抗体断片内の１つ以上のアンバーコドンを産生することを含み得る。１つ以上の非天然のアミノ酸を、標的化部分が、基づくか、またはそれから誘導されるポリペプチドに組込むことは、ポリペプチド内で１つ以上のアミノ酸残基を修飾し、抗体または抗体断片内で１つ以上のアンバーコドンを産生することを含み得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸は、アンバーコドンに応答して、ポリペプチドに組込まれ得る。１つ以上の非天然のアミノ酸は、部位特異的にポリペプチドに組込まれ得る。
１つ以上の非天然のアミノ酸を、ＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分が基づくか、またはそれから誘導されるポリペプチドに組込むことは、部位特異的に抗体、抗体断片、または標的化ペプチドを修飾するための基準の２０個のアミノ酸に対して直行性化学反応性を有する、１つ以上の遺伝子的にコードされた非天然のアミノ酸の使用を含み得る。１つ以上の非天然のアミノ酸を組込むことは、１つ以上のｔＲＮＡシンテターゼの使用を含み得る。ｔＲＮＡシンテターゼは、アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼであり得る。ｔＲＮＡシンテターゼは、変異ｔＲＮＡ合成であり得る。１つ以上の非天然のアミノ酸を組込むことは、ｔＲＮＡ／ｔＲＮＡシンテターゼの対を含み得る。ｔＲＮＡ／ｔＲＮＡシンテターゼの対は、ｔＲＮＡ／アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼの対を含み得る。ｔＲＮＡ／ｔＲＮＡシンテターゼの対は、ｔＲＮＡＴｙｒ／チロシルｔＲＮＡシンテターゼの対を含み得る。１つ以上の非天然のアミノ酸を組込むことは、１つ以上のアンバーナンセンスコドンに応答してポリペプチド内の画定された部位で、部位特異的に１つ以上の非天然のアミノ酸を組込むための、進化したｔＲＮＡ／アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼの対の使用を含み得る。
非天然のアミノ酸を組込むための追加の方法は、Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ ｅｔ ａｌ．（Ａ Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ プラットフォーム ｆｏｒ Ｓｉｎｇｌｅ−ａｎｄ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ−Ｕｎｎａｔｕｒａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１３）、Ｋａｚａｎｅ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１３５（１）：３４０−６，２０１３）、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１３４（２４）：９９１８−２１，２０１２）、Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ，７（１１）：７７９−８６，２０１１）、およびＨｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，４０６（４）：５９５−６０３，２０１１）に開示される方法を含むが、これらに限定されない。
キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるためのスイッチを産生する方法は、（ａ）非天然のアミノ酸を含む標的化部分を得ることと、（ｂ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を標的化部分に結合し、それによってスイッチを産生することを含み得る。したがって、いくつかの実施形態では、方法は、ＣＡＲ−ＩＤを、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合断片である標的化部分に含まれる非天然のアミノ酸に結合することを含む。
ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、１つ以上の環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、ヒュスゲン環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、［３＋２］環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、［３＋２］ヒュスゲン環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、無銅環化付加を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、無銅反応を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、１つ以上の銅含有反応を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、１つ以上のディールスアルダー反応を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、１つ以上のヘテロディールスアルダー反応を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、１つ以上のエステル結合を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、１つ以上のイソチオシアネート結合を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分のアミノ酸に結合することを含み得る。アミノ酸は、非天然のアミノ酸であり得る。ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、１つ以上の生体直交反応を含み得る。ＣＡＲ−ＩＤは、部位特異的方法で標的化部分に結合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、標的化部分内の予め決定された部位に結合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、非依存的方法で標的化部分部位に結合され得る。
方法は、第１のリンカーを標的化部分に結合し、第１のスイッチ中間体を産生することをさらに含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、１つ以上の環化付加を含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、無銅反応を含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、１つ以上の銅含有反応を含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、１つ以上のディールスアルダー反応を含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、１つ以上のヘテロディールスアルダー反応を含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、１つ以上のエステル結合を含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、オキシム連結を含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、第１のリンカーと標的化部分との間に１つ以上のオキシムを形成することを含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、第１のリンカーと標的化部分との間に１つ以上の安定した結合を形成することを含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、第１のリンカーと標的化部分との間に１つ以上の共有結合性結合を形成することを含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、第１のリンカーと標的化部分との間に１つ以上の非共有結合性結合を形成することを含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、第１のリンカーと標的化部分との間に１つ以上のイオン結合を形成することを含み得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、リンカーを標的化部分のアミノ酸に結合することを含み得る。アミノ酸は、非天然のアミノ酸であり得る。第１のリンカーを標的化部分に結合することは、１つ以上の生体直交反応を含み得る。
ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、第１のスイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに結合することを含み得る。第１のスイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上の環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、ヒュスゲン環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、［３＋２］環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、［３＋２］ヒュスゲン環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、無銅環化付加を含み得る。第１のスイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに結合することは、無銅反応を含み得る。第１のスイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上の銅含有反応を含み得る。第１のスイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上のディールスアルダー反応を含み得る。第１のスイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上のヘテロディールスアルダー反応を含み得る。第１のスイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上のエステル結合を含み得る。第１のスイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上のイソチオシアネート結合を含み得る。
方法は、第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合し、第２のスイッチ中間体を産生することをさらに含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上の環化付加を含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、無銅反応を含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上の銅含有反応を含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上のディールスアルダー反応を含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上のヘテロディールスアルダー反応を含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、１つ以上のエステル結合を含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、オキシム連結を含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤとの間に１つ以上のオキシムを形成することを含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤとの間に１つ以上の安定した結合を形成することを含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤとの間に１つ以上の共有結合性結合を形成することを含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤとの間に１つ以上の非共有結合性結合を形成することを含み得る。第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤに結合することは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤとの間に１つ以上のイオン結合を形成することを含み得る。
ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、第２のスイッチ中間体を標的化部分に結合することを含み得る。第２のスイッチ中間体を標的化部分に結合することは、１つ以上の環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、ヒュスゲン環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、［３＋２］環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、［３＋２］ヒュスゲン環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、無銅環化付加を含み得る。第２のスイッチ中間体を標的化部分に結合することは、無銅反応を含み得る。第２のスイッチ中間体を標的化部分に結合することは、１つ以上の銅含有反応を含み得る。第２のスイッチ中間体を標的化部分に結合することは、１つ以上のディールスアルダー反応を含み得る。第２のスイッチ中間体を標的化部分に結合することは、１つ以上のヘテロディールスアルダー反応を含み得る。第２のスイッチ中間体を標的化部分に結合することは、１つ以上のエステル結合を含み得る。第２のスイッチ中間体を標的化部分に結合することは、１つ以上のイソチオシアネート結合を含み得る。第２のスイッチ中間体を標的化部分に結合することは、リンカーをＣＡＲ−ＩＤのアミノ酸に結合することを含み得る。アミノ酸は、非天然のアミノ酸であり得る。第２のスイッチ中間体を標的化部分に結合することは、１つ以上の生体直交反応を含み得る。
ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合することは、第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合することを含み得る。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合することは、１つ以上の環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、ヒュスゲン環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、［３＋２］環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、［３＋２］ヒュスゲン環化付加を含み得る。１つ以上の環化付加は、無銅環化付加を含み得る。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合することは、無銅反応を含み得る。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合することは、１つ以上の銅含有反応を含み得る。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合することは、１つ以上のディールスアルダー反応を含み得る。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合することは、１つ以上のヘテロディールスアルダー反応を含み得る。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合することは、１つ以上のエステル結合を含み得る。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合することは、１つ以上のイソチオシアネート結合を含み得る。
（ａ）酵母転写因子ペプチドからのペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤと、（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）とを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが、本明細書で開示される。酵母転写因子ペプチドは、ＧＣＮ４ペプチドであり得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体の重鎖を含み得る。重鎖配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、軽鎖ヒト化されたＦＭＣ６３抗体を含み得る。軽鎖配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つまたは配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体のＦａｂを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、全長のヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその断片を含み得る。抗ＧＣＮ４ ＣＡＲを発現する抗ＧＣＮ４ ＣＡＲおよびＣＡＲ−ＥＣもまた、本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、（ｉ）（ａ）酵母転写因子ペプチドからのペプチド（例えば、本明細書で開示されるＧＣＮ４ペプチド）を含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）抗ＧＣＮ４ ＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを用いた対象の共治療は、ＣＤ１９発現標的細胞のスイッチ媒介細胞毒性をもたらす。
（ａ）Ｆｌａｇペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤと、（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）とを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが本明細書で開示される。Ｆｌａｇペプチドは、以下の配列、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号４０）およびＤＹＫＤＤＤＤＫＰ（配列番号３９）のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体の重鎖を含み得る。重鎖配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、軽鎖ヒト化されたＦＭＣ６３抗体を含み得る。軽鎖配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つまたは配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体のＦａｂを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、全長のヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその断片を含み得る。抗Ｆｌａｇ ＣＡＲを発現する抗Ｆｌａｇ ＣＡＲおよびＣＡＲ−ＥＣもまた、本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、（ｉ）（ａ）Ｆｌａｇペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）抗Ｆｌａｇ ＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを用いた対象の共治療は、ＣＤ１９発現標的細胞のスイッチ媒介細胞毒性をもたらす。
（ａ）ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤと、（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）とを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが、本明細書で開示される。ＦＩＴＣは、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体に非特異的に共役され得る。ＦＩＴＣは、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体に部位特異的に共役され得る。部位特異的共役は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体に含まれる人工アミノ酸へのものであり得る。共役は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体をＦＩＴＣに連結するリンカーを介し得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体の重鎖を含み得る。重鎖配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、軽鎖ヒト化されたＦＭＣ６３抗体を含み得る。軽鎖配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つまたは配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体のＦａｂを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、全長のヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその断片を含み得る。抗ＦＩＴＣ ＣＡＲ、および抗ＦＩＴＣ ＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣもまた、本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、（ｉ）（ａ）ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）抗ＦＩＴＣ ＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを用いた対象の共治療は、ＣＤ１９発現標的細胞のスイッチ媒介細胞毒性をもたらす。
（ａ）Ｋ４ペプチドまたはＥ４ペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤと、（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが、本明細書で開示される。Ｋ４ペプチドは、アミノ酸配列：ＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥ（配列番号４３）を含み得る。Ｅ４ペプチドは、アミノ酸配列：：ＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫ（配列番号４４）を含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体重鎖を含み得る。重鎖配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、軽鎖ヒト化されたＦＭＣ６３抗体を含み得る。軽鎖配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つまたは配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体のＦａｂを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、全長のヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその断片を含み得る。Ｋ４細胞外ドメインを含むＣＡＲもまた、本明細書で開示される。Ｅ４細胞外ドメインを含むＣＡＲもまた、本明細書で開示される。Ｋ４細胞外ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣもまた、本明細書で開示される。Ｅ４細胞外ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣもまた、本明細書で開示される。
いくつかの実施形態では、（ｉ）（ａ）Ｋ４ペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）Ｅ４細胞外ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを用いた対象の共治療は、ＣＤ１９発現標的細胞のスイッチ媒介細胞毒性をもたらす。いくつかの実施形態では、（ｉ）（ａ）Ｅ４ペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）Ｋ４細胞外ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを用いた共治療は、ＣＤ１９発現標的細胞のスイッチ媒介細胞毒性をもたらす。
ＩＩＩ．ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよびそれらの部分の精製
本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ産生系の構成成分（例えば、細胞デブリ、遊離アミノ酸）から単離することを含む、本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを精製する方法が、本明細書で開示される。ＣＡＲ−ＥＣスイッチを精製することは、１つ以上の濃縮カラム、電気泳動、濾過、遠心分離、クロマトグラフィーまたはそれらの組み合わせの使用を含み得る。クロマトグラフィーは、サイズ排除クロマトグラフィーを含み得る。追加のクロマトグラフィー方法は、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、金属結合、免疫親和性クロマトグラフィー、および高性能液体クロマトグラフィーまたは高圧液体クロマトグラフィーを含むが、これらに限定されない。電気泳動は、変性電気泳動または非変性電気泳動を含み得る。
ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つ以上のペプチドタグを含み得る。ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを精製する方法は、ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの１つ以上のペプチドタグを、捕獲剤に結合することを含み得る。捕獲剤は、抗体、カラム、ビーズ、およびそれらの組み合わせから選択され得る。１つ以上のタグは、１つ以上のプロテアーゼによって切断され得る。タグの例は、ポリヒスチジン、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、ＨＡ、ｃ−ｍｙｃ、Ｖ５、キチン結合タンパク質（ＣＢＰ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、およびグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を含むが、これらに限定されない。ペプチドタグは、ＣＡＲ−ＩＤであり得る。ペプチドタグは、ＨＴＰであり得る。ペプチドタグは、酵母転写因子ＧＣＮ４であり得る。
方法は、ＣＡＲ−ＩＤ、標的化ポリペプチドおよび／またはヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの、凍結乾燥または超遠心分離をさらに含み得る。
ＣＡＲ−ＩＤ、標的化ポリペプチド、および／またはヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上であり得る。ＣＡＲ−ＩＤ、標的化ポリペプチド、および／またはヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、８５％以上であり得る。ＣＡＲ−ＩＤ、標的化ポリペプチド、および／またはヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、９０％以上であり得る。ＣＡＲ−ＩＤ、標的化ポリペプチド、および／またはヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、９５％以上であり得る。ＣＡＲ−ＩＤ、標的化ポリペプチド、および／またはヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、９７％以上であり得る。ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを精製するかかる方法に従って精製されたヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチは、本明細書で「精製されたＣＡＲ−ＥＣスイッチ」または「精製されたヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチ」と称される。精製されたＣＡＲ−ＥＣスイッチは、エンドトキシンフリーまたは実質的にエンドトキシンフリーであり得る。
本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生する方法は、構造的に均一であるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生することを含み得る。ポリヌクレオチドからＣＡＲ−ＥＣスイッチを産生する方法は、同じまたは同様の形態、特徴、結合親和性（例えば、ＣＡＲまたは標的への）、幾何学および／もしくはサイズを有する、１つ以上のヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチをもたらし得る。ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの均一性は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上であり得る。ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの均一性は、８５％以上であり得る。均一性ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチは、９０％以上であり得る。ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの均一性は、９５％以上であり得る。ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの均一性は、９７％以上であり得る。均一性は、構造的均一性であり得る。均一性は、細胞を対象に投与する前に構造的均一性であり得る。均一性は、細胞活性（メチル化、アセチル化、グリコシル化など）によるＣＡＲ−ＥＣスイッチへの修飾前に構造的均一性であり得る。均一性のこれらの高い割合は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのより予測可能な効果を提供し得る。均一性のこれらの高い割合は、ＣＡＲ−ＥＣと組み合わせて対象の状態を治療する際に、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのより低いオフターゲット効果を提供し得る。
ＩＶ．医薬組成物
本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチのうち１つ以上を含む医薬組成物が、本明細書で開示される。ＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちの１つ以上は、精製されたＣＡＲ−ＥＣスイッチであり得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書で開示される１つ以上の精製されたヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む。組成物は、１つ以上の薬学的に許容される塩、賦形剤またはビヒクルをさらに含み得る。医薬組成物は、エンドトキシンフリーまたは実質的にエンドトキシンフリーであり得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、薬学的に許容される塩、賦形剤、ビヒクル、またはそれらの組み合わせ、ならびに軽鎖および重鎖を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む、医薬組成物を提供し、軽鎖は、本明細書で開示される任意のスイッチ軽鎖配列を含むか、またはそれから成り、重鎖は、本明細書で開示される任意のスイッチ重鎖配列を含むか、またはそれから成る。かかる重鎖および／または軽鎖配列は、ヒト化され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物に含まれるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ヒト化され、かつ配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列および配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み、重鎖および軽鎖の一方または両方は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤ）を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物に含まれるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ヒト化され、かつ配列番号１７〜２４から選択される配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である軽鎖配列および配列番号２〜１４から選択される配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である重鎖配列を含み、重鎖および軽鎖の一方または両方は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤ）を含む。いくつかの特定の実施形態では、軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列（Ｎ末端ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤを含む）および配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含む。いくつかの特定の実施形態では、軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択される配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一であるヒト化された配列（Ｎ末端ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤを含む）および配列番号２〜１４から選択される配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である重鎖配列を含む。いくつかの特定の実施形態では、スイッチは、表６または表８に記載されるスイッチであり、本明細書で開示されるスイッチのいくつかに含まれる重鎖／軽鎖の組み合わせを提示する。いくつかの実施形態では、スイッチは、スイッチに含まれるＣＡＲ−ＩＤが修飾され、構造Ｉの配列を有することを除いて、表６または表８に記載されるスイッチと同一である。いくつかの実施形態では、構造Ｉの配列は、配列番号２６、３６、１３９、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される。医薬組成物は、単一のスイッチを含み得る。医薬組成物は、複数のスイッチを含み得る。複数のスイッチはそれぞれ、同じＣＡＲ−ＩＤを含み得る。複数のスイッチのうち２つ以上はそれぞれ、異なるＣＡＲ−ＩＤを含み得る。複数のスイッチはそれぞれ、ＣＡＲ−ＥＣ上の同じＣＡＲによって結合され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体であり得る。
本医薬組成物での使用のための薬学的に許容される塩、賦形剤、またはビヒクルは、担体、賦形剤、希釈剤、抗酸化剤、保存剤、着色剤、着香希釈剤、乳化剤、懸濁剤、溶媒、注入剤、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、等張化剤、共溶媒、湿潤剤、錯化剤、緩衝薬、抗菌剤、および界面活性剤を含む。
血清アルブミンと混合される中性の緩衝食塩水または食塩水は、例示的で好適な担体である。医薬組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；単糖、二糖、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／またはツイーン、プルロニック、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含み得る。また、例として、好適な等張化剤は、アルカリ金属ハライド（好ましくはナトリウムまたは塩化カリウム）、マンニトール、ソルビトールなどを含む。好適な保存剤は、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸などを含む。過酸化水素はまた、保存料として使用され得る。好適な共溶媒は、グリセリン、プロピレングリコール、およびＰＥＧを含む。好適な錯化剤は、カフェイン、ポリビニルピロリドン、
ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピルβシクロデキストリンを含む。好適な界面活性剤または湿潤剤は、ソルビタンエステル、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなどを含む。緩衝剤は、アセテート、ボラテート、シトレート、ホスフェート、バイカルボネート、またはトリス−ＨＣｌなどの従来の緩衝剤であり得る。アセテート緩衝剤は、約ｐＨ４〜５．５であり得、トリス緩衝剤は、約ｐＨ７〜８．５であり得る。追加の医薬品は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０に記載される。
組成物は、液体形態、または凍結乾燥もしくは冷凍乾燥形態であり得、１つ以上の凍結防止剤、賦形剤、界面活性剤、高分子量構造的付加物および／または増量剤（例えば、米国特許第６，６８５，９４０号、同第６，５６６，３２９号、および同第６，３７２，７１６号を参照されたい）を含み得る。一実施形態において、スクロース、ラクトースまたはトレハロースなどの非還元性糖である凍結防止剤が含まれる。一般に含まれる凍結防止剤の量は、高浸透圧性またはわずかに低浸透圧性の製剤もまた好適になり得るにも関わらず、再構成時に、得られる製剤が等張になるような量である。加えて、凍結防止剤の量は、凍結乾燥時のタンパク質の分解および／または凝集の許容されない量を防止するのに十分であるべきである。予め凍結乾燥された製剤内での糖（例えば、スクロース、ラクトース、トレハロース）のための例示的な凍結防止剤の濃度は、約１０ｍＭ〜約４００ｍＭである。別の実施形態では、例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）などの非イオン性界面活性剤およびイオン性界面活性剤；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；ポリ（エチレングリコール）フェニルエーテル（例えば、トリトン）；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム；オクチルグルコシドナトリウム；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリール−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリール−サルコシン；リノレイル、ミリスチル−、またはセチル−ベタイン；ラウロアミドプロピル−、コカミドプロピル−、リノレアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パラミドプロピル−、またはイソステアロアミドプロピル−ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピル−、パラミドプロピル−、またはイソステアロアミドプロピル−ジメチルアミン；ココイルメチルナトリウム−または
メチルオフェイル−タウリン酸二ナトリウム；かつＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（ニュージャージー州、パターソン、Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、ならびにエチレンおよびプロピレングリコールのコポリマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ＰＦ６８など）などの界面活性剤が含まれる。予め凍結乾燥された製剤内に存在し得る界面活性剤の例示的な量は、約０．００１〜０．５％である。高分子量構造的付加物（例えば、注入剤、結合剤）は、例えば、アカシア、アルブミン、アルギン酸、リン酸カルシウム（二塩基性）、セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、デキストラン、デキストリン、デキストレート、スクロース、チロース、αデンプン、硫酸カルシウム、アミロース、グリシン、ベントナイト、マルトース、ソルビトール、エチルセルロース、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二ナトリウム、ピロ亜硫酸二ナトリウム、
ポリビニルアルコール、ゼラチン、グルコース、グアーガム、液体グルコース、圧縮糖、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、マルトデキストリン、ポリエチレンオキシド、ポリメタクリレート、ポビドン、アルギン酸ナトリウム、トラガカント微結晶セルロース、デンプン、およびゼインを含み得る。高分子量構造的付加物の例示的な濃度は、０．１重量％〜１０重量％である。他の実施形態では、増量剤（例えば、マンニトール、グリシン）が含まれ得る。
組成物は、無菌であり得る。組成物は、パイロジェンフリーまたは実質的にパイロジェンフリーであり得る。組成物は、エンドトキシンフリーまたは実質的にエンドトキシンフリーであり得る。組成物は、等張水溶液であり得る。組成物は、薬学的に許容される保存剤を含有し得る。
組成物は、非経口的投与に対して好適であり得る。例示的な組成物は、熟練労働者に利用可能な、関節内、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、または病巣内経路などの任意の経路によって、動物への注射または注入に対して好適である。非経口的製剤は典型的に、任意に薬学的に許容される保存剤を含有する、無菌、パイロジェンフリーの等張水溶液であろう。
非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能有機エステルである。水性担体は、水、アルコール／水溶液、乳剤、または食塩水および緩衝培地を含む懸濁液を含む。非経口的ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンガー、または固定油を含む。静脈内ビヒクルは、液体および栄養補給剤、リンガーデキストロースに基づくものなどの電解質補充剤を含む。保存剤および他の付加物、例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤、不活性ガスなどもまた、存在し得る。一般に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１６ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｅｄｓ．，１９８０（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）を参照されたい。
本明細書で記載される医薬組成物は、生成物の局所集中（例えば、急速投与、デポ効果）および／または増加した安定性もしくは特定の局所環境での半減期を提供する方法で、制御されるか、または持続性送達のために製剤され得る。組成物は、スイッチの製剤、ポリペプチド、核酸、またはポリ乳酸、ポリグリコール酸などのポリマー化合物の粒子性調製と共に本明細書で開示されるベクター、ならびに生分解性マトリックスなどの薬剤、注射可能ミクロスフェア、マイクロカプセル粒子、マイクロカプセル、生侵食性粒子ビーズ、リポソーム、および次いでデポ注射として送達され得る活性剤の、制御されるか、または持続性放出を提供する植込み型送達デバイスを含み得る。かかる持続性、または制御された送達手段を製剤するための技術が知られており、種々のポリマーが、開発されており、かつ薬物の制御された放出および送達のために使用されている。かかるポリマーは典型的に、生分解性および生体適合性である。温度またはｐＨ感受性特性を有する、鏡像異性ポリマーまたはポリペプチドセグメント、およびハイドロゲルの複合体形成によって形成されるものを含むポリマーハイドロゲルは、生理活性タンパク質剤（例えば、超長ＣＤＲ３を含む抗体）の補足に関わる穏やかかつ水性の状態のため、薬物デポ効果を提供するのに望ましい場合がある。例えば、ＷＯ９３／１５７２２の、医薬組成物の送達に関する制御された放出多孔性ポリマー微小粒子の記載を参照されたい。この目的のための好適な材料は、ポリ乳酸（例えば、米国特許第３，７７３，９１９号を参照されたい）、などのポリ（ａ−ヒドロキシカルボン酸）のポリマー、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシブチル酸（ＥＰ１３３，９８８Ａ）、Ｌ−グルタミン酸およびγエチル−Ｌ−グルタメート（Ｓｉｄｍｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｙｍｅｒｓｓ，２２：５４７−５５６（１９８３））のコポリマー、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７−２７７（１９８１）、およびＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８−１０５（１９８２））、エチレンビニルアセテート、またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシブチル酸を含む。他の生分解性ポリマーは、ポリ（ラクトン）、ポリ（アセタール）、ポリ（オルトエステル）、およびポリ（オルトカルボネート）を含む。持続性放出組成物もまた、当該技術分野で知られるいくつかの方法（例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８−９２（１９８５）を参照されたい）のいずれかによって調製され得る、リポソームを含み得る。担体自体、またはその分解生成物は、標的組織内で非毒性であるべきであり、かつさらに状態を悪化させるべきではない。これは、標的傷害の動物モデルか、またはかかるモデルが利用不可である場合、通常の動物内でのルーティンスクリーニングによって決定され得る。持続性放出のための組換えタンパク質のマイクロカプセル化が、ヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、インターフェロン−（ｒｈＩＦＮ−）、インターロイキン−２、およびＭＮ ｒｇｐ１２０を用いて無事に実施されている。Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２：７９５−７９９（１９９６）；Ｙａｓｕｄａ，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｔｈｅｒ．，２７：１２２１−１２２３（１９９３）；Ｈｏｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．８：７５５−７５８（１９９０）；Ｃｌｅｌａｎｄ，“Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｎｇｌｅ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ Ｕｓｉｎｇ ポリｌａｃｔｉｄｅ ポリｇｌｙｃｏｌｉｄｅ Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，”ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｏｗｅｌｌ ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，ｅｄｓ，（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５），ｐｐ．４３９−４６２；ＷＯ９７／０３６９２、ＷＯ９６／４００７２、ＷＯ９６／０７３９９；および米国特許第５，６５４，０１０号。これらのタンパク質の持続性放出製剤は、生分解性特性のその生体適合性および広範囲のため、ポリ乳酸コグリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマーを使用して開発された。ＰＬＧＡ、乳酸およびグリコール酸の分解生成物は、急速に人間の体内で排除され得る。さらに、このポリマーの分解性は、その分子量および組成に依存し得る。Ｌｅｗｉｓ，“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｌａｃｔｉｄｅ／ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ ｐｏｌｙｍｅｒ，”ｉｎ：Ｍ．Ｃｈａｓｉｎ ａｎｄ Ｒ．Ｌａｎｇｅｒ（Ｅｄｓ．），Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｓ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９０），ｐｐ．１−４１．持続性放出組成物の追加の例は、例えば、ＥＰ５８，４８１Ａ、米国特許第３，８８７，６９９号、ＥＰ１５８，２７７Ａ、カナダ特許第１１７６５６５号、Ｕ．Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２、５４７［１９８３］、Ｒ．Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２，９８［１９８２］、Ｓｉｎｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ ９０，２６１［２００３］、Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８，２４［２０００］、およびＤａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｌｏｉｄｓ Ｓｕｒｆ Ｂ Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ ４１，１１７［２００５］を含む。
生体接着性ポリマーもまた、本開示の組成物における、または組成物を用いた使用のために企図される。生体接着性は、生物学的基質に長期間付着可能な合成および天然発生材料である。例えば、カルボポールおよびポリカルボフィルは両方、ポリ（アクリル酸）の合成架橋誘導体である。天然発生物質に基づく生体接着性送達系は、例えばヒアルロナンとしても知られるヒアルロン酸を含む。ヒアルロン酸は、Ｄ−グルクロン酸およびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの残基から成る天然発生ムコポリサッカライドである。ヒアルロン酸は、結合組織を含む脊椎動物の細胞外組織マトリクス内、ならびに滑液内、かつ目の硝子体および房水内に見出される。ヒアルロン酸のエステル化誘導体は、生体適合性および生分解性である送達における使用のためのミクロスフェアを産生するために使用されている（例えば、Ｃｏｒｔｉｖｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（１９９１）１２：７２７−７３０、ＥＰ５１７，５６５、ＷＯ９６／２９９９８、Ｉｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌ．（１９９４）２９：１３３−１４１を参照されたい）。
生分解性および非生分解性ポリマーマトリクスの両方は、本開示の組成物を送達するのに使用され得、かかるポリマーマトリクスは、天然のまたは合成ポリマーを含み得る。生分解性マトリクスが、好まれる。放出が起きる期間は、ポリマーの選択に基づく。典型的には、数時間から３〜１２か月の範囲の期間にわたる放出が、最も所望される。生分解性送達系を形成するために使用され得る、例示的な合成ポリマーは、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリアミド、ポリカルボネート、ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリグリコライド、ポリシロキサン、ポリ無水物、ポリウレタンおよびそれらのコポリマー、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、アクリルおよびメタクリルエステルのポリマー、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシエチルセルロース、三酢酸セルロース、セルロース硫酸ナトリウム、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（ビニルアルコール）、酢酸ポリビニル、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ならびにポリビニルピロリドンを含む。例示的な天然のポリマーは、アルギネート、およびデキストランセルロースを含む他のポリサッカライド、コラーゲン、それらの化学誘導（置換、化学基の付加、例えば、当業者によりルーティンで行われるアルキル、アルキレン、ヒドロキシル化、酸化、および他の修飾）、アルブミンおよび他の親水性タンパク質、ゼインおよび他のプロラミンおよび疎水性タンパク質、コポリマー、ならびにそれらの混合物を含む。一般に、これらの材料は、酵素加水分解によって、または表面もしくはバルク侵食によるインビボでの水への暴露によって分解する。ポリマーは任意に、水中でその重量の約９０％まで吸収でき、さらに任意に多価イオンまたは他のポリマーを用いて架橋される、ヒドロゲルの形態（例えば、ＷＯ０４／００９６６４、ＷＯ０５／０８７２０１、Ｓａｗｈｎｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１９９３、２６，５８１−５８７を参照されたい）である。
送達系はまた、コレステロール、コレステロールエステルなどのステロール、ならびに脂肪酸またはモノ二およびトリグリセリドなどの中性脂肪を含む脂質、ヒドロゲル放出系、サイラスティック系、ペプチドベース系、ワックスコーティング、従来の結合剤および賦形剤を使用した圧縮錠剤、部分的に融合された移植片などである非ポリマー系を含む。特異的な例は、（Ａ）生成物が、米国特許第４，４５２，７７５号、同第４，６７５，１８９号、および同第５，７３６，１５２号に記載されるものなどのマトリクス内に形態で含有される浸食系、（ｂ）生成物が、米国特許第３，８５４，４８０、５，１３３，９７４、および５，４０７，６８６に記載されるものなどのポリマーから制御された速度で透過する拡散系を含むが、これらに限定されない。生成物を含有するリポソームは、例えば、（ＤＥ３，２１８，１２１、Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８−３６９２（１９８５）、Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０−４０３４（１９８０）、ＥＰ５２，３２２、ＥＰ３６，６７６、ＥＰ８８，０４６、ＥＰ１４３，９４９、ＥＰ１４２，６４１、ＪＰ８３−１１８００８、米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号、およびＥＰ１０２，３２４）などの方法として知られる方法により調製され得る。
代替的にまたは加えて、組成物は、本明細書で開示されるスイッチが吸収されているか、またはカプセル化されている、膜、スポンジ、または他の好適な材料の影響される領域への移植を介して局所的に投与され得る。移植デバイスが使用される場合、デバイスは、任意の好適な組織または器官に移植され得、スイッチ、核酸、または本明細書で開示されるベクターの送達は、急速投与を介して、または連続的投与を介して、または連続的注入を使用したカテーテルを介して、直接デバイスを通る。
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む医薬組成物（例えば、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体、またはそのＣＤ１９結合断片を含むＣＡＲ−ＥＣ、ならびに／または本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体を含むＣＡＲ−ＥＣ）は、例えば、ドライパウダーなどの吸入のために調剤され得る。吸入溶液もまた、エアロゾル送達のための液化性噴霧剤に調剤され得る。なお別の製剤では、溶液は噴霧され得る。肺投与のための追加の医薬組成物は、例えば、化学的に修飾されたタンパク質の肺送達を開示するＷＯ９４／２００６９に記載されるものを含む。肺送達のために、粒子サイズは、遠位の肺への送達のために好適であるべきである。例えば、粒子サイズは、１μｍ〜５μｍであり得るが、しかしながら、例えば、それぞれの粒子がかなり多孔性である場合、より大きな粒子が使用され得る。
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチ（例えば、ヒト化された抗ＣＤ１９ＣＡＲ−ＥＣスイッチ）を含有するある特定の製剤は、経口的に投与され得る。この様式で投与される製剤は、タブレットおよびカプセルなどの固体製剤の化合において習慣的に使用されるこれらの担体を用いてか、または用いずに調剤され得る。例えば、カプセルは、消化管内の、バイオアベイラビリティが最大化され、かつプレシステマティック分解が最小化される時点で、製剤の活性部分を放出するように設計され得る。追加の薬剤が、選択的結合剤の吸収を促進するために含まれ得る。希釈剤、風味付け、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤、および結合剤もまた、用いられ得る。
別の調製は、タブレットの製造に好適である非毒性賦形剤との混合物内の、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチ（例えば、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体を含む、ヒト化された抗ＣＤ１９ＣＡＲ−ＥＣおよび／またはＣＡＲ−ＥＣなどの抗ＣＤ１９ＣＡＲ−ＥＣ）の有効量に関与し得る。滅菌水または別の好適なビヒクル内でタブレットを溶解することによって、溶液は、単位服用量で調製され得る。好適な賦形剤は、カルシウムカルボネート、ナトリウムカルボネートもしくは炭酸水素、ラクトース、またはリン酸カルシウムなどの不活性希釈剤、あるいはデンプン、ゼラチン、またはアカシアなどの結合剤、あるいはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクなどの潤滑剤を含むが、これらに限定されない。
好適および／または好ましい薬学的製剤は、意図される投与経路、送達フォーマット、および望ましい用量に依存して、本開示および製剤技術の一般知識の観点で決定され得る。投与方法に関係なく、有効用量は、患者の体重、体表面積、または器官サイズに従って計算され得る。本明細書で記載される製剤のそれぞれに関与する治療のために好適な用量を決定するための計算のさらなる精製は、当該技術分野のルーティンで行われ、当該技術分野のルーティンで実施されるタスクの範囲内である。好適な用量は、好適な用量応答データの使用を通して確認され得る。
Ｖ．標的
標的細胞上で細胞表面分子と相互作用するキメラ受容体およびキメラ受容体スイッチが、本明細書で開示される。一般に、エフェクター細胞および標的細胞のスイッチへの結合は、標的細胞を、標的細胞上で効果を有するエフェクター細胞の活性のために十分近いエフェクター細胞の近位に移動させる。
いくつかの実施形態では、標的細胞とエフェクター細胞との間の近さは、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９７またはＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０（それぞれは参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に開示される方法に従って、最適化される。
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤを標的化部分に結合させる任意のリンカーのサイズは、標的細胞とエフェクター細胞との間の近さを最適化させるために、その長さを増加または減少させることによって修飾され得る。さらに、標的化部分上のＣＡＲ−ＩＤの位置は、標的細胞とエフェクター細胞との間の近さを最適化させるために変動し得る。
様々な実施形態では、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）および標的細胞が、スイッチに結合される場合、Ｔ細胞は、標的細胞上で細胞傷害性効果を有する免疫応答を生じる。
スイッチは、ＣＤ１９を発現する複数の標的細胞と相互作用し得る。標的細胞は、感染した細胞であり得る。標的細胞は、病原的に感染した細胞であり得る。標的細胞は、病気の細胞であり得る。標的細胞は、遺伝子的に修飾された細胞であり得る。標的細胞は、宿主細胞ではあり得ない。非細胞標的上の分子と相互作用するＣＡＲ−ＥＣスイッチが、さらに本明細書で開示される。非細胞標的は、ウィルスまたはその部分であり得る。非細胞標的は、細胞の断片であり得る。非細胞標的は、細胞外マトリクス構成成分またはタンパク質であり得る。
標的細胞は、組織から誘導され得る。組織は、脳、食道、乳房、結腸、肺、グリア、卵巣、子宮、精巣、前立腺、消化管、膀胱、肝臓、
胸腺、骨および皮膚から選択され得る。標的細胞は、１つ以上の内分泌腺から誘導され得る。代替的に、または加えて、標的細胞は、１つ以上の内分泌腺から誘導され得る。内分泌腺は、リンパ腺、
脳下垂体、甲状腺、副甲状腺、膵臓、生殖腺または
松果腺であり得る。
標的細胞は、幹細胞、多能性細胞、造血性幹細胞または前駆体細胞から選択され得る。標的細胞は、循環細胞であり得る。標的細胞は、免疫細胞であり得る。
標的細胞は、癌幹細胞であり得る。標的細胞は、癌細胞であり得る。癌細胞は、組織から誘導され得る。組織は、非限定的な例として、脳、食道、乳房、結腸、肺、グリア、卵巣、子宮、精巣、前立腺、消化管、膀胱、肝臓、甲状腺および皮膚から選択され得る。癌細胞は、骨から誘導され得る。癌細胞は、血から誘導され得る。癌細胞は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、血小板、白血球、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球、造血性幹細胞または内皮細胞前駆体から誘導され得る。癌細胞は、ＣＤ１９陽性Ｂリンパ球から誘導され得る。癌細胞は、幹細胞から誘導され得る。癌細胞は、多能性細胞から誘導され得る。癌細胞は、１つ以上の内分泌腺から誘導され得る。内分泌腺は、リンパ腺、脳下垂体、甲状腺、副甲状腺、膵臓、生殖腺または松果腺であり得る。
標的細胞は、幹細胞、多能性細胞、造血性幹細胞または前駆体細胞から選択され得る。標的細胞は、循環細胞であり得る。標的細胞は、免疫細胞であり得る。
標的細胞は、癌幹細胞であり得る。標的細胞は、癌細胞であり得る。癌細胞は、組織から誘導され得る。組織は、非限定的な例として、脳、食道、乳房、結腸、肺、グリア、卵巣、子宮、精巣、前立腺、消化管、膀胱、肝臓、甲状腺および皮膚から選択され得る。癌細胞は、骨から誘導され得る。癌細胞は、血から誘導され得る。癌細胞は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、血小板、白血球、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球、造血性幹細胞または内皮細胞前駆体から誘導され得る。癌細胞は、ＣＤ１９陽性Ｂリンパ球から誘導され得る。癌細胞は、幹細胞から誘導され得る。癌細胞は、多能性細胞から誘導され得る。癌細胞は、１つ以上のから誘導され得る。内分泌腺は、リンパ腺、脳下垂体、甲状腺、副甲状腺、膵臓、生殖腺または松果腺であり得る。
癌細胞は、ＣＤ１９陽性細胞であり得る。癌細胞は、ＣＤ１９陽性Ｂリンパ球であり得る。癌細胞、Ｈｅｒ２陽性細胞であり得る。Ｈｅｒ２陽性細胞は、Ｈｅｒ２陽性乳癌細胞であり得る。Ｈｅｒ２陽性細胞は、Ｈｅｒ２陽性膵臓癌細胞であり得る。癌細胞は、ＢＣＭＡ陽性細胞であり得る。癌細胞は、ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫細胞であり得る。癌細胞は、ＣＳ１陽性細胞であり得る。ＣＳ１陽性細胞は、多発性骨髄腫細胞であり得る。癌細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性細胞であり得る。ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性細胞は、神経膠芽細胞腫細胞であり得る。癌細胞は、ＣＤ２０陽性細胞であり得る。癌細胞は、ＣＤ２２陽性細胞であり得る。癌細胞は、ＣＤ３３陽性細胞であり得る。ＣＤ３３陽性細胞は、急性骨髄性白血病細胞であり得る。癌細胞は、ＣＤ１２３陽性細胞であり得る。ＣＤ１２３陽性細胞は、急性骨髄性白血病細胞であり得る。癌細胞は、ＣＬＬ１陽性細胞であり得る。ＣＤ１２３陽性細胞は、急性リンパ性白血病細胞であり得る。ＣＬＬ１陽性細胞は、急性骨髄性白血病細胞であり得る。癌細胞は、（ｉ）ＣＤ３３陽性、（ｉｉ）ＣＤ１２３陽性、（ｉｉｉ）ＣＬＬ１陽性、または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）のうちの２つ以上の組み合わせである急性骨髄性白血病細胞であり得る。
細胞表面分子は、抗原であり得る。抗原は、細胞上の表面抗原または細胞表面マーカーの少なくとも一部分であり得る。抗原は、細胞上の受容体または共受容体であり得る。抗原は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）によって結合され、Ｔ細胞受容体に提示され得る、分子または分子断片を指し得る。「抗原」という用語はまた、免疫原を指し得る。免疫原は、対照にそれ自体で注射された場合、適応性免疫応答を誘発し得る。免疫原は、それ自体で免疫応答を含み得る。抗原は、スーパー抗原、Ｔ依存性抗原またはＴ−非依存性抗原であり得る。抗原は、外来性抗原であり得る。外来性抗原は、例えば、吸入、接種、または注射によって、外から体に入る典型的には抗原である。いくつかの抗原は、外来性抗原として始まり得、後に内在性（例えば、細胞内ウィルス）になる。抗原は、内在性抗原であり得る。内在性抗原は、通常の細胞代謝の結果として、または病原性感染（例えば、ウィルス性、細菌性、真菌、寄生虫）のために、細胞内で産生されている抗原であり得る。抗原は、自己抗原であり得る。自己抗原は、特異性自己免疫疾患を罹患している性患者の免疫系によって認識されるタンパク質（および時折ＤＮＡまたはＲＮＡ）の通常のタンパク質または複合体であり得る。これらの抗原は、通常の条件下で、免疫系の標的であるべきではないが、遺伝子的および／または環境的因子により、かかる抗原に対する通常免疫学的耐性は、これらの患者では呈されない。抗原は、呈されるか、または状態または疾患のために、過剰発現され得る。状態または疾患は、癌または白血病であり得る。状態は、炎症性疾患または状態であり得る。状態または疾患は、代謝疾患であり得る。状態は、遺伝子障害であり得る。
細胞表面分子は、腫瘍抗原として名づけられている抗原であり得る。腫瘍抗原またはネオ抗原は、腫瘍細胞の表面上のＭＨＣ ＩまたはＭＨＣ ＩＩ分子によって呈される抗原であり得る。これらの抗原は時折、腫瘍細胞によって呈されるが、通常の細胞によっては絶対に呈されない。この場合、それらは腫瘍特異性抗原（ＴＳＡｓ）と呼ばれ、一般に、腫瘍特異性変異から生じる。腫瘍細胞および通常の細胞によって呈される抗原がより一般的であり、それらは腫瘍関連抗原（ＴＡＡｓ）と呼ばれる。これらの抗原を認識する細胞傷害性Ｔリンパ球は、それらが増殖するか、または転移する前に、腫瘍細胞を破壊し得る。腫瘍抗原は、例えば、それらがＢ細胞によって認識され得る変異受容体の形態で、腫瘍の表面上にあり得る。別様に明記されない限り、「腫瘍抗原」「腫瘍特異性抗原」および「腫瘍と関連する抗原」という用語は、本明細書で交換可能に使用される。
細胞表面分子は、受容体であり得る。受容体は、細胞外受容体であり得る。受容体は、細胞表面受容体であり得る。非限定的な例として、受容体は、ホルモン、神経伝達物質、サイトカイン、増殖因子または細胞認識分子に結合し得る。受容体は、膜貫通受容体であり得る。受容体は、酵素連結受容体であり得る。受容体は、Ｇ−タンパク質結合受容体（ＧＰＣＲ）であり得る。受容体は、増殖因子受容体であり得る。非限定的な例として、増殖因子受容体は、上皮性増殖因子受容体、線維芽細胞増殖因子受容体、血小板誘導増殖因子受容体、神経増殖因子受容体、形質転換増殖因子受容体、骨形態形成タンパク質増殖因子受容体、肝細胞増殖因子受容体、血管性内皮増殖因子受容体、幹細胞因子受容体、インスリン増殖因子受容体、ソマトメジン受容体、エリスロポエチン受容体およびホモログ、ならびにそれらの断片から選択され得る。受容体は、ホルモン受容体であり得る。受容体は、インスリン受容体であり得る。非限定的な例として、受容体は、エイコサノイド受容体、プロスタグランジン受容体、エストロゲン受容体、濾胞刺激ホルモン受容体、プロゲステロン受容体、増殖ホルモン受容体、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体、それらのホモログおよびそれらの断片から選択され得る。受容体は、アドレナリン性受容体であり得る。受容体は、インテグリンであり得る。受容体は、Ｅｐｈ受容体であり得る。受容体は、黄体化ホルモン受容体であり得る。細胞表面分子は、黄体化ホルモン受容体に少なくとも約５０％相同であり得る。受容体は、免疫受容体であり得る。非限定的な例として、免疫受容体は、パターン認識受容体、トール様受容体、ＮＯＤ様受容体、キラー活性化受容体、キラー阻害剤受容体、Ｆｃ受容体、Ｂ細胞受容体、補体受容体、ケモカイン受容体およびサイトカイン受容体から選択され得る。非限定的な例として、サイトカイン受容体は、インターロイキン受容体、インターフェロン受容体、形質転換増殖因子受容体、腫瘍壊死因子受容体、コロニー刺激因子受容体、それらのホモログおよびそれらの断片から選択され得る。受容体は、受容体キナーゼであり得る。受容体キナーゼは、チロシンキナーゼ受容体であり得る。受容体キナーゼは、セリンキナーゼ受容体であり得る。受容体キナーゼは、スレオニンキナーゼ受容体であり得る。非限定的な例として、受容体キナーゼは、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＰＩ３Ｋ、タンパク質キナーゼＡ、タンパク質キナーゼＢ、タンパク質キナーゼＣ、ＡＫＴ、ＡＭＰＫ、ホスホリパーゼ、それらのホモログおよびそれらの断片から選択されるシグナル伝達タンパク質を活性化し得る。受容体キナーゼは、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路を活性化し得る。受容体キナーゼは、Ｊａｋ、ＳｔａｔまたはＳｍａｄを活性化し得る。
細胞表面分子は、非受容体細胞表面タンパク質であり得る。細胞表面分子は、分化タンパク質のクラスターであり得る。非限定的な例として、細胞表面分子は、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１５、ＣＤ２４、ＣＤ１１４、ＣＤ１８２、ＣＤ１４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ９１、ＣＤ１６、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ８、ＣＤ３８、ＣＤ２２、ＣＤ６１、ＣＤ５６、ＣＤ３０、ＣＤ１３、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、それらの断片、およびそれらのホモログから選択され得る。
細胞表面分子は、ペプチドを含まない分子であり得る。細胞表面分子は、脂質を含み得る。細胞表面分子は、脂質部分または脂質群を含み得る。脂質部分は、ステロールを含み得る。脂質部分は、脂肪酸を含み得る。抗原は、糖脂質を含み得る。細胞表面分子は、炭水化物を含み得る。
（ａ）酵母転写因子ペプチドからのペプチドを含むキメラ抗原受容体結合ペプチド性抗原と、（ｂ）標的化ポリペプチドとを含む、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、本明細書で開示される。酵母転写因子ペプチドは、ＧＣＮ４ペプチドであり得る。標的化ポリペプチドは、標的化抗体または抗体断片を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗体の重鎖を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗体の軽鎖を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗体のＦａｂを含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ１抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ１２３抗体、およびそれらの断片から選択され得る。
（ａ）親水性標的ペプチド（ＨＴＰ）タグを含む領域に結合するＣＡＲと、（ｂ）標的化ポリペプチドとを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが、さらに本明細書で開示される標的化ポリペプチドは、標的化抗体または抗体断片を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗体の重鎖を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗体の軽鎖を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗体のＦａｂを含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片を含み得る。標的化抗体または抗体断片は、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ１抗体、抗ＣＤ３３抗体、および抗ＣＤ１２３抗体、およびそれらの断片から選択され得る。
標的（例えば、ＣＤ１９）は、標的細胞の細胞表面上で、呈されるか、または過剰発現され得る。標的（例えば、ＣＤ１９）は、呈されるか、または疾患または状態のために過剰発現され得る。疾患または状態は、癌または白血病であり得る。疾患または状態は、炎症性疾患または状態であり得る。疾患または状態は、代謝疾患であり得る。疾患または状態は、遺伝子傷害であり得る。
ＶＩ．キメラ受容体
キメラ受容体を発現する細胞の活性調節する、キメラ受容体エフェクター細胞スイッチ（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチが、本明細書で開示される。本明細書で使用される、「キメラ受容体」および「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）という用語は、「キメラ受容体エフェクター細胞」および「キメラ抗原受容体エフェクター細胞」という用語であるように、交換可能に使用される（キメラ「抗原」受容体という用語が、細胞外部分が、抗体またはその抗原結合部分であることを意味している事実にも関わらず）。キメラ抗原受容体は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、細胞外ドメイン、ヒンジ、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み得る。したがって、「キメラ抗原受容体」および「ＣＡＲ」という用語は、いくつかの実施形態では、抗体細胞外ドメインを含まないキメラ受容体を包含し、用語は、いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分を含むか、またはそれから成る細胞外ドメインを含むキメラ受容体を包含する。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞の活性を調節するＣＡＲ−ＥＣスイッチが、本明細書で開示される。本開示は、キメラ抗原受容体、ＣＡＲ−ＥＣスイッチによって調節される活性を提供する。キメラ抗原受容体は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み得る。細胞外ドメインは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ＧＣＮ４、Ｆｌａｇ、Ｋ４、もしくはＥ４ペプチド、またはＦＩＴＣなどの小分子）に結合し得る。
ＣＡＲは、免疫原性をヒトに減少するためにヒト化され得る。ＣＡＲは、ヒト化される細胞外ドメインを含み得る。ヒト化は、ＣＡＲの免疫原性を、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに対する細胞外ドメインの特異性および親和性を保持しながらヒトに減少し得る。ＣＡＲは、表１３に提供されるＣＡＲ配列のうちのいずれか１つのヒト化されたバージョンであり得るか、または配列番号２７０〜２８９のうちのいずれか１つのヒト化されたバージョンであり得る。ＣＡＲは、表１３に提供されるＣＡＲ配列のうちのいずれか１つと、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一であるヒト化された配列を含み得るか、または配列番号２７０〜２８９と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一であるヒト化された配列を含み得る。
細胞外ドメインは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ（ＣＡＲ−抗体）のＣＡＲ−ＩＤに結合する抗体または抗体断片を含み得る。抗体または抗体断片は、ヒト化され得る。ＣＡＲ抗体は、抗体の少なくとも一部分を含み得る。いくつかの例では、ＣＡＲ抗体は、全長抗体ではない。ＣＡＲ抗体は、免疫グロブリンまたはその断片の少なくとも一部分を含み得る。免疫グロブリンまたはその断片は、ｓｃＦｖ、ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆｃ、Ｆ（ａｂ’）２、ｐＦｃ’、ナノボディ、アフィボディ、ＤＡＲＰｉｎ、二重特異性抗体、ラクダ科、操作されたＴ細胞受容体およびモノボディから成る群から選択され得る。免疫グロブリンは、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から成る群から選択され得る。かかる免疫グロブリンまたはそれらの断片は、ヒト化され得る。ＣＡＲ抗体は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部分を含み得る。部分は、抗原結合部分であり得る。ｓｃＦｖまたはヒト化されたｓｃＦｖは、一般構造軽鎖リンカー重鎖を含むか、またはそれから成り得る。ｓｃＦｖまたはヒト化されたｓｃＦｖは、一般構造重鎖リンカー軽鎖を含むか、またはから成り得る。ヒト化されたｓｃＦｖは、ヒト免疫グロブリンフレームワークへの非ヒト（例えば、マウス）ＣＤＲ移植と共に、ヒト化されたＶＨ（可変重鎖）配列を含み得る。フレームワークは、ＩＧＨＪ４−５９であり得る。ヒト化されたＶＨ配列は、野生型ＩＧＨＪ４−５９フレームワークに移植されたマウスＣＤＲを含み得る。ヒト化されたＶＨ配列は、１つ以上のフレームワーク変化（すなわち、置換などのアミノ酸修飾）を含む修飾されたＩＧＨＪ４−５９フレームワークへ移植されたマウスＣＤＲを含み得る。フレームワーク変化は、位置７１（Ｋａｂａｔ Ｈ７１）、位置７３（Ｋａｂａｔ Ｈ７３）、位置９３（Ｋａｂａｔ Ｈ９０）、位置９４（Ｋａｂａｔ Ｈ９１）、またはかかる位置の組み合わせであり得る。ヒト化されたｓｃＦＶは、加えてまたは代替的に、ヒト免疫グロブリン軽鎖フレームワークに移植された非ヒト（例えば、マウス）ＣＤＲを有する、ヒト化されたＶＬ（可変軽鎖）配列を含み得る。軽鎖フレームワークは、ＩＧＬＶ７−４６フレームワークであり得る。ヒト化されたＶＬ配列は、野生型ＩＧＬＶ７−４６フレームワークへ移植されたマウスＣＤＲを含み得る。ヒト化されたＶＬ配列は、１つ以上のフレームワーク変化（すなわち、置換などのアミノ酸修飾）を含む修飾されたＩＧＬＶ７−４６フレームワークへ移植されたマウスＣＤＲを含み得る。ＣＡＲ抗体は、ヒト、完全なヒト、ヒト化され、ヒト操作された、非ヒトおよび／またはキメラ抗体であり得る。
ＣＡＲの細胞外ドメインは、抗ＧＣＮ４抗体またはそのＧＣＮ４結合部分を含み得る。細胞外ドメインは、ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖ（例えば、高親和性変異抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖであり、かつＺａｈｎｄ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，（２００４），Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９、１８８７０−１８８７７（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載されるクローン ５２ＳＲ４）を含み得る。ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦＶ（例えば、クローン５２ＳＲ４のヒト化されたバージョン）は、ヒト化された軽鎖、ヒト化された重鎖、またはヒト化された軽鎖およびヒト化された重鎖を含み得る。ヒト化された抗ＧＣＮ４（例えば、クローン５２ＳＲ４のヒト化されたバージョン）は、ヒト免疫グロブリンフレームワークへ移植された非ヒト（例えば、マウス）ＣＤＲを有するヒト化されたＶＨ（可変重鎖）配列を含み得る。フレームワークは、ＩＧＨＪ４−５９フレームワークであり得る。ヒト化されたＶＨ配列は、野生型ＩＧＨＪ４−５９フレームワークへ移植された抗ＧＣＮ４抗体からのマウスＣＤＲを含み得る。ヒト化されたＶＨ配列は、野生型ＩＧＨＪ４−５９フレームワークへ移植された５２ＳＲ４からのＣＤＲを含み得る。ヒト化されたＶＨ配列は、１つ以上のフレームワーク変化（すなわち、置換、欠失または付加などのアミノ酸修飾）を含む修飾されたＩＧＨＪ４−５９フレームワークへ移植された５２ＳＲ４抗体からのＣＤＲを含み得る。フレームワーク変化は、ＣＤＲ−Ｈ２立体構造、ＣＤＲ−Ｈ３立体構造に影響し、ＶＨドメインの内部パッキングを改善し、かつ／あるいは結合親和性を改善し得る。フレームワーク変化は、位置７１（Ｋａｂａｔ Ｈ７１）、位置７３（Ｋａｂａｔ Ｈ７３）、位置９３（Ｋａｂａｔ Ｈ９０）、位置９４（Ｋａｂａｔ Ｈ９１）、またはかかる位置の組み合わせであり得る。ヒト化された抗ＧＣＮ４（例えば、クローン５２ＳＲ４のヒト化されたバージョン）は、加えてまたは代替的に、免疫グロブリン軽鎖フレームワークへ移植された非ヒト（例えば、マウス）ＣＤＲを有する、ヒト化されたＶＬ（可変軽鎖）配列を含み得る。軽鎖フレームワークは、ＩＧＬＶ７−４６フレームワークであり得る。ヒト化されたＶＬ配列は、野生型ＩＧＬＶ７−４６フレームワークへ移植された抗ＧＣＮ４抗体からのマウスＣＤＲを含み得る。ヒト化されたＶＨ配列は、野生型ＩＧＬＶ７−４６フレームワークへ移植された５２ＳＲ４抗体からのＣＤＲを含み得る。ヒト化されたＶＨ配列は、１つ以上のフレームワーク変化（すなわち、置換、欠失または付加などのアミノ酸修飾）を含む修飾されたＩＧＬＶ７−４６フレームワークへ移植された５２ＳＲ４からのＣＤＲを含み得る。フレームワーク変化は、脱アミノへの低傾向を有する配列をもたらし得、ＣＤＲ立体構造に影響し、内部パッキングを改善し、かつ／あるいは結合親和性を改善し得る。フレームワーク変化は、本明細書で示される位置を含む任意の位置、またはかかる位置の組み合わせであり得る。ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦＶは、配列番号１６９〜１７４から選択されるアミノ酸配列によってコードされ得る。ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦＶは、配列番号１７５〜１８０から選択されるポリヌクレオチド配列によってコードされ得る。ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦＶは、配列番号１６９〜１７４のうちのいずれか１つから選択される配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列によってコードされ得る。ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦＶは、配列番号１７５〜１８０のうちのいずれか１つから選択される配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ得る。
ＣＡＲの細胞外ドメインは、表１４〜１６で提供されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つ、または配列番号２９０〜３８８、および４２３から選択されるいずれか１つの配列によってコードされた、ヒト化されたｓｃＦｖを含み得る。ＣＡＲの細胞外ドメインは、表１４〜１６のうちのいずれか１つで提供される配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列か、または配列番号２９０〜３８８、および４２３のうちのいずれか１つと、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列によってコードされたヒト化されたｓｃＦｖを含み得る。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは、配列番号３２２と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは、配列番号３２２と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列から成る。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは、配列番号３２２を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは、配列番号３２２から成る。
ＣＡＲは、表１７に提供されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つによってコードされ得る。ＣＡＲは、配列番号３８９〜３９７のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列によってコードされ得る。ＣＡＲは、表１７に提供されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つと、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列によってコードされ得る。ＣＡＲは、配列番号３８９〜３９７のうちのいずれか１つと、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列によってコードされ得る。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４１１のアミノ酸配列によってコードされ得る。特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４１２のポリヌクレオチド配列によってコードされ得る。
ＣＡＲ−抗体は、約０．０１ｐＭ、約０．０２ｐＭ、約０．０３ｐＭ、約０．０４ｐＭ、０．０５ｐＭ、約０．０６ｐＭ、約０．０７ｐＭ、約０．０８ｐＭ、約０．０９ｐＭ、約０．１ｐＭ、約０．２ｐＭ、０．３ｐＭ、約０．４ｐＭ、約０．５ｐＭ、約０．６ｐＭ、約０．７ｐＭ、約０．８ｐＭ、約０．９ｐＭもしくは約１ｐＭ、約２ｐＭ、約３ｐＭ、約４ｐＭ、約５ｐＭ、約６ｐＭ、約７ｐＭ、約８ｐＭ、約９ｐＭ、約１０ｐＭ、約０．０１ｎＭ、約０．０２ｎＭ、約０．０３ｎＭ、約０．０４ｎＭ、約０．０５ｎＭ、約０．０６ｎＭ、約０．０７ｎＭ、約０．０８ｎＭ、約０．０９ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、約１ｎＭ、約２ｎＭ、約２．５ｎＭ、約３ｎＭ、約４ｎＭ、約５ｎＭ、約６ｎＭ、約７ｎＭ、約８ｎＭ、約９ｎＭ、約１０ｎＭ、約１２ｎＭ、約１４ｎＭ、約１６ｎＭ、約１８ｎＭ、約２０ｎＭ、約２２ｎＭ、約２４ｎＭ、約２６ｎＭ、約２８ｎＭ、または約３０ｎＭ未満のＣＡＲ−ＩＤに対する結合親和性を有し得る。
細胞外ドメインは、抗フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）抗体またはそのＦＩＴＣ−結合部分を含み得る。抗ＦＩＴＣ抗体は、抗ＦＩＴＣ ｓｃＦｖであり得る。抗ＦＩＴＣ ｓｃＦｖは、４−４−２０、４Ｄ５Ｆｌｕ、４Ｍ５．３およびＦＩＴＣ−Ｅ２から選択され得る。抗ＦＩＴＣ ｓｃＦｖは、配列番号８７〜９０から選択される配列によってコードされ得る。
ＣＡＲ−抗体は、合成（非天然発生）ペプチドを認識し得る。ＣＡＲ−抗体は、ＦＬＡＧ（登録商標）タグまたはその断片を認識する抗体または抗体断片を含み得る。ＣＡＲ−抗体は、酵母転写因子ＧＣＮ４またはその断片を認識する抗体または抗体断片を含み得る。ＣＡＲ−抗体は、抗ＨＴＰ抗体またはその断片を含み得る。
膜貫通ドメインおよび／または細胞内ドメインは、細胞質シグナル伝達ドメイン少なくとも一部分を含み得る。膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通配列を含み得る。膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通配列を含み得る。膜貫通ドメインは、配列番号３９８または配列番号４１７と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含み得る。細胞内ドメイン、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、および４−１ＢＢを含む群から選択されるシグナル伝達分子の少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、（ｉ）配列番号４２０のＣＤ３ζ配列、（ｉｉ）配列番号４１８のＣＤ２８配列、（ｉｉｉ）配列番号４１９の４−１ＢＢ配列、もしくは（ｉ）および（ｉｉ）、（ｉ）および（ｉｉｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）の組み合わせ、または（ｉ）〜（ｉｉｉ）の全てを含み得る。細胞内ドメインは、配列番号４２０のＣＤ３ζ配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含み得る。細胞内ドメインは、配列番号４１８のＣＤ２８配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含み得る。細胞内ドメインは、配列番号４１９の４−１ＢＢ配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含み得る。細胞内ドメインは、Ｆｃ受容体またはその部分を含み得る。Ｆｃ受容体またはその部分は、ＣＤ１６またはその部分であり得る。シグナル伝達分子は、ＣＤ３ζを含み得る。シグナル伝達分子は、ＣＤ２８を含み得る。シグナル伝達分子は、４−１ＢＢを含み得る。細胞内ドメインは、ＣＤ３ζの少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、ＣＤ２８の少なくとも一部分を含み得、細胞内ドメインは、４−１ＢＢの少なくとも一部分を含み得、細胞内ドメインは、ＯＸ−４０の少なくとも一部分を含み得、細胞内ドメインは、ＣＤ３０の少なくとも一部分を含み得、細胞内ドメインは、ＣＤ４０の少なくとも一部分を含み得、細胞内ドメインは、ＣＤ２の少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、ＣＤ２７の少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、ＰＤ−１の少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、ＩＣＯＳの少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）の少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、ＣＤ７の少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、リンホトキシン、誘導性発現と同一である少なくとも一部分を含み、ヘルペスウィルス侵入媒介物に対するヘルペスウィルス糖タンパク質Ｄ、Ｔリンパ球（ＬＩＧＨＴ）上で発現される受容体と競合し得る。細胞内ドメインは、ＮＫＧ２Ｃの少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、Ｂ７−Ｈ３の少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、１つ以上のシグナル伝達分子からの細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、２つ以上の細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部分を含み得る。２つ以上の細胞質シグナル伝達ドメインは、２つ以上の異なるシグナル伝達分子からであり得る。細胞内ドメインは、３つ以上の細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、４つ以上の細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、１つ以上のシグナル伝達分子に結合するリガンドの少なくとも一部分を含み得る。細胞内ドメインは、ＣＤ８３に結合するリガンドの少なくとも一部分を含み得る。
ＣＡＲは、ヒンジを含み得る。ヒンジは、膜貫通ドメインと細胞外ドメインとの間に位置し得る。ヒンジは、膜貫通ドメインの部分を含み得る。ヒンジは、細胞外ドメインの部分を含み得る。ヒンジは、長さ、配向、幾何学または柔軟性を、最適な免疫シナプスに必要なＣＡＲに提供し得る。最適な免疫シナプスは、ＣＡＲ−ＥＣと標的細胞との間に、最適な距離および／または配向を提供し得る。最適な免疫シナプスは、標的細胞に対して最適なおよび／または最大の細胞毒性を提供し得る。ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）の例１５に示されるように、ＦＭＣ６３ Ｆａｂの境界に結合する抗原の近位に移植されたＦＩＴＣを有する、ＣＤ１９標的化スイッチは、Ｃ−末端で移植されたＦＩＴＣを有するスイッチより優位である。抗ＣＤ１９抗体ＦＭＣ６３のエピトープおよびＣＤ１９抗原の対応する構造が知られていないにも関わらず、これは、標的細胞とｓＣＡＲ−Ｔ細胞との間の増加した距離のためであり得る。天然のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって形成される生理的免疫シナプスでは、細胞を呈するＴ細胞と抗原との間の距離は、およそ１５０Åである。この距離は、シグナル伝達分子を脱リン酸化し、かつＴ細胞活性を下法調節するために作用するシナプスからのＣＤ４５およびＣＤ１４８などの抑制性ホスファターゼを、立体的に除外するのに決定的である。Ｃ末端スイッチ（Ｆａｂの長さ分のＮ末端スイッチより６５Å長い）によって寄与されるより長いシナプスは、これらの抑制性ホスファターゼを立体的に除外できない可能性が高く、より少ない生産性のｓＣＡＲシグナル伝達をもたらす可能性が高い。したがって、本明細書で開示される方法は、スイッチおよび／またはＣＡＲ細胞外ドメインの長さを調節することによって、免疫シナプスの距離が約１００Å、約１５０Å、約１７５Å、または約２００Å以下になるように、免疫シナプスの距離を調節することを含み得る。
いくつかの実施形態では、最適な免疫シナプスは、例えば、約１００Å、約１５０Å、約１７５Å、または約２００Å以下であり得る。
ヒンジは、ＣＤ２８または４−１ＢＢ、またはＣＤ３の構成要素などのＴ細胞に対して特異性である内在性膜貫通タンパク質の細胞外ドメインから誘導され得る。ヒンジは、合成的に誘導された配列（スイッチ設計に関連するリンカーに関して列挙されるものなど）から誘導され得る。ヒンジは、ヒトタンパク質から誘導され得る。ヒンジは、膜貫通ドメインと近接し得る。このヒンジは、ｓｃＦｖ）の重鎖定常領域１の部分を含み得る。このヒンジは、ｓｃＦｖ）の軽鎖定常領域１の部分を含み得る。
ヒンジの長さは、約１個のアミノ酸〜約１０個のアミノ酸であり得る。ヒンジの長さは、１個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸であり得る。ヒンジの長さは、約１個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸であり得る。ヒンジの長さは、約１個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸であり得る。ヒンジの長さは、１０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸であり得る。ヒンジの長さは、約１２個のアミノ酸であり得る。ヒンジの長さは、約４５個のアミノ酸であり得る。
ヒンジは、長いヒンジであり得る。長いヒンジは、約２０〜約２００個のアミノ酸、約２０〜約１００個のアミノ酸、約３０〜約１００個のアミノ酸、約４０〜約１００個のアミノ酸、または約４５〜約１００個のアミノ酸の長さを有し得る。
ヒンジは、短いヒンジであり得る。短いヒンジは、約１〜約２０個のアミノ酸、約５〜約２０個のアミノ酸、または約１０〜約２０個のアミノ酸の長さを有し得る。
ヒンジは、ＣＤ８タンパク質の部分を含み得る。ＣＤ８タンパク質の部分は、約４個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸であり得る。ＣＤ８タンパク質の部分は、約４５個のアミノ酸であり得る。ヒンジは、免疫グロブリンの部分を含み得る。免疫グロブリンは、ＩｇＧであり得る。免疫グロブリンは、ＩｇＧ４であり得る。ＩｇＧ４は、変異され得る（本明細書でＩｇＧ４ｍと称される）。免疫グロブリンの部分は、約１個のアミノ酸〜約２０個のアミノ酸であり得る。免疫グロブリンの部分は、約１２個のアミノ酸であり得る。
ヒンジは、柔軟性であり得る。ヒンジは、構造化され得る。
ペプチド配列（例えば、本明細書で開示されるヒンジまたはリンカー）への参照で本明細書で使用される、「柔軟性」という用語は、少しまたは全く知られる二次構造を有さないアミノ酸の直鎖配列を含むペプチド配列を意味する。かかる柔軟性配列は、ｉｎ ｗｈｉｃｈ ねじれ角度またはポリペプチド骨格の結合周りの回転が、多くの異なる配向を占める自由を有する、アミノ酸の直鎖配列を含み得る。いくつかの実施形態では、「柔軟性ヒンジ」への参照は、ヒンジが、様々な結合配向を介してＣＡＲをＣＡＲ−ＩＤに結合することを可能にする柔軟性ペプチド配列を含み、したがって、別様にＣＡＲ細胞外ドメインに結合するＣＡＲ−ＩＤに対して有害であったであろう立体障害を軽減することを意味する。
ペプチド配列（例えば、本明細書で開示されるヒンジまたはリンカー）への参照で本明細書で使用される、「構造化された」という用語は、画定された二次構造を形成するアミノ酸の直鎖配列を含むペプチド配列を意味する。かかる構造化された配列は、ねじれ角度またはポリペプチド骨格の結合周りの回転が、優先性を画定し、限られた数の配向を占めている、アミノ酸の直鎖配列を含み得る。いくつかの実施形態では、構造化されたヒンジは、免疫シナプスを画定し、かつより生産的な配向を見出すエントロピーコストを減少するペプチド配列を含み得る。言い換えると、構造化されたヒンジは、いくつかの実施形態では、柔軟性でないヒンジである。様々な実施形態では、「剛性」および「構造化された」という用語は、ペプチド配列（例えば、本明細書で開示されるヒンジまたはリンカー）への参照で交換可能に使用される。
ヒンジは、配列番号９３〜１０３から選択される配列を含み得る。ヒンジは、配列番号９３〜１０３から選択される配列と、少なくとも約５０％同一である配列を含み得る。ヒンジは、配列番号１６５〜１６８から選択される配列を含み得る。ヒンジは、１６５〜１６８から選択される配列と、少なくとも約５０％同一である配列を含み得る。ヒンジは、配列番号４２１の配列を含み得る。ヒンジは、配列番号４２１と、少なくとも５０％同一である配列を含み得る。ヒンジは、配列番号１６５〜１６８、および４２１から選択されるいずれか１つの配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含み得る。ヒンジ領域を有するＣＡＲは、配列番号１８１〜１８３から選択される配列によってコードされ得る。ヒンジ領域を有するＣＡＲは、配列番号１８１〜１８３から選択される配列と、少なくとも約５０％同一である配列によってコードされ得る。ヒンジは、配列番号１６５から成り得る。ヒンジは、配列番号１６７を含むか、またはそれから成り得る。ヒンジは、配列番号１６８含むか、またはそれから成り得る。配列番号１６８のヒンジはさらに、ｃ末端のＤ残基を含み得る。ヒンジは、配列番号４２１を含むか、またはそれから成り得る。ヒンジは、配列番号１６５、配列番号１６７、配列番号１６８、または配列番号４２１と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも、９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含むか、またはそれから成り得る。
ヒンジは、配列番号１６５、１６７、１６８、または４２１のうちのいずれか１つと同一である配列を含み得、かつヒンジは、配列番号１６６の配列をさらに含み得る。例えば、配列番号１６８のＩｇＧ４ｍヒンジ配列は、Ｃ末端のＤ残基（配列番号１６６）をさらに含み得る。
ＣＡＲは、ＣＡＲ−ＥＣ上で相対的に低レベルで発現され得る。ＣＡＲは、ＣＡＲ−ＥＣ上で相対的に高レベルで発現され得る。ＣＡＲは、１つの細胞につき約２ｘ１０６受容体の細胞密度で発現され得る。ＣＡＲは、１つの細胞につき約０．５ｘ１０６受容体の細胞密度で発現され得る。ＣＡＲは、１つの細胞につき約０．０５ｘ１０６超えの細胞密度で発現され得る。ＣＡＲは、ＥＦ１ａ、ＩＬ−２、ＣＭＶ、およびＣＡＲ発現を増加、または減少するように設計された合成プロモーターから選択されるプロモーターの制御下で発現され得る。プロモーターは、恒常的であり得る。プロモーターは、誘導性であり得る。
いくつかの特定の実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）ｓｃＦｖを含むか、またはそれから成る細胞外ドメイン、（ｂ）ヒンジ、（ｃ）膜貫通ドメイン、および（ｄ）細胞内ドメインを含み、
ａ．ｓｃＦｖが、
ｉ．表１４〜１７で提供されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つによってコードされたｓｃＦｖ、
Ｉｉ．配列番号２９０〜３８８、および４２３のうちのいずれか１つによってコードされたｓｃＦｖから選択され、
ｂ．ヒンジが、
ｉ．ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＧ４ｍヒンジ、ＣＤ２８ヒンジ、およびＣＤ８ヒンジ、
ｉｉ．配列番号１６５、１６７、１６８、および４２１のうちのいずれか１つを含むヒンジ、ならびに
Ｉｉｉ．配列番号１６５、１６７，１６８、および４２１のうちのいずれか１つから成るヒンジから選択され、
ｃ．膜貫通ドメインが、
ｉ．ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはその部分またはＣＤ２８膜貫通ドメインもしくはその部分、
ｉｉ．配列番号３９８および４１７のうちのいずれか１つを含む膜貫通ドメイン、
ｉｉｉ．配列番号３９８および４１７のうちのいずれか１つから成る膜貫通ドメインから選択され、
ｄ．細胞内ドメインが、
Ｉ．ＣＤ３ζシグナル伝達分子を含む細胞内ドメイン、
Ｉｉ．ＣＤ３ζシグナル伝達分子およびＣＤ２８シグナル伝達分子を含む細胞内ドメイン、
Ｉｉｉ．ＣＤ３ζシグナル伝達分子および４−１ＢＢシグナル伝達分子を含む細胞内ドメイン、ならびに
Ｉｖ．ＣＤ３ζシグナル伝達分子、ＣＤ２８シグナル伝達分子、および４−１ＢＢシグナル伝達分子を含む細胞内ドメインから選択される。
いくつかの特定の実施形態では、ＣＡＲは、図２４ＡのコンストラクトＡ〜Ｈから選択される構造を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、図２４ＡのコンストラクトＥに従う構造を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、表１１に記載されるＣＡＲから選択される。ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲは、表１２に記載されるＣＡＲから選択される。ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５のうちのいずれか１つの配列を含む。ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３８９〜３９７のうちのいずれか１つの配列を含む。ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される配列から成る。ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むか、またはそれから成る。ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、および４１６から選択される配列によってコードされる。
多価のＣＡＲ
結合価もまた、ＣＡＲヒンジに操作され得る（図１７Ｃ）。非限定的な例として、一価のスイッチは、ＣＡＲのヒンジ領域で形成するジスフィルドを通して２つのＣＡＲを補充し得る。ヒンジは、一価であると予期されされるＣＤ８誘導ヒンジ（配列番号１６５）であり得る。ヒンジは、ＩｇＧ分子のヒンジ領域から誘導され得る。ＩｇＧ分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４またはＩｇＧ４ｍ（変異）から選択され得る。ＩｇＧ４ヒンジ（配列番号１６７）は、鎖間ジスルフィドに関与し得ないが、代わりにＣＡＲを二量体化しない鎖内ジスルフィド結合を有する。ヒンジは、機能的に一価であると考えられる。ＩｇＧ１およびＩｇＧ４ｍヒンジ（配列番号１６８）は、共有結合性的にヒンジ領域を二量体化する鎖間ジスルフィド結合への関与を可能にする、プロリン変異に対するセリンを含有し得る（図１７）。これらのヒンジは、免疫シナプス（長いＣＤ８誘導ヒンジ対短いＩｇＧ４誘導ヒンジを試験することによる）の距離制約、ならびにＣＡＲおよび／またはスイッチの結合価効果（短いＩｇＧ４誘導ヒンジ対ＩｇＧ４ｍ誘導ＣＡＲを試験することによって）の両方を研究するために使用され得る。他のヒンジは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４分子ＣＨ２および／もしくはＣＨ３、またはそれらの部分、あるいはそれらの組み合わせを含み得る。ヒンジは、ＣＤ２８から誘導され得る。ヒンジは、二量体化し得る。
共ＣＡＲ／ｉＣＡＲ
本明細書で開示されるスイッチ可能なＣＡＲおよびスイッチは、特定の細胞（例えば、疾患細胞）へ免疫応答を標的化し、健康細胞への免疫攻撃を最小化するために、抑制性キメラ抗原受容体（ｉＣＡＲ）−Ｔ細胞スイッチおよびスイッチ可能なｉＣＡＲ−Ｔ細胞を包含し得る。本明細書で開示されるスイッチ可能なＣＡＲおよびスイッチはまた、標的細胞（例えば、疾患細胞）への免疫応答を標的化し、これらの細胞への免疫攻撃を最大化するために、スイッチ可能な共ＣＡＲ−Ｔ細胞を用いた使用のための共刺激キメラ抗原受容体（共ＣＡＲ）Ｔ細胞スイッチを包含し得る。ｉＣＡＲ−Ｔ細胞スイッチおよび共ＣＡＲ−Ｔ細胞スイッチは、ＣＡＲ結合ドメインおよび標的結合ドメインを含む。本明細書で開示される組成物は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を調節するための複数のスイッチを含み得、第１の標的細胞上の第１の抗原およびＣＡＲ−ＥＣ上の第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と相互作用する第１のスイッチ、ならびに第２の標的細胞上の第２の抗原およびＣＡＲ−ＥＣ上の第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と相互作用する第２のスイッチ。複数のスイッチは、既存のＣＡＲ−Ｔ細胞と共に、かつ基準のＣＡＲおよび／または抑制性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）を発現するＣＡＲ−ＥＣと共に使用され得る。複数のスイッチは、既存のＣＡＲ−Ｔ細胞と共に、かつ基準のＣＡＲおよび／または共刺激ＣＡＲ（共ＣＡＲ）を発現するＣＡＲ−ＥＣと共に使用され得る。
本明細書で開示されるスイッチ可能なＣＡＲ−ＥＣ細胞は、第１のスイッチ可能なＣＡＲおよび第２のスイッチ可能なＣＡＲを含み得る。第１のスイッチ可能なＣＡＲは、基準のＣＡＲであり得、かつ第２のスイッチ可能なＣＡＲは、ｉＣＡＲであり得る。第１のスイッチ可能なＣＡＲは、基準のＣＡＲであり得、かつ第２のスイッチ可能なＣＡＲは、共ＣＡＲであり得る。
ｉＣＡＲは、抑制性シグナルをＣＡＲ−Ｔ細胞に提供するキメラ受容体を含み得る。ｉＣＡＲは、ＰＤ−１またはＣＴＬＡ−４から選択される細胞質ドメインを含み得る。ｉＣＡＲは、基準の（活性化）ＣＡＲと同じ細胞によって発現され得る。ｉＣＡＲの活性は、基準のＣＡＲシグナルおよび／または活性を下げる。ｉＣＡＲの特異性は、ＣＡＲ−Ｔ細胞活性が所望されない組織を保護するために使用され得る。ｉＣＡＲ活性は、スイッチによって制御され得ず、本明細書で「ｉＣＡＲスイッチ」と称される。同様に、基準のＣＡＲ活性は、第１および／または第２のスイッチによって制御され、本明細書で「ＣＡＲスイッチ」と称される。スイッチ可能なｉＣＡＲ−Ｔ細胞は、基準またはＣＡＲ−Ｔ細胞と共に標的化するのに非安全であり得る抗原の標的化を可能にする。
免疫応答を開始するために、ＣＡＲスイッチは、攻撃される標的細胞（例えば、癌細胞）上の正または「Ａ」抗原と、基準のＣＡＲの活性を通して標的細胞に対して細胞傷害性活性を刺激する基準のＣＡＲとに結合する。通常の組織を保護するために、ｉＣＡＲスイッチは、Ｔ細胞によって回避される細胞（例えば、健康細胞）上の負または「Ｂ」抗原と、ｉＣＡＲのシグナル伝達を通して免疫活性を阻害するｉＣＡＲとに結合する。「Ｂ」抗原は、遍在的に通常組織上で発現されるが、しかしほとんどの悪性細胞内で下方調節する。「Ａ」抗原は、通常の組織に対して悪性細胞内で過剰発現され得る。Ｂ抗原は、タンパク質／細胞接着分子様遺伝子（ＯＰＣＭＬ）に結合するオピオイドであり得る。Ｂ抗原は、大腸癌（ＤＣＣ）内で欠失されるヒアルロニダーゼ２（ＨＹＡＬ２）、およびＳＭＡＲ１から選択され得る。
共ＣＡＲは、共刺激シグナルをＣＡＲ−Ｔ細胞に提供するキメラ受容体を含み得る。共ＣＡＲは、ＣＤ１３７および／またはＣＤ２８から選択される細胞質ドメインを含み得る。共ＣＡＲは、基準の（活性化）ＣＡＲと同じ細胞によって発現され得る。共ＣＡＲの活性は、基準のＣＡＲシグナルおよび／または活性を、促進および／またはそれと共同し得る。共ＣＡＲは、基準のＣＡＲ−Ｔ細胞のみを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞によって生成される標的細胞に向かう細胞毒性と比較して、細胞毒性を標的細胞に向かって増加し得る。共ＣＡＲ活性は、スイッチによって制御され得、本明細書で「共ＣＡＲスイッチ」と称される。同様に、基準のＣＡＲ活性は、第１および／または第２スイッチによって制御され得、本明細書で「ＣＡＲスイッチ」と称される。
非抗体ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、従来のＣＡＲとは対照的に、本明細書で開示されるキメラ抗原受容体は、ＣＡＲ−ＩＤと相互作用する非抗体細胞外ドメインを含み得る。すなわち、細胞外ドメインは、ＣＡＲ−ＩＤと相互作用する非抗体タンパク質または非抗体ペプチドを含み得る。したがって、キメラ抗原受容体は実際は、抗体または抗原を認識する抗体断片の伝統的な感覚では、標的上の抗原を認識し得ないが、しかし非抗体タンパク質またはペプチドがするであろう方法で標的と相互作用する。これらの場合、キメラ抗原受容体は、より正確には「キメラ受容体」と称され得る。当業者は、この開示全体の多くの例および説明において、キメラ抗原受容体が、キメラ受容体であり得ることを理解するであろう。スイッチのキメラ受容体の結合パートナーは、非抗体タンパク質またはペプチドであり得る。したがって、キメラ受容体およびスイッチは、タンパク質−タンパク質相互作用またはタンパク質−ペプチド相互作用を有し得る。
タンパク質−タンパク質相互作用
ＣＡＲは、非抗体細胞外ドメインを含み得、細胞外ドメインは、非抗体タンパク質を含む。非抗体タンパク質は、キメラ受容体結合パートナーと相互作用し得、キメラ受容体結合パートナーは、タンパク質−タンパク質相互作用を成すキメラ受容体結合タンパク質を含む。タンパク質−タンパク質相互作用は、疎性であり得る。疎性相互作用は、キメラ受容体結合パートナーおよび非抗体ペプチドが、約１０−４Ｍ、約１０−３Ｍ、約１０−２Ｍ、約１０−１ＭのＫＤで、または約１０−１Ｍ超えのＫＤで結合する相互作用であり得る。タンパク質−タンパク質相互作用は、密接な相互作用であり得る。密接な相互作用は、キメラ受容体結合パートナーおよび非抗体ペプチドが、約１０−５Ｍ、約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍまたは約１０−１２ＭのＫＤで結合する、相互作用であり得る。タンパク質−タンパク質相互作用は、共有結合性タンパク質−タンパク質相互作用を含み得る。タンパク質−タンパク質相互作用は、非共有結合性タンパク質−タンパク質相互作用を含み得る。非抗体タンパク質および／またはキメラ受容体結合タンパク質は、酵素を含み得る。酵素は、ヌクレアーゼであり得る。ヌクレアーゼは、リボヌクレアーゼであり得る。リボヌクレアーゼは、原核生物であり得る。非抗体タンパク質および／またはキメラ受容体結合タンパク質は、基質を含み得る。非抗体タンパク質は、バルナーゼを含み得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、バルスターを含み得る。非抗体タンパク質は、バルスターを含み得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、バルナーゼを含み得る。バルナーゼは、バチルスアミロリケファシエンスからのアミノ酸リボヌクレアーゼである。バルスターは、バルナーゼの天然の細胞内阻害剤である。バルナーゼは、１０＾８／ｓ／Ｍの定率でタンパク質−タンパク質結合を有することで、高親和性でバルスターと相互作用する（Ｂｕｃｋｌｅ ＡＭ，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ Ｇ，Ｆｅｒｓｈｔ ＡＲ；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３（３０）：８８７８−８（Ａｕｇｕｓｔ １９９４）、参照によりその全体が本明細書に組込まれる）。バルナーゼ、バルスター、およびそれらの相互作用は、Ｍｏｓｓａｋｏｗｓｋａ ＤＥ，Ｎｙｂｅｒｇ Ｋ，Ｆｅｒｓｈｔ ＡＲ；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８（９）：３８４３−５０（Ｍａｙ １９８９）（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載される
タンパク質−ペプチド相互作用
非抗体タンパク質は、キメラ受容体結合パートナーと相互作用し得、キメラ受容体結合パートナーは、タンパク質−ペプチド相互作用を成すＣＡＲ−ＩＤを含む。代替的に、非抗体細胞外ドメインは、キメラ受容体結合パートナーと相互作用する非抗体ペプチドを含み得、キメラ受容体結合パートナーは、タンパク質−ペプチド相互作用を成すキメラ受容体結合タンパク質を含む。タンパク質−ペプチド相互作用は、疎性相互作用であり得る。疎性相互作用は、キメラ受容体結合パートナーおよび非抗体ペプチドが、約１０−４Ｍ、約１０−３Ｍ、約１０−２Ｍ、約１０−１ＭのＫＤ、または約１０−１Ｍ超のＫＤで結合する相互作用であり得る。タンパク質−ペプチド相互作用は、密接な相互作用であり得る。密接な相互作用は、キメラ受容体結合タンパク質および非抗体ペプチド（またはＣＡＲ−ＩＤおよび非抗体タンパク質）が、約１０−５Ｍ、約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍまたは約１０−１２ＭのＫＤで結合する相互作用であり得る。非抗体タンパク質および／またはキメラ受容体結合タンパク質は、繊維状タンパク質、接着分子タンパク質、および膜タンパク質から選択され得る。
タンパク質−ペプチド相互作用は、共有結合性タンパク質−ペプチド相互作用を含み得る。例えば、非抗体タンパク質は、化膿連鎖球菌ピリンタンパク質を含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、イソペプタグを含み得る。代替的に、非抗体ペプチドは、イソペプタグを含み得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、化膿連鎖球菌ピリンタンパク質を含み得る。イソペプタグと化膿連鎖球菌ピリンタンパク質との間の相互作用は、Ｋａｎｇ，Ｈ．Ｊ．，Ｃｏｕｌｉｂａｌｙ，Ｆ．，Ｃｌｏｗ，Ｆ．，Ｐｒｏｆｔ，Ｔ．，ａｎｄ Ｂａｋｅｒ，Ｅ．Ｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１８、１６２５−１６２８（２００７）およびＺａｋｅｒｉ，Ｂ．ａｎｄ Ｈｏｗａｒｔｈ，Ｍ．；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３２、４５２６−４５２７（２０１０）（それぞれは参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載される。イソペプタグ配列は、配列番号４１である。また、非限定的な例として、非抗体タンパク質は、タンパク質（ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ）に結合する化膿連鎖球菌フィブロネクチンを含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、ＳｐｙＴａｇを含み得る。代替的に、非抗体ペプチドは、ＳｐｙＴａｇを含み得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、タンパク質（ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ）に結合する化膿連鎖球菌フィブロネクチンを含み得る。ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒとＳｐｙＴａｇとの間の共有結合性相互作用は、Ｚａｋｅｒｉ Ｂ，Ｈｏｗａｒｔｈ Ｍ，ＪＡＣＳ，ｖｏｌ．１０９ ｎｏ．１２，（２０１２）（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載される。
タンパク質−ペプチド相互作用は、非共有結合性タンパク質−ペプチド相互作用を含み得る。例えば、非抗体タンパク質は、シナプトブレビン、ＳＮＡＰ２５、およびシンタキシン、ならびにそれらの部分（例えば、αヘリックス）から選択され得、かつＣＡＲ−ＩＤは、ＳＮＡＲＥを含み得る。代替的に、非抗体ペプチドは、ＳＮＡＲＥを含み得、キメラ受容体結合タンパク質は、シナプトブレビン、ＳＮＡＰ２５およびシンタキシン、ならびにそれらの部分（例えば、αヘリックス）から選択され得る。ＳＮＡＲＥとシナプトブレビンと、ＳＮＡＰ２５とシンタキシンとの間の相互作用は、Ｓｏｌｌｎｅｒ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：３１８−３２４（１９９３）、Ｓｕｔｔｏｎ ＲＢ，Ｆａｓｓｈａｕｅｒ Ｄ、Ｊａｈｎ Ｒ，Ｂｒｕｎｇｅｒ ＡＴ，Ｎａｔｕｒｅ ３９５：３４７−３５３（１９９８）、およびＤａｒｉｏｓ、Ｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ １０７、１８１９７−１８２０１（２０１０）（それぞれは参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載される。また、非限定的な例として、非抗体タンパク質は、ＲＮＡｓｅＩを含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、Ｈｕタグを含み得る。代替的に、非抗体ペプチドは、Ｈｕタグを含み得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、ＲＮＡｓｅＩを含み得る。また、非限定的な例として、非抗体タンパク質は、ＨｕＳアダプタータンパク質を含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、Ｈｕタグを含み得る。代替的に、非抗体ペプチドは、Ｈｕタグを含み得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、ＨｕＳアダプタータンパク質を含み得る。Ｈｕタグと、ＲＮａｓｅ Ｉと、Ｈｕタグと、ＨｕＳアダプタータンパク質との間の相互作用は、Ｂａｃｋｅｒ，Ｍ．Ｖ．，ｅｔ．ａｌ．，Ａｄａｐｔｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒ ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｙｌｏａｄｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．１５，１０２１−１０２９（２００４）（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載される。
ペプチド−ペプチド相互作用
ＣＡＲは、非抗体細胞外ドメインを含み得、細胞外ドメインは、非抗体ペプチドを含む。非抗体ペプチドは、キメラ受容体結合パートナーと相互作用し得、キメラ受容体結合パートナーは、ペプチド−ペプチド相互作用を成すＣＡＲ−ＩＤを含む。ペプチド−ペプチド相互作用は、疎性相互作用であり得る。疎性相互作用は、キメラ受容体結合パートナーおよび非抗体ペプチドが、約１０−４Ｍ、約１０−３Ｍ、約１０−２Ｍ、約１０−１ＭのＫＤで、または約１０−１Ｍ超のＫＤで結合する相互作用であり得る。ペプチド−ペプチド相互作用は、密接な相互作用であり得る。密接な相互作用は、ＣＡＲ−ＩＤおよび非抗体ペプチド（またはＣＡＲ−ＩＤおよび非抗体ペプチド）が、約１０−５Ｍ、約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍまたは約１０−１２ＭのＫＤで結合する相互作用であり得る。非抗体ペプチドおよび／またはＣＡＲ−ＩＤは、タンパク質の二次構造（例えば、αヘリックス、βシート）、タンパク質ドメイン、酵素ドメイン、二量体化ドメイン、および多量体化ドメインを含み得るから選択される。
ペプチド−ペプチド相互作用は、非共有結合性ペプチド−ペプチド相互作用を含み得る。非抗体ペプチドは、タンパク質の第１のαヘリックスを含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、タンパク質の第２のαヘリックスを含み得る。第１のαヘリックスおよび第２のαヘリックスは、コイルドコイル構造を形成し得る。例えば、いかなる方法でも限定されないが、第１のペプチドは、Ｌｉｔｏｗｓｋｉ，Ｊ．Ｒ．（２００２）に開示されるＥ／Ｋペプチドのうちのいずれか１つ（例えば、配列番号４６〜４４、および４５〜４６、４７〜５８のうちのいずれか１つ）から選択され得、かつ第２のペプチドは、第１のペプチドを用いてαヘリックスを形成することが可能な任意のペプチドから選択され得る。第２のペプチドは、Ｌｉｔｏｗｓｋｉ（２００２）に開示されるＥ／Ｋペプチド（例えば、配列番号４３〜４４、４５〜４６、４７〜５８のうちのいずれか１つ）であり得る非抗体タンパク質は、Ｋ４ペプチド（配列番号４３）を含み得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、Ｅ４ペプチド（配列番号４４）を含み得る。非抗体タンパク質は、Ｅ４ペプチド（配列番号４４）を含み得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、Ｋ４ペプチド（配列番号４３）を含み得る。Ｋ４ペプチドとＥ４ペプチドとの間の相互作用は、Ｌｉｔｏｗｓｋｉ，Ｊ．Ｒ．，ａｎｄ Ｒ．Ｓ．Ｈｏｄｇｅｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２７７：３７２７２−９（２００２）およびＷｏｏｌｆｓｏｎ，Ｄ．Ｎ．，Ａｄｖ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍ，７０：７９−１１２（２００５）（それぞれは参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載される。非抗体タンパク質は、修飾されたＫ４ペプチドを含み得、キメラ受容体結合タンパク質は、修飾されたＥ４ペプチドを含み得る。非抗体タンパク質は、修飾されたＥ４ペプチドを含み得、キメラ受容体結合タンパク質は、修飾されたＫ４ペプチドを含み得る。非抗体タンパク質は、修飾されたＫ４ペプチドを含み得、キメラ受容体結合タンパク質は、Ｅ４ペプチド（配列番号４４）を含み得る。非抗体タンパク質は、修飾されたＥ４ペプチドを含み得、キメラ受容体結合タンパク質は、Ｋ４ペプチド（配列番号４３）を含み得る。非抗体タンパク質は、Ｋ４ペプチド（配列番号３３）を含み得、キメラ受容体結合タンパク質は、修飾されたＥ４ペプチドを含み得る。非抗体タンパク質は、Ｅ４ペプチド（配列番号４４）を含み得、キメラ受容体結合タンパク質は、修飾されたＫ４ペプチドを含み得る。非抗体タンパク質は、配列番号４３の配列を有するペプチドから成るか、またはそれから本質的に成り得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、配列番号４４の配列を有するペプチドから成るか、またはそれから本質的に成り得る。非抗体タンパク質は、配列番号４４の配列を有するペプチドから成るか、またはそれから本質的に成り得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、配列番号４３の配列を有するペプチドから成るか、またはそれから本質的に成り得る。非抗体タンパク質は、配列番号４３と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれ以上の同一性である配列を有するペプチドを含み得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、配列番号４４と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれ以上の同一性である配列を有するペプチドを含み得る。非抗体タンパク質は、配列番号４４と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれ以上の同一性である配列を有するペプチドを含み得、かつキメラ受容体結合タンパク質は、配列番号４３と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれ以上の同一性である配列を有するペプチドを含み得る。
また、非限定的な例として、非抗体ペプチドは、マウスコロニン１Ａタンパク質の第１のαヘリックスを含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、マウスコロニン１Ａタンパク質の第２のαヘリックスを含み得る。マウスコロニン１Ａタンパク質のコイルドコイル相互作用は、Ｋａｍｍｅｒｅｒ ＲＡ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０２：１３８９１−１３８９６（２００５）（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載される。
また、非限定的な例として、非抗体ペプチドは、Ａキナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）アンカードメイン（ＡＤ）を含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼＡの二量体化およびドッキングドメイン（ＤＤＤ）を含み得る。ＤｏｃｋおよびＬｏｃｋ系として知られるＤＤＤとのＡＤの相互作用は、Ｒｏｓｓｉ ＥＡ，Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ＤＭ，Ｃｈａｎｇ ＣＨ，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇＣｈｅｍ．Ｍａｒ ２１；２３（３）：３０９−２３（２０１２）、Ｒｏｓｓｉ ＥＡ，ｅｔ．ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．Ｍａｙ ２；１０３（１８）：６８４１−６（２００６）、およびＢａｃｋｅｒ ＭＶ，Ｐａｔｅｌ Ｖ，Ｊｅｈｎｉｎｇ ＢＴ，Ｂａｃｋｅｒ ＪＭ．，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇＣｈｅｍ．Ｊｕｌ−Ａｕｇ；１７（４）：９１２−９（２００６）（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載されている。
したがって、非限定的な例として、非抗体ペプチドは、Ａキナーゼアンカータンパク質のアンカードメイン（ＡＤ１）を含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼＡの二量体化およびドッキングドメイン（ＤＤＤ１）を含み得る。代替的に、非抗体ペプチドは、ＤＤＤ１を含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、アンカードメイン（ＡＤ１）を含み得る。
ペプチド−ペプチド相互作用は、共有結合性ペプチド−ペプチド相互作用を含み得る。非限定的な例として、非抗体ペプチドは、Ａキナーゼアンカータンパク質のアンカードメイン（ＡＤ２）を含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼＡの二量体化およびドッキングドメイン（ＤＤＤ２）を含み得、ＡＤ２およびＤＤＤ２は、ＡＤとＤＤＤとの間にジスルフィド結合を形成するシステインで修飾されている。代替的に、非抗体ペプチドは、ＤＤＤ２を含み得、かつＣＡＲ−ＩＤは、ＡＤ２を含み得、ＡＤ２およびＤＤＤ２は、ＡＤ２とＤＤＤ２との間にジスルフィド結合を形成するシステインで修飾されている。これらのジスルフィド結合は、ＡＤ２とＤＤＤ２との間に共有結合性相互作用を形成し得る。これは、ＣＡＲ−ＩＤに対して非抗体ペプチドの親和性を増加する利点であり得、その逆も同じである。
エフェクター細胞は、複数のキメラ受容体を含み得る。複数のキメラ受容体のうち２つ以上は、同じであり得る。複数のキメラ受容体のうち２つ以上は、異なり得る。複数のキメラ受容体のうちの２つ以上はそれぞれ、ＤＤＤ（例えば、ＤＤＤ１またはＤＤＤ２）を含む細胞外ドメインを含み得る。複数のキメラ受容体のうちの２つ以上のＤＤＤは、自己ホモ多量体化し、多量化されたＤＤＤを産生し得る。ＤＤＤは、自己ホモ二量体化し、二量体化したＤＤＤを産生し得る。多量体化された、または二量体化されたＤＤＤは、１つ以上のＡＤに結合し得る。１つ以上のＡＤに結合された多量体化された、または二量体化されたＤＤＤは、１つのＤＤＤを含むか、またはＤＤＤを含まないキメラ受容体と比較して、エフェクター細胞のシグナル形質導入および／または活性を増加し得る。
キメラ受容体は、細胞外ドメインを含み得、細胞外ドメインは、ＡＤを含む。スイッチは、ＤＤＤを含み得る。スイッチは、ＤＤＤが、ＡＤとの結合時に自己ホモ二量体化するため、ＡＤに対して二価であり得る（例えば、図１７を参照されたい）。ＡＤへの結合時に自己ホモ二量体化するＤＤＤは、標的細胞へのスイッチの結合活性を増加し得、かつ標的に対するスイッチの感受性を改善し得る。これは、細胞表面分子の低表面密度（または発現）を有する標的細胞に関連し得る。
スイッチは、ＡＤを含み得、かつキメラ受容体は、ＤＤＤを含み得るか（例えば、図１８を参照されたい）、あるいはスイッチは、ＤＤＤを含み得、かつキメラ受容体は、ＡＤを含み得、ＤＤＤ／ＡＤの対をもたらす（例えば、図１７を参照されたい）。ＤＤＤ／ＡＤの対は、ｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体と、ペプチドを含むスイッチとからもたらされるｓｃＦｃｖ／ペプチド対より小さくあり得、キメラ受容体結合パートナーに結合するキメラ受容体およびその後のキメラ受容体活性／シグナル伝達に対して最適であるサイズおよび幾何学をこの対に提供する。
キメラエフェクター受容体細胞は、複数のスイッチの標的細胞上の複数の抗原への架橋の多量体化によって活性化され得る。活性を引き起こすスイッチの最小数は、２個超であり得る。多量体化された、または二量体化されたＤＤＤは一般に、それが、基準のキメラ抗原受容体（例えば、二量体化された／多量体化された細胞外ドメインまたはその部分なし）が活性を達成するよりスイッチとの少ない架橋を必要とするため、シグナル伝達を増強している場合がある。
εＣＡＲ
スイッチ上の抗ＣＤ３抗体またはその断片と相互作用する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメイン（膜貫通ドメインの少なくとも一部分、または細胞内ドメインの少なくとも一部分は、ＣＤ３タンパク質に基づかないか、またはそれから誘導されない）を含むキメラ抗原受容体が、さらに本明細書で開示される。細胞外ドメインは、ＣＤ３細胞外ドメインまたはその部分を含み得る。細胞外ドメインは、ＣＤ３ε細胞外ドメインまたはその部分を含み得る。細胞外ドメインは、ＣＤ３δ細胞外ドメインまたはその部分を含み得る。細胞外ドメインは、ＣＤ３γ細胞外ドメインまたはその部分を含み得る。細胞外ドメインは、ＣＤ３ζ細胞外ドメインまたはその部分を含み得る。細胞外ドメインは、ＴＣＲ細胞外ドメインまたはその部分のα鎖を含み得る。細胞外ドメインは、ＴＣＲ細胞外ドメインまたはその部分のプレα鎖を含み得る。細胞外ドメインは、ＴＣＲ細胞外ドメインまたはその部分のβ鎖を含み得る。
ＶＩＩキット、ベクターＳおよびポリヌクレオチドＳ
本明細書で開示される１つ以上のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含むキットが、本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−ＩＤを含む、本明細書で開示される抗ＣＤ１９スイッチを含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−ＩＤを含む、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９スイッチを含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体を含む、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体を含む、本明細書で開示される抗ＣＤ１９スイッチを含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体を含む、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９スイッチを含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ１抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ１２３抗体、上述の抗体の抗原結合部分、および任意に、上述の抗体のヒト化された形態（例えば、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９抗体のうちのいずれか１つなど）から選択される標的化部分を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む。
いくつかの実施形態では、キットは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチまたはかかるスイッチを含む医薬組成物を含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、軽鎖および重鎖を含み、軽鎖は、本明細書で開示される任意のスイッチ軽鎖配列を含むか、またはそれから成り、重鎖は、本明細書で開示される任意のスイッチ重鎖配列を含むか、またはそれから成る。かかる重鎖および／または軽鎖配列は、ヒト化され得る。いくつかの実施形態では、キット内に含まれるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ヒト化され、かつ配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列、および配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み、重鎖および軽鎖の一方または両方は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤを含む（例えば、ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤ）。いくつかの特定の実施形態では、軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列（Ｎ末端ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤを含む）、および配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含む。いくつかの特定の実施形態では、スイッチは、表６または表８に記載されるスイッチであり、本明細書で開示されるスイッチのいくつかに含まれる重鎖／軽鎖の組み合わせを提示する。いくつかの実施形態では、スイッチは、スイッチに含まれるＣＡＲ−ＩＤが、修飾され、構造Ｉの配列を有することを除いて、表６または表８に記載されるスイッチと同一である。いくつかの実施形態では、構造Ｉの配列は、配列番号２６、３６、１３９、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される。キットは、単一のスイッチまたは単一のスイッチを含む医薬組成物を含み得る。キットは、複数のスイッチまたは複数のスイッチを含む医薬組成物を含み得る。
キットは、２個以上のスイッチを含み得る。キットは、３個のスイッチを含み得る。キットは、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２０、２４、３０、３５、４８、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、１２０、１５０、２００、３００、３８４、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００個のスイッチを含み得る。キットは、生物学的調査のために用いられ得る。キットは、疾患または状態の診断のために使用され得る。キットは、疾患または状態を治療するために使用され得る。キットのスイッチは、本明細書で開示されるエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−ＥＣ）または臨床的に使用されるか、もしくは試験される既存のＣＡＲ Ｔ細胞と共に使用され得る。キットは、１つ以上のエフェクター細胞を含み得る。エフェクター細胞は、ＣＡＲ−ＥＣであり得る。エフェクター細胞は、Ｔ細胞であり得る。Ｔ細胞は、１つ以上のキメラ受容体を発現し得る。Ｔ細胞は、ＣＡＲ−Ｔ細胞であり得る。ＣＡＲ−ＥＣは、スイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合し得る。ＣＡＲ−ＥＣは、ペプチド（例えば、本明細書で開示されるＧＣＮ４ペプチド、本明細書で開示されるｆｌａｇペプチド、本明細書で開示される別のαヘリックスペプチドと共にコイルドコイル構造を形成するαヘリックスペプチド）であるスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合し得る。ＣＡＲ−ＥＣは、小分子（例えば、ＦＩＴＣ）であるＣＡＲ−ＩＤに結合し得る。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、スイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合し得る。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ペプチド（例えば、本明細書で開示されるＧＣＮ４ペプチドまたはＧＣＮ４誘導体、本明細書で開示されるｆｌａｇペプチド、本明細書で開示される別のαヘリックスペプチドと共にコイルドコイル構造を形成するαヘリックスペプチド）であるスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合し得る。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、小分子（例えば、ＦＩＴＣ）であるＣＡＲ−ＩＤに結合し得る。
キットは、１つ以上のキメラ受容体（例えば、本明細書で記載される１つ以上のキメラ受容体）をコードするポリヌクレオチドを含み得る。キットは、１つ以上のキメラ抗原受容体（例えば、本明細書で記載される１つ以上のキメラ抗原受容体）をコードするポリヌクレオチドを含み得る。キットは、１つ以上のキメラ受容体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含み得る。キメラ受容体は、本明細書で開示されるキメラ受容体のいずれかから選択され得る。キメラ受容体は、本明細書で開示されるキメラ抗原受容体のいずれかから選択され得る。キメラ受容体は、本明細書で開示される任意のＣＡＲ配列を有し得る。ＣＡＲは、ヒト化され、ヒトへの免疫原性を減少し得る。ＣＡＲは、ヒト化される細胞外ドメインを含み得る。ヒト化は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに対する細胞外ドメインの特異性および親和性を保持しながら、ヒトへのＣＡＲの免疫原性を減少し得る。ＣＡＲは、表１３に提供されるＣＡＲ配列のうちのいずれか１つのヒト化されたバージョンであり得る。ＣＡＲは、配列番号２７０〜２８９のうちのいずれか１つのヒト化されたバージョンであり得る。ＣＡＲは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのＣＡＲ−ＩＤに結合する抗体または抗体断片を含む細胞外ドメインを含むヒト化されたＣＡＲであり得る。抗体または抗体断片は、ヒト化され得る。抗体断片は、ｓｃＦｖ（例えば、ヒト化されたｓｃＦｖ）であり得る。ｓｃＦｖまたはヒト化されたｓｃＦｖは、一般の構造軽鎖−リンカー−重鎖を含むか、またはそれから成り得る。ｓｃＦｖまたはヒト化されたｓｃＦｖは、一般の構造重鎖−リンカー−軽鎖を含むか、またはそれから成り得る。ヒト化されたｓｃＦｖは、ヒト免疫グロブリンフレームワークへ移植された非ヒト（例えば、マウス）ＣＤＲを有する、ヒト化されたＶＨ（可変重鎖）配列を含み得る。いくつかの特定の実施形態では、ＣＡＲは、図２４ＡのコンストラクトＡ〜Ｈから選択される構造を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、図２４のコンストラクトＡ、コンストラクトＢ、またはコンストラクトＣに従う構造を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、表１１に記載されるＣＡＲから選択される。ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲは、表１２に記載されるＣＡＲから選択される。キットは、本明細書で開示されるキメラ受容体ＥＣスイッチまたはその部分（例えば、抗体、抗体断片、ペプチド）をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含み得る。
ベクターならびにスイッチ（スイッチは、ＧＣＮ４誘導体およびポリペプチド標的化部分（例えば、標的化タンパク質または標的化ペプチド）を含む）およびそれらの部分をコードするポリヌクレオチドが、本明細書で開示される。ベクターならびにヒト化されたスイッチ（スイッチは、ＣＡＲ−ＩＤおよびヒト化されたポリペプチド標的化部分（例えば、標的化タンパク質または標的化ペプチド）を含む）およびそれらの部分をコードするポリヌクレオチドが、本明細書で開示される。ベクターならびにスイッチ（スイッチは、ＣＡＲ−ＩＤおよびヒト化されたポリペプチド標的化部分（例えば、標的化タンパク質または標的化ペプチド）を含む）（ポリペプチド標的化部分は、標的細胞上のＣＤ１９に結合する）およびそれらの部分をコードするポリヌクレオチドが、本明細書で開示される。ベクターならびにスイッチ（スイッチは、ＧＣＮ４誘導体およびヒト化されたポリペプチド標的化部分（例えば、標的化タンパク質または標的化ペプチド）を含む）（ポリペプチド標的化部分は、標的細胞上のＣＤ１９に結合する）およびそれらの部分をコードするポリヌクレオチドが、本明細書で開示される。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）であり得る。ポリヌクレオチドは、ＲＮＡであり得る。いくつかの実施形態では、標的化ポリペプチドは、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合断片であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、本明細書で開示されるＧＣＮ４ペプチド誘導体である。ベクターは、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合断片の重鎖をコードする配列を含み得る。ベクターは、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合断片の軽鎖をコードする配列を含み得る。ベクターは、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合断片の軽鎖をコードする配列と、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合断片の重鎖をコードする配列とを含み得る。軽鎖および重鎖は、同じベクターから発現され得る。軽鎖および重鎖は、２個の別個のベクターから発現され得る。重鎖は、ヒト化された配列を含み得る。軽鎖は、ヒト化された配列を含み得る。重鎖および軽鎖は、ヒト化された配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、キットは、ベクターおよびキメラ受容体（例えば、ＣＡＲ）（ＣＡＲは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのペプチドに結合する細胞外ドメインを含む）をコードするポリヌクレオチドを提供する。細胞外ドメインは、抗体または抗体断片を含み得る。抗体または抗体断片は、ＣＡＲ−ＥＣのＣＡＲ−ＩＤに結合し得る。ＣＡＲ−ＩＤは、小分子であり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ハプテンであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣまたはその誘導体であり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ペプチドであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＧＣＮ４ペプチドであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、二量体化しないＧＣＮ４ペプチドであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、本明細書で開示されるＧＣＮ４ペプチドであり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、ＧＣＮ４ペプチド誘導体であり得る。ＣＡＲ−ＩＤは、構造Ｉの配列：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）を含み得、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である。ＣＡＲ−ＩＤは、配列：ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫ（配列番号１４５）を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＩＤは、配列番号１３９、１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される配列を含むか、またはそれから成る。
いくつかの実施形態では、キットは、ベクターおよびキメラ受容体をコードするポリヌクレオチドを提供し、キメラ受容体は、非抗体細胞外ドメインを含む。非抗体細胞外ドメインは、抗体または抗体断片を含み得ない。非抗体細胞外ドメインは、非抗体タンパク質を含み得る。非抗体細胞外ドメインは、非抗体ペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では ポリヌクレオチドは、配列番号６８〜８４、８７〜９０、１０４、および１８１〜１８３から選択される配列を有し得る。
本明細書で開示される、キメラ受容体をコードする配列を含むベクターおよび／またはキメラ受容体エフェクター細胞スイッチならびにそれらの部分は、任意の市販の発現ベクターから選択され得る。発現ベクターは、原核生物発現ベクターであり得る。発現ベクターは、真核生物発現ベクターであり得る。発現ベクターは、哺乳類発現ベクターであり得る。発現ベクターは、ウィルス性発現ベクターであり得る。発現ベクターは、キメラ受容体および／または配列をコードするスイッチの恒常的発現への恒常的プロモーターを有し得る。発現ベクターは、キメラ受容体および／または配列をコードするスイッチの条件的発現への誘導性プロモーターを有し得る。
いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）（ａ）酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドからのペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）抗ＧＣＮ４ ＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを含む。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体の重鎖を含み得る。重鎖配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つを含み得る。ＧＣＮ４は、構造Ｉの配列：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）を含み得、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は全て、任意のアミノ酸であるか、または不在である。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、軽鎖ヒト化されたＦＭＣ６３抗体を含み得る。軽鎖配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つ、または配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体のＦａｂを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、全長のヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその断片を含み得る。いくつかの実施形態では、キットの使用は、（ｉ）（ａ）酵母転写因子ペプチド（例えば、本明細書で開示されるＧＣＮ４ペプチド）からのペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）抗ＧＣＮ４ ＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを用いた対照の共治療を含む（治療が、ＣＤ１９発現標的細胞のスイッチ媒介細胞毒性をもたらす）。
いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）（ａ）Ｆｌａｇペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）抗ＦｌａｇペプチドＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを含む。Ｆｌａｇペプチドは、以下の配列：ＤＹＫＤＤＤＤＫおよびＤＹＫＤＤＤＤＫＰのうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体の重鎖を含み得る。重鎖配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、軽鎖ヒト化されたＦＭＣ６３抗体を含み得る。軽鎖配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つまたは配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体のＦａｂを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、全長のヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその断片を含み得る。いくつかの実施形態では、キットの使用は、（ｉ）（ａ）Ｆｌａｇペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）抗Ｆｌａｇ ＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを用いた対照の共治療を含む（治療は、ＣＤ１９発現標的細胞のスイッチ媒介細胞毒性をもたらす）。
いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）（ａ）ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）抗ＦＩＴＣペプチドＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを含む。ＦＩＴＣは、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体に非特異的に共役され得る。ＦＩＴＣは、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体に部位特異的に共役され得る部位特異的共役は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体に含まれる人工アミノ酸へであり得る。共役は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体をＦＩＴＣに連結するリンカーを介し得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体の重鎖を含み得る。重鎖配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、軽鎖ヒト化されたＦＭＣ６３抗体を含み得る。軽鎖配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つまたは配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体のＦａｂを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、全長のヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその断片を含み得る。いくつかの実施形態では、キットの使用は、（ｉ）（ａ）ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）抗ＦＩＴＣ ＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを用いた対照の共治療を含む（治療は、ＣＤ１９発現標的細胞のスイッチ媒介細胞毒性をもたらす）。
いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）（ａ）Ｋ４ペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）Ｅ４細胞外ドメインを含むＣＡＲとを含む。Ｋ４ペプチドは、アミノ酸配列：ＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥを含み得る。Ｅ４ペプチドは、アミノ酸配列：ＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体の重鎖を含み得る。重鎖配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、軽鎖ヒト化されたＦＭＣ６３抗体を含み得る。軽鎖配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つまたは配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つを含み得るヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体のＦａｂを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、全長のヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその断片を含み得る。いくつかの実施形態では、キットの使用は、（ｉ）（ａ）Ｋ４ペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）Ｅ４細胞外ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを用いた対照の共治療を含む（治療は、ＣＤ１９発現標的細胞のスイッチ媒介細胞毒性をもたらす）。
いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）（ａ）Ｅ４ペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）Ｋ４細胞外ドメインとを含む。Ｋ４ペプチドは、アミノ酸配列：ＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥＫＶＡＡＬＫＥを含み得る。Ｅ４ペプチドは、アミノ酸配列：ＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫＥＶＡＡＬＥＫを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体の重鎖を含み得る。重鎖配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、軽鎖ヒト化されたＦＭＣ６３抗体を含み得る。軽鎖配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つまたは配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体のＦａｂを含み得る。ヒト化されたＦＭＣ６３抗体または抗体断片は、全長のヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその断片を含み得る。いくつかの実施形態では、キットの使用は、（ｉ）（ａ）Ｅ４ペプチドを含むＣＡＲ−ＩＤ、および（ｂ）ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書で記載されるヒト化されたＦＭＣ６３抗体のうちのいずれか１つ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）Ｋ４細胞外ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣとを用いた対照の共治療を含む（治療は、ＣＤ１９発現標的細胞のスイッチ媒介細胞毒性をもたらす）。
ＶＩＩＩ 療法使用
治療を必要とする対象の疾患または状態を治療するための、方法、プラットフォームおよびキットが、本明細書で開示され、方法は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを対象に投与することを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含む。かかる方法は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに相補的なＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣを投与することをさらに含む。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ヒト化され得る。ＣＡＲは、ヒト化され得る。
治療を必要とする対象の疾患または状態を治療するための方法、プラットフォームおよびキットが、本明細書で開示され、方法は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを対象に投与することを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体および標的化部分（「ＧＣＮ４−スイッチ」）を含む。かかる方法は、ＧＣＮ４スイッチに相補的であるＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣを投与することをさらに含む。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ヒト化され得る。ＣＡＲは、ヒト化され得る。
治療を必要とする対象の疾患または状態を治療するための、方法、プラットフォーム、およびキットが、本明細書で開示され、方法は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを対象に投与することを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体および抗ＣＤ１９抗体、またはＣＤ１９結合その部分（「抗ＣＤ１９ ＧＣＮ４−スイッチ」）を含むか、またはそれから成る標的化部分を含む。抗ＣＤ１９抗体のＣＤ１９結合部分は、ｓｃＦｖであり得る。抗ＣＤ１９ ＧＣＮ４−スイッチは、ＬＣＮＴスイッチであり得る。抗ＣＤ１９ ＧＣＮ４−スイッチは、軽鎖および重鎖を含み得、軽鎖は、本明細書で開示される任意のスイッチ軽鎖配列を含むか、またはそれから成り、重鎖は、本明細書で開示される任意のスイッチ重鎖配列を含むか、またはそれから成る。かかる重鎖および／または軽鎖配列は、ヒト化され得る。
治療を必要とする対象の疾患または状態を治療するための、方法、プラットフォームおよびキットが、本明細書で開示される、方法は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを対象に投与することを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体およびヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合部分を含むか、またはそれから成る標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ヒト化され、かつ配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列、および配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み、重鎖および軽鎖の一方または両方は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤ）を含む。特定の実施形態では、軽鎖配列は、ヒト化された配列番号２７〜３４から選択される配列（Ｎ末端のＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤを含む）、および配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含む。特定の実施形態では、スイッチは、表６または表８に記載されるスイッチであり、本明細書で開示されるスイッチのうちのいくつかに含まれる重鎖／軽鎖の組み合わせを呈する。いくつかの実施形態では、スイッチは、スイッチに含まれるＣＡＲ−ＩＤが、修飾され、構造Ｉの配列を有することを除いて、表６または表８に記載されるスイッチと同一である。いくつかの実施形態では、構造Ｉの配列は、配列番号２６、３６、１３９、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される。かかる方法は、抗ＣＤ１９ ＧＣＮ４−スイッチに相補的であるＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣを投与することをさらに含み得る。ＣＡＲは、ヒト化され得る。
治療を必要とする対象の疾患または状態を治療するための、方法、プラットフォーム、およびキットが、本明細書で開示され、方法は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを対象に投与することを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはＣＤ１９結合その部分（「抗ＣＤ１９ ＣＡＲ−ＥＣスイッチ」）を含むか、またはそれから成るＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含む。抗ＣＤ１９抗体のＣＤ１９結合部分は、ｓｃＦｖであり得る。抗ＣＤ１９ ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、Ｎ末端ＣＡＲ−ＩＤを含むＬＣＮＴスイッチであり得る。抗ＣＤ１９ ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、軽鎖および重鎖を含み得、軽鎖は、本明細書で開示される任意のスイッチ軽鎖配列を含むか、またはそれから成り、重鎖は、本明細書で開示される任意のスイッチ重鎖配列を含むか、またはそれから成る。かかる重鎖および／または軽鎖配列は、ヒト化され得る。かかる方法は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ−ＥＣスイッチを補完するＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣを投与することをさらに含み得る。ＣＡＲは、ヒト化され得る。
治療を必要とする対象の疾患または状態を治療する方法が、本明細書で開示され、方法は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちのいずれか１つを投与することを含む。治療を必要とする対象の疾患または状態を治療する方法が、本明細書で開示され、方法は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちのいずれか１つを投与すること、かつＣＡＲ−ＥＣスイッチ（すなわち、ＣＡＲは、相補的ＣＡＲ−ＥＣスイッチ上に含まれるＣＡＲ−ＩＤに対する結合親和性を有する細胞外ドメインを含む）を補完するＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣをさらに投与することを含む。
治療を必要とする対象の疾患または状態を治療する本明細書で開示される方法のいずれかで、ＣＡＲは、本明細書で開示されるＣＡＲであり得る。ＣＡＲは、本明細書で開示される任意のＣＡＲ配列を有し得る。ＣＡＲは、ヒト化され、免疫原性をヒトに減少し得る。ＣＡＲは、ヒト化される細胞外ドメインを含み得る。ヒト化は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに対する細胞外ドメインの特異性および親和性を保持しながら、ＣＡＲの免疫原性をヒトに減少し得る。ＣＡＲは、表１３に提供されるＣＡＲ配列のうちのいずれか１つのヒト化されたバージョンであり得るか、またはそれは、配列番号２７０〜２８９のうちのいずれか１つのヒト化されたバージョンであり得る。ＣＡＲは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのＣＡＲ−ＩＤに結合する抗体または抗体断片を含む細胞外ドメインを含むヒト化されたＣＡＲであり得る。抗体または抗体断片は、ヒト化され得る。抗体断片は、ｓｃＦｖ（例えば、ヒト化されたｓｃＦｖ）であり得る。ｓｃＦｖまたはヒト化されたｓｃＦｖは、一般の構造軽鎖−リンカー−重鎖を含むか、またはそれから成り得る。ｓｃＦｖまたはヒト化されたｓｃＦｖは、一般の構造重鎖−リンカー−軽鎖を含むか、またはそれから成り得る。ヒト化されたｓｃＦｖは、ヒト免疫グロブリンフレームワークへ移植された非ヒト（例えば、マウス）ＣＤＲを有するヒト化されたＶＨ（可変重鎖）配列を含み得る。ヒト化されたｓｃＦｖは、ヒト免疫グロブリンフレームワークへ移植された非ヒト（例えば、マウス）ＣＤＲを有するヒト化されたＶＬ（可変軽鎖）配列を含み得る。いくつかの特定の実施形態では、ＣＡＲは、図２４ＡのコンストラクトＡ〜Ｈから選択される構造を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、図２４のコンストラクトＡ、コンストラクトＢ、またはコンストラクトＣに従う構造を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、表１１に記載されるＣＡＲから選択される。ある特定の特定の実施形態では、ＣＡＲは、表１２に記載されるＣＡＲから選択される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは、配列番号２９０〜３８８、および４２３のうちのいずれか１つから選択されるヒト化されたｓｃＦｖ配列を含む。
本明細書で開示される治療を必要とする対象の疾患または状態を治療する方法のいずれかで、疾患または状態は、癌であり得る。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合部分は、軽鎖配列および重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合部分は、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体またはそのＣＤ１９結合部分を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはそのＣＤ１９結合部分の軽鎖配列は、配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つまたは配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つを含み得、代替的にまたは加えて、重鎖配列は、配列番号２〜１５のうちのいずれか１つを含み得る。
治療を必要とする対象の疾患または状態を治療する、本明細書で開示される方法は、ＣＡＲ−ＥＣ細胞および１つ以上のＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与することを含み得る。方法は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２０、２４、３０、３５、４８、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、１２０、１５０、２００、３００、３８４、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００個またはそれ以上のＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与することを含み得る。方法は、２個以上のＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与することを含み得る。２個以上のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じＣＡＲ−ＩＤを含み得る。もう２個のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じヒト化された抗ＣＤ１９標的化部分を含み得る。２個以上のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１個以上の異なるＣＡＲ−ＩＤを含み得る。もう２個のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１個以上の異なるヒト化された抗ＣＤ１９標的化部分を含み得る。方法は、複数のＣＡＲ−ＥＣ細胞および１個以上のＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与することを含み得る。ＣＡＲ−ＥＣ細胞を投与することは、静脈内ＣＡＲ−ＥＣ送達を含み得る。ＣＡＲ−ＥＣ細胞を投与することは、腹腔内ＣＡＲ−ＥＣ送達を含み得る。ＣＡＲ−ＥＣ細胞を投与することは、静脈内ＣＡＲ−ＥＣ送達および腹腔内ＣＡＲ−ＥＣ送達を含み得る。ＣＡＲ−ＥＣ細胞を投与することは、一度起こり得る。ＣＡＲ−ＥＣ細胞を投与することは、一度より多く起こり得る（例えば、反復注射）。ＣＡＲ−ＥＣは、選別され、ＣＡＲ−ＥＣの投与前に、ＣＡＲ−ＥＣのメモリー集団を濃縮し得る。ＣＡＲ−ＥＣは、反復刺激に供され、枯渇を促進する再帰的刺激とは対照的に、メモリー集団を濃縮し、長命で、持続性の表現型を提供する。この理論的根拠は、課題が除かれた後に起きる１〜２週間長の収縮フェーズを通した、濃縮長命メモリー細胞を用いた天然の急性感染に基づく。同様に、養子的に移動された細胞が、以下の刺激を休ませるＣＡＲ−Ｔ細胞系は、より近く、Ｔ細胞活性の生理的期間を繰り返す。
治療を必要とする対象の疾患または状態を治療する、方法が、本明細書で開示され、方法は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを対象に投与することを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）、および標的上のＣＤ１９に結合するヒト化された標的化部分を含む。ＣＡＲ−ＩＤは、非限定的な例として、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、酵母転写因子ＧＣＮ４（例えば、７ｐ１４ｐ ＧＣＮ４、親水性標的ペプチド（ＨＴＰ）、αヘリックスを形成するペプチドから選択され得る。標的化部分は、非限定的な例として、本明細書で開示されるヒト化された抗ＣＤ１９抗体のいずれかから選択され得る。
方法は、１つ以上キメラ抗原受容体エフェクター細胞を治療を必要とする対象に投与することと、次いで１個または複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチを治療を必要とする対象に投与することを含み得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの量または用量は、標的細胞に対するキメラ抗原受容体エフェクター細胞の度合に影響し得、したがってＣＡＲ−ＥＣスイッチの量または用量は、所望の効果のために滴定され得る。例えば、腫瘍は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの滴定によって標的化され、好適な療法指標を達成し得る。応答は、「オン」で滴定され、ＣＲＳ（サイトカイン放出症候群）およびＴＬＳ（腫瘍溶解症候群）事象を回避し、個人化された療法を提供し得る。さらには、スイッチの投与は、有害な事象、ＣＡＲ−ＥＣ細胞活性の制御、オン標的オフ腫瘍反応性またはオフ標的反応性の滴定、腫瘍溶解症候群（ＴＬＳ）の抑止、またはサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の減弱の場合に終了され得る。量または用量は、特定の期間、あるレベルで開始し得、かつ次いで量または用量は、第２の特定の期間、第２のレベルに増加または減少され得る。例えば、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの初期量または用量は、腫瘍を排除するのに必要な最も少ない用量であり得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの量または用量は次いで、任意の残りの腫瘍細胞を排除するために、より多い用量に増加され得る。方法は、腫瘍細胞が排除された際、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの投与を終了することを含み得る。方法は、腫瘍細胞が、患者内で再び起こった場合に、または患者が再発した場合に、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを再投与することを含み得る。
方法は、所望される効果のためにＣＡＲ−ＥＣスイッチを滴定することを含み得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチを滴定することは、抗原密度識別を可能にする。例えば、肺内のＨｅｒ２発現の低レベルへの、Ｈｅｒ２標的化ＣＡＲ−Ｔ細胞に対する致死的なオン標的、オフ腫瘍反応性は、臨床でのＣＡＲ−Ｔ細胞の固形腫瘍への適用を和らげている。ヒト内でおよそ１０時間の半減期を有することが予期されるＦａｂ系スイッチの使用は、長命ＩｇＧ系分子より急速な、活性の増加を可能にする。本明細書で記載される方法は、スイッチを最適なレベルに滴定することを含み得、スイッチ活性は、標的細胞上の標的抗原の密度によって影響され得、したがって健康組織上の標的抗原からの癌細胞上の標的抗原（およびスイッチ活性）を識別するか、またはそれを区別する。臨床では、これは、療法を好適な療法指標に滴定するために使用され得る。加えて、養子的に移動されたｓＣＡＲ−Ｔ細胞が、組織を取り除き、したがって組織への潜在性毒性を軽減した後に、スイッチのみを投与することによって、患者内でｓＣＡＲ−Ｔ細胞の注入を活性から分離することが可能であり得る。例えば、研究は、移動された細胞傷害性Ｔ細胞は直ちに、肺内で蓄積するが、蓄積は７２時間超で取り除かれることを示している。ｓＣＡＲ−Ｔ細胞の１つの利点は、それらが移動され得、かつスイッチ用量が、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞が不活性な間、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞が肺を綺麗にするまで遅延され得ることである。一度取り除かれると、スイッチは、投与され、スイッチのＣＡＲおよび標的抗原への結合時にｓＣＡＲ−Ｔを活性化し得る。当業者は、どのようにしてこの概念が、異なる密度の細胞上で発現されるＨｅｒ２以外に、他の抗原に適用されるかを容易に理解するであろう。
方法は、１つ以上キメラ抗原受容体エフェクター細胞を投与することを含み得る。方法は、１つ以上のＴ細胞を投与することを含み得る。１つ以上のエフェクター細胞は、未処理のＴ細胞、メモリー幹細胞Ｔ細胞、中央メモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、ｈｅｌｐｅｒ Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞）、ＣＤ８／ＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージから選択され得る。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、エフェクター細胞を標的細胞の近位に移動させることに少なくとも部分的に依存する療法効果を有し得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの意図された徴候上の療法効果は、少なくとも部分的に、エフェクター細胞を標的細胞に補充するＣＡＲ−ＥＣスイッチによるものであり得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの意図された徴候上の療法効果は、主にエフェクター細胞を標的細胞に補充するＣＡＲ−ＥＣスイッチによるものであり得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの療法効果は、ＣＡＲ−ＥＣ細胞内の免疫応答を刺激することに少なくとも部分的に依存し得る。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与することは、エフェクター細胞をさらに投与しないことにはいかなる療法効果も有し得ない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、エフェクター細胞をさらに投与しないことには、顕著で、所望および／または意図される療法効果を有し得ない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、エフェクター細胞をさらに投与しないことには、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームの意図された徴候に対していかなる療法効果も有し得ない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素（例えば、ＣＡＲ−ＩＤまたは標的化部分）は、第２の部分またはＣＡＲ−ＥＣスイッチの構成要素（例えば、ＣＡＲ−ＩＤまたは標的化部分）に共役されないことには、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの意図された徴候に対して療法効果を有し得ない。療法効果を提供するためにＣＡＲ−ＥＣプラットフォームの部分として投与される場合の、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素（例えば、ＣＡＲ−ＩＤまたは標的化部分）の用量は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素が、その用量で単独で投与される場合、療法効果を有さない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素は、Ｔ細胞を標的細胞に補充する他に、あらゆる療法効果を有することも意図され得ない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチ単独の部分または構成要素を投与することは、標的細胞上で療法効果を有し得、療法効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよびＣＡＲ−ＥＣ細胞を投与することの療法効果と比較して、無視できる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素を投与することは、標的細胞上で療法効果を有し得、療法効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよびＣＡＲ−ＥＣ細胞を投与することの療法効果未満である。
治療を必要とする対象の疾患または状態を治療するための、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチの使用が、本明細書で開示される。疾患の治療のための薬物の製造における、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチの使用が、さらに本明細書で開示される。
エフェクター細胞上のＣＡＲ（ＣＡＲ−ＩＤ）に結合するペプチド性抗原と、治療を必要とする対象の疾患または状態を治療するための標的上の抗原に結合する標的化ポリペプチドとを含むスイッチの使用が、本明細書で開示される。エフェクター細胞上のＣＡＲ（ＣＡＲ−ＩＤ）に結合するペプチド性抗原（ＣＡＲ−ＩＤ）と、疾患の治療のための薬物の製造における、標的上の抗原に結合する標的化ポリペプチドとを含むスイッチの使用が、さらに本明細書で開示される。
ＣＡＲ−ＩＤを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチの使用が、本明細書で開示され、ＣＡＲ−ＩＤが、低免疫原性ペプチド（例えば、ＦＬＡＧ）またはその誘導体および標的化ポリペプチドを含み、標的化ポリペプチドが、抗ＣＤ１９抗体またはその断片、ＣＡＲを含むエフェクター細胞を含み、ＣＡＲが、抗低免疫原性ペプチド抗体を含み、抗ＣＤ１９抗体またはその断片が、多発性骨髄腫を治療するためにＢ細胞上のＣＤ１９に結合する。著しく、いかなる以前に報告された抗体系制御系も、インビボで、ＣＤ１９の報告された標的化を有さない。本明細書で報告される通り、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞プラットフォームは、従来のＣＡＲＴ−１９と同等の有効性で、Ｎａｌｍ−６Ｌｕｃ／ＧＦＰをインビボで排除することができた。有効性は、最適な標的細胞関与に依存した。より具体的には、ＥＣ５０で一般に１０倍未満であったスイッチ／ヒンジ設計のインビトロでの溶解性活性の違いは、インビボでの腫瘍排除に対して決定的であった。
ＣＡＲ−ＩＤを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチの使用が、本明細書で開示され、ＣＡＲ−ＩＤが、酵母転写因子ＧＣＮ４またはその誘導体および標的化ポリペプチドを含み、標的化ポリペプチドが、抗ＣＤ１９抗体またはその断片、およびＣＡＲを含むエフェクター細胞を含み、ＣＡＲが、抗ＧＣＮ４抗体を含み、抗ＣＤ１９抗体またはその断片が、リンパ芽球、リンパ球またはＢ細胞上のＣＤ１９に結合し、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病またはＢ−細胞リンパ腫を治療する。
疾患または状態は、細胞増殖性障害であり得る。細胞増殖性障害は、固形腫瘍、リンパ腫、白血病および脂肪肉腫から選択され得る。細胞増殖性障害は、急性、慢性、再発性、抵抗性、促進的、寛解、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、ステージＩＶ、若年性または成人型であり得る。細胞増殖性障害は、骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、骨髄の白血病、急性骨髄性白血病、骨髄単球性白血病、好中球白血病、骨髄異形成症候群、Ｂ−細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、大型細胞リンパ腫、混合細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、再発性小型リンパ球性リンパ腫、有毛細胞白血病、多発性骨髄腫、好塩基球白血病、好酸球白血病、巨核芽球白血病、単芽球白血病、単球白血病、赤白血病、赤血球白血病および肝細胞性細胞腫から選択され得る。細胞増殖性障害は、血液学的悪性腫瘍を含み得る。血液学的悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍を含み得る。細胞増殖性障害は、慢性リンパ性白血病を含み得る。細胞増殖性障害は、急性リンパ性白血病を含み得る。細胞増殖性障害は、ＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫を含み得る。
疾患または状態は、癌、病原性感染、自己免疫疾患、炎症性疾患、または遺伝子障害であり得る。
いくつかの例では、１つ以上の疾患は、癌を含む。癌は、再発性および／または難治性癌を含み得る。癌の例は、肉腫、細胞腫、リンパ腫または白血病を含むが、これらに限定されない。
癌は、神経内分泌癌を含み得る。癌は、膵臓癌を含み得る。癌は、外分泌膵臓癌を含み得る。癌は、甲状腺癌を含み得る。甲状腺癌は、髄質甲状腺癌を含み得る。癌は、前立腺癌を含み得る。
癌は、上皮癌を含み得る。癌は、乳癌を含み得る。癌は、子宮内膜癌を含み得る。癌は、卵巣痛癌を含み得る。卵巣痛癌は、間質性卵巣痛癌を含み得る。癌は、頸部癌を含み得る。
癌は、皮膚癌を含み得る。皮膚癌は、新血管形成皮膚癌を含み得る。皮膚癌は、メラノーマを含み得る。
癌は、腎臓癌を含み得る。
癌は、肺癌を含み得る。肺癌は、小型細胞肺癌を含み得る。肺癌は、非小型細胞肺癌を含み得る。
癌は、大腸癌を含み得る。癌は、胃癌を含み得る。癌は、結腸癌を含み得る。
癌は、脳癌を含み得る。脳癌は、脳腫瘍を含み得る。癌は、神経膠芽細胞腫を含み得る。癌は、星状細胞腫を含み得る。
癌は、血液癌を含み得る。血液癌は、白血病を含み得る。白血病は、骨髄の白血病を含み得る。癌は、リンパ腫を含み得る。リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫を含み得る。
癌は、肉腫を含み得る。肉腫は、雌ヒツジの肉腫を含み得る。
肉腫は、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血液血管、または他の接続的または指示的な組織の癌である。肉腫は、骨癌、線維腺腫肉腫、コンドロ肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、両側性前庭シュワン腫、オステオ肉腫、軟性組織肉腫（例えば、歯槽軟部肉腫、血管肉腫、嚢胞肉腫、皮膚線維肉腫、デスモイド腫瘍、類上皮細胞肉腫、骨外性オステオ肉腫、線維腺腫肉腫、血管外皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性線維腺腫組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、および滑膜肉腫）を含むが、これらに限定されない。
細胞腫は、体の表面を被覆し、ホルモンを生成し、腺を形成する細胞である、上皮細胞内で始まる癌である。非限定的な例として、細胞腫は、乳癌、膵臓癌、肺癌、結腸癌、大腸癌、直腸癌、腎臓癌、膀胱癌、胃癌、前立腺癌、肝臓癌、卵巣痛癌、脳癌、腟癌、外陰部癌、子宮癌、口腔癌、陰茎癌、精巣癌、食道癌、皮膚癌、卵管の癌、頭頸部癌、消化器間質性癌、アデノ細胞腫、皮膚または眼内メラノーマ、肛門領域の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、尿道の癌、腎盂の癌、尿管の癌、子宮内膜の癌、子宮頸管の癌、脳下垂体の癌、中央神経系（ＣＮＳ）の新生物、一次ＣＮＳリンパ腫、脳幹神経膠腫、および脊椎軸腫瘍を含む。いくつかの例では、癌は、基底細胞細胞腫、扁平上皮、メラノーマ、非メラノーマ、または光線性（太陽）角化症などの皮膚癌である。
いくつかの例では、癌は、肺癌である。肺癌は、肺（気管支）または肺の小さな気嚢（肺胞）に供給するために分岐する気道内で始まり得る。肺癌は、非小型細胞肺細胞腫（ＮＳＣＬＣ）、小型細胞肺細胞腫、および中皮腫を含む。ＮＳＣＬＣの例は、扁平上皮細胞細胞腫、アデノ細胞腫、および大型細胞細胞腫を含む。中皮腫は、肺および胸腔（胸膜）の裏層、または腹部（腹膜）の裏層の癌性腫瘍であり得る。中皮腫は、アスベスト暴露によるものであり得る。癌は、神経膠芽細胞腫などの脳癌であり得る。
代替的に、癌は、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍であり得る。ＣＮＳ腫瘍は、神経膠腫または非神経膠腫として分類される。神経膠腫は、悪性神経膠腫、高級神経膠腫、小児脳幹部神経膠腫であり得る。神経膠腫の例は、星状細胞腫、乏突起神経膠腫（または乏突起神経膠腫と嚢胞腫要素との混合）、および上衣腫を含む。星状細胞腫は、低級星状細胞腫、未分化星状細胞腫、神経膠芽細胞腫多形、毛様細胞性星状細胞腫、多形性黄色芽細胞腫、および上衣下巨細胞星状細胞腫を含むが、これらに限定されない。乏突起膠腫は、低級乏突起膠腫（または、オリゴ星状細胞腫）および未分化乏突起膠腫を含む。非神経膠腫は、髄膜腫、下垂体腺腫、一次ＣＮＳリンパ腫、および髄芽腫を含む。いくつかの例では、癌は、髄膜腫である。
白血病は、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、または慢性骨髄球性白血病であり得る。白血病の追加の種類は、有毛細胞白血病、慢性骨髄単球性白血病、および若年性骨髄単球性白血病を含む。
リンパ腫は、リンパ球の癌であり、かつＢまたはＴリンパ球のいずれかから発達され得る。リンパ腫の２つの主要な種類は、ホジキン疾患、および非ホジキンリンパ腫として以前に知られるホジキンリンパ腫である。ホジキンリンパ腫は、Ｒｅｅｄ−Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ細胞の存在によってマークされる。非ホジキンリンパ腫は全て、ホジキンリンパ腫であるリンパ腫である。非ホジキンリンパ腫は、無痛性リンパ腫および攻撃的なリンパ腫であり得る。非ホジキンリンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、
小細胞リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、結節性周辺領域Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、
節外性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、血管内ラージＢ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、およびリンパ腫様肉芽腫症を含むが、これらに限定されない。
癌は、固形腫瘍を含み得る。癌は、肉腫を含み得る。癌は、膀胱癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、肺癌、メラノーマ、骨髄腫、甲状腺癌、膵臓癌、神経膠腫、脳の悪性神経膠腫、神経膠芽細胞腫、卵巣痛癌、および前立腺癌から成る群から選択され得る。癌は、非均一抗原発現を有し得る。癌は、調節された抗原発現を有し得る。抗原は、標的抗原であり得る。癌は、骨髄腫を含み得ない。癌は、メラノーマを含み得ない。癌は、結腸癌を含み得ない。癌は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）であり得る。癌は、再発したＡＬＬであり得る。癌は、難治性ＡＬＬであり得る。癌は、発現した、難治性ＡＬＬであり得る。癌は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）であり得る。癌は、再発したＣＬＬであり得る。癌は、難治性ＣＬＬであり得る。癌は、発現した、難治性ＣＬＬであり得る。
癌は、乳癌を含み得る。乳癌は、三重陽性乳癌（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体およびＨｅｒ２陽性）であり得る。乳癌は、三重陰性乳癌（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体およびＨｅｒ２陰性）であり得る。乳癌は、エストロゲン受容体陽性であり得る。乳癌は、エストロゲン受容体陰性であり得る。乳癌は、プロゲステロン受容体陽性であり得る。乳癌は、プロゲステロン受容体陰性であり得る。乳癌は、Ｈｅｒ２陰性乳癌を含み得る。乳癌は、低発現Ｈｅｒ２乳癌を含み得る。乳癌は、Ｈｅｒ２陽性乳癌を含み得る。Ｈｅｒ２を発現する細胞株は、悪性腫瘍を、０（１個の細胞につき＜２０，０００個のＨｅｒ２抗原）、１＋（１個の細胞につき１００，０００個のＨｅｒ２抗原）、２＋（１個の細胞につき５００，０００個のＨｅｒ２抗原）、および３＋（１個の細胞につき＞２，０００，０００個のＨｅｒ２抗原）として分類する、臨床免疫組織化学特徴付けを反映する抗原密度に対して良く特徴づけられている。本発明は、これらの分類の乳癌を治療する方法を提供する。乳癌は、Ｈｅｒ２ ０として分類される乳癌を含み得る。乳癌は、Ｈｅｒ２ １＋として分類される乳癌を含み得る。乳癌は、Ｈｅｒ２ ２＋として分類される乳癌を含み得る。乳癌は、Ｈｅｒ２ ３＋として分類される乳癌を含み得る。
疾患または状態は、病原性感染であり得る。病原性感染は、１つ以上の病原体によって引き起こされ得る。いくつかの例では、病原体は、細菌、真菌界、ウィルス、または原虫である。
例示的な病原体は、ボルデテラ、ボレリア、ブルセラ、カンピロバクター、クラミジア、クラミドフィラ、クロストリジウム、コリネバクテリウム、腸球菌、大腸菌類、フランシセラ、ヘモフィルス、ヘリコバクター、レジオネラ、レプトスピラ、リステリア、マイコバクテリウム、マイコプラズマ、ナイセリア、シュードモナス、リケッチア、サルモネラ、赤痢菌、ブドウ球菌、連鎖球菌、トレポネーマ、ビブリオ、またはエルシニアを含むが、これらに限定されない。いくつかの場合では、病原体によって引き起こされる疾患または状態は、結核であり、かつ不均一な試料は、細菌マイコバクテリウム結核から誘導される外来性分子および対象から誘導される分子を含む。いくつかの例では、細菌によって引き起こされる疾患または状態は、結核、連鎖球菌およびシュードモナスなどのバクテリアによって引き起こされ得る肺炎、赤痢菌、カンピロバクターおよびサルモネラなどのバクテリアによって引き起こされる食中毒、ならびにテタヌス、腸チフス、ジフテリア、梅毒およびハンセン病など感染である。疾患または状態、細菌性膣炎、天然発生バクテリア細菌叢の不均衡によって引き起こされる膣の疾患であり得る。代替的に、疾患または状態は、
細菌性髄膜炎、髄膜のバクテリア炎症（例えば、脳および脊髄を被覆する保護膜）である。バクテリアによって引き起こされる他の疾患または状態は、バクテリア肺炎、尿路感染、バクテリア胃腸炎、およびバクテリア皮膚感染を含むが、これらに限定されない。バクテリア皮膚感染の例は、ブドウ球菌黄色ブドウ球菌または
化膿性連鎖球菌によって引き起こされるインペティゴ、リンパ拡散を有する深い表皮の連鎖球菌バクテリア感染によって引き起こされ得る丹毒、および通常の皮膚細菌叢によってか、または外来性バクテリアによって引き起こされ得る蜂巣炎を含むが、これらに限定されない。
病原体は、カンジダ、アスペルギルス、クリプトコッカス、ヒストプラズマ、ニューモシスチス、およびスタキボトリス属などの菌類であり得る。菌類によって引き起こされる疾患または状態の例は、
痒み、酵母感染、白癬、および水虫を含むが、これらに限定されない。
病原体は、ウィルスであり得る。ウィルスの例は、アデノウィルス、コクサッキーウィルス、エプスタインバーウィルス、肝炎ウィルス（例えば、肝炎Ａ、Ｂ、およびＣ）、単純ヘルペスウィルス（１および２型）、サイトメガロウィルス、ヘルペスウィルス、ＨＩＶ、インフルエンザウィルス、はしかウィルス、おたふく風邪ウィルス、パピローマウィルス、パラインフルエンザウィルス、ポリオウィルス、呼吸器合胞体ウィルス、風疹ウィルス、および
水痘帯状疱疹ウィルスを含むが、これらに限定されない。ウィルスによって引き起こされる疾患または状態の例は、風邪、インフルエンザ、肝炎、エイズ、水疱、風疹、おたふく風邪、はしか、疣贅、および灰白髄炎を含むが、これらに限定されない。
病原体は、アカントアメーバ（例えば、
Ａ．アストロニクス、Ａ．カステラーニ、Ａ．カルバートソニ、Ａ．ハチェッティ、Ａ．ポリファガ、Ａ．ライソデス、Ａ．ヒーリー、Ａ．ジビオネンシス）、ブラシオラ（例えば、Ｂコンノリ、Ｂ．ベシキュラーラム）、クリプトスポリジウム（例えば、Ｃ．パルバム）、シクロスポラ（例えば、Ｃ．カヤタンシス）、脳炎症（例えば、Ｅ．クニクリ、Ｅ．ヘレム、Ｅ．腸炎）、アメーバ（例えば、Ｅ．ヒストリチカ）、腸内毒素（例えば、Ｅ．ビエニューシ）、ジアルジア（例えば、Ｇ．ランブリア）、イソスポラ（例えば、Ｉ．ベリ）、微胞子虫（例えば、Ｍ．アフリカヌム、Ｍ．セイロネンシス）、ネグレリア（例えば、Ｎ．フォーレリ）、ノセマ（例えば、Ｎ．アルゲレ、Ｎ．オクララム）、プレイストフォラ、トラチプレイストフォラ（例えば、Ｔ．アンスロポスレア、Ｔ．ホミニス）、およびヴィタフォルマ（例えば、Ｖ．コルネア）などの原虫であり得る。
疾患または状態は、自己免疫疾患または自己免疫関連疾患であり得る。自己免疫障害は、身体にその自信の組織への攻撃を引き起こす身体免疫系の機能不全であり得る。自己免疫疾患および自己免疫関連疾患の例は、アディソン疾患、
円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、
自己免疫性再生不良性貧血、
自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性心筋炎、ベーチェット病、セリアックスプルー、クローン病、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、
結節性紅斑、巨大細胞動脈炎（側頭動脈炎）、グッドパスチャー症候群、
バセドウ病、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、
若年性関節炎、糖尿病、若年糖尿病、川崎症候群、ランバート−イートン症候群、狼瘡（ＳＬＥ）、混合結合組織病（ＭＣＴＤ）、多発性硬化症、重症筋無力症、天疱瘡、結節性多発動脈炎、Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ型自己免疫性多腺症候群、多発性筋痛リウマチ、多発性筋炎、乾癬、乾癬性関節炎、ライター症候群、再発性多発性軟骨炎、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、精子および精巣自己免疫、スティフパーソン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨大細胞動脈炎、
潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症を含むが、これらに限定されない。
疾患または状態は、炎症性疾患であり得る。炎症性疾患の例は、肺胞炎、アミロイドーシス、血管炎、
強直性脊椎炎、無血管性壊死、バセドウ病、ベル麻痺、滑液包炎、手根管症候群、セリアック病、胆管炎、軟骨軟化症の膝蓋骨、慢性活動性肝炎、慢性疲労症候群、コーガン症候群、先天性股関節形成不全、肋軟骨炎、クローン病、嚢胞性線維症、ドゥケルバン腱炎、糖尿病関連関節炎、びまん性特発性骨肥大症、円盤状ループス、エーラーズ−ダンロス症候群、家族性地中海熱、筋膜炎、線維症／線維筋痛症、五十肩、
神経節嚢胞、巨大細胞動脈炎、痛風、バセドウ病、ＨＩＶ関連リウマチ性疾患症候群、副甲状腺機能亢進症関連関節炎、感染性関節炎、炎症性腸症候群／過敏性腸症候群、若年性関節リウマチ、ライム病、マルファン症候群、ミクリッツ病、混合結合組織病、多発性硬化症、筋筋膜痛症候群、変形性関節症、骨軟化症、骨粗鬆症およびコルチコステロイド誘因性骨粗鬆症、パジェット病、回帰性リウマチ、パーキソン病、プラマー病、多発性筋痛リウマチ、多発性筋炎、偽痛風、乾癬性関節炎、レイノー現象／症候群、ライター症候群、リウマチ熱、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、坐骨神経痛（腰椎神経根症）、強皮症、壊血病、鎌状赤血球症関節炎、シェーグレン症候群、脊椎狭窄、脊椎すべり症、スティル病、全身性エリテマトーデス、タカヤス（無脈）病、腱炎、テニス肘／ゴルフ肘、甲状腺関連関節炎、トリガーフィンガー、潰瘍性大腸炎、ウェゲナー肉芽腫症、およびホイップル病を含むが、これらに限定されない。
本明細書で開示される治療方法は、サイトカインレベルによって測定されるオフターゲット活性を含み得る。方法は、他のＣＡＲ−ＥＣ療法と比較して、サイトカインレベルによって測定されるオフターゲット活性を減少し得る。方法は、インターフェロンγレベルによってオフターゲット活性を減少し得る。減少され得る他のオフターゲット活性は、毒性リンパ球減少症、固形腫瘍標的の致死的な細胞溶解、および血液学的標的に対する慢性
低ガンマグロブリン血症を含む。本明細書で開示される治療方法および組成物は、ＣＤ１９媒介のＢ細胞形成不全を含む癌を治療するために使用され得る。方法および組成物は、ＣＤ１９媒介のＢ細胞形成不全を最小化し得る。方法は、長期Ｂ−細胞形成不全を回避し得る。
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム、方法および組成物は、治療を必要とする対象の不均一な腫瘍または不均一な血液細胞悪性腫瘍を治療するために使用され得る。「ｐａｎ−Ｂ細胞」マーカーＣＤ２０は、Ｂ細胞新生物に対して最も優性に標的化された抗原であり、ＦＤＡ承諾抗体リツキシマブは、多くの白血病およびリンパ腫の治療における重要な構成要素である。しかしながら、ＣＤ２０抗原発現の調節に関連する耐性メカニズムは、
わずかな数の患者において起きるＣＤ１９またはＣＤ２０抗原単独のいずれかを用いた標的化が、治療的療法には不十分であることは明らかである。本明細書で開示される方法は、異なる特異性（例えば、抗ＣＤ１９抗体ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび抗ＣＤ２０抗体ＣＡＲ−ＥＣスイッチ）を有する２つ以上のスイッチの構造および投与を提供する。本明細書で開示される方法は、異なる特異性（例えば、抗ＣＤ１９抗体ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび抗ＣＤ２２抗体ＣＡＲ−ＥＣスイッチ）を有する２つ以上のスイッチの構造および投与を提供する。この方法は、Ｂ細胞の持続的な欠如を回避しながら、臨床で再発への傾向に対して重要な利点を提供し得る。不均一な腫瘍または不均一な血液細胞悪性腫瘍はまた、抗ＣＤ１９抗体ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび抗ＣＤ２２抗体ＣＡＲ−ＥＣスイッチを用いて治療され得る。１つ以上ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、連続的にまたは同時に投与され得る。標的細胞上の第２の細胞表面分子を標的とする第２のスイッチは、第１のスイッチによって標的化される標的細胞上の第１の細胞表面分子の下方調節後に、投与され得る。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つ以上の追加の療法剤と共に投与され得る。１つ以上の追加の療法剤は、免疫療法、化学療法およびステロイドから成る群から選択され得る。１つ以上の追加の療法剤は、化学療法薬物であり得る。化学療法薬物は、アルキル化剤、抗代謝産物、アントラサイクリン、
トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、コルチコステロイドまたは異化剤であり得る。化学療法薬物は、アクチノマイシン−Ｄ、ブレオマイシン、
アルトレタミン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルボプラチン、カペシタビン、カルムスティン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、エストラムスチン、フロクスリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン（ジェムザール）、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、
イホスファミド、イリノテック（カンプトサー）、イクサベピロン、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロムスティン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、
メトトレキサート、マイトマイシン−Ｃ、パクリタキセル（タキソール）、ペメトレキセド、ペントスタチン、ストレプトゾシン、テモゾロマイド、テニポシド、チオグアニン、チオテパ、トポテック（ヒカムチン）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、レチノイド、トレチノイン（ＡＴＲＡまたはＡｔｒａｌｉｎ（登録商標））、ベキサロテン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））および三酸化ヒ素（Ａｒｓｅｎｏｘ（登録商標））から選択され得る。化学療法は、飲み込むためのピルとして、筋肉または脂肪組織への、静脈内、局所的または直接体腔への注射として投与され得る。
１つ以上の追加の療法剤は、血管新生阻害剤を含み得る。血管新生阻害剤は、ベバシズマブ、イトラコナゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ−４７０、ＣＭ１０１、ＩＦＮα、ＩＬ−１２、血小板因子４、スラミン、ＳＵ５４１６、トロンボスポンジン、ＶＥＧＦＲアンタゴニスト、ヘパリンを有する血管新生抑制ステロイド、ＣＡＲ−ＥＣｉｌａｇｅ誘導血管新生抑制性因子、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、アンジオスタチン、エンドスタチン、ソラフェニブ、スニチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、２−メトキシエストラジオール、テコガラン、テトラチオモリブデン酸、サリドマイド、プロラクチン、αｖβ３阻害剤、リノミド、タスキニモド、可溶性ＶＥＧＦＲ−１、可溶性ＮＲＰ−１、アンジオポエチン２、バソスタチン、カルレティキュリン、ＴＩＭＰ、ＣＤＡＩ、Ｍｅｔｈ−１、Ｍｅｔｈ−２、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、プロトロンビン、抗トロンビンＩＩＩ断片、プロラクチン、ＶＥＧＩ、ＳＰＡＲＣ、オステオポンチン、マスピン、カンスタチン、プロリフェリン関連タンパク質およびレスチンから選択され得る。
１つ以上の追加の療法剤は、ホルモン療法を含み得る。ホルモン療法は、抗エストロゲン（例えば、フルベストラント（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））、
タモキシフェン、トレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）））、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））、レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ（登録商標）））、
プロゲスチン（例えば、メゲストロール酢酸（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標）））、エストロゲン、抗アンドロゲン（例えば、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、ニルタミド（Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）））、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）または黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニストまたは類似体（例えば、ロイプロリド（Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標））、ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）））から選択され得る。
１つ以上の追加の療法剤が、ステロイドを含み得る。ステロイドは、コルチコステロイドであり得る。ステロイドは、コルチゾールまたはその誘導体であり得る。ステロイドは、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕｍｅｄｒｏｌ（登録商標））またはデキサメタゾンから選択され得る。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つ以上の追加の療法を用いて投与され得る。１つ以上の追加の療法は、レーザー治療を含み得る。１つ以上の追加の療法は、放射線療法を含み得る。１つ以上の追加の療法は、手術を含み得る。
対象の疾患または状態を治療するためのプラットフォーム、キットおよび方法が、本明細書で開示される。対象は、健康な対象であり得る。対象は、疾患または状態に罹患している場合がある。対象は、複数の疾患または状態に罹患している場合がある。対象は、慢性リンパ性白血病に罹患している場合がある。対象は、急性リンパ性白血病に罹患している場合がある。対象は、動物であり得る。対象は、哺乳類であり得る。哺乳類は、ヒト、チンパンジー、ゴリラ、サル、ウシ、ウマ、ロバ、ラバ、イヌ、ネコ、ブタ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ラット、ハムスター、モルモットまたはマウスであり得る。対象は、トリまたはチキンであり得る。対象は、ヒトであり得る。対象は、子供であり得る。子供は、急性リンパ性白血病に罹患している場合がある。対象は、６歳未満であり得る。対象は、約１歳、約２歳、約３歳、約４歳、約５歳、約６歳、約７歳、約８歳、約９歳、約１０歳、約１１歳、約１２歳、約１３歳、約１４歳、約１５歳、約１８歳、約２０歳、約２５歳、約３０歳、約３５歳、約４０歳、約４５歳、約５０歳、約５５歳、約６０歳、約６５歳、約７０歳、約７５歳、約８０歳、約８５歳、約９０歳、約９５歳、約１００歳または約１０５歳であり得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む、本明細書で開示される疾患または状態を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号６３〜９２、１０４、１１５、および１８１〜１８３から選択される配列を有するＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む、本明細書で開示される疾患または状態を治療する方法を提供する。スイッチは、配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列と、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤとを含み得る。軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列を含み得る。スイッチは、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み得る。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号２９０〜３８８および４２３のうちのいずれか１つから選択される配列を有するｓｃＦｖである細胞外ドメインを有するＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む、本明細書で開示される疾患または状態を治療する方法を提供する。スイッチは、配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列と、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤとを含み得る。軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列を含み得る。スイッチは、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み得る。投与は、任意の順番であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣ細胞は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ投与前に投与され得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ−ＥＣ細胞投与前に投与され得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣ細胞は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ投与と同時に投与され得る。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、ＣＤ１９＋細胞が病理学と関連付く疾患または状態である。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、異種の腫瘍および血球悪性腫瘍から選択される。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、急性リンパ性白血病および慢性リンパ性白血病から選択される。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、および有毛細胞白血病（ＨＣＬ）から選択される。
ＩＸ．標的細胞を死滅させるか、または活性化させる方法
本明細書で開示されるキメラ受容体エフェクター細胞を、本明細書で開示されるキメラ受容体エフェクター細胞スイッチと接触させることを含む、標的細胞を死滅させる方法が、さらに本明細書で開示され、キメラ受容体エフェクター細胞は、キメラ受容体エフェクター細胞スイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合する非抗体細胞外ドメインと共にキメラ受容体を発現し、キメラ受容体エフェクター細胞スイッチは、キメラ受容体の非抗体細胞外ドメインに結合する結合ドメインを含み、かつスイッチは、標的細胞上の抗原に結合する標的化部分を含む。
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣを、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させることを含む標的細胞を死滅させる方法が、さらに本明細書で開示され、ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合する細胞外ドメインと共にＣＡＲを発現し、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲの細胞外ドメインに結合するＣＡＲ−を含み、かつスイッチは、標的細胞上の抗原（例えば、腫瘍と関連する抗原）に結合する標的化部分を含む。
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣを、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させることを含む、標的細胞を溶解する方法が、さらに本明細書で開示され、ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合する細胞外ドメインと共にＣＡＲを発現する、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲの細胞外ドメインに結合するＣＡＲ−を含み、かつスイッチは、標的細胞上の抗原（例えば、腫瘍と関連する抗原）に結合する標的化部分を含む。
接触させることは、インビトロで起こり得る。接触させることは、インビボで対象内で起こり得る。対象は、本明細書で開示される対象のいずれかであり得る。対象は、疾患を有し得る。疾患は、本明細書で開示される疾患のうちの任意の１つ以上であり得る。疾患は、癌であり得る。接触させることは、投与を介し、本明細書で記載される方法を介し得る。投与することは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、スイッチに結合するキメラ受容体を発現するキメラ受容体エフェクター細胞が既に投与されている対象に投与することを含み得る。投与することは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを対象に投与することと、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合するキメラ受容体を発現するＣＡＲ−ＥＣを対象にさらに投与することとを含み得る。
接触させることは、標的化された細胞の溶解を含み得る。接触させることは、標的細胞を死滅させ得る。接触させることは、約１ｐＭ〜約１００ｐＭの範囲の死滅のために、ＥＣ５０を有する標的細胞を死滅させ得る。接触させることは、１ｐＭより低い死滅のために、ＥＣ５０を有する標的細胞を死滅させ得る。接触させることは、疾患を有する細胞を死滅させ得る。細胞は、本明細書で開示される任意の疾患を有し得る。疾患は、癌であり得る。
スイッチは、本明細書で開示される任意のスイッチであり得る。スイッチは、標的化部分に融合され、移植されるか、またはそれに結合されるＫ４ペプチドを含み得る。スイッチは、標的化部分に融合され、移植されるか、またはそれに結合されるＥ４を含み得る。スイッチは、標的化部分に融合され、移植されるか、またはそれに結合されるＧＣＮ４ペプチドを含み得る。ＧＣＮ４ペプチドは、構造Ｉの配列：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）を含み得、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は全て、任意のアミノ酸であるか、または不在である。ＧＣＮ４ペプチドは、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体（例えば、配列番号１３９〜１５３および２４５のうちのいずれか１つ）を含み得る。スイッチは、標的化部分に融合され、移植されるか、またはそれに結合されるＦＬＡＧタグを含み得る。スイッチは、標的化部分に結合されるＦＩＴＣを含み得る。標的化部分は、ＣＤ１９に結合し得る。標的化部分は、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分であり得る。標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分であり得る。標的化部分は、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｈｅｒ２、ＣＳ１、ＢＣＭＡ、ＣＥＡ、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、またはＣＤ１２３に結合し得る。標的化部分は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ１抗体、抗ＣＤ１２３抗体、または抗ＣＤ３３抗体であり得る。標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ２０抗体、ヒト化された抗ＣＤ２２抗体、ヒト化された抗ＥＧＦＲ抗体、ヒト化された抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、ヒト化された抗Ｈｅｒ２抗体、ヒト化された抗ＣＳ１抗体、ヒト化された抗ＢＣＭＡ抗体、ヒト化された抗ＣＥＡ抗体、ヒト化された抗ＣＬＬ１抗体、ヒト化された抗ＣＤ１２３抗体、またはヒト化された抗ＣＤ３３抗体であり得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む標的細胞を死滅させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号６３〜９２、１０４、１１５、および１８１〜１８３から選択される配列を有するＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む標的細胞を死滅させる方法を提供する。スイッチは、配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列と、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤとを含み得る。軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列を含み得る。スイッチは、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み得る。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）表１１または表１２に記載されるＣＡＲから選択されるＣＡＲ、または配列番号２９０〜３８８、および４２３のうちのいずれか１つから選択される配列を有するｓｃＦｖであるヒト化された細胞外ドメインを有するＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む標的細胞を死滅させる方法を提供する。スイッチは、配列番号から選択される軽鎖配列１７−２４と、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤとを含み得る。軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列を含み得る。スイッチは、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み得る。
本明細書で開示されるキメラ受容体エフェクター細胞を、本明細書で開示されるキメラ受容体エフェクター細胞スイッチと接触させることを含む、標的細胞を活性化させる方法が、さらに本明細書で開示され、キメラ受容体エフェクター細胞は、接触が、（ｉ）キメラ受容体エフェクター細胞スイッチ上のＣＡＲ−ＩＤの、キメラ受容体エフェクター細胞上で発現されるキメラ受容体の非抗体細胞外ドメインへの結合と、（ｉｉ）キメラ受容体エフェクター細胞スイッチ上の標的化部分の、その標的抗原への同時結合との両方を含む場合、活性化のみされる。
標的細胞を溶解する方法がさらに開示される。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む標的細胞を溶解する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号６３〜９２、１０４、１１５、および１８１〜１８３から選択される配列を有するＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む標的細胞を溶解する方法を提供する。スイッチは、配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列と、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤとを含み得る軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列を含み得る。スイッチは、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み得る。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）表１１または表１２に記載されるＣＡＲから選択されるＣＡＲ、または配列番号２９０〜３８８、および４２３のうちのいずれか１つから選択される配列を有するｓｃＦｖであるヒト化された細胞外ドメインを有するＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む標的細胞を溶解する方法を提供する。スイッチは、配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列と、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤとを含み得る。軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列を含み得る。スイッチは、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み得る。
ＣＡＲ−ＥＣ（例えば、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣ）を、本明細書で開示される相補的ＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させることを含む、ＣＡＲ−ＥＣ（例えば、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させる方法が、さらに本明細書で開示され、接触が、（ｉ）ＣＡＲ−ＥＣスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤの、ＣＡＲ−ＥＣ上で発現されるキメラ受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外ドメインへの結合と、（ｉｉ）ＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の標的化部分の、その標的抗原への同時結合との両方を含む場合、ＣＡＲ−ＥＣが活性化のみされる。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含むＣＡＲ−ＥＣを活性化させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号６３〜９２、１０４、１１５、および１８１〜１８３から選択される配列を有するＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む、ＣＡＲ−ＥＣを活性化させる方法を提供する。スイッチは、配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列と、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤとを含み得る。軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列を含み得る。スイッチは、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み得る。いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）表１１または表１２に記載されるＣＡＲから選択されるＣＡＲ、または配列番号２９０〜３８８、および４２３から選択されるのうちのいずれか１つの配列を有するｓｃＦｖであるヒト化された細胞外ドメインを有するＣＡＲを含むＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｉ）本明細書で開示される相補的なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチとを投与することを含む標的細胞を死滅させる方法を提供する。スイッチは、配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列と、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤとを含み得る。軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列を含み得る。スイッチは、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み得る。
接触は、インビトロで起こり得る。接触は、インビボで対象内で起こり得る。対象は、本明細書で開示される対象のいずれかであり得る。対象は、ヒトであり得る。対象は、疾患を有し得る。疾患は、本明細書で開示される疾患のうちの任意の１つ以上であり得る。疾患は、癌であり得る。接触は、投与（または「投与すること」）を介し得る。投与は、本明細書で記載される方法の任意の１つ以上を介し得る。投与することは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、スイッチ（すなわち、相補的ＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣ）に結合するキメラ受容体を発現するＣＡＲ−ＥＣが、既に投与されている対象に投与することを含み得る。投与することは、対象にＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与すること、対象に、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合するＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣをさらに投与することを含み得る。
接触は、標的化された細胞の溶解を誘発し得る。接触は、標的細胞を死滅させる場合がある。接触は、約１ｐＭ〜約１００ｐＭの範囲の死滅のためにＥＣ５０を有する標的細胞を死滅させる場合がある。接触は、約１ｐＭより低い死滅のためにＥＣ５０を有する標的細胞を死滅させる場合がある。接触は、疾患を有する細胞を死滅させ得る。細胞は、本明細書で開示される任意の疾患を有し得る。疾患は、癌であり得る。
スイッチは、本明細書で開示される任意のスイッチであり得る。スイッチは、標的化部分に融合され、移植されるか、またはそれに結合されるＫ４ペプチドを含み得る。スイッチは、標的化部分に融合され、移植されるか、またはそれに結合されるＥ４ペプチドを含み得る。スイッチは、標的化部分に融合され、移植されるか、またはそれに結合されるＧＣＮ４ペプチドを含み得る。ＧＣＮ４ペプチドは、構造Ｉの配列：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）を含み得、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は全て、任意のアミノ酸であるか、または不在である。ＧＣＮ４ペプチドは、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体（例えば、配列番号１３９〜１５３および２４５のうちのいずれか１つ）を含み得る。スイッチは、標的化部分に融合され、移植されるか、またはそれに結合されるＦＬＡＧタグを含み得る。スイッチは、標的化部分に結合されたＦＩＴＣを含み得る。標的化部分は、ＣＤ１９に結合し得る。標的化部分は、ヒト化された抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分であり得る。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、（ｉ）配列番号１６〜２５から成る群から選択される軽鎖配列と、（ｉｉ）配列番号１〜１５から成る群から選択される重鎖配列とを含む、ＦＭＣ６３抗体またはそのＣＤ１９結合部分である標的化部分を含み得る。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、（ｉ）配列番号１６〜２５から成る群から選択される軽鎖配列と、（ｉｉ）配列番号１〜１５から成る群から選択される重鎖配列を含む、ＦＭＣ６３抗体またはそのＣＤ１９結合部分である標的化部分に融合されるＧＣＮ４ペプチドを含み得ＧＣＮ４ペプチドは、構造Ｉの配列：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）を含み、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は全て、任意のアミノ酸であるか、または不在である。ＧＣＮ４ペプチドは、本明細書で開示されるＧＣＮ４誘導体を含み得る。ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号１３９〜１５３および２４５のうちのいずれか１つから選択され得る。）
Ｘ．ＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム
（ｉ）エフェクター細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを含む、エフェクター細胞と、（ｉｉ）ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、ＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、標的細胞上の細胞表面分子に結合し、ＣＡＲおよびＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちの一方または両方が、ヒト化される、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチとを含む、ヒト化されたキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）プラットフォームが、本明細書で開示される。（ｉ）エフェクター細胞が、ＣＡＲを発現する、エフェクター細胞と、（ｉｉ）ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、ＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの標的化部分が、標的細胞上の細胞表面分子に結合し、ＣＡＲおよびＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちの一方または両方が、ヒト化されるＣＡＲ−ＥＣスイッチとを含む、ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣプラットフォームも、本明細書で開示される。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、本明細書で開示される任意のＣＡＲ−ＥＣスイッチ（例えば、本明細書で開示されるヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチ）から選択され得る。本明細書で使用される、「スイッチ可能なＣＡＲプラットフォーム」、「ＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム」、「ｓＣＡＲ−Ｔプラットフォーム」、「ｓＣＡＲ−Ｔ細胞プラットフォーム」、「スイッチ可能なキメラ抗原受容体プラットフォーム」、「キメラ抗原受容体エフェクター細胞プラットフォーム」、「ＣＡＲ−Ｔスイッチプラットフォーム」、「ｓＣＡＲプラットフォーム」、「スイッチプラットフォーム」、および「スイッチ可能プラットフォーム」という用語は、交換可能に使用される。
ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含み得る。ＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび少なくとも１つの第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、少なくとも２つのヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む。ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上のヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを含み得る。ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、２０超、２５超、３０超、３５超、４０超、４５超または５０個超のヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを含み得る含み得る。２個以上のスイッチは、本明細書で開示される１つ以上ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチまたはその組み合わせから選択され得る
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチをさらに含み得、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、第１のＣＡＲ−ＩＤおよび第１の標的化部分を含み、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、第２のＣＡＲ−ＩＤおよび第２の標的化部分を含む。第１のＣＡＲ−ＩＤおよび第２のＣＡＲ−ＩＤは、同じであり得る。第１のＣＡＲ−ＩＤおよび第２のＣＡＲ−ＩＤは、異なり得る。第１のＣＡＲ−ＩＤおよび第２のＣＡＲ−ＩＤは、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得る。第１の標的化部分および第２の標的化部分は、同じであり得る。第１の標的化部分および第２の標的化部分は、異なり得る。第１の標的化部分および第２の標的化部分は、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％同一であり得る。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、配列本明細書で開示される任意のスイッチを有し得る。例えば、それは、軽鎖および重鎖を含み得、軽鎖が、本明細書で開示される任意のスイッチ軽鎖配列を含むか、またはそれから成り、重鎖が、本明細書で開示される任意のスイッチ重鎖配列を含むか、またはそれから成る。かかる重鎖および／または軽鎖配列は、ヒト化され得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ヒト化され、かつ配列番号１７〜２４から選択される軽鎖配列と、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列とを含み、重鎖および軽鎖のうちの一方または両方は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤ）を含む。特定の実施形態では、軽鎖配列は、配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された配列（Ｎ末端のＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤを含む）と、配列番号２〜１４から選択される重鎖配列とを含む。特定の実施形態では、スイッチは、表６または表８に記載されるスイッチであり、本明細書で開示されるスイッチのうちのいくつかに含まれる重鎖／軽鎖の組み合わせを呈する。いくつかの実施形態では、スイッチは、スイッチに含まれるＣＡＲ−ＩＤが、修飾され、構造Ｉの配列を有することを除いて、表６または表８に記載されるスイッチと同一である。いくつかの実施形態では、構造Ｉの配列は、配列番号２６、３６、１３９〜１６３、および２４５のうちのいずれか１つから選択される。
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、第１のＣＡＲ−ＥＣをさらに含み得る。第１のＣＡＲ−ＥＣは、第１のＣＡＲを含み得る。第１のＣＡＲは、ヒト化され得る。第１のＣＡＲは、本明細書で開示されるＣＡＲであり得る。第１のＣＡＲは、本明細書で開示される任意のＣＡＲ配列を有し得る。第１のＣＡＲは、ヒト化され、免疫原性をヒトに減少し得る。第１のＣＡＲは、ヒト化される細胞外ドメインを含み得る。ヒト化は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに対する細胞外ドメインの特異性および親和性を保持しながら、ＣＡＲの免疫原性をヒトに減少し得る。第１のＣＡＲは、表１３に提供されるＣＡＲ配列のうちのいずれか１つのヒト化されたバージョンであり得、またはそれは、配列番号２７０〜２８９のうちのいずれか１つのヒト化されたバージョンであり得る。第１のＣＡＲは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのＣＡＲ−ＩＤに結合する抗体または抗体断片を含む、細胞外ドメインを含むヒト化されたＣＡＲであり得る。抗体または抗体断片は、ヒト化され得る。抗体断片は、ｓｃＦｖ（例えば、ヒト化されたｓｃＦｖ）であり得る。ｓｃＦｖまたはヒト化されたｓｃＦｖは、一般の構造軽鎖−リンカー−重鎖を含むか、またはそれから成り得る。ｓｃＦｖまたはヒト化されたｓｃＦｖは、一般の構造重鎖−リンカー−軽鎖を含むか、またはそれから成り得る。ヒト化されたｓｃＦｖは、ヒト免疫グロブリンフレームワークに移植された、非ヒト（例えば、マウス）ＣＤＲと共にヒト化されたＶＨ（可変重鎖）配列を含み得る。ヒト化されたｓｃＦｖは、ヒト免疫グロブリンフレームワークに移植された非ヒト（例えば、マウス）ＣＤＲと共にヒト化されたＶＬ（可変軽鎖）配列を含み得る。いくつかの特定の実施形態では、第１のＣＡＲは、図２４ＡのコンストラクトＡ〜Ｈから選択される構造を含む。ある特定の実施形態では、第１のＣＡＲは、図２４のコンストラクトＡ、コンストラクトＢ、またはコンストラクトＣに従う構造を含む。ある特定の実施形態では、第１のＣＡＲは、表１１に記載されるＣＡＲから選択される。ある特定の特定の実施形態では、第１のＣＡＲは、表１２に記載されるＣＡＲから選択される。ある特定の実施形態では、第１のＣＡＲの細胞外ドメインは、配列番号２９０〜３８８、および４２３のうちのいずれか１つから選択されるヒト化されたｓｃＦｖ配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、
ａ．
ｉ．配列番号２７〜３４から選択されるヒト化された軽鎖配列（Ｎ末端のＧＣＮ４ ＣＡＲ−ＩＤを含む）、および配列番号２〜１４から選択される重鎖配列を含み、
ｉｉ．表６または表８に記載される通り、本明細書で開示されるスイッチのいくつかに含まれる重鎖／軽鎖の組み合わせを呈するか、または
ｉｉｉ．スイッチに含まれるＣＡＲ−ＩＤが、修飾され、配列番号２６、３６、１３９、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される配列を有することを除いて、表６または表８に記載されるスイッチと同一である、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、
ｂ．ＣＡＲが、
ｉ．図２４ＡのコンストラクトＡ〜Ｈから選択される構造を含み、
ｉｉ．図２４ＡのコンストラクトＥに従う構造を含み、
ｉｉｉ．表１１に記載されるＣＡＲから選択され、
ｉｖ．表１２に記載されるＣＡＲから選択されるか、または
ｖ．細胞外ドメインが、配列番号２９０〜３８８、および４２３のうちのいずれか１つから選択されるヒト化されたｓｃＦｖ配列を含む、相補的な第１のＣＡＲを発現する第１のＣＡＲ−ＥＣと、
任意に、
ｃ．少なくとも１個が、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の標的化部分とは異なる標的に結合する異なる標的化部分を含み、それぞれ第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤは、任意に第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤと同じか、または異なり
いくつかの実施形態では、第１のスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤは、第２のスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤとは異なり、第１のＣＡＲは、第２のＣＡＲ−ＩＤに結合し得ず、プラットフォームはまた、第２のスイッチ上のＣＡＲ−ＩＤに結合する第２のＣＡＲ−ＥＣを含み得る、１個以上の第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチとを含む。
実施例１
ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの設計
背景：
抗ＣＤ１９マウスクローンＦＭＣ６３を、スイッチ可能なＣＡＲ−ＥＣプログラムのためのスイッチとしての選考研究のコンセプトの証拠として使用した。ＦＭＣ６３クローンは元々、１９９１ ｂｙ Ｈ．Ｚｏｌａ ａｎｄ ｃｏｗｏｒｋｅｒｓ（１）に記載され、Ｃａｒｌ Ｊｕｎｅ ａｎｄ ｃｏｗｏｒｋｅｒｓ（２−４）からの最も良く研究された従来のＣＡＲ−Ｔ細胞で使用される。ヒトへの適用で免疫原性に対する潜在性を減少させるため、ＦＭＣ６３抗体のマウスフレームワーク領域を、部分的にヒト配列と入れ替えた。
一般プロセス：
手短に、ヒト化プロセスを以下のように実行した。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）ドメインに対するマウスＦＭＣ６３配列を、ワールドワイドウェブアドレス：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）のＮＣＢＩウェブサイトで利用可能なＩｇＢＬＡＳＴプログラムに提出した（またＹｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１３ Ｊｕｌ；４１（Ｗｅｂ Ｓｅｒｖｅｒ ｉｓｓｕｅ）も参照されたい（参照によりその全体が本明細書に組込まれる））。それぞれのマウス配列を、マウス生殖系列配列と比較し、次いでヒト生殖系列配列と比較した。
重鎖分析
マウスＦＭＣ６３ ＶＨを、ヒト生殖系列ＩＧＨＶ４−５９ヒトと整列させた（表４）。無料決定領域（ＣＤＲ）は一般に、ＡｂＭからのＡｂＹｓｉｓ（ワールドワイドウェブアドレスｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／で利用可能、参照によりその全体が本明細書に組込まれる）を使用して定義され、ＡｂＭ番号付けは、このレポートで使用されるであろう。マウスＦＭＣ ＶＨとヒトＩＧＨＶ４−５９との間の多数のフレームワーク差異において、ＶＨドメインおよびそのＣＤＲの立体構造に影響し得る９個を特定し、潜在性影響を調査することを決定した。
設計ｈＦＭＣＨ２（表４）は、７個の変更−−２０、４８、６７、７１、７８、８２、および８２ｃの位置のマウス残基と共に、完全なヒトＩＧＨＶ４−５９（「ｈ４−５９＿０１」）フレームワークを有する。
設計ｈＦＭＣＨ３（表４）は、ｈＦＭＣＨ２の全ての変更に加えて、マウスＡｓｎ７３に変更されたＴｈｒ７３を有する。
位置９４での追加の変更もまた、調査した。設計ｈＦＭＣＨ４ａは、ｈＦＭＣＨ２に含まれる全ての変化に加えて位置９４変更を有し、設計ｈＦＭＣＨ４ｂは、ｈＦＭＣＨ３に含まれる全ての変更に加えて位置９４変更を有する。
加えて、Ｎ末端残基を、ｐｙｒｏＧｌｎ形成を除去するため、様々なコンストラクトでのＧｌｎの代わりに、Ｇｌｕに変異させた。様々な例示的なコンストラクトの重鎖配列の整列は、図１Ａおよび図１Ｂに提供される。
軽鎖分析
マウスＦＭＣ ＶＬを、ヒト生殖系列ＩＧＫＶ１−３９と整列させた（表５）。使用されるＣＤＲの定義は、ＡｂＭ（ワールドワイドウェブアドレスｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／で利用可能（参照によりその全体が本明細書に組込まれる））からのものである。マウスＦＭＣ ＶＬとヒトＩＧＫＶ１−３９との間の差異の多数のフレームワークでは、位置７１のみ、ＶＬドメインおよびそのＣＤＲの立体構造に影響する可能性があるであろう。
設計ｈＦＭＣＬ２は、Ｐｈｅ７１Ｔｙｒ変更を含む。
ＦＭＣ ＣＤＲ−Ｌ３は、脱アミノに対して低傾向を有するＡｓｎ残基（Ａｓｎ９２）を有し、したがってこの残基は、アラニンに変更され得る。軽鎖配列の整列は、図２Ａおよび図２Ｂに提供される。
スイッチ産生
上記のヒト化された「ＦＭＣ６３ ＶＨ」および／または「ＦＭＣ６３ ＶＬ」配列を含有するＣＡＲ−ＥＣスイッチを、ＧＣＮ４ペプチドを、Ｒｏｄｇｅｒｓ ＤＴ，ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２０１６；１１３（４）：Ｅ４５９−６８．ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１５２４１５５１１３．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２６７５９３６９；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４７４３８１５（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に記載されるＧＧＧＧＳリンカーと接続された軽鎖（ＬＣＮＴ）のＮ末端に遺伝子的に融合することで産生した。これらの非限定的な例では、配列ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号２６）を含むＧＣＮ４ペプチドを使用した。したがって、ＬＣＮＴコンストラクトは、以下の構造：ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ−［ＧＧＧＧＳ］−［ＦＭＣ６３ ＶＬ配列またはそのヒト化されたバリアント］を含んだ。
（５）．スイッチを、１つの重鎖および１つの軽鎖（例えば、ＦＭＣ６３ ＶＬまたはＧＮＣ４ペプチド融合ＬＣＮＴバリアント）と共に発現させ、および実施例２に記載される通り均一に精製した。
表６は、ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチバリアントの２１個の非限定的な例を示す。これらのスイッチを製造するために使用される重鎖／軽鎖の組み合わせは、表６の列に示される。例えば、組み合わせ２として以下に標識されたＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＦＭＣ６３ヒト化された可変重鎖Ｈ２（すなわち、図１Ａおよび図１Ｂに示されるｈＦＭＣＨ２）およびヒト化された可変軽鎖Ｌ２（すなわち、図２Ａおよび図２Ｂに示されるｈＦＭＣＬ２）を含んだ。上記の通り、この実施例で例示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチに含まれる軽鎖の全ては、ＧＧＧＧＳリンカーによって連結されるそれらのＮ−末端にＧＣＮ４ペプチド融合をさらに含む。そのため、組み合わせ２は、一般の構造（Ｎ−末端からＣ−末端まで、または省略して「Ｎ〜Ｃ」）ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ−［ＧＧＧＧＳ］−［ｈＦＭＣＬ２］を有するｈＦＭＣＨ２およびタグ付けされた軽鎖を含み、組み合わせ３は、一般の構造Ｎ〜ＣのＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ−［ＧＧＧＧＳ］−［ｈＦＭＣＬ２］を有するｈＦＭＣＨ３およびタグされた軽鎖を含み、組み合わせ７は、一般の構造ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ−［ＧＧＧＧＳ］−［ｈＦＭＣＬ２ｂ］を有するｈＦＭＣＨ４ｂおよびタグされた軽鎖を含み、以下同様であった。これらの軽鎖Ｎ末端（ＬＣＮＴ）スイッチ配列は、表７の以下に列挙される。
実施例２
ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチの発現および精製
手短に、ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを発現および精製するために、表６に示される模式図に従って、表４に記載される１つの重鎖バリアントを、表５に記載される１つの軽鎖バリアントと対を形成させ、軽鎖は、表７に示される通りＬＣＮＴ形式でＧＧＧＧＳリンカーを介して連結されたＧＣＮ４ペプチドを含み、かつ以下のタンパク質発現方法に従って、得られたスイッチを発現および精製した。
Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（３０ｍｌの培養容積）内のタンパク質発現
Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（マサチューセッツ州、ウォルサム、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ１４５２７）のトランスフェクションを、ＥｘｐｉＦｅｃｔアミン２９３トランスフェクションキット（マサチューセッツ州、ウォルサム、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ１４５２４）と共に提供される、製造者のプロトコルの修飾されたバージョンを使用して実行した。
手短に、トランスフェクションの２４時間前に、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（マサチューセッツ州、ウォルサム、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ１４５２７）を、予め温められたＥｘｐｉ２９３発現培地（マサチューセッツ州、ウォルサム、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ１４３５１０１）内で１．５ｘ１０６細胞／ｍｌで播種した。トランスフェクションの日に、細胞を数え、生存率について調べ、次いで予め温められたＥｘｐｉ２９３発現培地内で、２．９ｘ１０６細胞／ｍｌと等しい最終的な密度まで希釈した。フラスコを、最小１時間で、３７°Ｃ／５％のＣＯ２インキュベーターでオービタルシェーカーに戻した。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチタンパク質をコードするＤＮＡを用いたトランスフェクションを、１：１の重鎖対軽鎖比（それぞれの鎖に対して１５μｇのＤＮＡ）で実施した。ＤＮＡを、ＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ減少血清培地内で、１．５ｍｌの最終容積に希釈した。８０μｌのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅを、１．５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ減少血清培地内で希釈し、かつ５分間室内温度でインキュベートした。ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ／ＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ混合物を、ＤＮＡを含有する管に添加し、次いでピペットで穏やかに混合し、２０分間室内温度でインキュベートした。Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞を、３７°Ｃ／５％のＣＯ２インキュベーターから除去し、３ｍｌのＤＮＡ／ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ混合物を、細胞に添加し、オービタルシェーカー上で、約１２０ｒｐｍ、３７°Ｃ／５％のＣＯ２インキュベーターでインキュベートした。トランスフェクションの１６〜１８時間後、１５０μｌの促進剤１および１．５ｍｌの促進剤２（ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ２９３トランスフェクションキットに提供される）をそれぞれのウェルに添加した。最終容積は、およそ３０ｍｌであった。最終的に、トランスフェクションの７２時間後、細胞を回収し、以下に記載されるプロトコルに従ってスイッチを精製した。
タンパク質Ｇ精製（０．６ｍｌの定着ベッド容積）
トランスフェクションの７２時間後、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを含有する３０ｍｌの細胞培養を回収し、細胞／培地を５０ｍｌのコニカル管に移動させ、５分間、４００×ｇ（約１，０００ ｒｐｍ）で回転させ、無菌濾過し、２０ｘタンパク質Ｇ結合緩衝剤（１Ｍのナトリウムアセテート）ｐＨ５．２の１／４０ｔｈの容積（０．７５ｍｌ）と混合させ、タンパク質Ｇセファロースへの最適な結合のために粗ＣＡＲ−ＥＣスイッチ溶液のｐＨを低下させた。
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、プロダクトコード１７−０６１８−０１）の５０％のスラリーを、１個のタンパク質Ｇ結合緩衝剤で調製し、１．２ｍｌの５０％のスラリーを、１２ｍｌＰｏｌｙ Ｐｒｅｐクロマトグラフィーカラムに添加し、次いで６ｍｌの１個のタンパク質Ｇ結合緩衝剤で洗浄した。発現されたＣＡＲ−ＥＣスイッチタンパク質を含有する上清を、カラム上に通し、５０ｍｌのコニカル管内でフロースルーを収集した。カラムを、１２ｍｌ（２０ ＣＶ）の１個のタンパク質Ｇ結合緩衝剤で洗浄し、次いでＣＡＲ−ＥＣスイッチタンパク質を、１．８ｍｌ、１００ｍＭのグリシンｐＨ２．８内で溶出し、次いで０．２ｍｌ、１ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ８を、溶出物に添加し、ｐＨを中性化した。
溶出に続いて、１個のＰＢＳ ｐＨ７．４を、溶出物断片に添加し、２．５ｍｌと等しい最終容積を生み出した。緩衝剤を、以下の通りにＰＤ１０脱塩カラムを使用して、１個のＰＢＳ ｐＨ７．４に交換した。ＰＤ１０カラムを、２５ｍｌの１個のＰＢＳ ｐＨ７．４で平衡した。２．５ｍｌの精製されるタンパク質溶液を、ＰＤ１０カラムに添加した。タンパク質を、３．５ｍｌの１個のＰＢＳ ｐＨ７．４内でＰＤ１０脱塩カラムから溶出し、タンパク質断片を、４ｍｌ、１０Ｋのカットオフアミコンスピン濃縮器でおよそ０．２００ｍｌに濃縮した。
タンパク質濃縮を、ＮａｎｏＤｒｏｐ（マサチューセッツ州、ウォルサム、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で、製造者のプロトコルに従って測定し、次いで２μｇのタンパク質を、４〜１２％のＢｉｓ−Ｔｒｉｓグラジエントゲル上でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって可視化した。図３および図４は、それぞれのレーンでロードされ、２つの状態（非還元（左側）および１０ｍＭのＤＴＴの付加によって還元された（ｒｉｇｈｔ ｓｉｄｅ））で分析された２μｇタンパク質を有するゲルの写真を示す。
ヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチバリアントの全ては、良く発現された。
実施例３
ＣＡＲ−ＥＣスイッチ結合効率の決定
ヒト化されたバリアントの相対結合効率を決定するために、フローサイトメトリー系結合を、以下の通りに実行した。
ＣＡＲ−ＥＣスイッチ結合効率のフローサイトメトリー分析のための細胞の調製
ＣＤ１９＋ＲＳ４；１１細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１８７３（商標））を、回収し、３００×ｇ、５分間、４°Ｃで遠心分離し、次いで細胞を、氷冷ＦＡＣ緩衝剤（ＰＢＳ、５％子牛血清、１ｍＭのＥＤＴＡ）で、５×１０６細胞／ｍＬの濃度で再懸濁した。１００μＬの細胞懸濁液を、９６−ウェルプレートの１つのウェルにつき分注し、次いで細胞を以下の洗浄方法を使用して洗浄した。ａ）２００μＬのＦＡＣ緩衝剤を、プレートのそれぞれウェルに添加し、ｂ）プレートを、３００×ｇ、５分間、４°Ｃで遠心分離し、ｃ）上清を、シンクへのフリックモーションによってプレートから除去し、ｄ）細胞ペレットを、プレートの穏やかなボルテックスにて緩め、かつｅ）細胞ペレットを、緩衝剤の好適な容積で再懸濁した（以下に記載される通り）。
初期ＣＡＲ−ＥＣスイッチ結合のために、洗浄方法工程ｅ）からの細胞ペレットをそれぞれ、ＦＡＣＳ緩衝剤で希釈された５０μｌの一次「試験」ＣＡＲ−ＥＣスイッチタンパク質で再懸濁した。ＣＡＲ−ＥＣスイッチ濃度の範囲を、結合を試験するために使用し、例えば１０−１〜１０３ｐＭのＣＡＲ−ＥＣスイッチの範囲である。
細胞をＣＡＲ−ＥＣスイッチを用いて、４°Ｃ、暗所で、３０分間インキュベートし、次いで細胞を３回、上記の洗浄方法を使用して洗浄した。洗浄方法工程ｅ）からのそれぞれの細胞ペレットを、ＦＡＣＳ緩衝剤（検知抗体は、ＰＥ共役されたヤギ抗ヒトΚ：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ｃａｔ．＃２０６０−０９である）内で１／１００で希釈された５０μＬの検知抗体を用いて再懸濁した。細胞を、４°Ｃ、暗所で、３０分間インキュベートし、３回、上記の洗浄方法を使用して洗浄し、次いで洗浄方法工程ｅ）からの細胞ペレットを、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝剤で再懸濁した。
データを、Ｕ底９６ウェルプレート、３青１赤のレーザー設定で構成されたフローサイトメトリー上で得た。ゲートを確立し、目的の細胞集団を同定し、単一の細胞およびＰＥ陽性細胞、および３０，０００の事象を得た。
データ分析
フローサイトメトリーデータを、ＦｌｏｗＪｏ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖ１０（オレゴン州、アッシュランド、ＦｌｏｗＪｏ，ＬＬＣ）を使用して分析した。手短に、ＰＥシグナルの平均蛍光性強度（ＭＦＩ）を全ての事象で得たが、しかしＰＥ陽性細胞上でゲートしなかった。ＸＹ表を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（カリフォルニア州、ラホヤ、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．）で作成し、およびデータを入力し、ＰＥ ＭＦＩ対ＣＡＲ−ＥＣスイッチ濃度をプロットした。データをＸ＝ｌｏｇ関数を使用して形質転換し、次いで「ｌｏｇ（アゴニスト）対応答（３つのパラメータ）」関数を使用して当てはめた。図５、図６、図７、図８、および図９は、データが、様々な試験されたＣＡＲ−ＥＣスイッチをプロットすることを示すＥＣ５０値は、プロットの隣に示される。
実施例４
標的細胞細胞毒性を誘発するためのＣＡＲ−ＥＣスイッチ効率の決定
スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞プラットフォームに対するスイッチとしてのヒト化されたＦＭＣ６３バリアントの有効性を決定するために、バリアントを、上記の実施例１に記載される通りにＧＧＧＧＳリンカーと接続された軽鎖のＮ末端（ＬＣＮＴ）上のＧＣＮ４ペプチドを用いて発現させ、１つの重鎖および１つの軽鎖ＬＣＮＴバリアントを用いてスイッチを発現かつ精製し、上記の実施例１および２に記載される通りに均一に精製した。
ｓＣＡＲ−Ｔ細胞を、Ｒｏｄｇｅｒｓ ＤＴ（２０１６）（上記）に以前に記載される通りにコンストラクト化した。コンストラクトは手短に、抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖ−ＩｇＧ４ｍヒンジ−ＣＤ８膜貫通ドメイン−ＣＤ１３７（ａｋａ ４−１ＢＢ）共刺激ドメイン−ＣＤ３ｚ活性ドメインとして記載される。
細胞毒性アッセイ方法
細胞毒性アッセイを以下の通りに実行した。１日目に、冷たいＲＰＭＩ−５内のスイッチの６点段階希釈を、可膨張性底の９６ウェルプレート内で、それぞれのスイッチに対して１カラムを使用して調整した。任意に、スイッチプレートを、４°Ｃで、１週間、またはドライアイス上での急速冷凍で保存し、−８０°Ｃの長期で保存した。試料を、２通りまたは３通りで実行した。加えて、以下の制御が、含まれた。
ｉ．最大死滅−アッセイの終了前４５分で溶解し、最大ＬＤＨレベル／１００％細胞毒性のための値を提供する標的細胞のみ。最大死滅はまた、「最大ＬＤＨ値」としても称される。
ｉｉ．自発性死滅−背景標的細胞溶解として作用する標的細胞のみ。
ｉｉｉ．エフェクター細胞のみ−この制御は、アッセイが失敗した際の診断での使用のためのエフェクター細胞の背景ＬＤＨシグナルを示す。
ｉｖ．エフェクターおよび標的細胞のみ−共培養細胞の結果の背景細胞毒性を決定するためのスイッチ制御はない。
ｖ．培地のみ−アッセイが失敗した際の診断の使用、かつ従来のＣＡＲ−Ｔ細胞の細胞毒性を計算するための培地のための制御。
細胞を、３００×ｇで、５分間室内温度で遠心分離し、および予め温められたＲＰＭＩ−５培地内で、２ｘ１０６／ｍＬの濃度で、ＣＡＲエフェクター細胞に対して、かつ２ｘ１０５／ｍＬで標的細胞に対して播種した。標的およびＣＡＲエフェクター細胞は、＞９５％生存率を有し、背景を減少した。基準アッセイのために、１００，０００個のエフェクター細胞（Ｅ）および１０，０００個の標的細胞（Ｔ）を使用し、１０：１のＥ：Ｔの比を得た。アッセイは、それぞれのウェルにおいて５０μＬのエフェクター細胞および５０μＬの標的細胞を使用し、次いでウェルを培地を用いて最高レベルにし、全てのウェル内で等しい容積になることを確実にした。最終的に、２μＬのＣＡＲ−ＥＣスイッチ溶液を、同等のウェルに添加し、次いでプレートを２０〜２４時間インキュベートした。
ＬＤＨアッセイ方法：２日目、ＬＤＨアッセイの実行：
ＬＤＨアッセイをＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒω、Ｇ１７８０）を使用して、製造者のプロトコルに従って実行した。このアッセイにおいて以下に列挙される全ての緩衝剤および試薬は、このＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）キットの構成要素である。手短に、２日目、アッセイの終了４５分前、１０μＬの１０個の溶解緩衝剤を‘最大死滅’制御ウェルに添加し、細胞を、複数のピペット動作で手動で溶解した。
ＬＤＨマスター混合物を、３７°Ｃの水浴で解凍した１２ｍＬのアッセイ緩衝剤を、１つのバイアルのＬＤＨアッセイ作業試薬に添加することで調整した。溶解緩衝剤を用いた最大死滅制御ウェルの４５分のインキュベーション後、プレートを４００×ｇで、５分間遠心分離し、３０μＬの上清を新しい９６ウェルプレート（平底）の同一のウェルに移動した。３０μＬのＬＤＨ作業試薬を、それぞれのウェルに添加し、３０分間、室内温度 、暗所でインキュベートした。次いで、３０μＬのＳｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎを、それぞれのウェルに添加し、吸収をＯＤ４９５で読み取り、かつデータを．ｔｘｔまたは．ｘｌｓｘファイルでエクスポートした。
ＬＤＨアッセイデータ分析：
未加工のデータを、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌに移動し、アッセイのための１００％の細胞毒性値を、以下の式を用いて計算した。ＯＤ最大死滅−ＯＤ自発性死滅
‘エフェクターおよび標的細胞のみ’の値（すなわち、ＯＤ４９５読み取り値）を、全ての試料値から差し引いた。
％細胞毒性を、以下の式を使用して計算した。
１００×（試料ＯＤ４９５／最大ＬＤＨ値）
値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ内にプロットした。データを、Ｘ＝ｌｏｇ関数を使用して形質転換し、ＥＣ５０値を「ｌｏｇ（アゴニスト）アゴニスト対応答（３つのパラメータ）」当てはめ関数を使用して計算した。
ＬＤＨ細胞毒性アッセイ結果：
ＬＤＨ細胞毒性アッセイ結果が、図１０〜１１に示される。特異的に、図１０は、ＣＤ１９陽性である、ＲＳ４；１１細胞に対するｓＣＡＲ−ＥＣ細胞（例えば、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞）のＬＤＨ細胞毒性を示し、図１１は、ＣＤ１９−陰性である、Ｋ５６２細胞に対するｓＣＡＲ−ＥＣ細胞（例えば、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞）のＬＤＨ細胞毒性を示す。両方の場合において、ｓＣＡＲ−ＥＣ細胞（例えば、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞）は、スイッチ可能なＣＡＲの発現に対して８０％陽性であり、細胞は、説明文に列挙される様々なヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチバリアントのうちの１つを用いて治療された。
ＣＤ１９陽性ＲＳ４；１１細胞細胞毒性の強い用量依存性誘発を、ｓＣＡＲ／ヒト化されたスイッチ組み合わせ（図１０、表８）を用いた治療により観察した。表８は、４回のアッセイにわたって調製される様々なヒト化されたスイッチを用いたＬＤＨ細胞毒性アッセイに対するＥＣ５０値を示す。アッセイは、ＤＴＲ−５−１５（図１０に示される）、ＤＴＲ−５−１６、ＤＴＲ−５−５０、ＤＴＲ−５−５１で番号付けされる。細胞が、ＰＢＭＣで標識されたアッセイは、選別されていないＰＢＭＣの形質導入から誘導されるスイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞であり、かつ細胞が、ＣＤ４：ＣＤ８で標識されたアッセイは、選別されたＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞から誘導されるスイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞であり、細胞毒性アッセイ内で同等の比で伝達および使用される。ｍｕＦＭＣ６３ ＬＣＮＴは、マウスＦＭＣ６３系スイッチを示す。
ｓＣＡＲ／ヒト化されたスイッチ組み合わせ（図１０）を用いた治療によって観察された、ＣＤ１９陽性ＲＳ４；１１細胞細胞毒性の強い用量依存性誘発とは対照的に、ＣＤ１９−陰性Ｋ５６２細胞に対するｓＣＡＲ−ＥＣ細胞（例えば、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞）のほとんどのＬＤＨ細胞毒性が、ｓＣＡＲ／ヒト化されたスイッチの組み合わせを用いた治療によって観察されなかった（図１１）。したがって、ｓＣＡＲ／ヒト化されたスイッチ組み合わせで誘発される細胞毒性は、標的抗原（ＣＤ１９）を発現する細胞に対して特異的であり、細胞毒性の非特異性活性は、スイッチのそのｓＣＡＲ−Ｔ細胞への結合のため、めったに起こらない。
相関性が、結合親和性（フローサイトメトリーによる）と活性（インビトロの細胞毒性による）との間に存在するかを決定するために、親和性を、サイトカイン放出およびそれぞれの候補に対する細胞毒性のＥＣ５０に沿ってプロットした（図２２Ａに示される細胞毒性の滝プロット、図２２Ｂに示される相関性）。直鎖関係を、親和性とＥＣ５０との間に、ならびにサイトカイン放出と図に示されるｒ２’ｓを用いたインビトロのＥＣ５０との間に見出した。高い効力（より低い）ＥＣ５０’ｓは、高いサイトカイン放出（０．１ｎＭのスイッチで測定される）を提供し、高い効力（より低い）ＥＣ５０’ｓは、より高い親和性とヒト化された候補とに相関関係を見出した。
これらの候補がどのようにインビボで機能したかをアッセイするために、ＮＡＬＭ−６アッセイを、研究者の基準の状態を使用して実施した（図２２Ｃ）。第１の実験では、４つの候補、Ｌ２ｂ／Ｈ４ｂ、Ｌ２ｂ／Ｈ４ｃ、Ｌ２ｃ／Ｈ４ｂ、Ｌ２ｃ／Ｈ４ｃを、元々の４−１ＢＢ系マウス５２ＳＲ４ ＣＡＲ−Ｔ候補（ＴＳＹ−２−１９３）を使用してこのモデル内で試験した。第２の実験では、元々の４−１ＢＢ系マウス５２ＳＲ４ ＣＡＲ−Ｔ候補を反復し、かつ三代目の２８ＢＢ Ｌ５Ｈ４候補ｓＣＡＲ−Ｔ細胞と比較した。総合的に、ヒト化されたスイッチ候補Ｌ２ｂ／Ｈ４ｃは、９匹のマウスのうち５匹で腫瘍を排除した。これは、他の候補より優れている。ヒト化されたフレームワーク領域とのこの候補の整列および元々のマウスＦＭＣ６３配列を、図２３で提供する。
ヒト化されたスイッチ候補Ｌ２ｂ／Ｈ４ｃは、高い回復ＭＳ、熱安定性を含んだ発達可能性分析を通して、シリコＴ細胞エピトープ分析（免疫原性）、およびＣＩＣ、ＳＩＣ、ＨＩＣ、ＳＥＣクロマトグラフィにおいて、好ましい生物物理学的特性を有した。特異的に、Ｌ２ｂ／Ｈ４ｃは、キメラＦＭＣ６３系スイッチと比較して、改善された熱安定性および産生率を有した（図２２Ｄ）。分析サイズ排除は、Ｌ２ｂ／Ｈ４ｃ候補が、モノマーであったことを示した
実施例５
クローンＨＦＭＣ２Ｂ−ＬＣＮＴ／ＨＦＭＣＨ４Ｃの免疫原性分析
ＥｐｉＭａｔｒｉｘシステム（ローアイランド州、プロヴィデンス、ＥｐｉＶａｘ，Ｉｎｃ）を使用して、軽鎖ｈｕＦＭＣＬ２ｂ−ＬＣＮＴのアミノ酸配列（いくつかの実施形態では、「ｈｕ」「ｈ」は、様々なコンストラクトで交換可能に使用され、例えば、ｈｕＦＭＣＬ２ｂおよびｈＦＭＣＬ２ｂは、コンストラクトが少なくとも部分的にヒト化されることを示すことに注意されたい）、および重鎖ｈＦＭＣＨ４ｃ配列は、総合および領域免疫原性潜在性の両方に対して、分析される。加えて、研究者は、これらの配列を、ＭＨＣＩＩ級エピトープへのジェンバンクの非重複性ヒトタンパク質データベースおよびアレルギーおよび免疫学へのＬａ Ｊｏｌｌａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの免疫エピトープデータベース（ワールドワイドウェブアドレス：ｉｅｄｂ．ｏｒｇ／にて利用可能（コンテンツは参照によりその全体が本明細書に組込まれる））に対してスクリーニングした。最終的に、研究者は、完全なヒトＦＭＣ抗体の免疫原性潜在性を評価するために、重鎖および軽鎖可変ドメインを組み合わせた。
全ての他の因子が等しい条件で、所与のタンパク質に含有されるＨＬＡリガンド（すなわち、ＥｐｉＭａｔｒｉｘ ｈｉｔｓ）が多い程、タンパク質が免疫応答を誘発する可能性が高い。このコンセプトを捕らえるために、研究者は、ＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅを使用した。ＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅは、研究者が所与のサイズのタンパク質内に見出すことを予測するであろう、予測されるＴ細胞エピトープの数と、ＥｐｉＭａｔｒｉｘシステムによって予測される推定上のエピトープの数との間の差異である。ＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅは、観察された免疫原性と相関する。ＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅは、「正規化され」、標準スケールでプロットされ得る。「平均」タンパク質のＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅは、０である。０超のＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅは、過剰のＭＨＣリガンドの存在を示し、免疫原性に対するより高い潜在性を表示するが、ゼロ未満のスコアは、予期されたものより少ない潜在性ＭＨＣリガンドおよび免疫原性に対するより低い潜在性の存在を示す。＋２０超のタンパク質スコアは、顕著な免疫原性潜在性を有することが考慮される。
調節性Ｔ細胞エピトープの存在のための調製抗体は、それらの可変ドメインのアミノ酸配列（特にそれらの相補性決定領域（ＣＤＲｓ））が、異常な程度まで変動し得る、固有のタンパク質である。それは、抗体に多種多様な抗原を認識させることを可能にする、この変動性である。しかしながら、この柔軟性は、代償を払う。抗体変異を制御する組換えおよび変異事象もまた、新しいまたはネオＴ細胞エピトープを産生し得る。これらのネオエピトープは、循環Ｔ細胞に対して「外来性」に見える場合がある。抗体配列内のネオエピトープの存在は、ヒト−抗ヒト抗体応答（いわゆるＨＡＨＡ応答）の形成に繋がる。
調節性Ｔ細胞は、変異され、および／または抗体ＣＤＲなどの高い可変配列を含有するものを含む、免疫応答を完全なヒトタンパク質に周辺で抑制するのに、重要な役割を果たす。調節性Ｔ細胞は、調節性Ｔ細胞エピトープによって関与および活性化される。研究者は、抗体配列内のネオエピトープの存在に関連する固有のリスクが、天然発生調節性Ｔ細胞エピトープの存在によってバランスが取られることを信じている。
多くのヒト抗体単離の配列のスクリーニングによって、研究者は、研究者が、調節性潜在性有すると信じるいくつかの高い保存ＨＬＡリガンドを特定した。実験の証拠は、これらのペプチドの多くが、実際に、ほとんどの対象において活性的に免疫寛容原性であることを示唆している。研究者は、これらの高い保存断片を、トレギトープ（トレギトープ）と称する。トレギトープ観察は、Ｂｌｏｏｄ（Ｄｅ Ｇｒｏｏｔ，ＡＳ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２００８）Ｏｃｔ １５；１１２（８）：３３０３−１１（参照によりその全体が本明細書に組込まれる））にて公開されており、および多くの候補トレギトープが、特許出願中である。多くの場合、ヒト化された抗体に含有されるネオエピトープの免疫原性潜在性は、顕著な数のトレギトープの存在において効果的に制御され得る。抗体免疫原性分析の目的のために、研究者は、トレギトープ調製され、抗療法抗体応答の予測に対応しているＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｓｃｏｒｅを開発した。トレギトープ調製されたＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｓｃｏｒｅを計算するために、研究者は、トレギトープのスコアを、抗体の組み合わせた可変ドメインのＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅから差し引いた。研究者の経験では、トレギトープ調製されたスコアは、観察される臨床免疫応答と良好に相関する。
トレギトープの存在のための調製後、抗体可変ドメインのＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅｓは、低くなる傾向がある。２２個のライセンス化された抗体の平均のトレギトープ調製されたＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅは、−２０．７１である。もちろん、全ての抗体が等しく産生されるわけではない。いくつかは、多くのトレギトープを含有するが、一方他は、少量を含有するか、または全く含有しない。抗療法抗体を、暴露された対象の５％超で誘発すると知られる、１０個の抗体の平均トレギトープ調製されたＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅは、−４．７７である。抗療法抗体を、暴露された対象の５％超で誘発すると知られる、１２個の抗体の平均トレギトープ調製されたＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅは、−３４．０１である。顕著な数のトレギトープの存在は、低い観察された免疫原性と良好に相関する。研究者の試料内の抗体の全てを考慮して、トレギトープ調製されたＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｓｃｏｒｅと観察された免疫原性との間の相関性の係数は、０．７６である（図１２を参照されたい）。
免疫原性抗体の相対的に低いトレギトープ調製された平均スコア（−４．７７）と、観察された抗療法免疫応答の相対的に高い発生率との間の明らかな矛盾を記述することは興味深い。研究者は、抗体のＣＤＲに含有されるネオエピトープが、別様の低いスコア抗体においてさえ、顕著なリスク因子であることを示唆する。上記で示唆される通り、研究者は、抗体ＣＤＲに関連する高リスクはおそらく、ヒト抗体生殖系列内のトレギトープの発達および保持の裏にある進化的ドライバーであることを信じる。
結果．
提出された重鎖および軽鎖配列の分析において、対立遺伝子による合計３，５２０フレーム評価を実施した。発見の概要が、以下表９に提示される。
図１３は、グラフィックスケールでの研究者の結果を示し、また、どのように提出された配列が、基準対象のシリーズに対して評価するかを示す。
ｈＦＭＣＨ４ｃは、合計１０４のＥｐｉＭａｔｒｉｘ ｈｉｔｓを含有する。そのトレギトープ調製されたＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅは、−２２．５１である。このスコアは、研究者のスケールの低端になり、免疫原性に対する限られた潜在性を示す。ｈＦＭＣ２ｂ−ＬＣＮＴは、合計１１１のＥｐｉＭａｔｒｉｘ ｈｉｔｓを含有する。そのトレギトープ調製されたＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅは、−１５．７０である。このスコアは、研究者のスケールの中位の範囲になり、免疫原性に対するわずかに減少された潜在性を示す。組み合わされたｈｕＦＭＣ可変ドメインを見ることで、研究者は、−１３．７３のトレギトープ調製されたＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅを計算し、ライセンス化されたモノクローナル抗体産生物のセット内の、観察される臨床免疫原性に対するトレギトープ調製されたＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｏｒｅの退縮に基づいて、５．７％の抗ｄｒｕｇ抗体レートを予測する。非免疫原性と知られる他のライセンス化された抗体と比較して、これらのスコアは、わずかに上昇し、抗療法応答に対して少なくともいくつかの潜在性を示す。
実施例６
ＧＣＮ４ペプチドエピトープの修飾
５２ＳＲ４（抗ＧＣＮ４）ＣＡＲへの結合のための最適なエピトープを決定するために、研究者は、ＧＣＮ４ペプチド配列（配列番号１３８）を様々な位置で修飾し、したがってＧＣＮ４ペプチド誘導体を作成した。
配列番号１３９、ＧＣＮ４エピトープは、Ｎ−末端上の３個の残基およびＣ−末端上の１個の残基によって拡大された。
配列番号１４０では、残基Ｌ１は、Ｄに変異され、Ｎ５は、Ｑに変異された、これは、ＧＣＮ４ペプチドの第１の５個の残基が、ＤＬＰＫＱである文献（Ｚａｈｎｄ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２７９，Ｎｏ．１８，Ｉｓｓｕｅ ｏｆ Ａｐｒｉｌ ３０，ｐｐ．１８８７０−１８８７７，２００４）に見出されるＧＣＮ４ペプチドの代替の配列に基づく。
配列番号１４１では、残基ＫおよびＬを、Ｃ−末端から除去し、Ｃ−末端から切断されたエーテルのより短い配列が、なお活性かどうかを決定した
配列番号１４２では、Ｌ１を除去し、この残基が、活性に関与しているかどうかを決定した。
配列番号１４３では、Ｌ１およびＬ２を除去し、これらの残基が活性に関与しているかを決定し、プロリンで始まる配列のための発現の生存率を理解した。
配列番号１４４では、Ｌ１、Ｌ２およびＰ３を除去し、さらにタンパク質を切断し、活性への影響を決定した。
配列番号１４５では、Ｌ１、Ｌ２、Ｐ３およびＫ４を除去し、さらにタンパク質を切断し、活性への影響を決定した。
配列番号１４６では、Ｌ１、Ｌ２、Ｐ３、Ｋ４およびＬ１８を除去し、Ｋ１７をＡと入れ替え、ペプチドをＣ−末端から延長し（ペプチドからＧＧＧＧＳリンカーを分離すること）、一方、元々のペプチド配列内のそこに存在する二重リジン（ＫＫ）モチーフを排除した。
配列番号１４７では、Ｋ１７をＡと入れ替え、元々のペプチド配列内のそこに存在する二重リジン（ＫＫ）モチーフを排除した。
配列番号１４８では、Ｌ１、Ｌ２およびＰ３を除去し、Ｋ１７をＡと入れ替え、元々のペプチド配列内のそこに存在する二重リジン（ＫＫ）モチーフを排除し、これを、Ａに示される延長されたペプチドモチーフとの組み合わせで試験した。
配列番号１４９では、Ｌ１、Ｌ２、Ｐ３およびＫ４を除去し、Ｋ１７をＡと入れ替え、元々のペプチド配列内のそこに存在する二重リジン（ＫＫ）モチーフを排除した。
配列番号１５０では、Ｌ１、Ｌ２、Ｐ３およびＫ４を除去し、Ｋ１７をＧと入れ替え、元々のペプチド配列内のそこに存在する二重リジン（ＫＫ）モチーフを排除した。
配列番号１５１では、Ｌ１、Ｌ２、Ｐ３およびＫ４を除去し、Ｋ１７をＡと入れ替え、Ｌ１８をＡと入れ替え、元々のペプチド配列内のそこに存在する二重リジン（ＫＫ）モチーフを排除した。
配列番号１５２では、Ｌ１、Ｌ２、およびＰ３を除去し、Ｋ１７をＧと入れ替え、元々のペプチド配列内のそこに存在する二重リジン（ＫＫ）モチーフを排除した。
配列番号１５３では、Ｌ１、Ｌ２、およびＰ３を除去し、Ｋ１７をＡと入れ替え、Ｌ１８をＡと入れ替え、元々のペプチド配列内のそこに存在する二重リジン（ＫＫ）モチーフを排除した。
配列番号２４５では、Ｌ１、Ｌ２、Ｐ３およびＫ４を除去し、エピトープはＣ−末端上の１個の残基によって延長される。
表１０に列挙されるペプチドのそれぞれを含有するスイッチを、ＦＡＢ形式のマウスＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体クローン上のＬＣＮＴ形式のペプチド発現によって産生した。
修飾されたエピトープスイッチのスイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞（５２ＳＲ４ ｓＣＡＲ）への結合を、同じ結合アッセイを使用して試験した（上記の実施例３に記載される）（図２０）。
修飾されたエピトープスイッチの活性を、上記の実施例４に記載される通りＬＤＨ細胞毒性アッセイで試験し、ＥＣ５０値を、上記に記載される通り決定した（図２１）。
実施例７
共刺激分子の比較
共刺激ドメインのｓＣＡＲ−Ｔ細胞活性上での効果を決定するために、抗ＧＣＮ４ペプチドｓＣＡＲ ｓｃＦｖ（クローン５２ＳＲ４）を、研究者の以前に報告された第２代目４−１ＢＢ系コンストラクト［Ｒｏｄｇｅｒｓ，Ｄ．Ｔ．（２０１６）］から、第２代目ＣＤ２８共刺激（同時刺激）ドメインまたは第三代目ＣＤ２８／４−１ＢＢ（２８ＢＢ）同時刺激ドメイン［Ｚｈａｎｇ（２００７）；Ｚｈｏｎｇ（２０１０）］を抱えるベクターにサブクローニングした。ＩｇＧ４ｍヒンジ（配列番号１６８）およびＣＤ８膜貫通（ＴＭ）（ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ、配列番号３９８）ドメインを、研究者の以前の設計と一致するように保持した。これらの構造の健康ドナー誘導Ｔ細胞への形質導入は、ｓｃＦｖ（データは示されない）の表面発現を実証できなかった。第２代目および第３代目コンストラクトは、どこでも広く使用されており、研究者は、研究者のコンストラクトの失敗が、ＣＤ２８同時刺激を有するＣＤ８ＴＭまたはＩｇＧ４ｍヒンジ領域の融合における不適合性のためであったと仮定した。この仮定を試験するために、ＣＤ２８ヒンジを有するＣＤ２８ＴＭまたはＣＤ２８ＴＭを使用し、ＣＤ８ＴＭおよびＩｇＧ４ｍヒンジを入れ替え、ｓＣＡＲコンストラクトＡ〜Ｆを産生した（図２４Ａ）。健康ドナー誘導細胞への形質導入は、ＩｇＧ４ｍヒンジ／ＣＤ２８ＴＭ／ＣＤ２８共刺激およびＣＤ２８ヒンジ／ＣＤ２８ＴＭ／ＣＤ２８共刺激の両方が、ｓｃＦｖを細胞の表面に発現したことを実証し、以前のコンストラクトにおけるＣＤ８ＴＭと、ＣＤ２８共刺激との不適合性を実証した。ＣＡＲコンストラクトに含まれる様々な細胞外、膜貫通、および細胞内ドメインの配列は、図２４Ｃに示される。
Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７標識ＧＣＮ４ペプチド（抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖを密接に結合かつ標識する）を使用したフロー結合実験は、２８ＢＢコンストラクト（Ｅ）が、ＣＤ２８（Ｃ）または４−１ＢＢ（Ａ）共刺激分子のみを抱えるコンストラクトと比較して、より低い表面発現を提供したことを実証した（図２５Ａ）。インビトロの細胞毒性アッセイは、２８ＢＢコンストラクト（Ｅ）もまた、元々のコンストラクト（Ａ）と比較して、抗ＣＤ１９スイッチのＣＤ１９＋ＲＳ４；１１細胞に対する滴定を使用して、細胞毒性のわずかに弱いＥＣ５０を有したことを実証した（図２５Ｂ〜図２５Ｄ）。抗原陰性細胞に対するいかなる活性も、ヒンジまたは膜貫通変更のいずれとも観察されなく、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞の特異性が、変造されなかった（データは示されない）ことを示した。より短い免疫シナプスが、より強力な細胞毒性をもたらす、研究者の以前の仮設と一致して、より短い１２個のアミノ酸ＩｇＧ４ｍヒンジ（Ａ、Ｂ、およびＣ）を有するコンストラクトは、これらのアッセイにおいて、対応するより長い３９個のアミノ酸ＣＤ２８ヒンジコンストラクト（ＤおよびＦ）よりも強力な細胞毒性を有した（ＦＩＧＳ．２５Ｃおよび２５Ｄ）。この効果は、複数のドナーにわたって一致した。対照的に、細胞毒性のＥＣ５０の差異は、ＣＤ８（Ａ）とＣＤ２８（Ｂ）系膜貫通ドメインとの間に見出されなかった。
コンストラクトを次いで、インビボのＮＡＬＭ−６異種移植片モデル（ｓＣＡＲ−Ｔ細胞（ｉｖ）の単一用量が、発達した腫瘍量を有するＮＳＧマウスに提供され、１日おきに１４日間のスイッチ（ｉｖ）の投薬およびマウスの再発の監視が続く）で試験した。このモデルは、研究者の以前の報告書［Ｒｏｄｇｅｒｓ（２０１６）］よりも半数のＣＡＲ−Ｔ細胞を用い、コンストラクト間の差異を強調するためにより課題のあるモデルを産生した。比較の頑強さを増加するために、モデルを、３つの別個のドナーからのＴ細胞と共に実行した。これらの条件下で、元々の４−１ＢＢ系コンストラクト（Ａ）は、疾患の可変排除を提供した。このモデルでは、２８ＢＢコンストラクト（Ｅ）は、腫瘍（９匹のマウス中７匹が投薬後に排除された）を、４−１ＢＢ（Ａ）（７匹のマウス中３匹が投薬後に排除された）より効果的に排除した（図２５Ｅ）。ＣＤ２８系コンストラクト（Ｃ）は、投薬期間中の再発を実証し、いかなるマウスにおいても排除できなかった（８匹のマウス中０匹が排除された）。研究者の以前の結果と一致して、ＩｇＧ４ｍヒンジは、ＣＤ２８ヒンジを、ＣＤ２８およびまたはＢＢ２８共刺激ドメインと共に用いたコンストラクト（Ｄ）および（Ｆ）が、いかなる動物内の腫瘍量も顕著に制御できなかったため、インビボでの活性に必要であった（図２６）。
スイッチの第１の用量の２４時間後に測定された急性サイトカイン放出は、４−１ＢＢ（Ａ）、ＣＤ２８（Ｃ）および２８ＢＢ（Ｅ）コンストラクトの間で同様であり、ＣＤ２８コンストラクト（Ｃ）のみが、元々の４−１ＢＢコンストラクト（Ａ）より低いレベルのＩＦＮｇを呈した（図２５Ｆ）。これは、４−１ＢＢ共刺激ドメインおよびＣＤ８ＴＭおよびヒンジを用いる、最近受諾されたキムリア（ＣＡＲＴ１９）後にモデル化された、従来のＣＡＲ−Ｔコンストラクトと比較された。ＣＡＲＴ１９は、これらの条件化で、顕著により大きなＩＬ−２およびＴＮＦサイトカイン放出を呈した。注目すべきことに、ＩｇＧ４ｍヒンジ（Ｅ）を有するＢＢ２８コンストラクトは、元々の４−１ＢＢ系コンストラクト（Ａ）と比較して、投薬期間に直接続いて、ＣＤ４において２４倍の増加、ＣＤ８細胞拡大において５倍の増加を呈した（図２５Ｇ）。この拡大は、それぞれＣＡＲＴ１９内のＣＤ４およびＣＤ８よりも、およそ４１倍および１５倍大きかった。４−１ＢＢ共刺激ドメインと比較したＣＤ８にわたるＣＤ４細胞のより大きな拡大は、ＣＤ２８刺激の付加が、ＣＤ４拡大を増加し得る以前の報告書［Ｋａｇｏｙａ（２０１７）］と一致する。したがって、第三代目２８ＢＢ系コンストラクト（Ｅ）は、顕著により大きなＴ細胞拡大を産生し、スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔプラットフォームでより強い有効性をもたらすが、顕著により低いサイトカイン放出を有し得る。
実施例８
ＳＣＡＲのヒト化
スイッチのＰＮＥペプチドに対するｓＣＡＲの特異性を配向する５２ＳＲ４ ｓｃＦｖを、マウス抗体ライブラリー［Ｈａｎｅｓ（１９９８）、Ｚａｈｎｄ（２００４）］の配向された進化から誘導した。これらのマウス配列は、潜在性を有し、ヒト内で免疫原性である。操作されたＴ細胞内の導入遺伝子の免疫原性は、患者内にアナフィラキシーを引き起こしており、患者からの細胞の拒絶に寄与する因子であることが示されている［Ｂｅｒｇｅｒ（２００６）、Ｊｅｎｓｅｎ（２０１０）、Ｍａｕｓ（２０１３）］。これらの理由のため、研究者は、５２ＳＲ４ ｓｃＦｖをヒト化した。
手短に、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）ドメインのためのマウス５２ＳＲ４配列を、ＮＣＢＩウェブサイト（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／）上のＩｇＢＬＡＳＴプログラムに提出した。それぞれマウス配列を、マウス生殖系列配列と比較し、次いでヒト生殖系列配列と比較した。マウスＶＨ配列は、マウスＩＧＨＶ２−６−７生殖系列から誘導され、マウスＶＬ配列は、マウスＩＧＬＶ１生殖系列から誘導される（図２７Ａ）。マウスＶＨは、ヒトＶＨ生殖系列ＩＧＨＶ４−５９に最も近く、マウスＶＬは、ヒトＶＬΚ生殖系列ＩＧＬＶ７−４６に最も近い。
マウスＶＨ配列を、ヒトＩＧＨＪ４−５９ＶＨと整列させ、ＣＤＲ定義が、図２７Ａに提供される（ワールドワイドウェブアドレス：ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／）。４つの異なるヒト化されたＶＨフレームワークを使用し、ヒト化された配列：ｈ５２ＳＲ４Ｈ１−Ｈ４（図２８）を生成した。ｈ５２ＳＲ４Ｈ１（全体にわたってＨ１、２、３、４…などと称されるコンストラクト）は、マウスＣＤＲｓが、ヒトＩＧＨＪ４−５９フレームワーク（すなわち、いかなるフレームワーク変更も有さない）に移植されているＣＤＲ交換である。ｈ５２ＳＲ４Ｈ２は、フレームワーク変更を位置７１（連続番号付け）（ＣＤＲ−Ｈ２立体構造に影響する）、および位置９３〜９４（ＣＤＲ−Ｈ３立体構造に影響する）に付加した。ｈ５２ＳＲ４Ｈ３は、追加の埋没フレームワーク変更を付加し、ＶＨドメインの内部パッキングを改善した。ｈ５２ＳＲ４２ｂ／３ｂは、Ａｓｎ７３の付加を試験した。Ｚａｈｎｄ ｅｔ ａｌ．［Ｚａｈｎｄ（２００４）］に基づいて、ＬｅｕＨ２８Ｓｅｒ（Ｈ３０ ｉｎ Ｚａｈｎｄ ｅｔ ａｌ．ＡＨｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）およびＩｌｅＨ５６Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（Ｈ６７ ｉｎ Ｚａｈｎｄ ｅｔ ａｌ．ＡＨｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）は、結合親和性を改善した。両方の位置で、疎水性測鎖は、完全に溶媒に暴露された。ＬｅｕＨ３０は、結晶構造ＰＤＢ １Ｐ４Ｂ内の標的との直接相互作用を有さないが、ＩｌｅＨ５６は標的との少しの相互作用を有する。
マウスＶＬを、ヒトＩＧＬＶ−７−４６と整列させ、ＣＤＲ定義が、図２７Ａに提供される（ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／）。いくつかの異なるヒト化されたＶＬフレームワークを使用して、ヒト化された配列：ｈ５２ＳＲ４ＶＬ１−３（全体にわたってＬ１、２、３…などと称されるコンストラクト）を生成した（図２９）。ＣＤＲ−Ｌ１およびＣＤＲ−Ｌ２は、脱アミノに対して低い傾向を有する配列を含む（図２ＡＶＬ）。マウスおよびヒト化された５Ｆ１１のＶＨ：ＶＬ対のコンピューターグラフィックモデルを、構造かし、ヒト化において役立てた。この整列および分析から、固有のヒト化されたｓｃＦｖ配列を、元々の第２代目４−１ＢＢ系コンストラクト内のマウス５２ＳＲ４ ｓｃＦｖの代わりに、構造化およびクローニングした（図２４のＡ、配列番号３８９）。
共刺激分子を比較した研究者の初期結果に基づいて、ＣＡＲ発現またはインビトロの有効性どちらのレベルも、２８ＢＢコンストラクトのインビボでの有効性の優性を十分に予測できなかった。さらに、同等のインビトロの有効性を有する従来のＣＤ１９およびＧＤ２ ＣＡＲは、緊張性シグナル伝達の差異のため、非常に異なるインビボの抗腫瘍活性を有することが示されている［Ｇａｒｇｅｔｔ（２０１６）］。この理由のため、さらなる調査のためヒト化された候補を特定するために、研究者は、ＮＡＬＭ−６異種移植片マウスモデル内でインビボスクリーニングを実行した。
４−１ＢＢベクター（図２４ＡのコンストラクトＡを参照されたい）内の４５個のヒト化された候補（表１１）を、個々に健康ヒトドナー誘導Ｔ細胞に形質導入し、別個のＮＳＧマウス（それぞれ候補に対する最小Ｎ＝３）に静脈内注射した。図２４
スイッチを用いた治療を、１日おきに１４日間、研究者の基準プロトコルに従って実行した（図２７Ｂ）。完全な腫瘍除去を提供するクローン（ＩＶＩＳによる＜１０４放射輝度、このもでるにおける腫瘍の検出のおよその限界、５０日目、スイッチの最後の投与の３０日後）を、さらになる研究のために選択した（表１２）。
これらのクローンを、Ｖ１２ＳまたはＬ１０９Ｄでの軽鎖およびＥ６ＱまたはＡ８７Ｄでの重鎖内での変異を用いて、ベースクローン軽鎖配列Ｌ５および重鎖配列Ｈ４から誘導した（図３０）。
これらの変異が直接ペプチド結合と相互作用しないにも関わらず、それらは報告されるか、または広範囲の立体構造変異、またはｓｃＦｖ構造および相関的にｓＣＡＲ−Ｔ細胞活性に影響し得るタンパク質フォールディングへの影響を含む、他の効果を有すると仮定されている。さらには、埋没ＨＣ Ｅ６Ｑ残基の例外と共に、残基は、表面暴露され、それらも、非特異性疎水性相互作用を通して、タンパク質−タンパク質相互作用において役割を果たし得ることを示唆した。これは、暴露された以前のＦａｂ可変領域／定常領域境界のある特定の残基を有する、ｓｃＦｖの場合に顕著であり得、Ｆａｂｓと比較して、ｓｃＦｖ分子における疎水性のより高い頻度をもたらし得る［Ｎｉｅｂａ（１９９７）］。
ＬＣ Ｖ１２Ｓ変異を、親Ｃ１１Ｌ３４系クローンからの５２ＳＲ４ ｓｃＦｖのインビトロの進化より得られた変異として、Ｚａｈｎｄ ｅｔ ａｌ．（２００４）（ＡＨｏ番号付けスキームを使用した公開においてＬＣ Ｔ１３Ｓとしょうされる）において特定した。この変異が、ｓｃＦｖの親和性を増加する可能性があるが、しかしながら、既存のデータに基づいて、研究者は、それが、５２ＳＲ４クローン内の高親和性の進化におけるパッセンジャーであったことを除外できなかった。ＬＣ１０９残基は、軽鎖の最後から２番目のアミノ酸であり、最後のアミノ酸がグリシンであり、ＧＧＧＧＳリンカーが続く。この残基が、以前のインビトロの進化研究を通して特定されていなく、かつヒトおよびマウスフレームワークにわたって保存されているにも関わらず、それは構造から突出し、他の非特異性タンパク質との相互作用を増加し得る疎水性表面を形成している。したがって、ＬＣ Ｌ１０９Ｄ変異は、表面疎水性を減少させるのに有益であり得る。
Ｚａｈｎｄ ｅｔ ａｌ．（２００４）に従って、ＨＣ「変異Ｈ６（Ｇｌｕ〜Ｇｌｎ）は、クローンＣ１１Ｌ３４と比較した際、２〜２０ｐＭまで親和性を改善し」、ＨＣにおけるこの変異の研究を裏付けた。公開において、この変異が、「広範囲の相互作用または「分子シミング」を通して効果を発揮し、ループまたはドメインの配向または柔軟性に影響を与えた」ことが仮定された。他の文献では、この残基は、重鎖のＮ末端部分の立体構造に影響を与えることが示されている［Ｈｏｎｅｇｇｅｒ（２００１）］。したがって、この残基のｓＣＡＲ−Ｔ細胞活性への影響のさらなる調査への良い裏付けとなった。最終的に、表面暴露ＨＣ残基８７は、４−４−２０抗ＦＩＴＣ ｓｃＦｖの開発において以前に研究されている［Ｎｉｅｂａ（１９９７）］。この研究において、Ｎｉｅｂａらは、この残基のＤ（カバット番号付けにおける８４Ｄ）への変異が、タンパク質フォールディングにおける凝集を減少させ、一方顕著にはｓｃＦｖの結合親和性または熱安定性を改変しなかったことを見出した。したがって、これらの変異の研究のための良い裏付けが存在した。
ｓＣＡＲ−Ｔ細胞機能上のこれらの変異の効果を試験するために、７ヒト化されたｓｃＦｖバリアントを、上記に記載される変異に沿ってＬ５Ｈ４系クローンから産生した（図２７Ｃ）。異なる共刺激分子間でそれらの活性を試験するために、ＣＡＲを、４−１ＢＢ、ＣＤ２８、または２８ＢＢ系ベクター（図２４でそれぞれ、Ａ、Ｃ、またはＥ）にサブクローニングし、合計２１個のベクターを産生した。複数の共刺激ドメイン背景における試験への理論的根拠は、Ｃｄ２８系共刺激ドメインが、緊張性シグナル伝達を悪化させることを示しているの文脈を有するｓＣＡＲを、圧力試験することであったが、４−１ＢＢは、緊張性シグナル伝達を隠し得る［Ｌｏｎｇ（２０１５）］。したがって、単一の共刺激ドメインの文脈でｓＣＡＲ−Ｔ細胞活性を試験することは、活性を区別するのに十分ではない場合がある。インビトロの細胞毒性アッセイは、バリアントが、抗ＣＤ１９スイッチの滴定を用いて、ＣＤ１９＋ＲＳ４；１１細胞に対する細胞毒性のＥＣ５０において顕著でない差異を有したことを実証した（図２７Ｄ）。
候補を次いで、インビボでＮＡＬＭ−６腫瘍を排除するそれらの能力について、マウス５２ＳＲ４ ｓＣＡＲコンストラクトと比較した（図２７Ｅ）。これらのモデルに対する細胞の拡大中、ＣＡＲ＋Ｔ細胞を、親和性カラムによって選別し、ｓｃＦｖバリアントからもたらされるＣＡＲ発現における潜在性差異を基準化した。対応して、これらのモデルにおける腫瘍排除は、図２５に示される以前のモデルと比較してわずかに改善したことが見出された。４−１ＢＢまたはＣＤ２８系共刺激分子を有するＣＡＲベクターは、可変腫瘍排除を有したが、しかしながら選別は、研究者の最初のモデルと比較して、ＣＤ２８系ＣＡＲの腫瘍量を制御する能力を改善した。第三代目２８ＢＢ共刺激ドメインの効力のため、全ての候補およびマウスＣＡＲは、投薬期間後に完全に腫瘍を排除した。このモデルを圧力試験するために、さらに、マウスを３０日目にＮＡＬＭ−６を用いて再び検証した。いかなる追加のＣＡＲ−Ｔ細胞も提供されず、基準プロトコルに従って、スイッチ投薬を、検証（３６日）の６日後に開始した。３６日目、これらの動物内の腫瘍量は、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞が、スイッチ投薬なしでは腫瘍増殖に効果を有さなかったことを示唆する初期検証に匹敵した。第２の投薬期間を、第１、１日おきに１４日間実施し、その後腫瘍が全ての群において再び排除された。マウスの多くは、研究の最後まで清潔なままであり、６０日目に少数の個々のマウスが明らかに再発していた。
これらの実験の全てのｓＣＡＲは、腫瘍排除の有望なレベルを呈した。ほとんどの有望な候補を区別するために、ヒト化されたｓｃＦｖのインビボ機能を、複数の共刺激ドメイン形式（ＣＤ２８＋ＣＤ３ｚ、４−１ＢＢ＋ＣＤ３ｚおよびＣＤ２８＋４１ＢＢ＋ＣＤ３ｚ）にわたって平均化し、それぞれのコンストラクトのそれぞれのシグナル伝達特徴によって導入されたバイアスを除去した。「ＣＤ３ｚ」、「ＣＤ３ζ」、および「ＣＤ３ζ」という用語は、本明細書で交換可能に使用される。以下のインビボのパラメータを、それぞれＣＡＲ−Ｔコンストラクトにわたって平均化した。（Ａ）腫瘍検証後１０、２０、３１および４５日目の腫瘍ＩＶＩＳ値、（Ｂ）スイッチ投薬の終了２日後に測定されたＴ細胞拡大、および（Ｃ）腫瘍再発の日（ＩＶＩＳ ＲＯＩ＞１０４）。それぞれのパラメータシリーズを、疾患関連についてランク付けした。（Ａ）腫瘍排除／再発を表す、低〜高とランク付けした、（Ｂ）活性を通したＴ細胞拡大の表示、高〜低とランク付けした、（Ｃ）初期腫瘍排除のレベルの表示、低〜高とランク付けした。したがって、この分析を通して、最良のＣＡＲコンストラクトは、強いＴ細胞拡大（Ｂ）およびまれな再発（Ｃ）を有する低腫瘍量（Ａ）を有するであろう。それぞれのパラメータを、それぞれ共刺激ドメインコホート内でランク付けし、および次いで平均化し、合計のランクスコアを作成した。ランクの標準偏差を、ランク分散の測定値として計算した。このランクシステムを使用して、ｓＣＡＲ Ｅ（Ｌ５−Ｌ１０９Ｄ、Ｈ４−Ｅ６Ｑ、Ａ８７Ｄ）が、最も有望な候補であった（図３１）。ＬＣ Ｌ１０９Ｄ、ＨＣ Ｅ６Ｑ、およびＨＣ Ａ８７Ｄの、Ｌ５Ｈ４系クローンへの負荷は、Ｔ細胞拡大をインビボで顕著に増加させた。サイトカインは、ｓＣＡＲ候補の間でわずかに異なった（図３２）。共刺激分子の比較で以前に見出された通り、２４時間目のサイトカイン放出は、インビボで効力を予測しなく、したがってｓＣＡＲ候補のランク付けに含まれなかった。したがって、２８ＢＢ ＣＡＲは、それらの４−１ＢＢの対応する部分より大きなＴＮＦαを放出することが注意されるべきであるが、とはいえ、図２５では顕著ではない。同様に、ｓＣＡＲ Ｅ候補は、そのインビボでの活性と相関して、他のクローンより大きなＴＮＦａを放出した。
研究者はさらに、延長したエクスビボ拡大を使用してこれらの候補を調査した（図３３）。手短に、アッセイを、それぞれのＣＡＲ候補を有する健康ドナー誘導Ｔ細胞を個々に形質導入することで実施した。培養を、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いて０日目に活性化し、ＩＬ−２が、培養プロセス全体を通して提供されたが、細胞は、再刺激されなかった。候補を、５日目にＣＡＲ＋細胞について選別し、培養フラスコ内で３３日目に細胞数、形質導入（ＣＡＲ＋細胞）、およびインビトロの細胞毒性の週毎の分析と共に拡大した。他の箇所で報告される通り、４−１ＢＢ系共刺激分子を有するＣＡＲ候補は、選別後１０３倍近く拡大したが、ＣＤ２８および第三代目ＣＡＲは、顕著により低い拡大を有した（図３３）。４−１ＢＢ系ＣＡＲに対する形質導入効率は、一貫したままであったが、ＣＤ２８系ＣＡＲは、ＣＡＲ＋細胞の顕著な欠如を有した。これが、ＣＡＲ発現の欠如によるものか、または細胞培養内のＣＡＲ＋細胞を追い越すＣＡＲ−陰性細胞の拡大によるものかは決定されていない。第三代目２８ＢＢ系ＣＡＲは、選別後にいくつかの形質導入効率を欠如したが、５０％近く標準化したように見えた。
インビトロの細胞毒性を、州ごとにそれぞれ候補について試験した（図３４および図３５）。延長されたエクスビボ拡大アッセイの過程全体を通して、４−１ＢＢ系候補は、細胞毒性同様のＥＣ５０および細胞毒性の最大レベルを有した（スイッチ分子の飽和量を使用して％溶解標的細胞によって定義される）。同様に、ＢＢ−２８候補は、時間経過全体を通して、同様のＥＣ５０および最大標的細胞溶解を有した。興味深いことに、ＣＤ２８系候補は、最大標的細胞溶解の増加に沿った細胞毒性のＥＣ５０の増加によって呈される、効力を失った。これは、Ｖ１２Ｓ変異を抱えるクローンに関して最も明らかであった。対応して、これらのクローンは、腫瘍量インビボで制御するそれらの能力において最も弱いスコアであった。
実施例８
ヒト化されたスイッチとヒト化されたＣＡＲとの組み合わせ
ヒト化されたｓＣＡＲ候補Ｌ５Ｈ４（図２７Ｃ〜２７Ｅ、候補Ａ）、Ｌ５Ｈ４−Ａ８７Ｄ（図２７Ｃ〜２７Ｅ、候補Ｂ）、Ｌ５Ｈ４−Ｅ６Ｑ，Ａ８７Ｄ（図２７Ｃ〜２７Ｅ、候補Ｃ）、およびＬ５−Ｌ１０９Ｄ−Ｈ４−Ｅ６Ｑ，Ａ８７Ｄ（図２７Ｃ〜２７Ｅ、候補Ｅ）と共に、ヒト化されたスイッチ候補Ｌ２ｂ／Ｈ４ｃの有効性を決定するために、ＮＡＬＭ−６モデルを、５００万個のｓＣＡＲ−Ｔ細胞を、２００００個の細胞の代わりに使用したことを除いて、以前に記載される通りに実施した（図３６）。これらの条件化で、誘発をもたらすが、腫瘍を排除しないＣＡＲ−Ｔ細胞効力を検証する。これらの状態はしたがって、ヒト化されたＣＡＲ候補間の少しの差異の解決を可能にする。このモデルでは、候補Ｅは、腫瘍量の最も大きい制御を提供した。Ｌ２ｂ／Ｈ４ｃヒト化されたスイッチと対を成した際の、このｓＣＡＲの活性は従来のＣＡＲＴ−１９に匹敵した。
ＥＸＡＭＰＬＥ ９
不均一な腫瘍
複数の腫瘍抗原を同時に、または異なる時間に標的化するｓＣＡＲ−Ｔ細胞の能力を、不均一なＲａｊｉ異種移植片腫瘍モデル内で試験した。Ｒａｊｉ細胞（ＣＤ１９およびＣＤ２０に対して自然に陽性）を、ＣＤ１９−ＣＤ２０＋Ｒａｊｉ細胞株をもたらすＣＤ１９に対する遺伝子のＣＲＩＳＰＲノックアウトによって修飾した。野生型Ｒａｊｉ細胞を、この細胞株とそれぞれ１：１、４：１、または４９：１の比で混合し、ＮＳＧマウスに静脈内注射し、播種性腫瘍を確立した（図３７）。細胞株の両方を、ＩＶＩＳによる腫瘍量に従ってルシフェラーゼ化した。３日後、マウスを、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞またはＣＡＲＴ−１９を用いて治療した。１：１の群では、抗ＣＤ１９スイッチと抗ＣＤ２０スイッチとの混合を用いたスイッチ投薬を、３日目に、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞の送達の４時間後に開始した（図３７Ａ）。このモデルでは、ＣＡＲＴ−１９は、腫瘍量適度に遅くしたが、腫瘍を完全に除去できなかった。これは、野生型Ｒａｊｉ細胞を、ＣＤ１９−陰性Ｒａｊｉ細胞の増殖への有害な効果を有さずに排除するＣＡＲＴ−１９の能力のためであると仮定される。ｓＣＡＲ−Ｔ細胞群は、抗ＣＤ１９と抗ＣＤ２０スイッチとの混合物を使用して、３匹のマウス中３匹の腫瘍を排除した。腫瘍の再発を観察し、抗ＣＤ２０スイッチで治療した。この後続のスイッチ治療は、３匹のマウス中２匹の腫瘍を排除した。この実験は、いくつかのｓＣＡＲ−Ｔ細胞が、複数の腫瘍抗原に同時に再指向され得ることを実証した。
野生型Ｒａｊｉ細胞対ＣＤ１９陰性Ｒａｊｉ細胞の４：１混合物を使用した第２のモデル（図３７Ｂ）を、このモデルにおいて、投薬が、抗ＣＤ１９スイッチのみを用いて述べられたことを除いて、同様に１：１モデルに対して実行した。腫瘍量（ＣＤ１９−陰性集団からと推定される）が、放射輝度１０５（平均）まで上昇した際、マウスを、基準の１日おき、１４日間の投薬レジメンを使用して抗ＣＤ２０スイッチを用いて治療した。これは、全てのマウス内で腫瘍を排除するのに効果的であった。再発を、３匹のマウス中１匹の腫瘍を排除した追加の抗ＣＤ２０スイッチで治療した。ＣＡＲＴ−１９群は、究極的にモデル１としてのＣＤ１９−陰性Ｒａｊｉ腫瘍量に屈する、細胞と動物との混合に対するわずかな活性を有した。
野生型Ｒａｊｉ細胞対ＣＤ１９−陰性Ｒａｊｉ細胞の４９：１の混合物を使用した第３のモデル（図３７Ｃ）を、４：１モデルと同様に実行した。腫瘍量（ＣＤ１９−陰性集団からと推定される）は、放射輝度１０５（平均）に上昇し、マウスを、基準の１日おき、１４日間の投薬レジメンを使用して抗ＣＤ２０スイッチで治療した。この群では、抗ＣＤ２０スイッチでの投薬を、抗ＣＤ１９投与終了の１日後に開始した。第１および第２のモデルと同様に、ＣＡＲＴ１９細胞は、野生型Ｒａｊｉ細胞を排除したが、この群で再発する全ての腫瘍を有するＣＤ１９−陰性Ｒａｊｉ細胞を排除しなかった。逆に、ｓＣＡＲ Ｔ細胞および抗ＣＤ１９および抗ＣＤ２０スイッチで治療された６匹のマウス中５匹は、投薬期間後、腫瘍を示さず、モデルの終了に近い１つの再発を有した。一緒に、第２および第３のモデルは、同じｓＣＡＲ−Ｔ細胞は、同時よりむしろ連続して、異なる抗原に再指向され得ることを実証した。
実施例１０
同一遺伝子系
完全なマウス、同一遺伝子スイッチ可能なＣＡＲ−Ｔ細胞プラットフォームを開発し、免疫応答性動物モデルの文脈でｓＣＡＲ−Ｔ細胞の活性を試験した。これらのモデルで、Ｃ３Ｈ免疫応答性マウスを、３８ｃ１３腫瘍細胞株と共に使用した。手短に、マウスを、０日目に腫瘍ＳＣで播種し、腫瘍は、５００〜１０００ｍｍ３に確立された。マウスを次いで、シクロホスファミドでプレコンディショニングし、マウスｓＣＡＲ−Ｔ細胞は、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞の４時間後に始めて、１日おきに１４日間継続するスイッチ用量で、２４時間後に送達した。ｓＣＡＲ−Ｔ細胞の単一の用量のみが、動物に提供された。
ヒンジ長さに基づいた差分活性を、ヒトＣＡＲ−Ｔ細胞に関する研究者の予備的な報告書に見出した。この効果が、マウス系内で観察されるかを決定するために、マウスｓＣＡＲを、ＩｇＧ４ショート、二量体ヒンジ（マウスｓＣＡＲ ＳＶ−３１９−０９２）を抱えることで、またはマウスＣＤ８ヒンジ（マウスｓＣＡＲ ＳＶ−３１９−０８９）を用いてコンストラクト化した。コンストラクトは、図３８に記載される）。インビボでのＳＶ−３１９−０９２は、腫瘍の完全な排除を提供したが、ＳＶ−３１９−０８９は、顕著に弱い制御を有し、研究者の先行する結論を裏付けた。より短いヒンジは、より短い免疫シナプスのため、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞内でより大きな有効性を提供する（図３９Ａ）。したがって、マウス系は、生理的学的に、研究者のヒト系と同様のプラットフォームであり、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞活性の研究に良く好適である。
異なるヒンジコンストラクトを、次いで試験した。手短に、マウスｓＣＡＲ−Ｔ細胞を、ＣＤ２８（ＳＶ−３１９−０９０）、４−１ＢＢ（ＳＶ−３９１−０９１）、またはＢＢ２８（ＳＶ−３１９−０９２）マウス共刺激分子（図３８の群２）でコンストラクト化し、およびＣ３Ｈマウス内の３８ｃ１３モデルで試験した。マウス共刺激ドメインを有するＳＶ−３１９−０９０コンストラクトは、３５日目前の疾患に屈する全てのマウスで腫瘍量を制御することができなかった（データは示されず）。ＳＶ−３９１−０９１およびＳＶ−３１９−０９２の両方は、全てのマウスで腫瘍を排除した（データは示されず）。これらの動物における投薬の第２および第３のサイクルは、図３９Ｂの通り腫瘍排除およびｓＣＡＲ−Ｔ細胞集団の周期的測定後に提供された。この実験では、マウスｓＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＳＶ−３９１−０９１ ４−１ＢＢ系マウスｓＣＡＲ−Ｔ細胞よりわずかに良好に拡大する、ＳＶ−３１９−０９２ ２８ＢＢ系マウスｓＣＡＲ−Ｔ細胞でのそれぞれの投薬後に拡大した。したがって、この実験は、２８ＢＢ系共刺激ドメインの拡大潜在性を実証した。マウスＣＤ２８系共刺激ドメインｓＣＡＲ−Ｔ細胞を、３５日を超えて生存できなかったそれらの失敗のため、この分析から除外した。
ＳＶ−３１９−０９２ ２８ＢＢ系マウスｓＣＡＲ−Ｔは、効率的にＢ細胞を排除することができた。Ｂ細胞とＴ細胞との両方が測定されるモデル（図３９Ｃ）では、マウスｓＣＡＲ−Ｔ細胞は、それぞれの投与後に拡大し、逆にＢ細胞集団に関係した。静止期は、それぞれの投薬期間の間に含まれた。静止期は、Ｂ細胞を、図３９Ｃに示される通り、マウスを再配置するのを可能にした。
スイッチ投薬が、メモリーマウスｓＣＡＲ−Ｔ細胞モデルへの効果を有するかを決定するために、ＳＶ−３１９−０９２細胞、腫瘍のないプレコンディショニングマウスに注射した。投薬は次いで、４つの異なるレジメン（図３９Ｄ）：高（５ｍｇ／ｋｇ）または低（０．２ｍｇ／ｋｇ）、短い（４用量）または長い（１２用量）の投薬期間の間、１日おきに静脈内注射を使用して提供された。これを、１日おきに８用量の既存の投薬レジメンと比較した。これらの投薬期間の後、図３９Ｄに示される静止期が続いた。静止期後、投薬を、なお１日おきの投薬で以前と同じレジメンを受け取るそれぞれの群で再開した。４用量後（合計６日）、Ｔ細胞カウントおよび表現型を測定した。著しく、高、短い群は、他の群と比較して１０３倍の拡大を実証した。この拡大は、一過性であり、投薬を停止した後に低下した。この発見は、マウスｓＣＡＲ−Ｔ細胞が、それらの以前の投薬レジメンのメモリーを有したことを実証し、静止期後に再同期される再、そのメモリーは呼び戻され、細胞の大きな拡大を生成する。図３９Ｅ内の細胞の表現型は、拡大が、３５日目で優位にエフェクターメモリーＣＤ８細胞であったことを例証する。投薬を停止した後、５３日目に、エフェクターメモリー集団の収縮が観察されたが、中央メモリー集団は、３５日目と比較的同様であった。この発見は、スイッチによって提供されるｓＣＡＲ−Ｔ細胞活性にわたる時間的制御の有用性を強調する。
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上記に記載される様々な実施形態を組み合わせ、さらなる実施形態を提供することができる。この明細書に参照される、および／または出願データシートに列挙される米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許公開の全ては、参照によりその全体が本明細書に組込まれる。実施形態の態様は、なおさらなる実施形態を提供するために、様々な特許、出願、および公開の概念を用いる必要がある場合は、改変することができる。
これらおよび他の変更を、上記の詳細の記載の観点から実施形態に行うことができる。一般に、以下の特許請求の範囲では、使用される用語は、特許請求の範囲を、本明細書に開示される具体的な実施形態および特許請求の範囲に限定すると解釈されるべきではないが、かかる特許請求の範囲に権利が与えられる同等物の完全な範囲に沿った、全ての可能な実施形態を含むと解釈されるべきではない。それに合うように特許請求の範囲は本開示によって限定されない。

Claims (199)

  1. 細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含むヒト化されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記細胞外ドメインが、配列番号２９０〜３８８、および４２３から選択される配列を含むヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖを含む、ヒト化されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
  2. 前記ｓｃＦｖが、配列番号３２２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  3. 前記ｓｃＦｖが、配列番号３２２と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  4. 図２２Ａの構造Ａ〜Ｈから選択される構造を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  5. 図２２Ａの構造Ｅに従う構造を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  6. 前記ＣＡＲが、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される配列を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  7. 前記ＣＡＲが、配列番号４１１のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  8. 前記ＣＡＲが、配列番号４１１の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  9. 前記細胞外ドメインが、配列番号９３〜１０３および１６５〜１６８から選択される配列を含むヒンジドメインを含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  10. 前記細胞外ドメインが、アミノ酸配列：ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＤを含むヒンジドメインを含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  11. 前記膜貫通ドメインが、配列番号３９８および４１７から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１および９〜１０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  12. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、（ａ）ＣＤ３−ζドメイン、ならびに（ｂ）ＣＤ２８ドメイン、４−１ＢＢドメイン、またはＣＤ２８ドメインおよび４−１ＢＢドメインを含む、請求項１および９〜１１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  13. 前記ＣＤ２８ドメインが、配列番号４１８の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載のＣＡＲ。
  14. 前記ＣＤ２８ドメインが、配列番号４１８のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載のＣＡＲ。
  15. 前記４−１ＢＢドメインが、配列番号４１９の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％と同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  16. 前記４−１ＢＢドメインが、配列番号４１９のアミノ酸配列を含む、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  17. 前記ＣＤ３−ζドメインが、配列番号４２０の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  18. 前記ＣＤ３−ζドメインが、配列番号４２０のアミノ酸配列を含む、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  19. 前記膜貫通ドメインが、配列番号４１７の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１および９〜１８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  20. 前記膜貫通ドメインが、配列番号４１７のアミノ酸配列を含む、請求項１および９〜１８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  21. キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチであって、
    ａ．前記ＣＡＲ−ＥＣ上の抗ＧＣＮ４キメラ抗原受容体と相互作用するＧＣＮ４誘導体ペプチドを含む、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、
    ｂ．標的化部分と、を含み、
    前記標的化部分が、配列番号１７〜２５、２７〜３５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む、標的化抗体、またはその抗原結合部分である、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチ。
  22. 前記標的化抗体、または前記その抗原結合部分が、配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む、請求項２１に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  23. キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチであって、
    ａ．前記ＣＡＲ−ＥＣ上の抗ＧＣＮ４キメラ抗原受容体と相互作用するＧＣＮ４誘導体ペプチドを含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、
    ｂ．標的化部分と、を含み、
    前記標的化部分が、配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む、標的化抗体、またはその抗原結合部分である、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチ。
  24. 前記標的化抗体、または前記その抗原結合部分が、配列番号１７〜２５、２７〜３５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む、請求項２３に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  25. 前記標的化部分が、ｓｃＦｖである、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  26. 配列番号３０の軽鎖配列および配列番号７の重鎖配列を含む、請求項２５に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  27. 配列番号７と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である重鎖配列を含む、請求項２１に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  28. 配列番号３０と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である軽鎖配列を含む、請求項２３に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  29. （ｉ）配列番号３０／配列番号７、（ｉｉ）配列番号３０／配列番号６、（ｉｉｉ）配列番号３４／配列番号６、および（ｉｖ）配列番号３４／配列番号７から選択される軽鎖／重鎖配列対を含む、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  30. 配列番号１７〜２５のうちのいずれか１つから選択される軽鎖を含み、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、配列番号２６、３６、１３９〜１６３および２４５のうちのいずれか１つから選択されるＧＣＮ４ペプチドであるＣＡＲ−ＩＤを含み、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、ＬＣＮＴスイッチである、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  31. ヒト化されたキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチであって、
    ａ．前記ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、
    ｂ．標的細胞上のＣＤ１９に結合するヒト化された標的化部分と、を含む、ヒト化されたキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチ。
  32. 前記ヒト化された標的化部分が、ＣＤ１９に結合するヒト化された抗体およびＣＤ１９に結合する抗体のヒト化された抗原結合部分から選択される、請求項３１に記載のスイッチ。
  33. 前記ヒト化された標的化部分が、免疫グロブリン、Ｆｃヌル免疫グロブリン、およびＦａｂ、ならびにそれらの断片から成る群から選択される、請求項３１または３２に記載のスイッチ。
  34. 前記ヒト化された標的化部分が、配列番号１６〜２５から成る群から選択される軽鎖配列を含む、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載のスイッチ。
  35. 前記ヒト化された標的化部分が、配列番号２７〜３５から成る群から選択される軽鎖配列を含む、請求項３１〜３４のいずれか一項に記載のスイッチ。
  36. 前記ヒト化された標的化部分が、配列番号１〜１５から成る群から選択される重鎖配列を含む、請求項３１〜３５のいずれか一項に記載のスイッチ。
  37. 前記ヒト化された標的化部分が、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体、またはヒト化されたＦＭＣ６３抗体の抗原結合部分から選択される、請求項３２に記載のスイッチ。
  38. 配列番号３５と約１〜約２０個のアミノ酸が異なる軽鎖配列を含む、請求項３７に記載のスイッチ。
  39. 前記軽鎖配列が、それが、Ｔ７、Ｔ８、Ｌ１５、Ｓ２２、Ｄ４１、Ｇ４２、Ｔ４３、Ｖ４４、Ｙ７１、Ｓ７２、Ｎ７７、Ｅ７９、Ｑ８０、Ｉ８３、Ｆ８７、およびＧ１００から成る群から選択される配列番号３５の軽鎖アミノ酸残基のうちの１つ以上の置換を含むことを除いて、配列番号３５と同一である、請求項３８に記載のスイッチ。
  40. 配列番号１５と約１〜約３０個のアミノ酸が異なる重鎖配列を含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載のスイッチ。
  41. 前記重鎖配列が、それが、Ｅ１、Ｋ３、Ａ１３、Ｑ１６、Ｓ１７、Ｖ２０、Ｒ４２、Ｌ４８、Ｓ６１、Ａ６２、Ｌ６７、Ｉ７０、Ｋ７１、Ｎ７３、Ｓ７６、Ｖ７８、Ｆ７９、Ｍ８２、Ｎ８３、Ｌ８５、Ｑ８６、Ｔ８７、Ｄ８８、Ｉ９２、Ｋ９７、およびＳ１１５から成る群から選択される配列番号１５の重鎖アミノ酸残基のうちの１つ以上の置換を含むことを除いて、配列番号１５と同一である、請求項４０に記載のスイッチ。
  42. 前記ＣＡＲ−ＩＤがペプチドを含み、前記ペプチドが、任意に酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチド、二量体化しないバリアントＧＣＮ４ペプチド、ＦＬＡＧタグペプチド、非天然発生ペプチド、天然発生ペプチド、合成ペプチドタグ、αヘリックス形成ペプチド、Ｋ４ペプチド、およびＥ４ペプチドから選択される、請求項３１〜４１のいずれか一項に記載のスイッチ。
  43. 配列番号３０の軽鎖配列および配列番号７の重鎖配列を含む、請求項３１に記載のスイッチ。
  44. 前記ＧＣＮ４ペプチドが、構造Ｉの配列、表１０に列挙される配列、ならびに配列番号２６、３６、１３９〜１６３、および２４５から選択される配列から選択される、請求項４２に記載のスイッチ。
  45. 前記ＣＡＲ−ＩＤが、小分子を含む、請求項３１〜４１のいずれか一項に記載のスイッチ。
  46. 前記小分子が、ハプテンである、請求項４５に記載のスイッチ。
  47. 前記ハプテンが、ＦＩＴＣである、請求項４６に記載のスイッチ。
  48. 前記スイッチが、ＬＣＮＴスイッチである、請求項３１〜４７のいずれか一項に記載のスイッチ。
  49. キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチであって、
    ａ．前記ＣＡＲ−ＥＣ上の抗ＧＣＮ４キメラ抗原受容体と相互作用するＧＣＮ４誘導体ペプチドを含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、
    ｂ．標的化部分と、を含む、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチ。
  50. 前記ＧＣＮ４ペプチド誘導体が、構造Ｉの配列：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）を含み、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である、請求項４９に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  51. Ｘ１が、Ｋであるか、または不在である、請求項５０に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  52. Ｘ２が、Ｋ、Ａ、およびＧから選択される、請求項５０または５１に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  53. Ｘ３が、Ｌ、Ａ、およびＧから選択される、請求項５０〜５２のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  54. 前記ＧＣＮ４ペプチド誘導体が、配列番号２６、３６、１３９〜１６３、および２４５のうちのいずれか１つから選択される配列を含む、請求項５０に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  55. 前記標的化部分が、標的化ポリペプチドである、請求項４９〜５４のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  56. 前記標的化部分が、標的化抗体またはその抗原結合部分である、請求項２９〜３５のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  57. 前記標的化部分が、ヒト化された抗体またはその抗原結合部分である、請求項４９〜５６のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  58. 前記標的化部分が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＥＡ、ＣＬＬ１、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１２３、およびＨｅｒ２から選択される細胞表面分子に結合する、請求項４９〜５７のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  59. 前記標的化部分が、本出願で開示される軽鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分である、請求項４９〜５８のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  60. 前記標的化部分が、本出願で開示される重鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分である、請求項４９〜５９のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  61. 前記標的化部分が、本出願で開示される軽鎖配列および重鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分である、請求項４９〜５８のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  62. 前記標的化部分が、配列番号１７〜２５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２６７のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む標的化抗体またはその抗原結合部分である、請求項４９〜６１のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  63. 前記標的化部分が、配列番号２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分である、請求項４９〜６２のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  64. 前記標的化部分が、配列番号２７〜３５のうちのいずれか１つから選択される軽鎖配列を含む、標的化抗体またはその抗原結合部分である、請求項４９〜５７のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  65. ２〜１５、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２６８のうちのいずれか１つから選択される重鎖配列を含む、請求項６４に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  66. 配列番号３０の軽鎖配列および配列番号７の重鎖配列を含む、請求項４９に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  67. 配列番号３０と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である軽鎖配列、および配列番号７と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％同一である重鎖配列を含む、請求項４９に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  68. （ｉ）配列番号３０／配列番号６、（ｉｉ）配列番号３４／配列番号６、および（ｉｉｉ）配列番号３４／配列番号７から選択される軽鎖／重鎖配列対を含む、請求項４９に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  69. 細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインを含むヒト化されたキメラ抗原受容体であって、前記細胞外ドメインが、
    ａ．キメラ抗原受容体スイッチと相互作用するヒト化された領域と、
    ｂ．ヒンジドメインと、を含む、ヒト化されたキメラ抗原受容体。
  70. 前記ヒンジドメインが、約１〜約２０のアミノ酸長である、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  71. 前記ヒンジドメインが、約２０超のアミノ酸長である、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  72. 前記ヒンジドメインが、可撓性である、請求項６９〜７１のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  73. 前記ヒンジドメインが、剛性である、請求項６９〜７１のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  74. 第１のキメラ抗原受容体の第１のシステインおよび第２のキメラ抗原受容体の第２のシステインが、ジスルフィド結合を形成し、前記第１のキメラ抗原受容体および前記第２のキメラ抗原受容体の多量体化をもたらす、請求項６９〜７３のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  75. 前記ヒンジドメインが、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＧ４ｍヒンジ、ＣＤ２８ヒンジ、およびＣＤ８ヒンジから選択される、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  76. 前記ヒンジドメインが、配列番号９３〜１０３および１６５〜１６８から選択される配列を含むか、またはそれから成る、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  77. 前記ヒンジドメインが、配列番号９３〜１０３および１６５〜１６８から選択される配列と、少なくとも５０％相同である配列を含むか、またはそれから成る、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  78. 前記細胞外ドメインが、ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖを含む、請求項６９〜７７のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  79. 前記細胞外ドメインが、ヒト化された５２ＳＲ４抗体またはその抗原結合部分を含む、請求項６９〜７７のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  80. 前記ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖが、配列番号２９０〜３８８、および４２３から選択される配列を含むか、またはそれから成る、請求項７８に記載のキメラ抗原受容体。
  81. 前記ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖが、配列番号２９０〜３８８、および４２３から選択される配列と少なくとも５０％同一である配列を含むか、またはそれから成る、請求項７８に記載のキメラ抗原受容体。
  82. 前記ヒト化された抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖが、配列番号３２２と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含むか、またはそれから成る、請求項７８に記載のキメラ抗原受容体。
  83. 前記ＣＡＲが、ＣＤ８膜貫通ドメインまたはＣＤ２８膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む、請求項６９〜８２のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  84. 前記膜貫通ドメインが、配列番号３９８および４１７から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれから成る、請求項８３に記載のキメラ抗原受容体。
  85. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、（ａ）ＣＤ３−ζドメイン、および（ｂ）ＣＤ２８ドメイン、４−１ＢＢドメイン、またはＣＤ２８ドメインおよび４−１ＢＢドメインを含む、請求項６９〜８４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  86. 前記ＣＤ２８ドメインが、配列番号４１８を含むか、またはそれから成る、請求項８５に記載のキメラ抗原受容体。
  87. 前記４−１ＢＢドメインが、配列番号４１９を含むか、またはそれから成る、請求項８５に記載のキメラ抗原受容体。
  88. 前記ＣＤ３−ζドメインが、配列番号４２０を含むか、またはそれから成る、請求項８５〜８７のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  89. キメラ抗原受容体スイッチと相互作用する前記領域が、前記キメラ抗原受容体スイッチのキメラ抗原受容体結合ペプチドと相互作用し、前記キメラ抗原受容体スイッチが、標的上の細胞表面分子と相互作用する標的化部分をさらに含む、請求項６９〜８８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  90. 前記キメラ抗原受容体が、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される配列を含む、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  91. 前記キメラ抗原受容体が、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される配列から成る、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  92. 前記キメラ抗原受容体が、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むか、またはそれから成る、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  93. 前記キメラ抗原受容体が、配列番号４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、および４１６から選択される配列によってコードされる、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  94. 前記キメラ抗原受容体が、配列番号４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、および４１６と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列によってコードされる、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  95. 前記ヒト化された領域のアミノ酸配列が、配列番号３２２を含むか、またはそれから成る、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  96. 前記ヒンジドメインが、前記アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＤを含むか、またはそれから成る、請求項６９または９５に記載のキメラ抗原受容体。
  97. 前記膜貫通ドメインが、配列番号４１７を含むか、またはそれから成る、請求項６９、９５、および９６のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  98. 前記細胞内ドメインが、配列番号４２０を含むか、またはそれから成るＣＤ３−ζシグナル伝達ドメインを含む、請求項６９および９５〜９７のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
  99. 前記細胞内ドメインが、配列番号４１８または４１９を含むか、またはそれから成る共刺激ドメインを含む、請求項９８に記載のキメラ抗原受容体。
  100. 前記細胞内ドメインが、配列番号４１８を含むか、またはそれから成る第１の共刺激ドメイン、および配列番号４１９を含むか、またはそれから成る第２の共刺激ドメインを含む、請求項９８に記載のキメラ抗原受容体。
  101. 前記キメラ抗原受容体が、配列番号４１１のアミノ酸配列を含むか、またはそれから成る、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  102. 前記キメラ抗原受容体が、配列番号４１１の配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むか、またはそれから成る、請求項６９に記載のキメラ抗原受容体。
  103. 請求項２１〜６８に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちのいずれか１つから選択される第１のヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチと、第１のＣＡＲ−ＥＣとを含むキット。
  104. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣが、ヒト化されたＣＡＲを含む、請求項１０３に記載のキット。
  105. 前記ヒト化されたＣＡＲが、請求項１〜２０および６９〜１０２に記載のヒト化されたＣＡＲのうちのいずれか１つから選択される、請求項１０４に記載のキット。
  106. 前記ヒト化されたＣＡＲが、配列番号３８９〜３９７、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、および４１５から選択される、請求項１０４に記載のキット。
  107. 請求項３１に記載の第１のヒト化されたＣＡＲ−ＥＣスイッチを含むキットであって、前記ＣＡＲ−ＩＤが、酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドまたはその誘導体、二量体化しないバリアントＧＣＮ４ペプチド、ＦＬＡＧタグペプチド、非天然発生ペプチド、天然発生ペプチド、合成ペプチドタグ、αヘリックス形成ペプチド、Ｋ４ペプチド、およびＥ４ペプチドから選択され、前記標的化部分が、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体、またはヒト化されたＦＭＣ６３抗体の抗原結合部分から選択されるヒト化された標的化部分を含む、キット。
  108. 前記ＣＡＲ−ＩＤがＧＣＮ４ペプチドであり、前記標的化部分が、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体、またはヒト化されたＦＭＣ６３抗体の抗原結合部分から選択されるヒト化された標的化部分を含む、請求項１０７に記載のキット。
  109. 前記ＣＡＲ−ＩＤがＦＩＴＣであり、前記標的化部分が、ヒト化されたＦＭＣ６３抗体、またはヒト化されたＦＭＣ６３抗体の抗原結合部分から選択されるヒト化された標的化部分を含む、請求項１０７に記載のキット。
  110. 前記ＦＭＣ６３抗体またはそのＣＤ１９結合部分が、
    ａ．配列番号１６〜２５から成る群から選択される軽鎖配列、または
    ｂ．配列番号２７〜３５から成る群から選択される軽鎖配列、および
    ｃ．配列番号１〜１５から成る群から選択される重鎖配列を含む、請求項１０７〜１０９のいずれか一項に記載のキット。
  111. 請求項２１〜６８のいずれか一項に記載の第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび第１のＣＡＲ−ＥＣを用いて、治療を必要とする対象を治療する方法。
  112. 前記ＣＡＲ−ＩＤが、構造Ｉの配列：Ｘ１ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＸ２Ｘ３（配列番号２６９）を含み、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が任意に、任意のアミノ酸であるか、または不在である、請求項１１１に記載の方法。
  113. （ｉ）Ｘ１がＫであるか、または不在であり、（ｉｉ）Ｘ２がＫ、Ａ、およびＧから選択され、（ｉｉｉ）Ｘ３がＬ、Ａ、およびＧから選択され、（ｉｖ）Ｘ１がＫであるか、または不在であり、かつＸ２がＫ、Ａ、およびＧから選択され、（ｖ）Ｘ１がＫであるか、または不在であり、かつＸ３がＬ、Ａ、およびＧから選択され、（ｖｉ）Ｘ２がＫ、Ａ、およびＧから選択され、かつＸ３がＬ、Ａ、およびＧから選択され、（ｖｉｉ）Ｘ１がＫであるか、または不在であり、Ｘ２がＫ、Ａ、およびＧから選択され、かつＸ３がＬ、Ａ、およびＧから選択される、請求項１１２に記載の方法。
  114. 前記ＣＡＲ−ＩＤが、配列番号２６、２６、１３９、１４５、および１５４〜１６３のうちのいずれか１つから選択される配列を含む、請求項１１２に記載の方法。
  115. 前記ＣＡＲ−ＩＤが、ＦＩＴＣを含む、請求項１１１に記載の方法。
  116. 前記対象が、ＣＤ１９＋細胞が病理と関連するとされる疾患または状態のために治療される、請求項１１１〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
  117. 前記対象が、不均一性腫瘍および血球悪性腫瘍から選択される疾患または状態のために治療される、請求項１１１〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
  118. 前記対象が、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、および慢性リンパ性白血病から選択される疾患または状態のために治療される、請求項１１１〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
  119. 前記対象が、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、および有毛細胞白血病（ＨＣＬ）から選択される疾患または状態のために治療される、請求項１１〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
  120. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣが、請求項１〜２０および６９〜１０２に記載のＣＡＲのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲを発現する、請求項１１１〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
  121. 前記ＣＡＲが、配列番号４１１のアミノ酸配列を含む、請求項１２０に記載の方法。
  122. 請求項１０３３〜１１０のいずれか一項に記載のキットを用いて、治療を必要とする対象を治療する方法。
  123. 前記対象が、ＣＤ１９＋細胞が病理と関連するとされる疾患または状態のために治療される、請求項１２２に記載の方法。
  124. 前記対象が、異種の腫瘍および血球悪性腫瘍から選択される疾患または状態のために治療される、請求項１２２または１２３に記載の方法。
  125. 前記対象が、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、および慢性リンパ性白血病から選択される疾患または状態のために治療される、請求項１２２〜１２４のいずれか一項に記載の方法。
  126. 前記対象が、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、および有毛細胞白血病（ＨＣＬ）から選択される疾患または状態のために治療される、請求項１１１〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
  127. 前記方法が、（ｉ）ＣＡＲ−ＩＤおよびヒト化された標的化部分を含む第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）ＣＡＲ−ＩＤおよびヒト化された標的化部分を含む第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉｉ）前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチのそれぞれに相補的な第１のＣＡＲ−ＥＣと、を投与することを含み、請求項２１〜６８のいずれか一項に記載の前記第１および第２のスイッチのうち少なくとも１つ、請求項１１１〜１２６のいずれか一項に記載の方法。
  128. 前記方法が、（ｉ）請求項２１〜６８に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチから選択される第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉ）ＣＡＲ−ＩＤおよびヒト化された標的化部分を含む第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、（ｉｉｉ）前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチに相補的であるが、前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチに相補的ではない第１のＣＡＲ−ＥＣと、（ｉｖ）前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチに相補的な第２のＣＡＲ−ＥＣと、を投与することを含む、請求項１１１〜１２６のいずれか一項に記載の方法。
  129. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣが、請求項１〜２０および６９〜１０２に記載のＣＡＲのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲを発現する、請求項１２７または１２８に記載の方法。
  130. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、異なる標的化部分に結合する、請求項１２７〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
  131. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、請求項２１〜６８の前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチから選択される、請求項１２７〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
  132. 前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、請求項２１〜６８の前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチから選択される、請求項１２７〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
  133. （ｉ）前記第１のスイッチの前記標的化部分の、標的細胞への結合、および（ｉｉ）前記第１のＣＡＲ−ＥＣ上の前記ＣＡＲの前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記ＣＡＲ−ＩＤへの結合の両方の結合が、第１のＣＡＲ−ＥＣ媒介の療法効果を誘導する、請求項１１１〜１３２のいずれか一項に記載の方法。
  134. （ｉ）前記第２のスイッチの前記標的化部分の、標的細胞への結合、および（ｉｉ）前記第１のＣＡＲ−ＲＣまたは前記第２のＣＡＲ−ＥＣのいずれか上の前記ＣＡＲの、前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記ＣＡＲ−ＩＤへの結合の両方の結合が、前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記ＣＡＲ−ＩＤに結合した前記第１または第２のＣＡＲ−ＥＣによって生成されるＣＡＲ−ＥＣ媒介の療法効果を誘導する、請求項１２７〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
  135. 前記療法効果が、前記標的細胞の死滅を含む、請求項１３３または１３４に記載の方法。
  136. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣが、Ｔ細胞である、請求項１１１〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
  137. Ｔ細胞である第２のＣＡＲ−ＥＣを含む、請求項１１１〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
  138. 前記キメラ抗原受容体が発現される前記ＣＡＲ−ＥＣがＴ細胞である、請求項２１〜６８のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチ。
  139. 請求項１〜２０および６９〜１０２の前記ＣＡＲのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲを発現するＣＡＲ−ＥＣ。
  140. 前記ＣＡＲ−ＥＣが、Ｔ細胞である、請求項１３９に記載のＣＡＲ−ＥＣ。
  141. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣが、Ｔ細胞である、請求項１０３〜１１０のいずれか一項に記載のキット。
  142. Ｔ細胞である第２のＣＡＲ−ＥＣを含む、請求項１０３３〜１１０および１４１のいずれか一項に記載のキット。
  143. 請求項２１〜６８に記載のいずれか一項のスイッチから選択されるスイッチと、１つ以上の薬学的に許容される塩、賦形剤、またはビヒクルとを含む、医薬組成物。
  144. 担体、賦形剤、希釈剤、抗酸化剤、保存剤、着色剤、着香希釈剤、乳化剤、懸濁剤、溶媒、注入剤、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、等張化剤、共溶媒、湿潤剤、錯化剤、緩衝薬、抗菌剤、および／または界面活性剤を含む、請求項１４３に記載の医薬組成物。
  145. 少なくとも２つのＣＡＲ−ＥＣスイッチであって、前記少なくとも２つのＣＡＲ−ＥＣスイッチのうち少なくとも１つが、請求項２１〜６８のいずれか一項に記載されるものから選択されるＣＡＲ−ＥＣスイッチである、ＣＡＲ−ＥＣスイッチと、１つ以上の薬学的に許容される塩、賦形剤またはビヒクルとを含む、医薬組成物。
  146. 請求項２１〜６８のいずれか一項に記載のものから選択される少なくとも２つのＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む、請求項１４５に記載の医薬組成物。
  147. 前記組成物が、実質的にエンドトキシンフリーである、請求項１４３〜１４６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  148. 請求項２１〜６８のいずれか一項の前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチから選択されるＣＡＲ−ＥＣスイッチをコードする、ポリヌクレオチド。
  149. 請求項１〜２０および６９〜１０２のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする、ポリヌクレオチド。
  150. 請求項１４８または１４９に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  151. 請求項１４８もしくは１４９に記載の前記ポリヌクレオチドまたは請求項１３０に記載の前記ベクターを含む、宿主細胞。
  152. 請求項１４９に記載の前記ポリヌクレオチド、または請求項１４９に記載の前記ポリヌクレオチドを含むベクターを含む、Ｔ細胞。
  153. 請求項２１〜６８のいずれか一項に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチから選択される第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、請求項１〜２０および６９〜１０２のいずれか一項に記載のＣＡＲから選択されるＣＡＲを含む第１のＣＡＲ−ＥＣと、を含む、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム。
  154. 請求項１５３に記載のＣＡＲ−ＥＣプラットフォームであって、１つ以上の第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチをさらに含み、それぞれの第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、
    ａ．ＣＡＲ−ＩＤと、
    ｂ．標的細胞上の細胞表面分子に結合する第２の標的化部分と、を含み、
    それぞれの第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチの前記第２の標的化部分が、前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上に含まれる前記第１の標的化部分とは異なり、
    前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上に含まれる前記ＣＡＲ−ＩＤが任意に、
    （ｉ）前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上に含まれる前記第１のＣＡＲ−ＩＤと同じであるか、または
    （ｉｉ）前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上に含まれる前記第１のＣＡＲ−ＩＤとは異なる第２のＣＡＲ−ＩＤであるが、
    但し、前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、第２のＣＡＲ−ＩＤを含む場合、前記ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームが、前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチの前記第２のＣＡＲ−ＩＤに結合するＣＡＲを含む第２のＣＡＲ−ＥＣをさらに含むことを条件とする、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム。
  155. 再発癌を治療する方法であって、対象に、
    ａ．請求項２１〜４８の前記スイッチのうちのいずれか１つから選択される第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、
    ｂ．ＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含む第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、
    ｃ．前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記ＣＡＲ−ＩＤおよび前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記ＣＡＲ−ＩＤに結合する、ＣＡＲ−ＥＣと、を投与することを含み、
    前記第１のＣＡＲ−ＥＣが、前記対象の再発前に投与され、かつ前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、前記対象の前記再発後に投与される、方法。
  156. 前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、抗ＣＤ２０標的化部分を含む、請求項１５５に記載の方法。
  157. 再発癌を治療する方法であって、対象に、
    ａ．ＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含む第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、
    ｂ．請求項１〜２８の前記スイッチのいずれか１つから選択される第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、
    ｃ．前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記ＣＡＲ−ＩＤおよび前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記ＣＡＲ−ＩＤに結合する、ＣＡＲ−ＥＣと、を投与することを含み、
    前記第１のＣＡＲ−ＥＣが、前記対象の再発前に投与され、かつ前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、前記対象の前記再発後に投与される、方法。
  158. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、抗ＣＤ２０標的化部分を含む、請求項１５７に記載の方法。
  159. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記標的化部分が、第１の細胞表面分子に結合し、かつ前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記標的化部分が、前記第１の細胞表面分子とは異なる第２の細胞表面分子に結合し、前記第１の細胞表面分子が、前記再発前に癌細胞上で発現され、かつ前記第２の細胞表面分子が、前記再発後に癌細胞上で発現される、請求項１５５〜１５７のいずれか一項に記載の方法。
  160. 前記第１の細胞表面分子が、
    ａ．前記再発前と比較して、前記再発後により低いレベルで発現されるか、または
    ｂ．前記再発後に発現されない、請求項１５９に記載の方法。
  161. 前記標的細胞を、請求項２１〜６８のいずれか１つの前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチから選択されるＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させることと、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチを相補的ＣＡＲ−ＥＣと接触させることとを含む、標的細胞を溶解する方法。
  162. 前記ＣＡＲ−ＥＣが、請求項１〜２０および６９〜１０２の前記ＣＡＲのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲを発現するが、但し、前記ＣＡＲが、前記ＣＡＲ−ＥＣ上の前記ＣＡＲ−ＩＤを補完する、請求項１６１に記載の方法。
  163. 前記接触が、インビボで起きる、請求項１６１または１６２に記載の方法。
  164. 前記標的細胞を、請求項２１〜６８のいずれか一項の前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチから選択されるＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させることと、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、相補的ＣＡＲ−ＥＣと接触させることと、を含む、標的細胞を死滅させる方法。
  165. 前記ＣＡＲ−ＥＣが、請求項１〜２０および６９〜１０２の前記ＣＡＲのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲを発現するが、但し、前記ＣＡＲが、前記ＣＡＲ−ＥＣ上の前記ＣＡＲ−ＩＤを補完する、請求項１６４に記載の方法。
  166. ＣＡＲ−ＥＣ上で発現されたＣＡＲを、請求項２１〜６８の前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させることを含み、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記標的化部分が、前記標的細胞上のその標的と、前記ＣＡＲ−ＥＣ上の前記ＣＡＲの前記細胞外ドメインとの両方に結合する際に、前記ＣＡＲ−ＥＣが活性化され、前記ＣＡＲが、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチ上の前記ＣＡＲ−ＩＤに結合する、ＣＡＲ−ＥＣを活性化させる方法。
  167. 前記ＣＡＲ−ＥＣが、Ｔ細胞である、請求項１５５〜１６６のいずれか一項に記載の方法。
  168. 前記対象が、癌である疾患または状態のために治療される、請求項１１１〜１１６、１２０〜１２３、および１２７〜１３７のいずれか一項に記載の方法。
  169. 前記標的化部分が、標的細胞上の細胞表面分子に結合する、請求項１１１〜１３７のいずれか一項に記載の方法。
  170. それぞれの標的化部分が、標的細胞上の細胞表面分子に結合する、請求項１５５〜１６０のいずれか一項に記載の方法。
  171. 前記標的細胞が、癌細胞である、請求項１６１〜１７０のいずれか一項に記載の方法。
  172. 前記癌細胞が、ＣＤ１９陽性細胞、ＣＤ１９陽性Ｂリンパ球、Ｈｅｒ２陽性細胞、Ｈｅｒ２陽性乳癌細胞、Ｈｅｒ２陽性膵臓癌細胞、ＢＣＭＡ陽性細胞、ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫細胞、ＣＳ１陽性細胞、ＣＳ１陽性多発性骨髄腫細胞、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性細胞、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性神経膠芽細胞腫細胞、ＣＤ２０陽性細胞、ＣＤ２２陽性細胞、ＣＤ３３陽性細胞、ＣＤ３３陽性急性骨髄性白血病細胞、ＣＤ１２３陽性細胞、ＣＤ１２３陽性急性骨髄性白血病細胞、ＣＤ１２３陽性細胞、ＣＤ１２３陽性急性リンパ性白血病細胞、ＣＬＬ１陽性細胞、ＣＬＬ１陽性急性骨髄性白血病細胞、ならびに（ｉ）ＣＤ３３陽性、（ｉｉ）ＣＤ１２３陽性、（ｉｉｉ）ＣＬＬ１陽性、または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）のうちの２つ以上の組み合わせである、急性骨髄性白血病細胞、から選択される、請求項１７１に記載の方法。
  173. 前記方法が、対象に、前記ＣＡＲ−ＥＣおよび前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与することを含む、請求項１１１〜１３７および１６１〜１７２のいずれか一項に記載の方法。
  174. ＣＤ２０に指向されたＣＡＲを発現する第１のＣＡＲ−ＥＣで以前に治療された対象の再発癌を治療する方法であって、前記対象が、前記再発前のＣＤ２０の発現と比較して、前記再発後の前記癌細胞上のＣＤ２０の発現の減少のため、再発癌を有し、前記方法が、前記対象に、請求項１〜４８の前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲ−ＥＣスイッチと、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチを補完するＣＡＲを発現する第２のＣＡＲ−ＥＣと、を投与することを含む、方法。
  175. 前記ＣＡＲが、請求項４９〜８２の前記ＣＡＲのうちのいずれか１つから選択される、請求項１７４に記載の方法。
  176. 前記癌が、急性リンパ性白血病または慢性リンパ性白血病である、請求項１５５〜１５８および１７４〜１７５のいずれか一項に記載の方法。
  177. 請求項１〜２０および６９〜１０２のいずれか一項の前記ＣＡＲのうちのいずれか１つを発現するＣＡＲ−ＥＣ、および標的化部分を含む第１の相補的ＣＡＲ−ＥＣスイッチ、およびＣＡＲ−ＩＤを用いて、治療を必要とする対象を治療する方法であって、前記標的化部分が、標的細胞上の細胞表面分子に結合する、方法。
  178. 再発癌を治療する方法であって、対象に、
    ａ．請求項１〜２０および６９〜１０２のいずれか一項の前記ＣＡＲのうちのいずれか１つを発現する第１のＣＡＲ−ＥＣと、
    ｂ．前記第１のＣＡＲ−ＩＤが、前記第１のＣＡＲを補完する、第１のＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含む第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、
    ｃ．前記第２のＣＡＲ−ＩＤが、前記第１のＣＡＲを補完する、第２のＣＡＲ−ＩＤおよび標的化部分を含む第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、を投与することを含み、
    前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、前記対象の再発前に投与され、かつ前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、前記対象の前記再発後に投与される、方法。
  179. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、抗ＣＤ２０標的化部分を含む、請求項１７８に記載の方法。
  180. 前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、抗ＣＤ１９標的化部分を含む、請求項１７８または１７９に記載の方法。
  181. 前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、抗ＣＤ１９標的化部分を含む、請求項７８に記載の方法。
  182. 前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、抗ＣＤ２０標的化部分を含む、請求項１７８または１８１に記載の方法。
  183. 前記第１の細胞表面分子が、
    ａ．前記再発前と比較して、前記再発後により低いレベルで発現されるか、または
    ｂ．再発後に発現されない、請求項１５９に記載の方法。
  184. 標的細胞を溶解する方法であって、前記標的細胞を、標的化部分およびＣＡＲ−ＩＤを含む第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させることと、前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチを、相補的ＣＡＲ−ＥＣと接触させることとを含み、前記ＣＡＲ−ＥＣが、請求項１〜２０および６９〜１０２のうちのいずれか一項の前記ＣＡＲのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲを発現する、方法。
  185. 標的細胞を死滅させる方法であって、前記標的細胞を、標的化部分およびＣＡＲ−ＩＤを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと接触させることと、前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチを、相補的ＣＡＲ−ＥＣと接触させることと、を含み、前記ＣＡＲ−ＥＣが、請求項１〜２０および６９〜１０２のいずれか一項の前記ＣＡＲのうちのいずれか１つから選択されるＣＡＲを発現する、方法。
  186. 前記ＣＡＲ−ＥＣが、Ｔ細胞である、請求項１７７〜１８５のいずれか一項に記載の方法。
  187. 前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、請求項２１〜６８および１３８〜１４０のいずれか一項の前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちのいずれか１つから選択される、請求項１７７〜１８６のいずれか一項に記載の方法。
  188. 前記標的細胞が、癌細胞である、請求項１７７〜１８７のいずれか一項に記載の方法。
  189. 前記癌細胞が、ＣＤ１９陽性細胞、ＣＤ１９陽性Ｂリンパ球、Ｈｅｒ２陽性細胞、Ｈｅｒ２陽性乳癌細胞、Ｈｅｒ２陽性膵臓癌細胞、ＢＣＭＡ陽性細胞、ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫細胞、ＣＳ１陽性細胞、ＣＳ１陽性多発性骨髄腫細胞、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性細胞、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性神経膠芽細胞腫細胞、ＣＤ２０陽性細胞、ＣＤ２２陽性細胞、ＣＤ３３陽性細胞、ＣＤ３３陽性急性骨髄性白血病細胞、ＣＤ１２３陽性細胞、ＣＤ１２３陽性急性骨髄性白血病細胞、ＣＤ１２３陽性細胞、ＣＤ１２３陽性急性リンパ性白血病細胞、ＣＬＬ１陽性細胞、ＣＬＬ１陽性急性骨髄性白血病細胞、ならびに（ｉ）ＣＤ３３陽性、（ｉｉ）ＣＤ１２３陽性、（ｉｉｉ）ＣＬＬ１陽性、または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）のうちの２つ以上の組み合わせである急性骨髄性白血病細胞、から選択される、請求項１８８に記載の方法。
  190. 対象へのＣＡＲ−ＥＣスイッチ投与の投薬レジメンを調節することによって、Ｔ細胞応答の度合を制御する方法。
  191. 第１の投薬レジメンが、第１の短期投薬スケジュール上で、第１の高投薬量でＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与することを含み、第２の投薬レジメンが、前記第１の投薬スケジュールより長い第２の投薬スケジュール上で、第２の低投薬量でＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与することを含む、請求項１９０に記載の方法。
  192. 前記第１の投薬スケジュールが、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチを少なくとも１日おきに１回投与することを含む、請求項１９１に記載の方法。
  193. 前記第１の投薬スケジュールが、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチを１日おきに投与することを含む、請求項１９１に記載の方法。
  194. 前記第１の投薬スケジュールが、前記第１の高投薬量の前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチを１日おきに合計４回の投与で投与することを含む、請求項１９１〜１９３のいずれか一項に記載の方法。
  195. 前記第１の投薬スケジュールが、前記第１の高投薬量の前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、１日おきにまたは約１日おきに合計４回の投与または合計約４回の投与で、投与することを含む、請求項１９１〜１９３のいずれか一項に記載の方法。
  196. 前記第２の投薬スケジュールが、前記第２の低投薬量を１日おきに合計１２回の投与で投与することを含む、請求項１９１〜１９５のいずれか一項に記載の方法。
  197. 前記第２の投薬スケジュールが、前記第２の低投薬量を、１日おきにまたは約１日おきに合計１２回の投与または合計約１２回の投与で、投与することを含む、請求項１９１〜１９６のいずれか一項に記載の方法。
  198. 前記高投薬量が、低投薬量の少なくとも５倍、１０倍、または少なくとも１５倍である、請求項１９１〜１９７のいずれか一項に記載の方法。
  199. 前記第１の投薬レジメンが、前記高投薬量で投与された対象でのＴ細胞拡大において、前記低投薬量で投与された対象での前記Ｔ細胞拡大と比較した際に、増加をもたらす、請求項１９０〜１９８のいずれか一項に記載の方法。
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