JP2022525435A - Ｃｄ１９抗体およびこれを使用する方法 - Google Patents

Ｃｄ１９抗体およびこれを使用する方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、概して、ＣＤ１９タンパク質と結合することができる免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体またはその抗原結合断片）に関する。本技術の抗体は、それを必要とする対象においてＣＤ１９関連自己免疫疾患またはＣＤ１９関連癌を検出および処置する方法において有用である。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年４月８日に出願された米国仮特許出願第６２／８３１，１２３号の利益および優先権を主張し、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
本技術は、概して、ＣＤ１９タンパク質と特異的に結合する免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体またはその抗原結合断片）の調製およびこれの使用に関する。特に、本技術は、ＣＤ１９結合抗体の調製ならびにＣＤ１９関連癌およびＣＤ１９関連自己免疫疾患の検出および処置におけるその使用に関する。
本技術の背景技術の以下の説明は、本技術の理解における補助として単に提供され、本技術の先行技術を説明するまたは構成すると認めるものではない。
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、３０種類を超えるＢリンパ球およびＴリンパ球悪性腫瘍を含む異質性疾患であり、米国で診断されるすべての癌の４．３％である。Ｂ細胞悪性腫瘍としては、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、および急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）が挙げられる。Ｂ細胞リンパ腫はすべてのＮＨＬの８５％を占め、３０％はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、２０％は濾胞性リンパ腫（２０％）であり、ほぼ１９，０００人が死に至る。米国では、ＣＬＬは白血病の３分の１を占め、毎年４６００人が死亡する原因となっている（Jemal et al., J Natl Cancer Inst 109 (9), djx030 (2017)）。
一態様では、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶH）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶL）を含む抗体またはその抗原結合断片であって、（ａ）ＶHは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに／または（ｂ）ＶLは、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｎ２９７ＡおよびＫ３２２Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含む。さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、抗体は、Ｓ２２８Ｐ突然変異を含むＩｇＧ４定常領域を含む。特定の実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ｓｃＦvおよびＦvからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である。
さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、アミノ酸配列ＥＥ ＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫ ＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬ ＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰ ＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧ ＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩ ＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱ ＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧ ＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧ ＷＴＶＮＶＥＧＳ（配列番号８２）（配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位のアミノ酸残基に対応する）を含むＩｇ様Ｃ２ループを含むＣＤ１９ポリペプチドと結合する。さらにまたはあるいは、特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基を含むコンホメーションエピトープと結合する。
一態様では、本開示は、配列番号２２、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３１、配列番号４５、配列番号４７、もしくは１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそのバリアントを含むアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）、および／または配列番号２０、配列番号２４、配列番号２８、配列番号３０、配列番号４４、配列番号４６、もしくは１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそのバリアントを含む軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を含む抗体を提供する。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２２および配列番号２０（ｃｈＦＭＣ６３×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）；配列番号２６および配列番号２４（ＢＣ２５０－ ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２／ＶＨ－１ｂ×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）；配列番号２９および配列番号２８（ｍＦＭＣ６３×ｍＣ８２５ ＢｓＡｂ）；配列番号３１および配列番号３０（ｍＦＭＣ６３×ｈＣ８２５ ＢｓＡｂ）；配列番号４５および配列番号４４（ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２ＶＨ－１ｂ×ｍＣ８２５）；ならびに配列番号４７および配列番号４６（ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２ＶＨ－１ｂ×ｈＣ８２５）からなる群からそれぞれ選択されるＨＣアミノ酸配列およびＬＣアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号１７、１８、もしくは１９のうちのいずれか１つに存在する軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列、および／または（ｂ）配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２のうちのいずれか１つに存在する重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体を提供する。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号２０、２４、２８、３０、４４もしくは４６のうちいずれか１つ中に存在するＬＣ配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＬＣ配列および／または（ｂ）配列番号２２、２６、２９、３１、４５もしくは４７のうちいずれか１つ中に存在するＨＣ配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％同一であるＨＣ配列を含む抗体を提供する。
上記実施形態のいずれにおいても、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である。さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、抗体は、Ｎ２９７ＡおよびＫ３２２Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含む。特定の実施形態では、本技術の抗体は、Ｓ２２８Ｐ突然変異を含むＩｇＧ４定常領域を含む。上記実施形態のいずれにおいても、抗体または抗原結合断片は、アミノ酸配列ＥＥ ＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫ ＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬ ＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰ ＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧ ＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩ ＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱ ＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧ ＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧ ＷＴＶＮＶＥＧＳ（配列番号８２）（配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位のアミノ酸残基に対応する）を含むＩｇ様Ｃ２ループを含むＣＤ１９ポリペプチドと結合する。さらにまたはあるいは、特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基を含むコンホメーションエピトープと結合する。
さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、本技術の抗体は、α－１，６－フコース修飾を欠く。
一態様では、本開示は、配列番号３２～４３、または４８～５９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む二重特異性抗体または抗原結合断片を提供する。特定の実施形態では、二重特異性抗体または抗原結合断片は、配列番号３２～４３、または４８～５９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、第１のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗原結合断片であって、第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；（ｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｉｉｉ）第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；（ｉｖ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｖ）第２のエピトープと特異的に結合することができる第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；（ｖｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｖｉｉ）第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含むフレキシブルペプチドリンカー配列と；（ｉｘ）自己集合分解（ｓｅｌｆ-ａｓｓｅｍｂｌｙ ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙ）（ＳＡＤＡ）ポリペプチドとを含み、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択され、ならびに／または第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインは、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９からなる群から選択される二重特異性抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本開示は、第１のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗原結合断片であって、第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；（ｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｉｉｉ）第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；（ｉｖ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｖ）第２のエピトープと特異的に結合することができる第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；（ｖｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｖｉｉ）第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含むフレキシブルペプチドリンカー配列と；（ｉｘ）自己集合分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチドとを含み、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択され；ならびに／または第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインは、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９からなる群から選択される二重特異性抗原結合断片を提供する。
本明細書に開示される二重特異性抗原結合断片の特定の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、四量体化、五量体化、または六量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、ｐ５３、ｐ６３、ｐ７３、ｈｎＲＮＰＣ、ＳＮＡ－２３、ステフィンＢ、ＫＣＮＱ４、およびＣＢＦＡ２Ｔ１のうちのいずれか１つの四量体化ドメインを含む。さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、二重特異性抗原結合断片は、配列番号３２～４３、または４８～５９から選択されるアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗体であって、第１および第２のポリペプチド鎖は互いに共有結合され、第２および第３のポリペプチド鎖は互いに共有結合され、第３および第４のポリペプチド鎖は互いに共有結合され、ならびに（ａ）第１のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖の各々は、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；（ｉｉ）第１の免疫グロブリンの軽鎖定常ドメインと；（ｉｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）3を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｉｖ）第２の免疫グロブリンの軽鎖および重鎖可変ドメインは、第２のエピトープと特異的に結合することができ、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーを介して一緒に連結されて一本鎖可変断片を形成する、第２の免疫グロブリンの相補的重鎖可変ドメインに連結された第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン、または第２の免疫グロブリンの相補的軽鎖可変ドメインに連結された第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインとを含み、（ｂ）第２のポリペプチド鎖および第３のポリペプチド鎖の各々は、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；（ｉｉ）第１の免疫グロブリンの重鎖定常ドメインとを含み；第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択され；および／または第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインは、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９からなる群から選択される二重特異性抗体を提供する。特定の実施形態では、第２の免疫グロブリンは、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、または小分子ＤＯＴＡハプテンと結合する。
一態様では、本開示は、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片のいずれかをコードする組換え核酸配列を提供する。いくつかの実施形態では、組換え核酸配列は、配列番号２１、２３、２５、および２７からなる群から選択される。
別の態様では、本開示は、本明細書において開示される組換え核酸配列のいずれかを含む宿主細胞またはベクターを提供する。
一態様では、本開示は、本技術の抗体または抗原結合断片および医薬上許容される担体を含む組成物を提供し、抗体または抗原結合断片は、同位元素、色素、クロマジェン（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、増殖因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡまたはそれらの任意の組合せからなる群から選択される物質にコンジュゲートされていてもよい。
本技術の二重特異性抗体または抗原結合断片のいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄系細胞、形質細胞または肥満細胞と結合する。さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、二重特異性抗体または抗原結合断片は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲまたは小分子ＤＯＴＡハプテンと結合する。小分子ＤＯＴＡハプテンは、ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－Ｂｎ、ＤＯＴＡ－デスフェリオキサミン、ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2、Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、およびＡｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2からなる群から選択され得る。
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象においてＣＤ１９関連癌、またはＣＤ１９関連自己免疫疾患を処置する方法であって、本明細書に開示される抗体または抗原結合断片のいずれか１つの有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の実施形態では、抗体は、配列番号２２および配列番号２０（ｃｈＦＭＣ６３×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）；配列番号２６および配列番号２４（ＢＣ２５０－ ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２／ＶＨ－１ｂ×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）；配列番号２９および配列番号２８（ｍＦＭＣ６３×ｍＣ８２５ ＢｓＡｂ）；配列番号３１および配列番号３０（ｍＦＭＣ６３×ｈＣ８２５ ＢｓＡｂ）；配列番号４５および配列番号４４（ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２ＶＨ－１ｂ×ｍＣ８２５）；ならびに配列番号４７および配列番号４６（ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２ＶＨ－１ｂ×ｈＣ８２５）からなる群からそれぞれ選択されるＨＣアミノ酸配列およびＬＣアミノ酸配列を含み、抗体は、ＣＤ１９と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号３２～４３、または４８～５９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
ＣＤ１９関連癌の例としては、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（リンパ形質細胞性リンパ腫）、重鎖病、原発性アミロイドーシス、移植後リンパ増殖性障害、ホジキンリンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、（胚中心様）びまん性大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、二系統の白血病、二表現型白血病（ｂｉｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、ヘアリー細胞白血病、前駆Ｂリンパ芽急性白血病／リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、濾胞性リンパ腫、または辺縁帯Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫が挙げられる。
ＣＤ１９関連自己免疫疾患の例としては、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス、腫瘍随伴症候群、尋常性天疱瘡、２型糖尿病、または移植片対宿主病が挙げられる。
さらにまたはあるいは、方法のいくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、対象に、さらなる治療薬と別個に、逐次または同時に投与される。癌を処置するためのさらなる治療薬の例としては、アルキル化剤、白金剤、タキサン、ビンカ剤、抗エストロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、卵巣抑制剤、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦ／ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、細胞分裂停止性アルカロイド、細胞傷害性抗生物質、代謝拮抗剤、内分泌／ホルモン剤、ビスホスホネート療法剤のうち１つまたは複数が挙げられる。自己免疫疾患を処置するためのさらなる治療薬例としては、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、グルココルチコイド、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、抗ＴＮＦ生物製剤、アバタセプト、トシリズマブ、アナキンラ、およびリツキシマブのうち１つまたは複数が挙げられる。
別の態様では、本開示は、ｉｎ ｖｉｖｏで対象において腫瘍を検出する方法であって、（ａ）対象に本技術の抗体または抗原結合断片の有効量を投与することであって、抗体または抗原結合断片がＣＤ１９を発現する腫瘍に局在するように構成されており、放射性同位元素で標識されていることと、（ｂ）参照値よりも高い抗体または抗原結合断片によって放射された放射性レベルを検出することによって、対象において腫瘍の存在を検出することとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、癌を有すると診断されている、または癌を有すると疑われている。抗体または抗原結合断片によって放射された放射性レベルは、陽電子放射型断層撮影または単一光子放出型コンピュータ断層撮影を使用して検出され得る。
さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、方法は、対象に放射性核種にコンジュゲートされた本技術の抗体または抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、放射性核種は、アルファ粒子放射性同位元素、ベータ粒子放射性同位元素、オージェ放射体またはそれらの任意の組合せである。ベータ粒子放射性同位元素の例として、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕおよび67Ｃｕが挙げられる。方法のいくつかの実施形態では、正常組織において非特異的ＦｃＲ依存性結合は、排除または低減される（例えば、非グリコシル化をもたらすＦｃ領域におけるＮ２９７Ａ突然変異によって）。
また、ＣＤ１９関連癌、またはＣＤ１９関連自己免疫疾患の検出および／または処置のためのキットであって、本技術の少なくとも１種の免疫グロブリン関連組成物（例えば、本明細書に記載される任意の抗体または抗原結合断片）、またはその機能的バリアント（例えば、置換バリアント）および使用説明書を含むキットも本明細書に開示される。特定の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、１種または複数の検出可能な標識にカップリングされている。一実施形態では、１つまたは複数の検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識または発色標識を含む。
さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される抗ＣＤ１９免疫グロブリン関連組成物と特異的に結合する二次抗体をさらに含む。いくつかの実施形態では、二次抗体は、放射性標識、蛍光標識または発色標識からなる群から選択される少なくとも１つの検出可能な標識にカップリングされている。
別の態様では、本開示は、プレターゲッティングされる放射免疫治療のために対象を選択する方法であって、（ａ）対象に放射性標識ＤＯＴＡハプテンならびに放射性標識ＤＯＴＡハプテンおよびＣＤ１９抗原と結合する本技術の二重特異性抗体または抗原結合断片を含む複合体の有効量を投与することであって、複合体が複合体の二重特異性抗体または抗原結合断片によって認識されるＣＤ１９抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されていることと、（ｂ）複合体によって放射された放射性レベルを検出することと、（ｃ）複合体によって放射された放射性レベルが参照値よりも高い場合に、プレターゲッティングされる放射免疫治療のために対象を選択することとを含む方法を提供する。
一態様では、本開示は、ＣＤ１９関連癌を有すると診断された対象において放射線療法に対する腫瘍感受性を増大させる方法であって、対象に放射性標識ＤＯＴＡハプテンならびに放射性標識ＤＯＴＡハプテンおよびＣＤ１９抗原標的を認識および結合する本技術の二重特異性抗体または抗原結合断片を含む複合体の有効量を投与することであって、複合体が複合体の二重特異性抗体または抗原結合断片によって認識されるＣＤ１９抗原標的を発現する腫瘍に局在するように構成されていることを含む方法を提供する。
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象において癌を処置する方法であって、対象に放射性標識ＤＯＴＡハプテンならびに放射性標識ＤＯＴＡハプテンおよびＣＤ１９抗原標的を認識および結合する本技術の二重特異性抗体または抗原結合断片を含む複合体の有効量を投与することであって、複合体が複合体の二重特異性抗体または抗原結合断片によって認識されるＣＤ１９抗原標的を発現する腫瘍に局在するように構成されていることを含む方法を提供する。
本明細書に開示される方法の上記実施形態のいずれにおいても、複合体は、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、脳室内、経口、腫瘍内、または鼻腔内投与される。本明細書において開示される方法のいくつかの実施形態では、対象はヒトである。さらにまたはあるいは、本明細書において開示される方法の上記の実施形態のいずれかでは、放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、255Ｆｍ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、68Ｇａ、227Ｔｈまたは64Ｃｕを含み、アルファ粒子放射性同位元素、ベータ粒子放射性同位元素またはオージェ放射体を含んでもよい。
一態様では、本開示は、ＣＤ１９関連癌と診断された対象において放射線療法に対する腫瘍感受性を増大させる方法であって、（ａ）本技術の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体または抗原結合断片の有効量を対象に投与することであって、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体または抗原結合断片は、ＣＤ１９抗原標的を発現する腫瘍に局在化するように構成されていることと、（ｂ）放射標識ＤＯＴＡハプテンの有効量を対象に投与することであって、放射標識ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体または抗原結合断片と結合するように構成されていることとを含む方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象において癌を処置する方法であって、（ａ）本技術の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体または抗原結合断片の有効量を対象に投与することであって、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体または抗原結合断片は、ＣＤ１９抗原標的を発現する腫瘍に局在化するように構成されていることと、（ｂ）放射標識ＤＯＴＡハプテンの有効量を対象に投与することであって、放射標識ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体または抗原結合断片と結合するように構成されていることとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本技術の方法は、放射性標識ＤＯＴＡハプテンの投与の前に対象に清澄剤の有効量を投与することをさらに含む。
さらにまたはあるいは、本明細書において開示される方法の上記の実施形態のいずれかでは、放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、255Ｆｍ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、68Ｇａ、227Ｔｈまたは64Ｃｕを含み、アルファ粒子放射性同位元素、ベータ粒子放射性同位元素またはオージェ放射体を含んでもよい。本明細書において開示される方法の上記の実施形態のいずれかでは、対象はヒトである。
図１Ａは、モジュラーＩｇＧ－ｓｃＦｖ ＣＤ１９－ＢｓＡｂの構造を示す模式図を示す図である。ＣＨ１～ＣＨ３は、第１の抗体の重鎖の定常ドメインである。ＣＬは、第１の抗体の軽鎖の定常ドメインである。ＣＬのＣ末端は、第２の抗体に由来する一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）に融合される。 図１Ｂは、本技術のＣＤ１９－ＢｓＡｂであるＢＣ２５０の純度を示す、サイズ排除クロマトグラフィー高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）を使用して生成されたクロマトグラムである。ＣＤ１９－ＢｓＡｂをサイズ排除カラムに通し、溶離液中のタンパク質を、波長２８０ｎｍを有する紫外線の吸光度に基づき検出した。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）を使用して画分を分析し、ＣＤ１９－ＢｓＡｂがクロマトグラムの１５．６５６分のピーク３で溶出されることが示された。 図２は、ＣＤ１９（＋）急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）細胞株ＮＡＬＭ６へのＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０の結合を実証する、フローサイトメトリープロファイルを示す図である。示された量のＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０または対照ＢｓＡｂを免疫染色に使用した。ＮＡＬＭ６細胞への抗体の結合を、フローサイトメトリーを使用して検出した。対照ＢｓＡｂの漸増濃度は蛍光の増加につながらなかったのに対し、ＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０の漸増濃度は蛍光の比例的増加につながり、ＮＡＬＭ６細胞へのＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０の結合が実証された。 図３は、ＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０が急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）において抗原特異的Ｔ細胞細胞傷害性を媒介することを示す図である。ＣＤ１９－ＢｓＡｂがＴ細胞にＡＬＬ細胞を死滅させるよう再指示することができるかを評価するために、ＮＡＬＭ６ ＡＬＬ細胞に51Ｃｒを負荷した。示された濃度のＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０、または対照ＢｓＡｂを、Ｔ細胞とともに51Ｃｒ負荷ＮＡＬＭ６細胞とインキュベートした。標準的な４時間５１Ｃｒ放出アッセイを行い、放出された51Ｃｒの量をＢｓＡｂ濃度の関数としてプロットした。対照ＢｓＡｂとのインキュベーションは、低いベースラインレベルの51Ｃｒを放出した（逆三角形を参照のこと）。ＢＣ２５０クローンとのインキュベーションは、対照ＢｓＡｂと比較して51Ｃｒ放出の増加を示し、癌細胞の死滅が実証された（丸を逆三角形と比較のこと）。これらのデータに基づき、ＮＡＬＭ６細胞の細胞溶解に関するＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０のＥＣ50は４２ｆＭと算出された。 図４は、相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を操作することなく、抗体のＶLおよび／またはＶHフレームワーク領域のアミノ酸を変えることによる本技術のＣＤ１９抗体の結合親和性の変化を示す図である。マウスＦＭＣ６３抗体に基づく８つのヒト化ＶH配列および３つのヒト化ＶL配列を開発した（以下の図１２～１３を参照のこと）。ヒト化ＶHおよびＶL配列を互いに対形成させて、マウスＦＭＣ６３抗体の２４種類の異なるヒト化バージョンを生成した。ＣＤ１９に対するそれらの親和性を評価するために、各抗体の単回用量を使用してＮＡＬＭ６ ＡＬＬ細胞を染色した（ＣＤ１９陽性）。染色後、細胞を５回洗浄した。各洗浄後に細胞アリコートを除去し、蛍光色素標識抗ヒト二次抗体とインキュベートした。ＮＡＬＭ６細胞へのＣＤ１９抗体の結合を、フローサイトメトリーを使用して検出した。図４に示すように、いくつかの抗体の結合は反復洗浄に耐え、それらの抗体がそれらの標的に対する高い親和性を有することが実証された。これらのヒト化クローンに関して低から高までの親和性スペクトラムがあった。ヒト化ＶHおよびＶL配列はＦＭＣ６３親と同一のＣＤＲ配列を有したため、これらのデータは、親抗体のＣＤＲ配列を保持しながら抗体フレームワーク領域の配列を変えることによって、ヒト化ＣＤ１９抗体の親和性が調節され得ることを実証するものである。 図５Ａは、抗ＣＤ１９－ＢｓＡｂの効力がＣＤ１９に対するその結合親和性と相関することを示す図である。細胞傷害性効力に対する抗体親和性の影響を評価するために、４種類の示されたヒト化ＢｓＡｂクローンを、ＣＤ１９に対するその親和性に基づき（フローサイトメトリーによって決定した場合の）２４種類のヒト化クローンから選択した。４種類のＢｓＡｂの異なる用量の存在下、ＣＤ１９（＋）ＮＡＬＭ６ ＡＬＬ細胞に対するＴ細胞細胞傷害性を標準的な４時間51Ｃｒ放出アッセイにより測定した。ＥＣ５０値を算出し、ＢｓＡｂの親和性の指標であるＮＡＬＭ６ ＡＬＬ細胞染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の関数としてプロットした。ＣＤ１９に対する親和性が高いクローンは、ＡＬＬ細胞の死滅においてより大きな効力（より低いＥＣ50）を示した。 図５Ｂは、ＢｓＡｂ濃度の関数としてプロットされた種々の抗ＣＤ１９ ＢｓＡｂの細胞傷害性のグラフを示す図である。 図５Ｃは、ＣＤ１９へのその対応する親和性に対する種々の抗ＣＤ１９ ＢｓＡｂのＥＣ50の比較を示す図である。抗ＣＤ１９－ＢｓＡｂの効力は、ＣＤ１９に対するその親和性と相関しており、ＢＣ２５０（ＶＬ－２、ＶＨ－１ｂ）は最も高い細胞傷害性効力を示す。 図６Ａ～６Ｃは、異種移植マウスモデルにおけるＡＬＬ ＮＡＬＭ６細胞に対するＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性を示す図である。ｉｎ ｖｉｖｏでの研究のために、１００万個のＮＡＬＭ６－ルシフェラーゼ発現ＡＬＬ細胞を、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃscid Ｉｌ２ｒｇtm1Wjl／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに０日目に静脈内注射した。３日後、マウスを撮像し（生物発光イメージング、ＢＬＩ）、以下の７つの処置群に分けた：（１）活性化Ｔ細胞のみ、（２）活性化Ｔ細胞プラス１００ｎｇ ＢＣ１１９（ＮＡＬＭ６細胞と結合しないＧＤ２×ＣＤ３対照ＢｓＡｂ）、（３）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（０．０１ｎｇ）、（４）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（０．１ｎｇ）、（５）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１ｎｇ）、（６）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１０ｎｇ）、および（７）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１００ｎｇ）。白血病が確立されたら、３日目に処置を開始した。マウスは１０００万活性化Ｔ細胞の週１回の注射を３週間にわたり受けた。ＢｓＡｂは１週間に２回、眼窩後方に投与した：一方の投与は活性化Ｔ細胞と混合し、他方のＢｓＡｂ投与は単独で注射した。活性化Ｔ細胞の最終投与後、抗体処置をさらに４回続け、次いで停止した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞の生存を支持するために、１０００ ＩＵ ＩＬ２を１週間に２回、皮下投与した。図６Ａは、ＢＬＩによってモニターした白血病の進行を示す図である。図６Ｂは、ＮＡＬＭ６－ルシフェラーゼＡＬＬ細胞の注射後日数の関数としてのマウスからの全光束のプロットを示す図である。図６Ｃは、ＮＡＬＭ６－ルシフェラーゼＡＬＬ細胞の注射後時間の関数としてのマウスの生存パーセンテージを示す図である。 図７Ａ～７Ｃは、異種移植マウスモデルにおけるヒトバーキットリンパ腫細胞に対するＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性を示す図である。１００万Ｄａｕｄｉ細胞を、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃscid Ｉｌ２ｒｇtm1Wjl／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに０日目に静脈内注射した。３日後、マウスを撮像し（生物発光イメージング、ＢＬＩ）、以下の３つの処置群に分けた：（１）処置なし（腫瘍のみ）、（２）活性化Ｔ細胞（Ｔ細胞）プラス１００ｎｇ ＢＣ１１９（Ｄａｕｄｉ細胞と結合しないＧＤ２×ＣＤ３対照ＢｓＡｂ）、および（３）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１００ｎｇ）。リンパ腫が確立されたら、１４日目に処置を開始した。マウスは、２０００万活性化Ｔ細胞の週１回の注射を３週間にわたり受けた。ＢｓＡｂは１週間に２回、眼窩後方に投与した：一方の投与は活性化Ｔ細胞と混合し、他方のＢｓＡｂ投与は単独で注射した。活性化Ｔ細胞の最終投与後、抗体処置をさらに２回続け、次いで停止した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞の生存を支持するために、１０００ ＩＵ ＩＬ２を１週間に２回、皮下投与した。図７Ａは、ＢＬＩによってモニターしたリンパ腫の進行を示す図である。図７Ｂは、Ｄａｕｄｉ細胞の注射後日数の関数としてのマウスからの全光束のプロットを示す図である。図７Ｃは、異なる処置群からの代表的なマウスの腎臓の写真（上のパネル）、ならびに抗ＣＤ１９および抗ヒトＣＤ４５抗体で染色した腎臓ホモジネートの対応するフローサイトメトリー画像（下のパネル）を示す図である。対角線に沿った細胞の集団は、Ｄａｕｄｉ細胞である。 図８Ａ～８Ｄは、異種移植マウスモデルにおけるヒト慢性骨髄性白血病急性転化（ＣＭＬ）ＢＶ１７３細胞に対するＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性を示す図である。１００万ＢＶ１７３－ルシフェラーゼ発現細胞を、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃscid Ｉｌ２ｒｇtm1Wjl／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに０日目に静脈内注射した。３日後、マウスを撮像し（生物発光イメージング、ＢＬＩ）、以下の３つの処置群に分けた：（１）処置なし（腫瘍のみ）、（２）活性化Ｔ細胞（Ｔ細胞）プラス１００ｎｇ ＢＣ１１９（ＢＶ１７３細胞と結合しないＧＤ２×ＣＤ３対照ＢｓＡｂ ）、および（３）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１００ｎｇ）。白血病が確立されたら、１４日目に処置を開始した。マウスは、８８０万活性化Ｔ細胞の単回注射を受けた。ＢｓＡｂは１週間に２回、眼窩後方に投与した：一方の投与は活性化Ｔ細胞と混合し、他方のＢｓＡｂ投与は単独で注射した。単回Ｔ細胞投与後、抗体処置をさらに５回続け、次いで停止した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞の生存を支持するために、１０００ ＩＵ ＩＬ２を１週間に２回、皮下投与した。白血病進行をＢＬＩによってモニターした。図８Ａは、ＢＬＩによってモニターした白血病の進行を示す図である。図８Ｂは、ＢＶ１７３－ルシフェラーゼ細胞の注射後時間の関数としてのマウスの生存パーセンテージを示す図である。図８Ｃは、ＢＶ１７３細胞の注射後日数の関数としてのマウスからの全光束のプロットを示す図である。図８Ｄは、異なる処置群からの代表的なマウスの肝臓の写真（上のパネル）、ならびに抗ＣＤ１９および抗ヒトＣＤ４５抗体で染色した肝臓ホモジネートの対応するフローサイトメトリー画像（下のパネル）を示す図である。ＢＣ２５０を受け取らなかった群からのマウスの肝臓は複数の目に見える転移があったが、ＡＴＣ／ＢＣ２５０で処置したマウスは肝臓転移を示さなかった。 図９Ａ～９Ｂは、異種移植マウスモデルにおけるヒトバーキットリンパ腫細胞に対するＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）の有効性を示す図である。１００万Ｒａｊｉ－ルシフェラーゼバーキットリンパ腫細胞を、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃscid Ｉｌ２ｒｇtm1Wjl／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに０日目に静脈内注射した。３日後、マウスを撮像し（生物発光イメージング、ＢＬＩ）、以下の３つの処置群に分けた：（１）処置なし（腫瘍のみ）、（２）活性化Ｔ細胞（Ｔ細胞）プラス１００ｎｇ ＢＣ１１９（ＧＤ２×ＣＤ３対照ＢｓＡｂ）、および（３）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１００ｎｇ）。リンパ腫が確立されたら、３日目に処置を開始した。３週間にわたり、マウスは平均２３００万活性化Ｔ細胞の注射を３、７、および１０日目に３回受けた。ＢｓＡｂを活性化Ｔ細胞と混合し、眼窩後方に投与した。さらに２回のＢＣ２５０を１４および２０日目に投与した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞の生存を支持するために、１０００ ＩＵ ＩＬ２を１週間に２回、皮下投与した。図９Ａは、ＢＬＩによってモニターしたリンパ腫の進行を示す図である。図９Ｂは、Ｒａｊｉ細胞の注射後日数の関数としてのマウスからの全光束のプロットを示す図である。 図１０Ａ～１０Ｂは、本技術のＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）と二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）ブリナツモマブ（白血病に対する唯一のＦＤＡ認可ＢｓＡｂ）の細胞傷害性特性の比較を示す図である。図１０Ａは、ＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）ＢｓＡｂ、およびブリナツモマブの漸増用量のｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞傷害性を示す図である。図１０Ｂは、異種移植マウスモデルにおけるＮＡＬＭ６細胞に対するＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）およびブリナツモマブのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性を示す図である。ＮＳＧマウスに、１００万ＮＡＬＭ６－ルシフェラーゼ発現ＡＬＬ細胞を０日目に静脈内注射した。３日後、マウスを撮像し（生物発光イメージング、ＢＬＩ）、７つの処置群に分けた ：（１）Ｔ細胞のみ、（２）Ｔ細胞プラス５フェムトモルＢＣ２５０、（３）Ｔ細胞プラス５０フェムトモルＢＣ２５０、（４）Ｔ細胞プラス５００フェムトモルＢＣ２５０、（５）Ｔ細胞プラス１０フェムトモルブリナツモマブ、（６）Ｔ細胞プラス１００フェムトモルブリナツモマブ、および（７）Ｔ細胞プラス１０００フェムトモルブリナツモマブ。白血病が確立されたら、４日目に処置を開始した。３週間にわたり、マウスは４、１１、および１８日目に１０００万活性化Ｔ細胞の３回注射を受けた。ＢｓＡｂは５日／週投与した。活性化Ｔ細胞の最終投与後、抗体をさらに８回投与し、次いで停止した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞の生存を支持するために、１０００ ＩＵ ＩＬ２を１週間に２回、皮下投与した。白血病進行をＢＬＩによってモニターした。 図１１Ａ～１１Ｆは、ＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）ｖｓ．ブリナツモマブで処置したＮＡＬＭ６異種移植マウスにおける腫瘍量および生存の比較を示す図である。図１１Ａは、ＡＴＣ単独、または１０フェムトモルブリナツモマブもしくは５フェムトモルＢＣ２５０と組み合わせたＡＴＣで処置したマウスにおける時間の関数としての全光束のプロットを示す図である。図１１Ｂは、ＡＴＣ単独、または１０フェムトモルブリナツモマブもしくは５フェムトモルＢＣ２５０と組み合わせたＡＴＣで処置したマウスの生存パーセントを示す図である。図１１Ｃは、ＡＴＣ単独、または１００フェムトモルブリナツモマブもしくは５０フェムトモルＢＣ２５０と組み合わせたＡＴＣで処置したマウスにおける、時間の関数としての全光束のプロットを示す図である。５０フェムトモル／用量のＢＣ２５０の投与は、１００フェムトモル／用量のブリナツモマブと比較して、白血病負荷を１１および１７日時点でそれぞれ１１倍および６８倍多く低減した。図１１Ｄは、ＡＴＣ単独、または１００フェムトモルブリナツモマブもしくは５０フェムトモルＢＣ２５０と組み合わせたＡＴＣで処置したマウスの生存パーセントを示す図である。図１１Ｅは、ＡＴＣ単独、または１０００フェムトモルブリナツモマブもしくは５００フェムトモルＢＣ２５０と組み合わせたＡＴＣで処置したマウスにおける、時間の関数としての全光束のプロットを示す図である。図１１Ｆは、ＡＴＣ単独、または１０００フェムトモルブリナツモマブもしくは５００フェムトモルＢＣ２５０と組み合わせたＡＴＣで処置したマウスの生存パーセントを示す図である。図１１Ａ、１１Ｃおよび１１Ｅの示されたｐ値は、１１日および１７日時点のＡＴＣ／ブリナツモマブｖｓ． ＡＴＣ／ＢＣ２５０の統計的差異に基づく。図１１Ｂ、１１Ｄおよび１１Ｆの示されたｐ値は、ＡＴＣ／ブリナツモマブｖｓ． ＡＴＣ／ＢＣ２５０の統計的差異に基づく。 図１１Ｇ～１１Ｉは、ｉｎ ｖｉｖｏでのＢＣ２５０効力とブリナツモマブ効力の比較を示す図である。図１０Ｂに記載されている実験を１群あたり１０匹で繰り返した。活性化Ｔ細胞を、二重特異性抗体と一緒に白血病マウス（ＮＡＬＭ６異種移植マウス）に注射した。Ｔ細胞生着を支持するために、ヒトインターロイキン－２（ＩＬ２）を皮下注射した。処置プロトコールは図１１Ｈに示されている。これらの結果は、ブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｕｍａｂ）と対比してＢＣ２５０の優れた効力を実証している。 図１１Ｊ～１１Ｋは、ｉｎ ｖｉｖｏでのＡＬＬ異種移植片の処置に関して、ＢＣ２５０がブリナツモマブよりも優れていたことを示す図である。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞武装（ａｒｍｉｎｇ）実験においてＢＣ２５０およびビーリンサイトの効力を比較するために、ＮＡＬＭ６ヒトＡＬＬ細胞を移植したＮＳＧマウスを活性化Ｔ細胞で処置した。活性化Ｔ細胞は、Ｔ細胞をＢｓＡｂと２０分間インキュベートし、その後それらを洗浄して非結合抗体を除去することによって得た。これらの結果は、ＢＣ２５０武装Ｔ細胞が、ブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｕｍａｂ）よりも強力に白血病増殖を低減し、マウスの生存を向上させたことを示している。 図１２は、マウスおよびヒト化ＦＭＣ６３重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（配列番号１および５～１２）。ＣＤＲ配列は、下線が引かれた太字フォントで示されている。マウスＦＭＣ６３ ＶHドメインのＶHＣＤＲ１、ＶHＣＤＲ２、およびＶHＣＤＲ３領域のアミノ酸配列は、それぞれ、ＧＶＳＬＰＤＹＧ（配列番号２）、ＩＷＧＳＥＴＴ（配列番号３）、およびＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹ（配列番号４）である。ＶＨ－１ｂ（配列番号５）、ＶＨ－２ｂ（配列番号６）、ＶＨ－３（配列番号７）、ＶＨ－４（配列番号８）、ＶＨ－５ｂ（配列番号９）、ＶＨ－６ｂ（配列番号１０）、ＶＨ－７ｂ（配列番号１１）およびＶＨ－８ｂ（配列番号１２）は、マウスＦＭＣ６３ ＶHドメインのヒト化バージョンである。 図１３は、マウスおよびヒト化ＦＭＣ６３軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（配列番号１３および１７～１９）。ＣＤＲ配列は、下線が引かれた太字フォントで示されている。マウスＦＭＣ６３ ＶLドメインのＶLＣＤＲ１、ＶLＣＤＲ２、およびＶLＣＤＲ３領域のアミノ酸配列は、それぞれ、ＱＤＩＳＫＹ（配列番号１４）、ＨＴＳ（配列番号１５）、およびＱＱＧＮＴＬＰＹＴ（配列番号１６）である。ＶＬ－１（配列番号１７）、ＶＬ－２（配列番号１８）、およびＶＬ－３（配列番号１９）は、マウスＦＭＣ６３ ＶLドメインのヒト化バージョンである。 図１４Ａおよび１４Ｂは、それぞれ、配列番号２０および２１として表される、キメラＢｓＡｂ（ｃｈＦＭＣ６３）の軽鎖のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す図である。図１４Ｃおよび１４Ｄは、それぞれ、配列番号２２および２３として表される、キメラＢｓＡｂ（ｃｈＦＭＣ６３）の重鎖のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、キメラ抗ＣＤ１９抗体の可変ドメインがイタリック体で示され、リンカー配列は太字で下線が引かれている。 図１５Ａ～１５Ｂは、それぞれ、配列番号２４および２５として表される、ＢｓＡｂ ＢＣ２５０（ｈＦＭＣ６３ Ｌ２ＨＣ１ｂ）の軽鎖のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す図である。図１５Ｃ～１５Ｄは、それぞれ、配列番号２６および２７として表される、ＢｓＡｂ ＢＣ２５０（ｈＦＭＣ６３ Ｌ２ＨＣ１ｂ）の重鎖のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、抗ＣＤ１９ ＢｓＡｂ ＢＣ２５０（ｈＦＭＣ６３ Ｌ２ＨＣ１ｂ）の可変ドメインがイタリック体で示され、リンカー配列は太字で下線が引かれている。 図１６Ａ～１６Ｂは、それぞれ、配列番号２８および２９として表される、マウスＦＭＣ６３×マウスＣ８２５（抗ＤＯＴＡ）ＢｓＡｂの軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、マウスＦＭＣ６３×マウスＣ８２５（抗ＤＯＴＡ）ＢｓＡｂの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカー配列は太字で下線が引かれている。 図１７Ａ～１７Ｂは、それぞれ、配列番号３０および３１として表される、マウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ＢｓＡｂの軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、マウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ＢｓＡｂの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカー配列は太字で下線が引かれている。 図１８Ａ～１８Ｂは、本技術の２つのマウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号３２および３３）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、マウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ５３四量体化ドメインが太字で示されている。 図１９Ａ～１９Ｂは、本技術の２つのマウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号３４および３５）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、マウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ６３四量体化ドメインが太字で示されている。 図２０Ａ～２０Ｂは、本技術の２つのマウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号３６および３７）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、マウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ７３四量体化ドメインが太字で示されている。 図２１Ａ～２１Ｂは、本技術の２つのマウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号３８および３９）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、マウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ５３四量体化ドメインが太字で示されている。 図２２Ａ～２２Ｂは、本技術の２つのマウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号４０および４１）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、マウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ６３四量体化ドメインが太字で示されている。 図２３Ａ～２３Ｂは、本技術の２つのマウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号４２および４３）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、マウスＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ７３四量体化ドメインが太字で示されている。 図２４Ａ～２４Ｂは、それぞれ、配列番号４４および４５として表される、ヒト化ＦＭＣ６３×マウスＣ８２５（抗ＤＯＴＡ）ＩｇＧ－ｓｃＦｖ ＢｓＡｂの軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、ヒト化ＦＭＣ６３×マウスＣ８２５（抗ＤＯＴＡ）ＢｓＡｂの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカー配列は太字で下線が引かれている。 図２５Ａ～２５Ｂは、それぞれ、配列番号４６および４７として表される、ヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ＩｇＧ－ｓｃＦｖ ＢｓＡｂの軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、ヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ＢｓＡｂの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカー配列は太字で下線が引かれている。 図２６Ａ～２６Ｂは、本技術の２つのヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号４８および４９）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、ヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ５３四量体化ドメインが太字で示されている。 図２７Ａ～２７Ｂは、本技術の２つのヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号５０および５１）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、ヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ６３四量体化ドメインが太字で示されている。 図２８Ａ～２８Ｂは、本技術の２つのヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号５２および５３）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、ヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ７３四量体化ドメインが太字で示されている。 図２９Ａ～２９Ｂは、本技術の２つのヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号５４および５５）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、ヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ５３四量体化ドメインが太字で示されている。 図３０Ａ～３０Ｂは、本技術の２つのヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号５６および５７）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、ヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ６３四量体化ドメインが太字で示されている。 図３１Ａ～３１Ｂは、本技術の２つのヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）一本鎖二重特異性タンデム断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）免疫グロブリン関連組成物のアミノ酸配列（配列番号５８および５９）を示す図である。シグナルペプチドに下線が引かれ、ヒト化ＦＭＣ６３×ヒト化Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＢｓＴａＦｖｓの可変ドメインがイタリック体で示され、リンカーまたはスペーサー配列は太字の下線が引かれたフォントで示され、ｐ７３四量体化ドメインが太字で示されている。 図３２は、各ＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体クローンのいくつかの細胞株に対する安定性データ、ＥＣ５０データ、およびＭＦＩデータを示す図である。 図３３Ａは、個々の動物（ｎ＝５）におけるＢＣ２５０の薬物動態特性を示す図である。図３３Ｂは、図３３Ａに示された動物に関するＢＣ２５０の平均薬物動態活性を示す図である。ＢＣ２５０の薬物動態は、マウスに抗体を注射し、注射後４時間から開始し９６時間までマウスを採血して決定した。ＥＬＩＳＡアッセイを使用して血中ＢＣ２５０のレベルを決定した。 図３４Ａ～３４Ｃは、それぞれ、ＣＤ１９（＋）白血病細胞株Ｄａｕｄｉ、ＮＡＬＭ６、およびＲａｊｉに対するＴ細胞媒介細胞傷害性アッセイにおける、Ｎ２９７Ａ／Ｋ３２２Ａ（ＢＣ２５０）およびＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＢＣ２５８）置換を有する２つの二重特異性抗体の比較を示す図である。ＢＣ２５８およびＢＣ２５０は同一のＶＬおよびＶＨ配列（すなわち、ＶＬ－２、ＶＨ－１ｂ）を有するが、異なるＦｃドメイン配列を有する。ＢＣ２５８がそのＦｃドメインにＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）突然変異を有するのに対し、ＢＣ２５０はそのＦｃドメインにＮ２９７Ａ／Ｋ３２２Ａ突然変異を有する。理論に縛られることを望むものではないが、二重特異性抗体のＦｃのサイレンシングは、Ｆｃ受容体を有する免疫細胞または補体活性化によるＴ細胞の不要な死滅を防ぎ得ることが考えられる。ＢＣ２５０は、３つの試験ＣＤ１９（＋）白血病細胞株のうち少なくとも２つにおいてＢＣ２５８よりも白血病細胞の溶解に効力がある。 図３５Ａ～３５Ｃは、白血病ＮＡＬＭ６異種移植マウスモデルにおける、Ｎ２９７Ａ／Ｋ３２２Ａ（ＢＣ２５０）およびＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＢＣ２５８）置換を有する２つの二重特異性抗体の比較を示す図である。白血病マウスを、異なる用量のＢＣ２５０またはＢＣ２５８と混合した活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）で処置し、腫瘍成長を生物発光イメージングによって測定した。二重特異性抗体は両方とも、ｉｎ ｖｉｖｏで同等の効力を示した。
当然のことではあるが、本技術の実質的な理解を提供するために、本方法の特定の態様、様式、実施形態、変法および特徴がさまざまな詳細レベルで以下に説明される。
本開示は、概して、ＣＤ１９ポリペプチドと特異的に結合することができる免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体またはその抗原結合断片）を提供する。本技術の免疫グロブリン関連組成物は、それを必要とする対象においてＣＤ１９関連癌またはＣＤ１９関連自己免疫疾患を検出または処置する方法において有用である。したがって、本方法の種々の態様は、抗ＣＤ１９抗体の調製、特性決定および操作に関する。本技術の免疫グロブリン関連組成物は、単独で、または癌を処置するためのさらなる治療薬と組み合わせて有用である。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、ヒト化抗体、キメラ抗体または二重特異性抗体である。
本方法の実施では、分子生物学、タンパク質生化学、細胞生物学、免疫学、微生物学および組換えＤＮＡにおける多数の従来技術が使用される。例えば、Sambrook and Russell eds. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition; the series Ausubel et al. eds. (2007) Current Protocols in Molecular Biology; the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); MacPherson et al. (1991) PCR 1: A Practical Approach (IRL Press at Oxford University Press); MacPherson et al. (1995) PCR 2: A Practical Approach; Harlow and Lane eds. (1999) Antibodies, A Laboratory Manual; Freshney (2005) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 5th edition; Gait ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis; U.S. Patent No. 4,683,195; Hames and Higgins eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization; Anderson (1999) Nucleic Acid Hybridization; Hames and Higgins eds. (1984) Transcription and Translation; Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press (1986)); Perbal (1984) A Practical Guide to Molecular Cloning; Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (Cold Spring Harbor Laboratory); Makrides ed. (2003) Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells; Mayer and Walker eds. (1987) Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, London); and Herzenberg et al. eds (1996) Weir’s Handbook of Experimental Immunologyを参照のこと。ポリペプチド遺伝子発現産物（すなわち、遺伝子翻訳レベル）のレベルを検出および測定する方法は、本技術分野において周知であり、抗体検出および定量化技術などのポリペプチド検出法の使用を含む。(Strachan & Read, Human Molecular Genetics, Second Edition. (John Wiley and Sons, Inc., NY, 1999)も参照のこと）
定義
別に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、一般に、この技術が属する技術分野の当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、内容が明らかに別のものを指示しない限り、複数の言及を含む。例えば、「細胞」への言及は、２つ以上の細胞の組合せなどを含む。一般に、本明細書において使用される命名法、ならびに細胞培養、分子遺伝学、有機化学、分析化学、および核酸化学における実験手順および以下に記載されるハイブリダイゼーションは、周知であり、当技術分野で一般に使用されている。
本明細書において、数に関連して用語「約」は、一般に、別に記載されない限りまたは文脈から明らかでない限り、数のいずれかの方向（より多いまたはより少ない）で１％、５％または１０％の範囲内に入る数を含むように解釈される（このような数が、あり得る値の０％より少ないまたは１００％を超える場合を除く）。
本明細書において、対象への薬剤または薬物の「投与」は、その意図される機能を発揮するために対象へ化合物を導入または送達する任意の経路を含む。投与は、それだけには限らないが、経口で、鼻腔内に、非経口的に（静脈内に、筋肉内に、腹膜内にまたは皮下に）、直腸性に、くも膜下腔内に、腫瘍内に、または局所的に含む任意の適した経路によって実施され得る。投与は、自己投与および別のものによる投与を含む。
「アジュバント」とは、免疫系の刺激を引き起こす１つまたは複数の物質を指す。これに関連して、アジュバントは、１つまたは複数のワクチン抗原または抗体に対する免疫応答を増強するために使用される。アジュバントは、対象に、ワクチンの投与の前、それと組み合わせて、またはその後に投与され得る。アジュバントとして使用される化学化合物の例として、アルミニウム化合物、オイル、ブロックポリマー、免疫刺激複合体、ビタミンおよびミネラル（例えば、ビタミンＥ、ビタミンＡ、セレンおよびビタミンＢ１２）、Ｑｕｉｌ Ａ（サポニン）、細菌および真菌細胞壁構成成分（例えば、リポ多糖、リポタンパク質および糖タンパク質）、ホルモン、サイトカインおよび同時刺激因子が挙げられる。
本明細書において、用語「抗体」とは、例として、制限するものではないが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、それらの組合せおよび任意の脊椎動物、例えば、ヒト、ヤギ、ウサギおよびマウスなどの哺乳動物において、ならびにサメ免疫グロブリンなどの非哺乳動物種において免疫応答の際に産生される同様の分子を含む免疫グロブリンまたは免疫グロブリン様分子をまとめて指す。本明細書において、「抗体」（無傷の免疫グロブリンを含む）および「抗原結合断片」は、その他の分子との結合を実質的に排除するほど、対象の分子（または対象の高度に同様の分子の群）と特異的に結合する（例えば、生物学的サンプル中のその他の分子に対する結合定数よりも、少なくとも１０3Ｍ-1より大きい、少なくとも１０4Ｍ-1より大きいまたは少なくとも１０5Ｍ-1より大きい、対象の分子に対する結合定数を有する抗体および抗体断片）。用語「抗体」とはまた、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体）などの遺伝子操作された形態も含む。Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.); Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W.H. Freeman & Co., New York, 1997も参照のこと。
より詳しくは、抗体は、少なくとも軽鎖免疫グロブリン可変領域または重鎖免疫グロブリン可変領域を含み、抗原のエピトープを特異的に認識し、結合するポリペプチドリガンドを指す。抗体は重鎖および軽鎖から構成され、その各々が重鎖可変（ＶH）領域および軽鎖可変（ＶL）領域と呼ばれる可変領域を有する。まとめて、ＶH領域およびＶL領域は、抗体によって認識される抗原に結合することに関与している。通常、免疫グロブリンは、ジスルフィド結合によって相互接続された重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖を有する。軽鎖、ラムダ（λ）およびカッパ（κ）の２つの種類がある。抗体分子の機能活性を決定する５種の主な重鎖クラス（またはアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥがある。各重鎖および軽鎖は、定常領域および可変領域を含有する（領域はまた、「ドメイン」としても知られる）。組合せでは、重鎖および軽鎖可変領域は、抗原と特異的に結合する。軽鎖および重鎖可変領域は、３つの超可変領域によって中断された「フレームワーク」領域を含有し、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる。フレームワーク領域およびＣＤＲの程度は、定義されている（参照により本明細書に組み込まれるKabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991を参照のこと）。Ｋａｂａｔデータベースは、現在オンラインで維持されている。種々の軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で比較的保存されている。成分軽鎖および重鎖の組み合わされたフレームワーク領域である抗体のフレームワーク領域は、主にβシートコンホメーションを採用し、ＣＤＲは、βシート構造と接続する、いくつかの場合には、βシート構造の一部を形成するループを形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間、非共有結合相互作用によって正しい配向にＣＤＲを位置させるようにするスキャフォールドを形成するよう働く。
ＣＤＲは、主に、抗原のエピトープとの結合に関与する。各鎖のＣＤＲは、通常、Ｎ末端から出発して逐次番号づけられたＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と呼ばれ、また通常、個々のＣＤＲが位置している鎖によって同定される。したがって、ＶH ＣＤＲ３は、それが見られる抗体の重鎖の可変ドメインに位置し、ＶL ＣＤＲ１は、それが見られる抗体の軽鎖の可変ドメインに由来するＣＤＲ１である。ＣＤ１９タンパク質と結合する抗体は、特定のＶH領域およびＶL領域配列、したがって、特定のＣＤＲ配列を有する。異なる特異性（すなわち、異なる抗原のための異なる組合せ部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体毎に異なるＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の制限された数のアミノ酸位置のみが抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。「免疫グロブリン関連組成物」とは、本明細書において、抗体（モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体などを含む）ならびに抗体断片を指す。抗体またはその抗原結合断片は、抗原と特異的に結合する。
本明細書において、用語「抗体関連ポリペプチド」とは、可変領域を単独で、または以下のポリペプチド要素：抗体分子のヒンジ領域、ＣＨ1、ＣＨ2およびＣＨ3ドメインのすべてもしくは一部と組み合わせて含み得る一本鎖抗体を含む、抗原結合性抗体断片を意味する。また、可変領域ならびにヒンジ領域、ＣＨ1、ＣＨ2およびＣＨ3ドメインの任意の組合せも本技術に含まれる。本方法において有用な抗体関連分子は、例えば、それだけには限らないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）2、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合されたＦｖ（ｓｄＦｖ）およびＶLまたはＶHドメインのいずれかを含む断片である。例として、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶL、ＶH、ＣLおよびＣＨ1ドメインからなる一価の断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）2断片、ヒンジ領域でジスルフィド橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、（ｉｉｉ）ＶHおよびＣＨ1ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶLおよびＶHドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶHドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et al., Nature 341: 544-546, 1989)および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。そのようなものとして、「抗体断片」または「抗原結合断片」は、全長抗体の一部、一般に、その抗原結合性または可変領域を含み得る。抗体断片または抗原結合断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2およびＦｖ断片、ダイアボディー、線形抗体、一本鎖抗体分子および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
「二重特異性抗体」または「ＢｓＡｂ」は、本明細書において、別個の構造を有する２種の標的、例えば、２種の異なる標的抗原、同一標的抗原上の２種の異なるエピトープまたはハプテンおよび標的抗原もしくは標的抗原上のエピトープと同時に結合し得る抗体を指す。さまざまな異なる二重特異性抗体構造が、当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体中の各抗原結合部分は、ＶHおよび／またはＶL領域を含み、いくつかのこのような実施形態では、ＶHおよび／またはＶL領域は、特定のモノクローナル抗体において見られるものである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、２つの抗原結合部分を含有し、各々、異なるモノクローナル抗体に由来するＶHおよび／またはＶL領域を含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、２つの抗原結合部分を含有し、２つの抗原結合部分のうち一方は、第１のモノクローナル抗体に由来するＣＤＲを含有するＶHおよび／またはＶL領域を有する免疫グロブリン分子を含み、もう一方の抗原結合部分は、第２のモノクローナル抗体に由来するＣＤＲを含有するＶHおよび／またはＶL領域を有する抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡＢ、ｓｃＦｖなど）を含む。
本明細書において、「清澄剤」は、腎臓による迅速なクリアランスを促進するように、対象の血液コンパートメント中に存在する過剰の二重特異性抗体と結合する物質である。ハプテン投与（例えば、ＤＯＴＡ）に先立つ清澄剤の使用は、プレターゲッティングされる放射免疫治療（ＰＲＩＴ）系においてより良好な腫瘍対バックグラウンド比を促進する。清澄剤の例として、５００ｋＤ－デキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）（Orcutt et al., Mol Cancer Ther. 11(6): 1365-1372 (2012)）、５００ｋＤアミノデキストラン－ＤＯＴＡコンジュゲート、プレターゲッティング抗体に対する抗体などが挙げられる。
本明細書において、用語「コンジュゲートされた」は、当業者に公知の任意の方法による２つの分子の関連を指す。関連の適した種類として、化学的結合および物理的結合が挙げられる。化学的結合として、例えば、共有結合および配位結合が挙げられる。物理的結合として、例えば、水素結合、双極性相互作用、ファンデルワールス力、静電相互作用、疎水性相互作用および芳香族スタッキングが挙げられる。
本明細書において、用語「ダイアボディー」とは、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片を指し、断片は、同一ポリペプチド鎖中に軽鎖可変ドメイン（ＶL）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶH）含む（ＶHＶL）。同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインは、別の鎖の相補性ドメインと対形成させられ、２つの抗原結合部位が生成する。ダイアボディーは、例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１およびHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA、90: 6444-6448 (1993)により十分に記載されている。
本明細書において、用語「一本鎖抗体」または「一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）」とは、Ｆｖ断片、ＶLおよびＶHの２つのドメインの抗体融合分子を指す。一本鎖抗体分子は、いくつかの個々の分子を有するポリマー、例えば、二量体、三量体またはその他のポリマーを含み得る。さらに、Ｆv断片、ＶLおよびＶHの２つのドメインは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、ＶLおよびＶH領域が対形成して一価分子（一本鎖Ｆv（ｓｃＦv）として知られる）を形成する単一タンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによって、組換え方法を使用してつなげられ得る。Bird et al. (1988) Science 242:423-426およびHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad Sci. USA 85:5879-5883。このような一本鎖抗体は、組換え技術または無傷の抗体の酵素的もしくは化学的切断によって調製され得る。
上記の抗体断片のいずれも、当業者に公知の従来技術を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同一方法で結合特異性および中和活性についてスクリーニングされる。
本明細書において、「抗原」とは、抗体（またはその抗原結合断片）が選択的に結合し得る分子を指す。標的抗原は、タンパク質、炭水化物、核酸、脂質、ハプテンまたはその他の天然に存在するもしくは合成化合物であり得る。いくつかの実施形態では、標的抗原は、ポリペプチド（例えば、ＣＤ１９ポリペプチド）であり得る。抗原は、動物において免疫応答を生成するために動物に投与され得る。
用語「抗原結合断片」とは、抗原との結合に関与しているポリペプチドの一部を有する全免疫グロブリン構造の断片を指す。本技術において有用な抗原結合断片の例として、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）2、ｓｃＦｖＦｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）2が挙げられるが、それらに限定されない。
「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）およびその結合パートナー（例えば、抗原または抗原性ペプチド）の単一結合部位間の総合非共有結合相互作用の強度を意味する。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫD）によって表され得る。親和性は、本明細書において記載されるものを含む当技術分野で公知の標準方法によって測定され得る。低親和性複合体は、一般に抗原から容易に解離する傾向がある抗体を含有するのに対し、高親和性複合体は、一般に抗原と長期間結合したままである傾向がある抗体を含有する。
本明細書において、用語「生物学的サンプル」とは、生存細胞に由来するサンプル材料を意味する。生物学的サンプルは、対象から単離された、組織、細胞、細胞のタンパク質または膜抽出物および生物学的流体（例えば、腹水または脳脊髄液（ＣＳＦ））ならびに対象内に存在する組織、細胞および流体を含み得る。本技術の生物学的サンプルとして、それだけには限らないが、乳房組織、腎組織、子宮頸部、子宮内膜、頭部または頸部、胆嚢、耳下腺組織、前立腺、脳、下垂体腺、腎臓組織、筋肉、食道、胃、小腸、結腸、肝臓、脾臓、膵臓、甲状腺組織、心組織、肺組織、膀胱、脂肪組織、リンパ節組織、子宮、卵巣組織、副腎組織、精巣組織、扁桃腺、胸腺、血液、毛髪、頬側、皮膚、血清、血漿、ＣＳＦ、精液、前立腺液、精液、尿、糞便、汗、唾液、痰、粘液、骨髄、リンパおよび涙から採取されたサンプルが挙げられる。生物学的サンプルはまた、内臓の、または癌からの生検から得ることができる。生物学的サンプルは、診断もしくは研究のために対象から得ることができ、または対照として、もしくは基礎研究のために非罹患個体から得ることができる。サンプルは、例えば、静脈穿刺および外科的生検を含む標準方法によって得ることができる。特定の実施形態では、生物学的サンプルは、血液サンプルまたは骨髄穿刺および生検に由来するサンプルである。
本明細書において、用語「ＣＤＲグラフト抗体」とは、「アクセプター」抗体の少なくとも１つのＣＤＲが、望ましい抗原特異性を有する「ドナー」抗体に由来するＣＤＲ「グラフト」によって置き換えられている抗体を意味する。
本明細書において、用語「キメラ抗体」とは、ある種に由来するモノクローナル抗体のＦｃ定常領域（例えば、マウスＦｃ定常領域）が、組換えＤＮＡ技術を使用して、別の種の抗体に由来する Ｆｃ定常領域（例えば、ヒトＦｃ定常領域）と置き換えられている抗体を意味する。全般的に、Robinson et al.、PCT/US86/02269; Akira et al.、欧州特許出願第１８４，１８７号； Taniguchi、欧州特許出願第１７１，４９６号； Morrison et al.、欧州特許出願第１７３，４９４号； Neuberger et al.、ＷＯ８６／０１５３３； Cabilly et al.米国特許第４，８１６，５６７号；Cabilly et al.、欧州特許出願第０１２５，０２３号; Better et al., Science 240: 1041-1043, 1988; Liu et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439-3443, 1987; Liu et al., J. Immunol 139: 3521-3526, 1987; Sun et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 214-218, 1987; Nishimura et al., Cancer Res 47: 999-1005, 1987; Wood et al.、Nature 314: 446-449, 1885;およびShaw et al., J. Natl. Cancer Inst. 80: 1553-1559, 1988を参照のこと。
本明細書において、用語「コンセンサスＦＲ」とは、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク（ＦＲ）抗体領域を意味する。抗体のＦＲ領域は、抗原と接触しない。
本明細書において、「対照」は、比較目的で実験において使用される代替サンプルである。対照は、「陽性」または「陰性」であり得る。例えば、実験の目的が、特定の種類の疾患の処置のための治療薬の有効性の相関を判定することである場合には、陽性対照（所望の治療効果を示すとわかっている化合物または組成物）および陰性対照（療法を受け取らない、またはプラセボを受け取る対象またはサンプル）が通常使用される。
本明細書において、用語「有効量」とは、所望の治療効果および／または予防効果を達成するのに十分な量、例えば、本明細書に記載される疾患もしくは状態または本明細書に記載される疾患もしくは状態と関連する１つもしくは複数の兆候もしくは症状の防止または減少をもたらす量を指す。治療または予防適用に関連して、対象に投与される組成物の量は、組成物、疾患の程度、種類および重症度ならびに個体の特徴、例えば、全身の健康状態、年齢、性別、体重および薬物に対する耐性に応じて変わる。当業者ならば、これらおよびその他の因子に応じて適当な投与量を決定できる。組成物はまた、１つまたは複数のさらなる治療用化合物と組み合わせて投与され得る。本明細書に記載される方法では、治療用組成物は、本明細書に記載される疾患または状態の１つまたは複数の兆候または症状を有する対象に投与され得る。本明細書において、組成物の「治療上有効な量」とは、疾患または状態の生理学的効果が寛解または排除される組成物レベルを指す。治療上有効な量は、１回または複数回の投与で与えられ得る。
本明細書において、用語「エフェクター細胞」とは、免疫応答の認知および活性化相とは対照的に、免疫応答のエフェクター相に関与する免疫細胞を意味する。例示的免疫細胞として、骨髄またはリンパ系起源の細胞、例えば、リンパ球（例えば、細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を含むＢ細胞およびＴ細胞）、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、好酸球、好中球、多形核細胞、顆粒球、肥満細胞および好塩基球が挙げられる。エフェクター細胞は、特定のＦｃ受容体を発現し、特定の免疫機能を保持する。エフェクター細胞は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導し得る、例えば、ＡＤＣＣを誘導可能な好中球。例えば、ＦｃαＲを発現する単球、マクロファージ、好中球、好酸球およびリンパ球は、標的細胞の特異的死滅および免疫系のその他の構成成分に対する抗原を提示することまたは抗原を提示する細胞と結合することに関与している。
本明細書において、用語「エピトープ」とは、抗体と特異的に結合することができるタンパク質決定基を意味する。エピトープは、普通、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基からなり、普通、特異的三次元構造特徴ならびに特異的電荷特徴を有する。コンホメーションおよび非コンホメーションエピトープは、変性溶媒の存在下で前者との結合は失われるが、後者との結合は失われない点で区別される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９タンパク質の「エピトープ」は、本技術の抗ＣＤ１９抗体が特異的に結合するタンパク質の一領域である。いくつかの実施形態では、エピトープは、コンホメーションエピトープまたは非コンホメーションエピトープである。エピトープと結合する抗ＣＤ１９抗体をスクリーニングするために、Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)に記載されるものなどの通常のクロスブロッキングアッセイを実施してもよい。このアッセイを使用して、抗ＣＤ１９抗体が本技術の抗ＣＤ１９抗体と同一の部位またはエピトープと結合するか否かを決定できる。あるいは、またはさらに、当技術分野で公知の方法によってエピトープマッピングを実施してもよい。例えば、接触残基を同定するために、抗体配列をアラニンスキャニングなどによって突然変異させてもよい。異なる方法では、ＣＤ１９タンパク質の異なる領域に対応するペプチドは、試験抗体を用いる、または試験抗体および特性決定されたもしくは公知のエピトープを有する抗体を用いる競合アッセイにおいて使用されてもよい。
本明細書において、「発現」は、適切な発現および機能のために必要な場合には以下のうち１つまたは複数を含む：遺伝子の前駆体ｍＲＮＡへの転写、成熟ｍＲＮＡを生成するための前駆体ｍＲＮＡのスプライシングおよびその他のプロセシング、ｍＲＮＡ安定性；成熟ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳（コドン使用およびｔＲＮＡ利用能を含む）ならびに翻訳産物のグリコシル化および／またはその他の修飾。
本明細書において、用語「遺伝子」とは、プロモーター、エキソン、イントロンおよび発現を制御するその他の非翻訳領域を含む、ＲＮＡ産物の調節された生合成についてのすべての情報を含有するＤＮＡのセグメントを意味する。
「相同性」または「同一性」または「類似性」とは、２つのペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性を指す。相同性は、比較目的でアラインされ得る各配列中の位置を比較することによって決定され得る。比較された配列中の位置が、同一塩基またはアミノ酸によって占められる場合には、その位置で分子は相同である。配列間の相同性の程度は、配列によって共有されるマッチするまたは相同な位置の数の関数である。ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドまたはポリペプチド領域）は、２つの配列の比較においてアラインされた場合に、塩基（またはアミノ酸）のそのパーセンテージが同一であることを意味する、別の配列に対する「配列同一性」の特定のパーセンテージ（例えば、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）を有する。このアラインメントおよびパーセント相同性または配列同一性は、当技術分野で公知のソフトウェアプログラムを使用して決定できる。いくつかの実施形態では、アラインメントのためにデフォルトパラメータを使用する。１つのアラインメントプログラムとして、デフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴがある。特に、プログラムとして、以下のデフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰがある：遺伝暗号＝標準、フィルター＝なし、鎖＝両方、カットオフ＝６０、予測＝１０、Ｍａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２、記載＝５０シーケンス、ソートされるもの＝ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ、データベース＝非重複、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は、アメリカ国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）で見ることができる。生物学的に等価のポリヌクレオチドは、指定の相同性パーセントを有し、同一または類似の生物活性を有するポリペプチドをコードするものである。２つの配列は、互いに４０％未満の同一性または25%未満の同一性しか共有しない場合に「無関係」または「非相同」と思われる。
本明細書において、非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）由来の超可変領域残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリンである。いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体では、またはドナー抗体では見られない残基を含み得る。これらの修飾は、結合親和性などの抗体性能をさらに改善するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、通常、２つの可変ドメイン（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2またはＦｖ）の実質的にすべてを含み、超可変ループのすべてまたは実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサスＦＲ配列のものであるが、ＦＲ領域は、結合親和性を改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を含み得る。ＦＲ中のこれらのアミノ酸置換の数は、通常、Ｈ鎖において６以下であり、Ｌ鎖において３以下である。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常、ヒト免疫グロブリンのものを含んでもよい。さらなる詳細については、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Reichmann et al., Nature 332:323-329 (1988);およびPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照のこと。例えば、Ahmed & Cheung, FEBS Letters 588(2):288-297(2014)を参照のこと。
本明細書において、用語「超可変領域」とは、抗原結合に関与している抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（例えば、ＶL中のおよそ残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）および８９～９７（Ｌ３）ならびにＶH中のおよそ３１～３５Ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）および９５～１０２（Ｈ３）（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)）ならびに／または「超可変ループ」由来のそれらの残基（例えば、ＶL中の残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）および９１～９６（Ｌ３）ならびにＶH中の２６～３２（Ｈ１）、５２Ａ～５５（Ｈ２）および９６～１０１（Ｈ３）（Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）を含む。
本明細書において、用語「同一」または「同一性」パーセントは、以下に記載されるデフォルトパラメータを用いてＢＬＡＳＴもしくはＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズムを使用して、または手作業によるアラインメントおよび目視検査（例えば、ＮＣＢＩウェブサイト）によって測定されるように、比較ウィンドウまたは指定された領域にわたって最大対応を求めて比較され、アラインされた場合に、２個以上の核酸またはポリペプチド配列に関連して使用される場合、同一であるか、または同一であるアミノ酸残基もしくはヌクレオチドの指定のパーセンテージ（すなわち、指定の領域（例えば、本明細書において記載される抗体をコードするヌクレオチド配列または本明細書において記載される抗体のアミノ酸配列）にわたって、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはより高い同一性）を有する、２つ以上の配列または部分配列を指す。このような配列は、次いで、「実質的に同一」であるといわれる。この用語はまた、試験配列の相補体を指す、またはそれに当てはまり得る。用語はまた、欠失および／または付加を有する配列ならびに置換を有するものを含む。いくつかの実施形態では、同一性は、少なくとも約２５個のアミノ酸もしくはヌクレオチド長または５０～１００個のアミノ酸もしくはヌクレオチド長を有する領域にわたって存在する。
本明細書において、用語「無傷の抗体」または「無傷の免疫グロブリン」とは、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖ポリペプチドおよび２つの軽（Ｌ）鎖ポリペプチドを有する抗体を意味する。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＨＣＶＲまたはＶHと略される）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ1、ＣＨ2およびＣＨ3から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＬＣＶＲまたはＶLと略される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣLから構成される。ＶHおよびＶL領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれ、より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域が散剤する超可変性の領域にさらに細分できる。各ＶHおよびＶLは、以下の順序：ＦＲ1、ＣＤＲ1、ＦＲ2、ＣＤＲ2、ＦＲ3、ＣＤＲ3、ＦＲ4でアミノ末端からカルボキシル末端に配列された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な相補系の第１の構成成分（Ｃｌｑ）を含む、免疫グロブリンの宿主組織または因子との結合を媒介し得る。
本明細書において、用語「個体」、「患者」または「対象」は、個体生物、脊椎動物、哺乳動物またはヒトであり得る。いくつかの実施形態では、個体、患者または対象は、ヒトである。
本明細書において用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得るあり得る天然に存在する突然変異を除いて同一である。例えば、モノクローナル抗体は、任意の真核細胞の、原核生物の、またはファージクローンを含む単一クローンに由来する抗体であり得るのであって、それが製造される方法に由来しない。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一結合特異性および親和性を示す。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原性部位に対するものである。さらに、通常、種々の決定基（エピトープ）に対する種々の抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。修飾語句「モノクローナル」は、実質的に均一な集団から得られているような抗体の特徴を示し、任意の特定の方法に織る抗体の製造を必要とすると解釈されてはならない。モノクローナル抗体は、例えば、それだけには限らないが、ハイブリドーマ、組換えおよびファージディスプレイ技術を含む当技術分野で公知のさまざまな技術を使用して調製され得る。例えば、本方法に従って使用されるべきモノクローナル抗体は、Kohler et al., Nature 256:495 (1975)によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作製され得る、または組換えＤＮＡ方法によって作製され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号）を参照のこと。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)およびMarks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)に記載された技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。
本明細書において、用語「医薬上許容される担体」は、医薬的投与と適合する、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌薬および抗真菌薬化合物、等張性および吸収遅延化合物などを含むように意図される。医薬上許容される担体およびその製剤化は、当業者に公知であり、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences (20th edition, ed. A. Gennaro, 2000, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.)に記載されている。
本明細書において、用語「ポリクローナル抗体」は、少なくとも２種（２）の異なる抗体産生細胞株に由来する抗体の調製物を意味する。この用語の使用は、抗原の異なるエピトープまたは領域と特異的に結合する抗体を含有する少なくとも２種（２）の抗体の調製物を含む。
本明細書において、用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」とは、任意のＲＮＡまたはＤＮＡを意味し、非修飾または修飾ＲＮＡまたはＤＮＡであり得る。ポリヌクレオチドとして、制限するものではないが、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡならびに一本鎖またはより通常は、二本鎖または一本鎖および二本鎖領域の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子が挙げられる。さらに、ポリヌクレオチドとは、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。用語ポリヌクレオチドはまた、１つまたは複数の修飾された塩基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡおよび安定性のためにまたはその他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡも含む。
本明細書において、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、本明細書において同義的に使用されて、ペプチド結合または修飾されたペプチド結合、すなわち、ペプチドアイソスターによって互いにつながれた２個以上のアミノ酸を含むポリマーを意味する。ポリペプチドとは、一般に、ペプチド、グリコペプチドまたはオリゴマーと呼ばれる短い鎖および一般に、タンパク質と呼ばれる長い鎖の両方を指す。ポリペプチドは、２０種の遺伝子によってコードされるアミノ酸以外のアミノ酸を含有し得る。ポリペプチドは、翻訳後プロセシングなどの天然プロセスによって、または当技術分野で周知である化学的修飾技術によって修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾は、基本的な教本におよびより詳細な研究所に、ならびに多量の研究文献に十分に記載されている。
本明細書において、「ＰＲＩＴ」または「プレターゲッティングされる放射免疫治療」とは、骨髄などの正常組織に対する望ましくない毒性に寄与する、腫瘍をターゲッティングする抗体の遅い血液クリアランスを解決するマルチステッププロセスを指す。プレターゲッティングでは、放射性核種またはその他の診断もしくは治療薬は、小ハプテンに付着される。ハプテンならびに標的抗原に対する結合部位を有するプレターゲッティング二重特異性抗体が最初に投与される。次いで、結合していない抗体が循環から除去されることが可能にされ、続いて、ハプテンが投与される。
本明細書において、用語「組換え体」は、例えば、細胞または核酸、タンパク質またはベクターに関連して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質またはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質の導入または天然核酸もしくはタンパク質の変更によって修飾されていること、または材料がそのように修飾された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組換え細胞は、細胞の天然（非組換え）形態内で見られない遺伝子を発現する、またはそうでなければ異常に発現される、発現不足である、または全く発現されない天然遺伝子を発現する。
本明細書において、治療的使用を用語「分離する」とは、異なる経路による同時のまたは実質的に同時の少なくとも２種の有効成分の投与を指す。
本明細書において、用語「逐次」治療的使用とは、異なる時間での少なくとも２種の有効成分の投与を指し、投与経路は、同一であるか、または異なっている。より詳しくは、逐次使用とは、有効成分のうち１種の、別のもの（単数または複数）の投与開始の前の全投与を指す。したがって、有効成分のうち１種を数分、数時間または数日かけて投与し、その後、その他の有効成分（単数または複数）を投与することすることが可能である。この場合には、同時処置はない。
本明細書において、「特異的に結合する」とは、別の分子（例えば、抗原）を認識し、結合するが、その他の分子を実質的に認識および結合しない分子（例えば、抗体またはその抗原結合断片）を指す。本明細書において使用される、用語「特異的結合」、特定の分子（例えば、ポリペプチド、またはポリペプチド上のエピトープ）、と「特異的に結合する」または「にとって特異的である」とは、例えば、約１０-4Ｍ、１０-5Ｍ、１０-6Ｍ、１０-7Ｍ、１０-8Ｍ、１０-9Ｍ、１０-10Ｍ、１０-11Ｍまたは１０-12Ｍの結合する分子に対するＫDを有する分子によって示され得る。用語「特異的に結合する」はまた、任意の他のポリペプチド、またはポリペプチドエピトープと実質的に結合することなく、分子（例えば、抗体またはその抗原結合断片）が特定のポリペプチド（例えば、ＣＤ１９ポリペプチド）、または特定のポリペプチド上のエピトープと結合する結合を指す場合もある。
本明細書において、用語「同時の」治療的使用とは、同時のまたは実質的に同時の同一経路による少なくとも２種の有効成分の投与を指す。
本明細書において、用語「治療薬」は、有効量で存在する場合に、それを必要とする対象に所望の治療効果をもたらす化合物を意味するように意図される。
「処置すること」または「処置」は、本明細書において、ヒトなどの対象における本明細書において記載される疾患または障害の処置を対象とし、（ｉ）疾患もしくは障害を阻害すること、すなわち、その発生を停止すること、（ｉｉ）疾患もしくは障害を軽減すること、すなわち、障害の退縮を引き起こすこと、（ｉｉｉ）障害の進行を減速することおよび／または（ｉｖ）疾患もしくは障害の１つもしくは複数の症状の進行を阻害、軽減もしくは減速することを含む。いくつかの実施形態では、処置は、疾患と関連する症状が、例えば、緩和される、低減される、治癒されるまたは緩解の状態に置かれることを意味する。
本明細書において記載されるような障害の処置の種々の様式は、完全な処置だけでなく、完全未満の処置も含み、いくつかの生物学的にまたは医学的に関連する結果が達成される「実質的」なものを意味するように意図されることも理解されたい。処置は、慢性疾患のための連続する長期の処置または急性状態の処置のための単回のもしくは２、３回の投与であり得る。
本明細書に記載される抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列修飾（複数可）が考慮される。例えば、抗体の結合親和性および／またはその他の生物学的特性を改善することが、望ましい場合がある。抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体核酸中に適当なヌクレオチド変化を導入することによって、またはペプチド合成によって調製される。このような修飾として、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失および／またはそれへの挿入および／またはその置換が挙げられる。得られた抗体が所望の特性を有する限り、対象の抗体を得るために欠失、挿入および置換の任意の組合せが行われる。修飾はまた、タンパク質のグリコシル化のパターンの変化も含む。置換的突然変異誘発のための最大の対象の部位として、超可変領域が挙げられるが、ＦＲ変更も考慮される。「保存的置換」は以下の表に示される。
Figure 2022525435000002
置換的バリアントのうち１種類は、親抗体の１つまたは複数の超可変領域残基を置換することを含む。このような置換的バリアントを作製するための好都合な方法は、ファージディスプレイを使用する親和性成熟を含む。具体的には、各部位ですべての可能性あるアミノ酸置換を作製するためにいくつかの超可変領域部位（例えば、６～７部位）が突然変異される。このように作製された抗体バリアントは、各粒子内でパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合物として繊維状ファージ粒子から一価様式で提示される。ファージに提示されたバリアントは、次いで、本明細書において開示されるようなその生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。修飾のための候補超可変領域部位を同定するために、アラニンスキャニング突然変異誘発を実施して抗原結合に大きく寄与する超可変領域残基を同定してもよい。あるいはまたはさらに、抗原－抗体複合体の結晶構造を解析して、抗体および抗原間の接触点を同定することが有益であり得る。このような接触残基および隣接残基は、本明細書において詳述される技術に従う置換の候補である。ひとたびこのようなバリアントを作製すれば、バリアントのパネルを本明細書において記載されるようなスクリーニングに付し、さらなる開発のために、１つまたは複数の関連アッセイにおいて同様のまたは優れた特性を有する抗体を選択してもよい。
ＣＤ１９
ＣＤ１９（分化抗原群１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４（または簡単にＢ４）、Ｔ細胞表面抗原Ｌｅｕ－１２、または分類不能型免疫不全症－３（ＣＶＩＤ３）としても知られる）は、Ｂ細胞における中心的な陽性応答制御因子である。ヒトＣＤ１９は約５５６アミノ酸長であり、第１６染色体の短腕に位置する７．４１キロベースＣＤ１９遺伝子によってコードされる。ＣＤ１９遺伝子は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインをコードする少なくとも１５個のエキソンを含有する。ＣＤ１９タンパク質の少なくとも５つのアイソフォームが天然に存在する。ヒトＣＤ１９アイソフォーム２前駆体のアミノ酸配列（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１７６１．３；配列番号６０）が以下に記載される：
1 MPPPRLLFFL LFLTPMEVRP EEPLVVKVEE GDNAVLQCLK GTSDGPTQQL TWSRESPLKP
61 FLKLSLGLPG LGIHMRPLAI WLFIFNVSQQ MGGFYLCQPG PPSEKAWQPG WTVNVEGSGE
121 LFRWNVSDLG GLGCGLKNRS SEGPSSPSGK LMSPKLYVWA KDRPEIWEGE PPCLPPRDSL
181 NQSLSQDLTM APGSTLWLSC GVPPDSVSRG PLSWTHVHPK GPKSLLSLEL KDDRPARDMW
241 VMETGLLLPR ATAQDAGKYY CHRGNLTMSF HLEITARPVL WHWLLRTGGW KVSAVTLAYL
301 IFCLCSLVGI LHLQRALVLR RKRKRMTDPT RRFFKVTPPP GSGPQNQYGN VLSLPTPTSG
361 LGRAQRWAAG LGGTAPSYGN PSSDVQADGA LGSRSPPGVG PEEEEGEGYE EPDSEEDSEF
421 YENDSNLGQD QLSQDGSGYE NPEDEPLGPE DEDSFSNAES YENEDEELTQ PVARTMDFLS
481 PHGSAWDPSR EATSLGSQSY EDMRGILYAA PQLRSIRGQP GPNHEEDADS YENMDNPDGP
541 DPAWGGGGRM GTWSTR
ヒトＣＤ１９アイソフォーム１前駆体のアミノ酸配列（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１７１５６９．１；配列番号６１）が以下に記載される：
1 MPPPRLLFFL LFLTPMEVRP EEPLVVKVEE GDNAVLQCLK GTSDGPTQQL TWSRESPLKP
61 FLKLSLGLPG LGIHMRPLAI WLFIFNVSQQ MGGFYLCQPG PPSEKAWQPG WTVNVEGSGE
121 LFRWNVSDLG GLGCGLKNRS SEGPSSPSGK LMSPKLYVWA KDRPEIWEGE PPCLPPRDSL
181 NQSLSQDLTM APGSTLWLSC GVPPDSVSRG PLSWTHVHPK GPKSLLSLEL KDDRPARDMW
241 VMETGLLLPR ATAQDAGKYY CHRGNLTMSF HLEITARPVL WHWLLRTGGW KVSAVTLAYL
301 IFCLCSLVGI LHLQRALVLR RKRKRMTDPT RRFFKVTPPP GSGPQNQYGN VLSLPTPTSG
361 LGRAQRWAAG LGGTAPSYGN PSSDVQADGA LGSRSPPGVG PEEEEGEGYE EPDSEEDSEF
421 YENDSNLGQD QLSQDGSGYE NPEDEPLGPE DEDSFSNAES YENEDEELTQ PVARTMDFLS
481 PHGSAWDPSR EATSLAGSQS YEDMRGILYA APQLRSIRGQ PGPNHEEDAD SYENMDNPDG
541 PDPAWGGGGR MGTWSTR
ＣＤ１９タンパク質の３つのさらなるより短いアイソフォームは、４６８アミノ酸長のＣＤ１９アイソフォームＸ１（ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿００６７２１１６６．１；配列番号６２）、４６７アミノ酸長のＣＤ１９アイソフォームＸ２（ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿０１６８７９３８２．１；配列番号６３）、および２８２アミノ酸長のＣＤ１９アイソフォームＸ３（ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿０１１５４４２８３．１；配列番号６４）である。
ＣＤ１９は、２つの細胞外Ｃ２型Ｉｇ様ドメイン、および大きな高度に保存された細胞質尾部を有する免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）の９５ｋＤａ Ｉ型膜貫通糖タンパク質である。細胞質ドメインは２４０アミノ酸長であり、９つの保存されたチロシン残基を含む。チロシンリン酸化されると、ＣＤ１９は、内因性のおよび抗原受容体誘導シグナル伝達に関与する特殊化したアダプタータンパク質として機能する。
ＣＤ１９は、Ｂ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達のための極めて重要な共受容体である。ＣＤ１９は、ＢＣＲシグナル伝達の調節を通じてＢリンパ球活性化および分化を調節し、抗原依存性Ｂ細胞発生、および免疫グロブリン誘導Ｂリンパ球活性化を制御して免疫応答を最適化する。
ＣＤ１９は、最終分化までＢ細胞発生のすべての段階で、および濾胞性樹状細胞で発現される。ＣＤ１９表面発現は、免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子再構成中、造血幹細胞からのＢ細胞分化系列決定と同時に起こる。ＣＤ１９は、次いで初期プロＢ細胞、後期プロＢ細胞、メモリーＢ細胞、形質芽細胞およびいくつかの形質細胞で発現される。ＣＤ１９発現は、Ｂ細胞性白血病、リンパ腫およびその他の癌で観察される。ＣＤ１９は、ＡＬＬ、Ｂ－ＮＨＬおよびＣＬＬの＞９０％で発現される。ＣＤ１９は、ＣＤ２０より幅広い発現プロファイルを有し、ＣＤ２０下方制御または喪失後も保持される。マウスでのＣＤ１９の過剰発現は、自己免疫疾患につながり得る。
本技術の免疫グロブリン関連組成物
本開示の抗ＣＤ１９免疫グロブリン関連組成物は、ＣＤ１９関連癌、およびＣＤ１９関連自己免疫疾患の診断、または処置において有用であり得る。本技術の範囲内の抗ＣＤ１９免疫グロブリン関連組成物としては、例えば、限定されるものではないが、標的ポリペプチドと特異的に結合するモノクローナル、キメラ、ヒト化、二重特異性抗体およびダイアボディー、その相同体、誘導体または断片が挙げられる。本開示はまた、本明細書において開示される抗ＣＤ１９抗体のいずれかの抗原結合断片を提供し、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ’、ｓｃＦvおよびＦvからなる群から選択される。本技術は、劣った腫瘍抗原結合アビディティー、短いｉｎ ｖｉｖｏ半減期および毒性の既存の問題に対処する抗ＣＤ１９二重特異性抗体フォーマットを開示する。一態様では、本技術は、多重特異性免疫グロブリン関連組成物（例えば、二重特異性抗体剤）を含む、ＦＭＣ６３のキメラおよびヒト化バリアントを提供する。
一態様では、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶH）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶL）を含む抗体またはその抗原結合断片であって、（ａ）ＶHは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに／または（ｂ）ＶLは、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、任意のアイソタイプ、例えば、それだけには限らないが、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ1およびＩｇＡ2を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭおよびＩｇＹのＦｃドメインをさらに含む。定常領域配列の限定されない例として、以下が挙げられる：
ヒトＩｇＤ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８８０（配列番号６５）
ＡＰＴＫＡＰＤＶＦＰＩＩＳＧＣＲＨＰＫＤＮＳＰＶＶＬＡＣＬＩＴＧＹＨＰＴＳＶＴＶＴＷＹＭＧＴＱＳＱＰＱＲＴＦＰＥＩＱＲＲＤＳＹＹＭＴＳＳＱＬＳＴＰＬＱＱＷＲＱＧＥＹＫＣＶＶＱＨＴＡＳＫＳＫＫＥＩＦＲＷＰＥＳＰＫＡＱＡＳＳＶＰＴＡＱＰＱＡＥＧＳＬＡＫＡＴＴＡＰＡＴＴＲＮＴＧＲＧＧＥＥＫＫＫＥＫＥＫＥＥＱＥＥＲＥＴＫＴＰＥＣＰＳＨＴＱＰＬＧＶＹＬＬＴＰＡＶＱＤＬＷＬＲＤＫＡＴＦＴＣＦＶＶＧＳＤＬＫＤＡＨＬＴＷＥＶＡＧＫＶＰＴＧＧＶＥＥＧＬＬＥＲＨＳＮＧＳＱＳＱＨＳＲＬＴＬＰＲＳＬＷＮＡＧＴＳＶＴＣＴＬＮＨＰＳＬＰＰＱＲＬＭＡＬＲＥＰＡＡＱＡＰＶＫＬＳＬＮＬＬＡＳＳＤＰＰＥＡＡＳＷＬＬＣＥＶＳＧＦＳＰＰＮＩＬＬＭＷＬＥＤＱＲＥＶＮＴＳＧＦＡＰＡＲＰＰＰＱＰＧＳＴＴＦＷＡＷＳＶＬＲＶＰＡＰＰＳＰＱＰＡＴＹＴＣＶＶＳＨＥＤＳＲＴＬＬＮＡＳＲＳＬＥＶＳＹＶＴＤＨＧＰＭＫ
ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８５７（配列番号６６）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ヒトＩｇＧ２定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８５９（配列番号６７）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＳＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ヒトＩｇＧ３定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８６０（配列番号６８）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＴＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＫＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＳＧＱＰＥＮＮＹＮＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＩＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＲＦＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ヒトＩｇＭ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７１（配列番号６９）
ＧＳＡＳＡＰＴＬＦＰＬＶＳＣＥＮＳＰＳＤＴＳＳＶＡＶＧＣＬＡＱＤＦＬＰＤＳＩＴＬＳＷＫＹＫＮＮＳＤＩＳＳＴＲＧＦＰＳＶＬＲＧＧＫＹＡＡＴＳＱＶＬＬＰＳＫＤＶＭＱＧＴＤＥＨＶＶＣＫＶＱＨＰＮＧＮＫＥＫＮＶＰＬＰＶＩＡＥＬＰＰＫＶＳＶＦＶＰＰＲＤＧＦＦＧＮＰＲＫＳＫＬＩＣＱＡＴＧＦＳＰＲＱＩＱＶＳＷＬＲＥＧＫＱＶＧＳＧＶＴＴＤＱＶＱＡＥＡＫＥＳＧＰＴＴＹＫＶＴＳＴＬＴＩＫＥＳＤＷＬＧＱＳＭＦＴＣＲＶＤＨＲＧＬＴＦＱＱＮＡＳＳＭＣＶＰＤＱＤＴＡＩＲＶＦＡＩＰＰＳＦＡＳＩＦＬＴＫＳＴＫＬＴＣＬＶＴＤＬＴＴＹＤＳＶＴＩＳＷＴＲＱＮＧＥＡＶＫＴＨＴＮＩＳＥＳＨＰＮＡＴＦＳＡＶＧＥＡＳＩＣＥＤＤＷＮＳＧＥＲＦＴＣＴＶＴＨＴＤＬＰＳＰＬＫＱＴＩＳＲＰＫＧＶＡＬＨＲＰＤＶＹＬＬＰＰＡＲＥＱＬＮＬＲＥＳＡＴＩＴＣＬＶＴＧＦＳＰＡＤＶＦＶＱＷＭＱＲＧＱＰＬＳＰＥＫＹＶＴＳＡＰＭＰＥＰＱＡＰＧＲＹＦＡＨＳＩＬＴＶＳＥＥＥＷＮＴＧＥＴＹＴＣＶＡＨＥＡＬＰＮＲＶＴＥＲＴＶＤＫＳＴＧＫＰＴＬＹＮＶＳＬＶＭＳＤＴＡＧＴＣＹ
ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８６１（配列番号７０）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
ヒトＩｇＡ１定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７６（配列番号７１）
ＡＳＰＴＳＰＫＶＦＰＬＳＬＣＳＴＱＰＤＧＮＶＶＩＡＣＬＶＱＧＦＦＰＱＥＰＬＳＶＴＷＳＥＳＧＱＧＶＴＡＲＮＦＰＰＳＱＤＡＳＧＤＬＹＴＴＳＳＱＬＴＬＰＡＴＱＣＬＡＧＫＳＶＴＣＨＶＫＨＹＴＮＰＳＱＤＶＴＶＰＣＰＶＰＳＴＰＰＴＰＳＰＳＴＰＰＴＰＳＰＳＣＣＨＰＲＬＳＬＨＲＰＡＬＥＤＬＬＬＧＳＥＡＮＬＴＣＴＬＴＧＬＲＤＡＳＧＶＴＦＴＷＴＰＳＳＧＫＳＡＶＱＧＰＰＥＲＤＬＣＧＣＹＳＶＳＳＶＬＰＧＣＡＥＰＷＮＨＧＫＴＦＴＣＴＡＡＹＰＥＳＫＴＰＬＴＡＴＬＳＫＳＧＮＴＦＲＰＥＶＨＬＬＰＰＰＳＥＥＬＡＬＮＥＬＶＴＬＴＣＬＡＲＧＦＳＰＫＤＶＬＶＲＷＬＱＧＳＱＥＬＰＲＥＫＹＬＴＷＡＳＲＱＥＰＳＱＧＴＴＴＦＡＶＴＳＩＬＲＶＡＡＥＤＷＫＫＧＤＴＦＳＣＭＶＧＨＥＡＬＰＬＡＦＴＱＫＴＩＤＲＬＡＧＫＰＴＨＶＮＶＳＶＶＭＡＥＶＤＧＴＣＹ
ヒトＩｇＡ２定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７７（配列番号７２）
ＡＳＰＴＳＰＫＶＦＰＬＳＬＤＳＴＰＱＤＧＮＶＶＶＡＣＬＶＱＧＦＦＰＱＥＰＬＳＶＴＷＳＥＳＧＱＮＶＴＡＲＮＦＰＰＳＱＤＡＳＧＤＬＹＴＴＳＳＱＬＴＬＰＡＴＱＣＰＤＧＫＳＶＴＣＨＶＫＨＹＴＮＰＳＱＤＶＴＶＰＣＰＶＰＰＰＰＰＣＣＨＰＲＬＳＬＨＲＰＡＬＥＤＬＬＬＧＳＥＡＮＬＴＣＴＬＴＧＬＲＤＡＳＧＡＴＦＴＷＴＰＳＳＧＫＳＡＶＱＧＰＰＥＲＤＬＣＧＣＹＳＶＳＳＶＬＰＧＣＡＱＰＷＮＨＧＥＴＦＴＣＴＡＡＨＰＥＬＫＴＰＬＴＡＮＩＴＫＳＧＮＴＦＲＰＥＶＨＬＬＰＰＰＳＥＥＬＡＬＮＥＬＶＴＬＴＣＬＡＲＧＦＳＰＫＤＶＬＶＲＷＬＱＧＳＱＥＬＰＲＥＫＹＬＴＷＡＳＲＱＥＰＳＱＧＴＴＴＦＡＶＴＳＩＬＲＶＡＡＥＤＷＫＫＧＤＴＦＳＣＭＶＧＨＥＡＬＰＬＡＦＴＱＫＴＩＤＲＭＡＧＫＰＴＨＶＮＶＳＶＶＭＡＥＶＤＧＴＣＹ
ヒトＩｇカッパ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８３４（配列番号７３）
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
いくつかの実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号６５～７２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一である重鎖定常領域を含む。さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号７３に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一である軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、アミノ酸配列ＥＥ ＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫ ＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬ ＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰ ＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧ ＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩ ＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱ ＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧ ＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧ ＷＴＶＮＶＥＧＳ（配列番号８２）（配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位のアミノ酸残基に対応する）を含むＩｇ様Ｃ２ループを含むＣＤ１９ポリペプチドと結合する。さらにまたはあるいは、特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基を含むコンホメーションエピトープと結合する。
別の態様では、本開示は、配列番号２２、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３１、配列番号４５、配列番号４７、または１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそのバリアントを含む重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、単離された免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体またはその抗原結合断片）を提供する。
さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号２０、配列番号２４、配列番号２８、配列番号３０、配列番号４４、配列番号４６、または１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそのバリアントを含む軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号２２および配列番号２０（ｃｈＦＭＣ６３×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）；配列番号２６および配列番号２４（ＢＣ２５０－ ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２／ＶＨ－１ｂ×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）；配列番号２９および配列番号２８（ｍＦＭＣ６３×ｍＣ８２５ ＢｓＡｂ）；配列番号３１および配列番号３０（ｍＦＭＣ６３×ｈＣ８２５ ＢｓＡｂ）；配列番号４５および配列番号４４（ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２ＶＨ－１ｂ×ｍＣ８２５）；ならびに配列番号４７および配列番号４６（ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２ＶＨ－１ｂ×ｈＣ８２５）からなる群からそれぞれ選択されるＨＣアミノ酸配列およびＬＣアミノ酸配列を含む。
免疫グロブリン関連組成物の上記実施形態のいずれにおいても、ＨＣおよびＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列は、アミノ酸配列ＥＥ ＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫ ＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬ ＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰ ＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧ ＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩ ＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱ ＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧ ＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧ ＷＴＶＮＶＥＧＳ（配列番号８２）（配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位のアミノ酸残基に対応する）を含むＩｇ様Ｃ２ループを含むＣＤ１９ポリペプチドと結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、エピトープはコンホメーションエピトープである。さらにまたはあるいは、特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基を含むコンホメーションエピトープと結合する。
いくつかの実施形態では、ＨＣおよびＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列は、同一ポリペプチド鎖の構成成分である。その他の実施形態では、ＨＣおよびＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列は、異なるポリペプチド鎖の構成成分である。特定の実施形態では、抗体は、全長抗体である。
いくつかの実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、少なくとも１つのＣＤ１９ポリペプチドと特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、約１０-3Ｍ、１０-4Ｍ、１０-5Ｍ、１０-6Ｍ、１０-7Ｍ、１０-8Ｍ、１０-9Ｍ、１０-10Ｍ、１０-11Ｍ、１０-12Ｍまたは１０-15の解離定数（ＫD）で少なくとも１つのＣＤ１９ポリペプチドと結合する。特定の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域を含む。
特定の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、以下の特徴の１つまたは複数を含む：（ａ）配列番号１７、１８、もしくは１９のうちのいずれか１つに存在する軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列、および／または（ｂ）配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２のうちのいずれか１つに存在する重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列。別の態様では、本明細書において提供される免疫グロブリン関連組成物中の１つまたは複数のアミノ酸残基は、別のアミノ酸と置換される。置換は、本明細書において定義されるような「保存的置換」であり得る。
いくつかの実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、（ａ）配列番号２０、２４、２８、３０、４４もしくは４６のうちいずれか１つ中に存在するＬＣ配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一であるＬＣ配列および／または（ｂ）配列番号２２、２６、２９、３１、４５もしくは４７のうちいずれか１つ中に存在するＨＣ配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一であるＨＣ配列を含む。
一態様では、本開示は、配列番号３２～４３、または４８～５９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン関連組成物を提供する。特定の実施形態では、本開示の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号３２～４３、または４８～５９から選択されるアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、第１のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗原結合断片であって、第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；（ｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｉｉｉ）第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；（ｉｖ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｖ）第２のエピトープと特異的に結合することができる第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；（ｖｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｖｉｉ）第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含むフレキシブルペプチドリンカー配列と；（ｉｘ）自己集合分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチドとを含み、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択され、ならびに／または第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインは、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９からなる群から選択される二重特異性抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本開示は、第１のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗原結合断片であって、第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；（ｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｉｉｉ）第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；（ｉｖ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｖ）第２のエピトープと特異的に結合することができる第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；（ｖｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｖｉｉ）第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含むフレキシブルペプチドリンカー配列と；（ｉｘ）自己集合分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチドとを含み、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択される、ならびに／または第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインは、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９からなる群から選択される二重特異性抗原結合断片を提供する。
本明細書に開示される二重特異性抗原結合断片の特定の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、四量体化、五量体化、または六量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、ｐ５３、ｐ６３、ｐ７３、ｈｎＲＮＰＣ、ＳＮＡ－２３、ステフィンＢ、ＫＣＮＱ４、およびＣＢＦＡ２Ｔ１のうちのいずれか１つの四量体化ドメインを含む。さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、二重特異性抗原結合断片は、配列番号３２～４３、または４８～５９から選択されるアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗体であって、第１および第２のポリペプチド鎖は互いに共有結合され、第２および第３のポリペプチド鎖は互いに共有結合され、第３および第４のポリペプチド鎖は互いに共有結合され、ならびに（ａ）第１のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖の各々は、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；（ｉｉ）第１の免疫グロブリンの軽鎖定常ドメインと；（ｉｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）3を含むフレキシブルペプチドリンカーと；（ｉｖ）第２の免疫グロブリンの軽鎖および重鎖可変ドメインは、第２のエピトープと特異的に結合することができ、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーを介して一緒に連結されて一本鎖可変断片を形成する、第２の免疫グロブリンの相補的重鎖可変ドメインに連結された第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン、または第２の免疫グロブリンの相補的軽鎖可変ドメインに連結された第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインとを含み、（ｂ）第２のポリペプチド鎖および第３のポリペプチド鎖の各々は、Ｎ末端からＣ末端方向に、（ｉ）第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；（ｉｉ）第１の免疫グロブリンの重鎖定常ドメインとを含み、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択され、および／または第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインは、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９からなる群から選択される二重特異性抗体を提供する。特定の実施形態では、第２の免疫グロブリンは、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、または小分子ＤＯＴＡハプテンと結合する。
特定の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、Ｎ２９７ＡおよびＫ３２２Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含有する。さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、Ｓ２２８Ｐ突然変異を含むＩｇＧ４定常領域を含有する。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗ＣＤ１９免疫グロブリン関連組成物は、迅速な結合および細胞取り込みおよび／または遅い放出を促進するために構造修飾を含有する。いくつかの態様では、本技術の抗ＣＤ１９免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体）は、迅速な結合および細胞取り込みおよび／または遅い放出を促進するために、ＣＨ２定常重鎖領域中に欠失を含有し得る。いくつかの態様では、迅速な結合および細胞取り込みおよび／または持続放出を促進するために、Ｆａｂ断片が使用される。いくつかの態様では、迅速な結合および細胞取り込みおよび／または持続放出を促進するために、Ｆ（ａｂ）’2断片が使用される。
一態様では、本技術は、本明細書に記載される免疫グロブリン関連組成物のいずれか１つをコードする組換え核酸配列を提供する。いくつかの実施形態では、核酸配列は、配列番号２１、２３、２５、および２７からなる群から選択される。
別の態様では、本技術は、本明細書に記載される免疫グロブリン関連組成物のいずれかをコードする任意の核酸配列を発現する宿主細胞を提供する。
本技術の免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗ＣＤ１９抗体）は、単一特異性、二重特異性、三重特異性またはそれより多い多重特異性であってもよい。多重特異性抗体は、１つもしくは複数のＣＤ１９ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であってもよく、またはＣＤ１９ポリペプチドおよび異種組成物、例えば、異種ポリペプチドもしくは固相支持体材料の両方に対して特異的であってもよい。例えば、ＷＯ９３／１７７１５、ＷＯ９２／０８８０２、ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／０５７９３、Tutt et al., J. Immunol. 147: 60-69 (1991)、米国特許第５，５７３，９２０号、同４，４７４，８９３号、同５，６０１，８１９号、同４，７１４，６８１号、同４，９２５，６４８号、同６，１０６，８３５号、Kostelny et al., J. Immunol. 148: 1547-1553 (1992)を参照のこと。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、キメラである。特定の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、ヒト化されている。
本技術の免疫グロブリン関連組成物は、さらに、Ｎ末端またはＣ末端で異種ポリペプチドに組換えによって融合されてもよく、またはポリペプチドもしくはその他の組成物に化学的にコンジュゲートされてもよい（共有結合によるおよび非共有結合によるコンジュゲーションを含む）。例えば、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、検出アッセイにおいて標識として有用である分子およびエフェクター分子、例えば、異種ポリペプチド、薬物または毒素に組換えによって融合されても、コンジュゲートされてもよい。例えば、ＷＯ９２／０８４９５、ＷＯ９１／１４４３８、ＷＯ８９／１２６２４、米国特許第５，３１４，９９５号およびＥＰ０３９６３８７を参照のこと。
本技術の免疫グロブリン関連組成物の上記の実施形態のいずれかでは、抗体または抗原結合断片は、同位元素、色素、クロマジェン、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、増殖因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡまたはそれらの任意の組合せからなる群から選択される物質にコンジュゲートされていてもよい。化学的結合または物理的結合については、免疫グロブリン関連組成物上の官能基は、通常、物質上の官能基と会合する。あるいは、物質上の官能基は、免疫グロブリン関連組成物上の官能基と会合する。
物質および免疫グロブリン関連組成物上の官能基は、直接会合し得る。例えば、物質上の官能基（例えば、スルフヒドリル基）は、免疫グロブリン関連組成物上の官能基（例えば、スルフヒドリル基）と会合して、ジスルフィドを形成し得る。あるいは、官能基は、架橋剤（すなわち、リンカー）を介して会合することもある。架橋剤のいくつかの例が以下に記載されている。架橋剤は、物質または免疫グロブリン関連組成物のいずれかに付着され得る。コンジュゲート中の物質または免疫グロブリン関連組成物の数はまた、他方上に存在する官能基の数によって制限される。例えば、コンジュゲートと会合される物質の最大数は、免疫グロブリン関連組成物上に存在する官能基の数に応じて変わる。あるいは、物質と会合される免疫グロブリン関連組成物の最大数は、物質上に存在する官能基の数に応じて変わる。
さらに別の実施形態では、コンジュゲートは、１つの物質に会合された１つの免疫グロブリン関連組成物を含む。一実施形態では、コンジュゲートは、少なくとも１つの免疫グロブリン関連組成物に化学的に結合された（例えば、コンジュゲートされた）少なくとも１つの物質を含む。物質は、当業者に公知の任意の方法によって免疫グロブリン関連組成物に化学的に結合され得る。例えば、物質上の官能基は、免疫グロブリン関連組成物上の官能基に直接付着され得る。適した官能基のいくつかの例として、例えば、アミノ、カルボキシル、スルフヒドリル、マレイミド、イソシアネート、イソチオシアネートおよびヒドロキシルが挙げられる。
物質はまた、架橋剤、例えば、ジアルデヒド、カルボジイミド、ジマレイミドなどによって免疫グロブリン関連組成物に化学的に結合され得る。架橋剤は、例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．、イリノイ州、ロックフォードから得ることができる。Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．ウェブサイトは、助けとなり得る。さらなる架橋剤として、Ｋｒｅａｔｅｃｈ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂ．Ｖ．、オランダ、アムステルダムの米国特許第５，５８０，９９０号、同５，９８５，５６６号および同６，１３３，０３８号に記載された白金架橋剤が挙げられる。
あるいは、物質および免疫グロブリン関連組成物上の官能基は、同一であり得る。ホモ二機能性架橋剤は、通常、同一官能基を架橋するために使用される。ホモ二機能性架橋剤の例として、ＥＧＳ（すなわちエチレングリコールビス［スクシンイミジルスクシネート］）、ＤＳＳ（すなわち、ジスクシンイミジルスベレート）、ＤＭＡ（すなわち、ジメチルアジピミデート．２ＨＣｌ）、ＤＴＳＳＰ（すなわち、３，３’－ジチオビス［スルホスクシンイミジルプロピオネート］））、ＤＰＤＰＢ（すなわち、１，４－ジ－［３’－（２’－ピリジルジチオ）－プロピオンアミド］ブタン）およびＢＭＨ（すなわち、ビス－マレイミドヘキサン）が挙げられる。このようなホモ二機能性架橋剤はまた、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．から入手可能である。
その他の場合には、物質を免疫グロブリン関連組成物から切断することが有益であり得る。上記のＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．のウェブサイトはまた、例えば、細胞中で酵素によって切断され得る適した架橋剤の選択において当業者の助けとなり得る。したがって、物質は免疫グロブリン関連組成物から分離され得る。切断可能なリンカーの例として、ＳＭＰＴ（すなわち、４－スクシンイミジルオキシカルボニル－メチル－ａ－［２－ピリジルジチオ］トルエン）、スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（すなわち、スルホスクシンイミジル６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート）、ＬＣ－ＳＰＤＰ（すなわち、スクシンイミジル６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート）、スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（すなわち、スルホスクシンイミジル６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート）、ＳＰＤＰ（すなわち、Ｎ－スクシンイミジル３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミドヘキサノエート）およびＡＥＤＰ（すなわち、３－［（２－アミノエチル）ジチオ］プロピオン酸ＨＣｌ）が挙げられる。
別の実施形態では、コンジュゲートは、少なくとも１つの免疫グロブリン関連組成物と物理的に結合される少なくとも１つの物質を含む。物質を免疫グロブリン関連組成物と物理的に結合するために、当業者に公知の任意の方法が使用され得る。例えば、当業者に公知の任意の方法によって、免疫グロブリン関連組成物および物質が一緒に混合され得る。混合の順序は重要ではない。例えば、当業者に公知の任意の方法によって、物質は免疫グロブリン関連組成物と物理的に混合され得る。例えば、免疫グロブリン関連組成物および物質は、容器中に入れられ、例えば、容器を振盪することによって撹拌されて、免疫グロブリン関連組成物および物質が混合され得る。
免疫グロブリン関連組成物を、当業者に公知の任意の方法によって修飾することができる。例えば、免疫グロブリン関連組成物を、上記のように、架橋剤または官能基によって修飾してもよい。
Ａ．本技術の抗ＣＤ１９抗体を調製する方法
一般的な概要。最初に、本技術の抗体が産生され得る標的ポリペプチドが選択される。例えば、抗体は、完全長ＣＤ１９タンパク質、細胞質ドメインを欠くＣＤ１９タンパク質、ＣＤ１９細胞外および膜貫通ドメインに対して、またはＣＤ１９タンパク質の細胞外ドメインの一部分（例えば、ＣＤ１９の２つのＩｇ様Ｃ２ループを含む領域、または配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基を含む定常領域２（Ｃ２）型Ｉｇ様ループ）に対して産生され得る。このような標的ポリペプチドに対する抗体を作製するための技術は、当業者に周知である。このような技術の例としては、例えば、限定されるものではないが、ディスプレイライブラリー、ゼノマウスまたはヒトマウス、ハイブリドーマなどを含むものが挙げられる。本技術の範囲内の標的ポリペプチドとしては、免疫応答を誘発することができる細胞外ドメイン（例えば、ＣＤ１９のエキソン２によってコードされるＩｇ様Ｃ２ループ）を含有するＣＤ１９タンパク質に由来する任意のポリペプチドが挙げられる。
ＣＤ１９タンパク質およびその断片に対する、組換えによって遺伝子操作された抗体および抗体断片、例えば、抗体関連ポリペプチドが、本開示による使用に適していることが理解されるべきである。
本明細書において示される技術に付され得る抗ＣＤ１９抗体として、モノクローナルおよびポリクローナル抗体および抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｄ、ｓｃＦｖ、ダイアボディー、抗体軽鎖、抗体重鎖および／または抗体断片が挙げられる。抗体Ｆｖ含有ポリペプチド、例えば、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）2抗体断片の高収率製造にとって有用な方法は、記載されている。米国特許第５，６４８，２３７を参照のこと。
一般に、抗体は、元来の種から得られる。より詳しくは、標的ポリペプチド抗原に対して特異性を有する元来の種の抗体の軽鎖、重鎖または両方の可変部分の核酸またはアミノ酸配列が得られる。元来の種は、本技術の抗体または抗体のライブラリーを作製するのに有用であった任意の種、例えば、ラット、マウス、ウサギ、ニワトリ、サル、ヒトなどである。
ファージまたはファージミドディスプレイ技術は、本技術の抗体を導くための有用な技術である。モノクローナル抗体を作製し、クローニングするための技術は、当業者に周知である。本技術の抗体をコードする配列の発現は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で実施され得る。
配列をコードする核酸の縮重のために、本技術の実施において、天然に存在するタンパク質のものと実質的に同一のアミノ酸配列をコードするその他の配列が使用されてもよい。これらとして、それだけには限らないが、配列内で機能的に同等のアミノ酸残基をコードする異なるコドンの置換によって変更され、したがって、サイレント変化をもたらす、上記のポリペプチドをコードする核酸配列のすべてまたは一部を含む核酸配列が挙げられる。本技術の免疫グロブリンのヌクレオチド配列は、このようなバリアントがＣＤ１９タンパク質を認識する作動抗体を形成する限り、標準方法（“Current Methods in Sequence Comparison and Analysis,” Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, pp. 127-149, 1998, Alan R. Liss, Inc.）によって算出されるような最大２５％の配列相同性変動を許容することは理解される。例えば、ポリペプチド配列内の１つまたは複数のアミノ酸残基が、機能的等価物として働く同様の極性の別のアミノ酸によって置換されてもよく、その結果、サイレント変化が得られる。配列内のアミノ酸の置換は、アミノ酸が属するクラスのその他のメンバーから選択され得る。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸として、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびメチオニンが挙げられる。極性天然アミノ酸として、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンが挙げられる。正電荷を有する（塩基性）アミノ酸として、アルギニン、リシンおよびヒスチジンが挙げられる。負電荷を有する（酸性）アミノ酸として、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。例えば、グリコシル化、タンパク質分解による切断、抗体分子またはその他の細胞性リガンドとの連結などによって、翻訳の間または翻訳後に異なって修飾されるタンパク質またはその断片または誘導体も本技術の範囲内に含まれる。さらに、免疫グロブリンをコードする核酸配列は、翻訳、開始および／または終止配列を作出および／または破壊して、コーディング領域の変動を作出する、および／または新規制限エンドヌクレアーゼ部位を形成する、または既存のものを破壊するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ修飾をさらに促進するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで突然変異され得る。それだけには限らないが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ部位特異的突然変異誘発、J. Biol. Chem. 253:6551、use of Tab linkers (Pharmacia)などを含む、当技術分野で公知の突然変異誘発のための任意の技術が使用されてもよい。
ポリクローナル抗血清および免疫原の調製。本技術の抗体または抗体断片を作製する方法は、通常、対象（一般に、マウスまたはウサギなどの非ヒト対象）を、精製ＣＤ１９タンパク質もしくはその断片を用いて、またはＣＤ１９タンパク質もしくはその断片を発現する細胞を用いて免疫処置することを含む。適当な免疫原性調製物は、例えば、組換え発現されたＣＤ１９タンパク質または化学合成されたＣＤ１９ペプチドを含有し得る。ＣＤ１９タンパク質、またはその一部もしくは断片（例えば、配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基を含む一部または断片）の細胞外ドメインは、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体調製のための標準的な技術を使用してＣＤ１９タンパク質、またはその一部もしくは断片と結合する抗ＣＤ１９抗体を作製するための免疫原として使用することができる。完全長ＣＤ１９タンパク質またはその断片は、免疫原としての断片として有用である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９断片は、ペプチドに対して産生される抗体がＣＤ１９タンパク質と特異的免疫複合体を形成するように、配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基を含む。ＣＤ１９のエキソン２によってコードされるポリペプチドもまた、免疫原として使用され得る。
いくつかの実施形態では、抗原ＣＤ１９ペプチドは、少なくとも５個、８個、１０個、１５個、２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、または９０個のアミノ酸残基を含む。用途に応じておよび当業者に周知の方法により、短い抗原ペプチドよりも長い抗原ペプチドが時として望ましい。所与のエピトープの多量体は、単量体よりも時として有効である。
必要に応じて、ＣＤ１９タンパク質（またはその断片）の免疫原性は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）またはオボアルブミン（ＯＶＡ）などのハプテンとの融合またはコンジュゲーションによって増大され得る。多数のこのようなハプテンは、当技術分野で公知である。ポリペプチドに対する対象の免疫反応を増大させるために、ＣＤ１９タンパク質標的を、従来のアジュバント、例えば、フロイントの完全または不完全アジュバントと組み合わせてもよい。免疫学的反応を増大させるために使用される種々のアジュバントとして、それだけには限らないが、フロイントのもの（完全および不完全）、無機ゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、表面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチドまたはオイルエマルジョン、ジニトロフェノールなど）、ヒトアジュバント、例えば、カルメット・ゲラン桿菌およびコリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）または同様の免疫賦活性化合物が挙げられる。これらの技術は、当技術分野で標準である。
本技術の説明において、免疫応答は、「一次」または「二次」免疫応答として記載され得る。一次免疫応答は、「防御的」免疫応答とも記載され、特定の抗原、例えば、ＣＤ１９タンパク質に対するいくつかの最初の曝露（例えば、最初の「免疫処置」）の結果として個体において生じた免疫応答を指す。いくつかの実施形態では、免疫処置は、抗原を含有するワクチンを用いる個体のワクチン接種の結果として生じ得る。例えば、ワクチンは、１つまたは複数のＣＤ１９タンパク質由来抗原を含む ＣＤ１９ワクチンであってもよい。一次免疫応答は、継時的に減弱または弱毒化になり得る、さらに消失し得る、または少なくとも検出され得ないように弱毒化になり得る。したがって、本技術はまた、本明細書において「記憶免疫応答」とも記載される「二次」免疫応答に関する。用語二次免疫応答は、一次免疫応答がすでに生成された後に個体において誘発される免疫応答を指す。
したがって、減弱または弱毒化になった既存の免疫応答を増強するために、または消失してしまった、またはもはや検出され得ないこれまでの免疫応答を再構築するために、二次免疫応答が誘発され得る。二次または記憶免疫応答は、体液性（抗体）応答または細胞性応答のいずれかであり得る。二次または記憶体液性応答は、抗原の最初の提示で生じた記憶Ｂ細胞の刺激の際に生じる。遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答は、ＣＤ４+Ｔ細胞によって媒介される細胞性二次または記憶免疫応答の種類である。抗原に対する最初の曝露は、免疫系を抗原刺激し、さらなる曝露は、ＤＴＨをもたらす。
適当な免疫処置後、抗ＣＤ１９抗体は、対象の血清から調製され得る。必要に応じて、ＣＤ１９タンパク質に向けられた抗体分子は、ＩｇＧ画分を得るために周知の技術、例えば、ポリペプチドＡクロマトグラフィーによって、哺乳動物から（例えば、血液から）単離され、さらに精製され得る。
モノクローナル抗体。本技術の一実施形態では、抗体は、抗ＣＤ１９モノクローナル抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９モノクローナル抗体は、ヒトまたはマウス抗ＣＤ１９モノクローナル抗体であり得る。ＣＤ１９タンパク質またはその誘導体、断片、類似体または相同体に対するモノクローナル抗体の調製のために、連続細胞株培養による抗体分子の製造を提供する任意の技術が利用され得る。このような技術として、それだけには限らないが、ハイブリドーマ技術（例えば、Kohler & Milstein, 1975. Nature 256: 495-497を参照のこと）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（例えば、Kozbor, et al., 1983. Immunol. Today 4: 72を参照のこと）およびヒトモノクローナル抗体を作製するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（例えば、Cole, et al., 1985. In: MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96）が挙げられる。本技術の実施では、ヒトモノクローナル抗体が利用されてもよく、ヒトハイブリドーマを使用することによって（例えば、Cote, et al., 1983. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 2026-2030を参照のこと）またはｉｎ ｖｉｔｒｏでＥｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒウイルスを用いてヒトＢ細胞を形質転換することによって（例えば、Cole, et al., 1985. In: MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96を参照のこと）製造されてもよい。例えば、抗体の領域をコードする核酸の集団が単離され得る。集団に由来する抗体の一部をコードする配列を増幅するために、抗体の保存された領域をコードする配列に由来するプライマーを利用するＰＣＲが使用され、次いで、抗体またはその断片、例えば、可変ドメインをコードするＤＮＡが、増幅された配列から再構築される。このような増幅された配列はまた、ファージまたは細菌での融合ポリペプチドの発現およびディスプレイのために、その他のタンパク質、例えば、バクテリオファージコートまたは細菌細胞表面タンパク質をコードするＤＮＡと融合され得る。増幅された配列は、次いで発現され、例えば、ＣＤ１９タンパク質に存在する抗原またはエピトープに対する発現された抗体またはその断片の親和性に基づき、さらに選択または単離され得る。あるいは、抗ＣＤ１９モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマは、対象を免疫処置し、次いで、日常的な方法を使用して対象の脾臓からハイブリドーマを単離することによって調製され得る。例えば、Milstein et al., (Galfre and Milstein, Methods Enzymol (1981) 73: 3-46)を参照のこと。標準方法を使用してハイブリドーマをスクリーニングすることは、変動する特異性（すなわち、種々のエピトープに対する）および親和性のモノクローナル抗体をもたらす。所望の特性、例えば、ＣＤ１９結合を有する選択されたモノクローナル抗体は、ハイブリドーマによって発現されたように使用されてもよく、その特性を変更するためにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの分子に結合されてもよく、またはそれをコードするｃＤＮＡは、種々の方法で単離されてもよく、シーケンシングされてもよく、操作されてもよい。ＣＤ１９タンパク質の免疫原性特性を増強するために、合成デンドロメリックツリー（ｄｅｎｄｒｏｍｅｒｉｃ ｔｒｅｅ）が反応性アミノ酸側鎖、例えば、リジンに付加されてもよい。また、ＣＤ１９タンパク質の免疫原性特性を増強するために、ＣＰＧジヌクレオチド法も使用することができる。その他の操作としては、貯蔵中または対象への投与後に抗体の不安定性に寄与する特定のアミノアシル残基を置換または欠失すること、およびＣＤ１９タンパク質の抗体の親和性を改善するための親和性成熟法が挙げられる。
ハイブリドーマ技術。いくつかの実施形態では、本技術の抗体は、不死化細胞に融合された、ヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって生成される抗ＣＤ１９モノクローナル抗体である。ハイブリドーマ技術は、当技術分野で公知の、Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 349 (1988); Hammerling et al., Monoclonal Antibodies And T-Cell Hybridomas, 563-681 (1981)において教示されたものを含む。ハイブリドーマおよびモノクローナル抗体を製造するためのその他の方法は、当業者には周知である。
ファージディスプレイ技術。上記で記載したように、本技術の抗体は、組換えＤＮＡおよびファージディスプレイ技術の適用によって製造され得る。例えば、抗ＣＤ１９抗体は、当技術分野で公知の種々のファージディスプレイ方法を使用して調製され得る。ファージディスプレイ方法では、機能的抗体ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保持するファージ粒子の表面にディスプレイされる。所望の結合特性を有するファージは、抗原、通常、固体表面またはビーズに結合または捕捉された抗原を用いて直接的に選択することによって、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から選択される。これらの方法において使用されるファージは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換えによって融合されたＦａｂ、Ｆｖまたはジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインを有するｆｄおよびＭ１３を含む繊維状ファージである。さらに、ＣＤ１９ポリペプチド、例えば、ポリペプチドまたはその誘導体、断片、類似体もしくは相同体に対して所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速で有効な同定を可能にするために、Ｆａｂ発現ライブラリーの構築のための方法が適合されてもよい（例えば、Huse, et al., Science 246: 1275-1281, 1989を参照のこと）。本技術の抗体を作製するために使用され得るファージディスプレイ方法のその他の例として、Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A., 85: 5879-5883, 1988; Chaudhary et al., Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A., 87: 1066-1070, 1990; Brinkman et al., J. Immunol. Methods 182: 41-50, 1995; Ames et al., J. Immunol. Methods 184: 177-186, 1995; Kettleborough et al., Eur. J. Immunol. 24: 952-958, 1994; Persic et al., Gene 187: 9-18, 1997; Burton et al., Advances in Immunology 57: 191-280, 1994、ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４、ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１、ＷＯ９６／０６２１３、ＷＯ９２／０１０４７（Medical Research Council et al.）、ＷＯ９７／０８３２０（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）、ＷＯ９２／０１０４７（ＣＡＴ／ＭＲＣ）、ＷＯ９１／１７２７１（Ａｆｆｙｍａｘ）および米国特許第５，６９８，４２６号、同５，２２３，４０９号、同５，４０３，４８４号、同５，５８０，７１７号、同５，４２７，９０８号、同５，７５０，７５３号、同５，８２１，０４７号、同５，５７１，６９８号、同５，４２７，９０８号、同５，５１６，６３７号、同５，７８０，２２５号、同５，６５８，７２７号および同５，７３３，７４３号に開示されるものが挙げられる。ジスルフィド結合によってポリペプチドを引きつけることによるバクテリオファージ粒子の表面上にポリペプチドをディスプレイするのに有用な方法は、Lohning、米国特許第６，７５３，１３６号によって記載されている。上記の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージから得た抗体コーディング領域は、単離され、ヒト抗体を含む全抗体または任意のその他の所望の抗原結合断片を作製するために使用され、任意の哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌を含む所望の宿主において発現され得る。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）2断片を組換え製造するための技術もまた、ＷＯ９２／２２３２４； Mullinax et al., BioTechniques 12: 864-869, 1992;およびSawai et al., AJRI 34: 26-34, 1995; およびBetter et al., Science 240: 1041-1043, 1988に開示されるものなどの当技術分野で公知の方法を使用して使用され得る。
一般に、ディスプレイベクター中にクローニングされたハイブリッド抗体またはハイブリッド抗体断片は、抗体または抗体断片は、ファージまたはファージミド粒子の表面に存在するからであるので、良好な結合活性を維持するバリアントを同定するために適当な抗原に対して選択され得る。例えば、Barbas III et al., Phage Display, A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 2001)を参照のこと。しかし、選択および／またはスクリーニングのために、抗体断片ライブラリーの溶解性ファージベクターへのクローニングなどのその他のベクターフォーマットが、このプロセスに使用され得る（修飾されたＴ７またはラムダＺａｐ系）。
組換え抗ＣＤ１９抗体の発現。上記で記載されたように、本技術の抗体は、組換えＤＮＡ技術の適用によって製造され得る。本技術の抗ＣＤ１９抗体をコードする組換えポリヌクレオチド構築物は、通常、天然において付随するまたは異種のプロモーター領域を含む、抗ＣＤ１９抗体鎖のコード配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む。そのようなものとして、本技術の別の態様は、本技術の抗ＣＤ１９抗体をコードする１つまたは複数の核酸配列を含有するベクターを含む。本技術の１つまたは複数のポリペプチドの組換え発現のために、抗ＣＤ１９抗体をコードするヌクレオチド配列のすべてまたは一部を含有する核酸は、当技術分野で周知の、以下に詳述されるような組換えＤＮＡ技術によって、適当なクローニングベクターまたは発現ベクター（すなわち、挿入されたポリペプチドコード配列の転写および翻訳のために必要なエレメントを含有するベクター）に挿入される。ベクターの多様な集団を製造する方法は、Lerner et al.,米国特許第６，２９１，１６０号および同６，６８０，１９２号によって記載されている。
一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターがプラスミドの形態であることが多い。本開示では、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドがベクターの最も一般的な形態であるので同義的に使用され得る。しかし、本技術は、同等の機能を果たす技術的にプラスミドではない発現ベクターのこのようなその他の形態、例えば、ウイルスベクター（例えば、複製欠損のレトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）を含むように意図される。このようなウイルスベクターは、対象の感染およびその対象における構築物の発現を可能にする。いくつかの実施形態では、発現制御配列は、真核細胞の宿主細胞を形質転換またはトランスフェクト可能なベクターにおける真核細胞プロモーター系である。ベクターが適当な宿主に組み込まれると、宿主は、抗ＣＤ１９抗体をコードするヌクレオチド配列の高レベル発現ならびに抗ＣＤ１９抗体、例えば、交差反応性抗ＣＤ１９抗体の収集および精製に適した条件下で維持される。全般的に、米国特許出願公開第２００２／０１９９２１３号を参照のこと。これらの発現ベクターは、通常、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの不可欠な部分としてのいずれかで宿主生物において複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列を用いて形質転換された細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えば、アンピシリン耐性またはハイグロマイシン耐性を含有する。ベクターはまた、細胞外抗体断片の分泌に向けるのに有用なシグナルペプチド、例えば、ペクチン酸リアーゼをコードしてもよい。米国特許第５，５７６，１９５号を参照のこと。
本技術の組換え発現ベクターは、宿主細胞における核酸の発現に適した形態で、ＣＤ１９結合特性を有するタンパク質をコードする核酸を含み、これは、組換え発現ベクターが、発現されるべき核酸配列に作動可能に連結されている発現に使用されるべき宿主細胞に基づいて選択された１つまたは複数の調節配列を含むことを意味する。組換え発現ベクター内に、「作動可能に連結された」とは、ヌクレオチド配列の発現を可能にする方法で（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写／翻訳系における、またはベクターが宿主細胞に導入される場合宿主細胞において）、対象のヌクレオチド配列が、調節配列に連結されていることを意味することを意図される。用語「調節配列」とは、プロモーター、エンハンサーおよびその他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むように意図される。このような調節配列は、例えば、Goeddel, GENE EXPRESSION TECHNOLOGY: METHODS IN ENZYMOLOGY 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)に記載されている。調節配列は、多くの種類の宿主細胞においてヌクレオチド配列の構成的発現を指示するものおよび特定の宿主細胞のみにおいてヌクレオチド配列の発現を指示するもの（例えば、組織特異的調節配列）を含む。発現ベクターの設計は、形質転換されるべき宿主細胞の選択、所望のポリペプチドの発現のレベルなどのような因子に応じて変わり得るということは当業者によって理解されよう。組換えポリペプチド発現（例えば、抗ＣＤ１９抗体）のプロモーターとして有用である通常の調節配列として、例えば、それだけには限らないが、３－ホスホグリセリン酸キナーゼおよびその他の解糖酵素のプロモーターが挙げられる。誘導性酵母プロモーターとして、中でも、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソチトクロームＣならびにマルトースおよびガラクトース利用に関与する酵素に由来するプロモーターが挙げられる。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体をコードするポリヌクレオチドは、ａｒａ Ｂプロモーターに作動可能に連結され、宿主細胞において発現可能である。米国特許第５，０２８，５３０号を参照のこと。本技術の発現ベクターは、宿主細胞に導入され、それによって、本明細書において記載されるような核酸によってコードされる融合ポリペプチドを含むポリペプチドまたはペプチド（例えば、抗ＣＤ１９抗体など）を産生できる。
本技術の別の態様は、１つまたは複数の抗ＣＤ１９抗体をコードする核酸を含有する、抗ＣＤ１９抗体を発現する宿主細胞に関する。本技術の組換え発現ベクターは、原核細胞または真核細胞における抗ＣＤ１９抗体の発現のために設計され得る。例えば、抗ＣＤ１９抗体は、大腸菌、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを使用する）、真菌細胞、例えば、酵母、酵母細胞または哺乳動物細胞などの細菌細胞において発現され得る。適した宿主細胞は、Goeddel, GENE EXPRESSION TECHNOLOGY: METHODS IN ENZYMOLOGY 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)においてさらに論じられる。あるいは、組換え発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼを使用して転写され、翻訳され得る。確率論的に作製されるポリヌクレオチド配列の発現による、所定の特性を有するポリペプチド、例えば、抗ＣＤ１９抗体の調製およびスクリーニングにとって有用な方法は、これまでに記載されている。米国特許第５，７６３，１９２号、同５，７２３，３２３号、同５，８１４，４７６号、同５，８１７，４８３号、同５，８２４，５１４号、同５，９７６，８６２号、同６，４９２，１０７号、同６，５６９，６４１号を参照のこと。
原核生物におけるポリペプチドの発現は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で融合または非融合ポリペプチドいずれかの発現を指示する構成的または誘導プロモーターを含有するベクターを用いて実施されることが最も多い。融合ベクターは、いくつかのアミノ酸を、本明細書においてコードされるポリペプチドに普通、組換えポリペプチドのアミノ末端に付加する。このような融合ベクターは、通常、３つの目的：（ｉ）組換えポリペプチドの発現を増大させるため、（ｉｉ）組換えポリペプチドの溶解度を増大させるため、および（ｉｉｉ）アフィニティー精製においてリガンドとして作用することによって組換えポリペプチドの精製を補助するためを果たす。融合発現ベクターでは、融合ポリペプチドの精製後に融合部分からの組換えポリペプチドの分離を可能にするために、融合部分と組換えポリペプチドの接合部にタンパク質分解による切断部位が導入されることが多い。このような酵素およびその同族認識配列として、第Ｘ因子、トロンビンおよびエンテロキナーゼが挙げられる。通常の融合発現ベクターとして、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合ポリペプチドまたはポリペプチドＡをそれぞれ標的組換えポリペプチドに融合する、ｐＧＥＸ（Pharmacia Biotech Inc; Smith and Johnson, 1988. Gene 67: 31-40）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、マサチューセッツ州、ビバリー）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、ニュージャージー州、ピスカタウェイ）が挙げられる。
適した誘導性非融合大腸菌発現ベクターの例として、ｐＴｒｃ（Amrann et al., (1988) Gene 69: 301-315）およびｐＥＴ １１ｄ（Studier et al., GENE EXPRESSION TECHNOLOGY: METHODS IN ENZYMOLOGY 185, Academic Press, San Diego、Calif. (1990) 60-89）が挙げられる。ポリペプチド融合によって多機能ポリペプチドを得るための、別個の活性ペプチドまたはタンパク質ドメインの標的化されたアセンブリーの方法は、Pack et al.,米国特許第６，２９４，３５３号、同６，６９２，９３５号によって記載されている。大腸菌における組換えポリペプチド発現、例えば、抗ＣＤ１９抗体を最大化するための１つの戦略は、組換えポリペプチドをタンパク質分解性に切断する能力が損なわれた宿主細菌においてポリペプチドを発現することである。例えば、Gottesman, GENE EXPRESSION TECHNOLOGY: METHODS IN ENZYMOLOGY 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990) 119-128を参照のこと。別の戦略は、各アミノ酸の個々のコドンが、発現宿主、例えば、大腸菌において優先的に利用されるものであるように、発現ベクター中に挿入されるべき核酸の核酸配列を変更することである（例えば、Wada, et al., 1992. Nucl. Acids Res. 20: 2111-2118を参照のこと）。本技術の核酸配列のこのような変更は、標準ＤＮＡ合成技術によって実施され得る。
別の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体発現ベクターは、酵母発現ベクターである。酵母サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）における発現のためのベクターの例として、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Baldari, et al., 1987. EMBO J. 6: 229-234）、ｐＭＦａ（Kurjan and Herskowitz、Cell 30: 933-943, 1982）、ｐＪＲＹ８８（Schultz et al., Gene 54: 113-123, 1987）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州、サンディエゴ）およびｐｉｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ、カリフォルニア州、サンディエゴ）が挙げられる。あるいは、抗ＣＤ１９抗体は、バキュロウイルス発現ベクターを使用して昆虫細胞において発現されてもよい。培養昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）における、ポリペプチド、例えば、抗ＣＤ１９抗体の発現のために利用可能なバキュロウイルスベクターとして、ｐＡｃシリーズ（Smith, et al., Mol. Cell. Biol. 3: 2156-2165, 1983）およびｐＶＬシリーズ（Lucklow and Summers, 1989. Virology 170: 31-39）が挙げられる。
さらに別の実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体をコードする核酸は、哺乳動物発現ベクターを使用して哺乳動物細胞において発現される。哺乳動物発現ベクターの例として、例えば、それだけには限らないが、ｐＣＤＭ８（Seed, Nature 329: 840, 1987）およびｐＭＴ２ＰＣ（Kaufman, et al., EMBO J. 6: 187-195, 1987）が挙げられる。哺乳動物細胞において使用される場合には、発現ベクターの制御機能は、ウイルス調節エレメントによって提供されることが多い。例えば、よく使用されるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルスおよびサルウイルス４０に由来する。本技術の抗ＣＤ１９抗体の発現に適している原核細胞および真核細胞両方のためのその他の適した発現系については、例えば、Sambrook, et al., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL. 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989のChapter 16および17を参照のこと。
別の実施形態では、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞種において核酸の発現を指示可能である（例えば、組織特異的調節エレメント）。組織特異的調節エレメントは、当技術分野で公知である。適した組織特異的プロモーターの限定されない例として、アルブミンプロモーター（肝臓特異的; Pinkert, et al., Genes Dev. 1: 268-277, 1987）、リンパ球特異的プロモーター（Calame and Eaton, Adv. Immunol. 43: 235-275, 1988）、Ｔ細胞受容体のプロモーター（Winoto and Baltimore, EMBO J. 8: 729-733, 1989）および免疫グロブリン（Banerji, et al., 1983. Cell 33: 729-740;Queen and Baltimore, Cell 33: 741-748, 1983.）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、神経フィラメントプロモーター； Byrne and Ruddle, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 5473-5477, 1989）、膵臓特異的プロモーター（Edlund, et al., 1985. Science 230: 912-916）および乳腺特異的プロモーター（例えば、乳清プロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号および欧州特許出願公開第２６４，１６６号）が挙げられる。発達によって調節されるプロモーターも包含される、例えば、マウスｈｏｘプロモーター（Kessel and Gruss, Science 249: 374-379, 1990）およびα－胎児タンパク質プロモーター（Campes and Tilghman, Genes Dev. 3: 537-546, 1989)。
本方法の別の態様は、本技術の組換え発現ベクターが導入されている宿主細胞に関する。用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細書において同義的に使用される。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の後代または潜在的な後代も指すことは理解される。特定の修飾は突然変異または環境影響いずれかのために続く世代において生じ得るので、このような後代は、親細胞と実際同一ではない場合もあるが、本明細書における用語の範囲内に依然として含まれる。
宿主細胞は、任意の原核細胞または真核細胞であり得る。例えば、抗ＣＤ１９抗体は、大腸菌、昆虫細胞、酵母または哺乳動物細胞などの細菌細胞において発現され得る。哺乳動物細胞は、免疫グロブリンまたはその断片をコードするヌクレオチドセグメントを発現するための適した宿主である。Winnacker, From Genes To Clones(VCH Publishers, NY, 1987)を参照のこと。無傷の異種タンパク質を分泌可能ないくつかの適した宿主細胞株が当技術分野で開発されており、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、種々のＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、Ｌ細胞および骨髄腫細胞株が挙げられる。いくつかの実施形態では、細胞は、非ヒトである。これらの細胞の発現ベクターは、発現制御配列、例えば、複製起点、プロモーター、エンハンサーおよび必要なプロセシング情報部位、例えば、リボソーム結合部位、ＲＮＡスプライシング部位、ポリアデニル化部位および転写ターミネーター配列を含み得る。Queen et al., Immunol. Rev. 89: 49, 1986。例示的発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Co et al., J Immunol. 148: 1149, 1992。その他の適した宿主細胞は、当業者に公知である。
ベクターＤＮＡは、従来の形質転換またはトランスフェクション技術によって原核細胞または真核細胞中に導入され得る。本明細書において、用語「形質転換」および「トランスフェクション」は、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性トランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーション、微粒子銃またはウイルスベーストランスフェクションを含む、外来核酸（例えば、ＤＮＡ）を宿主細胞中に導入するための種々の技術分野で認識された技術を指すように意図される。哺乳動物細胞を形質転換するために使用されるその他の方法として、ポリブレンの使用、プロトプラスト融合、リポソーム、エレクトロポレーションおよびマイクロインジェクションが挙げられる（全般的には、Sambrook et al.，Molecular Cloningを参照のこと）。宿主細胞に形質導入するまたはトランスフェクトするための適した方法は、Sambrook, et al. (MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL. 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989)およびその他の実験室マニュアルに見出すことができる。対象のＤＮＡセグメントを含有するベクターは、細胞宿主の種類に応じて周知の方法によって宿主細胞中に移行され得る。
哺乳動物細胞の安定なトランスフェクションのために、使用される発現ベクターおよびトランスフェクション技術に応じて、細胞の小画分のみが外来ＤＮＡをそのゲノム中に組み込み得るということがわかっている。これらの組み込み体を同定および選択するために、一般に、選択マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードする遺伝子が、対象の遺伝子とともに宿主細胞中に導入される。種々の選択マーカーとして、Ｇ４１８、ハイグロマイシンおよびメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与するものが挙げられる。選択マーカーをコードする核酸は、抗ＣＤ１９抗体をコードするものと同一ベクターで宿主細胞中に導入され得る、または別個のベクターで導入され得る。導入される核酸を用いて安定にトランスフェクトされた細胞は、薬物選択によって同定され得る（例えば、選択マーカー遺伝子を組み込んだ細胞は生存し、その他の細胞は死滅する）。
培養中の原核細胞または真核細胞の宿主細胞などの本技術の抗ＣＤ１９抗体を含む宿主細胞は、組換え抗ＣＤ１９抗体を製造（すなわち、発現）するために使用され得る。一実施形態では、方法は、宿主細胞（抗ＣＤ１９抗体をコードする組換え発現ベクターが導入されている）を、抗ＣＤ１９抗体が産生されるような適した培地中で培養することを含む。別の実施形態では、方法は、抗ＣＤ１９抗体を、培地または宿主細胞から単離するステップをさらに含む。ひとたび発現されると、抗ＣＤ１９抗体、例えば、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体関連ポリペプチドの収集物は、培養培地および宿主細胞から精製される。抗ＣＤ１９抗体は、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む当技術分野の標準手順に従って精製され得る。一実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、Boss et al.米国特許第４，８１６，３９７号の方法によって宿主生物において産生される。普通、抗ＣＤ１９抗体鎖は、シグナル配列とともに発現され、したがって、培養培地中に放出される。しかし、抗ＣＤ１９抗体鎖が、宿主細胞によって自然に分泌されない場合には、抗ＣＤ１９抗体鎖は、穏やかな洗浄剤を用いる処置によって放出され得る。組換えポリペプチドの精製は、当技術分野で周知であり、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティークロマトグラフィー精製技術、カラムクロマトグラフィー、イオン交換精製技術、ゲル電気泳動などが挙げられる（全般的には、Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag、N.Y.、1982)を参照のこと。
抗ＣＤ１９抗体をコードするポリヌクレオチド、例えば、抗ＣＤ１９抗体コード配列は、トランスジェニック動物のゲノムへの導入およびトランスジェニック動物の乳におけるその後の発現のために導入遺伝子に組み込まれ得る。例えば、米国特許第５，７４１，９５７号、同５，３０４，４８９号および同５，８４９，９９２号を参照のこと。適した導入遺伝子は、乳腺特異的遺伝子、例えば、カゼインまたはβ－ラクトグロブリン由来のプロモーターおよびエンハンサーと作動可能な連結にある軽鎖および／または重鎖のコード配列を含む。トランスジェニック動物の製造のためには、導入遺伝子は、受精した卵母細胞中にマイクロインジェクションされてもよい、または胚幹細胞のゲノム中に組み込まれてもよく、このような細胞の核は、除核された卵母細胞に移される。
一本鎖抗体。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、一本鎖抗ＣＤ１９抗体である。本技術によれば、技術は、ＣＤ１９タンパク質に特異的な一本鎖抗体の製造のために採用され得る（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと）。一本鎖Ｆｖおよび本技術の抗体を製造するために使用され得る技術の例として、米国特許第４，９４６，７７８号および同５，２５８，４９８号； Huston et al., Methods in Enzymology, 203: 46-88, 1991; Shu, L. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7995-7999, 1993;およびSkerra et al., Science 240: 1038-1040, 1988に記載されるものが挙げられる。
キメラおよびヒト化抗体。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、キメラ抗ＣＤ１９抗体である。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、ヒト化抗ＣＤ１９抗体である。本技術の一実施形態では、ドナーおよびアクセプター抗体は、異なる種に由来するモノクローナル抗体である。例えば、アクセプター抗体は、ヒト抗体であり（ヒトにおけるその抗原性を最小化するために）、その場合には、得られたＣＤＲ移植抗体は、「ヒト化」抗体と呼ばれる。
組換え抗ＣＤ１９抗体、例えば、ヒトおよび非ヒト部分両方を含む、キメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、標準組換えＤＮＡ技術を使用して作製され得、本技術の範囲内である。ヒトにおける本技術の抗ＣＤ１９抗体のｉｎ ｖｉｖｏ使用ならびにｉｎ ｖｉｔｒｏ検出アッセイにおけるこれらの物質の使用を含むいくつかの使用のために、キメラまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体を使用することがあり得る。このようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、当技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術によって製造され得る。このような有用な方法として、例えば、それだけには限らないが、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９、米国特許第５，２２５，５３９号、欧州特許第１８４１８７号、欧州特許第１７１４９６号、欧州特許第１７３４９４号、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ８６／０１５３３、米国特許第４，８１６，５６７号、同５，２２５，５３９号、欧州特許第１２５０２３号、Better, et al., 1988. Science 240: 1041-1043; Liu, et al., 1987. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439-3443; Liu, et al., 1987. J. Immunol. 139: 3521-3526; Sun, et al., 1987. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 214-218; Nishimura, et al., 1987. Cancer Res. 47: 999-1005; Wood, et al., 1985. Nature 314: 446-449; Shaw, et al., 1988. J. Natl. Cancer Inst. 80: 1553-1559; Morrison (1985) Science 229: 1202-1207; Oi, et al. (1986) BioTechniques 4: 214; Jones, et al., 1986. Nature 321: 552-525; Verhoeyan, et al., 1988に記載される方法が挙げられる。例えば、抗体は、ＣＤＲ移植（ＥＰ０２３９４００、ＷＯ９１／０９９６７、米国特許第５，５３０，１０１号、同５，５８５，０８９号、同５，８５９，２０５号、同６，２４８，５１６号、ＥＰ４６０１６７）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ＥＰ０５９２１０６、ＥＰ０５１９５９６、Padlan E. A., Molecular Immunology、28: 489-498, 1991; Studnicka et al., Protein Engineering 7: 805-814, 1994; Roguska et al., PNAS 91: 969-973, 1994）およびチェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む種々の技術を使用してヒト化され得る。一実施形態では、マウス抗ＣＤ１９モノクローナル抗体をコードするｃＤＮＡは、Ｆｃ定常領域をコードする配列を除去するように特別に選択された制限酵素を用いて消化され、ヒトＦｃ定常領域をコードするｃＤＮＡの同等部分が置換される(Robinson et al.、ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Akira et al.、欧州特許出願第１８４，１８７号； Taniguchi、欧州特許出願第１７１，４９６号； Morrison et al.、欧州特許出願第１７３，４９４号； Neuberger et al.、ＷＯ８６／０１５３３； Cabilly et al.、米国特許第４，８１６，５６７号； Cabilly et al.、欧州特許出願第１２５，０２３号； Better et al. (1988) Science 240: 1041-1043; Liu et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439-3443; Liu et al. (1987) J Immunol 139: 3521-3526; Sun et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 214-218; Nishimura et al. (1987) Cancer Res 47: 999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314: 446-449;およびShaw et al. (1988) J. Natl. Cancer Inst. 80: 1553-1559;米国特許第６，１８０，３７０号；米国特許第６，３００，０６４号；同６，６９６，２４８号；同６，７０６，４８４号；同６，８２８，４２２号。
一実施形態では、本技術は、ヒト抗マウス抗体（本明細書において以下、「ＨＡＭＡ」と呼ばれる）応答を誘導する可能性が低く、一方で、有効な抗体エフェクター機能は依然として有するヒト化抗ＣＤ１９抗体の構築を提供する。本明細書において、抗体に関連して、用語「ヒト」および「ヒト化」は、ヒト対象において治療上許容される弱い免疫原性応答を誘発するように予測される任意の抗体に関する。一実施形態では、本技術は、ヒト化抗ＣＤ１９抗体、重鎖および軽鎖免疫グロブリンを提供する。
ＣＤＲ抗体。いくつかの実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、抗ＣＤ１９ＣＤＲ抗体である。全般的に、抗ＣＤ１９ＣＤＲ抗体を作製するために使用されるドナーおよびアクセプター抗体は、異なる種に由来するモノクローナル抗体であり、通常、アクセプター抗体は、ヒト抗体であり（ヒトにおける抗原性を最小化するために）、その場合には、得られたＣＤＲ移植抗体は、「ヒト化」抗体と呼ばれる。移植は、アクセプター抗体の単一ＶHまたはＶL内の単一ＣＤＲ（またはさらに単一ＣＤＲの一部）のものであり得る、またはＶHおよびＶLの一方または両方内の複数のＣＤＲ（またはその一部）のものであり得る。得られたＣＤＲ移植抗体のＣＤ１９タンパク質との適切な結合を可能にするのに必要な数だけを置き換える必要があるものの、アクセプター抗体のすべての可変ドメインの３つのＣＤＲすべてが、対応するドナーＣＤＲと置き換えられる場合が多い。ＣＤＲ移植およびヒト化抗体を作製する方法は、Queen et al.米国特許第５，５８５，０８９号；米国特許第５，６９３，７６１号；米国特許第５，６９３，７６２号；およびWinter 米国特許第５，２２５，５３９号；およびＥＰ０６８２０４０によって教示される。ＶHおよびＶLポリペプチドを調製するのに有用な方法は、Winter et al.米国特許第４，８１６，３９７号；同６，２９１，１５８号；同６，２９１，１５９号；同６，２９１，１６１号；同６，５４５，１４２号；ＥＰ０３６８６８４；ＥＰ０４５１２１６；およびＥＰ０１２０６９４によって教示される。
同一ファミリーおよび／または同一ファミリーメンバーから適したフレームワーク領域候補を選択した後、元の種からハイブリッドフレームワーク領域中にＣＤＲを移植することによって、重鎖および軽鎖可変領域のいずれかまたは両方が製造される。上記の態様のいずれかに関して、当業者に公知の従来の方法を使用して、ハイブリッド可変鎖領域を有するハイブリッド抗体またはハイブリッド抗体断片のアセンブリーが達成され得る。例えば、本明細書において記載されるハイブリッド可変ドメイン（すなわち、標的種および元の種に由来するＣＤＲをベースとするフレームワーク）をコードするＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド合成および／またはＰＣＲによって製造され得る。ＣＤＲ領域をコードする核酸はまた、適した制限酵素を使用して元の種の抗体から単離され、適したライゲーション酵素を用いてライゲーションすることによって標的種フレームワーク中にライゲーションされ得る。あるいは、元の種の抗体の可変鎖のフレームワーク領域は、部位特異的突然変異誘発によって変更され得る。
各フレームワーク領域に対応する複数の候補の中から選択してハイブリッドが構築されるので、本明細書において記載される原理に従う構築を受け入れる配列の多数の組合せが存在する。したがって、個々のフレームワーク領域の異なる組合せを有するメンバーを有するハイブリッドのライブラリーがアセンブルされ得る。このようなライブラリーは、ハイブリッドの、配列の電子データベース収集物または物理的収集物であり得る。
このプロセスは、通常、移植ＣＤＲをフランキングするアクセプター抗体のＦＲを変更しない。しかし、当業者ならば、時には、ドナー抗体の対応するＦＲにより同様のＦＲを作製するために、所与のＦＲの特定の残基を置き換えることによって、得られた抗ＣＤ１９ＣＤＲ移植抗体の抗原結合親和性を改善できる。置換の適した位置は、ＣＤＲに隣接する、またはＣＤＲと相互作用可能なアミノ酸残基を含む（例えば、ＵＳ５，５８５，０８９、特に列１２～１６を参照のこと）。または当業者ならば、ドナーＦＲを用いて開始し、アクセプターＦＲまたはヒトコンセンサスＦＲとより同様であるように修飾できる。これらの修飾を行う技術は、当技術分野で公知である。特に、得られたＦＲが、その位置のヒトコンセンサスＦＲと適合する、またはこのようなコンセンサスＦＲに対して少なくとも９０％またはそれ以上同一である場合には、そのようにすることは、得られた修飾された抗ＣＤ１９ＣＤＲ移植抗体の抗原性を、完全ヒトＦＲを有する同一抗体と比較して有意に増大させない可能性がある。
二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）。二重特異性抗体は、別個の構造を有する２種の標的、例えば、２種の異なる標的抗原、同一標的抗原上の２種の異なるエピトープまたはハプテンおよび標的抗原もしくは標的抗原上のエピトープと同時に結合し得る抗体である。ＢｓＡｂは、例えば、同一または異なる抗原の異なるエピトープを認識する重鎖および／または軽鎖を組み合わせることによって作製され得る。いくつかの実施形態では、二重特異性結合剤は、分子機能によって、２つの結合アームのうち一方（一方のＶＨ／ＶＬ対）上の１種の抗原（またはエピトープ）と結合し、その第２のアーム（異なるＶＨ／ＶＬ対）上の異なる抗原（またはエピトープ）と結合する。この定義によって、二重特異性結合剤は、２つの別個の抗原結合アーム（特異性およびＣＤＲ配列の両方において）を有し、結合する各抗原に対して一価である。
本技術の二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）および二重特異性抗体断片（ＢｓＦａｂ）は、例えば、ＣＤ１９と特異的に結合する少なくとも１つのアームおよび第２の標的抗原と特異的に結合する少なくとも１つのその他のアームを有する。いくつかの実施形態では、第２の標的抗原は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、骨髄系細胞、形質細胞または肥満細胞の抗原またはエピトープである。さらにまたはあるいは、特定の実施形態では、第２の標的抗原は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６およびＫＩＲからなる群から選択される。特定の実施形態では、ＢｓＡｂは、細胞表面でＣＤ１９抗原を発現する腫瘍細胞と結合することができる。いくつかの実施形態では、ＢｓＡｂは、細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍部位に向ける（または動員する）ことによって腫瘍細胞の死滅を促進するように遺伝子操作されている。その他の例示的ＢｓＡｂとして、ＣＤ１９に対して特異的な第１の抗原結合部位および小分子ハプテン（例えば、ＤＴＰ Ａ、ＩＭＰ２８８、ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－Ｂｎ、ＤＯＴＡ－デスフェリオキサミン、本明細書に記載されるその他のＤＯＴＡキレート、ビオチン、フルオレセインまたはGoodwin, D A. et al, 1994, Cancer Res. 54(22):5937-5946に開示されるもの）に対して特異的な第２の抗原結合部位を有するものが挙げられる。
さまざまな二重特異性融合タンパク質が、分子工学を使用して製造され得る。例えば、完全免疫グロブリンフレームワーク（例えば、ＩｇＧ）、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）またはそれらの組合せのいずれかを利用するＢｓＡｂが構築されている。いくつかの実施形態では、二重特異性融合タンパク質は、例えば、１種の抗原に対する単一結合部位を有するｓｃＦｖおよび第２の抗原に対する単一結合部位を有するＦａｂ断片を含む二価である。いくつかの実施形態では、二重特異性融合タンパク質は、例えば、１つの抗原に対する単一結合部位を有するｓｃＦｖ、および第２の抗原に対する単一結合部位を有する別のｓｃＦｖ断片を含む二価である。その他の実施形態では、二重特異性融合タンパク質は、四価であり、例えば、１種の抗原に対する２つの結合部位および第２の抗原に対する２つの同一のｓｃＦｖを有する免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）を含む。タンデムで２つのｓｃＦｖ単位から構成されるＢｓＡｂは、臨床的に成功した二重特異性抗体形式であるとわかっている。いくつかの実施形態では、ＢｓＡｂは、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）と結合するｓｃＦｖが、Ｔ細胞に関与する（例えば、ＣＤ３と結合することによって）ｓｃＦｖと連結されるように設計されている、２つの一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をタンデムで含む。このようにして、Ｔ細胞は腫瘍部位に動員され、その結果、それらは腫瘍細胞の細胞傷害性死滅を媒介し得る。例えば、Dreier et al., J. Immunol. 170:4397-4402(2003); Bargou et al., Science 321 :974- 977(2008)）を参照のこと。いくつかの実施形態では、本技術のＢｓＡｂは、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）と結合するｓｃＦｖが、小分子ＤＯＴＡハプテンと結合するｓｃＦｖと連結されるように設計されている２つの一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をタンデムに含む。
ＢｓＡｂを製造するための最近の方法として、より一般的な免疫グロブリンアイソタイプよりも強力に架橋する、さらなるシステイン残基を有する操作された組換えモノクローナル抗体が挙げられる。例えば、FitzGerald et al., Protein Eng. 10(10):1221-1225 (1997）を参照のこと。別のアプローチとして、必要とされる二重特異性を有する２つ以上の異なる一本鎖抗体または抗体断片セグメントを連結して組換え融合タンパク質を操作により作製することがある。例えば、Coloma et al., Nature Biotech. 15:159-163(1997)を参照のこと。分子工学を使用して、さまざまな二重特異性融合タンパク質が製造され得る。
２つ以上の異なる一本鎖抗体または抗体断片を連結する二重特異性融合タンパク質は同様の方法で製造される。さまざまな融合タンパク質を製造するために組換え法が使用され得る。いくつかの特定の実施形態では、本技術によるＢｓＡｂは、重鎖および軽鎖およびｓｃＦｖを含む免疫グロブリンを含む。いくつかの特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、本明細書において開示される任意のＣＤ１９免疫グロブリンの重鎖のＣ末端に連結される。いくつかの特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、本明細書において開示される任意のＣＤ１９免疫グロブリンの軽鎖のＣ末端に連結される。種々の実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカー配列を介して重鎖または軽鎖に連結される。重鎖ＦｄのｓｃＦｖへのインフレーム接続に必要な適当なリンカー配列が、ＰＣＲ反応によってＶLおよびＶkappaドメイン中に導入される。次いで、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡ断片が、ＣＨ１ドメインをコードするＤＮＡ配列を含有するステージング（ｓｔａｇｉｎｇ）ベクターにライゲーションされる。得られたｓｃＦｖ－ＣＨ１構築物が切り出され、ＣＤ１９抗体のＶH領域をコードするＤＮＡ配列を含有するベクターにライゲーションされる。得られたベクターは、二重特異性融合タンパク質の発現のために適当な宿主細胞、例えば、哺乳動物細胞をトランスフェクトするために使用され得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００個またはそれより長いアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、頑強な三次元構造をとらず、むしろポリペプチド（例えば、第１のおよび／または第２の抗原結合部位）に対して可動性を提供するという点を特徴とする。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＢｓＡｂに与えられる特定の特性、例えば、安定性の増大などに基づいて、本明細書に記載されるＢｓＡｂにおいて使用される。いくつかの実施形態では、本技術のＢｓＡｂは、Ｇ4Ｓリンカーを含む。いくつかの特定の実施形態では、本技術のＢｓＡｂは、（Ｇ4Ｓ）nリンカーを含み、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５またはそれより多い。
自己集合分解（ＳＡＤＡ）コンジュゲート。いくつかの実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、１つまたは複数のＳＡＤＡドメインを含む。ＳＡＤＡドメインは、有益な動力学的、熱力学的、および／または薬理学的特性により環境依存的多量体化を達成するように設計および／または適合され得る。例えば、ＳＡＤＡドメインは、標的外相互作用のリスクを最小化しながら、対象の標的部位にペイロードを有効に送達できるようにするコンジュゲートの部分であってもよいことが認識されている。本技術の抗ＣＤ１９抗体は、１つまたは複数の結合ドメインに連結されたＳＡＤＡドメインを含んでもよい。いくつかの実施形態では、このようなコンジュゲートは、適切な条件下で（例えば、コンジュゲートが閾値濃度もしくはｐＨより上で存在する溶液中で、および／またはコンジュゲートが、ペイロードに対する受容体の適切なレベルまたは密度によって特性決定される標的部位に存在する場合に）多量体化して所望の大きさの複合体を形成し、その他の条件下で（例えば、適切な環境的多量体化トリガーがない）より小さな形態に分解するという点で特性決定される。
ＳＡＤＡコンジュゲートは、ＳＡＤＡドメインがないコンジュゲートと比較して改善された特徴を有し得る。いくつかの実施形態では、多量体コンジュゲートの改善された特徴としては、標的へのアビディティー／結合の増大、標的細胞もしくは組織に対する特異性の増大、および／または初期血清半減期の延長が挙げられる。いくつかの実施形態では、改善された特徴は、より小さな状態（例えば、二量体または単量体）への解離により、ＳＡＤＡコンジュゲートが非特異的結合の低減、毒性の減少、および／または腎クリアランスの改善を示すことを含む。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡコンジュゲートは、ヒトホモ多量体化ポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を示し、１つまたは複数の多量体化解離定数（ＫD）によって特性決定されるアミノ酸配列を有するＳＡＤＡポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡコンジュゲートは、第１の多量体化状態および１つまたは複数の高次多量体化状態をとるように構築および配列される。いくつかの実施形態では、第１の多量体化状態は約７０ｋＤａ未満の大きさである。いくつかの実施形態では、第１の多量体化状態は非多量体化状態（例えば、単量体または二量体）である。いくつかの実施形態では、第１の多量体化状態は単量体である。いくつかの実施形態では、第１の多量体化状態は二量体である。いくつかの実施形態では、第１の多量体化状態は多量体化状態（例えば、三量体または四量体）である。いくつかの実施形態では、高次多量体化状態は、１５０ｋＤａを超える大きさのホモ四量体または高次ホモ多量体である。いくつかの実施形態では、コンジュゲートがＳＡＤＡポリペプチドＫDより上の濃度で存在する場合、高次ホモ多量体化コンジュゲートは水溶液中で安定である。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの濃度がＳＡＤＡポリペプチドＫDより下である場合、ＳＡＤＡコンジュゲートは、生理学的条件下で高次多量体化状態から第１の多量体化状態に移行する。
いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、リンカーを介して結合ドメインに共有結合される。当技術分野で公知の任意の適切なリンカーが使用され得る。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、ポリペプチドリンカーを介して結合ドメインに連結される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドリンカーはＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここで、ｎは反復ＧＧＧＧＳ単位の数を表し、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０またはそれ以上である）の配列である、または該配列を含む。いくつかの実施形態では、結合ドメインはＳＡＤＡポリペプチドに直接融合される。
いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡドメインは、ヒトポリペプチドまたはその断片および／もしくは誘導体である。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡドメインは、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは多量体として安定である。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは非対形成システイン残基を欠く。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは大きな露出した疎水性表面を持たない。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡドメインは、平行または抗逆平行配向で会合することができるヘリックス束を含む構造を有する、または有することが予測される。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは可逆的に多量体化することができる。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡドメインは、四量体化ドメイン、七量体化ドメイン、六量体化ドメインまたは八量体化ドメインである。特定の実施形態では、ＳＡＤＡドメインは四量体化ドメインである。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡドメインは、平行または抗逆平行配向で会合するヘリックス束から各々成る多量体化ドメインから成る。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡドメインは、以下のヒトタンパク質のうちの１つの群から選択される：ｐ５３、ｐ６３、ｐ７３、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｃ（ｈｎＲＮＰＣ）、シナプトソーム関連タンパク質２３（ＳＮＡＰ－２３）のＮ末端ドメイン、ステフィンＢ（シスタチンＢ）、カリウム電位依存性チャネルサブファミリーＫＱＴメンバー４（ＫＣＮＱ４）、またはサイクリンＤ関連タンパク質（ＣＢＦＡ２Ｔ１）。適切なＳＡＤＡドメインの例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３１２３５に記載されている。以下に提供されるのは、例示的ＳＡＤＡドメインのポリペプチド配列である。
ヒトｐ５３四量体化ドメインアミノ酸配列（３２１～３５９）ＫＰＬＤＧＥＹＦＴＬＱＩＲＧＲＥＲＦＥＭＦＲＥＬＮＥＡＬＥＬＫＤＡＱＡＧＫＥＰ（配列番号７４）
ヒトｐ６３四量体化ドメインアミノ酸配列（３９６～４５０）ＲＳＰＤＤＥＬＬＹＬＰＶＲＧＲＥＴＹＥＭＬＬＫＩＫＥＳＬＥＬＭＱＹＬＰＱＨＴＩＥＴＹＲＱＱＱＱＱＱＨＱＨＬＬＱＫＱ（配列番号７５）
ヒトｐ７３四量体化ドメインアミノ酸配列（３４８～３９９）ＲＨＧＤＥＤＴＹＹＬＱＶＲＧＲＥＮＦＥＩＬＭＫＬＫＥＳＬＥＬＭＥＬＶＰＱＰＬＶＤＳＹＲＱＱＱＱＬＬＱＲＰ（配列番号７６）
ヒトＨＮＲＮＰＣ四量体化ドメインアミノ酸配列（１９４～２２０）ＱＡＩＫＫＥＬＴＱＩＫＱＫＶＤＳＬＬＥＮＬＥＫＩＥＫＥ（配列番号７７）
ヒトＳＮＡＰ－２３四量体化ドメインアミノ酸配列（２３～７６）ＳＴＲＲＩＬＧＬＡＩＥＳＱＤＡＧＩＫＴＩＴＭＬＤＥＱＫＥＱＬＮＲＩＥＥＧＬＤＱＩＮＫＤＭＲＥＴＥＫＴＬＴＥＬ（配列番号７８）
ヒトステフィンＢ四量体化ドメインアミノ酸配列（２～９８）ＭＣＧＡＰＳＡＴＱＰＡＴＡＥＴＱＨＩＡＤＱＶＲＳＱＬＥＥＫＥＮＫＫＦＰＶＦＫＡＶＳＦＫＳＱＶＶＡＧＴＮＹＦＩＫＶＨＶＧＤＥＤＦＶＨＬＲＶＦＱＳＬＰＨＥＮＫＰＬＴＬＳＮＹＱＴＮＫＡＫＨＤＥＬＴＹＦ（配列番号７９）
ＫＣＮＱ４四量体化ドメインアミノ酸配列（６１１～６４０）ＤＥＩＳＭＭＧＲＶＶＫＶＥＫＱＶＱＳＩＥＨＫＬＤＬＬＬＧＦＹ（配列番号８０）
ＣＢＦＡ２Ｔ１四量体化ドメインアミノ酸配列（４６２～５２１）ＴＶＡＥＡＫＲＱＡＡＥＤＡＬＡＶＩＮＱＱＥＤＳＳＥＳＣＷＮＣＧＲＫＡＳＥＴＣＳＧＣＮＴＡＲＹＣＧＳＦＣＱＨＫＤＷＥＫＨＨ（配列番号８１）
いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、ｐ５３、ｐ６３、ｐ７３、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｃ（ｈｎＲＮＰＣ）、シナプトソーム関連タンパク質２３（ＳＮＡＰ－２３）のＮ末端ドメイン、ステフィンＢ（シスタチンＢ）、カリウム電位依存性チャネルサブファミリーＫＱＴメンバー４（ＫＣＮＱ４）、またはサイクリンＤ関連タンパク質（ＣＢＦＡ２Ｔ１）の四量体化ドメインである、または該四量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、配列番号７４～８１のいずれか１つに記載されている配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である配列である、または該配列を含む。
Ｆｃ修飾。いくつかの実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体はバリアントＦｃ領域を含み、前記バリアントＦｃ領域は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）に対する前記分子の親和性が変わるように、野生型Ｆｃ領域（または親Ｆｃ領域）と比べて少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む。ただし、これは、Ｆｃ－Ｆｃ受容体相互作用の結晶解析および構造解析、例えば、Sondermann et al., Nature, 406:267-273 (2000)によって開示されている解析に基づく前記バリアントＦｃ領域がＦｃ受容体と直接接触する位置に置換を持たないことを前提としている。Ｆｃ受容体、例えば、ＦｃγＲと直接接触させるＦｃ領域内の位置の例として、アミノ酸２３４～２３９（ヒンジ領域）、アミノ酸２６５～２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸２９７～２９９（Ｃ７Ｅループ）およびアミノ酸３２７～３３２（Ｆ／Ｇ）ループが挙げられる。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸修飾を有するバリアントＦｃ領域を有する本技術の抗ＣＤ１９抗体は、活性化および／または抑制性受容体に対して変更された親和性を有し、前記の１つまたは複数のアミノ酸修飾は、アラニンでのＮ２９７置換またはアラニンでのＫ３２２置換である。
グリコシル化修飾。いくつかの実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、親のＦｃ領域と比較してバリアントグリコシル化を有するＦｃ領域を有する。いくつかの実施形態では、バリアントグリコシル化は、フコースの不在を含み、いくつかの実施形態では、バリアントグリコシル化は、ＧｎＴ１欠損ＣＨＯ細胞における発現に起因する。
いくつかの実施形態では、本技術の抗体は、抗体の機能性、例えば、抗原に対する結合活性を変更することなく、対象の抗原（例えば、ＣＤ１９）と結合する適当な参照抗体に対して修飾されたグリコシル化部位を有し得る。本明細書において、「グリコシル化部位」は、オリゴ糖（すなわち、一緒に連結された２個またはそれより多い単糖を含有する炭水化物）が、特異的に、共有結合によって付着する抗体中に任意の特定のアミノ酸配列を含む。
オリゴ糖側鎖は、通常、Ｎ－またはＯ－連結のいずれかによって抗体の骨格に連結される。Ｎ結合型グリコシル化とは、オリゴ糖部分のアスパラギン残基の側鎖への付着を指す。Ｏ結合型グリコシル化とは、オリゴ糖部分の、ヒドロキシアミノ酸、例えば、セリン、トレオニンへの付着を指す。例えば、フコースおよび末端Ｎ－アセチルグルコサミンを含む特定のオリゴ糖を欠くＦｃ－グリコフォーム（ｈＣＤ１９－ＩｇＧｌｎ）は、特定のＣＨＯ細胞において製造され、増強されたＡＤＣＣエフェクター機能を示し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書において開示される免疫グロブリン関連組成物の炭水化物内容は、グリコシル化部位を付加または欠失することによって修飾される。抗体の炭水化物内容を修飾する方法は、当技術分野で周知であり、本技術内に含まれる、例えば、すべて、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２１８，１４９号、ＥＰ０３５９０９６Ｂ１、米国特許公開第ＵＳ２００２／００２８４８６号、国際特許出願公開ＷＯ０３／０３５８３５、米国特許公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許第６，２１８，１４９号、米国特許第６，４７２，５１１号を参照のこと。いくつかの実施形態では、抗体の１つまたは複数の内因性炭水化物部分を欠失することによって、抗体（またはその関連部分もしくは構成成分）の炭水化物内容が修飾される。いくつかの特定の実施形態では、本技術は、位置２９７をアスパラギンからアラニンに修飾することによって、抗体のＦｃ領域のグリコシル化部位を欠失することを含む。
操作されたグリコフォームは、それだけには限らないが、エフェクター機能を増強または低減することを含むさまざまな目的のために有用であり得る。操作されたグリコフォームは、当業者に公知の任意の方法、例えば、操作された、もしくはバリアント発現株を使用することによって、１種もしくは複数の酵素、例えば、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）との同時発現によって、種々の生物もしくは種々の生物に由来する細胞株においてＦｃ領域を含む分子を発現させることによって、またはＦｃ領域を含む分子が発現された後に炭水化物（複数可）を修飾することによって作製され得る。操作されたグリコフォームを作製する方法は、当技術分野で公知であり、それだけには限らないが、Umana et al., 1999, Nat. Biotechnol. 17: 176-180; Davies et al., 2001, Biotechnol. Bioeng. 74:288-294; Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-26740; Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:3466-3473、米国特許第６，６０２，６８４号、米国特許出願番号第１０／２７７，３７０号、米国特許出願番号第１０／１１３，９２９号、国際特許出願公開ＷＯ００／６１７３９Ａ１、ＷＯ０１／２９２２４６Ａ１、ＷＯ０２／３１１１４０Ａ１、ＷＯ０２／３０９５４Ａ１、ＰＯＴＩＬＬＥＧＥＮＴ（商標）技術（Ｂｉｏｗａ、Ｉｎｃ．ニュージャージー州、プリンストン）、ＧＬＹＣＯＭＡＢ（商標）グリコシル化エンジニアリング技術（ＧＬＹＣＡＲＴ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ、スイス、チューリッヒ）に記載されるものが挙げられ、それらの各々は、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる。例えば、国際特許出願公開ＷＯ００／０６１７３９、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、Okazaki et al., 2004, JMB, 336: 1239-49を参照のこと。
融合タンパク質。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、融合タンパク質である。本技術の抗ＣＤ１９抗体は、第２のタンパク質に融合された場合、抗原性タグとして使用され得る。ポリペプチドに融合され得るドメインの例として、異種シグナル配列だけでなく、その他の異種機能性領域も挙げられる。融合は必ずしも直接である必要はなく、リンカー配列を介して起こる場合もある。さらに、本技術の融合タンパク質はまた、抗ＣＤ１９抗体の特徴を改善するように遺伝子操作され得る。例えば、さらなるアミノ酸、特に、荷電アミノ酸の領域は、宿主細胞からの精製またはその後の取り扱いおよび貯蔵の間の安定性および持続性を改善するために、抗ＣＤ１９抗体のＮ末端に付加され得る。また、ペプチド部分が、精製を促進するために抗ＣＤ１９抗体に付加され得る。このような領域は、抗ＣＤ１９抗体の最終調製に先立って除去され得る。ポリペプチドの取り扱いを促進するためのペプチド部分の付加は、当技術分野ではよく知られており、日常的な技術である。本技術の抗ＣＤ１９抗体は、ペプチドなどのマーカー配列に融合されてもよく、これは、融合されたポリペプチドの精製を促進する。選択実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、ヘキサヒスチジンペプチド、例えば、中でも、その多くが市販されているｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ、Ｉｎｃ．、カリフォルニア州、チャッツワース）において提供されるタグである。Gentz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 821-824, 1989に記載されるように、例えば、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の好都合な精製を提供する。精製に有用な別のペプチドタグ、「ＨＡ」タグは、インフルエンザ血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに対応する。Wilson et al., Cell 37: 767, 1984。
したがって、これらの上記の融合タンパク質のいずれも、本技術のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを使用して遺伝子操作され得る。また、いくつかの実施形態では、本明細書において記載される融合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｖｏで半減期の増大を示す。
ジスルフィド結合された二量体構造（ＩｇＧによる）を有する融合タンパク質は、単量体で分泌されるタンパク質またはタンパク質断片単独と比較して、その他の分子に結合および中和することにおいてより有効であり得る。Fountoulakis et al., J. Biochem. 270: 3958-3964, 1995。
同様に、ＥＰ－Ａ－Ｏ ４６４５３３（カナダ対応物２０４５８６９）には、免疫グロブリン分子の定常領域の種々の部分を含む融合タンパク質が、別のヒトタンパク質またはその断片と一緒に開示されている。多くの場合、融合タンパク質中のＦｃ部分は、療法および診断において有益であり、したがって、例えば、薬物動態特性の改善をもたらし得る。ＥＰ－Ａ０２３２２６２を参照のこと。あるいは、融合タンパク質が発現され、検出され、精製された後にＦｃ部分を欠失または修飾することが望まれることもある。例えば、融合タンパク質が免疫処置の抗原として使用される場合には、Ｆｃ部分が、療法および診断を妨げることもある。創薬では、例えば、ｈＩＬ－５などのヒトタンパク質が、ｈＩＬ－５のアンタゴニストを同定するためのハイスループットスクリーニングアッセイを目的としてＦｃ部分と融合されている。Bennett et al., J. Molecular Recognition 8: 52-58, 1995; Johanson et al., J. Biol. Chem., 270: 9459-9471, 1995。
標識された抗ＣＤ１９抗体。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、標識部分、すなわち、検出可能な基とカップリングされている。抗ＣＤ１９抗体にコンジュゲートされた特定の標識または検出可能な基は、本技術の抗ＣＤ１９抗体のＣＤ１９タンパク質との特異的結合を大幅に干渉しない限り、技術の重大な態様ではない。検出可能な基は、検出可能な物理的または化学的特性を有する任意の材料であり得る。このような検出可能な標識は、イムノアッセイおよびイメージングの分野では十分に開発されている。一般に、このような方法において有用なほとんどあらゆる標識が、本技術に適用され得る。したがって、標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的または化学的手段によって検出可能な任意の組成物である。本技術の実施において有用な標識として、磁性ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標））、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミンなど）、放射標識（例えば、3Ｈ、14Ｃ、35Ｓ、125Ｉ、121Ｉ、131Ｉ、112Ｉｎ、99ｍＴｃ）、マイクロバブルなどのその他の造影剤（超音波イメージングのための）、18Ｆ、11Ｃ、15Ｏ（陽電子放射型断層撮影のための）、99mＴＣ、111Ｉｎ（単一光子放出型コンピュータ断層撮影のための）、酵素（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼおよびＥＬＩＳＡにおいて一般に使用されるその他のもの）およびコロイド金などの熱量測定標識または着色ガラスまたはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）ビーズが挙げられる。このような標識の使用を記載する特許として、米国特許第３，８１７，８３７号、同３，８５０，７５２号、同３，９３９，３５０号、同３，９９６，３４５号、同４，２７７，４３７号、同４，２７５，１４９号および同４，３６６，２４１号が挙げられ、各々、すべての目的でその全文が参照により本明細書に組み込まれる。またHandbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals (6th Ed., Molecular Probes, Inc., Eugene OR.)も参照のこと。
標識は、当技術分野で周知の方法に従って、アッセイの所望の成分に直接的にまたは間接的にカップリングされている。上記で示されたように、広範な標識が使用されてもよく、標識の選択は、必要な感受性、化合物とのコンジュゲーションの容易さ、安定性必要条件、入手可能な計測手段および廃棄規定などの因子に応じて変わる。
非放射性標識は、間接的な手段によって付着されることが多い。一般に、リガンド分子（例えば、ビオチン）は、分子に共有結合によって結合される。次いで、リガンドは、本質的に検出可能であるか、または検出可能な酵素、蛍光化合物もしくは化学発光化合物などのシグナル系に共有結合によって結合された抗リガンド（例えば、ストレプトアビジン）分子と結合する。いくつかのリガンドおよび抗リガンドが使用され得る。リガンドが、中性抗リガンド、例えば、ビオチン、チロキシンおよびコルチゾールを有する場合には、標識された天然に存在する抗リガンドとともに使用され得る。あるいは、任意のハプテン性または抗原性化合物が、抗体、例えば、抗ＣＤ１９抗体と組み合わせて使用され得る。
分子はまた、シグナル生成化合物に直接的に、例えば、酵素またはフルオロフォアとのコンジュゲーションによってコンジュゲートされ得る。標識として対象の酵素は、主に、ヒドロラーゼ、特に、ホスファターゼ、エステラーゼおよびグリコシダーゼまたは酸化還元酵素、特に、ペルオキシダーゼとなる。標識部分として有用である蛍光化合物として、それだけには限らないが、例えば、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロンなどが挙げられる。標識部分として有用である化学発光化合物として、それだけには限らないが、例えば、ルシフェリンおよび２，３－ジヒドロフタラジンジオン、例えば、ルミノールが挙げられる。使用され得る、種々の標識またはシグナル生成系の概要については、米国特許第４，３９１，９０４を参照のこと。
標識を検出する手段は、当業者に周知である。したがって、例えば、標識が放射性標識である場合には、検出のための手段として、シンチレーションカウンターまたはオートラジオグラフィーにおけるような写真フィルムが挙げられる。標識が蛍光標識である場合には、光の適当な波長を用いて蛍光色素を励起することおよび得られた蛍光を検出することによって検出され得る。蛍光は、写真フィルムによって、電荷結合素子（ＣＣＤ）または光電子増倍管などのような電子検出器を使用することによって視覚的に検出され得る。同様に、酵素的標識は、酵素に適当な物質を提供することおよび得られた反応生成物を検出することによって検出され得る。最後に、簡単な比色標識は、標識と関連する色を観察することによって簡単に検出され得る。したがって、種々の尿試験紙アッセイにおいて、コンジュゲートされた金はピンク色に見え、一方で、種々のコンジュゲートされたビーズは、ビーズの色に見える。
いくつかのアッセイ形式は、標識された構成成分の使用を必要としない。例えば、凝集アッセイは、標識抗体、例えば、抗ＣＤ１９抗体の存在を検出するために使用され得る。この場合には、抗原によってコーティングされた粒子が、標的抗体を含むサンプルによって凝集される。この形式では、標識されることを必要とする構成成分はなく、標識抗体の存在は、簡単な目視検査によって検出される。
Ｂ．本技術の抗ＣＤ１９抗体の同定および特性決定
本技術の抗ＣＤ１９抗体を同定および／またはスクリーニングする方法。ＣＤ１９タンパク質に対して所望の特異性を有するもの（例えば、配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基、またはＣＤ１９ ｍＲＮＡのエキソン２によってコードされるポリペプチドを含むエピトープと結合するもの）について、ＣＤ１９ポリペプチドに対する抗体を同定およびスクリーニングするのに有用な方法としては、当技術分野内で公知の任意の免疫学的媒介法が挙げられる。例えば、フローサイトメトリーおよび免疫蛍光または免疫組織化学が使用され得る。免疫応答の構成成分は、当業者に周知である種々の方法によってｉｎ ｖｉｔｒｏで検出され得る。例えば、（１）細胞傷害性Ｔリンパ球は、放射活性標識された標的細胞とともにインキュベートされ、これらの標的細胞の溶解は、放射活性の放出によって検出され得る、（２）ヘルパーＴリンパ球は、抗原および抗原提示細胞とともにインキュベートされ、サイトカインの合成および分泌は、標準方法によって測定され得る（Windhagen A et al., Immunity, 2: 373-80, 1995）、（３）抗原提示細胞は、全タンパク質抗原とともにインキュベートされ、ＭＨＣ上のその抗原の提示は、Ｔリンパ球活性化アッセイまたは生物物理学的方法のいずれかによって検出され得る（Harding et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 86: 4230-4, 1989）、（４）肥満細胞は、そのＦｃ－イプシロン受容体と架橋結合する試薬とともにインキュベートされ、ヒスタミン放出は、酵素イムノアッセイによって測定され得る（Siraganian et al., TIPS, 4: 432-437, 1983）および（５）酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）。
同様に、モデル生物（例えば、マウス）またはヒト対象いずれかにおける免疫応答の生成物はまた、当業者に周知である種々の方法によって検出され得る。例えば、（１）ワクチン接種に応じた抗体の製造は、臨床検査室において現在使用される標準方法、例えば、ＥＬＩＳＡによって容易に検出され得る、（２）免疫細胞の炎症の部位への遊走は、皮膚の表面を引っ掻くことおよび引っ掻き部位にわたって遊走細胞を捕捉するために滅菌容器を置くことによって検出され得る（Peters et al., Blood, 72: 1310-5, 1988）、（３）マイトジェンまたは混合リンパ球反応物に応じた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の増殖は、3Ｈ－チミジンを使用して測定され得る、（４）ＰＢＭＣ中の顆粒球、マクロファージおよびその他の貪食細胞の食作用は、ＰＢＭＣを標識された粒子と一緒にウェル中に入れることによって測定され得る（Peters et al., Blood, 72: 1310-5, 1988）および（５）免疫系細胞の分化は、ＰＢＭＣをＣＤ４およびＣＤ８などのＣＤ分子に対する抗体を用いて標識することおよびこれらのマーカーを発現するＰＢＭＣの画分を測定することによって測定され得る。
一実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、複製可能な遺伝子パッケージの表面でのＣＤ１９タンパク質のディスプレイを使用して選択される。例えば、米国特許第５，５１４，５４８号、同５，８３７，５００号、同５，８７１，９０７号、同５，８８５，７９３号、同５，９６９，１０８号、同６，２２５，４４７号、同６，２９１，６５０号、同６，４９２，１６０号、ＥＰ５８５２８７、ＥＰ６０５５２２、ＥＰ６１６６４０、ＥＰ１０２４１９１、ＥＰ５８９８７７、ＥＰ７７４５１１、ＥＰ８４４３０６を参照のこと。所望の特異性を有する結合分子をコードするファージミドゲノムを含有する繊維状バクテリオファージ粒子を製造／選択するのに有用な方法は、記載されている。例えば、ＥＰ７７４５１１、ＵＳ５８７１９０７、ＵＳ５９６９１０８、ＵＳ６２２５４４７、ＵＳ６２９１６５０、ＵＳ６４９２１６０を参照のこと。
いくつかの実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、酵母宿主細胞の表面上のＣＤ１９タンパク質のディスプレイを使用して選択される。酵母表面ディスプレイによるＦｖポリペプチドの単離に有用な方法は、Kieke et al., Protein Eng. 1997 Nov; 10(11): 1303-10によって記載されている。
いくつかの実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、リボソームディスプレイを使用して選択される。リボソームディスプレイを使用してペプチドライブラリー中でリガンドを同定するのに有用な方法は、Mattheakis et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 9022-26, 1994およびHanes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 4937-42, 1997によって記載されている。
特定の実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９ペプチドのｔＲＮＡディスプレイを使用して選択される。ｔＲＮＡディスプレイを使用したリガンドのｉｎ ｖｉｔｒｏ選択に有用な方法は、Merryman et al., Chem. Biol., 9: 741-46, 2002によって記載されている。
一実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、ＲＮＡディスプレイを使用して選択される。ＲＮＡディスプレイライブラリーを使用したペプチドおよびタンパク質の選択に有用な方法は、Roberts et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA、94: 12297-302、1997；およびNemoto et al., FEBS Lett., 414: 405-8, 1997によって記載されている。非天然ＲＮＡディスプレイライブラリーを使用したペプチドおよびタンパク質の選択に有用な方法は、Frankel et al., Curr. Opin. Struct. Biol., 13: 506-12、2003によって記載されている。
いくつかの実施形態では、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、グラム陰性菌のペリプラズムで発現され、標識ＣＤ１９タンパク質と混合される。ＷＯ ０２／３４８８６を参照のこと。ＣＤ１９タンパク質に対して親和性を有する組換えポリペプチドを発現するクローンでは、Harvey et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 22: 9193-98 2004および米国特許公開第２００４／００５８４０３号に記載されているように、抗ＣＤ１９抗体と結合する標識ＣＤ１９タンパク質の濃度が増大し、細胞をライブラリーのその他の部分から単離できるようになる。
所望の抗ＣＤ１９抗体の選択後、当業者に公知の任意の技術、例えば、原核細胞または真核細胞発現などによって前記抗体が大容量で製造され得ることが企図される。例えば、それだけには限らないが、抗ＣＤ１９ハイブリッド抗体または断片である抗ＣＤ１９抗体は、抗体重鎖をコードする発現ベクターを構築するための従来技術を使用して製造されてもよく、ＣＤＲおよび必要に応じて、元の種の抗体結合特異性を保持するために必要である可変領域フレームワークの最小部分（本明細書において記載される技術に従って遺伝子操作されるので）が、元の種の抗体に由来し、抗体の残部が、本明細書において記載されるように操作される標的種免疫グロブリンに由来し、それによって、ハイブリッド抗体重鎖の発現のためのベクターが生成する。
ＣＤ１９結合の測定。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合アッセイとは、ＣＤ１９タンパク質および抗ＣＤ１９抗体が、ＣＤ１９タンパク質と抗ＣＤ１９抗体間の結合に適した条件下で混合され、ＣＤ１９タンパク質と抗ＣＤ１９抗体間の結合の量を評価するアッセイ形式を指す。結合の量はＣＤ１９タンパク質の非存在下での結合の量、非特異的免疫グロブリン組成物の存在下での結合の量または両方であり得る適した対照と比較される。結合の量は、任意の適した方法によって評価され得る。結合アッセイ法として、例えば、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、シンチレーション近接アッセイ、蛍光エネルギー移動アッセイ、液体クロマトグラフィー、膜濾過アッセイなどが挙げられる。抗ＣＤ１９抗体とのＣＤ１９タンパク質結合の直接測定のための生物物理学的アッセイとして、例えば、核磁気共鳴、蛍光、蛍光偏光、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡＣＯＲＥチップ）などがある。特異的結合は、当技術分野で公知の標準アッセイ、例えば、放射性リガンド結合アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＦＲＥＴ、免疫沈降、ＳＰＲ、ＮＭＲ（２Ｄ－ＮＭＲ）、質量分析などによって決定される。候補抗ＣＤ１９抗体の特異的結合が、候補抗ＣＤ１９抗体の非存在下で観察される結合よりも少なくとも１パーセント多い場合には、候補抗ＣＤ１９抗体は、本技術の抗ＣＤ１９抗体として有用である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９タンパク質は、細胞外ドメイン（例えば、ＣＤ１９の２つのＩｇ様Ｃ２ループ）を含有するＣＤ１９タンパク質、または配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基を含むＣＤ１９ポリペプチドである。
本技術の抗ＣＤ１９抗体の使用
全般。本技術の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９タンパク質の局在性および／または定量化に関する当技術分野で公知の方法において有用である（例えば、適当な生理学的サンプル内のＣＤ１９タンパク質のレベルの測定において使用するため、診断法において使用するため、ポリペプチドのイメージングにおいて使用するためなど）。本技術の抗体は、アフィニティークロマトグラフィー、免疫蛍光、フローサイトメトリー、免疫組織化学、または免疫沈降などの標準的な技術によってＣＤ１９タンパク質を単離または検出するのに有用である。本技術の抗ＣＤ１９抗体は、生物学的サンプル、例えば、哺乳動物血清または細胞からの天然の免疫反応性ＣＤ１９タンパク質、および宿主系において発現される組換えによって製造された免疫反応性ＣＤ１９タンパク質の精製を促進することができる。さらに、本開示の抗ＣＤ１９抗体は、免疫反応性ポリペプチドの発現の存在量およびパターンを評価するために、免疫反応性ＣＤ１９タンパク質（例えば、血漿、細胞溶解物または細胞上清中の）を検出するのに使用することができる。本技術の抗ＣＤ１９抗体は、臨床試験手順の一部として組織における免疫反応性ＣＤ１９タンパク質レベルをモニタリングするために、例えば、所与の治療計画の有効性を判定するために診断的に使用され得る。上記で記載されるように、検出は、本技術の抗ＣＤ１９抗体を、検出可能な物質にカップリングすること（すなわち、物理的に連結すること）によって促進され得る。
ＣＤ１９タンパク質の検出。生物学的サンプル中の免疫反応性ＣＤ１９タンパク質の有無を検出するための例示的方法は、試験対象から生物学的サンプルを得ることおよび生物学的サンプルを、免疫反応性ＣＤ１９タンパク質を検出可能な本技術の抗ＣＤ１９抗体と接触させ、その結果、生物学的サンプルにおいて免疫反応性ＣＤ１９タンパク質の存在が検出されることを含む。検出は、抗体に付着された検出可能な標識によって達成され得る。
用語「標識された」は、抗ＣＤ１９抗体に関して、検出可能な物質を、抗体にカップリングすること（すなわち、物理的に連結すること）による抗体の直接標識ならびに二次抗体などの直接標識される別の化合物との反応性による抗体の間接標識を包含するように意図される。間接標識の例として、蛍光標識二次抗体を使用する一次抗体の検出および蛍光標識ストレプトアビジンを用いて検出され得るようなビオチンを用いるＤＮＡプローブの末端標識が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書において開示される抗ＣＤ１９抗体は、１つまたは複数の検出可能な標識にコンジュゲートされる。このような使用のために、抗ＣＤ１９抗体は、発色性、酵素的、放射性同位元素性、同位元素的、蛍光性、毒性、化学発光性、核磁気共鳴造影剤またはその他の標識の共有結合または非共有結合による付着によって検出可能に標識され得る。
適した発色性標識の例として、ジアミノベンジジンおよび４－ヒドロキシアゾ－ベンゼン－２－カルボン酸が挙げられる。適した酵素標識の例として、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌のヌクレアーゼ、Δ－５－ステロイドイソメラーゼ、酵母－アルコールデヒドロゲナーゼ、α－グリセロールリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－６リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。
適した放射性同位元素標識の例として、3Ｈ、111Ｉｎ、125Ｉ、131Ｉ、32Ｐ、35Ｓ、14Ｃ、51Ｃｒ、57Ｔｏ、58Ｃｏ、59Ｆｅ、75Ｓｅ、152Ｅｕ、90Ｙ、67Ｃｕ、217Ｃｉ、211Ａｔ、212Ｐｂ、47Ｓｃ、109Ｐｄなどが挙げられる。111Ｉｎは、肝臓による125Ｉまたは131Ｉ標識化ＣＤ１９結合性抗体の脱ハロゲン化の問題を避けるので、ｉｎ ｖｉｖｏイメージングが使用される場合には、例示的同位元素である。さらに、この同位元素は、イメージングのためのより好都合なガンマ放射エネルギーを有する（Perkins et al, Eur. J. Nucl. Med. 70:296-301 (1985); Carasquillo et al., J. Nucl. Med. 25:281-287 (1987)）。例えば、１－（Ｐ－イソチオシアナトベンジル）－ＤＰＴＡを用いてモノクローナル抗体にカップリングされた111Ｉｎは、非腫瘍性組織、特に、肝臓にはほとんど取り込まれないことを示し、腫瘍局在性の特異性を増強する（Esteban et al., J. Nucl. Med. 28:861-870(1987)）。適した非放射性同位元素標識の例として、157Ｇｄ、55Ｍｎ、162Ｄｙ、52Ｔｒおよび56Ｆｅが挙げられる。
適した蛍光標識の例として、152Ｅｕ標識、フルオレセイン標識、イソチオシアネート標識、ローダミン標識、フィコエリトリン標識、フィコシアニン標識、アロフィコシアニン標識、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）標識、ｏ－フタルデヒド（ｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）標識およびフルオレサミン標識が挙げられる。適した毒素標識の例として、ジフテリア毒素、リシンおよびコレラ毒素が挙げられる。
化学発光標識の例として、ルミノール標識、イソルミノール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジニウム塩標識、オキサレートエステル標識、ルシフェリン標識、ルシフェラーゼ標識およびエクオリン標識が挙げられる。核磁気共鳴造影剤の例として、重金属核、例えば、Ｇｄ、Ｍｎおよび鉄が挙げられる。
本技術の検出方法は、生物学的サンプルにおいてｉｎ ｖｉｔｒｏならびにｉｎ ｖｉｖｏで免疫反応性ＣＤ１９タンパク質を検出するために使用され得る。免疫反応性ＣＤ１９タンパク質の検出のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法としては、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット、免疫組織化学、免疫沈降、ラジオイムノアッセイ、および免疫蛍光が挙げられる。さらに、免疫反応性ＣＤ１９タンパク質の検出のためのｉｎ ｖｉｖｏ技術は、標識された抗ＣＤ１９抗体を対象へ導入することを含む。例えば、抗ＣＤ１９抗体は、標準イメージング技術によって対象におけるその存在および位置が検出され得る放射活性マーカーを用いて標識されてもよい。一実施形態では、生物学的サンプルは、試験対象由来のＣＤ１９タンパク質分子を含有する。
イムノアッセイおよびイメージング。本技術の抗ＣＤ１９抗体は、抗体ベース技術を使用して生物学的サンプル（例えば、ヒト血漿）において免疫反応性ＣＤ１９タンパク質レベルをアッセイするために使用され得る。例えば、組織におけるタンパク質発現が、古典的免疫組織学的方法を用いて研究され得る。Jalkanen, M. et al., J. Cell. Biol. 101: 976-985, 1985; Jalkanen, M. et al., J. Cell. Biol. 105: 3087-3096, 1987。タンパク質遺伝子発現を検出するのに有用なその他の抗体ベースの方法としては、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）などのイムノアッセイが挙げられる。適した抗体アッセイ標識は、当技術分野で公知であり、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識および放射性同位元素またはその他の放射活性物質、例えば、ヨウ素（125Ｉ、121Ｉ、131Ｉ）、炭素（14Ｃ）、硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3Ｈ）、インジウム（112Ｉｎ）およびテクネチウム（99ｍＴｃ）ならびに蛍光標識、例えば、フルオレセイン、ローダミンおよび緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）ならびにビオチンが挙げられる。
生物学的サンプルにおいて免疫反応性ＣＤ１９タンパク質レベルをアッセイすることに加えて、本技術の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９のｉｎ ｖｉｖｏイメージングに使用され得る。この方法にとって有用な抗体として、Ｘ－Ｘ線撮影、ＮＭＲまたはＥＳＲによって検出可能なものが挙げられる。Ｘ－Ｘ線撮影のために、適した標識として、検出可能な放射線を発するが、対象にとって明白に有害ではないバリウムまたはセシウムなどの放射性同位元素が挙げられる。ＮＭＲおよびＥＳＲにとって適したマーカーとして、重水素などの検出可能な特徴的なスピンを有するものが挙げられ、これは、関連ｓｃＦｖ クローンの栄養分を標識することによって、抗ＣＤ１９抗体中に組み込まれ得る。
適当な検出可能なイメージング部分、例えば、放射性同位元素（例えば、131Ｉ、112Ｉｎ、99ｍＴｃ）、放射性不透過性物質または核磁気共鳴によって検出可能な材料を用いて標識されている抗ＣＤ１９抗体が、対象中に導入される（例えば、非経口的に、皮下にまたは腹膜内に）。対象の大きさおよび使用されるイメージングシステムが、診断画像を作成するのに必要なイメージング部分の量を左右するということは、当技術分野では理解されよう。放射性同位元素部分の場合には、ヒト対象のためには、注入される放射能の量は、普通、約５～２０ミリキュリーの99ｍＴｃの範囲となる。標識された抗ＣＤ１９抗体は次いで、特異的標的ポリペプチドを含有する細胞の位置に蓄積する。例えば、標識された本技術の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９タンパク質が局在した細胞および組織において対象内に蓄積する。
したがって、本技術は、医学的状態の診断方法であって、（ａ）個体の細胞または体液において本技術の抗ＣＤ１９抗体の結合を測定することによって、免疫反応性ＣＤ１９タンパク質の発現をアッセイすることと、（ｂ）サンプル中に存在する免疫反応性ＣＤ１９タンパク質の量を、標準参照と比較することとを含み、標準と比較した免疫反応性ＣＤ１９タンパク質レベルの増大または減少が、医学的状態を示す方法を提供する。
アフィニティー精製。本技術の抗ＣＤ１９抗体は、免疫反応性ＣＤ１９タンパク質をサンプルから精製するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、固相支持体上に固定化されている。このような固相支持体の例として、ポリカーボネートなどのプラスチック、アガロースおよびセファロースなどの複合糖質、ポリアクリルアミドおよびラテックスビーズなどのアクリル樹脂が挙げられる。抗体をこのような固相支持体にカップリングする技術は、当技術分野で周知である（Weir et al., “Handbook of Experimental Immunology” 4th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxford, England, Chapter 10 (1986); Jacoby et al., Meth. Enzym. 34 Academic Press, N.Y. (1974)）。
抗原を抗体－支持体マトリックスに結合させる最も簡単な方法は、カラム中にビーズを集め、抗原溶液をカラムに流すことである。この方法の効率は、固定化抗体と抗原の間の接触時間に応じて変わり、これは低流速を使用することによって延長され得る。固定化抗体は、抗原を、それが流れ過ぎるときに捕捉する。あるいは、抗原は、抗原溶液を支持体（例えば、ビーズ）と混合することおよびスラリーを回転または振盪することによって抗体－支持体マトリックスと接触されてもよく、これによって、抗原と固定化抗体の間の最大接触が可能となる。結合反応が完了した後、ビーズの回収のために、スラリーはカラムに通される。適した洗浄バッファーを使用してビーズが洗浄され、次いで、純粋なまたは実質的に純粋な抗原が溶出される。
対象の抗体またはポリペプチドは、ビーズなどの固相支持体にコンジュゲートされ得る。さらに、第１のビーズなどの固相支持体はまた、必要に応じて、ポリペプチドの支持体とのコンジュゲーションのための本明細書において開示されるものを含む任意の適した手段によって、第２のビーズまたはその他の支持体であり得る第２の固相支持体にコンジュゲートされてもよい。したがって、ポリペプチドの固相支持体とのコンジュゲーションに関して本明細書において開示されるコンジュゲーション方法および手段のいずれも、第１の支持体の第２の支持体とのコンジュゲーションに適用されてもよく、第１および第２の固相支持体は、同一である場合も異なっている場合もある。
ポリペプチドを固相支持体とコンジュゲートさせるために使用するための架橋結合剤であり得る適当なリンカーとして、支持体の表面上に存在する官能基と、またはポリペプチドとまたは両方と反応し得る種々の物質が挙げられる。架橋結合物質として有用である試薬として、ホモ二機能性、特に、ヘテロ二機能性試薬が挙げられる。有用な二機能性架橋結合物質として、それだけには限らないが、Ｎ－ＳＩＡＢ、ジマレイミド、ＤＴＮＢ、Ｎ－ＳＡＴＡ、Ｎ－ＳＰＤＰ、ＳＭＣＣおよび６－ＨＹＮＩＣが挙げられる。架橋結合物質は、ポリペプチドと固相支持体の間の選択的に切断可能な結合を提供するように選択され得る。例えば、感光性架橋剤、例えば、３－アミノ－（２－ニトロフェニル）プロピオン酸が、固相支持体からポリペプチドを切断するための手段として使用され得る（Brown et al., Mol. Divers, pp, 4-12 (1995); Rothschild et al., Nucl. Acids Res., 24:351-66 (1996)および米国特許第５，６４３，７２２号）。その他の架橋結合試薬は当技術分野で周知である（例えば、Wong (1991)、前掲;およびHermanson (1996)、前掲を参照のこと）。
抗体またはポリペプチドは、ビーズなどの固相支持体上に、カルボキシル基官能基付与されたビーズと、ポリペプチドのアミノ末端の間で形成された共有結合アミド結合によって、または逆に、アミノ基官能基付与されたビーズと、ポリペプチドのカルボキシル末端の間で形成された共有結合アミド結合によって固定化され得る。さらに、二機能性トリチルリンカーは、支持体、例えば、Ｗａｎｇ樹脂などの樹脂上の４－ニトロフェニル活性エステルに、アミノ樹脂による樹脂上のアミノ基またはカルボキシル基によって付着され得る。二機能性トリチルアプローチを使用すると、固相支持体は、ポリペプチドが切断され、除去され得ることを確実にするために、ギ酸またはトリフルオロ酢酸などの揮発性酸を用いる処置を必要とし得る。このような場合には、ポリペプチドは、固相支持体のウェルの底に、または固相支持体の平坦な表面上にビーズのないパッチとして堆積されてもよい。マトリックス溶液を加えた後、ポリペプチドはＭＳ中に放出され得る。
ポリペプチドからアミノ連結されたトリチル基を切断するために、揮発性酸または適当なマトリックス溶液、例えば、３－ＨＰＡを含有するマトリックス溶液を使用することによって、酸不安定性リンカーとして疎水性トリチルリンカーも利用され得る。酸不安定性はまた、変更され得る。例えば、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルまたはトリメトキシトリチルは、ポリペプチドの適当なｐ－置換された、またはより酸不安定性のトリチルアミン誘導体に変更されてもよい、すなわち、トリチルエーテルおよびトリチルアミン結合がポリペプチドに行われる。したがって、ポリペプチドは、例えば、疎水性引力を破壊することによって、または必要に応じて、３－ＨＰＡなどのマトリックスが酸として作用する通常のＭＳ条件下を含む酸性条件下でトリチルエーテルもしくはトリチルアミン結合を切断することによって、疎水性リンカーから除去され得る。
直交性に切断可能なリンカーもまた、第１の固相支持体、例えば、ビーズの第２の固相支持体への結合にとって、または対象のポリペプチドの固相支持体への結合にとって有用であり得る。このようなリンカーを使用すると、第１の固相支持体、例えば、ビーズが第２の固相支持体から、ポリペプチドを支持体から切断することなく選択的に切断され得、次いで、後の時間にポリペプチドがビーズから切断され得る。例えば、ＤＴＴなどの還元剤を使用して切断され得るジスルフィドリンカーが、ビーズを第２の固相支持体に結合するために使用されてもよく、ポリペプチドを支持体に固定化するために酸切断可能な二機能性トリチル基が使用されてもよい。必要に応じて、例えば、第１および第２の支持体間の連結は無傷なままで、ポリペプチドの固相支持体との連結が、最初に切断され得る。トリチルリンカーは、共有結合または疎水性コンジュゲーションを提供し得るが、コンジュゲーションの性質に関わらず、トリチル基は、酸性条件において容易に切断される。
例えば、ビーズは、ビーズの固相支持体との高密度結合、またはポリペプチドのビーズとの高密度結合が促進されるような、長さおよび科学的性質を有するように選択され得る連結基によって第２の支持体に結合され得る。このような連結基は、例えば、「ツリー状」構造を有し、それによって、固相支持体上の付着部位あたりに多様な官能基を提供し得る。このような連結基の例として、ポリリジン、ポリグルタミン酸、ペンタエリスロールおよびトリス－ヒドロキシ－アミノメタンが挙げられる。
非共有結合関連。非共有結合相互作用によって、抗体またはポリペプチドは、固相支持体にコンジュゲートされ得る、または第１の固相支持体はまた、第２の固相支持体にコンジュゲートされ得る。例えば、磁化されることが可能である強磁性材料で作製された磁性ビーズは、磁性固相支持体に引き寄せられ得る、また磁場の除去によって支持体から放出され得る。あるいは、固相支持体は、イオン性または疎水性部分を提供されてもよく、これは、それぞれ、イオン性または疎水性部分の、ポリペプチド、例えば、付着されたトリチル基を含有するポリペプチドとの、または疎水性を有する第２の固相支持体との相互作用を可能にし得る。
固相支持体はまた、特異的結合対のメンバーを提供されてもよく、したがって、相補性結合部分を含有するポリペプチドまたは第２の固相支持体にコンジュゲートされ得る。例えば、アビジンでまたはストレプトアビジンでコーティングされたビーズは、ビオチン部分が組み込まれたポリペプチドに、またはビオチンもしくはビオチンの誘導体、例えば、イミノビオチンでコーティングされた第２の固相支持体に結合され得る。
本明細書において開示される、そうでなければ当技術分野で公知の結合メンバーのいずれも逆転されてもよいということは理解されなくてはならない。したがって、ビオチンは、例えば、ポリペプチドまたは固相支持体のいずれかに組み込まれてもよく、逆に、アビジンまたはその他のビオチン結合部分がそれぞれ支持体またはポリペプチドに組み込まれる。本明細書において使用するために考慮されるその他の特異的結合対として、それだけには限らないが、ホルモンおよびその受容体、酵素およびその基質、ヌクレオチド配列およびその相補性配列、抗体および特異的に相互作用する抗原および当業者に公知のその他のこのような対が挙げられる。
Ａ．本技術の抗ＣＤ１９抗体の診断的使用
全般。本技術の抗ＣＤ１９抗体は、診断方法において有用である。そのようなものとして、本技術は、対象におけるＣＤ１９活性の診断において抗体を使用する方法を提供する。本技術の抗ＣＤ１９抗体は、任意のレベルのエピトープ結合特異性およびＣＤ１９タンパク質に対する極めて高い結合親和性を有するように選択され得る。一般に、イムノアッセイでは標的ポリペプチドを除去することなく非特異的に結合した材料を除去するために、抗体の結合親和性が高いほどよりストリンジェントな洗浄条件が実施され得る。したがって、診断アッセイにおいて有用な本技術の抗ＣＤ１９抗体は、普通、約１０8Ｍ-1、１０9Ｍ-1、１０10Ｍ-1、１０11Ｍ-1または１０12Ｍ-1の結合親和性を有する。さらに、診断試薬として使用される抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも１２時間、少なくとも５（５）時間または少なくとも１（１）時間で標準条件下で平衡に達するための十分な動力学的結合速度（ｏｎ－ｒａｔｅ）を有することが望ましい。
抗ＣＤ１９抗体は、種々の標準アッセイ形式で免疫反応性ＣＤ１９タンパク質を検出するために使用され得る。このような形式として、免疫沈降、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイおよび免疫測定アッセイが挙げられる。Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Publications, New York, 1988)、米国特許第３，７９１，９３２号、同３，８３９，１５３号、同３，８５０，７５２号、同３，８７９，２６２号、同４，０３４，０７４号、同３，７９１，９３２号、同３，８１７，８３７号、同３，８３９，１５３号、同３，８５０，７５２号、同３，８５０，５７８号、同３，８５３，９８７号、同３，８６７，５１７号、同３，８７９，２６２号、同３，９０１，６５４号、同３，９３５，０７４号、同３，９８４，５３３号、同３，９９６，３４５号、同４，０３４，０７４号および同４，０９８，８７６号を参照のこと。生物学的サンプルは、対象の任意の組織または体液から得ることができる。特定の実施形態では、対象は、前記癌の初期段階である。一実施形態では、癌の初期段階は、対象から得られたサンプルにおけるＣＤ１９タンパク質のレベルまたは発現パターンによって決定される。特定の実施形態では、サンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、羊水、脳脊髄液（ＣＳＦ）および生検された身体組織からなる群から選択される。
免疫測定またはサンドイッチアッセイは、本技術の診断方法のための１つの形式である。米国特許第４，３７６，１１０号、同４，４８６，５３０号、同５，９１４，２４１号および同５，９６５，３７５号を参照のこと。このようなアッセイは、１種の抗体、例えば、抗ＣＤ１９抗体または固相に固定化された抗ＣＤ１９抗体の集団および別の抗ＣＤ１９抗体または溶液中の抗ＣＤ１９抗体の集団を使用する。通常、溶液抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体の集団は標識される。抗体集団が使用される場合、集団は、標的ポリペプチド内の異なるエピトープ特異性と結合する抗体を含有し得る。したがって、固相および溶液抗体の両方に同一集団が使用され得る。抗ＣＤ１９モノクローナル抗体が使用される場合には、固体および溶液相に対して、異なる結合特異性を有する第１および第２のＣＤ１９モノクローナル抗体が使用される。固相（「捕捉」とも呼ばれる）および溶液（「検出」とも呼ばれる）抗体は標的抗原と、いずれかの順序でまたは同時に接触され得る。固相抗体が第１に接触される場合には、アッセイは、フォワードアッセイであると呼ばれる。逆に、溶液抗体が第１に接触される場合には、アッセイは、リバースアッセイであると呼ばれる。標的が両抗体に同時に接触される場合には、アッセイは、同時アッセイと呼ばれる。ＣＤ１９タンパク質を、抗ＣＤ１９抗体と接触させた後、サンプルは、普通、約１０分～約２４時間で変わる期間、普通、約１時間である期間の間インキュベートされる。次いで、洗浄ステップが実施されて、診断試薬として使用されている抗ＣＤ１９抗体に特異的に結合していないサンプルの構成成分が除去される。固相および溶液抗体が別個のステップで結合される場合には、洗浄は、いずれかまたは両方の結合ステップの後に実施されてもよい。洗浄後、結合は、通常、標識された溶液抗体の結合によって固相に連結された標識を検出することによって定量化される。普通、抗体または抗体の集団の所与の対および所与の反応条件について、既知濃度の標的抗原を含有するサンプルから較正曲線が準備される。試験されているサンプル中の免疫反応性ＣＤ１９タンパク質の濃度が次いで、較正曲線（すなわち、標準曲線）からの補間から読み取られる。解析物は、平衡で結合した標識された溶液抗体の量から、または平衡が到達される前の一連の時点での結合した標識された溶液抗体の動力学的測定によって測定され得る。このような曲線の傾斜は、サンプル中のＣＤ１９タンパク質の濃度の尺度である。
上記の方法において使用するための適した支持体として、例えば、ニトロセルロースメンブレン、ナイロンメンブレンおよび誘導体化ナイロンメンブレンならびにまたアガロースなどの粒子、デキストランベースゲル、尿試験紙、微粒子、ミクロスフェア、磁性粒子、試験管、マイクロタイターウェル、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ニュージャージー州、ピスカタウェイ）などが挙げられる。固定化は、吸収によってでも、共有結合的付着によってでもよい。抗ＣＤ１９抗体が、アビジンなどの表面に結合されたリンカーへの付着のためにビオチンなどのリンカー分子につながれてもよい。
いくつかの実施形態では、本開示は、診断薬にコンジュゲートされた本技術の抗ＣＤ１９抗体を提供する。診断薬は、放射性または非放射性標識、造影剤（例えば、磁気共鳴イメージング、コンピュータ断層撮影法または超音波のため）を含む場合があり、放射性標識は、ガンマ－、ベータ－、アルファ－、オージェ電子－、または陽電子－放射性同位元素であり得る。診断薬は、抗体部分、すなわち、抗体または抗体断片または部分断片にコンジュゲートされて投与される分子であり、抗原を含有する細胞の位置を決定することによって疾患の診断または検出において有用である。
有用な診断薬として、それだけには限らないが、放射性同位元素、色素（例えば、ビオチン－ストレプトアビジン複合体を用いる）、造影剤、蛍光化合物または分子および磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）のための増強剤（例えば、常磁性イオン）が挙げられる。米国特許第６，３３１，１７５号には、ＭＲＩ技術およびＭＲＩ増強剤にコンジュゲートされた抗体の調製が記載されており、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、診断薬は、放射性同位元素、磁気共鳴イメージングにおいて使用するための増強剤および蛍光化合物からなる群から選択される。抗体成分に放射性金属または常磁性イオンを負荷するために、それを、イオンを結合するために複数のキレート基が付着される長いテールを有する試薬と反応させることが必要である場合がある。このようなテールは、ポリリジン、多糖またはキレート基、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビスーチオセミカルバゾン、ポリオキシムおよびこの目的のために有用であることがわかっている同様の基などが結合され得るペンダント基を有する、その他の誘導体化されたもしくは誘導体化可能な鎖などのポリマーであり得る。キレートは、標準化学を使用して本技術の抗体にカップリングされ得る。キレートは、普通、免疫反応性の最小の喪失および最小の凝集および／または内部架橋で分子との結合の形成を可能にする基によって抗体に連結される。キレートを抗体とコンジュゲートするためのその他の方法および試薬は、米国特許第４，８２４，６５９号に開示されている。特に有用な金属－キレートの組合せは、放射性イメージングのために診断用同位元素とともに使用される、２－ベンジル－ＤＴＰＡおよびそのモノメチルおよびシクロヘキシル類似体を含む。同一キレートは、マンガン、鉄およびガドリニウムなどの非放射性金属と複合体形成されると、本技術のＣＤ１９抗体とともに使用される場合にＭＲＩにとって有用である。
大環状キレート、例えば、ＮＯＴＡ（１，４，７－トリアザ－シクロノナン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ”－三酢酸）、ＤＯＴＡおよびＴＥＴＡ（ｐ－ブロモアセトアミド－ベンジル－テトラエチルアミン四酢酸）は、さまざまな金属および放射性金属、例えば、それぞれ、ガリウム、イットリウムおよび銅の放射性核種とともに使用するためのものである。このような金属キレート複合体は、環の大きさを対象の金属に合わせることによって安定化され得る。その他のＤＯＴＡキレートの例として、（ｉ）ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｉｉ）Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｉｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｉｖ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2；（ｉｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｘｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｘｉｉｉ）（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2；（ｘｉｖ）Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｘｖ）（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｘｖｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ2；（ｘｖｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘｖｉｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；および（ｘｉｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2が挙げられる。
ＲＡＩＴのための223Ｒａなどの核種を安定に結合するために対象である大環状ポリエーテルなどのその他の環型キレートも考慮される。
Ｂ．本技術の抗ＣＤ１９抗体の治療的使用
本技術の免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体またはその抗原結合断片）は、ＣＤ１９関連癌およびＣＤ１９関連自己免疫疾患の処置にとって有用である。このような処置は、病的に高レベルのＣＤ１９を有すると同定された患者（例えば、本明細書において記載される方法によって診断されたもの）において、またはこのような病的レベルと関連するとわかっている疾患を有すると診断された患者において使用され得る。一態様では、本開示は、それを必要とする対象においてＣＤ１９関連癌またはＣＤ１９関連自己免疫疾患を処置する方法であって、本技術の抗体（またはその抗原結合断片）の有効量を対象に投与することとを含む方法を提供する。本技術の抗体によって処置され得る癌の例としては、限定されるものではないが、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（リンパ形質細胞性リンパ腫）、重鎖病、原発性アミロイドーシス、移植後リンパ増殖性障害、ホジキンリンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、（胚中心様）びまん性大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、二系統の白血病、二表現型白血病、ヘアリー細胞白血病、前駆Ｂリンパ芽急性白血病／リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫が挙げられる。本技術の抗体によって処置され得る自己免疫疾患の例としては、限定されるものではないが、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス、腫瘍随伴症候群、尋常性天疱瘡、２型糖尿病、および移植片対宿主病が挙げられる。
本技術の組成物は、ＣＤ１９関連癌の処置において有用なその他の治療薬とともに使用され得る。例えば、本技術の抗体は、アルキル化剤、白金剤、タキサン、ビンカ剤、抗エストロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、卵巣抑制剤、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦ／ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、細胞分裂停止性アルカロイド、細胞傷害性抗生物質、代謝拮抗剤、内分泌／ホルモン剤、ビスホスホネート療法剤およびターゲッティングされる生物学的療法剤（例えば、ＵＳ６３０６８３２、ＷＯ２０１２００７１３７、ＷＯ２００５０００８８９、ＷＯ２０１００９６６０３などに記載される治療用ペプチド）からなる群から選択される少なくとも１種のさらなる治療薬と、別個に、逐次または同時に投与され得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１種のさらなる治療薬は、化学療法薬である。特定の化学療法薬として、それだけには限らないが、シクロホスファミド、フルオロウラシル（または５－フルオロウラシルもしくは５－ＦＵ）、メトトレキサート、エダトレキサート（１０－エチル－１０－デアザ－アミノプテリン）、チオテパ、カルボプラチン、シスプラチン、タキサン、パクリタキセル、タンパク質が結合されたパクリタキセル、ドセタキセル、ビノレルビン、タモキシフェン、ラロキシフェン、トレミフェン、フルベストラント、ゲムシタビン、イリノテカン、イクサベピロン、テモゾルミド（ｔｅｍｏｚｏｌｍｉｄｅ）、トポテカン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エリブリン、ムタマイシン（ｍｕｔａｍｙｃｉｎ）、カペシタビン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、リュープロリド、アバレリックス、ブセルリン（ｂｕｓｅｒｌｉｎ）、ゴセレリン、酢酸メゲストロール、リセドロネート、パミドロネート、イバンドロネート、アレンドロネート、デノスマブ、ゾレドロネート、トラスツズマブ、タイケルブ、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシンおよびドキソルビシン）、ベバシズマブ、オキサリプラチン、メルファラン、エトポシド、メクロレタミン、ブレオマイシン、微小管毒、バンレイシ科のアセトゲニンまたはそれらの組合せが挙げられる。
本技術の組成物は、単回ボーラスとしてそれを必要とする対象に投与されてもよい。あるいは、投薬計画は、腫瘍の出現後種々の時間で実施される複数回投与を含んでもよい。
自己免疫疾患を処置する方法は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、グルココルチコイド、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、抗ＴＮＦ生物製剤、アバタセプト、トシリズマブ、アナキンラ、およびリツキシマブのうちから選択される少なくとも１つのさらなる療法を対象に逐次、別個に、または同時に投与することをさらに含んでもよい。ＮＳＡＩＤの例としては、（１）アセチルサリチル酸（アスピリン）、ジフルニサルおよびスルファサラジンなどのサリチル酸誘導体；（２）アセトアミノフェンなどのパラ－アミノフェノール誘導体；（３）メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸などのフェナム酸；（４）イブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジンなどのプロピオン酸誘導体；（５）ピロキシカム、テノキシカムなどのエノール酸（ｅｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ）（オキシカム）誘導体；（６）メロキシカム、サリチル酸、およびニメスリドなどの選択的ＣＯＸ－２阻害剤；ならびに（７）セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、およびエトリコキシブなどの高選択的ＣＯＸ－２阻害剤が挙げられる。グルココルチコイドの例としては、プレドニゾン／プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ならびにデキサメタゾンおよびベタメタゾンなどのフッ素化グルココルチコイドが挙げられる。ＤＭＡＲＤの例としては、メトトレキサート、レフルノミド、金化合物、スルファサラジン、アザチオプリン、シクロホスファミド、抗マラリア薬、Ｄ－ペニシラミン、シクロスポリン、ヒドロキシクロロキン、およびクロロキンが挙げられる。抗ＴＮＦ生物製剤の例としては、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブ、およびセルトリズマブペゴルが挙げられる。
投与は、経口で、鼻腔内に、非経口的に（静脈内に、筋肉内に、腹膜内にまたは皮下に）、直腸性に、頭蓋内に、腫瘍内に、くも膜下腔内に、または局所的にを含む任意の適した経路で実施され得る。投与は、自己投与および別のものによる投与を含む。記載されるような医学的状態の処置の種々の様式は、完全な処置だけでなく、完全未満の処置も含み、いくつかの生物学的にまたは医学的に関連する結果が達成される「実質的」なものを意味するものとすることも理解されたい。
いくつかの実施形態では、本技術の抗体は、１回または複数回用量でそれを必要とする対象に投与され得る医薬製剤を含む。投与計画は、所望の応答（例えば、治療的応答）を提供するように調整され得る。
通常、治療効果を達成するのに十分な本技術の抗体組成物の有効量は、約 ０．０００００１ｍｇ／体重１キログラム／日～約１０，０００ｍｇ／体重１キログラム／日の範囲である。通常、投与量範囲は、約０．０００１ｍｇ／体重１キログラム／日～約１００ｍｇ／体重１キログラム／日である。抗ＣＤ１９抗体の投与については、投与量は、対象の体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より普通は、０．０１～５ｍｇ／ｋｇ毎週、２週毎または３週毎の範囲である。例えば、投与量は、１ｍｇ／体重１ｋｇまたは１０ｍｇ／体重１ｋｇ毎週、２週毎もしくは３週毎または１～１０ｍｇ／ｋｇ毎週、２週毎もしくは３週毎の範囲内であり得る。一実施形態では、抗体の単回投与量は、０．１～１０，０００マイクログラム／体重１ｋｇの範囲である。一実施形態では、担体中の抗体濃度は、送達されるミリリットルあたり０．２～２０００マイクログラムの範囲である。例示的処置投与計画は、２週に１回または１カ月に１回または３～６カ月毎に１回の投与を伴う。抗ＣＤ１９抗体は、複数回投与され得る。単回投与量の間の間隔は、毎時、毎日、毎週、毎月または毎年であり得る。間隔は、対象における抗体の血液レベルを測定することによって示されるので、不定期である場合もある。いくつかの方法では、投与量は、約７５μｇ／ｍＬ～約１２５μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ～約１５０μｇ／ｍＬ、約１２５μｇ／ｍＬ～約１７５μｇ／ｍＬまたは約１５０μｇ／ｍＬ～約２００μｇ／ｍＬの対象における血清抗体濃度を達成するように調整される。あるいは、抗ＣＤ１９抗体は、徐放製剤として投与されることがあり、この場合には、あまり頻繁ではない投与が必要とされる。投与量および頻度は、対象における抗体の半減期に応じて変わる。投与の投与量および頻度は、処置が予防的であるか治療的であるかに応じて変わる。予防的適用では、比較的低い投与量が、比較的頻繁ではない間隔で長期間にわたって投与される。治療的適用では、疾患の進行が低減もしくは終結されるまで、または対象が、疾患の症状の部分的もしくは完全寛解を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い投与量が時には必要とされる。その後、患者は、予防的投与計画を投与され得る。
別の態様では、本開示は、ｉｎ ｖｉｖｏで対象において腫瘍を検出する方法であって、（ａ）対象に本技術の抗体（またはその抗原結合断片）の有効量を投与することであって、抗体は、ＣＤ１９を発現する腫瘍に局在するように構成されており、放射性同位元素を用いて標識されていることと、（ｂ）参照値よりも高い抗体によって放射された放射性レベルを検出することによって、対象における腫瘍の存在を検出することとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、参照値は、１グラムあたりの注入された用量（％ＩＤ／ｇ）として表される。参照値は、非腫瘍（正常）組織中に存在する放射性レベルを測定することおよび非腫瘍（正常）組織中に存在する平均放射性レベル±標準偏差をコンピュータによって計算することによって算出され得る。いくつかの実施形態では、腫瘍および正常組織間の放射性レベルの比は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１または１００：１である。
いくつかの実施形態では、対象は、癌を有すると診断されている、または癌を有すると疑われている。抗体によって放射される放射性レベルは、陽電子放射型断層撮影または単一光子放出型コンピュータ断層撮影を使用して検出され得る。
さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、方法は、対象に、放射性核種にコンジュゲートされた本技術の抗体を含むイムノコンジュゲートの有効量を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、放射性核種は、アルファ粒子放射性同位元素、ベータ粒子放射性同位元素、オージェ放射体またはそれらの任意の組合せである。ベータ粒子放射性同位元素の例として、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕおよび67Ｃｕが挙げられる。アルファ粒子放射性同位元素の例として、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔおよび255Ｆｍが挙げられる。オージェ放射体の例として、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌおよび203Ｐｂが挙げられる。方法のいくつかの実施形態では、正常組織における非特異的ＦｃＲ依存性結合が排除または低減される（例えば、非グリコシル化をもたらすＦｃ領域におけるＮ２９７Ａ突然変異によって）。このようなイムノコンジュゲートの治療有効性は、曲線下面積（ＡＵＣ）腫瘍：ＡＵＣ正常組織比をコンピュータによって計算することによって決定され得る。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１または１００：１のＡＵＣ腫瘍：ＡＵＣ正常組織比を有する。
ＰＲＩＴ。一態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍を検出する方法であって、（ａ）対象に、放射性標識ＤＯＴＡハプテンならびに放射性標識ＤＯＴＡハプテンおよびＣＤ１９抗原と結合する本技術の二重特異性抗体を含む複合体の有効量を投与することであって、複合体が、複合体の二重特異性抗体によって認識されるＣＤ１９抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されていることと、（ｂ）参照値よりも高い複合体によって放射された放射性レベルを検出することによって、対象において固形腫瘍の存在を検出することとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
別の態様では、本開示は、プレターゲッティングされる放射免疫治療のために対象を選択する方法であって、（ａ）対象に、放射性標識ＤＯＴＡハプテンならびに放射性標識ＤＯＴＡハプテンおよびＣＤ１９抗原と結合する本技術の二重特異性抗体を含む複合体の有効量を投与することであって、複合体が、複合体の二重特異性抗体によって認識されるＣＤ１９抗原を発現する腫瘍に局在するように構成されていることと、（ｂ）複合体によって放射された放射性レベルを検出することと、（ｃ）複合体によって放射された放射性レベルが、参照値よりも高い場合に、プレターゲッティングされる放射免疫治療のために対象を選択することとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
ＤＯＴＡハプテンの例として、（ｉ）ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｉｉ）Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｉｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｉｖ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2；（ｉｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｘｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｘｉｉｉ）（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2；（ｘｉｖ）Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｘｖ）（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｘｖｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ2；（ｘｖｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘｖｉｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｘｉｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2および（ｘｘ）ＤＯＴＡが挙げられる。放射性標識は、アルファ粒子放射性同位元素、ベータ粒子放射性同位元素またはオージェ放射体であり得る。放射性標識の例として、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、255Ｆｍ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、68Ｇａ、227Ｔｈまたは64Ｃｕが挙げられる。
本明細書において開示される方法のいくつかの実施形態では、複合体によって放射される放射性レベルは、陽電子放射型断層撮影または単一光子放出型コンピュータ断層撮影を使用して検出される。さらにまたはあるいは、本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、対象は、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（リンパ形質細胞性リンパ腫）、重鎖病、原発性アミロイドーシス、移植後リンパ増殖性障害、ホジキンリンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、（胚中心様）びまん性大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、二系統の白血病、二表現型白血病、ヘアリー細胞白血病、前駆Ｂリンパ芽急性白血病／リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫などのＣＤ１９関連癌を有すると診断される、またはＣＤ１９関連癌を有すると疑われる。さらにまたはあるいは、本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、対象は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス、腫瘍随伴症候群、尋常性天疱瘡、２型糖尿病、または移植片対宿主病などの自己免疫疾患を有すると診断される、または自己免疫疾患を有すると疑われる。
さらにまたはあるいは、本明細書において開示される方法のいくつかの実施形態では、複合体は、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、くも膜下腔内に、関節内に、眼窩内に、皮内に、腹膜内に、経気管的に、皮下に、脳室内に、経口的に、腫瘍内に、または鼻腔内に投与される。特定の実施形態では、複合体は、対象の脳脊髄液または血液中に投与される。
本明細書において開示される方法のいくつかの実施形態では、複合体によって放射される放射性レベルは、複合体が投与された２～１２０時間の間の後に検出される。本明細書において開示される方法の特定の実施形態では、複合体によって放射される放射性レベルは、１グラム組織あたりの注入された用量パーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として表される。参照値は、非腫瘍（正常）組織中に存在する放射性レベルを測定することおよび非腫瘍（正常）組織中に存在する平均放射性レベル±標準偏差をコンピュータによって計算することによって算出され得る。いくつかの実施形態では、参照値は、標準取り込み値（ＳＵＶ）である。Thie JA, J Nucl Med. 45(9):1431-4(2004)を参照のこと。いくつかの実施形態では、腫瘍および正常組織間の放射性レベルの比は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１または１００：１である。
別の態様では、本開示は、ＣＤ１９関連癌と診断された対象において放射線療法に対する腫瘍感受性を増大させる方法であって、（ａ）本技術の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の有効量を対象に投与することであって、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、ＣＤ１９抗原標的を発現する腫瘍に局在化するように構成されていることと、（ｂ）放射標識ＤＯＴＡハプテンの有効量を対象に投与することであって、放射標識ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体と結合するように構成されていることとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、腫瘍細胞を飽和するのに十分な条件下で、期間の間、投与される（例えば、投薬計画に従って）。いくつかの実施形態では、結合していない抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後に血流から除去される。いくつかの実施形態では、放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、結合していない抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体のクリアランスを可能にするのに十分であり得る期間の後に投与される。
放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後に１分～４またはそれより多い日数の間任意の回数で投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後、１分、２分、３分、４分、５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、１．２５時間、１．５時間、１．７５時間、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、６．５時間、７時間、７．５時間、８時間、８．５時間、９時間、９．５時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間またはその中の任意の範囲で投与される。あるいは、放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後、４またはそれより多い日数の後に任意の回数で投与され得る。
さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、方法は、放射性標識ＤＯＴＡハプテンの投与前に対象に清澄剤の有効量を投与することをさらに含む。清澄剤は、Ｃ８２５－ハプテンとコンジュゲートされ得る任意の分子（デキストランまたはデンドリマーまたはポリマー）であり得る。いくつかの実施形態では、清澄剤は、２０００ｋＤ、１５００ｋＤ、１０００ｋＤ、９００ｋＤ、８００ｋＤ、７００ｋＤ、６００ｋＤ、５００ｋＤ、４００ｋＤ、３００ｋＤ、２００ｋＤ、１００ｋＤ、９０ｋＤ、８０ｋＤ、７０ｋＤ、６０ｋＤ、５０ｋＤ、４０ｋＤ、３０ｋＤ、２０ｋＤ、１０ｋＤまたは５ｋＤ以下である。いくつかの実施形態では、清澄剤は、５００ｋＤアミノデキストラン－ＤＯＴＡコンジュゲート（例えば、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｌｕ）または５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｉｎ）など）である。
いくつかの実施形態では、清澄剤および放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、本技術の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体のさらなる投与を伴わずに投与される。例えば、いくつかの実施形態では、本技術の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、（ｉ）本技術の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与（その結果、関連腫瘍細胞が飽和されてもよい）、（ｉｉ）放射性標識ＤＯＴＡハプテンの投与および任意に清澄剤、（ｉｉｉ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体のさらなる投与を伴わない、放射性標識ＤＯＴＡハプテンおよび／または清澄剤の任意のさらなる投与のうち少なくとも１つのサイクルを含むレジメンに従って投与される。いくつかの実施形態では、方法は、複数のこのようなサイクル（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多いサイクル）を含み得る。
さらにまたはあるいは、方法のいくつかの実施形態では、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体および／または放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、くも膜下腔内に、関節内に、眼窩内に、皮内に、腹膜内に、経気管的に、皮下に、脳室内に、腫瘍内に、経口的に、または鼻腔内に投与される。
一態様では、本開示は、ＣＤ１９関連癌を有すると診断された対象において放射線療法に対する腫瘍感受性を増大させる方法であって、対象に、放射性標識ＤＯＴＡハプテンならびに放射性標識ＤＯＴＡハプテンおよびＣＤ１９抗原標的を認識し、結合する本技術の二重特異性抗体を含む複合体の有効量を投与することであって、複合体が複合体の二重特異性抗体によって認識されるＣＤ１９抗原標的を発現する腫瘍に局在するように構成されていることを含む方法を提供する。複合体は、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、くも膜下腔内に、関節内に、眼窩内に、皮内に、腹膜内に、経気管的に、皮下に、脳室内に、経口的に、腫瘍内に、または鼻腔内に投与され得る。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象において癌を処置する方法であって、（ａ）対象に本技術の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の有効量を投与することであって、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体がＣＤ１９抗原標的を発現する腫瘍に局在するように構成されることと、（ｂ）対象に放射性標識ＤＯＴＡハプテンの有効量を投与することであって、放射性標識ＤＯＴＡハプテンが、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体と結合するように構成されることとを含む方法を提供する。抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、腫瘍細胞を飽和するのに十分な条件下で、期間の間、投与される（例えば、投薬計画に従って）。いくつかの実施形態では、結合していない抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後に血流から除去される。いくつかの実施形態では、放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、結合していない抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体のクリアランスを可能にするのに十分であり得る期間の後に投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
したがって、いくつかの実施形態では、方法は、放射性標識ＤＯＴＡハプテンの投与の前に対象に清澄剤の有効量を投与することをさらに含む。放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後１分～４またはそれより多い日数の間に任意の回数で投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後、１分、２分、３分、４分、５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、１．２５時間、１．５時間、１．７５時間、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、６．５時間、７時間、７．５時間、８時間、８．５時間、９時間、９．５時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間またはその中の任意の範囲で投与される。あるいは、放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後、４またはそれより多い日数の後に任意の回数で投与され得る。
清澄剤は、５００ｋＤアミノデキストラン－ＤＯＴＡコンジュゲート（例えば、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｌｕ）または５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｉｎ）など）であり得る。いくつかの実施形態では、清澄剤および放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体のさらなる投与を伴わずに投与される。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、（ｉ）本技術の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与（その結果、関連腫瘍細胞が飽和されてもよい）、（ｉｉ）放射性標識ＤＯＴＡハプテンの投与および任意に清澄剤、（ｉｉｉ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体のさらなる投与を伴わない、放射性標識ＤＯＴＡハプテンおよび／または清澄剤の任意のさらなる投与のうち少なくとも１つのサイクルを含むレジメンに従って投与される。いくつかの実施形態では、方法は、複数のこのようなサイクル（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多いサイクル）を含み得る。
また、それを必要とする対象において癌を処置する方法であって、対象に放射性標識ＤＯＴＡハプテンならびに放射性標識ＤＯＴＡハプテンおよびＣＤ１９抗原標的を認識および結合する本技術の二重特異性抗体を含む複合体の有効量を投与することであって、複合体が複合体の二重特異性抗体によって認識されるＣＤ１９抗原標的を発現する腫瘍に局在するように構成されていることを含む方法が本明細書において提供される。このような複合体の治療有効性は、曲線下面積（ＡＵＣ）腫瘍：ＡＵＣ正常組織比をコンピュータによって計算することによって決定され得る。いくつかの実施形態では、複合体は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１または１００：１のＡＵＣ腫瘍：ＡＵＣ正常組織比を有する。
毒性。最適には、本明細書において記載される抗ＣＤ１９抗体の有効量（例えば、用量）は、対象に実質的な毒性を引き起こすことなく治療的利益を提供する。本明細書において記載される抗ＣＤ１９抗体の毒性は、細胞培養または実験動物における標準製薬手順によって、例えば、ＬＤ50（集団の５０％に対する致死用量）またはＬＤ100（集団の１００％に対する致死用量）を決定することによって決定され得る。毒性および治療効果の間の用量比が治療係数である。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータが、ヒトにおいて使用するための毒性ではない投与量範囲の策定において使用され得る。本明細書において記載される抗ＣＤ１９抗体の投与量は、毒性がほとんどまたは全くない有効用量を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、使用される投与形および利用される投与経路に従ってこの範囲内で変わり得る。正確な処方、投与経路、および投与量は、対象の状態を鑑みて個々の医師によって選択され得る。例えば、Fingl et al., In: The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ch. 1 (1975)を参照のこと。
医薬組成物の製剤化。本技術の方法に従って、抗ＣＤ１９抗体は、投与に適した医薬組成物に組み込まれ得る。医薬組成物は、一般に、組換えまたは実質的に精製された抗体および医薬上許容される担体を、対象への投与に適した形態で含む。医薬上許容される担体は、投与される個々の組成物の一部において、ならびに組成物を投与するために使用される個々の方法によって決定される。したがって、抗体組成物を投与するための医薬組成物のさまざまな適した製剤化がある（例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA 18th ed., 1990を参照のこと）。医薬組成物は、一般に、無菌で、実質的に等張性として、米国食品医薬品局のすべての適正製造基準（ＧＭＰ）規制に完全準拠して製剤化される。
用語「医薬上許容される」、「生理学的に許容される」およびそれらの文法的変形は、それらが、組成物、担体、希釈剤および試薬を指す場合、同義的に使用され、材料が組成物の投与を妨げる程度に、望ましくない生理学的効果をもたらすことなく、対象に投与可能であることを表す。例えば、「医薬上許容される賦形剤」とは、一般に、安全な、非毒性の、望ましい医薬組成物の調製において有用である賦形剤を意味し、獣医学的使用に、ならびにヒト医薬的使用に許容される賦形剤を含む。このような賦形剤は、固体、液体、半固体、またはエアゾール組成物の場合には気体であり得る。「医薬上許容される塩およびエステル」とは、医薬上許容される、所望の薬理学的特性を有する塩およびエステルを意味する。このような塩として、組成物中に存在する酸性プロトンが、無機または有機塩基と反応可能である場合に形成され得る塩が挙げられる。適した無機塩として、アルカリ金属、例えば、ナトリウムおよびカリウム、マグネシウム、カルシウムおよびアルミニウムと形成されたものが挙げられる。適した有機塩として、アミン塩基、例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ－メチルグルカミンなどといった有機塩基と形成されたものが挙げられる。このような塩としてまた、無機酸（例えば、塩酸および臭化水素酸）および有機酸（例えば、酢酸、クエン酸、マレイン酸およびアルカン－およびアレン－スルホン酸、例えば、メタンスルホン酸およびベンゼンスルホン酸）と形成された酸付加塩が挙げられる。医薬上許容されるエステルとして、抗ＣＤ１９抗体中に存在するカルボキシ、スルホニルオキシおよびホスホンオキシ基から形成されたエステル、例えば、Ｃ1-6 アルキルエステルが挙げられる。２つの酸性基が存在する場合には、医薬上許容される塩またはエステルは、モノ－酸－モノ－塩またはエステルまたはジ－塩またはエステルである場合があり、同様に、２つ以上の酸性基が存在する場合には、このような基のうちいくつかまたはすべてが塩化またはエステル化され得る。この技術において名付けられた抗ＣＤ１９抗体は、非塩化もしくは非エステル化形態で、または塩化および／もしくはエステル化形態で存在する可能性があり、このような抗ＣＤ１９抗体の命名は、元の（非塩化および非エステル化）化合物およびその医薬上許容される塩およびエステルの両方を含むように意図される。また、本技術の特定の実施形態は、２つ以上の立体異性形で存在する可能性があり、このような抗ＣＤ１９抗体の命名は、このような立体異性体のすべての単一立体異性体およびすべての混合物（ラセミか否かに関わらず）を含むように意図される。当業者ならば、特定の薬物および本技術の組成物の投与の適当なタイミング、順序および投与量を決定するのに困難はないであろう。
このような担体または希釈剤の例として、それだけには限らないが、水、生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液および５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。リポソームおよび硬化油などの非水性ビヒクルも使用され得る。医薬上活性な物質のためのこのような媒体および化合物の使用は、当技術分野で周知である。任意の従来媒体または化合物が、抗ＣＤ１９抗体不適合である場合を除いて、組成物におけるその使用が考慮される。補足的活性化合物も組成物中に組み込まれる。
本技術の医薬組成物は、その意図される投与経路と適合するように製剤化される。本技術の抗ＣＤ１９抗体組成物は、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸、頭蓋内、くも膜下腔内、腹腔内、鼻腔内または筋肉内経路によって、または吸入剤として投与され得る。抗ＣＤ１９抗体は、種々のＣＤ１９関連癌またはＣＤ１９関連自己免疫疾患の処置において少なくとも部分的に有効であるその他の薬剤と組み合わせて投与されてもよい。
非経口、皮内または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液として、以下の構成成分を挙げることができる：注射水、生理食塩水溶液、硬化油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶媒などの滅菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌化合物、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化物質、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート化化合物、酢酸、クエン酸またはリン酸などのバッファーおよび塩化ナトリウムまたはデキストロースなおの張力の調整のための化合物。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基を用いて調整され得る。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、ディスポーザブルシリンジまたは複数可用量バイアルに封入され得る。
注射用使用に適した医薬組成物として、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散物および滅菌注射用溶液または分散物の即時調製のための滅菌散剤が挙げられる。静脈内投与のために、適した担体として、生理食塩水、静菌性水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、ニュージャージー州、パーシッパニー）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。すべての場合において、組成物は、無菌でなくてはならず、容易な注射性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性でなくてはならない。製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されなくてはならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適した混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌薬および抗真菌薬化合物、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張性化合物、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムを含むことが望ましい。注射用組成物の吸収延長は、組成物中に吸収を遅延する化合物、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
滅菌注射用溶液は、本技術の抗ＣＤ１９抗体を、必要に応じて、上記で列挙された成分のうち１種または組合せとともに、適当な溶媒中に必要な量で組み込むことと、それに続く、濾過滅菌によって調製され得る。一般に、分散物は、抗ＣＤ１９抗体を、基本分散媒および上記で列挙されたものから必要なその他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌散剤の場合には、調製する方法は、事前に滅菌濾過されたその溶液から、有効成分および任意のさらなる所望の成分の散剤が得られる真空乾燥および凍結乾燥である。本技術の抗体は、有効成分の持続性または拍動性放出を可能にするような方法で製剤化され得る、デポー注射液または留置調製物の形態で投与され得る。
経口組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用担体を含む。それらは、ゼラチンカプセル中に封入されてもよく、錠剤に打錠されてもよい。経口治療的投与目的で、抗ＣＤ１９抗体は、賦形剤とともに組み込まれ、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の形態で使用されてもよい。経口組成物はまた、マウスウォッシュとして使用するために流体担体を使用して調製されてもよく、流体担体中の化合物は経口的に適用され、素早く動かされ（ｓｗｉｓｈ）、吐出されるか飲み込まれる。医薬上適合する結合化合物および／またはアジュバント材料は、組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分または同様の性質の化合物のうちいずれも含有し得る：微晶質セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチンなどの結合剤、デンプンまたはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌまたはコーンスターチなどの崩壊化合物、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓなどの滑沢剤、コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤、スクロースまたはサッカリンなどの甘味化合物またはペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジフレーバーなどの矯味化合物。
吸入による投与のために、抗ＣＤ１９抗体は、適した噴射剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサーまたは噴霧器からエアゾールスプレーの形態で送達される。
全身投与は、経粘膜または経皮手段によるものであり得る。経粘膜または経皮投与のために、製剤中で浸透されるべき障壁に適当な浸透剤が使用される。このような浸透剤は、一般に、当技術分野で公知であり、例えば、経粘膜投与のための、洗浄剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻腔スプレーまたは坐剤の使用によって達成され得る。経皮投与のためには、抗ＣＤ１９抗体は、当技術分野で一般に知られるような、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲルまたはクリーム中に製剤化される。
抗ＣＤ１９抗体はまた、坐剤（例えば、ココアバターおよびその他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を用いて）または直腸送達のための保留浣腸の形態で医薬組成物として調製され得る。
一実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系を含む放出制御製剤などの抗ＣＤ１９抗体を身体からの迅速な排出から保護する担体を用いて調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。このような製剤の調製方法は、当業者には明らかとなろう。材料はまた、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃから商業的に得ることができる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を有する感染細胞を標的とするリポソームを含む）も、医薬上許容される担体として使用され得る。これらは、当業者に公知の、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるような方法に従って調製され得る。
Ｃ．キット
本技術は、ＣＤ１９関連癌またはＣＤ１９関連自己免疫疾患の検出および／または処置のためのキットであって、少なくとも１種の本技術の免疫グロブリン関連組成物（例えば、本明細書に記載される任意の抗体または抗原結合断片）、またはその機能的バリアント（例えば、置換バリアント）を含むキットを提供する。本技術のキットの上記の構成成分は、ＣＤ１９関連癌またはＣＤ１９関連自己免疫疾患の診断および／または処置のために適切な容器に詰められ、ラベルが付けられてもよい。上記の構成成分は、水性の、好ましくは、無菌の溶液として、または復元のための凍結乾燥された、好ましくは、無菌の製剤として、単位または複数回用量容器、例えば、密閉されたアンプル、バイアル、ボトル、シリンジおよび試験管中で貯蔵され得る。キットは、医薬組成物をより大きな容量にするために希釈するのに適した希釈剤を保持する第２の容器をさらに含み得る。適した希釈剤として、それだけには限らないが、医薬組成物の医薬上許容される賦形剤および生理食塩水溶液が挙げられる。さらに、キットは、医薬組成物を希釈するための説明書および／または希釈されるか否かに関わらず、医薬組成物を投与するための説明書を含み得る。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成されてもよく、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿刺され得るストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。キットは、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液などの医薬上許容されるバッファーを含むより多くの容器をさらに含み得る。その他のバッファー、希釈剤、フィルター、ニードル、シリンジ、適した宿主のうち１種または複数のための培養培地を含む、商業的およびユーザー観点から望ましいその他の材料をさらに含み得る。キットは、治療薬または診断薬の市販のパッケージ中に習慣的に含まれる説明書を含んでもよく、これは、このような治療薬または診断薬の、例えば、適応症、用法、投与量、製造、投与、禁忌症に関する情報および／または使用に関わる警告を含有する。
キットは、生物学的サンプル、例えば、それだけには限らないが、例えば、血清、血漿、リンパ、嚢胞液、尿、便、脳脊髄液、腹水または血液を含む、および身体組織の生検サンプルを含む任意の体液における免疫反応性ＣＤ１９タンパク質の存在を検出するのに有用である。例えば、キットは、生物学的サンプル中のＣＤ１９タンパク質と結合可能な１種または複数の本技術のヒト化、キメラまたは二重特異性抗ＣＤ１９抗体（またはその抗原結合断片）、サンプル中のＣＤ１９タンパク質の量を決定する手段およびサンプル中の免疫反応性ＣＤ１９タンパク質の量を標準と比較する手段を含み得る。抗ＣＤ１９抗体の１種または複数は標識され得る。キット構成成分（例えば、試薬）は、適した容器中に詰められ得る。キットは、免疫反応性ＣＤ１９タンパク質を検出するためのキットを使用するための説明書をさらに含み得る。
抗体ベースのキットについては、キットは、例えば、１）第１の抗体、例えば、ＣＤ１９タンパク質と結合する、固相支持体に付着された、本技術のヒト化、キメラまたは二重特異性ＣＤ１９抗体（またはその抗原結合断片）と、任意に、２）ＣＤ１９タンパク質または第１の抗体のいずれかと結合し、検出可能な標識にコンジュゲートされている第２の異なる抗体とを含み得る。
キットはまた、例えば、緩衝剤、防腐剤またはタンパク質安定化剤を含み得る。キットは、検出可能な標識を検出するのに必要な構成成分、例えば、酵素または基質をさらに含み得る。キットはまた、アッセイされ、試験サンプルと比較され得る、対照サンプルまたは一連の対照サンプルを含有し得る。キットの各成分は、個々の容器内に封入されてもよく、種々の容器のすべては、キットを使用して実施されるアッセイの結果を解釈するための説明書とともに単一パッケージ内にあり得る。本技術のキットは、キット容器上または中に書面の製品を含有し得る。書面の製品には、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ１９タンパク質を検出するための、またはそれを必要とする対象におけるＣＤ１９関連癌またはＣＤ１９関連自己免疫疾患を処置するための、キットに含有される試薬の使用方法が記載されている。特定の実施形態では、試薬の使用は、本技術の方法に従い得る。
本技術は、以下の実施例によってさらに例示されるが、これは決して制限と解釈されてはならない。以下の実施例は、本技術の例示的抗ＣＤ１９抗体の調製、特性決定および使用を実証する。以下の実施例は、本技術のキメラ、ヒト化、および二重特異性抗体の製造、ならびにその結合特異性およびｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ生物学的活性の特性決定を実証する。
（実施例１）
ＣＤ１９－ＣＤ３二重特異性抗体の配列および構築
図１に示されたＩｇＧ－ｓｃＦｖモジュラープラットフォームを使用してＣＤ１９－ＣＤ３ ＢｓＡｂを設計した。抗ＣＤ３ヒト化ＯＫＴ３（ｈｕＯＫＴ３）一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を、ＦＭＣ６３ ＩｇＧ１の軽鎖のカルボキシル末端に遺伝子的に融合させた。マウスＦＭＣ６３抗体のヒト化バージョンを作製した。配列エレメントを、種々のリンカー、スペーサーなどを使用してつなげた。本明細書に開示される配列は、モジュラー配列エレメント、リンカー、スペーサーなどのいくつかの例を示す。例えば、ＣＤ１９－ＢｓＡｂは、ヒト化ＯＫＴ３ ｓｃＦｖを、Xu H et al., Cancer Immunology Research 3:266-277 (2015)およびLopez-Albaitero A et al., OncoImmunology 6:e1267891 (2017)にこれまでに記載されているように、（Ｇ４Ｓ）3リンカーを介してキメラまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体の軽鎖のＣ末端に融合して構築した。Ｎ２９７ＡおよびＫ３２２Ａ突然変異を、抗体のＦｃ領域に導入して、それぞれＦｃＲおよび補体結合活性を排除した（Shields RL et al., Journal of Biological Chemistry 276:6591-6604(2001); Idusogie EE et al., Journal of Immunology 164:4178-4184(2000)）。抗体、ｓｃＦｖ断片およびそれらをつなぎ合わせる正確な機構を選択するとき、種々のその他の因子のうち以下の因子を考慮した：
（１）腫瘍取り込みを最大化する最適な大きさ（１００～２００ｋｄ）。例えば、Wittrup KD, Thurber GM, Schmidt MM, et al., Methods Enzymol 503:255-68 (2012)を参照のこと；
（２）アビディティーを維持するための腫瘍標的に対する二価性；
（３）標準的なプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって精製可能な、ＣＨＯ細胞における任意のＩｇＧ（重鎖および軽鎖）のように自然にアセンブルされるスキャフォールド；
（４）抗ＣＤ３成分を機能的に一価にし、それ故にＴ細胞の非特異的活性化を低減する構造配置；および
（５）動物モデルにおいて証明された腫瘍ターゲッティング効率を有するプラットフォーム。
マウスＦＭＣ６３のヒト化。ＦＭＣ６３の重鎖および軽鎖のＣＤＲを、それぞれ、ＶHのヒトフレームワークＩＧＨＶ４－４*０８－ＩＧＨＪ４*０１、およびＶLのヒトフレームワークＩＧＫＶ１－３３*０１－ＩＧＫＪ２*０１との相同性に基づき、ヒトＩｇＧ１フレームワークに移植した。８つの重鎖および３つの軽鎖設計から、２４バージョンのｈｕＦＭＣ６３遺伝子を合成し、ＤＧ４４細胞で発現させた。マウス、キメラ、およびヒト化ＦＭＣ６３可変重鎖のアミノ酸配列は、図１２および図１４Ｃ～１４Ｄに示されている。マウス、キメラ、およびヒト化ＦＭＣ６３可変軽鎖のアミノ酸配列は、図１３および図１４Ａ～１４Ｂに示されている。
（実施例２）
ＣＤ１９特異的ＢｓＡｂの設計
ＣＤ１９－ＢｓＡｂの作製。ＣＤ１９－ＢｓＡｂは、次のように設計した：ＢｓＡｂの軽鎖ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に順次、（１）シグナルペプチド、（２）マウス抗ＣＤ１９抗体（ＦＭＣ６３）（またはそのヒト化バージョン）のＶLドメイン、（３）ヒトＣLドメイン、（４）（Ｇ４Ｓ）3リンカー、（５）ヒト化抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３のＶHドメイン、（６）（Ｇ４Ｓ）6リンカー、および（７）ＯＫＴ３のＶLドメインを含む。ＢｓＡｂの重鎖ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に逐次、（１）シグナルペプチド、（２）マウスＦＭＣ６３（またはそのヒト化バージョン）のＶHドメイン、および（３）ヒトＣＨ1-3ドメインを含む。例えば、図１４Ａ～Ｄおよび図１５Ａ～１５Ｂを参照のこと。
プレターゲッティングされる放射免疫治療のためのさらなる抗ＣＤ１９ ＢｓＡｂ。ＣＤ１９ ＢｓＡｂの２つのさらなるカテゴリーは、（ａ）３ステップのプレターゲッティングされる放射免疫治療（ＰＲＩＴ）（ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０４０９１１）のためのＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖプラットフォーム、および（ｂ）２ステップのターゲッティング（ＳＡＤＡ）（ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３１２３５）のための多量体抗体プラットフォームを含む。両プラットフォームは、ＨＥＲ２などの抗原のエンドサイトーシスにも万能な選択肢となり（例えば、Cheal SM, Xu H, Guo HF, et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 43:925-37 (2016)を参照のこと）、アルファ放射体ランタノイド（ＰＣＴ／２０１８／０４０９０１１）などの異なる放射性核種を用いて使用することができる。ＣＤ１９特異的ＤＯＴＡ結合二重特異性抗体または抗原結合断片の例示的アミノ酸配列は、図１６Ａ～１６Ｂから図３１Ａ～３１Ｂに示されている。
（実施例３）
ＣＤ１９－ＣＤ３特異的ＢｓＡｂの発現および特性決定
ＣＤ１９－ＣＤ３ ＢｓＡｂの重鎖および軽鎖の両方をコードするＤＮＡ構築物を哺乳動物発現ベクターに挿入し、ＣＨＯ－Ｓ細胞にトランスフェクトし、最も高いレベルの抗体産生を示す安定なクローンを選択した。選択した安定なクローンをシェーカーフラスコで拡大した。ワンステッププロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して、シェーカーフラスコから収集した上清から二重特異性抗体を精製した。
ＣＤ１９－ＣＤ３ ＢｓＡｂの純度。ＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体の純度を、サイズ排除クロマトグラフィー－高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）を使用してアッセイした。溶離液中のタンパク質を、波長２８０ｎｍを有する紫外線の吸光度に基づき検出した。図１Ｂは、精製ＣＤ１９－ＣＤ３二重特異性抗体のＳＥＣ－ＨＰＬＣプロファイルを示す。ＳＥＣ－ＨＰＬＣからの画分を、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）を使用して解析した。図１Ｂに示すように、ＣＤ１９－ＢｓＡｂは、クロマトグラムの１５．６５６分のピーク３で溶出された。
ＣＤ１９－ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ１９（＋）細胞との結合。ＣＤ１９－ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ１９（＋）急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）細胞株ＮＡＬＭ６との結合を、フローサイトメトリーを使用してアッセイした。グロボＨと結合する無関係の二重特異性抗体を陰性対照として使用した。ＮＡＬＭ６細胞を、示された量 のＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０または対照ＢｓＡｂとインキュベートし、その後、蛍光色素標識抗ヒト二次抗体とインキュベートした。フローサイトメトリーを使用して結合を検出した。図２に示すように、対照ＢｓＡｂの漸増濃度は、無抗体対照と比較して蛍光の増大をもたらさなかった。対照的に、０．０１から０．１から０．１μｇへのＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０の漸増濃度は蛍光の比例的増大をもたらし、ＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０のＮＡＬＭ６細胞との結合を実証した。図２を参照のこと。
したがって、これらの結果は、本技術の抗体または抗原結合断片が、生物学的サンプル中のＣＤ１９ポリペプチドを検出する方法において有用であることを実証するものである。
ＣＤ１９抗体の親和性は、ＣＤＲ配列を変更することなく抗体フレームワーク領域の配列を変えることによって調節することができる。マウスＦＭＣ６３抗体に基づく８つのヒト化ＶHおよび３つのヒト化ＶL配列を開発した。ヒト化ＶHおよびＶL配列は、マウスＦＭＣ６３のＣＤＲ配列に対して同一であるＣＤＲ配列を有するが、ＶHまたはＶLフレームワーク領域内の特定のアミノ酸残基に関しては互いに異なる。図１２～１３を参照のこと。
ヒト化ＶHおよびＶL配列を互いに対形成させて、ＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体の２４種類のヒト化バージョンを作製した。ＣＤ１９に対する２４種類のヒト化ＣＤ１９－ＣＤ３ ＢｓＡｂの親和性を、フローサイトメトリーを使用してアッセイした。マウスＦＭＣ６３抗体のＶHおよびＶLドメインを含むＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体を、陽性抗体対照として使用した。ＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体を、ＮＡＬＭ６細胞（ＣＤ１９陽性）とインキュベートした。結合したら細胞を５回洗浄した。各洗浄後に細胞アリコートを除去し、蛍光色素標識抗ヒト二次抗体で染色した。ＮＡＬＭ６細胞へのＣＤ１９抗体の結合を、フローサイトメトリーを使用して検出し、正規化した蛍光強度を算出した。図４に示すように、種々のヒト化ＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体クローンに関して低から高までの親和性スペクトラムがあった。これらのデータは、本技術のヒト化ＣＤ１９抗体の親和性が、ＣＤＲ配列を変更することなく、抗体フレームワーク領域の配列を変えることによって調節され得ることを実証するものである。図３２は、各ＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体クローンのいくつかの細胞株に対する安定性データ、ＥＣ５０データ、およびＭＦＩデータを示す。図３３Ａ～３３Ｂは、本技術のＢＣ２５０ ＢｓＡｂの薬物動態特性を示す。
これらの結果は、本技術の抗体または抗原結合断片が、生物学的サンプル中のＣＤ１９ポリペプチドを検出する方法において有用であることを実証するものである。
（実施例４）
ＣＤ１９標的細胞に対するＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ ＢｓＡｂの細胞傷害性
二重特異性ＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ抗体ＢＣ２５０の細胞傷害性。ＣＤ１９－ＣＤ３ ＢｓＡｂが細胞傷害性であるかを評価するために、ＣＤ１９（＋）ＡＬＬ細胞におｋけるＴ細胞細胞傷害性を、標準的な４時間51Ｃｒ放出アッセイを使用して試験した。グロボＨと結合する無関係の二重特異性抗体を陰性対照として使用した。
ＮＡＬＭ６細胞に51Ｃｒを負荷し、漸増濃度のＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０、または対照ＢｓＡｂを、活性化Ｔ細胞とともに51Ｃｒ負荷ＮＡＬＭ６細胞とインキュベートした。回収した培養上清中に存在する放出された51Ｃｒの量を定量化した。細胞溶解の指標である51Ｃｒ放出を、ＢｓＡｂ濃度の関数としてプロットした。対照ＢｓＡｂとのインキュベーションは、低いベースラインレベルの51Ｃｒを放出した（図３の逆三角形を参照のこと）。ＢＣ２５０クローンとのインキュベーションは、対照ＢｓＡｂと比較して51Ｃｒ放出の増大を示し、癌細胞の死滅を実証した（逆三角形と丸を比較のこと）。これらのデータに基づき、ＮＡＬＭ６細胞の細胞溶解に関するＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０のＥＣ50は４２ｆＭと算出された。
抗ＣＤ１９－ＢｓＡｂの効力は、ＣＤ１９に対するその親和性と相関する。細胞傷害性効力に対する抗体親和性の影響を評価するために、ヒト化ＢｓＡｂクローンＢＣ２５０、ＢＣ２５３、ＢＣ２５４およびＢＣ２５５を、ＣＤ１９に対するその親和性に基づき２４種類のヒト化ＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ抗体から選択した。４種類のＢｓＡｂの異なる用量の存在下でのＣＤ１９（＋）ＮＡＬＭ６ ＡＬＬ細胞におけるＴ細胞細胞傷害性を、標準的な４時間51Ｃｒ放出アッセイを使用して測定した。異なるＢｓＡｂの細胞傷害性を、ＢｓＡｂ濃度の関数としてプロットした。４種類のＢｓＡｂクローンを含むＮＡＬＭ６ ＡＬＬ細胞で観察される平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、フローサイトメトリーによって測定した。ＥＣ50値を算出し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の関数としてプロットした。
図５Ｂ～５Ｃに示すように、抗ＣＤ１９－ＢｓＡｂの効力はＣＤ１９に対するその親和性と相関し、ＢＣ２５０（ＶＬ－２、ＶＨ－１ｂ）は、最も高い細胞傷害性効力を示した。ＭＦＩ値はＢｓＡｂの親和性の指標であるため、ＣＤ１９に対する親和性が高いクローンほど、ＡＬＬ細胞のより強力な死滅（より低いＥＣ50）を示した。図５Ａを参照のこと。クローンＢＣ２５０（ＶＬ－２＋ＶＨ－１ｂ）は、（１）ＣＤ１９に対して高い親和性を有した、（２）安定性が４０℃で継時的により良好であった（データ未掲載）、ならびに（３）ＶLおよびＶH配列のヒトらしさ（ｈｕｍａｎｎｅｓｓ）がＷＨＯ基準（＞８５％）を満たしたため、これをリードコンストラクトとして選択した。
これらの結果は、全体として、本技術の抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片がＣＤ１９（＋）腫瘍を検出し、腫瘍成長を阻害できることを実証するものである。これらの結果は、本技術の抗体または抗原結合断片が、それを必要とする対象におけるＣＤ１９関連癌を処置する方法において有用であることを実証している。
（実施例５）
本技術のＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ ＢｓＡｂのｉｎ ｖｉｖｏでの治療効果
異種移植マウスモデルにおけるヒトＡＬＬ ＮＡＬＭ６に対するＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）の有効性。ｉｎ ｖｉｖｏでの研究のために、１００万個のＮＡＬＭ６－ルシフェラーゼ発現ＡＬＬ細胞を、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃscid Ｉｌ２ｒｇtm1Wjl／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに０日目に静脈内注射した。３日後、マウスを撮像し（生物発光イメージング、ＢＬＩ）、以下の７つの処置群に分けた：（１）活性化Ｔ細胞のみ、（２）活性化Ｔ細胞プラス１００ｎｇ ＢＣ１１９（ＮＡＬＭ６細胞と結合しないＧＤ２×ＣＤ３対照ＢｓＡｂ）、（３）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（０．０１ｎｇ）、（４）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（０．１ｎｇ）、（５）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１ｎｇ）、（６）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１０ｎｇ）、および（７）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１００ｎｇ）。白血病が確立されたら、３日目に処置を開始した。マウスは、１０００万活性化Ｔ細胞の週１回の注射を３週間にわたり受けた。ＢｓＡｂは１週間に２回、眼窩後方に投与した：一方の投与は活性化Ｔ細胞と混合し、他方のＢｓＡｂ投与は単独で注射した。活性化Ｔ細胞の最終投与後、抗体処置をさらに４回続け、次いで停止した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞の生存を支持するために、１０００ ＩＵ ＩＬ２を１週間に２回、皮下投与した。ＢＬＩによってモニターした白血病の進行。
図６Ａ～６Ｂに示すように、≧１ｎｇのＢＣ２５０ ＢｓＡｂの投与を受けた動物は、陰性対照ＢＣ１１９ ＢｓＡｂを受けた群と比較してＢＬＩシグナルおよび全光束の減少を示した。故に、ＢＣ２５０ ＢｓＡｂは、白血病負荷を低減するように活性化Ｔ細胞に再指示することができる。図６Ｃに示すように、０．００１μｇ（１ｎｇ）、０．０１μｇ（１０ｎｇ）および０．１μｇ（１００ｎｇ）ＢＣ２５０ ＢｓＡｂによる処置は、活性化Ｔ細胞のみ（無ＢｓＡｂ対照）による処置と比較して統計的に有意な生存の改善を示した（活性化Ｔ細胞のみｖｓ活性化Ｔ細胞／ＢＣ２５０ １ｎｇ投与のｐ＝０．００４７）。１００ｎｇ／投与のＢＣ２５０は、このｉｎ ｖｉｖｏモデルではＮＡＬＭ６細胞に対して治癒的であることが見出された（活性化Ｔ細胞のみｖｓ活性化Ｔ細胞／ＢＣ２５０ １０ｎｇおよび１００ｎｇのｐ＝０．００８２）。
異種移植マウスモデルにおけるヒトバーキットリンパ腫（Ｄａｕｄｉ）に対するＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）の有効性。１００万Ｄａｕｄｉ細胞を、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃscid Ｉｌ２ｒｇtm1Wjl／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに０日目に静脈内注射した。３日後、マウスを撮像し（生物発光イメージング、ＢＬＩ）、以下の３つの処置群に分けた：（１）処置なし（腫瘍のみ）、（２）活性化Ｔ細胞（Ｔ細胞）プラス１００ｎｇ ＢＣ１１９（Ｄａｕｄｉ細胞と結合しないＧＤ２×ＣＤ３対照ＢｓＡｂ）、および（３）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１００ｎｇ）。リンパ腫が確立されたら、１４日目に処置を開始した。マウスは、２０００万活性化Ｔ細胞の週１回の注射を３週間にわたり受けた。ＢｓＡｂは１週間に２回、眼窩後方に投与した：一方の投与は活性化Ｔ細胞と混合し、他方のＢｓＡｂ投与は単独で注射した。活性化Ｔ細胞の最終投与後、抗体処置をさらに２回続け、次いで停止した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞の生存を支持するために、１０００ ＩＵ ＩＬ２ を１週間に２回、皮下投与した。リンパ腫の進行を ＢＬＩによってモニターした。Ｄａｕｄｉ細胞の注射後日数の関数としてマウスからの全光束をプロットした。図７Ａに示すように、１００ｎｇ／投与のＢＣ２５０抗体はＤａｕｄｉ異種移植片に対して治癒的であった。１００ｎｇ／投与のＢＣ２５０抗体で処置したマウスは、陰性対照抗体（ＢＣ１１９）で処置した対照マウスと比較して腫瘍量の実質的な低減を示した。図７Ｂを参照のこと。さらに、ＢＣ２５０を受け取らなかった群内のマウスが腎臓に複数の目に見える転移を示したのに対し、Ｔ細胞／ＢＣ２５０で処置したマウスは腎臓転移を示さなかった。図７Ｃを参照のこと。腎臓ホモジネートのフローサイトメトリーにより、対照群の腎臓内の広範なリンパ腫増殖が明らかになったが、Ｔ細胞／ＢＣ２５０処置群からの腎臓にはリンパ腫細胞がなく、故にＢＣ２５０処置マウスにおける根治を裏付けた。
異種移植マウスモデルにおけるヒト慢性骨髄性白血病急性転化（ＣＭＬ）細胞株ＢＶ１７３に対するＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）の有効性。１００万ＢＶ１７３－ルシフェラーゼ発現細胞を、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃscid Ｉｌ２ｒｇtm1Wjl／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに０日目に静脈内注射した。３日後、マウスを撮像し（生物発光イメージング、ＢＬＩ）、以下の３つの処置群に分けた：（１）無処置（腫瘍のみ）、（２）活性化Ｔ細胞（Ｔ細胞）プラス１００ｎｇ ＢＣ１１９（ＢＶ１７３細胞と結合しないＧＤ２×ＣＤ３対照ＢｓＡｂ）、および（３）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１００ｎｇ）。白血病が確立されたら、１４日目に処置を開始した。マウスは、８８０万活性化Ｔ細胞の単回注射を受けた。ＢｓＡｂは１週間に２回、眼窩後方に投与した：一方の投与は活性化Ｔ細胞と混合し、他方のＢｓＡｂ投与は単独で注射した。単回Ｔ細胞投与後、抗体処置をさらに５回続け、次いで停止した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞の生存を支持するために、１０００ ＩＵ ＩＬ２を１週間に２回、皮下投与した。白血病の進行をＢＬＩによってモニターした。
図８Ａに示すように、１００ｎｇ／投与のＢＣ２５０抗体はＢＶ１７３異種移植片に対して治癒的であった。１００ｎｇ／投与のＢＣ２５０抗体で処置したマウスは、陰性対照抗体（ＢＣ１１９）で処置した対照マウスと比較して生存の増大および腫瘍量の実質的な低減を示した。図８Ｂ～８Ｃを参照のこと。図８Ｄに示すように、ＢＣ２５０を受け取らなかった群内のマウスが肝臓に複数の目に見える転移を示したのに対し、Ｔ細胞／ＢＣ２５０で処置したマウスは肝臓転移を示さなかった。肝臓ホモジネートのフローサイトメトリーにより、対照群の肝臓内の広範な白血病増殖が明らかになったが、Ｔ細胞／ＢＣ２５０処置群からの肝臓には白血病細胞がなく、故にＢＣ２５０処置マウスにおける根治を裏付けた。
異種移植マウスモデルにおけるヒトバーキットリンパ腫（Ｒａｊｉ）に対するＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）の有効性。１００万Ｒａｊｉ－ルシフェラーゼバーキットリンパ腫細胞を、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃscid Ｉｌ２ｒｇtm1Wjl／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに０日目に静脈内注射した。３日後、マウスを撮像し（生物発光イメージング、ＢＬＩ）、以下の３つの処置群に分けた：（１）無処置（腫瘍のみ）、（２）活性化Ｔ細胞（Ｔ細胞）プラス１００ｎｇ ＢＣ１１９（ＧＤ２×ＣＤ３対照ＢｓＡｂ）、および（３）活性化Ｔ細胞プラスＢＣ２５０（１００ｎｇ）。リンパ腫が確立されたら、３日目に処置を開始した。３週間にわたり、マウスは平均２３００万活性化Ｔ細胞の注射を３、７、および１０日目に３回受けた。ＢｓＡｂを活性化Ｔ細胞と混合し、眼窩後方に投与した。さらに２回のＢＣ２５０を１４および２０日目に投与した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞の生存を支持するために、１０００ ＩＵ ＩＬ２を１週間に２回、皮下投与した。リンパ腫進行をＢＬＩによってモニターした。
図９Ａ～９Ｂに示すように、無処置（腫瘍のみ）群または陰性対照ＢＣ１１９ ＢｓＡｂで処置した群と比較して、１００ｎｇ／投与のＢＣ２５０抗体はこのｉｎ ｖｉｖｏ異種移植モデルにおけるＲａｊｉ細胞白血病の負荷を低減した。
したがって、これらの結果は、本技術の抗体または抗原結合断片が、それを必要とする対象におけるＣＤ１９関連癌を処置する方法において有用であることを実証するものである。
（実施例６）
二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）ブリナツモマブと比較した、ＡＬＬ異種移植片に対する本技術のＣＤ１９－ＢｓＡｂのＩｎ ｖｉｖｏでの優れた治療効果
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＢＣ２５０ ＢｓＡｂとブリナツモマブとの抗白血病効果の比較。ブリナツモマブは、白血病に対する唯一のＦＤＡ認可ＢｓＡｂである。二重特異性ＣＤ１９－ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ抗体ＢＣ２５０の効力をブリナツモマブと比較するために、活性化Ｔの存在下のｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞傷害性を、ＣＤ１９（＋）ＮＡＬＭ６細胞を標的細胞として使用してアッセイした。漸増濃度のＣＤ１９－ＢｓＡｂ ＢＣ２５０、またはブリナツモマブを、活性化Ｔ細胞の存在下で51Ｃｒ負荷ＮＡＬＭ６細胞とインキュベートした。標準的な４時間51Ｃｒ放出アッセイを行い、51Ｃｒ放出レベルをＢｓＡｂ濃度の関数としてプロットした。図１０Ａに示すように、ＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）ＢｓＡｂ、およびブリナツモマブは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＣＤ１９白血病細胞の同様の死滅を示した。
ｉｎ ｖｉｖｏでのＢＣ２５０ ＢｓＡｂとブリナツモマブとの抗白血病効果の比較。ＡＬＬ異種移植片に対するＣＤ１９－ＢｓＡｂ（ＢＣ２５０）およびブリナツモマブのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性を比較するために、ＮＳＧマウスに、１００万ＮＡＬＭ６－ルシフェラーゼ発現ＡＬＬ細胞を０日目に静脈内注射した。３日後、マウスを撮像し（生物発光イメージング、ＢＬＩ）、７つの処置群に分けた：（１）Ｔ細胞のみ、（２）Ｔ細胞プラス５フェムトモルＢＣ２５０、（３）Ｔ細胞プラス５０フェムトモルＢＣ２５０、（４）Ｔ細胞プラス５００フェムトモルＢＣ２５０、（５）Ｔ細胞プラス１０フェムトモルブリナツモマブ、（６）Ｔ細胞プラス１００フェムトモルブリナツモマブ、および（７）Ｔ細胞プラス１０００フェムトモルブリナツモマブ。ブリナツモマブは、ＢＣ２５０と比較して２×用量で使用して、いかなる観察された差も、同じ数の利用可能な抗原結合部位が不足していたせいではないことを確実にした。白血病が確立されたら、４日目に処置を開始した。３週間にわたり、マウスは４、１１、および１８日目に１０００万活性化Ｔ細胞の３回注射を受けた。ＢｓＡｂは５日／週投与した。活性化Ｔ細胞の最終投与後、抗体をさらに８回投与し、次いで停止した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＴ細胞の生存を支持するために、１０００ ＩＵ ＩＬ２を１週間に２回、皮下投与した。白血病の進行をＢＬＩによってモニターした。
図１０Ｂに示すように、ＢＣ２５０またはブリナツモマブ処置マウスは、「腫瘍のみ」群の未処置動物と比較して腫瘍量の低減を示した。さらに、５フェムトモルＢＣ２５０で処置したマウスの白血病負荷は、１０フェムトモルブリナツモマブで処置したマウスと比べて低減した。同様に、５０および５００フェムトモルＢＣ２５０で処置したマウスの白血病負荷は、それぞれ、１００および１０００フェムトモルブリナツモマブで処置したマウスより大幅に低減した。図１０Ｂを参照のこと。
図１１Ａ～１１Ｆに示すように、ＢＣ２５０は、すべての試験用量でブリナツモマブより強力に白血病負荷を低減し、生存を増大させる。具体的には、５０フェムトモル／用量のＢＣ２５０は、１００フェムトモル／用量のブリナツモマブと比較して、白血病負荷を１１および１７日時点でそれぞれ１１倍および６８倍有効に低減することができる。図１１Ｇ～１１Ｋは、ｉｎ ｖｉｖｏでのＡＬＬ異種移植片の処置に関して、ＢＣ２５０はブリナツモマブより優れていたことをさらに実証するものである。
図３４Ａ～３４Ｃは、それぞれ、ＣＤ１９（＋）白血病細胞株Ｄａｕｄｉ、ＮＡＬＭ６、およびＲａｊｉに対するＴ細胞媒介細胞傷害性アッセイにおける、Ｎ２９７Ａ／Ｋ３２２Ａ（ＢＣ２５０）およびＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＢＣ２５８）置換を有する２つの二重特異性抗体の比較を示している。理論に縛られることを望むものではないが、二重特異性抗体のＦｃのサイレンシングは、Ｆｃ受容体を有する免疫細胞または補体活性化によるＴ細胞の不要な死滅を防ぎ得ることが考えられる。図３４Ａ～３４Ｃに示すように、ＢＣ２５０は、３つの試験ＣＤ１９（＋）白血病細胞株のうち少なくとも２つにおいてＢＣ２５８よりも白血病細胞の溶解に効力がある。図３５Ａ～３５Ｃは、ＢＣ２５０およびＢＣ２５８二重特異性抗体が両方とも、白血病マウスモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで同等の効力を示したことをさらに実証している。
したがって、これらの結果は、本技術の抗体または抗原結合断片が、それを必要とする対象におけるＣＤ１９関連癌を処置する方法において有用であることを実証するものである。
（実施例７）
ＰＲＩＴにおける抗ＣＤ１９ ＢｓＡｂの使用
ＩｇＧベースのＣＤ１９－Ｃ８２５ ＢｓＡｂ。ＣＤ１９（＋）白血病細胞が、皮下、腹腔内、静脈内、またはその他の経路により動物に注射される。腫瘍確立後（腫瘍の種類および注射経路に依存する）に処置が開始されることになる。処置は１つまたは複数のサイクルから成る。各サイクルは、試験ＢｓＡｂの投与（２５０μｇ、静脈内）と、それに続く２４～４８時間後の清澄剤（ＤＯＴＡデキストランまたはＤＯＴＡデンドリマー；用量はＢｓＡｂ用量の５～１５％である。Cheal SM et al., Mol Cancer Ther 13:1803-12, 2014を参照のこと）の注射を含む。４時間後、ＤＯＴＡ－177Ｌｕ（最大１．５ｍＣｉ）またはＤＯＴＡ－225Ａｃ（１μＣｉ）が静脈内注射されるであろう。概して、ＤＯＴＡ－225ＡｃはＤＯＴＡ－177Ｌｕよりも効力があり、腫瘍根絶に必要なサイクルは少なくなり得る。
四量体化ＢｓＡｂ。ＣＤ１９（＋）白血病細胞が、皮下、腹腔内、静脈内、またはその他の経路により動物に注射され、腫瘍確立後（腫瘍の種類および注射経路に依存する）に処置が開始されることになる。処置は１つまたは複数のサイクルから成る。各サイクルは、ＢｓＡｂの投与（２５０μｇ、静脈内）と、それに続く２４～４８時間後のＤＯＴＡ－177Ｌｕ（最大１．５ｍＣｉ）またはＤＯＴＡ－225Ａｃ（１μＣｉ）の静脈内注射からなる。概して、ＤＯＴＡ－225ＡｃはＤＯＴＡ－177Ｌｕよりも効力があり、腫瘍根絶に必要なサイクルは少なくなり得る。
これらの結果は、本技術の抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片が、腫瘍を検出し、腫瘍増殖および／または転移の進行を阻害し得ることを実証するものである。したがって、本明細書に開示される免疫グロブリン関連組成物は、それを必要とする対象におけるＣＤ１９関連癌の検出および処置に有用である。
（実施例８）
自己免疫疾患を処置するための本技術の抗ＣＤ１９抗体の使用
ヒトＣＤ３をマウスＴ細胞で発現するトランスジェニックマウスが、ヒトＣＤ１９をマウスＢ細胞で発現するトランスジェニックマウスと交配される。得られた子孫は、赤血球（ＲＢＣ）に対する自己抗体のため貧血を自然に発症するニュージーランドブラック（ＮＺＢ）マウスと交配される。貧血が誘導された子孫は、マウスＴ細胞でヒトＣＤ３を、およびマウスＢ細胞でヒトＣＤ１９を発現することになる。貧血を示す動物が、抗ＣＤ１９ ＢｓＡｂまたは対照ＢｓＡｂで処置される。実験の読み出しとして貧血の発症がそれらのマウスで検出される。ＣＤ１９ ＢｓＡｂは抗ＲＢＣ抗体を産生するＢ細胞を枯渇させるため、抗ＣＤ１９ ＢｓＡｂを受け取った動物は、プラセボを受け取った動物と比較して貧血の低減を示すことが予想される。
したがって、本明細書に開示される免疫グロブリン関連組成物は、それを必要とする対象におけるＣＤ１９関連自己免疫疾患を処置する方法において有用である。
均等物
本技術は、本出願に記載される特定の実施形態に関して限定されるべきではなく、本技術の個々の態様の単一の例示として意図される。当業者には明らかなように、本技術の多くの改変および変法は、その趣旨および範囲から逸脱することなく行うことができる。本明細書に列挙されたものに加えて、本技術の範囲内の機能的に同等の方法および装置は、前述の説明から当業者には明らかであろう。そのような改変および変法は、本技術の範囲内にあることが意図される。この本技術は、特定の方法、試薬、化合物組成または生物学的システムに限定されず、これらはもちろん変わり得ることは理解されなければならない。また、本明細書で使用される用語は、単に特定の実施形態を説明することを目的としており、限定されることを意図するものではないことも理解されるべきである。
さらに、本開示の特徴または態様がマーカッシュグループの観点から説明される場合、当業者は、開示がまた、マーカッシュグループの任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループの観点から説明されることを認識するであろう。
当業者によって理解されるように、特に書面による説明を提供するという観点から、ありとあらゆる目的のために、本明細書に開示されるすべての範囲は、ありとあらゆるあり得る部分範囲およびその部分範囲の組合せも包含する。列挙された範囲は、同じ範囲を少なくとも等しい半分、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などに分解して十分に説明し、有効にするものとして簡単に認識できる。限定されない例として、本明細書で論じられる各範囲は、下位３分の１、中３分の１、および上位３分の１などに容易に分解できる。また、当業者によって理解されるように、「まで」、「少なくとも」、「より大きい」、「未満」などのすべての言語は、列挙された数を含み、上記で論じたような部分範囲にその後分解され得る範囲を指す。最後に、当業者によって理解されるように、範囲は各個々のメンバーを含む。したがって、例えば、１～３個のセルを有するグループは、１個、２個、または３個のセルを持つグループを指す。同様に、１～５個のセルを有するグループは、１、２、３、４、または５個のセルを有するグループなどを指します。
本明細書で参照されるまたは引用されるすべての特許、特許出願、仮出願、および刊行物は、本明細書の明示的な教示と矛盾しない範囲で、すべての図および表を含む、全文が参照により組み込まれる。

Claims (58)

  1. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶH）および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶL）を含む抗体またはその抗原結合断片であって、
    （ａ）ＶHは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに／または
    （ｂ）ＶLは、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合断片。
  2. ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインをさらに含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
  3. Ｎ２９７ＡおよびＫ３２２Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含む、請求項２に記載の抗体。
  4. Ｓ２２８Ｐ突然変異を含むＩｇＧ４定常領域を含む、請求項２に記載の抗体。
  5. Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ｓｃＦvおよびＦvからなる群から選択される、請求項１に記載の抗原結合断片。
  6. 配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基を含むＣＤ１９ポリペプチドと結合する、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片。
  7. モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である、請求項１～４または６のいずれか１項に記載の抗体。
  8. 配列番号２２、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３１、配列番号４５、配列番号４７、もしくは１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそのバリアントを含む重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列、ならびに／または、配列番号２０、配列番号２４、配列番号２８、配列番号３０、配列番号４４、配列番号４６、もしくは１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそのバリアントを含む軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を含む抗体。
  9. 配列番号２２および配列番号２０（ｃｈＦＭＣ６３×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）；
    配列番号２６および配列番号２４（ＢＣ２５０－ ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２／ＶＨ－１ｂ×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）；
    配列番号２９および配列番号２８（ｍＦＭＣ６３×ｍＣ８２５ ＢｓＡｂ）；
    配列番号３１および配列番号３０（ｍＦＭＣ６３×ｈＣ８２５ ＢｓＡｂ）；
    配列番号４５および配列番号４４（ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２ＶＨ－１ｂ×ｍＣ８２５）；ならびに
    配列番号４７および配列番号４６（ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２ＶＨ－１ｂ×ｈＣ８２５）
    からなる群からそれぞれ選択されるＨＣアミノ酸配列およびＬＣアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗体。
  10. （ａ）配列番号１７、１８、もしくは１９のうちのいずれか１つの軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に対して少なくとも９５％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列、および／または
    （ｂ）配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２のうちのいずれか１つの重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に対して少なくとも９５％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列
    を含む抗体。
  11. （ａ）配列番号２０、２４、２８、３０、４４もしくは４６のうちいずれか１つ中に存在するＬＣ配列に対して少なくとも９５％同一であるＬＣ配列および／または
    （ｂ）配列番号２２、２６、２９、３１、４５もしくは４７のうちいずれか１つ中に存在するＨＣ配列に対して少なくとも９５％同一であるＨＣ配列
    を含む抗体。
  12. キメラ抗体、ヒト化抗体または二重特異性抗体である、請求項８～１１のいずれか１項に記載の抗体。
  13. 配列番号６０または配列番号６１の２９～１１８位に対応するアミノ酸残基を含むＣＤ１９ポリペプチドと結合する、請求項８～１２のいずれか１項に記載の抗体。
  14. Ｎ２９７ＡおよびＫ３２２Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含む、請求項８～１３のいずれか１項に記載の抗体。
  15. Ｓ２２８Ｐ突然変異を含むＩｇＧ４定常領域を含む、請求項８～１３のいずれか１項に記載の抗体。
  16. 配列番号３２～４３、または４８～５９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む二重特異性抗体または抗原結合断片。
  17. 配列番号３２～４３、または４８～５９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の抗体または抗原結合断片。
  18. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片をコードする組換え核酸配列。
  19. 配列番号２１、２３、２５および２７からなる群から選択される組換え核酸配列。
  20. 請求項１８または請求項１９に記載の組換え核酸配列を含む宿主細胞またはベクター。
  21. 請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片および医薬上許容される担体を含む組成物であって、抗体または抗原結合断片は、同位元素、色素、クロマジェン、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、増殖因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡまたはそれらの任意の組合せからなる群から選択される物質にコンジュゲートされていてもよい、組成物。
  22. 請求項８～１７のいずれか１項に記載の抗体および医薬上許容される担体を含む組成物であって、抗体は、同位元素、色素、クロマジェン、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、増殖因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡまたはそれらの任意の組合せからなる群から選択される物質にコンジュゲートされていてもよい、組成物。
  23. 請求項１～４、６または７のいずれか１項に記載の抗体であって、α－１，６－フコース修飾を欠く抗体。
  24. 請求項８～１５のいずれか１項に記載の抗体であって、α－１，６－フコース修飾を欠く抗体。
  25. Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄系細胞、形質細胞または肥満細胞と結合する、請求項７または１２に記載の二重特異性抗体。
  26. ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、または小分子ＤＯＴＡハプテンと結合する、請求項７、１２、１６または１７に記載の二重特異性抗体または抗原結合断片。
  27. それを必要とする対象においてＣＤ１９関連癌またはＣＤ１９関連自己免疫疾患を処置する方法であって、各々が、
    それぞれ、
    配列番号２２および配列番号２０（ｃｈＦＭＣ６３×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）；
    配列番号２６および配列番号２４（ＢＣ２５０－ ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２／ＶＨ－１ｂ×ＣＤ３ ＢｓＡｂ）；
    配列番号２９および配列番号２８（ｍＦＭＣ６３×ｍＣ８２５ ＢｓＡｂ）；
    配列番号３１および配列番号３０（ｍＦＭＣ６３×ｈＣ８２５ ＢｓＡｂ）；
    配列番号４５および配列番号４４（ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２ＶＨ－１ｂ×ｍＣ８２５）；ならびに
    配列番号４７および配列番号４６（ｈＦＭＣ６３ ＶＬ－２ＶＨ－１ｂ×ｈＣ８２５）
    からなる群から選択される配列を含む、ＨＣアミノ酸配列およびＬＣアミノ酸配列を含む抗体の有効量を対象に投与することを含み、
    抗体は、ＣＤ１９と特異的に結合する方法。
  28. それを必要とする対象においてＣＤ１９関連癌、またはＣＤ１９関連自己免疫疾患を処置する方法であって、配列番号３２～４３、または４８～５９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む二重特異性抗体または抗原結合断片の有効量を対象に投与することを含む方法。
  29. ＣＤ１９関連癌が、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（リンパ形質細胞性リンパ腫）、重鎖病、原発性アミロイドーシス、移植後リンパ増殖性障害、ホジキンリンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、（胚中心様）びまん性大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、二系統の白血病、二表現型白血病、ヘアリー細胞白血病、前駆Ｂリンパ芽急性白血病／リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、濾胞性リンパ腫、または辺縁帯Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫である、請求項２７または２８に記載の方法。
  30. ＣＤ１９関連自己免疫疾患が、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス、腫瘍随伴症候群、尋常性天疱瘡、２型糖尿病、または移植片対宿主病である、請求項２７または２８に記載の方法。
  31. 抗体または抗原結合断片が、さらなる治療薬と別個に、逐次または同時に対象に投与される、請求項２７～３０のいずれか１項に記載の方法。
  32. ｉｎ ｖｉｖｏで対象における腫瘍を検出する方法であって、
    （ａ）請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片の有効量を対象に投与することであって、抗体は、ＣＤ１９を発現する腫瘍に局在化するように構成され、放射性同位元素で標識されていることと、
    （ｂ）参照値よりも高い抗体または抗原結合断片によって放射された放射性レベルを検出することによって、対象における腫瘍の存在を検出することと
    を含む方法。
  33. 対象が、ＣＤ１９関連癌を有すると診断される、またはＣＤ１９関連癌を有すると疑われる、請求項３２に記載の方法。
  34. 抗体または抗原結合断片によって放射された放射性レベルが、陽電子放射型断層撮影または単一光子放射型コンピュータ断層撮影を使用して検出される、請求項３２または３３に記載の方法。
  35. 放射性核種にコンジュゲートされた請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートの有効量を対象に投与することをさらに含む、請求項３２～３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. 放射性核種が、アルファ粒子放射性同位元素、ベータ粒子放射性同位元素、オージェ放射体またはそれらの任意の組合せである、請求項３５に記載の方法。
  37. ベータ粒子放射性同位元素が、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕおよび67Ｃｕからなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
  38. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片および使用説明書を含むキット。
  39. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片が、放射性標識、蛍光標識、および発色標識からなる群から選択される少なくとも１つの検出可能な標識にカップリングされている、請求項３８に記載のキット。
  40. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体と特異的に結合する二次抗体をさらに含む、請求項３８または３９に記載のキット。
  41. 二重特異性抗体が、放射標識ＤＯＴＡハプテンおよびＣＤ１９抗原と結合する、請求項７、１２、１６、または１７に記載の二重特異性抗体または抗原結合断片。
  42. プレターゲッティングされる放射免疫治療のために対象を選択する方法であって、
    （ａ）放射標識ＤＯＴＡハプテンおよび請求項４１に記載の二重特異性抗体または抗原結合断片を含む複合体の有効量を対象に投与することであって、複合体はＣＤ１９発現腫瘍に局在化するように構成されていることと、
    （ｂ）複合体によって放射された放射性レベルを検出することと、
    （ｃ）複合体によって放射された放射性レベルが参照値よりも高い場合に、プレターゲッティングされる放射免疫治療のために対象を選択することと
    を含む方法。
  43. ＣＤ１９関連癌と診断された対象において放射線療法に対する腫瘍感受性を増大させる方法であって、放射標識ＤＯＴＡハプテンおよび請求項４１に記載の二重特異性抗体または抗原結合断片を含む複合体の有効量を対象に投与することであって、複合体は、ＣＤ１９発現腫瘍に局在化するように構成されていることを含む方法。
  44. それを必要とする対象において癌を処置する方法であって、放射標識ＤＯＴＡハプテンおよび請求項４１に記載の二重特異性抗体または抗原結合断片を含む複合体の有効量を対象に投与することであって、複合体は、ＣＤ１９発現腫瘍に局在化するように構成されていることを含む方法。
  45. ＣＤ１９関連癌と診断された対象において放射線療法に対する腫瘍感受性を増大させる方法であって、
    （ａ）請求項４１に記載の二重特異性抗体または抗原結合断片の有効量を投与することであって、二重特異性抗体または抗原結合断片は、ＣＤ１９発現腫瘍に局在化するように構成されていることと、
    （ｂ）放射性標識ＤＯＴＡハプテンの有効量を対象に投与することであって、放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、二重特異性抗体または抗原結合断片と結合するように構成されていることと
    を含む方法。
  46. それを必要とする対象において癌を処置する方法であって、
    （ａ）請求項４１に記載の二重特異性抗体または抗原結合断片の有効量を投与することであって、二重特異性抗体または抗原結合断片は、ＣＤ１９発現腫瘍に局在化するように構成されていることと、
    （ｂ）の有効量を対象に投与することであって、放射性標識ＤＯＴＡハプテンは、二重特異性抗体または抗原結合断片と結合するように構成されていることと
    を含む方法。
  47. 放射性標識ＤＯＴＡハプテンの投与の前に対象に清澄剤の有効量を投与することをさらに含む、請求項４５または４６に記載の方法。
  48. 対象がヒトである、請求項４２～４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. 複合体が、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、脳室内、経口、腫瘍内、または鼻腔内投与される、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の方法。
  50. 放射性標識ＤＯＴＡハプテンが、アルファ粒子放射性同位元素、ベータ粒子放射性同位元素またはオージェ放射体を含む、請求項４２～４９のいずれか１項に記載の方法。
  51. 放射性標識ＤＯＴＡハプテンが、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、255Ｆｍ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、68Ｇａ、227Ｔｈまたは64Ｃｕを含む、請求項４２～５０のいずれか１項に記載の方法。
  52. 第１のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗原結合断片であって、
    第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
    ｉ． 第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；
    ｉｉ． アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；
    ｉｉｉ． 第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；
    ｉｖ． アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含むフレキシブルペプチドリンカーと；
    ｖ． 第２のエピトープと特異的に結合することができる第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；
    ｖｉ． アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；
    ｖｉｉ． 第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；
    ｖｉｉｉ． アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含むフレキシブルペプチドリンカー配列と；
    ｉｘ． 自己集合分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチドと
    を含み、
    第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択され、ならびに／または第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインは、配列番号１７、配列番号１８および配列番号１９からなる群から選択される二重特異性抗原結合断片。
  53. 第１のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗原結合断片であって、
    第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
    ｉ． 第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；
    ｉｉ． アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；
    ｉｉｉ． 第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；
    ｉｖ． アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含むフレキシブルペプチドリンカーと；
    ｖ． 第２のエピトープと特異的に結合することができる第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；
    ｖｉ． アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーと；
    ｖｉｉ． 第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；
    ｖｉｉｉ． アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含むフレキシブルペプチドリンカー配列と；
    ｉｘ． 自己集合分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチドと
    を含み、
    第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択され、ならびに／または第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインは、配列番号１７、配列番号１８および配列番号１９からなる群から選択される二重特異性抗原結合断片。
  54. ＳＡＤＡポリペプチドが、四量体化、五量体化、または六量体化ドメインを含む、請求項５２または５３に記載の抗原結合断片。
  55. ＳＡＤＡポリペプチドが、ｐ５３、ｐ６３、ｐ７３、ｈｎＲＮＰＣ、ＳＮＡ－２３、ステフィンＢ、ＫＣＮＱ４、またはＣＢＦＡ２Ｔ１のうちのいずれか１つの四量体化ドメインを含む、請求項５４に記載の抗原結合断片。
  56. 配列番号３２～４３、または４８～５９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５２～５５のいずれか１項に記載の抗原結合断片。
  57. 第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗体であって、第１および第２のポリペプチド鎖は互いに共有結合され、第２のおよび第３のポリペプチド鎖は互いに共有結合され、第３のおよび第４のポリペプチド鎖は互いに共有結合され、ならびに
    ａ． 第１のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖の各々は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
    ｉ． 第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと；
    ｉｉ． 第１の免疫グロブリンの軽鎖定常ドメインと；
    ｉｉｉ． アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）3を含むフレキシブルペプチドリンカーと；
    ｉｖ． 第２の免疫グロブリンの軽鎖および重鎖可変ドメインが、第２のエピトープと特異的に結合することができ、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含むフレキシブルペプチドリンカーを介して一緒に連結されて一本鎖可変断片を形成する、第２の免疫グロブリンの相補的重鎖可変ドメインに連結された第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン、または第２の免疫グロブリンの相補的軽鎖可変ドメインに連結された第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと
    を含み、
    ｂ． 第２のポリペプチド鎖および第３のポリペプチド鎖の各々は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
    ｉ． 第１のエピトープと特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと；
    ｉｉ． 第１の免疫グロブリンの重鎖定常ドメインと
    を含み、
    第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択され；および／または第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインは、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９からなる群から選択される二重特異性抗体。
  58. 第２の免疫グロブリンが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、または小分子ＤＯＴＡハプテンと結合する、請求項５７に記載の二重特異性抗体。
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8679492B2 (en) * 2009-02-23 2014-03-25 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Humanized antibodies that bind to CD19 and their uses
EP2885002A4 (en) * 2012-08-14 2016-04-20 Ibc Pharmaceuticals Inc BISPECIFIC ANTIBODIES REDIRECTED AGAINST T CELLS FOR THE TREATMENT OF DISEASES
CA2936785A1 (en) * 2014-01-15 2015-07-23 Zymeworks Inc. Bi-specific cd3 and cd19 antigen-binding constructs
EA201790719A1 (ru) * 2014-09-26 2017-07-31 Макродженикс, Инк. Биспецифические моновалентные диатела, которые способны связывать cd19 и cd3, а также их применения
EA039859B1 (ru) * 2016-02-03 2022-03-21 Эмджен Рисерч (Мюник) Гмбх Биспецифические конструкты антител, связывающие egfrviii и cd3
US11174306B2 (en) * 2016-10-19 2021-11-16 The Scripps Research Institute Chimeric antigen receptor effector cell switches with humanized targeting moieties and/or optimized chimeric antigen receptor interacting domains and uses thereof
JOP20180042A1 (ar) * 2017-04-24 2019-01-30 Kite Pharma Inc نطاقات ربط مولد ضد متوافقة مع البشر وطرق الاستخدام
US11365254B2 (en) * 2017-09-22 2022-06-21 WuXi Biologics Ireland Limited Bispecific CD3/CD19 polypeptide complexes
JP7303802B2 (ja) * 2017-09-23 2023-07-05 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター Ａ３３抗体組成物および放射性免疫療法におけるその使用方法

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