KR20180073687A - 호흡기 질환의 치료를 위한 jak 키나제 저해제 화합물 - Google Patents

호흡기 질환의 치료를 위한 jak 키나제 저해제 화합물 Download PDF

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KR20180073687A
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존 알. 제이콥슨
앤-마리 뷰솔레일
게리 이.엘. 브랜트
멜리사 플뢰리
란 지앙
카메론 스미스
스티븐 디.이. 설리반
오든 로리 진 반
피어-진 콜슨
진 티모시 파스
미로슬라브 랍타
노아 벤자민
마르타 다브로스
벤캇 알. 탈라디
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Abstract

본 발명은 화학식 (I)의 화합물:
Figure pct00113

X는
Figure pct00114
이고, 변수들은 명세서에 정의된 바와 같음
, 또는 그의 약학적으로-허용가능한 염을 제공하고, 이는 JAK 키나제 저해제로서 유용하다. 본 발명은 또한 상기 화합물을 포함하는 약학적 조성물, 호흡기 질환을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하는 방법, 및 상기 화합물을 제조하는데 유용한 방법 및 중간체를 제공한다.

Description

호흡기 질환의 치료를 위한 JAK 키나제 저해제 화합물
본 발명은 JAK 키나제 저해제 (kinase inhibitors)로서 유용한 디아미노 (diamino) 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 화합물을 포함하는 약학적 조성물, 호흡기 질환 (respiratory diseases)을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하는 방법, 및 상기 화합물을 제조하는데 유용한 방법 및 중간체에 관한 것이다.
천식 (asthma)은 예방법 또는 치료법이 없는 만성 기도 질환이다. 상기 질환은 기도의 염증, 섬유증 (fibrosis), 과민성 (hyperresponsiveness), 및 재형성 (remodeling)을 특징으로 하고, 상기 모두는 호기류 (airflow)를 제한한다. 전세계적으로 3억명의 사람들이 천식을 앓는 것으로 추정되며, 천식에 걸린 사람의 수는 2025년까지 1억명 이상 증가할 것으로 추정된다. 미국에서, 천식 환자는 인구의 약 6 % 내지 8 %이고, 이는 미국에서 가장 흔한 만성 질환 중 하나이다. 대부분의 환자는, 류코트리엔 조절제 (leukotriene modifier) 및/또는 지속성 베타 작용제 (long acting beta agonist)와 조합될 수 있는, 흡입 (inhaled) 코르티코스테로이드 (corticosteroids)를 사용하여 천식 증상을 제어할 수 있지만, 기존의 요법으로는 제어되지 않는 중증 천식을 갖는 환자의 서브세트 (subset)가 있다. 중증 지속 천식 (severe persistent asthma)은 다량의 흡입 코르티코스테로이드로 제어되지 않는 질환으로 정의된다. 중증 천식 환자는 모든 천식 환자의 대략 5 %를 차지할 것으로 추정되며, 이들은 고위험의 이환율 (morbidity) 및 사망율 (mortality)을 가지며, 천식환자들 중 헬스 케어 자원 이용의 불균형한 공유에 책임이 있다. 이러한 환자를 치료하기 위한 새로운 치료법이 필요하다.
시토킨 (cytokines)은 케모킨 (chemokines), 인터페론 (interferons), 인터루킨 (interleukins), 림포킨 (lymphokines), 및 종양 괴사 인자 (tumour necrosis factor)를 포함하는 세포간 신호전달 분자 (intercellular signaling molecules)이다. 시토킨은 정상적인 세포 성장 및 면역조절에 중요하지만 면역-매개 질환을 유발하고 악성 세포의 성장에 기여한다. 다수의 시토킨의 상승된 수준은 천식 염증의 병리학 (pathology)에 연루되어 있다. 예를 들어, 인터루킨 (interleukin: IL)-5, 및 13을 표적으로 하는 항체-기반 요법은 중증 천식 환자의 서브세트에서 임상적 유익함을 제공하는 것이 밝혀졌다. 천식 염증에 관여하는 시토킨들 중에, 다수는 티로신 키나제의 Janus 패밀리 (Janus family of tyrosine kinases: JAKs)에 의존하는 신호전달 경로를 통해 작용하고, 이는 전사 인자의 STAT (Signal Transducer and Activator of Transcription) 패밀리를 통해 신호를 전달한다. JAK-STAT 경로를 통해 신호를 전달하는 천식 염증에 관여하는 시토킨은 IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-11, IL-13, IL-23, IL-31, IL-27, 흉선 기질상 림포포이에틴 (thymic stromal lymphopoietin: TSLP), 인터페론-γ (interferon-γ: IFNγ) 및 과립구-마크로파지 콜로니-자극 인자 (granulocyte-macrophage colony-stimulating factor: GM-CSF)를 포함한다.
상기 JAK 패밀리는 4개의 구성원인, JAK1, JAK2, JAK3, 및 티로신 키나제 2 (tyrosine kinase 2: TYK2)를 포함한다. 시토킨의 JAK-의존성 시토킨 수용체로의 결합은 수용체의 이량체화 (dimerization)를 유도하여, JAK 키나제 상에 티로신 잔기의 포스포릴화 (phosphorylation)를 초래하여, JAK 활성화에 영향을 준다. 포스포릴화된 JAKs는, 이량체화, 세포 핵에서 내재화 및 유전자 전사를 직접 조절하는, 다양한 STAT 단백질과 차례로 결합 및 포스포릴화하여, 다른 효과들 중에서 염증 질환과 관련된 하류 효과 (downstream effect)를 유도한다. 상기 JAKs는 대개 시토킨 수용체와 결합하여 호모다이머 (homodimers) 또는 헤테로다이머 (heterodimers)로 쌍을 이룬다. 특정 시토킨은 특정 JAK 대합 (pairing)과 관련이 있다. 상기 JAK 패밀리 중 4개의 구성원들 각각은 천식 염증과 관련된 시토킨들 중 적어도 하나의 신호전달에 관여되어 있다. 결과적으로, 상기 JAK 패밀리의 모든 구성원에 대한 전체-활성 (pan-activity)을 갖는 화학적 저해제는 중증 천식에 기여하는 광범위한 전-염증성 (pro-inflammatory) 경로를 조절할 수 있다.
그러나, 상기 저해제의 광범위한 항-염증 효과는 정상 면역 세포 기능을 억제할 수 있어서, 잠재적으로 감염의 위험을 증가시킬 수 있다. 증가된 감염 위험의 증거는 류마티스 관절염의 치료를 위해 경구로 투여되는 JAK 저해제인 토파시티닙 (tofacitinib)에서 관찰되었다. 천식에서, 염증은 호흡기관에 국한되어 있다. 기도의 염증은 천식 이외에 다른 호흡기 질환을 특징으로 한다. 만성 폐쇄성 폐 질환 (chronic obstructive pulmonary disease: COPD), 낭성 섬유증 (cystic fibrosis: CF), 폐렴 (pneumonitis), 간질성 폐 질환 (interstitial lung diseases) (특발성 폐 섬유증 (idiopathic pulmonary fibrosis) 포함), 급성 폐 손상 (acute lung injury), 급성 호흡 곤란 증후군 (acute respiratory distress syndrome), 기관지염 (bronchitis), 폐기종 (emphysema), 및 폐쇄세기관지염 (bronchiolitis obliterans)은 또한, 그 병태생리학이 JAK-신호전달 시토킨과 관련이 있는 것으로 여겨지는, 호흡기관 질환이다. 흡입에 의해 JAK 저해제를 폐에 국소 투여하는 것은, 효능이 있는 항-시토킨 작용제를 작용 부위에 직접 전달하여 전신 노출을 제한함으로써, 유해 전신 면역억제 가능성을 제한하여 치료적 유효성이 있을 가능성을 제공한다. 호흡기 질환의 치료를 위해 폐에 국소 투여하기에 적합한 효능이 있는 JAK 저해제에 대한 필요성이 남아있다.
일 양상에서, 본 발명은 JAK 키나제 저해제로서 활성을 갖는 신규한 화합물을 제공한다.
따라서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로-허용가능한 염을 제공한다:
Figure pct00001
상기에서:
X는 하기 화학식 (II)의 그룹이고:
Figure pct00002
n은 0 또는 1이고;
R1은 수소 또는 C1- 3알킬이고;
R2는 수소 또는 C1- 3알킬이고;
R3은 수소 또는 C1- 3알킬이고;
또는 R2 및 R3은 함께 C2- 4알킬렌을 형성하고;
또는, n이 1인 경우, R3은 수소, -OH, -OC1- 3알킬, 할로, -C(O)OC1 - 3알킬, 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 상기 C1-3알킬은 -OH로 선택적으로 치환되고;
R4는 수소 또는 C1- 3알킬이고;
R5는 수소, C1- 3알킬, -C(O)OC1 - 3알킬, 및 페닐로부터 선택되고;
또는 n이 1인 경우, R2 및 R5는 함께 C1- 3알킬렌을 형성하고;
R6은 수소 또는 C1- 3알킬이고;
R7은 수소 또는 C1- 3알킬이고,
또는 n이 0인 경우, R2 및 R7은 함께 C1- 3알킬렌을 형성하거나, 또는 R4 및 R7은 함께 C2-4알킬렌 또는 C1알킬렌-O-C2알킬렌을 형성하고;
또는 n이 1인 경우, R2 및 R7은 함께, C1- 3알킬 또는 Rx로 선택적으로 치환된, C2알킬렌을 형성하거나, 또는 R4 및 R7은 함께 C1- 3알킬렌 또는 -O-C2알킬렌을 형성하고;
R8은
(a) 수소,
(b) 메틸로서, -CN, 페닐 또는 C3- 6시클로알킬로 선택적으로 치환되는 것인 메틸;
(c) C2- 6알킬로서, 상기 C2- 6알킬은 -OH, -OC1- 3알킬, -CN, -SC1- 3알킬, 페닐, C3- 6시클로알킬, 할로로부터 선택된 1 또는 2개의 치환체로 선택적으로 치환되고, 및 선택적으로, 부가로 단일 탄소 원자 상에서 2개의 치환체가 함께 C2- 3알킬렌을 형성하는 것인 C2- 6알킬;
(d) C3- 6시클로알킬로서, 상기 C3- 6시클로알킬은 -OH, -CN, -OC1- 3알킬, 또는 C1- 3알킬로 선택적으로 치환되고, 상기 C1- 3알킬은 -OC1- 3알킬 또는 1 또는 2개의 할로로 선택적으로 치환되는 것인 C3-6시클로알킬,
(e) 옥세타닐,
(f) 테트라히드로피라닐,
(g) 테트라히드로티오페닐 1,1-디옥시드, 및
(h) 페닐로부터 선택되고,
또는 R7 및 R8은 함께 C3- 5알킬렌 또는 C2알킬렌-O-C2알킬렌을 형성하고; 상기 C3-5알킬렌은 1 또는 2개의 Rx로 선택적으로 치환되고;
Rx는 -OH, -CN, -OC1- 3알킬, 할로, 페닐, 및 C1- 3알킬로부터 선택되고, 상기 C1-3알킬은 -OC1- 3알킬 또는 -OH로 선택적으로 치환되고, 또는
2개의 치환체 Rx는 함께 C1- 5알킬렌 또는 -CH2OCH2-를 형성하고,
또는 n이 1이고 및 R2 및 R7은 함께 C2알킬렌을 형성하는 경우, C2알킬렌 상에서 R4 및 치환체 Rx는 함께 C2알킬렌을 형성하고;
단, 동일한 탄소 원자 상에 2개의 치환체 Rx는 둘다 플루오로는 아니고, 및
단, Rx가 질소 원자에 인접한 탄소 원자에 부착되는 경우, Rx는 -OH, -OC1- 3알킬, 또는 할로는 아니다.
이후에 사용되는 바와 같이, 문구 "화학식 (I)의 화합물"은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 의미하고; 즉, 상기 문구는, 달리 언급하지 않는 한, 유리 염기 (free base) 형태 또는 약학적으로 허용가능한 염 형태의 화학식 (I)의 화합물을 의미한다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 및 약학적으로-허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
또다른 양상에서, 본 발명은 결정 유리 염기 히드레이트 (crystalline free base hydrate)로서 화학식 (I)의 특정 화합물을 제공한다. 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이트 (crystalline hydrate)는 약 206 ℃ 내지 약 216　℃, 통상적으로 약 209 ℃ 내지 약 214 ℃ 범위의 용융 온도 (melting temperature)를 갖고, 약 245 ℃에서 분해가 개시되고, 및 실온에서 약 5 % 내지 약 90 %의 상대 습도의 범위로 노출될 때 약 0.12 % 미만의 중량 변화를 나타내는 것이 밝혀졌다.
본 발명은 또한 포유동물에서 호흡기 질환, 구체적으로 천식을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 약학적 조성물의 치료적으로 유효한 양을 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 개별 및 구별되는 양상에서, 본 발명은 또한 본원에 개시된 합성 방법 및 중간체를 제공하고, 이는 본 발명의 화합물을 제조하는데 유용하다.
본 발명은 또한 의학적 치료에 사용하기 위한 본원에 개시된 바와 같은 본 발명의 화합물 뿐만 아니라 포유동물에서 호흡기 질환을 치료하기 위한 제제 또는 약제의 제조에서 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명의 다양한 양상은 첨부된 도면을 참조로 서술된다.
도 1은 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이트의 분말 X-선 회절 (powder x-ray diffraction: PXRD) 패턴을 개시하였다.
도 2는 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이트의 시차 주사 열량계 (differential scanning calorimetry: DSC) 서모그램 (thermogram)을 개시하였다.
도 3은 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이트의 열 중량 분석 (thermal gravimetric analysis: TGA) 플롯을 개시하였다.
도 4는 약 25 ℃의 온도에서 관찰된, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이트의 동적 수분 흡착 (dynamic moisture sorption: DMS) 등온선 (isotherm)을 개시하였다.
다른 양상들 중에서, 본 발명은 화학식 (I)의 JAK 키나제 저해제, 그의 약학적으로-허용가능한 염 및 그의 제조를 위한 중간체를 제공한다. 하기 치환체 및 값은 본 발명의 다양한 양상의 대표적인 예를 제공하기 위한 것이다. 이러한 대표적인 값은 상기 양상을 더 정의하기 위한 것이고, 다른 값들을 배제하거나 또는 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다.
특정 양상에서 X는 화학식 (II)의 그룹이다:
Figure pct00003
.
다른 특정 양상에서, X는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00004
상기 변수 (variables) R4, R5, R7, R8, 및 Rx는 상기 화학식 (I)에서 정의되는 바와 같거나 또는 하기에서 정의되는 바와 같고, R3은 수소 또는 C1- 3알킬이고, 및 R3a는 수소, -OH, -OC1- 3알킬, 할로, -C(O)OC1 - 3알킬, 및 C1- 3알킬로부터 선택되고, 상기 C1- 3알킬은 -OH로 선택적으로 치환된다. 다른 양상에서, R3a는 수소, -OH, -OC1-3알킬, 할로, -C(O)OC1-3알킬, 및 C1-3알킬로부터 선택된다.
또다른 양상에서, X는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00005
상기 변수 R3a, R7, 및 R8은 상기 직전에서 정의된 바와 같이 정의되거나 또는, 구체적으로, R3a는 할로이고 및
Figure pct00006
의 피롤리딘 고리는 C1- 3알킬로 선택적으로 치환된다.
또다른 양상에서, X는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00007
상기에서:
R7은 C1- 3알킬이고; 및
R8은 수소, 메틸, C2- 4알킬, C3- 4시클로알킬, 및
Figure pct00008
로부터 선택된다.
특정 양상에서, n은 0 또는 1이다. 다른 특정 양상에서, n은 0이다. 또다른 특정 양상에서, n은 1이다.
특정 양상에서, R1은 수소 또는 C1- 3알킬이다. 다른 특정 양상에서, R1은 수소이다.
특정 양상에서, R2는 수소 또는 C1- 3알킬이다. 다른 특정 양상에서, R2는 수소이다.
특정 양상에서, R3은 수소 또는 C1- 3알킬이고; 또는 R2 및 R3은 함께 C2- 4알킬렌을 형성하고; 또는, n이 1인 경우, R3은 수소, -OH, -OC1- 3알킬, 할로, -C(O)OC1 - 3알킬, 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 상기 C1-3알킬은 -OH로 선택적으로 치환된다;
다른 특정 양상에서, R3은 수소 또는 C1- 3알킬이고; 또는, n이 1인 경우, R3은 수소, -OH, -OC1-3알킬, 할로, -C(O)OC1-3알킬, 및 C1-3알킬로부터 선택되고;
특정 양상에서, R2 및 R3은 함께 C3알킬렌을 형성하고;
R3의 특정 값은 수소, -CH3, -OH, -CH2OH, 및 플루오로를 포함한다.
특정 양상에서, R4는 수소 또는 C1- 3알킬이다. 다른 특정 양상에서, R4는 수소이다.
특정 양상에서, R5는 수소, C1- 3알킬, -C(O)OC1 - 3알킬, 및 페닐로부터 선택되고, 또는 n이 1인 경우, R2 및 R5는 함께 C1-3알킬렌을 형성한다.
다른 특정 양상에서, R2 및 R5는 함께 C1알킬렌을 형성한다.
다른 특정 양상에서, R5는 수소 또는 C1- 3알킬이다. 또다른 특정 양상에서, R5는 수소이다
특정 양상에서, R6은 수소 또는 C1- 3알킬이다. 다른 특정 양상에서, R6은 수소이다.
특정 양상에서, R7은 수소 또는 C1- 3알킬이고 또는 n이 0인 경우, R2 및 R7은 함께 C1- 3알킬렌을 형성하거나, 또는 R4 및 R7은 함께 C2- 4알킬렌 또는 C1알킬렌-O-C2알킬렌을 형성하고; 또는 n이 1인 경우, R2 및 R7은 함께, C1- 3알킬로 선택적으로 치환되는, C2알킬렌을 형성하거나, 또는 R4 및 R7은 함께 C1- 3알킬렌 또는 -O-C2알킬렌을 형성한다. 다른 특정 양상에서, n이 1인 경우, R4 및 R7은 함께 -O-C2알킬렌을 형성한다.
다른 특정 양상에서, R7은 수소 또는 C1- 3알킬이다.
특정 양상에서, R8은 (a) 수소, (b) 메틸로서, -CN, 페닐 또는 C3- 6시클로알킬로 선택적으로 치환되는 것인 메틸; (c) C2- 6알킬로서, 상기 C2- 6알킬은 -OH, -OC1-3알킬,-CN, -SC1- 3알킬, 페닐, C3- 6시클로알킬, 할로로부터 선택된 1 또는 2개의 치환체로 선택적으로 치환되고, 및 선택적으로, 부가로 단일 탄소 원자 상에 2개의 치환체가 함께 C2- 3알킬렌을 형성하는 것인 C2- 6알킬; (d) C3- 6시클로알킬로서, 상기 C3-6시클로알킬은 -OH, -CN, -OC1- 3알킬, 또는 C1- 3알킬로 선택적으로 치환되고, 상기 C1- 3알킬은 -OC1-3알킬 또는 1 또는 2개의 할로로 선택적으로 치환되는 것인 C3- 6시클로알킬, (e)　옥세타닐, (f) 테트라히드로피라닐, (g) 테트라히드로티오페닐 1,1-디옥시드, 및 (h) 페닐로부터 선택되고; 또는 R7 및 R8은 함께 C3- 5알킬렌 또는 C2알킬렌-O- C2알킬렌을 형성한다.
다른 특정 양상에서, R8은 (a) 수소, (b) 메틸로서, C3- 6시클로알킬로 선택적으로 치환되는 것인 메틸; (c) C2- 4알킬로서, 상기 C2- 4알킬은 -OH, -OC1- 3알킬, -CN, -SC1-3알킬, C3- 4시클로알킬, 및 할로로부터 선택된 1개의 치환체로 선택적으로 치환되고 및 선택적으로, 부가로, 단일 탄소 원자 상에 2개의 치환체는 함께 C2알킬렌을 형성하는 것인 C2- 4알킬; (d)　C3- 4시클로알킬로서, 상기 C3- 4시클로알킬은 -OH, -CN, -OC1-3알킬, 또는 C1- 3알킬로 선택적으로 치환되고, 상기 C1- 3알킬은 -OC1- 3알킬 또는 1 또는 2개의 할로로 선택적으로 치환되는 것인 C3- 4시클로알킬; (e) 옥세타닐; (f) 테트라히드로피라닐; 및 (g) 테트라히드로티오페닐 1,1-디옥시드로부터 선택된다.
R8의 특정 값은 수소, -CH3, -C2H5, 이소프로필, 시클로프로필, 시클로부틸, -CH(CH3)C2H5, -(CH2)2CN, -CH2CH2F, -CH2이소프로필, -CH2시클로프로필, -(CH2)2OH, (CH2)2-3OCH3, -(CH2)2- 3SCH3, -(CH2)2CH(CH3)SCH3, 테트라히드로피란-4-일, 피리딘-4-일,
Figure pct00009
를 포함한다.
다른 특정 양상에서, R8은 수소, 메틸, C2- 4알킬, C3- 4시클로알킬, 및
Figure pct00010
; 및 수소, 메틸, C2- 4알킬 및
Figure pct00011
로부터 선택된다.
또다른 특정 양상에서, R8은 수소, 메틸, C2- 4알킬, 및 C3- 4시클로알킬, 또는 수소, 메틸, C2- 4알킬 및 C3시클로알킬로부터 선택된다.
특정 양상에서, 본 발명은 화학식 (III)의 화합물을 제공하고:
Figure pct00012
상기 변수 R8은 본원에 정의된 바와 같다.
다른 양상에서, 본 발명은 화학식 (IV)의 화합물을 제공하고:
Figure pct00013
상기 변수 R8은 본원에 정의된 바와 같다.
또다른 양상에서, 본 발명은 화학식 (V)의 화합물을 제공하고:
Figure pct00014
상기 변수 R7 및 R8은 본원에 정의된 바와 같다.
다른 양상에서, 본 발명은 하기 화합물들로부터 선택된 화합물을 제공한다:
5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
4-(3-(5-(아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
4-(3-(5-(1-(sec-부틸)아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
4-(3-(5-(1-시클로프로필아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
4-(3-(5-(2-(디메틸아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(2-((3-메톡시시클로부틸)아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
5-에틸-4-(3-(5-(2-(에틸(메틸)아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-2-플루오로페놀,
4-(3-(5-(2-(sec-부틸(메틸)아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
(S)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-((1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
4-(3-(5-(3-(디메틸아미노)-2-플루오로프로필)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
(S)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(모르폴린-3-일메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
(R)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(모르폴린-3-일메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
(S)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(2-(2-메틸피롤리딘-1-일)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
및 그의 약학적으로-허용가능한 염.
일 양상에서, 본 발명은 하기 실시예 1-18 및 표　1-19의 화합물을 제공한다.
특정 양상에서, 본 발명은 화학식 (I)에 포함되지 않는 표 3에 개시되어 있는, 화합물 3-19, 3-28, 및 3-29를 제공한다.
화학 구조는 ChemDraw 소프트웨어 (PerkinElmer, Inc., Cambridge, MA)에서 구현되는 바와 같이 IUPAC 조약에 따라 본원에서 명명되었다. 예를 들면, 실시예 1의 화합물인:
Figure pct00015
은 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀로 명명되었다.
또한, 화학식 (I)의 구조에서 테트라히드로이미다조피리딘 모이어티 (moiety)의 이미다조 부분은, 실시예 1의 화합물의 단편에 있어서 하기에 예시되는, 토토머 형태 (tautomeric forms)로 존재한다:
Figure pct00016
.
IUPAC 조약에 따르면, 이러한 표현은 이미다졸 부분의 원자의 넘버링을 다르게 한다: 2-(1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘 (구조 A) 대 2-(1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-3 H -이미다조[4,5-c]피리딘 (구조 B). 구조들이 특정 형태로 개시되거나 또는 명명되었음에도 불구하고, 본 발명은 또한 그 토토머를 포함하는 것으로 이해될 것이다.
본 발명의 화합물은 하나 이상의 키랄 중심 (chiral centers)을 포함할 수 있고, 그러므로 상기 화합물 (및 그의 중간체)은 라세미 (racemic) 혼합물; 순수 입체이성질체 (즉, 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체); 입체이성질체-강화된 혼합물 등으로 존재할 수 있다. 키랄 중심에서 정의된 입체화학 없이 본 명세서에 개시되거나 또는 명명된 키랄 화합물들은, 달리 지시되지 않는 한 상기 정의되지 않은 입체중심에서 임의의 또는 모든 가능한 입체이성질체 변형 (variation)을 포함하는 것으로 의도된다. 특정한 입체이성질체의 묘사 (depiction) 또는 명명은 표시된 입체중심이 상기 지정된 입체화학을 갖는 것을 의미하며, 상기 묘사되거나 명명된 화합물의 유용성이 또다른 입체이성질체의 존재에 의해 제거되지 않는 것을 전제로, 달리 명시되지 않은 한, 소량의 다른 입체이성질체가 또한 존재할 수 있는 것으로 이해된다.
화학식 (I)의 화합물은 또한 여러 염기성 기 (예를 들면, 아미노 기)를 포함하고, 따라서, 그와 같은 화합물들은 유리 염기, 또는 일-양성자화 (mono-protonated) 염 형태, 이-양성자화 (di-protonated) 염 형태, 삼-양성자화 (tri-protonated) 염 형태, 또는 이들의 혼합물과 같은, 다양한 염의 형태로 존재할 수 있다. 그와 같은 모든 형태들은 달리 명시되지 않는 한 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명은 또한, 화학식 (I)의 동위원소-표지된 (isotopically-labeled) 화합물, 즉, 하나의 원자가 동일한 원자번호를 갖지만 천연 상태에서 우세하게 존재하는 원자량과는 다른 원자량을 갖는 원자로 치환되거나 또는 강화시킨 (enriched), 화학식 (I)의 화합물을 포함한다. 화학식 (I)의 화합물 내에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 35S, 36Cl, 및 18F를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 특히 중요한 것은, 삼중수소 (tritium) 또는 탄소-14가 강화된 화학식 (I)의 화합물이며, 상기 화합물들은 예를 들면, 조직 분포 연구에 사용될 수 있다. 또한, 대사 부위에서 이중수소 (deuterium)가 강화된 화학식 (I)의 화합물이 특히 중요하며, 이 화합물들은 보다 우수한 대사 안정성 (metabolic stability)을 가질 것으로 기대된다. 또한 특히 중요한 것은 11C, 18F, 15O 및 13N과 같은, 양전자 방출 동위원소 (positron emitting isotope)가 강화된 화학식 (I)의 화합물이고, 상기 화합물들은 예를 들면, 양전자 방출 단층촬영 (Positron Emission Tomography, PET) 연구에 사용될 수 있다.
정의
본 발명의 다양한 양상 및 구체예를 포함하는 본 발명을 개시할 때, 하기 용어는 달리 지시하지 않는 한 하기의 의미를 갖는다.
용어 "알킬 (alkyl)"은 직쇄 또는 분지쇄 또는 그의 조합일 수 있는 1가 포화된 탄화수소기를 의미한다. 달리 정의하지 않는 한, 이러한 알킬기는 통상적으로 1개 내지 10개의 탄소 원자를 포함한다. 대표적인 알킬 기는, 예로서 메틸 (Me), 에틸 (Et), n-프로필 (n-Pr) 또는 (nPr), 이소프로필 (i-Pr) 또는 (iPr), n-부틸 (n-Bu) 또는 (nBu), sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸 (t-Bu) 또는 (tBu), n-펜틸, n-헥실, 2,2-디메틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, 2-에틸부틸, 2,2-디메틸펜틸, 2-프로필펜틸 등을 포함한다.
용어 "알킬렌 (alkylene)"은 직쇄 또는 분지쇄 또는 그의 조합일 수 있는 2가 포화된 탄화수소기를 의미한다. 달리 정의하지 않는 한, 이러한 알킬기는 통상적으로 1개 내지 10개의 탄소 원자를 포함한다. 대표적인 알킬렌기는, 예로서 -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- 등을 포함한다.
탄소 원자의 특정 수가 특정 용어에 대해 의도되는 경우, 탄소 원자의 수는 상기 용어 앞에 개시되었다. 예를 들면, 용어 "C1-3 알킬"은 1개 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 의미하고, 상기에서 탄소 원자는, 직쇄 또는 분지쇄 형태를 포함하는, 임의의 화학적으로-허용가능한 형태이다.
용어 "시클로알킬 (cycloalkyl)"은 모노시클릭 (monocyclic) 또는 멀티시클릭 (multicyclic)일 수 있는 1가 포화된 카르보시클릭 기를 의미한다. 달리 정의되지 않는 한, 상기 시클로알킬 기는 통상적으로 3개 내지 10개의 탄소 원자를 포함한다. 대표적인 시클로알킬 기는, 예로서 시클로프로필 (cPr), 시클로부틸 (cBu), 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 아다만틸 등을 포함한다.
용어 "헤테로사이클 (heterocycle)", "헤테로시클릭 (heterocyclic)", 또는 "헤테로시클릭 고리 (heterocyclic ring)"는, 3개 내지 10개의 총 고리 원자를 갖는, 1가 포화된 또는 부분 불포화된 시클릭 비-방향족 기를 의미하고, 상기 고리는 2개 내지 9개의 탄소 고리 원자 및 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 1개 내지 4개의 고리 헤테로원자 (heteroatoms)를 포함한다. 헤테로시클릭 기는 모노시클릭 또는 멀티시클릭 (즉, 융합된 (fused) 또는 브릿지된 (bridged))일 수 있다. 대표적인 헤테로시클릭 기는, 예로서 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 이미다졸리디닐, 모르폴리닐, 티오모르폴릴, 인돌린-3-일, 2-이미다졸리닐, 테트라히드로피라닐, 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-2-일, 퀴뉴클리디닐 (quinuclidinyl), 7-아자노르보르나닐, 노르트로파닐 등을 포함하고, 여기서 부착점은 임의의 이용가능한 탄소 또는 질소 고리 원자에 있다. 본원에서 헤테로시클릭 기의 부착점을 명백하게 하는 경우, 상기 기들은 대안으로 비-원자가 (non-valent) 종, 즉 피롤리딘, 피페리딘, 피페라진, 이미다졸, 테트라히드로피란 등으로 나타낼 수 있다.
용어 "할로 (halo)"는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 아이오도를 의미한다.
용어 "용매화물 (solvate)"은 하나 이상의 용질 분자, 즉 본 발명의 화합물 또는 그의 약학적으로-허용가능한 염, 및 하나 이상의 용매 분자에 의해 형성된 복합체 (complex) 또는 응집체 (aggregate)를 의미한다. 상기 용매화물은 통상적으로, 실질적으로 고정된 용질과 용매의 몰비 (molar ratio)를 갖는 결정 고형물이다. 대표적인 용매는 예로서 물, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 아세트산 등을 포함한다. 상기 용매가 물인 경우, 형성된 용매화물은 특별히 히드레이트 (hydrate)라고 한다.
용어 "치료적으로 유효한 양 (therapeutically effective amount)"은 치료를 필요로 하는 환자에게 투여될 때 치료를 달성하는데 충분한 양을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료 (treatment)"는 포유동물 (특히, 사람)과 같은 환자에서 질환, 장애 또는 의학적 병태 (가령 호흡기 질환)의 치료를 의미하고, 이는 하기 중 하나 이상을 포함한다:
(a) 질환, 장애 또는 의학적 병태의 발생 방지, 즉 질환 또는 의학적 병태의 재발 방지 또는 질환 또는 의학적 병태에 걸리기 쉬운 (pre-disposed) 환자의 예방적 치료 (prophylactic treatment);
(b) 질병, 장애 또는 의학적 병태의 개선 (ameliorating), 즉 다른 치료제의 효과에 길항 작용을 하는 것을 포함하는, 환자에서 질환, 장애 또는 의학적 병태를 제거하거나 또는 퇴행 (regression)을 야기하는 것;
(c) 질환, 장애 또는 의학적 병태의 억제 (suppressing), 즉 환자에서 질환, 장애 또는 의학적 병태의 발전을 둔화 또는 저지하는 것; 또는
(d) 환자에서 질환, 장애 또는 의학적 병태의 증상 완화.
용어 "약학적으로 허용가능한 염 (pharmaceutically acceptable salt)"은 환자 또는 사람과 같은 포유동물에 투여를 위해 허용가능한 염 (예컨대, 해당 투여 계획 (dosage regime)에 대해 허용가능한 포유동물 안전성을 갖는 염)을 의미한다. 대표적인 약학적으로 허용가능한 염은 아세트산, 아스코르브산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캄포술폰산, 시트르산, 에탄술폰산, 에디실산 (edisylic acid), 푸마르산, 겐티스산 (gentisic acid), 글루콘산, 글루코론산, 글루탐산, 힙푸르산 (hippuric acid), 히드로브롬산, 히드로클로르산, 이세티온산 (isethionic acid), 락트산, 락토비온산 (lactobionic acid), 말레산, 말산, 만델산, 메탄술폰산, 무신산 (mucic acid), 나프탈렌술폰산, 나프탈렌-1,5-디술폰산, 나프탈렌-2,6-디술폰산, 니코틴산, 니트르산, 오로트산 (orotic acid), 파모산 (pamoic acid), 판토텐산, 포스포르산, 숙신산, 술푸르산, 타르타르산, p-톨루엔술폰산 및 크시나포산 (xinafoic acid) 등의 염을 포함한다.
용어 "그의 염 (salt thereof)"은 산의 수소가 양이온, 가령 금속 양이온 또는 유기 양이온 등으로 대체되는 경우 형성된 화합물을 의미한다. 예를 들면, 상기 양이온은 화학식 (I)의 화합물의 양성자화된 형태 (protonated form), 즉 하나 이상의 아미노기가 산에 의해 양성자화되어진 형태일 수 있다. 통상적으로, 상기 염은 약학적으로 허용가능한 염이고, 상기는 환자에게 투여하기 위한 것이 아닌 중간체 화합물의 염을 필요로 하지 않는다.
용어 "아미노-보호 기 (amino-protecting group)"는 아미노 질소에서 원하지 않는 반응을 방지하기에 적합한 보호 기를 의미한다. 대표적인 아미노-보호 기는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 포르밀; 아실 기, 예를 들면 알카노일 기, 가령 아세틸 및 트리-플루오로아세틸; 알콕시카르보닐 기, 가령 tert 부톡시카르보닐 (Boc); 아릴메톡시카르보닐 기, 가령 벤질옥시카르보닐 (Cbz) 및 9-플루오레닐메톡시카르보닐 (Fmoc); 아릴메틸 기, 가령 벤질 (Bn), 트리틸 (Tr), 및 1,1-디-(4'-메톡시페닐)메틸; 실릴 기, 가령 트리메틸실릴 (trimethylsilyl: TMS), tert -부틸디메틸실릴 (TBDMS), [2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸 (SEM); 등을 포함한다. 다수의 보호 기, 및 그의 도입 및 제거는 T. W. Greene and P.G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York에 개시되어 있다.
일반 합성 절차
본 발명의 화합물, 및 그의 중간체가 상업적으로-이용가능한 또는 통상적으로-제조된 개시 물질 및 시약을 사용하여 하기 일반적 방법 및 절차에 따라 제조될 수 있다. 하기 반응식에서 사용된 치환체 및 변수 (예컨대, R1, R2, R3, R4, 등)는 달리 지시하지 않는 한 본원에 정의된 것과 동일한 의미를 갖는다. 또한, 산성 또는 염기성 원자 또는 관능기를 갖는 화합물이 사용될 수 있거나 또는 달리 지시하지 않는 한 염으로 제조될 수 있다 (일부 경우에, 특정 반응에서 염의 사용은, 상기 반응을 수행하기 전에 통상적인 절차를 사용하여, 상기 염을 비-염 (non-salt)의 형태, 예컨대 유리 염기로의 전환을 필요로 할 것이다).
본 발명의 특별한 구체예는 하기 절차에 개시 또는 서술될 수 있지만, 당 분야의 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 다른 구체예 또는 양상이 또한 상기 절차를 사용하거나 또는 당분야의 통상의 지식을 가진 자에게 알려져 있는 다른 방법, 시약 및 개시 물질을 사용하여 제조될 수 있다는 것을 알 수 있을 것이다. 구체적으로, 본 발명의 화합물은 다양한 공정 경로에 의해 제조될 수 있고, 여기서 반응물들이 다른 순서로 배합되어, 최종 산물을 생성하는 도중에 상이한 중간체를 제공할 수 있다는 것을 알 수 있을 것이다.
본 발명의 최종 화합물을 제조하는 일반적인 방법은 반응식 1에 도시되는 바와 같이 중요한 중간체 1을 사용한다. 변수 R2, R3, R4, 및 R7은 화학식 (I)에서 정의된 바와 같고, R1은 수소이고, Pg는 아미노 보호기, 통상적으로 Boc를 나타내고, 및 R8a 및 R8b는 R8기가 반응 완료시에 형성되도록 정의되고, 즉 R8a-C(H)-R8b는 R8이다. 예를 들어, R8이 메틸인 경우, 변수 R8a 및 R8b는 각각 수소이므로 R8a-C(=O)-R8b는 포름알데히드이다. R8이 이소프로필로 정의되는 경우, R8a 및 R8b는 각각 메틸이므로 R8a-C(=O)-R8b는 아세톤이다.
반응식 1
Figure pct00017
반응식 1에서, 중간체 1은 알데히드 또는 케톤 2와의 반응에 의해 환원적으로 (reductively) N-알킬화되어 보호된 중간체 3을 제공한다. 상기 반응은 통상적으로 중간체 1을 약 1 내지 약 2 당량의 화합물 2와 적합한 비활성 희석제, 가령 디클로로메탄, 메탄올, 테트라히드로푸란, 또는 디메틸포름아미드에서 약 2 내지 약 4 당량의 환원제의 존재하에 접촉시킴으로써 수행되었다. 약 2 내지 약 3 당량의 아세트산이 상기 반응에 선택적으로 포함될 수 있다. 상기 반응은 통상적으로 약 20 ℃ 내지 약 40 ℃ 범위의 온도에서 약 2 내지 약 48 시간 동안 또는 상기 반응이 실질적으로 완료될 때까지 수행되었다. 통상적인 환원제는 나트륨 트리아세톡시보로히드리드 및 나트륨 시아노보로히드리드를 포함한다.
상기 보호기는 통상적인 조건하에 중간체 3으로부터 제거된다. 예를 들어, Boc 기는 산, 통상적으로 트리플루오로아세트산 또는 히드로클로르산과 디옥산에서 표준 처리에 의해 제거되어 중간체 4를 제공할 수 있고, 이는 화학식 R8a-C(=O)-R8b의 화합물과 상기 제1 단계에서와 유사한 환원적 알킬화 (reductive alkylation) 조건하에 반응하여 최종 화합물 (I)'을 제공한다.
화학식 (II)의 기가 3차 질소를 포함하는 화합물에 있어서, 예를 들어, R7 및 R8이 함께 C3- 5알킬렌 또는 C2알킬렌-O- C2알킬렌을 형성하는 경우, 최종 화합물은 중간체 1과 중간체 2'의 반응에 의해 직접 제조될 수 있고
Figure pct00018
상기 화학식 2의 화합물 중 아미노 보호기 Pg는 R8로 대체된다. 예를 들어, 하기 실시예 6 및 17에 개시되어 있는 바와 같이, 화학식 (IV)의 최종 화합물은 중간체 1과 화학식 2"의 화합물의 반응에 의해 제조될 수 있다:
Figure pct00019
중간체 1의 유용한 제조 방법은 하기 반응식 2에 개시되어 있다.
반응식 2
Figure pct00020
하기 제조 9 및 10, 및 또한 13 및 14에 상세히 개시된 바와 같이, 브로모인다졸 알데히드 5는 벤질 보호된 이민 화합물 6과 반응하여 중간체 7을 제공한다. 상기 반응은 통상적으로 나트륨 비술피트 (sodium bisulfite)의 존재하에, 약 130 ℃ 내지 약 140 ℃의 온도에서 약 1 내지 약 6 시간 동안 또는 상기 반응이 실질적으로 완료될 때까지 수행되었다. 산물은 상기 반응 혼합물로부터 침전, 그 후 유리염기화 (freebasing) 및 재결정화에 의해 단리될 수 있다. 화합물 7은 환원제 가령 나트륨 보로히드리드를 사용하여 환원되어 화합물 8을 제공한다. 상기 반응은 메틸테트라히드로푸란, 메탄올, 및 물로 이루어진 희석제에서 유익하게 수행된다.
유리염기 또는 히드로클로리드 염으로서 산물 8의 단리는 우수한 순도를 갖는 산물을 제공한다. 중간체 8은 보호된 페닐트리플루오로보레이트 9와 통상적인 Suzuki-Miyaura 커플링 조건 (coupling conditions)하에 조합되어 중간체 10을 제공한다. 상기 반응은 통상적으로 높은 온도에서 팔라듐 촉매의 존재하에 수행되었다. 선택적으로, 상기 Suzuki 커플링 반응은, 제조 16에 개시된 바와 같이, 비스(피나콜레이토)보론과 칼륨 수소 디플루오리드의 반응에 의해 제조된 부가의 작용제 (agent)의 봉입 (inclusion)으로 촉진되었다. 마지막으로, 중간체 10의 벤질기는 통상적인 조건, 예를 들어 수소 대기에서 팔라듐 촉매의 존재하에 제거되어, 중간체 1을 제공하였다.
반응식 2의 제1 단계에서 사용된 이민 화합물 6은 편리하게 피리딘 디아민을 벤질 브로미드와 반응시켜서 제조되었고, 히드로브로미드 염 (hydrobromide salt)으로 공급되었다. 제조 8에서 개시된 바와 같이, 상기 반응식 2에서 트리플루오로보레이트 칼륨 염으로 개시된 Suzuki 파트너 9는 벤질 브로미드와의 반응에 의해 4-브로모-5-에틸-2-플루오로페놀을 벤질 보호하고 및 벤질 보호된 페놀을 비스(피나콜레이토)디보론과 반응시켜서 보로네이트를 제조하여 제조될 수 있고, 이후 칼륨 수소 디플루오리드와 반응시켜서 중간체 9를 제공하였다. 대안으로서, 보로네이트 중간체는 트리플루오로보레이트 9 대신에 사용될 수 있다.
따라서, 일 방법 양상에서, 본 발명은 화학식 (I')의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) 화학식 1의 화합물과 화학식 2의 화합물이 반응하여 화학식 3의 중간체를 제공하는 단계, (b) 중간체 3을 탈보호하여 (deprotecting) 중간체 4를 제공하는 단계, 및 (c) 중간체 4를 R8a-C(=O)-R8b와 반응시켜서 화학식 (I')의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 단계를 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 (IV)의 화합물 또는 그의 약학적으로-허용가능한 염을 제조하는 방법을 더 제공하고, 상기 방법은 화학식 1의 화합물과 화학식 2"의 화합물을 반응시켜서 화학식 (IV)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 단계를 포함한다.
부가의 방법 양상에서, 본 발명은 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) 화학식 8의 화합물과 화학식 9의 화합물을 반응시켜서 화학식 10의 화합물을 제공하는 단계, 및 (b) 상기 화학식 10의 화합물을 탈보호하여 화학식 1의 화합물을 제공하는 단계를 포함한다.
또다른 양상에서, 본 발명은 중간체 1의 제조에 유용한 화학식 8의 화합물 및 그의 히드로클로리드 염을 제공한다.
결정 형태
다른 양상에서, 본 발명은 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이트를 제공한다.
본 발명의 결정 히드레이트는 실시예 6의 화합물의 결정 유리염기이다. 일 양상에서, 상기 결정 히드레이트는, 다른 피크들 중에서, 6.20±0.20, 9.58±0.20, 17.53±0.20, 19.28±0.20, 및 21.51±0.20의 2θ 값에서 유의한 (significant) 회절 피크를 갖는 분말 X-선 회절 (PXRD) 패턴을 특징으로 한다. 상기 결정 히드레이트는 10.34±0.20, 11.54±0.20, 12.77±0.20, 13.01±0.20, 16.94±0.20, 20.61±0.20, 및 22.10±0.20으로부터 선택된 2θ 값에서 2 이상의 부가의 회절 피크, 3 이상 및 4 이상의 부가의 회절 피크들을 갖는 PXRD 패턴을 더 특징으로 한다. 다른 양상에서, 상기 결정 히드레이트는 6.20±0.20, 9.58±0.20, 10.34±0.20, 11.54±0.20, 12.77±0.20, 13.01±0.20, 16.94±0.20, 17.53±0.20, 19.28±0.20, 20.61±0.20, 21.51±0.20, 및 22.10±0.20의 2θ 값에서 회절 피크를 갖는 PXRD 패턴을 특징으로 한다.
분말 X-선 회절의 분야에 잘 알려져 있는 바와 같이, PXRD 스펙트럼의 피크 위치는 실험적 세부사항, 가령 시료 제조 및 기기 기하학의 세부사항에 대해 상대 피크 높이보다 상대적으로 덜 민감하다. 그러므로, 일 양상에서, 상기 결정 히드레이트는 상기 피크 위치가 도 1에 개시된 것과 실질적으로 일치하는 분말 x-선 회절 패턴을 특징으로 한다.
다른 양상에서, 상기 결정 히드레이트는 고온에 노출되었을 때 그의 거동을 특징으로 한다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 분 (minute) 당 10　℃의 가열 속도로 기록된 시차 주사 열량계 (DSC) 트레이스 (trace)는 약 83 ℃에서 개시 및 약 128 ℃에서 피크 및 용융 전이 (melt transition)로서 확인되는, 약 206 ℃ 내지 약 216　℃의 범위, 약 209　℃ 내지 약 214 ℃를 포함하는 흡열 열 흐름 (endothermic heat flow)에서 피크를 갖는 탈용매화 흡열 (desolvation endotherm)을 나타낸다. 도 3의 열 중량 분석 (TGA) 트레이스는 약 112 ℃의 온도에서 개시되는 탈용매화 및 약 250 ℃의 온도에서 개시되는 분해를 보여주었다. 상기 TGA 프로파일은 190 ℃에서 약 3.86 %의 중량 손실 (weight loss)을 보였고, 이는 모노히드레이트에 있어서 물의 이론적 중량 퍼센트인 3.65 %와 비교되는 물의 손실로서 해석될 수 있다. 따라서, 퍼센트 결정 히드레이트는 모노히드레이트인 것으로 사료된다.
본 결정 히드레이트는 흡습성에 있어서 예외적인 작은 경향을 갖는 가역적 흡착/탈착 프로파일 (reversible sorption/desorption profile)을 갖는 것으로 나타났다. 형태 I은 도 4에서 개시된 바와 같이, 5　% 내지 90　%의 상대 습도의 습도 범위에서 약 0.12% 미만의 중량 증량을 보였다. 흡착 및 탈착의 두 사이클에서 히스테리시스 (hysteresis)는 관찰되지 않았다. 상기 결정 히드레이트는 비-흡습성 (non-hygroscopic)인 것으로 사료된다.
5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이트는 편리하게 화학식 1의 중간체와 1-메틸피페리딘-4-온의 환원적 N-알킬화 반응의 반응 산물의 슬러리의 슬러리 형태 전환 (slurry form conversion)에 의해 제조된다. 수중 암모니아에 의한 상기 환원적 N-알킬화 반응의 초기 퀀치 (quench) 후에, 결과의 (resulting) 슬러리는 양성자성 용매 (protic solvent), 예를 들어 메탄올, 에탄올, 이소프로필 알콜, 또는 n-프로필 알콜 중에 희석되고, 및 약 40 ℃ 내지 약 60 ℃의 온도에서 약 1 내지 약 24 시간 동안 또는 용매화물 형태로의 전환이 완료될 때까지 가열되었다. 고온인 경우, 물이 반용매 (antisolvent)로서 첨가되어 상기 반응 산물의 용매화물을 침전시키고, 이는 예를 들어 약 10 ℃로 냉각시켰다. 상기 침전물을 물과 양성자성 용매의 1:1 혼합물로 세척하였다. 통상적으로, 상기 용매화물은 상기 환원적 알킬화 반응이 수행된 희석제, 양성자성 용매, 및 물을 포함한다.
본 발명의 결정 히드레이트로의 슬러리 형태 전환은 상기에 개시된 바와 같이 형성된 용매화물 또는 비결정 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 슬러리를 유기 용매와 함께 약 1 내지 약 30 % v/v의 물을 포함하는 희석제에서 형성시킴으로써 수행되었다. 형태 전환을 위한 유용한 유기 용매는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 메탄올, 테트라히드로푸란, tert-부틸 알콜, 아세토니트릴, 이소프로필아세테이트 및 아세톤을 포함한다. 상기 형태 전환은 선택적으로 가열, 예를 들어 약 40 ℃ 내지 약 60 ℃로 약 1 시간 내지 약 2 일 동안 또는 상기 형태 전환이 완료될 때까지 가열하는 것을 포함한다. 실시예 17에서 개시되는 바와 같이, 메탄올은 초기 단계에서 양성자성 용매로서 유용하고, 아세톤은 슬러리 형태 전환을 위해 특히 유용하다.
따라서, 일 방법 양상에서, 본 발명은 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이트를 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) 메탄올, 테트라히드로푸란, tert-부틸 알콜, 아세토니트릴, 이소프로필아세테이트 및 아세톤으로부터 선택된 유기 용매와 함께 약 1 내지 약 30 % v/v의 물을 포함하는 희석제 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 슬러리를 용매화물 또는 비결정 형태로 형성하는 단계, (b) 상기 슬러리를 약 40　℃ 내지 약 60 ℃의 온도에서 약 1 시간 내지 약 2일 동안 가열하는 단계, 및 (c) 상기 슬러리로부터 상기 결정 히드레이트를 단리하는 단계를 포함한다.
약학적 조성물
본 발명의 화합물 및 그의 약학적으로-허용가능한 염은 통상적으로 약학적 조성물 또는 제제 (formulation)의 형태로 사용된다. 이러한 약학적 조성물은 흡입에 의해 환자에게 투여하는 것이 유익할 수 있다. 또한, 약학적 조성물은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 경구, 직장, 비강, 국소 (경피 포함) 및 비경구 투여 방식을 포함하는 허용가능한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다.
따라서, 그의 조성물 양상들 중 하나에서, 본 발명은 약학적으로-허용가능한 담체 또는 부형제 및 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이고, 여기서 상기에 정의된 바와 같이, "화학식 (I)의 화합물"은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로-허용가능한 염을 의미한다. 선택적으로, 이러한 약학적 조성물은 원한다면 다른 치료제 및/또는 제제화제 (formulating agents)를 포함할 수 있다. 조성물 및 그의 용도를 논의하는 경우, "본 발명의 화합물"은 본원에서 "활성 작용제 (active agent)"로도 지칭될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "본 발명의 화합물"은 화학식 (I)에 포함되는 모든 화합물뿐만 아니라 화학식 (III), (IV), 및 (V)에서 구체화된 종들 및 그의 약학적으로-허용가능한 염을 포함하는 것으로 의도된다.
본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 본 발명의 화합물의 치료적으로 유효한 양을 포함한다. 그러나 당 분야의 통상의 지식을 가진 자는 약학적 조성물이 벌크 (bulk) 조성물에서와 같이 치료적으로 유효한 양을 초과하여 포함하거나, 또는 치료적으로 유효한 양보다 적게, 즉 치료적으로 유효한 양을 달성하기 위해 다회 투여 목적으로 설계된 개별 단위 투여량 (individual unit dose)을 포함할 수 있다는 것을 알 것이다.
통상적으로, 상기 약학적 조성물은 약 0.01 내지 약 95 중량% (% by weight)의 활성 작용제; 예를 들어, 약 0.05 내지 약 30 중량%; 및 약 0.1 % 내지 약 10 중량%의 활성 작용제를 포함할 것이다.
임의의 기존의 담체 또는 부형제가 본 발명의 약학적 조성물에 사용될 수 있다. 특정 담체 또는 부형제, 또는 담체나 부형제의 조합의 선택은 특정한 환자 또는 의학적 병태 또는 질환 상태의 유형을 치료하기 위해 사용되는 투여 방식에 의존할 것이다. 이와 관련하여, 특정한 투여 방식에 적합한 약학적 조성물의 제조는 약제학 분야에 통상의 지식을 가진 자의 범위 내에 속한다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물에 사용되는 담체 또는 부형제들은 상업적으로 이용가능하다. 추가적인 예시로서, 통상적인 제제화 기술은 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); and H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999)에 기재되어 있다.
약학적으로 허용가능한 담체로서 제공될 수 있는 물질들의 대표적인 예는 하기를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다: 당, 가령 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예를 들어, 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스, 가령 미정질 셀룰로스, 및 그의 유도체, 가령 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 트라가칸트 분말 (powdered tragacanth); 맥아 (malt); 젤라틴; 탈크; 부형제, 가령 코코아 버터 및 좌제 왁스 (suppository wax); 오일, 가령 땅콩유, 면실유, 홍화씨유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 가령 프로필렌 글리콜; 폴리올, 가령 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 가령 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 아가 (agar); 완충제, 가령 마그네슘 히드록시드 및 알루미늄 히드록시드; 알긴산; 발열성물질-제거수 (pyrogen-free water); 등장성 식염수; 링거액; 에틸 알콜; 포스페이트 완충 용액; 및 약학적 조성물에 사용되는 무독성 적합성 물질.
약학적 조성물은 통상적으로, 상기 활성 작용제를 약학적으로-허용가능한 담체 및 하나 이상의 선택적 성분들과 철저하게 (thoroughly) 및 긴밀하게 (intimately) 혼합 (mixing) 또는 블렌딩 (blending)시켜 제조된다. 결과의 균일하게 블렌딩된 혼합물은 그 다음, 기존의 절차 및 장비를 사용하여, 정제, 캡슐, 환제 (pill) 등으로 성형 또는 로딩될 수 있다.
일 양상에서, 상기 약학적 조성물은 흡입 투여에 적합하다. 흡입 투여를 위한 약학적 조성물은 통상적으로 에어로졸 또는 분말의 형태이다. 상기 조성물은 일반적으로 흡입 전달 장치 (inhaler delivery devices), 가령 건조 분말 흡입기 (dry powder inhaler: DPI), 정량식 흡입기 (metered-dose inhaler: MDI), 네뷸라이저 흡입기 (nebulizer inhaler), 또는 유사한 전달 장치를 사용하여 투여된다.
특정 구체예에서, 상기 약학적 조성물은 건조 분말 흡입기를 사용하여 흡입에 의해 투여된다. 상기 건조 분말 흡입기는 통상적으로 상기 약학적 조성물이 호흡하는 동안 환자의 기류 (air-stream)에 분산되는 자유-유동 분말 (free-flowing powder)로서 투여된다. 자유-유동 분말 조성물을 수득하기 위해서, 치료제는 통상적으로 적합한 부형제 가령 락토스, 전분, 만니톨, 덱스트로스, 폴리락트산 (polylactic acid: PLA), 폴리락티드-코-글리콜리드 (polylactide-co-glycolide: PLGA) 또는 그의 조합과 제제화된다. 통상적으로, 상기 치료제는 미분화되고 (micronized) 및 적합한 담체와 조합되어 흡입에 적합한 조성물을 형성한다.
건조 분말 흡입기에 사용하기 위한 대표적인 약학적 조성물은 락토스 및 본 발명의 화합물을 미분화된 형태 (micronized form)로 포함한다. 이러한 건조 분말 조성물은, 예를 들어, 건조 분쇄된 (dry milled) 락토스를 치료제와 조합하고, 및 그 다음에 상기 성분들을 건조 블렌딩 (dry blending)하여 제조될 수 있다. 상기 조성물은 그 다음에 통상적으로 건조 분말 전달 장치에서 사용하기 위한 건조 분말 디스펜서 (dry powder dispenser), 또는 흡입 카트리지 (inhalation cartridges) 또는 캡슐 (capsules)로 로딩되었다.
흡입에 의해 치료제를 투여하는데 적합한 건조 분말 흡입기 전달 장치는 당분야에 개시되어 있고 상기 장치의 예는 상업적으로 이용가능하다. 예를 들어, 대표적인 건조 분말 흡입기 전달 장치 또는 제품은 Aeolizer (Novartis); Airmax (IVAX); ClickHaler (Innovata Biomed); Diskhaler (GlaxoSmithKline); Diskus/Accuhaler (GlaxoSmithKline); Ellipta (GlaxoSmithKline); Easyhaler (Orion Pharma); Eclipse (Aventis); FlowCaps (Hovione); Handihaler (Boehringer Ingelheim); Pulvinal (Chiesi); Rotahaler (GlaxoSmithKline); SkyeHaler/Certihaler (SkyePharma); Twisthaler (Schering-Plough); Turbuhaler (AstraZeneca); Ultrahaler (Aventis) 등을 포함한다.
다른 특정 구체예에서, 상기 약학적 조성물은 정량식 흡입기를 사용하여 흡입에 의해 투여된다. 상기 정량식 흡입기는 통상적으로 압축된 분사제 가스 (propellant gas)를 사용하여 치료제의 측정된 양을 배출한다. 따라서, 정량식 흡입기를 사용하여 투여된 약학적 조성물은 통상적으로 액화된 분사제 중에 상기 치료제의 용액 또는 현탁액을 포함한다. 히드로플루오로알칸 (hydrofluoroalkanes: HFAs), 가령 1,1,1,2-테트라플루오로에탄 (HFA 134a) 및 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로-n-프로판, (HFA 227); 및 클로로플루오로카본, 가령 CCl3F를 포함하는 임의의 적합한 액화된 분사제가 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 분사제는 히드로플루오로알칸이다. 일부 구체예에서, 상기 히드로플루오로알칸 제제는 보조-용매 (co-solvent), 가령 에탄올 또는 펜탄, 및/또는 계면활성제, 가령 소르비탄 트리올레에이트, 올레산, 레시틴, 및 글리세린을 포함한다.
정량식 흡입기에 사용하기 위한 대표적인 약학적 조성물은 약 0.01% 내지 약 5 중량%의 본 발명의 화합물; 약 0% 내지 약 20중량%의 에탄올; 및 약 0% 내지 약 5중량%의 계면활성제; 나머지는 HFA 분사제를 포함한다. 상기 조성물은 통상적으로 냉각된 (chilled) 또는 가압된 (pressurized) 히드로플루오로알칸을 상기 치료제, 에탄올 (존재하는 경우) 및 계면활성제 (존재하는 경우)를 포함하는 적합한 용기에 부가하여 제조된다. 현탁액을 제조하기 위해서, 상기 치료제는 미분화되고 및 그 다음에 상기 분사제와 조합된다. 상기 조성물은 그 다음에 에어로졸 캐니스터 (canister)에 로딩되고, 이는 통상적으로 정량식 흡입기 장치의 일부를 형성한다.
치료제를 흡입에 의해 투여하기에 적합한 정량식 흡입기 장치는 당분야에 개시되어 있고, 상기 장치의 예는 상업적으로 이용가능하다. 예를 들어, 대표적인 정량식 흡입기 장치 또는 제품은 AeroBid Inhaler System (Forest Pharmaceuticals); Atrovent Inhalation Aerosol (Boehringer Ingelheim); Flovent (GlaxoSmithKline); Maxair Inhaler (3M); Proventil Inhaler (Schering); Serevent Inhalation Aerosol (GlaxoSmithKline) 등을 포함한다.
다른 특정 양상에서, 상기 약학적 조성물은 네뷸라이저 흡입기를 사용하여 흡입에 의해 투여된다. 상기 네뷸라이저 장치는 통상적으로 상기 약학적 조성물을 미스트 (mist)로 분무하여 환자의 호흡기관으로 전달하는 고속의 (high velocity) 기류를 생성한다. 따라서, 네뷸라이저 흡입기에서 사용하기 위해 제제화되는 경우, 상기 치료제는 적합한 담체에 용해되어 용액을 형성할 수 있다. 대안으로서, 상기 치료제는 미분화되거나 또는 나노분쇄되고 (nanomilled) 및 적합한 담체와 조합되어 현탁액을 형성할 수 있다.
네뷸라이저 흡입기에 사용하기 위한 대표적인 약학적 조성물은 약 0.05 μg/mL 내지 약 20　mg/mL의 본 발명의 화합물 및 네뷸라이즈된 제제에 적합한 부형제를 포함하는 용액 또는 현탁액을 포함한다. 일 구체예에서, 상기 용액은 약 3 내지 약 8의 pH를 갖는다.
치료제를 흡입에 의해 투여하기에 적합한 네뷸라이저 장치는 당분야에 개시되어 있고, 상기 장치의 예는 상업적으로 이용가능하다. 예를 들어, 대표적인 네뷸라이저 장치 또는 제품은 Respimat Softmist Inhalaler (Boehringer Ingelheim); the AERx Pulmonary Delivery System (Aradigm Corp.); the PARI LC Plus Reusable Nebulizer (Pari GmbH) 등을 포함한다.
또다른 양상에서, 본 발명의 약학적 조성물은 대안으로서 경구 투여를 위한 투여 형태 (dosage form)로 제조될 수 있다. 경구 투여를 위한 적합한 약학적 조성물은 캡슐, 정제, 환제, 로젠지 (lozenges), 카쉐 (cachets), 드라제 (dragees), 산제 (powders), 과립제 (granules); 또는 수성 또는 비-수성 액체 중의 용액 또는 현탁액; 또는 수중유 (oil-in-water) 또는 유중수 (water-in-oil) 액체 에멀젼; 또는 엘릭서제 (elixir) 또는 시럽제 등의 형태일 수 있고; 각각은 본 발명의 화합물의 미리 정해진 양을 활성 성분으로 포함한다.
고체 투여 형태로 경구 투여를 의도하는 경우, 본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 활성 작용제 및 하나 이상의 약학적으로-허용가능한 담체, 가령 나트륨 시트레이트 또는 디칼슘 포스페이트를 포함할 것이다. 선택적 또는 대안으로서, 이러한 고체 투여 형태는 또한 하기를 포함할 수 있다: 충전제 (filler) 또는 증량제 (extenders), 결합제, 보습제 (humectants), 용액 지연제, 흡수 촉진제, 습윤제, 흡착제, 윤활제, 착색제, 및 완충제. 이형제, 습윤제, 코팅제, 감미제, 향미제 및 방향제, 보존제 및 산화방지제가 본 발명의 약학적 조성물 중에 또한 존재할 수 있다.
대안의 제제로는 또한 제어 방출 제제, 경구 투여를 위한 액체 투여 형태, 경피 패치, 및 비경구 제제를 포함할 수 있다. 상기 대안의 제제의 제조를 위한 기존의 부형제 및 방법은 예를 들어, 상기의 Remington의 참고문헌에 개시되어 있다.
하기의 비제한적인 예는 본 발명의 대표적인 약학적 조성물을 예시한다.
건조 분말 조성물
미분화된 화학식 (I)의 화합물 (1 g)이 분쇄된 락토스 (25 g)와 블렌딩되었다. 상기 블렌딩된 혼합물은 그 다음에 투여 (dose) 당 약 0.1 mg 내지 약 4 mg의 화학식 I의 화합물을 제공하기에 충분한 양의 박리가능한 블리스터 팩 (peelable blister pack)의 개별 블리스터 (blisters)로 로딩되었다. 상기 블리스터의 내용물은 건조 분말 흡입기를 사용하여 투여된다.
건조 분말 조성물
미분화된 화학식 (I)의 화합물 (1 g)이 분쇄된 락토스 (20　g)와 블렌딩되어 화합물 대 분쇄된 락토스의 중량비가 1:20인 벌크 조성물을 형성하였다. 상기 블렌딩된 조성물을 투여 당 약 0.1 mg 내지 약 4 mg의 화학식 I의 화합물을 전달할 수 있는 건조 분말 흡입 장치로 패킹되었다.
정량식 흡입기 조성물
미분화된 화학식 (I)의 화합물 (10 g)은 탈염수 (demineralized water) (200 mL) 중에 레시틴 (0.2 g)을 용해시켜서 제조된 용액 중에 분산되었다. 결과의 현탁액은 분무 건조되었고 및 그 다음에 미분화되어 평균 직경이 약 1.5 μm 미만인 입자를 포함하는 미분화된 조성물을 형성하였다. 그 다음에 상기 미분화된 조성물은, 정량식 흡입기에 의해 투여되는 경우 투여 당 약 0.1 mg 내지 약 4 mg의 화학식 I의 화합물을 제공하기에 충분한 양으로 가압된 1,1,1,2-테트라플루오로에탄을 포함하는 정량식 흡입기 카트리지로 로딩되었다.
네뷸라이저 조성물
화학식 (I)의 화합물 (25 mg)이 1.5-2.5 당량의 히드로클로르산을 포함하는 용액에 용해되었고, 그 다음에 pH를 3.5 내지 5.5로 조정하기 위한 나트륨 히드록시드 및 3중량%의 글리세롤을 첨가하였다. 상기 용액은 모든 성분들이 용해될 때까지 잘 교반되었다. 상기 용액은 투여 당 약　 0.1 mg 내지 약 4 mg의 화학식 I의 화합물을 제공하는 네뷸라이저 장치를 사용하여 투여되었다.
유용성
본 발명의 JAK 저해제는 호흡기관의 염증 및 섬유증 질환의 치료를 위해 설계되었다. 구체적으로, 상기 화합물은, 전신 노출을 제한하면서, 폐에서 호흡기 질환의 작용 부위에 효능이 있는 항-시토킨 작용제를 직접 전달할 수 있도록 설계되었다.
본 발명의 화합물은 효소의 JAK 패밀리인 JAK1, JAK2, JAK3, 및 TYK2의 효능이 있는 저해제인 것으로 개시되었다. 또한, 상기 화합물은, 세포 분석 (cellular assays)에서 세포독성을 나타내지 않으면서, 전-염증성 및 전-섬유화성 (pro-fibrotic) 시토킨의 강력한 저해를 나타내었다. JAK 저해제의 광범위한 항-염증 효과는 정상적인 면역 세포 기능을 억제하는 것이 인정되었지만, 잠재적으로 감염 위험을 증가시킨다. 그러므로 본 발명의 화합물은 폐에서 혈장으로의 흡수를 제한하도록 최적화되어서, 면역억제 위험을 최소화하였다.
하기 실험 부분에서 개시되는 바와 같이, 통상적인 화합물들의 흡수 및 분포는 전임상 분석에서 프로파일되었다. 마우스 (mice)에서 시험된 선별된 화합물들은 폐 조직에서 농도는 높았지만 동시에 혈장으로의 흡수는 낮은 것을 보여주었다. 마우스에서 시험된 화합물은 혈장에 노출되는 것보다 1 내지 2 자릿수 (orders of magnitude) 더 큰 폐에서 노출을 나타내었다. 상기 화합물은 또한 약 5시간 이상의 폐에서 반감기로 입증되는 바와 같이 마우스 폐에서 유의한 잔류 (retention)를 나타내었다. 중요하게, 상기 마우스 폐에서 시험 화합물의 농도는 JAK 효소 저해의 예측된 약력학적 효과 (pharmacodynamic effect)와 상관관계가 있음을 보여주었다. 본 발명의 화합물은 마우스 폐 조직에서 전-염증성 시토킨 IL-13의 효과를 저해하는 것으로 나타났다. 특히, 상기 화합물은 인 비보에서 국소 폐 JAK 표적 결합의 증거를 제공하는 폐 조직에서 STAT6의 IL-13-유도된 포스포릴화의 투여량 및 농도 의존성 저해를 나타내었다. 상기 효과는 전-염증성 시토킨 IL-13이 시험 화합물을 투여하고 4시간 후에 투여되는 경우 관찰되었고, 이는 폐에서 유의한 잔류의 추가의 증거로 제공되었다.
시험된 화합물은 세포 수준에서 강력한 저해 활성 및 폐 조직에서 유의한 잔류 모두를 나타내는 것이 입증되었다. 본 발명자들에 의한 광범위한 조사로 세포 수준에서 효능이 있는 화합물 또는 폐에서 유의한 잔류를 보이는 화합물을 동정할 수 있지만, 동시에 두가지 소망하는 특성들을 나타내는 화합물을 발견하는 것은 훨씬 어렵다는 것이 판명되었다.
2개의 아미노 질소 원자를 포함하는, 본 발명의 화합물의 디아미노 구조는 세포 효능 및 폐 잔류의 기준 둘 다를 만족시키는 것이 중요하다는 것을 보여주었다. 하기 분석 섹션에서 개시되어 있는 바와 같이, 화학식 (II)의 그룹에서 질소 원자가 탄소 원자로 대체된 화합물은 상기 두 가지 기준을 만족시키지 못했다. 상기 모노아미노 화합물은 상응하는 디아미노 화합물보다 세포 수준에서 현저하게 효능이 떨어질 뿐만 아니라 본 발명의 화합물이 폐에서 유의한 잔류를 보이는 것과 동일한 분석 조건하에 약력학적 분석에서 유의한 저해를 나타내지 않았고 또한 폐 조직에서 높은 농도를 나타내지 않았다.
또한, 본 발명의 화합물은 네뷸라이저에 의한 투여를 위한 제제에 적합한 pH 값에서 충분한 용해도를 나타내는 것이 입증되었다. 용해도는 흡입에 의해 투여되는 화합물의 독성 시험과 관련이 있을 수 있다. 흡입에 의해 용해되지 않은 입자체 물질의 투여는 독성 시험 중에 유해 폐 효과와 관련이 있다는 것이 관찰되었다 (Jones et al, Xenobiotica, 2011,1-8). 본 발명의 화합물의 용해도는 또한 흡입에 의한 독성 평가를 용이하게 할 수 있다.
JAK 저해제의 항-염증 활성은 천식의 전임상 모델에서 견고하게 입증되었다 (Malaviya et al., Int Immunopharmacol , 2010, 10, 829,-836; Matsunaga et al., Biochem and Biophys Res Commun , 2011, 404, 261-267; Kudlacz et al., Eur J Pharmacol, 2008, 582, 154-161). 따라서, 본 발명의 화합물은 염증성 호흡기 질환, 구체적으로 천식의 치료에 유용할 것으로 기대된다. 폐의 염증 및 섬유증은 천식 이외에 다른 호흡기 질환, 가령 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 낭성 섬유증 (CF), 폐렴, 간질성 폐 질환 (특발성 폐 섬유증 포함), 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 기관지염, 폐기종, 및 폐쇄세기관지염을 특징으로 한다. 그러므로, 본 발명의 화합물은 또한 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 폐렴, 간질성 폐 질환 (특발성 폐 섬유증 포함), 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 기관지염, 폐기종 및 폐쇄세기관지염의 치료에 유용할 것으로 기대된다.
일 양상에서, 그러므로, 본 발명은 포유동물 (예컨대, 사람)에서 호흡기 질환을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 약학적으로-허용가능한 담체 및 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물의 치료적으로-유효한 양을 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 양상에서, 상기 호흡기 질환은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 폐렴, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 낭성 섬유증 (CF), 폐렴, 간질성 폐 질환 (특발성 폐 섬유증 포함), 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 기관지염, 폐기종 또는 폐쇄세기관지염이다. 다른 양상에서, 상기 호흡기 질환은 천식 또는 만성 폐쇄성 폐 질환이다.
본 발명은 또한 포유동물에서 천식을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 약학적으로-허용가능한 담체 및 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물의 치료적으로-유효한 양을 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
천식을 치료하기 위해 사용되는 경우, 본 발명의 화합물은 통상적으로 1일 1회, 또는 1일 수회 투여량으로 투여될 것이고, 다른 투여 형태도 사용될 수 있다. 투여 당 투여되는 활성 작용제의 양 또는 1일 당 투여되는 전체 양은 통상적으로, 치료될 병태, 선택된 투여 경로, 투여된 실제 화합물 및 그의 관련 활성, 개별 환자의 연령, 체중 및 반응, 환자 증상의 중증도 등을 포함하는 관련 상황에 비추어 의사에 의해 결정될 것이다.
본 발명의 화합물은, 하기 실시예에서 개시되는 바와 같이, 효소 결합 분석에서 JAK1, JAK2, JAK3, 및 TYK2 효소의 강력한 저해제이고, 세포 분석에서 세포독성 없이 강력한 기능적 활성을 가지며, 및 전임상 모델에서 JAK 저해의 약력학적 효과를 발휘하는 것이 입증되었다.
실시예
하기 합성 및 생물학적 실시예는 본 발명을 서술하기 위해 제공되었고, 어느 방식으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 의도되지 않았다. 하기 실시예에서, 하기 약어들은 달리 지시하지 않는 한 하기 의미를 갖는다. 하기에 정의되지 않은 약어는 그의 일반적으로 받아들여지는 의미를 갖는다.
ACN = 아세토니트릴
CPME = 시클로펜틸 메틸 에테르
DCM = 디클로로메탄
DIPEA = N,N-디이소프로필에틸아민
DMAc = 디메틸아세트아미드
DMF = N,N-디메틸포름아미드
EtOAc = 에틸 아세테이트
h = 시간(들)
IPAc = 이소프로필아세테이트
KOAc = 칼륨 아세테이트
MeOH = 메탄올
MeTHF = 2-메틸테트라히드로푸란
min = 분(들)
MTBE = 메틸 tert-부틸 에테르
NMP = N-메틸-2-피롤리돈
Pd(amphos)2Cl2 = 비스(디-tert-부틸(4-디메틸아미노페닐)-포스핀)디클로로팔라듐(II)
Pd(dppf)Cl2= 디클로로(1,1'-비스(디페닐포스피노)-페로센)디팔라듐(II)
Pd(PPh3)4 = 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)
Pd(t-Bu3P)2= 비스(트리-tert-부틸포스핀) 팔라듐(0)
RT = 실온
TEA = 트리에틸아민
TFA = 트리플루오로아세트산
THF = 테트라히드로푸란
비스(피나콜레이토)디보론 = 4,4,5,5,4',4',5',5'-옥타메틸-[2,2']비[[1,3,2]디옥사보롤라닐]
시약 및 용매는 상업적 공급처 (Aldrich, Fluka, Sigma, 등)로부터 구입되었고, 추가의 정제 없이 사용되었다. 반응 혼합물의 진행은 얇은 막 크로마토그래피 (thin layer chromatography: TLC), 분석적 고성능 액체 크로마토그래피 (analytical high performance liquid chromatography: anal. HPLC), 및 질량 분광법으로 모니터링되었다. 반응 혼합물은 각 반응에서 구체적으로 기재된 바와 같이 구축된다; 흔히 상기 반응 혼합물은 추출 및 기타 정제 방법, 가령 온도- 및 용매-의존성 결정화 및 침전에 의해 정제되었다. 더욱이, 반응 혼합물은, 통상적으로 C18 또는 BDS 컬럼 패키징 및 통상적인 용리액을 이용한, 컬럼 크로마토그래피 또는 분취 HPLC에 의해 일상적으로 정제되었다. 통상적인 분취 HPLC 조건은 하기에 개시된다.
반응 산물의 특징분석은 질량 및 1H-NMR 분광법에 의해 일상적으로 수행되었다. NMR 분석을 위해, 시료를 중수소화 용매 (가령 CD3OD, CDCl3, 또는 d 6 -DMSO)에 용해시키고, 1H-NMR 스펙트럼은 표준 관찰 조건하에 Varian Gemini 2000 기기 (400 MHz)로 획득되었다. 화합물의 질량 분광분석적 확인은, 자동정제 시스템 (autopurification systems)과 결합된, Applied Biosystems (Foster City, CA) 모델 API 150 EX 기기 또는 Waters (Milford, MA) 3100 기기에 의한 전자분무 이온화 방법 (electrospray ionization method: ESMS)에 의해 수행되었다.
분취 HPLC 조건
컬럼: C18, 5　μm 21.2 x 150 mm 또는 C18, 5 μm 21 x 250 또는 C14, 5 μm 21x150 mm
컬럼 온도: 실온
유속: 20.0 mL/분
이동상: A = 물 + 0.05 % TFA
B = ACN + 0.05 % TFA,
주입 부피: (100-1500 μL)
검출기 파장: 214 nm
조질 (crude) 화합물이 1:1의 물:아세트산 중에 약 50 mg/mL로 용해되었다. 4분 분석 스케일 테스트 실행 (analytical scale test run)은 2.1 x 50 mm C18 컬럼을 사용하여 수행되었고, 그 후 15 또는 20분 분취 스케일 실행 (preparative scale run)은 분석 스케일 테스트 실행의 % B 체류에 기반한 구배로 100μL 주입을 사용하여 수행되었다. 정확한 구배는 시료 의존성이다. 근접한 실행 불순물을 갖는 시료는 최적의 분리를 위해 21 x 250 mm C18 컬럼 및/또는 21 x 150 mm C14 컬럼으로 확인되었다. 원하는 산물을 포함하는 분획물이 질량 분광 분석으로 확인되었다.
분석적 HPLC 조건
방법 A
컬럼: Advanced Material Technology HALO® C18 (2), 150 x 4.60 nm, 2.7　미크론 (micron)
컬럼 온도: 30 ℃
유속: 1.0 mL/분
주입 부피: 5μL
시료 제조: 1:1의 ACN:물에 용해
이동상: A = 물:ACN:TFA (98:2:0.1)
B = 물:ACN:TFA (30:70:0.1)
검출기 파장: 254 nm
구배: 22분 전체 (시간(분)/ % B): 0/30, 15/100, 18/100, 20/30, 22/30
방법 B
컬럼: Agilent Zorbax Bonus-RP C18, 150 x 4.60 nm, 3.5　미크론
컬럼 온도: 40 ℃
유속: 1.5 mL/분
주입 부피: 5μL
시료 제조: 1:1의 ACN:1 M HCl에 용해
이동상: A = 물: TFA (99.95:0.05)
B = ACN:TFA (99.95:0.05)
검출기 파장: 254 nm 및 214 nm
구배: 26분 전체 (시간(분)/ % B): 0/5, 18/90, 22/90, 22.5/90, 26/5
방법 C
컬럼: Agilent Poroshell 120 Bonus-RP, 4.6 x 150 mm, 2.7 μm
컬럼 온도: 30 ℃
유속: 1.5 mL/분
주입 부피: 10μL
이동상: A = ACN:물:TFA (2:98:0.1)
B = ACN:물:TFA (90:10:0.1)
시료 제조: 이동상 B에 용해
검출기 파장: 254 nm 및 214 nm
구배: 60분 전체 (시간(분)/ % B): 0/0, 50/100, 55/100, 55.1/0, 60/0
제조 1: 1 -(벤질옥시)-4-브로모-5-에틸-2-플루오로벤젠
Figure pct00021
(a) 5-에틸-2-플루오로페놀
무수 테트라히드로푸란 (800 mL) 중에 화합물 5-브로모-2-플루오로페놀 (80 g, 419 mmol)의 혼합물이 탈기되었고 (degassed) 및 질소로 3회 퍼지되었고 (purged), 및 Pd(t-Bu3P)2 (4.28 g, 8.38 mmol)가 첨가되었다. 디에틸아연 (114 g, 921 mmol)이 상기 혼합물에 적상으로 25 ℃에서 첨가되었고, 및 상기 반응 혼합물이 50 ℃에서 12시간 동안 질소하에 교반되었고 및 얼음-물 (1 L)에 천천히 부었다. EtOAc (350 mL)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 20분 동안 교반되었고 및 여과되었다. 필터 케이크가 EtOAc (3 x 500 mL)로 세척되었다. 조합된 유기 층이 브라인 (brine) (600 mL)으로 세척되었고, 나트륨 술페이트상에서 건조되었고, 농축되었고, 및 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제되어 표제의 중간체 (85 g, 조질)가　황색 오일로 제공되었다.
(b) 2-(벤질옥시)-4-에틸-1-플루오로벤젠
ACN (850　mL) 중에 이전 단계의 산물 (85 g, 606 mmol)의 용액에 벤질 브로미드 (124 g, 728 mmol) 및 K2CO3 (126 g, 909 mmol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 25 ℃에서 12시간 동안 교반되었고, 물 (1 L)에 붓고 및 EtOAc (4　x　500 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층이 브라인 (600　mL)으로 세척되었고, 나트륨 술페이트상에서 건조되었고, 농축되었고, 및 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제되어 표제의 중간체 (100 g)가 황색 오일로 제공되었다.
(c) 1-(벤질옥시)-4-브로모-5-에틸-2-플루오로벤젠
ACN (1.0 L) 중에 이전 단계의 산물 (100 g, 434 mmol)의 용액에 N-브로모숙신이미드 (85 g, 477 mmol)가 일부분씩 (portion wise) 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 25 ℃에서 5시간 동안 교반되었고, 물 (1.3 L)에 붓고 및 EtOAc (3　x　500　mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층이 브라인 (800 mL)으로 세척되었고, 나트륨 술페이트상에서 건조되었고, 농축되었고, 및 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제되어 표제의 화합물 (83 g)이 황색 오일로 제공되었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) 7.27-7.43 (m, 6H), 6.86 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 2.64 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 1H).
제조 2: 2-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란
Figure pct00022
디옥산 (830 mL) 중에 제조 1의 화합물 (83 g, 268 mmol), 비스(피나콜레이토)디보론 (102 g, 402 mmol), 및 KOAc (79.0 g, 805 mmol)의 혼합물이 탈기되었고 및 질소로 3회 퍼지되었고, 및 Pd(dppf)Cl2 (3.93 g, 5.37　mmol)가　첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 120 ℃에서 4시간 동안 질소하에 교반되었다. 상기 혼합물이 25 ℃로 냉각되었고, 물 (1 L)로 붓고, 및 EtOAc (3　x　500 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층이 브라인 (800 mL)으로 세척되었고, 나트륨 술페이트상에서 건조되었고, 및 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제되었다. 상기 산물이 메탄올 (200 mL)로 세척되었고, 여과되었고, 및 필터 케이크가 건조되어 표제의 화합물 (65　g)이 백색 고형물로 제공되었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) 7.26-7.42 (m, 5H), 6.74 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.08 (s, 2H), 2.76 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 12 H), 1.06 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
제조 3: 1 -벤질-4-이미노-1,4-디 히드로피리딘 -3-아민
Figure pct00023
ACN (17.0 L) 중에 피리딘-3,4-디아민 (200 g, 1.8 mol)의 용액에 벤질 브로미드 (306 g, 1.79 mol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 15 ℃에서 12시간 동안 교반되었고, 여과되었고 및 필터 케이크가 진공하에 건조되어 표제의 화합물 (250　g)이 백색 고형물로 제공되었다. 1H NMR (d 6-DMSO, 400 MHz) δ (ppm) 8.02 (dd, J　=7.2, 1.6 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.34-7.41 (m, 5H), 6.79 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.62 (s, 2H), 5.36 (s, 2H).
제조 4: 5 - 벤질 -2-(6- 브로모 -1 H - 인다졸 -3-일)-5 H - 이미다조[4,5-c]피리딘
Figure pct00024
(a) 6-브로모-1H-인다졸-3-일-카르브알데히드
물 (1 L) 중에 NaNO2 (704 g, 10.2 mol)의 용액이 아세톤 (7 L) 중에 6-브로모-1H-인돌 (400 g, 2.0 mol)의 용액에 10 ℃에서 적상으로 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 10 ℃에서 30분 동안 교반되었고, 수성 3M HCl (437 mL)이 격렬하게 교반하면서 천천히 첨가되었고, 10 내지 25 ℃의 내부 온도로 유지되었다. 상기 용액이 20 ℃에서 3시간 동안 교반되었고, 및 농축되었고, 온도는 35 ℃ 미만으로 유지하였다. 고형물이 여과로 수집되었다. 필터 케이크가 1:2의 석유 에테르:MTBE (800 mL)로 세척되었다. 상기 고형물이 여과로 수집되었고 및 진공하에 건조되어 표제의 중간체 (450 g)가 검은 갈색 (black brown) 고형물로 제공되었다. 1H NMR (CH3OD, 400　MHz) δ (ppm) 7.77 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.22 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H).
b) 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-5H-이미다조[4,5-c]피리딘
DMF (750 mL) 중에 6-브로모-1H-인다졸-3-일-카르브알데히드 (150.0 g, 666　mmol) 및 1-벤질-4-이미노-1,4-디히드로피리딘-3-아민 (127.5 g, 639.9 mmol)의 교반된 용액에 NaHSO3 (83.2 g, 799.9 mmol)가 충전되었고 (charged) 및 상기 반응 혼합물이 6시간 동안 140 ℃에서 교반되었고 및 물 (3.5 L)에 부었다. 침전물이 여과되었고 및 물 (1　L)로 세척되어 표제의 화합물 (180 g)이 검은 갈색 고형물로 제공되었다. 1H　NMR (d 6-DMSO, 400 MHz) δ (ppm) 8.69 (s, 1H) 8.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H) 8.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H) 8.07 (d, J = 6.4 Hz, 1H) 7.97 (s, 1H) 7.38-7.43(m, 3H) 7.50-7.54 (m, 4H) 5.87 (s, 2H).
제조 5: 5 - 벤질 -2-(6- 브로모 -1 H - 인다졸 -3-일)-4,5,6,7- 테트라히드로 -1 H - 이미다조[4,5-c]피리딘
Figure pct00025
MeOH (200 mL) 및 THF (1 L) 중에 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-5H-이미다조[4,5-c]피리딘 (23.0 g, 56.9　mmol)의 용액에 NaBH4 (12.9 g, 341.3　mmol)가 일부분씩 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 50 ℃에서 2시간 동안 교반되었다. 아세트산 (10 eq)이 첨가되었고, 상기 용액이 농축 건조되었고 및 실리카 겔 크로마토그래피 (30 g 실리카, 0.1% TEA를 갖는 0-10% MeOH/DCM)에 의해 정제되어 표제의 화합물 (6.0 g)이 제공되었다. 1H　NMR (d 6-DMSO, 400 MHz) δ (ppm) 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.28 - 7.37 (m, 7H), 3.74 (s, 2H), 3.48 (br.s, 2H), 2.80 (s, 2H), 2.66 (s, 2H).
제조 6: 5-벤질-2-(6-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-1 H -인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘
Figure pct00026
(a) tert-부틸 5-벤질-2-(6-브로모-1-(tert-부톡시카르보닐)-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-1-카르복실레이트
2개의 반응들이 병행하여 수행되었다. DCM (1 L) 중에 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘 (80 g, 196 mmol), 디-tert-부틸 디카르보네이트 (128 g, 587.8 mmol, 135 mL) 및 TEA (79.3 g, 784 mmol, 109　mL)의 현탁액이 20 ℃에서 12시간 동안 교반되었다. 상기 두 반응 현탁액이 조합되었고, 농축 건조되었고, 및 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르 : EtOAc 10:1 - 0:1)에 의해 정제되어 표제의 중간체 (170.0 g)가 제공되었다.
(b) 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘
두개의 반응이 병행하여 수행되었다. DCM (400 mL) 중에 이전 단계의 산물 (85 g, 140 mmol) 및 MeOH 중에 4M HCl (400 mL)의 용액이 25　℃에서 12시간 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물이 조합되었고 및 농축 건조 되었고, DCM (250　mL)이 교반하면서 첨가되었고, 및 상기 반응 혼합물이 30분 동안 교반되었고 및 여과되었다. 필터 케이크가 DCM (2 x 20 mL)으로 세척되었고 및 건조되어 표제의 화합물 (85 g)이 황-백색 (off-white) 고형물로 제공되었다.
(c) 5-벤질-2-(6-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘
85개의 반응이 병행하여 수행되었다. 이전 단계의 산물 (1.0 g, 2.5　mmol), 2-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (873 mg, 2.5 mmol), 및 Pd(PPh3)4 (227 mg, 196. μmol)가 물 (4 mL)과 디옥산 (10 mL)의 혼합물에 첨가되었다. 상기 반응 바이알 (vial)이 질소로 2분 동안 버블링되었고 (bubbled) 및 Na2CO3 (779 mg, 7.4 mmol)가 질소하게 빠르게 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 130 ℃에서 1.5시간 동안 가열되었다. 상기 85개의 반응 혼합물이 조합되었고 및 감압하에 농축되었다. 잔류물이 DCM (500 mL)에 용해되었고 및 실리카 겔 크로마토그래피 (150 g 실리카, DCM:THF (6:1 내지 3:1)로 용리시킴)에 의해 정제되어 표제의 화합물 (50 g)이 황-백색 고형물로 제공되었다.
제조 7: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(4,5,6,7- 테트라히드로 -1 H - 이미다조[4,5-c]피리딘 -2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀
Figure pct00027
MeOH (500 mL) 중에 5-벤질-2-(6-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘 (44.5 g, 79.8 mmol), Pd(OH)2/C (25 g, 2.7　mmol, 50% 순도) 및 TFA (44.5 g, 390 mmol, 28.9 mL)의 혼합물이 수소 (50 Psi)하에 4시간 동안 교반되었고 및 여과되었다. Pd(OH)2/C (25 g, 2.7 mmol, 50% 순도)가 상기 여과물로 첨가되었고 및 결과의 현탁액이 수소 (50 Psi)하에 25 ℃에서 12시간 동안 교반되었다. 상기 현탁액이 이전 반응으로부터의 현탁액과 5.5 g의 스케일로 조합되었고 및 여과되었다. 필터 케이크가 20:1의 MeOH:TFA (2 x 200 mL)로 세척되었다. 조합된 여과물이 농축되었고 및 MeOH 중 4 M HCl (200　mL)이 상기 잔류물에 교반하면서 첨가되었다. 결과의 현탁액이 농축되었고, MeOH (80　mL)로 슬러리화되었고 (slurried) 및 30분 동안 교반되었다. 백색 고형물이 침전되었다. 고형물이 여과되었고, 필터 케이크가 MeOH (2 x 10 mL)로 세척되었고 및 진공하에 건조되어 표제 화합물의 HCl 염 (24.8 g)이 황-백색 고형물로 제공되었다. (m/z):　C21H20FN5O에 대한 [M+H]+ 계산치 378.17 실측치 378.1. 1H　NMR (d 6-DMSO, 400 MHz) δ (ppm) 8.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.35 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 6.90 - 6.97 (m, 2H), 4.57 (s, 2H), 3.72 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.22 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.51 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.04 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
제조 8: (4-( 벤질옥시 )-2-에틸-5- 플루오로페닐 ) 트리플루오로보레이트 , 칼륨
Figure pct00028
(a) 1-(벤질옥시)-4-브로모-5-에틸-2-플루오로벤젠
4-브로모-5-에틸-2-플루오로페놀 (50 g, 228 mmol) 및 DMF(200　mL)의 혼합물에 칼륨 카르보네이트 (34.7 g, 251 mmol)가 RT에서 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 15분 동안 교반되었고; 벤질 브로미드 (25.8 mL, 217 mmol)가 적상으로 첨가되었고; 상기 반응 혼합물이 RT에서 밤새 교반되었고 및 물 (1 L)에 부었다. 에틸 아세테이트 (1 L)가 첨가되었고; 상들이 분리되었고; 유기 층이 브라인 (1 L)으로 세척되었고, 및 나트륨 술페이트로 건조되었고, 그 후 용매가 제거되어 조질의 표제의 중간체 (71 g)가 진한 오일로 제공되었다. HPLC 방법 A 체류 시간 17.37분.
(b) 2-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란
이전 단계의 산물 (70 g, 226 mmol) 및 디옥산 (800　mL)의 혼합물이 질소로 퍼지되었고 및 그 다음에 비스(피나콜레이토)디보론 (86 g, 340 mmol)이 첨가되었고, 그 후 칼륨 아세테이트 (66.7 g, 679 mmol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 질소로 퍼지되었고; Pd(dppf)Cl2 (3.31 g, 4.53 mmol)가 첨가되었고; 상기 반응 혼합물이 120 ℃에서 질소하에 4시간 동안 가열되었고; RT로 냉각되었고 및 밤새 교반되었다. 상기 반응 혼합물이 회전 증발에 의해 농축되었고 및 물 (800 mL)과 에틸 아세테이트 (800 mL) 사이에서 분배되었다. 유기 층이 브라인 (800 mL)으로 세척되었고 및 나트륨 술페이트로 건조되었고 그 후 용매가 제거되었다. 상기 조질 산물이 DCM (400 mL)에 용해되었고 및 실리카 겔 크로마토그래피 (1 kg 실리카, 헥산 중에 20 % 에틸 아세테이트 (2 L)로 용리됨)에 의해 정제되었다. 용매가 회전 증발에 의해 제거되어 표제의 중간체 (81 g)가 연황색 오일로 제공되었다.
(c) (4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)트리플루오로보레이트, 칼륨
이전 단계의 산물 (81g, 227 mmol)이 아세톤 (400　mL)과 완전히 용해될 때까지 혼합되었고 및 메탄올 (400 mL)이 첨가되었고 그 후 수 중 3　M　칼륨 수소 디플루오리드 (379 mL, 1137 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 RT에서 교반되었다. 대부분의 용매가 회전 증발에 의해 제거되었다. 물 (500 mL)이 첨가되었고 및 결과의 진한 슬러리가 30분 동안 교반되었고 및 여과되었다. 플라스크 및 케이크가 물 (2　x　100　mL)로 세척되었고 및 고형물이 밤새 건조되었다. 톨루엔 (400 mL)이 첨가되었고, 이 중 200 mL이 회전 증발에 의해 50 ℃에서 제거되었다. 상기 반응 혼합물이 RT로 냉각되었고, 30분 동안 교반되었고 및 여과되었다. 고형물이 건조되어 표제의 화합물 (69.7 g, 205 mmol, 90 % 수득율)이 백색 고형물로 제공되었다. HPLC 방법 A 체류 시간 10.90분.
제조 9: 5 - 벤질 -2-(6- 브로모 -1 H - 인다졸 -3-일)-5 H - 이미다조[4,5-c]피리딘
Figure pct00029
(a) 1-벤질-4-이미노-1,4-디히드로피리딘-3-아민
피리딘-3,4-디아민 (700 g, 6.414 mol) 및 ACN (15.5 L)의 혼합물이 80분 동안 25 ℃에서 15 ℃로 교반되었다. ACN (1 L) 중에 벤질 브로미드 (763 mL, 6.414　mol)의 용액이 10분 내에 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 1시간 동안 25 ℃에서 및 20 ℃에서 밤새 교반되었다. 상기 반응 혼합물이 여과되었다. 반응기 및 케이크가 ACN (8 L)으로 세척되었고 및 25 ℃로 가온되었고, 및 다시 ACN (8 L)으로 세척되었고 및 25　℃로 가온되었다. 고형물이 필터 상에서 3시간 동안 질소 하에, 50 ℃에서 진공 하에 2시간 동안 및 그 다음에 RT에서 밤새 건조되어 표제 중간체의 HBR 염 (1659 g, 5.922 mol, 92 % 수득율)이 제공되었다. HPLC 방법 B 체류 시간 3.74분.
(b) 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-5H-이미다조[4,5-c]피리딘
6-브로모-1H-인다졸-3-카르브알데히드 (558 g, 2.480 mol), 이전 단계의 산물 (746 g, 2.529 mol) 및 DMF (4.75 L)의 용액이 80분 동안 교반되었고 및 나트륨 비술피트 (261 g, 2.504 mol)가 혼합하면서 첨가되었다. 반응 혼합물이 135 ℃로 가열되었고 및 2시간 동안 유지되었고 및 RT로 약 3시간 내에 냉각시켰고, 2 ℃로 냉각되었고 및 1시간 동안 0-5 ℃에서 유지되었다. 상기 슬러리가 가압 필터 (pressure filter) 상에 완속 여과 (slow filtration)에 의해 여과되었다. 반응기에 DMF (1 L)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 5　℃로 냉각되었다. 케이크가 세척되었고 및 상기 절차가 또다른 부분의 DMF　(4　L)로 반복되었다. 케이크가 ACN (1 L)으로 세척되었고 및 질소 하에 및 진공 하에 밤새 건조되어 표제의 화합물 (1080 g, 2.591 mol, 105 % 수득율, 97 % 순도)이 연황색 고형물로 제공되었다. HPLC 방법 B 체류 시간 7.83분.
표제의 화합물 (1000 g, 2.474 mol) 및 MeTHF (6 L)의 혼합물이 55 ℃로 가열되었고 및 1 M 나트륨 히드록시드 (3.216 L)가 5분내에 첨가되었다. 온도를 45　℃로 떨어뜨리고 및 혼합물이 냉 (cold) 나트륨 히드록시드 용액으로 희석되었다. 층들을 분리시키고 및 수성 층이 배수되었다. 혼합물이 RT로 냉각되었고, 그 다음에 5 ℃로 냉각되었고 및 밤새 유지되었다. 상기 혼합물이 여과되었고 및 반응기 및 케이크가 MeTHF (1 L)로 세척되었다. 결과의 베이지색 내지 황색 고형물이 필터 상에서 3일 동안 건조되어 표제의 화합물 (700 g, 1.680 mol, 67.9 % 수득율, 97 % 순도)이 연황색 고형물로 제공되었다. HPLC 방법 B 체류 시간 7.84분.
제조 10: 5 - 벤질 -2-(6- 브로모 -1 H - 인다졸 -3-일)-4,5,6,7- 테트라히드로 -1H- 이미다조[4,5-c]피리딘
Figure pct00030
15 L의 플라스크에 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-5H-이미다조[4,5-c]피리딘 (350 g, 866 mmol) 그 후 MeTHF (4 L), 메탄올 (2 L) 및 물 (1 L)이 첨가되었다. 상기 슬러리가 25 ℃에서 45분 동안 교반되었고 및 NaBH4 (197 g, 5195　mmol)가 2부분으로 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 25 ℃에서 18시간 동안 교반되었다. 물　(1　L)이 첨가되었고 그 후 20 wt %.의 나트륨 클로리드 용액 (2 L)이 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 30분 동안 교반되었고 및 층들이 분리되었다. 수성 층이 배수되었고; NaOH (1.732 L)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 30분 동안 교반되었고; 층들을 분리시키고 및 수성 층이 배수되었다.
유기 층이 상기 제2 배치의 산물과 동일한 스케일로 조합되었고 및 55 ℃에서 회전 증발에 의해 부피가 약 반으로 농축되었다. 층들을 침강시키고 및 수성 층이 배수되었다. 유기 층에 CPME 중에 3M HCl (1.732 L)이 35 ℃에서 첨가되었고 그 후 MeTHF (4 L) 및 MeOH (4 L)가 첨가되었고 및 상기 혼합물이 60 ℃로 가열되어 진한 슬러리를 형성하였고, 25 ℃로 5시간 내에 냉각되었고 및 밤새 상기 온도로 유지되었다. 상기 슬러리를 가압 필터로 옮기고 및 습식 케이크가 2개의 트레이-건조기 (tray-driers)로 55 ℃에서 옮기고 및 진공 하에 및 질소 하에 6시간 동안 및 그 다음에 35 ℃에서 2일 동안 건조되어 표제 화합물의 3　HCl 염 (609 g, 1153　mmol, 66.6 % 수득율, 98 % 순도)이 강모 (bristle) 황색/베이지색 고형물로 제공되었다. HPLC 방법 B 체류 시간 5.93분.
제조 11: 5 - 벤질 -2-(6-(4-( 벤질옥시 )-2-에틸-5- 플루오로페닐 )-1 H - 인다졸 -3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘
Figure pct00031
5 L 플라스크에 세슘 카르보네이트 (123 g, 377 mmol) 및 물 (455　mL)이 22℃에서 교반하면서 첨가되었고, 그 후 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘, 3HCl (65 g, 126 mmol) 및 MeOH (1365　mL)가 첨가되었다. 상기 슬러리가 0.5시간 동안 가열 환류되었고 및 세슘 카르보네이트 (127 g, 389　mmol), 그 후 (4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)트리플루오로보레이트, 칼륨 (52.8 g, 157 mmol)이 첨가되었다. 상기 슬러리가 질소로 3회 퍼지되었고, 비스(디-tert-부틸(4-디메틸아미노페닐) 포스핀) 디클로로팔라듐(II) (8.89 g, 12.56　mmol)이 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 42시간 동안 가열 환류되었다. 부가의 (4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)트리플루오로보레이트, 칼륨 (5.28 g, 15.7　mmol) 및 세슘 카르보네이트 (16.4 g, 50.3 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 추가로 18시간 동안 교반 환류되었고 및 25 ℃로 냉각되었다.
상기 반응 혼합물에 수 중 1M HCl (502 mL, 502 mmol) 그 후 물 (3 L)이 첨가되었다. 결과의 슬러리가 22 ℃에서 1시간 동안 교반되었고, 및 여과되었다. 필터 케이크가 물 (1 L)로 린스되었고 (rinsed) 및 진공 하에 및 질소 하에 건조되어 표제 화합물의 3HCl 염 (88 g, 132 mmol, 105 % 수득율)이 제공되었고 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다. HPLC 방법 B 체류 시간 10.07분.
제조 12: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(4,5,6,7- 테트라히드로 -1H- 이미다조[4,5-c]피리딘 -2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀
Figure pct00032
EtOH (845　mL) 중에 5-벤질-2-(6-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘 (70.6 g, 127 mmol) 및 MeOH 중에 1.25 M HCl (203 mL, 253 mmol)의 용액이 질소 하에 10분 동안, 50 ℃로 가열시키면서, 교반되었고 및 그 다음에 10　wt % Pd/C (8.45 g)가 즉시 첨가되었고 그 후 수소 기체가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 수소 (50 Psi) 하에 50　℃에서 3시간 동안 밀봉되었고, Celite®를 통해 여과되었고, 및 169 mL로 농축되었다. 에틸 아세테이트 (845　mL)가 첨가되었고, 상기 반응 혼합물이 169 mL로 농축되었고, EtOAc (1521 mL)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 22 ℃에서 1시간 동안 교반되었고, 0 ℃로 냉각되었고, 그 다음에 1시간 동안 유지되었고 및 여과되었다. 케이크가 EtOAc (100 mL)로 린스되었고 및 진공 하에 및 질소 하에 건조되어 표제의 산물의 3 HCl 염 (52 g, 107 mmol, 70.5 % 수득율)이 제공되었다. HPLC 방법 B 체류 시간 6.06분.
제조 13: 5 - 벤질 -2-(6- 브로모 -1 H - 인다졸 -3-일)-5 H - 이미다조[4,5-c]피리딘
Figure pct00033
(a) 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-5H-이미다조[4,5-c]피리딘
6-브로모-1H-인다졸-3-카르브알데히드 (550 g, 2.444 mol), 1-벤질-4-이미노-1,4-디히드로피리딘-3-아민 HBr (721 g, 2.333 mol) 및 DMAc (2.65 L)의 용액이 60분 동안 교반되었고 및 나트륨 비술피트 (257 g, 2.468 mol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 135 ℃로 가열되었고 및 3시간 동안 유지되었고, 및 20 ℃로 냉각되었고 및 20 ℃에서 밤새 유지되었다. 아세토니트릴 (8 L)이 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 4시간 동안 15 ℃에서 교반되었다. 상기 슬러리가 가압 필터 상에 중간 여과 속도로 여과되었다. 상기 반응기에 ACN (1 L)이 첨가되었다. 케이크가 ACN으로 세척되었고 반응기가 세척되었고 및 질소 하에 밤새 및 그 다음에 진공 하에 50 ℃에서 24시간 동안 건조되어 표제 화합물의 HBr 염 (1264 g, 2.444　mol, 100 % 수득율, 94 % 순도)이 진한 습식 베이지색/갈색 고형물로 제공되었다. HPLC 방법 B 체류 시간 8.77분.
이전 단계의 산물 (1264 g, 2.444 mol), MeTHF (6 L) 및 물 (2.75 L)의 혼합물이 65 ℃로 가열되었고 및 나트륨 히드록시드 50 wt % (254 g, 3.177 mol)가 5분에 걸쳐 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 65 ℃에서 1시간 동안 교반되었고, RT, 그 다음에 5 ℃로 냉각되었고 및 2시간 동안 유지되었다. 상기 슬러리가 여과되었고 및 상기 반응기 및 케이크가 MeTHF (1 L)로 세척되었다. 결과의 베이지색 내지 황색 고형물이 필터 상에서 질소 하에 3일 동안 건조되어 표제의 화합물 (475 g, 1.175 mmol, 48 % 수득율)이 베이지색/황색 고형물로 제공되었다. 모액 (mother liquor) (약 8 L)이 약 2 L로 농축되었고, 그 결과 고형물이 침전되기 (crash out) 시작되었다. 상기 슬러리가 50 ℃로 가열되었고, 2시간 동안 유지되었고, 5 ℃로 2시간에 걸쳐 냉각되었고, 밤새 교반되었고, 및 여과되었다. 상기 케이크가 MeTHF (100　mL)로 세척되었고 및 밤새 진공하에 40 ℃에서 건조되어 부가의 표제의 화합물 (140 g, 0.346 mol, 14 % 수득율)이 제공되었다.
제2 배치의 산물과 동일한 스케일 (1500 g, 3.710 mol)로 조합된, 이전 단계의 전체 산물 및 MeTHF (4 L)의 혼합물이 20 ℃에서 2시간 동안 교반되었고 및 여과되었다. 상기 반응기 및 케이크가 MeTHF (1.5 L)로 세척되었다. 결과의 베이지색 내지 황색 고형물이 질소 하에 3일 동안 건조되어 표제의 화합물이 베이지 황색 고형물 (1325 g, 3.184　mol, 86 % 수득율 (전체 68 % 수득율), 97　% 순도)로 제공되었다. HPLC 방법 B 체류 시간 8.77분
제조 14: 5 - 벤질 -2-(6- 브로모 -1 H - 인다졸 -3-일)-4,5,6,7- 테트라히드로 -1H- 이미다조[4,5-c]피리딘
Figure pct00034
15 L 플라스크에 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-5H-이미다조[4,5-c]피리딘 (440 g, 1.088 mol) 그 후 MeTHF (4.5 L), 메탄올 (2.25　L) 및 물 (1.125　L)이 첨가되었다. 상기 슬러리가 20 ℃로 냉각되었고, 1시간 동안 교반되었고, 및 NaBH4 (247 g, 6.530　mol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 25 ℃에서 18시간 동안 교반되었다. 물　(1.125　L)이 첨가되었고 그 후 20 wt %. 나트륨 클로리드 용액 (1.125 L)이 첨가되었고 및 상기 혼합물이 30분 동안 교반되었고 및 층들이 분리되었다. 수성 층이 배수되었다. NaOH (522　g) 및 물 (5 L)의 사전혼합된 (premixed) 용액이 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 60분 동안 교반되었고; 층들이 분리되었고 및 수성 층이 배수되었다. 동일한 스케일로 2개의 추가의 배치가 제조되었다.
하나의 배치로부터의 유기 층은 자켓 (jacket)을 50 ℃로 설정하고, 내부 온도를 20 ℃로 한 15　L의 자켓 반응기 (jacketed reactor)에서 감압 하에 농축되었다. 추가의 배치가 상기 반응기에 첨가되었고 및 한번에 하나씩 농축되어 슬러리가 약 6 L 부피로 수득되었다. 상기 슬러리가 50 ℃로 가열되었고, IPAc (6 L)가 첨가되었고 및 상기 혼합물이 60　℃에서 1.5시간 동안 유지되었고, 20 ℃로 10시간 동안 냉각되었고, 60 ℃로 50시간 동안 가열되었고, 20 ℃로 5시간 내에 냉각되었고, 그 다음에 5 ℃로 냉각되었고 및 3시간 동안 유지되었다. 상기 혼합물이 여과되었고 및 상기 반응기 및 케이크가, 5 ℃로 사전냉각된 (precooled), IPAc (1 L) 및 MeTHF (1　L)의 사전혼합된 용액으로 세척되었다. 상기 고형물이 질소 하에 필터 상에서 40 ℃에서 3일 동안 건조되어 표제의 화합물 (1059 g, 2.589　mol, 79 % 수득율)이 황-백색 고형물로 제공되었다. 상기 물질이 진공 오븐 (vacuum oven)에서 50-60 ℃로 8시간 동안 및 27 ℃로 2일 동안 더 건조되어 표제의 화합물 (1043 g, 2.526 mol, 77 % 수득율, 99 % 순도)이 제공되었다. HPLC 방법 B 체류 시간 6.73분.
제조 15: (4-( 벤질옥시 )-2-에틸-5- 플루오로페닐 ) 트리플루오로보레이트 , 칼륨
Figure pct00035
(a) 2-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란
1-(벤질옥시)-4-브로모-5-에틸-2-플루오로벤젠 (520 g, 1682　mmol) 및 디옥산 (5193　mL)의 혼합물이 질소로 퍼지되었고 및 그 다음에 비스(피나콜레이토)디보론 (641 g, 2523　mmol)이 첨가되었고 그 후 칼륨 아세테이트 (495 g, 5046 mmol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 질소로 퍼지되었고; Pd(dppf)Cl2 (41.2 g, 50.5 mmol)가 첨가되었고; 상기 반응 혼합물이 질소로 퍼지되었고, 103 ℃에서 질소 하에 5시간 동안 가열되었고; 및 RT로 냉각되었다. 상기 반응 혼합물이 진공 증류로 농축되었고 및 에틸 아세테이트 (5204　mL)와 물 (5212　mL) 사이에서 분배되었다. 상기 반응 혼합물이 Celite를 통해 여과되었고; 유기 층이 브라인 (2606 mL)으로 세척되었고 그 후 진공 증류에 의해 용매가 제거되어 조질 산물이 진한 검정색 오일 (~800 g)로 제공되었다.
상기 조질 산물이 DCM (1289 mL)에 용해되었고 및 실리카 겔 크로마토그래피 (2627 g 헥산 중에 사전슬러리화된 (preslurried) 실리카, 헥산 중에 20 % 에틸 아세테이트 (10.35 L)로 용리됨)에 의해 정제되었다. 용매가 진공 증류로 제거되어 연황색 오일 (600 g)이 수득되었다. HPLC 방법 C 체류 시간 33.74분.
(b) (4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)트리플루오로보레이트, 칼륨
이전 단계의 산물 (200 g, 561 mmol)이 아세톤 (1011 mL)과 완전히 용해될 때까지 혼합되었고 및 메탄올 (999 mL)이 첨가되었고 그 후 3　M　칼륨 수소 디플루오리드 (307 g, 3930 mmol)가 수 (1310 mL) 중에 용해되었다. 상기 반응 혼합물이 3.5시간 동안 교반되었다. 대부분의 유기 용매가 진공 증류에 의해 제거되었다. 물 (759 mL)이 첨가되었고 및 결과의 진한 슬러리가 30분 동안 교반되었고 및 여과되었다. 케이크가 물 (506　mL)로 세척되었고 및 고형물이 필터 상에서 30분 동안 건조되었다. 고형물이 아세톤 (1237 mL)에서 슬러리화되었고 및 1시간 동안 교반되었다. 결과의 슬러리가 여과되었고 및 고형물이 아세톤 (247 mL)으로 세척되었다. 상기 아세톤 용액이 진공 증류에 의해 농축되었고, 및 모든 아세톤 및 물이 증류될 때까지 톨루엔 (2983 mL)의 완속 첨가로 일정한 부피 (2　L)가 유지되었다. 상기 톨루엔 용액이 진한 황색 슬러리로 회전 증발에 의해 증류되었고, 그 동안 상기 산물이 백색 고형물로 침전되었다. 톨루엔의 추가 부분 (477 mL)이 상기 혼합물로 첨가되었고 및 1시간 동안 교반되었다. 상기 혼합물이 그 다음에 여과되었고 및 톨루엔 (179 mL)으로 린스되었고 및 진공 하에 50 ℃에서 24시간 동안 건조되어 표제의 화합물 (104 g, 310 mmol, 55 % 수득율)이 자유-유동 (free-flowing), 플러피 (fluffy), 약간 황-백색 고형물로 제공되었다. HPLC 방법 C 체류 시간 27.71분.
제조 16: 5 - 벤질 -2-(6-(4-( 벤질옥시 )-2-에틸-5- 플루오로페닐 )-1 H - 인다졸 -3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘
Figure pct00036
(a) 5-벤질-2-(6-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘
비스(피나콜레이토)디보론 (250 g, 984 mmol) 및 IPA (1.88 L)의 혼합물이 교반되어 용해되었고 및 그 다음에 수 (2.31 L) 중에 칼륨 수소 디플루오리드 (538 g, 6.891　mol)의 용액이 10분에 걸쳐 일부분씩 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 1시간 동안 교반되었고 및 여과되었다. 겔-형태 (gel-like) 고형물이 물 (1.33 L)로 상기 혼합물이 맑은 히드로겔 (hydrogel)을 형성할 때까지 및 그 다음에 추가의 45분 동안 슬러리화되었다. 결과의 고형물/겔이 여과되었고, 그 다음에 아세톤 (1.08 L)에서 재슬러리화되었고, 여과되었고, 필터 상에서 30분 동안 공기 건조되었고 (air dried) 및 밤새 건조되어 플러피 백색 고형물 (196.7 g)이 제공되었다.
5 L 플라스크에 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘 (135 g, 331 mmol), (4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-트리플루오로보레이트, 칼륨 (133 g, 397 mmol), 및 이전 단계의 백색 고형 산물 (40.5 g) 그 후 MeTHF (1.23 L) 및 MeOH (1.75 L)가 첨가되었다. 결과의 슬러리가 질소로 3회 탈기되었다. 상기 슬러리에 수 (1.35 L) 중 세슘 카르보네이트 (431　g, 1.323 mol)의 탈기된 용액이 첨가되었다. 상기 슬러리가 2회 탈기되었고, Pd (amphos)2Cl2 (11.71 g, 16.53 mmol)가 첨가되었고, 상기 슬러리가 다시 2회 탈기되었고 및 상기 반응 혼합물이 67 ℃에서 밤새 교반되었고 및 20 ℃로 냉각되었다. 층들이 분리되었고 및 MeTHF (550　mL)로 재 추출되었다. 유기 층들이 조합되었고 및 회전 증발에 의해 고형물이 침전될 때까지 농축되었다. MeTHF (700 mL)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 65　℃에서 교반되었다. 층들이 분리되었고 및 수성 상이 MeTHF (135 mL)로 재 추출되었다. 유기 상들이 조합되었고 및 약 300 mL로 농축되어 진한 오렌지색 슬러리가 수득되었다. 상기 슬러리에 MeOH (270 mL) 그 후 1M HCl (1.325 L)이 20 ℃에서 급속 교반하면서 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 5분 동안 교반되었고 및 물 (1 L)이 첨가되었고 및 결과의 슬러리가 1시간 동안 교반되었다. 고형물이 여과되었고, 물 (150 mL)로 세척되었고, 필터 상에서 10분 동안 및 45 ℃에서 질소 하에 16시간 동안 건조되어 표제 화합물의 2 HCl 염 (221.1 g, 351 mmol, 92.2 % 순도)이 연황색 고형물로 제공되었다. HPLC 방법 C 체류 시간 23.41분.
제조 17: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(4,5,6,7- 테트라히드로 -1 H - 이미다조[4,5-c]피리딘 -2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀
Figure pct00037
1 L 플라스크에 에탄올 (348 mL) 중에 슬러리로서 5-벤질-2-(6-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘, 2 HCl (40 g, 63.4 mmol) 및 MeOH 중에 1.25 M HCl (101 mL) 및 물 (17.14　mL)이 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 질소로 5분 동안 탈기되었고 및 10　wt　%Pd/C, 50 wt% H2O (4.05 g, 1.903　mmol)가 첨가되었다. 상기 반응기가 밀봉되었고, H2로 퍼지되었고, 1-2 psi.로 가압되었고, 50 ℃로 가온되었고, 및 상기 반응 혼합물이 밤새 교반되었고 및 Celite를 통해 여과되었다. 상기 반응기 및 필터가 메탄올 (100 mL)로 세척되었다.
상기 여과된 용액이 제2 배치의 산물과 98　mmol 스케일로 조합되었고 및 390 g로 농축되었다. EtOAc (2.04 L)가 교반하면서 천천히 첨가되었고 및 그 다음에 상기 용액이 교반하면서 5 ℃로 냉각되었다. 고형물이 여과되었고, EtOAc (510 mL)로 세척되었고, 및 밤새 45 ℃에서 질소 하에 건조되어 표제 화합물의 2 HCl 염 (58 g, 80　% 수득율)이 황-백색 고형물로 제공되었다. HPLC 방법 C 체류 시간 12.83분.
실시예 1: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(5-(1- 메틸아제티딘 -3-일)-4,5,6,7- 테트라히드로 -1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀
Figure pct00038
(a) 4-(3-(5-(아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
THF (6 mL) 및 DMF (2 mL)의 혼합물 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 HCl (300 mg, 0.795 mmol), tert -부틸 3-옥소아제티딘-1-카르복실레이트 (272 mg, 1.590 mmol) 및 아세트산 (0.137 ml, 2.385 mmol)의 혼합물이 40 ℃에서 30분 동안 가열되었다. 상기 반응 혼합물이 RT로 냉각되었고, 나트륨 트리아세톡시보로히드리드 (505 mg, 2.385 mmol)로 처리되었고, 및 40 ℃에서 2시간 동안 가열되었다. 상기 반응 혼합물이 병행 반응과 0.132 mmol 스케일로 조합되었고 및 농축되었다. 결과의 잔류물이 EtOAc (200　mL)와 포화된 암모늄 클로리드 (30 mL) 사이에서 분배되었다. 상기 유기 층이 물 (2　x　20　mL)로 세척되었고, 나트륨 술페이트 상에서 건조되었고, 여과되었고, 농축되었고, 및 실리카 겔 크로마토그래피 (24g 실리카 겔, 0-15% MeOH/DCM)에 의해 정제되었다. 소망하는 분획 (fractions)이 조합되고 및 농축되어 백색 연질 고형물이 제공되었다.
상기 고형물이 1,4-디옥산 (3.97 mL) 및 물 (1 mL) 중에 4 N HCl로 RT에서 2시간 동안 처리되었고, 농축되었고, 및 동결 건조되어 표제 중간체의 HCl 염 (388　mg, 0.768 mmol, 83 % 수득율)이 백색 고형물로 제공되었다. (m/z):　C24H25FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 433.21 실측치 433.
(b) 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀
RT에서 MeOH (7　ml) 중에 이전 단계의 산물 (259.4 mg, 0.513 mmol)의 용액에 수 중 포름알데히드 용액, 37 % (0.076 mL, 1.026　mmol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 5분 동안 교반되었고 및 그 다음에 나트륨 시아노보로히드리드 (129 mg, 2.053　mmol)가 첨가되었고 및 상기 혼합물이 밤새 정치되었다. 다음 날 나트륨 보로히드리드 (194 mg, 5.13　mmol)가 RT에서 첨가되었다. 1시간 후에, 상기 반응은 아세트산 (5 mL) 및 물 (2 mL)을 천천히 첨가하여 퀀칭되었다 (quenched). 상기 반응 혼합물이 30분 동안 교반되었고, 농축되었고, 및 추가의 물 (3 mL)이 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 여과되었고, 분취 HPLC에 의해 정제되었고, 및 동결 건조되어 표제 화합물의 TFA 염 (132 mg)이 황색을 띤 고형물로 제공되었다. (m/z):　C25H27FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 447.22 실측치 447. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.17 (dd, J = 8.5, 0.9 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 1.4, 0.8 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 8.5, 1.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.58 - 4.43 (m, 1H), 4.41 - 4.28 (m, 1H), 4.23 - 3.97 (m, 2H), 3.81 - 3.67 (m, 3H), 3.00 (s, 3H), 2.97 - 2.88 (m, 4H), 2.53 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.05 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
실시예 2: 4 -(3-(5-( 아제티딘 -3-일)-4,5,6,7- 테트라히드로 -1 H - 이미다조[4,5- c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
Figure pct00039
메탄올 (2 mL) 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (50mg, 0.132 mmol) 및 tert -부틸 3-옥소아제티딘-1-카르복실레이트 (68.0 mg, 0.397 mmol)의 용액에 나트륨 시아노보로히드리드 (50.0 mg, 0.795 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 RT에서 교반되었고, 5 mL의 2:1의 아세트산:물 (5 mL)에 용해되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되었다. 상기 산물 분획들이 조합되었고 및 용매가 증발되었다. 순수한 무수 산물에 ACN (1 mL) 및 디옥산 중 4 N HCl (1 mL)이 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 RT에서 30분 동안 교반되었고, 농축되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되어 표제 화합물의 TFA 염 (20 mg)이 제공되었다. (m/z):　C24H25FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 433.21 실측치 433.
실시예 3: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(5-(1- 이소프로필아제티딘 -3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀
Figure pct00040
MeOH (2.0 ml) 중에 4-(3-(5-(아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀 (15 mg, 0.035 mmol) 및 아세톤 (10.07 mg, 0.173 mmol)의 용액에 나트륨 시아노보로히드리드 (17.44 mg, 0.277　mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 RT에서 밤새 교반되었고, 진공 하에 농축되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되어 표제 화합물의 TFA 염 (10.4 mg)이 제공되었다. (m/z):　C27H31FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 475.25 실측치 475.1.
실시예 4: 4 -(3-(5-(1-( sec -부틸) 아제티딘 -3-일)-4,5,6,7- 테트라히드로 -1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
Figure pct00041
아세톤 대신에 시약인 2-부타논으로 0.045 mmol 스케일로 실시예 3의 방법과 유사한 방법을 사용하여, 표제 화합물의 TFA 염 (10 mg)이 제조되었다. (m/z):　C28H33FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 489.27 실측치 489.2.
실시예 5: 4 -(3-(5-(1- 시클로프로필아제티딘 -3-일)-4,5,6,7- 테트라히드로 -1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
Figure pct00042
메탄올 (4.03 mL) 중에 4-(3-(5-(아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀 (349 mg, 0.807 mmol), [(1-에톡시시클로프로필)옥시]-트리메틸실란 (0.811 mL, 4.03 mmol), 및 아세트산 (0.185 ml, 3.23 mmol)의 용액에 나트륨 시아노보로히드리드 (507 mg, 8.07 mmol)가 첨가되었고 메탄올 (4.03 mL)이 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 65 ℃에서 2시간 동안 교반되었고, 회전 증발에 의해 농축되었고, 및 분취 HPLC에 의해 정제되었다. 분획들이 조합되어 표제 화합물의 TFA 염 (62 mg)이 제공되었다. (m/z):　C27H29FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 473.24 실측치 473.2.
실시예 6: 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀
Figure pct00043
DMF (30 mL) 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 HCl (0.80 g, 1.93 mmol), 아세트산 (0.33 mL, 5.80 mmol), 및 1-메틸피페리딘-4-온 (0.29 mL, 2.32 mmol)의 용액에 나트륨 트리아세톡시보로히드리드 (1.229 g, 5.80 mmol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 RT에서 48시간 동안 교반되었고, 농축되었고, 및 분취 HPLC에 의해 정제되어 표제의 화합물 (612 mg)이 제공되었다. (m/z):　C27H31FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 475.25 실측치 475.1. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.19 (dd, J = 8.5, 1.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.22 (s, 2H), 3.75 - 3.61 (m, 2H), 3.53 - 3.37 (m, 4H), 3.22 - 3.08 (m, 1H), 3.07 - 3.00 (m, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.52 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.43 - 2.30 (m, 3H), 2.19 - 2.01 (m, 3H), 1.05 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
실시예 7: 4 -(3-(5-(2-(디메틸아미노)에틸)-4,5,6,7- 테트라히드로 -1 H - 이미 다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
Figure pct00044
(a) tert-부틸 (2-(2-(6-(2-에틸-5-플루오로-4-히드록시페닐)-1H-인다졸-3-일)-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)카르바메이트
DMF (20 mL) 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 HCl (600 mg, 1.45 mmol)의 현탁액에 tert-부틸 (2-옥소에틸)카르바메이트 (277 mg, 1.74 mmol) 및 아세트산 (0.25 mg, 4.35　mmol)이 첨가되었고 그 후 나트륨 트리아세톡시보로히드리드 (922 mg, 4.35 mmol)가 수 분에 걸쳐 나누어 (in portions) 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 RT에서 96시간 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물이 회전 증발에 의해 농축되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되어 표제 중간체의 TFA 염 (364 mg)이 제공되었다.
(b) 4-(3-(5-(2-아미노에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
이전 단계의 산물 (364 mg, 0.57 mmol)에 디옥산 중에 4 M HCl (3 mL) 및 물 (0.1 mL)이 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 RT에서 30분 동안 교반되었고, 회전 증발에 의해 농축되었고, EtOAc (3 x 5 mL)로 회전 증발에 의해 증발되었고, 및 높은 진공 하에 건조되어 표제 중간체의 HCl 염 (283 mg)이 제공되었고 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다.
(c) 4-(3-(5-(2-(디메틸아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
RT에서 MeOH (11 mL) 중에 이전 단계의 산물 (283 mg)의 용액에 수 중 포름알데히드 용액, 37% (0.171 mL, 2.30 mmol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 5분 동안 교반되었고 및 그 다음에 나트륨 시아노보로히드리드 (252　mg, 4.02 mmol)가 첨가되었다. 1시간 15분 후에, 나트륨 보로히드리드 (152 mg, 4.02　mmol)가 첨가되었다. 1시간 후에, 상기 반응 혼합물이 회전 증발에 의해 농축되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되어 표제 화합물의 TFA 염 (141 mg)이 황색 분체로 제공되었다. (m/z):　C25H29FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 449.24 실측치 449. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.16 (dd, J = 8.5, 0.9 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 8.4, 1.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.89 (s, 2H), 3.40 (dd, J = 6.5, 5.0 Hz, 2H), 3.12 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.06 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.98 - 2.86 (m, 8H), 2.52 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.05 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
실시예 8: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(5-(2-((3- 메톡시시클로부틸 )아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀
Figure pct00045
(a) tert-부틸 (2-(2-(6-(2-에틸-5-플루오로-4-히드록시페닐)-1H-인다졸-3-일)-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)카르바메이트
DMF (20 mL) 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 HCl (600 mg, 1.45 mmol)의 현탁액에 tert-부틸 (2-옥소에틸)카르바메이트 (277 mg, 1.74 mmol) 및 아세트산 (0.25 mg, 4.35　mmol) 그 후 나트륨 트리아세톡시보로히드리드 (922 mg, 4.35 mmol)가 수 분에 걸쳐 나누어 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 RT에서 96시간 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물이 농축되었고 및 분취 HPLC (10-70% ACN/물)에 의해 정제되어 표제 중간체의 TFA 염 (507 mg)이 제공되었다.
(b) 4-(3-(5-(2-아미노에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
이전 단계의 산물 (505 mg, 0.80 mmol)이 디옥산 (8　mL) 및 물 (1.6 mL)에 용해되었고 및 그 다음에 디옥산 중에 4 M HCl (8 mL, 32 mmol)이 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 RT에서 20분 동안 교반되었고, 동결되었고, 및 동결 건조되어 (lyophilized) 표제 중간체의 HCl 염이 제공되었고 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다.
(c) 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(2-((3-메톡시시클로부틸)아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀
이전 단계의 산물 (393 mg, 0.80 mmol) 및 아세트산 (0.14 mL, 2.39　mmol)이 DMF (10 mL)에 용해되었고, 그 다음에 3-메톡시시클로부탄-1-온 (0.094 mL, 0.88　mmol)이 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 RT에서 30분 동안 교반되었고 및 나트륨 트리아세톡시보로히드리드 (507 mg, 2.39 mmol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 RT에서 밤새 교반되었고, 농축되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되어 표제 중간체의 TFA 염 (56 mg)이 제공되었다. (m/z):　C28H33FN6O2에 대한 [M+H]+ 계산치 505.26 실측치 505.3.
실시예 9: 5 -에틸-4-(3-(5-(2-( 에틸(메틸)아미노 )에틸)-4,5,6,7- 테트라히드 로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)-2-플루오로페놀
Figure pct00046
(a) tert-부틸 (2-(2-(6-(2-에틸-5-플루오로-4-히드록시페닐)-1H-인다졸-3-일)-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에틸)(메틸)카르바메이트
아세트산 (0.166 mL, 2.90 mmol), tert-부틸 메틸(2-옥소에틸)카르바메이트 (201 mg, 1.160 mmol), 및 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀, HCl (400 mg, 0.966 mmol)이 DMF (3.65 mL)에서 조합되었다. 나트륨 트리아세톡시보로히드리드 (615 mg, 2.90 mmol)가 5분에 걸쳐 일부분씩 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 밤새 교반되었고 및 EtOAc (50 mL)로 희석되었다. 상기 유기 용액이 포화된 NaHCO3 (2 x 20 mL)로 세척되었다. 유기 상이 수집되었고, (MgSO4)로 건조되었고, 및 진공 하에 농축되었다. 조질의 잔류물이 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 0 % 내지 15 % MeOH)에 의해 정제되었다. 순수한 분획들이 조합되었고 및 농축되어 표제의 중간체 (491 mg)가 무색, 비결정 고형물로 제공되었다. (m/z):　C29H35FN6O3에 대한 [M+H]+ 계산치 535.28 실측치 536.
(b) 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(2-(메틸아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀
이전 단계의 산물 (0.491 g, 0.918 mmol)이 디옥산 (4.59 mL)에 용해되었고 및 물 (4.59 mL) 및 디옥산 중 4 N HCl (4.59 mL, 18.36 mmol)이 5분에 걸쳐 천천히 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 1시간 동안 교반되었고, 물 (20 mL)로 희석되었고, -78 ℃에서 동결 건조되었고, 및 동결건조되어 표제 중간체의 디-HCL 염 (413 mg)이 제공되었다.
(c) 5-에틸-4-(3-(5-(2-(에틸(메틸)아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-2-플루오로페놀
MeOH (1.971　mL)에 용해된 이전 단계의 산물 (0.2 g, 0.394 mmol)에 아세트알데히드 (0.11 mL, 1.971 mmol) 그 후 나트륨 시아노보로히드리드 (248 mg, 3.94 mmol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 밤새 교반되었고, 2:1의 아세트산:물에 용해되었고, 시린지 (syringe) 여과되었고, 및 분취 HPLC에 의해 정제되었다. 순수한 분획들이 조합되었고 및 동결건조되어 표제 화합물의 TFA 염 (25 mg)이 제공되었다. (m/z):　C26H31FN6O3에 대한 [M+H]+ 계산치 436.28 실측치 436.2.
실시예 10: 4-(3-(5-(2-( sec -부틸(메틸)아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
Figure pct00047
단계 (c)에서 아세트알데히드 대신에 부탄-2-온 (0.177　mL, 1.971　mmol)을 사용하여 실시예 9의 일반적 절차에 따라 표제 화합물의 TFA 염이 제조되었다 (66 mg). (m/z):　C28H35FN6O3에 대한 [M+H]+ 계산치 491.29 실측치 492.
실시예 11: ( S )-5-에틸-2- 플루오로 -4-(3-(5-((1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메틸 )-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀
Figure pct00048
(a) tert-부틸 (S)-2-((2-(6-(2-에틸-5-플루오로-4-히드록시페닐)-1H-인다졸-3-일)-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트
메탄올 (1.34 mL) 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (50 mg, 0.132 mmol) 및 (S)-tert-부틸 2-포르밀피롤리딘-1-카르복실레이트 (34.3 mg, 0.172 mmol)의 현탁액에 나트륨 시아노보로히드리드 (33.3 mg, 0.530 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 25　℃에서 밤새 교반되었다. 추가의 나트륨 시아노보로히드리드 (33.3 mg, 0.530 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 70 ℃에서 30분 동안 가열되었다. 다음 날, (S)-tert-부틸 2-포르밀피롤리딘-1-카르복실레이트 (34.3 mg, 0.172 mmol)의 추가의 두 부분이 첨가되었고, 그후 각각 70 ℃에서 1시간 동안 가열이 가해졌다. 상기 반응 혼합물이 8:2의 DCM:메탄올 (8 mL)에 용해되었고 및 실리카 겔 크로마토그래피 (100 % DCM 15분, 0-5% DCM:메탄올, 20분, 5% DCM:메탄올, 20 분)에 의해 정제되었다. 분획들이 조합되었고 및 농축되어 표제의 중간체가 백색 왁스형 (waxy) 고형물 (167 mg)이 제공되었다. (m/z):　C31H37FN6O3에 대한 [M+H]+ 계산치 561.29 실측치 561.3.
(b) (S)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(피롤리딘-2-일메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀
이전 단계의 산물 (167 mg, 0.298 mmol)에 DCM (14.9　mL) 그 후 TFA (14.9 mL)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 1시간 동안 교반되었고, 농축되었고, 및 8방울의 메탄올을 갖는 4:1의 물:아세트산 (8 mL)에 용해되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되었다. 분획들이 조합되었고 및 농축되어 표제 중간체의 TFA 염 (70 mg)이 유리 같은 (glassy) 백색 고형물로 제공되었다. (m/z): C26H29FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 461.24 실측치 461.1.
(c) S)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-((1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀
메탄올 (15.2 mL) 중에 수 중 포름알데히드 용액 37 % (0.023 mL, 0.304 mmol) 및 이전 단계의 산물 (70 mg, 0.152 mmol)의 용액에 나트륨 시아노보로히드리드 (38.2 mg, 0.608 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 25 ℃에서 밤새 교반되었다. 포름알데히드의 추가 부분 (0.023 mL, 0.304　mmol)이 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 25 ℃에서 밤새 교반되었고 및 농축되었다. 메탄올 (1.52 mL) 및 나트륨 시아노보로히드리드 (382 mg, 6.08 mmol)가 첨가되었고; 상기 반응 혼합물이 3시간 동안 교반되었고; 추가의 나트륨 시아노보로히드리드 (382 mg, 6.08 mmol)가 첨가되었고; 상기 반응 혼합물이 25 ℃에서 주말 (weekend)에 걸쳐 교반되었고; 농축되었고; 1:1의 아세트산:물 (4 mL)에 용해되었고, 여과되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되어 표제 화합물의 TFA 염이 제공되었다. (m/z):　C27H31FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 475.25 실측치 475.2.
실시예 12: 4 -(3-(5-(3-(디메틸아미노)-2- 플루오로프로필 )-4,5,6,7- 테트라히드로 -1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
Figure pct00049
(a) tert-부틸 (3-(2-(6-(2-에틸-5-플루오로-4-히드록시페닐)-1H-인다졸-3-일)-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)-2-플루오로프로필)카르바메이트
DMF (2.416 mL) 중에 DIPEA (0.505 mL, 2.90 mmol) 및 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀, HCl (400 mg, 0.966　mmol)의 용액에 DMF (2.416 mL) 중에 tert-부틸 (3-브로모-2-플루오로프로필)카르바메이트 (248 mg, 0.966 mmol)의 용액이 적상으로 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 RT에서 밤새 교반되었다. 추가의 tert-부틸 (3-브로모-2-플루오로프로필)카르바메이트 (248　mg, 0.966 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 밤새 교반되었고, 진공하에 농축되었고, 및 실리카 겔 크로마토그래피 (MeOH:DCM)에 의해 정제되어 표제의 중간체 (286 mg, 0.518 mmol, 54 % 수득율)가 제공되었다. (m/z):　C29H34F2N6O3에 대한 [M+H]+ 계산치 553.27 실측치 553.
(b) 4-(3-(5-(3-아미노-2-플루오로프로필)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
이전 단계의 산물 (0.286 g, 0.518 mmol)이 디옥산 (2.15 mL)에 용해되었고 및 물 (0.48 mL) 및 디옥산 중 4 M HCl (2.15 mL, 8.60 mmol)이 5분에 걸쳐 천천히 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 RT에서 30분 동안 교반되었고, 동결되었고, 및 동결건조되어 표제 중간체의 HCl 염 (261 mg)이 제공되었다. (m/z):　C24H26F2N6O에 대한 [M+H]+ 계산치 453.21 실측치 453.
(c) 4-(3-(5-(3-(디메틸아미노)-2-플루오로프로필)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
이전 단계의 산물 (0.261 g, 0.497 mmol) 및 수 중 포름알데히드 용액 37 % (0.083 mL, 1.043 mmol)가 MeOH (4.97 mL)에서 조합되었다. 나트륨 시아노보로히드리드 (0.156 g, 2.484 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 RT에서 수 시간 동안 교반되었다. 나트륨 보로히드리드가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 농축되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되었다. 순수한 분획들이 조합되었고 및 동결건조되어 표제 화합물의 TFA 염 (30 mg)이 제공되었다. (m/z):　C26H30F2N6O에 대한 [M+H]+ 계산치 481.24 실측치 481.
실시예 13: ( S )-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(모르폴린-3-일메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀
Figure pct00050
MeOH (5 mL) 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 TFA (100 mg, 0.203 mmol) 및 tert-부틸 (R)-3-포르밀모르폴린-4-카르복실레이트 (285 mg, 1.325 mmol)의 용액에 나트륨 시아노보로히드리드 (167 mg, 2.65 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 RT에서 밤새 교반되었다.
상기 반응 혼합물이 농축되었고 및 TFA (3 mL)가 0 ℃에서 첨가되었다. 30분 후에, 상기 반응 혼합물이 농축되었고 및 분취 HPLC (2-70% ACN/물)에 의해 정제되어 표제 화합물의 TFA 염 (55.2 mg)이 제공되었다. (m/z):　C26H29FN6O2에 대한 [M+H]+ 계산치 477.23 실측치 477.1. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.16 (dd, J = 8.5, 0.9 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.31 (dd, J = 8.5, 1.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.04 (ddd, J = 15.8, 12.7, 3.4 Hz, 2H), 3.97 - 3.72 (m, 4H), 3.66 (td, J = 8.2, 7.3, 3.1 Hz, 1H), 3.57 (dd, J = 12.5, 9.1 Hz, 1H), 3.35 - 3.32 (m, 1H), 3.28 - 3.12 (m, 2H), 3.07 - 2.96 (m, 1H), 2.96 - 2.90 (m, 2H), 2.88 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 2.52 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.05 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
실시예 14: ( R )-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(모르폴린-3-일메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀
Figure pct00051
0.159 mmol 스케일로 실시예 13의 방법과 유사한 방법을 사용하여, 표제 화합물의 TFA 염 (29.1 mg)이 제조되었다. (m/z):　C26H29FN6O2에 대한 [M+H]+ 계산치 477.23 실측치 477.1
실시예 15: ( S )-5-에틸-2- 플루오로 -4-(3-(5-(2-(2- 메틸피롤리딘 -1-일)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀
Figure pct00052
(a) 4-(3-(5-(2,2-디메톡시에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀
MeOH (4.83 mL) 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 HCl (200 mg, 0.483 mmol) 및 2,2-디메톡시아세트알데히드 (0.146 mL, 0.966 mmol)의 혼합물에 나트륨 시아노보로히드리드 (121mg, 1.933 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 밤새 RT에서 교반되었고, 농축되었고, 및 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 10 % MeOH)에 의해 정제되어 표제의 중간체 (210　mg)가 제공되었다. (m/z):　C25H28FN5O3에 대한 [M+H]+ 계산치 466.22 실측치 466.
(b) 2-(2-(6-(2-에틸-5-플루오로-4-히드록시페닐)-1H-인다졸-3-일)-1,4,6,7-테트라히드로-5H-이미다조[4,5-c]피리딘-5-일)에탄-1,1-디올
이전 단계의 산물 (210 mg, 0.0.451 mmol)이 MeTHF (4　mL)에 용해되었고 및 수 중 3 N HCl (4 mL, 12 mmol)이 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 4일 동안 교반되었고, 농축되었고, 1:1의 아세트산: 물에 용해되었고, 및 분취 HPLC에 의해 정제되었다. 순수한 분획들이 조합되었고 및 동결건조되어 표제의 중간체 (150 mg)가 제공되었다. (m/z):　C23H24FN5O3에 대한 [M+H]+ 계산치 438.19 실측치 438.
(c) (S)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(2-(2-메틸피롤리딘-1-일)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀
MeOH (0.5 mL) 중에 이전 단계의 산물 (20 mg, 0.046 mmol) 및 (S)-2-메틸피롤리딘 (19 mg, 0.229 mmol)의 혼합물에 MeOH (0.5 mL) 중에 나트륨 시아노보로히드리드 (28.7 mg, 0.457 mmol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물이 밤새 교반되었고, 2:1의 아세트산: 물에 용해되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되어 표제 화합물의 TFA 염 (6 mg, 0.0084 mmol, 18 % 수득율)이 제공되었다. (m/z):　C28H33FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 489.27 실측치 489.2.
실시예 16: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(5-(2-( 피롤리딘 -1-일)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀
Figure pct00053
DMF (500 μL) 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (30 mg, 0.079 mmol)의 용액에 1-(2-브로모에틸)피롤리딘 (21.23 mg, 0.119 mmol) 및 DIPEA (69.2 μL, 0.397 mmol)가 첨가되었다. 상기 반응 혼합물에 캡을 씌우고 (capped) 및 RT에서 1시간 동안 교반되었고, 농축되었고, 1:1의 아세트산:물에 용해되었고, 및 분취 HPLC에 의해 정제되어 표제 화합물의 TFA 염 (18 mg, 0.026 mm, 32 % 수득율)이 제공되었다. (m/z):　C27H31FN6O에 대한 [M+H]+ 계산치 475.25 실측치 475.2.
유사한 합성 방법을 사용하여, 하기 표 1-19의 화합물들이 제조되었다. 하기 표에서, 임의의 컬럼 중에 빈칸 (blank)은 수소 원자를 나타내고, 표 앞에 구조 중 *는 키랄 중심을 나타내고, 및 치환체 앞에 표기 (R) 또는 (S)는 상기 치환체가 부착되는 탄소 원자의 배열 (configuration)을 나타낸다.
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
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Figure pct00065
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Figure pct00067
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Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
실시예 17: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(5-(1- 메틸피페리딘 -4-일)-4,5,6,7- 테 트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이 트
Figure pct00076
3 L 플라스크에 NMP (239 mL) 및 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀, 2 HCl (74.5 g, 165　mmol)이 교반하면서 첨가되었고 그 후 NMP (74 mL)가 첨가되었다. 아세트산 (31.3 mL)이 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 55 ℃로 10분 동안 가온되었고 및 그 다음에 25 ℃로 냉각되었다. 1-메틸피페리딘-4-온 (61.0 mL, 496　mmol)이 단일 부분으로 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 25 ℃에서 30분 동안 교반되었고 및 15 ℃로 냉각되었다. 나트륨 트리아세톡시보로히드리드 (98 g, 463 mmol)가 첨가되었고 및 외부 자켓 (external jacket)이 5분 후에 20　℃로 설정되었다. 3시간 후에, 암모늄 히드록시드 (365 mL, 5790　mmol)가 45분에 걸쳐 적상으로 첨가되었고 상기 온도를 25 ℃ 미만으로 유지하였다. 상기 반응 혼합물이 1.5시간 동안 20 ℃에서 교반되었고, 황-백색 슬러리를 형성하였다. 메탄올 (709 mL)이 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 밤새 55 ℃에서 천천히 교반되었다. 물 (1.19 L)이 30분에 걸쳐 55 ℃에서 첨가되었고 및 상기 혼합물이 10 ℃로 냉각되었고, 2시간 동안 교반되었고, 및 여과되었다. 케이크가 1:1의 MeOH:물 (334 mL)로 세척되었고, 필터 상에서 20분 동안 및 45　℃에서 진공하에 질소 블리드 (nitrogen bleed)로 건조되어 황색 고형물 (87 g)이 제공되었다.
상기 고형물에 5 % 물/아세톤 (1.5 L)이 55 ℃에서 천천히 교반하면서 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 55 ℃에서 6시간 동안 가열되었고, 10 ℃로 냉각되었고, 여과되었고, 및 5 % 물/아세톤 (450 mL)으로 세척되었다. 상기 고형물이 밤새 50 ℃에서 진공하에 질소 블리드로 건조되었고, 공기 중에서 20시간 동안 평형화되었고 (equilibrated), 진공 오븐에서 48시간 동안 건조되었고 및 공기로 평형화되어 표제의 화합물 (71.3 g, 91 % 수득율)이 자유 유동 연황색 고형물로 제공되었다. HPLC 방법 C 체류 시간 12.29분.
실시예 18: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(5-(1- 메틸피페리딘 -4-일)-4,5,6,7- 테 트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이 트
플라스크에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (45.4 g, 95 mmol) 및 물 (450 mL) 및 37 % NH4OH (11.25 mL)가 첨가되었고 및 상기 슬러리가 10분 동안 교반되었고 및 여과되었다. 상기 습식 케이크를 2 L 플라스크로 옮기고 및 2.5 % 물/아세톤 (900 mL)이 첨가되었고 및 상기 슬러리가 밤새 교반되었다. 추가의 물 (23 mL)이 첨가되었고 및 상기 혼합물이 48시간 동안 교반되었고, 55 ℃로 가온되었고 및 55 ℃에서 밤새 교반되었다. 추가의 물 (69 mL)이 첨가되었고 및 상기 슬러리가 25 ℃에서 밤새 교반되었고 및 55　℃로 가온되었다. 3시간 후에, 물의 추가 부분 (23 mL)이 첨가되었고, 상기 혼합물이 RT로 냉각되었고, 여과되었고, 및 15 % 물/아세톤 (250 mL)으로 세척되었다. 고형물이 밤새 진공 오븐내에 50 ℃에서 건조되어 표제의 화합물 (32.4　g, 68.3 mmol, 72 % 수득율, 99/2 % 순도)이 제공되었다. HPLC 방법 C 체류 시간 12.27분. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.24 (dd, J = 8.4, 0.8 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 1.1 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 8.4, 1.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.78 (s, 2H), 3.00 (dd, J = 10.0, 4.0 Hz, 4H), 2.81 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.68 - 2.57 (m, 1H), 2.53 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.18 - 2.06 (m, 2H), 1.99 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 1.75 (td, J = 12.4, 3.7 Hz, 2H), 1.05 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
비교 실시예 C- 1: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(5-(3- 메틸시클로부틸 )-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀
Figure pct00077
MeOH (1.221 mL) 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 TFA (60 mg, 0.122 mmol) 및 3-메틸시클로부탄-1-온 (51　mg, 0.610 mmol)의 용액에 나트륨 시아노보로히드리드 (77 mg, 1.221 mmol)가 첨가되었고 및 상기 반응 혼합물이 4시간 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물이 회전 증발에 의해 농축되었고, 2:1의 아세트산:물 (1.5 mL)에 용해되었고 및 분취 HPLC에 의해 정제되어 표제 화합물의 TFA 염 (40 mg)이 제공되었다. (m/z):　C26H28FN5O에 대한 [M+H]+ 계산치 446.23 실측치 446.1.
유사한 방법을 사용하여, 3-메틸시클로부탄-1-온을 적절한 시약으로 대체하여, 하기 비교 화합물들이 제조되었다:
비교 화합물 C-2 내지 C-4
Figure pct00078
실시예 19-21: 본 발명의 고체 형태의 특성
실시예 18의 결정 히드레이트 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 시료는 분말 X-선 회절 (PXRD), 시차 주사 열량계 (DSC), 열중량 분석 (thermogravimetric analysis: TGA), 및 동적 수분 흡착 (DMS)에 의해 분석되었다.
실시예 19 분말 X-선 회절
도 1의 분말 X-선 회절 패턴은, 출력 전압 45 kV 및 전류 40 mA를 갖는, Cu-Kα 방사선 (λ = 1.54051 Å)을 사용하는 Bruker D8-Advance X-선 회절계에 의해 수득되었다. 상기 기기는 입사각, 발산각 및 산란 슬릿이 상기 시료에서 세기를 최대화하도록 설정된 Bragg-Brentano 기하학으로 작동되었다. 측정을 위해, 소량의 분말 (5-25 mg)을 시료 홀더에 부드럽게 눌러 매끄러운 표면을 만들고, X-선에 노출시켰다. 상기 시료는, 0.02°의 스텝 크기 (step size) 및 스텝 당 0.30°초의 스캔 속도로, 2θ에서 2°에서 40°까지 2θ-2θ 모드로 스캔되었다. 상기 데이터 수집은 Bruker DiffracSuite 측정 소프트웨어로 제어되었고, Jade 소프트웨어 (버전 7.5.1)로 분석되었다. 상기 기기는 corundum 표준으로 ±0.02° 2θ 각내에서, 검정되었다. 관찰된 PXRD 2-θ 피크 위치 및 d-간격 (spacings)은 표 20에 개시되었다.
Figure pct00079
실시예 20: 열 분석
시차 주사 열량계 (DSC)는 Thermal Analyst 컨트롤러가 장착된 TA Instruments Model Q-100 모듈을 사용하여 수행되었다. TA Instruments Thermal Analysis 소프트웨어를 사용하여 데이터가 수집되고 분석되었다. 각 결정 형태의 시료는 뚜껑을 덮은 알루미늄 팬으로 정확하게 칭량되었다. 5℃에서 5분 등온 평형 기간 후, 0℃에서 250℃까지 10℃/분의 선형 가열 램프를 사용하여 시료를 가열하였다. 본 발명의 형태 I 결정 유리염기의 대표적인 DSC 서모그램이 도 2에 개시되어 있다.
열중량 분석 (TGA) 측정은 고해상도 능력을 갖춘 TA Instruments Model Q-50 모듈을 사용하여 수행되었다. TA Instruments Thermal Analyst 컨트롤러를 사용하여 데이터가 수집되었고, TA Instruments Universal Analysis 소프트웨어를 사용하여 분석되었다. 칭량된 시료를 백금 팬 상에 놓고, 주위 온도에서 300℃까지 10 ℃의 가열 속도로 스캔하였다. 저울 및 노 챔버는 사용 중에 질소 흐름으로 퍼지되었다. 본 발명의 형태 I 결정 유리염기의 대표적인 TGA 트레이스가 도 3에 개시되어 있다.
실시예 21: 동적 수분 흡착 평가
동적 수분 흡착 (DMS) 측정은 VTI 대기 마이크로저울, SGA-100 시스템 (VTI Corp., Hialeah, FL 33016)을 사용하여 수행되었다. 칭량된 시료가 사용되었으며, 습도는 분석 시작시 가능한 가장 낮은 값 (상대 습도 0%에 가까움)이었다. 상기 DMS 분석은 120분 동안 초기 건조 단계 (~0% RH), 이후 5% RH 내지 90% RH의 습도 범위에 걸쳐서 5% RH/단계의 스캔 속도로 흡착 및 탈착의 두 사이클로 구성되었다. 상기 DMS 수행은 25 ℃에서 등온으로 수행되었다. 본 발명의 형태 I 결정 유리염기의 대표적인 DMS 트레이스가 도 4에 개시되어 있다.
생물학적 분석
본 발명의 화합물은 하기 하나 이상의 생물학적 분석들에서 특성화되었다.
분석 1: 생화학적 JAK 및 오프-타켓 (Off-target) 키나제 분석
4개의 LanthaScreen JAK 생화학적 분석 (JAK1, 2, 3 및 Tyk2)의 패널이 통상의 키나제 반응 버퍼 (50 mM HEPES, pH 7.5, 0.01% Brij-35, 10 mM MgCl2, 및 1 mM EGTA)에서 수행되었다. 재조합 GST-태그된 JAK 효소 및 GFP-태그된 STAT1 펩티드 기질은 Life Technologies로부터 입수되었다.
일련의 희석된 화합물들은 4개의 JAK 효소 각각 및 기질과 화이트 (white) 384-웰 미크로플레이트 (Corning)에서 주위 온도로 1시간 동안 사전-인큐베이트되었다. ATP가 이후에 상기 키나제 반응을 개시하기 위해서 10 μL의 전체 부피로, 1% DMSO와 함께 첨가되었다. JAK1, 2, 3 및 Tyk2에 대한 최종 효소 농도는 각각 4.2 nM, 0.1 nM, 1 nM, 및 0.25 nM이고; 사용된 해당하는 Km ATP 농도는 25 μM, 3 μM, 1.6 μM, 및 10 μM이고; 상기 기질 농도는 모두 4개의 분석에 대해서 200nM이었다. TR-FRET 희석 버퍼 (Life Technologies) 중 EDTA (10mM 최종 농도) 및 Tb-항-pSTAT1 (pTyr701) 항체 (Life Technologies, 2nM 최종 농도)의 10 μL 조제가 첨가되기 전에, 키나제 반응을 1시간 동안 주위 온도에서 진행시켰다. 상기 플레이트를 주위 온도에서 1시간 동안 인큐베이트시키고, EnVision 판독기 (Perkin Elmer)에서 판독되었다. 방출 비율 시그날 (520nm/495nm)이 기록되었고, DMSO 및 배경 대조군에 기반한 퍼센트 저해 값을 산출하는데 사용되었다.
용량-반응 분석 (dose-response analysis)에 있어서, 퍼센트 저해 데이터는 화합물의 농도에 대해 플로팅되었고, IC50 값은 Prism 소프트웨어 (GraphPad Software)에 의해 4-parameter robust fit 모델로부터 결정되었다. 결과는 pIC50 (IC50의 음의 로그)으로 표시되었고, 그 후 Cheng-Prusoff 방정식을 사용하여 pKi (해리 상수, Ki의 음의 로그)로 변환되었다.
4개의 JAK 분석의 각각에서 더 높은 pKi 값을 갖는 시험 화합물들은 JAK 활성의 더 높은 저해를 보여주었다. 상기 분석에서 시험된 본 발명의 화합물은 통상적으로 약 9 내지 약 10.5의 pKi 값을 나타내었다.
오프-타켓 티로신 키나제 분석 (Flt3, RET, FGFR2, TrkA, 및 pDGFRβ)의 패널은, Life Technologies로부터 입수된 재조합 효소 및 AnaSpec에서 합성된 바이오티닐화 (biotinylated) 펩티드 기질로, 유사한 방법을 사용하여 개발되었다. 모든 분석은 주위 온도에서 최종 ATP 농도 100 μM로 수행되었다. Eu-항-포스포티로신 (pY20) 항체 및 SureLight APC-SA를 포함하는 검출 시약은 Perkin Elmer로부터 구입되었다. 방출 비율 시그날 (665nm/615nm)이 기록되고 데이터 분석을 위해 사용되었고, 최종 결과는 pIC50으로 표시되었다.
분석 2: 세포 JAKI 효능 분석
AlphaScreen JAKI 세포 효능 분석은, BEAS-2B 인간 폐 상피 세포 (ATCC)에서 인터루킨-13 (IL-13, R&D System) 유도된 STAT6 포스포릴화를 측정함으로써 수행되었다. 상기 항-STAT6 항체 (Cell Signaling Technologies)는 AlphaScreen 수용체 비드 (acceptor beads) (Perkin Elmer)에 콘쥬게이트되었고, 상기 항-pSTAT6 (pTyr641) 항체 (Cell Signaling Technologies)는 EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin (Thermo Scientific)을 사용하여 바이오티닐화되었다.
BEAS-2B 세포를 37℃에서 5% CO2 습윤 인큐베이터에서, 10% FBS (Hyclone), 100 U/mL 페니실린, 100 μg/mL 스트렙토마이신 (Life Technologies), 및 2 mM GlutaMAX (Life Technologies)가 보충된 50% DMEM/50% F-12 배지 (Life Technologies)에서 성장시켰다. 분석 1일에, 세포는 25μL 배지를 갖는 화이트 폴리-D-리신-코팅된 384-웰 플레이트 (Corning)에서 7,500 세포/웰의 밀도로 시딩되었고, 상기 인큐베이터에서 밤새 고착시켰다. 분석 2일에, 상기 배지를 제거하였고, 시험 화합물의 용량-반응을 포함하는 12 μL의 분석 버퍼 (Hank's Balanced Salt Solution/HBSS, 25mM HEPES, 및 1 mg/ml 우혈청 알부민/BSA)로 교체되었다. 화합물들이 DMSO에서 일련으로 희석되었고, 그 후 배지에서 1000배 더 희석시켜서, 최종 DMSO 농도는 0.1%가 되었다. 세포는 시험 화합물과 37℃에서 1시간 동안 인큐베이트되었고, 그 후 12μL의 사전-가온된 IL-13 (분석 버퍼 중 80 ng/ml)이 자극을 위해 첨가되었다. 37℃에서 30분 동안 인큐베이트한 후에, 상기 분석 버퍼 (화합물 및 IL-13을 함유함)가 제거되었고, 10μL의 세포 용해 버퍼 (25 mM HEPES, 0.1% SDS, 1% NP-40, 5 mM MgCl2, 1.3 mM EDTA, 1 mM EGTA, 및 Roche Diagnostics제 Complete Ultra mini 프로테아제 저해제 및 PhosSTOP이 보충됨). 상기 플레이트를 주위 온도에서 30분 동안 진탕시키고, 그 후 검출 시약이 첨가되었다. 비오틴-항-pSTAT6 및 항-STAT6 콘쥬게이트된 수용체 비드의 혼합물이 먼저 첨가되었고, 주위 온도에서 2시간 동안 인큐베이트되었고, 그 후 스트렙타비딘 (streptavidin) 콘쥬게이트된 공여체 비드 (Perkin Elmer)가 첨가되었다. 최소 2시간 인큐베이션 후에, 상기 분석 플레이트는 EnVision 플레이트 판독기에서 판독되었다. AlphaScreen 발광 (luminescence) 시그날이 기록되고 DMSO 및 배경 대조군에 기반하여 퍼센트 저해 값을 산출하는데 사용되었다.
용량-반응 분석에 있어서, 퍼센트 저해 데이터는 화합물 농도에 대해 플로팅되었고, IC50 값은 Prism 소프트웨어에 의해 4-parameter robust fit 모델로부터 결정되었다. 결과는 IC50 값의 음의 로그값, pIC50으로 표시되었다.
상기 분석에서 더 높은 pIC50 값을 갖는 시험 화합물은 IL-13 유도된 STAT6 포스포릴화를 더 많이 저해하는 것을 보여주었다. 상기 분석에서 시험된 본 발명의 화합물은 통상적으로 약 7.5 내지 약 8.5의 pIC50 값을 나타내었다.
분석 3: 세포독성 분석
CellTiter-Glo 발광 세포 생존력/세포독성 분석은 정상 성장 조건하에 BEAS-2B 인간 폐 상피 세포 (ATCC)에서 수행되었다.
세포는 37℃에서 5% CO2 습윤된 인큐베이터에서, 10% FBS (Hyclone), 100 U/mL 페니실린, 100 μg/mL 스트렙토마이신 (Life Technologies), 및 2 mM GlutaMAX (Life Technologies)가 보충된 50% DMEM/50% F-12 배지 (Life Technologies)에서 성장되었다. 분석 1일에, 세포는 25 μL 배지를 갖는 화이트 384-웰 조직 배양 플레이트 (Corning)에서 500 세포/웰의 밀도로 시딩되었고, 상기 인큐베이터에서 밤새 고착시켰다. 분석 2일에, 시험 화합물의 용량-반응을 포함하는 배지 5 μL가 첨가되었고, 37℃에서 48시간 동안 인큐베이트되었다. 30 μl의 CellTiter-Glo 검출 용액 (Promega)이 그 후에 첨가되었고, 오비탈 쉐이커 (orbital shaker)에서 5분 동안 혼합되었고, 추가 10분 동안 인큐베이트되어서, EnVision 판독기에서 판독되었다. 발광 시그날이 기록되었고, 퍼센트 DMSO 대조값이 산출되었다.
용량-반응 분석에 있어서, 퍼센트 DMSO 대조군 데이터는 화합물 농도에 대해 플로팅되어서, 각 데이터 점을 선으로 연결하여 용량-반응 곡선이 유도되었다. 각 곡선이 15% 저해 역치를 가로지르는 농도를 CC15로 정의하였다. 결과는 CC15 값의 음의 로그값, pCC15로 표시되었다.
상기 분석에서 더 낮은 pCC15 값을 나타내는 시험 화합물은 세포독성을 일으킬 가능성이 적은 것으로 기대된다. 상기 분석에서 시험된 본 발명의 화합물은 통상적으로 5 미만 내지 약 6.6의 pCC15 값을 나타내었다.
인 비트로 분석 결과
실시예 1 내지 16 및 표 1 내지 19의 모든 화합물들은 전술한 하나 이상의 분석으로 시험되었다. 하기 표에서, JAK1, JAK2, JAK3, 및 TYK2 효소 분석에 있어서, A는 pKi 값 ≥ 10 (Ki ≤ 0.1 nM)을 나타내고, B는 9 내지 10의 pKi 값 (1 nM 내지 0.1 nM의 Ki)을 나타내고, C는 9 내지 9.5의 pKi 값 (1 nM 내지 0.32 nM의 Ki)을 나타내고, 및 D는 8.5 내지 9의 pKi 값 (32 nM 내지 1 nM의 Ki)을 나타낸다. BEAS-2B 세포 효능 분석에 있어서, A는 pIC50 값 ≥ 8 (IC50 ≤ 10 nM)을 나타내고, B는 7.4 내지 8의 pIC50 값 (40 nM 내지 10 nM의 IC50)을 나타낸다. 하기 화합물은 상기에 개시된 인 비트로 분석들 모두에서 시험되었다.
Figure pct00080
Figure pct00081
JAK 1 효소 효능은 BEAS-2B 분석에서 세포 효능을 예측하는 것이 관찰되었다. 그러므로 모든 나머지 화합물이 JAK1 효소 분석 및 세포 분석에서 시험되었고 9 내지 10.5 사이의 pKi 효소 값 및 7.4 내지 8.5 사이의 BEAS-2B pIC50 값을 나타내었고 예외적으로 화합물 3-32, 4-8, 4-16 및 8-11은 8.5 내지 9 사이의 pKi 효소 값에서 JAK 저해 및 6 내지 7.4 사이의 세포 효능을 나타내었다.
분석 4: 마우스에서 혈장 및 폐에서 약동학
시험 화합물의 혈장 및 폐 수준 및 그의 비율은 하기 방식으로 결정되었다. Charles River Laboratories의 BALB/c 마우스가 본 분석에 사용되었다. 시험 화합물은 pH 4 시트레이트 버퍼 중에 20% 프로필렌 글리콜에서 0.2 mg/mL의 농도로 각각 제제화되었고 및 50 uL의 투여 용액 (dosing solution)은 마우스의 기관 (trachea)으로 경구 흡인 (oral aspiration)에 의해 도입되었다. 투여 후에 다양한 시점 (통상적으로 0.167, 2, 6, 24 시간)에서, 혈액 시료가 심장 천자 (cardiac puncture)를 통해 제거되었고 및 무손상의 폐가 상기 마우스로부터 절제되었다. 혈액 시료는 4분 동안 대략 12,000 rpm으로 4℃에서 원심분리 (Eppendorf centrifuge, 5804R)되어 혈장이 수집되었다. 폐는 패드로 눌러 건조시키고 (padded dry), 칭량하고, 및 멸균수 중에 1:3으로 희석하여 균질화시켰다. 시험 화합물의 혈장 및 폐 수준은 시험 매트릭스 (test matrix)에서 표준 곡선으로 만들어진 분석 표준 (analytical standards)에 대해 LC-MS 분석으로 결정되었다. 폐 대 혈장 비율은 μg hr/g의 폐 AUC 대 μg　hr/mL의 혈장 AUC의 비율로서 결정되었고, 여기서 AUC는 관례대로 시험 화합물 농도 대 시간의 곡선하 면적으로 정의된다. 본 발명의 화합물은 마우스 혈장에서 노출된 것보다 1 내지 2 자릿수 더 큰 폐에서의 노출을 나타내었다. 본 분석에서 프로파일된 모든 화합물은 약 5 내지 약 12 시간의 반감기를 나타내었다.
분석 5: 폐 조직에서 IL-13 유도된 pSTAT6 도입의 쥐과 (마우스) 모델
Il-13은 천식의 병태생리학을 기초로 하는 중요한 시토킨이다 (Kudlacz et al. Eur . J. Pharmacol, 2008, 582,154-161). IL-13은 키나제의 Janus 패밀리 (JAK)의 구성원을 활성화시키는 세포 표면 수용체에 결합하고 그 다음에 STAT6을 포스포릴화시키고 및 이후에 추가의 전사 경로를 활성화시킨다. 개시된 모델에서, IL-13의 투여량은 마우스의 폐로 국소적으로 전달되어 STAT6의 포스포릴화 (pSTAT6)를 유도하고, 이는 그 후 종말점 (endpoint)으로 측정된다.
Harlan으로부터의 성체 balb/c 마우스가 본 분석에서 사용되었다. 연구 당일에, 동물들을 이소플루란 (isoflurane)으로 가볍게 마취시키고 비히클 (vehicle) 또는 시험 화합물 (0.5 mg/mL, 수회 호흡에 대해 50 μL 전체 부피)을 경구 흡인으로 투여하였다. 동물들은 투여 후에 측면 횡와위 (lateral recumbency)로 놓고, 마취에서 완전히 회복되는 동안 모니터하고 이후 이들을 홈 케이지로 되돌려 보냈다. 4시간 후에, 동물들을 다시 한번 간단하게 마취시키고, 비히클 또는 IL-13 (전달된 전체 용량 0.03 μg, 50 μL 전체 부피)으로 경구 흡인을 통해 챌린지시키고 (challenged) 마취로부터 회복되는 동안 모니터되었고 이후 이들을 홈 케이지로 되돌려 보냈다. 비히클 또는 IL-13 투여하고 1시간 후에, 폐들이 pSTAT6 검출을 위해 항-pSTAT6 ELISA (토끼 mAb 캡쳐/코팅 항체; 마우스 mAb 검출/리포트 항체: 항-pSTAT6-pY641; 2차 항체: 항-마우스 IgG-HRP)를 사용하여 수집되었고 및 상기 분석 4에서 개시된 바와 같이 전체 약물 농도가 분석되었다.
본 발명의 선별된 화합물이 본 분석에서 시험되었다. 상기 모델에서 활성은, 비히클로 처리되고, IL-13으로 챌린지된 대조군 동물과 비교하여, 5시간에서 처리된 동물의 폐에 존재하는 pSTAT6 수준의 감소로 입증되었다. 비히클-처리되고, IL-13 챌린지된 대조군 동물과, 비히클-처리되고, 비히클 챌린지된 대조군 동물 사이의 차이는 임의의 주어진 실험에서 각각 0% 및 100%의 저해 효과로 나타내었다. 본 발명의 예시되는 화합물이 본 분석에서 시험되었고, 및 하기에 문서로 기록된 바와 같이 IL-13 챌린지하고 4시간 후에 STAT6 포스포릴화의 저해를 나타내었다. 화합물들 1-15 및 3-1은 본 분석의 조건하에 예외로 언급되었다.
기도 염증에서 JAK-STAT 경로의 관련성을 확인하면서, IL13-유도된 pSTAT6 마우스 모델에서 인 비보 표적 결합을 입증하는 화합물들이 이후에 시험되었고 및 알레르겐-유도된 호산구성 염증의 마우스 모델에서 효능이 입증되었다.
인 비보 분석 결과
본 발명의 선별된 화합물은 약동학적 분석 (분석 4) 및 약력학적 분석 (분석 5)에서 특성화되었다. 투여 후 유사한 시점에서 약동학적 분석 및 약력학적 분석에서 결정된 폐에서 시험 화합물 농도 사이의 양호한 상관관계가 관찰되었다. 약력학적 분석에서 마우스 폐내에 유의한 화합물 농도의 관찰로 IL-13 유도된 pSTAT6 유도의 관찰된 저해는 상기 시험 화합물의 활성의 결과인 것으로 확인되었다.
하기 표에서, 폐 노출 대 혈장 노출의 비율 (분석 4)에 있어서, A는 > 100의 비율을 나타내고, B는 50 내지 100 사이의 비율을 나타내고, 및 C는 10 내지 50 사이의 비율을 나타낸다. IL-13 유도된 pSTAT6 유도의 퍼센트 저해 (분석 5)에 있어서, A는 > 65 % 저해를 나타내고, B는 50 % 내지 65 %의 저해를 나타내고 및 C는 33 % 내지 50 %의 저해를 나타낸다.
Figure pct00082
분석 6: 폐의 알터나리아 알터나타 ( Alternaria alternata )-유발된 호산구성 염증의 쥐과 모델
기도 호산구증가증 (eosinophilia)은 인간 천식의 특징이다. 알터나리아 알터나타는 인간에서 천식을 악화시키고 및 마우스의 폐에서 호산구성 염증을 유발하는 진균 공기알레르겐이다 (Havaux et al. Clin Exp Immunol. 2005, 139(2):179-88). 마우스에서, 알터나리아는 폐에서 조직 정주 (tissue resident) 타입 2 선천성 림프구 세포 (innate lymphoid cells)를 간접적으로 활성화시키고, 이는 (예컨대 IL-2 및 IL-7)에 반응하고 및 JAK-의존성 시토킨 (예컨대 IL-5 및 IL-13)을 분비하고 및 호산구성 염증을 조절하는 것이 입증되었다 (Bartemes et al. J Immunol. 2012, 188(3):1503-13).
Taconic으로부터 7주 내지 9주령 수컷 C57 마우스가 본 연구에 사용되었다. 연구 당일에, 동물들을 이소플루란으로 가볍게 마취시키고 및 비히클 또는 시험 화합물 (0.1 - 1.0 mg/mL, 수회의 호흡에 대해 50 μL 전체 부피)이 구인두 (oropharyngeal) 흡인을 통해 투여되었다. 동물들을 투여 후에 측면 횡와위로 놓고, 마취에서 완전히 회복되는 동안 모니터하고 이후 이들을 홈 케이지로 되돌려 보냈다. 1시간 후에, 동물들을 다시 한번 간단하게 마취시키고, 비히클 또는 알터나리아 추출물 (전달된 전체 추출물 200 ug, 50 μL 전체 부피)로 구인두 흡인을 통해 챌린지시키고 마취로부터 회복되는 동안 모니터되었고 이후 이들을 홈 케이지로 되돌려 보냈다. 알터나리아를 투여하고 48시간 후에, 기관지폐포 세척액 (bronchoalveolar lavage fluid: BALF)이 수집되었고 및 호산구가 BALF에서 Advia 120 Hematology System (Siemens)을 사용하여 계수되었다.
본 발명의 선별된 화합물이 본 알터나리아 분석에서 시험되었다. 상기 모델에서 활성은, 비히클로 처리되고, 알터나리아로 챌린지된 대조군 동물과 비교하여, 48시간에서 처리된 동물의 BALF에 존재하는 호산구 수준의 감소로 입증되었다. 데이터는 비히클-처리되고, 알터나리아 챌린지된 BALF 호산구 반응의 퍼센트 저해로 나타내었다. 퍼센트 저해를 산출하기 위해, 각 조건에 대한 BALF 호산구 수는 비히클로 처리되고, 알터나리아로 챌린지된 BALF 호산구의 퍼센트로 전환되고 및 이를 100퍼센트에서 차감하였다. 본 발명의 예시되는 화합물이 본 분석에서 시험되었고, 및 하기에 문서로 기록된 바와 같이 알터나리아 챌린지하고 48시간 후에 BALF 호산구 계수의 저해를 나타내었다.
인 비보 분석 결과
시험된 모든 화합물은 알터나리아-유발된 BALF 호산구의 저해 범위 (60% - 98%)를 나타내었다. 하기 표는 호산구 유도의 비히클 처리되고, 알터나리아 챌린지된 수준의 최대 통계적으로 유의한 퍼센트 저해를 반영하였다.
Figure pct00083
비교 화합물의 특성
비교 화합물과 본 발명의 화합물 사이의 대응은 하기에 예시되었다.
Figure pct00084
비교 화합물은 JAK1 효소 분석, BEAS-2B 세포 분석 및 pSTAT6 저해 약력학적 분석에서 특성화되었다. 비교 화합물들 C-1, C-2, C-3, 및 C-4는, 효소 분석에서 본 발명의 해당하는 화합물보다 각각 2-배, 3-배, 6-배, 및 2.5-배 효능이 떨어지고, BEAS-2B 세포 분석에서 본 발명의 해당하는 화합물보다 각각 6-배, 6-배, 3-배, 및 6-배 효능이 떨어진다. 상기 비교 화합물은 약력학적 분석에서 pSTAT6 저해를 나타내지 않았다. 또한 상기 분석에서, 상기 화합물은 유의한 폐 농도를 보이지 않았다. 비교 화합물들 C-1, C-2, C-3, 및 C-4에 대해 관찰된 폐 농도는 본 발명의 해당하는 화합물에 대해 관찰된 폐 농도보다 각각 36, 52, 13, 및 23배 더 적었다.
본 발명은 그 특정 양상 및 구체예를 참조로 서술되었으며, 이는 당분야의 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 진정한 정신 및 범위로부터 벗어나지 않고 다양한 변경이 만들어질 수 있고, 균등물로 대체될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 또한, 적용가능한 특허법 및 규정에 의해 허용되는 한도 내에서, 본원에 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각각의 문헌이 본원에서 참고 문헌으로 개별적으로 인용된 것과 동일한 정도까지 그 전체가 참고 문헌으로 인용된다.

Claims (37)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로-허용가능한 염으로서:
    Figure pct00085

    X는 하기 화학식 (II)의 그룹이고:
    Figure pct00086

    n은 0 또는 1이고;
    R1은 수소 또는 C1-3알킬이고;
    R2는 수소 또는 C1-3알킬이고;
    R3은 수소 또는 C1-3알킬이고;
    또는 R2 및 R3은 함께 C2-4알킬렌을 형성하고;
    또는, n이 1인 경우, R3은 수소, -OH, -OC1- 3알킬, 할로, -C(O)OC1 - 3알킬, 및 C1-3알킬로부터 선택되고, 상기 C1-3알킬은 -OH로 선택적으로 치환되고;
    R4는 수소 또는 C1-3알킬이고;
    R5는 수소, C1- 3알킬, -C(O)OC1 - 3알킬, 및 페닐로부터 선택되고;
    또는 n이 1인 경우, R2 및 R5는 함께 C1-3알킬렌을 형성하고;
    R6은 수소 또는 C1-3알킬이고;
    R7은 수소 또는 C1-3알킬이고,
    또는 n이 0인 경우, R2 및 R7은 함께 C1- 3알킬렌을 형성하거나, 또는 R4 및 R7은 함께 C2-4알킬렌 또는 C1알킬렌-O-C2알킬렌을 형성하고;
    또는 n이 1인 경우, R2 및 R7은 함께, C1- 3알킬 또는 Rx로 선택적으로 치환된, C2알킬렌을 형성하거나, 또는 R4 및 R7은 함께 C1- 3알킬렌 또는 -O-C2알킬렌을 형성하고;
    R8은
    (a) 수소,
    (b) 메틸로서, -CN, 페닐 또는 C3- 6시클로알킬로 선택적으로 치환되는 것인 메틸;
    (c) C2- 6알킬로서, 상기 C2- 6알킬은 -OH, -OC1- 3알킬, -CN, -SC1- 3알킬, 페닐, C3- 6시클로알킬, 할로로부터 선택된 1 또는 2개의 치환체로 선택적으로 치환되고, 및 선택적으로, 부가로 단일 탄소 원자 상에서 2개의 치환체가 함께 C2- 3알킬렌을 형성하는 것인 C2- 6알킬;
    (d) C3- 6시클로알킬로서, 상기 C3- 6시클로알킬은 -OH, -CN, -OC1- 3알킬, 또는 C1- 3알킬로 선택적으로 치환되고, 상기 C1- 3알킬은 -OC1- 3알킬 또는 1 또는 2개의 할로로 선택적으로 치환되는 것인 C3-6시클로알킬,
    (e) 옥세타닐,
    (f) 테트라히드로피라닐,
    (g) 테트라히드로티오페닐 1,1-디옥시드, 및
    (h) 페닐로부터 선택되고,
    또는 R7 및 R8은 함께 C3- 5알킬렌 또는 C2알킬렌-O-C2알킬렌을 형성하고; 상기 C3-5알킬렌은 1 또는 2개의 Rx로 선택적으로 치환되고;
    Rx는 -OH, -CN, -OC1- 3알킬, 할로, 페닐, 및 -OC1- 3알킬 또는 -OH로 선택적으로 치환된 C1-3알킬로부터 선택되고, 또는
    2개의 치환체 Rx는 함께 C1-5알킬렌 또는 -CH2OCH2-를 형성하고,
    또는 n이 1이고 및 R2 및 R7은 함께 C2알킬렌을 형성하는 경우, C2알킬렌 상에서 R4 및 치환체 Rx는 함께 C2알킬렌을 형성하고;
    단, 동일한 탄소 원자 상에 2개의 치환체 Rx는 둘다 플루오로는 아니고, 및
    단, Rx가 질소 원자에 인접한 탄소 원자에 부착되는 경우, Rx는 -OH, -OC1- 3알킬, 또는 할로는 아닌 것인 화합물 또는 그의 약학적으로-허용가능한 염.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 X는 하기로부터 선택되고:
    Figure pct00087

    R3은 수소 또는 C1- 3알킬이고;
    R3a는 수소, -OH, -OC1- 3알킬, 할로, -C(O)OC1 - 3알킬, 및 C1- 3알킬로부터 선택되고, 상기 C1-3알킬은 -OH로 선택적으로 치환되고;
    R4는 수소 또는 C1- 3알킬이고;
    R5는 수소, C1- 3알킬, -C(O)OC1 - 3알킬, 및 페닐로부터 선택되고;
    R6은 수소 또는 C1- 3알킬이고;
    R7은 수소 또는 C1- 3알킬이고; 및
    R8은
    (a) 수소,
    (b) 메틸로서, -CN, 페닐 또는 C3- 6시클로알킬로 선택적으로 치환되는 것인 메틸;
    (c) C2- 6알킬로서, 상기 C2- 6알킬은 -OH, -OC1- 3알킬, -CN, -SC1- 3알킬, 페닐, C3- 6시클로알킬, 할로로부터 선택된 1 또는 2개의 치환체로 선택적으로 치환되고, 및 선택적으로, 부가로 단일 탄소 원자 상에서 2개의 치환체가 함께 C2- 3알킬렌을 형성하는 것인 C2- 6알킬;
    (d) C3- 6시클로알킬로서, 상기 C3- 6시클로알킬은 -OH, -CN, -OC1- 3알킬, 또는 C1- 3알킬로 선택적으로 치환되고, 상기 C1- 3알킬은 -OC1- 3알킬 또는 1 또는 2개의 할로로 선택적으로 치환되는 것인 C3- 6시클로알킬,
    (e) 옥세타닐,
    (f) 테트라히드로피라닐,
    (g) 테트라히드로티오페닐 1,1-디옥시드, 및
    (h) 페닐로부터 선택되는 것인 화합물.
  3. 청구항 2에 있어서,
    R3a는 수소, -OH, -OC1- 3알킬, 할로, -C(O)OC1 - 3알킬, 및 C1- 3알킬로부터 선택되고; 및
    R8은
    (a) 수소,
    (b) 메틸로서, C3- 6시클로알킬로 선택적으로 치환되는 것인 메틸;
    (c) C2- 4알킬로서, 상기 C2- 4알킬은 -OH, -OC1- 3알킬, -CN, -SC1- 3알킬, C3-4시클로알킬, 및 할로로부터 선택된 1개의 치환체로 선택적으로 치환되고, 및 선택적으로, 부가로, 단일 탄소 원자 상에서 2개의 치환체가 함께 C2알킬렌을 형성하는 것인 C2-4알킬;
    (d) C3- 4시클로알킬로서, 상기 C3- 4시클로알킬은 -OH, -CN, -OC1- 3알킬, 또는 C1- 3알킬로 선택적으로 치환되고, 상기 C1- 3알킬은 -OC1- 3알킬 또는 1 또는 2개의 할로로 선택적으로 치환되는 것인 C3-4시클로알킬,
    (e) 옥세타닐,
    (f) 테트라히드로피라닐, 및
    (g) 테트라히드로티오페닐 1,1-디옥시드로부터 선택되는 것인 화합물.
  4. 청구항 2에 있어서, 상기 X는 하기로부터 선택되고:
    Figure pct00088

    R3a는 할로이고 및
    Figure pct00089
    의 피롤리딘 고리는 C1- 3알킬로 선택적으로 치환되는 것인 화합물.
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 R8은:
    (a) 수소,
    (b) 메틸로서, C3- 6시클로알킬로 선택적으로 치환되는 것인 메틸,
    (c) C2- 4알킬로서, 상기 C2- 4알킬은 -OH, -OC1- 3알킬,-CN, -SC1- 3알킬, C3- 4시클로알킬, 및 할로로부터 선택된 1개의 치환체로 선택적으로 치환되고 및 선택적으로, 부가로, 단일 탄소 원자 상에서 2개의 치환체들은 함께 C2알킬렌을 형성하는 것인 C2- 4알킬;
    (d) C3- 4시클로알킬로서, 상기 C3- 4시클로알킬은 -OH, -CN, -OC1- 3알킬, 또는 C1-3알킬로 선택적으로 치환되고, 상기 C1- 3알킬은 -OC1- 3알킬 또는 1 또는 2개의 할로로 선택적으로 치환되는 것인 C3- 4시클로알킬,
    (e) 옥세타닐,
    (f) 테트라히드로피라닐, 및
    (g) 테트라히드로티오페닐 1,1-디옥시드로부터 선택되는 것인 화합물.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 R8은 수소, -CH3, -C2H5, 이소프로필, 시클로프로필, 시클로부틸, -CH(CH3)C2H5 , -(CH2)2CN, -CH2CH2F, -CH2이소프로필, -CH2시클로프로필, -(CH2)2OH, (CH2)2- 3OCH3 ,-(CH2)2- 3SCH3, -(CH2)2CH(CH3)SCH3, 테트라히드로피란-4-일, 피리딘-4-일,
    Figure pct00090
    로부터 선택되는 것인 화합물.
  7. 청구항 5에 있어서, 상기 X는 하기로부터 선택되고:
    Figure pct00091

    R8은 수소, 메틸, C2- 4알킬, C3- 4시클로알킬, 및
    Figure pct00092
    로부터 선택되는 것인 화합물.
  8. 청구항 1에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (III)의 화합물이고:
    Figure pct00093

    상기 R8은:
    (a) 수소,
    (b) 메틸로서, C3- 6시클로알킬로 선택적으로 치환되는 것인 메틸,
    (c) C2- 4알킬로서, 상기 C2- 4알킬은 -OH, -OC1- 3알킬,-CN, -SC1- 3알킬, C3- 4시클로알킬, 및 할로로부터 선택된 1개의 치환체로 선택적으로 치환되고 및 선택적으로, 부가로, 단일 탄소 원자 상에서 2개의 치환체는 함께 C2알킬렌을 형성하는 것인 C2- 4알킬;
    (d) C3- 4시클로알킬로서, 상기 C3- 4시클로알킬은 -OH, -CN, -OC1- 3알킬, 또는 C1- 3알킬로 선택적으로 치환되고, 상기 C1- 3알킬은 -OC1- 3알킬 또는 1 또는 2개의 할로로 선택적으로 치환되는 것인 C3- 4시클로알킬,
    (e) 옥세타닐,
    (f) 테트라히드로피라닐, 및
    (g) 테트라히드로티오페닐 1,1-디옥시드로부터 선택되는 것인 화합물.
  9. 청구항 8에 있어서, 상기 R8은 수소, -CH3, -C2H5, 이소프로필, 시클로프로필, -CH(CH3)C2H5, -(CH2)2CN, -CH2CH2F, -CH2이소프로필, -CH2시클로프로필, -(CH2)2OH, (CH2)2- 3OCH3, -(CH2)2SCH3, -(CH2)2CH(CH3)SCH3,
    Figure pct00094
    로부터 선택되는 것인 화합물.
  10. 청구항 8에 있어서, 상기 R8은 수소, 메틸, C2- 4알킬, 및 C3시클로알킬로부터 선택되는 것인 화합물.
  11. 청구항 1에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (IV)의 화합물이고:
    Figure pct00095

    상기 R8은 수소, 메틸, C2- 4알킬, 및 C3- 4시클로알킬로부터 선택되는 것인 화합물.
  12. 청구항 1에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (V)의 화합물이고:
    Figure pct00096

    R7은 수소 또는 C1- 3알킬이고 및 R8은 메틸, C2- 4알킬 또는
    Figure pct00097
    인 것인 화합물.
  13. 청구항 1에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은:
    5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
    4-(3-(5-(아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
    5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
    4-(3-(5-(1-(sec-부틸)아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
    4-(3-(5-(1-시클로프로필아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
    5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
    4-(3-(5-(2-(디메틸아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
    5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(2-((3-메톡시시클로부틸)아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
    5-에틸-4-(3-(5-(2-(에틸(메틸)아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-2-플루오로페놀,
    4-(3-(5-(2-(sec-부틸(메틸)아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
    (S)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-((1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
    4-(3-(5-(3-(디메틸아미노)-2-플루오로프로필)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)-5-에틸-2-플루오로페놀,
    (S)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(모르폴린-3-일메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
    (R)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(모르폴린-3-일메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
    (S)-5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(2-(2-메틸피롤리딘-1-일)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀,
    및 그의 약학적으로 허용가능한 염으로부터 선택되는 것인 화합물.
  14. 하기 화학식의 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸아제티딘-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00098
    .
  15. 하기 화학식의 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00099
    .
  16. 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀.
  17. 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이트 (crystalline hydrate)로서, 상기 결정 형태는 6.20±0.20, 9.58±0.20, 17.53±0.20, 19.28±0.20, 및 21.51±0.2의 2θ 값에서 회절 피크들을 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 특징으로 하는 것인 결정 히드레이트.
  18. 청구항 17에 있어서, 상기 분말 X-선 회절 패턴은 10.34±0.20, 11.54±0.20, 12.77±0.20, 13.01±0.20, 16.94±0.20, 20.61±0.20, 및 22.10±0.20으로부터 선택된 2θ 값에서 2 이상의 부가의 회절 피크들을 갖는 것을 더 특징으로 하는 것인 결정 히드레이트.
  19. 청구항 17에 있어서, 상기 결정 형태는 피크 위치가 도 1에 개시된 패턴의 피크 위치와 실질적으로 일치하는 분말 X-선 회절 패턴을 특징으로 하는 것인 결정 히드레이트.
  20. 청구항 17에 있어서, 상기 결정 형태는 분당 10℃의 가열 속도로 기록된 시차 주사 열량계 트레이스 (trace)를 특징으로 하고, 약 206℃ 내지 약 216℃의 온도에서 흡열 열 흐름 (endothermic heat flow)의 최대를 나타내는 것인 결정 히드레이트.
  21. 청구항 20에 있어서, 상기 결정 형태는 도 2에 개시된 것과 실질적으로 일치하는 시차 주사 열량계 트레이스를 특징으로 하는 것인 결정 히드레이트.
  22. 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항의 화합물 및 약학적으로-허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  23. 하기 화학식 (I')의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제조하는 방법으로서:
    Figure pct00100

    상기 R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, 및 n은 청구항 1에서 정의된 바와 같고, 상기 방법은:
    (a) 화학식 1의 화합물:
    Figure pct00101
    을
    Pg가 아미노-보호기인 화학식 2의 화합물:
    Figure pct00102
    과 반응시켜서, 화학식 3의 중간체:
    Figure pct00103
    를 제공하는 단계;
    (b) 상기 중간체 3을 탈보호하여 (deprotecting) 중간체 4:
    Figure pct00104
    를 제공하는 단계; 및
    (c) 상기 중간체 4를, R8a 및 R8b는 R8a-C(H)-R8b가 R8이 되도록 정의되는, R8a-C(=O)-R8b와 반응시켜서 화학식 (I')의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  24. 하기 화학식 (IV)의 화합물을 제조하는 방법으로서:
    Figure pct00105

    상기 R8은 수소, 메틸, C2- 4알킬, 및 C3- 4시클로알킬로부터 선택되고, 상기 방법은 화학식 1의 화합물:
    Figure pct00106
    을
    화학식 2"의 화합물:
    Figure pct00107
    과 반응시켜서 화학식 (IV)의 화합물 또는 그의 약학적으로-허용가능한 염을 제공하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  25. 하기 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법으로서:
    Figure pct00108

    상기 방법은:
    (a) Bn이 벤질 보호기를 나타내는, 화학식 8의 화합물:
    Figure pct00109
    을
    화학식 9의 화합물:
    Figure pct00110
    과 반응시켜서
    화학식 10의 화합물:
    Figure pct00111
    을 형성하는 단계; 및
    (b) 상기 화학식 10의 화합물을 탈보호하여, 화학식 1의 화합물 또는 그의 염을 제공하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  26. 화학식 8의 화합물 또는 그의 염:
    Figure pct00112
    .
  27. 청구항 26에 있어서, 상기 화합물은 화학식 8의 화합물의 히드로클로리드 염 (hydrochloride salt)인 것인 화합물.
  28. 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 결정 히드레이트를 제조하는 방법으로서, 상기 방법은:
    (a) 메탄올, 테트라히드로푸란, tert-부틸 알콜, 아세토니트릴, 이소프로필아세테이트 및 아세톤으로부터 선택된 유기 용매와 함께 약 1 내지 약 30 % v/v의 물을 포함하는 희석제 중에 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀의 슬러리 (slurry)를 용매화물 또는 비결정 형태로 형성하는 단계;
    (b) 상기 슬러리를 약 40　℃ 내지 약 60 ℃의 온도에서 약 1시간 내지 약 2일 동안 가열하는 단계; 및
    (c) 상기 슬러리로부터 결정 히드레이트를 단리시키는 단계를 포함하는 것인 방법.
  29. 포유동물에서 호흡기 질환의 치료에 사용하기 위한 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항의 화합물.
  30. 청구항 29에 있어서, 상기 호흡기 질환은 천식 (asthma), 만성 폐쇄성 폐 질환 (chronic obstructive pulmonary disease), 낭성 섬유증 (cystic fibrosis), 폐렴 (pneumonitis), 특발성 폐 섬유증 (idiopathic pulmonary fibrosis), 급성 폐 손상 (acute lung injury), 급성 호흡 곤란 증후군 (acute respiratory distress syndrome), 기관지염 (bronchitis), 폐기종 (emphysema) 또는 폐쇄세기관지염 (bronchiolitis obliterans)인 것인 화합물.
  31. 청구항 30에 있어서, 상기 호흡기 질환은 천식 또는 만성 폐쇄성 폐 질환인 것인 화합물.
  32. 포유동물에서 호흡기 질환의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
  33. 청구항 32에 있어서, 상기 호흡기 질환은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 폐렴, 특발성 폐 섬유증, 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 기관지염, 폐기종 또는 폐쇄세기관지염인 것인 용도.
  34. 청구항 33에 있어서, 상기 호흡기 질환은 천식 또는 만성 폐쇄성 폐 질환인 것인 용도.
  35. 포유동물에서 호흡기 질환을 치료하는 방법으로서, 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항의 화합물 및 약학적으로-허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  36. 청구항 35에 있어서, 상기 호흡기 질환은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 폐렴, 특발성 폐 섬유증, 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 기관지염, 폐기종 또는 폐쇄세기관지염인 것인 방법.
  37. 청구항 36에 있어서, 상기 호흡기 질환은 천식 또는 만성 폐쇄성 폐 질환인 것인 방법.
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