KR20190140062A - Jak 저해제 화합물을 사용하는 치료 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 하기 화학식의 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 사용하여 안 질환 및 소정의 호흡기 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다:

Description

JAK 저해제 화합물을 사용하는 치료 방법

본 발명은 특정 JAK 저해제 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 사용하여 안구 및 소정의 호흡기 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.

시토킨은 케모킨, 인터페론, 인터루킨, 림포킨 (lymphokines) 및 종양 괴사 인자를 포함하는 세포간 신호전달 분자이다. 시토킨은 정상적인 세포 성장 및 면역 조절에 중요할 뿐만 아니라 면역-매개 질환을 유발하고, 악성 세포 성장에 기여한다. 다수의 시토킨 수준의 증가는 많은 질환 또는 병태, 구체적으로 염증을 특징으로 하는 질환의 병리에 관련되어 있다. 질환에 관련된 다수의 시토킨은 티로신 키나제의 Janus 패밀리 (Janus family of tyrosine kinase: JAK)에 의존하는 신호전달 경로를 통해 작용하고, 이는 전사 인자 중 전사의 신호 변환인자 및 활성인자 (Signal Transducer and Activator of Transcription: STAT) 패밀리를 통해 신호를 전달한다.

상기 JAK 패밀리는 JAK1, JAK2, JAK3 및 티로신 키나제 2 (TYK2)의 4개의 구성원을 포함한다. 시토킨의 JAK-의존성 시토킨 수용체로의 결합은 수용체 이량체화를 유도하고, JAK 키나제에서 티로신 잔기의 인산화를 초래하여 JAK 활성화에 영향을 준다. 인산화된 JAK는, 이량체화되고 세포 핵내에 내재되어 유전자 전사를 직접 조절하는 다양한 STAT 단백질에 결합하고 인산화하여, 여러 효과 중에 염증 질환과 관련된 다운스트림 효과를 유도한다. 상기 JAK는 통상 시토킨 수용체와 쌍으로 동종이량체 또는 이종이량체로 회합한다. 특정 시토킨은 특정 JAK 페어링 (pairings)과 관련이 있다. JAK 패밀리 중 4개의 구성원 각각은 염증과 관련된 시토킨 중 적어도 하나의 신호전달에 관련되어 있다.

포도막염 (uveitis), 당뇨 망막병증 (diabetic retinopathy), 당뇨 황반 부종 (diabetic macular edema), 건성안 질환 (dry eye disease), 연령-관련 황반 변성 (age-related macular degeneration) 및 아토피성 각막결막염 (atopic keratoconjunctivitis)을 포함하는 다수의 안 질환에서 염증은 현저한 역할을 한다. 포도막염은 다수의 안구내 염증 병태를 포함하고, 종종 자가면역으로, 알려져 있는 감염성 유발인자 없이 발생한다. 이러한 병태는 미국에서 약 2백만명의 환자에게 영향을 미치는 것으로 추정된다. 일부 환자에서, 포도막염과 관련된 만성 염증은 조직 파괴를 초래하므로, 이는 미국에서 실명 (blindness)의 5번째 주요 원인이다. JAK-STAT 경로를 통해 신호를 전달하는 포도막염 환자의 눈에서 증가된 시토킨으로는 IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-23 및 IFN-γ를 포함한다. (Horai and Caspi, J Interferon Cytokine Res, 2011, 31, 733-744; Ooi et al, Clinical Medicine and Research, 2006, 4, 294-309). 포도막염에 대한 기존의 요법은 종종 차선책이며, 많은 환자들이 거의 제어되지 않았다. 스테로이드는 종종 효과적이지만, 백내장 및 증가된 안압/녹내장과 관련이 있다.

당뇨 망막병증 (DR)은 망막의 혈관 손상으로 인해 발생한다. 이는 당뇨병 환자 중에 시력 손상의 가장 흔한 원인이다. 혈관 형성뿐만 아니라 염증 경로는 상기 질환에서 중요한 역할을 한다. 종종, DR은 당뇨병 환자에서 시력 손상의 가장 빈번한 원인인 당뇨 황반 부종 (DME)으로 진행될 것이다. 상기 병태는 미국에서만 약 150만명의 환자에게 영향을 미치는 것으로 추정되며, 이 중 약 20　%는 질환이 양쪽 눈에 영향을 주었다. IL-6과 같은 JAK-STAT 경로를 통해 신호를 전달하는 시토킨뿐만 아니라 JAK-STAT 경로 신호전달에 의해 생성이 일부 유도되는 IP-10 및 MCP-1 (대안으로서 CCL2로 불림)과 같은 다른 시토킨은 DR/DME와 관련된 염증에서 역할을 하는 것으로 여겨진다 (Abcouwer, J Clin Cell Immunol, 2013, Suppl 1, 1-12; Sohn et al., American Journal of Opthalmology, 2011, 152, 686-694; Owen and Hartnett, Curr Diab Rep, 2013, 13, 476-480; Cheung et al, Molecular Vision, 2012, 18, 830-837; Dong et al, Molecular Vision, 2013, 19, 1734-1746; Funatsu et al, Ophthalmology, 2009, 116, 73-79). DME에 대한 기존의 요법은 차선책이며: 유리체내 항-VEGF 치료는 일부 환자에서만 유효하고, 스테로이드는 백내장 및 증가된 안압과 관련이 있다.

건성안 질환 (DED)은 미국에서 대략 5백만명의 환자에게 영향을 미치는 다인자성 장애이다. 안구 표면 염증은 상기 질환의 발생 및 전파에 중요한 역할을 하는 것으로 여겨진다. IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6 및 IFN-γ와 같은 시토킨의 수준이 DED 환자의 안구액에서 증가하는 것으로 알려져 있고 (Stevenson et al, Arch Ophthalmol, 2012, 130, 90-100), 상기 수준은 종종 질환 중증도와 관계가 있다. 연령-관련 황반 변성 및 아토피성 각막결막염은 또한 JAK-의존성 시토킨과 관련이 있는 것으로 사료된다.

염증 질환에서 증가된 시토킨의 수 및 각 시토킨이 특정 JAK 페어링과 관련이 있다는 것을 고려하여, 안 질환 치료를 위해 JAK 패밀리의 모든 구성원에 대해 전체-활성 (pan-activity)을 갖는 화학적 저해제를 제공하는 것이 바람직할 것이다. 그러나, 이러한 저해제의 광범위한 항-염증 효과는 정상적인 면역 세포 기능을 억제할 수 있어서, 잠재적으로 감염 위험을 증가시킨다. 그러므로, 안구의 작용 부위로 국소로 전달될 수 있는 저해제를 제공함으로써, 이에 의해 유해 전신 면역억제 가능성을 제한하는 것이 바람직할 것이다.

2016년 11월 2일자로 제출된 통상적으로 양도된 미국 출원 일련번호 제15/341,226호는 JAK 저해제로서 유용한 디아미노 화합물을 개시하였다. 구체적으로, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 화합물 (화합물 1)이 특히 강력한 전체-JAK 저해제로서 상기 출원에 개시되어 있다:

상기 출원은 화합물 1의 다양한 용도, 구체적으로 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (chronic obstructive pulmonary disease), 낭성 섬유증 (cystic fibrosis), 폐렴, 간질성 폐 질환 (특발성 폐 섬유증 (idiopathic pulmonary fibrosis) 포함), 급성 폐 손상 (acute lung injury), 급성 호흡 곤란 증후군 (acute respiratory distress syndrome), 기관지염 (bronchitis), 폐기종 (emphysema) 및 폐쇄세기관지염 (bronchiolitis obliterans)을 포함하는 호흡기 질환 치료를 개시하고 있다. 그러나, 상기 출원은 안 질환 치료를 위한 화합물 1의 용도는 개시하지 않았다.

본 발명은 JAK 저해제 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 사용하여 안 질환 (ocular disease) 또는 그의 증상을 치료하는 방법에 관한 것이다.

일 양상에서, 본 발명은 인간 환자에서 안 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 환자의 안구에, 하기 화학식의 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 화합물 (이후 화합물 1) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함한다:

.

일 양상에서, 상기 안 질환은 포도막염, 당뇨 망막병증, 당뇨 황반 부종, 건성안 질환, 연령-관련 황반 변성 및 아토피성 각막결막염이다. 구체적으로, 상기 안 질환은 포도막염 또는 당뇨 황반 부종이다.

다른 양상에서, 본 발명은 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (화합물 1) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 약학적 조성물을 제공하며, 상기 약학적 조성물은 환자 안구에 직접 투여하기에 적절하다.

본 발명은 또한 소정의 특정 호흡기 질환을 치료하는데 화합물 1을 사용하는 방법에 관한 것이다.

일 양상에서, 본 발명은 포유동물에서 호흡기 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 포유동물에게 화합물 1 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 호흡기 질환은 폐 감염 (lung infection), 연충 감염 (helminthic infection), 폐 동맥 고혈압 (pulmonary arterial hypertension), 사르코이드증 (sarcoidosis), 림프관평활근종증 (lymphangioleiomyomatosis), 기관지확장증 (bronchiectasis) 또는 침윤성 폐 질환 (infiltrative pulmonary disease)이다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 포유동물에서 호흡기 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 포유동물에게 화합물 1 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 호흡기 질환은 약물-유발 폐렴 (drug-induced pneumonitis), 진균 유발 폐렴 (fungal induced pneumonitis), 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증 (allergic bronchopulmonary aspergillosis), 과민성 폐렴 (hypersensitivity pneumonitis), 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증 (eosinophilic granulomatosis with polyangiitis), 특발성 급성 호산구성 폐렴 (idiopathic acute eosinophilic pneumonia), 특발성 만성 호산구성 폐렴 (idiopathic chronic eosinophilic pneumonia), 과호산구성 증후군 (hypereosinophilic syndrome), 뢰플러 증후군 (Loeffler syndrome), 폐쇄세기관지염 기질화 폐렴 (bronchiolitis obliterans organizing pneumonia) 또는 면역-체크포인트-저해제 유발 폐렴 (immune-checkpoint-inhibitor induced pneumonitis)이다.

본원에서 화학 구조는 ChemDraw 소프트웨어 (PerkinElmer, Inc., Cambridge, MA)에서 구현되는 바와 같이 IUPAC 규칙에 따라 명명되었다.

더욱이, 본 발명의 화합물의 구조에서 테트라히드로이미다조피리딘 모이어티 중 이미다조 부분은 토토머 형태로 존재한다. 상기 화합물은 하기와 같이 동등하게 나타낼 수 있다:

IUPAC 규칙에 따라, 이러한 표현은 상기 이미다조피리딘 부분의 원자에 번호를 다르게 부여할 수 있다. 따라서, 상기 구조는 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로- 3 H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀로 명명된다. 특정 형태의 구조들을 나타내거나 또는 명명하더라도, 본 발명은 또한 그의 토토머를 포함하는 것으로 이해될 것이다.

정의

본 발명을 기재할 때, 하기 용어는 달리 지시하지 않는 한 하기의 의미를 갖는다.

단수 용어 "a", "an" 및 "the"는 사용 문맥에서 명확하게 달리 지시하지 않는 한 해당하는 복수 용어를 포함한다.

용어 "약"은 명시된 값의 ± 5 퍼센트를 의미한다.

용어 "치료적으로 유효한 양 (therapeutically effective amount)"은 치료를 필요로 하는 환자에게 투여될 때 치료에 영향을 주는 충분한 양, 예컨대 원하는 치료 효과를 얻는데 필요한 양을 의미한다.

용어 "치료하는 (treating)" 또는 "치료 (treatment)"는 환자 (구체적으로 인간)에서 치료되는 의학적 병태, 질환 또는 장애 (예: 호흡기 질환)를 방지, 개선 또는 억제; 또는 상기 의학적 병태, 질환 또는 장애의 증상을 완화시키는 것을 의미한다.

용어 "유닛 제형 (unit dosage form)" 또는 "유닛 용량 (unit doses)"은 환자에게 투여하기에 적절한 물리적 개별 유닛을 의미하며, 즉 각 유닛은 치료 효과를 발휘하도록 산출된 치료제의 미리 결정된 양을 단독으로 또는 하나 이상의 부가의 유닛과 조합하여 함유한다. 예로는 캡슐, 정제 및 유사물을 포함한다.

본원에서 사용된 모든 다른 용어는 본 발명이 속하는 분야의 통상의 기술을 가진 자가 이해하는 것과 같은 이의 통상적인 의미를 갖는 것으로 의도된다.

용어 "약학적으로 허용가능한 (pharmaceutically-acceptable)"이란 환자에게 투여하는데 허용가능한 것을 의미한다 (예: 명시된 사용에 허용가능한 안전성을 가짐).

용어 "약학적으로 허용가능한 염 (pharmaceutically-acceptable salt)"은 환자에게 투여하는데 허용가능한 산 및 염기 (양쪽성이온 (zwitterions) 포함)로부터 제조된 염 (예: 주어진 용량 용법에 대해 허용가능한 안전성을 가진 염)을 의미한다.

대표적인 약학적으로 허용가능한 염은 아세트산, 아스코르브산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캄포술폰산, 시트르산, 에탄술폰산, 에디실산 (edisylic), 푸마르산, 겐티스산 (gentisic), 글루콘산, 글루코론산, 글루탐산, 힙푸르산 (hippuric), 히드로브롬산, 히드로클로르산, 이세티온산 (isethionic), 락트산, 락토비온산 (lactobionic), 말레산, 말산, 만델산, 메탄술폰산, 무신산 (mucic), 나프탈렌술폰산, 나프탈렌-1,5-디술폰산, 나프탈렌-2,6-디술폰산, 니코틴산, 니트르산, 오로트산 (orotic), 옥살산, 파모산 (pamoic), 판토텐산, 포스포르산, 숙신산, 황산, 타르타르산, p-톨루엔술폰산 및 크시나포산 (xinafoic acid)의 염 등을 포함한다.

용어 "그의 염 (salt thereof)"은 산의 수소가 양이온, 예컨대 금속 양이온 또는 유기 양이온 등으로 대체될 때 형성된 화합물을 의미한다.

화합물 1

본 방법 발명은 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (화합물　1) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 사용한다:

.

화합물 1은 미국 출원 일련번호 제15/341,226호 또는 첨부된 실시예에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.

본 발명의 일 양상에서, 화합물 1은 다른 피크들 중에 2θ 값 6.20±0.20, 9.58±0.20, 17.53±0.20, 19.28±0.20 및 21.51±0.20에서 유의한 회절 피크를 갖는 분말 X-선 회절 (powder X-ray diffraction: PXRD) 패턴을 특징으로 하는 결정성 유리염기 (freebase) 수화물 형태로 사용된다. 상기 결정성 수화물의 제조는 또한 미국 출원 일련번호 제15/341,226호 및 하기 실시예에 기재되어 있다.

약학적 조성물

본 발명의 화합물인, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (1) 및 그의 약학적으로 허용가능한 염은 전형적으로 약학적 조성물 또는 제제의 형태로 사용된다. 이러한 약학적 조성물은 유익하게 경구, 흡입, 선택적 주사, 국소 (경피 포함), 직장, 비강 및 비경구 투여 방식을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 허용가능한 임의의 투여 경로로 환자에게 투여될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 약학적 조성물은 전형적으로 화합물 1의 치료적으로 유효한 양을 포함한다. 그러나 당 분야의 통상의 기술자는 약학적 조성물이 벌크 (bulk) 조성물과 같이 치료적으로 유효한 양을 초과하여 포함하거나, 또는 치료적으로 유효한 양보다 적게, 즉 치료적으로 유효한 양의 달성을 위해 다회 투여 목적으로 설계된 개별 유닛 용량으로 포함할 수 있다는 것을 알 것이다. 조성물 및 용도를 논의할 때, 화합물 1은 또한 본원에서 '활성제 (active agent)'로도 언급될 수 있다.

전형적으로, 약학적 조성물은 약 0.01 내지 약 95 중량%의 활성제; 예를 들어, 약 0.05 내지 약 30 중량%; 및 약 0.1 내지 약 10 중량%의 활성제를 포함할 것이다.

임의의 종래의 담체 또는 부형제가 본 발명에서 사용되는 약학적 조성물에 사용될 수 있다. 특정 담체 또는 부형제의 선택, 또는 담체나 부형제의 조합은 특정한 환자 또는 의학적 병태 또는 질환 상태의 유형을 치료하기 위해 사용되는 투여 방식에 의존할 것이다. 이와 관련하여, 특정한 투여 방식에 적절한 약학적 조성물의 제조는 약제학 분야의 통상의 기술의 범위 내에 속한다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물에 사용되는 담체 또는 부형제는 상업적으로 입수가능하다. 추가적 예시로서, 기존의 제제화 기법은 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); 및 H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999)에 기재되어 있다.

약학적으로 허용가능한 담체로 제공될 수 있는 물질의 대표적인 예로는 하기를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다: 당, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스, 예컨대 미정질 셀룰로스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 트라가칸트 분말 (powdered tragacanth); 맥아 (malt); 젤라틴; 탈크; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스 (suppository waxes); 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화씨유, 참깨유, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 아가 (agar); 완충제, 예컨대 마그네슘 히드록시드 및 알루미늄 히드록시드; 알긴산; 발열성물질-제거수 (pyrogen-free water); 등장성 식염수; 링거액; 에틸 알콜; 포스페이트 완충 용액; 및 약학적 조성물에 사용되는 기타 무독성 적합성 물질.

약학적 조성물은 전형적으로 활성제를 약학적으로 허용가능한 담체 및 하나 이상의 선택적 성분과 철저하게 (thoroughly) 및 친밀하게 (intimately) 혼합 (mixing) 또는 블렌딩 (blending)시켜 제조된다. 그 다음에 결과의 균일하게 블렌딩된 혼합물은 기존의 절차 및 장비를 사용하여, 정제, 캡슐, 환제 (pill) 등으로 성형 또는 로드 (load)될 수 있다.

일 양상에서, 상기 약학적 조성물은 안구 주사에 적절하다. 본 양상에서, 상기 화합물은 멸균 수성 현탁액 또는 용액으로 제제화될 수 있다. 이러한 수성 제제에 포함될 수 있는 유용한 부형제는 폴리소르베이트 80, 카르복시메틸셀룰로스, 포타슘 클로리드, 칼슘 클로리드, 마그네슘 클로리드, 소듐 아세테이트, 소듐 시트레이트, 히스티딘, α-α-트레할로스 디히드레이트, 수크로스, 폴리소르베이트 20, 히드록시프로필-β-시클로덱스트린 및 소듐 포스페이트를 포함한다. 벤질 알콜은 보존제로 제공될 수 있고, 소듐 클로리드는 강장도 (tonicity)를 조정하기 위해 포함될 수 있다. 또한, 염산 및/또는 소듐 히드록시드가 pH 조정을 위해 상기 용액에 첨가될 수 있다. 안구 주사를 위한 수성 제제는 보존제 없이 (preservative-free) 제조될 수 있다.

다른 양상에서, 상기 약학적 조성물은 흡입 투여에 적절하다. 흡입 투여를 위한 약학적 조성물은 전형적으로 에어로졸 또는 분말의 형태이다. 이러한 조성물은 일반적으로 건조 분말 흡입기 (dry powder inhaler: DPI), 정량식 흡입기 (metered-dose inhaler: MDI), 네뷸라이저 흡입기 (nebulizer inhaler) 또는 유사한 전달 장치와 같은 흡입기 전달 장치를 사용하여 투여된다.

특정 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 건조 분말 흡입기를 사용하여 흡입에 의해 투여된다. 이러한 건조 분말 흡입기는 전형적으로 약학적 조성물을 흡기 (inspiration) 중에 환자의 기류에 분산된 자유-유동 분말로서 투여한다. 자유-유동 분말 조성물을 수득하기 위해, 치료제는 전형적으로 적절한 부형제 예컨대 락토스, 전분, 만니톨, 덱스트로스, 폴리락트산 (polylactic acid: PLA), 폴리락티드-코-글리콜리드 (polylactide-co-glycolide: PLGA) 또는 그의 조합과 제제화된다. 전형적으로, 상기 치료제는 미분화되고, 적절한 담체와 조합되어 흡입에 적절한 조성물을 형성한다.

건조 분말 흡입기에 사용되는 대표적인 약학적 조성물은 락토스 및 본 발명의 화합물을 미분화된 형태로 포함한다. 이러한 건조 분말 조성물은 예를 들어 건조 분쇄된 락토스를 치료제와 조합하고, 그 다음에 상기 성분을 건조 블렌딩하여 제조될 수 있다. 그 다음에 상기 조성물은 전형적으로 건조 분말 디스펜서 또는 건조 분말 전달 장치에 사용하기 위한 흡입 카트리지 또는 캡슐로 로딩된다.

치료제를 흡입에 의해 투여하기에 적절한 건조 분말 흡입기 전달 장치는 당 분야에 개시되어 있고, 이러한 장치의 예는 상업적으로 입수가능하다. 예를 들어, 대표적인 건조 분말 흡입기 전달 장치 또는 제품으로는 Aeolizer (Novartis); Airmax (IVAX); ClickHaler (Innovata Biomed); Diskhaler (GlaxoSmithKline); Diskus/Accuhaler (GlaxoSmithKline); Ellipta (GlaxoSmithKline); Easyhaler (Orion Pharma); Eclipse (Aventis); FlowCaps (Hovione); Handihaler (Boehringer Ingelheim); Pulvinal (Chiesi); Rotahaler (GlaxoSmithKline); SkyeHaler/Certihaler (SkyePharma); Twisthaler (Schering-Plough); Turbuhaler (AstraZeneca); Ultrahaler (Aventis) 등을 포함한다.

다른 특정 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 정량식 흡입기를 사용하여 흡입에 의해 투여된다. 이러한 정량식 흡입기는 전형적으로 압축된 분사제 기체를 사용하여 치료제의 측정된 양을 배출한다. 따라서, 정량식 흡입기를 사용하여 투여된 약학적 조성물은 전형적으로 액화된 분사제 중 치료제의 용액 또는 현탁액을 포함한다. 히드로플루오로알칸 (HFAs), 예컨대 1,1,1,2-테트라플루오로에탄 (HFA 134a) 및 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로-n-프로판, (HFA 227); 및 클로로플루오로카본, 예컨대 CCl₃F를 포함하는 임의의 적절한 액화된 분사제가 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 분사제는 히드로플루오로알칸이다. 일부 구현예에서, 상기 히드로플루오로알칸 제제는 보조-용매 (co-solvent), 예컨대 에탄올 또는 펜탄, 및/또는 계면활성제, 예컨대 소르비탄 트리올레에이트, 올레산, 레시틴 및 글리세린을 포함한다.

정량식 흡입기에 사용되는 대표적인 약학적 조성물은 본 발명의 화합물 약 0.01 내지 약 5 중량%; 에탄올 약 0 내지 약 20 중량%; 및 계면활성제 약 0 내지 약 5 중량%; 나머지는 HFA 분사제를 포함한다. 이러한 조성물은 전형적으로 치료제, 에탄올 (존재하는 경우) 및 계면활성제 (존재하는 경우)를 포함하는 적당한 용기에 냉각되거나 또는 압축된 히드로플루오로알칸을 첨가하여 제조된다. 현탁액을 제조하기 위해, 치료제를 미분화하고, 그 다음에 분사제와 조합하였다. 그 다음에 상기 조성물을 에어로졸 캐니스터 (aerosol canister)에 로딩하고, 이는 전형적으로 정량식 흡입기 장치의 일부를 형성한다.

치료제를 흡입에 의해 투여하기에 적절한 정량식 흡입기 장치는 당 분야에 개시되어 있고, 이러한 장치의 예는 상업적으로 입수가능하다. 예를 들어, 대표적인 정량식 흡입기 장치 또는 제품으로는 AeroBid Inhaler System (Forest Pharmaceuticals); Atrovent Inhalation Aerosol (Boehringer Ingelheim); Flovent (GlaxoSmithKline); Maxair Inhaler (3M); Proventil Inhaler (Schering); Serevent Inhalation Aerosol (GlaxoSmithKline) 등을 포함한다.

다른 특정 양상에서, 상기 약학적 조성물은 네뷸라이저 흡입기를 사용하여 흡입에 의해 투여된다. 이러한 네뷸라이저 장치는 전형적으로 고속 공기 스트림을 생성하여 약학적 조성물이 미스트로 분무되도록 하여 환자 기도로 운반되도록 한다. 따라서, 네뷸라이저 흡입기에서 사용하기 위해 제제화될 때, 치료제를 적절한 담체에 용해하여 용액을 형성할 수 있다. 대안으로서, 치료제를 미분화하거나 또는 나노분쇄하고 적절한 담체와 조합하여 현탁액을 형성할 수 있다.

네뷸라이저 흡입기에 사용되는 대표적인 약학적 조성물은 약 0.05 μg/mL 내지 약 20　mg/mL의 본 발명 화합물 및 네뷸라이저 제제에 적절한 부형제를 포함하는 용액 또는 현탁액을 포함한다. 일 구현예에서, 상기 용액의 pH는 약 3 내지 약 8이다.

치료제를 흡입에 의해 투여하기에 적절한 네뷸라이저 장치는 당 분야에 개시되어 있고, 이러한 장치의 예는 상업적으로 입수가능하다. 예를 들어, 대표적인 네뷸라이저 장치 또는 제품으로는 Respimat Softmist Inhaler (Boehringer Ingelheim); AERx Pulmonary Delivery System (Aradigm Corp.); PARI LC Plus Reusable Nebulizer (Pari GmbH) 등을 포함한다.

또 다른 양상에서, 본 발명의 약학적 조성물은 대안으로서 경구 투여를 위한 제형으로 제조될 수 있다. 경구 투여에 적절한 약학적 조성물은 캡슐, 정제, 환제, 로젠지 (lozenge), 카세제 (cachet), 드라제 (dragee), 산제 (powder), 과립제 (granule); 또는 수성 또는 비-수성 액체 중의 용액 또는 현탁액; 또는 수중유 (oil-in-water) 또는 유중수 (water-in-oil) 액체 에멀젼; 또는 엘릭실제 (elixir) 또는 시럽제 등의 형태일 수 있고; 각각은 활성 성분으로서 본 발명의 화합물의 미리 결정된 양을 포함한다.

고체 제형으로 경구 투여를 의도하는 경우, 본 발명의 약학적 조성물은 전형적으로 활성제 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 예컨대 소듐 시트레이트 또는 디칼슘 포스페이트를 포함할 것이다. 선택적으로 또는 대안으로서, 이러한 고체 제형은 또한 하기를 포함할 수 있다: 충전제 (filler) 또는 증량제 (extender), 결합제, 보습제 (humectants), 용액 지연제, 흡수 촉진제, 습윤제, 흡수제, 윤활제, 착색제; 및 완충제. 이형제, 습윤제, 코팅제, 감미제, 향미제 및 방향제, 보존제 및 산화방지제가 또한 본 발명의 약학적 조성물 중에 존재할 수 있다.

대체 제제로는 또한 제어 방출 제제, 경구 투여를 위한 액체 제형, 경피 패치 및 비경구 제제를 포함할 수 있다. 이러한 대체 제제의 기존의 부형제 및 제조 방법은 예를 들어 상기 Remington를 참조하여 개시되어 있다.

하기 비제한적인 예는 본 발명의 대표적인 약학적 조성물을 예시한다.

안구 주사용 수성 제제

각 mL의 멸균 수성 현탁액은 5 mg 내지 50 mg의 화합물　1, 강장도를 위한 소듐 클로리드, 보존제로서 0.99 % (w/v) 벤질 알콜, 0.75 % 카르복시메틸셀룰로스 소듐 및 0.04 % 폴리소르베이트를 포함한다. 소듐 히드록시드 또는 염산은 pH를 5 내지 7.5로 조정하기 위해 포함될 수 있다.

안구 주사용 수성 제제

무-보존제 멸균 수성 현탁액은 10 mM 소듐 포스페이트, 40 mM 소듐 클로리드, 0.03 % 폴리소르베이트 20 및 5　% 수크로스 중에 5 mg/mL 내지 50 mg/mL의 화합물 1을 포함한다.

건조 분말 조성물

미분화된 화합물 1 (1 g)을 분쇄된 락토스 (25 g)와 블렌딩하였다. 그 다음에 상기 블렌딩된 혼합물은 투여 (dose)당 화학식 I의 화합물을 약 0.1 mg 내지 약 4 mg으로 제공하기에 충분한 양으로 박리형 블리스터 팩 (peelable blister pack)의 개별 블리스터로 로딩되었다. 상기 블리스터의 내용물을 건조 분말 흡입기를 사용하여 투여하였다.

건조 분말 조성물

미분화된 화합물 1 (1 g)을 분쇄된 락토스 (20　g)와 블렌딩하여 화합물 대 분쇄된 락토스의 중량비가 1:20인 벌크 조성물을 형성하였다. 상기 블렌딩된 조성물은 투여 당 화학식 I의 화합물을 약 0.1 mg 내지 약 4 mg으로 전달할 수 있는 건조 분말 흡입 장치로 패킹되었다.

정량식 흡입기 조성물

미분화된 화합물 1 (10 g)을 탈염수 (200 mL)에 레시틴 (0.2 g)을 용해시켜서 제조된 용액 중에 분산시켰다. 결과의 현탁액을 분무 건조하고, 그 다음에 미분화하여 약 1.5 μm 미만의 평균 직경을 갖는 입자를 포함하는 미분화된 조성물을 형성하였다. 그 다음에 상기 미분화된 조성물을 정량식 흡입기로 투여할 때, 투여 당 화학식 I의 화합물을 약 0.1 mg 내지 약 4 mg으로 제공하기에 충분한 양으로 상기 미분화된 조성물을 가압된 1,1,1,2-테트라플루오로에탄을 포함하는 정량식 흡입기 카트리지에 로딩하였다.

네뷸라이저 조성물

화합물 1 (25 mg)을 1.5-2.5 당량의 염산을 포함하는 용액에 용해시키고, 그 다음에 pH를 3.5 내지 5.5로 조정하기 위한 소듐 히드록시드 및 3 중량%의 글리세롤을 첨가하였다. 모든 성분들이 용해될 때까지 상기 용액을 잘 교반하였다. 상기 용액은 네뷸라이저 장치를 사용하여 투여하여, 투여 당 화학식 I의 화합물을 약 0.1 mg 내지 약 4 mg으로 제공하였다.

유용성

본 발명의 화합물인, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (화합물 1)은 JAK 패밀리 효소인 JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2의 강력한 저해제인 것으로 밝혀졌다.

안 질환

많은 안 질환이 JAK-STAT 경로에 의존하는 염증유발 시토킨의 증가와 관련이 있는 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 화합물은 4개의 JAK 효소 모두에서 강력한 저해를 나타내기 때문에, 이는 JAK를 통해 신호를 전달하는 다수의 시토킨 (예컨대 IL-6, IL-2 및 IFN-γ)의 신호전달 및 병원성 효과를 강력하게 저해할 뿐만 아니라 JAK-STAT 경로 신호전달에 의해 생성이 유도되는 다른 시토킨 (예컨대 MCP-1 및 IP-10)의 증가를 방지할 것으로 기대된다.

구체적으로, 본 발명의 화합물은 시토킨 증가의 하류 효과 (downstream effects)의 저해를 기록하는 분석법을 포함하는, 분석법 3 내지 7에 기재되어 있는 세포 분석에서 IL-2, IL-4, IL-6 및 IFNγ 신호전달의 저해에 있어서 pIC₅₀ 값이 6.7 이상 (IC₅₀ 값 200 nM 이하)을 나타내었다.

분석법 8의 약동학적 연구는 단회 유리체내 주사 후에 토끼 눈에서 지속적인 노출과, 유리체 조직에서 관찰된 농도보다 적어도 3차수 더 낮은 혈장 중 농도를 나타내었다.

또한, 본 발명의 화합물의 유리체내 투여는 래트 (rat)의 망막/맥락막 조직에서 IL-6 유도된 pSTAT3의 유의한 저해뿐만 아니라 토끼 유리체 및 망막/맥락막 조직에서 IFN-γ 유도된 IP-10의 유의한 저해를 나타내었다.

유의한 전신 수준 없이 지속되는 안구 JAK 저해는 전신-유발 유해 효과 없이 안구에서 강력한, 국소 항-염증 활성을 초래할 것으로 기대된다. 본 발명의 화합물은 포도막염, 당뇨 망막병증, 당뇨 황반 부종, 건성안 질환, 연령-관련 황반 변성 및 아토피성 각막결막염을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아닌 다수의 안 질환에서 유익할 것으로 기대된다.

구체적으로, 포도막염 (Horai and Caspi, J Interferon Cytokine Res, 2011, 31, 733-744), 당뇨 망막병증 (Abcouwer, J Clin Cell Immunol, 2013, Suppl 1, 1-12), 당뇨 황반 부종 (Sohn et al., American Journal of Opthamology, 2011, 152, 686-694), 건성안 질환 (Stevenson et al, Arch Ophthalmol , 2012, 130, 90-100) 및 연령-관련 황반 변성 (Knickelbein et al, Int Ophthalmol Clin, 2015, 55(3), 63-78)은 JAK-STAT 경로를 통해 신호를 전달하는 소정의 염증유발 시토킨 증가를 특징으로 한다. 따라서, 본 발명의 화합물은 관련된 안구 염증을 완화 및 질병 진행을 역전 또는 증상 완화를 제공할 수 있다.

망막 정맥 폐쇄 (Retinal vein occlusion: RVO)는 매우 만연한 시각 장애 질환이다. 망막 혈류의 폐쇄는 망막 혈관구조 손상, 출혈 및 조직 허혈을 초래할 수 있다. RVO 원인이 다인자성임에도 불구하고, 혈관 및 염증 매개인자 모두가 중요한 것으로 밝혀졌다 (Deobhakta et al, International Journal of Inflammation, 2013, article ID 438412). IL-6 및 IL-13과 같은 JAK-STAT 경로를 통해 신호를 전달하는 시토킨뿐만 아니라 JAK-STAT 경로 신호전달에 의해 생성이 일부 유발되는 MCP-1과 같은 다른 시토킨이 RVO 환자의 안구 조직에서 증가된 수준으로 검출되었다 (Shchuko et al, Indian Journal of Ophthalmology, 2015, 63(12), 905-911). 따라서, 화합물 1은 관련된 안구 염증을 완화 및 질환 진행을 역전 또는 이들 질환의 증상 완화를 제공할 수 있다. 많은 RVO 환자는 광응고 (photocoagulation)에 의해 치료되며, 이는 본질적으로 파괴적 요법 (destructive therapy)이다. 항-VEGF 활성제가 또한 사용되지만, 이는 일부 환자에서만 유효하다. 눈에서 염증 수준을 감소시키는 스테로이드 약제 (트리암시놀론 아세토니드 (Triamcinolone acetonide) 및 덱사메타손 이식물 (dexamethasone implants))는 또한 소정의 RVO 형태의 환자에서 유익한 결과를 제공하는 것으로 밝혀졌지만, 또한 백내장 및 증가된 안압/녹내장을 유발하는 것으로 나타났다.

일 양상에서, 그러므로, 본 발명은 포유동물에서 안 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 상기 포유동물의 안구에 투여하는 단계를 포함한다. 일 양상에서, 상기 안 질환은 포도막염, 당뇨 망막병증, 당뇨 황반 부종, 건성안 질환, 연령-관련 황반 변성, 망막 정맥 폐쇄 또는 아토피성 각막결막염이다. 일 양상에서, 상기 방법은 본 발명의 화합물을 유리체내 주사로 투여하는 단계를 포함한다.

호흡기 질환

본 발명의 화합물인, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (1)은 T 세포 활성화의 저해, 염증과 관련된 시토킨의 저해, 및 설치류 (rodent) 폐 호산구증가증 및 호중구증가증 분석에서 활성을 나타내었다. 그러므로 상기 화합물은 소정의 특정 호흡기 질환 치료에 유용한 것으로 여겨진다.

호산구성 기도 염증은 호산구성 폐 질환으로 집합적으로 불리는 질환의 특징적인 특성이다 (Cottin et al., Clin . Chest. Med ., 2016, 37(3), 535-56). 호산구성 질환 (eosinophilic disease)은 IL-4, IL-13 및 IL-5 신호전달과 관련이 있다. 호산구성　폐　질환은 감염 (구체적으로 연충 감염), 약물-유발 폐렴 (예를 들어 치료 약물 예컨대 항생제, 페니토인 (phenytoin) 또는　l-트립토판에 의한 유발), 진균-유발 폐렴 (예: 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증), 과민성 폐렴 및 다발혈관염을 동반한 호산구성　육아종증 (이전에 척-스트라우스 증후군 (Churg-Strauss syndrome)으로 알려져 있음)을 포함한다. 알려져 있지 않은 병인의 호산구성　폐　질환으로는 특발성 급성　호산구성　폐렴, 특발성 만성　호산구성　폐렴, 과호산구성　증후군 및 뢰플러 증후군을 포함한다. 화합물 1은 분석법 13의 설치류 기도 모델에서 폐 호산구증가증을 유의하게 감소시키고, 세포 분석에서 IL-13, IL-4 및 IL-2 신호전달을 강력하게 저해하는 것으로 나타났다.

IL-6 유전자의 다형 (polymorphism)은 IL-6의 증가된 수준 및 폐 동맥 고혈압 (PAH) 발생의 증가된 위험과 관련이 있다 (Fang et al., J Am Soc Hypertens ., Interleukin-6 -572C/G polymorphism is associated with serum interleukin-6 levels and risk of idiopathic pulmonary arterial hypertension, 2017, ahead of print). PAH에서 IL-6의 역할을 입증하고, IL-6 수용체 사슬 gp130의 저해는 PAH의 래트 모델에서 질환을 개선하였다 (Huang et al., Can J Cardiol ., 2016, 32(11), 1356.e1-1356.e10). 본 발명의 화합물은 IL-6 신호전달을 저해하는 것으로 나타났다.

시토킨 예컨대 IFNγ, IL-12 및 IL-6은 광범위한 비-알레르기성 폐 질환 예컨대 사르코이드증 및 림프관평활근종증과 관련이 있다 (El-Hashemite et al., Am. J. Respir . Cell Mol . Biol ., 2005, 33, 227-230, and El-Hashemite et al., Cancer Res., 2004, 64, 3436-3443). 본 발명의 화합물은 또한 IL-6 및 IFNγ 신호전달을 저해하는 것으로 나타났다.

기관지확장증 및 침윤성 폐 질환은 만성 호중구성 염증과 관련이 있는 질환이다. 본 발명의 화합물은 설치류 모델에서 기도 호중구증가증을 저해하는 것으로 나타났다.

병리학적 T 세포 활성화는 다수의 호흡기 질환의 병인에서 중요하다. 자가반응성 T 세포는 폐쇄세기관지염 기질화 폐렴 (또한 COP [cryptogenic organizing pneumonia]라고 함)에서 역할을 한다. 최근에, 면역-체크포인트 저해제 사용의 증가로 다른 T 세포 매개 폐 질환인 면역-체크포인트 저해제 유발 폐렴이 대두되었다. 이러한 T 세포 자극 제제로 치료한 암 환자에서, 치명적인 폐렴이 발생할 수 있다. 본 발명의 화합물은 인간 말초혈 단핵 세포 (peripheral blood mononuclear cell)에서 분리된 T 세포의 활성화를 저해하는 것으로 나타났다.

일 양상에서, 그러므로, 본 발명은 포유동물 (예: 인간)에서 호흡기 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 포유동물에게 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 약학적으로 허용가능한 담체 및 본 발명의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 호흡기 질환은 폐 감염, 연충 감염, 폐 동맥 고혈압, 사르코이드증, 림프관평활근종증, 기관지확장증 또는 침윤성 폐 질환이다.

다른 양상에서, 본 발명은 포유동물 (예: 인간)에서 호흡기 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 포유동물에게 본 발명의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 약학적으로 허용가능한 담체 및 본 발명의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 호흡기 질환은 약물-유발 폐렴, 진균 유발 폐렴, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 과민성 폐렴, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 특발성 급성 호산구성 폐렴, 특발성 만성 호산구성 폐렴, 과호산구성 증후군, 뢰플러 증후군, 폐쇄세기관지염 기질화 폐렴 또는 면역-체크포인트-저해제 유발 폐렴이다.

JAK-신호전달 시토킨은 또한 많은 면역 과정에 중요한 면역 세포의 서브 타입인 T 세포의 활성화에 주요 역할을 한다. 병리학적 T 세포 활성화는 다수의 호흡기 질환 병인에서 중요하다. 자가반응성 T 세포는 폐쇄세기관지염 기질화 폐렴 (또한 COS라고 함)에서 역할을 한다. COS와 유사하게, 폐 이식 거부의 병인은 이식된 공여자 폐에 의한 수혜자 T 세포의 이상 (aberrant) T 세포 활성화와 관련이 있다. 폐 이식 거부는 초기에는 원발성 이식편 기능장애 (PGD), 기질화 폐렴 (OP), 급성 거부 (AR) 또는 림프구성 세기관지염 (LB)으로 발생할 수 있거나 또는 폐 이식하고 몇 년 후에는 만성 폐 동종이식편 기능장애 (CLAD)로 발생할 수 있다. CLAD는 이미 폐쇄세기관지염 (BO)으로 알려져 있지만, 현재 BO, 제한 CLAD (rCLAD 또는 RAS) 및 호중구성 동종이식편 기능장애를 포함하는 상이한 병리학적 증상을 가질 수 있는 증후군으로 고려되었다. 만성 폐 동종이식편 기능장애 (CLAD)는 이식된 폐가 점차로 기능을 상실하기 때문에 폐 이식 수혜자의 장기적 관리에 있어서 주요 과제이다 (Gauthier et al., Curr Transplant Rep., 2016, 3(3), 185-191). CLAD는 치료에 잘 반응하지 않아서, 이러한 병태를 예방 또는 치료할 수 있는 효과적인 화합물이 여전히 필요하다. 몇 가지 JAK-의존성 시토킨 예컨대 IFNγ 및 IL-5는 CLAD 및 폐 이식 거부에서 상향-조절된다 (Berastegui et al, Clin Transplant. 2017, 31, e12898). 더욱이, JAK-의존성 IFN 신호전달의 다운스트림에 있는 CXCL9 및 CXCL10과 같은 CXCR3 케모킨의 높은 폐 수준은 폐 이식 환자에서 좋지 않은 결과와 관련이 있다 (Shino et al, PLOS One, 2017, 12 (7), e0180281). 전신 JAK 저해는 신장 이식 거부에서 효과적인 것으로 밝혀졌다 (Vicenti et al., American Journal of Transplantation, 2012, 12, 2446-56). 그러므로, JAK 저해제는 폐 이식 거부 및 CLAD를 치료 또는 예방하는데 효과적일 가능성이 있다. 폐 이식 거부에 기초하여 개시된 유사한 T 세포 활성화 사례는 조혈 줄기 세포 이식후 발생할 수 있는 폐 이식편-대-숙주 질환 (GVHD)의 주요 동인으로 고려되었다. CLAD와 유사하게, 폐 GVHD는 만성 진행성 질환으로, 결과가 극도로 좋지 않고, 현재 승인된 치료법은 없다. 구제 요법 (salvage therapy)으로 전신 JAK 저해제 룩솔리티닙 (ruxolitinib)을 투여받은 스테로이드-불응성 급성 또는 만성 GVHD 환자 95명에 대한 후향적 다기관 조사 연구 (retrospective, multicenter survey study)에서 폐 GVHD 환자를 포함하는 대부분의 환자에서 룩솔리티닙에 대해 완전 또는 일부 반응을 나타내었다 (Zeiser et al, Leukemia, 2015, 29, 10, 2062-68). 전신 JAK 저해는 심각한 유해 사례 및 작은 치료 지수 (therapeutic index)와 관련이 있기 때문에, 폐 이식 거부 또는 폐 GVHD를 예방 및/또는 치료하기 위한 흡입형 폐-지향, 비-전신 JAK 저해제에 대한 필요성이 남아 있다.

따라서, 본 개시내용은 포유동물에서 상기에 기재된 추가의 호흡기 병태를 치료하는 방법을 더 제공하며, 상기 방법은 상기 포유동물에게 화합물 1 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함한다.

위장관 염증 질환

JAK 저해제로서, 화합물 1 또는 그의 약학적 염은 또한 이에 한정되는 것은 아니지만, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염 (직장구불창자염 (proctosigmoiditis), 전대장염 (pancolitis), 궤양성 직장염 (ulcerative proctitis) 및 좌측 대장염 (left-sided colitis)), 크론병, 콜라겐성 대장염, 림프구성 대장염, 베체트병 (Behcet's disease), 복강병 (celiac disease), 면역 체크포인트 저해제 유발 대장염, 돌창자염 (ileitis), 호산구성 식도염 (eosinophilic esophagitis), 이식편대 숙주 질환-관련 대장염 및 감염성 대장염을 포함하는 위장관 염증 질환을 치료하는데 유용할 수 있다. 궤양성 대장염 (Reimund et al., J Clin Immunology, 1996, 16, 144-150), 크론병 (Woywodt et al., Eur J Gastroenterology Hepatology, 1999, 11, 267-276), 콜라겐성 대장염 (Kumawat et al., Mol Immunology, 2013, 55, 355-364), 림프구성 대장염 (Kumawat et al., 2013), 호산구성 식도염 (Weinbrand-Goichberg et al., Immunol Res, 2013, 56, 249-260), 이식편대 숙주 질환-관련 대장염 (Coghill et al., Blood, 2001, 117, 3268-3276), 감염성 대장염 (Stallmach et al., Int J Colorectal Dis, 2004, 19, 308-315), 베체트병 (Zhou et al., Autoimmun Rev, 2012, 11, 699-704), 복강병 (de Nitto et al., World J Gastroenterol, 2009, 15, 4609-4614), 면역 체크포인트 저해제 유발 대장염 (예: CTLA-4 저해제-유발 대장염; (Yano et al., J Translation Med, 2014, 12, 191), PD-1- 또는 PD-L1-저해제-유발 대장염) 및 돌창자염 (Yamamoto et al., Dig Liver Dis, 2008, 40, 253-259)은 소정의 염증유발 시토킨 수준의 증가를 특징으로 한다. 다수의 염증유발 시토킨이 JAK 활성화를 통해 신호전달하기 때문에, 본 출원에 기재된 화합물은 염증을 완화시키고, 증상 완화를 제공할 수 있다.

염증성 피부 질환

아토피성 피부염 및 다른 염증성 피부 질환은 JAK-STAT 경로에 의존하는 염증유발 시토킨 증가와 관련이 있다. 그러므로, 화합물 1 또는 그의 약학적 염은 이에 한정되는 것은 아니지만, 아토피성 피부염, 원형탈모증, 백반증, 건선, 피부근육염, 피부 T 세포 림프종 (Netchiporouk et al., Cell Cycle. 2014; 13, 3331-3335) 및 서브타입 (세자리 증후군 (Sezary syndrome), 균상식육종 (mycosis fungoides), 파제트병모양망상증 (pagetoid reticulosis), 육아종 이완 피부 (granulomatous slack skin), 림프종양 구진증 (lymphomatoid papulosis), 만성 태선양 비강진 (pityriasis lichenoides chronica), 급성태선모양잔비늘증 (pityriasis lichenoides et varioliformis acuta), CD30+ 피부 T-세포 림프종, 속발성 피부 CD30+ 거대 세포 림프종, 비-균상식육종 CD30- 피부 거대 T-세포 림프종, 다형 T-세포 림프종, 레너트 림프종 (Lennert lymphoma), 피하 T-세포 림프종, 혈관중심성 림프종, 모구성 (blastic) NK-세포 림프종), 결절성 가려움발진 (prurigo nodularis), 편평태선, 원발성 국소 피부 아밀로이드증 (primary localized cutaneous amyloidosis), 물집유사천포창 (bullous pemphigoid), 이식편대 숙주 질환의 피부 소견, 유사천포창 (pemphigoid), 원반모양 루푸스, 고리 육아종, 단순 만성 태선 (lichen simplex chronicus), 외음부/음낭/항문주위 가려움 (vulvar/scrotal/perianal pruritus), 경화 태선 (lichen sclerosus), 대상포진 신경통후 가려움 (post herpetic neuralgia itch), 모공 편평 태선 (lichen planopilaris) 및 탈모털집염 (foliculitis decalvans)을 포함하는 다수의 피부 염증 또는 소양성 병태에 유익할 수 있다. 구체적으로, 아토피성 피부염 (Bao et al., JAK-STAT, 2013, 2, e24137), 원형탈모증 (Xing et al., Nat Med. 2014, 20, 1043-1049), 백반증 (Craiglow et al, JAMA Dermatol. 2015, 151, 1110-1112), 결절성 가려움발진 (Sonkoly et al., J Allergy Clin Immunol . 2006, 117, 411-417), 편평태선 (Welz-Kubiak et al., J Immunol Res. 2015, ID:854747), 원발성 국소 피부 아밀로이드증 (Tanaka et al., Br J Dermatol. 2009, 161, 1217-1224), 물집유사천포창 (Feliciani et al., Int J Immunopathol Pharmacol. 1999, 12, 55-61) 및 이식편대 숙주 질환의 피부 소견 (Okiyama et al., J Invest Dermatol . 2014, 134, 992-1000)은 JAK 활성화를 통해 신호 전달하는 소정의 시토킨 증가를 특징으로 한다. 따라서, 화합물 1 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 상기 시토킨에 의해 유도된 관련 피부 염증 또는 소양증을 완화시킬 수 있다.

기타 질환

화합물 1 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 또한 다른 질환 예컨대 다른 염증 질환, 자가면역 질환 또는 암 치료에 유용할 수 있다.

화합물 1 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 하나 이상의 관절염, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 이식 거부, 안구건조증, 건선 관절염, 당뇨병, 인슐린 의존성 당뇨병, 운동 신경세포 질환, 골수형성이상 증후군, 통증, 근감소증 (sarcopenia), 악액질 (cachexia), 패혈성 쇼크 (septic shock), 전신 홍반 루푸스, 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수구성 백혈병, 급성 림프모구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 강직 척추염, 골수섬유증, B-세포 림프종, 간세포 암종, 호지킨 (Hodgkins) 질환, 유방암, 다발 골수종, 흑색종, 비-호지킨 (non-Hodgkin) 림프종, 비-소세포 폐암, 난소 투명 세포 암종 (ovarian clear cell carcinoma), 난소 종양, 췌장 종양, 진성적혈구증가증 (polycythemia vera), 쇼그렌 증후군 (Sjoegrens syndrome), 연조직 육종 (soft tissue sarcoma), 육종, 지라비대 (splenomegaly), T-세포 림프종 및 중증성 지중해빈혈 (thalassemia major) 치료에 유용할 수 있다.

병용 요법

본 개시내용의 화합물 1 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 질환을 치료하기 위해 동일한 기전 또는 상이한 기전으로 작용하는 하나 이상의 활성제와 병용하여 사용될 수 있다. 상이한 활성제는 개별의 조성물 또는 동일한 조성물로 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 병용 요법에 유용한 활성제 부류로는 이에 한정되는 것은 아니지만, 베타 2 아드레날린 수용체 효능제, 무스카린 수용체 길항제, 글루코코르티코이드 효능제, G-단백질 커플링된 수용체-44 길항제, 류코트리엔 D4 길항제, 무스카린 M3 수용체 길항제, 히스타민 H1 수용체 길항제, 면역글로불린 E 길항제, PDE 4 저해제, IL-4 길항제, 무스카린 M1 수용체 길항제, 히스타민 수용체 길항제, IL-13 길항제, IL-5 길항제, 5-리폭시게나제 저해제, 베타 아드레날린 수용체 효능제, CCR3 케모킨 길항제, CFTR 자극제, 면역글로불린 조절제, 인터루킨 33 리간드 저해제, PDE 3 저해제, 포스포이노시티드-3 키나제 델타 저해제, 트롬복산 A2 길항제, 엘라스타제 저해제, Kit 티로신 키나제 저해제, 류코트리엔 E4 길항제, 류코트리엔 길항제, PGD2 길항제, TNF 알파 리간드 저해제, TNF 결합제, 보체 캐스케이드 (complement cascade) 저해제, 에오탁신 리간드 저해제, 글루타티온 레덕타제 저해제, 히스타민 H4 수용체 길항제, IL-6 길항제, IL2 유전자 자극제, 면역글로불린 감마 Fc 수용체 IIB 조절제, 인터페론 감마 리간드, 인터루킨 13 리간드 저해제, 인터루킨 17 리간드 저해제, L-Selectin 길항제, 백혈구 엘라스타제 저해제, 류코트리엔 C4 길항제, 류코트리엔 C4 신타제 저해제, 멤브레인 쿠퍼 아민 옥시다제 저해제 (membrane copper amine oxidase inhibitor), 메탈로프로테아제-12 저해제, 메탈로프로테아제-9 저해제, 진드기 알레르겐 조절제, 무스카린 수용체 조절제, 니코틴 아세틸콜린 수용체 효능제, 핵 인자 카파 B 저해제 (nuclear factor kappa B inhibitor), p-Selectin 길항제, PDE 5 저해제, PDGF 수용체 길항제, 포스포이노시티드-3 키나제 감마 저해제, TLR-7 효능제, TNF 길항제, Abl 티로신 키나제 저해제, 아세틸콜린 수용체 길항제, 산성 포유동물 키티나제 저해제 (acidic mammalian chitinase inhibitor), ACTH 수용체 효능제, 액틴 중합화 조절제 (actin polymerization modulator), 아데노신 A1 수용체 길항제, 아데닐레이트 시클라제 자극제, 아드레날린 수용체 길항제, 부신피질자극 호르몬 리간드, 알콜 데히드로게나제 5 저해제, 알파 1 항트립신 자극제, 알파 1 프로테나제 저해제, 안드로겐 수용체 조절제, 안지오텐신 전환 효소 2 자극제, ANP 효능제, Bcr 단백질 저해제, 베타 1 아드레날린 수용체 길항제, 베타 2 아드레날린 수용체 길항제, 베타 2 아드레날린 수용체 조절제, 베타 아밀로이드 조절제, BMP10 유전자 저해제, BMP15 유전자 저해제, 칼슘 채널 저해제, 카텝신 G 저해제, CCL26 유전자 저해제, CCR3 케모킨 조절제, CCR4 케모킨 길항제, 세포 부착 분자 저해제, 샤페로닌 (chaperonin) 자극제, 키티나제 저해제, 콜라겐 I 길항제, 보체 C3 저해제, CSF-1 길항제, CXCR2 케모킨 길항제, 시토킨 수용체 공통 베타 사슬 조절제, 세포독성 T-림프구 단백질-4 자극제, 데옥시리보뉴클레아제 I 자극제, 데옥시리보뉴클레아제 자극제, 디펩티딜 펩티다제 I 저해제, DNA 자이라제 (gyrase) 저해제, DP 프로스타노이드 수용체 조절제, E-Selectin 길항제, EGFR 패밀리 티로신 키나제 수용체 저해제, 엘라스틴 조절제, 엔도텔린 ET-A 길항제, 엔도텔린 ET-B 길항제, 에폭시드 히드롤라제 저해제, FGF3 수용체 길항제, Fyn 티로신 키나제 저해제, GATA 3 전사 인자 저해제, 글루코실세라미다제 조절제, 글루타메이트 수용체 조절제, GM-CSF 리간드 저해제, 구아닐레이트 시클라제 자극제, H+ K+ ATPase 저해제, 헤모글로빈 조절제, 헤파린 효능제, 히스톤 데아세틸라제 저해제, 히스톤 데아세틸라제-2 자극제, HMG CoA 레덕타제 저해제, I-카파 B 키나제 베타 저해제, ICAM1 유전자 저해제, IL-17 길항제, IL-17 수용체 조절제, IL-23 길항제, IL-4 수용체 조절제, 면역글로불린 G 조절제, 면역글로불린 G1 효능제, 면역글로불린 G1 조절제, 면역글로불린 엡실론 Fc 수용체 IA 길항제, 면역글로불린 감마 Fc 수용체 IIB 길항제, 면역글로불린 카파 조절제, 인슐린 감광제 (Insulin sensitizer), 인터페론 베타 리간드, 인터루킨 1 유사 수용체 길항제, 인터루킨 18 리간드 저해제, 인터루킨 수용체 17A 길항제, 인터루킨-1 베타 리간드 저해제, 인터루킨-5 리간드 저해제, 인터루킨-6 리간드 저해제, KCNA 전압-게이트 포타슘 채널-3 저해제 (KCNA voltage-gated potassium channel-3 inhibitor), Kit 리간드 저해제, 라미닌 (Laminin)-5 효능제, 류코트리엔 CysLT1 수용체 길항제, 류코트리엔 CysLT2 수용체 길항제, LOXL2 유전자 저해제, Lyn 티로신 키나제 저해제, MARCKS 단백질 저해제, MDR 결합 단백질 4 저해제, 메탈로프로테아제-2 조절제, 메탈로프로테아제-9 조절제, 미네랄로코르티코이드 수용체 길항제, 무스카린 M2 수용체 길항제, 무스카린 M4 수용체 길항제, 무스카린 M5 수용체 길항제, 나트륨이뇨 (Natriuretic) 펩티드 수용체 A 효능제, 자연 살해 세포 (Natural killer cell) 수용체 조절제, 니코틴 ACh 수용체 알파 7 서브유닛 자극제, NK 세포 수용체 조절제, 핵 인자 카파 B 조절제, 오피오이드 성장 인자 수용체 효능제, P-당단백질 저해제, P2X3 퓨린수용체 (purinoceptor) 길항제, p38 MAP 키나제 저해제, 펩티다제 1 조절제, 포스포리파제 A2 저해제, 포스포리파제 C 저해제, 플라스미노겐 활성인자 저해제 1 저해제, 혈소판 활성화 인자 수용체 길항제, PPAR 감마 효능제, 프로스타시클린 효능제, 단백질 티로신 키나제 저해제, SH2 도메인 이노시톨 포스파타제 1 자극제, 신호 전달 저해제, 나트륨 채널 저해제, STAT-3 조절제, 줄기세포 항원-1 저해제, 수퍼옥시드 디스뮤타제 (superoxide dismutase) 조절제, T 세포 표면 당단백질 CD28 저해제, T-세포 표면 당단백질 CD8 저해제, TGF 베타 효능제, TGF 베타 길항제, 트롬복산 신세타제 저해제, 흉선 기질 림포단백질 리간드 저해제 (thymic stromal lymphoprotein ligand inhibitor), 티모신 효능제, 티모신 베타 4 리간드, TLR-8 효능제, TLR-9 효능제, TLR9 유전자 자극제, 토포이소머라제 (Topoisomerase) IV 저해제, 트로포닌 I 급속 골격근 자극제 (Troponin I fast skeletal muscle stimulator), 트로포닌 T 급속 골격근 자극제, 타입 I IL-1 수용체 길항제, 타입 II TNF 수용체 조절제, 이온 채널 조절제, 유테로글로빈 (uteroglobin) 자극제 및 VIP 효능제를 포함한다.

본 JAK 저해제 화합물 1과 병용하여 사용될 수 있는 특정 활성제로는 이에 한정되는 것은 아니지만, 로십터 아세테이트 (rosiptor acetate), 우메클리디늄 브로미드 (umeclidinium bromide), 세쿠키누맙 (secukinumab), 메텐케팔린 아세테이트 (metenkefalin acetate), 트리데칵티드 아세테이트 (tridecactide acetate), 플루티카손 프로피오네이트 (fluticasone propionate), 알파-시클로덱스트린-안정화된 술포라판, 테제펠루맙 (tezepelumab), 모메타손 푸로에이트 (mometasone furoate), BI-1467335, 두필루맙 (dupilumab), 아클리디늄 (aclidinium), 포르모테롤 (formoterol), AZD-1419, HI-1640V, 리비판셀 (rivipansel), CMP-001, 만니톨, ANB-020, 오말리주맙 (omalizumab), 트레갈리주맙 (tregalizumab), 미티작스 (Mitizax), 벤랄라주맙 (benralizumab), 골리무맙 (golimumab), 로플루밀라스트 (roflumilast), 이마티닙 (imatinib), REGN-3500, 마시티닙 (masitinib), 아프레밀라스트 (apremilast), RPL-554, 악팀문 (Actimmune), 아달리무맙 (adalimumab), 루파타딘 (rupatadine), 파로그렐릴 (parogrelil), MK-1029, 베클로메타손 디프로피오네이트 (beclometasone dipropionate), 포르모테롤 푸마레이트 (formoterol fumarate), 모가물리주맙 (mogamulizumab), 세라트로다스트 (seratrodast), UCB-4144, 네미랄리십 (nemiralisib), CK-2127107, 페비피프란트 (fevipiprant), 다니릭신 (danirixin), 보센탄 (bosentan), 아바타셉트 (abatacept), EC-18, 두벨리십 (duvelisib), 도시파르스타트 (dociparstat), 시프로플록사신 (ciprofloxacin), 살부타몰 HFA (salbutamol HFA), 에르도스테인 (erdosteine), PrEP-001, 네도크로밀 (nedocromil), CDX-0158, 살부타몰 (salbutamol), 에노보사름 (enobosarm), R-TPR-022, 렌질루맙 (lenzilumab), 플루티카손 푸로에이트 (fluticasone furoate), 빌란테롤 트리페나테이트 (vilanterol trifenatate), 플루티카손 프로피오네이트 (fluticasone propionate), 살메테롤 (salmeterol), PT-007, PRS-060, 레메스템셀 (remestemcel)-L, 시트룰린 (citrulline), RPC-4046, 니트릭 옥시드 (nitric oxide), DS-102, 게릴림주맙 (gerilimzumab), 악테르 (Actair), 플루티카손 푸로에이트 (fluticasone furoate), 우메클리디늄 (umeclidinium), 빌란테롤 (vilanterol), AG-NPP709, 가무넥스 (Gamunex), 인플릭시맙 (infliximab), 암피온 (Ampion), 아큐마피모드 (acumapimod), 카나키누맙 (canakinumab), INS-1007, CYP-001, 시루쿠맙 (sirukumab), 플루티카손 프로피오네이트, 메폴리주맙 (mepolizumab), 피타바스타틴 (pitavastatin), 솔리트로마이신 (solithromycin), 에타네르셉트 (etanercept), 이바카프토 (ivacaftor), 아나킨라 (anakinra), MPC-300-IV, 글리코피로늄 브로미드 (glycopyrronium bromide), 아클리디늄 브로미드 (aclidinium bromide), FP-025, 리산키주맙 (risankizumab), 글리코피로늄 (glycopyrronium), 포르모테롤 푸마레이트 (formoterol fumarate), 아디포셀 (Adipocell), YPL-001, 티오트로피움 브로미드 (tiotropium bromide), 글리코피로늄 브로미드 (glycopyrronium bromide), 인다카테롤 말레에이트 (indacaterol maleate), 안데칼릭시맙 (andecaliximab), 올로다테롤 (olodaterol), 에소메프라졸 (esomeprazole), 집먼지 진드기 백신 (dust mite vaccine), 머그워트 폴렌 알레르겐 백신 (mugwort pollen allergen vaccine), 바모롤론 (vamorolone), 게파픽산트 (gefapixant), 레베페나신 (revefenacin), 게피티닙 (gefitinib), 레조인 (ReJoin), 티펠루카스트 (tipelukast), 베도라드린 (bedoradrine), SCM-CGH, SHP-652, RNS-60, 브로달루맙 (brodalumab), BIO-11006, 우메클리디늄 브로미드, 빌란테롤 트리페나테이트 (vilanterol trifenatate), 이프라트로피움 브로미드 (ipratropium bromide), 트랄로키누맙 (tralokinumab), PUR-1800, VX-561, VX-371, 올로파타딘 (olopatadine), 툴로부테롤 (tulobuterol), 포르모테롤 푸마레이트 (formoterol fumarate), 트리암시놀론 아세토니드 (triamcinolone acetonide), 레슬리주맙 (reslizumab), 살메테롤 크시나포에이트 (salmeterol xinafoate), 플루티카손 프로피오네이트 (fluticasone propionate), 베클로메타손 디프로피오네이트, 포르모테롤 푸마레이트, 티오트로피움 브로미드, 리겔리주맙, RUTI, 베르틸리무맙, 오말리주맙, 글리코피로늄 브로미드, SENS-111, 베클로메타손 디프로피오네이트, CHF-5992, LT-4001, 인다카테롤 (indacaterol), 글리코피로늄 브로미드, 모메타손 푸로에이트, 펙소페나딘 (fexofenadine), 글리코피로늄 브로미드, 아지트로마이신, AZD-7594, 포르모테롤, CHF-6001, 바테펜테롤, OATD-01, 올로다테롤, CJM-112, 로시글리타존 (rosiglitazone), 살메테롤 (salmeterol), 세티피프란트 (setipiprant), 흡입된 인터페론 베타, AZD-8871, 플레카나티드 (plecanatide), 플루티카손, 살메테롤, 에이코사펜타에노산 모노글리세리드, 레브리키주맙 (lebrikizumab), RG-6149, QBKPN, 모메타손, 인다카테롤 (indacaterol), AZD-9898, 소듐 피루베이트, 질루톤 (zileuton), CG-201, 이미다페나신 (imidafenacin), CNTO-6785, CLBS-03, 모메타손, RGN-137, 프로카테롤 (procaterol), 포르모테롤, CCI-15106, POL-6014, 인다카테롤 (indacaterol), 베클로메타손, MV-130, GC-1112, 알레르고바크 데포트 (Allergovac depot), MEDI-3506, QBW-251, ZPL-389, 우데나필 (udenafil), GSK-3772847, 레보세티리진 (levocetirizine), AXP-1275, ADC-3680, 티마피프란트 (timapiprant), 아베디테롤 (abediterol), AZD-7594, 이프라트로피움 브로미드 (ipratropium bromide), 살부타몰 술페이트 (salbutamol sulfate), 타데키니그 알파 (tadekinig alfa), ACT-774312, 도르나제 알파 (dornase alfa), 일로프로스트 (iloprost), 바테펜테롤, 플루티카손 푸로에이트, 알리카포르센 (alicaforsen), 시클레소니드 (ciclesonide), 에메라미드 (emeramide), 아르포르모테롤 (arformoterol), SB-010, 오자그렐 (Ozagrel), BTT-1023, 데크트레쿠맙 (Dectrekumab), 레발부테롤 (levalbuterol), 프란루카스트 (pranlukast), 히알루론산, GSK-2292767, 포르모테롤, NOV-14, 루시나크탄트, 살부타몰, 프레드니솔론, 에바스틴, 덱사메타손 시페실레이트, GSK-2586881, BI-443651, GSK-2256294, VR-179, VR-096, hdm-ASIT+, 부데소니드, GSK-2245035, VTX-1463, 에메다스틴 (Emedastine), 덱스프라미펙솔 (dexpramipexole), 레발부테롤 (levalbuterol), N-6022, 덱사메타손 소듐 포스페이트, PIN-201104, OPK-0018, TEV-48107, 수플라타스트 (suplatast), BI-1060469, 게밀루카스트 (Gemilukast), 인터페론 감마, 달라자티드 (dalazatide), 빌라스틴 (bilastine), 플루티카손 프로피오네이트, 살메테롤 크시나포에이트, RP-3128, 벤시클로퀴디움 브로미드 (bencycloquidium bromide), 레슬리주맙 (reslizumab), PBF-680, CRTH2 길항제, 프란루카스트 (Pranlukast), 살메테롤 크시나포에이트, 플루티카손 프로피오네이트, 티오트로피움 브로미드 모노히드레이트, 마실루카스트 (masilukast), RG-7990, 독소필린 (Doxofylline), 아베디테롤 (abediterol), 글리코피로늄 브로미드 (glycopyrronium bromide), TEV-46017, ASM-024, 플루티카손 프로피오네이트, 글리코피로늄 브로미드, 살메테롤 크시나포에이트, 살부타몰, TA-270, 플루니솔리드 (Flunisolide), 소듐 크로모글리케이트 (sodium chromoglycate), Epsi-gam, ZPL-521, 살부타몰, 아빕타딜 (aviptadil), TRN-157, 자피르루카스트 (Zafirlukast), 스템포셀 (Stempeucel), 페미롤라스트 소듐 (pemirolast sodium), 나돌롤 (Nadolol), 플루티카손 프로피오네이트 + 살메테롤 크시나포에이트, RV-1729, 살부타몰 술페이트, 카본 디옥시드 + 퍼플루오로옥틸 브로미드, APL-1, 데크트레쿠맙 (dectrekumab) + VAK-694, 리신 아세틸살리실레이트, 질루톤, TR-4, 인간 알로겐 아디포스-유래 간엽 전구 세포 요법 (human allogenic adipose-derived mesenchymal progenitor cell therapy), MEDI-9314, PL-3994, HMP-301, TD-5471, NKTT-120, 페미롤라스트 (pemirolast), 베클로메타손 디프로피오네이트, 트란틴테롤 (trantinterol), 모노소듐 알파 루미놀, IMD-1041, AM-211, TBS-5, ARRY-502, 세라트로다스트 (seratrodast), 레콤비난트 미디스마제 (recombinant midismase), ASM-8, 데플라자코르트 (deflazacort), 밤부테롤 (bambuterol), RBx-10017609, 이프라트로피움 (ipratropium) + 페노테롤 (fenoterol), 플루티카손 + 포르모테롤, 에피나스틴 (epinastine), WIN-901X, VALERGEN-DS, 올리고G-COPD-5/20, 툴로부테롤 (tulobuterol), 옥시스 투르부할러 (oxis Turbuhaler), DSP-3025, ASM-024, 미졸라스틴 (mizolastine), 부데소니드 (budesonide) + 살메테롤, LH-011, AXP-E, 히스타민 인간 면역글로불린, YHD-001, 테오필린 (theophylline), 암브록솔 (ambroxol) + 에르도스테인 (erdosteine), 라마트로반 (ramatroban), 몬텔루카스트 (montelukast), 프란루카스트 (pranlukast), AG-1321001, 툴로부테롤 (tulobuterol), 이프라트로피움 (ipratropium) + 살부타몰, 트라닐라스트 (tranilast), 메틸프레드니솔론 술렙타네이트 (methylprednisolone suleptanate), 콜포르신 다로페이트 (colforsin daropate), 레피리나스트 (repirinast) 및 독소필린 (doxofylline)을 포함한다.

또한 본원에서 화합물 1 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 하나 이상의 다른 치료제를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다. 상기 치료제는 상기 명시된 활성제 부류 및 상기 기재된 특정 활성제 목록으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 폐로의 전달에 적절하다. 일부 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 흡입 또는 네뷸라이저 투여에 적절하다. 일부 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 건조 분말 또는 액체 조성물이다.

또한, 방법 양상에서, 본 발명은 화합물 1 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 하나 이상의 다른 치료제를 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.

병용 요법으로 사용할 때, 상기 활성제는 단일의 약학적 조성물로 제제화될 수 있거나, 또는 상기 활성제는 동시에 또는 개별 시점에서 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로로 투여되는 개별 조성물로 제공될 수 있다. 이러한 조성물은 개별로 포장될 수 있거나 또는 키트로서 함께 포장될 수 있다. 상기 키트 내에 2 이상의 치료제를 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로로 투여할 수 있다.

본 발명의 화합물은 하기 실시예에 기재된 바와 같이, 효소 결합 분석에서 JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2 효소의 강력한 저해제이고, 세포 분석에서 세포독성이 없는 강력한 기능적 활성을 가지며, 전임상 모델에서 JAK 저해의 약력학적 효과를 발휘하는 것으로 나타났다.

실시예

하기 합성 및 생물학적 실시예는 본 발명을 예시하기 위해 제공되며, 어느 방식으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되지 않는다. 하기 실시예에서, 다음의 약어들은 달리 지시하지 않는 한 하기 의미를 갖는다. 하기에 정의되지 않은 약어는 그의 일반적으로 허용되는 의미를 갖는다.

ACN = 아세토니트릴

DCC = 디시클로헥실카르보디이미드

DIPEA = N,N-디이소프로필에틸아민

DMF = N,N-디메틸포름아미드

EtOAc = 에틸 아세테이트

HATU = N,N,N ',N'-테트라메틸-O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트

LDA = 리튬 디이소프로필아미드

min = 분

MTBE = 메틸 tert-부틸 에테르

NBS = N-브로모숙신이미드

RT = 실온

THF = 테트라히드로푸란

비스(피나콜레이토)디보론 = 4,4,5,5,4',4',5',5'-옥타메틸-[2,2']비[[1,3,2]디옥사보롤라닐]

Pd(dppf)Cl₂-CH₂Cl₂ = 디클로로메탄과 디클로로(1,1'-비스(디페닐포스피노)-페로센)-디팔라듐(II) 복합체

시약 및 용매는 상업적 공급처 (Aldrich, Fluka, Sigma 등)로부터 구입하고, 추가의 정제 없이 사용하였다. 반응 혼합물의 진행은 박막 크로마토그래피 (thin layer chromatography: TLC), 분석용 고성능 액체 크로마토그래피 (analytical high performance liquid chromatography: anal. HPLC) 및 질량 분광분석계로 모니터하였다. 반응 혼합물은 각 반응에서 구체적으로 기재된 바와 같이 구축되었다; 통상 상기 반응 혼합물은 추출 및 다른 정제 방법, 예컨대 온도- 및 용매-의존성 결정화, 및 침전에 의해 정제되었다. 더욱이, 반응 혼합물은, 전형적으로 C18 또는 BDS 컬럼 팩킹 (column packings) 및 기존의 용출액을 이용하여, 컬럼 크로마토그래피 또는 분취용 HPLC (preparative HPLC)에 의해 통상적으로 정제되었다. 전형적인 분취용 HPLC는 하기에 기재되어 있다.

반응 산물의 특성 규명은 질량 및 ¹H-NMR 분광법에 의해 통상적으로 수행되었다. NMR 분석을 위해, 시료를 중수소화 용매 (예컨대 CD₃OD, CDCl₃ 또는 d ₆ -DMSO)에 용해시키고, ¹H-NMR 스펙트럼은 표준 관찰 조건하에 Varian Gemini 2000 기기 (400 MHz)로 수득하였다. 화합물의 질량 분광분석적 확인은, 자동정제 시스템 (autopurification systems)과 결합된, Applied Biosystems (Foster City, CA) 모델 API 150 EX 기기 또는 Waters (Milford, MA) 3100 기기로 전기분무 이온화 방법 (electrospray ionization method: ESMS)에 의해 수행되었다.

분취용 HPLC 조건

컬럼: C18, 5 μm 21.2 x 150 mm 또는 C18, 5 μm 21 x 250 또는 C14, 5 μm 21 x 150 mm

컬럼 온도: 실온

유속: 20.0 mL/min

이동상: A = 물 + 0.05 % TFA

B = ACN + 0.05 % TFA,

주입 부피: (100-1500 μL)

검출기 파장: 214 nm

조질 (crude)의 화합물을 1:1의 물:아세트산 중에 약 50 mg/mL로 용해시켰다. 4분 분석용 스케일 테스트 실행 (analytical scale test run)을 2.1 x 50 mm C18 컬럼을 사용하여 수행하고, 그 다음에 15 또는 20분 분취용 스케일 실행 (preparative scale run)은 분석용 스케일 테스트 실행의 % B 보유 (retention)에 기반한 구배로 100μL 주입을 사용하여 수행하였다. 정확한 구배는 시료 의존성이다. 근접한 실행 불순물을 갖는 시료는 최선의 분리를 위해 21 x 250 mm C18 컬럼 및/또는 21 x 150 mm C14 컬럼으로 확인하였다. 원하는 산물을 포함하는 분획물은 질량 분광 분석으로 확인하였다.

분석용 HPLC 조건

방법 A

컬럼: Agilent Zorbax Bonus-RP C18, 150 x 4.60 nm, 3.5　마이크론

컬럼 온도: 40℃

유속: 1.5 mL/분

주입 부피: 5 μL

시료 제조: 1:1의 ACN:1 M HCl 중에 용해

이동상: A = 물:TFA (99.95:0.05)

B = ACN:TFA (99.95:0.05)

검출기 파장: 254 nm 및 214 nm

구배: 26분 전체 (시간 (분)/ % B): 0/5, 18/90, 22/90, 22.5/90, 26/5

방법 B

컬럼: Agilent Poroshell 120 Bonus-RP, 4.6 x 150 mm, 2.7 μm

컬럼 온도: 30℃

유속: 1.5 mL/분

주입 부피: 10 μL

이동상: A = ACN:물:TFA (2:98:0.1)

B = ACN:물:TFA (90:10:0.1)

시료 제조: 이동상 B 중에 용해

검출기 파장: 254 nm 및 214 nm

구배: 60분 전체 (시간 (분)/ % B): 0/0, 50/100, 55/100, 55.1/0, 60/0

제조예 1: 1 - 벤질 -4-이미노-1,4- 디히드로피리딘 -3- 아민

피리딘-3,4-디아민 (445 g, 4.078 mol) 및 ACN (11.0 L)의 혼합물을 25 ℃에서 15 ℃로 80분 동안 교반하였다. 벤질 브로미드 (485 mL, 4.078　mol)를 20분에 걸쳐 첨가하고, 반응 혼합물을 20 ℃에서 밤새 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 10 ℃로 냉각하고, 여과하였다. 반응기에 ACN (3 L)을 부가하고, 이를 10 ℃로 냉각하였다. 케이크를 반응기 린스로 세척하고, 25 ℃로 가온된 ACN (3 L)으로 다시 세척하였다. 고형물을 필터에서 질소하에 24시간 동안, 진공하에 55 ℃에서 2시간 동안, 그 다음에 RT에서 밤새 및 4일 동안 건조하여 표제 화합물의 HBr 염 (1102.2 g, 3.934 mol, 96 % 수율)을 제공하였다. HPLC 방법 A 체류 시간 4.12분.

제조예 2: 5 - 벤질 -2-(6- 브로모 -1 H - 인다졸 -3-일)-5 H - 이미다조[4,5-c]피리딘

(a) 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-5H-이미다조[4,5-c]피리딘

6-브로모-1H-인다졸-3-카르브알데히드 (550 g, 2.444 mol), 1-벤질-4-이미노-1,4-디히드로피리딘-3-아민 HBr (721 g, 2.333 mol) 및 DMAc (2.65 L)의 용액을 60분 동안 교반하고, 소듐 비술파이트 (257 g, 2.468 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 135 ℃로 가열하고, 3시간 동안 유지하고, 20 ℃로 냉각시키고, 20 ℃에서 밤새 유지하였다. 아세토니트릴 (8 L)을 첨가하고, 반응 혼합물을 15 ℃에서 4시간 동안 교반하였다. 슬러리를 가압 필터에서 중간 여과 속도로 여과하였다. 상기 반응기에 ACN (1 L)을 부가하였다. 케이크를 ACN 반응기 워시액으로 세척하고, 질소하에 밤새, 그 다음에 50 ℃의 진공하에 24시간 동안 건조하여 표제 화합물의 HBr 염 (1264 g, 2.444　mol, 100 % 수율, 94 % 순도)을 고밀도 (dense) 습윤 베이지/갈색 고형물로 제공하였다. HPLC 방법 A 체류 시간 8.77분.

이전 단계의 산물 (1264 g, 2.444 mol), MeTHF (6 L) 및 물 (2.75 L)의 혼합물을 65 ℃로 가열하고, 소듐 히드록시드 50 wt % (254 g, 3.177 mol)를 5분에 걸쳐서 첨가하고, 반응 혼합물을 65 ℃에서 1시간 동안 교반하고, RT 그 다음에 5 ℃로 냉각하고, 2시간 동안 유지하였다. 슬러리를 여과하고, 반응기 및 케이크를 MeTHF (1 L)로 세척하였다. 결과의 베이지 황색 고형물을 필터에서 질소하에 3일 동안 건조하여 표제의 화합물 (475 g, 1.175 mmol, 48 % 수율)을 베이지/황색 고형물로 제공하였다. 모액 (약 8 L)을 약 2 L로 농축하고, 그러면 고형물이 부서지기 시작했다. 슬러리를 50 ℃로 가열하고, 2시간 동안 유지하고, 5 ℃로 2시간에 걸쳐서 냉각하고, 밤새 교반하고, 여과하였다. 케이크를 MeTHF (100　mL)로 세척하고, 40 ℃에서 진공하에 밤새 건조하여 추가의 표제 화합물 (140 g, 0.346 mol, 14 % 수율)을 제공하였다.

동일한 스케일의 제2 배치의 산물 (1500 g, 3.710 mol) 및 MeTHF (4 L)와 조합된 이전 단계의 전체 산물의 혼합물을 20 ℃에서 2시간 동안 교반하고, 여과하였다. 반응기 및 케이크를 MeTHF (1.5 L)로 세척하였다. 결과의 베이지 황색 고형물을 질소하에 3일 동안 건조하여 표제의 화합물을 베이지 황색 고형물 (1325 g, 3.184　mol, 86 % 수율 (전체 68 % 수율), 97　% 순도)로 제공하였다. HPLC 방법 A 체류 시간 8.77분

제조예 3: 5 - 벤질 -2-(6- 브로모 -1 H - 인다졸 -3-일)-4,5,6,7- 테트라히드로 -1H-이미다조[4,5-c]피리딘

15 L 플라스크에 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-5H-이미다조[4,5-c]피리딘 (440 g, 1.088 mol) 그 다음에 MeTHF (4.5 L), 메탄올 (2.25　L) 및 물 (1.125　L)을 부가하였다. 슬러리를 20 ℃로 냉각하고, 1시간 동안 교반하고, NaBH₄ (247 g, 6.530　mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 ℃에서 18시간 동안 교반하였다. 물　(1.125　L) 그 다음에 20 wt %. 소듐 클로리드 용액 (1.125 L)을 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하고, 층을 분리시켰다. 수성층을 따라낸다. NaOH (522　g) 및 물 (5 L)의 사전혼합된 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 60분 동안 교반하고; 층을 분리시키고, 수성층을 따라낸다. 동일한 스케일의 2개의 추가의 배치를 제조하였다.

하나의 배치로부터의 유기층을 재킷 온도 50 ℃, 내부 온도 20 ℃로 설정한 15　L 재킷 반응기에서 감압하에 농축하였다. 추가의 배치를 상기 반응기에 부가하고, 한번에 농축하여 약 6 L 부피의 슬러리를 수득하였다. 슬러리를 50 ℃로 가열하고, IPAc (6 L)를 첨가하고, 혼합물을 60　℃에서 1.5시간 동안 유지하고, 10시간 동안 20 ℃로 냉각하고, 50시간 동안 60 ℃로 가열하고, 5시간 내에 20 ℃로 냉각하고, 그 다음에 5 ℃로 냉각하고 3시간 동안 유지하였다. 혼합물을 여과하고, 반응기 및 케이크를 5 ℃로 사전냉각된 IPAc (1 L) 및 MeTHF (1　L)의 사전혼합된 용액으로 세척하였다. 고형물을 40 ℃에서 질소 하에 3일 동안 필터 상에서 건조하여 표제의 화합물 (1059 g, 2.589　mol, 79 % 수율)을 황백색 고형물로 제공하였다. 상기 물질을 50-60 ℃의 진공 오븐에서 8시간 동안 27 ℃에서 2일 동안 건조하여 표제의 화합물 (1043 g, 2.526 mol, 77 % 수율, 99 % 순도)을 제공하였다. HPLC 방법 A 체류 시간 6.73분.

제조예 4: (4-( 벤질옥시 )-2-에틸-5- 플루오로페닐 ) 트리플루오로보레이트 , 포타슘

(a) 2-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란

1-(벤질옥시)-4-브로모-5-에틸-2-플루오로벤젠 (520 g, 1682　mmol) 및 디옥산 (5193　mL)의 혼합물을 질소로 퍼지하고, 그 다음에 비스(피나콜레이토)디보론 (641 g, 2523　mmol) 그 다음에 포타슘 아세테이트 (495 g, 5046 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 퍼지하고; Pd(dppf)Cl₂ (41.2 g, 50.5 mmol)를 첨가하고; 반응 혼합물을 질소로 퍼지하고, 질소하에 103 ℃에서 5시간 동안 가열하고; RT로 냉각하였다. 반응 혼합물을 진공 증류로 농축하고, 에틸 아세테이트 (5204　mL)와 물 (5212　mL) 사이에서 분배하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 (Celite)를 통해 여과하고; 유기층을 브라인 (2606 mL)으로 세척하고, 진공 증류로 용매를 제거하여 조질의 산물을 진한 검정색 오일 (~800 g)로 제공하였다.

조질의 산물을 DCM (1289 mL)에 용해시키고, 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 사전슬러리된 실리카 2627 g, 헥산 중 20 % 에틸 아세테이트 (10.35 L)로 용출)로 정제하였다. 용매를 진공 증류로 제거하여 밝은 황색 오일 (600 g)을 수득하였다. HPLC 방법 B 체류 시간 33.74분.

(b) (4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)트리플루오로보레이트, 포타슘

이전 단계의 산물 (200 g, 561 mmol)을 아세톤 (1011 mL)과 완전히 용해될 때까지 혼합하고, 메탄올 (999 mL) 그 다음에 물 (1310 mL)에 용해된 3　M　포타슘 히드로겐 디플루오리드 (307 g, 3930 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3.5시간 동안 교반하였다. 대부분의 유기 용매를 진공 증류로 제거하였다. 물 (759 mL)을 첨가하고, 결과의 진한 슬러리를 30분 동안 교반하고, 여과하였다. 케이크를 물 (506　mL)로 세척하고, 고형물을 필터에서 30분 동안 건조하였다. 고형물을 아세톤 (1237 mL)에 슬러리화하고, 1시간 동안 교반하였다. 결과의 슬러리를 여과하고, 고형물을 아세톤 (247 mL)으로 세척하였다. 아세톤 용액을 진공 증류로 농축하고, 모든 아세톤과 물이 증류될 때까지 톨루엔 (2983 mL)을 천천히 첨가하여 일정 부피 (2　L)를 유지하였다. 톨루엔 용액을 회전 증발로 진한 황색 슬러리로 증류시키고, 이때 산물은 백색 고형물로 침전되었다. 톨루엔의 추가 부분 (477 mL)을 상기 혼합물에 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 그 다음에 혼합물을 여과하고, 톨루엔 (179 mL)으로 헹구고, 50 ℃에서 진공하에 24시간 동안 건조하여 표제의 화합물 (104 g, 310 mmol, 55 % 수율)을 자유-유동 (free-flowing)의 플러피형 (fluffy) 약간 황백색 고형물로 제공하였다. HPLC 방법 B 체류 시간 27.71분.

제조예 5: 5 - 벤질 -2-(6-(4-( 벤질옥시 )-2-에틸-5- 플루오로페닐 )-1 H - 인다졸 -3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘

(a) 5-벤질-2-(6-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘

비스(피나콜레이토)디보론 (250 g, 984 mmol) 및 IPA (1.88 L)의 혼합물을 교반하여 용해시키고, 그 다음에 물 (2.31 L) 중 포타슘 히드로겐 디플루오리드 (538 g, 6.891　mol)의 용액을 10분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 여과하였다. 겔형 (gel-like) 고형물을 물 (1.33 L)로, 상기 혼합물이 맑은 히드로겔을 형성할 때까지, 그 다음에 또 다른 45분 동안 슬러리화하였다. 결과의 고형물/겔을 여과하고, 그 다음에 아세톤 (1.08 L)에 재슬러리화하고, 여과하고, 필터에서 30분 동안 공기 건조시키고, 밤새 건조하여 플러피형 백색 고형물 (196.7 g)을 제공하였다.

5 L 플라스크에 5-벤질-2-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘 (135 g, 331 mmol), (4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-트리플루오로보레이트, 포타슘 (133 g, 397 mmol) 및 이전 단계의 백색 고체 산물 (40.5 g) 그 다음에 MeTHF (1.23 L) 및 MeOH (1.75 L)를 부가하였다. 결과의 슬러리를 질소로 3회 탈기시켰다. 상기 슬러리에 물 (1.35 L) 중 세슘 카르보네이트 (431　g, 1.323 mol)의 탈기된 용액을 첨가하였다. 상기 슬러리를 2회 탈기하고, Pd (amphos)₂Cl₂ (11.71 g, 16.53 mmol)를 첨가하고, 상기 슬러리를 다시 2회 탈기하고, 반응 혼합물을 67 ℃에서 밤새 교반하고, 20 ℃로 냉각하였다. 층을 분리시키고, MeTHF (550　mL)로 역 추출하였다. 유기층을 조합하고, 회전 증발에 의해 고형물이 침전될 때까지 농축하였다. MeTHF (700 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 65　℃에서 교반하였다. 층을 분리하고, 수성상을 MeTHF (135 mL)로 역추출하였다. 유기상을 조합하고, 약 300 mL로 농축하여 진한 오렌지색 슬러리를 수득하였다. 상기 슬러리에 MeOH (270 mL)를 첨가하고, 그 다음에 20 ℃에서 빠르게 교반하면서 1M HCl (1.325 L)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반하고, 물 (1 L)을 첨가하고, 결과의 슬러리를 1시간 동안 교반하였다. 고형물을 여과하고, 물 (150 mL)로 세척하고, 필터에서 10분 동안 건조 그리고 45 ℃에서 질소하에 16시간 동안 건조하여 표제 화합물의 2 HCl 염 (221.1 g, 351 mmol, 92.2 % 순도)을 밝은 황색 고형물로 제공하였다. HPLC 방법 B 체류 시간 23.41분.

제조예 6: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(4,5,6,7- 테트라히드로 -1 H - 이미다조[4,5-c]피리딘 -2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀

1 L 플라스크에 에탄올 (348 mL) 중 슬러리로 5-벤질-2-(6-(4-(벤질옥시)-2-에틸-5-플루오로페닐)-1H-인다졸-3-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘, 2 HCl (40 g, 63.4 mmol) 및 MeOH 중 1.25 M HCl (101 mL) 및 물 (17.14　mL)을 부가하였다. 반응 혼합물을 질소로 5분 동안 탈기하고, 10　wt% Pd/C, 50 wt% H₂O (4.05 g, 1.903　mmol)를 첨가하였다. 반응기를 밀봉하고, H₂로 퍼지하고, 1-2 psi로 압축하고, 50 ℃로 가온하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 반응기 및 필터를 메탄올 (100 mL)로 세척하였다.

여과된 용액을 98　mmol 스케일로 제2 배치의 산물과 배합하고, 390 g으로 농축하였다. EtOAc (2.04 L)를 교반하면서 천천히 첨가하고, 그 다음에 용액을 5 ℃로 교반하면서 냉각하였다. 고형물을 여과하고, EtOAc (510 mL)로 세척하고, 질소하에 45 ℃에서 밤새 건조하여 표제 화합물의 2 HCl 염 (58 g, 80　% 수율)을 황백색 고형물로 제공하였다. HPLC 방법 B 체류 시간 12.83분.

실시예 1: 5 -에틸-2- 플루오로 -4-(3-(5-(1- 메틸피페리딘 -4-일)-4,5,6,7- 테트 라히드로-1 H -이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1 H -인다졸-6-일)페놀의 결정성 수화물

3 L 플라스크에 NMP (239 mL) 및 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀, 2 HCl (74.5 g, 165　mmol)을 교반하면서 첨가하고 그 다음에 NMP (74 mL)를 첨가하였다. 아세트산 (31.3 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 55 ℃로 10분 동안 가온하고, 그 다음에 25 ℃로 냉각하였다. 1-메틸피페리딘-4-온 (61.0 mL, 496　mmol)을 한 번에 첨가하고, 반응 혼합물을 25 ℃에서 30분 동안 교반하고, 15 ℃로 냉각하였다. 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (98 g, 463 mmol)를 첨가하고, 외부 재킷을 5분 후에 20　℃로 설정하였다. 3시간 후에, 암모늄 히드록시드 (365 mL, 5790　mmol)를, 온도를 25 ℃ 이하로 유지하면서 45분에 걸쳐서 적가하였다. 반응 혼합물을 20 ℃에서 1.5시간 동안 교반하여, 황백색 슬러리를 형성하였다. 메탄올 (709 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 55 ℃에서 밤새 천천히 교반하였다. 물 (1.19 L)을 55 ℃에서 30분에 걸쳐 첨가하고, 혼합물을 10 ℃로 냉각하고, 2시간 동안 교반하고, 여과하였다. 케이크를 1:1의 MeOH:물 (334 mL)로 세척하고, 필터에서 20분 동안 건조 그리고 45　℃에서 질소 블리드 (nitrogen bleed)로 진공하에 건조하여 황색 고형물 (87 g)을 제공하였다.

상기 고형물에 55 ℃에서 5 % 물/아세톤 (1.5 L)을 천천히 교반하면서 첨가하고, 반응 혼합물을 55 ℃에서 6시간 동안 가열하고, 10 ℃로 냉각하고, 여과하고, 5 % 물/아세톤 (450 mL)으로 세척하였다. 고형물을 50 ℃에서 질소 블리드로 진공하에 밤새 건조하고, 공기 중에서 20시간 동안 평형화하고 (equilibrated), 진공 오븐에서 48시간 동안 건조하고, 공기로 평형화하여 표제의 화합물 (71.3 g, 91 % 수율)을 자유 유동의 연한 황색 고형물로 제공하였다. HPLC 방법 B 체류 시간 12.29분.

실시예 2: 분말 X-선 회절

실시예 1의 산물의 분말 X-선 회절 (PXRD) 패턴은, 출력 전압 45 kV 및 전류 40 mA로 Cu-Kα 방사선 (λ = 1.54051 Å)을 사용하는 Bruker D8-Advance X-선 회절계에 의해 수득되었다. 상기 기기는 입사각, 발산각 및 산란 슬릿을 상기 시료에서 세기를 최대화하도록 설정된 Bragg-Brentano 기하학으로 작동되었다. 측정을 위해, 소량의 분말 (5-25 mg)을 시료 홀더 상에서 부드럽게 눌러 매끄러운 표면을 만들고, X-선에 노출시켰다. 상기 시료를, 0.02°의 스텝 크기 (step size) 및 스텝 당 0.30°초의 스캔 속도로, 2θ로 2°에서 40°까지 2θ-2θ 모드로 스캔하였다. 데이터 수집은 Bruker DiffracSuite 측정 소프트웨어로 제어되고, Jade 소프트웨어 (버전 7.5.1)로 분석되었다. 상기 기기는 corundum 표준으로 ±0.02° 2θ 각내에서, 검정되었다. 관찰된 PXRD 2θ 피크 위치 및 d-간격 (spacings)은 표 1에 기재되어 있다.

생물학적 분석

5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (화합물 1)은 하기 생물학적 분석으로 특성이 규명되었다.

분석법 1: 생화학적 JAK 키나제 분석

4개의 LanthaScreen JAK 생화학적 분석 (JAK1, 2, 3 및 Tyk2)의 패널을 통상의 키나제 반응 버퍼 (50 mM HEPES, pH 7.5, 0.01% Brij-35, 10 mM MgCl₂ 및 1 mM EGTA)에서 수행하였다. 재조합 GST-태그된 JAK 효소 및 GFP-태그된 STAT1 펩티드 기질은 Life Technologies로부터 입수하였다.

일련의 희석된 화합물을 4개의 JAK 효소 각각 및 기질과 화이트 384-웰 마이크로플레이트 (Corning)에서 주위 온도로 1시간 동안 사전-인큐베이션하였다. 그 다음에 ATP를 부가하여, 1% DMSO와 10 μL의 총 부피로 키나제 반응을 개시하였다. JAK1, 2, 3 및 Tyk2에 대한 최종 효소 농도는 각각 4.2 nM, 0.1 nM, 1 nM 및 0.25 nM이고; 사용된 해당하는 Km ATP 농도는 25 μM, 3 μM, 1.6 μM 및 10 μM이며; 상기 기질 농도는 4개의 분석 모두에 대해서 200 nM이었다. 키나제 반응을 1시간 동안 주위 온도에서 진행시키고, 그 후에 TR-FRET 희석 버퍼 (Life Technologies) 중 EDTA (10mM 최종 농도) 및 Tb-항-pSTAT1 (pTyr701) 항체 (Life Technologies, 2 nM 최종 농도)의 10 μL 제제를 첨가하였다. 상기 플레이트를 주위 온도에서 1시간 동안 인큐베이션하고, EnVision 리더 (Perkin Elmer)에서 판독하였다. 방출 비율 신호 (520nm/495nm)를 기록하고, 이를 사용하여 DMSO 및 배경 대조군에 기반한 저해 퍼센트 값을 산출하였다.

용량-반응 분석 (dose-response analysis)을 위해, 저해 퍼센트 데이터를 화합물 농도에 대해 플로팅하고, IC₅₀ 값은 Prism 소프트웨어 (GraphPad Software)를 구비한 4-parameter robust fit 모델로부터 결정하였다. 결과는 pIC₅₀ (IC₅₀의 음의 로그)으로 나타내고, 후속하여 Cheng-Prusoff 식을 사용하여 pK_i (해리 상수 Ki의 음의 로그)로 변환시켰다.

본 발명의 화합물은 하기 효소 효능을 나타내었다.

분석법 2: 세포 JAK 효능 분석: IL-13의 저해

AlphaScreen JAKI 세포 효능 분석은 BEAS-2B 인간 폐 상피 세포 (ATCC)에서 인터루킨-13 (IL-13, R&D Systems) 유도 STAT6 인산화를 측정하여 수행하였다. 항-STAT6 항체 (Cell Signaling Technologies)를 AlphaScreen 수용체 비드 (acceptor beads) (Perkin Elmer)에 접합시키고, 항-pSTAT6 (pTyr641) 항체 (Cell Signaling Technologies)는 EZ-Link 술포-NHS-비오틴 (Thermo Scientific)을 사용하여 비오티닐화하였다.

BEAS-2B 세포를 37℃에서 5% CO₂ 습윤 인큐베이터에서, 10% FBS (Hyclone), 100 U/mL 페니실린, 100 μg/mL 스트렙토마이신 (Life Technologies) 및 2 mM GlutaMAX (Life Technologies)가 보충된 50% DMEM/50% F-12 배지 (Life Technologies)에서 성장시켰다. 분석 1 일차에, 세포를 25μL 배지를 갖는 화이트 폴리-D-리신-코팅된 384-웰 플레이트 (Corning)에 7,500 세포/웰의 밀도로 시딩하고, 상기 인큐베이터에서 밤새 부착시켰다. 분석 2 일차에, 상기 배지를 제거하고, 시험 화합물의 용량-반응을 포함하는 12 μL의 분석 버퍼 (Hank's Balanced Salt Solution/HBSS, 25mM HEPES 및 1 mg/ml 우혈청 알부민/BSA)로 교체하였다. 화합물을 DMSO에서 연속하여 희석하고, 그 다음에 배지에서 1000배 더 희석시켜서, 최종 DMSO 농도를 0.1%로 하였다. 세포를 시험 화합물과 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 그 후 12μl의 사전-가온된 IL-13 (분석 버퍼 중 80 ng/mL)을 자극을 위해 첨가하였다. 37℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후에, 상기 분석 버퍼 (화합물 및 IL-13을 함유함)를 제거하고, 10μL의 세포 용해 버퍼 (25 mM HEPES, 0.1% SDS, 1% NP-40, 5 mM MgCl₂, 1.3 mM EDTA, 1 mM EGTA 및 Roche Diagnostics제 Complete Ultra mini 프로테아제 저해제 및 PhosSTOP 보충제). 상기 플레이트를 주위 온도에서 30분 동안 진탕시키고, 그 다음에 검출 시약을 첨가하였다. 비오틴-항-pSTAT6 및 항-STAT6 접합된 수용체 비드의 혼합물을 먼저 첨가하고, 주위 온도에서 2시간 동안 인큐베이션하고, 그 다음에 스트렙타비딘 (streptavidin) 접합된 공여체 비드 (Perkin Elmer)를 첨가하였다. 최소 2시간 인큐베이션 후에, 상기 분석 플레이트를 EnVision 플레이트 리더에서 판독하였다. AlphaScreen 발광 (luminescence) 신호를 기록하고, 이를 사용하여 DMSO 및 배경 대조군에 기반하여 저해 퍼센트 값을 산출하였다.

용량-반응 분석을 위해, 저해 퍼센트 데이터를 화합물 농도에 대해 플로팅하고, IC₅₀ 값은 Prism 소프트웨어를 구비한 4-parameter robust fit 모델로부터 결정하였다. 결과는 또한 IC₅₀ 값의 음의 로그값인, pIC₅₀으로 나타낼 수 있다. 본 발명의 화합물은 본 분석에서 pIC₅₀ 값이 8.2를 나타내었다.

분석법 3: 세포 JAK 효능 분석: 인간 PBMC에서 IL-2/항-CD3 자극된 IFNγ의 저해

인터루킨-2 (IL-2)/항-CD3 자극된 인터페론 감마 (IFNγ) 저해에 대한 시험 화합물의 효능은 인간 전혈 (Stanford Blood Center)로부터 단리된 인간 말초혈 단핵 세포 (PBMC)에서 측정하였다. IL-2는 JAK를 통해 신호를 전달하기 때문에, 본 분석은 JAK 세포 효능의 측정을 제공한다.

(1) 인간 말초혈 단핵 세포 (PBMC)는 ficoll 구배를 사용하여 건강한 공여자의 인간 전혈로부터 단리되었다. 37 ℃, 5 % CO₂ 습윤된 인큐베이터에서 10 % 열 불활성화된 우태아 혈청 (FBS, Life Technologies), 2 mM Glutamax (Life Technologies), 25 mM HEPES (Life Technologies) 및 1X Pen/Strep (Life Technologies)이 보충된 RPMI (Life Technologies)에서 세포를 배양하였다. 세포를 배지 (50 μL) 중에 200,000 세포/웰로 시딩하고, 1시간 동안 배양하였다. 화합물을 DMSO에서 연속하여 희석하고, 그 다음에 배지 중에서 500-배 (2x 최종 분석 농도까지)로 더 희석하였다. 시험 화합물 (100　μL/웰)을 세포에 첨가하고, 37 ℃, 5 % CO₂에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 그 다음에 24시간 동안 사전-가온된 분석 배지 (50　μL) 중에 IL-2 (R&D Systems; 최종 농도 100 ng/mL) 및 항-CD3 (BD Biosciences; 최종 농도 1 μg/mL)을 첨가하였다.

(2) 시토킨 자극 후에, 세포를 500 g으로 5분 동안 원심분리하고, 상등액을 꺼내고, -80 ℃로 동결시켰다. IL-2/항-CD3에 반응하는 시험 화합물의 저해 효능을 결정하기 위해, 상등액 IFNγ 농도를 ELISA (R&D Systems)를 통해 측정하였다. IC₅₀ 값은 IFNγ 농도 대 화합물 농도의 저해 곡선 분석으로부터 결정하였다. 데이터는 pIC₅₀ (음의 십의 로그 IC₅₀) 값으로 나타내었다. 본 발명의 화합물은 본 분석에서 pIC₅₀ 값이 약 7.3을 나타내었다.

분석법 4: 세포 JAK 효능 분석: CD4+ T 세포에서 IL-2 자극된 pSTAT5의 저해

인터루킨-2 (IL-2)/항-CD3 자극된 STAT5 인산화 저해에 대한 시험 화합물의 효능은 유세포 측정기를 사용하여 인간 전혈 (Stanford Blood Center)로부터 단리된 인간 말초혈 단핵 세포 (PBMC) 중에 CD4-포지티브 (CD4+) T 세포에서 측정하였다. IL-2는 JAK를 통해 신호를 전달하기 때문에, 본 분석은 JAK 세포 효능의 측정을 제공하였다.

CD4+ T 세포는 피코에리트로빌린 (phycoerythrobilin: PE) 접합된 항-CD4 항체 (Clone RPA-T4, BD Biosciences)를 사용하여 동정하고, Alexa Fluor 647 접합된 항-pSTAT5 항체 (pY694, Clone 47, BD Biosciences)는 STAT5 인산화를 검출하는데 사용하였다.

(1) 항-CD3에 의한 시토킨 자극을 24시간이 아닌 30분 동안 수행하는 것을 제외하고 분석법 3의 문단 (1)의 프로토콜을 따랐다.

(2) 시토킨 자극 후에, 세포를 사전 가온된 고정 용액 (200 μL; BD Biosciences)으로 10분 동안 37 ℃, 5 % CO₂에서 고정시키고, DPBS 버퍼 (1 mL, Life Technologies)로 2회 세척하고, 4 ℃에서 30분 동안 빙냉한 Perm 버퍼 III (1000 μL, BD Biosciences)에 재현탁하였다. 세포를 DPBS 중 2 % FBS (FACS 버퍼)로 2회 세척하고, 그 다음에 항-CD4 PE (1:50 희석) 및 항-CD3 항-CD3 Alexa Fluor 647 (1:5 희석)을 포함하는 FACS 버퍼 (100 μL)에 60분 동안 실온의 어두운 곳에서 재현탁하였다. 인큐베이션 후에, 세포를 FACS 버퍼에서 2회 세척하고, 그 후에 LSRII 유세포 측정기 (BD Biosciences)를 사용하여 분석하였다. IL-2/항-CD3에 반응하는 시험 화합물의 저해 효능을 결정하기 위해서, pSTAT5의 중간 형광 세기 (MFI)를 CD4+ T 세포에서 측정하였다. IC₅₀ 값은 MFI 대 화합물 농도의 저해 곡선 분석으로부터 결정하였다. 데이터는 pIC₅₀ (음의 십의 로그 IC₅₀) 값으로 나타내었다. 본 발명의 화합물은 본 분석에서 pIC₅₀ 값이 약 7.7을 나타내었다.

분석법 5: 세포 JAK 효능 분석: CD3+ T 세포에서 IL-4 자극된 pSTAT6의 저해

인터루킨-4 (IL-4) 자극된 STAT6 인산화 저해에 대한 시험 화합물의 효능은 유세포 측정기를 사용하여 인간 전혈 (Stanford Blood Center)로부터 단리된 인간 말초혈 단핵 세포 (PBMC) 중에 CD3-포지티브 (CD3+) T 세포에서 측정하였다. IL-4는 JAK를 통해 신호를 전달하기 때문에, 본 분석은 JAK 세포 효능의 측정을 제공하였다.

CD3+ T 세포는 피코에리트로빌린 (PE) 접합된 항-CD3 항체 (Clone UCHT1, BD Biosciences)를 사용하여 동정하고, Alexa Fluor 647 접합된 항-pSTAT6 항체 (pY641, Clone 18/P, BD Biosciences)는 STAT6 인산화를 검출하는데 사용하였다.

인간 말초혈 단핵 세포 (PBMC)는 분석법 3 및 4에 기재된 바와 같이 건강한 공여자의 인간 전혈로부터 단리되었다. 세포를 배지 (200 μL) 중에 250,000 세포/웰로 시딩하고, 1시간 동안 배양하고, 그 다음에 다양한 농도의 시험 화합물을 포함하는 분석 배지 (50 μL) (0.1% 우혈청 알부민 (Sigma), 2mM Glutamax, 25mM HEPES 및 1X Penstrep이 보충된 RPMI)에 재현탁하였다. 화합물을 DMSO에서 연속하여 희석하고, 그 다음에 분석 배지 중에서 500-배 (2x 최종 분석 농도까지)로 더 희석하였다. 시험 화합물 (50　μL)을 세포와 37 ℃, 5 % CO₂에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 그 다음에 30분 동안 사전-가온된 분석 배지 중에 IL-4 (50　μL) (R&D Systems; 최종 농도 20 ng/mL)를 첨가하였다. 시토킨 자극 후에, 세포를 사전-가온된 고정 용액 (100 μL) (BD Biosciences)으로 10분 동안 37℃, 5% CO₂에서 고정시키고, FACS 버퍼 (1 mL) (DPBS 중 2% FBS)로 2회 세척하고, 4℃에서 30분 동안 빙냉한 Perm 버퍼 III (1000 μL) (BD Biosciences)에 재현탁하였다. 세포를 FACS 버퍼로 2회 세척하고, 그 다음에 60분 동안 실온의 어두운 곳에서 항-CD3 PE (1:50 희석) 및 항-pSTAT6 Alexa Fluor 647 (1:5 희석)을 포함하는 FACS 버퍼 (100 μL)에 재현탁하였다. 인큐베이션 후에, 세포를 FACS 버퍼에서 2회 세척하고, 그 후에 LSRII 유세포 측정기 (BD Biosciences)를 사용하여 분석하였다.

IL-4에 반응하는 시험 화합물의 저해 효능을 결정하기 위해, pSTAT6의 중간 형광 세기 (MFI)를 CD3+ T 세포에서 측정하였다. IC₅₀ 값은 MFI 대 화합물 농도의 저해 곡선 분석으로부터 결정하였다. 데이터는 pIC₅₀ (음의 십의 로그 IC₅₀)으로 나타내었다. 본 발명의 화합물은 본 분석에서 pIC₅₀ 값이 8.1을 나타내었다.

분석법 6: 세포 JAK 효능 분석: CD3+ T 세포에서 IL-6 자극된 pSTAT3의 저해

분석법 5와 유사한 프로토콜을 사용하여 시험 화합물의 인터루킨-6 (IL-6) 자극된 STAT3 인산화 저해 효능을 결정하였다. Alexa Fluor 647 접합된 항-pSTAT3 항체 (pY705, Clone 4/P, BD Biosciences)는 STAT3 인산화를 검출하는데 사용하였다.

본 발명의 화합물은 본 분석에서 pIC₅₀ 값이 7.4를 나타내었다.

분석법 7: 세포 JAK 효능 분석: IFNγ -유도된 pSTAT1의 저해

인터페론 감마 (IFNγ) 자극된 STAT1 인산화 저해에 대한 시험 화합물의 효능은 유세포 측정기를 사용하여 인간 전혈 (Stanford Blood Center)로부터 유래된 CD14-포지티브 (CD14+) 단핵구 (monocytes)에서 측정하였다. IFNγ는 JAK를 통해 신호를 전달하기 때문에, 본 분석은 JAK 세포 효능의 측정을 제공하였다.

단핵구는 플루오레세인 이소티오시아네이트 (fluorescein isothiocyanate: FITC) 접합된 항-CD14 항체 (Clone RM052, Beckman Coulter)를 사용하여 동정하고, Alexa Fluor 647 접합된 항-pSTAT1 항체 (pY701, Clone 4a, BD Biosciences)는 STAT1 인산화를 검출하는데 사용하였다.

인간 말초혈 단핵 세포 (PBMC)는 ficoll 구배를 사용하여 건강한 공여체의 인간 전혈로부터 단리되었다. 37 ℃, 5 % CO₂ 습윤 인큐베이터에서, 10 % 우태아 혈청 (FBS, Life Technologies), 2 mM Glutamax (Life Technologies), 25 mM HEPES (Life Technologies) 및 1X Pen/Strep (Life Technologies)이 보충된 RPMI (Life Technologies) 중에서 세포를 배양하였다. 세포를 배지 (200 μL) 중에 250,000 세포/웰로 시딩하고, 2시간 동안 배양하고, 다양한 농도의 시험 화합물을 포함하는 분석 배지 (50 μL) (0.1 % 우혈청 알부민 (Sigma), 2 mM Glutamax, 25 mM HEPES 및 1X Penstrep이 보충된 RPMI)에 재현탁하였다. 상기 화합물을 DMSO에서 연속하여 희석하고, 그 다음에 배지에서 1000-배 더 희석하여 최종 DMSO 농도를 0.1 %로 하였다. 시험 화합물 희석물을 세포와 37 ℃, 5 % CO₂에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 그 다음에 사전-가온된 배지 (50μL) 중 IFNγ (R&D Systems)를 최종 농도 0.6　ng/mL로 30분 동안 첨가하였다. 시토킨 자극 후에, 세포를 사전-가온된 고정 용액 (100 μL) (BD　Biosciences)으로 10분 동안 37 ℃, 5 % CO₂에서 고정시키고, FACS 버퍼 (1　mL) (PBS 중 1% BSA)로 2회 세척하고, 1:10의 항-CD14 FITC:FACS 버퍼 (100 μL)에 재현탁하고, 4 ℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 한번 세척하고, 그 다음에 빙냉한 Perm 버퍼 III (BD Biosciences) (100 μL)에 4 ℃에서 30분 동안 재현탁하였다. 세포를 FACS 버퍼로 2회 세척하고, 그 다음에 30분 동안 RT의 어두운 곳에서 1:10의 항-pSTAT1 Alexa Fluor 647:FACS 버퍼 (100 μL)에 재현탁하고, FACS 버퍼에서 2회 세척하고, LSRII 유세포 측정기 (BD Biosciences)를 사용하여 분석하였다.

시험 화합물의 저해 효능을 결정하기 위해서, pSTAT1의 중간 형광 세기 (MFI)를 CD14+ 단핵구에서 측정하였다. IC₅₀ 값은 MFI 대 화합물 농도의 저해 곡선 분석으로부터 결정하였다. 데이터는 pIC₅₀ (음의 십의 로그 IC₅₀) 값으로 나타내었다. 본 발명의 화합물은 본 분석에서 pIC₅₀ 값이 약 7.5를 나타내었다.

분석법 8: 토끼 눈에서 안구 약동학

본 분석의 목적은 토끼 안구 조직에서 시험 화합물의 약동학을 결정하는데 있다.

용액 제제

본 발명의 화합물인, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 (1)을, 표적 농도 4　mg/mL를 얻기 위해 10 % 2-히드록시프로필-β-시클로덱스트린에 용해시키거나 또는 표적 농도 1　mg/mL를 얻기 위해 정제수에 용해시켰다. 시험 화합물 용액의 양측 유리체내 주사 (50　μL/안구)를, 시클로덱스트린 및 물 비히클 제제 각각에 대해, 200 μg/안구 및 50 μg/안구의 2개의 용량 그룹으로, New Zealand 화이트 토끼에게 투여하였다. 상기 시험 화합물 농도는 주사 후에 미리 결정된 시점 (30분, 4 h, 1 d, 3 d, 7 d, 14 d)에서 유리체, 눈방수, 망막/맥락막 및 홍채-섬모체 (iris-ciliary body)와 같은 안구 조직에서 측정하였다. 각 시점에 대해 2마리의 토끼 (4개의 눈)에게 투여하였다. 유리체 조직에서, 화합물 1은 대략 12시간의 반감기를 갖는 초기 농도 감소 및 마지막으로 대략 3.6일의 최종 반감기를 특징으로 하는 2단계의 농도 감소를 나타내었다. 상기 화합물은 망막 및 맥락막 영역으로 빠르게 분포하는 것이 밝혀졌을 뿐만 아니라 유리체 조직에서 유사한 약동학적 프로파일을 나타내었다.

현탁액 제제

현탁액 제제는 실시예 1의 결정성 화합물 1을, 0.5 % 히드록시프로필 메틸셀룰로스 (HPMC E5) + 0.02 % Tween 80과 조합하여 제조하고, 표적 농도 10 mg/mL를 수득하였다. 시험 화합물 현탁액의 양측 유리체내 주사 (50　μL/안구)를 New Zealand 화이트 토끼에게 투여하였다 (500　μg/안구). 상기 시험 화합물 농도는 현탁액 제제 분석에서와 같이 안구 조직에서 주사 후 30분, 2주, 4주, 6주 및 8주에 측정하였다. 상기 화합물은 대략 3 μg/mL/day의 청소율 (clearance rate)로 30분에서 6주까지 유리체에서 약물 농도의 선형 감소를 나타내었다. 상기 거동은 비히클 중 화합물 1의 용해도 및 용액 제제에서 안구 약동학적 거동과 일치하였다. 혈장 중 약물 농도를 측정한 결과, 유리체 조직 중 농도보다 적어도 3 차수 더 적은 것으로 밝혀졌다.

분석법 9: 약력학적 분석: 래트에서 IL6-유도된 pSTAT3의 저해

시험 화합물의 단회 유리체내 투여로 IL-6 유도된 pSTAT3을 저해하는 능력은 래트의 망막/맥락막 균질물 (homogenates)에서 측정하였다.

현탁액 제제는 실시예 1의 결정성 화합물 1을, 정제수 중 0.5 % 히드록시프로필 메틸셀룰로스 (HPMC E5 LV), 0.02 % Tween 80 및 0.9% 소듐 클로리드와 조합하여 제조하고, 표적 농도 3 mg/mL 및 10 mg/mL를 수득하였다.

암컷 Lewis 래트에게 현탁액 제제 또는 약물 비히클을 유리체내 (IVT) 투여하였다 (안구 당 5 μL). 3일 후에, IL-6 (Peprotech; 0.1 mg/mL; 안구 당 5 μL) 또는 비히클을 유리체내 투여하여 pSTAT3을 유도하였다. IL-6으로 두번째 IVT 주사하고 1시간 후에 안구 조직을 절개하였다. 망막/맥락막 조직을 균질화하고, pSTAT3 수준은 ELISA (Cell Signaling Technology)를 사용하여 측정하였다. IL-6-유도된 pSTAT3의 저해 퍼센트는 비히클/비히클 및 비히클/IL-6 그룹과 비교하여 산출하였다. 저해율이 100%를 초과하는 것은 pSTAT3 수준이 비히클/비히클 그룹에서 관찰된 수준 이하로 감소한 것을 반영한다.

IL-6 챌린지 전에 3일 사전-처리로, 현탁액 제제로 투여된 본 발명의 화합물의 15 μg 용량 및 50 μg 용량은 망막/맥락막 조직에서 IL-6-유도된 pSTAT3을 각각 33 % 및 109 % 만큼 저해하였다.

분석법 10: 약력학적 분석: 토끼에서 IFNγ -유도된 IP -10의 저해

시험 화합물의 단회 유리체내 투여로 인터페론-감마 (IFNγ) 유도된 IP-10 단백질 수준을 저해하는 능력은 토끼의 유리체 및 망막/맥락막 조직에서 측정하였다.

실시예 1의 화합물 1의 농도 1 mg/mL 및 4 mg/mL의 용액 제제를 분석법 8에서와 같이 제조하였다. 현탁액 제제는 실시예 1의 결정성 화합물 1을, 정제수 중 0.5 % 히드록시프로필 메틸셀룰로스 (HPMC E5), 0.02 % Tween 80 및 9 mg/mL 소듐 클로리드와 조합하여 제조하고, 표적 농도 20 mg/mL를 수득하였다.

수컷 New Zealand 화이트 토끼 (Liveon Biolabs, India)를 본 연구에 사용하였다. 동물을 연구소에 도착 후에 순응시켰다 (Jubilant Biosys Ltd., India). 각 토끼에게 안구 당 50　μL의 총 투여 부피로, 총 2회 유리체내 (IVT) 주사하였다. 제1 IVT 주사 (안구 당 45 μL)로 처방된 시점 (즉, 용액 제제에 대해 24시간 또는 현탁액 제제에 대해 1주)에서 시험 화합물 또는 비히클을 전달하였다. IP-10 유도를 위해 제2 IVT 주사 (안구 당 5 μL)로 IFNγ (1 μg/안구; 스톡 용액 1　mg/mL; Kingfisher Biotech) 또는 비히클을 전달하였다. 요약하면, 주사 당일에, 토끼를 케타민 (35 mg/kg) 및 크실라진 (5　mg/kg)의 근육내 주사로 마취하였다. 깊게 마취하고, 각 안구를 멸균 식염수로 헹구고, Braunstein 고정 캘리퍼 (2 3/4")로 직근 (rectus muscle)으로부터 3.5 mm 및 가장자리 (limbus)로부터 4 mm 위치에 표시하여 양쪽 안구의 비강 위 측에서 31-게이지 바늘을 구비한 0.5 mL 인슐린 주사기 (50　유닛=0.5　mL)를 사용하여 IVT 주사를 수행하였다.

IFNγ로 제2 IVT 주사하고 24시간 후에 조직을 수집하였다. 유리체액 (VH) 및 망막/맥락막 조직 (R/C)을 수집하고, 균질화하고, IP-10 단백질 수준은 토끼 CXCL10 (IP-10) ELISA 키트 (Kingfisher Biotech)를 사용하여 측정하였다. IFNγ-유도된 IP-10의 저해 퍼센트는 비히클/비히클 및 비히클/IFNγ 그룹과 비교하여 산출하였다.

용액으로 투여할 때, IFNγ 챌린지 전에 24시간 사전-처리로, 45　μg의 화합물 1은 유리체액 및 망막/맥락막 조직에서 IFNγ-유도된 IP-10을 각각 70% 및 86% 만큼 저해하고, 180 μg의 화합물은 유리체액 및 망막/맥락막 조직에서 IFNγ-유도된 IP-10을 각각 91% 및 100% 만큼 저해하였다.

IFNγ 챌린지 전에 1주 사전-처리로, 화합물 1의 결정성 현탁액 제제는 유리체액 및 망막/맥락막 조직 모두에서 IFNγ-유도된 IP-10을 100% 만큼 저해하였다.

분석법 11: 마우스의 혈장 및 폐에서 약동학

시험 화합물의 혈장 및 폐 수준 및 그의 비율은 하기 방식으로 결정하였다. Charles River Laboratories의 BALB/c 마우스를 본 분석에 사용하였다. 시험 화합물은 농도 0.2 mg/mL로 pH 4 시트레이트 버퍼 중 20% 프로필렌 글리콜에서 개별적으로 제제화하고, 50 μL의 투여 용액을 마우스의 기도로 구강 흡인에 의해 도입하였다. 투여후 다양한 시점 (전형적으로 0.167, 2, 6, 24시간)에서, 혈액 시료를 심장 천자로 내보내고, 온전한 폐를 마우스로부터 절제하였다. 혈액 시료를 4℃에서 대략 12,000 rpm으로 4분 동안 원심분리하여 (Eppendorf centrifuge, 5804R) 혈장을 수집하였다. 폐를 패드로 건조시키고, 칭량하고, 멸균수 중에 1:3으로 희석하여 균질화하였다. 시험 화합물의 혈장 및 폐 수준은 시험 매트릭스의 표준 곡선으로 구축된 분석용 표준에 대해 LC-MS 분석으로 결정하였다. 폐 대 혈장 비율은 폐 AUC (μg hr/g) 대 혈장 AUC (μg　hr/mL)의 비율로서 결정하고, 여기서 AUC는 통상적으로 시험 화합물 농도 대 시간의 곡선하 면적으로 정의된다.

본 발명의 화합물은 마우스에서 폐 중 노출이 혈장 중 노출보다 약 55배 더 큰 것으로 나타났다.

분석법 12: 폐 조직에서 IL-13 유도된 pSTAT6 유도의 뮤린 (마우스) 모델

Il-13은 천식의 병태생리학에 기초가 되는 중요한 시토킨이다 (Kudlacz et al. Eur . J. Pharmacol, 2008, 582,154-161). IL-13은 Janus 패밀리 키나제 (JAK)의 구성원을 활성화하는 세포 표면 수용체에 결합하고, 그 다음에 STAT6을 인산화하고, 그 후에 추가의 전사 경로를 활성화한다. 기재된 모델에서, IL-13의 용량을 마우스의 폐에 국소로 전달하여 STAT6의 인산화를 유도하고 (pSTAT6), 그런 다음 이는 종말점 (endpoint)으로서 측정하였다.

Harlan의 성체 balb/c 마우스를 본 분석에 사용하였다. 연구 당일에, 동물을 이소플루란으로 간단히 마취시키고, 비히클 또는 시험 화합물 (0.5 mg/mL, 몇 번의 호흡을 통해 총 부피 50 μL)을 구강 흡인을 통해 투여하였다. 동물을 투여 후에 측면 횡와위 (lateral recumbency)로 배치하고, 마취로부터의 완전한 회복을 모니터하고, 그 후 이들의 홈 케이지로 복귀시켰다. 4시간 후에, 동물을 다시 한번 간단히 마취시키고, 비히클 또는 IL-13 (전달된 총 용량 0.03 μg, 총 부피 50 μL)을 구강 흡인으로 챌린지한 후, 마취로부터의 회복을 모니터하고, 그 후 이들의 홈 케이지로 복귀시켰다. 비히클 또는 IL-13을 투여하고 1시간 후에, 항-pSTAT6 ELISA (토끼 mAb 포획/코팅 항체; 마우스 mAb 검출/리포트 항체: 항-pSTAT6-pY641; 2차 항체: 항-마우스 IgG-HRP)를 사용하여 모든 pSTAT6 검출을 위해 폐를 수집하고, 상기 분석법 11에 기재된 바와 같이 총 약물 농도에 대해 분석하였다.

상기 모델에서 활성은 비히클 처리되고 IL-13 챌린지된 대조군 동물과 비교하여 5시간에서 치료된 동물의 폐에 존재하는 pSTAT6 수준의 감소로 입증되었다. 비히클-처리되고 IL-13 챌린지된 대조군 동물과 비히클-처리되고 비히클 챌린지된 대조군 동물 사이의 차이는 임의의 주어진 실험에서 각각 0% 및 100% 저해 효과로 나타내었다. 본 발명의 화합물은 IL-13 챌린지하고 4시간 후에 약 60%의 STAT6 인산화 저해를 나타내었다.

분석법 13: 폐의 알테르나리아 알테르나타 ( Alternaria alternata )-유발 호산구성 염증의 뮤린 모델

기도 호산구증가증은 인간 천식의 특징이다. 알테르나리아 알테르나타는 인간에서 천식을 악화시킬 수 있는 진균 공기알레르겐 (aeroallergen)이고, 마우스의 폐에서 호산구성 염증을 유발한다 (Havaux et al. Clin Exp Immunol. 2005, 139(2):179-88). 마우스에서, 알테르나리아는 폐에서 조직에 상주하는 타입 2 선천성 림프구 세포를 간접적으로 활성화시키고, 이는 (예: IL-2 및 IL-7)에 반응하고, JAK-의존성 시토킨 (예: IL-5 및 IL-13)을 방출하며, 호산구성 염증을 조정하는 것으로 나타났다 (Bartemes et al. J Immunol. 2012, 188(3):1503-13).

Taconic의 7주령 내지 9주령의 수컷 C57 마우스를 본 연구에 사용하였다. 연구 당일에, 동물들을 이소플루란으로 가볍게 마취시키고, 비히클 또는 시험 화합물 (0.1 - 1.0 mg/mL, 몇 번의 호흡으로 총 부피 50 μL)을 구인두 흡인을 통해 투여하였다. 동물들을 투여 후에 측면 횡와위로 배치하고, 마취로부터의 완전한 회복을 모니터하고, 그 후 이들의 홈 케이지로 복귀시켰다. 1시간 후에, 동물들을 다시 한번 간단히 마취시키고, 비히클 또는 알테르나리아 추출물 (전달된 총 추출물 200 ug, 총 부피 50 μL)을 구인두 흡인을 통해 챌린지하고, 그 후에 마취로부터의 회복을 모니터하고, 그 후 이들의 홈 케이지로 복귀시켰다. 알테르나리아 투여하고 48시간 후에, 기관지폐포 세척액 (bronchoalveolar lavage fluid: BALF)을 수집하고, Advia 120 Hematology System (Siemens)을 사용하여 BALF에서 호산구를 계수하였다.

상기 모델에서 활성은 비히클 처리되고 알테르나리아 챌린지된 대조군 동물과 비교하여 48시간에서 치료된 동물의 BALF에 존재하는 호산구 수준의 감소로 입증되었다. 데이터는 비히클 처리되고 알테르나리아 챌린지된 BALF 호산구 반응의 저해 퍼센트로 나타내었다. 저해 퍼센트를 산출하기 위해, 각 조건에 대한 BALF 호산구의 수를 평균 비히클 처리되고 알테르나리아 챌린지된 BALF 호산구의 퍼센트로 변환시키고, 100 퍼센트에서 감산하였다. 본 발명의 화합물은 알테르나리아 챌린지하고 48시간 후에 약 88%의 BALF 호산구 계수의 저해를 나타내었다.

분석법 14: 폐 모델의 LPS /G- CSF /IL-6/ IFNγ 칵테일-유발 기도 호중구성 염증의 뮤린 모델

기도 호중구증가증은 인간에서 광범위한 호흡기 질환의 특징이다. 기도 호중구증가증을 유발하기 위해 LPS/G-CSF/IL-6/IFNγ 칵테일을 사용한 호중구성 기도 염증 모델에서 화합물 1을 시험하였다.

Jackson Laboratory의 7주령 내지 9주령의 수컷 Balb/C (야생형) 마우스를 본 연구에서 사용하였다. 연구 당일에, 동물들을 이소플루란으로 가볍게 마취시키고, 비히클 또는 시험 화합물 (1.0 mg/mL, 몇 번의 호흡으로 총 부피 50 μL)을 구인두 흡인을 통해 투여하였다. 동물들을 투여 후에 측면 횡와위로 배치하고, 마취로부터의 완전한 회복을 모니터하고, 그 후 이들의 홈 케이지로 복귀시켰다. 1시간 후에, 동물들을 다시 한번 간단히 마취시키고, 비히클 또는 LPS; 0.01 mg/kg/G-CSF; 5 μg/IL-6; 5 μg/IFNγ; 5 μg (총 부피 100 μL)을 구인두 흡인 (OA)을 통해 챌린지하였다. LPS/G-CSF/IL-6/IFNγ 칵테일 투여하고 24시간 후에, 기관지폐포 세척액 (BALF)을 수집하고, 호중구를 계수하였다.

화합물 1로 OA 치료 시에, 기도 호중구가 통계적으로 유의하게 감소하였고 (비히클 처리된 마우스와 비교하여 84%), 이는 JAK-의존성 신호전달의 차단이 호중구성 기도 염증에 영향을 주는 것으로 나타났다.

분석법 15: 인간 3D 기도 배양물 중 IFNγ 및 IL-27 유도된 케모킨 CXCL9 및 CXCL10의 저해

EpiAirway 조직 배양물을 Mattek (AIR-100)으로부터 입수하였다. 배양물은 천식 공여체로부터 유래되었다. 세포 배양 인서트에서, 인간 유래 기관/기관지 상피 세포를 성장시키고, 다공성 멤브레인 서포트에서 분화시켜서 세포 아래로는 가온된 배양 배지 및 위로는 기체성 시험 대기를 갖는 공기-액체 계면을 허용하였다. 37℃, 5% CO2 습윤 인큐베이터에서 유지 배지 (Mattek, AIR-100-MM) 중에 조직을 배양하였다. 4개의 공여체를 시험하였다. 0일 차에, 조직 배양물을 10μM, 1μM 및/또는 0.1μM의 시험 화합물로 처리하였다. 화합물을 디메틸 술폭시드 (DMSO, Sigma)에서 희석하여 최종 농도 0.1%로 하였다. 0.1%의 DMSO를 비히클 대조군으로 사용하였다. 시험 화합물을 37℃, 5% CO₂에서 1시간 동안 배양물과 인큐베이션하고, 최종 농도 100ng/ml로 IFNγ (R&D Systems) 또는 IL-27 (R&D Systems) 함유 사전-가온된 배지를 첨가하였다. 조직 배양물을 8일 동안 유지하였다. 배지는 화합물 및 IFNγ 또는 IL-27 함유 신선한 배지로 2일 마다 교체하였다. 8일 차에, 분석을 위해 조직 배양물 및 상등액을 수집하였다. CXCL10 (IP-10) 및 CXCL9 (MIG)에 대해 luminex 분석 (EMD Millipore)을 사용하여 상등액 시료를 분석하였다. 데이터는 % 저해 +/- 표준 편차 (±STDV)로 나타내었다. 저해 퍼센트는 비히클 처리된 세포와 비교하여 IFNγ 또는 IL-27 유도된 CXCL10 또는 CXCL9 분비에 대한 화합물의 저해 효능을 결정하였다. 데이터는 3 또는 4개의 공여체로부터의 평균이다. 화합물 1은 IFNγ 유도된 CXCL10 분비를 비히클 대조군과 비교할 때 99% ±2.0 (10μM), 71% ±19 (1μM) 및 17% ±12 (0.1μM) 만큼 저해할 수 있다. 화합물 1은 IFNγ 유도된 CXCL9 분비를 비히클과 비교할 때 100% ±0.3 (10μM), 99% ±0.9 (1μM) 및 74% ±17 (0.1μM) 만큼 저해할 수 있다. 화합물 1은 IL-27 유도된 CXCL10 분비를 비히클 대조군과 비교할 때 108% ±11 (10μM), 98% ±10 (1μM) 및 73% ±8.5 (0.1μM) 만큼 저해할 수 있다. 화합물 1은 IL-27 유도된 CXCL9 분비를 비히클 대조군과 비교할 때 100% ±0 (10μM), 95% ±3.7 (1μM) 및 75% ±3.5 (0.1μM) 만큼 저해할 수 있다.

분석법 16: IL-5 매개된 호산구 생존 분석

IL-5 매개된 호산구 생존에 대한 시험 화합물의 효능은 인간 전혈 (AllCells)로부터 단리된 인간 호산구에서 측정하였다. IL-5는 JAK를 통해 신호를 전달하기 때문에, 본 분석은 JAK 세포 효능의 측정을 제공한다.

인간 호산구가 건강한 공여자의 신선한 인간 전혈 (AllCells)로부터 단리되었다. 혈액을 0.9% 소듐 클로리드 용액 (Sigma-Aldrich) 중 4.5% 덱스트란 (Sigma-Aldrich)과 혼합하였다. 적혈구 세포를 35분 동안 침강시켰다. 백혈구가 풍부한 상층을 꺼내고, Ficoll-Paque (GE Healthcare) 상에 층을 이루고, 600g으로 30분 동안 원심분리하였다. 혈장 및 단핵 세포 층을 꺼낸 후에 과립구 층을 물로 용해시켜서 임의의 오염된 적혈구 세포를 제거하였다. 호산구는 인간 호산구 단리 키트 (Miltenyi Biotec)를 사용하여 추가로 정제하였다. 정제된 호산구 분획물을 항-CD16 FITC (Miltenyi Biotec)와 10분 동안 4℃의 어두운 곳에서 인큐베이션하였다. LSRII 유세포 측정기 (BD Biosciences)를 사용하여 순도를 분석하였다.

37℃, 5% CO₂ 습윤 인큐베이터에서, 10% 열 불활성화된 우태아 혈청 (FBS, Life Technologies), 2mM Glutamax (Life Technologies), 25mM HEPES (Life Technologies) 및 1X Pen/Strep (Life Technologies)이 보충된 RPMI 1640 (Life Technologies)에서 세포를 배양하였다. 세포를 배지 (50 μL) 중에 10,000 세포/웰로 시딩하였다. 상기 플레이트를 300g으로 5분 동안 원심분리하고, 상등액을 제거하였다. 화합물을 DMSO에서 연속하여 희석하고, 그 다음에 배지 중에서 500-배 내지 2x 최종 분석 농도로 더 희석하였다. 시험 화합물 (50　μL/웰)을 세포에 부가하고, 37 ℃, 5 % CO₂에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 그 다음에 72시간 동안 사전-가온된 분석 배지 (50　μL) 중에 IL-5 (R&D Systems; 최종 농도 1 ng/mL 및 10 pg/ml)를 첨가하였다.

시토킨 자극 후에, 세포를 300 g으로 5분 동안 원심분리하고, 차가운 DPBS (Life Technologies)로 2회 세척하였다. 생존력 및 아폽토시스에 접근하기 위해, 세포를 프로피디움 요오디드 (Thermo Fisher Scientific) 및 APC Annexin V (BD Biosciences)와 인큐베이션하고, LSRII 유세포 측정기 (BD Biosciences)를 사용하여 분석하였다. IC₅₀ 값은 세포 생존력 퍼센트 대 화합물 농도의 생존력 곡선 분석으로부터 결정하였다. 데이터는 pIC₅₀ (음의 십의 로그 IC₅₀) 값으로 나타내었다. 화합물 1은 10 pg/ml IL-5의 존재하에 pIC₅₀ 값 7.9±0.5 및 1 ng/ml IL-5의 존재하에 pIC₅₀ 값 6.5±0.2를 나타내었다.

분석법 17: 약력학적 분석: 토끼 눈에서 IFNγ -유도된 pSTAT1의 저해

시험 화합물의 단회 유리체내 투여로 STAT1 단백질의 인터페론-감마 (IFNγ) 유도된 인산화 (pSTAT1)를 저해하는 능력은 토끼 망막/맥락막 조직에서 측정하였다.

현탁액 제제는 실시예 1의 화합물 1을, 정제수 중 0.5 % 히드록시프로필 메틸셀룰로스 (HPMC E5), 0.02 % Tween 80 및 9 mg/mL 소듐 클로리드와 조합하여 제조하고, 표적 농도 20 mg/mL를 수득하였다.

수컷 New Zealand 화이트 토끼 (Liveon Biolabs, India)를 본 연구에 사용하였다. 동물을 연구소에 도착 후에 순응시켰다 (Jubilant Biosys Ltd., India). 각 토끼에게 안구 당 50　μL의 총 투여 부피로, 총 2회 유리체내 (IVT) 주사하였다. 제1 IVT 주사 (안구 당 45 μL)로 0.9 mg의 시험 화합물 또는 비히클을 전달하였다. 1주일 후에, IP-10의 유도를 위해 제2 IVT 주사 (안구 당 5 μL)로 IFNγ (1 μg/안구; 스톡 용액 1　mg/mL; Kingfisher Biotech) 또는 비히클을 전달하였다. 주사 당일에, 토끼를 케타민 (35 mg/kg) 및 크실라진 (5　mg/kg)의 근육내 주사로 마취하였다. 깊게 마취시키고, 각 안구를 멸균 식염수로 헹구고, Braunstein 고정 캘리퍼 (2 3/4")로 직근으로부터 3.5 mm 및 가장자리로부터 4 mm 위치에 표시하여 양쪽 안구의 비강 위 측에서 31-게이지 바늘을 구비한 0.5 mL 인슐린 주사기 (50　유닛=0.5　mL)를 사용하여 IVT 주사를 수행하였다.

IFNγ로 제2 IVT 주사하고 2시간 후에 조직을 수집하였다. 망막/맥락막 조직 (R/C)을 수집하고, 균질화하고, pSTAT1 수준은 ProteinSimple WES 기기 상에서 정량적 웨스턴 블롯 (quantitative Western Blot)으로 측정하였다. IFNγ-유도된 pSTAT1의 저해 퍼센트는 비히클/비히클 및 비히클/IFNγ 그룹과 비교하여 산출하였다.

IFNγ 챌린지 전에 1주 사전-처리로, 실시예 1의 화합물 1의 현탁액 제제는 IFNγ-유도된 pSTAT1을 85% 만큼 저해하였다.

본 발명은 그의 특정 양상 또는 구현예를 참고로 서술되었으며, 당분야의 통상의 기술을 가진 자라면 본 발명의 진정한 정신 및 범위로부터 벗어나지 않고 다양한 변경이 만들어질 수 있거나, 균등물로 대체될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 또한, 적용가능한 특허법 및 규정에 의해 허용되는 한도 내에서, 본원에 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은, 각 문헌이 본원에서 개별적으로 참고로 포함되는 것과 동일한 정도로 그 전문이 참고로 본원에 포함된다.

Claims (25)

1. 포유동물에서 안 질환 (ocular disease)을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 상기 포유동물의 안구에 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
2. 청구항 1에 있어서, 상기 안 질환은 포도막염 (uveitis), 당뇨 망막병증 (diabetic retinopathy), 당뇨 황반 부종 (diabetic macular edema), 건성안 질환 (dry eye disease), 연령-관련 황반 변성 (age-related macular degeneration) 또는 아토피성 각막결막염 (atopic keratoconjunctivitis)인 것인 방법.
3. 청구항 2에 있어서, 상기 안 질환은 포도막염 또는 당뇨 황반 부종인 것인 방법.
4. 청구항 1에 있어서, 상기 약학적 조성물은 주사로 투여되는 것인 방법.
5. 포유동물에서 안 질환 치료에 사용하기 위한, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
6. 청구항 5에 있어서, 상기 안 질환은 포도막염, 당뇨 망막병증, 당뇨 황반 부종, 건성안 질환, 연령-관련 황반 변성 또는 아토피성 각막결막염인 것인 화합물.
7. 포유동물에서 안 질환 치료용 약제 제조에 있어서, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
8. 포유동물에서 호흡기 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 포유동물에게 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 호흡기 질환은 폐 감염 (lung infection), 연충 감염 (helminthic infection), 폐 동맥 고혈압 (pulmonary arterial hypertension), 사르코이드증 (sarcoidosis), 림프관평활근종증 (lymphangioleiomyomatosis), 기관지확장증 (bronchiectasis) 또는 침윤성 폐 질환 (infiltrative pulmonary disease)인 것인 방법.
9. 청구항 8에 있어서, 상기 약학적 조성물은 흡입으로 투여되는 것인 방법.
10. 청구항 9에 있어서, 상기 약학적 조성물은 네뷸라이저 흡입기로 투여되는 것인 방법.
11. 청구항 9에 있어서, 상기 약학적 조성물은 건조 분말 흡입기로 투여되는 것인 방법.
12. 포유동물에서 호흡기 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 포유동물에게 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 호흡기 질환은 약물-유발 폐렴 (drug-induced pneumonitis), 진균 유발 폐렴 (fungal induced pneumonitis), 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증 (allergic bronchopulmonary aspergillosis), 과민성 폐렴 (hypersensitivity pneumonitis), 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증 (eosinophilic granulomatosis with polyangiitis), 특발성 급성 호산구성 폐렴 (idiopathic acute eosinophilic pneumonia), 특발성 만성 호산구성 폐렴 (idiopathic chronic eosinophilic pneumonia), 과호산구성 증후군 (hypereosinophilic syndrome), 뢰플러 증후군 (Loeffler syndrome), 폐쇄세기관지염 기질화 폐렴 (bronchiolitis obliterans organizing pneumonia) 또는 면역-체크포인트-저해제 유발 폐렴 (immune-checkpoint-inhibitor induced pneumonitis)인 것인 방법.
13. 청구항 12에 있어서, 상기 약학적 조성물은 흡입으로 투여되는 것인 방법.
14. 청구항 13에 있어서, 상기 약학적 조성물은 네뷸라이저 흡입기로 투여되는 것인 방법.
15. 청구항 13에 있어서, 상기 약학적 조성물은 건조 분말 흡입기로 투여되는 것인 방법.
16. 포유동물에서 호흡기 질환 치료에 사용하기 위한 것으로서, 상기 호흡기 질환은 폐 감염, 연충 감염, 폐 동맥 고혈압, 사르코이드증, 림프관평활근종증, 기관지확장증 또는 침윤성 폐 질환인 것인, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
17. 포유동물에서 호흡기 질환 치료에 사용하기 위한 것으로서, 상기 호흡기 질환은 약물-유발 폐렴, 진균 유발 폐렴, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 과민성 폐렴, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 특발성 급성 호산구성 폐렴, 특발성 만성 호산구성 폐렴, 과호산구성 증후군, 뢰플러 증후군, 폐쇄세기관지염 기질화 폐렴 또는 면역-체크포인트-저해제 유발 폐렴인 것인, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
18. 포유동물에서 호흡기 질환 치료용 약제 제조에 있어서, 상기 호흡기 질환은 폐 감염, 연충 감염, 폐 동맥 고혈압, 사르코이드증, 림프관평활근종증, 기관지확장증 또는 침윤성 폐 질환인 것인, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
19. 청구항 18에 있어서, 상기 약제는 흡입으로 투여하기에 적절한 것인 용도.
20. 청구항 19에 있어서, 상기 약제는 네뷸라이저 흡입기로 투여하기에 적절한 것인 용도.
21. 청구항 19에 있어서, 상기 약제는 건조 분말 흡입기로 투여하기에 적절한 것인 용도.
22. 포유동물에서 호흡기 질환 치료용 약제 제조에 있어서, 상기 호흡기 질환은 약물-유발 폐렴, 진균 유발 폐렴, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 과민성 폐렴, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 특발성 급성 호산구성 폐렴, 특발성 만성 호산구성 폐렴, 과호산구성 증후군, 뢰플러 증후군, 폐쇄세기관지염 기질화 폐렴 또는 면역-체크포인트-저해제 유발 폐렴인 것인, 5-에틸-2-플루오로-4-(3-(5-(1-메틸피페리딘-4-일)-4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조[4,5-c]피리딘-2-일)-1H-인다졸-6-일)페놀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
23. 청구항 22에 있어서, 상기 약제는 흡입으로 투여하기에 적절한 것인 용도.
24. 청구항 23에 있어서, 상기 약제는 네뷸라이저 흡입기로 투여하기에 적절한 것인 용도.
25. 청구항 24에 있어서, 상기 약제는 건조 분말 흡입기로 투여하기에 적절한 것인 용도.