KR20180033502A - 항-cd33 항체 및 그의 사용 방법 - Google Patents

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Abstract

본 개시내용은 일반적으로 CD33 단백질, 예를 들면, 인간 CD33 또는 포유동물 CD33 내의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 예를 들면, 단클론성, 키메라성, 인간화된 항체, 항체 단편, 등을 포함하는 조성물, 및 위험을 예방하고, 감소시키거나 그것이 필요한 대상체를 치료하는 그와 같은 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

항-CD33 항체 및 그의 사용 방법
관련 출원에 대한 교차-참조
본원은 2015년 6월 12일 출원된, 미국 가출원 번호 62/175,152, 및 2015년 10월 14일 출원된, 미국 가출원 번호 62/241,701의 이점을 주장하고, 각각의 이들은 그 전문이 본 명세서에 참고로 편입되어 있다.
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발명의 분야
본 개시내용은 항-CD33 항체 및 상기 항체의 치료 용도에 관한 것이다.
발명의 배경
Siglec-3으로서 또한 공지된, 골수성 세포 표면 항원 CD33 전구체 (CD33)은, 미성숙한 및 성숙한 골수성 세포, 수지상 세포, 및 미세아교 세포를 포함하는, 면역 및 조혈 세포에서 발현된 유형 1, 면역글로불린-유사, 막관통 단백질이다 (Crocker 등 (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; McMillan and Crocker (2008) Carbohydr Res. 343:2050-2056; Von Gunten and Bochner (2008) Ann NY Acad Sci. 1143:61-82; Handgretinger 등 (1993) Immunol Lett. 37:223-228; 및 Hernandez-Caselles 등 (2006) J Leukoc Biol. 79:46-58). CD33 발현은 주변 과립구 및 상주하는 대식세포에서 낮은 수준으로 하향조절되고 단백질은 별아교세포, 희소돌기교세포, 내피 세포, 및 휴지 T 세포에서 부재인 것으로 보고되었다 (Griffin JD. 등, (1984) Leukemia Research Vol. S, No. 4, pp. 521-534). CD33은 당단백질 및 당지질의 시알산 잔기를 결합시키는 렉틴의 Siglec 패밀리의 구성원이다. Siglec 단백질을 위한 1종의 잠재적인 결합 표적은 강글리오사이드; 즉, 시알화된 글리칸에 연결된 세라미드로 구성되는 당지질이다. 대부분의 강글리오사이드는 통상의 락토-세라미드 코어 및 1종 이상의 시알산 잔기를 공유한다. Siglec 리간드에서 다양성은 상이한 연결기내 다른 중성 당류 및 시알산의 첨가, 및 시알산 자체의 변형에 의해 생성된다.
14 Siglec 단백질은 인간에서 확인되고 있고 시알산-결합 부위를 함유하는 아미노-말단 V-세트 도메인을 포함하는 2-17 세포외 Ig 도메인으로 구성되는 마우스에서 9개가 확인되고 있다. 시알산-결합 영역은, 2개의 방향족 잔기 및 전체 Siglecs에서 고도로 보존된 1개의 아르기닌 모티프를 함유하는, V-세트 Ig-유사 도메인에서 위치한다 (Crocker 등 (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; McMillan and Crocker (2008) Carbohydr Res. 343:2050-2056; Von Gunten and Bochner (2008) Ann NY Acad Sci. 1143:61-82; May 등 (1998) Mol Cell. 1:719-728; Crocker 등 (1999) Biochem J. 341:355-361; 및 Crocker and Varki (2001) Trends Immunol. 2:337-342). 시알화된 리간드에 결합 부위는 공-결정 구조에 의해 맵핑되고 있다 (Attrill 등, (2006) J. Biol. Chem.281:32774-32783; 및 Varki 등, Glycobiology,16 pp. 1R-27R). 세포 막은 시알산이 풍부하기 때문에, Siglecs에 의한 리간드 결합은, 그것의 기능성 특성에 모두 영향을 주는, 시스에서 및 트랜스에서 발생할 수 있다. 각각의 Siglec은 포유동물 세포의 표면에서 발견되는 시알화된 글리칸의 다양한 유형의 결합에 대하여 상이한 선호를 갖는다 (Crocker 등 (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; 및 Crocker 등 (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266). Siglec-3을 포함하는, 대부분의 CD33-관련된 Siglecs는, 티로신 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 동원을 통해 면역 기능의 억제 수용체 및 음성 조절물질로서 이들을 가능하게 하는, 그것의 세포질 꼬리에서 1종 이상의 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 (ITIM) 서열을 함유한다 (Crocker 등 (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; McMillan and Crocker (2008) Carbohydr Res. 343:2050-2056; 및 Von Gunten and Bochner (2008) Ann NY Acad Sci. 1143:61-82). 특정 Siglecs는, 비장 티로신 키나아제 (Syk)의 예상된 동원을 통해 면역 기능의 활성화 수용체 및 양성 조절물질로서 작용하도록 이들을 가능하게 하는, 그것의 세포질 꼬리에서 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM) 서열을 함유한다 (Macauley SM. 등, (2014) Nature Reivews Immunology 14, 653-666). Siglec 단백질 패밀리는 자가면역, 감염에 대한 감수성, 림프종을 포함한 암의 다중 유형, 백혈병 및 급성 골수성 백혈병, 전신 홍반성 낭창, 류마티스성 관절염, 신경퇴행성 장애, 천식, 알러지, 패혈증, 만성적 폐쇄성 폐 질환, 이식편대숙주 질환, 호산구증가증, 및 골다공증을 포함하는 다중 인간 질환과 관련된다 (Macauley SM. 등, (2014) Nature Reivews Immunology 14, 653-666).
Siglec-3 (CD33)은 1988년에 클론화되었고 (Peiper 등 (1988) Blood. 72:314-321; Simmons and Seed (1988) J Immunol. 141:2797-2800), 선택적 발현은 골수에서 아세포, 전골수세포 및 골수세포상에서, 그리고 말초 혈액에서 단핵세포에 의해 검출되었다 (Griffit J.D 등, (1984) Leukemia Research Vol. S, No. 4, pp. 521-534). 미토겐 또는 동종항원-활성화된 인간 T 및 자연 살해 (NK) 세포의 서브셋상에서 발현은 또한 보고되고 있다 (Herna'ndez-Caselles T. 등, (2006) Journal of Leukocyte Biology.79, 46-58). 게다가, CD33은 급성 골수성 백혈병의 성인 및 소아 사례의 85-90%에서 발현된다 (Griffin, J.D., 등, (1984). Leuk Res 8, 521-534).
CD33은 Ig-유사 C2-유형 (면역글로불린-유사) 및 Ig-유사 V-유형 (면역글로불린-유사) 세포외 도메인, 뿐만 아니라 그것의 세포질 도메인에서 2개의 ITIM-유사 모티프를 함유한다. CD33M으로 명명된, 더 높은 분자량 변이체, 및 Ig-유사 V-유형 도메인 (리간드-결합 부위)가 부족한 더 작은 동형체 CD33m, 및 V 및 C 도메인을 연결하는 디설파이드 결합을 포함하는, CD33의 3개의 대안적으로 스플라이싱된 형태 (동형체)는 확인되고 있다. 게다가, 조직 특이적 번역후, CD33의 변형은 보고되고 있다 (Herna'ndez-Caselles T. 등, (2006) Journal of Leukocyte Biology.79, 46-58; 및 Perez-Oliva 등, (2011) Glycobiol. 21, 757-770). CD33은 단백질 키나아제 C (Grobe, K 등, (2002) Blood 99,3188-3196)에 의해 세린 307 (Ser-307) 및 세린 342 (Ser-342)의 및 Src 패밀리 티로신 키나아제, 예컨대 LCK (Paul, S.P., 등, (2000). Blood 96, 483-490)에 의해 Tyr-340, 및 Tyr-358상에서 리간드-유도된 인산화를 경험한다.
주로 Tyr-340상에서, 그러나 또한 그것의 ITIM 도메인의 Tyr-358상에서 인산화 이후, CD33은 SHP-2/PTPN11 및 SHP-1/PTPN6을 결합시킨다. CD33에 이들 포스파타제의 결합은 CD64와 CD33의 공결찰 이후 향상된다 (Taylor, V. C 등, (1999), J. Biol. Chem. 274,11505-11512). 포스파타제 활성은 감소된 세포내 칼슘 동원, 및 다중 단백질상에서 감소된 티로신 인산화 (Ulyanova, T., 등, (1999) Eur J lmmunol 29, 3440-3449; Paul, S.P., 등, (2000). Blood 96, 483-490) 뿐만 아니라, ITAM 모티프, 패턴 인식 수용체, 톨-유사 수용체 및 손상-관련된 분자 패턴 (DAMP) 수용체를 함유하는 것을 포함하는, 부분적으로, 인접한 활성화 수용체상에서 신호전달 분자의 탈인산화를 통한, 신호 형질도입 및 면역 반응의 봉쇄와 관련된다. CD33의 활성화는 원암유전자 c-Cbl, Vav 및 Syk의 티로신 인산화 및 상기와 결합으로 이어진다 (Balaian, L. 등, (2001). Leuk Res 25, 1115-1125). c-Cbl은 E3 유비퀴틴 리가제이고 활성화시 CBL-의존적 유비퀴틴화 및 CD33 뿐만 아니라 레티노산-유도성 유전자의 프로테오좀 열화를 유도한다 (Taylor 등 (1999) J Biol Chem. 274:11505-11512; Ulyanova 등 (1999) Eur J Immunol. 29:3440-3449; Paul 등 (2000) Blood. 96:483-490; 및 Lajaunias 등 (2005) Eur J Immunol. 35:243-251). 일부, 그러나 모두가 아닌, Siglec 리간드는 수용체 하향 조절을 유도한다 ((Macauley SM. 등, (2014) Nature Reviews Immunology 14, 653-666). 리간드-유도된 수용체 열화의 유사한 기전은 티로신 키나아제 수용체 (Monsonego-Oran 등, (2002) Febs letters 528, 83-89; 및 Fasen 등, (2008) Cell & Molecular Biology 9. 251-266), 뿐만 아니라 스테로이드 수용체 (Callige 등, (2005) Mol. Cell. Biol. 25. 4349-4358; 및 Pollenz 등, (2006) Chemico-Biological Interactions. 164. 49-59)에 대하여 보고되고 있다.
CD33 신호전달의 활성화는 또한 타고난 면역 세포로부터 전염증 사이토카인 IL-1β, IL-8, 및 TNF-α의 생산에서 감소와 관련되는 것으로 나타났다. CD33의 이들 활성은 포스포이노시티드 3-키나아제 (PI3K)의 활성화를 통해 매개되는 것으로 보인다 (Lajaunias F. 등 (2005). Eur. J. Immunol. 2005. 35: 243-251). ITIM-함유 Siglec 수용체와 활성화 수용체 사이 연관성이 이들 수용체를 결합 및 브릿징하는 세포외 리간드에 의해 매개될 수 있다는 것이 제안되고 있다 (Macauley SM. 등, (2014) Nature Reviews Immunology 14, 653-666).
다중 연구는 타고난 면역력의 조절에서 그리고 면역 반응을 억제 또는 통제하는 세포-세포 상호작용 매개에서 CD33에 대하여 억제 역할을 표시한다 (Crocker 등, (2012) Ann. N Y Acad. Sci. 1253, 102-111; Pillai 등, (2012) Annu. Rev. Immunol. 30, 357-392.; von Gunten and Bochner (2008) Ann. N Y Acad. Sci. 1143, 61-82; Griciuc 등, (2013) Neuron 78, 1-13; Ferlazzo 등 (2000) Eur J Immunol. 30:827-833; Vitale 등 (2001) Proc Natl Acad Sci USA. 98:5764-5769; 및 Herna'ndez-Caselles T. 등, (2006) Journal of Leukocyte Biology.79, 46-58). 마우스에서 CD33 불활성화는 명백한 발달성, 조직학적, 또는 행동 비정상으로 이어지고; CD33-결핍된 마우스는 정상적으로 번식하여, CD33이 필수적인 유전자가 아니라는 것 그리고 그것의 기능이 타고난 면역력에 제한될 수 있다는 것을 표시한다 (Brinkman-Van der Linden 등, (2003) Mol. Cell. Biol. 23, 4199-4206).
확장된 집단 (예를 들면, 수 천의 개체)상에서 수행된 전유전체 연관성 연구 (GWAS)는 알츠하이머병의 후기 발병에 대한 위험의 유전적 조절물질로서 CD33내 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNPs) rs3865444 CC (AKA rs3826656) 및 rs3865444 AA 를 확인하였다. 소수의 동종접합성 대립유전자 rs3865444 AA SNP는 감소된 전장 CD33 단백질 수준 및 Ig-V 리간드 결합 도메인 (Raj T. 등 (2014) Human Molecular Genetics)이 부족한 CD33 동형체의 증가된 발현과 관련되고 있고 알츠하이머병 (AD)에 대한 보호를 제공하도록 제안되고 있다. 그에 반해서, 동종접합성 rs3865444 CC 대립유전자는 AD에 대한 위험 대립유전자를 구성하는 것으로 제안되고 있고 어린 및 늙은 개체의 주변 단핵세포에서 전장 CD33의 세포 표면 발현의 ~7-배수 증가와 관련된다. 이종접합성 rs3865444 AC 는 CD33 세포 표면 발현의 3-4 배수 증가를 나타내고 또한 AD에 대하여 위험으로 간주된다. CD33은 미세아교세포 및 대식세포의 활성화의 전체 3 병기에서 발현되지만, CD33 표면 발현상에서 연령의 효과는 없다. 다형성 대립유전자 rs3865444 CC 및 rs3865444 AC 는 시험관내 아밀로이드 베타 42 (A-베타 42) 펩타이드를 식균작용하는 단핵세포의 감소된 능력 및 생체내 증가된 신경증의 아밀로이드 병리학 및 원섬유성 아밀로이드와 또한 관련된다.
덜 기능성일 수 있고 아밀로이드 베타 플라크를 제거하는데 실패할 수 있는 활성화된 인간 미세아교세포의 증가된 수는 또한 위험 대립유전자에 대하여 보고되고 있고, rs3865444 C 대립유전자가 기능성 특성에 대하여 우세할 수 있고 알츠하이머병 (AD)의 사전-증상기에서 아밀로이드 축적에 역할을 할 수 있다는 것을 나타낸다. rs3865444 C 가 더 큰 신경증의 아밀로이드 플라크 부하와 관련되어도, 신경섬유 엉킴의 부하와 관련되지 않는다 (Bradshaw 등, (2013) Nat. Neurosci. 16, 848-850.). 상기 SNP는 CD33 유전자의 5' UTR의 국재화된 업스트림이지만, 코딩 영역에서 위치한 기능성 변이체(들)과 연관 비평형을 나타낼 수 있고 (Bertram, 등 (2008). Am. J. Hum. Genet. 83, 623-632; Hollingworth, 등 (2011) Nat. Genet. 43, 429-435; 및 Naj, 등 (2011) Nat Genet. 43, 436-441), 이는 엑손 2에 의해 인코딩된 리간드 결합 도메인의 제거 및 대안적인 스플라이싱으로 이어질 수 있다 (Malik 등, (2013) J. Neuros, 33: 13320-13325; 및 Raj 등, (2014), Human Molecular Genetics, 23, 2729). CD33 mRNA 및 단백질 수준, 뿐만 아니라 CD33-양성 미세아교세포의 수는 연령-매칭된 대조군에 비해 AD 뇌에서 증가되는 것으로 나타났다. 그러나, rs3865444 AA 대립유전자의 담체로부터 AD 뇌 미세아교세포는 rs3865444 C 비-보호성 대립유전자의 담체로부터 AD 뇌에 비교된 CD33 발현의 더 낮은 수준 및 불용성 A-베타 42 펩타이드의 감소된 수준과 여전히 관련되었다.
CD33-면역반응성 미세아교세포의 증가된 수는 알츠하이머병 (AD) 사례에서 더 높은 불용성 A-베타 42 수준 및 더 높은 아밀로이드 플라크 부하와 상관관계가 있는 것으로 나타났다. 플라크 및 엉킴 병리학의 절반정량적 조직학적 측정을 이용하여, Walker 등은 SNPs rs3865444 CC (AKA rs3826656)과 rs3865444 AA 대립유전자 사이 병리학에서 유의차 없음을 제안하였다 (Walker 등, (2015) Neurobiology of Aging 36 571-582). 그러나, CD33 mRNA의 증가된 발현은 일시적 피질 뇌 샘플에서 증가하는 AD 병리학과 관련되고 있다 (Walker 등, (2015) Neurobiology of Aging 36 571-582).
기능 연구의 이득 및 손실은 CD33이 모두 A-베타 42의 미세아교 흡수를 억제하는데 충분하고 요구되는 것을 표시하였다. 또한, 시알산-결합 V-유형 면역글로불린-유사 (V-Ig) 도메인이 결실된 CD33m 변이체의 분석은 시알산 결합이 미세아교세포에 의한 A-베타 42 식균작용 및 청소능의 억제를 매개하기 위해 CD33에 요구되는 것을 입증한다 (Perez-Oliva 등, (2011) Glycobiol. 21, 757-770). 추가적으로, CD33 유전자가 제거되는, 알츠하이머병의 APP/PS1 트랜스제닉 마우스 모델은 불용성 A-베타 42 수준 및 A-베타 플라크 부하의 마킹된 감소를 나타낸다 (Griciuc 등, (2013) Neuron 78, 1-13; 및 Bradshaw 등, (2013) Nat. Neurosci. 16, 848-850).
종양학에서, CD33의 감소된 발현으로 이어지는 CD33 변이체는 소아 급성 골수성 백혈병 (AML)으로부터 개선된 생존율과 관련되는 것으로 나타났다. 차도로부터 3-년 전체 생존율은, CD33의 더 낮은 전장 발현과 관련된, rs3865444 AA 변이체와 강한 연관 비평형인, 변이체 rs35112940 GG 를 운반하는 것에 대하여 84%+/- 8%이다. 비-보호성 대립유전자에 대하여 차도율은 68%+/- 15%이다. 보호성 대립유전자의 담체는 또한 더 낮은 재발 위험 및 우월한 무질환 생존을 갖는다. 마찬가지로, 전장 CD33의 46% 넘게 더 낮은 발현과 관련되는, rs12459419의 소수의 변이체 대립유전자 (TT)에 대하여 환자 동종접합성은 변이체 CC 및 CT의 담체보다 좀더 양호한 질환 결과 (52% 대 31%)를 가질 것 같고 다른 유전자형보다 상당히 더 낮은 진단 아세포 CD33 발현을 갖는다. 이것은 항-CD33 항체 및 독성 칼리키아마이신-감마 유도체로 치료를 경험하는 환자에서 균등한 경우이다 (Mortland 등, (2013) Clin Cancer Res; 1-8). 전장 CD33의 발현에서 25% 초과 감소를 보여주는, 2459419 TT 대립유전자의 담체, 뿐만 아니라 rs12459419 CT 대립유전자의 담체는 또한 감소된 알츠하이머병 위험을 표시한다 (Malik M. 등 (2015) Human Molecular Genetics,1-14). 이것은 CD33의 감소된 발현 또는 기능성이 알츠하이머병 및 암에서 유익할 수 있다는 것을 시사한다. 그러나, 생리적으로 관련있는, 1차 면역 세포에서, CD33을 하향조절하는, 또는 CD33 리간드/수용체 상호작용을 차단하는 항-CD33 항체의 능력에 관한 데이터는 보고되지 않고 있다.
CD33에 대한 항체는, 예를 들어, 하기에 기재되어 있다: US7,342,110, US7,557,189, US 8119787, US 8,337,855, US8,124,069, US5,730,982, US7,695,71, WO2012074097, WO2004043344, WO1993020848, WO2012045752, WO2007014743, WO2003093298, WO2011036183, WO1991009058, WO2008058021, WO2011038301, Hoyer 등, (2008) Am. J. Clin. Pathol. 129, 316-323, Rollins-Raval and Roth, (2012) Histopathology 60, 933-942), Perez-Oliva 등, (2011) Glycobiol. 21, 757-770), Ferlazzo 등 (2000) Eur J Immunol. 30:827-833, Vitale 등, (2001) Proc Natl Acad Sci USA. 98:5764-5769, Jandus 등, (2011) Biochem. Pharmacol. 82, 323-332, O'Reilly and Paulson, (2009) Trends Pharmacol. Sci. 30, 240-248, Jurcic, (2012) Curr Hematol Malig Rep 7, 65-73, 및 Ricart, (2011) Clin. Cancer Res. 17, 6417-6427. 그러나, 이들 항체는, CD33을 발현하는 백혈병 세포를 살해하기 위해, 세포상에서 CD33을 검출하는데 또는 독소, 예컨대 칼리키아마이신-감마 유도체를 표적하는데 주로 사용된다. 또한, 항-종양 면역 반응 향상에 의해, CD33을 발현시키지 않는 고형 종양 세포를 치료하는 항-CD33 항체의 능력을 보여주는 데이터는 보고되지 않고 있다.
따라서, 요망되지 않는 CD33 활성과 관련된 1종 이상의 질환, 장애, 및 병태 치료용 치료 항체가 필요하다.
특허, 특허 출원 및 공개를 포함하는, 본 명세서에서 인용된 모든 참조문헌은 이로써 그 전문이 참고로 편입된다.
발명의 요약
본 개시내용은 일반적으로 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체, 및 그와 같은 CD33 제제를 사용하는 방법을 지향한다. 본 명세서에서 제공된 방법은 하기를 예방하고, 그 위험을 감소시키거나, 그것을 가지고 있는 개체를 치료하는데 사용된다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 고형 및 혈액 암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자. 본 명세서에서 제공된 방법은 그것이 필요한 개체에서 1종 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 기능성, 이동, 또는 증식을 유도 또는 촉진하는데 또한 사용된다. 본 명세서에서 제공된 방법은 그것이 필요한 개체에서 조절 T 세포, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포, 종양-매립된 면역억제제 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 급성 골수 백혈병 (AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 세포, 또는 만성 골수 백혈병 (CML) 세포의 활성, 기능성, 또는 생존을 감소시키는데 추가로 사용된다.
본 개시내용의 특정 측면은, 적어도 부분적으로, 인간 1차 면역 세포 및 CD33-발현 세포주 상의 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킬 수 있고, 거나 적혈구 상의 CD33 리간드의 CD33에의 결합을 억제할 수 있는 항-CD33 항체의 확인을 기반으로 한다 (참조, 예를 들면, 실시예 1-5). 유익하게는, 항-CD33 항체는 65 pM 내지 20 pM 범위인 반-최대 효과적인 농도 (EC50)로 CD33의 세포 수준을 감소시키고, 8.0 mg/kg 내지 2.0 mg/kg 범위의 반-최대 효과적인 농도 (EC50)로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키고, 200 pM 내지 10 pM 범위의 EC50로 인간 세포, 예컨대 인간 수지상 세포에 결합하고, 그리고 300 pM 내지 10 pM 범위로 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 갖는다.
따라서, 본 개시내용의 특정 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준을 감소키기거나, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두이다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 나타낸다: a. 항-CD33 항체 젬투주맙보다 더 낮은 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며; b. 항-CD33 항체 젬투주맙 또는 린투주맙보다 더 낮은 EC50로 인간 수지상 세포에 결합하고; c. 항-CD33 항체 젬투주맙 또는 린투주맙보다 더 낮은 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시키고; d. 300 pM 내지 10 pM 범위의 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 상기 KD는 대략 25 ℃의 온도에서 결정되고; e. 200 pM 내지 10 pM 범위의 EC50로 인간 수지상 세포에 결합하고, 상기 EC50는 대략 4 ℃의 온도에서 결정되고; f. 65 pM 내지 20 pM 범위의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시키거나; 또는 g. 8.0 mg/kg 내지 2.0 mg/kg 범위의 EC50로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)는 300 pM 미만이고, 상기 KD는 대략 25 ℃의 온도에서 결정된다. 일부 구현예에서, KD는 1가 항체를 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, KD는 1가 형태로 전장 항체를 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 200 pM 미만인 EC50으로 인간 수지상 세포에 결합하고, 상기 EC50는 대략 4 ℃의 온도에서 결정된다. 일부 구현예에서, CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키는 EC50은 마우스를 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 65 pM 내지 22 pM, 또는 22 pM 미만 범위의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 65 pM 이하, 60 pM 이하, 55 pM 이하, 50 pM 이하, 45 pM 이하, 40 pM 이하, 35 pM 이하, 30 pM 이하, 25 pM 이하, 24 pM 이하, 23 pM 이하, 22 pM 이하, 21 pM 이하, 20 pM 이하, 10 pM 이하, 9 pM 이하, 8 pM 이하, 7 pM 이하, 6 pM 이하, 또는 5 pM 이하의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다.
본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두이고, 그리고 상기 항-CD33 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 나타낸다: a. 항-CD33 항체 젬투주맙의 해리 상수보다 다 낮은 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며; b. 항-CD33 항체 젬투주맙 또는 린투주맙보다 더 낮은 EC50로 인간 수지상 세포에 결합하고; c. 항-CD33 항체 젬투주맙 또는 린투주맙보다 더 낮은 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시키고; d. 300 pM 내지 10 pM 범위의 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 상기 KD는 대략 25 ℃의 온도에서 결정되고; e. 200 pM 내지 10 pM 범위의 EC50로 인간 수지상 세포에 결합하고, 상기 EC50는 대략 4 ℃의 온도에서 결정되고; f. 65 pM 내지 20 pM 범위의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시키거나; 또는 g. 8.0 mg/kg 내지 2.0 mg/kg 범위의 EC50로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)는 300 pM 미만이고, 상기 KD는 대략 25 ℃의 온도에서 결정된다. 일부 구현예에서, KD는 1가 항체를 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, KD는 1가 형태로 전장 항체를 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 200 pM 미만인 EC50으로 인간 수지상 세포에 결합하고, 상기 EC50는 대략 4 ℃의 온도에서 결정된다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 65 pM 내지 22 pM, 또는 22 pM 미만 범위의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 65 pM 이하, 60 pM 이하, 55 pM 이하, 50 pM 이하, 45 pM 이하, 40 pM 이하, 35 pM 이하, 30 pM 이하, 25 pM 이하, 24 pM 이하, 23 pM 이하, 22 pM 이하, 21 pM 이하, 20 pM 이하, 10 pM 이하, 9 pM 이하, 8 pM 이하, 7 pM 이하, 6 pM 이하, 또는 5 pM 이하의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키는 EC50은 마우스를 사용하여 결정된다.
이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키고, CD33의 세포내 수준을 감소시키고, CD33의 총 수준을 감소시키거나, 또는 이들의 임의의 조합이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33 분해, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 흘리기, CD33 발현의 하향조절, 또는 이들의 임의의 조합을 유도한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하지 않으면서 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준을 감소시키고 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항체는 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 약 8.0 mg/kg 내지 약 2.0 mg/kg, 또는 2.0 mg/kg 미만 범위의 EC50로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준을 감소시키지 않으면서 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 세포 표면 클러스터링을 억제한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 1종 이상의 CD33 활성을 억제한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 CD33 활성: (a) 시알산-함유 당단백질, 시알산-함유 당지질, 또는 둘 모두에 결합하는 CD33; (b) SHP1 또는 SHP2에 결합하는 CD33; (c) 1종 이상의 SRC 계열 티로신 키나제에 의해 유도된 Tyr-340, Tyr-358, 또는 둘 모두의 인산화, 선택적으로, 상기 1종 이상의 SRC 계열 티로신 키나제는 Syk, LCK, 및 FYM으로 구성된 군으로부터 선택되고; (d) Ser-307, Ser-342, 또는 둘 모두의 인산화, 선택적으로 상기 인산화는 단백질 키나제 C에 의해 유도되고; (e) 1종 이상의 항-염증성 사이토카인의 조절된 발현으로서, 선택적으로 상기 1종 이상의 항-염증성 사이토카인은 IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b, 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체로 구성된 군으로부터 선택되고; (f) 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 및 미세신경교 세포로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포에서 1종 이상의 항-염증성 사이토카인의 조절된 발현; (g) 1종 이상의 전-염증 사이토카인의 조절된 발현으로서, 선택적으로 상기 1종 이상의 전-염증 사이토카인은 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, 및 MIP-1-베타로 구성된 군으로부터 선택되고; (h) 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 및 미세신경교 세포로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포에서 1종 이상의 전-염증 사이토카인의 조절된 발현; (i) C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, PYCARD, CD14, CD16, HLA-DR, 및 CCR2로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질의 조절된 발현; (j) 세포외 신호-조절된 키나제 (ERK) 인산화의 억제; (k) 다중 세포 단백질 상의 티로신 인산화를 증가시키고; (l) C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)의 조절된 발현; (m) CCL19 및 CCL21 발현 세포를 향한 미세신경교 세포 화학주성의 억제; (n) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, M2 미세아교, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및 M2 대식세포로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포에 의해 유도된 T 세포 증식을 감소시키고; (o) 파골세포 생산의 억제, 파골세포생성의 감소된 속도, 또는 둘 모두; (p) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및 M2 미세아교로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포의 생존을 감소시키고; (q) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및 M2 미세아교로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포의 증식을 감소시키고; (r) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및 M2 미세아교로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포의 이동을 억제하고; (s) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및 M2 미세아교로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포 중 1종 이상의 기능을 감소시키고; (t) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및 M2 미세아교로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포의 성숙을 억제하고; (u) 세포자멸적 뉴런 청소능, 신경 조직 잔해 청소능, 기능이상 시냅스 청소능, 비-신경 조직 잔해 청소능, 박테리아 청소능, 다른 이물질 청소능, 질환 유발 단백질 청소능, 질환 유발 펩타이드 청소능, 및 종양 세포 청소능으로 구성된 군으로부터 선택된 청소능 중 하나 이상의 유형의 억제로서; 선택적으로 상기 질환 유발 단백질은 하기로 구성된 군으로부터 선택되고: 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드 및 상기 종양 세포는 로 구성된 군으로부터 선택된 암이고 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 및 갑상선암; (v) 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 기능이상 시냅스, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 질환 유발 단백질, 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 핵산, 또는 종양 세포 중 하나 이상의 식균작용의 억제로서; 선택적으로 상기 질환 유발 핵산은 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA이고, 질환 유발 단백질은 하기로 구성된 군으로부터 선택되고: 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드, 및 상기 종양 세포는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 또는 갑상선암로 구성된 군으로부터 선택된 암이고; (w) 종양 세포 상의 CD33 리간드에 결합하고; (x) 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, 및 대식세포로 구성된 군으로부터 선택된 세포 상의 CD33 리간드에 결합하고; (y) 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 억제; (z) 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항종양 세포 증식 활성을 억제하고; (aa) 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항종양 세포 전이 활성을 억제하고; (bb) 1종 이상의 ITAM 모티프 함유 수용체의 억제로서, 선택적으로 상기 1종 이상의 ITAM 모티프 함유 수용체는 TREM1, TREM2, FcgR, DAP10, 및 DAP12로 구성된 군으로부터 선택되고; (cc) 1종 이상의 패턴 인식 수용체 (PRRs)에 의한 신호전달의 억제로서, 선택적으로 상기 1종 이상의 PRRs는 병원체-관련된 분자 패턴 (PAMPs)를 확인하는 수용체, 손상-관련된 분자 패턴 (DAMPs)를 확인하는 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되고; (dd) 모티프 D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I (서열식별번호:247)를 포함하는 1종 이상의 수용체의 억제; (ee) 1종 이상의 톨(Toll)-유사 수용체에 의한 신호전달의 억제; (ff) JAK-STAT 신호전달 경로의 억제; (gg) 활성화된 B 세포 (NFκB)의 핵 인자 카파-경쇄-인핸서의 억제; (hh) ITAM 모티프 함유 수용체의 탈-인산화; (ii) 1종 이상의 염증성 수용체의 조절된 발현으로서, 선택적으로 상기 1종 이상의 염증성 수용체는 CD86을 포함하고 상기 1종 이상의 염증성 수용체는 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상 상에서 발현되고; (jj) 1종 이상의 CD33-의존적 유전자의 발현을 증가시키고; (kk) 파괴된 CD33-의존적 유전자 발현의 정규화; (ll) 1종 이상의 ITAM-의존적 유전자의 발현을 증가시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 ITAM-의존적 유전자는 활성화된 T 세포 (NFAT) 전사 인자의 핵 인자에 의해 활성화되고; (mm) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 분화를 촉진하고; (nn) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 기능성을 촉진하고; (oo) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양으로의 침윤을 향상시키고; (pp) 종양, 말초 혈액, 또는 다른 림프양 장기에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포의 수를 증가시키고; (qq) 골수-유래된 억제 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고; (rr) 종양 또는 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인의 발현을 증가시키되, 선택적으로 상기 종양-촉진 사이토카인은 TGF-베타 또는 IL-10이고; (ss) 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤을 증가시키고; (tt) 골수-유래된 억제 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고 (MDSC); (uu) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 활성화를 감소시키고; (vv) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 NK 세포의 침윤을 감소시키고; (ww) 면역 반응을 향상시키는 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 B 림프구의 침윤을 감소시키고; (xx) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 침윤을 감소시키고; (yy) 종양 부피를 증가시키고; (zz) 종양 성장률을 증가시키고; (aaa) 종양 재발의 속도를 증가시키고; (bbb) 항종양 T 세포 반응을 조절하는 1종 이상의 면역-요법의 효능을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 면역-요법은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합, 또는 1종 이상의 암 백신으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질을 표적으로 하는 면역-요법이고; (ccc) PLCγ/PKC/칼슘 동원의 억제; 및 (ddd) PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 억제. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 1종 이상의 CD33 활성은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: (a) 시알산-함유 당단백질, 시알산-함유 당지질, 또는 둘 모두에 결합하는 CD33; (b) 1종 이상의 항-염증성 사이토카인의 조절된 발현으로서, 선택적으로 상기 1종 이상의 항-염증성 사이토카인은 IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b, 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체로 구성된 군으로부터 선택되고; (c) 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 및 미세신경교 세포로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포에서 1종 이상의 항-염증성 사이토카인의 조절된 발현; (d) 1종 이상의 전-염증 사이토카인의 조절된 발현으로서, 선택적으로 상기 1종 이상의 전-염증 사이토카인은 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, 및 MIP-1-베타로 구성된 군으로부터 선택되고; (e) 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 및 미세신경교 세포로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포에서 1종 이상의 전-염증 사이토카인의 조절된 발현; (f) C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, PYCARD, CD14, CD16, HLA-DR, 및 CCR2로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질의 조절된 발현; (g) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, M2 미세아교, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및 M2 대식세포로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포에 의해 유도된 T 세포 증식을 감소시키고; (h) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및 M2 미세아교로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포의 증식을 감소시키고; (i) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및 M2 미세아교로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포 중 1종 이상의 기능을 감소시키고; (j) 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 기능이상 시냅스, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 질환 유발 단백질, 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 핵산, 또는 종양 세포 중 하나 이상의 식균작용의 억제로서; 선택적으로 상기 질환 유발 핵산은 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA이고, 질환 유발 단백질은 하기로 구성된 군으로부터 선택되고: 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드, 및 상기 종양 세포는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 또는 갑상선암로 구성된 군으로부터 선택된 암이고; (k) 종양 세포 상의 CD33 리간드에 결합하고; (l) 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, 및 대식세포로 구성된 군으로부터 선택된 세포 상의 CD33 리간드에 결합하고; (m) 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 억제; (n) 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항종양 세포 증식 활성을 억제하고; (o) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 기능성을 촉진하고; (p) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 CD45+CD14+ 골수 세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양으로의 침윤을 향상시키고; (q) 종양, 말초 혈액, 또는 다른 림프양 장기에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포의 수를 증가시키고; (r) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 및/또는 비-종양형성 CD45+CD14+ 골수 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고; (s) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC) 및/또는 비-종양형성 CD45+CD14+ 골수 세포의 생존을 향상시키고; (t) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 활성화를 감소시키고; (u) 종양 사멸화 잠재성을 갖는 CD45+CD3+ T 림프구의 활성화를 감소시키고; (v) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 NK 세포의 침윤을 감소시키고; (w) 면역 반응을 향상시키는 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 B 림프구의 침윤을 감소시키고; (x) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 침윤을 감소시키고; (y) CD45+CD3+ T 림프구의 침윤을 감소시키고; (z) 종양 부피를 증가시키고; (aa)종양 성장률을 증가시키고; 그리고 (bb) 항종양 T 세포 반응을 조절하는 1종 이상의 면역-요법의 효능을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 면역-요법은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합, 또는 1종 이상의 화학요법 제제 및/또는 암 백신으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질을 표적으로 하는 면역-요법이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 활성을 나타낸다: (a) 종양 침윤 CD3+ T 세포의 수를 증가시키고; (b) 비-종양형성 CD14+ 골수 세포에서 CD33의 세포 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고; (c) 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고; (d) 1종 이상의 세포에서 PD-L1 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (e) 1종 이상의 세포에서 PD-L2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (f) 1종 이상의 세포에서 B7-H2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (g) 1종 이상의 세포에서 B7-H3 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (h) 1종 이상의 세포에서 CD200R 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (i) 1종 이상의 세포에서 CD163 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (j) 1종 이상의 세포에서 CD206 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (k) 고형 종양의 고형 성장률을 감소시키고; (l) 종양 부피를 감소시키고; (m) 1종 이상의 PD-1 억제제의 효능을 증가시키고; (n) 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능을 증가시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법은 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적으로 하고; (o) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 증가시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합이고; (p) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 존재에서 T 세포의 증식을 증가시키고; (q) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 억제하고; 그리고 (r) 화학 또는 방사성 독소에 접합될 때, 고형 종양 및 관련된 혈관에서 CD33-발현 면역억제제 비-종양형성 골수 세포 및/또는 비-종양형성 CD14-발현 세포을 사멸시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 제제에 접합되지 않고, 선택적으로 상기 제제는 약물, 독소, 화학치료제, 또는 방사선동위원소이다.
이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 불연속 CD33 에피토프에 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 불연속 CD33 에피토프는 2종 이상의 펩타이드, 3종 이상의 펩타이드, 4종 이상의 펩타이드, 5종 이상의 펩타이드, 6종 이상의 펩타이드, 7종 이상의 펩타이드, 8종 이상의 펩타이드, 9종 이상의 펩타이드, 또는 10종 이상의 펩타이드를 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 각각의 상기 펩타이드는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열의 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 11 이상, 12 이상, 13 이상, 14 이상, 15 이상, 16 이상, 17 이상, 18 이상, 19 이상, 또는 20 또는 그 초과 개의 아미노산 잔기; 또는 상기 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 11 이상, 12 이상, 13 이상, 14 이상, 15 이상, 16 이상, 17 이상, 18 이상, 19 이상, 또는 20 또는 그 초과 개의 아미노산 잔기를 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 형태적 에피토프에 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-259, 19-135, 145-228, 또는 229-259 내의; 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-259, 19-135, 145-228, 또는 229-259에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: i. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; ii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; iii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98에 대응하는포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; iv. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; v. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; vi. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; vii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; 및 viii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기에 결합한다: 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 1종 이상의 아미노산 잔기. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기에 결합한다: 서열식별번호: 1의 Y49, Y50, 및 K52로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열식별번호: 1의 Y49, Y50, 및 K52로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 1종 이상의 아미노산 잔기. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49 및 K52, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49 및 K52에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49, Y50, 및 K52, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49, Y50, 및 K52에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33에 결합하기 위해 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으 로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체와 경쟁한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체와 본질적으로 동일한 CD33 에피토프에 결합한다: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준은 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, T 세포, 및 대식세포로 구성된 군으로부터 선택된 일차 세포, 또는 세포주 상에서 측정되고, 그리고 상기 CD33의 세포 수준은 시험관내 세포 검정을 이용하여 측정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 1종 이상의 CD33 리간드는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 적혈구 상에서 발현된 CD33 리간드, 박테리아 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 세포자멸적 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 종양 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 바이러스 상에서 발현된 CD33 리간드, 수지상 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 신경 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 신경교 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 미세신경교 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 별아교세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 베타 아밀로이드 플라크 상의 CD33 리간드, 타우 엉킴 상의 CD33 리간드, 질환 유발 단백질 상의 CD33 리간드, 질환 유발 펩타이드 상의 CD33 리간드, 대식세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 천연 살해 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 도움 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 세포독성 T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, B 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양-매립된 면역억제제 대식세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 조절 T 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 분비된 뮤신, 시알산, 시알산-함유 당지질, 시알산-함유 당단백질, 알파-2,6-연결된 시알산-함유 당지질, 알파-2,6-연결된 시알산-함유 당단백질, 알파-2,3-연결된 시알산-함유 당지질, 알파-2,3-연결된 시알산-함유 당단백질, 알파-1-산 당단백질 (AGP), CD24 단백질, 및 강글리오사이드.
이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인, 중쇄 가변 도메인, 또는 둘 모두는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서: (a) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:22의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:26의 아미노산 서열을 포함하고; (b) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하고; (c) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:69의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하고; (d) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:24의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하고; (e) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:68의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:74의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:77의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하고; (f) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (g) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (h) 상기 HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (i) 상기 HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (j) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:184의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:185의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:186의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:187의 아미노산 서열을 포함하고; (k) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:231의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (l) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:228의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:229의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:230의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:232의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:233의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 그리고 상기 중쇄 가변 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인은 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3을 포함하고, 상기 중쇄 가변 도메인은 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 HVR-H3이다: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인은 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3을 포함하고, 상기 중쇄 가변 도메인은 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 30-48, 112-153, 192-202, 및 241-243으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및/또는 서열식별번호: 49-66, 154-183, 203-213, 및 244-246으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 경쇄 가변 도메인; 및/또는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2 로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-259, 19-135, 145-228, 또는 229-259 내의; 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-259, 19-135, 145-228, 또는 229-259에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: i. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; ii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; iii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98에 대응하는포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; iv. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; v. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; vi. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; vii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; 및 viii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기.
본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-228 내의; 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-228에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: i. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; ii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; iii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98에 대응하는포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; iv. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; v. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; vi. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; vii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; 및 viii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기.
본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 하기에 결합한다: 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 1종 이상의 아미노산 잔기. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기에 결합한다: 서열식별번호: 1의 Y49, Y50, 및 K52로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열식별번호: 1의 Y49, Y50, 및 K52로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 1종 이상의 아미노산 잔기. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49 및 K52, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49 및 K52에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49, Y50, 및 K52, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49, Y50, 및 K52에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다.
본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 중쇄 가변 도메인, 경쇄 가변 도메인, 또는 둘 모두는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합. 일부 구현예에서: (a) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:22의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:26의 아미노산 서열을 포함하고; (b) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하고; (c) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:69의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하고; (d) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:24의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하고; (e) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:68의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:74의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:77의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하고; (f) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (g) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (h) 상기 HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (i) 상기 HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (j) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:184의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:185의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:186의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:187의 아미노산 서열을 포함하고; (k) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:231의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (l) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:228의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:229의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:230의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:232의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:233의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 경쇄 가변 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및 상기 중쇄 가변 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 또는 서열식별번호: 226-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열.
본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 서열식별번호: 30-48, 112-153, 192-202, 및 241-243으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및/또는 서열식별번호: 49-66, 154-183, 203-213, 및 244-246으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 경쇄 가변 도메인; 및/또는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2 로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 CD33에 결합하기 위해 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.2 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체와 경쟁한다. 본 개시내용의 다른 측면은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체와 본질적으로 동일한 CD33 에피토프에 결합하는 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이다: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2. 본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 상기 중쇄 가변 도메인은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 상기 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인은 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3을 포함하고, 상기 중쇄 가변 도메인은 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 HVR-H3이다: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.21A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2. 본 개시내용의 다른 측면은 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항-CD33 항체에 관한 것이고, 여기서 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인은 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3을 포함하고, 상기 중쇄 가변 도메인은 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항체는 IgG 부류, IgM 부류, 또는 IgA 부류의 것이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서: (a) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG1 아이소타입을 가지며 하기로 구성된 군으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고: N297A, D265A, D270A, L234A, L235A, G237A, P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G, A330R, C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E, P331S, S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, T256E, N297Q, P238S, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, T394D, 및 이들의 임의의 조합, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르거나, 또는 글리신 236에 대응하는 위치의 Fc 영역에서 아미노산 결실을 포함하고; (b) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG1 아이소타입을 가지며 IgG2 아이소타입 중쇄 불변 도메인 1(CH1) 및 힌지 영역을 포함하고, 선택적으로 상기 IgG2 아이소타입 CH1 및 힌지 영역은 ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVERKCCVECPPCP (서열식별번호:214)의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 선택적으로 상기 항체 Fc 영역은 S267E 아미노산 치환, L328F 아미노산 치환, 또는 둘 모두, 및/또는 N297A 또는 N297Q 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르고; (c) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG2 아이소타입을 가지며, 하기로 구성된 군: P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, V309L, A330S, P331S, C214S, C232S, C233S, S267E, L328F, M252Y, S254T, T256E, H268E, N297A, N297Q, A330L, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르고; (d) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG4 아이소타입을 가지며, 하기로 구성된 군: L235A, G237A, S228P, L236E, S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T, T256E, E233P, F234V, L234A/F234A, S228P, S241P, L248E, T394D, N297A, N297Q, L235E, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르거나; 또는 (e) 상기 항-CD33 항체는 혼성 IgG2/4 아이소타입을 가지며, 그리고 선택적으로 상기 항체는 인간 IgG2의 아미노산 118 내지 260 및 인간 IgG4의 아미노산 261 내지 447을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따른다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서: (a) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG1 아이소타입을 가지며, 하기로 구성된 군: N297A, N297Q, D270A, D265A, L234A, L235A, C226S, C229S, P238S, E233P, L234V, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, L234F, L235E, P331S, T394D, A330L, M252Y, S254T, T256E, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르고; (b) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG2 아이소타입을 가지며, 하기로 구성된 군: P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, H268E, V309L, N297A, N297Q, A330S, P331S, C232S, C233S, M252Y, S254T, T256E, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르거나; 또는 (c) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG4 아이소타입을 가지며, 하기로 구성된 군: E233P, F234V, L234A/F234A, L235A, G237A, E318A, S228P, L236E, S241P, L248E, T394D, M252Y, S254T, T256E, N297A, N297Q, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따른다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서: (a) 상기 Fc 영역은 추가로, A330L, L234F; L235E, P331S, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에서 1개 이상의 추가 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르고; (b) 상기 Fc 영역은 추가로, M252Y, S254T,T256E, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에서 1개 이상의 추가 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르거나; 또는 (c) 상기 Fc 영역은 추가로, EU 넘버링에 따라 S228P 아미노산 치환을 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, CD33 단백질은 포유동물 단백질 또는 인간 단백질이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, CD33 단백질은 야생형 단백질이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, CD33 단백질은 천연 발생 변이체이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, CD33 단백질은 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 중성구, 인간 T 세포, 인간 T 도움 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구, 및 인간 미세아교로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포 상에서 발현된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 포유동물 CD33 단백질, 인간 CD33 단백질, 또는 둘 모두에 특이적으로 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 인간 CD33, 마우스 CD33, 또는 둘 모두에 특이적으로 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 pH 의존 방식으로 CD33에 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 5.5 내지 8.0 범위의 pH로 CD33에 결합한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는5.0 미만의 pH에서 CD33로부터 해리된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 인간 CD33 또는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체 단편이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 인간 CD33, 인간 CD33의 천연 발생 변이체, 및 인간 CD33의 질환 변이체로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 인간 단백질에 결합하는 항체 단편이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항체 단편은 인간 CD33, 인간 CD33의 천연 발생 변이체, 및 인간 CD33의 질환 변이체로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 인간 단백질에 결합하는 제2 항체 단편에 가교결합된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 또는 scFv 단편이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 쥣과 항체이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 인간화된 항체, 이중특이적 항체, 단클론성 항체, 다가 항체, 접합된 항체, 또는 키메라성 항체이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 제1 항원 및 제2 항원을 인식하는 이중특이적 항체이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD33이고 상기 제2 항원은 하기이다: (a) 상기 혈액-뇌-장벽을 가로질로 수송을 촉진하는 항원; (b) 하기로 구성된 군으로부터 선택된 혈액-뇌-장벽을 가로질로 수송을 촉진하는 항원: 트랜스페린 수용체 (TR), 인슐린 수용체 (HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체 (IGFR), 저밀도 지질단백질 수용체 관련된 단백질 1 및 2 (LPR-1 및 2), 디프테리아 독소 수용체, CRM197, llama 단일 도메인 항체, TMEM 30(A), 단백질 형질도입 도메인, TAT, Syn-B, 페네트라틴, 폴리-아르기닌 펩타이드, 안지오펩 펩타이드, 및 ANG1005; (c) 질환 유발 펩타이드 또는 단백질 및 질환 유발 핵산으로 구성된 군으로부터 선택된 질환 유발 제제로서, 상기 질환 유발 펩타이드 또는 단백질은 하기로 구성된 군으로부터 선택되고: 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드, 및 질환 유발 핵산은 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA; (d) 면역 세포 상에 발현된 리간드 및/또는 단백질로서, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, 및 포스파티딜세린으로 구성된 군으로부터 선택된 상기 리간드 및/또는 단백질; 및 (e) 1종 이상의 종양 세포 상에서 발현되는 단백질, 지질, 다당류, 또는 당지질이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 접합된 항체이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 검출가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 독소에 접합된다: 리신, 리신 A-사슬, 독소루비신, 다우노루비신, 메이탄시노이드, 탁솔, 에티듐 브로마이드, 미토마이신, 에토포시드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 디하이드록시 안트라신 디온, 악티노마이신, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소 (PE) A, PE40, 아브린, 아브린 A 사슬, 모덱신 A 사슬, 알파-사르신, 젤로닌, 마이토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 큐리신, 크로틴, 칼리키아마이신, 사포나리아 오피시날리스 억제제, 글루코코르티코이드, 아우리스타틴, 아우로마이신, 이트륨, 비스무트, 콤브레스타틴, 듀오카르마이신, 돌라스타틴, cc1065, 및 시스플라틴. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 질환 유발 제제에 특이적으로 결합하는 1종 이상의 항체 와 함께 사용된다: 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 단백질, 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드, 및 이들의 임의의 조합; 또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 면역조절 단백질에 결합하는 1종 이상의 항체: CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, TREM1, TREM2, 시글렉-5, 시글렉-7, 시글렉-9, 시글렉-11, 포스파티딜세린, 질환 유발 핵산, 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA, 및 이들의 임의의 조합. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 약 100 nM 내지 약100 pM, 또는 100 pM 미만 범위인 인간 CD33 및 마우스 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 그리고 상기 KD는 25 ℃의 온도에서 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 약 10 nM 내지 약 500 pM, 또는 미만 500 pM 범위인 인간 CD33 에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 및 상기 KD는 25 ℃의 온도에서 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 약 100 nM 내지 약 100 pM, 또는 100 pM 미만 범위인 인간 CD33 에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 및 상기 KD는 25 ℃의 온도에서 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 약 100 nM 내지 약100 pM, 또는 100 pM 미만의 범위인 마우스 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 그리고 상기 KD는 25 ℃의 온도에서 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, KD는 1가 항체를 사용하여 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, KD는 1가 형태로 전장 항체를 사용하여 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 제제에 접합되지 않고, 선택적으로 상기 제제는 약물, 독소, 화학치료제, 또는 방사선동위원소이다.
본 개시내용의 다른 측면은 이전의 구현예 중 임의의 것의 항-CD33 항체를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 측면은 핵산 이전의 구현예 중 임의의 것의 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 측면은 이전의 구현예 중 임의의 것의 벡터를 포함하는 숙주세포에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 측면은 항-CD33 항체를 생성하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 이전의 구현예 중 임의의 것의 숙주세포를 배양하여 항-CD33 항체를 생성하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 숙주세포에 의해 생성된 항-CD33 항체를 회수하는 것을 포함한다. 본 개시내용의 다른 측면은 이전의 구현예 중 임의의 것의 방법에 의해 생성된 단리된 항-CD33 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 측면은 이전의 구현예 중 임의의 것의 항-CD33 항체, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 개시내용의 다른 측면은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 질환, 장애, 또는 손상을 예방하고, 그 위험을 감소시키거나, 그것들을 치료하는 방법에 관한 것이다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자, 상기 방법은 그것이 필요한 개체에게, CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 치료적 유효량의 제제를 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 제제에 관한 것이고, 상기 제제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 질환, 장애, 또는 손상을 예방하고, 그 위험을 감소시키거나 그것들을 치료하는데 사용된다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 이들 둘 모두인 제제의 용도에 관한 것이고, 상기 용도는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 질환, 장애, 또는 손상을 예방하고, 그 위험을 감소시키거나 그것들을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 것이다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자. 일부 구현예에서, 제제는 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 1종 이상의 CD33 리간드를 억제하는 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제제는 단리된 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 이전의 구현예 중 임의의 것의 항-CD33 항체이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 질환, 장애, 또는 손상은 암이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 제제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 CD33 활성을 억제한다: (a) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 비-종양형성 CD14+ 골수 세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 증식, 성숙, 이동, 분화, 및/또는 기능성을 촉진하고; (b) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양으로의 침윤을 향상시키고; (c) 종양, 말초 혈액, 또는 다른 림프양 장기에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포 및/또는 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 증가시키고; (d) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 및/또는 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고; (e) 종양 또는 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인의 발현을 증가시키되, 선택적으로 상기 종양-촉진 사이토카인은 TGF-베타 또는 IL-10이고; (f) 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤을 증가시키고; (g) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 활성화를 감소시키고; (h) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 침윤을 감소시키고; (i) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 NK 세포의 침윤을 감소시키고; (j) NK 세포의 종양 사멸화 잠재성을 감소시키고; (k) 면역 반응을 향상시키는 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 B 림프구의 침윤을 감소시키고; (l) 종양 부피를 증가시키고; (m) 종양 성장률을 증가시키고; (n) 전이를 증가시키고; (o) 종양 재발의 속도를 증가시키고; (p) 1종 이상의 PD-1 리간드의 발현을 증가시키고; (q) 항종양 T 세포 반응을 조절하는 1종 이상의 면역-요법의 효능을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 면역-요법은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합, 또는 1종 이상의 암 백신으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질을 표적으로 하는 면역-요법이고; (r) PLCγ/PKC/칼슘 동원의 억제; (s) PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 억제; 및 (t) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 감소시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 제제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 활성을 나타낸다: (a) 종양 침윤 CD3+ T 세포의 수를 증가시키고; (b) 비-종양형성 CD14+골수 세포에서 CD33의 세포 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고; (c) 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고; (d) 1종 이상의 세포에서 PD-L1 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (e) 1종 이상의 세포에서 PD-L2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (f) 1종 이상의 세포에서 B7-H2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (g) 1종 이상의 세포에서 B7-H3 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (h) 1종 이상의 세포에서 CD200R 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (i) 1종 이상의 세포에서 CD163 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (j) 1종 이상의 세포에서 CD206 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (k) 고형 종양의 고형 성장률을 감소시키고; (l) 종양 부피를 감소시키고; (m) 1종 이상의 PD-1 억제제의 효능을 증가시키고; (n) 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능을 증가시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법은 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적으로 하고; (o) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 증가시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합이고; (p) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 존재에서 T 세포의 증식을 증가시키고; 그리고 (q) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 억제하고; 그리고 (r) 화학 또는 방사성 독소에 접합될 때, 고형 종양 및 관련된 혈관에서 CD33-발현 면역억제제 골수 세포 및/또는 CD14-발현 세포를 사멸시킨다.
본 개시내용의 다른 측면은 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 타우병증 질환, 감염, 및 암으로 구성된 군으로부터 선택된 질환, 장애, 또는 손상을 예방하고, 그 위험을 감소시키거나, 그것들을 치료하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 그것이 필요한 개체에게, CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 치료적 유효량의 제제를 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 제제에 관한 것이고, 상기 제제는 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 타우병증 질환, 감염, 및 암으로 구성된 군으로부터 선택된 질환, 장애, 또는 손상을 예방하고, 그 위험을 감소시키거나, 그것들을 치료하는데 사용된다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 이들 둘 모두인 제제의 용도에 관한 것이고, 상기 용도는 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 타우병증 질환, 감염, 및 암으로 구성된 군으로부터 선택된 질환, 장애, 또는 손상을 예방하고, 그 위험을 감소시키거나 그것들을 치료하는 약제를 제조하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 제제는 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 1종 이상의 CD33 리간드를 억제하는 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제제는 단리된 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 이전의 구현예 중 임의의 것의 항-CD33 항체이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 질환, 장애, 또는 손상은 암이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 암은 CD33을 발현시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 상기 암은 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 및 다발성 골수종으로 구성된 군으로부터 선택된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 제제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 CD33 활성을 억제한다: (a) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 비-종양형성 CD14+ 골수 세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 증식, 성숙, 이동, 분화, 및/또는 기능성을 촉진하고; (b) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양으로의 침윤을 향상시키고; (c) 종양, 말초 혈액, 또는 다른 림프양 장기에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포 및/또는 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 증가시키고; (d) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 및/또는 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고; (e) 종양 또는 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인의 발현을 증가시키되, 선택적으로 상기 종양-촉진 사이토카인은 TGF-베타 또는 IL-10이고; (f) 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤을 증가시키고; (g) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 활성화를 감소시키고; (h) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 침윤을 감소시키고; (i) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 NK 세포의 침윤을 감소시키고; (j) NK 세포의 종양 사멸화 잠재성을 감소시키고; (k) 면역 반응을 향상시키는 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 B 림프구의 침윤을 감소시키고; (l) 종양 부피를 증가시키고; (m) 종양 성장률을 증가시키고; (n) 전이를 증가시키고; (o) 종양 재발의 속도를 증가시키고; (p) 1종 이상의 PD-1 리간드의 발현을 증가시키고; (q) 항종양 T 세포 반응을 조절하는 1종 이상의 면역-요법의 효능을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 면역-요법은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합, 또는 1종 이상의 암 백신으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질을 표적으로 하는 면역-요법이고; (r) PLCγ/PKC/칼슘 동원의 억제; (s) PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 억제; 및 (t) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 감소시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 제제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 활성을 나타낸다: (a) 종양 침윤 CD3+ T 세포의 수를 증가시키고; (b) 비-종양형성 CD14+골수 세포에서 CD33의 세포 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고; (c) 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고; (d) 1종 이상의 세포에서 PD-L1 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (e) 1종 이상의 세포에서 PD-L2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (f) 1종 이상의 세포에서 B7-H2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (g) 1종 이상의 세포에서 B7-H3 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (h) 1종 이상의 세포에서 CD200R 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (i) 1종 이상의 세포에서 CD163 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (j) 1종 이상의 세포에서 CD206 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (k) 고형 종양의 고형 성장률을 감소시키고; (l) 종양 부피를 감소시키고; (m) 1종 이상의 PD-1 억제제의 효능을 증가시키고; (n) 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능을 증가시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법은 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적으로 하고; (o) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 증가시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합이고; (p) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 존재에서 T 세포의 증식을 증가시키고; 그리고 (q) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 억제하고; 그리고 (r) 화학 또는 방사성 독소에 접합될 때, 고형 종양 및 관련된 혈관에서 CD33-발현 면역억제제 골수 세포 및/또는 CD14-발현 세포를 사멸시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 질환, 장애, 또는 손상은 감염. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 감염은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
본 개시내용의 다른 측면은 암을 예방하고, 그 위험을 감소시키고, 그것을 치료하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 그것이 필요한 개체에게, CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 치료적 유효량의 제제를 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 제제에 관한 것이고, 상기 제제는 그것이 필요한 개체에서 암을 예방하고, 그 위험을 감소시키거나, 그것들을 치료하는데 사용된다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 이들 둘 모두인 제제의 용도에 관한 것이고, 상기 용도는 그것이 필요한 개체에서 암을 예방하고, 그 위험을 감소시키거나 그것을 치료하는 약제의 제조하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 제제는 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 1종 이상의 CD33 리간드를 억제하는 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제제는 단리된 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 이전의 구현예 중 임의의 것의 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 및 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 CD33-발현 암으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 CD33을 발현시키는 종양을 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 제제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 CD33 활성을 억제한다: (a) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 비-종양형성 CD14+ 골수 세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 증식, 성숙, 이동, 분화, 및/또는 기능성을 촉진하고; (b) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양으로의 침윤을 향상시키고; (c) 종양, 말초 혈액, 또는 다른 림프양 장기에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포 및/또는 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 증가시키고; (d) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 및/또는 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고; (e) 종양 또는 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인의 발현을 증가시키되, 선택적으로 상기 종양-촉진 사이토카인은 TGF-베타 또는 IL-10이고; (f) 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤을 증가시키고; (g) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 활성화를 감소시키고; (h) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 침윤을 감소시키고; (i) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 NK 세포의 침윤을 감소시키고; (j) NK 세포의 종양 사멸화 잠재성을 감소시키고; (k) 면역 반응을 향상시키는 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 B 림프구의 침윤을 감소시키고; (l) 종양 부피를 증가시키고; (m) 종양 성장률을 증가시키고; (n) 전이를 증가시키고; (o) 종양 재발의 속도를 증가시키고; (p) 1종 이상의 PD-1 리간드의 발현을 증가시키고; (q) 항종양 T 세포 반응을 조절하는 1종 이상의 면역-요법의 효능을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 면역-요법은 로 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합, 또는 1종 이상의 암 백신으구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질을 표적으로 하는 면역-요법이고; (r) PLCγ/PKC/칼슘 동원의 억제; (s) PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 억제; 및 (t) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 감소시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 제제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 활성을 나타낸다: (a) 종양 침윤 CD3+ T 세포의 수를 증가시키고; (b) 비-종양형성 CD14+골수 세포에서 CD33의 세포 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고; (c) 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고; (d) 1종 이상의 세포에서 PD-L1 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (e) 1종 이상의 세포에서 PD-L2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (f) 1종 이상의 세포에서 B7-H2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (g) 1종 이상의 세포에서 B7-H3 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (h) 1종 이상의 세포에서 CD200R 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (i) 1종 이상의 세포에서 CD163 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (j) 1종 이상의 세포에서 CD206 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (k) 고형 종양의 고형 성장률을 감소시키고; (l) 종양 부피를 감소시키고; (m) 1종 이상의 PD-1 억제제의 효능을 증가시키고; (n) 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능을 증가시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법은 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적으로 하고; (o) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 증가시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합이고; (p) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 존재에서 T 세포의 증식을 증가시키고; 그리고 (q) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 억제하고; 그리고 (r) 화학 또는 방사성 독소에 접합될 때, 고형 종양 및 관련된 혈관에서 CD33-발현 면역억제제 골수 세포 및/또는 CD14-발현 세포를 사멸시킨다.
본 개시내용의 다른 측면은 1종 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 기능성, 이동, 또는 증식을 그것이 필요한 개체에서 유도 또는 촉진시키는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 상기 개체에게, CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 치료적 유효량의 제제를 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 제제에 관한 것이고, 상기 제제는 그것이 필요한 개체에서 1종 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 기능성, 이동, 또는 증식을 유도 또는 촉진하는데 사용된다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 이들 둘 모두인 제제의 용도에 관한 것이고, 상기 용도는 그것이 필요한 개체에서 1종 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 기능성, 이동, 또는 증식을 유도 또는 촉진하기 위한 약제의 제조를 위한 것이다. 일부 구현예에서, 제제는 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 1종 이상의 CD33 리간드를 억제하는 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제제는 단리된 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 이전의 구현예 중 임의의 것의 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 면역 세포는 수지상 세포, 대식세포, 미세아교, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 개시내용의 다른 측면은 그것이 필요한 개체에서 조절 T 세포, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포, 종양-매립된 면역억제제 대식세포, 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 급성 골수 백혈병 (AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 세포, 또는 만성 골수 백혈병 (CML) 세포의 활성, 기능성, 또는 생존을 감소시키는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 상기 개체에게, 치료적 유효량의 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제를 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 관한 것이고, 상기 제제는 그것이 필요한 개체에서 조절 T 세포, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포, 종양-매립된 면역억제제 대식세포, 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 급성 골수 백혈병 (AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 세포, 또는 만성 골수 백혈병 (CML) 세포의 활성, 기능성, 또는 생존을 감소시키는데 사용된다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제의 용도에 관한 것이고, 상기 용도는 그것이 필요한 개체에서 조절 T 세포, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포, 종양-매립된 면역억제제 대식세포, 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 급성 골수 백혈병 (AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 세포, 또는 만성 골수 백혈병 (CML) 세포를 감소시키기 위한 약제를 제조하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 제제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 항체, 길항제 항체, 불활성 항체, 효능제 항체, CD33 리간드, CD33 리간드 효능제 단편, CD33 면역부착소, CD33 리간드 모방체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, 1종 이상의 CD33 리간드를 억제하는 가용성 시글렉 수용체, 1종 이상의 CD33 리간드에 결합하는 시글렉-Fc 융합 단백질, 및 소분자 화합물. 일부 구현예에서, 제제는 단리된 항-CD33 항체 또는 항-CD33 항체 콘주게이트이다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체 콘주게이트는 검출가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합된 항-CD33 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체 콘주게이트는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 독소에 접합된 항-CD33 항체를 포함한다: 리신, 리신 A-사슬, 독소루비신, 다우노루비신, 메이탄시노이드, 탁솔, 에티듐 브로마이드, 미토마이신, 에토포시드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 디하이드록시 안트라신 디온, 악티노마이신, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소 (PE) A, PE40, 아브린, 아브린 A 사슬, 모덱신 A 사슬, 알파-사르신, 젤로닌, 마이토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 큐리신, 크로틴, 칼리키아마이신, 사포나리아 오피시날리스 억제제, 글루코코르티코이드, 아우리스타틴, 아우로마이신, 이트륨, 비스무트, 콤브레스타틴, 듀오카르마이신, 돌라스타틴, cc1065, 및 시스플라틴. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 세포 표면 수준을 상당히 감소시키지 않고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하지 않는 이전의 구현예 중 임의의 것의 항-CD33 항체이다.
본 개시내용의 다른 측면은 relate to 방법 of CD33의 세포 수준을 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 둘 모두 on 그것이 필요한 개체의 1종 이상의 세포, 상기 방법은 상기 개체에게, 치료적 유효량의 단리된 항-CD33 항체를 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용의 다른 측면은 그것이 필요한 개체의 1종 이상의 세포상에서 CD33의 세포 수준을 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 둘 모두에서 사용하기 위한 단리된 항-CD33 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 측면은 그것이 필요한 개체의 1종 이상의 세포 상에서 CD33의 세포 수준을 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 둘 모두를 위한, 약제의 제조에서의 단리된 항-CD33 항체의 용도에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 세포는 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, T 세포, 및 대식세포; 및/또는 세포주로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 65 pM 내지 20 pM 범위의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 65 pM 이하, 60 pM 이하, 55 pM 이하, 50 pM 이하, 45 pM 이하, 40 pM 이하, 35 pM 이하, 30 pM 이하, 25 pM 이하, 24 pM 이하, 23 pM 이하, 22 pM 이하, 21 pM 이하, 20 pM 이하, 10 pM 이하, 9 pM 이하, 8 pM 이하, 7 pM 이하, 6 pM 이하, 또는 5 pM 이하의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 65 pM 내지 22 pM, 또는 22 pM 미만 범위의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 약 8.0 mg/kg 내지 약 2.0 mg/kg 범위의 EC50로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 300 pM 내지 10 pM 범위의 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 상기 KD는 대략 25 ℃의 온도에서 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 300 pM 미만인 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 상기 KD는 대략 25 ℃의 온도에서 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, KD는 1가 항체를 사용하여 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, KD는 1가 형태로 전장 항체를 사용하여 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 200 pM 내지 10 pM 범위의 EC50으로 인간 수지상 세포에 결합하고, 상기 EC50는 대략 4 ℃의 온도에서 결정된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 200 pM 미만인 EC50으로 인간 수지상 세포에 결합하고, 상기 EC50는 대략 4 ℃의 온도에서 결정된다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 길항제 항-CD33 항체, 불활성 항-CD33항체, 및 효능제 항-CD33항체로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 이전의 구현예 중 임의의 것의 항-CD33 항체이다.
이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 개체는 CD33의 변이체를 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 변이체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 다형성을 포함한다: (a) SNP rs3865444 AC ; (b) SNP rs3865444 CC ; (c) SNP rs35112940GG, AA, AG; (d) SNP rs12459419 CC, CT 또는 TT; 및 이들의 임의의 조합. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 방법 상기 개체에게 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 및/또는 1종 이상의 표준 또는 조사적인 항암 요법을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 상기 항-CD33 항체와 함께 투여된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항- B- 및 T-림프구 감쇠기 (BTLA) 항체, 항-살해 억제 수용체 (KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM3 항체, 항-A2AR 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-TNFa 항체, 항-시글렉-5 항체, 항-시글렉-7 항체, 항-시글렉-9 항체, 항-시글렉-11 항체, 길항적 항-TREM1 항체, 길항적 항-TREM2 항체, 및 이들의 임의의 조합. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 1종 이상의 표준 또는 조사적인 항암 요법은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적 요법, 이마티닙 요법, 트라스투주맙 요법, 에타네르셉트 요법, 입양 세포 전달 (ACT) 요법, 키메라성 항원 수용체 T 세포 전이 (CAR-T) 요법, 백신 요법, 및 사이토카인 요법. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 방법 상기 개체에게 억제성 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 억제성 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 상기 항-CD33 항체와 함께 투여된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 억제성 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 방법 상기 개체에게, 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 작용적 항체를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 작용적 항체는 상기 항-CD33 항체와 함께 투여된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 작용적 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 효능제 항-CD40 항체, 효능제 항-OX40 항체, 효능제 항-ICOS 항체, 효능제 항-CD28 항체, 작용적 항-TREM1 항체, 작용적 항-TREM2 항체, 효능제 항-CD137/4-1BB 항체, 효능제 항-CD27 항체, 효능제 항-글루코코르티코이드-유도된 TNFR-관련된 단백질 GITR 항체, 및 이들의 임의의 조합. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 방법 상기 개체에게 적어도 1종의 자극 사이토카인을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 적어도 1종의 자극 사이토카인은 상기 항-CD33 항체와 함께 투여된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 적어도 1종의 자극 사이토카인은 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 개시내용의 다른 측면은 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 의한 치료를 위해 그것을 필요로 하는 대상체를 선택하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 하기를 포함한다: a. 상기 대상체로부터 샘플을 얻는 단계; b. 상기 대상체에서 존재하는 CD33 대립유전자를 검출하는 단계; 및 c. CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 의한 치료를 위한 상기 대상체를 선택하는 단계로서, 상기 대상체는 1종 이상의 CD33 대립유전자를 가지며, 상기 1종 이상의 CD33 대립유전자는 rs3865444 AC , 및 rs3865444 CC 로 구성된 군으로부터 선택된다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 대한 그것을 필요로 하는 대상체의 반응성을 평가하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 하기를 포함한다: a. 상기 대상체에게 항-CD33 항체를 투여하기 전 상기 대상체로부터 수득된 혈액 샘플에서 비-종양형성 골수 세포 상의 CD45+ 및 CD14+의 발현 수준을 측정하는 단계; b. 상기 대상체에게 치료적 유효량의 상기 제제를 투여하는 단계; 및 c. 항-CD33 항체의 투여 후 상기 대상체로부터 수득된 혈액 샘플에서 비-종양형성 골수 세포 상의 CD45+ 및 CD14+의 발현 수준을 측정하는 단계, 여기서 항-CD33 항체의 투여 후 비-종양형성 골수 세포 상의 CD45+ CD14+ 수준의 감소는, 상기 대상체가 상기 제제에 반응한다는 것을 나타낸다. 일부 구현예에서, 반응성을 평가하는 방법은 추가로, 1종 이상의 추가 치료적으로 효과적인 양의 제제를 투여하는 것을 포함한다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 제제는 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드로 구성된 군으로부터 선택된다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 제제는 단리된 항-CD33 항체 또는 항-CD33 항체 콘주게이트이다. 이전의 구현예 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 이전의 구현예 중 임의의 것의 항-CD33 항체이다.
도면의 간단한 설명
도 1은 CD33의 구조, 및 도메인 CD33의 구조 뿐만 아니라 인산화 또는 유비퀴틴화 사건과 연루되었거나 상대적으로 빈번한 비-동의어 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNPs)의 잔기로서 확인되었던 개별 아미노산을 도시하는 반응식을 도시한다. 약어: CBL: 캐시타스 B-계통 림프종 E3 유비퀴틴 리가제; C2: C2-세트 Ig-유사 도메인; ECS: 엘론긴 B/C-컬린-5 SPRY 도메인 유비퀴틴 리가제; P: 포스포-; PKC: 단백질 키나제 C; SFKs: Src-계열 키나제; SHP-1/2: Src 상동성 영역 2 도메인-함유 포스파타제-1 및 -2; SOCS3: 사이토카인 신호전달 3의 억제제; Ub: 유비퀴틴; V: V-세트 Ig-유사 도메인. (소an 등, (2013) Frontiers in Bioscience 18:1311-1334).
도 2는 인간 CD33 (서열식별번호:1)와 하기 사이의 아미노산 서열 정렬을 도시한다: 및 마우스 CD33 (서열식별번호:2), 랫트 CD33 (서열식별번호:3), 침팬지 CD33 (서열식별번호:4), 레수스 CD33(서열식별번호:5), 개 CD33 (서열식별번호:6), 소 CD33 (서열식별번호:7), 및 제브라피쉬 CD33 (서열식별번호:8). 별표 ("*")는 단일, 완전히 보존된 잔기를 갖는 위치를 나타내고; 결장 (":")는 강하게 유사한 특성 - Gonnet PAM 250 매트릭스에서 평점 > 0.5의 그룹들 사이의 보존을 나타내고; 그리고 기간 (".")는 약하게 유사한 특성 - Gonnet PAM 250 매트릭스에서 평점 =< 0.5의 그룹 사이의 보존을 나타낸다.
도 3은 인간 시글렉 단백질, 예컨대 CD33의 글리칸-결합 특이성을 보여준다. 상기 도는 가장 통상적으로 연구된 시알릴화된글리칸에 대한 가장 통상적으로 보고된 특이성의 요약을 보여준다. 각각의 시글렉의 연구 내의 상대 결합은 하기로서 나타낸다: ++, 강한 결합; +, 검출가능한 결합; 및 -, 매우 약한 또는 검출불가능한 결합. 6'-황산화된-시알릴-Lewis x (sLex)에 대한 Siglec-8 및 mSiglec-F 및 6-황산화된-sLex에 대한 Siglec-9의 최근에 보고된 강한-결합 선호도는 보여지 않는다. 몇 개의 예외 (CD22 및 MAG)를 제외하고, 상이한 검정을 사용하는 상이한 조사자에 의한 인간 시클렉의 결합 특이성 연구의 결과는 상당히 변했다. 검정 포맷 및 글리칸 링커 쟁점 외에, 연구된 리간드의 밀도 및 배열은 이러한 변동에 대해 책임이 있을 수 있다 (Varki 등, (2006) Glycobiol. 16:1R-27R).
도 4은 포유동물 뇌에서 강글리오사이드의 구조 및 대사를 보여준다. 도면 중 강글리오사이드의 명명법은 하기의 시스템을 따른다: Svennerholm (1964) J. Lipid Res. 5:145-155 (Ariga T et l. (2008) J. Lipid Res. 49:1157-1175).
도 5A는 인간 1차 면역 세포에서 CD33 발현을 설명하는 FACS 분석의 결과를 도시한다. 도 5B는 정제된 CD33-his 태그된 단백질에 대한 CD33 항체 1A8의 결합 친화도를 보여주는 Biacore 센서그램을 도시한다. 도 5C는 정제된 CD33-his 태그된 단백질에 대한 CD33 항체 2E12의 결합 친화도를 보여주는 Biacore 센서그램을 도시한다. 도 5D는 정제된 CD33-his 태그된 단백질에 대한 CD33 항체 2F5의 결합 친화도를 보여주는 Biacore 센서그램을 도시한다. 도 5E는 정제된 CD33-his 태그된 단백질에 대한 CD33 항체 6A3의 결합 친화도를 보여주는 Biacore 센서그램을 도시한다. 도 5F는 정제된 CD33-his 태그된 단백질에 대한 CD33 항체 6C7의 결합 친화도를 보여주는 Biacore 센서그램을 도시한다. 도 5G는 정제된 CD33-his 태그된 단백질에 대한 CD33 항체 젬투주맙의 결합 친화도를 보여주는 Biacore 센서그램을 도시한다. 도 5H는 인간 1차 수지상 세포 상의 CD33에 대한 CD33 항체 2F5 및 6C7 결합의 결합 곡선을 도시한다. 도 5I는 인간 1차 수지상 세포 상의 CD33에 대한 CD33 항체 젬투주맙 및 린투주맙 결합의 결합 곡선을 도시한다.
도 6A 및 도 6B는 인간 CD33 단백질 상의 항체 결합 부위를 묘사한다. 도 6A은 본 개시내용의 항-CD33 항체를 이용하여 항-CD33 항체의 선형 에피토프 결합 부위를 보여준다. CD33 골격은 투명한 회색 묘사로 표현된다. 항체에 대해 확인된 선형 결합 영역은 도면에서 열거된다. 도 6B는 항체 1A8에 대한 불연속 에피토프의 결합 부위의 만화 렌더링을 도시한다. 불연속 결합 영역 39VPCTFFHPIPYYD51, 88GRFRLLGDPS0R98 , 및 110RRDNGSYFFRM120는 도면에서 열거된다. 도 6C는 결합 반응성을, CD33 돌연변이체에 대한 본 개시내용의 항체의 야생형 CD33 (% WT)의 백분율로 도시한다. 도 6D는 항체 결합에 관여된 아미노산 잔기를 나타내는 CD33의 모델을 도시한다.
도 7은, 수지상 세포 상의 시알산 CD3 리간드가 인간 1차 세포와의 혼합된 림프구 반응 동안 T 세포 증식을 제한함을 보여주는 FACS 분석을 도시한다.
도 8 은, 수지상 세포 상의 시알산 CD3 리간드가 혼합된 림프구 반응 동안 T 세포 증식을 제한함을 보여주는 결과를 도시한다.
도 9A-9F은 다양한 자극에 의해 유도된 인간 골수 세포에 대한 증가된 CD33 및 CD33 리간드 발현을 보여주는 결과를 묘사한다. 도 9A 및 도 9B은 종양 상청액으로 처리한 후 인간 1차 수지상 세포 상의 CD33 발현의 증가를 보여주는 결과를 묘사한다. 도 9C 및 도 9D은 LPS-유도된 염증 동안 인간 수지상 세포 상의 CD33 발현의 증가를 보여주는 결과를 묘사한다. 도 9E 및 도 9F은 LPS-유도된 염증 동안 인간 골수 세포 상의 시알산 발현의 증가를 보여주는 결과를 묘사한다.
도 10 은, CD33 리간드를 E. 콜리로부터 제거하기 위한 시알리다제 처리가 인간 1차 수지상 세포에 의한 식균작용을 증가시킴을 보여주는 결과를 도시한다.
도 11A 및 도 11B은, 항-CD33 항체가 원발성 인간 대식세포에 의해 E.콜리의 증가된 식균작용으로 이어짐을 보여주는 결과를 묘사한다. 도 11A는 생물입자 대조군, mIgG1아이소타입 대조군 항체, 및 항-CD33 항체 2E12를 도시한다. 도 11B는 항-CD33 항체 2F5, 항-CD33 항체 6A3, 및 항-CD33 항체 6C7을 도시한다.
도 12A 및 도 12B는 알츠하이머병 뇌 (AD) 및 건강한 뇌 (비-AD)으로부터 뇌 부문에서 CD33 리간드 발현을 묘사한다. 도 12A는 AD 및 비-AD 뇌에서 CD33-Fc의 면역조직화학 염색을 도시한다. 대조군 IgG1-Fc는 이들 세포에 결합하지 않는다. 도 12B는 5 AD 및 5 비-AD 뇌 샘플로부터 CD33-Fc 및 대조군 수용체 염색의 일원 변량분석 통계적인 분석의 결과를 도시하는데, 이는 억제성 CD33 리간드가 AD 병리에 기여함을 나타낸다.
도 13A 및 도 13B는 알츠하이머병 뇌 (AD) 및 건강한 뇌 (비-AD)으로부터 뇌 부문에서 CD33 수용체 발현을 묘사한다. 도 13A는 아이소타입 대조군 in AD 및 비-AD 뇌 부문에서 아이소타입과 비교하여 CD33 항체의 면역조직화학 염색을 도시한다. 도 13B는 5 AD 및 5 비-AD 뇌 샘플로부터의 CD33 항체 및 아이소타입 대조군 염색의 일원 변량분석 통계적인 분석의 결과를 도시한다.
도 14A-14D는 배양 및 생체내에서 종양 세포의 CD33 및 억제성 CD33 리간드의 발현을 묘사한다. 도 14A는, 억제성 CD33 리간드의 발현이 흑색종 세포, 폐 종양 세포, 및 결장암 세포에서 대략 20-배까지 증가됨을 보여주는 결과를 도시한다. 도 14B은 말초 혈액 및 비장으로부터의 인간 면역 세포, 및 성숙한 마우스 T 세포, B 세포, 및 인간 CD45+ 면역 세포 및 환자-유래된 흑색종이 이식된 NK 세포가 없는 면역결핍된 마우스 모델로부터 으로부터의 세포 침윤물에서 CD33 발현을 보여주는 결과를 도시한다. 도 14C은 CD3+ T 세포, CD11b+ 면역 세포, 및 비장으로부터의 Gr1+CD11b+ 면역 세포 및 마우스 종양 모델로부터의 유방암 종양 EMT-6으로부터 침투된 세포에서 CD33 발현을 보여주는 결과를 도시한다. 도 14D은 CD45- T 세포, Gr1+ 세포 및 비장으로부터의 Gr1- CD11b- 면역 세포 및 마우스 종양 모델로부터의 유방암 종양 EMT-6으로부터의 세포 침윤물에서 CD33 발현을 보여주는 결과를 도시한다. 상기 결과는, CD33 및 CD33 면역 억제 리간드가 다중 유형의 고형 종양에 대한 면역 반응에서 역할을 한다는 것을 나타낸다.
도 15A-15E은 CD33가 유전적 수단에 의해 중화된 마우스에서 결장 암종 종양 성장의 억제를 보여주는 결과를 묘사한다. 도 15A는 정상 CD33 발현을 갖는 대조군 마우스 (WT 마우스)를 도시한다. 도 15B는, CD33가 유전자 상으로 불활성화된 마우스 (CD33 KO 마우스)를 도시한다. 도 15C는 중앙 종양 부피를 보여주는 도 15A 및 15B의 결과의 요약을 도시한다. 도 15D는 결장 암종을 가지고 있는 CD33 KO 마우스가 결장 암종을 가지고 있는 대응하는 WT 마우스보다 더 오래 생존함을 설명하는 카플란-마이어 생존 플롯을 도시한다. 도 15E는 마우스 CD33 발현의 FACS 분석을 도시한다. 특이적인 세포 집단 분석은 WT 마우스 및 CD33 KO 마우스로부터의 비장 및 종양, 뿐만 아니라 미접촉 비장에 대해 수행되었다. 상기 결과는, CD33 기능의 봉쇄는 (either 유전자 상으로 또는 약리적으로) 암에서 유익할 결과로 이어짐을 나타낸다. 도 15F는 면역학적으로 인간화된 마우스에서 환자-유래된 암의 마우스 모델에 대한 PD-1/CD33 조합 항체 처리 프로토콜을 도시한다. 도 15G는 인간 공여체 165547112 및 17509112으로부터의 면역 줄기세포가 접목된 개별 마우스에서 항체 처리 후의 종양 부피를 도시한다. 마우스는 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 처리되었다. 도 15H는 인간 공여체 165547112 및 17509112로부터의 인간 면역 줄기세포가 접목된 마우스에서 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 25일 동안 처리한 후의 평균 중양 부피를 도시한다. 도 15I는 인간 공여체 165547112, 17509112, 및 984480112로부터 면역 줄기세포가 접목된 개별 마우스에서 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 한 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체로 처리한 후의 종양 부피를 도시한다. *: p<0.05; **: p<0.01; ***: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001. 처리 그룹에 대한 평균이 제공된다. 오차 막대는 SEM을 제공한다. 도 15J는 로 처리한 후의 평균 중양 부피를 도시한다 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 처리된 마우스로부터 in 마우스. *: p<0.05; **: p<0.01; ***: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001. 처리 그룹에 대한 평균이 제공된다. 오차 막대는 SEM을 제공한다. 도 15K는 인간 공여체 984480112로부터의 인간 면역 줄기세포가 접목된 마우스에서 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 처리한 후의 평균 중양 부피를 도시한다. 도 15L은 인간 공여체 165547112 및 17509112로부터의 인간 면역 줄기세포가 접목된 마우스에서 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 28일 동안 처리한 후의 평균 중양 부피를 도시한다. 도 15M는 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 처리된 마우스로부터 마우스의 생체내 종양 성장률을 도시한다. **: p<0.01; + : 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15N은 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 처리된 마우스로부터 말초 혈액 인간 (h) CD45+CD14+ 골수 세포의 CD33의 세포 표면 수준에서의 생체내 감소를 도시한다. +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15O은 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 처리된 마우스로부터 종양 침투 인간 (h) CD45+ CD14+ 골수 세포의 생체내 감소를 도시한다. **:p<0.01; ***:p<0.001; +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15P은 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 처리된 마우스로부터 종양 침투 인간 (h) CD45+ CD3+ T 세포의 생체내 증가를 도시한다. (*):p<0.10, **:2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.01, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15Q은 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 항-PD-1 항체 단독으로 또는 항-CD33 항체 2F5와 함께 처리된 마우스로부터 말초 혈액 인간 (h) CD45+ CD14+ 골수 세포의 생체내 감소를 도시한다. ***: p<0.001; **: p<0.01; *: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.05, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15R는 면역학적으로 인간화된 마우스 에서 환자-유래된 암의 마우스 모델에 대한 항-CD33 항체 처리 프로토콜을 도시한다. 도 15S는 개별 마우스에서 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리한 후의 종양 부피를 도시한다. *: p<0.05 ; **:p<0.01; ***:2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001. 처리 그룹에 대한 평균이 제공된다. 오차 막대는 SEM을 제공한다. 도 15T는 마우스 내의 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체 로 처리한 후의 평균 중양 부피를 도시한다. *: p<0.05 ; **:p<0.01; ***:2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001. 처리 그룹에 대한 평균이 제공된다. 오차 막대는 SEM을 제공한다. 도 15U는 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스의 생체내 종양 성장률을 도시한다. **:p<0.01; ***:2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, + : 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15V는 알츠하이머병 CD33 대립유전자 rs3865444 A/A 대립유전자, A/C 대립유전자 및 C/C 대립유전자 중 임의의 것을 가지고 있고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스의 생체내 종양 성장률을 도시한다. *:p<0.05; **:p<0.01; ***:2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, + : 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15W는 알츠하이머병 rs3865444 C/C 대립유전자를 함유하고 있는 마우스의 생체내 종양 성장률을 도시한다. *:p<0.05; **:p<0.01; ***:2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, + : 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15X는 알츠하이머병 rs3865444 A/A 대립유전자를 가지고 있는 마우스의 생체내 종양 성장률을 도시한다. *:p<0.05; **:p<0.01; ***:2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, + : 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15Y는 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 말초 혈액 인간 (h) CD45+CD14+ 골수 세포의 CD33의 세포 표면 수준에서의 생체내 감소를 도시한다. ***: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함), +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15Z는 알츠하이머병 CD33 대립유전자 rs3865444 A/A 대립유전자, A/C 대립유전자 및 C/C 대립유전자 중 임의의 것을 가지고 있고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 말초 혈액 인간 (h) CD45+CD14+ 골수 세포의 CD33의 세포 표면 수준에서의 생체내 감소를 도시한다. ***: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함), + : 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15AA는 알츠하이머병 rs3865444 C/C 대립유전자를 함유하고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 말초 혈액 인간 (h) CD45+CD14+ 골수 세포의 CD33의 세포 표면 수준에서의 생체내 감소를 도시한다. ***: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함), +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15BB는 알츠하이머병 rs3865444 A/A 대립유전자를 가지고 있고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 말초 혈액 인간 (h) CD45+CD14+ 골수 세포의 CD33의 세포 표면 수준에서의 생체내 감소를 도시한다. "n.s.": 통계적으로 유의미하지 않음; +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15CC는 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+CD14+ 골수 세포의 CD33의 세포 표면 수준에서의 생체내 감소를 도시한다. ***: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함), +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15DD는 알츠하이머병 CD33 대립유전자 rs3865444 A/A 대립유전자, A/C 대립유전자 및 C/C 대립유전자 중 임의의 것을 가지고 있고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+CD14+ 골수 세포의 CD33의 세포 표면 수준에서의 생체내 감소를 도시한다. ***: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15EE는 알츠하이머병 rs3865444 C/C 대립유전자를 함유하고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+CD14+ 골수 세포의 CD33의 세포 표면 수준에서의 생체내 감소를 도시한다. ***: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15FF는 알츠하이머병 rs3865444 A/A 대립유전자를 가지고 있고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+CD14+ 골수 세포의 CD33의 세포 표면 수준에서의 생체내 감소를 도시한다. "n.s.": 통계적으로 유의미하지 않음; +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15GG은 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+ CD14+ 골수 세포의 생체내 감소를 도시한다. ***:p<0.01; ***:2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함) +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15HH은 알츠하이머병 CD33 대립유전자 rs3865444 A/A 대립유전자, A/C 대립유전자 및 C/C 대립유전자 중 임의의 것을 가지고 있고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+ CD14+ 골수 세포의 생체내 감소를 도시한다. ***: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15II은 알츠하이머병 rs3865444 C/C 대립유전자를 함유하고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+ CD14+ 골수 세포의 생체내 감소를 도시한다. **: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.01, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15JJ은 알츠하이머병 rs3865444 A/A 대립유전자를 가지고 있고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+ CD14+ 골수 세포의 생체내 감소를 도시한다. *: p<0.05; (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15KK은 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+ CD3+ T 세포의 생체내 증가를 도시한다. (*):p<0.10, **:2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.01, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15LL은 알츠하이머병 CD33 대립유전자 rs3865444 A/A 대립유전자, A/C 대립유전자 및 C/C 대립유전자 중 임의의 것을 가지고 있고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+ CD3+ T 세포의 생체내 증가를 도시한다. (*): p<0.10 for 2F5 vs 아이소타입 Ctl, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. p=0.0042 for rs3865444 A/A 대립유전자 및 p=0.59 for rs3865444 C/C 대립유전자. 도 15MM은 알츠하이머병 rs3865444 C/C 대립유전자를 함유하고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+ CD3+ T 세포의 생체내 증가를 도시한다. "n.s.": 통계적으로 유의미하지 않음; +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15NN은 알츠하이머병 rs3865444 A/A 대립유전자를 가지고 있고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 종양 침투 인간 (h) CD45+ CD3+ T 세포의 생체내 증가를 도시한다. **: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.001, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15OO는 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 말초 혈액 인간 (h) CD45+ CD14+ 골수 세포의 생체내 감소를 도시한다. *: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.05, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15PP는 알츠하이머병 CD33 대립유전자 rs3865444 A/A 대립유전자, A/C 대립유전자 및 C/C 대립유전자 중 임의의 것을 가지고 있고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 말초 혈액 인간 (h) CD45+ CD14+ 골수 세포은의 생체내 감소를 도시한다. *: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.05, (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15QQ은 알츠하이머병 rs3865444 C/C 대립유전자를 함유하고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 마우스로부터의 말초 혈액 인간 (h) CD45+ CD14+ 골수 세포의 생체내 감소를 도시한다. *: 2F5 vs 아이소타입 Ctl에 대한 p<0.05 (이것은 공여체 및 동물 희생의 일수를 보정하기 위함); +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다. 도 15RR은 알츠하이머병 rs3865444 A/A 대립유전자를 가지고 있는 마우스로부터 유래하고 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 (Ctl) 항체로 처리된 말초 혈액 인간 (h) CD45+ CD14+ 골수 세포의 생체내 감소를 도시한다. "n.s.": 통계적으로 유의미하지 않음 ; +: 평균; 상자그림 정중선: 중앙; 박스의 상부 및 하부 경계는 제1 및 제3 사분위수 (25th 및 75th 백분위)에 해당한다.
도 16A-16J은 CD33의 세포 표면 수준의 감소를 보여주는 결과를 묘사한다 on 다양한 1차 면역 세포. 도 16A-16C는 항-CD33 항체로 처리된 인간 1차 미세아교 상의 CD33의 세포 표면 수준의 감소를 보여주는 결과를 묘사한다. 도 16A는 항체 대조군 없음 (mAb 없음) 및 아이소타입 대조군 항체 (아이소타입)을 도시한다. 도 16B는항-CD33 항체 1A8 (1A8.2), 2E12, 및 2F5를 도시한다. 도 16C는 항-CD33 항체 6A3 및 6C7 (6C7.2) 도시한다.
도 16D은 항-CD33 항체 2E12, 6A3, 및 6C7로 처리된 인간 1차 단핵구 상의 CD33의 세포 표면 수준의 용량 의존적 감소를 보여주는 결과를 도시한다. 도 16E은 항-CD33 항체 2E12, 6A3, 및 6C7로 처리된 인간 1차 수지상 세포 상의 CD33의 세포 표면 수준의 용량 의존적 감소를 보여주는 결과를 도시한다. 도 16F-16H은 탈글리코실화 항-CD33 항체 1A8 (1A8.2), 2E12, 6A3, 및 6C7 (6C7.2)으로 처리된 인간 1차 수지상 세포 상의 CD33의 세포 표면 수준의 감소를 보여주는 결과를 묘사한다. 도 16F는 환자 공여체 258로부터 수득된 인간 1차 수지상 세포에 대한 CD33의 세포 표면 수준의 감소를 도시한다. 도 16G는 환자 공여체 259로부터 수득된 인간 1차 수지상 세포에 대한 CD33의 세포 표면 수준의 감소를 도시한다. 도 16H는 항-CD33 항체로 처리된 공여체 258과 259로부터의 세포 사이의 세포 표면 감소 (하향조절) 에서 퍼센트 변화 (% 델타)를 도시한다. 도 16I 및 도 16J는 NOD-scid IL2Rgnull-3/GM/SF, NSG-SGM3로부터 단리된 인간 단핵수, 인간 IL3을 발현시키는 삼중 트랜스제닉 NSG-SGM3 (NSGS) 마우스, 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 항체 (mIgG1)로 처리되었던 GM-CSF 및 SCF (NSGS) 마우스에서 CD33 발현 및 Siglec-9 발현의 FACS 분석을 묘사한다. 도 16I는 CD33의 세포 표면 발현을 감소시키기 위해 CD33 항체 2F5, 6C7, 젬투주맙, 및 린투주맙의 반-최대 농도 (EC50)를 보여주는 12-포인트 적정 곡선을 도시한다. 도 16J는 CD11c의 세포 표면 발현을 감소시키기 위해 CD33 항체 2F5, 6C7, 및 젬투주맙의 반-최대 농도 (EC50)를 보여주는 12-포인트 적정 곡선을 도시한다. 도 16K는 생체내 항체 처리 다음에 CD33의 세포 표면 수준에서의 생체내 감소를 보여준다. 도 16L은 관련없는 수용체 Siglec-9의 발현을 보여준다. Siglec-9은 대조군으로서 사용되었다. Siglec-9의 세포 표면 수준은 생체내 항체 처리 다음에 변함없었다. 도 16M은 40 mg/kg, 8.0 mg/kg, 1.6 mg/kg, 또는 0.3 mg/kg CD33 항체 2F5에 의한 생체내 처리 다음에 CD33의 세포 표면 수준 에서 생체내 감소를 보여준다. 도 16N은 40 mg/kg, 8.0 mg/kg, 1.6 mg/kg, 또는 0.3 mg/kg CD33 항체 2F5에 의한 생체내 처리 다음에의 생체내 세포 표면 수준 대조군 수용체 (Siglec-9)을 보여준다.
도 17A는 상이한 항체 농도에서 인간 1차 단핵구에 결합하는 CD33 항체를 도시한다. 상기 도에서, 하기 항체는 각각의 표시된 농도에 대해 왼쪽으로부터 오른쪽으로 정돈된다: 마우스 아이소타입 대조군 항체 (mIgG1), 항-CD33 항체 2F5 (C-2F5), 항-CD33 항체 2E12 (C-2E12), 항-CD33 항체 6A3 (C-6A3.1), 항-CD33 항체 6C7 (C-6C7.2), 인간 아이소타입 대조군 항체 (인간 아이소타입), 항-CD33 항체 C-64, 항-CD33 항체 젬투주맙, 및 항-CD33 항체 린투주맙. 도 17B는 상이한 항체 농도에서 CD33 항체에 의한 처리 후의 인간 1차 단핵구에서 CD33의 세포 표면 수준을 도시한다. 도 17C는 상이한 항체 농도에서 CD33 항체에 의한 처리 후의 인간 1차 단핵구에서 CD14의 세포 표면 수준을 도시한다.
도 18A는 야생형 및 CD33 넉아웃 THP-1 세포에서 CD33의 발현 수준을 도시한다. 도 18B는 야생형 및 CD33 넉아웃 THP-1 세포에서 CD14의 발현 수준을 도시한다. 도 18C는 상이한 농도의 LPS 또는 IL-6, IL-8, 및 GM-CSF로 처리된 야생형 및 CD33 넉아웃 THP-1 세포 에서 사이토카인의 수준을 도시한다. 도 18D는 상이한 농도의 LPS 또는 IL-6, IL-8, 및 GM-CSF로 처리된 야생형 및 CD33 넉아웃 THP-1 세포 에서 활성화 마커의 수준을 도시한다.
도 19A는 항-CD33 항체 2F5로 처리된 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)에서 CD33 및 PD-L1의 발현 수준을 도시한다. 상기 도에서, "미처리된 MDSC"는 고 항체로 처리된 세포를 지칭하고, "MDSC +아이소타입"은 아이소타입 대조군 항체로 처리된 세포를 지칭하며; 그리고 "MDSC +C-2F5"은 항-CD33 항체 2F5로 처리된 세포를 지칭한다. 도 19B는 아이소타입 대조군 항체로 처리된 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)와 항-CD33 항체 2F5로 처리된 세포 사이의 CD163, CD33, CD206, PD-L2, CD200R, B7 H3, 및 PD-L1의 발현의 변화의 정량화를 도시한다. 도 19C는 항-CD33 항체 2F5, 마우스 아이소타입 대조군 항체 (mIgG1), 또는 항-PD-L1 항체 (PDL1)로 미처리 상태로 있거나 그것으로 처리되었던 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)에 의해 유도된 CD3+ T 세포 증식 및 CD8+ T 세포 증식의 백분율을 도시한다. MDCS는 자궁경부암 세포 조건화된 배지에서 T 세포와 함께 공-배양되었다. **: p<0.01. 도 19D는 항-CD33 항체 2F5, 마우스 아이소타입 대조군 항체 (mIgG1), 또는 항-PD-L1 항체 (PDL1)로 미처리 상태로 있거나 그것으로 처리되었던 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)에 의해 유도된 CD3+ T 세포 증식 및 CD8+ T 세포 증식의 백분율을 도시한다. **: p<0.01. MDCS는 교모세포종 세포 조건화된 배지에서 T 세포와 함께 공-배양되었다.
도 20은, 항-CD33 항체가 비종양형성 골수-유래된 억제 세포를 선택적으로 사멸함을 보여주는 결과를 도시한다. 최상부 행: 세포 형태에 의한 살아있는/죽은 게이트: C-6C7에 의한 죽은 세포 게이트의 증가. 가운데 행: 염료를 사용하는 살아있는/죽은 세포에 대한 게이팅: 염료 HIGH 양성 세포는 DEAD, 염료 낮은 세포는 살아있다. 6C7 처리된 세포에서 죽은 세포의30% 증가율. 히스토그램: 히스토그램 포맷에서 살아있는/죽은 세포 염료를 나타냄, 2F5에서 피크 없음, 다른 mAbs에서 죽은 세포의 피크.
상세한 발명의 설명
일반적인 기술
본 명세서에서 기재되거나 언급된 기술 및 절차는 일반적으로 잘 이해되고, 당해 분야의 숙련가에 의한 종래의 방법론, 예를 들면, 하기에서 기재된 널리 이용된 방법론을 사용하여 통상적으로 이용된다: Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, 등 eds., (2003)); series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis 등, eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan 등, eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); 및 Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita 등, eds., J.B. Lippincott Company, 1993).
정의
본원에 사용된 용어 "예방하는"은 한 개체의 특정 질병, 장애 또는 질환의 발병 또는 재발과 관련하여 예방(prophylaxis)을 제공하는 것을 포함한다. 한 개체는 특정 질병, 장애 또는 질환의 경향이 있거나 또는 특정 질병, 장애 또는 질환에 민감하거나, 또는 그와 같은 질병, 장애 또는 질환을 발현할 위험이 있을 수 있다.
본원에 사용된, 특정 질병, 장애 또는 질환을 발현할 "위험이 있는" 개체는 본원에 기술된 치료법 사용 이전에 감지될 수 있는 질병 또는 질병의 증상이 있거나 없을 수 있고, 질병 또는 질병의 증상이 보이거나 보이지 않을 수도 있다. "위험이 있는"이란 본 기술에 알려진 바와 같이, 한 개체가 특정 질병, 장애 또는 질환의 전개와 상관관계가 있는 측정가능 매개변수들인, 하나 이상의 위험 인자를 갖는다는 것을 의미한다. 이와 같은 위험 인자를 하나 이상 갖는 개체는 이와 같은 위험 인자를 하나 이상 갖지 않는 개체보다 특정 질병, 장애 또는 질환이 발병할 확률이 더 높다.
본원에 사용된 용어 "치료"는 임상 병리의 과정 동안 치료 받는 중인 개체의 자연적인 경과를 변화시키도록 고안된 임상적 개입을 가리킨다. 치료의 바람직한 효과에는 특정 질병, 장애 또는 질환의 진행률의 감소, 병리적 상태의 완화 또는 경감 및 차도 또는 예후의 향상이 포함된다. 개체는 예를 들어 특정 질병, 장애 또는 질환과 연관된 하나 이상의 증상이 완화되거나 또는 제거된 경우, 성공적으로 "치료된 것"이다.
"유효량" 이란 치료 차원 또는 예방 차원의 바람직한 결과를 달성하기 위해 적어도 효과적인 양, 필요한 복용량 및 기간을 가리킨다. 유효량은 1회 이상의 투여로 제공될 수 있다. 본원에서 유효량은 해당 개체의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중과 같은 인자, 그리고 상기 개체에서 바람직한 반응을 초래하는 치료 능력에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 또한 상기 치료의 모든 유독성 또는 유해한 영향을 치료 차원의 이로운 효과가 능가하는 양이다. 예방용의 경우, 이로운 또는 바람직한 결과에는 위험의 제거 또는 감소, 중증도의 감소, 그리고 생화학적, 조직학적 및/또는 행동학적 증상, 그것의 합병증 및 상기 질환의 발현 중에 제시되는 중간 병리학적 표현형(intermediate pathological phenotypes)을 비롯한 질병의 발병 지연이 포함된다. 치료용의 경우, 이로운 또는 바람직한 결과에는 해당 질병으로 유발된 하나 이상의 증상의 감소, 해당 질병을 않는 환자의 삶의 질의 향상, 해당 질병을 치료하는 데 필요한 다른 약물의 용량의 감소, 해당 질병의 표적을 통한 또 다른 약물의 효과의 상승, 해당 질병의 진행의 지연, 및/또는 생존율 연장과 같은 임상적 결과가 포함된다. 약물, 화합물 또는 약제 조성물의 유효량은 직접 또는 간접적으로 예방차원 또는 치료 차원의 치료를 달성하는 데 충분한 양이다. 임상적 상황에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 약제 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물 또는 약제 조성물과 함께 달성될 수도 그렇지 않을 수도 있다. 따라서, "유효량"은 하나 이상의 치료제를 투여하는 상황에서 고려될 수 있고, 하나 이상의 다른 제제와 함께 사용되어, 바람직한 결과가 달성될 수도 또는 달성되기도 한다면, 단일 제제가 유효량만큼 투여되는 것으로 간주될 수 있다.
"치료차원의 유효량"은 특정 질병, 장애 또는 질환의 측정가능한 개선을 유발하는 데 필요한 적어도 최소한의 농도이다. 본원에서 치료차원의 유효량은 해당 환자의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중과 같은 인자들, 그리고 해당 개체에서 바람직한 반응을 유발시키는 CD33 단백질 길항제의 능력에 따라 달라질 수 있다. 치료차원의 유효량은 또한 CD33 단백질 길항제의 모든 유독성 또는 유해한 영향을 치료차원의 이로운 효과가 능가하는 양이다.
본원에 사용된, 또 다른 화합물 또는 조성물과 "함께" 투여에는 동시 투여 및/또는 다른 시간 대 투여가 포함된다. 함께 투여는 또한 통합제제(co-formulation)로서 투여 또는, 서로 다른 투여 빈도 또는 서로 다른 간격의 투여를 포함하고, 동일한 투여 경로 또는 서로 다른 투여 경로를 사용하는 별개 조성물의 투여를 아우른다.
치료, 예방 또는 위험 감소를 목적으로 하는 "개체" 는 인간, 가축 및 농장 동물, 및 동물원의 동물, 경주용 동물 또는 애완동물, 예컨대 개, 말, 토끼, 소, 돼지, 햄스터, 게르빌루스쥐, 생쥐, 페렛, 들쥐, 고양이 등을 비롯하여 포유류로 분류되는 모든 동물을 가리킨다. 바람직하게는, 상기 개체는 사람이다.
용어 "면역글로불린" (Ig)은 본원에서 "항체"와 상호교환하여 사용된다. 본원에서 용어 "항체"는 넓은 의미로 사용되며, 상세하게는 단클론성 항체, 다클론성 항체, 적어도 두 개의 손상되지 않은 항체로 형성된 다중특이 항체(예컨대, 이중특이 항체), 및 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 항체 절편을 포괄한다.
기본 4-쇄 항체 단위는 동일한 경쇄(L) 두 개 및 동일한 중쇄(H) 두 개로 이루어진 이종 4량체(heterotetrameric) 당단백질이다. VH및 VL 이 함께 쌍을 이룸으로써 단일 항원-결합부위가 형성된다. 다른 종류의 항체의 구조 및 특성에 대해서는, 예컨대, Basic and Clinical Immunology, 8th Ed., Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6을 참조한다.
모든 척추동물종의 경쇄는, 그것의 불변부위의 아미노산 염기서열에 기반하여, 카파 ("κ") 및 람다 ("λ")라 불리는 명확히 구별되는 두 가지 유형 중 하나에 할당될 수 있다. 중쇄의 불변부위(CH)의 아미노산 염기서열에 따라, 면역글로불린은 서로 다른 종류 또는 동형(isotype)에 할당될 수 있다. 면역글로불린에는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM와 같이 5가지 종류가 있고, 각각은 알파 ("α"), 델타 ("δ"), 엡실론 ("ε"), 감마 ("γ") 및 뮤 ("μ")라고 불리는 중쇄를 갖는다. γ 및 α 종류는 더 나아가 CH 염기서열 및 기능의 상대적으로 사소한 차이를 기준으로 하위 종류(동형(isotype))로 분할되는데, 예컨대, 인간은 하기의 하위종류 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2를 발현한다. 면역글로불린의 하위단위 구조 및 서로 다른 종류의 3차원 구성은 잘 알려져 있고, 예를 들어 Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders Co., 2000)에 전반적으로 기술되어 있다.
"천연 항체(천연 antibodies)" 는 보통 동일한 경쇄(L) 2개와 동일한 중쇄(H) 2개로 이루어진 약 150,000 달톤의 이종 4량체(heterotetrameric) 당단백질이다. 각 경쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결되되, 이황화 연결의 수는 서로 다른 면역글로불린 동형(isotype)의 중쇄들마다 달라진다. 각 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 사슬내 이황화 다리(bridges)가 있다. 각 중쇄는 일단에 가변부위(VH)가 있고, 이어서 다수의 불변부위가 이어진다. 각 경쇄는 일단에 하나의 가변부위(VL)가 있고 타단에 하나의 불변부위가 있으며; 상기 경쇄의 불변부위는 상기 중쇄의 제1 불변부위와 나란히 배열되고, 상기 경쇄 가변부위는 상기 중쇄의 가변부위와 나란히 배열된다. 특정 아미노산 잔기가 상기 경쇄와 중쇄 가변부위 사이의 접점(interface)을 형성하는 것으로 여겨진다.
본원의 항-CD33 항체와 같은 "단리된" 항체는 이것의 생산 환경(예컨대, 자연적 또는 재조합)의 요소에서 식별, 분리 및/또는 회수된 것이다. 바람직하게는, 단리된 폴리펩티드는 그것의 생산 환경에서 비롯된 모든 기타 오염 요소와의 결합에서 자유롭다. 생산 환경에서 비롯된 오염 요소, 예컨대 재조합 형질주입 세포에서 초래된 것은 상기 항체의 연구, 진단 또는 치료용 사용을 전형적으로 방해하는 물질로, 효소, 호르몬 및 기타 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 상기 폴리펩티드는 (1) 예를 들어 Lowry 법에 의해 측정된 바와 같이 항체 95중량%보다 크게, 일부 구현예에서는 99중량%보다 크게; (2) 회전컵 배열결정장치(spinning cup sequenator)의 사용에 의해 N-단말 또는 내부 아미노산 염기서열의 최소한 15개 잔기를 획득하기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는, 바람직하게는, 은색 염색제를 사용하는 비환원 또는 환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의한 동질성(homogeneity)으로 정제될 것이다. 단리된 항체에는 항체의 자연적 환경의 요소가 전혀 존재하지 않기 때문에 재조합 T 세포 내의 제 위치의 항체가 포함된다. 하지만, 일반적으로 단리된 폴리펩티드 또는 항체는 적어도 하나의 정제 단계를 통해 제조된다.
본원의 항-CD33 항체와 같은 항체의 "가변영역(variable region)" 또는 "가변부위(variable domain)"는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 부위를 가리킨다. 상기 중쇄 및 경쇄의 가변부위는 각각 "VH" 및 "VL"로 명명될 수 있다. 이들 부위는 일반적으로 항체의 가장 가변적인 부분(동일 종류의 다른 항체와 비교하여)으로, 항원결합부들을 함유한다.
용어 "가변"은 상기 가변부위의 어떤 세그먼트(segments)가 본원의 항-CD33 항체와 같은 항체들 중 염기서열에서 광범위하게 다르다는 사실을 가리킨다. 가변부위(V)은 항원결합을 중재하고 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 규정한다. 하지만, 가변도는 가변부위의 전구간에 걸쳐 고르게 분포하지 않는다. 그보다 경쇄 및 중쇄 가변부위 모두에서 고도가변영역(HVRs)으로 불리는 세 개 세그멘트에 집중된다. 가변부위의 고도의 보존 부위는 뼈대 영역(framework regions, FR)이라 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변부위는 각각, 대체로 베타-시트 구성을 채택하고 HVRs 3개로 연결되는 FR 4개를 포함하는데, 이들은 베타 시트 구조를 연결하고, 어떤 경우에는 상기 구조의 일부를 형성하는 고리(loops)를 형성한다. 각 사슬의 HVR들은 FR 영역에 의해 밀접하게 서로 붙들려 있고, 다른 사슬의 HVR들과 함께, 항체의 항원결합부 형성에 기여한다(Kabatet al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991) 참조). 불변부위는 항체의 항원 결합에 직접적으로 관여하지 않지만, 다양한 반응기(effector) 기능, 예컨대 항체의 항체-의존 세포 독성에 관여 등을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 동종의 항체들의 개체군(예를 들어, 상기 개체군을 구성하는 개별 항체들이 적은 양에서 존재할 수 있는 가능한 자연발생적 돌연변이 및/또는 번역후 변형(예컨대, 이성질체화, 아미드화)은 제외하고 동일함)에서 획득된 본원의 항-CD33 항체와 같은 항체이다. 단클론성 항체는 상당히 특이적이고, 하나 이상의 항원부위로 향한다. 일부 구현예에서, 본원의 단클론성 항체는 이중특이 항체일 수 있다. 전형적으로 서로 다른 결정 인자(항원 결정부)로 향하는 서로 다른 항체를 포함하는 다클론성 항체 제제와 상반되게, 각 단클론성 항체는 상기 하나 이상의 항원부 상의 단일 결정 인자로 향한다. 수식어 "단클론성"은 실질적으로 동종 개체군에서 획득되는 항체의 성격을 지시하는 것이지, 어떤 특정 방법에 의한 항체의 생산이 요구되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본원에서 사용될 단클론성 항체는 다양한 기법들, 예를 들어 파지-디스플레이 기술 (예컨대, Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 101(34):12467-472 (2004); and Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004) 참조), 하이브리도마 법(예컨대, Kohler and Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongoet al., Hybridoma,14 (3):253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2d ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)), 재조합 DNA 법 (예컨대, U.S. Patent No. 4,816,567 참조) 및 인간 면역글로불린 염기서열을 인코딩하는 인간 면역글로불린 위치(loci) 또는 유전자의 일부 또는 전부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간 유사 항체를 생산하기 위한 기술(예컨대, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 90:2551 (1993); Jakobovitset al., Nature 362:255-258 (1993); Bruggemannet al., Year in Immunol. 7:33 (1993); U.S. Patent Nos. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016; Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Lonberget al., Nature 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14:845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14:826 (1996); 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995) 참조)에 의해 제조된다.
용어 "전장(full-length) 항체," "손상되지 않은(intac)t 항체" 또는 "온전한 항체" 는 상호교환 가능하게 사용되어 항체 절편과 대조적으로, 본원의 항-CD33 항체와 같이 실질적으로 손상되지 않은 형태의 항체를 가리킨다. 특이적으로 온전한 항체에는 Fc 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 항체가 포함된다. 불변부위는 천연 염기서열 불변부위(예컨대, 인간 천연 염기서열 불변부위) 또는 이것의 아미노산 염기서열 변이체일 수 있다. 일부 경우에, 손상되지 않은 항체는 하나 이상의 반응기 기능을 가질 수 있다.
"항체 절편"은 손상되지 않은 항체의 일부분, 바람직하게는 항원 결합부 및/또는 상기 손상되지 않은 항체의 가변영역을 포함한다. 항체 절편의 예에는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 절편; 디아바디(diabodies); 선형 항체 (U.S. Patent 5,641,870, Example 2; Zapata et al., Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995) 참조); 단일사슬 항체 분자 및 항체 절편들로 형성된 다중특이 항체가 포함된다.
본원의 항-CD33 항체와 같은 항체의 파파인 소화(Papain digestion)는 "Fab" 절편과 잔류 "Fc" 절편(명칭은 용이하게 결정화하는 능력을 반영함)이라 불리는 동일한 항원결합 절편 2개를 생성한다. Fab 절편은 중쇄의 가변부위(VH)와 함께 경쇄 전체, 그리고 중쇄 하나의 제1 불변부위(CH1)로 구성된다. 각각의 Fab 절편은 항원결합과 관련하여 1가로, 즉, 단일 항원결합부를 갖는다. 항체의 펩신 처리로 인해, 서로 다른 항원결합 활성도를 갖는 두 개의 이황화 연결 Fab 절편에 대략적으로 상응하고 여전히 항원의 가교결합을 이행할 수 있는 단일의 거대 F(ab')2 절편이 생성된다. Fab' 절편은 항체 힌지 영역에서 하나 이상의 시스테인을 포함하는 CH1 부위의 카르복시 말단에 몇몇의 추가적인 잔기를 가짐으로써 Fab 절편과 다르다. Fab'-SH는 불변부위의 시스테인 잔기(들)이 자유 티올기를 가진 Fab'에 대한 본원에서의 명칭이다. F(ab')2 항체 절편들은 원래 사이에 시스테인을 갖는 Fab' 절편 쌍들로 생성되었다. 기타 항체 절편들의 화학적 결합 또한 알려져 있다.
Fc 절편은 이황화염에 의해 붙들린 양쪽 중쇄의 카르복시 말단 부분을 포함한다. 항체의 반응기 기능은 Fc영역의 염기서열에 의해 결정되는데, 상기 영역은 또한 세포의 특정 유형에서 발견되는 Fc 수용체(FcR)에 의해 인식되는 것이다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 결합부를 함유하는 최소한의 항체 절편이다. 이와 같은 절편은 단단한 비공유 결합 중인 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변영역으로 구성된 이량체로 이루어진다. 이와 같은 두 가변영역의 접힘에서, 항원 결합을 위한 아미노산 잔기를 제공하고 상기 항체에 항원 결합 특이성을 제공하는 고도가변 고리(loop) 6개 (중쇄 및 경쇄에서 유래된 고리가 각각 3개)가 유래된다. 그러나, 단일 가변부위 (또는 항원에 특이적인 단 3개의 HVR를 포함하는 Fv의 반쪽) 조차, 전체 결합부위보다 낮은 친화도에서도, 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
"sFv" 또는 "scFv" 로 축약되는 "단일 사슬 Fv"는 단일 폴리펩티드 사슬에 연결된 VH 및 VL 항체 부위를 포함하는 항체 절편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩티드는 추가로 sFv가 항원 결합을 위한 바람직한 구조를 형성하게 하는 VH 및 VL 부위 사이의 폴리펩티드 링커를 포함한다. sFv에 대한 내용은, Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)를 참조할 수 있다.
본원의 항-CD33 항체와 같은 항체의 "기능성 절편"은 손상되지 않은 항체의 일부분, 예컨대 일반적으로 손상되지 않은 항체의 항원 결합 또는 가변영역, 또는 변형된 FcR 결합능을 보유 또는 소유한 항체의 F 영역을 포함한다. 항체 절편의 예에는 선형 항체, 단일 사슬 항체 분자 및 항체 절편들로 형성된 다중특이 항체가 포함된다.
용어 "디아바디"는 V 부위들의 사슬내 쌍 이룸이 아닌 사슬간 쌍 이룸(pairing)이 달성되어, 2가 절편, 즉 항원결합부2개를 갖는 절편을 구성하기 위해, VH 및 VL 부위 사이의 짧은 링커(약 5-10개 잔기)로 sFv 절편(앞절 참조)을 구성함으로써 제조된 작은 항체 절편을 가리킨다. 이중특이 디아바디는 두 항체의 VH 및 VL 부위가 서로 다른 폴리펩티드 사슬에 존재하는, "교차형(crossover)" sFv 절편 두 개의 이질이량체(heterodimers)이다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 90:6444-48 (1993)에 좀 더 상세히 기술되었다.
본원에 사용된, "키메라 항체"는 본원의 항-CD33 항체와 같은 항체(면역글로불린)를 가리키되, 이 항체에서 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분은 특정 종에서 유도된 또는 특정 항체의 종류 또는 하위 종류에 속한 항체의 해당 염기서열과 동일하거나 또는 동종인 반면, 사슬(들)의 나머지 부분은, 이들이 바람직한 생물학적 활성을 보이는 한, 그와 같은 항체의 절편뿐만 아니라, 또 다른 종에서 유도된 또는 또 다른 항체 종류 또는 하위 종류에 속한 항체의 해당 염기서열과 동일하거나 또는 동종이다. (U.S. Patent No. 4,816,567; Morrison et al.,Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 81:6851-55 (1984)). 본원의 관심대상인 키메라 항체는 PRIMATIZEDㄾ 항체를 포함하되, 상기 항체의 항원 결합부는 예컨대, 관심대상인 항원을 갖는 면역력을 갖는(immunizing) 짧은 꼬리 원숭이(macaque monkeys)에 의해 생성된 항체에서 유래된다. 본원에 사용된, "인간화된 항체"는 "키메라 항체"의 하위분류로 사용된다.
본원의 항-CD33 항체의 "인간화된" 형태인 비인간 (예컨대, 쥣과) 항체는 비인간 면역글로불린에서 유래된 최소한의 염기서열을 함유한 키메라 항체이다. 한 구현예에서, 인간화된 항체는 수령자의 HVR에서 유래된 잔기가 바람직한 특이성, 친화도 및/또는 용량을 갖는 비인간 종(기증자 항체), 예컨대 생쥐, 쥐, 토끼 또는 비인간 영장류의 HVR에서 유래된 잔기로 교체된 인간 면역글로불린(수령자 항체)이다. 일부 예에서, 상기 인간 면역글로불린의 FR 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 더 나아가, 인간화된 항체는 수령자 항체 또는 기증자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이와 같은 변형들이 이루어져 결합 친화도와 같은 항체 성능을 추가로 개선할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 적어도 하나 그리고 전형적으로 2개의 가변부위를 포함하는데, 이들 가변부위에서는 고도가변 고리 모두 또는 실질적으로 거의 모두가 비인간 면역글로불린 염기서열의 그것에 상응하고, 그리고 FR 영역에 결합 친화도, 이성질체화, 면역원성 등과 같은 항체 성능을 개선하는 하나 이상의 개별 FR 잔기 치환이 포함될 수 있지만, 실질적으로 FR 영역의 거의 모두가 인간 면역글로불린 염기서열의 그것이다. 이와 같은 FR의 아미노산 치환의 개수는 중쇄의 경우 전형적으로 6개를 넘어가지 않고, 경쇄의 경우 3개를 넘어가지 않는다. 인간화된 항체는 또한 선택적으로 면역글로불린 불변 영역 (Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 그것의 적어도 일부분을 포함한다. 추가적인 내용은, 예컨대, Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)를 참조할 수 있다. 또한 예를 들어, Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma &Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); and U.S. Patent Nos. 6,982,321 and 7,087,409를 참조할 수 있다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생성된, 본원의 항-CD33 항체와 같은 항체의 아미노산 염기서열에 상응하는 것을 소유하고, 본원에 개시된 인간 항체 제조 기법들 중 하나를 사용하여 제조된 것이다. 인간 항체의 이와 같은 정의는 상세하게는 비인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체는 제외한다. 인간 항체는 당해기술에 알려진, 파지-디스플레이 라이브러리를 비롯한, 다양한 기법을 사용하여 제조될 수 있다. Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). 또한 인간 단클론성 항체의 제조에 유용한 방법들이 Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)에 기술되었다. 또한 van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-74 (2001)를 참조할 수 있다. 인간 항체는 항원 투여 면역유도(challenge)에 대응하여 그와 같은 항체를 생성하기 위해 변형된 형질전환 동물(transgenic animal)(이것의 내생 위치(endogenous loci)가 불활성됨), (예컨대 면역성을 갖춘 지노생쥐에서 상기 항원이 제조될 수 있다(예컨대, XENOMOUSETM 기술과 관련하여 U.S. Patent Nos. 6,075,181 및 6,150,584 참조). 또한, 인간 B-세포 융합세포(hybridoma) 기술을 통해 생성된 인간 항체에 대한 내용은, 예를 들어 Li et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)를 참조할 수 있다.
본원에 사용되는 용어 "고도가변영역," "HVR" 또는 "HV"는 염기서열 중 고도가변하고 및/또는 구조적으로 규정된 고리를 형성하는 항체-가변부위의 영역들, 예컨대 본원의 항-CD33 항체의 그것을 가리킨다. 일반적으로, 항체는 HVRs 6개를 포함한다; VH (H1, H2, H3)에 3개, 그리고 VL (L1, L2, L3)에 3개. 천연 항체에서, H3 및 L3은 HVRs 6개 중 가장 큰 다양성을 나타내고, 특히 H3은 항체에 우수한 특이성을 제공하는 데 독특한 역할을 하는 것으로 보인다. 예컨대, Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003))참조. 사실, 중쇄만으로 이루어진 자연발생적 낙타 항체는 경쇄의 부재 중에 기능적이고 안정적이다. 예컨대, Hamers-Casterman et al.,Nature 363:446-448 (1993) and Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)을 참조할 수 있다.
수 많은 HVR 묘사들이 사용되고 본원에서 포괄된다. EU 또는 Kabat 보완성결정영역(CDRs)인 HVRs는 염기서열 가변성을 기반으로 하고 가장 일반적으로 사용되는 것이다 (Kabat et al., supra). 대신 Chothia는 구조적 고리의 위치를 언급한다 (Chothia and LeskJ. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). AbM HVRs는 EU 또는 Kabat CDRs 및 Chothia 구조적 고리 사이의 절충을 나타내고, Oxford Molecular'sAbM항체-모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "접촉" HVRs는 확보 가능한 복합 결정 구조의 분석을 기반으로 한다. 이들 HVRs 각각에서 나온 잔기들은 아래 언급되었다.
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HVRs는 하기와 같이 "연장된 HVRs"를 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2), 및 89-97 또는 89-96 (L3), 그리고 VH에서 26-35 (H1), 50-65 또는 49-65 (바람직한 구현예) (H2), 및 93-102, 94-102, 또는 95-102 (H3). 가변부위 잔기는 이와 같은 연장된-HVR 정의와 관련하여 EU 또는 Kabat et al., supra.에 따라 넘버링된다.
"뼈대" 또는 "FR" 잔기는 본원에서 정의된 HVR 잔기 이외의 가변부위 잔기이다.
"EU 또는 Kabat에서의 가변부위 잔기 넘버링" 또는 "EU 또는 Kabat에서의 아미노산-위치 넘버링"이란 구절 및 이들의 변형구절은 EU 또는 Kabat et al., supra에서 항체의 편집본의 중쇄 가변부위 또는 경쇄 가변부위를 위해 사용되는 넘버링 체계를 가리킨다. 이와 같은 넘버링 체계를 사용하여, 실제 선형 아미노산 염기서열은 가변부위의 FR 또는 HVR의 단축 또는 이들로의 삽입에 상응하는 몇몇 또는 추가적인 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변부위는 H2의 잔기 52 이후에 단일 아미노산 삽입(Kabat에 따르면 잔기 52a)을, 중쇄 FR 잔기 82 이후에 삽입된 잔기 (예컨대, Kabat에 따르면 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. "표준" Kabat 넘버링된 염기서열을 갖는 항체의 염기서열의 동종 영역에 배열함으로써 소정의 항체에 대한 잔기의 EU 또는 Kabat 넘버링이 결정될 수 있다.
EU 또는 Kabat 넘버링 체계는 일반적으로 가변부위 (대략 경쇄의 잔기 1-107 및 중쇄의 잔기 1-113) 중의 잔기를 가리킬 때 사용된다(예컨대, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). "EU 또는 Kabat 넘버링 체계" 또는 "EU 지수"는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역 중의 잔기를 가리킬 때 사용된다(예컨대, Kabatet al., supra에 보고된 EU 지수). "Kabat에서와 같은 EU 지수"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 가리킨다. 본원에서 달리 언급되지 않는 한, 항체의 가변부위에서 잔기 번호에 대한 언급은 Kabat 넘버링 시스템에 의한 잔기 넘버링을 의미한다. 본원에 달리 언급되지 않는 한, 항체의 불변부위의 잔기 번호의 언급은 EU 또는 Kabat 넘버링 시스템에 의한 잔기 넘버링을 가리킨다(예컨대, United States Patent Publication No. 2010-280227 참조).
본원에 사용된 "수용자 인간 뼈대"는 인간 면역글로불린 뼈대 또는 인간 공통 뼈대에서 유래된 VL 또는 VH 뼈대의 아미노산 염기서열을 포함하는 뼈대이다. 인간 면역글로불린 뼈대 또는 인간 공통 뼈대에서 "유래된" 수용자 인간 뼈대는 이들의 동일한 아미노산 염기서열을 포함할 수 있고, 또는 기존의 아미노산 염기서열 변경을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 기존의 아미노산 변경의 개수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하 또는 2개 이하이다. 기존의 아미노산 변경은 VH에 존재하고, 바람직하게는 이와 같은 변경은 위치 71H, 73H 및 78H 중 단 셋, 둘 또는 하나에서 발생하는데; 예를 들어, 이와 같은 위치에서의 아미노산 잔기는 71A, 73T 및/또는 78A에 의해 발생할 수 있다. 한 구현예에서, 상기 VL 수용자 인간 뼈대는 염기서열에서 VL 인간 면역글로불린 뼈대 염기서열 또는 인간 공통 뼈대 염기서열과 동일하다.
"인간 공통 뼈대"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 뼈대 염기서열의 선택 집합 중 가장 일반적으로 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 뼈대이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 염기서열의 선택 집합은 가변부위 염기서열의 하위 그룹에서 유래된다. 일반적으로, 염기서열의 하위그룹은 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)에서와 같은 하위그룹이다. VL과 관련하여 포함되는 하위그룹의 예는 Kabatet al., supra.에서와 같이 하위그룹 카파 I, 카파 II, 카파 III 또는 카파 IV일 수 있다. 추가적으로, VH의 경우, 상기 하위그룹은 Kabatet al., supra에서와 같이 하위그룹 I, 하위그룹II 또는 하위그룹III이다.
예컨대, 본원의 항-CD33 항체의, 특정 위치에서의 "아미노산 변형"은 명시된 잔기의 치환 또는 결실, 또는 명시된 잔기에 이웃한 적어도 하나의 아미노산 잔기의 삽입을 가리킨다. 명시된 잔기에 "이웃한" 삽입이란 이것의 잔기 한 개 내지 두 개 내 삽입을 의미한다. 상기 삽입은 명시된 잔기에 대한 N- 말단 또는 C-말단의 삽입을 의미한다. 본원에서 바람직한 아미노산 변형은 치환이다.
본원의 항-CD33 항체와 같은 "친화도-성숙" 항체는 그것의 하나 이상의 HVRs에 하나 이상의 변형을 가짐으로써, 그와 같은 변형(들)을 소유하지 않는 모 항체와 비교하여, 항원에 대한 항체의 친화도가 개선된 것이다. 한 구현예에서, 친화도-성숙 항체는 표적 항원에 대한 나노몰 또는 심지어 피코몰의 친화도를 갖는다. 친화도-성숙 항체는 당해기술에 알려진 절차에 의해 생산된다. 예를 들어, Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)은 VH- 및 VL-부위 셔플링(shuffling)에 의한 친화도 성숙을 기술한다. HVR 및/또는 뼈대 잔기의 임의 돌연변이 유발이, 예를 들어 Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); and Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)에 기술되었다.
본원에 사용되는 용어 "특이적으로 인식하는" 또는 "특이적으로 결합하는"은 표적과, 본원의 항-CD33 항체와 같은 항체 사이의 끌림 또는 결합과 같은, 측정가능하고 재현가능한 상호작용을 가리키며, 이와 같은 상호작용은 생물학적 분자를 비롯한 이종 분자 개체의 존재 하에 상기 표적의 존재를 판단하는 인자이다. 예를 들어, 표적 또는 항원결정부에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는, 본원의 항-CD33 항체와 같은 항체는, 그것이 다른 표적 또는 해당 표적의 다른 항원결정부보다 더 큰 친화도, 더 큰 결합능으로 더 용이하게, 그리고/또는 더 긴 기간 동안, 상기 표적 또는 항원결정부에 결합하는 항체이다. 이것은 또한 제1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체(또는 모이어티)가 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수도 또는 결합하지 않을 수도 있다는 정의를 읽음으로써 이해된다. 이와 같이, "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"은 반드시 배타적 결합을 요구하지는 않는다(그러나 배타적 결합을 포함할 수는 있다). 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 결합 상수가 최소한 약 10 3 M -1 또는 10 4 M -1, 때로는 약 10 5 M -1 또는 10 6 M -1, 기타의 경우에는 약 10 6 M -1 또는 10 7 M -1, 약 10 8 M -1 또는 10 9 M -1 , 또는 약 10 10 M -1 또는 10 11 M -1 또는 그 보다 높을 수 있다. 다양한 면역분석 포맷을 사용하여 특정 단백질에 특이적으로 면역반응성을 갖는 항체를 선택할 수 있다. 예를 들어, 고체상 ELISA 면역분석법을 정기적으로 사용하여 단백질에 특이적으로 면역반응성을 갖는 단클론성 항체를 선택한다. 특이적 면역반응성을 결정하기 위해 사용될 수 있는 면역분석법의 포맷 및 조건의 내용과 관련해서는, 예컨대, Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York을 참조할 수 있다.
본원에 사용된 CD33 단백질과 제2 단백질 사이의 "상호작용"은, 제한 없이, 단백질-단백질 상호작용, 물리적 상호작용, 화학적 상호작용, 결합, 공유결합 및 이온결합을 아우른다. 본원에 사용된 바와 같이, 두 단백질 사이의 상호작용을 방해, 감소 또는 완전히 제거할 경우, 상기 항체는 두 단백질 사이의 "상호작용을 억제"한다. 본원의 항체 또는 이것의 절편은, 상기 항체 또는 이것의 절편이 두 단백질 중 하나에 결합할 경우, 두 단백질 사이의 "상호작용을 억제"한다.
"작동제(agonist)" 항체 또는 "활성화" 항체는, 항체가 항원에 결합한 후 상기 항원의 하나 이상의 활성 또는 기능을 유도하는(예컨대, 증가시키는), 본원의 작동제 항-CD33 항체와 같은 항체이다.
"차단성" 항체, "길항제" 항체, 또는 "억제성" 항체는 항체가 항원과 결합한 후, 항원이 하나 이상의 리간드와 결합하는 것을 억제 또는 감소시키는(예컨대, 줄게 하는), 및/또는 항체가 항원에 결합한 후, 상기 항원의 하나 이상의 활성 또는 기능을 억제 또는 감소시키는(예컨대, 줄게 하는), 본원의 항-CD33 항체와 같은 항체이다. 일부 구현예에서, 차단성 항체, 길항제 항체 또는 억제성 항체는 항원이 하나 이상의 리간드에 결합하는 것 및/또는 상기 항원의 하나 이상의 활성 또는 기능을 실질적으로 또는 완전히 억제한다.
항체 "반응기 기능"은 항체의 Fc 영역(천연 염기서열 Fc 영역 또는 아미노산 염기서열 변이 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 활성들을 가리키고, 항체 동형에 따라 달라진다.
본원의 용어 "Fc 영역"은 면역글로불린의 C-말단 영역, 예컨대 천연-염기서열 Fc 영역과 변이 Fc 영역을 정의하기 위해 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계가 달라질 수는 있으나, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 Cys226의 아미노산 잔기 또는 Pro230에서 이것의 카르복실-말단까지 늘어난다고 정의된다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 또는 Kabat 넘버링 시스템에 따르면 잔기 447)은 예를 들어, 상기 항체의 생산 또는 정제 동안, 또는 상기 항체의 중쇄를 인코딩하는 핵산을 재조합함으로써 제거될 수 있다. 이에 따라서, 손상되지 않은 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 개체군(populations), K447 잔기가 전혀 제거되지 않은 항체 개체군 및, K447 잔기가 있는 항체와 상기 잔기가 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 개체군을 포함할 수 있다. 본원의 항체에 사용하기에 적절한 천연-염기서열 Fc 영역에는 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4가 포함된다.
"천연 염기서열 Fc 영역"은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 염기서열과 동일한 아미노산 염기서열을 포함한다. 천연 염기서열 인간 Fc 영역에는 이것의 자연발생적 변이뿐만 아니라 천연 염기서열 인간 IgG1 Fc 영역 (비-A 및 A 동종이인자형(allotypes)); 천연 염기서열 인간 IgG2 Fc 영역; 천연 염기서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 천연 염기서열 인간 IgG4 Fc 영역이 포함된다.
"변이 Fc 영역"은 적어도 하나의 아미노산 변경, 바람직하게는 하나 이상의 아미노산 치환(들)에 의해 천연 염기서열 Fc 영역의 아미노산 염기서열과는 다른 아미노산 염기서열을 포함한다. 바람직하게는, 상기 변이 Fc 영역은, 천연 염기서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 비교하여, 천연 염기서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역에서 적어도 하나의 아미노산 치환, 예컨대 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 그리고 바람직하게는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원의 변이 Fc 영역은 바람직하게는 천연 염기서열 Fc 영역과, 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 적어도 약 80%의 상동성(homology)을 갖고, 가장 바람직하게는 이들과 적어도 약 90%의 상동성을, 더 바람직하게는 이들과 적어도 약 95%의 상동성을 갖는다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"는 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 가리킨다. 바람직한 FcR는 천연 염기서열 인간 FcR이다. 더 나아가, 바람직한 FcR는 IgG 항체에 결합하는 것(감마 수용체)이고, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위종류의 수용체를 포함하는데, 여기에는 이들 수용체의 대립형질 변이체 및 선택적으로 붙여진 형태가 포함되고, FcγRII 수용체에는 FcγRIIA( "활성화 수용체") 및 FcγRIIB("억제성 수용체")이 포함되고, 이들은 일차적으로 이들의 세포질 부위가 다른 유사한 아미노산 염기서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그것의 세포질 부위에 면역수용체 타이로신계 활성 모티프("ITAM")를 함유한다. 억제성 수용체 FcγRIIB는 이것의 세포질 부위에 면역수용체 타이로신계 억제 모티프("ITIM")를 함유한다.(예컨대, M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997) 참조). FcRs는 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)에서 검토되었다. 앞으로 식별될 것을 비롯한, 기타 FcRs는 본원의 용어 "FcR"에 의해 포괄된다. FcRs는 또한 항체의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있다.
예컨대, 인간 FcRn를 발현하는 형질전환된 생쥐 또는 형질주입 인간 세포주에서, 또는 변이 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드가 투여된 영장류에서, 체내 FcRn 결합 및 폴리펩티드에 고친화도로 결합한 인간 FcRn의 혈청 반감기가 분석될 수 있다. WO 2004/42072 (Presta)가 FcRs에 대한 개선된 또는 감소된 결합을 갖는 항체 변이를 기술한다. 또한 예컨대, hields et al., J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001)를 참조할 수 있다.
펩티드, 폴리펩티드 또는 항체 염기서열과 관련하여, 본원에 사용된, "퍼센트 (%) 아미노산 염기서열 동일성" 및 "상동성"은 염기서열들을 배열하고, 필요한 경우, 최대 퍼센트 염기서열 동일성을 달성하기 위해 간격을 도입한 후, 그리고 염기서열 동일성의 일부로서 어떤 보존치환은 고려하지 않으면서, 특정 펩티드 또는 폴리펩티드 염기서열 중 아미노산 잔기와 동일한 후보 염기 서열들 중 아미노산 잔기의 퍼센트를 가리킨다. 퍼센트 아미노산 염기서열 동일성을 결정하기 위한 배열은 당해기술에 해당하는 다양한 방식, 예컨대, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 MEGALIGNTM (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 구입가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여, 달성될 수 있다. 당해기술의 기술자는 비교되는 염기서열들의 전장에 걸쳐 최대 배열을 달성하기 위해 필요한 당해기술에 알려진 모든 알고리즘을 비롯하여 배열을 측정하기 위한 적절한 매개변수들을 결정할 수 있다.
본원의 항-CD33 항체와 같은 항체를 인코딩하는 "단리된" 핵산 분자는 이것이 생산된 환경에서 보통 관련되는 적어도 하나의 오염성 핵산 분자로부터 식별 및 분리된 핵산 분자이다. 바람직하게는, 단리된 핵산은 생산 환경과 관련된 모든 요소와 어떤 관련도 없다. 본원의 폴리펩티드 및 항체를 인코딩하는 단리된 핵산 분자는 자연에서 발견되는 형태 또는 셋팅을 제외한 형태로 존재한다. 이것을 위한 단리된 핵산 분자는 자연적으로 세포에 존재하는 본원의 폴리펩티드와 항체를 인코딩하는 핵산과 구별된다.
본원에서 사용되는 용어 "벡터"는 어떤 핵산 분자가 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 상기 핵산 분자이다. 벡터의 한 가지 유형은, 추가적인 DNA 세그멘트가 결찰될 수 있는 원형 이중가닥 DNA를 가리키는 "플라스미드"이다. 또 다른 유형의 벡터는 파지 벡터이다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스성 벡터로, 추가적인 DNA 세그멘트가 바이러스 게놈에 결찰될 수 있다. 어떤 벡터들은 그들이 유입된 숙주세포에서 자율적인 복제를 할 수 있다(예컨대, 박테리아성 벡터는 박테리아성 복제 기원을 갖는 에피솜 포유류 벡터). 기타 벡터(예컨대, 비-에피솜 포유류 벡터)는 숙주세포에 유입되면서 숙주세포의 게놈에 통합될 수 있고, 그럼으로써, 숙주 게놈과 함께 복제된다. 뿐만 아니라, 어떤 벡터는 이들이 작동차원에서 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이와 같은 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터" 또는 단순히 "발현 벡터"라 명명된다. 일반적으로 재조합 DNA 기법에서 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태로 존재한다. 본 명세서에서, "플라스미드"와 "벡터"는, 플라스미드가 벡터 중 가장 통상적으로 사용되는 형태이기 때문에, 상호교환하여 사용될 수 있다.
본원에서 상호교환하여 사용되는 "폴리펩티드" 또는 "핵산"은 모든 길이의 뉴클레오티드로 이루어진 폴리머를 가리키고, DNA와 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보 뉴클레오티드, 리보 뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 이들의 염기 및/또는 이들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제 또는 합성 반응에 의해 폴리머에 편입될 수 있는 모든 기질일 수 있다. 폴리펩티드는 메틸화된 뉴클레오티드 및 이것의 유사체와 같은 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 존재할 경우, 뉴클레오티드 구조의 변형이 폴리머의 조립 전 또는 조립 후에 제공될 수 있다. 뉴클레오티드의 염기서열은 비-뉴클레오티드 요소에 의해 중단될 수 있다. 폴리펩티드는 표지(label)에 접합과 같은, 합성 후 이루어진 변형(들)을 포함할 수 있다. 다른 유형의 변형에는, 예를 들어, 하나 이상의 자연발생적 뉴클레오티드를 유사체로 치환하는 것인 "캡(caps)", 뉴클레오티드간 변형체, 예컨대 비대전된(uncharged) 연결(예컨대, 메틸포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포아미데이트, 카바메이트 등) 및 대전된 연결(예컨대, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)을 갖는 것들, 펜던트 모이어트, 예를 들어 단백질(예컨대, 뉴클레아제, 독성물질, 항체, 단일 펩티드, ply-L-라이신 등)을 갖는 것들, 삽입제(intercalators)(예컨대, 아크리딘, 프소라렌 등)로 치환된 것들, 킬레이터(예컨대, 금속, 방사능 금속, 붕소, 산화성 금속 등)를 함유한 것들, 알킬레이터를 함유하는 것들, 변형된 연결(예컨대, 알파 아노머 핵산 등)을 갖는 것들뿐만 아니라 폴리펩티드(들)의 변형되지 않은 형태가 포함된다. 더 나아가, 보통 설탕에 존재하는 모든 수산화기가, 예를 들어 포스포네이트기, 포스페이트기에 의해 대체되고, 표준 보호 작용기에 의해 보호되거나 또는 활성화되어 추가적 뉴클레오티드에 추가적 연결을 마련할 수 있고, 또는 고체 또는 반고체 지지체에 접합될 수 있다. 5' 및 3' 말단 OH는 인산화되거나 또는 아민 또는, 탄소 원자 1 내지 20개로 이루어진 유기 캡핑 작용기 모이어티로 치환될 수 있다. 기타 수산화기는 또한 표준 보호 작용기로 유도될 수 있다. 폴리펩티드는 또한 일반적으로 당해기술에 잘 알려진 리보오스 또는 데옥시리보오스의 유사체 형태를 함유할 수 있는데, 여기에는 예를 들어 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴-, 2'-플루오로- 또는 2'-아티도-리보오스, 카보시클릭 설탕 유사체, α-아노머 설탕, 에피머성 설탕(epimeric sugars), 예컨대 아라비노오스, 자일로오스 또는 릭소오스(lyxoses), 피라노오스 설탕, 퓨라노오스 설탕, 세도헵튤로오스, 비고리형 유사체, 및 메틸 리보시드와 같은 염기성 뉴클레오시드 리보보시드가 포함된다. 하나 이상의 포스포디에테르 연결은 선택적인 연결기로 대체될 수 있다. 이와 같은 선택적인 연결기에는, 이에 국한되지 않으나, 포스페이트기, P(O)S("티오에이트"), P(S)S ("디티오에이트"), (O)NR2 ("아미데이트"), P(O)R, P(O)OR', CO, 또는 CH2 ("포름아세트")에 의해 치환되는 구현예들이 포함되되, R 또는 R'는 각각 독립적으로 H 또는, 에테르 (-O-) 연결, 아릴, 알케닐, 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 아랄딜을 선택적으로 함유하는, 치환된 또는 미치환된 알킬(C, 1-20개)이다. 폴리펩티드 중 모든 연결이 동일할 필요는 없다. 앞선 내용은 RNA 및 DNA를 비롯하여, 본원에서 언급된 모든 폴리펩티드에 적용된다.
"숙주 세포"에는 폴리펩티드 삽입물의 편입을 위한 벡터(들)의 수령자(recipient)일 수 있거나 또는 수령자였던 개별적인 세포 또는 세포배양물이 포함된다. 숙주 세포에는 단일 숙주 세포의 자손이 포함되고, 상기 자손은 자연적인, 우발적인 또는 고의의 돌연변이 때문에 반드시 원래 모세포와 완전히 동일(형태학상 또는 게놈 DNA 보완체에서)하지 않을 수 있다. 숙주 세포에는 본원의 폴리펩티드(들)로 체내에서 형질주입된 세포가 포함된다.
본원에 사용된 "운반체"에는 약제학적으로 허용가능한 운반체, 부형제 또는 활용된 복용량 및 농도에서 이것에 노출된 세포 또는 포유류에 무해한 안정제가 포함된다. 종종 생리학적으로 허용가능한 운반체는 수성 pH 완충용액이다. 생리학적으로 허용가능한 운반체의 예에는 완충제, 예컨대 인산염, 구산염 및 기타 유기산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산; 저분자량 (약 10개 미만 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴 또는 라이신; 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물, 예컨대 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린; 킬레이트 제제, 예컨대 EDTA; 당 알코올, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 TWEEN™, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 및 PLURONICS™이 포함된다
본원에 사용된 용어 "세포자멸"은 세포내 세포 파괴의 유전자-유도 과정(gene-directed process)을 가리킨다. 세포자멸은 세포자살과 구별되는데; 세포자멸에는 세포골격분열, 세포질 수축 및 응축, 세포막의 외면 상에 포스파티딜세린의 발현 및 세포 기포생성이 포함되고, 이것은 세포막이 결합된 소포체 또는 세포사멸체의 형성을 야기한다. 이와 같은 과정은 또한 "프로그램된 세포 죽음"으로 불린다. 세포자멸 동안, 세포 표면의 곡면화, 핵염색질의 응축, 염색체 DNA의 절편화, 및 미토콘드리아의 기능의 상실과 같은 특징적인 현상들이 관찰된다. 세포자멸을 검출하기 위해 알려진 다양한 기술들이 사용될 수 있는데, 예컨대 애넥신 V와 요오드 프로피디움으로 세포 염색, DNA 절편화 분석 및 YO-PRO-1(Invitrogen)이 포함된다. 일부 구현예에서, 애넥신 V와 요오드 프로피디움으로 염색이 사용될 수 있고, 애넥신V+/PI+, 애넥신V+/PI- 및 애넥신V-/PI+ 개체군의 조합 퍼센트가 죽은 세포로 간주된다.
본원에 사용된 용어 "CD33의 세포 수위를 감소시키고, CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이 또는 둘 사이의 상호작용을 억제하는 제제"는 체외, 본위치, 및/또는 체내에서 CD33 (포유류, 예컨대 인간 CD33) 생물학적 활성을 감소시키고(유의미하게도 포함), 축소시키고, 차단하고, 억제하고 또는 방해하는 분자를 가리킨다. 용어 "제제"는 어떤 것이든 생물학적 작용의 특이적 메커니즘이 있다는 것을 의미하지 않고, 명시적으로 직접적이든 또는 간접적이든, CD33과의 모든 가능한 약제학적, 생리학적 및 생화학적 상호작용을, 또는 CD33과 상호작용을 하든 또는 하지 않든, 그것의 리간드들 중 하나 이상을, 또는 또 다른 메커니즘을 통해, 그리고 화학적으로 분기된 다양한 상이한 조성물들에 의해 달성될 수 있는 결과를 포함하고 망라한다. 예시적인 제제에는, 비제한적으로, CD33에 특이적으로 결합하는 항-CD33 항체, 가용성 CD33 수용체 단백질, 가용성 CD33-Fc 융합 단백질(예컨대, CD33 면역접합체), CD33 리간드에 결합하는 가용성 Siglec 수용체, CD33 리간드에 결합하는 Siglec-Fc 융합 단백질 (예컨대, Siglec 면역접합체), CD33을 인코딩하는 핵산을 향하는 항-감각 분자, CD33을 인코딩하는 핵산을 향하는 짧은 간섭 RNA ("siRNA") 분자, CD33 억제성 화합물, CD33에 결합하는 RNA 또는 DNA 앱타머, CD33 구조적 유사체가 포함된다. 일부 구현예에서, CD33 억제제(예컨대, 항체)는, CD33의 세포 수위를 감소시키거나, CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이, 또는 둘 사이의 상호작용을 억제하거나 또는 CD33 리간드에 결합하거나, 및/또는 CD33 합성 또는 생산을 억제(감소)하는 제제와 결합(제제와 물리적으로 상호작용함)한다. 다른 구현예에서, 본원의 억제제인 제제는 CD33과 결합하여 이것이 하나 이상의 리간드에 결합하는 것을 방지한다. 그 밖의 다른 구현예에서, 본원의 제제는 CD33의 발현(즉, 전사 또는 번역)을 감소 또는 제거한다. CD33의 세포 수위를 감소시키고, CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이, 또는 둘 사이의 상호작용을 억제하는 제제의 예시적인 유형들이 본원에 제시된다.
본원에 사용된 용어 "CD33과 결합 또는 상호작용하는 제제"는 CD33 단백질과 직접 또는 간접적으로 상호작용하는 분자를 가리킨다. 용어 "제제"는 어떤 것이든 생물학적 작용의 특이적 메커니즘이 있다는 것을 의미하지 않고, 명시적으로 직접적이든 또는 간접적이든, CD33과의 모든 가능한 약제학적, 생리학적 및 생화학적 상호작용을, 또는 CD33과 상호작용을 하든 또는 하지 않든, 그것의 리간드들 중 하나 이상을, 또는 또 다른 메커니즘을 통해, 그리고 화학적으로 분기된 다양한 상이한 조성물들에 의해 달성될 수 있는 결과를 포함하고 망라한다. 예시적 제제에는, 비제한적으로, CD33에 특이적으로 결합하는 항-CD33 항체가 포함된다.
본원에 사용된 용어 "RNA 간섭" 또는 "RNAi"는 일반적으로 이중가닥 RNA 분자 또는 짧은 헤어핀 RNA 분자가 상기 이중가닥 또는 짧은 헤어핀 RNA 분자가 실질적인 또는 전면적인 상동성을 공유하는 핵산 염기서열의 발현을 감소 또는 억제하는 과정을 가리킨다. 용어 "짧은 간섭 RNA" 또는 "siRNA" 또는 "RNAi 제제"는 RNA 간섭을 초래하는 RNA 염기서열을 가리킨다. Kreutzer et al., WO 00/44895; Zernicka-Goetz et al., WO 01/36646; Fire, WO 99/32619; Mello and Fire, WO 01/29058 참조. 본원에 사용된 siRNA 분자에는 화학적으로 변형된 뉴클레오티드와 비-뉴클레오티드를 아우르는 RNA 분자가 포함된다. 용어 "ddRNAi 제제"는 외인성 벡터에서 전사된 DNA-주도 RNAi 제제를 가리킨다. 용어 "짧은 헤어핀 RNA" 또는 "shRNA"는 듀플렉스 영역(duplex region)과 고리 영역을 구비한 RNA 구조를 가리킨다. 어떤 구현예에서는, ddRNAi 제제는 최초에 shRNAs로 발현된다.
본원에 사용된 용어 "앱타머"는 바람직한 분자 표적, 예컨대, 예를 들어, 일반적인 대사 보조인자(예컨대, 조효소 A, S-아데노실 메티오닌 등), 단백질(예컨대, 보완 단백질 C5, 항체 등), 또는 핵산 분자 내 보존적 구조 또는 보존적 구조적 원소(예컨대, 전사 인자의 결합에 중요한 구조 등)에 밀접하게 그리고 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드를 가리킨다. 앱타머는 전형적으로 길이가 약 10 내지 약 100 뉴클레오티드, 약 10 내지 약 75 뉴클레오티드, 약 10 내지 약 50 뉴클레오티드, 약 10 내지 약 35 뉴클레오티드, 약 10 내지 약 25 뉴클레오티드의 범위의 DNA 또는 RNA 뉴클레오티드 염기서열을 포함한다. 합성 DNA 또는 RNA 올리고뉴클레오티드는 표준 고체상 포스포라미다이트 법 및 장치, 예컨대 Applied Biosystems(Foster City, CA)에서 구매가능한 3900 High Throughput DNA SynthesizerTM에 의해, 제조될 수 있다. 앱타머는 가끔 DNA와 RNA에서 발견되는 일반적으로 발생하는 뉴클레오티드(예컨대, A, G, C 및 T/U), 예컨대 근간(backbone) 또는 연결 변형체(예컨대, 펩티드 핵산(PNA) 또는 포스포티오에이트 연결)의 유도체 또는 유사체를 편입시켜 뉴클레아제 저항성, 결합능(binding avidity)을 증가시키거나, 또는 그렇지 않으면 이들의 약동학적 특성들을 변경한다. 예시적인 변형들이 U.S. Patent Nos. 6,455,308; 4,469,863; 5,536,821; 5,541,306; 5,637,683; 5,637,684; 5,700,922; 5,717,083; 5,719,262; 5,739,308; 5,773,601; 5,886,165; 5,929,226; 5,977,296; 6,140,482; 및 WIPO publications WO 00/56746 및 WO 01/14398에 명시되었다. 유사체 또는 유도체를 포함한 올리고뉴클레오티드의 합성 방법들이, 예를 들어, 앞서 언급된 특허문헌 및 U.S. Patent Nos. 6,455,308; 5,614,622; 5,739,314; 5,955,599; 5,962,674; 6,117,992; 및 WO 00/75372에 개시되었다.
본원에 사용된 용어 "약"은 당해기술 분야의 숙련가에게 잘 알려진 각각의 값에 대한 일반적인 오차 범위를 가리킨다. 본원의 값 또는 매개변수 앞의 "약"에는 그 값 또는 그 매개변수 자체를 가리키는 구현예가 포함된다("약"은 상기 구현예를 기술한다).
본원과 청구항에서 사용된 단수 형태(영어에서는 "a", "an" 및 "the")에는 문맥이 명백하게 달리 명시하지 않는 한, 복수형 지시어가 포함된다. 예를 들어 "항체"라고 언급하는 경우, 하나의 항체에서 몰량과 같은 수많은 항체에 이르기까지 언급한 것이고, 여기에는 당해기술의 숙련가에게 알려진 그것의 등가물이 포함된다.
본원에 기술된 본 발명의 측면 및 구현예에 측면 및 구현예를 "포함하는", 이들로 "구성되는" 및 "필수적으로 구성되는"이 포함되는 것이 이해된다.
개요
본 개시내용은 CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 (예를 들면, 항-CD33 항체) 사이의 상호작용을 억제하는 제제, 그와 같은 제제 (예를 들면, 항-CD33 항체)를 제조 및 사용하는 방법; 그와 같은 제제 (예를 들면, 항-CD33 항체)를 함유하는 약제학적 조성물; 그와 같은 제제 (예를 들면, 항-CD33 항체)를 인코딩하는 핵산; 및 그와 같은 제제 (예를 들면, 항-CD33 항체)를 인코딩하는 핵산을 함유하는 숙주세포에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33와 1종 이상의 천연 글리칸 리간드 사이의 상호작용을 억제하기 위한 항체의 능력에 적어도 부분적으로 기인한 1종 이상의 길항적 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33의 분해, 하향조절, 절단, 수용체 탈민감화, 및/또는 리소좀 표적화를 유도하여 CD33의 세포 발현 (예를 들면, 세포 표면 발현)을 감소시키기 위한 항체의 능력에 적어도 부분적으로 기인한 1종 이상의 길항적 활성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 나타낸다: a. 항-CD33 항체 젬투주맙보다 더 낮은 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며; b. 항-CD33 항체 젬투주맙 또는 린투주맙의 농도보다 더 낮은 반-최대 효과적인 농도 (EC50) 로 인간 세포, 예컨대 인간 수지상 세포에 결합하고; c. 항-CD33 항체 젬투주맙 또는 린투주맙의 농도보다 더 낮은 반-최대 효과적인 농도 (EC50) 로 CD33의 세포 수준을 감소시키고; d. 예를 들면 KD가 대략 25 ℃의 온도에서 결정될 때 300 pM 내지 10 pM 범위일 수 있는 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며; e. 예를 들면 EC50이 대략 4 ℃의 온도에서 결정될 때 200 pM 내지 10 pM 범위일 수 있는 반-최대 효과적인 농도 (EC50)로 인간 세포, 예컨대 인간 수지상 세포에 결합하고; f. 65 pM 내지 20 pM 범위일 수 있는 반-최대 효과적인 농도 (EC50) 로 CD33의 세포 수준을 감소시키거나, 또는 g. 8.0 mg/kg 내지 2.0 mg/kg 범위일 수 있는 반-최대 효과적인 농도 (EC50) 로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. 본 명세서에서 개시된 바와 같이 반-최대 효과적인 농도 (EC50)는, 본 개시내용의 항-CD33 항체가 세포 상에서 또는 세포내에서 CD33의 세포 수준으르 감소시키거나, 항체가 세포 상의 CD33에 대한 반-최대 결합을 달성하는 농도를 지칭한다.
유익하게는, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 상업적 항-CD33 항체, 예컨대 젬투주맙 및 린투주맙과 비교하여 CD33에 결합하기 위해 개선된 EC50을 가지며 (예를 들면, 대략 3-배 초과), 상업적 항-CD33 항체, 예컨대 젬투주맙 및 린투주맙보다 더 강한 (예를 들면, 더 낮은 EC50) 세포 표면 발현을 감소시킨다 (예를 들면, 대략 5-배 초과) (실시예 1 및 3). 상업적으로 입수가능한 항-CD33 항체 젬투주맙의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열식별번호:248에서 제시되고, 그리고 항-CD33 항체 젬투주맙의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열식별번호:249에서 제시된다. 상업적으로 입수가능한 항-CD33 항체 린투주맙의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열식별번호:250에서 제시되고, 그리고 항-CD33 항체 린투주맙의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열식별번호:251에서 제시된다.
일부 구현예에서, 항체-유도된 CD33 활성은 본 명세서에서 개시된 기술 중 임의의 것 (참조, 예를 들면, 실시예 1-5)에 의해 결정되거나 시험관내에서 시험될 수 있고, 상기 기술은 전장 항-CD33 항체의 플레이트-결합을 시험하여 CD33에 노출된 항체의 밀도를 증가시키고, 항-CD33 항체을 2차 항체와 가교결합시키고, 항-CD33 항체를 1종 이상의 Fcg 수용체 (예를 들면, FcgRIIB)를 발현시키는 세포와 가교결합시키고, 용액에서 CD33 항체를 사용하고, 그리고 CD33 항체의 Fab 단편을 사용하는 것을 비제한적으로 포함한다.
본 개시내용의 특정 측면은, CD33에 결합하기 위해 1종 이상의 CD33 리간드와 경쟁하는 능력 및/또는 세포 상의 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 능력을 나타내는, 제제, 예컨대 항-CD33 항체의 확인에 적어도 부분적으로, 기초하며, 이로 인해 하기를 비제한적으로 포함하는1종 이상의 CD33 활성의 감소, 중화, 예방, 또는 억제를 초래한다: 1종 이상의 Src 계열 티로신 키나제, 예컨대 LCK 및 FYN에 의한 Tyr-340 및 Tyr-358의 인산화에 역작용하고; 티로신-특이 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 동원 및 그것에의 결합; 다이나미니-1에 대한 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자로서 작용하는 PLC-감마1의 동원 및 그것에의 결합; SH2-도메인 함유 단백질 (예를 들면, Crkl)의 동원 및 그것에의 결합; 비장 티로신 키나제 Syk의 동원 및 그것에의 결합; SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합된 단백질 2 (Grb2)의 동원 및 그것에의 결합; 다중 SH2-함유 단백질의 동원 및 그것에의 결합; Ser-307 및 Ser-342 by 단백질 키나제 C의 인산화; 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 및/또는 미세신경교 세포에서 1종 이상의 항-염증성 사이토카인, 예컨대 IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b, 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체의 조절된 발현; 세포내 칼슘 동원의 감소; 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 및/또는 미세신경교 세포에서 1종 이상의 전-염증 사이토카인, 예컨대 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, 및 MIP-1-베타의 조절된 발현; C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, PYCARD, CD14, CD16, HLA-DR, 및 CCR2로부터 선택된 1종 이상의 단백질의 조절된 발현; 세포외 신호-조절된 키나제 (ERK) 인산화의 억제; 다중 세포 단백질 상의 티로신 인산화의 증가; C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)의 조절된 발현; CCL19 및 CCL21 발현 세포를 향한 미세신경교 세포 화학주성의 억제; 포스포이노시티드 3-키나제의 활성화; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포 및/또는 미세아교의 세포성장의 감소; 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, M2 미세아교, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및/또는 M2 대식세포에 의해 유도된 T 세포 증식의 감소; 파골세포 생산의 억제, 파골세포생성의 감소된 속도, 또는 둘 모두; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 생존의 감소; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 증식의 감소; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 이동을 억제하고; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교 중 1종 이상의 기능을 감소시키고; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 성숙을 억제하고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 세포사 및 세포자멸사를 증가시키고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 식세포 활성을 감소시키고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 증식을 감소시키고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 전체 기능성을 감소시키고, ITAM 함유 수용체의 인산화; ITAM 신호전달을 매개하는 신호전달 분자의 인산화; 패턴 인식 수용체의 활성화를 감소시키고; 톨(Toll)-유사 수용체의 활성화를 감소시키고; 세포 및 단백질 잔해의 청소능과 관련된 손상의 활성화를 감소시키고; CD33과 그것의 리간드 중 하나 이상 사이의 상호작용; CD33과 공-수용체 예컨대 CD64 사이의 상호작용; 세포자멸적 뉴런 청소능, 신경 조직 잔해 청소능, 기능이상 시냅스 청소능, 비-신경 조직 잔해 청소능, 박테리아 또는 다른 이물질 청소능, 질환 유발 단백질 청소능, 및 종양 세포 청소능으로부터 선택된 청소능 중 1종 이상의 유형을 감소시키고; 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 기능이상 시냅스, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 질환 유발 단백질, 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 핵산, 질환 유발 지질, 또는 종양 세포 중 하나 이상의 식균작용의 억제; 질환 유발 핵산의 청소능의 억제로서, 상기 질환 유발 핵산은 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA이고; 하기로부터 선택된 질환 유발 단백질의 청소능의 활성화: 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드; 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 급성 골수 백혈병, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 및 갑상선암으로부터 선택된 암의 상이한 융형에 대한 유익한 면역 반응의 억제; 하기로부터 선택된 상이한 유형의 신경적 장애에 대한 유익한 면역 반응의 억제: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 본태 떨림, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 및 다발성 경화증; 하기로부터 선택된 상이한 유형의 염증성 및 감염성 장애에 대한 유익한 면역 반응의 억제: 낭창, 급성 및 만성 결장염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 및 골의 파젯병; 종양 세포 상의 CD33 리간드에 결합하고; 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, T 세포, 중성구, 및/또는 대식세포 상의 CD33 리간드에 결합함; 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 억제; 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항종양 세포 증식 활성의 억제; 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항- 종양 세포 전이 활성의 억제; 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 또는 조절 T 세포의 촉진; 1종 이상의 ITAM 모티프 함유 수용체, 예컨대 TREM1, TREM2, FcgR, DAP10, 및 DAP12의 억제; 모티프 D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I (서열식별번호:247)를 함유하는 1종 이상의 수용체의 억제; 1종 이상의 패턴 인식 수용체 (PRRs), 예컨대 병원체-관련된 분자 패턴 (PAMPs)를 확인하는 수용체, 및 손상-관련된 분자 패턴 (DAMPs)를 확인하는 수용체에 의한 신호전달의 억제; 1종 이상의 톨(Toll)-유사 수용체에 의한 신호전달의 억제; JAK-STAT 신호전달 경로의 억제; 활성화된 B 세포 (NFκB)의 핵 인자 카파-경쇄-인핸서의 억제; 1종 이상의 염증성 수용체, 예컨대 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상 상에서 발현된 CD86의 조절된 발현; 1종 이상의 CD33-의존적 유전자의 발현을 증가시킴; 파괴된 CD33-의존적 유전자 발현의 정규화; 및 1종 이상의 ITAM-의존적 유전자, 예컨대 NFAT 전사 인자의 발현의 감소; 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 분화의 촉진; 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 기능성을 촉진하고; 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양으로의 침윤의 향상; 종양, 말초 혈액, 또는 다른 림프양 장기에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포의 수를 증가시키고; 골수-유래된 억제 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고; 종양 또는 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인, 예컨대 TGF-베타 또는 IL-10의 발현을 증가시키고; 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤을 증가시키고; 골수-유래된 억제 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고 (MDSC); 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 활성화를 감소시키고; 종양 사멸화 잠재성을 갖는 CD45+CD3+ T 림프구의 활성화를 감소시키고; 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 NK 세포의 침윤을 감소시키고; 면역 반응을 향상시키는 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 B 림프구의 침윤을 감소시키고; 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 침윤을 감소시키고; CD45+CD3+ T 림프구의 침윤을 감소시키고; 종양 부피를 증가시키고; 종양 성장률을 증가시키고; 종양 재발의 속도를 증가시키고; 항종양 T 세포 반응을 조절하는 1종 이상의 면역-요법의 효능을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 면역-요법은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 단백질을 표적으로 하는 면역 요법임, 또는 또는 화학요법 제제 및/또는 더 많은 암 백신 중 하나; PLCγ/PKC/칼슘 동원의 억제; 및 PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 억제.
일부 구현예에서, 제제, 예컨대 CD33 차단 항체에 의한 암의 치료는 하기이다: (i) 암 환자의 종양, 말초 혈액, 및 림프양 기관에서 축적되는 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포의 생존, 증식, 성숙, 분화, 및/또는 기능성을 직접적으로 또는 간접적으로 감소시키고; (ii) 암 환자의 종양, 말초 혈액, 및 다른 림프양 기관에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포의 수를 감소시키고; (iii) 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 종양-촉진 활성을 차단하고; (iv) 암 환자의 종양 및 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인, 예컨대 TGF-베타 및 IL-10의 발현을 감소시키고; (v) 종양에서 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구 침윤을 감소시키고; (vi) 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸을 증가시키고; (vii) 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항종양 세포 증식 활성을 증가시키고; (viii) 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항종양 세포 전이 활성을 증가시키고; (ix) 1종 이상의 ITAM 모티프 함유 수용체, 예컨대 TREM1, TREM2, FcgR, DAP10, 및 DAP12를 증가시키고; (x) 1종 이상의 패턴 인식 수용체 (PRRs), 예컨대 병원체-관련된 분자 패턴 (PAMPs)를 확인하는 수용체, 손상-관련된 분자 패턴 (DAMPs)를 확인하는 수용체, 및 이들의 임의의 조합에 의한 신호전달을 증가시키고; (xi) 모티프 D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I (서열식별번호:247)을 포함하는 1종 이상의 수용체를 증가시키고; (xii) 1종 이상의 톨(Toll)-유사 수용체에 의한 신호전달을 증가시키고; (xiii) JAK-STAT 신호전달 경로를 증가시키고; (xiv) 활성화된 B 세포 (NFκB)의 핵 인자 카파-경쇄-인핸서를 증가시키고; (xv) 포스포릴레이트 ITAM 모티프 함유 수용체; (xvi) 예컨대 활성화된 T 세포 (NFAT) 전사 인자의 핵 인자에 의해 활성화된 1종 이상의 ITAM-의존적 유전자의 발현을 증가시키고; (xvii) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 분화 및/또는 기능성을 억제하고; (xviii) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양으로의 침윤을 감소 또는 억제하고; (xix) 종양, 말초 혈액, 또는 다른 림프양 장기에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포의 수를 감소시키고; (xx) 골수-유래된 억제 세포의 종양-촉진 활성을 감소시키거나 억제하고; (xxi) 종양 또는 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인, 예컨대 TGF-베타 또는 IL-10의 발현을 감소시키고; (xxii) 종양 사멸화 잠재성을 갖는 종양 특이적 T 림프구의 활성화를 증가시키고; (xxiii) 종양 사멸화 잠재성을 갖는 종양 특이적 NK 세포의 침윤을 증가시키고, (xxiv) NK 세포의 종양 사멸화 잠재성을 증가시키고; (xxv) 면역 반응을 향상시키는 잠재성을 갖는 종양 특이적 B 림프구의 침윤을 증가시키고; (xxvi) 종양 부피를 감소 또는 억제하고; (xxvii) 종양 성장률을 감소 또는 억제하고; (xxviii) 전이를 감소 또는 억제하고; (xxix) 종양 재발의 속도를 감소 또는 억제하고; (xxx) 항종양 T 세포 반응을 조절하는 1종 이상의 면역-요법, 예컨대 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, TREM1, TREM2, CSF1 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질을 표적으로 하는 면역 요법, 또는 1종 이상의 암 백신의 효능을 증가시키고; (xxxi) PLCγ/PKC/칼슘 동원을 활성화하고; 그리고 (xxxii) PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달을 활성화한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 골수 세포는, 비제한적으로, CD45+CD14+ 골수 세포, CD14+ 골수 세포, 및 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 골수 세포는 비-종양형성 골수 세포이다.
면역억제 세포는 때때로 또한 일명 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이다. 인간에서, MDSC는 마커의 하기 조합 중 하나에 의해 한정될 수 있다: (1) CD14+ HLA-DR낮은/-, (2) CD14+ IL4Rα+, (3) CD14+ HLA-DR- IL4Rα+, (4) CD34+ CD14+ CD11b+ CD33+, (5) CD11b+ CD14+ CD33+, (6) CD33+ HLA-DR-, (7) Lin- HLA-DR-, (8) Lin- HLA-DR- CD33+, (9) Lin- HLA-DR- CD33+ CD11b+, (10) Lin- CD33+ CD11b+ CD15+, (11) Lin- HLA-DR- CD33+ CD11b+ CD14- CD15+, (12) CD11b+ CD14- CD33+, (13) CD11b+ CD14- HLA-DR- CD33+ CD15+, (14) CD33+ HLA-DR- CD15+, (15) CD15+ IL4Rα+, (16) CD11b+ CD15+ CD66b+, (17) CD15+ FSC낮은 SSC높은, (18) CD15높은 CD33+, (19) CD11b+ CD14- CD15+, (20) CD66b+ SSC높은, 및 (21) CD11b+ CD15+ (참조 또한 Solito S 등 Annals of NY Academy of Sciences, 2014). 마우스에서, MDSC는 표면 마커 CD45+, CD11b+, Gr1+, 및/또는 Il4Ra+의 발현에 의해 한정될 수 있다. 추가 예시적인 면역억제성 단구성 계통은 CD45+, CD11b+, Gr1낮은; 및 CD45+, CD11c+이다.
본 개시내용은 추가로, CD33, 예컨대 항-CD33 항체에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 항-CD33 항체는 상당히 CD33의 세포 표면 수준을 상당히 감소시키지 않고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하지 않는다.
CD33 단백질
일 측면에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 CD33 단백질 내의 영역, 예컨대 에피토프와 상호작용하거나 달리 그것에 결합하는 제제, 예컨대 단리된 (예를 들면, 단클론성) 항체를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 단백질에 결합하고 CD33 단백질에 결합한 후의 1종 이상의 CD33 활성, 예를 들면, 세포에서 CD33 발현과 관련된 활성을 조절한다. 본 개시내용의 CD33 단백질은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 포유동물 CD33 단백질, 인간 CD33 단백질, 마우스 CD33 단백질, 및 랫트 CD33 단백질.
CD33는 다양하게 CD33 분자, 시글렉3, 시글렉-3, CD33 항원 (Gp67), P67, Gp67, 시알산-결합-Ig-유사 렉틴 3, 골수 세포 표면 항원 CD33, 또는 FLJ00391로 칭한다.
CD33는 면역글로불린-유사 수용체는 대식세포, 수지상 세포, 파골세포, 단핵구, 및 미세아교를 비제한적으로 포함하는 골수 계열 세포 상에서 주로 발현된다. 일부 구현예에서, CD33는 CD64와의 수용체-신호전달 복합체를 형성한다. 일부 구현예에서, CD33 신호전달은 PI3K 또는 다른 세포내 신호의 다운스트림 억제를 초래한다. On 골수 세포, 톨(Toll)-유사 수용체 (TLR) 신호는 예를 들면, 감염 반응의 문맥에서 CD33 활성의 억제에 중요하다. TLR은 또한 병리적 염증 반응, 예를 들면, 대식세포 및 수지상 세포에서 발현된 TLR에서 주요 역할을 한다.
다양한 CD33 동족체는 인간 CD33, 마우스 CD33, 랫트 CD33, 침팬지 CD33, 레수스 CD33, 개 CD33, 소 CD33, 제브라피쉬 CD33, 오리너구리 CD33, 및 도마뱀 CD33를 비제한적으로 포함하여 공지된다. 인간 CD33의 아미노산 서열은 서열식별번호:1 로서 아래에 제시된다:
Figure pct00002
일부 구현예에서, CD33는 신호 서열을 포함하는 프레단백질이다. 일부 구현예에서, CD33는 성숙한 단백질이다. 일부 구현예에서, 성숙한 CD33 단백질은 신호 서열을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 성숙한 CD33 단백질은 세포 상에서 발현된다. 일부 구현예에서, 성숙한 CD33 단백질은 세포, 예컨대 세포의 표면 상에서 발현되고, 상기 세포는 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 중성구, 인간 T 세포, 인간 T 도움 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구, 및 인간 미세아교를 비제한적으로 포함한다. 본 개시내용의 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 본 명세서에서 개시된 임의의 세포 상에서 발현된 본 개시내용의 CD33 단백질 중 임의의 것 에 결합할 수 있다.
본 개시내용의 CD33 단백질, 예컨대 인간 CD33은, 몇 개의 도메인을 함유하고, 이 도메인은 비제한적으로, 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 1-17에 위치한 신호 서열, 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-135에 위치한 세포외 면역글로불린-유사 가변성-유형 (IgV) 도메인, 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 145-228에 위치한 Ig-유사 C2-유형 도메인, 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 260-282에 위치한 막관통 도메인, 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 338-343에 위치한 ITIM 모티프 1, 및 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 356-361 에 위치한 ITIM 모티프 2를 포함한다. 당업자라면 알 수 있듯이, 본 개시내용의 도메인의 개시 및 종료 잔기는 사용된 컴퓨터 모델링 프로그램 또는 도메인을 결정하기 위해 사용된 방법에 따라 변할 수 있다.
본 개시내용의 특정 측면은 항-CD33 항체를 제공하되, 이 항체는 인간 CD33, 또는 포유동물 CD33 단백질 및 다른 종으로부터의 Cd33 오쏘로그를 비제한적으로 포함하는 그것의 동족체에 결합한다. 예시적인 CD33 동족체 및 오쏘로그는 표 A에서 열거된다.
Figure pct00003
따라서, 본 명세서에서 사용된 바와 같이 본 개시내용의 "CD33" 단백질은, 비제한적으로, 포유동물 CD33 단백질, 인간 CD33 단백질, 영장류 CD33 단백질, 마우스 CD33 단백질, 및 랫트 CD33 단백질을 포함한다. 추가로, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 포유동물 CD33 단백질, 인간 CD33 단백질, 영장류 CD33, 마우스 CD33 단백질, 및 랫트 CD33 단백질 중 하나 이상 내의 에피토프 에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 포유동물 CD33 단백질, 인간 CD33 단백질, 또는 둘 모두 에 특이적으로 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33, 마우스 CD33, 또는 둘 모두 에 특이적으로 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 CD33, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 결합하거나 그것과 상호작용하는 본 개시내용의 제제는, pH 의존 방식으로 CD33에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 제제, 예컨대 항-CD33 항체는, 중성 pH에서 CD33에 결합할 수 있고 CD33 단백질로부터 분리되지 않고 내재화될 수 있다. 대안적으로, 산성 pH에서 본 개시내용의 제제, 예컨대 항-CD33 항체는, 내재화되고, 그 다음 엔도솜/리소좀 경로에 의해 분리되면 CD33로부터 분리될 수 있다. 특정 구현예에서, 항-CD33 항체는 5.5 내지 8.0, 5.5 내지 7.5, 5.5 내지 7.0, 5.5 내지 6.5, 5.5 내지 6.0, 6.0 내지 8.0, 6.5 내지 8.0, 7.0 내지 8.0, 7.5 내지 8.0, 6.0 내지 7.5, 6.0 내지 7.0, 6.5 내지 7.5 범위의 pH로 CD33에 결합한다. 특정 구현예에서, 항-CD33 항체는 6.0미만, 5.5미만, 5.0미만, 4.5미만, 4.0미만, 3.5미만, 3.0미만, 2.5 미만, 또는 2.0 미만의 pH에서 CD33로부터 분리된다.
일부 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 CD33, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 결합하거나 그것과 상호작용하는 본 개시내용의 제제는, 본 개시내용의 야생형 CD33 단백질, 그것의 천연 발생 변이체, 및/또는 그것의 질환 변이체에 결합한다.
일부 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 CD33, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 결합하거나 그것과 상호작용하는 본 개시내용의 제제는, 인간 CD33의 변이체에 결합하고, 상기 변이체는 (C) 뉴클레오타이드를 갖는 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNP) rs3865444 C 를 함유한다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 CD33, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 결합하거나 그것과 상호작용하는 본 개시내용의 제제는, 인간 CD33의 변이체에 결합하고, 상기 변이체는 (A) 뉴클레오타이드를 갖는 SNP rs3865444를 함유한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33의 변이체에 결합하고, 상기 변이체는 SNP rs3865444 AC 또는 rs3865444 CC을 함유한다.
일부 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 CD33, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 결합하거나 그것과 상호작용하는 본 개시내용의 제제는, 인간 CD33의 변이체에 결합하고, 상기 변이체는 GG 뉴클레오타이드, AA 뉴클레오타이드, 또는 AG 뉴클레오타이드를 갖는 SNP rs35112940을 함유한다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 CD33, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 결합하거나 그것과 상호작용하는 본 개시내용의 제제는, 인간 CD33의 변이체에 결합하고, 상기 변이체는 CC, CT 또는 TT 유전자형을 갖는 SNP rs12459419를 함유한다. 특정 구현예에서, 상기 대상체는 GG 뉴클레오타이드, CG 뉴클레오타이드, 또는 CC 뉴클레오타이드를 갖는 SNPs, rs1803을 코팅하기 위해 동종접합성 또는 이종접합성을 갖는다.
일부 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 CD33, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 결합하거나 그것과 상호작용하는 본 개시내용의 제제는 세포의 표면 상에서 발현된 CD33 단백질에 결합하고, 상기 세포는, 비제한적으로, 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 중성구, 인간 T 세포, 인간 T 도움 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구, 및 인간 미세아교를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 that CD33, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 결합하거나 그것과 상호작용하는 본 개시내용의 제제는, 세포의 표면 상에서 발현된 CD33 단백질에 결합하고 표면 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 본 개시내용의 적어도 1종의 CD33 활성을 조절하고 (예를 들면, 유도하거나 억제한다). 본 개시내용의 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33 단백질 에 특이적으로 결합한다. 본 개시내용의 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 추가로, 적어도 1종의 추가 시글렉 단백질에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 적어도 1종의 추가 시글렉 단백질 또는 적어도 1종의 추가 시글렉 단백질을 발현시키는 세포의 1종 이상의 활성을 조절한다.
CD33 리간드
본 개시내용의 CD33 단백질은 1종 이상의 CD33 리간드 와 상호작용할 수 있다 (예를 들면, 그것에 결합할 수 있다).
예시적인 CD33 리간드는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 시알산, 시알산-함유 당지질, 시알산-함유 당단백질, 알파-2,6-연결된 시알산-함유 당지질, 알파-2,6-연결된 시알산-함유 당단백질, 알파-2,3-연결된 시알산-함유 당지질, 알파-2,3-연결된 시알산-함유 당단백질, 알파-1-산 당단백질 (AGP), CD24 단백질, 강글리오사이드 (예를 들면, 시알릴화된 글리칸에 연결된 세라미드를 함유하는 당지질), 분비된 뮤신, 적혈구 상에서 발현된 CD33 리간드,박테리아 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 세포자멸적 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 종양 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 바이러스 상에서 발현된 CD33 리간드, 수지상 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 신경 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 신경교 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 미세아교 상에서 발현되는 CD33 리간드, 별아교세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 베타 아밀로이드 플라크 상의 CD33 리간드, 타우 엉킴 상의 CD33 리간드, 질환 유발 단백질 상의 CD33 리간드, 질환 유발 펩타이드 상의 CD33 리간드, 대식세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 천연 살해 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 도움 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 세포독성 T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, B 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양-매립된 면역억제제 대식세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 골수-유래된 억제 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 및 조절 T 세포 상에서 발현된 CD33 리간드. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 리간드는 강글리오사이드이다. 강글리오사이드는 일반적으로 공통의 락토-세라미드 코어 및 1종 이상의 시알산 잔기를 공유한다.
적합한 CD33 리간드의 추가 예는 도 3에서 묘사된다.
적합한 강글리오사이드 리간드의 추가 예는 도 4에서 묘사되고 표 B에서 열거된다. 일반적으로, 강글리오사이드는 당 사슬에 연결된 1종 이상의 시알산 (예를 들면, n-아세틸-뉴라민산, NANA)을 갖는 글리코스핑고지질을 포함하는 분자이다.
Figure pct00004
CD33 제제
본 개시내용의 특정 측면은 제제 (예를 들면, CD33 제제)에 관한 것이고, 이 제제는 CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제한다. 본 개시내용의 다른 측면은 제제 (예를 들면, CD33 제제)에 관한 것이고, 이 제제는 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 제제는 시험관내, 원위치, 및/또는 생체내 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 차단하고, 억제하고, 감소시키거나 방해한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 제제는 시험관내, 원위치, 및/또는 생체내 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 차단하지 않고, 억제하지 않고, 감소시키지 않거나 방해하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 제제는, 시험관내, 원위치, 및/또는 생체내 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 증가시키고, 활성화시키거나 유도한다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 제제는 제제 (예를 들면, CD33 제제)이고, 이 제제는 CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제한다. CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 본 개시내용의 제제는 하기 특징 중 하나 이상을 갖는 분자이다: (1) 1종 이상의 CD33활성을 억제하거나 감소시키고; (2) CD33의 그것의 리간드 중 하나 이상에의 결합을 억제하거나 감소시키는 능력; (3) CD33-발현 세포에서 (예컨대 mRNa 수준에서 및/또는 단백질 수준)에서 CD33 발현을 감소시키는 능력; (4) CD33 단백질과 상호작용하고, 그것에 결합하거나 그것을 인식하는 능력; (5) CD33 단백질과 구체적으로 상호작용하거나 그것에 결합하는 능력; 및 (6) 본 명세서에서 기재되거나 고려된 질환 또는 장애의 임의의 측면을 치료, 완화 또는 예방하는 능력.
CD33의 생산을 억제하는 예시적인 제제는 CD33 합성을 구체적으로 억제하고/거나 CD33에 지향된 안티센스 분자, 또는 CD33을 인코딩하는 핵산에 지향된 짧은 간섭 RNA (siRNA) 분자를 방출하는 화합물을 비제한적으로 포함한다. 1종 이상의 CD33 활성을 억제하는 추가 예시적인 제제는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: CD33 단백질에 특이적으로 결합하는 항-CD33 항체, 구체적으로 1종 이상의 CD33 활성을 구체적으로 억제하는 화합물 예컨대 소분자 억제제 및/또는 펩타이드 억제제, 1종 이상의 리간드, CD33 구조적 유사체, 또는 CD33에 결합하는 RNA 또는 DNA 압타머에 대한 CD33 결합을 구체적으로 억제하는 화합물. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는 알로스테릭 억제제이다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는 오쏘스테릭 억제제이다.
특정 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는, 작은 펩타이드 또는 펩타이드-유사 분자, 가용성 펩타이드, 및 합성 비-펩티딜 유기 또는 무기 화합물을 비제한적으로 포함하는 소분자 억제제이다. 소분자 억제제는 약 100 내지 약 20,000 달톤 (Da), 약 500 내지 약 15,000 Da, 약 1000 내지 약 10,000 Da 중 임의의 것의 분자량을 가질 수 있다. 소분자가 1종 이상의 CD33 활성에 대해 갖는 억제 효과를 만들고 시험하는 방법은 당해 분야에서 잘 알려져 있고 그와 같은 방법은 CD33 활성 에 대한 소분자 억제제의 효과를 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 명세서에서 개시된 방법 및 검정 중 임의의 것은 CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 소분자 억제제를 스크리닝하기 위해 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는 항-CD33 항체이고, 이 항체는 CD33에 결합하거나 그것과 물질적으로 상호작용한다. 항체는 표적 항원 (예를 들면, CD33)에 대한 나노몰 또는 심지너 피코몰 친화도를 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 항체의 KD는 약 0.05 내지 약 100 nM이다. 특정 구현예에서, 항체의 해리 상수 (KD)는 약 0.5 내지 약 10 nM이다. 예를 들면, KD of 항체는 약 100 nM, 약 50 nM, 약 10 nM, 약 9 nM, 약 8 nM, 약 7 nM, 약 6 nM, 약 5 nM, 약 4 nM, 약 3 nM, 약 2 nM, 약 1 nM, 약 500 pM, 약 400 pM, 약 300 pM, 약 200 pM, 약 175 pM, 약 170 pM, 약 169 pM, 약 168 pM, 약 167 pM, 약 166 pM, 약 166.2 pM, 약 165 pM, 약 164 pM, 약 163 pM, 약 162 pM, 약 161 pM, 약 160 pM, 약 150 pM, 약 145 pM, 약 140 pM, 약 139 pM, 약 138 pM, 약 138.2 pM, 약 137 pM, 약 136 pM, 약 135 pM, 약 134 pM, 약 133 pM, 약 132 pM, 약 131 pM, 약 130 pM, 약 120 pM, 약 110 pM, 약 100 pM, 또는 약 50 pM 중 임의의 것 내지 약 2 pM, 약 5 pM, 약 10 pM, 약 15 pM, 약 20 pM, 또는 약 40 pM 중 임의의 것이다. 일부 구현예에서, CD33에 대한 해리 상수 (KD)는 대략 25 ℃의 온도에서 결정된다. 일부 구현예에서, KD는 1가 항체 (예를 들면, Fab) 또는 1가 형태의 전장 항체를 사용하여 결정된다. 특이성으로 CD33과 상호작용하고/거나 그것에 결합하는 항체의 제조 및 선택 방법은 본 명세서 (예를 들면, 참고 실시예 1) 에 기재되어 있다.
특정 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는 CD33을 인코딩하는 핵산을 표적화하여 기능성 CD33의 발현을 차단 또는 감소시킬 수 있는 적어도 1종의 안티센스 분자를 포함한다. CD33의 핵산 서열은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 인간 CD33은 NCBI 수탁 번호 NM_001082618.1에서 나타낸 핵산 서열을 가질 수 있고 및 마우스 CD33은 NCBI 수탁 번호 NM_001111058.1에서 나타낸 핵산 서열을 가질 수 있다. 방법은 안티센스 올리고뉴클레오타이드 분자의 제조에 대해 공지되어 있고 그와 같은 방법은 다른 폴리뉴클레오타이드와의 교차-반응 없이 CD33 mRNA 중 하나 이상에 특이적으로 결합할 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 표적화의 예시적인 부위는, 비제한적으로, 개시 코돈, 5' 조절 영역, 코딩 서열 (임의의 보존된 공통 영역을 포함, 및 3' 미번역된 영역 포함)을 포함한다. 특정 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 그 길이가 약 10 내지 약 100개의 뉴클레오타이드, 그 길이가 약 15 내지 약 50개의 뉴클레오타이드이고, 그 길이가 약 18 내지 약 25개 이상의 뉴클레오타이드이다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 추가로, 뉴클레아제 저항 및 기타 동종의 것, 예를 들면, 당해 분야의 숙련가에게 공지된 포스포로티오에이트 연결기 및 2'-O-당 변형을 증가시키기 위한 화학 변형을 포함한다.
특정 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는 CD33을 인코딩하는 핵산을 표적화하여 기능성 CD33의 발현을 차단 또는 감소시킬 수 있는 적어도 1종의 siRNA 분자를 포함한다. siRNA 분자의 제조 방법은 당해 분야에서 잘 알려져 있고 그와 같은 방법은 다른 폴리뉴클레오타이드와의 교차-반응 없이 CD33 mRNA를 특이적으로 표적화할 siRNA 분자을 제조하기 위해 사용될 수 있다. siRNA 분자는 방법 예컨대 전형적인 고상 올리고뉴클레오타이드 합성에 의해 생성될 수 있고, siRNA 제제의 반감기 및/또는 효능을 증가시키기 위해, 그리고/또는 더 많은 강력한 전달 제형을 허용하기 위해 화합 변형을 종종 편입할 것이다. 대안적으로, siRNA 분자는 전 siRNA의 세포내 전사를 위해 발현 카세트를 인코딩하는 벡터를 사용하여 전달된다.
특정 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는 CD33에 결합하고 그것과 물질적으로 상호작용하고 CD33과 그것의 리간드 중 하나 이상 사이의 상호작용을 차단하는 RNA 또는 DNA 압타머이다. 특정 구현예에서, 압타머는 성숙한 형태의 CD33에 결합하는 적어도 1종의 RNA 또는 DNA 압타머를 포함한다.
특정 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는 적어도 1종의 CD33 구조적 유사체를 포함한다. 용어 CD33 구조적 유사체는 CD33의 구조의 일부와 유사한 3차원 구조를 가지며 시험관내 또는 생체내 생리적 조건 하에서 1종 이상의 CD3 리간드에 결합하는 화합물을 지칭하고, 여기서 결합은 CD33 생물학적 활성을 적어도 부분적으로 억제한다. 적합한 CD33 구조적 유사체는 리간드, 예컨대 본 개시내용의 CD33 리간드에 대한 CD33 결합의 분자 모델링을 통해 설계 및 합성될 수 있다. CD33 구조적 유사체는 개선된 친화도 및 생물학적 효과를 얻기 위해 동일 또는 상이한 구조의 임의의 요망된 조합의 모노머, 이량체, 또는 고차 다량체일 수 있다. 일부 구현예에서, 제제는 CD33의 아미노산 서열에 결합하거나 그것과 상호작용한다.
특정 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는 가용성 CD33 수용체 단백질, 가용성 CD33-Fc 융합 단백질 (예를 들면, CD33 면역부착소), CD33 리간드에 결합하는 가용성 시글렉 수용체, CD33 리간드에 결합하는 시글렉-Fc 융합 단백질 (예를 들면, 시글렉 면역부착소)을 포함한다. 특정 구현예에서, 그와 같은 제제는 1종 이상의 CD33 리간드에 결합하고 이로써 주어진 CD33 리간드와 기능성 CD33 수용체 사이의 상호작용을 방지한다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 제제는 제제 (예를 들면, CD33 제제)이고, 이 제제는 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용한다. CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 예시적인 제제는, 비제한적으로, 불활성 항-CD33 항체, 효능제 항-CD33 항체, CD33 리간드, CD33 리간드 효능제 단편, CD33 면역부착소, CD33 가용성 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질 (예를 들면, 시글렉 면역부착소), 가용성 시글렉 수용체, CD33 리간드 모방체, 및 소분자 화합물을 포함한다. 소분자 화합물은 약 100 내지 약 20,000 달톤 (Da), 약 500 내지 약 15,000 Da, 약 1000 내지 약 10,000 Da 중 임의의 것의 분자량을 가질 수 있다. 1종 이상의 CD33 활성에 대해 제제가 갖는 효과를 만들고 시험하는 방법은 당해 분야에서 잘 알려져 있고, 그와 같은 방법은 CD33 활성에 대한 소분자 억제제의 효과를 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 명세서에서 개시된 방법 및 검정 중 임의의 것은 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 소분자 억제제를 스크리닝하기 위해 사용될 수 있다.
검정
CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는 당해 분야에서 잘 알려진 방법, 예를 들면, 방사선표지된 억제제 검정, 광학 검정, 단백질 결합 검정, 생화학적 선별 검정, 면역검정, 질량 이동 측정 검정, 형광 검정, 및/또는 플루오로제닉 펩타이드 절단 검정을 사용하여 확인 및/또는 특성규명될 수 있다.
결합 검정 및 다른 검정
특정 구현예에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 제제는 CD33에 대한 CD33 제제 후보의 상호작용 및/또는 결합 친화도의 존재를 검출하기 위해 기술 당해 분야에서 잘 알려진 기술 에 의해 확인될 수 있다.
특정 구현예에서, CD33와 상호작용하는 제제는 방사선표지된 억제제 검정을 사용하여 확인될 수 있다. 예를 들면, 공지된 양의 방사선표지된 제제 후보는 공지된 양의 고정된 CD33 및 완충액 과 함께 인큐베이션될 수 있다. 그 뒤에, 고정된 CD33는 완충액으로 세정될 수 있고 고정된 CD33는 당해 분야에서 공지된 기술, 예를 들면, 감마 계수기를 사용하여 방사선표지된 CD33 제제 후보의 나머지 존재에 대해 측정될 수 있다. 방사선표지된 서브스턴스의 존재를 나타내는 측정은, 방사선표지된 제제 후보가 CD33와 상호작용하고/거나 그것에 결합할 수 있음을 나타낼 수 있다.
특정 구현예에서, CD33과 상호작용하는 제제는 광학 기술을 사용하여 확인될 수 있다. CD33 제제를 검출하기 위한 예시적인 광학 기술은, 예를 들면, 비색 공명 그라프팅 표면에 CD33를 부착시킴으로써, 이로써 광이 취해야 하는 광로의 변화로 인해 반사광의 파장을 이동시키고, 및 후속적으로 후보 제제가 CD33와 상호작용될 때 반사광의 파장의 추가 변화를 측정하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 제제가 CD33와 함께 인큐베이션될 때의 반사광의 측정된 파장의 변화는, 제제 후보가 CD33과 상호작용할 수 없음을 나타낼 수 없다. 제제 후보가 D33와 함께 인큐베이션될 때의 반사광의 측정된 파장의 변화는, 제제 후보가 CD33에 결합하고/거나 그것과 상호작용할 수 있음을 나타낼 수 있다.
특정 구현예에서, CD33과 상호작용하는 제제는 단백질 결합 검정을 사용하여 확인될 수 있다. CD33 제제를 검출하기 위한 예시적인 단백질 결합 검정은 제제 후보의 존재에서 예를 들면, CD33의 공-면역침강 포함할 수 있다. 예를 들면, CD33는 완충액에서 제제 후보와 함께 인큐베이션될 수 있고, 그 뒤에 CD33, 예를 들면, 항-CD33 항체를 포착하는데 특이적인 고정된 분자는, 제제 후보의 존재에서 CD33을 포착하기 위해 사용될 수 있고 당해 분야에서 공지된 세정 절차 동안에 잠재적으로 상호작용제 후보와 함께 CD33에 결합한다. 그 뒤에, CD33은, 잠재적으로 상호작용제 후보와 함께, 방출될 수 있고 제제 후보의 존재는 기술, 예를 들면, 질량 분광분석법 및/또는 웨스턴 블에 의해 제제 후보 특징을 기반으로 검출될 수 있다.
특정 구현예에서, CD33과 상호작용하는 제제는 당해 분야에서 공지된 생화학적 및/또는 면역검정 검정 웰을 사용하여 확인될 수 있다. 예시적인 기술은 기술, 예를 들면, 웨스턴 블랏, 면역염색, 및 공-면역침강을 사용하여 예를 들면, CD33 농도 및/또는 단백질 반감기의 변화를 정량적으로 측정하기 위한 검정을 포함할 수 있다. 예를 들면, 제제 후보는 CD33, 예컨대 세포 CD33를 발현시키는 세포를 함유하는 샘플 과 함께 인큐베이션될 수 있고, 및 그 뒤에 CD33 단백질 양 및/또는 세포 수준은 시간 경과 연구 동안의 이점에서 측정될 수 있다. 대조군 치료와 비교한 단백질 양, 세포 수준, 및/또는 단백질 반감기의 변화는, CD33 제제 후보가 CD33 반감기 및/또는 활성을 변경시킬 수 있음을 나타낼 수 있다.
특정 구현예에서, 질량 이동 측정 검정은 CD33과 상호작용하는 제제를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 예시적인 질량 이동 측정 검정은, 예를 들면, 기기, 예컨대, 비제한적으로, 질량 분광분석기를 사용하여 제제 후보가 CD33과 상호작용할 때의 CD33 질량의 변화를 측정하여 강하고/거나 공유로 결합된 CD33 제제의 존재를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 질량 이동 검정은 제제 후보 상호작용의 본성에 따라 전체의 단백질 및/또는 펩타이드-기반 분석에서 수행될 수 있다. 상기 제제 후보의 CD33에의 첨가와 상관된 질량 이동의 검출은, 제제 후보가 CD33와 상호작용하거나 달리 그것을 억제할 수 있음을 나타낼 수 있다. 추가로, 예시적인 질량 이동 측정 검정은 예를 들면, 기술, 예를 들면, 표면 플라즈몬 공명을 사용하여 제제 후보가 CD33과 상호작용하고 있을 때의 각각의 제제 후보 질량과 상관된 질량의 CD33에의 첨가를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 광의 굴절률의 변화는 측정될 수 있고 센서 표면에 부착된 CD33의 질량의 변화와 상관된다.
특정 구현예에서, 화학 가교결합 검정은 CD33 CD33과 상호작용하는 제제를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, 제제 후보는 생체내 또는 시험관내 CD33 과 함께 인큐베이션될 수 있고, 분자 가교결합제는 CD33과 상호작용하는 제제 후보를 상기 CD33 분자에 공유결합시킬 수 있다. 그 뒤에, 기술, 예컨대, 비제한적으로, 질량 분광분석법 및/또는 웨스턴 블랏은, CD33와 상호작용하거나 달리 그것을 억제할 수 있는 제조 후보를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, 제제 후보와 공유 가교결합된 CD33의 검출은, 제제 후보가, CD33와 상호작용하거나 달리 그것을 억제할 수 있음을 나타낼 수 있다.
특정 구현예에서, CD33와 상호작용하는 제제는 형광 검정을 사용하여 확인될 수 있다. 예를 들면, 공지된 양의 형광 제제 후보는 공지된 양의 고정된 CD33 및 완충액 과 함께 인큐베이션될 수 있다. 그 뒤에, 고정된 CD33는 완충액으로 세정될 수 있고 고정된 CD33는 당해 분야에서 공지된 기술, 예컨대, 비제한적으로, 형광 검출을 사용하여 형광 CD33 제제 후보의 나머지 존재에 대해 측정될 수 있다. 형광 서브스턴스의 존재를 보여주는 측정은 형광 제제 후보가 CD33 와 상호작용하고/거나 그것에 결합할 수 있음을 나타낼 수 있다.
활성 검정
당해 분야에서 공지되고 본 명세서 (예를 들면, 실시예 1-10)에 기재된 검정은 본 개시내용의 CD33 제제의 생물학적 활성을 확인 및 시험하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 CD33 활성을 조절하기 위한 CD33 제제의 능력을 시험하는 검정이 제공된다.
항-CD33 항체
본 개시내용의 특정 측면은 항-CD33 항체에 관한 것이고, 이 항체는 CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제하지 않으면서 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준을 감소시키지 않으면서 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준을 감소시키고 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 상업적 항-CD33 항체 (예를 들면, 젬투주맙)보다 더 낮은 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 갖는다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 상업적 항-CD33 항체 (예를 들면, 젬투주맙 또는 린투주맙)보다 더 낮은 반-최대 효과적인 농도 (EC50) 로 인간 세포, 예컨대 수지상 세포 에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 상업적 항-CD33 항체 (예를 들면, 젬투주맙 또는 린투주맙)보다 더 낮은 반-최대 효과적인 농도 (EC50)로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는, 예를 들면 KD가 대략 25 ℃의 온도에서 결정될 때 300 pM 내지 10 pM 범위일 수 있는 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)을 갖는다. 일부 구현예에서 KD는 1가 항체, 또는 1가 형태의 전장 항체를 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)는, 예를 들면 KD가 대략 25 ℃의 온도에서 결정될 때 300 pM 미만이다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는, 예를 들면 EC50가 대략 4 ℃의 온도에서 결정될 때 200 pM 내지 10 pM 범위일 수 있는 반-최대 효과적인 농도 (EC50) 로 인간 세포, 예컨대 수지상 세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 65 pM 내지 20 pM 범위일 수 있는 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 8.0 mg/kg 내지 2.0 mg/kg 범위일 수 있는 EC50로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키는 EC50은 적합한 설치류, 예컨대 랫트 또는 마우스를 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키는 EC50은 마우스 모델, 예컨대 실시예 3에서 기재된 것을 사용하여 결정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 상업적 항-CD33 항체 (예를 들면, 젬투주맙)의 인간 CD33에 대한 KD보다 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 61%, 적어도 62%, 적어도 63%, 적어도 64%, 적어도 65%, 적어도 66%, 적어도 67%, 적어도 68%, 적어도 69%, 적어도 70%, 적어도 71%, 적어도 72%, 적어도 73%, 적어도 74%, 적어도 75%, 적어도 76%, 적어도 77%, 적어도 78%, 적어도 79%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 그 초과의 백분율 더 낮은 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)을 갖는다. 본 명세서에서 기재된 임의의 적합한 방법 (예를 들면, 참고 실시예 1)는 해리 상수 (KD)을 결정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, KD는 대략 25 ℃의 온도에서 결정된다. 일부 구현예에서, KD는 1가 항체 또는 1가 형태의 전장 항체를 사용하여 결정된다 (예를 들면, 실시예 1에서 기재된 BiaCore).
일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 상업적 항-CD33 항체 (예를 들면, 젬투주맙 또는 린투주맙)보다 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 71%, 적어도 72%, 적어도 73%, 적어도 74%, 적어도 75%, 적어도 76%, 적어도 77%, 적어도 78%, 적어도 79%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 그 초과의 백분율보다 더 낮은 반-최대 효과적인 농도 (EC50)로 인간 세포, 예컨대 1차 수지상 세포에 결합한다. 본 명세서에서 기재된 임의의 적합한 방법 (예를 들면, 참고 실시예 1)는 EC50을 계산하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, EC50는 대략 4 ℃의 온도에서 결정된다.
일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 상업적 항-CD33 항체 (예를 들면, 젬투주맙 또는 린투주맙)보다 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 61%, 적어도 62%, 적어도 63%, 적어도 64%, 적어도 65%, 적어도 66%, 적어도 67%, 적어도 68%, 적어도 69%, 적어도 70%, 적어도 71%, 적어도 72%, 적어도 73%, 적어도 74%, 적어도 75%, 적어도 76%, 적어도 77%, 적어도 78%, 적어도 79%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 그 초과의 백분율보다 더 낮은 반-최대 효과적인 농도 (EC50)로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 본 명세서에서 기재된 임의의 적합한 방법 (예를 들면, 참고 실시예 4 및 45)는 EC50을 계산하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 500 pM 미만, 400 pM, 300 pM 미만미만, 200 pM 미만, 175 pM 미만, 170 pM 미만, 169 pM 미만, 168 pM 미만, 167 pM 미만, 166 pM 미만, 166.2 pM 미만, 165 pM 미만, 164 pM 미만, 163 pM 미만, 162 pM 미만, 161 pM 미만, 160 pM 미만, 150 pM 미만, 145 pM 미만, 140 pM 미만, 139 pM 미만, 138 pM 미만, 138.2 pM 미만, 137 pM 미만, 136 pM 미만, 135 pM 미만, 134 pM 미만, 133 pM 미만, 132 pM 미만, 131 pM 미만, 130 pM 미만, 120 pM 미만, 110 pM, 100 pM 미만미만, 90 pM 미만, 80 pM 미만, 70 pM 미만, 60 pM 미만, 50 pM 미만, 40 pM 미만, 30 pM 미만, 20 pM 미만, 또는 10 pM 미만일 수 있는 반-최대 효과적인 농도 (EC50)로 인간 세포, 예컨대 1차 수지상 세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 약 300 pM 내지 약 10 pM, 또는 10 pM 미만 범위의 EC50로 인간 세포, 예컨대 1차 수지상 세포에 결합한다. 본 명세서에서 기재된 임의의 적합한 방법 (예를 들면, 참고 실시예 1)는 EC50을 계산하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, EC50는 대략 4 ℃의 온도에서 결정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 70 pM 미만, 69 pM 미만, 68 pM 미만, 67 pM 미만, 66 pM 미만, 65 pM 미만, 64 pM 미만, 63 pM 미만, 62 pM 미만, 61 pM 미만, 60 pM 미만, 55 pM 미만, 50 pM 미만, 45 pM 미만, 40 pM 미만, 39 pM 미만, 38 pM 미만, 37 pM 미만, 36 pM 미만, 35 pM 미만, 34.8 pM 미만, 34 pM 미만, 33 pM 미만, 32 pM 미만, 31 pM 미만, 30 pM 미만, 25 pM 미만, 24 pM 미만, 23 pM, 22 pM 미만미만, 21 pM 미만, 21.5 pM 미만, 20 pM 미만, 19 pM 미만, 18 pM 미만, 17 pM 미만, 16 pM 미만, 15 pM 미만, 14 pM 미만, 13 pM 미만, 12 pM 미만, 11 pM 미만, 또는 10 pM 미만일 수 있는 반-최대 효과적인 농도 (EC50)로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 약 65 pM 내지 약 20 pM, 또는 20 pM 미만 범위인 반-최대 효과적인 농도 (EC50)로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 임의의 적합한 방법 (예를 들면, 실시예 1 및 3에서 기재된 것들)는 CD33 항체를 투여하지 않는 대응 세포와 비교하여 세포에서 CD33의 세포 수준을 감소시키기 위해 반-최대 효과적인 농도 (EC50)를 측정하기 위해 사용될 수 있다.
CD33의 세포 수준은, 비제한적으로, CD33의 세포 표면 수준, CD33의 세포내 수준, 및 CD33의 전체 수준을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준의 증가는 CD33의 세포 표면 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항-CD33 항체는, CD33의 세포 표면 수준을 측정하기 위해 예를 들면, 유세포측정, 예컨대 형광-활성화된 세포 분류 (FACS)를 이용하여본 명세서에서 기재되거나 당해 분야에서 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 검정 또는 적합한 생체내 모델에 의해 측정된 CD33의 세포 표면 수준에서 21% 이상의 감소의 감소를 유도하면 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준의 증가는 CD33의 세포내 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항-CD33 항체는, 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야, 예를 들면 면역염색, 웨스턴 블랏 분석, 공-면역침강, 및 세포 세포측정에서 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 검정 또는 적합한 생체내 모델에 의해 측정된 바와 같이 CD33의 세포내 수준에서 21% 이상의 감소를 유도하면 CD33의 세포내 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준의 증가는 CD33의 전체 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항-CD33 항체는, 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야, 예를 들면 면역염색, 웨스턴 블랏 분석, 공-면역침강, 및 세포 세포측정에서 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 검정 또는 적합한 생체내 모델에 의해 측정된 바와 같이 CD33의 전체 수준에서 21% 이상의 감소를 유도하면 CD33의 총 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33 분해, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 흘리기, 및/또는 CD33 발현의 하향조절을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준은 시험관내 세포 검정을 이용하여 일차 세포 (예를 들면, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, 및 대식세포) 또는 세포주 상에서 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 항-CD33 항체의 부재에서의 CD33의 세포 수준과 비교하여 적어도 21%, 적어도 22%, 적어도 23%, 적어도 24%, 적어도 25%, 적어도 26%, 적어도 27%, 적어도 28%, 적어도 29%, 적어도 30%, 적어도 31%, 적어도 32%, 적어도 33%, 적어도 34%, 적어도 35%, 적어도 36%, 적어도 37%, 적어도 38%, 적어도 39%, 적어도 40%, 적어도 41%, 적어도 42%, 적어도 43%, 적어도 44%, 적어도 45%, 적어도 46%, 적어도 47%, 적어도 48%, 적어도 49%, 적어도 50%, 적어도 51%, 적어도 52%, 적어도 53%, 적어도 54%, 적어도 55%, 적어도 56%, 적어도 57%, 적어도 58%, 적어도 59%, 적어도 60%, 적어도 61%, 적어도 62%, 적어도 63%, 적어도 64%, 적어도 65%, 적어도 66%, 적어도 67%, 적어도 68%, 적어도 69%, 적어도 70%, 적어도 71%, 적어도 72%, 적어도 73%, 적어도 74%, 적어도 75%, 적어도 76%, 적어도 77%, 적어도 78%, 적어도 79%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 초과까지 CD33의 세포 수준을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 40 mg/kg 미만, 35 mg/kg 미만, 30 mg/kg 미만, 25 mg/kg 미만, 20 mg/kg 미만, 15 mg/kg 미만, 10 mg/kg 미만, 9.0 mg/kg 미만, 8.0 mg/kg 미만, 7.0 mg/kg 미만, 6.0 mg/kg 미만, 5.0 mg/kg 미만, 4.0 mg/kg 미만, 3.0 mg/kg, 2.0 mg/kg 미만미만, 1.9 mg/kg 미만, 1.8 mg/kg 미만, 1.6 mg/kg 미만, 1.5 mg/kg 미만, 1.4 mg/kg 미만, 1.3 mg/kg 미만, 1.2 mg/kg 미만, 1.1 mg/kg 미만, 또는 1.0 mg/kg 미만의 EC50로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 약 8.0 mg/kg 내지 약 2.0 mg/kg, 또는 2.0 mg/kg 미만 범위의 EC50로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. 임의의 적합한 방법 (예를 들면, 실시예 1 및 3에서 기재된 것)는 CD33 항체를 투여하지 않은 대응하는 대상체와 비교하여 대상체 (즉, 생체내)에서 CD33의 세포 수준을 감소시키기 위해 EC50을 측정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키는 EC50은 적합한 설치류, 예컨대 랫트 또는 마우스를 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키는 EC50은 마우스 모델, 예컨대 실시예 3에서 기재된 것을 사용하여 결정된다.
본 명세서에서 기재되거나 당해 분야에서 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 검정 또는 적합한 생체내 모델은 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)의 억제를 측정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야에서 공지된 임의의 시험관내 검정 또는 세포 기반 배양 검정을 이용하는 (예를 들면, 67 nM)에서 포화 항체 농도에서 적어도 21%, 적어도 22%, 적어도 23%, 적어도 24%, 적어도 25%, 적어도 26%, 적어도 27%, 적어도 28%, 적어도 29%, 적어도 30%, 적어도 31%, 적어도 32%, 적어도 33%, 적어도 34%, 적어도 35%, 적어도 36%, 적어도 37%, 적어도 38%, 적어도 39%, 적어도 40%, 적어도 41%, 적어도 42%, 적어도 43%, 적어도 44%, 적어도 45%, 적어도 46%, 적어도 47%, 적어도 48%, 적어도 49%, 적어도 50%, 적어도 51%, 적어도 52%, 적어도 53%, 적어도 54%, 적어도 55%, 적어도 56%, 적어도 57%, 적어도 58%, 적어도 59%, 적어도 60%, 적어도 61%, 적어도 62%, 적어도 63%, 적어도 64%, 적어도 65%, 적어도 66%, 적어도 67%, 적어도 68%, 적어도 69%, 적어도 70%, 적어도 71%, 적어도 72%, 적어도 73%, 적어도 74%, 적어도 75%, 적어도 76%, 적어도 77%, 적어도 78%, 적어도 79%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 초과까지 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33의 세포 표면 클러스터링을 억제한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 비제한적으로 하기를 포함하여 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 억제한다: Src 계열 티로신 키나제, 예컨대 LCK 및 FYN에 의한 Tyr-340 및 Tyr-358의 인산화 중 하나 이상의 역작용; 티로신-특이 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 동원 및 그것에의 결합; 다이나미니-1에 대한 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자로서 작용하는 PLC-감마1의 동원 및 그것에의 결합; SH2-도메인 함유 단백질 (예를 들면, Crkl)의 동원 및 그것에의 결합; 비장 티로신 키나제 Syk의 동원 및 그것에의 결합; SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합된 단백질 2 (Grb2)의 동원 및 그것에의 결합; 다중 SH2-함유 단백질의 동원 및 그것에의 결합; Ser-307 및 Ser-342 by 단백질 키나제 C의 인산화; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포 중성구, 및/또는 미세아교에서 1종 이상의 항-염증성 사이토카인, IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b, 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체의 조절된 발현; 세포내 칼슘 동원의 감소; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교에서 1종 이상의 전-염증 사이토카인, IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, 및 MIP-1-베타의 조절된 발현; C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, PYCARD, CD14, CD16, HLA-DR, 및 CCR2로부터 선택된 1종 이상의 단백질의 조절된 발현; 세포외 신호-조절된 키나제 (ERK) 인산화의 억제; 다중 세포 단백질 상의 티로신 인산화의 증가; C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)의 조절된 발현; CCL19 및 CCL21 발현 세포를 향한 미세신경교 세포 화학주성의 억제; 포스포이노시티드 3-키나제의 활성화; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포 및/또는 미세아교의 세포성장의 감소; 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, M2 미세아교, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및/또는 M2 대식세포에 의해 유도된 T 세포 증식의 감소; 파골세포 생산의 억제, 파골세포생성의 감소된 속도, 또는 둘 모두; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 생존의 감소; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 증식의 감소; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 이동의 억제; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교 중 1종 이상의 기능을 감소시키고; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 성숙을 억제하고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 세포사 및 세포자멸사를 증가시키고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 식세포 활성을 감소시키고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 증식을 감소시키고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 전체 기능성을 감소시키고, ITAM 함유 수용체의 인산화; ITAM 신호전달을 매개하는 신호전달 분자의 인산화; 패턴 인식 수용체의 활성화를 감소시키고; 톨(Toll)-유사 수용체의 활성화를 감소시키고; 세포 및 단백질 잔해의 청소능과 관련된 손상의 활성화를 감소시키고; CD33과 그것의 리간드 중 하나 이상 사이의 상호작용; CD33과 공-수용체 예컨대 CD64 사이의 상호작용; 세포자멸적 뉴런 청소능, 신경 조직 잔해 청소능, 기능이상 시냅스 청소능, 비-신경 조직 잔해 청소능, 박테리아 또는 다른 이물질 청소능, 질환 유발 단백질 청소능, 및 종양 세포 청소능으로부터 선택된 청소능 중 1종 이상의 유형을 감소시키고; 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 질환 유발 단백질, 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 핵산, 질환 유발 지질, 또는 종양 세포 중 하나 이상의 식균작용의 억제; 질환 유발 핵산의 청소능의 억제로서, 상기 질환 유발 핵산은 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA이고; 하기로부터 선택된 질환 유발 단백질의 청소능의 활성화: 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드; 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 급성 골수 백혈병, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 및 갑상선암으로부터 선택된 암의 상이한 융형에 대한 유익한 면역 반응의 억제; 하기로부터 선택된 신경적 장애의 상이한 유형에 대한 유익한 면역 반응의 억제: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 본태 떨림, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 및 다발성 경화증; 하기로부터 선택된 염증성 및 감염성 장애의 상이한 유형에 대한 유익한 면역 반응의 억제: 낭창, 급성 및 만성 결장염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 및 골의 파젯병; 종양 세포 상의 CD33 리간드에 결합하고; 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, T 세포, 중성구, 및/또는 대식세포상의 CD33 리간드에 결합함; 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 억제; 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항종양 세포 증식 활성의 억제; 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항- 종양 세포 전이 활성의 억제; 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 또는 조절 T 세포의 촉진; 1종 이상의 ITAM 모티프 함유 수용체, 예컨대 TREM1, TREM2, FcgR, DAP10, 및 DAP12의 억제; 모티프 D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I (서열식별번호:247)를 함유하는 1종 이상의 수용체의 억제; 1종 이상의 패턴 인식 수용체 (PRRs), 예컨대 병원체-관련된 분자 패턴 (PAMPs)를 확인하는 수용체, 및 손상-관련된 분자 패턴 (DAMPs)를 확인하는 수용체에 의한 신호전달의 억제; 1종 이상의 톨(Toll)-유사 수용체에 의한 신호전달의 억제; JAK-STAT 신호전달 경로의 억제; 활성화된 B 세포 (NFκB)의 핵 인자 카파-경쇄-인핸서의 억제; PLCγ/PKC/칼슘 동원의 억제; PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 억제; 1종 이상의 염증성 수용체, 예컨대 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상 상에서 발현된 CD86의 감소된 발현; 1종 이상의 CD33-의존적 유전자의 발현을 증가시키고; 파괴된 CD33-의존적 유전자 발현의 정규화; 및 1종 이상의 ITAM-의존적 유전자, 예컨대 NFAT 전사 인자의 발현의 감소.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 하기를 비제한적으로 포함하여 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 나타낸다: 종양 침윤 CD3+ T 세포의 수를 증가시키고; CD14+골수 세포, 예컨대 혈액 내에 존재하는 종양 침윤 CD14+ 골수 세포 및 CD14+ 골수 세포에서 CD33의 세포 수준을 감소시키고; CD14+ 골수 세포, 예컨대 혈액 내에 존재하는 종양 침윤 CD14+ 골수 세포 및 CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키고; 1종 이상의 세포, 예컨대 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)에서 PD-L1 수준을 감소시키고; 1종 이상의 세포, 예컨대 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)에서 PD-L2 수준을 감소시키고; 1종 이상의 세포, 예컨대 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)에서 B7-H2 수준을 감소시키고; 1종 이상의 세포, 예컨대 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)에서 B7-H3 수준을 감소시키고; 1종 이상의 세포, 예컨대 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)에서 CD200R 수준을 감소시키고; 1종 이상의 세포, 예컨대 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)에서 CD163 수준을 감소시키고; 1종 이상의 세포, 예컨대 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)에서 CD206 수준을 감소시키고; 고형 종양의 고형 성장률을 감소시키고; 종양 부피를 감소시키고; 1종 이상의 PD-1 억제제의 효능을 증가시키고; 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적으로 하는 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능을 증가시키고; 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 증가시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합임; 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 존재에서 T 세포의 증식을 증가시키고; 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 억제하고; 및 화학 또는 방사성 독소에 접합될 때, 고형 종양 및 관련된 혈관에서 CD33-발현 면역억제제 비-종양형성 골수 세포 및/또는 비-종양형성 CD14-발현 세포을 사멸시킨다.
일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 본 개시내용의 CD33 단백질 및 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제하되, 상기 리간드는 하기를 비제한적으로 포함한다: 적혈구 상에서 발현된 CD33 리간드, 박테리아 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 세포자멸적 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 종양 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 바이러스 상에서 발현된 CD33 리간드, 수지상 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 신경 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 신경교 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 미세아교 상에서 발현되는 CD33 리간드, 별아교세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 베타 아밀로이드 플라크 상의 CD33 리간드, 타우 엉킴 상의 CD33 리간드, 질환 유발 단백질 상의 CD33 리간드, 질환 유발 펩타이드 상의 CD33 리간드, 대식세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 천연 살해 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 도움 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 세포독성 T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, B 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양-매립된 면역억제제 대식세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 골수-유래된 억제 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 조절 T 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 분비된 뮤신, 시알산, 시알산-함유 당지질, 시알산-함유 당단백질, 알파-2,6-연결된 시알산-함유 당지질, 알파-2,6-연결된 시알산-함유 당단백질, 알파-2,3-연결된 시알산-함유 당지질, 알파-2,3-연결된 시알산-함유 당단백질, 알파-1-산 당단백질 (AGP), CD24 단백질, 및 강글리오사이드.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 세포의 표면 상에서 발현된 본 개시내용의 CD33 단백질에 결합하고 네이키드 항체는 CD33 단백질과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제한다. 일부 구현예에서, 본 CD33의 CD33 단백질에 결합하는 본 개시내용의 항-CD33 항체는 세포 표면 상의 또는 세포 내부의 이들 단백질과 상호작용하도록 이용가능한 CD33의 효과적인 수준을 감소시켜서 단백질과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 단백질에 결합하는 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33의 분해를 유도하여 CD33 단백질과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제한다.
본 개시내용의 다른 측면은 항-CD33 항체에 관한 것이고, 이 항체는 CD33의 세포 표면 수준을 상당히 감소시키지 않고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하지 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항-CD33 항체는, 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야에서 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 검정 또는 적합한 생체내 모델을 이용하여 항-CD33 항체의 부재에서의 CD33의 세포 수준과 비교하여 CD33에 대한 리간드 결합을 20% 미만까지 감소시킨다면 CD33의 세포 표면 수준을 상당히 감소시키지 않는다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 항-CD33 항체의 부재에서의 CD33의 세포 수준과 비교하여 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만까지 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킨다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항-CD33 항체는, 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야에서 공지된 임의의 시험관내 검정 또는 세포 기반 배양 검정을 이용하여 포화 항체 농도 (예를 들면, 67 nM)에서 CD33에 대한 리간드 결합을 20% 미만까지 감소시킨다면 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야에서 공지된 임의의 시험관내 검정 또는 세포 기반 배양 검정을 이용하여 포화 항체 농도 (예를 들면, 67 nM)에서 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만까지 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, CD33의 수준은 CD33을 인코딩하는 유전자의 발현 수준; CD33을 인코딩하는 1종 이상의 전사체의 발현 수준; CD33 단백질의 발현 수준; 및/또는 세포 내에 및/또는 세포 표면 상에 존재하는 CD33 단백질의 양을 지칭할 수 있다. 유전자 발현, 전사, 번역, 및/또는 단백질 존재도 또는 국재화의 수준을 측정하기 위한 임의의 당해 분야에서 공지된 방법은 CD33의 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
추가로, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 하기를 예방하고, 그 위험을 감소시키거나 그것을 치료하기 위해 사용될 수 있다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및/또는 헤모필루스 인플루엔자. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 그것이 필요한 개체에서 1종 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 기능성, 이동, 또는 증식을 유도 또는 촉진하기 위해; 또는 그것이 필요한 개체에서 조절 T 세포, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포, 종양-매립된 면역억제제 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 급성 골수 백혈병 (AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 세포, 및/또는 만성 골수 백혈병 (CML) 세포의 활성, 기능성, 또는 생존을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 단클론성 항체이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준 (예를 들면, 세포 표면 수준, 세포내 수준, 및/또는 총 수준)을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 하향조절을 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 절단를 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 내재화를 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 흘리기를 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 분해를 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 탈민감화를 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33을 일시적으로 활성화하기 위해 리간드 모방체로서 작용한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고 CD33을 일시적으로 활성화한 후, CD33의 세포 수준의 감소 및/또는 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)의 억제를 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고 CD33을 일시적으로 활성화한 후, CD33의 분해를 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고 CD33을 일시적으로 활성화한 후, CD33의 절단을 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고 CD33을 일시적으로 활성화한 후, CD33의 내재화를 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고 CD33을 일시적으로 활성화한 후, CD33의 흘리기를 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고 CD33을 일시적으로 활성화한 후, CD33 발현의 하향조절을 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고 CD33을 일시적으로 활성화한 후, CD33의 탈민감화를 유도한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 쥣과 항체이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 인간 항체, 인간화된 항체, 이중특이적 항체, 단클론성 항체, 다가 항체, 또는 키메라성 항체이다. 그와 같은 항체의 예시적인 설명은 본 개시내용 전체에서 발견된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33, 또는 그것의 동족체에 결합하고, 이것은 비제한적으로, 하기를 포함한다: 포유동물 CD33 단백질, 마우스 CD33 단백질 (NCBI 수탁 번호 NP_001104528.1), 랫트 CD33 단백질 (NCBI 수탁 번호 XP_008757645.1), 침팬지 CD33 단백질 (NCBI 수탁 번호 XP_512850.3), 히말라야 원숭이 CD33 단백질 (NCBI 수탁 번호 XP_001114616.2), 개 CD33 단백질 (NCBI 수탁 번호 XP_005616306.1), 또는 소 CD33 단백질 (NCBI 수탁 번호 XP_005219197.1). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 마우스 CD33 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33 및 마우스 CD33 둘 모두 에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 세포의 표면 상에서 발현된 본 개시내용의 CD33 단백질에 결합하고 본 개시내용의 1종 이상의 CD33 활성을 조절하고 (예를 들면, 유도하거나 억제한) 후, 표면-발현된 CD33 단백질에 결합하는 효능제 항체 또는 길항제 항체이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 불활성 항체.
항-CD33 항체-결합 영역
본 개시내용의 특정 측면은 항-CD33 항체를 제공하되, 이 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 19-259, 19-135, 145-228, 또는 229-259 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-259, 19-135, 145-228, 또는 229-259에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 48-54 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 88-98 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 110-120 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 112-122 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 137-147 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 137-147에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 1종 이상의 아미노산 잔기에 결합한다 from 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53로부터 선택된, 또는 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로부터 선택된 아미노산 잔기에 상응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 1종 이상의 아미노산 잔기.
본 개시내용의 다른 측면은 항-CD33 항체를 제공하되, 이 항체는 CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제하고, 1종 이상의 CD33 리간드하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 19-228 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-228에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 48-54 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 88-98 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 110-120 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 112-122 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 137-147 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 137-147에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53로부터 선택된 1종 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로부터 선택된 아미노산 잔기에 상응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 1종 이상의 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 1의 Y49, Y50, 및 K52로부터 선택된 1종 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열식별번호: 1의 Y49, Y50, 및 K52로부터 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 1종 이상의 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49 및 K52, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49 및 K52에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49, Y50, 및 K52, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 Y49, Y50, 및 K52에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다.
본 개시내용의 다른 측면은 항-CD33 항체를 제공하되, 이 항체는 CD33의 세포 표면 수준을 상당히 감소시키지 않고/거나 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제하지 않고, 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 19-259 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-259에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 48-54 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 88-98 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 110-120 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 112-122 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 하기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합한다: 인간 CD33의 아미노산 잔기 137-147 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 137-147에 상응하는 CD33 동족체 또는 오쏘로그 상의 아미노산 잔기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53로부터 선택된 1종 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로부터 선택된 아미노산 잔기에 상응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 1종 이상의 아미노산 잔기에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 형태적 에피토프 에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 불연속 CD33 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 불연속 CD33 에피토프는 2종 이상의 펩타이드, 3종 이상의 펩타이드, 4종 이상의 펩타이드, 5종 이상의 펩타이드, 6종 이상의 펩타이드, 7종 이상의 펩타이드, 8종 이상의 펩타이드, 9종 이상의 펩타이드, 또는 10종 이상의 펩타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 1종 이상의 펩타이드를 포함하는 CD33 에피토프 에 결합할 수 있다. 본 명세서에서 개시된 바와 같이, CD33 에피토프는 서열식별번호:1의 아미노산 서열에 상응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 11 이상, 12 이상, 13 이상, 14 이상, 15 이상, 16 이상, 17 이상, 18 이상, 19 이상, 또는 20 또는 그 초과 개의 아미노산 잔기 of 아미노산 서열 of 서열식별번호:1의 , 또는 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 11 이상, 12 이상, 13 이상, 14 이상, 15 이상, 16 이상, 17 이상, 18 이상, 19 이상, 또는 20 또는 그 초과 개의 아미노산 잔기을 포함하는 1종 이상의 펩타이드를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거된 항체 중 임의의 것으로부터 선택된 적어도 1종의 항체의 결합을 경쟁적으로 억제한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 적어도 1종의 항체의 결합을 경쟁적으로 억제한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 항-CD33 항체가 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체의 CD33에의 결합을, 항-CD33 항체의 부재에서 CD33에의 결합과 비교하여 약 50% 내지 100% 범위의 양으로 감소시킬 때 CD33에 결합하기 위해 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체 와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 항-CD33 항체가 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체의 CD33에의 결합을, 항-CD33 항체의 부재에서 CD33에의 결합과 비교하여 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100%까지 감소시킬 때 CD33 에 결합하기 위해, 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체 와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체의 CD33에의 결합을 100%까지 감소시키는 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 항-CD33 항체가 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체의 CD33에의 결합을 반드시 완전히 차단한다는 것을 나타낸다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체 및 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체는 항-CD33 항체 대 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체의 10:1 비, 9:1 비, 8:1 비, 7:1 비, 6:1 비, 5:1 비, 4:1 비, 3:1 비, 2:1 비, 1:1 비, 0.75:1 비, 0.5:1 비, 0.25:1 비, 0.1:1 비, 0.075:1 비, 0.050:1 비, 0.025:1 비, 0.01:1 비, 0.0075: 비, 0.0050:1 비, 0.0025:1 비, 0.001: 비, 0.00075:1 비, 0.00050:1 비, 0.00025:1 비, 0.0001: 비, 1:10 비, 1:9 비, 1:8 비, 1:7 비, 1:6 비, 1:5 비, 1:4 비, 1:3 비, 1:2 비, 1:0.75 비, 1:0.5 비, 1:0.25 비, 1:0.1 비, 1:0.075 비, 1:0.050 비, 1:0.025 비, 1:0.01 비, 1:0.0075 비, 1:0.0050 비, 1:0.0025 비, 1:0.001 비, 1:0.00075 비, 1:0.00050 비, 1:0.00025 비, 또는 1:0.0001 비에 상응하는 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체의 양과 비교하여 약 1.5-배 내지 100-배, 또는 100-배 초과 범위의 과잉량으로 존재한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체의 양과 비교하여 약 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배, 15-배, 20-배, 25-배, 30-배, 35-배, 40-배, 45-배, 50-배, 55-배, 60-배, 65-배, 70-배, 75-배, 80-배, 85-배, 90-배, 95-배, 또는 100-배 과잉의 양으로 존재한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거된 항체 중 임의의 것으로부터 선택된 적어도 1종의 항체에 의해 결합된 CD33 에피토프 와 동일하거나 그것과 중합된 인간 CD33의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 적어도 1종의 항체에 의해 결합된 CD33 에피토프 와 동일하거나 그것과 중합된 인간 CD33의 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거된 항체 중 임의의 것으로부터 선택된 적어도 1종의 항체에 의해 결합된 동일한 CD33 에피토프 에 본질적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 적어도 1종의 항체에 의해 결합된 동일한 CD33 에피토프 에 본질적으로 결합한다. which 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하는 상세한 예시적인 방법은 하기에서 제공된다: Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33에 결합하기 위해 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으 로부터 1종 이상의 항체와 경쟁한다.
당해 분야, 예컨대 BIAcore 분석, ELISA 검정, 또는 유세포측정에서 공지된 임의의 적합한 경쟁 검정 또는 CD33 결합 검정은, 항-CD33 항체가 CD33에 결합하기 위해 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 1종 이상의 항체와 경쟁하는 지를 결정하기 위해 이용될 수 있다. 예시적인 경쟁 검정에서, 고정된 CD33 또는 세포 표면 상의 CD33를 발현시키는 세포 CD33 (예를 들면, 인간 또는 비-인간 영장류)에 결합하는 제1 표지된 항체 및 CD33에 결합하기 위해 제1 항체와 결합하는 그것의 능력에 대해 시험된 제2 비표지된 항체를 포함하는 용액에서 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액에서 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 CD33 또는 세포 CD33를 발현시키는 세포는 제1 표지된 항체를 포함하지만 제2 비표지된 항체를 포함하지 않는 용액에서 인큐베이션된다. 제1 항체의 CD33에의 결합이 허용된 조건 하에서 인큐베이션된 후, 과잉의 미결합된 항체는 제거되고, 고정된 CD33 또는 세포 CD33를 발현시키는 세포와 관련된 표지의 양이 측정된다. 고정된 CD33 또는 세포 CD33를 발현시키는 세포와 관련된 표지의 양이 대조군 샘플에 대해 시험 샘플에서 실질적으로 감소되면, 이때, 제2 항체는 CD33에 결합하기 위해 제1 항체와 경쟁한다는 것을 나타낸다. 참고, Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY). 일부 구현예에서, 이용된 경쟁 검정은 실시예 2 및 4에서 기재된 경쟁 검정 중의 하나이다.
항-CD33 항체 경쇄 및 중쇄 가변 영역
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 하기를 포함한다: (a) 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 또는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합 로부터 선택된 항체 중 임의의 하나의 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3로부터 선택된 적어도 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및/또는 (b) 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거되거나 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 항체 중 임의의 것의 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함하는 중쇄 가변 영역. 일부 구현예에서, HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3은 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 나타내거나 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 항체 로 부터의 EU 또는 카밧 CDR, 초티아 CDR, 또는 컨택트 CDR 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다: (i) 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거되거나 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 항체 로부터의 HVR-L1 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (ii) 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거되거나 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 항체 로부터의 HVR-L2 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; (iii) 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거되거나 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 항체 로부터의 HVR-L3 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; (iv) 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거되거나 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 항체 로부터의 HVR-H1 서열 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (v) 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거되거나 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 항체 로부터의 HVR-H2 서열 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (vi) 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거되거나 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 항체 로부터의 HVR-H3 서열 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인, 상기 경쇄 가변 도메인은 하기 중 하나 이상을 포함한다: (a) 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 2-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 2-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및/또는 상기 중쇄 가변 도메인은 하기 중 하나 이상을 포함한다: (a) 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체 본 개시내용의 항체 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인, 식 중: (a) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:22의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:26의 아미노산 서열을 포함하고; (b) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하고; (c) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:69의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하고; (d) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:24의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하고; (e) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:68의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:74의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:77의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하고; (f) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (g) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (h) 상기 HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (i) 상기 HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고; (j) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:184의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:185의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:186의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:187의 아미노산 서열을 포함하고; (k) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:231의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (l) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:228의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:229의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:230의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:232의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:233의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 하기를 포함한다: 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거되거나 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 항체 중 임의의 것의 경쇄 가변 영역; 및/또는 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거되거나 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 항체 중 임의의 중쇄 가변 영역. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열식별번호: 30-48, 112-153, 192-202, 및 241-243 중 임의의 것으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및/또는 서열식별번호: 49-66, 154-183, 203-213, 및 244-246으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
본 개시내용의 항체 중 임의의 것은 세포주에 의해 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포주는 포유동물 세포주일 수 있다. 특정 구현예에서, 세포주는 하이브리도마 세포주일 수 있다. 다른 구현예에서, 세포주는 효모 세포주일 수 있다. 항체 생산에 적합한 당해 분야에서 공지된 임의의 세포주는 본 개시내용의 항체를 생산하기 위해 사용될 수 있다. 항체 생산의 예시적인 세포주는 본 개시내용 전체에 기재된다.
일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 항-CD33 단클론성 항체이다. 특정 구현예에서, 항-CD33 항체는 길항제 항체이다. 특정 구현예에서, 항-CD33 항체는 효능제 항체 또는 불활성 항체이다.
항-CD33 항체 결합 친화도
인간 CD33, 마우스 CD33, 또는 둘 모두에 대한 항-CD33 항체의 해리 상수 (KD)는, 100nM 미만, 90 nM 미만, 80 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만, 30 nM 미만, 20 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만, 6 nM 미만, 5 nM 미만, 4 nM 미만, 3 nM 미만, 2 nM 미만, 1 nM 미만, 0.9 nM 미만, 0.8 nM 미만, 0.7 nM 미만, 0.6 nM 미만, 0.5 nM, l 미만 0.4 nM 미만, 0.3 nM 미만, 0.2 nM 미만, 0.19 nM 미만, 0.18 nM 미만, 0.17 nM 미만, 0.16 nM 미만, 0.15 nM 미만, 0.14 nM 미만, 0.13 nM 미만, 0.12 nM 미만, 0.11 nM 미만, 0.1 nM 미만, 0.05 nM 미만, 0.01 nM 미만, 또는 0.005 nM 미만일 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 CD33, 마우스 CD33, 또는 둘 모두에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 그 범위는 약 100 nM 내지 약 100 pM, 또는 100 pM (즉, 0.1 nM) 미만이다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 CD33, 마우스 CD33, 또는 둘 모두에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 그 범위는 약 10 nM 내지 약 500 pM, 또는 500 pM (즉, 0.5 nM) 미만이다.
인간 CD33 및 마우스 CD33에 대한 항-CD33 항체의 해리 상수 (KD)는 100 nM 미만, 90 nM 미만, 80 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만, 30 nM 미만, 20 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만, 6 nM 미만, 5 nM 미만, 4 nM 미만, 3 nM 미만, 2 nM 미만, 1 nM 미만, 0.9 nM 미만, 0.8 nM 미만, 0.7 nM 미만, 0.6 nM 미만, 0.5 nM, l 미만 0.4 nM 미만, 0.3 nM 미만, 0.2 nM 미만, 0.1 nM 미만, 0.05 nM 미만, 0.01 nM 미만, 또는 0.005 nM 미만일 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 CD33 단백질에 대한 항-CD33 항체의 해리 상수는 약 100 nM 내지 약 100 pM, 또는 100 pM (즉, 0.1 nM) 미만의 범위이다. 일부 구현예에서, 인간 CD33 단백질에 대한 항-CD33 항체의 해리 상수는 약 10 nM 내지 약 500 pM, 또는 500 pM (즉, 0.5 nM) 미만의 범위이다. 일부 구현예에서, 마우스 CD33 단백질에 대한 항-CD33 항체의 해리 상수는 약 100 nM 내지 약 100 pM, 또는 100 pM (즉, 0.1 nM) 미만의 범위이다. 일부 구현예에서, CD33에 대한 해리 상수 (KD)는 대략 25 ℃의 온도에서 결정된다. 일부 구현예에서, KD는 1가 형태의 1가 항체 (예를 들면, Fab) 또는 전장 항체를 사용하여 결정된다.
인간 CD33 및/또는 마우스 CD33에 대한 항-CD33 항체의 해리 상수 (KD)는 500 pM 미만, 450 pM 미만, 400 pM 미만, 350 pM, 300 pM 미만미만, 250 pM 미만, 200 pM 미만, 175 pM 미만, 150 pM 미만, 145 pM 미만, 140 pM 미만, 135 pM 미만, 130 pM 미만, 125 pM 미만, 120 pM 미만, 115 pM 미만, 110 pM, 100 pM 미만미만, 90 pM 미만, 80 pM 미만, 70 pM 미만, 60 pM 미만, 50 pM 미만, 40 pM 미만, 30 pM 미만, 20 pM 미만, 또는 미만 10 pM 미만일 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 CD33 단백질에 대한 항-CD33 항체의 해리 상수는 약 300 pM 내지 약 10 pM, 또는 10 pM 미만의 범위이다. 일부 구현예에서, 인간 CD33 단백질에 대한 항-CD33 항체의 해리 상수는 약 300 pM 이하이다. 해리 상수는 하기를 포함하는 임의의 분석 기술을 통해 결정될 수 있다: 임의의 생화학적 또는 생체물리학적 기술 예컨대 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 바이오-층 간섭법 (참조, 예를 들면, ForteBio에 의한 옥테트 시스템), 등온 적정 열량측정 (ITC), 시차 주사 열량측정 (DSC), 원형 2색성 (CD), 중단된-f낮은 분석, 및 비색 또는 형광 단백질 용융 분석. 일부 구현예에서, CD33에 대한 해리 상수 (KD)는 대략 25 ℃의 온도에서 결정된다. 일부 구현예에서, KD는 1가 항체 (예를 들면, Fab) 또는 전장 항체를 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, KD는 예를 들면, 본 명세서에서 기재된 표면 플라즈몬 공명 검정을 이용하여 1가 형태로 전장 항체를 사용하여 결정된다. (참조, 예를 들면, 실시예 1).
추가 항-CD33 항체, 예를 들면, 본 개시내용의 CD33 단백질에 특이적으로 결합하는 항체는, 당해 분야에서 공지된 다양한 검정에 의해 그것의 물리적/화학 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 확인, 선별, 및/또는 특성규명될 수 있다.
Fc 감마 수용체에 결합할 수 있는 항-CD33 항체
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 Fc 감마 수용체에 결합하는 능력을 보유한다. 일부 구현예에서, 수용체 활성화와 양립할 수 있는 정확한 에피토프 특이성을 가질 때의 항체는 상기 항체를 클러스링하고 예를 들면, CD33 수용체를 일시적으로 자극할 수 있는 특징을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 그와 같은 항체는 그 뒤에 CD33 분해, CD33 탈민감화, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 흘리기, CD33 발현의 하향조절, 및/또는 리소좀 CD33의 분해를 유도하여 CD33 발현 및/또는 CD33 단백질의 1종 이상의 활성의 장기적 억제제로서 작용할 수 있다.
생체내에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 수용체를 클러스터링하고 다중 잠재적인 기전 중 임의의 1종 이상에 의해 CD33을 일시적으로 활성화할 수 있다. 인간 항체의 일부 아이소타입 예컨대 IgG2은그것의 특유의 구조로 인해, 클러스터 수용체를 클러스터링하는 고유 능력을 가지거나 군집형태의 배치구성에서 수용체를 보유하고, 이로써 Fc 수용체에 결합하지 않고 수용체 예컨대 CD33를 일시적으로 활성화한다 (예를 들면, White 등, (2015) Cancer Cell 27, 138-148).
일부 구현예에서, 다른 항체는 인접한 세포 상의 Fcg 수용체 에 결합하여 수용체 (예를 들면, CD33)를 클러스터링한다. 일부 구현예에서, 항체의 불변 IgG Fc 영역의 Fcg 수용체에의 결합은 항체의 응집으로 이어질 수 있고, 및 항체는 이어서 그것의 가변 영역을 통해 결합하는 수용체를 응집시킬 수 있다 (Chu 등 (2008) Mol Immunol, 45:3926-3933; 및 Wilson 등, (2011) Cancer Cell 19, 101-113). 일부 구현예에서, 사이토카인 분비, 산화적 폭발, 증가된 식균작용, 및 향상된 항체-의존적, 세포-매개된 세포독성 (ADCC)를 유도하지 않는 억제성 Fcg 수용체 FcgR (FcgRIIB)에 대한 결합이 생체내에서 항체를 클러스터링하는 바람직한 방식인 것은, FcgRIIB에 대한 결합이 부정적인 면역 반응 효과와 관련없기 때문이다.
본 개시내용의 항-CD33 항체가 수용체를 클러스터링하는 다른 기전이 있다. 예를 들면, 함께 가교결합된 항체 단편 (예를 들면, Fab 단편)은 상기에 기재된 바와 같이 Fcg 수용체에 결합하는 Fc 영역을 갖는 항체와 유사한 방식으로 수용체 (예를 들면, CD33)를 클러스터링하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 가교결합된 항체 단편 (예를 들면, Fab 단편)은, 세포 표면 상의 수용체 클러스터링을 유도하고 표적 상의 적절한 에피토프 (예를 들면, CD33)에 결합하면, 효능제 항체로서 일시적으로 기능할 수 있다.
따라서, 일부 구현예에서, CD33 단백질에 결합하는 본 개시내용의 항체는, 그것의 에피토프 특이성으로 인해, CD33에 결합하고 1종 이상의 CD33 활성을 일시적으로 활성화한 후에, 예를 들면, CD33의 세포 수준를 감소시키고, 1종 이상의 CD33 활성을 억제한다, 및/또는 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제하는 효능제 항체를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 그와 같은 항체는 CD33 상의 리간드-결합 부위에 결합하고 천연 리간드의 작용을 일시적으로 모방하거나, 리간드-결합 부위가 아닌 1종 이상의 도메인에 결합하여 신호를 전달하기 위해 표적 항원을 자극할 수 있다. 일부 구현예에서, 그와 같은 항체는 리간드 결합을 방해하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 CD33 상의 리간드-결합 부위에의 결합 여부와는 무관하게, 항체는 그 뒤에 CD33 분해, CD33 탈민감화, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 흘리기, CD33 발현의 하향조절, 및/또는 리소좀 CD33의 분해를 유도하여 CD33 발현 및/또는 CD33 단백질의 1종 이상의 활성의 억제제로서 장기간 작용할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 일시적으로 유도하는 일시적 효능제 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후에 1종 이상의 활성을 일시적으로 유도한다. 일부 구현예에서, CD33 단백질은 세포 표면 상에서 발현된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 일시적 효능제 항-CD33 항체에 의해 일시적으로 유도된 CD33 단백질의 1종 이상의 활성은 하기를 비제한적으로 포함할 수 있다: Src 계열 티로신 키나제, 예컨대 LCK 및 FYN에 의한 Tyr-340 및 Tyr-358의 인산화; 티로신-특이 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 동원 및 그것에의 결합; 다이나미니-1에 대한 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자로서 작용하는 PLC-감마1의 동원 및 그것에의 결합; SH2-도메인 함유 단백질 (예를 들면, Crkl)의 동원 및 그것에의 결합; 비장 티로신 키나제 Syk의 동원 및 그것에의 결합; SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합된 단백질 2 (Grb2)의 동원 및 그것에의 결합; 다중 SH2-함유 단백질의 동원 및 그것에의 결합; Ser-307 및 Ser-342 by 단백질 키나제 C의 인산화; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포 중성구, 및/또는 미세아교에서 1종 이상의 항-염증성 사이토카인, IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b, 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체의 조절된 발현; 세포내 칼슘 동원의 감소; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교에서 1종 이상의 전-염증 사이토카인, IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, 및 MIP-1-베타의 조절된 발현; C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, PYCARD, CD14, CD16, HLA-DR, 및 CCR2로부터 선택된 1종 이상의 단백질의 조절된 발현; 세포외 신호-조절된 키나제 (ERK) 인산화의 억제; 다중 세포 단백질 상의 티로신 인산화의 증가; C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)의 조절된 발현; CCL19 및 CCL21 발현 세포를 향한 미세신경교 세포 화학주성의 억제; 포스포이노시티드 3-키나제의 활성화; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포 및/또는 미세아교의 세포성장의 감소; 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, M2 미세아교, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및/또는 M2 대식세포에 의해 유도된 T 세포 증식의 감소; 파골세포 생산의 억제, 파골세포생성의 감소된 속도, 또는 둘 모두; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 생존의 감소; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 증식의 감소; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 이동의 억제; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교 중 1종 이상의 기능을 감소시키고; 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및/또는 M2 미세아교의 성숙을 억제하고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 세포사 및 세포자멸사를 증가시키고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 식세포 활성을 감소시키고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 증식을 감소시키고; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 전체 기능성을 감소시키고, ITAM 함유 수용체의 인산화; ITAM 신호전달을 매개하는 신호전달 분자의 인산화; 패턴 인식 수용체의 활성화를 감소시키고; 톨(Toll)-유사 수용체의 활성화를 감소시키고; 세포 및 단백질 잔해의 청소능과 관련된 손상의 활성화를 감소시키고; CD33과 그것의 리간드 중 하나 이상 사이의 상호작용; CD33과 공-수용체 예컨대 CD64 사이의 상호작용; 세포자멸적 뉴런 청소능, 기능이상 시냅스 청소능, 신경 조직 잔해 청소능, 비-신경 조직 잔해 청소능, 박테리아 또는 다른 이물질 청소능, 질환 유발 단백질 청소능, 및 종양 세포 청소능으로부터 선택된 청소능의 1종 이상의 유형의 감소; 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 질환 유발 단백질, 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 핵산, 질환 유발 지질, 또는 종양 세포 중 하나 이상의 식균작용의 억제; 질환 유발 핵산의 청소능의 억제로서, 상기 질환 유발 핵산은 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA이고; 하기로부터 선택된 질환 유발 단백질의 청소능의 활성화: 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드; 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 급성 골수 백혈병, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 및 갑상선암으로부터 선택된 암의 상이한 융형에 대한 유익한 면역 반응의 억제; 하기로부터 선택된 신경적 장애의 상이한 유형에 대한 유익한 면역 반응의 억제: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 본태 떨림, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 및 다발성 경화증; 하기로부터 선택된 염증성 및 감염성 장애의 상이한 유형에 대한 유익한 면역 반응의 억제: 낭창, 급성 및 만성 결장염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 및 골의 파젯병; 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 기능이상 시냅스, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 질환 유발 단백질, 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 핵산, 또는 종양 세포 중 하나 이상의 식균작용의 억제로서, 상기 질환 유발 핵산은 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA일 수 있고, 질환 유발 단백질은 하기를 포함할 수 있음: 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드, 및 종양 세포는 하기로부터 선택된 암일 수 있음: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 또는 갑상선암; 종양 세포 상의 CD33 리간드에 결합하고; 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, T 세포, 중성구, 및/또는 대식세포상의 CD33 리간드에 결합함; 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 억제; 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항종양 세포 증식 활성의 억제; 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항- 종양 세포 전이 활성의 억제; 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 또는 조절 T 세포의 촉진; 1종 이상의 ITAM 모티프 함유 수용체, 예컨대 TREM1, TREM2, FcgR, DAP10, 및 DAP12의 억제; 모티프 D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I (서열식별번호:247)를 함유하는 1종 이상의 수용체의 억제; 1종 이상의 패턴 인식 수용체 (PRRs), 예컨대 병원체-관련된 분자 패턴 (PAMPs)를 확인하는 수용체, 및 손상-관련된 분자 패턴 (DAMPs)를 확인하는 수용체에 의한 신호전달의 억제; 1종 이상의 톨(Toll)-유사 수용체에 의한 신호전달의 억제; JAK-STAT 신호전달 경로의 억제; 활성화된 B 세포 (NFκB)의 핵 인자 카파-경쇄-인핸서의 억제; PLCγ/PKC/칼슘 동원의 억제; PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 억제; 1종 이상의 염증성 수용체, 예컨대 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상 상에서 발현된 CD86의 조절된 발현; 1종 이상의 CD33-의존적 유전자의 발현을 증가시킴; 파괴된 CD33-의존적 유전자 발현의 정규화; 및 1종 이상의 ITAM-의존적 유전자, 예컨대 NFAT 전사 인자의 발현의 감소. 본 개시내용의 항-CD33 항체는 당해 분야에서 공지되고 본 명세서에서 개시된 임의의 적합한 기술 또는 검정을 이용하여 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 일시적으로 유도하는 그것의 능력에 대해 시험될 수 있다. 그와 같은 항체가 일시적으로 유도하는 활성과는 무관하게, 그와 같은 항체는 그 뒤에 CD33 분해, CD33 탈민감화, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 흘리기, CD33 발현의 하향조절, 및/또는 리소좀 CD33의 분해를 유도하여 CD33 발현 및/또는 CD33 단백질의 1종 이상의 활성의 장기적 억제제로서 작용할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 항체는 Fc 수용체에의 결합과는 독립적으로 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 일시적으로 유도한다.
예시적인 항체 Fc 아이소타입 및 변형은 아래의 표 C에서 제공된다. 일부 구현예에서, Fc 감마 수용체에 결합할 수 있는 본 개시내용의 항-CD33 항체는 아래의 표 C에서 열거된 Fc 아이소타입을 갖는다.
Figure pct00005
표 C에 기재된 아이소타입 외에, 그리고 이론에 의한 구속됨 없이, 인간에서 Fcg 수용체 I, IIA, IIC, IIIA, IIIB 및/또는 마우스에서 Fcg 수용체 I, III 및 IV에 결합하는 인간 IgG1 또는 IgG3 아이소타입 및 그것의 돌연변이체 (예를 들면 Strohl (2009) Current Opinion in Biotechnology 2009, 20:685-691)를 갖는 항체는, 또한, 일시적 효능제 항체로서 작용할 수 있는 것으로 생각된다.
일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG 부류, IgM 부류, 또는 IgA 부류의 것이다. 일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소타입을 갖는다.
특정 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG2 아이소타입을 갖는다. 일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 인간 IgG2 불변 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 인간 IgG2 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합한다. 특정 구현예에서, 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)이다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 1종 이상의 변형을 함유한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, Fc 영역은 (예를 들면, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 대한) 1종 이상의 아미노산 치환을 함유한다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 아미노산 치환은 V234A (Alegre 등, (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu 등, (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A (Cole 등 (1999) Transplantation, 68:563-571), H268Q, V309L, A330S, P331S (US 2007/0148167; Armour 등 (1999) Eur J Immunol 29: 2613-2624; Armour 등 (2000) The Haematology Journal 1(Suppl.1):27; Armour 등 (2000) The Haematology Journal 1(Suppl.1):27), C232S, 및/또는 C233S (White 등(2015) Cancer Cell 27, 138-148), S267E, L328F (Chu 등, (2008) Mol Immunol, 45:3926-3933), M252Y, S254T, 및/또는 T256E 로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다.
일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 C127S 아미노산 치환을 함유하는 중쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 아이소타입을 가지며, 상기 아미노산 위치는 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다 (White 등,(2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle 등, (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762; 및 WO2008079246).
일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 C214S 아미노산 치환을 함유하는 카파 경쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 아이소타입을 가지며, 상기 아미노산 위치는 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다 (White 등,(2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle 등, (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762; 및 WO2008079246).
특정 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG1 아이소타입을 갖는다. 일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 마우스 IgG1 불변 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 인간 IgG1 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합한다. 특정 구현예에서, 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)이다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 1종 이상의 변형을 함유한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, Fc 영역은 (예를 들면, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 대한) 1종 이상의 아미노산 치환을 함유한다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 아미노산 치환은 N297A (Bolt S 등 (1993) Eur J Immunol 23:403-411), D265A (Shields 등 (2001) R. J. Biol. Chem. 276, 6591-6604), D270A, L234A, L235A (Hutchins 등 (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984; Alegre 등, (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu 등, (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A (Alegre 등 (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu 등 (2000) Cell Immunol, 200:16-26), P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G, A330R, C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E (McEarchern 등, (2007) Blood, 109:1185-1192), P331S (Sazinsky 등, (2008) Proc Natl Acad Sci USA 2008, 105:20167-20172), S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, T256E, N297Q, P238S, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, 및/또는 T394D 로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다.
일부 구현예에서, 항체는 IgG2 아이소타입 중쇄 불변 도메인 1(CH1) 및 힌지 영역을 포함한다 (White 등, (2015) Cancer Cell 27, 138-148). 특정 구현예에서, IgG2 아이소타입 CH1 및 힌지 영역은 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP (서열식별번호:214)의 아미노산 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 Fc 영역은 S267E 아미노산 치환, L328F 아미노산 치환, 또는 둘 모두, 및/또는 N297A 또는 N297Q 아미노산 치환을 함유하고, 상기 아미노산 위치는 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다.
특정 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG4 아이소타입을 갖는다. 일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 인간 IgG4 불변 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 인간 IgG4 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합한다. 특정 구현예에서, 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)이다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 1종 이상의 변형을 함유한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, Fc 영역은 (예를 들면, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 대한) 1종 이상의 아미노산 치환을 함유한다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 아미노산 치환은 L235A, G237A, S228P, L236E (Reddy 등, (2000) J Immunol, 164:1925-1933), S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T, 및/또는 T256E 로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다.
특정 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 혼성 IgG2/4 아이소타입을 갖는다. 일부 구현예에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 인간 IgG2의 EU, 또는 카밧 넘버링에 따른 아미노산 118 내지 260및 인간 IgG4의 EU, 또는 카밧 넘버링에 따른 아미노산 261-447을 함유하는 아미노산 서열을 포함한다 (WO 1997/11971; WO 2007/106585).
특정 구현예에서, 항체는 마우스 IgG4 불변 영역을 함유한다 (Bartholomaeus, 등 (2014). J. Immunol. 192, 2091-2098).
일부 구현예에서, Fc 영역은 추가로, EU, 또는 카밧 넘버링; 및 이들의 임의의 조합에 따른 A330L, L234F; L235E, 또는 P331S 로 구성된 군으로부터 1종 이상의 추가 아미노산 치환을 함유한다.
불활성 항체
또 다른 부류의 본 개시내용의 항-CD33 항체는 불활성 항체를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "불활성" 항체는 그것의 표적 항원 (예를 들면, CD33)에 특이적으로 결합하지만, 항원 기능.을 조절 (예를 들면, 감소/억제 또는 활성화/유도)하지 않는 항체를 지칭한다. 예를 들면, CD33의 경우에, 불활성 항체는 CD33의 세포 수준을 조절하지 않으며, CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 조절하지 않거나, 또는 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 조절하지 않는다. 일부 구현예에서, 세포 표면 상의 CD33를 클러스터링하는 능력을 갖지 않는 항체는, 수용체 활성화와 양립가능한 에피토프 특이성을 가질지라도 불활성 항체일 수 있다.
일부 구현예에서, CD33 단백질에 결합하는 항체는 CD33에 결합하지만, 그것의 에피토프 특이성, 또는 특징으로 인해, do not CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제하지 않는 항체를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 그와 같은 항체는 예를 들면, 독소 (예를 들면, 화학치료제)를 종양 세포로 수송하기 위해 카고로서 사용될 수 있다. 그와 같은 항체는, 칼리키아마이신의 부류로부터의 세포독성 약물에 접합되고 급성 골수성 백혈병 종양을 표적화 및 사멸하기 위해 사용된 젬투주맙 조가마이신과 같은 CD33의 세포 수준을 감소시키는 현재 상업적으로 입수가능한 항-CD33 항체보다 우월할 수 있다 (Naito 등, (2000), Leukemia, 14, 1436-1443; Ricart (2011) Clin Cancer Res 17; 6417-6436; Hamann 등, (2002) Journal: Bioconjugate Chemistry, 13, 47-58; Beitz 등, (2001) Clin Cancer Res 7; 1490-6; 및 Malik M. 등 (2015) Human Molecular Genetics, 1-14.). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 불활성 항-CD33 항체가 상업적 항체, 예컨대 젬투주맙 조가마이신보다 우월할 수 있는 것은, CD33의 세포 수준을 감소시키지 않는 항체가 추가 독소-접합된 항체에 의한 표적화에 대해 종양 세포의 표면 상에 CD33를 온전한 채로 남기기 때문일 것이다. 그에 반해서, CD33의 세포 수준을 감소시키는 항체를 CD33을 세포 표면로부터 제거할 것이고 독소-접합된 항체에 의한 추가 표적화로부터 종양 세포의 보호로 이어질 것이다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 CD33에 결합하지만 CD33의 세포 수준을 감소시킬 수 없고, CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제할 수 없거나, CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 유도할 수 없는 불활성 항체이다.
세포 상의 CD33의 세포 수준을 감소시키거나 그렇지 않는 항체는 1종 이상의 Fcg 수용체에 대한 감소된 결합을 나타내는 불활성 Fc 영역과 조합될 수 있다. 그와 같은 Fc 영역 및 변형의 예는 아래의 표 D에서 제공된다. 일부 구현예에서, 불활성 Fc 영역을 갖는 항체는 아래의 표 D에서 열거된 Fc 아이소타입을 갖는다.
길항제 항-CD33 항체
제3 부류의 본 개시내용의 항-CD33 항체는 길항제 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33 단백질에 결합하는 항체는 CD33의 세포 수준을 감소시키고, CD33 및/또는 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제하고, 및 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 억제하는 길항제 항체를 포함할 수 있다. 그와 같은 항체는 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 예방하거나 1종 이상의 CD33 리간드의 존재에서 CD33의 세포 세포질로의 세포외 도입으로서 신호 형질도입을 예방하여 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 억제한다. 길항제 항체는 또한 CD33 분해, CD33 탈민감화, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 흘리기, CD33 발현의 하향조절, 및/또는 리소좀 CD33의 분해을 유도하여 CD33의 세포 표면 수준을 감소시켜서 CD33 단백질의 1종 이상의 활성을 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 그와 같은 길항제 항-CD33 항체는 CD33을 일시적으로 활성화할 수 없다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 본 개시내용의 일시적 효능제 항-CD33 항체의 에피토프 특이성을 가질 수 있지만, Fcg 수용체에 결합할 수 없는 Fc 도메인을 가지며, 따라서 예를 들면, CD33의 일시적인 클러스터링 및 활성화가 불가능하다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, 비제한적으로, 하기 활성 중 하나 이상을 갖는다: CD33 단백질의 1종 이상의 CD33 리간드, 예컨대 시알산-함유 당지질 또는 시알산-함유 당단백질에의 결합을 감소시키는 능력, 사이토카인 신호전달 (SOCS) 단백질 (예를 들면, SOCS3 단백질)의 억제제의 CD33 단백질에의 결합을 감소시키는 능력, 프로테아솜 CD33의 분해 단백질을 증가시키는 능력, 순환 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, T 세포, 및/또는 미세아교의 표면 상의 CD33의 기능성 발현을 감소시키는 능력, Src 계열 티로신 키나제 예컨대 LCK 및 FYN에 의한 Tyr-340 및 Tyr-358의 인산화를 감소시키는 능력, 티로신-특이 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 동원 및 그것에 결합하는 능력, 구아닌 뉴클레오타이드로서 작용하는 PLC-g1의 동원 및 그것에 결합하는 능력, 다이나민-1에 대한 인자 교환, Crkl의 동원 및 그것에 결합하는 능력, 비장 티로신 키나제 Syk의 동원 및 그것에 결합하는 능력, SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합된 단백질 2 (Grb2)의 동원 및 그것에 결합하는 능력, 다중 SH2 함유 단백질의 동원 및 그것에 결합하는 능력, 세포내 칼슘 동원을 증가시키는 능력, 전-염증 사이토카인 IL-1β, IL-8, 및 TNF-α의 생산을 조절하는 능력 생산, 포스포이노시티드 3-키나제의 활성화를 증가시키는 능력, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, T 세포, 및/또는 미세아교의 성장을 증가시키는 능력, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, T 세포, 및/또는 미세아교의 생존을 증가시키는 능력, 다중 세포 단백질상의 티로신 인산화를 증가시키는 능력, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포 및/또는 미세아교의 식세포 활성을 증가시키는 능력, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, T 세포, 및/또는 미세아교의 세포 증식을 증가시키는 능력, ITAM 신호전달을 매개하는 신호전달 분자의 인산화를 증가시키는 능력, 패턴 인식 수용체의 기능을 증가시키는 능력, 톨(Toll)-유사 수용체의 기능을 증가시키는 능력, 손상-관련된 분자 패턴 (DAMP) 수용체의 기능을 증가시키는 능력, C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)의 발현을 조절하는 능력, 및 세포 및 단백질 잔해의 청소능을 증가시키는 능력.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 1종 이상의 Fcg 수용체에 대한 감소된 결합을 나타내는 Fc 영역을 갖는다. 그와 같은 Fc 영역 및 변형의 예는 아래의 표 D에서 제공된다. 일부 구현예에서, 항체는 아래의 표 D에서 열거된 Fc 아이소타입을 갖는다.
Fc 감마 수용체에 대한 감소된 결합을 갖는 항체 Fc 아이소타입
일부 구현예에서, Fc 감마 수용체에 대한 감소된 결합을 갖는 항-CD33 항체는 아래의 표 D에서 열거된 Fc 아이소타입을 갖는다.
Figure pct00006
특정 구현예에서, 항-CD33항체는 IgG1 아이소타입을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 마우스 IgG1 불변 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 인간 IgG1 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 1종 이상의 변형을 함유한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, Fc 영역은 (예를 들면, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 대한) 1종 이상의 아미노산 치환을 함유한다.
일부 구현예에서, 1종 이상의 아미노산 치환은 N297A, N297Q (Bolt S 등 (1993) Eur J Immunol 23:403-411), D265A, D270A, L234A, L235A (McEarchern 등, (2007) Blood, 109:1185-1192), C226S, C229S (McEarchern 등, (2007) Blood, 109:1185-1192), P238S (Davis 등, (2007) J Rheumatol, 34:2204-2210), E233P, L234V (McEarchern 등, (2007) Blood, 109:1185-1192), P238A, A327Q, A327G, P329A (Shields RL. 등, (2001) J Biol Chem. 276(9):6591-604), K322A, L234F, L235E (Hezareh,등, (2001) J Virol 75, 12161-12168; Oganesyan 등, (2008). Acta Crystallographica 64, 700-704), P331S (Oganesyan 등, (2008) Acta Crystallographica 64, 700-704), T394D (Wilkinson 등 (2013) MAbs 5(3): 406-417), A330L, M252Y, S254T, 및/또는 T256E 로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다. 특정 구현예에서, Fc 영역은 추가로, EU 또는 카밧 넘버링 규약에 따른 글리신 236에 상응하는 위치에서 아미노산 결실을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 EU 또는 카밧 넘버링 규약에 따른 C220S 아미노산 치환을 함유하는 중쇄 불변 영역을 갖는 IgG1 아이소타입을 갖는다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 추가로, EU 또는 카밧 넘버링 규약에 따라 A330L, L234F; L235E, 및/또는 P331S 로부터 선택된 1종 이상의 추가 아미노산 치환을 함유한다. 특정 구현예에서, 항-CD33 항체는 IgG2 아이소타입을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 인간 IgG2 불변 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 인간 IgG2 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 1종 이상의 변형을 함유한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, Fc 영역은 (예를 들면, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 대한) 1종 이상의 아미노산 치환을 함유한다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 아미노산 치환은 P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, H268E, V309L, N297A, N297Q, V309L, A330S, P331S, C232S, C233S, M252Y, S254T, 및/또는 T256E 로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다 (Vafa O. 등, (2014) Methods 65:114-126).
특정 구현예에서, 항-CD33 항체는 IgG4 아이소타입을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 인간 IgG4 불변 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 인간 IgG4 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 1종 이상의 변형을 함유한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, Fc 영역은 (예를 들면, relative to 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 대한) 1종 이상의 아미노산 치환을 함유한다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 아미노산 치환은 E233P, F234V, L235A, G237A, E318A (Hutchins 등 (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984), S228P, L234A/F234A, L236E, S241P, L248E (Reddy 등, (2000) J Immunol, 164:1925-1933; Angal 등, (1993) Mol Immunol. 30(1):105-8; US 8614299 B2; Vafa O. 등, (2014) Methods 65:114-126), T394D, M252Y, S254T, T256E, N297A, 및/또는 N297Q 로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다.
일부 구현예에서, Fc 영역은 추가로, M252Y, S254T, 및/또는 T256E 로부터 선택된 1종 이상의 추가 아미노산 치환을 함유하고, 상기 아미노산 위치는 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다.
추가의 IgG 돌연변이
일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 IgG1 변이체 중 하나 이상은 A330L 돌연변이 (Lazar 등, (2006) Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010), 또는 L234F, L235E, 및/또는 P331S 돌연변이 중 하나 이상 (Sazinsky 등, (2008) Proc Natl Acad Sci USA, 105:20167-20172) 와 조합될 수 있고, 상기 아미노산 위치는 보체 활성화를 제거하기 위해 EU 또는 카밧 넘버링 규약을 따른다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 IgG 변이체는 인간 혈청에서 항-CD33 항체 반감기를 향상시키기 위해 1종 이상의 돌연변이 와 조합될 수 있다 (예를 들면 EU 또는 카밧 넘버링 규약에 따른 M252Y, S254T, T256E 돌연변이) (Dall'Acqua 등, (2006) J Biol Chem, 281:23514-23524; 및 Strohl 등, (2009) Current Opinion in Biotechnology, 20:685-691).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 IgG4 변이체는 항체 안정화를 향상시키기 위해 EU 또는 카밧 넘버링 규약에 따른 S228P 돌연변이 (Angal 등, (1993) Mol Immunol, 30:105-108) 및/또는 Peters 등, (2012) J Biol Chem. 13;287(29):24525-33)에 기재된 1종 이상의 돌연변이와 조합될 수 있다.
이중특이적 항체
본 개시내용의 특정 측면은 본 개시내용의 CD33 단백질 및 제2 항원 상의 1종 이상의 도메인 에 결합하는 이중특이적 항체이다. 이중특이적 항체를 생성하는 방법은 당해 분야에서 잘 알려져 있고, 본 명세서에서 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 이중특이적 본 개시내용의 항체는 본 개시내용의 CD33 단백질의 1종 이상의 아미노산 잔기, 예컨대 인간 CD33의 1종 이상의 아미노산 잔기 (서열식별번호:1), 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기에 상응하는 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기 에 결합한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 본 개시내용의 항체는 제1 항원 및 제2 항원을 인식한다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD33 단백질 또는 그것의 천연 발생 변이체이다. 일부 구현예에서, 제2 항원은 또한 CD33 단백질, 또는 그것의 천연 발생 변이체이다. 일부 구현예에서, 제2 항원은 상기 혈액-뇌-장벽을 가로질로 수송을 촉진하는 항원이다 (참조, 예를 들면, Gabathuler R., Neurobiol. Dis. 37 (2010) 48-57). 그와 같은 제2 항원은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 트랜스페린 수용체 (TR), 인슐린 수용체 (HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체 (IGFR), 저밀도 지질단백질 수용체 관련된 단백질 1 및 2 (LPR-1 및 2), 디프테리아 독소 수용체, CRM197, llama 단일 도메인 항체, TMEM 30(A), 단백질 형질도입 도메인, TAT, Syn-B, 페네트라틴, 폴리-아르기닌 펩타이드, 안지오펩 펩타이드 예컨대 ANG1005 (참조, 예를 들면, Gabathuler, 2010), 및 혈액-뇌 장벽 내피 세포 상에 풍부한 다른 세포 표면 단백질 (참조, 예를 들면, Daneman 등, PLoS One. 2010 Oct 29;5(10):e13741). 일부 구현예에서, 제2 항원은 질환 유발 단백질이고, 이 단백질을 비제한적으로 하기를 포함한다: 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드. 일부 구현예에서, 제2 항원은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, CD3, 및 포스파티딜세린을 비제한적으로 포함하는, 1종 이상의 면역 세포 상에 발현된 리간드 및/또는 단백질이다. 일부 구현예에서, 제2 항원은 1종 이상의 종양 세포 상에서 발현되는 단백질, 지질, 다당류, 또는 당지질이다.
항체 단편
본 개시내용의 특정 측면은 본 개시내용의 CD33 단백질, CD33 단백질의 천연 발생 변이체, 및 CD33 단백질의 질환 변이체 중 하나 이상에 결합하는 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편이다.
일부 구현예에서, 항체 단편은 하기로부터 선택된 질환 유발 단백질에 특이적으로 결합하는 제2 CD33 항체 및/또는 1종 이상의 항체와 함께 사용된다: 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드, 및 이들의 임의의 조합; 또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 면역조절 단백질에 결합하는 1종 이상의 항체: CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR5, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 시글렉-5, 시글렉-7, 시글렉-9, 시글렉-11, 포스파티딜세린, 및 이들의 임의의 조합.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체 단편은 본 개시내용의 항-CD33 항체 중 임의의 것과 동일한 에피토프에 결합하는 기능적 단편일 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 대응하는 전장 항체의 동일한 에피토프를 갖지만 훨씬 더 작은 분자량을 갖는 본 개시내용의 항-CD33 항체 또는 항체 단편의 소형화된 버전이다. 그와 같은 소형화된 항-CD33 항체 단편은 더 나은 뇌 침투 능력 및 더 짧은 반감기를 가질 수 있는데, 이것은 이미지형성 및 진단 유용성에 유리하다 (참조 예를 들면, Lutje S 등, Bioconjug Chem. 2014 Feb 19;25(2):335-41; Tavare R 등, Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 Jan 21; 111(3):1108-13; 및 Wiehr S 등, Prostate. 2014 May; 74(7):743-55). 따라서, 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체 단편은 그것의 대응하는 전장 항체와 비교하여 더 나은 뇌 침투를 가지고/거나 그것의 대응하는 전장 항체과 비교하여 더 짧은 반감기를 갖는다.
항체 프레임워크
본 명세서에 기재된 항체 중 임의의것은 추가로, 프레임워크를 포함한다. 일부 구현예에서, 프레임워크는 인간 면역글로불린 프레임워크이다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 항체 (예를 들면, 항-CD33 항체) 는 상기 구현예 중 임의의 것에서와 같이 HVR을 포함하고 추가로 수용체 인간 프레임워크, 예를 들면, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다. 인간 면역글로불린 프레임워크는 인간 항체의 일부일 수 있거나, 비-인간 항체는 1종 이상의 내인성 프레임워크를 인간 프레임워크 영역(들)로 대체하여 인간화되리 수 있다. 인간화를 위해 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역 은하기를 비제한적으로 포함한다: "최적화" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (참조, 예를 들면, Sims 등 J. Immunol. 151:2296 (1993)); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 하위그룹의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (참조, 예를 들면, Carter 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta 등 J. Immunol., 151:2623 (1993)); 인간 성숙한 (체세포로 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역 (참조, 예를 들면, Almagro 및 Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); 및 선별 FR 라이브러리로부터 유래된 프레임워크 영역 (참조, 예를 들면, Baca 등, J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok 등, J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)).
일부 구현예에서, 항체는 본 개시내용의 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 표 3A에서 묘사된 경쇄 가변 영역의 경쇄 프레임워크 영역1, 2, 3 또는 4개르르 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 본 개시내용의 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 표 3B에서 묘사된 중쇄 가변 영역의 중쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3 또는 4개를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 본 개시내용의 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 표 3A에서 묘사된 경쇄 가변 영역의 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3 또는 4개를 포함하고, 추가로 본 개시내용의 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 표 3B에서 묘사된 중쇄 가변 영역의 중쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3 또는 4개를 포함한다.
항체 제조
본 개시내용의 항-CD33 항체는 하기를 포함할 수 있다: 다클론성 항체, 단클론성 항체, 인간화된 및 키메라 항체, 인간 항체, 항체 단편 (예를 들면, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 및 F(ab')2), 이중특이적 및 다중특이적 항체, 다가 항체, 헤테로콘주게이트 항체, 접합된 항체, 라이브러리 유래된 항체, 변형된 효과기 기능을 갖는 항체, 항체 부분을 함유하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위, 예컨대 항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체, 및 공유결합으로 변형된 항체를 포함하는, 본 개시내용의 CD33 단백질의 아미노산 잔기를 갖는 에피토프를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 배치구성. 항-CD33 항체는 인간, 쥣과, 랫트, 또는 (키메라 또는 인간화된 항체를 포함하는) 임의의 다른 기원일 수 있다.
(1) 다클론성 항체
다클론성 항체, 예컨대 다클론성 항-CD33 항체는 관련 항원 및 아쥬반트의 다중 피하 (sc) 또는 복강내 (ip) 주사에 의해 동물에서 일반적으로 상승된다. 이중기능성 또는 유도체화 제제, 예를 들면, 말레이미도벤조일 설포석신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통한 콘주게이션), N-하이드록시석신이미드 (라이신 잔기를 통한), 글루타르알데하이드, 석신산 무수물, SOCl2, 또는 R1N=C=NR (식 중 R 및 R1 은 독립적으로 저급 알킬 기이다)를 이용하여, 면역화되는 종에서 면역원성인 단백질, 예를 들면, 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 혈청 알부민, 소 티로글로불린, 또는 대두 트립신 억제제에 관련 항원 (예를 들면, 본 개시내용의 정제된 또는 재조합 CD33 단백질)을 접합하는 것이 유용할 수 있다. 이용될 수 있는 아쥬반트의 예는 프로인트 완전 아쥬반트 및 MPL-TDM 아쥬반트 (모노포스포릴 지질 A, 합성 트레할로오스 디코리노마이콜레이트)를 포함한다. 면역화 프로토콜은 과도한 실험과정 없이 당해 분야의 숙련가에 의해 선택될 수 있다.
동물은, 예를 들면, 3 용적의 프로인트 완전 아쥬반트와 단백질 또는 콘주게이트의 100 μg (토끼용) 또는 5 μg (마우스용) 배합 및 다중 부위에서 진피내로 용액 주입에 의해 요망된 항원, 면역원성 콘주게이트, 또는 유도체에 대해 면역화된다. 1 개월 후, 동물은 다중 부위에서 피하 주사에 의해 프로인트 완전 아쥬반트내 펩타이드 또는 콘주게이트의 1/5 내지 1/10 최초 양으로 부양된다. 7 내지 14 일 후, 동물은 번식되고 혈청은 항체 역가를 위하여 분석된다. 동물은 역가 안정기까지 부양된다. 콘주게이트는 또한 단백질 융합물로서 재조합 세포 배양에서 제조될 수 있다. 또한, 응집 제제 예컨대 명반은 면역 반응을 향상시키는데 적합하다.
(2) 단클론성 항체
단클론성 항체, 예컨대 단클론성 항-CD33 항체는 실질적으로 균질한 항체의 집단, 즉, 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이 및/또는 번역후 변형 (예를 들면, 이성질체화, 아미드화)를 제외하고 동일한 집단을 포함하는 개별 항체로부터 수득된다. 따라서, 변형제 "단클론성"은 별개의 항체의 혼합물이 아닌 경우 항체의 특징을 나타낸다.
예를 들어, 단클론성 항-CD33 항체는 Kohler 등, Nature, 256:495 (1975)에 의해 최초 기재된 하이브리도마 방법을 이용하여 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법 (미국 특허 번호 4,816,567)에 의해 제조될 수 있다.
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대 햄스터는 면역화를 위하여 사용된 단백질 (예를 들면, 본 개시내용의 정제된 또는 재조합 CD33 단백질)에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유도하기 위해 본 명세서에서 상기에 기재된 바와 같이 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관내 면역화될 수 있다. 림프구는 그 다음 적합한 융합 제제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 골수종 세포와 융합되어, 하이브리도마 세포를 형성한다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)).
면역화 제제는 전형적으로 항원성 단백질 (예를 들면, 본 개시내용의 정제된 또는 재조합 CD33 단백질) 또는 이들의 융합 변이체를 포함할 것이다. 일반적으로 말초 혈액 림프구 ("PBLs")는 인간 기원의 세포가 요망되면 사용되고, 반면에 비장 또는 림프절 세포는 비-인간 포유동물 공급원이 바람직하면 사용된다. 림프구는 그 다음 적합한 융합 제제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 불멸화된 세포주와 융합되어, 하이브리도마 세포를 형성한다. Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986), pp. 59-103.
불멸화된 세포주는 일반적으로 전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 또는 인간 기원의 골수종 세포이다. 일반적으로, 랫트 또는 마우스 골수종 세포주가 이용된다. 그렇게 제조된 하이브리도마 세포는 씨딩되고 비융합된, 친계 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제시키는 1종 이상의 서브스턴스를 바람직하게는 함유하는 적합한 배양 배지에서 성장된다. 예를 들어, 친계 골수종 세포가 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 전달효소 (HGPRT 또는 HPRT)이 부족하면, 하이브리도마를 위한 배양 배지는 전형적으로, HGPRT-결핍된 세포의 성장을 예방하는 서브스턴스인, 하이포잔틴, 아미노프테린, 및 티미딘 (HAT 배지)를 포함할 것이다.
바람직한 불멸화된 골수종 세포는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생산 세포에 의해 항체의 안정적인 고-수준 생산을 지지하고, 배지 예컨대 HAT 배지에 감수성인 것이다. 이들 중에서, 바람직한 것은 쥣과 골수종 주, 예컨대 (Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA로부터 이용가능한) MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양, 뿐만 아니라 (American Type Culture Collection, Manassas, Virginia USA로부터 이용가능한) SP-2 세포 및 이들의 유도체 (예를 들면, X63-Ag8-653)로부터 유래된 것이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로골수종 세포주는 또한 인간 단클론성 항체의 생산에 대하여 기재되어 있다 (Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur 등, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지는 항원에 관한 단클론성 항체 (예를 들면, 본 개시내용의 CD33 단백질)의 생산을 위하여 분석된다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생산된 단클론성 항체의 결합 특이성은 면역침강에 의해 또는 시험관내 결합 검정, 예컨대 방사선면역검정 (RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정된다.
하이브리도마 세포가 배양되는 배양 배지는 요망된 항원에 관한 단클론성 항체 (예를 들면, 본 개시내용의 CD33 단백질)의 존재에 대하여 분석될 수 있다. 바람직하게는, 단클론성 항체의 결합 친화도 및 특이성은 면역침강에 의해 또는 시험관내 결합 검정, 예컨대 방사선면역검정 (RIA) 또는 효소-결합 검정 (ELISA)에 의해 결정될 수 있다. 상기 기술 및 검정은 종래 기술에서 공지된다. 예를 들어, 결합 친화도는 Munson 등, Anal. Biochem., 107:220 (1980)의 스카차드(Scatchard) 분석에 의해 결정될 수 있다.
요망된 특이성, 친화도, 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 확인된 후, 클론은 희석 절차 제한에 의해 아클론화될 수 있고 표준 방법 (Goding, 상동)에 의해 성장될 수 있다. 이러한 목적을 위해 적합한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 게다가, 하이브리도마 세포는 포유동물에서 종양으로서 생체내 성장될 수 있다.
아클론에 의해 분비된 단클론성 항체는 종래의 면역글로불린 정제 절차 예컨대, 예를 들어, 단백질 A-세파로오스 크로마토그래피, 하이드록실인회석 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 친화성 크로마토그래피, 및 상기 기재된 바와 같이 다른 방법에 의해 배양 배지, 복수 유체, 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.
항-CD33 단클론성 항체는 또한 재조합 DNA 방법, 예컨대 미국 특허 번호 4,816,567에 개시된 것에 의해, 그리고 상기 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 단클론성 항체를 인코딩하는 DNA는 쉽게 단리되고 종래의 절차를 이용하여 (예를 들면, 쥣과 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 올리고뉴클레오타이드 프로브 이용에 의해) 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 상기 DNA의 바람직한 공급원으로서 작용한다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터 속에 배치될 수 있고, 이는 그 다음, 상기 재조합 숙주 세포내 단클론성 항체를 합성하기 위해, 면역글로불린 단백질을 달리 생산하지 않는 숙주 세포 예컨대 E. 콜리 세포, 유인원 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 골수종 세포 속에 형질감염된다. 항체를 인코딩하는 DNA의 박테리아내 재조합 발현의 검토 논문은 Skerra 등, Curr. Opin. Immunol., 5:256-262 (1993) 및 Pluckthun, Immunol. Rev. 130:151-188 (1992)를 포함한다.
특정 구현예에서, 항-CD33 항체는 McCafferty 등, Nature, 348:552-554 (1990)에 기재된 기술을 이용하여 생성된 항체 파아지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. Clackson 등, Nature, 352:624-628 (1991) 및 Marks 등, J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)은, 파아지 라이브러리로부터, 쥣과 및 인간 항체, 각각의 단리를 기재하였다. 차후의 간행물은 쇄 셔플링 (Marks 등, Bio/Technology, 10:779-783 (1992)), 뿐만 아니라 매우 큰 파아지 라이브러리 (Waterhouse 등, Nucl. Acids Res., 21:2265-2266 (1993)) 작제용 전략으로서 조합 감염 및 생체내 재조합에 의해 고친화도 (나노몰 ("nM") 범위) 인간 항체의 생산을 기재한다. 따라서, 이들 기술은 요망된 특이성의 단클론성 항체 (예를 들면, 본 개시내용의 CD33 단백질을 결합시키는 것)의 단리용 전통적 단클론성 항체 하이브리도마 기술에 대한 생존가능한 대안이다.
항체 또는 이들의 단편을 인코딩하는 DNA는 또한, 예를 들어, 상동성 쥣과 서열 대신에 인간 중-쇄 및 경-쇄 불변 도메인으로 코딩 서열 치환 (미국 특허 번호 4,816,567; Morrison, 등, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984))에 의해, 또는 비-면역글로불린 폴리펩타이드용 코딩 서열의 전부 또는 일부의 면역글로불린 코딩 서열에 공유결합으로 연결에 의해 변형될 수 있다. 전형적으로 상기 비-면역글로불린 폴리펩타이드는 항체의 불변 도메인으로 치환되거나, 이들은 항체의 하나의 항원-조합 부위의 가변 도메인으로 치환되어 항원에 대하여 특이성을 갖는 하나의 항원-조합 부위 및 상이한 항원에 대하여 특이성을 갖는 또 다른 항원-조합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체를 창출한다.
본 명세서에서 기재된 단클론성 항체 (예를 들면, 본 개시내용의 항-CD33 항체 또는 이들의 단편)은 1가일 수 있고, 이의 제조는 당해 기술에 양호하게 공지된다. 예를 들어, 하나의 방법은 면역글로불린 경쇄 및 변형된 중쇄의 재조합 발현을 포함한다. 중쇄는 중쇄 가교결합을 예방하기 위해 Fc 영역에서 임의의 지점에 일반적으로 절단된다. 대안적으로, 관련 시스테인 잔기는 또 다른 아미노산 잔기로 치환될 수 있거나 가교결합을 예방하기 위해 결실될 수 있다. 시험관내 방법은 1가 항체 제조에 또한 적합하다. 이들의 단편, 특히 Fab 단편을 생산하기 위한 항체의 소화는 당해 기술에 공지된 일상적인 기술을 이용하여 달성될 수 있다.
키메라 또는 혼성 항-CD33 항체는 또한, 가교결합 제제를 관여하는 것을 포함하는, 합성 단백질 화학에 공지된 방법을 이용하여 시험관내 제조될 수 있다. 예를 들어, 면역독소는 디설파이드-교환 반응을 이용하여 또는 티오에테르 결합 형성에 의해 작제될 수 있다. 이러한 목적을 위해 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토부티르이미데이트를 포함한다.
(3) 인간화된 항체
본 개시내용의 항-CD33 항체 또는 이들의 항체 단편은 추가로 인간화된 또는 인간 항체를 포함할 수 있다. 비-인간 (예를 들면, 쥣과) 항체의 인간화된 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 이들의 면역글로불린 쇄 또는 단편 (예컨대 항체의 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, F(ab')2 또는 다른 항원-결합 하위서열)이다. 인간화된 항체는 수령체의 상보성 결정 영역 (CDR)으로부터 잔기가 요망된 특이성, 친화도 및 수용력을 갖는 비-인간 종 (공여체 항체) 예컨대 마우스, 랫트 또는 토끼의 CDR로부터 잔기에 의해 대체되는 인간 면역글로불린 (수령체 항체)를 포함한다. 일부 사례에서, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 잔기는 대응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 인간화된 항체는 또한 수령체 항체에서도 도입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 1종의, 및 전형적으로 2종, 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이고, 여기에서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 것에 대응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 공통 서열의 것이다. 인간화된 항체는 최적으로 또한 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 한 부분, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함할 것이다. Jones 등, Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann 등, Nature 332: 323-329 (1988) 및 Presta, Curr. Opin. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992).
비-인간 항-CD33 항체의 인간화 방법은 당해 기술에 양호하게 공지된다. 일반적으로, 인간화된 항체는 비-인간인 공급원으로부터 그 속에 도입된 1종 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종, 전형적으로 "도입" 가변 도메인으로부터 채택되는, "도입" 잔기로서 지칭된다. 인간화는 Winter 및 공동-작업자의 방법, Jones 등, Nature 321:522-525 (1986); Riechmann 등, Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen 등, Science 239:1534-1536 (1988)에 따라, 또는 인간 항체의 대응하는 서열로 설치류 CDRs 또는 CDR 서열 치환을 통해 본질적으로 수행될 수 있다. 따라서, 상기 "인간화된" 항체는 키메라 항체 (미국 특허 번호 4,816,567)이고, 여기서 온전한 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 적게 비-인간 종으로부터 대응하는 서열에 의해 치환되고 있다. 실제로, 인간화된 항체는 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체내 유사한 부위로부터 잔기에 의해 치환되는 전형적으로 인간 항체이다.
인간화된 항체 제조에서 사용되는, 두 경 및 중, 인간 가변 도메인의 선택은 항원성을 감소시키는데 매우 중요하다. 소위 "최적화" 방법에 있어서, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열은 공지된 인간 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 선별된다. 설치류의 것에 가장 가까운 인간 서열은 그 다음 인간화된 항체를 위한 인간 프레임워크 (FR)로서 허용된다. Sims 등, J. Immunol., 151:2296 (1993); 초티아 등, J. Mol. Biol., 196:901 (1987). 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정한 하위그룹의 모든 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 특정한 프레임워크를 이용한다. 동일한 프레임워크는 몇 개의 상이한 인간화된 항체에 사용될 수 있다. Carter 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:4285 (1992); Presta 등, J. Immunol. 151:2623 (1993).
더욱이, 항체가 항원에 대하여 고친화도 및 다른 양호한 생물학적 특성의 유지로 인간화되는 것이 중요하다. 상기 목표를 달성하기 위해, 바람직한 방법에 따르면, 인간화된 항체는 친계 및 인간화된 서열의 3-차원 모델을 이용하는 친계 서열 및 다양한 개념의 인간화된 생성물의 분석 방법에 의해 제조된다. 3-차원 면역글로불린 모델은 통상적으로 이용가능하고 당해 분야의 숙련가에 익숙하다. 선택된 후보자 면역글로불린 서열의 정황적 3-차원 형태적 구조를 설명하고 표시하는 컴퓨터 프로그램은 이용가능하다. 이들 디스플레이의 점검은 후보자 면역글로불린 서열의 기능화에서 잔기의 알맞은 역할의 분석, 즉, 그것의 항원을 결합시키는 후보자 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이런 식으로, FR 잔기는 요망된 항체 특징, 예컨대 상기 표적 항원 또는 항원들 (예를 들면, 본 개시내용의 CD33 단백질)에 대한 증가된 친화도가 달성되도록 수령체 및 도입 서열로부터 선택 및 조합될 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기는 항원 결합 영향에 직접적으로 및 가장 실질적으로 관여된다.
다양한 형태의 인간화된 항-CD33 항체는 고려된다. 예를 들어, 인간화된 항-CD33 항체는, 면역접합체를 생성하기 위해 1종 이상의 세포독성 제제(들)로 선택적으로 접합되는, 항체 단편, 예컨대 Fab일 수 있다. 대안적으로, 인간화된 항-CD33 항체는 온전한 항체, 예컨대 온전한 IgG1 항체일 수 있다.
(4) 인간 항체
대안적으로, 인간 항-CD33 항체는 생성될 수 있다. 예를 들어, 면역화시, 내인성 면역글로불린 생산의 부재하에 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예를 들면, 마우스)를 생산하는 것이 이제 가능하다. 키메라 및 생식계열 돌연변이체 마우스내 항체 중-쇄 결합 영역 (JH) 유전자의 동종접합성 결실은 내인성 항체 생산의 완전한 억제를 초래한다. 상기 생식계열 돌연변이체 마우스내 인간 생식계열 면역글로불린 유전자 어레이 이동은 항원 공격시 인간 항체의 생산을 초래할 것이다. 참고, 예를 들면, Jakobovits 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits 등, Nature, 362:255-258 (1993); Bruggermann 등, Year in Immunol., 7:33 (1993); 미국 특허 번호 5,591,669 및 WO 97/17852.
대안적으로, 파아지 디스플레이 기술은, 면역화되지 않은 공여체로부터 면역글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터, 시험관내 인간 항-CD33 항체 및 항체 단편을 생산하는데 사용될 수 있다. McCafferty 등, Nature 348:552-553 (1990); Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227: 381 (1991). 상기 기술에 따르면, 항체 V 도메인 유전자는 섬유상 박테리오파아지, 예컨대 M13 또는 fd의 주요 또는 소수의 코트 단백질 유전자 속에 인프레임 클론화되고, 파아지 입자의 표면상에서 기능성 항체 단편으로서 표시된다. 섬유상 입자가 파아지 게놈의 단일가닥 DNA 카피를 함유하기 때문에, 항체의 기능성 특성에 기반된 선택은 또한 그들 특성을 나타내는 항체를 인코딩하는 유전자의 선택을 초래한다. 따라서, 파아지는 B-세포의 특성의 일부를 모방한다. 파아지 디스플레이는, 예를 들면, Johnson, Kevin S. 및 Chiswell, David J., Curr. Opin Struct. Biol. 3:564-571 (1993)에서 검토된, 다양한 포맷으로 수행될 수 있다. V-유전자 세그먼트의 몇 개의 공급원은 파아지 디스플레이에 사용될 수 있다. Clackson 등, Nature 352:624-628 (1991)은 면역화된 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 작은 랜덤 조합 라이브러리로부터 항-옥사졸론 항체의 다양한 어레이를 단리시켰다. 면역화되지 않은 인간 공여체로부터 V 유전자의 레퍼토리는 작제될 수 있고 (자기-항원을 포함하는) 항원의 다양한 어레이에 대한 항체는 Marks 등, J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991), 또는 Griffith 등, EMBO J. 12:725-734 (1993)에 의해 기재된 기술에 따라 본질적으로 단리될 수 있다. 참고 또한 미국 특허 번호 5,565,332 및 5,573,905. 추가로, 효모 디스플레이 기술은 시험관내 인간 항-CD33 항체 및 항체 단편을 생산하는데 사용될 수 있다 (예를 들면, WO 2009/036379; WO 2010/105256; WO 2012/009568; US 2009/0181855; US 2010/0056386; 및 Feldhaus and Siegel (2004) J. Immunological Methods 290:69-80). 다른 구현예에서, 리보솜 디스플레이 기술은 시험관내 인간 항-CD33 항체 및 항체 단편을 생산하는데 사용될 수 있다 (예를 들면, Roberts and Szostak (1997) Proc Natl Acad Sci 94:12297-12302; Schaffitzel 등 (1999) J. Immunolical Methods 231:119-135; Lipovsek and Pluckthun (2004) J. Immunological Methods 290:51-67).
Cole 등, 및 Boerner 등의 기술은 또한 인간 항-CD33 단클론성 항체의 제조에 이용가능하다 (Cole 등, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985) 및 Boerner 등, J. Immunol. 147(1): 86-95 (1991). 유사하게, 인간 항-CD33 항체는 내인성 면역글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 불활성화되고 있는 트랜스제닉 동물, 예를 들면, 마우스 속에 인간 면역글로불린 유전자좌 도입에 의해 제조될 수 있다. 공격시, 인간 항체 생산은 관측되고, 이는 유전자 재배열, 어셈블리 및 항체 레퍼토리를 포함하는 모든 면에서 인간에서 보이는 것을 밀접하게 닯는다. 상기 접근법은, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806, 5,569,825, 5,625,126, 5,633,425, 5,661,016에 그리고 하기 과학 간행물에 기재된다: Marks 등, Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg 등, Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-13 (1994), Fishwild 등, Nature Biotechnology 14: 845-51 (1996), Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996) 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995).
마지막으로, 인간 항-CD33 항체는 또한 활성화된 B-세포에 의해 시험관내 생성될 수 있다 (참조 미국 특허 번호 5,567,610 및 5,229,275).
(5) 항체 단편
특정 구현예에서 전체의 항-CD33 항체 보다는, 항-CD33 항체 단편 이용에 대한 이점이 있다. 더 작은 단편 크기는 급속 청소능 및 더 나은 뇌 침투를 허용한다.
다양한 기술이 항체 단편의 생산을 위하여 개발되고 있다. 종래에, 이들 단편은 온전한 항체의 단백분해 소화를 통해 유래되었다 (참조, 예를 들면, Morimoto 등, J. Biochem. Biophys. Method. 24:107-117 (1992); 및 Brennan 등, Science 229:81 (1985)). 그러나, 이들 단편은 이제 재조합 숙주 세포에 의해, 예를 들어, 본 개시내용의 항-CD33 항체를 인코딩하는 핵산을 이용하여 직접적으로 생산될 수 있다. Fab, Fv 및 scFv 항체 단편은 모두 E. 콜리에서 발현될 수 있고 상기로부터 분비될 수 있어서, 따라서 이들 단편의 간단한 다량 생산을 허용한다. 항-CD33 항체 단편은 또한 상기에 논의된 바와 같이 항체 파아지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 F(ab')2 단편을 형성하기 위해 E. 콜리로부터 직접적으로 회수될 수 있고 화학적으로 커플링될 수 있다 (Carter 등, Bio/Technology 10:163-167 (1992)). 또 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양액으로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 증가된 생체내 반감기로 Fab 및 F(ab')2 항체 단편의 생산은 미국 특허 번호 5,869,046에 기재된다. 다른 구현예에서, 선택의 항체는 단쇄 Fv 단편 (scFv)이다. 참고 WO 93/16185; 미국 특허 번호 5,571,894 및 미국 특허 번호 5,587,458. 항-CD33 항체 단편은 또한, 예를 들면, 미국 특허 5,641,870에 기재된 바와 같이, "선형 항체"일 수 있다. 상기 선형 항체 단편은 단일특이적 또는 이중특이적일 수 있다.
(6) 이중특이적 및 다중특이적 항체
이중특이적 항체 (BsAbs)는, 동일한 또는 또 다른 단백질 (예를 들면, 본 개시내용의 1종 이상의 CD33 단백질)상의 것을 포함하는, 적어도 2종의 상이한 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 항체이다. 대안적으로, BsAb의 일 부분은 상기 표적 CD33 항원에 결합하도록 아암될 수 있고, 또 다른 것은 제2 단백질에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 상기 항체는 전장 항체 또는 항체 단편 (예를 들면, F(ab')2 이중특이적 항체)로부터 유래될 수 있다.
이중특이적 항체의 제조 방법은 당해 기술에 공지되어 있다. 전장 이중특이적 항체의 전통적 생산은, 2개 쇄가 상이한 특이성을 갖는 2개 면역글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 공동발현에 기반된다. Millstein 등, Nature, 305:537-539 (1983). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 랜덤 조합 때문에, 이들 하이브리도마 (항체생산융합세포)는 10 상이한 항체 분자의 잠재적인 혼합물을 생산하고, 이들 중 단 하나가 정확한 이중특이적 구조를 갖는다. 일반적으로 친화성 크로마토그래피 단계에 의해 실시되는, 정확한 분자의 정제는 다소 다루기 힘들고, 수율은 낮다. 유사한 절차는 WO 93/08829에 그리고 Traunecker 등, EMBO J., 10:3655-3659 (1991)에 개시된다.
상이한 접근법에 따르면, 요망된 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인 (항체-항원 배합 부위)는 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 융합은 바람직하게는, 적어도 일부의 힌지, CH2, 및 CH3 영역을 포함하는, 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 갖는 것이다. 적어도 1종의 융합에서 존재하는, 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 영역 (CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합 및, 요망하는 경우, 면역글로불린 경쇄를 인코딩하는 DNAs는 별도의 발현 벡터 속에 삽입되고, 적합한 숙주 유기체 속에 공동-형질감염된다. 이것은 작제에서 사용된 3개 폴리펩타이드 쇄의 불균등 비가 최적의 수율을 제공하는 경우 구현예에서 3개 폴리펩타이드 단편의 상호 분율 조정으로 상당한 가요성을 제공한다. 그러나, 균등 비로 적어도 2종의 폴리펩타이드 쇄의 발현이 고수율을 초래하는 경우 또는 비가 특정한 유의성이 없는 경우 하나의 발현 벡터에서 2개 또는 모두 3개의 폴리펩타이드 쇄에 대하여 코딩 서열을 삽입하는 것이 가능하다.
상기 접근법의 바람직한 구현예에서, 이중특이적 항체는 하나의 아암에서 제1 결합 특이성을 갖는 혼성 면역글로불린 중쇄, 및 다른 아암에서 (제2 결합 특이성을 제공하는) 혼성 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍으로 구성된다. 이중특이적 분자의 단지 절반에서 면역글로불린 경쇄의 존재가 분리의 용이한 방식을 제공함에 따라, 상기 비대칭 구조가 원치않는 면역글로불린 쇄 조합으로부터 요망된 이중특이적 화합물의 분리를 촉진한다는 것이 밝혀졌다. 상기 접근법은 WO 94/04690에 개시된다. 이중특이적 항체 생성의 추가 세부사항에 대하여, 참고, 예를 들어, Suresh 등, Methods in Enzymology 121: 210 (1986).
WO 96/27011 또는 미국 특허 번호 5,731,168에 기재된 또 다른 접근법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 사이 계면은 재조합 세포 배양액으로부터 회수되는 헤테로이량체의 백분율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 영역의 적어도 일 부분을 포함한다. 상기 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터 1종 이상의 작은 아미노산 측쇄는 더 큰 측쇄 (예를 들면, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 큰 측쇄(들)에 동일한 또는 유사한 크기의 보상성 "공동"은 더 작은 것 (예를 들면, 알라닌 또는 트레오닌)으로 큰 아미노산 측쇄의 대체에 의해 제2 항체 분자의 계면에서 창출된다. 이것은 다른 원치않는 최종 산물 예컨대 호모이량체 넘어 헤테로이량체의 수율을 증가시키기 위한 기전을 제공한다.
항체 단편으로부터 이중특이적 항체 생성 기술은 문헌에서 기재되어 있다. 예를 들어, 이중특이적 항체는 화학 연결을 사용하여 제조될 수 있다. Brennan 등, Science 229:81 (1985)는 온전한 항체가 단백분해로 절단되어 F(ab')2 단편을 생성하는 절차를 기재한다. 이들 단편은 근접 디티올을 안정화시키기 위해 그리고 분자간 디설파이드 형성을 예방하기 위해 디티올 복합화 제제 나트륨 아르세나이트의 존재하에 감소된다. 생성된 Fab' 단편은 그 다음 티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로 전환된다. Fab'-TNB 유도체 중 하나는 그 다음 Fab'-TNB 유도체로 재전환되어 이중특이적 항체를 형성한다. 생산된 이중특이적 항체는 효소의 선택적 고정화용 제제로서 사용될 수 있다.
Fab' 단편은 E. 콜리로부터 직접적으로 회수될 수 있고 화학적으로 커플링되어 이중특이적 항체를 형성할 수 있다. Shalaby 등, J. Exp. Med. 175: 217-225 (1992)는 완전히 인간화된 이중특이적 항체 F(ab')2 분자의 생산을 기재한다. 각각의 Fab' 단편은 E. 콜리로부터 개별적으로 분비되었고 시험관내 관련된 화학 커플링에 적용되어 이중특이적 항체를 형성하였다. 그렇게 형성된 이중특이적 항체는 ErbB2 수용체를 과발현하는 세포 및 정상 인간 T 세포에 결합할 수 있었고, 뿐만 아니라 인간 유방 종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용해 활성을 유발시킬 수 있었다.
재조합 세포 배양액으로부터 직접적으로 2가 항체 단편의 제조 및 단리를 위한 다양한 기술은 또한 기재되어 있다. 예를 들어, 2가 헤테로이량체는 류신 지퍼를 이용하여 생산되고 있다. Kostelny 등, J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992). Fos 및 Jun 단백질로부터 류신 지퍼 펩타이드는 유전자 융합에 의해 2 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결되었다. 항체 호모이량체는 힌지 영역에서 감소되어 모노머를 형성하고 그 다음 재-산화되어 항체 헤테로이량체를 형성한다. Hollinger 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)에 의해 기재된 "디아바디" 기술은 이중특이적/2가 항체 단편 제조를 위한 대안적인 기전으로 제공된다. 단편은 동일한 쇄상에서 2 도메인 사이 짝짓기를 허용하기에 너무 짧은 링커에 의해 경-쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중-쇄 가변 도메인 (VH)을 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 또 다른 단편의 상보성 VL 및 VH 도메인과 강제로 짝짓기하여, 이로써 2 항원-결합 부위를 형성한다. 단-쇄 Fv (sFv) 이량체의 사용에 의한 이중특이적/2가 항체 단편의 또 다른 제조 전략은 또한 보고되고 있다. 참고 Gruber 등, J. Immunol., 152:5368 (1994).
2 초과 원자가를 갖는 항체는 또한 고려된다. 예를 들어, 삼중특이적 항체는 제조될 수 있다. Tutt 등, J. Immunol. 147:60 (1991).
예시적인 이중특이적 항체는 소정의 분자 (예를 들면, 본 개시내용의 CD33 단백질)상에서 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안적으로, CD33 신호전달 성분을 표적하는 아암은 특정한 단백질을 발현시키는 세포에 세포 방어 기전을 집중하기 위해 백혈구 예컨대 T 세포 수용체 분자 (예를 들면, CD2, CD3, CD28 또는 B7), 또는 IgG용 Fc 수용체 (FcγR), 예컨대 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)상에서 유발 분자에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 특정한 단백질을 발현시키는 세포에 세포독성 제제를 국재화하는데 사용될 수 있다. 상기 항체는 단백질-결합 아암 및 세포독성 제제 또는 방사선핵종 킬레이터, 예컨대 EOTUBE, DPTA, DOTA 또는 TETA를 결합시키는 아암을 소유한다. 또 다른 당해 이중특이적 항체는 당해 단백질을 결합시키고 추가로 조직 인자 (TF)를 결합시킨다.
(7) 다가 항체
다가 항체는 항체가 결합하는 항원을 발현시키는 세포에 의해 2가 항체보다 더 빨리 내재화 (및/또는 이화)될 수 있다. 본 개시내용의 항-CD33 항체 또는 이들의 항체 단편은, 항체의 폴리펩타이드 쇄를 인코딩하는 핵산의 재조합 발현에 의해 쉽게 생산될 수 있는, 3 이상의 항원 결합 부위를 가진 (IgM 부류 이외인) 다가 항체 (예를 들면, 4가 항체)일 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3 이상 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 바람직한 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함한다. 상기 시나리오에서, 항체는 Fc 영역 및 Fc 영역에 대한 3 이상 항원 결합 부위 아미노-말단을 포함할 것이다. 본 명세서에서 바람직한 다가 항체는 약 8, 그러나 바람직하게는 4 항원 결합 부위를 함유한다. 다가 항체는 적어도 1종의 폴리펩타이드 쇄 (및 바람직하게는 2 폴리펩타이드 쇄)를 함유하고, 여기서 상기 폴리펩타이드 쇄 또는 쇄들은 2 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들어, 폴리펩타이드 쇄 또는 쇄들은 VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc를 포함할 수 있고, 여기서 VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이고, Fc는 Fc 영역의 하나의 폴리펩타이드 쇄이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 폴리펩타이드를 나타내고, n은 0 또는 1이다. 유사하게, 폴리펩타이드 쇄 또는 쇄들은 VH-CH1-가요성 링커-VH-CH1-Fc 영역 쇄; 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 쇄를 포함할 수 있다. 본 명세서에서 다가 항체는 바람직하게는 추가로 적어도 2 (및 바람직하게는 4) 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드를 포함한다. 본 명세서에서 다가 항체는, 예를 들어, 약 2 내지 약 8 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 여기서 고려된 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 선택적으로, 추가로 CL 도메인을 포함한다. 다가 항체는 CD33 항원 뿐만 아니라, 제한 없이, 추가의 항원 A 베타 펩타이드, 항원 또는 알파 시누클레인 단백질 항원 또는, 타우(Tau) 단백질 항원 또는, TDP-43 단백질 항원 또는, 프리온 단백질 항원 또는, 헌팅틴 단백질 항원, 또는 RAN, 글리신-알라닌 (GA), 글리신-프롤린 (GP), 글리신-아르기닌 (GR), 프롤린-알라닌 (PA), 또는 프롤린-아르기닌 (PR)로 구성된 디펩타이드 반복부,(DPRs 펩타이드)를 포함하는, 번역 생성물 항원, 인슐린 수용체, 인슐린 유사 성장 인자 수용체, 트랜스페린 수용체, 또는 혈액 뇌 장벽을 거쳐 항체 이동을 촉진시키는 임의의 다른 항원을 인식할 수 있다.
(8) 헤테로콘주게이트 항체
헤테로콘주게이트 항체는 또한 본 개시내용의 범위 내이다. 헤테로콘주게이트 항체는 2개의 공유결합으로 연결된 항체 (예를 들면, 본 개시내용의 항-CD33 항체 또는 이들의 항체 단편)으로 구성된다. 예를 들어, 헤테로콘주게이트에서 항체 중 하나는 아비딘에 커플링될 수 있고, 다른 것은 바이오틴에 커플링될 수 있다. 상기 항체는, 예를 들어, 원치않는 세포에 면역 시스템 세포를 표적하는 것이 제안되고 있고, 미국 특허 번호 4,676,980, 그리고 HIV 감염 치료에 사용되고 있다. 국제공개 번호 WO 91/00360, WO 92/200373 및 EP 0308936. 항체가, 가교결합 제제를 관여하는 것을 포함하는, 합성 단백질 화학에서 공지된 방법을 이용하여 시험관내 제조될 수 있다는 것이 고려된다. 예를 들어, 면역독소는 디설파이드 교환 반응을 이용하여 또는 티오에테르 결합을 형성함으로써 작제될 수 있다. 이러한 목적을 위해 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토부티르이미데이트 그리고, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980에 개시된 것을 포함한다. 헤테로콘주게이트 항체는 임의의 편리한 가교결합 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 적합한 가교결합 제제는 당해 기술에 양호하게 공지되고, 수많은 가교결합 기술과 함께, 미국 특허 번호 4,676,980에 개시된다.
(9) 효과기 기능 공학기술
효과기 기능을 변형시키기 위해 및/또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해 본 개시내용의 항-CD33 항체를 변형시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 예를 들어, 불변 영역상에서 Fc 수용체 결합 부위는 특정 Fc 수용체, 예컨대 FcγRI, FcγRII, 및/또는 FcγRIII에 결합 친화도를 제거 또는 감소시키기 위해 변형 또는 돌연변이될 수 있다. 일부 구현예에서, 효과기 기능은 항체의 (예를 들면, IgG의 CH 2 도메인에서) Fc 영역의 N-글리코실화 제거에 의해 손상된다. 일부 구현예에서, 효과기 기능은 PCT WO 99/58572 및 Armour 등, Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddy 등, J. Immunology 164:1925-1933 (2000)에 기재된 바와 같이 인간 IgG의 영역 예컨대 233-236, 297, 및/또는 327-331 변형에 의해 손상된다.
항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어 미국 특허 5,739,277에 기재된 바와 같이 항체 (특히 항체 단편) 속에 구제 수용체 결합 에피토프를 편입시킬 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "구제 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기 증가를 책임지는 IgG 분자 (예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다.
(10) 다른 아미노산 서열 변형
본 개시내용의 항-CD33 항체, 또는 이들의 항체 단편의 아미노산 서열 변형은 또한 고려된다. 예를 들어, 항체 또는 항체 단편의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 항체 또는 항체 단편의 아미노산 서열 변이체는 항체 또는 항체 단편을 인코딩하는 핵산 속에 적절한 뉴클레오타이드 변화 도입에 의해, 또는 펩타이드 합성에 의해 제조된다. 상기 변형은, 예를 들어, 항체의 아미노산 서열 내에 잔기 결실, 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 결실, 삽입, 및 치환의 임의의 조합은 최종 작제물에 도달하도록 제조되고, 단, 최종 작제물은 요망된 특징 (즉, 본 개시내용의 CD33 단백질과 물리적으로 상호작용하거나 상기를 결합시키는 능력)을 보유한다. 아미노산 변화는 또한 항체의 번역후 공정, 예컨대 글리코실화 부위의 번호 또는 위치의 변화를 변경할 수 있다.
돌연변이생성에 바람직한 위치인 항-CD33 항체의 영역 또는 특정 잔기의 유용한 확인 방법은 Science, 244:1081-1085 (1989)에서 Cunningham 및 Wells에 의해 기재된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이생성"으로 불린다. 여기에서, 잔기 또는 표적 잔기의 그룹은 확인되고 (예를 들면, 충전된 잔기 예컨대 arg, asp, his, lys, 및 glu) 중성 또는 음성 하전된 아미노산 (가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 대체되어 상기 표적 항원과 아미노산의 상호작용에 영향을 준다. 치환에 기능성 감수성을 증명하는 그들 아미노산 위치는 그 다음 치환의 부위에서, 또는 상기를 위하여 추가 또는 다른 변이체 도입에 의해 정제된다. 따라서, 아미노산 서열 변동 도입용 부위가 예정되는 동안, 돌연변이 자체의 성질은 예정될 필요없다. 예를 들어, 소정의 부위에서 돌연변이의 성능을 분석하기 위해, 알라닌 스캐닝 또는 랜덤 돌연변이생성은 상기 표적 코돈 또는 영역에서 수행되고 발현된 항체 변이체는 요망된 활성에 대하여 선별된다.
아미노산 서열 삽입은 1 잔기 내지 100 이상 잔기를 함유하는 폴리펩타이드, 뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입 길이 범위의 아미노-("N") 및/또는 카복시-("C") 말단 융합을 포함한다. 말단 삽입의 예는 세포독성 폴리펩타이드에 융합된 항체 또는 N-말단 메티오닐 잔기를 가진 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소 또는 폴리펩타이드에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에 융합을 포함한다.
변이체의 또 다른 유형은 아미노산 치환 변이체이다. 이들 변이체는 상이한 잔기에 의해 대체된 항체 분자에서 적어도 1종의 아미노산 잔기를 갖는다. 치환형 돌연변이생성을 위한 가장 큰 관심의 부위는 초가변 영역을 포함하지만, FR 변경은 또한 고려된다. 보존적 치환은 "바람직한 치환"의 제목하에 아래 표 E에서 나타난다. 상기 치환이 생물학적 활성에서 변화를 초래하면, 표 E에서 "예시적인 치환"으로 명명된, 또는 아미노산 부류와 관련하여 아래 추가로 기재된 바와 같이, 더욱 실질적인 변화는 도입될 수 있고 생성물은 선별될 수 있다.
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항체의 생물학적 특성에서 실질적인 변형은 (a) 치환의 구역에서, 예를 들어, 시트 또는 나선 형태로서, 폴리펩타이드 골격의 구조, (b) 상기 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크 유지에 관한 그것의 효과에서 상당히 상이한 치환 선택에 의해 달성된다. 자연 발생 잔기는 통상 측-쇄 특성에 기반하여 그룹으로 분할된다:
(1) 소수성: 노르류신, met, ala, val, leu, ile;
(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;
(3) 산성: asp, glu;
(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 주는 잔기: gly, pro; 및
(6) 방향족: trp, tyr, phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원의 또 다른 부류로 교환을 수반한다.
항체의 적절한 형태 유지에 관여되지 않는 임의의 시스테인 잔기는 또한, 분자의 산화적 안정성을 개선하기 위해 그리고 비정상 가교결합을 예방하기 위해, 일반적으로 세린으로, 치환될 수 있다. 반대로, 시스테인 결합(들)은 (특히 항체가 항체 단편, 예컨대 Fv 단편인 경우) 그것의 안정성을 개선하기 위해 항체에 첨가될 수 있다.
치환형 변이체의 특히 바람직한 유형은 모 항체 (예를 들면 인간화된 또는 인간 항-CD33 항체)의 1종 이상의 초가변 영역 잔기 치환을 포함한다. 일반적으로, 추가 발달을 위하여 선택된 수득한 변이체(들)은 이들이 생성되는 모 항체에 비하여 개선된 생물학적 특성을 가질 것이다. 상기 치환형 변이체 생성을 위한 편리한 방식은 파아지 디스플레이를 이용하는 친화도 성숙을 포함한다. 간단히, 몇 개의 초가변 영역 부위 (예를 들면, 6-7 부위)는 돌연변이되어 각각의 부위에서 모든 가능한 아미노 치환을 생성한다. 그렇게 생성된 항체 변이체는 각각의 입자 내에 포장된 M13의 유전자 III 생성물에 융합으로서 섬유상 파아지 입자로부터 1가 방식으로 표시된다. 파아지-표시된 변이체는 그 다음 본 명세서에서 개시된 바와 같이 그것의 생물학적 활성 (예를 들면, 결합 친화도)로 선별된다. 변형을 위한 후보자 초가변 영역 부위를 확인하기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이생성은 항원 결합에 상당히 기여하는 초가변 영역 잔기를 확인하기 위해 수행될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 항체와 항원 (예를 들면, 본 개시내용의 CD33 단백질) 사이 접점을 확인하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하는 것이 유익할 수 있다. 상기 접촉 잔기 및 인접 잔기는 본 명세서에서 정교화된 기술에 있어서 치환용 후보자이다. 일단 상기 변이체가 생성되면, 변이체의 패널은 본 명세서에서 기재된 바와 같이 선별에 적용되고 1종 이상의 관련 검정에서 우월한 특성을 가진 항체는 추가 개발을 위하여 선택될 수 있다.
항체의 아미노산 변이체의 또 다른 유형은 항체의 최초 글리코실화 패턴을 변경한다. 변경은 항체에서 발견된 1종 이상의 탄수화물 모이어티 결실, 및/또는 항체에서 존재하지 않는 1종 이상의 글리코실화 부위 부가를 의미한다.
항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된다. N-연결된은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 탄수화물 모이어티의 부착을 지칭한다. X가 프롤린을 제외한 임의의 아미노산인, 트리펩타이드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌은 아스파라긴 측쇄에 탄수화물 모이어티의 효소 부착을 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩타이드에서 이들 트리펩타이드 서열 중 어느 하나의 존재는 잠재적인 글리코실화 부위를 창출한다. 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시리신이 또한 사용될 수 있어도, O-연결된 글리코실화는 하이드록시아미노산에 당류 N-아세일갈락토사민, 갈락토오스, 또는 자일로스 중 하나, 가장 통상적으로 세린 또는 트레오닌의 부착을 지칭한다.
항체에 글리코실화 부위의 부가는 (N-연결된 글리코실화 부위를 위한) 1종 이상의 상기-기재된 트리펩타이드 서열을 함유하도록 아미노산 서열 변경에 의해 편리하게 달성된다. 변경은 또한 (O-연결된 글리코실화 부위를 위한) 최초 항체의 서열에 1종 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가, 또는 치환에 의해 실시될 수 있다.
항-IgE 항체의 아미노산 서열 변이체를 인코딩하는 핵산 분자는 당해 기술에 공지된 다양한 방법에 의해 제조된다. 이들 방법은, 비제한적으로, (자연 발생 아미노산 서열 변이체의 경우에서) 천연 공급원으로부터 단리 또는 항체 (예를 들면, 본 개시내용의 항-CD33 항체) 또는 항체 단편의 더욱 초기에 제조된 변이체 또는 비-변이체 버전의 올리고뉴클레오타이드-매개된 (또는 부위-관련된) 돌연변이생성, PCR 돌연변이생성, 및 카세트 돌연변이생성에 의한 제조를 포함한다.
(11) 항체 콘주게이트
본 개시내용의 항-CD33 항체, 또는 이들의 항체 단편은 검출가능한 마커, 독소, 또는 치료 제제에 접합될 수 있다. 항체에 분자, 예컨대 검출가능한 마커, 독소, 또는 치료 제제 접합을 위하여 당해 기술에 공지된 임의의 적합한 방법은 사용될 수 있다.
예를 들어, 약물 콘주게이션은 특정 종양 마커 (예를 들면, 이상적으로, 종양 세포 안밖에서 단지 발견되는 단백질)을 특이적으로 표적하는 항체에 생물학적 활성 세포독성 (항암) 적재물 또는 약물의 커플링을 포함한다. 항체는 바디에서 아래로 이들 단백질을 추적하고 암 세포의 표면에 자체 부착한다. 항체와 상기 표적 단백질 (항원) 사이 생화학적 반응은 종양 세포에서 신호를 유발하고, 그 다음 세포독소와 함께 항체를 흡수 또는 내재화한다. ADC가 내재화된 이후, 세포독성 약물은 방출되고 암을 사멸한다. 상기 표적화 때문에, 이상적으로 약물은 더 낮은 부작용을 갖고 다른 화학요법 제제보다 더 넓은 적정 약물 농도를 제공한다. 항체를 접합하는 기술은 개시된다 당해 기술에 공지되어 있다 (참조, 예를 들면, Jane de Lartigue, OncLive July 5, 2012; ADC Review on antibody-drug conjugates; 및 Ducry 등, (2010). Bioconjugate Chemistry 21 (1): 5-13).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 리신, 리신 A-쇄, 독소루비신, 다우노루비신, 메이탄시노이드, 탁솔, 에티듐 브로마이드, 미토마이신, 에토포시드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 디하이드록시 안트라신 디온, 악티노마이신, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소 (PE) A, PE40, 아브린, 아브린 A 쇄, 모덱신 A 쇄, 알파-사르신, 젤로닌, 마이토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 큐리신, 크로틴, 칼리키아마이신, 사포나리아 오피시날리스 억제제, 글루코코르티코이드, 아우리스타틴, 아우로마이신, 이트륨, 비스무트, 콤브레스타틴, 듀오카르마이신, 돌라스타틴, cc1065, 및 시스플라틴으로부터 선택된 독소에 접합될 수 있다.
(12) 다른 항체 변형
본 개시내용의 항-CD33 항체, 또는 이들의 항체 단편은 당해 기술에 공지되어 있고 쉽게 이용가능한 추가의 비-단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 바람직하게는, 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 폴리머이다. 수용성 폴리머의 비-제한 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 코폴리머, 카복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 코폴리머, 폴리아미노산 (호모폴리머 또는 랜덤 코폴리머), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 호모폴리머, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 코-폴리머, 폴리옥시에틸레이트화된 폴리올 (예를 들면, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 물에서 그것의 안정성 때문에 제조에서 이점을 가질 수 있다. 폴리머는 임의의 분자량일 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 폴리머의 수는 다양할 수 있고, 1 초과 폴리머가 부착되면, 이들은 동일한 또는 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용된 폴리머의 수 및/또는 유형은, 항체 유도체가 한정된 조건하에 요법, 등에서 사용될 것이든 아니든, 비제한적으로, 개선되는 항체의 특정한 특성 또는 기능을 포함하는 고려사항들에 기반하여 결정될 수 있다. 상기 기술 및 다른 적합한 제형은 하기에 개시된다: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Alfonso Gennaro, Ed., Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000).
결합 검정 및 다른 검정
본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들면, 공지된 방법 예컨대 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 웨스턴 블랏, 등에 의해 항원 결합 활성에 대하여 시험될 수 있다.
일부 구현예에서, 경쟁 검정은 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거된, 또는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 임의의 항체와 경쟁하는 항체를 확인하는데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 그와 같은 경쟁 항체는 표 1, 2, 3A, 3B, 6A, 및 6B에서 열거된, 또는 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2로부터 선택된 임의의 항체에 의해 결합되는 동일한 에피토프 (예를 들면, 선형 또는 형태적 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프 맵핑을 위한 상세한 예시적인 방법은 하기에서 제공된다: Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
예시적인 경쟁 검정에서, 세포 표면상에서 고정된 CD33 또는 CD33을 발현하는 세포는 CD33에 결합하는 제1 표지된 항체 (예를 들면, 인간 또는 비-인간 영장류) 및 CD33에 결합을 위하여 제1 항체와 경쟁하는 그것의 능력에 대하여 시험되고 있는 제2 비표지된 항체를 포함하는 용액에서 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액에서 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 CD33 또는 CD33을 발현하는 세포는 제1 표지된 항체를 포함하지만 제2 비표지된 항체를 포함하지 않는 용액에서 인큐베이션된다. CD33에 제1 항체의 결합이 허용된 조건하에 인큐베이션 이후, 과잉의 미결합된 항체는 제거되고, 고정된 CD33 또는 CD33을 발현하는 세포와 관련된 표지의 양은 측정된다. 고정된 CD33 또는 CD33을 발현하는 세포와 관련된 표지의 양이 대조군 샘플에 비하여 시험 샘플에서 실질적으로 감소되면, 그것은 제2 항체가 CD33에 결합을 위하여 제1 항체와 경쟁하고 있는 것을 나타낸다. 참고, Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
핵산, 벡터, 및 숙주 세포
본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들면, 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 이용하여 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 임의의 항-CD33 항체를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 단리된 핵산은 제공된다. 상기 핵산은 항-CD33 항체 (예를 들면, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)의 VH를 함유하는 아미노산 서열 및/또는 VL을 함유하는 아미노산 서열을 인코딩할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 핵산을 함유하는 1종 이상의 벡터 (예를 들면, 발현 벡터)는 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 핵산을 함유하는 숙주 세포는 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 하기를 함유한다 (예를 들면, 하기로 형질도입되고 있다): (1) 항체의 VL을 함유하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 함유하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 함유하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 함유하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 함유하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 함유하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 함유하는 제2 벡터. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 진핵, 예를 들면, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 림프양 세포 (예를 들면, Y0, NS0, Sp20 세포)이다.
본 개시내용의 항-CD33 항체의 제조 방법은 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 항체의 발현에 적합한 조건하에, 항-CD33 항체를 인코딩하는 핵산을 함유하는 본 개시내용의 숙주 세포 배양을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 후속적으로 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 회수된다.
본 개시내용의 항-CD33 항체의 재조합 생산을 위하여, 항-CD33 항체를 인코딩하는 핵산은 단리되고 숙주 세포에서 추가 클론화 및/또는 발현을 위하여 1종 이상의 벡터 속에 삽입된다. 상기 핵산은 쉽게 단리될 수 있고 종래의 절차를 이용하여 (예를 들면, 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브 이용에 의해) 서열분석될 수 있다.
본 개시내용의 임의의 항-CD33 항체, 또는 본 명세서에서 기재된 (항체를 포함하는) 이들의 폴리펩타이드 단편을 인코딩하는 핵산 서열을 함유하는 적합한 벡터는, 제한 없이, 클론화 벡터 및 발현 벡터를 포함한다. 적합한 클론화 벡터는 표준 기술에 따라 작제될 수 있거나, 당해 기술에서 이용가능한 다수의 클론화 벡터로부터 선택될 수 있다. 선택된 클론화 벡터가 사용되도록 의도된 숙주 세포에 따라 다양할 수 있는 반면에, 유용한 클론화 벡터는 일반적으로 자가-복제하는 능력을 갖고, 특정한 제한 엔도뉴클레아제를 위한 단일 표적을 보유할 수 있고, 및/또는 벡터를 함유하는 클론 선택에서 사용될 수 있는 마커용 유전자를 운반할 수 있다. 적합한 예는 하기를 포함한다: 플라스미드 및 박테리아 바이러스, 예를 들면, pUC18, pUC19, 블루스크립트(Bluescript) (예를 들면, pBS SK+) 및 그것의 유도체, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파아지 DNAs, 및 셔틀 벡터 예컨대 pSA3 및 pAT28. 이들 및 많은 다른 클론화 벡터는 상업적 판매인 예컨대 BioRad, Strategene, 및 Invitrogen으로부터 이용가능하다.
발현 벡터는 일반적으로 본 개시내용의 핵산을 함유하는 복제가능 폴리뉴클레오타이드 작제물이다. 발현 벡터는 에피솜으로서 또는 염색체 DNA의 일체부로서 숙주 세포에서 복제가능할 수 있다. 적합한 발현 벡터는 비제한적으로 플라스미드, 아데노바이러스, 아데노-관련된 바이러스, 레트로바이러스를 포함하는, 바이러스성 벡터, 코스미드, 및 PCT 공개 번호 WO 87/04462에 개시된 발현 벡터(들)을 포함한다. 벡터 성분은, 비제한적으로, 1종 이상의 하기를 일반적으로 포함할 수 있다: 신호 서열; 복제의 기원; 1종 이상의 마커 유전자; 적합한 전사 제어 요소 (예컨대 프로모터, 인핸서 및 종결자). 발현 (즉, 번역)을 위하여, 1종 이상의 번역 제어 요소, 예컨대 리보솜 결합 부위, 번역 개시 부위, 및 정지 코돈은 또한 일반적으로 요구된다.
당해 핵산을 함유하는 벡터는, 전기천공, 염화칼슘, 염화루비듐, 인산칼슘, DEAE-덱스트란, 또는 다른 서브스턴스를 사용하는 형질감염; 미세투사물 폭격; 리포펙션; 및 감염 (예를 들면, 벡터가 감염성 제제 예컨대 백시니아 바이러스인 경우)을 포함하는, 임의의 수의 적절한 수단에 의해 숙주 세포 속에 도입될 수 있다. 벡터 또는 폴리뉴클레오타이드 도입의 선택은 종종 숙주 세포의 특징에 의존할 것이다. 일부 구현예에서, 벡터는 본 개시내용의 항-CD33 항체를 인코딩하는 1종 이상의 아미노산 서열을 함유하는 핵산을 함유한다.
항체-인코딩 벡터의 클론화 또는 발현을 위한 적합한 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 특히 글리코실화 및 Fc 효과기 기능이 필요없는 경우, 박테리아에서 생산될 수 있다. 박테리아내 항체 단편 및 폴리펩타이드의 발현을 위하여 (예를 들면, 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199, 및 5,840,523; 및 Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254, E. 콜리에서 항체 단편의 발현 기재.). 발현 이후, 항체는 가용성 분획으로 박테리아 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물에 더하여, 진핵 미생물, 예컨대 사상균 또는 효모는 또한, 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 패턴으로 항체의 생산을 초래하는, 글리코실화 경로가 "인간화되"고 있는 진균 및 효모 균주를 포함하는, 항체-인코딩 벡터용 적합한 클론화 또는 발현 숙주이다 (예를 들면, Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004); 및 Li 등, Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)).
글리코실화된 항체의 발현용 적합한 숙주 세포는 또한 다중세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유래될 수 있다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 특히 스포도프테라 프루지페르다 세포의 형질감염을 위하여, 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 수많은 바큘로바이러스 균주는 확인되고 있다. 식물 세포 배양액은 또한 숙주로서 이용될 수 있다 (예를 들면, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429, 형질전환 식물에서 항체 생산용 PLANTIBODIES™ 기술 기재.).
척추동물 세포는 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액에서 성장하도록 적응되는 포유동물 세포주는 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 하기이다: SV40 (COS-7)에 의해 전환된 원숭이 신장 CV1 주; 인간 배아 신장 주 (예를 들면, Graham 등, J. Gen Virol. 36:59 (1977)에 기재된 바와 같이 293 또는 293 세포); 어린 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들면, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)에 기재된 바와 같이 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 갯과 신장 세포 (MDCK; 버팔로 랫트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유선 종양 (MMT 060562); 예를 들면, Mather 등, Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)에 기재된 바와 같이, TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는, DHFR- CHO 세포 (Urlaub 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))을 포함하는, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포; 및 골수종 세포주 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0를 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위하여, 참고, 예를 들면, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).
CD33 활성
PI3K 활성화
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 PI3K 활성화를 유도할 수 있다.
PI3Ks는 포스파티딜이노시톨 (PtdIns)의 이노시콜 고리의 3-위치 하이드록실 그룹을 인산화할 수 있는 관련된 세포내 신호 변환체 키나제의 계열이다. PI3K 계열은 1차 구조, 조절, 및 시험관내 지질 기질 특이성을 기준으로 3종의 상이한 부류 (부류 I, 부류 II, 및 부류 III)으로 분할될 수 있다.
활성화된 PI3K는 PtdIns3P, PtdIns(3,4)P2, PtdIns(3,5)P2, 및 PtdIns(3,4,5)P3을 비제한적으로 포함하는 다양한 3-인산화된 포스포이노시티드를 생성한다. 이들 3-인산화된 포스포이노시티드는, 신호전달 단백질이 다양한 세포 막에 동원된 기전에서 기능한다. 이들 신호전달 단백질은 PX 도메인, 플렉스트린 상동성 도메인 (PH 도메인), 및 FYVE 도메인을 비제한적으로 포함하는 포스포이노시티드-결합 도메인을 함유한다. PI3K 활성화를 결정하는 당해 분야에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 감소된 수준의 PI3K 활성과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
사이토카인의 조절된 발현
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포 표면 상에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 뇌에서 전-염증 매개체를 조절할 수 있다 (예를 들면, 증가 또는 감소시킬 수 있다). 특정 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 사이토카인 (예를 들면, 전염증 매개체)의 발현을 조절하고/거나 항-염증성 매개체의 발현을 조절한다.
염증은 유해한 자극, 예컨대 병원체, 손상된 세포, 및 자극제에 대한 혈관 조직의 복합 생물학적 반응의 일부이다. 급성 염증의 조전적 징후는 통증, 열, 적열상태, 및 팽윤이다. 염증은 손상의 부위를 제거하거나 면역계의 세포를 동원하고 활성화하여 감염을 깨끗하게 하여 유기체를 보호하는 면역 반응이다. 염증 반응은 유기체의 손상의 야기를 피하기 위해 단단히 조절되고 그것의 지속기간 및 중증도에서 제한된다. 염증은 급성 또는 만성으로서 분류될 수 있다. 급성 염증은 유해한 자극을 초기에 인식하고 혈액으로부터 손상된 조직으로 백혈구를 동원하는 타고난 면역 반응 에 의해 유도된다. 사이토카인 및 케모카인 방출을 포함하는 생화학적 사건의 케스케이드는, 국부 혈관계, 면역계, 및 손상된 조직 내의 다양한 세포를 수반하는 염증 반응을 전파한다. 만성 염증은 장기적이고 지속적인데, 이것은 염증 반응에 참여한 면역 세포의 유형에서 진행성 이동으로 이어진다. 만성 염증은 염증 과정의 결과로서 조직의 진행성 파괴 및 섬유증을 특징으로 한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항-염증성 매개체는 염증 반응을 감소, 억제 또는 불활성화하는 기전과 (예를 들면, 항-염증성 신호전달 경로에 의해) 직접적으로 또는 간접적으로 관련된 단백질이다. 항-염증성 매개체를 확인 및 특성화하는 당해 분야에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 항-염증성 매개체의 예는, 비제한적으로, 사이토카인, 예컨대 IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, IFN-알파, TGF-베타, IL-1ra, G-CSF, 및 TNF-알파 또는 IL-6 에 대한 가용성 수용체를 포함한다. 전-염증 매개체의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 사이토카인, 예컨대 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, 및 MIP-1-베타.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 사이토카인, 예컨대 IL-1β, IL-8, 및 TNF-α의 발현을 조절할 수 있다 (예를 들면, 증가 또는 감소시킬 수 있다). 특정 구현예에서, 사이토카인의 조절된 발현은 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, 천연 살해 세포, 및/또는 미세신경교 세포에서 일어난다. 조절된 발현은, 비제한적으로, 유전자 발현의 증가, 전사 발현의 증가, 또는 단백질 발현의 증가를 포함할 수 있다. 유전자, 전사체 (예를 들면, mRNA), 및/또는 단백질 발현을 결정하는 당해 분야에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 예를 들면, 노던 블랏 분석은 사이토카인 유전자 발현 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, RT-PCR는 사이토카인 전사의 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, 웨스턴 블랏 분석은 사이토카인 단백질 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 사이토카인은, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체로 치료되지 않은 대상체의 1종 이상의 세포에서 그것의 발현이 CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서 발현된 동일한 사이토카인의 발현과 비교하여 조절되면 조절된 발현을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서의 사이토카인 발현과 비교하여 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 대상체의 1종 이상의 세포에서 사이토카인 발현을 조절할 수 있다. 다른 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서의 사이토카인 발현과 비교하여 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 대상체의 1종 이상의 세포에서 사이토카인 발현을 조절한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 1종 이상의 전-염증 매개체의 비정상 수준과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추거나 그것을 치료하는데 유용하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
전-염증 매개체의 조절된 발현
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 전-염증 매개체의 상기 발현을 조절할 수 있다 (예를 들면, 증가 또는 감소시킬 수 있다).
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 전-염증 매개체는 염증 반응을 유도, 활성화, 촉진 또는 달리 증가시키는 기전과 (예를 들면, 전-염증 신호전달 경로에 의해) 직접적으로 또는 간접적으로 관련된 단백질이다. 전-염증 매개체를 확인하고 특성화하는 당해 분야에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다.
전-염증 매개체의 예는, 비제한적으로, 사이토카인, 예컨대 1형 및 II 인터페론, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-20 패밀리 일원, IL-33, LIF, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, 및 CRP을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 전-염증 매개체, 예컨대 1형 및 II 인터페론, IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, 및 MIP-1-베타의 기능성 발현 및/또는 분비를 조절할 수 있다. 특정 구현예에서, 전-염증 매개체의 조절된 발현은 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, 및/또는 미세신경교 세포에서 일어난다. 조절된 발현은, 비제한적으로, 조절된 유전자 발현, 조절된 전사 발현, 또는 조절된 단백질 발현을 포함할 수 있다. 유전자, 전사체 (예를 들면, mRNA), 및/또는 단백질 발현을 결정하는, 당해 분야에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 예를 들면, 노던 블랏 분석은 전-염증 매개체 유전자 발현 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, RT-PCR는의 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고 전-염증 매개체 전사, 및 웨스턴 블랏 분석은 전-염증 매개체 단백질 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 전-염증 매개체는 염증성 사이토카인을 포함한다. 따라서, 특정 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 1종 이상의 염증성 사이토카인의 분비를 조절할 수 있다. 본 개시내용의 항-CD33 항체에 의해 조절될 수 있는 염증성 사이토카인의 예는, 비제한적으로, 예컨대 1형 및 II 인터페론, IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, 및 MIP-1-베타을 포함한다.
특정 구현예에서, 전-염증 매개체는 염증성 수용체를 포함한다. 따라서, 특정 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 1종 이상의 염증성 수용체의 발현을 조절할 수 있다. 발현이 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 의해 조절될 수 있는 염증성 수용체의 예는, 비제한적으로, CD86, CD80, 및 CD83을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 전-염증 매개체는, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 효능제 항-CD33 항체로 치료된 대상체의1종 이상의 세포에서 그것의 발현이 효능제 항-CD33 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서 발현된 동일한 전-염증 매개체의 발현과 비교하여 조절되면 (예를 들면, 증가되거나 감소되면) 조절된 발현을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 항-CD33 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서의 전-염증 매개체 발현과 비교하여 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 대상체의 1종 이상의 세포에서 전-염증 매개체 발현을 조절할 수 있다. 다른 구현예에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서의 전-염증 매개체 발현과 비교하여 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 대상체의 1종 이상의 세포에서 전-염증 매개체 발현을 조절할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 1종 이상의 전-염증 매개체의 비정상 수준과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추거나 그것을 치료하는데 유용할 수 있고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
ERK 인산화
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 세포외 신호-조절된 키나제 (ERK) 인산화를 유도할 수 있다.
세포외-신호-조절된 키나제 (ERK)는 예를 들면, 분화된 세포에서 감수분열, 유사분열, 및 유사분열후 기능의 조절과 관련된 널리 발현된 단백질 키나제 세포내 신호전달 키나제이다. 다양한 자극, 예컨대 성장 인자, 사이토카인, 바이러스 감염, 헤테로트리머 G 단백질-커플링된 수용체의 리간드, 변형제, 및 발암원은 ERK 경로를 형성화한다. ERK의 인산화는 그것의 키나제 활성의 활성화로 이어진다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 감소된 수준의 ERK 인산화와 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
Syk 인산화
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 비장 티로신 키나제 (Syk) 인산화를 유도할 수 있다.
비장 티로신 키나제 (Syk)는 몇 개의 기질을 인산화하여 CD33의 다운스트림에서 기능하여, 신호전달 복합체의 형성을 촉진하면 세포 활성화 및 염증 과정으로 이어지는 세포내 신호전달 분자이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 감소된 수준의 Syk 인산화와 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
CD33 인산화
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 Src 계열 티로신 키나제 예컨대 Src, Syk, Fyn, Fgr, Lck, Hck, Blk, Lyn, 및 Frk에 의한 Tyr-340 및 Tyr-358의 CD33 인산화를 일시적으로 유도할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 감소된 수준의 CD33 인산화와 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
ITAM 모티프 함유 수용체의 인산화
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 ITAM 모티프-함유 수용체, 예컨대 TREM1, TREM2, FcgR, DAP10, 및 DAP12의 인산화를 유도할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, ITAM 모티프-함유 수용체의 인산화의 감소된 수준과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 또는 질환은 비제한저으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
C-C 케모카인 수용체 7의 조절된 발현
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)의 발현을 조절할 수 있다. 조절된 (예를 들면, 증가된 또는 감소된) 발현은, 비제한적으로, 유전자 발현의 조절, 전사 발현의 조절, 또는 단백질 발현의 조절을 포함할 수 있다. 유전자, 전사체 (예를 들면, mRNA), 및/또는 단백질 발현을 결정하는, 당해 분야에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 예를 들면, 노던 블랏 분석은 항-염증성 매개체 유전자 발현 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, RT-PCR는 항-염증성 매개체 전사의 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, 웨스턴 블랏 분석은 항-염증성 매개체 단백질 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)는 G 단백질-커플링된 수용체 계열의 구성원이다. CCR7는 다양한 림프양 조직에서 발현되고 B 세포 및 T 세포를 활성화할 수 있다. 일부 구현예에서, CCR7은 기억 T 세포의 2차 림프양 기관, 예컨대 림프절로의 이동을 조절할 수 있다. 다른 구현예에서, CCR7은 수지상 세포 성숙을 자극할 수 있다. CCR7는 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 CCL19/ELC 및 CCL21에 결합할 수 있는 수용체 단백질이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, CCR7은, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체로 치료되지 않은 대상체의 1종 이상의 세포에서의 그것의 발현이 CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서 발현된 CCR7의 발현과 비교하여 조절되면 (예를 들면, 증가되거나 감소되면) 조절된 발현을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서의 CCR7 발현과 비교하여 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 대상체의 1종 이상의 세포에서 CCR7 발현을 조절할 수 있다. 다른 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서의 CCR7 발현과 비교하여 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 대상체의 1종 이상의 세포에서 CCR7 발현을 조절한다.
일부 구현예에서, CCR7의 조절된 발현은 대식세포, 수지상 세포, 및/또는 미세신경교 세포에서 일어난다. CCR7의 조절된 발현은 케모카인 CCL19 및 CCL21를 발현시키는 세포를 향한 미세신경교 세포 화학주성을 유도할 수 있다. 따라서, 특정 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CCL19 및 CCL21 발현 세포를 향한 미세신경교 세포 화학주성을 유도할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CCR7의 비정상 수준과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추거나 그것을 치료하는데 유용하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
면역-관련된 단백질의 조절된 발현
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206의 발현을 조절할 수 있다. 조절된 (예를 들면, 증가된 또는 감소된) 발현은 비제한적으로, 유전자 발현의 조절, 전사 발현의 조절, 또는 단백질 발현의 조절을 포함할 수 있다. 유전자, 전사체 (예를 들면, mRNA), 및/또는 단백질 발현을 결정하기 위한 당해 분야에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 예를 들면, 노던 블랏 분석은 항-염증성 매개체 유전자 발현 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, RT-PCR는 항-염증성 매개체 전사의 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, 그리고 웨스턴 블랏 분석은 항-염증성 매개체 단백질 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206는, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체로 치료되지 않은 대상체의 1종 이상의 세포에서의 그것의 발현이 CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서 발현된 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206의 발현과 비교하여 조절되면 (예를 들면, 증가되거나 감소되면) 조절된 발현을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서의 PD-L1, PD-L2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206 발현과 비교하여 대상체의 1종 이상의 세포에서 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206 발현을 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 조절할 수 있다. 다른 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1개 이상의 세포에서의 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206 발현 과 비교하여, 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 대상체의 1종 이상의 세포에서의 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206 발현을 조절한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206의 비정상 수준과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추거나 그것을 치료하는데 유용하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
항원-특이적인 T 세포 증식를 유도하기 위한 골수-유래된 수지상 세포의 능력의 향상 또는 정규화
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 항원-특이적인 T 세포 증식를 유도하기 위한 골수-유래된 수지상 세포의 능력을 향상시키고/거나 정규화할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, 상기 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1종 이상의 골수-유래된 수지상 세포에서의 항원-특이적인 T 세포 증식를 유도하기 위한 골수-유래된 수지상 세포의 능력과 비교하여 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 대상체의 1종 이상의 골수-유래된 수지상 세포에서 항원-특이적인 T 세포 증식를 유도하기 위한 골수-유래된 수지상 세포의 능력을 향상시키고/거나 정규화할 수 있다. 다른 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 길항제 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 1종 이상의 골수-유래된 수지상 세포에서의 항원-특이적인 T 세포 증식를 유도하기 위한 골수-유래된 수지상 세포의 능력 과 비교하여 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 대상체의 1종 이상의 골수-유래된 수지상 세포에서 항원-특이적인 T 세포 증식을 유도하기 위한 골수-유래된 수지상 세포의 능력을 향상시키고/거나 정규화할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 감소된 또는 이상조절된 항원-특이적인 T 세포 증식를 유도하기 위한 골수-유래된 수지상 세포의 능력과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
파골세포 생산
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후 파골세포 생산을 유도하고/거나 파골세포생성의 속도를 증가시킬 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 파골세포는 그것의 무기화된 매트릭스를 제거하고 유기 골 (예를 들면, 골 흡수)를 해체하여 골 조직을 제거할 수 있는 골 세포의 유형이다. 파골세포는 골수 계통의 세포의 융합에 의해 형성될 수 있다. 일부 구현예에서, 파골세포는 타르트레이트 저항성 산 포스파타제 (TRAP) 및 카텝신 K의 높은 발현을 특징으로 할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 파골세포생성의 속도는, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 길항제 항-CD33 항체로 치료된 대상체에서 파골세포생성의 속도가, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 파골세포생성의 속도보다 더 크면 증가될 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 파골세포생성의 속도와 비교하여 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 대상체에서 파골세포생성의 속도를 증가시킬 수 있다. 다른 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 파골세포생성의 속도와 비교하여 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 대상체에서 파골세포생성의 속도를 증가시킬 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 파골세포생성의 속도는, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 효능제 항-CD33 항체로 치료된 대상체에서 파골세포생성의 속도가, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 파골세포생성의 속도보다 더 작으면 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 효능제 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 파골세포생성의 속도와 비교하여 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 대상체에서 파골세포생성의 속도를 감소시킬 수 있다. 다른 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 효능제 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 파골세포생성의 속도와 비교하여 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 대상체에서 파골세포생성의 속도를 감소시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 골 밀도의 병리적 감소와 관련된 골다공증 및 골 밀도의 병리적 증가와 관련된 골다공증 질환을 포함하는, 비정상 골 형성 및 유지와 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하다.
CD33-발현 세포의 증식 및 생존
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는 수지상 세포, 대식세포, 단핵세포, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 및 세포상에서 발현된 CD33 단백질에 결합 이후 미세아교 세포의 증식, 생존, 및/또는 기능을 증가시킬 수 있다.
미세아교 세포는 뇌 및 척수의 상주하는 대식세포인 신경교 세포의 유형이고, 따라서 중추신경계 (CNS)에서 활성 면역 방어의 제1 및 주요 형태로서 작용한다. 미세아교 세포는 뇌 내에 총 신경교 세포 집단의 20%를 구성한다. 미세아교 세포는 플라크, 손상된 뉴런 및 감염성 제제로 CNS를 일정하게 소거하는 중이다. 뇌 및 척수는 이들이 혈액-뇌 장벽으로서 공지된 일련의 내피 세포에 의해 바디의 나머지로부터 분리된다는 점에서 "면역 특권화된" 기관으로 간주되고, 이는 대부분의 병원체가 취약한 신경 조직에 도달하는 것을 예방한다. 감염성 제제가 뇌에 또는 혈액-뇌 장벽을 거쳐 직접적으로 도입되는 경우에서, 미세아교 세포는 염증을 제한하기 위해 그리고 감염성 제제를 이들이 감수성 신경 조직을 손상시키기 전에 파괴하기 위해 빠르게 반응해야 한다. 바디의 나머지로부터 항체의 이용불가능성 때문에 (소수의 항체는 혈액 뇌 장벽을 교차하기에 충분히 작다), 미세아교세포는 이물질을 인식할 수 있어야 하고, 이들을 삼킬 수 있어야 하고, 항원-제시 세포 활성화 T 세포로서 작용할 수 있어야 한다. 상기 공정이 잠재적으로 치명적 손상을 예방하기 위해 빠르게 실시되어야 하기 때문에, 미세아교 세포는 CNS에서 작은 병리적 변화에조차 극도로 감수성이다. 이들은 세포외 칼륨내 작은 변화에조차 반응하는 특유의 칼륨 채널을 가짐으로써 부분적으로 상기 감수성을 달성한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 본 개시내용의 대식세포는을 포함한다, 비제한적으로, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및 M2 대식세포를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 본 개시내용의 미세신경교 세포는, 비제한적으로, M1 미세신경교 세포, 활성화된 M1 미세신경교 세포, 및 M2 미세신경교 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 수지상 세포, 단핵구, 및/또는 대식세포 상의 CD80, CD83 및/또는 CD86의 발현을 증가시킬 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, T 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 증식의 속도, 생존, 및/또는 기능은, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체로 치료된 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세아교의 증식의 속도, 생존, 및/또는 기능이 CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, 중성구, 및/또는 미세아교의 증식의 속도, 생존, 및/또는 기능보다 더 크면 증가된 발현을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, 및/또는 미세아교의 증식의 속도, 생존, 및/또는 기능과 비교하여, 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, 및/또는 미세아교의 증식의 속도, 생존, 및/또는 기능을 증가시킬 수 있다. 다른 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, 및/또는 미세아교의 증식의 속도, 생존, 및/또는 기능과 비교하여, 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, 및/또는 미세아교의 증식의 속도, 생존, 및/또는 기능을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 수지상 세포, 중성구, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, 및/또는 미세아교의 증식, 생존, 증가된 세포자멸사 및/또는 기능의 감소와 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
청소능 및 식균작용
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포자멸적 뉴런, 신경계의 신경 조직 잔해, 기능이상 시냅스, 비-신경계의 신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 질환 유발 단백질, 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 핵산, 또는 종양 세포 중 하나 이상의 세포에서 발현된 CD33 단백질에 결합한 후에 청소능 및/또는 식균작용을 유도할 수 있다. 특정 구현예에서, 질환 유발 단백질은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드. 특정 구현예에서, 질환 유발 핵산은, 비제한적으로, 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포자멸적 뉴런 청소능, 신경 조직 잔해 청소능, 비- 신경 조직 잔해 청소능, 박테리아 또는 다른 이물질 청소능, 질환 유발 단백질 청소능, 질환 유발 펩타이드 청소능, 질환 유발 핵산 청소능, 및 종양 세포 청소능을 비제한적으로 포함하는 1종 이상의 유형의 청소능을 유도할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 질환 유발 단백질, 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 핵산, 및/또는 종양 세포 중 하나 이상의 식균 작용을 유도할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 대식세포 콜로니-자극 인자 (M-CSF)의 감소된 수준의 조건 하에서 중성구, 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, 및/또는 미세아교로 식균작용을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 세포자멸적 뉴런, 신경계의 신경 조직 잔해, 기능이상 시냅스, 비-신경계의 신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 질환 유발 단백질과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
CD33-의존적 유전자 발현
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, CD33-의존적 유전자의 활성 및/또는 발현을 감소시킬 수 있고, 면역계를 활성화하는 신호전달 캐스케이드와 관련된 유전자 발현 예컨대 ITAM 함유 수용체, 패턴 인식 수용체, 톨(Toll)-유사 수용체, 손상-관련된 분자 패턴 (DAMP) 수용체 예컨대 전사 인자의 활성화된 T 세포 (NFAT) 계열의 핵 인자의1종 이상의 전사 인자와 관련된 유전자 발현을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, 높은 수준의 CD33-의존적 유전자 과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 비제한적으로 하기를 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
면역 세포의 CD33-의존적 활성화
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, 세포독성 T 세포 헬퍼 T 세포 또는 둘 모두의 활성을 증가시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, 세포독성 T 세포 헬퍼 T 세포 또는 둘 모두의 감소된 활성 과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 고형 종양 예컨대 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 및 갑상선암을 비제한적으로 포함하는 종양을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경교 세포의 증식, 생존, 활성, 및/또는 수의 증가를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 존재에서 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경교 세포의 증식, 생존, 활성, 및/또는 수의 증가를 유도할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경교 세포의 증식, 생존, 활성의 속도, 및/또는 수는, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체로 치료된 대상체에서 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경교 세포의 증식, 생존, 활성의 속도, 및/또는 수가 CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경교 세포의 증식, 생존, 활성의 속도, 및/또는 수보다 더 크면 증가율을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경교 세포의 증식, 생존, 활성, 및/또는 수의 수준과 비교하여, 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 대상체에서 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경교 세포의 증식, 생존, 활성, 및/또는 수를 증가시킬 수 있다. 다른 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경교 세포의 증식, 생존, 활성, 및/또는 수의 수준과 비교하여, 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 대상체에서 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 중성구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경교 세포의 증식, 생존, 활성, 및/또는 수를 증가시킬 수 있다.
중성구의 CD33-의존적 활성화
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 효능제 항-CD33 항체는, 중성구, 또는 둘 모두의 활성을 증가시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 효능제 항-CD33 항체는, 천연 살해 세포, 중성구 또는 둘 모두의 활성의 감소된 활성 과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 고형 종양 예컨대 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 및 갑상선암을 비제한적으로 포함하는 종양을 포함한다.
종양-관련된 면역 세포의 CD33-의존적 억제
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 효능제 항-CD33 항체는, 활성을 감소시키고, 증식을 감소시키고, 생존을 감소시키고, 기능성을 감소시키고, 종양 또는 림프양 기관 (예를 들면, 비장 및 림프절)에의 침윤을 감소시키고, CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키고, 종양 성장률을 감소시키고, 종양 부피를 감시소키고, 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 감소 또는 억제하고/거나, T-조절 세포 또는 억제 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포, 또는 종양-관련된 대식세포, 또는 골수-유래된 억제 세포의 세포자멸사를 촉진할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 효능제 항-CD33 항체는, 면역 억제 세포의 1종 이상의 유형의 활성과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하고, 그 위험을 낮추며, 그것을 치료하는데 유익하고, 상기 병태 및/또는 질환은 CD33을 발현시키지 않는 고형 종양 예컨대 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 갑상선암, 및 혈액 CD33를 발현시키는 종양, 예컨대 백혈병 세포를 포함하는 종양을 비제한적으로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키고, 종양 성장률을 감소시키고, 종양 부피를 감소시키거나, 또는 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 감소 또는 억제할 수 있다.
일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 CD14+ 골수 세포의 수, 종양 성장률, 종양 부피, 또는 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능의 수준과 비교하여, 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 대상체에서 CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키고, 종양 성장률을 감소시키고, 종양 부피를 감소시키거나, 또는 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 감소 또는 억제할 수 있다. 다른 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 CD14+ 골수 세포의 수, 종양 성장률, 종양 부피, 또는 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능의 수준과 비교하여, 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 대상체에서 CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키고, 종양 성장률을 감소시키고, 종양 부피를 감소시키거나, 또는 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 감소 또는 억제할 수 있다.
체크포인트 억제제 요법의 증가된 효능
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 PD-1 억제제 또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, 및/또는 LAG3 중 하나 이상을 표적으로 하는 요법의 효능을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 그와 같은 1종 이상의 요법을 받은 대응하는 대상체에서 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 PD-1 억제제 또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, 및/또는 LAG3 중 하나 이상을 표적으로 하는 요법의 유효성의 수준과 비교하여 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 그와 같은 1종 이상의 요법을 받은 대상체에서 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 PD-1 억제제 또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, 및/또는 LAG3 중 하나 이상을 표적으로 하는 요법의 효능을 증가시킬 수 있다. 다른 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 그와 같은 1종 이상의 요법을 받은 대응하는 대상체에서 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 PD-1 억제제 또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, 및/또는 LAG3 중 하나 이상을 표적으로 하는 요법의 유효성의 수준과 비교하여, 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 그와 같은 1종 이상의 요법을 받은 대상체에서 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 PD-1 억제제 또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, 및/또는 LAG3 중 하나 이상을 표적으로 하는 요법의 효능을 증가시킬 수 있다.
화학치료제의 증가되니 효능
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, 1종 이상의 화학요법 제제, 예컨대 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 및/또는카보플라틴 (Paraplatinㄾ)의 효능을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 그와 같은 1종 이상의 요법을 받은 대응하는 대상체에서 1종 이상의 화학요법 제제의 유효성의 수준과 비교하여, 예를 들면 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%까지 그와 같은 1종 이상의 요법을 받은 대상체에서 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 증가시킬 수 있다. 다른 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, CD33 제제로 치료되지 않은 그와 같은 1종 이상의 요법을 받은 대응하는 대상체에서 1종 이상의 화학요법 제제의 유효성의 수준과 비교하여, 예를 들면 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배까지 그와 같은 1종 이상의 요법을 받은 대상체에서 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 증가시킬 수 있다.
약제학적 조성물
본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는 제제, 예컨대 항-CD33 항체를 적절한 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제와 배합시킴으로써 치료 투여를 위한 다양한 제형으로 편입될 수 있고, 고체, 반-고체, 액체 또는 기체 형태로 제제 속에 제형화될 수 있다. 상기 제형의 예는, 제한 없이, 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌약, 주사, 흡입제, 겔, 마이크로구형체, 및 에어로졸을 포함한다. 약제학적 조성물은, 제형에 의존하여, 동물 또는 인간 투여를 위하여 약제학적 조성물을 제형화하는데 통상적으로 사용된 비히클인, 요망된, 약제학적으로-허용가능한, 비-독성 담체 또는( of ) 희석제를 포함할 수 있다. 희석제는 조합의 생물학적 활성에 영향을 주지 않기 위해 선택된다. 상기 희석제의 예는, 제한 없이, 증류수, 완충된 물, 생리적 염수, PBS, 링거 용액, 덱스트로오스 용액, 및 행크 용액을 포함한다. 본 개시내용의 약제학적 조성물 또는 제형은 다른 담체, 아쥬반트, 또는 비-독성, 비치료제, 비면역원성 안정제, 부형제 및 기타 동종을 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 또한 생리적 조건에 근접하기 위해 추가의 서브스턴스, 예컨대 pH 조정 및 완충 제제, 독성 조정 제제, 습윤 제제 및 세제를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물은 또한 예를 들어 임의의 다양한 안정화 제제, 예컨대 산화방지제를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물이 폴리펩타이드를 포함하는 경우, 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 생체내 안정성을 향상시키는, 또는 달리 그것의 약리적 특성을 향상시키는 (예를 들면, 폴리펩타이드의 반감기를 증가시키는, 그것의 독성을 감소시키는, 그리고 용해도 또는 흡수를 향상시키는) 다양한 널리-공지된 화합물로 복합체화될 수 있다. 상기 변형 또는 복합체화 제제의 예는, 제한 없이, 설페이트, 글루코네이트, 시트레이트 및 포스페이트를 포함한다. 조성물의 폴리펩타이드는 또한 그것의 생체내 속성을 향상시키는 분자로 복합체화될 수 있다. 상기 분자는, 제한 없이, 탄수화물, 폴리아민, 아미노산, 다른 펩타이드, 이온 (예를 들면, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 망간), 및 지질을 포함한다.
다양한 유형의 투여에 적합한 제형의 추가 예는 아래에 발견될 수 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed. (1985). 약물 전달용 방법의 간단한 검토를 위하여, 참고, Langer, Science 249:1527-1533 (1990).
경구 투여를 위하여, 활성 성분은 고체 복용 형태, 예컨대 캡슐, 정제, 및 분말로, 또는 액체 복용 형태, 예컨대 엘릭시르, 시럽, 및 현탁액으로 투여될 수 있다. 활성 성분(들)은 불활성 성분 및 분말화된 담체, 예컨대 글루코스, 락토오스, 수크로오스, 만니톨, 전분, 셀룰로오스 또는 셀룰로오스 유도체, 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 나트륨 사카린, 활석, 탄산마그네슘과 함께 젤라틴 캡슐에서 캡슐화될 수 있다. 바람직한 색상, 맛, 안정성, 완충 수용력, 분산 또는 다른 공지된 바람직한 특징을 제공하기 위해 첨가될 수 있는 추가의 불활성 성분의 예는 적색 산화철, 실리카겔, 나트륨 라우릴 설페이트, 이산화티타늄, 및 식용 백색 잉크이다. 유사한 희석제는 압축 정제를 제조하는데 사용될 수 있다. 두 정제 및 캡슐은 일정 기간 동안 약물의 연속 방출을 제공하기 위해 지속 방출 생성물로서 제조될 수 있다. 압축 정제는 임의의 좋지 않은 맛을 마스킹하기 위해 그리고 분위기로부터 정제를 보호하기 위해 당 코팅 또는 필름 코팅될 수 있거나, 위장관에서 선택적 붕해를 위하여 장용 코팅될 수 있다. 경구 투여용 액체 복용 형태는 환자 승인을 증가시키기 위해 착색제 및 풍미제를 함유할 수 있다.
비경구 투여에 적합한 제형은, 산화방지제, 버퍼, 정균제, 및 의도된 수령체의 혈액과 등장이도록 제형을 만드는 용질을 함유할 수 있는, 수성 및 비-수성, 등장의 멸균된 주사 용액, 및 현탁 제제, 가용화제, 증점 제제, 안정제, 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균된 현탁액을 포함한다.
약제학적 조성물을 제형화하는데 사용된 성분은 바람직하게는 고순도이고 잠재적으로 유해한 오염물질이 실질적으로 없다 (예를 들면, 적어도 National Food (NF) 등급, 일반적으로 적어도 분석적 등급, 및 더욱 전형적으로 적어도 약제학적 등급). 또한, 생체내 사용을 위하여 의도된 조성물은 일반적으로 멸균된다. 소정의 화합물이 사용에 앞서 합성되어야 하는 정도로, 수득한 생성물은 전형적으로, 합성 또는 정제 공정 동안 존재할 수 있는, 임의의 잠재적으로 독성 제제, 특히 임의의 내독소가 실질적으로 없다. 친계 투여용 조성물은 또한 멸균되고, 실질적으로 등장이고 GMP 조건하에 제조된다.
제형은 뇌 또는 중추신경계에서 유지 및 안정화를 위하여 최적화될 수 있다. 제제가 두개 구획 속에 투여되는 경우, 제제가 구획에서 유지되는 것이, 그리고 혈액 뇌 장벽을 확산 또는 달리 교차하는 것이 바람직하다. 안정화 기술은 분자량 증가를 달성하기 위해 가교결합, 다합체화, 또는 그룹 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 폴리아크릴아미드, 중성 단백질 담체, 등에 연결을 포함하다.
유지 증가를 위한 다른 전략은, 생분해성 또는 생체붕괴성 임플란트에서, 본 개시내용의 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체의 포착을 포함한다. 치료적으로 활성 제제의 방출 속도는 폴리머 매트릭스를 통한 이동의 속도, 및 임플란트의 생체내분해에 의해 제어된다. 폴리머 장벽을 통한 약물의 이동은 화합물 용해도, 폴리머 친수성, 폴리머 가교결합의 정도, 폴리머 장벽을 약물에 더욱 침투성으로 만들기 위한 물 흡수시 폴리머의 팽창, 임플란트의 기하학, 및 기타 동종에 의해 또한 영향을 받을 것이다. 임플란트는 이식의 부위로서 선택된 영역의 크기 및 형상에 비례한 치수이다. 임플란트는 입자, 시트, 패치, 플라크, 섬유, 마이크로캡슐 및 기타 동종일 수 있고 삽입의 선택된 부위와 양립가능한 임의의 크기 또는 형상일 수 있다.
임플란트는 단일체성, 즉 폴리머 매트릭스를 통해 균일하게 분포된, 또는 캡슐화된 활성 제제를 갖는 것일 수 있고, 여기에서 활성 제제의 저장소는 폴리머 매트릭스에 의해 캡슐화된다. 이용되는 폴리머 조성물의 선택은 투여의 부위, 치료의 요망된 기간, 환자 내성, 치료받는 질환 및 기타 동종으로 다양할 것이다. 폴리머의 특징은 이식의 부위에서 생물분해능, 당해 제제와 혼용성, 캡슐화의 용이성, 생리적 환경에서 반감기를 포함할 것이다.
이용될 수 있는 생분해성 폴리머 조성물은, 분해된 경우, 모노머를 포함하는, 생리적으로 허용가능한 열화 생성물을 초래하는, 유기 에스테르 또는 에테르일 수 있다. 자체로 또는 다른 모노머와 조합으로, 무수물, 아미드, 오르토에스테르 또는 기타 동종은 용도를 찾을 수 있다. 폴리머는 축합 폴리머일 수 있다. 폴리머는 가교결합 또는 비-가교결합될 수 있다. 호모- 또는 코폴리머인, 하이드록시지방족 카복실산, 및 다당류의 폴리머가 특히 관심이다. D-락트산, L-락트산, 라세미 락트산, 글라이콜산, 폴리카프로락톤, 및 이들의 조합의 폴리머가 폴리에스테르 중에서 포함된다. L-락테이트 또는 D-락테이트 이용에 의해, 서서히 생분해하는 폴리머는 달성되고, 반면에 열화는 라세미체로 실질적으로 향상된다. 글라이콜산과 락트산의 코폴리머는 특히 관심이고, 여기에서 생분해는 글라이콜산 대 락트산의 비에 의해 제어된다. 가장 빠르게 분해된 코폴리머는 글라이콜산 및 락트산의 거의 동등량을 갖고, 여기에서 어느 한쪽의 호모폴리머는 열화에 더욱 저항성이다. 글라이콜산 대 락트산의 비는 또한 임플란트의 취성에 영향을 줄 것이고, 여기에서 더욱 가요성 임플란트는 더 큰 기하학적 구조에 바람직하다. 관심 다당류 중에서 알긴산칼슘, 및 수불용성, 약 5 kD 내지 500 kD의 분자량, 등을 특징으로 하는 작용화된 셀룰로오스, 특히 카복시메틸셀룰로오스 에스테르가 있다. 생분해성 하이드로겔은 또한 본 개시내용의 임플란트에서 이용될 수 있다. 하이드로겔은 전형적으로, 액체를 흡입하는 능력을 특징으로 하는, 코폴리머 물질이다. 이용될 수 있는 예시적인 생분해성 하이드로겔은 하기에서 헬러(Heller)에 기재된다: Hydrogels in Medicine and Pharmacy, N. A. Peppes ed., Vol. III, CRC Press, Boca Raton, Fla., 1987, pp 137-149.
약제학적 복용량
본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체를 함유하는 본 개시내용의 약제학적 조성물은, 공지된 방법, 예컨대 볼러스로서 정맥내 투여 또는 by 일정 기간에 걸쳐 연속 주입으로, 근육내로, 복강내, 뇌척수내, 두개내, 척수내, 피하, 관절내, 활막내, 척추강내, 경구, 국소, 또는 흡입 경로로 CD33 제제에 의한 치료가 필요한 개체, 바람직하게는 인간에게 투여될 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물의 복용량 및 요망된 약물 농도는 구상된 특정 용도 에 따라 변할 수 있다. 적절한 복용량 또는 투여 경로의 결정은 통상적인 숙련가의 기술 내에 있다. 동물 실험은 인간 요법에 대한 효과적인 용량의 결정에 대한 신뢰할 수 있는 지도를 제공한다. 효과적인 용량의 종간 규모는 하기에 기재된 원리에 따라 수행될 수 있다: Mordenti, J. 및 Chappell, W. "The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics," In Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi 등, Eds, Pergamon Press, New York 1989, pp.42-46.
본 개시내용의 CD33 제제 중 임의의 것, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체 중 임의의 것의 생체내 투여에 대해, 정상 복용량은 투여 경로에 따라 약 10 ng/kg 초과 내지 약 100 mg/kg 이상의 개인의 체중 / 1일, 바람직하게는 약 1 mg/kg/1일 내지 10 mg/kg/1일에서 변할 수 있다. 며칠 또는 더 긴 시간 동안 반복된 투여에 대해, 치료될 질환, 장애, 또는 병태의 중증도에 따라, 치료는, 증상의 요망된 억제가 달성될 때까지 지속된다.
예시적인 투여 레지멘은 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체의 약 2 mg/kg의 초기 용량, 그 다음 격주로 약 1 mg/kg의 매주 유지 용량을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 다른 복용 요법은, 의사가 달성하고자 하는 약력학적 소실의 패턴에 따라 유용할 수 있다. 예를 들면, 매주 1 내지 21 회의 개체 투약이 본 명세서에서 고려된다. 특정 구현예에서, 약 3 μg/kg 내지 약 2 mg/kg (예컨대 약 3 μg/kg, 약 10 μg/kg, 약 30 μg/kg, 약 100 μg/kg, 약 300 μg/kg, 약 1 mg/kg, 및 약 2/mg/kg)의 투여 범위가 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 투여 빈도는 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 하루 걸러 1회, 매주 1회, 매 2주 1회, 매 4주 1회, 매 5주 1회, 매 6주 1회, 매 7주 1회, 매 8주 1회, 매 9주 1회, 매 10주 1회, 또는 매월 1회, 매 2 개월 1회, 매 3 개월, 또는 그 초과 1회이다. 요법의 진행은 종래의 기술 및 검정으로 쉽게 모니터링된다. 투여된 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체를 포함하는 투여 레지멘은 사용된 용량과는 독립적으로 경시적으로 변할 수 있다.
특정한 CD33 제제, 예컨대 특정한 항-CD33 항체의 복용량은, CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체의1종 이상의 투여가 주어졌던 개체에서 실험적으로 결정될 수 있다. 개체는 증분적 용량의 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체가 주어진다. CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체의 효능을 평가하기 위해, 본 개시내용의 질환, 장애 또는 병태 중 임의의 것의 임상 증상 (예를 들면, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 발작, 망막 이상증, 외상성 뇌 손상, 척수 손상, 장기간 우울증, 죽상경화성 혈관 질환, 및 정상 노화의 바람직하지 않은 증상)는 모니터링될 수 있다.
CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체의 투여는, 예를 들면, 투여 목적이 치료 또는 예방이든지 수령체의 생리적 조건, 및 당업자에게 공지된 다른 인자에 따라 연속 또는 간헐적일 수 있다. CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체의 투여는, 사전선택된 기간 동안 본질적으로 연속일 수 있거나 일련의 이격된 용량일 수 있다.
특정한 복용량 및 전달 방법에 관한 지도는 문헌에서 제공된다; 참고, 예를 들면, U.S. 특허 번호 4,657,760; 5,206,344; 또는 5,225,212. 상이한 제형이 상이한 치료 및 상이한 장애에 효과적일 것이고, 특이적인 장기 또는 조직을 치료하기 위한 투여가 또 다른 장기 또는 조직과 상이한 방식으로 전달될 필요가 있음은 본 개시내용의 범위 내에 있다. 또한, 복용량은 1종 이상의 개별의 투여에 의해, 또는 연속 주입으로 투여될 수 있다. 며칠 또는 더 긴 기간 동안 반복된 투여에 대해, 병태에 따라, 치료는, 질환 증상의 요망된 억제가 일어날 때까지 지속된다. 그러나, 다른 복용 요법은 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 종래의 기술 및 검정으로 쉽게 모니터링된다.
치료 용도
본 개시내용의 추가 측면은 개체에서 CD33 활성 중 하나 이상을 조절하기 위해 (예를 들면, 활성화하거나 억제하기 위해) 상기 개체에게, 치료적 유효량의 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여하여, 그것이 필요한 개체에서 1종 이상의 CD33 활성을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 비제한적으로, 본 개시내용의 CD33 단백질을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 티로신-특이 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 동원 및 그것에의 결합을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 다이나미니-1에 대한 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자로서 작용하는 PLC-감마1의 동원 및 그것에의 결합을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), SH2 도메인 함유 단백질을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), Crkl의 동원 및 그것에의 결합을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합된 단백질 2 (Grb2)의 동원 및 그것에의 결합을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 다중 SH2 함유 단백질의 동원 및 그것에의 결합을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 단백질 키나제 C에 의한 Ser-307 및 Ser-342의 인산화를 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 원생생물유전자 c-Cbl, Vav 및 Syk과의 회합 및 그것의 활성화를 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), Cbl- CD33 자체 뿐만 아니라 레티노산-유도성 유전자의 의존적 유비퀴틴화 및 프로테아솜 분해을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 세포내 칼슘 동원을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 생산 of 전염증 사이토카인 IL-1β, IL-8, 및 TNF-α, 포스포이노시티드 3-키나제의 활성화의 생성을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 단핵구, 대식세포, T 세포, 중성구, 천연 살해 세포, 수지상 세포, 종양-포매된 면역억제제 수지상 세포, 종양-관련된 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 및/또는 조절 T 세포, 및/또는 미세아교의 세포 성장을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 단핵구, 대식세포, T 세포, 천연 살해 세포, 중성구, 수지상 세포, 종양-포매된 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 및/또는 조절 T 세포, 및/또는 미세아교의 세포사 및 세포자멸사를 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 다중 세포 단백질에 대한 티로신 인산화를 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 단핵구, 대식세포, 수지상 세포 및/또는 미세아교의 식세포 활성을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는, 단핵구, 대식세포, T 세포, 천연 살해 세포, 수지상 세포 및/또는 미세아교의 증식을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 단핵구, 대식세포, T 세포, 천연 살해 세포, 중성구, 수지상 세포, 종양 포매된 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 골수 유래된 억제 세포, 종양 관련된 대식세포, 조절 T 세포, 및/또는 미세아교의 상기 전체 기능성을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), ITAM 함유 수용체의 인산화를 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), ITAM 신호전달을 매개하는 신호전달 분자의 인산화 인산화를 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 패턴 인식 수용체의 상기 활성을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 톨(Toll)-유사 수용체의 상기 활성을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는), 또는 손상-관련된 분자 패턴 (DAMP) 수용체의 상기 활성을 조절하는 (예를 들면, 활성화하거나 억제하는) Methods을 제공한다.
본 명세서에서 개시된 바와 같이, CD33의 세포 수준을 감소시키고/거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 하기를 예방하고, 그 위험을 감소시키거나 그것을 치료하기 위해 사용될 수 있다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 및 하기를 포함하는 암: 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및/또는 헤모필루스 인플루엔자. 일부 구현예에서, 제제는 하기로부터 선택된다: 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 1종 이상의 CD33 리간드를 억제하는 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNAs, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드. 일부 구현예에서, CD33 제제는 효능제 항체이다. 일부 구현예에서, CD33 제제는 불활성 항체이다. 일부 구현예에서, CD33 제제는 길항제 항체이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 그것이 필요한 개체에게, CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 본 개시내용의 제제를 치료적 유효량으로 투여하여 하기를 예방하고, 그 위험을 감소시키거나, 그것을 치료하는 방법을 제공한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이스체를 갖는 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯병, 암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래된 종양, CD33를 발현시키는 종양, 갑상선암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닝기디티스 감염, I형 HIV, 및/또는 헤모필루스 인플루엔자. 일부 구현예에서, 제제는 하기로로부터 선택된다: 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 1종 이상의 CD33 리간드를 억제하는 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드. 일부 구현예에서, 제제는 본 개시내용의 항-CD33 항체이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 그것이 필요한 개체에게, CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 본 개시내용의 제제를 치료적 유효량으로 투여하여, 암을 예방하고, 그 위험을 감소시키거나, 그것을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 제제는 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 1종 이상의 CD33 리간드를 억제하는 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 제제는 본 개시내용의 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 제제는 하기로부터 선택된 1종 이상의 CD33 활성을 나타낸다: (a) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 비-종양형성 CD14+ 골수 세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 증식, 성숙, 이동, 분화, 및/또는 기능성을 촉진하고; (b) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양으로의 침윤을 향상시키고; (c) 종양, 말초 혈액, 또는 다른 림프양 장기에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포 및/또는 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 증가시키고; (d) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 및/또는 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고; (e) 종양 또는 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인의 발현을 증가시키되, 선택적으로 상기 종양-촉진 사이토카인은 TGF-베타 또는 IL-10이고; (f) 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤을 증가시키고; (g) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 활성화를 감소시키고; (h) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 침윤을 감소시키고; (i) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 NK 세포의 침윤을 감소시키고; (j) NK 세포의 종양 사멸화 잠재성을 감소시키고; (k) 면역 반응을 향상시키는 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 B 림프구의 침윤을 감소시키고; (l) 종양 부피를 증가시키고; (m) 종양 성장률을 증가시키고; (n) 전이를 증가시키고; (o) 종양 재발의 속도를 증가시키고; (p) 1종 이상의 PD-1 리간드의 발현을 증가시키고; (q) 항종양 T 세포 반응을 조절하는 1종 이상의 면역-요법의 효능을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 면역-요법은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질을 표적으로 하는 면역-요법 또는 암 백신이고; (r) PLCγ/PKC/칼슘 동원의 억제; (s) PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 억제; 및 (t) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 감소시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합이다. 일부 구현예에서, 제제는 하기로부터 선택된 1종 이상의 활성을 나타낸다: (a) 종양 침윤 CD3+ T 세포의 수를 증가시키고; (b) 비-종양형성 CD14+골수 세포에서 CD33의 세포 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고; (c) 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고; (d) 1종 이상의 세포에서 PD-L1 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (e) 1종 이상의 세포에서 PD-L2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (f) 1종 이상의 세포에서 B7-H2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (g) 1종 이상의 세포에서 B7-H3 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (h) 1종 이상의 세포에서 CD200R 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (i) 1종 이상의 세포에서 CD163 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (j) 1종 이상의 세포에서 CD206 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고; (k) 고형 종양의 고형 성장률을 감소시키고; (l) 종양 부피를 감소시키고; (m) 1종 이상의 PD-1 억제제의 효능을 증가시키고; (n) 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능을 증가시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법은 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적으로 하고; (o) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 증가시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합이고; (p) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 존재에서 T 세포의 증식을 증가시키고; 그리고 (q) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 억제하고; 그리고 (r) 화학 또는 방사성 독소에 접합될 때, 고형 종양 및 관련된 혈관에서 CD33-발현 면역억제제 골수 세포 및/또는 CD14-발현 세포를 사멸시킨다.
본 명세서에서 개시된 바와 같이, 본 개시내용의 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 또한, 1종 이상의 면역 세포 (예를 들면, 타고난 면역 세포 또는 적응성 면역 세포)의 생존 성숙, 기능성, 이동, 또는 증식을 유도 및/또는 촉진하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은 상기 개체에게, CD33의 세포 수준를 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두인 치료적 유효량의 본 개시내용의 제제를 투여하여 1종 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 기능성, 이동, 또는 증식을 그것이 필요한 개체에서 유도 또는 촉진시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 제제는 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 1종 이상의 CD33 리간드를 억제하는 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제제는 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 면역 세포는 수지상 세포, 대식세포, 미세아교, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 제제는 효능제 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 제제는 본 개시내용의 일시적 효능제 항-CD33 항체이고, 이 항체는 초기에 효능제로서 작용하고 그 다음 장기간 길항제 항체로서 작용한다. 일부 구현예에서, 제제는 불활성 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 제제는 길항제 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 세포 (예를 들면, 세포 표면, 세포내, 또는 총) 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 분해를 유도한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 절단를 유도한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 내재화를 유도한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 흘리기를 유도한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33 발현의 하향조절을 유도한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33와 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용 (예를 들면, 결합)을 억제한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 CD33의 분해를 활성화하고 그 다음 유도한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 CD33의 절단을 활성화하고 그 다음 유도한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 CD33의 내재화를 활성화하고 그 다음 유도한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 CD33의 흘리기. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 CD33 발현의 하향조절을 활성화하고 그 다음 유도한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 CD33의 감소된 발현을 활성화하고 그 다음 유도한다. 특정 구현예에서, 개체는 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNPs) rs3865444 CC 또는 AC를 갖는 CD33 변이체 대립유전자를 갖는다. 특정 구현예에서, 개체는 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNPs) 2459419 CC 또는 CT를 갖는 CD33 변이체 대립유전자를 갖는다.
본 명세서에서 개시된 바와 같이, CD33, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 결합하거나 그것과 상호작용하는 본 개시내용의 제제는, 추가로 하기의 활성, 기능성, 또는 생존을 감소시키기 위해 사용될 수 있다: 조절 T 세포, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포, 종양-매립된 면역억제제 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 급성 골수 백혈병 (AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 세포, 및/또는 만성 골수 백혈병 (CML) 세포. 일부 구현예에서, 본 개시내용은 상기 개체에게, 치료적 유효량의 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제를 투여하여, 그것이 필요한 개체에서 조절 T 세포, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포, 종양-매립된 면역억제제 대식세포, 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 급성 골수 백혈병 (AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 세포, 또는 만성 골수 백혈병 (CML) 세포의 활성, 기능성, 또는 생존을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 제제는 하기로부터 선택된다: 항체, 길항제 항체, 불활성 항체, 효능제 항체, CD33 리간드, CD33 리간드 효능제 단편, CD33 면역부착소, CD33 리간드 모방체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, 1종 이상의 CD33 리간드를 억제하는 가용성 시글렉 수용체, 1종 이상의 CD33 리간드에 결합하는 시글렉-Fc 융합 단백질, 및 소분자 화합물. 일부 구현예에서, 제제는 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체 또는 항-CD33 항체 콘주게이트이다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체 콘주게이트는 검출가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합된 항-CD33 항체를 포함한다.
본 명세서에서 개시된 바와 같이, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 시험관내 또는 생체내 1종 이상의 세포 상의 CD33의 세포 수준을 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 둘 모두를 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은 상기 개체에게, 치료적 유효량의 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체를 투여하여, 그것이 필요한 개체의 1종 이상의 세포 상의 CD33의 세포 수준을 감소시키고, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 둘 모두인 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다.
본 명세서에서 개시된 바와 같이, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, T 세포, 및 대식세포, 및/또는 세포주를 비제한적으로 포함하는 1종 이상의 세포 상의 CD33의 세포 수준을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은 상기 개체에게, 치료적 유효량의 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여하여 그것이 필요한 개체의 1종 이상의 세포 상의 CD33의 세포 수준을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 세포는 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, T 세포, 및 대식세포, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시킨다. CD33의 세포 수준은, 비제한적으로, CD33의 세포 표면 수준, CD33의 세포내 수준, 및 CD33의 전체 수준을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준의 증가는 CD33의 세포 표면 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, CD33의 세포 표면 수준은 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야에서 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 검정 또는 적합한 생체내 모델에 의해 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준의 증가는 CD33의 세포내 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, CD33의 세포내 수준은 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야에서 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 검정 또는 적합한 생체내 모델에 의해 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준의 증가는 CD33의 전체 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, CD33의 전체 수준은 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야에서 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 검정 또는 적합한 생체내 모델에 의해 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 CD33 분해, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 흘리기, 및/또는 CD33 발현의 하향조절을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33의 세포 수준은 시험관내 세포 검정을 이용하여 일차 세포 (예를 들면, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, T 세포, 및 대식세포) 또는 세포주에 대해 측정된다.
본 개시내용의 다른 측면은 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 의한 치료를 위해 그것을 필요로 하는 대상체를 선택하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 하기를 포함한다: a. 샘플 (예를 들면, 혈액 샘플)을 상기 대상체로부터 얻는 단계; b. 상기 대상체에서 존재하는 CD33 대립유전자를 검출하는 단계; 및 c. CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 의한 치료를 위한 상기 대상체를 선택하는 단계로서, 상기 대상체는 1종 이상의 CD33 대립유전자를 가지며, 상기 1종 이상의 CD33 대립유전자는 rs3865444 AC , 및 rs3865444 CC 로 구성된 군으로부터 선택된다. 본 개시내용의 다른 측면은 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 대한 그것을 필요로 하는 대상체의 반응성을 평가하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 하기를 포함한다: a. 상기 대상체에게 항-CD33 항체를 투여하기 전 상기 대상체로부터 수득된 혈액 샘플에서 비-종양형성 골수 세포 상의 CD45+ 및 CD14+의 발현 수준을 측정하는 단계; b. 상기 대상체에게 치료적 유효량의 상기 제제를 투여하는 단계; 및 c. 항-CD33 항체의 투여 후 상기 대상체로부터 수득된 혈액 샘플에서 비-종양형성 골수 세포 상의 CD45+ 및 CD14+의 발현 수준을 측정하는 단계, 여기서 항-CD33 항체의 투여 후 비-종양형성 골수 세포 상의 CD45+ CD14+ 수준의 감소는, 상기 대상체가 상기 제제에 반응한다는 것을 나타낸다. 샘플, 예컨대 혈액 샘플을 얻는 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 또한, CD33 변이체 및/또는 대립유전자를 검출하는 임의의 공지된 방법, 예컨대 SNP 분석이 사용될 수 있음이 인정될 것이다. 일부 구현예에서, 반응성을 평가하는 방법은 1종 이상의 추가 치료적으로 효과적인 양의 제제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제제는 단리된 항-CD33 항체 또는 항-CD33 항체 콘주게이트이다. 일부 구현예에서, 항-CD33 항체는 본 개시내용의 항-CD33 항체이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 인간이다.
일부 구현예에서 개체는 CD33의 변이체를 갖는다. 일부 구현예에서, 변이체는 비제한적으로, 하기로부터 선택된 1종 이상의 다형성을 포함한다: (a) SNP rs3865444 AC ; (b) SNP rs3865444 CC ; (c) SNP rs35112940GG, AA, AG; 및 (d) SNP rs12459419 CC, CT 또는 TT; 및 이들의 임의의 조합.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 방법은 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체 또는 이중특이적 항-CD33 항체와, 패턴 인식 수용체에 결합하는 항체, 톨(Toll)-유사 수용체에 결합하는 항체, 손상-관련된 분자 패턴 (DAMP) 수용체에 결합화는 항체, 및/또는 사이토카인에 결합하는 항체 또는 인터류킨에 결합하는 항체)와의 공투여를 추가로 수반할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 방법은 추가로, 상기 개체에게, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 및/또는 1종 이상의 표준 또는 조사적인 항암 요법을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 상기 항-CD33 항체와 함께 투여된다. 일부 구현예에서, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항- B- 및 T-림프구 감쇠기 (BTLA) 항체, 항-살해 억제 수용체 (KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM3 항체, 항-A2AR 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-TNFa 항체, 항-시글렉-5 항체, 항-시글렉-7 항체, 항-시글렉-9 항체, 항-시글렉-11 항체, 길항적 항-TREM1 항체, 길항적 항-TREM2 항체, 및 이들의 임의의 조합 으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 표준 또는 조사적인 항암 요법은 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적 요법, 이마티닙 요법, 트라스투주맙 요법, 에타네르셉트 요법, 입양 세포 전달 (ACT) 요법, 키메라성 항원 수용체 T 세포 전이 (CAR-T) 요법, 백신 요법, 및 사이토카인 요법으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 방법은 추가로, 상기 개체에게, 억제성 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 억제성 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체와 함께 투여된다. 일부 구현예에서, 억제성 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합 으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 방법은 추가로, 상기 개체에게, 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 작용적 항체를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 작용적 항체는 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체와 함께 투여된다. 일부 구현예에서, 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 작용적 항체는 효능제 항-CD40 항체, 효능제 항-OX40 항체, 효능제 항-ICOS 항체, 효능제 항-CD28 항체, 작용적 항-TREM1 항체, 작용적 항-TREM2 항체, 효능제 항-CD137/4-1BB 항체, 효능제 항-CD27 항체, 효능제 항-글루코코르티코이드-유도된 TNFR-관련된 단백질 GITR 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 방법은 추가로, 상기 개체에게 적어도 1종의 자극 사이토카인을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 자극 사이토카인은 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체와 함께 투여된다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 자극 사이토카인은 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 구현예에서. 대상체 또는 개체는 포유동물이다. 포유동물은, 비제한적으로, 사육된 동물 (예를 들면, 소, 양, 고양이, 개, 및 말), 영장류 (예를 들면, 인간 및 비-인간 영장류 예컨대 원숭이), 토끼, 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체 또는 개체는 인간이다.
치매
치매는, 정상 노화로부터 기대될 수 있는 것을 넘어, 이전에 비장애인으로 전반적인 인지 능력의 심각한 손실을 나타내는 비-특이적 증후군 (즉, 일련의 징후 및 증상)이다. 치매는 특유의 전반적인 뇌 손상의 결과로서 정적일 수 있다. 대안적으로, 치매는, 바디에서 손상 또는 질환 때문에 장기간 쇠퇴를 초래하는, 진행성일 수 있다. 치매가 노인 집단에서 훨씬 더 흔한 반면, 65세 이전 또한 발생할 수 있다. 치매에 의해 영향받는 인지 영역은, 제한 없이, 기억, 주의 범위, 언어, 및 문제 해결을 포함한다. 일반적으로, 증상은 개체가 치매로 진단되기 이전 적어도 6 개월 동안 나타나야 한다.
치매의 예시적인 형태는, 제한 없이, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 의미 치매, 및 루이체 치매를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체의 투여는 치매를 예방, 치매 위험을 감소, 및/또는 치매를 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체 투여는 치매를 갖는 개체에서 1종 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
전두측두 치매
전두측두 치매 (FTD)는 뇌의 전두엽의 진행성 악화에서 비롯하는 병태이다. 경시적으로, 퇴행은 측두엽으로 진전할 수 있다. 유병률에서 알츠하이머병 (AD)에 버금가는, FTD는 초로기 치매 사례의 20%를 차지한다. FTD의 임상 특징은 기억력 결핍, 행동 비정상, 인격 변화, 및 언어 장애를 포함한다 (Cruts, M. & Van Broeckhoven, C., Trends Genet. 24:186-194 (2008); Neary, D., 등, Neurology 51:1546-1554 (1998); Ratnavalli, E., Brayne, C., Dawson, K. & Hodges, J. R., Neurology 58:1615-1621 (2002)).
FTD 사례의 상당한 부분은 상염색체 우세한 방식에서 선천적이지만, 한 가족에서조차, 증상은 행동 방해를 가진 FTD로부터, 1차 진행성 언어상실증까지, 피질-기저 신경절 퇴행까지 스펙트럼을 걸칠 수 있다. 대부분의 신경퇴행성 질환처럼, FTD는 이환 뇌에서 특이적 단백질 응집물의 병리적 존재를 특징으로 할 수 있다. 역사적으로, FTD의 최초 설명은 신경섬유 엉킴 또는 픽(Pick) 바디내 하이퍼인산화된 타우 단백질의 신경세포내 축적의 존재를 인식하였다. 미세소관 관련된 단백질 타우에 대한 원인적 역할은 몇 개의 계열내 타우 단백질을 인코딩하는 유전자에서 돌연변이의 확인에 의해 지지되었다 (Hutton, M., 등, Nature 393:702-705 (1998). 그러나, 다수의 FTD 뇌는 하이퍼인산화된 타우의 축적을 보여주지 않지만 유비퀴틴 (Ub) 및 TAR DNA 결합 단백질 (TDP43)에 대한 면역반응성을 나타낸다 (Neumann, M., 등, Arch. Neurol. 64:1388-1394 (2007)). Ub 내포물 (FTD-U)을 가진 대다수의 그들 FTD 사례는 프로그라눌린 유전자에서 돌연변이를 운반하는 것으로 나타났다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체 투여는 FTD를 예방, 위험을 감소, 및/또는 FTD를 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체 투여는 FTD를 갖는 개체에서 1종 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
알츠하이머병
알츠하이머병 (AD)은 치매의 가장 흔한 형태이다. 진행함에 따라 악화되고, 결국 사망으로 이어지는, 질환에 대한 치료법은 없다. 가장 종종, AD는 65 세 넘는 사람에서 진단된다. 그러나, 덜-만연한 조기 발병 알츠하이머병이 훨씬 초기에 발생할 수 있다.
알츠하이머병의 흔한 증상은 행동 증상, 예컨대 최근 사건 기억하기의 어려움; 인지 증상, 혼란, 자극감수성 및 공격, 감정 기복, 언어 장애, 및 장기간 기억 상실을 포함한다. 질환이 진행함에 따라 신체적으로 기능은 상실되고, 궁극적으로 사망으로 이어진다. 알츠하이머병은 완전히 분명해지기 전에 미공지된 및 가변 양의 시간 동안 발달하고, 수년간 미진단된 채 진행할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체 투여는 알츠하이머병을 예방, 알츠하이머병 위험을 감소, 및/또는 알츠하이머병을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체 투여는 알츠하이머병을 갖는 개체에서 1종 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
파킨슨병
특발성 또는 원발성 파킨슨증, 운동기능감퇴 경직 증후군 (시간), 또는 진전 마비로 지칭될 수 있는, 파킨슨병은 운동계 제어에 영향을 주는 신경퇴행성 뇌 장애이다. 뇌에서 도파민-생산 세포의 진행성 사망은 파킨슨병의 주요 증상으로 이어진다. 가장 흔한, 파킨슨병은 50 세 넘은 사람에서 진단된다. 파킨슨병은 대부분의 사람에서 (공지된 원인이 없는) 특발성이다. 그러나, 유전적 인자는 또한 질환에서 역할을 한다.
파킨슨병의 증상은, 제한 없이, 손, 팔, 다리, 턱, 및 얼굴의 떨림, 사지 및 몸통에서 근육 경직성, 운동 느림 (운동완서), 체위성 불안정, 걷기 어려움, 신경정신 문제, 말하기 또는 행동의 변화, 우울증, 불안, 통증, 정신병, 치매, 환각, 및 수면 문제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체 투여는 파킨슨병을 예방, 파킨슨병 위험을 감소, 및/또는 파킨슨병을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체 투여는 파킨슨병을 갖는 개체에서 1종 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
근위축 측삭 경화증 (ALS)
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 근위축 측삭 경화증 (ALS) 또는, 운동 뉴런 질환 또는, 루게릭 질환은 상호교환적으로 사용되고 급속 진행 약화, 근위축 및 근다발수축, 근육 경직, 말하기 어려움 (말더듬증), 삼키기 어려움 (연하곤란), 및 숨쉬기 어려움 (호흡곤란)을 특징으로 하는 각종 병인을 갖는 쇠약 질환을 지칭한다.
프로그라눌린이 ALS (Schymick, JC 등, (2007) J Neurol Neurosurg Psychiatry.;78:754-6)에서 역할을 하고 ALS 유발 단백질 예컨대 TDP-43 (Laird, AS 등, (2010). PLoS ONE 5: e13368)에 의해 야기된 손상을 다시 보호하는 것으로 나타났다. 프로-NGF가 척수 손상 이후 희소돌기교세포 및 피질척수 뉴런의 p75 매개된 사망을 유도하는 것이 또한 실증되었다 (Beatty 등, Neuron (2002),36, pp. 375-386; Giehl 등, Proc. Natl. Acad. Sci USA (2004), 101, pp 6226-30).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체 투여는 ALS를 예방, ALS 위험을 감소, 및/또는 ALS를 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체 투여는 근위축 측삭 경화증을 갖는 개체에서 1종 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
헌팅턴병
헌팅턴병 (HD)은 헌팅틴 유전자 (HTT)에서 상염색체 우세한 돌연변이에 의해 야기된 선천적 신경퇴행성 질환이다. 헌팅틴 유전자 내에서 사이토카인-아데닌-구아닌 (CAG) 삼중항 반복부의 팽창은 유전자에 의해 인코딩된 헌팅틴 단백질 (Htt)의 돌연변이체 형태의 생산을 초래한다. 상기 돌연변이체 헌팅틴 단백질 (mHtt)은 독성이고 뉴런의 사망에 기여한다. 헌팅턴병의 증상은, 이들이 임의의 연령에서 발생할 수 있어도, 35세와 44세 사이에서 가장 흔하게 발생한다.
헌팅턴병의 증상은, 제한 없이, 운동 제어 문제, 요동, 랜덤 운동 (무도병), 비정상 눈 운동, 손상된 밸런스, 발작, 씹기 어려움, 삼키기 어려움, 인지 문제, 변화된 말하기, 기억력 결핍, 생각 어려움, 불면증, 피로, 치매, 인격 변화, 우울증, 불안, 및 강박성 행동을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체 투여는 헌팅턴병 (HD)을 예방, 헌팅턴병 (HD) 위험을 감소, 및/또는 헌팅턴병 (HD)을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체 투여는 헌팅턴병을 갖는 개체에서 1종 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
타우병증 질환
타우병증 질환, 또는 타우병증은 뇌 내에 미세소관-관련된 단백질 타우의 응집에 의해 야기된 신경퇴행성 질환의 부류이다. 알츠하이머병 (AD)은 가장 널리-공지된 타우병증 질환이고, 불용성 신경섬유 엉킴 (NFTs)의 형태로 뉴런 내에 타우 단백질의 축적을 포함한다. 다른 타우병증 질환 및 장애는 하기를 포함한다: 진행성 핵상 마비, 권투선수 치매 (크롬산 외상성 뇌병증), 염색체 17에 연결된 전두측두 치매 및 파킨슨증, 라이티코-보디그 질환 (괌의 파킨슨-치매 복합증), 엉킴-우세한 치매, 신경절교종 및 신경절세포종, 수막혈관종증, 아급성 경화 범뇌염, 납 독성뇌증, 결절성 경화증, 할러포르덴-슈파츠 질환, 지질갈색소증, 피크병, 피질기저 퇴행증, 은친화성 입자 질환 (AGD), 헌팅턴병, 및 전두측두엽 퇴행.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체의 투여는 타우병증 질환을 예방, 타우병증 위험을 감소, 및/또는 타우병증 질환을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체 투여는 타우병증 질환을 갖는 개체에서 1종 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
다발성 경화증
다발성 경화증 (MS)은 또한 파종성 경화증 또는 파종성 뇌척수염으로서 지칭될 수 있다. MS는 뇌 및 척수의 축색돌기 주위 지방 수초 덮개가 손상되어, 탈수초화 및 흉터 뿐만 아니라 광범위 스펙트럼의 징후 및 증상으로 이어진다. MS는 서로 효과적으로 소통하기 위해 뇌 및 척수에서 신경 세포의 능력에 영향을 준다. 신경 세포는, 수초로 불리는 절연 서브스턴스 내에 함유되는, 축색돌기로 불리는 장섬유 아래로 활동 전위로 불리는 전기 신호 송신에 의해 소통한다. MS에서, 바디의 자체 면역 시스템은 수초를 공격하고 손상시킨다. 수초가 상실되는 경우, 축색돌기는 더 이상 효과적으로 신호를 수행할 수 없다. MS 발병은 일반적으로 청소년에서 발생하고, 여성에서 더욱 흔하다.
MS의 증상은, 제한 없이, 하기를 포함한다: 감각의 변화, 예컨대 감수성 또는 따끔거림의 상실; 따끔거림 또는 저림, 예컨대 감각저하 및 지각이상증; 근육 약화; 간헐성경련; 근경직; 이동 어려움; 협응 및 균형잡기 어려움, 예컨대 운동실조증; 말하기 문제, 예컨대 말더듬증, 또는 삼키기 문제, 예컨대 연하곤란; 시각적 문제, 예컨대 안진, 안내섬광을 포함하는 시신경염, 및 복시; 피로; 급성 또는 만성 통증; 및 방광 및 장 어려움; 다양한 정도의 인지 손상; 우울증 또는 불안정 기분의 정서 증상; 보통 주위 온도보다 더 높은 주위 온도에 노출로 인한 잔존 증상의 악화인, 우토프 현상; 및 목을 굽힌 경우 등 아래로 움직이는 전기 감각인, 레미트 징후.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체 투여는 다발성 경화증을 예방, 다발성 경화증 위험을 감소, 및/또는 다발성 경화증을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체 투여는 다발성 경화증을 갖는 개체에서 1종 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
암
본 개시내용의 추가 측면은, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체의 치료적 유효량을 이들을 필요로 하는 개체에 투여함으로써, 암 예방, 위험 감소, 또는 치료 방법을 제공한다. 본 개시내용의 임의의 단리된 항체는 이들 방법에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 효능제 항체이다. 다른 구현예에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 길항제 항체이다. 다른 구현예에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 불활성 항체이다. 다른 구현예에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 항체 콘주게이트이다.
본 명세서에서 개시된 바와 같이, 종양 미세환경은, T 림프구, 대식세포 및 골수성/과립구성 계통의 세포를 포함하는, 불균일 면역 침윤물을 함유한다고 공지된다. 종양에서 T-조절 세포, 종양-매립된 면역억제제 골수성 세포, 및/또는 M2-대식세포의 존재 및 활성은 좋지 못한 예측과 관련된다. 그에 반해서, 세포독성 T 세포의 존재 및 활성은 암 요법에 유익하다. 세포독성 T 세포의 활성을 직접적으로 또는 간접적으로 향상시키고 다양한 면역억제제 세포의 수 및 활성을 감소시키는 요법은 상당한 치료 이점을 제공한다고 기대된다. 정액 전임상 연구는, 양쪽 세포 유형 조작이 개별 요법이 저조하게 효과적인 종양 모델에서 효능을 보여준다는 것을 나타내는, 세포독성 T 세포를 활성화하는 면역 체크포인트 차단 항체 및 면역억제제 세포 (예를 들면, CSF1/CSF1R 차단 항체)를 표적하는 약물 사이 상승효과를 보여주었다 (Zhu Y; Cancer Res. 2014 Sep 15; 74(18):5057-69). 따라서, 일부 구현예에서, 골수성 세포, T 세포의 서브셋, 및 종양-관련된 면역 세포 상에서 발현되는, CD33 차단은, 치료 항-종양 면역 반응을 초래하는, 유익한 항-종양 면역 반응을 자극시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 암을 갖는 개체 예방, 위험 감소, 또는 치료 방법은 추가로 억제 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 개체에 투여하는 것을 포함한다. 억제 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 항체의 예는, 제한 없이, 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항-BTLA 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM3 항체, 항-A2AR 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 및 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 억제 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체와 조합으로 투여된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 방법에 의해 예방 또는 치료되는 암은, 제한 없이, 하기를 포함한다: 편평상피 세포 암 (예를 들면, 상피성 편평상피 세포 암), 소-세포 폐 암, 비-소 세포 폐 암을 포함하는 폐 암, 폐의 선암종 및 폐의 편평상피 암종, 복막의 암, 간세포 암, 위장 암 및 위장 기질 암을 포함하는 위의 또는 위 암, 췌장 암, 교모세포종, 자궁경부 암, 난소 암, 간 암, 방광 암, 요로의 암, 간종양, 유방 암, 결장 암, 직장 암, 결장직장 암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액샘 암종, 신장 또는 신장 암, 전립선 암, 외음부 암, 갑상선 암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종, 흑색종, 표재 확장성 흑색종, 악성 흑자 흑색종, 선단 흑자성 흑색종, 결절성 흑색종, 다중 골수종 및 B 세포 림프종; 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 급성 림프아구성 백혈병 (ALL); 털 세포 백혈병; 만성 골수아세포 백혈병; 및 이식후 림프증식성 장애 (PTLD), 뿐만 아니라 모반증과 관련된 비정상 혈관 증식, 부종 (예컨대 뇌 종양과 관련된 것), 메이그스 증후군, 뇌, 뿐만 아니라 두경부 암, 및 관련된 전이. 일부 구현예에서, 암은 결장직장 암이다. 일부 구현예에서, 암은 비-소 세포 폐 암, 교모세포종, 신경교세포종, 신장 세포 암종, 방광 암, 난소 암, 흑색종, 유방 암종, 위 암, 및 간세포 암종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 삼중-음성 유방 암종이다. 일부 구현예에서, 암은 초기 단계 암 또는 말기 단계 암일 수 있다. 일부 구현예에서, 암은 원발성 종양일 수 있다. 일부 구현예에서, 암은 암의 임의의 상기 유형으로부터 유래된 제2 부위에서 전이성 종양일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 제한 없이, 방광 암 유방 암, 결장 및 직장 암, 자궁내막 암, 신장 암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐 암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장 암, 전립선 암, 난소 암, 섬유육종, 및 갑상선 암을 포함하는, 암 예방, 위험 감소, 또는 치료에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체의 치료적 유효량을 개체에 투여함으로써, 암을 갖는 개체 예방, 위험 감소, 또는 치료 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 억제 면역 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 개체에 투여하는 것, 및/또는 또 다른 표준 또는 조사적인 항-암 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 억제 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체와 조합으로 투여된다. 일부 구현예에서, 억제 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항- B- 및 T-림프구 감쇠기 (BTLA) 항체, 항-살해 억제 수용체 (KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM3 항체, 항-A2AR 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 표준 또는 조사적 항-암 요법은 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적화된 요법, 이마티닙 (Gleevecㄾ), 트라스투주맙 (Herceptinㄾ), 입양 세포 이동 (ACT), 키메라 항원 수용체 T 세포 이동 (CAR-T), 백신 요법, 및 사이토카인 요법으로부터 선택된 1종 이상의 요법이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 억제 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 개체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 억제 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체와 조합으로 투여된다. 일부 구현예에서, 억제 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 자극 면역 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 기능성 항체를 개체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 기능성 항체는 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체와 조합으로 투여된다. 일부 구현예에서, 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 기능성 항체는 효능제 항-CD40 항체, 효능제 항-OX40 항체, 효능제 항-ICOS 항체, 효능제 항-CD28 항체, 효능제 항-CD137/4-1BB 항체, 효능제 항-CD27 항체, 효능제 항-글루코코르티코이드-유도된 TNFR-관련된 단백질 GITR 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 적어도 1종의 자극 사이토카인을 개체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 자극 사이토카인은 본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 항-CD33 항체와 조합으로 투여된다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 자극 사이토카인은 TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, OSM, CNTF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-8, CRP, IFN-α, IFN-β, IL-2, IL-18, GM-CSF, G-CSF, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
키트/제조 물품
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 CD33 제제 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체), 또는 이들의 기능성 단편을 함유하는 키트 및/또는 제조 물품을 제공한다. 본 개시내용의 키트 및/또는 제조 물품은 본 개시내용의 정제된 항체를 포함하는 1종 이상의 용기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트 및/또는 제조 물품은 추가로 본 개시내용의 방법에 따라 사용 지침을 포함한다. 일부 구현예에서, 이들 지침은 본 개시내용의 임의의 방법에 따라 하기로부터 선택된 질환, 장애, 또는 손상을 갖는 개체를 예방, 위험 감소, 또는 치료하기 위해 본 개시내용의 CD33 제제 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체)의 투여의 설명을 포함한다: 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 크로이펠츠-야콥병, 정상압 수두증, 근위축 측삭 경화증, 헌팅턴병, 타우병증 질환, 나수-하코라 질환, 뇌졸중, 급성 트라우마, 만성 트라우마, 낭창, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태 떨림, 중추신경계 낭창, 베체트병, 파킨슨병, 루이체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드레이가 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 퇴행, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 퇴행, 기도 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 낭창, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골형성, 골화성 질환, 골의 파젯 질환, 및 하기를 포함하는 암: 방광 암, 뇌암, 유방 암, 결장 암, 직장 암, 자궁내막 암, 신장 암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐 암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장 암, 전립선 암, 난소 암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다중 골수종, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수성-유래된 종양, CD33을 발현시키는 종양, 갑상선 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노솜 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에어루기노사 감염, 라이쉬마니아 도노바니 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 나이세리아 메닌기디티스 감염, 유형 I HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 예를 들어 개체에서, 조직 샘플에서, 또는 세포에서 CD33 단백질을 검출하는 방법의 설명을 포함한다. 키트 및/또는 제조 물품은 추가로 개체가 질환 및 질환의 병기를 갖는지 확인에 기반하여 치료에 적합한 개체의 선택의 설명을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 키트 및/또는 제조 물품은 추가로 본 개시내용의 또 다른 항체 (예를 들면, 억제 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 억제 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 및/또는 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 기능성 항체 및/또는 적어도 1종의 자극 사이토카인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트 및/또는 제조 물품은 추가로 본 개시내용의 임의의 방법에 따라 본 개시내용의 CD33 제제 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체)와 조합으로 항체 및/또는 자극 사이토카인 사용 지침, 항체 및/또는 자극 사이토카인과 조합으로 본 개시내용의 CD33 제제 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체)의 사용 지침, 또는 본 개시내용의 CD33 제제 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체) 및 항체 및/또는 자극 사이토카인의 사용 지침을 포함할 수 있다.
상기 지침은 일반적으로 의도된 치료를 위하여 복용량, 투여 스케줄, 및 투여의 경로에 관한 정보를 포함한다. 용기는 단위 용량, 벌크 포장 (예를 들면, 다중-용량 포장) 또는 하위-단위 용량일 수 있다. 본 개시내용의 키트 및/또는 제조 물품에서 공급된 지침은 전형적으로 표지 또는 포장 삽입물상에서 서면 지침 (예를 들면, 키트에서 포함된 종이 시트)이지만, 기계-판독가능한 지침 (예를 들면, 자기 또는 광학 저장 디스크상에서 운반되는 지침)은 또한 허용가능하다.
표지 또는 포장 삽입물은 조성물이, 예를 들면, 본 개시내용의 질환 치료에 사용되는 것을 표시한다. 지침은 본 명세서에서 기재된 임의의 방법 실시를 위하여 제공될 수 있다.
본 개시내용의 키트 및/또는 제조 물품은 적합한 패키징 내이다. 적합한 패키징은, 비제한적으로, 바이알, 병, 단지, 가요성 패키징 (예를 들면, 밀봉된 마일러 또는 플라스틱 백), 및 기타 동종을 포함한다. 특이적 디바이스, 예컨대 흡입기, 비강 투여 디바이스 (예를 들면, 아토마이져) 또는 주입 디바이스 예컨대 미니펌프와 조합으로 사용하기 위한 포장 또한 고려된다. 키트 및/또는 제조 물품은 멸균된 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 스토퍼를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 용기는 또한 멸균된 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들면, 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 스토퍼를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 조성물에서 적어도 1종의 활성 제제는 본 개시내용의 CD33 제제 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체)이다. 용기는 추가로 제2 약제학적으로 활성 제제를 포함할 수 있다.
키트 및/또는 제조 물품은 선택적으로 추가의 성분 예컨대 버퍼 및 해석 정보를 제공할 수 있다. 정상적으로, 상기 키트는 용기 및 용기 상에 또는 이와 관련된 표지 또는 포장 삽입물(들)을 포함한다.
진단 용도
본 개시내용의 CD33 제제, 예컨대 본 개시내용의 단리된 항체 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체)는 또한 진단 유용성을 갖는다. 본 개시내용은 따라서, 진단 목적, 예컨대 개체로부터 유래된 조직 샘플에서 또는 개체에서 CD33 단백질의 검출을 위하여, 본 개시내용의 항체, 또는 이들의 기능성 단편의 이용 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 개체는 인간이다. 일부 구현예에서, 개체는 본 개시내용의 질환, 장애, 또는 손상의 발생에 대한 위험에 처한, 또는 상기를 앓고 있는 인간 환자이다. 일부 구현예에서, 진단 방법은 생물학적 샘플, 예컨대 생검 시료, 조직, 또는 세포에서 CD33 단백질 검출을 포함한다. 본 개시내용의 CD33 제제 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체)는 생물학적 샘플과 접촉되고 항원-결합된 항체는 검출된다. 예를 들어, 생검 시료는 질환-관련된 세포를 검출 및/또는 정량화하기 위해 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체로 염색될 수 있다. 검출 방법은 항원-결합된 항체의 정량화를 포함할 수 있다. 생물학적 샘플내 항체 검출은, 면역형광 현미경검사, 면역세포화학, 면역조직화학, ELISA, FACS 분석, 면역침강, 또는 마이크로-양전자 방출 단층촬영을 포함하는, 당해 기술에 공지된 임의의 방법으로 발생시킬 수 있다. 특정 구현예에서, 항체는, 예를 들어 18F로 방사선표지되고 후속적으로 마이크로-양전자 방출 단층촬영 분석을 이용하여 검출된다. 항체-결합은 또한 비-침습성 기술 예컨대 양전자 방출 단층촬영 (PET), X-선 전산화단층촬영법, 단일-광자 방출 전산화단층촬영법 (SPECT), 전산화단층촬영법 (CT), 및 전산화 축 단층촬영 (CAT)에 의해 환자에서 정량화될 수 있다.
다른 구현예에서, 본 개시내용의 단리된 항체 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체)는, 예를 들어, 전임상 질환 모델 (예를 들면, 비-인간 질환 모델)로부터 채집된 뇌 시료에서 미세아교세포를 검출 및/또는 정량화하는데 사용될 수 있다. 이와 같이, 본 개시내용의 단리된 항체 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 항-CD33 항체)는, 대조군에 비교된 경우, 신경계 질환 또는 손상 예컨대 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 발작, 망막 이상증, 죽상경화성 혈관 질환, 나수-하코라 질환, 또는 다발성 경화증에 대하여 모델에서 치료 이후 치료 반응 평가에 유용할 수 있다.
본 개시내용은 하기 실시예를 참고로 더욱 완전히 이해될 것이다. 이들은, 그러나, 본 개시내용의 범위 제한으로서 해석되지 않아야 한다. 본 개시내용 내내 모든 인용은 이로써 명확히 참고로 편입된다.
실시예
실시예 1: 항-CD33 항체의 생산, 확인, 및 특성규명
도입
인간 CD33의 아미노산 서열은 서열 식별 번호:1에서 아래에 제시된다. 인간 CD33은 하기를 함유한다: 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 1-17에 위치한 신호 서열, 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 19-135에 위치한 세포외 면역글로불린-유사 가변-유형 (IgV) 도메인, 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 145-228에 위치한 Ig-유사 C2-유형 도메인, 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 260-282에 위치한 막관통 도메인, 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 338-343에 위치한 ITIM 모티프 1, 및 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 356-361에 위치한 ITIM 모티프 2. CD33의 구조는 도 1에서 묘사된다. CD33 동족체를 갖는 CD33의 일 부분의 정렬은 도 2에서 나타난다.
CD33 아미노산 서열 (서열 식별 번호:1):
Figure pct00008
하기 실시예의 목적은 수지상 세포, 단핵세포, 대식세포, T 세포, 중성구, NK 세포 및/또는 미세아교세포의 유익한 효과를 향상시키는 CD33-결합 항체 (예를 들면, 길항적 항체, CD33 특이적 항체)를 생산하는 것이었다. CD33의 세포외 도메인, 특히 IgV 도메인 (서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 19-135)를 결합시키는 항체는 마우스 하이브리도마 기술, 파아지 디스플레이 기술, 및 효모 디스플레이 기술을 이용하여 생성된다. 항체는 확인되고 그 다음, 하기 실시예에 기재된 바와 같이, CD33에 결합시 CD33 리간드와 경쟁, CD33 하향조절을 유도, CD33 탈민감화를 유도, CD33 열화를 유도, 리소좀에 CD33 표적화를 유도, CD33 절단을 유도, 세포내 및 동물 생체내 CD33 신호전달 및/또는 1종 이상의 기능을 조절하는 그들의 능력에 대하여 선별된다. CD33에 의해 결합된 예시적인 리간드는 도 3 및 도 4에서 묘사된다.
예를 들어, IgV 도메인 (CD33의 아미노산 잔기 19-135를 표적하는 항-CD33 항체는 선택된다. IgV 도메인은 시알산 표적에 결합하고, 상기 결합은 항체로 차단될 수 있다. 따라서, 아미노산 잔기 19-135는 1종 이상의 내인성 표적 (예를 들면, 리간드)에 CD33의 결합을 차단할 항체에 대하여 CD33 펩타이드 표적에 대응한다.
인간 CD33 단백질 내에서 유용한 부위 확인을 위한 또 다른 접근법은, IgV 도메인 내에서 일반적으로 발견되는, CD33M에 비교된 경우 CD33m에서 존재하지 않는 항체 표적화 부위 선택에 의한 것이다. CD33m은 아밀로이드 베타 펩타이드의 청소능을 억제시킬 수 없다. 유용한 항체의 확인을 위한 또 다른 접근법은 단핵세포, 대식세포, 수지상 세포, 중성구, 미세아교세포 및/또는 T 세포의 세포 표면 상에서 CD33의 수준을 감소시키는 항체용으로 선택하는 것이다.
본 명세서에서 기재된 바와 같이, 7 항-CD33 항체는 확인 및 특성규명되었다.
결과
항-CD33 항체 생산
면역화 절차
급속 프라임 방법: 4 50-일령 암컷 BALB/c 마우스는 하기 절차를 이용하여 면역화되었다. 인간 CD33 항원을 함유하지만 아쥬반트가 없는 일련의 피하 수성 주사는 19 일의 기간 동안 제공되었다. 마우스는 Lab Products로부터 환기된 랙(rack) 시스템에서 하우징되었다. 모두 4 마우스는 19일째에 안락사되었고 림프구는 하이브리도마 세포주 생성을 위하여 수확되었다.
표준 방법: 4 50-일령 암컷 BALB/c 또는 NZB/W 마우스는 하기 절차를 이용하여 면역화되었다. 마우스는 Lab Products로부터 환기된 랙 시스템에서 하우징되었다. 마우스는 25 μg 단백질 항원 / 마우스 (총 용적 125 μL / 마우스)로 CpG-ODN 아쥬반트에서 혼합된 인간 CD33 항원으로 매 3 주 복강내로 주사되었다. 시험 채혈은 제2 부양 7 일 후 복재 정맥 랜싱(lancing)에 의해 실시되었다. 시험 채혈 (면역 혈청)은 융합에 대하여 최상의 2 반응 마우스를 결정하기 위한 간접 ELISA 검정에 의해 시험되었다. 마우스는 제3 및 제4 부양 그리고 융합 이전 역가를 평가하기 위해 부양 7 일 후 또 다른 시험 채혈을 필요로 할 수 있다. 항체 역가가 충분히 높은 경우 최상의 2 반응 마우스는 측면 꼬리 정맥을 통해 최종 정맥내 제공된다. IV 부양 4 일 후 마우스는 융합을 위하여 안락사되었다. 비장은 수확되었고 비장으로부터 단리된 림프구는 하이브리도마를 생산하기 위해 융합 공정에서 사용되었다.
하이브리도마 발생
림프구는 단리되었고 표준 로세(Roche) 프로토콜에 따라 폴리-에틸렌 글리콜 (PEG 1500)의 존재하에 쥣과 SP2/0 골수종 세포와 융합되었다. 융합된 세포는 단일-단계 클론화 방법 (HAT 선택)을 이용하여 배양되었다. 상기 방법은 하이브리도마 선택 및 클론화를 하나의 단계로 조합하기 위해 반-고체 메틸셀룰로오스-기반 HAT 선택적 배지를 이용한다. 단일 세포-유래된 하이브리도마는 반-고체 배지 상에서 단클론성 콜로니를 형성하도록 성장한다. 융합 사례 10 일 후, 수득한 하이브리도마 클론의 948개는 96-웰 조직 배양 플레이트에 전달되었고 중간-대수 성장이 도달된 (5 일)때까지 HT 함유 배지에서 성장되었다.
하이브리도마 선별
948 하이브리도마로부터 조직 배양 상청액은 선별 항원 (Primary Screening) 상에서 간접 ELISA에 의해 시험되었고 염소 항-IgG/IgM(H&L)-HRP 2차를 이용하여 IgG 및 IgM 항체 둘 모두에 대하여 탐색되었고 TMB 기질로 발색되었다. 상기 검정에서 클론 >0.2 OD는 다음 라운드의 시험으로 채택되었다. 양성 배양액은 분비를 확인하기 위해 선별 항원 상에서 그리고 비-특이적 또는 "점착성" mAbs를 제거하기 위해 및 거짓 양성을 배제하기 위해 무관한 항원 (인간 트랜스페린) 상에서 재시험되었다. 모든 당해 클론은 이들이 IgG 또는 IgM 아이소타입인지를 결정하기 위해 항체 트랩핑 ELISA에 의해 아이소타입화되었다.
하이브리도마 세포 배양
당해 하이브리도마 세포주는 96-웰 플레이트로 이동 후 32 일 동안 24-웰 배양 플레이트내 배양액에서 유지되었다. 이것은 안정성 기간으로서 지칭되고 클론이 안정적으로 남아있고 분비하는지를 시험한다. 상기 안정성 기간 동안 일시적 냉동된 세포주 백업은 -80℃ 저장 (생존가능한 6 개월) 동안 모든 당해 클론으로 제조된다. 하이브리도마는 분비 및 특이성에 대하여 이 기간 동안 주기적으로 시험되었다.
아클론화
최상부 하이브리도마 세포주 (클론)은 단클론성을 보장하기 위해 아클론화되었다. 아클론화는 다시 단일-단계 클론화 시스템을 이용하여 친계 클론을 배제함으로써 수행되었다. 24 내지 90 아클론은 96-웰 배양 플레이트에 이동되었다. 아클론은 간접 ELISA 및 항체 트랩핑 ELISA에 의해 선별되었다. 각각의 친계에 대한 최상부 아클론은 배양액에서 팽창을 위하여 채집되었다. <50% 클론이었던 임의의 친계 클론은 수행된 아클론화의 제2 라운드를 가졌다.
항체는 그 다음 CD33 결합을 위하여 선별되었다. 인간 CD33에 대한 결합에 양성이었던 항체는 리간드 결합을 차단시키는 능력 및 다중 세포 유형내 CD33의 표면 수준을 감소시키는 능력에 대하여 시험되었다.
항체 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열
표준 기술을 이용하여, 생성된 항체의 경쇄 가변 및 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 아미노산 서열은 결정되었다. 항체의 EU 또는 카밧 경쇄 CDR 서열은 표 1에서 제시된다. 항체의 EU 또는 카밧 중쇄 CDR 서열은 표 2에서 제시된다. 항체의 EU 또는 카밧 경쇄 프레임워크 (FR) 서열은 표 3A에서 제시된다. 항체의 EU 또는 카밧 중쇄 프레임워크 (FR) 서열은 표 3B에서 제시된다.
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
CD33 항체 결합의 특성규명
CD33 항체의 초기 특성규명은 CHO 세포주, 인간 1차 단핵세포, 인간 1차 수지상 세포, 및 인간 1차 대식세포 상에서 발현된 CD33을 결합시키는 그것의 능력 결정을 포함하였다. 세포는 수확되었고, 96-웰 플레이트에서 106/ml로 플레이팅되었고, 빙상에서 1 시간 동안 2% FBS, 2 mM EDTA 및 10 μg/ml 항체 그리고 Fc 차단 시약을 함유하는 100 μl PBS에서 인큐베이션되었다. 세포는 2회 세정되었고 빙상에서 30 분 동안 2% FBS, 2 mM EDTA 및 5 μg/ml PE-접합된 2차 항체를 함유하는 100ul PBS에서 인큐베이션되었다. 세포는 차가운 PBS에서 2회 세정되었고 BD FACS Canto에서 유세포측정에 의해 분석되었다. 데이터 분석 및 평균 형광 강도 (MFI) 값의 계산은 FlowJo (TreeStar) 소프트웨어 버전 10.0.7으로 수행되었다.
FACS 염색 분석은 CD33이, 인간 1차 단핵세포, 대식세포, 수지상 세포, CD4+ T 세포, 및 중성구를 포함하는, 1차 골수성 및 림프양 세포 상에서 발현되는 것을 표시한다 (도 5A).
표 4는 재조합 인간 CD33 (CHO hCD33)을 발현하는 CHO 세포주에 결합하는 항체를 입증한다. CD33 항체에 의해 결합된 세포 유형에 대하여 평균 형광 강도 (MFI) 값 및 퍼센트 양성 결합은 표 4에서 열거된다. 결합은 친계 CHO 세포주에 비교된다. 표 4에서, "아이소타입"은 아이소타입 mIgG1 대조군 항체를 지칭한다.
Figure pct00013
CD33 항체에 의해 결합된 세포 유형에 대하여 평균 형광 강도 (MFI) 값 및 퍼센트 양성 결합은 표 5에서 열거된다. 결합은 아이소타입 대조군에 비교된다. 항체는 인간 1차 단핵세포, 인간 1차 수지상 세포 및 인간 1차 대식세포에 결합한다. 표 5에서, "아이소타입"은 아이소타입 mIgG1 대조군 항체를 지칭하고; "DCs"는 수지상 세포를 지칭한다.
Figure pct00014
CD33 항체의 겉보기 친화도 상수는 그 다음 결정되었다. SPR 데이터는 BiaCore T200 기기에서 25℃에 10 Hz의 속도로 수집되었다. 데이터 분석은 BiaCore T200 평가 소프트웨어, 버전 2.0을 이용하여 수행되었다. HBS-EP+ (100 mM HEPES, 1.5 M NaCl, 30 mM EDTA, 0.5% v/v 계면활성제 P20, pH 7.4)는 운영 버퍼로서 그리고 시약 제조를 위하여 사용되었다. 각각의 항-CD33 항체 1A8, 2E12, 2F5, 6A3, 6C7, 및 젬투주맙 (20 nM)은 항-마우스 IgG로 고정된 CM5 센서 칩 (GE Healthcare)에서 포착되었다 (60 s 접촉 시간, 30 μL/min 유량, 0 s 안정화 시간). 20 nM 히스티딘-태그된 인간 CD33 (Sino Biological)은 그 다음 포착된 항-CD33 표면 위에 유동되었다 (120 s 접촉 시간, 30 μL /min 유량, 300 s 해리 시간). 이중 단일-농도 실험은 수행되었고 바탕 (0 nM 항원) 샘플에 의해 괄호로 묶였다. 칩 표면은 10 mM 글리신-HCl, pH 1.7 (60 s 접촉 시간, 30 μL/min 유량, 60 s 안정화 시간)을 이용하여 사이클 사이 재생되었다. 수득한 SPR 신호는 바탕 유동 세포 상에서 수행된 측정으로부터 반응의 차이로서 수득되었다. 단일-농도 동력학 분석 (Canziani, 등 Analytical Biochemistry 325 (2004), 301-307)은 각각의 항체에 대하여 결합 및 해리 속도 상수 (k a 및 k d , 각각)을 구하기 위해 1:1 상호작용 모델을 이용하여 수행되었다. 겉보기 친화도 상수 (K D )는 비 k d /k a 로부터 계산되었다. 단일-농도 분석은 실험의 이전의 세트에서 다중-농도 접근법 (사용된 항원의 5개 농축액, 더하기 1개의 바탕액)으로 입증되었다. 결과는 도 5B-5G 및 표 5B에서 묘사된다.
Figure pct00015
인간 1차 수지상 세포에 결합을 위하여 CD33 항체 2F5, 6C7, 젬투주맙, 및 린투주맙의 절반-최대 효과 농도 (EC50)는 또한 대략 0.003 nM 내지 대략 3 nM 범위이었던 항체 농도를 이용하여 결합 곡선에 의해 결정되었다. 도 5H에 나타낸 바와 같이, CD33 항체는 200 pM 미만의 EC50으로 인간 1차 수지상 세포에 결합하였다. 특히, 항체 2F5는 138.2 pM의 EC50으로 결합하였고 항체 6C7은 166.2 pM의 EC50으로 결합하였다 (도 5H). 그에 반해서, 상업적 항체 젬투주맙 및 린투주맙은 612.5 pM 및 845.3 pM, 각각의 EC50으로 인간 1차 수지상 세포에 결합하였다 (도 5I). 도 5H 및 5I에서 결과는 항체 2F5 및 6C7이 상업적 항체 젬투주맙 및 린투주맙이 한 것보다 더 낮은 EC50으로 인간 세포 (예를 들면, 1차 수지상 세포)에 개선된 결합을 갖는다는 것을 입증한다. 결과는 추가로 항체 2F5 및 6C7가 상업적 항-CD33 항체에 비교된 경우 인간 1차 골수성 세포에 개선된 표적 참여를 갖는다는 것을 나타낸다.
항체 인간화
항체 인간화는 인간 투여에서 면역원성을 예방하기 위해 서열 및 구조적 관계를 통해 인간 항체를 가장 많이 닮은 상이한 종에서 생성된 항체를 형질변환시키는데 사용된다. 상이한 종으로부터 항체는 인간 항체 프레임워크상에 비-인간 항체의 특이성-결정 영역 (SDRs)의 그라프팅을 허용하는 특징적인 서열 및 구조적 특징을 공유한다. 이것은 비-인간 항체의 특이성의 유지를 초래한다. 인간화 공정은, 프레임워크 영역 및 SDRs를 포함하는, 비-인간 항체 서열 및 특징의 확인을 포함한다. 하기 기준은 항체를 인간화하는데 사용된다: 1) 비-인간 및 공지된 인간 항체 사이 프레임워크 영역내 퍼센트 유사성, 2) 비-인간 및 공지된 인간 항체 사이 SDRs내 길이 유사성, 3) 인간 항체의 프레임워크 영역을 생성하는데 사용된 유전자, 및 4) 인간화에서 그리고 치료제로서 인간 항체 프레임워크의 이전의 용도. 차이가 항체의 특이성을 변화시킬 수 있는 항체에서 구조적 차이를 생성할 수 있기 때문에 프레임워크 영역 및 SDR 길이에서의 유사성은 중요하다. 인간 항체의 프레임워크를 생성하는데 사용된 특이적 유전자는 항체의 안정성 또는 특이성에 유익한 또는 해로운 것으로 공지되고, 따라서 선택적으로 사용되거나 회피된다. 마지막으로, 양호한 반감기로 양호하게 용인되는, 인간 치료제에서 사용된 것을 포함하는, 이전에 성공적인 인간화 프레임워크는 미래의 성공적인 인간화를 위한 가능한 후보자이다.
표 6A 및 6B에 나타낸 바와 같이, 4 인간화된 경쇄 및 중 가변 영역 서열은 항체 1A8에 대하여 확인되었고; 7 경쇄 가변 영역 서열 및 4 중쇄 가변 영역 서열은 항체 2E12에 대하여 확인되었고; 5 경쇄 가변 영역 서열 및 4 중쇄 가변 영역 서열은 항체 6A3에 대하여 확인되었고; 1 중쇄 가변 영역 서열은 항체 6C7에 대하여 확인되었고; 1 중쇄 가변 영역 서열은 항체 3A12에 대하여 확인되었다. 표 6A 및 6B에서, 볼드체 문자는 CDR 서열을 표시한다.
Figure pct00016
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실시예 2: CD33 항체의 에피토프 맵핑
CD33 항체는 전체 인간 CD33에 걸치는 15 또는 25-량체 펩타이드를 결합시키는 그들의 능력에 대하여 시험되었다. CD33 항체는 그들의 CD33 결합 영역 결정에 의해 참조 CD33 항체에 또한 비교되었다.
방법론
선형 15-량체 펩타이드는, 14 잔기가 중첩하면서, 인간 CD33 (서열 식별 번호:1)의 서열에 기반하여 합성되었다. 게다가, 선형 25-량체 펩타이드는 단일 잔기가 이동하면서 인간 CD33 (서열 식별 번호:1) 또는 마우스 CD33 (서열 식별 번호:2)의 서열에 기반하여 합성되었다. 각각의 합성된 펩타이드에 CD33 항체의 결합은 ELISA 기반 방법에서 시험되었다. 이 검정에서, 펩타이드 어레이는 1차 항체 용액으로 인큐베이션되었다 (밤새 4℃에서). 세정 이후, 펩타이드 어레이는 25℃에서 1 시간 동안 항체 페록시다아제 콘주게이트 (SBA, cat. nr. 2010-05)의 1/1000 희석액으로 인큐베이션되었다. 세정 이후, 페록시다아제 기질 2,2'-아지노-디-3-에틸벤즈티아졸린 설포네이트 (ABTS) 및 2 μl/ml의 3% H2O2는 첨가되었다. 1 시간 후, 발색은 측정되었다. 발색은 전하 커플링된 디바이스 (CCD) 카메라 및 이미지 처리 시스템으로 정량화되었다.
항체의 에피토프 비닝(binning)은 표준 샌드위치 포멧 비닝 검정 (참조 Estep 등, (2013) MAbs 5(2):270-8)을 이용하는 Forte Bio Octet Red384 시스템 (Pall Forte Bio Corporation, Menlo Park, CA)에서 수행되었다. 대조군 항-표적 IgG는 AHQ 센서 상에 장입되었고 센서에서 미점유된 Fc-결합 부위는 비-관련 인간 IgG1 항체로 차단되었다. 센서는 그 다음 100 nM 표적 항원 그 다음 제2 항-표적 항체에 노출되었다. 데이터는 ForteBio's 데이터 분석 소프트웨어 7.0을 이용하여 처리되었다. 항원 결합 이후 제2 항체에 의한 추가의 결합은 미점유된 에피토프 (비-경쟁자)를 표시하지만, 반면에 무 결합은 에피토프 차단 (경쟁자)를 표시한다.
대안적으로, 상기 표적 분자의 에피토프를 재작제하기 위해, 고리모양 및 조합 펩타이드의 라이브러리는 합성되었다. 아미노 작용화된 폴리프로필렌 지지체는 전매 친수성 폴리머 제형으로 그라프팅, 그 다음 N-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt)와 디사이클로헥실카보디이미드 (DCC)를 이용하는 t-부틸옥시카보닐-헥사메틸렌디아민 (BocHMDA)와 반응 및 트리플루오로아세트산 (TFA)를 이용하는 Boc-그룹의 차후의 절단에 의해 수득되었다. 표준 Fmoc-펩타이드 합성은 주문 변형된 JANUS 액체 취급소 (Perkin Elmer)에 의해 아미노-작용화된 고형 지지체 상에서 펩타이드를 합성하는데 사용되었다.
구조적 모방체의 합성은 스캐폴드 (CLIPS) 기술에서 펩스캔의(Pepscan's) 전매 화학적으로 연결된 펩타이드를 이용하여 실시되었다. CLIPS 기술은 단일 루프 및 이중-루프 속에 펩타이드를 구조화시킨다. CLIPS 템플레이트는 시스테인 잔기에 커플링된다. 펩타이드에서 다중 시스테인의 측-쇄는 1 또는 2 CLIPS 템플레이트에 커플링된다. 예를 들어, mP2 CLIPS (2,6-비스(브로모메틸)피리딘)의 0.5 mM 용액은 중탄산암모늄 (20 mM, pH 7.8)/아세토니트릴 (1:3(v/v))에 용해된다. 상기 용액은 펩타이드 어레이 상에 첨가된다. CLIPS 템플레이트는 펩타이드-어레이 (3 μl 웰을 가진 455 웰 플레이트)의 고체상 결합된 펩타이드에서 존재하는 경우 2 시스테인의 측-쇄에 결합할 것이다. 펩타이드 어레이는 30 내지 60 분 동안 용액에서 약하게 진탕되고 그 동안 용액에서 완전히 피복되었다. 마지막으로, 펩타이드 어레이는 과잉의 H2O로 광범위하게 세정되고 30 분 동안 70℃에서 PBS (pH 7.2)내 1 % SDS/0.1 % β-머캅토에탄올을 함유하는 붕괴-버퍼에서 초음파처리된 다음, 또 다른 45 분 동안 H2O에서 초음파처리된다. 펩타이드를 운반하는 T3 CLIPS (2,4,6-트리스(브로모메틸)피리딘)은 유사한 방식으로 그러나 현재 3 시스테인으로 제조되었다.
고리모양 펩타이드: 길이 17의 구속된 펩타이드. 위치 2-16은 상기 표적 서열로부터 유래된 15-량체이다. 원상태 Cys 잔기는 아세트아미도메틸기 (ACM)에 의해 보호된다. 위치 1 및 17은 mP2 CLIPS 모이어티에 의해 연결되는 Cys이다.
조합 펩타이드 (불연속 모방체): 길이 33의 구속된 펩타이드. 위치 2-16 및 18-32는 ACM에 의해 보호된 원상태 Cys 잔기를 가진 상기 표적 서열로부터 유래된 15-량체 펩타이드이다. 위치 1, 17 및 33은 T3 CLIPS모이어티에 의해 연결되는 Cys이다.
각각의 합성된 펩타이드에 항체의 결합은 PEPSCAN-기반 ELISA에서 시험된다. 펩타이드 어레이는 실험적으로 최적화된 농도의 시험 항체 및 차단 용액 (예를 들어 PBS/1% Tween80내 4% 말 혈청, 5% 난백알부민 (w/v))으로 구성된 시험 항체 용액으로 인큐베이션된다. 펩타이드 어레이는 4℃에서 밤새 시험 항체 용액으로 인큐베이션된다. 세정 버퍼 (1ㅧPBS, 0.05% Tween80)로 광범위한 세정 이후, 펩타이드 어레이는 25℃에서 1 시간 동안 적절한 항체 페록시다아제 콘주게이트의 1/1000 희석액으로 인큐베이션된다. 세정 버퍼로 세정 이후, 페록시다아제 기질 2,2'-아지노-디-3- 에틸벤즈티아졸린 설포네이트 (ABTS) 및 2 μl/ml의 3% H2O2는 첨가된다. 1 시간 후, 발색은 측정된다. 발색은 전하 커플링된 디바이스 (CCD) - 카메라 및 이미지 처리 시스템으로 정량화된다.
대안적으로 질량 분광분석 방법은 형태적 에피토프를 확인하는데 사용된다. 항-CD33 항체가, 고해상도로, 결합하는 CD33 단백질 상에서 형태적 에피토프의 핵심 잔기를 결정하기 위해, 항체/항원 복합체는 중수소화된 가교결합제로 인큐베이션되고 다중-효소 단백분해 절단에 적용된다. 가교결합된 펩타이드의 농축 이후, 샘플은 고해상도 질량 분광분석 (nLC-Orbitrap MS)에 의해 분석되고 생성된 데이터는 XQuest 소프트웨어를 이용하여 분석된다. 특이적으로, CD33 ECD/항체 복합체는 CD33 항원 및 항체의 등몰 용액 (5 μl 각각으로 4 μM) 혼합에 의해 생성된다. 수득된 1 μl의 혼합물은 아세토니트릴/물 (1:1, v/v)내 재-결정화된 시나핀산 매트릭스 (10 mg/ml), TFA 0.1% (K200 MALDI 키트)로 구성된 매트릭스의 1 μl와 혼합된다. 혼합 이후, 1 μl의 각각의 샘플은 MALDI 플레이트 (SCOUT 384) 상에서 배치된다. 실온에서 결정화 이후, 플레이트는 MALDI 질량 분광분석기에 도입되고 즉시 분석된다. 분석은 삼중으로 반복된다. 모노머성 항체, 항원, 및 항체 및 항원/항체 복합체를 나타내는 피크는 예상된 분자량에서 검출된다.
형태적 결합에서 에피토프가 단백질분해에 의해 생성된 체계 없는 C1q 펩타이드와 경쟁하는지는 그 다음 결정된다. 특이적으로, CD33 ECD/항체 복합체가 선형 펩타이드와 경쟁할 수 있는지를 결정하기 위해, CD33 ECD 항원은 고정된 펩신으로 소화된다. 10 μM의 농도를 가진 25 μl의 항원은 고정된 펩신 5 μM과 혼합되고 실온에서 30 분 동안 인큐베이션한다. 인큐베이션 시간 이후, 샘플은 원심분리되고 상청액은 피펫팅된다. 단백질분해의 완료는 선형 방식으로 고-질량 MALDI 질량 분광분석에 의해 제어된다. 펩신 단백질분해는 1000-3500 Da 범위에서 다량의 펩타이드를 수득하기 위해 최적화된다. 다음으로, 단백질분해에 의해 생성된 5 μl의 항원 펩타이드는 5 μl의 항체 (8 μM)와 혼합되고 37℃에서 6 시간 동안 인큐베이션된다. CD33 항원 펩타이드로 항체의 인큐베이션 이후, 5 μl의 혼합물은 5 μl의 온전한 CD33 항원 (4 μM)과 혼합되어 이로써 최종 혼합물은 2 μM/2 μM/2.5 μM의 CD33/항체/CD33 항원 펩타이드를 함유한다. MALDI ToF MS 분석은 표준 질소 레이저를 가진 CovalX's HM3 상호작용 모듈 및 상이한 질량 범위 0 내지 2000 kDa에서 초점조정을 이용하여 수행된다. 분석을 위하여, 하기 파라미터가 질량 분광분석기에 적용된다: 선형 및 양성 방식; 이온 공급원 1: 20 kV; 이온 공급원 2: 17 kV; 펄스 이온 추출: 400 ns; HM3에 대하여: 이득 전압: 3.14 kV; 이득 전압: 3.14 kV; 가속 전압: 20 kV. 기기를 조정하기 위해, 인슐린, BSA 및 IgG의 클러스터로 외부 보정은 적용되는 중이다. 각각의 샘플에 대하여, 3 지점은 분석된다 (300 레이저 샷 / 지점). 나타난 스펙트럼은 300 레이저 샷의 합계에 상응한다. MS 데이터는 Complex Tracker 분석 소프트웨어 버전 2.0 (CovalX Inc)을 이용하여 분석된다. 항원과 항체 사이 상호작용 계면의 화학 가교결합, 고-질량 MALDI 질량 분광분석 및 nLCOrbitrap 질량 분광분석을 이용하여, 항체에 결합하는 CD33에 대하여 형태적 에피토프를 확인하기 위해 하기 절차가 수행된다. 5μl의 샘플 항원 (농도 4 μM)는 최종 농도 2 μM/2 μM를 가진 항체/항원 혼합물을 수득하기 위해 5 μl의 샘플 항체 (농도 4 μM)과 혼합된다. 혼합물은 37℃에서 180 분 동안 인큐베이션된다. 제1 단계에서, 1 mg의 디석신이미딜우베레이트 H12 (DSS-H12) 가교결합제는 1 mg의 디석신이미딜우베레이트 D12 (DSS-D12) 가교결합제와 혼합된다. 제조된 2 mg은 DSS H12/D12의 2mg/ml 용액을 수득하기 위해 1 mL의 DMF와 혼합되었다. 이전에 제조된 10 μl의 항체/항원 혼합물은 제조된 가교결합제 d0/d12 (2 mg/ml)의 용액의 1 μl와 혼합되었다. 용액은 가교결합 반응을 달성하기 위해 실온에서 180 분 인큐베이션된다.
단백질분해를 촉진시키기 위해, 단백질에서 존재하는 디설파이드 결합을 감소시키는 것이 필요하다. 가교결합된 샘플은 20 μl의 중탄산암모늄 (25 mM, pH 8.3)과 혼합된다. 혼합 이후 2.5 μl의 DTT (500 mM)는 용액에 첨가된다. 혼합물은 그 다음 55℃에서 1 시간 인큐베이션된다. 인큐베이션 이후, 2.5 μl의 이오디오 아세트아미드 (1 M)는 첨가된 후 암실내 실온에서 1 시간 인큐베이션된다. 인큐베이션 이후, 용액은 단백질분해를 위하여 사용된 버퍼의 120 μl 첨가에 의해 1/5 희석된다. 145 μl의 감소된/알킬화된 가교결합된 샘플은 2 μl의 트립신 (Sigma, T6567)과 혼합된다. 단백분해 혼합물은 밤새 37℃에서 인큐베이션된다. a-키모트립신 단백질분해를 위하여, 단백질분해의 버퍼는 트리스-HCL 100 mM, CaCl2 10 mM, pH7.8이다. 145 μl의 감소된/알킬화된 가교결합된 복합체는 2 μl의 α-키모트립신 200 μM과 혼합되고 밤새 30℃에서 인큐베이션된다. 상기 분석을 위하여, Orbitrap 질량 분광분석과 조합으로 nLC는 사용된다. 가교결합제 펩타이드는 Xquest 버전 2.0 및 stavrox 소프트웨어를 이용하여 분석된다. 펩타이드 및 가교결합된 아미노산은 그 다음 확인된다.
결과
CD33 결합 영역은 4 항-CD33 항체에 대하여 결정되었다. 결합 영역은 표 7A에서 열거된다. 도 6A 및 6B는, 항-CD33 항체에 의해 결합된 영역을 나타내는, 인간 CD33의 도식적 묘사를 보여준다.
Figure pct00026
표 7A에서 표시된 바와 같이, 항체 3A12, 6C7, 및 1A8은 CD33의 세포외 면역글로불린-유사 가변-유형 (IgV) 도메인 내에서 펩타이드에 대하여 배타적으로 강력한 결합을 보여주었다.
표 7A에서 표시된 바와 같이, 항체 3A12 및 6C7에 의해 인식된 펩타이드는 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 48-54에 상응하고 하기의 아미노산 서열을 갖는다: PYYDKNS. 항체AF5에 의해 인식된 펩타이드는 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 137-147에 상응하고 하기의 아미노산 서열을 갖는다: HVTDLTHRPKI. 1A8의 항체에 의해 인식된 펩타이드는 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122에 상응하고, 하기의 아미노산 서열을 갖는다: VPCTFFHPIPYYD, GRFRLLGDPSR, RRDNGSYFFRM, 및 DNGSYFFRMER.
각각의 항체에 의해 결합된 펩타이드는 도 6A 및 6B에서 묘사된다.
기능성 맵핑
항-CD33 항체 2E12, 2F5, 6C7, 및 6A3의 샷건 돌연변이생성 에피토프 맵핑은 CD33 단백질용 알라닌-스캐닝 라이브러리를 이용하여 수행되었다. C-말단 V5 에피토프 태그를 인코딩하는 CD33 발현 작제물 (Uniprot id P20138)은 고-처리 알라닌 스캐닝 돌연변이생성에 적용되어 포괄적인 돌연변이 라이브러리를 생성하였다 (Davidson and Doranz, (2014) Immunology 143: 13-20). CD33 세포외 도메인을 나타내는, 각각의 잔기 8 내지 259는 주로 알라닌으로 돌연변이되었고, 반면에 알라닌 코돈은 세린으로 돌연변이되었다. 전체로, 252 CD33 돌연변이체 발현 작제물은 생성되었고, 서열 확인되었고, 384-웰 플레이트 속에, 1 돌연변이체 / 웰로 배열되었다.
384-웰 마이크로플레이트에 배열된, CD33 돌연변이 라이브러리 클론은 개별적으로 HEK-293T 세포 속에 형질감염되었고 22 시간 동안 발현하게 되었다. 세포는 그 다음 10% 정상 염소 혈청 (NGS) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)에서 희석된 항-CD33 항체로 인큐베이션되었다. 라이브러리 선별에 앞서, 1차 항체 선별 농도는 야생형 CD33 (WT)를 발현하는 세포에 대해 독립적인 면역형광 적정 곡선을 이용하여 결정되었고, 이것은 최적의 신호-대-배경 비 (>5:1)를 확인하였고 신호가 검출의 선형 범위 내인 것을 보장하였다. 항-CD33 항체는 10% NGS내 3.75 μg/ml AlexaFluor488-접합된 2차 항체 (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Westgrove, PA)를 이용하여 검출되었다. 세포는 칼슘 또는 마그네슘 없이 PBS로 2회 세정되었고 0.1% BSA (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)를 가진 Cellstripper (Cellgro, Manassas, VA)에서 재현탁되었다. 평균 세포 형광은 Intellicyt 고 처리 유세포측정기 (HTFC, Intellicyt, Albuquerque, NM)을 이용하여 검출되었다. 배경 형광은 벡터-형질감염된 대조군 세포의 형광 측정에 의해 결정되었다. 각각의 돌연변이체 클론에 대한 항체 반응성은 모의-형질감염된 대조군으로부터 신호 뺄셈 및 야생형 CD33-형질감염된 대조군으로부터 신호로 정상화에 의해 야생형 CD33 단백질 반응성에 비해 계산되었다.
결정적 클론 내에서 돌연변이된 잔기는 이들이 시험 항체의 반응성을 지지하지 않았지만 상업적으로 입수가능한 대조군 항체 WM53 Mab (Biolegend, Cat#: 303402) 또는 추가의 항-CD33 항체의 반응성을 지지했다면 항-CD33 항체 에피토프에 결정적으로서 확인되었다. 상기 카운터-스크린 전략은 국소적으로 미스폴딩된 또는 발현 결함을 가진 CD33 돌연변이체의 제외를 촉진시켰다.
도 6C는 스크린에서 확인된 전체 결정적 잔기에 대하여 평균 결합 반응성 및 범위를 도시한다. 범위는 이중 실험적 결합 값 사이 차이이다. 1차 결정적 잔기는 적색으로 설명되고 돌연변이가 시험 항체 결합에 대하여 음성 (WT에 결합의 <30%) 그러나 대조군 항체에 대하여 양성 (>80% WT)이었던 잔기로서 확인되었다. 청색으로 설명된 잔기는 역치 지침을 충족시키지 못한, 그러나 이들이 항체 에피토프의 일부일 수 있다는 것을 감소된 결합 활성 및 결정적 잔기에 근접이 나타내는 추가의 2차 잔기이다 (도 6C). 도 6D는 적색 구형체로서 결정적 잔기 및 청색 구형체로서 2차 잔기를 나타내는 Siglec-7 (PDB ID 1NKO; Dimasi 등, 2004)의 IgV 도메인의 결정 구조 모델을 도시한다. 항체 결합에 결정적인 아미노산 잔기, 뿐만 아니라 2차 잔기는 표 7B에서 열거된다.
Figure pct00027
표 7B에서 표시된 바와 같이, 항체 2E12 및 2F5에 의한 결합에 관여된 결정적 CD33 잔기는 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 Y49 및 K52에 상응하고; 항체 2E12 및 2F5에 의한 결합에 관여된 2차 잔기는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 Y50에 상응한다. 항체 6C7에 의해 결합에 관여된 결정적 CD33 잔기는 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 Y49 및 N53에 상응하고; 항체 6C7에 의한 결합에 관여된 2차 잔기는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 Y50 및 K52에 상응한다. 항체 6A3에 의한 결합에 관여된 결정적 CD33 잔기는 서열 식별 번호:1의 아미노산 잔기 D18, N20, F21, 및 P46에 상응하고; 항체 6A3에 의한 결합에 관여된 2차 잔기는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 P19 및 F44에 상응한다.
실시예 3: 시험관내 및 생체내 CD33의 세포 표면 수준에서 CD33 항체-유도된 감소
CD33의 시험관내 발현
하기 실시예의 목적은 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체가 단핵세포, 대식세포, 수지상 세포, 중성구, T 세포, 및/또는 미세아교세포 상에서 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는지를 시험하는 것이었다.
조직구성 림프종 세포주 U937, 뿐만 아니라 인간 1차 단핵세포, 말초 혈액 단핵세포로부터 유래된 인간 1차 수지상 세포 (DC), 말초 혈액 단핵세포로부터 유래된 인간 1차 대식세포, 및 인간 단핵세포로부터 유래된 인간 1차 미세아교 세포 상에서 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 항-CD33 항체의 능력은 평가되었다.
인간 미세아교 세포는 Etemad 등, JI (2012), 및 Ohgidani 등, Scientific Reports (2014)에 기재된 프로토콜에 따라 1% Pen/Strep, 10 ng/ml GM-CSF, 10 ng/ml M-CSF, 10 ng/ml 베타-NGF, 100 ng/ml CCL-2, 100ng/ml IL-34를 가진 무혈청 RPMI내 배양액에 의해 말초 혈액 단핵세포로부터 제조되었다. 세포는 분지된 형태가 나타난 경우 7-10 일째에 수확되었다. 주변 인간 혈액 샘플로부터 단핵세포는 RosetteSep™ 단핵세포 단리 항체 칵테일 (StemCell Technologies)를 이용하여 단리되었고, GM-CSF 및 IL-4 (PeproTech)를 가진 수지상 세포 속에 분화되었고 5 일 동안 배양되었다. 세포는 10% 태아 송아지 혈청 (Hyclone)을 함유하는 RPMI 배지 (Invitrogen)내 배양 접시 상에서 플레이팅되었고 5% CO2에서 37℃에 배양되었다. 비-부착 세포는 수집되었고 식균작용 실험에 사용되었다. 인간 대식세포를 생성하기 위해, 주변 인간 혈액 샘플로부터 단핵세포는 단리되었고 50 μg/ml M-CSF를 가진 대식세포로, 또는 100 μg/ml GM-CSF 및 100 μg/ml IL-4를 가진 수지상 세포로 5 일 동안 분화되었다.
세포 샘플은 200,000 세포 / mL로 24-웰 플레이트에 또는 10% Hyclone FBS, 2 mM 글루타민, pen/strep, 및 비-필수 아미노산으로 보충된 2 mL의 RPMI내 500,000 세포로 6-웰 접시에 플레이팅되었다. CD33 항체 또는 대조군 아이소타입은 1.0 μg/ml로 첨가되었고, 24 시간 동안 37℃에서 5% CO2로 인큐베이션되었다.
수용체 동력학을 평가하기 위해, 항체는 1 시간 동안 세포를 결합하도록 되었고, 세정 제거되었고 CD33의 표면 수준은 24 및 48 시간 후 결정되었다.
세포 표면 수용체 발현은 FACS 분석에 의해 검출되었다. 세포는 항-CD33-FITC 클론 HIM3-4, 뿐만 아니라 대조군 표면 마커 (U937: Siglec-5, 인간 단핵세포: CD14, 인간 수지상 세포: CD11c, 인간 대식세포: CD11b)로 30 분 동안 어둠속 빙상에서 인큐베이션되었다. 세포는 FACS 버퍼 (PBS +2% FBS, 2mM EDTA)에서 2X 세정되었고 유세포측정은 BD FACS Canto 상에서 수행되었다. 데이터는 TreeStar FlowJo 소프트웨어를 이용하여 분석되었다. 데이터는 각각의 형광단에 대하여 MFI 값을 이용하는 항체의 부재하에 수용체 발현의 퍼센트로서 계산되었다.
표 8A는 인간 세포로부터 CD33 세포 표면 수준의 결과를 도시한다. 표 8A에서, "아이소타입"은 아이소타입 mIgG1 대조군 항체를 지칭한다.
Figure pct00028
표 8B는 인간 미세아교 세포로부터 CD33 세포 표면 수준의 결과를 도시한다. 표 8B에서, "아이소타입"은 아이소타입 mIgG1 대조군 항체를 지칭하고, "ND"는 결정되지 않음을 지칭한다.
Figure pct00029
표 8A 및 8B 및 도 16A-16H에 나타낸 바와 같이, 항체 1A8, 2E12, 2F5, 3A12, 6A3, 및 6C7, 및 더 낮은 정도로 2B4는 인간 세포의 다중 유형 상에서 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킬 수 있었다.
추가로, 시험관내 표면 CD33 하향조절 연구는 CD33 항체 2F5, 6C7, 젬투주맙, 및 린투주맙이 12-포인트 곡선에 대하여 2-배 적정된 것에서 수행되었다 (도 16I). 유사한 적정 곡선은 대조군 수용체 CD11c에 대하여 수행되었다 (도 16J). 절반-최대 효과 농도 (EC50) 계산은 그 다음 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행되었다. 도 16J에 나타낸 바와 같이, 대조군 수용체 CD11c의 세포 표면 발현은 임의의 항체로 조절되지 않았다. 이 결과는 CD33 항체 2F5가 21.47 pM의 EC50으로 CD33의 세포 표면 발현을 감소시키고, CD33 항체 6C7이 34.81 pM의 EC50으로 CD33의 세포 표면 발현을 감소시키고, 상업적 항체 젬투주맙이 107.5 pM의 EC50으로 CD33의 세포 표면 발현을 감소시키는 것을 나타냈다 (도 16I). 결과는 항체 2F5 및 6C7가 시험된 CD33 최대 농도의 세포 표면 발현 감소에서 상업적 항체 젬투주맙 또는 린투주맙보다 더 강하고 강력하다는 것을 나타낸다 (도 16I).
CD33의 생체내 발현
생체내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 CD33 항체의 능력을 시험하기 위해, 인간화된 NSGS 마우스 (hu-NSGS)는 이용되었다. Hu-NSGS 마우스 (또한 NOD-scid IL2Rgnull-3/GM/SF로 불림)는 CMV 프로모터의 제어하에 인간 IL-3, 인간 CSF2, 및 인간 KITL 이식유전자를 발현하는 트랜스제닉 NSG 마우스이다. Hu-NSGS 마우스는 또한 인간 CD34+ 조혈 줄기 세포로 생착되고 있다. 암컷 Hu-NSGS 마우스는 Jax로부터 구매되었고 인간 세포로 생착 15 주 이후 이용되었다. 마우스는 0 일째에 40 mg/Kg 항-CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군 마우스 IgG1 항체 (클론 MOPC-21)의 복강내 주사를 받았다. -7, 1, 3, 및 7 일째에 혈액 샘플은 마우스로부터 헤파린 속에 인출되었고 FACS 분석을 위하여 처리되었다. 간단히, 혈액 샘플은 적혈구를 용해시키기 위해 빙랭 ACK 용해 버퍼에서 5 분 동안 제1 인큐베이션되었고 그 다음 차가운 PBS로 광범위하게 세정되었다. 상기 절차는 2회 반복되었다. 세포는 그 다음 항-인간-CD45-Pe-Cy7, 항-마우스-CD45-APC-Cy7, 항-인간-CD3-PerCP-Cy5.5, 항-인간-CD14-FITC, 항-인간-CD11c-PB, 항-CD33-PE, 항-Siglec-9-APC의 존재하에 FACS 버퍼 (PBS +2% FBS, 2mM EDTA)에, 그리고 Fc 차단 용액의 존재하에 빙상에서 30 분 동안 생존력 다이 (Life Technologies, Cat# L34957)에 인큐베이션되었고, 그 다음 차가운 FACS 버퍼로 2회 세정되었다. 4% PFA-고정된 샘플은 그 다음 획득되었다. 데이터는 BD FACS CANTO™ II 세포계산기 (Becton Dickinson)로 획득되었고 FlowJo 소프트웨어로 분석되었다. CD33 및 Siglec 9의 발현 수준은 hCD45+, hCD14+ 세포 집단에서 결정되었다.
도 16K 및 16L에 나타낸 바와 같이, 대조군 항체 치료 및 사전-치료 수준에 비교된 경우, 항-CD33 항체 2F5로 치료는 치료받은 hu-NSGS 마우스의 말초 혈액의 세포내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킬 수 있었다. CD33 발현은 항체 치료후 1 일만큼 조기에 ~80%만큼 감소되었고 시험된 마지막 시점 (치료후 7 일)까지 낮게 남아있었다. 비교로서, 관련없는 표면 수용체 Siglec-9의 세포 표면 발현은 사전-치료 수준에 비교하여 변함없이 남아있었다.
추가적으로, 생체내 표면 CD33 하향조절 연구는 CD33 항체 2F5가 주변 단핵세포 상에서 세포 표면 발현 감소를 위하여 절반-최대 효과 농도 (EC50)를 결정하기 위해 적정되었던 것에서 수행되었다. Taconic으로부터 NOG 인간화된 마우스는 CD33 항체 2F5의 어느 한 40 mg/kg, 8.0 mg/kg, 1.6 mg/kg, 또는 0.3 mg/kg의 단일 복강내 주사로 주사되었다. CD33 및 대조군 수용체 Siglec-9의 세포 표면 수준은 하기 시점에서 FACS에 의해 측정되었다: 치료에 앞서 7 일 (-7일째), 치료후 1 일째, 및 35 일째까지 그 후에 매주. CD33 및 Siglec-9의 세포 표면 수준은 FACS에 의해 주변 인간 CD45+ CD14+ 단핵세포 상에서 평가되었다. -7 일째의 MFI는 % 감소를 계산하기 위해 100% 세포 표면 발현의 기준선을 설정하는데 사용되었다. 도 16M에 나타낸 바와 같이, 항체 2F5는 시험된 항체의 모든 농도에서 주변 단핵세포 상에서 인간화된 마우스내 생체내 경시적으로 CD33의 세포 표면 수준을 지속적으로 감소시켰다. 대조군 수용체의 것이 아닌, CD33의 세포 표면 수준에서 50% 감소는 40 mg/kg, 8.0 mg/kg, 및 1.6 mg/kg의 항체 농도에서 관측되었다 (도 16M 및 16N).
실시예 4: CD33 항체는 인간 CD33에 결합을 위하여 CD33 리간드와 경쟁한다
하기 실시예의 목적은 항-CD33 항체가 CD33 상에서 리간드-결합 부위를 인식하고 CD33 수용체 상에서 결합하는 리간드와 경쟁하는지를 시험하는 것이었다.
항체가 CD33에 결합하는 리간드와 경쟁하는지를 결정하기 위해, 적혈구 (RBC) 고형 접착력 검정은 표준 프로토콜에 따라 수행되었다 (Kelm 등, Current Biology, 1994). 적혈구는 시알산을 함유하는 당단백질로 고도로 장식되고; 따라서, 고정된 CD33에 결합하는 RBC를 차단하기 위한 항체의 능력은 리간드 간섭을 결정하기 위해 사용될 수 있다. 간단히, 5 μg/ml CD33-Fc는 RT에서 밤새 96-웰 Immunolon 플레이트에서 코팅되었고, 그 다음 PBS로 세정되었고, 1 시간 동안 결합 버퍼 (%0.25 BSA 1mM CaCl2를 함유하는 PBS)로 차단되었다. CD33 항체 (0.5 μg/ml 또는 1.0 μg/ml) 또는 Fabs (25 μg/ml)는 1 시간 동안 RT에서 약한 흔들면서 결합되었다. 미결합된 항체의 제거 이후, 적혈구는 각각의 웰에 3.0 x106 세포 / mL의 농도로 첨가되었고 RT에서 1 시간 동안 인큐베이션되었다. 미결합된 RBCs는 그 다음 PBS로 3X 주의하여 세정 제거되었고, 물은 각각의 웰에 결합된 RBCs의 저삼투압 용해를 위하여 첨가되었다. 플레이트는 -80℃로 10 분 동안, 그 다음 37℃로 15 분 동안 이동되었다. 결합된 RBCs는 페록시다아제 활성에 의해 검출되었고, 그 다음 2N 황산으로 반응을 멈추었다. 신호는 450nM에서 검출되었다. 데이터는 항체의 부재하에 플레이트 결합된 CD33-Fc에 결합하는 RBC의 퍼센트로서 계산되었다.
리간드 경쟁 검정의 결과는 표 9에서 묘사된다. 표 9에서, "아이소타입"은 아이소타입 mIgG1 대조군 항체를 지칭한다.
Figure pct00030
표 9에 나타낸 바와 같이, 항체 1A8, 2E12, 2F5, 3A12, 6A3, 및 6C7, 및 더 낮은 정도로 2B4는 CD33에 결합하는 RBC를 차단할 수 있었고, 따라서 CD33 상에서 리간드-결합 부위에 항체의 경쟁적 결합, 및 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이 상호작용을 억제시키는 (즉, CD33에 결합하는 리간드를 차단하는) 그들의 능력을 나타낸다.
실시예 5: CD33 항체 기능성 연구의 요약.
표 10은 상기 실시예 3 및 4에서 기재된 세포 표면 발현 및 리간드 결합 연구의 결과를 요약한다. 표 10에서 표시된 바와 같이, CD33 항체의 1종의 일반적인 부류가 있었다. 이러한 부류의 항체는 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키고 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이 상호작용을 억제시킨다.
CD33의 세포 표면 수준을 감소시키고 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이 상호작용을 억제시키는 항체의 부류에서 항체는 하기를 포함한다: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2.
Figure pct00031
실시예 6: 수지상 세포 상에서 CD33에 결합하는 리간드는 T 세포 증식 및 식균작용을 억제시킨다
인간 수지상 세포 (DCs)는 GM-CSF 및 IL-4를 가진 말초 혈액 단핵세포로부터 분화되었고 5 일 동안 배양되었다. 미성숙한 (현탁액) DCs는 수확되었고 12 웰 접시에서 200,000 세포 / mL의 밀도로 플레이팅되었다. DCs는 24 시간 동안 TNFa (50 μg/ml), IL-1β (50 μg/ml), IL-6 (150 ng/ml), 및 프로스타글란딘 E2 (1 μg/ml)의 사이토카인 칵테일로 활성화되었다. 수지상 세포 성숙은 LIN, CD11c, HLA-DR, CD86, 및 CD83 (BD Biosciences)에 대하여 상업적으로 입수가능한 항체로 유세포측정에 의해 결정되었다. 동종 단리된 T 세포로 공동-배양 직전에, 활성화된 DCs는 2 시간 동안 37℃에서 무혈청 배지내 비브리오 콜레라로부터 100 mU/ml 뉴라미니다제로 시알리다제 처리되었거나, 미처리되었다. 효소 활성은 혈청-함유 배지의 첨가로 켄칭되었고, 세포 펠렛화되었고 완전 배지에서 재현탁되었다. 시알리다제 활성화된, 미처리 활성화된, 또는 미활성화된 DCs는 동종 CFSE 표지된 T 세포와 1:10의 비로 공동-배양되었다. CD3/CD28 Dynal 비드는 양성 대조군으로서 T 세포 단독에 첨가되었다. 5 일 후 T 세포 증식은 BD FACS Canto 상에서 CFSE 희석에 의해 측정되었다.
도 7 및 8은 수지상 세포 상에서 시알산이 혼합된 림프구 반응 (MLR) 동안 T 세포 증식을 제한하는 것을 보여준다. 도 8은 억제 리간드를 정상적으로 발현하는 DCs가 T 세포 증식의 낮은 수준을 유도하고 (좌측 패널), 반면에 DCs 상에서 억제 리간드의 제거가 T 세포 증식을 증가시키는 (우측 패널) 것을 보여준다.
도 7 및 8에 나타낸 바와 같이, 활성화된 DCs로부터 시알산의 효소 제거는 미처리 활성화된 DCs에 비교된 경우 T 세포 증식을 증가시켰다. 이들 결과는 DCs에서 존재하는 시알산이 동종 DCs와 공동-배양된 경우 T 세포 증식을 제한하기 위해 억제성 방식으로 T 세포 상에 작용한다는 것을 나타낸다. 이들 결과는 T 세포 또는 수지상 세포 상에서 CD33을 차단하는 항체가 T 세포 및/또는 수지상 세포 기능성을 향상시킨다는 것을 나타낸다. CD3/CD28 Dynal 비드는 양성 대조군으로서 사용되었다. 더욱이, 이들 결과는 DCs 또는 임의의 다른 세포 또는 생물학적 공급원과 시알산 상호작용 차단이 T 세포 기능을 증가시킬 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 7: 염증성 병태는 골수성 세포에서 CD33 발현을 유도한다
인간 수지상 세포 (DCs)는 GM-CSF 및 IL-4를 가진 말초 혈액 단핵세포로부터 분화되었고 5 일 동안 배양되었다. 미성숙한 인간 DCs는 5 일째에 수확되었고 B16으로부터 멸균-여과된 상청액, 루이스 폐, MC38 종양 상청액 또는 10 ng/ml LPS로 공동-배양되었다. 24 시간 후 CD33 발현은 직접적으로 접합된 CD33-PE 항체로 유세포측정에 의해 결정되었다. 시알산 리간드 발현은 인간 IgG1-Fc에 융합된 50 μg/ml 가용성 CD33으로 빙상에서 30 분 동안 인큐베이션에 의해 평가되었고, IgG1-Fc 단독은 인간 Fc 차단의 존재하에 음성 대조군으로 사용되었다. 세포 상에서 시알산에 가용성 수용체의 결합은 세정 단계 및 PE에 접합된 항-인간 2차로 빙상에서 30 분 동안 인큐베이션 이후 검출되었다. 유세포측정 분석은 BD FACS Canto 상에서 수행되었다.
1차 대식세포를 유도하기 위해, 주변 인간 혈액 샘플로부터 인간 단핵세포는 단리되고 직접적으로 사용되거나 5 일 동안 50 μg/ml M-CSF를 가진 대식세포로 분화된다. 염증성 사이토카인 생산에서 CD33의 역할을 결정하기 위해, 인간 대식세포는 다양한 염증성 매개체로 배양되고, 사이토카인 수준은 배양 상청액에서 측정된다. 인간 대식세포를 생성하기 위해, 주변 인간 혈액 샘플로부터 단핵세포는 단리되고 직접적으로 사용되거나 50 μg/ml M-CSF를 가진 대식세포 또는 100 μg/ml GM-CSF 및 100 μg/ml IL-4를 가진 수지상 세포로 5 일 동안 분화된다. 세포는 5 일 동안 배양되고, 부착 세포는 PBS내 1mM EDTA로 탈착되었다. 세포는 96-웰 플레이트 상에서 105세포/웰로 플레이팅되고 4시간 동안 37℃에서 부착하게 된다. 세포는 그 다음 0.01-100ng/ml (LPS) 또는 0.01-100 μg/ml (자이모산) 범위의 농도에서 TLR 효능제 LPS (살모넬라 아보르투스 에퀴) 또는 자이모산 (사카로마이세스 세레비지애)로 자극된다. 대안적으로, 대식세포는 10 ng/ml의 사이토카인 IL-4 또는 50 ng/ml의 IFN-g의 존재하에 배양된다. 세포 배양 상청액은 자극 24 또는 48 시간 이후 수집되고 TNFa, IL-6, IL-10, 및 MCP-1 사이토카인의 수준은 제조자의 프로토콜에 따라 혈구계산 비드 어레이 염증 키트 (BD)를 이용함으로써 측정된다. 염증성 매개체 LPS 또는 자이모산으로 자극된 대식세포는 억제 글리콜 리간드를 제거하는 효소로 또는 CD33 길항적 항체로 처리된 경우 더 많은 염증성 사이토카인 TNFa, IL-6, IL-10, 및 MCP-1을 분비하는 것으로 기대된다.
도 9A 및 9B는 CD33 발현이 종양 상청액에 노출 이후 인간 수지상 세포 상에서 증가되는 것을 보여준다. 도 9C 및 9D는 CD33 발현이 LPS-유도된 염증 동안 인간 수지상 세포 상에서 증가되는 것을 보여준다. 도 9E 및 9F는 LPS-유도된 염증이 시알산 (CD33 리간드)의 발현을 증가시키는 것을 보여준다.
이들 결과는 염증성 병태 및 종양 환경이 두 CD33 및 시알산 리간드의 상향조절로 이어지는 것을 나타낸다. 결과는 증가된 CD33 기능이 인간 1차 수지상 세포를 면역억제할 수 있다는 것을 또한 입증한다. 이들 결과는 항체 하향조절 또는 차단으로 CD33 억제가 면역억제된 골수성-유래된 또는 종양-관련된 골수성 세포를 완화시킬 수 있고 면역 기능을 회복시킬 수 있다는 것을 나타낸다. 이들 결과는 추가로 골수성 세포 상에서 CD33을 차단하는 항체가 골수성 세포 기능성을 향상시킨다는 것을 나타낸다.
실시예 8: 시알리다제 치료로 수지상 세포에 의한 증가된 E.콜리 식균작용
하기 실시예의 목적은 길항적 항-CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체가 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 및 질환 유발 단백질, 예컨대 A 베타 펩타이드, 알파 시누클레인 단백질, 타우 단백질, TDP-43 단백질, 프리온 단백질, 헌팅틴 단백질, RAN, 골수성 계통으로부터 세포, 예컨대 단핵세포, 수지상 세포 대식세포 및 미세아교세포에서 글리신-알라닌 (GA), 글리신-프롤린 (GP), 글리신-아르기닌 (GR), 프롤린-알라닌 (PA), 또는 프롤린-아르기닌 (PR)으로 구성된 디펩타이드 반복부,(DPRs 펩타이드)를 포함하는, 번역 생성물 항원의 식균작용을 유도하는지를 시험하는 것이었다. 이중특이적 항체는, 제한 없이, CD3, A 베타 펩타이드, 항원 또는 알파 시누클레인 단백질 항원 또는, 타우 단백질 항원 또는, TDP-43 단백질 항원 또는, 프리온 단백질 항원 또는, 헌팅틴 단백질 항원, 또는 RAN, 글리신-알라닌 (GA), 글리신-프롤린 (GP), 글리신-아르기닌 (GR), 프롤린-알라닌 (PA), 또는 프롤린-아르기닌 (PR)으로 구성된 디펩타이드 반복부,(DPRs 펩타이드)를 포함하는, 번역 생성물 항원을 포함하는 제2 항원 및 CD33 항원을 인식하는 항체일 수 있다.
주변 인간 혈액 샘플로부터 단핵세포는 RosetteSep™ 단핵세포 단리 항체 칵테일 (StemCell Technologies)을 이용하여 단리되었고, GM-CSF 및 IL-4 (PeproTech)를 가진 수지상 세포로 분화되었고 5 일 동안 배양되었다. 세포는 10% 태아 송아지 혈청 (Hyclone)을 함유하는 RPMI 배지 (Invitrogen)내 배양 접시 상에서 플레이팅되었고 5% CO2에서 37℃에 배양되었다. 비-부착 세포는 수집되었고 식균작용 실험에 사용되었다.
박테리아 식균작용 검정을 수행하기 위해, 수지상 세포는 수확되었고 2 시간 동안 사이토카인 없이 96-웰 편평 바닥 플레이트에 플레이팅되었다. pHrodo-표지된 E. 콜리 BioParticles는 제조자의 프로토콜에 따라 재현탁되었고 37℃에서 2.5 시간 동안 비브로 콜레라로부터 0.2 U/ml 또는 0.4 U/ml 시알리다제, 또는 PBS 단독으로 처리되었다. BioParticles는 세정되었고, RPMI에서 재현탁되었고 20 μg/웰 첨가되었다. 수지상 세포 및 E. 콜리 세포는 혼합되었고, 펠렛화되었고, 30 분 동안 37℃에서 인큐베이션되었다. 사이토칼라신 D는 대조군 웰에 10 μM로 첨가되었다. FACS 분석 직전에, 세포는 얼음에 이동되었고 4℃에 FACS 버퍼에서 2X 세정되었다. pHrodo-표지된 E.콜리 식균작용은 BD FACS Canto 상에서 유세포측정에 의해 PE 채널에서 검출되었다.
도 10은 시알리다제 치료가 E. 콜리의 수지상 세포-매개된 식균작용을 증가시켰음을 보여준다. 이들 결과는, 예를 들어, CD33의 세포 표면 발현을 감소시키고/시키거나 CD33에 1종 이상의 CD33 리간드의 결합을 억제시키는 길항적 항-CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체가 또한 식균작용을 유도하는데 또는 달리 증가시키는데 사용될 수 있다는 것을 나타낸다.
도 11A 및 11B는 CD33 항체 2F5 및 6C7이 E.콜리의 대식세포 식균작용을 증가시키는 것을 보여준다. 이들 결과는 CD33의 세포 표면 수준을 하향조절하는 CD33 항체가 대식세포를 더욱 식세포가 되게 할 수 있고, 아이소타입 대조군이 아닌, CD33 항체의 존재하에 박테리아 기질의 흡수를 증가시킬 수 있다는 것을 나타낸다. 결과는 또한 대식세포가 감소된 CD33 발현 때문에 그들의 식세포 기능 및 따라서 감소된 CD33 기능을 증가시킨다는 것을 나타낸다.
실시예 9: 알츠하이머병 환자의 뇌 부문에서 CD33 리간드의 증가된 발현
시알산 리간드 발현은 음성 대조군으로서 바이오티닐화된 CD33-Fc (R&D) 및 IgG1-Fc로 면역조직화학에 의해 정상 및 알츠하이머병 (AD) 환자의 뇌에서 검출되었다. CD33-Fc 및 대조군 IgG-Fc 단백질은 제조자의 지침에 따라 EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin (Thermo Scientific)으로 바이오티닐화되었다. 밤새 인큐베이션을 예외로, IHC 절차는 진탕기에서 수행되었다. 샘플은 15 분 동안 10% MeOH, PBS내 3% H2O2에서 인큐베이션되었고, 그 다음 4% 혈청으로 PBS내 3회 세정되었다. 다음으로, 샘플은 30 분 동안 0.2% 트리톤-X, 4% 혈청, PBS내 0.019% L-라이신에서 인큐베이션되었고, 그 다음 1 시간 지나서 1차 항체에서 그 다음 밤새 4C에 4% 혈청을 갖는 PBS에서 인큐베이션되었다. 다음 날 샘플은 진탕기에서 1 시간 동안 배치되었고 그 다음 3회 세정되었고, 그 다음 샘플은 1 시간 동안 ABC 버퍼에서 인큐베이션되었고 3회 세정되었다. 샘플은 벡터 DAB 페록시다아제 키트로 발색되었고, 3회 세정되었고 탈수되었고 컬러 카메라, 200X의 배율을 가진 Nikon 90i 현미경으로 이미지화되었다. 정량화는 Nikon Elements BR 이미지 분석 소프트웨어를 이용하여 수행되었다.
도 12A 및 12B는 시알산 CD33 리간드가 AD 환자로부터 뇌 부문에서 상향조절되는 것을 보여준다. 5 AD 및 5 비-AD 인간 뇌로부터 데이터는, 대조군 시약, IgG1-Fc, p=0.1842에 비교된, 1원 ANOVA, p=0.0002에 의해 CD33 시알산 리간드의 발현에서 통계적으로 유의미한 증가를 보여준다 (도 12B). 도 13A 및 13B는 CD33 발현이, 정상 환자 (비-AD)에 비교된, AD 환자로부터 뇌 부문에서 증가되는 것을 보여준다. 도 13B에서 데이터는 5 AD 및 5 비-AD 인간 뇌로부터이다.
전장 CD33 발현에서 증가와 관련된 유전적 데이터 확인된 SNPs는 AD 위험을 증가시킨다. 도 12 및 13에서 묘사된 결과는, 일부 AD 뇌에서 CD33 상향조절에 더하여, CD33용 시알산 리간드가 AD 뇌에서 또한 증가되는 것을 나타낸다.
이들 결과는 세포 표면으로부터 CD33을 제거하거나 증가된 리간드 상호작용을 차단하는 항체가 뇌에서 미세아교세포 또는 다른 골수성 세포 상에서 억제 CD33-의존적 신호전달을 완화시킬 수 있고, 알츠하이머병에 대하여 유익한 효과와 함께, 이들 세포에 정상 기능을 회복할 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 10: 암 세포에서 CD33 및 CD33 리간드의 증가된 발현 및 CD33 절제의 효과
시험관내 연구
시알산 리간드 발현은 인간 IgG1-Fc (R&D)에 융합된 50 μg/ml 가용성 CD33 수용체로 빙상에서 30 분 동안 인큐베이션에 의해 B16, 루이스 폐, 및 MC38 결장 암종 세포 상에서 평가되었고, IgG1-Fc 단독은 인간 Fc 차단의 존재하에 음성 대조군으로서 사용되었다. 세포 상에서 시알산에 가용성 수용체의 결합은 PE에 접합된 항-인간 2차로 빙상에서 30 분 동안 세정 단계 및 인큐베이션 이후 검출되었다. 유세포측정 분석은 BD FACS Canto 상에서 수행되었다.
도 14A는 억제 CD33 리간드의 발현이 흑색종 세포, 폐 종양 세포, 및 결장 암 세포에서 배경 넘어 적어도 20-배 증가되는 것을 보여준다. 이론에 의한 구속됨 없이, 이들 종양 세포 상에서 억제 시알산 리간드 발현의 확인은 암 세포가 면역 인식 및 청소능을 면하는 기여 기전을 나타낸다. 종양 세포 상에서 시알산 리간드는 골수성 및 림프양 면역 세포 상에서 발현된 CD33을 통해 면역억제성 상호작용을 매개할 수 있다 (도 14B-14D). 이들 결과는 세포 표면으로부터 CD33을 제거하거나 증가된 리간드 상호작용을 차단하는 항체가 면역 시스템 상에서 종양의 억제 효과를 완화시킬 수 있고 암 요법을 향상시킬 수 있다는 것을 나타낸다.
생체내 연구
CD33의 부재 또는 존재하에 생체내 MC38 결장 암종 성장을 연구하기 위해, 8-10 주령 C57BL/6NJ 야생형 마우스 (WT; n=7) 또는 CD33 넉아웃 마우스 (KO; n=10)은 옆구리에서 0.1mL PBS내 1x106 MC38 결장 암종 세포로 피하로 공격받았다. 종양이 2000 mm3의 크기에 도달한 때까지, 종양 성장은 캘리퍼스로 매 3-4 일 모니터링되었다.
생체내 CD33의 발현을 결정하기 위해, 4 주령 암컷 Taconic NOG 마우스는 정맥내 주사에 의해 인간 태아 간 CD34+ 세포 (100,000 세포/마우스)로 생착 대략 24시간 이전 골수말소되었다. 면역 세포의 재구성은 말초 혈액의 유세포측정으로 모니터링되었다. 생착 12 주 후, Champions TumorGraft™ 흑색종 모델은 피하로 이식되었다. 대략 8-10 주 후, 종양이 150-200 mm3의 크기에 도달된 경우, 혈액, 비장, 및 종양 세포는 수확되었고 BD FACSCanto™상에서 유세포측정에 의해 분석을 위하여 가공되었다. 유세포측정 분석은 인간 (hCD45+) 면역 시스템의 상이한 구획에서 CD33의 발현을 결정하기 위해 수행되었다. 특이적으로, 발현은 CD3+ T 세포, CD14+ 단핵세포/대식세포, 및 다른 CD3-CD14-인간 면역 세포 세포에서 분석되었다. 데이터는 TreeStar에 의해 FlowJo 소프트웨어 버전 10.0.6으로 분석되었다.
도 14B-14D는 생체내 종양 세포에서 CD33의 발현을 보여준다. 도 14B는 인간 CD45+ 면역 세포로 그리고 환자 유래된 흑색종으로 이식된 성숙한 마우스 T 세포, B 세포, 및 NK 세포가 결핍된 면역결핍된 마우스 모델에서 환자-유래된 흑색종으로부터 세포 침윤물 및 말초 혈액 및 비장으로부터 인간 면역 세포내 CD33 발현을 보여준다. 도 14C는 마우스 종양 모델에서 유방 암 종양 EMT-6으로부터 세포 침윤물 및 비장으로부터 CD3+ T 세포, CD11b+ 면역 세포, 및 Gr1+ CD11b+ 면역 세포내 CD33 발현을 보여준다. 도 14D는 마우스 종양 모델에서 유방 암 종양 EMT-6으로부터 세포 침윤물 및 비장으로부터 CD45- T 세포, Gr1+ 세포, 및 Gr1-CD11b-면역 세포내 CD33 발현을 보여준다.
도 15A-15C는 CD33 KO 마우스가 야생형 마우스에 비교된 피하 MC38 종양 용적을 감소시켰다는 것을 보여준다. 도 15D는 CD33 KO 마우스가 야생형 마우스보다 더 양호하게 MC38 종양 공격에 생존한다는 것을 입증하는 카플란-마이어 생존 데이터를 보여준다.
도 15E는, 비장 및 종양으로부터 단리된, CD33 KO 마우스가 아닌, 야생형 마우스 (WT)로부터 면역 세포 상에서 CD33의 발현을 입증한다., CD33은 미접촉 마우스에 비교된 종양-공격받은 WT 마우스내 비장 대식세포/단구성 CD45+CD11b+Gr1lo 세포, CD45+CD11b+Gr1hi 골수성-유래된 억제제 세포, 및 CD11c+ 수지상 세포 상에서 상향조절된다. CD33 발현은, WT 종양-공격받은 또는 미접촉 WT 마우스에 비교된 경우, 종양-침윤된 CD45+CD11b+Gr1lo 세포 상에서 추가로 증가되고, 비장 CD45+CD11b+Gr1hi 세포와 동일한 수준으로 남아있고, 종양-침윤된 CD11c+ 세포 상에서 고도로 상향조절되고, NK 세포 상에서 약간 상향조절된다.
이들 결과는 CD33의 억제가 피하 종양의 제한된 성장 또는 제한을 허용한다는 것을 입증한다. 결과는 또한 CD33 기능이 종양 청소능을 경험하도록 면역 시스템을 허용하고 종양 성장을 제한하는 유익한 면역 반응을 억제한다는 것을 나타낸다. 이들 결과는 추가로 CD33 차단 항체가 종양-침윤된 면역억제제 세포의 수 감소, 그들의 기능 변경, 및/또는 침윤하는 세포독성 T-세포, 자연 살해 세포의 수 증가, 또는 다른 면역학적 종양 청소능 기전 증가에 의해 부분적으로 고형 종양 성장을 감소시킬 수 있다는 것을 나타낸다. CD33 항체는 CD33 발현 감소 또는 억제 시알산 리간드 상호작용 차단의 어느 한쪽에 의해 그렇게 할 수 있다. 본 명세서에서 입증하는 바와 같이, CD33 KO 마우스는 종양 공격시 WT 마우스보다 더 양호하게 생존하여, CD33 차단 항체가 암 치료에 유익한 효과를 가질 수 있다는 것을 나타낸다. 종양-침윤 골수성 세포가 종양-공격받은 마우스에서 비장 CD33+ 세포에 비교된 경우 CD33을 상향조절하고, 미접촉 마우스에 비교된 경우 더욱더 그러하다는 것이 본 명세서에서 추가로 실증된다.
항-CD33 항체 치료의 생체내 효과
CD33 차단 항체의 유익한 효과를 시험하기 위해, 야생형 (WT) 암컷 BALB/c 마우스는 동계의 종양, 예컨대 MC38 결장 암종, B16 흑색종, 또는 EMT-6 쥣과 유방 암종으로 주사된다. 8-12 주령 마우스는 0.1 mL/마우스의 용적으로 옆구리에서 0% 매트리겔 sc로 5x106 EMT-6 종양 세포로 주사된다. 마우스는 1 일째 체중에 기반하여 치료 그룹으로 무작위화된다. 체중은 실험의 종료까지 격주에 측정된다. 종양을 받은 마우스는 단독 또는 항-CTLA4 9H10 항체 또는 항-PD1 항체와 조합으로 1,4,8,15, 및 22 일째에서 20-100 mg/kg의 CD33 또는 대조군 항체로 주사된다. 종양 크기는 그 다음 종료까지 격주에 캘리퍼스 측정으로 측정된다. 부정적인 반응 또는 사망은 모니터링된다. > 30% 체중 감소 또는 종양 크기 >25% 체중 감소의 3 연속적인 측정을 가진 임의의 개별 동물은 안락사된다. 실험의 종점은, 어느 것이 먼저 오든, 2000 mm3의 종양 용적 또는 45 일이다. 반응군은 더 오래 따를 수 있다. 종점이 도달된 경우, 동물은 안락사된다. 종양 용적 및 생존에 관한 항체의 효과는 모니터링된다.
항-CD33 및 항-PD-1 항체 조합 치료의 생체내 효과
CTG-0202 환자-유래된 흑색종 종양은 인간화된 마우스에 이식에 앞서 사전-연구 마우스에 먼저 배양되었다. 종양이 스톡 마우스에서 용적으로 1-1.5 cm3에 도달한 경우, 이들은 사전-연구 마우스 속에 재-이식을 위하여 수확되었다. 사전-연구 마우스는 종양 단편으로 좌측 옆구리에서 단일측면으로 이식되었다. CTG-0202 흑색종 종양은 계대 횟수 6에서 사용되었다.
면역저하된 암컷 마우스 (Taconic NOG)는 태아 간-유래된 CD34+ 조혈 세포 (Champion TumorGraft™ Melanoma Model CTG-0202)로 인간화되었다. 마우스는 68-74℉ (20-23℃) 및 30-70% 습도에서 12-시간 명-암 사이클 상에 개별 HEPA 환기된 케이지 (Innocageㄾ IVC, Innovive USA)내 조사된 페이퍼트위스트(papertwist)-풍부한 1/8" 콘콥 베딩(corncob bedding) (Sheperd) 상에서 하우징되었다. 마우스는 선택적으로 (역삼투법, 2 ppm Cl2) 물이 공급되었고 조사된 시험 설치류 다이어트 (Teklad 2919)는 19% 단백질, 9% 지방, 및 4% 섬유로 이루어졌다. 48 인간화된 마우스는 이식되었고 사전-연구 종양 용적은 이식 7 내지 10 일 이후 시작하는 각각의 실험에 대하여 기록되었다. 종양이 용적으로 대략 80-200 mm3에 도달한 경우, 마우스는 0 일째에 개시된 투여에 사용되도록 치료 또는 대조군 그룹으로 종양 용적에 의해 매칭되었다. 치료 그룹은 항-PD-1 항체 Keytrudaㄾ (펨브롤리주맙) 단독, 또는 항-CD33 항체 2F5와 조합으로 투여되었다. 대조군 그룹은 항-PD-1 항체 및 아이소타입 대조군 항체 또는 저친화도/비-리간드 차단 항-CD33 항체의 조합이 투여되었다. 투여는 그 다음 0 일째에 개시되었다. 표 11 및 도 15F는 투여 스케줄, 투여 양, 및 투여의 경로를 묘사한다
Figure pct00032
표 11에서, "N"은 각각의 치료 그룹에서 복제물의 수를 지칭하고; "CTR mAb"는 아이소타입 대조군 항체 또는 저친화도/비-리간드 차단 항-CD33 항체를 지칭하고; "2F5 mAb"는 항-CD33 항체 2F5를 지칭하고; "ROA"는 투여의 경로를 지칭하고; "IP"는 복강내를 지칭하고; "q5dx6"은 총 6회 동안 매 5 일 투여의 투여 스케줄을 지칭한다.
0 일째에 시작하여, 마우스는 매일 관측되었고 디지털 스케일을 이용하여 매주 2회 계량되었다. 종양 치수는 디지털 캘리퍼스에 의해 매주 2회 측정되었고 데이터는 각각의 그룹에 대하여 기록된 개별 및 평균 추정된 종양 용적 (평균 TV ㅁ SEM)을 포함하였다. 종양 용적은 식 (1): TV= 폭 2 x 길이 x 0.52를 이용하여 계산되었다. 연구 완료에서, 퍼센트 종양 성장 억제 (%TGI) 값은 식 (2): %TGI= 1- (T f -T i ) / (C f -C i )에 의해 초기 (i) 및 말기 (f) 종양 측정을 이용하여 각각의 치료 그룹 (T) 대 대조군 (C)에 대하여 계산 및 보고되었다.
2 연속적인 측정에 대하여 0 일째 측정의 종양 용적 ≤50%를 보고하는 개별 마우스는 부분 반응군 (PR)으로 간주되었다. 촉지가능한 종양 (2 연속적인 측정에 대하여 < 4x4 mm2)이 부족한 개별 마우스는 완전 반응군 (CR)으로서 분류되었고; 연구 완료까지 지속된 CR은 무종양 생존자 (TFS)로 간주되었다. 종양 배가 시간 (DT)은 식 (3): DT = (D i - D f ) * log 2 / (logTV i - logTV) f (식 중 D = 일 및 TV = 종양 용적)을 이용하여 비히클 처리 그룹에 대하여 결정되었다. 종양 용적에서 통계적인 차이는 2원 ANOVA를 이용하여 결정되었다. 대조군 그룹의 평균 종양 용적이 28 일째에 1500 mm3에 도달한 경우 연구는 결론지어졌다.
연구 종료에서 수확된 종양은 얼음 팩 상의 배지에 밤새 출하되었고 다음 날 가공되었다. 전혈 샘플은 심장 천자에 의해 수집되었고 나트륨 헤파린에 출하되었고 전달시 다음 날 가공되었다. 종양 샘플은 37℃에서 30분 동안 콜라겐분해효소로 처리되었다. 샘플은 세포 스트레이너를 통해 해리되었고 PBS내 2% FBS에서 재현탁되었다. 전혈 샘플내 적혈구는 ACK 용해 버퍼를 이용하여 용해되었고 세포는 그 다음 PBS내 2% FBS에서 2회 세정되었다. 세포는 혈구계를 이용하여 카운트되었고 일 백만 세포는 빙상에서 30 분 동안 형광색소-접합된 항체로 염색되었고, 그 다음 PBS내 2% FBS로 세정되었다. 세포는 PBS내 4% 파라포름알데하이드로 고정되었다. 전체 염색된 세포는 FACS Canto (BD Biosciences) 상에서 분석되었고 데이터는 FlowJo 소프트웨어 (TreeStar)로 분석되었다. 수용체 하향조절을 평가하기 위해, 마우스 (m) CD45, 인간 (h) CD45, 인간 (h) CD3, 및 인간 (h) CD14 항체는 CD14+ 집단에서 출입하는데 사용되었다. 종양-침윤 면역 세포를 확인하기 위해, hCD45, hCD3, hCD4, hCD8, 및 hCD14 항체는 표준 절차에 따라 집단에서 출입하는데 사용되었다.
도 15G 및 도 15H는 인간 암 치료를 위한 치료제로서 항-CD33 항체 2F5의 전-임상 효능을 묘사한다. 항체 2F5는 강력한 수용체 하향조절물질 및 리간드 차단 항체이다. 항-PD-1 항체 펨브롤리주맙과 조합으로 투여된 경우, 항체 2F5는 흑색종 종양에서 종양 용적을 상당히 감소시켰다 (도 15G 및 15H). 현저히, 아이소타입 대조군 또는 더 낮은 친화도/비-리간드 차단 CD33 항체 (CTRmAb)와 조합으로 펨브롤리주맙은 종양 성장을 나타내지 않았다 (도 15G 및 15H).
도 15I 및 15J에 나타낸 바와 같이, CD33 항체 2F5 및 항-PD-1 항체로 조합 치료는 인간 면역 줄기 세포로 생착된 마우스내 환자-유래된 흑색종 종양 모델에서 생체내 종양 성장을 억제시켰다. 각각의 시점에서 종양 용적은 공여체, 0 시간에서 종양 크기 및 R lm() 함수를 이용한 다중 선형 회귀에 의한 마우스 중량에 대하여 보정되었다. 각각의 시점에서, 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하여 평가되었다.
도 15K 및 15L에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 및 항-PD-1 항체로 조합 치료는 상이한 인간 공여체 (984480112, 16554711, 및 17509112)로부터 인간 면역 줄기 세포 생착된 마우스에서 이식된 환자-유래된 흑색종 종양 모델에서 생체내 종양 성장을 억제시켰다. 항-종양 효과는 공여체에 의해 나타난다.
도 15M에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 및 항-PD-1 항체로 조합 치료는 인간 면역 줄기 세포로 생착된 마우스내 환자-유래된 흑색종 종양 모델에서 생체내 종양 성장 속도를 둔화시켰다. 종양 지수 성장은, 마우스 중량에 대하여 보정하는, 0 일째부터 12 일째까지, R tumgr 패키지를 이용하여 평가되었다. 통계적 유의도는, 공여체, 동물 중량 및 종양 초기 용적에 대하여 보정하는, R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
도 15N에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 및 항-PD-1 항체로 조합 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델로부터 말초 혈액 hCD45+ CD14+ 골수성 세포에서 CD33의 세포 표면 수준을 감소시켰다. 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
도 15O에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 및 항-PD-1 항체로 조합 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델에서 종양 침윤 hCD45+ CD14+ 골수성 세포의 수를 감소시켰다. 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
도 15P에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 및 항-PD-1 항체로 조합 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델에서 종양 침윤 hCD45+ CD3+ T 세포의 수를 증가시켰다. 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
도 15Q에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 및 항-PD-1 항체로 조합 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델에서 말초 혈액 hCD45+ CD14+ 골수성 세포의 수를 감소시켰다. 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
항-CD33 항체 치료의 생체내 효과
CTG-0202 환자-유래된 흑색종 종양은 인간화된 마우스에 이식에 앞서 사전-연구 마우스에서 먼저 배양되었다. 종양이 스톡 마우스내 용적으로 1-1.5 cm3에 도달한 경우, 이들은 사전-연구 마우스 속에 재-이식을 위하여 수확되었다. 사전-연구 마우스는 종양 단편으로 좌측 옆구리 상에 단일측면으로 이식되었다. CTG-0202 흑색종 종양은 계대 횟수 7에서 사용되었다.
면역저하된 암컷 마우스 (Taconic NOG)는 태아 간 유래된 CD34+ 조혈 세포로 인간화되었다. 마우스는 68-74℉ (20-23℃) 및 30-70% 습도에서 12-시간 명-암 사이클 상에서 개별 HEPA 환기된 케이지 (Innocage IVC, Innovive USA)내 조사된 페이퍼트위스트-풍부한 1/8" 콘콥 베딩 (Sheperd) 상에서 하우징되었다. 마우스는 선택적으로 (역삼투법, 2 ppm Cl2) 물이 공급되었고 조사된 시험 설치류 다이어트 (Teklad 2919)는 19% 단백질, 9% 지방, 및 4% 섬유로 이루어졌다. 인간화된 마우스는 이식되었고 사전-연구 종양 용적은 이식 7 내지 10 일 이후 시작하는 각각의 실험에 대하여 기록되었다. 종양이 대략 80-200 mm3에 도달한 경우 마우스는 투여에 사용되도록 치료 또는 대조군 그룹으로 종양 용적에 의해 매칭되었고 투여는 0 일째에 개시되었다.
치료 그룹은 항-CD33 항체가 2F5 투여되었다. 대조군 그룹은 아이소타입 대조군 항체가 투여되었다. 투여는 그 다음 0 일째에 개시되었다. 표 12 및 도 15R는 투여 스케줄, 투여 양, 및 투여의 경로를 묘사한다.
Figure pct00033
표 12에서, "N"은 각각의 치료 그룹에서 복제의 수를 지칭하고; "CTR mAb"는 아이소타입 대조군 항체 또는 저친화도/비-리간드 차단 항-CD33 항체를 지칭하고; "2F5 mAb"는 항-CD33 항체 2F5를 지칭하고; "ROA"는 투여의 경로를 지칭하고; "IP"는 복강내를 지칭하고; "q4dx6"은 총 6회 동안 매 4 일 투여의 투여 스케줄을 지칭한다.
0 일째에 시작하여, 마우스는 매일 관측되었고 디지털 스케일을 이용하여 매주 2회 계량되었다. 종양 치수는 디지털 캘리퍼스에 의해 매주 2회 측정되었고 데이터는 각각의 그룹에 대하여 기록된 개별 및 평균 추정된 종양 용적 (평균 TV ㅁ SEM)을 포함하였다. 종양 용적은 식 (1): TV= 폭 2 x 길이 x 0.52를 이용하여 계산되었다. 연구 완료에서, 퍼센트 종양 성장 억제 (%TGI) 값은 식 (2): %TGI= 1- (T f -T i ) / (C f -C i )에 의해 초기 (i) 및 말기 (f) 종양 측정을 이용하여 각각의 치료 그룹 (T) 대 대조군 (C)에 대하여 계산 및 보고되었다.
2 연속적인 측정에 대하여 0 일째 측정의 종양 용적 ≤50%를 보고하는 개별 마우스는 부분 반응군 (PR)으로 간주되었다. 촉지가능한 종양 (2 연속적인 측정에 대하여 < 4x4 mm2)이 부족한 개별 마우스는 완전 반응군 (CR)으로서 분류되었고; 연구 완료까지 지속된 CR은 무종양 생존자 (TFS)로 간주되었다. 종양 배가 시간 (DT)은 식 (3): DT = (D i - D f ) * log 2 / (logTV i - logTV) f (식 중 D = 일 및 TV = 종양 용적)을 이용하여 비히클 처리 그룹에 대하여 결정되었다. 종양 용적에서 통계적인 차이는 2원 ANOVA를 이용하여 결정되었다. 다중 수확 시점은 연구 동안 발생하였다. 최종 연구 종료에 대하여 25, 32, 및 39 일째에 치료 그룹과 무관하게 종양 용적 >1500 mm3의 종점 요건에 따라 마우스는 채집되었다.
연구 종료에서 수확된 종양은 얼음 팩 상의 배지에 밤새 출하되었고 다음 날 가공되었다. 전혈 샘플은 심장 천자에 의해 수집되었고 나트륨 헤파린에 출하되었고 전달시 다음 날 가공되었다. 종양 샘플은 37℃에서 30분 동안 콜라겐분해효소로 처리되었다. 샘플은 세포 스트레이너를 통해 해리되었고 PBS내 2% FBS에서 재현탁되었다. 전혈 샘플내 적혈구는 ACK 용해 버퍼를 이용하여 용해되었고 세포는 그 다음 PBS내 2% FBS에서 2회 세정되었다. 세포는 혈구계를 이용하여 카운트되었고 일 백만 세포는 빙상에서 30 분 동안 형광색소-접합된 항체로 염색되었고, 그 다음 PBS내 2% FBS로 세정되었다. 세포는 PBS내 4% 파라포름알데하이드로 고정되었다. 전체 염색된 세포는 FACS Canto (BD Biosciences) 상에서 분석되었고 데이터는 FlowJo 소프트웨어 (TreeStar)로 분석되었다. 수용체 하향조절을 평가하기 위해, 마우스 (m) CD45, 인간 (h) CD45, 인간 (h) CD3, 및 인간 (h) CD14 항체는 CD14+ 집단에서 출입하는데 사용되었다. 종양-침윤 면역 세포를 확인하기 위해, hCD45, hCD3, hCD4, hCD8, 및 hCD14 항체는 표준 절차에 따라 집단에서 출입하는데 사용되었다.
도 15S 및 15T에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포로 생착된 마우스내 환자-유래된 흑색종 종양 모델에서 생체내 종양 성장을 억제시켰다. 각각의 시점에서 종양 용적은 공여체, 0 시간에서 종양 크기 및 R lm() 함수를 이용한 다중 선형 회귀에 의한 마우스 중량에 대하여 보정되었다. 각각의 시점에서, 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하여 평가되었다.
도 15U에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포로 생착된 마우스내 환자-유래된 흑색종 종양 모델에서 생체내 종양 성장 속도를 둔화시켰다. 종양 지수 성장은, 마우스 중량에 대하여 보정하는, 0 일째부터 11 일째까지, R tumgr 패키지를 이용하여 평가되었다. 통계적 유의도는, 공여체, 동물 중량 및 종양 초기 용적에 대하여 보정하는, R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
도 15V, 15W, 및 15X에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델에서 존재하는 CD33 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNP) CD33 대립유전자 rs3865444 A/A, A/C, 또는 C/C와 독립적으로 종양 성장 속도를 감소시켰다. rs3865444 C/C 대립유전자는 알츠하이머병에 대하여 위험 대립유전자이고, 반면에 rs3865444 A/A 대립유전자는 알츠하이머병에 대하여 보호성 대립유전자이다.
도 15Y에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델로부터 말초 혈액 hCD45+ CD14+ 골수성 세포내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시켰다. 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
도 15Z, 15AA, 및 15BB에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델로부터 말초 혈액 hCD45+ CD14+ 골수성 세포내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시켰고, 여기에서 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNP) CD33 대립유전자 rs3865444 A/A, A/C, 또는 C/C는 마우스에서 존재하였다. CD33의 세포 표면 수준에서 감소는 알츠하이머병 위험 대립유전자 rs3865444 C/C에 대하여 담체이었던 마우스에서 통계적으로 유의미하였지만 (도 15Z 및 15AA), 알츠하이머병 보호성 대립유전자 rs3865444 A/A의 담체이었던 마우스에 대하여는 아니었다 (도 15BB).
도 15CCC에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델로부터 종양 침윤 hCD45+ CD14+ 골수성 세포내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시켰다. 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
도 15DD, 15EE, 및 15FF에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델로부터 종양 침윤 hCD45+ CD14+ 골수성 세포내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시켰고, 여기에서 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNP) CD33 대립유전자 rs3865444 A/A, A/C, 또는 C/C는 마우스에서 존재하였다. CD33의 세포 표면 수준에서 감소는 알츠하이머병 위험 대립유전자 rs3865444 C/C에 대하여 담체이었던 마우스에서 통계적으로 유의미하였지만 (도 15DD 및 15EE), 알츠하이머병 보호성 대립유전자 rs3865444 A/A의 담체이었던 마우스에 대해서는 아니었다 (도 15FF).
도 15GG에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델내 종양 침윤 hCD45+ CD14+ 골수성 세포의 수를 감소시켰다. 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
도 15HH, 15II, 및 15JJ에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델내 종양 침윤 hCD45+ CD14+ 골수성 세포의 수를 감소시켰고, 여기에서 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNP) CD33 대립유전자 rs3865444 A/A, A/C, 또는 C/C는 마우스에서 존재하였다. 종양 침윤 hCD45+ CD14+ 골수성 세포에서 감소는 알츠하이머병 위험 대립유전자 rs3865444 C/C 및 알츠하이머병 보호성 대립유전자 rs3865444 A/A에 대하여 담체이었던 마우스에서 통계적으로 유의미하였다 (도 도 15HH, 15II, 및 15JJ).
도 15KK에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델내 종양 침윤 hCD45+ CD3+ T 세포의 수를 증가시켰다. 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
도 15LL, 15MM, 및 15NN에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델에서 존재하는 CD33 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNP) CD33 대립유전자 rs3865444 A/A, A/C, 또는 C/C에 독립적인 종양 침윤 hCD45+ CD3+ T 세포의 수를 증가시켰다. rs3865444 C/C 대립유전자는 알츠하이머병에 대하여 위험 대립유전자이고, 반면에 rs3865444 A/A 대립유전자는 알츠하이머병에 대하여 보호성 대립유전자이다.
도 15OO에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델내 말초 혈액 hCD45+ CD14+ 골수성 세포의 수를 감소시켰다. 통계적 유의도는 R lm() 함수를 이용하는 다중 선형 회귀에 의해 평가되었다.
도 15PP, 15QQ, 및 15RR에 나타낸 바와 같이, CD33 항체2F5 단독으로 치료는 인간 면역 줄기 세포 및 환자-유래된 이종이식 CTG-0202 흑색종 종양으로 생착된 마우스 종양 모델에서 존재하는 CD33 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNP) CD33 대립유전자 rs3865444 A/A, A/C, 또는 C/C에 독립적인 말초 혈액 hCD45+ CD14+ 골수성 세포의 수를 감소시켰다. rs3865444 C/C 대립유전자는 알츠하이머병에 대하여 위험 대립유전자이고, 반면에 rs3865444 A/A 대립유전자는 알츠하이머병에 대하여 보호성 대립유전자이다.
항체 치료의 생체내 효과의 결론
도 15F-15RR에서 묘사된 결과는 인간 암 (예를 들면, 흑색종) 치료용 치료제로서 항-CD33 항체 2F5의 전-임상 효능을 입증한다. 2F5 항체는 강력한 수용체 하향조절물질 및 리간드-차단 항체이다. 2F 항체는, 단일요법 요법으로서 (도 15R-15RR) 또는 항-PD-1 항체와 조합으로 (도 15F-15Q) 투여된 경우, 흑색종 종양에서 종양 용적 및 종양 성장 속도를 상당히 감소시킨다. 현저히, 아이소타입 대조군 (또는 더 낮은 친화도/비-리간드 차단 CD33 항체) 단독 또는 항-PD-1 항체와 조합으로 투여는 종양 성장을 억제시키지 않았다.
CD33 항체 단일요법 또는 항-PD-1 항체와 조합으로 처리된 종양 침윤 면역 세포 집단의 분석은 종양 침윤 CD3+ T 세포의 수에서 유의미한 증가를 입증하였다 (도 15P 및 15KK-15NN). 골수성 세포 집단은 CD33 항체 단일요법 또는 항-PD-1 항체와 조합에 의해 감소되었다 (도 15O, 15Q, 15GG-15JJ, 및 15OO-15RR). 두 종양 침윤 CD14+ 골수성 세포 및 말초 혈액 iCD14+ 골수성 세포에서 상당한 감소는 관측되었다.
현저히, 종양에 반응하는 두 종양 및 면역 시스템은 상기 마우스 연구에서 인간이다. 마우스의 면역 시스템은 마우스 면역 시스템이 유전적으로 제거되고 골수성 및 림프양 면역 세포를 재증식하고 발생시키는 인간 공여체 CD34+ 조혈 줄기 및 전구 세포로 대체되는 방법을 이용하여 인간화된다. 종양은 환자-유래된 흑색종이다. 결과는 인간-특이적 항-CD33 항체 (2F5)가 표적 특이적 참여를 표현하고 인간 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킨다는 것을 입증한다. CD33의 세포 표면 수준의 하향조절은 주변 및 종양 CD14+ 골수성 세포 상에서 상당하였다. 따라서 종양 용적, 종양 성장 속도, CD3+ T 세포의 종양 침윤의 증가된 수, 및 CD14+ 세포의 감소된 수에 관한 임의의 효과는 인간 골수성 면역 세포 상에서 CD33의 2F5 항체-매개된 하향조절의 결과이다.
추가적으로, 결과는 종양-이식된 마우스의 면역 시스템을 재-거주하는데 사용된 인간 공여체의 CD33 유전자형을 고려한다. 알츠하이머병 위험 대립유전자인 것으로 입증되고 있는, CD33 SNP rs3865444의 평가시, 보호성 rs3865444 A/A 대립유전자를 가진 공여체는 rs3865444 C 위험 대립유전자의 담체이었던 공여체에 비교된 경우 더 낮은 CD33 세포 표면 수준 및 감소된 종양 성장 속도를 보여주었다. 더욱이, 2F5 항체가 CD14+ 골수성 세포 상에서 세포 표면 CD33 수준을 감소시켰고 양쪽 연구에서 종양 성장 속도를 감소시켰다는 점에서, CD33 항체 2F5로 치료가 CD33 유전자형을 표현형모사하였다.
실시예 11: 길항적 및/또는 이중특이적 CD33 항체에 의해 골수성 세포에서 항-염증성 사이토카인 IL-10의 감소
본 실시예의 목적은 골수-유래된 골수성 세포가 세포자멸적 세포로 공동-배양에 의해, 또는 유사한 자극에 의해 길항적 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체로 치료 및 100 ng/ml LPS (Sigma)로 자극 이후 항-염증성 사이토카인 IL-10 및 다른 항-염증성 매개체에서 감소를 보여주는지를 시험하는 것이다.
인간 골수성 전구체 세포의 단리는 이전에 기재된 바와 같이 수행된다. 배지는 5 d 이후 변화되고 세포는 추가의 10-11 d 동안 배양된다. 상청액은 24 h 이후 수집되고, 세포로부터 방출된 IL-10 및 다른 항-염증성 사이토카인의 수준은 제조자의 지침 (R&D Systems)에 따라 IL-10 ELISA에 의해 결정된다 (JEM (2005), 201; 647-657; 및 PLoS Medicine (2004), 4 | Issue 4 | e124).
실시예 12: 길항적 및/또는 이중특이적 CD33 항체에 의해 골수성 계통으로부터 세포내 식균작용의 유도
본 실시예의 목적은 길항적 항-CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체가 하기의 식균작용을 유도하는지를 시험하는 것이다: 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 및 질환 유발 단백질, 예컨대 A 베타 펩타이드, 알파 시누클레인 단백질, 타우 단백질, TDP-43 단백질, 프리온 단백질, 헌팅틴 단백질, RAN, 골수성 계통, 예컨대 단핵세포, 수지상 세포 대식세포 및 미세아교세포로부터 세포내 글리신-알라닌 (GA), 글리신-프롤린 (GP), 글리신-아르기닌 (GR), 프롤린-알라닌 (PA), 또는 프롤린-아르기닌 (PR)로 구성된 디펩타이드 반복부,(DPRs 펩타이드)를 포함하는, 번역 생성물 항원. 이중특이적 항체는, 제한 없이, A 베타 펩타이드, 항원 또는 알파 시누클레인 단백질 항원 또는, 타우 단백질 항원 또는, TDP-43 단백질 항원 또는, 프리온 단백질 항원 또는, 헌팅틴 단백질 항원, 또는 RAN, 글리신-알라닌 (GA), 글리신-프롤린 (GP), 글리신-아르기닌 (GR), 프롤린-알라닌 (PA), 또는 프롤린-아르기닌 (PR)로 구성된 디펩타이드 반복부,(DPRs 펩타이드)를 포함하는, 번역 생성물 항원을 포함하는 제2 항원 및 CD33 항원을 인식하는 항체일 수 있다.
주변 인간 혈액 샘플로부터 단핵세포는 RosetteSep 단핵세포 단리 항체 칵테일 (StemCell Technologies)를 이용하여 단리되고 5 일 동안 50μg/ml M-CSF (PeproTech)를 가진 대식세포로 분화된다. 세포는 10% 태아 송아지 혈청 (Hyclone)을 함유하는 RPMI 배지 (Invitrogen)내 배양 접시 상에서 플레이팅되고 5% CO2에서 37℃에 배양된다. 부착 세포는 부드러운 박리에 의해 수집되고 식균작용 실험에 사용된다.
인간 미세아교 세포는 Etemad 등, JI (2012), 및 Ohgidani 등, Scientific Reports (2014)에 기재된 프로토콜에 따라 1% Pen/Strep, 10 ng/ml GM-CSF, 10 ng/ml M-CSF, 10 ng/ml 베타-NGF, 100 ng/ml CCL-2, 100ng/ml IL-34를 가진 무혈청 RPMI에서 배양에 의해 말초 혈액 단핵세포로부터 제조된다. 분지된 형태가 나타난 경우 세포는 7-10 일째에 수확되었다.
식균작용 검정을 수행하기 위해 미세아교세포, 대식세포 또는 수지상 세포는 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 및 질환 유발 단백질로 배양된다. 뉴런은 5-10 d 동안 배양되고, 오카다산은 그 다음 세포자멸사를 유도하기 위해 3시간 동안 30 nM의 최종 농도에서 첨가된다. 뉴런의 세포 막은 CellTracker CM-DiI 막 염료 (Molecular Probes)로 표지된다. 인큐베이션 이후, 식균작용의 세포자멸적 뉴런 또는 다른 표적은 2회 세정되고 1:20의 효과기/표적 비에서 형질도입된 미세아교 배양액에 첨가된다. 세포자멸적 뉴런의 첨가 이후 1 및 24 h에서, 식균작용된 뉴런의 세포 막을 갖는 미세아교세포의 수는 공초점 형광 현미경 (Leica)하에 카운트된다. 세포자멸적 세포는 60의 배율로 3 상이한 영역에서 카운트된다. 식균작용의 양은 유세포측정에 의해 확인된다. 또한, 세포자멸적 뉴런의 첨가 24, 48, 또는 72 h 이후, 세포는 수집되고 사이토카인의 RT-PCR에 사용된다.
마이크로구형체 비드 또는 박테리아 식균작용 검정을 수행하기 위해, 미세아교세포, 대식세포 또는 수지상 세포는 항-CD33 효능적 항체로 처리된다. 세포는 수확되고 2 시간 동안 사이토카인 없이 96-웰 편평 바닥 플레이트에 플레이팅된다. pHrodo-표지된 E. 콜리 BioParticles는 제조자의 프로토콜에 따라 재현탁되고 37C에서 2.5 시간 동안 비브로 콜레라로부터 0.2 U/ml 또는 0.4 U/ml 시알리다제, 또는 PBS 단독으로 처리된다. BioParticles는 세정되고, RPMI에서 재현탁되고 20μg/웰 첨가된다. 세포 및 E. 콜리는 혼합되었고, 펠렛화되었고, 37C에서 30 분 동안 인큐베이션되었다. 사이토칼라신 D는 대조군 웰에 10uM으로 첨가된다. FACS 분석 직전에, 세포는 얼음에 전달되고 4C에 FACS 버퍼에서 2X 세정된다. pHrodo-표지된 E.콜리 식균작용은 BD FACS Canto 상에서 유세포측정에 의해 PE 채널에서 검출된다.
24 h 이후, 1.00 μM의 적색 형광 마이크로구형체 비드 (Fluoresbrite Polychromatic Red Mi-crospheres; Polysciences Inc.)는 1시간 동안 첨가된다. 미세아교세포에 의한 마이크로구형체 비드의 식균작용은 형광 현미경검사에 의해 분석된다. 더욱이, 미세아교세포는 배양 플레이트로부터 수집되고 유세포측정에 의해 분석된다. 식균작용된 비드를 갖는 미세아교세포의 백분율은 결정된다. 식균작용이 하나의 실험부터 다른 실험까지 다양하기 때문에, 식균작용내 상대적 변화는 또한 결정된다. 데이터는 기능성 항체 및 대조군 항체로 배양된 미세아교세포 사이 식균작용에서 상대적 변화로서 나타난다.
염증성 유전자 전사체의 분석용 RT-PCR을 수행하기 위해, 미세아교세포는 CD33 벡터 또는 GFP1 대조군 벡터로 형질도입된다. 세포는 그 다음 접시 상에서 배양되고 항-CD33 기능성 항체로 처리된다. 24, 48, 및 72 h 이후, RNA는 RNeasy Mini 키트 (QIAGEN)를 이용하여 미세아교세포로부터 단리된다. RNA는 sh-CD33 RNA, sh-대조군 RNA, wCD33, GFP2, mtDAP12-GFP, 및 GFP1 벡터로 형질도입되고 있는 미세아교세포로부터 또한 수집되고 48시간 동안 세포자멸적 뉴런으로 공동-배양된다.
RNA의 역전사는 그 다음 수행된다. SYBR Green에 의한 정량적 RT-PCR은 ABI Prism 5700 서열 검출 시스템 (PerkinElmer) 상에서 수행된다. GAPDH의 증폭은 샘플 정규화에 사용된다. 증폭 프로토콜은 GeneAmp 5700 서열 검출 시스템 소프트웨어 (버전 1.3)을 따랐다. GAPDH, TNF-α, IL-1, NOS2, 및 TGF-베타 전사체의 검출을 위하여, 하기 순방향 및 역방향 프라이머는 200 nM의 최종 농도에서 사용되었다:
GAPDH 순방향 프라이머: 5'-CTCCACTCACGGCAAATTCAA-3' (서열 식별 번호: 218), 및 GAPDH 역방향 프라이머: 5'-GATGACAAGCTTCCCATTCTCG-3' (서열 식별 번호: 219);
TNF-α 순방향 프라이머: 5'-CCGTCAGCCGATTTGCTATCT-3'(서열 식별 번호: 220), 및 TNF-α 역방향 프라이머: 5'-ACGGCAGAGAGGAGGTTGACTT-3'(서열 식별 번호: 221);
IL-1α 순방향 프라이머: 5'-ACAA-CAAAAAAGCCTCGTGCTG-3'(서열 식별 번호: 222), 및 IL-1α 역방향 프라이머: 5'-CCATTGAGGTGGAGAGCTTTCA-3'(서열 식별 번호: 223);
NOS2 순방향 프라이머: 5'-GGCAAACCCAAGGTCTACGTTC-3' (서열 식별 번호 224), NOS2 역방향 프라이머: 5'-TACCTCATTGGCCAGCTGCTT-3'(서열 식별 번호: 225); 및
TGF-β1 순방향 프라이머: 5'-AGGACCTGGGTTGGAAGTGG-3'(서열 식별 번호: 226), 및 TGF-β1역방향 프라이머: 5'-AGTTGGCATGGTAGCCCTTG-3'(서열 식별 번호: 227).
아밀로이드 식균작용 검정을 수행하기 위해, HiLyteFluor™ 647 (Anaspec)-A베타-(1-40)은 20 mM으로 Tris/EDTA (pH 8.2)에서 재현탁되고 그 다음 응집을 촉진시키기 위해 37℃에서 3 d 동안 어둠 속에 인큐베이션된다. 미세아교세포, 대식세포 또는 수지상 세포는 응집된 형광 표지된 베타 펩타이드의 첨가에 앞서 24시간 동안 낮은 혈청 (인슐린으로 보충된 0.5% FBS), LPS (50 ng/ml), IFNc (100 유닛/ml), 및 항-CD33 길항적 항체에서 전처리된다. 아밀로이드 식균작용 및 CD33의 표면 발현은 100 nM 응집된 HiLyteFluorTM 647-Ab-(1-40) (ASN NEURO (2010) 2(3): 157-170)의 5 h 첨가후 유세포측정 분석에 의해 결정된다. 다른 질환 유발 단백질의 식균작용은 유사한 방식으로 수행된다.
실시예 13: 길항적 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체에 의한 SYK 및/또는 ERK 활성화의 유도
본 실시예의 목적은 효능적 항-CD33 항체 및/또는 CD33/이중특이적 항체가 Syk 및 ERK 활성화를 유도하는지를 시험하는 것이다.
미세아교세포, 대식세포 또는 수지상 세포는 1시간 동안 효능적 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체에 노출된다. 자극 이후, 세포는 웨스턴 블랏 분석을 위하여 환원 샘플 버퍼에 용해된다. ERK의 인산화 및 Syk 및/또는 ERK의 총량은 웨스턴 블랏 분석 (JEM (2005), 201, 647-657)에 의해 항-포스포-Syk 또는 ERK 및 항-Syk 또는 ERK 항체, 각각 (모두 Cell Signaling Technology로부터)으로 면역-검출에 의해 결정된다.
실시예 14: CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체가 Syk 인산화를 유도한다
비장 티로신 키나아제 (Syk)는 몇 개의 기질 인산화, 이로써 세포 활성화 및 염증성 공정으로 이어지는 신호전달 복합체의 형성 촉진에 의해 CD33의 다운스트림 기능하는 세포내 신호전달 분자이다. Syk 활성화를 유도하기 위한 효능제 CD33 항체의 능력은 인간 대식세포 및 인간 1차 수지상 세포 배양 및 세포 추출물내 Syk 단백질의 인산화 상태 측정에 의해 결정된다.
인간 1차 수지상 세포는 1% 혈청 RPMI에서 4 시간 동안 기아되고 그 다음 PBS-EDTA를 가진 조직 배양 접시로부터 제거되고, PBS로 세정되고, 카운트된다. 세포는 전장 효능제 CD33 항체, 또는 대조군 항체로 15 분 동안 빙상에서 코팅된다. 차가운 PBS로 세정 이후, 세포는 염소 항-인간 IgG의 존재하에 표시된 기간 동안 37℃에서 인큐베이션된다. 자극 이후, 세포는 용해 버퍼 (1% v/v NP-40%, 50 Mm 트리스-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1.5 mM MgCl2, 10% 글리세롤, 플러스 프로테아제 및 포스파타제 억제제)로 용해되고 그 다음 16,000 g으로 10분 동안 4℃에서 원심분리되어 불용성 물질을 제거한다. 용해물은 그 다음 항-Syk Ab (인간 DCs에 대하여 4D10, Santa Cruz Biotechnology)로 면역침강된다. 침강된 단백질은 SDS-PAGE에 의해 분획화되고, PVDF 막에 전달되고 항-포스포티로신 Ab (4G10, Millipore)로 탐색된다. 전체 기질이 적절하게 면역침강되는 것을 확인하기 위해, 면역블랏은 항-Syk (Novus Biological, 인간 DCs에 대하여)으로 재탐색된다. 가시화는, 기재된 바와 같이 (예를 들면, Peng 등, (2010) Sci Signal., 3(122): ra38), 향상된 화학발광(ECL) 시스템 (GE Healthcare)으로 수행된다.
실시예 15: 길항적 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체에 의해 미세아교세포, 대식세포, T 세포, 및 수지상 세포에서 CCL19 및 CCL21에 대한 이동 및 CCR7의 유도
본 실시예의 목적은 항-CD33 및/또는 CD33/ 이중특이적 항체가 미세아교 세포, 대식세포, 및 수지상 세포에서 CCL19 및 CCL21에 대한 이동 및 CCR7을 유도하는지 시험하는 것이다.
미세아교, 대식세포 또는 수지상 세포는 효능적 항-CD33 및/또는 CD33/DAP12 이중특이적 항체로, 또는 대조군 항체로 배양된다. 세포는 72 h 이후 수집되고, CCR7 특이적 항-바디로 면역-표지되고, 유세포측정에 의해 분석된다.
증가된 CCR7 발현의 임의의 기능적 결과를 결정하기 위해, 화학주성 검정은 수행된다. 미세아교세포, 대식세포 또는 수지상 세포는 길항적 항-CD33 및/또는 CD33/DAP12 이중특이적 항체로 CD33을 통해 자극되고 2-챔버 시스템에서 배치된다. 케모카인 리간드 CCL19 및 CCL21에 대해 이동하는 미세아교 세포의 수는 정량화된다 (JEM (2005), 201, 647-657).
화학주성 검정을 위하여, 미세아교, 대식세포 또는 수지상 세포는 길항적 항-CD33 또는 CD33/ 이중특이적 항체에 노출되고 1 μg/ml LPS로 처리된다. 미세아교세포, 대식세포 또는 수지상 세포는 더 낮은 챔버에서 100 ng/ml CCL19 또는 CCL21 (모두 PeproTech로부터)을 가진 450μl 배지를 함유하는 트랜스웰 시스템 (3 μm 기공 필터; Millipore)의 상부 챔버 속에 전달된다. 1 h 인큐베이션 기간 이후, 더 낮은 챔버로 이동한 미세아교 대식세포 또는 수지상 세포의 수는 현미경검사 (JEM (2005), 201, 647-657)에 의해 3 독립 영역에서 카운트된다.
실시예 16: 길항적 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체에 의한 미세아교세포, 대식세포, T 세포, 및 수지상 세포내 F-액틴의 유도
본 실시예의 목적은 길항적 항-CD33, 또는 CD33 이중특이적 항체가 미세아교 세포, 대식세포, 및 수지상 세포에서 F-액틴을 유도하는지를 시험하는 것이다.
CD33으로 형질도입되는 또는 CD33을 발현하는 미세아교세포, 대식세포 또는 수지상 세포 및 다른 관심 세포는 배양 플레이트에 첨가되고 그 다음 길항적 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체, 또는 대조군 항체에 노출된다. 세포는 고정되고, 차단되고, 그 다음 1 h 이후 Alexa Fluor 546-접합된 팔로이딘 (Molecular Probes)으로 염색되고 F-액틴은 형광 염료로 표지된다. 이미지는 40x 대물 렌즈 (Leica)로 공초점 레이저 스캐닝 현미경검사에 의해 수집된다. (JEM (2005), 201, 647-657).
실시예 17: 길항적 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체에 의한 파골세포 생산의 유도 및 파골세포생성의 증가율
본 실시예의 목적은 길항적 항-CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체가 파골세포 생산을 유도하고 파골세포생성의 속도를 증가시키는지 시험하는 것이다.
인간 단핵세포 유래된 단핵세포/대식세포는, 10% FBS (Atlantic Biologics, Atlanta, GA, USA) 및 페니실린-스트렙토마이신-글루타민 (Mediatech)으로 보충된, 또 다른 적절한 배지 또는, RPMI-1640 배지 (Mediatech)에서 유지된다. 세포는 10% FBS, 페니실린-스트렙토마이신-글루타민, 50 ng/ml RANKL, 및 20 ng/ml M-CSF로 보충된 알파-MEM 배지내 3000 세포/웰을 가진 96-웰 플레이트에 씨딩된다. 배지는 매 3 일 변화되고, 항-CD33 길항적 항체에 노출되고 다핵 (적어도 3 핵) TRACP+ 파골세포의 수는 카운트되고 광학 현미경검사에 의해 채점된다. 복합성 및 크기를 결정하기 위해, 파골세포는 핵의 수 (>10 또는 3-10 핵)에 의해 카운트된다. 파골세포의 표면적은 Image J 소프트웨어 (NIH) 이용에 의해 또한 측정된다. 게다가, 파골세포 유전자의 발현 수준은 결정된다. 총 RNA는 TRIzol 시약 (Invitrogen)을 이용하여 상이한 시점에서 파골세포형성촉진성 배양액으로부터 추출된다. SuperScript III 키트 (Invitrogen)를 이용하는 제1-가닥 cDNA 합성 이후, 실시간 정량적 PCR 반응은 Nfatc1, Acp5, Ctsk, Calcr, 및 Ccnd1에 대하여 수행된다. 표적 mRNA 발현의 상대적 정량화는 계산되고 사이클로필린이 발현으로 정규화되고 (상기 표적 유전자의 mRNA/사이클로필린의 mRNA) 3 X106 으로서 표현된다. (J. OF BONE AND MINERAL RESEARCH (2006), 21, 237-245; J Immunol 2012; 188:2612-2621).
대안적으로, 대식세포는 삼중 웰로 플레이트상에 씨딩되고 RANKL, M-CSF, 및 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체, 또는 아이소타입-매칭된 대조군 단클론성 항체로 처리된다. 큰 다핵 세포가 가시적인 때까지 배지는 매 3 일 변화된다. 배양액에서 3 내지 5 일 이후, 세포는 10분 동안 PBS내 3.7% 포름알데하이드로 고정된다. 플레이트는 그 다음 PBS에서 2회 세정되고, 30 s 동안 50% 아세톤 및 50% 에탄올의 용액에서 인큐베이션되고, PBS로 세정된다. 세포는 Sigma로부터 키트 (제품 435)로 타르트레이트-저항성 산 포스파타제 (TRAP)에 대하여 염색된다. 다핵 (2 초과 핵), TRAP-양성 세포는 그 다음 (예를 들면, Peng 등, (2010) Sci Signal., 3(122): ra38) 기재된 바와 같이 광학 현미경검사에 의해 카운트된다.
실시예 18: 전체의 동물에서 EAE 및 쿠프리존(cuprizone)으로부터 생체내 보호
(Charles River Laboratories로부터 수득된) 성체 7-9 주령 암컷 C57BL/6 마우스는 불완전 프로인트 아쥬반트 (Difco)내 1 mg의 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37 Ra (Difco) 및 100 μg의 수초 희소돌기교세포 당단백질 펩타이드 35-55 (아미노산 MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK (서열 식별 번호: 215); Seqlab)를 함유하는 200 μl의 접종물로 양측성으로 꼬리 기저부에서 주사된다. 백일해 독소 (200 ng; List Bio-logical Laboratories)는 면역화 이후 0 일째 및 2 일째에 주사된다. 임상 징후는 아래와 같이 채점된다: 0, 무 임상 징후; 1, 완전 늘어진 꼬리; 2, 완전 늘어진 꼬리 및 비정상 보행; 3, 한쪽 뒷다리 대부전마비; 4, 완전 뒷다리 대부전마비; 및 5, 앞다리 및 뒷다리 마비 또는 빈사. 14 일째에 질환 개시 (1 이상의 임상 점수)를 갖는 마우스만이 실험에 사용된다. 효능적 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체는 제1 임상 증상의 날에 또는 임의의 다른 요망된 시간에 EAE-이환 마우스에서 복강내로 또는 정맥내로 주사된다 (PLoS Med (2007) 4(4): e124).
어린 또는 늙은 야생형 (WT) 마우스는 4, 6 또는 12 주 동안 0.2 % 쿠프리존 (CPZ) 분말화된 옥살산 비스(사이클로헥실리덴하이드라자이드) (Sigma-Aldrich)를 함유하는 표준 다이어트 (Harlan) 공급된다. 조직학적 및 면역조직화학적 분석을 위하여 뇌는 4 % 파라포름알데하이드 (PFA)로 마우스 관류 이후 제거되고, 24시간 동안 4 % PFA에서 고정되고, 그 다음 24-48 h 동안 30 % 수크로오스에 액침된다. 수초 완전성 및 손상을 평가하기 위해, 게다가 세포 증식 및 염증 부문 또는 마우스 뇌는 항-MBP (1:100; Abcam, ab7349), -dMBP (1:2000; Millipore, ab5864), -β APP (1:100; Invitrogen, 51-2700), -SMI-31 (1:1000;Covance, smi-31R), -Iba1 (1:600; Wako, 019-19741), -BrdU (1:250; Abcam, ab1893), -GFAP (1:200; Invitrogen,13-0300), -iNOS (1:100; BD Pharmingen, 610329), -LPL(1:400, Dr. G. Olivecrona로부터) 및 -MHC II (1:100; BD Pharmingen, 553549)로 염색된다. 항체의 행동 효과를 위하여, 마우스는 투명한 폴리스티렌 봉입물 및 컴퓨터화된 포토빔(photobeam) 계기 장비를 이용하여 보행성 활성에 대하여 분석된다. 소비된 시간, 이동된 거리 및 진입을 포함하는 정서성의 지수와 함께, 일반적인 활성 변수 (총 보행, 수직 양식)은 분석된다. 수많은 감각운동 시험은 균형잡기 (턱 및 플랫폼), 강도 (반전된 스크린), 협응 (폴 및 기울어진 스크린) 및 운동의 개시 (걷기 개시)를 평하하기 위해 수행된다. 운동 협응 및 균형잡기는 로타로드 프로토콜을 이용하여 연구된다 (Cantoni 등, Acta Neuropathol (2015)129(3):429-47).
실시예 19: 외상성 뇌 손상의 확립된 동물 모델에서 길항적 CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체의 치료 용도의 특성규명
길항적 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체의 치료 유용성은 외상성 뇌 손상의 확립된 동물 모델에서 시험된다 (Tanaka, Y 등 (2013) Neuroscience 231 49-60). 박테리아 인공 염색체하에 또는 골수성 프로모터하에 인간 CD33 유전자를 발현시키는 마우스 또는 규칙적 마우스는 사용될 수 있다. 예를 들어, 미세아교세포 및 별아교세포의 활성화를 유도하는 외상성 뇌 손상의 모델이 사용된다. 8 또는 9 주령 숫컷 C57BL/6J WT 마우스는 사용된다 (Charles River Laboratories 또는 Jackson Laboratories로부터 구매된다). 마우스는 멸균된 염수에 용해된 크실라진 하이드로클로라이드 (8 mg/kg) 및 클로랄 수화물 (300 mg/kg)의 복강내 투여에 의해 마취되고, 후속적으로 뇌고정 장치에 배치된다 (Narishige, Tokyo, Japan). 절개는 두피에서 실시되고 두개골은 노출된다. 골막은 두개골로부터 제거되고, 구멍은 치과 드릴로 우측 대뇌반구에서 드릴링되고, 경막은 바늘 끝으로 제거된다. 0.5 mm 외부 직경을 가진, 스테인레스강 캐뉼라는 우측 반구에서 종방향 자창을 만드는데 사용된다. 캐뉼라는 정중선에 대해 1.3 mm 측면, 및 정수리점에 대해 1 mm 후측에 배치되고, 끝이 2 mm의 깊에 도달하는 때가지 뇌 속에 도입된다. 캐뉼라는 그 다음 꼬리로 2 mm (정수리점 3 mm) 이동되고, 그 다음 그의 초기 위치에 대해 부리모양으로 2 mm 뒤로 이동한다. 마지막으로, 캐뉼라는 뇌에서 제거되고, 두피 상처는 봉합된다. 마우스는 그 다음 표준 절차에 따라 길항적 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체로 처리되고 그 다음 조직학 및 면역형광 염색 및 행동 시험에 의해 분석된다. 그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 20: 독소-유도된 손상 이후 신경-염증 및 뉴런 손실의 모델에서 길항적 CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체의 치료 용도의 특성규명
효능적 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체의 치료 유용성은 독소-유도된 손상 이후 신경-염증 및 뉴런 손실의 모델에서 시험된다 (Martens, LH 등, (2012) The Journal of Clinical Investigation, 122, 3955). 3월령 규칙적 마우스는 2 일 동안 1일당 MPTP (1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라하이드로피리딘) (4 μg/g 체중) (Sigma-Aldrich) 또는 PBS의 4 복강내 주사로 처리된다. 마우스는 표준 프로토콜에 따라 효능적 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체로 처리되고 그 다음 기재된 바와 같이 흑질 치밀부 (SNpc)에서 도파민 뉴런 및 미세아교세포를 정량화하기 위해 입체학적 계수를 이용하여 분석된다. 그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 21: 노화, 발작, 척수 손상, 망막 이상증, 전두측두 치매, 및 알츠하이머병의 동물 모델에서 길항적 CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체의 치료 용도의 특성규명
길항적 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체의 치료 유용성은 이전에 기재된 바와 같이 노화, 발작, 척수 손상, 망막 이상증, 전두측두 치매, 헌팅턴 질환, 파킨슨병 근위축 측삭 경화증 및 알츠하이머병에 대하여 동물 모델에서 시험된다 (예를 들면, Beattie, MS 등, (2002) Neuron 36, 375-386; Volosin, M 등, (2006) J. Neurosci. 26, 7756-7766; Nykjaer, A 등, (2005) Curr. Opin. Neurobiol. 15, 49-57; Jansen, P 등, (2007) Nat. Neurosci. 10, 1449-1457; Volosin, M 등, (2008) J. Neurosci. 28, 9870-9879; Fahnestock, M 등, (2001) Mol. Cell Neurosci. 18, 210-220; Nakamura, K 등, (2007) Cell Death. Differ. 14, 1552-1554; Yune, T 등, (2007) Brain Res. 1183, 32-42; Wei, Y 등, (2007) Neurosci. Lett. 429, 169-174; Provenzano, MJ 등, (2008) Laryngoscope 118, 87-93; Nykjaer, A 등, (2004) Nature 427, 843-848; Harrington, AW 등, (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 6226-6230; Teng, HK 등, (2005) J. Neurosci. 25, 5455-5463; Jansen, P 등, (2007) Nat. Neurosci. 10, 1449-1457; Volosin, M 등, (2008) J. Neurosci. 28, 9870-9879; Fan, YJ 등, (2008) Eur. J. Neurosci. 27, 2380-2390; Al-Shawi, R 등, (2008) Eur. J. Neurosci. 27, 2103-2114; 및 Yano, H 등, (2009) J. Neurosci. 29, 14790-14802). 그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 22: 감염의 모델에서 길항적 CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체의 치료 용도의 특성규명
길항적 항-CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체의 치료 유용성은 감염의 모델에서 시험된다. 예를 들어, 정상 마우스에서 리스테리아 모노사이토게네스 또는 다른 감염은 이전에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다 (예를 들면, Yin, F 등, (2009) J. Exp. Med, 207, 117-128). 규칙적 마우스 또는 박테리아 인공 염색체하에 또는 골수성 프로모터하에 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스는 사용될 수 있다.
실시예 23: 염증성 질환의 모델에서 길항적 CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체의 치료 용도의 특성규명
길항적 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체의 치료 유용성은 염증성 질환의 모델에서 시험된다. 예를 들어 류마티스성 관절염 또는 또 다른 염증성 질환의 확립된 모델에서 (Mizoguchi (2012) Prog Mol Biol Transl Sci.,105:263-320; 및 Asquith 등, (2009) Eur J Immunol. 39:2040-4). 그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 24: CD33 및 다운스트림 신호전달 분자의 인산화를 유도 또는 억제하는 항-CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체용 선별.
세포 (J774, RAW 264.7, BMM 세포, 인간 1차 단핵세포, 대식세포, 수지상 세포, T 세포 미세아교세포 또는 파골세포)는 PBS-EDTA를 가진 조직 배양 접시로부터 제거되고, PBS로 세정되고, 카운트된다. 세포는 빙상에서 20분 동안 또는 다른 조건하에서 1 μg/106 세포로 항-CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체로 또는 아이소타입-매칭된 대조군 항체로 인큐베이션된다. 세포는 20분 동안 빙랭 방사선면역침강 검정 (RIPA) 버퍼에서 용해되고 그 다음 16,000 g으로 10분 동안 4℃에서 원심분리되어 불용성 물질을 제거한다. 수득한 상청액은 표시된 항체 (DAP12, ERK, 또는 AKT) 및 단백질 A- 또는 단백질 G-아가로스 (Sigma)로 면역침강 반응에 적용된다. 비드는 광범위하게 RIPA 버퍼로 세정되고 단백질은 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)에 의해 분리된다. 단백질은 그 다음 웨스턴 블랏팅에 의해 니트로셀룰로오스 막에 전달되고, 적절한 항체 (DAP12, ERK, Syk, LCK, FYN, C-Cbl, VAV, 또는 AKT의 인산화된 형태 또는 인산화된 티로신을 특이적으로 인식하는 항체)로 인큐베이션되고 기재된 바와 같이 향상된 화학발광(ECL) 시스템 (Pierce)으로 시각화된다 (예를 들면, Peng 등, (2010) Sci Signal., 3(122): ra38).
실시예 25: 칼슘 유동을 유도 또는 억제하는 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체용 선별
BMM 세포는 HEPES-함유 버퍼 [20 mM HEPES (pH 7.3), 120 mM NaCl, 1 mM CaCl, 1 mM MgCl, 5 mM KCl, 글루코스 (1 mg/ml), 소 혈청 알부민 (1 mg/ml)]로 2회 세정되고 그 다음 37℃에서 20분 동안 0.05% 플루론산 F-127 (Invitrogen) 및 1 μM Indo-1 AM (Invitrogen)에 인큐베이션된다. 세포는 HEPES 버퍼로 2회 세정되고 그 다음 항-CD33 항체 및/또는 CD33 이중특이적 항체 (16 μg/ml)로 또는 대조군 항체 (16 μg/ml)로 자극되고 분광측정기 (PTL Photon Technology International)로 모니터링된다. Indo-1 형광 방출은 제조자의 지침에 따라 칼슘 (Ca2+)로 전환된다 (예를 들면, Peng 등, (2010) Sci Signal., 3(122): ra38).
실시예 26: CD33은 대식세포, T 세포, 및 수지상 세포의 생존을 증가시킨다
세포 생존에서 CD33의 역할을 평가하기 위해, 인간 또는 마우스 대식세포, 미세아교세포, T 세포 및 수지상 세포는 염증성 매개체의 존재하에 배양되고, 세포 생존은 측정된다.
CD33 WT, Het, 및 KO 마우스로부터 쥣과 골수 전구체 세포는 차가운 PBS로 경골 및 대퇴부 골수 세포 플러싱에 의해 수득된다. PBS로 1회 세정 이후, 적혈구는 ACK 용해 버퍼 (Lonza)를 이용하여 용해되고, PBS로 2회 세정되고 대식세포를 생산하기 위해 50ng/ml M-CSF, 또는 수지상 세포를 생산하기 위해 10ng/ml GM-CSF의 표시된 양을 가진 완전 RPMI 배지 (10% FCS, Pen/Strep, Gln, neAA)에서 0.5x106 세포/ml로 현탁된다. M2-유형 대식세포를 위하여, 10ng/ml IL-4는 배양된 세포에 첨가된다. M1-유형 대식세포를 위하여, 50 ng/ml IFN은 첨가된다. 일부 실험에서 LPS 또는 자이모산은 1 μg/ml-0.01 ng/ml의 농도 범위로 5 일째에 세포 배양액에 첨가된다. 재조합 사이토카인은 Peprotech로부터 구매된다.
골수-유래된 대식세포의 생존력을 분석하기 위해, 세포는 상기와 같이 제조되고 MCSF에서 배양된다. 세포는 (루시퍼라아제 기반-검정을 이용하는 생존력 분석을 위하여) 96-웰 플레이트에서 105/200 ul로 또는 비-조직 배양 처리 플레이트내 (트리판 블루 제외 세포 카운트를 위하여) 6-웰 플레이트에서 0.5x106/1ml로 플레이팅된다. 신선한 M-CSF를 함유하는 배지는 3 일째에 첨가된다. 표시된 시점에서 세포는 3 mM EDTA를 가진 플레이트로부터 약하게 탈착되고 버커 챔버를 이용하여 카운트된다. 생 세포의 FACS 분석을 위하여, 대식세포는 6 일 동안 50 ng/ml MCSF (+MCSF)에서 또는 4 일 동안 50 ng/ml MCSF에서 배양된 다음 MCSF는 추가의 36 시간 제거된다 (-MCSF). 세포는 CD11b 항체 및 DAPI를 이용하여 염색된다. 루시퍼라아제 생존력 검정을 위하여, 세포 생존력은 성장 인자 GMCSF (수지상 세포), MCSF (M1 대식세포), 또는 MCSF+IL-4 (M2 대식세포)의 단계적인 농도로 배양액에서 5 일째에 측정된다. 세포는 ToxGlo 시약 (Promega)로 직접적으로 인큐베이션되고 루시퍼라아제 활성 (발광)은 결정된다. 염증성 매개체 IFN, LPS, 또는 자이모산의 존재하에 배양된 생존가능한 대식세포의 FACS 분석을 위하여, 세포는 5 일째에 수집되고 CD11b 항체 및 DAPI를 이용하여 염색된다.
실시예 27: CD33은 대식세포 상에서 염증성 세포 표면 마커의 발현을 증가시킨다
염증성 마커 발현에서 CD33의 역할을 결정하기 위해, 대식세포는 다양한 염증성 매개체로 배양되고, 표면 마커 CD86 및 CD206의 발현은 CD33 항체의 존재 또는 부재하에 측정된다.
대식세포는 플레이팅되고 4시간 동안 37℃에서 부착하게 되고, TLR 효능제 LPS (살모넬라 아보르투스 에퀴) 및 자이모산 (사카로마이세스 세레비지애)는 0.01-100 ng/ml (LPS) 또는 0.01-10 μg/ml (자이모산) 범위의 농도에서 첨가된다. 대안적으로, 대식세포는 사이토카인 IL-4 (10 ng/ml) 또는 IFN (0.5-50 ng/ml)의 존재하에 배양된다. CD86 및 CD206의 FACS 분석은 48 시간 이후 BD FACS Canto 상에서 수행된다. 데이터 분석은 FlowJo (TreeStar) 소프트웨어 버전 10.0.7로 수행된다.
실시예 28: CD33 결핍된 마우스에서 종양 성장의 분석
10 CD33 야생형 (WT), CD33 이종접합성 (HET), 및 CD33 녹아웃 (KO) 마우스 (성별 및 연령-매칭된 한배새끼, 8 주령 (+/- 2 주))의 집단은 종양 세포 (예를 들어 1x105 - 1x106 MC38 결장 암종, 루이스 폐 암종, 또는 B16 흑색종 세포)로 피하로 공격받고 100 ul PBS에 현탁된다. 동물은 임플란트에 앞서 이소플루란으로 마취된다. 종양 성장은 격주로 캘리퍼스로 모니터링되어 4 일째에 시작하는 종양 성장을 측정한다. 실험의 종점은 2000 mm3의 종양 용적 또는 60 일이다. 종양 성장 및 % 생존은 결과 측정기준이다. 감소된 종양 흡수 및 성장 속도 및 종양 침윤 면역억제제 대식세포의 감소된 수는 CD33 KO 마우스에서 종양 속에 증가된 효과기 T 세포 유입을 나타낸다.
침윤 종양 관련된 면역 억제제 대식세포 및 T 세포의 수를 결정하기 위해, 6-8 성별 및 연령-매칭된 한배새끼의 그룹이 사용된다. 8-주령 (+/- 2 주) WT-HET-KO 한배새끼는 종양 세포 (예를 들면 1x105 -1x106 MC38, 루이스 폐, 또는 B16 세포)로 피하로 공격받고 200ul 매트리겔 (감소된 매트리겔 매트릭스 성장 인자; BD)에 현탁된다. 동물은 임플란트에 앞서 이소플루란으로 마취된다. 종양 주사 7 및 10 일 이후, 매트리겔 플러그는 절제되고, 1 시간 동안 37℃에서 1 mg/ml 콜라겐분해효소 D (Sigma)로 인큐베이션되고, 해리되어 단일-세포 현탁액을 수득하고, 세포 스트레이너를 통해 여과된다. 종양에서 동원된 T 세포의 양 및 효과기 T 세포와 조절 T 세포 사이 비를 결정하기 위해, 5x106 세포는 항-CD45.2 PercpCy5.5, 항-CD3-FITC, 항-CD8-PE-Cy7, 항-CD4-APC, 항-FoxP3-PE (BD), 및 DAPI로 염색된다. 종양 속에 동원된 단핵세포/대식세포 계통 세포의 양을 결정하기 위해, 5x106 세포는 항-CD45.2 PercpCy5.5, 항-CD11b-PECY7, 항-F4/80-FITC, 항-Ly6C/G-APC, 항-CD86-PE, 및 DAPI로 염색된다. 세포는 BD FACS Canto 상에서 획득된다. 데이터 분석은 FlowJo (TreeStar) 소프트웨어 버전 10.0.7로 수행된다.
실시예 29: CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 항-암 효과의 분석
8 주 (+/- 2 주)령으로 10 C57Bl6/NTac 마우스의 그룹, 규칙적 마우스 또는 박테리아 인공 염색체로부터 또는 골수성 프로모터로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스는 종양 세포 (예를 들면 1x105 내지 1x106 MC38, 루이스 폐, 또는 B16 세포)로 피하로 공격받고 100ul PBS에 현탁된다. 동물은 임플란트에 앞서 이소플루란으로 마취된다. 2 일째에 시작하여, 마우스의 그룹은 각각의 길항적 항-CD33 항체, 예컨대 실시예 38 및 40에 기재된 것의 200ug으로 4 용량으로 매 3 일 i.p. 주사된다. 종양 성장은 격주로 캘리퍼스로 모니터링되어 4 일째에 시작하는 종양 성장을 측정한다. 실험의 종점은 2000 mm3의 종양 용적 또는 60 일이다. 종양 성장 및 % 생존은 결과 측정기준이다. 감소된 종양 흡수 및 성장 속도, 종양 침윤 면역 억제제 대식세포의 감소된 수, 및 종양 속에 증가된 효과기 T 세포 유입은 차단 항-CD33 항체의 항-암 효과를 나타낸다.
인간 IL-3, 인간 GM-CSF, 인간 IL-6, 인간 IL-2를 발현하고, 인간 태반, 태아 간, 말초 혈액 또는 또 다른 공급원으로부터 인간 면역 세포로 씨딩된 면역결핍된 마우스 또는 면역결핍된 트랜스제닉 마우스는 또한 상기 연구에 사용될 수 있다 (Ito M 등, (2008) Curr Top Microbiol Immunol.;324:53-76; Ito R., 등, (2012) Cellular & Molecular Immunology 9, 208-214; Brehm 등, (2010) Curr Opin Endocrinol Diabetes Obes. 17(2): 120-125; Zhou 등, (2013) Cancer Letters. 344,13-19). 그와 같은 마우스는 세포주 종양 또는 환자-유래된 인간 종양 이종이식과 함께 사용될 수 있다 (Siolas 등, (2013) Cancer Res.; 73(17): 5315-5319).
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 30: 억제 체크포인트 단백질 또는 억제 사이토카인/케모카인 및 그들의 수용체에 대해 항체와 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체를 조합하는 조합 요법의 부가적 항-종양 효과의 분석
8 주 (+/- 2 주)령으로 15 C57Bl6/NTac 마우스의 그룹은 실시예 35에 기재된 바와 같이 종양 세포로 피하로 공격받는다. 동물은 임플란트에 앞서 이소플루란으로 마취된다. 2 일째에 시작하여, 마우스는 3, 6, 및 9 일째에 체크포인트 단백질 (예를 들면 항-PDL1 mAb 클론 10F.9G2 및/또는 항-CTLA4 mAb 클론 UC10-4F10-11)에 대해 항체와 조합으로 또는 200ug 항-CD33 항체 단독으로 4 용량으로 매 3 일 i.p. 주사된다. 치료 그룹은 항-CD33; 항-CTLA4; 항-PDL1; 항-CD33+항-CTLA4; 항-CD33+항-PDL1; 및 아이소타입 대조군을 포함한다. 종양 성장은 격주로 캘리퍼스로 모니터링되어 4 일째에 시작하는 종양 성장을 측정한다. 실험의 종점은 2000 mm3의 종양 용적 또는 60 일이다. 종양 성장 및 % 생존은 결과 측정기준이다. 조합 요법으로 종양 성장에서 감소 및 % 생존에서 증가는 항-CD33 항체가 항-체크포인트 항체로 부가적 또는 상승작용 치료 효과를 갖는 것을 나타낸다. 체크포인트 분자에 대한 길항적 항체는 PDL1, PDL2, PD1, CTLA4, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG-3, 및 포스파티딜 세린에 대한 항체를 포함한다. 억제 사이토카인에 대한 길항제 항체는 CCL2, CSF-1, 및 IL-2에 대한 항체를 포함한다. 인간 IL-3, 인간 GM CSF, 인간 IL-6, 인간 Il2를 발현하고, 인간 태반, 치명적 간, 말초 혈액 또는 또 다른 공급원으로부터 인간 면역 세포로 씨딩된 면역-결핍된 마우스 또는 면역-결핍된 트랜스제닉 마우스는 또한 상기 연구에 사용될 수 있다 (Ito M 등, (2008) Curr Top Microbiol Immunol.;324:53-76; Ito R., 등, (2012) Cellular & Molecular Immunology 9, 208-214; Brehm 등, (2010) Curr Opin Endocrinol Diabetes Obes. 17(2): 120-125; Zhou 등, (2013) Cancer Letters. 344,13-19). 그와 같은 마우스는 세포주 종양 또는 환자 유래된 인간 종양 이종이식과 함께 사용될 수 있다 (Siolas 등, (2013) Cancer Res.; 73(17): 5315-5319).
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 31: 자극 체크포인트 단백질을 활성화하는 항체와 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체를 조합하는 조합 요법의 부가적 항-종양 효과의 분석
8 주 (+/- 2 주)령으로 15 C57Bl6/NTac 마우스의 그룹은 실시예 35에 기재된 바와 같이 종양 세포로 피하로 공격받는다. 동물은 임플란트에 앞서 이소플루란으로 마취된다. 2 일째에 시작하여, 마우스는 3, 6, 및 9 일째에 자극 체크포인트 단백질 (예를 들면 OX40 또는 ICOS mAb)를 활성화하는 기능성 항체와 조합으로 또는 200ug 항-CD33 항체 단독으로 4 용량으로 매 3 일 i.p. 주사된다. 종양 성장은 격주로 캘리퍼스로 모니터링되어 4 일째에 시작하는 종양 성장을 측정한다. 실험의 종점은 2000 mm3의 종양 용적 또는 60 일이다. 종양 성장 및 % 생존은 결과 측정기준이다. 조합 요법으로 종양 성장에서 감소 및 % 생존에서 증가는 항-CD33 항체가 자극 체크포인트 항체로 부가적 또는 상승작용 치료 효과를 갖는 것을 나타낸다. 자극 체크포인트 항체는 CD28, ICOS, CD137, CD27, CD40, 및 GITR에 대해 효능적/자극 항체를 포함한다.
인간 IL-3, 인간 GM CSF, 인간 IL-6, 인간 Il2를 발현하고, 인간 태반, 치명적 간, 말초 혈액 또는 또 다른 공급원으로부터 씨딩된 면역-결핍된 마우스 또는 면역-결핍된 트랜스제닉 마우스는 또한 상기 연구에 사용될 수 있다 (Ito M 등, (2008) Curr Top Microbiol Immunol.;324:53-76; Ito R., 등, (2012) Cellular & Molecular Immunology 9, 208-214; Brehm 등, (2010) Curr Opin Endocrinol Diabetes Obes. 17(2): 120-125; Zhou 등, (2013) Cancer Letters. 344,13-19). 그와 같은 마우스는 세포주 종양 또는 환자 유래된 인간 종양 이종이식과 함께 사용될 수 있다 (Siolas 등, (2013) Cancer Res.; 73(17): 5315-5319).
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 인간 CD33 cDNA를 함유하는 렌티바이러스 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 32: 자극 사이토카인과 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체를 조합하는 조합 요법의 부가적 항-종양 효과의 분석
8 주 (+/- 2 주)령으로 15 C57Bl6/NTac 마우스의 그룹은 실시예 35에 기재된 바와 같이 종양 세포로 피하로 공격받는다. 동물은 임플란트에 앞서 이소플루란으로 마취된다. 2 일째에 시작하여, 마우스는 자극 사이토카인 (예를 들면 IL-12, IFN-a)와 조합으로 또는 200ug 항-CD33 항체 단독으로 4 용량으로 매 3 일 i.p. 주사된다. 종양 성장은 격주로 캘리퍼스로 모니터링되어 4 일째에 시작하는 종양 성장을 측정한다. 실험의 종점은 2000 mm3의 종양 용적 또는 60 일이다. 종양 성장 및 % 생존은 결과 측정기준이다. 조합 요법으로 종양 성장에서 감소 및 % 생존에서 증가는 항-CD33 항체가 면역-자극 사이토카인으로 부가적 또는 상승작용 치료 효과를 갖는 것을 나타낸다. 자극 사이토카인은 IFN-a/b, IL-2, IL-12, IL-18, GM-CSF, 및 G-CSF를 포함한다.
인간 IL-3, 인간 GM CSF, 인간 IL-6, 인간 Il2를 발현하고, 인간 태반, 치명적 간, 말초 혈액 또는 또 다른 공급원으로부터 인간 면역 세포로 씨딩된 면역-결핍된 마우스 또는 면역-결핍된 트랜스제닉 마우스는 또한 상기 연구에 사용될 수 있다 (Ito M 등, (2008) Curr Top Microbiol Immunol.;324:53-76; Ito R., 등, (2012) Cellular & Molecular Immunology 9, 208-214; Brehm 등, (2010) Curr Opin Endocrinol Diabetes Obes. 17(2): 120-125; Zhou 등, (2013) Cancer Letters. 344,13-19). 그와 같은 마우스는 세포주 종양 또는 환자 유래된 인간 종양 이종이식과 함께 사용될 수 있다 (Siolas 등, (2013) Cancer Res.; 73(17): 5315-5319).
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 33: 타고난 및 적응성 면역 세포의 생존력을 자극하는 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 능력의 분석
플레이트 결합된, 가교결합된 항-CD33 항체 Fab 단편의 효능적 기능성은 타고난 면역 세포 (예를 들면, 대식세포) 또는 적응성 면역 세포 (예를 들면, T 세포)에서 평가된다.
대식세포는 M-CSF 및 플레이트 결합된 CD33 항체 Fabs의 존재하에 배양되었고 세포 생존력은 측정되었다.
인간 단핵세포로부터 유래된 대식세포 및 DC, 뿐만 아니라 인간 단핵세포로부터 유래된 T 세포 및 인간 미세아교세포는 비-조직-배양-처리 96-웰 플레이트 상에서 플레이팅되었고, 가교결합된 CD33 Fabs의 12.5nM 또는 100nM으로 사전-코팅되었다. 세포는 10ng/ml M-CSF의 존재하에 48 시간 동안 배양되었다. 생존력의 분석은 CellTiter-Gloㄾ 키트 (Promega)를 이용하여 수행되었다. 플레이트는 GEN5 2.04 소프트웨어를 이용하는 BioTek 상승효과 마이크로플레이트 판독기로 판독되었다.
실시예 34: NFAT-의존적 유전자를 조절하는 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 능력의 분석
NFAT-의존적 유전자를 활성화하는 길항적 항-CD33 항체의 능력은 NFAT (활성화된 T 세포의 핵 인자) 프로모터의 대조하에 루시퍼라아제 리포터 유전자를 이용하여 평가된다.
공-수용체 DAP12 및 그것의 리간드 결합 파트너 TREM2를 함유하는 ITAM 모티프를 발현하는 마우스 T 림프구 BW5147.G.1.4로부터 유래된 세포주 (ATCCㄾ TIB48™)는 인간 CD33, 및 Cignal Lenti NFAT-루시퍼라아제 바이러스 (Qiagen)로 감염된다. 루시퍼라아제 신호전달은 플레이트 결합된 항-TREM2 항체에 의해 활성화된다. 전장 및 Fab 단편 항-CD33 항체는 TREM2 항체로 공동-플레이팅되거나 용액에 적용된다. 플레이트 결합을 위하여, 항체는 조직-배양 처리된 투명 바닥 백색 96웰 플레이트 (100μL/웰)상에서, 밤새 4℃에서 DPBS내 10 μg/ml로 적용된다. 웰은 DPBS로 3회 린스되고 1% 혈청을 가진 배지에서 100,000 세포/웰로 후속적으로 플레이팅된다. 신호전달용 양성 대조군으로서, PMA (0.05μg/ml) 및 아이오노마이신 (0.25uM)는 함께 첨가된다. 세포는 6 시간 동안 인큐베이션되고 루시퍼라아제 활성은 각각의 웰에 ONE-Glo™ 시약 (Promega) 첨가 및 플레이트 진탕기상에 RT에서 3분 인큐베이팅에 의해 측정된다. 루시퍼라아제 신호는 BioTek 플레이트 판독기를 이용하여 측정된다.
실시예 35: CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 항-뇌졸중 효과의 분석
중간 뇌동맥 (MCAO)의 일시적 폐색 - 인간 뇌졸중을 밀접하게 닮은 모델은 마우스에서 뇌 경색을 유도하는데 사용된다. 모노필라멘트 (70SPRe, Doccol Corp, USA)는 우측 총경동맥의 절개를 통해 내부 경동맥 속에 도입된다. 중간 뇌동맥은 재관류 시간 (6 h, 12 h, 24 h, 2 d, 7 d 및 28 d)의 범위로 30 분 동안 폐색된다. 수술의 효과는 12 h 및 7 d에서 모조 동물을 이용하여 제어된다. 모조 동물은 중간 뇌동맥의 폐색 없이 동일한 수술 과정을 경험한다. 길항적 항-CD33 항체 또는 대조군 항체로 처리된 MCAO 동물은 경색 용적측정, 급성 염증성 반응 (12 h 재관류), 염증전 사이토카인 TNFa, IL-1a, 및 IL-1β의 전사, 미세아교 활성 (CD68, Iba1), 케모카인 CCL2 (MCP1), CCL3 (MIP1a 및 케모카인 수용체 CX3CR1 및 CD3-양성 T 세포의 침습 (Sieber 등. (2013) PLoS ONE 8(1): e52982. doi:10.1371/journal.pone.0052982.)의 전사에 대하여 시험된다. 그와 같은 실험은 규칙적 마우스에서 또는 대안적으로 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 36: 항-CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 항-알츠하이머병 효과의 분석
알츠하이머병 (AD)의 발생을 지연, 예방, 또는 반전시키는 길항적 항-CD33 항체의 능력을 평가하기 위해, 5X FAD 마우스는 사용된다. 5X FAD 마우스는, 2 FAD 돌연변이, M146L 및 L286V를 포함하는 인간 PS1과 함께, Swedish (K670N, M671L), Florida (I716V), 및 London (V717I) 가족성 알츠하이머병 (FAD) 돌연변이를 갖는 돌연변이체 인간 APP (695)를 과발현한다. 양쪽 이식유전자는 마우스 Thy1 프로모터에 의해 조절되어 뇌에서 발현에 대해 구동하고 AD의 주요 특징을 요약한다. 효능적 항-CD33 항체 또는 대조군 항체로 처리된 마우스는 면역조직화학으로 A 베타 플라크 부하에 대하여 그리고 조직 추출물의 ELISA에 의해 시험된다. 이들은 뇌에서 미세아교세포의 수에 대하여, 그리고 모리스 수중 미로, 공간적 학습 및 기억 과제, 방사상 아암 수중 미로, 공간적 학습 및 기억 과제, (공간적 인지의 측정으로서 자발적인 변경을 정량화하는) Y 미로, 노지에서 신규성 선호, 학습 및 기억을 평가하는 작동 학습, 및 공포 조건화 (mousebiology.org website; Wang 등,(2015) Cell. pii: S0092-8674(15)00127-0)를 이용하여 인지 결손에서 감소에 대하여 추가로 시험된다. 그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 37: 기도 감염에서 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 보호성 효과의 분석
박테리아 기도 감염을 지연, 예방, 또는 치료하는 길항제 CD33 항체의 능력을 평가하기 위해, 연쇄상구균 뉴모니아에로 C57Bl6 마우스의 공격을 포함하는 전임상 마우스 모델은 사용된다. 상기 모델은 기재된 바와 같이 105 CFU S. 뉴모니아에 혈청형 3 (ATCC 6303)의 비강내 (i.n.) 투여를 포함한다 (참조, 예를 들면, Sharif O 등, 2014 PLoS Pathog. 2014 Jun; 10(6): e1004167; 및 Schabbauer G 등, 2010 J Immunol 185: 468-476). 상기 모델에서 ~90% WT C57Bl6 마우스는 감염후 6 일 이내 감염 때문에 사망한다.
10 내지 15 마우스/그룹은 S. 뉴모니아에로 공격받고 수반하여 0 일째부터 시작하여 매 2일 길항제 항-CD33 항체로 처리된다. 항-CD33 항체의 제1 용량은 S. 뉴모니아에로 공격하기에 앞서 3 시간 투여된다. 마우스는 사망 사례를 체크하기 위해 15 일 동안 매일 모니터링된다. 박테리아 공격에 생존한 마우스의 %는 결정된다.
별도의 실험에서, 혈액에서 그리고 폐에서 사이토카인 발현 및 박테리아 부하의 카운트는 또한 결정된다. 감염 24 또는 48 시간 이후 혈액은 EDTA-함유 튜브에서 수집되고 한천 플레이트 상에서 플레이팅되어 혈장에서 박테리아 CFU를 열거한다. 혈장은 ELISA에 의한 사이토카인 분석을 위하여 -20℃에서 저장된다. 폐는 수확되고, 균질화되고 한천 플레이트 상에서 플레이팅되어 박테리아 CFU를 열거하거나, 용해 버퍼에서 30분 동안 인큐베이션되고 사이토카인 측정을 위하여 상청액 분석된다.
별도의 실험에서, 폐는 박테리아 감염후 40 시간에 수집되고, 10% 포르말린에서 고정되고, H&E 병리학 분석을 위하여 파라핀에서 포매된다.
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 38: 패혈증에서 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 보호성 효과의 분석
패혈증을 지연, 예방, 또는 치료하는 길항제 CD33 항체의 능력을 평가하기 위해, LPS로 C57Bl6 마우스의 전신 공격을 포함하는 전임상 마우스 모델은 사용된다. 상기 모델은 기재된 바와 같이 37 mg/ml LPS의 복강내 (i.p.) 투여를 포함한다 (참조, 예를 들면, Gawish R 등, 2014 FASEB J). 상기 모델에서 >95% WT C57Bl6 마우스는 LPS 주사후 40 시간 이내 감염때문에 사망한다.
마우스의 집단은 LPS로 공격받고 수반하여 0 일째부터 시작하여 매일 길항제 항-CD33 항체로 처리된다. 항-CD33 항체의 제1 용량은 LPS로 공격하기에 앞서 3 시간 투여된다. 마우스는 사망 사례에 대하여 체크하기 위해, 주간 동안 매 ~4 시간 모니터링된다. LPS 공격에 생존한 마우스의 백분율은 결정된다.
별도의 실험에서, 복막 세척 유체 (PLF)는 수집된다. 상청액은 ELISA에 의해 사이토카인 분석을 위하여 -20℃에서 저장되고; 펠렛화된 세포는 복강에서 동원된 염증성 세포를 정량화하기 위해 카운트된다. 유사한 연구는 감염의 다른 모델에서 CD33 항체의 효능을 시험하기 위해 수행될 수 있다 (참조, 예를 들면, Sun 등, (2013) Invest Ophthalmol Vis Sci. 17;54(5):3451-62).
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 39: 급성 및 만성 결장염에서 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 보호성 효과의 분석
결장염을 지연, 예방, 또는 치료하는 길항제 항-CD33 항체의 능력을 평가하기 위해, 급성 또는 만성 결장염의 전임상 마우스 모델은 사용된다. DSS-유도된 결장염을 위하여, 마우스는 8 일 동안 선택적으로 음용수내 3% DSS를 받는다. TNBS-유도된 결장염을 위하여, 마우스는 마취되고 대조군으로서 비히클 단독 또는 20% 에탄올 (vol/vol)내 3 mg TNBS의 직장내 주사로 처리된다. 만성 결장염 모델을 위하여, 모든 마우스는 5 일 동안 2% DSS, 그 다음 10-일 회수 기간의 3 사이클로 처리된다. 모든 모델에 대하여, 체중 감소, 대변 일관성, 및 대변 잠혈의 존재는 매일 모니터링되고 기재된 바와 같이 질환 활성 지수를 계산하는데 사용된다 (참조, 예를 들면, Correale C, 2013, Gastroenterology, February 2013, pp. 346-356.e3).
마우스의 집단은 0 일째부터 시작하여 매일 길항제 항-CD33 항체로 처리되고 DSS 또는 TNBS 투여에 적용된다. 마우스는 체중 감소에 대하여 체크하기 위해 매일 모니터링되고, 대변 일관성, 및 대변 잠혈의 존재는 매일 모니터링되고 기재된 바와 같이 질환 활성 지수를 계산하는데 사용된다 (참조, 예를 들면, S. Vetrano, Gastroenterology, 135 (2008), pp. 173-184).
별도의 실험에서, 점막 손상의 내시경 및 조직학적 이미지는 염증성 세포 침윤 및 점막 손상을 평가하기 위해 수집된다. 유사한 연구는 크론병, 염증성 장 질환, 및 궤양성 대장염을 포함하는 자가면역의 다른 모델에서 CD33 항체의 이점을 시험하기 위해 수행될 수 있다 (참조, 예를 들면, Low 등, (2013) Drug Des Devel Ther.; 7: 1341-1357; 및 Sollid 등, (2008) PLoS Med 5(9): e198).
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 40: 상처 치유에서 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 보호성 효과의 분석
손상 이후 결장 상처 치유를 증가시키는 효능적 항-CD33 항체의 능력을 평가하기 위해, 결장에서 생검 손상의 마우스 모델은 사용된다. 상기 모델에서, 외부 수술 덮개를 가진 내시경은 중간-하행 결장에 삽입되고 점막은 항문-직장 접합에 대해 조사된다. 그 다음, 전체 점막 및 점막하조직의 단일 전체 두께 영역은 3 프렌치(French)의 직경을 가진 가요성 생검 겸자로 제거되어, 고유근층의 침투를 피한다. 각각의 마우스는 결장의 등쪽을 따라 3-5 부위에서 생검 손상된다 (참조, 예를 들면, Seno H, 2008, Proc Natl Acad Sci U S A. 2009 Jan 6; 106(1): 256-261).
마우스의 집단은 생검 손상 2 또는 3 일 이후 효능제 항-CD33 항체로 처리된다. 마우스는 병변의 표면적을 측정함으로써 체중 감소 및 상처 치유에 대하여 체크하기 위해 15 일 동안 매일 모니터링된다.
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 41: 망막 퇴행에서 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 보호성 효과의 분석
AMD는 외부 망막의 퇴행성 질환이다. 염증, 특히 염증성 사이토카인 및 대식세포가 AMD 질환 진행에 기여한다고 여겨진다.
AMD 병변에 근접하여 대식세포의 존재는 결정강, 브루크막, 맥락막 및 망막에서 문서로 기록된다. 대식세포는 조직 인자 (TF) 및 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)를 방출시키고, 이는 맥락막 혈관신생을 보여주는 환자에서 신규한 혈관 형성의 팽창을 유발시킨다.
황반 맥락막에서 존재하는 대식세포의 유형은 더 어린 눈과 비교된 더 늙은 눈에서 M2 대식세포의 상승된 수준을 표현하는, 연령에 따라 변화한다. 그러나, 진행성 aMD 황반은 유사한 연령의 정상 검시된 눈에 비교된 더 높은 M1 대 M2 비를 가졌다 (참조, 예를 들면, Cao X 등, (2011), Pathol Int 61(9): pp528-35). 이것은 AMD 진행의 늦은 개시에 있어서 눈에서 고전적 M1 대식세포 활성화 사이 연결을 시사한다.
망막 미세아교세포 세포는 내부 망막에서 또한 정상적으로 존재하는 조직-상주하는 대식세포이다. 손상의 사례에서, 미세아교세포는 활성화될 수 있고 염증의 매개체로서 작용할 수 있다. 활성화된 미세아교세포는 AMD 조직 샘플에서 검출되고 있고 AMD 발병으로 이어지는 가공된 염증성의 하나의 잠재적인 원인제공자로서 제안되고 있다 (Gupta 등, (2003) Exp Eye Res., 76(4):463-71.). AMD를 예방, 지연, 또는 반전하는 CD33 항체의 능력은 1종 이상의 AMD 모델에서 시험된다 (참조, 예를 들면, Pennesi 등, (2012) Mol Aspects Med.; 33(4): 487-509).
전체 염증성 대식세포 (M1 및/또는 활성화된 미세아교세포)는 AMD 질환 진행과 연관성을 보여주기 위해 문서로 기록되고 따라서 길항제 CD33 항체에 대하여 치료 표적을 나타낸다. 유사한 치료 이점은 녹내장 및 유전적 형태 또는 망막 퇴행 예컨대 색소성 망막염에서 달성될 수 있다.
녹내장내 망막 신경절 세포 퇴행을 예방, 지연, 또는 반전시키는 CD33 항체의 능력은 녹내장 모델에서 시험된다 (참조, 예를 들면, El-Danaf 등, (2015). J Neurosci. 11;35(6):2329-43). 마찬가지로, 유전적으로 유도된 망막 퇴행 및 색소성 망막염에서 REM2의 치료 이점은 하기에 기재된 바와 같이 시험된다: Chang 등, (2002) Vision Res.; 42(4):517-25, 및 "P23H 및 S334ter 돌연변이체 로돕신 트랜스제닉 랫트의 망막 퇴행 랫트 모델 자원 이용가능성 및 랫트의 RCS 근친교배한 및 RCS 유사유전자형 균주", MM LaVail, 2011년 6월 30일.
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 42: 지방생성 및 다이어트-유도된 비만에서 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 보호성 효과의 분석
지방생성 및 비만에서 CD33 항체의 효과를 시험하기 위해, 고-지방 다이어트 (HFD)의 마우스 모델은 사용된 (참조, 예를 들면, Park 등, (2015) Diabetes. 64(1):117-27).
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 43: 골다공증에서 길항제 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 보호성 효과의 분석
골은 칼슘 항상성 및 구조적 필요성을 지지하기 위해 일정하게 리모델링되는 동적 장기이다. 파골세포는 골의 유기 및 무기 성분 둘 모두 제거를 책임지는 세포이다. 파골세포는 대식세포 계통에서 조혈 전구세포로부터 유래되고 NFκB 리간드의 종양 괴사 인자 패밀리 사이토카인 수용체 활성제와 반응하여 분화한다. 파골세포, 단독 골-흡수 세포는 골다공증 및 골석화증의 발병의 중심이다 (Novack 등, (2008) Annual Rev Pathol., 3:457-84).
골다공증은 골절의 증가된 위험으로 이어질 수 있는 골량 및 골밀도에서 감소를 특징으로 하는 진행성 골 질환이다. 골 교체가 파골세포 및 골아세포 둘 모두의 증가된 활성과 함께 가속화되는 경우 폐경후 첫해에서 주로 명시된다. 재흡수 및 합성의 과정에서 불균형 때문에, 그러나, 순 효과는, 주로 섬유주인, 골손실이다. 따라서, 골다공증에서 골절의 가장 보편적인 부위는, 섬유주 구조가 전체 골 강도에 핵심인, 손목, 대퇴경부, 및 척추 바디이다.
감소된 파골세포 기능은, DAP12 ITAM 신호전달 어댑터가 부족하고 파골세포-유사 세포의 분화에서 상당한 결함을 초래하는 동물 모델에서 관측된 바와 같이, 골수 공간의 제거 및 증가된 골량과 함께, 골석화증을 초래한다 (Koga, 등, (2004) Nature 428: 758-763).
따라서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 골다공증을 예방, 골다공증의 위험을 감소, 및/또는 골다공증을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 효능제 항-CD33 항체 투여는 골석화증 (예를 들면, DAP12 인산화, Syk 활성화, 및 파골세포로의 가속화된 분화)를 갖는 개체에서 1종 이상의 CD33 활성을 유도할 수 있다 (Peng 등 (2010). Sci Signal. 2010 18;3 122; 및 Humphrey 등, (2006) J Bone Miner Res.,21(2):237-45).
그와 같은 실험은 골수성 프로모터에 의해 유도된 cDNA로부터 또는 박테리아 인공 염색체로부터 인간 CD33 유전자를 발현하는 마우스에서 또는 hCD33 cDNA를 함유하는 렌티 또는 AAV 바이러스로 형질도입된 마우스에서 또한 수행될 수 있다.
실시예 44: SHP1, SHP2 및 다른 신호전달 분자에 CD33의 결합을 조절하는 CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 능력의 분석
인간 1차 단핵세포, 대식세포, 수지상 세포, T 세포, 미세아교세포 또는 파골세포는 PBS-EDTA로 조직 배양 접시로부터 제거되고, PBS로 세정되고, 카운트된다. 세포는 빙상에서 또는 다른 조건하에 20분 동안 1μg/106 세포에서 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체로 또는 아이소타입-매칭된 대조군 항체로 인큐베이션된다. 세포는 빙랭 방사선면역침강 검정 (RIPA) 버퍼에서 20분 동안 용해되고 그 다음 16,000 g으로 10분 동안 4℃에서 원심분리되어 불용성 물질을 제거한다. 수득한 상청액은 표시된 항체 (SHP1, SHP2, c-Cbl., Vav, Syk, LcK, Fyn, GRb2, PLC-감마. 톨 유사 수용체, DAMP 수용체, 패턴 인식 수용체) 및 단백질 A- 또는 단백질 G-아가로스 (Sigma)로 면역침강 반응에 적용된다. 비드는 광범위하게 RIPA 버퍼로 세정되고 단백질은 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)에 의해 분리된다. 단백질은 그 다음 웨스턴 블랏팅에 의해 니트로셀룰로오스 막에 전달되고, 적절한 CD33 항체로 인큐베이션되고 기재된 바와 같이 향상된 화학발광(ECL) 시스템 (Pierce)으로 시각화된다 (예를 들면, Peng 등, (2010) Sci Signal., 3(122): ra38). 대안적으로, 세포는 빙상에서 또는 다른 조건하에 20분 동안 1 μg/106 세포에서 항-CD33 및/또는 CD33 이중특이적 항체로 또는 아이소타입-매칭된 대조군 항체로 인큐베이션된다. 세포는 20분 동안 빙랭 방사선면역침강 검정 (RIPA) 버퍼에서 용해되고 그 다음 16,000 g으로 10분 동안 4℃에서 원심분리되어 불용성 물질을 제거한다. 수득한 상청액은 제2 CD33 항체로 면역침강 반응에 적용된다. 단백질은 그 다음 웨스턴 블랏팅에 의해 니트로셀룰로오스 막에 전달되고 표시된 항체 (SHP1, SHP2, c-Cbl., Vav, Syk, LcK, Fyn, GRb2, PLC-감마. 톨 유사 수용체, DAMP 수용체, 패턴 인식 수용체)로 인큐베이션된다.
실시예 45: 시험관내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 및 CD33을 결합시키는 CD33 항체의 능력 비교
CD33 항체 결합의 비교
인간 1차 단핵세포 상에서 발현된 CD33을 결합하는 상이한 항-CD33 항체의 능력은 결정되었다. 항-CD33 항체 2F5, 2E12, 6A3, 및 6C7의 결합 능력은 상업적 항-CD33 항체 젬투주맙 및 린투주맙의 결합 능력과 비교되었다. 마우스 IgG1 (mIgG1) 아이소타입 대조군 및 인간 아이소타입 대조군은 참조로서 사용되었다. 세포는 수확되었고, 96-웰 플레이트에서 106/ml로 플레이팅되었고, 빙상에서 1 시간 동안 2% FBS, 2 mM EDTA 및 1 μg/ml, 0.1 μg/ml, 또는 0.01 μg/ml의 항-CD33 항체 및 Fc 차단 시약을 함유하는 100 μl PBS에서 인큐베이션되었다. 세포는 2회 세정되었고 빙상에서 30 분 동안 2% FBS, 2 mM EDTA 및 5 μg/ml PE-접합된 2차 항체를 함유하는 100 μl PBS에서 인큐베이션되었다. 세포는 차가운 PBS에서 2회 세정되었고 BD FACS Canto 상에서 유세포측정에 의해 분석한다. 데이터 분석 및 평균 형광 강도 (MFI) 값의 계산은 FlowJo (TreeStar) 소프트웨어 버전 10.0.7로 수행되었다.
도 17A에 나타낸 바와 같이, 항-CD33 항체 2F5, 2E12, 6A3, 및 6C7은 상업적 항체 젬투주맙 및 린투주맙이 하는 것보다 0.1 μg/ml 항체의 농도에서 더 높은 MFI로 인간 1차 단핵세포에 결합한다. 결과는 본 개시내용의 항-CD33 항체가, 상업적 항체에 비교된 경우, 인간 1차 골수성 세포에서 개선된 표적 참여를 나타내는 것을 입증한다.
CD33의 시험관내 발현의 비교
인간 1차 단핵세포 상에서 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 항-CD33 항체 2F5, 2E12, 6A3, 및 6C7의 능력은 인간 1차 단핵세포 상에서 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 상업적 항-CD33 항체 젬투주맙 및 린투주맙의 능력과 비교되었다. 마우스 IgG1 (mIgG1) 아이소타입 대조군 및 인간 아이소타입 대조군은 참조로서 사용되었다.
주변 인간 혈액 샘플로부터 단핵세포는 RosetteSep™ 단핵세포 단리 항체 칵테일 (StemCell Technologies)을 이용하여 단리되었다. 세포 샘플은 200,000 세포 / mL로 24-웰 플레이트에서 또는 10% Hyclone FBS, 2 mM 글루타민, pen/strep, 및 비-필수 아미노산으로 보충된 2 mL의 RPMI내 500,000 세포로 6-웰 접시에서 플레이팅되었다. CD33 항체 또는 대조군 아이소타입은 1.0 μg/ml, 0.1 μg/ml, 0.01 μg/ml, 0.001 μg/ml, 0.0001 μg/ml, 및 0.00001 μg/ml에서 첨가되었고, 24 시간 동안 37℃에서 5% CO2로 인큐베이션되었다.
수용체 동력학을 평가하기 위해, 항체는 1 시간 동안 세포를 결합하게 되었고, 세정 제거되었고 CD33의 표면 수준은 24 및 48 시간 후 결정되었다.
세포 표면 수용체 발현은 FACS 분석에 의해 검출되었다. 세포는 어둠 속에 빙상에서 30 분 동안 항-CD33-FITC 클론 HIM3-4 (도 17B), 뿐만 아니라 대조군 표면 마커 CD14 (도 17C)로 인큐베이션되었다. 세포는 FACS 버퍼 (PBS +2% FBS, 2 mM EDTA)에서 2X 세정되었고 유세포측정은 BD FACS Canto 상에서 수행되었다. 데이터는 TreeStar FlowJo 소프트웨어를 이용하여 분석되었다. 데이터는 각각의 형광단에 대하여 MFI 값을 이용하는 항체의 부재하에 수용체 발현의 퍼센트로서 계산되었다.
도 17B는 항-CD33 항체가 6-포인트 곡선에 대하여 10-배 적정된 인간 세포로부터 CD33 세포 표면 수준의 결과를 도시한다. 결과는 1.0 μg/ml 미만의 항체 농도에서 대조군 수용체 CD14가 아닌 CD33의 감소된 표면 수준을 입증한다 (도 17B 및 17C). 0.01 μg/ml의 농도에서 항체 2F5, 2E12, 6A3, 및 6C7은 CD33의 세포 표면 수준을 약 20%로 감소시켰고, 반면에 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 상업적 항체 린투주맙의 능력은 0.01 μg/ml의 농도에서 완전히 폐지되었다 (도 17B). 또한, CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 상업적 항체 젬투주맙의 능력은 0.01μg/ml의 농도에서 또한 상당히 감소된 하향조절 기능이었고, 0.001 μg/ml의 농도에서 완전히 상실되었다 (도 17B). 반대로 0.001μg/ml의 농도에서 항체 2F5, 2E12, 6A3, 및 6C7은 CD33의 표면 수준을 약 50-30%로 감소시킬 수 있었다 (도 17B). 도 17C에 나타낸 바와 같이, CD14 대조군 수용체의 세포 표면 수준은 임의의 항-CD33 항체에 의해 조절되지 않았다.
결과는 항-CD33 항체 2F5, 2E12, 6A3, 및 6C7이 상업적 항체에 비교된 경우 개선된 능력으로 CD33의 세포 표면 수준을 강력하게 감소시킨다는 것을 입증한다. 특히, 항체 2F5, 2E12, 6A3, 및 6C7은 CD33의 세포 표면 수준 감소에 있어서 상업적 항체 젬투주맙보다 대략 10-배 더 양호하였고, CD33의 세포 표면 수준 감소에 있어서 상업적 항체 린투주맙보다 대략 100-배 더 양호하였다 (도 17B).
실시예 46: 사이토카인 생산 및 세포 활성화에서 CD33 발현 손실의 효과
단구성 세포주 THP-1은 50,000 세포 / 웰로, 24-웰 접시에서 37℃, 5%CO2에 밤새 CRISPR/Cas9 일체형 렌티벡터 (pLenti-U6-sgRNA-SFFV-Cas9-2A-Puro, ABM)로부터 발현된 스크램블 소형 가이드 RNA (표적 서열: GCACTCACATCGCTACATCA (서열 식별 번호: 216)) 또는 CD33 소형 가이드 RNA (표적 서열: CTAGAGTGCCAGGGATG(서열 식별 번호: 217))로 렌티바이러스적으로 형질도입되었다. 배지는 다음 날 첨가되었다. 렌티바이러스 첨가 3 일 후, 형질도입된 세포는, 새로운 배지 및 항생제가 매 2-3 일 첨가되면서, 2 주 동안 0.5 μg/ml 퓨로마이신으로 선택되었다. CD33 수용체 발현 및 대조군 CD14 발현은 FACS에 의해 검출되었다 (도 18A 및 18B).
사이토카인 생산 및 세포 활성화 상태를 평가하기 위해, 스크램블 sgRNA-발현 또는 CD33 sgRNA-발현 THP-1 세포는 24-웰 접시에서 100,000 세포 / 웰로 플레이팅되었고 무 LPS, 1.0 μg/ml LPS, 100 ng/ml LPS, 또는 10 ng/ml LPS로 처리되었다. 사이토카인 자극된 웰에서, 10 ng/ml GM-CSF, 10 ng/ml IL-6, 및 10 ng/ml IL-8이 첨가되었다. 자극 3 일 후, 세포 상청액은 인간 염증성 혈구계산 비드 어레이 키트 (BD Biosciences)로 사이토카인 생산에 대하여 분석되었다 (도 18C). 데이터는 PE 검출기의 평균 형광 강도 (MFI)로서 나타난다. 자극 3 일 후, 세포는 FACS Canto (BD Biosciences) 상에서 CD14 (Pacific Blue, BD Biosciences), CD16 (v500, BD Biosciences), HLA-DR (APC-Cy7, BD Biosciences), 및 CCR2 (PE, Biolegend) 발현에 대하여 FACS 분석되었고 데이터는 FlowJo 10.1r5 (TreeStar)로 가공되었다 (도 18D). 데이터는 미처리에 비교된 MFI에서 변화로서 나타난다.
사이토카인 생산 및 세포 활성화에서 CD33 발현의 손실의 효과를 평가하기 위해, CRISPR CD33 KO THP-1 세포주는 생성되었고 대조군 스크램블 sgRNA 형질도입된 세포에 비교되었다. 기초 상태에서, CD33 CRISPR KO 세포는 큰 차별적인 사이토카인 또는 활성화 마커 발현을 표시하지 않았다 (도 18C 및 18D). 그러나, LPS의 적정 양으로 자극시, CD33 KO 세포는 IL-6, IL-8, IL-1β, IL-12, TNF-α, 및 IL-10의 증가된 수준을 생산하였고 CD14, CD16, HLA-DR, 및 CCR2를 상향조절하였다 (도 18C 및 18D). 이들 결과는 CD33이 부족한 세포가 더욱 면역-반응성인 것을 나타낸다.
실시예 47: 면역 체크포인트에서 CD33 항체의 효과
인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs)는 피콜 원심분리에 의해 전혈로부터 분리되었다. 적혈구의 ACK 용해 이후, 인간 PBMCs는 10% FBS (Hyclone), L-글루타민, Pen/Strep, 비-필수 아미노산, 피루브산나트륨, 및 하기를 함유하는 억제성 사이토카인 칵테일로 보충된 RPMI 배지에서 배양되었다: 10 ng/ml 재조합 IL-6 (Siigma-Aldrich), IL-8 (R&D Systems), 및 GM-CSF (R&D Systems). 일부 실험에서, 인간 PBMCs는 10 ng/ml GM-CSF로 보충된 종양 조건화된 배지로 배양되었다. 종양 조건화된 배지는 종양 세포주 배양액 (자궁경부 암 세포 또는 교모세포종 세포)로부터 수확되고 있고 0.2 μM 막으로 멸균 여과되고 있는 IL-6 및 IL-8을 제외하고 상기 언급된 보충물을 가진 RPMI 배지이다. 사이토카인, 항체 (CD33 항체 2F5 또는 아이소타입 대조군), 또는 rhGM-CSF 스파이킹된 종양 상청액은 1 주 동안 매 2-3 일 인간 PBMCs에 첨가되었다.
FACS 분석을 위하여, 현탁액 및 부착 세포는 수확되었고 표준 FACS 절차에 의해 표시된 수용체의 발현에 대하여 시험되었다.
T 세포 증식 검정을 위하여, 골수-유래 억제 세포 (MDSC)는 7 일의 배양 이후 CD2, CD3, CD8, CD19, 및 CD56 (STEMCELL Technologies)에 항체의 칵테일을 이용하는 자기-기반 음성 선택에 의해 단리되었다. 단리된 MDSC는 편평 바닥 96-웰 비-TC 플레이트에서 50,000 세포 / 웰로 플레이팅되었고 T 세포의 첨가에 앞서 CD33 항체 2F5, 마우스 아이소타입 대조군 항체 (mIgG1), 또는 항-PD-L1 항체로 처리되었다.
비-자가조직 공여체 CD3 T 세포 또는 CD8 T 세포는 RosetteSep 선택 기술 (STEMCELL Technologies)를 이용하여 전혈로부터 단리되었고, CFSE (Life Technologies)로 표지되었고, 10 U/ml IL-2 및 1:1 비 CD3/CD28 T-활성제 Dynabeads (Life Technologies)로 활성화되었다. MDSC 및 T 세포는 1:2 또는 50,000:100,000 세포 / 웰의 비로 공동-배양되었다. CFSE는 공동-배양 3 일 후 FACS Canto (BD Biosciences) 상에서 검출되었다. 데이터는 FlowJo 버전 10.1 (TreeStar) 소프트웨어로 분석되었다.
도 19A에 나타낸 바와 같이, 항-CD33 항체 2F5는 MDSC 상에서 면역 억제 리간드 PD-L1의 발현을 감소시켰고, 종양에 대한 T 세포 기능의 감소된 억제로 이어진다. 항-CD33 항체 2F5로 배양된 MDSC는 또한 표현형 변화를 표시하고, 줄어든 면역억제성 수용력을 시사한다. 배지 단독 대조군 (MDSC 미처리) 또는 아이소타입 대조군 항체-처리 세포 (MDSC +아이소타입)에 비교하여, 2F5 항체로 배양된 MDSC (MDSC +C-2F5)는 더 낮은 수준의 PD-1 리간드 (PD-L1 및 PD-L2), 감소된 수준의 B7-H3 (강력한 T 세포 체크 포인트 억제제), 감소된 수준의 CD200R (억제 신호전달 수용체), 및 감소된 수준의 M2-유형 마커 CD163 및 CD206을 발현한다 (도 19B). 결과는 CD33의 세포 표면 수준의 항체-매개된 표적 참여 및 차후의 하향조절이 억제성 리간드 및 수용체를 감소시키는 그와 같은 방식으로 표현형 변경으로 이어지는 것을 나타낸다.
도 19C 및 19D에 나타낸 바와 같이, 항-CD33 항체 2F5는 MDSC의 존재하에 T 세포 증식을 증가시켰고, 더욱 종양-방어 T 세포의 생성을 허용한다. 활성화된 T 세포로 공동-배양된 MDSC는 T-세포 증식을 억제시킨다. 이들 연구에서, 항체 2F5로 처리된 MDSC는 총 CD3 T 세포 또는 세포독성 CD8 T 세포의 T 세포 증식의 더 적은 억제를 유도하였다 (도 19C 및 19D). 아이소타입 대조군 항체 (mIgG1)는 T 세포 증식의 MDSC-의존적 억제를 변화시키지 않았다 (도 19C 및 19D). 또한, 2F5 항체는 항-PD-L1 항체에 비교된 경우 MDSC-매개된 T 세포 억제 완화에 더 효과적이었다 (도 19C 및 19D). 결과는 억제성 리간드 및 수용체의 발현 감소에 의해 MDSC를 표현형으로 변경할 수 있는 항-CD33 항체가 또한 다운스트림 기능, 예컨대 T 세포 증식에 영향을 줄 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 48: 골수-유래 억제 세포 (MDSC)에서 CD33 항체의 효과
인간 말초 혈액 세포는 피콜처리되었고, 적혈구는 ACK 용해 버퍼로 용해되었고, 세포는 3회 세정된 다음 10% FBS, Pen/Strep, 1mM 글루타민, 비-필수 아미노산, 및 피루브산나트륨을 가진 RPMI에 플레이팅되었다. 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs)는 하기 사이토카인으로, 5%CO2내 37℃에서 1 주 동안 배양되었다: 10 ng/ml rhGM-CSF (R&D), 10 ng/ml rhIL-8 (R&D), 및 10 ng/ml rhIL-6 (Sigma). mIgG1 (BioXcell) 아이소타입, 또는 CD33 항체 2F5 또는 6C7는 그 다음 플라스크에 첨가되었다. 매 2-3 일, 배지, 사이토카인, 및 항체 (해당하는 경우)는 보충되었다. 7 일의 배양 이후, 세포는 박리 및 분쇄에 의해 수확되었고, FACS 분석을 위하여 2% FBS 및 1 mM EDTA를 가진 PBS에서 재현탁되었다. 살아있는 및 죽은 세포 집단의 평가를 위하여, Live/Dead Fixable Aqua dead cell stain (Thermo Fisher)는 2% FBS 및 1 mM EDTA를 가진 PBS에서 1:500 희석되었고 빙상에서 30 분 동안 인큐베이션되었다. 세포는 버퍼에서 3회 세정되었고 전면 및 측면 산란검출기 및 AmCyan 형광에 대하여 BD FACS Canto (BD Biosciences) 상에서 분석되었다. 데이터는 FlowJo (Tree Star 소프트웨어)로 분석되었다.
도 20에 나타낸 바와 같이, CD33 항체 6C7은 분화하는 골수-유래 억제 세포 (MDSC)에서 세포 사망을 유도할 수 있다.
<110> ROSENTHAL, Arnon MONROE, Kate AVOGARDRI-CONNORS, Francesca <120> ANTI-CD33 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> 735022000740 <150> 62/241,701 <151> 2015-06-12 <150> 62/175,152 <151> 2015-10-14 <160> 251 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 356 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Met Asp 1 5 10 15 Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln Glu Gly 20 25 30 Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro Tyr Tyr 35 40 45 Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Ala Ile 50 55 60 Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln Glu Val 65 70 75 80 Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro Ser Arg 85 90 95 Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn Gly 100 105 110 Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr Lys 115 120 125 Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr Pro Lys Ile Leu 130 135 140 Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn Leu Thr Cys Ser 145 150 155 160 Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe Ser Trp Leu 165 170 175 Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr His Ser Ser Val 180 185 190 Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr Asn Leu Thr Cys 195 200 205 Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg Thr Ile Gln 210 215 220 Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr Gly Ile Phe Pro 225 230 235 240 Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly Val Val His Gly 245 250 255 Ala Ile Gly Gly Ala Gly Val Thr Ala Leu Leu Ala Leu Cys Leu Cys 260 265 270 Leu Ile Phe Phe Ile Val Lys Thr Arg Lys Ala Ala Arg Thr Ala Val 275 280 285 Gly Arg Asn Asp Thr His Pro Thr Thr Gly Ser Asp Lys His Gln Lys 290 295 300 Lys Ser Lys Leu His Gly Pro Thr Glu Thr Ser Ser Cys Ser Gly Ala 305 310 315 320 Ala Pro Thr Val Glu Met Asp Glu Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn 325 330 335 Phe His Gly Met Asn Pro Ser Lys Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu 340 345 350 Val Arg Thr Gln 355 <210> 2 <211> 403 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Met Leu Trp Pro Leu Pro Leu Phe Leu Leu Cys Ala Gly Ser Leu Ala 1 5 10 15 Gln Asp Leu Glu Phe Gln Leu Val Ala Pro Glu Ser Val Thr Val Glu 20 25 30 Glu Gly Leu Cys Val His Val Pro Cys Ser Val Phe Tyr Pro Ser Ile 35 40 45 Lys Leu Thr Leu Gly Pro Val Thr Gly Ser Trp Leu Arg Lys Gly Val 50 55 60 Ser Leu His Glu Asp Ser Pro Val Ala Thr Ser Asp Pro Arg Gln Leu 65 70 75 80 Val Gln Lys Ala Thr Gln Gly Arg Phe Gln Leu Leu Gly Asp Pro Gln 85 90 95 Lys His Asp Cys Ser Leu Phe Ile Arg Asp Ala Gln Lys Asn Asp Thr 100 105 110 Gly Met Tyr Phe Phe Arg Val Val Arg Glu Pro Phe Val Arg Tyr Ser 115 120 125 Tyr Lys Lys Ser Gln Leu Ser Leu His Val Thr Ser Leu Ser Arg Thr 130 135 140 Pro Asp Ile Ile Ile Pro Gly Thr Leu Glu Ala Gly Tyr Pro Ser Asn 145 150 155 160 Leu Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Thr 165 170 175 Phe Ser Trp Met Ser Thr Ala Leu Thr Ser Leu Ser Ser Arg Thr Thr 180 185 190 Asp Ser Ser Val Leu Thr Phe Thr Pro Gln Pro Gln Asp His 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norvegicus <220> <221> VARIANT <222> (310)..(316) <223> Xaa = Any Amino Acid <400> 3 Met Leu Trp Ile Val Leu Leu Leu Leu Leu Cys Thr Asp Ser Leu Val 1 5 10 15 Gln Asp Leu Glu Phe Gln Leu Val Ala Pro Lys Ser Val Thr Val Glu 20 25 30 Glu Ala Leu Cys Val His Val Pro Cys Ser Val Ser Tyr Pro Ser Ile 35 40 45 Arg Pro Thr Phe Gly Pro Val Thr Gly Tyr Trp Leu Leu Lys Gly Thr 50 55 60 Ser Leu His Glu Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Asp Pro Arg Gln Leu 65 70 75 80 Val Gln Lys Ala Thr Gln Gly Arg Phe Gln Leu Leu Gly Asp Pro Gln 85 90 95 Lys His Asp Cys Ser Leu Leu Ile Arg Asp Ala Gln Lys Asn Asp Thr 100 105 110 Gly Val Tyr Phe Phe Arg Val Val Arg Glu Pro Phe Val Arg Tyr Ser 115 120 125 Tyr Arg Ala Asn Gln Leu Leu Leu His Val Thr Pro Leu Ser Arg Thr 130 135 140 Pro Asp Ile Ile Ile Pro Glu Thr Leu Arg Ala Gly His Pro Ser Asn 145 150 155 160 Leu Ser Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Thr 165 170 175 Phe Ser Trp Met Ser Asp Ala Leu Thr Ser Leu Ser Ser Arg Thr Thr 180 185 190 Asn Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr 195 200 205 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Phe Ser Gly Ala Gly Val Thr Val Glu 210 215 220 Arg Thr Ile Arg Leu Asn Val Thr Trp Lys Ser Asp Gln Met Arg Gln 225 230 235 240 Val Val Leu Val Ala Val Gly Glu Ala Ala Val Lys Leu Leu Ile Leu 245 250 255 Gly Leu Cys Leu Thr Leu Leu Ser Val Val Ile Cys Arg Arg Lys Ala 260 265 270 Thr Lys Leu Ser Val His Met Asn Cys Glu Asn Pro Thr Gln Ala His 275 280 285 Pro Gln Asp Ser Lys Val His Ser His Ala Glu Asn Ser Arg Pro Leu 290 295 300 Arg Lys Asp Leu Pro Xaa Glu Gln Ser Ser Ile Xaa Thr Xaa Ile Pro 305 310 315 320 Leu Asn Phe Met Gly Ala Lys Ser Gln Glu Tyr Pro Glu Ile 325 330 <210> 4 <211> 356 <212> PRT <213> Pan troglodytes <400> 4 Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Met Asp 1 5 10 15 Pro Lys Ile Arg Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln Glu Gly 20 25 30 Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro Tyr Tyr 35 40 45 Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Pro Ile 50 55 60 Val Ser Gly Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Pro Asp Gln Glu Val 65 70 75 80 Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Leu Ser Arg 85 90 95 Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn Gly 100 105 110 Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr Lys 115 120 125 Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr Pro Lys Ile Leu 130 135 140 Ile Pro Gly Ala Leu Asp Pro Gly His Ser Lys Asn Leu Thr Cys Ser 145 150 155 160 Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe Ser Trp Leu 165 170 175 Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr His Ser Ser Val 180 185 190 Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr Asn Leu Thr Cys 195 200 205 Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg Thr Ile Gln 210 215 220 Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr Gly Ile Phe Pro 225 230 235 240 Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly Val Val His Gly 245 250 255 Ala Val Gly Gly Ala Gly Ile Thr Ala Leu Leu Ala Leu Cys Leu 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Leu Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Gly Val Val Gln Gly Ala Ile 115 120 125 Gly Gly Ala Gly Val Thr Val Leu Leu Ala Leu Cys Leu Cys Leu Ile 130 135 140 Phe Phe Thr Val Lys Thr Arg Lys Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg 145 150 155 160 Ile Asp Thr His Pro Ala Thr Gly Pro Thr Ser Ser Lys His Gln Lys 165 170 175 Lys Ser Lys Leu His Gly Ala Thr Glu Thr Ser Gly Cys Ser Gly Thr 180 185 190 Thr Leu Thr Val Glu Met Asp Glu Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn 195 200 205 Phe His Gly Met Asn Pro Ser Glu Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu 210 215 220 Val Arg Thr Gln 225 <210> 6 <211> 378 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 6 Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Ile Leu Trp Ala Val Glu Trp Ala Gln 1 5 10 15 Gly Lys Val Lys Leu Gly Ala Ser Ala Asp Ala Gly Val Pro Arg Ser 20 25 30 Leu Ala Gln Asp Pro Ile Tyr Trp Leu Gln Ile Gln Glu Ser Leu Thr 35 40 45 Val Gln Glu Gly Leu Cys Ile Ser Val Pro Cys Tyr Phe Ser Tyr Pro 50 55 60 Met Glu Tyr Trp Ile Lys Thr Tyr Ser Ala Leu Gly Tyr Trp Phe Arg 65 70 75 80 Asn Gly Thr Asn Val 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Leu Ile Phe Phe Arg Val Lys Thr Cys 290 295 300 Arg Lys Thr Ala Ser Arg Thr Ala Val Gly Met Asp Asn Ile His Pro 305 310 315 320 Val Val Glu Pro Ala Pro Leu Asp Tyr Gln Glu Ser Asp Leu Pro Asp 325 330 335 Asp Pro Thr Ser Ser Ala Glu Val Pro Ser Thr Ser Glu Met Glu Gln 340 345 350 Glu Leu Tyr Tyr Ala Ser Ile Ser Phe His Arg Arg Thr Glu Ser Thr 355 360 365 Cys Ala Glu Tyr Ser Glu Ile Arg Thr Gln 370 375 <210> 7 <211> 366 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 7 Met Leu Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Ala 1 5 10 15 Thr Leu Ala Gln Asp Pro Asn Tyr Trp Leu Lys Ala Pro Trp Ser Val 20 25 30 Ser Val Gln Glu Gly Leu Cys Val Arg Val Pro Cys Ser Val Tyr Tyr 35 40 45 Pro Ser Asp Phe Arg Ser Gly Ser Thr Pro Val His Gly Phe Trp Phe 50 55 60 Arg Glu Gly Ala Glu Val Leu Lys Asp Ala Pro Val Ala Thr Asn Lys 65 70 75 80 Leu Asp Arg Glu Ala Gln Lys Glu Thr Gln Gly Arg Phe His Leu Leu 85 90 95 Gly Asp Pro Arg Asp Asn Asn Cys Ser Leu Glu Ile Arg Asp Ala Arg 100 105 110 Lys Ser Asp Arg Gly Ser 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ggagagcttt ca 22 <210> 224 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 224 ggcaaaccca aggtctacgt tc 22 <210> 225 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 225 tacctcattg gccagctgct t 21 <210> 226 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 226 aggacctggg ttggaagtgg 20 <210> 227 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 227 agttggcatg gtagcccttg 20 <210> 228 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 228 Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr Ile Glu 1 5 10 <210> 229 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 229 Met Glu Leu Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly Asp 1 5 10 <210> 230 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 230 Gly Val Gly Asp Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val 1 5 10 <210> 231 <211> 13 <212> 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musculus <400> 243 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Thr Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val 65 70 75 80 Glu Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp Glu Ile 85 90 95 Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 244 <211> 117 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 244 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Leu His Trp Val Lys Leu Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Thr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 245 <211> 120 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 245 Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Cys Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Val Tyr 50 55 60 Cys Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys 65 70 75 80 Ser Arg Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Gly Glu Asp Thr Gly 85 90 95 Phe Tyr Thr Arg Asp Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 246 <211> 117 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 246 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Leu His Trp Val Lys Leu Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Thr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 247 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Xaa = D or E <220> <221> VARIANT <222> (2)..(3) <223> Xaa = Any Amino Acid and up to 2 of them can be present or absent <220> <221> VARIANT <222> (5)..(6) <223> Xaa = Any Amino Acid <220> <221> VARIANT <222> (7) <223> Xaa = L or I <220> <221> VARIANT <222> (8)..(9) <223> Xaa = Any Amino Acid and up to 2 of them can be present or absent <220> <221> VARIANT <222> (17)..(18) <223> Xaa = Any Amino Acid <220> <221> VARIANT <222> (19) <223> Xaa = L or I <400> 247 Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa <210> 248 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 248 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Ser 20 25 30 Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Pro Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Asn Gly Asn Pro Trp Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 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Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser <210> 250 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 250 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 251 <211> 163 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 251 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser

Claims (115)

  1. 단리된 항-CD33 항체로서, 상기 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준을 감소키기거나, CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 둘 모두이고, 그리고 상기 항-CD33 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 나타내는, 단리된 항-CD33 항체:
    a. 항-CD33 항체 젬투주맙의 해리 상수보다 다 낮은 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며;
    b. 항-CD33 항체 젬투주맙 또는 린투주맙 보다 더 낮은 EC50로 인간 수지상 세포에 결합하고;
    c. 항-CD33 항체 젬투주맙 또는 린투주맙 보다 더 낮은 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시키고;
    d. 300 pM 내지 10 pM 범위의 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지되, 상기 KD는 대략 25 ℃의 온도에서 결정되고;
    e. 200 pM 내지 10 pM 범위의 EC50로 인간 수지상 세포에 결합하되, 상기 EC50는 대략 4 ℃의 온도에서 결정되고;
    f. 65 pM 내지 20 pM 범위의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시키거나; 또는
    g. 8.0 mg/kg 내지 2.0 mg/kg 범위의 EC50로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키는, 항-CD33 항체.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키고, CD33의 세포내 수준을 감소시키고, CD33의 총 수준을 감소시키거나, 또는 이들의 임의의 조합인, 항-CD33 항체.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 CD33 분해, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 흘리기, CD33 발현의 하향조절, 또는 이들의 임의의 조합을 유도하는, 항-CD33 항체.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하지 않으면서 CD33의 세포 수준을 감소시키는, 항-CD33 항체.
  5. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준을 감소시키고 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는, 항-CD33 항체.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 2.0 mg/kg미만의 EC50로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키는, 항-CD33 항체.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준을 감소시키지 않으면서 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하는, 항-CD33 항체.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 CD33의 세포 표면 클러스터링을 억제하는, 항-CD33 항체.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 1종 이상의 CD33 활성을 억제하는, 항-CD33 항체.
  10. 청구항 9에 있어서, 상기 1종 이상의 CD33 활성은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 항-CD33 항체:
    (a) 시알산-함유 당단백질, 또는 시알산-함유 당지질, 또는 둘 모두에 결합하는 CD33;
    (b) 1종 이상의 항-염증성 사이토카인의 조절된 발현으로서, 선택적으로 상기 1종 이상의 항-염증성 사이토카인은 IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b, 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체로 구성된 군으로부터 선택되고;
    (c) 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 및 미세신경교 세포로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포에서 1종 이상의 항-염증성 사이토카인의 조절된 발현;
    (d) 1종 이상의 전-염증 사이토카인의 조절된 발현으로서, 선택적으로 상기 1종 이상의 전-염증 사이토카인은 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, 및 MIP-1-베타로 구성된 군으로부터 선택되고;
    (e) 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 및 미세신경교 세포로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포에서 1종 이상의 전-염증 사이토카인의 조절된 발현;
    (f) C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, PYCARD, CD14, CD16, HLA-DR, 및 CCR2로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질의 조절된 발현;
    (g) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, M2 미세아교, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및 M2 대식세포로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포에 의해 유도된 T 세포 증식을 감소시키고;
    (h) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및 M2 미세아교로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포의 증식을 감소시키고;
    (i) 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 중성구, 미세아교, M1 미세아교, 활성화된 M1 미세아교, 및 M2 미세아교로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포 중 1종 이상의 기능을 감소시키고;
    (j) 세포자멸적 뉴런, 신경 조직 잔해, 기능이상 시냅스, 비-신경 조직 잔해, 박테리아, 다른 이물질, 질환 유발 단백질, 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 핵산, 또는 종양 세포 중 하나 이상의 식균작용의 억제로서; 선택적으로 상기 질환 유발 핵산은 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA이고, 질환 유발 단백질은 하기로 구성된 군으로부터 선택되고: 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드, 및 상기 종양 세포는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 또는 갑상선암로 구성된 군으로부터 선택된 암이고;
    (k) 종양 세포 상의 CD33 리간드에 결합하고;
    (l) 중성구, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, 및 대식세포로 구성된 군으로부터 선택된 세포 상의 CD33 리간드에 결합하고;
    (m) 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 억제;
    (n) 미세아교, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항종양 세포 증식 활성을 억제하고;
    (o) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 기능성을 촉진하고;
    (p) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 CD45+CD14+ 골수 세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양으로의 침윤을 향상시키고;
    (q) 종양, 말초 혈액, 또는 다른 림프양 장기에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포 및/또는 비-종양형성 CD45+CD14+ 골수 세포의 수를 증가시키고;
    (r) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC) 및/또는 비-종양형성 CD45+CD14+ 골수 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고;
    (s) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC) 및/또는 비-종양형성 CD45+CD14+ 골수 세포의 생존을 향상시키고;
    (t) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 활성화를 감소시키고;
    (u) 종양 사멸화 잠재성을 갖는 CD45+CD3+ T 림프구의 활성화를 감소시키고;
    (v) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 NK 세포의 침윤을 감소시키고;
    (w) 면역 반응을 향상시키는 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 B 림프구의 침윤을 감소시키고;
    (x) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 침윤을 감소시키고;
    (y) CD45+CD3+ T 림프구의 침윤을 감소시키고;
    (z) 종양 부피를 증가시키고;
    (aa) 종양 성장률을 증가시키고; 그리고
    (bb) 항종양 T 세포 반응을 조절하는 1종 이상의 면역-요법의 효능을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 면역-요법은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합, 또는 1종 이상의 화학요법 제제 및/또는 암 백신으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질을 표적으로 하는 면역-요법인, 항-CD33 항체.
  11. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 활성을 나타내는, 항-CD33 항체:
    (a) 종양 침윤 CD3+ T 세포의 수를 증가시키고;
    (b) 비-종양형성 CD14+골수 세포에서 CD33의 세포 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고;
    (c) 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고;
    (d) 1종 이상의 세포에서 PD-L1 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (e) 1종 이상의 세포에서 PD-L2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (f) 1종 이상의 세포에서 B7-H2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (g) 1종 이상의 세포에서 B7-H3 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (h) 1종 이상의 세포에서 CD200R 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (i) 1종 이상의 세포에서 CD163 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (j) 1종 이상의 세포에서 CD206 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (k) 고형 종양의 고형 성장률을 감소시키고;
    (l) 종양 부피를 감소시키고;
    (m) 1종 이상의 PD-1 억제제의 효능을 증가시키고;
    (n) 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능을 증가시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법은 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적으로 하고
    (o) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 증가시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합이고;
    (p) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 존재에서 T 세포의 증식을 증가시키고;
    (q) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 억제하고; 그리고
    (r) 화학 또는 방사성 독소에 접합될 때, 고형 종양 및 관련된 혈관에서 CD33-발현 면역억제제 비-종양형성 골수 세포 및/또는 비-종양형성 CD14-발현 세포을 사멸시키는, 항-CD33 항체.
  12. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 불연속 CD33 에피토프에 결합하는, 항-CD33 항체.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 불연속 CD33 에피토프는 2종 이상의 펩타이드, 3종 이상의 펩타이드, 4종 이상의 펩타이드, 5종 이상의 펩타이드, 6종 이상의 펩타이드, 7종 이상의 펩타이드, 8종 이상의 펩타이드, 9종 이상의 펩타이드, 또는 10종 이상의 펩타이드를 포함하는, 항-CD33 항체.
  14. 청구항 13에 있어서, 각각의 상기 펩타이드는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열의 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 11 이상, 12 이상, 13 이상, 14 이상, 15 이상, 16 이상, 17 이상, 18 이상, 19 이상, 또는 20 또는 그 초과 개의 아미노산 잔기; 또는 상기 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 11 이상, 12 이상, 13 이상, 14 이상, 15 이상, 16 이상, 17 이상, 18 이상, 19 이상, 또는 20 또는 그 초과 개의 아미노산 잔기를 포함하는, 항-CD33 항체.
  15. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 CD33의 형태적 에피토프에 결합하는, 항-CD33 항체.
  16. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-259, 19-135, 145-228, 또는 229-259 내의; 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-259, 19-135, 145-228, 또는 229-259에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합하는, 항-CD33 항체.
  17. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합하는, 항-CD33 항체:
    i. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    ii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    iii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98에 대응하는포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    iv. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    v. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    vi. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    vii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; 및
    viii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기.
  18. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 하기에 결합하는, 항-CD33 항체: 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 1종 이상의 아미노산 잔기.
  19. 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 CD33에 결합하기 위해 1A8, 2B4, 2E12, 2F5, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체와 경쟁하는, 항-CD33 항체.
  20. 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD33의 세포 수준은 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세아교, T 세포, 및 대식세포로 구성된 군으로부터 선택된 일차 세포, 또는 세포주 상에서 측정되고, 그리고 상기 CD33의 세포 수준은 시험관내 세포 검정을 이용하여 측정되는, 항-CD33 항체.
  21. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 1종 이상의 CD33 리간드는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 항-CD33 항체: 적혈구 상에서 발현된 CD33 리간드, 박테리아 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 세포자멸적 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 종양 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 바이러스 상에서 발현된 CD33 리간드, 수지상 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 신경 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 신경교 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 미세신경교 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 별아교세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 베타 아밀로이드 플라크 상의 CD33 리간드, 타우 엉킴 상의 CD33 리간드, 질환 유발 단백질 상의 CD33 리간드, 질환 유발 펩타이드 상의 CD33 리간드, 대식세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 천연 살해 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 도움 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 세포독성 T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, B 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양-매립된 면역억제제 대식세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 조절 T 세포 상에서 발현된 CD33 리간드, 분비된 뮤신, 시알산, 시알산-함유 당지질, 시알산-함유 당단백질, 알파-2,6-연결된 시알산-함유 당지질, 알파-2,6-연결된 시알산-함유 당단백질, 알파-2,3-연결된 시알산-함유 당지질, 알파-2,3-연결된 시알산-함유 당단백질, 알파-1-산 당단백질 (AGP), CD24 단백질, 및 강글리오사이드.
  22. 청구항 1 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인, 또는 중쇄 가변 도메인, 또는 둘 모두는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는, 항-CD33 항체: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2.
  23. 청구항 22에 있어서,
    (a) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:22의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:26의 아미노산 서열을 포함하고;
    (b) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하고;
    (c) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:69의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하고;
    (d) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:24의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하고;
    (e) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:68의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:74의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:77의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하고;
    (f) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고;
    (g) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고;
    (h) the HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고;
    (i) the HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고;
    (j) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:184의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:185의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:186의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:187의 아미노산 서열을 포함하고;
    (k) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:231의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (l) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:228의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:229의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:230의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:232의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:233의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하는, 항-CD33 항체.
  24. 청구항 1 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인은 하기를 포함하고:
    (a) 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1;
    (b) 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및
    (c) 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및
    상기 중쇄 가변 도메인은 하기를 포함하는, 항-CD33 항체:
    (a) 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1;
    (b) 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및
    (c) 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  25. 청구항 1 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 서열식별번호: 30-48, 112-153, 192-202, 및 241-243으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및/또는 서열식별번호: 49-66, 154-183, 203-213, 및 244-246으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-CD33 항체.
  26. 청구항 1 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 경쇄 가변 도메인: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2; 및/또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 중쇄 가변 도메인: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2을 포함하는, 항-CD33 항체.
  27. 단리된 항-CD33 항체로서, 상기 항-CD33 항체는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-259, 19-135, 145-228, 또는 229-259 내의; 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 19-259, 19-135, 145-228, 또는 229-259에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합하는, 단리된 항-CD33 항체.
  28. 청구항 of 청구항 27에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 내의 1종 이상의 아미노산에 결합하는, 항-CD33 항체:
    i. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    ii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 48-54에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    iii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 88-98에 대응하는포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    iv. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 110-120에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    v. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    vi. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 110-120에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기;
    vii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 및 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기; 및
    viii. 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122, 또는 서열식별번호:1의 아미노산 잔기 39-51, 88-98, 110-120, 및 112-122에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기.
  29. 단리된 항-CD33 항체로서, 상기 항-CD33 항체는 하기에 결합하는, 단리된 항-CD33 항체: 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열식별번호: 1의 D18, P19, N20, F21, F44, P46, Y49, Y50, K52, 및 N53으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유동물 CD33 단백질 상의 1종 이상의 아미노산 잔기.
  30. 단리된 항-CD33 항체로서, 상기 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 중쇄 가변 도메인, 또는 경쇄 가변 도메인, 또는 둘 모두는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는, 단리된 항-CD33 항체: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합.
  31. 청구항 30에 있어서,
    (a) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:22의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:26의 아미노산 서열을 포함하고;
    (b) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하고;
    (c) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:69의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하고;
    (d) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:24의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하고;
    (e) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:68의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:74의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:77의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하고;
    (f) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고;
    (g) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고;
    (h) the HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고;
    (i) the HVR-H1은 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하고;
    (j) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:184의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:185의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:186의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:187의 아미노산 서열을 포함하고;
    (k) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:231의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (l) 상기 HVR-L1은 서열식별번호:228의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L2는 서열식별번호:229의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열식별번호:230의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H1은 서열식별번호:232의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열식별번호:233의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 HVR-H3은 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하는, 항-CD33 항체.
  32. 청구항 30에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 하기를 포함하고:
    (a) 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1;
    (b) 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및
    (c) 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 및
    상기 중쇄 가변 도메인은 하기를 포함하는 단리된 항-CD33 항체:
    (a) 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1;
    (b) 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및
    (c) 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  33. 단리된 항-CD33 항체로서, 상기 항-CD33 항체는 서열식별번호: 30-48, 112-153, 192-202, 및 241-243으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및/또는 서열식별번호: 49-66, 154-183, 203-213, 및 244-246으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-CD33 항체.
  34. 단리된 항-CD33 항체로서, 상기 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 경쇄 가변 도메인: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2; 및/또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 중쇄 가변 도메인: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2을 포함하는, 항-CD33 항체.
  35. 단리된 항-CD33 항체로서, 상기 항-CD33 항체는 CD33에 결합하기 위해 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 6C7.2, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체와 경쟁하는, 항-CD33 항체.
  36. 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항체와 본질적으로 동일한 CD33 에피토프에 결합하는 단리된 항-CD33 항체: 1A8, 2B4, 2E12, 2E12.1, 2F5, 2F5.1, 3A12a, 3A12b, 6A3a, 6A3b, 6C7a, 6C7b, 및 6C7.2.
  37. 단리된 항-CD33 항체로서, 상기 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인은 하기를 포함하고:
    (a) 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 9-11, 67, 68, 184, 및 228로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1;
    (b) 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 12-14, 69-71, 185, 및 229로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및
    (c) 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 15-17, 72-74, 및 230으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는
    상기 중쇄 가변 도메인은 하기를 포함하는, 항-CD33 항체:
    (a) 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 18-21, 75, 231, 및 232로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1;
    (b) 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 22-25, 76, 77, 186, 및 233으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및
    (c) 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 26-29, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  38. 청구항 1 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG 부류, IgM 부류, 또는 IgA 부류의 것인, 항-CD33 항체.
  39. 청구항 38에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소타입을 갖는, 항-CD33 항체.
  40. 청구항 39에 있어서, 상기 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합하는, 항-CD33 항체.
  41. 청구항 40에 있어서, 상기 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)인, 항-CD33 항체.
  42. 청구항 41에 있어서,
    (a) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG1 아이소타입을 가지며 하기로 구성된 군: N297A, D265A, D270A, L234A, L235A, G237A, P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G, A330R, C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E, P331S, S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, T256E, N297Q, P238S, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, T394D, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르거나, 또는 글리신 236에 대응하는 위치의 Fc 영역에서 아미노산 결실을 포함하고;
    (b) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG1 아이소타입을 가지며 IgG2 아이소타입 중쇄 불변 도메인 1(CH1) 및 힌지 영역을 포함하고, 선택적으로 상기 IgG2 아이소타입 CH1 및 힌지 영역은 ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVERKCCVECPPCP (서열식별번호:214)의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 선택적으로 상기 항체 Fc 영역은 S267E 아미노산 치환, 또는 L328F 아미노산 치환, 또는 둘 모두, 및/또는 N297A 또는 N297Q 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르고;
    (c) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG2 아이소타입을 가지며 하기로 구성된 군: P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, V309L, A330S, P331S, C214S, C232S, C233S, S267E, L328F, M252Y, S254T, T256E, H268E, N297A, N297Q, A330L, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르고;
    (d) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG4 아이소타입을 가지며 하기로 구성된 군: L235A, G237A, S228P, L236E, S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T, T256E, E233P, F234V, L234A/F234A, S228P, S241P, L248E, T394D, N297A, N297Q, L235E, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르거나; 또는
    (e) 상기 항-CD33 항체는 혼성 IgG2/4 아이소타입을 가지며, 그리고 선택적으로 상기 항체는 인간 IgG2의 아미노산 118 내지 260 및 인간 IgG4의 아미노산 261 내지 447을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 또는 카밧 넘버링을 따르는, 항-CD33 항체.
  43. 청구항 39에 있어서,
    (a) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG1 아이소타입을 가지며 하기로 구성된 군: N297A, N297Q, D270A, D265A, L234A, L235A, C226S, C229S, P238S, E233P, L234V, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, L234F, L235E, P331S, T394D, A330L, M252Y, S254T, T256E, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르고;
    (b) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG2 아이소타입을 가지며 하기로 구성된 군: P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, H268E, V309L, N297A, N297Q, A330S, P331S, C232S, C233S, M252Y, S254T, T256E, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르거나; 또는
    (c) 상기 항-CD33 항체는 인간 IgG4 아이소타입을 가지며 하기로 구성된 군: E233P, F234V, L234A/F234A, L235A, G237A, E318A, S228P, L236E, S241P, L248E, T394D, M252Y, S254T, T256E, N297A, N297Q, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르는, 항-CD33 항체.
  44. 청구항 43에 있어서,
    (a) 상기 Fc 영역은 추가로, A330L, L234F; L235E, P331S, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에서 1개 이상의 추가 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르고;
    (b) 상기 Fc 영역은 추가로, M252Y, S254T,T256E, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에서 1종 이상의 추가 아미노산 치환을 포함하고, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링을 따르거나; 또는
    (c) 상기 Fc 영역은 추가로, EU 넘버링에 따라 S228P 아미노산 치환을 포함하는, 항-CD33 항체.
  45. 청구항 1 내지 44 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD33 단백질은 포유동물 단백질 또는 인간 단백질인, 항-CD33 항체.
  46. 청구항 1 내지 45 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD33 단백질은 야생형 단백질인, 항-CD33 항체.
  47. 청구항 1 내지 45 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD33 단백질은 천연 발생 변이체인, 항-CD33 항체.
  48. 청구항 1 내지 47 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD33 단백질은 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 중성구, 인간 T 세포, 인간 T 도움 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구, 및 인간 미세아교 로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 세포 상에서 발현되는, 항-CD33 항체.
  49. 청구항 1 내지 48 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 포유동물 CD33 단백질, 또는 인간 CD33 단백질, 또는 둘 모두에 특이적으로 결합하는, 항-CD33 항체.
  50. 청구항 1 내지 48 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 인간 CD33, 또는 마우스 CD33, 또는 둘 모두에 특이적으로 결합하는, 항-CD33 항체.
  51. 청구항 1 내지 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 pH 의존 방식으로 CD33에 결합하는, 항-CD33 항체.
  52. 청구항 51에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 5.5 내지 8.0 범위의 pH로 CD33에 결합하는, 항-CD33 항체.
  53. 청구항 51에 있어서, 상기 항-CD33 항체는5.0 미만의 pH에서 CD33로부터 해리되는, 항-CD33 항체.
  54. 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 인간 CD33 또는 포유동물 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체 단편인, 항-CD33 항체.
  55. 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 인간 CD33, 인간 CD33의 천연 발생 변이체, 및 인간 CD33의 질환 변이체 로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 인간 단백질에 결합하는 항체 단편인, 항-CD33 항체.
  56. 청구항 54 또는 청구항 55에 있어서, 상기 항체 단편은 인간 CD33, 인간 CD33의 천연 발생 변이체, 및 인간 CD33의 질환 변이체 로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 인간 단백질에 결합하는 제2 항체 단편에 가교결합되는, 항-CD33 항체.
  57. 청구항 54 내지 56 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 또는 scFv 단편인, 항-CD33 항체.
  58. 청구항 1 내지 57 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 쥣과 항체인, 항-CD33 항체.
  59. 청구항 1 내지 57 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 인간화된 항체, 이중특이적 항체, 단클론성 항체, 다가 항체, 접합된 항체, 또는 키메라성 항체인, 항-CD33 항체.
  60. 청구항 1 내지 57 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 제1 항원 및 제2 항원을 인식하는 이중특이적 항체인, 항-CD33 항체.
  61. 청구항 60에 있어서, 상기 제1 항원은 CD33이고 상기 제2 항원은 하기인, 항-CD33 항체:
    (a) 상기 혈액-뇌-장벽을 가로질로 수송을 촉진하는 항원;
    (b) 하기로 구성된 군으로부터 선택된 혈액-뇌-장벽을 가로질로 수송을 촉진하는 항원: 트랜스페린 수용체 (TR), 인슐린 수용체 (HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체 (IGFR), 저밀도 지질단백질 수용체 관련된 단백질 1 및 2 (LPR-1 및 2), 디프테리아 독소 수용체, CRM197, llama 단일 도메인 항체, TMEM 30(A), 단백질 형질도입 도메인, TAT, Syn-B, 페네트라틴, 폴리-아르기닌 펩타이드, 안지오펩 펩타이드, 및 ANG1005;
    (c) 질환 유발 펩타이드 또는 단백질 및 질환 유발 핵산으로 구성된 군으로부터 선택된 질환 유발 제제로서, 상기 질환 유발 펩타이드 또는 단백질은 하기로 구성된 군으로부터 선택되고: 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), c9RAN단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드, 및 질환 유발 핵산은 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA;
    (d) 리간드 및/또는 단백질 expressed on 면역 세포, 상기 리간드 및/또는 단백질 선택된 from the 군 consisting of CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, 및 포스파티딜세린; 및
    (e) 1종 이상의 종양 세포 상에서 발현되는 단백질, 지질, 다당류, 또는 당지질.
  62. 청구항 1 내지 61 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 접합된 항체인, 항-CD33 항체.
  63. 청구항 62에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 검출가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합되는, 항-CD33 항체.
  64. 청구항 63에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 독소에 접합되는, 항-CD33 항체: 리신, 리신 A-사슬, 독소루비신, 다우노루비신, 메이탄시노이드, 탁솔, 에티듐 브로마이드, 미토마이신, 에토포시드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 디하이드록시 안트라신 디온, 악티노마이신, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소 (PE) A, PE40, 아브린, 아브린 A 사슬, 모덱신 A 사슬, 알파-사르신, 젤로닌, 마이토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 큐리신, 크로틴, 칼리키아마이신, 사포나리아 오피시날리스 억제제, 글루코코르티코이드, 아우리스타틴, 아우로마이신, 이트륨, 비스무트, 콤브레스타틴, 듀오카르마이신, 돌라스타틴, cc1065, 및 시스플라틴.
  65. 청구항 1 내지 64 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 질환 유발 제제에 특이적으로 결합하는 1종 이상의 항체와 함께 사용되는, 항-CD33 항체: 질환 유발 펩타이드, 질환 유발 단백질, 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구단백질 또는 그것의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 열린 해독틀 72), 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 초과산화물 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이체, 심방나트륨 이뇨 인자, 소도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복체-관련된 비-ATG (RAN) 번역 생성물, 디펩타이드 반복체 (DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩타이드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩타이드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩타이드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩타이드, 및 이들의 임의의 조합; 또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 면역조절 단백질에 결합하는 1종 이상의 항체: CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, TREM1, TREM2, 시글렉-5, 시글렉-7, 시글렉-9, 시글렉-11, 포스파티딜세린, 질환 유발 핵산, 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복체-팽창 RNA, 및 이들의 임의의 조합.
  66. 청구항 1 내지 65 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 약 100 nM 내지 약100 pM, 또는 100 pM 미만의 범위인 마우스 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 그리고 상기 KD는 25 ℃의 온도에서 결정되는, 항-CD33 항체.
  67. 청구항 1 내지 중 어느 한 항의 항-CD33 항체를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산.
  68. 청구항 67의 핵산을 포함하는 벡터.
  69. 청구항 68의 벡터를 포함하는, 단리된 숙주세포.
  70. 항-CD33 항체를 생성하는 방법으로서, 항-CD33 항체가 생성되도록 숙주세포 of 청구항 69의 숙주세포를 배양하는 것을 포함하는 방법.
  71. 청구항 70에 있어서, 상기 숙주세포에 의해 생성된 항-CD33 항체를 회수하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  72. 청구항 70 또는 청구항 71의 방법에 의해 생성된 단리된 항-CD33 항체.
  73. 청구항 1 내지 66 중 어느 한 항의 항-CD33 항체, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  74. 치매, 전두측두 치매, 알츠하이머병, 혈관 치매, 혼합된 치매, 타우병증 질환, 감염, 및 암으로 구성된 군으로부터 선택된 질환, 장애, 또는 손상을 예방하거나, 그 위험을 감소시키거나, 치료하는 방법으로서, 그것이 필요한 개체에게 CD33의 세포 수준을 증가시키거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 둘 모두인 제제의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  75. 청구항 74에 있어서, 상기 질환, 장애, 또는 손상은 암인, 방법.
  76. 청구항 74 또는 또는 청구항 75에 있어서, 상기 암은 CD33 또는 1종 이상의 CD33 리간드를 발현시키는, 방법.
  77. 청구항 74 내지 76 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막 암, 신장암, 신장 세포 암, 신우 암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 및 다발성 골수종으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  78. 청구항 74 내지 77 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 CD33 활성을 억제하는, 방법:
    (a) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 비-종양형성 CD14+ 골수 세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 증식, 성숙, 이동, 분화, 및/또는 기능성을 촉진하고;
    (b) 면역억제제 수지상 세포, 면역억제제 대식세포, 면역억제제 중성구, 비-종양형성 골수 유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양로의 침윤을 향상시키고;
    (c) 종양, 말초 혈액, 또는 다른 림프양 장기에서 종양-촉진 골수/과립구성 면역-억제성 세포 및/또는 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 증가시키고;
    (d) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 및/또는 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 종양-촉진 활성을 향상시키고;
    (e) 종양 또는 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인의 발현을 증가시키되, 선택적으로 상기 종양-촉진 사이토카인은 TGF-베타 또는 IL-10이고;
    (f) 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤을 증가시키고;
    (g) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 활성화를 감소시키고;
    (h) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 T 림프구의 침윤을 감소시키고;
    (i) 종양 사멸화 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 NK 세포의 침윤을 감소시키고;
    (j) NK 세포의 종양 사멸화 잠재성을 감소시키고;
    (k) 면역 반응을 향상시키는 잠재성을 가지고 있는 종양 특이적 B 림프구의 침윤을 감소시키고;
    (l) 종양 부피를 증가시키고;
    (m) 종양 성장률을 증가시키고;
    (n) 전이를 증가시키고;
    (o) 종양 재발의 속도를 증가시키고;
    (p) 1종 이상의 PD-1 리간드의 발현을 증가시키고;
    (q) 항종양 T 세포 반응을 조절하는 1종 이상의 면역-요법의 효능을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 면역-요법은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG, DR-5, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합, 또는 1종 이상의 암 백신으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질을 표적으로 하는 면역-요법이고;
    (r) PLCγ/PKC/칼슘 동원의 억제;
    (s) PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 억제; 및
    (t) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 감소시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합인, 방법.
  79. 청구항 74 내지 77 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 활성을 나타내는, 방법:
    (a) 종양 침윤 CD3+ T 세포의 수를 증가시키고;
    (b) 비-종양형성 CD14+골수 세포에서 CD33의 세포 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고;
    (c) 비-종양형성 CD14+ 골수 세포의 수를 감소시키되, 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 종양 침윤 세포 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수 세포는 혈액에 존재하고;
    (d) 1종 이상의 세포에서 PD-L1 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (e) 1종 이상의 세포에서 PD-L2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (f) 1종 이상의 세포에서 B7-H2 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (g) 1종 이상의 세포에서 B7-H3 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (h) 1종 이상의 세포에서 CD200R 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (i) 1종 이상의 세포에서 CD163 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (j) 1종 이상의 세포에서 CD206 수준을 감소시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이고;
    (k) 고형 종양의 고형 성장률을 감소시키고;
    (l) 종양 부피를 감소시키고;
    (m) 1종 이상의 PD-1 억제제의 효능을 증가시키고;
    (n) 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능을 증가시키되, 선택적으로 상기 1종 이상의 체크포인트 억제제 요법 및/또는 면역-조절 요법은 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적으로 하고;
    (o) 1종 이상의 화학요법 제제의 효능을 증가시키되, 선택적으로 여기서 화학요법 제제 중 하나 이상은 젬시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신 (Adriamycinㄾ), 에피루비신 (Ellenceㄾ), 탁산, 파클리탁셀 (Taxolㄾ), 도세탁셀 (Taxotereㄾ), 5-플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cytoxanㄾ), 카보플라틴 (Paraplatinㄾ), 및 이들의 임의의 조합이고;
    (p) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 존재에서 T 세포의 증식을 증가시키고; 그리고
    (q) 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 1종 이상의 기능을 억제하고; 그리고
    (r) 화학 또는 방사성 독소에 접합될 때, 고형 종양 및 관련된 혈관에서 CD33-발현 면역억제제 골수 세포 및/또는 CD14-발현 세포를 사멸시키는, 방법.
  80. 1종 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 기능성, 이동, 또는 증식을 그것이 필요한 개체에서 유도 또는 촉진시키는 방법으로서, 상기 개체에게 CD33의 세포 수준을 증가시키거나 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 둘 모두인 제제의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  81. 청구항 81에 있어서, 상기 1종 이상의 면역 세포는 수지상 세포, 대식세포, 미세아교, 중성구, T 세포, T 도움 세포, 세포독성 T 세포, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  82. 청구항 74 내지 81 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  83. 청구항 74 내지 81 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 단리된 항-CD33 항체인, 방법.
  84. 청구항 83에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 청구항 1 내지 66 중 어느 한 항의 항-CD33 항체인, 방법.
  85. 조절 T 세포, 종양-매립된 면역억제제 수지상 세포, 종양-매립된 면역억제제 대식세포, 비-종양형성 골수-유래된 억제 세포, 종양-관련된 대식세포, 급성 골수 백혈병 (AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 세포, 또는 만성 골수 백혈병 (CML) 세포의 활성, 기능성, 또는 생존을 그것이 필요한 개체에서 감소시키는 방법으로서, 상기 개체에게 치료적 유효량의 CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  86. 청구항 85에 있어서, 상기 제제는 단리된 항-CD33 항체 또는 항-CD33 항체 콘주게이트인, 방법.
  87. 청구항 86에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 청구항 1 내지 66 중 어느 한 항의 항-CD33 항체인, 방법.
  88. 필요한 개체에서 CD33의 세포 수준을 감소시키거나, 1종 이상의 세포 상의 CD33과 1종 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나, 또는 둘 모두인 방법으로서, 상기 개체에게 치료적 유효량의 단리된 항-CD33 항체를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  89. 청구항 88에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키는, 방법.
  90. 청구항 88 또는 청구항 89에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 65 pM 내지 20 pM 범위의 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시키는, 방법.
  91. 청구항 88 내지 90 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 약 8.0 mg/kg 내지 약 2.0 mg/kg 범위의 EC50로 CD33의 생체내 세포 수준을 감소시키는, 방법.
  92. 청구항 88 내지 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 300 pM 내지 10 pM 범위의 인간 CD33에 대한 해리 상수 (KD)를 가지며, 상기 KD는 대략 25 ℃의 온도에서 결정되는, 방법.
  93. 청구항 88 내지 92 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 200 pM 내지 10 pM 범위의 EC50으로 인간 수지상 세포에 결합하고, 상기 EC50는 대략 4 ℃의 온도에서 결정되는, 방법.
  94. 청구항 88 또는 청구항 89에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 청구항 1 내지 66 중 어느 한 항의 항-CD33 항체인, 방법.
  95. 청구항 74 내지 94 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 CD33의 변이체를 포함하는, 방법.
  96. 청구항 95에 있어서, 상기 변이체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 다형성을 포함하는, 방법:
    (a) SNP rs3865444 AC ;
    (b) SNP rs3865444 CC ;
    (c) SNP rs35112940GG, AA, AG;
    (d) SNP rs12459419 CC, CT 또는 TT; 및 이들의 임의의 조합.
  97. 청구항 74 내지 96 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에게 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 및/또는 1종 이상의 표준 또는 조사적인 항암 요법을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  98. 청구항 97에 있어서, 상기 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 상기 항-CD33 항체와 함께 투여되는, 방법.
  99. 청구항 97 또는 청구항 98에 있어서, 상기 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항- B- 및 T-림프구 감쇠기 (BTLA) 항체, 항-살해 억제 수용체 (KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM3 항체, 항-A2AR 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-TNFa 항체, 항-시글렉-5 항체, 항-시글렉-7 항체, 항-시글렉-9 항체, 항-시글렉-11 항체, 길항적 항-TREM1 항체, 길항적 항-TREM2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  100. 청구항 97에 있어서, 상기 1종 이상의 표준 또는 조사적인 항암 요법는 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적 요법, 이마티닙 요법, 트라스투주맙 요법, 에타네르셉트 요법, 입양 세포 전달 (ACT) 요법, 키메라성 항원 수용체 T 세포 전이 (CAR-T) 요법, 백신 요법, 및 사이토카인 요법으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  101. 청구항 74 내지 100 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에게 억제성 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  102. 청구항 101에 있어서, 상기 억제성 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 상기 항-CD33 항체와 함께 투여되는, 방법.
  103. 청구항 101 또는 청구항 102에 있어서, 상기 억제성 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  104. 청구항 74 내지 103 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에게, 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 작용적 항체를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  105. 청구항 104에 있어서, 상기 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 작용적 항체는 상기 항-CD33 항체와 함께 투여되는, 방법.
  106. 청구항 104 또는 청구항 105에 있어서, 상기 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 작용적 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 효능제 항-CD40 항체, 효능제 항-OX40 항체, 효능제 항-ICOS 항체, 효능제 항-CD28 항체, 작용적 항-TREM1 항체, 작용적 항-TREM2 항체, 효능제 항-CD137/4-1BB 항체, 효능제 항-CD27 항체, 효능제 항-글루코코르티코이드-유도된 TNFR-관련된 단백질 GITR 항체, 및 이들의 임의의 조합.
  107. 청구항 74 내지 106 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에게 적어도 1종의 자극 사이토카인을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  108. 청구항 107에 있어서, 상기 적어도 1종의 자극 사이토카인은 상기 항-CD33 항체와 함께 투여되는, 방법.
  109. 청구항 107 또는 청구항 108에 있어서, 상기 적어도 1종의 자극 사이토카인은 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 일원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  110. CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 의한 치료를 위해 그것을 필요로 하는 대상체를 선택하는 방법으로서, 하기의 단계들을 포함하는, 방법:
    a. 상기 대상체로부터 샘플을 얻는 단계;
    b. 상기 대상체에서 존재하는 CD33 대립유전자를 검출하는 단계; 및
    c. CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 의한 치료를 위한 상기 대상체를 선택하는 단계로서, 상기 대상체는 1종 이상의 CD33 대립유전자를 가지며, 상기 1종 이상의 CD33 대립유전자는 rs3865444 AC , 및 rs3865444 CC 로 구성된 군으로부터 선택되는, 단계.
  111. CD33에 결합하거나 그것과 상호작용하는 제제에 대한 그것을 필요로 하는 대상체의 반응성을 평가하는 방법으로서, 하기 단계들을 포함하는, 방법:
    a. 상기 대상체에게 항-CD33 항체를 투여하기 전 상기 대상체로부터 수득된 혈액 샘플에서 비-종양형성 골수 세포 상의 CD45+ 및 CD14+의 발현 수준을 측정하는 단계;
    b. 상기 대상체에게 치료적 유효량의 상기 제제를 투여하는 단계; 및
    c. 항-CD33 항체의 투여 후 상기 대상체로부터 수득된 혈액 샘플에서 비-종양형성 골수 세포 상의 CD45+ 및 CD14+의 발현 수준을 측정하는 단계로서,
    (a) 여기서 항-CD33 항체의 투여 후 비-종양형성 골수 세포 상의 CD45+ CD14+ 수준의 감소는, 상기 대상체가 상기 제제에 반응한다는 것을 나타내는, 단계.
  112. 청구항 111에 있어서, 1종 이상의 추가 치료적으로 효과적인 양의 제제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  113. 청구항 110 내지 112 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 항체, 가용성 CD33 수용체, CD33-Fc 융합 단백질, CD33 면역부착소, 가용성 시글렉 수용체, 시글렉-Fc 융합 단백질, 시글렉 면역부착소, 안티센스 분자, siRNA, 소분자 억제제, 단백질, 및 펩타이드로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  114. 청구항 110 내지 112 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 단리된 항-CD33 항체 또는 항-CD33 항체 콘주게이트인, 방법.
  115. 청구항 113 또는 114에 있어서, 상기 항-CD33 항체는 청구항 1 내지 66 중 어느 한 항의 항-CD33 항체인, 방법.
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