KR20170132871A - 5'-치환된 뉴클레오시드 유사체 - Google Patents

5'-치환된 뉴클레오시드 유사체 Download PDF

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KR20170132871A
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자히드 쿠욤 본데이
길레르모 에스. 코르테즈
카를 로버트 당케
마이클 존 그로간
안토니오 로드리게스 에르게타
제임스 앤드류 재미슨
브라이언 모간 왓슨
티모시 앤드류 우즈
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일라이 릴리 앤드 캄파니
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Abstract

본 발명은 신규 5'-치환된 뉴클레오시드 화합물, 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 암을 치료하기 위해, 보다 특히 암, 특히 교모세포종, 흑색종, 육종, 위암, 췌장암, 담관암종, 방광암, 유방암, 비소세포 폐암, 급성 골수성 백혈병을 포함하는 백혈병, 및 림프종의 치료를 위해 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

5'-치환된 뉴클레오시드 유사체
본 발명은 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 5 (PRMT5)의 활성을 억제하는 신규 5'-치환된 뉴클레오시드 화합물, 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 화합물을 사용하여 생리학적 장애를 치료하는 방법, 보다 특히 암의 치료를 위한 방법에 관한 것이다.
단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (PRMT)는 1 또는 2개의 메틸 기를 히스톤 및 비-히스톤 단백질 상의 아르기닌 잔기의 구아니딘 질소 원자에 부가할 수 있는 효소의 패밀리이다. PRMT에 의해 야기된 풍부한 후성적 변형은, 예를 들어, RNA 대사, 전사 조절, 신호 전달, 배아 발생, 및 DNA 손상 복구를 포함하는, 매우 다양한 세포 기능의 조절을 가능하게 한다. 상이한 PRMT의 과다발현은 많은 인간 암과 빈번하게 연관되어 왔다. 최근에, 증가하는 증거는, PRMT 패밀리의 중요한 구성원인 PRMT5가 잠재적 종양단백질이고 종양발생에 수반된다는 것을 시사한다. PRMT5는 수많은 종양에서 과다발현되고, 중요한 종양유전자 및 암 생존 유전자를 기질로서 가지며, 단백질 발현에 핵심적인 신규 메카니즘인 대안적 스플라이싱 및 RNA 성숙을 조절한다. 추가적으로, 외투 세포 림프종은 PRMT5 억제에 정교하게 민감한 것으로 밝혀졌다.
PRMT5의 잠재적 억제제는 문헌에 이미 공지되어 있다. 예를 들어, WO2011/079236, WO2014/100764, WO2014/100716, WO2014/100695, WO2014/100730, WO2014/100734, 및 WO2014/100719를 참조한다. 게다가, 특정 5'-치환된 뉴클레오시드는 문헌에 공지되어 있다. 예를 들어, WO2001/27114 및 WO2013/009735를 참조한다.
새로운 암 치료에 대한 필요가 있다. 특히 교모세포종, 위암, 췌장암, 방광암, 폐암, 백혈병, 및 림프종을 위한 새로운 암 치료에 대한 필요가 있다. 암의 치료에 유용한 대안적 PRMT5 억제제를 제공하기 위한 필요가 남아 있다. 바람직하게는 이러한 화합물은 종양 세포 성장의 최대 억제를 위해 요구되는 최적의 투여를 가능하게 하는 한편 환자에 대해 허용되는 내약성을 갖는 특성을 갖는다. 바람직하게는 이러한 화합물은 또한 경구로 생체이용가능할 것이다.
본 발명은 PRMT5의 억제제이며, 단일 작용제로서 또는 상이한 유형의 암 및 특히 교모세포종, 흑색종, 육종, 위암, 췌장암, 담관암종, 방광암, 유방암, 비소세포 폐암, 급성 골수성 백혈병을 포함하는 백혈병, 및 림프종의 치료를 위한 다른 항암제와 조합하여 임상적 유용성을 가질 수 있는 특정 신규 5'-치환된 뉴클레오시드 화합물을 제공한다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공하며:
Figure pct00001
여기서
R1a는 수소, C1-C2 알킬, 트리플루오로메틸, 시아노, 클로로 또는 플루오로이고;
R1b는 수소, 클로로 또는 플루오로이고;
R2는 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
R3은 수소, 메틸 또는 아미노이다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공하며:
Figure pct00002
여기서
R1a는 수소, C1-C2 알킬, C3-C6 시클로알콕시, 트리플루오로메틸, 시아노, 클로로 또는 플루오로이고;
R1b는 수소, 클로로 또는 플루오로이고;
R2는 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
R3은 수소, 메틸 또는 아미노이다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 추가로 제공하며:
Figure pct00003
여기서
R1a는 수소, C1-C2 알킬, 트리플루오로메틸, 시아노, 클로로 또는 플루오로이고;
R1b는 수소, 클로로 또는 플루오로이고;
R2는 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
R3은 수소, 메틸 또는 아미노이다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 추가로 제공하며:
Figure pct00004
여기서
R1a는 수소, C1-C2 알킬, C3-C6 시클로알콕시, 트리플루오로메틸, 시아노, 클로로 또는 플루오로이고;
R1b는 수소, 클로로 또는 플루오로이고;
R2는 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
R3은 수소, 메틸 또는 아미노이다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물:
Figure pct00005
,
또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물을 제공하며:
Figure pct00006
,
이는 결정질이고, 25.1˚에서의 피크를 17.1˚, 13.6˚, 20.5˚, 24.0˚, 및 14.5˚ (2θ+/-0.2˚)로 이루어진 군으로부터 선택되는 피크 중 하나 이상과 조합하여 포함하는 X선 분말 회절 패턴 (Cu 방사선, λ = 1.54060 Å)을 특징으로 한다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물:
Figure pct00007
,
또는 그의 제약상 허용되는 염을 추가로 제공한다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물:
Figure pct00008
,
또는 그의 제약상 허용되는 염을 추가로 제공한다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물:
Figure pct00009
,
또는 그의 제약상 허용되는 염을 추가로 제공한다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물:
Figure pct00010
,
또는 그의 제약상 허용되는 염을 추가로 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제약상 허용되는 부형제, 담체, 또는 희석제와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 암, 특히 교모세포종, 흑색종, 육종, 위암, 췌장암, 담관암종, 방광암, 유방암, 비소세포 폐암, 급성 골수성 백혈병을 포함하는 백혈병, 및 림프종을 이들의 치료를 필요로 하는 환자에서 치료하는 방법을 제공하며, 이는 유효량의 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 추가적으로, 본 발명은 암, 특히 교모세포종, 흑색종, 육종, 위암, 췌장암, 담관암종, 방광암, 유방암, 비소세포 폐암, 급성 골수성 백혈병을 포함하는 백혈병, 및 림프종의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 게다가, 본 발명은 암, 특히 교모세포종, 흑색종, 육종, 위암, 췌장암, 담관암종, 방광암, 유방암, 비소세포 폐암, 급성 골수성 백혈병을 포함하는 백혈병, 및 림프종의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다.
특히, 화합물은
Figure pct00011
,
또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
특히 화합물은
Figure pct00012
,
또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
특히 화합물은
Figure pct00013
,
또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
특히 화합물은
Figure pct00014
또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본원에 사용된 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 기존 증상 또는 장애의 진행 또는 중증도를 억제, 둔화, 정지, 또는 역전시키는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "환자"는 특정한 질환, 장애, 또는 상태를 앓고 있는 온혈 동물 예컨대 포유동물, 특히 인간을 지칭한다.
하기 단락은 본 발명의 바람직한 부류를 기재한다.
a) R1a는 수소, 클로로 또는 시클로프로폭시이고;
b) R1b는 수소 또는 클로로이고;
c) R2는 수소 또는 메틸이고;
d) R3은 아미노이고;
e) R1a는 클로로이고, R1b는 수소이고, R2는 수소이고;
f) R1a는 클로로이고, R1b는 수소이고, R2는 메틸이고;
g) R1a는 수소이고, R1b는 수소이고, R2는 수소이고;
h) R1a는 시클로프로폭시이고, R1b는 클로로이고, R2는 수소이고;
i) R1a는 클로로이고, R1b는 수소이고, R3은 아미노이고;
j) R1a는 수소이고, R1b는 수소이고, R3은 아미노이고;
k) R1a는 시클로프로폭시이고, R1b는 클로로이고, R3은 아미노이고;
l) R2는 수소이고 R3은 아미노이고;
m) R2는 메틸이고 R3은 아미노이고;
n) R1a는 클로로이고, R1b는 수소이고, R2는 수소이고, R3은 아미노이고;
o) R1a는 수소이고, R1b는 수소이고, R2는 수소이고, R3은 아미노이고;
p) R1a는 클로로이고, R1b는 수소이고, R2는 메틸이고, R3은 아미노이고;
q) R1a는 시클로프로폭시이고, R1b는 클로로이고, R2는 수소이고, R3은 아미노이다.
본 발명의 화합물이 염을 형성할 수 있다는 것이 숙련된 독자에 의해 이해될 것이다. 본 발명의 화합물은 염기성 헤테로원자, 구체적으로는 아민을 함유하고, 따라서 다수의 무기 및 유기 산 중 임의의 것과 반응하여 제약상 허용되는 산 부가염을 형성한다. 이러한 제약상 허용되는 산 부가염 및 이를 제조하기 위한 통상의 방법론은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2008); S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts, " Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, January 1977]을 참조한다.
본 발명의 화합물 또는 그의 염은 관련 기술분야에 공지된 다양한 절차에 의해 제조될 수 있으며, 그 중 일부가 하기 반응식, 제조예, 및 실시예에 예시된다. 기재된 각각의 경로에 대한 구체적인 합성 단계는 본 발명의 화합물 또는 염을 제조하기 위해 상이한 방식으로 또는 반응식으로부터의 단계와 함께 조합될 수 있다. 하기 반응식에서의 각 단계의 생성물은 추출, 증발, 침전, 크로마토그래피, 여과, 연화처리, 및 결정화를 포함하는, 관련 기술분야에 널리 공지된 통상적인 방법에 의해 회수될 수 있다.
본 발명의 일부 중간체 또는 화합물은 1개 이상의 키랄 또는 입체생성 중심을 가질 수 있다. 본 발명은 상기 화합물의 모든 개별 입체이성질체, 거울상이성질체, 및 부분입체이성질체, 뿐만 아니라 라세미체를 포함하는 거울상이성질체 및 부분입체이성질체의 혼합물을 고려한다. 적어도 1개의 키랄 중심을 함유하는 본 발명의 화합물이 단일 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체로서 존재하는 것이 바람직하다. 단일 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체는 키랄 시약으로 시작하여 (하기 반응식 I에 예시되는 바와 같음) 또는 입체선택적 또는 입체특이적 합성 기술에 의해 (하기 반응식 II에 예시되는 바와 같음) 제조될 수 있다. 대안적으로, 단일 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체는 혼합물로부터 표준 키랄 크로마토그래피 또는 결정화 기술에 의해 단리될 수 있다.
추가적으로, 하기 반응식에 기재되는 특정 중간체는 1개 이상의 산소 또는 질소 보호기를 함유할 수 있다. 가변 보호기는 수행될 특정한 반응 조건 및 특정한 변환에 따라 각 경우에서 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 보호 및 탈보호 조건은 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고 문헌에 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 ["Greene's Protective Groups in Organic Synthesis", Fourth Edition, by Peter G.M. Wuts and Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2007] 참조).
특정 약어는 하기와 같이 정의된다: "A375"는 인간 흑색종 종양 유래 세포주를 지칭하고; "ACN"은 아세토니트릴을 지칭하고; "ATCC"는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)을 지칭하고; "BID"는 1일 2회 투여를 지칭하고; "cat. #"는 카탈로그 번호를 지칭하고; "CDI"는 1,1'-카르보닐디이미다졸을 지칭하고; "CDKN1A"는 시클린-의존성 키나제 억제제 1, p21, p21Cip1, 또는 p21Waf1을 지칭하고; "CPD"는 화합물-처리된 샘플로부터의 값을 지칭하고; "[Cp*IrCl2]2"는 디클로로(펜타메틸시클로-펜타디에닐)이리듐(III) 이량체를 지칭하고; "CPM"은 분당 카운트를 지칭하고; "CT"는 시클릭 역치를 지칭하고; "DCC"는 N,N'-디시클로헥실카르보디이미드를 지칭하고; "DCM"은 디클로로메탄을 지칭하고; "DIAD"는 디이소프로필 아조디카르복실레이트를 지칭하고; "DIC"는 N,N'-디이소프로필카르보디이미드를 지칭하고; "DIPEA"는 N,N-디이소프로필에틸아민을 지칭하고; "DLBCL"은 미만성 대 B-세포 림프종을 지칭하고; "DMEM"은 둘베코 변형 이글(Dulbecco's Modified Eagle's) (조직 배양) 배지를 지칭하고; "DMSO"는 디메틸 술폭시드를 지칭하고; "DNA"는 데옥시리보핵산을 지칭하고; "DNAse"는 데옥시리보뉴클레아제를 지칭하고; "cDNA"는 상보적 DNA를 지칭하고; "dNTP"는 데옥시뉴클레오티드 트리포스페이트를 지칭하고; "DTT"는 디티오트레이톨을 지칭하고; "EDCI"는 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드를 지칭하고; "EDTA"는 에틸렌디아민테트라아세트산을 지칭하고; "EGTA"는 에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸에테르)-N,N,N',N'-테트라아세트산을 지칭하고; "EtOAc"는 에틸 아세테이트를 지칭하고; "EtOH"는 에탄올 또는 에틸 알콜을 지칭하고; "FBS"는 태아 소 혈청을 지칭하고; "GAPDH"는 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제를 지칭하고; "GC"는 기체 크로마토그래피를 지칭하고; " 3H-SAM"은 S-[메틸-3H]-아데노실-L-메티오닌을 지칭하고; "HAT"는 하이포크산틴-아미노프테린-티미딘을 지칭하고; "HATU"는 [디메틸아미노(트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일옥시)메틸리덴]-디메틸아자늄 헥사플루오로포스페이트를 지칭하고; "HBTU"는 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트를 지칭하고; "HOBt"는 히드록시벤조트리아졸을 지칭하고; "HEC"는 히드록시에틸 셀룰로스를 지칭하고; "HEPES"는 4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-에탄술폰산을 지칭하고; "hr"은 시간 또는 시간들을 지칭하고; "HOAt"는 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸을 지칭하고; "IC50"은 작용제에 대하여 가능한 최대 억제 반응의 50%를 생성하는 작용제의 농도를 지칭하고; "IVTI"는 생체내 표적 억제를 지칭하고; "KLH"는 키홀 림펫 헤모시아닌을 지칭하고; "리튬 트리-sec-부틸보로히드라이드 용액"은 리튬 트리(sec-부틸)보로히드라이드를 지칭하고; "MDM4"는 마우스 이중 미세염색체 4를 지칭하고; "MeOH"는 메탄올을 지칭하고; "MEP50"은 메틸로솜 단백질 50을 지칭하고; "min"은 분 또는 분들을 지칭하고; "MTBE"는 메틸 t-부틸 에테르를 지칭하고; "OD"는 광학 밀도를 지칭하고; "o.d."는 외부 직경을 지칭하고; "PAGE"는 폴리아크릴아미드 겔 전기영동을 지칭하고; "PBS"는 포스페이트-완충 염수를 지칭하고; "PCR"은 폴리머라제 연쇄 반응을 지칭하고; "PEG"는 폴리에틸렌 글리콜을 지칭하고; "pNPP"는 4-니트로페닐 포스페이트를 지칭하고; "PO"는 경구로 또는 경구 투여를 지칭하고; "ppm"은 백만분율을 지칭하고; "PRMT5"는 단백질 아르기닌 메틸 트랜스퍼라제 5를 지칭하고; "PyBOP"는 (벤조트리아졸-1-일-옥시트리스피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트)를 지칭하고; "psig"는 제곱 인치당 파운드-힘 게이지를 지칭하고; "PTFE"는 폴리테트라플루오로에틸렌을 지칭하고; "PyBROP"는 브로모-트리스피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트를 지칭하고; "QD"는 매일 또는 1일 1회 투여를 지칭하고; "qPCR"은 정량적 폴리머라제 연쇄 반응을 지칭하고; "RNA"는 리보핵산을 지칭하고; "RPMI"는 로스웰 파크 메모리얼 인스티튜트(Roswell Park Memorial Institute)를 지칭하고; "(R,R)-Ts-DENEB™"는 N-[(1R,2R)-1,2-디페닐-2-(2-(4-메틸벤질옥시)에틸아미노)-에틸]-4-메틸벤젠 술폰아미드(클로로)루테늄(II)을 지칭하고; "(R,R)-Ts-DEPEN"은 (1R,2R)-(-)-N-(4-톨루엔술포닐)-1,2-디페닐에틸렌디아민을 지칭하고; "RT"는 리버스 트랜스크립타제를 지칭하고; "SAH"는 S-아데노실-호모시스테인을 지칭하고; "SAM"은 S-아데노실-메티오닌을 지칭하고; "(S)-CBS 촉매"는 (S)-코리(Corey)-바크쉬(Bakshi)-시바타(Shibata) 촉매 또는 (S)-1-부틸-3,3-디페닐헥사히드로피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자보롤을 지칭하고; "sf9"는 클론 유래 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 곤충 세포를 지칭하고; "SmD1"은 소형 핵 리보핵단백질 D1을 지칭하고; "SPA"는 섬광 근접 검정을 지칭하고; "SS"는 스테인레스 스틸을 지칭하고; "SWFI"는 멸균 주사용수를 지칭하고; "TEA"는 트리에틸아민을 의미하고; "트리스" 및 "TRIZMA®"는 2-아미노-2-(히드록시메틸)-1,3-프로판디올 또는 트리스(히드록시메틸)아미노메탄을 지칭하고; "TBS"는 트리스-완충 염수를 지칭하고; "TEMPO"는 2,2,6,6-테트라메틸피페리딘 1-옥실을 지칭하고; "THF"는 테트라히드로푸란을 지칭하고, "TAME"는 N-알파-p-토실-L-아르기닌 에스테르 히드로클로라이드를 지칭하고; "TPCK"는 토실페닐알라닐클로로메탄을 지칭하고; "wt."는 중량을 지칭하고; "YSI"는 이트륨 실리케이트를 지칭하고, "*"는 곱셈의 수학적 연산을 지칭한다.
하기 반응식에서, 달리 나타내지 않는 한, 모든 치환기는 이전에 정의된 바와 같다. 시약 및 출발 물질은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 입수가능하다. 다른 것들은 유기 및 헤테로시클릭 화학의 표준 기술에 의해 또는 본원의 임의의 신규 절차를 포함하는 하기 제조예 및 실시예에 기재된 절차에 의해 제조될 수 있다.
Figure pct00015
반응식 1은 화학식 I의 화합물의 형성을 도시한다. "PG"는 히드록시 기를 위해 개발된 보호기이다. 이러한 보호기는 관련 기술분야에 널리 공지 및 인지되어 있다.
반응식 1, 단계 1, 하위단계 1에서 트리스-보호된 1-아세틸화 리보푸라노스가 4-클로로-7H-피롤로(2,3-d)피리미딘과 피롤로 질소에서 커플링되어 단계 1의 보호된 생성물을 제공한다. 에탄이미드산, N-(트리메틸실릴)-, 트리메틸실릴 에스테르와 조합된 트리메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트를 활성화제로서 사용하여, 4-클로로-7H-피롤로(2,3-d)피리미딘을 보호된 리보푸라노스에 용매 예컨대 ACN을 사용하여 커플링시킬 수 있다. 원 포트 2 단계 절차에서, 히드록실 기가 MeOH 중에서 무기 염기 예컨대 소듐 메톡시드를 사용하는 염기성 조건 하에 탈보호되고, 리보스 백본의 2,3-히드록시 치환이 이어서 활성화제로서 p-톨루엔술폰산 1수화물과 2,2-디메톡시프로판을 사용하여 용매 예컨대 아세톤 중에서 케탈로서 선택적으로 보호되어, 반응식 1, 단계 1, 하위단계 2의 생성물에 이어서 단계 2, 하위단계 1의 생성물을 제공한다. 5' 알콜이 아이오도벤젠 디아세테이트 및 촉매 예컨대 TEMPO를 사용하여 용매 예컨대 ACN 중에서 0℃ 내지 실온의 온도에서 약 1시간 동안 카르복실산으로 산화되어 반응식 1, 단계 2, 하위단계 2의 케탈 카르복실산 생성물을 제공한다. 반응식 1, 단계 3의 웨인렙 아미드 생성물이 N,O-디메틸히드록실아민 히드로클로라이드로 적합한 용매, 예컨대 EtOAc 중에서 펩티드 커플링 작용제 예컨대 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스포리난-2,4,6-트리옥시드를 사용하여 제조될 수 있다. 대안적인 아미드, 예컨대 모르폴린 아미드가 반응식 1, 단계 2의 카르복실산 생성물 및 적절한 친핵성 아민 예컨대 모르폴린으로 용매 예컨대 DCM 중에서 커플링 시약 예컨대 CDI를 사용하여 제조될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 카르복실산 및 아민의 반응으로부터 생성되는 아미드 형성을 위한 다수의 방법 및 시약이 있다는 것을 인식할 것이다. 예를 들어, 유기 염기 예컨대 DIPEA 또는 트리에틸아민을 사용하거나 또는 사용하지 않고 커플링 시약의 존재 하에 적절한 아민을 반응식 1, 단계 2의 카르복실산 생성물과 반응시켜 반응식 1, 단계 3 또는 반응식 1, 단계 4의 화합물을 제공할 수 있다. 커플링 시약은 카르보디이미드, 예컨대 DCC, DIC, 및 EDCI 또는 카르보닐디이미다졸 예컨대 CDI를 포함한다. 아미드 커플링 첨가제, 예컨대 HOBt 및 HOAt가 또한 반응을 증진시키는 데 사용될 수 있다. 추가적으로, 비-친핵성 음이온의 우로늄 또는 포스포늄 염, 예컨대 HBTU, HATU, PyBOP 및 PyBrOP가 보다 전통적인 커플링 시약 대신에 사용될 수 있다.
반응식 1, 단계 3의 웨인렙 아미드 생성물 또는 반응식 1, 단계 4의 모르폴린 아미드 생성물이 그리냐르 시약으로 처리되어 각각 반응식 1, 단계 5 및 반응식 1, 단계 6의 생성물을 형성할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 적절한 그리냐르 시약이 아미드와 반응할 수 있거나 또는 그리냐르 시약이 상업용 그리냐르 시약 예컨대 이소프로필마그네슘 클로라이드-리튬 클로라이드 복합체로부터 적절한 브로모- 또는 아이오도-치환된 벤젠 화합물을 사용하여 계내에서 생성되어 반응식 1, 단계 5 및 반응식 1, 단계 6의 생성물을 제공할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 또는, 대안적으로 그리냐르 시약이 마그네슘 터닝 및 아이오딘과 적절한 브로모- 또는 클로로-치환된 벤젠 화합물을 사용하여 계내에서 생성되어 반응식 1, 단계 5의 생성물을 제공할 수 있다.
반응식 1, 단계 5 및 반응식 1, 단계 6의 케톤 생성물이 제2 그리냐르 반응에서 반응하여 반응식 1, 단계 7의 히드록시 생성물을 제공할 수 있으며 여기서 R2는 수소가 아니고 R2는 이전에 정의된 바와 같다. 반응식 1, 단계 5 또는 반응식 1, 단계 6의 생성물이 용매 예컨대 THF 중에서 약 0℃의 온도에서 적절한 알킬 그리냐르 시약으로 처리되고 켄칭 시에 1 N HCl 또는 수성 염화암모늄으로 처리되어 반응식 1, 단계 7의 생성물을 제공한다.
반응식 1, 단계 8, 하위단계 1, 치환에서, R3 = NH2인 화학식 I의 생성물에 대하여, 피롤로 피리미딘의 4-클로로의 아민으로의 치환은 MeOH 중에서 NH3 예컨대 7 N NH3을 사용하여 달성될 수 있다. 반응은 밀봉된 용기에서 마이크로웨이브에서 약 100℃에서 가열하여 수행될 수 있다. 대안적으로, 수성 수산화암모늄 (물 중 약 28-30% wt%)을 사용하여 밀봉된 용기에서 약 80-110℃에서 약 8-24시간 동안 가열하면서 클로라이드를 치환시킬 수 있다.
반응식 1, 단계 8, 하위단계 1, 커플링에서, R3 = CH3에 대하여, 피롤로 피리미딘의 4-클로로가 Al(CH3)3과 팔라듐 공급원 예컨대 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)을 사용하는 Pd 커플링 조건 하에 용매 예컨대 THF 또는 1,4-디옥산 중에서 불활성 분위기 하에 약 70-80℃의 온도에서 메틸로 전환될 수 있다.
반응식 1, 단계 8, 하위단계 1, 수소화에서, R3=H에 대하여, 피롤로피리미딘의 4-클로로가 수소화 조건 하에 제거될 수 있다. 이러한 화합물의 수소화는 관련 기술분야에 널리 공지 및 인지되어 있다.
반응식 1, 단계 8, 하위단계 2에서, 보호된 케탈이 산성 조건 예컨대 물 중 TFA 또는 HCl, 예컨대 디옥산 및 MeOH 중 4 N 또는 2-프로판올 및 물 중 4.99 M 하에 탈보호되어 화학식 I의 화합물을 제공할 수 있다. 이러한 화합물의 탈보호는 관련 기술분야에 널리 공지 및 인지되어 있다.
Figure pct00016
대안적으로 반응식 2에서, R2 = H인 반응식 1, 단계 5 또는 단계 6의 케톤 생성물이 비키랄 또는 키랄 환원제를 사용하는 부분입체-제어 방식으로 환원되어 하나의 부분입체이성질체에 대하여 풍부화된 히드록시 생성물을 제공할 수 있다. 예로서, 용매 예컨대 THF 중에서 약 -78℃의 온도에서 리튬 트리-sec-부틸보로히드라이드 용액 (L-셀렉트리드(SELECTRIDE)®)을 사용하는 케톤 환원은 반응식 2, 단계 1의 히드록실 생성물을 부분입체이성질체적으로 풍부화된 또는 주요 생성물로서 생성한다. 대안적으로 반응식 2, 단계 2에서, 키랄 환원 촉매는 리튬 트리-sec-부틸보로히드라이드 용액 조건에서 생산된 것과 반대의 히드록실 입체배위를 갖는 풍부화된 또는 주요 부분입체이성질체로서 히드록실 생성물을 선택적으로 생산할 수 있다. 사용될 수 있는 이러한 키랄 촉매의 예는 (S)-CBS-촉매를 보란-THF 복합체와 용매 예컨대 THF 중에서 약 -15℃의 온도에서, 또는, 대안적으로, 옥소-테더링 루테늄 (II) 복합체 촉매 예컨대 (R,R)-Ts-DENEB™를 포름산/트리에틸아민 복합체와 약 실온에서, 또는, 대안적으로, 이리듐 (III) 복합체를 용매 혼합물 예컨대 2-상 물/DCM 시스템 중에서 약 실온에서 사용하는 것을 포함한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 적절한 이리듐 (III) 복합체가 상업용 [Cp*IrCl2]2 및 (R,R)-Ts-DEPEN으로부터 계내에서 생성되어 반응식 2, 단계 2의 생성물을 제공할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
상기 키랄 환원 촉매, (S)-CBS 또는 (R,R)-DENEB™ 또는 이리듐(III) 복합체를 사용하는 반응식 2, 단계 2의 생성물로부터의 주요 또는 풍부화된 부분입체이성질체는, 일반적으로 본 발명에 기재되는 실시예에서 형성된 히드록실 중심의 부분입체 배위인 것으로 발견된다.
본 발명의 화합물을 생산하기 위한 대안적 합성 방법은 친핵체 예컨대 4-니트로벤조산을 알콜과 반응시켜 에스테르를 형성하는 것을 수반하는 미츠노부(Mitsunobu) 반응 (반응식 2, 단계 3)을 사용한다. 미츠노부 반응은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 산 예컨대 4-니트로벤조산, 트리페닐포스핀, 및 아조디카르복실레이트 예컨대 디에틸 아조디카르복실레이트 (DEAD) 또는 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (DIAD)를 사용하여 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 중에서 약 0℃ 내지 실온의 온도에서 알콜을 에스테르로 전환시키는 것을 수반한다. 미츠노부 알콜 활성화 및 친핵체로의 치환 동안, 알콜 입체중심은 입체화학의 반전을 겪는다. 미츠노부 반응을 사용하는 이 방법에 의해, 반응식 2, 단계 1에서의 리튬 트리-sec-부틸보로히드라이드 용액 환원으로부터 생산된 풍부화된 부분입체이성질체가 반응식 2, 단계 2에서 (S)-CBS 또는 (R,R)-Ts-DENEB™ 또는 이리듐 (III) 복합체 촉매를 사용하여 생산된 것과 동일한 주요 부분입체이성질체에 대하여 풍부화된 알콜 입체배위를 갖는 생성물로 전환될 수 있다.
반응식 2, 단계 5, 하위단계 1에서, R3 = NH2인 화학식 I의 생성물에 대하여, 에스테르가 이어서 알콜로 비누화되고 피롤로 피리미딘의 4-클로로가 반응식 1, 단계 8에 대하여 논의된 바와 동일한 방식으로 원-포트 반응에서 아민으로 치환될 수 있다. 반응식 2, 단계 5, 하위단계 2에서, 보호된 케탈이 반응식 1, 단계 8, 하위단계 2에서 논의된 바와 같은 산성 조건 하에 탈보호되어 화학식 I의 화합물을 제공할 수 있다.
반응식 2, 단계 4에서, R3 = NH2, CH3, 또는 H인 반응식 2, 단계 2의 생성물은 반응식 1, 단계 8, 하위단계 1에 논의된 바와 같이 달성될 수 있거나, 또는, 대안적으로 수성 수산화암모늄 (물 중 약 28-30% wt%) 및 디옥산이 연속 유동 화학을 사용하여 약 200℃ 및 10 mL/분의 유량 (30분 체류 시간)에서 또는, 대안적으로 약 200℃ 및 0.251 mL/분의 유량 (30분 체류 시간)에서 가열하면서 클로라이드를 치환시키는 데 사용될 수 있다. 반응식 2, 단계 4, 하위단계 2에서, 보호된 케탈이 반응식 1, 단계 8, 하위단계 2에서 논의된 바와 같이 탈보호될 수 있거나, 또는 대안적으로, 보호된 케탈이 수성 HCl (물 중 약 6 N)로 EtOH/MeOH/EtOAc 혼합물 중에서 연속 유동 화학을 사용하여 약 55℃ 및 1.5 mL/분의 유량 (20분 체류 시간)에서 가열하면서 또는 수성 HCl (물 중 약 4 N)을 사용하여 EtOH 중에서 약 82℃ 및 0.288 mL/분의 유량 (10분 체류 시간)에서 탈보호되어 화학식 I의 화합물을 제공할 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 일반적으로 예시된 화합물의 1H NMR 스펙트럼이 동일성 뿐만 아니라 부분입체이성질체 풍부화의 정도 또는 생산된 단일 부분입체이성질체의 순도를 결정하기 위해 사용될 수 있다는 것을 알 것이다.
임의적 단계에서, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염은 표준 조건 하에 적합한 용매 중에서 화학식 I의 적절한 유리 염기의 적절한 제약상 허용되는 산과의 반응에 의해 형성될 수 있다. 이러한 염의 형성은 관련 기술분야에 널리 공지 및 인지되어 있다.
본 발명의 화합물은 하기 실시예에서 예시된 바와 같이 제조된다. 하기 제조예 및 실시예는 본 발명을 추가로 예시하고 본 발명의 화합물의 전형적인 합성을 나타낸다. 시약 및 출발 물질은 용이하게 입수가능하거나 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 합성될 수 있다. 제조예 및 실시예는 제한이 아니라 예시로서 제시되고, 다양한 변형이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이루어질 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 화합물의 부분입체이성질체 배위는 표준 기술 예컨대 X선 분석, 1H NMR, 및 키랄-HPLC 체류 시간과의 상관관계에 의해 결정될 수 있다.
LC-ES/MS는 애질런트(AGILENT)® HP1100 액체 크로마토그래피 시스템에서 수행된다. 전기분무 질량 분광측정법 측정 (양성 및/또는 음성 모드에서 획득됨)은 HP1100 HPLC에 인터페이스된 질량 선택성 검출기 사중극자 질량 분광계에서 수행된다. LC-MS 조건 (낮은 pH): 칼럼: 페노메넥스(PHENOMENEX)® 제미니(GEMINI)® NX C18 2.1 x 50 mm 3.0 μm; 구배: 3분 내에 5-100% B, 이어서 0.75분 동안 100% B 칼럼 온도: 50℃ +/-10℃; 유량: 1.2 mL/분; 용매 A: 0.1% HCOOH를 갖는 탈이온수; 용매 B: 0.1% 포름산을 갖는 ACN; 파장 214 nm. 대안적 LC-MS 조건 (높은 pH): 칼럼: 엑스테라(XTERRA)® MS C18 칼럼 2.1x50 mm, 3.5 μm; 구배: 0.25분 동안 5%의 용매 A, 3분 내에 5%에서 100%로의 용매 B 구배 및 0.5분 동안 100%의 용매 B 또는 3분 내에 10%에서 100%로의 용매 B 및 0.75분 동안 100%의 용매 B; 칼럼 온도: 50℃ +/-10℃; 유량: 1.2 mL/분; 용매 A: 10 mM NH4HCO3 pH ~9-10; 용매 B: ACN; 파장: 214 nm.
NMR 스펙트럼은 브루커(Bruker) AVIII HD 400 MHz NMR 분광계에서 수행되고, 잔류 용매 [CDCl3, 7.26 ppm; (CD3)2SO, 2.05 ppm]를 참조 표준물로서 사용하여, ppm (화학적 이동 δ)으로 보고된 CDCl3 또는 (CD3)2SO 용액으로서 수득된다. 피크 다중도가 보고되는 경우에, 하기 약어가 사용될 수 있다: s (단일선), t (삼중선), q (사중선), m (다중선), br-s 또는 bs (넓은 단일선), dd (이중선의 이중선), dt (삼중선의 이중선), 및 td (이중선의 삼중선). 커플링 상수 (J)는, 보고되는 경우, 헤르츠 (Hz)로 보고된다.
제조예 1
[(2R,3R,4R,5R)-3,4-디벤조일옥시-5-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트
4-클로로-7H-피롤로-(2,3-d)피리미딘 (55.3 g, 0.36 mol)을 ACN (1.8 L) 중에 현탁시키고 실온에서 교반하였다. 에탄이미드산, N-(트리메틸실릴)-, 트리메틸실릴 에스테르 (110.8 mL, 0.45 mol)를 적가하고 혼합물을 20분 동안 실온에서 N2 하에 교반하였다. 트리메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트 (1.0 L, 0.54 mol)를 적가하고 이어서 [(2R,3R,4R,5S)-5-아세톡시-3,4-디벤조일옥시-테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (272.4 g, 0.54 mol)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 85℃ (내부)에서 가열하였다. 혼합물을 40℃ (내부)로 냉각시키고 추가의 [(2R,3R,4R,5S)-5-아세톡시-3,4-디벤조일옥시-테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (45.40 g, 90.0 mmol)를 혼합물에 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 85℃ (내부)에서 가열하였다. 혼합물을 추가의 18시간 동안 N2 하에 실온에서 교반하였다. 반응물에 물 (500 mL) 및 EtOAc (500 mL)를 첨가하였다. 생성된 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (3 x 250 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 NaHCO3 (500 mL) 및 포화 수성 염화나트륨 (500 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 10-30% EtOAc/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (98.0 g, 41% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 598.0/600.0 [M+H]+.
제조예 2
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]메탄올
[(2R,3R,4R,5R)-3,4-디벤조일옥시-5-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (80.5 g, 134.61 mmol)를 MeOH (805 mL) 중에 현탁시키고 MeOH 중 0.5 M 소듐 메톡시드의 용액 (53.8 mL, 26.92 mmol)으로 실온에서 3시간 동안 처리하였다. 0℃로 냉각시키고 혼합물을 다우엑스(DOWEX)® 50WX2 수지로 처리하였다 (pH <5까지). 여과하고 진공에서 농축시켜 잔류물을 수득하였다. MTBE (100 mL)로부터 연화처리하였다. 혼합물을 가만히 따르고 생성된 잔류물을 건조시켜 백색 고체를 수득하였다. 고체를 아세톤 (1100 mL) 중에 현탁시키고 2,2-디메톡시프로판 (41.5 mL, 336.5 mmol) 및 p-톨루엔술폰산 1수화물 (25.6 g, 134.6 mmol)을 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매의 ~1/3까지를 감압 하에 제거하고 DCM (250 mL) 및 물 (100 mL)을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고 수성 층을 DCM (2 x 100 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 NaHCO3 (150 mL; pH~9) 및 포화 수성 염화나트륨 (100 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 용매를 감압 하에 제거하여 조 혼합물을 수득하였다. DCM 중 30% EtOAc로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (26.5 g, 60% 수율)을 무색 오일로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 326.0/328.0 [M+H]+.
제조예 3
(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르복실산
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]메탄올 (60.0 g, 184.2 mmol)을 ACN (250 mL) 중에 용해시켰다. 물 (180 mL)을 첨가하고 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 아이오도벤젠 디아세테이트 (160 g, 496.8 mmol)를 0℃에서 조금씩 첨가하고 이어서 TEMPO (14 g, 89.6 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 조 잔류물을 EtOAc (300 mL) 중에 용해시켰다. 물 (100 mL)을 0℃에서 첨가하고 생성된 유기 층을 분리하였다. 수성부를 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 티오술페이트의 10% 수용액 (2x100 mL) 및 물 (2x100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 연황색 고체를 수득하였다. 조 물질을 헥산 (400 mL)과 혼합하고 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고, 헥산 (100 mL)으로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (66.7 g, 89% 순도, 100% 조 물질)을 황색 고체로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 340.00/342.00 [M+H]+.
제조예 4
(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-N-메톡시-N,2,2-트리메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르복스아미드
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]메탄올 (45.0 g, 138.1 mmol)을 ACN (175 mL) 중에 용해시켰다. 물 (133 mL)을 첨가하고 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 아이오도벤젠 디아세테이트 (122.3 g, 379.7 mmol)를 0℃에서 조금씩 첨가하고 이어서 TEMPO (10.5 g, 67.0 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 물 (100 mL) 및 EtOAc (250 mL)를 0℃에서 첨가하고 생성된 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 물 (100 mL), 중아황산나트륨의 20% w/v 수용액 (100 mL), 및 물 (100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 갈색 고체 (53.0 g)를 수득하였다. 이 고체를 EtOAc (400 mL) 중에 실온에서 용해시키고 N,O-디메틸히드록실아민 히드로클로라이드 (18.8 g, 193.0 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 실온에서 교반하고 EtOAc 중 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스포리난-2,4,6-트리옥시드의 1.67 M 용액 (176.3 mL, 294 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3일 동안 N2 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 물 (150 mL) 및 EtOAc (150 mL)를 첨가하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (3 x 150 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 물 (200 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 혼합물을 수득하였다. 0-30% EtOAc/DCM의 구배로 용리하는 실리카 플러그를 통한 여과에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 유리질 고체 (31.0 g, 2개의 단계에 걸쳐 60%)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 383.0/385.0 [M+H]+.
제조예 5
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-모르폴리노-메타논
(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르복실산 (63.7 g, 166 mmol)을 DCM (320 mL) 중에 현탁시키고 0℃에서 교반하였다. 1,1'-카르보닐디이미다졸 (37.7 g, 232 mmol)을 조금씩 첨가하고 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 모르폴린 (21.7 g, 249 mmol)을 혼합물에 적가하고 실온에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM 및 물 (150 mL)로 희석하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 DCM (3 x 100mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 물 (100 mL) 및 포화 수성 염화나트륨 (100 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 20-60% EtOAc/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (34 g, 50% 수율)을 갈색 발포체로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 409.00/411.00 [M+H]+.
제조예 6
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-페닐-메타논
디에틸 에테르 중 페닐마그네슘 브로마이드의 3.0 M 용액 (1.79 ml, 5.38 mmol)을 THF (15 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-모르폴리노-메타논 (1.00 g, 2.45 mmol)의 용액에 2분에 걸쳐 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반하고, 1 N 수성 HCl (7.3 mL)을 첨가하였다. 3분 후에, 수성 층을 DCM으로 추출하였다. 층을 분리하고 유기 층을 감압 하에 증발시켰다. 헥산 중 MTBE/DCM의 10% 혼합물의 35-75%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 25분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물 (893 mg, 91% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 400.0/402.0 [M+H]+.
제조예 7
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메타논
(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-N-메톡시-N,2,2-트리메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르복스아미드 (30.0 g, 78.4 mmol)를 THF (300 mL) 중에 용해시키고 -10℃로 냉각시켰다. 디에틸 에테르 중 4-클로로페닐마그네슘 브로마이드의 1.0 M 용액 (157 mL, 157 mmol)을 적가하고 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 0℃로 냉각시키고 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 (50 mL) 및 EtOAc (200 mL)를 첨가함으로써 켄칭하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물 (250 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 유기 여과물을 감압 하에 제거하여 조 혼합물을 수득하였다. 0-15% EtOAc/DCM의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (30.1 g, 84% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 434.0/436.0 [M+H]+.
대안적 제조예 7
(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-N-메톡시-N,2,2-트리메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르복스아미드 (257.0 g, 617.7 mmol)를 THF (2570 mL) 중에 용해시키고 -15℃로 냉각시켰다. 2-메틸테트라히드로푸란 중 4-클로로페닐마그네슘 브로마이드의 1.0 M 용액 (1050 mL, 1050 mmol)을 적가하고 혼합물을 1시간 동안 -15℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 (1000 mL) 및 물 (500 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (2 x 500 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 여과물을 감압 하에 증발시켜 백색 고체를 수득하였다. EtOH (5300 mL)로부터의 재결정화에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (238.3 g, 87% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 434.0/436.0 [M+H]+.
제조예 8
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-(트리플루오로메틸)페닐]메타논
1-브로모-4-(트리플루오로메틸)벤젠 (4.0 g, 18 mmol)을 THF 중 이소프로필마그네슘 클로라이드의 2.0 M 용액 (8 mL, 16 mmol)에 추가의 THF (10 mL) 중에서 실온에서 적가하였다. 혼합물을 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 이 혼합물에, THF (14 mL) 중 (3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-N-메톡시-N,2,2-트리메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르복스아미드 (3.4 g, 8.9 mmol)의 용액을 실온에서 적가하고 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 0℃로 냉각시키고 반응물을 시트르산의 10% 용액 (100 mL)으로 켄칭하였다. MTBE (200 mL)를 첨가하고 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 2개의 상을 분리하고 수성 층을 MTBE로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 포화 수성 염화암모늄, 물, 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 잔류물을 수득하였다. 0-50% EtOAc/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 잔류물을 정제하여 표제 화합물 (3.60 g, 87% 수율)을 황색 발포체로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 468.00/470.00 [M+H]+.
제조예 9
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-클로로페닐)메타논
1-클로로-3-아이오도벤젠 (0.42 g, 1.7 mmol)을 THF (5 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. THF 중 이소프로필마그네슘 클로라이드-리튬 클로라이드 복합체의 1.3 M 용액 (1.23 mL, 1.6 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하고, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. THF (5 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-모르폴리노-메타논 (0.5 g, 1.2 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서의 1시간 동안의 교반 후, 혼합물을 1 N 수성 HCl (2 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 희석하고 유기 층을 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 0-25% EtOAc/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 20분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물 (0.35 g, 66% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 434.2/436.2 [M+H]+ .
제조예 10
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로-2-플루오로-페닐)메타논
4-클로로-2-플루오로-1-아이오도-벤젠 (1.9 g, 7.5 mmol)을 THF (50 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. THF 중 이소프로필마그네슘 클로라이드-리튬 클로라이드 복합체의 1.3 M 용액 (6.3 mL, 8.2 mmol)을 첨가하고, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. THF (10 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-모르폴리노-메타논 (2.8 g, 6.8 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서의 5시간 동안의 교반 후에, 혼합물을 1 N 수성 HCl (9.09 mL, 9.09 mmol)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 유기 층을 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 0-50% EtOAc/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (1.57 g, 51% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 452.0/454.0/456 [M+H]+.
제조예 11
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-에틸페닐)메타논
THF 중 3-에틸페닐마그네슘 브로마이드의 0.5 M 용액 (5.8 mL, 2.9 mmol)을 THF (10 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-모르폴리노-메타논 (1.0 g, 2.5 mmol)의 용액에 10분에 걸쳐 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반하고 1 N 수성 HCl (3.9 mL, 3.9 mmol)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 물로 희석하고, 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 0-100% EtOAc/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 30분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물 (0.98 g, 94% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 428/430 [M+H]+.
제조예 12
4-[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르보닐]벤조니트릴
4-브로모벤조니트릴 (1.36 g, 7.40 mmol)을 THF (10 mL) 중에 0℃에서 용해시켰다. THF 중 이소프로필마그네슘 클로라이드-리튬 클로라이드 복합체의 1.3 M 용액 (6.6 mL, 8.53 mmol)을 첨가하고 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 THF (14 mL) 중 (3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-N-메톡시-N,2,2-트리메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르복스아미드 (2.18 g, 5.68 mmol)의 용액 내로 0℃에서 캐뉼라삽입하였다. 실온으로 가온하고 2시간 교반하였다. 1 N 수성 HCl (9.09 mL)을 0℃에서 첨가함으로써 켄칭하였다. 반응 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 비카르보네이트 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 헥산 중 15-30% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (1.49 g, 62% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 425.0/427.0 [M+H]+.
제조예 13
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디플루오로페닐)메타논
4-브로모-1,2-디플루오로-벤젠 (2.21 g, 1.29 mL, 11.4 mmol)을 THF 중 이소프로필마그네슘 클로라이드의 2.0 M 용액 (6.05 mL, 12.1 mmol)에 -15℃에서 첨가하고 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 가온하고 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 THF (16.3 mL) 중 (3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-N-메톡시-N,2,2-트리메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르복스아미드 (1.25 g, 3.27 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하였다. 15분 후에, 1 N 수성 HCl (5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (30 mL)로 희석하고 2상 혼합물을 실온에서 15분 동안 격렬하게 교반하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (2 x 40 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 비카르보네이트 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 4% EtOAc/DCM으로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (1.12g, 74% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 436, 438 [M+H]+.
제조예 14
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디클로로페닐)메타논
1-브로모-3,4-디클로로벤젠 (1.04 g, 4.57 mmol)을 THF 중 이소프로필마그네슘 클로라이드-리튬 클로라이드 복합체의 2.0 M 용액 (1.2 mL, 2.4 mL)에 -15℃에서 첨가하였다. 15분 후에, 혼합물을 0℃로 가온하고 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 THF (6.5 mL) 중 (3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-N-메톡시-N,2,2-트리메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르복스아미드 (0.50 g, 1.31 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하고 10분 동안 교반하였다. 1 N 수성 HCl (5 mL)로 켄칭하고, EtOAc (30 mL)를 첨가하였다. 실온에서 15분 동안 격렬하게 교반하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (2x40 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 비카르보네이트 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 10-20% EtOAc/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (1.49 g, 62% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 468/470 [M+H]+.
제조예 15
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(p-톨릴)메타논
THF 중 p-톨릴마그네슘 브로마이드의 1.0 M 용액 (2.4 mL, 2.4 mmol)을 THF (6.1 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-모르폴리노-메타논 (500 mg, 1.22 mmol)의 교반 용액에 -15℃에서 적가하였다. 1시간 후에, 포화 수성 염화암모늄 (15 mL)으로 켄칭하고 EtOAc (3x40 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 비카르보네이트 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 10-20% EtOAc/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (405.3 mg, 80% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 414/416 [M+H]+.
제조예 16
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-플루오로페닐)메타논
THF 중 4-플루오로페닐마그네슘 브로마이드의 1.0 M 용액 (9.8 mL, 9.8 mmol)을 THF (20 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-모르폴리노-메타논 (2.0 g, 4.90 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하였다. 15분 동안 0℃에서, 이어서 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 포화 염화암모늄 (12 mL)을 첨가하였다. EtOAc (25 mL)를 첨가하고 실온에서 15분 동안 격렬하게 교반하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (2x25 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 비카르보네이트 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켰다. 2-10% EtOAc/DCM의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (1.76 g, 83% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 418/420 [M+H]+.
제조예 17
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(2-플루오로페닐)메타논
1-브로모-2-플루오로벤젠 (2.39 g, 7.88 mmol)을 THF (15 mL) 중에 0℃에서 용해시켰다. THF 중 이소프로필마그네슘 클로라이드-리튬 클로라이드 복합체의 1.3 M 용액 (9.1 mL, 11.8 mmol)을 첨가하고 0℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 THF (30 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-모르폴리노-메타논 (2.93 g, 7.17 mmol)의 용액 내로 0℃에서 캐뉼라삽입하고 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고 1 N 수성 HCl (11.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 반응 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 NaHCO3 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 10-70% MTBE/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (2.14 g, 71% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 418.0/420.0 [M+H]+.
제조예 18
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[2-(트리플루오로메틸)페닐]메타논
2-브로모벤조트리플루오라이드 (2.97 g, 13.1 mmol)를 THF (15 mL) 중에 0℃에서 용해시켰다. THF 중 이소프로필마그네슘 클로라이드-리튬 클로라이드 복합체의 1.3 M 용액 (8.6 mL, 11.2 mmol)을 첨가하고 0℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 다시 0℃로 냉각시키고 이 혼합물을 THF (20 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-모르폴리노-메타논 (3.05 g, 7.46 mmol)의 용액 내로 0℃에서 캐뉼라삽입하고 2.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 1 N 수성 HCl (14.9 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 NaHCO3 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 25-50% MTBE/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (1.48 g, 42% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 468.0/470.0 [M+H]+.
제조예 19
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-클로로-3-(시클로프로폭시)페닐]메타논
THF (150 mL) 중 마그네슘 터닝 (4.97 g, 204 mmol) 및 아이오딘 (920 mg, 3.63 mmol)의 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반하였다. THF (400 mL) 중 4-브로모-1-클로로-2-(시클로프로폭시)벤젠 (46.0 g, 186 mmol)의 용액을 천천히 적가하고 혼합물을 30분 동안 환류시켰다. 40℃로 냉각시키고 이 혼합물을 THF (400 mL) 중 (3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-N-메톡시-N,2,2-트리메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르복스아미드 (35.0 g, 91.6 mmol)의 용액에 10분에 걸쳐 천천히 적가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 0℃로 냉각시키고 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 (200 mL) 및 MTBE (200 mL)를 첨가함으로써 켄칭하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 MTBE (2 x 200 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물 (150 mL), 포화 수성 염화나트륨 (100 mL)으로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 혼합물을 수득하였다. MTBE (80 mL) 및 헵탄 (400 mL)으로부터의 연화처리에 의해 정제하여 표제 화합물 (48.8 g, 89.9% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 490.0/492.0 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.85-0.89 (m, 4H), 1.44 (s, 3H), 1.69 (s, 3H), 3.74-3.83 (m, 1H), 5.46-5.48 (m, 2H), 5.68 (dd, J= 2.2, 6.1 Hz, 1H), 6.39 (d, J= 0.6 Hz, 1H), 6.59 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.34-7.42 (m, 3H), 7.65 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H).
제조예 20
(1R)-1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(4-클로로페닐)에탄올
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메타논 (15.9 g, 36.6 mmol)을 THF (175 mL) 중에 용해시키고 0℃로 냉각시켰다. 2-메틸테트라히드로푸란 중 메틸마그네슘 브로마이드의 3.4 M 용액 (21.53 mL, 73.3 mmol)을 적가하고 혼합물을 2시간 동안 0℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 (50 mL)으로 켄칭하고, 이어서 EtOAc (250 mL)를 첨가하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물 (100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 여과물을 감압 하에 농축시켜 백색 유리질 고체를 수득하였다. 10-15% EtOAc/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (11.5 g, 70% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 450.00/452.00 [M+H]+.
제조예 21
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(3,4-디클로로페닐)에탄올의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디클로로페닐)메타논 (0.50 g, 1.07 mmol)을 THF (5.3 mL) 중에 용해시키고 0℃로 냉각시켰다. 디에틸 에테르 중 메틸마그네슘 브로마이드의 3.0 M 용액 (0.53 mL, 1.60 mmol)을 천천히 첨가하고 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 포화 염화암모늄 (20 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. EtOAc (40 mL)로 희석하고 층을 분리하였다. 수성 층을 추가의 EtOAc (3x40 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 비카르보네이트에 이어서 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 25-30% MTBE/헥산의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (342 mg, 66% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 484/486 [M+H]+.
제조예 22
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(2-플루오로페닐)에탄올의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(2-플루오로페닐)메타논 (0.685 g, 1.64 mmol)을 THF (20 mL) 중에 용해시키고 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 디에틸 에테르 중 메틸마그네슘 브로마이드의 3 M 용액 (1.09 mL, 3.27 mmol)을 첨가하고 2시간 동안 0℃에서 교반하였다. 반응물을 1 N 수성 HCl (3.44 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 반응 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 NaHCO3 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 물질을 헥산 중 10-75% MTBE의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.482 g, 68% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 434.0/436.0 [M+H]+.
제조예 23
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-[2-(트리플루오로메틸)페닐]에탄올의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[2-(트리플루오로메틸)페닐]메타논 (0.434 g, 0.928 mmol)을 THF (12 mL) 중에 용해시키고 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 디에틸 에테르 중 메틸마그네슘 브로마이드의 3.0 M 용액 (0.62 mL, 1.86 mmol)을 첨가하고 30분 동안 0℃에서 교반하였다. 반응물을 1 N 수성 HCl (1.95 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 반응 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 NaHCO3 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10-50% MTBE의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.202 g, 45% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 484.0/486.0 [M+H]+.
제조예 24
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에탄올
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-(트리플루오로메틸)페닐]메타논 (0.425 g, 0.908 mmol)을 THF (10 mL) 중에 용해시키고 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 디에틸 에테르 중 메틸마그네슘 브로마이드의 3.0 M 용액 (0.45 mL, 1.35 mmol)을 첨가하고 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 반응물을 1 N 수성 HCl (1.45 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 NaHCO3 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10-25% MTBE의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체의 혼합물 (0.348 g, 79% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 484.0/486.0 [M+H]+.
제조예 25
(S)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올
THF 중 리튬 트리-sec-부틸보로히드라이드 용액의 1.0 M 용액 (19 mL, 19 mmol)을 THF (200 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메타논 (6.5 g, 15 mmol)의 용액에 -78℃에서 천천히 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 4시간 동안 N2 하에 교반하고 이어서 포화 수성 염화암모늄 용액 (50 mL)으로 켄칭하였다. EtOAc (200 mL)를 첨가하고 유기 상을 분리하였다. 수성 상을 EtOAc (3 x 70 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물 (100 mL)로 세척하고, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10-30% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (4.55 g, 70% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 436.0/438.0 [M+H]+.
제조예 26
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메타논 (4.77 g, 11.0 mmol) 및 (R,R)-Ts-DENEB™ (357 mg, 0.549 mmol)를 5:2 포름산-트리에틸아민 복합체 (45 mL) 중에 현탁시켰다. 혼합물을 실온에서 18시간 교반하였다. 혼합물을 물 (300 mL) 및 DCM (75 mL)으로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 DCM (3 x 75 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 아세톤/헥산의 20% 혼합물의 30-60%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (3.50 g, 73% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 436.0/438.0/440.0 [M+H]+.
대안적 제조예 26
1.33/1 물 /DCM (3972 mL) 중 [Cp*IrCl2]2 (8.41 g, 10.45 mmol) 및 (R,R)-Ts-DEPEN (7.899, 20.91 mmol)의 혼합물을 50℃에서 45분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시키고 포름산암모늄 (509.7 g, 7840 mmol)을 첨가하였다. 2상 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메타논 (227.0 g, 522.7 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 DCM (1000 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 감압 하에 농축시켜 오렌지색 고체를 수득하였다. 생성된 잔류물을 EtOH (3400 mL)로부터의 재결정화에 의해 정제하여 표제 화합물 (199.5 g, 86% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 436.0/438.0/440.0 [M+H]+.
제조예 27
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-클로로-3-(시클로프로폭시)페닐]메탄올
1/1 물 /DCM (860 mL) 중 [Cp*IrCl2]2 (1.58 g, 1.95 mmol) 및 (R,R)-Ts-DEPEN (1.43 g; 3.90 mmol)의 혼합물을 40℃에서 45분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시키고 포름산암모늄 (100 g, 1462 mmol)을 첨가하였다. 2상 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고 DCM (100 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-클로로-3-(시클로프로폭시)페닐]메타논 (48.8 g, 97.4 mmol)의 용액을 10분 동안 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 DCM (2 x 200 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 물 (200 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 5-10% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (35.3 g, 70% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 492.0/494.0 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 0.59-0.71 (m, 4H) 1.30 (s, 3H), 1.51 (s, 3H), 3.61-3.65 (m, 1H), 4.20-4.22 (m, 1H), 4.68 (t, J= 4.9 Hz, 1H), 5.12-5.14 (m, 1H), 5.31-5.34 (m, 1H), 6.09 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 6.34-6.35 (m, 1H), 6.87-6.80 (m, 2H), 7.11 (s, 1H), 7.29 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 8.70 (s, 1H).
제조예 28
[(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메틸] 4-니트로벤조에이트
THF (120 mL) 중 (S)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올 (10.3 g, 23.7 mmol), 4-니트로벤조산 (5.94 g, 35.5 mmol) 및 트리페닐포스핀 (9.32 g, 35.5 mmol)의 혼합물을 0℃에서 N2 하에 교반하였다. DIAD (7.19 g, 35.5 mmol)를 혼합물에 적가하고 6시간 동안 실온에서 교반하였다. 추가의 4-니트로벤조산 (1.98, 11.8 mmol), 트리페닐포스핀 (3.11 g, 11.8 mmol) 및 DIAD (2.40 g, 11.8 mmol)를 실온에서 첨가하고 혼합물을 18시간 동안 실온에서 N2 하에 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 물 (100 mL)로 켄칭하였다. EtOAc (100 mL)를 첨가하고 생성된 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (3 x 75 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물 (100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 혼합물을 수득하였다. 헥산 중 10-15% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (10.1 g, 73% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 585.00/587.00 [M+H]+.
제조예 29
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-(트리플루오로메틸)페닐]메탄올의 부분입체이성질체
THF 중 1.0 M 리튬 트리-sec-부틸보로히드라이드 용액의 용액 (93.5 mL, 93.5 mmol)을 THF (525 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-(트리플루오로메틸)페닐]메타논 (35.0 g, 74.8 mmol)의 용액에 -78℃에서 천천히 첨가하였다. N2 분위기 하에, 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하고 이어서 0℃로 가온하였다. 포화 수성 염화암모늄으로 켄칭하였다. EtOAc를 첨가하고 유기 상을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 헥산 중 0-50% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (22.0 g, 55% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 470.00/472.00 [M+H]+.
제조예 30
[[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-(트리플루오로메틸)페닐]메틸] 4-니트로벤조에이트의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-(트리플루오로메틸)페닐]메탄올의 부분입체이성질체 (21.0 g, 44.7 mmol), 4-니트로벤조산 (14.9 g, 89.4 mmol) 및 트리페닐포스핀 (23.45 g, 89.4 mmol)을 THF (315 mL) 중에 용해시키고 0℃에서 N2 하에 교반하였다. DIAD (18.1 g, 89.4 mmol)를 혼합물에 적가하고 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 추가의 4-니트로벤조산 (7.50 g, 44.7 mmol), 트리페닐포스핀 (11.8 g, 44.7 mmol), 및 DIAD (9.1 g, 44.7 mmol)를 실온에서 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 실온에서 N2 하에 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 물 (100 mL)로 켄칭하고, EtOAc (200 mL)로 희석하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (3 x 75 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 물 (100 mL) 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 헥산 중 0-50% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (18.5 g, 60% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 619.00/621.00 [M+H]+.
제조예 31
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-클로로페닐)메탄올의 부분입체이성질체
THF 중 1.0 M 리튬 트리-sec-부틸보로히드라이드 용액의 용액 (1.05 mL, 1.05 mmol)을 THF (10.7 mL) 중 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-클로로페닐)메타논 (0.35 g, 0.81 mmol)의 용액에 -78℃에서 천천히 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 10분 동안 N2 하에 교반하고 이어서 1 N 수성 HCl (1.3 mL)을 첨가하였다. EtOAc (50 mL)를 첨가하고, 유기 층을 물 (10 mL)에 이어서 포화 수성 염화나트륨 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 헥산 중 10-30% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.22 g, 61% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 436.2/438.2 [M+H]+.
제조예 32
[[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-클로로페닐)메틸] 4-니트로벤조에이트의 부분입체이성질체
THF (1 mL) 중 [(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-클로로페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (0.100 g, 0.229 mmol), 4-니트로벤조산 (0.76 g, 0.46 mmol), 및 트리페닐포스핀 (0.12 g, 0.46 mmol)을 0℃에서 N2 하에 교반하였다. DIAD (0.95 g, 0.46 mmol)를 혼합물에 적가하고 1.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 추가의 4-니트로벤조산 (1.98 g, 11.8 mmol), 트리페닐포스핀 (0.015 g, 0.057 mmol), 및 DIAD (0.012 g, 0.057 mmol)를 첨가하고 혼합물을 18시간 동안 실온에서 N2 하에 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 물 (10 mL), EtOAc (10 mL)를 첨가하고, 생성된 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 물 (100 mL)로 세척하고, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10-15% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.11 g, 82% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 585.0/587.0 [M+H]+.
제조예 33
4-[[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-히드록시-메틸]벤조니트릴의 부분입체이성질체
4-[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-카르보닐]벤조니트릴 (1.33 g, 3.14 mmol) 및 톨루엔 중 (S)-1-부틸-3,3-디페닐헥사히드로피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자보롤의 1.0 M 용액 (0.31 mL, 0.31 mmol)을 THF (50 mL) 중에 용해시키고 혼합물을 -15℃로 냉각시켰다. THF 중 보란-THF 복합체의 1.0 M 용액 (2.07 mL, 2.07 mmol)을 첨가하였다. 반응물이 실온으로 가온되도록 하고 반응물을 17시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 MeOH (5 mL)를 첨가함으로써 켄칭하였다. 포화 수성 염화암모늄 (40 mL) 및 EtOAc (80 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 추가의 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 25-40% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.75 g, 58% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 427.0/429.0 [M+H]+.
제조예 34
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디클로로페닐)메탄올의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디클로로페닐)메타논 (490.0 mg, 1.045 mmol) 및 톨루엔 중 (S)-1-부틸-3,3-디페닐헥사히드로피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자보롤의 1.0 M 용액 (0.10 mL, 0.10 mmol)을 THF (20.9 mL) 중에 용해시키고 혼합물을 -15℃로 냉각시켰다. THF 중 보란-THF 복합체의 1.0 M 용액 (0.69 mL, 0.69 mmol)을 첨가하였다. 반응물이 실온으로 가온되도록 하고 반응물을 17시간 동안 교반하였다. MeOH (1 mL)를 첨가함으로써 켄칭하였다. 포화 수성 염화암모늄 (40 mL) 및 EtOAc (40 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 추가의 EtOAc (2x40 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 비카르보네이트 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 5-25% MTBE의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (246.8 mg, 50% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 470/472 [M+H]+.
제조예 35
(R)-(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-페닐-메탄올
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-페닐-메타논 (0.866 g, 2.17 mmol) 및 (R,R)-Ts-DENEB™ (70.4 mg, 10.8 mmol)를 5:2 포름산-트리에틸아민 복합체 (15 mL) 중에 현탁시키고, 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (60 mL)로 희석하였다. 수성 층을 DCM으로 추출하였다. 유기 추출물을 감압 하에 증발시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 15-30% 아세톤의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 20분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물 (0.420 g, 48% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 402.0/404.0 [M+H]+.
제조예 36
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로-2-플루오로-페닐)메탄올의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로-2-플루오로-페닐)메타논 (0.50 g, 1.0 mmol) 및 (R,R)-Ts-DENEB™ (30 mg, 0.05 mmol)를 5:2 포름산-트리에틸아민 복합체 (10 mL) 중에 현탁시키고 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, 수성 층을 DCM으로 추출하였다. 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-40% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.45 g, 95% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 454.0/456.0/458.0 [M+H]+.
제조예 37
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-에틸페닐)메탄올의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-에틸페닐)메타논 (0.975 g, 2.28 mmol) 및 (R,R)-Ts-DENEB™ (74 mg, 0.11 mmol)를 5:2 포름산-트리에틸아민 복합체 (22 mL) 중에 현탁시키고, 실온에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (250 mL)로 희석하였다. 수성 층을 DCM으로 추출하였다. 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-20% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 30분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물 (0.37 g, 38% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 430.2/432.2 [M+H]+.
제조예 38
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디플루오로페닐)메탄올의 부분입체이성질체
(R,R)-Ts-DENEB™ (93 mg, 0.143 mmol)를 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디플루오로페닐)메타논 (1.12 g, 2.57 mmol) 및 5:2 포름산-트리에틸아민 복합체 (10 mL)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 반응 용기를 N2로 플러싱하고 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (75 mL) 및 DCM (25 mL)으로 희석하고 5분 동안 혼합하였다. 층을 분리하고 수성 층을 DCM으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 여과하고 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 5-10% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.8 g, 69% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 438 [M+H]+.
제조예 39
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(p-톨릴)메탄올의 부분입체이성질체
5:2 포름산-트리에틸아민 복합체 (4.0 mL)를 1,4-디옥산 (4.0 mL) 중 (R,R)-Ts-DENEB™ (31.8 mg, 0.048 mmol) 및 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(p-톨릴)메타논 (405.0 mg, 0.978 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 물 (15 mL)로 희석하고 EtOAc (3 x 40 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 비카르보네이트 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10-30% MTBE의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (144 mg, 38% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 416/418 [M+H]+.
제조예 40
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-플루오로페닐)메탄올의 부분입체이성질체
(R,R)-Ts-DENEB™ (242 mg, 0.372 mmol)를 [(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-플루오로페닐)메타논 (1.41 g, 3.24 mmol), 5:2 포름산-트리에틸아민 복합체 (25 mL) 및 1,4-디옥산 (12 mL)의 혼합물에 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (80 mL) 및 DCM (40 mL)으로 희석하고 5분 동안 혼합하였다. 층을 분리시키고 수성 층을 추가의 DCM (2 x 40 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 4-10% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (1.01 g, 73% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 420 [M+H]+.
제조예 41
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-페닐-메탄올
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-페닐-메탄올 (0.399 g, 0.993 mmol) 및 MeOH 중 7 N NH3 (15 mL, 105 mmol)의 혼합물을 밀봉된 반응 용기에서 교반하였다. 혼합물을 100℃에서 8시간 동안 마이크로웨이브처리하였다. 용기를 실온으로 냉각시키고 용매를 N2의 스트림 하에 증발시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10% MeOH/MTBE 혼합물의 50-100%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 25분 정제하여 표제 화합물 (0.295 g, 78% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 383.2 [M+H] +.
제조예 42
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메틸] 4-니트로벤조에이트 (10.1 g, 17.3 mmol), 수산화암모늄 (물 중 28%, 50 mL) 및 1,4-디옥산 (50 mL)을 밀봉된 용기에 첨가하고 110℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고 물 (50 mL) 및 EtOAc (100 mL)를 첨가하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 헥산:EtOAc (1:1)의 등용매 혼합물로 용리하는 실리카 플러그를 통한 여과에 의해 정제하여 표제 화합물 (6.78 g, 75% 수율)을 갈색 유리질 고체로 수득하였으며 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
대안적 제조예 42
GC 오븐 내부에 300-mL 심리스 스테인레스 스틸 튜브형 반응기 (o.d. = 1/8")를 두었다. 3:10 비 수산화암모늄 (물 중 28%)/디옥산으로 10 mL/분으로 40분에 걸쳐 플러싱하였다. N2의 배압 (800 psig)을 반응 시스템의 유출구에 적용하고 GC 오븐의 온도를 200℃로 설정하였다. 3:10 비 수산화암모늄 (물 중 28%)/디옥산 (1300 mL) 중 (R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올 (200.0 g, 458.41 mmol)의 용액을 반응기를 통하여 10 mL/분 (30분 체류 시간)으로 고-압력 1L 텔레다인 이스코(Teledyne ISCO)™ 시린지 펌프를 사용하여 펌핑하였다. 이 공급 용액의 소비 후에, 반응기를 3:10 수산화암모늄 (물 중 28%):디옥산 (600 mL)으로 10 mL/분으로 펌핑하여 플러싱하였다. 수집된 용액의 용매를 진공 하에 1/3 부피로 제거하고, 물 (300 mL)을 첨가하고 EtOAc (3 x 150 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 (200 mL)으로부터의 연화처리에 의해 정제하여 표제 화합물 (189.0 g, 95% 순도)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 416.0/418.0 [M+H]+.
제조예 43
(1R)-1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(4-클로로페닐)에탄올
(1R)-1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(4-클로로페닐)에탄올 (11.4 g, 25.3 mmol)을 수산화암모늄 (물 중 28%, 60 mL) 및 1,4-디옥산 (60 mL) 중에 밀봉된 용기에서 용해시키고 110℃에서 18시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시키고 용매를 감압 하에 제거하였다. 물 (50 mL) 및 EtOAc (100 mL)를 첨가하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켜 표제 화합물 (10.7 g, 96% 수율)을 갈색 유리질 고체로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 431.00/433.20 [M+H]+.
제조예 44
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-(트리플루오로메틸)페닐]메탄올의 부분입체이성질체
[[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-(트리플루오로메틸)페닐]메틸] 4-니트로벤조에이트의 부분입체이성질체 (21 g, 33.9 mmol)를 수산화암모늄 (물 중 28 wt%, 100 mL) 및 1,4-디옥산 (100 mL) 중에 밀봉된 튜브에서 용해시키고, 혼합물을 110℃에서 18시간 동안 가열하였다. 튜브를 실온으로 냉각시키고, 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고, 필터 케이크를 물로 세척하였다. 필터 케이크를 EtOAc (300 mL) 중에 용해시켰다. 생성된 유기 층을 물로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 헥산:EtOAc (1:1)의 등용매 혼합물로 용리하는 실리카 겔 플러그를 통한 여과에 의해 정제하여 표제 화합물 (13.5 g, 80% 수율)을 부분입체이성질체로서 무색 오일로 수득하였다. ES/MS m/z 451.2/452.2 [M+H] +.
제조예 45
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-클로로페닐)메탄올의 부분입체이성질체
[[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-클로로페닐)메틸] 4-니트로벤조에이트의 부분입체이성질체 (0.105 g, 0.18 mmol), 1,4-디옥산 (4 mL), 및 수산화암모늄 (물 중 30 wt%, 6 mL)을 밀봉된 반응 용기에서 교반하였다. 반응물을 85℃로 가열하였다. 85℃에서의 24시간 후 실온으로 냉각시키고, 추가의 수산화암모늄 (물 중 30 wt%, 6 mL)을 첨가하고, 95℃에서 추가의 24시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시키고 물 (50 mL)을 첨가하였다. EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 50-100% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.053 g, 71% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 417.2/419.2 [M+H]+.
제조예 46
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로-2-플루오로-페닐)메탄올의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로-2-플루오로-페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (0.12 mg, 0.26 mmol), 1,4-디옥산 (2 mL), 및 수산화암모늄 (물 중 30 wt%, 4 mL)의 혼합물을 밀봉된 반응 용기에서 교반하였다. 혼합물을 80℃로 가열하였다. 12시간 후에, 튜브를 실온으로 냉각시키고, 추가의 수산화암모늄 (물 중 30 wt%, 4 mL)을 첨가하였다. 밀봉된 용기를 80℃에서 추가의 3시간 동안 계속해서 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, DCM (3 x 25 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-50% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 30분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물 (0.070 g, 61% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 435.2/437.2 [M+H]+.
제조예 47
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-에틸페닐)메탄올의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-에틸페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (0.370 g, 0.861 mmol), 1,4-디옥산 (4 mL), 및 수산화암모늄 (물 중 30 wt%, 6 mL)의 혼합물을 밀봉된 반응 용기에서 교반하였다. 혼합물을 80℃로 12시간 동안 가열하였다. 용기를 실온으로 냉각시키고, 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (3 x 25 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-100% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 30분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물 (0.240 g, 68% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 411.2 [M+H]+.
제조예 48
4-[[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-히드록시-메틸]벤조니트릴의 부분입체이성질체
4-[[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-히드록시-메틸]벤조니트릴의 부분입체이성질체 (0.765 g, 1.79 mmol)를 1,4-디옥산 (4 mL) 및 수산화암모늄 (물 중 28 wt%, 4 mL) 중에 밀봉된 반응 용기에서 용해시켰다. 반응물을 85℃로 가열하고 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 MeOH/MTBE 중 10% 7 N NH3의 9:1 혼합물의 60-75%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.64 g, 88% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 408 [M+H]+.
제조예 49
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디플루오로페닐)메탄올의 부분입체이성질체
반응 용기에서, [(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디플루오로페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (795.9 mg, 1.76 mmol)를 1,4-디옥산 (4 mL) 중에 용해시키고 수산화암모늄 (물 중 28 wt%, 6 mL)을 첨가하였다. 용기를 밀봉하고 혼합물을 85℃로 18시간 동안 교반하면서 가열하였다. 용기를 실온으로 냉각시키고 감압 하에 농축시켰다. 생성된 고체를 DCM 중 2% MeOH의 용액 중에 용해시키고 용액을 글래스 울의 플러그를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (694.5 mg, 79% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 419 [M+H] +.
제조예 50
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디클로로페닐)메탄올의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디클로로페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (245.0 mg, 0.520 mmol)를 수산화암모늄 (물 중 28 wt%, 2.0 mL) 및 1,4-디옥산 (2.0 mL) 중에 밀봉된 반응 용기에서 용해시켰다. 용기를 85℃로 가열하고 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10% MeOH/MTBE의 혼합물의 10-50%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (184.6 mg, 78% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 451/453 [M+H]+.
제조예 51
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(p-톨릴)메탄올의 부분입체이성질체
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(p-톨릴)메탄올의 부분입체이성질체 (144 mg, 0.346 mmol)를 수산화암모늄 (물 중 28 wt%, 4.0 mL) 및 1,4-디옥산 (4.0 mL) 중에 밀봉된 반응 용기에서 용해시켰다. 반응물을 85℃로 가열하고 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10% MeOH/MTBE의 혼합물의 25-75%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (119.4 mg, 87% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 397 [M+H] +.
제조예 52
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-플루오로페닐)메탄올의 부분입체이성질체
2개의 밀봉된 용기를 각각 [(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-플루오로페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (505 mg, 1.20 mmol), 수산화암모늄 (물 중 28wt%, 15 mL) 및 1,4-디옥산 (15 mL)으로 충전하였다. 혼합물을 85℃로 가열하고 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 수산화암모늄 (물 중 28 wt%, 8 mL)을 첨가하였다. 혼합물 둘 다를 75℃로 가열하고 60시간 동안 교반하였다. 용기 둘 다의 내용물을 합하고, 감압 하에 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 2% MeOH의 용액 중에 용해시키고 글래스 울의 플러그를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 DCM 중 5% MeOH의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (909.6 mg, 93% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 401 [M+H] +.
제조예 53
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(3,4-디클로로페닐)에탄올의 부분입체이성질체
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(3,4-디클로로페닐)에탄올의 부분입체이성질체 (150.0 mg, 0.309 mmol), 수산화암모늄 (물 중 28 wt%, 3.0 mL) 및 1,4-디옥산 (3.1 mL)을 밀봉된 반응 용기에서 용해시켰다. 반응물을 85℃로 가열하고 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10% MeOH/MTBE의 혼합물의 10-50%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (110.9 mg, 77% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 465/467 [M+H]+.
제조예 54
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(2-플루오로페닐)에탄올의 부분입체이성질체
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(2-플루오로페닐)에탄올의 부분입체이성질체 (0.48 g, 1.1 mmol)를 1,4-디옥산 (6 mL) 및 수산화암모늄 (물 중 28 wt%, 4 mL) 중에 밀봉된 반응 용기에서 용해시켰다. 용기를 85℃로 가열하고 22시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 MeOH/MTBE 중 10% 7 N NH3의 9:1 혼합물의 25-75%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.35 g, 75% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 415.0 [M+H] +.
제조예 55
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-[2-(트리플루오로메틸)페닐]에탄올의 부분입체이성질체
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-[2-(트리플루오로메틸)페닐]에탄올의 부분입체이성질체 (0.18 g, 0.37 mmol)를 1,4-디옥산 (3 mL) 및 수산화암모늄 (물 중 28 wt%, 1 mL) 중에 밀봉된 반응 용기에서 용해시켰다. 용기를 85℃로 가열하고 22시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 MeOH/MTBE 중 10% 7 N NH3의 9:1 혼합물의 50-75%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.14 g, 84% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 465.0 [M+H] +.
제조예 56
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에탄올의 부분입체이성질체
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에탄올 (0.33 g, 0.68 mmol)을 1,4-디옥산 (2 mL) 및 수산화암모늄 (물 중 28 wt%, 3 mL) 중에 밀봉된 반응 용기에서 용해시켰다. 용기를 85℃로 가열하고 내용물을 22시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 MeOH/MTBE 중 10% 7 N NH3의 9:1 혼합물의 25-75%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.152 g, 48% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 465.0 [M+H] +.
제조예 57
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-클로로-3-(시클로프로폭시)페닐]메탄올
59-mL 심리스 스테인레스 스틸 튜브형 반응기 (o.d. = 1/8")를 GC 오븐 내부에 두었다. 1:6 비 수산화암모늄 (물 중 28%)/디옥산으로 2.0 mL/분으로 40분에 걸쳐 플러싱하였다. N2의 배압 (1400-1500 psig)을 반응 시스템의 유출구에 적용하고 GC 오븐의 온도를 200℃로 설정하였다. 수산화암모늄 (물 중 28%)/디옥산의 1/6 혼합물 (350 mL) 중 (R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-클로로-3-(시클로프로폭시)페닐]메탄올의 부분입체이성질체 (35.3 g, 70.2 mmol)의 용액을 반응기를 통해 0.25 mL/분 (30분 체류 시간)에서 고-압력 1L 텔레다인 이스코™ 시린지 펌프를 사용하여 펌핑하였다. 이 공급 용액의 소비 후에, 반응기를 1:6 수산화암모늄 (물 중 28%):디옥산 (89 mL)으로 2.0 mL/분으로 펌핑하면서 플러싱하였다. 물 (1400 mL) 및 EtOAc (500 mL)를 첨가하였다. 생성된 유기 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (200 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 여과하고 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (34 g, 88.6% 순도)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 473.1/475.1 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 0.73-0.63 (m, 4H), 1.30 (s, 3H), 1.49 (s, 3H), 4.10 (dd, J= 1.6, 6.6 Hz, 1H), 4.66 (dd, J= 4.3, 6.4 Hz, 1H), 5.11 (dd, J= 1.8, 6.2 Hz, 1H), 5.33 (dd, J= 3.3, 6.3 Hz, 1H), 6.12 (d, J= 3.3 Hz, 1H), 6.30 (d, J= 4.1 Hz, 1H), 6.64 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.86-6.90 (m, 1H), 6.93 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.14 (s, 2H), 7.28 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H).
제조예 58
(1R)-1-[(3aR,4R,6S,6aR)-2,2-디메틸-4-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(4-클로로페닐)에탄올
N2 분위기 하에서의 고압 반응 용기에, 톨루엔 중 Al(CH3)3의 2.0 M 용액 (120 μL, 0.24 mmol)을 (1R)-1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(4-클로로페닐)에탄올 (0.30 mg, 0.666 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (0.154 g, 0.016 mmol), 및 건조 THF (8 mL)의 교반 혼합물에 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고 혼합물을 70℃로 가열하였다. 70℃에서의 6시간 후에, 용기를 실온으로 냉각시키고 1 N 수성 HCl (15 mL)을 조심스럽게 첨가하였다. 혼합물을 물 (15 mL)로 희석하고 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고; 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 1:1 EtOAc:헥산의 등용매 혼합물로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.270 g, 89% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 430.0/432.0 [M+H]+.
제조예 59
[(3aR,4R,6R,6aR)-2,2-디메틸-4-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로-2-플루오로-페닐)메탄올의 부분입체이성질체
N2 분위기 하에서의 고압 반응 용기에, 톨루엔 중 Al(CH3)3의 2.0 M 용액 (120 μL, 2.4 mmol)을 [(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로-2-플루오로-페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (0.271 mg, 0.597 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (0.138 mg, 0.119 mmol), 및 건조 THF (2.2 mL)의 교반 혼합물에 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고 혼합물을 80℃로 가열하였다. 80℃에서의 6시간 후에, 용기를 실온으로 냉각시키고 1 N 수성 HCl (10 mL)을 조심스럽게 첨가하였다. 물 (15 mL)로 희석하고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켜 표제 화합물 (0.266 g, 83% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 434.2/436.2 [M+H]+.
제조예 60
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-2,2-디메틸-4-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(3,4-디클로로페닐)에탄올의 부분입체이성질체
톨루엔 중 Al(CH3)3의 2.0 M 용액 (0.57 g, 1.41 mmol)을 1,4-디옥산 (4.4 mL) 중 1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(3,4-디클로로페닐)에탄올의 부분입체이성질체 (171.4 mg, 0.354 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (0.082 g, 0.071 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 8시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 포화 염화암모늄 (20 mL)으로 켄칭하였다. EtOAc (40 mL)를 첨가하고 수성 층을 EtOAc (4 x 30 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 수성 비카르보네이트 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 MeOH/MTBE 중 10% 7 N NH3의 9:1 혼합물의 25-40%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (125.9 mg, 77% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 451/453 [M+H]+.
제조예 61
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-2,2-디메틸-4-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올
N2 분위기 하에서의 고압 반응 용기에, 톨루엔 중 Al(CH3)3의 2.0 M 용액 (120 μL, 0.24 mmol)을 (R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올 (0.50 g, 1.15 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (0.266 g, 0.230 mmol), 및 건조 THF (13.8 mL)의 교반 혼합물에 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고 70℃로 가열하였다. 70℃에서의 6시간 후에, 실온으로 냉각시키고 1 N 수성 HCl (15 mL)로 조심스럽게 켄칭하였다. 물 (15 mL)로 희석하고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고; 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 1:1 EtOAc:헥산의 등용매 혼합물로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물 (0.50 g, 95% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 416.0/418.0 [M+H]+.
실시예 1
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(R)-(4-클로로페닐)-히드록시-메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올
Figure pct00017
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올 (6.78 g, 13.0 mmol)을 TFA (90 mL) 중에 0℃에서 용해시켰다. 물 (9 mL)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 잔류물을 MeOH (25 mL)에 녹였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 수성 수산화암모늄 (28 wt%)을 pH~10까지 적가하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 조 혼합물을 수득하였다. EtOAc 중 0-2%MeOH의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 EtOAc (50 mL) 중에 용해시키고 용매를 감압 하에 제거하였다. 생성된 밝은 유리질 고체를 물 (약 50 mL)에 첨가하고 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 백색 고체를 여과하고 물 (50 mL)로 세척하였다. 고체를 건조시켜 표제 화합물 (3.24 g, 66% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 377.05/379.05 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 4.01 (d, J= 4.0 Hz, 2H), 4.63 (dd, J= 5.3, 7.5 Hz, 1H), 4.81 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 5.01 (bs, 1H), 5.20 (bs, 1H), 5.91 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 6.59 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 6.69 (bs, 1H), 7.11 (bs, 2H), 7.32-7.45 (m, 5H), 8.05 (s, 1H).
대안적 제조예 A 실시예 1, 결정질 형태 I
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올 (15.38 g, 0.037 mol)을 2-프로판올 (50 mL) 중에 0℃에서 슬러리화하였다. 2-프로판올HCl 중 4.99 M의 용액 (200 mL, 1000 mmol) 및 물 (4 mL)을 첨가하고 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 2-프로판올 HCl 중 4.99 M의 추가의 용액 (25 mL)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 24시간 교반하였다. 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 가열하였다. 감압 하에 농축시키고 EtOH (50 mL) 및 물 (50 mL)을 생성된 잔류물에 첨가하였다. 0℃로 냉각시키고 수성 NH4OH (28% 수율)를 적가하여 pH를 ~10으로 조정하고 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 감압 하에 농축시켜 연황색 고체를 생성하였다. 물 (50 mL)을 황색 고체에 적가하고, 이어서 NH4OH (28%, 2 mL)를 첨가하여 pH를 9로 조정하고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하고, 필터 케이크를 물 (50 mL)로 헹구고, 진공 하에 2일 동안 건조시켜 표제 화합물 (13.37 g, 96% 수율)을 수득하였다.
대안적 제조예 B, 실시예 1
유동 화학
200-mL PTFE 반응기 (o.d. =1/8")를 GC 오븐 내부에 두었다. EtOAc (300 mL)로 플러싱하였다. GC 오븐의 온도를 55℃로 설정하였다. 1 L 텔레다인 ISCO™ 시린지 펌프를 사용하여, 5:2:2 EtOH:MeOH:EtOAc (1674 mL) 중 (R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올 (186.0 g, 01.57 mmol)의 용액을 8.5 mL/분으로 펌핑하고 T-혼합기에서 6 N 수성 HCl의 스트림으로 합하였다. 혼합물을 반응기를 통해 1.5 mL/분으로 연동 펌프로 펌핑하였다 (총 20분의 체류 시간이 주어짐). 이 공급 용액의 소비 후에, 반응기를 5:1 혼합물 EtOAc:6 N 수성 HCl (400 mL)로 10 mL/분으로 플러싱하였다. 수집된 용액을 감압 하에 농축시키고 생성된 수용액을 10℃로 빙수조에서 냉각시켰다. NH4OH (28%, 2 mL)를 적가하여 pH ~ 10으로 조정하고 혼합물을 10℃에서 35시간 동안 냉각시키면서 교반하였다. 생성된 고체를 수집하고, 물 (100 mL)로 헹구고, 진공 하에 2일 동안 35℃에서 건조시켜 무수 표제 화합물 (134.5 g; 89% 수율)을 수득하였다.
35 kV 및 50 mA에서 작동하는, CuKa 공급원 (λ = 1.54060 Å) 및 반텍(Vantec) 검출기가 장착된 브루커(Bruker) D4 인데버(Endeavor) X선 분말 회절계에서 결정질 고체의 X선 분말 회절 패턴을 수득하였다. 샘플을 0.0087˚ (2θ)의 스텝 크기 및 0.5초/스텝의 스캔 속도, 및 0.6 mm 발산, 5.28mm 고정 산란방지 슬릿, 및 9.5 mm 검출기 슬릿을 사용하여 4 내지 40˚ (2θ)를 스캔하였다. 건조 분말을 석영 샘플 홀더 상에 패킹하고 유리 슬라이드를 사용하여 평활 표면을 수득하였다. 임의의 주어진 결정 형태에 대해, 회절 피크의 상대 강도가 요인 예컨대 결정 형태 및 습성으로부터 생성된 바람직한 배향으로 인해 달라질 수 있다는 것이 결정학 기술분야에 널리 공지되어 있다. 바람직한 배향의 영향이 존재하는 경우, 피크 강도는 변경되지만, 다형체의 특징적인 피크 위치는 변하지 않는다. 예를 들어, 문헌 [The U. S. Pharmacopeia 35 - National Formulary 30 Chapter <941> Characterization of crystalline and partially crystalline solids by X-ray powder diffraction (XRPD) Official December 1, 2012-May 1, 2013]을 참조한다. 또한, 임의의 주어진 결정 형태에 대하여 각도 피크 위치가 약간 달라질 수 있다는 것이 또한 결정학 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 피크 위치는 샘플이 분석되는 온도 또는 습도에서의 변동, 샘플 변위, 또는 내부 표준의 존재 또는 부재로 인해 이동할 수 있다. 본 경우에, ± 0.2 (2θ)의 피크 위치 변동성은 나타낸 결정 형태의 명백한 확인을 방해하지 않으면서 이러한 잠재적 변동을 고려할 것이다. 결정 형태의 확인은 구별되는 피크 (˚ 2θ의 단위), 전형적으로 보다 우세한 피크의 임의의 고유한 조합에 기초하여 수행될 수 있다. 주위 온도 및 상대 습도에서 수집된 결정 형태 회절 패턴을 8.84 및 26.76 도 2-세타에서의 NIST 675 표준 피크에 기초하여 조정하였다.
결정질 형태 1
대안적 제조예 A, 실시예 1, 형태 I의 제조된 샘플은 CuKa 방사선을 사용하는 X선 회절 패턴에 의해 하기 표 1에 기재된 바와 같은 회절 피크 (2-세타 값)를 갖는 것으로 특징화되었다. 구체적으로, 패턴은 25.1˚에서의 피크를 17.1˚, 13.6˚, 20.5˚, 24.0˚, 및 14.5˚로 이루어진 군으로부터 선택된 피크 중 하나 이상과 조합하여 0.2도의 회절 각에 대한 허용오차로 함유한다.
표 1 결정질 실시예 1, 형태 1의 X선 분말 회절 피크
Figure pct00018
실시예 2
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5[(R)-히드록시(페닐)메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올
Figure pct00019
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-페닐-메탄올 (0.293 g, 0.766 mmol), 1,4-디옥산 중 4 N HCl (9.6 mL), 및 물 (3 방울)의 용액을 실온에서 교반하였다. 실온에서의 45분 후에, 용액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 50-100% 아세톤의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 25분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물 (0.195 g, 74% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z 343.0 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 4.04-4.06 (m, 2H), 4.55-4.67 (m, 1H), 4.81 (t, J= 3.5 Hz, 1H), 4.95 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 5.19 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 5.92 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 6.60 (t, J= 3.4 Hz, 2H), 7.11-7.13 (m, 2H), 7.24 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.32-7.35 (m, 3H), 7.42 (d, J= 7.3 Hz, 2H), 8.06 (s, 1H).
실시예 3
(2R,3R,4S,5S)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(1R)-1-(4-클로로페닐)-1-히드록시-에틸]테트라히드로푸란-3,4-디올
Figure pct00020
(1R)-1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(4-클로로페닐)에탄올 (10.3 g, 23.9 mmol)을 2-프로판올 (100 mL) 중에 용해시키고 0℃에서 교반하였다. 2-프로판올 중 HCl의 4.99 M 용액 (200 mL, 1000 mmol) 및 물 (2 mL)을 적가하고 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 EtOH (50 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 수성 수산화암모늄 (28 wt% 수율)을 pH ~ 10까지 적가하였다. 감압 하에 농축시켜 백색 유리질 고체를 수득하였다. 고체를 물 (약 40 mL)에 첨가하고 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 여과하고 생성된 백색 고체를 수집하고, 물 (50 mL)로 세척하고 공기-건조시켜 표제 화합물 (9.0 g, 96% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 391.10/393.10 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 1.40 (s, 3H), 3.65-3.67 (m, 1H), 4.13 (s, 1H), 4.61-4.68 (m, 1H), 4.78 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 5.12 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 5.81 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.59 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.10 (bs, 1H), 7.19 (bs, 2H), 7.32 (d, J= 3.3 Hz, 1H), 7.40 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.58 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 8.07 (s, 1H).
실시예 4
Figure pct00021
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(R)-[4-클로로-3-(시클로프로폭시)페닐]-히드록시-메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
15-mL 테플론 코팅된 SS 반응기 (o.d. =1/8")를 베이퍼텍(Vapourtec) E-시리즈 장비에 두었다. 배압 조절제 (4-5 bar)를 반응 시스템의 유출구에 적용하고 온도를 설정하고 온도를 82℃로 설정하였다. EtOH (317 mL) 중 (R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-클로로-3-(시클로프로폭시)페닐]메탄올의 부분입체이성질체 (32.1 g, 60.1 mmol)의 용액을 1.1 mL/분으로 펌핑하고 이 용액을 T-혼합기에서 4 N 수성 HCl 용액의 스트림과 합하고 이 혼합물을 0.288 mL/분으로 반응기를 통해 (총 10분의 체류 시간이 주어짐) 82℃에서 펌핑하였다. 이 공급 용액의 소비 후에, 반응기를 혼합물 EtOH/4 N 수성 HCl (400 mL)로 0.29 mL/분으로 플러싱하였다. 조 반응 혼합물을 활성탄, 다르코(Darco) KB® (100 메쉬; 습윤 분말, 13 g)로 처리하고 규조토의 짧은 패드를 통해 여과하였다. 처리를 활성탄, 다르코 KB® (100 메쉬; 습윤 분말, 26 g)로 반복하고 규조토를 통해 여과하였다. 수집된 용액의 유기 용매를 진공 하에 ¼ 부피까지 감소시키고, 물 (150 mL) 및 수성 NH4OH (28%, 40 mL)를 적가하여 pH를 ~ 10으로 조정하고, EtOAc (2 x 300 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물 (17 g)을 수득하였다. 추가적으로, 규조토 패드 둘 다를 MeOH (1000 mL)로 헹구고 유기 여과 세척물을 감압 하에 제거하여 추가의 잔류물 (7.89 g)을 수득하였다. 1:10 MeOH:EtOAc (300 mL) 중 잔류물 둘 다를 합하고 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물 (17.45 g; 67% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 433.0/435.0 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 0.73-0.81 (m, 4H), 3.77-3.83 (m, 1H), 4.00 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 4.04-4.09 (m, 1H), 4.67-4.73 (m, 1H), 4.81 (t, J= 4.0 Hz, 1H), 5.04 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 5.21 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 5.91 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 6.58 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.65 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 7.01 (dd, J= 1.5, 8.2 Hz, 1H), 7.10 (bs, 2H), 7.35 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.43 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H).
실시예 5
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[히드록시-[4-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00022
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-[4-(트리플루오로메틸)페닐]메탄올의 부분입체이성질체 (13.5 g, 27.0 mmol)를 2-프로판올 (50 mL) 중에 용해시키고 0℃에서 교반하였다. 2-프로판올 중 HCl의 4.99 M 용액 (200 mL, 0.998 mol) 및 물 (2 mL)을 혼합물에 적가하고 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 EtOH (50 mL) 중에 용해시키고 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 수성 수산화암모늄 (28 wt%)을 pH ~ 10까지 적가하고 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 백색 유리질 고체를 수득하였다. 헥산 중 80-100% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 발포체를 수득하였다. 발포체를 물 (300 mL) 중에 현탁시키고 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 백색 고체를 여과하고, 필터 케이크를 물 (50 mL)로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (7.85 g, 71% 수율)을 부분입체이성질체로 수득하였다. ES/MS m/z 411.10 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 4.02-4.07 (m, 2H), 4.65 (td, J= 7.4, 5.1 Hz, 1H), 4.92 (t, J= 3.6 Hz, 1H), 5.02 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 5.22 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 5.92 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.60 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.81 (d, J= 3.3 Hz, H), 7.11 (s, 2H), 7.32 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 7.71-7.63 (m, 4H), 8.06 (s, 1H).
실시예 6
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(3-클로로페닐)-히드록시-메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00023
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-클로로페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (0.052 g, 0.124 mmol), 1,4-디옥산 중 4 N HCl (5 mL) 및 MeOH (5 mL)를 혼합하였다. 혼합물을 실온에서 교반하였다. 실온에서의 1시간 후에, 용액을 N2의 스트림 하에 농축시켜 용매를 제거하였다. 물 (5 mL) 중에 용해시키고 EtOAc (2 mL)로 추출하였다. 1 N 수성 NaOH를 용액이 염기성일 때까지 첨가하고, DCM (4 x 3 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 헥산 중 50-100% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.023 g, 49% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 377.0/379.0 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 3.37 (bs, 1H), 4.04-4.08 (m, 2H), 4.63-4.69(m, 1H), 4.85-4.88 (m, 1H), 5.07 (d, J=3.6Hz,1H), 5.26 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 5.96 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.64 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 6.76-6.74 (m, 1H), 7.15-7.18 (bs, 1H), 7.33-7.42 (m, 4H), 7.50-7.52 (m, 1H), 8.09 (s, 1H).
실시예 7
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(4-클로로-2-플루오로-페닐)-히드록시-메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올 히드로클로라이드의 부분입체이성질체
Figure pct00024
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로-2-플루오로-페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (0.067 g, 0.154 mmol), 1,4-디옥산 중 4 N HCl (5.0 mL) 및 MeOH (5.0 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 실온에서의 1시간 후에, 용액을 N2의 스트림 하에 농축시켜 용매를 제거하였다. 생성된 잔류물을 ACN으로 연화처리하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.046 g, 69% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 395/397 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 3.97-4.00 (m, 1H), 4.09-4.11 (m, 1H), 4.44-4.49 (m, 1H), 4.92-4.96 (m, 1H), 6.06-6.09 (m, 1H), 6.98-7.00 (m, 1H), 7.26-7.28 (m, 1H), 7.32-7.35 (m, 1H), 7.51-7.56 (m, 1H), 7.65-7.66 (m, 1H), 8.35 (s, 1H),
실시예 8
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(2-플루오로페닐)-히드록시-메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00025
파르 용기에서, (2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(4-클로로-2-플루오로-페닐)-히드록시-메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올 히드로클로라이드의 부분입체이성질체 (0.036 g, 0.083 mmol), 10% Pd/C (0.010 mg, 0.009 mmol) 및 EtOH (2.0 mL)의 혼합물을 감압 하에 배기시켰다. 용기를 수소 기체로 10 psi로 충전하였다. 24시간 동안 10 psi에서의 교반 후에, 트리에틸아민 (0.25 mg, 0.25 mmol) 및 추가의 10% Pd/C (0.010 mg, 0.009 mmol)를 첨가하였다. 용기를 배기시키고, 10 psi로 수소로 충전하였다. 실온에서 추가의 24시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 5% MeOH/10 mM 암모늄 비카르보네이트의 혼합물 중 5-45% ACN의 구배로 용리하는 역상 고압 크로마토그래피 (페노메넥스® 제미니®-NX)를 통해, pH ~ 10, 20분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.010 g, 33% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 361 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ4.01-4.03 (m, 2H), 4.63-4.64 (m, 1H), 4.97-5.01 (m, 1H), 5.19-5.21 (m, 1H), 5.89-5.93 (m, 1H), 6.56-6.57 (m, 1H), 6.85-6.89 (m, 1H), 7.31-7.32 (m, 5H), 7.60-7.61 (m, 1H), 8.02 (s, 1H).
실시예 9
((2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(3-에틸페닐)-히드록시-메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올 히드로클로라이드의 부분입체이성질체
Figure pct00026
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3-에틸페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (0.240 g, 0.585 mmol), 1,4-디옥산 중 4 N HCl (5.0 mL), 및 MeOH (5.0 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 실온에서의 1시간 후에, 용액을 N2의 스트림 하에 농축시켜 용매를 제거하였다. 생성된 잔류물을 ACN으로 연화처리하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.160 g, 67% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 371 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.12 (t, J= 7.6 Hz, 3H), 2.51-2.57 (q, J= 7.6Hz, 2H), 3.98-4.02 (m, 1H), 4.08-4.11 (m, 1H), 4.546-4.50 (m, 1H), 4.69-4.72 (m, 1H), 6.06 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 6.97 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.01-7.06 (m, 1H), 7.14-7.27 (m, 4H), 7.68 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H).
실시예 10
4-[[(2R,3S,4R,5R)-5-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-3,4-디히드록시-테트라히드로푸란-2-일]-히드록시-메틸]벤조니트릴의 부분입체이성질체
Figure pct00027
TFA (3.5 mL) 및 물 (0.5 mL)을 혼합하고 0℃로 냉각시켰다. 이를 4-[[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-히드록시-메틸]벤조니트릴의 부분입체이성질체 (0.50 g, 1.24 mmol)에 첨가하고 0℃에서 교반하였다. 1시간 후에, 감압 하에 농축시키고 생성된 고체를 MeOH 중에 용해시켰다. 실리사이클(SILICYCLE)® Si-카르보네이트 칼럼 (70 mL, 5 g)을 통해 MeOH를 사용하여 용리하였다. 적절한 분획을 수집하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.47 g, 100% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 368 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO)δ 3.33-3.41 (m, 2H), 4.04 (d, J= 4.2 Hz, 2H), 4.61-4.65 (m, 1H), 4.91 (d, J= 4.3 Hz, 1H), 5.06 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 5.22-5.26 (m, 1H), 5.94 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.65 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.71-6.79 (m, 1H), 7.31-7.35 (m, 2H), 7.39 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.80 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 8.10 (s, 1H).
실시예 11
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(3,4-디플루오로페닐)-히드록시-메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00028
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디플루오로페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (694 mg, 1.66 mmol), 1,4-디옥산 (6 mL), 물 (2 mL), 1,4-디옥산 중 4 M HCl (3 mL, 12 mmol)을 0℃에서 혼합하였다. 혼합물을 18시간 동안 교반하고 이어서 추가의 1,4-디옥산 중 4 M HCl (4 mL, 16 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 추가 18시간 동안 실온에서 교반하였다. HCl (물 중 31 wt%, 0.5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 냉각시키고, 포화 NaHCO3 용액을 pH ~ 7이 달성될 때까지 천천히 첨가하였다. DCM 중 2-4% MeOH로 추출하였다. 유기 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 77% DCM, 15% EtOAc, 및 7% MeOH의 등용매 혼합물로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (408 mg, 64% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 379 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 4.02-4.04 (m, 2H), 4.63 (td, J= 7.3, 5.2 Hz, 1H), 4.82 (t, J= 3.9 Hz, 1H), 5.03 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 5.22 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 5.92 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.61 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.11 (s, 2H), 7.27 (dd, J= 4.0, 8.2 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.39-7.46 (m, 2H), 8.06 (s, 1H).
실시예 12
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(3,4-디클로로페닐)-히드록시-메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00029
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(3,4-디클로로페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (180.0 mg, 0.398 mmol), 물 (0.20 mL) 및 TFA (2.0 mL)를 실온에서 혼합하였다. 45분 후에, 혼합물을 감압 하에 농축시키고 생성된 잔류물을 MeOH 중에 용해시켰다. 혼합물을 실리사이클® Si-카르보네이트 칼럼 (70 mL, 5 g)을 통해 MeOH를 사용하여 용리하였다. 적절한 분획을 수집하고 진공 하에 농축시켜 조 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 CHCl3 중 10% NH3/MeOH의 혼합물의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (98.3 mg, 60% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 411/413 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 4.01-4.03 (m, 2H), 4.62 (td, J= 7.3, 5.0 Hz, 1H), 4.84 (t, J= 4.0 Hz, 1H), 5.05 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 5.22 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 5.92 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.60 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.11 (s, 2H), 7.34 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.41 (dd, J= 1.8, 8.4 Hz, 1H), 7.59 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H).
실시예 13
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[히드록시(p-톨릴)메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00030
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(p-톨릴)메탄올의 부분입체이성질체 (115 mg, 0.290 mmol), 물 (0.15 mL) 및 TFA (1.5 mL)를 실온에서 혼합하였다. 90분 후에, 감압 하에 농축시키고 생성된 고체를 MeOH 중에 용해시켰다. 실리사이클® Si-카르보네이트 칼럼 (70 mL, 5 g)을 통해 MeOH를 사용하여 용리하였다. 적절한 분획을 수집하고 감압 하에 증발 건조시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 DCM 중 10% 7 N NH3/MeOH의 혼합물의 5-15%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (50.2 mg, 49% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 357 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 2.29 (s, H), 4.62-4.67 (m, 1H), 4.77 (t, J= 3.3 Hz, 1H), 4.93 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 5.18 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 5.90 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 6.58 (dd, J= 3.4, 12.3 Hz, 2H), 7.11-7.15 (m, 3H), 7.29-7.33 (m, 3H), 8.06 (s, 1H).
실시예 14
(2R,3R,4S,5R)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[(4-플루오로페닐)-히드록시-메틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00031
[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-플루오로페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (158 mg, 0.394 mmol), 1,4-디옥산 (3 mL), 물 (0.75 mL) 및 1,4-디옥산 중 HCl의 4 M 용액 (3 mL, 12 mmol)을 혼합하고 혼합물을 0℃에서 5분 동안, 이어서 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 감압 하에 농축시키고, 이어서 EtOAc (30 mL)를 첨가하고 다시 농축시켰다. EtOAc를 첨가하고 농축시키는 이 절차를 2회 더 반복하였다. 생성된 잔류물을 DCM 중 7% MeOH의 등용매 혼합물로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (103.5 mg, 73% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 361 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 4.03 (dd, J= 4.3, 10.6 Hz, 2H), 4.63 (td, J= 7.3, 5.2 Hz, 1H), 4.81 (t, J= 3.7 Hz, 1H), 4.99 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 5.20 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 5.92 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.61 (dd, J= 3.6, 9.5 Hz, 2H), 7.11-7.17 (m, 4H), 7.32 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.45 (dd, J= 5.8, 8.5 Hz, 2H), 8.06 (s, 1H).
실시예 15
(2R,3R,4S,5S)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[1-(4-클로로페닐)-1-히드록시-프로필]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00032
[(3aR,4R,6S,6aS)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메타논의 부분입체이성질체 (426.9 mg, 0.983 mmol)를 THF (5 mL) 중에 용해시키고 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. THF 중 에틸마그네슘 브로마이드의 1.0 M 용액 (1.97 mL, 1.97 mmol)을 1분에 걸쳐 첨가하였다. 15분 동안 교반하고 실온으로 가온하였다. 1시간 후에, 1 N 수성 HCl (2.48 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 반응 혼합물을 DCM (10 mL)으로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 DCM (5 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 7 M NH3/MeOH (10 mL, 70 mmol) 중에 용해시키고 마이크로웨이브 반응기 내에서 100℃에서 6시간 동안 가열하였다. 생성된 혼합물을 N2 스트림 하에 50℃에서 증발시켰다. 생성된 잔류물을 1,4-디옥산 중 4 N HCl (1.29 mL, 49.2 mmol)에 용해시키고 물 (35μL, 1.97 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 5% MeOH/10 mM 암모늄 비카르보네이트, pH ~ 10의 혼합물 중 13-48% ACN의 구배로 용리하는 역상 고압 액체 크로마토그래피 (페노메넥스® 제미니®-NX)을 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (97.8 mg, 25% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 405.1/407.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.54 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 1.75-1.92 (m, 2H), 3.63 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.22 (s, 1H), 4.69 (dd, J= 5.3, 7.6 Hz, 1H), 4.78-4.82 (m, 1H), 5.14-5.20 (m, 1H), 5.75 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.59 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.31 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.42 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 7.53-7.56 (m, 2H), 8.08 (s, 1H).
실시예 16
(2R,3R,4S,5S)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[1-(3,4-디클로로페닐)-1-히드록시-에틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00033
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(3,4-디클로로페닐)에탄올의 부분입체이성질체 (101.2 mg, 0.217 mmol), 물 (0.1 mL) 및 TFA (1.0 mL)를 실온에서 합하였다. 1시간 교반한 후에, 감압 하에 농축시키고 생성된 고체를 MeOH 중에 용해시켰다. 실리사이클® Si-카르보네이트 칼럼 (70 mL, 5 g)을 통해 MeOH를 사용하여 용리하였다. 적절한 분획을 수집하여 잔류물을 수득하였다. 생성된 잔류물을 CHCl3 중 MeOH/MeOH/클로로포름 (부피 기준, 1:1:2) 중 10% 7 N NH3의 혼합물의 5-30%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (81.7 mg, 88% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 426/428 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ1.42 (s, 3H), 3.66 (t, J= 4.4 Hz, 1H), 4.15 (s, 1H), 4.56-4.65 (m, 1H), 4.85 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 5.14 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 5.83 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.61 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.20 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.33 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.55 (dd, J= 2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H).
실시예 17
(2R,3R,4S,5S)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[1-(2-플루오로페닐)-1-히드록시-에틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00034
TFA (4 mL) 및 물 (1 mL)을 혼합하고 0℃로 냉각시켰다. 이를 1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(2-플루오로페닐)에탄올의 부분입체이성질체 (0.341 g, 0.823 mmol)에 첨가하고 0℃에서 교반하였다. 30분 후에, 감압 하에 농축시키고 생성된 고체를 MeOH 중에 용해시켰다. 실리사이클® Si-카르보네이트 칼럼 (70 mL, 5 g)을 통해 MeOH를 사용하여 용리하였다. 적절한 분획을 수집하고 DCM 중 10% 7 N NH3/MeOH의 혼합물의 0-100%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 추가로 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.271 g, 88% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 375.0 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.49 (s, 3H), 3.33 (s, 2H), 3.64 (t, J= 4.4 Hz, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.68 (td, J= 7.5, 5.2 Hz, 1H), 4.80 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 5.13 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 5.83 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.61 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.15-7.27 (m, 4H), 7.31-7.35 (m, 3H), 7.81 (td, J= 8.0, 1.6 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H).
실시예 18
(2R,3R,4S,5S)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[1-히드록시-1-[2-(트리플루오로메틸)페닐]에틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00035
TFA (3 mL) 및 물 (1 mL)을 혼합하고 0℃로 냉각시켰다. 이 혼합물을 1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-[2-(트리플루오로메틸)페닐]에탄올의 부분입체이성질체 (0.137 g, 0.295 mmol)에 첨가하고 0℃에서 교반하였다. 20분 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고 생성된 고체를 MeOH 중에 용해시켰다. 용액을 실리사이클® Si-카르보네이트 칼럼 (70 mL, 5 g)을 통해 MeOH를 사용하여 용리하였다. 적절한 분획을 수집하고 DCM 중 10% 7 N NH3/MeOH의 혼합물의 0-100%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 추가로 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.109 g, 87% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 425.0 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.52 (s, 3H), 3.76 (t, J= 4.4 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.64 (dd, J= 7.6, 12.8 Hz, 1H), 4.80 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 5.14 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 5.86 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.61 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 7.17 (s, 2H), 7.38 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.48 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.65 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H).
실시예 19
(2R,3R,4S,5S)-2-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-5-[1-히드록시-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에틸]테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00036
TFA (2 mL) 및 물 (0.5 mL)을 혼합하고 0℃로 냉각시켰다. 이를 1-[(3aR,4R,6S,6aR)-4-(4-아미노피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에탄올의 부분입체이성질체 (0.136 g, 0.292 mmol)에 첨가하고 0℃에서 교반하였다. 45분 후에, 감압 하에 농축시키고 생성된 고체를 MeOH 중에 용해시켰다. 실리사이클® Si-카르보네이트 칼럼 (70 mL, 5 g)을 통해 MeOH를 사용하여 용리하였다. 적절한 분획을 수집하고 DCM 중 10% 7 N NH3/MeOH의 혼합물의 10-25%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 추가로 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.095 g, 76% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 425.0 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.44 (s, 3H), 3.66 (t, J= 4.3 Hz, 1H), 4.20 (s, 1H), 4.67 (td, J= 7.5, 5.2 Hz, 1H), 4.81 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 5.14 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 5.83 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.61 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.21 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.33 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.81 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 8.09 (s, 1H).
실시예 20
(2S,3S,4R,5R)-2-[(1R)-(1-(4-클로로페닐)-1-히드록시-에틸]-5-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)테트라히드로푸란-3,4-디올
Figure pct00037
(1R)-1-[(3aR,4R,6S,6aR)-2,2-디메틸-4-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(4-클로로페닐)에탄올 (0.265 g, 0.616 mmol), 1,4-디옥산 중 4 N 수성 HCl (10 mL), 및 MeOH (10 mL)의 혼합물을 실온에서 교반하였다. 실온에서의 1시간 후에, 용액을 N2의 스트림 하에 농축시켜 용매를 제거하였다. 물 (30 mL)을 첨가하고, 포화 수성 NaHCO3으로 pH ~ 7로 중화시키고, DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-50% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 35분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물 (0.180 g, 75% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 390.02/392.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ1.39 (s, 3H), 2.46-2.48 (m, 5H), 3.30 (s, 1H), 2.65 (s, 3H), 3.68 (t, J= 4.3 Hz, 1H), 4.08 (s, 1H), 4.51-4.54 (m, 1H), 4.84 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 5.15-5.17 (m, 1H), 6.07 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 6.18 (s, 1H), 6.76 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.37-7.39 (m, 2H), 7.53-7.56 (m, 2H), 7.79 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H).
실시예 21
(2R,3S,4R,5R)-2-[(4-클로로-2-플루오로-페닐)-히드록시-메틸]-5-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00038
[(3aR,4R,6R,6aR)-2,2-디메틸-4-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로-2-플루오로-페닐)메탄올의 부분입체이성질체 (0.220 g, 0.507 mmol), 1,4-디옥산 중 4 N HCl (10.0 mL), 및 MeOH (10.0 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 실온에서의 1시간 후에, 용액을 N2의 스트림 하에 농축시켜 용매를 제거하였다. 잔류물을 DCM (25 mL), 및 물 (25 mL) 사이에 분배하였다. 포화 수성 NaHCO3으로 pH ~ 7로 중화시키고, DCM (4x20 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-100% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 5분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.192 g, 96% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 394.2/396.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 2.63 (s, 3H), 3.28-3.32 (m, 2H), 3.97-4.02 (m, 1H), 4.08-4.10 (m, 1H), 4.54-4.57 (m, 1H), 4.94-4.97 (m, 1H), 5.13-5.16 (m, 1H), 5.26-5.30 (m, 1H), 6.14 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 6.23 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.26 (dd, J= 1.9, 8.3 Hz, 1H), 7.33 (dd, J= 2.0, 10.2 Hz, 1H), 7.54 (t, J= 8.2 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 8.61 (s, 1H).
실시예 22
((2R,3S,4R,5R)-2-[(2-플루오로페닐)-히드록시-메틸]-5-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00039
파르 용기에서, (2R,3S,4R,5R)-2-[(4-클로로-2-플루오로-페닐)-히드록시-메틸]-5-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체 (0.090 g, 0.228 mmol), 10% Pd/C (0.025 g), 트리에틸아민 (0.069 g, 0.68 mmol), 및 EtOH (4.0 mL)의 혼합물을 감압 하에 배기시켰다. 용기를 수소 기체로 10 psi로 충전하고, 생성된 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-100% EtOAc의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 5분에 걸쳐 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (0.082 g, 85% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z 360.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 2.63 (s, 3H), 4.01-4.04 (m, 1H), 4.08-4.11 (m, 1H), 4.56-4.58 (m, 1H), 4.97-5.00 (m, 1H), 5.10 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 5.26 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 6.13-6.18 (m, 2H), 6.75 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.12-7.14 (m, 1H), 7.18-7.21 (m, 1H), 7.29-7.31 (m, 1H), 7.56-7.57 (m, 1H), 7.71-7.72 (m, 1H), 8.62 (s, 1H).
실시예 23
(2S,3S,4R,5R)-2-[1-(3,4-디클로로페닐)-1-히드록시-에틸]-5-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)테트라히드로푸란-3,4-디올의 부분입체이성질체
Figure pct00040
1-[(3aR,4R,6S,6aR)-2,2-디메틸-4-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-1-(3,4-디클로로페닐)에탄올의 부분입체이성질체 (122.0 mg, 0.26 mmol), 물 (0.15 mL) 및 TFA (1.5 mL)를 실온에서 혼합하였다. 1시간 후에, 감압 하에 농축시키고 생성된 고체를 MeOH 중에 용해시켰다. 실리사이클® Si-카르보네이트 칼럼 (70 mL, 5 g)을 통해 MeOH를 사용하여 용리하였다. 적절한 분획을 수집하고 감압 하에 농축 건조시켜 잔류물을 수득하였다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10% MeOH/MTBE의 혼합물의 10-50%의 구배로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체 (62.8 mg, 56% 수율)로 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 426/428 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ1.45 (s, 3H), 2.69 (s, 3H), 3.73 (t, J= 4.5 Hz, 1H), 4.14 (s, 1H), 4.52 (dd, J= 7.4, 12.7 Hz, 1H), 4.92 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 5.19 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 6.12 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.32 (s, 1H), 6.80 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.55 (dd, J= 2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.63 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.80-7.81 (m, 2H), 8.68 (s, 1H).
실시예 24 및 실시예 25
(2R,3S,4R,5R)-2-[(R)-히드록시(페닐)메틸]-5-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일-테트라히드로푸란-3,4-디올
Figure pct00041
(2R,3S,4R,5R)-2-[(R)-(4-클로로페닐)-히드록시-메틸]-5-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일-테트라히드로푸란-3,4-디올
Figure pct00042
(R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-클로로피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2,2-디메틸-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올 (200.0 mg, 0.264 mmol)을 EtOAc (30 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 탈레스나노™ H-큐브(THALESNANO™ H-Cube) 유동 시스템으로 실온에서 수소화시켰다 (2000 kPa/분당 1 mL/70 mm Pd/Al2O3 카트리지). 생성된 용액을 감압 하에 증발시키고, 생성된 잔류물을 EtOAc (20 mL) 중에 용해시키고, 수소화를 새로운 Pd/Al2O3 카트리지로 반복하였다. 생성된 용액을 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 1,4-디옥산 중 4 N HCl (5.73 mL, 22.9 mmol) 중에 용해시키고 물 (3 방울)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 45분 동안 교반하고 감압 하에 증발시켰다. 생성된 잔류물을 5% MeOH/10 mM 암모늄 비카르보네이트, pH ~ 10의 혼합물 중 5-38% ACN의 구배로 용리하는 역상 고압 크로마토그래피 (페노메넥스® 제미니®-NX)을 통해 정제하여 실시예 23 및 실시예 24를 수득하였다.
실시예 24 (2R,3S,4R,5R)-2-[(R)-히드록시(페닐)메틸]-5-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일-테트라히드로푸란-3,4-디올 (15.0 mg, 9.11% 수율). ES/MS m/z 328.1 [M+H)]. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 3.18 (d, J= 5.3 Hz, 3H), 4.05-4.15 (m, 3H), 4.62 (dd, J= 5.2, 7.5 Hz, 1H), 4.80 (t, J= 4.2 Hz, 1H), 5.10 (s, 1H), 5.22-5.30 (m, 1H), 6.22 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.32 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 7.41 (d, J= 7.4 Hz, 2H), 7.87 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 8.81 (s, 1H), 9.04 (s, 1H).
실시예 25 (2R,3S,4R,5R)-2-[(R)-(4-클로로페닐)-히드록시-메틸]-5-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일-테트라히드로푸란-3,4-디올 (51.9 mg, 28.8% 수율). ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 362.1/364.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO)δ3.18 (d, J= 5.3 Hz, 3H), 4.01 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.08-4.14 (m, 2H), 4.61 (dd, J= 7.2, 12.4 Hz, 1H), 4.81 (t, J= 4.7 Hz, 1H), 5.14 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 5.31 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 8.81 (s, 1H), 6.06 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 6.21 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.35-7.43 (m, 4H), 7.88 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 9.04 (s, 1H).
실시예 26
(2R,3S,4R,5R)-2-[(R)-(4-클로로페닐)-히드록시-메틸]-5-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)테트라히드로푸란-3,4-디올
Figure pct00043
용액 (R)-[(3aR,4R,6R,6aR)-2,2-디메틸-4-(4-메틸피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-3a,4,6,6a-테트라히드로푸로[3,4-d][1,3]디옥솔-6-일]-(4-클로로페닐)메탄올 (0.500 g, 1.08 mmol), 1,4-디옥산 중 4 N HCl (50 mL), 및 MeOH (50 mL)를 실온에서 교반하였다. 실온에서의 1시간 후에, 용액을 N2의 스트림 하에 농축시켜 용매를 제거하였다. 잔류물에 DCM (20 mL) 및 물 (20 mL)을 첨가하였다. DCM으로 추출하고, 폐기하였다. 수성 상의 pH를 포화 수성 비카르보네이트로 pH ~ 10으로 조정하고, DCM (4 x 20 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EtOAc 중에 용해시키고, 용액을 실리카 겔의 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 용리하였다. 여과물을 감압 하에 제거하여 표제 화합물 (0.393 g, 97% 수율)을 수득하였다. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 376.2/378.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ2.63 (s, 3H), 3.95-3.97 (m, 1H), 4.05-4.08 (m, 1H), 4.53-4.59 (m, 1H), 4.75-4.79 (m, 1H), 5.09 (d, 1H,J=4.4Hz), 5.25 (d, 1H,J=7.0 Hz), 6.07-6.13 (m, 2H), 6.75 (d, 1H,J=3.6Hz), 7.31-7.34 (m, 2H), 7.36-7.40 (m, 2H), 7.76 (s, 1H,J=3.6 Hz), 8.62 (s, 1H).
하기 검정의 결과는 본원에 예시된 화합물이 PRMT5 억제제로서 유용하고 암을 치료하는 데 유용할 수 있다는 증거를 입증하였다.
PRMT5/MEP50 SPA 검정
본 검정의 목적은 인간 히스톤 H4의 N-말단 서열로부터 유래된 기질 펩티드로의 방사성표지된 메틸-3H의 전달에 의해 나타내어진, PRMT5/MEP50 복합체의 촉매 활성을 억제함으로써 시험관내에서 PRMT5의 효소 활성을 억제하는 시험 화합물의 능력을 측정하는 것이다.
PRMT5/MEP50 효소 복합체를 바큘로바이러스/Sf9 시스템을 사용하여 발현하고 항-FLAG 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다 (본질적으로 문헌 [Stephen Antonysamy, Zahid Bonday, Robert M. Campbell, Brandon Doyle, Zhanna Druzina, Tarun Gheyi, Bomie Han, Louis N. Jungheim, Yuewei Qian, Charles Rauch, Marijane Russell, J. Michael Sauder, Stephen R. Wasserman, Kenneth Weichert, Francis S. Willard, Aiping Zhang, and Spencer Emtage; Crystal structure of the human PRMT5:MEP50 complex, Proceedings of the National Academy of Sciences, 2012, Volume 109, pages 17960-17965]에 의해 제조예에 기재된 바와 같음). 정제된 효소를 검정 완충제 (50 mM 트리즈마(TRIZMA)® 사전설정 pH 8.5, 1 mM DTT, 0.005% 트윈(TWEEN)® 80 0.01% HSA) 중에서 6.67 nM의 작업 스톡으로 희석하였다.
효소 (15 μL/웰)를 384-웰 검정 플레이트 (코닝(CORNING)® cat. # 3706)에 첨가하였다. 10 mM DMSO 원액으로부터 시험 화합물을 플레이트에 검정 완충제 중의 연속 희석물로서 첨가하여 50.0 μM 내지 25 nM 범위의 최종 시험 농도를 달성하였다. 검정 완충제 중 하기를 함유하는 반응 믹스를 생성하였다: 1 μM 히스톤 H4 비오티닐화 펩티드 기질, ABI 431 펩티드를 사용하여 패스트목(FastMoc) 화학에 의해 제조된 H-SGRGKGGKGLGKGGAKRHRKVLRDK-비오틴 (서열식별번호: 1), 및 4 μM 3H-SAM; 15 Ci/mmol, 0.366 mCi/mL, 37 μM, 퍼킨-엘머(PERKIN-ELMER)® cat. # NET155000MC. 각각의 플레이트 웰에 펩티드/ 3H-SAM 반응 믹스의 5 μL를 첨가하여, 5 nM 효소, 1 μM 3H-SAM, 250 nM 펩티드 및 0.5% DMSO를 포함하는 50 μM 최대 시험 화합물 농축물의 최종 검정 조건을 20 μL의 최종 부피로 수득하였다. 검정을 2시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 반응을 구아니딘 HCl (5 M, 20 μL, 시그마(Sigma) cat. # G3272)의 첨가로 중단시켰다.
스트렙타비딘 YSI SPA 섬광 비드 (퍼킨-엘머®, #RPNQ0012)를 1 mg/mL로 5 M 구아니딘 HCl을 함유하는 pH 8.5 트리스 완충제 중에 현탁시켰다. 각 웰에, 이 비드 현탁액의 20 μL를 첨가하고, 생성된 혼합물을 교반하고, 1시간 동안 실온에서 인큐베이션한 후에, 마이크로플레이트 액체 섬광 계수기를 사용하여 메틸화 펩티드 생성물의 형성의 지표로서 그의 방사능을 측정하였다.
미가공 데이터를 방사능 측정치로부터 분당 카운트 (CPM)로서 생성하였다. 비억제된 대조군 (DMSO) 및 최대 억제된 대조군 (250 μM 데히드로신펀진, (문헌 [Berry, D. R. & Abbott, B. J. Incorporation of carbon-14-labeled compounds into sinefungin (A9145), a nucleoside antifungal antibiotic. J. Antibiot. 1978 (31) 185-191] 및 그에 인용된 참고문헌에 기재된 바와 같이 본질적으로 단리됨))을 사용하였다. 대조군과 비교하여 각각의 시험 화합물 농도에서의 퍼센트 억제를 하기와 같이 계산하였다:
% 억제 = [중앙 CPM (비억제된 대조군) - 중앙 CPM (시험 화합물)]/[중앙 CPM (비억제된 대조군) - 중앙 CPM (최대 억제된 대조군)] * 100
데이터를 액티비티베이스(ActivityBase) XE 또는 진데이터(Genedata) 소프트웨어를 사용하여, % 억제 (y-축) vs. 로그 시험 화합물 농도 (x-축)로서 플롯팅하였다. IC50 값을 4-파라미터 로지스틱 곡선 피팅 알고리즘을 사용하여 계산하였다.
본 검정의 결과는 모든 예시된 화합물이 PRMT5/MEP50 촉매 활성을 500 nM 미만의 IC50으로 억제한다는 것을 입증하였다. 추가적으로, 실시예 1-3은 본질적으로 상기 기재된 바와 같이 시험되고 표 1에 제시된 바와 같이 PRMT5/MEP50에 대해 하기 활성을 나타낸다.
표 1
Figure pct00044
평균 ± SEM; SEM = 평균의 표준 오차
프로토콜 증식 7-일
본 검정의 목적은 암 세포의 증식을 억제하는 시험 화합물의 능력을 측정하는 것이다.
제1일에, A375 세포 (ATCC, DMEM 고 글루코스/10% Hi FBS)를 96-웰 검정 플레이트 (BD 팔콘(Falcon) 35-3219) 내에 250개 세포/웰 (100 μL/웰)로 플레이팅하였다. 플레이트를 37℃ 인큐베이터 (5% CO2)에서 18-24시간 동안 인큐베이션하였다. 제2일에, 시험 화합물을 화합물 원액 (100% DMSO 중 10 mM)으로부터 제조하고 배지 중에서 연속적으로 희석하였다 (1:2 10-지점 연속 희석물). 10 μL의 연속 희석된 시험 화합물을 세포 플레이트에 첨가하였다 (0.2% DMSO 최종 농도). 10 μL의 참조 화합물 (실시예 1)을 세포 플레이트의 칼럼 1에 첨가하였다 (20 μM 최종, 0.2% DMSO). 세포 플레이트를 37℃/5% CO2에서 7일 동안 인큐베이션하였다. 제9일에, 셀 타이터-글로(CELL TITER-GLO)® (프로메가(Promega) #G7571) 완충제를 해동시키고 사용 전에 실온으로 평형화하였다. 또한, 동결건조된 셀 타이터-글로® 기질을 사용 전에 실온으로 평형화하였다. 셀 타이터-글로® 완충제를 호박색 기질 병에 전달하여 동결건조된 효소/기질 혼합물을 재구성함으로써 셀 타이터-글로® 시약을 형성하였다. 세포 플레이트(들)를 실온으로 5-10분 동안 평형화하였다. 세포 플레이트 내의 배지를 한 더미의 종이 수건 상에 플리킹 및 블롯팅함으로써 부드럽게 제거하였다. 셀 타이터-글로® 시약 (25 μL)을 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 판독 전에 10-20분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 발광을 퍼킨-엘머® 엔비전(ENVISION)® 다중-라벨 플레이트 판독기를 사용하여 측정하였다. 이 발광 데이터를 액티비티 베이스를 사용하는 4-파라미터 곡선 피트에 의해 분석하여, 세포 증식 IC50 값을 산출하였다.
본 검정의 결과는 실시예 1-3이 PRMT5 활성을 억제하는 그의 능력에 따라, 종양 세포에 대해 항증식 효과를 갖는다는 것을 입증하였다. 생성된 증식 IC50 값은 표 2에 제시된다:
표 2
Figure pct00045
평균 ± SEM; SEM = 평균의 표준 오차
A375 종양 세포에서의 MDM4 엑손5/6 qPCR 검정
본 검정의 목적은 암 세포에서 PRMT5 기능을 억제하는 시험 화합물의 능력을 엑손 5 및 6을 지닌 MDM4 mRNA의 단독으로 엑손 5만을 지닌 것에 대한 비에 의해 측정된 바와 같은, A375 흑색종 세포에서 MDM4의 PRMT5-의존성 선택적 스플라이싱을 조절하는 그의 능력을 측정함으로써 입증하는 것이다.
흑색종 암 세포주인 A375 종양 세포 (ATCC)를 성장 배지 (DMEM; 10% FBS를 포함하는 하이클론™ #SH30022; 깁코(GIBCO)® 10082-147 또는 등가물)를 포함하는 T150 플라스크에서 70%-90% 전면생장률로 배양하였다. 세포를 표준 트립신/EDTA 처리로 3분 동안 처리하고 흡인하고 PBS로 세척하여 부착 세포를 배양 플라스크로부터 방출시켰다. 세포를 96 웰 플레이트 (코스타(Costar) 3596) 내에 성장 배지 (90 μL) 중에서 5000개/웰로 시딩하였다. 플레이트를 밤새 37℃ 및 5% CO2에서 인큐베이션하고 세포를 연속 희석 (20, 6.67, 2.22, 0.74, 0.247, 0.082, 0.027, 0.009, 0.003, 0.010 μM, 0.2% 수율의 최종 DMSO 첨가)된 시험 화합물로 72시간 동안 처리하였다. 최대 (2.0 μM)의 실시예 2 및 최저 (0.2% DMSO) 대조군에 비교한 활성을 측정하였다.
인큐베이션 후 제5일에, 배지를 배양 플레이트로부터 제거하고 세포를 차가운 PBS (150 μL/웰)로 2회 세척하였다. 용해 작업 시약을 택맨(TAQMAN)® 진 익스프레션 셀즈-투-CT 키트(Gene Expression Cells-to-CT Kit) (인비트로젠(INVITROGEN)™ cat. # AM1729)로부터 DNAse 1을 용해 용액 내로 1/100으로 희석하여 제조하였다. 용해 작업 시약 (50 μL/웰)을 세포 플레이트에 첨가하고, 잘 혼합하고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 키트 정지 용액 (5 μL)을 각 웰에 첨가하고, 웰을 혼합하고, 2분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 리버스 트랜스크립타제 마스터 믹스(Reverse Transcriptase Master Mix)를 하기 부피 비; RT 완충제: 뉴클레아제-무함유 물: RT 효소 62.5:31.25:6.25에서 제조하였다. RT 믹스 (48 μL/웰)를 96-웰 눈크(NUNC)™ 플레이트 (써모 사이언티픽(THERMO SCIENTIFIC)™ #260860)의 각 웰에 첨가하였다. RT 믹스 (20 μL) 및 각 세포 용해물 샘플 (5 μL)을 384 PCR 플레이트 (클리어 옵티칼 리액션 플레이트(Clear Optical Reaction Plate), cat. # 4309849, 어플라이드 바이오시스템즈(APPLIED BIOSYSTEMS)®) 사분면 1 내에 첨가하고 RT 믹스의 제2 첨가물 및 세포 용해물을 사분면 3에 첨가하였다. RT 반응을 위해, 플레이트를 밀봉하고 이어서 그들을 37℃에서 60분 동안; 95℃에서 5분 동안; 4℃에서의 정지로 설정된 써멀 사이클러에 두었다. qPCR을 위해, MDM4 엑손 5 프라이머 (라이프 테크놀로지스(Life Technologies) Hs00967240-m1) 및 엑손 6 프라이머 (라이프 테크놀로지스 Hs00967242-m1)를 개별적으로 하기 부피 비: RT 믹스: H2O: 엑손 프로브 10:6:1로 제조하였다. 엑손 5 (17 μL)를 384 PCR 플레이트의 홀수 칼럼에 첨가하고 엑손 6 (17 μL)을 짝수 칼럼에 첨가하였다. cDNA (RT 플레이트로부터 3 μL)를 17 μL 엑손 프라이머 용액을 함유하는 qPCR 플레이트의 각 웰에 사분면 스탬핑에 의해 첨가하였다. 이 방식으로, 개별 세포 용해물에서의 단일 RT 반응으로부터의 cDNA 상의 엑손 둘 다에 대해 qPCR을 수행하였다. 플레이트를 밀봉하고, 회전시키고, 실시간 PCR 기기 (라이프 테크놀로지스 ViiA7 실시간 PCR)에 두었다. 택맨® 반응을 하기 단계적 사이클로 실행하였다: 단계 1 (50℃, 2분), 단계 2 (95℃, 10분), 단계 3 (95℃, 15초), 단계 4 (60℃, 60초), 단계 3 및 4는 40회 사이클 동안 반복됨.
실시간 PCR 판독기로부터 CT 데이터를 회수하고 엑셀(Excel) 템플릿을 사용하여 하기 계산을 수행하였으며, 여기서 "CPD"는 화합물-처리된 샘플로부터의 값이고, "DMSO"는 최소 대조군 샘플이다:
(엑손 6 CT CPD - 엑손 6 CT DMSO) - (엑손 5 CT CPD - 엑손 5 CT DMSO) = ΔCT
2(-ΔCT) = 배수 변화
진데이터 소프트웨어를 사용하여, 데이터를 배수 변화 (y 축) 대 로그 시험 화합물 농도 (x-축)로서 플롯팅하고 EC50 값을 4-파라미터 로지스틱 피트를 사용하여 계산하였다.
본 검정은 생산된 엑손 6을 지니는 mRNA 대 엑손 5 및 6을 지니는 mRNA의 비에 의해 나타내어진 바와 같이, 본 검정에서 시험된 모든 예시된 화합물이 MDM4의 스플라이싱의 PRMT5 매개 조절을 억제한다는 것을 입증하였다.
예를 들어, MDM4의 스플라이싱을 조정하는 실시예 1, 2, 및 3의 능력에 대해 생성된 EC50 값은 표 3에 제시된다.
표 3
Figure pct00046
평균 ± SEM; SEM = 평균의 표준 오차
AML 세포주 (4-일 및 7-일 세포 증식 검정)에서의 BCL2 억제제 ABT-199와의 조합
본 검정의 목적은 PRMT5 억제제가 BCL2 억제제, ABT-199 (애보트 래보러토리즈(Abbot Laboratories))와 조합되는 경우에 AML 세포주의 증식에 대한 상승작용적 억제 효과를 입증하는 것이다.
제1일에, GDM-1 [ATCC®, GDM-1 검정 배지 중에서 전체에 걸쳐 유지됨: RPMI-1640 배지/20% 열-불활성화 FBS (깁코®)] 및 EOL-1 세포 [ATCC®, EOL-1 검정 배지 중에서 전체에 걸쳐 유지됨: RPMI-1640 배지/10% 열-불활성화 FBS (깁코®)]를 각각 4000 및 10000개 세포/웰 (100 μL/웰)로, 96-웰 검정 플레이트 (BD 팔콘® 35-3219)에 플레이팅하였다. 플레이트를 37℃ 인큐베이터 (5% CO2)에서 18-24시간 동안 인큐베이션하였다. 제2일에, 검정 배지 (상기 나타낸 바와 같거나 또는 각각 GDM-1 및 EOL-1에 대해 RPMI-1640/20% 열-불활성화 FBS 및 RPMI-1640/10% FBS) + 2.0% DMSO를 제조하고 100 μL를 제조 플레이트에서의 칼럼 3-12에 첨가하였다. 시험 화합물 ABT-199를 2% DMSO 중 10 μM로 및 PRMT5 억제제 실시예 1을 2% DMSO 중 25 μM로 제조하고 각각 웰 A2 및 B2 내에 분배하고, 이어서 각각 웰 A11 및 B11까지 연속 희석 (1:3, 10 지점)하였다. 조합 처리를 위해, 시험 화합물 실시예를 웰 C2-C11 (0.1μM)에서 H2-H11까지 검정 배지 (상기 나타낸 바와 같거나 또는 각각 GDM-1 및 EOL-1에 대해 RPMI-1640/20% 열-불활성화 FBS 및 RPMI-1640/10% FBS) 중에서 1:2로 연속적으로 희석하고, 이어서 시험 화합물 ABT-199를 C2-H2 (1.0 μM)에서 C11-H11까지 1:3으로 연속적으로 희석하였다. 2% DMSO 중 20 μM 스타우로스포린 (시그마에서 입수가능함)을 참조 화합물로서 웰 A1 내지 H1에서 제조하였다. 11 μL의 연속 희석된 화합물을 세포 플레이트에서 100 μl 세포-함유 웰에 첨가하였다. 세포 플레이트에서의 최종 출발 농도는 하기와 같다: 단일 화합물에 대해서는, PRMT5 억제제 실시예 1에 대해 2.5 μM 및 ABT-199에 대해 1 μM; 2개의 화합물의 조합에 대해서는, 출발 농도는 PRMT5 억제제 실시예 1에 대해 0.01 μM 및 ABT-199에 대해 0.1 μM; 최종 DMSO 농도는 0.2%. 세포 플레이트를 37℃/5% CO2에서 4 또는 7일 동안 인큐베이션하였다. 제6일 또는 제9일 (각각 4-일 또는 7-일 처리를 시험하기 위함)에, 셀 타이터-글로® (프로메가 #G7571) 완충제를 해동시키고 사용 전에 실온으로 평형화하였다. 또한, 동결건조된 셀 타이터-글로® 기질을 사용 전에 실온으로 평형화하였다. 셀 타이터-글로® 완충제를 호박색 기질 병에 전달하여 동결건조된 효소/기질 혼합물을 재구성함으로써 셀 타이터-글로® 시약을 형성하였다. 세포 플레이트를 실온으로 5-10분 동안 평형화하였다. 셀 타이터-글로® 시약 (100 μL)을 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 판독 전에 10-15분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 발광을 퍼킨-엘머® 엔비전® 다중-라벨 판독기를 사용하여 측정하였다. 데이터를 미디엄 스루풋 도살(Medium Throughput Dorsal)로 분석하여, 슈-탈랄레이(Chou-Talalay) 분석에 기초한 억제 조합 지수 및 세포 증식 IC50 값을 산출하였다. [Chou TC, Talalay P. Analysis of combined drug effects: a new look at a very old problem. Trends Pharmacol Sci 1983;4:450-4].
본 검정의 결과는 BCL2 억제제 ABT-199 및 PRMT5 억제제 실시예 1의 조합이 암 세포 증식에 대한 상승작용적 억제 효과를 갖는다는 것을 입증하였다. 생성된 증식 절대 IC50 값 및 조합 지수 값은 표 4에 제시된다:
표 4
Figure pct00047
평균 ± 평균의 표준 오차
마우스 A375 이종이식 종양 MDM4 엑손5/6 RNA 스플라이싱 검정
본 검정의 목적은 마우스 종양 이종이식편 모델에서 A375 종양 세포의 프로세싱된 MDM4 mRNA에서의 엑손 6의 PRMT5-매개 체류를 억제하는 시험 화합물의 능력을 측정하는 것이다. 본 검정은 동물 모델의 종양에서의 특정한 PRMT5-매개 스플라이싱 사건에 대한 시험 화합물의 효과를 나타낸다.
A375 세포를 배지 (DMEM 고 글루코스/10% Hi FBS) 중에서 37℃에서 인큐베이터 (5% CO2)에서 18-24시간 동안 성장시켰다. 세포를 매트리겔(MATRIGEL)®과 혼합 (1:1)하고 세포 (5 x 106개/동물)를 마우스 (암컷 누드 마우스, 하를란(Harlan))의 후방 측복부 내로 피하로 이식하였다. 이식된 종양 세포는 고형 종양으로서 성장하였다. 종양 부피 및 체중을 1주 2회 캘리퍼로 측정하였다. 종양 부피가 대략 200-250 mm3에 도달한 후 (이식 약 20일 후), 동물을 무작위화하고, 그들을 화합물 치료군으로 군별화하였다. 시험 화합물 (SWFI에서 1% HEC/0.25% 트윈® 80/0.05% 소포제로 제제화됨)을 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 시험 화합물 용량은 3 내지 100 mg/kg의 범위였다. 최종 투여 (4일의 투여) 4시간 후에 마우스를 희생시켰다.
종양 조직을 수확하고 하기 기재된 바와 같이 균질화였다. 종양 샘플을 보울에 두고 1 mL의 액체 N2를 첨가하였다. 종양을 보울에서 으깼다. 종양의 작은 조각 (각각 약 20 mg)을 2개의 용해 매트릭스 D 튜브 (MP바이오(MPBIO) cat. # 6913-250) 내로 전달하였다. 튜브 1개는 RNA 프로세싱을 위해 및 다른 것은 단백질 용해물 제조를 위해 사용하였다. RNA 프로세싱을 위해, 종양 조직을 RN이지(RNEASY)® 미니 키트 (퀴아젠(QIAGEN)-74104) 추출 완충제 (각각 0.5 mL)에서 30초 동안 바이오101 패스트프렙(Bio101 FastPrep) FP120 균질화기 (설정 6)를 사용하여 균질화하였다. 총 RNA를 쿼치(QUARTZY)® RN이지® 미니 키트 - 50 (QIAGEN-74104, RNEASY® Mini Handbook, Fourth Edition, June 2012)으로 정제하였다. OD 260/280 nM ≥ 1.9를 보장하기 위한 RNA 농도를 확인하였다. cDNA 합성을 위해 A&B 어플라이드 바이오시스템즈(APPLIED BIOSYSTEMS)®, 고용량 cDNA 역전사 키트 (cat. # 4368813)를 사용하였다. 10x RT 완충제 - 2.0 μL; 25x dNTP 믹스 (100 mM) - 0.8 μL; 10x RT 랜덤 프라미어스(Random Primers) - 2.0 μL; 멀티스크라이브(MULTISCRIBE)™ 리버스 트랜스크립타제 - 1.0 μL; 뉴클레아제-무함유 H2O - 4.2 μL를 함유하는 20 μL의 각각의 RT 반응 부피에서 1 μg 총 RNA (10 μL)를 사용하였다. 이들 조건 (어플라이드 바이오시스템즈®로부터의 써멀 사이클러)을 고용량 cDNA 역전사 키트와 사용하기 위해 최적화하였다: 단계 1 - 온도 25℃/시간 10분; 단계 2 - 온도 37℃/시간 120분; 단계 3 - 온도 85℃/시간 5분; 단계 4 추가로 사용할 때까지 온도 4℃. 다음에, 10 μL의 2x PCR 믹스, 1 μL의 프로브, 3 μL의 제조된 cDNA (20 ng) 및 물 (6 μL)을 함유하는 20 μL 총 부피에서 택맨® qPCR 반응을 위한 써멀 사이클러 프로그램을 실행하였다. [써모 사이언티픽™으로부터의 앱솔루트 블루(ABsolute blue) QPCR ROX 믹스 (2x) cat. #: AB-4139; 어플라이드 바이오시스템즈®로부터의 MDM4 (엑손 5 및 엑손 6) 프로브, 각각 cat. #: Hs00967240-m1 및 cat. #: Hs00967242-m1; 어플라이드 바이오시스템즈®로부터의 GAPDH 프로브, cat. #: Hs02758991-g1; 어플라이드 바이오시스템즈®로부터의 CDKN1A (P21) 프로브, cat. #: Hs02758991-g1]. 샘플을 ViiA7 택맨® 써멀 사이클 기계 (어플라이드 바이오시스템즈®)에서 실행하였다.
마우스 A375 종양 이종이식편 MDM4 및 SmD1-me2S 웨스턴 블롯 검정
웨스턴 블롯팅을 위해, 종양 조직을 프로테아제 억제제 칵테일 완전 미니 (로슈(Roche), cat. #: 11 836 170 001)를 포함하는 500 μL의 키트 XY 용해 완충제 중에서 상기 수행된 바와 같이 균질화하였다 [이 칵테일은 10 mg/mL 류펩틴 헤미술페이트 (시그마 cat. # L2884); 10 mg/mL 트립신-키모트립신 억제제 (시그마 cat. # T9777); 10 μg/mL TPCK (시그마 cat. # T4376); 10 μg/mL 아프로티닌 (시그마 cat. # A1153); 60 mM 베타-글리세로포스페이트 이나트륨 염 수화물 (시그마 cat. # G9891); 1% 트리톤(TRITON)™ X-100 (시그마 cat. # T9284); 25 mM 트리스 pH ~ 7.5 (인비트로젠™ cat. # 15567-027); 2.5 mM 이염기성 피로인산나트륨 (플루카(Fluka) cat. # 71501); 300 mM NaCl2 (말린크로트(Mallinckrodt) cat. # 7581); 2 mM TAME (시그마 cat. # T4626); 15 mM pNPP (pNPP 이나트륨 염 6수화물, 시그마 cat. #P4744); 5 mM 벤즈아미딘 히드로클로라이드 수화물 (시그마 cat. #B6506); 10 mM 플루오린화나트륨 (시그마 cat. #S-7920); 1 mM 무수 메타바나듐산나트륨 (시그마 cat. #59088); 5g. 1 mM DTT (시그마 cat. # D9779); 15 mM EDTA pH ~ 8.0 (인비트로젠™ cat. #15575020); 5 mM EGTA pH ~ 8.0 (시그마 cat. #E3889); 1 mM 마이크로시스틴-LR (피셔/악소라(Fisher/Axxora) cat. # A350012m001); 0.25 mM 페파 블록(Pefa Bloc) (시그마 cat. #76307)을 함유한다]. 단백질 용해물을 8,000 rpm에서 10분 동안 원심분리하고 상청액을 1.5 mL 튜브에 15초 동안의 초음파처리 (진폭 25% 수율)를 위해 전달하였다. 용해물을 다시 15,000 rpm에서 10분 동안 회전 침강시켰다. 상청액으로부터, 60 μg의 각 단백질 용해물을 채취하고, SDS-PAGE 샘플 로딩 완충제 [15 μL의 단백질 용해물; 5 μL의 4x 샘플 완충제 (바이오-라드(Bio-Rad) cat. # 161-0791); 2.25 μL 10x 샘플 환원제 (인비트로젠™ cat. # NP0004); 샘플을 100℃에서 10분 동안 비등함]와 혼합하고, 4-20% 트리스-글리신 겔-1.5 mm x 15 웰 (인비트로젠™)을 사용하여 SDS-PAGE에서 전개시켰다. 일단 전방 염료가 겔의 하부에 도달하면, 전기영동을 중단하고 하기 1차 항체로의 웨스턴 블롯팅을 위해 단백질을 겔로부터 니트로셀룰로스 막으로 전달하였다: 항-MDM4 클론 8c6, 밀리포어(Millipore)로부터의 마우스 모노클로날, cat. # 04-1555, 항-SmD1-me2S [마우스 모노클로날, 2.14 mg/mL] 및 토끼 항-GAPDH 항체 (CAT: AB9485 압캠(Abcam)). 항-SmD1-me2S 모노클로날 항체는 일라이 릴리(Eli Lilly)에서 NZB/W 마우스 (더 잭슨 래보러토리(The Jackson Laboratory))에서 생성된 것이다. 5마리의 6주령 암컷 마우스를 75 μg의, 완전 프로인트 아주반트 중에서 KLH에 접합된 2개의 펩티드의 혼합물로 피하로 면역화시켰다.
CREAVAGR*GR*GR*GR*GR*GGPRR (서열식별번호: 2)
REAVAGR*GR*GR*GR*GR*GGPRRC (서열식별번호: 3)
별표는 대칭적 디메틸-Arg를 나타낸다. KLH는 Cys 아미노산 (C)과 접합된다. 프라이밍 후, 마우스는 3주마다 50 μg의, 불완전 프로인트 아주반트 중에서 KLH에 접합된 2개의 펩티드의 혼합물로 피하로 주사하였다. 제3 부스트 10일 후에, 혈액을 안와후 절차를 사용하여 수집하여 혈청 중 항체 역가를 측정하였다. 문헌 [Harlow (Antibodies: a laboratory manual. Cold Spring Harbor, NY, 2004)]에 의해 기재된 바와 같이 양성 마우스로부터의 비장 세포를 단리하고 PEG를 사용하여 골수종 세포주 P3X63Ag8.653 (ATCC® CRL-1580)과 비 (1:4)로 융합시켰다. 융합된 세포를 96 웰 플레이트에 시딩하고 HAT를 함유하는 선택 배지 중에서의 1주 후에 상청액을 ELISA에 의해 SmD1-me2S 펩티드에 대한 결합에 대해 시험하였다. 특이성을 비메틸화 펩티드 및 SmD3-대칭 디메틸-Arg 펩티드를 사용하여 ELISA에 의해 시험하였다. ELISA 양성 하이브리도마 세포를 연속 희석물에 의해 서브클로닝하고 항체를 상기 펩티드 항원을 사용하여 친화성 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
일단 전달이 완료되면, 막을 차단 완충제 (오디세이(Odyssey) 차단 완충제, 리-코르 바이오사이언시스(LI-COR Biosciences) cat. # 927-40000 + 0.05% 트윈®-20, 바이오라드(Biorad) cat. # 161-0781)로 차단하고 이어서 막을 밤새 4℃에서 하기로 처리하였다: 항-MDM4 클론 8c6, 밀리포어로부터의 마우스 모노클로날 cat. # 04-1555 - 1:500으로 희석, 항-SmD1-me2S (사내 마우스 모노클로날 2.14 mg/ml) - 1:300으로 희석, 및 토끼 항-GAPDH 항체 (CAT : AB9485 압캠) - 1:1000으로 희석 (차단 완충제 중). 막을 TBS 트윈® (0.05% 수율)으로 3회, 매 회마다 10-15분 동안 세척하였다 [10x TBS (시그마 cat. # 170-6435)]. 다음에 막을 1.5시간 동안 실온에서 차단 완충제 중에서 하기와 같이 희석된 하기 2차 항체와 인큐베이션하였다: IRDye 680LT, 염소 항-토끼, 리코르(LICOR )® cat. # 926-68021, Lot# C10314-03 - 1:6000으로 희석 및 IRDye 800CW, 염소 항-마우스 IgG (H+L), 리코르® cat. # 926-32210, lot# C10131-01 - 1:6000으로 희석. 막을 TBS 트윈®으로 3 x (각각 10분) 세척하였다. 리코르® 오디세이® 영상화 시스템으로 스캐닝하기 위해 막을 현상하여 검출된 웨스턴 블롯 밴드 강도를 측정하였다. 최소 억제 군으로서의 비히클 처리군 샘플에 비교한 시험 화합물 처리군의 퍼센트 억제를 하기 식을 사용하여 계산하였다:
% 억제 = [중앙 밴드 강도 (비억제된 대조군) - 중앙 밴드 강도 (시험 화합물)]/[중앙 밴드 강도(비억제된 대조군) - 중앙 밴드 강도 (최대 억제된 대조군)] * 100
여기서 최대 억제된 대조군 샘플은 실시예 1, 10 mg/kg BID의 4일의 경구 투여 후에 종양을 지닌 마우스로부터 생체외로 취해진 A375 종양으로부터 선택되었다.
ED50을 용량 반응 연구로부터 이 시점에서 50% 효과를 달성하는 데 필요한 용량으로서 계산하였다.
기재된 검정 (마우스 A375 이종이식 종양 MDM4 엑손5/6 RNA 스플라이싱 검정 및 마우스 A375 종양 이종이식편 MDM4 및 SmD1-me2S 웨스턴 블롯 검정)에 대해, 실시예 1, 2 및 3의 화합물은 QD 또는 BID로 주어진 용량 ≤ 30 mg/kg PO 후에 50% 효과를 달성하였다. 이들 결과는 실시예 1, 2 및 3의 예시된 화합물이 PRMT5 기질에 대한 그의 효과 및 연관된 결과적 분자 세포 생물학 종점에 의해 나타내어진 바와 같이 생체내에서 PRMT5 활성을 억제한다는 것을 입증하였다.
이종이식 종양 모델
본 검정의 목적은 암의 마우스 모델에서 시험 화합물 투여에 대한 반응으로의 종양 부피의 감소를 측정하는 것이다.
A375 (흑색종) 세포를 10% HI FBS (깁코® cat. # 10082-147)를 포함하는 DMEM/고 글루코스 (하이클론™ cat. # SH30022) 중에서 성장시켰다. Will-2 (DLBCL) 세포를 L-글루타민 및 20% 열 불활성화 FBS를 포함하는 RPMI 1640 중에서 성장시켰다. 나말바(Namalwa) (버킷(Burkitt)의 림프종) 세포 (ATCC)를 L-글루타민, 25 mM HEPES (깁코® 22400-089), 1 mM 피루브산나트륨 및 7.5% FBS가 보충된 RPMI 1640 배지 중에서 성장시켰다. Molt 4 세포를 L-글루타민, 25 mM HEPES [깁코 22400-089], 1mM 피루브산나트륨, 및 10% FBS를 포함하는 RPMI 1640 중에서 성장시켰다. 세포를 수확하고 누드 마우스의 후방 측복부 상에 피하로 주사하였다 (A375: 5 x 106개 세포/동물, 매트리겔®과 1:1 혼합됨; Will-2: 1 x 107개 세포/동물; 나말바: 2 x 106개 세포/동물; Molt 4: : 5 x 106개 세포/동물, 매트리겔®과 1:1 혼합됨). 종양이 확립되었을 때 (대략 200 mm3, 이식 7-21일 후), 동물을 무작위화하고, 그들을 대조군 및 시험군으로 군별화하였다. 시험 화합물을 1% HEC/0.25% 트윈®-80/0.05% 소포제 중에서 제제화하였다. 시험 화합물 및 비히클을 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 종양 반응을 치료 과정 동안 1주 2회 수행된 종양 부피 측정 (캘리퍼)에 의해 결정하고 비히클 대조군에 대한 종양 부피의 퍼센트 억제로서 보고하였다.
실시예 1은 모든 3개의 이종이식 종양 모델에서 용량 의존성 항종양 활성을 입증하였다. 예를 들어, 흑색종 모델 (A375)에서, 10 mg/kg QD로 4-일-투약 및 3-일-휴약 스케줄 상에서 26일 동안 투여되는 경우, 64% 억제를 달성하고; 15 mg/kg으로 동일한 스케줄 상에서 투여되는 경우, 71% 억제를 달성하였다. DLBCL 종양 모델 (WILL-2)에서, 2 mg/kg (14일 동안 BID)으로 투여되는 경우, 50% 퇴행을 달성하고; 5 mg/kg (14일 동안 QD)으로 투여되는 경우 74% 억제를 달성하였다. 림프종 종양 모델 (나말바)에서, 2 mg/kg (14일 동안 BID)으로 투여되는 경우 74% 억제를 달성하고; 5 mg/kg (14일 동안 QD)으로 투여되는 경우, 61% 억제를 달성하였다. 이 데이터는 실시예 1이 상기 3개 종양 모델에서 종양 이종이식편 성장을 억제한다는 것을 입증하였다.
급성 림프모구성 백혈병 모델 (Molt 4)에서의 실시예 4는, 60 mg/kg (30일 동안 BID)으로 투여되는 경우, -75% 억제를 달성하였다. 이 데이터는 실시예 4가 상기 종양 모델에서 종양 이종이식편 성장을 억제한다는 것을 입증하였다.
본 발명의 화합물은 바람직하게는 다양한 경로에 의해 투여되는 제약 조성물로서 제제화된다. 가장 바람직하게는, 이러한 조성물은 경구 또는 정맥내 투여를 위한 것이다. 이러한 제약 조성물 및 그를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (D. Troy, et al., eds., 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005)]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "유효량"은 환자에게 단일 또는 다중 용량 투여 시에, 진단 또는 치료 하에 있는 환자에서 목적하는 효과를 제공하는, 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 양 또는 용량을 지칭한다.
유효량은 공지된 기술을 사용함으로써 및 유사한 상황 하에 획득된 결과를 관찰함으로써 관련 기술분야의 통상의 기술자로서의 담당 진단자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 환자를 위한 유효량을 결정하는 데 있어서, 포유동물의 종; 그의 크기, 연령, 및 전반적 건강; 침범된 구체적 질환 또는 장애; 질환 또는 장애의 침범 정도 또는 중증도; 개별 환자의 반응; 투여되는 특정한 화합물; 투여 방식; 투여되는 제제의 생체이용률 특징; 선택되는 용량 요법; 병용 의약의 사용; 및 다른 관련 상황을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 인자가 담당 진단자에 의해 고려된다.
본 발명의 화합물은 일반적으로 넓은 투여량 범위에 걸쳐 효과적이다. 예를 들어, 1일 투여량은 통상 약 0.05-1000 mg의 1일 범위 내에 포함된다. 바람직하게는 이러한 용량은 0.1-500 mg의 1일 범위 내에 포함된다. 보다 바람직하게는 이러한 용량은 0.5-100 mg의 1일 범위 내에 포함된다. 일부 경우에는 상기 범위의 하한치 미만의 투여량 수준이 적절량보다 클 수 있는 반면에, 다른 경우에는 훨씬 더 큰 용량이 어떠한 유해 부작용도 초래하지 않으면서 사용될 수 있고, 따라서 상기 투여량 범위는 어떠한 방식으로도 본 발명의 범주를 제한하도록 의도된 것은 아니다. 실제로 투여되는 화합물의 양은 치료될 상태, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 화합물 또는 화합물들, 개별 환자의 연령, 체중 및 반응, 및 환자 증상의 중증도를 포함한 관련 상황에 비추어 의사에 의해 결정될 것으로 이해될 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> Eli Lilly and Company <120> 5'-SUBSTITUTED NUCLEOSIDE COMPOUNDS <130> X20426 <140> 15382225.9 <141> 2015-05-04 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> Lysine at position 26 is Biotinylated <400> 1 His Ser Gly Arg Gly Lys Gly Gly Lys Gly Leu Gly Lys Gly Gly Ala 1 5 10 15 Lys Arg His Arg Lys Val Leu Arg Asp Lys 20 25 <210> 2 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Arg at position 8 is symmetric dimethyl-Arg <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Arg at position 10 is symmetric dimethyl-Arg <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Arg at position 12 is symmetric dimethyl-Arg <220> <221> MOD_RES <222> (14)..(14) <223> Arg at position 14 is symmetric dimethyl-Arg <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Arg at position 16 is symmetric dimethyl-Arg <400> 2 Cys Arg Glu Ala Val Ala Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg 1 5 10 15 Gly Gly Pro Arg Arg 20 <210> 3 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Arg at position 7 is symmetric dimethyl-Arg <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Arg at position 9 is symmetric dimethyl-Arg <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Arg at position 11 is symmetric dimethyl-Arg <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> Arg at position 13 is symmetric dimethyl-Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Arg at position 15 is symmetric dimethyl-Arg <400> 3 Arg Glu Ala Val Ala Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly 1 5 10 15 Gly Pro Arg Arg Cys 20

Claims (17)

  1. 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00048

    여기서
    R1a는 수소, C1-C2 알킬, C3-C6 시클로알콕시, 트리플루오로메틸, 시아노, 클로로, 또는 플루오로이고;
    R1b는 수소, 클로로, 또는 플루오로이고;
    R2는 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
    R3은 수소, 메틸 또는 아미노이다.
  2. 제1항에 있어서, 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물 또는 그의 염.
    Figure pct00049

    여기서
    R1a는 수소, C1-C2 알킬, C3-C6 시클로알콕시, 트리플루오로메틸, 시아노, 클로로, 또는 플루오로이고;
    R1b는 수소, 클로로, 또는 플루오로이고;
    R2는 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
    R3은 수소, 메틸 또는 아미노이다.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R2 치환기가 부착되는 키랄 탄소의 배위가 R, S 또는 그의 혼합인 화합물 또는 그의 염.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    Figure pct00050

    또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
  5. 제4항에 있어서, 결정질이고, 25.1°에서의 피크를 17.0°, 13.6°, 20.5°, 24.0°, 및 14.5° (2θ ± 0.2°)로 이루어진 군으로부터 선택되는 피크 중 하나 이상과 조합하여 포함하는 X선 분말 회절 패턴 (Cu 방사선, λ = 1.54060 Å)을 특징으로 하는 화합물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    Figure pct00051

    또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    Figure pct00052

    또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    Figure pct00053

    또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R1a가 수소, 클로로, 또는 시클로프로폭시인 화합물.
  10. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R1b가 수소 또는 클로로인 화합물.
  11. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 수소 또는 메틸인 화합물.
  12. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 아미노인 화합물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염을 제약상 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제와 함께 포함하는 제약 조성물.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염의 유효량을 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 암은 교모세포종, 흑색종, 육종, 위암, 췌장암, 담관암종, 방광암, 유방암, 비소세포 폐암, 급성 골수성 백혈병을 포함하는 백혈병, 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 상기 환자에서 암을 치료하는 방법.
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 염.
  16. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 염.
  17. 제16항에 있어서, 암이 교모세포종, 흑색종, 육종, 위암, 췌장암, 담관암종, 방광암, 유방암, 비소세포 폐암, 급성 골수성 백혈병을 포함하는 백혈병, 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 염.
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