KR20170047394A

KR20170047394A - (6s)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 조성물 및 그 제조와 용도

Info

Publication number: KR20170047394A
Application number: KR1020177009202A
Authority: KR
Inventors: 융즈 청; 즈 청
Original assignee: 리안윤강 진강 해신 파머수티컬 코. 엘티디.
Priority date: 2014-09-04
Filing date: 2015-09-04
Publication date: 2017-05-04
Also published as: CN105524066A; CN105524066B; AU2015311370A1; JP2017526699A; EP3190112A4; US20170273984A1; EP3190112A1; WO2016034145A1; AU2015311370B2; US10398697B2; JP6960853B2

Abstract

본발명은 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량이 98.0%보다 작지 않고, 관련 이물질인 JK12A의 함량이 0.1%보다 크지 않으며, 5-메틸테트라히드로프테로산이 검출되지 않는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 조성물 및 그 제조와 용도에 관한 것이다.

Description

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 조성물 및 그 제조와 용도 {COMPOSITION OF (6S)-5-METHYL TETRAHYDROFOLIC ACID OR SALT THEREOF AS WELL AS PREPARATION THEREFOR AND APPLICATION THEREOF}

본 발명은 약물학 분야에 관한 것으로, 구체적으로 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 조성물과 그 제조 방법, 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 고체 용액 조성물과 그 제조 방법 및 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산과 그 염의 용도에 관한 것이다. 그 용도는 상기 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그의 염을 사용하는 조성물 또는 고체 용액을 제조하는 것과 약물학적으로 허용가능한 환원성 물질을 첨가하여 안정제로 하는 것을 포함하는데, 이러한 안전적인 사용방법은 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 제품의 우수한 안전성능을 제공하였다.

최근, 5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염의 인체에 대한 생리활성의 연구가 점점 많아지고 있다. 사람들은 이를 인체 엽산의 보총제로서 신경학적 질병을 예방 및/또는 치료하는데 사용하고, 5-플루오로우라실 또는 메토트렉세이트와 함께 종양치료에 적용하며, 병리생리학적혈관과 심혈관질병에 적용하고, 중도우울증, 중도노인성치매의 치료와 보조치료에 적용하는 등 양호한 적용전망을 드러냈다.

그러나, 5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염은 매우 불안정하여 쉽게 분해되며, 특히 산소와 수분에 대해 매우 민감하다. 따라서, 5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 조성물, 예를 들어 약물제제는 보편적으로 안정성이 떨어지고, 쉽게 변색되며, 색상이 짙어지고, 함량이 현저히 저하되며, 분해산물이 증가되는 문제가 있다.

5-메틸테트라히드로폴산 또는 그의 활성단일이성질체인 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 산화분해에 대해서는 이미 많은 논문에서 언급되었다. 불행히도, 본 발명자의 한 연구에 따르면, 5-메틸테트라히드로폴산의 1차 산화산물에 관한 종래의 많은 논술은 편면적인 것이고, 심지어 잘못된 것이다. 이러한 결론들은 사람들을 오도하여 5-메틸테트라히드로폴산의 품질에 대한 요구를 낮추게 하였다. Ratanasthien K 등의 Serum folates in man(Ratanasthien K., Blair J.A., Leeming R.J., Cooke W.T. and Melikian V. (1977).. J. Clin. Path. 30: 438-448), Blair J.A 등의 Autoxidation of 5-Methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid (Blair J.A., Pearson A.J. and Robb A.J. (1975).. J.C.S. Perkin II, p. 18-21.) 및 유럽식품안전국의 Opinion of the Scientific Panel on Food Additives, Flavourings, Processing Aids and Materials in Contact with Food on a request from the Commission related to Calcium L-Methylfolate Question (The EFSA Journal (2004) 135,1- 20)에 따르면, 5-메틸테트라히드로폴산은 산화제 작용하에서 먼저 5-메틸디히드로폴산으로 산화된다고 논술하였다.

5-메틸디히드로폴산

기타문헌에서, 1차 산화산물은 4-히드록시-5-메틸테트라히드로폴산으로 정성되었다. 사람들은 구조에 따라 이 산물은 독성과 부작용이 없는 것으로 추측하였다.

발명자가 고효율 방법을 개발하였는데, 먼저 고순도의 5-메틸테트라히드로폴산의 1차 산화산물을 제조하고 일련의 연구(PCT/CN2013/073959)를 진행한 결과, 5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 1차 산화산물은 다음과 같은 구조식을 가진 JK12A인 것을 발견하였다.

JK12A

JK12A는 5-메틸테트라히드로폴산의 1차 산화산물을 말하는데, 본 발명의 검출 조건하에서 구체적인 조건 차이에 따라 이와 메인 피크의 상대적 유지시간은 0.36 정도이며, 관련 문헌에서는 5-메틸-디히드로폴산 또는 4-히드록시-5-메틸-테트라히드로폴산이라고 한다.

이는 새로운 구조를 가진 산물이다. 이러한 발견은 상기 문헌의 결론을 포함하는 결론들을 뒤엎었다. 일반적으로, 구조가 크게 변하게 되면 생리활성의 큰 변화를 일으킬 수 있다. 이후의 연구에 따르면, JK12A는 T 임파세포증식에 대해 현저한 억제 작용을 가지고 있다. 이에따라, 인간 면역력이 저하하게 된다.

JK12A에 대한 한 급성 독성 연구에 따르면, 실험용 생쥐는 2000mg/kg의 사용량하에서 1분 내에 모두 사망하였으나, 해부한 결과 간장, 신장에 현저한 변화가 없음을 발견하였고, 이에 따라 상기 화합물은 기타 표적이 있고 이에 대한 급성독성이 현저하다는 것을 알아냈다.

발명자의 연구에 따르면, 5-메틸테트라히드로프테로산은 5-메틸테트라히드로폴산 산물 중의 또 다른 하나의 흔한 이물질인데, 상기 이물질은 JK12A의 형성과 유사하고, 산화된 후에 다음과 같은 구조를 가진 JK1303으로 되었다.

5-메틸테트라히드로프테로산 JK1303

이후의 연구에 따르면, JK1303은 심각한 신장 독성을 가지고 있다. 1000mg/kg을 일회량으로 마우스에 JK1303을 투여하고, 14일 투여한 후 마우스의 세뇨관이 심각히 괴사되는데, 해부한 결과 그 세뇨관에 수많은 공포가 발생되었다. 5-메틸테트라히드로프테로산의 1차 산화산물의 독성도 매우 현저하게 변하였다.

상술한 실험에 따르면, 5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염을 포함하는 제품에서 5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염의 산화분해에 의한 이물질인 JK12A, 5-메틸테트라히드로프테로산의 산화산물인 JK1303은 모두 인체에 매우 해로운 것으로, 무시해서는 안 된다. 따라서, 5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 안전하고 신뢰성있는 적용방안을 개발하는 것이 필수적이다.

특허 CN102612358에서는 결정성 5-메틸테트라히드로폴산염을 왁스로 감싸 그 안정성을 증가하는 5-메틸테트라히드로폴산염을 포함하는 안정과립제를 공개하였다.

특허 CN102813656에서는 메르캅토기를 함유하는 않는 하나 또는 다양한 아미노산을 포함하여 안정성을 증가하는 5-메틸테트라히드로폴산염을 포함하는 안정 조성물을 공개하였다.

특허 US6441168에서는 5-메틸테트라히드로폴산 칼슘을 어떤 결정형으로 제조하여 그 안정성을 현저히 증강하는 것을 공개하였다. 그러나, 상기 결정형은 과립도가 커서 용해가 느리고, 제제생산과정에서 항상 먼저 연마해야 하는데, 이것은 5-메틸테트라히드로폴산이 산화되는 리스크를 증가시킬 수 있다.

특허 CN2012086794에서는 화학안정성이 양호하면서도 용해성능이 현저히 향상되어 제제생산과정에서 연마할 필요가 없는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 칼슘의 새로운 결정형을 공개하였다. 그러나, JK12A 등의 이물질 함량이 여전히 높고, 시간이 흐름에 따라 이러한 이물질의 양도 점차 증가하게 된다.

또 다른 문헌에서는, 셀룰로오스, 셸락 등의 재료로 마이크로캡슐을 제조하여 5-메틸테트라히드로폴산을 감쌈으로써, 제제제품 중의 활성성분인 5-메틸테트라히드로폴산의 안정성을 향상시키는 것을 보도하였다.

그러나, 이러한 모든 조치는 여전히 JK12A를 충분히 안전한 수준에 제어할 수 없다. 실험에 의한 검출에 따르면, 현재 시판하고 있는 5-메틸테트라히드로폴산의 원료약물 제품에서 결정형 5-메틸테트라히드로폴산의 총이물질은 일반적으로 1~4%이고 그 중 JK12A가 0.3~3.0%에 달하며, 시판하고 있는 무정형 제품의 총이물질은 심지어 10% 이상으로 높아 사람들의 약물사용 안전에 큰 위협을 주고 있는데, 이러한 사실들로부터 현재에서 이러한 모든 원료약품제품에 포함한 JK12A를 비롯한 이물질은 중시받고 있지 않음을 알 수 있다. 높은 화학불안정성으로 인해서도 적용시 사용량을 정밀하게 제어할 수 없게 된다. 예를 들어, 0.451mg과 같은 흔한 사용량 하에서, 불안정성은 실제 사용량에 큰 편차가 쉽게 발생되도록 한다.

본 발명의 목적은 기존 기술을 바탕으로 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 함유하는 조성물 및 그 제조 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 한 목적은 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액 및 그 제조 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 세번째 목적은 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 함유하거나 상기 고체 용액을 함유하는 약물 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 네번째 목적은 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염, 또는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액의약물 방면에서의 용도를 제공하는 것이다.

본 발명의 목적은 다음과 같이 달성할 수 있다.

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량이 98.0%보다 작지 않고, 관련 이물질인 JK12A의 함량이 0.1%보다 크지 않으며, 5-메틸테트라히드로프테로산이 검출되지 않는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 함유하는 조성물.

JK12A 5-메틸테트라히드로프테로산

본 발명에 따른(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 함유하는 조성물의 주요물질은 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염이다. 상기 조성물에서, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량은 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 질량함량 또는 HPLC 함량인데, 일반적으로 질량함량이다.

하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량이 99.0%보다 작지 않고, 관련 이물질인 JK12A의 함량이 0.1%보다 크지 않으며, 5-메틸테트라히드로프테로산이 검출되지 않는다.

다른 한 실시형태에서, 상기 조성물은 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량이 99.5%보다 작지 않고, 관련 이물질인 JK12A의 함량이 0.1%보다 크지 않으며, 5-메틸테트라히드로프테로산이 검출되지 않는다.

다른 한 실시형태에서, 상기 조성물은 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량이 99.8%보다 작지 않고, 관련 이물질인 JK12A의 함량이 0.05%보다 크지 않으며, 5-메틸테트라히드로프테로산이 검출되지 않는다.

본 발명에 따른 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염은 칼륨염, 나트륨염, 칼슘염, 마그네슘염, 바륨염, 아연염, D-글루코사민염, D-갈락토사민염 또는 아르기닌염에서 선택되는데, 칼슘염, D-글루코사민염, D-갈락토사민염 또는 아르기닌염이 바람직하다.

물에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염의 크루드와 역변환원제를 pH 6~8, 온도 50~90℃하에서 직접 반응시키거나 또는 초음파조건하에서 반응시켜 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염 조성물을 얻는 방법A와,

물에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 크루드, 역변환원제와 해당하는 염을 pH 6~8, 온도 50~90℃하에서 반응시키거나 또는 초음파조건하에서 반응시켜 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염 조성물을 얻는 방법B를 포함하며,

방법A 또는 방법B의 역변환원제는 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르, 이소비타민C 염, 메르캅토에탄올, 시스테인, 메르캅토에탄술폰산, 디티오트레이톨, 환원형글루타티온 또는 리포산에서 하나 또는 몇개를 선택하는 상기 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 조성물의 제조 방법.

하나의 바람직한 실시형태에서, 방법A 또는 방법B의 역변환원제는 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르 또는 이소비타민C 염에서 하나 또는 몇개를 선택하는데, 비타민C, 비타민C 나트륨염, 비타민C 칼륨염, 비타민C 칼슘염, 마그네슘아스코빌포스페이트, 나트륨아스코빌포스페이트 또는 이소비타민C 중의 하나 또는 몇개가 바람직하고, 비타민C 또는 이소비타민C가 가장 바람직하며, 상기 해당하는 염은 염화염인데, 염화칼슘, 염화마그네슘, 염화아연이 바람직하다.

하나의 바람직한 실시형태에서, 상기 방법A 또는 방법B의 반응과정은 반응온도가 60~80℃이고 pH가 7~7.5인데, 수산화나트륨을 이용하여 pH를 조절하는 것이 바람직하며, 역변환원제의 물에서의 중량농도가 2%보다 작지 않는데, 20%보다 작지않는 것이 바람직하고 40%보다 작지 않는 것이 더욱 바람직하다.

주로 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 포함하고, 액체크로마토그래피패턴에서 안정제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량의 합이 99.5%보다 크며, 상기 안정제가 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르, 이소비타민C 염, 디티오트레이톨, 환원형글루타티온 또는 리포산에서 하나 또는 몇개를 선택하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액.

하나의 바람직한 실시형태에서, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액의 액체크로마토그래피 패턴에서 안정제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량의 합은 99.8%보다 크는데, 99.9%보다 크는 것이 바람직하며, 상기 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염은 청구항1에 따른 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염이다.

하나의 바람직한 실시형태에서, 상기 안정제는 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르 또는 이소비타민C 염에서 하나 또는 몇개를 선택하는데, 비타민C, 비타민C 나트륨염, 비타민C 칼륨염, 비타민C 칼슘염, 마그네슘아스코빌포스페이트, 나트륨아스코빌포스페이트, 이소비타민C, 이소비타민C 나트륨염, 이소비타민C 칼륨염, 이소비타민C 칼슘염, 이소마그네슘아스코빌포스페이트, 이소나트륨아스코빌포스페이트 중의 하나 또는 몇개가 바람직하고, 비타민C 또는 이소비타민C가 더욱 바람직하다. 안정제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염의 중량비는 0.2~1000:1인데, 1~10:1이 바람직하다.

물에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 크루드 또는 청구항1에 따른 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산과 안정제를 pH 3~5, 온도 50~90℃하에서 직접 반응시키거나 또는 초음파조건하에서 반응시킨 후 고체를 석출하고 분리하는 방법C와,

물에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 크루드 또는 청구항1에 따른 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산, 안정제와 해당하는 염을 pH 6~8, 온도 50~90℃하에서 반응시키거나 또는 초음파조건하에서 반응시킨 후 고체를 석출하고 분리하는 방법D를 포함하며,

상기 안정제는 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르, 이소비타민C 염, 디티오트레이톨, 환원형글루타티온 또는 리포산에서 하나 또는 몇개를 선택하고, 상기 해당하는 염은 염화염인데, 염화칼슘, 염화마그네슘, 염화아연이 바람직하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액의 제조 방법.

하나의 바람직한 실시형태에서, 상기 방법C의 반응과정은 반응온도가 60~80℃, pH가 3~4이고 염산을 이용하여 pH를 조절하는 것이며, 방법D의 반응과정은 반응온도가 60~80℃, pH가 7~7.5이고 수산화나트륨을 이용하여 pH를 조절하는 것이다.

a) 상기(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 함유하는 조성물, 또는 상기 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액과,

b) 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르, 이소비타민C 염, 메르캅토에탄올, 시스테인, 메르캅토에탄술폰산, 디티오트레이톨, 환원형글루타티온 또는 리포산에서 하나 또는 몇개를 선택하는 환원제를 포함하는 약물 조성물.

하나의 실시형태에서, 상기 약물 조성물은 일반정제, 서방형정제, 방출제어형정제, 발포형정제, 과립제, 일반캡슐, 서방형캡슐, 방출제어형캡슐, 드라이현탁제, 경구용액, 경구현탁액, 주사제 또는 동결건조주사제이다.

하나의 실시형태에서, 상기 약물 조성물의 환원제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 중량비는 0.2~1000:1인데, 1~10:1이 바람직하다.

본 발명에 따른 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염, 또는 상기(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액의 5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 결핍에 의한 포유동물의 질병을 치료하거나 예방하는 약물을 제조하는 용도.

용어의 의미:

특별히 설명하지 않는 한 본 발명의 명세서에서 사용한 아래의 용어는 다음과 같은 의미를 가진다.

역변: (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염 중의 JK12A 이물질이 다시 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염으로 변하고, JK1303이 다시 5-메틸테트라히드로프테로산으로 변하는 현상을 말한다.

염석: 고체용질의 용액에 일정농도의 중성염을 첨가하여 결정을 개선하는 방법을 말하는데, 수율과 품질을 향상시킬 수 있다.

고체 용액: 하나 또는 몇개의 고체가 다른하나의 고체에 균일하게 분산되어 형성된 혼합물을 말한다.

관련물질: (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염의생산, 사용, 저장과정에서 진입되고 발생한 이물질을 말하는데, 4-아미노벤조일글루탐산, JK12A, (6S)-Mefox, 피라진 및 트리아진유도체, 테트라히드로폴산, 7,8-디히드로폴산, 엽산, 5,10-메틸테트라히드로폴산, 5-메틸테트라히드로프테로산, N2-메틸아미노-테트라히드로폴산과 이들의 염을 포함한다.

순도: 액체크로마토그래피에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 피크면적이 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산과 모든 관련물질의 피크면적 총합에서 차지하는 비례를 말한다.

함량: 특별히 설명하지 않는 한 본 명세서에 기재한 함량은 일반적으로 물질의 질량함량을 말한다.

종래의 연구에서, 사람들은 지속되는 산화분해를 방지하기 위해 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산용액에 메르캅토에탄올, 아스코르빈산, 아황산나트륨등과 같은 산소제거제를 첨가하여 산소를 제거하는 것을 시도하였다. 이와같은 시도를 통해, 이러한 물질은 생산에서 적용불가하고, 또한 적용할 필요가 없다는 결론을 얻게 되었다. 이러한 연구에 따르면, 저농도환원제를 사용하기만 하면 산소제거의 목적을 달성할 수 있다. 그러나, 이러한 농도는 본 발명에 기재한 산화이물질의 충분한 역변을 이루지 못한다. JK방안에서는 고농도환원제를 사용하여 이 상황을 개선하였다.

본 발명자는 환원성이 적절한 고농도 환원제를 사용함으로써, 대부분의 산화분해이물질을 역변시킬 수 있다는 것을 발견하였는데, 예를 들어 JK12A를 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산으로, JK1303을 5-메틸테트라히드로프테로산으로 역변시킬 수 있다. 이후의 염석 작용은 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염을 석출할 수 있어 높은 수율하에서 생각치못한 고순도를 얻었는데, 이것은 종래문헌에서 보도된 적이 없는 것이다.

JK12A (6S)-5-메틸테트라히드로폴산

JK1303 5-메틸테트라히드로프테로산

이 방법을 사용함으로써 순도가 98.0%를 초과하고 심지어 100.0%에 가까운 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염을 제조할 수 있으며, 관련 이물질인 JK12A, JK1303, 5-메틸테트라히드로프테로산의 함량이 모두 크게 저하되고 심지어 액체 크로마토그래피의 검출한계보다 낮은데, 이것은 기존기술에 의해 이루지 못하는 것이다.

고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염의 성공적인 제조는 제조기술의 현저한 진보를 상징할 뿐만 아니라, 종래 연구 결핍에 의한 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염의 품질요구에 대한 오해를 해소하여 이러한 오해로 인한 잘못을 바로 잡았다. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 사용량이 점차 증가됨에 따라 그 의미가 더욱 현저해지게 된다. 아래의 데이터를 통해 상술한 문제를 설명할 수 있다. 현재 공개한 급성독성시험데이터에서, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘의 래트 LD50(반수치사량)은 2000mg/kg이고, 발명자의 기술을 사용하여 유해이물질을 회피한 제품은 대비시험에서 래트가 15000mg/kg의 사용량하에 이상반응이 없으므로, 다만 MTD(최대내약량)가 15g/kg보다 크다는 결론을 얻을 수 있다. 제품안전성에 대한 신제품의 기여는 자명할 것이다.

본 발명은 또한 먼저 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 크루드를 물 또는 함수용매에 용해하고, 역변환원제로 처리하여 산화분해 이물질 대부분이 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염으로 역변되도록 한 후 염석작용 또는 기타방법을 통해 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 석출하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 조성물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명에서 사용한 역변환원제는 상술한 바와 같고, 산화이물질을 역변시키기 위한 상기 역변환원제는 적절한 환원성이 있어야 하는데, 환원성이 너무 높으면 환원분해가 발생되고, 너무 낮으면 원하는 효과를 달성하지 못한다.

하나의 실시형태에서, 방법A, 방법B 및 상기 조성물의 제조 방법에서 역변환원제의 용매에서의 중량농도는 2%보다 작지 않는데, 20%보다 작지 않는 것이 바람직하고, 40%보다 작지 않는 것이 더욱 바람직하다.

상기 염석이라는 용어는 생물화학에서 일반적으로 사용되고 있는 의미와 약간 다르나, 결정수율을 향상시키고, 이물질에 대한 결정모액의 농축 효과를 강화하여 제품의 순도를 매우 높은 수준에 달하게하는 효과가 유사하다.

본 발명에 따른 염석작용을 발휘하는 염석제는 상술한 환원제를 제외하고 통상의 염류일 수도 있는데, 예를 들어 염화나트륨, 염화칼륨, 황산마그네슘 등의 중성무기염을 첨가할 수 있다. 본 발명은 환원제의 농도를 증대하여 염석효과를 달성하는 것이 바람직하다.

한편, 본 발명이 제공한 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제로 구성된 고체 용액은 액체크로마토그래피패턴에서 안정제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염의 함량의 합이 99.5%보다 크는데, 99.8%보다 크는 것이 바람직하고, 99.9%보다 크는 것이 더욱 바람직하다. 상기 함량은 액체크로마토그래피패턴중의 피크면적에 의해 계산한다.

고체 용액은 균일성이 우수한 분산형태로서, 본 발명의 활성성분을 효과적으로 보호할 수 있다.

본 발명에 따른 고체 용액은(6S)-5-메틸테트라히드로폴산과 안정제가 높은 균일성을 유지되도록 하여 안정효과를 확보하였다. 전형적인 실시예에서, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘은 C형결정으로서, 과립이 균일하고 미세하며, 입도분포범위가 좁고, 안정제와 함께 균일도가 높은 고체 용액을 형성할 수 있다. 이것은 기존기술에 의해 구현되기 어려운 것이다.

하나의 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따른 고체 용액은(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염과비타민C, 이소비타민C, 리포산, 환원형글루타티온, 또는 디티오트레이톨 및 이들의 염의 고체 용액이다.

전형적으로, 본 발명에 따른 고체 용액은 그 HPLC 패턴에서 2개의 전형적인 흡수피크만 있어 높은 순수도를 나타냈다.

고체 용액에서 안정제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산이 균일하게 분산되어 안정효과를 더욱 양호하게 구현할 수 있다.

본 발명에 따른 고체 용액제품에 안정제를 추가로 첨가할 수 있고, 필요에 따라 기타보조제를 첨가할 수도 있다.

본 발명은 또한 먼저 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 물 또는 함수용매에 용해하고, 안정제를 첨가하여 이물질이 역변시킨 후 안정제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염을 함께 석출하고 여과하여 건조시키는 고체 용액의 제조 방법을 제공한다. 나아가, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산과 안정제를 물에 분산시키고, 수산화나트륨을 적가하여 교반용해시킨 후 해당하는 염을 첨가하여 결정을 석출하고 여과하여 건조시킨다.

본 발명은 또한a) 상기 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 함유하는 조성물 또는 상기 고체 용액을 제조하고; b)약물학적으로 허용가능한 환원성 물질을 첨가하여 안정제로 하는 것을 포함하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 안전사용방법을 제공한다.

바람직하게는, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 안전사용방법에서상기 안정제는 비타민C 및 그 에스테르와 염, 이소비타민C 및 그 에스테르와 염, 디티오트레이톨, 환원형글루타티온, 리포산에서 선택되는데, 비타민C 및 그 에스테르와 염, 이소비타민C 및 그 에스테르와 염이 바람직하고, 비타민C와 이소비타민C의 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 마그네슘아스코빌포스페이트, 나트륨아스코빌포스페이트가 더욱 바람직하며, 비타민C와 이소비타민C가 가장 바람직하다.

바람직하게는, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 안전사용방법에서 안정제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 조합방식은 고체를 직접 혼합하거나, 먼저 용액에 용해한 후 함께 석출하거나 공정 또는 고체 용액으로 제조하는 것인데, 고체 용액으로 제조하는 것이 바람직하다.

상기 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 안전사용방법에서, 안정제가 사용됨으로써(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염이 계속 산화되는 것을 중단시켰다. 이러한 방안은 인체에 대한 JK12A 및 기타유해분해산물의 악영향을 효과적으로 제어하고 사용량을 정밀하게 제어할 수 있다. 이러한 안전사용방법을 JK 방안(METHOD JK)이라고도 한다. JK 방안에서, 두부분을 단독사용하여도 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산제품의 안전특성을 개선할 수 있다.

바람직하게는, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 안전사용방법에서 상기 안정제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 중량비가 0.2~1000:1인데, 1~10:1이 더욱 바람직하다.

하나의 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따른 안전사용방법은 비타민C 및 그 염을 함께 사용하여 상기 환원제, 염석제, 안정제로 하는 것이다. 바꾸어 말하면, 비타민C 및 그 염은 산화이물질을 역변시키는 환원제이면서도 정제과정에서의 염석제이며, 또한 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 안정제이기도 한다. 제조과정에서 잔류한 비타민C 및 그 염은 별도로 제거할 필요가 없다. 그 후의 과정에서는 필요에 따라 수요량의 비타민C를 첨가하면 된다. 마찬가지로, 환원형글루타티온, 리포산 및 그 단일이성질체, 디티오트레이톨, 이소비타민C 등을 사용하여도 모두 유사한효과를 얻을 수 있다. 논리적으로, 이러한 물질들은 환원제, 염석제와 안정제로 단독 사용하여도 된다.

상기 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 안전사용방법은 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 단일제제 또는 기타활성성분과 구성된 복합제제를 제조하는데 적용된다. 일반정제, 서방형정제, 방출제어형정제, 발포형정제, 과립제, 일반캡슐, 서방형캡슐, 방출제어형캡슐, 드라이현탁제, 경구용액, 경구현탁액, 주사제, 동결건조주사제 등이 바람직하다. 일반정제, 일반캡슐, 경구용액, 주사제, 동결건조주사제가 더욱 바람직하다.

상기 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 안전사용방법은 5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 결핍에 의한 포유동물의 질병을 치료하거나 예방하는 약물을 제조하는데 적용된다.

본 발명은 또한 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 안전사용방법의 5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 결핍에 의한 포유동물의 질병을 치료하거나 예방하는 약물을 제조하는데 있어서의 용도를 제공한다. 5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 결핍에 의한 질병은 예를 들어 치매와 공포척수병과 관련된 아급성뇌염, 뇌엽산결핍증; 조기폐쇄성동맥질병, 유아기와 아동기에 발생하는 혈관질병, 진행성동맥협착, 간헐성파행증, 신장혈관고혈압, 빈혈성뇌혈관질병, 조기망막동맥과망막정맥폐쇄, 뇌폐쇄성동맥질병, 폐쇄성말초동맥질병, 혈전질병 및/또는 빈형성심장병에 의한 조기사망과 같은 병리생리학적혈관과 심혈관질병; 건선, 셀리악병, 관절염 및 염증과 같은 자가면역질병; 폴산염결핍에 의한 거대적혈모구빈혈, 장흡수장애; 엽산길항제(예를 들어 메토트렉세이트, 피리메타민 또는 트리메토프림 등)로 인한 중독; 메토트렉세이트의 과량 또는 많은 사용량에 의한 독성작용; 유산 및/또는 신경관결함, 구순열 및/또는 구개열결함이 있는 태아를 생산하는 리스크; 정상적인 호모시스테인 수준 및/또는 대사이상에 의한 질병; DNA와 RNA의 합성 및/또는 기능 및/또는 변화의 개변과 세포합성의 개변에 의한 질병; 우울증을 포함한다.

본 발명의 환원제, 염석제, 안정제의 선택원칙은 제품이 분해되지 않도록 하는 화학적 안전성을 먼저 고려하고, 그 다음 생리적 안전성을 고려하며, 식품과 약물분야에서 안전성이 충분히 검증된 물질을 우선적으로 사용하는 것이다. 환원제, 염석제, 안정제의 사용량은 모두 최소사용량을 초과해야 하며, 만약 초과하지 않으면 이물질을 충분히 역변시킬 수 없고, 염석효과 및/또는 안정효과가 좋지 않을 수 있다. 일반적으로 환원제, 안정제의 사용량은 엄격한 상한이 없다.

본 발명에 따른(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염의 이물질은 JK12A, 5-메틸테트라히드로프테로산이있는데, 이들의 구조는 각각 다음과 같다.

JK12A

5-메틸테트라히드로프테로산

6(S)-Mefox

그중, 5-메틸테트라히드로프테로산은 산화된 후 고수율로 신장독성이 큰 JK1303으로 전환될 수 있으므로, 역시 염격히 제어할 필요가 있다.

본 발명은 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염 및 그 제조 방법, 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 고체 용액 및 그 제조 방법 및 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염의 안전사용방법을 제공하는 유익효과가 있는데, 이러한 실시형태에서는 모두 약물학적으로 허용가능한 환원제를 교모하게 적용하여 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 제품에서 발생할 수 있는 유해화학품을 다시 제품자체로 역변시킴으로써, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 제품을 안전사용하는 목적을 달성한다.

도 1은 JK1303을 14일 투유한 후 마우스의 세뇨관이 심각히 괴사되어 수많은 공포가 발생된 부분해부확대도이다.

본 발명의 기술 방안을 더욱 명확히 이해하기 위해, 이하에서는 본 발명의 구체적인 실시예에 결부하여 본 발명의 기술방안을 더욱 상세하게 설명하기로 하는데, 본 발명은 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 HPLC 검출조건은 다음과 같다.

크로마토그래피 조건:

이동상의 배합：

이동상A: 7.80g의 NaH₂PO₄·2H₂O를 물 1000ml에 용하하고, 32% NaOH 용액을 이용하여 pH를 6.5로 조절한다.

이동상B: 5.07g의 NaH₂PO₄·2H₂O를 물 650ml에 용해하고, 메탄올 350ml를 첨가하며, 32% NaOH 용액을 이용하여 pH를 8.0으로 조절한다.

구배프로세스:

샘플용액의 제조: 적량의 샘플을 취하여 2~8도의 온도하에서 저온수(질소분위기에서 아황산나트륨을 첨가하여 증류하고 수집하며 보존하여 2~8℃로 냉각방치)로질소분위기에서 용해하여 농도가 약 0.5mg/ml인 용액을 제조하는데, 필요시 바로 제조하여 사용하면 된다.

본 발명의 일부 실시예에서는 보조수단으로서 초음파를 사용하였고, 이에 따라 역변과 결정속도를 현저히 향상시킬 수 있다.

주요문제를 편리하게 설명하기 위해, 실시예에서는 5-메틸테트라히드로폴산 및 그 염과 그 관련물질에 관한 데이터만 검출한다.

실시예1. JK12A의 제조

질소분위기에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산10g을 반응플라스크에넣고, 물80g을 첨가하여 교반하면서 10% 수산화나트륨을 이용하여 용액의 pH를 7.3으로 조절하며, 고체가 완전히 용해된 후 활성탄소5g을 첨가하고 개구한 상태에서 교반하여 밤새 반응시킨다. 원료의 반응이 완료된 후 이를 여과하고, 50%초산을 이용하여 여액의 pH를 4.0으로 조절하며, 결정체를 석출하고 여과한 다음 각각 에탄올, 아세톤을 이용하여 여과케이크를 세척하고, 진공건조시켜 황색고체인 JK12A6.0g을 얻는데, 그 화학순도는 99.42%이다.

실시예2. 5-메틸테트라히드로프테로산의 제조

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산61g을 25% 수산화나트륨수용액600ml에 천천히 첨가하고, 환류온도로 상승시켜 밤새 반응시키며, 원료의 반응이 완료된 후 온도를 실온으로 낮추고, 이물질을 여과제거하며, 진한황산을 이용하여 여액의 pH를 9~10으로 조절하고, 이물질을 석출한 후 온도를 10~15℃로 낮추어 여과하며, 계속하여 진한황산을 이용하여 여액의 pH를 2로 조절하고, 고체를 석출하며, 60℃에서 반시간동안 교반한 후 바로 여과하고, 물로 세척한 다음 건조시켜 순도가 96%인 백색고체44g을 얻는다.

실시예3. JK1303의 제조

(6S)-5-메틸테트라히드로프테로산5g을 3구플라스크에넣고, 물50g을 첨가하여 충분히 교반한 후, 10% 수산화나트륨용액을 이용하여 pH를 9.0으로 조절하며, 완전히 용해된 다음 활성탄소 3g을 첨가하고 산소볼로 밀폐하며, 밤새 교반한 후 여과하고, 물로 여과케이크를 세척하며, 50% 초산수용액을 이용하여 여액의 pH를 4로 조절하고, 30min 동안 교반하여 결정을 석출한 후 여과하며, 물로 여과케이크를 2회 세척하고, 아세톤30ml을 이용하여 2회 반죽하며, 30℃에서 진공건조하여 산물3.04g을 얻는다. HPLC 순도는 94.3%이다.

실시예4. JK12A의 역변

JK12A(HPLC: 95.91%) 0.1g을 물 10g에 첨가하고, 교반하면서 10% 수산화나트륨을 이용하여 pH를 7.2로 조절하며, 고체를 완전히 용해시킨다. 그후, 디티오트레이톨0.8g을 천천히 첨가하여 1h 동안 교반한 다음 반응액에서 5-메틸테트라히드로폴산97.53%를 샘플링하여 검출하는데, JK12A가 0.72% 잔류된다.

실시예5. JK12A의 역변

JK12A(HPLC: 95.91%) 0.1g을 물10g에 첨가하고, 교반하면서 10% 수산화나트륨을 이용하여 pH를 7.2로 조절하며, 고체를 완전히 용해시킨다. 그후, 시스테인0.5g을 천천히 첨가하여 1h 동안 교반한 다음 반응액에서 5-메틸테트라히드로폴산 96.64%을 샘플링하여 검출하는데, JK12A가 0.85% 잔류된다.

실시예6. JK12A의 역변

JK12A(HPLC: 74.04%) 0.1g과 메르캅토에탄올0.2g을 물5ml에 첨가하고, 교반하면서 30% 수산화나트륨을 이용하여 pH를 7.5로 조절하여 용해시킨다. 계속하여 1h 동안 교반한 후, 반응액에서 5-메틸테트라히드로폴산60.92%을 샘플링하여 검출하는데, JK12A가 0.59% 잔류된다.

실시예7. JK12A의 역변

JK12A(HPLC: 74.04%) 0.1g과 소듐메르캅토에탄술폰산0.2g을 물5ml에 첨가하고, 교반하면서 30% 수산화나트륨을 이용하여 pH를 7.5로 조절하여 용해시킨다. 계속하여 1h 동안 교반한 후, 반응액에서 5-메틸테트라히드로폴산72.85%를 샘플링하여 검출하는데, JK12A가 0.61% 잔류된다.

실시예8. (6S)-Mefox와 JK12A의 혼합물의 제조와 전환

질소분위기에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산1g을 반응플라스크에 넣고, 물8g을 첨가하여 교반하며, 10% 수산화나트륨을 이용하여 용액의 pH를 7.3으로 조절하고, 고체가 완전히 용해된 후 활성탄소3g을 첨가하여 개구한 상태에서 10시간 교반반응한 후 반응액을 HPLC 검출하며(5-메틸테트라히드로폴산: 12.20%, JK12A: 83.51%, (6S)-Mefox: 0.57%), 이를 여과한 후 여액에 비타민C 10g을 첨가하고, 액체염기성이 pH 7.0을 유지하도록 조절하며, 60℃에서 3시간 교반한 후 반응액을 샘플링하여 검출한다(5-메틸테트라히드로폴산: 96.49%, JK12A: 0%, (6S)-Mefox: 0%).

실시예9. JK1303의 역변

JK1303(HPLC: 96.7%) 0.1g을 물10g에 첨가하고, 교반하면서 10% 수산화나트륨을 이용하여 pH를 7.0으로 조절하며, 고체를 완전히 용해시킨다. 그 후, 비타민C 나트륨1g을 천천히 첨가하고 1h 동안 교반한 후 반응액에서 5-메틸테트라히드로프테로산96.6%을 샘플링하여 검출하는데, JK1303가 0% 잔류된다.

실시예10. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물

물50ml에 비타민C 50g을 첨가하고, 수산화나트륨을 이용하여 7.0으로 중화한 후 투명될 때까지 용해시킨다. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염의 크루드1g을 나누어 첨가한다. 65℃에서 2h 동안 초음파처리하며, 여과하고 세척한 다음 진공건조시켜(6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물0.72g을 얻는다.

함량은 질량함량이며, 이하에서도 마찬가지이다.

실시예11. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산15g, 비타민C 150g을 물225ml에 첨가하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.0으로 중화하여 용해시킨다. 1h 동안 교반한 후, 40% 염화칼슘수용액15g을 첨가하고, 70℃에서 초음파에 의해 결정을 석출하는데, 3h후 백색과립이 석출되며, 이를 여과한 후 물로 세척하고, 여과케이크를 진공건조시켜(6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 고체조성물10.1g을 얻는다.

실시예12. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산1g, 비타민C 1g, NaCl 0.5g을 물10ml에 첨가하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.0으로 중화하여 용해시킨다. 1h 동안 교반한 후, 40% 염화칼슘수용액lg을 첨가하고, 70℃에서 초음파처리하는데, 1h후 고체가 석출되며, 이를 여과한 후 세척하고, 여과케이크를 진공건조시켜 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 고체조성물0.52g을 얻는다.

실시예13. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산0.5g, 비타민C 10mg, 염화나트륨0.1g을 물10ml에 첨가하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.5로 중화하며, 투명할때까지 용해시킨다. 질소분위기에서 1h 동안 교반한 후, 20% 염화칼슘수용액1g을 첨가하고, 70℃에서 초음파에 의해 결정을 석출하는데, 1.0h 후백색과립이 석출된다. 이를 여과하고 세척하며, 여과케이크를 진공건조시켜 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 고체조성물0.38g을 얻는다.

실시예14. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산1g, 이소비타민C 3g을 물20ml에 첨가하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.0으로 중화하며, 투명할때까지 용해시킨다. 1h 동안 교반한 후, 40% 염화칼슘수용액1g을 첨가하고, 60℃에서 초음파처리하는데, 1h 후 고체가 석출되며, 이를 여과한 후 세척하고, 여과케이크를 진공건조시켜 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물0.80g을 얻는다.

실시예15. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산조성물

실시예11의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물0.5g을 취하여 40℃로가열하고, 염산용액을 이용하여 pH 4.0으로 조절하며, 체계의 pH가 변하지 않도록 유지하고, lh 교반하여 결정을 석출한 후 실온으로 냉각하며, 이를 여과하고 세척한다. 25℃에서 진공건조시켜 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산조성물0.23g을 얻고, HPLC 검출을 진행한다((6S)-5-메틸테트라히드로폴산: 99.80%, JK12A: 0%, (6S)-Mefox: 0.07%, 5-메틸테트라히드로프테로산 0%).

실시예16. 6R,S-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물

6R,S-5-메틸테트라히드로폴산1g, 비타민C 10g을 물15ml에 첨가하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.0으로 중화하며, 투명할 때까지 용해시킨다. 40% 염화칼슘수용액1g을 첨가하고, 70℃에서 초음파에 의해 결정을 석출하며, 이를 여과한 후 물로 세척하고 진공건조시켜 6R,S-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물0.54g을 얻는다.

실시예17. 6R,S-5-메틸테트라히드로폴산나트륨염 조성물

6R,S-5-메틸테트라히드로폴산1g, 비타민C 5g을 물20ml에 첨가하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.0으로 중화하며, 투명할때까지 용해시킨 후 산소를 차단한 상태에서 60℃로 2시간 반응시킨다. 그 후, 상기 반응액을 에탄올200ml에 적가하여 나트륨염을 석출하며, 이를 여과하고 세척한 후 진공건조시켜 6R,S-5-메틸테트라히드로폴산나트륨염 조성물0.52g을 얻는다.

실시예18. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산아르기닌염 조성물

비타민C 5g을 물5ml에 첨가하고, 수산화나트륨을 이용하여 7.0으로 중화하며, 투명할 때까지 용해시킨다. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산아르기닌염크루드0.5g을 첨가하여 용해하고, 60℃에서 초음파에 의해2h 교반하며, 상기 반응액을 에탄올50ml에 적가하여 고체를 교반석출한 후, 고체를 여과하고 검출하여 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산아르기닌염 조성물0.26g을 얻는다.

실시예19. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산D-글루코사민염 조성물

비타민C 5g을 물10ml에 첨가하고, 수산화나트륨을 이용하여 7.0으로 중화하며, 투명할 때까지 용해시킨다. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산D-글루코사민염의 크루드2.0g을 첨가하여 용해하고, 60℃에서 초음파에 의해 2h 교반한 후, 에탄올을 천천히 적가하여 고체를 석출하며, 이를 여과하고 에탄올을 다시 결정시켜(6S)-5-메틸테트라히드로폴산D-글루코사민염 조성물을 얻는다.

실시예20. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염과 비타민C의 고체 용액

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산1g, 비타민C 2.0g을 물20ml에 첨가하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.5로 중화하여 용해시킨다. 1h 동안 교반한 후, 40% 염화칼슘수용액1g을 첨가하고, 70℃에서 초음파에 의해 결정을 석출하는데, l.0h 후백색과립이 석출되며, 이를 여과하고 건조시킨 다음 액체검출을 진행한다((6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염: 94.89%, 비타민C: 5.11%).

실시예21. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염과 이소비타민C의 고체 용액

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산0.1g, 이소비타민C 0.3g을 물1.5ml에 첨가하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.5로 중화하여 용해시킨다. 1h 동안 교반한 후, 40% 염화칼슘수용액1g을 첨가하고, 90℃에서 교반하고 결정을 석출하는데, 1.0h 후백색과립이 석출되며, 이를 여과하고 건조시킨 다음 액체검출을 진행한다((6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염: 29.29%, 이소비타민C: 70.66%).

실시예22. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염과 리포산의 고체 용액

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산0.5g, 리포산l.0g을 물10ml에 첨가하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.5로 중화하여 용해시킨다. 1h 동안 교반한 후, 20% 염화칼슘수용액1g을 첨가하고, 70℃에서 초음파에 의해 결정을 석출하는데, 1h 후고체 용액이획득되며, 이를 여과하고 건조시킨 다음 액체검출(ELSD 검출기사용)을 진행한다((6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염: 27.69%, 리포산72.26%).

실시예23. 5-메틸테트라히드로폴산칼슘과 환원형글루타티온의 고체 용액

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산0.5g, 환원형 글루타티온1.5g을 물10ml에 첨고하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.5로 중화하여 용해시키며, 1h 동안 교반한 후, 20% 염화칼슘수용액1g을 첨가하고, 70℃에서 초음파에 의해 결정을 석출하는데, 1.0h 후백색과립이 석출되며, 이를 여과하고 건조시킨 다음 액체검출(ELSD검출기사용)을 진행한다((6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염: 37.62%, 환원형글루타티온62.33%).

실시예24. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산과 비타민C의 고체 용액

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산0.5g, 비타민C 3.0g을 물10ml에 첨가하고, 30% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.5로 중화하여 용해시키며, 1h 동안 교반한 후, 적절한6N 염산수용액을 적가하여 pH를 4.0으로 조절하고, 50℃에서 교반하여 결정을 석출하는데, l.0h 후백색과립이 석출되며, 이를 여과하고 건조시킨 다음 액체검출을 진행한다((6S)-5-메틸테트라히드로폴산: 26.80%, 비타민C: 73.17%).

실시예25. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산아연과 비타민C의 고체 용액

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산0.5g, 비타민C 1.5g을 물10ml에 첨가하고, 20% 수산화나트륨수용액을 이용하여 pH 7.5로 중화할때 반응액이 용해된다. 50% 염화아연수용액0.8g을 첨가하고, 2시간 결정시킨 후 질소분위기에서 여과하고 진공건조하여 액체검출을 진행한다((6S)-5-메틸테트라히드로폴산아연88.7%, 비타민C: 11.0%).

실시예26. (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘과 마그네슘아스코빌포스페이트의 고체 용액

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산0.5g, 마그네슘아스코빌포스페이트2.0g을 물10ml에 첨가하고, 20% 수산화나트륨수용액을 이용하여 7.5로 중화하여 용해시킨다. 50% 염화칼슘수용액0.6g을 첨가하고, 70℃에서 초음파에 의해 반응시키는데, 1.5h 후백색과립이 석출되며, 이를 질소분위기에서 여과하고 건조시킨 다음 액체검출을 진행한다((6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘: 62.4%, 비타민C: 37.4%).

실시예27. JK 방안에 따른 제품인 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염과 비타민C의 조성물의 안정성

실시예11의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘염 조성물1g과 서로 다른 중량비의 비타민C를 충분히 연마하고 혼합하여 온도25℃, 습도40%의 인큐베이터에 넣어 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산칼슘과 JK12A를 정기적으로 검출한다.

Claims

(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량이 98.0%보다 작지 않고, 관련 이물질인 JK12A의 함량이 0.1%보다 크지 않으며, 5-메틸테트라히드로프테로산이 검출되지 않는 것을 특징으로 하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 함유하는 조성물:

JK12A 5-메틸테트라히드로프테로산.
제1항에 있어서,
(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량이 99.0%보다 작지 않고, 관련 이물질인 JK12A의 함량이 0.1%보다 크지 않으며, 5-메틸테트라히드로프테로산이 검출되지 않는데, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량이 99.5%보다 작지 않고, 관련 이물질인 JK12A의 함량이 0.1%보다 크지 않으며, 5-메틸테트라히드로프테로산이 검출되지 않는 것이 바람직하고, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량이 99.8%보다 작지 않고, 관련 이물질인 JK12A의 함량이 0.05%보다 크지 않으며, 5-메틸테트라히드로프테로산이 검출되지 않는 것이 더욱 바람직하는 것을 특징으로 하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 함유하는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염은 칼륨염, 나트륨염, 칼슘염, 마그네슘염, 바륨염, 아연염, D-글루코사민염, D-갈락토사민염 또는 아르기닌염에서 선택되는데, 칼슘염, D-글루코사민염, D-갈락토사민염 또는 아르기닌염이 바람직하는 것을 특징으로 하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염을 함유하는 조성물.
물에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염의 크루드와 역변환원제를 pH 6~8, 온도 50~90℃에서 직접 반응시키거나 또는 초음파조건하에서 반응시켜 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염 조성물을 얻는 방법A와,
물에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 크루드, 역변환원제와 해당하는 염을 pH 6~8, 온도 50~90℃에서 반응시키거나 또는 초음파조건하에서 반응시켜 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염 조성물을 얻는 방법B를 포함하며,
상기 역변환원제는 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르, 이소비타민C 염, 메르캅토에탄올, 시스테인, 메르캅토에탄술폰산, 디티오트레이톨, 환원형글루타티온 또는 리포산에서 하나 또는 몇개를 선택하는 것을 특징으로 하는 제1항 또는 제2항에 따른 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 조성물의 제조 방법.
제4항에 있어서,
상기 역변환원제는 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르 또는 이소비타민C 염에서 하나 또는 몇개를 선택하는데, 비타민C, 비타민C 나트륨염, 비타민C 칼륨염, 비타민C 칼슘염, 마그네슘아스코빌포스페이트, 나트륨아스코빌포스페이트 또는 이소비타민C 중의 하나 또는 몇개가 바람직하고, 비타민C 또는 이소비타민C가 가장 바람직하며, 상기 해당하는 염은 염화염인데, 염화칼슘, 염화마그네슘, 염화아연이 바람직하는 것을 특징으로 하는 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 조성물의 제조 방법.
제4항에 있어서,
상기 방법A 또는 방법B의 반응과정은 반응온도가 60~80℃, pH가 7~7.5이고, 수산화나트륨을 이용하여 pH를 조절하는 것이 바람직하며, 역변환원제의 물에서의 중량농도가 2%보다 작지 않는데, 20%보다 작지 않는 것이 바람직하고, 40%보다 작지 않는 것이 더욱 바람직하는 것을 특징으로 하는 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 조성물의 제조 방법.
주로 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 포함하고, 액체크로마토그래피패턴에서 안정제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량의 합이 99.5%보다 크며, 상기 안정제는 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르, 이소비타민C 염, 디티오트레이톨, 환원형글루타티온 또는 리포산에서 하나 또는 몇개를 선택하는 것을 특징으로 하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제을 함유하는 고체 용액.
제7항에 있어서,
액체크로마토그래피패턴에서, (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 함량의 합이 99.8%보다 크는데, 99.9%보다 크는 것이 바람직하며, 상기 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염이 제1항에 따른 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염인 것을 특징으로 하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액.
제7항에 있어서,
상기 안정제는 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르 또는 이소비타민C 염에서 하나 또는 몇개를 선택하는데, 비타민C, 비타민C 나트륨염, 비타민C 칼륨염, 비타민C 칼슘염, 마그네슘아스코빌포스페이트, 나트륨아스코빌포스페이트, 이소비타민C, 이소비타민C나트륨염, 이소비타민C 칼륨염, 이소비타민C 칼슘염, 이소마그네슘아스코빌포스페이트, 이소나트륨아스코빌포스페이트중의 하나 또는 몇개가 바람직하고, 비타민C 또는 이소비타민C가 더욱바람직하며, 안정제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산염의 중량비가 0.2~1000:1인데, 1~10:1이 바람직하는 것을 특징으로 하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액.
물에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 크루드 또는 제1항에 따른 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산과 안정제를 pH 3~5, 온도 50~90℃에서 직접 반응시키거나 또는 초음파조건하에서 반응시켜 고체를 석출하고 분리하는 방법C와,
물에서 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산의 크루드 또는 제1항에 따른 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산, 안정제와 해당하는 염을 pH 6~8, 온도 50~90℃에서 반응시키거나 또는 초음파조건하에서 반응시켜 고체를 석출하고 분리하는 방법D를 포함하며,
상기 안정제는 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르, 이소비타민C 염, 디티오트레이톨, 환원형글루타티온 또는 리포산에서 선택되는 하나 또는 몇개이고, 상기 해당하는 염은 염화염인데, 염화칼슘, 염화마그네슘, 염화아연이 바람직하는 것을 특징으로 하는 제7항에 따른(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액의 제조 방법.
제10항에 있어서,
상기 방법C의 반응과정은 반응온도가 60~80℃, pH가 3~4이고, 염산을 이용하여 pH를 조절하며, 방법D의 반응과정은 반응온도가 60~80℃, pH가 7~7.5이고, 수산화나트륨을 이용하여 하는 것을 특징으로 하는 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액의 제조 방법.
a) 제1항에 따른 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그의 염을 함유하는 조성물, 또는 제6항에 따른(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액 및
b) 비타민C, 비타민C 에스테르, 비타민C 염, 이소비타민C, 이소비타민C 에스테르, 이소비타민C 염, 메르캅토에탄올, 시스테인, 메르캅토에탄술폰산, 디티오트레이톨, 환원형글루타티온 또는 리포산에서 하나 또는 몇개를 선택하는 환원제를 포함하는 것을 특징으로 하는 약물 조성물.
제12항에 있어서,
일반정제, 서방형정제, 방출제어형정제, 발포형정제, 과립제, 일반캡슐, 서방형캡슐, 방출제어형캡슐, 드라이현탁제, 경구용액, 경구현탁액, 주사제 또는 동결건조주사제이고, 환원제와 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 중량비가0.2~1000:1인데, 1~10:1이 바람직하는 것을 특징으로 하는 약물 조성물.
제1항에 따른 고순도의 (6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염, 또는 제6항에 따른(6S)-5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염과 안정제를 함유하는 고체 용액의 5-메틸테트라히드로폴산 또는 그 염의 결핍에 의한 포유동물의 질병을 치료하거나 예방하는 약물을 제조하는 용도.