CN109164182B - 一种对l-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6s）光学纯度的分析检测方法 - Google Patents

一种对l-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6s）光学纯度的分析检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109164182B
CN109164182B CN201811094309.6A CN201811094309A CN109164182B CN 109164182 B CN109164182 B CN 109164182B CN 201811094309 A CN201811094309 A CN 201811094309A CN 109164182 B CN109164182 B CN 109164182B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mobile phase
solution
tetrahydrofolic acid
toluenesulfonate
optical purity
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811094309.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109164182A (zh
Inventor
高友新
黄春
王旭阳
王莉佳
陈宏宇
于庆洋
汤伟彬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuxi Yew Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Wuxi Yeshan Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuxi Yeshan Pharmaceutical Co ltd filed Critical Wuxi Yeshan Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN201811094309.6A priority Critical patent/CN109164182B/zh
Publication of CN109164182A publication Critical patent/CN109164182A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109164182B publication Critical patent/CN109164182B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明提供了一种对L‑四氢叶酸对甲苯磺酸盐(6S)光学纯度的分析检测方法，所述方法是利用结合紫外检测器的高效液相色谱进行的，其中，采用蛋白质键合手性柱；流动相由流动相A和流动相B组成；采用有机相与缓冲盐溶液混合溶液作为所述流动相A；采用水作为所述流动相B；洗脱方式为等度洗脱。利用本发明的该方法可以很好的对L‑四氢叶酸对甲苯磺酸盐光学纯度进行检测，具有较高系统适应性，且灵敏度高，检测过程迅速的特点。

Description

一种对L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6S）光学纯度的分析检测 方法
技术领域
本发明涉及分析化学技术领域，尤其是涉及一种对L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（即6S）的光学纯度的分析检测方法。
背景技术
L-5-甲基四氢叶酸（L-5-MTHF）是组织和血液叶酸的主要形式，参与人体内多种重要的生化反应（比如嘌呤和胸腺嘧啶的生物合成等）。
天然存在的5-MTHF仅为L型，合成的光学异构体D型无生物活性，通过肾脏排出体外，对应的L-5-MTHF在人体中不需要经过繁琐的酶促步骤，可以直接被人体吸收利用。
因而，在L-5-甲基四氢叶酸及其盐在合成过程中，对L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6S）光学纯度的检测非常重要。在传统方法中，可以通过测定比旋度来定性检测，但结果不够精确，且稀释剂N,N-二甲基甲酰胺吸入及皮肤接触有害。
发明内容
针对L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6S）光学纯度的研究需求，本申请人提供了一种对L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐的光学纯度的分析检测方法，本方法具有较高系统适应性，且灵敏度高，检测过程迅速的特点，对L-5-甲基四氢叶酸及其盐在合成过程有重要意义。
本发明的技术方案为：
一种L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐的光学纯度的分析检测方法，所述方法是利用结合紫外检测器的高效液相色谱进行的；其中，采用蛋白质键合手性柱；流动相由流动相A和流动相B组成；所述流动相A为有机相与缓冲盐溶液的混合溶液；所述流动相B为水；洗脱方式为将流动相A与流动相B混合后进行等度洗脱。
所述紫外检测器的检测波长为280±2nm。
所述高效液相色谱法的柱温为40~45℃，流速为1.0~1.5ml/min。
所述缓冲盐溶液为磷酸二氢钠盐溶液，其溶液浓度为4.54g/L。所述有机相为乙腈。所述有机相与缓冲盐溶液的体积比为3:97。
有机相与缓冲盐溶液混合后，用浓度为32%的氢氧化钠溶液调节有机相与缓冲盐溶液的混合溶液的pH为6.5~7.0，优选pH为6.8，从而得到流动相A。
所述流动相A与流动相B的体积比为70%~45%。
所述L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐的光学纯度的分析检测方法包括以下步骤：
（1）取L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐，加入稀释剂水及浓度为1 mol/L的氢氧化钠溶液助溶，配制成浓度为0.5mg/ml的供试品溶液；
（2）色谱条件：将有机相与缓冲盐溶液的混合溶液混合，然后用浓度为32%的氢氧化钠溶液调节有机相与缓冲盐溶液的混合溶液的pH为6.5~7.0，得到流动相A；以水为流动相B；流动相A和流动相B的体积比为70%~45%；采用蛋白质键合手性柱，流速为1.0~1.5ml/min，柱温为40~45℃，等度洗脱；
（3）取所述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入配备紫外检测器的高效液相色谱仪，检测波长为280±2nm，记录色谱图；
（4）计算公式：de = AL-四氢叶酸 / （AL-四氢叶酸+ AD-四氢叶酸） * 100%。
所述de为光学纯度，单位为%。
本发明有益的技术效果在于：
在L-5-甲基四氢叶酸钙合成过程中，L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6S）光学纯度的拆分尤为重要。在检测过程中，传统的方法为通过旋光仪测定比旋度来定性考察，判断是否合格。而本发明利用高效液相色谱法，能对L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6S）光学纯度进行准确定量，且检测时间较短，利于反应过程的中控检测，具有明显优势。
附图说明
图1为实施例1测试所得高效液相色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图，对本发明进行具体描述。
实施例1
（1）取L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6S），加入稀释剂水，及适量1mol/L的氢氧化钠助溶，配制成0.5mg/ml的供试品溶液；
（2）色谱条件：将乙腈与磷酸缓冲液按照3:97（V/V）的比例混合，然后用32%氢氧化钠调节pH至6.8，得到所述流动相A，以水为所述流动相B，两者比例为50%（V/V），采用蛋白质键合手性柱，流速为1.2ml/min，柱温为42℃，等度洗脱；
（3）取所述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入配备紫外检测器的高效液相色谱仪，检测波长为280nm，记录色谱图，如图1所示。
（4）计算公式：de（光学纯度）（%）=AL-四氢叶酸/（AL-四氢叶酸+ AD-四氢叶酸）*100%=318.38/（318.38+430.77）*100%=42.5%。
实施例2
（1）取L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6S），加入稀释剂水，及适量1mol/L的氢氧化钠助溶，配制成0.5mg/ml的供试品溶液；
（2）色谱条件：将乙腈与磷酸缓冲液按照3:97（V/V）的比例混合，然后用32%氢氧化钠调节pH至6.5，得到所述流动相A，以水为所述流动相B，两者比例为45%（V/V），采用蛋白质键合手性柱，流速为1.0ml/min，柱温为40℃，等度洗脱；
（3）取所述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入配备紫外检测器的高效液相色谱仪，检测波长为278nm，记录色谱图。
（4）计算公式：de（%）=AL-四氢叶酸/（AL-四氢叶酸+ AD-四氢叶酸）*100%
计算所得的de值（光学纯度）为40.9%。
实施例3
（1）取L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6S），加入稀释剂水，及适量1mol/L的氢氧化钠助溶，配制成0.5mg/ml的供试品溶液；
（2）色谱条件：将乙腈与磷酸缓冲液按照3:97（V/V）的比例混合，然后用32%氢氧化钠调节pH至7.0，得到所述流动相A，以水为所述流动相B，两者比例为70%（V/V），采用蛋白质键合手性柱，流速为1.5ml/min，柱温为45℃，等度洗脱；
（3）取所述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入配备紫外检测器的高效液相色谱仪，检测波长为282nm，记录色谱图。
（4）计算公式：de（%）=AL-四氢叶酸/（AL-四氢叶酸+ AD-四氢叶酸）*100%
计算所得的de值（光学纯度）为41.5%。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和应用本发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于这里的实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的变化、修改、替换和变型都应该在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (2)

1.一种L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐的光学纯度的分析检测方法，其特征在于，所述方法是利用结合紫外检测器的高效液相色谱进行的；其中，采用蛋白质键合手性柱；流动相由流动相A和流动相B组成；所述流动相A为有机相与缓冲盐溶液的混合溶液；所述流动相B为水；洗脱方式为将流动相A与流动相B混合后进行等度洗脱；
所述L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐的光学纯度的分析检测方法包括以下步骤：
（1）取L-四氢叶酸对甲苯磺酸盐，加入稀释剂水及浓度为1 mol/L的氢氧化钠溶液助溶，配制成浓度为0.5mg/ml的供试品溶液；
（2）色谱条件：将有机相与缓冲盐溶液的混合溶液混合，所述有机相为乙腈；所述缓冲盐溶液为磷酸二氢钠盐溶液，其溶液浓度为4.54g/L；所述有机相与缓冲盐溶液的体积比为3:97；
然后用浓度为32%的氢氧化钠溶液调节有机相与缓冲盐溶液的混合溶液的pH为6.5~7.0，得到流动相A；以水为流动相B；流动相A和流动相B的体积比为70%~45%；采用蛋白质键合手性柱，流速为1.0~1.5ml/min，柱温为40~45℃，等度洗脱；
（3）取所述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入配备紫外检测器的高效液相色谱仪，检测波长为280±2nm，记录色谱图；
（4）计算公式：de = AL-四氢叶酸 / （AL-四氢叶酸+ AD-四氢叶酸） * 100%；
所述de为光学纯度，单位为%。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用浓度为32%的氢氧化钠溶液调节有机相与缓冲盐溶液的混合溶液的pH为6.8。
CN201811094309.6A 2018-09-19 2018-09-19 一种对l-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6s）光学纯度的分析检测方法 Active CN109164182B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811094309.6A CN109164182B (zh) 2018-09-19 2018-09-19 一种对l-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6s）光学纯度的分析检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811094309.6A CN109164182B (zh) 2018-09-19 2018-09-19 一种对l-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6s）光学纯度的分析检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109164182A CN109164182A (zh) 2019-01-08
CN109164182B true CN109164182B (zh) 2021-06-11

Family

ID=64879610

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811094309.6A Active CN109164182B (zh) 2018-09-19 2018-09-19 一种对l-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6s）光学纯度的分析检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109164182B (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101143863A (zh) * 2006-09-13 2008-03-19 南京莱因医药科技有限公司 5-甲基四氢叶酸的拆分及其成盐方法
CN103214487A (zh) * 2013-04-12 2013-07-24 张家港威胜生物医药有限公司 一种重要医药化工原料(6s)-5-甲基四氢叶酸盐的合成
EP2781214A1 (en) * 2013-03-22 2014-09-24 Chemo Research, S.L. Formulation of amorphous calcium L-5-methyltetrahydrofolate (L-5-MTHF-Ca)
CN105524066A (zh) * 2014-09-04 2016-04-27 连云港金康和信药业有限公司 (6s)-5-甲基四氢叶酸或其盐组合物及其制备和应用
CN108164531A (zh) * 2018-02-12 2018-06-15 江苏红豆杉药业有限公司 一种l-5-甲基四氢叶酸钙的制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101143863A (zh) * 2006-09-13 2008-03-19 南京莱因医药科技有限公司 5-甲基四氢叶酸的拆分及其成盐方法
EP2781214A1 (en) * 2013-03-22 2014-09-24 Chemo Research, S.L. Formulation of amorphous calcium L-5-methyltetrahydrofolate (L-5-MTHF-Ca)
CN103214487A (zh) * 2013-04-12 2013-07-24 张家港威胜生物医药有限公司 一种重要医药化工原料(6s)-5-甲基四氢叶酸盐的合成
CN105524066A (zh) * 2014-09-04 2016-04-27 连云港金康和信药业有限公司 (6s)-5-甲基四氢叶酸或其盐组合物及其制备和应用
CN108164531A (zh) * 2018-02-12 2018-06-15 江苏红豆杉药业有限公司 一种l-5-甲基四氢叶酸钙的制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
(6S)一5一甲基四氢叶酸的合成及其研究;张越等;《精细与专用化学品》;20051121;全文 *
Resolution of the Stereoisomers of Leucovorin and 5-Methyltetrahydrofolate by Chiral High-Performance Liquid Chromatography;KYUNG E. CHOI et al.;《ANALYTICAL BIOCHEMISTRY》;19881231;全文 *
菌体中L － 5 － 甲基四氢叶酸的HPLC 法检测;卞筱泓等;《中国新药杂志》;20121231;全文 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109164182A (zh) 2019-01-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Byun et al. Analysis of polyamines as carbamoyl derivatives in urine and serum by liquid chromatography–tandem mass spectrometry
Cheng et al. High-performance liquid chromatographic analysis with electrochemical detection of biogenic amines using microbore columns
CN109725073B (zh) 乙酰半胱氨酸对映异构体的分离检测方法
Bongaerts et al. Sensitive targeted methods for brain metabolomic studies in microdialysis samples
Wang et al. High-performance liquid chromatographic determination of histamine in biological samples: The cerebrospinal fluid challenge–A review
Zhang et al. Sensitive determination of melamine leached from tableware by reversed phase high-performance liquid chromatography using 10-methyl-acridone-2-sulfonyl chloride as a pre-column fluorescent labeling reagent
JP2013541009A (ja) 検体検出方法
CN109164182B (zh) 一种对l-四氢叶酸对甲苯磺酸盐（6s）光学纯度的分析检测方法
Czejka et al. Determination of thalidomide and its major metabolites by high-performance liquid chromatography
CN107271592B (zh) 一种盐酸替吡拉西与其相关杂质完全分离的液相色谱纯度检测方法
Dasgupta Postcolumn techniques: A critical perspective for ion chromatography
Song et al. Chemiluminescence assay for uric acid in human serum and urine using flow-injection with immobilized reagents technology
Yoshitake et al. Liquid chromatography method for detecting native fluorescent bioamines in urine using post-column derivatization and intramolecular FRET detection
CN112034066B (zh) 一种分离测定瑞博西尼及杂质的方法
CN112611814B (zh) 一种干血片中1,5-脱水葡萄糖醇的测定方法
CN112630314B (zh) 一种l-丙氨酸异丙酯盐酸盐与其对映异构体的分离方法
Bertucci et al. HSA binding of HIV protease inhibitors: a high‐performance affinity chromatography study
Flood et al. Urinary metanephrines as measured by liquid chromatography with an on-line post-column reaction detector.
Simonson et al. Separation and detection of underivatized amino acids
CN110702819A (zh) 一种用高效液相色谱法分离测定含多个手性中心的多肽手性异构体的方法
Chen et al. High‐performance liquid chromatographic resolution of 1‐(1, 4‐benzodioxane‐2‐formyl)‐piperazine enantiomers after chiral derivatization
Khalil et al. Dipyridamole: comprehensive profile
CN117030917B (zh) 一种维生素d代谢物的衍生方法与检测方法和检测维生素d代谢物的试剂盒
CN103512991A (zh) 尿液中丙烯酰胺巯基尿酸代谢物的自动在线分析方法
CN116003378B (zh) 一种pd-l1靶向的分子探针及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 214000 red bean Industrial Park, Donggang Town, Xishan District, Jiangsu, Wuxi

Applicant after: Wuxi Yeshan Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: 214199 red bean Industrial Park, Donggang Town, Xishan District, Jiangsu, Wuxi

Applicant before: JIANGSU YEW PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP01 Change in the name or title of a patent holder
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 214000 Hongdou Industrial Park, Donggang Town, Xishan District, Wuxi City, Jiangsu Province

Patentee after: Wuxi yew Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: 214000 Hongdou Industrial Park, Donggang Town, Xishan District, Wuxi City, Jiangsu Province

Patentee before: Wuxi Yeshan Pharmaceutical Co.,Ltd.