KR20170039275A - 인플루엔자 바이러스 감염에 사용하기 위한 인돌 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 인플루엔자 감염의 또는 이에 대한 치료에 사용될 수 있는 화학식 I의 구조를 갖는 화합물에 관한 것이다.
Description
인플루엔자는 인간 집단에서 높은 발병률로 잦은 대규모 이환율 및 사망률을 초래하는 심각한 공중 보건 문제이다. 이는 급성 열병(acute febrile illness)을 야기하는 고도로 접촉전염성인 공기매개 질병(highly contagious airborne disease)이다. 전신 증상은 중증도에 있어서 경미한 피로부터 호흡 부전 및 사망에 이르기까지 다양하다. WHO에 따르면, 매년 발생되는 유행병의 평균 전세계 부담은 약 10억 건 정도의 사례일 수 있으며, 3백만 내지 5백만 건의 사례는 심각한 병(severe illness)이고, 300,000 내지 500,000건의 사망건수가 해마다 발생되고 있다. 해마다, 인플루엔자 바이러스는 인간에서 순환하여, 전형적으로 모든 연령 그룹 내에 있는 인구의 5 내지 20%에 영향을 주는데, 이 숫자는 대유행기에는 최대 30%까지 상승한다. 심각한 병 및 사망의 비율은 65세 초과의 사람, 2세 미만의 어린이, 및 인플루엔자로부터 합병증에 대한 증가 위험에 놓이게 하는 의학적 질환, 예컨대 만성 심장, 폐, 신장, 간 혈액 또는 대사성 질병, 또는 약화된 면역 시스템을 갖는 임의의 연령의 사람 사이에서 최고이다. 사망이 어린이 사이에서 드물기는 하지만, 입원율은 동반이환(co-morbid) 상태의 존재 또는 부재에 따라 5세 미만의 어린이의 경우 100,000건당 대략 100 내지 500건의 범위이다. 24개월 미만의 어린이 사이에서의 입원율은 65세 초과의 사람 사이에서 보고된 입원율과 비견된다.
미국에서, 매년 발생되는 인플루엔자 유행병은 대략 3000만 외래환자 내원을 초래하며, 그 결과 해마다 100억 달러의 의료 비용이 들게 된다. 병 및 사망으로 인한 상실 수익액(lost earning)은 해마다 150억 달러를 초과하는 비용을 나타내고, 매년 발생되는 인플루엔자 유행병의 총 미국 경제적 부담은 850억 달러를 초과하기에 이른다.
인플루엔자를 야기하는 병원체는, 오르토믹소바이러스과(family Orthomyxoviridae)에 속하는, 네거티브 센스 단일-가닥 RNA 바이러스이다. A형, B형 및 C형의 3가지 유형의 인플루엔자 바이러스가 있다. A형 인플루엔자 바이러스는 가장 일반적인 형태로, 이는 포유동물 및 조류에서 확산될 수 있다. A형 인플루엔자의 아형은 표면 단백질인 혈구응집소(H) 및 뉴라미니다제(N)의 유형에 따라 명명된다. 18개의 상이한 혈구응집소 및 11개의 알려진 뉴라미니다제가 있다. 인간에서 발견되는 현재의 계절성 인플루엔자 바이러스는 주로 H1N1 및 H3N2 아형이다. B형 인플루엔자 바이러스는 단지 인간에게서만 통상 발견된다. 이것은 아형으로 세분되지 않지만, 상이한 바이러스주(strain)로 추가로 나누어질 수 있다. 순환성 인플루엔자 바이러스는 매년마다 매우 변동되기 쉬우며, A형 및 B형 인플루엔자 둘 모두 전세계에 걸쳐 계절성 유행병을 야기한다. C형 인플루엔자 바이러스는 훨씬 더 경미한 증상을 나타내며, 이는 유행병을 야기하지 않는다.
3가지 모든 유형의 바이러스는 유사한 게놈 구조를 갖는다. 게놈은 유형에 따라 9 내지 11개의 단백질을 인코딩하는 8개의 절편을 포함한다. A형 인플루엔자는 11개의 단백질을 인코딩하는데, 이에는 표면 단백질(혈구응집소(HA) 및 뉴라미니다제(NA)), 중합효소 복합체(PA, PB1 및 PB2), 핵단백질(NP), 막 단백질(M1 및 M2), 및 기타 단백질(NS1, NS2, NEP)이 포함된다. 3가지 인플루엔자 바이러스 유형 중에서, A형 인플루엔자가 최고의 돌연변이율을 갖는다. B형 인플루엔자는 A형보다는 더 느리게 그러나 C형보다는 더 빠르게 진화된다. 절편화된 게놈은 유전자가 상이한 바이러스주들 사이에서 교환될 수 있게 하며, 이는 인플루엔자 바이러스의 신종 변이체를 발생시킨다.
인플루엔자 바이러스는 감염된 개인 또는 바이러스-오염된 물질과의 직접 접촉에 의해 인간들 사이에서 전염될 수 있다. 사람들은 또한 공기 중에 떠다니는 바이러스 비말(droplet)의 흡입에 의해 감염될 수 있다. 비말은 기침, 재채기에 의해 또는 감염자가 말할 때 발생된다. 계절성 인플루엔자는 고열, 기침(통상 마른 기침), 두통, 근육 및 관절 통증, 심각한 권태감(찌뿌드한 느낌), 인후염 및 콧물의 갑작스러운 발생에 의해 특징지어진다. 기침은 심각할 수 있어서 2주 이상 지속될 수 있다. 대부분의 사람들은 의학적 치료에 대한 필요 없이 1주 이내에 열 및 기타 증상으로부터 회복한다. 그러나, 인플루엔자는, 특히 상기 언급된 바와 같은 고위험에 처한 사람들에서 심각한 병 또는 사망을 야기할 수 있다. 잠복기(incubation period)로 알려진, 감염으로부터 병에 이르기까지의 시간은 약 2일이다.
그러한 병으로부터의 질병 및/또는 심각한 결과를 방지하는 가장 효과적인 방법은 백신화(vaccination)이다. 안전하고 효과적인 백신이 입수가능하고, 60세 초과의 사람에게 사용되어 왔다. 건강한 성인들 사이에서, 인플루엔자 백신은 합리적인 보호를 제공할 수 있다. 그러나, 백신화는 몇몇 제한을 갖는다. 먼저, 인플루엔자 백신은 고령자들 사이에서 병을 예방하는 데 덜 효과적일 수 있고, 단지 질병의 중증도 및 합병증 및 사망의 발생률을 감소시킬 수 있을 뿐이다. 게다가, 인플루엔자 백신화는 순환성 바이러스가 백신 바이러스와 잘 매칭될 때 가장 효과적이어서, 백신화의 성공은 그 계절의 가장 우세한 바이러스 유형의 우수한 예측에 대체로 좌우된다. 현재의 인플루엔자 백신에 대한 백신-유도 면역 반응의 단수명 성질과 결합된, 항원 소변이(antigenic drift)를 통한 인플루엔자 바이러스주의 신속하고 계속적인 진화는, 계절적으로 적절한 바이러스주에 의한 백신화가 예방을 위해 해마다 필요함을 의미한다.
인플루엔자의 현재의 치료는 직접 항바이러스 약물, 또는 인플루엔자-유도 증상을 풀어주는 의약을 사용한다. 시장에서 입수가능한 다음 2가지 부류의 인플루엔자 항바이러스 약물이 있다: 뉴라미니다제 억제제 및 M2 채널 억제제. 뉴라미니다제 억제제인 오셀타미비르(oseltamivir) 또는 자나미비르(zanamivir)는 인플루엔자의 예방 및 치료를 위해 권장되는 1차 항바이러스제이다. 이들은 A형 및 B형 인플루엔자 바이러스 둘 모두에 대해 효과적이다. 이들 항바이러스 약물에 대한 내성의 발생이 계절성 인플루엔자의 치료 동안에, 그리고 산발성 오셀타미비르-내성 2009 H1N1 바이러스에서 확인되었지만, 공중 보건 영향은 지금까지 제한되어 있다. M2 채널 억제제, 예컨대 아만타딘 및 리만타딘(아만타단)은 A형 인플루엔자 바이러스주에 대해서는 활성이지만, B형 인플루엔자 바이러스주에 대해서는 비활성이다. 순환성 A형 인플루엔자 바이러스들 사이에서의 아다만탄 내성은 2003년 내지 2004년을 시작으로 그 두 해 동안 전세계적으로 급속히 증가하였다. 따라서, 아만타딘 및 리만타딘은 현재의 순환성 A형 인플루엔자 바이러스주의 항바이러스 치료 또는 화학예방(chemoprophylaxis)에 권장되지 않는다.
2009년에, 신종 돼지(swine) H1N1 바이러스주는 인간, 피그(pig), 및 조류의 H1N1 바이러스로부터의 유전자의 재편성(reassortment)의 결과로서 예기치 않은 인플루엔자 범유행(pandemic)을 야기하였다. 고병원성 조류 H5N1 바이러스주의 계속 진행 중인 순환, 및 중국에 격리되어 있고 40% 사망률을 갖는 심각한 호흡기 질병 - 이는 잠재적으로 인간-대-인간 전염에 대해 적응될 수 있음 - 과 관련된 조류 기원의 신종 재편성체인 H7N9 바이러스의 최근의 출현과 함께, 이러한 과거의 범유행은 신종 인플루엔자 바이러스주에 대한 전세계 인구의 취약성을 강조하였다. 백신화가 인플루엔자 감염을 제어하기 위한 주요 예방적 전략을 유지하여 신종 백신이 입수가능하게 되기 전에 그 기간을 이어주고 심각한 인플루엔자 사례를 치료할 뿐만 아니라, 바이러스 내성의 문제에 대응하기도 하지만, 항-인플루엔자 약물의 더 넓은 선택이 요구되고 있다. 따라서, 신규한 인플루엔자 항바이러스제의 개발은 다시 높은 우선도 및 충족되지 않은 의학적 필요성을 갖게 되었다.
본 발명은 바이러스성 인플루엔자 감염의 치료 또는 예방에 사용될 수 있는 화학식 I의 화합물, 이의 입체이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체에 관한 것이다:
[화학식 I]
(상기 식에서,
X는 N 또는 C이며, N 및 C는 -CN, -CF3, -C1-3 알킬-NH-C(O)-C1-3 알킬, -C(O)-NH2, -C(O)-NH-C1-3 알킬, -C(O)-N-(디알킬) 또는 -CH2-NH-C(O)-CH3에 의해 선택적으로 치환되고;
R1은 F 또는 Cl이고;
R2 및 R4는 각각 H, 할로겐, CN, CF3, -O-알킬 또는 NH2로부터 선택되고;
R3은 F, Cl, CN, CF3, -C1-3 알킬, -O-알킬, 카르복실산 에스테르 또는 카르복실산 아미드이고;
R5는 Br, CN, CH3, CH2OH, C(O)NH2, NH2 또는 H이고;
R6은 카르복실산에 의해 치환된 C1-8 알킬이거나; 또는
카르복실산, -N-C1- 3알킬설폰, 또는 C1-6 알킬에 의해 선택적으로 치환된 -N-C(O)-C3-6헤테로사이클에 의해 치환된 C3-8 사이클로알킬이거나; 또는
-N-C(O)-C3- 6헤테로사이클에 의해 치환된 C3-6 헤테로사이클이거나; 또는
COOH에 의해 치환된 C3-6 헤테로사이클임).
바람직하게는, 본 발명에 따른 화합물은, R1 및 R3이 둘 모두 F인 화학식 I에 따른 화합물이다.
본 발명에 따른 바람직한 화합물은
또한, 본 발명의 일부는, 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체를 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약제학적 조성물이다.
본 약제학적 조성물은 또한 추가 치료제, 예컨대 또 다른 항바이러스제 또는 인플루엔자 백신, 또는 둘 모두를 포함할 수 있다.
또한, 약제로서 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체, 또는 약제학적 조성물이 본 발명에 속한다.
추가적으로, 본 발명은 인플루엔자의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체, 또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
따라서, 본 발명의 일부는 생물학적 샘플 또는 환자에서 인플루엔자 바이러스(들)의 복제를 억제하기 위한 하기 구조식 I로 나타낸 화합물, 이의 입체이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체의 용도이다.
[화학식 I]
(상기 식에서,
X는 N 또는 C이며, N 및 C는 -CN, -CF3, -C1-3 알킬-NH-C(O)-C1-3 알킬, -C(O)-NH2, -C(O)-NH-C1-3 알킬, -C(O)-N-(디알킬) 또는 -CH2-NH-C(O)-CH3에 의해 선택적으로 치환되고;
R1은 F 또는 Cl이고;
R2 및 R4는 각각 H, 할로겐, CN, CF3, -O-알킬 또는 NH2로부터 선택되고;
R3은 F, Cl, CN, CF3, -C1-3 알킬, -O-알킬, 카르복실산 에스테르 또는 카르복실산 아미드이고;
R5는 Br, CN, CH3, CH2OH, C(O)NH2, NH2 또는 H이고;
R6은 카르복실산에 의해 치환된 C1-8 알킬이거나; 또는
카르복실산, -N-C1- 3알킬설폰, 또는 C1-6 알킬에 의해 선택적으로 치환된 -N-C(O)-C3-6헤테로사이클에 의해 치환된 C3-8 사이클로알킬이거나; 또는
-N-C(O)-C3- 6헤테로사이클에 의해 치환된 C3-6 헤테로사이클이거나; 또는
COOH에 의해 치환된 C3-6 헤테로사이클임).
상기 용도는 또한 추가 치료제의 병용-투여를 포함할 수 있으며, 상기 추가 치료제는 항바이러스제 또는 인플루엔자 백신, 또는 둘 모두로부터 선택된다.
용어 "알킬"은 지정된 개수의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 지방족 탄화수소를 지칭한다.
용어 "할로겐"은 F, Cl, Br 또는 I를 지칭한다.
용어 "사이클로알킬"은 지정된 개수의 탄소 원자를 함유하는 카보사이클릭 고리를 지칭한다. 명확함을 위하여, 이는, 예를 들어 화합물 5에서와 같이 C1 또는 C2 가교(bridge)를 포함할 수 있다.
용어 "헤테로사이클"은 N, O 또는 S로부터, 특히 N 및 O로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 포화 또는 부분 포화된 분자를 지칭한다. 상기 헤테로사이클은 4, 5, 6 또는 7개의 고리 원자를 가질 수 있다. 특히, 상기 헤테로사이클은 5개 또는 6개의 고리 원자를 가질 수 있다.
화학식 I의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염은 이의 산 부가 염 및 염기 염을 포함한다. 적합한 산 부가 염은 비독성 염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 적합한 염기 염은 비독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다.
본 발명의 화합물은 또한 비용매화된 형태 및 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 본 명세서에서, 용어 "용매화물"은 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 용매 분자, 예를 들어 에탄올을 포함하는 분자 복합체를 기술하기 위해 사용된다.
용어 "다형체"는, 본 발명의 화합물이 하나 초과의 형태 또는 결정 구조로 존재할 수 있음을 지칭한다.
본 발명의 화합물은 결정질 또는 비정질 생성물로서 투여될 수 있다. 이는 침전, 결정화, 냉동 건조, 분무 건조, 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해, 예를 들어 고체 조각(solid plug), 분말, 또는 필름으로서 수득될 수 있다. 이는 단독으로 투여되거나, 또는 본 발명의 하나 이상의 다른 화합물과 병용하거나 하나 이상의 다른 약물과 병용하여 투여될 수 있다. 일반적으로, 이는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 회합하여 제형으로서 투여될 것이다. 본 명세서에서, 용어 "부형제"는 본 발명의 화합물(들) 이외의 임의의 성분을 기술하기 위해 사용된다. 부형제의 선택은 특정 투여 방식, 용해성 및 안정성에 미치는 부형제의 영향, 및 투여형의 성질과 같은 인자들에 대체로 좌우된다.
본 발명의 화합물 또는 이의 임의의 하위그룹은 투여 목적을 위하여 다양한 약제학적 형태로 제형화될 수 있다. 적절한 조성물로서는, 전신 투여 약물에 통상 사용되는 모든 조성물이 언급될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물을 제조하기 위하여, 활성 성분으로서, 선택적으로 부가 염 형태인 특정 화합물의 유효량을 약제학적으로 허용되는 담체와 친밀한 혼화물(admixture) 상태로 배합하며, 이러한 담체는 투여에 요구되는 제제의 형태에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 이러한 약제학적 조성물은 바람직하게는, 예를 들어 경구, 직장, 또는 경피 투여에 적합한 단일 투여형(unitary dosage form)이다. 예를 들어, 경구 투여형의 조성물을 제조하는 데 있어서는, 통상의 약제학적 매체 중 임의의 것이 사용될 수 있는데, 예를 들어, 현탁액, 시럽, 엘릭서(elixir), 에멀젼, 및 용액과 같은 경구 액체 제제의 경우에는 물, 글리콜, 오일, 알코올 등과 같은 약제학적 매체가 사용되거나; 또는 분말, 환제, 캡슐, 및 정제의 경우에는 고체 담체, 예컨대 전분, 당, 카올린, 희석제, 윤활제, 결합제, 붕해제 등과 같은 약제학적 매체가 사용된다. 투여에 있어서의 용이성 때문에, 정제 및 캡슐이 가장 유리한 경구 투여 단위형을 나타내며, 이 경우에 고체 약제학적 담체가 명백히 사용된다. 또한, 사용 직전에 액체 형태로 변환될 수 있는 고체 형태 제제가 포함된다. 경피 투여에 적합한 조성물에서, 담체는 선택적으로 침투 향상제 및/또는 적합한 습윤제를 포함하는데, 이들은 선택적으로 미소한 비율로 임의의 성질의 적합한 첨가제와 배합되며, 이러한 첨가제는 피부에 대해 상당한 유해 영향을 미치지 않는다. 상기 첨가제는 피부에 대한 투여를 촉진시킬 수 있고/있거나 원하는 조성물을 제조하는 데 도움이 될 수 있다. 이들 조성물은 다양한 방법으로, 예를 들어 경진피(transdermal) 패치로서, 스폿-온(spot-on)으로서, 연고로서 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 흡입 또는 취입(insufflation)을 통해 투여될 수 있는데, 이는 이러한 방식을 통한 투여를 위해 당업계에 사용되는 방법 및 제형에 의해 달성될 수 있다. 따라서, 일반적으로 본 발명의 화합물은 용액, 현탁액 또는 건조 분말의 형태로 폐에 투여될 수 있다.
투여 용이성 및 투여량의 균일성을 위하여, 상기 언급된 약제학적 조성물을 단위 투여형(unit dosage form)으로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 단위 투여형은 단일 투여량(unitary dosage)으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위들을 지칭하며, 각각의 단위는 필요한 약제학적 담체와 회합하여 원하는 치료적 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 성분을 함유한다. 그러한 단위 투여형의 예는 정제(스코어링(scored) 또는 코팅(coated) 정제를 포함함), 캡슐, 환제, 분말 패킷, 웨이퍼, 좌제, 주사 용액 또는 현탁액 등, 및 이들의 분리된 다회분(segregated multiple)이다.
감염성 질병의 치료에 관한 숙련자는 이후에 제출되는 검사 결과로부터 유효량을 결정할 수 있을 것이다. 일반적으로는, 유효 일일량이 0.01 mg/kg 내지 50 mg/kg 체중, 더 바람직하게는 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg 체중일 것으로 고려된다. 필요한 용량을 2회, 3회, 4회 또는 그 이상의 하위용량으로 하루 종일 적절한 간격으로 투여하는 것이 적절할 수 있다. 상기 하위용량은 단위 투여형으로 제형화될 수 있는데, 이러한 단위 투여형은, 예를 들어 단위 투여형당 1 내지 1000 mg, 특히 5 내지 200 mg의 활성 성분을 함유할 수 있다.
정확한 투여량 및 투여 빈도는 사용되는 특정 화학식 I의 화합물, 치료되는 특정 질환, 치료되는 질환의 중증도, 특정 환자의 연령, 체중 및 일반적인 신체 상태뿐만 아니라 개인이 복용 중일 수 있는 다른 투약제에도 좌우되는데, 이는 당업자에게 잘 알려진 바와 같다. 더욱이, 유효량은 치료되는 대상체의 반응에 따라 그리고/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 평가에 따라 감소 또는 증가될 수 있음이 명백하다. 따라서, 상기 언급된 유효량 범위는 단지 가이드라인이며, 본 발명의 범주 또는 용도를 전혀 제한하고자 하지 않는다.
실시예
반응도식 1.
화합물 1의 제조
반응도식 1. 시약 및 조건(Ts = 토실). i) TsCl, TBAHS, NaOH, 톨루엔, 3h, rt, ii) NBS, DCM, 18h, rt, iii) 비스 피나콜레이토디보론, Pd(dppf)Cl2, KOAc, 디옥산, 18h, 75℃, iv) [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II), K3PO4, 디옥산/물, D, 10min, 전자레인지(microwave) 100℃, v) NaOCH3/메탄올, rt.
중간체 A의 제조
5,7-디플루오로인돌[301856-25-7](500 mg, 3.27 mmol)을 질소 하에서 교반하면서 톨루엔(8 mL)에 첨가하였다. 테트라부틸암모늄 하이드로겐 설페이트(83 mg, 0.25 mmol)를 첨가한 후, NaOH(H2O 중 50%, 5 mL)를 첨가하고, 혼합물을 격렬하게 교반하였다. 톨루엔(8 mL) 중 p-톨루엔설포닐 클로라이드(654 mg, 3.43 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물 전체를 3시간 동안 교반하였다. p-톨루엔설포닐 클로라이드(300 mg)의 추가의 양을 톨루엔(5 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 적가하고, 혼합물 전체를 3시간 동안 교반하였다. 반응은 완료되었고, 유기 층을 분리하고 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 백색 고체, A를 수득하였다. LC-MS ES- m/z = 306.0, Rt: 1.22분, 방법 A. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)δppm 2.36 (s, 3 H), 6.92 (m, 1 H), 7.19 (m, 1 H), 7.35 (m, 1 H), 7.44 (m, 2 H), 7.80 (m, 2 H), 7.99 (m, 1 H)
중간체 B의 제조
N-브로모석신이미드(9.64 g, 54.18 mmol)를 실온에서 CH2Cl2(300 mL) 중 5,7-디플루오로-1-토실-인돌(16.65 g, 54.18 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 처리하고, 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 유기 층을 건조시키고(MgSO4), 고체를 여과에 의해 제거하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 물질(crude)을 실리카 플래시 컬럼 크로마토그래피(구배: 헵탄부터 헵탄/DCM 1/1까지)에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜, 갈색 고체로서 3-브로모-5,7-디플루오로-1-토실-인돌을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 385.9, Rt: 1.37분, 방법 A.
중간체 C의 제조
디옥산(50 mL) 중 3-브로모-5,7-디플루오로-1-토실-인돌(2 g, 5.18 mmol), 비스-피나콜레이토디보론[201733-56-4](1973 mg, 7.77 mmol), Pd(dppf)Cl2(379 mg, 0.52 mmol) 및 KOAc(1525 mg, 15.54 mmol)의 혼합물을 질소 하에서 18시간 동안 75℃까지 가열하였다. 반응을 실온까지 냉각시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 농축시켰다. 조 C, 5,7-디플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
중간체 D의 제조
2,4-디클로로-5-플루오로-피리미딘(2.76 g, 16.55 mmol)의 용액을 에탄올(70 mL) 및 THF(70 mL) 중에서 실온에서 교반하였다. (+/-)-시스-N-(3-아미노사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(4.1 g, 16.548 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(8.56 mL, 0.75 g/mL, 49.64 mmol)을 반응 혼합물에 적가하고, 70℃에서 1시간 동안 그리고 이어서 주위 온도에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 물 중에 흡수시키고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 1회 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 실리카 플래시 컬럼 크로마토그래피(구배: CH2Cl2부터 CH2Cl2/메탄올: 90/10까지)에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 풀링(pooling)하고 증발 건조시켜, 백색 고체로서 D를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 342.3; Rt: 0.75분, 방법 A.
1의 제조
1,4-디옥산(3 mL) 및 물(0.6 mL) 중 C(100 mg, 0.23 mmol), (+/-)-N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(79 mg, 0.23 mmol), [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐[95408-45-0]15 mg, 0.023 mmol) 및 K3PO4(147 mg, 0.69 mmol)의 혼합물을 전자레인지에서 10분 동안 100℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 패킹된 셀라이트(packed celite) 위로 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 조 물질에 주위 온도에서 2시간 동안 메탄올(2 mL), 및 소듐 메톡사이드(메탄올 중 30%, 3 mL)를 첨가하였다. 반응을 완료하고, 혼합물을 진한 HCl로 중화시켰다. 조 물질을 분취용 HPLC(고정상: RP Uptisphere Prep C18 ODB-10 μm, 30x150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH4HCO3 용액, 메탄올)를 통해 정제하였다. 분획을 수집하고, 용매를 감압 하에서 제거하여 1을 수득하였다.
중간체 G의 제조
THF(250 mL) 중 (+/-)-시스-3-(boc-아미노)사이클로헥산카르복실산[222530-33-8](9.51 g, 39.09 mmol), 디페닐 포스포릴 아지드(12.61 mL, 58.63 mmol) 및 Et3N(7.61 mL, 54.72 mmol)의 혼합물을 2시간 동안 환류하였다. 용액을 실온에 도달하게 하고, 이어서 피롤리딘(9.81 mL, 117.26 mmol)을 첨가하고, 용액을 1시간 동안 환류하였다. 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 침전물을 여과에 의해 단리하고 THF로 세척하고, 진공 중에서 건조시켜, 백색 분말로서 H, t-부틸 (+/-)-(시스-3-(피롤리딘-1-카르복스아미도)사이클로헥실)카르바메이트를 수득하였다.
1,4-디옥산(4 M, 344 mL) 중 HCl 중 (+/-)-t-부틸 (시스-3-(피롤리딘-1-카르복스아미도)사이클로헥실)카르바메이트(23.77 g, 76.33 mmol)의 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용액을 감압 하에서 농축시키고, 이어서 진공 중에서 건조시켜, 백색 고체로서 G, (+/-)-N-((시스)-3-아미노사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드를 수득하였다.
2의 제조
2,4-디클로로-5-플루오로-피리미딘(3 g, 17.97 mmol)의 용액을 에탄올(70 mL) 및 THF(70 mL) 중에서 실온에서 교반하였다. (+/-)-메틸 3-아미노-4,4-디메틸펜타노에이트[1273387-45-3](3.62 g, 22.75 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(9.3 mL, 53.90 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 1시간 동안, 이어서 주위 온도에서 18시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고; 잔류물을 물 중에 용해시키고, 이어서 CH2Cl2로 분배하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 위로 플래시 컬럼 크로마토그래피(구배: CH2Cl2부터 CH2Cl2/메탄올: 90/10까지)에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜 에틸 및 메틸 (+/-)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜타노에이트의 혼합물을 수득하였다. 혼합물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LC-MS ES+ m/z = 290.1; Rt: 1.00분, m/z = 304.1; Rt: 1.08분; 방법 A.
THF(20 mL) 및 물(5 mL) 중 에틸 및 메틸 (+/-)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜타노에이트(1 g, 3.45 mmol) 및 LiOH(827 mg, 34.51 mmol)의 혼합물을 주위 온도에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 HCl로 중화시키고, 감압 하에서 용매의 부피를 감소시켰다. 침전물을 여과에 의해 단리하고, 물로 세척하고 50℃에서 진공 중에서 건조시켜, 백색 고체, (+/-)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄산을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 276.1; Rt: 0.57분, 방법 A.
디옥산(15 mL) 중 C(1 g, 2.31 mmol), (+/-)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄산(789 mg, 2.86 mmol), [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(150 mg, 0.23 mmol), K3PO4(1470 mg, 6.92 mmol) 및 물(1.5 mL)의 혼합물을 전자레인지에서 10분 동안 100℃까지 가열하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 조 (+/-)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄산을 다음 단계에 그대로 사용하였다.
메탄올(30 mL) 중 (+/-)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄산(2.5 g, 4.57 mmol)의 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 소듐 메톡사이드(메탄올 중 30%, 3 mL)로 처리하였다. 반응 혼합물을 진한 HCl로 중화시켰다. 조 물질을 분취용 HPLC(고정상: RP Uptisphere Prep C18 ODB-10 μm, 30x150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH4HCO3 용액, 메탄올)를 통해 정제하였다. 최상의 분획을 수집하고, 풀링하고, 용매를 감압 하에서 제거하여 2를 수득하였다.
3의 제조
CH2Cl2(100 mL) 중 (+/-)-tert-부틸 ((시스)-3-아미노사이클로헥실)카르바메이트(5 g, 23.3 mmol) 및 DMAP(7.1 g, 58.3 mmol)의 혼합물을 주위 온도에서 교반하고, 이어서 1-메틸-1h-이미다졸-4-카르복실산(2.9 g, 23.3 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 10분 동안 교반한 후, EDC(6.7 g, 35 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 시트르산(5% 수용액)으로 세척하고, 유기 층을 제거하고, 건조시키고(MgSO4), 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하여 (+/-)-t-부틸 ((시스)-3-(1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미도)사이클로헥실)카르바메이트를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 323.5; Rt: 0.75분, 방법 A.
중간체 G를 제조하는 방법에서와 같이, boc 기의 제거를 디옥산 중 HCl을 통해 진행하여 (+/-)-N-((시스)-3-아미노사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드를 수득하였다.
(+/-)-N-[(시스)-3-아미노사이클로헥실]-1-메틸-이미다졸-4-카르복스아미드(4.64 g, 15.7 mmol) 및 2,6-디클로로-5-플루오로-3-피리딘카르보니트릴(3 g, 15.7 mmol)의 용액을 ACN(50 mL) 중에서 실온에서 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(10 mL, 54 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2 d 동안, 이어서 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. CH2Cl2를 첨가하고, 백색 침전물을 여과에 의해 단리하였으며, (+/-)-N-((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LC-MS ES+ m/z = 377.1; Rt: 1.58분, 방법 B.
(+/-)-N-((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드를 생성물 1 및 2의 형성에서 기재된 바와 동일한 조건 하에서 중간체 C와 반응시켰다. 이어서, 생성물 1 및 2의 형성에서 기재된 바와 같이 토실 기의 탈보호를 수행하였다.
4의 제조
THF(40 mL) 중 2,6-디클로로-5-플루오로-3-피리딘카르보니트릴(4.77 g, 25 mmol)의 용액을 실온에서 교반하였으며, 이 동안에 ACN(20 mL) 중 G(6.19 g, 25 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(8.62 mL, 50 mmol)의 혼합물을 적가하였다. 반응을 주위 온도에서 2일 동안 교반되게 하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 물질을 디이소프로필에테르/에틸아세테이트: 1/1 중에 용해시키고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고(MgSO4), 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔류물을 디이소프로필에테르 중에 분쇄하고 진공 중에서 건조시켜, 백색 고체, (+/-)-N-((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 366.1; Rt: 0.88분, 방법 A.
(+/-)-N-((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드를 생성물 1 및 2의 형성에서 기재된 바와 동일한 조건 하에서 중간체 C와 반응시켰다. 이어서, 생성물 1 및 2의 형성에서 기재된 바와 같이 토실 기의 제거를 수행하였다.
5의 제조
J(제조를 위해서는 문헌[J. Med. Chem. 2014, DOI : 10.1021/jm5007275] 참조)를 생성물 1 및 2의 형성에서 기재된 바와 동일한 조건 하에서 중간체 C와 반응시켰다. 이어서, 생성물 1 및 2의 형성에서 기재된 바와 같이 토실 기의 탈보호를 수행하였다. THF(5 mL) 및 물(1 mL) 중 (+/-)-(트랜스)-메틸 3-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.2]옥탄-2-카르복실레이트(34 mg, 0.079 mmol) 및 LiOH(19 mg, 0.79 mmol)의 용액을 주위 온도에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진한 HCl로 중화시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 조 물질을 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30 x 150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH4HCO3 용액, CH3CN)를 통해 정제하였다. 수집된 분획을 풀링하고, 용매를 감압 하에서 제거하여 5를 수득하였다.
6의 제조
압력 반응기 내에 (+/-)-N-((시스)-3-((5-시아노-6-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(200 mg, 0.31 mmol), NH3(aq., 4 mL), 메탄올(12 mL), 및 라니 Ni(18 mg)를 넣었다. 베셀(vessel)을 밀봉하고, 대기를 제거하고 주위 온도에서 20분 동안 5 bar에서 수소 가스로 대체하고, 이어서 50℃에서 9시간 동안 10 bar로 증가시켰다. 반응을 실온까지 냉각시키고 압력을 해제하였다. 반응 혼합물을 패킹된 셀라이트 위로 여과하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하여 (+/-)-N-((시스)-3-((5-(아미노메틸)-6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드를 수득하였으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
유리 튜브 내에 (+/-)-N-((시스)-3-((5-(아미노메틸)-6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(100 mg, 0.14 mmol), CH2Cl2(2 mL), Et3N(80 μL, 0.58 mmol) 및 아세틸 클로라이드(31 μL, 0.43 mmol)를 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 물, 염수 및 에틸 아세테이트를 반응 혼합물에 첨가하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고(MgSO4), 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 혼합물을 분취용 LC(실리카 15 내지 40 μm, 이동상 구배: CH2Cl2/CH3OH/aq. NH3 100/0/0부터 90/10/1까지)에 의해 정제하였다. 최상의 분획을 풀링하고, 용매를 감압 하에서 제거하고, 진공 중에서 건조시켜(50℃에서 24시간), 백색 고체로서 6을 수득하였다.
[표 A] 약어 및 정의
N
-((1
R*,
3
S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(
9
)의 제조
N-((시스)-3-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(1)의 정제를 분취용 SFC(정지상: Chiralpak Diacel AS 20 x 250 mm, 이동상: CO2, 0.2% 이소프로필아민을 갖는 에탄올)를 통해 수행하였다. 최상의 분획을 수집하고, 용매를 감압 하에서 제거하여 표제 화합물(9)을 수득하였다.
(2
S*,
3
S
*)-3-
(
(2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.2]옥탄-2-카르복실산(
10
)의 제조
(+/-)-(트랜스)-3-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.2]옥탄-2-카르복실산(5)의 정제를 분취용 SFC(정지상: Chiralpak Diacel AS 20 x 250 mm, 이동상: CO2, 0.2% 이소프로필아민을 갖는 2-프로판올)를 통해 수행하였다. 최상의 분획을 풀링하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 염(crude salt)을 분취용 HPLC(정지상: Uptisphere C18 ODB - 10 μm, 200 g, 5 cm, 이동상: 물 중 0.25% NH4HCO3 용액, CH3CN)를 통해 정제하였다. 최상의 분획을 풀링하고, 용매를 감압 하에서 제거하여, 백색 고체로서 표제 화합물(10)을 수득하였다.
(+)-
벤질
tert
-부틸 ((1
R
*,3
S
*)-
사이클로헥산
-1,3-
디일
)
디카르바메이트의
제조
트리에틸아민(35 mL, 251.6 mmol) 및 디페닐포스포릴 아지드(39.056 mL, 181.086 mmol)를 톨루엔(600 mL) 중 시스-3-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]사이클로헥산카르복실산(39 g, 160.25 mmol)의 교반된 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 벤질 알코올(33.167 mL, 320.51 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 100℃까지 가열하였다. 12시간 후에, 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 진공 중에서 농축시켰다. 순상 키랄 분리(정지상: Daicel Chiralpak AD 2 kg, 이동상: 구배 80% 헵탄, 20% 에탄올부터 80% 헵탄, 20% 에탄올까지)를 통해 정제를 수행하여 (+)-벤질 tert-부틸 ((1R*,3S*)-사이클로헥산-1,3-디일)디카르바메이트, [α]D 20 +10.9(c 0.52, DMF) 및 (-)-벤질 tert-부틸 ((1R*,3S*)-사이클로헥산-1,3-디일)디카르바메이트, [α]D 20 -10.9(c 0.47, DMF)를 수득하였다.
tert
-부틸 ((1
R
*,3
S
*)-3-
아미노사이클로헥실
)
카르바메이트의
합성
메탄올(55 mL) 중 벤질 tert-부틸 ((1R*,3S*)-사이클로헥산-1,3-디일)디카르바메이트(6.50 g, 18.65 mmol), Pd/C 10%(0.79 g)의 혼합물을 25℃에서 7시간 동안 수소 분위기(5 bar) 하에서 교반하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 용매를 감압 하에서 제거하여 tert-부틸 ((1R*,3S*)-3-아미노사이클로헥실)카르바메이트(3.88 g, 18.09 mmol)를 수득하였으며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다. LC-MS ES+ m/z = 215.1; Rt: 0.40분, 방법 E.
tert
-부틸 ((1
R*,
3
S
*)-3-((2-
클로로
-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)
사이클로헥실
)카르바메이트의 합성.
이소프로필 알코올(20 mL) 중 tert-부틸 ((1R*,3S*)-3-아미노사이클로헥실)카르바메이트(2.75 g, 12.83 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(2.68 mL, 15.39 mmol) 및 2,4-디클로로-5-플루오로피리미딘(2.25 g, 13.47 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 조 물질을 CH2Cl2 중에 용해시켰다. 유기 용액을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시켰다. 유기 층을 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 ((1R*,3S*)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(2.70 g, 7.83 mmol)를 수득하였다.
LC-MS ES+ m/z = 345.0; Rt: 1.42분, 방법 G. [α]D 23 -131.6 (c 0.36, MeOH).
1H NMR (300 MHz, CDCl3) ppm 0.97-1.26 (m, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.50 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 1.96-2.14 (m, 2H), 2.39 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 3.55 (m, 1H), 4.07 (m, 1H), 4.40 (m, 1H), 5.04 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 2.25 Hz, 1H).
N
-((1
R*,
3
S
*)-3-((2-(5-
클로로
-7-
플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-5-메틸피라진-2-카르복스아미드(
11
)의 합성.
단계 1. 5-
클로로
-7-
플루오로
-3-
요오도
-1
H
-
인돌의
합성
THF(15 mL) 중 5-클로로-7-플루오로-1H-인돌(500 mg, 2.94 mmol)의 용액에 THF(15 mL) 중 N-요오도석신이미드(729 mg, 3.24 mmol)의 용액을 적가하고, 생성된 현탁액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고 CH2Cl2 중에 용해시켰다. 유기 용액을 포화 Na2S2O5 용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고 증발 건조시켜 조 물질을 생성하였으며, 이것을 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 5-클로로-7-플루오로-3-요오도-1H-인돌(580 mg, 1.96 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CD3OD) ppm 6.98 (dd, J= 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.13 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H).
단계 2.
tert
-부틸 5-
클로로
-7-
플루오로
-3-
요오도
-1
H
-인돌-1-
카르복실레이트의
합성.
CH2Cl2(10 mL) 중 디-tert-부틸 디카르보네이트(0.54 mL, 2.35 mmol)를 실온에서 DCM(10 mL) 중 5-클로로-7-플루오로-3-요오도-1H-인돌(580 mg, 1.96 mmol), 트리에틸아민(0.41 mL, 2.94 mmol) 및 DMAP(2.32 mg, 0.02 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 및 물로 세척하였다. 유기 층을 증발 건조시키고 조 물질을 헵탄-EtOAc로 용리하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 5-클로로-7-플루오로-3-요오도-1H-인돌-1-카르복실레이트(700 mg, 1.77 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) ppm 1.64 (s, 9H), 7.12 (dd, J= 11.8, 1.6 Hz, 1H), 7.21 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H).
단계 3.
tert
-부틸 5-
클로로
-7-
플루오로
-3-(4,4,5,5-
테트라메틸
-1,3,2-
디옥사보롤란
-2-일)-1
H
-인돌-1-카르복실레이트의 합성
4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란(19.96 mL, 126.39 mmol) 및 트리에틸아민(10.19 mL, 75.83 mmol)를 디옥산(250 mL) 중 tert-부틸 5-클로로-7-플루오로-3-요오도-1H-인돌-1-카르복실레이트(10.0 g, 25.27 mmol)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 이어서, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(2.92 g, 2.52 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 5분 동안 탈기하고 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 용매를 증발 건조시켰다. 조 물질을 헵탄-EtOAc로 용리하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 5-클로로-7-플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인돌-1-카르복실레이트(5.7 g, 14.4 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) ppm 1.36 (s, 12H), 1.63 (s, 9H), 7.03 (dd, J= 11.9, 1.7 Hz, 1H), 7.76 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H).
단계 4.
tert
-부틸 3-(4-(((1S*,3R*)-3-((
tert
-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)-5-클로로-7-플루오로-1
H
-인돌-1-카르복실레이트의 합성
디옥산(30 mL) 및 물(3 mL) 중 tert-부틸 5-클로로-7-플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인돌-1-카르복실레이트(1.5 g, 3.79 mmol), tert-부틸 ((1R*,3S*)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(1.30 g, 3.79 mmol), [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)(247 mg, 0.38 mmol) 및 인산삼칼륨(2.41 g, 11.37 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고, 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 용매를 증발 건조시키고, CH2Cl2 중에 희석시키고, 물로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 3-(4-(((1S*,3*R*)-3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)-5-클로로-7-플루오로-1H-인돌-1-카르복실레이트(1.30 g, 2.25 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 578.3; Rt: 1.64분, 방법 E. [α]D 23 -75.1 (c 0.26, MeOH).
단계 5.
tert
-부틸 3-(4-(((
1S*,3R
*)-3-
아미노사이클로헥실
)아미노)-5-
플루오로피리미딘
-2-일)-5-클로로-7-플루오로-1
H
-인돌-1-카르복실레이트의 합성.
HCl(디옥산 중 4.0 M, 0.75 mL, 3.01 mmol)을 1,4-디옥산(2 mL) 중 (tert-부틸 3-(4-(((1S*,3R*)-3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)-5-클로로-7-플루오로-1H-인돌-1-카르복실레이트(290 mg, 0.50 mmol)의 용액에 서서히 첨가하고, 이어서 진한 HCl(0.1 mL, 0.19 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭(quenching)하고 CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고 증발 건조시키고, 조 물질을 DCM-MeOH(92:8)로 용리하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 3-(4-(((1S*,3R*)-3-아미노사이클로헥실)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)-5-클로로-7-플루오로-1H-인돌-1-카르복실레이트(120 mg, 0.25 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 478.1; Rt: 1.27분, 방법 E. [α]D 23 -54.9 (c 0.26, MeOH).
단계 6.
tert
-부틸 5-클로로-7-플루오로-3-(5-플루오로-4-(((1
S*,
3
R
*)-3-(5-메틸피라진-2-카르복스아미도)사이클로헥실)아미노)피리미딘-2-일)-1
H
-인돌-1-카르복실레이트의 합성.
HBTU(396 mg, 1.04 mmol)를 불활성 분위기 하에서 실온에서 5분 동안 THF(2 mL) 중 5-메틸피라진-2-카르복실산(75.8 mg, 0.54 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, DMSO(0.25 mL) 중 tert-부틸 3-(4-(((1S*,3R*)-3-아미노사이클로헥실)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)-5-클로로-7-플루오로-1H-인돌-1-카르복실레이트(250 mg, 0.52 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.22 mL, 1.30 mmol)의 용액을 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 물로 희석시키고 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시키고 조 물질을 헵탄-EtOAc로 용리하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 5-클로로-7-플루오로-3-(5-플루오로-4-(((1S*,3R*)-3-(5-메틸피라진-2-카르복스아미도)사이클로헥실)아미노)피리미딘-2-일)-1H-인돌-1-카르복실레이트(160 mg, 0.26 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 598.2; Rt: 1.43분, 방법 E.
단계 7.
N
-((1
R*,
3
S
*)-3-((2-(5-
클로로
-7-
플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-5-메틸피라진-2-카르복스아미드(
11
)의 합성.
트리플루오로아세트산(2 mL)을 DCM(2 mL) 중 tert-부틸 5-클로로-7-플루오로-3-(5-플루오로-4-(((1S*,3R*)-3-(5-메틸피라진-2-카르복스아미도)사이클로헥실)아미노)피리미딘-2-일)-1H-인돌-1-카르복실레이트(150 mg, 0.25 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 5% NaOH 수용액으로 염기성화(basify)하고, 침전물을 여과하고 CH2Cl2 로 세척하여 N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-클로로-7-플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-5-메틸피라진-2-카르복스아미드(11)(45 mg, 0.09 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 498.1; Rt 2.86분, 방법 D. [α]D 23 -159.3 (c 0.22, MeOH). mp 251.5℃. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) ppm 1.28-1.78 (m, 4H), 1.89 (m, 2H), 2.04 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 2.58 (s, 3H), 4.05 (m, 1H), 4.26 (m, 1H), 7.24 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 8.30 (m, 4H), 8.60 (s, 1H), 8.76 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 9.02 (s, 1H), 12.58 (br s, 1H).
N -((1 R*, 3 S *)-3-((2-(5,7- 디플루오로 -1 H -인돌-3-일)-5- 플루오로피리미딘 -4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1 H -이미다졸-5-카르복스아미드의 합성.
tert
-부틸 ((1
R
*,3
S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트의 합성
단계 1. 5,7-디플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌(3.0 g, 6.92 mmol), tert-부틸 ((1R*,3S*)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(2.86 g, 8.30 mmol, [α]D 23 -131.6(c 0.36, MeOH)), 인산삼칼륨(4.41 g, 20.77 mmol) 및 [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)(0.45 g, 0.69 mmol)를 불활성 분위기 하에서 디옥산(90 mL) 및 물(9 mL)의 탈기된 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고 용매를 증발 건조시켜 조 물질을 생성하였으며, 이것을 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 ((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(3.0 g, 4.87 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 616.2; Rt: 1.38분, 방법 E.
단계 2. (1
S*,
3
R
*)-N
1
-(2-(5,7-
디플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민의 합성.
디옥산(34.1 mL, 136.43 mmol) 중 HCl 4.0 M을 디옥산(20 mL) 중 tert-부틸 ((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(7.0 g, 11.37 mmol)의 용액에 서서히 첨가하고, 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고 CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고 증발시켜 (1S*,3R*)-N1-(2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민(3.63 g, 7.05 mmol)을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 516.2; Rt: 0.90분, 방법 E. [α]D 23 -80.9 (c 0.23, MeOH).
단계 3.
N
-((1
R*,
3
S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1
H
-이미다졸-5-카르복스아미드의 합성.
1-메틸-1H-이미다졸-5-카르복실산(55 mg, 0.43 mmol)을 THF(2 mL) 중 HBTU(331 mg, 0.87 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 실온에서 5분 동안 교반하였다. 이어서, DMSO(2 mL) 중 (1S*,3R*)-N 1-(2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민(150 mg, 0.29 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.15 mL, 0.87 mmol)의 용액을 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 물로 희석시키고 CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켜 N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-5-카르복스아미드(142 mg, 0.23 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 624.2; Rt: 0.99분, 방법 E.
단계 4.
N
-((
1R*,3S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-5-카르복스아미드의 합성.
소듐 메톡사이드(0.62 mL의 25% w/v 용액, 2.71 mmol)를 CH3OH(1 mL) 중 N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-5-카르복스아미드(141 mg, 0.23 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-5-카르복스아미드(12)(41 mg, 0.09 mmol)를 수득하였다.
N
-((
1R*,3S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-시스-2,5-디메틸피롤리딘-1-카르복스아미드(
13
) 및
N-
((
1R*,3S*
)-3-((2-(5,7-디플루오로-1
H
-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-트랜스-2,5-디메틸피롤리딘-1-카르복스아미드(
14
)의 제조
단계 1. 1,4-디옥산(8 mL) 중 (1S*,3R*)-N 1-(2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민(160 mg, 0.31 mmol) 및 Et3N(0.086 mL, 0.728 g/mL, 0.621 mmol)의 용액을 주위 온도에서 교반하였다. 1,4-디옥산(2 mL) 중 페닐 클로로포르메이트(39 μL, 0.31 mmol)의 혼합물을 실온에서 적가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응을 완료하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔류 분획을 CH2Cl2 중에 용해시키고 염수로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고(MgSO4), 감압 하에서 농축시켰다. 수득된 생성물을 다음 단계에 그대로 사용하였다.
단계 2. 50 mL 둥근바닥 플라스크에서, 1,4-디옥산(15 mL) 중 페닐 ((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(150 mg, 0.236 mmol), 2,5-디메틸피롤리딘(33 μL, 0.271 mmol), Et3N(37.72 μL, 0.271 mmol) 및 DMAP(9 mg, 0.07mmol)의 혼합물을 가열 환류하고, 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 물질을 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 3. 100 mL 플라스크에서, N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-2,5-디메틸피롤리딘-1-카르복스아미드(170 mg, 0.266 mmol)를 60℃에서 1,4-디옥산(9 mL) 중에서 교반하였으며, 이 동안에 증류수(1 mL) 중 LiOH(63.7 mg, 2.7 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 환류되게 하고, 주위 온도에서 하룻밤 교반되게 하였다. 1,4-디옥산을 증발시키고, 잔류물을 20 mL의 CH3OH 중에 흡수시키고, 교반하고, 진한 HCl로 중화시켰다. 용액을 분취용 HPLC(고정상: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 μm, 30 x 250 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH4HCO3 용액, CH3OH)를 통해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜, 백색 고체, N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-시스-2,5-디메틸피롤리딘-1-카르복스아미드(13) 및 N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-트랜스-2,5-디메틸피롤리딘-1-카르복스아미드(14)를 수득하였다.
1-((1
R*,
3
S*
)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-3-(테트라하이드로푸란-3-일)우레아(
15
)의 제조
CH3CN(8 mL) 중 (1S*,3R*)-N 1-(2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민(150 mg, 0.291 mmol)의 혼합물을 실온에서 교반하였다. CH3CN(2 mL) 중 3-이소시아네이토옥솔란(33 mg, 0.291 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응을 완료하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 물질을 다음 단계에 정제 없이 사용하였다. 이어서, 화합물 13 및 14에 대해 토실 기를 탈보호하는 절차에 따라 토실 기의 탈보호를 행하였다. 조 물질을 분취용 HPLC(고정상: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 μm, 30 x 250 mm, 이동상: 0.25% aq. NH4HCO3, CH3OH)를 통해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜 백색 고체(15)를 수득하였다.
(
시스
)-
N
1
-(6-(5,7-
디플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로
-5-(
트리플루오로메틸
)피리딘-2-일)사이클로헥산-1,3-디아민의 제조
단계 1. CH3CN(35 mL) 중 벤질(시스)-3-아미노사이클로헥실카르바메이트(3.55 g, 12.47 mmol), 2,6-디클로로-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-피리딘(2916.674 mg, 12.47 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(4.3 mL, 24.93 mmol)의 혼합물을 120℃에서 18시간 동안 오토클레이브에서 가열하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔류 분획을 헵탄부터 디클로로메탄까지의 구배를 사용하여 실리카 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜, 백색 고체, 벤질 ((시스)-3-((6-클로로-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 446.1; Rt: 1.36분, 방법 A.
단계 2. 1,4-디옥산(10 mL) 및 H2O(1 mL) 중 C(350 mg, 0.808 mmol), 벤질 ((시스)-3-((6-클로로-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(191.31 mg, 0.61 mmol), [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(52.6 mg, 0.08 mmol) 및 K3PO4(514.4 mg, 2.423 mmol)의 혼합물을 오토클레이브에서 20분 동안 100℃까지 가열하였다. 반응을 완료하고, 혼합물을 농축시켰다. 잔류 분획을 다음 단계에 그대로 사용하였다. LC-MS ES+ m/z = 717.2; Rt: 1.55분, 방법 A.
단계 3. 벤질 ((시스)-3-((6-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(8.6 g, 8.4 mmol)가 담긴 100 mL 둥근바닥 플라스크에 50℃에서 TFA(25 mL)를 첨가하고, 12시간 동안 교반을 계속하였다. 물(5 mL)을 첨가하고 주위 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 감압 하에서 혼합물의 부피를 감소시키고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 포화 NaHCO3 용액 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜, 오일, (시스)-N 1-(6-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)사이클로헥산-1,3-디아민을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 583.2; Rt: 1.29분, 방법 A.
N
-((
시스
)-3-((6-(5,7-
디플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로
-5-(
트리플루오로메틸
)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실) 아미드의 합성에 대한 일반적 절차
CH2Cl2(15 mL) 중 (시스)-N 1-(6-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)사이클로헥산-1,3-디아민(0.5 g, 0.858 mmol) 및 DMAP(0.262 g, 2.146 mmol)의 혼합물을 실온에서 교반하고, 이어서 1 당량의 카르복실산 유도체를 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. EDC(0.247 g, 1.287 mmol)를 첨가하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 HCl(aq., 1 N)로 세척하고, 유기 상을 농축시켜 조 화합물을 수득하였다.
N
-((
시스
)-3-((6-(5,7-
디플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로
-5-(
트리플루오로메틸
)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실) 아미드의 토실 기
탈보호에
대한 예시적인 절차
N-((시스)-3-((6-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(500 mg, 0.724 mmol)를 물(5 mL) 및 1,4-디옥산(15 mL) 중 NaOH(290 mg, 7.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 주위 온도에서 하룻밤 교반하였다. 반응을 1 N HCl(aq., 10 mL)로 중화시키고, 이어서 증발 건조시켰다. 분취용 HPLC(정지상: Uptisphere C18 ODB - 10 μm, 200 g, 5 cm, 이동상: 물 중 0.25% NH4HCO3 용액, CH3CN)를 통해 정제를 수행하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜, 고체, N-((1S*,3R*)-3-((6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(16)를 수득하였다.
3-((6-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로
-5-(
트리플루오로메틸
)피리딘-2-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄산의 제조.
단계 1. DMA(5 mL) 중 2,6-디클로로-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘(1 g, 4.15 mmol) 및 메틸 3-아미노-4,4-디메틸펜타네이트 HCl(973.5 mg, 4.975 mmol)의 용액을 N,N-디이소프로필에틸아민(2.89 mL, 16.58 mmol)에 첨가하였다. 혼합물을, 마이크로파 조사 하에서, 밀봉된 튜브에서 140℃에서 45분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 빙수 중에서 켄칭하고 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 물질을 플래시 컬럼 크로마토그래피(실리카; 100% CH2Cl2)에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 진공 중에서 증발시켜, 고체, 메틸 3-((6-클로로-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아미노)-4,4-디메틸펜타노에이트를 수득하였다.
단계 2. 이어서, 1을 제조하는 방법에 따라 스즈키(Suzuki) 반응 및 토실 기의 탈보호를 진행하였다.
단계 3. 1,4-디옥산(20 mL) 및 물(2 mL)의 용액 중 조 메틸 3-((6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아미노)-4,4-디메틸펜타노에이트(110 mg, 0.232 mmol) 및 LiOH(55.6 mg, 2.32 mmol)의 혼합물을 주위 온도에서 18시간 동안 교반하였다. 반응을 진한 HCl로 중화시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하고 조 물질을 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30x150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH4HCO3 용액, CH3CN)를 통해 정제한 후, 분취용 HPLC(정지상: XBridge Prep C18 ODB- 5 μm, 30x250 mm, 이동상: 0.25% aq. NH4HCO3, CH3OH)를 통해 두 번째 정제를 수행하였다. 원하는 분획을 수집하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 거울상 이성질체 분리를 분취용 SFC(정지상: Chiralpak Diacel AS 20 x 250 mm, 이동상: CO2, 0.2% 이소프로필아민을 갖는 에탄올)를 통해 수행하였다. 원하는 분획을 수집하고 용매를 감압 하에서 제거하여 (S*)-3-((6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄산(17) 및 (R*)-3-((6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄산(18)을 수득하였다.
2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-
N
-(3,3-디메틸-1-(1
H
-
테트라졸
-5-일)부탄-2-일)-5-플루오로피리미딘-4-아민(
19
)의 합성
단계 1. 둥근바닥 플라스크에서, 2,4-디클로로-5-플루오로-피리미딘(1.5 g, 8.98 mmol)의 용액을 THF(36 mL) 중에서 실온에서 교반하였다. 3-아미노-4,4-디메틸-펜탄니트릴 하이드로클로라이드(1.85 g, 11.38 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(4.64 mL, 26.95 mmol)을 반응 혼합물에 적가하고, 70℃에서 1시간 동안 교반하고, 주위 온도에서 하룻밤 계속하였다. 고체를 여과에 의해 제거하고, THF로 세척하고, 감압 하에서 증발시켰다. 조 물질을 실리카 플래시 컬럼 크로마토그래피 (구배: CH2Cl2부터 CH2Cl2/CH3OH까지 100부터 90/10까지)에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜, 고체로서 3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄니트릴을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 257.2; Rt: 1.76분, 방법 B.
단계 2. 1,4-디옥산(9 mL) 및 H2O(1.2 mL) 중 C(750 mg, 0.865 mmol), 3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄니트릴(1739 mg, 4.616 mmol), [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(56.41 mg, 0.087 mmol) 및 K3PO4(551 mg, 2.596 mmol)의 혼합물을 마이크로파 조사 하에서 20분 동안 125℃까지 가열하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 CH2Cl2 중에 용해시켰다. 혼합물을 데칼라이트(decalite) 위로 여과하고, 여과액을 염수로 2회 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄니트릴을 다음 단계에 추가의 정제 없이 사용하였다. LC-MS ES+ m/z = 528.4; Rt: 2.47분, 방법 B.
단계 3. 2-프로판올(1.5 mL) 및 물(3 mL) 중 3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜탄니트릴(100 mg, 0.19 mmol)의 용액에 아지드화나트륨(24.6 mg, 0.38 mmol), 브롬화아연(21 mg, 0.095 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 HCl(3 N, 3 mL) 및 EtOAc(15 mL)를 첨가하였다. 유기 층을 단리하고, 수성 층을 EtOAc(2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 증발시켰다. 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30x150 mm, 이동상: 0.25% aq. NH4HCO3, CH3CN)를 통해 정제를 수행하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜 백색 고체(19)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 417.4; Rt: 1.50분, 방법 B.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 1.06 (s, 9 H) 3.21 - 3.32 (m, 2 H) 4.76 (td, J=9.85, 3.41 Hz, 1 H) 6.77 (d, J=10.78 Hz, 1 H) 6.85 - 6.95 (m, 1 H) 7.96 - 8.01 (m, 2 H) 8.03 (d, J=3.74 Hz, 1 H) 11.75 (s, 1 H)
7-
플루오로
-5-
메틸
-3-(4,4,5,5-
테트라메틸
-1,3,2-
디옥사보롤란
-2-일)-1-토실-1
H
-인돌(
C2
)의 제조
2-
플루오로
-6-
요오도
-4-
메틸아닐린의
제조
일염화요오드(8.9 mL, DCM 중 1 M, 8.9 mmol)를 실온에서 MeOH(5 mL) 및 CH2Cl2(10 mL) 중 2-플루오로-4-메틸아닐린(0.5 mL, 4.45 mmol)의 용액에 20분에 걸쳐 적가하고, 이어서 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. NaOH(1 N)를 5℃에서 서서히 첨가하고, 유기 층을 분리하고, aq. Na2SO3, 이어서 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피(실리카, 15 내지 35 μm, 헵탄/EtOAc 95/5)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 증발시켜, 무색 오일로서 2-플루오로-6-요오도-4-메틸아닐린(0.662 g, 95%)을 수득하였다.
2-
플루오로
-4-
메틸
-6-((
트리메틸실릴
)
에티닐
)아닐린의 제조
THF(98 mL) 중 2-플루오로-6-요오도-4-메틸아닐린(8.66 g, 34.5 mmol), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드(1.21 g, 1.72 mmol), 요오드화구리(0.33 g, 1.72 mmol) 및 트리에틸아민(19.4 mL, 138 mmol)의 용액을 N2 가스로 5분 동안 퍼지하고, 이어서 트리메틸실릴아세틸렌(7.64 mL, 55.19 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2로 희석시키고, 물/NH3(30% aq.), 이어서 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고(MgSO4), 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 실리카 플래시 크로마토그래피(15 내지 35 μm, 헵탄/EtOAc 100/0부터 95/5까지)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고, 용매를 증발시켜 2-플루오로-4-메틸-6-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린(7.47g, 94%)을 수득하였다.
7-
플루오로
-5-
메틸
-1
H
-
인돌의
제조
NMP(100 mL) 중 2-플루오로-4-메틸-6-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린(5.77 g, 24.76 mmol) 및 포타슘 t-부톡사이드(8.34 g, 74.29 mmol)의 용액을 교반하고, 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 이어서 얼음/물에 붓고, EtOAc로 추출하였으며, 유기 층을 분리하고, 물 및 염수로 2회 세척하고, 건조시켰으며(MgSO4), 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 95/5부터 85/15까지)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고, 용매를 증발시켜 7-플루오로-5-메틸-1H-인돌(2.70 g, 73%)을 수득하였으며, 이는 정치 시에 결정화되었다.
7-
플루오로
-5-
메틸
-1-토실-1
H
-
인돌의
제조
NaH(광유 중 60% 분산물)(0.87 g, 21.72 mmol)를 N2 유동으로 퍼지된 0℃의 DMF(30 mL) 중 7-플루오로-5-메틸-1H-인돌(2.7 g, 18.1 mmol)의 용액에 적가하고, 이어서 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 토실 클로라이드(3.62 g, 19.01 mmol)를 0℃에서 적가하고, 이어서 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수-물(90 mL)에 붓고, 이어서 혼합물을 10분 동안 교반하였다. EtOAc를 첨가하고 유기 층을 추출하고, MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하여 7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌(5.08g, 92%)을 수득하였다.
3-
브로모
-7-
플루오로
-5-
메틸
-1-토실-1
H
-
인돌의
제조
N-브로모석신이미드(2.27 g, 12.75 mmol)를 실온에서 CH2Cl2(66 mL) 중 7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌(4.07 g, 12.75 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 aq. NaHCO3로 처리하고, 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 실리카 플래시 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 95/5부터 80/20까지)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 용매를 증발시켰다. 잔류물을 EtOH로부터 결정화하고, 여과하고, 진공 하에서 건조시켜, 옅은 베이지색 분말로서 3-브로모-7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌(3.30g, 68%)을 수득하였다.
7-
플루오로
-5-
메틸
-3-(4,4,5,5-
테트라메틸
-1,3,2-
디옥사보롤란
-2-일)-1-토실-1
H
-인돌(
C2
)의 제조
DME(16 mL) 중 3-브로모-7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌(0.7 g, 1.83 mmol), 비스(피나콜레이토)디보론(0.7 g, 2.75 mmol), 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II):CH2Cl2(0.075 g, 0.092 mmol) 및 포타슘 아세테이트(0.54 g, 5.49 mmol)의 혼합물을 N2 유동으로 5분 동안 퍼지하고, 이어서 교반하고, 100℃에서 18시간 동안 가열하였다. EtOAc(40 mL) 및 염수(10 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 셀라이트의 짧은 패드를 통해 여과하고, 여과액을 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 증발 건조시켜 7-플루오로-5-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌(C2)(1.27 g, 96%)을 수득하였다. 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
N
-((
시스
)-3-((5-
플루오로
-2-(7-
플루오로
-5-
메틸
-1H-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(
20
)의 합성
단계 1. N-((시스)-3-((5-플루오로-2-(7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드의 제조. DME(16 mL) 중 C2(1.27 g, 1.77 mmol), D(0.43 g, 1.27 mmol), K2CO3(2 M, 2.54 mL, 5.07 mmol)의 용액을 N2 가스로 5분 동안 퍼지하고, 이어서 CH2Cl2와 복합체를 형성한 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐 II(0.1 g, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 용액을 전자레인지에서 20분 동안 100℃까지 가열하였다. 혼합물을 물 및 CH2Cl2에 붓고, 유기 층을 소수성 프릿(frit)으로 분리하고 증발 건조시켰다. 실리카 플래시 크로마토그래피(CH2Cl2/MeOH/NH4OH, 100/0/0부터 97/3/0.1까지)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고, 용매를 증발시켜, 베이지색 포말로서 N-((시스)-3-((5-플루오로-2-(7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(0.14 g, 18%)를 수득하였다.
단계 2. MeOH(2.8 mL) 중 N-((시스)-3-((5-플루오로-2-(7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(0.14 g, 0.23 mmol) 및 소듐 메톡사이드(MeOH 중 30 중량% 용액)(0.13 mL, 0.69 mmol)의 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 유기 층을 추출하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 0.1 g의 조 생성물을 수득하였다. 분취용 LC(고정상: 구형 베어(bare) 실리카 5 μm 150 x 30.0 mm, 이동상: 구배 0.2% NH4OH, 98% CH2Cl2, 2% CH3OH부터 0.8% NH4OH, 92% CH2Cl2, 8% MeOH까지)를 통해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 증발시켜 0.025 g을 생성하였다. 잔류물을 하룻밤 아세토니트릴/물 2/8로 냉동 건조시켜, 백색 분말로서 20(0.023 g, 22%)을 수득하였다.
N
-((
시스
)-3-((5-
플루오로
-2-(7-
플루오로
-5-
메틸
-1
H
-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실) 아미드의 합성에 대한 일반적 절차.
tert
-부틸 ((
시스
)-3-((2-
클로로
-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)
사이클로헥실
)카르바메이트의 제조.
EtOH(21 mL) 및 THF(21 mL) 중 2,4-디클로로-5-플루오로-피리미딘(2.14 g, 12.83 mmol), tert-부틸 ((시스)-3-아미노사이클로헥실)카르바메이트(3.3 g, 15.4 mmol), 디이소프로필에틸아민(13.3 mL, 76.99 mmol)의 용액을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 물 중에 흡수시키고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 DIPE로부터 결정화하고, 여과하고, 60℃에서 진공 하에서 건조시켜, 백색 분말로서 tert-부틸 ((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(3.67 g, 83%)를 수득하였다.
(
시스
)-
N
1
-(2-
클로로
-5-
플루오로피리미딘
-4-일)
사이클로헥산
-1,3-
디아민
하이드로클로라이드의
제조
HCl(1,4-디옥산 중 4 M, 58.5 mL, 234.15 mmol) 중 tert-부틸 ((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(3.67 g, 10.64 mmol)의 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용액을 50℃에서 감압 하에서 농축시켜, 백색 고체, (시스)-N 1-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민 하이드로클로라이드(3.3 g, 99%)를 수득하였다.
N
-((
시스
)-3-((2-
클로로
-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)
사이클로헥실
)
피콜린아미드의
제조
THF(6 mL) 및 CH2Cl2(6 mL) 중 (시스)-N 1-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민 하이드로클로라이드(0.7 g, 2.05 mmol), 피콜린산(0.30 g, 2.46 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸 카르보디이미드 하이드로클로라이드(0.47 g, 2.46 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 수화물(0.38 g, 2.46 mmol), 및 디이소프로필에틸아민(1.41 mL, 8.20 mmol)의 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 CH2Cl2로 추출하고, 유기 층을 소수성 프릿으로 분리하고 증발 건조시켰다. 잔류물을 DIPE로부터 결정화하고, 여과에 의해 단리하고, 50℃에서 진공 하에서 건조시켜, 백색 분말로서 N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드(0.508 g, 71%)를 수득하였다.
(시스)-N 1-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민 하이드로클로라이드 및 5-메틸-4-티아졸카르복실산으로부터 출발하여, N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하는 방법에 따라 N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-5-메틸티아졸-4-카르복스아미드를 제조하였다.
(시스)-N 1-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민 하이드로클로라이드 및 5-메틸-1,3-옥사졸-4-카르복실산으로부터 출발하여, N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하는 방법에 따라 N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-5-메틸옥사졸-4-카르복스아미드를 제조하였다.
(시스)-N 1-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민 하이드로클로라이드 및 1-메틸-1H-이미다졸-5-카르복실산으로부터 출발하여, N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하는 방법에 따라 N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-5-카르복스아미드를 제조하였다.
(시스)-N 1-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민 하이드로클로라이드 및 2,5-디메틸-1,3-옥사졸-4-카르복실산으로부터 출발하여, N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하는 방법에 따라 N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-2,5-디메틸옥사졸-4-카르복스아미드를 제조하였다.
N
-
((시스)-3-((5-플루오로-2-
(7-
플루오로
-5-
메틸
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드(
21
)의 제조.
단계 1. DME(15 mL) 중 C2(1.03 g, 1.2 mmol), N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드(0.23 g, 0.67 mmol) 및 K2CO3(2 M, 1.33 mL, 2.67 mmol)의 용액을 N2 가스로 5분 동안 퍼지하고, 이어서 CH2Cl2와 복합체를 형성한 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐 II(0.055 g, 0.067 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 교반하고, 전자레인지에서 100℃에서 30분 동안 가열하였다. 혼합물을 물 및 CH2Cl2에 붓고, 유기 층을 소수성 프릿(frit)으로 분리하고 증발 건조시켰다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피(CH2Cl2/CH3OH 100/0부터 98/2까지)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 증발시켜 N-((시스)-3-((5-플루오로-2-(7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 수득하였다.
단계 2. 에탄올(7 mL) 중 N-((시스)-3-((5-플루오로-2-(7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드(0.3 g, 0.49 mmol) 및 수산화칼륨(0.14 g, 2.43 mmol)의 용액을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 CH2Cl2로 추출하고, 유기 층을 분리하고, 물, 이어서 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 증발 건조시켰다. 분취용 LC(정지상: 실리카, 이동상: 99% CH2Cl2, 1% CH3OH)를 통해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 증발시켜 0.08 g, 35%를 생성하였다. 조 물질을 디이소프로필에테르로부터 결정화하고, 여과에 의해 단리하고, 70℃에서 진공 하에서 건조시켜, 백색 분말로서 21(0.058 g, 26%)을 수득하였다.
N
-((
시스
)-3-((5-
시아노
-3-
플루오로
-6-(7-
플루오로
-5-
메틸
-1
H
-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실) 아미드의 합성에 대한 일반적 절차
tert
-부틸 ((
시스
)-3-((6-
클로로
-5-
시아노
-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)
사이클로헥실
)카르바메이트의 제조
에탄올(5 mL) 및 Me-THF(5 mL) 중 2,6-디클로로-5-플루오로-3-피리딘카르보니트릴(0.45 g, 2.33 mmol), tert-부틸-3-아미노사이클로헥실카르바메이트(0.6 g, 2.8 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(2.41 mL, 14 mmol)의 용액을 교반하고, 80℃에서 5시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 물 중에 흡수시키고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 DIPE로부터 결정화하고, 여과하고, 60℃에서 진공 하에서 건조시켜, 백색 분말로서 tert-부틸 ((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(0.718 g, 83%)를 수득하였다.
6-(((
시스
)-3-
아미노사이클로헥실
)아미노)-2-
클로로
-5-
플루오로니코티노니트릴
하이드로클로라이드의
제조
HCl(디옥산 중 4 M, 58.5 mL, 233.82 mmol) 중 tert-부틸 ((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리미딘-2-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(3.92 g, 10.63 mmol)의 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용액을 감압 하에서 농축시켜 백색 고체를 생성하였으며, 이것을 50℃에서 감압 하에서 건조시켜, 베이지색 포말로서 6-(((시스)-3-아미노사이클로헥실)아미노)-2-클로로-5-플루오로니코티노니트릴 하이드로클로라이드(3.39 g, 99%)를 수득하였다.
N
-((
시스
)-3-((2-
클로로
-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)
사이클로헥실
)
피콜린아미드를
제조하는 방법에 따라 하기의 중간체를
제조하였다
6-(((시스)-3-아미노사이클로헥실)아미노)-2-클로로-5-플루오로니코티노니트릴 하이드로클로라이드 및 2-피콜린산으로부터 출발하여, N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하는 방법에 따라 N-((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하였다.
6-(((시스)-3-아미노사이클로헥실)아미노)-2-클로로-5-플루오로니코티노니트릴 하이드로클로라이드 및 2-메틸-5-티아졸카르복실산으로부터 출발하여, N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하는 방법에 따라 N-((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)-2-메틸티아졸-5-카르복스아미드를 제조하였다.
6-(((시스)-3-아미노사이클로헥실)아미노)-2-클로로-5-플루오로니코티노니트릴 하이드로클로라이드 및 5-메틸-1,3-옥사졸-4-카르복실산으로부터 출발하여, N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하는 방법에 따라 N-((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)-5-메틸옥사졸-4-카르복스아미드를 제조하였다.
6-(((시스)-3-아미노사이클로헥실)아미노)-2-클로로-5-플루오로니코티노니트릴 하이드로클로라이드 및 5-티아졸카르복실산으로부터 출발하여, N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하는 방법에 따라 N-((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)티아졸-5-카르복스아미드를 제조하였다.
6-(((시스)-3-아미노사이클로헥실)아미노)-2-클로로-5-플루오로니코티노니트릴 하이드로클로라이드 및 2,5-디메틸-1,3-옥사졸-4-카르복실산으로부터 출발하여, N-((시스)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하는 방법에 따라 N-((시스)-3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)-2,5-디메틸옥사졸-4-카르복스아미드를 제조하였다.
N
-((
시스
)-3-((5-
시아노
-3-
플루오로
-6-(7-
플루오로
-5-
메틸
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드의 제조
N-((시스)-3-((5-플루오로-2-(7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하는 방법과 유사한 방법을 사용하여 N-((시스)-3-((5-시아노-3-플루오로-6-(7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드를 제조하여 표제 화합물(0.630 g, 92%)을 수득하였다.
N
-
((시스)-3-(
(5-
시아노
-3-
플루오로
-6-(7-
플루오로
-5-
메틸
-1
H
-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드(
22
)의 제조
N-((시스)-3-((5-플루오로-2-(7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)피콜린아미드(21)(0.068 g, 43%)를 제조하는 방법과 유사한 방법을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.
23의 제조
밀봉된 튜브에서, THF(10 mL) 및 H2O(2 mL) 중 N-((시스)-3-((5-시아노-6-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(200 mg, 314 μmol) 및 하이드리도(디메틸아포스핀산-kP)[수소 비스(디메틸포스피나이토-kP)]백금(II)[173416-05-2](27 mg, 62.8 μmol)의 혼합물을 95℃에서 3시간 동안, 이어서 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 95℃에서 3시간 동안 가열하였다. 물, 염수 및 EtOAc를 반응 혼합물에 첨가하고, 수성 층을 EtOAc(2회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 조 물질을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: CH2Cl2/CH3OH/aq. NH3 100/0/0부터 90/10/1까지)에 의해 정제하여 156 mg의 2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로-6-(((시스)-3-(피롤리딘-1-카르복스아미도)사이클로헥실)아미노)니코틴아미드(76%)를 수득하였다.
단계 2. 밀봉된 튜브에서, NaOH(3 N aq., 0.397 mL, 1.19 mmol)를 실온에서 MeOH(3 mL) 중 2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로-6-(((시스)-3-(피롤리딘-1-카르복스아미도)사이클로헥실)아미노)니코틴아미드(156 mg, 0.238 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1일 동안 교반하였다. 물, 염수 및 EtOAc를 반응 혼합물에 첨가하였다. 수성 층을 EtOAc(2회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. Et2O를 잔류물에 첨가하고, 고체를 여과하고, EtOAc 및 NaHCO3에 의해 처리하였다. 유기 층을 NaHCO3(2회)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 아세톤을 잔류물에 첨가하고, 용매를 진공 중에서 증발시키고, 이어서 고진공 하에서(50℃에서 36시간) 건조시켜, 황백색(off-white) 고체로서 82 mg의 23(69%)을 수득하였다.
24의 제조
단계 1. DMFDMA(2.8 mL) 중 2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로-6-(((시스)-3-(피롤리딘-1-카르복스아미도)사이클로헥실)아미노)니코틴아미드(71 mg, 0.108 mmol)의 혼합물을 105℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 건조될 때까지 증발시켰다. 조 물질을 AcOH(2.8 mL) 중에 희석시키고, 하이드라진 1수화물(37 μL, 0.759 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: DCM/MeOH/aq NH3 100/0/0부터 95/5/0.5까지)에 의해 정제하여, 백색 고체로서 41 mg의 N-((시스)-3-((6-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-3-플루오로-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(56%)를 수득하였다.
단계 2. 밀봉된 튜브에서, KOH(13 mg; 236 μmol)를 실온에서 EtOH(1 mL) 중 N-((시스)-3-((6-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-3-플루오로-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(16 mg, 23.6 μmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 물, 염수, NaHCO3(aq., 포화) 및 EtOAc를 반응 혼합물에 첨가하고, 수성 층을 EtOAc(2회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: DCM/MeOH/aq. NH3 100/0/0부터 95/5/0.5까지)에 의해 정제하여 7 mg의 24(57%)를 수득하였다.
25
의 합성
2-(1-
메틸
-1
H
-
피라졸
-3-일)
아세토니트릴의
제조
N2 하에서 DME(110 mL) 중 토실메틸 이소시아나이드(17.8 g, 91.2 mmol)의 용액을 -50℃에서 MeOH(110 mL) 중 t-BuOK(19.5 g, 174 mmol)의 현탁액에 적가하였다. DME(110 mL) 중 1-메틸-1H-피라졸-3-카르복스알데하이드(9.57 g, 86.9 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 -50℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, MeOH(110 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 80℃까지 가열하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 용매를 증발시켰다. 물 및 AcOH(대략 10 mL)를 pH = 5 내지 6이 될 때까지 첨가하였다. CH2Cl2를 첨가하고, 층들을 분리하였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 분취용 실리카 크로마토그래피(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 80/20부터 40/60까지)에 의해 정제를 수행하여, 무색 오일로서 2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)아세토니트릴을 수득하였다.
2-
메틸
-2-(1-
메틸
-1H-
피라졸
-3-일)
프로판니트릴의
제조
t-BuOK(14.5 g, 130 mmol)를 0℃에서 THF(200 mL) 중 2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)18-크라운-6(6.28 g, 51.8 mmol)의 용액에 일부씩 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반한 후, CH3I(9.7 mL, 156 mmol)를 서서히 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안, 이어서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 aq. NH4Cl로 켄칭하고, EtOAc(2회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 80/20부터 0/100까지)에 의해 정제를 수행하여, 무색 오일로서 2-메틸-2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)프로판니트릴(6 g, 78%)을 수득하였다.
3-아미노-4-
메틸
-4-(1-
메틸
-1H-
피라졸
-3-일)
펜트
-2-
에노에이트의
제조
THF(65 mL) 중 활성 아연(10.5 g, 161 mmol) 및 메탄설폰산(800 μL, 12.3 mmol)의 현탁액을 15분 동안 환류에서 가열하고, 이어서 THF(15 mL) 중 2-메틸-2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)프로판니트릴(4.8 g, 32.2 mmol)을 첨가하였다. 이어서, THF(50 mL)중 에틸브로모아세테이트(10.7 mL, 96.7 mmol)를 45분에 걸쳐 적가하였다. 혼합물을 1시간 동안 환류에서 교반하고, 이어서 실온까지 냉각시키고, 이어서 NaHCO3(aq., 포화)로 처리하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 층들을 분리하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 농축시켰다. 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 80/20부터 50/50까지)에 의해 정제를 수행하여, 무색 오일로서 에틸 3-아미노-4-메틸-4-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)펜트-2-에노에이트를 수득하였다.
3-아미노-4-
메틸
-4-(1-
메틸
-1
H
-
피라졸
-3-일)
펜타노에이트의
제조
시아노붕수소화나트륨(1.86 g, 29.6 mmol)을 메탄올(80 mL) 및 아세트산(15 mL) 중 에틸 3-아미노-4-메틸-4-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)펜트-2-에노에이트(2.94 g, 12.4 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 56시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물의 첨가에 의해 켄칭하고, 용매를 진공 중에서 농축시켰다. 생성된 혼합물을 NaOH 용액(1 N)의 첨가에 의해 pH = 10 내지 14가 될 때까지 염기성화하고, 이어서 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 농축시켰다. 분취용 실리카 LC(이동상 구배: CH2Cl2/MeOH: 100/0부터 90/10까지)에 의해 정제를 수행하여, 무색 오일로서 에틸 3-아미노-4-메틸-4-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)펜타노에이트(2.09 g, 70%)를 수득하였다.
3-((6-
클로로
-5-
시아노
-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-4-
메틸
-4-(1-
메틸
-1
H
-피라졸-3-일)펜타노에이트의 제조
MeOH(5 mL) 및 THF(5 mL) 중 2,6-디클로로-5-플루오로-3-피리딘카르보니트릴(0.33 g, 1.74 mmol), 에틸 3-아미노-4-메틸-4-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)펜타노에이트(0.5 g, 2.09 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(1.8 mL, 10.45 mmol)의 용액을 교반하고, 70℃에서 17시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 잔류물을 물 중에 흡수시키고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 85/15부터 70/30까지)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고, 용매를 증발시켜, 무색 오일로서 에틸 3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)-4-메틸-4-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)펜타노에이트(0.544 g, 79%)를 수득하였다.
에틸 3-((5-
시아노
-3-
플루오로
-6-(7-
플루오로
-5-
메틸
-1
H
-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)-4-메틸-4-(1-메틸-1
H
-피라졸-3-일)펜타노에이트의 제조
DME(12 mL) 중 F(0.79 g, 1.01 mmol), 에틸 3-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)-4-메틸-4-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)펜타노에이트(0.21 g, 0.56 mmol) 및 K2CO3(1.12 mL, 2.23 mmol)의 용액을 N2 가스로 5분 동안 퍼지하고, 이어서 Pd(dppf)Cl2(0.046 g, 0.056 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 교반하고, 전자레인지에서 100℃에서 30분 동안 가열하였다. 혼합물을 물 및 CH2Cl2에 붓고, 유기 층을 소수성 프릿으로 분리하고 증발 건조시켰다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피(CH2Cl2/MeOH 100/0부터 98/2까지)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 증발시켜, 무색 오일로서 에틸 3-((5-시아노-3-플루오로-6-(7-플루오로-5-메틸-1H-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)-4-메틸-4-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)펜타노에이트(0.363 g, 55%)를 수득하였다.
3-((5-
시아노
-3-
플루오로
-6-(7-
플루오로
-5-
메틸
-1
H
-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)-4-메틸-4-(1-메틸-1
H
-피라졸-3-일)펜탄산(
25
)의 제조
LiOH.H2O(0.12 g, 2.75 mmol)를 THF/물의 혼합물(3/1, 12 mL) 중 에틸 3-((5-시아노-3-플루오로-6-(7-플루오로-5-메틸-1H-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)-4-메틸-4-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)펜타노에이트(0.363 g, 0.55 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 교반하고, 60℃에서 24시간 동안 가열하였다. LiOH.H2O(0.12 g, 2.75 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 18시간 동안 60℃까지 가열하였다. 용액을 실온까지 냉각시켰다. 물을 첨가하고, 수성 층을 3 N aq. HCl로 pH = 2가 될 때까지 산성화하였다. 유기 층을 EtOAc로 추출하고, 분리하고, MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 분취용 실리카 크로마토그래피(이동상: 96% CH2Cl2, 4% MeOH)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 증발시켜 25(0.012 g, 4.6%)를 수득하였다.
164
의 합성
DME(14 mL) 중 C2(1.13 g, 1.58 mmol), J(0.41 g, 1.32 mmol) 및 K2CO3(2 M aq., 2.63 mL, 5.26 mmol)의 용액을 N2 유동으로 5분 동안 퍼지하고, 이어서 CH2Cl2와 복합체를 형성한 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II)(0.11 g, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 교반하고, 전자레인지에서 100℃에서 가열하였다. 혼합물을 물 및 CH2Cl2에 붓고, 유기 층을 소수성 프릿으로 분리하고 증발 건조시켰다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 70/30)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 증발시켜 0.412 g, 51%를 생성하였다.
EtOH(8.5 mL) 중 (트랜스)-메틸 3-((5-플루오로-2-(7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.2]옥탄-2-카르복실레이트(0.34 g, 0.59 mmol) 및 수산화칼륨(0.33 g, 5.89 mmol)의 용액을 80℃에서 40분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 증발시켰다. H2O 및 이어서 HCl(3 N aq., 1.96 mL, 5.89 mmol)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 5분 동안 교반하였다. CH2Cl2를 첨가하고, 유기 층을 소수성 프릿으로 분리하고, 침전물을 단리하고, 아세톤으로 세척하고, 50℃에서 16시간 동안 진공 하에서 건조시켰다. 역상(정지상: X-Bridge-C18 5 μm 30 x 150 mm, 이동상: 구배 65% 물(0.05% TFA를 함유함), 35% ACN부터 25% 물(0.05% TFA를 함유함), 75% ACN까지)을 통해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 용매를 증발시켜 0.083 g을 생성하였다. 조 물질을 DIPE로부터 결정화하고, 여과에 의해 단리하고, 진공 하에서 60℃에서 건조시켜, TFA 염으로서 백색 분말, 164를 수득하였다. 키랄 SFC(정지상: Chiralpak AD-H 5 μm 250 x 30 mm, 이동상: 60% CO2, 40% 이소프로판올(0.3% 이소프로필아민))를 통해 키랄 분리를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 용매를 증발시켜 2개의 분획을 수득하였다. EtOAc를 첨가하고, 유기 층을 KHSO4(aq. 10% x 2)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 농축 건조시켰다. 조 고체를 아세토니트릴/물 2/8로 하룻밤 냉동-건조시켜 백색 분말, 165 및 166을 수득하였다.
167
의 합성
단계 1. DME(14 mL) 중 C2(1.23 g, 1.58 mmol), 에틸 3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜타노에이트(0.4 g, 1.31 mmol) 및 K2CO3(2 M aq., 2.63 mL, 5.26 mmol)의 용액을 N2 가스로 5분 동안 퍼지하고, 이어서 CH2Cl2와 복합체를 형성한 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐 II(0.11 g, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 교반하고, 전자레인지에서 100℃에서 가열하였다. 혼합물을 물 및 CH2Cl2에 붓고, 유기 층을 소수성 프릿으로 분리하고 증발 건조시켰다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 95/5부터 80/20까지)에 의해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 증발시켜 에틸 3-((5-플루오로-2-(7-플루오로-5-메틸-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-4-일)아미노)-4,4-디메틸펜타노에이트(0.485 g, 65%)를 수득하였다.
단계 2. 단계 1의 생성물에 EtOH(12 mL) 중 수산화칼륨(0.47 g, 8.32 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 40분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 증발시켰다. H2O 및 이어서 HCl 3 N(2.77 mL, 8.32 mmol)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, H2O(2 mL)로 세척하고, 50℃에서 16시간 동안 진공 하에서 건조시켰다. 역상 크로마토그래피(정지상: X-Bridge-C18 5 μm 30 x 150 mm, 이동상: 구배 65% 물(0.05% TFA를 함유함), 35% ACN부터 25% 물(0.05% TFA를 함유함), 75% ACN까지)을 통해 정제를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하고 용매를 증발시켜 0.078 g을 생성하였다. 잔류물을 DIPE로부터 결정화하고, 여과에 의해 단리하고, 60℃에서 진공 하에서 건조시켜, 백색 분말로서 167(0.060 g, 18%)을 수득하였다. 키랄 SFC(정지상: Chiralcel OJ-H 5 μm 250x20 mm, 이동상: 90% CO2, 10% CH3OH(0.3% iPrNH2))를 통해 분리를 수행하였다. 분획을 KHSO4 10%로 세척하고, EtOAc로 추출하고, 건조시키고(MgSO4), 고체를 여과에 의해 제거하고, 용매를 증발 건조시키고, 고체를 CH3CN/H2O(80/20)로 동결건조시켜 다음을 수득하였다: 0.062 g의 168, 및 0.058 g의 169, 13%, m.p. = 검(gum) 144℃, OR = -34,61° (589 nm, c 0,27 w/v%, DMF, 20℃).
N
-((
1R*,3S
*)-3-((2-(5-
시아노
-7-
플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(
170
)의 합성.
단계 1. 7-
플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-5-
카르보니트릴의
합성.
7-플루오로-1H-인돌-5-카르보니트릴(300 mg, 1.87 mmol)을 질소 분위기 하에서 톨루엔(3 mL)에 첨가하였다. 테트라부틸암모늄 하이드로겐 설페이트(63.5 mg, 0.18 mmol)를 첨가한 후, NaOH(50% aq., 2 mL)를 첨가하고, 혼합물을 격렬하게 교반하였다. 이어서, 톨루엔(3 mL) 중 p-톨루엔설포닐 클로라이드(535 mg, 2.81 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석시키고 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 건조시키고, 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 실리카 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 7-플루오로-1-토실-1H-인돌-5-카르보니트릴(360 mg, 1.14 mmol)을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 315.0; Rt: 1.02분, 방법 E. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) 2.40 (s, 3H), 6.74 (m, 1H), 7.19 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.69 (br s, 1H), 7.81 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.91 (d, J= 3.6 Hz, 1H).
단계 2. 3-
브로모
-7-
플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-5-
카르보니트릴의
합성
브롬(0.05 mL, 0.99 mmol)을 CH2Cl2(3 mL) 중 7-플루오로-1-토실-1H-인돌-5-카르보니트릴(260 mg, 0.82 mmol)의 용액에 서서히 첨가하고, 0℃에서 30분 동안, 그리고 이어서 실온에서 추가 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, 5% 중아황산나트륨 용액으로 처리하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고 감압 하에서 제거하여 3-브로모-7-플루오로-1-토실-1H-인돌-5-카르보니트릴(300 mg, 0.76 mmol)을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 392.9; Rt: 1.15분, 방법 E.
단계 3. 7-
플루오로
-3-(4,4,5,5-
테트라메틸
-1,3,2-
디옥사보롤란
-2-일)-1-토실-1
H
-인돌-5-카르보니트릴의 합성.
1,4-디옥산(5 mL)을 10분 동안 탈기하고, 이어서 불활성 분위기 하에서 3-브로모-7-플루오로-1-토실-1H-인돌-5-카르보니트릴(400 mg, 1.01 mmol), 비스(피나콜레이토)디보론(774.9 mg, 3.05 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)(74.4 mg, 0.10 mmol) 및 포타슘 아세테이트(449.2 mg, 4.57 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 추가로 세척하였다. 용매를 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 7-플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌-5-카르보니트릴(300 mg, 0.68 mmol)을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 441.1; Rt: 1.32분, 방법 E.
단계 4.
tert
-부틸 ((1R*,3S*)-3-((2-(5-
시아노
-7-
플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트의 합성
물(0.2 mL) 및 디옥산(2 mL) 중 7-플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌-5-카르보니트릴(300 mg, 0.68 mmol), tert-부틸 ((1R*,3S*)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(234 mg, 0.68 mmol), [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)(44.4 mg, 0.068 mmol) 및 인산삼칼륨(434 mg, 2.04 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고, 마이크로파 조사 하에서 30분 동안 100℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고 물로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 ((1R*,3S*)-3-((2-(5-시아노-7-플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(200 mg, 0.32 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 623.2; Rt: 1.34분, 방법 E.
단계 5. 3-(4-(((
1S*,3R
*)-3-
아미노사이클로헥실
)아미노)-5-
플루오로피리미딘
-2-일)-7-플루오로-1-토실-1
H
-인돌-5-카르보니트릴의 합성.
디옥산(1.2 mL, 4.8 mmol) 중 HCl 4 M을 디옥산(1.2 mL) 중에 용해된 tert-부틸 ((1R*,3S*)-3-((2-(5-시아노-7-플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바메이트(300 mg, 0.48 mmol)의 용액에 서서히 첨가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고 증발 건조시켜 3-(4-(((1S*,3R*)-3-아미노사이클로-헥실)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)-7-플루오로-1-토실-1H-인돌-5-카르보니트릴(200 mg, 0.38 mmol)을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 523.2; Rt: 0.83분, 방법 E.
단계 6. N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-시아노-7-플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드의 합성.
HBTU(522 mg, 1.38 mmol)를 불활성 분위기 하에서 실온에서 5분 동안 THF(2.5 mL) 중 1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산(50.7 mg, 0.40 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, DMSO(0.5 mL) 중 3-(4-(((1S*,3R*)-3-아미노사이클로헥실)아미노)-5-플루오로피리미딘-2-일)-7-플루오로-1-토실-1H-인돌-5-카르보니트릴(200 mg, 0.38 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.24 mL, 1.38 mmol)의 용액을 첨가하고, 실온에서 12시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 물로 희석시키고 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켜 조 물질을 생성하였으며, 이것을 헵탄-EtOAc로 용리하는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-시아노-7-플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(150 mg, 0.23 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 631.2; Rt: 1.09분, 방법 E.
단계 7.
N
-((1
R
*,3
S
*)-3-((2-(5-시아노-7-플루오로-1
H
-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1
H
-이미다졸-4-카르복스아미드(
170
)의 합성.
소듐 메톡사이드(0.54 mL의 25% w/v 용액, 2.38 mmol)를 MeOH(3 mL) 중 N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-시아노-7-플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(150 mg, 0.24 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-시아노-7-플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(170)(80 mg, 0.16 mmol)를 수득하였다.
N
-(5-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)-3,3-디메틸사이클로헥실)-1-메틸-1
H
-이미다졸-4-카르복스아미드(
202
)의 합성
단계 1.
N
1
-(2-
클로로
-5-
플루오로피리미딘
-4-일)-5,5-
디메틸사이클로헥산
-1,3-디아민의 합성.
2,4-디클로로-5-플루오로피리미딘(586 mg, 3.51 mmol)을 이소프로판올(10 mL) 중 5,5 디메틸사이클로헥산-1,3-디아민(500 mg, 3.51 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 CH2Cl2 중에 용해시키고 물로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 N 1-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)-5,5-디메틸사이클로헥산-1,3-디아민(250 mg, 0.92 mmol)을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 273.0; Rt: 1.75분, 방법 D.
단계 2.
N
-(5-((2-
클로로
-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)-3,3-
디메틸사이클로헥실
)-1-메틸-1
H
-이미다졸-4-카르복스아미드의 합성.
HBTU(428 mg, 1.13 mmol)를 불활성 분위기 하에서 실온에서 5분 동안 THF(1 mL) 중 1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산(258 mg, 2.05 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, THF(1 mL) 중 N 1-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)-5,5-디메틸사이클로헥산-1,3-디아민(280 mg, 1.03 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.45 mL, 2.57 mmol)의 용액을 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 물로 희석시키고 CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켜 조 물질을 생성하였으며, 이것을 CH2Cl2-CH3OH로 용리하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-(5-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)-아미노)-3,3-디메틸사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(350 mg, 0.92 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 381.1; Rt: 0.630 및 0.65분, 방법 E.
단계 3.
N
-(5-((2-(5,7-
디플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)-3,3-디메틸사이클로헥실)-1-메틸-1
H
-이미다졸-4-카르복스아미드의 시스/트랜스 혼합물의 합성.
5,7-디플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌(300 mg, 0.69 mmol), N-(5-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-3,3-디메틸사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(316 mg, 0.83 mmol), 인산삼칼륨(440 mg, 2.08 mmol) 및 [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)(45 mg, 0.07 mmol)를 불활성 분위기 하에서 디옥산(4 mL) 및 물(1 mL)의 탈기된 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하고, 용매를 증발 건조시켜 조 물질을 생성하였으며, 이것을 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 N-(5-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-3,3-디메틸사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(250 mg, 0.38 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 652.2; Rt: 1.24분, 방법 E.
단계 4.
N
-(5-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)-3,3-디메틸사이클로헥실)-1-메틸-1
H
-이미다졸-4-카르복스아미드(
202
)의
시스
/트랜스 혼합물의 합성.
소듐 메톡사이드(0.87 mL의 25% w/v 용액, 3.84 mmol)를 MeOH(4 mL) 중 N-(5-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-3,3-디메틸사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(250 mg, 0.38 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 N-(5-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-3,3-디메틸사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(202)(100 mg, 0.19 mmol)의 시스/트랜스 혼합물을 수득하였다.
(+/-)-(2-
엑소
, 3-엔도)-3-
((2-(5,7-디플루오로-1
H
-인돌-3-일)
-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산의 합성.
단계 1.
바이사이클로[2.2.1]헵탄
-2,3-엔도-디카르복실산 무수물의 합성.
문헌[Birney, David et al., J. Am. Chem . Soc., 2002, 124 (18), 5091-5099]에 기재된 절차에 따라 화합물 바이사이클로[2.2.1]헵탄-2,3-엔도-디카르복실산 무수물을 제조하였다.
단계 2. (+/-)-(2-엔도, 3-
엑소
)-3-
(메톡시카르보닐)바이사이클로[2.2.1]헵탄
-2-카르복실산의 합성.
바이사이클로[2.2.1]헵탄-2,3-엔도-디카르복실산 무수물(2.79 g, 16.83 mmol)을 MeOH 중 NaOMe의 용액(30.8 mL의 25% w/w, 134.70 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 3일 동안 그리고 이어서 45℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 부분적으로 제거하고, 잔류물을 빙조에서 냉각된 물(60 mL) 중 HCl(14.0 mL의 37% w/w, 168.37 mmol)의 용액에 첨가하였다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 진공 중에서 건조시켜 (+/-)-(2-엔도, 3-엑소)-3-(메톡시카르보닐)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산(1.50 g, 7.56 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) ppm 1.24-1.68 (m, 6H), 2.58 (m, 1H), 2.68 (br. s, 1H), 2.78 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 3.26 (s, 1H), 3.68 (s, 3H).
단계 3. (+/-)-(2-
엑소
, 3-엔도)-3-
(벤질옥시카르보닐아미노)바이사이클로
[2.2.1]헵탄-2-카르복실산
메틸
에스테르의 합성.
디페닐포스포릴 아지드(1.73 mL, 8.04 mmol)를 톨루엔(15 mL) 중 (+/-)-(2-엔도, 3-엑소)-3-(메톡시카르보닐)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산(1.45 g, 7.31 mmol) 및 트리에틸아민(1.02 mL, 7.31 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 벤질 알코올(0.75 mL, 7.31 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 4일 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, EtOAc로 희석시키고, NaHCO3(aq., 포화)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 건조시키고, 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 헵탄-EtOAc(100:0부터 80:20까지)로 용리하여 정제하여 (+/-)-(2-엑소, 3-엔도)-3-(벤질옥시카르보닐아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산 메틸 에스테르(1.78 g, 5.86 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 304.1; Rt: 0.87분, 방법 E.
단계 4. (+/-)-(2-
엑소
, 3-엔도)-3-
아미노바이사이클로[2.2.1]헵탄
-2-
카르복실산
메틸
에스테르의 합성.
Pd/C 10%(248 mg)를 MeOH(20 mL) 중 (+/-)-(2-엑소, 3-엔도)-3-(벤질옥시카르보닐아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산 메틸 에스테르(1.77 g, 5.83 mmol)의 용액에 첨가하고, 현탁액을 수소 분위기(5 bar) 하에서 실온에서 25℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 용매를 감압 하에서 제거하여 (+/-)-(2-엑소, 3-엔도)-3-아미노바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산 메틸 에스테르(920 mg, 5.43 mmol)를 수득하였으며, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다. LC-MS ES+ m/z = 170.1; Rt: 0.13분, 방법 E
단계 5. (+/-)-(2-
엑소
, 3-엔도)-3-
((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)
아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산
메틸
에스테르의 합성.
이소프로필 알코올(15 mL) 중 (+/-)-(2-엑소, 3-엔도)-3-아미노바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산 메틸 에스테르(861 mg, 5.08 mmol), 2,4-디클로로-5-플루오로피리미딘(1.02 g, 6.10 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(1.77 mL, 10.17 mmol)의 혼합물을 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc 중에 희석시키고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 헵탄-EtOAc(100:0부터 80:20까지)로 용리하는 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 (+/-)-(2-엑소, 3-엔도)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산 메틸 에스테르(739 mg, 2.46 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) ppm 1.31-1.42 (m, 2H), 1.50-1.62 (m, 2H), 1.64-1.77 (m, 1H), 1.91 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 2.02 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 2.50 (m, 1H), 2.63 (br. s, 1H), 3.75 (s, 3H), 4.44 (q, J= 4.8 Hz, 1H), 5.34 (br. 단일선, 1H), 7.87 (d, J= 2.7 Hz, 1H).
단계 6. (+/-)-(2-
엑소
, 3-엔도)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1
H
-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산
메틸
에스테르의 합성.
디옥산(4 mL) 및 물(1 mL) 중 5,7-디플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌(100 mg, 0.23 mmol) 및 (+/-)-(2-엑소, 3-엔도)-3-((2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산 메틸 에스테르(76 mg, 0.25 mmol)의 혼합물을 실온에서 10분 동안 질소로 퍼지하였다. 이어서, Pd2(dba)3(11 mg, 0.012 mmol), 인산삼칼륨(147 mg, 0.69 mmol) 및 XPhos(11 mg, 0.023 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 조 물질을 헵탄-EtOAc(100:0부터 65:35까지)로 용리하는 실리카 겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (+/-)-(2-엑소, 3-엔도)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산 메틸 에스테르(54 mg, 0.095 mmol)를 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 571.2; Rt: 1.42분, 방법 E.
단계 7. (+/-)-(2-
엑소
, 3-엔도)-3-
((2-(5,7-디플루오로-1
H
-인돌-3-일)
-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산(
217
)의 합성.
NaOCH3(3 mL, CH3OH 중 25% w/w, 13.12 mmol)를 THF(3 mL) 중 (+/-)-(2-엑소, 3-엔도)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산 메틸 에스테르(326 mg, 0.57 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 불활성 분위기 하에서 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 조 물질을 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 (+/-)-(2-엑소, 3-엔도)-3-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산(217)(105 mg, 0.26 mmol)를 수득하였다.
2-(((1
R*,
3
S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바모일)벤조산의 합성.
단계 1. 2-(((1
R*,
3
S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1-토실-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바모일)벤조산의 합성.
프탈산 무수물(15 mg, 0.097 mmol)을 THF(4 mL) 중 (1S*,3R*)-N 1-(2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)사이클로헥산-1,3-디아민(50 mg, 0.097 mmol), 트리에틸아민(0.014 mL, 0.097 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 증발 건조시켜 2-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바모일)벤조산(64 mg, 0.097)을 수득하였다. LC-MS ES+ m/z = 663.9; Rt: 1.67분, 방법 G.
단계 2. 2-(((1
R*,
3
S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바모일)벤조산(
224
)의 합성.
소듐 메톡사이드(0.22 mL의 25% w/v 용액, 0.97 mmol)를 메탄올(5 mL) 중에 용해된 2-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바모일)벤조산(129 mg, 0.19 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하여 조 물질을 생성하였으며, 이것을 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 2-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바모일)벤조산(224)(58 mg, 0.11 mmol)을 수득하였다.
N
-((
1R*,3S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-3-(메틸설폰아미도)-1
H
-피라졸-5-카르복스아미드(
226
)의 제조
3-아미노-N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드(350 mg, 0.548 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.472 mL, 2.74 mmol)을 실온에서 무수 1,2-디클로로에탄(6 mL) 중에서 교반하고, 이어서 1,2-디클로로에탄(1 mL) 중 MsCl(0.085 mL, 1.09 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이어서 CH2Cl2와 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 합하고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 고체에 테트라부틸암모늄 플루오라이드(1 M THF, 10 mL)를 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 환류에서 가열하고, 이어서 감압 하에서 농축시키고 CH2Cl2(40 mL) 중에서 재구성하고, 물(4 x 25 mL), 이어서 염수(25 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 농축시켰다. 조 물질을 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 μm, 30 x 250 mm, 이동상: 0.5% aq. NH4Ac + 10% CH3CN, MeOH)를 통해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고, 감압 하에서 부피를 감소시켰다. 수성 층을 aq. NaHCO3로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하여 N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-3-(메틸설폰아미도)-1H-피라졸-5-카르복스아미드(226)를 수득하였다.
N
-((1
R*,
3
S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-3-(설파모일아미노)-1
H
-피라졸-5-카르복스아미드(
227
)의 제조
단계 1. 1,2-디클로로에탄(3.5 mL) 중 3-아미노-N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드(350 mg, 0.548 mmol) 및 피리딘(40 μL, 0.49 mmol)의 용액에 1,2-디클로로에탄(0.5 mL) 중 설파모일 클로라이드(89 μL, 1.37 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응을 1시간 동안 60℃까지 가열하였다. 냉각 시에, 반응 혼합물을 진공 중에서 농축시키고, EtOAc로 희석시키고, 1 M HCl 및 물로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 농축시켰다. 조 물질을 다음 단계에 추가의 정제 없이 사용하였다.
단계 2. 100 mL 플라스크에서, N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-3-(설파모일아미노)-1H-피라졸-5-카르복스아미드(300 mg, 0.418 mmol)를 실온에서 1,4-디옥산(9 mL) 중에서 교반하였으며, 이 동안에 물(1 mL) 중 LiOH(200 mg, 8.36 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물이 대략 4시간 동안 80 내지 90℃가 되게 하였다. 1,4-디옥산을 증발시키고, 잔류물을 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 μm, 30x250 mm, 이동상: 0.25% aq. NH4HCO3, CH3OH)를 통해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜 고체(227)를 수득하였다.
3-
아세트아미도
-
N
-((1
R
*,3
S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1
H
-피라졸-5-카르복스아미드(
228
)의 제조
단계 1. Ac2O(2 mL) 중 3-아미노-N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)-1-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드(350 mg, 0.548 mmol)의 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 물질을 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 2. 227을 제조하기 위해 단계 2에 사용된 방법에 따라 토실 기의 탈보호가 일어났다. 조 물질을 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 μm, 30 x 250 mm, 이동상: 0.5% aq. NH4Ac + 10% CH3CN, MeOH)를 통해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고, 감압 하에서 부피를 감소시켰다. 수층을 aq. NaHCO3로 염기성화하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 증발 건조시켜, 고체로서 표제 화합물(228)을 수득하였다.
3-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-4-메틸-4-(티오펜-2-일)펜탄산(
229
)의 제조
2-메틸-2-(티오펜-2-일)프로판니트릴로부터 출발하여, 3-((5-시아노-3-플루오로-6-(7-플루오로-5-메틸-1H-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)-4-메틸-4-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)펜탄산(25)을 제조하는 방법과 유사한 방법을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.
3-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-4-메틸-4-(티아졸-2-일)펜탄산(
242
)의 제조
2-메틸-2-(티아졸-2-일)프로판니트릴로부터 출발하여, 3-((5-시아노-6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)-4-메틸-4-(티오펜-2-일)펜탄산(229)을 제조하는 방법과 유사한 방법을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.
2-
메틸
-2-(티아졸-2-일)
프로판니트릴의
제조.
t-BuOK(4.74 g, 42.3 mmol)를 0℃에서 THF(65 mL) 중 2-(티아졸-2-일)아세토니트릴(2.10 g, 16.9 mmol)의 용액에 첨가하였다. 18-크라운-6(0.670 g, 2.50 mmol)을 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 요오도메탄(2.57 mL, 50.7 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 15분 동안, 이어서 실온에서 하룻밤 교반하였다. NH4Cl(aq., 포화)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(2x150 mL)로 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상: 사이클로헥산/EtOAc 구배: 90/10부터 70/30까지)에 의해 정제하여, 황색 액체로서 1.64 g의 표제 화합물(64%)을 수득하였다.
3-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-4-메틸-4-(피리딘-2-일)펜탄산(
237
)의 제조
2-메틸-2-(피리딘-2-일)프로판니트릴로부터 출발하여, 3-((5-시아노-3-플루오로-6-(7-플루오로-5-메틸-1H-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)-4-메틸-4-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)펜탄산(25)을 제조하는 방법과 유사한 방법을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.
3-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1H-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-4-메톡시-4-메틸펜탄산(
240
)의 제조
중간체
E2
의 제조
(카르브에톡시메틸렌)트리페닐포스포란(12 g, 34 mmol)을 건조 DCM(144 mL) 중 화합물 E1(2.3 g, 22 mmol)의 혼합물에 한꺼번에 첨가하고, 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축시키고 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 90/10부터 80/20까지)에 의해 정제하여, 무색 오일로서 0.82 g의 중간체 E2(21%)를 수득하였다.
중간체
E3
의 제조
Et3N(0.99 mL, 7.1 mmol)을 건조 DCM(30 mL) 중 중간체 E2(820 mg, 4.8 mmol) 및 N-벤질하이드록실아민 하이드로클로라이드(0.99 g, 6.2 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축시키고 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 90/10부터 70/30까지)에 의해 정제하여, 무색 오일로서 0.64 g의 E3(54%)를 수득하였다.
중간체
E4
의 제조
EtOH(30 mL) 중 중간체 E3(640 mg, 2.6 mmol)의 용액을 18시간 동안 촉매로서 B(721 mg; 0.52 mmol)를 사용하여 5 bar 미만에서 수소화하였다. 혼합물을 MeOH로 희석시키고, 셀라이트®의 패드를 통해 여과하였다. 용매를 진공 중에서 제거하여, 회색 고체로서 457 mg의 E4(97%, 순도 88%)를 수득하였다.
중간체
E5
의 제조
진한 H2SO4(0.27 mL; 5.0 mmol)를 EtOH(17 mL) 중 중간체 E4(0.457 g; 2.50 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 1시간 30분 동안 가열하였다. 혼합물을 농축시키고, EtOAc 및 NaHCO3(aq., 포화) 중에서 재구성하였다. 수성 층을 DCM(3회)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켜, 무색 오일로서 230 mg의 E5(49%)를 수득하였다.
중간체
E6
의 제조
THF(3.0 mL) 및 EtOH(3.0 mL) 중 2,6-디클로로-3 시아노-5 플루오로피리딘(0.23 g; 1.2 mmol), DIPEA(1.1 mL, 6.1 mmol), 중간체 E5(0.23 g, 1.2 mmol)를 밀봉된 튜브에서 90℃에서 18시간 동안 가열하였다. EtOAc를 첨가하고 염수로 2회 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시키고, 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/AcOEt 80/20부터 70/30까지)로 정제하여, 백색 고체로서 0.195 g의 E6(47%)을 수득하였다.
중간체
E7
의 제조
N2 하에서, 밀봉된 튜브에서, 디옥산(2.4 mL) 및 증류수(0.75 mL) 중 C(144 mg; 0.33 mmol), E6(95 mg; 0.28 mmol) 및 Cs2CO3(0.32 g; 0.97 mmol)의 혼합물을 5분 동안 N2로 탈기하였다. PdCl2(PPh3)2(19 mg, 28 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2분 동안 N2로 다시 탈기하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. DCM 및 염수를 반응 혼합물에 첨가하였다. 수성 층을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시키고, 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 90/10부터 70/30까지)에 의해 정제하여, 백색 고체로서 71 mg의 E7을 수득하였다.
3-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1H-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-4-메톡시-4-메틸펜탄산(
240
)의 제조
증류수(0.22 mL) 중 LiOH·H2O(24 mg, 0.58 mmol)의 용액을 THF(0.64 mL) 중 중간체 E7(71 mg, 0.12 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 용액을 진공 중에서 증발시키고, 분취용 실리카 LC(이동상: DCM/MeOH/AcOH 98/2/0.2)에 의해 정제하여 무색 오일을 생성하였으며, 이것을 MeCN/H2O 중에서 동결-건조시켜 백색 고체로서 28 mg을 수득하였다. 고체를 CH3CN 중에 흡수시키고, 펜탄으로 3회 세척하고, CH3CN을 진공 중에서 증발시키고, 잔류물을 CH3CN/H2O 중에서 냉동-건조시켜, 백색 고체로서 25 mg의 3-((5-시아노-6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)-4-메톡시-4-메틸펜탄산(240)(50%)을 수득하였다.
3-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-4,4-디메틸헵트-6-엔산(
241
)의 제조
중간체
F1
의 제조
무수 CH2Cl2(225 mL) 중 2,2-디메틸-4-펜타날(3.68 g, 32.8 mmol) 및 2-메틸-2-프로판설핀아미드(4.77 g, 39.4 mmol)의 혼합물에 실온에서 티타늄(IV) 에톡사이드(9.8 mL, 39.4 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. TiO2가 모두 침전될 때까지 물을 일부씩 첨가하고, 혼합물을 셀라이트 위로 여과하였다. 여과액을 디캔팅(decanting)하고, 유기 층을 물(1회)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 중에서 제거하였다. 조 물질을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc: 95/5부터 70/30까지)에 의해 정제하여, 무색 오일로서 4.89 g의 F1(69%)을 수득하였다.
중간체
F2
의 제조
건조 THF(10 mL) 중 활성 Zn(1.41 g, 21.6 mmol) 및 메탄설폰산(107 μL, 1.65 mmol)의 현탁액을 15분 동안 환류에서 가열하고, 이어서 건조 THF(5 mL) 중 화합물 F1(930 mg; 4.32 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 건조 THF(5 mL)중 에틸브로모아세테이트(1.4 mL, 13.0 mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 혼합물을 1시간 동안 환류에서 교반하고, 이어서 실온까지 냉각시키고, 이어서 NaHCO3(aq., 포화)로 처리하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 층들을 분리하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 농축시키고, 분취용 실리카 LC(구배: 헵탄/EtOAc 90/10부터 50/50까지)에 의해 정제하여, 무색 오일로서 672 mg의 중간체 F2(51%)를 수득하였다.
중간체
F3/F3'
의 제조
MeOH(20 mL) 중 F2(670 mg; 2.21 mmol) 및 HCl(CPME 중 3 M, 2.2 mL, 6.62 mmol)의 혼합물을 실온에서 56시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증발 건조시키고, 이어서 Et2O 및 펜탄 중에서 재구성하고, 용매를 증발시켜, 무색 오일로서 중간체 F3 및 F3'(70/30)의 혼합물 510 mg을 수득하였다.
중간체
F4/F4'
의 제조
THF(6.4 mL) 및 EtOH(6.4 mL) 중 2,6-디클로로-3 시아노-5 플루오로피리딘(457 mg, 2.39 mmol), N,N-디이소프로필아민(2.1 mL, 12.0 mmol), 중간체 F3/F3'(510 mg, 2.56 mmol)을 밀봉된 튜브에서 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시켰다. EtOAc를 첨가하고, 생성된 용액을 물로 2회 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시키고, 분취용 실리카 LC(이동상 구배: from 헵탄/EtOAc 90/10 내지 50/50)에 의해 정제하여, 황색 고체로서 304 mg의 중간체 F4(36%)를, 그리고 황색 오일로서 76 mg의 중간체 F4'(9%)을 수득하였다.
중간체
F5
의 제조
N2 하에서, 밀봉된 튜브에서, 디옥산(6.5 mL) 및 증류수(2 mL) 중 C(462 mg, 821 μmol), F4(264 mg, 746 μmol) 및 Cs2CO3(851 mg, 2.61 mmol)의 혼합물을 N2(2회)로 탈기하였다. PdCl2(PPh3)2(52.4 mg, 74.6 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 N2(2회)로 다시 탈기하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 2시간 동안, 이어서 실온에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 이어서 EtOAc를 첨가하고, 유기 층을 물(2회) 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시키고, 분취용 LC(실리카, 이동상 구배: 헵탄/EtOAc 90/10부터 60/40까지)에 의해 정제하여, 갈색 고체로서 188 mg의 불순한 F5를 수득하였다. 고체를 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 90/10부터 70/30까지)에 의해 다시 정제하여, 황색 포말로서 153 mg의 F5를 수득하였다.
3-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-4,4-디메틸헵트-6-엔산(
241
)의 제조
THF(4.7 mL) 및 증류수(1.6 mL) 중 F5(153 mg, 0.245 mmol)의 용액에 LiOH·H2O(52.4 mg, 1.22 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 중에서 증발시켰다. 이어서, 잔류물을 HCl(aq., 1 M)로 산성화하고, 생성된 침전물을 여과하고 물로 세척하여 녹색 고체를 수득하였다. 이 고체를 디에틸 에테르 중에 희석시켰다. 펜탄을 첨가하고, 생성된 침전물을 여과하고, 펜탄으로 세척하고, 역상 크로마토그래피(정지상: X-Bridge-C18 5 μm 30 x 150 mm, 이동상 구배: H2O(NH4HCO3 0.5%)/CH3CN 75/25부터 35/65까지)를 통해 정제하여 11 mg의 241(10%)을 수득하였다.
3-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1H-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-3-(1-메틸사이클로펜틸)프로판산(
244
)의 제조
중간체
H1
의 제조
단계 1. 질소 하에서, LiHMDS(THF 중 1 M)(189 mL, 189 mmol)를 -78℃에서 THF(64 mL) 중 사이클로펜탄카르보니트릴(15 g, 158 mmol)의 용액에 적가하였다. 이어서, 혼합물을 30분에 교반하고, CH3I(14.7 mL, 240 mmol)를 일부씩 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 실온까지 서서히 가온하였다. EtOAc(250 mL)를 첨가하고, NH4Cl 10%(200 mL)를 0℃에서 서서히 첨가하였다. 이어서, 물(100 mL)을 첨가하여 용액을 형성하고, 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시켜 1-메틸사이클로펜탄카르보니트릴(16.8 g, 황색 오일)을 수득하였으며, 이것을 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 2. 질소 하에서 -78℃에서, DIBAL(37 mL, 37 mmol)을 CH2Cl2(117 mL) 중 1-메틸사이클로펜탄카르보니트릴(2.0 g, 18 mmol)의 용액에 적가하였으며, 첨가를 종료한 후, 혼합물을 -78℃에서 15분 교반하였다. CH3OH(37 mL)를 -78℃에서 서서히 첨가하고, 반응을 실온까지 가온시켰다. NaOH(1 M) 200 mL를 첨가하고, 수용액을 CH2Cl2로 2회 추출하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 혼합물을 HCl 수용액(3 M) 중에서 1시간 동안 교반하고, CH2Cl2로 추출하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 1-메틸사이클로펜탄카르브알데하이드(1.4 g, 황색 오일)를 수득하였다.
단계 3. EtOH(5.6 mL) 중 1-메틸사이클로펜탄카르브알데하이드(1.4 g, 12 mmol), 말론산(1.0 g, 9.6 mmol), NH4OAc(1.5 g, 19 mmol)를 밀봉된 튜브에서 80℃에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 여과하고, EtOH로 세척하였다. H2SO4(0.51 mL, 9.6 mmol)를 여과액에 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 물 중에 흡수시키고, DCM(3x)으로 세척하였다. 유기 혼합물을 폐기하고, 수성 층을 NaOH(3 N)로 염기성화하고, DCM으로 3회 추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 H1(0.75 g, 무색 오일)을 수득하였다.
중간체
H2
의 제조
THF(3.9 mL) 및 EtOH(3.9 mL) 중 2,6-디클로로-3 시아노-5-플루오로피리딘(0.3 g, 1.6 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(1.4 mL, 7.9 mmol), H1(0.47 g, 2.4 mmol)을 90℃에서 3시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 농축시키고, 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 90/10부터 70/30까지)에 의해 정제하여, 무색 오일로서 295 mg의 H2(53%)를 수득하였다.
중간체
H3
의 제조
PdCl2(PPh3)2(58 mg, 0.083 mmol)를 1,4-디옥산(11 mL) 및 H2O (3.8 mL) 중 H2(0.295 g, 0.83 mmol), C(0.39 g, 0.83 mmol) 및 Cs2CO3(0.95 g, 2.9 mmol)의 탈기된 용액에 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 1시간 교반하였다. 물 및 EtOAc를 첨가하고, 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시키고, 분취용 실리카 LC(이동상: 헵탄/EtOAc 90/10부터 80/20까지)에 의해 정제하여, 베이지색 고체로서 320 mg의 H3을 수득하였다.
244
의 제조
KOH(287 mg; 5.12 mmol)를 EtOH(7.4 mL) 중 H3(320 mg; 0.512 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고 물 중에서 재구성하고, 침전물이 형성될 때까지 3 N HCl로 산성화하였다. 용액을 여과하고, 고체를 CH2Cl2 중에서 재구성하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 베이지색 고체를 생성하였으며, 이것을 역상 크로마토그래피(정지상: X-Bridge-C18 5 μm 30 x 150 mm, 이동상: 구배 75% H2O(NH4HCO3 0.5%), 25% CH3CN부터 35% H2O(NH4HCO3 0.5%), 65% CH3CN까지)를 통해 정제하여, 고체로서 137 mg의 표제 화합물(244)(60%)을 수득하였다. 키랄 SFC(정지상: Lux 셀룰로스 25 μm 250 x 21.2 mm, 이동상: 80% CO2, 20% CH3OH)를 통해 분리하여, 백색 고체로서 98 mg의 245를 수득하였다.
246
의 제조
THF(1.4 mL) 및 CH2Cl2(1.3 mL) 중 H4(30.0 mg; 67.8 μmol), HMDS(28.8 μL, 0.136 mmol), EDCI·HCl(15.6 mg, 0.0814 mmol), HOBT(11.0 mg, 0.081 mmol) 및 TEA(14.1 μL, 0.102 mmol)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 물 및 DCM을 첨가하고, 수성 층을 CH2Cl2(2회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(2회)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 이 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상: CH2Cl2/CH3OH/aq. NH3 98:2:0.2부터 96:4:0.4까지)에 의해 정제하여 246(12 mg, 백색 고체, 43%)을 수득하였다.
(트랜스)-2-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-1-에틸사이클로헥산카르복실산(
247
)의 제조
(트랜스)-
메틸
2-((6-
클로로
-5-
시아노
-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-1-
에틸사이클로헥산카르복실레이트의
제조
THF(5 mL) 및 EtOH(5 mL) 중 2,6-디클로로-3 시아노-5-플루오로피리딘(400 mg, 2.09 mmol), N,N-디이소프로필아민(1.8 mL, 10.5 mmol), (트랜스)-메틸 2-아미노-1-에틸사이클로헥산카르복실레이트[1446439-08-2](616 mg, 3.32 mmol)를 2시간 동안 환류에서 가열하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 이어서 용매를 진공 중에서 증발시켰다. 물, 염수 및 EtOAc를 첨가하였다. 유기 층을 제거하고, 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시키고, 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 90/10부터 50/50까지)에 의해 정제하여, 백색 고체로서 600 mg의 (트랜스)-메틸 2-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)-1-에틸사이클로헥산카르복실레이트(84%)를 수득하였다.
(트랜스)-
메틸
2-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1-토실-1H-인돌-3-일)-3-
플
루오로피리딘-2-일)아미노)-1-에틸사이클로헥산카르복실레이트의 제조
N2 하에서, 밀봉된 튜브에서, 1,4-디옥산(7.5 mL) 및 증류수(2.5 mL) 중 C(250 mg, 0.346 mmol), (트랜스)-메틸 2-((6-클로로-5-시아노-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)-1-에틸사이클로헥산카르복실레이트(176 mg; 0.519 mmol) 및 Cs2CO3(395 mg, 1.21 mmol)의 혼합물을 N2(3회)로 탈기하였다. PdCl2(PPh3)2(24.3 mg, 34.6 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 N2(3회)로 다시 탈기하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 용매를 진공 중에서 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc 중에 흡수시키고, 유기 층을 염수(2회)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시키고, 분취용 LC(실리카, 이동상 구배: 헵탄/EtOAc 95/5부터 70/30까지)에 의해 정제하여, 청색 고체로서 196 mg의 표제 화합물(93%)을 수득하였다.
(트랜스)-2-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-1-에틸사이클로헥산카르복실산(
247
)의 제조
KOH(101 mg; 1.80 mmol)를 EtOH(5.2 mL) 중 (트랜스)-메틸 2-((5-시아노-6-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)-1-에틸사이클로헥산카르복실레이트(165 mg, 0.361 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 이어서, 증류수(1 mL) 중 LiOH·H2O(30.3 mg, 0.722 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 이어서, 혼합물을 50℃에서 6시간 동안, 이어서 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시켰다. 잔류물을 물 중에 흡수시키고, pH = 1이 될 때까지 HCl(aq. 1 N)을 첨가하였다. 생성된 침전물을 여과하여 89 mg의 베이지색 고체를 수득하였다. 이 고체를 분취용 실리카 LC(이동상 구배: CH2Cl2/MeOH 98/2부터 90/10까지)에 의해 정제하여 55 mg의 백색 고체를 수득하고, 이것을 역상(정지상: X-Bridge-C18 5 μm 30 x 150 mm, 이동상 구배: H2O(TFA 0.05%를 함유함)/CH3CN 60/40부터 0/100까지)을 통해 정제하여, 베이지색 고체로서 25 mg의 표제 화합물(16%)을 수득하였다.
248
의 제조
키랄 SFC(정지상: CHIRALCEL OJ-H 5 μm 250x20 mm, 이동상: 80% CO2, 20% CH3OH(0.3% 이소프로필아민))를 통해 82 mg의 6에 대해 키랄 분리를 수행하고, 수집된 분획을 냉동-건조시킨 후에 29 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
N
-((
시스
)-3-((6-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로
-5-(
메틸설폰아미도메틸
)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(
250
)의 제조
밀봉된 튜브에서, 메탄설포닐 클로라이드(26 μL 0.331 mmol)를 DCM(2 mL) 중 N-((시스)-3-((5-(아미노메틸)-6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(115 mg, 0.165 mmol) 및 Et3N (81 μL, 0.579 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 물, 염수 및 EtOAc를 반응 혼합물에 첨가하였다. 수성 층을 EtOAc(2회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: DCM/MeOH/aq. NH3 100/0/0부터 90/10/1까지)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고 증발 건조시켰다. 잔류물을 아세톤으로 흡수시키고 진공 중에서 증발시키고, 고체를 고진공 하에서(50℃에서 36시간) 건조시켜, 황백색 고체로서 50 mg의 250(54%)을 수득하였다.
251
의 제조
K1
의 제조
N2 하에서, -78℃에서, TiCl4(10.8 μL, 98.7 mmol)를 E(340 mL) 중 1-메톡시-2-메틸-1-(트리메틸실록시)프로펜(20 mL; 98.7 mmol) 및 tert-부틸 프로피올레이트(13.5 μL, 98.7 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. H2O(65 mL)를 -78℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 가온되게 하고 물 및 DCM을 첨가하였다. 수성 층을 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켜 K1(79%)을 수득하였다.
K2
의 제조
N2 하에서, Et3N(16.3 mL, 117 mmol, 1.5 eq)을 건조 DCM(400 mL) 중 O1(22.3 g, 78.1 mmol) 및 벤질하이드록실아민 하이드로클로라이드(16.2 g, 102 mmol, 1.3 eq)의 혼합물에 첨가하고, 실온에서 4시간 교반하였다. 반응 혼합물을 2일 6시간 동안 환류에서 가열하였다. DCM 및 물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 수성 층을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 80/20부터 50/50까지)에 의해 정제하여 16.5 g의 K2(62%)를 수득하였다.
K3
의 제조
MeOH(245 mL) 중 K2(16.5 g, 51.7 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 압력 베셀 반응기에서 촉매로서 펄먼(Pearlman) 촉매(7.36 g, 5.17 mmol)를 사용하여 15 bar 하에서 실온에서 수소화하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드 위로 여과하고, MeOH로 헹구었다. 용매를 진공 중에서 증발시켜 15.5 g의 K3을 수득하였다.
K4
의 제조
Me-THF(5 mL) 및 EtOH(5 mL) 중 2.4-디클로로플루오로피리미딘(263 mg, 1.58 mmol), K3(490 mg, 1.13 mmol), DIPEA(1.15 mL, 6.57 mmol)를 80℃에서 18시간 동안 가열하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 물 및 염수를 첨가하였다. 수성 층을 EtOAc(2회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: DCM/MeOH/AcOH: 100/0/0부터 95/5/0.5까지)에 의해 정제하여 373 mg의 K4(72%)를 수득하였다.
K5
의 제조
N2 하에서, 마이크로파 튜브에서, 디옥산(8 mL) 및 H2O(2.5 mL) 중 C(594 mg, 1.14 mmol, 83% 순도), K4(373 mg; 0.948 mmol; 92% 순도) 및 Cs2CO3(1.08 g, 3.32 mmol)의 혼합물을 5분 동안 N2로 탈기하였다. PdCl2(PPh3)2(67 mg, 94.9 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2분 동안 N2로 다시 탈기하였다. 반응 혼합물을 전자레인지에서 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 위로 여과하고, DCM/MeOH 80/20의 혼합물로 헹구었다. 여과액을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 80/20부터 60/40까지)에 의해 정제하여 419 mg의 K5(57%)를 수득하였다.
K6
의 제조
HN(CH3)2(THF 0.402 mL 중 2 M, 0.805 mmol)를 DCM(10 mL) 중 K5(419 mg, 0.536 mmol), HATU(408 mg, 1.07 mmol) 및 Et3N(0.186 mL, 1.34 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. NaHCO3(포화, aq.) 및 DCM을 반응 혼합물에 첨가하였다. 수성 층을 DCM(2회)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: DCM/MeOH/AcOH 100/0/0부터 99/1/0.1까지)에 의해 정제하여 240 mg의 K6(68%)을 수득하였다.
K7
의 제조
KOH(102 mg; 1.82 mmol)를 EtOH(10 mL) 중 K6(240 mg, 0.364 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. NaHCO3(포화, aq.) 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성 층을 EtOAc(2회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 NaHCO3(포화, aq.) 및 물(9/1)의 혼합물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켜 207 mg의 K7을 수득하였다.
251
의 제조
포름산(2 mL)을 K7(90 mg; 0.178 mmol)에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하였다. 톨루엔을 첨가하고, 반응 혼합물을 진공 중에서 증발시켰다. 잔류물을 역상(정지상: X-Bridge-C18 5 μm 30 x 150 mm, 이동상: 구배: aq. NH4HCO3(0.5%)/MeCN 85/15부터 45/55까지)을 통해 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 진공 중에서 증발시켜 10 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
3-((5-
시아노
-6-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-3-
플루오로피리딘
-2-일)아미노)-3-(4-메틸테트라하이드로-2H-피란-4-일)프로판산(
255
)의 제조
중간체
Q1
의 제조
질소 하에서, Et3N(1.5 mL, 10.8 mmol)을 DCM(50 mL) 중 [502609-48-5](1.4 g, 7.60 mmol) 및 N-벤질하이드록실아민 HCl(1.5 g, 9.40 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 90:10부터 50:50까지)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 용매를 진공 중에서 제거하여, 무색 오일로서 960 mg의 Q1(46%)을 수득하였다.
Q2
의 제조
오토클레이브에서, MeOH(30 mL) 중 Q1(960 mg; 3.49 mmol) 및 펄먼 촉매(979 mg, 0.697 mmol)의 용액을 H2(5 bar)의 분위기 하에서 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드 상에서 여과하고, MeOH로 세척하고, 여과액을 진공 중에서 증발시켜, 백색 고체로서 670 mg의 Q2를 수득하였다.
Q3
의 제조
MeTHF(14 mL) 및 EtOH(14 mL) 중 2,6-디클로로-3 시아노-5 플루오로피리딘(820 mg, 4.29 mmol), Q2(670 mg, 3.58 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(3.12 mL, 17.9 mmol)을 80℃에서 하룻밤 가열하였다. 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 물 중에서 재구성하고, 이어서 pH = 1이 될 때까지 HCl(aq., 1 M)로 산성화하였다. 수성 층을 EtOAc(x2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켜, 갈색 고체로서 1.09 g의 Q3(89%)를 수득하였다.
Q4
의 제조
MeOH(401 μL; 9.90 mmol)를 DCM(31 mL) 중 Q3(1.09 g; 3.19 mmol), HATU(1.82 g; 4.78 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(989 μL; 5.74 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 물 및 CH2Cl2를 첨가하고, 층들을 분리하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 이어서 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: CH2Cl2/EtOAc 100/0부터 90/10까지)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 용매를 진공 중에서 제거하여, 무색 오일로서 255 mg의 Q4(22%)를 수득하였다.
255
의 제조
1,4-디옥산(8 mL) 및 H2O(3.2 mL) 중 Q4(255 mg, 0.717 mmol), C(405 mg; 0.860 mmol) 및 Cs2CO3(701 mg, 2.15 mmol)의 용액을 10분 동안 N2 버블링함으로써 탈기한 후, PdCl2(PPh3)2(50 mg, 71.7 μmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 10분 동안 N2 버블링에 의해 탈기하고, 이어서 90℃에서 하룻밤 교반하였다. 수산화리튬 1수화물(153 mg, 3.58 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 진공 중에서 증발시켰다. 잔류물을 MeOH/AcOH(90:10) 중에서 재구성하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 여과액의 용매를 진공 중에서 증발시켰다. 조 물질을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: CH2Cl2/MeOH/AcOH 100:0:0부터 90:10:1까지)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 용매를 진공 중에서 제거하여 갈색 오일을 수득하였으며, 이것을 톨루엔(2회)과 공비증류하였다. 고체를 MeCN 중에 분쇄시키고, 이어서 여과에 의해 단리하여, 백색 고체로서 60 mg의 255(18%)를 수득하였다.
256
의 제조
단계 1. 6을 제조하는 방법과 유사한 방법을 사용함으로써 니트릴 기의 환원을 수행하였다.
단계 2. 밀봉된 튜브에서, 에틸 클로로포르메이트(26.6 μL, 279 μmol)를 DCM(2.75 mL) 중 메틸 3-((5-(아미노메틸)-6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-3-플루오로피리딘-2-일)아미노)-4,4-디메틸펜타노에이트(55 mg, 127 μmol), DMAP(2 mg, 13 μmol) 및 Et3N(53 μL, 380 μmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. NaOH(51 mg, 1.27 mmol, 10 eq), EtOH(1 mL), H2O(1 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. NaOH(203 mg, 5.06 mmol, 40 eq)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 수산화리튬 1수화물(108 mg, 2.53 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. KHSO4(aq. 10%) 및 EtOAc를 반응 혼합물에 첨가하였다. 수성 층을 EtOAc(2회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 진공 중에서 증발시켰다. 조 물질을 역상(정지상: X-Bridge-C18 5 μm 30 x 150 mm, 이동상: 구배 MeCN/H2O(NH4HCO3 0.5%) 85/15부터 55/40까지)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 증발 건조시키고, MeCN 중에 용해시키고, 그것에 물을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 냉동-건조시켜, 백색 고체로서 표제 화합물(11 mg, 18%)을 수득하였다.
(
S
)-2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로
-6-
((1-하이드록시-3,3-디메틸부탄-2-일)
아미노)니코티노니트릴(
257
)의 제조
P1
의 제조
MeTHF(6.5 mL) 및 EtOH(6.5 mL) 중 2,6-디클로로-3-시아노-5-플루오로피리딘(0.518 g, 2.71 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(2.37 mL, 13.6 mmol), [112245-09-7](318 mg, 2.71 mmol)을 20시간 동안 환류에서 가열하였다. 혼합물을 증발 건조시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/EtOAc 85/15부터 60/40까지)에 의해 정제하여 0.5 g의 P1(68%)을 수득하였다.
P2
의 제조
1,4-디옥산(18 mL) 및 H2O(7.3 mL) 중 C(450 mg, 1.66 mmol), P1(936 mg, 1.99 mmol) 및 Cs2CO3(1.62 g, 4.97 mmol)의 용액을 10분 동안 N2 버블링함으로써 탈기한 후, PdCl2(PPh3)2(116 mg, 166 μmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 10분 동안 N2 버블링에 의해 탈기하고, 이어서 90℃에서 3시간 동안 교반하였다. 물 및 EtOAc를 첨가하고, 층들을 분리하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에서 증발시켰다. 잔류물을 분취용 실리카 LC(이동상 구배: 헵탄/DCM 50:50부터 100:0까지)에 의해 정제하였다. 최상의 분획을 합하고, 용매를 진공 중에서 제거하여, 백색 고체로서 274 mg의 P2(30%)를 수득하였다.
257
의 제조
THF(0.7 mL) 및 H2O(173 μL) 중 P2(50 mg, 92.2 μmol) 및 수소화리튬 1수화물(19 mg, 0.461 mmol)의 혼합물을 60℃에서 하룻밤 교반하였다. 용액을 진공 중에서 증발시켰다. 잔류물을 MeOH/AcOH(90:10) 중에서 재구성하고, 진공 중에서 증발시키고, 분취용 실리카 LC(이동상 구배: DCM/MeOH/AcOH 100:0:0부터 95:5:0.5까지)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 용매를 진공 중에서 제거하여 백색 고체를 생성하고, 톨루엔(2회)과 공비증류하여 20 mg의 불순한 백색 고체를 생성하고, 이것을 역상(정지상: X-Bridge-C18 5 μm 30 x 150 mm, 이동상 구배: H2O(NH4HCO3 0.5%)/MeCN 65:35부터 25:75까지)을 통해 정제하여, 황색 고체로서 10 mg의 257(28%)을 수득하였다.
N-((시스)-3-((5-(아세트아미도메틸)-6-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)피리딘-2-일)아미노)사이클로헥실)피롤리딘-1-카르복스아미드(260)를 이 공정 동안 부산물로서 단리하여 화합물(6)을 형성하였다.
N
-(5-((2-(5,7-
디플루오로
-1
H
-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)테트라하이드로-2H-피란-3-일)-1
H
-1,2,3-트리아졸-5-카르복스아미드(
261
)의 제조
2H-피란-3,5(4H,6H)-디온으로부터 출발하여, 이것을 Faming Zhuanli Shenqing (2015), 중국 특허 104592038 및 문헌[Yingyong Huaxue (1992), 9(6), 57-60]에 기재된 절차에 따라 테트라하이드로-2H-피란-3,5-디아민으로 전환시키고, N-(5-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)-3,3-디메틸사이클로헥실)-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복스아미드(202)를 제조하는 방법과 유사한 방법을 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.
N-((1
R
*,3
S
*)-3-((2-(5,7-
디플루오로
-1H-인돌-3-일)-5-
플루오로피리미딘
-4-일)아미노)사이클로헥실)-3-(하이드록시메틸)-1-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드(
262
)의 제조
THF(10 mL) 중 5-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-디플루오로-1H-인돌-3-일)-5-플루오로피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)카르바모일)-1-메틸-1H-피라졸-3-카르복실산(159)(350 mg, 0.663 mmol)의 용액에 얼음/염 조에서 0 내지 5℃에서 LAH(THF 중 1 M)(0.995 mL, 1 M, 0.995 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 가온시키고, 추가 2시간 후에, 반응을 얼음/물(1 mL)로 켄칭하고, 디클로로메탄(3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 조 물질을 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30x150 mm, 이동상: 0.5% aq. NH4Ac + 10% CH3CN, CH3OH)를 통해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 물질을 메탄올 중에 용해시키고, 감압 하에서 농축시켜, 고체로서 표제 화합물을 수득하였다.
[표 1] 화학식 I의 화합물 및 상응하는 분석 데이터. 실험 섹션에 기재된 방법 또는 매우 관련된 절차에 따라 화합물을 제조하였다.
소정의 화합물의 경우, DSC823e(Mettler-Toledo사)를 사용하여 융점(MP)을 결정하였다. 30℃/min의 온도 구배 및 400℃의 최대 온도를 사용하여 융점을 측정하였다. 기록된 값은 피크 값 또는 용융 범위이다. 이러한 분석 방법과 일반적으로 관련된 실험 불확실성을 수반하면서 값을 얻었다. 다른 화합물들의 경우, 모세관 방법을 사용하였다.
선광도는 나트륨 램프를 구비한 JASCO P-2000, 또는 Perkin-Elmer 341 편광계 상에서 측정하였으며, 하기와 같이 기록하였다: [α]° (λ, c g/100 ml, 용매, T℃). [α]λ T = (100α) / (l x c): 여기서, l은 경로 길이(단위: dm)이고, c는 온도 T(℃) 및 파장 λ(단위: nm)에서의 샘플에 대한 농도(단위: g/100 ml)이다. 사용되는 광의 파장이 589 nm(나트륨 D 라인)인 경우, 기호 D가 대신 사용될 수 있다. 선광도의 기호(+ 또는 -)는 항상 주어져야 한다. 이 식을 사용하는 경우에는, 항상 농도 및 용매가 선광도 뒤에 괄호 안에 제공되어야 한다. 선광도는 도(degree)를 사용하여 기록되고, 농도 단위는 주어지지 않는다(이는 g/100 ml인 것으로 상정된다).
NMR은, 양성자에 대해 500 MHz로 작동하고 z 구배를 갖는 리버스(reverse) 삼중-공명(1H, 13C, 15N TXI) 프로브 헤드를 구비한, 360 MHz Bruker DPX 300 기계 NMR, 400 MHz Bruker AVANCE NMR 기계, 또는 Bruker Avance 500 분광계에서 실행하였다. 신호는 잔류 용매 피크에 대한 백만분율(ppm)로 제시되어 있다. 다중도는 하기와 같이 제시되어 있다: s, 단일선; d, 이중선; t, 삼중선; q, 사중선; p, 오중선; dd, 이중 이중선; dt, 이중 삼중선; ddd, 이중 이중 이중선; dtd, 이중 삼중 이중선; m, 다중선; br s., 넓은 단일선.
고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 측정은 LC 펌프, 다이오드-어레이(DAD) 또는 UV 검출기, 및 각각의 방법에 지정된 바와 같은 컬럼을 사용하여 수행하였다. 필요하다면, 추가의 검출기를 포함하였다(하기의 방법의 표 참조).
컬럼으로부터의 유동을 대기압 이온 공급원으로 구성된 질량 분석계(MS)로 가져왔다. 화합물의 공칭 단일동위원소(monoisotopic) 분자량(MW)의 확인을 가능하게 하는 이온을 얻기 위하여 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 유지 시간(dwell time) 등)를 설정하는 것은 숙련자의 지식 내에 있다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터 획득을 수행하였다.
화합물들은 그들의 실험 체류 시간(Rt) 및 이온에 의해 기재되어 있다. 데이터의 표에 상이하게 지정되어 있지 않다면, 기록된 분자 이온은 [M+H]+(양성자화된 분자) 및/또는 [M-H]-(탈양성자화된 분자)에 상응한다. 화합물이 직접 이온화 불가능한 경우에는, 부가생성물의 유형이 지정된다(즉, [M+NH4]+, [M+HCOO]- 등). 다수의 동위원소 패턴을 갖는 분자(Br, Cl 등)의 경우에, 기록된 값은 최저 동위원소 질량에 대해 얻어진 것이다. 사용된 방법과 일반적으로 관련된 실험 불확실성을 수반하면서 모든 결과를 얻었다.
[표 2] 분석 방법
화학식 I의 화합물의 생물학적 활성
세포-기반 항바이러스 검정을 사용하여 화합물의 시험관내(in vitro) 항바이러스 활성을 결정하였다. 이 검정에서는, 인플루엔자 바이러스 A/타이완(Taiwan)/1/86(H1N1)에 의해 감염된 마딘-다비 개 신장(Madin-Darby canine kidney, MDCK) 세포에서의 세포변성 효과(cytopathic effect, CPE)를 화합물의 존재 또는 부재 하에서 모니터링하였다. 백색의 384웰 미세적정 검정 플레이트(Greiner사)를 에코 액체 핸들러(echo liquid handler)(미국 캘리포니아주 서니베일 소재의 Labcyte사)를 사용하여 음향 액적 분사(acoustic drop ejection)를 통해 충전하였다. 200 나노리터의 화합물 스톡 용액(100% DMSO)을 검정 플레이트에 전달하였다. MDCK 세포를 25,000 또는 6,000개 세포/웰의 최종 밀도로 플레이트에 분배하였다. 이어서, A형 인플루엔자/타이완/1/86(H1N1) 바이러스를 각각 0.001 또는 0.01의 감염 다중도로 첨가하였다. 웰은 부피당 0.5% DMSO를 수용한다. 바이러스- 및 모의(mock)-감염된 대조군을 각각의 시험에 포함시켰다. 플레이트를 5% CO2 중에서 37℃에서 인큐베이션하였다. 바이러스 노출 후 3일째에, ATPlite™ 키트(벨기에 자벤템 소재의 PerkinElmer사)를 제조업체의 사용설명서에 따라 사용하여 ATP 수준의 감소를 측정함으로써 세포변성 효과를 정량화하였다. IC50을 50% 억제 농도로 정의하였다. 이와 동시에, 백색 384웰 미세적정 플레이트에서 3일 동안 화합물을 인큐베이션하고, MDCK 세포에서의 화합물의 시험관내 세포독성을, ATPlite™ 키트(벨기에 자벤템 소재의 PerkinElmer사)를 제조업체의 사용설명서에 따라 사용하여 세포의 ATP 함량을 측정함으로써 결정하였다. 세포독성은 세포 생존력의 50% 감소를 야기하는 농도인 CC50으로 기록되어 있다.
[표 3] 화학식 I의 화합물의 생물학적 활성
Claims (9)
- 화학식 I의 화합물, 이의 입체이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체:
[화학식 I]
(상기 식에서,
X는 N 또는 C이며, N 및 C는 -CN, -CF3, -C1-3 알킬-NH-C(O)-C1-3 알킬, -C(O)-NH2, -C(O)-NH-C1-3 알킬, -C(O)-N-(디알킬) 또는 -CH2-NH-C(O)-CH3에 의해 선택적으로 치환되고;
R1은 F 또는 Cl이고;
R2 및 R4는 각각 H, 할로겐, CN, CF3, -O-알킬 또는 NH2로부터 선택되고;
R3은 F, Cl, CN, CF3, -C1-3 알킬, -O-알킬, 카르복실산 에스테르 또는 카르복실산 아미드이고;
R5는 Br, CN, CH3, CH2OH, C(O)NH2, NH2 또는 H이고;
R6은 카르복실산에 의해 치환된 C1-8 알킬이거나;
카르복실산, -N-C1- 3알킬설폰, 또는 C1-6 알킬에 의해 선택적으로 치환된 -N-C(O)-C3-6헤테로사이클에 의해 치환된 C3-8 사이클로알킬이거나;
-N-C(O)-C3- 6헤테로사이클에 의해 치환된 C3-6 헤테로사이클이거나;
COOH에 의해 치환된 C3-6 헤테로사이클임). - 제1항에 있어서, R1 및 R3 둘 모두가 F인 화합물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 구조식
또는
을 갖는 화합물.
- 제1항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체를 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약제학적 조성물.
- 약제로서 사용하기 위한, 제1항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체, 또는 제4항에 따른 약제학적 조성물.
- 인플루엔자의 치료에 사용하기 위한, 제1항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체, 또는 제4항에 따른 약제학적 조성물.
- 생물학적 샘플 또는 환자에서 인플루엔자 바이러스(들)의 복제를 억제하기 위한 하기 구조식 I로 나타낸 화합물, 이의 입체이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체의 용도:
[화학식 I]
(상기 식에서,
X는 N 또는 C이며, N 및 C는 -CN, -CF3, -C1-3 알킬-NH-C(O)-C1-3 알킬, -C(O)-NH2, -C(O)-NH-C1-3 알킬, -C(O)-N-(디알킬) 또는 -CH2-NH-C(O)-CH3에 의해 선택적으로 치환되고;
R1은 F 또는 Cl이고;
R2 및 R4는 각각 H, 할로겐, CN, CF3, -O-알킬 또는 NH2로부터 선택되고;
R3은 F, Cl, CN, CF3, -C1-3 알킬, -O-알킬, 카르복실산 에스테르 또는 카르복실산 아미드이고;
R5는 Br, CN, CH3, CH2OH, C(O)NH2, NH2 또는 H이고;
R6은 카르복실산에 의해 치환된 C1-8 알킬이거나;
카르복실산, -N-C1- 3알킬설폰, 또는 C1-6 알킬에 의해 선택적으로 치환된 -N-C(O)-C3-6헤테로사이클에 의해 치환된 C3-8 사이클로알킬이거나;
-N-C(O)-C3- 6헤테로사이클에 의해 치환된 C3-6 헤테로사이클이거나;
COOH에 의해 치환된 C3-6 헤테로사이클임). - 제7항에 있어서, 추가 치료제를 병용-투여하는 것을 추가로 포함하는 용도.
- 제8항에 있어서, 추가 치료제가 항바이러스제 또는 인플루엔자 백신, 또는 둘 모두로부터 선택되는 용도.
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