KR20170024267A

KR20170024267A - 무궁화의 꽃으로부터 추출된 정유를 포함하는 피부 재생용 외용제 및 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20170024267A
Application number: KR1020150119303A
Authority: KR
Inventors: 이환명; 김도윤; 황대일; 윤석원; 이수진; 김보경; 원경종
Original assignee: 호서대학교 산학협력단
Priority date: 2015-08-25
Filing date: 2015-08-25
Publication date: 2017-03-07
Also published as: KR101762750B1

Abstract

본원 발명은 무궁화 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 재생용 조성물 및 화장료 조성물에 관한 발명으로, 피부세포 수준에서 세포 증식 및 이동유도, 콜라젠 합성 및 분비 촉진을 통하여 피부 탄력 증진 및 상처치유 효과가 우수하다.

Description

무궁화의 꽃으로부터 추출된 정유를 포함하는 피부 재생용 외용제 및 화장료 조성물{Cosmetic composition for skin cell regeneration and wound healing the use there of containing absolute of Hibiscus syriacus L.flower}

본 발명은 무궁화(Hibiscus syriacus L.)의 꽃으로부터 추출된 정유(精油) 또는 이의 유효성분을 포함하는 피부 재생용 외용제 및 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부(skin)는 표피(epidermis), 진피(dermis) 및 피하지방층(subcutis)의 3층으로 구성되어 있다. 표피는 인체의 최외부에 존재하여 외부의 물리적 화학적 자극에 대한 1차적인 방어를 담당하는 신체의 중요한 방어 조직이다. 피부는 자외선 및 스트레스 등에 의해 노화되거나 상처로 인해 손상되면 그 기능이 약화되고 이때 피부 재생 과정이 시작된다. 피부 재생 과정은 급성 염증반응을 시작으로 표피 세포의 증식과 이동과 증식을 거쳐 새로운 혈관의 생성과 콜라젠(collagen) 합성을 통하여 결체조직의 수축을 거친다. 이때 표피의 90% 이상을 차지하는 각질형성세포(keratinocyte)의 이동과 증식은 상처치유와 피부 재생을 제공할 뿐만 아니라, 콜라젠(collagen) 합성을 유도하여 피부의 탄력 증진과 기저막 형성에 중요한 역할을 한다. 콜라젠은 -chain에 따라 20종 이상의 콜라젠이 있으며, 사람의 피부에는 type I, III, IV, V, VI 및 VII 형 콜라젠이 분포하고 있다. 주로 type I 콜라젠은 피부 진피층의 85% 이상을 구성한다. 그리고, type IV 콜라겐은 기저막(basement membrane)의 주요 구조 단백질로서, type I 및 IV 콜라겐의 합성은 피부의 탄력을 증진시키고, 기저막 형성을 향상시켜 피부 세포들의 부착과 증식이 조절되고, 유해물질을 선택적으로 투과하는 장벽기능의 향상과 표피와 진피의 상호작용 등을 제공하는 것으로 알려졌다. 이로 인해, 피부 재생과 상처 치유뿐만 아니라 피부 탄력을 증진시키고 건강한 피부가 유지되도록 도와준다.

천연물 유래 "정유(精油)"란 방향유(식물의 잎, 줄기, 열매, 꽃, 뿌리 따위에서 채취한 향기로운 휘발성의 물질)을 통칭하는 용어로서, 추출물, 추출법, 용도 및 목적에 따라 다양하게 분류된다. 천연물 유래 정유(精油)는 추출법에 따라 에센셜 오일(essential oil), 앱솔루트(absolute), 콘크리트(concrete) 등으로 분류된다. 이러한 천연물 유래 정유(精油)의 방향성 성분이 피부, 순환계, 후각계를 통해 진정, 긴장완화 등의 효과를 나타낼 뿐만 아니라 항균작용, 면역 증진, 항알러지 작용 등의 치료효과를 나타내어 오래전부터 질병의 치료와 예방에 활용되어왔을 뿐만 아니라, 식품 향료와 향장품 원료로 사용되고 있다.

무궁화(Hibiscus syriacus L.)는 아욱과(Malvaceae)에 속하는 낙엽활엽관목이다. 한국, 인도 시베리아 등지에 널리 분포하며, 우리나라 국화이다. 7월~10월 사이에 꽃을 피운다. 예로부터 잎은 이뇨작용과 천식 해소에 효과가 있고 피부 가려움증을 비롯한 피부 질환을 치료하는 약으로 쓴다. 잎과 꽃은 차로 만들어 마시며, 최근 잎의 추출물은 머리를 감는 데 쓰는 샴푸를 만들 때 첨가물로 이용되기도 한다. 한의학에서 무궁화의 뿌리껍질이나 줄기껍질을 벗겨 햇볕에 말려서 사용하며, 간경, 비경, 대장경, 소장경에 사용한다. 열을 내리고 습사를 없애며 독을 제거하고 기생충을 구제한다. 또, 혈액 순환을 촉진하고 출혈을 멎게 한다. 장출혈, 이질, 탈항, 대하증, 옴, 무좀, 치질 등에 사용한다. 지금까지, 무궁화에 대해서는 무궁화의 뿌리껍질(목근피)에 대한 연구가 가장 많았고, 무궁화나무의 경피와 근피 추출물의 항산화 및 Tyrosinase 저해 효과 (장아람. 2012. 무궁화 추출물의 화장품 생리 및 피부세포 활성 연구. 한남대학교 대학원석사논문. P.43.)로 인하여 천연미백제로 활용이 가능하다는 것이 보고되었을 뿐, 아직까지 무궁화 꽃 유래 정유(精油)를 활용한 피부 재생 및 상처치유 개발 연구는 보고된 바가 없다.

이러한 상황에서, 본 발명자들은 무궁화 꽃으로부터 추출한 정유(精油)가 피부 표피 각질형성세포의 증식 및/또는 이동을 유도할 수 있으며, type I 및 IV 콜라젠의 합성 및/또는 분비를 유도할 수 있는 효과가 우수하여 피부 재생 및 탄력 증진과 상처 치유 효과가 있음을 규명하고, 이를 활용한 피부의 탄력 증진, 재생 및/또는 상처치유 효과가 있는 의약품, 화장품, 및/또는 피부 외용제 조성물을 완성하기에 이르렀다.

본 발명자들은 천연물질로부터 피부의 탄력 증진과 재생 및 상처 치유용 화장품 또는 의약품 피부 외용제 조성물을 개발하기 위해 지속적으로 연구한 결과, 무궁화 꽃의 정유(精油)가 피부 표피 각질형성세포의 증식과 이동을 유도하고, type I 및 IV 콜라젠 합성과 분비를 촉진하는 작용이 있음을 확인하고, 이에 본 발명을 완성하게 되었다.

상기와 같은 기술적 과제를 해결하기 위해, 본 발명의 피부 재생용 조성물은 무궁화 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함한다.

본 발명의 일실시예에 따른 상기 정유는 휘발성 용제를 이용하여 유기용매 추출법에 의해 추출된 것이 바람직하다.

본 발명의 일실시예에 따른 상기 정유는 상기 유기 용매 추출법에 의해 추출된 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스를 제거한 앱솔루트인 것이 바람직하다.

본 발명의 일실시예에 따른 상기 정유는 휘발성 유기 화합물을 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명의 일실시예에 따른 상기 휘발성 유기 화합물은 팔미트산(Palmitic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 스테아르산(stearic acid), 9-노나데센(9-Nonadecene), 시클로아르테놀(Cycloartenol), γ-시토스테롤 (γ-Sitosterol), 루페닐아세테이트(Lupenyl acetate), 미리스트산(Myristic acid), 스쿠알렌(Squalene) 및 γ-토코페롤(γ-Tocopherol)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것이 바람직하다.

본 발멸의 일실시예에 따른, 상기 정유는 0.001~0.1 mg/mL 포함하는 것이 바람직하다.

상기와 같은 기술적 과제를 해결하기 위해, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 무궁화 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함한다.

상기와 같은 기술적 과제를 해결하기 위해, 본 발명의 화장료 조성물은 무궁화 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함한다.

상기와 같은 기술적 과제를 해결하기 위해, 무궁화 꽃의 정유 추출 방법은 무궁화 꽃을 휘발성 용제에 용해하여 유기용매추출법에 의해 콘크리트를 추출하는 단계; 및 상기 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스를 제거하여 앱솔르트를 얻는 단계를 포함한다.

본 발멸의 일실시예에 따른, 상기 무궁화 꽃의 정유는 팔미트산(Palmitic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 스테아르산(stearic acid), 9-노나데센(9-Nonadecene), 시클로아르테놀(Cycloartenol), γ-시토스테롤 (γ-Sitosterol), 루페닐아세테이트(Lupenyl acetate), 미리스트산(Myristic acid), 스쿠알렌(Squalene) 및 γ-토코페롤(γ-Tocopherol)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것이 바람직하다.

상기와 같은 본 발명의 화장품 또는 의약품 피부 외용제 조성물은 피부세포 수준에서 세포 증식 및 이동유도, 콜라젠 합성 및 분비 촉진을 통하여 피부 탄력 증진 및 상처치유 효과가 우수하여 피부의 재생 촉진제 및 상처치유제로 유용하게 사용할 수 있다.

도 1은 본 발명의 바람직한 일실시예에 따라 무궁화 꽃으로부터 앱솔루트(absolute)를 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 무궁화 꽃의 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 증식에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 3A는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 무궁화 꽃의 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 이동에 미치는 효과를 나타낸 사진이다.
도 3B는 상기 도 3A의 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 이동에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.
도 4A는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질 형성세포 내 세린/트레오닌 단백질 키나제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나제 (ERK1/2)의 인산화에 미치는 영향을 나타낸 사진이다.
도 4B는 상기 도 4A의 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포 내 세린/트레오닌 단백질 키나제(Akt)의 인산화에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.
도 4C는 상기 도 4A의 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포 내 세포외 신호 조절 키나제(ERK1/2)의 인산화에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.
도 5A는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 type I 콜라젠 합성과 분비에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 5B은 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 6A는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 표피 각질형성세포에서 콜라젠 맹아(sprouting) 자연성장(out growth)에 미치는 효과를 나타낸 사진이다.
도 6B는 상기 도 6A의 무궁화 꽃 앱솔루트가 콜라젠 맹아(sprouting) 자연성장(out growth)에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.

본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

제1, 제2 등과 같이 서수를 포함하는 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 해당 구성요소들은 이와 같은 용어들에 의해 한정되지는 않는다. 이 용어들은 하나의 구성요소들을 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다.

이하의 설명에 있어, 당업자에게 주지 저명한 기술에 대해서는 그 상세한 설명을 생략 할 수 있다. 또한, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다.

따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 발명은 무궁화 꽃의 정유(精油) 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물이다. 또한, 본 발명은 피부 탄력 증진용 조성물이거나 피부의 상처 치유 기능을 가지는 의약 또는 화장품 조성물일 수 있다.

상기 정유 성분은 건조하지 않은 무궁화 꽃으로부터 얻는 것이 바람직하며, 유기용매 추출법에 의해 추출된 콘크리트(concrete)를 알코올로 추출하여 불용성 왁스(wax)를 제거한 앱솔루트(absolute)인 것을 특징으로 한다.

구체적으로, 본 발명은 무궁화의 꽃을 휘발성 용제를 이용한 유기용매 추출법으로 추출하여 콘크리트(concrete)를 얻는 단계; 및 상기 얻은 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스(wax)를 제거하고 앱솔루트(absolute)를 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 무궁화 꽃의 추출 방법일 수 있다.

일례로, 건조하지 않은 무궁화 꽃을 헥산(n-hexane)에 침전시킨 뒤, 얻은 추출물을 회전식 증발기(rotary evaporation)를 이용하여 농축시켜서 콘크리트를 얻은 다음, 상기 얻은 콘크리트에 에틸알코올(ethyl alcohol)를 넣고 영하 20℃에서 12시간 동안 용해시킨 후, 진공 냉각 필터(vacuum cooling filtration) 및 회전식 증발기를 이용하여 분리/정제함으로써, 본 발명에 따른 무궁화 꽃 앱솔루트를 제조할 수 있다.

상기 유기용매 추출법과 추출물로부터 앱솔루트를 분리하는 방법은 이 기술 분야에서 보통의 지식을 가진 자가 변형할 수 있는 모든 방법을 포함하는 것이 가능하다.

본 발명의 무궁화 꽃 정유(精油)는 휘발성 유기화합물을 포함할 수 있고, 더욱 구체적으로는 총 10종의 휘발성 유기화합물이 함유되어 있었는데, 상기 휘발성 유기화합물은 팔미트산(Palmitic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 스테아르산(stearic acid), 9-노나데센(9-Nonadecene), 시클로아르테놀(Cycloartenol), γ-시토스테롤 (γ-Sitosterol), 루페닐아세테이트(Lupenyl acetate), 미리스트산(Myristic acid), 스쿠알렌(Squalene) 및 γ-토코페롤(γ-Tocopherol)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것이 가능하다 (실험예 1 및 표 1 참조).

본 발명에 의한 화장품 또는 의약품 및 피부외용제 조성물은 상기 무궁화 꽃 정유(精油)의 함량은 특별히 제한된 것은 아니고, 필요에 따라 0.001~0.1 mg/mL 범위 (바람직하게는, 0.01~0.1 mg/mL 범위) 내의 농도에서 피부 세포(각질형성세포)가 높은 세포 생존율을 나타내고, 가장 우수한 피부 탄력 증진과 재생 및 상처치유 효과를 가지기 때문에 바람직하다.

본 발명의 조성물은 피부 탄력 증진과 재생용 및 상처치유 피부 외용제 조성물로서 사용될 수 있으며, 이는 노화와 주름, 상처 및 피부 병변으로 인하여 생리활성이 저하된 피부의 탄력, 재생, 및/또는 상처치유 등에 유용한 것이 특징이다.

본 발명에 의한 무궁화 꽃 정유는 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하였다.

또한, 본 발명에 의한 무궁화 꽃 정유는 표피 각질형성세포내 세린/트레오닌 키나제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나제(ERK 1/2)의 인산화를 농도 의존적으로 유도하였다.

또한, 본 발명에 의한 무궁화 꽃 정유는 표피 각질형성세포의 type I과 type IV 콜라젠 분비와 합성을 촉진시켰다.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 무궁화 꽃 정유는 피부 노화와 주름, 상처 및 피부 병변으로 인하여 생리활성이 저하된 각질형성세포의 증식을 유도하여 피부의 탄력유지와 재생, 상처 치유의 유도를 통해 피부 탄력유지와 재생용 및 상처 치유용 피부 외용제로 널리 활용될 수 있다.

즉, 본 발명은 무궁화 꽃 정유로부터 유기용매 추출법을 통해 추출되는 정유을 포함하는 피부 재생용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 피부 표피 각질형성세포(keratinocyte)의 증식과 이동을 유도하고, type I 및 IV 콜라젠(collagen)의 합성과 분비를 촉진시키는 무궁화 꽃 정유를 유효성분으로 하여, 피부의 탄력유지와 재생 및 상처 치유 효과가 있는 화장품 또는 의약품 및 피부 외용제 조성물을 제공할 수 있다.

이와 함께, 상기한 본 발명에 따른 조성물은 활성 성분으로서의 상기한 무궁화 꽃 정유(精油)와 함께, 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 결합제, 붕괴제, 글리덴트(glident), 희석제, 윤활제, 착색제, 감미제, 향미제, 방부제 등을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화 될 수 있으며, 경구 또는 비경구 투여를 위한 다양한 형태로 제형화 될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캡슐, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 목적하는 효과를 상승시킬 수 있는 공지의 화합물과도 병행하여 투여할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 전형적으로 원하는 투여 형태에 대하여, 즉, 정제, 캡슐 (고체, 반고체 또는 액체 충전), 구성용 분말, 통상적인 약무와 일치하는 에어로졸 제제 형태의 경구 투여를 위해 선택된 적절한 담체 물질과 함께 투여될 수 있다.

본 발명의 또 하나의 측면은 본 발명의 무궁화 꽃 정유(精油)를 포함하는 약제학적 조성물을 후술하는 질환을 치료하는데 효과적인 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 피부 재생 및 상처치유 방법에 관한 것이다.

본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하여, 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다. 또한, 피부탄력과 재생 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다.

하기의 실시예는 본 발명의 예시 목적을 위한 것이며, 첨부된 특허청구범위에 의하여 한정되는 보호범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.

무궁화 꽃 앱솔루트의 제조

도 1은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 무궁화 꽃으로부터 앱솔루트(absolute)를 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이고, 여기에 나타난 바와 같은 방법으로 무궁화 꽃 앱솔루트를 제조하였다.

본 실시예에서 무궁화 꽃은 호서대학교(아산, 한국) 실습지에서 자생된 무궁화 꽃을 8월에 채취하여 사용하였다. 무궁화 꽃이 피기 직전의 꽃망울 전체를 채취하여 세척 후, 생초 2 kg씩 유기용매 추출법을 이용하여 추출하였다.

즉, 건조하지 않은 무궁화 꽃을 헥산(n-hexane)에 상온으로 60분 동안 침전시켰고, 이렇게 얻은 침전물을 회전식 증발기(rotary evaporation)에서 25℃로 90분간 증발시켜서 농축시킴으로서 고형의 콘크리트(concrete)를 획득하였다. 그 다음, 상기 콘크리트를 에틸 알코올(ethyl alcohol)를 넣어서 용해시키고 영하20℃에서 12시간 동안 보관한 후, 영하 20℃의 진공 냉각 필터(vacuum cooling filtration)를 거쳐서 불용성 왁스(wax)를 제거하였으며, 다시 회전식 증발기에서 30℃로 90분간 증발시켜서 분리/정제함으로써 무궁화 꽃 앱솔루트(1.5 mL)를 제조하였다. 그리고 상기 제조한 무궁화 꽃 앱솔루트는 4℃의 저온고에서 보관하였다.

[실험예1]

무궁화 꽃 앱솔루트의 성분 분석

상기 실시예 1에서 제조한 무궁화 꽃 앱솔루트의 성분 분석은 KBSI(Korea Basic Science Institute, Seoul center)에 의뢰하였다. 더욱 구체적으로는, gas chromatography/ mass spectrometer(6890N GC/5975i MS, Agilent, USA)를 사용하였고, GC/MS의 column은 DB5-MS(30 m × 250 μm, 0.25 μm)를 사용하였으며, carrier gas는 He를 사용하여 1 mL/분으로 흐르게 하여 분석하였다. Oven의 온도는 40℃-2℃/분-230℃-5℃/분-300℃(5분)으로 유지하였으며, injection의 온도는 280℃에서 분석하였다. 또한 Interface의 온도는 300℃, ion source의 온도는 230℃, analyzer의 온도는 150℃에서 분석하였으며, Mass range는 40~800 m/z에서 분석하였다.

그 결과, 하기 표 1에 나타난 바와 같이, 무궁화 꽃 앱솔루트의 휘발성 성분은 총 10개의 성분으로 구성되어 있었으며, 그 중에서도 팔미트산(Palmitic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 스테아르산(stearic acid), 9-노나데센(9-Nonadecene), 시클로아르테놀(Cycloartenol), γ-시토스테롤 (γ-Sitosterol), 루페닐아세테이트(Lupenyl acetate), 미리스트산(Myristic acid), 스쿠알렌(Squalene), γ-토코페롤(γ-Tocopherol) 순으로 많은 양이 포함되어 있었다.

	Compound name	%
1	Palmitic acid	18.94
2	Linoleic acid	8.57
3	stearic acid	5.87
4	9-Nonadecene	5.82
5	Cycloartenol	3.31
6	γ-Sitosterol	2.22
7	Lupenyl acetate	1.52
8	Myristic acid	1.16
9	Squalene	0.83
10	γ-Tocopherol	0.81

[실험예2]

무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 증식에 미치는 효과

상기 실시예 1에서 얻은 무궁화 꽃 앱솔루트가 피부 표피각질형성세포 증식에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같이 조사하였다.

사람 피부 유래 표피 각질형성세포(HaCat)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 배양하고 본 발명의 실험예에 활용하였다. 표피 각질형성세포를 96 well microtiter plate에 각 well 당 세포수 2 X 10³cells/100 μL/well이 되도록 주입하여 37℃, 5% CO₂배양기에서 부착시켰다.

무궁화 꽃 앱솔루트 0.001~0.1 mg/mL 농도로 각 well에 100 μL씩 처리하여 24시간 동안 배양시켰다. Ez-cytox와 DMEM를 1:1로 혼합하여 각 well 당 20 μL씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시켰다. ELISA plate reader(Synerge2, BioTek, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도 측정 후, 백분율로 환산하여 무궁화 꽃 앱솔루트의 피부 표피각질형성세포 증식에 대한 결과를 확보하였다.

도 2은 본 발명의 실시예 1에 의해 추출된 무궁화 꽃 앱솔루트의 표피

각질형성세포의 증식 효과를 나타낸 그래프이다. 여기서, 음성 대조군은 무궁화 꽃 앱솔루트를 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래에 상처치유 및/또는 피부 재생에 활용되고 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 무궁화 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하는 것으로 나타났다. 즉, 표피성장인자(50 ng/mL)에 의한 표피 각질형성세포의 증식은 166.25±3.03% 유도가 되었으며, 양성 대조군가 비교하여 무궁화 꽃 앱솔루트 0.01 mg/mL 농도에서 117.46±2.55%의 증식 유도율을 나타내었고, 0.1 mg/mL의 농도에서 154.27±2.92%의 증식 유도율을 나타내어, 각질형성세포의 증식을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

[실험예3]

무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포 이동에 미치는 효과

상기 실시예 1에서 얻은 무궁화 꽃 앱솔루트가 피부 표피 각질형성세포 이동에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같이 실험하였다.

사람 피부 유래 표피 각질형성세포(HaCat)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 배양하고 본 발명의 실험예에 활용하였다. 48 well Boyden microchemotaxis chamber를 사용하여 표피 각질형성세포의 이동률을 조사하였으며, 먼저 lower chamber에 무궁화 꽃 앱솔루트를 각각 0.001~0.1 mg/mL 의 농도를 처리하고, type I 콜라젠 코팅이 된 8 μm pore의 polycarbonate membrane을 올려 주었다. 이후, upper chamber에 표피 각질형성세포를 well당 5×10⁴cell/50㎕씩 처리하였다. Chamber를 37℃ 배양기에서 3시간 배양시킨 후, membrane을 Diff-Quick solution으로 염색 및 고정하였다. Membrane을 통과하여 이동한 세포의 수를 세어, 백분율로 환산하여 무궁화 꽃 앱솔루트의 피부 표피 각질형성세포 이동에 대한 결과를 확보하였다.

도 3A는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 무궁화 꽃의 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 이동에 미치는 효과를 나타낸 사진이며, 도 3B는 본 발명의 일 실시예 1에 의해 추출된 무궁화 꽃 앱솔루트의 피부각질형성세포의 이동효과를 나타내는 그래프이다. 음성 대조군은 무궁화 꽃 앱솔루트를 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래에 상처치유 및/또는 피부 재생에 활용되는 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 5 ng/mL)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 3A에 나타난 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따른 무궁화 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하였으며, 특히, 무궁화 꽃 앱솔루트 0.01mg/mL의 농도에서 127.07±4.11%의 증식 유도율 나타내었고, 0.1mg/mL의 농도에서 160.79±4.0%의 최대 이동률을 나타내어, 무궁화 꽃 앱솔루트가 각질형성세포의 이동을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

[실험예4]

무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포내 신호전달 과정에 미치는 영향 조사

상기 실시예 1에 의해 얻은 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 증식과 이동을 조절하는 주요 신호전달과정인 세린/트레오닌 키나제(Akt)와 세포외 신호조절 키나제(ERK1/2)의 인산화 과정에 미치는 효과를 측정하기 위해서, 상기 실험예1에서 제시된 무궁화 꽃 앱솔루트의 농도를 처리하고, 각각의 특이항체 (P-Akt, Akt, P-ERK1/2, ERK1/2)를 이용하여 면역블롯(Immuno Blot)법을 활용하였다.

도 4는 본 발명의 일 실시예 1에 의해 추출된 무궁화 꽃 앱솔루트의 표피 각질형성세포내 세린/트레오닌 키나제(Akt)와 세포외 신호조절 키나제(ERK1/2)의 인산화 과정에 미치는 영향을 나타낸 결과이며, 음성 대조군은 무궁화 꽃 앱솔루트를 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처치유 및/또는 피부 재생에 활용되는 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 4 A, B에 나타난 바와 같이, 무궁화 꽃 앱솔루트는 농도 의존적으로 표피 각질형성세포내 세린/트레오닌 키나제(Akt)와 세포외 신호조절 키나제(ERK1/2)의 인산화를 유도하였으며, 특히, 무궁화 꽃 앱솔루트 0.1 mg/mL 농도에서 세포내 세린/트레오닌 키나제(Akt)의 인산화가 403.16±3.66% 유도되었으며, 세포외신호조절 키나제(ERK1/2)의 인산화는 334.12±3.31%가 유도되는 것으로 나타났다.

[실험예5]

무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라젠 합성과 분비에 미치는 영향

상기 실시예 1에 의해 얻은 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라젠 합성과 분비에 미치는 효과를 측정하기 위해서, 하기와 같이 조사하였다.

96 well microtiter plate에 monoclonal anti-collagen I 또는 IV Ab, (2 μg/well/PBS)를 주입 후 12시간 동안 상온에서 코팅하였다. Blocking buffer로 1시간 동안 blocking 후, 샘플을 well당 100 μL 씩 처리하여 상온에서 90분 동안 반응시켰다. 샘플은 무궁화 꽃 앱솔루트를 처리하지 않은 표피 각질형성세포의 배양액(CM), 무궁화 꽃 앱솔루트 0.1 mg/mL 농도로 처리된 표피 각질형성세포의 배양액(CM)을 처리하였다. 그 후, polyclonal anti-collagen I 또는 IV Ab를 각 well에 처리하여 상온에서 90분 동안 반응시킨 다음, streptavidin-POD를 각 well에 처리하여 상온에서 60분 동안 반응시켰다. Supersinal ELISA pico chemiluminescent substrate를 각 well 당 100 μL 씩 주입하여 10분 동안 반응시킨 후, ELISA plate reader를 이용하여 luminescence 정도를 측정하였고, 무궁화 꽃 앱솔루트의 표피 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라젠 합성과 분비에 대한 결과를 확보하였다.

도 5는 본 발명의 일 실시예 1에 의해 추출된 무궁화 꽃 앱솔루트의 표피 각질형성세포의 type I 및 IV 콜라젠 합성과 분비에 미치는 영향을 나타낸 결과이며, 음성 대조군은 무궁화 꽃 앱솔루트를 이용하지 않은 것이다.

그 결과, 도 5A에 나타난 바와 같이, 무궁화 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성세포의 type I 콜라젠 합성과 분비를 유의하게 촉진시켰다. 특히, 표피 각질형성세포의 배양액(CM)에서 143.61±1.78% 유도되었으며, 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 type I 콜라젠 합성과 분비를 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

또한, 결과 도 5B에 나타난 바와 같이, 칡 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비를 유의하게 촉진시켰다. 특히, 표피 각질형성세포의 배양액(CM)에서 152.57±1.84% 유도되었으며, 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비를 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

[실험예6]

무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포 콜라젠 sprouting의 out growth에 미치는 영향

상기 실시예 1에 의해 얻은 무궁화 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포 콜라젠 sprouting의 out growth에 미치는 효과를 측정하기 위해서, 하기와 같이 조사하였다.

Type I 콜라젠과 표피 각질형성세포를 2.5×107 cells/mL이 되도록 섞은 후, NaOH (1 N)용액을 처리하여 중화한 후, 24 well plate에 5 μL씩 spoting하고, 5~10분 정도 상온에서 건조하여 인공피부조직을 형성하였다. 샘플을 처리하고, 72~90시간 동안 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 배양액을 제거하고, Diff-Quik solution을 이용하여 세포와 조직을 고정 및 염색하였으며, 염색된 세포와 조직을 촬영하여 결과를 확보하였다.

도 6은 본 발명의 실시예 1에 의해 추출된 무궁화 꽃 앱솔루트의 표피 각질형성세포 콜라젠 sprouting의 out growth에 미치는 영향을 나타낸 결과이며, 음성 대조군은 무궁화 꽃 앱솔루트를 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처치유 및/또는 피부 재생에 활용되는 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 6 A에 나타난 바와 같이, 무궁화 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성세포 콜라젠 sprouting의 out growth를 농도 의존적으로 유도하는 것으로 나타났다. 즉, 양성 대조군가 비교하여 무궁화 꽃 앱솔루트 0.1 mg/mL 농도에서 각질형성세포 콜라젠 sprouting의 out growth를 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다. 특히, 도 6B에 나타난 바와 같이 무궁화 꽃 앱솔루트 0.001 mg/mL 농도에서 182.76±4.03%가 유도되었으며, 0.1 mg/mL 농도에서 458.0±6.38%가 유도되었다.

한편, 상기에서는 본 발명을 특정의 바람직한 실시예에 관련하여 도시하고 설명하였지만, 이하의 특허청구범위에 의해 마련되는 본 발명의 기술적 특징이나 분야를 이탈하지 않는 한도 내에서 본 발명이 다양하게 개조 및 변화될 수 있다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명백한 것이다.

또한, 상기 무궁화 꽃 정유(精油)는 표피 각질형성세포의 증식 및/또는 이동을 유도하는 것이 가능하다. 즉, 후술하는 실시예 및 실험에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 무궁화 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하였으며, 그 중에서도 0.01~ 0.1 mg/mL의 농도에서 각질형성 세포의 증식을 효과적으로 유도하였다(실험예 2 및 도 2 참조).

또한, 본 발명에 의한 무궁화 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성세포의 이동을 농도 의존적으로 유도하였으며, 그 중에서도 0.01~0.1 mg/mL의 농도에서 표피 각질형성세포의 이동을 농도 의존적으로 유도하였다(실험예 3 및 도 3 참조).

또한, 상기 무궁화 꽃 정유(精油)는 표피 각질형성세포 내 세린/트레오닌 키나제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나제(ERK1/2)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 인산화 과정 또는 신호전달 과정을 유도하는 것일 수 있다. 즉, 후술하는 실시예 및 실험에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 무궁화 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성세포 내 세린/트레오닌 키나제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나제(ERK1/2)의 인산화를 농도 의존적으로 유도하였으며, 그 중에서도 0.1 mg/mL의 농도에서 세린/트레오닌 키나제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나제(ERK1/2)의 인산화를 유의하게 유도하였다(실험예 4 및 도 4 참조).

또한, 상기 무궁화 꽃 정유(精油)는 표피 각질형성세포의 type I 및 IV 콜라젠 합성과 분비를 촉진시키는 것이 바람직하다. 즉, 후술하는 실시예 및 실험에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 무궁화 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성 세포의 type I 및 IV 콜라젠 분비와 합성을 촉진시켰으며, 그 중에서도 0.1 mg/mL의 농도에서 표피 각질형성세포의 type I 및 IV 콜라젠 합성과 분비를 유의하게 촉진시켰다(실험예 5 및 도 5 참조).

또한, 상기 무궁화 꽃 정유(精油)는 표피 각질형성세포에서 콜라젠 맹아(sprouting) 자연성장(out growth)을 유도하는 것이 가능하다. 즉, 후술하는 실시 예 및 실험에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 무궁화 꽃 앱솔루트는 표피각질형성세포의 콜라젠 sprouting out growth를 농도 의존적으로 유도하였으며, 그 중에서도 0.1 mg/mL의 농도에서 sprouting의 out growth를 유의하게 유도하였다(실험예 6 및 도 6 참조).

Claims

무궁화 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 재생용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 정유는 휘발성 용제를 이용하여 유기용매 추출법에 의해 추출된 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
제 2항에 있어서,
상기 정유는 상기 유기 용매 추출법에 의해 추출된 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스를 제거한 앱솔루트인 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 정유는 휘발성 유기 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
제 4항에 있어서,
상기 휘발성 유기 화합물은 팔미트산(Palmitic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 스테아르산(stearic acid), 9-노나데센(9-Nonadecene), 시클로아르테놀(Cycloartenol), γ-시토스테롤 (γ-Sitosterol), 루페닐아세테이트(Lupenyl acetate), 미리스트산(Myristic acid), 스쿠알렌(Squalene) 및 γ-토코페롤(γ-Tocopherol)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
제 1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 정유는 0.001~0.1 mg/mL 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
무궁화 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 외용제 조성물.
무궁화 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 화장료 조성물.
무궁화 꽃을 휘발성 용제에 용해하여 유기용매추출법에 의해 콘크리트를 추출하는 단계;
상기 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스를 제거하여 앱솔르트를 얻는 단계를 포함하는 무궁화 꽃의 정유 추출 방법.
제 9항에 있어서,
상기 무궁화 꽃의 정유는 팔미트산(Palmitic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 스테아르산(stearic acid), 9-노나데센(9-Nonadecene), 시클로아르테놀(Cycloartenol), γ-시토스테롤 (γ-Sitosterol), 루페닐아세테이트(Lupenyl acetate), 미리스트산(Myristic acid), 스쿠알렌(Squalene) 및 γ-토코페롤(γ-Tocopherol)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 무궁화 꽃의 정유 추출 방법.