KR102335679B1

KR102335679B1 - 버드나무 꽃 정유를 포함하는 피부재생 또는 상처치유용 조성물

Info

Publication number: KR102335679B1
Application number: KR1020200132752A
Authority: KR
Inventors: 이환명; 김난영; 김하빈; 김도윤; 강혜민; 이수연
Original assignee: 호서대학교 산학협력단
Priority date: 2020-10-14
Filing date: 2020-10-14
Publication date: 2021-12-06

Abstract

본 발명은 버드나무 꽃 정유를 포함하는 피부재생 또는 상처치유용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃에서 유기용매 추출법(solvent extraction)으로 추출한 정유의 피부재생 또는 상처치유용 화장료 조성물 또는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 본 발명은 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃으로부터 추출한 정유의 성분을 규명하고, 각질 형성세포의 증식 및 이동을 유도하며, typeⅠ및 type Ⅳ 콜라겐 합성과 분비를 유도하고, 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)을 촉진하여, 상처치유 또는 피부재생에 우수한 효과를 갖는다.

Description

버드나무 꽃 정유를 포함하는 피부재생 또는 상처치유용 조성물{Composition for enhancing skin cell regeneration or wound healing containing absolute of Salix koreensis ANDERSS. flower}

본 발명은 버드나무 꽃 정유를 포함하는 피부재생 또는 상처치유용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃에서 유기용매 추출법(solvent extraction)으로 추출한 정유의 피부재생 또는 상처치유용 화장료 조성물 또는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

피부란 인체에서 가장 넓은 기관으로 물리적, 화학적, 면역학적 장벽을 형성하여 감염과 외부 이물질로부터 인체를 보호하고 표피, 진피, 피하지방층으로 구성되어 있다. 또한 피부는 항상성 유지에 필수적이며 체온조절, 수분손실 억제, 감각수용기 함유, 다양한 피부(skin)는 외부로부터의 물리적 혹은 화학적 변화와 자극으로부터의 충격을 완충시키며, 인체 내부의 환경을 보호하고 유지하는 등 몸을 지키는 생체 장벽의 기능을 수행하는 조직이자 기관이기 때문에 피부재생 및 상처치유는 매우 중요한 연구 분야이다.

피부(skin)는 크게 표피(epidermis), 진피(dermis), 그리고 피하지방층(subcutis)의 3개 층으로 구성되며, 표피층은 가장 바깥층부터 각질층, 투명층, 과립층, 유극층, 기저층으로 구성되다. 이러한 표피는 대부분(약 95%) 각질형성세포(Keratinocyte)로 이루어지며, 해당 세포는 피부에 침투하는 세균 및 화학 물질 등을 효율적으로 방어한다. 또한, 다양한 사이토카인(cytokine)의 분비를 통해 피부의 염증반응과 면역반응에 관여한다.

각질형성세포(keratinocyte)의 증식 및 이동은 type IV 콜라겐(collagen)과 라미닌(laminin)의 합성을 유도하여 피부 탄력의 증진 및 유지, 재생 및 상처복원을 촉진한다. 또한 기저막 형성에 있어서도 중요한 역할을 한다. 표피와 진피의 경계부에 위치하는 기저막(basement membrane)은 type IV, VII 콜라겐, fibronection, 라미닌 등의 당단백질(glycoprotein)과 헤파란 설페이트(heparan sulface)와 같은 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycans) 구성되어 있다. 이러한 기저막은 피부 세포의 증식 및 부착 등의 피부 세포 기능을 조절하며, 물질투과를 선택적으로 조절하는 장벽의 역할을 한다. 또한, 표피와 진피 사이의 상호작용, 상처치유 등 피부의 다양한 역할을 하는 중요 구조물이다. 특히, 기저막 주요 구조 단백질인 type IV 또는 VII 콜라겐의 합성 및 분비는 기저막 형성에 있어 중요한 요소로 기저막 형성 유도는 피부의 장벽기능을 향상시키고, 피부의 탄력 개선 및 손상된 피부의 재생과 상처복원을 촉진하는 것으로 알려졌다.

이에 따라, 피부의 노화 및 상처, 피부 병변으로 인한 생리활성의 저하를 각질형성세포의 증식, 이동 및 type IV 콜라겐의 합성과 분비를 유도하여 개선 혹은 향상시키고, 피부의 탄력 유지 및 재생을 통한 상처복원 유도를 통해 피부 질환을 예방할 수 있으면서도 소재의 안전성을 가지는 천연 소재의 개발 필요성이 필연적으로 요구되고 있다.

버드나무(Salix koreensis ANDERSS.)는 버드나무과에 속하는 낙엽교목으로 우리나라에서는 충남 ·충북 ·강원 등을 거쳐 전역의 냇가에서 흔히 자라며, 그 외 일본, 만주, 타이완 등에 분포한다. 버드나무는 높이는 20m, 지름은 80cm에 달하며, 검은 갈색의 수피에 황록색 가지를 가진다. 또한, 4월에 꽃을 피우며, 암·수가 다른 그루에서 달리기도 때로 같은 나무에서 달리기도 한다. 수꽃 화수는 길이가 1~2cm이고 화서축에 털이 있으며, 포는 타원형의 명주실과 같은 생김새의 털이 밀생한다. 암꽃의 화수는 수꽃의 화수와 길이가 비슷하며, 화서축에 털이 있고 포는 난형이며 털이 있다.

버드나무의 껍질은 살리신 (Salicin)을 주성분으로 하여 소염, 진통 및 해열효능을 지니며, 버드나무 속 아스코르브산(Ascrobic acid)은 산화방지 및 콜레스테롤 수치 저하 효과를 나타낸다. 이외에도 버드나무는 타닌(tannin), 플라보노이드(flavonoid) 등의 성분을 함유하고 있다. 또한, 수피를 수렴제, 해열 및 이뇨제의 재료로 사용하기도 한다. 한방에서는 버드나무 껍질과 뿌리를 이용해 부스럼, 방광염, 습진 및 치통 치료제로 사용하고 있다.

천연 향료는 추출대상, 추출방법, 추출결과물, 이용 용도 및 이용 목적에 따라 다양하게 구분되며, 식물유래 천연 향료의 경우 추출방법에 따라서 에센셜 오일(essential oil), 정유(absolute), 콘크리트(concrete) 등으로 분류된다. 식물유래 천연 향료는 휘발성 화학 물질로, 대부분 식물의 2차 대사 산물 중 용도, 용량에 따라 인체에 약리효과를 나타내는 성분이다.

대표적으로 알코올, 에스테르, 테르펜, 알데하이드, 케톤 등의 여러 유기 화합물로 구성되어 있으며, 이러한 방향성 성분들은 피부, 순환계 및 후각계를 통해 스트레스 해소, 피로 회복, 근육 이완 등의 효과를 나타낼 뿐만 아니라 항균작용, 면역 증진, 항알러지 작용 등의 치료 효과를 나타내어 오래전부터 아로마테라피 등의 방법을 통해 질병의 치료와 예방에 활용되어왔다.

에센셜 오일 및 정유 등과 같은 천연 향료의 효능·효과는 현대에도 이어져 제약 및 식품뿐만 아니라 화장품 분야와 함께 바이오산업 분야에 이르기까지 다양한 연구 및 활용이 진행되고 있다. 특히 최근에는 화장품 분야에 있어 합성 향료를 대신해 에센셜 오일과 같은 천연 소재의 성분을 선호하는 경향이 증가하고 있어 수요가 점점 증가하고 있는 추세이다.

이에 본 발명자들은 버드나무 꽃에서 유기용매 추출법으로 추출한 정유의 각질 형성세포의 증식을 유도하며, typeⅠ및 type Ⅳ 콜라겐 합성과 분비를 유도하고, 콜라겐 맹아의 성장을 촉진하는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

한국등록특허 10-2085422호

본 발명의 목적은 피부재생 또는 주름개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상처치유 또는 피부재생 촉진용 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 버드나무 꽃 정유의 제조방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃에서 추출한 정유를 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃에서 추출한 정유를 유효성분으로 포함하는 상처치유 또는 피부재생 촉진용 피부외용제 조성물을 제공한다.

나아가 본 발명은 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃의 헥산(n-hexane) 추출물을 농축하여 고형의 콘크리트를 얻는 단계(단계 1); 및

상기 단계 2의 고형의 콘크리트를 에틸알코올에 용해시켜 불용성 왁스를 제거하고, 농축하여 버드나무 꽃 앱솔루트(absolute) 형태의 정유를 수득하는 단계(단계 2);를 포함하는 버드나무 꽃 정유의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃으로부터 추출한 정유의 성분을 규명하고, 각질 형성세포의 증식 및 이동을 유도하며, typeⅠ및 type Ⅳ 콜라겐 합성과 분비를 유도하고, 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)을 촉진하여, 상처치유 또는 피부재생에 우수한 효과를 갖는다.

도 1은 본 발명의 실시예에 따라 버드나무 꽃으로부터 정유를 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따라 버드나무 꽃 정유가 표피 각질형성세포의 생존율에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따라 버드나무 꽃 정유가 표피 각질형성세포의 증식에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따라 버드나무 꽃 정유가 표피 각질형성세포의 이동에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 5A는 본 발명의 실시예에 따른 버드나무 꽃 정유가 표피 각질형성세포의 type I 콜라겐 합성과 분비에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 5B는 본 발명의 실시예에 따른 버드나무 꽃 정유가 표피 각질형성세포의 type IV 콜라겐 합성과 분비에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 6A는 본 발명의 실시예에 따른 버드나무 꽃 정유가 표피 각질형성세포의 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 6B는 본 발명의 실시예에 따른 버드나무 꽃 정유가 표피 각질형성세포의 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

피부재생 또는 주름개선용 화장료 조성물

본 발명은 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃에서 추출한 정유를 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 버드나무 꽃을 유기용매 추출법(solvent extraction)으로 추출하여 콘크리트(concrete)를 얻고 이를 유기용매에 용해 및 여과하여 불용성 왁스를 제거하여 앱솔루트 형태의 정유를 얻음으로써 제조될 수 있다.

보다 상세하게, 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃의 헥산(n-hexane) 추출물을 농축하여 고형의 콘크리트를 얻는 단계; 및

상기 고형의 콘크리트를 에틸알코올에 용해시켜 불용성 왁스를 제거하고, 농축하여 버드나무 꽃 앱솔루트(absolute) 형태의 정유를 수득하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있다.

상기 유기용매 추출법과 추출물로부터 앱솔루트 형태의 정유를 분리하는 방법은 이 기술 분야에서 보통의 지식을 가진 자가 변형할 수 있는 모든 방법을 포함하는 것이 가능하다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 노나날 (Nonanal), (-)-버베논 ((-)-Verbenone), 테트라데카날 (Tetradecanal), n-에이코산 (n-Eicosane), 펜타데카날 (Pentadecanal), 무스카몬 (Muscalure), 트리코산 (Tricosane), 2-노나데카논 (2-Nonadecanone), n-도코산 (n-Dcosane), n-테트라코산 (n-Tetracosane), 스테롤 (Stearol), 펜타코산 (Pentacosane), 9-옥틸테트라코산 (9-Octyltetracosane; Tetracosane, p-octyl-), 11-n-데실테트라코산 (11-n-Decyltetracosane; Tetracosane, 11-decyl-), 옥타데실 2-클로로프로파노에이트 (Octadecyl 2-chlororopropanoate), 1,2-에폭시옥타데칸 (Oxirane, hexadecyl-; 1,2-Epoxyoctadecane) 또는 사이클로아르테놀 아세테이트 (Cycloartenol acetate)와 같은 성분을 하나 이상 포함할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 버드나무 꽃은 건조되지 않은 꽃일 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "정유(精油)"란 식물 (식물의 잎, 줄기, 열매, 꽃, 뿌리 등)로부터 추출 분리한 방향유(휘발성 물질)을 통칭하는 용어로서, 추출물, 추출법, 용도 및 목적에 따라 다양하게 분류된다. 천연물 유래 정유는 추출법에 따라 에센셜오일(essential oil), 앱솔루트(absolute), 콘크리트(concrete) 등으로 분류된다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 10 내지 250 ㎍/㎖의 범위로 사용할 수 있으며, 바람직하게 100 내지 250 ㎍/㎖의 범위로 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게 100 내지 175 ㎍/㎖의 범위로 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 상술한 본 발명의 버드나무 꽃에서 추출한 정유의 화장품학적 유효량(cosmetically effective amount) 및 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조할 수 있다.

화장료 조성물의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따른 상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 구성된 제형에서 선택된 하나 이상의 제형일 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물에는 상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 또한, 상기 기능성 첨가물과 더불어 필요에 따라 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분을 배합해도 된다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

상처치유 또는 피부재생 촉진용 피부외용제 조성물

본 발명은 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃에서 추출한 정유를 유효성분으로 포함하는 상처치유 또는 피부재생 촉진용 피부외용제 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는

버드나무 꽃을 유기용매 추출법(solvent extraction)으로 추출하여 콘크리트(concrete)를 얻고 이를 유기용매에 용해 및 여과하여 불용성 왁스를 제거하여 앱솔루트 형태의 정유를 얻음으로써 제조될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 노나날 (Nonanal), (-)-버베논 ((-)-Verbenone), 테트라데카날 (Tetradecanal), n-에이코산 (n-Eicosane), 펜타데카날 (Pentadecanal), 무스카몬 (Muscalure), 트리코산 (Tricosane), 2-노나데카논 (2-Nonadecanone), n-도코산 (n-Dcosane), n-테트라코산 (n-Tetracosane), 스테롤 (Stearol), 펜타코산 (Pentacosane), 9-옥틸테트라코산 (9-Octyltetracosane; Tetracosane, p-octyl-), 11-n-데실테트라코산 (11-n-Decyltetracosane; Tetracosane, 11-decyl-), 옥타데실 2-클로로프로파노에이트 (Octadecyl 2-chlororopropanoate), 1,2-에폭시옥타데칸 (Oxirane, hexadecyl-; 1,2-Epoxyoctadecane) 또는 사이클로아르테놀 아세테이트 (Cycloartenol acetate) 와 같은 성분을 하나 이상 포함할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 표피 각질세포의 증식이나 또는 이동을 촉진시키고, 표피 각질형성세포의 type I 및 type IV 콜라겐 합성과 분비를 촉진시키고, 콜라겐 맹아의 성장을 촉진시켜 피부재생 촉진 및 상처치유 효과가 있는 것을 확인하였다(실험예 2 내지 5 및 도 3 및 6 참조).

또한, 본 발명은 버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃의 헥산(n-hexane) 추출물을 농축하여 고형의 콘크리트(concrete)를 얻는 단계(단계 1); 및

하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 버드나무 꽃 정유의 제조

도 1은 버드나무 꽃으로부터 정유를 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이고, 여기에서 나타난 바와 같이, 본 발명은 버드나무 꽃으로부터 유기용매 추출법으로 추출하여 얻은 정유이다.

본 실시예에서 버드나무 꽃은 호서대학교(아산, 한국) 실습지에서 자생하고 있는 버드나무 꽃을 채취하여 사용하였다. 유기용매추출법을 통하여 정유를 획득하였고, 4℃의 저온고에서 보관하였다.

<실시예 2> 버드나무 꽃 정유의 성분 분석

버드나무 꽃 정유의 성분 분석은 KBSI(Korea Basic Science Institute, Seoul Center)에 의뢰하였다. 가스 크로마토그래피/질량분석계(6890N GC/5975i MS, Agilent, USA)를 사용하였고, GC/MS의 컬럼(column)은 DB5-MS(30 m×50 μm, 0.25 μm)를 사용하였으며, 캐리어 가스(carrier gas)는 헬륨을 사용하여 1 mL/분으로 흐르게 하여 분석하였다. 오븐의 온도는 40℃-2℃/분-230℃-5℃/분-300℃(5분)으로 유지하였으며, injection의 온도는 280℃에서 분석하였다. 또한, Interface의 온도는 300℃, ion source의 온도는 230℃, analyzer의 온도는 150℃ 에서 분석하였으며, Mass range는 40~800 m/z에서 분석하였다.

버드나무 정유 성분의 확인은 휘발성분의 지체시간(retention indices, RI)과 표준물질의 지체시간과 일치하거나 휘발물질의 질량 스펙트럼과 Wiley 7Nist 05 library의 질량 스펙트럼을 비교하여 물질을 확인하였다.

RI는 C₆ ~ C₂₄ (n-alkane)를 이용하여 시료와 동일 조건에서 결정하였다. 그 결과, 총 17개의 성분으로 구성되어 있음을 확인할 수 있었으며, n-Tetracosane, Tricosane, n-Eicosane 순으로 높은 함량을 나타내었다. (표 1참조).

No	Component name	Retention time	Area (%)	Cas No.
1	노나날(Nonanal)	22.243	2.32	124-19-6
2	(-)-버베논((-)-Verbenone)	28.935	5.52	1196-01-6
3	테트라데카날(Tetradecanal)	65.685	2.25	124-25-4
4	n-에이코산(n-Eicosane)	79.448	12.83	112-95-8
5	펜타데카날(Pentadecanal-)	84.759	0.70	2765-1109
6	무스카몬(Muscalure)	86.831	8.31	27519-02-4
7	트리코산(Tricosane)	88.081	18.00	638-67-5
8	2-노나데카논(2-Nonadecanone)	88.229	3.56	629-66-3
9	n-도코산(n-Dcosane)	90.975	1.35	629-97-0
10	n-테트라코산(n-Tetracosane)	94.642	29.49	646-31-1
11	스테롤(Stearol)	95.234	0.79	112-92-55
12	펜타코산(Pentacosane)	95.990	4.80	629-99-2
13	9-옥틸테트라코산 (9-Octyltetracosane; Tetracosane, p-octyl-)	98.193	2.14	55401-54-2
14	11-n-데실테트라코산(11-n-Decyltetracosane; Tetracosane, 11-decyl-)	100.495	0.68	55429-84-0
15	옥타데실 2-클로로프로파노에이트 (Octadecyl 2-chlororopropanoate)	100.726	4.08	88104-31-8
16	1,2-에폭시옥타데칸 (Oxirane, hexadecyl-; 1,2-Epoxyoctadecane)	103.932	0.65	7390-81-0
17	사이클로아르테놀 아세테이트 (Cycloartenol acetate)	107.960	2.50	1259-10-5

<실험예 1> 버드나무 꽃 정유의 피부 표피 각질형성세포 생존율에 미치는 영향

상기 실시예 1에서 얻은 버드나무 꽃 유래 정유가 피부 표피 각질형성세포 생존율에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같이 조사하였다. 인간 피부 유래 표피 각질형성세포 (HaCat)는 10% 우태아 혈청(Fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지에 배양하고, 본 발명의 실험에 활용하였다.

피부 표피 각질형성세포를 96 well microtiter plate에 각 well 당 세포 수 5 X 10³ cells/100 μL/well이 되도록 주입하고 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 버드나무 꽃 유래 정유는 1 ~ 250 μg/mL 농도로 각 well에 100 μL씩 처리하여 24시간 동안 배양하였다.

Ez-cytox를 각 well 당 30 μL씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시킨 후, ELISA plate reader(Synergy 2, BioTek, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정결과는 백분율로 환산하여 버드나무 꽃 유래 정유의 피부 표피 각질형성세포의 생존율에 대한 결과를 확보하였다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 버드나무 꽃 유래 정유는 농도 1 ~ 250 μg/mL에서 세포 생존율에 영향을 미치지 않았으며, 본 발명에 사용될 버드나무 꽃 유래 정유의 농도는 250 μg/ml 이하의 농도가 바람직한 것을 확인하였다.

<실험예 2> 버드나무 꽃 정유의 피부 표피 각질형성세포 증식에 미치는 영향

상기 실시예 1에서 얻은 버드나무 꽃 유래 정유가 피부 표피 각질형성세포 증식 미치는 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같이 조사하였다. 인간 피부 유래 표피 각질형성세포 (HaCaT)는 10% 우태아 혈청(Fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지에 배양하고, 본 발명의 실험예에 활용하였다.

피부 표피 각질형성세포를 96 well microtiter plate에 각 well 당 세포 수 3 X 10³ cells/100 μL/well이 되도록 주입하고 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 버드나무 꽃 유래 정유는 10 ~ 250 μg/mL 농도로 각 well에 100 μL씩 처리하여 36시간 동안 배양하였다.

Ez-cytox를 각 well 당 30 μL씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시킨 후, ELISA plate reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정결과는 백분율로 환산하여 버드나무 꽃 유래 정유의 피부 표피 각질형성세포의 증식률에 관한 결과를 확보하였다. 음성대조군은 버드나무 꽃 정유를 처리하지 않은 것이며, 양성대조군은 종래에 피부재생 및/또는 상처 복원제에 활용되고 있는 표피 성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 버드나무 꽃 유래 정유는 피부 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하는 것으로 나타났다.

<실험예 3> 버드나무 꽃 정유의 피부 표피 각질형성세포 이동에 미치는 영향

상기 실시예 1에 의해 얻은 버드나무 꽃 유래 정유가 표피 각질세포의 이동에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같이 조사하였다.

인간 유래 표피 각질세포(HaCaT)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 배양하고 본 발명의 실험 예에 활용하였다. 48 well chemotactic boyden chamber를 사용하여 표피 각질세포의 이동률을 조사하였다.

먼저 lower chamber에 버드나무 꽃 유래 정유를 각각 10 ~ 250 μg/ml의 농도를 처리하고, 콜라겐(collagen) 코팅이 된 8 μm pore의 membrane을 올려 주었다. 이후, upper chamber에 표피 각질형성세포를 well 당 1×10⁶ cell/50 μl씩 처리하였다.

Chamber를 37℃ 배양기에서 배양시킨 후, membrane을 염색 및 고정하였다. Membrane을 통과하여 이동한 세포의 수를 세어 백분율로 환산하여 버드나무 꽃 유래 정유의 피부 표피 각질형성세포의 이동률에 관한 결과를 확보하였다.

음성 대조군은 버드나무 꽃 유래 정유를 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처복원 및/또는 피부재생에 활용되는 있는 표피성장인자(epithermal growth factor)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 버드나무 꽃 유래 정유는 농도 의존적으로 피부 표피 각질형성세포의 이주를 유도하는 것으로 확인되었으며, 특히 버드나무 꽃 유래 정유 100 μg/ml의 농도에서 165.87±5.16%의 최대 이동률을 나타내어, 효과적으로 이동을 유도하는 것으로 나타났다.

<실험예 4> 버드나무 꽃 정유가 피부 표피 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라겐 합성과 분비에 미치는 영향

상기 실시예 1에 의해 얻은 버드나무 꽃 정유가 표피 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라겐 합성과 분비에 미치는 효과를 측정하기 위해서, 하기와 같이 조사하였다. 96 well microtiter plate에 monoclonal anti-collagen I 또는 IV Ab, (2 μg/well/PBS)를 주입 후 코팅하였다.

Blocking buffer로 1시간 동안 blocking 후, 샘플을 well 당 100 μl씩 처리하여 90분 동안 반응시켰다. 샘플은 버드나무 꽃 정유를 처리하지 않은 표피 각질형성세포의 배양액(CM)과 세포 용해물(Lysate), 버드나무 꽃 정유 50 μg/ml, 150 μg/ml 농도로 처리된 표피 각질형성세포의 배양액(CM)과 세포 용해물(Lysate)을 처리하였다.

그 후, polyclonal anti-collagen I 또는 IV Ab를 각 well에 처리하여 90분 동안 반응시킨 다음, streptavidin-POD를 각 well에 처리하여 60분 동안 반응시켰다. Supersinal ELISA pico chemiluminescent substrate를 각 well 당 100 μl 씩 주입하여 10분 동안 반응시킨 후, ELISA plate reader를 이용하여 luminescence 정도를 측정하였고, 버드나무 꽃 정유의 표피 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라겐 합성과 분비에 관한 결과를 확보하였다. 음성 대조군은 버드나무 꽃 정유를 이용하지 않은 것을 사용하였다.

그 결과, 도 5A에 나타난 바와 같이, 버드나무 꽃 정유는 표피 각질형성세포의 type I 콜라겐 합성과 분비를 유의하게 촉진시켰다. 특히, 표피 각질형성세포의 배양액(CM)의 150 μg/ml의 농도에서 type I 콜라겐 합성과 분비가 127.35±5.29% 유도되었다.

또한, 결과 도 5B에 나타난 바와 같이, 버드나무 꽃 정유는 표피 각질형성세포의 type IV 콜라겐 합성과 분비를 유의하게 촉진시켰다. 특히, 표피 각질형성세포의 배양액(CM)의 150 μg/ml의 농도에서 type IV 콜라겐 합성과 분비를 136.54±3.73% 유도하는 것으로 나타났다.

<실험예 5> 버드나무 꽃 정유가 피부 표피 각질형성세포의 콜라겐 sprouting의 out growth에 미치는 영향

상기 실시예 1에 의해 얻은 버드나무 꽃 정유가 표피 각질형성세포 콜라겐 sprouting의 out growth에 미치는 효과를 측정하기 위해서, 하기와 같이 조사하였다. Type I 콜라겐과 표피 각질형성세포를 2.5×10⁷cells/mL이 되도록 섞은 후, NaOH 용액을 처리하여 중화한 후, 24 well plate에 spotting하고, 5 ~ 10분 정도 상온에서 건조하여 인공피부조직을 형성하였다.

샘플을 처리하고, 48시간 동안 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 배양액을 제거하고, 세포와 조직을 고정 및 염색하였으며, 염색된 세포와 조직을 촬영하여 결과를 확보하였다. 음성 대조군은 버드나무 꽃 정유를 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처복원 및/또는 피부 재생에 활용되는 있는 표피 성장인자(epidermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 6 (A)에 나타난 바와 같이, 버드나무 꽃 정유는 표피 각질형성세포 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)을 농도 의존적으로 유도하는 것으로 나타났다. 즉, 양성 대조군과 비교하여 버드나무 꽃 정유 150 μg/mL 농도에서 각질형성세포 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

특히, 도 6 (B)에 나타난 바와 같이 버드나무 꽃 정유 150 μg/mL 농도에서 173.60±15.30%가 유도되는 것을 확인하였다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다.

본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃에서 추출한 정유를 유효성분으로 포함하는 피부재생 또는 주름개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는
버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃의 헥산(n-hexane) 추출물을 농축하여 고형의 콘크리트를 얻는 단계; 및
상기 고형의 콘크리트를 에틸알코올에 용해시켜 불용성 왁스를 제거하고, 농축하여 버드나무 꽃 앱솔루트(absolute) 형태의 정유를 수득하는 단계;를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 피부재생 또는 주름개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 노나날 (Nonanal), (-)-버베논 ((-)-Verbenone), 테트라데카날 (Tetradecanal), n-에이코산 (n-Eicosane), 펜타데카날 (Pentadecanal), 무스카몬 (Muscalure), 트리코산 (Tricosane), 2-노나데카논 (2-Nonadecanone), n-도코산 (n-Dcosane), n-테트라코산 (n-Tetracosane), 스테롤 (Stearol), 펜타코산 (Pentacosane), 9-옥틸테트라코산 (9-Octyltetracosane; Tetracosane, p-octyl-), 11-n-데실테트라코산 (11-n-Decyltetracosane; Tetracosane, 11-decyl-), 옥타데실 2-클로로프로파노에이트 (Octadecyl 2-chlororopropanoate), 1,2-에폭시옥타데칸 (Oxirane, hexadecyl-; 1,2-Epoxyoctadecane) 및 사이클로아르테놀 아세테이트 (Cycloartenol acetate)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부재생 또는 주름개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 10 내지 250 ㎍/㎖의 범위로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부재생 또는 주름개선용 화장료 조성물.
제4항에 있어서,
상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 100 내지 250 ㎍/㎖의 범위로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부재생 또는 주름개선용 화장료 조성물.
버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃에서 추출한 정유를 유효성분으로 포함하는 상처치유 또는 피부재생 촉진용 피부외용제 조성물.
제6항에 있어서,
상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는
버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃의 헥산(n-hexane) 추출물을 농축하여 고형의 콘크리트를 얻는 단계; 및
상기 고형의 콘크리트를 에틸알코올에 용해시켜 불용성 왁스를 제거하고, 농축하여 버드나무 꽃 앱솔루트(absolute) 형태의 정유를 수득하는 단계;를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 상처치유 또는 피부재생 촉진용 피부외용제 조성물.
제6항에 있어서,
상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 10 내지 250 ㎍/㎖의 범위로 포함되는 것을 특징으로 하는 상처치유 또는 피부재생 촉진용 피부외용제 조성물.
제8항에 있어서,
상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 100 내지 250 ㎍/㎖의 범위로 포함되는 것을 특징으로 하는 상처치유 또는 피부재생 촉진용 피부외용제 조성물.
제6항에 있어서,
상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 표피 각질세포의 증식이나 또는 이동을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 상처치유 또는 피부재생 촉진용 피부외용제 조성물.
제6항에 있어서,
상기 버드나무 꽃에서 추출한 정유는 표피 각질형성세포의 type I 및 type IV 콜라겐 합성과 분비를 촉진시키는 것을 특징으로 하는 상처치유 또는 피부재생 촉진용 피부외용제 조성물.
버드나무(Salix koreensis ANDERSS.) 꽃의 헥산(n-hexane) 추출물을 농축하여 고형의 콘크리트(concrete)를 얻는 단계(단계 1); 및
상기 단계 1의 고형의 콘크리트를 에틸알코올에 용해시켜 불용성 왁스를 제거하고, 농축하여 버드나무 꽃 앱솔루트(absolute) 형태의 정유를 수득하는 단계(단계 2);를 포함하는 버드나무 꽃 정유의 제조방법.