KR102215769B1

KR102215769B1 - 새삼 꽃 유래 정유를 포함하는 조성물

Info

Publication number: KR102215769B1
Application number: KR1020190034349A
Authority: KR
Inventors: 이환명; 황대일; 김하빈; 김도윤; 강혜민; 리야리
Original assignee: 호서대학교 산학협력단
Priority date: 2019-03-26
Filing date: 2019-03-26
Publication date: 2021-02-16
Also published as: KR20200115788A

Abstract

본 발명은 새삼 꽃으로부터 정유를 추출하는 방법 및 이로부터 제조된 정유를 포함하는 피부 외용제 조성물 및 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 새삼의 꽃에서 추출한 정유는 표피 각질형성세포에 세포 독성을 나타내지 않으면서, 이의 증식을 향상시켰으며, 표피 각질형성세포의 이동 및 콜라겐 형성을 촉진하는 효과를 가지므로, 표피 각질형성세포 증식, 피부 재생 주름 개선 및 상처 치유를 위한 피부 외용제 조성물 및 화장료 조성물로서 사용될 수 있다.

Description

새삼 꽃 유래 정유를 포함하는 조성물{Composition containing essential oil of Cuscuta japonica CHOISY Flower}

본 발명은 새삼 꽃 유래 정유를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로, 새삼 꽃으로부터 정유를 추출하는 방법 및 이로부터 제조된 정유를 포함하는 피부 외용제 조성물 및 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부(skin)는 인체의 가장 외부를 덮고 있는 조직으로 인체를 보호하고 장벽기능을 하여 외부의 화학적·물리적 충격으로부터 몸을 보호하는 일차적인 방어기능을 한다. 피부는 표피(epidermis)와 진피(dermis), 피하지방층(subcutis)의 3개의 층으로 구성되어 있으며, 가장 바깥층에 위치하고 있는 표피는 90 %가 각질형성세포(keratinocyte)로 구성되어있다. 피부는 자외선 및 스트레스 등에 의해 노화되거나 상처로 인해 손상되면 그 기능이 약화되고, 이때 피부 재생 과정이 시작된다. 피부 재생 과정은 급성 염증반응을 시작으로 표피 세포의 증식과 이동과 증식을 거쳐 새로운 혈관의 생성과 콜라겐(collagen) 합성을 통하여 결체조직의 수축을 거친다. 이때 표피의 90 % 이상을 차지하는 각질형성세포의 이동과 증식은 상처치유와 피부 재생을 제공할 뿐만 아니라, 콜라겐 합성을 유도하여 피부의 탄력 증진과 기저막 형성에 중요한 역할을 한다.

한편, 식물유래 천연 정유는 식물의 2차 대사산물 중 인체에 약리효과를 나타내는 휘발성 화학물질로, 주로 테르펜, 알코올, 알데하이드, 에스테르, 케톤 등의 여러 가지 유기화합물로 구성되어 있다. 이러한 천연물 유래 정유의 방향성 성분이 피부, 순환계, 후각계를 통해 스트레스 해소, 피로 회복, 근육 이완 등의 효과를 나타낼 뿐만 아니라 항균작용, 면역 증진, 항알러지 작용 등의 치료효과를 나타내어 오래전부터 질병의 치료와 예방에 활용되어왔을 뿐만 아니라, 식품 향료와 화장품 원료로 사용되고 있다.

또한, 새삼(Cuscuta japonica CHOISY)은 메꽃과(Conboluvulaceae)에 속하며, 산기슭, 길섶, 밭두렁 등에서 콩과식물이나 국화과식물에 기생하는 자생하는 일년생 덩굴식물이다. 대한약전, 한약(생약)규격에 새삼의 씨앗(종자)을 말린 것을 토사자로 기재되어 오래 전부터 한약재로 사용되어왔다. 특히 새삼은 오래 전부터 피부미용에 탁월한 효과가 있다고 알려져 있으며, 천금요방 및 천금약방에는 새삼을 외용 도포 시 여드름이나 기미를 제거하는데 탁월한 효과가 있다고 기록되어있고, 동의보감 본초에는 토사자 묘(苗)의 즙이 피부의 기미, 여드름 및 반점 제거에 사용된다고 기록되어 있을 정도로, 새삼은 오래 전부터 여드름, 기미, 주근깨, 잡티 및 반점을 제거하고 피부를 윤택하게 하는 효과가 있다고 하여 피부 미용을 위한 민간요법 약재로 널리 사용되어왔다.

그러나, 현재 새삼을 활용한 피부생리활성 및 피부미용에 관한 연구 진행은 미흡한 실정이며, 토사자의 간경화 예방, 뇌 신경전달물질 조절, 면역체계 조절, 고지혈증 조절, 항암, 항골다공증, 미백효과 등 토사자를 활용한 인체 생리활성 연구만 활발히 진행되어왔다.

따라서 본 발명자들은 새삼의 꽃으로부터 정유를 추출하여 in vitro 피부 재생효과에 대해 연구하던 중 새삼 꽃 유래 정유가 피부 표피 각질형성세포의 증식과 이주를 유도하여 피부재생 효과를 나타냄을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

공개특허공보 제10-2011-0001538호

본 발명의 목적은 새삼의 꽃에서 추출한 정유를 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 새삼의 꽃에서 추출한 정유를 유효 성분으로 포함하는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

아울러, 본 발명의 목적은 새삼 꽃 정유의 제조방법을 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 새삼의 꽃에서 추출한 정유를 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 새삼의 꽃에서 추출한 정유를 유효 성분으로 포함하는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

아울러, 본 발명은 새삼 꽃 정유의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 새삼의 꽃에서 추출한 정유는 표피 각질형성세포에 세포 독성을 나타내지 않으면서, 이의 증식을 향상시켰으며, 표피 각질형성세포의 이동 및 콜라겐 형성을 촉진하는 효과를 가지므로, 표피 각질형성세포 증식, 피부 재생 주름 개선 및 상처 치유를 위한 피부 외용제 조성물 및 화장료 조성물로서 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 새삼의 꽃에서 정유를 추출하는 과정을 도식화한 흐름도이다.
도 2는 새삼의 꽃에서 추출한 정유 (앱솔루트)의 성분 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 새삼의 꽃에서 추출한 정유 (앱솔루트)의 표피 각질형성 세포에 대한 세포 독성을 확인한 도이다.
도 4는 새삼의 꽃에서 추출한 정유 (앱솔루트)의 표피 각질형성 세포 증식 촉진 효과를 확인한 도이다.
도 5는 새삼의 꽃에서 추출한 정유 (앱솔루트)의 표피 각질형성 세포 이동 촉진 효과를 확인한 도이다.
도 6은 새삼 꽃 유래 정유 (앱솔루트)가 피부 표피 각질형성세포에서 콜라겐 맹아(sprouting)의 성장(out growth)에 미치는 영향을 나타낸 이미지 및 이를 정량한 그래프를 나타낸 도이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.

또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.

일 측면에서, 새삼(Cuscuta japonica CHOISY)의 꽃에서 추출한 정유를 포함하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

일 구현예에서, 정유는 새삼의 꽃을 유기용매 추출법으로 추출하여 콘크리트를 얻고 이를 유기용매에 용해 및 여과하여 불용성 왁스를 제거하여 앱솔루트를 얻음으로써 제조될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 새삼의 꽃에서 추출한 정유는 새삼의 꽃을 유기용매에 침지하고; 침지액을 증발 및 농축하여 콘크리트를 얻으며; 콘크리트를 유기용매에 용해하고 여과하여 불용성 왁스를 제거하며; 증발을 통해 앱솔루트를 분리 및 정제함으로써 제조될 수 있다.

상기 유기용매 추출법과 추출물로부터 앱솔루트를 분리하는 방법은 이 기술 분야에서 보통의 지식을 가진 자가 변형할 수 있는 모든 방법을 포함하는 것이 가능하다.

일 구현예에서, 새삼의 꽃에서 추출한 정유는 (+)-아사리닌(Asarinin), 노나코산(Nonacosane), 펜타코산(Pentacosane), 감마-시토스테롤(γ-Sitosterol) 및 헵타코산(Heptacosane)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 새삼의 꽃은 꽃이 피기 직전의 꽃봉오리일 수 있으며, 건조되지 않은 꽃일 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 표피 각질형성세포 증식, 재생 및 콜라겐 형성용일 수 있으며, 이는 노화와 주름, 상처 및 피부 병변으로 인하여 생리활성이 저하된 피부의 탄력, 재생, 및/또는 상처치유 등에 유용할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 새삼의 꽃에서 추출한 정유를 0.1 내지 300 μg/mL의 농도로 포함할 수 있으며, 50 내지 250 μg/mL의 농도로 포함하는 것이 가장 우수한 피부 재생 및 상처 치유 효과를 가지기 때문에 더욱 바람직하다.

본 발명에서 사용된 용어 "정유(精油)"란 식물 (식물의 잎, 줄기, 열매, 꽃, 뿌리 등)로부터 추출 분리한 방향유(휘발성 물질)을 통칭하는 용어로서, 추출물, 추출법, 용도 및 목적에 따라 다양하게 분류된다. 천연물 유래 정유는 추출법에 따라 에센셜오일(essential oil), 앱솔루트(absolute), 콘크리트(concrete) 등으로 분류된다.

본 발명에서 사용된 용어 "추출물(extract)"이란 천연물로부터 분리된 활성성분 즉, 목적하는 활성을 보이는 물질을 의미한다. 상기 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 이용하는 추출과정으로 획득할수 있으며, 추출물 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함한다. 또한, 상기 추출물에는 상기 추출과정을 거친 추출물을 분획한 것도 포함된다. 추출물의 추출 방법은 특별히 제한되지 않으며, 예컨대 교반 추출, 진탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법으로 추출될 수 있다. 추출 용매로는 물, C₁-C₄의 저급 알코올과 같은 극성 용매나 헥산, 클로로 포름, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트와 같은 비극성 용매, 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 사용할 수도 있다.

일 측면에서, 본 발명은 새삼의 꽃에서 추출한 정유를 포함하는 상처치유 조성물에 관한 것이다.

일 측면에서, 본 발명은 새삼의 꽃에서 추출한 정유를 포함하는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 화장료 조성물은 상술한 본 발명의 새삼의 꽃에서 추출한 정유의 화장품학적 유효량(cosmetically effective amount) 및 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조할 수 있다.

본 명세서에서 용어 "화장품학적 유효량"은 상술한 본 발명의 조성물의 표피 각질형성세포의 증식을 통한 피부 재생 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.

화장료 조성물의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스 등의 화장품으로 제형화될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 에센스, 팩, 파운데이션, 색조화장품, 선크림, 투웨이케이크, 페이스파우더, 콤팩트, 메이크업베이스, 스킨커버, 아이쉐도우, 립스틱, 립글로스, 립픽스, 아이브로우 펜슬, 화장수 등의 화장품 및 샴푸, 비누 등의 세정제에 적용될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물에는 상기 새삼의 꽃에서 추출한 정유 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 또한, 상기 기능성 첨가물과 더불어 필요에 따라 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분을 배합해도 된다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 새삼의 꽃을 유기용매에 침지하고, 침지액을 증발 및 농축하여 콘크리트를 얻으며, 콘크리트를 유기용매에 용해 및 여과하여 불용성 왁스를 제거하고, 앱솔루트를 분리 및 정제하는 것을 포함하는 새삼 꽃 정유의 제조방법에 관한 것이다.

하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 새삼 꽃 정유 제조

전라남도 해남군 해남읍 인근에서 자생된 새삼의 꽃이 피기 직전의 꽃망울 전체를 8월에 채취하여 세척한 후, 건조하지 않고 헥산(n-hexane)에 60분 동안 침지하여 추출한 뒤 회전식 증발기로 농축하여 고형의 콘크리트를 획득하였다. 그 후, 상기 고형의 콘크리트에 알코올을 첨가하여 12시간 동안 반응시키고, 진공 냉각 필터를 거쳐 불용성 왁스를 제거한 뒤, 다시 회전식 증발기로 분리/정제함으로써 새삼 꽃 앱솔루트(absolute)를 획득하였다 (도 1). 제조한 새삼 꽃 앱솔루트는 4℃의 저온고에서 보관하였다.

실시예 2. 새삼 꽃 정유의 성분 분석

가스 크로마토그래피/질량분석계(6890N GC/5975i MS, Agilent, USA)를 사용하여 새삼 꽃 앱솔루트의 성분을 휘발성분의 지체시간(retention indices, RI)과 표준물질의 지체시간 및 휘발물질의 질량 스펙트럼과 Wiley 7Nist05 library의 질량 스펙트럼을 비교하여 분석하였다. 구체적으로, GC/MS의 컬럼(column)은 DB5-MS (30m×50μm, 0.25μm)를 사용하였으며, 캐리어 가스(carrier gas)는 헬륨을 사용하여 1 mL/분으로 흐르게하여 분석하였다. 오븐의 온도는 40℃ - 2℃/분 - 230℃ - 5℃/분 - 300℃(5분)으로 유지하였으며, injection의 온도는 280℃에서 분석하였다. 또한 Interface의 온도는 300℃, ion source의 온도는 230℃, analyzer의 온도는 150℃에서 분석하였으며, Mass range는 40~800m/z에서 분석하였다. RI는 C6 ~ C24(n-alkane)를 이용하여 시료와 동일 조건에서 결정하였다.

그 결과, 상기 실시예 1에서 제조한 새삼 꽃 앱솔루트는 총 5개의 성분으로 구성되어 있었으며, (+)-Asarinin, Nonacosane, Pentacosane, γ-Sitosterol 및 Heptacosane의 순으로 높은 함량을 나타냈다 (Pentacosane 8.7 중량%, Heptacosane 4.45 중량%, Nonacosane 32.45 중량%, (+)-Asarinin 48.74 중량% 및 γ-Sitosterol 5.65 중량%) (도 2).

실시예 3. 새삼 꽃 정유의 세포독성 확인

상기 실시예 1에서 얻은 새삼 꽃 정유 (앱솔루트)가 피부 표피 각질형성세포에 독성을 나타내는지 확인하였다. 구체적으로, 인간 피부 유래 표피 각질형성세포(HaCat)를 10% 우태아 혈청(Fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지에 배양하고, 96웰 플레이트에 5×10³cells/100μL/well이 되도록 분주하고 37℃의 5% CO₂배양기에서 배양하였다. 그 후, 새삼 꽃 유래 정유를 0 내지 250 μg/mL의 농도로 각 웰에 100 μL씩 처리하고 24시간 동안 인큐베이션하였다. Ez-cytox를 웰당 10 μL씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시킨 후, ELISA 플레이트 리더 (Synerge 2, BioTek, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정결과는 백분율로 환산하여 새삼 꽃 유래 정유의 피부 표피 각질형성세포의 생존율을 계산하였다.

그 결과, 새삼 꽃 유래 정유는 농도 1~250 μg/mL에서 유의한 세포독성이 관찰되지 않았다 (도 3).

실시예 4. 새삼 꽃 정유의 표피 각질형성세포 증식 향상 효과

상기 실시예 1에서 얻은 새삼 꽃 정유 (앱솔루트)가 표피 각질형성세포의 증식에 미치는 영향을 확인하였다. 구체적으로, 사람 피부 유래 표피 각질형성세포(HaCat)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 배양하고, 표피 각질형성세포를 96웰 마이크로플레이트에 3×10³ cells/100 μL/well이 되도록 분주하여 37℃의 5 % CO₂ 배양기에서 배양하였다. 그 후, 새삼 꽃 앱솔루트를 0.1 내지 250 μg/mL의 농도로 각 웰에 100 μL씩 처리하여 48시간 동안 인큐베이션하였다. 여기서, 음성 대조군은 새삼 꽃 앱솔루트를 처리하지 않은 무처리군이고, 양성 대조군은 종래에 피부재생 및 상처치유제로 활용되고 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용하였다. 그 후, Ez-cytox를 각 웰에 10 μL씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시켰다. ELISA 플레이트 리더 (Synerge2, BioTek, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정한 후, 측정 결과를 백분율로 환산하여 새삼 꽃 앱솔루트의 표피 각질형성세포 증식에 대한 결과를 확인하였다.

그 결과, 새삼 꽃 유래 정유 100 μg/mL 농도에서 119.58±2.83% 증식 유도율을 나타내었고, 250 μg/mL 농도에서는 179.18±6.80%의 증식 유도율을 나타내어, 본 발명의 새삼 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하는 것으로 나타났으며, 특히, 250 μg/mL 농도가 표피성장인자에 의한 표피 각질형성세포의 증식 유도율인 163.69±3.55%보다도 높은 것으로 나타났다 (도 4).

실시예 5. 새삼 꽃 정유의 표피 각질형성세포 이동 향상 효과

상기 실시예 1에서 얻은 새삼 꽃 정유가 표피 각질형성세포의 이동에 미치는 효과를 확인하였다. 구체적으로, 48 well chemotactic boyden chamber의 lower chamber에 새삼 꽃 앱솔루트를 0.1 내지 250 μg/mL의 농도를 처리하고 (음성 대조군: 무처리군 및 양성 대조군: 표피성장인자 처리군) 콜라겐(collagen) 코팅이 된 8 μm pore의 poly-carbonate membrane을 올린 뒤, upper chamber에 사람 피부 유래 표피 각질형성세포(HaCat)를 웰 당 5×10⁴ cells/50 μL로 분주하였다. 이 후 37℃의 5% CO₂배양기에서 210분 동안 배양한 뒤, 멤브레인을 Diff-Quick solution으로 염색 및 고정하여 멤브레인을 통과하여 이동한 세포의 수를 세어 백분율로 환산함으로써 새삼 꽃 유래 정유의 피부 표피 각질형성세포의 이동률을 계산하였다.

그 결과, 새삼 꽃 앱솔루트가 농도 의존적으로 피부 표피 각질형성세포의 이동을 유도하는 것으로 나타났으며, 특히, 250 μg/mL의 농도에서 124.86±6.06%의 최대 이동률을 나타냈다 (도 5).

실시예 6. 새삼 꽃 정유의 콜라겐 sprouting의 out growth 촉진 효과

상기 실시예 1에서 얻은 새삼 꽃 정유가 콜라겐 sprouting의 out growth에 미치는 효과를 확인하였다. 구체적으로, Type I 콜라겐과 표피 각질형성세포를 2.5×10⁷cells/mL이 되도록 섞은 후, NaOH (1 N)용액을 처리하여 중화한 뒤, 24웰 플레이트에 5 μL씩 분주하고 5 내지 10분 정도 상온에서 건조하여 인공피부조직을 형성하였다. 형성된 인공피부조직에 새삼 꽃 유래 정유 또는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL) (양성 대조군)을 처리하고 72 내지 90시간 동안 37℃, 5% CO₂배양기에서 배양하였다. 그 후, 배양액을 제거하고, Diff-Quik 용액을 이용하여 세포와 조직을 고정 및 염색하였으며, 염색된 세포와 조직을 촬영하였다.

그 결과, 새삼 꽃 앱솔루트는 각질형성세포 콜라겐 sprouting의 out growth를 50 μg/mL 농도에서 140.20±11.83% 및 250 μg/mL 농도에서 191.81±13.00% 유도하여, 각질형성세포 콜라겐 sprouting의 out growth를 효과적으로 유도하는 것으로 나타났으며, 농도 의존적인 것으로 나타났다 (도 6).

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다.

본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

새삼(Cuscuta japonica CHOISY)의 꽃에서 추출한 정유를 포함하는 피부 재생 또는 주름 개선용 피부 외용제 조성물.
제 1항에 있어서, 정유는 유기용매 추출법으로 추출되는, 피부 재생 또는 주름 개선용 피부 외용제 조성물.
제 1항에 있어서, 새삼의 꽃을 유기용매 추출법으로 추출하여 콘크리트를 얻고 이를 유기용매에 용해 및 여과하여 불용성 왁스를 제거하여 앱솔루트를 얻음으로써 제조된 정유인, 피부 재생 또는 주름 개선용 피부 외용제 조성물.
제 1항에 있어서, 새삼의 꽃에서 추출한 정유는 (+)-아사리닌(Asarinin), 노나코산(Nonacosane), 펜타코산(Pentacosane), 감마-시토스테롤(γ-Sitosterol) 및 헵타코산(Heptacosane)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는, 피부 재생 또는 주름 개선용 피부 외용제 조성물.
제 1항에 있어서, 표피 각질형성세포 증식, 재생 및 콜라겐 형성용인, 피부 재생 또는 주름 개선용 피부 외용제 조성물.
제 1항에 있어서, 새삼의 꽃에서 추출한 정유를 0.1 내지 300 μg/mL의 농도로 포함하는, 피부 재생 또는 주름 개선용 피부 외용제 조성물.
새삼의 꽃에서 추출한 정유를 유효 성분으로 포함하는, 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물.
제 7항에 있어서, 새삼의 꽃에서 추출한 정유는 (+)-아사리닌(Asarinin), 노나코산(Nonacosane), 펜타코산(Pentacosane), 감마-시토스테롤(γ-Sitosterol) 및 헵타코산(Heptacosane)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는, 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물.
제 7항에 있어서, 새삼의 꽃에서 추출한 정유를 0.1 내지 300 μg/mL의 농도로 포함하는, 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물.
새삼의 꽃을 유기용매에 침지하고;
침지액을 증발 및 농축하여 콘크리트를 얻으며;
콘크리트를 유기용매에 용해 및 여과하여 불용성 왁스를 제거하고;
앱솔루트를 분리 및 정제하는 것을 포함하는 새삼 꽃 정유의 제조방법.