KR101885224B1

KR101885224B1 - 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합 추출물 제조방법, 및 이로부터 제조된 기능성 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101885224B1
Application number: KR1020160064861A
Authority: KR
Inventors: 서용창; 주철규; 함경만; 박진오; 이상종; 민진우; 김순영; 김훈중; 김호영
Original assignee: 대봉엘에스 주식회사; 주식회사 웰코스
Priority date: 2016-05-26
Filing date: 2016-05-26
Publication date: 2018-09-11
Also published as: KR20170133721A

Abstract

본 발명은 추출물 간의 혼합에 의해 시너지 효과를 가지는, 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물의 제조방법, 및 이로부터 제조된 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 각종 노화인자 및 피부 자극으로부터 피부를 보호하는 효과가 뛰어나다. 특히, 본 발명에 따른 천연 유래인 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀의 복합추출물은 항산화, 세포보호, 피부 보습, 피부 진정 효과가 우수하여, 상기 천연식물추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료는 항산화, 피부 보습 및 피부 진정용 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합 추출물 제조방법, 및 이로부터 제조된 기능성 화장료 조성물{A COMPOSITION COMPRISING EXTRACT OF INULA JAPONICA THUNBERG, EPIMEDIUM KOREANUM AND KNOTGRASS AS ACTIVE INGREDIANT FOR FUNCTIONAL COSMETICS}

본 발명은 추출물 간의 혼합에 의해 시너지 효과를 가지는, 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물의 제조방법, 및 이로부터 제조된 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 각종 노화인자 및 피부 자극으로부터 피부를 보호하는 효과가 뛰어나다.

인간은 시간이 흐름에 따라 생리적 기능이 저하되는 노화 현상을 경험하게 되고, 생체적인 노화 정도를 판단할 수 있는 지표가 되는 것 중 하나가 피부이다. 피부는 외부환경에 항상 노출되어 있으므로 노화에 따른 피부변화는 많은 부분이 외부인자들의 영향에 의한 것이라고 할 수 있다. 특히 외부 인자에 대한 염증 반응, 활성산소, 자외선 등이 주요 원인으로 간주되고 있다.

활성산소는 피부세포 및 조직 손상을 주도하여 항산화 방어체계를 파괴하여 생체 노화 뿐 아니라 피부노화에 관여하고 있으며 여러 장기에 기능적 손상을 입힘으로써 여러 질병을 유발하고 노화를 촉진시킨다. 또한 지속적인 산화스트레스로 인해 단백질 분해효소의 활성화, 탄력섬유인 콜라겐과 엘라스틴 절단, 히아루론산 절단 등의 생체 구성 성분들의 손상을 일으키며 피부 염증 유발 및 피부 면역기능을 억제시켜 세균 감염증 또는 발암율의 증가를 가져온다. 따라서 활성산소 생성을 억제하고 활성산소로 인한 염증 반응 억제 및 피부 보습력을 증가시켜 피부세포를 보호하여야 한다.

인체는 약 72％ 정도의 수분을 함유하고 있어 피부를 촉촉하게 유지시켜 주며 부드럽게 보호해 주는 역할을 한다. 따라서, 피부에서의 수분 유지란 건강한 피부를 지니기 위해 매우 중요한 요인이며 피부의 시간 경과에 따른 저항력 약화에 대응할 수 있는 가장 기본적인 요인일 것이다. 수분은 각질층에 적당하게 유지되어 피부의 탄력이나 유연성을 유지하는데 중요하며, 정상적인 피부는 약 30％ 정도의 수분이나 수용성 성분을 함유하고 있다. 피부는 외부에서부터 순서대로 표피, 진피, 피하 조직의 3개 층으로 크게 구분되며, 체내의 제 기관을 기온 및 습도 변화, 자외선, 기타 물리적, 화학적인 외부 환경의 자극으로부터 보호해 주는 기능이 있다. 특히, 표피에서는 인체 내부의 수분증발을 방지하는 중요한 역할을 한다.

상기 표피는 외부로부터 순서대로 각질층, 과립층, 유극층, 기저층으로 구분되며, 각질층의 세포들은 벽돌과 같은 역할을 하고 각질세포 사이의 세포간 지질들은 모르타르와 같은 역할로 작용하여 피부 장벽을 구성한다. (J. Invest. Dermatol. 80(Suppl.), 44-49. 1983). 또한, 건강한 사람의 각질세포에는 고농도의 자연보습인자 (Natural Moisturing Factor, NMF)가 존재하여 피부의 수분 보유를 돕는데, 예를 들면 아미노산과 같은 물질은 수용성이기 때문에 효과적으로 수분과 결합하여 피부에서 수분이 건조되는 것을 억제한다. (J. Invest. Dermatol. 54, 24-31, 1970).

수분은 각질층 내에서 크게 두 가지 형태로 존재하는데 하나는 결합수(bound water) 이고 하나는 자유수(free water)이다. 결합수는 각질층 내에 이온류, 아미노산 및 단백질 등과 분자 상태로 결합되어 있는 것을 말하며, 이중 건조되어 고화된 각질층에 보통 존재하고 있는 물을 1차 결합수라 하며 각질층에 5％ 정도 함유되어 있는 것으로 보고되어 있다. 또한, 각질층과 매우 빠르게 결합하지만 건조한 상태에서도 잘 떨어지지 않는 형태로 존재하며 비교적 강하게 결합된 상태로 있는 물 분자를 2차 결합수라고 부른다. 따라서, 각질층에 수분이 결합하여 그 수분이 결합수로서, 특히 2차 결합수 형태로서 존재할 때 외부의 습도가 낮은 건조한 상태에서도 수분이 각질층에 결합되어 피부가 촉촉하게 유지된다.

그러나, 요즘과 같이 환경의 변화나 생활 패턴의 변화에 따른 냉/난방의 인위적인 온도 조절, 사회생활에서 발생되는 각종 스트레스와 환경오염으로 인한 피부 스트레스, 화장 습관에 따른 잦은 세안 및 연령 증가에 따른 자연적인 피부 노화 등의 여러 가지 원인으로 인하여 각질층의 수분이 감소하여 피부가 건조해지고 표면이 거칠게 되며 피부가 푸석거리고 촉촉함을 잃어 생기가 없어 보이는 등의 현상이 발생하기 때문에 피부 보습제 및 피부진정의 필요가 증가하고 있다.

종래에는 이를 위해 보습제로서 수분을 흡수하는 성질이 있는 휴멕턴트(humectant)나 수분 증발을 방지하는 폐쇄 보습제(Occlusive Moisturizer)를 사용하여 결국 각질층에서의 수분 보유를 증가시키는 방식이 행하여져 왔다. 휴멕턴트로는 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 솔비톨, 2-피롤리돈-5-카르본산나트륨 등의 물질이 있으나, 피부에 도포시 끈적임이 심하거나 눅진한 느낌이 드는 단점이 있고 또한, 폐쇄보습제로는 세라마이드 등의 지질성분이나 필수지방산 및 지질 복합체 등이 사용되었으나(J. Invest. Dermatol.(5), 731-740, 1994), 유화 제형의 안정도를 유지하는데 난점이 있으며 투명한 젤상의 제품을 제조하는 데에는 부적합한 단점이 있다.

따라서, 스트레스로 인한 피부에의 악영향을 최소화하는 것, 즉 피부장벽보호와 각질 턴오버를 재빨리 정상화하고 피부에 휴식을 주어 아침의 피부 고민을 해결 할 수 있는 간편하고 즉효성 있는 조성물의 필요성이 대두되고 있다.

금불초는 우리나라 각처의 산과 들에서 자라는 다년생 초본이다. 산과 들의 물기가 많은 곳에서 잘 자라며, 반그늘 혹은 양지식물이고, 키는 20~60㎝, 잎은 길이 5~10㎝, 폭 1~3㎝이고 어긋나며, 긴 타원형이고 가장자리에 드문드문 톱니가 있다. 꽃은 노란색이며 가지 끝과 줄기 끝에 달리고 지름은 약 3㎝ 내외이고, 열매는 10월경에 달리고 길이 0.5㎝ 정도 되는 갓털이 붙어 있다. 꽃은 다른 국화류와는 달리 꽃잎이 좁고 길게 나와 있는 것이 특징이며, 어린순은 식용으로, 꽃은 약용으로도 쓰인다.

금불초(旋覆花, 학명:Inula japonica Thunberg)는 지상부에 세스퀴테르페노이드 락톤(sesquiterpenoid lactone), 브리타닌(britanin) 및 이눌린(inulin)이 함유되어있고, 꽃인 선복화에는 퀘르세틴(quercetin), 이소퀘르세틴(isoquercetin), 카페인산(caffeic acid), 클로로겐산(cholorogenic acid), 이눌린(inulin) 및 타락스테롤(taraxasterol) 등 다량의 스테롤(sterol) 성분이 함유되어 있다.

상기 금불초 추출물은 금불초의 꽃에서 추출한 것이 바람직하다. 이는 체내 면역력을 증강시키고, 항산화, 항염, 항알레르기 효능이 있는 Flavonoid 성분이 다른 부위에 비해 높기 때문이다.

대한민국 공개특허 제2011-0087448호 "선복화 추출물로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증 또는 알러지 질환의 예방 및 치료용 조성물"에는 '선복화(금불초의 꽃) 추출물로부터 분리된 화합물이 각종 염증 및 알러지 질환의 원인이 되는 비만세포로부터 시클로옥시게나제-2 (COX-2) 의존적 프로스타글란딘 (prostaglandin) 생성 및 류코트리엔 (leukotriene)의 생성을 억제함과 동시에 비만세포로부터 히스타민 (histamine)의 방출을 억제하므로, 각종 염증 또는 알러지 질환의 예방 및 치료를 위한 의약품 또는 건강기능식품으로 유용하게 이용'될 수 있음이 개시되어 있다.

또한 J. Soc. Cosmet. Scientists Korea Vol. 35, No. 3, September 2009, 209-217, "금불초 꽃 추출물의 항균 및 항산화 활성"에는 '금불초 꽃 추출물이 피부상재균에 대한 항균활성을 가지며, 항산화작용, 티로시나제 저해활성을 가져 기능성 화장품 원료로서 응용 가능성이 있음'이 개시되어 있다.

삼지구엽초(Epimedium koreanum)는 쌍떡잎식물 미나리아재비목 매자나무과의 여러해살이풀로, 한국, 중국 동북부 지역 등에서 자생하고 있는 식물이다. 주로, 산지의 나무 그늘에서 자라며, 뿌리줄기는 옆으로 뻗고 잔뿌리가 많이 달린다. 줄기는 뭉쳐나고 높이가 30cm이며 가늘고 털이 없으며 밑부분은 비늘모양의 잎으로 둘러싸인다. 줄기 윗부분은 3개의 가지가 갈라지고 가지 끝마다 3개의 잎이 달리므로 삼지구엽초라고 한다. 뿌리에서 나온 잎은 무여나고 잎자루가 길다. 줄기에 달린 잎은 길이 5~13.5cm의 달걀 모양이고 끝이 뾰족하며 밑 부분은 밑 부분은 심장 모양이고 가장자리에 털 같은 잔 톱니가 있다. 꽃은 5월에 피고 줄기 끝에 총상꽃차례를 이루며 밑을 향해 달린다. 열매는 골돌이고 길이 10-13mm의 양끝이 뾰족한 원기둥 모양이다. 한방에서는 식물체 전체를 음양곽(陰羊藿)이라는 약재로 쓰는데, 최음, 강장, 강정, 및 거풍 효과가 있다. 민간에서는 음위(陰謄), 신경쇠약, 건망증, 히스테리 및 발기력 부족 등에 사용한다.

마디풀은 마디풀과(여뀌과) 마디풀속에 속하는 1년생 식물로서, 전체에 털이 없고 줄기는 갈라져 위로 뻗고 세로줄이 많으며 마디는 부풀어 있다. 키는 10∼40 cm 정도이며, 잎은 짧은 자루가 있고 어긋나며 긴 타원형으로 길이가 2∼4cm, 털이 없고 뒷면은 가운데 맥이 도드라진다. 잎집은 막질이며 불규칙적으로 가늘게 찢어지고, 가는 맥이 있다. 7∼9월에 잎 겨드랑이에 녹색의 작은 꽃에 다발로 핀다. 꽃받침은 5장이며 타원형이고 녹색에 흰빛 또는 분홍빛이 돌고, 수술은 6∼8개이며 암술대는 3개이고, 열매는 수과로 세모지고 잔점이 퍼져 있으며 광택이 없다. 개화기는 6∼7월이며, 어린잎은 나물로 식용하고, 전초는 약용으로 사용한다. 전세계적으로 널리 퍼져 있으며, 다양한 효능을 갖고 있기 때문에 많은 나라에서 민간 약초로 사용하고 있다. 특히 마디풀은　이뇨작용, 혈압강하작용, 피응고촉진작용 및 자궁수축작용이 있음이 알려져 있으며, 이 밖에도 폐결핵, 신경쇠약, 방부약, 신석증, 위장병, 어린이 설사, 호홉기 질환, 위궤양 및 두통 등 여러 가지 다른 질환에도 많이 사용되고 있다고 알려져 있다.

그러나 상기 문헌 어디에도 각 천연식물 추출물이 혼합될 시, 시너지 효과에 의한 활성성분의 효력 증대에 대한 개시는 없었다. 이에, 본 발명자들은 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물을 제조하여 그 활성에 대하여 연구하였으며, 각 성분이 독립하여 화장료 조성물에 함유될 시보다, 복합되어 함유될 시 더욱 우수한 항산화, 세포보호, 피부보습, 피부진정 효능이 있음을 알 수 있었다.

KR 공개 10-2011-0087448 (2011.08.03)

J. Soc. Cosmet. Scientists Korea Vol. 35, No. 3, September 2009, 209-217

종래의 금불초, 삼지구엽초 또는 마디풀 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 비하여, 그 시너지 효과에 의해 피부 관련 효과가 더욱 뛰어난, 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 기능성 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 종래 기술보다 더 나은 활성증진 효과를 가지는 복합추출물을 얻기 위해 안출 된 것으로서,

금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물을 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀은 1 ~ 15 : 1 ~ 15 : 1 ~ 15 중량비 로 혼합하여 추출된 복합추출물을 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 항산화 활성 효과 있는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 세포보호 효과 있는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 피부 보습 효과 있는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 피부 진정 효과 있는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물은, 열수추출물 또는 용매추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 용매는, 물, 발효주정, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 에틸아세테이트, 아이소펜틸디올, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 클로로포름, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 용매로 이루어진 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물은 화장료 조성물 전체 중량 대비 0.001 내지 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 항산화, 세포보호, 피부 보습 및 피부 진정용 화장료 조성물은 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 패치, 바디 워시, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 콘디셔너, 헤어젤, 피부접착용 겔, 파운데이션, 립스틱, 마스카라 및 메이크업 베이스 제품 중에서 선택되는 어느 하나의 제형으로 제조된 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀을 혼합하는 단계;

상기 혼합된 천연식물을 80 내지 120℃ 에서 가열하여 추출한 추출물을 수득하는 단계;

상기 추출물을 필터로 여과를 수행하여 여과액을 수득하는 단계; 및

상기 여과액을 농축 및 동결 건조하여 복합추출물을 수득하는 단계를 순차적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명에 따른 천연 유래인 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀의 복합추출물은 항산화, 세포보호, 피부보습, 피부진정 효과가 우수하여, 상기 천연식물추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료는 항산화, 세포보호, 피부 보습 및 피부 진정용 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.

이하 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.

본 명세서에서, 용어 "삼지구엽초 추출물"은 삼지구엽초의 다양한 기관 또는 부분 (예: 열매, 잎, 꽃, 뿌리, 줄기, 가지 및 껍질 등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하며, 더욱 바람직하게는 삼지구엽초의 말린 전초(all body)로부터 얻은 추출물을 의미한다.

본 발명의 일 구체예에 따르면 먼저 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀을 세절한 후 혼합하여 제조한다. 이어 상기 천연혼합물에 용매를 가하여 복합추출액을 제조한다. 또는, 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀의 복합추출물은, 성분 각각을 용매로 추출한 후 혼합한 복합추출물 형태로 사용될 수도 있다.

이를 구현하기 위한 본 발명의 일측면은,

금불초 : 삼지구엽초 : 마디풀 = 1 ~ 15 : 1 ~ 15 : 1 ~ 15 중량비 로 혼합하여 추출하거나, 금불초 : 삼지구엽초 : 마디풀 = 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 중량비 로 혼합하여 추출하는 것이 바람직하다. 특히, 금불초 : 삼지구엽초 : 마디풀 = 1 ~ 5 : 1 ~ 5 : 1 ~ 5 중량비 로 혼합하여 추출하는 것이 가장 바람직하다.

상기 복합추출물은 그 조합에 의해 뛰어난 항산화, 세포보호, 피부 보습 및 피부 진정 효과를 나타낸다. 이에 대한 보다 상세한 이해는 후술할 실시예 및 실험예를 통하여 이루어질 수 있을 것이다.

상기 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀의 복합 추출물은 열수추출물이거나, 물, 발효주정, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 에틸아세테이트, 아이소펜틸디올, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 클로로포름, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나 또는 하나 이상의 용매에 의한 용매추출물이며, 바람직하게는 열수추출물이다.

상기 복합추출물은, 조성물 전체 중량 대비, 0.001 내지 20 중량% 포함하며, 0.01 내지 10 중량% 포함하는 것이 바람직하다. 또한, 1 ~ 5 중량% 포함하는 것이 가장 바람직하다. 이러한 중량비는 0.001 중량% 미만에서는 원하는 효과를 기대할 수 없으며, 20 중량%를 초과하는 경우에는 함량 증가에 비해 그 효과의 증가가 미미하고, 세포 독성이 있을 수 있으며, 제형 안정성이 악화될 수 있다.

상기 각 추출물은 항산화, 세포보호, 피부 보습 효과 및 피부 진정 작용을 동시에 가질 뿐 아니라, 각 성분의 조합으로 인해, 보다 증가된 효과를 나타낸다. 이에 대한 보다 상세한 이해는 후술할 실시예 및 실험예를 통하여 이루어질 수 있을 것이다.

본 발명의 화장료 조성물은, 다양한 화장료 조성물 제형으로 제조될 수 있고, 이에 비제한적인 예시로, 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 패치, 바디 워시, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 콘디셔너, 헤어젤, 피부접착용 겔, 파운데이션, 립스틱, 마스카라 및 메이크업 베이스 제품 중에서 선택되는 어느 하나의 제형을 들 수 있으며, 보다 구체적으로 액상, 크림상, 페이스트상 및 고체상 등 다양한 성상으로 적용이 가능하며, 이들 각 제형에 적합하고 당업계에 주지된 각종의 통상적인 보조제와 담체를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 다른 측면은, 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물의 제조방법으로서, 이들 천연식물을 혼합 및 열수추출 후 여과 농축 및 동결 건조하는 것을 특징으로 한다. 보다 상세히는, 금불초, 삼지구엽초, 마디풀을 1 ~ 15 : 1 ~ 15 : 1 ~ 15 중량비 로 혼합, 바람직하게는 금불초 : 삼지구엽초 : 마디풀 = 1 ∼ 10 : 1 ∼ 10 : 1 ∼ 10 중량비 로 혼합, 보다 바람직하게는 금불초 : 삼지구엽초 : 마디풀 = 1 ∼ 5 : 1 ∼ 5 : 1 ∼ 5 중량비 로 혼합하여 하는 단계; 상기 혼합된 천연식물을 80 내지 120℃에서 가열하여 추출한 추출물을 수득하는 단계; 상기 추출물을 필터로 여과, 바람직하게는 0.4 내지 1.5 um 필터로 여과를 수행하여 여과액을 수득하는 단계; 및 상기 여과액을 농축 및 동결 건조하는 공정을 포함하여 제조한다.

이하 본 발명에 대하여 실시예를 들어 보다 더 상세히 설명한다. 이하의 실시예는 발명의 상세한 설명을 위한 것일 뿐 이에 의해 권리범위를 제한하려는 의도가 아님을 분명히 하며, 본 발명의 범위 내에서 당업자의 통상적인 변화가 가능하다.

실시예

실시예 1

금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 시료를 1:1:1의 비율로 각각 16.6 g씩을 추출 챔버에 첨가한 후, 추출부에는 물 950 g을 첨가한 후 80℃에서 2시간 동안 추출을 진행한다. 이렇게 추출된 추출물을 0.8 um, 0.45 um 필터로 여과를 수행하여 여과액을 수득하였고, 이 여과액을 농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 60℃이하에서 농축을 실시하고, 이 농축물을 -21℃ 조건에서 동결 전처리 후 동결건조기(Bondiro, Ilshin, Korea)를 이용하여 -80℃, 48시간 동안 동결건조를 실시하여 금불초, 삼지구엽초, 마디풀 복합 추출물을 얻었다. 이와 같이 수득된 것을 하기 시험예에서 사용하였다.

비교예 1

금불초 시료를 50g을 추출 챔버에 첨가한 후, 추출부에는 물 950g을 첨가한 후 80℃에서 3시간 동안 추출을 진행한다. 이렇게 추출된 추출물을 0.8 um, 0.45 um 필터로 여과를 수행하여 여과액을 수득하였고, 이 여과액을 농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 60℃이하에서 농축을 실시하고, 이 농축물을 -21℃ 조건에서 동결 전처리 후 동결건조기(Bondiro, Ilshin, Korea)를 이용하여 -80℃, 48시간 동안 동결건조를 실시하여 금불초 추출물을 얻었다. 이와 같이 수득된 것을 하기 시험예에서 사용하였다.

비교예 2

삼지구엽초 시료를 50g을 추출 챔버에 첨가한 후, 추출부에는 물 950g을 첨가한 후 80℃에서 3시간 동안 추출을 진행한다. 이렇게 추출된 추출물을 0.8 um, 0.45 um 필터로 여과를 수행하여 여과액을 수득하였고, 이 여과액을 농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 60℃이하에서 농축을 실시하고, 이 농축물을 -21℃ 조건에서 동결 전처리 후 동결건조기(Bondiro, Ilshin, Korea)를 이용하여 -80℃, 48시간 동안 동결건조를 실시하여 금불초 추출물을 얻었다. 이와 같이 수득된 것을 하기 시험예에서 사용하였다.

비교예 3

마디풀 시료를 50g을 추출 챔버에 첨가한 후, 추출부에는 물 950g을 첨가한 후 80℃에서 3시간 동안 추출을 진행한다. 이렇게 추출된 추출물을 0.8 um, 0.45 um 필터로 여과를 수행하여 여과액을 수득하였고, 이 여과액을 농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 60℃이하에서 농축을 실시하고, 이 농축물을 -21℃ 조건에서 동결 전처리 후 동결건조기(Bondiro, Ilshin, Korea)를 이용하여 -80℃, 48시간 동안 동결건조를 실시하여 금불초 추출물을 얻었다. 이와 같이 수득된 것을 하기 시험예에서 사용하였다.

시험예

시험예 1 - 항산화 효과 측정 시험

본 발명의 상기 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물에 대한 피부 노화개선 효과 검정시험으로 항산화 효과를 확인하기 위하여 자유라디칼 소거시험과 활성산소 소거시험을 실시하였다.

자유라디칼 소거시험은 안정한 DPPH의 흡광도가 540 nm에서 최대 흡광도를 나타는 것을 이용, 자유라디칼인 DPPH가 시료에 의해 소거되어 보라색에서 투명한 색이 될수록 즉, 자유라디칼 소거율이 증가될수록 상기 540 nm파장에서 흡광도가 줄어들게 됨을 응용하여 하기와 같은 검정시험방법에 의해 진행하였다.

먼저 0.1 mM 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl radical(DPPH, Sigma)용액 1 mL에 상기의 실시예 및 비교예 시료를 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 1 mL를 혼합하고, 37℃에서 15분간 방치한 후 microplate reader(UVT-06685, Thermo max, USA)를 이용하여 540 nm파장에서 흡광도를 측정하였다.

상기 자유라디칼 소거시험에서 대조군은 DPPH 1 ml과 메탄올 1 ml을 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, 메탄올 1 ml과 시료 1 ml을 넣어 시료와 대조군에 대한 각각의 색 보정값을 얻는 것으로 설정하였다.

하기 수학식 1을 이용하여 자유라디칼 소거율을 계산하여 하기 표 1에 나타내었다. 표 1에서 FSC₅₀은 자유라디칼을 50 % 소거하기 위해 소요되는 시료의 농도이며, 값이 작을수록 항산화활성이 높음을 나타낸다.

활성산소 소거시험은 잔틴/잔틴옥시데이즈(xanthine/xanthine oxidase, Sigma)의 효소반응에 의한 활성산소 발생을 이용하여 활성산소에 의한 니트로블루 테트라졸리움(nitroblue tetrazolium, NBT)의 산화를 이용한 흡광도 변화를 측정함으로써 활성산소의 소거능을 알 수 있다.

Na₂CO₃ 2.4 mL, xanthine(Sigma) 0.1 mL, ethylenediamine tetraacetic acid(EDTA) 0.1 mL, bovine serum albumin(BSA, Sigma) 0.1 mL, NBT 0.1 mL 및 시료 0.1 mL을 넣고 vortex mixer(Type 37600 Mixer, Mini mix, USA)를 이용하여 voltexing 후 25℃에서 10분간 방치한 후 xanthine oxidase 0.1mL을 넣고 25℃ 20분간 반응시킨 후, 6 mM CuCl₂를 넣어 반응을 정지, microplate reader(UVT-06685, Thermo max, USA)를 이용하여 540 nm파장에서 흡광도를 측정하였다.

상기 활성산소 소거활성시험에서의 대조군은 시료용액 대신 3차 증류수를 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, xanthine oxidase 용액 대신 3차 증류수를 넣어 추출 시료와 대조군에 대한 각각의 색 보정값을 얻는 것으로 설정하였다.

수학식 2를 이용하여 활성산소 소거율을 수치로 계산하여 하기 표 1에 나타내었다. 표 1에서, IC₅₀은 활성산소를 50 % 소거하기 위해 소요되는 시료 농도이며, 값이 작을수록 항산화활성이 강함을 의미한다.

시험에 사용한 시료는 실시예 1에서 수득한 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물과 비교예 1 내지 3 에서 수득한 금불초, 삼지구엽초 또는 마디풀 추출물이며, 항산화 효과를 비교하기 위해 상기 시험예 1과 같이 시험을 하였고 그 결과를 표 1에 나타내었다.

상기 표 1에 나타난 바와 같이, 금불초, 삼지구엽초 또는 마디풀을 각각 추출한 추출물에서는 마디풀의 항산화 효과가 가장 높게 나타났으며, 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합 추출물이 월등한 항산화 효과를 나타내었다. 또한, 자유라디칼 소거 활성은 양성대조군으로 사용한 강력한 합성 항산화제인 BHT과 비슷한 효과를 확인할 수 있었다.

시험예 2 - 보습효과 측정 시험

보습효과의 측정은 유수분측정기(WSK-P500U, Inforward. Inc, 일본)를 이용한 커패시턴스 측정법을 사용하고, 실시예 및 비교예 1% 수용액 시료와 여러 연구결과에서 피부 보습 효과가 뛰어나다고 알려진 히아루론산(Hyaluronic acid sodium salt, Sigma) 1% 수용액과 비교하였다. 20∼30대 여성 30명을 대상으로 하여, 시험 시작 직전에 전박 굴측면을 항온항습실 (22℃, 상대습도 40~60%)에서 20분 동안 적응하게 하여 피부의 수분 자체를 일정하게 유지시켰다. 이후, 유수분측정기(WSK-P500U, Inforward. Inc, 일본)를 사용하여 각 시료 도포부위의 초기 수분 보유량을 측정한 후, 시료를 2.0 ㎎/㎝²를 전박 굴측면에 따른 오차를 최소화하기 위하여 피검자마다 도포하는 시료의 위치를 달리하면서 도포하였다. 도포 10분, 30분, 60분, 90분, 120분에서 시간별로 피부 수분량을 1차 측정하고, 2시간 후에 다시 피부 수분량을 측정하였다. 각 측정부 위치를 3번 반복 측정하고 그 평균값으로 피부 수분량을 계산하여 표 2에 나타내었다.

그 결과, 모든 시료에서 정제수보다 높은 보습효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었고, 그 중에서도 실시예 1에서 수득한 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합 추출물 1% 수용액은 현재 보습효과가 뛰어나다고 알려진 히아루론산의 1% 수용액과 비교하여 비슷한 효과가 나타나, 시료 중에서 보습효과가 가장 우수함을 확인할 수 있었다.

시험예 3 - 자외선 조사 후 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물에 의한 MMP -1 발현억제 평가 시험

본 발명의 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물의 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP-1 농도를 측정하여 MMP-1 발현억제를 검정하기 위해서 하기와 같이 효소면역분석법(ELISA)를 실시하였다.

UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 5 J/㎠의 에너지로 조사한다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고 UVA를 조사한 후 실시예 및 비교예가 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수하여 96-웰에 코팅한다. 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체와 MMP-2(Ab-3) 단일클론항체)를 처리하고 37℃에서 60분 반응시킨다. 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1 mg/ml ρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 microplate reader(UVT-06685, Termo max, USA)를 사용하여 405 nm에서 흡광도를 측정한다. 이때, MMP-1 발현 억제 평가를 하기 위해 MMP-1 발현 억제효과가 뛰어나다고 알려진 레티놀을 비교군으로 설정하여 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물이 월등한 MMP-1 발현 억제효과를 나타내었고, 이는 대조군으로 사용한 레티놀의 억제율 보다 우수한 결과를 나타내었다. 또한, 금불초, 삼지구엽초 또는 마디풀 추출물을 각각 사용한 비교예에서도 레티놀보다 비슷하거나 높은 억제율을 나타내었다.

시험예 4 - 자외선조사에 대한 세포보호 증가 효과 시험

본 발명의 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물의 자외선조사에 대한 세포보호 증가 효과를 확인하기 위해 하기와 같이 실험하였다.

섬유아세포(fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 1 X 10⁵개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 uL의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15 W, Sankyo Dennki, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/cm²를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 10 % FBS가 첨가된 것) 1 mL을 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물(실시예 1), 금불초 추출물(비교예1), 삼지구엽초 추출물(비교예2) 또는 마디풀 추출물(비교예 3)을 처리한 후 24시간동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 세포배양 배지 500 uL 배지와 MTT 용액(2.5 mg/mL) 60 uL를 넣은 후 2시간동안 37℃ CO₂ 배양기에서 배양하였다. 배지를 제거하고 이소프로판올-HCl(0.04 N)을 500 uL씩 넣어주었다. 5분간 진탕하여 세포를 용해시키고 상등액 100 uL씩을 96-웰 시험 플레이트에 옮긴 후, microplate reader(UVT-06685, Termo max, USA)를 사용하여 565 nm 흡광도를 측정하였다. 수학식 3에 의해 세포생존율(%)을 측정하고, 자외선에 대한 세포보호 증가율은 수학식 4에 의하여 계산하여 하기 표 4에 나타내었다.

상기 표 4에 나타난 바와 같이, 금불초, 삼지구엽초 또는 마디풀을 각각 추출한 추출물보다 복합으로 추출한 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물의 세포보호 증가율이 높게 나타나 자외선에 대한 세포보호가 효과적임을 알 수 있었다.

시험예 5 - 각질 세포주 HaCaT에서 레티노익산 또는 소듐라우릴설페이 트(Sodium Lauryl Sulphate , SLS ) 자극에 따른 프로스타글란딘 E2 및 α-MSH(Melanocyte stimulating hormone) 분비의 억제에 의한 자극완화효과 시험

시험 세포인 각질형성세포(세포주명: HaCaT 입수처: Dr. N.E. Fusenig, Deutsches Krebsforschungszentrum, Heidelberg, Germany)를 10%의 우태아 혈청 (Fetal bovine sereum, FBS, 입수처: Gibco, USA)과 1% 페니실린-스트렙토마이신 (Penicillin-Streptomycin, 입수처: Gibco, USA)을 함유한 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, 입수처: Lonza, USA) 배지를 이용하여 96 웰 플레이트 (96 well plate)에 약 2 x 10⁴세포수/웰의 밀도로 분주한 후, 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 24시간 동안 배양하였다. 배양액을 제거한 후, 인산염완충용액 (Phosphate buffered saline, PBS) 200㎕로 1회 세척하고, 우태아 혈청이 함유되지 않는 DMEM배지 200㎕를 넣어 24시간 배양하였다. 이후 1% 우태아 혈청이 함유된 DMEM으로 하기 실시예 및 비교예를 0.01%농도로 10분간 처리한 다음 100μM 농도의 레티노익산 (Retinoic acid, 입수처: Sigma-Aldrich, USA) 또는 1Oppm 농도의 소듐라우릴설페이트 (Sodium lauryl sulfate, 입수처: Sigma-Aldrich, USA)로 추가 처리(이하, `물질처리군` 이라 칭함)하여 24시간 동안 배양시켰다. 배양액 50㎕를 취하여 프로스타글란딘 E2 (PGE₂)ELISA키트(입수처: R & D system, USA)를 이용하여 레티노익산 또는 소듐라우릴설페이트에 의한 프로스타글란딘 E2 유리 억제 효과를 측정하였으며, 억제능은 표준물질인 rh PGE₂의 흡광도를 토대로 표준 곡선을 그려 흡광도와 표준물질간의 반응식을 구한후, 처리 물질의 흡광도를 대입하여 PGE₂의 분비량을 얻었다. 이후 아래의 수학식 5에 의해 자극완화율을 평가하였으며, 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다.

또한, 상기와 동일한 방법으로 각질형성세포를 배양하고 동일한 방법으로 실시예 및 비교예를 처리하여 배양한 다음, 배양액 50㎕를 취하여 프로스타글란딘 E2 (PGE₂)ELISA키트 대신 α-MSH (Melanocyte stimulating hormone) EIA-ELISA 키트 (입수처: Phoenix pharmaceutical Inc. USA)를 이용하여 레티노익산 또는 소듐라우릴설페이트에 의한 α-MSH 활성 억제 효과를 측정하였으며, 억제능은 표준물질인 재조합 α-MSH 의 흡광도를 토대로 표준 곡선을 그려 흡광도와 표준물질간의 반응식을 구한 후, 처리 물질의 흡광도를 대입하여 α-MSH 의 분비량을 얻었다. 이후 하기 수학식 6에 의해 자극완화율을 평가하였으며, 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다.

상기 표 5의 결과를 보면, 프로스타글란딘 E2의 분비억제능에 있어서 실시예 1에서 제조한 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물을 처리한 경우는 비교예 1 내지 3에서 제조한 단일 추출물을 처리한 경우와 비교하여 현저하게 높은 수준으로 프로스타글란딘 E2의 분비를 억제함을 알 수 있다.

또한, α-MSH의 분비활성능에 있어서도 실시예 1에서 제조한 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물을 처리한 경우는 비교예 1 내지 3에서 제조한 단일 추출물을 처리한 경우와 비교하여 현저하게 높은 수준으로 α-MSH의 분비를 억제함을 알 수 있다.

시험예 6 - 본 발명에 따른 화장료 조성물의 피부 진정 효과 시험

본 발명에 따른 화장료 조성물의 적용 시 피부 자극 완화 효과(피부 진정효과)를 살펴보기 위해, 20∼40대 남녀 20명을 대상으로 피부 자극 완화 시험을 하였다.

자극원으로 5％ 락틱산(L-lactic acid)을 실시예 1과 비교예 1 내지 3에서 제조한 4종의 추출물에 첨가하여 10일간 사용하도록 하여, 락틱산에 의해 유발되는 자극에 대한 완화 효과를 비교하여 보았다. 매일 아침, 저녁으로 사용하게 한 다음 자극 여부 및 강도를 설문지에 표시하게 하였다. 시험 결과의 평가는 1일 1회로 하였으며, 따끔거림이나 가려움 같은 주관적 자극과 피부 홍반이나 부종 같은 객관적 자극으로 나누어 표시하게 하였으며, 그 결과는 하기 표 6과 같다.

상기 표 6에서 알 수 있듯이, 실시예 1에서 제조한 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물이 5％ 락틱산에 의해 유발된 피부자극의 완화 효과가 가장 뛰어남을 알 수 있었다.

이하, 본 발명의 제형예로서 유연 화장수, 수렴화장수, 영양 화장수, 마사지 크림, 에센스 및 팩을 예시하나 본 발명의 화장료 조성물의 제형은 이에 제한되는 것으로 해석해서는 안 되며, 본 발명의 범위 내에서 당업자의 통상적인 변화가 가능하다.

[제형예 1] 유연화장수

[제형예 2] 수렴화장수

[제형예 3] 영양화장수

[제형예 4] 에센스

[제형예 5] 팩

Claims

금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물을 활성성분으로 함유하고, 항산화 활성, 또는 자외선에 대한 세포보호 효과가 있는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1항에 있어, 상기 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀은 1 ~ 15 : 1 ~ 15 : 1 ~ 15 중량비 로 혼합하여 추출된 복합추출물을 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물.
삭제
삭제
청구항 1에 있어, 상기 화장료 조성물은, 피부 보습 효과가 더 있는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어, 상기 화장료 조성물은, 피부 진정 효과가 더 있는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어, 상기 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물은, 열수추출물 또는 용매추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 7에 있어, 상기 용매는, 물, 발효주정, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 에틸아세테이트, 아이소펜틸디올, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 클로로포름, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 용매로 이루어진 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어, 상기 금불초, 삼지구엽초 및 마디풀 복합추출물은 화장료 조성물 전체 중량 대비 0.001 내지 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1항에 있어, 상기 화장료 조성물은 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 패치, 바디 워시, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 콘디셔너, 헤어젤, 피부접착용 겔, 파운데이션, 립스틱, 마스카라 및 메이크업 베이스 제품 중에서 선택되는 어느 하나의 제형으로 제조된 화장료 조성물.
삭제