KR20110085543A

KR20110085543A - 피부염증 완화용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20110085543A
Application number: KR1020100005394A
Authority: KR
Inventors: 홍은숙; 안기웅; 조병기
Original assignee: (주)더페이스샵
Priority date: 2010-01-21
Filing date: 2010-01-21
Publication date: 2011-07-27
Also published as: KR101195577B1

Abstract

본 발명은 피부 염증 완화용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 홍조류에 속하는 김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯(Sparassis crispa), 신령버섯(Agaricus blazeii), 저령(Polyporus umbellatus)으로 이루어진 혼합 추출물을 함유하여 피부 염증 완화, 피부자극 완화 또는 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

피부염증 완화용 화장료 조성물{Cosmetic composition for alleviating skin inflammation}

본 발명의 홍조류 추출물과 버섯 혼합 추출물이 항산화 효과, NO 생성억제효과, 지질 과산화 억제효과, 항염증효과 등으로 인하여 피부염 예방 및 개선 효과를 나타낸다.

항산화란 체내에서 일어나는 여러 산화반응을 억제하는 것을 말한다. 산화작용은 체내에 존재하는 여러 불포화 지방산이 산화되면서 과산화 지질의 형태가 생겨나게 되고 이러한 물질이 증가함으로써 노화가 촉진되는 현상을 말한다. 산화반응에 의해 형성되는 자유 라디칼 등에 의하여 일어나는 노화를 막고자 산화반응에 대한 방어기작으로 SOD (superoxide dismutase), CAT (Catalase), GSHpx (Glutathione peroxidase) 등이 존재하여 산화적 스트레스로부터 신체를 보호한다.

한편, 염증반응은 여러원인이 있다고 알려져 있으며 그중 하나로 대식세포가 생성하는 사이토카인과 NO(일산화질소)가 중요한 역할을 한다. NO는 염증과 암 등과 같은 다양한 병리학적 과정에서 iNOS에 의해 생성되는 것으로 NOS는 염증, 혈관확장, 신경전달, 종양세포와 신체의 항상성을 조절하는 중요한 효소로 L-arginine으로부터 생성된다.

이러한 산화적 스트레스 및 염증반응 등에 의하여 피부세포는 손상을 입게되는데, 손상된 피부의 세포증식이 제대로 일어나지 않게 되면 피부는 더욱더 큰 손상을 받게 되므로 피부세포의 증식이 활발히 일어나게 하는 것 또한 중요하다.

종래, 피부자극을 완화하기 위한 여러 가지 방법이 시도되어 왔으며, 예를 들면 피부자극을 유발하는 물질을 제거하는 방법이 시도되었다. 그러나, 기능성 원료 자체가 자극원으로 작용하는 경우가 허다하기 때문에 이와 같은 연구에는 한계가 있다. 예를 들어, 락틱산(lactic acid), 글리콜산(glycolic acid), 살리실산(salicylcic acid), 레티노이드 (retinoid) 등은 피부세포 재생의 촉진 또는 항주름의 효과를 위해 화장품에 함유되지만 피부자극을 유발한다. 이에 따라 최근에는 NaOH나 KOH 등의 강알칼리를 자극 유발 기능성 원료에 첨가하여 산도를 중화시켜 자극을 완화하고자하는 연구가 많이 이루어졌으나, 이와 같은 처방은 기존 원료의 효능을 저하시키는 문제점이 있다. 그리고, 최근에는 세포간의 면역유발물질들을 억제하는 방법에 관한 연구가 진행되고 있으며, 신경세포에서 분비되는 CGRP(calcitonin gene-related peptide), 물질 P(sunstance P) 등의 신경 펩티드류 (Neuropepetides), 조직이나 혈장에서 스트레스에 의해서 활성화되는 브라디키닌(bradykinin)과 같은 키닌류(kinins) 등, 피부세포와 면역세포에서 다양한 사이토카인(cytokine) 및 PGE2 등이 부종 형성과 혈관 확장에 관여하여 염증의 원인으로 작용하는 것이 알려져 있고, 물질 P를 비롯한 신경 펩타이드 길항제, 브라디키닌 길항제, COX 억제제 등이 피부염증 및 자극을 감소시킬 수 있는 물질로 제시되어 왔으며, 자극완화에 대한 화장료를 살펴보면 비타민 복합체를 이용하여 자외선으로 인한 피부자극의 완화 화장료 조성물(대한민국 공개특허 제2000-0058730호), 라스베리 잎 또는 열매 추출물 함유하는 피부 외용제 조성물(대한민국 공개특허 제2003-0015654호), 피토스테롤을 함유하는 화장료 조성물(공개특허 제2002-0063987호) 등이 있으나 뚜렷한 효과를 나타내지는 못하였다.

본 연구에서는 항산화 효과, NO 생성억제효과, 지질 과산화 억제효과, 항염증효과, 세포증식효과 등으로 인하여 피부염 예방 및 개선 효과가 우수한 천연물을 개발하고자 하였다.

이에 본 발명자들은 자외선 및 자유 라디칼에 의한 산화적 스트레스와 외부 유해물질로부터 피부를 보호하는데 탁월한 효능을 갖는 천연 성분을 찾아내고자 예의 연구 노력한 결과, 홍조류 추출물 및 버섯 혼합 추출물이 피부 염증 완화에 우수한 효과를 가지는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 홍조류인 김 또는 우뭇가사리 추출물 및 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령으로 이루어진 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 피부 자극 완화용 또는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.

상술한 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 다음과 같은 수단을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 피부 염증 완화용 화장료 조성물은 김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯, 신령버섯 및 저령으로 이루어진 혼합 추출물을 함유한다.

본 발명의 다른 실시예에 따른 피부 자극 완화용 화장료 조성물은 김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯, 신령버섯 및 저령으로 이루어진 혼합 추출물을 함유한다.

본 발명의 또 다른 실시예에 따른 피부 자극 완화용 화장료 조성물은 김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯, 신령버섯 및 저령으로 이루어진 혼합 추출물을 함유한다.

상기 김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯, 신령버섯 및 저령으로 이루어진 혼합추출물의 함량은 상기 화장료 조성물 총 중량에 대해서 각각 0.1~20 중량%인 것을 특징으로 한다.

상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형을 선택하는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯(Sparassis crispa), 신령버섯(Agaricus blazeii), 저령(Polyporus umbellatus)으로 이루어진 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여 피부 염증 완화 효과를 도모하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 피부자극완화와 항산화용 화장료를 제공한다.

본 발명에 따른 피부 염증 완화용, 또는 피부 자극 완화용 화장료 조성물은 김 또는 우뭇가사리 추출물 과 꽃송이버섯(Sparassis crispa), 신령버섯(Agaricus blazeii), 저령(Polyporus umbellatus)을 유효성분으로 함유한다.

본 발명에서 이용되는 김은 홍조식물 보라털목 보라털과의 해조류로 길이 14~25㎝, 나비 5~12㎝의 긴 타원모양 또는 줄처럼 생긴 달걀모양을 하고 있다. 김의 종류로는 참김(Porphyra tenera), 방사무늬 돌김(P.yexoensis), 둥근 돌김(P. suborbiculata) 등이 있으며, 그중 우리나라에서 양식하는 김의 주종을 이루는 것이 방사무늬 돌김이다. 김에는 특히, 칼슘과 인이 풍부하게 함유되어 있으며, 그중에서도 김에 함유되어있는 다당류인 포피란이 앞서 제시한 바와 같이, 항암, 항바이러스, 항응고작용 등의 생리효과를 가진다는 사실이 알려져 있다.

본 발명에서 이용되는 우뭇가사리는 우뭇가사리(Gelidium amansii)는 홍조식물 우뭇가사리과의 바닷말로, 한국, 일본, 인도네시아 등에 분포하며, 조간대 중부 및 하부에서 바위에 서식하고, 크기는 10 내지 30cm이고, 나비는 약 1mm이다. 식물체는 뭉쳐나고 선상이며, 편압된 줄기와 양 가장자리에서 우상(羽狀)으로 갈라지는 가지로 이루어져서 전체가 부채 모양으로 퍼진다. 우뭇가사리는 보통 이 속에 속하는 식물을 대표하는 말로서도 쓰이며, 한천질(寒天質)을 포함하므로 한천 제조의 주원료로 이용되는 해초들로서 일찍부터 잘 알려졌다. 한국에는 우뭇가사리 외에 애기우뭇가사리, 실우뭇가사리, 막우뭇가사리와 인접된 속인 개우무(Pterocladia tenuis) 등이 있다. 특히 우뭇가사리와 개우무가 한천 원료로 많이 이용된다. 한천은 우뭇가사리를 주원료로 하여 개우무, 석묵, 단박 등의 홍조식물을 10∼20 % 가량 섞어서 만든다. 그 밖에 꼬시래기 싹새기 등도 한천 원료로 이용되나 이들은 각각 제조 방법이 달라서 함께 섞어서 쓰지 않는 것이 보통이다. 우뭇가사리는 다년생 식물로서 그 생활사는 배우체에 의한 유성세대와 사분 포자체에 의한 무성세대가 매우 규칙적으로 반복된다. 지방에 따라서 생육 시기에 약간의 차이가 있지만 대체로 5∼11월에 생육한다. 이 시기가 지나면 모체는 점차 녹아 없어지며 기부의 가는 줄기만 남게 된다. 그리하여 봄이 되면 다시 남아 있던 기부에서 새로운 직립부를 형성하는 한편 포자에서 발아한 개체도 자라서 함께 번성한다.

상기 꽃송이버섯(Sparassis crispa)은 민주름버섯목 꽃송이버섯과의 버섯이다. 전 세계에 1과 1속 2종이 보고되어 있다. 자실체는 하얀 꽃 모양으로 10~25㎝ 크기의 꽃양배추 모양을 하고 있다. 색은 전체적으로 담황색 또는 흰색이고 두께는 1mm 정도로 평평하며 갓 둘레는 물결 모양인데 표면은 백색에서 담황색의 색깔을 지니고 있다. 가을에 소나무, 잣나무, 낙엽송, 너도밤나무, 메밀잣나무 등 침엽수 또는 활엽수의 뿌리 부근 땅 위나 그루터기 위에 단생하는 근주심재 갈색 부후성 버섯이다. 흔하게 발견되지 않아 귀하게 대접받는 버섯중의 하나이다. 꽃송이버섯은 우리나라, 일본, 중국, 북아메리카, 유럽, 오스트레일리아 등에 분포하고 있으며 식용버섯으로서 씹는 맛이 좋고 송이버섯과 같은 향이 나므로, 꽃모양을 하고 있는 송이버섯과 같다고 하여 '꽃송이버섯'이라고 부른다. 특히 꽃송이버섯은 일본 동경 약학대학의 연구 그룹에서 발표하여 건강보조식품으로 판매되고 있으며 꽃송이버섯 자실체 생산에 대한 인공재배는 1998년 봄, 일본 사이타마현 쿠마가야 농업고등학교의 후쿠시마 선생이 연구하여 성공하여 인공재배가 가능해졌다. 최근의 연구에서 면역력을 높이고 암을 방지하는 성분은 베타(1→3)D 글루칸이라고 해명되었는데 꽃송이버섯의 성분을 조사하는 과정에서 상상도 못할 만큼 베타글루칸이 많이 함유되어 있는데, 브라질산 아가리쿠스버섯보다 약 3배 이상이나 함유하고 있다는 사실이 밝혀졌다.

상기 신령버섯(Agaricus blazeii)은 아가리쿠스버섯(Agaricus) 또는 흰들버섯이라고도 하며, 분류상 주름버섯목 주름버섯과, 원산지는 아메리카, 분포지역은 미국 플로리다주 일대와 라틴아메리카 북부 고원지대, 자생지는 미국 플로리다주 및 브라질의 산간지대, 크기는 자루 5~10㎝, 갓 6~12㎝로, 생김새는 양송이와 비슷하지만, 자루가 양송이보다 두껍고 길다. 그리고 갓의 겉부분은 발생 조건에 따라 흰색·갈색 또는 옅은 갈색을 띠지만, 자루는 희고 들에서 자생하는 버섯 가운데 가장 무거운 편에 속하며, 포자의 갈변(褐變)이 늦고, 마른 오징어나 멸치 냄새 같은 구수한 향이 나며, 씹으면 단맛이 난다. 1944년 미국 플로리다주(州)에서 처음 발견된 뒤, 1960년대 중반 브라질의 산악지대인 피아다데의 원주민들이 식용한다는 사실이 밝혀지면서 널리 알려지기 시작하였으며, 북아메리카와 중남미 일부 지역에서 자생하는 것으로 알려져 있을 뿐 다른 지역에서는 보고된 적이 없다. 단백질·지방·섬유질·비타민·무기염류·아미노산·필수지방산·핵산 등 각종 영양소가 풍부하고, 암을 비롯한 각종 성인병에 좋다는 사실이 알려지면서 1990년대를 전후해 인공재배 연구가 이루어지기 시작하였다. 그 결과 1992년 일본에서 처음으로 인공재배에 성공하였고, 현재는 한국·중국에서도 인공적으로 재배되고 있으며, 자연 상태로 채취하면 바로 썩기 시작하기 때문에 날것으로는 보관하기 어렵고, 주로 동결건조 방법을 이용해 보관한다.

상기 저령(Polyporus umbellatus)은 주령, 시령, 저시령, 지오도, 희령, 가저시 등의 이명으로도 불리며, 분류상 담자균류 민주름버섯목 구멍장이버섯과에 속하는 버섯으로, 가을에 활엽수림 내의 특히 오리나무, 참나무, 단풍나무나 떡갈나무 등의 산뿌리에 기생하며 그 성미는 달고 쓰다. 주로 한국·일본·유럽·중국·미국 등에 분포하며, 자루는 밑동에서 몇 번 갈라지며 갓은 각 가지의 끝에 핀다. 높이는 10~20cm, 지름은 10~30cm이다. 균핵은 불규칙한 괴상으로 생강과 비슷한 것이 많고 표면은 특이한 형태를 보이며 황백색 또는 족제비색이다. 마치 돼지 변과 비슷하여 ‘저령’이란 명칭이 붙었다. 자실체는 복잡하게 가지친 자루와 갓으로 된다. 불규칙한 긴 덩어리이거나 원형에 가까운 덩어리로 크기는 고르지 않으며 긴 것은 대개 굽어 있거나 생강처럼 갈라지며 길이 5~25cm이다. 표면은 흑색이거나 흑갈색으로 쭈그러져 있거나 혹은 혹모야의 돌기가 있다. 가볍고 질기며 단면은 유백색이거나 황백색을 띤다. 저령은 수분대사를 원활하게 하는 효능이 있으며, 소변을 잘 보지 못하거나 온몸에 부종이 있을 때 이용하고 임신중에 소변을 잘 보지 못하고 다리고 붓는 증상, 소화기능이 약하여 속이 차고 설사를 하는 증상에 좋다. 이뇨, 항균, 항종양, 해열, 급성요도염 등에도 쓰인다. 만기 원발성 폐암, 간암에도 효과가 있으며, 만성 병독성 간염에도 효과가 있다.

상기 김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령 혼합 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 극성용매를, 가장 바람직하게는, 물을 첨가하여 열수 추출한다.

또한, 본 발명에 의한 김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯, 신령버섯, 및 저령을 혼합한 추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다.

김 또는 우뭇가사리, 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령을 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조한다. 건조한 홍조류 또는 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령 혼합물(1 : 1 : 1의 중량비, 단 버섯 혼합 추출물은 다양한 조성비로 형성될 수 있다.)을 추출용기에 넣고, 적당량의 추출 용매에 적절한 온도에서 일정 시간 추출한다. 상기 추출물은 여과되고, 동결건조기 등을 이용하여 농축될 수 있다.

상기 추출 용매로는 물(정제수), 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 극성용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 물을 사용한다.

상기 추출 용매의 양은 생약 건조 중량의 2 ~ 10 배로 한다.

상기 침적 온도는 30 ~ 90℃ 이며, 보다 바람직하게는 60 ~ 80℃이며, 가장 바람직하게는 70℃ 정도로 유지하는 것이 부패, 변색 및 변취의 예방에 가장 효과적이다.

상기 침적 시간은 5 ~ 20 시간이며, 바람직하게는 10 시간이다.

상기 김 또는 우뭇가사리 추출물 및 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령 혼합 추출물을 수득한 후, 거름종이 등을 이용하여 고형분을 제거하고, 현탁액을 원심분리 시키고, 상층액을 동결 건조할 수 있다.

본 발명의 조성물에서 상기 김 또는 우뭇가사리 추출물과, 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령으로 이루어진 혼합 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 각각 0.1 ~ 20 중량% 함유될 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 김 또는 우뭇가사리 및 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령 혼합 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 김 또는 우뭇가사리 및 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물로 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 혼합 추출물을 함유하는 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 김 또는 우뭇가사리 및 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령 혼합 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[제조예 1]김 또는 우뭇가사리 추출물의 제조

김 또는 우뭇가사리를 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조한다. 건조한 김 또는 우뭇가사리 각각 100g을 파쇄기에 곱게 파쇄하여 정제수 500ml에 침지시켜 70℃ 수욕조에서 10시간 이상 온탕하였다. 얻어진 추출액을 실온으로 냉각시키고 거름종이로 여과하여 여과액을 취하여 홍조류추출물인 김 또는 우뭇가사리 추출물을 제조하였다.

[제조예 2]꽃송이버섯, 신령버섯, 저령 혼합 추출물의 제조

꽃송이버섯, 신령버섯, 저령을 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조한다. 건조한 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령 혼합물(1 : 1 : 1) 100g을 파쇄기에 곱게 파쇄하여 정제수 500ml에 침지시켜 70℃ 수욕조에서 10시간 이상 온탕하였다. 얻어진 추출액을 실온으로 냉각시키고 거름종이로 여과하여 여과액을 취하여 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령으로 이루어진 버섯 혼합 추출물을 제조하였다.

[실험예 1] 항산화 활성 실험

제조예 1에서 형성된 김 또는 우뭇가사리 추출물과 제조예 2에서 꽃송이버섯, 신령버섯, 저령으로 제조된 버섯 혼합 추출물의 항산화 활성을 확인하기 위하여 일반적으로 항산화 활성을 측정하는 방법인 DPPH 라디칼을 이용하여 측정하였다.

김 또는 우뭇가사리 추출물과 버섯 혼합 추출물 100ul와 항산화 측정 용액인 0.2mM DPPH 용액을 100ul씩 혼합하여 37℃에서 30분간 반응시킨 후 ELISA 리더(reader)를 이용하여 파장 520nm에서 흡광도를 측정하였다.

항산화제로 알려진 비타민C와 함께 실험하여 추출물이 어느 정도의 활성을 갖는지를 상대적으로 비교해보았다. 실험결과 하기 표 1에서와 같이 김 또는 우뭇가사리 추출물이 항산화 효과를 갖음을 확인하였다.

시료명	비타민 C	우뭇가사리추출물	김추출물	버섯혼합 추출물
SC₅₀	100ug/ml	0.7%	0.8%	1.7%

[실험예 2]세포독성 완화 효과 시험

섬유아세포(Human fibroblast)를 96웰 플레이트(96-well plate)의 각 웰에 5x10⁴ 세포를 분주하여 10% 우태아 혈청이 함유된 배지에서 24시간 동안 배양한다. 그 후 우태아 혈청이 없는 배지로 교체하고, 상기 김 또는 우뭇가사리 추출물과 버섯 혼합 추출물을 배양액 내에 최종농도 100ppm이 되도록 첨가한 후, 4시간 후에 0.02% 소듐 도데실 설페이트(Sodium dodecyl sulfate : SDS)를 첨가하여 24시간 동안 배양하였다. 배양이 끝난 후에 5㎎/㎖의 황색 테트라졸리움염(MTT) 용액을 웰당 10㎕ 씩 가한 후, 4시간 후에 황색 테트라졸리움염 용액을 제거하고, 디메칠설폭시드(DMSO)를 웰당 100㎕씩 가한 다음, 10분간 용해하여 스펙트로포토메터(spectrophotometer: Molecular Devices, USA)를 이용하여 570nm의 흡광도를 측정 하였다. 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

시 료	세포생존율 (%)
음성대조군(-SDS)	100.0
양성대조군(+SDS)	12.5
SDS + 김 추출물	69.5
SDS + 우뭇가사리 추출물	68.9
SDS + 버섯 혼합 추출물	75.1
SDS + 김 추출물 및 버섯 혼합 추출물(1:1)	88.4
SDS + 우뭇가사리 추출물 및 버섯 혼합 추출물(1:1)	87.9

상기 실험 수행의 결과, 하기 표 2에서 보는 바와 같이 홍조류 추출물과 버섯 혼합 추출물을 함께 사용한 것이 홍조류 추출물 혹은 버섯 혼합 추출물 각각을 사용한 것에 비해 우수한 세포독성 완화 효과를 나타내었다.

[실험예 3]NO 생성량

LPS로 산화적 스트레스를 유발시킨 RAW 264.7 세포에서 상기 제조예의 홍조류 및 버섯 혼합 추출물이 NO 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 다음 시험을 수행하였다. 24 웰플레이트에 8X10⁵ 세포를 주입하여 부착시키고 상기 추출물들을 100㎍/ml로 처리하여 2시간 배양한 후 LPS (1㎍/㎖)를 첨가하여 20시간 배양하였다. 100㎍의 배지 상등액에 50㎍의 1% 셀파닐아미드와 50㎍의 0.1% 나프틸렌디아민 디히드로클로라이드를 넣어 실온에서 10분간 반응시킨 후, 550nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 표준곡선은 NaNO₂를 농도별로 조제하여 사용하였다.

시료명	추출물 비처리군	김추출물	우뭇가사리추출물	버섯 혼합 추출물	김 추출물 및 버섯 혼합 추출물(1:1)	우뭇가사리 추출물 및 버섯 혼합추출물(1:1)
NO생성량(㎛)	12.1	5.9	5.8	8.2	4.9	4.8

상기 시험을 통하여 홍조류 추출물 및 버섯 혼합 추출물을 함께 처리하였을 때 NO의 생성이 가장 많이 억제되는 것을 확인하였다.

[실험예 4]지질 과산화

LPS로 산화적 스트레스를 유발시킨 RAW 264.7 세포에서 상기 제조예의 홍조류 및 버섯 혼합 추출물이 지질 과산화 정도에 미치는 영향을 TBARS 함량측정을 통하여 알아보았다. 24 웰플레이트에 8X10⁵ 세포를 주입하여 부착시키고 상기 추출물들을 100㎍/ml로 처리하여 2시간 배양한 후 LPS (1㎍/㎖)를 첨가하여 20시간 배양하였다. 200㎍의 배지 상등액에 400㎍의 TBARS 용액을 가한후 95℃에서 30분간 반응시킨 후, 4000rpm에서 10분간 원심분리하고 상등액을 취하여 532nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 표준곡선은 1,1,3,3-TMP(Tetramethoxypropane)를 농도별로 조제하여 사용하였다.

시료명	김 추출물	우뭇가사리 추출물	버섯 혼합 추출물	김 추출물 및 버섯 혼합 추출물(1:1)	우뭇가사리 추출물 및 버섯 혼합 추출물(1:1)
TBARS IC₅₀ (㎍/ml)	248.8	250.9	187.9	118.2	119.7

상기 시험을 통하여 홍조류인 김 추출물 또는 우뭇가사리 추출물 및 버섯 혼합 추출물을 함께 처리하였을 때 지질 과산화를 억제하는데 가장 우수한 효과가 있음을 알 수 있었다.

[제조예 5] 실시예 및 비교예

상기 제조예 중에서 김 추출물 또는 우뭇가사리 추출물(비교예1,3)과 버섯 혼합 추출물(비교예2) 및 김 추출물 또는 우뭇가사리 추출물 및 버섯 혼합 추출물(실시예 1, 2)을 함유하는 화장료를 제조하고, 이와 비교하기 위하여 추출물이 결여된 화장료 조성물(비교예 3)을 하기 표 5의 조성비로 제조하였다.

구분	함량(중량%)
성분	실시예1	실시예2	비교예1	비교예2	비교예3	비교예4
김 추출물	1.0	-	2.0	-	-	-
우뭇가사리 추출물	-	1.0	-	-	2.0	-
버섯 혼합 추출물	1.0	1.0	-	2.0	-	-
세테아릴 옥타노에이트	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
이소프로필 팔미테이트	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
폴리아크릴아마이드/C13-14이소파라핀/라우레스-7	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
폴리소르베이트60	1.7	1.7	1.7	1.7	1.7	1.7
솔비탄 세스퀴올리에이트	1.3	1.3	1.3	1.3	1.3	1.3
향료, 방부제	정량	정량	정량	정량	정량	정량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량
합계	100	100	100	100	100	100

[시험예 5]항염증 실험

김 추출물 및 버섯 복합 추출물에 대한 항염증 효과를 알라보기 위하여 ICR 마우스 5마리씩 총 7군으로 나누어 실험하였다. ICR 마우스의 우측귀를 시험 부위로 하여 시료를 적용하기 전 에탄올로 귀를 깨끗하게 세척하고 시료 20㎕를 1일 1회 4일간 지속적으로 도포하고 마지막 도포 1시간 후 우측 귀에 아라키돈산을 2㎎/ear을 도포하여 1시간 후 귀의 부종 정도를 마이크로미터로 양쪽 귀를 3회씩 반복 측정하였다. 항염 효과는 아라키돈산 처리군을 기준으로 다음 수학식 2과 같이 부종 억제율을 판정하였으며 그 결과를 다음 표 6에 나타내었다. 그 값은 각 군의 평균값으로 나타내었다.

A : 대조군 귀의 변화 (시료처리 후 귀의 두께 - 시료처리 전 귀의 두께)

B : 시료처리군의 귀의 변화 (시료처리 후 귀의 두께 - 시료처리 전 귀의 두께)

	귀두께(㎛)		염증 억제율(%)
	시료처리 전	시료처리 후	염증 억제율(%)
대조군	253	551	-
실시예1	249	329	73.2
실시예2	254	322	77.2
비교예1	257	419	45.6
비교예2	251	347	67.8
비교예3	256	410	48.3
비교예4	256	540	4.7

상기 표 6에 나타난 결과로부터, 실시예 1 및 2가 가장 높은 항염증 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

[시험예 6] 인체 피부 첩포시험

과거력상 피부자극에 과민반응을 보인 적이 없으며, 현재 피부병 내지 피부 알러지 증상이 없는 20-30대 여성 20명을 대상으로 인체 피부 첩포시험을 통하여 자극 완화 효과를 확인하였다. 피부 자극 물질인 락틱산 5.0%를 자극원으로 첨가한 실시예1,2 및 비교예 1~4를 사용하였다. 우선 시험부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시켰다. 준비된 시험물질을 15 ㎍씩 핀챔버(Finn chamber, 100x10, EPITEST, 핀란드) 내에 적하시킨 후 시험대상자의 전박 (forearm) 안쪽 부위에 밀폐첩포하였다. 24시간 동안 첩포하고 첩포를 제거한 후 마킹펜으로 시험부위를 표시하였다. 표시 후 각각 1시간 및 24시간 후에 확대경 (8MC-150, DAZOR, 미합중국)을 이용하여 시험 부위를 관찰하여 홍반 및 부종 유무를 관찰하였다. 피부반응은 국제접촉피부염연구회 (ICDRG, International Contact Dermatitis Research Group)의 규정에 따라 판정하였으며, 그 결과를 표 7에 나타나있다.

* 피부반응의 평가 기준 및 점수

기 호 점수 평가 기준

- 0 무반응

± 0.5 희미한 또는 가벼운 홍반

+ 1 경계가 뚜렷하나 약한 홍반, 부종 및 구진

++ 2 뚜렷한 홍반, 구진 및 소수포

+++ 3 심한 홍반 및 대수포, 가피형성

시험물질	1 시간 후	24 시간 후	반응도 (%) (n=20)
시험물질	± + ++	± + ++	반응도 (%) (n=20)
실시예1 + 5% 락틱산 실시예2 + 5% 락틱산 비교예1 + 5% 락틱산 비교예2 + 5% 락틱산 비교예3 + 5% 락틱산 비교예4 + 5% 락틱산	6 - - 6 - - 7 1 - 9 1 - 9 1 - 12 2 -	1 - - 1 - - 2 - - 2 - - 2 - - 2 1 -	2.92 2.88 4.58 5.42 4.59 8.33

상기 표 7에서 알 수 있듯이, 본 발명의 김 추출물 및 버섯 혼합 추출물을 함유한 실시예1 및 2가 비교예 1~3에 비하여 락틱산에 의해 유발된 피부자극 완화 효과가 우수함을 알 수 있었다.

앞선 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 홍조류 추출물(김 또는 우뭇가사리 추출물) 및 버섯 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 조성하여 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

[제형예 1]유연 화장수

홍조류 추출물 및 버섯 혼합 추출물을 함유한 유연 화장수의 제형예는 다음 표 8의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량%)
홍조류 추출물 및 버섯 혼합 추출물	1.00
1,3-부틸렌글리콜	1.00
디소듐이디티에이	0.05
알란토인	0.10
디포타슘글리시리제이트	0.05
시트릭애씨드	0.01
소듐시트레이트	0.02
글리세레스-26	1.00
알부틴	2.00
하이드로제네이티드캐스터오일	1.00
에탄올	30.00
보존제	미량
착색제	미량
착향제	미량
정제수	잔량

[제형예 2]영양 크림

홍조류 추출물 및 버섯 혼합 추출물을 함유한 영양크림의 제형예는 다음 표 9의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량%)
홍조류 추출물 및 버섯혼합 추출물	4.0
1,3-부틸렌 글리콜	7.0
글리세린	1.0
D-판테놀	0.1
식물 추출물	3.2
마그네슘알루미늄실리케이트	0.3
PEG-40 스테아레이트	1.2
스테아릭애씨드	2.0
폴리소르베이트 60	1.5
친유형글리세릴스테아레이트	2.0
소르비탄세스퀴올리에이트	1.5
세테아릴알코올	3.0
미네랄오일	4.0
스쿠알란	3.8
카르릴릭/카프릭트리글리세라이드	2.8
식물성 오일	1.8
디메치콘	0.4
디포타슘글리시리제이트	미량
알란토인	미량
소듐 히아루로네이트	미량
토코페릴아세테이트	적량
트리에탄올아민	적량
보존제	적량
착향제	적량
정제수	잔량

Claims

김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯, 신령버섯 및 저령으로 이루어진 혼합 추출물을 함유하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물.
김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯, 신령버섯 및 저령으로 이루어진 혼합 추출물을 함유하는 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯, 신령버섯 및 저령으로 이루어진 혼합 추출물을 함유하는 항산화용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 김 또는 우뭇가사리 추출물과 꽃송이버섯, 신령버섯 및 저령으로 이루어진 혼합추출물의 함량은 상기 화장료 조성물 총 중량에 대해서 각각 0.1~20 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형을 선택하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.