KR20190036388A

KR20190036388A - 해죽순 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20190036388A
Application number: KR1020170125521A
Authority: KR
Inventors: 박성민; 이정노; 김용길
Original assignee: 주식회사 코씨드바이오팜
Priority date: 2017-09-27
Filing date: 2017-09-27
Publication date: 2019-04-04

Abstract

본 발명은 해죽순(Nypa fruticans Wurmb. Fruit, NF) 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 피부 염증 개선, 항산화, 피부 자극 완화, 자외선에 의한 피부세포 손상 방지 및 피부 주름 개선효과가 우수한 해죽순 추출물을 함유하여 우수한 피부개선 효과를 발휘한다.

Description

해죽순 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition with extract of Nypa fruticans Wurmb. Fruit}

본 발명은 해죽순 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 해죽순 추출물을 함유하는 피부 염증 완화용, 항산화용, 피부자극 완화용, 자외선에 의한 피부세포 손상 방지용 및 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 환경으로부터 인체를 보호하며, 내부의 수분 및 유용 성분이 밖으로 유출되는 것을 막아주는 장벽기능, 체온조절, 배설 등 다양한 생리적 기능을 담당하고 있는 중요한 기관이다. 그러나, 과학의 발달에 따른 산업화로 인간의 건강에 심각한 영향을 미치게 되었으며 각종 만성 및 난치성 질환과 알레르기 비염, 아토피피부염 등 환경성 질환의 발생 빈도가 크게 증가하는 추세이다.

한편, 염증(炎蒸, inflammation)이란 어떤 자극에 대한 생체조직의 방어반응의 하나로, 조직 변질, 순환장애와 삼출(渗出), 조직 증식의 세 가지를 병발하는 복잡한 병변을 일컫는다. 또한, 여러 가지 형태의 감염(infection)이나 생체 내 대사 산물 중의 자극성 물질에 대한 생체 내 방어기전의 발현이라 할 수 있고, 다양한 화학적 매개체가 염증의 발현 기전에 관여하고 있으며, 그 병인도 매우 복잡하다. 이는 조직의 상해 또는 파괴에 의해 유발되는 국소 보호 반응으로, 상해 유발 물질과 상해된 조직 모두를 파괴, 약화시키거나 차폐하는 작용을 한다. 이러한 염증의 특징은 미세혈관이 천공되고, 혈액 성분이 틈새 공간으로 누출되며, 백혈구가 염증 조직으로 이동한다는 것으로, 통상적으로 홍반, 부종, 통각 과민 및 통증 등의 임상적 증상들을 동반한다. 생체에서 발생되는 염증의 원인으로는 다양한 생화학적인 현상이 관여하고 있으며, 특히 산화질소(nitric Oxide:NO)를 발생시키는 효소인 니트릭옥사이드 신타제(nitric oxide synthase:NOS)와 프로스타글란딘(prostaglandin)의 생합성에 관련된 효소들이 염증 반응을 매개하는데 중요한 역할을 하고 있는 것으로 알려진 바 있다. 이에 L-아르기닌(L-Arginine)으로부터 NO를 생성시키는 효소인 NOS나, 아라키돈산(Arachidonic acid)으로부터 프로스타글란딘류를 합성하는데 관련된 효소인 COX(시클로옥시게나제)는 염증을 차단하는데 있어서 주된 작용을 하고 있다.

최근의 연구 결과에 따르면, NOS는 뇌에 존재하는 bNOS(brain NOS), 신경계에 존재하는 nNOS(neuronal NOS), 혈관계에 존재하는 eNOS(endothelial NOS) 등이 있으며, 체내에 항상 일정수준으로 발현되고 있고, 이들에 의해 소량 생성되는 NO는 신경전달이나 혈관확장을 유도하는 등 정상적인 신체의 항상성 유지에 중요한 역할을 한다.

이에 반하여, 각종 사이토카인(cytokines)이나 외부 자극물질에 의해 유도되는 iNOS(inducible NOS)에 의해 급격히 과량 발생되는 NO는 세포독성이나 각종 염증반응을 일으키는 것으로 알려져 있으며, 만성 염증은 iNOS 활성의 증가와 관련 있다는 연구가 있다. TNF-α와 같은 다기능성 사이토카인(cytokine)은 정상조직에서 발현될 뿐만 아니라 병변 과정에서 그 발현 정도가 증가되며, 특히 암촉진 과정에서 일어나는 피부염증에 중요한 역할을 한다. TNF-α가 인간의 염증성 피부 질환과 관련이 있음은 이미 많이 보고되고 있다.

또한, 여러 염증질환과 알러지(allergy) 현상에 TNF-α에 대한 항체를 처리하였을 때 증상이 완화되었고, TNF-α는 호중성 백혈구를 활성화시켜 과산화수소 생성을 증가시킴으로써 내인성 암촉진제로서의 기능도 하고 있다.

피부 주름 형성에 관련이 있는 결합 조직은 주로 콜라겐 섬유(collagen fiber), 세망섬유(reticular fiber), 엘라스틴 섬유(elastic fiber) 등의 섬유 성분으로 구성되어 있다. 진피 조직 내에 있는 콜라겐과 엘라스틴은 서로 긴밀하게 관련되어 작용함으로써 피부의 유연성과 탄력을 유지하게 하는 중요한 섬유 조직이다.

한편, MMP-1은 MMP(matrix metalloproteinase) 중 하나로, 피부 내에 존재하는 단백질 분해효소이며, 세포 간 형태 형성, 상처 치유, 조직 재생 및 재조직에 중요한 역할을 수행한다. 하지만, 자외선에 노출되었을 때, MMP-1은 체내에서 평소보다 많이 생성되어, 콜라겐과 결합 후 콜라겐을 절단하여 피부 노화를 유발한다. 더욱 구체적으로 설명하자면, 콜라겐 단백질들은 MMP-1 헤모펙신 도메인(hemopexin domain)에 특이적으로 결합하고, 이를 통해 콜라겐의 3차 구조는 풀리게 되는데, 풀린 콜라겐은 MMP-1 촉매활성 도메인(catalytic domain)의 아연 이온과 결합한 후, 절단되는 것이다.

한편, 최근에는 피부에 부작용이 적은 천연 재료를 이용한 화장품이 소비자들에게 각광을 받고 있어 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다. 이에, 본 발명자들은 여러 천연물들에 있어서 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 해죽순 추출물이 탁월한 항염, 항산화, 피부 세포독성 완화, 피부 자극완화, 피부 주름억제 효과를 나타냄을 확인하고, 화장품으로서의 효능을 기대할 수 있다는 것을 발견하게 되어 본 발명을 완성하게 되었다.

대한민국 등록특허 제10-0373776호 (등록일자 2003.02.13)에는, 겨우살이 추출물, 죽순 추출물 또는 글루쿠론산을 유효 성분으로 함유하는 피부 화장료을 포함하는 천연물 함유 화장료 조성물이 기재되어 있다. 대한민국 공개특허 제10-2010-0000081호 (공개일자 2010.01.06)에는 자소잎, 선학초, 엉겅퀴잎, 찔레꽃, 둥글레, 칡뿌리, 오디, 쑥부쟁이, 제비꽃, 원추리, 죽순, 천년초 및 씀바귀로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 산야초 발효액을 화장료 조성물이 기재되어 있다.

본 발명은 해죽순 추출물을 함유하는 피부 염증 개선용, 항산화용, 피부자극 완화용, 자외선에 의한 피부세포 손상 방지용 또는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 개발하여 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 해죽순(Nypa fruticans Wurmb . Fruit, NF) 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물 제공한다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 해죽순 추출물은, 바람직하게 10~95%(v/v) 에탄올 수용액 또는 증류수 중 선택되는 어느 하나의 추출용매에 해죽순을 첨가한 후 10~85℃에서 침지 추출한 것이 좋다. 더욱 바람직하게는 상기 침지 추출 후, 여과, 감압농축 및 동결건조하여 수득한 동결건조물인 것이 좋다.

또한, 본 발명에 있어서, 상기 동결건조물은, 바람직하게 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 및 그의 혼합물로부터 선택되는 어느 하나의 추출용매로 추출한 것이 좋다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 피부 염증 개선용, 항산화용, 피부 자극 완화용, 자외선에 의한 피부세포 손상 방지용 또는 피부 주름 개선용일 수 있다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물의 제형은, 바람직하게 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형; 연고; 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형; 및 두피용 제형; 중에서 선택되는 어느 하나인 것이 좋다.

본 발명은 해죽순 추출물을 함유하여 피부 염증 개선, 항산화, 피부 자극 완화, 자외선에 의한 피부세포 손상 방지 및 피부 주름 개선효과가 우수한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

또한, 본 발명은 천연 추출물을 유효성분으로 함유하여 기존의 여러 화학물질을 함유하여 피부에 자극을 주는 화장료에 대한 소비자의 거부감을 감소시킬 수 있다.

해죽순(Nypa fruticans Wurmb . Fruit, NF)은 천남성과에 속한 식물로서, 미얀마, 인도네시아, 필리핀 등 동남아시아에서 재배되고 있다. 해죽순은 바닷가 갯벌에서 자라는 야자수의 새순으로서, 우리나라에서는 죽순과 닮았다하여 해죽순이라고 부르고 있다. 해죽순은 잇몸 염증에 좋다고 알려져 있으며, 아직까지 화장료의 유효성분으로서 활용되지 않고 있다.

한편, 본 발명은 해죽순 추출물을 함유하는 피부 염증 완화용, 항산화용, 피부 자극 완화용, 자외선에 의한 피부세포 손상 완화용 및 피부주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

건강한 피부를 유지하기 위해서는 신체의 대사 과정 중 발생하는 자외선 조사 또는 염증반응에 의해 매개되는 프리라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생화시켜야 한다. 본 발명의 해죽순 추출물은 우수한 자유라디칼 소거효과, TRPV1 발현 억제효과, 자외선 조사에 의한 세포독성 완화 효과, 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1β의 생성 억제 효과, MMP-1 생성 억제 효과를 나타냄으로써 우수한 피부 염증 완화효과, 항산화 효과, 피부 자극 완화 효과, 자외선에 의한 피부세포 손상 방지 효과, 피부 주름 개선 효과를 발휘한다.

한편, 본 발명의 해죽순 추출물은, 바람직하게 10~95%(v/v) 에탄올 수용액 또는 증류수 중 선택되는 어느 하나의 추출용매에 해죽순을 첨가한 후 10~85℃에서 침지 추출한 것이 좋다. 더욱 바람직하게는 상기 침지 추출 후, 여과, 감압농축 및 동결건조하여 수득한 동결건조물인 것이 좋다. 상기와 같이 추출된 해죽순 추출물은 더욱 우수한 피부 개선 효과를 발휘한다.

이때, 해죽순 추출물을 화장료에 적용시킬 시, 화장료의 제형에 따라 상기 해죽순 동결건조물을 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 및 그의 혼합물로부터 선택되는 어느 하나의 추출용매로 추출한 것을 사용하는 것이 좋다. 상기와 같이 추출한 것을 화장료에 적용시키면 제형 안정성이 우수하다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 해죽순 추출물 함량은 특정한 범위에 한정하는 것은 아니고, 화장료 조성물의 품질 적성을 훼손하지 않으면서 상기에서 설명한 해죽순 추출물의 효과가 발휘되는 범위라면 무방하다. 바람직하게는 화장료 조성물 전체에 대해 동결건조 중량 기준으로 0.001~30.0 중량% 포함되는 것이 좋다. 해죽순 추출물이 화장료 조성물 전체에 대해 동결건조 중량 기준으로 0.001 중량% 미만으로 첨가되는 경우에는 피부개선 효과가 미미하고, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 첨가량 대비 효율성이 떨어진다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 해죽순 추출물 외 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분을 함유하는 것도 무방하다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물의 제형은, 바람직하게 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형; 연고; 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형; 두피용 제형; 중에서 선택되는 어느 하나인 것이 좋다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 본 기술이 속하는 분야에서 통상적인 보조제, 예컨대 친수성 또는 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제 및 염료를 함유할 수 있다. 보조제의 양은 본 기술이 속하는 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 조성물 총중량에 대해 0.01 내지 20 중량%이다. 보조제의 선택 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 수 있다.

이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

[실시예 1: 해죽순 추출물의 제조]

세절하여 음건한 해죽순을 70%(v/v) 에탄올 수용액으로 25℃에서 48시간씩 2회 침지한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 그 후, 상기 동결 건조물이 15중량% 함유되게 정제수를 사용하여 분산 및 용해하여 해죽순 추출물을 제조하였다.

[ 실험예 1: DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정 실험]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득한 해죽순 추출물의 항산화 효과 수준을 확인하고자 하였다.

녹차 추출물과 비타민 E와 같은 항산화제를 비교 사용하였으며, 항산화 측정은 DPPH법을 이용하였다.

DPPH법은 '2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical (DPPH)'라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정하는 방법으로, 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 540 nm에서 자유라디칼 소거율을 측정하는 방법이다.

사용한 시약은 '2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical (Aldrich Chem. Co., MW=618.76)' 0.1 mM 용액으로서 61.88 mg을 메탄올에 용해하여 100 ㎖로 사용하였다. 측정방법은 다음과 같았다.

96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.18 ㎖를 가하고 각각의 시료용액(실시예 1의 해죽순 추출물, 녹차 추출물, 비타민E)을 0.02 ㎖씩 가한 후, 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양한 다음, 540 nm에서의 흡광도(St)를 측정하였다. 공시험은 시료용액 대신 증류수를 사용한 것으로 상기와 동일한 방법으로 흡광도(Bt)를 측정하였다. 시료용액의 블랭크(Blank)는 0.1 mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용한 것으로 상기와 동일한 방법으로 흡광도(Bo)를 측정하였다. 항산화 효과의 결과는 하기 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 그 결과를 표 1에 나타내었다.

St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 540 nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 540 nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 540 nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 540 nm에서의 흡광도

시료명	처리농도(%)	자유라디칼 소거율(%; 항산화 효과)
실시예 1(해죽순 추출물)	0.01	75
녹차 추출물	0.01	35
비타민 E	0.01	30

항산화 효과를 측정한 결과(표 1), 0.01% 처리농도에서 실시예 1의 해죽순 추출물은 녹차 추출물 및 비타민 E보다 우수한 항산화 효과를 발휘하는 것을 확인할 수 있었다.

상기와 같은 결과로부터, 본 발명의 해죽순 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 항산화 효과가 뛰어남을 추론할 수 있었다.

[실험예 2: 피부자극 측정]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득한 해죽순 추출물의 피부 자극을 측정하고자 TRPV1 발현 억제효과 확인하였다.

인간 섬유아세포(Human Dermal Fibroblast neonatal;HDFn)를 배양용 페트리디쉬에 넣고 80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 이후, 상기 실시예 1에서 제조한 해죽순 추출물을 10, 50, 100, 200 ppm 농도로 희석하여 각각 처리하였고, TRPV1의 발현을 위하여 캡사이신을 처리하였다. 대조군으로 완충 용액을 음성 대조군으로 100 nm 캡사이신(시그마)을 각각 처리하였다. 이후 24시간 배양 후, 용균 버퍼(lysis buffer)를 이용하여 단백질을 용균(lysis)하였다. 이후 단백질 BCA 방법으로 단백질을 정량하여 20 ㎍의 단백질을 취하여 SDS-PAGE를 진행하였다. 그 후, PVDF membrane으로 트랜스퍼(transfer) 후 anti-TRPV1을 1:1000으로 냉장에서 24시간 처리 한 다음 검출하였다. 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

샘 플		TRPV1 발현 양 (%)
대조군(완충용액)		100.0
해죽순 에탄올 추출물 10 ppm	캡사이신 100 nm	180.3
해죽순 에탄올 추출물 50 ppm	캡사이신 100 nm	153.4
해죽순 에탄올 추출물 100 ppm	캡사이신 100 nm	80.1
해죽순 에탄올 추출물 200 ppm	캡사이신 100 nm	43.5
음성 대조군(캡사이신 100 nm)		290.5

실험결과, 해죽순 추출물은 농도 의존적으로 TRPV1의 발현을 감소시킴을 확인할 수 있었다. TRPV1을 유도하는 캡사이신만 처리된 음성 대조군은 TRPV1 발현 양이 290.5%로 매우 높음에 반해, 해죽순 추출물 처리 군은 TRPV1의 발현을 43.5%까지 억제시킴을 확인할 수 있었다.

상기의 결과로부터 본 발명의 해죽순 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 피부에 대한 자극을 완화시킨다는 것을 추론할 수 있었다.

[ 실험예 3: 자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과 측정]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득한 해죽순 추출물의 자외선 조사에 의한 세포독성 완화 효과를 측정하고자 하였다.

인간 섬유아세포(Human Dermal Fibroblast neonatal;HDFn)를 94-웰 시험 플레이트에 1×10⁴개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다.

각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 200 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B (UVB) 램프(Model : F15T8, UV B15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 10% FBS가 첨가된 것) 200 ㎕를 첨가하였다. 여기에 해죽순 추출물을 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 세포배양 배지 200 ㎕배지와 MTT 용액(5 ㎎/㎖) 50 ㎕를 넣은 후 2시간동안 37℃ CO₂배양기에서 배양하였다. 배지를 제거하고 DMSO (dimethyl sulfoxide)을 200 ㎕씩 넣어주었다. 5분간 진탕하여 세포를 용해시키고 마이크로플레이트 판독기에서 540 nm 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로 전환 성장 인자 베타(Transforming growth factor beta;TGF-β)를 사용하였다. 자외선에 의한 세포독성 완화율은 하기 수학식 2에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 표 3에 나타내었다.

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 세포생존율

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포생존율

So : 자외선 조사하지 않고 시료를 처리한 웰의 세포생존율

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포생존율

시료명	처리농도	세포독성 완화율(%)
TGF-β(양성 대조군)	10 ng/㎖	20.3
실시예 1(해죽순 추출물)	0.01%	42.5
실시예 1(해죽순 추출물)	0.02%	67.8

해죽순 추출물의 자외선 조사에 의한 세포독성 완화 효과를 측정한 결과(표 3), 0.01% 농도에서는 자외선에 의한 세포독성을 42.5% 완화시켰고, 0.02%에서는 자외선에 의한 세포독성을 67.8% 완화시킴을 확인할 수 있었다.

상기의 결과로부터 본 발명의 해죽순 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 자외선에 의한 세포독성을 효과적으로 방어함으로써, 자외선에 의한 피부세포 손상을 방지할 수 있음을 추론할 수 있었다.

[실험예 4: 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과 측정]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득한 해죽순 추출물의 항염증효과를 확인하고자 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 정도를 측정하였다.

인간 섬유아세포(HDFn)를 24-웰 시험 플레이트에 5×10⁴개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 ㎕의 PBS를 넣었다. 상기 섬유아세포에 자외선B (UVB)램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 500 ㎕를 첨가하였다. 여기에 해죽순 추출물을 처리한 후 5시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 150 ㎕ 취하여 IL-1β를 정량함으로서 해죽순 추출물의 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 판단하였다. IL-1β의 양은 효소면역분석법(Enzyme-linked Immunosorbent Assay ;ELISA)을 이용하여 정량화하였으며, IL-1β의 생성율은 하기 수학식 3에 의해 계산하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다. 또한, 양성 대조군으로 노르디히드로구아이아레트산(nordihydroguaiaretic acid;NDGA)을 사용하였다.

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1β 생성량

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1β 생성량

So : 자외선 조사하지 않고 시료를 처리한 웰의 IL-1β 생성량

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1β 생성량

시료명	처리농도	염증성 사이토카인 발현 억제율(%)
NDGA(양성 대조군)	10 μM	29.7
실시예 1(해죽순 추출물)	0.01%	48.3
실시예 1(해죽순 추출물)	0.02%	72.5

해죽순 추출물 항염증 효과를 측정한 결과(표 4), 해죽순 추출물은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1β의 생성을 0.01% 농도에서는 48.3%, 0.02% 농도에서는 72.5% 억제함으로써, 낮은 농도에서 자외선에 의한 염증 발생을 효과적으로 방어할 수 있음을 확인할 수 있었다.

상기의 결과로부터 본 발명의 해죽순 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물의 우수한 항염증 효과를 추론할 수 있었다.

[실험예 5: 해죽순 추출물의 MMP-1 생성 억제 효과]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득한 해죽순 추출물의 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성 억제 효과를 측정하였다.

인간 정상 피부 세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1×10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 실시예 1의 해죽순 추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 해죽순 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.

배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 4에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 5에 나타내었다.

시료명	처리 농도 (ppm)	activity (%)
시료명	처리 농도 (ppm)	실시예 1
해죽순 추출물	200	92.63
	100	82.50
	50	75.88
	25	63.32
	12.5	52.40
TGF-β	200nM	76.87

상기 표 5의 결과에서 보는 바와 같이, 해죽순 추출물은 농도의존적으로 MMP-1의 생성을 억제(MMP-1 활성 억제)시키는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 본 발명의 해죽순 추출물은 단일 물질이 아닌 여러 물질이 혼합된 추출물 수준에서 양성대조군인 TGF-β와 같은 정도의 MMP-1 억제율을 나타내어, 본 발명의 해죽순 추출물은 MMP-1 생성 억제 효과가 우수함을 알 수 있었다.

상기와 같은 결과로부터, 본 발명의 해죽순 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 피부 주름 억제 효과가 있음을 추론할 수 있었다.

[실시예 2 : 해죽순 추출물을 함유하는 화장료 조성물 제조]

본 실시예에서는 상기 실시예 1에서 수득한 해죽순 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제조하고자 하였다.

제조된 조성물은 점성의 크림형태이고, 그 조성은 하기 표 6에 나타내었다. 우선 하기 표 6의 (나)상을 가열하여 70℃에 보존하였고, (나)상에 (가)상을 가하여 예비 유화 후, 호모믹서로 균일하게 유화하고, 서서히 냉각하여 해죽순 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제조하였다. 한편, 해죽순 추출물이 함유되지 않은 것을 비교제형예 1이라고 하였다.

원료		제형예 1 (중량%)	비교제형예 1 (중량%)
가	스테아릴 알콜	8	8
	스테아린산	2	2
	스테아린산 콜레스테롤	2	2
	스쿠알란	4	4
	2-옥틸도데실알콜	6	6
	폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르	3	3
	글리세릴모노스테아린산 아스테르	2	2
나	해죽순 추출물	5	-
	프로필렌글리콜	5	5
	정제수	to 100	to 100

[실험예 4 : 해죽순 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 가려움증(scratches) 억제 효과 확인]

본 실험예에서는 상기 실시예 2에서 제조한 해죽순 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 가려움증 억제 효과를 확인하고자 하였다.

평소 아토피 병변을 갖고 있는 피부 질환자 40명을 대상으로 20명에는 해죽순 추출물을 함유하는 제형을 나머지 20명에게는 비교제형예 1을 도포 후 3시간 동안 동영상을 촬영하여 긁는 횟수를 관찰하였다. 결과는 하기 표 7에 나타내었다.

	제형예 1	비교제형예 1
긁는 회수/h	5	50

실험결과, 해죽순 추출물을 함유하는 제형예 1을 도포한 피부 질환자는 비교제형예 1을 도포한 피부 질환자보다 피부 긁는 횟수가 현저히 감소됨을 확인할 수 있었다.

Claims

해죽순(Nypa fruticans Wurmb . Fruit, NF) 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 해죽순 추출물은,
10~95%(v/v) 에탄올 수용액 또는 증류수 중 선택되는 어느 하나의 추출용매에 해죽순을 첨가한 후 10~85℃에서 침지 추출한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제2항에 있어서,
상기 해죽순 추출물은,
상기 침지 추출 후, 여과, 감압농축 및 동결건조하여 수득한 동결건조물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제3항에 있어서,
상기 해죽순 추출물은,
상기 동결건조물을 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 및 그의 혼합물로부터 선택되는 어느 하나의 추출용매로 추출한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 해죽순 추출물은,
화장료 조성물 전체에 대하여 동결건조 중량 기준으로 0.001~30.0중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 염증 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
항산화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 자극 완화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
자외선에 의한 피부세포 손상 방지용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 주름 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물의 제형은,
화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형; 연고; 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형; 및 두피용 제형; 중에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.