KR20090085844A

KR20090085844A - 약용식물 추출물을 포함하는 피부 염증 완화용 화장료조성물

Info

Publication number: KR20090085844A
Application number: KR1020080011719A
Authority: KR
Inventors: 이찬우; 김한성; 조선아; 강찬구; 김진웅; 김한곤; 김은경; 구경아; 윤현주; 이범종
Original assignee: (주)아모레퍼시픽; 인제대학교 산학협력단
Priority date: 2008-02-05
Filing date: 2008-02-05
Publication date: 2009-08-10
Also published as: KR100964428B1

Abstract

본 발명은 스트렙토컬론 주벤타스(Streptocaulon juventas) 외 12종의 약용 식물 추출물을 함유함으로써 산화 질소(NO) 매개 염증 및 레티노이드에 의한 피부자극 및 염증을 완화시키는 효과를 가지는 화장료 조성물을 제공한다. 상기 화장료 조성물은 산화질소(NO) 매개 염증과 관련된 피부 질환을 예방할 수 있고, 레티노이드 자극 및 염증으로부터 피부를 보호하고, 염증성 매개분자의 발현을 조절하여 레티노이드에 의한 피부 자극을 완화할 수 있다.

아시아 자생 약용 식물, 레티노이드, 산화 질소, 자극완화, 염증

Description

약용식물 추출물을 포함하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물 {Cosmetic composition containing natural medicinal plant extract for alleviating skin inflammation}

본 발명은 약용식물 추출물을 포함하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 스트렙토컬론 주벤타스(Streptocaulon juventas) 외 12종의 약용 식물 추출물을 함유함으로써 산화 질소(NO) 매개 염증 및 레티노이드에 의한 피부자극 및 염증을 완화시키는 효과를 가지는 화장료 조성물에 관한 것이다.

레티노이드(retinoid)는 각질형성세포에 작용하여 세포의 분화를 촉진하고, 콜라겐 및 엘라스틴의 생성을 증가시켜 두터운 점액층을 형성하며, 각질화를 억제함으로써 피부의 탄력을 증가시키고 주름의 형성을 억제하는 효과를 가지고 있어서 주름 개선용 화장품의 유효성분으로 많이 사용되고 있으며, 여드름, 건선, 각질이상 등의 피부병을 치료하는데도 사용되고 있다.

그러나, 레티노이드는 피부에 도포시 사람에 따라 피부건조, 홍반, 각질, 가려움, 화끈거림 등의 증상을 유발하는 것으로 알려져 있다. 이는 레티노이드 피부 염(reinoiddermatitis)이라고 하는 레티노이드 특화된 자극성 접촉피부염의 특징적인 증상이다. 따라서, 레티노이드 도포 치료에 있어 자극을 줄이기 위해 전달체에 유연크림을 첨가하거나 마이크로스폰지 젤 형성 기술(entrapped microsponge gel formulation)을 쓰거나, 투과를 감소시키기 위해 폴리프레폴리머(polyprepolymer)를 넣은 처방을 쓰기도 한다.

이러한 레티노이드의 피부 부작용에도 불구하고 레티노이드는 주름완화 및 그 밖의 약리작용이 뛰어나 지속적으로 사용되고 있으며, 이러한 피부 부작용을 감소시키기 위해서 구조가 다른 레티노이드 유도체를 개발하거나 새로운 제형을 개발하기 위한 연구들도 활발하게 진행되고 있다.

한편, 지금까지의 저자극성 피부용 화장품들은 자극을 일으킬 여지가 있는 유효성분을 제거하여 접촉성 피부염, 알러지성 피부염 등을 일으키지 않도록 개발되어 왔다. 그러나 환경적, 심리적 요인에 의해 민감성 피부 보유자들의 화장품에도 유효성분들의 사용이 요구된다. 이에, 종래 레티노이드 함유 화장품 업계에서는 싸이토카인 및 염증성 매개물질의 조절에 의해 면역반응을 완화시키며, 피부 장벽 강화 기능, 피부 보호 기능을 통해 레티노이드에 의한 피부 자극을 완화시키려는 시도들이 있어 왔다.

일반적으로 자극반응이나 염증반응의 기전을 살펴보면, 사람의 각질형성 세포나 랑게르한스 세포에서는 외부의 물질에 의해 다양한 싸이토카인을 만들어 방출한다. 이러한 싸이토카인은 인체 내 면역 체계 활성화 촉진 물질로서 피부의 자극유발이나 국소적인 염증반응의 진행에 필수적이다. 실제로 자극성 접촉피부염에서 인터루 킨-6(Interleukin-6;IL-6), 인터루킨-1(Interleukin-1;IL-1), 종양 괴사인자-α(Tumor necrosis factor-α; TNF-α)의 증가가 보고된 바 있다. 또한 세포간 유착 분자-1(Intracellular Adhesion Molecule-1;ICAM-1)은 각질형성 세포와 림프구 간의 유착에 있어서 필수적인 분자인데, 피부에서 자극유발이나 국소적인 염증반응이 진행될 때 염증성 싸이토카인인 인터페론-γ (Interferon-γ;IFN-γ)에 의해서 각질형성 세포 표면의 ICAM-1 분자 발현이 단백질 수준 및 유전자 수준에서 증가한다.

이에, 본 발명자들은 스트렙토컬론 주벤타스(Streptocaulon juventas) 외 12종의 아시아 자생 약용 식물 추출물이 산화질소(NO) 매개 염증에 대한 염증 완화 효과를 가지고, 특히 피부노화 방지 및 주름개선 효과가 있어 화장료로서 유용하나 피부 자극 및 염증 등의 부작용으로 인해 그 이용이 어려웠던 레티노이드의 피부 자극을 완화시키는 효과를 가짐을 발견하였다. 따라서, 본 발명의 목적은 산화질소(NO) 매개 염증과 관련된 피부 질환을 예방할 수 있고, 레티노이드에 의한 피부자극 및 염증을 완화시켜 레티노이드 함유 화장품의 자극 완화성분으로 사용할 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 13종의 아시아 자생 약용 식물 중 1종 이상의 추출물을 함유하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물, 특히 레티노이드에 의한 피부 자극 및 염증 완화용 화장료 조성물을 제공한다.

13종의 아시아 자생 약용 식물은 다음과 같다. 스트렙토컬론 주벤타스 (Streptocaulon juventas), 알스토니아 스콜라리스 (Alstonia scholaris), 곰판드라 톤키넨시스(Gomphandra tonkinensis), 아사럼 페텔로티 (Asarum petelotii), 페기아 사멘토사 (Pegia sarmentosa), 알리엄 폴리리점 (Allium polyrrhizum), 아스파라거스 고비커스 이바노바 (Asparagus gobicus Ivanova), 레엄 유니너브 맥심 (Rheum uninerve Maxim), 코리스퍼미엄 몽골리컴 (Corispermium mongolicum), 코리 스퍼멈 칭가니컴 (Corispermum chinganicum), 살솔라 모노테라(Salsola monoptera), 주리네아 몽골리카 맥심 (Jurinea mongolica Maxim), 알리엄 알타이컴 (Allium altaicum).

본 발명의 일실시예에 따른 13종의 아시아 자생 약용식물 추출물을 함유한 화장료 조성물은 산화질소(NO) 매개 염증과 관련된 피부 질환을 예방할 수 있고, 레티노이드 자극 및 염증으로부터 피부를 보호하고, 염증성 매개분자의 발현을 조절하여 레티노이드에 의한 피부 자극을 완화할 수 있다.

13종의 아시아 자생 약용 식물은 다음과 같다. 스트렙토컬론 주벤타스 (Streptocaulon juventas), 알스토니아 스콜라리스 (Alstonia scholaris), 곰판드라 톤키넨시스(Gomphandra tonkinensis), 아사럼 페텔로티 (Asarum petelotii), 페기아 사멘토사 (Pegia sarmentosa), 알리엄 폴리리점 (Allium polyrrhizum), 아스파라거스 고비커스 이바노바 (Asparagus gobicus Ivanova), 레엄 유니너브 맥심 (Rheum uninerve Maxim), 코리스퍼미엄 몽골리컴 (Corispermium mongolicum), 코리스퍼멈 칭가니컴 (Corispermum chinganicum), 살솔라 모노테라(Salsola monoptera), 주리네아 몽골리카 맥심 (Jurinea mongolica Maxim), 알리엄 알타이컴 (Allium altaicum).

상기 약용식물 추출물은 RAW 세포를 이용하여 항염증 효과 예비선별(Prescreening)을 진행함으로써 효능이 우수한 천연 약용식물을 도출한 것이고, 도출된 상기 13종을 이용하여 레티노이드에 의한 피부자극의 형성 과정에 관여하는 염증성 매개인자에 대한 효능을 연구하였다. 그 결과, 염증 반응경로에 관계된 염증성 싸이토카인인 IL-1중에서 IL-1α, IL-6, IL-8, MCP-1 인자가 레티노이드에 의한 피부자극의 형성 과정에 관여하며, 상기 약용식물 추출물이 이들 염증성 매개분자의 발현을 억제함으로써 레티노이드에 의한 피부 자극을 완화시키는 효과를 도모할 수 있음을 발견하였다.

본 발명의 일실시예에 따른 화장료 조성물은 상기 약용식물 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.1~1중량% 함유하며, 상기 약용식물 추출물은 레티노이노이드 자극에 의한 IL-1α, IL-6, IL-8, MCP-1의 발현을 억제하고, 홍반 및 부종 형성 반응을 저해하는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 일실시예에서 레티노이드는 레티놀, 레티날 및 레티노익산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상임을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

스트렙토컬론 주벤타스 (Streptocaulon juventas)는 중국, 베트남 및 동남아시아에서 자생하는 약용식물이며 말린 뿌리는 강장제로 사용되며 뿌리, 줄기, 잎은 발영, 말라리아 치료에 사용된다. 식물은 굽은 형으로 2~5m 가량의 크기로 자라며 줄기와 껍질은 모상의 붉은 갈색이다. 잎은 갈라지지 않는 마주나기로 배열되어 자라며 꽃봉오리는 노란색 또는 갈색으로 타원형이 난다. 전체식물은 유액의 액즙이 있는 특징이 있다. 스트렙토컬론 주벤타스 (Streptocaulon juventas)는 항증식 활성이 있다고 보고되고 있으며 이외의 활성에 대해서는 아직 보고되고 있지 않다.

알스토니아 스콜라리스 (Alstonia scholaris)는 중국, 베트남 및 동남아시아에서 자생하는 약용식물로서 줄기와 껍질을 주로 사용하며 껍질은 강장제 또는 말라리아, 치통과 뱀에 물렸을 때의 치료, 이질 또는 설사 등에 사용된다. 식물은 15~30cm의 크기로 자라며 꽃은 작고 흰색이며 향이 있고 전체식물은 유액의 액즙이 있다. 지금까지 항암, NO 제거 효과, 피임효과, 항균효과 등에 대한 보고가 있다.

곰판드라 톤키넨시스(Gomphandra tonkinensis)는 베트남 및 중국, 동남아시아에서 자생하는 약용식물이며 뿌리는 강장제로 사용되며 2-4m 크기의 식물로서 잎은 긴 달걀 모양이며 끝이 뾰족하다. 꽃과 잎은 마주나기로 잎의 반대편에 피고 뿌리는 덩이뿌리이며 열매에는 털로 덮인 꼭지가 있다.

아사럼 페텔로티 (Asarum petelotii)는 중국, 동남아시아 등에서 자생하는 약용식물로서 허브로 알려져 있으며 식물전체를 약용으로 사용하며 식욕을 돋우고 건과 뼈를 강화시키는 역할을 한다. 이 식물은 뿌리는 직경이 3~4mm정도이며 식용으로 사용되고 잎은 외 잎으로 한 뿌리에 1~2 개의 잎만 가지고 있으며 잎에 털은 없고 반들반들하다.

페기아 사멘토사 (Pegia sarmentosa)는 중국, 동남아시아 등에서 자생하는 약용식물로서 뿌리를 제외한 모든 부분을 사용하며 간질과 어린아이의 경기의 치료 에 사용된다. 이 식물은 낙엽활엽 덩굴성 식물로 알려져 있으며 작은 가지는 털이 없는 자주빛을 띈 갈색이며 원추꽃차례는 8~20cm 크기이다.

알리엄 폴리리점 (Allium polyrrhizum)은 중국, 몽골 등 중앙 및 동아시아 등에서 자생하는 약용식물로서 전통적으로 중국, 몽골 등 중앙아시아 지방에서 음식으로 사용하며 가축의 먹이로 사용되며 뿌리는 구근의 형태로 갈색이며 식용으로 사용 가능하고 덩굴성 식물이다.

아스파라거스 고비커스 이바노바 (Asparagus gobicus Ivanova)는 중국, 몽골 등 중앙 및 동아시아 등에서 자생하는 약용식물로서 줄기, 뿌리, 열매 등이 사용되며 아직까지 정확한 효능은 알려져 있지 않다. 고비사막 등지에서 자라는 식물로서 작은 가축의 먹이로 사용되고 있다.

레엄 유니너브 맥심 (Rheum uninerve Maxim)은 중국, 몽골 등 중앙 및 동아시아 등에서 자생하는 약용식물로서 줄기는 녹색 또는 붉은 보라색이며 가지는 기부에서부터 자라난다.

코리스퍼미엄 몽골리컴 (Corispermium mongolicum)은 몽골 등 중앙 및 동아시아 등에서 자생하는 약용식물로서 10~30cm까지 자라며 꽃은 가늘고 수상은 꽃차례이며 3~6cm의 길이며 얇은 과피에 씨가 하나인 열매를 맺으며 타원형이다.

코리스퍼멈 칭가니컴 (Corispermum chinganicum)는 중국, 몽골 등 중앙 및 동아시아 등에서 자생하는 약용식물로서 10~50cm까지 자라며 줄기는 녹색 또는 붉은 보라색이며 가자는 기부에서 수직으로 자라며 잎은 끝이 뾰족한 직선형이고 열매는 껍질에 갈색의 반점이 있으며 타원형이다.

살솔라 모노테라(Salsola monoptera)는 중국, 몽골 등 중앙 및 동아시아 등에서 자생하는 약용식물로서 줄기에는 많은 가지들이 나있고 다육성 줄기로 10~40cm의 길이이며 잎은 많고 꽃은 한 잎 겨드랑이에서 한 개의 꽃이 핀다.

주리네아 몽골리카 맥심 (Jurinea mongolica Maxim)은 중국, 몽골 등 중앙 및 동아시아 등에서 자생하는 약용식물이며 줄기는 20~30cm의 길이로 가지가 많고 잎도 많다.

알리엄 알타이컴 (Allium altaicum)은 중국, 몽골 등 중앙 및 동아시아 등에서 자생하는 약용식물로서 음식 첨가물로 사용하며 혈액 속의 콜레스테롤 수치를 감소시키며 소화기관을 튼튼하게 해주며 혈액순환을 돕는 작용을 한다. 이 식물은 뿌리는 구근으로 30cm 가량의 크기로 자라며 꽃은 양성화이다.

한편, 상기 언급한 13종의 약용식물들의 항염증 활성에 대해서는 어떠한 연구결과도 보고되어 있지 않다.

본 발명의 일실시예에 따른 약용식물 추출물은 상기 약용식물 13종의 유기용매 추출물이나 압착하여 얻은 오일로부터 분리 정제할 수 있다. 추출 용매로는 정제수(water), 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 또는 석유에테르(petroleum ether) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있고, 특히 에탄올을 사용할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따른 화장료 조성물은 상기 약용식물 추출물을 조성물 총 중량에 대해서 0.1 ~ 10 중량%의 양으로 함유할 수 있다. 이는 추출물의 함량이 0.1중량% 미만이면 효과가 거의 없고, 10 중량%을 초과하면 피부 안전성에 문제가 생길 수 있으므로 바람직하지 않기 때문이다.

본 발명에서 레티노이드(Retinoid)는 비타민 A와 관련된 화합물의 총칭으로, 레티놀(Retinol), 레티날(Retinal), 레티노익산(Retinoic acid)등을 포함할 수 있다. 특히 레티놀은 레틴산의 전구물질로 피부에 흡수된 후 서서히 레틴산으로 변하여 작용하므로 효과는 다소 떨어지지만 부작용이 상대적으로 적어 항노화 또는 주름개선용 화장료 조성물로 많이 쓰인다. 본 발명의 일실시예에 따른 화장료 조성물의 레티노이드는 레티놀, 레티날 및 레티놀익산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 함유할 수 있다.

이하, 본 발명을 시험예에 의거 상세하게 설명하고자 하지만, 본 발명의 권리범위가 이들에 한정되는 것은 아니다.

우선 30종의 아시아 자생 약용식물을 염증완화 기능을 가지는지 확인하기 위하여 일반적인 마우스 대식 세포 RAW 264.7 세포주를 이용하여 염증 억제 정도를 실험하였다(시험예 1). 이를 바탕으로 20% 이상의 염증완화 기능을 가지는 추출물 13종을 선별하여 구체적으로 레티노이드에 특이적인 자극완화 기능을 가지는지 확인하기 위하여, 활성형태인 레티노익산으로 자극을 부여한 세포에서의 염증성 매개분자의 발현량 조절 정도를 실험하였다(시험예 2~3). 또한, 실제 생체에서의 효능 을 평가하기 위하여 토끼를 통한 누적자극 평가를 수행하였으며(시험예 4), 추가로 인체 누적자극 평가를 수행하여(시험예 5) 사람피부에서의 레티노이드에 대한 자극을 완화하는 효과를 최종 확인하였다.

하기 시험예에서 레티놀의 단위인 IU(international unit)는 효소나 비타민의 활성이나 양을 나타내는 단위로, 1 IU는 비타민 A가 결핍된 어린 흰쥐에 비타민 A를 부여하여 체중이 하루에 3g씩 증가되는 비타민A의 양을 말한다.

[ 시험예 1] 항염증 활성 측정 (세포를 이용한 분석)

RAW 246.7 마크로파지 세포주를 10% FBS 페니실린 (100IU/㎖)과 스트렙토마이신 (100㎍/㎖) 포함 DMEM 배지에 넣고 온도 37^oC, 5% CO₂ 배양기에서 세포를 키워 48 웰플레이트에 5 × 10⁵세포수/㎖의 밀도로 300㎕를 분주하고 24시간 후 추출물 시료를 50 ppm의 농도로 처리하였다. 시료 처리 후 1시간 후에 LPS 1㎍/㎖를 처리하여 18시간 후 배지 내에 방출된 NO 양을 그리스 시약(Griess reagent)을 이용하여 측정하였다. 덱사메타손(Dexamethasone)을 처리한 군을 NO의 방출을 저해시키는 항염증 활성의 양성대조군으로 하였고, NO의 양은 표준품 NaNO₂의 측정값과 비교하여 결정하여 NO 방출 억제율(%)을 하기 표 1에 나타내었다.

성분	추출물 농도(ppm)	% 억제율
음성 대조군	-	100
LPS 1㎍/㎖	-	0
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 1(스트렙토컬론 주벤타스)	50	32.2
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 2(알스토니아 스콜라리스)	50	31.6
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 3(곰판드라 톤키넨시스)	50	39.1
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 4(아사럼 페텔로티)	50	48.6
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 5(페기아 사멘토사)	50	44.1
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 6(알리엄 폴리리점)	50	29.3
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 7(아스파라거스 고비커스 이바노바)	50	33.6
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 8(레엄 유니너브 맥심)	50	26.5
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 9(코리스퍼미엄 몽골리컴)	50	24.4
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 10(코리스퍼멈 칭가니컴)	50	37.6
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 11(살솔라 모노테라)	50	21.5
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 12(주리네아 몽골리카 맥심)	50	35.2
LPS 1㎍/㎖ + 실시예 13(알리엄 알타이컴)	50	31.5

[ 시험예 2] 각질 세포주 HaCaT 에서 레티노익산 자극에 의한 IL -1α생합성 억제 효능 확인

각질형성세포 (세포주명: HaCaT, 입수처: Dr. N.E. Fusenig, Deutsches Krebsforschungszentrum, Heidelberg, Germany)를 10%의 우태아 혈청 (Fetal bovine sereum, FBS, 입수처: Gibco, USA)과 1% 페니실린-스트렙토마이신 (Penicillin-Streptomycin, 입수처: Gibco, USA)을 함유한 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, 입수처: Lonza, USA) 배지에서 48 웰 플레이트(48 well plate)에 약 2 x 10⁴ 세포수/웰의 밀도로 분주한 후, 37°C, 5% CO₂ 조건하에서 24시간 동안 배양하였다. 배양액을 제거한 후, 인산염완충용액 (Phosphate buffered saline, PBS) 200ul로 1회 세척하고, 우태아 혈청이 함유되지 않는 DMEM배지 200ul를 넣어 24시간 배양하였다. 이후 1% 우태아 혈청이 함유된 DMEM으로 옮겨, 평가하고자 하는 추출물 시료를 하기 표 2에 언급한 농도로 10분간 처리한 후, 10uM 농도의 레티노익산 (Retinoic acid, 입수처: Sigma-Aldrich, USA)으로 처리하여 24시간 동안 배양시켰다. 그리고 배양액 50ul를 취하여 ELISA 법을 이용하여 쥐의 항인간 IL-1α항체 (입수처:pharmigen, USA)가 코팅된 96 웰 플레이트에 4시간, 쥐의 비오틴화된 항인간 IL-1α 항체 (입수처: pharmigen, USA) 에 1시간, 아비딘-홀스래디시 퍼옥시다제 결합체 (입수처: pharmigen, USA) 에 30분씩 순차적으로 반응시켰다. 반응의 확인은 차광된 형태로 2,2'아지노-비스(3-에틸벤즈티아졸린-6-설폰산) [2,2'azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)] (입수처: Sigma-Aldrich, USA) 으로 30분간 반응시킨 후, 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질인 rh IL-1α (입수처: eBioscience, USA)의 흡광도를 토대로 표준 곡선을 그려 흡광도와 표준물질간의 반응식을 구한 후, 각각 시료의 흡광도를 대입하여 각각의 IL-1α 분비량을 얻었다. 이후 아래의 식에 의해 자극완화율을 평가하였다. 그 결과는 하기 표 2에 나타나 있다.

자극완화율 (%) = 100 x [1-(시료처리군에서의 IL-1α분비량/ 레티노익산 단독처리군에서의 IL-1α분비량)]

성분	추출물 농도 (ppm)	IL-1α 분비량 (pg/ml)	% 자극완화율
음성 대조군	-	0	-
레티노익산(10 μm)	-	180	-
레티노익산(10 μm) + 실시예 1(스트렙토컬론 주벤타스)	100	70	61.24
레티노익산(10 μm) + 실시예 2(알스토니아 스콜라리스)	100	92	48.34
레티노익산(10 μm) + 실시예 3(곰판드라 톤키넨시스)	100	60	66.69
레티노익산(10 μm) + 실시예 4(아사럼 페텔로티)	100	49	72.95
레티노익산(10 μm) + 실시예 5(페기아 사멘토사)	100	47	73.76
레티노익산(10 μm) + 실시예 6(알리엄 폴리리점)	100	126	29.92
레티노익산(10 μm) + 실시예 7(아스파라거스 고비커스 이바노바)	100	178	1.16
레티노익산(10 μm) + 실시예 8(레엄 유니너브 맥심)	100	45	74.81
레티노익산(10 μm) + 실시예 9(코리스퍼미엄 몽골리컴)	100	79	56.02
레티노익산(10 μm) + 실시예 10(코리스퍼멈 칭가니컴)	100	101	43.73
레티노익산(10 μm) + 실시예 11(살솔라 모노테라)	100	115	34.84
레티노익산(10 μm) + 실시예 12(주리네아 몽골리카 맥심)	100	53	70.63
레티노익산(10 μm) + 실시예 13(알리엄 알타이컴)	100	118	34.10
자극완화율은 레티노익산을 처리하지 않은 HaCaT 세포와 레티노익산을 처리한 세포의 IL-1α 생성량의 차이를 기준으로 상기 식에 따라 계산한 것임

[ 시험예 3] 각질 세포주 HaCaT 에서 레티노익산 자극에 의한 IL -6, IL -8, MCP-1 생합성 억제 효능 확인

각질형성세포 (세포주명: HaCaT 입수처: Dr. N.E. Fusenig, Deutsches Krebsforschungszentrum, Heidelberg, Germany)를 10%의 우태아 혈청 (Fetal bovine sereum, FBS, 입수처: Gibco, USA)과 1% 페니실린-스트렙토마이신 (Penicillin-Streptomycin, 입수처: Gibco, USA)을 함유한 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, 입수처: Lonza, USA) 배지에서 48 웰 플레이트(48 well plate)에 약 2 x 10⁴ 세포수/웰의 밀도로 분주한 후, 37°C, 5% CO₂ 조건하에서 24시간 동안 배양하였다. 배양액을 제거한 후, 인산염완충용액 (Phosphate buffered saline, PBS) 200ul로 1회 세척하고, 우태아 혈청이 함유되지 않는 DMEM배지 200ul를 넣어 24시간 배양하였다. 이후 1% 우태아 혈청이 함유된 DMEM으로 옮겨, 평가하고자 하는 추출물 시료를 하기 표 3에 언급한 농도로 10분간 처리한 후, 10uM 농도의 레티노익산 (Retinoic acid, 입수처: Sigma-Aldrich, USA)으로 처리하여 24시간 동안 배양시켰다. 그리고 배양액 50ul를 취하여 IL-6, IL-8, MCP-1에 대한 ELISA 키트를 (입수처: BD pharmigen, USA) 이용하여 이들 싸이토카인의 분비 억제 효과를 평가하였다. 표준물질인 rh IL-6, rh IL-8, rh MCP-1 (입수처: BD pharmigen, USA)의 흡광도를 토대로 표준 곡선을 그려 흡광도와 표준물질간의 반응식을 구한 후, 각각 시료의 흡광도를 대입하여 싸이토카인들의 분비량을 얻었다. 이후 아래의 식에 의해 자극완화율을 평가하였다. 그 결과는 표 3 내지 표 5에 각각 나타나있다.

자극완화율 (%) = 100 x [1-(시료처리군에서의 싸이토카인 분비량/ 레티노익산 단독처리군에서의 싸이토카인 분비량)]

성분	추출물 농도 (ppm)	MCP-1 (pg/ml) 분비량	% 자극완화율
음성 대조군	-	0	-
레티노익산(10 μm)	-	167	-
레티노익산(10 μm) + 실시예 1(스트렙토컬론 주벤타스)	100	100	40.15
레티노익산(10 μm) + 실시예 2(알스토니아 스콜라리스)	100	49	70.76
레티노익산(10 μm) + 실시예 3(곰판드라 톤키넨시스)	100	17	89.62
레티노익산(10 μm) + 실시예 4(아사럼 페텔로티)	100	23	86.29
레티노익산(10 μm) + 실시예 5(페기아 사멘토사)	100	38	77.42
레티노익산(10 μm) + 실시예 6(알리엄 폴리리점)	100	113	32.61
레티노익산(10 μm) + 실시예 7(아스파라거스 고비커스 이바노바)	100	29	82.52
레티노익산(10 μm) + 실시예 8(레엄 유니너브 맥심)	100	10	94.06
레티노익산(10 μm) + 실시예 9(코리스퍼미엄 몽골리컴)	100	19	88.73
레티노익산(10 μm) + 실시예 10(코리스퍼멈 칭가니컴)	100	94	43.70
레티노익산(10 μm) + 실시예 11(살솔라 모노테라)	100	81	51.69
레티노익산(10 μm) + 실시예 12(주리네아 몽골리카 맥심)	100	90	46.14
레티노익산(10 μm) + 실시예 13(알리엄 알타이컴)	100	25	84.96
자극완화율은 레티노익산을 처리하지 않은 HaCaT 세포와 레티노익산을 처리한 세포의 MCP-1 생성량의 차이를 기준으로 상기 식에 따라 계산한 것임

성분	추출물 농도 (ppm)	IL-6 (pg/ml) 분비량	% 자극완화율
음성 대조군	-	0	-
레티노익산(10 μm)	-	297	-
레티노익산(10 μm) + 실시예 1(스트렙토컬론 주벤타스)	100	83	72.00
레티노익산(10 μm) + 실시예 2(알스토니아 스콜라리스)	100	122	58.88
레티노익산(10 μm) + 실시예 3(곰판드라 톤키넨시스)	100	40	86.46
레티노익산(10 μm) + 실시예 4(아사럼 페텔로티)	100	114	61.57
레티노익산(10 μm) + 실시예 5(페기아 사멘토사)	100	92	69.08
레티노익산(10 μm) + 실시예 6(알리엄 폴리리점)	100	289	2.45
레티노익산(10 μm) + 실시예 7(아스파라거스 고비커스 이바노바)	100	355	-19.51
레티노익산(10 μm) + 실시예 8(레엄 유니너브 맥심)	100	35	88.26
레티노익산(10 μm) + 실시예 9(코리스퍼미엄 몽골리컴)	100	125	57.87
레티노익산(10 μm) + 실시예 10(코리스퍼멈 칭가니컴)	100	185	46.20
레티노익산(10 μm) + 실시예 11(살솔라 모노테라)	100	229	23.10
레티노익산(10 μm) + 실시예 12(주리네아 몽골리카 맥심)	100	54	81.98
레티노익산(10 μm) + 실시예 13(알리엄 알타이컴)	100	168	43.40
자극완화율은 레티노익산을 처리하지 않은 HaCaT 세포와 레티노익산을 처리한 세포의 IL-6 생성량의 차이를 기준으로 상기 식에 따라 계산한 것임

성분	추출물 농도 (ppm)	IL-8 (pg/ml) 분비량	% 자극완화율
음성 대조군	-	0	-
레티노익산(10 μm)	-	5753	-
레티노익산(10 μm) + 실시예 1(스트렙토컬론 주벤타스)	100	1713	70.22
레티노익산(10 μm) + 실시예 2(알스토니아 스콜라리스)	100	1597	72.25
레티노익산(10 μm) + 실시예 3(곰판드라 톤키넨시스)	100	2003	65.18
레티노익산(10 μm) + 실시예 4(아사럼 페텔로티)	100	1667	71.03
레티노익산(10 μm) + 실시예 5(페기아 사멘토사)	100	63	98.90
레티노익산(10 μm) + 실시예 6(알리엄 폴리리점)	100	1727	69.99
레티노익산(10 μm) + 실시예 7(아스파라거스 고비커스 이바노바)	100	1823	68.31
레티노익산(10 μm) + 실시예 8(레엄 유니너브 맥심)	100	107	98.15
레티노익산(10 μm) + 실시예 9(코리스퍼미엄 몽골리컴)	100	1997	65.30
레티노익산(10 μm) + 실시예 10(코리스퍼멈 칭가니컴)	100	1640	71.49
레티노익산(10 μm) + 실시예 11(살솔라 모노테라)	100	1857	67.73
레티노익산(10 μm) + 실시예 12(주리네아 몽골리카 맥심)	100	93	98.38
레티노익산(10 μm) + 실시예 13(알리엄 알타이컴)	100	2873	50.06
자극완화율은 레티노익산을 처리하지 않은 HaCaT 세포와 레티노익산을 처리한 세포의 IL-8 생성량의 차이를 기준으로 상기 식에 따라 계산한 것임

[ 시험예 4] 동물시험을 통한 약용식물 추출물의 레티놀 홍반 자극 완화효능 평가

하기 표 6에 나타낸 조성물을 뉴질랜드 흰토끼의 등 피부에 1일 2회 간격으로 4일간 총 8회 도포를 2회 반복실시 하였다.

물질 도포 후, 홍반 및 가피형성 평점과 부종형성 평점 값을 누적시켜 피부누적자극 지수를 구하였다. 피부누적자극 지수는 하기 표 7에 나타낸 판정 기준에 따라 평가하였고, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다. 사용한 자극 지수는 일반적으로 많이 이용되는 Draize의 1차 자극 지수(Primary Irritation Index) 산출 방법에 따른 것이다. 자극완화율은 하기 식을 사용하여 구하였다.

자극완화율(%)= 100×(1-{시료처리군에서의 지수의 합}/{레티놀 및 부형제만 처리한 군에서의 지수의 합})

조성물	약용식물추출물 농도(%)	% 자극완화율
(+)레티놀 3000IU + 부형제(Vehicle) : 비교예	-	-
(+)레티놀 3000IU + 실시예 1(스트렙토컬론 주벤타스)	1%	21.3
(+)레티놀 3000IU + 실시예 2(알스토니아 스콜라리스)	1%	20.7
(+)레티놀 3000IU + 실시예 3(곰판드라 톤키넨시스)	1%	32.6
(+)레티놀 3000IU + 실시예 4(아사럼 페텔로티)	1%	19.4
(+)레티놀 3000IU + 실시예 5(페기아 사멘토사)	1%	28.4
(+)레티놀 3000IU + 실시예 6(알리엄 폴리리점)	1%	17.8
(+)레티놀 3000IU + 실시예 7(아스파라거스 고비커스 이바노바)	1%	29.5
(+)레티놀 3000IU + 실시예 8(레엄 유니너브 맥심)	1%	26.4
(+)레티놀 3000IU + 실시예 9(코리스퍼미엄 몽골리컴)	1%	33.2
(+)레티놀 3000IU + 실시예 10(코리스퍼멈 칭가니컴)	1%	15.3
(+)레티놀 3000IU + 실시예 11(살솔라 모노테라)	1%	18.6
(+)레티놀 3000IU + 실시예 12(주리네아 몽골리카 맥심)	1%	20.8
(+)레티놀 3000IU + 실시예 13(알리엄 알타이컴)	1%	17.4
자극완화율은 레티놀을 도포하지 않은 군과 도포한 군의 누적자극지수의 차를 기준으로 하여 상기 식에 따라 계산한 것임

피부자극정도	평점
1) 홍반과 가피형성 홍반이 없음 아주 경도의 홍반 (육안으로 겨우 식별할 정도) 명료한 홍반 중등도의 강한 홍반 심홍색의 강한 홍반과 가피 형성	0 1 2 3 4
2) 부종 형성 부종 없음 매우 가벼운 부종 (육안으로 겨우 식별할 정도) 명료한 부종 (주위와 명료한 구분이 됨) 중등도의 강한 부종 (1mm 정도 부어 올랐을 경우) 강한 부종 (1mm 이상 부어오르고 노출 부위 밖에까지 확장된 상태	0 1 2 3 4
피부일차자극지수(Promary irritation index, P.I.I) = (홍반 평점과 부종 평점의 합의 평균치)/4

상기 표 6의 결과로부터, 본 발명의 일실시예에 따른 약용식물 추출물이 레티놀에 의한 피부 자극을 완화시키는 효능이 있는 것을 알 수 있었다.

[ 시험예 5] 인체시험을 통한 약용식물 추출물 함유 제형의 레티놀에 의한 피부홍반 완화효능 평가

시험에 들어가기 전 한달 동안 비스테로이드성 항염증제 및 기타 스테로이드 제제를 복용한 경력이 없는 건강한 자원자를 대상으로 본 발명의 일실시예에 따른 약용식물 추출물의 레티놀에 의한 피부홍반 유발억제 효과를 CTFA(The Cosmetic Toiletry and Fragrance Association)의 안전성 평가 지침(Safety Testing Guideline, 1981, p3)에 따라 평가하였다. 즉, 15명의 피검자의 전박 안쪽에 하기 표 8의 처방과 같이 제형화한 조성물을 하루에 두번씩 도포하고 (50 ㎕/1.5×1.5 ㎠), 흡수를 돕기 위해 랩(wrap)으로 3시간 동안 싸두었다. 시험 기간은 피검자의 반응 정도와 피부 상태를 고려하여 조정하였으며 최대 3주로 하였다. 검사는 매일 오전 도포 전에 시행하였고, 마지막 검사는 첩포 시행일로부터 8일 후까지 실시하였다. 자극의 회복 정도를 반영하기 위해 첩포 종료 후에도 계속 평가하였고, 홍반이 완전히 사라지고 색소 침착만 남은 경우에는 점수를 부여하지 않았다. 각 검사 시점에서 하기 표 9의 판정 방법에 따라 자극정도를 평가하였고, 그 합으로부터 상기 식에 의해 자극완화율을 계산하여 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다.

성분	함량(중량%)
성분	비교예	시료처리군
약용 식물 추출물 (실시예 1-13)	-	1.0
레티놀	3000IU	3000IU
밀납	4.00	4.00
폴리솔베이트	1.50	1.50
솔비탄세스퀴올레이트	0.70	0.70
유동파라핀	5.00	5.00
카프릴릭 / 카프릭트리글리세라이드	5.00	5.00
글리세린	3.00	3.00
부틸렌글리콜	3.00	3.00
프로필렌글리콜	3.00	3.00
카르복시비닐폴리머	0.10	0.10
트리에탄올아민	0.20	0.20
방부제	적량	적량
색소	적량	적량
향료	적량	적량
정제수	to 100	to 100

피부의 자극정도	평점
경도의 홍반(mild erythema)	1
심한 홍반 (intense erythema)	2
부종을 동반한 심한 홍반 (intense erythema with edema)	3
부종과 수포를 동반한 심한 홍반 (intense erythema with edema and vesicle)	4

조성물	자극완화율(%)
비교예	-
실시예 1 처리군	26.8
실시예 2 처리군	11.4
실시예 3 처리군	28.8
실시예 4 처리군	26.4
실시예 5 처리군	36.7
실시예 6 처리군	9.4
실시예 7 처리군	13.2
실시예 8 처리군	16.8
실시예 9 처리군	29.1
실시예 10 처리군	16.7
실시예 11 처리군	32.5
실시예 12 처리군	15.5
실시예 13 처리군	13.0

상기 표 10으로부터, 본 발명의 일실시예에 따른 약용식물 추출물을 함유한 조성물 제형은 사람의 피부에서 레티놀에 의한 홍반 유발을 억제하는 효능이 있는 것을 확인하였다.

본 발명의 일실시예에 따른 화장료 조성물은 레티노이드에 의한 피부자극 및 염증 생성을 방지 또는 완화시키고, 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 보디로션, 보디크림, 보디오일, 보디에센스 등의 화장료 제형을 가질 수 있으며 또한 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투과형 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있다.

또한, 각각의 제형에 있어서 다른 성분들은 기타 외용제의 종류 또는 사용목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합 할 수 있다.

Claims

스트렙토컬론 주벤타스 (Streptocaulon juventas), 알스토니아 스콜라리스 (Alstonia scholaris), 곰판드라 톤키넨시스(Gomphandra tonkinensis), 아사럼 페텔로티 (Asarum petelotii), 페기아 사멘토사 (Pegia sarmentosa), 알리엄 폴리리점 (Allium polyrrhizum), 아스파라거스 고비커스 이바노바 (Asparagus gobicus Ivanova), 레엄 유니너브 맥심 (Rheum uninerve Maxim), 코리스퍼미엄 몽골리컴 (Corispermium mongolicum), 코리스퍼멈 칭가니컴 (Corispermum chinganicum), 살솔라 모노테라(Salsola monoptera), 주리네아 몽골리카 맥심 (Jurinea mongolica Maxim) 및 알리엄 알타이컴 (Allium altaicum)으로 구성된 약용 식물군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물을 함유하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 산화질소(NO) 매개 염증을 완화하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 레티노이드에 의한 피부 자극 또는 염증을 완화하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물.
제3항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 레티노이노이드 자극에 의한 IL-1α, IL-6, IL-8 또는 MCP-1의 발현을 억제하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물.
제3항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 레티노이드 자극에 의한 홍반 또는 부종 형성 반응을 저해하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물.
제3항에 있어서, 상기 레티노이드는 레티놀, 레티날 및 레티노익산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 피부 염증 완화용 화장료 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1~1중량% 함유되는 피부 염증 완화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 레티노이드를 더 함유하는 피부 염증 완화용 화장료 조성물.