CN111712305B

CN111712305B - 木棉树花提取物，以及含有其的化妆品、药物或皮肤病学组合物

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Publication number: CN111712305B
Application number: CN201880089203.9A
Authority: CN
Inventors: 索菲·莱克勒-比恩法特; 斯蒂芬妮·布雷迪夫
Original assignee: Laboratoires Expanscience SA
Current assignee: Laboratoires Expanscience SA
Priority date: 2017-12-22
Filing date: 2018-12-21
Publication date: 2023-08-04
Anticipated expiration: 2038-12-21
Also published as: JP2021509413A; JP7338105B2; US11484559B2; KR20200122304A; CN111712305A; ES2942766T3; EP3727603A1; EP3727603B1; FR3075642B1; WO2019122408A1; US20210093685A1; FR3075642A1

Abstract

本发明涉及木棉树，特别是红木棉树的花，优选花萼的提取物，涉及其制备方法，以及涉及通过所述方法可获得的提取物。本发明还涉及包含这种提取物的组合物，所述组合物有利地是化妆品、药物或皮肤病学组合物。本发明还涉及这样的组合物或这样的提取物在预防或治疗皮肤、粘膜或皮肤附件的病症或疾病中的用途，以及在预防或治疗血管病症中的用途。本发明最后涉及用于皮肤、角质附件或粘膜的美容护理方法，以改善其状况或其外观，所述方法包括施用这样的组合物或这样的提取物。

Description

木棉树花提取物，以及含有其的化妆品、药物或皮肤病学组合物

技术领域

本发明涉及一种包含木棉树花提取物，特别是红木棉树(Bombax costatum)花提取物的组合物。所述组合物有利地是化妆品的、药学的或皮肤病学的。本发明还涉及一种提取木棉树花提取物，优选木棉树花萼提取物的方法，以及可通过所述方法获得的提取物。本发明还涉及这样的组合物或这样的提取物，其用于预防或治疗皮肤、粘膜或皮肤附件的病症或疾病，以及用于预防或治疗血管病症。最后，本发明涉及用于皮肤、皮肤附件或粘膜以改善它们的状况或外观的美容照护方法，所述方法包括施用这样的组合物或这样的提取物。

背景技术

木棉树

木棉树，特别是红木棉树(Bombax costatum)，是木棉科(APG:锦葵科)的一员。红木棉树也称为Bombax andrieui或Bombax houardii。红木棉树更俗称红花丝棉树、奶酪制造者树、红色木棉树、丝棉树、冈比亚丝棉树、Vaka(Moré语言)或Boumbou(Jula语言)。

木棉是一种泛热带属，其包含8种：非洲2种，亚洲5种，大洋洲1种，一直延伸到所罗门群岛。在以前，木棉属的分布要广得多。红木棉树有时被认为与Bombax buonopozense是同种的。

红木棉树的用途

一般来说，在非洲，红木棉树是一种相对常见的食物来源的树：叶子可以像猴面包树的叶子一样晒干和食用，并且花，特别是花萼也可以食用。

幼小植物的块茎被牛食用。

它有许多神奇的和宗教的用途，因为它有时被认为是一种神圣的树(Sanou，2013)。

在布基纳法索，树皮被用来将牙齿染成红色。这些花通常是为了肉质花萼而采集的，花萼被烹饪后作为蔬菜食用。叶子也被用作蔬菜。未成熟的果实，有时还有花作为增稠剂被添加到调味汁中。未成熟的幼果也用于制备饮料。种子的油是可食用的。这些花因其产蜜的特质而具有很高的价值。

该树的几个部分在传统医学中被用来治疗多种疾病。根被磨成粉末，作为调味汁食用，或者用作沐浴剂以对抗癫痫。树皮制剂用于伤口以促进愈合。

在塞内加尔和塞拉利昂，利尿剂的特性被归因于茎和根的树皮。

树皮也用于制备药物以对抗滴虫病、阿米巴病和其他形式痢疾。以茎皮提取物沐浴是为了防止精神错乱。茎皮的粉末被用于通过熏蒸治疗头痛的药物组合物中。可以将茎皮的压缩物应用于头部，以治疗头痛和牙痛。

叶子和其他药用植物一起被用来治疗白带和腹泻。磨碎的叶子提取物被当作一种饮料，用来预防分娩过程中的问题。反复用磨碎的叶子提取物沐浴以防止抽搐。一种由干树叶制成的草药茶被饮用或用于身体以预防麻疹。茎或根的叶和树皮的水煎剂被用作饮料以用于严重水肿。叶和幼芽的水煎剂被用来治疗黄疸。叶子的水煎剂也作为饮料给儿童服用以防止佝偻病。

该植物的不同部分被用来促进泌乳和作为疲劳的补药。皮肤用混合了乳木果油的叶子擦拭以防止麻风病。

在马里，树皮和树叶与其他植物的部分一起的水煎剂被用来治疗月经问题。叶子是润肤剂，以叶子的水煎剂中温浴可以用于发烧的病人，特别是儿童。叶子也被用来治疗钩虫并且花被用来治疗绦虫。

在尼日尔，已经发现所述果实含有20-25％的蛋白质。种子具有高的油含量(20％)。所述油的脂肪酸组成如下:己酸3％、辛酸7％、棕榈酸8％、硬脂酸3％、油酸49％、亚油酸13％、花生酸3％、木蜡酸1-2％、以及其他13％。粘液质的花提取物主要由糖(鼠李糖和阿拉伯糖)组成；它构成了一种适用于颗粒板的粘合剂。

所有这些数据都来自Lassina SANOU博士(水和森林部主管)的民族植物学报告。他在Ouagadougou的布基那法索国家森林种子中心(CNRS)的环境和可持续发展部工作(2014年12月)。

OPCS

低聚原花青素低聚物，其更多地被称为OPC或原花青素，是许多蔬菜中发现的酚类化合物。OPC是类黄酮(单宁的前体)的聚合物。组成原花青素的单体是儿茶素和表儿茶素。因此，原花青素由重复2、3、4或5次的称为儿茶素(式Ia和Ib)或表儿茶素(式IIa和IIb)的相同重复组组成：

超过6次重复后，该分子被称为原花青素聚合物且具有更高的分子量。它们被非常弱地吸收，因此仅具有非常弱的生物学活性。

OPC以其血管保护特性而闻名，它是血管紧张素转化酶、弹性蛋白酶和胰蛋白酶的抑制剂，并且通过与结缔组织的胶原蛋白结合以及通过抑制胶原酶来提供对血管壁的保护，从而改善了壁的完整性、抗性和弹性。它们还因其抗氧化、抗自由基、抗炎和抗病毒特性而闻名。

发明内容

申请人已经发现，木棉树，特别是红木棉树的花提取物，优选花萼提取物，具有迄今为止从未描述过的化妆品和皮肤病学特性。更具体地说，这是此类木棉树，特别是红木棉树的花提取物，特别是花萼提取物，第一次因为它们的特殊性质被如此使用。

本发明的目的是木棉树花，优选木棉树花萼的富含多酚的提取物，所述木棉树特别是指红木棉树。有利地，本发明的目的是红木棉树花，优选红木棉树花萼的富含多酚的提取物。

在植物学中，花是植物的一部分，当它完整时，从外向内包括：

-花萼，由萼片组成；

-花冠，由花瓣组成；

-雄蕊群，也就是产生花粉的雄蕊(雄性部分)；以及

-雌蕊群或雌蕊，由心皮(雌性部分)组成。

在本发明的范围内，术语“花”包括至少花冠和花萼。所述花也可以是完整的。

根据本发明的提取物优选为木棉树花萼的提取物，更有利地为红木棉树花萼的提取物。

术语“富含多酚的提取物”被理解为是指主要或基本上由多酚组成的提取物。

相对于干提取物的总重量，根据本发明的提取物有利地包含至少15重量％，更有利地至少20重量％的多酚；即每毫升液体提取物中至少含有2.5mg多酚(以没食子酸当量计)。百分比是相对于所述干提取物(在加入任何干燥剂之前)的总重量给出的。有利地，相对于干提取物的总重量，根据本发明的提取物包含15重量％-40重量％，更有利地20重量％-40重量％的多酚。

有利地，相对于所述提取物的总重量，本发明的提取物还包含以儿茶素当量表示的至少10重量％，更有利地至少13重量％，甚至更有利地至少15重量％的OPCS，即每毫升液体提取物至少1.9mg OPC。有利地，相对于所述干提取物的总重量，根据本发明的提取物包含10重量％-25重量％，更有利地13重量％-25重量％，甚至更有利地15重量％-25重量％的OPC。

有利地，相对于干提取物的总重量，根据本发明的提取物还包含至少6重量％，有利地6重量％-10重量％的有机酸，特别是α-羟基酸(AHA)，特别是乙酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸或其混合物。

有利地，相对于干提取物的总重量，本发明的提取物还包含以芦丁当量表示的至少5重量％，有利地5重量％-10％重量的类黄酮。

根据一个有利的方面，根据本发明的提取物主要包括(根据提取物中的含量按降序分类)：多酚、OPCS、有机酸以及类黄酮。

特别地，这种提取物有利地包含(％获得的干提取物的分子，以降序排列)：

-约20％的多酚—以没食子酸当量表示

-约15％的OPCS(低聚原花青素—以儿茶素当量表示)，

-约6％的有机酸(主要是柠檬酸和苹果酸)

-约4％的类黄酮(以芦丁当量表示)

在本发明的范围内，上述富含多酚的提取物有利地通过在选自水、乙醇、二醇及其混合物的溶剂中对木棉树花，优选木棉树花萼进行固/液提取而获得，所述木棉树特别是红木棉树。所述提取溶剂更特别地选自水/二醇、水/乙醇及其混合物的二元混合物，有利地二醇和/或乙醇在水中的比例为30-90％，通常为50-90％。特别地，所述提取溶剂选自水/丙二醇、水/丙烯乙二醇和水/乙醇的二元混合物，特别是水/丙二醇，更特别是水/1,3-丙二醇。

更有利地，上述富含多酚的提取物通过在选自水、二醇及其混合物的溶剂中对木棉树花，优选木棉树花萼进行固/液提取而获得，所述木棉树特别是红木棉树。所述提取溶剂更特别地选自水/二醇的二元混合物，有利地二醇在水中的比例为30-90％，通常为50-90％。特别地，所述提取溶剂选自水/丙二醇和水/丙烯乙二醇的二元混合物，特别是水/丙二醇，更特别是水/1,3-丙二醇。

有利地，上述二醇是植物来源的二醇，特别是丙二醇和/或丙烯乙二醇，更特别是丙二醇，特别是1,3-丙二醇。

在更有利的方式中，上述富含多酚的提取物是通过在水/1,3-丙二醇的二元混合物中对木棉树，特别是红木棉树的花，优选花萼的提取物进行固/液提取获得的，有利地，1,3-丙二醇在水中的比例为30-90％，通常为50-90％。此特殊的溶剂导致所需活性成分的更好的产量，所述活性成分特别是多酚、OPCS、类黄酮和/或有机酸。

在有利的方式中，当木棉树，特别是红木棉树的花，优选花萼的固/液提取在水/溶剂的二元混合物中进行时，溶剂在水中的比例为50-90％。

本发明的目的还在于一种用于制备木棉树花，优选木棉树花萼的富含多酚的提取物的方法，所述木棉树特别是红木棉树，有利地，红木棉树花萼，所述方法包括在合适的溶剂或溶剂混合物中，在本领域技术人员已知的最佳pH、持续时间和温度下的至少一个固/液提取步骤。

有利地，根据本发明，所述用于制备木棉树花，优选木棉树花萼的富含多酚的提取物的方法包括以下连续步骤，所述木棉树特别是红木棉树：

a)研磨花，特别是花萼；

b)在适当的溶剂或溶剂混合物中，并在最佳pH、持续时间和温度条件下，提取经研磨的花，特别是经研磨的花萼；

c)通过倾析和/或离心和/或连续过滤分离固相和液相；以及

d)如果需要，干燥步骤c)中获得的提取物。

植物研磨步骤a)可以使用本领域技术人员已知的方法进行，特别是借助于刀式粉碎机、锤式粉碎机等。

在步骤b)中，提取阶段优选在单独的水和/或二醇和/或乙醇或在二元混合物的存在下进行。有利地，在步骤b)中使用的提取溶剂更特别地选自水/二醇、水/乙醇及其混合物的二元混合物，有利地二醇和/或乙醇在水中的比例为30-90％，通常为50-90％。特别地，所述提取溶剂选自水/丙二醇、水/丙烯乙二醇和水/乙醇的二元混合物，特别是水/丙二醇，更特别是水/1,3-丙二醇。更有利地，在步骤b)中使用的提取溶剂选自水/二醇的二元混合物，有利地二醇在水中的比例为30-90％，通常为50-90％。特别地，所述提取溶剂选自水/丙二醇、水/丙烯乙二醇的二元混合物，特别是水/丙二醇，更特别是水/1,3-丙二醇。

在更有利的方式中，在步骤b)中使用的提取溶剂是水/1,3-丙二醇的二元混合物，有利地1,3-丙二醇在水中的比例为30-90％，通常为50-90％。此特殊的溶剂导致所需活性成分的更好产量，所述活性成分特别是多酚、OPCS、类黄酮和/或有机酸。

此外，固/液提取的步骤b)优选在20℃-90℃，特别是30℃-80℃，更特别是30℃-75℃，典型地50℃的温度下进行。

提取的持续时间有利地为30分钟-4小时，特别是1小时-3小时，有利地为约2小时。

使用本领域技术人员已知的方法进行将固相与液相分离的步骤c)，特别是通过倾析、离心和/或连续过滤，优选通过过滤进行。进行步骤c)，直到达到绝对透明和微生物卫生。

有利地，可以借助本领域技术人员已知的方法通过干燥步骤d)使根据本发明的富含多酚的提取物稳定。

所述干燥步骤d)可以例如在麦芽糖糊精或阿拉伯胶纤维类型(由CNI提供的)的支撑物的存在下进行。支撑物含量根据相对于在提取物的液体形式中获得的干物质的百分比的支撑物的0％-80％的比例变化。

所述提取物优选通过冻干或雾化以获得最终粉末。最终粉末有利地包含30-70重量％的干提取物物质，其中100％的补体为冻干或雾化支撑物。更有利地，最终粉末包含50％的源于提取物的干物质和50％的冻干或雾化支撑物。

根据另一个有利的实施方案，根据本发明的提取物可以通过选自二醇(例如丙二醇，通常为1,3-丙二醇)的溶剂在物理和微生物学上稳定，所述溶剂以适合于这种稳定化的比例存在。优选地，所述二醇，特别是丙二醇，优选1,3-丙二醇将单独存在或以在水中的二醇为30-90％，优选50-90％的比例与水组合存在。

因此，本发明还涉及另一种组合物，其包含根据本发明的木棉树花，优选木棉树花萼的富含多酚的提取物，所述木棉树特别是红木棉树，以及对于物理和微生物稳定作用有效的量的选自二醇的溶剂，例如(水中的，如果需要的话)丙二醇，特别是1,3-丙二醇。用于物理和微生物稳定作用的有效量有利地是上述那些。

优选地，作为实例，根据本发明的富含多酚的提取物可以根据以下方法获得：

a')在1,3-丙二醇/水(60/40)的混合物中将经研磨的花以5％(w/w)放入溶液；

b')在40℃下搅拌提取2小时；

c')通过连续的过滤步骤进行纯化；以及

d')无菌过滤。

在下面的描述中，术语“根据本发明的提取物”是指如上所述的提取物本身或可以通过如上所述的本发明的方法获得的提取物。可以通过如上所述的本发明的方法获得的提取物具有与如上所述的根据本发明的提取物本身相同的组成。

本发明的另一个目的是一种组合物，其包含根据本发明的木棉树花，优选木棉树花萼的富含多酚的提取物作为活性成分，所述木棉树特别是红木棉树，以及必要时合适的赋形剂。根据本发明的提取物是涉及所述提取物本身的如以上段落中所定义的，以及涉及可以通过本发明的方法获得的提取物的那些。

所述组合物有利地是化妆品的、药学的或皮肤病学的。所述组合物优选配制成用于通过外部局部途径施用。

有利地，根据本发明的组合物包含0.001-10重量％，通常0.01-5重量％的本发明的提取物，所述提取物的重量表示为以组合物的总重量计的干提取物。

根据本发明的组合物还可以包含一种或多种活性成分。

根据本发明的组合物可以被配制成适合局部施用的不同制剂的形式，其包括乳膏剂、乳化剂、乳剂、软膏剂、洗剂、油、水性、醇或二醇溶液、粉剂、贴剂、喷雾剂、香波、清漆或任何其他用于外部应用的产品。

取决于其类型(化妆品的、药学的或皮肤病学的)，根据本发明的组合物可以进一步包含至少一种化妆品，药学或皮肤病学可接受的赋形剂。特别地，根据本发明的组合物可以进一步包含至少一种本领域技术人员在化妆品，药学或皮肤病学上已知的佐剂，其选自表面活性剂、增稠剂、防腐剂、香料、染料、化学或矿物过滤剂、水合试剂、热水等。本领域技术人员知道如何通过使用他或她的常识来调整根据本发明的组合物的配方。

根据本发明的剂量和最佳盖仑制剂可以根据在配制适合患者或动物的药学、皮肤病学或化妆品治疗时通常考虑的标准来确定，例如患者或动物的年龄和体重、一般病况的严重程度、治疗耐受性、观察到的副作用、皮肤类型。

本发明的目的还在于根据本发明的提取物或根据本发明的组合物，其用于预防和/或治疗皮肤和/或粘膜(牙龈、牙周膜、生殖器粘膜)和/或皮肤附件(头发和指甲)的病症或疾病，无论是未成熟的、正常的还是成熟的/年老的，其有利的是炎症反应、氧化反应、与无论是否与污染相关的自由基攻击有关的病症、屏障或体内平衡病症、衰老、特别是顺序老化和/或光老化、和/或机械或热侵袭因素，更有利地是炎症、刺激性反应或疾病，或皮肤、皮肤附件和/或粘膜(牙龈、牙周膜、生殖器粘膜)的屏障或体内平衡病症，无论是未成熟的、正常的还是成熟的/年老的。

本发明的目的还在于根据本发明的提取物，其用于预防和/或治疗血管病症，特别是发红和斑点。

本发明的另一个目的还在于根据本发明的提取物或本发明的组合物在生产化妆品、药物或皮肤病学组合物中的用途，所述化妆品、药物或皮肤病学组合物用于预防和/或治疗皮肤和/或粘膜(牙龈、牙周膜、生殖器粘膜)和/或皮肤附件(头发和指甲)的病症或疾病，无论是未成熟的、正常的还是成熟的/年老的，其有利的是炎症反应、氧化反应、与无论是否与污染相关的自由基攻击有关的病症、屏障或体内平衡病症、衰老、特别是顺序老化和/或光老化、和/或机械或热侵袭因素，更有利地是炎症、刺激性反应或疾病，或皮肤、皮肤附件和/或粘膜(牙龈、牙周膜、生殖器粘膜)的屏障或体内平衡病症，无论是未成熟的、正常的还是成熟的/年老的。

本发明的目的还在于根据本发明的提取物或本发明的组合物，其用于制造化妆品的、药学的或皮肤病学的组合物以预防和/或治疗血管疾病，特别是发红和斑点。

此外，本发明的目的还在于一种预防和/或治疗皮肤和/或粘膜(牙龈、牙周膜、生殖器粘膜)和/或皮肤附件(头发和指甲)的病症或疾病的方法，无论是未成熟的、正常的还是成熟的/年老的，其有利的是炎症反应、氧化反应、与无论是否与污染相关的自由基攻击有关的病症、屏障或体内平衡病症、衰老、特别是顺序老化和/或光老化、和/或机械或热侵袭因素，更有利地是炎症、刺激性反应或疾病，或皮肤、皮肤附件(头发和指甲)和/或粘膜(牙龈、牙周膜、生殖器粘膜)的屏障或体内平衡病症，无论是未成熟的、正常的还是成熟的/年老的，所述方法包含向有此需要的受试者施用，特别是局部施用有效量的根据本发明的提取物或根据本发明的组合物。

本发明的目的还在于一种预防和/或治疗血管疾病，特别是发红和斑点的方法，所述方法包含向有此需要的受试者施用，特别是局部施用有效量的根据本发明的提取物或根据本发明的组合物。

特别地，根据本发明的组合物或提取物旨在预防和/或治疗炎症反应或刺激性反应或疾病，或皮肤、皮肤附件(头发和指甲)和/或粘膜(牙龈、牙周膜、生殖器粘膜)的屏障或体内平衡病症，无论是未成熟的、正常的还是成熟的/年老的。

有利地，所述皮肤的炎症或刺激性反应、病症或疾病或屏障或体内平衡病症为：痤疮、酒渣鼻或赤红血丝(erythrocouperose)、血管病症，特别是发红和斑点、座位皮炎、特应性皮炎、湿疹、接触性皮炎、刺激性皮炎、过敏性皮炎，脂溢性皮炎(摇篮帽)、敏感皮肤、反应性皮肤、干性皮肤(干燥症)、脱水皮肤、发红的皮肤、皮肤红斑、年老的或光老化皮肤、光敏性皮肤、色素性皮肤(黄褐斑、后炎症性色素沉着等)、带有妊娠纹的皮肤、晒伤、化学、物理刺激(例如孕妇的自然组织张力)、细菌和真菌剂、皮肤老化，特别是光老化以及与化学或大气污染相关的和/或与暴露于UV或IR相关的自由基攻击相关的病症。

有利地，所述粘膜的炎症或刺激性反应、病症或疾病，或者屏障或体内平衡病症为牙龈炎(新生儿敏感的牙龈，吸烟或其他原因引起的卫生问题)以及内部或外部男性或女性生殖器区域刺激。

有利地，所述皮肤附件的炎症或刺激性反应、病症或疾病，或者屏障或体内平衡病症为脆甲症、易碎指甲、受损的头发、毛发焦枯、干发、脱发、脂溢性皮炎和滤泡性皮炎。

在特别有利的方式中，根据本发明的组合物或提取物旨在抗衰老、抗皮肤老化、特别是顺序老化或光老化，例如与暴露在阳光下或炎症现象有关，甚至与受刺激的皮肤有关。

本发明的目的还在于根据本发明的提取物在治疗和/或预防以下时的化妆品用途：脱水皮肤；发红的皮肤；年老的或光老化皮肤；光敏性皮肤、皮肤老化，特别是光老化；以及与化学或大气污染相关的和/或与暴露于UV或IR相关的自由基攻击相关的病症。

本发明的目的还在于根据本发明的提取物或根据本发明的组合物用于治疗皮肤附件，特别时用于治疗和/或预防以下时的化妆品用途：脆甲症；易碎指甲；受损的头发；毛发焦枯；以及干发。

本发明还涉及用于皮肤和/或皮肤附件和/或粘膜的美容照护方法，以改善它们的状况和/或外观，所述方法包括施用根据本发明的组合物或提取物。

特别地，本发明涉及用于皮肤和/或皮肤附件的美容照护方法，以防止皮肤屏障的改变及其脱水，所述方法包括将根据本发明的组合物或提取物应用于皮肤和/或皮肤附件。

本发明涉及用于皮肤和/或皮肤附件的美容照护方法，以防止老化，所述方法包括将根据本发明的组合物或提取物应用于皮肤和/或皮肤附件。

本发明还涉及根据本发明的组合物或提取物的以下化妆品用途：水合皮肤和/或粘膜，以作用于皮肤弹性或紧肤程度(特别是作为紧肤剂或抗皱剂)，作用于敏感皮肤，或者对抗污染。

附图说明

图1显示了与健康成纤维细胞(HF)相比，由皱纹成纤维细胞(WF)形成的收缩力。

图2显示了在存在或不存在根据本发明的KPO提取物的情况下，健康成纤维细胞(HF)形成的收缩力。

图3显示了在存在或不存在根据本发明的KPO提取物的情况下，皱纹成纤维细胞(WF)形成的收缩力。

以下实施例有助于说明本发明。

具体实施方式

实施例1：根据本发明的提取物

根据以下方法获得红木棉树花萼的富含多酚的提取物：

a)将研磨过的红木棉树花萼置于水/丙二醇30/70、20/80或10/90w/w的混合物中的溶液中

b)在50℃下提取2小时

c)通过连续过滤进行固/液分离。

以这种方式获得的富含多酚的液体提取物具有以下特性(％分子重量/所得提取物的干提取物)：

水/丙二醇的混合物(w/w)	30/70	20/80	10/90
				干提取物(2h、105℃、通风烤箱)	1.6％	1.2％	1.3％
总多酚(没食子酸当量)	19％	23％	22％
				OPC(儿茶素当量)	20.6％	22.5％	24％
类黄酮(芦丁当量)	4.6％	6％	5％
				抗氧化活性(DPPH)	31(μg)	12(μg)	27(μg)

根据实施例1(20/80)获得的根据本发明的木棉树提取物在本文和附图中也称为KPO提取物。

实施例2：根据本发明的提取物

根据以下方法获得红木棉树花萼的富含多酚的提取物：

a)将研磨过的红木棉树花萼置于水/乙醇20/70w/w的混合物中的溶液中

b)在75℃下提取2小时；以及

c)通过连续过滤进行固/液分离。

以这种方式获得的富含多酚的液体提取物具有以下特性(％分子/所得提取物的干提取物)：

实施例3：根据本发明的提取物的生物活性测试

在下面的实施例中，测试的提取物，称为KPO提取物，是根据实施例1获得的根据本发明的提取物(水/丙二醇20/80的混合物)。

1–成纤维细胞、角质形成细胞和皮肤外植体培养中基因表达的筛选

在特征皮肤模型中评估了KPO提取物对化妆品需求的信使RNA表达特征的影响：将正常的人表皮角质细胞或正常的人皮肤成纤维细胞与0.0005％和0.001％KPO提取物(干提取物浓度：d.e.)培养24小时。另外，将皮肤外植体与0.005％和0.001％KPO提取物(d.e.)培养24小时。培养结束时，提取mRNA，并通过RT-qPCR分析90个目的基因的表达。

结果表明，KPO提取物在以下领域具有潜在的生物活性：

-真皮基质的新合成、构建和重塑：刺激DCN、SPARC、BGN、COL3A1、TP63、TGFB1基因；

-粘附和屏障功能：刺激CD44、CTNNA1、ITGA2、SDC1、LAMC2、TNC、COL17A1、VCAN、PXN、LAMA5、S100A7基因；

-长寿和更新：刺激SIRT6、ATP5A1、INSR、EGF、SIRT3基因；

-色素沉着：刺激POMC和PMEL基因；

-排毒和抗氧化剂防御：刺激BSG、CAT、GLRX、MSRA、MSRB2、TXN、SOD2、PPIA、HMOX1、HSPB1、DGAT1、GBA基因。

总而言之，该分析显示了KPO提取物的两个主要作用。首先是涉及细胞-细胞或细胞-基质粘附的基因的强表达的粘附和屏障功能。通过细胞外基质的新合成和构建活性使得这种活性得到增强，这对组织的牢固性有影响。应激反应也与许多基因的诱导密切相关，其中一些基因表现出特别强的诱导作用。在这种应激反应中，抗氧化应激的保护是主要的。对其他类型应激的反应途径和解毒途径也被激活。

2–真皮细胞外基质和细胞通讯的标志物的基因表达

评估了KPO提取物对成纤维细胞中参与细胞通讯和真皮细胞外基质组织的标志物的基因表达的影响：将正常人真皮成纤维细胞与0.0005％或0.001％KPO提取物(d.e.)或5ng/ml的TGFβ1孵育6小时或24小时(真皮基质诱导标志物的阳性对照)。培养结束时，通过RT-qPCR分析下列标志物的基因表达。

-CTNNA1(连环蛋白α)：与钙粘蛋白结合以促进细胞间的相互作用。

-Syndecan：巩固细胞/细胞以及细胞/基质相互作用的蛋白聚糖。

-层粘连蛋白5(α3β3γ2)：一种有助于粘附基底膜的分子。

-TNC(腱生蛋白C)：参与皮肤-表皮结合的细胞外基质蛋白，这促进胶原蛋白VII的合成。

-SPARC：与细胞外基质的多种成分相关的蛋白质，有助于其组织。

-BGN(双糖素)：参与胶原纤维组装的蛋白聚糖。

-多功能蛋白聚糖(Versican)：ECM的主要成分，在组织的形态发生和维持中起着核心作用。它还有助于皮肤弹性纤维的形成。

-赋予真皮紧实感和抗压性的胶原蛋白，约占真皮细胞外基质(ECM)成分的70％，大部分为I型胶原蛋白(真皮胶原蛋白的85-90％)，其通常与III型胶原蛋白相关联。

-IV型和VII型胶原蛋白：糖蛋白，真皮-表皮结合部的组成部分。

-纤连蛋白：是一种高分子量的糖蛋白。它在真皮ECM的结构中起作用。

-弹性纤维负责皮肤弹性。它们由两个主要部件组装而成：弹性蛋白(真皮的1％至3％)和微纤维。

-LOXL：负责弹性蛋白纤维的组装。

-饰胶蛋白聚糖(Decorin)：参与基质组装的蛋白聚糖。

-皮连蛋白：在胶原纤维的组装中起作用；这对于维持真皮细胞外基质的结构排列和组织柔韧性很重要。

-层粘连蛋白5(α3β3)：一种有助于粘附于基底膜(真皮-表皮结合部)的分子。

结果以相对于未处理的对照的相对数量(RQ)给出。结果的显著性使用统计检验进行评估(单因素方差分析，然后进行Dunnet检验)：*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001；ns：不显著p>0.05。

结果汇总在下表1和2中。它们显示出KPO提取物对所研究的标志物组具有相当的诱导作用，这表明在真皮基质，真皮-表皮结合部(DEJ)和细胞通讯方法的结构化方面具有强大的潜力。因此，KPO提取物在水合作用、弹性、真皮交换(EDJ)和皮肤衰老中起作用。

表1：治疗6小时后的基因表达分析：

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表2：治疗24小时后的基因表达分析：

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3–评估真皮成纤维细胞中的抗蛋白酶活性

评估了KPO提取物限制由皮肤成纤维细胞中的炎症应激触发的MMP1(基质金属蛋白酶-1)产生的能力。

正常人皮肤成纤维细胞与0.0005％或0.001％的KPO(d.e.)预培养24小时。然后将成纤维细胞用100nM PMA(十四烷酸佛波醇酯)刺激，并与KPO提取液培养过夜。在细胞上清液中通过ELISA试验评估MMP1的产生。结果以每毫克总蛋白中的MMP1的皮克数给出(由BC试验确定)。通过单因素方差分析然后进行Tukey检验评估显著性：*p<0.05；***p<0.001；ns：不显著p>0.05。

结果汇总于下表3中。KPO提取物显著抑制了成纤维细胞中PMA应激触发的MMP1释放；该结果显示了真皮基质的保护作用，并且这是时序性和光化性的抗衰老作用。

表3：由PMA刺激的成纤维细胞中的MMP1的产生：

4–抗炎能力评估

在由PMA处理刺激的角质形成细胞中评估了KPO提取物的抗炎活性。

将正常的人表皮角质形成细胞与0.001％、0.002％或0.005％的KPO提取物(d.e.)或参考抗炎分子0.1μM的地塞米松或0.1μM的消炎痛一起预培养24小时。然后将角质形成细胞用10μg/ml的PMA(十四烷酸佛波醇酯)刺激，并与KPO提取物或参考分子培养过夜。在细胞上清液中通过ELISA试验评估炎症介质白介素8(IL*)、白介素-1β(IL1β)和前列腺素E2(PGE2)的产生。通过单因素方差分析然后进行Tukey检验来评估显著性：*p<0.05；***p<0.001；ns：不显著p>0.05。

结果汇总在下表4、5和6中。KPO提取物显著抑制细胞因子IL1和IL8的释放，并在较小程度上抑制PGE2的释放，所述释放通过角质形成细胞中的促炎性应激引发。这些结果显示了KPO提取物的抗炎的潜力，以及对敏感皮肤甚至是受刺激的皮肤具有抗衰老作用。

表4：由PMA刺激的角质形成细胞中的IL8的产生：

表5：由PMA刺激的角质形成细胞中的IL1β的产生：

表6：PMA刺激的角质形成细胞中的PGE2的产生：

5–抗氧化能力评估

KPO提取物的抗氧化能力在由促氧化H₂O₂应激诱导的细胞内ROS(活性氧类)的试验模型中评估。

将正常的人表皮角质形成细胞与0.001％、0.002％或0.005％的KPO提取物(d.e.)或参考抗炎分子10μM的檞皮素或500μM的维生素C一起预培养24小时。然后将细胞层与DCFH-DA探针接触，然后通过100μM的H₂O₂诱导氧化应激。通过测量探针被氧化时发出的荧光来评估ROS产生的量。通过单因素方差分析然后进行Tukey检验来进行统计分析：**p<0.01；***p<0.001。

结果汇总于下表7中。KPO提取物显著抑制了H₂O₂的存在引发的ROS的产生。这些结果证明了强大的抗氧化潜力。因此，KPO提取物可以有利地用于对抗污染和老化。

表7：在H₂O₂应激作用下的角质形成细胞中的ROS的产生：

6–抗皱和紧肤效果的体外评估

在GlasBox系统中评估了KPO提取物对皱纹基部的成纤维细胞和相邻的无皱纹皮肤的成纤维细胞(“健康的”成纤维细胞)的“紧肤”效果。系统使在真皮等效物中测量成纤维细胞产生的收缩力成为可能。源自皱纹基部的成纤维细胞的收缩力要比相邻的无皱纹皮肤的成纤维细胞小，因此可以评估化合物的“抗皱”效果。

通过将成纤维细胞(健康的皮肤或皱纹的皮肤)与胶原蛋白溶液混合来制备真皮等效物。一方面，成纤维细胞来源于从同一患者(65岁女性)获得的样品，所述样品一方面来自皱纹的深处，以及来自附近的无皱纹的皮肤。将该混合物在矩形柜中冷却。加入含有或不含0.005％或0.001％KPO提取物(d.e.)的培养基。将两个柔性硅叶片插入这些柜中的每一个。因此，所述真皮等效物会在配备有应变仪(“传感器”)的两个叶片之间形成。在成纤维细胞产生的回缩力的作用下，硅叶片变形；这可以通过应变仪的电阻值变化来看出。实时测量的这种变化代表了所述真皮等效物内产生的力。如此测量了24小时的等长收缩力。

结果汇总于图1-3和表8。如所预期的，皱纹成纤维细胞(WF)产生的收缩力相对于健康成纤维细胞(HF)产生的收缩力显著降低。

在皱纹成纤维细胞(WF)中，0.0005％的KPO提取物显著增加了收缩力。该结果证明了抗皱效果。

应用于健康的成纤维细胞，KPO提取物显著增加了收缩力。图的分析表明，在存在提取物的情况下，AUC(曲线下的面积)和最大收缩显著增加。这些结果证明了提取物的紧肤效果。

表8：Glasbox图(HF)的分析

**p<0.01vs对照HF–单因素方差分析，随后进行Fisher检验7-KPO提取物对皮肤成纤维细胞中线粒体活性的作用的评估

正常人皮肤成纤维细胞与0.001％的KPO提取物(d.e.)培养24小时。在处理结束时，通过胰蛋白酶作用收集细胞，并在对氧敏感的荧光探针存在下培养，以便通过荧光光谱测定法实时测量氧消耗。

结果汇总于表9中。这些结果表明，KPO提取物可触发并增加总体呼吸。因此，KPO提取物触发呼吸链活性的刺激，一种代表线粒体功能的刺激的作用。

表9：NHDF中氧消耗的测量

	O2消耗(％)
		未处理的对照	100
0.001％的KPO	145.40

Claims

1.红木棉树(Bombax costatum)的花的富含多酚的提取物，其包含，相对于干提取物的总重量的至少15重量％的多酚和至少6重量％的有机酸，以及以儿茶素当量表示的相对于干提取物的总重量的至少15重量％的低聚原花青素(OPC)，所述提取物是通过在选自水/二醇的二元混合物的溶剂中对红木棉树的花进行固/液提取而获得的，其中二醇在水中的比例为70-90％。

2.根据权利要求1所述的提取物，其包含相对于干提取物的总重量的至少20重量％的多酚。

3.根据权利要求1所述的提取物，其中所述有机酸选自乙酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸或其混合物。

4.根据权利要求1所述的提取物，其中所述提取物还包含以芦丁当量表示的相对于干提取物的总重量的至少5重量％的类黄酮。

5.根据权利要求1所述的提取物，其中所述提取物来自红木棉树的花萼。

6.制备根据权利要求1-5中的任一项所述的红木棉树的花的富含多酚的提取物的方法，所述方法包括在选自水/二醇的二元混合物的溶剂中的至少一个固/液提取步骤，其中二醇在水中的比例为70-90％。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下连续步骤：

a)研磨花；

b)在选自水/二醇的二元混合物的溶剂中对经研磨的花进行固/液提取，

其中二醇在水中的比例为70-90％；

c)通过倾析和/或离心和/或连续过滤分离固相和液相；以及

d)如果需要，干燥步骤c)中获得的提取物。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述二醇是丙二醇或丙烯乙二醇。

9.一种组合物，其包含权利要求1-5中的任一项所定义的红木棉树的花的富含多酚的提取物作为活性成分，以及包含适当的赋形剂。

10.根据权利要求1-5中的任一项所述的提取物或根据权利要求9所述的组合物在制备用于预防和/或治疗以下的药物中的用途：

-皮肤和/或粘膜和/或皮肤附件的病症或疾病，和/或

-血管疾病，和/或

-与暴露于UV或IR相关的自由基攻击有关的病症。

11.根据权利要求10所述的用途，其中所述皮肤和/或粘膜和/或皮肤附件的病症或疾病是炎症反应、氧化反应、与污染相关的自由基攻击有关的病症、屏障或体内平衡病症、机械和/或热侵袭性因素。

12.根据权利要求10所述的用途，其中所述血管疾病是红斑或酒糟鼻。

13.用于皮肤和/或皮肤附件和/或粘膜以改善它们的状况和/或外观的非治疗性美容护理方法，所述方法包括施用根据权利要求1-5中的任一项所述的提取物或根据权利要求9所述的组合物。

14.根据权利要求13所述的非治疗性美容护理方法，其特征在于，所述方法旨在防止皮肤屏障的改变及其脱水和/或防止皮肤老化。

15.根据权利要求1-5中的任一项所述的提取物或根据权利要求9所述的组合物对于以下的非治疗性化妆品用途：脱水的皮肤；发红的皮肤；年老的或光老化的皮肤；光敏性皮肤；皮肤老化；以及与化学或大气污染相关的自由基攻击有关的病症。