FR3118879A1 - Extrait de parties aeriennes de basilic sacre et compositions cosmetiques, ou dermatologiques le comprenant - Google Patents

Extrait de parties aeriennes de basilic sacre et compositions cosmetiques, ou dermatologiques le comprenant Download PDF

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Abstract

L’invention se rapporte à un extrait de parties aériennes de basilic sacré, en particulier d’Ocimum sanctum, ainsi qu’à son procédé de préparation et l’extrait susceptible d’être obtenu par ledit procédé. L’invention a également pour objet une composition comprenant un tel extrait ; la composition étant avantageusement cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique. L’invention concerne également une telle composition ou un tel extrait pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères et pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles vasculaires. L’invention concerne enfin un procédé de soin cosmétique de la peau, des phanères ou des muqueuses, en vue d’améliorer leur état ou leur aspect, consistant à administrer une telle composition ou un tel extrait.

Description

EXTRAIT DE PARTIES AERIENNES DE BASILIC SACRE ET COMPOSITIONS COSMETIQUES, OU DERMATOLOGIQUES LE COMPRENANT
L’invention se rapporte à une composition comprenant un extrait de parties aériennes de basilic sacré (Ocimum sanctum), variété verte ou pourpre. La composition est avantageusement cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique. L’invention a également pour objet un procédé d’extraction d’un extrait de parties aériennes de basilic sacré, ainsi que l’extrait susceptible d’être obtenu par ledit procédé. L’invention concerne également une telle composition ou un tel extrait pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères, et dans la prévention ou le traitement des troubles vasculaires. L’invention concerne enfin un procédé de soin cosmétique de la peau, des phanères ou des muqueuses, en vue d’améliorer leur état ou leur aspect, consistant à administrer une telle composition ou un tel extrait.
BASILIC SACRE
Description botanique
Ocimum sanctum(ouocimum tenuiflorum) communément appelé « basilic sacré » ou « tulsi » est une plante aromatique de la famille des lamiacés. Elle possède un port érigé de 30 à 60 cm de haut avec des tiges poilues. Les feuilles sont vertes ou violettes selon la variété. Elles sont simples, pétiolées et font jusqu’à 5 cm de long. Les petites fleurs violacées sont placées sur des racèmes allongées. Il existe deux variées de basilic sacré : le basilic vert et le basilic pourpre. Les deux variétés ont une composition phytochimique similaire.
Le basilic sacré est cultivé en Asie pour ses usages religieux et médicinaux, notamment en médecine ayurvédique où il est considéré comme un « élixir de vie ». Les feuilles de basilic sacré sont aussi utilisées en cuisine thaï et en répulsif à insecte.
Phytochimie
Composition deOcimum sanctum :
Protéines : 174,5 g/Kg plante sèche
Fibres : 90,7 g/Kg plante sèche
Cendres : 135,6 g/Kg plante sèche
De nombreuses molécules ont été identifiées dans des extraits aqueux et alcooliques deOcimum sanctum. Les polyphénols sont largement présents avec l’acide rosmarinique comme composé majoritaire. Sont aussi largement reportés la présence d’acide ursolique, de dérivés d’apigénine et d’acides phénoliques.
Les sucres sont composés de xylose et de polysaccharides. Les tiges et les feuilles contiennent des saponines, flavonoïdes, triterpénoïdes et des tannins.
La composition en minéraux montre que le potassium est largement majoritaire (cf. tableau 1) :
[Table 1] Composition en minéraux deOcimum sanctum(ppm)
Descriptif de l’invention
L’invention a pour objet un extrait riche en polyphénols de basilic sacré,notamment un extrait riche en polyphénols de parties aériennes de basilic sacré.
Dans le cadre de l’invention, les termes « basilic sacré » et« Ocimum sanctum »ont la même signification et peuvent être employés de manière indifférente. Il existe deux variétés de basilic sacré : la variété verte et la variété pourpre. Sauf indication contraire, dans le cadre de la présente invention, on entend par « basilic sacré » ou «Ocimum sanctum», les deux variétés existantes, c’est-à-dire les variétés verte et pourpre.
Dans le contexte de l’invention, les « parties aériennes » d’Ocimum sanctumcomprennent les feuilles, les tiges et les fleurs, de préférence les feuilles et les tiges.
Par « extrait riche en polyphénols », on entend un extrait comprenant majoritairement ou essentiellement des polyphénols.
L’extrait selon l’invention comprend ainsi au moins 6% en poids de polyphénols, par rapport au poids total de l’extrait sec, soit au moins 1.2 mg de polyphénols par ml d’extrait liquide (en équivalent acide gallique). Avantageusement, l’extrait selon l’invention comprend au moins 9% en poids, plus avantageusement au moins 11% en poids, plus avantageusement au moins 15% en poids, de polyphénols, par rapport au poids total de l’extrait sec. Avantageusement, l’extrait selon l’invention comprend entre 6% et 17 %, plus avantageusement entre 9% et 17 %, plus avantageusement entre 11% et 17 %, plus avantageusement entre 15% et 17 % en poids de polyphénols. Les pourcentages sont exprimés par rapport au poids total dudit extrait sec (avant ajout éventuel d’un support de séchage) et sont déterminés selon la méthode de Folin Ciocalteu.
Avantageusement, l’extrait selon l’invention comprend en outre au moins 5 % en poids d’acides hydroxycinnamiques, plus avantageusement au moins 7 % en poids, c’est-à-dire au moins 1,0 mg d’acides hydroxycinnamiques par ml d’extrait liquide. Plus avantageusement, l’extrait selon l’invention comprend au moins 10 % en poids, plus avantageusement au moins 15 % en poids, d’acides hydroxycinnamiques. Avantageusement, l’extrait selon l’invention comprend entre 5 % et 20 % en poids, plus avantageusement entre 7 % et 20 % en poids, plus avantageusement entre 10 % et 20 % en poids, plus avantageusement entre 15 % et 20 % en poids, d’acides hydroxycinnamiques. Les pourcentages sont exprimés par rapport au poids total dudit extrait sec (avant ajout éventuel d’un support de séchage) et sont déterminés selon la méthode d’Arnow
Avantageusement, l’extrait selon l’invention comprend en outre au moins 2,5 % en poids de flavonoïdes, exprimés en équivalent rutine, par rapport au poids total dudit extrait sec, plus avantageusement au moins 3,5 % en poids. Avantageusement, l’extrait selon l’invention comprend entre 2,5 % et 6 % en poids, plus avantageusement entre 3,5 % et 6 % en poids de flavonoïdes, exprimés en équivalent rutine, par rapport au poids total dudit extrait sec. La teneur en flavonoïdes est déterminée selon la méthode de Loots (AlCl3).
Dans le cadre de la présente invention, l’extrait riche en polyphénols décrit ci-dessus est avantageusement obtenu par extraction solide/liquide des parties aériennes de basilic sacré, dans un solvant choisi parmi l’eau, les glycols, et leurs mélanges. Le solvant d’extraction est plus particulièrement choisi parmi les mélanges binaires eau/glycols, et leurs mélanges, avantageusement dans une proportion comprise entre 30 % et 90 %, typiquement entre 50 % et 80 %, plus avantageusement entre 60 % et 70 % de glycol dans l’eau, en volume par rapport au volume total de solvant utilisé (eau + glycol). En particulier, le solvant d’extraction est choisi parmi les mélanges binaires eau/propanediol, eau/propylène glycol, en particulier eau/propanediol, plus particulièrement eau/1,3-propanediol.
Avantageusement, les glycols cités ci-dessus sont des glycols d’origine végétale, en particulier le propanediol et/ou le propylène glycol, plus particulièrement le propanediol, notamment le 1,3-propanediol.
L’invention a également pour objet un procédé de préparation d’un extrait riche en polyphénols de parties aériennes de basilic sacré,comprenant au moins une étape d’extraction solide/liquide dans un solvant ou un mélange de solvant approprié, notamment tel que défini dans le paragraphe ci-dessus, et dans les conditions optimales de pH, durée et de température, connues de l’homme de l’art.
Avantageusement selon l’invention, le procédé de préparation d’un extrait riche en polyphénols de parties aériennes de basilic sacré, comprend les étapes successives suivantes :
  1. broyage des parties aériennes de basilic sacré ;
  2. extraction des parties aériennes broyées dans un solvant choisi parmi l’eau, les glycols, et leurs mélanges dans des conditions optimales de durée, pH et température ;
  3. séparation de la phase solide et de la phase liquide par décantation et/ou centrifugation et/ou filtration successive; et
  4. Eventuellement, séchage de l’extrait obtenu à l’étape c).
L’étape a) de broyage de la plante peut être réalisée par des méthodes connues de l’homme du métier, notamment à l’aide d’un broyeur à couteaux, d’un broyeur à marteaux, etc.
A l’étape b), l’extraction est réalisée de préférence en présence d’un solvant d’extraction choisi parmi l’eau, les glycols, et leurs mélanges, en particulier leurs mélanges binaires. Avantageusement, le solvant d’extraction utilisé à l’étape b) est choisi parmi les mélanges binaires eau/glycols, avantageusement dans une proportion comprise entre 30 % et 90 %, typiquement entre 50 % et 80 %, plus avantageusement entre 60 % et 70 % de glycol dans l’eau, en volume par rapport au volume total de solvant utilisé (eau + glycol). En particulier, le solvant d’extraction est choisi parmi les mélanges binaires eau/propanediol, eau/propylène glycol, en particulier eau/propanediol, plus particulièrement eau/1,3-propanediol.
Avantageusement, les glycols cités ci-dessus sont des glycols d’origine végétal, en particulier le propanediol et/ou le propylène glycol, plus particulièrement le propanediol, notamment le 1,3-propanediol.
En outre, l’étape b) d’extraction solide/liquide est réalisée de préférence à une température comprise entre 20°C et 90°C, en particulier entre 30°C et 80 °C, plus particulièrement entre 30°C et 75°C, typiquement 60°C.
La durée d’extraction est avantageusement comprise entre 30 minutes et 4h, en particulier entre 1h et 3h, avantageusement elle est d’environ 2 heures.
L’étape c) de séparation de la phase solide et de la phase liquide est réalisée par des méthodes connues de l’homme du métier, notamment par décantation, centrifugation et/ou filtrations successives, de préférence par filtration. Durant l’étape c), la phase liquide obtenue est avantageusement purifiée et concentrée par exemple par ultrafiltration et/ou filtration stérilisante. L’étape c) est effectuée jusqu’à parfaite limpidité et propreté microbiologique de degré inférieur ou égal à 100 UFC/g en germe totaux.
Avantageusement, l’extrait riche en polyphénols selon l’invention peut être stabilisé par l’étape de séchage d), par des procédés connus de l’homme de l’art.
L’étape d) de séchage peut, par exemple, être réalisée en présence d’un support de type maltodextrines ou fibres d’acacia (Fibregum® société CNI). La teneur en support varie typiquement selon un ratio allant de 0% à 80% de support par rapport au pourcentage de matière sèche obtenu dans la forme liquide de l’extrait.
L’extrait peut éventuellement être séché par lyophilisation afin d’obtenir une poudre finale. La poudre finale comprend avantageusement 30 à 70% en poids de matière sèche de l’extrait, le complément à 100% étant le support de lyophilisation. Plus avantageusement la poudre finale comprend 50% de matière sèche issue de l’extrait et 50% de support de lyophilisation.
Avantageusement, le procédé selon l’invention ne comprend pas d’étape d). Ainsi, l’extrait tel qu’obtenu est conservé dans le solvant d’extraction, le solvant étant en quantité suffisante pour présenter une activité bactériostatique/bactéricide, en particulier le solvant étant en quantité supérieure ou égale à 50% en poids par rapport au poids total de l’extrait et du solvant.
Préférentiellement, à titre d’exemple,l’extrait riche en polyphénols selon l’invention peut être obtenu selon le procédé suivant :
  1. Broyage des parties aériennes de basilic sacré ;
  2. Mise en solution des parties aériennes broyées à 10% (p/p) dans un mélange 1,3– propanediol / eau (60/40) ;
  3. Extraction sous agitation pendant 2h à 60°C ;
  4. Purification par étapes de filtrations successives ;
  5. Filtration stérile ; et
Dans la suite de la description, on parlera d’« extrait selon l’invention » pour désigner l’extrait en tant que tel, tel que défini ci-dessus, ou l’extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’invention tel que décrit ci-dessus. L’extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’invention tel que décrit ci-dessus présente la même composition que l’extrait selon l’invention en tant que tel, tel que défini ci-dessus.
L’invention a également pour objet une composition comprenant un extrait selon l’invention et un mélange eau/solvant dans un ratio eau/solvant (v/v) compris entre 50/50 et 0/100, avantageusement entre 30/70 et 10/90, plus avantageusement 20/80, ledit solvant étant choisi parmi les glycols, la glycérine végétale et leurs mélanges, de préférence parmi les glycols d’origine végétale, et préférentiellement parmi le 1,3-propanediol.
Avantageusement, la composition comprend de 0.001 à 30 % en poids, avantageusement 0.001 % à 10 % en poids, d’un extrait selon l’invention (exprimés en poids d’extrait sec par rapport au poids total de la composition) et entre 70 % et 99.999 % en poids, avantageusement entre 90 % et 99.999 % en poids, d’un mélange eau/solvant, par rapport au poids total de la composition, le ratio eau/solvant étant compris entre 50/50 et 0/100, avantageusement entre 30/70 et 10/90, plus avantageusement 20/80, et le solvant étant choisi parmi les glycols, la glycérine végétale et leurs mélanges, de préférence parmi les glycols d’origine végétale, et préférentiellement parmi le 1,3-propanediol. Selon cet aspect de l’invention, le solvant est en quantité efficace pour une action de stabilisation physique et microbiologique de la composition selon l’invention et notamment de l’extrait selon l’invention.
L’invention a également pour objet une composition comprenant un extrait riche en polyphénols des parties aériennes d’Ocinum sanctumselon l’invention, en tant que principe actif, et le cas échéant un excipient approprié. L’extrait selon l’invention est tel que défini dans les paragraphes ci-dessus concernant l’extrait en tant que tel et ceux concernant l’extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’invention.
La composition est avantageusement cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique. Ladite composition est de préférence formulée pour être administrée par voie topique externe.
Avantageusement, la composition selon l’invention comprend de 0,001 à 10 %, typiquement de 0,01 à 5 %, en poids d’extrait selon l’invention, le poids de l’extrait étant exprimé en extrait sec, par rapport au poids total de la composition.
La composition selon l’invention peut comprendre en outre un ou plusieurs autres principes actifs.
La composition selon l’invention peut être formulée sous la forme de différentes préparations adaptées à une administration topique et incluent notamment les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays, les shampooings, les vernis ou tout autre produit pour application externe.
Selon sa nature (cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique), la composition selon l’invention peut en outre comprendre au moins un excipient cosmétiquement, pharmaceutiquement ou dermatologiquement acceptable. Notamment, la composition selon la présente invention peut en outre comprendre au moins un adjuvant cosmétiquement, pharmaceutiquement ou dermatologiquement connu de l’homme du métier, choisi parmi les tensioactifs, les épaississants, les conservateurs, les parfums, les colorants, des filtres chimiques ou minéraux, les agents hydratants, les eaux thermales, etc. L’homme du métier sait adapter la formulation de la composition selon l’invention en utilisant ses connaissances générales.
Les posologies et les formes galéniques optimales des compositions selon l’invention peuvent être déterminées selon les critères généralement pris en compte dans l’établissement d’un traitement pharmacologique, dermatologique ou cosmétique adapté à un patient ou à un animal, comme par exemple l’âge ou le poids corporel du patient ou de l’animal, la gravité de son état général, la tolérance au traitement, les effets secondaires constatés, le type de peau.
L’invention a aussi pour objet un extrait selon l’invention ou une composition selon l’invention pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter les troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) et/ou des phanères (cheveux et ongles) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s), avantageusement les réactions inflammatoires, les réactions d’oxydation, les désordres liés à des stress intrinsèques ou extrinsèques (tels que le stress psychologique, le stress lié à un état d’anxiété, le stress liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution (notamment la pollution chimique ou atmosphérique) et/ou liées à l’exposition aux UV ou aux IR), les troubles de la barrière ou de l’homéostasie, le vieillissement, notamment le vieillissement chronologique et/ou actinique, la peau photosensibilisée, et/ou les agressions mécaniques ou thermiques.
L’invention a aussi pour objet un extrait selon l’invention ou une composition selon l’invention pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter les troubles vasculaires, en particulier les rougeurs et les couperoses.
L’invention a aussi pour objet un extrait selon l’invention ou une composition selon l’invention pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter les déséquilibres et/ou les troubles liés au déséquilibre du microbiote de la peau et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) et/ou des phanères et/ou leurs annexes, immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s). En effet, l’extrait selon l’invention présente une activité protectrice de la peau et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) et/ou des phanères et/ou leurs annexes, immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s), à l’encontre des agressions mécaniques, microbiennes, thermiques et radicalaires. L’extrait selon l’invention agit pour la défense du microbiote et permet donc de lutter contre le déséquilibre microbiote. En outre, l’extrait selon l’invention permet de stimuler les défenses immunitaires de la peau et le système antioxydant cutanée.
L’invention a également pour objet l’utilisation d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention pour la fabrication d’une composition cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique pour prévenir et/ou traiter les troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) et/ou des phanères (cheveux et ongles) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s), avantageusement les réactions inflammatoires, les réactions d’oxydation, les désordres liés à des stress intrinsèques ou extrinsèques (tels que le stress psychologique, le stress lié à un état d’anxiété, le stress liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution (notamment la pollution chimique ou atmosphérique) et/ou liées à l’exposition aux UV ou aux IR), les troubles de la barrière ou de l’homéostasie, le vieillissement, notamment le vieillissement chronologique et/ou actinique, la peau photosensibilisée, et/ou les agressions mécaniques ou thermiques.
L’invention a aussi pour objet l’utilisation d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention pour la fabrication d’une composition pharmaceutique, cosmétique ou dermatologique pour prévenir et/ou traiter les troubles vasculaires, en particulier les rougeurs et les couperoses.
L’invention a aussi pour objet l’utilisation d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention pour la fabrication d’une composition pharmaceutique, cosmétique ou dermatologique pour prévenir et/ou traiter les déséquilibres et/ou les troubles liés au déséquilibre du microbiote de la peau et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) et/ou des phanères et/ou leurs annexes, immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s).
L’invention a en outre pour objet une méthode pour prévenir et/ou traiter les troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) et/ou des phanères (cheveux et ongles) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s), avantageusement les réactions inflammatoires, les réactions d’oxydation, les désordres liés à des stress intrinsèques ou extrinsèques (tels que le stress psychologique, le stress lié à un état d’anxiété, le stress liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution (notamment la pollution chimique ou atmosphérique) et/ou liées à l’exposition aux UV ou aux IR), les troubles de la barrière ou de l’homéostasie, le vieillissement, notamment le vieillissement chronologique et/ou actinique, la peau photosensibilisée, et/ou les agressions mécaniques ou thermiques, comprenant l’administration, notamment l’administration topique, d’une quantité efficace d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention, à un sujet en ayant besoin.
L’invention a aussi pour objet une méthode pour prévenir et/ou traiter les troubles vasculaires, en particulier les rougeurs et les couperoses, comprenant l’administration, notamment l’administration topique, d’une quantité efficace d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention, à un sujet en ayant besoin.
L’invention a aussi pour objet une méthode pour prévenir et/ou traiter pour prévenir et/ou traiter les déséquilibres et/ou les troubles liés au déséquilibre du microbiote de la peau et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) et/ou des phanères et/ou leurs annexes, immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s), comprenant l’administration, notamment l’administration topique, d’une quantité efficace d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention, à un sujet en ayant besoin.
En particulier, la composition ou l’extrait selon l’invention est destiné(e) à la prévention et/ou au traitement des réactions ou pathologies inflammatoires, irritatives ou des troubles de la barrière ou de l’homéostasie de la peau, des phanères (cheveux et ongles) et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s).
Avantageusement, les réactions, troubles ou pathologies inflammatoires, irritatives ou des troubles de la barrière ou de l’homéostasie de la peau sont : l’acné, la rosacée ou érythrocouperose, les troubles vasculaires, en particulier les rougeurs et les couperoses, la dermite du siège, la dermatite atopique, l’eczéma, la dermatite de contact, la dermatite irritative, la dermatite allergique, la dermite séborrhéique (croûte de lait), la peau sensible, la peau réactive, la peau sèche (xérose), la peau déshydratée, la peau avec rougeur, l’érythème cutané, la peau âgée ou photo âgée, la peau photosensibilisée, la peau pigmentée (mélasma, pigmentation post-inflammatoire...), la peau avec vergetures, les coups de soleil, les irritations par agents chimiques, physiques (par exemple contrainte de tension pour les femmes enceintes), bactériologiques, fongiques, le vieillissement cutanée, notamment du photo vieillissement et les désordres liés à des attaques radicalaires liées à la pollution chimique ou atmosphérique, et/ou liées à l’exposition aux UV ou aux IR.
Avantageusement, les réactions, troubles ou pathologies inflammatoires, irritatives ou des troubles de la barrière ou de l’homéostasie des muqueuses sont les gingivites (gencives sensibles des nouveaux nés, problèmes d’hygiène, dus au tabagisme ou autres), et les irritations des sphères génitales mâles ou femelles externes ou internes.
Avantageusement, les réactions, troubles ou pathologies inflammatoires, irritatives ou des troubles de la barrière ou de l’homéostasie des phanères sont les ongles cassants, les ongles fragiles, les cheveux fragilisés, les cheveux cassants, les cheveux secs, l’alopécie, les dermites séborrhéiques, et les dermites folliculites.
De manière particulièrement avantageuse, la composition ou l’extrait selon l’invention est destiné(e) comme anti-âge, contre le vieillissement cutané, en particulier chronologique et actinique, par exemple lié à l’exposition solaire ou à des phénomènes d’inflammation, ou encore pour agir sur les peaux irritées.
L’invention a également pour objet l’utilisation cosmétique d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention dans le traitement et /ou la prévention de la peau déshydratée ; la peau avec rougeur ; la peau âgée ; du vieillissement cutané.
L’invention a également pour objet l’utilisation cosmétique d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention pour le soin des phanères, notamment pour la prévention des ongles cassants ; des ongles fragiles ; des cheveux fragilisés ; des cheveux cassants ; et des cheveux secs.
L’invention concerne également un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses, en vue d’améliorer leur état et/ou leur aspect, consistant à administrer une composition ou un des extraits selon la présente invention.
En particulier, l’invention concerne un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères, en vue d’en prévenir les altérations de la barrière et sa déshydratation, consistant à appliquer sur la peau et/ou les phanères une composition ou un extrait selon la présente invention.
L’invention concerne un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères, en vue d’en prévenir le vieillissement consistant à appliquer sur la peau et/ou les phanères une composition ou un extrait selon la présente invention.
L’invention concerne également l’utilisation cosmétique d’une composition ou d’un extrait selon l’invention pour hydrater la peau et/ou les muqueuses, pour agir sur l’élasticité ou la fermeté de la peau, en particulier comme agent tenseur ou anti-rides, pour agir sur les peaux sensibles.
Description des Figures
: la décrit la Mesure de la production de NO par des kératinocytes soumis à un stress au cortisol
[Fig. 2] : la [Fig. 2] décrit les effets de l’extrait de basilic sacré sur la bioénergétique cellulaire dans des fibroblastes soumis à un stress polluant, en particulier les effets sur la consommation d’oxygène , la production ATP , la production de lactate et le ratio NAD/NADH (*p<0.05 ; ** p<0.01 vs contrôle non traité ; #p<0.05 ; ##p<0.01 vs polluant).
: la décrite le pourcentage de mitochondries endommagées par cellules (%) (###p<0.0001 vs polluant).
: la démontre la densité lysosomale (intensité / µm²) (*** p<0.0001 vs contrôle ; #p<0.05 ; ###p<0.0001 vs polluant).
: Mitophagie (% de lysosomes co-localisés à des mitochondries endommagées) (*** p<0.0001 vs contrôle ; ###p<0.0001 vs polluant)
: la démontre le pourcentage de migration des fibroblastes entre T0 et T40h
Exemple 1 : extrait selon l’invention
Un extrait de basilic sacré est obtenu selon le procédé suivant :
a) mise en solution de 10% (p/p) des parties aériennes d’Ocimum sanctum –variétépourpre -broyées dans un mélange eau /propanediol 40/60 p/p
b) extraction 2h à 60°C
c) séparation solide/liquide par filtrations successives.
L’extrait liquide riche en polyphénols ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes (% en poids de molécules /extrait sec de l’extrait obtenu) :
  • Extrait sec (2h, 105°C, étuve ventilée) : 1.0%
  • Polyphénols totaux : 11.4%
  • Flavonoïdes : 3.6%
  • Dérivés hydroxycinnamiques : 7.6%
Exemple 2 : extrait selon l’invention
Un extrait de basilic sacré est obtenu selon le procédé suivant :
a) mise en solution de 10% (p/p) des parties aériennes d’Ocimum sanctum –variétéverte -broyées dans un mélange eau /propanediol 40/60 p/p
b) extraction 3h à 60°C
c) séparation solide/liquide par filtrations successives.
L’extrait liquide riche en polyphénols ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes (% en poids de molécules /extrait sec de l’extrait obtenu) :
  • Extrait sec (2h, 105°C, étuve ventilée) : 1.4%
  • Polyphénols totaux (déterminination par le méthode de Folin Ciocalteu): 16%
  • Flavonoïdes : 3.5%
  • Dérivés hydroxycinnamiques : 20%
Exemple 3 : Tests d’activités biologiques de l’extrait selon l’invention
A. Activité anti-oxydante
A.1. Effet anti-oxydant
A.1.1 Activité sur la production de ROS induits par H 2 O 2 dans des kératinocytes humains normaux
L’activité anti-oxydante de l’extrait de basilic sacré a été recherchée en évaluant la quantité de ROS (Reactive Oxygen Species, ou ERO Espèces Réactives de l’Oxygène) produits par des kératinocytes soumis à un stress oxydatif induit par H2O2.
a. Matériel et méthode
Des kératinocytes humains normaux ont été traités pendant 24 heures par six concentrations de l’extrait de basilic sacré obtenu selon l’exemple 1 (0,00032% à 0,01% ms) ou les molécules de référence anti-oxydantes : Quercétine à 10 µM ou Vitamine C à 500 µM, avant incorporation de la sonde H2DCF-DA.
Les kératinocytes ont ensuite été stimulés par du peroxyde d’hydrogène (H2O2) à 100 µM pendant 20 minutes.
La production de ROS a été évaluée par mesure de la fluorescence émise par la sonde au contact des ROS.
Les résultats ont été analysés statistiquement par une ANOVA à un facteur, suivie d’un test de Tukey.
b. Résultats
Les résultats sont regroupés dans le tableau 2. L’extrait de basilic sacré a significativement, et de façon dose-dépendante, inhibé la production de ROS par des kératinocytes en réponse à un stress oxydant induit par H2O2 ; il présente doncune activité anti-oxydante.
[Table 2] Production de ROS par des kératinocytes soumis à un stress H2O2
A.1.2. Activité sur la production de ROS induits par les UVA sur des épidermes humains reconstruits
L’effet protecteur vis-à-vis d’un stress oxydatif induit par une irradiation aux UVA a été étudié par dosage des ROS sur des épidermes humains reconstruits.
a. Matériel et méthode
Des épidermes humains reconstruits ont été pré-traités par une formulation contenant 3% d’extrait de basilic obtenu selon l’exemple 1 ou son placebo pendant 24 heures. Les épidermes ont ensuite été irradiés par 30J/cm² d’UVA.
La production de ROS a été évaluée par mesure de fluorescence émise par la sonde H2DCF-DA au contact des ROS.
b. Résultats
Les résultats sont regroupés dans le tableau 3. L’extrait de basilic sacré en formulation à 3% a inhibé la production de ROS induite par les UVA, ce qui démontre un effet protecteur vis-à-vis d’un stress oxydatif induit par une irradiation aux UVA.
[Table 3] Production de ROS dans des épidermes reconstruits irradiés aux UVA
1.3. Activité sur la production de ROS induits par la ménadione dans des kératinocytes et des fibroblastes humains normaux
L’activité anti-oxydante de l’extrait de basilic sacré a été recherchée en évaluant la quantité de ROS produits par des kératinocytes ou des fibroblastes soumis à un stress oxydatif induit par la ménadione.
a. Matériel et méthode
Des kératinocytes humains normaux, d’une part, et des fibroblastes humains normaux, d’autre part, ont été traités pendant 24 heures par l’extrait de basilic sacré à 0,001% et 0,005% de matière sèche (ms) obtenu selon l’exemple 1 ou par le N-Acetyl Cystéine à 10 mM (NAC), molécule scavenger de ROS utilisée comme référence anti-oxydante. Le stress oxydatif a alors été induit par incubation 1h en présence de ménadione à 50 ou 20 µM (2-méthyl-1,4-naphtoquinone).
Les ROS ont été marqués par la sonde CellRox® ; la fluorescence intracellulaire, proportionnelle à la quantité de ROS a été mesurée.
Les résultats ont été analysés statistiquement par une ANOVA à un facteur, suivie d’un test de Dunnett.
b. Résultats
Les résultats sont regroupés dans les tableaux 4 et 5. L’extrait de basilic sacré a significativement inhibé la production de ROS induit par un stress à la ménadione dans des kératinocytes (Tab.4) et des fibroblastes (Tab.5), confirmant sonactivité anti-oxydante.
[Table 4] Production de ROS par des kératinocytes soumis à un stress à la Ménadione
[Table 5] Production de ROS par des fibroblastes soumis à un stress à la Ménadione
A.2. Inhibition de la peroxydation lipidique
Les ROS sont les principaux activateurs de la péroxydation lipidique, ayant pour cibles principales les lipides polyinsaturés liés à la membrane cellulaire. L’activité anti-peroxydation lipidique de l’extrait de basilic sacré a été recherchée dans des kératinocytes ou des fibroblastes soumis à un stress oxydatif induit par l’hydroperoxyde de cumène.
a. Matériel et méthode
Des kératinocytes humains normaux, d’une part, et des fibroblastes humains normaux, d’autre part, ont été traités pendant 24 heures par l’extrait de basilic sacré à 0,001% et 0,005% ms obtenu selon l’exemple 1 ou par la référence anti-oxydante, vitamine E à 200µM. Le stress oxydatif a alors été induit par incubation 1h en présence d’hydroperoxyde de cumène à 200 ou 50µM.
Les peroxydes lipidiques ont été révélés par marquage à l’aide de la sonde BODIPY® 581/591 C11 ; la fluorescence intracellulaire a été mesurée.
Les résultats ont été analysés statistiquement par une ANOVA à un facteur, suivie d’un test de Tukey.
b. Résultats
Les résultats ont été regroupés dans les tableaux 6 et 7. L’extrait de basilic sacré a significativement inhibé la peroxydation des lipides induite par un stress oxydatif dans des kératinocytes (tab.6) et des fibroblastes (tab.7), confirmant sonactivité anti-oxydante.
[Table 6] Quantification de la peroxydation lipidique dans des kératinocytes soumis à un stress à l’hydroperoxyde de cumène
[Table 7] Quantification de la peroxydation lipidique dans des fibroblastes soumis à un stress à l’hydroperoxyde de cumène
A.3. Effet sur les défenses anti-oxydantes
Le glutathion (GSH) est le principal peptide anti-oxydant endogène capable de neutraliser les ROS. Une déplétion intra-cellulaire en GSH est responsable des dommages induits par le stress oxydatif, associés à une toxicité mitochondriale.
L’effet de l’extrait de basilic sacré sur le stock de glutathion intracellulaire a été évalué dans des fibroblastes soumis à un stress oxydatif induit par la ménadione.
a. Matériel et méthode
Des fibroblastes humains normaux ont été traités pendant 24 heures par l’extrait de basilic sacré à 0,001% et 0,005% ms obtenu selon l’exemple 1 ou par la référence anti-oxydante, NAC à 10 mM. Le stress oxydatif a alors été induit par incubation 4h en présence de ménadione à 25 µM.
Le stock en GSH a été suivi à l’aide de la sonde fluorescente Monochlorobimane (Mbi) ; la fluorescence intracellulaire, proportionnelle à la quantité de GSH, a été mesurée.
b. Résultats
Les résultats ont été regroupés dans le tableau 8. L’extrait de basilic sacré a restauré le stock de glutathion intracellulaire déplété sous l’effet du stress oxydatif induit par la ménadione de manière plus significative que la référence anti-oxydante (NAC à 10 mM), ce résultat confirme l’activitéanti-oxydantede l’extrait.
[Table 8] Evolution du contenu en glutathion (GSH) dans des fibroblastes soumis à un stress à la Ménadione
A.4. Conclusion
L’ensemble de ces résultats montrent l’activité anti-oxydante de l’extrait de basilic sacré.
B. Activité anti-inflammatoire
L’activité anti-inflammatoire de l’extrait de basilic sacré a été recherchée par dosage de l’interleukine 8 (IL8) produite par des kératinocytes en réponse à un stress pro-inflammatoire induit par le PMA.
a. Matériel et méthode
Des kératinocytes humains normaux ont été pré-incubés pendant 24 heures en présence de l’extrait de basilic sacré obtenu selon l’exemple 1 à 0,001%, 0,005% ou 0,01% ms ou de dexaméthasone à 0,1µM, référence anti-inflammatoire. Les cellules ont ensuite été stimulées par traitement 24 heures en présence 10 µg/ml de PMA (Phorbol-Myristate-Acetate).
A l’issue du traitement, l’IL8 produite a été quantifiée par dosage ELISA dans les surnageants de culture.
Les résultats ont été analysés statistiquement par un test t de Student.
b. Résultats
Les résultats ont été regroupés dans le tableau 9. L’extrait de basilic sacré a significativement inhibé la production d’IL8 induite par le PMA dans les kératinocytes, parfois de manière plus significative que la référence dexaméthasone ; il présente donc une activité anti-inflammatoire.
[Table 9] Dosage de l’interleukine 8 produite par des kératinocytes soumis à un stress inflammatoire induit par le PMA
C. Activité anti-âge
Le vieillissement cutané se caractérise par une altération de la matrice dermique avec, notamment, une diminution de la qualité et quantité des fibres matricielles, principalement collagène et élastine.
L’activité anti-âge du basilic sacré a été évaluée par sa capacité à stimuler l’expression et la production de marqueurs de la matrice dermique en conditions standards et dans des conditions de stress inflammatoire modélisant l’inflammation chronique, également appelée l’« inflamm’aging » ou inflammation bas grade.
C.1. Effet sur la matrice dermique
L’effet de l’extrait de basilic sacré sur l’expression de marqueurs de la matrice dermique a été évalué sur des fibroblastes dermiques humains normaux en culture ou sur des peaux humaines reconstruites.
C.1.1 Stimulation de l’expression génique de marqueurs de la matrice dermique dans des fibroblastes humains normaux
a. Matériel et méthode
Des fibroblastes dermiques humains normaux ont été incubés pendant 48 heures en présence de l’extrait de basilic sacré obtenu selon l’exemple 1 à 0,001% et 0,005% ms ou de TGFβ1 à 5ng/ml, référence positive du test.
L’expression génique du Collagène I, de l’Elastine, de la Dermatopontine et de la MMP1 (Matrix-Metalloproteinase-1) a été évaluée par PCR quantitative en temps réel.
Les résultats ont été analysés statistiquement par une analyse de variance à un facteur (ANOVA), suivie d’un post-test de Dunnett.
b. Résultats
Les résultats ont été regroupés dans le tableau 10. L’extrait de basilic sacré a significativement stimulé l’expression génique du collagène I, de l’élastine et de la dermatopontine, marqueurs clés impliqués dans la densité de la matrice dermique. De plus, l’extrait a significativement inhibé l’expression génique de la MMP1, enzyme impliquée dans la dégradation de la matrice dermique.
Ces résultats démontrent unedensification de la matrice dermiqueet ainsi une activitéanti-vieillissement cutané.
[Table 10] Expression génique de marqueurs de la matrice dermique dans des fibroblastes
C.1.2 Stimulation de l’expression protéique de marqueurs de la matrice dermique dans des fibroblastes humains normaux
a. Matériel et méthode
Des fibroblastes dermiques humains ont été traités pendant 48 heures par l’extrait de basilic sacré obtenu selon l’exemple 1 à 0,001% et 0,005% ms ou par un mélange Vitamine C à 10µM et TGFβ à 5 ng/ml, utilisé comme référence positive.
La production de collagène I a été évaluée par marquage en immunofluorescence et analyse d’image.
b. Résultats
Les résultats ont été regroupés dans le tableau 11. L’extrait de basilic sacré a significativement stimulé le marquage de collagène I dans des fibroblastes. Ce résultat confirme l’activité de l’extrait sur ladensification de la matrice dermique.
[Table 11] Production de Collagène I par des fibroblastes
C.1.3 Stimulation de l’expression protéique de marqueurs de la matrice dermique dans des fibroblastes humains normaux
a. Matériel et méthode
Une formulation (crème) contenant 3% d’extrait de basilic sacré obtenu selon l’exemple 1 , ou son placébo, ont été appliqués en surface de peaux humaines reconstruites. Après 24 heures d’incubation, l’expression génique de marqueurs d’intérêt pour leurs bénéfices dermiques a été évaluée par PCR quantitative en temps réel.
b. Résultats
Les résultats ont été regroupés dans le tableau 12. L’extrait de basilic sacré a significativement augmenté l’expression des gènes CLN3 et PXN dans des peaux reconstruites.
CLN3 code pour une protéine transmembranaire lysosomale/endosomale (ceroid-lipofuscinosis neuronal 3) impliquée dans la régulation du processus d’autophagie. L’autophagie est un processus intracellulaire de détoxification permettant la dégradation et le recyclage de protéines et organites endommagés. Ce processus est indispensable pour le maintien du fonctionnement et de l’homéostasie cellulaires. La stimulation de l’autophagie présente un intérêt pour ralentir le vieillissement et allonger la durée de vie des cellules.
PXN code pour une molécule d’adhésion focale (paxillin), dont l’expression diminue avec l’âge et représente donc une cible pour une action anti-âge. En raison de son rôle crucial dans les connections cellule-matrice et la mécanotransduction entre le fibroblaste et sa matrice, la perte de paxilline avec l’âge pourrait compromettre le fonctionnement cellulaire, résultant dans l’apparition ou l’aggravation de vieillissement cutané. L’induction de son expression pourrait contribuer à restaurer la perte de collagène et de contractilité du derme liées à l’âge.
[Table 12] Gènes modulés significativement par la formulation à 3% d’extrait de basilic sacré comparativement au placébo (fixé à 1.00)
C.2. Effet dans un modèle d’Inflamm’aging
Avec l’âge, une inflammation bas grade, silencieuse mais chronique peut s’installer au sein des tissus cutanés. Celle-ci est la conséquence des expositions à des stress externes cumulées au cours de la vie. Cette inflammation se traduit par le relargage de cytokines inflammatoires (IL1, IL6, TNF, CRP…), capables de générer des dommages tissulaires et la production d’espèces réactives de l’oxygène, favorisant ainsi l’accélération du processus de vieillissement cutané. Ce phénomène de vieillissement cutané lié à un processus inflammatoire est nomméInflamm’aging.
L’extrait de basilic sacré a été évalué dans un modèlein vitroreproduisant le processus d’inflammaging : une inflammation, représentée par la stimulation de la production d’IL1α, est induite sur des épidermes reconstruits. Les milieux conditionnés de ces épidermes reconstruits sont ensuite appliqués sur des fibroblastes et l’expression de marqueurs dermiques, altérés par l’IL1α produit par les épidermes, est évaluée.
a. Matériel et méthode
Des épidermes reconstruits ont été traités en topique par une formulation (crème) contenant 3% d’extrait de basilic sacré obtenu selon l’exemple 1 ou son placébo, ou en systémique par la dexaméthasone à 1µM, référence anti-inflammatoire. Après 24 heures de pré-incubation, les épidermes ont été stimulés par 0,5µg/ml de PMA et incubés de nouveau pour 24 heures.
Les sousnageants de culture ont été collectés, un dosage d’IL1α a été réalisé d’une part et, d’autre part, ces sousnageants (milieux conditionnés) ont été déposés sur des cultures de fibroblastes dermiques humains normaux.
Après 24 heures d’incubation des fibroblastes en présence des milieux conditionnés, l’expression de marqueurs d’intérêt a été évaluée par PCR quantitative en temps réel.
Les résultats ont été analysés statistiquement à l’aide d’une ANOVA suivie d’un test de Tukey.
b. Résultats
Les résultats ont été regroupés dans les tableaux 13 et 14. L’extrait de basilic sacré, formulé à 3%, a significativement inhibé le relargage d’IL1α induit par le PMA sur des épidermes reconstruits (tab.13). Cet effet est significativement plus élevé que celui du placébo.
L’application sur les cultures de fibroblastes des milieux conditionnés, des épidermes reconstruits stimulés par le PMA, a induit des variations d’expression génique de marqueurs inflammatoires, du stress oxydant, de synthèse et de dégradation de la matrice dermique (tab. 14). Ces résultats valident le modèle d’Inflamm’aging.
Dans ces conditions, l’extrait de basilic sacré a modulé la surexpression des cytokines et chimiokines (CXCL1, IL8, IL6, CCL2), de marqueurs du stress oxydatif (MT1G, SOD2), des enzymes de dégradation de la matrice (MMP1, MMP3) et de l’ICAM1. L’extrait a également permis de restaurer l’expression des marqueurs de l’assemblage de la matrice (HAS2, DPT).
Ces résultats montrent la capacité de l’extrait de basilic sacré àmoduler le processus d’inflamm’aging.
[Table 13] Dosage de l’IL1α produit par des épidermes reconstruits stimulés par le PMA
[Table 14] Gènes modulés par la formule à 3% de Basilic sacré dans le modèle d’Inflamm’aging : expression génique dans les fibroblastes incubés en présence des milieux conditionnés
(Niveau d’expression en quantité relative ; % d’évolution par rapport au PMA)
D. Activité de défense contre différents stress
La peau est quotidiennement exposée à différents types de stress exogènes et/ou endogènes, susceptibles d’en altérer le fonctionnement et la qualité, et pouvant à terme conduire à des dommages irréversibles.
L’effet protecteur de l’extrait de basilic sacré a été évalué dans différents modèles représentatifs de différents stress externes (pollution) ou internes (stress psychologique).
D.1. Protection contre les dommages cutanés liés au stress psychologique
L’oxyde nitrique (NO) est une espèce réactive impliquée dans la régulation de l’homéostasie cutanée. Cette molécule très instable est synthétisée et relarguée par de nombreux types cellulaires pour réguler des réactions physiologiques et homéostatiques, telles que la mélanogénèse, la cicatrisation, la régulation de l’inflammation, l’immunomodulation, la vasodilatation…
Alors que de faibles niveaux de NO sont importants pour la signalisation cellulaire, le relargage de fortes quantités de NO est généralement associé à un stress oxydatif.
Le stress psychologique se caractérise par une activation de l’axe hypothalamo-pituitaire-adrénalien (HPA), reliant les systèmes nerveux central et endocrinien, qui se caractérise par l’augmentation de glucocorticoïdes endogènes, tels que le cortisol.
De nombreuses études ont décrit les effets négatifs du stress psychologique sur l’homéostasie cutanée, conduisant à une altération des réponses immune et inflammatoire. La réponse inflammatoire inclue l’activation de radicaux libres, parmi lesquels, le NO.
L’extrait de basilic sacré a été évalué dans un modèle reproduisant l’effet du stress psychologique (désordre émotionnel / anxiété) sur la peau par traitement de kératinocytes par du cortisol et quantification du NO comme biomarqueur du stress induit.
a. Matériel et méthode
La production de NO par des kératinocytes épidermiques humains normaux a été mesurée par ampérométrie en continu, pendant 10 minutes, après traitement par du cortisol à 1µM en présence de l’extrait de basilic sacré obtenu selon l’exemple 1 à 0,001% et 0,005% ms ou d’acide ascorbique (AA) à 1mM (référence positive).
b. Résultats
Les résultats apparaissent dans la . L’extrait de basilic sacré a significativement inhibé la production de NO induite dans des kératinocytes par un stress au cortisol. L’extrait permet donc de contrebalancer les effets néfastes d’un stress émotionnel / psychologique sur l’homéostasie cutanée.
D.2. Protection contre les dommages à l’ADN
Les polluants atmosphériques ont des effets négatifs sur de nombreux tissus, dont la peau. L’exposition répétée à des polluants peut contribuer notamment au vieillissement prématuré, à la dépigmentation ou à des dommages à l’ADN.
L’effet protecteur de l’extrait de basilic sacré a été évalué sur les dommages ADN (cassures doubles brins) induits dans des kératinocytes par un stress polluant.
a. Matériel et méthode
Des kératinocytes épidermiques humains normaux ont été pré-incubés pendant 24 heures en présence de l’extrait de basilic sacré obtenu dans l’exemple 1 à 0,001% et 0,005% ms ou de la référence nicotinamide, avant exposition 1 heure à la camptothecine. La camptothécine est un composé génotoxique, inhibiteur de toposiomérase I, utilisé pour l’induction de cassures doubles brins de l’ADN.
Les cassures double brin ont été détectées par immunomarquage de γH2AX (phosphorylation de l’histone H2AX qui intervient précocement en réponse à des cassures double brin) et quantifiées par analyse d’image.
Les résultats ont été analysés statistiquement à l’aide d’une ANOVA suivie d’un test de Tukey.
b. Résultats
Les résultats sont regroupés dans le tableau 15. L’extrait de basilic sacré a significativement inhibé les cassures de l’ADN double brin induites par le traitement à la camptothecine. L’extrait présente donc une activitéprotectrice vis-à-vis d’un stress polluant génotoxique.
[Table 15] Expression de γH2AX dans des kératinocytes en présence d’un stress par la camptothecine
D.3. Protection du fonctionnement mitochondrial face à un stress polluant
L’effet protecteur de l’extrait de basilic sacré vis-à-vis d’une pollution urbaine a été recherché dans des fibroblastes humains normaux. Les cellules ont été exposées au polluant urbain en présence de l’extrait, la bioénergétique cellulaire a été analysée par la technologie BBS+, ainsi que l’occurrence de l’autophagie/mitophagie.
L’altération du fonctionnement mitochondrial joue un rôle central dans le processus de vieillissement ; 90% de la production de ROS liés à l’âge est d’origine mitochondriale.
Les facteurs environnementaux (UV, Pollution) peuvent ralentir le fonctionnement cellulaire et augmenter le stress oxydatif, contribuant au vieillissement prématuré.
Les ROS intracellulaires sont principalement formés par dysfonctionnement de la chaine mitochondriale de transfert des électrons.
L’ADN mitochondrial est particulièrement sensible aux ROS, avec pour conséquences, les phénomènes suivants qui contribuentin fineau processus de vieillissement :
diminution de la production énergétique,
augmentation du stress oxydatif,
augmentation des fonctions mitochondriales.
D.3.1 Etude de la bioénergétique cellulaire
a. Matériel et méthode
Des fibroblastes dermiques humains normaux ont été incubés pendant 120 minutes en présence du mélange de polluants urbains à 0,1% et de l’extrait de basilic sacré obtenu dans l’exemple 1 à 0,001% et 0,005% ms.
La bioénergétique cellulaire a été évaluée par la méthode BBS+ (Bioenergetic Balance Screen Plus) qui consiste en une quantification multiplexée de la consommation de dioxygène, de la production d’ATP, du niveau de lactate extracellulaire et du ratio NAD+/NADH.
Les résultats ont été analysés statistiquement par un test t de Student.
b. Résultats
Les résultats apparaissent à la [Fig. 2]. L’exposition des cellules aux polluants urbains a induit une altération de la chaine respiratoire de transport des électrons se traduisant par une diminution de la consommation d’oxygène et du niveau d’ATP.
Dans ces conditions, l’extrait de basilic sacré a augmenté de façon dose-dépendante le taux de consommation d’oxygène, tout en stimulant la production d’ATP. Ces observations démontrent un effet direct de l’extrait sur la stimulation et la normalisation du fonctionnement du cycle de Krebs et de la production d’énergie. L’extrait a également une capacité à résoudre l’altération de la chaine respiratoire mitochondriale induite par le polluant. Enfin, la diminution de la production de lactate par l’extrait montre que celui-ci permet de réduire la contribution de la glycolyse de novo dans la production d’ATP, tout en réengageant l’activité de la chaine respiratoire dans la bioénergétique cellulaire.
L’extrait de basilic sacré permet ainsi de normaliser la balance énergétique altérée par le stress polluant.
D.3.2 Etude de l’autophagie / mitophagie
a. Matériel et méthode
Des fibroblastes dermiques humains normaux ont été incubés pendant 120 minutes en présence du mélange de polluants urbains à 0,1% et de l’extrait de basilic sacré obtenu dans l’exemple 1 à 0,001% et 0,005% ms.
L’analyse de l’autophagie et de la mitophagie a été évaluée via un marqueur lysosomal et un colorant spécifique des mitochondries endommagées : Les mitochondries endommagées ont été visualisées par une fluorescence rouge produite par réaction d’un fluorochrome lié par liaison covalente à la membrane mitochondriale qui émet quand des dommages à la membrane mitochondriale ont lieu. Un colorant lysosomal a été utilisé pour marquer les lysosomes et évaluer la colocalisation des mitochondries endommagées aux lysosomes.
Trois paramètres ont été analysés :
- le pourcentage de mitochondries endommagées par cellules ;
- la densité de lysosomes par cellules (indice lysosomal représentatif de l’autophagie) ;
- le pourcentage de lysosomes incluant des litochondries endommagées (indice mitophagique représentatif de la mitophagie).
Les résultats ont été analysés statistiquement par un test t de Student.
b. Résultats
Les résultats sont regroupés dans les Figures 3, 4 et 5. L’exposition des cellules aux polluants urbains a augmenté le nombre de mitochondries endommagées. L’extrait de basilic sacré a très fortement et significativement inhibé la quantité de mitochondries endommagées ( ).
Au cours de la macro-autophagie, des autophagosomes se forment pour véhiculer les membranes mitochondriales endommagées recyclées vers le compartiment lysosomal. Le stress polluant a significativement augmenté la densité de lysosomes par cellules, montrant une augmentation du processus d’autophagie. L’extrait de basilic sacré a réduit et normalisé la densité lysosomale ( ).
La mitophagie est représentée par le pourcentage de lysosomes co-localisés avec un signal de mitochondries endommagées. La pollution a augmenté la fréquence de lysosomes contenant des mitochondries endommagées, démontrant une augmentation du processus de mitophagie. La pollution augmente le stress mitochondrial et au niveau du réticulum endoplasmique, tous deux inducteurs de dommages à la membrane mitochondriale. L’augmentation de la mitophagie observée sous l’effet du stress est liée aux cellules essayant d’éliminer les mitochondries endommagées et/ou les protéines ou lipides malformés. L’extrait de basilic sacré a réduit et normalisé la mitophagie induite par le stress polluant ( ).
Au global, l’extrait de basilic sacré a renversé l’effet de la pollution sur l’altération des mitochondries et a normalisé les processus d’autophagie et de mitophagie. Ces résultats montrent une activité protectrice du réseau mitochondrial vis-à-vis d’un stress externe.
E. Activité pro-cicatrisante
L’activité pro-cicatrisante de l’extrait de basilic sacré a été étudiée par évaluation de la migration de fibroblastes dans un modèle de « scratch-assay ».
a. Matériel et méthode
Une éraflure mécanique a été réalisée sur un tapis confluent de fibroblastes dermiques humains normaux. Immédiatement après réalisation de la « cicatrice », l’extrait de basilic sacré obtenu dans l’exemple 1 à 0,001% et 0,005% ms ou le contrôle positif, insuline à 10-5M, ont été ajoutés au milieu de culture et la migration cellulaire suivie au cours du temps par marquage immunofluorescent des noyaux cellulaires. Le pourcentage de migration a été calculé.
b. Résultats
Les résultats sont regroupés dans la . L’extrait de basilic sacré à 0,005% a stimulé la migration de fibroblastes, indiquant l’activité pro-cicatrisante de l’extrait.
F. Activité hydratante
L’effet de l’extrait de basilic sacré a été évalué sur sa capacité à induire la production d’aquaporine 3 dans des kératinocytes.
L’hydratation est un critère important dans la prévention d’une altération de la fonction barrière de la peau. L’aquaporine 3 joue un rôle important pour préserver l’hydratation de la peau : cette protéine transmembranaire est impliquée dans le transport de l’eau et du glycérol dans les kératinocytes pour maintenir l’hydratation épidermique
a. Matériel et méthode
Des kératinocytes épidermiques humains normaux ont été incubés pendant 24 heures en présence de l’extrait de basilic sacré obtenu dans l’exemple 1 à 0,001% et 0,005% ms ou de l’acide rétinoique, référence positive. L’expression d’aquaporine 3 a été évaluée par immunomarquage et quantifiée par analyse d’image.
b. Résultats
Les résultats sont regroupés dans le tableau 16. L’extrait de basilic sacré à 0,001% ms a significativement augmenté l’expression d’aquaporine 3 dans des kératinocytes. Ce résultat révèle l’activité hydratante de l’extrait.
[Table 16] Production d’Aquaporine 3 dans des kératinocytes
G. Activité sur le microbiote cutané
L’effet de l’extrait de basilic sacré a été étudié sur différentes souches bactériennes représentatives du microbiote cutané, plus particulièrement sur leur capacité à former un biofilm.
a. Matériel et méthodes
Souches bactériennes étudiées :
- Staphylococcus epidermidis MFP04 ;
- Staphylococcus aureus MFP03 ;
- Corynebacterium xerosis CIP 100653T/ATCC373 ;
- Micrococcus luteus 0116.
a1. Etude de l’effet de l’extrait sur la croissance bactérienne
L’effet de l’extrait de basilic sacré obtenu dans l’exemple 1 dilué au 1/50e sur la croissance des 6 modèles bactériens a été étudié par suivi de la croissance sous agitation en continue sur 24h (S. aureus, S. epidermidis) ou 48h (M. luteus, C. xerosis), à l’aide d’un incubateur/lecteur de plaques multipuits. Les temps de génération des souches bactériennes ont été mesurés, en prenant comme référence la souche sauvage. Les différences statistiques ont été établies à l’aide du test Mann-Whitney.
a2. Etude de l’effet sur la formation de biofilm
La production de biofilm des espèces bactériennes a été étudiée en plaque multipuits par la technique de coloration par le cristal violet. Les résultats ont été normalisés et exprimés en pourcentage en fonction de la valeur de formation de biofilm en milieu contrôle. Les différences statistiques sont établies à l’aide du test Mann-Whitney.
b. Résultats
Les résultats sont regroupés dans les tableaux 17 et 18. L’extrait de basilic sacré augmente le temps de génération d’une souche pathogène (S. aureus), sans altération significative de la croissance de souches commensales (tab. 17).
Par ailleurs, l’extrait de basilic sacré a fortement et significativement altéré la capacité deS. aureusà former un biofilm (tab.18), sans altérer la capacité des autres souches étudiées à former un biofilm.
Ces résultats démontrent la capacité de l’extrait à préserver l’équilibre du microbiote cutané.
[Table 17] Effet de l’extrait de basilic sacré sur les temps de génération de différentes souches bactériennes
[Table 18] Effet de l’extrait de basilic sacré sur la formation de biofilm de différentes souches bactériennes

Claims (15)

  1. Extrait riche en polyphénols de parties aériennes de basilic sacré,Ocimum sanctum, comprenant au moins 6% en poids de polyphénols, par rapport au poids total de l’extrait sec.
  2. Extrait selon la revendication 1, comprenant au moins 9% en poids, avantageusement au moins 11%, en poids de polyphénols, par rapport au poids total de l’extrait sec.
  3. Extrait selon l’une quelconque des revendications 1 à 2, dans lequel ledit extrait comprend au moins 7 % en poids de dérivés hydroxycinnamiques par rapport au poids total de l’extrait sec.
  4. Extrait selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel ledit extrait comprend en outre au moins 2.5 % en poids, avantageusement au moins 3,5% en poids de flavonoïdes, exprimé en équivalent rutine par rapport au poids total de l’extrait sec.
  5. Extrait selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu’il est obtenu par extraction solide/liquide de parties aériennes de basilic sacré, dans un solvant choisi parmi l’eau, les glycols, et leurs mélanges.
  6. Extrait selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu’il est obtenu par extraction solide/liquide de parties aériennes de basilic sacré, dans un solvant choisi parmi les mélanges binaires eau/glycol, et leurs mélanges, avantageusement dans une proportion comprise entre 30 % et 90% de glycol dans l’eau.
  7. Procédé de préparation d’un extrait riche en polyphénols de parties aériennes de basilic sacré, tel que défini selon l’une quelconque des revendications 1 à 4,comprenant au moins une étape d’extraction solide/liquide dans un solvant choisi parmi l’eau, les glycols, et leurs mélanges.
  8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce qu’il comprend les étapes successives suivantes :
    a) broyage des parties aériennes séchées de basilic sacré ;
    b) extraction solide/liquide des parties aériennes de basilic sacré broyées dans un solvant choisi parmi l’eau, les glycols, et leurs mélanges ;
    c) séparation de la phase solide et de la phase liquide par décantation et/ou centrifugation et/ou filtrations successives ; et
    d) éventuellement séchage de l’extrait obtenu à l’étape c).
  9. Procédé selon la revendication 7 ou 8,caractérisé en ce que ledit solvant d’extraction solide/liquide est choisi parmi les mélanges binaires eau/glycol, et leurs mélanges, avantageusement dans une proportion comprise entre 30 % et 90% de glycol dans l’eau.
  10. Procédé selon l’une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisé en ce que le glycol est un glycol végétal, en particulier un propanediol ou le propylène glycol, notamment le 1,3-propanediol.
  11. Composition comprenant en tant que principe actif, un extrait de parties aériennes de basilic sacré, tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 6 ou d’un extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’une quelconque des revendications 7 à 10, et avantageusement un excipient approprié.
  12. Extrait selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 ou extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’une quelconque des revendications 7 à 10 ou composition selon la revendication 11, pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter :
    - les troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères, avantageusement les réactions inflammatoires, les réactions d’oxydation, les désordres liés à des stress intrinsèques ou extrinsèques (tels que le stress psychologique, le stress lié à un état d’anxiété, le stress liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution chimique ou atmosphérique, et/ou liées à l’exposition aux UV ou aux IR), les troubles de la barrière ou de l’homéostasie, le vieillissement, notamment le vieillissement chronologique et/ou actinique, la peau photosensibilisée, les agressions mécaniques et/ou thermiques ; et/ou
    - les troubles vasculaires, notamment les rougeurs ou les couperoses et/ou
    - les déséquilibres du microbiote.
  13. Procédé de soin cosmétique non thérapeutique de la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses, en vue d’améliorer leur état et/ou leur aspect, consistant à administrer un extrait tel que défini selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 ou un extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’une quelconque des revendications 7 à 10 ou une composition telle que définie selon la revendication 11.
  14. Procédé de soin cosmétique non thérapeutique selon la revendication 13, caractérisé en ce qu’il est destiné à prévenir les altérations de la barrière de la peau et sa déshydratation et/ou à prévenir le vieillissement cutané.
  15. Utilisation cosmétique non thérapeutique d’un extrait selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 ou d’un extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’une quelconque des revendications 7 à 10 ou d’une composition selon la revendication 11 dans le traitement et /ou la prévention de la peau déshydratée ; la peau avec rougeur ; la peau âgée ; ou le vieillissement cutané.
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