CN117529328A - 圣罗勒的地上部分的提取物及含有其的美容组合物或皮肤病用组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及圣罗勒(特别是神罗勒)的地上部分的提取物，用于制备该提取物的方法，以及可通过所述方法获得的提取物。本发明还涉及包含所述提取物的组合物，该组合物有利地为美容组合物、药物组合物或皮肤病用组合物。本发明还涉及所述组合物或所述提取物，其用于预防或治疗皮肤、粘膜或皮肤附属物的病症或疾病的用途，以及其用于预防或治疗血管疾病的用途。最后，本发明涉及用于皮肤、皮肤附属物或粘膜以改善其状况或外观的美容护理方法，该方法包括施用所述组合物或所述提取物。

Description

圣罗勒的地上部分的提取物及含有其的美容组合物或皮肤病 用组合物

技术领域

本发明涉及一种包含绿色或紫色圣罗勒(神罗勒(Ocimum sanctum))地上部分的提取物的组合物。该组合物有利地为美容组合物、药物组合物或皮肤病用组合物。本发明还涉及一种提取圣罗勒地上部分的提取物的方法以及可通过所述方法获得的提取物。本发明还涉及所述组合物或提取物用于预防或治疗皮肤、粘膜或皮肤附属物的疾病或病状的用途，以及用于预防或治疗血管疾病的用途。最后，本发明涉及一种用于皮肤、皮肤附属物或粘膜以改善它们的状况或外观的美容护理方法，其包括施用所述组合物或所述提取物。

背景技术

圣罗勒

植物学描述

神罗勒(Ocimum sanctum)(或九层塔(ocimum tenuiflorum))通常被称为“圣罗勒”或“神圣罗勒”，其是唇形科的一种芳香植物。它可长到30至60cm高，茎有毛。取决于品种，叶子是绿色或紫色的。它们为无分杈的，有柄，长可达5厘米。略带紫色的小花置于细长的总状花序上。圣罗勒有两个品种：绿色罗勒和紫色罗勒。这两个品种的植物化学成分相似。

植物化学

神罗勒的成分：

蛋白质：174.5g/kg干植物

纤维：90.7g/kg干植物

灰分：135.6g/kg干植物

在神罗勒的水提取物和醇提取物中已鉴定出许多种分子。广泛存在多酚，其中迷迭香酸是主要化合物。还广泛报道了熊果酸、芹菜素衍生物和酚酸。

糖由木糖和多糖组成。茎和叶子含有皂苷、黄酮、三萜和鞣酸。

矿物成分显示为钾占大多数(参见表1)：

表1：神罗勒的矿物成分(ppm)

Ca	P	Mg	K	Na	Cu	Zn	Mn
								1.00	10.90	1.05	5260	680	12.31	81.66	51.35

发明内容

本发明的主题为圣罗勒的富含多酚的提取物，特别是圣罗勒地上部分的富含多酚的提取物。

在本发明的上下文中，术语“圣罗勒”和“神罗勒”具有相同的含义，并且可以互换使用。圣罗勒有两个品种：绿色和紫色。除非另有说明，否则出于本发明的目的，“圣罗勒”或“神罗勒”是指两种现有的品种，即绿色品种和紫色品种。

在本发明的上下文中，神罗勒的“地上部分”包括叶子、茎和花，优选叶子和茎。

“富含多酚的提取物”是指主要或基本上包含多酚的提取物。

因此，根据本发明的提取物包含基于干提取物的总重量至少6重量％的多酚，即每毫升液体提取物包含至少1.2mg的多酚(以没食子酸当量计)。有利地，根据本发明的提取物包含相对于干提取物的总重量至少9重量％，更有利地至少11重量％，更有利地至少15重量％的多酚。有利地，根据本发明的提取物包含在6重量％至17重量％之间，更有利地在9重量％至17重量％之间，更有利地在11重量％至17重量％之间，更有利地在15重量％至17重量％之间的多酚。百分比表示为相对于所述干提取物的总重量(在加入任何干燥介质之前)，并根据福林酚法加以确定。

出于本发明的目的，多酚为包含由一个或多个苯环携带的至少两个羟基官能团的分子。特别有利地，根据本发明的多酚含有羟基肉桂衍生物和黄酮或由羟基肉桂衍生物和黄酮组成。

有利地，根据本发明的提取物包含至少5重量％的羟基肉桂衍生物，更有利地至少7重量％的羟基肉桂衍生物，即每毫升液体提取物包含至少1.0mg的羟基肉桂衍生物。更有利地，根据本发明的提取物包含至少10重量％，更有利地至少15重量％的羟基肉桂衍生物。有利地，根据本发明的提取物包含在5重量％至20重量％之间，更有利地在7重量％至20重量％之间，更有利地在10重量％至20重量％之间，更有利地在15重量％至20重量％之间的羟基肉桂衍生物。百分比表示为相对于所述干提取物的总重量(在可能加入干燥介质之前)，以绿原酸当量计，并根据Arnow法加以确定。

有利地，根据本发明的提取物包含相对于所述干提取物的总重量至少2.5重量％，更有利地至少3.5重量％的黄酮(以芦丁当量表示)。有利地，根据本发明的提取物包含相对于所述干提取物的总重量在2.5重量％至6重量％之间，更有利地在3.5重量％至6重量％之间的黄酮(以芦丁当量表示)。使用Loots(AlCl₃)法确定黄酮含量。

特别有利地，根据本发明的提取物包含基于干提取物的总重量至少6重量％的多酚，即每毫升液体提取物包含至少1.2mg的多酚(以没食子酸当量计)，特别是基于干提取物的总重量至少5重量％的羟基肉桂衍生物和相对于干提取物的总重量至少2.5重量％的黄酮(以芦丁当量表示)。

在本发明的上下文中，羟基肉桂衍生物为结构中包含以下基序的分子：

应理解，基序的氢可以被任何其它基团取代。在本发明的含义内，羟基肉桂衍生物尤其包括羟基肉桂酸、酯和糖基化衍生物。

根据本发明的羟基肉桂衍生物的示例包括菊苣酸、咖啡酸、迷迭香酸或单咖啡酰酒石酸及其混合物。

在本发明的上下文中，黄酮被定义为结构中包含以下基序的分子：

应理解，该部分的氢可以被任何其它基团取代。上式中的虚线表示单键或双键。

根据本发明的黄酮的示例包括芹菜素、芹菜素-7-葡萄糖苷酸或木犀草素-7-葡萄糖苷酸、以及它们的混合物。

出于本发明的目的，黄酮和羟基肉桂衍生物通常为多酚。

特别有利地，根据本发明的提取物基本上不含丁香酚和甲基丁香酚，丁香酚和甲基丁香酚是致敏化合物，它们是酚，但不是本发明含义上的多酚。丁香酚和甲基丁香酚尤其因其物理化学性质而未被归类于多酚族。事实上，这些化合物是圣罗勒精油的主要组分之一，是可由蒸汽夹带的化合物，这不同于本发明的多酚。

因此，有利地，根据本发明的提取物不包含丁香酚和甲基丁香酚，或者包含小于50ppm的丁香酚和小于100ppm的甲基丁香酚。

有利地，根据本发明，由于提取物的组分不可由蒸汽夹带，所以提取物不是精油。

在本发明的上下文中，上述富含多酚的提取物有利地通过在溶剂中对圣罗勒的地上部分进行固体/液体提取而获得，所述溶剂选自水、二醇或甘油、以及它们的混合物。根据本发明的提取溶剂为无毒溶剂，并且更特别地选自二元混合物水/二醇或水/甘油，其比例有利地为在水中具有以相对于所用溶剂(水+二醇或者水+甘油)总体积以体积计在30％至90％之间，通常在50％至80％之间，更有利地在60％至70％之间的二醇或甘油。特别地，提取溶剂选自二元混合物水/丙二醇(propanediol)、水/丙二醇(propylène glycol)、水/甘油，特别是水/丙二醇，更特别是水/1,3-丙二醇或者水/甘油。

有利地，上述二醇为植物来源的二醇，特别是丙二醇(propanediol)和/或丙二醇(propylène glycol)，更特别是丙二醇(propanediol)，尤其是1,3-丙二醇。

有利地，上述甘油为植物来源的甘油。

本发明的另一个目的是一种用于制备圣罗勒地上部分的富含多酚的提取物的方法，其包括：在本领域技术人员已知的pH、时间和温度的最佳条件下，在合适的溶剂混合物中，特别是在如以上段落中所限定的溶剂混合物中进行的至少一个固体/液体提取步骤。

根据本发明有利地，用于制备圣罗勒地上部分的富含多酚的提取物的方法包括以下连续步骤：

a)研磨圣罗勒的地上部分；

b)在时间、pH和温度的最佳条件下，在选自水、二醇、甘油及其混合物的溶剂中提取经研磨的地上部分，所述溶剂有利地选自二元混合物水/二醇或水/甘油；

c)通过倾析和/或离心和/或连续过滤将固相与液相分离；以及

d)任选地，将在步骤c)中获得的提取物干燥。

根据本发明特别有利地，提取物制备方法包括以下步骤：去除丁香酚或甲基丁香酚或者大幅减小丁香酚和甲基丁香酚的含量，通常是通过真空蒸发或除臭。

研磨植物的步骤a)可以通过本领域技术人员已知的方法进行，特别是使用切割机式磨机、锤磨机等进行。

在步骤b)中，优选在选自二元混合物水/二醇或水/甘油的提取溶剂存在下进行提取。有利地，在步骤b)中使用的提取溶剂选自二元混合物水/二醇或水/甘油，其比例为在水中具有以相对于所用溶剂(水+二醇或者水+甘油)总体积以体积计在30％至90％之间，通常在50％至80％之间，更有利地在60％至70％之间的二醇或甘油。特别地，提取溶剂选自二元混合物水/丙二醇(propanediol)、水/丙二醇(propylène glycol)或水/甘油，特别是水/丙二醇，更特别是水/1,3-丙二醇或者水/甘油。

有利地，二醇为植物来源的二醇，特别是丙二醇(propanediol)和/或丙二醇(propylène glycol)，更特别是丙二醇(propanediol)，尤其是1,3-丙二醇。有利地，甘油为植物来源的甘油。

此外，优选在介于20℃至90℃之间，特别是介于30℃至80℃之间，更特别是介于30℃至75℃之间，通常是60℃的温度下进行固体/液体提取的步骤b)。

与其它现有技术方法相比，具有提取持续时间短的优点。其有利地在30分钟至4小时之间，特别是在1小时至3小时之间，有利地为约2小时。

通过本领域技术人员已知的方法，特别是通过倾析、离心和/或连续过滤，优选通过过滤来进行将固相与液相分离的步骤c)。在步骤c)的过程中，有利地将所获得的液相纯化和浓缩，例如通过超滤和/或除菌过滤。进行步骤c)，直至液体完全澄清，并且从微生物学上清洁到小于或等于100UFC/g总菌的程度。

有利地，可以通过本领域技术人员已知的方法进行干燥步骤d)来使根据本发明的富含多酚的提取物稳定。

例如，可以在诸如麦芽糊精或阿拉伯树胶纤维(CNI的)的载体存在下进行干燥步骤d)。相对于以提取物的液体形式获得的干物质的百分比，载体含量的比例通常为0％至80％的载体。

可以通过冷冻干燥来干燥提取物，以获得最终粉末。最终粉末有利地包含30至70重量％的来自提取物的干物质，其余为冷冻干燥载体至100％。更有利地，最终粉末包含50％的提取物干物质和50％的冷冻干燥载体。

有利地，根据本发明的方法不包括步骤d)。因此，将获得的提取物保存在提取溶剂中，溶剂的量足以表现出抑菌/杀菌活性，特别地溶剂的量相对于提取物和溶剂的总重量大于或等于50重量％。

根据本发明的提取方法有利地使得可以在单个主要提取步骤中以简单的实施方法获得多酚浓缩的提取物。换言之，它使得无需像分馏一样重复连续的提取步骤，就可获得浓缩的提取物。

优选地，举例而言，根据本发明的富含多酚的提取物可以根据以下方法获得：

i.研磨圣罗勒的地上部分；

ii.将经研磨的地上部分以10％(p/p)溶解在1,3-丙二醇/水混合物(60/40)或甘油/水混合物中(60/40)中；

iii.在60℃下搅拌提取2小时；

iv.通过连续的过滤步骤进行纯化；

v.有利地去除丁香酚和甲基丁香酚，通常是通过真空蒸发或除臭；以及

vi.无菌过滤。

在下文的描述中，表述“根据本发明的提取物”将用于表示如上所限定的提取物本身，或可通过如上所述的根据本发明的方法获得的提取物。可通过上述方法获得的提取物具有与如上所限定的提取物本身相同的组成。

本发明的另一个目的是一种组合物，其包含根据本发明的提取物和水/溶剂混合物，水/溶剂比例(v/v)在50/50至0/100之间，有利地在30/70至10/90之间，更有利地为20/80，所述溶剂选自二醇、植物甘油及其混合物，优选地选自植物来源的二醇，优选地选自1,3-丙二醇。

有利地，组合物包含相对于组合物的总重量0.001至30重量％，有利地0.001至10重量％的根据本发明的提取物(以相对于组合物总重量的干提取物重量表示)以及在70重量％至99.999重量％之间，有利地在90重量％至99.999重量％之间的水/溶剂混合物，水/溶剂比例在50/50至0/100之间，有利地在30/70至10/90之间，更有利地为20/80，溶剂选自二醇、植物甘油及其混合物，优选地选自植物来源的二醇，优选地选自1,3-丙二醇。根据本发明的这个方面，溶剂为对根据本发明的组合物，特别是根据本发明的提取物的物理和微生物稳定作用是有效的量。

本发明的另一个目的是一种组合物，其包含根据本发明的神罗勒地上部分的富含多酚的提取物作为活性成分，和任选地合适的赋形剂。根据本发明的提取物如在以上关于提取物本身的段落和关于可通过根据本发明方法获得的提取物的段落中所限定。

该组合物有利地为美容组合物、药物组合物或皮肤病用组合物。所述组合物优选地被配制为用于外部局部施用。

有利地，根据本发明的组合物包含相对于组合物的总重量0.001至10重量％，通常为0.01至5％重量的根据本发明的提取物，提取物的重量以干提取物表示。

根据本发明的组合物还可以包含一种或多种其它活性成分。

根据本发明的组合物可以被配制为适合局部施用的各种制剂的形式，并且特别地包括霜剂、乳剂、乳液、软膏、洗剂、油剂、水性或水醇或二醇溶液、粉末剂、贴剂、喷雾、洗发剂、漆剂或任何其它外用产品。

取决于其性质(美容、药物或皮肤病用的)，根据本发明的组合物还可以包含至少一种在美容、药学或皮肤病学上可接受的赋形剂。特别地，根据本发明的组合物还可以包含至少一种本领域技术人员已知的在美容、药学或皮肤病学上可接受的佐剂，所述佐剂选自表面活性剂、增稠剂、防腐剂、香料、着色剂、化学或矿物过滤剂、保湿剂、温泉水等。本领域技术人员知晓如何利用其常识来调整根据本发明的组合物的制剂。

根据本发明的组合物的最佳剂量和盖仑形式可以根据在建立适合于患者或动物的药理学、皮肤病学或美容上的治疗时通常考虑的标准来确定，例如患者或动物的年龄或体重、总体病症的严重程度、对治疗的耐受性、观察到的副作用、皮肤类型。

本发明的另一个目的是根据本发明的提取物或根据本发明的组合物，其用于预防和/或治疗未成熟、正常或成熟/老化的皮肤和/或粘膜(牙龈、牙周组织、生殖器粘膜)和/或皮肤附属物(毛发和指甲)的疾病或病状，有利地炎症反应，氧化反应，与内源性或外源性应激(例如心理应激、与焦虑状态有关的应激、与涉及(或不涉及)污染(特别是化学污染或大气污染)和/或涉及UV或IR暴露的自由基攻击有关的应激)有关的疾病，屏障或体内平衡障碍，老化(特别是时间和/或光老化)，光敏皮肤，和/或机械或热侵袭的用途。

本发明的另一个目的是根据本发明的提取物或根据本发明的组合物，其用于预防和/或治疗血管疾病，特别是发红和红血丝的用途。

本发明的另一个目的是根据本发明的提取物或根据本发明的组合物，其用于预防和/或治疗与未成熟、正常或成熟/老化的皮肤和/或粘膜(牙龈、牙周组织、生殖器粘膜)和/或皮肤附属物的微生物群失衡相关的失衡和/或疾病的用途。事实上，根据本发明的提取物对未成熟、正常或成熟/老化的皮肤和/或粘膜(牙龈、牙周组织、生殖器粘膜)和/或皮肤附属物和/或其附件具有对抗机械、微生物、热和自由基侵袭的保护活性。根据本发明的提取物起到保护微生物群的作用，从而有助于对抗微生物群失衡。提取物还有助于刺激皮肤的免疫防御和抗氧化系统。

本发明的另一个目的是根据本发明的提取物或根据本发明的组合物用于制造美容组合物、药物组合物或皮肤病用组合物的用途，所述美容组合物、药物组合物或皮肤病用组合物用于预防和/或治疗未成熟、正常或成熟/老化的皮肤和/或粘膜(牙龈、牙周炎、生殖器粘膜)和/或皮肤附属物(毛发和指甲)的疾病或病状，有利地炎症反应，氧化反应，与内源性或外源性应激(例如心理应激、与焦虑状态有关的应激、与涉及(或不涉及)污染(特别是化学污染或大气污染)和/或涉及UV或IR暴露的自由基攻击有关的应激)有关的疾病，屏障或体内平衡障碍，老化(特别是时间和/或光老化)，光敏皮肤，和/或机械或热侵袭。

本发明的另一个目的是根据本发明的提取物或根据本发明的组合物在制造用于预防和/或治疗血管疾病，特别是发红和红血丝的药物组合物、美容组合物或皮肤病用组合物中的用途。

本发明的另一个目的是根据本发明的提取物或根据本发明的组合物在制造用于预防和/或治疗与未成熟、正常或成熟/老化的皮肤和/或粘膜(牙龈、牙周组织、生殖器粘膜)和/或皮肤附属物和/或其附属器的微生物群失衡相关的失衡和/或疾病的药物组合物、美容组合物或皮肤病用组合物中的用途。

本发明的进一步目的是一种用于预防和/或治疗未成熟、正常或成熟/老化的皮肤和/或粘膜(牙龈、牙周炎、生殖器粘膜)和/或皮肤附属物(毛发和指甲)的疾病或病状，有利地炎症反应，氧化反应，与内源性或外源性应激(例如心理应激、与焦虑状态有关的应激、与涉及(或不涉及)污染(特别是化学污染或大气污染)和/或涉及UV或IR暴露的自由基攻击有关的应激)有关的疾病，屏障或体内平衡障碍，老化(特别是时间和/或光老化)，光敏皮肤，和/或机械或热侵袭的方法，其包括向有需要的受试者施用，特别是局部施用有效量的根据本发明的提取物或根据本发明的组合物。

本发明的另一个目的是一种用于预防和/或治疗血管疾病，特别是发红和红血丝的方法，其包括向有需要的受试者施用，特别是局部施用有效量的根据本发明的提取物或根据本发明的组合物。

本发明的另一个目的是一种用于预防和/或治疗与未成熟、正常或成熟/老化的皮肤和/或粘膜(牙龈、牙周组织、生殖器粘膜)和/或皮肤附属物和/或其附属器的微生物群失衡相关的失衡和/或疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用，特别是局部施用有效量的根据本发明的提取物或根据本发明的组合物。

特别地，根据本发明的组合物或提取物旨在用于预防和/或治疗未成熟、正常或成熟/老化的皮肤、皮肤附属物(毛发和指甲)和/或粘膜(牙龈、牙周组织、生殖器粘膜)的炎症或刺激性反应或病状或屏障障碍或体内平衡障碍。

有利地，炎症或刺激性反应、疾病或病状或皮肤屏障障碍或体内平衡障碍为：痤疮，红斑痤疮或红斑狼疮，血管疾病，特别是发红和红血丝，尿布皮炎，特应性皮炎，湿疹，接触性皮炎，刺激性皮炎，过敏性皮炎，脂溢性皮炎(乳痂)，敏感性皮肤，反应性皮肤，干燥皮肤(干燥症)，脱水皮肤，皮肤发红，皮肤红斑，老化或光老化的皮肤，光敏性皮肤，色素性皮肤(黄褐斑、炎症后色素沉着……)，妊娠纹皮肤，晒伤，化学、物理(例如孕妇的紧张压力)、细菌或真菌剂引起的刺激，皮肤老化，特别是与化学或大气污染和/或UV或IR暴露引起的自由基攻击有关的光老化和疾病。

有利地，炎症或刺激性反应、疾病或病状或粘膜屏障障碍或体内平衡障碍为牙龈炎(新生儿牙龈敏感，卫生问题，由于吸烟或其它原因)以及男性或女性生殖器区域外部或内部的刺激。

有利地，皮肤附属物的炎症、刺激性反应、疾病或病状或屏障障碍或体内平衡障碍为脆甲症、指甲易碎、毛发脆弱、毛发易断、毛发干燥、脱发、脂溢性皮炎和毛囊炎性皮炎。

以特别有利的方式，根据本发明的组合物或提取物旨在用作抗老化剂对抗皮肤老化，特别是时间和光老化，例如与阳光暴露或炎症现象有关的皮肤老化，或者旨在对刺激性皮肤起作用。

在优选的实施方案中，根据本发明的提取物用于预防和/或治疗：

-皮肤和/或粘膜和/或皮肤附属物的疾病或病状，有利地为炎症反应，与内源性或外源性应激(例如心理应激、与焦虑状态有关的应激、与涉及(或不涉及)化学或大气污染和/或涉及UV或IR暴露的自由基攻击有关的应激)有关的疾病，有利地选自敏感性皮肤、反应性皮肤和/或反应性粘膜、刺激性皮肤、发炎皮肤、屏障或体内平衡障碍、光敏性皮肤、机械和/或热侵袭；和/或

-血管疾病，优选发红和红血丝；和/或

-微生物群失衡，有利地选自特应性皮炎、湿疹、令人不快的腋臭的产生、皮肤屏障减弱、痤疮、银屑病、化脓性汗腺炎、毛囊炎、乳痂、头皮屑、瘙痒(特别是头皮瘙痒)、刺激、念珠菌病和细菌性阴道病，和/或用于作为愈合剂的用途。

本发明的另一个目的是根据本发明的提取物或根据本发明的组合物在治疗和/或预防脱水皮肤、皮肤发红、老化的皮肤、皮肤老化中的美容用途。

本发明的另一个目的是根据本发明的提取物或根据本发明的组合物用于护理皮肤附属物，特别是用于预防脆甲症、指甲易碎、毛发脆弱、毛发易断和毛发干燥的美容用途。

本发明还涉及一种用于皮肤和/或皮肤附属物和/或粘膜的美容护理以改善它们的状况和/或外观的方法，其包括施用根据本发明的组合物或提取物；特别是改善皮肤的紧实度、弹性或紧张性，增强皮肤和粘膜的力学性质，特别是对抗皱缩、无力、肿胀和/或下垂的皮肤，和/或增强和/或恢复皮肤的弹性或紧实度，或治疗细纹和皱纹。

特别地，本发明涉及一种用于皮肤和/或粘膜和/或皮肤附属物的美容护理以预防皮肤屏障损伤和脱水或以使皮肤和/或粘膜保湿的方法，其包括向皮肤和/或粘膜和/或皮肤附属物施用根据本发明的组合物或提取物。

本发明还涉及一种用于皮肤和/或皮肤附属物的美容护理以预防老化的方法，其包括向皮肤和/或皮肤附属物施用根据本发明的组合物或提取物。

本发明还涉及根据本发明的组合物或提取物或组合物用于使皮肤和/或粘膜保湿、对皮肤的弹性或紧实度起作用(特别是作为提拉剂或抗皱剂)、对敏感性皮肤起作用的美容用途。

特别地，本发明涉及根据本发明的组合物或提取物在治疗和/或预防脱水皮肤、皮肤发红、老化的皮肤、肤色均匀、减少皮肤上的斑点或皮肤老化，特别是时间和/或光老化中的美容用途。

根据本发明的美容用途和美容护理方法通常在身体的健康皮肤或健康部位上进行，并且是非治疗性的。

附图说明

图1：图1描绘了对在皮质醇应激下角质形成细胞产生的NO的测量。

图2：图2描绘了圣罗勒提取物对经受污染物应激的成纤维细胞的细胞生物能量学的作用，特别是图2A中对氧消耗的作用、图2B中对ATP的产生的作用、图2C中对乳酸的产生的作用和图2D中对NAD/NADH比例的作用(*p<0.05；**p<0.01相对于未处理的对照；#p<0.05；##p<0.01相对于污染物)。

图3：图3描绘了每个细胞的损伤线粒体的百分比(％)(###p<0.0001相对于污染物)。

图4：图4示出了溶酶体密度(强度/μm²)(***p<0.0001相对于对照；#p<0.05；###p<0.0001相对于污染物)。

图5：线粒体自噬(与损伤线粒体共定位的溶酶体的％)(***p<0.0001相对于对照；###p<0.0001相对于污染物)。

图6：图6示出了T0和T40h之间的成纤维细胞迁移的百分比。

具体实施方式

实施例1：根据本发明的提取物

通过以下方法获得圣罗勒的提取物：

a)将10％(p/p)的神罗勒(紫色品种)地上部分研磨溶解在40/60p/p的水/丙二醇混合物中

b)在60℃提取2小时

c)通过连续过滤进行固体/液体分离。

由此获得的富含多酚的液体提取物具有以下特征(所获得的提取物的分子/干提取物的重量％)：

·干提取物(2小时，105℃，通风的烘箱)：1.0％

·总多酚：11.4％

·黄酮：3.6％

·羟基肉桂衍生物：7.6％。

实施例2：根据本发明的提取物

通过以下方法获得圣罗勒的提取物：

a)将10％(p/p)的经研磨的神罗勒(绿色品种)地上部分溶解在40/60p/p的水/丙二醇混合物中

b)在60℃提取3小时

c)通过连续过滤进行固体/液体分离。

由此获得的富含多酚的液体提取物具有以下特征(所获得的提取物的分子/干提取物的重量％)：

·干提取物(2小时，105℃，通风的烘箱)：1.4％

·总多酚(通过福林酚法确定)：16％

·黄酮：3.5％

·羟基肉桂衍生物：20％。

实施例3：根据本发明的提取物的生物活性测试

A.抗氧化活性

A.1.抗氧化作用

A.1.1对H ₂ O ₂ 诱导的正常人角质形成细胞中ROS的产生的活性

通过评估经受H₂O₂诱导的氧化应激的角质形成细胞所产生的ROS(活性氧)的量，研究了圣罗勒提取物的抗氧化活性。

a.材料和方法

用六种浓度的根据实施例1获得的圣罗勒提取物(0.00032％至0.01％ms)或抗氧化剂参比分子(10μM的槲皮素或500μM的维生素C)处理正常人角质形成细胞24小时，而后加入H2DCF-DA探针。

然后用100μM过氧化氢(H₂O₂)刺激角质形成细胞20分钟。

通过测量探针与ROS接触时发出的荧光来评估ROS的产生。

使用单因素方差分析和随后的Tukey检验对结果进行统计学分析。

b.结果

结果汇总在表2中。圣罗勒提取物以剂量依赖性的方式显著抑制了角质形成细胞响应于H₂O₂诱导的氧化应激时的ROS产生，从而表现出抗氧化活性。

表2：在H₂O₂应激下角质形成细胞的ROS产生

A.1.2.对UVA诱导的重建人表皮中ROS的产生的活性

通过对重建人表皮进行ROS测定，研究了对抗UVA辐照诱导的氧化应激的保护作用。

a.材料和方法

用含有根据实施例1获得的3％罗勒提取物的制剂或其安慰剂预处理重建人表皮24小时。然后用30J/cm²的UVA辐照表皮。

通过测量H2DCF-DA探针与ROS接触时发出的荧光来评估ROS的产生。

b.结果

结果汇总在表3中。3％制剂的圣罗勒提取物抑制了UVA诱导的ROS产生，从而证实了对抗UVA辐照诱导的氧化应激的保护作用。

表3：经UVA辐照的重建表皮中的ROS产生

1.3.对甲萘醌诱导的正常人角质形成细胞和成纤维细胞中ROS的产生的活性

通过评估经受甲萘醌诱导的氧化应激的角质形成细胞或成纤维细胞所产生的ROS的量，研究了圣罗勒提取物的抗氧化活性。

a.材料和方法

用根据实施例1获得的0.001％和0.005％干物质(ms)的圣罗勒提取物或10mM的N-乙酰半胱氨酸(NAC)来将一方面的正常人角质形成细胞和另一方面的正常人成纤维细胞处理24小时，所述NAC是用作抗氧化剂参比的ROS清除剂分子。然后通过在50或20μM甲萘醌(2-甲基-1,4-萘醌)存在下孵育1小时来诱导氧化应激。

用探针标记ROS；测量了与ROS的量成比例的细胞内荧光。

使用单因素方差分析和随后的Dunnett检验对结果进行统计学分析。

b.结果

结果示于表4和表5中。圣罗勒提取物显著抑制了甲萘醌应激诱导的角质形成细胞(表4)和成纤维细胞(表5)中的ROS产生，从而证实了其抗氧化活性。

表4：经受甲萘醌应激的角质形成细胞的ROS产生

表5：经受甲萘醌应激的成纤维细胞的ROS产生

A.2.脂质过氧化抑制

ROS是脂质过氧化的主要活化剂，其主要靶向与细胞膜结合的多不饱和脂质。研究了圣罗勒提取物在经受氢过氧化枯烯诱导的氧化应激的角质形成细胞或成纤维细胞中的抗脂质过氧化活性。

a.材料和方法

用根据实施例1获得的0.001％和0.005％ms的圣罗勒提取物或抗氧化剂参比200μM的维生素E来将一方面的正常人角质形成细胞和另一方面的正常人成纤维细胞处理24小时。然后通过在200或50μM的氢过氧化枯烯存在下孵育1小时来诱导氧化应激。

通过用581/591C11标记来揭示脂质过氧化物；测量了细胞内荧光。

使用单因素方差分析和随后的Tukey检验对结果进行统计学分析。

b.结果

结果汇总在表6和表7中。圣罗勒提取物显著抑制了氧化应激诱导的角质形成细胞(表6)和成纤维细胞(表7)中的脂质过氧化，从而证实了其抗氧化活性。

表6：经受氢过氧化枯烯应激的角质形成细胞中脂质过氧化的量化

表7：经受氢过氧化枯烯应激的成纤维细胞中脂质过氧化的量化

A.3.对抗氧化防御的作用

谷胱甘肽(GSH)是主要的内源性抗氧化肽，其能够中和ROS。细胞内GSH耗竭是与线粒体毒性相关的氧化应激诱导的损伤的原因。

评估了圣罗勒提取物对经受甲萘醌诱导的氧化应激的成纤维细胞中的细胞内谷胱甘肽储存的作用。

a.材料和方法

用根据实施例1获得的0.001％和0.005％ms的圣罗勒提取物或抗氧化剂参比10mM的NAC处理正常人成纤维细胞24小时。然后通过在25μM甲萘醌存在下孵育4小时来诱导氧化应激。

使用荧光探针Monochlorobimane(Mbi)监测GSH储备；测量了与GSH的量成比例的细胞内荧光。

b.结果

结果汇总在表8中。圣罗勒提取物相比于抗氧化剂参比(10mM的NAC)更加显著地恢复了在甲萘醌诱导的氧化应激下耗竭的细胞内谷胱甘肽，从而证实了提取物的抗氧化活性。

表8：经受甲萘醌应激的成纤维细胞中的谷胱甘肽(GSH)含量的变化

A.4.结论

总体来看，这些结果证实了圣罗勒提取物的抗氧化活性。

B.抗炎活性

通过测定角质形成细胞响应于PMA诱导的促炎应激而产生的白细胞介素8(IL8)，研究了圣罗勒提取物的抗炎活性。

a.材料和方法

在根据实施例1获得的0.001％、0.005％或0.01％ms的圣罗勒提取物或0.1μM的地塞米松(抗炎参比)存在下，将正常人角质形成细胞预孵育24小时。然后通过在10μg/mL的PMA(佛波醇-豆蔻酸酯-乙酸酯)存在下处理24小时来刺激细胞。

在处理结束时，通过ELISA测定法将培养上清液中所产生的IL8量化。

使用学生t检验对结果进行统计学分析。

b.结果

结果汇总在表9中。圣罗勒提取物显著抑制了PMA诱导的角质形成细胞中的IL8产生，在某些情况下比参比地塞米松更为显著；因此它表现出抗炎活性。

表9：经受PMA诱导的炎症性应激的角质形成细胞所产生的白细胞介素8的测定

C.抗老化活性

皮肤老化的特征在于真皮基质的改变，其中基质纤维(主要是胶原蛋白和弹性蛋白)的质量和数量减少。

圣罗勒的抗老化活性是通过其在标准条件下以及在模拟慢性炎症(也称为“炎性衰老”或低度炎症)的炎症性应激条件下刺激真皮基质标记物表达和产生的能力来评估的。

C.1.对真皮基质的作用

在培养的正常人真皮成纤维细胞或重建人皮肤上评估了圣罗勒提取物对真皮基质标记物的表达的作用。

C.1.1对正常人成纤维细胞中的真皮基质标记物的基因表达的刺激

a.材料和方法

在根据实施例1获得的0.001％和0.005％ms的圣罗勒提取物或5ng/mL的TGFβ1(阳性测定参比)存在下，将正常人成纤维细胞孵育48小时。

通过实时定量PCR评估了胶原蛋白I、弹性蛋白、皮连蛋白和MMP1(基质金属蛋白酶-1)的基因表达。

使用单因素方差分析(ANOVA)和随后的Dunnett事后检验对结果进行统计学分析。

b.结果

结果汇总在表10中。圣罗勒提取物显著刺激了胶原蛋白I、弹性蛋白和皮连蛋白的基因表达，这些蛋白是参与真皮基质密度的关键标记物。此外，提取物显著抑制了MMP1的基因表达，MMP1是一种参与真皮基质降解的酶。

这些结果证实了真皮基质的致密化，从而证实了抗老化活性。

表10：成纤维细胞中的真皮基质标记物的基因表达

C.1.2对正常人成纤维细胞中的真皮基质标记物的蛋白质表达的刺激

a.材料和方法

用根据实施例1获得的0.001％和0.005％ms的圣罗勒提取物或用10μM的维生素C和5ng/mL的TGFβ的混合物(用作阳性参比)处理人真皮成纤维细胞48小时。

通过免疫荧光标记和图像分析评估了胶原蛋白I的产生。

b.结果

结果汇总在表11中。圣罗勒提取物显著刺激了成纤维细胞中标记的胶原蛋白I。该结果证实了提取物对真皮基质致密化的活性。

表11：成纤维细胞产生的胶原蛋白I

C.1.3对正常人成纤维细胞中的真皮基质标记物的蛋白质表达的刺激

a.材料和方法

将含有根据实施例1获得的3％圣罗勒提取物的制剂(霜剂)或其安慰剂施用于重建人皮肤的表面。在孵育24小时后，通过实时定量PCR评估了对真皮有益处的感兴趣标记物的基因表达。

b.结果

结果汇总在表12中。圣罗勒提取物显著增加了重建皮肤中的CLN3和PXN基因表达。

CLN3编码一种参与调节自噬过程的溶酶体/内涵体跨膜蛋白质(蜡样脂褐质沉积神经元3)。自噬是一种细胞内解毒过程，其能够降解和回收损伤的蛋白质和细胞器。该过程对于维持细胞功能和稳态至关重要。自噬的刺激对减缓老化和延长细胞寿命是有益的。

PXN编码一种局灶性粘附分子(桩蛋白)，该分子的表达随着年龄的增长而减少，因此代表抗老化作用的靶标。由于其在成纤维细胞和其基质之间的细胞-基质连接和力学转导中的关键作用，桩蛋白随着年龄增长的丧失会损害细胞功能，导致皮肤老化的开始或加剧。诱导其表达可以有助于恢复与年龄有关的胶原蛋白丧失和真皮收缩性。

表12：与安慰剂(设定为1.00)相比，通过3％圣罗勒提取物制剂显著调节的基因

C.2.在炎性衰老模型中的作用

随着年龄的增长，在皮肤组织中可能会产生低度的无症状但慢性的炎症。这是整个生命期间累积暴露于外部应激的结果。这种炎症导致炎症性细胞因子(IL1、IL6、TNF、CRP……)的释放(能够产生组织损伤)和活性氧的产生，从而加速皮肤的老化过程。与炎症过程有关的这种皮肤老化现象被称为炎性衰老。

在再现炎症过程的体外模型中对圣罗勒提取物进行了评估：在重建表皮上诱导以刺激IL1α的产生为代表的炎症。然后将这些重建表皮的条件培养基施用于成纤维细胞，并评估因表皮产生的IL1α而改变的真皮标记物的表达。

a.材料和方法

用含有根据实施例1获得的3％圣罗勒提取物的制剂(霜剂)或其安慰剂局部处理重建表皮，或用1μM的地塞米松(抗炎参比)全身性处理重建表皮。在预孵育24小时后，用0.5μg/mL的PMA刺激表皮，并再次孵育24小时。

收集培养上清液，一方面进行IL1α测定，另一方面将这些上清液(条件培养基)接种到正常人真皮成纤维细胞的培养物上。

在条件培养基存在下孵育成纤维细胞24小时后，通过实时定量PCR评估了感兴趣的标记物的表达。

使用单因素方差分析和随后的Tukey检验对结果进行统计学分析。

b.结果

结果示于表13和表14中。配制为3％的圣罗勒提取物显著抑制了PMA诱导的重建表皮的IL1α释放(表13)。该作用显著高于安慰剂。

经PMA刺激的重建表皮的条件培养基向成纤维细胞培养物的施用诱导了炎症标记物的基因表达、氧化应激以及真皮基质合成和降解的变化(表14)。这些结果验证了炎性衰老模型。

在这些条件下，圣罗勒提取物调节了细胞因子和趋化因子(CXCL1、IL8、IL6、CCL2)、氧化应激标记物(MT1G、SOD2)、基质降解酶(MMP1、MMP3)和ICAM1的过表达。提取物还恢复了基质组装标记物(HAS2、DPT)的表达。

这些结果证实了圣罗勒提取物调节炎性衰老过程的能力。

表13：由经PMA刺激的重建表皮产生的IL1α的测定

表14：在炎性衰老模型中由3％圣罗勒制剂调节的基因：用条件培养基孵育的成纤维细胞中的基因表达

(相对数量的表达水平；变化％相对于PMA)

D.对抗各种应激的防御活性

皮肤每天都暴露于各种类型的外源性和/或内源性应激，这会改变其功能和质量，最终导致不可逆转的损伤。

在代表不同外部应激(污染)或内部应激(心理应激)的各种模型中评估了圣罗勒提取物的保护作用。

D.1.对抗心理应激引起的皮肤损伤的保护

一氧化氮(NO)是一种参与调节皮肤内稳态的反应性物质。这种高度不稳定的分子由多种细胞类型合成和释放，以调节生理和内稳态反应，例如黑色素生成、伤口愈合、炎症调节、免疫调节、血管舒张……

虽然低水平的NO对细胞信号传导很重要，但高水平NO的释放通常与氧化应激相关。

心理应激的特征在于连接中枢神经和内分泌系统的下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的活化，其中诸如皮质醇的内源性糖皮质激素增加。

许多研究描述了心理应激对皮肤内稳态的不良作用，导致改变的免疫和炎症反应。炎症反应包括自由基(包括NO)的活化。

通过用皮质醇处理角质形成细胞并将作为诱导的应激的生物标记物的NO量化，在再现心理应激(情绪障碍/焦虑)对皮肤的影响的模型中评估了圣罗勒提取物。

a.材料和方法

在根据实施例1获得的0.001％和0.005％ms的圣罗勒提取物或1mM抗坏血酸(AA)(阳性参比)存在下用1μM皮质醇处理后，通过10分钟的连续电流分析法测量了正常人表皮角质形成细胞的NO产生。

b.结果

结果示于图1中。圣罗勒提取物显著抑制了皮质醇应激诱导的角质形成细胞中的NO产生。因此，该提取物抵消了情绪/心理应激对皮肤内稳态的不利影响。

D.2.对抗ADN损伤的保护

大气污染物对包括皮肤在内的许多组织有不良影响。反复暴露于污染物会导致过早老化、色素脱失和ADN损伤。

评估了圣罗勒提取物针对污染物应激诱导的角质形成细胞中的ADN损伤(双链断裂)的保护作用。

a.材料和方法

在实施例1获得的0.001％和0.005％ms的圣罗勒提取物或参比烟酰胺存在下，将正常人表皮角质形成细胞预孵育24小时，而后暴露于喜树碱1小时。喜树碱是一种基因毒性化合物，其是一种拓扑异构酶I抑制剂，用于诱导ADN双链断裂。

通过γH2AX(组蛋白H2AX的磷酸化，其响应于双链断裂而进行早期干预)的免疫染色检测了双链断裂，并通过图像分析进行量化。

使用单因素方差分析和随后的Tukey检验对结果进行统计学分析。

b.结果

结果示于表15中。圣罗勒提取物显著抑制了喜树碱处理诱导的双链ADN断裂。因此，提取物表现出对抗基因毒性污染物应激的保护活性。

表15：在喜树碱应激下的角质形成细胞中γH2AX的表达

D.3.保护线粒体功能对抗污染物应激

在正常人成纤维细胞中研究了圣罗勒提取物对抗城市污染的保护作用。在提取物存在下，将细胞暴露于城市污染物，并使用BBS+技术分析细胞生物能量学，以及自噬/线粒体自噬的发生。

线粒体功能的改变在老化过程中起着核心作用；90％的与年龄相关的ROS产生来源于线粒体。

环境因素(UV、污染)会降低细胞功能并增加氧化应激，从而导致过早老化。

细胞内的ROS主要因线粒体电子传递链的功能障碍而形成。

线粒体ADN对ROS特别敏感，以下现象最终导致老化过程：

能源的产生减少，

氧化应激增加，

线粒体功能增强。

D.3.1研究细胞生物能量学

a.材料和方法

在0.1％城市污染物混合物和实施例1获得的0.001％和0.005％ms圣罗勒提取物存在下，将正常人真皮成纤维细胞孵育120分钟。

使用BBS+(生物能量平衡筛查+(Bioenergetic Balance Screen Plus))方法评估了细胞生物能量学，所述方法涉及对氧消耗、ATP产生、细胞外乳酸水平和NAD+/NADH比例的多重量化。

使用学生t检验对结果进行统计学分析。

b.结果

结果示于图2中。细胞暴露于城市污染物诱导了电子传输的呼吸链发生改变，导致氧消耗下降以及ATP水平下降。

在这些条件下，圣罗勒提取物剂量依赖性地增加了氧消耗率，同时刺激了ATP的产生。这些观察结果证实了提取物对克雷布斯循环功能和能量产生的刺激和正常化有直接作用。提取物还能够解决污染物诱导的线粒体呼吸链的改变。最后，由提取物引起的乳酸产生的减少表明，它减少了从头糖酵解对ATP产生的贡献，同时重新参与细胞生物能量学中的呼吸链活性。

圣罗勒提取物有助于使因污染物应激而改变的能量平衡正常化。

D.3.2研究自噬/线粒体自噬

a.材料和方法

在0.1％城市污染物混合物和实施例1获得的0.001％和0.005％ms圣罗勒提取物存在下，将正常人真皮成纤维细胞孵育120分钟。

通过溶酶体标记物和特异于损伤线粒体的染料评估了自噬和线粒体自噬的分析：当线粒体膜出现损伤时，通过共价结合至线粒体膜的荧光物(fluorochrome)的反应而产生并发出的红色荧光，观察了损伤的线粒体。使用溶酶体染料标记溶酶体，并评估损伤线粒体与溶酶体的共定位。

分析了三个参数：

-每个细胞的损伤线粒体的百分比；

-每个细胞的溶酶体密度(代表自噬的溶酶体指数)；

-包含损伤线粒体的溶酶体的百分比(代表线粒体自噬的线粒体自噬指数)。

使用学生t检验对结果进行统计学分析。

b.结果

结果示于图3、图4和图5中。细胞暴露于城市污染物增加了损伤的线粒体的数量。圣罗勒提取物强烈而显著地抑制了损伤的线粒体的数量(图3)。

在大自噬的过程中，形成自噬体以将回收的损伤线粒体膜运输至溶酶体隔室。污染物应激显著增加了每个细胞的溶酶体密度，表明自噬过程增加。圣罗勒提取物减小了溶酶体密度并使得溶酶体密度正常化(图4)。

线粒体自噬是由与损伤线粒体的信号共同定位的溶酶体的百分比表示的。污染增加了含有损伤线粒体的溶酶体的出现次数，表明线粒体自噬过程增加。污染使得线粒体应激和内质网应激增加，这两种应激都会诱导线粒体膜损伤。在应激下观察到的线粒体自噬增加与细胞试图消除损伤的线粒体和/或畸形的蛋白质或脂质有关。圣罗勒提取物减少了污染物应激诱导的线粒体自噬并使得所述线粒体自噬正常化(图5)。

总体而言，圣罗勒提取物逆转了污染对线粒体损伤的影响，并使得自噬和线粒体自噬过程正常化。这些结果证实了保护线粒体网络对抗外部应激的活性。

E.促愈合活性

通过在划痕试验模型中评估成纤维细胞迁移，研究了圣罗勒提取物的促愈合活性。

a.材料和方法

在正常人真皮成纤维细胞的汇合垫上形成机械划痕。在形成“疤痕”后，立即将实施例1获得的0.001％和0.005％ms的圣罗勒提取物或阳性对照10^-5M的胰岛素添加至培养基，并通过细胞核的免疫荧光标记来监测随时间推移的细胞迁移。计算出迁移百分比。

b.结果

结果示于图6中。0.005％的圣罗勒提取物刺激了成纤维细胞迁移，表明该提取物具有促愈合活性。

F.保湿活性

在诱导角质形成细胞产生水通道蛋白-3的能力方面评价了圣罗勒提取物的作用。

水合作用是防止皮肤屏障功能受损的重要标准。水通道蛋白-3在保持皮肤水合作用中发挥着重要作用：这种跨膜蛋白质参与将水和甘油运输到角质形成细胞中，以维持表皮水合作用。

a.材料和方法

在实施例1获得的0.001％和0.005％ms的圣罗勒提取物或阳性参比视黄酸存在下，将正常人表皮角质形成细胞孵育24小时。通过免疫染色评估了水通道蛋白-3的表达，并通过图像分析进行量化。

b.结果

结果示于表16中。0.001％ms的圣罗勒提取物显著增加了角质形成细胞中水通道蛋白-3的表达。该结果揭示了提取物的保湿活性。

表16：角质形成细胞中水通道蛋白-3的产生

G.对皮肤微生物群的活性

研究了圣罗勒提取物对代表皮肤微生物群的不同细菌菌株的作用，更具体地对它们形成生物膜的能力的作用。

a.材料和方法

所研究的细菌菌株：

-表皮葡萄球菌MFP04；

-金黄色葡萄球菌MFP03；

-干燥棒状杆菌CIP 100653T/ATCC373；

-藤黄微球菌0116。

a1.研究提取物对细菌生长的作用

实施例1获得的圣罗勒提取物的1:50稀释液对6种细菌模型的生长的作用是通过以下方式来研究的：使用多孔培养器/酶标仪，在连续搅拌下在24小时(金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌)或48小时(藤黄微球菌、干燥棒状杆菌)内监测生长。使用野生型菌株作为参比，测量了细菌菌株的世代时间。使用Mann-Whitney检验确定出统计学差异。

a2.研究对生物膜形成的作用

使用结晶紫染色技术，在多孔板中研究了细菌物种的生物膜产生。将结果归一化并表示为对照培养基中生物膜形成值的百分比。使用Mann-Whitney检验确定出统计学差异。

b.结果

结果示于表17和表18中。圣罗勒提取物增加了致病菌株(金黄色葡萄球菌)的世代时间，而且不会显著改变共生菌株的生长(表17)。

此外，圣罗勒提取物强烈而显著地改变了金黄色葡萄球菌形成生物膜的能力(表18)，而且没有改变所研究的其它菌株形成生物膜的能力。

这些结果证实了提取物保持皮肤微生物群平衡的能力。

表17：圣罗勒提取物对不同细菌菌株的世代时间的作用

表18：圣罗勒提取物对不同细菌菌株的生物膜形成的作用

实施例4：对根据本发明的提取物的临床研究

通过体内临床研究评价了根据本发明的圣罗勒提取物的临床抗老化功效。出于该目的，评价了含有根据实施例1获得的3％圣罗勒提取物(在下文称为活性成分)的制剂(霜剂)或其安慰剂。

A.方案

该研究是一项双盲的安慰剂对照研究。受试者施用含有圣罗勒提取物(活性成分)的霜剂或安慰剂(随机纳入)56天，每天两次(早上和晚上)。

安慰剂的组成如下：

表19：安慰剂组成

招募受试者限定的纳入标准为：

·性别：女

·年龄：40至60岁之间

·照相底片：I至III

·类型：高加索

·受试者有皱纹(鱼尾纹、前额纹)

·第6天至第0天之间没有用美容产品。

使用以下技术评估功效(在J0、J28和J56进行测量)：

·图像分析-形貌

·生物力学皮肤性质的测量

·交叉偏振光摄影。

B.评价针对皱纹的抗老化作用

a.针对鱼尾纹的结果

通过形貌分析在J0、J28和J56获得的结果列于下表中。

活性成分显著减少了在J56检测到的皱纹的面积和长度，与安慰剂相比具有显著差异。

表20：测量结果-鱼尾纹

b.针对前额纹的结果

通过形貌分析在J0、J28和J56获得的结果列于下表中。

在整体面积上：活性成分在J28时显著改善了前额纹，在J56时没有变化。安慰剂在J28时没有引起任何显著变化，在J56时引起显著的总体恶化。总体而言，对于所评估的所有形貌参数，在J28和J56存在有利于活性成分的显著差异。

表21：测量结果-前额纹

d.结论-抗皱作用

结果表明，针对鱼尾纹(改善了皱纹面积和长度)和前额纹(改善了形貌参数)具有与安慰剂显著不同的抗皱作用。

C.评估针对皮肤生物力学性质的抗老化作用

下表列出了通过Cutométrie在J0、J28和J56获得的结果。

表22：Cutométrie测试结果

活性成分在J56时改善了紧张性(Ur和Ua)，而安慰剂导致显著恶化。活性成分和安慰剂之间的差异在两个参数上都是显著的，有利于活性成分。

活性成分在J56时改善了Ur/Uf总弹性。与导致恶化的安慰剂相比，差异是显著的。

活性成分在J28和J56时显著改善了Ua/Uf生物弹性。与在J56时导致恶化的安慰剂相比，差异是显著的。

活性成分在J56时改善了净弹性Ur/Ue。与在J56时导致恶化的安慰剂相比，差异是显著的。

活性成分在J28时改善并在J56时显著改善了Q1粘弹性恢复。与在J56时导致恶化的安慰剂相比，差异是显著的。

活性成分在J56时改善了Q2弹性恢复。与在J56时导致恶化的安慰剂相比，差异是显著的。

活性成分在J28和J56时显著改善了Q3粘性恢复。与在J56时没有显示出任何显著变化的安慰剂相比，差异是显著的。

结论-生物力学性质：

与安慰剂相比，活性成分显著改善了皮肤的生物力学性质，其中改善了皮肤紧张性和弹性。

D.评价针对肤色的抗老化作用：在照片上测量颜色和均匀度

下表列出了通过图像分析在J0、J28和J56获得的结果。

表23：在照片上的颜色和均匀性测量结果

活性成分在J28和J56时显著减少了发红a*。与安慰剂(其在J28和J56时也显著减少了发红)相比，在J28和J56时的差异有利于活性成分。

活性成分在J28和J56时减少了血红蛋白。

从H76可知，活性成分到J56显著改善了肤色均匀度。

结论-肤色评价

活性成分显著改善了肤色的亮度、发红和均匀度。

E.临床研究结果的概述

·针对皱纹的抗老化作用：

活性成分对面部上部的皱纹(即鱼尾纹和前额纹)具有仪器观察到的抗老化作用。随着时间的推移，观察到与安慰剂相比的显著差异，其有利于活性成分。

·针对生物力学性质的抗老化作用：

根据所考虑的参数，活性成分在J28和J56时显著改善了皮肤紧张性和弹性，其中与安慰剂的显著差异有利于活性成分。

·对肤色和均匀度的作用：

活性成分在J56时改善了肤色均匀性，其中与安慰剂相比的差异有利于活性成分。

Claims (15)

1.一种圣罗勒Ocimum sanctum地上部分的富含多酚的提取物，其包含相对于干提取物的总重量至少6重量％的多酚，特别地包含相对于干提取物的总重量至少5重量％的羟基肉桂衍生物和相对于干提取物的总重量至少2.5重量％的以芦丁当量表示的黄酮。

2.根据权利要求1所述的提取物，其包含相对于干提取物的总重量至少9重量％，有利地至少11重量％的多酚。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的提取物，其中，所述提取物包含相对于干提取物的总重量至少7重量％，优选10重量％的羟基肉桂衍生物。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的提取物，其中，所述提取物包含相对于干提取物的总重量至少3.5重量％的以芦丁当量表示的黄酮。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的提取物，其特征在于，在选自二元混合物水/二醇或水/甘油的溶剂中对圣罗勒地上部分进行固体/液体提取获得所述提取物，有利地，所述溶剂的比例为在水中具有在30％至90％之间的二醇或甘油。

6.一种用于制备根据权利要求1至4中任一项所述的圣罗勒地上部分的富含多酚的提取物的方法，其包括在选自二元混合物水/二醇或水/甘油的溶剂中的至少一个固体/液体提取步骤，有利地，所述溶剂的比例为在水中具有在30％至90％之间的二醇或在水中具有在30％至90％之间的甘油。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下连续步骤：

a)研磨干燥的圣罗勒地上部分；

b)在选自二元混合物水/二醇或水/甘油的溶剂中提取经研磨的地上部分；

c)通过倾析和/或离心和/或连续过滤将固相与液相分离；以及

d)任选地，将在步骤c)中获得的提取物干燥。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，其还包括真空蒸发或除臭步骤。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述二醇为植物来源的二醇，特别是丙二醇或丙二醇，尤其为1,3-丙二醇。

10.一种组合物，其包含根据权利要求1至5中任一项所述的圣罗勒地上部分的提取物或能够通过根据权利要求6至9中任一项所述的方法获得的提取物作为活性成分，和有利地合适的赋形剂。

11.根据权利要求1至5中任一项所述的提取物或能够通过根据权利要求6至9中任一项所述的方法获得的提取物或根据权利要求10所述的组合物，其用于预防和/或治疗：

-皮肤和/或粘膜和/或皮肤附属物的疾病或病状，有利地为炎症反应，与内源性或外源性应激有关的疾病，所述内源性或外源性应激例如为心理应激、与焦虑状态有关的应激、与涉及或不涉及化学或大气污染和/或涉及UV或IR暴露的自由基攻击有关的应激，有利地选自敏感性皮肤、反应性皮肤和/或反应性粘膜、刺激性皮肤、发炎皮肤、屏障或体内平衡障碍、光敏性皮肤、机械和/或热侵袭；和/或

-血管疾病，优选发红和红血丝；和/或

-微生物群失衡，有利地选自特应性皮炎、湿疹、令人不快的腋臭的产生、皮肤屏障减弱、痤疮、银屑病、化脓性汗腺炎、毛囊炎、乳痂、头皮屑、瘙痒特别是头皮瘙痒、刺激、念珠菌病和细菌性阴道病的用途

和/或其用作愈合剂的用途。

12.一种用于皮肤和/或皮肤附属物和/或粘膜以改善其状况和/或外观的非治疗性美容护理方法，其包括施用根据权利要求1至5中任一项所述的提取物或能够通过根据权利要求6至9中任一项所述的方法获得的提取物或根据权利要求10所述的组合物。

13.根据权利要求12所述的非治疗性美容护理方法，其用于使皮肤和/或粘膜保湿和/或预防皮肤屏障损伤和脱水和/或预防皮肤老化。

14.根据权利要求12所述的非治疗性美容护理方法，其用于改善皮肤的紧实度、弹性或紧张性，增强皮肤和粘膜的力学性质，特别是对抗皱缩、无力、肿胀和/或下垂的皮肤，和/或增强和/或恢复皮肤的弹性或紧实度，或治疗细纹和皱纹。

15.根据权利要求1至5中任一项所述的提取物或能够通过根据权利要求6至9中任一项所述的方法获得的提取物或根据权利要求10所述的组合物在治疗和/或预防脱水皮肤、皮肤发红、老化的皮肤、肤色均匀、减少皮肤上的斑点或皮肤老化特别是时间和/或光老化中的非治疗性美容用途。