KR20220008081A

KR20220008081A - 아토피 등 극건성 피부의 보습과 진정, 피부장벽강화 효과를 지니는 흰민들레 태좌 배양 추출물 함유 피부개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20220008081A
Application number: KR1020200086211A
Authority: KR
Inventors: 채문선
Original assignee: 탈리다쿰 주식회사
Priority date: 2020-07-13
Filing date: 2020-07-13
Publication date: 2022-01-20
Also published as: US20220008328A1; CN113925803B; EP3939562A1; CN113925803A; KR102552616B1; US11684564B2

Abstract

본 발명은 아토피 등 극건성 피부의 보습과 진정, 피부장벽강화 효과를 지니는 흰민들레 태좌 배양 추출물 에 관한 것이다. 본 발명에 따른 흰민들레 태좌 세포 배양물 또는 그 추출물은 피부 세포에 독성이 없으면서도, 피부 보습, 항노화, 피부 장벽 강화, 주름 개선, 피부 진정, 자외선으로부터의 피부 보호, 블루라이트로부터의 피부 보호 등의 효능이 있다.

Description

아토피 등 극건성 피부의 보습과 진정, 피부장벽강화 효과를 지니는 흰민들레 태좌 배양 추출물 함유 피부개선용 화장료 조성물 {Cosmetic composition for improving atopic dermatitis and dry skin containing Taraxacum Coreanum Phytoplacenta Culture Extract}

본 발명은 아토피 등 극건성 피부의 보습과 진정, 피부장벽강화 효과를 지니는 흰민들레 태좌 배양 추출물 함유 피부개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 된다. 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하고 환경오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가하며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 트러블이 자주 발생하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.

피부 노화 현상이 진행되면 각질형성세포 및 섬유아세포의 분열 감소, 콜라겐 합성의 감소, MMP 생성의 증가, 멜라닌 생성의 신호 전달 증가 등이 발생하게 되고, 이로 인하여 주름은 증가하게 되고 피부의 탄력은 감소하며, 기미, 주근깨 및 검버섯 등은 증가하게 된다. 특히, 40대 전후로 호르몬의 균형이 깨져 세포 재생 능력, 콜라겐의 합성 능력, 피부 보습에 중요한 각질층의 수분 함유량이 유의하게 저하된다. 이는 각질층 지질구성 성분의 감소, 자연보습인자의 감소 등이 그 원인으로 제시되고 있다. 결국 노화 피부에서는 하부 표피로부터 각질층까지 공급되는 수분량이 부족하여 피부 건조가 심해지고 이로 인해 염증과 소양증이 쉽게 발생하게 된다. 반면, 피부의 주름은 콜라겐의 합성과 분해의 불균형에 기안하는데 보통 피부에서 type I 콜라겐의 합성과 그 분해 효소인 MMP-1이 균형을 이루고 있다. 그러나 광노화된 피부에서는 type I, III 콜라겐의 합성이 저하되고, MMP-1의 활성이 증가된다. 이러한 MMPs (matrix metalloproteinases)는 단백분해효소로 세포외 기질(extracellular matrix)을 분해하는 기능을 나타내며 정상적인 상태에서는 상처치유나 조직 재생 과정에 관여하는 것으로 알려져 있다.

이러한 변화로 피부의 노화를 억제할 수 있는 소재에 대한 관심과 이를 함유하는 화장품에 대한 사회적 수요가 증가하고, 생체 친화적이면서도 피부 침투율이 우수한 물질을 개발하는 것이 중요한 과제로 대두되고 있다. 최근 다양한 방법이 응용되고 있는데, 그 중 다양한 식물성 자원과 펩타이드가 상기와 같은 피부 손상 회복을 위해 연구되어 오고 있다.

'캘러스(Callus)'는 식물체에 상처가 났을 때, 세포가 분열 능력을 회복하여 상처를 막고 비대하여 지는 유상조직으로, 식물체에서 잘라낸 조직을 옥신을 함유한 배지에서 배양하는 방법 등에 의해 생기는 특수한 조직덩어리를 의미하며, 이러한 캘러스의 이용에 관해 최근 관심이 고조되고 있고, 다양한 방면에서 연구 중에 있다. 식물은 식물을 구성하는 잎, 줄기, 뿌리 등 그 일부만을 이식하여도 전체 개체가 다시 형성되는 전형성능(totipotency)이 뛰어나다. 캘러스는 식물세포 배양, 특히 조직배양을 통하여 식물의 어느 부분에서도 유도될 수 있으며, 계대 배양에 의해 계속해서 만들어 낼 수 있다는 특징을 가지고 있다. 식물 세포의 배양의 기본 원칙은, 모든 식물 세포는 그 세포가 유래되는 전체 식물을 건설하는 능력을 갖는다는 생물학적 사실을 이용한다. 이 전형성능은 동물의 배아줄기세포의 다분화성과 비교 가능하다. 그러므로, 식물 세포가 피부 줄기 세포의 보호 및 활성화에 대한 긍정적 영향을 준다는 것을 받아들일 수 있다. 한편 식물의 '태좌(Placenta)'는 동물 유래의 태반과 같이, 종자 육성을 주관하는 중요한 부위로, 암술의 씨방(Ovary)안에서 밑씨가 붙는 부분이다. 태좌 없이는 밑씨의 분화가 불가능하며, 다른 조직보다 생리활성 영양소인 피토케미칼을 다량 함유하고 있다. 외부 자극에 대해 항상성 유지에 관여하고, 샤페론 등 구조유지 단백질이 분포해 있다.

이러한 식물의 성질을 이용한 조직배양을 통한 미분화 세포 덩어리인 캘러스 배양을 이용한다면 우수한 생리활성 효능을 지닌 화장품 원료로서의 가치가 있다고 볼 수 있다.

본 발명은 전술한 문제 및 이와 연관된 다른 문제를 해결하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 일 예시적 목적은 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 태좌 세포 배양물의 추출물을 함유한 화장료 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 일 예시적 목적은 상기 방법에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 일 예시적 목적은 상기 방법에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 피부 장벽 강화용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 일 예시적 목적은 상기 방법에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 자외선으로부터의 피부 보호를 위한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 일 예시적 목적은 상기 방법에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 블루라이트로부터의 피부 보호를 위한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 일 예시적 목적은 상기 방법에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 피부 스트레스 예방 또는 완화를 위한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 일 예시적 목적은 상기 방법에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 미세먼지에 대한 피부 보호용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 일 예시적 목적은 상기 방법에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 피부 진정을 위한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 명세서에 개시된 발명의 기술적 사상에 따라 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 문제점을 해결하기 위한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제는 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 하나의 양태는 (a) 흰민들레(Taraxacum Coreanum) 식물의 씨방내의 태좌 조직으로부터 태좌 세포를 분리하여 배양하는 단계; 및 (b) 상기 (a)단계에서 얻어진 배양물 또는 상기 태좌 세포 배양물의 추출물을 함유하는 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 태좌 세포 배양물의 추출물을 함유한 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 일 관점에서, 상기 제조방법에 따른 흰민들레 태좌 세포 배양물 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 구체적으로는, 상기 태좌 세포 배양물 또는 그 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 10 중량%로 함유할 수 있다. 이러한 비율은 단지 바람직한 범위일 뿐이며, 예컨대, 하기 실시예에서는 1%, 5% 및 10% 농도에서 실험하여 우수한 효능을 가지고 있는 것을 확인하였으며, 세포 생존율 또한 10%에서도 영향이 없음을 확인하였다. 이 이외에 20%, 30% 이상 경우도, 우수한 피부개선효과, 피부장벽 강화, 개선, 피부 보습, 피부 항노화, 피부 주름개선, 자외선 또는 블루라이트로부터의 피부 보호, 피부 스트레스로부터의 보호, 피부 진정, 미세먼지 차단 기능 등을 가짐은 당업자에게 자명하다.

본 발명은 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 그 추출물을 함유한 화장료 조성물의 제조방법은 다음의 단계를 포함한다:

(a) 흰민들레 식물의 씨방내의 태좌 조직으로부터 태좌 세포를 분리하여 배양하는 단계; 및 (b) 상기 (a)단계에서 얻어진 배양물 또는 그 추출물을 함유하는 조성물을 제조하는 단계.

본 발명에 있어서, 상기 (b)단계는, (a)단계에서 얻어진 흰민들레식물의 태좌 세포 배양물을 건조하고, 분말화하여 정제수에 혼합시켜 조성물을 제조하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 (b)단계는, (a)단계에서 얻어진 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물을 건조하고, 분말화하여 정제수에 혼합시킨 다음, 감압 추출, 초음파 추출 또는 열수 추출하여 조성물을 제조하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 흰민들레 태좌 세포 배양물 (배양체) 자체를 사용하거나, 배양물을 여과하여 사용하거나, 배양물을 파쇄하여 사용하거나, 배양물을 건조시켜 분말화한 다음, 정제수에 녹여 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, "추출물"은 상기 흰민들레 태좌 세포 배양물을 분말화하거나, 감압추출법, 냉수추출법, 열수추출법, 에탄올 추출법 등 종래 알려진 다양한 추출법에 의해 수득한 추출물을 의미한다.

본 발명에서 추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 감압 추출, 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 추출, 열수 추출 등이 있다.

여기서, 감압 추출의 경우, 저온 감압추출 일 수 있으며, 예를 들어, 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물을 저온 (60℃ 내지 80℃ 에서 6 내지 8시간동안 감압추출 할 수 있다. 또한, 감압 추출시 특별히 이용하는 감압 추출 장치에 제한은 없으며, 감압 추출시에, 0.03 내지 0.3 MPa의 압력, 구체적으로 0.05 내지 0.1 MPa의 압력으로 감압하여 추출함으로써 본 발명 화장료 조성물 소재로써의 효과가 우수한 추출물을 얻는다.

여기서, 열수추출의 경우, 열탕증류기에서 8~48시간동안, 80~100℃ 로 가열하여 열수 추출물을 얻는다.

냉수 추출의 경우, 예컨대, 냉수 (15-25℃)에 상기 태좌 조직 배양물 자체 또는 그것의 건조된 분말을 혼합하여 3일동안 추출하여 냉수추출물을 얻는다.

또는, 물, 유기 용매, 또는 이의 혼합 용매를 사용하여 추출하는 방법으로 제조될 수 있다. 추출한 액은 바로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 유기용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매인 유기용매를 사용하며 생약의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 약제의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다.

본 발명에 있어서, 상기 추출물은 농축, 또는 희석하여 사용할 수 있고, 추출물의 증류액을 사용할 수도 있다.

본 발명에 있어서, 항노화란, 피부 보호 및 피부 상태 개선, 피부 미백, 피부 노화 및 주름의 예방 또는 개선, 모공 수축, 축소, 피부 보호 및 피부의 염증 반응의 완화, 면역질환 개선능, 또는 피부 장벽 기능 개선, 피부자극 완화, 피부 세포 증식 및 재생능, 항산화능, 콜라겐 합성 증진능 등을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명에 있어서, "유효성분으로 함유하는"의 의미는, 피부 화장료 조성물로써 피부 보습, 피부 장벽 강화, 개선, 주름 개선 등 본 발명에서 목적하는 효과를 발현하기 위한 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미한다.

본 발명에 따른 피부 장벽 보호 기능에 있어서, 피부장벽(skin barrier)은 표피의 최외곽 층인 각질층(stratum corneum)은 주로 무핵의 편평한 각질세포(corneocyte)로 이루어져 있다. 정상적인 표피세포의 분열 및 분화과정을 통해 유지되는 피부장벽의 각질세포가 합성하는 세라마이드, 콜레스테롤, 및 지방산과 같은 세포간 지질로 형성된 다층지질막(multi lamella lipid layer)는 피부 내의 수분이 증발하지 않도록 방어막 역할을 한다. 한편, 이들 세포간 지질 중 오메가 히드록시 세라마이드는 각질세포(corneocyte) 외곽층의 단백질인 인볼루크린(involucrin)과 화학적 공유결합으로 연결되어 각질세포지질막(corneocyte lipid envelope, CLE)을 형성함으로써 다층 지질막 형태의 세포간 지질을 물리적으로 안정화시키는 역할을 하여 장벽기능을 강화시키는 역할을 하게 된다.

본 발명의 조성물은 피부도포를 통해 각질층에 전달되어 각질세포의 분화를 촉진시켜, 표피층의 두께를 두껍게 개선시키는 효과가 있을 뿐 아니라, 피부장벽 손상을 회복시키는 효과가 우수하여 피부장벽의 손상에 의해 유발되는 피부질환의 치료 및 예방에 유용하게 사용할 수 있다. 상기 피부장벽 손상에 의해 유발되는 피부질환으로는 아토피 피부염(atopic dermatitis), 피부건조증(xeroderma), 건선(psoriasis), 어린선(ichthyosis), 여드름 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 피부 장벽 보호 기전은 밀착연접 구성 단백질인 occludin과 claudin-1의 단백질량 증가를 통해 확인하였다. Filaggrin은 각질형성세포가 분화단계에서 발현시키는 여러 구조 단백질 중 하나로 표피의 기저층으로부터 각질층까지 분화가 이루어지도록 하는데에 관여하며, 피부 조직의 수분유지에 필수적인 천연보습인자(Natural moisture factor, NMF)의 주체를 이루기도 해 피부의 수분 유지 및 피부막기능의 주요한 지표로 사용되는데, 본 발명에 따른 태좌 세포 배양물은 필라그린의 유전자 발현이 월등히 증가됨에 따라 우수한 피부 장벽 보호, 강화, 개선 기능을 가진다.

아울러, 본 발명에 따른 태좌 세포 배양물이 자외선 조사, 또는 블루라이트 조사에 따른 피부 세포 보호 효과가 월등함을 확인한 바, 자외선 조사에 따른 피부 보호용으로도 활용 가능하다.

한편, 식물의 태좌(胎座, Placenta)는 동물 유래의 태반과 같이, 종자 육성을 주관하는 중요한 부위로, 암술의 씨방(자방, 子房, Ovary)안에서 밑씨가 붙는 부분이다. 보통 씨방을 형성하는 심피(心皮, carpel)의 가장자리에 있는데, 때로는 심피의 중맥에도 있다. 또 씨방의 기저나, 기저로부터 씨방 안에 직립하는 기둥 모양으로 생길 때도 있다.

본 발명은 이러한 관점에서, (a) 흰민들레 식물의 태좌 조직을 분리하여 배양하는 단계; 및 (b) 상기 흰민들레 태좌 세포 배양물 또는 그 추출물을 함유하는 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 흰민들레 태좌 세포 배양물 또는 그 추출물을 함유한 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

상기 (a)단계에서, 구체적으로는 흰민들레 태좌 세포를 배양하기 위해 적절한 배지를 선택할 수 있다. 기술 분야에서 식물조직배양에 일반적으로 사용되고 있는 배지가 있다면, 제한 없이 사용가능하다. 식물에서는 일반적으로 MS배지, B5배지 등을 주로 사용하고, 일 예로, MS배지의 조성(1L기준시)은 CoCl₂.6H₂O 0.025 mg, CuSO₄.5H₂O 0.025 mg, FeNaEDTA 36.70 mg, H₃BO₃ 6.20 mg, KI 0.83 mg, MnSO₄.H₂O 16.90 mg, Na₂MoO₄.2H₂O 0.25 mg, ZnSO₄.7H₂O 8.60 mg, CaCl₂ 332.02 mg, KH₂PO₄ 170.00 mg, KNO₃ 1900.00 mg, MgSO₄ 180.54 mg, NH₄NO₃ 1650.00 mg의 조성을 가진 MS 배지를 사용할 수 있다.

아울러, 상기 배지에 미노시톨, 티아민, 제아틴 및 수크로오스를 포함할 수 있으며, 이들 물질의 조합을 통해, 우수한 흰민들레 태좌 세포 유도 수율을 달성할 수 있다. 본 발명에 있어서 티아민 및 제아틴은 2~6: 1의 중량비로 포함할 수 있다. 일 예로, MS 배지(1L기준)에 미노시톨(Myoinositol) 100 mg, 티아민(Thiamine) 0.4 mg, 제아틴(Zeatin) 0.1mg, 수크로오스(Sucrose) 30g을 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 (b)단계에서 있어서, (a)단계의 배양을 통해 얻어진 흰민들레 태좌 세포 배양물 그대로를 포함하는 조성물을 적절한 형태의 피부 외용제 조성물로 제조하거나, 또는 상기 배양물을 공지된 추출 방법을 통해 추출물 형태로 수득하여 적절한 형태의 화장료 조성물로 제조할 수 있다.

예컨대, 상기 (b)단계는, (a)단계에서 얻어진 흰민들레 태좌 세포 배양물을 건조하고, 분말화하여 정제수에 혼합시켜 조성물을 제조하거나, (a)단계에서 얻어진 흰민들레 태좌 세포 배양물을 건조하고, 분말화하여 정제수에 혼합시킨 다음, 냉수 추출, 열수 추출 또는 에탄올 추출하여 조성물을 제조하는 단계를 포함할 수 있다.

또 다른 예로, 상기 (a)단계에서 얻어진 배양물을 열풍 건조후 분말화하여 수분을 증발시켜 제조할 수 있다.

상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 피부 외용제 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 제조되는 후술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로써, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 태좌 세포 배양 추출물 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 착색료, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 화장수, 에센스, 젤, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말, 또는 젤라틴 등의 피막이 있는 캅셀 (소프트 캅셀, 하드 캅셀) 제형 등의 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서의 피부는 얼굴뿐만 아니라, 두피, 전신도 포함되는 개념으로, 이러한 두피에 적용될 수 있는 피부 외용제 조성물로써, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 발모제 등이 있고, 전신에 적용될 수 있는 바디클렌져 등의 용도로써 다양한 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 흰민들레 태좌 세포 배양 추출물을 함유 화장료 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 본 발명에 따른 흰민들레 태좌 세포 배양 추출물을 함유 화장료 조성물을 제조할 수 있다.

특히, 상기 화장료 조성물은 본 발명에 특별히 개시된 제조방법 이외에도, 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.

화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일,염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

특히, 이하의 실시예에서는 흰민들레 태좌 세포 배양 추출물에 관한 효능을 확인하였으나, 추출물이 아닌 배양물 자체에 대해서도 이러한 효과가 있음은 당업자에게 자명할 것이다.

본 발명에 따른 흰민들레 태좌 세포 배양물 또는 그 추출물은 피부 세포에 독성이 없으면서도, 피부 보습, 항노화, 피부 장벽 강화, 주름 개선, 피부 진정, 자외선으로부터의 피부 보호, 블루라이트로부터의 피부 보호 등의 효능이 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예만으로 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 본 발명에 따른 조성물 제조

실시예 1-1: 식물의 표면소독

본 발명에 따른 식물세포 생산을 위하여 흰민들레의 꽃봉오리를 조심스럽게 핀셋으로 씨방벽을 벗겨내어 태좌 세포를 분리한 후, 70 % Ethanol에 30초간 침지시키고, 2 % Sodium hypochlorite에 5분 진탕하여 살균 후, 멸균수로 세척하였다.

실시예 1-2: 식물 태좌 세포 유도

살균된 태좌 세포를 날카로운 칼을 이용하여 한번에 잘라서 MS 배지(1L기준)에 식물생장조절물질(Plant Growth Regulators)인 미노시톨(Myoinositol) 100 mg, 티아민(Thiamine) 0.4 mg, 제아틴(Zeatin) 0.1 mg, 수크로오스(Sucrose) 30 g가 포함된 기본 MS 배지(Murashige and Skoog 1962, Duchefa사, Cat. M0221)에서 25 ℃ 습도 70 %의 생장상 조건으로 암배양하며 초기 식물세포를 유도하였다. 각각의 배지는 1 N NaOH를 이용하여 pH 5.8 로 조정하였다. 계대배양은 2주 간격으로 수행하였다.

실시예 1-3: 본 발명에 따른 식물 태좌 세포 배양 및 대량생산

무균적으로 계대배양을 통하여 배양된 흰민들레 태좌 세포는 이후, 생물반응기를 이용하여 agar를 제외한 동일한 조성의 액체 배지에서 온도 25 ℃ 습도 70 %, 공기공급량 0.1 vvm으로 일정하게 조절하며 14일 간격으로 배양 및 증식하여 대량생산하였다.

실시예 1-4: 본 발명에 따른 식물 태좌 세포 조성물 제조

배양한 흰민들레 태좌 세포는 수확되어 깨끗한 티슈로 충분히 수분을 제거한 후 60 ℃로 2일 동안 건조하였다. 본 발명에 따른 조성물을 수득하기 위하여 20 g 흰민들레 태좌 세포를 정제수 10 L에 60 ~ 80 ℃에서 6 ~ 8시간동안 저온 감압추출하고 필터하였다.

실험예 1: 피부세포 무자극 효과 확인 시험

먼저 실시예 1의 본 발명에 따른 조성물이 피부세포에서 처리 농도 별 독성에 의한 자극이 있는지 알아보기 위해, 세포생존률을 측정하는 MTT assay를 진행하였다.

이를 위하여 HaCaT 세포(keratinocyte, 각질형성세포), Detroit 세포(fibroblast, 섬유아세포)를 각각 10 % FBS(Fetal Bovine Serum), 1 % Antibiotic-Antimycotic이 함유된 DMEM(Dubelcco's Modified Eagle's Medium)과 함께 96-well plate에 분주하고, 5 % CO₂, 37 ℃의 조건인 항온기에서 24시간 배양하였다. 이 후 정제수를 첨가한 대조군과 시험물질인 조성물을 최종 1, 5, 10 %인 농도가 되도록 세포에 처리하고, 24시간 동안 추가 배양하였다. 이어 5 mg/mL MTT(3-(4, 5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) 용액을 각 well에 4 μL씩 첨가하고, 4시간 동안 배양하여 반응시켰다. 배양액을 제거한 다음 DMSO(Dimethyl sulfoxide) 용액 100 μL씩 첨가하여 세포를 용해시킨 후, 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

시료	처리 농도(%)	HaCaT 세포 생존률(%)	Detroit 세포 생존률(%)
대조군	-	100.00	100.00
실험군	1	101.26	98.01
	5	100.46	96.93
	10	97.96	96.73

그 결과, 본 발명의 조성물을 1 ~ 10 % 농도별 처리 시 대조군 대비 세포생존률이 모두 95 % 이상으로 피부세포 내 독성을 일으키지 않았다. 이에 "흰민들레피토플라센타배양추출물"이 피부세포에 자극의 유발 가능성이 낮고 피부세포에 무해하다는 효과를 확인하였다.

실험예 2: DPPH 라디칼 소거능으로부터 항산화 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) free radical 생성의 억제로 인한 항산화효과를 살펴보기 위하여, DPPH assay를 진행하였다.

이를 위하여 에탄올 400 μL에 0.1 mM DPPH 용액 500 μL와 대조군 및 시험물질인 조성물을 100 μL씩 첨가하였다. 각 시료들을 혼합한 후 실온 암조건에서 30분간 반응시킨 후, 517 nm에서 흡광도를 측정하였다.

시료	처리 농도(%)	DPPH 라디칼 소거능(%)
대조군	-	0.00
실험군	1	3.61
	5	11.68
	10	23.84

그 결과, 본 발명의 조성물을 농도별 처리 시 대조군 대비 DPPH 라디칼 소거능이 증가함으로써 "흰민들레피토플라센타배양추출물"이 항산화 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 3: H ₂ O ₂ 산화 독성으로부터 항산화 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 H₂O₂ 산화 독성으로부터 항산화효과를 살펴보기 위하여, H₂O₂에 의한 세포생존률의 변화를 알아보았다.

이를 위하여 HaCaT 세포를 48-well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이후 1 mM H₂O₂를 조사하고, 대조군과 시험물질인 조성물을 세포에 처리하여 12~16시간 동안 추가 배양하였다. 이때 양성대조군으로 N-acetylcy-L-steine(NAC) 2 mM을 사용하였다. 이후 H₂O₂ 산화 독성 유도에 의한 피부세포의 손상을 보호하는지 확인하고자 MTT assay를 이용하여 세포 생존율을 측정하였다.

시료	처리 농도(%)	H ₂ O ₂	HaCaT 세포 생존률(%)
대조군	-	-	100.00
대조군	-	+	60.33
양성대조군	-	+	88.8
실험군	1	+	66.56
	5	+	76.73
	10	+	79.46

그 결과, 본 발명의 조성물을 농도별 처리한 세포에서 대조군(+H₂O₂) 대비 H₂O₂ 처리에 의한 세포 사멸이 저해되어 "흰민들레피토플라센타배양추출물"이 H₂O₂ 산화 독성으로부터 항산화 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 4: PIP 생성 증가에 따른 주름 개선 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 주름 개선 효과를 살펴보기 위하여, 콜라겐의 합성의 전구체인 프로콜라겐(Procollagen Type I C-Peptide, PIP)의 생합성양을 측정하였다.

이를 위하여 Detroit551 세포를 48-well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 대조군과 시험물질인 조성물을 세포에 처리하고, 48시간 동안 추가 배양하였다. 이어 배양한 배지의 상층액을 희석한 일부 20 μL를 취해 PIP EIA Kit(Takara, Cat. MK101) 내 PIP 표준물질 20 μL와 함께 각각 antibody coated microtiter plate에 넣고 100 μL의 peroxidase 표식 antibody solution을 또한 각 well에 첨가하여, 37 ℃에서 3시간 동안 반응시켰다. 배지를 제거하여 200 μL의 PBS로 4회 세척한 후, 각 well에 100 μL의 substrate solution을 첨가하고 차광한 상태에서 15분간 실온에서 반응시켰다. 이 후 100 μL stop solution (1 N H₂SO₄)을 첨가하고, 450 nm에서의 흡광도를 측정하였다.

시료	처리 농도(%)	PIP 합성능(%)
대조군	-	100.00
양성대조군	-	122.60
실험군	1	109.5
	5	114.1
	10	119.1

그 결과, 본 발명의 조성물을 농도별 처리한 세포에서 대조군 대비 PIP 양이 증가하여 "흰민들레피토플라센타배양추출물"이 항주름에 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 5: AQP3과 FLG 발현 증가에 따른 보습 및 피부장벽 개선 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 보습 및 피부장벽 개선 효능을 살펴보기 위하여, 수분/glycerol 수송체인 AQP3(Aquaporin)와 자연보습인자로 알려진 FLG(Filaggrin)의 발현양 변화를 알아보았다.

HaCaT 세포를 96-well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 대조군과 시험물질인 조성물을 세포에 처리하고, 24시간 동안 추가 배양하였다. AQP3와 FLG의 유전자 수준에서 확인하기 위해 Real-time PCR 법을 수행하였으며, 그 시험 순서는 다음과 같다.

RNA isolation과 cDNA합성을 위해 SuperPrep^TM cell lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO, Cat. SCQ-101)을 사용하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 50 μL cell lysis mixture 를 넣고 5분간 반응시킨 후, stop solution을 첨가하였다. RT reaction mixture 32 μL에 앞서 추출한 lysate 8 μL를 첨가하고 PCR을 이용하여 37 ℃ 15분, 50 ℃ 5분, 95 ℃ 5분 조건에서 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 비교분석하기 위하여 상기에서 합성한 cDNA를 template로 하고, Thunderbird^TM SYBR qPCR Mix (TOYOBO, Cat. QPS-201)를 이용하여 Real-time PCR 분석을 진행하였다. 실험에 사용한 primer는 Qiagen사의 QuantiTect　primer assays (GAPDH; Cat. QT01192646, AQP3; Cat. QT00212996, FLG; Cat. QT02448138)이며 시료의 AQP3, FLG mRNA 발현량은 GADPH로 정량하였다. Real-time qPCR 조건은 먼저 95 ℃ 1분 반응 후, 1 사이클 당 94 ℃ 15초, 60 ℃ 30초, 72 ℃ 30초로 하여 총 40 사이클로 진행하였다.

시료	처리 농도(%)	상대 발현양(Fold)
시료	처리 농도(%)	AQP3	FLG
대조군	-	1.00	1.00
실험군	1	1.49	1.83
	5	2.37	1.77
	10	2.11	1.66

그 결과, 본 발명의 조성물을 농도별 처리한 세포에서 대조군 대비 AQP3와 FLG의 mRNA 발현양이 증가하여 "흰민들레피토플라센타배양추출물"이 보습과 피부장벽 개선에 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 6: COX-2 발현 감소에 따른 항염증 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 항염증 효과를 살펴보기 위하여, 염증 반응에 관여하는 COX-2(Cyclooxygenase-2)의 발현양 변화를 알아보았다.

이를 위하여 HaCaT 세포를 96-well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이후 UVB 조사를 통해 염증반응을 유도하고, 대조군과 시험물질인 조성물을 세포에 처리하고, 4시간 동안 추가 배양하였다. COX-2의 유전자 수준에서 확인하기 위해 Real-time PCR 법을 수행하였으며, 그 시험 순서는 다음과 같다.

RNA isolation과 cDNA합성을 위해 SuperPrep^TM cell lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO, Cat. SCQ-101)을 사용하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 50 μL cell lysis mixture 를 넣고 5분간 반응시킨 후, stop solution을 첨가하였다. RT reaction mixture 32 μL에 앞서 추출한 lysate 8 μL를 첨가하고 PCR을 이용하여 37 ℃ 15분, 50 ℃ 5분, 95 ℃ 5분 조건에서 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 비교분석하기 위하여 상기에서 합성한 cDNA를 template로 하고, Thunderbird^TM SYBR qPCR Mix (TOYOBO, Cat. QPS-201)를 이용하여 Real-time PCR 분석을 진행하였다. 실험에 사용한 primer는 Qiagen사의 QuantiTect　primer assays (GAPDH; Cat. QT01192646, COX-2; Cat. QT00040586)이며 시료의 COX-2 mRNA 발현량은 GADPH로 정량하였다. Real-time qPCR 조건은 먼저 95 ℃ 1분 반응 후, 1 사이클 당 94 ℃ 15초, 60 ℃ 30초, 72 ℃ 30초로 하여 총 40 사이클로 진행하였다.

시료	처리 농도(%)	UVB	COX-2 상대 발현양(Fold)
대조군	-	-	0.129
대조군	-	+	1.00
실험군	1	+	0.88
	5	+	0.67
	10	+	0.54

그 결과, 본 발명의 조성물을 농도별 처리한 세포에서 대조군(UVB 처리) 대비 COX-2의 mRNA 발현양이 감소하여 "흰민들레피토플라센타배양추출물"이 항염증 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 7: 자외선 자극으로부터 피부세포 보호 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 자외선 자극으로부터 피부세포 보호 효과를 살펴보기 위하여, 세포생존률의 변화를 알아보았다.

이를 위하여 HaCaT 세포를 96-well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이후 UVB를 조사하고, 대조군과 시험물질인 조성물을 세포에 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다. 이어 자외선 유도에 의한 피부세포의 손상을 보호하는지 확인하고자 MTT assay를 이용하여 세포 생존율을 측정하였다.

시료	처리 농도(%)	UVB	HaCaT 세포 생존률(%)
대조군	-	-	100.00
대조군	-	+	40.46
실험군	1	+	49.60
	5	+	54.06
	10	+	60.46

그 결과, 본 발명의 조성물을 농도별 처리한 세포에서 대조군(+UVB) 대비 UVB 처리에 의한 세포 사멸이 저해되어 "흰민들레피토플라센타배양추출물"이 자외선으로부터 세포 보호 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 8: 블루라이트 유도로부터 피부세포 보호 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 블루라이트 자극으로부터 피부세포 보호 효과를 살펴보기 위하여, 세포생존률의 변화를 알아보았다.

이를 위하여 HaCaT 세포를 96-well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 대조군과 시험물질인 조성물을 세포에 처리하고, 2시간 후 Topview 5450 VRI SMD LED (ITSWELL, Cat. IWS-L5056-VRI-K3)를 이용하여 블루라이트를 6시간 조사한 후, 24시간 동안 세포를 추가 배양하였다. 이어 블루라이트 유도에 의한 피부세포의 손상을 보호하는지 확인하고자 MTT assay를 이용하여 세포 생존율을 측정하였다.

시료	처리 농도(%)	블루라이트	HaCaT 세포 생존률(%)
대조군	-	-	100.00
대조군	-	+	74.1
실험군	1	+	82.01
	5	+	88.43
	10	+	89.62

그 결과, 본 발명의 조성물을 농도별 처리한 세포에서 대조군(+블루라이트) 대비 블루라이트 처리에 의한 세포 사멸이 저해되어 "흰민들레피토플라센타배양추출물"이 블루라이트로부터 세포 보호 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 9: TERT 발현 증가에 따른 노화 방지 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 노화 방지 효능을 살펴보기 위하여, DNA 가닥 끝의 텔로미어의 길이를 연장하는 효소로 알려진 TERT(Telomerase reverse transcriptase)의 발현양 변화를 알아보았다.

DNA 가닥 끝의 텔로미어의 길이를 연장하는 효소로 알려진 TERT(Telomerase reverse transcriptase)의 발현양 변화를 알아보았다.

HaCaT 세포를 96-well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 대조군과 시험물질인 조성물을 세포에 처리하고, 24시간 동안 추가 배양하였다. TERT의 유전자 수준에서 확인하기 위해 Real-time PCR 법을 수행하였으며, 그 시험 순서는 다음과 같다.

RNA isolation과 cDNA합성을 위해 SuperPrep^TM cell lysis & RT Kit for qPCR (TOYOBO, Cat. SCQ-101)을 사용하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 한 번 세척하고, 50 μL cell lysis mixture 를 넣고 5분간 반응시킨 후, stop solution을 첨가하였다. RT reaction mixture 32 μL에 앞서 추출한 lysate 8 μL를 첨가하고 PCR을 이용하여 37 ℃ 15분, 50 ℃ 5분, 95 ℃ 5분 조건에서 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 비교분석하기 위하여 상기에서 합성한 cDNA를 template로 하고, Thunderbird^TM SYBR qPCR Mix (TOYOBO, Cat. QPS-201)를 이용하여 Real-time PCR 분석을 진행하였다. 실험에 사용한 primer는 Qiagen사의 QuantiTect　primer assays (GAPDH; Cat. QT01192646, TERT; Cat. QT00073409)이며 시료의 TERT mRNA 발현량은 GADPH로 정량하였다. Real-time qPCR 조건은 먼저 95 ℃ 1분 반응 후, 1 사이클 당 94 ℃ 15초, 60 ℃ 30초, 72 ℃ 30초로 하여 총 40 사이클로 진행하였다.

시료	처리 농도(%)	TERT 상대 발현양(Fold)
대조군	-	1
실험군	1	1.38
	5	1.67
	10	1.81

그 결과, 본 발명의 조성물을 농도별 처리한 세포에서 대조군 대비 TERT의 mRNA 발현양이 증가하여 "흰민들레피토플라센타배양추출물"이 노화 방지에 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 10: LEA 발현 증가에 따른 항스트레스 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물의 항스트레스 효과를 살펴보기 위하여, 스트레스에 대한 세포 손상을 보호하는 것으로 알려진 LEA(Late embryogenesis abundant)의 발현 변화를 알아보았다.

이를 위하여 HaCaT 세포 6-well plate에 분주한 후, 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 이 후 대조군과 시험물질인 조성물을 세포에 처리하고, 이후 24시간 동안 세포를 추가 배양하고, LEA 단백질 발현양을 측정하기 위해 In-Cell ELISA Colorimetric Detection kit (Invitrogen 社, Cat No. 62200)를 사용하였다. 배양이 끝난 세포의 배지를 제거하고, 100 μL fixing solution으로 15분간 상온에서 배양하여 세포를 고정시켰다. 이후 PBS로 세척하고, 100 μL의 Permeabilization solution을 넣고 15분간 상온에서 반응시켰다. 이후 PBS로 세척하고, 100 μL Quenching solution을 넣고 20분간 상온에서 반응시켰다. 이후 PBS로 세척하고, 100 μL Blocking solution을 넣고 30분간 상온에서 반응시켰다. 용액을 제거하고 LEA 1차 항체 50 μL를 첨가하여 4 ℃에서 24시간 반응시켰다. 항체 제거 후 PBS로 세척하고, HRP conjugated 2차 항체 50 μL를 첨가하여 1시간 동안 반응시켰다. 이후 항체 제거하여 PBS로 세척을 한 뒤, 100 μL의 TMB substrate solution을 첨가하고 차광한 상태에서 15분간 실온에서 반응시켰다. 이후 100 μL stop solution (1 N H2SO4)을 첨가하고, 450 nm에서의 흡광도를 측정하였다.

시료	처리 농도(%)	UVB	LEA 단백질 합성능(%)
대조군	-	-	68.57
대조군	-	+	100.00
실험군	1	+	103.21
	5	+	108.85
	10	+	111.95

그 결과, 본 발명의 조성물을 농도별 처리한 세포에서 대조군(+UVB) 대비 UVB 처리에 의해 LEA 발현양이 증가하여 "흰민들레피토플라센타배양추출물"이 세포 손상을 보호함으로써 스트레스 완화 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 11: (in vivo) 미세먼지 차단 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물을 1 % 적용한 에센스 제형의 미세먼지 차단 효과를 알아보았다.

먼저, 에센스 제형은 실험군의 경우, 흰민들레피토플라센타배양추출물 1 중량부, 베타인 1 중량부, 디팔미토일하이드록시프롤린 0.5 중량부, 1,2 헥산디올 0.3 중량부, 카보머 0.2 중량부, 프로필렌글라이콜 0.1 중량부, 소르비톨 0.05 중량부, 소듐하이드록사이드 0.02 중량부, 나머지 정제수 100중량부로 제조되었으며, 대조군 에센스 제형은 실험군 에센스 제형에 본 발명의 조성인 흰민들레피토플라센타배양추출물 1중량부가 제외되었다.

테스트를 위하여 피험자 20명의 전완부에 정사각형(2 ㎝ X 2 ㎝)을 구획하고 제품을 각각 50 μL 양으로 도포한 뒤, 프로펠러가 장착된 미세먼지 부유 챔버에 시험 부위를 1분간 노출시켰다. 대체 미세먼지는 카본블랙(Korea Carbon Black Co.,Ltd., Corax N220, 입자크기: 20~25 ㎚)으로, 1 g을 챔버 내에 부유시켰다. 측정은 대체 미세먼지 흡착 전, 대체 미세먼지 흡착 후에 진행하였다. 사진 촬영은 Digital Camera(Canon, EOS70D)를 이용하여 전완부 사진 촬영을 하였다. 촬영된 이미지는 이미지분석 프로그램(Image-pro® plus)을 이용하여 시험 부위의 AOI(Area of Interest)를 지정한 후, 미세먼지 흡착 전과 후의 픽셀 값 차이로 분석하였다. 단위는 무차원 단위(Arbitrary Unit: A.U.)이다.

시료	처리 농도(%)	미세먼지	픽셀 변화량
대조군1	-	-	0.00
대조군2	-	+	20.01
실험군	1	+	14.65

대조군 대비 실험군의 대체 미세먼지 흡착방지 효과에 대한 개선율(%) = [1-(실험군의 대체 미세먼지 픽셀 변화량)/(대조군2의 대체 미세먼지 픽셀 변화량)]*100

그 결과, 본 발명의 조성물을 적용한 실험군에서 대조군2 대비 26.79 %의 미세먼지 흡착방지 개선율을 나타냈다. 따라서 "흰민들레피토플라센타배양추출물"은 대체 미세먼지 흡착방지 효과에 도움을 주는 제품으로 판단된다.

실 험예 12: (in vivo) 피부 진정 효과 확인 시험

본 발명에 따른 조성물을 1 % 적용한 에센스 제형의 피부 온도 감소율에 따른 피부 진정 효과를 알아보았다.

이를 위하여 피험자 25명의 전완부에 정사각형(2 ㎝ X 2 ㎝)을 구획하고 제품을 각각 50 μL 양으로 도포한 뒤, 시험 전 20분간 직사광선에 노출시켰다. 측정은 컴퓨터 적외선체열감지기(Digital Infrared Thermographic Imaging; DITI)를 이용하여 0분(시료 도포 전), 5분(시료 도포 후), 10분(시료 도포 후) 간격으로 체열을 측정하고, 온도 감소율을 계산하였다.

시료	처리 농도(%)	열 감소율(%)
시료	처리 농도(%)	0분 후	5분 후	20분 후
대조군	-	7.1	3.1	0.9
실험군	1	7.3	5.5	3.8

그 결과, 본 발명의 조성물을 적용한 실험군에서 대조군 대비 20분 후에도 지속적인 열 감소율이 유지됨을 확인하였다. 따라서 "흰민들레피토플라센타배양추출물" 은 피부 진정 효과가 있음을 확인하였다.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

(a) 흰민들레 식물의 씨방내의 태좌 조직으로부터 태좌 세포를 분리하여 배양하는 단계; 및
(b) 상기 (a)단계에서 얻어진 배양물 또는 상기 태좌 세포 배양물의 추출물을 함유하는 조성물을 제조하는 단계;
를 포함하는 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 태좌 세포 배양물의 추출물을 함유한 화장료 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서, 상기 (b)단계는, (a)단계에서 얻어진 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물을 건조하고, 분말화하여 정제수에 혼합시켜 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 (b)단계는, (a)단계에서 얻어진 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물을 건조하고, 분말화하여 정제수에 혼합시킨 다음, 초음파 추출 또는 열수 추출하여 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 피부 장벽 개선용 화장료 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 자외선으로부터의 피부 보호를 위한 화장료 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 블루라이트로부터의 피부 보호를 위한 화장료 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 피부 스트레스 예방 또는 완화를 위한 화장료 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 미세먼지에 대한 피부 보호용 화장료 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 피부 진정을 위한 화장료 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 흰민들레 식물의 태좌 세포 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 함유하는 피부 주름 개선 또는 예방을 위한 화장료 조성물.