KR101587447B1 - 초임계추출조건으로 추출한 추출물, bl-s를 포함하는 피부유분조절, 피부장벽강화, 피부수분조절, 피부보호효과를 지닌 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무로 조성된 혼합물을 초임계 추출하여 수득한 혼합추출물인 BL-S를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 'BL-S'를 함유하는 화장료 조성물은 우수한 피부유분 조절효과, 피부장벽기능 개선효과, 피부수분 조절효과 및 피부보호 효과를 발휘한다.

Description

초임계추출조건으로 추출한 추출물, BL-S를 포함하는 피부유분조절, 피부장벽강화, 피부수분조절, 피부보호효과를 지닌 화장료 조성물 {Cosmetic composition with BL-S extract by the supercritical extraction with the effect of skin sebum control, skin barrier intention, skin moisture control and skin protection}

본 발명은 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무로 조성된 혼합물을 초임계 추출하여 수득한 혼합추출물 (BL-S)을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무로 조성된 혼합물을 초임계 이산화탄소로 추출하여 수득한 혼합추출물 (BL-S)을 함유하여 피부유분 조절효과, 피부장벽기능 개선효과, 피부수분 조절효과 및 피부보호 효과를 발휘하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부의 각질층(Stratum Corneum, SC)은 피부 최외각층에 존재하면서 외부의 유해미생물, 자외선, 오염물질, 열 등으로부터 우리 몸을 보호하고, 피부 수분 증발 및 피부 수분 보유량 등을 조절하는 역할을 수행하며, 흔히들 피부장벽기능이라고 알려져 있고, 우리 몸에서 가장 표면적이 큰 것으로 알려져 있다. 피부는 표피, 진피, 피하지방 층으로 구성되며, 외부 유해물질의 침입을 방어하는 1차 방어벽인 각질층은 각질세포가 층층이 쌓여서 구성되고, 트리글리세라이드(triglyceride) 43%, 지방산(free fatty acid) 15%, 왁스(wax) 23%, 스쿠알렌(squalene) 15%, 콜레스테롤(cholesterol) 4%, 콜레스테롤 에스테르(cholsterol ester) 및 아주 미미한 양의 인지질과 당지질을 함유하여 건강한 피부상태를 유지한다. 건강한 피부는 피부의 각질화, 각질의 탈락, 수분의 상질, 피지와 땀의 분비 등 피부의 여러 생물학적 과정들이 서로 균형을 이루고 있는 상태라고 할 수 있으며, 연령, 성별, 건강상태, 스트레스, 식습관, 자외선 등의 영향으로 다양한 변화를 나타낸다. 표피에서는 연령, 성별, 구체적 부위, 지속적인 환경자극, 스트레스의 증가 등의 외부자극의 누적으로 인해서 그 기능이나 구조에 변화가 일어날 수 있다. 이러한 변화를 통해서 피부 염증, 노화 등의 반응이 진행되고 피부 보호막으로서의 기능이 저하될 수 있다.

이러한 세포간지질 성분은 외부 물질의 피부침투를 방지하고, 피부의 표면에서 증발되는 수분의 양, 즉 경피수분손실량(Transepideramal Water Loss; TEWL)을 막아주는 기능을 가지고 있다. 또한 건강한 사람의 각질세포에는 천연보습인자(Natural Moisture Factor, NMF)가 고농도로 존재하기 때문에 피부 표면의 장력을 낮추고 케라틴으로부터 수분의 반발력을 받아 보습에 직접적인 영향을 주어 피부가 건조되는 것을 억제한다.

한편, 표피에는 수분 항상성(Water homeostasis)과 연관이 있는 두 종류의 포어(pores)가 존재하는데, 바로 아쿠아포린(Aquaporins)과 타이트 정션(Tight Junction)이다. 물과 용매의 수송은 아쿠아포린을 통해 세포를 통과하는 트랜스셀룰러(transcellular)와 타이트 정션(tight junctions)을 통한 세포간 공간(extracellular space)을 통과하는 파라셀룰러(paracellular)로 수행된다.

타이트 정션(Tight Junction) 및 타이트 정션 단백질(Tight Junction-proteins)은 건강한 피부에선 경피수분손실을 막기 위해 피부장벽 역할을 하고, 표피가 손실되거나 상처를 입었을 땐 상향 조절되어 구조 시스템으로서 역할을 하고 있다.

아쿠아포린(Aquaporins)은 피부 장벽기능을 강화하고 손상된 장벽을 회복하기 위한 피부 인자이며, 워터 트랜스포터((water transporter)로 작용하는 인터그랄 브레인 프로테인(integral membrane protein)이다. 포유류에는 13종류(0~12)가 있으며, 물(water) 이외에도 글리세롤(glycerol) 등을 운송(transport)할 수 있다. 아쿠아포린 중 피부에서는 아쿠아포린-1(aquaporin-1, AQP1), 아쿠아포린-3(aquaporin-3, AQP3), 아쿠아포린-5(aquaporin-5, AQP5)가 발현된다. 그 중 아쿠아포린-3(aquaporin-3, AQP3)은 주로 표피의 기저층에서 발현되며, 아토피 피부염 및 건선 피부에서는 AQP3 발현이 기저층에서부터 유극층까지 정상 조직보다 더 강하게 발현된다. AQP3가 아토피 피부염과 건선에서 발현이 증가 되는 것으로 보아 이는 수분 이동과 보습에 중요한 역할을 할 것이라고 알려져 있다.

한편, 일반적으로 정상적인 피부 각질층은 약 10~30%의 수분함량을 지니며, 이로 인해 피부 표면이 매끄럽고 부드러울 뿐만 아니라 정상적인 신체 보호기능을 유지하게 된다. 그러나 건강한 피부라 할지라도 가변적인 외부 환경의 영향으로 피부 상태가 열악해지거나 수분 부족 현상이 일어나기 쉽다. 그렇게 되면 피부 각질층의 수분함량이 10% 이하로 되면서 피부는 거칠어지고 신체의 보호기능을 잃게 되어 노화현상이 일어나게 된다.

건성 피부는 정상 피부에 비해서 수분함량이 적다고 알려져 있으며, 건성 피부는 각질세포의 결집력이 악화되어 피부표면으로부터 비늘조각이 허옇게 벗겨져 떨어져 나오는 스케일링(Scaling) 현상이 나타난다. 이와 같이 피부가 건성화되는 것은 피부 각질층의 수분함량이 감소하고 장벽 기능이 제대로 발휘되지 않기 때문이다.

한편, 피지는 피부 표면 근처에 위치하는 피지선(sebaceous gland)에서 분비되는 유용성 물질이다. 피지 분비는 나이, 호르몬, 질병, 기후나 계절, 정신적 인자에 영향을 받으며, 이러한 피지의 분비량에 따라 건성, 지성, 중성 피부 및 얼굴의 유수분 양이 부위별로 상대적 차이가 나는 복합성 피부와 외부 물질에 대한 피부 방어기능(barrier fuction)이 떨어져 피부 트러블이 잦은 민감성 피부로 나누어 진다. 피지는 피부 표면에서 얇은 피지막을 형성하여 피부 외부로부터의 이물질 진입과 각질층을 통한 피부 내부의 수분 손실을 막아주며 피부를 보호하지만, 피지가 과다하게 분비되면 피부 표면에 피지 축적이 일어나 피부가 번들거리게 되고, 모공을 넓어지게 하며, 피부 트러블을 일으키는 원인이 될 수 있다.

한편, 초임계 유체는 임계점 이상의 온도 및 압력을 가지는 물질의 상태를 기체 또는 액체와 구분하기 위하여 설정된 용어이다. 초임계 유체는 임계점 부근에서 각종 물성이 큰 폭으로 변화하는데 특히 밀도의 변화가 각종 물질을 용해하는 능력과 깊은 관계가 있다. 초임계 유체의 밀도는 액체의 밀도와 비슷하지만 점도는 기체처럼 낮으며, 확산 계수는 액체의 값보다 수백 또는 수천 배 정도 크다. 즉, 초임계 유체는 액체와 기체의 장점을 모두 가지고 있다. 초임계 유체가 용매로 쓰이면 일반 액체 용매와 마찬가지로 액체나 고체를 용해하는 능력을 가지며, 압력과 온도를 변화시킴으로서 용해력을 조절할 수 있고, 추출 후에 추출 용매와 용질을 쉽게 분리할 수 있다. 또한, 초임계 유체는 점도가 기체처럼 작으므로 시료 침투력이 좋아 추출 효율이 향상되고, 확산계수가 크므로 평형에 빨리 접근할 수 있다. 또한, 비교적 저온에서 추출함으로써 열에 의한 손상을 피할 수 있고, 환경을 오염시키지 않는 무공해 공정이 가능하며, 무해 무취이고, 인화성이 없는 초임계 이산화탄소는 의약품이나 식품 향신료의 추출 처리에 적합하다. 또한, 엔트레이너(Entrainer)를 첨가하여 목적 물질의 용해도를 증대시켜 추출 효율을 높일 수 있다. 또한, 초임계 유체의 용해력을 조절하여 추출물을 분류정제(fractionation)할 수 있어, 화학적 성질과 휘발도(volatility)가 유사한 성분도 동이하게 분리할 수 있다.

한편, 대나무는 외떡잎 식물 벼목 화본과(벼과, Poaceae) 대나무아과(Bambisoideae)에 속하는 상록성 여러해살이 식물의 총칭을 의미하며, 선조부터 식품을 오래가게 하는 순 천연의 보존제로서 이용하였다. 또한 성질이 차갑고 약간의 단맛이 있어 한방에서는 열내림, 소갈, 소담, 억균 작용 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

담쟁이덩굴(Parthenocissus tricuspidata (sieb.et Zucc.) Planch.)은 포도과(Vitacess)에 속하는 낙엽활엽의 만목으로서 한국, 중국, 일본, 대만, 만주 및 유럽에 분포하며 외국에서는 담쟁이덩굴을 보스톤 아이비(Boston Ivy) 또는 재패니즈 아이비(Japanese Ivy)라고 부른다. 이들의 덩굴손은 잎과 대로 성장하며 끝에 흡착근이 존재하여 바위나, 오래된 건물 또는 소나무의 높은 곳까지 오를 수 있으며, 보통 길이가 10 m 이상 자라는 식물이다. 민간 의약에서는 뿌리와 잎을 약용해왔다.

당아욱(Malva sylvestris var. mauritiana)은 쌍떡잎식물 아욱목 아욱과의 두해살이풀로 바닷가에서 주로 자라는 식물이다. 꽃, 잎, 뿌리 부분이 이용될 수 있으며, 주요 성분으로는 안토시아닌, 플라보노이드, 탄닌, 비타민 A, B₁, C, E 등이 알려져 있다.

라놀린은 면양의 털에서 추출한 기름으로 양털 세척 시 폐액에서 원심분리하거나 용제 추출하여 얻는 양모지가 탈수라놀린이며 이것을 정제한 것이 정제라놀린이다. 피부에 대한 밀착력이 좋아 화장품 및 의약품에 주로 사용된다.

백합(Lilium Tigrinum)은 백합과의 여러해살이풀로서 땅 속에서는 여러 개의 비늘잎을 가진 둥근 비늘 줄기가 있고, 줄기는 곧 추선이다. 백합은 거담과 진해, 건위, 강장 등에 효능이 있으며 부스럼, 부종 및 타박상 등 피부 질환 및 손상에도 효능이 있다.

소나무는 상록성 침엽교목으로 우리나라를 비롯하여 만주, 일본 등지에 널리 분포하고 있어 예로부터 솔잎, 송진, 꽃가루, 솔방울, 껍질 등을 구황식품으로 널리 식용되어 왔다. 현재도 한방과 식품 분야에서 여러 가지 형태로 이용되고 있는데, 특히 솔잎은 생체조직의 산화 환원 촉진작용 및 지혈작용 등을 한다고 하여 민간약으로 많이 사용되어졌다. 솔잎에는 엽록소, 비타민 A, K가 함유되어 있고 그 외에도 단백질, 지방, 인, 철, 효소, 미네랄 등이 함유되어 있으며 체내의 노폐물을 배출시키고 신진대사를 활발하게 하는 것으로 알려져 있다.

월귤나무(Vaccinium vitis-idaea var. minus LODD)는 쌍떡잎식물 진달래목 진달래과의 송록 소관목으로 고산지대에 주로 자생하며 우리나라의 북부 산간지역과 일본이나 중국에서 서식한다고 한다. 잎은 수렴, 이뇨, 방부 등의 효능이 있어 요도염과 임질 등의 치료약으로 쓰이고, 열매는 감기, 편도선염, 구강 통증 등에 효과가 있다. 또한 피부의 미백 효과가 있어 화장품 원료로 사용하기도 한다.

한편, 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무로 조성된 혼합물을 초임계 추출하여 수득한 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부유분 조절용, 피부장벽 강화용, 피부수분 조절용 및 피부보호용 화장료 조성물에 대한 기술은 개시된 바 없다.

대한민국 등록특허 제10-1400264호 (등록일자: 2014.05.21)에는, 진피 및 우슬의 혼합 추출물을 함유하는 피부장벽 강화용 조성물에 대한 기술이 기재되어 있다. 대한민국 공개특허 제10-2013-0042918호 (공개일자: 2013.04.29)에는, 옥테닐 숙시네이트 무수물-개질 변성 전분, 다공성 분체, 콜레스테롤 또는 그 유도체 및 실리콘 오일을 함유하는 피부 유수분 밸런스 유지용 조성물에 대한 기술이 기재되어 있다.

본 발명은 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무로 조성된 혼합물을 초임계 추출하여 수득한 혼합추출물 (BL-S)을 함유하여 피부유분 조절, 피부장벽기능 개선, 피부수분 조절 및 피부보호 효과를 발휘하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무로 조성된 혼합물을 초임계 추출하여 수득한 혼합추출물인 BL-S를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 초임계 이산화탄소로 추출하여 수득한 혼합추출물인 BL-S는 항산화 효과가 우수하고, 아쿠아포린-3의 발현을 촉진하여 우수한 피부수분 조절 및 피부장벽기능 강화, 피부유분 조절 및 피부보호 효과를 발휘한다.

본 발명에서는 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무로 조성된 혼합물을 초임계 추출하여 수득한 혼합추출물을 'BL-S'라고 지칭하기로 한다.

상기 혼합추출물 (BL-S)은 초임계 이산화탄소를 이용하여 효과적으로 지용성 성분을 추출할 수 있다. 이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체의 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되며, 이는 지용성 용질에 대한 용해도를 증가시킨다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 초임계 추출은, 바람직하게 35~100℃의 온도, 100~500 기압의 초임계 이산화탄소를 용매로 사용하여 추출하는 것이 좋다. 더욱 바람직하게는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 공용매가 초임계 이산화탄소에 추가된 것을 용매로 사용하여 추출하는 것이다. 또한, 상기 공용매는 용매 총 부피를 기준으로 5~40부피% 만큼 함유되는 것이 좋다. 초임계 추출 후, 추출 용기에 남아있는 시료에 소량의 공용매가 추가된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면, 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나올 수 있다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 혼합물은, 바람직하게 대나무 0.00001~30.0중량%, 담쟁이덩굴 0.00001~30.0중량%, 당아욱 0.00001~30.0중량%, 라놀린 0.00001~30.0중량%, 백합 0.00001~30.0중량%, 솔잎 0.00001~30.0중량% 및 월귤나무 0.00001~30.0중량%로 조성된 것이 좋다. 혼합추출물이 단일 추출물보다 우수한 항산화효과, 아쿠아포린-3 합성 촉진 효과를 발휘하며, 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물이 그렇지 않은 화장료 조성물보다 우수한 피부유분 조절효과, 피부장벽기능 강화효과, 피부수분 조절효과, 피부보호 효과를 발휘한다.

상기 대나무 및 월귤나무는 잎, 줄기 및 목부 중 1종 이상을 의미한다. 상기 담쟁이덩굴은 잎, 줄기 및 뿌리 중 1종 이상을 의미한다. 상기 당아욱은 꽃, 잎 및 뿌리 중 1종 이상을 의미한다. 상기 백합은 줄기 및 잎 중 1종 이상을 의미한다.

또한, 상기 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무는 건조되기 전의 것을 사용할 수 있으나, 바람직하게는 건조하여 추출하는 것이다.

또한, 본 발명의 혼합추출물 (BL-S)은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수도 있다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 혼합추출물은, 바람직하게 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.00001~30.0중량%가 함유되는 것이 좋다. 0.00001중량% 미만으로 함유하면 피부 개선 효과가 미미하며, 30중량%를 초과하여 함유하면 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효능이 증가하지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 피부유분조절 개선용, 피부장벽기능 강화용, 피부수분 조절용, 피부보호용일 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무로 조성된 혼합물을 초임계 추출하여 수득한 혼합추출물 (BL-S)을 함유하는 화장료 조성물은 우수한 피부유분 조절효과, 피부장벽기능 개선효과, 피부수분 조절효과 및 피부보호 효과를 발휘한다.

이하, 본 발명의 구성을 하기 실시예를 통해 구체적으로 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

[ 제조예 1: 초임계 추출을 이용한 혼합추출물 ( BL -S) 제조]

대나무 5 g, 담쟁이덩굴 5 g, 당아욱 5 g, 백합 5 g, 솔잎 5 g, 월귤나무 5 g을 정제수로 세척하고 건조한 다음 모두 분쇄한 후 10 메시의 체를 이용하여 크기를 일정하게 만들었다. 그 후, 라놀린 5g과 혼합한 혼합물을 초임계 추출용기(Supercritical fluid extractor)에 넣었다. 그 후, 액체 크로마토그래피 펌프(Supercritical fluid chromatograph)를 이용하여 순수한 이산화탄소를 온도 70 ℃ 및 압력 300기압 조건에서 초임계 상태로 만들고, 공용매로 부틸아세테이트를 흘려보내면서 매 4분씩 40분까지 추출물을 10 ㎖ 용량의 유리 시험관에 받았다. 본 발명에서는 상기에서 수득된 혼합추출물을 'BL-S'라고 지칭하였다. BL-S를 회전감압증발기로 건조하여 건조중량 25.7 mg/g을 얻었으며, 하기 실험예에서는 건조된 BL-S 파우더를 50% 부틸렌 글리콜(Butylene Glycol)에 용해하여 사용하였다.

[ 비교제조예 1 내지 7: 초임계 추출을 이용한 단일 추출물 제조]

하기 표 1과 같이 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무 각각의 단일 초임계 추출물을 제조하였다. 추출방법은 상기 제조예 1과 동일하였다.

	추출물
비교제조예 1	대나무 추출물
비교제조예 2	담쟁이덩굴 추출물
비교제조예 3	당아욱 추출물
비교제조예 4	라놀린 추출물
비교제조예 5	백합 추출물
비교제조예 6	솔잎 추출물
비교제조예 7	월귤나무 추출물

[ 비교제조예 8: 냉침법을 이용한 혼합추출물 ( BL -S(E)) 제조]

대나무 5 g, 담쟁이덩굴 5 g, 당아욱 5 g, 백합 5 g, 솔잎 5 g, 월귤나무 5 g를 정제수로 세척하고 건조한 다음 모두 분쇄한 후 100메시의 체를 이용하여 미세하게 만들었다. 그 후, 라놀린 5 g을 혼합한 혼합물에 상기의 원물의 100 g/L가 되도록 70% 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #3 여과지로 여과 후, 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하여 냉침법을 이용한 혼합추출물을 제조하였다. 상기와 같이 수득된 혼합추출물을 'BL-S(E)'라고 지칭하였다.

[실험예 1: DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정]

본 실험예에서는 상기 제조예 1 및 비교제조예 1 내지 8에서 수득한 BL-S, 단일 추출물 및 BL-S(E)의 농도별 자유라디칼 소거 활성(free radical scavenging acticity)을 비교하고자 하였다.

DPPH 측정법은 억제제(inhibitor)가 안정한 라디칼 DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl radical)를 소거하여 탈색되는 정도를 측정하는 방법이다. 사용한 시료의 농도는 하기 표 2와 같았으며, 하기 수학식 1을 이용하여 자유라디칼 소거활성을 측정하였다. 대조군은 비타민C로 하였다.

<측정방법>

① 96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.15 ㎖와 시료 용액 0.15 ㎖를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간 배양을 개시한다.

② 그 후 560 nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

③ 시료 용액의 블랭크 (Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 So를 측정한다.

④ 공시험은 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bt를 측정한다.

⑤ 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하고 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

자유라디칼 소거율(%)의 결과는 하기 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 그 결과는 하기의 표 2에 나타내었다.

[수학식 1]

St : 시료의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

처리 농도 (ppm)	activity (%)
	제조예 1	비교제조예 1	비교제조예 2	비교제조예 3	비교제조예 4	비교제조예 5	비교제조예 6	비교제조예 7	비교제조예 8	비타민 C (300ppm)
300	93.21	64.30	52.21	55.16	68.24	56.63	56.21	68.97	66.34	91.94
150	95.25	69.87	56.63	55.97	69.02	59.32	58.66	69.25	71.29	85.33
75	92.30	66.25	48.24	53.24	64.37	62.76	43.88	64.37	68.21	64.23
37.5	79.65	60.11	33.76	43.32	56.71	57.43	36.37	57.15	60.62	39.45
18.75	64.39	42.64	15.61	35.19	40.30	36.15	18.86	30.21	40.21	35.23

실험결과, BL-S (제조예 1)는 농도 의존적으로 항산화 효과가 증가하는 것을 확인할 수 있었으며, 300 ppm 농도에서는 양성 대조군인 비타민 C보다 우수한 항산화 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

또한, 각 단일 추출물 (비교제조예 1 내지 7)과 BL-S(E) (비교제조예 8, 냉침법으로 추출된 혼합추출물)는 항산화 효과가 있지만, BL-S에 비해서 낮은 항산화효과를 발휘함을 확인할 수 있었다. 상기와 같은 결과로부터, 본 발명의 초임계추출로 추출된 혼합추출물인 'BL-S'는 우수한 항산화 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

[실험예 2: 아쿠아포린-3(aquaporins-3) 합성 촉진]

본 실험예에서는 상기 제조예 1 및 비교제조예 1 내지 8에서 제조된 추출물의 아쿠아포린-3(aquaporins-3) 합성 촉진 효과를 확인하고자 세포에 각 추출물 처리 후 웨스턴 블랏팅(Western blotting)을 실시하였다.

각질형성세포를 접종하여 24시간 후 제조예 1 및 비교제조예 1 내지 8의 추출물을 각각 300 ppm, 150 ppm과 30 mg/㎖의 EGF(epidermal growth factor)를 각 첨가하여 KSFM 배지, 37℃, 5% CO₂ 에서 배양하였다. 24시간 배양 후 세포를 회수한 다음 파쇄하여 단백질만을 추출하여 -50℃에 보관하였다. 추출된 단백질은 BCA assay를 통해 단백질을 정량하였다. 각각의 시료의 단백질량을 30 ㎍으로 희석한 후, 12% SDS-gel에서 전기영동하여 P 멤브레인(P membrane)으로 옮겼다. 그 후, 1차 항체(rabbit anti-aquqporins-3 antibody)와 반응시킨 후 남은 항체를 세척하여 제거하고 2차 항체 (rabbit HRP-coupled anti-IgG antibody)와 반응시켰다. 반응 후, 남은 항체를 제거하고 항체와 반응하여 발색 반응을 일으키는 시약인 퍼옥시다제 서브스트레이트 및 크로모젠 솔루션(peroxidase substrate and chromogen solution)을 첨가하였다. 그 후, 발색된 밸브는 이미지 분석을 통해 수치화 하였으며, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.

시료명		Level of aquaporins-3 (%)
대조군		100
EGF (30 mg/㎖)		148*
제조예 1	300 ppm	141
	150 ppm	145*
비교제조예 1	300 ppm	114
	150 ppm	122
비교제조예 2	300 ppm	129
	150 ppm	123
비교제조예 3	300 ppm	120
	150 ppm	112
비교제조예 4	300 ppm	105
	150 ppm	108
비교제조예 5	300 ppm	112
	150 ppm	110
비교제조예 6	300 ppm	106
	150 ppm	106
비교제조예 7	300 ppm	100
	150 ppm	114
비교제조예 8	300 ppm	102
	150 ppm	108

* : Significant results according to student's test(<0.05)

실험결과, BL-S (제조예 1)를 각질형성세포에 처리했을 때, 아쿠아포린-3(aquaporins-3)의 합성이 대조군 대비 38% 증가하였으며, 양성 대조군인 EGF, 단일 추출물 (비교제조예 1 내지 7) 및 BL-S(E) (비교제조예 8, 냉침법으로 추출된 혼합추출물)보다 우수한 아쿠아포린-3 합성 촉진 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다. 상기와 같은 결과로부터, 본 발명의 초임계 추출로 추출된 혼합추출물인 'BL-S'는 물의 이동을 원활하게 하여 진피층으로부터 각질층으로의 수분 공급을 증가시켜주는 것을 확인할 수 있었다.

[실시예 1: BL-S를 함유하는 화장료 조성물의 제조]

본 실시예에서는 하기 표 4와 같이 BL-S 및 각 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제조한 후 (A-B-C의 순서대로 혼합), 각각 제형예 1 및 비교제형예 1 내지 8이라고 지칭하였다.

구분	성분	제형예 1	비교제형예1	비교제형예 2	비교제형예 3	비교제형예 4	비교제형예 5	비교제형예 6	비교제형예 7	비교제형예 8
A	BL-S (제조예 1)	5.0	-	-	-	-	-	-	-	-
	대나무 초임계 추출물 (비교제조예 1)	-	5.0	-	-	-	-	-	-	-
	담쟁이덩굴 초임계 추출물 (비교제조예 2)	-	-	5.0	-	-	-	-	-	-
	당아욱 초임계 추출물 (비교제조예 3)	-	-	-	5.0	-	-	-	-	-
	라놀린 초임계 추출물 (비교제조예 4)	-	-	-	-	5.0	-	-	-	-
	백합 초임계 추출물 (비교제조예 5)	-	-	-	-	-	5.0	-	-	-
	솔잎 초임계 추출물 (비교제조예 6)	-	-	-	-	-	-	5.0	-	-
	월귤나무 초임계 추출물 (비교제조예 7)	-	-	-	-	-	-	-	5.0	-
	BL-S(E) (비교제조예 8)	-	-	-	-	-	-	-	-	5.0
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.03	0.02	0.02	0.02	0.02
	정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
B	세토스테아릴알코올	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
	마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	스쿠알	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	유동파라핀	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	트리옥타노인	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	토코페릴아세테이트	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	사이클로메치콘	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
C	향,방부제	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량

[실험예 3: BL-S를 함유하는 화장료 조성물의 피부 보습 효과 확인]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 제조된 제형예 1 및 비교제형예 1 내지 8의 화장료 조성물의 피부 보습 효과를 확인하고자 하였다.

설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 225명을 무작위로 25 명씩 9개 그룹 (A, B, C, D, E, F, G, H 및 I)으로 나눈 후, A 그룹에는 제형예 1의 화장료 조성물을 B, C, D, E, F, G, H, I 그룹에는 각각 비교제형예 1 내지 8의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 안면에 도포하게 하였다. 보습 효과는 사용전, 사용 2주 후, 사용 4주 후에 수분측정기인 Corneometer CM 820 (Corage +Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였다. 실험 결과는 하기 표 5에 나타내었다.

구분	사용전	사용 2주 후	사용 4주 후
제형예 1	23.5	38.6	45.7
비교제형예 1	20.2	26.1	39.6
비교제형예 2	21.4	30.4	37.3
비교제형예 3	23.4	29.7	35.9
비교제형예 4	22.7	31.5	40.1
비교제형예 5	22.3	33.8	38.6
비교제형예 6	23.6	34.2	32.7
비교제형예 7	22.8	26.5	26.9
비교제형예 8	22.9	32.4	38.3

실험결과, BL-S를 함유하는 화장료 조성물 (제형예 1)이 단일 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (비교제형예 1, 초임계 추출로 추출된 단일 추출물을 함유하는 화장료 조성물) 및 BL-S(E) (비교제형예 8, 냉침법으로 추출된 혼합추출물)보다 우수한 피부 보습 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다. 상기와 같은 결과로부터, 초임계 추출로 추출된 혼합추출물을 함유하면 피부 보습 효과가 우수한 화장료 조성물을 제조할 수 있음을 확인할 수 있었다.

[실험예 4 : BL-S를 함유하는 화장료 조성물의 경피수분손실량 측정 실험]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 제조된 제형예 1 및 비교제형예 1 내지 8의 화장료 조성물의 경피수분손실량(TEWL: Trans-Epidemal Water Loss)을 비교하고자 하였다.

20~40대 여성 45명을 대상으로 오른쪽과 왼쪽 얼굴에 각 시료를 바르고 눈가에서 3 cm 우측으로 1 cm 아래로 떨어진 부위를 바르기 전과 바른 후 1시간, 2시간, 4시간, 6시간의 경피수분손실량을 테와미터(Tewameterr, TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)를 이용하여 3회 측정하였으며, 평균값을 사용하여 경피수분손실량을 평가하였다. 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다.

구분	바르기 전	1시간	2시간	4시간	6시간
제형예 1	47.9	65.0	59.3	50.2	48.7
비교제형예 1	50.4	63.5	60.7	58.4	55.6
비교제형예 2	51.7	64.0	61.2	59.2	57.1
비교제형예 3	49.3	60.6	56.6	55.3	52.8
비교제형예 4	50.4	62.0	60.4	57.5	53.6
비교제형예 5	52.9	64.1	61.6	58.7	54.7
비교제형예 6	51.3	63.8	62.3	59.6	52.4
비교제형예 7	50.8	62.9	60.1	57.5	53.2
비교제형예 8	51.3	61.7	58.6	55.9	55.3

실험결과, BL-S를 함유하는 화장료 조성물 (제형예 1)이 단일 추출물을 함유하는 화장료 조성물 (비교제형예 1, 초임계 추출로 추출된 단일 추출물을 함유하는 화장료 조성물) 및 BL-S(E) (비교제형예 8, 냉침법으로 추출된 혼합추출물)보다 우수한 경피수분손실량 감소효과를 발휘함을 확인할 수 있었다. 상기와 같은 결과로부터, 초임계 추출법으로 추출된 혼합추출물인 'BL-S'를 함유하는 화장료 조성물은 경피수분손실량 감소효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

[실시예 2: BL-S를 함유하는 피부 유수분 밸런스 유지용 화장료 조성물의 제조]

본 실시예에서는 하기 표 7에 기재된 조성에 따라 피부 유수분 밸런스 유지용 화장료 조성물을 제조한 후, 각각 제형예 2 및 비교제형예 9 내지 16이라고 지칭하였다.

성분	제형예 2	비교제형예9	비교제형예10	비교제형예11	비교제형예12	비교제형예13	비교제형예14	비교제형예15	비교제형예16
BL-S (제조예 1)	15.0	-	-	-	-	-	-	-	-
대나무 추출물 (비교제조예 1)	-	15.0	-	-	-	-	-	-	-
담쟁이덩굴 추출물 (비교제조예 2)	-	-	15.0	-	-	-	-	-	-
당아욱 추출물 (비교제조예 3)	-	-	-	15.0	-	-	-	-	-
라놀린 추출물 (비교제조예 4)	-	-	-	-	15.0	-	-	-	-
백합 추출물 (비교제조예 5)	-	-	-	-	-	15.0	-	-	-
솔잎 추출물 (비교제조예 6)	-	-	-	-	-	-	15.0	-	-
월귤나무 추출물 (비교제조예 7)	-	-	-	-	-	-	-	15.0	-
BL-S(E) (비교제조예 8)	-	-	-	-	-	-	-	-	15.0
스쿠알란	50.0	50.0	50.0	50.0	50.0	50.0	50.0	50.0	50.0
실리카	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0
알루미늄스타치옥테닐석시네이트	20.0	20.0	20.0	20.0	20.0	20.0	20.0	20.0	20.0
총합	100.0

[실험예 5 : BL-S를 함유하는 화장료 조성물의 피지 흡유량 측정 실험]

본 실험예에서는 상기 제형예 2 및 비교제형예 9 내지 16에서 제조된 피부 유수분 밸런스 유지용 화장료 조성물의 피지 흡유 효과를 확인하고자 하였다.

건강한 성인 남녀 225명을 무작위로 25 명씩 9개 그룹 (A, B, C, D, E, F, G, H 및 I)으로 나눈 후, A 그룹에는 제형예 2의 화장료 조성물을 B, C, D, E, F, G, H, I 그룹에는 각각 비교제형예 9 내지 16의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 안면에 도포하게 하였다. 그 후, 도포 전, 1시간 후, 6시간 후의 피지량을 Sebumeter MDA 580(Sourge & Khazaka) 기기를 이용하여 측정하였다. 그 결과는 하기 표 8에 나타내었다.

구분	도포 전 피지량 (㎍/m2)	1시간 후 (㎍/m2)	6시간 후 (㎍/m2)
제형예 2	65.0	48.6	53.7
비교제형예 9	67.3	57.5	59.2
비교제형예 10	64.0	58.7	66.3
비교제형예 11	60.6	59.6	64.8
비교제형예 12	62.0	57.5	59.8
비교제형예 13	64.1	58.7	62.6
비교제형예 14	63.8	58.4	60.8
비교제형예 15	62.9	59.2	71.6
비교제형예 16	61.7	59.6	62.0

실험결과, 1시간 후, 전체적으로 피지가 감소하였으나, 제형예 2 (BL-S 함유)의 화장료 조성물이 가장 우수한 피지 흡유 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

또한, 6시간 후, 제형예 2가 가장 우수한 피지 흡유 효과를 발휘하였으며, 비교제형예 10 (담쟁이덩굴 추출물 함유), 11 (당아욱 추출물 함유), 15 (월귤나무 추출물 함유), 16 (BL-S(E) 함유) 화장료의 경우 오히려 피지량이 증가하였음을 확인할 수 있었다. 상기와 같은 결과로부터, 초임계 추출로 추출된 혼합추출물인 'BL-S'를 함유하는 화장료 조성물은 피부 유수분 밸런스를 효과적으로 조절할 수 있음을 확인할 수 있었다.

Claims (8)

1. 대나무, 담쟁이덩굴, 당아욱, 라놀린, 백합, 솔잎 및 월귤나무로 조성된 혼합물을 초임계 추출하여 혼합추출물 BL-S을 제조한 후, 상기 혼합추출물 BL-S를 화장료 조성물에 첨가하는 것을 특징으로 하는 피지유분 조절, 피부장벽기능 강화, 피부수분 조절 및 피부보호용 화장료 조성물의 제조방법.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 초임계 추출은,
   35~100℃의 온도, 100~500 기압의 초임계 이산화탄소를 용매로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 피지유분 조절, 피부장벽기능 강화, 피부수분 조절 및 피부보호용 화장료 조성물의 제조방법.
   
3. 제2항에 있어서,
   상기 용매는,
   클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 공용매가 초임계 이산화탄소에 추가된 것을 특징으로 하는 피지유분 조절, 피부장벽기능 강화, 피부수분 조절 및 피부보호용 화장료 조성물의 제조방법.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 혼합물은,
   대나무 0.00001~30.0중량%, 담쟁이덩굴 0.00001~30.0중량%, 당아욱 0.00001~30.0중량%, 라놀린 0.00001~30.0중량%, 백합 0.00001~30.0중량%, 솔잎 0.00001~30.0중량% 및 월귤나무 0.00001~30.0중량%로 조성된 것을 특징으로 하는 피지유분 조절, 피부장벽기능 강화, 피부수분 조절 및 피부보호용 화장료 조성물의 제조방법.
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 삭제