KR20140109221A - 산쑥 에센셜 오일을 유효성분으로 함유하는 피부 재생용 화장료 및 피부 외용제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 산쑥(Artemisia montana Pampan)으로부터 수증기 증류법을 통해 분리한 에센셜 오일을 함유하는 피부탄력 개선과 재생용 및 상처치유 화장료 조성물 또는 피부 외용제에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 표피 각질형성세포의 증식과 진피 섬유아세포의 이동을 촉진시키며, 각질형성세포의 type IV 콜라겐(collagen) 합성 및 분비를 촉진하는 산쑥 에센셜 오일을 유효성분으로 하는 피부탄력 개선 및 재생, 상처치유용 화장료 조성물 또는 피부 외용제에 관한 것이다.

Description

산쑥 에센셜 오일을 유효성분으로 함유하는 피부 재생용 화장료 및 피부 외용제 조성물{Cosmetic composition for skin cell regeneration and the use there of containing essential oil of Artemisia montana Pampan}

본 발명은 산쑥(Artemisia montana Pampan)으로부터 분리된 유용성분을 포함하는 피부용 의약 또는 화장료 조성물에 대한 것이다.

피부(skin)는 인체의 최외각에 존재하여 외부 환경과 직접적으로 접해 있어, 외부의 손상으로부터 인체를 보호하고, 체내수분과 열의 과도한 증발을 막는 역할을 한다. 또한 피부는 세 개의 층으로 이루어져 있으며, 가장 바깥에서부터 표피(epidermis), 진피(dermis), 피하지방(subcutaneous tissue)으로 구분된다. 표피는 기저층(stratum basale), 유극층(stratum spinosum), 과립층(stratum granulosum), 각질층(stratum corneum)으로 되어 있어 최종적으로 분화된 죽은 세포가 피부 표면에 쌓여 피부장벽의 기능을 수행한다. 표피의 대부분은 각질형성세포로 구성되어 있으며, 이러한 각질형성세포는 기저층으로부터 증식, 이동 및 분화과정을 통해 각질을 형성하여 피부를 보호하고, 다양한 사이토카인을 생산하여 염증반응과 면역반응에 관여하며, 주위 세포의 성장에도 관여하는 역할을 하고 특히, 각질형성세포의 증식은 표피 재생 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

표피와 진피의 경계부에 위치하는 기저막은 표피를 지탱하고, 방어장벽의 역할과 표피와 진피의 상호작용이 잘 이루어지도록 하며, 피부세포의 부착, 증식, 이주 및 분화 등 피부 생리기능에 관여하여 상처치유에 중요한 역할을 한다. 이러한 기저막은 type IV collagen, laminin, proteoglycans, fibronectin, 등으로 구성되어있으며, type IV collagen은 기저막의 주된 구성요소로서 type IV collagen등의 합성과 분비는 기저막 형성에 중요한 요소로 작용함으로써 피부의 재생과 상처 치유를 촉진하는 것으로 알려져 있다.

진피는 유두층과 망상층으로 구성되며, 섬유아세포(fibroblast)가 풍부하고 미세 혈관과 콜라겐, 엘라스틴 등의 교원질 등으로 풍부하게 구성되어 있다. 섬유아세포는 콜라겐합성과 결체조직을 형성하고, 표피와의 상호작용으로 피부의 재생을 촉진시키며, 진피층의 균열된 부위로 이동하여 상처치유에 효과적인 작용을 한다.

인체의 피부는 노화가 진행될수록 각질형성세포나 섬유아세포의 증식이 감소되고, 표피와 진피 경계부가 편평해지면서 경미한 상처에도 피부가 쉽게 벗겨지거나 피부 재생 및 상처치유 능력이 쇠퇴되기 시작한다. 또한, 인체 피부의 상피기저막의 주요 구성요소인 type IV collagen의 합성이 노화가 진행됨에 따라 감소되는 것으로 알려졌으며, 이로 인해, 나이가 들어가면서 피부의 두께와 탄력이 감소되고 주름이 증가하며, 피부재생 및 상처치유의 회복속도가 줄어들게 된다.

이에 따라, 합성물질의 부작용을 경감시키면서 피부노화, 피부 병변으로 인해 생리활성이 감소된 각질형성세포와 섬유아세포의 증식 및 이동을 유도하고 collagen의 합성/분비 효과가 우수한 천연물질의 연구가 활발하게 진행되고 있으며, 이러한 효능을 갖는 천연물질을 통하여 피부재생 및 상처치유의 유도효과 뿐만 아니라 피부노화 예방에도 효과를 나타낼 수 있다.

한편, 쑥은 국화과(Composita) 쑥속(Artemisia)에 속하는 다년생 초본으로 전국의 산야에 널리 자생하고 있으며, 전 세계적으로 약 400여종이 분포하며, 국내에서 약 300여종이 자생하고 있다. 최근에 쑥은 항산화, 항암, 면역증진 등의 연구가 이루어져 있으며, 의약품, 식품 등의 다양한 산업에 응용되고 있다.

산쑥(Artemisia montana Pampan)은 각지의 산지에서 나는 다년초이며, 높이 1.5 ~ 2 m되는 여러해살이풀이다. 잎은 깃겹잎으로 중앙부의 잎은 가턱잎이 없고, 길이 14 ~ 19 cm, 너비 6 ~ 12 cm로 2회 깃 모양으로 갈라져 있다. 또한 갈래는 긴 타원형과 긴 타원상 피침형으로 끝이 뾰족하고, 위로 갈수록 갈래는 없어지고 작아진다. 꽃은 8 ~ 9월에 개화되며, 연한 노란색으로 줄기 끝에 두상화서가 원추화서 모양으로 달려있고 총포에 거미줄 같은 털이 있는 것이 특징이다.

산쑥의 성분으로 전초에 0.03 ~ 0.2%의 정유, 피레트린, 콜린, 아데닌, 이눌린, 카로틴, 등이 포함되어 있으며, 산쑥은 민간에서 잎 달임약을 피멎이약, 독풀이약, 열내림약으로 임신중독, 신경쇠약, 뇌염, 페결핵 등에 사용된다. 특히 성숙한 전초를 태워 뜸쑥용으로 사용되고 있다. 산쑥의 추출물은 항산화 효과가 뛰어난 것으로 보고된바 있으나, 산쑥 에센셜 오일과 관련된 연구는 행해진바 없다.

따라서, 산쑥 추출물 뿐만 아니라, 에센셜 오일을 활용한 피부 생리활성, 피부재생 및 상처치유 연구를 통해 인체에 부작용이 거의 없고, 우수한 효능을 갖는 화장료 조성물 및 피부 외용제의 개발의 필요성이 요구되고 있다.

본 발명자들은 피부탄력 개선과 재생용 화장료 및 피부 외용제 조성물을 개발하기 위해 연구하던 중, 산쑥 에센셜 오일이 피부의 각질형성세포의 증식 및 이동을 유도하며, 각질형성세포의 type IV collagen 합성/분비를 촉진하는 뛰어난 효과가 있음을 확인하였으며, 이러한 효과로 인해 산쑥 에센셜 오일의 피부탄력 개선과 재생 및 상처치유를 가능하게 할 것으로 나타낸다. 반면, 산쑥 에센셜 오일은 진피 섬유아세포의 증식 및 collagen 합성을 유도하지 않으며, 각질형성세포 특이적 반응을 나타낸다.

이에 따라, 본 발명은 섬유아세포의 과도한 증식에 의해 생성될 수 있는 비대흉터와 켈로이드 형성의 부작용을 유발하지 않으면서, 피부재생과 상처치유 효과가 우수한 조성물을 제공하는 것이 목적이다.

또한, 본 발명은 상기한 효과를 나타내는 산쑥 에센셜 오일을 활용하여 피부탄력 개선 및 재생과 상처 치유 기능을 갖으며, 피부 생리활성이 우수한 화장료 또는 의약 조성물을 제공하는 것이 목적이다.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 산쑥(Artemisia montana Pampan)의 에센셜 오일(essential oil) 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물이다.

여기서, 상기 에센셜 오일 성분은 산쑥 추출물의 지용성 성분인 것이 바람직하다.

그리고, 상기 산쑥 추출물은 산쑥 증류액인 것이 가능하다.

또한, 상기 지용성 성분은 상기 증류액으로부터 수용액 성분이 제거된 것일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 피부 재생용 조성물은, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 더 포함하고, 상기 에센셜 오일 성분은 0.0001~1.0 ㎍/ml 범위 내로 포함되는 것이 바람직하다.

또한, 상기 에센셜 오일 성분은 0.1~1.0 ㎍/ml 범위 내로 포함되는 것이 더욱 바람직하다.

또한, 상기 에센셜 오일 성분은 피부 각질형성세포와 섬유아세포 중 하나 이상의 증식이나 또는 이동을 유도하는 것이 가능하다.

이와 함께, 본 발명은 산쑥(Artemisia montana Pampan)의 에센셜 오일(essential oil) 성분을 포함하고, 피부 각질형성세포와 섬유아세포 중 하나 이상의 증식이나 또는 이동을 유도하는 상처치유용 피부 외용제 조성물일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 에센셜 오일 성분 또는 조성물은 피부 각질형성세포의 type IV 콜라겐(collagen) 합성 및 분비를 촉진하는 것도 가능하다.

한편, 본 발명의 다른 실시형태는, 산쑥(Artemisia montana Pampan)을 수증기 증류법(steam distillation)으로 증류하여 증류액을 얻고, 상기 얻은 증류액으로부터 에센셜 오일 성분을 분리하는 산쑥 증류액의 추출방법인 것도 가능하다.

또한, 본 발명은 상기 추출방법으로 얻은 에센셜 오일 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물일 수도 있다.

또한, 본 발명은 상기 추출방법으로 얻은 에센셜 오일 성분을 포함하는 화장료 조성물인 것도 가능하다.

기타 실시예들의 구체적인 사항들은 상세한 설명 및 도면들에 포함되어 있다.

본 발명에 따른 산쑥 에센셜 오일을 함유하는 피부탄력 개선과 재생 및 상처치유용 조성물은 인체의 피부세포에 독성을 나타내지 않으면서, 피부 각질형성세포의 증식 및 이동을 유도하는 효과를 나타내며, 각질형성세포의 type IV collagen 합성/분비를 촉진하는 효과를 가진다. 그러나, 진피 섬유아세포의 증식 및 type I collagen의 합성을 유도하지 않는다.

이에 따라, 본 발명은 섬유아세포의 과도한 증식에 의해 생성될 수 있는 비대흉터와 켈로이드 형성 등과 같은 부작용을 유발하지 않으면서, 피부탄력 개선 및 재생과 상처 치유를 가능하게 하는 화장료 및 의약 조성물로서 제공할 수 있다.

도 1 은 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일의 추출 분리 및 정제 과정을 나타낸 도식도이다.
도 2 는 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일의 성분분석을 나타낸 표이다.
도 3 은 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일이 피부 각질형성세포의 독성에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4 는 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일이 피부 진피형성 섬유아세포의 독성에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 5 은 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일이 피부 각질형성세포의 증식에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 6 는 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일이 피부 진피형성 섬유아세포의 증식에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 7 는 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일이 피부 각질형성세포의 이동에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 8 은 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일이 피부 진피형성 섬유아세포의 이동에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 9 는 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일이 세포내 신호전달과정에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 10 은 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일이 각질형성세포의 type IV collagen 합성/분비에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 11 은 본 발명의 일 실시예에 따라 산쑥 에센셜 오일이 각질형성세포의 type I collagen 합성/분비에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시 예를 가질 수 있는 바, 특정 실시 예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에서 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.

본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.

제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어서는 안 된다. 상기 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다.

본 발명은 산쑥(Artemisia montana Pampan)의 에센셜 오일(essential oil) 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물이다. 또한, 본 발명은 피부 탄력개선용 조성물이거나 피부의 상처 치유 기능을 가지는 의약 또는 화장품 조성물일 수 있다.

상기 에센셜 오일 성분은 산쑥으로부터 얻을 수 있고, 산쑥의 추출물에서 얻은 것이 바람직하며, 산쑥의 증류 추출물로부터 얻은 것이 더욱 바람직하다. 더욱 구체적으로, 상기 에센셜 오일 성분은 산쑥을 증류하여 얻은 것으로, 예들 들어 산쑥을 수증기 증류법을 이용하여 추출한 에센셜 오일일 수 있고, 산쑥 증류액에서 수용액 성분이 제거된 것이 가능하다.

본 발명자들은 피부 세포에서 표피를 구성하는 각질형성세포와 진피를 구성하는 섬유아세포의 증식 및 이동을 조절하고 피부 생리활성이 뛰어난 물질을 개발하기 위해 천연물 유래 에센셜 오일을 탐색하던 중, 산쑥 에센셜 오일이 피부 각질형성세포의 증식 및 이동을 유도하는 사실을 확인하였으며, 또한 산쑥 에센셜 오일이 각질형성세포의 type IV collagen 합성/분비를 촉진하는 반면, 진피 섬유아세포의 증식 및 type I collagen의 합성을 유도하지 않는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

이에 따라, 본 발명은 산쑥으로부터 얻은 에센셜 오일을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부탄력 개선 및 재생, 상처치유용 조성물이다. 여기서, 상기 산쑥 에센셜 오일은 에탄올, 메탄올과 같은 유기 용매를 이용한 추출이 아닌 증류수를 이용한 수증기 증류법을 통하여 추출된 것이 바람직하다.

본 발명은 산쑥 에센셜 오일을 포함하는 것을 특징으로 하여, 표피의 각질형성세포의 증식 및 이동을 유도하고 각질형성세포의 type IV collagen 합성/분비를 촉진함으로써, 피부 재생 및 상처 치유를 가능하게 하는 효과에 탁월하다. 반면, 진피 섬유아세포의 증식을 유도하지 않음으로서 섬유아세포의 과도적 증식에 의해 유도될 수 있는 비대흉터 및 켈로이드 형성등의 부작용을 나타내지 않는다.

본 발명에 따른 산쑥 에센셜 오일은 지용성 성분이기 때문에 실험에 사용되는 수용성 배지에 골고루 분산되지 않아 세포 실험에 적용하기 어려우며, 실험 결과에도 상당히 큰 오차를 가져올 수 있다. 이에 따라, 화장품 원료로 많이 사용되고 이에 적합한 가용화제인 transcutol-CG등을 혼합하여 산쑥 에센셜 오일을 가용화하는 것이 바람직하다.

이러한 본 발명에 있어서 산쑥 에센셜 오일은 0.0001~1.0 ㎍/㎖ 범위(바람직하게는, 0.1~1.0 ㎍/㎖ 범위) 내의 농도에서 각질형성세포 및 섬유아세포가 높은 세포 생존율을 나타내고, 산쑥 에센셜 오일로 인한 피부 질환이나 부작용 등의 위험 없이 높은 안전성을 가지며, 세포 친화적이서 피부탄력 개선 및 재생이나 상처치유를 위한 의약 또는 화장품 원료로서 바람직하다.

한편, 본 발명자들은 이러한 산쑥 에센셜 오일이 각질형성세포의 증식과 type IV collagen의 활성을 효과적으로 유도하는 것을 확인하였다. 즉 산쑥 에센셜 오일은 피부 재생에 있어 중요하게 연구되고 있는 각질형성세포의 증식을 농도의존적으로 유도하였으며, 특히 산쑥 에센셜 오일 성분 0.1~1㎍/㎖에서 표피성장인자와 비슷한 효과를 갖는 것을 확인하였다.

또한, 본 발명에 의한 산쑥 에센셜 오일 성분은 산쑥 에센셜 오일은 각질형성세포와 섬유아세포의 이동을 유도하였다. 즉, 산쑥 에센셜 오일은 피부 재생 및 상처치유에 관여하는 섬유아세포의 이동을 유도하였으며, 산쑥 에센셜 오일의 약 1㎍/㎖ 농도에서 섬유아세포의 이동을 유의하게 유도하는 것을 확인하였다.

또한, 본 발명에 의한 산쑥 에센셜 오일이 각질형성세포의 세포내 신호전달과정인 Akt와 Erk1/2의 인산화를 유도하였다. 즉, 산쑥 에센셜 오일은 각질형성세포의 증식과 이동을 조절하는 주요 신호전달과정인 Akt와 Erk1/2의 인산화를 유도하는 것을 확인하였다.

또한, 본 발명에 의한 산쑥 에센셜 오일이 각질형성세포의 type collagen 합성/분비를 촉진하였다. 즉, 산쑥 에센셜 오일의 0.1㎍/㎖ 농도에서 기저막 형성에 중요한 역할을 하는 type IV collagen의 합성/분비를 촉진하는 것을 확인하였다.

상술한 바와 같이 본 발명에 따른 산쑥 에센셜 오일은 피부 노화, 상처 및 피부 병변으로 인하여 생리활성이 저하된 각질형성세포의 증식과 섬유아세포의 이동을 유도하여 피부의 재생과 상처 치유 효과를 나타내며, 각질형성세포의 type IV collagen 합성/분비를 촉진하여 피부탄력 개선 및 재생 및 상처치유용 피부 외용제와 피부노화 예방을 위해 화장료 조성물로서 널리 활용될 수 있다.

도 1 은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 산쑥으로부터 에센셜 오일 성분을 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이고, 여기에 나타난 바와 같이, 본 발명은 산쑥을 수증기 증류법(steam distillation)으로 증류하여 증류액을 얻고, 상기 얻은 증류액으로부터 에센셜 오일 성분을 분리하는 산쑥 증류액의 추출방법일 수 있다.

예를 들어, 건조하지 않은 산쑥의 꽃 부분(꽃으로부터 5 cm)을 수증기 증류법으로 증류시킨 다음, 저온 냉각시켜서 증류액을 얻고, 그것으로부터 수용액층을 분리/정제한 후, 동결 건조함으로써, 산쑥 증류액 또는 산쑥 증류액의 에센셜 오일 성분을 획득할 수 있다.

상기 수증기 증류법과, 증류액으로부터 수용액 성분을 분리하는 방법은 이 기술분야에서 널리 알려진 다양한 방법에 의해 수행될 수 있다.

본 발명은 산쑥에 대하여 수증기 증류법으로 얻은 에센셜 오일 성분, 특히 증류액의 에센셜 오일이 피부탄력 개선 및 재생과 상처치유 등에 유용함을 확인한 것이 특징이다.

이에 따라, 본 발명은 상기 추출방법으로 얻은 에센셜 오일을 포함하는 산쑥 증류액일 수도 있다.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 산쑥 에센셜 오일은 섬유아세포의 증식에는 영향을 미치지 않으므로 상처 치유 과정에서 발생할 수 있는 비대 흉터, 켈로이드와 같은 부작용을 유발시키지 않으면서 피부 질환과 피부노화 예방에 활용될 수 있다.

상기한 바와 같이, 본 발명은 산쑥의 에센셜 오일을 유효성분으로 함유하며, 이에 따라 피부탄력 개선과 재생용 및 피부 외용제와 상처 치유 조성물일 수도 있다.

이와 함께, 본 발명은 산쑥 에센셜 오일을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물인 것도 가능하다.

이와 함께, 본 발명에 따른 조성물은 활성 성분으로서의 상기한 산쑥의 에센셜 오일과 함께, 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 결합제, 붕괴제, 글리덴트(glident), 희석제, 윤활제, 착색제, 감미제, 향미제, 방부제 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 공지된 방법으로 적절한 용량 레벨로 통상적인 고체 또는 액체 담체 또는 희석제 및 통상적인 약제학적으로 제조된 애주번트 중에서 제조될 수 있다.

바람직하게, 상기 산쑥 에센셜 오일은 정맥내 투여에 적합하거나, 경구 투여에 적합하거나, 흡입 투여에 적합하다. 투여 형태로는 예를 들면, 환약, 정제, 필름 정제, 코팅 정제, 캡슐, 리포좀 제제, 마이크로 및 나노 제제, 분말 및 침착물을 들 수 있다. 또한, 본 발명은 또한 피부, 피내, 위내, 피부내 (intracutan), 혈관내, 정맥내, 근육내, 복강내, 비강내, 질내, 구강내, 경피적 (percutan), 직장, 피하, 설하, 국소, 또는 경피 투여를 포함한 비경구 투여용 약제학적 제제를 포함하며, 제제는 전형적인 비히클 및/또는 희석제 이외에도, 본 발명의 산쑥 에센셜 오일을 함유한다.

본 발명은 또한 약제학적 제제 및/또는 영양 보조 식품으로서 신생아 (newborn), 유아 (toddler), 및 소아(infant)에게 산쑥 증류액 성분을 경구 투여하기 위한 제제로서 포유동물 밀크, 인공 포유동물 밀크, 및 포유동물 밀크 대용품을 포함한다.

본 발명의 산쑥 에센셜 오일은 또한 이의 약제학적으로 활성인 염의 형태로 투여될 수 있다. 적절한 약제학적으로 활성인 염은 산부가염 및 알칼리염 또는 알칼리 토금속염을 포함한다. 예를 들면, 나트륨, 칼륨, 리튬, 마그네슘 또는 칼슘 염이 얻어질 수 있다. 본 발명의 산쑥 에센셜 오일 성분은 유기산 및 무기산과 약제학적으로 허용가능한 염을 생성한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 전형적으로 원하는 투여 형태에 대하여, 즉, 정제, 캡슐 (고체, 반고체 또는 액체 충전), 구성용 분말, 통상적인 약무와 일치하는 에어로졸 제제 형태의 경구 투여를 위해 선택된 적절한 담체 물질과 함께 투여될 수 있다.

본 발명의 또 하나의 측면은 본 발명의 산쑥 에센셜 오일을 포함하는 약제학적 조성물을 후술하는 질환을 치료하는데 효과적인 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 피부 재생 방법에 관한 것이다.

본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하여, 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다. 또한, 피부 재생 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다.

이와 함께, 본 발명은 산쑥 에센셜 오일을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것도 가능하다.

본 발명은 하기의 실시예에 의하여 보다 더 잘 이해 될 수 있으며, 하기의 실시예는 본 발명의 예시 목적을 위한 것이며, 첨부된 특허청구범위에 의하여 한정되는 보호범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예 1: 산쑥 에센셜 오일의 제조

도 1은 산쑥으로부터 에센셜 오일 성분을 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이고, 여기에서 나타난 바와 같이, 본 발명은 산쑥을 수증기 증류법으로 증류하여 수용액 성분을 제거한 산쑥 에센셜 오일이다.

본 실시예에서는 채취한 산쑥을 세척 한 후, 생초 20 ㎏씩 수증기 증류법을 통해 10ℓ의 산쑥 증류액을 얻고, 상기 얻은 증류액으로부터 수용액 성분을 제거하여 에센셜 오일 50㎖를 획득하였다.

실험예 1. 산쑥 에센셜 오일의 성분 분석

본 실시예에서는 실시예 1에서 얻은 산쑥 오일 성분을 Gas Chromatography/Mass Spectrometer : 6890N GC/5975i MS (Agilent, USA)을 사용하여 분석하였다. GC/MSD의 column은 DB5-MS (30 m x 250㎛, 0.25㎛)를 사용하였고, Injection temperature와 interface temperature는 각각 280℃, 300℃로 하였으며, ion source temperature와 quadrupole temperature는 각각 230℃, 150℃로 하여 분석하였다. 또한, carrier gas는 He를 사용하여 260℃에서 1.0 ml/min으로 흐르게 한 후, injector는 Split ratio 50:1, 280℃로 하여 분석하였다. oven temperature는 초기온도 40℃에서 5분간 지속하고, 2℃/min으로 230℃까지 상승시킨 후 5분간 지속시켰으며, 5℃/min으로 300℃까지 올려 유지한 후 5분간 지속하는 조건으로 분석하였다. 분석된 피크는 Willey 7^th Edition/NIST 0.5 MS Library (USA)의 retention time과 비교하여 성분을 확인하고 정량하였다.

분석 결과, 총 49개의 성분을 확인할 수 있었으며, 오일 성분 분석표를 도 2에 나타내었다.

실험예 2. 산쑥 에센셜 오일이 각질형성세포 및 섬유아세포에 미치는 독성 측정

상기 실시예 1에서 얻은 산쑥 에센셜 오일 성분을 이용하여 각질형성세포에 미치는 독성을 조사하였다.

각질형성세포 및 섬유아세포에 미치는 독성 측정은, 각질형성세포 및 섬유아세포를 0.1㎍/㎖의 콜라겐(collagen, type I) 코팅된 96 well-plate에 5×10³/100㎕/well의 농도로 넣은 다음, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 12시간 배양하였다. 12시간 후, 산쑥 에센셜 오일 성분을 0.0001 ~ 10㎍/㎖ 농도로 처리하고 24시간 배양하였으며, EZ-cytox를 처리한 후, 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.

본 발명의 일 실시예에 의해 얻은 산쑥 에센셜 오일성분의 각질형성세포의 독성 측정은 도 3에 나타내었으며, 섬유아세포의 독성 측정은 도 4에 나타내었다.

실험 결과, 도 3과 도 4에 나타난 바와 같이, 산쑥 에센셜 오일 성분 0.0001 ~ 1㎍/㎖의 농도에서는 각질형성세포와 섬유아세포의 세포독성이 관찰되지 않은 반면, 10㎍/㎖의 농도에서는 10% 이하의 생존율을 나타내었다. 따라서 본 발명에 사용되는 산쑥 에센셜 오일 성분의 농도는 10㎍/㎖ 이하의 농도가 바람직하다

실험예 3. 산쑥 에센셜 오일 성분이 피부 각질형성세포 및 섬유아세포의 증식에 미치는 영향 측정

상기 실시예 1에서 얻은 산쑥 에센셜 오일 성분을 이용하여 각질형성세포와 섬유아세포의 증식에 미치는 효과를 측정하기 위해 하기와 같이 세포증식활성을 측정하였다.

각질형성세포를 0.1㎍/㎖의 콜라겐(collagen, type I) 코팅된 96 well-plate에 5×10³/100㎕/well의 농도로 하여 37, 5% CO₂ 인큐베이터에서 12시간 배양하였으며, 섬유아세포는 0.1㎍/㎖의 콜라겐(collagen, type I) 코팅된 96 well-plate에 2.5×10³/100㎕/well의 농도로 하여 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 12시간 배양하였다. 12시간 후, 산쑥 에센셜 오일 성분을 0.0001 ~ 1㎍/㎖ 농도로 처리하고, 24시간 배양하였다. 그 후, EZ-cytox를 처리하고, 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.

본 발명의 일 실시예에 의해 얻은 산쑥 에센셜 오일성분의 각질형성세포의 증식효과를 도 5에 나타내었으며, 섬유아세포의 증식효과를 도 6에 나타내었다.

실험 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 각질형성세포는 산쑥 에센셜 오일 성분에 의해 농도 의존적으로 증식이 유도되는 것으로 나타났으며, 도 6에 나타난 바와 같이 섬유아세포는 산쑥 에센셜 오일 성분에 의한 증식이 유도되지 않는 것으로 나타났다.

실험예 4. 산쑥 에센셜 오일 성분이 피부 각질형성세포 및 섬유아세포의 이동에 미치는 영향 측정

상기 실시예 1에서 얻은 산쑥 에센셜 오일 성분을 이용하여 각질형성세포와 섬유아세포의 이동에 미치는 효과를 측정하기 위해 하기와 같이 세포이동 효과를 측정하였다.

48 well Boyden Microchemotaxis Chamber를 이용하였으며, 8㎛ proe의 poly-carbonate membrane은 0.1㎍/㎖의 콜라겐(collagen, type I)으로 코팅하였다. lower chamber에는 산쑥 에센셜 오일을 0.0001~1㎍/㎖의 농도로 처리하였고, 코팅된 8 ㎛ proe의 poly-carbonate membrane을 올려놓은 후, upper chamber에 각질형성세포와 섬유아세포를 50,000 cells/well의 농도로 넣어주고 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 각질형성세포는 3시간, 섬유아세포는 90분 동안 배양하였다. 배양 후, chamber를 분리하여 membrane은 Diff-Quik solution을 통해 세포를 고정 및 염색하였으며, 이동하지 않은 세포를 제거한 후 현미경을 통해 이동한 세포를 세어 백분율로 환산하였다.

본 발명의 일 실시예에 의해 얻은 산쑥 에센셜 오일성분의 각질형성세포의 이동효과를 도 7에 나타내었으며, 섬유아세포의 이동효과를 도 8에 나타내었다.

실험결과, 도 7에 나타난 바와 같이, 각질형성세포의 이동은 산쑥 에센셜 오일 성분에 의해 유도되지 않는 것으로 나타났으며, 도 8에 나타난 바와 같이, 섬유아세포는 산쑥 에센셜 오일 성분에 의해 1㎍/㎖에서 이동이 유도되는 것으로 나타났다.

실험예 5. 산쑥 에센셜 오일이 세포내 신호전달 과정에 미치는 영향 측정

상기 실시예 1에서 얻은 산쑥 에센셜 오일을 이용하여 각질형성세포의 증식과 이동을 조절하는 주요 신호 전달과정인 Akt와 Erk1/2의 인산화 활성에 미치는 영향을 확인하기 위해 하기와 같이 측정하였다.

각질형성세포를 0.1 ㎎/㎖의 콜라겐(collagen, type I) 코팅된 100 mm dish에 5x10⁵ cells/ml의 농도로 하여, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 12시간 배양한 후, serum-free medium에서 24시간 동안 starvation하였다. 그 후, 산쑥 에센셜 오일을 0.0001 ~ 1 ㎍/㎖ 농도로 처리하고, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 10분간 배양하여 cell을 lysis하였다. Akt와 Erk1/2의 인산화 활성을 측정하기 위해 각각의 특이항체(P-Akt, Akt, P-Erk, Erk)를 이용하여 Immuno Blot을 활용하였다.

본 발명의 일 실시예에 의해 얻은 산쑥 에센셜 오일이 각질형성세포내 Akt와 Erk1/2의 인산화 활성에 미치는 효과를 도 9에 나타내었다.

실험 결과, 도 9에 나타난 바와 같이, 산쑥 에센셜 오일에 의해 각질형성세포내 Akt와 Erk1/2의 인산화가 유도되는 것을 나타내었다. 특히 산쑥 에센셜 오일의 0.01 ~ 0.1 ㎍/㎖에서 Akt와 Erk1/2의 인산화가 유의하게 유도되었다.

실험예 6. 산쑥 에센셜 오일이 각질형성세포의 type I, IV collagen 합성/분비에 미치는 영향 측정

상기 실시예 1에서 얻은 산쑥 에센셜 오일을 이용하여 각질형성세포의 type I, IV collagen 합성/분비에 미치는 효과를 측정하기 위해 산쑥 에센셜 오일을 0.1 ㎍/㎖의 농도로 하여 하기와 같이 측정하였다.

각질형성세포를 100 mm dish에 5x10⁵ cells/ml의 농도로 하여, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 12시간 배양한 후, 산쑥 에센셜 오일을 0.1 ㎍/㎖ 농도로 처리하고, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 그 후, 각질형성세포의 배양액과 lysate를 이용하여 ELISA assay를 하였다.

96 well-plate에 2 ㎍/well의 monoclonal anti-collagen type IV와 monoclonal anti-collagen type I을 처리하여 상온에서 12시간 코팅한 후, blocking buffer(1% BSA + 5% sucrose / PBS)로 1시간 동안 blocking하였으며, 각질형성세포에 산쑥 에센셜 오일을 처리하지 않은 대조군의 배양액과 lysate, 산쑥 에센셜 오일을 처리한 실험군의 배양액과 lysate의 샘플을 처리하여 상온에서 90분 동안 반응시켰다. 그 후, Biotin이 label 되어 있는 polyclonal anti-collagen type IV와 polyclonal anti-collgen type I을 처리하여 상온에서 90분 동안 반응시킨 후, Streptavidin-HRP conjugate를 주입하여 상온에서 1시간 반응시켰으며, ELISA pico chemiluminescent Substrate를 처리하여 반응시킨 다음, ELISA plate reader를 이용하여 Lumiescence 측정을 통해 얻은 값을 통해 산쑥 에센셜 오일이 type I, IV collagen 합성/분비에 미치는 영향을 측정하였다.

본 발명의 일 실시예에 의해 얻은 산쑥 에센셜 오일이 각질형성세포의 type IV collagen 합성/분비에 미치는 영향을 도 10에 나타내었으며, type IV collagen 합성/분비에 미치는 영향을 도 11에 나타내었다.

실험 결과, 도 10에 나타난 바와 같이, 대조군에 비해 산쑥 에센셜 오일 0.1 ㎍/㎖을 처리한 배양액에서 type IV collagen이 유의하게 증가하였으며, 도 11에 나타난 바와 같이, 각질형성세포의 type I collagen 합성/분비는 산쑥 에센셜 오일 0.1 ㎍/㎖에 의해 유도되지 않는 것을 확인하였다. 이를 통해 산쑥 에센셜 오일에 의해 특이적으로 각질형성세포의 type IV collagen 합성/분비가 촉진되는 것을 확인하였다.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따라 수증기 증류법을 이용하여 분리된 산쑥 에센셜 오일은 피부 각질형성세포의 증식과 섬유아세포의 이동을 유도하고, 각질형성세포의 type IV collagen 합성/분비를 촉진시킴으로써 피부재생 및 상처치유에 효과가 있는 것을 암시한다.

한편, 상기에서는 본 발명을 특정의 바람직한 실시예에 관련하여 도시하고 설명하였지만, 이하의 특허청구범위에 의해 마련되는 본 발명의 기술적 특징이나 분야를 이탈하지 않는 한도 내에서 본 발명이 다양하게 개조 및 변화될 수 있다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명백한 것이다.

Claims (12)

1. 산쑥(Artemisia montana Pampan)의 에센셜 오일(essential oil) 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 에센셜 오일 성분은 산쑥 추출물의 지용성 성분인 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
3. 제2항에 있어서,
   상기 산쑥 추출물은 산쑥 증류액인 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
4. 제3항에 있어서,
   상기 지용성 성분은 상기 증류액으로부터 수용액 성분이 제거된 것임을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 더 포함하고,
   상기 에센셜 오일 성분은 0.0001~1.0 ㎍/㎖ 범위 내로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
6. 제5항에 있어서,
   상기 에센셜 오일 성분은 0.1~1.0 ㎍/㎖ 범위 내로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 에센셜 오일 성분은 피부 각질형성세포와 섬유아세포 중 하나 이상의 증식이나 또는 이동을 유도하는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
8. 산쑥(Artemisia montana Pampan)의 에센셜 오일(essential oil) 성분을 포함하고,
   피부 각질형성세포와 섬유아세포 중 하나 이상의 증식이나 또는 이동을 유도하는 상처치유용 피부 외용제 조성물.
   
9. 제8항에 있어서,
   피부 각질형성세포의 type IV 콜라겐(collagen) 합성 및 분비를 촉진하는 것을 특징으로 하는 상처치유용 피부 외용제 조성물.
   
10. 산쑥(Artemisia montana Pampan)을 수증기 증류법(steam distillation)으로 증류하여 증류액을 얻고,
    상기 얻은 증류액으로부터 에센셜 오일 성분을 분리하는 산쑥 증류액의 추출방법.
    
11. 제10항에 따른 추출방법으로 얻은 에센셜 오일 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물.
    
12. 제10항에 따른 추출방법으로 얻은 에센셜 오일 성분을 포함하는 화장료 조성물.
    

Images