KR101888258B1

KR101888258B1 - 개망초꽃으로부터 추출된 에센셜 오일을 포함하는 피부재생용 조성물

Info

Publication number: KR101888258B1
Application number: KR1020160148641A
Authority: KR
Inventors: 이환명; 김도윤; 황대일; 윤미소; 조동주; 노수진
Original assignee: 호서대학교 산학협력단
Priority date: 2016-11-09
Filing date: 2016-11-09
Publication date: 2018-08-13
Also published as: KR20180051821A

Abstract

본 발명은 개망초꽃으로부터 추출한 추출된 에센셜 오일을 포함하는 피부재생용 조성물 및 화장료에 관한 것으로, 상기 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 증식 및 이동을 유도함으로써 우수한 피부 재생 효과를 제공한다.

Description

개망초꽃으로부터 추출된 에센셜 오일을 포함하는 피부재생용 조성물{COMPOSITION FOR SKIN REGENERATION CONTAINING EXTRACTED FROM ERIGERON ANNUUS (L.) PERS FLOWER}

본 발명은 개망초꽃(Erigeron annuus (L.) Pers flower)으로부터 추출된 에센셜 오일을 유효성분으로 포함하는 피부재생용 조성물, 화장료 조성물 및 피부 외용제 조성물에 대한 것이다.

피부(skin)는 인체의 최외각에 존재하여 외부 환경과 직접적으로 접해 있어, 외부의 손상으로부터 인체를 보호하고, 체내수분과 열의 과도한 증발을 막는 역할을 한다. 피부는 표피(epidermis), 진피(dermis), 피하지방(subcutaneous tissue)의 3개의 층으로 구성되어 있으며, 가장 바깥쪽에 위치하고 있는 표피의 대부분은 각질형성세포로 구성되어 있다. 표피의 각질형성세포는 기저층으로부터 증식, 이동 및 분화과정을 통해 각질을 형성하여 피부를 보호하고, 다양한 사이토카인을 생산하여 염증반응과 면역반응에 관여한다. 또한, 각질형성세포의 증식과 이동은 상처치유와 피부 재생을 제공할 뿐만 아니라, 콜라젠(collagen) 합성을 유도하여 피부의 탄력 증진과 기저막 형성을 향상시켜 피부 세포들의 부착과 증식이 조절되고, 유해물질을 선택적으로 투과하는 장벽기능의 향상과 표피와 진피의 상호작용 등을 제공한다. 이로 인해, 피부 표피 각질형성세포의 이동과 증식은 피부 재생과 상처치유 뿐만 아니라 피부탄력을 증진시키고 건강한 피부가 유지되도록 도와준다.

한편, 개망초 (Erigeron annuus (L.) Pers.)는 국화과에 속하는 두해살이풀로, 북아메리카가 원산이며, 전 세계적으로 분포하며, 우리나라에서는 각처의 밭, 들판, 길가 등 야생으로 자라고 있는 흔히 볼 수 있는 식물이다. 높이는 30-100 cm로 자라고 위쪽에서 가지가 갈라지며, 전체에 굵은 털이 있는 특징을 갖는다. 꽃은 6-7월에 피고, 가지 끝과 원줄기 끝에 산방상으로 달리며, 지름 2 cm 정도로 백색을 띄며, 다량의 방향족 화합물을 함유하고 있어 독특한 향취를 지니고 있다. 민간에서 개망초는 위장염, 소화불량, 장염으로 인한 복통 및 설사 치료, 혈당 강하 작용, 혈뇨, 말라리아, 항염 등의 약효가 있는 것으로 알려져 예로부터 사용되어 왔다.

그러나, 아직까지 개망초는 우리나라 전역의 밭에서 흔히 발견되는 잡초로 쉽게 대량 채집/수확이 가능하며, 독특한 향취를 가지고 있어 산업적으로 활용가치가 매우 높으나, α-amyenone, α-amyrin 및 β-amyrin등과 같은 triterpenoid를 분리한 성분분석에만 국한되어 있으며, 약리학적 및 생리학적 등의 연구뿐만 아니라 개망초꽃에 함유되어 있는 에센셜 오일 성분에 대해서는 연구가 부족한 실정이다.

천연물 유래 에센셜 오일은 식물의 2차대사 산물 중 인체에 약리효과를 나타내는 휘발성 화학물질로, 주로 알코올, 알데하이드, 에스테르, 케톤 등의 여러 가지 유기화합물로 구성되어 있다. 에센셜 오일의 독특한 향기 성분과 치료 성분은 피부, 순환계, 후각계를 통해 스트레스 해소, 피고 회복, 근육 이완 등에 효과를 나타낼 뿐만 아니라 항균작용, 면역 증진, 항알러지 작용이 있어 오래전부터 질병의 치료와 예방에 활용되었으며 노화 예방과 같은 미용에서 효과가 있다. 에센셜 오일의 이러한 효능은 현대에도 이어져 제약이나 식품뿐만 아니라 화장품 분야까지 다양하게 연구가 요구되고 있다.

한국공개특허 2008-0023827호

상기와 같은 문제를 해소하기 위해, 본 발명은 개망초꽃으로부터 추출된 에센셜 오일의 성분을 규명하고, 이의 피부 탄력증진, 피부재생 및 상처 치유 효능을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 개망초꽃(Erigeron annuus (L.) Pers flower)으로부터 추출된 에센셜 오일을 유효성분으로 포함하는 피부재생용 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 에센셜 오일은 수증기 증류법에 의해 추출될 수 있으며, 수증기 증류법에 의해 추출된 증류액으로부터 수용액 성분을 제거하여 제조된 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 개망초꽃은 건조되지 않은 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 에센셜 오일은 미르센(Myrcene), 오시멘(cis-β-Ocimene), 엘레멘(β-Elemene), 카리오필렌(β-Caryophyllene), 파르네센(E-β-Farnesene), 제르마크렌(Germacrene D), Benzene, 1-(-1-cycolopropylethenyl)-4-methoxy)- 으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 에센셜 오일은 0.0001~10 ㎍/㎖의 범위로 포함될 수 있으며, 예를 들어 0.1~1 ㎍/㎖의 범위로 포함될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 증식 및 이동을 유도할 수 있다. 구체적으로, 상기 에센셜 오일은 표피 각질형성세포 내 세린/트레오닌 키나아제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나아제(ERK1/2)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 인산화 과정 또는 신호전달 과정을 유도할 수 있다.

또한, 본 발명은 개망초꽃으로부터 추출한 에센셜 오일을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 개망초꽃으로부터 추출한 에센셜 오일을 유효성분으로 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명은 개망초꽃으로부터 추출된 에센셜 오일의 성분을 규명하고, 이의 피부 탄력증진, 피부재생 및 상처 치유 효능을 입증한 것으로, 표피 각질 형성세포의 증식 및/또는 이동을 유도하는 활성을 나타내고, 세린/트레오닌 키나아제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나아제(ERK1/2)의 인산화를 유도하여 세포의 증식을 조절할 수 있어 피부재생에 우수한 효과를 갖는다. 또한, 본 발명에 따른 개망초꽃으로부터 추출된 에센셜 오일은 피부 탄력 개선 및 상처 치유 효과도 나타내고 있어, 화장료, 피부 외용제 등으로서 다양하게 적용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 있어서 개망초꽃으로부터 에센셜 오일을 추출하는 공정을 나타내는 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서 개망초꽃으로부터의 에센셜 오일의 성분분석 결과 도표이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서 개망초꽃의 에센셜 오일이 피부 각질형성세포의 이동에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4 는 본 발명의 일 실시예에 있어서 개망초꽃의 에센셜 오일이 피부 각질형성세포의 증식에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서 개망초꽃의 에센셜 오일의 (A) 표피 각질형성세포 내 세린/트레오닌 단백질 키나아제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나아제(ERK1/2)의 인산화에 미치는 영향을 나타낸 이미지, (B) 표피 각질형성세포 내 세린/트레오닌 단백질 키나아제(Akt)의 인산화에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프 및 (C) 표피 각질형성세포 내 세포외 신호조절 키나아제(ERK1/2)의 인산화에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.

이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 상세히 설명한다. 이하의 설명에 있어, 당업자에게 주지 저명한 기술에 대해서는 그 상세한 설명을 생략할 수 있다. 또한, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다.

따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 발명은 개망초꽃(Erigeron annuus (L.) Pers flower)으로부터 추출된 에센셜 오일을 유효성분으로 포함하는 피부재생용 조성물, 화장료 조성물 및 피부 외용제 조성물에 대한 것이다

상기 에션셜 오일은 건조하지 않은 개망초꽃으로부터 얻는 것이 바람직하며, 수증기 증류법 공정에 따라 제조할 수 있다. 수증기 증류법은 본 분야에서 통상적으로 사용되는 방식으로 제조될 수 있으며, 예를 들어 수증기 증류(steam distillation)방법 또는 수증기 증류-추출을 동시에 하는 방법에 의해 제조할 수 있다. 수증기 증류법은 도 1에 도시된 바와 같은 공정에 따라 개망초꽃을 세척한 후 수증기 증류법으로 증류하고, 저온에서 냉각시킨 후 분리 및 정제 과정을 거쳐 수용액 성분을 제거함으로써 개망초꽃 에센셜 오일을 제조할 수 있다.

구체적으로는, 본 발명의 개망초꽃에서 추출한 에센셜 오일은 개망초꽃을 세척한 후 건조 및 분쇄하고 분쇄물을 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 알코올, 아세톤, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포롬 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출용매로 냉침 또는 온침하여 1회 이상 추출하여 얻을 수 있다. 예를 들어, 탄소수 1 내지 4의 무수 및 함수 저급 알코올, 아세톤 및 부틸렌글리콜을 포함하는 극성 용매 중 어느 하나 이상을 사용한 1차 추출을 한 후, 순차적으로 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 및 헥산을 포함하는 저극성 용매 중 어느 하나 이상을 사용한 2차 추출을 통하여 추출하는 것일 수 있다. 추가로 상기에서 얻어진 추출물을 증류 장치에서 적정 온도로 감압 농축시키는 과정을 더 거쳐 제조할 수 있다.

추출 방법으로는 냉침의 경우 약 12 ~ 96시간 동안 행하거나, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급알코올, 에틸아세테이트 또는 디에틸에테르 등을 용매로 하여 4 ~ 25℃ 상온에서 1 ~ 20일 방치 숙성시켜서 유효성분을 추출할 수 있다. 온침의 경우는 추출용매의 종류와 온도에 따라 상이하나, 용매의 환류 온도에 가까운 온도로 약 5 ~ 24시간 동안 행하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 개망초꽃에서 추출한 에센셜 오일은 다양한 생리활성을 나타내는 성분을 함유하고 있는데, 보다 구체적으로 미르센(Myrcene), 오시멘(cis-β-Ocimene), 엘레멘(β-Elemene), 카리오필렌(β-Caryophyllene), 파르네센(E-β-Farnesene), 제르마크렌(Germacrene D), Benzene, 1-(-1-cycolopropylethenyl)-4-methoxy)- 으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 성분을 포함하는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다(도 2).

본 발명의 조성물에 함유되는 개망초꽃 에센셜 오일의 함량은 특별히 제한된 것은 아니고, 필요에 따라 0.0001 ~ 10 ㎍/㎖ 범위 내로 포함될 수 있으며, 그 중에서도 0.1 ~ 1 ㎍/㎖ 범위 내로 포함되는 것이 가장 우수한 효과를 갖는다. 즉, 상기 개망초꽃 에센셜 오일의 0.0001~10 ㎍/㎖ 범위 내의 농도에서 피부 표피 각질형성세포가 높은 세포 생존율을 나타내었고, 개망초꽃 에센셜 오일로 인한 피부 질환이나 부작용 등의 위험 없이 높은 안전성을 가질 뿐만 아니라, 세포 친화적이어서, 피부 탄력 증진과 재생 및 상처치유를 위한 화장품 또는 의약품 및 피부외용제 원료로서 바람직하다.

또한, 상기 개망초꽃 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 증식 및/또는 이동을 유도하는 것이 가능하다. 즉, 후술하는 실시예 및 실험에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 개망초꽃 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 이동을 농도 의존적으로 유도하였으며, 그 중에서도 0.1, 1 ㎍/㎖의 농도에서 각질형성세포의 이동을 효과적으로 유도하였다(실험예 1 및 도 3 참조). 또한, 본 발명에 의한 개망초꽃 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하였으며, 그 중에서도 0.01, 0.1, 1 ㎍/㎖의 농도에서 표피 각질형성세포의 증식을 유의하게 유도하였다(실험예 2 및 도 4 참조). 또한, 상기 개망초꽃 에센셜 오일은 표피 각질형성세포 내 세린/트레오닌 키나아제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나아제 (ERK1/2)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 인산화 과정 또는 신호전달 과정을 유도하는 것일 수 있다. 즉, 후술하는 실시예 및 실험에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 개망초꽃 에센셜 오일은 표피 각질형성 세포내 세린/트레오닌 키나아제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나아제(ERK1/2)의 인산화를 농도 의존적으로 유도하였으며, 그 중에서도 1 ㎍/㎖의 농도에서 세린/트레오닌 키나아제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나아제(ERK1/2)의 인산화를 유의하게 유도하였다(실험예 3 및 도 5 참조).

상술한 바와 같이 본 발명은 개망초꽃에 대하여 수증기 증류법으로 얻은 개망초꽃 에센셜 오일이 피부 노화와 주름, 상처 및 피부 병변으로 인하여 생리활성이 저하된 표피 각질형성세포의 증식과 이동을 유도함으로써, 피부 탄력, 재생, 및/또는 상처치유 등에 유용한 것이 특징이다.

이에 따라, 본 발명은 개망초꽃으로부터 추출된 개망초꽃 에센셜 오일을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부재생용 조성물, 피부 외용제 조성물 또는 화장료 조성물일 수 있다. 이러한 조성물은 의약품과 의약외품을 모두 포함하고, 피부 탄력 증진, 피부 재생, 및/또는 피부 상처 치유용 등으로 다양하게 활용가능하다.

본 발명에 따른 개망초꽃으로부터 추출된 개망초꽃 에센셜 오일을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부재생용 조성물은 약학적 조성물로 사용될 수 있으며, 약학적으로 유효한 양의 개망초꽃 에센셜 오일을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.

상기에서 "약학적으로 유효한 양"이란 상기 생리활성성분이 동물 또는 사람에게 투여되어 목적하는 생리학적 또는 약리학적 활성을 나타내기에 충분한 양을 말한다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.

또한, 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있으며, 경구 또는 비경구 투여를 위한 다양한 형태로 제형화 될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캡슐, 멸균 주사용액, 멸균 분말, 연고, 로션, 크림, 고약, 페이스트 등의 형태일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 목적하는 효과를 상승시킬 수 있는 공지의 화합물과도 병행하여 투여할 수 있다.

나아가 본 발명에 따른 조성물은 상기 기술한 바와 같이 약학적 조성물로 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 건강기능식품으로도 사용할 수 있다. 예컨대, 피부 탈력과 재생 효과를 목적으로 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 기능성 식품 또는 음료로 용이하게 활용할 수 있다.

상기 “식품”이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성식품 및 음료를 모두 포함하는 것을 말한다.

상기 식품용 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합체, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 특수영양식품(예, 조제유류, 영, 유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스낵류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등)를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

또한, 상기 “기능성 식품”또는 “건강기능성 식품”이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물 공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 구체적으로는 건강 기능성 식품일 수 있다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

상기 건강보조식품의 종류로는 이에 제한되지는 않으나, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태 일 수 있다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예들은 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[ 실시예 ]

실시예 1: 개망초꽃 에센셜 오일의 제조

도 1에 도시된 공정에 따라 개망초꽃 에센셜 오일을 제조하였다.

개망초꽃은 호서대학교(아산, 한국) 실습지에서 자생된 개망초꽃을 6-7월에 채취하여 사용하였다. 개망초꽃이 피기 직전의 꽃망울 전체를 채취하여 세척 후, 생초 18.6 kg을 수증기 증류법을 통해 약 12 L의 개망초 증류액을 얻고, 저온에서 냉각하고, 분리 및 정제과정을 거쳐 상기 얻은 증류액으로부터 수용액 성분을 분리하여 에센셜 오일 20 mL을 획득하였다. 그런 다음 수득한 개망초꽃 에센셜 오일을 4℃의 저온고에서 보관하였다.

실시예 2. 개망초꽃 에센셜 오일의 성분 분석

상기 실시예 1에서 제조한 개망초꽃 에센셜 오일의 성분 분석은 KBSI(korea basic science institute, seoul center)에 의뢰하였다. 가스 크로마토그래피/질량분석계(6890N GC/5975i MS, Agilent, USA)를 사용하였고, GC/MS의 컬럼(colum)은 DB5-MS(30 m X 250 μm, 0.25 μm)를 사용하였으며, 캐리어 가스(carrier gas)는 헬륨을 사용하여 1 mL/분으로 흐르게 하여 분석하였다. Oven의 온도는 40℃-2℃/분-230℃-5℃/분-300℃(5분)으로 유지하였으며, injection의 온도는 280℃에서 분석하였다. 또한 Interface의 온도는 300℃, ion source의 온도는 230℃, analyzer의 온도는 150℃에서 분석하였으며, Mass range는 40-800 m/z에서 분석하였다.

개망초 에센셜 오일 성분의 확인은 휘발성분의 지체시간(retention indices, RI)과 표준물질의 지체시간과 일치하거나 휘발물질의 질량 스펙트럼과 Wiley 7Nist 05 library의 질량 스페그럼을 비교하여 물질을 확인하였다. RI는 C6-C24(nalkane)를 이용하여 시료와 동일 조건에서 결정하였다. 그 결과, 총 7개의 성분으로 구성되어 있음을 확인할 수 있었으며, Germacrene D, Benzene, 1-(1-cyclopropylethenyl)-4-methoxy-, β-Elemene 순으로 높은 함량을 나타내었다(도 2).

실험예 1. 개망초꽃 에센셜 오일이 각질형성세포 이동에 미치는 효과

실시예 1에서 얻은 개망초꽃 에센셜 오일을 이용하여 표피 각질형성세포 이동에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기와 같이 실험하였다.

사람 피부 유래 표피 각질형성세포(HaCat)를 10% 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 배양하고 본 실험에 활용하였다. 48 well Boyden Microchemotaxis Chamber를 이용하여 표피 각질형성세포의 이동률을 조사하였으며, 먼저 lower chamber에 개망초꽃 에센셜 오일을 각각 0.0001~10 μg/mL 의 농도로 처리하였고, 코팅된 8 μm proe의 poly-carbonate membrane을 올려주었다. 이후, upper chamber에 각질형성세포를 well당 1X10⁶ cells/mL씩 처리하였다. Chamber를 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 3시간 배양시킨 후, membrane을 Diff-Quik solution으로 고정 및 염색하였다. Membrane을 통과하여 이동한 세포의 수를 세어, 백분율로 환산하여 개망초꽃 에센셜 오일의 피부 표피 각질형성세포 이동에 대한 결과를 확보하였다. 음성 대조군은 개망초꽃 에센셜 오일을 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처치유 및/또는 피부재생에 활용되고 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 5 ng/mL)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예에 의해 얻은 개망초꽃 에센셜 오일의 각질형성세포의 이동효과를 나타내었으며, 특히 개망초꽃 에센셜 오일 0.1 μg/mL의 농도에서 334.4 ± 13.80 %의 이동률을 나타내었고, 1 μg/mL의 농도에서 363.1 ± 14.80%의 최대 이동률을 나타내어 개망초꽃 에센셜 오일이 각질형성세포의 이동을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

실험예 2. 개망초꽃 에센셜 오일이 각질형성세포 증식에 미치는 효과

실시예 1에서 얻은 개망초꽃 에센셜 오일을 이용하여 표피 각질형성세포 증식에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기와 같이 실험하였다.

사람 피부 유래 표피 각질형성세포(HaCat)를 10% 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 배양하고 본 실험에 활용하였다. 표피 각질형성세포를 96 well microtiter plate에 각 well 당 세포수 2 x 10³ cell/100 μL/well이 되도록 주입하여, 37, 5% CO₂ 배양기에서 부착시켰다. 개망초꽃 에센셜 오일 0.0001~10 μg/mL의 농도로 각 well에 100 μL씩 처리하였고, 48시간 동안 배양시켰다.

EZ-cytox와 DEME를 1:1로 혼합하여 각 well당 20 μL씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시켰다. ELISA plate reader(Synerge2, BioTek, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도 측정 후, 백분율로 환산하여 개망초꽃 에센셜 오일의 피부 표피 각질형성세포 증식에 대한 결과를 확보하였다. 음성 대조군은 개망초꽃 에센셜 오일을 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처치유 및/또는 피부재생에 활용되고 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 개망초꽃 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하는 것으로 나타났다. 특히 개망초꽃 에센셜 오일 0.1 μg/mL의 농도에서 126.5 ± 4.998%의 증식 유도율을 나타내었고, 1 μg/mL의 농도에서 153.1 ± 2.967%의 증식 유도율을 나타내어 개망초꽃 에센셜 오일이 각질형성세포의 증식을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

실험예 3. 개망초꽃 에센셜 오일이 각질형성세포내 신호전달 과정에 미치는 영향

실시예 1에서 얻은 개망초꽃 에센셜 오일을 이용하여 표피 각질형성세포의 증식과 이동을 조절하는 주요 신호전달과정인 세린/트레오닌 키나아제(Akt)와 세포외 신호조절 키나아제(ERK1/2)의 인산화 과정에 미치는 효과를 측정하기 위해서, 개망초꽃 에센셜 오일을 농도별로 처리하고, 각각의 특이항체(PAkt, Akt, P-ERK1/2, ERK1/2)를 이용하여 면역블록(Immuno Blot)법을 활용하였다. 음성 대조군은 개망초꽃 에센셜 오일을 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처치유 및/또는 피부재생에 활용되고 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 개망초꽃 에센셜 오일은 농도 의존적으로 표피 각질형성세포내 세린/트레오닌 키나아제(Akt)와 세포외 신호조절 키나아제(ERK1/2)의 인산화를 유도하였으며, 특히 1 μg/mL 농도에서 세포내 세린 트레오닌 키나아제(Akt)의 인산화가 229.5 ± 4.522% 유도되었으며, 세포외 신호조절 키나아제(ERK1/2)의 인산화는 335.6 ± 16.90% 유도되는 것으로 나타났다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

개망초꽃(Erigeron annuus (L.) Pers flower)으로부터 추출된 에센셜 오일을 유효성분으로 포함하는 피부재생용 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 에센셜 오일은 수증기 증류법에 의해 추출된 것인 피부재생용 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 에센셜 오일은 미르센(Myrcene), 오시멘(cis-β-Ocimene), 엘레멘(β-Elemene), 카리오필렌(β-Caryophyllene), 파르네센(E-β-Farnesene), 제르마크렌(Germacrene D) 및 Benzene, 1-(-1-cycolopropylethenyl)-4-methoxy- 으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 피부재생용 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 에센셜 오일은 0.0001~10 μg/mL의 범위로 포함되는 것인 피부재생용 조성물.
제 4 항에 있어서,
상기 에센셜 오일은 0.1~1 μg/mL의 범위로 포함되는 것인 피부재생용 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 증식 및 이동을 유도하는 것인 피부 재생용 조성물.
제 6 항에 있어서,
상기 에센셜 오일은 표피 각질형성세포 내 세린/트레오닌 키나아제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나아제(ERK1/2)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 인산화 과정 또는 신호전달 과정을 유도하는 것인 피부 재생용 조성물.
개망초꽃으로부터 추출한 에센셜 오일을 유효성분으로 포함하는 피부 재생용 화장료 조성물.
개망초꽃으로부터 추출한 에센셜 오일을 유효성분으로 포함하는 피부 재생용 피부 외용제 조성물.