KR20130032995A - 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 항염증 효과 뿐만 아니라 피부보습 및 피부보호 효과가 뛰어난 인체에 안전하게 작용하는 약용식물 추출물로서 타마린드 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물에 관한 것으로서, 유효성분으로서 타마린드 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하며, 상기 타마린드 추출물은 원료인 타마린드 식물의 잎을 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 이들 중 2이상의 혼합물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 추출용매로 추출된 것이거나, 또는 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 분획용매로 분획한 것이 될 수 있다. 또한, 본 발명에 따르면, 상기한 바와 같은 항염증 활성을 갖는 조성물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증제 또는 항염증 효과를 갖는 화장품을 제공한다.

Description

타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물 {Anti inflammatory composition comprising Tamarindus indica extract as effective composition}
본 발명은 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물에 관한 것으로 특히, 항염증 효과 뿐만 아니라 피부보습 및 피부보호 효과가 뛰어난 인체에 안전하게 작용하는 약용식물 추출물로서 타마린드 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물에 관한 것이다.
염증은 외부에서 들어온 해로운 물질이나 유기체 등과 같은 여러 요인에 의하여 세포나 조직이 손상을 입거나 파괴되었을 때 그 손상을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키기 위하여 국소적으로 일어나는 면역반응으로서, 생체를 보호하고 조직 손상으로 생성된 산물들을 제거하는데 유용한 방어 메카니즘이다. 상기 방어 메카니즘에 의해, 결과적으로 통증, 부종, 발적 또는 발열 등이 일어나 기능장애가 유발되기도 한다. 상기 염증을 유발하는 여러 요인에는 외상, 화상, 동상, 방사능 등에 의한 물리적 요인, 산(acid)과 같은 화학물질에 의한 화학적 요인 및 항체반응에 의한 면역학적 요인들이 있으며, 그 외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해 발생되기도 한다.
상기 염증은 정상적인 경우에는 생체 내에서 염증반응을 통하여 발병 요인을 중화시키거나 제거하고 상한 조직을 재생시켜서 정상적인 구조와 기능을 회복시키는 작용을 하지만, 염증의 정도가 일정 수준 이상이 되거나 만성화되어 만성염증과 같은 질병 상태로 진행되는 경우 문제가 된다. 임상질환 가운데 거의 모든 질환에서 염증 반응을 관찰할 수 있을 뿐만 아니라, 암발생과정(carcinogenesis)에서도 염증 반응과 관련된 효소들이 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.
최근 밝혀진 바에 의하면, 체내에서의 염증반응의 진행은 COX(cyclooxygenase) 효소 활성과 관련된 것으로 알려져 있다. 상기 COX 효소는 생체 내에 존재하는 프로스타그란딘(prostaglandin)의 생합성에 관련하는 주 효소로서(Smith 등, J. Biol.Chem., 271, 33157(1996) 참조), 두 종류의 이성 효소인 COX-1과 COX-2가 존재하는 것으로 알려져 있다. 상기 COX-1은 위 또는 신장 등과 같은 조직에 일정하게 존재하며, 정상적인 항상성을 유지하는데 관여하는 반면, 상기 COX-2는 염증이나 기타 면역 반응 시 세포분열인자(mitogen)나 사이토카인(cytokines)류에 의해 세포 내에서 일시적이고 빠르게 발현되는 효소이다. 따라서 주로 비가역적인 반응과 관련된 COX-1 억제와 관련된 부작용 없는 항염증효과를 위하여 COX-2를 선택적으로 억제할 수 있는 물질이 염증을 저해하는 효과적인 방법으로 보고되고 있다.
또 하나의 강력한 염증 매개물인 일산화질소(Nitric oxide, NO)는 NO 합성효소(NOS)에 의해 L-알기닌으로부터 생성되며, 자외선(UV)과 같은 외부 스트레스나 엔도톡신 또는 사이토카인과 같은 물질에 의해 많은 종류의 세포에서 생성된다. 상기와 같은 염증 자극들은 세포 내의 유도성 NOS(iNOS)의 발현을 증가시키고, 이를 통하여 세포 내에서 일산화질소 생성을 유도하여, 대식 세포를 활성화시킴으로써 염증 반응을 일으킬 수 있다.
따라서 최근 효과적인 염증 완화를 위하여, COX-2 및 iNOS를 억제할 수 있는 물질에 대한 연구가 진행되고 있다. 그러나 이러한 연구에 의해 개발된 항염물질의 경우 몇 가지 부작용이 문제되고 있다. 일례로, 급성 또는 류마티스성 관절염과 같은 만성의 염증 질환의 치료에 사용되는 비스테로이드성 소염 약물들은 COX-2 효소를 억제할 뿐만 아니라 COX-1 효소도 억제함으로써 위장관 장애와 같은 부작용을 나타내는 것으로 알려져 있다.
한편, 일상생활에 사용되는 화장품은 피부를 보호하고 미화 청결을 위해 사용되는 제품이지만 화장품 조성물을 살펴보면 피부 보호 목적과는 상이한 성분들이 제품 형성에 필수 불가결한 존재로서 사용된다. 예를 들어, 계면활성제, 방부제, 향료, 자외선 차단제, 색소 및 기타 효능이나 효과를 부여하기 위해 쓰이는 여러 가지 성분들을 들 수 있다. 상기 화장품 제조에 필수적으로 사용되는 성분은 일반적으로 피부에 염증이나, 뾰루지 또는 부종 등과 여러 가지 부작용을 발생하는 것으로 알려져 있다.
또한, 체내로부터 배출되는 피지 성분, 땀 성분 및 화장품 성분 중의 지방산, 고급 알코올, 단백질 등이 피부 상에 존재하는 피부상재균들에 의해 독성이 강한 물질로 분해되면, 이들에 의해 피부 염증이 유발될 수도 있으며, 태양으로부터 나오는 자외선에 의해서도 피부 염증이 유발된다는 것은 잘 알려진 사실이다.
이렇듯 화장품에 있어서 피부 부작용 유발요인은 항상 잠재되어 있으며 이를 해결 하고자 여러 가지 연구가 진행되어 왔다. 현재까지 홍반이나 부종 같은 자극완화 및 염증 완화 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계로 플루페남산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 벤지다민(benzydamine), 인도메타신(indomethacin) 등이 있고, 스테로이드계로는 프레드니솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexamethasone) 등이 있으며, 알란토인, 아즈렌, ε-아미노키프론산, 하이드로코티존, 감초산 및 그 유도체(β-글리칠레친산, 글리칠레친산 유도체) 등이 항염증에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
그러나 일반적으로 항염제로 쓰이는 상기 인도메타신은 화장료에는 사용할 수 없는 물질이고, 상기 하이드로코티존은 사용량이 제한되어 있으며, 감초산 및 그 유도체는 안정화시키기 어렵거나 용해도가 좋지 않아 실제 적용 시 농도의 제한으로 인하여 실질적인 효과를 거두기가 어려운 점이 있는 등 지금까지 알려진 항염제는 피부안전성 면이나 화장료 배합시의 안정성 면에서 대부분 문제점을 가지고 있어서 그 사용이 제한되고 있다.
그러므로 천연물질 유래 물질로 이러한 부작용이나 세포독성에 대한 위험이 없거나 적으면서, 효과적으로 COX-2 및 iNOS를 억제할 수 있어 항염효과가 우수하여, 부작용 없이 염증을 억제할 수 있을 뿐만 아니라 그 함량의 제한 없이 화장품에 사용될 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.
특히, 최근에는 소비자들의 욕구에 부응하기 위하여 천연 원료를 이용한 화장품 또는 화장료 조성물에 대한 연구개발이 활발히 진행되고 있는 실정이다.
본 발명은 항염증 효과 뿐만 아니라 피부보습 및 피부보호 효과가 뛰어난 인체에 안전하게 작용하는 약용식물 추출물로서 타마린드 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물에 관한 것이다.
상기와 같은 요구에 부응하기 위하여, 본 발명은 부작용과 관련된 문제가 발생될 가능성이 적은 식물 추출물을 유효성분으로 하는 항염증 활성을 갖는 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 기존의 항염물질과 달리 식용으로 사용될 수 있는 천연식물에서 비롯하여 부작용 등이 문제되지 아니하고, 안전성이 우수할 뿐만 아니라, 염증과 관련된 COX-2 및 iNOS를 억제할 수 있는 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증제 또는 화장품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명에 따른 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물은 유효성분으로서 타마린드 추출물을 포함하는 것을 특징으로 한다.
상기 타마린드 추출물은 원료인 타마린드 식물의 잎을 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 이들 중 2이상의 혼합물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 추출용매로 추출된 것이 될 수 있다.
상기 타마린드 추출물은 또한 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 분획용매로 분획한 것이 될 수 있다.
상기 타마린드 추출물은 바람직하게는 분획용매로서 에틸아세테이트로 분획한 에틸아세테이트 분획물이 될 수 있다.
본 발명에 따르면, 상기한 바와 같은 항염증 활성을 갖는 조성물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증제 또는 항염증 효과를 갖는 화장품을 제공한다.
본 발명에 따르면, 항염증 효과 뿐만 아니라 피부보습 및 피부보호 효과가 뛰어난 인체에 안전하게 작용하는 약용식물 추출물로서 타마린드 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물, 항염증제 또는 항염증 효과를 갖는 화장품을 제공하는 효과가 있다.
도 1은 타마린드의 조추출물 및 분획물 별 일산화질소(NO)량 측정에 의한 항염 효능의 결과를 나타낸 그래프이다. 도 1에서 crude는 조추출물 자체를 의미하는 것이고, CH2Cl2는 메틸렌클로라이드의 분획물을 의미하는 것이고, EtOAc는 에틸아세테이트의 분획물을 의미하는 것이고, BuOH는 부탄올의 분획물을 의미하는 것이고, H2O는 물의 분획물을 의미하는 것이다.
도 2는 타마린드의 에틸아세테이트 추출물의 세포독성을 MTT 분석법(MTT assay)으로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 타마린드의 에틸아세테이트 분획물의 일산화질소(NO) 량 측정에 의한 항염 효능 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 타마린드의 에틸아세테이트 분획물의 PGE2량 측정에 의한 항염 효능 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 타마린드의 에틸아세테이트 분획물의 iNOS 단백질 발현량 및 COX-2 단백질 발현량을 웨스턴 블롯 분석법을 통하여 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐으로 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으므로, 이는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물은 유효성분으로서 타마린드 추출물을 포함하는 것을 특징으로 한다. 상기 타마린드 추출물은 일산화질소(NO) 분비를 억제할 수 있고, 염증 유발 물질인 PGE2의 발생량을 억제하며, 또한, iNOS 및 COX-2의 발현을 억제할 수 있을 뿐만 아니라, 천연물로부터 유래된 것으로 부작용이 문제될 가능성도 낮고, MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) 분석 결과 세포 독성도 없는 것으로 확인되었다. 따라서 본 발명의 항염증 활성을 갖는 조성물은 항염증제의 유효성분 또는 염증을 억제하기 위한 목적으로 화장료 조성물의 유효성분으로 제공될 수 있다. 본 발명자들은 타마린드 추출물이 염증을 직접적으로 유도할 수 있는 일산화질소의 분비를 억제할 수 있고, 상기 일산화질소의 분비 및 염증을 유발하는 프로스타글란딘 생성과 관련된 iNOS 및 COX-2의 발현을 억제할 수 있다는 결과를 통하여 타마린드 추출물이 항염 효과가 우수하다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
상기 타마린드(Tarindus indica)는 콩과(Leguminosae)의 상록교목으로서 북아프리카 원산이며, 인도나 인도네시아의 건조 열대지역에 분포 되어 있으며, 높이 약 20m이다. 꽃은 5월 상순에서 9월 중순에 피는데, 총상꽃차례에 5 내지 12개의 꽃이 달리며, 노란색 바탕에 자줏빛이 섞인 붉은 줄이 있고, 뒷면은 흰색이다. 잎은 어긋나는데, 깃털 모양의 겹입이며, 잔 잎은 길이가 약 2㎝이다. 꽃잎은 5개 중에서 2개가 퇴화한다. 열매는 길이 약 20㎝, 나비 약 2.5㎝이고 외과피는 얇다. 중과피는 끈적임이 있고, 두꺼우며, 짙은 갈색이고, 납작한 종자가 들어 있다. 열매는 협과로서 길이 10 내지 20㎝이고, 2 내지 4월에 익으며, 벌어지지 않는다. 번식은 종자와 꺾꽂이로 한다. 인도나 인도네시아에서는 공원수나 가로수로 이용된다. 어린 식물 잎, 꽃은 채소로 이용되며, 필리핀에서는 잎으로 만든 허브차를 말라리아열을 내리는데 전통적으로 사용하였다. 열매는 생식 외에 음료, 조미료, 약재로 쓴다. 성숙한 열매의 과육에 전화당이 30% 정도, 펙틴과 그 밖의 유기산이 15% 정도 들어 있다. 인도에서는 어린이들의 완하제, 괴혈병 치료, 카레의 조미료, 청량음료의 재료 등으로 사용되었다.
상기 타마린드 추출물은 통상의 식물 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있으며, 일례로 타마린드의 꽃, 잎, 가지, 뿌리, 열매 또는 껍질이나, 이의 분쇄물, 바람직하게는 타마린드의 잎에 추출용매를 가하여 추출함으로써 제조하거나, 추출용매로 추출하여 제조한 조추출물에 분획용매를 가하여 분획하여 제조된 것일 수 있다. 상기 추출용매는 물 또는 유기용매로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 것이 될 수 있다. 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 상기 알코올 희석수, 에틸아세테이트 또는 아세톤 등의 극성용매와 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄의 비극성용매 또는 이들의 혼합용매가 될 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 5의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소프로판올 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 알코올 희석수는 알코올을 50 내지 99.9용적/용적(v/v)%로 물에 희석한 것일 수 있다. 본 발명의 타마린드 추출물의 추출용매는 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 알코올 희석수 또는 이들 중 2이상의 혼합물로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 것이 될 수 있고, 더욱 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들 중 2이상의 혼합물로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 것이 될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 75 내지 99% 메탄올 수용액이 될 수 있다. 상기 추출과정은 일례로, 4 내지 120℃, 또는 50 내지 90℃, 또는 60 내지 80℃에서 수행될 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 또한, 상기 추출시간은 특별히 한정되지는 않으나, 10분 내지 12 시간일 수 있다. 본 발명의 타마린드 추출물은 통상의 식물 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있으며, 구체적으로는 냉침추출법, 온침추출법, 열 추출법, 초음파 추출법 등일 수 있으며, 통상의 추출기기, 초음파분쇄 추출기 또는 분획기를 이용할 수 있으나, 본 발명이 이들에 제한되는 것은 아니다. 또한, 상기 추출물의 제조방법들은 당업자에게는 용이하게 이해될 수 있는 것임은 물론 추출기기, 초음파분쇄 추출기 또는 분획기들 역시 당업자로서는 국내외 유수의 제조업자들에 의해 상용적으로 공급되는 것을 구입하여 사용할 수 있을 정도로 공지된 것임은 이해될 수 있는 것이다.
또한, 상기 추출용매로 추출한 추출물은 이후, 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 물 또는 이들 중 2이상의 혼합물로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 분획용매, 바람직하게는 분획용매로서 헥산 또는 메틸렌클로라이드 또는 에틸아세테이트로 분획하는 분획과정을 더욱 실시할 수 있다. 상기 분획 시, 분획용매는 2종 이상 사용할 수 있으며, 용매의 극성에 따라 순차적으로 사용하거나 혼합하여 사용하여, 각 분획용매들에 대한 분획물들을 제조할 수 있다. 또한, 상기 분획과정은 일례로, 4℃ 내지 120℃, 또는 50℃ 내지 90℃, 또는 60℃ 내지 80℃에서 수행될 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
상기한 바에 따라 수득되는 추출물 또는 상기 분획물들은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 구체적으로 상기 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 상기 농축은 감압 농축기, 일례로 회전 증발기를 이용하여 감압 농축할 수 있으며, 상기 건조는 일례로 동결건조법으로 수행할 수 있다.
본 발명의 타마린드 잎 에탄올 추출물의 분획물들에 대하여 실험을 수행한 결과, 에틸아세테이트 분획물이 일산화질소의 생성 저해율이 가장 컸으며, 에틸아세테이트 분획물 50㎍/㎖를 처리한 경우, 세포 내 실험에서 LPS(Lipopolysaccharide ; 지질다당체)에 의해 유도된 일산화질소와 PGE2 생성을 억제하였으며, iNOS와 COX-2 단백질 발현을 억제하였다. 한편, 타마린드 잎 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 MTT 분석결과 50㎍/㎖의 농도를 처리한 경우에도 세포 독성이 없는 것으로 확인되었다.
따라서 본 발명에 따른 상기 항염증 활성을 갖는 조성물은 염증을 억제하거나 염증을 치료 또는 예방하기 위하여 사용될 수 있다. 상기 염증은 일반적인 염증질환을 포함하는 개념이며, 일례로 상기 염증질환은 각종 피부염, 알레르기, 전신성 홍반성, 낭창, 망막염, 위염, 간염, 장염, 췌장염 및 신장염들로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 것일 수 있고, 상기 알레르기는 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 알러지성 결막염, 알러지성 피부염, 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 접촉성 피부염, 두드러기(urticaria), 곤충 알러지, 식품 알러지 및 약품 알러지를 포함한다. 따라서, 본 발명의 항염증 활성을 갖는 조성물은 염증질환의 치료 또는 예방용 조성물로 응용되거나, 상기 염증질환의 예방 또는 개선용 식품조성물로 응용될 수 있다. 상기 식품조성물은 일례로 상기 염증질환의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품 조성물일 수 있다. 상기 건강기능식품은 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나, 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절 기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다. 본 발명의 염증질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물은 상기 타마린드 추출물을 전체 식품 중량의 0.001 내지 15 중량% 포함될 수 있다. 상기 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용될 수 있다. 상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하고, 소화기관, 배설기관 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하며, 바람직하게는 포유류, 더욱 바람직하게는 인간일 수 있다. 상기 타마린드 추출물은 상기 항염증 활성을 갖는 조성물 내에 단독으로 사용될 수 있으며, 그 외 약리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다. 보다 상세하게는, 상기 타마린드 추출물을 포함하는 조성물이 약제로 사용되거나, 의약 또는 약학적 용도로 사용되는 경우, 상기 타마린드 추출물은 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합하거나 희석제로 희석하여 사용될 수 있다. 이 경우, 상기 조성물 내 타마린드 추출물의 함량은 0.001 중량 % 내지 99.9 중량 %, 0.1 중량% 내지 99 중량% 또는 1 중량% 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 조성물의 사용태양 및 사용방법에 따라 상기 화합물의 함량은 바람직한 함량으로 적절히 조절하여 사용될 수 있다. 상기 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수 또는 이들 중 이상의 혼합물로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 것이 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다. 또한, 상기 약학 조성물은 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, pH 조절제, 영양제, 비타민, 전해질, 알긴산 및 그의 염, 펙트산 및 그의 염, 보호성 콜로라이드, 글리세린, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 타마린드 추출물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다. 또한, 본 발명의 항염증 활성을 갖는 조성물은 상기 유효성분 이외에 공지의 항염효과가 있는 것으로 인정된 물질, 일례로 COX-2 저해제, 일산화질소 저해제 또는 항염증제 등으로 사용되는 물질을 더욱 포함할 수 있다.
상기 조성물이 약제로 사용하는 경우, 투여방법은 경구 또는 비경구 모두 가능하며, 일례로는 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다.
또한, 상기 조성물의 제형은 사용방법에 따라 달라질 수 있으며, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 일반적으로는, 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제(TABLETS), 알약, 연질 또는 경질 캅셀제(CAPSULES), 환제(PILLS), 산제(POWDERS) 및 과립제(GRANULES) 등이 포함되고, 이러한 제제는 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제(SUSTESIONS), 내용액제, 유제(EMULSIONS) 및 시럽제(SYRUPS) 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구투여를 위한 형태는 크림(CREAM), 로션제(LOTIONS), 연고제(ONITMENTS), 경고제(PLASTERS), 액제(LIQUIDS AND SOULTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 유동엑스제(FRUIDEXTRACTS), 엘릭서(ELIXIR), 침제(INFUSIONS), 향낭(SACHET), 패취제(PATCH) 또는 주사제(INJECTIONS) 등의 형태일 수 있다.
더 나아가, 본 발명의 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 제형화될 수 있다.
상기 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 환자의 중증도, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성률 및 병용되는 약물을 고려하여 결정할 수 있으며, 일례로 1일 유효성분을 기준으로 하였을 때, 체중 1㎏ 당 0.1 내지 500㎎, 바람직하게는 체중 1㎏ 당 0.1 내지 400㎎, 보다 바람직하게는 체중 1㎏ 당 0.1 내지 300㎎의 범위 이내의 양으로 투여할 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명은 또한, 상기 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물을 유효성분으로 포함하는 항염증제를 제공한다.
상기 타마린드 추출물은 바람직하게는 타마린드 잎 에탄올 추출물, 더욱 바람직하게는 타마린드 잎 에탄올 추출물의 헥산 분획물, 메틸렌클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 물 분획물들로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 것이 될 수 있다.
상기 항염증제는 상기 유효성분을 단독으로 포함할 수 있으며, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 혼합물로 제공되는 경우, 상기 유효성분은 항염증제 전체에 대해 0.1 내지 99.9중량%로 포함될 수 있으나, 통상 0.001 내지 50 중량%의 함량으로 포함되는 것이 일반적이다.
상기 항염제는 류마티스 관절염, 루푸스, 다발성 경화증과 같은 각종 만성 염증 질환, 패혈증, 쇼크, 장기이식의 거부반응과 같은 각종 급성 염증 질환, 안과질환, 기관지염, 또는 염증성 장질환의 예방 및 치료의 목적으로 사용가능하다.
상기 담체 또는 부형제의 일례로는 물, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 락토스, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수, 덱스트로스, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 담체 또는 부형제는 2종 이상 사용될 수 있다.
또한 항염증제를 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있다.
또한 본 발명의 항염증제는, 타마린드 추출물 이외에 공지의 항염활성을 갖는 화합물 또는 식물 추출물을 더욱 포함할 수 있으며, 타마린드 추출물 100 중량부에 대하여 각각 5 내지 20중량부의 범위 이내의 양으로 포함될 수 있다.
상기 항염증제의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 경고제, 과립제, 로션제, 리니멘트제, 리모나데제, 산제, 시럽제, 안연고제, 액제, 에어로솔제, 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제, 연고제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 전제, 침제, 점안제, 정제, 좌제, 주사제, 주정제, 캅셀제, 크림제, 환제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다.
본 발명에 따른 상기 항염증제는 경구 또는 비경구로 사용될 수 있으며, 예컨대 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하내, 코안, 경막외 및 구강경로를 통하여 사용될 수 있으며, 이의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 좋다. 일례로, 본 발명의 항염증제는 유효성분을 기준으로 하였을 때 1일 체중 1㎏ 당 0.1 내지 100㎎으로 1회 이상 투여가능하다. 그러나 상기한 투여량은 예시하기 위한 일례에 불과하며 상기 범위에 한정되지는 않는다.
본 발명은 또한, 상기 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
상기 타마린드 추출물은 식용으로 사용되던 천연물질 유래이므로 부작용이 문제되지 아니하고, 세포독성도 없을 뿐만 아니라, 염증 억제 효과가 뛰어나기 때문에 항염 및 항자극 활성이 뛰어나므로, 화장품에 포함된 성분들에 의해 유도되는 염증 및 외부 환경에 의해 유도되는 염증을 효과적으로 제어할 수 있기 때문에, 상기 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물은 염증 개선 및 완화효과를 갖는 화장료 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다.
상기 타마린드 추출물은 타마린드 잎 에탄올 추출물, 바람직하게는 타마린드 잎 에탄올 추출물의 헥산 분획물, 메틸렌클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 물 분획물로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 것, 더욱 바람직하게는 타마린드 잎 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 기초 화장료, 메이크업 화장료, 바디 화장료, 두발용 화장료, 두피용 화장료, 면도용 화장료 또는 구강용 화장료의 용도로 제공될 수 있다.상기 기초 화장료의 예로는 크림, 화장수, 팩, 마사지 크림, 유액 등이 있고, 상기 메이크업 화장료의 예로는 파운데이션, 메이크업 베이스, 립스틱, 아이섀도, 아이라이너, 마스카라, 아이브로우 펜슬 등이 있으며, 상기 바디 화장료의 예로는 비누, 액체 세정제, 입욕제, 선스크린 크림, 선 오일 등이 있고, 상기 두발용 화장료의 예로는 샴푸, 린스, 헤어 트리트먼트, 헤어 무쓰, 헤어 리퀴드, 포마드, 헤어 칼라제, 헤어 블리치제 또는 칼라린스 등이 있으며, 상기 두피용 화장료의 예로는 헤어 토닉 또는 스칼프 트리트먼트 등이 있고, 상기 면도용 화장료의 예로는 애프터셰이브로션 또는 셰이빙 크림 등이 있으며, 상기 구강용 화장료의 예로는 치약 또는 마우스 워셔 등이 있다.
상기 화장료 조성물에는 유효성분 외에 사용용도 및 화장료 조성물의 성질에 따라 통상 화장료 조성물에 배합되고 있는 성분, 일례로 보습제, 자외선 흡수제, 비타민류, 동식물 추출성분, 소화제, 미백제, 혈관확장제, 수렴제, 청량제, 호르몬제 등을 추가로 배합될 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 약물 또는 유효성분을 피부조직으로 침투 또는 이행시키기 위해서 필요한 기제를 추가로 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형은 사용용도 및 화장료 조성물의 성질에 따라 적절한 형태를 취할 수 있으며, 일례로 수용액계, 가용화계, 유화계, 유액계, 겔계, 페이스트계, 연고계, 에어졸계, 물-기름 2층계 또는 물-기름-분말 3층계일 수 있으며, 상기 제형의 예는 단순한 예시일 뿐, 상기 예시에 의해 본 발명의 화장료 조성물의 제형 및 형태가 제한되는 것은 아니다.
상기 유효성분은 상기 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 0.001 내지 50중량%로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.01 내지 20중량%일 수 있으나, 상기 함량은 제형 또는 화장료 조성물에 함유되는 유효성분 외의 성분의 함량에 따라 적절히 조절할 수 있으며, 상기 함량에 의해 본 발명에 포함되는 유효성분의 함량이 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따르면, 상기한 바와 같은 항염증 활성을 갖는 조성물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증제 또는 항염증 효과를 갖는 화장품을 제공한다.
이하에서 본 발명의 바람직한 실시예 및 비교예들이 기술되어질 것이다.
이하의 실시예들은 본 발명을 예증하기 위한 것으로서 본 발명의 범위를 국한시키는 것으로 이해되어져서는 안될 것이다.
실시예 1 내지 6. 타마린드 조추출물 및 분획물들의 제조
타마린드(Tamarindus indica)의 잎 100g을 에탄올 10L에 침지한 후, 온침 추출법으로 추출하였다.
보다 구체적으로 상기 타마린드 잎 500g에 에탄올 50ℓ를 가하여 추출용매에 완전히 침지시킨 후, 70℃에서 환류시키면서 추출하여 조추출물(실시예 1)을 수득하였다. 상기 조추출물을 감압농축기를 이용하여 감압 농축한 뒤, 물을 넣어 현탁하여 헥산(hexane)을 첨가하고 분획하여 헥산층만을 분리함으로써 헥산 분획액을 제조하고, 상기 헥산층을 분리하고 남은 나머지 용액(물층)에 동일한 양의 메틸렌클로라이드(methylenechloride)를 첨가하고 분획하여 메틸렌클로라이드층만을 분리함으로써 메틸렌클로라이드 분획액을 제조하고, 상기 메틸렌클로라이드층을 분리하고 남은 나머지 용액(물층)에 동일한 양의 에틸아세테이트를 첨가하고 분획하여 에틸아세테이트층만을 분리함으로써 에틸아세테이트 분획액을 제조하고, 상기 에틸아세테이트층을 분리하고 남은 나머지 용액(물층)에 동일한 양의 부탄올(butanol)을 첨가하고 분획하여 부탄올층만을 분리함으로써 부탄올 분획액을 제조하고, 나머지 용액을 물(water) 분획액으로 사용하였다. 상기 분획을 통해 제조된 각 용매별 타마린드 분획액들을 각각 감압농축기를 이용하여 감압 농축한 뒤, -20℃에서 동결건조하여 분획물들(헥산 분획물(실시예 2), 메틸렌클로라이드 분획물(실시예 3), 에틸아세테이트 분획물(실시예 4), 부탄올 분획물(실시예 5), 물 분획물(실시예 6))을 제조하였다. 상기 수득한 조추출물 및 분획물들은 실험에 사용하기 전까지 냉동보관하였다.
실험예 1. 세포 독성 실험
본 실험예에서는 쥐의 대식세포인 RAW 264.7 세포에 24시간 동안 타마린드 잎의 조추출물(실시예 1) 및 각 분획물(실시예 2 내지 6)들을 5- 100㎍/㎖의 농도로 처리하여 MTT assay로 세포 사멸능(증식능)을 조사하였다.
RAW 264.7 세포는 DMEM 배지에 10% FBS, 1% 페니실린 스트렙토마이신을 첨가한 배양액을 사용하여, 37℃의 습윤한 이산화탄소(CO2) 배양기에서 배양하였다. 세포가 배양 접시의 70 내지 80% 정도 차면, PBS(phosphate-buffered saline, pH 7.4)로 세포의 단층을 씻어낸 후, 세포를 계대 배양하였고, 배지는 2일마다 교환하였다.
상기와 같이 배양한 RAW 264.7 세포를 10% FBS를 첨가한 DMEM에 희석하여 (1× 106 세포들/웰)의 밀도로 6웰-플레이트에 분주하였다. 24시간 배양한 후, 1% FBS가 포함된 SDM(serum-deprivation medium)으로 24시간 동안 추가 배양하였다. 이 후, 50㎍/㎖ 농도의 타마린드 잎의 조추출물 및 각 분획물들이 포함된 SDM으로 교환하고, 24시간 경과한 후, MTT assay 방법으로 살아있는 세포의 수를 측정하였다.
상기 실시예들의 타마린드 조추출물 및 각 분획물들을 용해시키기 위한 용매로는 세포 생존에 별다른 영향을 미치지 않는 것으로 확인된 디메틸술폭사이드(DMSO)를 사용하였다. 상기 MTT 분석을 위하여, 각 시간대 별로 세포배양 배지를 제거한 후, MTT를 1㎎/㎖로 포함하는 DMEM/F12 배지를 웰 당 1㎖씩 처리하고, 37℃ 습윤한 이산화탄소 배양기에서 3시간 더 배양하였다. 이후 배지를 제거한 후, 0.5㎖ 이소프로판올을 첨가하여 포르마잔 크리스탈을 용해시키고, 마이크로 플레이트리더(BIO-RAD)에서 570㎚ 파장으로 흡광도를 측정하여 세포생존율을 확인하였다. 24시간 동안 타마린드 추출물로 처리한 결과를 도 1에 나타내었다.
상기 도 1에 나타낸 바와 같이, 24시간을 처리한 경우에도, 아무런 시료를 처리하지 않은 대조예와 LPS와 함께 상기 실시예 1 내지 6들에서 제조된 타마린드 조추출물 및 각 분획물들을 다양한 농도로 처리한 경우, 모두 세포의 증식에 별다른 영향을 나타내지 않는 것으로 확인되었다. 따라서, 상기 결과로부터 타마린드 추출물은 50㎍/㎖까지는 세포독성이 없는 것으로 확인되었다.
실험예 2. 일산화질소( NO ) 량 측정에 의한 항염 효능 평가
본 발명에 따른 상기 실시예 1의 조추출물 및 실시예 2 내지 6들의 각 분획물들이 50㎍/㎖의 농도에서 대식세포에 증식에 아무런 영향을 주지 않았으므로, 본 실험예에서는 이 범위 내에서 항염 효능을 탐색하고자 하였다.
Raw264.7 세포를 실시예 1에서와 같이 상기 실시예 1의 조추출물 및 실시예 2 내지 6들의 각 분획물들에 LPS가 첨가된 배양액에서 24시간 배양한 후, 배지를 수집하여 일산화질소의 분비량을 ‘그리스 시약 시스템(Griess reagent system) ; Promega)‘을 이용하여 측정하였다.
측정 결과, LPS 처리 시 일산화질소가 증가하였고, 본 발명에 따른 상기 실시예 1의 조추출물 및 실시예 2 내지 6들의 각 분획물들의 처리에 의해 증가한 일산화질소가 감소함이 확인되었다(도 1). 분획물들 중에서는 실시예 4의 에틸아세테이트(EtOAc) 분획이 가장 효과가 좋았고, 이 에틸아세테이트 분획물을 대상으로 일산화질소 억제율을 평가한 결과, 농도 의존적으로 감소함이 확인되었다(도3).
실험예 3. PGE 2 생성량 측정
본 발명에서는 많은 다른 악성 및 만성 염증질환에서 잘 알려진 전염증성 중재자인 프로스타글란딘 E2(PGE2)의 생성에 있어 본 발명에 따른 상기 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물(50㎍/㎖)의 LPS에 의해 활성화된 대식세포에서 프로스타글란딘 E2(PGE2)의 생성 억제효능을 평가하였다.
Raw264.7 세포 배양액 내의 PGE2 양을 측정하기 위해 경쟁적 효소면역분석킷트(commercial competitive enzyme immunoassay kit ; R&D systems 미합중국 미네아폴리스(Minneapolis, USA) 소재)에서 구입하여 실험하였다. 세포에 본 발명에 따른 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물을 전처리하고, 1㎍/㎖의 LPS를 처리하였다. 18 시간 후, 세포 배양액을 얻어 PGE2 측정에 사용하였다. 배양액을 염소항-생쥐(goat anti-mouse)로 코팅된 96웰 플레이트에 각각 100㎕씩 적재(loading)하고, 여기에 원발성 항체 용액(primary antibody solution) 50㎕와 PGE2 컨쥬게이트(conjugate) 50㎕씩을 첨가하여 4℃에서 밤새도록 유지시켰다. 세척완충액(Washing buffer)으로 4회 세척하고 기질 용액(substrate solution)을 200㎕씩 처리하여 5분간 반응시킨 후, 50㎕의 정지액(stop solution)을 처리한 후, 450㎚에서 흡광도를 측정하였다.
측정 결과, 아라키돈선(arachidonic acid)으로부터 COX-2에 의해 생성이 유도되어 염증반응을 조절하는 것으로 알려진 PGE2의 경우, LPS 단독처리 군과 비교하여 농도 의존적으로 PGE2의 생성을 억제함으로 항염증 활성을 나타냄을 나타내었다(도 4).
실험예 4. iNOS 와 COX -2의 단백질 발현량 측정에 의한 항염 효능 조사
실험예 2와 3들로부터 일산화질소 및 PGE2가 감소함을 확인하였으므로, 본 실험예에서는 염증반응과 관련된 단백질인 iNOS와 COX-2의 발현을 조사하고자 하였다. 샘플로는 본 발명에 따른 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물을 사용하였다.
RAW264.7 세포를 1× 106 세포들/웰의 밀도로 6 웰-플레이트에 분주하였다. 24시간 배양 후, SDM으로 배지를 교환하였다. 상기 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물을 다양한 농도로 첨가하여 3시간 전 처리한 후 LPS를 1㎍/㎖의 농도로 처리하였다. 18시간 후, 세포를 찬 PBS(1mmol/ℓ 요오드아세트산(iodoacetic acid)과 1mmol/ℓ 페닐메틸설포닐플루오라이드(phenylmethylsulfonylfluoride ; PMSF) 포함)로 헹구고, 스크래퍼(scraper)로 세포를 수집하여 원심분리 (2,000rpm, 2분, 4℃) 하였다. 펠렛에 라이시스 버퍼(20mmol/ℓ 헤페스(Hepes), pH 7.5, 1% 트리톤 엑스(Triton X)-100, 150mmol/ℓ NaCl, 1mmol/ℓ EDTA, 1mmol/ℓ EGTA, 100mmol/ℓ NaF, 10 mmol/ℓ 요오드아세트산, 0.2mmol/ℓ PMSF, 20㎎/ℓ aprotinin, 10㎎/ℓ 안티페인(antipain), 10㎎/ℓ 리펩틴(lepeptin), 80㎎/ℓ 벤즈아미딘 염산염(benzamidine HCl))를 첨가하여 4℃에서 40분간 교반하여 세포를 용해시킨 후, 원심 분리하여 상층액을 취하여 -70℃에 보관하였다. 용해물(Lysate, 50㎍ 단백질)을 10% SDS-PAGE로 분리하여 폴리비닐리덴 플루오라이드 막(PVDF ; polyvinylodene fluoride membrane)에 이동시켰다. 얻어진 멤브레인은 5% 무지방유(non-fat milk)-TBST(20mmol/ℓ 트리스 염산염(Tris· HCl), pH 7.6, 150mmol/ℓ NaCl, 0.1% 트윈 20)에서 1시간 동안 브라킹(blocking)한 다음, TBST로 10분간 3회 헹구었다. 멤브레인에 COX-2, iNOS 항체를 첨가하여 4℃에서 24시간 배양시킨 후, TBST로 10분간 3회 헹구었다. 그 후 멤브레인을 고추냉이 퍼옥시다아제(HRP ; horseradish peroxidase)-결합 항-래빗(rabbit)이나 고트(goat) 면역글로블린(IgG)를 첨가하여 1시간 배양한 후, TBST로 10분간 3회 헹구었다. 항체에 결합한 단백질들의 시그날은 이모빌론 웨스턴 케미루니네슨트(Immobilon Western Chemiluminescent) HRP 기질을 이용하여 밴드를 가시화하였다.
측정 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 염증과 관련이 없는 베타-액틴(β-actin)의 경우, 모든 실험군에서 유사한 정도의 밴드가 확인되어, 상기 밴드로부터 LPS 및 본 발명에 따른 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물의 첨가가 세포 생존과 관련이 없으며, 염증과 관계없는 대부분의 단백질의 발현에는 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었다.
상기 염증과 관련된 iNOS 및 COX-2 단백질 발현여부를 확인한 결과, LPS를 첨가하지 않은 대조군에서는 상기 단백질들이 발견되지 아니하였으나, LPS를 첨가한 경우에는 iNOS와 COX-2 단백질의 발현이 급격히 증가하는 것으로 확인되었다. 또한, 본 발명의 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물을 첨가한 경우에는 iNOS와 COX-2 단백질의 발현량이 감소하는 것이 확인되었고, 특히 iNOS의 경우에는 50㎍/㎖를 첨가한 경우부터는 현저하게 단백질 발현량이 감소하는 것이 확인되었다.
상기 결과로부터, 본 발명에 따른 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물은 염증 관련 단백질, 특히, iNOS의 발현을 억제하여, 염증을 저해할 수 있을 뿐만 아니라, COX-2의 발현도 저해하여 항염효과가 있는 것으로 확인되었다(도 5).
상기 실험결과에 의하면, 본 발명에 따른 실시예 1의 조추출물 내지 실시예 2 내지 6의 각 분획물들은, MTT 분석결과, 세포독성이 전혀 없는 것으로 확인되었고, 항염효과와 관련하여 염증을 유발하는 다양한 메카니즘을 검토하면 일산화질소에 의해 유발되는 염증과 관련된 결과(NO의 분비량, NO 생성과 관련된 iNOS의 발현량), COX-2에 의해 유발되는 염증과 관련된 결과(COX-2의 발현량)를 고려하면, 매우 효과적으로 염증을 저해할 수 있을 것으로 확인되었고, 특히 타마린드 잎 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획은 항염효과가 매우 뛰어난 것으로 확인되었으므로, 본 발명의 타마린드 추출물 특히, 타마린드 잎 에탄올 추출물과 이의 에틸아세테이트 분획물은 기존 염증 치료제를 대체할 수 있을 뿐만 아니라, 기존 화장품에 사용되는 성분으로 인한 염증 발생을 적절하게 제어할 수 있어 화장료 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
이하에서는 본 발명에 따라 제조될 수 있는 화장료조성물들의 구체적인 처방을 예시적으로 나타내었으나, 상기 영양크림을 포함하여 하기의 처방들로 본 발명이 제한되는 것으로 의도되는 것이 아님은 당업자에게는 이해될 수 있는 것이며, 다른 적절한 화장료조성물들로 처방, 제조될 수 있음은 이해될 수 있으며, 이들 역시 본 발명의 관점의 범주 내에 속하는 것으로 이해되어야만 한다.
제조예 1 : 영양크림의 제조
하기 표 1의 조성(중량%)에 따라 수상과 유상을 구분하여 계량한 후, 80± 2℃에서 따로 혼합, 용해하고, 유상을 수상에 넣으며 혼합하였다. 이어서 중화제인 원료 11를 투입하여 중화시킨 후, 45℃까지 냉각시켰다. 냉각 후, 원료 12을 투입하고 35℃까지 냉각시켜 영양크림을 제조하였다. 원료 2인 실시예 4의 분획물은 본 발명에 따른 상기 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물이다.
구분 원료명 중량
수


상		 1 정제수 잔량
2 실시예 4의 분획물 5.0
3 디소듐이이디티에이 0.05
4 하이알루론산 추출물 6.00
5 글리세린 3.00
6 카보머 0.20
유

상		 7 천연방부제 0.5
8 레시틴 1.00
9 마카데미아넛오일 4.00
중
화		 11 트리에탄올아민 0.15
향 12 향료 0.2
제조예 2 : 유연 화장수의 제조
하기 표 2의 조성(중량%)에 따라 수상과 에탄올상을 구분하여 계량한 후, 따로 혼합, 용해시키고, 에탄올상을 수상에 넣으며 혼합하였다. 이어서 첨가제를 넣고 혼합하였다. 이를 멤브레인 필터(대한민국 소재 삼덕여과상사, 페이퍼필터)를 사용하여 여과하여 유연화장수를 제조하였다.
구분 원료명 중량
수
상		 1 정제수 잔량
2 실시예 4의 분획물 5.0
3 글리세린 1.00
4 소듐피씨에이액 3.00
알
코
상		 5 변성알코올 4.00
6 천연방부제 0.3
첨
가
제		 7 향료 0.08
제조예 3 : 영양 화장수의 제조
하기 표 3의 조성(중량%)에 따라 수상과 유상을 구분하여 계량한 후, 80± 2℃에서 따로 혼합, 용해하고, 유상을 수상에 넣으며 혼합하였다. 이어서 중화제인 원료 13를 투입하여 중화시킨 후, 45℃까지 냉각시켰다. 냉각 후, 원료 14을 투입하고 35℃까지 냉각시켜 영양 화장수를 제조하였다.
구분 원료명 중량
수


상		 1 정제수 잔량
2 실시예 4의 분획물 5.0
3 카보머 0.15
4 디소듐이이티에이 0.02
5 부틸렌글리콜 1.00
유


상		 6 천연방부제 0.5
7 마카데미아넛오일 2.00
8 미네랄오일 4.00
9 디메티콘 2.00
11 소르비탄세스퀴올리에이트 0.40
12 폴리소르베이트 60 1.60
중
화		 13 트리에탄올아민 0.15
향 14 향료 0.15
본 발명은 화장품 및 의약부외품 등을 제조하는 산업 등에서 이용될 수 있다.
이상에서 본 발명은 기재된 구체예에 대해서만 상세히 설명되었지만 본 발명의 기술사상 범위 내에서 다양한 변형 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속함은 당연한 것이다.
(도면 부호 없음)

Claims (6)

  1. 유효성분으로서 타마린드 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 타마린드 추출물이 원료인 타마린드 식물의 잎을 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 이들 중 2이상의 혼합물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 추출용매로 추출된 것임을 특징으로 하는 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서,
    상기 타마린드 추출물이 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 분획용매로 분획한 것임을 특징으로 하는 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물.
  4. 제 3 항에 있어서,
    상기 타마린드 추출물이 분획용매로서 에틸아세테이트로 분획한 에틸아세테이트 분획물임을 특징으로 하는 타마린드 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물.
  5. 청구항 제 1 항 내지 제 4 항들 중의 어느 한 항에 따른 항염증 활성을 갖는 조성물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증제.
  6. 청구항 제 1 항 내지 제 4 항들 중의 어느 한 항에 따른 항염증 활성을 갖는 조성물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증 효과를 갖는 화장품.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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