KR20230134094A - 천일국 추출물을 포함하는 피부질환의 예방, 개선, 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 천일국 (Echinacea purpurea) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방, 개선, 및/또는 치료용 조성물 등에 관한 것으로서, 천일국 추출물이 피부 노화 및 피부암을 포함한 다양한 피부 질환의 예방 및 치료 용도로 사용될 수 있음을 확인하여 완성된 것이다. 본 발명에 따른 천일국 추출물은 자외선으로 유도되는 COX-2의 발현을 효과적으로 억제할 뿐만 아니라, 대표적인 암 예방 효소인 Heme oxygenase-1의 발현을 촉진하는 것으로 확인되었다. 즉, 천일국 추출물은 자외선으로 인한 피부 염증을 억제하고, 항암 단백질의 발현을 증가시킬 수 있으므로, 피부염, 광노화, 피부암, 주름 등 다양한 피부질환의 예방, 개선, 및/또는 치료에 활용될 수 있다.

Description

천일국 추출물을 포함하는 피부질환의 예방, 개선, 또는 치료용 조성물 {Composition comprising Echinacea purpurea extract for preventing, alleviating, or treating skin diseases}

본 발명은 천일국 추출물을 포함하는 피부질환의 예방, 개선, 및/또는 치료용 조성물 등에 관한 것이다.

화장품 분야에서 동아시아 여성들 특히 한국, 일본, 중국의 여성들에게 피부 노화와 관련된 화장품은 큰 관심을 받고 있다. 피부 노화란 성장기가 끝나면서부터 점진적으로 진행되는 모든 생리학적 현상이라 할 수 있는데, 가장 대표적인 피부 노화 증상은 주름이다. 과학의 발달로 현대인들은 생명을 연장시키고 이에 따라 길어진 노년기 동안에 외모를 젊게 하기 위하여 새로운 활성성분 개발이나 주름제거술 등에 주목하고 있지만, 여러 가지 부작용 등에 노출되고 있는 상황이다.

화장품 분야에서는 주름 개선을 위한 비타민 A인 레티놀 및 레티노이드에 대한 광노화 개선이 연구의 핵심이 되고 있으며, 나아가 주름생성의 근본적인 기작 규명 및 이를 방지하기 위한 분자생물학적 연구도 활발히 진행되고 있다. 또한 전 세계적으로 주름개선 제품에 대한 소비자의 관심이 집중됨에 따라 화장품업계에의 최대 관심이 집중되고 있는 연구 분야이다. 주름의 주원인은 피부 노화로 노화에는 크게 자연노화와 광노화의 두 가지 경우로 나누어 볼 수 있다. 자연노화의 경우, 신체가 노화됨에 따라 세포재생 능력도 저하되어 콜라겐이나 엘라스틴 등 탄력섬유가 감소하고, 활성산소가 축적되어 생체 구성물질의 산화에 따른 변성 등이 발생하면서 주름이 생긴다. 광노화 (photoaging)는 태양광선, 특히 자외선에 의해 피부가 손상되면서 촉진되는 노화를 지칭한다. 특히, 광노화는 주름을 형성할 뿐만 아니라 기미, 주근깨 등의 색소침착, 건조증, 모세혈관 확장증, 피부염 등을 일으킬 수 있으며 심각하게는 피부암을 유발할 수도 있다.

특히, 최근에는 “inflammatory”와 “aging”의 합성어로 “Inflammaging”이라는 새로운 개념이 되두되고 있다. 이는 UV와 같은 광 스트레스에 의해 유도된 염증성 반응이 노화와 관련이 있다는 발견에 기초한다. 자외선 B (ultraviolet B; UVB)에 의해 유도되는 염증반응은 prostaglandin이나 leukotriene 등과 같은 염증 매개체 (inflammatory mediator)의 생성을 수반하며, UVB 노출 조건에서 이들 eicosanoid의 생성은 phospholipase A2 (PLA2)의 발현 또는 활성 증가와 밀접한 관련이 있는 것으로 알려져 왔으나, 최근의 연구보고에 의하면 prostaglandin 생성에 있어 PLA2의 하위 단계인 cyclooxygenase-2 (COX-2)의 발현 역시 자외선 조사에 의해 야기되는 prostaglandin 생성 증가에 매우 중요한 역할을 하는 것으로 추정된다.

한편, 피부암은 대한민국을 포함하여 전 세계적으로 발생률이 현저히 증가하는 추세를 보이고 있으며, 따라서 피부암의 발생기전과 예방이 피부과학적으로 매우 중요한 연구 분야로 부상하고 있다. 피부에 만성적인 일광 조사에 의한 광발암 (photocarcinogenesis)은 최근 관심도가 높아지고 있는 분야이다. 피부암을 주로 유발하는 290-320 nm 파장의 UVB는 인체 피부에서 가장 유해한 광선이다. 자외선 B는 하이드록시 라디칼이나 초과산화물과 같은 활성산소종 (reactive oxygen species, ROS)의 생성을 유도하고 DNA를 손상시켜 피부의 산화적 스트레스 및 항산화 방어기전의 불균형을 초래하며, 염증, 광노화, 피부암 등의 피부질환을 일으킬 수 있다. 피부는 다른 조직에 비하여 세포대사나 자외선 등 외적 요인에 의한 ROS의 발생이 높기 때문에 ROS-유도성 세포손상에 취약하며, 따라서 암이 발생하기도 쉽다. 피부에서의 효소적 항산화제 (enzymatic antioxidants)에 대한 연구는 현재까지 superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), glutathione reductase (GRx) 및 peroxiredoxin (Prx)가 주를 이루고 있다. 그러나, 아직까지 피부암을 효과적으로 예방, 치료할 수 있는 화합물 내지 천연물은 발굴되고 있지 않다.

최근에는 천연물을 이용하여 이를 다양한 질환의 예방, 개선, 및 치료 용도로 사용하고자 하는 시도들이 이루어지고 있다. 이에, 피부 노화와 관련된 동물, 사람유래 각질세포 및 진피의 섬유아세포에 자외선을 조사하여 광노화를 유발시킨 후 천연물인 녹차, 홍차, 적송엽, 인삼열매, 누룩, 치자, 애엽, 황백 등의 추출물이나 분획물의 항산화, 항염 등의 피부보호 및 노화억제 효과 규명에 대한 연구가 주류를 이루고 있다. 그러나 아직까지 천일국 추출물의 피부질환의 예방, 개선, 및 치료 효과에 관해서는 보고된 바가 없다.

대한민국 공개특허공보 제10-2022-0005194호

본 발명은 상기 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 천일국 (Echinacea purpurea, 아키나시아) 추출물이 피부 노화 및 피부암을 포함한 다양한 피부 질환의 예방 및 치료 용도로 사용될 수 있음을 확인하여 완성된 것이다.

따라서, 본 발명의 목적은 천일국 (Echinacea purpurea) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물 또는 식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 국소 적용 제제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 이를 필요로 하는 개체의 피부에 적용하는 단계를 포함하는, 피부 노화를 예방 또는 개선하기 위한 피부 미용방법을 제공하는 것이다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명은 천일국 (Echinacea purpurea) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서, 상기 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물로서, 상기 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 국소 적용 제제로서, 상기 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 국소 적용 제제를 제공한다.

또한, 본 발명은 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물로서, 상기 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 식품 조성물을 제공한다. 상기 식품 조성물은 건강기능식품 조성물을 포함한다.

뿐만 아니라, 본 발명은 천일국 추출물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 피부질환의 예방, 개선, 또는 치료방법을 제공한다.

뿐만 아니라, 본 발명은 피부질환의 예방, 개선, 또는 치료를 위한 천일국 추출물의 용도를 제공한다.

뿐만 아니라, 본 발명은 피부질환의 개선, 예방, 또는 치료용 약제의 제조를 위한 천일국 추출물의 용도를 제공한다. 상기 약제는 국소 적용 제제 또는 외용제일 수 있다.

뿐만 아니라, 본 발명은 천일국 추출물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 피부 개선을 위한 미용방법을 제공한다. 상기 피부 개선은 피부 주름, 피부염, 피부 노화 개선 등을 포함하며, 바람직하게는 광노화로 인한 피부 주름, 피부염, 피부 노화 개선 등을 포함한다.

본 발명의 일 구현예서, 상기 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 다른 구현예에서, 상기 피부 노화는 자외선에 의한 피부 광노화증일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 천일국 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6개의 알코올 (alcohol), 아세톤 (acetone), 에테르(ether), 벤젠 (benzene), 클로로포름 (chloroform), 에틸아세테이트 (ethyl acetate), 메틸렌클로라이드 (methylene chloride), 헥산 (hexane), 시클로헥산 (cyclohexane), 석유에테르 (petroleum ether), 아임계 유체, 및 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매에 의한 추출물일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 천일국 추출물은 COX-2의 발현 또는 활성을 억제할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 천일국 추출물은 Heme Oxygenase-1의 발현 또는 활성을 증가시킬 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 화장료 조성물은 세럼, 화장수, 페이스트, 패치, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 크림, 마사지 크림, 영양크림, 미스트, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 핸드로션, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 오일, 파운데이션, 메이크업 베이스, 왁스, 스프레이, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 클렌징오일, 클렌징밤, 바디로션, 또는 바디클렌저 제형일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 국소 적용 제제는 크림, 젤, 로션, 파우더, 파우더 스프레이, 오일, 롤-온 제형, 연고, 폼, 스프레이, 스틱, 또는 팅쳐 (tincture) 형태일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명은 천일국 (Echinacea purpurea) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방, 개선, 및/또는 치료용 조성물 등에 관한 것으로서, 천일국 추출물이 피부 노화 및 피부암을 포함한 다양한 피부 질환의 예방 및 치료 용도로 사용될 수 있음을 확인하여 완성된 것이다. 본 발명에 따른 천일국 추출물은 자외선으로 유도되는 COX-2의 발현을 효과적으로 억제할 뿐만 아니라, 대표적인 암 예방 효소인 Heme oxygenase-1의 발현을 촉진하는 것으로 확인되었다. 즉, 천일국 추출물은 자외선으로 인한 피부 염증을 억제하고, 항암 단백질의 발현을 증가시킬 수 있으므로, 피부염, 광노화, 피부암, 주름 등 다양한 피부질환의 예방, 개선, 및/또는 치료에 활용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 구현예에 따른 천일국 추출물이 자외선 조사로 유발된 COX-2 단백질 발현에 미치는 영향을 나타낸다.
도 2는 본 발명의 일 구현예에 따른 천일국 추출물의 COX-2 단백질 발현에 미치는 영향을 효소결합 면역흡착 분석으로 확인한 결과를 나타낸다.
도 3은 본 발명의 일 구현예에 따른 천일국 추출물이 자외선 조사로 유발된 cJun (ser63, ser73) 인산화에 미치는 영향을 나타낸다.
도 4는 본 발명의 일 구현예에 따른 천일국 추출물이 자외선 조사로 유발된 p38 인산화에 미치는 영향을 나타낸다.
도 5는 본 발명의 일 구현예에 따른 천일국 추출물이 자외선 조사로 유발된 COX-2 mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸다.
도 6은 본 발명의 일 구현예에 따른 천일국 추출물이 암 예방 효소계인 HO-1 단백질의 발현에 미치는 영향을 나타낸다.

본 발명은 상기 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 천일국 (Echinacea purpurea, 아키나시아) 추출물이 피부 노화 및 피부암을 포함한 다양한 피부 질환의 예방 및 치료 용도로 사용될 수 있음을 확인하여 완성된 것이다.

구체적으로, 인간 각질세포주에 자외선을 조사하면서 본 발명에 따른 천일국 추출물을 처리한 결과, 자외선에 의한 염증 유발성 단백질 COX-2의 mRNA 및 단백질 발현이 효과적으로 억제되는 것이 확인되었다 (실시예 2).

또한, 본 발명에 따른 천일국 추출물이 처리된 각질세포주는 자외선 조사에도 불구하고 항암 단백질인 Heme oxygenase-1 (HO-1)의 발현이 증가하는 것으로 나타났다 (실시예 3).

따라서, 본 발명에 따른 천일국 추출물은 COX-2의 억제 및 HO-1의 증진을 통해 자외선 등으로 인한 피부 주름 내지 피부 노화를 억제할 뿐만 아니라, 항암 단백질의 발현 촉진을 통해 피부암의 예방 내지 치료 효과를 달성할 수 있다.

이에, 본 발명의 주 목적은 천일국 (Echinacea purpurea) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명에 있어서, “천일국 (Echinacea purpurea)”은 국화과의 여러해살이 허브식물로, 북아메리카와 유럽에서 재배된다. 천일국은 60 내지 150cm까지 자라고, 줄기는 곧게 자라며, 호생 잎을 갖는다. 기후에 따라 여름부터 가을까지 꽃을 피우는데, 꽃이 오래될수록 중앙의 작은 꽃들로 형성된 돌출부가 부풀어오르며 꽃잎은 밑으로 처진다. 꽃 머리 안에 있는 개별 꽃 (florets)들은 자웅동체이며 각 꽃에 암수 기관이 모두 존재한다. 잎은 어긋나고 털이 없으며 끝은 피침형의 긴 타원형이다. 본 발명에 따른 천일국은 “아키네시아 (아키나시아)”, “Echinacea purpurea (L.) Moench”등으로도 지칭될 수 있다.

본 발명에서 "추출물"은, 천일국의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 용제 추출물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.

본 발명에 따른 천일국 추출물에 있어서, 천일국을 추출하는 방법에는 특별한 제한이 없으며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.

본 발명에 따른 천일국은 그 원형을 훼손하지 않고 그대로 사용하거나, 당업자가 의도하는 공정 속도 및 공정 (제조) 효율을 고려하여 전처리 과정을 수행한 후 사용할 수 있으며, 상기 전처리 과정으로는 예를 들어 통상적인 선별, 수세, 절단, 분말화, 건조 등의 단계를 거칠 수 있다. 예컨대, 본 발명에 따른 천일국 추출물은 천일국의 일부를 건조한 후 분말화하여 수득된 분말시료로부터 추출될 수 있다. 달리 표현하면, 본 발명의 천일국 추출물은 건조된 상태의 천일국으로부터 추출된 추출물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

일 예로, 본 발명에 따른 천일국 추출물은 천일국의 건조 분말시료를 40 내지 60℃, 40 내지 55℃, 45 내지 55℃, 또는 48 내지 52℃의 온도에서 추출될 수 있으며, 40 내지 60℃, 40 내지 55℃, 45 내지 55℃, 또는 48 내지 52℃의 온도에서 감압농축을 통해 용매를 제거하여 수득될 수 있다.

본 발명에 따른 천일국 추출물은 식물체 전체 또는 식물의 일부로부터 수득될 수 있으며, 예를 들어 줄기, 꽃대, 꽃봉오리, 꽃차례, 순, 뿌리, 잎, 열매, 및 꽃으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 부위로부터 수득될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 천일국 추출물은 지상부 또는 꽃으로부터 수득될 수 있다.

본 발명의 천일국 추출물은 본 발명에서 천일국을 추출하는 데에 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 예를 들어, 물, 탄소수 1 내지 6개의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출될 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 6개의 유기용매는 탄소수 1 내지 6개의 알코올 (alcohol), 아세톤 (acetone), 에테르 (ether), 벤젠 (benzene), 클로로포름 (chloroform), 에틸아세테이트 (ethyl acetate), 메틸렌클로라이드 (methylene chloride), 헥산 (hexane), 시클로헥산 (cyclohexane) 석유에테르 (petroleum ether), 아임계 유체, 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 천일국 추출물은 바람직하게는 에탄올 또는 메탄올로 추출될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 추출방법은 상기 용매를 사용하여 냉침, 온침, 가열 등 통상의 추출방법이 사용 가능하다.

상기 에탄올 또는 메탄올은 농도가 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어, 본 발명의 추출물은 30 내지 100%, 40 내지 100%, 50 내지 100%, 60 내지 100%, 60 내지 90%, 60 내지 80%, 70 내지 90%, 70 내지 100%, 80 내지 100%, 또는 90 내지 100% 에탄올 또는 메탄올 추출물일 수 있다.

상기 제조된 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 천일국 추출물은 피부질환의 예방, 개선, 및/또는 치료 목적으로 사용될 수 있다.

본 발명에 있어서, “피부질환”이란 피부에서 발생하는 모든 피부 병변 내지 피부 질환을 모두 포함하는 개념이다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 피부질환은 자외선 (UVA, UVB, 및 UVC 포함)으로 인해 유도되는 피부질환일 수 있다. 더욱 바람직하게는, 본 발명에 따른 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, “피부 노화”란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부장벽기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소 등을 포괄한다. 상기 피부 노화는 시간의 흐름에 따른 내인성 노화 및 외부 환경에 의한 외인성 노화를 포함한다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 포함한다. 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연노화 현상을 포함하며 주름, 탄력 감소, 피부 쳐짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 상기 노화는 자외선 노출에 의한 피부 광노화일 수 있다. 본 발명에 있어서, “피부 노화를 예방, 개선, 및/또는 치료”한다는 것은 피부 노화를 방지하거나 억제하는 모든 작용을 의미한다.

본 발명에 있어서, “피부 주름 개선 (억제, 치료 등)”은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제, 저해, 또는 지연시키거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것일 수 있다.

본 발명에 있어서, “피부염”은 피부에서 염증이 발생한 상태를 지칭하며, 광피부염을 포함한다. 광피부염은 자외선에 노출된 신체 부위에 생기는 피부 질환으로, 피부가 붉게 변하거나, 가려움증, 각질, 반점, 수포, 피부 착색 등이 나타날 수 있다.

본 발명에 있어서, “피부암”은 피부에 발생하는 악성 종양을 의미하는 것으로서, 주로 햇빛, 즉, 자외선에 의한 피부 손상이 원인이 된다. 본 발명에 있어서, 피부암은 기저 세포암, 편평 상피암, 악색 흑색종 등을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 천일국 추출물은 COX-2의 발현 및/또는 활성을 억제하는 것을 특징으로 한다. 즉, 본 발명에 따른 천일국 추출물은 COX-2의 발현 또는 활성을 억제함으로써 피부질환의 예방, 개선, 및 치료 효과를 달성할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 천일국 추출물은 자외선에 의한 COX-2 발현 및/또는 활성 증가를 억제하는 것일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 천일국 추출물에 의한 COX-2의 발현 또는 활성 억제는 AP-1 전사인자의 인산화를 억제함으로써 이루어지는 것일 수 있다. 예컨대, 상기 COX-2의 발현 또는 활성 억제는 c-jun 및 p38의 인산화를 억제함으로써 달성되는 것일 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물은 COX-2의 발현 및/또는 활성이 증가된 개체에서 더욱 우수한 피부질환 예방, 개선, 및/또는 치료 효과를 달성할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 천일국 추출물은 Heme Oxygenase-1 (HO-1)의 발현 및/또는 활성을 증가시키는 것을 특징으로 한다. 즉, 본 발명에 따른 천일국 추출물은 HO-1의 발현 또는 활성을 증진시킴으로써 피부질환의 예방, 개선, 및 치료 효과를 달성할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물은 HO-1의 발현 및/또는 활성이 감소된 개체에서 더욱 우수한 피부질환 예방, 개선, 및/또는 치료 효과를 달성할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 상기 천일국 추출물은 자외선에 의한 HO-1 발현 및/또는 활성 감소를 억제하는 것 (즉, 회복시키는 것)일 수 있다.

본 발명에 있어서, 어떠한 “단백질의 발현”은 최종적으로 해당 단백질 (이하, '목적 단백질'로 지칭)의 생성을 의미하는 것으로서, “목적 단백질의 발현 억제”란 목적 단백질 코딩 유전자의 전사 단계에서 mRNA의 발현을 억제하거나, 또는 상기 mRNA의 번역을 감소시키는 것을 모두 포함하는 의미이다. 본 발명에 있어서, mRNA의 발현 억제는 목적 단백질-코딩 유전자의 상위 작용기전에서 해당 유전자의 전사를 감소시킬 수 있는 작용기전이 활성화되거나, 반대로 해당 유전자의 전사를 촉진할 수 있는 상위 작용기전이 억제되는 것일 수 있고, 또한 해당 유전자 프로모터 부위의 메틸화 (methylation), 또는 해당 유전자 발현과 관련된 히스톤 단백질의 변형 (histone modification) 등 직간접적으로 목적 단백질의 발현을 억제할 수 있는 개념이 모두 본 발명에 포함된다. 본 발명에서 목적 단백질의 mRNA의 번역 감소는 생산된 해당 mRNA의 번역을 감소시킬 수 있는 모든 기전들이 포함될 수 있으며, 예컨대 상기 mRNA의 번역을 막는 miRNA 등의 발현 또는 활성을 증진시키거나, 상기 mRNA의 번역 관련 효소들의 활성을 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 당업자라면 전술한 기재에 근거하여 “목적 단백질의 발현 촉진”의 의미 또한 상응하는 범주로 이해할 수 있을 것이다.

또한, 본 발명에 있어서 어떠한 "단백질의 활성"은 번역과정을 통해 생산된 상기 단백질 (이하, “목적 단백질”로 지칭) 혹은 이미 세포 내 생산되어 존재하는 목적 단백질의 활성을 의미하는 것으로서, “목적 단백질의 활성 억제”는 번역 후 변형 (post-translational modification) 등의 과정을 거치거나 혹은 함께 상호작용하는 단백질 등의 활성/불활성에 의해 목적 단백질의 활성이 감소하는 것을 모두 포함한다. 당업자라면 전술한 기재에 근거하여 “목적 단백질의 활성 증진”의 의미 또한 상응하는 범주로 이해할 수 있을 것이다.

본 발명의 조성물 내의 상기 천일국 추출물의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9중량%, 또는 0.001 내지 50중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC) 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜(PEG) 4000, PEG 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC), HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9% 염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO₃) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na₂S₂O₅), 아황산나트륨(Na₂SO₃), 질소가스(N₂), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

예컨대, 본 발명에 따른 천일국 추출물은 1 μg/ml 내지 10 mg/ml, 1 μg/ml 내지 1 mg/ml, 1 μg/ml 내지 500 μg/ml, 1 μg/ml 내지 300 μg/ml, 1 μg/ml 내지 100 μg/ml, 1 μg/ml 내지 50 μg/ml, 1 μg/ml 내지 30 μg/ml, 또는 10 μg/ml 내지 30 μg/ml의 농도로 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다. 구체적으로, 본 발명에 따른 조성물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1 kg 당 0.001 내지 150 mg, 바람직하게는 0.01 내지 100 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 질환의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.

본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

또한, 본 발명은 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다. 이외에도, 본 발명에 따른 천일국 추출물은 자외선 등으로 인한 다양한 피부 손상 (피부 건조증, 화상, 색소침착증 등)을 예방 및 개선하기 위한 목적으로 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 천일국 추출물; 또는 이를 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 피부를 개선하기 위한 피부 미용방법을 제공할 수 있다. 예컨대, 상기 미용방법은 광자극에 의한 피부 노화, 주름, 착색, 색소침착 등을 예방 내지 개선하기 위한 목적으로 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 천일국 추출물은 상기 개체의 피부에 적용될 수 있으며, 여기서 “적용”이란 투여, 주사, 또는 도포 등 화장료 조성물을 피부에 제공할 수 있는 모든 수단을 포함한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 미스트, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 핸드로션, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 클렌징오일, 클렌징밤, 바디로션 또는 바디클렌저의 형태일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 및 스핑고 지질로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 더 포함할 수 있다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장품에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 0.01-5% 중량 백분율 또는 0.01-3% 중량 백분율로 배합될 수 있다.

본 발명의 제형이 로션, 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 국소 적용 제제를 제공한다. 피부질환 등에 대한 설명은 상술하였으므로 생략한다. 상기 국소 적용 제제는, 예컨대, 외용제일 수 있다. 상기 국소 적용 제제는 크림, 젤, 로션, 파우더, 파우더 스프레이, 오일, 롤-온 제형, 연고, 폼, 스프레이, 스틱, 또는 팅쳐 (tincture) 형태일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다. 상기 식품 조성물은 건강기능식품 조성물을 포함한다. 피부질환 등에 대한 설명은 상술하였으므로 생략한다.

본 발명의 천일국 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 천일국 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 천일국 추출물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 또는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20g, 또는 약 0.04-0.10g 이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 명세서에 있어서, “건강기능식품”이란 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)와 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하는데, 상기 식품은 피부질환의 예방 또는 개선에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.

본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.

또한, 본 발명은 천일국 추출물을 포함하는, 피부질환의 예방, 개선, 및/또는 치료용 키트를 제공한다.

본 발명에 있어서 “키트 (kit)”는 본 발명의 천일국 추출물을 포함하며 피부질환의 예방 또는 치료 목적으로 사용되는 도구를 의미한다. 상기 키트에는 상기 추출물 외에도 상기 추출물의 제조, 보관, 투여 등에 통상적으로 필요한 다른 구성성분, 조성물, 용액, 장치 등이 포함될 수 있다. 예컨대, 상기 키트에는 본 발명에 따른 추출물의 특성, 이들의 적합한 사용 및 보관 등을 지시하는 설명서 등을 포함할 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1. 천일국 추출물의 제조

천일국 (Echinacea purpurea)의 광노화 억제 및 피부암 예방 효능을 평가하기 위해 천일국 추출물을 제조하였다. 100% 에탄올, 메탄올을 이용한 천일국의 용제 추출물은 천일국 지상부 및 꽃의 건조 분말시료를 가속용매추출장치(ASE)를 사용하여 제조하였다. 천일국 지상부 및 꽃의 건조 분말시료 100g을 50℃온도에서 상기 용제로 가속용매추출장치로 40분간 2회 반복 추출하고 여과한 후 50℃의 감압농축장치에서 용매를 제거하였다. 천일국 지상부 및 꽃 추출물을 각각 25.2g, 14.3 g을 수득하여 -20℃에 보관하였으며 이하 실시예 분석을 위한 시료로는 천일국 지상부의 메탄올 추출물을 사용하였다.

실시예 2. 천일국 추출물의 COX-2 단백질 발현 억제 효능 평가

실시예 2-1. 사람의 각질세포주 (HaCaT)에서의 COX-2 단백질 발현 억제 효능 평가

천일국 추출물의 광노화 억제 활성 효능을 확인하기 위해, 천일국 추출물이 COX-2 단백질 발현을 억제하는지 확인하였다. COX-2는 피부에서 염증을 유발하는 것으로 알려진 단백질이다. 사람의 각질세포인 HaCaT 세포주를 30 Φ 배양접시에 2.2 × 10⁵ cells/ml로 plating하여 24시간동안 세포를 증식시킨 후 cell confluency가 90% 정도 도달했을 때 PBS로 3번 세척하여 세포에 있는 FBS을 완전히 제거하였다. 이후 시료가 주입된 배지 (0.5% FBS, 1% AA in colorless DMEM)를 정량 배지량의 1/4 용량에 15 mJ/cm² UVB 조사 후, 나머지 배지를 넣어 37℃, 5% CO₂ incubator에서 6시간 처리한 후 인산 완충 생리식염수 (PBS)로 2회 세척하였다. UVB을 처리하지 않는 대조군도 같은 조건으로 배양되었다. 부착된 세포를 회수하여 PBS 로 2 회 세척한 후 가열한 2X 시료 loading buffer (250 mM Tris-HCl (pH 6.8), 4% SDS, 10% glycerol, 0.006% bromophenol blue, 2% β-mercaptoethanol, 50 mM sodium fluoride와 5 mM sodium orthovanadate)를 넣어 세포를 파쇄시키고 이를 100℃ 에서 15 분간 두었다. 식힌 후 -20℃에서 보관하였고 사용 직전에 상온에서 녹여 단백질 정량 및 전기영동에 사용하였다.

10 μg 의 단백질을 5-12% SDS-polyacrylamide gel (#456-1036, Bio-rad, Hercules, CA)을 이용하여 100 V에서 1시간 40분 동안 전기영동을 수행하였다. 분리된 단백질을 PVDF 멤브레인 (membrane, ISEQ15150, Millipore, Bedford, MA)으로 100 V에서 2 시간 동안 옮긴 후 blocking buffer [5% BSA in TBST (Trisbuffered saline containing 0.1% Tween-20)]로 blocking 한 후 2.5% BSA in TBST 에 희석한 1차 항체와 함께 4℃에서 밤새 반응시켰다. 멤브레인 [Membrane, ISEQ 1S150, Millipore, Bedford, MA)을 TBST로 15 분간 3회 세척한 후 해당 이차항체를 TBST로 1:1,000-1:2,000의 비율로 희석하여 멤브레인 (membrane)과 함께 상온에서 3-4시간 반응시켰다. 이후 TBST로 5분간 3회 세척한 후 화학발광 (chemiluminescent) 시약 (Intron, Daejeon, Korea)으로 처리하여 LAS-4000 (Fuji Film Corp., Japan)에서 COX-2의 단백질 발현 정도를 확인하였다.

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, UVB을 조사함에 따라 COX-2 단백질 발현이 대조군에 비해 증가되고 천일국 추출물이 처리된 각질세포주에서는 COX-2 단백질의 발현이 억제되었다. 구체적으로, COX-2 단백질 발현량은 UV 조사시 대조군 대비 현저하게 증가하였으나, 천일국 추출물이 10, 20, 또는 30 μg/ml 농도로 처리된 그룹에서 광노화 억제효능을 분석한 결과, COX-2 발현이 천일국 추출물의 농도 의존적으로 억제되는 것으로 나타났다.

실시예 2-2. 효소결합 면역흡착 분석 (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)을 이용한 COX-2 단백질 발현 억제 효능 평가

본 실시예에서는 천일국 추출물 농도에 따른 광노화 억제효능을 분석하였다. 배양 상등액으로 유리된 Prostaglandin E2 (PGE2)의 정량분석은 ELISA kit (Cat. No.ab133021, abcam, Cambridge, UK)를 이용하여 제조사의 실험방법에 따라 실시하였다. PGE2는 COX-2에 의해 조절되는 염증 매개인자로 다양한 염증반응을 일으킬 수 있다. 사람의 각질세포주에 천일국 추출물을 10, 20, 및 30 μg/ml 농도로 처리한 후 광노화 억제효능을 분석한 결과 UVB처리에 따라 PGE2의 생성량이 증가되었고 각각의 처리 농도에 따라 50.9, 81.6, 및 86.5%로 측정된 바, PGE2의 생성량이 통계적으로 유의하게 (***P<0.005) 천일국 추출물의 농도 의존적으로 억제되었음을 확인할 수 있었다 (도 2).

COX-2 발현에 있어 상위조절자로 mitogen-activated protein kinase (MAPK) family의 인산화 효소들을 들 수 있다. MAPK 인자나 이들 인자의 조절을 받는 전사인자들이 관여하는 신호전달경로가 비정상적으로 또는 부적절하게 활성화되거나 비활성화될 경우 암화 또는 염증반응을 초래할 수 있다. 보다 자세하게는 MAPK 경로는 세포증식, 분화 및 생존과 같이 여러 세포외 자극을 특이적 세포반응으로 전환시키는 것을 조절하는 것으로 잘 알려져 있으며 세포외 신호조절 인산화 효소 (extracellular signal-regulated kinases; ERK-1/2), c-Jun N-말단 인산화 효소 (c-Jun N-terminal kinase; JNK) 및 p38이 주요한 조절제이다. JNK와 p38은 IL-1β 및 TNF-α와 같은 염증성 사이토카인, TNF-α, 세포 스트레스, 활성산소 및 자외선 조사에 의해 활성화되는 반면, ERKs는 마이토겐과 성장인자에 의하여 활성화 된다. ERK, JNK 및 p38 의 활성화로 MAPK 신호전달은 인산화를 조정하여 AP-1 (cFos/cJun), ETS, RUNX-2, HIF-2α, C/EBPβ 및 NF-κB와 같은 전사인자를 활성화 시켜 염증반응과 관련된 유전자의 발현을 조절하게 된다. 여러 전사인자중 특히 AP-1은 Jun 및 Fos family의 단백질들이 leucine-zipper domain을 통해 상호결합된 homo 또는 heterodimer로 구성되어 있으며 AP-1 활성화는 MAPK 신호전달 경로의 조절을 받는다.

본 발명에 따른 천일국 추출물의 COX-2의 상위 조절기전을 확인하기 위해 사람의 각질세포주에 천일국 추출물을 처리한 후 COX-2 생성을 매개하는 다양한 전사인자 (transcription factor, TF)들의 발현을 확인하였다. 그 결과, 본 발명의 천일국 추출물은 AP-1에 해당하는 c-jun (ser63, ser73)와 p38의 인산화를 저해하는 것을 확인하였다 (도 3 및 4). 즉, 상기 결과는 본 발명의 천일국 추출물이 c-jun 및 p38의 기능을 조절하여 COX-2의 발현을 억제한다는 것을 보여준다.

실시예 2-3. 각질세포주 (HaCaT)에서의 COX-2 유전자 발현량 확인

사람의 각질세포에서의 COX-2 발현량을 확인하기 위하여 사람의 각질세포인 HaCaT 세포주를 30 Φ 배양접시에 2.2 × 10⁵ cells/ml로 plating하여 24시간동안 세포를 증식시킨 후 cell confluency가 90% 정도 도달했을 때 PBS로 3번 세척하여 세포에 있는 FBS을 완전히 제거하였다. 이후 시료가 주입된 배지 (0.5% FBS, 1% AA in colorless DMEM)를 정량 배지량의 1/4 용량에 15 mJ/cm² UVB 조사 후, 나머지 배지를 넣어 37℃, 5% CO₂ incubator에서 6시간 처리한 후 인산 완충 생리식염수 (PBS)로 2회 세척하였다. UVB을 처리하지 않는 대조군도 같은 조건으로 배양되었다. 부착된 세포를 PBS로 2회 세척한 후 TRI reagent (TRIZol (#15596-026, Invitrogen, Grand Island, NY))를 이용하여 세포를 파쇄한 후 CHCl₃를 첨가하여 RNA를 추출하고 isopropyl alcohol을 이용하여 침전시켰다. RNA 침전물을 70% 에탄올로 세척한 후 공기 중에서 건조시킨 후 nuclease-free water (AM9937, Ambion, Austin, TX)를 이용하여 녹인 다음 55℃에서 10분간 가열하고, 70℃에서 5분간 열처리하여 RNA가 single strand 상태로 존재하도록 하였다. Total RNA를 NanoDrop (ND-1000, Dae Myung Sceince, Seoul, Korea)을 이용하여 정량하여 1 μg/μL으로 희석한 후 avian myeloblastosis virus (AMV) reverse transcriptase (M5108, Promega, Madison, WI)과 oligo(dT)15 primer (C110B, Promega, Madison, WI)를 이용하여 cDNA를 제조하였다. iQTM SYBR^® Green Supermix (#170-8880, Bio-Rad, Hercules, CA), [표 1]의 target gene-specific primers를 이용하여 target gene을 MiniOpticon^TM Real-time PCR Detection system (CFB-3120, Bio-Rad, Hercules, CA)에서 증폭시켰다. Real-time PCR 조건은 95℃에서 20초간 변성(denaturation) 시킨 뒤 95℃에서 20초 (denaturation), 56℃에서 20초 (annealing), 72℃에서 30초 (elongation)의 PCR cycle을 40회 반복하였고 이후 95℃에서 1분 및 55℃에서 1분간 최종 수행하였다. MJ Opticon Monitor software (Opticon Monitor 3.1.32, Bio-rad, Hercules, CA)를 이용하여 리박 등(Livak KJ et al (1996) Method 25:402-408)의 방법에 의하여 Ct 값을 결정하였고, 시료의 β-액틴의 Ct 값으로 보정하여 각질세포주 (HaCaT)에서의 COX2의 mRNA 발현을 도 5에 나타냈다.

도 5에 나타난 바와 같이, 본 발명의 천일국 추출물은 COX-2의 mRNA 발현을 억제하는 것으로 확인되었다. 구체적으로, 각질세포주에 천일국 추출물을 10, 20, 및 30 μg/ml 농도로 처리시 COX-2 유전자 발현이 52, 58.7, 및 73.8%로 감소한 바, COX-2 유전자 발현이 통계적으로 유의하게, 천일국 추출물의 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인하였다.

Real-time PCR에 사용된 타겟 유전자 검출용 프라이머 서열
Target genes		Sequences
COX2	Sense	5′-CTT CAC GCA TCA GTT TTT CAA G-3′
	Antisense	5′-TCA CCG TAA ATA TGA TTT AAG TCA AC-3′
β-Actin	Sense	5′-AGC ACA ATG AAG ATC AAG AT-3′
	Antisense	5′-TGT AAC GCA ACT AAG TCA TA-3′

실시예 3. 피부 각질세포에서의 천일국 추출물의 Heme Oxygenase-1의 활성화를 통한 피부암 예방 효능 확인

Phase II 해독화 효소 시스템은 세포내 스트레스 방어 반응의 중요한 구성 요소이다. 이 해독화 효소 시스템은 친전자성의 산화적 스트레스를 유발할 수 있는 독성물질들이 세포 내에서 DNA에 손상을 입히기 전에 이들을 세포로부터 제거하는 역할을 한다. 항산화 물질은 활성산소종을 제거할 뿐만 아니라 Phase II 해독화 효소들을 포함한 기타 생체방어 단백질들의 발현을 유도한다. 관련 유전자로는 glutathione peroxidase, gamma-glutamylcysteine synthetase (γ-GCS), Glutathione S-transferase (GST), NAD(P)H:quinone acceptor oxidoreductase (NQO-1) 그리고 heme oxygenase-1 (HO-1) 등이 있다 (Hayes JD et al, Cancer Lett 2001; 174, 103~113). 본 실시예에서는 본 발명에 따른 천일국 추출물의 피부암 예방 효능에 대해 분석하였으며, 특히, 천일국 추출물이 대표적인 암 예방 효소인 HO-1의 발현을 활성화하여 피부암 예방 효과를 발휘하는지 확인하였다.

이를 위해, 사람의 각질세포주에 UVB를 조사하면서 본 발명의 천일국 추출물을 처리한 후, HO-1의 단백질 발현량을 확인하였다. 그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, 천일국 추출물이 처리된 그룹은 미처리 대조군에 비해 HO-1 발현량이 증가하였으며, 특히 천일국 추출물의 농도에 의존적으로 증가하는 것으로 나타났다. 상기 결과는 본 발명에 따른 천일국 추출물이 광노화 예방 효능을 가질 뿐만 아니라, 피부암 예방 및 치료 효과를 발휘할 수 있음을 보여준다.

이하, 본 발명의 제형예로서 크림 조성물, 마사지크림 조성물, 로션 조성물, 스킨로션 조성물, 에센스 조성물, 팩 조성물 및 클렌징폼 조성물을 예시하였다. 그러나 이는 본 발명이 구현될 수 있는 제형의 예시를 제시한 것에 불과하며, 본 발명에 따른 조성물의 제형이 이에 한정되는 것은 아니다.

제형예 1. 크림 조성물

하기 표에 기재된 조성 및 함량(중량%)으로 유상과 수상을 각각 75℃로 가열 혼합한 후 실온으로 냉각한다.

원료명	중량%
1. 세토스테아릴 알코올2. 자기유화형 모노스테아린산 글리세린 3. 친유형 모노스테아린산 글리세린 4. 마이크로 스탈린 납 5. 파라옥시안식향산메칠 6. 파라옥시안식향산프로필 7. 밀납 8. 모노스테아린산 폴리에칠렌글리콜 9. 모노스테아린산 소로비탄 10. 트리(카프릴, 카프린산)글리세린 11. 액상 리놀린 12. 미리스틴산 옥틸도데실 13. 스쿠알란 14. 농글리세린 15. 1,3-부틸렌글리콜 16. 알란토인 17. 천일국 추출물 18. 향료 19. 황색 4호 20. 정제수	1.0 1.0 2.5 2.0 0.2 0.1 2.0 2.0 1.0 5.0 5.0 8.0 8.0 5.0 5.0 0.1 2.0 적량 적량 to 100

제형예 2. 마사지 크림 조성물

하기 표에 기재된 조성 및 함량(중량%)으로 유상과 수상을 각각 75℃로 가열 용해 혼합한 후 실온으로 냉각한다.

원료명	중량%
1. 세토스테아릴 알코올2. 친유형 모노스테아린산 글리세린 3. 자기유화형 모노스테아린산 글리세린 4. 파라옥시안식향산메칠 5. 파라옥시안식향산프로필 6. 바셀린 7. 모노스테아린산 폴리에칠렌글리콜 8. 세스퀴올레인산 소르비탄 9. 유동 파라핀 10. 트리(카프릴, 카프린산)글리세린 11. 옥틸도데칸올 12. 스쿠알렌 13. 농글리세린 14. 천일국 추출물 15. 히아루로닉애씨드추출물 16. 향료 17. 정제수	2.0 2.5 1.5 0.2 0.1 3.5 3.5 1.8 35.0 3.0 5.0 2.0 5.0 2.0 1.0 적량 to 100

제형예 3. 로션 조성물

하기 표에 기재된 조성 및 함량(중량%)으로 유상과 수상을 각각 75℃로 가열 혼합 유화한 후 실온으로 냉각한다.

원료명	중량%
1. 세토스테아릴 알코올2. 스테아린산 3. 자기유화형 모노스테아린산 글리세린 4. 친유형 모노스테아린산 글리세린 5. 바셀린 6. 모노스테아린산 폴리에칠렌글리콜 7. 세스퀴올레인산 소르비탄 8. 유동파라핀 9. 스쿠알렌 10. 파라옥시안식향산프로필 11. 파라옥시안식향산메칠 12. 글리세린 13. 천일국 추출물 14. 트리에탄올아민 15. 카르복시비닐폴리머 16. 향료 17. 정제수	2.0 1.0 2.0 1.0 1.0 1.5 1.0 5.0 5.0 0.2 0.2 5.0 2.0 0.5 0.2 적량 to 100

제형예 4. 스킨로션 조성물

하기 표에 기재된 조성 및 함량(중량%)으로 수상과 에탄올상을 각각 제조 혼합한 후 여과한다.

원료명	중량%
1. 글리세린2. 1,3-부틸렌글리콜 3. 구연산 4. 에탄올 5. 폴리옥시에칠렌경화피마자유 6. 천일국 추출물 7. 향료 8. 위치하젤추출물 9. 정제수	2.0 2.0 0.01 15.0 1.0 2.0 적량 1.0 to 100

제형예 5. 에센스 조성물

하기 표에 기재된 조성 및 함량(중량%)으로 수상과 에탄올상을 각각 제조 혼합한 후 여과한다.

원료명	중량%
1. 농글리세린2. 1,3-부틸렌글리콜 3. 알란토인 4. 에탄올 5. 파라옥시안식향산메칠 6. 트리에탄올아민 7. 폴리옥시에칠렌경화피마자유 8. 초산토코페롤 9. 카르복시비닐폴리머 10. 천일국 추출물 11. 향료 12. 정제수	15.0 5.0 0.1 7.0 0.15 0.15 1.0 0.5 0.15 2.0 적량 to 100

제형예 6. 팩 조성물

하기 표에 기재된 조성 및 함량(중량%)으로 수상과 에탄올상을 각각 분산 용해하여 혼합시킨 후 실온으로 냉각한다.

원료명	중량%
1. 폴리비닐알코올2. 카르복시메칠셀룰로이스나트륨 3. 농글리세린 4. 알란토인 5. 에칠렌디아민테트라초산디나트륨 6. 폴리에칠렌글리콜 7. 에탄올 8. 파라옥시안식향산메칠 9. 파라옥시안식향산프로필 10. 디엘판테놀 11. 폴리옥시에틸렌(12)노닐페닐에텔 12. 천일국 추출물 13. 향료 14. 정제수	15.0 0.3 3.0 0.1 0.01 1.0 6.0 0.15 0.05 0.1 0.5 2.0 적량 to 100

제형예 7. 클렌징폼 조성물

하기 표에 기재된 조성 및 함량(중량%)으로 수상과 오일상을 각각 분산 용해하여 혼합 검화한 후 실온으로 냉각한다.

원료명	중량%
1. 스테아린산2. 미리스틴산 3. 자기유화형 모노스테아린산 글리세린 4. 프로필렌 글리콜 5. 농글리세린 6. 수산화나트륨 7. 에칠렌디아민테트라초산나트륨 8. 프라센타 추출물 9. 천일국 추출물 10. 향료 11. 정제수	6.5 28.0 3.0 5.0 10.0 7.0 0.1 0.5 2.0 적량 to 100

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.

Claims (11)

1. 천일국 (Echinacea purpurea) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서, 상기 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 피부 노화는 자외선에 의한 피부 광노화증인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 천일국 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6개의 알코올 (alcohol), 아세톤 (acetone), 에테르(ether), 벤젠 (benzene), 클로로포름 (chloroform), 에틸아세테이트 (ethyl acetate), 메틸렌클로라이드 (methylene chloride), 헥산 (hexane), 시클로헥산 (cyclohexane), 석유에테르 (petroleum ether), 아임계 유체, 및 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매에 의한 추출물인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 천일국 추출물은 COX-2의 발현 또는 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 천일국 추출물은 Heme Oxygenase-1의 발현 또는 활성을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
   
6. 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물로서, 상기 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 화장료 조성물.
   
7. 제6항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 세럼, 화장수, 페이스트, 패치, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 크림, 마사지 크림, 영양크림, 미스트, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 핸드로션, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 오일, 파운데이션, 메이크업 베이스, 왁스, 스프레이, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 클렌징오일, 클렌징밤, 바디로션, 또는 바디클렌저 제형인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
8. 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 국소 적용 제제로서, 상기 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 국소 적용 제제.
   
9. 제8항에 있어서,
   상기 국소 적용 제제는 크림, 젤, 로션, 파우더, 파우더 스프레이, 오일, 롤-온 제형, 연고, 폼, 스프레이, 스틱, 또는 팅쳐 (tincture) 형태인 것을 특징으로 하는, 국소 적용 제제.
   
10. 천일국 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물로서, 상기 피부질환은 피부염, 피부 노화, 피부암, 및 피부 주름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 식품 조성물.
    
11. 제10항에 있어서,
    상기 식품은 건강기능식품인, 식품 조성물.