KR101403396B1

KR101403396B1 - 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증제

Info

Publication number: KR101403396B1
Application number: KR1020120015565A
Authority: KR
Inventors: 류동영; 마승진; 박찬선; 강성국; 박진영
Original assignee: 목포대학교산학협력단
Priority date: 2012-02-15
Filing date: 2012-02-15
Publication date: 2014-06-11
Also published as: KR20130094145A

Abstract

본 발명은 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 개꼬시래기 아임계수 추출물은 식용으로 사용되는 식물 및 가장 안전한 추출용매인 수용매를 이용한 추출물로서 부작용이나 안전성에 대한 문제가 없고, 염증과 관련된 NO 분비량 및 세포 생존률을 통하여 확인한 결과, 효과적으로 염증을 저해할 수 있는 것으로 확인되었다. 따라서, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물은 염증을 억제하여 염증과 관련된 질병을 치료 또는 예방하기 위한 항염증제 및 특정 제형 등과 관련하여 화장품 제조에 필수적으로 사용되는 성분 또는 외부환경으로 인한 피부의 염증을 효과적으로 억제할 수 있는 특징을 갖는 화장료 조성물 등에 응용될 수 있다.

Description

개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증제{ANTI-INFLAMMATORY AGENT CONTAINING SUBCRITICAL WATER EXTRACTS OF GRACILARIOPSIS CHORDA}

본 발명은 항염효과가 있는 식물 추출물, 구체적으로 개꼬시래기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물에 관한 것이다.

염증은 외부에서 들어온 해로운 물질이나 유기체 등과 같은 여러 요인에 의하여 세포나 조직이 손상을 입거나 파괴되었을 때 그 손상을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키기 위하여 국소적으로 일어나는 면역반응으로서, 생체를 보호하고 조직 손상으로 생성된 산물들을 제거하는데 유용한 방어 메카니즘이다. 상기 방어 메카니즘에 의해, 결과적으로 통증, 부종, 발적 또는 발열 등이 일어나 기능장애가 유발되기도 한다. 상기 염증을 유발하는 여러 요인에는 외상, 화상, 동상, 방사능 등에 의한 물리적 요인, 산(acid)과 같은 화학물질에 의한 화학적 요인 및 항체반응에 의한 면역학적 요인들이 있으며, 그 외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해 발생되기도 한다.

상기 염증은 정상적인 경우에는 생체 내에서 염증반응을 통하여 발병 요인을 중화시키거나 제거하고 상한 조직을 재생시켜서 정상적인 구조와 기능을 회복시키는 작용을 하지만, 염증의 정도가 일정 수준 이상이 되거나 만성화되어 만성염증과 같은 질병 상태로 진행되는 경우 문제가 된다. 임상질환 가운데 거의 모든 질환에서 염증 반응을 관찰할 수 있을 뿐만 아니라, 암발생과정(carcinogenesis)에서도 염증 반응과 관련된 효소들이 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.

최근 밝혀진 바에 의하면, 체내에서의 염증반응의 진행은 COX(cyclooxygenase) 효소 활성과 관련된 것으로 알려져 있다. 상기 COX 효소는 생체 내에 존재하는 프로스타그란딘(prostaglandin)의 생합성에 관련하는 주 효소로서(Smith 등, J. Biol.Chem., 271, 33157(1996)), 두 종류의 이성 효소인 COX-1과 COX-2가 존재하는 것으로 알려져 있다. 상기 COX-1은 위나 신장과 같은 조직에 일정하게 존재하며, 정상적인 항상성을 유지하는데 관여하는 반면, 상기 COX-2는 염증이나 기타 면역 반응 시 세포분열인자(mitogen)나 사이토카인(cytokines)류에 의해 세포 내에서 일시적이고 빠르게 발현되는 효소이다.

또 하나의 강력한 염증 매개물인 나이트릭 옥사이드(Nitric oxide, NO)는 NO 합성효소(NOS)에 의해 L-알지닌으로부터 생성되며, UV와 같은 외부 스트레스나 엔도톡신 또는 사이토카인과 같은 물질에 의해 많은 종류의 세포에서 생성된다. 상기와 같은 염증 자극들은 세포 내의 유도성 NOS(iNOS)의 발현을 증가시키고, 이를 통하여 세포내에서 NO 생성을 유도하여, 대식 세포를 활성화시킴으로써 염증 반응을 일으킬 수 있다.

따라서, 최근 효과적인 염증 완화를 위하여, NO의 생성을 억제할 수 있는 물질에 대한 연구가 진행되고 있다. 그러나, 이러한 연구에 의해 개발된 항염물질의 경우 몇 가지 부작용이 문제되고 있다. 일 예로, 급성 또는 류마티스성 관절염과 같은 만성 염증 질환의 치료에 사용되는 비스테로이드성 소염 약물들은 COX-2 효소를 억제할 뿐만 아니라 COX-1 효소도 억제함으로써 위장관 장애와 같은 부작용을 나타내는 것으로 알려져 있다.

한편, 일상생활에 사용되는 화장품은 피부를 보호하고 미화 청결을 위해 사용되는 제품이지만 화장품 조성물을 살펴보면 피부 보호 목적과는 상이한 성분들이 제품 형성에 필수 불가결한 존재로서 사용된다. 예를 들어, 계면활성제, 방부제, 향료, 자외선 차단제, 색소 및 기타 효능이나 효과를 부여하기 위해 쓰이는 여러 가지 성분들을 들 수 있다. 상기 화장품 제조에 필수적으로 사용되는 성분은 일반적으로 피부에 염증이나, 뾰루지 또는 부종 등과 여러 가지 부작용을 발생하는 것으로 알려져 있다.

또한, 체내로부터 배출되는 피지 성분, 땀 성분 및 화장품 성분 중의 지방산, 고급 알코올, 단백질 등이 피부 상에 존재하는 피부 상재 균들에 의해 독성이 강한 물질로 분해되면, 이들에 의해 피부 염증이 유발될 수도 있으며, 태양으로부터 나오는 자외선에 의해서도 피부 염증이 유발된다는 것은 잘 알려진 사실이다.

이렇듯 화장품에 있어서 피부 부작용 유발요인은 항상 잠재되어 있으며 이를 해결 하고자 여러 가지 연구가 진행되어 왔다. 현재까지 홍반이나 부종 같은 자극완화 및 염증 완화 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계로 플루페나믹산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 벤지다민(benzydamine), 인도메타신(indomethacin)등이 있고, 스테로이드계로는 프레드니솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexamethasone) 등이 있으며, 알란토인, 아즈렌, ε-아미노키프론산, 하이드로코티존, 감초산 및 그 유도체(β-글리칠레친산, 글리칠레친산 유도체) 등이 항염증에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

그러나, 일반적으로 항염제로 쓰이는 상기 인도메타신은 화장료에는 사용할 수 없는 물질이고, 상기 하이드로코티존은 사용량이 제한되어 있으며, 감초산 및 그 유도체는 안정화시키기 어렵거나 용해도가 좋지 않아 실제 적용 시 농도의 제한으로 인하여 실질적인 효과를 거두기가 어려운 점이 있는 등 지금까지 알려진 항염제는 피부안전성 면이나 화장료 배합시의 안정성 면에서 대부분 문제점을 가지고 있어서 그 사용이 제한되고 있다.

그러므로, 천연물질 유래 물질로 이러한 부작용이나 세포독성에 대한 위험이 없거나 적으면서, 효과적으로 NO의 생성을 억제할 수 있어 항염효과가 우수하여, 부작용 없이 염증을 억제할 수 있을 뿐만 아니라 그 함량의 제한 없이 화장품에 사용될 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.

특히, 최근에는 소비자들의 욕구에 부응하기 위하여 천연 원료를 이용한 화장료에 대한 연구개발이 활발히 진행되고 있는 실정이다.

KR

0793081

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0649712

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20020083555

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20100044593

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20040005013

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상기와 같은 요구에 부응하기 위하여, 본 발명은 부작용과 관련된 문제가 발생될 가능성이 적은 식물 추출물을 유효성분으로 하는 항염 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 기존의 항염물질과 달리 식용으로 사용될 수 있는 천연식물에서 비롯하여 부작용 등이 문제되지 아니하고, 안전성이 우수할 뿐만 아니라, 염증과 관련된 NO 생성을 억제할 수 있는 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증제 또는 화장품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물을 제공한다. 구체적으로, 본 발명의 유효성분인 개꼬시래기 아임계수 추출물은 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 아임계수로 추출한 개꼬시래기 아임계수 추출물일 수 있고, 더욱 구체적으로, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃의 아임계수로 추출한 것일 수 있으며, 보다 구체적으로, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 3 MPa 및 210℃의 아임계수로 추출한 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 개꼬시래기(Gracilariopsis chorda) 분쇄물에 물을 첨가하고 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 추출하는 것을 특징으로 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물일 수 있다.

또한, 본 발명의 항염 조성물은 항염증제의 유효성분 또는 염증을 억제하기 위한 목적으로 화장료 조성물의 유효성분으로 제공될 수 있다. 이러한 측면에서 본 발명은 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물일 수 있다.

또한, 본 발명은 개꼬시래기 로부터 항염 활성이 가장 우수할 뿐만 아니라 추출수율도 우수한 개꼬시래기 아임계수 추출물의 제조방법에 관한 것이다.

구체적으로, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물의 제조방법은 개꼬시래기(Gracilariopsis chorda)를 분쇄하여 개꼬시래기 분쇄물을 제조하는 단계; 상기 개꼬시래기 분쇄물에 물을 첨가하는 단계; 및 상기 개꼬시래기 분쇄물 및 물을 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 반응시켜 개꼬시래기 아임계수 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 항염 활성을 가진 개꼬시래기 아임계수 추출물 제조방법일 수 있다.

보다 구체적으로, 상기 개꼬시래기 분쇄물에 첨가되는 물의 양은 개꼬시래기 분쇄물 100 중량부를 기준으로 500 중량부 내지 1,500 중량부이고, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 제조하는 단계의 반응조건은 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃일 수 있다.

더욱 구체적으로, 상기 개꼬시래기 분쇄물을 제조하는 단계는 상기 개꼬시래기(Gracilariopsis chorda)를 건조한 후, 분쇄하는 방법으로 수행하는 것이고, 상기 개꼬시래기 분쇄물에 첨가되는 물의 양은 개꼬시래기 분쇄물 100 중량부를 기준으로 900 중량부 내지 1,100 중량부이며, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 제조하는 단계는 3 MPa 및 210℃의 조건에서 1분간 수행하는 것일 수 있다.

본 발명자들은 기존에 다양하게 연구가 진행된 육상 식물과 달리 연구가 제한적으로 진행된 해양자원에 대해 연구하던 중, 장흥 지역에 풍부한 개꼬시래기에 대해 수용매를 이용하여 아임계수 추출물을 제조하는 경우, 기존 용매 추출법에 비하여 항염활성이 향상될 수 있다는 것을 확인하고, 더욱 연구를 진행하여 항염활성과 관련된 효능 즉, NO 생성량 및 세포 생존률(Cell viability)과 관련하여, 특정 조건 즉, 3 MPa 및 210℃ 조건에서 NO를 가장 효과적으로 억제하면서도 세포 생존율은 높게 유지되어 가장 우수하며, 상기 온도보다 낮은 온도 또는 높은 온도에서는 오히려 활성이 감소할 뿐만 아니라 추출수율도 감소한다는 것을 확인하여, 이로부터 본 발명을 완성하였다.

본 발명에 있어서, 염증이란 일반적인 염증질환을 포함하는 개념으로, 일 예로 각종 피부염, 알레르기, 전신성 홍반성 낭창, 망막염, 위염, 간염, 장염, 췌장염 및 신장염 등을 포함한다.

본 발명에 있어서, 유효성분이란 항염 효과를 제공하는 의약 조성물 또는 화장료 조성물의 성분을 의미한다.

본 발명에 있어서, 초임계 유체(supercritical fluid)란 물질이 액체와 기체의 두 상태가 서로 분간할 수 없게 되는 임계상태에서의 온도와 이때의 증기압 즉, 그의 임계점보다 높은 온도와 압력하에 있을 때 즉, 초임계점 이상의 상태에 있는 유체를 의미한다. 또한, 본 발명에 있어서, 아임계 유체(sub-supercritical fluid)란 초임계 유체와 거의 비슷한 성격을 가진 유체를 의미한다. 또한, 아임계 추출법이란 아임계 유체를 이용한 추출법을 의미한다.

상기 아임계 유체는 물, 이산화탄소(CO₂), 에틸렌, 에탄, 프로판, 아세틸렌 또는 암모니아 등일 수 있고, 바람직하게는 경제적이고, 유해성분이 없으며, 안전하게 폐기할 수 있어 친환경적일 뿐만 아니라, 본 발명에 의하여 추출효율을 극대화할 수 있는 조건을 확인한 물, 더욱 바람직하게는 아임계수일 수 있다. 상기 아임계수란 아임계 조건의 물을 의미한다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명은 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물에 관한 것이다

상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 다른 추출법 즉, 용매 추출법에 비하여, NO 분비를 효과적으로 억제할 수 있고, 특히, 3 MPa 및 210℃ 조건에서 다른 온도 조건 즉, 210℃ 보다 높거나 낮은 온도에 비해서도 우수한 NO 분비 억제 효과를 나타내고, 세포 생존율도 높아서 항염 효과가 우수할 뿐만 아니라, 식용으로 사용되는 천연물인 개꼬시래기 및 가장 안전한 용매인 물을 이용한 것으로 부작용도 문제되지 아니한 것으로 확인되었다.

상기 개꼬시래기(Gracilariopsis chorda)는 홍조식물 돌가사리목 꼬시래기과의 해조류이다. 상기 꼬시래기과(Gracilariaceae)는 주로 바닷가의 조개껍데기나 바위 등에 생기는 홍조류로, 꼬시래기, 각시꼬시래기, 개꼬시래기, 잎꼬시래기 또는 꼬불꼬시래기 등이 있으며, 예로부터 식용으로 사용되거나 한천을 만들기 위해 사용되어 왔다.

상기 개꼬시래기는 꼬시래기과의 홍조식물로 주로 외해에 면한 조용한 점심대에 분포한다. 상기 개꼬시래기는 높이가 약 1m 정도까지 자라고, 원기둥 모양이고 주축이 뚜렷하다. 가지는 성글게 나고 길며, 중심가지에 어긋나고 주축 또는 중심가지와 같은 모양이다. 가지의 밑동과 끝은 차츰 가늘어진다. 낭과는 공을 반으로 잘라놓은 모양이며 부풀어올라 커지고, 빛깔은 연하고 다 자라서 오래되면 연골지이 되며 잘 부러진다.

상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 180℃ 내지 240℃의 아임계수로 추출한 개꼬시래기(Gracilariopsis chorda) 아임계수 추출물일 수 있다.

또한, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 1 MPa 내지 5 MPa 및 180℃ 내지 240℃ 또는 2 MPa 내지 4 MPa 및 200℃ 내지 220℃ 또는 3 MPa 및 200℃ 내지 210℃의 아임계 조건 또는 3 MPa 및 200℃ 내지 210℃의 조건에서 1분간 추출한 개꼬시래기 아임계수 추출물일 수 있다.

또한, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 개꼬시래기 분쇄물에 물을 첨가하고 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 추출하는 것을 특징으로 개꼬시래기 아임계수 추출물일 수 있다.

상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃의 아임계수로 추출한 것, 또는 3 MPa 및 210℃의 아임계수로 추출한 것일 수 있다.

상기 아임계수 추출물을 제조하기 위한 아임계 추출법의 조건은 상기 아임계 수의 압력이 1 MPa 내지 5 MPa 또는 2 MPa 내지 4 MPa 또는 2.5 MPa 내지 3.5 MPa 또는 3 MPa일 수 있고, 상기 아임계수의 온도는 180℃ 내지 240℃ 또는 190℃ 내지 230℃ 또는 200℃ 내지 220℃ 또는 210℃일 수 있다.

상기 아임계수 추출물을 제조하기 위한 아임계 추출법은 5초 내지 10분, 또는 10초 내지 5분, 또는 30초 내지 3분 또는 45초 내지 2분 또는 1분 동안 수행할 수 있다.

상기 아임계수 추출물은 용매 추출물에 비하여 NO 생성 저해능이 현저하게 낮고, 특히 3 MPa의 압력 조건 및 210℃에서는 150℃ 또는 270℃에 비하여 우수한 항염활성이 확인되었다.

상기 아임계수 추출물은 상기 아임계 추출 후에 여과공정, 농축공정 또는 건조공정을 선택적으로 추가할 수 있으며, 상기 여과공정은 여과지를 이용하여 수행할 수 있고, 상기 농축공정은 감압농축 등을 통하여 수행할 수 있으며, 상기 건조공정은 열풍건조 또는 냉동건조 등의 방법으로 수행할 수 있다.

따라서, 상기 항염 조성물은 염증을 억제하거나 염증을 치료 또는 예방하기 위하여 사용될 수 있다.

상기 염증은 일반적인 염증질환을 포함하는 개념이며, 일 예로 상기 염증질환은 각종 피부염, 알레르기, 전신성 홍반성 낭창, 망막염, 위염, 간염, 장염, 췌장염 및 신장염으로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 상기 알레르기는 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 알러지성 결막염, 알러지성 피부염, 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 접촉성 피부염, 두드러기(urticaria), 곤충 알러지, 식품 알러지 및 약품 알러지를 포함한다.

따라서, 본 발명의 항염 조성물은 염증질환의 치료 또는 예방용 조성물로 응용되거나, 상기 염증질환의 예방 또는 개선용 식품조성물로 응용될 수 있다. 상기 식품조성물은 일 예로 상기 염증질환의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품 조성물일 수 있다.

이러한 측면에서 본 발명은 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증질환의 개선 또는 예방용 건강기능식품 조성물일 수 있다.

상기 건강기능식품은 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

본 발명의 염증질환의 개선 또는 예방용 건강기능식품 조성물은 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 전체 식품 중량의 0.001 중량% 내지 99.9 중량% 또는 0.01 중량% 내지 50 중량% 또는 0.1 중량% 내지 30 중량% 또는 0.1 중량% 내지 15 중량% 포함될 수 있다.

상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용될 수 있다. 상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하고, 소화기관, 배설기관 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하며, 바람직하게는 포유류, 더욱 바람직하게는 인간일 수 있다.

상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 상기 항염 조성물 내에 단독으로 사용될 수 있으며, 그 외 약리학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다. 보다 상세하게는, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 포함하는 조성물이 약제로 사용되거나, 의약 또는 약학적 용도로 사용되는 경우, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합하거나 희석제로 희석하여 사용될 수 있다.

이 경우 상기 조성물 내 개꼬시래기 아임계수 추출물의 함량은 0.001 중량 % 내지 99.9 중량 %, 0.1 중량% 내지 99 중량% 또는 1 중량% 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 조성물의 사용태양 및 사용방법에 따라 상기 화합물의 함량은 바람직한 함량으로 적절히 조절하여 사용될 수 있다.

상기 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1 이상을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다. 또한, 상기 약학 조성물은 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, pH 조절제, 영양제, 비타민, 전해질, 알긴산 및 그의 염, 펙트산 및 그의 염, 보호성 콜로라이드, 글리세린, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 개꼬시래기 아임계수 추출물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 공지의 항염효과가 있는 것으로 인정된 물질, 일 예로 COX-2 저해제, NO 저해제 또는 항염증제 등으로 사용되는 물질을 더욱 포함할 수 있다.

상기 조성물이 약제로 사용하는 경우 투여방법은 경구 또는 비경구 모두 가능하며, 일 예로는 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다.

또한, 상기 조성물의 제형은 사용방법에 따라 달라질 수 있으며, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 일반적으로는, 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제(TABLETS), 알약, 연질 또는 경질 캅셀제(CAPSULES), 환제(PILLS), 산제(POWDERS) 및 과립제(GRANULES) 등이 포함되고, 이러한 제제는 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제(SUSTESIONS), 내용액제, 유제(EMULSIONS) 및 시럽제(SYRUPS) 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구투여를 위한 형태는 크림(CREAM), 로션제(LOTIONS), 연고제(ONITMENTS), 경고제(PLASTERS), 액제(LIQUIDS AND SOULTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 유동엑스제(FRUIDEXTRACTS), 엘릭서(ELIXIR), 침제(INFUSIONS), 향낭(SACHET), 패취제(PATCH) 또는 주사제(INJECTIONS) 등의 형태일 수 있다.

더 나아가, 본 발명의 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 제형화될 수 있다.

상기 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 환자의 중증도, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성률 및 병용되는 약물을 고려하여 결정할 수 있으며, 일 예로 1일 유효성분을 기준으로 하였을 때 0.1 mg/kg(체중) 내지 500 mg/kg(체중), 0.1 mg/kg(체중) 내지 400 mg/kg(체중) 또는 1 mg/kg(체중) 내지 300 mg/kg(체중)으로 투여할 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명은 또한, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물 또는 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증제를 제공한다.

상기 항염증제는 상기 유효성분을 단독으로 포함할 수 있으며, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 혼합물로 제공되는 경우, 상기 유효성분은 항염증제 전체에 대해 0.1 중량% 내지 99.9 중량%로 포함될 수 있으나, 통상 0.001 중량% 내지 50 중량%의 함량으로 포함되는 것이 일반적이다.

상기 항염제는 류마티스 관절염, 루푸스, 다발성 경화증과 같은 각종 만성 염증 질환, 패혈증, 쇼크, 장기이식의 거부반응과 같은 각종 급성 염증 질환, 안과질환, 기관지염, 또는 염증성 장질환의 예방 및 치료의 목적으로 사용가능하다.

상기 담체 또는 부형제의 일예로는 물, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 락토스, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수, 덱스트로스, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 담체 또는 부형제는 2종이상 사용될 수 있다.

또한 항염증제를 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있다.

또한 본 발명의 항염증제는, 상기 유효성분 이외에 공지의 항염활성을 갖는 화합물 또는 식물 추출물을 더욱 포함할 수 있으며, 상기 유효성분 100 중량부에 대하여 각각 5 중량부 내지 20 중량부로 포함될 수 있다.

항염증제의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 경고제, 과립제, 로션제, 리니멘트제, 리모나데제, 산제, 시럽제, 안연고제, 액제, 에어로솔제, 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제, 연고제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 전제, 침제, 점안제, 정제, 좌제, 주사제, 주정제, 캅셀제, 크림제, 환제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다.

본 발명에 따른 항염증제는 경구 또는 비경구로 사용될 수 있으며, 예컨대 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하내, 코안, 경막외 및 구강경로를 통하여 사용될 수 있으며, 이의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 좋다. 일예로, 본 발명의 항염증제는 유효성분을 기준으로 하였을 때 1일 0.1 ㎎/㎏(체중) 내지 100 ㎎/㎏(체중)으로 1회 이상 투여가능하다. 그러나 상기한 투여량은 예시하기 위한 일예에 불과하며 상기 범위에 한정되지는 않는다.

본 발명은 또한, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물 또는 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 천연물질 유래이므로 부작용이 문제되지 아니하고, 세포독성도 없을 뿐만 아니라, 염증 억제 효과가 뛰어나기 때문에 항염 및 항자극 활성이 뛰어나므로, 화장품에 포함된 성분들에 의해 유도되는 염증 및 외부 환경에 의해 유도되는 염증을 효과적으로 제어할 수 다. 따라서, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물 또는 개꼬시래기 아임계수 추출물은 염증 개선 및 완화효과를 갖는 화장료 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 기초 화장료, 메이크업 화장료, 바디 화장료, 두발용 화장료, 두피용 화장료, 면도용 화장료 또는 구강용 화장료의 용도로 제공될 수 있다.

상기 기초 화장료의 예로는 크림, 화장수, 팩, 마사지 크림, 유액 등이 있고, 상기 메이크업 화장료의 예로는 파운데이션, 메이크업 베이스, 립스틱, 아이섀도, 아이라이너, 마스카라, 아이브로우 펜슬 등이 있으며, 상기 바디 화장료의 예로는 비누, 액체 세정제, 입욕제, 선스크린 크림, 선 오일 등이 있고, 상기 두발용 화장료의 예로는 샴푸, 린스, 헤어 트리트먼트, 헤어 무쓰, 헤어 리퀴드, 포마드, 헤어 칼라제, 헤어 블리치제 또는 칼라 린스 등이 있으며, 상기 두피용 화장료의 예로는 헤어 토닉 또는 스칼프 트리트먼트 등이 있고, 상기 면도용 화장료의 예로는 애프터셰이브로션 또는 셰이빙 크림 등이 있으며, 상기 구강용 화장료의 예로는 치약 또는 마우스 워셔 등이 있다.

상기 화장료 조성물에는 유효성분 외에 사용용도 및 화장료 조성물의 성질에 따라 통상 화장료 조성물에 배합되고 있는 성분, 일예로 보습제, 자외선 흡수제, 비타민류, 동식물 추출성분, 소화제, 미백제, 혈관확장제, 수렴제, 청량제, 호르몬제 등을 추가로 배합될 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 약물 또는 유효성분을 피부조직으로 침투 또는 이행시키기 위해서 필요한 기제를 추가로 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형은 사용용도 및 화장료 조성물의 성질에 따라 적절한 형태를 취할 수 있으며, 일예로 수용액계, 가용화계, 유화계, 유액계, 겔계, 페이스트계, 연고계, 에어졸계, 물-기름 2층계 또는 물-기름-분말 3층계일 수 있으며, 상기 제형의 예는 단순한 예시일 뿐, 상기 예시에 의해 본 발명의 화장료 조성물의 제형 및 형태가 제한되는 것은 아니다.

상기 유효성분은 상기 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 0.001 중량% 내지 50 중량%로 포함될 수 있으며, 바람직하기로는 0.01 중량% 내지 20 중량%일 수 있으나, 상기 함량은 제형 또는 화장료 조성물에 함유되는 유효성분외의 성분의 함량에 따라 적절히 조절할 수 있으며, 상기 함량에 의해 본 발명에 포함되는 유효성분의 함량이 제한되는 것은 아니다.

상기한 바와 같이, 다른 아임계 추출 조건에서 추출된 개꼬시래기 아임계수 추출물 또는 다른 추출법에 의해 제조된 개꼬시래기 용매 추출물에 비하여, 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃, 또는 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃, 또는 3 MPa 및 210℃의 아임계수로 추출한 개꼬시래기(Gracilariopsis chorda) 아임계수 추출물의 경우, NO 생성 억제 효과가 우수하고 세포 생존율도 높게 유지되며, 천연물질 유래의 물질이어서 부작용이 문제되지 않고, 안전할 수 있으므로, 염증질환 치료를 위한 항염증제의 유효성분 또는 화장품의 유효성분으로 사용될 수 있다.

이러한 측면에서 본 발명은 항염활성을 가진 개꼬시래기 아임계수 추출물의 제조방법에 관한 것일 수 있다.

본 발명의 개꼬시래기 아임계수 추출물의 제조방법에 의해 제조된 추출물은 항염 활성이 가장 우수할 뿐만 아니라, 본 발명의 제조방법은 다른 추출방법 또는 다른 추출조건에 비하여 추출수율도 가장 높다는 장점을 갖는다.

구체적으로, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물의 제조방법은 개꼬시래기(Gracilariopsis chorda)를 분쇄하여 개꼬시래기 분쇄물을 제조하는 단계; 상기 개꼬시래기 분쇄물에 물을 첨가하는 단계; 및 상기 개꼬시래기 분쇄물 및 물을 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 반응시켜 개꼬시래기 아임계수 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 항염활성을 가진 개꼬시래기 아임계수 추출물 제조방법일 수 있다.

상기 개꼬시래기 분쇄물을 제조하는 단계는 상기 개꼬시래기를 통상의 해조류 분쇄기를 이용하여 수행할 수 있고, 상기 분쇄물 제조과정에 앞서 개꼬시래기의 건조 과정을 추가로 수행할 수 있다. 이러한 측면에서, 상기 개꼬시래기 분쇄물을 제조하는 단계는 상기 개꼬시래기를 건조하는 과정 및 상기 건조된 개꼬시래기를 분쇄하는 과정을 포함하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 개꼬시래기 건조는 통상의 해조류 건조방법, 일 예로 자연건조법, 열풍건조법, 냉동건조법 등의 방법으로 수행할 수 있으며, 상기 자연건조법은 20℃ 내지 30℃의 온도조건 및 통풍이 가능한 통기조건에서 수행할 수 있다.

상기 개꼬시래기 분쇄물에 물을 첨가하는 단계에서, 첨가되는 물의 양은 개꼬시래기 분쇄물 100 중량부를 기준으로 500 중량부 내지 1,500 중량부 또는 700 중량부 내지 1,300 중량부 또는 900 중량부 내지 1,100 중량부일 수 있다.

상기 물은 일반적인 물 또는 증류수일 수 있고, 상기 증류수는 1차 증류수 또는 2차 증류수 또는 3차 증류수일 수 있다.

상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 제조하는 단계는 상기 개꼬시래기 분쇄물 및 물을 일정 온도 및 일정 압력 조건에서 일정 시간 동안 반응시키는 방법으로 수행할 수 있다.

보다 구체적으로, 상기 압력 조건 구체적으로, 상기 아임계 추출의 압력 조건은 1 MPa 내지 5 MPa 또는 2 MPa 내지 4 MPa 또는 2.5 MPa 내지 3.5 MPa 또는 3 MPa일 수 있고, 상기 온도 조건 구체적으로, 상기 아임계 추출의 온도 조건은 180℃ 내지 240℃ 또는 190℃ 내지 230℃ 또는 200℃ 내지 220℃ 또는 210℃일 수 있다. 도한, 상기 반응시간, 구체적으로 상기 아임계수 추출물을 제조하기 위한 아임계 추출법을 수행하는 시간은 5초 내지 10분, 또는 10초 내지 5분, 또는 30초 내지 3분 또는 45초 내지 2분 또는 1분일 수 있다.

구체적으로, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 제조하는 단계의 반응조건은 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃ 또는 3 MPa 및 210℃의 조건에서 1분간 수행하는 것일 수 있다.

상기 아임계 추출에 있어서, 운반체(carrier)가 필요한 경우, 상기 운반체는 질소가스(nitrogen gas)일 수 있다. 보다 구체적으로 상기 아임계 추출법은 아임계 유체로 아임계 수를 이용하고, 운반체로 질소가스를 사용하는 것일 수 있다.

상기 아임계수추출법에 의한 경우, 기존 추출법이 가지는 유기용매의 제거를 위한 과도한 비용 및 공정이 요구된다는 점과 환경문제를 유발할 수 있다는 문제점을 해결하였을 뿐만 아니라, 본 발명의 최적 조건에 의해 추출을 수행하는 경우, 특히 최적 조건인 3 MPa 및 210℃의 조건에서 수행하는 경우, 기존 추출법인 용매 추출법에 비하여 현저하게 향상된 수율을 얻을 수 있는 것으로 평가되었다.

상기한 바와 같이, 본 발명의 아임계수를 이용하여 항염 활성을 갖는 개꼬시래기 추출물을 제조하는 방법은 기존 방법에 비하여, 안전성 및 친환경성이 인정되고, 비교적 간단한 공정으로 수행할 수 있을 뿐만 아니라, 항염 활성도 개선되고, 수율도 현저하게 상승되는 장점이 있다.

본 발명의 개꼬시래기 아임계수 추출물은 식용으로 사용되는 식물 및 가장 안전한 추출용매인 수용매를 이용한 추출물로서 부작용이나 안전성에 대한 문제가 없고, 염증과 관련된 NO 분비량을 통하여 확인한 결과, 효과적으로 염증을 저해할 수 있으며, NO 분비량을 확인한 세포에 대한 세포 생존율을 확인한 결과 이도 높은 수치로 확인되어, 항염 효과가 우수한 것으로 확인되었다. 따라서, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물은 염증을 억제하여 염증과 관련된 질병을 치료 또는 예방하기 위한 항염증제 및 특정 제형 등과 관련하여 화장품 제조에 필수적으로 사용되는 성분 또는 외부환경으로 인한 피부의 염증을 효과적으로 억제할 수 있는 특징을 갖는 화장료 조성물 등에 응용될 수 있다. 그러므로, 본 발명은 염증과 관련된 질병에 대한 치료와 관련된 의료산업 및 피부염증의 제어와 관련된 화장품 산업의 분야에서 널리 사용될 수 있다.

또한, 우리나라 서해안에서 풍부하게 생산되는 해조류를 이용하여 간단한 방법으로 제조될 수 있어 경제적으로도 유리하고, 지역경제 활성화 및 지역 농어민 소득향상에도 이바지할 수 있으므로, 본 발명의 화장료 조성물은 산업적 측면에서 그 효과가 매우 크다 할 것이다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른, RAW264.7 세포주를 이용하여, 개꼬시래기추출물의 항염효과를 확인하기 위하여, NO 분비량을 측정한 결과를 나타낸 그래프로, 가로축은 시료의 종류를 의미하고, 세로축은 NO 분비량을 나타내는 것이며, 상기 그래프에서 1은 아무런 시료를 처리하지 않은 대조군이고, 2 내지 14는 LPS(1 ㎍/mL)를 처리한 것으로, 2는 LPS만을 처리한 비교군(control)이고, 3 및 4는 3 MPa 및 90℃ 조건의 아임계수 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이며, 5 및 6은 3 MPa 및 150℃ 조건의 아임계수 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이고, 7 및 8은 3 MPa 및 210℃ 조건의 아임계수 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이며, 9 및 10은 3 MPa 및 270℃ 조건의 아임계수 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이고, 11 및 12는 열수 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이며, 13 및 14는 메탄올 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른, 상기 RAW 264.7 세포주를 이용하여, 개꼬시래기 아임계수 추출물이 세포생존률(Cell Viability)에 미치는 영향을 측정한 결과를 나타낸 그래프로, 상기 그래프에서 1은 아무런 시료를 처리하지 않은 대조군이고, 2 내지 14는 LPS(1 ㎍/mL)를 처리한 것으로, 2는 LPS만을 처리한 비교군(control)이고, 3 및 4는 3 MPa 및 90℃ 조건의 아임계수 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이며, 5 및 6은 3 MPa 및 150℃ 조건의 아임계수 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이고, 7 및 8은 3 MPa 및 210℃ 조건의 아임계수 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이며, 9 및 10은 3 MPa 및 270℃ 조건의 아임계수 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이고, 11 및 12는 열수 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이며, 13 및 14는 메탄올 추출물을 각각 125 ug/ml 및 250 ug/ml로 처리한 것이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 구체적인 실시예 및 비교예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 보다 상세히 설명하기로 한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명을 보다 명확하기 이해시키기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 하기 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 보호 범위는 특허청구범위에 의하여 해석되어야 하고, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

< 실시예 1> 개꼬시래기 추출물의 제조

해조류 즉, 개꼬시래기 시료는 전라남도 장흥지역에서 채취된 개꼬시래기를 20℃ 내지 30℃의 온도조건 및 통풍이 가능한 조건에서 3일간 자연건조시킨 개꼬시래기를 분쇄기로 분쇄하여 제조하였다.

개꼬시래기 아임계 추출물은 상기 개꼬시래기 분쇄물 20 g과 3차 증류수 200 mL를 아임계 추출장치에 넣은 후, 3MPa의 압력 조건에서 온도를 각각 90℃, 150℃, 210℃ 및 270℃로 조절하고, 상기 각각의 압력 및 온도 조건에서 1분간 반응시켜 추출하는 방법으로 제조하였다. 상기 제조된 추출액을 종이여과지(Whatman, No.2)를 이용하여 감압여과 하였으며, 상기 여과 후 회전식 감압농축기(Rotary Vacuum Evaporator)를 이용하여 농축하였으며, 상기 농축 후 동결건조기를 이용하여 건조시켜 분말화시켜 추출물을 제조하였다. 최종 제조된 추출물은 -20℃ 보관하며 실험에 사용하였다.

개꼬시래기 용매 추출물은 물 및 메탄올을 이용하여 용매 추출법으로 제조하였다. 구체적으로, 개꼬시래기 열수 추출물은 상기 개꼬시래기 분쇄물 20 g을 3차 증류수 200 mL에 침지시킨 후, 100℃에서 15분동안 추출하는 방법으로 제조하였다. 상기 제조된 추출액을 종이여과지(Whatman, No.2)를 이용하여 감압여과 하였으며, 상기 여과 후 회전식 감압농축기(Rotary Vacuum Evaporator)를 이용하여 농축하였으며, 상기 농축 후 동결건조기를 이용하여 건조시켜 분말화시켜 추출물을 제조하였다. 최종 제조된 추출물은 -20℃ 보관하며 실험에 사용하였다.

유기용매를 이용한 개꼬시래기 용매 추출물은 상기 개꼬시래기 분쇄물 20 g을 메탄올(Methanol)을 200 mL에 침지하여 24시간 동안 추출하는 방법으로 제조하였다. 상기 제조된 추출액을 종이여과지(Whatman, No.2)를 이용하여 감압여과 하였으며, 상기 여과 후 회전식 감압농축기(Rotary Vacuum Evaporator)를 이용하여 농축하였으며, 상기 농축 후 동결건조기를 이용하여 건조시켜 분말화시켜 추출물을 제조하였다. 최종 제조된 추출물은 -20℃ 보관하며 실험에 사용하였다.

상기 각 방법에 의해 제조된 추출물의 추출수율은 처음 사용된 개꼬시래기 시료 대비 최종 수득한 추출물의 중량을 비교하여 확인하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

추출물 종류	아임계 추출(3M Pa)				용매 추출
추출물 종류	90℃	150℃	210℃	270℃	열수	메탄올
추출수율(%)	11.13	11.12	25.61	19.2	19.42	3.75

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 아임계 추출법에 의할 경우 용매 추출법에 비하여 비교적 추출수율이 높은 것으로 확인되었다. 아임계 추출법에서는 150℃까지는 추출수율이 정체되었으나, 210℃에서는 추출수율이 현저하게 증가되었고, 270℃에서는 오히려 추출수율이 감소되어 210℃의 온도가 가장 적합한 것으로 확인되었다. 특히, 용매 추출법에서 가장 추출수율이 좋은 열수 추출법에 비하여 210℃의 아임계 추출이 약 25% 이상 수율이 개선되었고, 메탄올을 이용한 용매 추출법에 비해서는 약 700% 수율이 개선된 것으로 확인되었다.

따라서, 추출수율 면에서 상기 3 MPa 및 210℃의 조건에서 아임계 추출을 수행하여 추출물을 제조하는 것이 가장 바람직한 것으로 확인되었다.

< 실시예 2> 항염활성 확인

상기 실시예 1에서 제조된 개꼬시래기 아임계수 추출물의 세포 독성을 측정하기 위하여, 쥐의 대식세포인 RAW264.7 세포를 ATCC(USA)에서 분양받아 이용하였다.

상기 세포의 배양(Cell culture)에 사용된 배지는 100 Units/mL 페니실린, 100 ug/mL 스트렙토마이신, 10% FBS(fetal bovine serum)가 함유된 DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium)를 이용하였고, 37℃ 습윤한 CO₂배양기(5% CO₂/95% air)에서 배양하였다.

상기 RAW264.7 세포는 상기 배지에서 2일마다 신선한 배지로 보충하면서 계대 배양하여 실험에 사용하였다.

상기 RAW264.7 세포는 96 well plate에 1x10⁵ cells/well로 분주하고 12시간 동안 배양하였다. 상기 12시간 동안 배양한 후에 각 well에 상기 실시예 1에서 제조된 다양한 개꼬시래기 추출물을 첨가하고, 1시간 동안 정치반응시킨 후에, LPS(1 ug/mL)를 첨가하고, 상기와 같은 동일한 조건에서 24시간 배양하였다.

상기 배양한 배양액을 3,000 rpm으로 5분동안 원심분리하여 상층액을 분리하여, 새로운 96 well plate에 상기 분리된 상층액과 상기 상층액과 동량의 Griess 시약(1% sulfanilamide, 0.1% naphthyl-ethylenediamine dihydrochloride, 2% phosphoric acid, Promega, USA)을 1:1로 혼합하여 5분 동안 반응시킨 후, NO의 분비량을 540nm(Immuno Mini NJ-2300)에서 흡광도를 측정하였으며, 상기 NO의 분비량 측정 실험은 상기 실험을 동일하게 3회 수행하여, 측정된 값의 평균 값으로 최종 값을 확인하였다. 상기 확인된 결과를 도 1 및 하기 표 2에 나타내었다.

시료			NO 함량(uM)
시료의 종류		함량(ug/mL)
Normal		-	12.8±0.70
Control		-	52.56±2.31
아임계 추출 (3M Pa)	90℃	125	48.3±1.1
		250	46.9±0.8
	150℃	125	49.3±1.9
		250	49.1±1.0
	210℃	125	30.2±0.7
		250	18.6±1.4
	270℃	125	44.5±1.4
		250	44.4±3.2
용매 추출	열수추출	125	50.0±0.9
		250	52.1±1.1
	메탄올추출	125	43.6±0.7
		250	39.75±2.9

상기 표 2 및 도 1에 나타낸 바와 같이, LPS를 처리하지 않은 대조군의 경우 낮은 NO 분비량(12.8 uM)이 확인되었다. 반면, LPS를 첨가한 비교군(Control)의 경우 LPS로 인해 염증이 유발됨으로써 NO의 함량이 현저하게 증가(52.56 uM)하는 것이 확인되었다.

또한, LPS 처리에도 불구하고, 상기 실시예 1에서 제조된 개꼬시래기 추출물을 처리한 경우 NO 분비량이 감소되었고, 특히 3 MPa 및 210℃ 조건에서 아임계 추출한 개꼬시래기 아임계수 추출물의 경우 125 ug/mL를 처리한 경우에 30.2 uM, 250ug/mL를 처리한 경우에 18.6 uM으로 다른 용매 추출물뿐만 아니라 다른 아임계 추출 조건에 비해서도 현저하게 우수한 NO 분비량 감소 효과가 확인되었다.

또한, 추가적으로 항염 효과를 확인하기 위하여, LPS에 의해 유도된 세포 사멸 방지 효과 즉, 세포 생존율(Cell Viability)를 확인하였다. 상기 세포 생존율의 경우, 상기 NO 분비량의 감소가 세포의 사멸에 의한 것인지 여부를 확인하기 위하여 수행하였다.

구체적으로, 상기 배양한 RAW264.7 세포는 96 well plate에 1x10⁵ cells/well로 분주하고 12시간 동안 배양하였다. 상기 12시간 동안 배양한 후에 각 well에 상기 실시예 1에서 제조된 다양한 개꼬시래기 추출물을 첨가하고, 1시간 동안 정치반응시킨 후에, LPS(1 ug/mL)를 첨가하고, 상기와 같은 동일한 조건에서 24시간 배양하였다.

상기 배양 후, MTT 용액(3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyltetrazolium-12-bromide, 4 mg/mL)를 각 웰에 처리하고, 37℃ 및 습윤한 CO₂배양기에서 4시간 더 배양하였다. 이후 MTT 용액이 첨가된 배지를 제거한 후, DMSO(Sigma, USA) 200 ㎕를 분주하여 각 웰에 생성된 포르마잔 크리스탈을 용해시키고, 15분 후에 540nm(Immuno Mini NJ-2300)에서 흡광도를 측정하였다. 상기 세포생존율 측정 실험은 상기 실험을 동일하게 3회 수행하여, 측정된 값의 평균 값으로 최종 값을 확인하였다. 측정된 결과는 control 값에 대한 비율(%)로 계산하였으며, 그 결과를 도 2 및 하기 표 3에 나타내었다.

시료			Cell Viability(%)
시료의 종류		함량(ug/mL)
Normal		-	100±0.36
Control		-	85.49±3.48
아임계 추출 (3M Pa)	90℃	125	93.98±4.73
		250	92.9±4.89
	150℃	125	95.42±2.83
		250	98.6±11.9
	210℃	125	93.36±3.32
		250	96.06±4.98
	270℃	125	89.66±4.41
		250	82.7±2.37
용매 추출	열수추출	125	94.13±6.6
		250	87.7±4.5
	메탄올추출	125	83.46±4.46
		250	71.3±4

상기 도 2 및 표 3에 의하면, 물 용매에 비해 메탄올 용매를 사용한 경우, 세포 생존율이 낮은 것으로 확인되었고, 일반적으로 아임계수 추출물의 경우에는 세포 생존율이 높은 것으로 확인되었다. 한편, 90℃ 내지 210℃에서는 유사한 세포 생존율이 확인되었으나, 210℃ 보다 높은 270℃의 경우에는 세포 생존율이 감소하는 것이 확인되었다.

상기 결과로부터, NO 생성 억제율 및 세포 생존율의 측면에서 개꼬시래기의 3 MPa 및 210℃ 조건의 아임계수 추출물은 다른 추출용매 및 추출조건에 비하여 현저하게 우수한 항염 효과를 가지는 것으로 확인되었으므로, 본 발명의 개꼬시래기의 3 MPa 및 210℃ 조건에서 제조된 개꼬시래기 아임계수 추출물은 기존 염증 치료제를 대체할 수 있을 뿐만 아니라, 기존 화장품에 사용되는 성분으로 인한 염증 발생을 적절하게 제어할 수 있어 화장료 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있을 것으로 평가되었다.

Claims

3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 아임계수로 추출한 개꼬시래기(Gracilariopsis chorda) 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃의 아임계수로 추출한 것인 항염용 약학 조성물.
제2항에 있어서,
상기 개꼬시래기 아임계수 추출물은 3 MPa 및 210℃의 아임계수로 추출한 것인 항염용 약학 조성물.
개꼬시래기(Gracilariopsis chorda) 분쇄물에 물을 첨가하고 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 추출하는 것을 특징으로 하는 개꼬시래기 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염용 약학 조성물.
삭제
3 MPa 및 210℃의 아임계수로 추출한 개꼬시래기(Gracilariopsis chorda) 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 예방 또는 개선용 기능성 화장료 조성물.
개꼬시래기(Gracilariopsis chorda)를 분쇄하여 개꼬시래기 분쇄물을 제조하는 단계; 상기 개꼬시래기 분쇄물에 물을 첨가하는 단계; 및 상기 개꼬시래기 분쇄물 및 물을 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 반응시켜 개꼬시래기 아임계수 추출물을 제조하는 단계
를 포함하는 항염 활성을 가진 개꼬시래기 아임계수 추출물 제조방법.
제7항에 있어서,
상기 개꼬시래기 분쇄물에 첨가되는 물의 양은 개꼬시래기 분쇄물 100 중량부를 기준으로 500 중량부 내지 1,500 중량부이고, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 제조하는 단계의 반응조건은 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃의 조건인 항염 활성을 가진 개꼬시래기 아임계수 추출물 제조방법.
제8항에 있어서,
상기 개꼬시래기 분쇄물을 제조하는 단계는 상기 개꼬시래기(Gracilariopsis chorda)를 건조한 후, 분쇄하는 방법으로 수행하는 것이고, 상기 개꼬시래기 분쇄물에 첨가되는 물의 양은 개꼬시래기 분쇄물 100 중량부를 기준으로 900 중량부 내지 1100 중량부이며, 상기 개꼬시래기 아임계수 추출물을 제조하는 단계는 3 MPa 및 210℃의 조건에서 1분간 수행하는 것인 항염 활성을 가진 개꼬시래기 아임계수 추출물 제조방법.