KR20170023209A - 항-ｉｌ-１７ａ／ｉｌ-１７ｆ 교차-반응성 항체 및 그의 사용 방법 - Google Patents

항-ｉｌ-１７ａ／ｉｌ-１７ｆ 교차-반응성 항체 및 그의 사용 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 IL-17F, IL-17F 동종이량체, IL-17A, IL-17A 동종이량체, 및/또는 이종이량체성 IL-17A/IL-17F 단백질 복합체를 인식하는 완전 인간 모노클로날 항체를 제공한다. 본 발명은 치료제, 진단제 및 예방제로서 상기 모노클로날 항체를 사용하는 방법을 추가로 제공한다.

Description

항-ＩＬ-１７Ａ／ＩＬ-１７Ｆ 교차-반응성 항체 및 그의 사용 방법{ANTI-IL-17A/IL-17F CROSS-REACTIVE ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF}
관련 출원
본원은 각각의 내용이 전체가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 가출원 61/126,465 (2008년 5월 5일 출원) 및 미국 특허 가출원 61/098,369 (2008년 9월 19일)을 기초로 한 우선권을 주장한다.
본 발명은 일반적으로 IL-17F를 인식하는 모노클로날 항체, 예를 들어, 완전 인간 모노클로날 항체, 이종이량체성 IL-17A/IL-17F 복합체를 인식하는 모노클로날 항체, 예를 들어, 완전 인간 항체, 및 함께 복합되지 않을 때 IL-17F 및 IL-17A 둘 다를 인식하는 모노클로날 항체, 예를 들어, 완전 인간 교차-반응성 항체의 생성, 및 치료제로서 모노클로날 항체의 사용 방법에 관한 것이다.
IL-17A (원래 명칭은 CTL-8이고, IL-17로도 또한 알려져 있다)는 IL-17 패밀리의 시토킨의 전형적인/근본 구성원이다. IL-17A에 추가로, IL-17 시토킨 패밀리의 구성원은 현재 보존된 C-말단 구역을 공유하지만 상이한 N-말단 세그먼트를 갖는 단백질 IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E (IL-25로도 불림) 및 IL-17F를 포함한다.
IL-17A 및 IL-17F는 서열 및 생물학적 특성의 면 둘 다에서 패밀리의 2개의 가장 밀접하게 관련된 구성원이다. IL-17F는 아미노산 수준에서 IL-17A와 55%의 서열 동일성을 공유한다. IL-17A 및 IL-17F는 둘 다 수용체 IL-17R, IL-17RC, 또는 IL-17R 및 IL-17RC로 구성된 다량체성 수용체 복합체를 통해 신호를 전달하는 디술피드 연결된 동종이량체로서 분비된다. 둘 다 동일한 T 세포 하위세트 (주로 Th17 CD4+ T 세포에 의해) 상에서 또한 동시-발현된다.
또한, 둘 다 인간에서 및 인간 질병의 마우스 모델에서 다양한 염증성 및 자가면역 질병의 진행 및 병리학에 대한 기여 물질로서 유사하게 관련되었다. 구체적으로, IL-17A 및 IL-17F는 염증성 반응을 촉발하여 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 및 염증성 장 질병을 포함한 많은 자가염증성 질병 및 암에 기여하는 주요 효과기 시토킨으로서 관련되었다.
IL-17A 및 IL-17F 둘 다의 입증된 생체내 활성은 IL-17A 및 IL-17F 길항제의 임상 및/또는 치료 가능성 및 그에 대한 필요를 설명한다. 구체적으로, IL-17A 및 IL-17F 둘 다에 결합하고 IL-17A 및 IL-17F 둘 다의 하나 이상의 면역학적 활성을 억제하는 항체 (길항제 항체)가 유익할 것이다. 따라서, 당업계에서는 IL-17A 및 IL-17F 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체 둘 다에 교차 반응성인 길항제가 필요하다.
발명의 개요
본 발명은 IL-17F, IL-17F 동종이량체, IL-17A, IL-17A 동종이량체 및/또는 이종이량체성 IL-17A/IL-17F 복합체에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체를 제공한다. 본 발명의 항체는 IL-17, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 매개된 전염증성 시토킨 및/또는 케모킨 생산을 조정, 예를 들어, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해할 수 있다.
본 발명의 예시적인 모노클로날 항체는 예를 들어, 30D12 항체, 29D8 항체, 1E4 항체, 31A3 항체, 39F12 항체, 12B12 항체, 15B7 항체, 4H11 항체, 4B11 항체, 8B11 항체, 38B1 항체, 15E6 항체, 5E12 항체, 41B10 항체 및 그의 변이체를 포함한다. 상기 항체의 변이체는 30D12BF 항체 (변형된 중쇄 가변 구역을 갖는 30D12 항체의 변이체), 39F12A 항체 (변형된 중쇄 가변 구역을 갖는 39F12 항체의 변이체), 및 15E6FK 항체 (변형된 경쇄 가변 구역을 갖는 15E6 항체의 변이체)를 포함한다. 별법으로, 모노클로날 항체는 30D12 항체, 29D8 항체, 1E4 항체, 31A3 항체, 39F12 항체, 12B12 항체, 15B7 항체, 4H11 항체, 4B11 항체, 8B11 항체, 38B1 항체, 15E6 항체, 5E12 항체, 41B10 항체 및 그의 변이체, 예를 들어 30D12BF 항체, 39F12A 항체 및 15E6FK 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다. 각각의 상기 항체는 각각 본원에서 "huIL-17A/F" 항체로 칭한다. huIL-17A/F 항체는 완전 인간 모노클로날 항체, 및 인간화 모노클로날 항체 및 키메라 항체를 포함한다. 바람직하게는, 항체는 IgG1이다.
이들 항체는 인간 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 특이성을 보여주고, 이들은 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 매개된 시토킨 생산을 억제하는 것으로 나타났다. 이들 항체는 독특한 특이성을 갖는다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 huIL-17A/F 항체는 IL-17F 및 IL-17A 단독에 대해 (즉, 함께 복합되지 않을 때) 특이적으로 결합한다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 huIL-17A/F 항체는 IL-17F, IL-17F 동종이량체, 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 특이적으로 결합한다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 huIL-17A/F 항체는 IL-17F, IL-17F 동종이량체, IL-17A, IL-17A 동종이량체, 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 30D12, 29D8, 1E4, 31A3, 39F12, 12B12, 15B7, 4H11, 38B1, 15E6, 30D12BF, 4B11, 15E6FK, 및 39F12A는 IL-17F에 결합하고 IL-17A와 교차-반응하고, 이들 항체는 또한 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합한다. 5E12 및 41B10 항체는 IL-17F 및 IL-17F 동종이량체에 결합하지만, IL-17A 또는 IL-17A 동종이량체에 결합하지 않는다. 41B10 항체는 또한 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합한다.
본 발명의 완전 인간 항체는 서열 2, 6, 8, 10, 14, 18, 20, 24, 28, 32, 34, 38, 44, 48, 52, 및 54의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 구역을 함유한다. 본 발명의 완전 인간 항체는 서열 4, 12, 16, 22, 26, 30, 36, 40, 46, 및 56의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 구역을 함유한다. 3개의 중쇄 CDR은 서열 57, 60, 66, 69, 76, 79, 82, 85 및 90으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 서열에 적어도 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 구역; 서열 58, 61, 63, 65, 67, 70, 72, 74, 77, 80, 83, 86, 88, 91, 93 및 94로 이루어지는 군 중에서 선택되는 서열에 적어도 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 구역; 및 서열 59, 62, 64, 68, 71, 73, 75, 78, 81, 84, 87, 89, 92 및 95로 이루어지는 군 중에서 선택되는 서열에 적어도 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 구역을 포함한다. 3개의 경쇄 CDR은 서열 96, 101, 104, 107 및 110으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 서열에 적어도 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 구역; 서열 97, 102, 105 및 108로 이루어지는 군 중에서 선택되는 서열에 적어도 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 구역; 및 서열 98, 99, 100, 103, 106, 109, 111, 112 및 113으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 서열에 적어도 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 구역을 포함한다.
IL-17F, IL-17A 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체는 IL-17F 및 IL-17A가 공유하는 에피토프를 인식하고 결합한다. 본 발명의 항체는 이종이량체성 IL-17A/IL-17F 복합체에 특이적으로 결합하고, 여기서 항체는 인간 IL-17F, IL-17A 또는 둘 다 상의 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 본 발명의 항체는 IL-17F에 면역특이적으로 결합하고, 여기서 항체는 인간 IL-17F 상의 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 본 발명의 항체는 IL-17A에 특이적으로 결합하고, 여기서 항체는 인간 IL-17F, IL-17A 또는 둘 다 상의 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다.
huIL-17A/F 항체는 IL-17F 동종이량체, IL-17A 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체 둘 다 상에서 발견되는 공통의 에피토프에 결합한다. 계면에서 에피토프에 결합하거나 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 걸치는 항체와는 달리, huIL-17A/F 항체는 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 특이적으로 결합하고, 따라서 함께 복합되지 않을 때 IL-17F 및 IL-17A를 인식하고 결합한다. 따라서, huIL-17A/F 항체는 IL-17F 및/또는 IL-17A를 인식하기 위해 IL-17A/IL-17F 복합체의 형성을 요구하지 않는다.
huIL-17A/F 항체는 중화 능력을 보이고, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체의 하나 이상의 생물학적 기능을 억제한다. huIL-17A/F 항체는 IL-17F 동종이량체를 포함한 IL-17F, IL-17A 동종이량체를 포함한 IL-17A, 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체 각각에 결합할 수 있다.
huIL-17A/IL-17F 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하고, 이들 항체는 (i) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 100 pM 이하의 결합 친화도, (ii) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 300 pM 이하의 결합 친화도, (iii) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 400 pM 이하의 결합 친화도, (iv) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 40 nM 이하의 중화 능력, (v) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 120 nM 이하의 중화 능력, 및 (vi) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 31 nM 이하의 중화 능력을 보인다.
일부 실시태양에서, huIL-17A/IL-17F 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하고, 이들 항체는 (i) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 40 pM 이하의 결합 친화도, (ii) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 10 pM 이하의 결합 친화도, 및 (iii) IL-17A/IL-17F 이종이량체에 대한 적어도 50 pM 이하의 결합 친화도를 보인다.
일부 실시태양에서, huIL-17A/IL-17F 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하고, 이들 항체는 (i) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 15 pM 이하의 결합 친화도, (ii) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 10 pM 이하의 결합 친화도, 및 (iii) IL-17A/IL-17F 이종이량체에 대한 적어도 30 pM 이하의 결합 친화도를 보인다.
일부 실시태양에서, huIL-17A/IL-17F 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하고, 이들 항체는 (iv) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 13 nM 이하의 중화 능력, (v) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 1.9 nM 이하의 중화 능력, 및 (vi) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 11 nM 이하의 중화 능력을 보인다.
일부 실시태양에서, huIL-17A/IL-17F 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하고, 이들 항체는 (iv) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 1.6 nM 이하의 중화 능력, (v) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 1.7 nM 이하의 중화 능력, 및 (vi) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 1.1 nM 이하의 중화 능력을 보인다.
일부 실시태양에서, huIL-17A/IL-17F 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하고, 이들 항체는 (iv) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 0.2 nM 이하의 중화 능력, (v) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 1.2 nM 이하의 중화 능력, 및 (vi) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 0.2 nM 이하의 중화 능력을 보인다.
huIL-17A/F 항체는 다음 특징을 갖는다:
결합 친화도 (pM):
Figure pat00001
MEF 세포 분석을 이용하여 측정한 중화 능력 (nM):
Figure pat00002
결합 친화도는 본원에서 칭할 때 본원, 예를 들어, 실시예 5에 기재된 분석을 이용하여 결정하였다. 중화 능력은 본원에서 칭할 때 본원, 예를 들어, 실시예 7에 기재된 마우스 배아 섬유모세포 세포 분석을 이용하여 결정하였다.
바람직한 실시태양에서, huIL-17A/IL-17F 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하고, 이들 항체는 (i) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 40 pM 이하의 결합 친화도, (ii) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 10 pM 이하의 결합 친화도, (iii) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 50 pM 이하의 결합 친화도, (iv) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 1.6 nM 이하의 중화 능력, (v) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 1.7 nM 이하의 중화 능력, 및 (vi) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 1.1 nM 이하의 중화 능력을 보인다.
보다 바람직한 실시태양에서, huIL-17A/IL-17F 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하고, 이들 항체는 (i) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 15 pM 이하의 결합 친화도, (ii) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 10 pM 이하의 결합 친화도, (iii) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 30 pM 이하의 결합 친화도, (iv) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 0.2 nM 이하의 중화 능력, (v) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 1.2 nM 이하의 중화 능력, 및 (vi) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 0.2 nM 이하의 중화 능력을 보인다.
바람직한 실시태양에서, huIL-17A/IL-17F 항체는 15E6 항체, 또는 15E6 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 15E6 항체의 결합 부위와 교차-경쟁하는 항체이다. 보다 바람직한 실시태양에서, huIL-17A/IL-17F 항체는 15E6FK 항체, 또는 15E6FK 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 15E6FK 항체의 결합 부위와 교차-경쟁하는 항체이다. 가장 바람직한 실시태양에서, huIL-17A/IL-17F 항체는 상기 설명된 결합 친화도 및 중화 조건을 갖고, 15E6 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 15E6 항체의 결합 부위와 경쟁한다.
바람직하게는, huIL-17A/IL-17F 항체는 15E6 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 15E6 항체의 결합 부위와 경쟁하고, huIL-17A/IL-17F 항체는 또한 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하고, 이들 항체는 (i) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 40 pM 이하의 결합 친화도, (ii) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 10 pM 이하의 결합 친화도, (iii) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 50 pM 이하의 결합 친화도, (iv) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 1.6 nM 이하의 중화 능력, (v) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 1.7 nM 이하의 중화 능력, 및 (vi) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 1.1 nM 이하의 중화 능력을 보인다.
바람직하게는, huIL-17A/IL-17F 항체는 15E6FK 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 15E6FK 항체의 결합 부위와 경쟁하고, huIL-17A/IL-17F 항체는 또한 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하고, 이들 항체는 (i) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 15 pM 이하의 결합 친화도, (ii) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 10 pM 이하의 결합 친화도, (iii) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 30 pM 이하의 결합 친화도, (iv) IL-17A 동종이량체에 대한 적어도 0.2 nM 이하의 중화 능력, (v) IL-17F 동종이량체에 대한 적어도 1.2 nM 이하의 중화 능력, 및 (vi) IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 적어도 0.2 nM 이하의 중화 능력을 보인다.
본 발명의 항체는 또한 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F에 특이적으로 결합하는 완전 인간 항체를 포함하고, 여기서 항체는 시험관 내에서 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 매개된 전염증성 시토킨 생산의 50% 초과의 억제를 보인다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 IL-17 자극된 세포에 의한 IL-6 분비의 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 초과의 억제를 보인다. 본원에서 사용될 때, 용어 "전염증성 시토킨"은 염증을 촉진하고/하거나 염증과 연관되는 면역조절 시토킨을 나타낸다. 전염증성 시토킨 및 케모킨은 예를 들어 IL-6, IL-8, G-CSF 및 GM-CSF를 포함한다. 전염증성 케모킨은 예를 들어 GRO-α, GRO-b, LIX, GCP-2, MIG, IP10, I-TAC 및 MCP-1, RANTES, 에오탁신 (Eotaxin), SDF-1 및 MIP3a를 포함한다.
또한, 본 발명은 본 발명의 모노클로날 항체 (예를 들어, 완전 인간 모노클로날 항체)를 치료 또는 예방이 요구되는 대상에게 투여함으로써, 비정상적인 IL-17, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 활성 (예를 들어, 비정상적인 전염증성 시토킨 생산, 예를 들어 비정상적인 IL-6 생산)과 연관된 병상을 치료 또는 예방하는, 또는 그러한 병상과 연관된 증상을 완화시키는 방법을 제공한다. 치료할 대상은 예를 들어 인간이다. 모노클로날 항체는 병상과 연관된 증상을 치료, 예방 또는 완화시키기 위해 충분한 양으로 투여된다. 대상에서 병상을 치료 또는 예방하기 위해 충분한 모노클로날 항체의 양은 예를 들어 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 신호전달 (예를 들어, 하나 이상의 전염증성 시토킨 (예를 들어, IL-6)의 IL-17F 유도된 생산)을 감소시키기 위해 충분한 양이다. 본원에서 사용될 때, 용어 "감소된"은 본 발명의 모노클로날 항체의 존재 하에 전염증성 시토킨의 감소된 생산을 나타내고, 여기서 생산은 예를 들어 국소 전염증성 시토킨 생산 (예를 들어, 염증이 생긴 조직의 부위에서) 또는 전신 전염증성 시토킨 생산이다. IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 신호전달 (예를 들어, IL-17F 유도된 전염증성 시토킨, 예를 들어 IL-6)은 본 발명의 모노클로날 항체의 존재 하에서의 전염증성 시토킨 (예를 들어, IL-6) 생산 수준이 전염증성 시토킨 생산의 대조 수준 (즉, 모노클로날 항체의 부재 하에 전염증성 시토킨 생산의 수준)보다 적어도 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 100% 더 낮을 때 감소된 것이다. 전염증성 시토킨 생산 (예를 들어, IL-6) 수준은 예를 들어 본원에 기재된 IL-17-자극된 마우스 배아 섬유모세포 (MEF) 세포 분석을 이용하여 측정된다. 당업자는 전염증성 시토킨 생산 수준을 예를 들어 시판 ELISA 키트를 포함한 다양한 분석을 이용하여 측정할 수 있음을 이해할 것이다.
본 발명의 모노클로날 항체 (예를 들어, 완전 인간 모노클로날 항체)를 사용하여 치료 및/또는 예방되는 병상은 예를 들어 급성 염증, 만성 염증 (예를 들어, 알레르기성 병태 및 천식과 연관된 만성 염증), 자가면역 질병 (예를 들어, 크론 (Crohn) 병, 다발성 경화증), 염증성 장 질환, 및 이식 거부를 포함한다.
본 발명에 따른 제약 조성물은 본 발명의 항체 및 담체를 포함할 수 있다. 이들 제약 조성물은 키트, 예를 들어, 진단 키트에 포함될 수 있다.
또한, 본 발명은 가용성 IL-17F 단백질, IL-17F 단백질의 발현 방법, 및 그러한 단백질을 가용성 형태로 정제하는 방법을 제공한다.
일부 실시태양에서, 치료할 병상은 하나 이상의 자가면역 질병, 염증성 질환 및 암이다. 예를 들어, 병상은 류마티스 관절염, 크론병, 건선, 다발성 경화증, 만성 폐쇄성 폐질환, 천식, 혈관신생 및 암이고, 이로 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 제약 조성물은 본 발명의 항체 및 담체를 포함할 수 있다. 이들 제약 조성물은 키트, 예를 들어, 진단 키트에 포함될 수 있다.
당업자는 본 발명의 항체가 다양한 용도를 갖는다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 본 발명의 단백질은 예를 들어 류마티스 관절염, 크론병, 건선, 다발성 경화증, 만성 폐쇄성 폐질환, 천식, 혈관신생 및 암과 같은 질환에서 IL-17 수용체 및/또는 IL-17 수용체 복합체의 활성화를 억제하기 위한 치료제로서 사용된다. 또한, 본 발명의 항체는 진단 키트의 시약으로서 또는 진단 도구로서 사용되거나, 또는 상기 항체는 치료 시약을 생성하기 위해 경쟁 분석에 사용될 수 있다.
본 발명은 IL-17F에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체를 제공한다. 본 발명은 함께 복합체를 형성하지 않을 때 IL-17F 및 IL-17A에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 (즉, 교차-반응성 모노클로날 항체)를 추가로 제공한다. 본 발명은 IL-17F 및 이종이량체성 IL-17A/IL-17F 복합체 (본원에서 IL-17A/IL-17F 이종이량체로도 언급됨)에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체를 추가로 제공한다. 또한, 본 발명은 IL-17F, IL-17A 및 이종이량체성 IL-17A/IL-17F 복합체에 결합하는 교차-반응성 모노클로날 항체도 제공한다. 이들 항체는 본원에서 집합적으로 "huIL-17A/F" 항체로 언급된다. 항체는 예를 들어 완전 인간 항체이다.
본 발명의 항체는 IL-17F에 특이적으로 결합하고, 항체는 인간 IL-17F의 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 본 발명의 항체는 IL-17F 및 IL-17A 둘 다에 특이적으로 결합하고, 항체는 인간 IL-17F, 인간 IL-17A, 또는 둘 다의 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 본 발명의 항체는 IL-17F 및 이종이량체성 IL-17A/IL-17F 복합체에 특이적으로 결합하고, 항체는 인간 IL-17F, IL-17A, 또는 둘 다의 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다.
본 발명의 항체는 ≤1 μM, 예를 들어 ≤100 nM, 바람직하게는 ≤10 nM, 보다 바람직하게는 ≤1 nM의 평형 결합 상수 (Kd)로 IL-17F 에피토프 및/또는 IL-17A 에피토프에 결합한다. 예를 들어, 본원에서 제공되는 huIL-17A/F 항체는 약 ≤1 nM 내지 약 1 pM의 Kd를 보인다.
IL-17F의 결정 구조는 이 단백질이 시스테인 knot 폴드 (fold)를 취하고 있음을 보여주고, 이것은 단백질의 시스테인 knot 수퍼패밀리에 대한 관련성을 시사한다. 그러나, IL-17F의 시스테인 knot 모티프는 knot를 형성하기 위해서 전통적인 6개의 시스테인 대신에 4개의 시스테인만을 이용한다. 시스테인 knot 패밀리의 다른 구성원처럼, IL-17F도 IL-17A와의 이종이량체로서 존재한다. IL-17A/IL-17F 이종이량체는 IL-17R 및/또는 다량체 IL-17R/IL-17RC 복합체를 통해 신호를 전달하는 것으로 생각된다. 최근의 연구는 IL-17A/IL-17F 이종이량체 형성에 이용되는 시스테인 잔기가 IL-17F 동종이량체 형성에 이용되는 시스테인과 동일함이 밝혀졌다. 상기 데이타는 IL-17F 동종이량체 또는 IL-17A/IL-17F 이종이량체에 대한 수용체가 시스테인 knot 패밀리의 다른 단백질처럼 이량체 계면에서 보존된 시스테인 잔기에 결합할 수 있음을 시사한다.
많은 면역 조절 기능이 시토킨의 IL-17 패밀리에 대해 보고되었고, 이는 시토킨이 많은 면역 신호전달 분자를 유도하기 때문인 것으로 추정된다. IL-17A 및 IL-17F는 매우 유사한 생물학적 기능을 공유한다. 둘 다는 매우 다양한 세포, 예를 들어 섬유모세포, 각질세포, 대식세포, 상피 세포 및 내피 세포로부터 전염증성 시토킨 (예를 들어, IL-6, IL-8, G-CSF, 및 GM-CSF), 케모킨 (예를 들어, GRO-α, GRO-b, LIX, GCP-2, MIG, IP10, I-TAC, 및 MCP-1, RANTES, 에오탁신, SDF-1, 및 MIP3a) 및 프로스타글란딘 (예를 들어, PGE2)의 분비를 촉진한다. 또한, 둘 다는 연골 기질 교체를 조절하는 것으로 밝혀졌다. 또한, IL-17F는 IL-17A과 구분되는 생물학적 기능, 예를 들어 T 세포 및 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 증식 및 활성화를 자극하고, 혈관신생을 억제하는 능력을 갖는다.
본 발명의 huIL-17A/F 항체는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체의 생물학적 활성을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해하는 작용을 한다. IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F의 생물학적 활성은 예를 들어 IL-17R, IL-17RC 및/또는 다량체 IL-17R/IL-17RC 수용체 복합체에 대한 결합, 및 표적 세포에서 시토킨 및/또는 케모킨 발현 (예를 들어, IL-6, IL-8, G-CSF, GM-CSF, GRO-α, GRO-b, LIX, GCP-2, MIG, IP10, I-TAC, 및 MCP-1, RANTES, 에오탁신, SDF-1, 및 MIP3a)의 유도를 포함한다. 예를 들어, huIL-17A/F 항체는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F의 그의 수용체에 대한 결합을 부분적으로 또는 완전히 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해하거나, 또는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체 신호전달 활성을 부분적으로 또는 완전히 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화함으로써 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 생물학적 활성을 완전히 또는 부분적으로 억제한다.
huIL-17A/F 항체는 IL-17F 항체의 존재 하의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 활성의 수준이 본원에서 설명되는 IL-17F 항체와의 결합의 부재 하의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F의 수준에 비해 적어도 95%, 예를 들어 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 감소하는 경우에, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 생물학적 활성을 완전히 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해하는 것으로 간주된다. huIL-17A/F 항체는 IL-17F 항체의 존재 하의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 활성의 수준이 본원에서 설명되는 IL-17F 항체와의 결합의 부재 하의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F의 수준에 비해 95% 미만, 예를 들어, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 85% 또는 90% 감소하는 경우에, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 활성을 부분적으로 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해하는 것으로 간주된다.
huIL-17A/F 교차-반응성 항체는 IL-17F 항체의 존재 하의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 활성의 수준이 본원에서 설명되는 IL-17F 항체와의 결합의 부재 하의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 활성의 수준에 비해 적어도 95%, 예를 들어 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 감소하는 경우에, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 활성을 완전히 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해하는 것으로 간주된다. IL-17F 교차-반응성 항체는 IL-17F 항체의 존재 하의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 활성의 수준이 본원에서 설명되는 IL-17F 항체와의 결합의 부재 하의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F의 수준에 비해 95% 미만, 예를 들어, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 85% 또는 90% 감소하는 경우에, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 활성을 부분적으로 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해하는 것으로 간주된다.
정의
달리 규정되지 않으면, 본 발명과 관련하여 사용되는 학술 및 기술 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 또한, 문맥상 달리 요구되지 않으면, 단수 용어는 복수를 포함하고, 복수 용어는 단수를 포함할 것이다. 일반적으로, 본원에서 설명되는 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 및 단백질 및 올리고- 또는 폴리뉴클레오티드 화학 및 혼성화와 관련하여 사용되는 명명법 및 그에 대한 기술은 당업계에서 공지되고 일반적으로 사용되는 것이다. 표준 기술이 재조합 DNA, 올리고뉴클레오티드 합성, 및 조직 배양 및 형질전환 (예를 들어, 전기천공, 리포펙션)을 위해 사용된다. 효소 반응 및 정제 기술은 제조사의 명세사항에 따라 또는 당업계에서 일반적으로 달성되는 바와 같이 또는 본원에 설명된 바와 같이 수행된다. 상기 기술 및 절차는 일반적으로 당업계에 잘 공지된 통상적인 방법에 따라 및 본 명세서 전체에서 언급되고 논의되는 다양한 일반적인 및 보다 구체적인 참고문헌에 설명된 바와 같이 수행된다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))]을 참조한다. 본원에서 설명되는 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의약 및 제약 화학과 관련하여 사용되는 명명법, 및 그에 대한 실험 절차 및 기술은 당업계에서 공지되고 일반적으로 사용되는 것이다. 표준 기술이 화학적 합성, 화학적 분석, 제약 제제, 제형화 및 전달, 및 환자의 치료를 위해 사용된다.
본원의 개시 내용에 따라 사용되는 바와 같이, 다음 용어는 달리 지시하지 않으면 다음 의미를 갖는 것으로 이해된다:
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 인터류킨-17A, IL-17A, IL17A, IL-17, IL17, CTLA8, CTLA-8, 세포독성 T-림프구-연관 항원 8 및 인터류킨-17A 전구체는 동의어이고, 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 각각의 상기 용어는 달리 지시하는 경우를 제외하고는 동종이량체 단백질을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 인터류킨-17F, IL-17F, IL17F, ML-1, ML1, 인터류킨-24, IL-24, IL24 및 인터류킨-17F 전구체는 동의어이고, 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 각각의 상기 용어는 달리 지시하는 경우를 제외하고는 동종이량체성 단백질을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체"는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 (Ig) 분자, 즉 항원에 특이적으로 결합하는 (항원과 면역반응하는) 항원 결합 부위를 포함하는 분자의의 면역 활성 부분을 의미한다. "특이적으로 결합하다" 또는 "와 면역반응하다" 또는 "에 대해 작용하는"은 항체가 요구되는 항원의 하나 이상의 항원 결정자와 반응하고 다른 폴리펩티드와는 반응하지 않거나 또는 훨씬 더 낮은 친화도 (Kd > 10- 6)로 결합함을 의미한다. 항체는 폴리클로날, 모노클로날, 키메라, dAb (도메인 항체), 단일쇄, Fab, Fab ' 및 F(ab')2 단편, scFv, 및 Fab 발현 라이브러리를 포함하고 이로 제한되지 않는다.
기본적인 항체 구조 단위는 사량체를 포함하는 것으로 알려져 있다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩티드 사슬로 이루어지고, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄" (약 25 kDa) 및 하나의 "중쇄" (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각각의 사슬의 아미노-말단부는 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 구역을 포함한다. 각각의 사슬의 카르복시-말단부는 주로 효과기 기능을 담당하는 불변 구역을 규정한다. 일반적으로, 인간으로부터 얻은 항체 분자는 클래스 IgG, IgM, IgA, IgE 및 IgD 중의 임의의 클래스에 관련되고, 이들은 분자에 존재하는 중쇄의 특질에 의해 서로 상이하다. 특정 클래스는 또한 IgG1, IgG2 등과 같은 서브클래스를 갖는다. 또한, 인간에서, 경쇄는 카파 사슬 또는 람다 사슬일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "모노클로날 항체" (MAb) 또는 "모노클로날 항체 조성물"은 특유한 경쇄 유전자 생성물 및 특유한 중쇄 유전자 생성물로 구성된 항체 분자의 하나의 분자 종만을 함유하는 항체 분자의 집단을 의미한다. 특히, 모노클로날 항체의 상보성 결정 구역 (CDR)은 집단의 모든 분자에서 동일하다. MAb는 그에 대한 특유한 결합 친화도를 특징으로 하는 항원의 특정 에피토프와 면역반응할 수 있는 항원 결합 부위를 함유한다.
일반적으로, 인간으로부터 얻은 항체 분자는 클래스 IgG, IgM, IgA, IgE 및 IgD 중의 임의의 클래스에 관련되고, 이들은 분자에 존재하는 중쇄의 특질에 의해 서로 상이하다. 특정 클래스는 또한 IgG1, IgG2 등과 같은 서브클래스를 갖는다. 또한, 인간에서, 경쇄는 카파 사슬 또는 람다 사슬일 수 있다.
용어 "항원-결합 부위" 또는 "결합 부분"은 항원 결합에 참여하는 면역글로불린 분자의 일부를 의미한다. 항원 결합 부위는 중쇄 ("H") 및 경쇄 ("L")의 N-말단 가변 ("V") 구역의 아미노산 잔기에 의해 형성된다. "초가변 구역"으로 언급되는, 중쇄 및 경쇄의 V 구역 내의 3개의 고도로 분기하는 스트레치는 "프레임워크 구역" 또는 "FR"로 알려진 보다 보존된 측면에 접하는 스트레치 사이에 삽입된다. 따라서, 용어 "FR"은 천연에서 면역글로불린의 초가변 구역 사이에서 및 그에 인접하여 발견되는 아미노산 서열을 의미한다. 항체 분자에서, 경쇄의 3개의 초가변 구역 및 중쇄의 3개의 초가변 구역은 3차원 공간에서 서로에 대해 항원 결합 표면을 형성하도록 배치된다. 항원 결합 표면은 결합된 항원의 3차원 표면에 상보성이고, 각각의 중쇄 및 경쇄의 3개의 초가변 구역은 "상보성 결정 구역" 또는 "CDR"로 언급된다. 각각의 도메인에 대한 아미노산의 배정은 문헌 [Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991))], 또는 [Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)], [Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989)]의 규정에 따른다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 그의 단편, 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 단백질 결정자를 포함한다. 용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 단백질 결정자를 포함한다. 에피토프 결정자는 대체로 분자의 화학적 활성 표면기, 예를 들어 아미노산 또는 당 측쇄로 구성되고, 대체로 특이적 3차원 구조적 특징, 및 특이적 전하 특징을 갖는다. 항체는 해리 상수가 ≤1 μM, 예를 들어 ≤100 nM, 바람직하게는 ≤10 nM, 보다 바람직하게는 ≤1 nM일 때 항원에 특이적으로 결합하는 것으로 언급된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "면역학적 결합" 및 "면역학적 결합 특성"은 면역글로불린 분자와, 면역글로불린이 그에 대해 특이적인 항원 사이에서 발생하는 종류의 비-공유 상호작용을 의미한다. 면역학적 결합 상호작용의 강도, 또는 친화도는 상호작용의 해리 상수 (Kd)로 표현될 수 있고, Kd가 작을수록 친화도가 큼을 나타낸다. 선택된 폴리펩티드의 면역학적 결합 특성은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 정량할 수 있다. 한가지 방법은 항원-결합 부위/항원 복합체 형성 및 해리 속도의 측정을 수반하고, 이 속도는 복합체 파트너의 농도, 상호작용의 친화도, 및 양 방향으로의 속도에 균등한 영향을 주는 기하 파라미터에 의해 결정된다. 따라서, "온 레이트 (on rate) 상수" (Kon) 및 "오프 레이트 (off rate) 상수" (Koff) 둘 다는 농도 및 회합 및 해리의 실제 속도의 계산에 의해 결정될 수 있다 ([Nature 361:186-87 (1993)] 참조). Koff/Kon의 비는 친화도에 관련되지 않은 모든 파라미터의 취소를 허용하고, 해리 상수 Kd와 동일하다 (일반적으로, 문헌 [Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473] 참조). 본 발명의 항체는 방사성 리간드 결합 분석과 같은 분석 또는 당업자에게 공지된 유사한 분석에 의해 측정될 때 평형 결합 상수 (Kd)가 ≤1 μM, 바람직하게는 ≤100 nM, 보다 바람직하게는 ≤10 nM, 가장 바람직하게는 ≤ 100 pM 내지 약 1 pM일 때, IL-17F 동종이량체, IL-A 동종이량체 및/또는 IL-17A/IL-17F 이종이량체에 특이적으로 결합하는 것으로 언급된다.
본원에서 사용되는 용어 "단리된 폴리뉴클레오티드"는 게놈, cDNA, 또는 합성 기원의 폴리뉴클레오티드 또는 이들의 일부 조합을 의미하고, 그의 기원에 의해 "단리된 폴리뉴클레오티드"는 (1) "단리된 폴리뉴클레오티드"가 자연에서 발견되는 폴리뉴클레오티드의 전부 또는 일부와 회합하지 않거나, (2) 그가 자연에서 연결되지 않는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결되거나, 또는 (3) 보다 큰 서열의 일부로서 자연에서 발생하지 않는다. 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드는 서열 2, 6, 8, 10, 14, 18, 20, 24, 28, 32, 34, 38, 44, 48 또는 54에 제시된 중쇄 면역글로불린 분자를 코딩하는 핵산 분자 및 서열 4, 12, 16, 22, 26, 30, 36, 40, 46 또는 56에 제시된 경쇄 면역글로불린 분자를 코딩하는 핵산 분자를 포함한다.
본원에서 언급되는 용어 "단리된 단백질"은 cDNA, 재조합 RNA 또는 합성 기원의 단백질 또는 이들의 일부 조합을 의미하고, 그의 기원 또는 유도원에 의해 "단리된 단백질"은 (1) 자연에서 단백질과 회합하지 않거나, (2) 동일한 공급원으로부터의 다른 단백질, 예를 들어 해양 단백질이 존재하지 않거나, (3) 상이한 종의 세포에 의해 발현되거나, 또는 (4) 자연에서 발생하지 않는다.
용어 "폴리펩티드"는 천연 단백질, 폴리펩티드 서열의 단편, 또는 유사체를 나타내기 위한 일반명으로서 본원에서 사용된다. 따라서, 천연 단백질 단편, 및 유사체는 폴리펩티드 속의 종이다. 본 발명에 따른 폴리펩티드는 서열 2, 6, 8, 10, 14, 18, 20, 24, 28, 32, 34, 38, 44, 48, 또는 54에 제시된 중쇄 면역글로불린 분자 및 서열 4, 12, 16, 22, 26, 30, 36, 40, 46, 50 또는 56에 제시된 경쇄 면역글로불린 분자, 및 중쇄 면역글로불린 분자와 경쇄 면역글로불린 분자, 예를 들어 카파 경쇄 면역글로불린 분자의 조합, 및 그 반대의 조합에 의해 형성된 항체 분자, 및 그의 단편 및 유사체를 포함한다.
특정 대상에 적용되는, 본원에서 사용되는 용어 "천연 생성"은 사물이 자연에서 발견될 수 있음을 나타낸다. 예를 들어, 자연에서 공급원으로부터 단리될 수 있는 유기체 (바이러스 포함)에 존재하고 인간에 의해 실험실에서 또는 다른 방식으로 의도적으로 변형되지 않은 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열은 천연 생성된 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "작동가능하게 연결된"은 설명되는 성분의 위치가, 그 성분이 의도되는 방식으로 기능하도록 허용하는 관계로 존재함을 나타낸다. 코딩 서열에 "작동가능하게 연결된" 제어 서열은 코딩 서열의 발현이 코딩 서열에 적합한 조건 하에서 달성되도록 라이게이션된다.
본원에서 사용되는 용어 "제어 서열"은 그가 라이게이션되는 코딩 서열의 발현 및 프로세싱의 수행에 필요한 폴리뉴클레오티드 서열을 의미한다. 상기 제어 서열의 특성은 원핵생물에서 숙주 유기체에 따라 상이하고, 상기 제어 서열은 일반적으로 진핵생물에서 프로모터, 리보좀 결합 부위, 및 전사 종결 서열을 포함하고, 일반적으로 상기 제어 서열은 프로모터 및 전사 종결 서열을 포함한다. 용어 "제어 서열"은 최소한 그의 존재가 발현 및 프로세싱에 필수적인 모든 성분을 포함하는 것으로 의도되고, 그의 존재가 유리한 추가의 성분, 예를 들어, 리더 서열 및 융합 파트너 서열을 또한 포함할 수 있다. 본원에서 언급되는 바와 같이, 용어 "폴리뉴클레오티드"는 리보뉴클레오티드 또는 데옥시뉴클레오티드 또는 이들 중 어느 한 종류의 뉴클레오티드의 변형된 형태의, 길이가 적어도 10개의 염기인 뉴클레오티드의 중합체를 의미한다. 이 용어는 단일 및 이중 가닥 형태의 DNA를 포함한다.
본원에서 언급되는 용어 "올리고뉴클레오티드"는 천연 생성, 및 비-천연 생성 올리고뉴클레오티드 연결에 의해 함께 연결된 천연 생성, 및 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 올리고뉴클레오티드는 일반적으로 200개 이하의 염기를 포함하는 폴리뉴클레오티드 하위세트이다. 바람직하게는, 올리고뉴클레오티드의 길이는 10 내지 60개의 염기, 가장 바람직하게는 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20 내지 40개의 염기이다. 올리고뉴클레오티드는 대체로 예를 들어 프로브에 대해 단일 가닥이지만, 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 유전자 돌연변이체의 제작에 사용하기 위해서는 이중 가닥일 수 있다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 센스 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드이다.
본원에서 언급되는 용어 "천연 생성 뉴클레오티드"는 데옥시리보뉴클레오티드 및 리보뉴클레오티드를 포함한다. 본원에서 언급되는 용어 "변형된 뉴클레오티드"는 변형된 또는 치환된 당기 등을 갖는 뉴클레오티드를 포함한다. 본원에서 언급되는 용어 "올리고뉴클레오티드 연결"은 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포로디셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포르아닐라데이트, 포스포르아미데이트 등과 같은 올리고뉴클레오티드 연결을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [LaPlanche et al. Nucl. Acids Res. 14:9081 (1986)]; [Stec et al. J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984)], [Stein et al. Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988)], [Zon et al. Anti Cancer Drug Design 6:539 (1991)]; [Zon et al. Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991))]; 미국 특허 5,151,510 (Stec et al.); [Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990)]을 참조한다. 올리고뉴클레오티드는 요구되는 경우 검출용 표지를 포함할 수 있다.
본원에서 언급되는 용어 "선택적으로 혼성화하다"는 검출가능하게 특이적으로 결합함을 의미한다. 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드, 올리고뉴클레오티드 및 그의 단편은 비특이적 핵산에 대한 검출가능한 결합의 평가가능한 양을 최소화하는 혼성화 및 세척 조건 하에서 핵산 가닥에 선택적으로 혼성화한다. 고 엄격성 조건은 당업계에 공지되고 본원에서 논의된 바와 같이 선택적 혼성화 조건을 달성하기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 폴리뉴클레오티드, 올리고뉴클레오티드, 및 단편과 관심있는 핵산 서열 사이의 핵산 서열 상동성은 적어도 80%이고, 보다 일반적으로 적어도 85%, 90%, 95%, 99%, 및 100%의 증가하는 상동성이 바람직하다. 2개의 아미노산 서열은 그 서열 사이에 부분적인 또는 완전한 동일성이 존재할 경우 상동성이다. 예를 들어, 85% 상동성은 2개의 서열이 최대로 매치되도록 정렬될 때 85%의 아미노산이 동일함을 의미한다. 갭 (gap) (매치되는 2개의 서열 중의 어느 하나 내의)이 매치를 최대화할 때 허용되고, 갭 길이는 5 이하가 바람직하고, 2 이하가 보다 바람직하다. 별법으로 및 바람직하게는, 2개의 단백질 서열 (또는 적어도 30개 아미노산 길이의, 그들로부터 유도되는 폴리펩티드 서열)이, 돌연변이 데이타 매트릭스 및 6 이상의 갭 페널티 (gap penalty)를 사용하는 프로그램 ALIGN을 이용하여 5 초과의 정렬 스코어 (표준 편차 단위에서)를 가질 경우, 이들 서열은 본원에서 사용되는 바와 같이 상동성이다 ([Dayhoff, M.O., in Atlas of Protein Sequence and Structure, pp. 101-110 (Volume 5, National Biomedical Research Foundation (1972) 및 Supplement 2 to this volume, pp. 1-10] 참조). 2개의 서열 또는 그의 일부는 보다 바람직하게는 ALIGN 프로그램을 사용하여 최적으로 정렬될 때 그의 아미노산이 50% 이상 동일한 경우에 상동성이다. 용어 "에 대응하다"는 폴리뉴클레오티드 서열이 참조 폴리뉴클레오티드 서열의 전부 또는 일부에 상동성 (즉, 동일하지만, 엄격하게 진화상 관련되지 않음)이거나, 또는 폴리펩티드 서열이 참조 폴리펩티드 서열에 동일함을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 이와 대조적으로, 용어 "에 상보성인"은 상보성 서열이 참조 폴리뉴클레오티드 서열의 전부 또는 일부에 상동성임을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 예를 들어, 뉴클레오티드 서열 "TATAC"는 참조 서열 "TATAC"에 대응하고, 참조 서열 "GTATA"에 상보성이다.
2 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 서열 관계를 설명하기 위해 다음 용어가 사용된다: "참조 서열", "비교창", "서열 동일성", "서열 동일성 비율", 및 "실질적인 동일성". "참조 서열"은 서열 비교를 위한 기초로서 사용되는 규정된 서열이고, 참조 서열은 예를 들어 전장 cDNA 또는 서열 목록에 제시된 유전자 서열의 세그먼트로서 보다 큰 서열의 하위세트일 수 있거나 또는 완전한 cDNA 또는 유전자 서열을 포함할 수 있다. 일반적으로, 참조 서열의 길이는 적어도 18개의 뉴클레오티드 또는 6개의 아미노산, 종종 적어도 24개의 뉴클레오티드 또는 8개의 아미노산, 및 종종 적어도 48개의 뉴클레오티드 또는 16개의 아미노산이다. 2개의 폴리뉴클레오티드 또는 아미노산 서열은 각각 (1) 2개의 분자 사이에 유사한 서열 (즉, 완전한 폴리뉴클레오티드 또는 아미노산 서열의 일부)을 포함할 수 있고, (2) 2개의 폴리뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이에서 분기하는 서열을 추가로 포함할 수 있다. 2개 (이상)의 분자 사이의 서열 비교는 일반적으로 서열 유사성의 국소 구역을 확인 및 비교하기 위해 "비교창"에서 2개의 분자의 서열을 비교함으로써 수행된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "비교창"은 적어도 18개의 연속적인 뉴클레오티드 위치 또는 6개의 아미노산의 개념적 세그먼트를 의미하고, 여기서 폴리뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열이 적어도 18개의 연속적인 뉴클레오티드 또는 6개의 아미노산 서열의 참조 서열에 대해 비교되고, 비교창 내의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 참조 서열 (부가 또는 결실을 포함하지 않는)에 비해 20% 이하의 부가, 결실, 치환 등 (즉, 갭)을 포함할 수 있다. 비교창을 정렬하기 위한 서열의 최적 정렬은 문헌 [Smith and Waterman Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)]의 국소 상동성 알고리즘에 의해, 문헌 [Needleman and Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970)]의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 문헌 [Pearson and Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 85:2444 (1988)]의 유사성 방법에 의해, 상기 알고리즘의 컴퓨터에 의한 실행 (위스콘신 제네틱스 소프트웨어 패키지 릴리스 (Wisconsin Genetics Software Package Release) 7.0 (제네틱스 컴퓨터 그룹 (Genetics Computer Group), 미국 위스콘신주 사이언스 디스트릭트 575), 진웍스 (Geneworks), 또는 맥벡터 (MacVector) 소프트웨어 패키지 내의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의해, 또는 검사에 의해 수행할 수 있고, 다양한 방법에 의해 생성된 최적 정렬 (즉, 비교창에서 최고 비율의 상동성을 생성시킴)을 선택한다.
용어 "서열 동일성"은 2개의 폴리뉴클레오티드 또는 아미노산 서열은 비교창에서 동일하다 (즉, 뉴클레오티드 대 뉴클레오티드 또는 잔기 대 잔기를 기초로 하여). 용어 "서열 동일성 비율"은 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교창에서 비교하고, 매치되는 위치의 수를 얻기 위해 동일한 핵산 염기 (예를 들어, A, T, C, G, U 또는 I) 또는 잔기가 두 서열 둘 다에서 존재하는 위치의 수를 결정하고, 매치되는 위치의 수를 비교창 내의 위치의 총수 (즉, 창 크기)로 나누고, 결과에 100을 곱하여 서열 동일성 비율을 얻음으로써 계산된다. 본원에서 사용되는 용어 "실질적인 동일성"은 폴리뉴클레오티드 또는 아미노산 서열의 특징을 나타내기 위해 본원에서 사용되고, 여기서 폴리뉴클레오티드 또는 아미노산은 적어도 18개의 뉴클레오티드 (6개의 아미노산) 위치의 비교창, 종종 적어도 24-48개의 뉴클레오티드 (8-16개의 아미노산) 위치의 비교창에서 참조 서열에 비해 적어도 85%의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 90 내지 95%의 서열 동일성, 보다 대체로 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 서열 동일성 비율은 전체적으로 참조 서열의 20% 이하의 결실 또는 부가를 포함할 수 있는 서열에 참조 서열을 비교창에서 비교함으로써 계산된다. 참조 서열은 보다 큰 서열의 하위세트일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 20개의 통상적인 아미노산 및 그의 약어는 통상적인 용례를 따른다 (문헌 [Immunology - A Synthesis (2nd Edition, E.S. Golub and D.R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland7 Mass. (1991))] 참조). 20개의 통상적인 아미노산의 입체이성질체 (예를 들어, D-아미노산), 비천연 아미노산, 예를 들어 α-,α-이치환된 아미노산, N-알킬 아미노산, 락트산, 및 다른 비통상적인 아미노산도 본 발명의 폴리펩티드에 대한 적합한 성분일 수 있다. 비통상적인 아미노산의 예는 다음을 포함한다: 4 히드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트, ε-N,N,N-트리메틸라이신, ε-N-아세틸라이신, O-포스포세린, N- 아세틸세린, N-포르밀메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-히드록시라이신, σ-N-메틸아르기닌, 및 다른 유사한 아미노산 및 이미노산 (예를 들어, 4-히드록시프롤린). 본원에서 사용되는 폴리펩티드 표시에서, 표준 용례 및 규약에 따라 왼쪽 방향은 아미노 말단 방향이고, 오른쪽 방향은 카르복시-말단 방향이다.
유사하게, 달리 특정되지 않으면, 단일 가닥 폴리뉴클레오티드 서열의 왼쪽 말단은 5' 말단이고, 이중 가닥 폴리뉴클레오티드 서열의 왼쪽 방향은 5' 방향으로 언급된다. 신생 RNA 전사체의 5'에서 3' 부가 방향은 전사 방향으로 언급되고, RNA와 동일한 서열을 갖는, RNA 전사체의 5' 말단에 대해 5'인 DNA 가닥 상의 서열 구역은 "상류 서열"로 언급되고, RNA와 동일한 서열을 갖는, RNA 전사체의 3' 말단에 대해 3'인 DNA 가닥 상의 서열 구역은 "하류 서열"로 언급된다.
폴리펩티드에 적용될 때, 용어 "실질적인 동일성"은 예를 들어 디폴트 갭 가중치를 사용하여 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해 최적으로 정렬될 때 2개의 펩티드 서열이 적어도 80%의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 90%의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 95%의 서열 동일성, 가장 바람직하게는 적어도 99%의 서열 동일성을 공유함을 의미한다.
바람직하게는, 동일하지 않은 잔기 위치는 보존적 아미노산 치환에 의해 상이하다.
보존적 아미노산 치환은 유사한 측쇄를 갖는 잔기의 상호 교환가능성을 의미한다. 예를 들어, 지방족 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 글라이신, 알라닌, 발린, 류신, 및 이소류신이고; 지방족-히드록실 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 세린 및 트레오닌이고; 아미드-함유 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 아스파라긴 및 글루타민이고; 방향족 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판이고; 염기성 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘이고; 황-함유 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 시스테인 및 메티오닌이다. 바람직한 보존적 아미노산 치환기는 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 라이신-아르기닌, 알라닌 발린, 글루탐산-아스파르트산, 및 아스파라긴-글루타민이다.
본원에서 논의되는 바와 같이, 항체 또는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열의 작은 변이는, 이 아미노산 서열의 변이가 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 90%, 95%, 가장 바람직하게는 99%를 유지할 경우 본 발명에 포함되는 것으로 고려된다. 특히, 보존적 아미노산 교체가 고려된다. 보존적 교체는 그의 측쇄에서 관련되는 아미노산의 패밀리 내에서 발생하는 것이다. 유전자에 의해 코딩되는 아미노산은 일반적으로 다음 패밀리로 분류된다: (1) 산성 아미노산은 아스파르테이트, 글루타메이트이고; (2) 염기성 아미노산은 라이신, 아르기닌, 히스티딘이고; (3) 비-극성 아미노산은 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판이고, 및 (4) 비하전 극성 아미노산은 글라이신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신이다. 친수성 아미노산은 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르테이트, 글루타민, 글루타메이트, 히스티딘, 라이신, 세린, 및 트레오닌을 포함한다. 소수성 아미노산은 알라닌, 시스테인, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 트립토판, 티로신 및 발린을 포함한다. 아미노산의 다른 패밀리는 (i) 지방족-히드록시 패밀리인 세린 및 트레오닌; (ii) 아미드 함유 패밀리인 아스파라긴 및 글루타민; (iii) 지방족 패밀리인 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; 및 (iv) 방향족 패밀리인 페닐알라닌, 트립토판, 및 티로신. 예를 들어, 류신의 이소류신 또는 발린으로의 교체, 아스파르테이트의 글루타메이트로의 교체, 트레오닌의 세린으로의 교체, 또는 아미노산의 구조적으로 관련된 아미노산으로의 유사한 교체, 특히 교체가 프레임워크 부위 내의 아미노산을 수반하지 않을 경우에 교체는 생성되는 분자의 결합 또는 특성에 큰 영향을 주지 않을 것으로 예상하는 것이 합리적이다. 아미노산 변화가 기능적 펩티드를 생성시키는지의 여부는 폴리펩티드 유도체의 비활성을 분석함으로써 쉽게 결정할 수 있다. 분석은 본원에 상세하게 설명되어 있다. 항체 또는 면역글로불린 분자의 단편 또는 유사체는 당업자에 의해 쉽게 제조될 수 있다. 단편 또는 유사체의 바람직한 아미노- 및 카르복시-말단은 기능적 도메인의 경계 부근에서 발생한다. 구조적 및 기능적 도메인은 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 서열 데이타를 공공 또는 사유 서열 데이타베이스와 비교함으로써 확인될 수 있다. 바람직하게는, 구조 및/또는 기능이 공지된 다른 단백질에서 발생하는 서열 모티프 또는 예측된 단백질 입체형태 도메인을 확인하기 위해 컴퓨터에 의한 비교 방법을 사용한다. 공지의 3차원 구조로 폴딩되는 단백질 서열을 확인하는 방법이 알려져 있다 (Bowie et al. Science 253:164 (1991)). 따라서, 상기 예는 당업자가 본 발명에 따라 구조적 및 기능적 도메인을 규정하기 위해 사용될 수 있는 서열 모티프 및 구조적 입체형태를 인식할 수 있음을 입증한다.
바람직한 아미노산 치환은 (1) 단백질 분해에 대한 감수성을 감소시키고, (2) 산화에 대한 감수성을 감소시키고, (3) 단백질 복합체를 형성하기 위해 결합 친화도를 변경하고, (4) 결합 친화도를 변경하고, (4) 상기 유사체의 다른 물리화학적 또는 기능적 특성을 부여하거나 변경하는 것이다. 유사체는 천연 생성 펩티드 서열 이외의 다른 서열의 다양한 뮤테인 (mutein)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단일 또는 다중 아미노산 치환 (바람직하게는 보존적 아미노산 치환)이 자연 발생 서열에서, 바람직하게는 분자간 접촉을 형성하는 도메인(들) 외부의 폴리펩티드 부분에서 이루어질 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 모 서열의 구조적 특징을 실질적으로 변경시키지 않아야 한다 (예를 들어, 교체 아미노산은 모 서열에서 발생하는 나선을 파괴하거나, 또는 모 서열을 특징짓는 다른 종류의 2차 구조를 붕괴시키는 경향이 없어야 한다). 당업계에서 인식되는 폴리펩티드 2차 및 3차 구조의 예는 문헌 ([Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984))]; [Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991))]; 및 [Thornton et al. Nature 354:105 (1991)])에 설명되어 있다.
본원에서 사용되는 용어 "폴리펩티드 단편"은 아미노 말단 및/또는 카르복시-말단 결실을 갖지만, 나머지 아미노산 서열이 예를 들어 전장 cDNA 서열로부터 추정된 천연 생성 서열 내의 대응하는 위치에 동일한 폴리펩티드를 의미한다. 단편의 길이는 일반적으로 적어도 5, 6, 8 또는 10개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 14개의 아미노산, 보다 바람직하게는 적어도 20개의 아미노산, 대체로 적어도 50개의 아미노산, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 70개의 아미노산이다. 본원에서 사용되는 용어 "유사체"는 추정되는 아미노산 서열의 일부에 대한 실질적인 동일성을 갖고 적합한 결합 조건 하에서 IL-17F 단독 또는 IL-17A/IL-17F 이종이량체 (즉, 복합체)에 특이적으로 결합하는, 적어도 25개 아미노산의 세그먼트로 이루어지는 폴리펩티드를 의미한다. 일반적으로, 폴리펩티드 유사체는 자연 발생 서열에 대해 보존적 아미노산 치환 (또는 부가 또는 결실)을 포함한다. 유사체는 일반적으로 적어도 20개의 아미노산 길이, 바람직하게는 적어도 50개의 아미노산 길이이거나 또는 그보다 길고, 종종 전장 천연 생성 폴리펩티드만큼 길 수 있다.
펩티드 유사체가 주형 펩티드와 유사한 특성을 갖는 비-펩티드 약물로서 제약 산업에서 통상적으로 사용된다. 상기 종류의 비-펩티드 화합물은 "펩티드 모방체 (mimetic)" 또는 "펩티드모방체 (peptidomimetic)"로 언급된다 ([Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986)], [Veber and Freidinger TINS p.392 (1985)]; 및 [Evans et al. J. Med. Chem. 30:1229 (1987)]. 상기 화합물은 종종 컴퓨터에 의한 분자 모델링을 사용하여 개발된다. 치료상 유용한 펩티드에 구조적으로 유사한 펩티드 모방체는 동등한 치료 또는 예방 효과를 생성시키기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, 펩티드모방체는 패러다임 (paradigm) 폴리펩티드 (즉, 생화학적 특성 또는 약리학적 활성을 갖는 폴리펩티드), 예를 들어 인간 항체에 구조적으로 유사하지만, 당업계에 공지된 방법에 의해 -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=CH- (시스 및 트랜스), -COCH2-, CH(OH)CH2-, 및 -CH2SO-로 이루어진 군 중에서 선택되는 연결에 의해 임의로 교체된 하나 이상의 펩티드 연결을 갖는다. 컨센서스 서열의 하나 이상의 아미노산의 동일한 종류의 D-아미노산으로의 체계적인 치환 (예를 들어, L-라이신 대신에 D-라이신)을 사용하여 보다 안정한 펩티드를 생성시킬 수 있다. 또한, 컨센서스 서열 또는 실질적으로 동일한 컨센서스 서열 변이를 포함하는 속박 (constrained) 펩티드는 당업계에 공지된 방법 (Rizo and Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992))에 의해; 예를 들어 펩티드를 고리화하는 분자내 디술피드 다리를 형성할 수 있는 내부의 시스테인 잔기를 첨가함으로써 생성될 수 있다.
용어 "물질"은 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 거대분자, 또는 생물학적 물질로부터의 추출물을 나타내기 위해 본원에서 사용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "표지" 또는 "표지된"은 방사성 표지된 아미노산의 혼입 또는 마킹된 아비딘 (예를 들어, 광학 또는 비색 방법에 의해 검출될 수 있는 형광 마커 또는 효소 활성을 함유하는 스트렙타비딘)에 의해 검출될 수 있는 비오티닐 모이어티의 폴리펩티드에 대한 부착에 의한 검출가능한 마커의 혼입을 의미한다. 특정 상황에서, 표지 또는 마커는 치료 목적으로 사용될 수 있다. 폴리펩티드 및 당단백질을 표지하기 위한 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있고, 사용될 수 있다. 폴리펩티드에 대한 표지의 예는 다음을 포함하고 이로 제한되지 않는다: 방사성 동위원소 또는 방사성 핵종 (예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광 표지 (예를 들어, FITC, 로다민, 란탄족 인광체), 효소 표지 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제, p-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광, 비오티닐기, 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프 (예를 들어, 류신 지퍼쌍 서열, 2차 항체의 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그). 일부 실시태양에서, 표지는 잠재적인 입체 방해를 감소시키기 위해서 다양한 길이의 스페이서 아암에 의해 부착된다. 본원에서 사용되는 용어 "제약 물질 또는 약물"은 환자에게 적절하게 투여될 때 요구되는 치료 효과를 유도할 수 있는 화학적 화합물 또는 조성물을 의미한다.
본원에서 다른 화학 용어는 문헌 [McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985))]에 예시된 바와 같이 당업계의 통상적인 용법에 따라 사용된다.
용어 "항신생물제"는 인간에서 신생물, 특히 악성 (암성) 병변, 예를 들어 암종, 육종, 림프종, 또는 벽혈병의 발생 또는 진행을 억제하는 기능적 특성을 갖는 물질을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 전이의 억제는 종종 항신생물제의 특성이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "실질적으로 순수한"은 대상 종이 존재하는 우세한 종임을 의미하고 (즉, 몰 기준으로, 임의의 다른 개별적인 종보다 조성물에 풍부함), 바람직하게는 실질적으로 정제된 분획은 대상 종이 존재하는 모든 거대분자 종의 적어도 약 50% (몰 기준)를 구성하는 조성물이다.
일반적으로, 실질적으로 순수한 조성물은 조성물에 존재하는 모든 거대분자 종의 약 80% 초과, 보다 바람직하게는 약 85%, 90%, 95%, 및 99% 초과를 구성할 것이다. 가장 바람직하게는, 대상 종은 필수적인 균질성으로 정제되고 (오염물질 종을 통상적인 검출 방법에 의해 조성물에서 검출할 수 없음), 여기서 조성물은 필수적으로 단일 거대분자 종으로 구성된다.
자가면역 질병은 예를 들어 후천성 면역결핍 증후군 (자가면역 성분이 존재하는 바이러스 질병인 AIDS), 원형 탈모증, 강직성 척추염, 항인지질 증후군, 자가면역 애디슨 (Addison) 병, 자가면역 용혈 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환 (AIED), 자가면역 림프증식 증후군 (ALPS), 자가면역 혈소판 감소성 자반증 (ATP), 베체트 (Behcet) 병, 심근병증, 비열대성 스프루-포진성 피부염; 만성 피로 면역 기능장애 증후군 (CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증 (CIPD), 반흔성 유천포창, 저온응집병, 크레스트 증후군, 크론병, 데고스 (Degos) 병, 연소성 피부근염, 원판상 루푸스, 본태성 혼합 한랭글로불린 혈증, 섬유근통-섬유근염, 그레이브스 (Graves) 병, 길랑-바레 (Guillain-Barre) 증후군, 하시모또 (Hashimoto) 갑상선염, 특발성 폐 섬유증, 특발성 혈소판 감소성 자반증 (ITP), IgA 신장병증, 인슐린-의존성 당뇨병, 연소성 만성 관절염 (스틸 (Still) 병), 연소성 류마티스 관절염, 메니에르 (Meniere) 병, 혼합형 결합 조직 질병, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 악성 빈혈, 결절성 다발동맥염, 다발성 연골염, 다분비선 증후군, 류마티스성 다발성 근육통, 다발성 근육염 및 피부근염, 원발성 무감마글로불린혈증, 원발성 담즙성 간경변, 건선, 건선성 관절염, 레이노 (Raynaud) 현상, 라이터 (Reiter) 증후군, 류마티스성 열, 류마티스 관절염, 사르코이드증, 경피증 (진행성 전신 경화증 (PSS), 전신 경화증 (SS)로도 알려져 있음), 쇼그렌 (Sjogren) 증후군, 근강직 증후군, 전신 홍반성 루푸스, 다까야스 (Takayasu) 동맥염, 관자 동맥염/거대세포 동맥염, 궤양성 대장염, 포도막염, 백반증 및 베게너 (Wegener) 육아종증을 포함한다.
염증성 질환은 예를 들어 만성 및 급성 염증성 질환을 포함한다. 염증성 질환의 예는 알츠하이머 (Alzheimer) 병, 천식, 아토피성 알레르기, 알레르기, 죽상경화증, 기관지 천식, 습진, 사구체신염, 이식편 대 숙주 질병, 용혈 빈혈, 골관절염, 패혈증, 뇌졸중, 조직 및 장기의 이식, 혈관염, 당뇨 망막병증 및 인공호흡기 유도 폐 손상을 포함한다.
huIL -17F-A 항체
본 발명의 모노클로날 항체 (예를 들어, 완전 인간 모노클로날 항체)는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-IF/IL-17A-유도 전염증성 시토킨 생산 (예를 들어, IL-6)을 억제하는 능력을 갖는다. 억제는 예를 들어 본원에서 설명되는 IL-17 자극된 마우스 배아 섬유모세포 (MEF) 세포 분석에 의해 결정된다.
본 발명의 예시적인 항체는 예를 들어 30D12 항체, 29D8 항체, 1E4 항체, 31A3 항체, 39F12 항체, 12B12 항체, 15B7 항체, 4H11 항체, 4B11 항체, 8B11 항체, 38B1 항체, 및 15E6 항체, 5E12 항체, 41B10 항체, 및 그의 변이체를 포함한다. 그러한 항체의 변이체는 30D12BF 항체 (30D12 항체의 변이체), 39F12A 항체 (39F12 항체의 변이체), 및 15E6FK 항체 (15E6 항체의 변이체)를 포함한다. 상기 항체는 인간 IL-17F에 대한 특이성을 보이고, 시험관 내에서 전염증성 시토킨 IL-6의 인간 IL-17F 유도를 억제하는 것으로 밝혀졌다. 또한, 29D8 항체 ("Mab02a"), 1E4 ("Mab02b") 항체, 31A3 항체 ("Mab02c"), 39F12 항체 ("Mab06a"), 12B12 항체 ("Mab06b"), 15B7 항체 ("Mab06c"), 4H11 항체 ("Mab09"), 30D12 항체, 8B11 항체, 38B1 항체, 15E6 항체 및 4B11 항체는 인간 IL-17A에 대한 특이성을 보이고, 시험관 내에서 인간 IL-17A 유도 IL-6 생산을 억제하는 것으로 밝혀졌다. 29D8 항체, 1E4 항체, 31A3 항체, 39F12 항체, 12B12 항체, 15B7 항체, 4H11 항체, 30D12 항체, 8B11 항체, 38B1 항체, 15E6 항체 및 4B11 항체는 인간 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 대한 특이성을 보인다. 5E12 항체는 인간 IL-17F에는 결합하지만, 인간 IL-17A, IL-17A 동종이량체 또는 인간 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에는 결합하지 않는다. 41B10 항체는 인간 IL-17F 및 인간 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하지만, 인간 IL-17A 또는 IL-17A 동종이량체에는 결합하지 않는다.
본원에서 설명되는 각각의 huIL-17F 모노클로날 항체는 아래 나열된 아미노산 및 대응하는 핵산 서열에 제시된 바와 같은 중쇄 가변 구역 (VH) 및 경쇄 가변 구역 (VL)을 포함한다. 30D12 항체는 서열 1에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 2), 및 서열 3에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 구역 (서열 4)을 포함한다.
> 30D12 VH 핵산 서열 (서열 1)
Figure pat00003
> 30D12 VH 아미노산 서열 (서열 2)
Figure pat00004
> 30D12 VL 핵산 서열 (서열 3)
Figure pat00005
> 30D12 VL 아미노산 서열 (서열 4)
Figure pat00006
29D8, 1E4 및 31A3 항체는 각각 구분되는 중쇄 가변 구역을 포함하지만, 공통적인 경쇄 가변 구역을 포함한다. 29D8 항체는 서열 5에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 6)을 포함한다. 1E4 항체는 서열 7에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 8)을 포함한다. 31A3 항체는 서열 9에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 10)을 포함한다. 29D8, 1E4 및 31A3 항체에 대한 경쇄 가변 구역 (서열 12)은 서열 11에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩된다.
> 29D8 VH 핵산 서열 (서열 5)
Figure pat00007
> 29D8 VH 아미노산 서열 (서열 6)
Figure pat00008
> 1E4 VH 핵산 서열 (서열 7)
Figure pat00009
> 1E4 VH 아미노산 서열 (서열 8)
Figure pat00010
>31A3 VH 핵산 서열 (서열 9)
Figure pat00011
>31A3 VH 아미노산 서열 (서열 10)
Figure pat00012
> 29D8 , 1E4 및 31A3 VL 핵산 서열 (서열 11)
Figure pat00013
> 29D8 , 1E4 및 31A3 VL 아미노산 서열 (서열 12)
Figure pat00014
4B11 항체는 서열 13에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 14), 및 서열 15에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 구역 (서열 16)을 포함한다.
>4B11 VH 핵산 서열 (서열 13)
Figure pat00015
>4B11 VH 아미노산 서열 (서열 14)
Figure pat00016
>4B11 VL 핵산 서열 (서열 15)
Figure pat00017
>4B11 VL 아미노산 서열 (서열 16)
Figure pat00018
39F12 및 12B12 항체는 각각 구분되는 중쇄 가변 구역을 포함하지만, 공통적인 경쇄 가변 구역을 공유한다. 39F12 항체는 서열 17에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 18)을 포함한다. 12B12 항체는 서열 19에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 20)을 포함한다. 39F12 및 12B12 항체에 대한 경쇄 가변 구역 (서열 22)은 서열 21에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩된다.
>39F12 VH 핵산 서열 (서열 17)
Figure pat00019
>39F12 VH 아미노산 서열 (서열 18)
Figure pat00020
>12B12 VH 핵산 서열 (서열 19)
Figure pat00021
>12B12 VH 아미노산 서열 (서열 20)
Figure pat00022
>39F12 및 12B12 VL 핵산 서열 (서열 21)
Figure pat00023
>39F12 및 12B12 VL 아미노산 서열 (서열 22)
Figure pat00024
4H11 항체는 서열 27에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 28), 및 서열 29에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 구역 (서열 30)을 포함한다.
>4H11 VH 핵산 서열 (서열 23)
Figure pat00025
>4H11 VH 아미노산 서열 (서열 24)
Figure pat00026
>4H11 VL 핵산 서열 (서열 25)
Figure pat00027
>4H11 VL 아미노산 서열 (서열 26)
Figure pat00028
8B11 항체는 서열 31에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 32), 및 서열 33에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 구역 (서열 34)을 포함한다.
>8B11 VH 핵산 서열 (서열 27)
Figure pat00029
>8B11 VH 아미노산 서열 (서열 28)
Figure pat00030
>8B11 VL 핵산 서열 (서열 29)
Figure pat00031
>8B11 VL 아미노산 서열 (서열 30)
Figure pat00032
15B7 항체는 서열 35에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 구분되는 중쇄 가변 구역 (서열 36)을 포함하고, 이전에 제시된 서열 21에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 공통적인 경쇄 가변 구역 (서열 22)을 39F12 및 12B12 항체와 공유한다.
>15B7 VH 핵산 서열 (서열 31)
Figure pat00033
>15B7 VH 아미노산 서열 (서열 32)
Figure pat00034
38B1 항체는 서열 33에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 구분되는 중쇄 가변 구역 (서열 34), 및 서열 35에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 구역 (서열 36)을 포함한다.
>38B1 VH 핵산 서열 (서열 33)
Figure pat00035
>38B1 VH 아미노산 서열 (서열 34)
Figure pat00036
>38B1 VL 핵산 서열 (서열 35)
Figure pat00037
>38B1 VL 아미노산 서열 (서열 36)
Figure pat00038
15E6 항체는 서열 37에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 구분되는 중쇄 가변 구역 (서열 38), 및 서열 39에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 구역 (서열 40)을 포함한다.
>15E6 VH 핵산 서열 (서열 37)
Figure pat00039
>15E6 VH 아미노산 서열 (서열 38)
Figure pat00040
>15E6 VL 핵산 서열 (서열 39)
Figure pat00041
>15E6 VL 아미노산 서열 (서열 40)
Figure pat00042
5E12 항체는 서열 43에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 44), 및 서열 45에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 구역 (서열 46)을 포함한다. 5E12 항체는 IL-17F 및 IL-17F 동종이량체에 결합하지만, IL-17A 또는 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에는 결합하지 않는다.
>5E12 VH 핵산 서열 (서열 43)
Figure pat00043
>5E12 VH 아미노산 서열 (서열 44)
Figure pat00044
>5E12 VL 핵산 서열 (서열 45)
Figure pat00045
>5E12 VL 아미노산 서열 (서열 46)
Figure pat00046
41B10 항체는 서열 47에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 48) 및 서열 49에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 구역 (서열 50)을 포함한다. 5E12 항체는 IL-17F, IL-17F 동종이량체, 및 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체에 결합하지만, IL-17A에는 결합하지 않는다.
>41B10 VH 핵산 서열 (서열 47)
Figure pat00047
>41B10 VH 아미노산 서열 (서열 48)
Figure pat00048
>41B10 VL 핵산 서열 (서열 49)
Figure pat00049
>41B10 VL 아미노산 서열 (서열 50)
Figure pat00050
본 발명의 huIL-17A/F 항체는 예를 들어 표 1에 제시된 중쇄 상보성 결정 구역 (VH CDR), 표 2에 제시된 경쇄 상보성 결정 구역 (VL CDR), 및 이들의 조합물을 추가로 포함한다.
huIL-17F 항체의 변이체
본원에서 설명되는 몇몇 huIL-17F 항체의 변이체는 모 항체 코딩 유전자의 DNA 서열을 변형하여 제조하였다. 예를 들어, DNA 변형은 30D12 및 15E6 중쇄 가변 구역 및 39F12 경쇄 가변 구역에서 이루어졌다. 구체적으로, 이들 아미노산 변화는 상기 항체에서 많은 변화를 생성하였다. 예를 들어, 30D12 중쇄 가변 구역에 대한 변형은 30D12 중쇄 내의 글리코실화 부위를 제거하였다 (N-연결된 글리코실화 부위는 NXS 또는 NXT이고, 여기서 X는 P를 제외한 임의의 아미노산이다). 추가로, 30D12 및 15E6 VH CDR에 대한 변형은 화학적 변형이 쉬운 잔기의 제거 (즉, 치환)에 의해 항체 제제의 보다 큰 화학적 안정성 및 균질성을 제공하였다. 예를 들어, 15E6 VH의 CDR2에서, 이소아스파르테이트를 형성할 수 있는 아스파라긴 잔기는 세린으로 변경되었다. 30D12 VH CDR2 및 15E6 VH CDR3에서, 메티오닌 잔기는 메티오닌 황 산화 가능성을 제거하기 위해 각각 류신 및 이소류신으로 변경되었다. 30D12 중쇄 가변 구역 및 39F12 경쇄 가변 구역에 대한 추가의 변형은 인간 생식계열의 원래의 프레임워크 서열을 회복시켰다 (예를 들어, 30D12 VH의 프레임워크 3에서 Asn을 Ser으로, 및 39F12 VL의 프레임워크 3에서 Ala을 Thr으로).
30D12, 15E6 및 39F12 변이체는 각각 본원에서 30D12BF, 15E6FK 및 39F12A로서 설명된다. 각각의 상기 변이체에 대한 중쇄 가변 구역 (VH) 및 경쇄 가변 구역 (VL)은 아래에서 나열되는 아미노산 및 대응하는 핵산 서열에 제시된다.
30D12BF 항체는 서열 51에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 구분되는 중쇄 가변 구역 (서열 52)을 포함하고, 서열 3에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 구역 (서열 4)을 모 30D12 항체와 공유한다. 서열 51에 제시된 핵산 서열 내의 변형된 잔기는 굵고 밑줄친, 음영진 문자로 표시된다. 서열 52에 제시된 아미노산 서열 내의 CDR은 이중-밑줄친 문자로 표시되고, 변형된 잔기는 굵지 않은 이탤릭체의 음영진 회색이다.
>30D12BF VH 핵산 서열 (서열 51)
Figure pat00051
>30D12BF VH 아미노산 서열 (서열 52)
Figure pat00052
서열 52에서, Met는 가능한 메티오닌 황 산화를 억제하기 위해 Leu으로 변경되었고; NTS 모티프는 프레임워크 3에서 글리코실화 부위를 제거하기 위해 DTS로 변경되었고; Asn의 Ser으로의 역돌연변이 (생식계열로의)가 프레임워크 3에 도입되었다.
15E6FK 항체는 서열 53에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 구분되는 중쇄 가변 구역 (서열 54)을 포함하고, 서열 39에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 구역 (서열 40)을 모 15E6 항체와 공유한다. 서열 53에 제시된 핵산 서열 내의 변형된 잔기는 굵고 밑줄친, 음영진 문자로 표시된다. 서열 54에 제시된 아미노산 서열 내의 CDR은 이중-밑줄친 문자로 표시되고, 변형된 잔기는 굵지 않은 이탤릭체의 음영진 회색이다.
>15E6FK VH 핵산 서열 (서열 53)
Figure pat00053
>15E6FK VH 아미노산 서열 (서열 54)
Figure pat00054
서열 54에서, NS는 Asn 탈아미드화 가능성을 억제하기 위해 CDR2에서 SS로 변경되고, Met는 메티오닌 황 산화 가능성을 억제하기 위해 Ile으로 변경되었다.
39F12A 항체는 서열 17에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 구역 (서열 18)을 모 39F12 항체와 공유하고, 서열 55에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 구분되는 경쇄 가변 구역 (서열 56)을 포함한다. 서열 55에 제시된 핵산 서열 내의 변형된 잔기는 굵고 밑줄친, 음영진 문자로 표시된다. 서열 56에 제시된 아미노산 서열 내의 CDR은 이중-밑줄친 문자로 표시되고, 변형된 잔기는 굵지 않은 이탤릭체의 음영진 회색이다.
>39F12A VL 핵산 서열 (서열 55)
Figure pat00055
>39F12A VL 아미노산 서열 (서열 56)
Figure pat00056
서열 56에서, Ala의 Thr으로의 역돌연변이가 프레임워크 3에 도입되었다.
각각의 상기 변이체는 예를 들어 표 1에 제시된 중쇄 상보성 결정 구역 (VH CDR), 표 2에 제시된 경쇄 상보성 결정 구역 (VL CDR), 및 이들의 조합물을 추가로 포함한다. 상기 클론에서 VH CDR에 대한 변형은 표 1에 굵은 이탤릭체의 밑줄친 문자로 제시된다.
Figure pat00057
Figure pat00058
상보성 결정 구역 (CDR)을 포함하는 아미노산은 문헌 [Kabat, EA, et al., Sequences of Protein of immunological interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office (1991)]에 규정되어 있다.
또한, 본원에서 설명되는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체도 본 발명에 포함된다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 IL-17F에 특이적으로 결합하고, 여기서 항체는 인간 IL-17F (기탁 번호 AAH70124) 상의 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 본 발명의 항체는 함께 복합체를 형성하지 않은 IL-17F 및 IL-17A에 특이적으로 결합하고, 여기서 항체는 인간 IL-17F, 인간 IL-17A (예를 들어, 기탁 번호 AAH67505), 또는 둘 다 상의 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 본 발명의 항체는 IL-17F 및 이종이량체성 IL-17A/IL-17F 복합체에 특이적으로 결합하고, 여기서 항체는 인간 IL-17F (예를 들어, 기탁 번호 AAH70124) 상의 에피토프 및/또는 인간 IL-17A (예를 들어, 기탁 번호 AAH67505) 상의 에피토프에 결합한다. 본 발명의 항체는 IL-17F, IL-17A 및 IL-17A/IL-17F에 특이적으로 결합하고, 여기서 항체는 인간 IL-17F (예를 들어, 기탁 번호 AAH70124) 상의 에피토프 및/또는 인간 IL-17A (예를 들어, 기탁 번호 AAH67505) 상의 에피토프에 결합한다.
당업자는 과도한 실험을 실시하지 않으면서, 모노클로날 항체 (예를 들어, 완전 인간 모노클로날 항체)가 본 발명의 모노클로날 항체 (예를 들어, 클론 30D12, 29D8, 1E4, 31A3, 5E12, 39F12, 12B12, 15B7, 4H11, 41B10, 8B11, 38B1, 15E6, 30D12BF, 15E6FK, 및 39F12A)와 동일한 특이성을 갖는지를, 상기 본 발명의 모노클로날 항체가 IL-17F, IL-17A, 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체에 결합하는 것을 상기 모노클로날 항체가 억제하는지의 여부를 확인함으로써 결정하는 것이 가능함을 인식할 것이다. 본 발명의 모노클로날 항체에 의한 결합의 감소에 의해 제시되는 바와 같이, 시험되는 모노클로날 항체가 본 발명의 모노클로날 항체와 경쟁할 경우, 2개의 모노클로날 항체는 동일한, 또는 밀접하게 관련된 에피토프에 결합한다.
모노클로날 항체가 본 발명의 모노클로날 항체의 특이성을 갖는지를 결정하기 위한 다른 방법은 본 발명의 모노클로날 항체를 가용성 IL-17F, IL-17A 또는 IL-17A/IL-17F 단백질 (통상 그와 반응성인)과 함께 예비-인큐베이팅한 후, 시험되는 모노클로날 항체가 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체에 결합하는 능력이 억제되는지를 결정하기 위해 시험되는 모노클로날 항체를 첨가하는 것이다. 시험되는 모노클로날 항체가 억제될 경우, 이는 아마도 본 발명의 모노클로날 항체와 동일한, 또는 기능상 동등한 에피토프 특이성을 가질 것이다.
또한, 본 발명의 모노클로날 항체의 스크리닝은 예를 들어 IL-17F, IL-1A 및/또는 IL-17A/IL-17F-유도 시토킨 및/또는 케모킨 (예를 들어, IL-6, IL-8, G-CSF, GM-CSF, GRO-α, GRO-b, LIX, GCP-2, MIG, IP10, I-TAC, 및 MCP-1, RANTES, 에오탁신, SDF-1, 및 MIP3a) 생산을 측정하고, 시험 모노클로날 항체가 IL-17F, IL-1A 및/또는 IL-17F/IL-17A-유도 시토킨 및/또는 케모킨 생산을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해할 수 있는지를 결정함으로써 수행될 수 있다.
당업계에 공지된 다양한 절차가 IL-17F, IL-17A, 및/또는 IL-17A/IL-17F에 대해, 또는 그의 유도체, 단편, 유사체, 상동체 또는 오르토로그 (ortholog)에 대해 작용하는 모노클로날 항체의 생산을 위해 사용될 수 있다 (예를 들어, 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow E, and Lane D, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY] 참조). 완전 인간 항체는 CDR을 포함하여 경쇄 및 중쇄 둘 다의 전체 서열이 인간 유전자로부터 발생하는 항체 분자이다. 상기 항체는 본원에서 "인간 항체", 또는 "완전 인간 항체"로 언급된다. 인간 모노클로날 항체는 예를 들어 아래에서 제시되는 실시예에서 설명되는 절차를 사용하여 제조된다. 또한, 인간 모노클로날 항체는 트리오마 (trioma) 기술; 인간 B-세포 하이브리도마 기술 (Kozbor et al., 1983 Immunol Today 4:72); 및 인간 모노클로날 항체를 생산하기 위한 EBV 하이브리도마 기술 ([Cole, et al., 1985 In: MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96] 참조)을 사용하여 제조할 수 있다. 인간 모노클로날 항체는 유용할 수 있고, 인간 하이브리도마를 사용하여 ([Cole, et al., 1983. Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-2030] 참조) 또는 인간 B-세포를 엡스타인 바르 (Epstein Barr) 바이러스로 시험관 내에서 형질전환시켜 생산될 수 있다 ([Cole, et al., 1985 In: MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96] 참조).
항체는 주로 면역 혈청의 IgG 분획을 제공하는 단백질 A 또는 단백질 G를 사용하여 잘 공지된 기술, 예를 들어 친화도 크로마토그래피에 의해 정제된다. 후속적으로, 또는 별법으로, 목적하는 면역글로불린의 표적인 특이적 항원, 또는 그의 에피토프는 면역친화도 크로마토그래피에 의해 면역 특이적 항체를 정제하기 위해 컬럼 상에 고정시킬 수 있다. 면역글로불린의 정제는 예를 들어 문헌 [D. Wilkinson, The Scientist, published by The Scientist, Inc., Philadelphia PA, Vol. 14, No. 8 (April 17, 2000), pp. 25-28]에 논의되어 있다.
본 발명의 항체 (예를 들어, 30D12, 29D8, 1E4, 31A3, 5E12, 39F12, 12B12, 15B7, 4H11, 41B10, 8B11, 38B1, 15E6, 30D12BF, 15E6FK, 및 39F12A)는 완전 인간 모노클로날 항체이다. IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F에 의해 매개되는 전염증성 시토킨 생산을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해하는 모노클로날 항체는 예를 들어 동물을 IL-17F 또는 IL-17A/IL-17F, 예를 들어, 쥐, 래트 또는 인간 IL-17F 또는 IL-17A/IL-17F 또는 그의 면역원성 단편, 유도체 또는 변이체로 면역화하여 생성된다. 별법으로, IL-17F 또는 IL-17A/IL-17F가 발현되어 형질감염된 세포의 표면과 회합하도록 동물은 IL-17F 또는 IL-17A/IL-17F를 코딩하는 핵산 분자를 함유하는 벡터로 형질감염된 세포로 면역화된다. 별법으로, IL-17F 또는 IL-17A/IL-17F에 대한 결합을 위해 항체 또는 항원 결합 도메인 서열을 함유하는 라이브러리를 스크리닝함으로써 항체를 얻는다. 상기 라이브러리는 예를 들어 박테리오파지에서 조립된 파지 입자의 표면 상에 발현되는 박테리오파지 코트 단백질에 대한 단백질 또는 펩티드 융합체 및 파지 입자 내에 함유된 코딩 DNA 서열로서 제조된다 (즉, "파지 디스플레이된 라이브러리"). 이어서, 골수종/B 세포 융합체로부터 생성되는 하이브리도마는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F에 대한 반응성에 대해 스크리닝된다.
모노클로날 항체는 예를 들어 하이브리도마 방법, 예를 들어 문헌 [Kohler and Milstein, Nature, 256:495 (1975)]에 기재된 것을 사용하여 제조된다. 하이브리도마 방법에서, 마우스, 햄스터, 또는 다른 적절한 숙주 동물은 일반적으로 면역화제에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 생성시키기 위해 면역화제로 면역화된다. 별법으로, 림프구는 시험관 내에서 면역화될 수 있다.
면역화제는 일반적으로 단백질 항원, 그의 단편 또는 그의 융합 단백질을 포함할 것이다. 일반적으로, 인간 기원의 세포가 요구될 경우 말초 혈액 림프구가 사용되거나, 또는 비-인간 포유동물 공급원이 요구될 경우 비장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 이어서, 림프구는 적합한 융합제, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 불멸화 세포주와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103). 불멸화 세포주는 대체로 형질전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간 기원의 골수종 세포이다. 대체로, 래트 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 하이브리도마 세포는 바람직하게는 비융합된 불멸화 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 배양될 수 있다. 예를 들어, 모 세포에 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 결여된 경우, 하이브리도마에 대한 배양 배지는 일반적으로 HGPRT-결핍 세포의 성장을 억제하는 물질인 하이포잔틴, 아미노프테린, 및 티미딘 ("HAT 배지")을 포함할 것이다.
바람직한 불멸화 세포주는 효율적으로 융합하여, 선택된 항체-생산 세포에 의한 항체의 안정한 고수준 발현을 지지하는 것이고, 배지, 예를 들어 HAT 배지에 감수성이다. 보다 바람직한 불멸화 세포주는 예를 들어 솔크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터 (Salk Institute Cell Distribution Center, 미국 캘리포니아주 샌 디에고) 및 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (American Type Culture Collection, 미국 버지니아주 매나서스)으로부터 얻을 수 있는 쥐 골수종 주이다. 또한, 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주도 모노클로날 항체의 생산에 대해 설명된 바 있다 ([Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984)]; [Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63)] 참조).
이어서, 하이브리도마 세포가 배양되는 배양 배지는 항원에 대해 작용하는 모노클로날 항체의 존재에 대해 분석할 수 있다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생산되는 모노클로날 항체의 결합 특이성은 면역침전 또는 시험관내 결합 분석, 예를 들어 방사성 면역분석 (RIA) 또는 효소-연결된 면역흡착 분석 (ELISA)에 의해 결정된다. 그러한 기술 및 분석은 당업계에 공지되어 있다. 모노클로날 항체의 결합 친화도는 예를 들어 문헌 [Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)]의 스캐챠드 (Scatchard) 분석에 의해 결정될 수 있다. 또한, 모노클로날 항체의 치료 용도에서, 표적 항원에 대한 고도의 특이성 및 고결합 친화도를 갖는 항체를 확인하는 것이 중요하다.
요구되는 하이브리도마 세포가 확인된 후, 클론은 제한 희석 절차에 의해 서브클로닝되고 표준 방법에 의해 성장될 수 있다 ([Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103] 참조). 상기 목적을 위한 적합한 배양 배지는 예를 들어 둘베코 (Dulbecco) 변형 이글 (Eagle) 배지 및 RPMI-1640 배지를 포함한다. 별법으로, 하이브리도마 세포는 포유동물 내에서 복수로서 생체 내에서 성장할 수 있다.
서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 통상적인 면역글로불린 정제 절차, 예를 들어, 단백질 A-세파로스, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화도 크로마토그래피에 의해 배양 배지 또는 복수액으로부터 단리 또는 정제될 수 있다.
또한, 모노클로날 항체는 미국 특허 4,816,567에 설명된 것과 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 발명의 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여 (예를 들어, 쥐 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 쉽게 단리하고 서열결정될 수 있다. 본 발명의 하이브리도마 세포는 상기 DNA의 바람직한 공급원으로 기능한다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터 내로 도입될 수 있고, 이것은 재조합 숙주 세포에서 모노클로날 항체를 합성하기 위해서, 그렇지 않으면 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는 숙주 세포, 예를 들어 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 골수종 세포 내로 형질감염된다. 또한, DNA는 예를 들어 상동성 쥐 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인 코딩 서열을 치환함으로써 (미국 특허 4,816,567; [Morrison, Nature 368, 812-13 (1994)] 참조) 또는 비-면역글로불린 폴리펩티드 코딩 서열의 전부 또는 일부를 면역글로불린 코딩 서열에 공유 연결시킴으로써 변형될 수 있다. 상기 비-면역글로불린 폴리펩티드는 본 발명의 항체의 불변 도메인을 치환할 수 있거나, 또는 본 발명의 항체의 한 항원 결합 부위의 가변 도메인을 치환하여 키메라 2가 항체를 생성할 수 있다.
인간 항체 및 항체의 인간화
본 발명의 모노클로날 항체는 완전 인간 항체 또는 인간화 항체를 포함한다. 상기 항체는 투여된 면역글로불린에 대한 인간의 면역 반응을 유발하지 않으면서 인간에게 투여하기에 적합하다.
huIL-17A/F 항체는 예를 들어 아래 제공되는 실시예에 설명된 절차를 이용하여 생성된다.
다른 대체 방법에서, huIL-17A/F 항체는 예를 들어 인간 서열만을 함유하는 항체를 사용하는 파지-디스플레이 방법을 사용하여 개발된다. 상기 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다 (예를 들어, 본원에 참조로 포함되는 WO92/01047 및 미국 특허 6,521,404). 상기 방법에서, 경쇄 및 중쇄의 무작위 쌍을 보유하는 파지의 조합 라이브러리는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 또는 그의 단편의 천연 또는 재조합 공급원을 사용하여 스크리닝된다. 다른 방법에서, huIL-17F 항체는 적어도 하나의 단계가 트랜스제닉 (transgenic) 비-인간 동물을 인간 IL-17F 단백질로 면역화하는 것을 포함하는 방법에 의해 생산될 수 있다. 상기 방법에서, 상기 이종 비-인간 동물의 몇몇 내인성 중쇄 및/또는 카파 경쇄 로커스는 불능화되었고, 항원에 반응하여 면역글로불린을 코딩하는 유전자를 생성시키는데 필요한 재배열이 불가능하다. 또한, 적어도 하나의 인간 중쇄 로커스 및 적어도 하나의 인간 경쇄 로커스는 동물 내로 안정하게 형질감염되었다. 따라서, 투여되는 항원에 반응하여, 인간 로커스는 항원에 면역특이적인 인간 가변 구역을 코딩하는 유전자를 제공하기 위해 재배열된다. 따라서, 면역화시에, 제노마우스는 완전 인간 면역글로불린을 분비하는 B-세포를 생산한다.
이종 비-인간 동물을 생산하기 위한 다양한 기술이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 6,075,181 및 6,150,584를 참조한다. 상기 일반적인 전략은 1994년에 발표된 제1 제노마우스™ 동물주의 생성과 관련하여 입증되었다. 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Green et al. Nature Genetics 7:13-21 (1994)]을 참조한다. 또한, 미국 특허 6,162,963, 6,150,584, 6,114,598, 6,075,181, 및 5,939,598 및 일본 특허 3 068 180 B2, 3 068 506 B2, 및 3 068 507 B2 및 유럽 특허 EP 0 463 151 Bl 및 국제 특허 출원 WO 94/02602, WO 96/34096, WO 98/24893, WO 00/76310 및 관련 패밀리 출원을 참조한다.
다른 방법에서는, 외인성 Ig 로커스가 Ig 로커스로부터의 조각들 (개개의 유전자)의 통합을 통해 모방되는 "미니로커스" 방법을 이용하였다. 따라서, 하나 이상의 VH 유전자, 하나 이상의 DH 유전자, 하나 이상의 JH 유전자, 뮤 불변 구역, 및 제2 불변 구역 (바람직하게는 감마 불변 구역)은 동물 내로 삽입하기 위한 구성체로 형성된다. 예를 들어, 미국 특허 5,545,806; 5,545,807; 5,591,669; 5,612,205; 5,625,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,643,763; 5,661,016; 5,721,367; 5,770,429; 5,789,215; 5,789,650; 5,814,318; 5,877,397; 5,874,299; 6,023,010; 및 6,255,458; 및 유럽 특허 0 546 073 B1; 및 국제 특허 출원 WO 92/03918, WO 92/22645, WO 92/22647, WO 92/22670, WO 93/12227, WO 94/00569, WO 94/25585, WO 96/14436, WO 97/13852, 및 WO 98/24884 및 관련 패밀리 출원을 참조한다.
마이크로셀 (microcell) 융합을 통해 염색체의 큰 조각, 또는 전체 염색체가 도입된 마우스로부터 인간 항체의 생성도 입증되었다. 유럽 특허 출원 773 288 및 843 961을 참조한다.
인간 항-마우스 항체 (HAMA) 반응을 통해 키메라 또는 인간화 항체가 산업적으로 제조되었다. 키메라 항체가 인간 불변 구역 및 면역 가변 구역을 갖는 한편, 특정 인간 항-키메라 항체 (HACA) 반응은 특히 항체의 만성 또는 다중-용량 이용시에 관찰될 것으로 예상된다. 따라서, HAMA 또는 HACA 반응의 중요성 및/또는 효과를 무효로 하거나 완화하기 위해서 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F에 대한 완전 인간 항체를 제공하는 것이 바람직할 것이다.
또한, 면역원성이 감소된 항체의 생산은 적절한 라이브러리를 사용하여 인간화, 키메라화 및 디스플레이 기술을 통해 달성된다. 당업계에 잘 공지된 기술을 사용하여 쥐 항체 또는 다른 종으로부터의 항체는 인간화 또는 영장류화될 수 있음이 이해될 것이다 (예를 들어, 문헌 [Winter and Harris Immunol Today 14:43 46 (1993)] 및 [Wright et al. Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992)] 참조). 관심있는 항체는 CH1, CH2, CH3, 힌지 도메인, 및/또는 프레임워크 도메인을 대응하는 인간 서열로 치환하기 위해 재조합 DNA 기술에 의해 공학처리될 수 있다 (WO 92102190 및 미국 특허 5,530,101, 5,585,089, 5,693,761, 5,693,792, 5,714,350, 및 5,777,085 참조). 또한, 키메라 면역글로불린 유전자의 제작을 위한 Ig cDNA의 사용은 당업계에 공지되어 있다 ([Liu et al. P.N.A.S. 84:3439 (1987)] 및 [J. Immunol. 139:3521 (1987)]). mRNA는 하이브리도마 또는 다른 항체 생산 세포로부터 단리되고, cDNA를 생산하기 위해 사용된다. 관심있는 cDNA는 특이적 프라이머를 사용하여 중합효소 연쇄 반응에 의해 증폭될 수 있다 (미국 특허 4,683,195 및 4,683,202). 별법으로, 라이브러리가 제조되고, 관심있는 서열을 단리하기 위해 스크리닝된다. 항체의 가변 구역을 코딩하는 DNA 서열은 이어서 인간 불변 구역 서열에 융합된다. 인간 불변 구역 유전자의 서열은 문헌 [Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of immunological Interest, N.I.H. publication no. 91-3242]에서 볼 수 있다. 인간 C 구역 유전자는 공지의 클론으로부터 쉽게 입수할 수 있다. 이소형은 요구되는 효과기 기능, 예를 들어 보체 고정, 또는 항체-의존성 세포성 세포독성에서의 활성에 의해 선택될 것이다. 바람직한 이소형은 IgG1, IgG3 및 IgG4이다. 인간 경쇄 불변 구역인 카파 또는 람다가 사용될 수 있다. 이어서, 키메라 인간화 항체는 통상적인 방법에 의해 발현된다.
항체 단편, 예를 들어 Fv, F(ab')2 및 Fab는 무손상 단백질의 절단, 예를 들어 프로테아제 또는 화학적 절단에 의해 제조될 수 있다. 별법으로, 말단절단된 (truncated) 유전자가 설계된다. 예를 들어, F(ab')2 단편의 일부를 코딩하는 키메라 유전자는 말단절단된 분자를 생성시키기 위해서 H 사슬의 CH1 도메인 및 힌지 구역을 코딩하는 DNA 서열, 이어서 번역 정지 코돈을 포함한다.
H 및 L J 구열의 컨센서스 서열은 V 구역 세그먼트의 인간 C 구역 세그먼트에 대한 후속적인 연결을 위해 유용한 제한 부위를 J 구역 내로 도입하기 위한 프라이머로서 사용하기 위한 올리고뉴클레오티드를 설계하기 위해 사용될 수 있다. C 구역 cDNA는 인간 서열 내의 유사한 위치에 제한 부위를 도입하기 위해 부위 지정 돌연변이 유발에 의해 변형될 수 있다.
발현 벡터는 플라스미드, 레트로바이러스, YAC, EBV 유래 에피솜 등을 포함한다. 편리한 벡터는 임의의 VH 또는 VL 서열이 쉽게 삽입되고 발현될 수 있도록 조작된 적절한 제한 부위가 존재하는, 기능적으로 완전한 인간 CH 또는 CL 면역글로불린 서열을 코딩하는 것이다. 상기 벡터 내에서, 스플라이싱은 대체로 삽입된 J 구역 내의 스플라이스 공여자 부위와 인간 C 구역에 선행하는 스플라이스 수용 부위 사이에서, 및 또한 인간 CH 엑손 내에서 발생하는 스플라이스 구역에서 발생한다. 폴리아데닐화 및 전사 종결은 코딩 구역 하류의 천연 염색체 부위에서 발생한다. 생성되는 키메라 항체는 레트로바이러스 LTR, 예를 들어, SV-40 조기 프로모터 (Okayama et al. Mol. Cell. Bio. 3:280 (1983)), 라우스 (Rous) 육종 바이러스 LTR (Gorman et al. P.N.A.S. 79:6777 (1982)), 및 몰로니 쥐 벽혈병 바이러스 LTR (Grosschedl et al. Cell 41:885 (1985))을 포함하는 임의의 강력한 프로모터에 연결될 수 있다. 또한, 이해되는 바와 같이, 천연 Ig 프로모터 등을 사용할 수 있다.
또한, 인간 항체 또는 다른 종으로부터의 항체는 당업계에 잘 공지된 기술을 사용하여, 파지 디스플레이, 레트로바이러스 디스플레이, 리보좀 디스플레이를 포함하고 이로 제한되지 않는 디스플레이 종류 기술, 및 다른 기술을 통해 생성될 수 있고, 생성되는 분자는 추가의 증진, 예를 들어 친화도 증진에 적용될 수 있고, 상기 기술은 당업계에 공지되어 있다 ([Wright et al. Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992)], [Hanes and Plueckthun PNAS USA 94:4937-4942 (1997)] (리보좀 디스플레이), [Parmley and Smith Gene 73:305-318 (1988)] (파지 디스플레이), [Scott, TIBS, vol. 17:241-245 (1992)], [Cwirla et al. PNAS USA 87:6378-6382 (1990)], [Russel et al. Nucl. Acids Research 21:1081-1085 (1993)], [Hoganboom et al. Immunol. Reviews 130:43-68 (1992)], [Chiswell and McCafferty TIBTECH; 10:80-8A (1992)], 및 미국 특허 5,733,743). 디스플레이 기술이 인간 항체가 아닌 항체를 생산하기 위해 이용될 경우, 상기 항체는 상기 설명된 바와 같이 인간화될 수 있다.
이들 기술을 이용하여, 항체는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 발현 세포, IL-17F 자체, IL-17F 및/또는 IL-17A의 형태, 그의 에피토프 또는 펩티드, 및 그의 발현 라이브러리 (예를 들어, 미국 특허 5,703,057 참조)로 생성될 수 있고, 본원에 설명되는 활성에 대해 상기 설명된 바와 같이 추후에 스크리닝될 수 있다.
본 발명의 huIL-17A/F 항체는 상기 설명된 단일쇄 항체를 코딩하는 DNA 세그먼트를 함유하는 벡터에 의해 발현될 수 있다.
이들은 벡터, 리포좀, 네이키드 DNA, 어쥬번트 (adjuvant)-지원 DNA, 유전자총, 카테테르 등을 포함할 수 있다. 벡터는 WO 93/64701에 설명된 바와 같은 표적화 모이어티 (예를 들어 세포 표면 수용체에 대한 리간드) 및 핵산 결합 모이어티 (예를 들어 폴리라이신)를 갖는 화학적 접합체, 바이러스 벡터 (예를 들어 DNA 또는 RNA 바이러스 벡터), 표적 모이어티 (예를 들어 표적 세포에 특이적인 항체) 및 핵산 결합 모이어티 (예를 들어 프로타민)를 함유하는 융합 단백질인 PCT/US 95/02140 (WO 95/22618)에 설명된 것과 같은 융합 단백질, 플라스미드, 파지 등을 포함한다. 벡터는 염색체, 비-염색체 또는 합성 벡터일 수 있다.
바람직한 벡터는 바이러스 벡터, 융합 단백질 및 화학적 접합체를 포함한다. 레트로바이러스 벡터는 몰로니 쥐 백혈병 바이러스를 포함한다. DNA 바이러스 벡터가 바람직하다. 이들 벡터는 폭스 벡터, 예를 들어 오르토폭스 (orthopox) 또는 조류 폭스 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 예를 들어 단순 헤르페스 I 바이러스 (HSV) 벡터 ([Geller, A.I. et al., J. Neurochem, 64:487 (1995)]; [Lim, F., et al., in DNA Cloning: Mammalian Systems, D. Glover, Ed. (Oxford Univ. Press, Oxford England) (1995)]; [Geller, A. I. et al., Proc Natl. Acad. Sci.: U.S.A. 90:7603 (1993)]; [Geller, A. I., et al., Proc Natl. Acad. Sci USA 87:1149 (1990)] 참조), 아데노바이러스 벡터 ([LeGal LaSalle et al., Science, 259:988 (1993)]; [Davidson, et al., Nat. Genet 3:219 (1993)]; [Yang, et al., J. Virol. 69:2004 (1995) 참조) 및 아데노-연관 바이러스 벡터 ([Kaplitt, M.G.. et al., Nat. Genet. 8:148 (1994)] 참조)를 포함한다.
폭스 바이러스 벡터는 유전자를 세포 세포질 내로 도입한다. 조류 폭스 바이러스 벡터는 단지 핵산의 짧은 기간의 발현을 유발한다. 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스 벡터 및 단순 헤르페스 바이러스 (HSV) 벡터는 핵산을 신경 세포 내로 도입하기에 바람직하다. 아데노바이러스 벡터는 아데노-연관 바이러스 (약 4개월)보다 더 짧은 기간의 발현 (약 2개월)을 유발하고, 이는 HSV 벡터보다 더 짧은 것이다. 선택되는 특정 벡터는 표적 세포 및 치료되는 병태에 따라 결정된다. 도입은 표준 기술, 예를 들어 감염, 형질감염, 형질도입 또는 형질전환일 수 있다. 유전자 전달 방식의 예는 예를 들어 네이키드 DNA, CaPO4 침전, DEAE 덱스트란, 전기천공, 원형질체 융합, 리포펙션 (lipofection), 세포 미세주사, 및 바이러스 벡터를 포함한다.
벡터는 본질적으로 임의의 요구되는 표적 세포를 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 정위 (stereotaxic) 주사를 사용하여 벡터 (예를 들어 아데노바이러스, HSV)를 요구되는 위치로 유도할 수 있다. 추가로, 입자는 미니펌프 주입 시스템, 예를 들어 신크로메드 인퓨젼 (SynchroMed Infusion) 시스템을 사용하여 뇌실내 (icv) 주입에 의해 전달될 수 있다. 또한, 대류로 불리는 용적 유동 (bulk flow)을 기초로 한 방법도 큰 분자를 뇌의 확장된 영역에 전달하는데 효과적인 것을 입증되었고, 표적 세포에 대한 벡터의 전달시에 유용할 수 있다 ([Bobo et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:2076-2080 (1994)]; [Morrison et al., Am. J. Physiol. 266:292-305 (1994)] 참조). 사용될 수 있는 다른 방법은 카테테르, 정맥내, 비경구, 복강내 및 피하 주사, 및 경구 또는 다른 공지의 투여 경로를 포함한다.
이들 벡터는 예를 들어 샘플에서 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체의 존재를 검출하기 위해서 다양한 방식으로 사용될 수 있는 다량의 항체를 발현하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 항체는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F에 결합하여 이들과 관련된 신호전달을 붕괴시키기 위해 사용될 수 있다.
기술은 본 발명의 항원 단백질에 특이적인 단일쇄 항체의 생산을 위해 변용될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 4,946,778 참조). 또한, 방법은 단백질에 대한 요구되는 특이성을 갖는 모노클로날 Fab 단편 또는 그의 유도체, 단편, 유사체 또는 상동체의 신속하고 효과적인 확인을 허용하기 위해 Fab 발현 라이브러리의 제작을 위해 변용할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Huse et al., 1989 Science 246: 1275-1281] 참조). (i) 항체 분자의 펩신 소화에 의해 생산되는 F(ab')2 단편; (ii) F(ab')2 단편의 디술피드 다리의 환원에 의해 생성된 Fab 단편; (iii) 파파인 및 환원제를 사용한 항체 분자의 처리에 의해 생성된 Fab 단편 및 (iv) Fv 단편을 포함하고 이로 제한되지 않는, 단백질 항원에 대한 개별특이형을 함유하는 항체 단편이 당업계에 공지된 기술에 의해 생산될 수 있다.
또한, 본 발명은 Fv, Fab, Fab ' 및 F(ab')2 항-IL-17F 단편 또는 항-IL-17A/IL-17F 복합체 단편, 단일쇄 항-IL-17F 또는 항-IL-17A/IL-17F 항체, 이중특이적 항-IL-17F, IL-17A 및/또는 항-IL-17A/IL-17F 항체, 및 이종접합체 항-IL-17F, IL-17A 및/또는 항-IL-17A/IL-17F 항체를 포함한다.
이중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 이 경우에, 결합 특이성의 하나는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체에 대한 것이다. 제2 결합 표적은 임의의 다른 항원이고, 유리하게는 세포-표면 단백질 또는 수용체 또는 수용체 서브유닛이다.
이중특이적 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전통적으로, 이중특이적 항체의 재조합 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄/경쇄쌍의 동시발현을 기초로 하고, 여기서 2개의 중쇄는 상이한 특이성을 갖는다 (Milstein and Cuello, Nature, 305:537-539 (1983)). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류 때문에, 이들 하이브리도마 (콰드로마 (quadroma))는 그 중 하나만 정확한 이중특이적 구조를 갖는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적인 혼합물을 생산한다. 정확한 분자의 정제는 대체로 친화도 크로마토그래피 단계에 의해 달성된다. 유사한 절차가 1993년 5월 13일 공개된 WO 93/08829 및 문헌 [Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)]에 개시되어 있다.
요구되는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인 (항체-항원 결합 부위)은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합될 수 있다. 융합은 바람직하게는 힌지, CH2, 및 CH3 구역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 사용하여 이루어진다. 적어도 하나의 융합체에 존재하는 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 구역 (CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합 및, 요구되는 경우, 면역글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA는 별개의 발현 벡터 내로 삽입되고, 적합한 숙주 유기체 내로 동시-형질감염된다. 이중특이적 항체를 생성하는 추가의 상세한 내용에 대해서는 예를 들어 문헌 [Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)]을 참조한다.
WO 96/27011에 설명된 다른 방안에 따르면, 항체 분자의 쌍 사이의 계면은 재조합 세포 배양액으로부터 회수되는 이종이량체의 백분율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 구역의 적어도 일부를 포함한다. 이 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터의 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄는 보다 큰 측쇄 (예를 들어 티로신 또는 트립토판)로 교체된다. 큰 측쇄(들)에 대한 동일한 또는 유사한 크기의 보상 "캐비티 (cavity)"는 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 측쇄 (예를 들어 알라닌 또는 트레오닌)로 치환함으로써 제2 항체 분자의 계면 상에 생성된다. 이는 다른 원치 않는 최종-생성물, 예를 들어 동종이량체보다 이종이량체의 수율을 증가시키기 위한 기전을 제공한다.
이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편 (예를 들어 F(ab')2 이중특이적 항체)로서 제조될 수 있다. 항체 단편으로부터 이중특이적 항체를 생성하는 기술은 문헌에 설명되어 있다. 예를 들어, 이중특이적 항체는 화학적 연결을 사용하여 제조될 수 있다. 문헌 [Brennan et al., Science 229:81 (1985)]에는 무손상 항체를 단백질 분해에 의해 절단하여 F(ab')2 단편을 생성시키는 절차가 기재되어 있다. 상기 단편은 인접 디티올을 안정화시키고 분자간 디술피드 형성을 억제하기 위해서 디티올 착화제인 아비소산나트륨의 존재 하에 환원시킨다. 이어서, 생성된 Fab' 단편은 티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로 전환된다. 이어서, Fab'-TNB 유도체 중의 하나는 머캅토에틸아민을 사용한 환원에 의해 Fab'-티올로 재전환되고, 등몰량의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합되어 이중특이적 항체를 형성한다. 생산된 이중특이적 항체는 효소의 선택적인 고정을 위한 물질로 사용될 수 있다.
추가로, Fab' 단편은 이. 콜라이로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 이중특이적 항체를 형성할 수 있다. 문헌 [Shalaby et al., J. Exp. Med. 175:217-225 (1992)]에는 완전 인간화 이중특이적 항체 F(ab')2 분자의 생산이 기재되어 있다. 각각의 Fab' 단편은 이. 콜라이로부터 별개로 분리되고, 시험관 내에서 유도된 화학적 커플링에 적용되어 이중특이적 항체를 형성한다. 이와 같이 형성된 이중특이적 항체는 ErbB2 수용체를 과다발현하는 세포 및 정상 인간 T 세포에 결합하고, 인간 유방 종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용해 활성을 촉발시킬 수 있었다.
또한, 이중특이적 항체 단편을 재조합 세포 배양으로부터 직접 제조하고 단리하기 위한 다양한 기술도 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 이중특이적 항체는 류신 지퍼를 사용하여 생산되었다 (Kostelny et al., J. Immunol. 148(5): 1547-1553 (1992)). Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩티드는 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결되었다. 항체 동종이량체는 힌지 구역에서 환원되어 단량체를 형성한 후, 재산화되어 항체 이종이량체를 형성한다. 상기 방법은 또한 항체 동종이량체의 생산을 위해 이용될 수 있다. 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)]에 기재된 "디아바디" 기술은 이중특이적 항체 단편의 제조를 위한 다른 기전을 제공하였다. 단편은 동일한 사슬 상의 2개의 도메인 사이의 페어링을 형성하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 다른 단편의 상보성 VL 및 VH 도메인과 강제로 페어링되어, 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 또한, 단일쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용하여 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 다른 전략이 보고되었다 (Gruber et al., J. Immunol. 152:5368 (1994)).
2가 초과의 항체가 고려된다. 예를 들어, 삼중특이적 항체를 제조할 수 있다 (Tutt et al., J. Immunol. 147:60 (1991)).
예시적인 이중특이적 항체는 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있고, 그 중 적어도 하나는 본 발명의 단백질 항원에서 유래한다. 별법으로, 면역글로불린 분자의 항-항원성 아암은 세포 방어 기전을 특정 항원을 발현하는 세포에 집중하기 위해서 백혈구 상의 촉발 분자, 예를 들어 T-세포 수용체 분자 (예를 들어 CD2, CD3, CD28, 또는 B7), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체 (FcγR), 예를 들어 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 또한, 이중특이적 항체는 세포독성제를 특정 항원을 발현하는 세포로 유도하기 위해 사용될 수 있다. 이들 항체는 항원 결합 아암 및 세포독성제 또는 방사성 핵종 킬레이터, 예를 들어 EOTUBE, DPTA, DOTA, 또는 TETA에 결합하는 아암을 보유한다. 관심있는 다른 이중특이적 항체는 본원에서 설명되는 단백질 항원에 결합하고, 조직 인자 (TF)에 추가로 결합한다.
또한, 이종접합체 항체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 이종접합체 항체는 2개의 공유 연결된 항체로 이루어진다. 상기 항체는 예를 들어 면역계 세포를 원치 않는 세포에 대해 표적화하고 (미국 특허 4,676,980 참조), HIV 감염의 치료를 위해 (WO 91/00360; WO 92/200373; EP 03089 참조) 제안되었다. 항체는 가교결합제를 수반하는 것을 포함하는 합성 단백질 화학에 공지된 방법을 사용하여 시험관 내에서 제조될 수 있음이 고려된다. 예를 들어, 면역독소는 디술피드 교환 반응을 사용하여 또는 티오에테르 결합을 형성함으로써 제작될 수 있다. 상기 목적을 위한 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토부티르이미데이트 및 예를 들어 미국 특허 4,676,980에 개시된 것을 포함한다.
예를 들어 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체 신호전달과 연관된 질병 및 질환의 치료시에 항체의 효과를 향상시키기 위해서 효과기 기능에 대해 본 발명의 항체를 변형하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 시스테인 잔기(들)이 Fc 구역에 도입되어, 상기 구역 내에 사슬내 디술피드 결합을 형성할 수 있다. 이렇게 생성된 동종이량체성 항체는 개선된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개 세포 치사 및 항체-의존성 세포성 세포독성 (ADCC)을 가질 수 있다 ([Caron et al., J. Exp Med., 176: 1191-1195 (1992)] 및 [Shopes, J. Immunol, 148: 2918-2922 (1992)] 참조). 별법으로, 이중 Fc 구역을 갖는 항체는 조작되어 향상된 보체 용해 및 ADCC 능력을 가질 수 있다 ([Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3: 219-230 (1989)] 참조).
또한, 본 발명은 세포독성제, 예를 들어 독소 (예를 들어, 세균, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 그의 단편), 또는 방사성 동위원소 (즉, 방사성 접합체)에 접합된 항체를 포함하는 면역접합체에 관한 것이다.
사용될 수 있는 효소 활성 독소 및 그의 단편은 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 사슬 (슈도모나스 애루기노사 (Pseudomonas aeruginosa)로부터의), 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모데신 A 사슬, 알파-사르신, 알류리테스 포르디이 (Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나 (Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아 (momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 (sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센을 포함한다. 다양한 방사성 핵종이 방사선 접합 항체의 생산을 위해 이용가능하다. 그 예는 212Bi, 131I, 131In, 90Y, 및 186Re를 포함한다.
항체 및 세포독성제의 접합체는 다양한 이기능성 단백질-커플링제, 예를 들어 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올) 프로피오네이트 (SPDP), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이기능성 유도체 (예를 들어, 디메틸 아디피미데이트 HCL), 활성 에스테르 (예를 들어 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예를 들어 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예를 들어 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예를 들어 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예를 들어 톨리엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물 (예를 들어 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조된다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al., Science 238: 1098 (1987)]에 설명된 바와 같이 제조할 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 방사성 뉴클레오티드를 항체에 접합하기 위한 예시적인 킬레이팅제이다 (WO94/11026 참조).
당업자는 매우 다양한 가능한 모이어티가 본 발명의 생성되는 항체에 커플링될 수 있음을 알 것이다 (예를 들어, 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함되는 문헌 ["Conjugate Vaccines", Contributions to Microbiology and Immunology, J. M. Cruse and R. E. Lewis, Jr (eds), Carger Press, New York, (1989)] 참조).
커플링은 항체 및 다른 모이어티가 그의 각각의 활성을 보유한다면 두 분자에 결합하는 임의의 화학 반응에 의해 수행될 수 있다. 상기 연결은 많은 화학적 기전, 예를 들어 공유 결합, 친화도 결합, 개입 (intercalation), 배위 결합 및 복합체화를 포함할 수 있다. 그러나, 바람직한 결합은 공유 결합이다. 공유 결합은 존재하는 측쇄의 직접 축합에 의해 또는 외부 가교 분자의 도입에 의해 달성할 수 있다. 많은 2가 또는 다가 연결제가 단백질 분자, 예를 들어 본 발명의 항체를 다른 분자에 커플링할 때 유용하다. 예를 들어, 대표적인 커플링제는 유기 화합물, 예를 들어 티오에스테르, 카르보디이미드, 숙신이미드 에스테르, 디이소시아네이트, 글루타르알데히드, 디아조벤젠 및 헥사메틸렌 디아민을 포함할 수 있다. 이들은 당업계에 공지된 커플링제의 다양한 클래스를 하나도 빠짐없이 나열한 것으로 의도되지 않으며, 보다 통상적인 커플링제를 예시한 것이다 (문헌 [Killen and Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984)]; [Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982)]; 및 [Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)] 참조).
바람직한 링커는 문헌에 설명되어 있다 (예를 들어, MBS (M-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르의 사용을 설명하고 있는 문헌 [Ramakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984)] 참조). 또한, 올리고펩티드 링커에 의해 항체에 커플링된 할로겐화 아세틸 히드라지드 유도체의 사용을 설명하고 있는 미국 특허 5,030,719를 참조한다. 특히 바람직한 링커는 다음을 포함한다: (i) EDC (1-에틸-3-(3-디메틸아미노-프로필) 카르보디이미드 염산염; (ii) SMPT (4-숙신이미딜옥시카르보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-디티오)-톨루엔 (피어스 켐. 코. (Pierce Chem. Co.), Cat. (21558G)); (iii) SPDP (숙신이미딜-6 [3-(2- 피리딜디티오) 프로피온아미도]헥사노에이트 (피어스 켐. 코., Cat #2165 IG); (iv) 술포-LC-SPDP (술포숙신이미딜 6 [3-(2-피리딜디티오)-프로피온아미도] 헥사노에이트 (피어스 켐. 코. Cat. #2165-G); 및 (v) EDC에 접합된 술포-NHS (N-히드록시술포-숙신이미드: 피어스 켐. 코., Cat. #24510).
상기 설명된 링커는 상이한 속성을 갖는 성분을 함유하여, 상이한 물리화학적 특성을 갖는 접합체를 생성시킨다. 예를 들어, 알킬 카르복실레이트의 술포-NHS 에스테르는 방향족 카르복실레이트의 술포-NHS 에스테르보다 더 안정하다. NHS-에스테르 함유 링커는 술포-NHS 에스테르보다 가용성이 더 낮다. 또한, 링커 SMPT는 입체적으로 방해된 디술피드 결합을 포함하고, 안정성이 증가된 접합체를 형성할 수 있다. 디술피드 연결은 시험관 내에서 절단되기 때문에, 일반적으로 디술피드 연결은 다른 연결보다 안정성이 낮고, 접합체의 이용성이 감소된다. 술포-NHS는 특히 카르보디이미드 커플링의 안정성을 향상시킬 수 있다. 카르보디이미드 커플링 (예를 들어 EDC)은 술포-NHS와 함께 사용될 때, 카르보디이미드 커플링 반응 단독시보다 가수분해에 대해 더 저항성인 에스테르를 형성한다.
또한, 본원에 개시된 항체는 면역리포좀으로서 제형화될 수 있다. 항체 함유 리포좀은 예를 들어 문헌 [Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985)]; [Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77: 4030 (1980)]; 및 미국 특허 4,485,045 및 4,544,545에 설명된 당업계에 공지된 방법에 의해 제조된다. 순환 시간이 향상된 리포좀은 미국 특허 5,013,556에 개시되어 있다.
특히 유용한 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤, 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용하여 역상 증발 방법에 의해 생성될 수 있다. 리포좀은 규정된 공극 크기의 필터를 통해 압출되어 요구되는 직경을 갖는 리포좀을 생산한다. 본 발명의 항체의 Fab' 단편은 문헌 [Martin et al., J. Biol. Chem., 257: 286-288 (1982)]에 설명된 바와 같이 디술피드-상호교환 반응을 통해 리포좀에 접합될 수 있다.
IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체에 대한 항체의 용도
본 발명에 따른 치료 엔티티 (entity)는 적합한 담체, 부형제, 및 개선된 전이, 전달, 관용성 등을 제공하기 위해 제형 내로 혼입되는 다른 물질과 함께 투여될 것임이 이해될 것이다. 많은 적절한 제형을 모든 제약 화학자에게 알려진 공식집에서 볼 수 있다 (Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company, Easton, PA (1975)), 특히 이 문헌의 Chapter 87 by Blaug, Seymour). 이들 제형은 예를 들어 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 소포 (vesicle)를 함유하는 지질 (양이온성 또는 음이온성) (예를 들어 리포펙틴 (Lipofectin)™), DNA 접합체, 무수 흡수 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀젼, 에멀젼 카르보왁스 (다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반고체 겔, 및 카르보왁스를 함유하는 반고체 혼합물을 포함한다. 제형 내의 활성 성분이 제형에 의해 불활성화되지 않고 제형이 생리학상 적합하고 투여 경로를 견딘다면, 임의의 상기 혼합물이 본 발명에 따른 치료 및 요법에 적절할 수 있다. 또한, 제약 화학자에게 공지된 제형, 부형제 및 담체에 관련된 추가의 정보에 대해서는 문헌 [Baldrick P. "Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance." Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000)], [Wang W. "Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals." Int. J. Pharm. 203(1-2): 1-60 (2000)], [Charman WN "Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts." J Pharm Sci.89(8):967-78 (2000)], [Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998)] 및 그의 인용문을 참조한다.
한 실시태양에서, 본 발명의 모노클로날 항체 (예를 들어, 완전 인간 모노클로날 항체)를 포함하는 본 발명의 항체는 치료제로서 사용될 수 있다. 상기 물질은 일반적으로 대상에서 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 신호전달과 연관된 질병 또는 병상을 진단, 예측, 모니터링, 치료, 완화 및/또는 예방하기 위해 사용될 것이다. 치료 요법은 표준 방법을 사용하여 염증성 질병 또는 질환으로 고통받는 (또는 발생할 위험이 있는) 대상, 예를 들어, 인간 환자를 확인함으로써 수행된다. 항체 제제, 바람직하게는 그의 표적 항원에 대한 고특이성 및 고친화도를 갖는 제제가 대상에게 투여되고, 일반적으로 표적에 대한 그의 결합에 의해 효과를 보일 것이다. 항체의 투여는 표적 (예를 들어, IL-17F, IL-17A 또는 IL-17A/IL-17F 복합체)의 신호전달 기능을 제거 또는 억제 또는 저해할 수 있다. 항체의 투여는 내인성 리간드 (예를 들어, IL-17R 또는 IL-17RC) (그에 대해 표적이 천연적으로 결합함)에 대한 표적 (예를 들어, IL-17F)의 결합을 제거 또는 억제 또는 저해할 수 있다. 예를 들어, 항체는 표적에 결합하고, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F-유도 전염증성 시토킨 생산을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해한다.
IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 신호전달에 관련된 질병 또는 질환은 류마티스 관절염, 크론병, 건선, 다발성 경화증, 만성 폐쇄성 폐질환, 및 천식을 포함하고 이로 제한되지 않는 자가면역 질병 또는 염증성 질병 또는 질환을 포함한다. 예를 들어, IL-17A 발현은 류마티스 관절염 환자의 윤활 조직에서 상향-조절되는 것으로 밝혀졌다 ([Khono et al., Mod. Rheumatol. Dec. 20 2007, Epub ahead of print] 참조). IL-17F는 낭성 섬유증 환자의 가래 ([McAllister et al., J.Immunol. 175: 404-412 (2005)] 참조), 및 염증성 장 질환으로부터 고통받는 환자의 결장 ([Seiderer et al., Inflamm. Bowel Dis. Dec. 18 2007, Epub. ahead of print] 참조)에서 상향-조절되는 것으로 밝혀졌다. IL-17A/IL-17F는 기도 호중구의 동원에서 일정 역할을 하는 것으로 나타났고, 이것은 호흡기 질병의 발병에서 일정 역할을 수행함을 제안한다 ([Liang et al., J. Immunol. 179(11): 7791-9 (2007)] 참조).
또한, IL-17F 및 IL-17A는 IL-21 신호전달에 의해 상향조절되는 것으로 밝혀졌고, 이것은 IL-21 신호전달과 연관된 전염증성 효과가 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17F/IL-17A에 의해 매개됨을 시사한다 (Wei et al., J Biol Chem. 282(48):34605-10 (2007)). 따라서, 본 발명의 항체는 염증성/자가면역 질환, 예를 들어 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 이식 거부, 및 건선을 포함하고 이로 제한되지 않는, IL-21 신호전달에 의해 매개되는 질환 또는 질병의 진단, 예측, 모니터링 및/또는 치료에도 유용하다.
염증-관련 질환과 연관된 증상은 예를 들어, 염증, 열, 전신 권태, 열, 종종 염증이 생긴 영역에 국소적인 통증, 빠른 맥박수, 관절 통증 또는 아픔 (관절통), 빠른 호흡 또는 다른 비정상적인 호흡 패턴, 오한, 착란, 방향상실, 초조, 현기증, 기침, 호흡곤란, 폐 감염, 심부전, 호흡부전, 부종, 체중 증가, 점액농 재방, 악액질, 천명, 두통, 및 복부 증상, 예를 들어, 복통, 설사 또는 변비를 포함한다. 면역-관련 질환과 연관된 증상은 예를 들어 염증, 열, 식욕 상실, 체중 감소, 복부 증상, 예를 들어 복통, 설사 또는 변비, 관절 통증 또는 아픔 (관절통), 피로, 발진, 빈혈, 추위에 대한 과도한 감수성 (레이노 현상), 근육 약화, 근육 피로, 피부 또는 조직 긴장도의 변화, 숨참 또는 다른 비정상적인 호흡 패턴, 흉통 또는 가슴 근육의 수축, 비정상적인 심박수 (예를 들어, 상승 또는 감소), 광 감수성, 흐릿하거나 비정상적인 시력, 및 장기 기능의 저하를 포함한다.
본 발명의 항체의 치료 유효량은 일반적으로 치료 목적을 달성하기 위해 필요한 양에 관한 것이다. 상기한 바와 같이, 이 양은 특정 경우에 표적의 기능을 저해하는 항체와 그의 표적 항원 사이의 결합 상호작용일 수 있다. 투여를 위해 필요한 양은 또한 그의 특이적 항원에 대한 항체의 결합 친화도에 의해 결정될 것이고, 항체가 투여되는 다른 대상으로부터 투여된 항체가 고갈되는 속도에 의해서도 결정될 것이다. 본 발명의 항체 또는 항체 단편의 치료 유효 투여량의 통상적인 범위는 예를 들어 약 0.1 mg/kg (체중) 내지 약 50 mg/kg (체중)일 수 있다. 통상적인 투여 빈도는 예를 들어 1일 2회 내지 1주 1회일 수 있다.
치료 효능은 특정 염증-관련 질환을 진단 또는 치료하기 위한 임의의 공지의 방법과 연관하여 결정된다. 염증-관련 질환의 하나 이상의 증상의 완화는 항체가 임상 이익을 제시함을 나타낸다.
요구되는 특이성을 보유하는 항체의 스크리닝 방법은 효소 연결 면역흡착 분석 (ELISA) 및 당업계에 공지된, 면역학적으로 매개된 다른 기술을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
또다른 실시태양에서, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17F/IL17A 복합체에 대해 생성된 항체는 IL-17F, IL-17A 또는 IL-17A/IL-17F 복합체의 국소화 및/또는 정량에 관련된 당업계에 공지된 방법 (예를 들어, 적절한 생리학적 샘플 내에서 IL-17F, IL-17A, 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체의 수준을 측정하는데 사용하기 위한, 진단 방법에 사용하기 위한, 단백질 영상화에 사용하기 위한 등)에서 사용될 수 있다. 제시된 실시태양에서, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체에 특이적인 항체 또는 항체 유래 항원 결합 도메인을 함유하는 그의 유도체, 단편, 유사체 또는 상동체는 약리학상 활성 화합물 (본원에서 "치료제"로서 언급됨)로서 이용된다.
또다른 실시태양에서, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체에 특이적인 항체는 표준 기술, 면역친화도, 크로마토그래피 또는 면역침전에 의해 IL-17F 또는 IL-17A 폴리펩티드, 또는 IL-17A/IL-17F 폴리펩티드를 단리하기 위해 사용될 수 있다. IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 단백질에 대해 작용하는 항체 (또는 그의 단편)는 예를 들어 제시된 치료 요법의 효능을 결정하기 위해 임상 시험 절차의 일부로서 조직 내의 단백질 수준을 모니터링하기 위해 진단 목적으로 사용될 수 있다. 검출은 항체의 검출가능한 물질에 대한 커플링 (즉, 물리적 연결)에 의해 용이해질 수 있다. 검출가능한 물질의 예는 다양한 효소, 보결분자단 (prosthetic group), 형광 물질, 발광 물질, 생체발광 물질 및 방사성 물질을 포함한다. 적합한 효소의 예는 양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 또는 아세틸콜린에스테라제를 포함하고; 적합한 보결분자단 복합체의 예는 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 포함하고; 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함하고; 발광 물질의 예는 루미놀을 포함하고; 생체발광 물질의 예는 루시퍼라제, 루시페린, 및 애쿠오린을 포함하고, 적합한 방사성 물질의 예는 125I, 131I, 35S 또는 3H를 포함한다.
또다른 실시태양에서, 본 발명에 따른 항체는 샘플에서 IL-17A/IL-17F 및/또는 IL-17A/IL-17F 단백질 (또는 그의 단백질 단편)의 존재를 검출하기 위한 물질로서 사용될 수 있다. 일부 실시태양에서, 항체는 검출가능한 표지를 함유한다. 항체는 폴리클로날, 또는 보다 바람직하게는 모노클로날 항체이다. 무손상 항체, 또는 그의 단편 (예를 들어, Fab, scFv, 또는 F(ab)2)이 사용된다. 프로브 또는 항체에 대해, 용어 "표지된"은 검출가능한 물질의 프로브 또는 항체에 대한 커플링 (즉, 물리적 연결)에 의한 프로브 또는 항체의 직접 표지, 및 직접 표지된 다른 시약과의 반응에 의한 프로브 또는 항체의 간접 표지를 포함하는 것으로 의도된다. 간접 표지의 예는 형광-표지된 2차 항체, 및 형광-표지된 스트렙타비딘으로 검출될 수 있도록 DNA 프로브를 비오틴으로 말단-표지하는 것을 사용하여 1차 항체를 검출하는 것을 포함한다. 용어 "생물학적 샘플"은 대상으로부터 단리된 조직, 세포 및 생물학적 유체, 및 대상 내에 존재하는 조직, 세포 및 유체를 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, 혈액, 및 혈청, 혈장 또는 림프를 포함한 혈액의 분획 또는 성분이 용어 "생물학적 샘플"의 사용에 포함된다. 즉, 본 발명의 검출 방법은 시험관 내에서 및 생체 내에서 생물학적 샘플 내에서 분석물질 mRNA, 단백질, 또는 게놈 DNA를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 분석물질 mRNA의 검출을 위한 시험관내 기술은 노던 (Northern) 혼성화 및 계내 혼성화를 포함한다. 분석물질 단백질의 검출을 위한 시험관내 기술은 효소 연결 면역흡착 분석 (ELISA), 웨스턴 블롯 (Western blot), 면역침전, 및 면역형광을 포함한다. 분석물질 게놈 DNA의 검출을 위한 시험관내 기술은 서던 (Southern) 혼성화를 포함한다. 면역분석을 수행하기 위한 절차는 예를 들어 문헌 ["ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology", Vol. 42, J. R. Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995]; ["Immunoassay", E. Diamandis and T. Christopoulus, Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1996]; 및 ["Practice and Theory of Enzyme Immunoassay", P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985]에 기재되어 있다. 또한, 분석물질 단백질을 검출하기 위한 생체내 기술은 대상에게 표지된 항-분석물질 단백질 항체를 도입하는 것을 포함한다. 예를 들어, 항체는 대상에서 그의 존재 및 위치가 표준 영상화 기술에 의해 검출될 수 있는 방사성 마커로 표지될 수 있다.
huIL-17A/F 항체의 치료 목적의 투여 및 제형
본 발명의 항체 (본원에서 "활성 화합물"로도 칭함) 및 그의 유도체, 단편, 유사체 및 상동체는 투여에 적합한 제약 조성물 내로 포함될 수 있다. 그러한 조성물을 제조하는데 관련되는 원리 및 고려사항, 및 성분의 선택에 대한 지침은 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences: The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed. (Alfonso R. Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co., Easton, Pa.: 1995]; [Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa., 1994]; 및 [Peptide And Protein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker, New York])에 제공되어 있다.
상기 조성물은 일반적으로 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 항체 단편이 사용되는 경우에, 표적 단백질의 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 최소 억제 단편이 바람직하다. 예를 들어, 항체의 가변 구역 서열에 기초하여, 표적 단백질 서열에 결합하는 능력을 보유하는 펩티드 분자를 설계할 수 있다. 그러한 펩티드는 화학적으로 합성되고/되거나 재조합 DNA 기술에 의해 생산할 수 있다 (예를 들어, [Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993)] 참조).
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용되는 담체"는 제약 투여에 적합한 임의의 및 모든 용매, 분산매, 코팅, 항균 및 항진균제, 등장 및 흡수 지연제 등을 포함하는 것으로 의도된다. 적합한 담체는 본원에 참조로 포함되는, 해당 분야의 표준 참조 서적인 [Remington's Pharmaceutical Sciences]의 최신판에 설명되어 있다. 그러한 담체 또는 희석제의 바람직한 예는 물, 염수, 링거액, 덱스트로스 용액 및 5% 인간 혈청 알부민을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 리포좀 및 비-수성 비히클, 예를 들어 고정유도 사용될 수 있다. 제약상 활성 물질에 대한 상기 매질 및 물질의 사용은 당업계에 잘 공지되어 있다. 임의의 통상적인 배지 또는 물질이 활성 화합물과 비상용성인 경우를 제외하고, 이를 조성물에 사용하는 것이 고려된다.
생체내 투여를 위해 사용되는 제형은 멸균되어야 한다. 이는 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성된다.
본 발명의 제약 조성물은 그의 의도되는 투여 경로에 적합하도록 제형화된다. 투여 경로의 예는 비경구, 예를 들어 정맥내 피내, 피하, 경구 (예를 들어, 흡입), 경피 (즉, 외용), 경점막 및 직장 투여를 포함한다. 비경구, 피내, 또는 피하 적용을 위해 사용되는 용액 또는 현탁액은 다음 성분을 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예를 들어 주사수, 염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항균제, 예를 들어 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이팅제, 예를 들어 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA); 버퍼, 예를 들어 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트, 및 긴장성 조정제, 예를 들어 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기, 예를 들어 염산 또는 수산화나트륨으로 조정될 수 있다. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰퓰, 1회용 주사기 또는 다중 용량 바이알에 봉입될 수 있다.
주사가능한 용도에 적합한 제약 조성물은 멸균 주사가능 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 수용액 (수용성인 경우) 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 정맥내 투여를 위해, 적합한 담체는 생리학적 염수, 정균수, 크레모포르 (Cremophor) EL™ (바스프 (BASF), 미국 뉴저지주 파시파니)) 또는 포스페이트 완충 염수 (PBS)를 포함한다. 모든 경우에, 조성물은 멸균되어야 하고, 주사가 용이한 정도의 유동성을 보여야 한다. 조성물은 제조 및 저장 조건 하에서 안정하여야 하고, 미생물, 예를 들어 세균 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어 레시틴과 같은 코팅의 사용, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물의 작용의 방지는 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성할 수 있다. 많은 경우에, 조성물에 등장화제, 예를 들어, 당, 다가알콜, 예를 들어 만니톨, 소르비톨, 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 조성물에 흡수 지연제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써 달성할 수 있다.
멸균 주사가능 용액은 요구되는 양의 활성 화합물을 필요한 상기 나열된 성분 중의 하나 또는 조합물과 함께 적절한 용매에 혼입합한 후, 여과에 의해 멸균하여 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 염기성 분산 매질 및 상기 나열된 것으로부터의 요구되는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입하여 제조된다. 멸균 주사가능 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 제조 방법은 그의 사전에 멸균-여과된 용액으로부터의 활성 성분의 분말 및 임의의 추가의 요구되는 성분을 생성시키는 진공 건조 및 동결 건조이다.
경구 조성물은 일반적으로 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함한다. 이 조성물은 젤라틴 캡슐 내에 봉입되거나 정제로 압축될 수 있다. 치료 목적의 경구 투여를 위해, 활성 화합물은 부형제와 통합되어 정제, 트로키, 또는 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 또한, 경구 조성물은 구강세정제 (mouthwash)로서 사용하기 위해 유동성 담체를 사용하여 제조할 수 있고, 여기서 유동성 담체 내의 화합물은 경구로 적용되고, 입을 헹군 후 뱉어내거나 또는 삼키게 된다. 제약상 적합한 결합제, 및/또는 어쥬번트 물질은 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 알약, 캡슐, 트로키 등은 유사한 특성의 임의의 다음 성분, 또는 화합물을 함유할 수 있다: 결합제, 예를 들어 미결정질 셀룰로스, 검 트라가칸트 또는 젤라틴; 부형제, 예를 들어 전분 또는 락토스, 붕해제, 예를 들어 알긴산, 프리모겔 (Primogel), 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예를 들어 마그네슘 스테아레이트 또는 세테로트 (Sterote); 활택제, 예를 들어 콜로이드성 이산화규소; 감미제, 예를 들어 수크로스 또는 사카린; 또는 향미제, 예를 들어 페퍼민트, 메틸 살리실레이트, 또는 오렌지 향료 (orange flavoring).
흡입에 의한 투여를 위해, 화합물은 적합한 추진제, 예를 들어 기체, 예를 들어 이산화탄소를 함유하는 압축 용기 또는 분배기, 또는 연무기로부터 에어로졸 분무의 형태로 전달된다.
전신 투여는 경점막 또는 경피 수단에 의해 이루어질 수 있다. 경점막 또는 경피 투여를 위해, 투과되는 장벽에 적절한 침투제가 제형에 사용된다. 상기 침투제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 경점막 투여를 위해 세제, 담즙산염, 및 푸시드산 유도체를 포함한다. 경점막 투여는 비내 분무 또는 좌제를 사용하여 수행될 수 있다. 경피 투여를 위해, 활성 화합물은 일반적으로 당업계에 공지된 바와 같이 연고, 고약, 겔, 또는 크림제로 제형화된다.
또한, 화합물은 좌제 (예를 들어, 통상적인 좌제 베이스, 예를 들어 코코아 버터 및 다른 글리세리드 사용) 또는 직장 전달을 위한 정체 관장제의 형태로 제조될 수 있다.
한 실시태양에서, 활성 화합물은 신체로부터의 신속한 제거에 대해 화합물을 보호할 담체를 사용하여 임플란트 및 미세캡슐화 전달 시스템을 포함하는 지속/조절 방출 제형으로 제조된다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예를 들어 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안히드라이드 (polyanhydride), 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 상기 제형의 제조 방법은 당업자에게 자명할 것이다.
예를 들어, 활성 성분은 예를 들어 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포좀, 알부민 미세구, 미세에멀젼, 나노-입자, 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼에서 각각 액적형성 (coacervation) 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 미세캡슐, 예를 들어, 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-미세캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 미세캡슐 내에 도입할 수 있다.
지속-방출 제제를 제조할 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 소수성 고체 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 상기 매트릭스는 성형품, 예를 들어, 필름 또는 미세캡슐의 형태이다. 지속-방출 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 히드로겔 (예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (미국 특허 3,773,919), L-글루탐산과 γ 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예를 들어 루프론 데포 (LUPRON DEPOT)™ (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 이루어진 주사가능한 미세구), 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산을 포함한다. 중합체, 예를 들어 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산은 100일 이상의 기간 동안 분자의 방출을 허용하지만, 특정 히드로겔은 이보다 짧은 기간 동안 단백질을 방출한다.
또한, 물질은 알자 코포레이션 (Alza Corporation) 및 노바 파마슈티칼스 인크. (Nova Pharmaceuticals, Inc.)로부터 상업적으로 입수할 수 있다. 리포좀 현탁액 (감염된 세포를 표적으로 하는 리포좀 및 바이러스 항원에 대한 모노클로날 항체 포함)도 제약상 허용되는 담체로서 사용될 수 있다. 이들은 예를 들어 미국 특허 4,522,811에 설명된 바와 같은 당업자에게 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다.
경구 또는 비경구 조성물을 투여 용이성 및 용량 균일성을 위해 투여 단위 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 투여 단위 형태는 치료할 대상에 대한 단위 용량으로서 적합한 물리적으로 구분되는 단위를 의미하고; 각각의 단위는 요구되는 제약상 담체와 함께 요구되는 치료 효과를 생성시키기 위해 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 투여 단위 형태에 대한 세부 사양은 활성 화합물의 특유한 특징 및 달성될 특정 치료 효과, 및 개체의 치료를 위한 상기 활성 화합물의 배합 기술에 내재된 제한 사항에 의해 영향을 받고, 이들에 의해 직접적으로 좌우된다.
제약 조성물은 용기, 팩, 또는 분배기에 투여를 위한 사용지시서와 함께 포함될 수 있다.
또한, 제형은 치료되는 특정 적응증에 필요한 1 초과의 활성 화합물, 바람직하게는 서로 유해한 영향을 주지 않는 상보적 활성을 갖는 것을 함유할 수 있다. 별법으로, 또는 추가로, 조성물은 그의 기능을 향상시키는 물질, 예를 들어, 세포독성제, 시토킨, 화학치료제, 또는 성장억제제를 포함할 수 있다. 상기 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.
한 실시태양에서, 활성 화합물은 조합 요법으로, 즉, 다른 물질, 예를 들어 병리학적 상태 또는 질환, 예를 들어 자가면역 질환 및 염증성 질병의 치료에 유용한 치료제와 조합되어 투여된다. 상기 문맥에서 용어 "조합되어"는 물질이 실질적으로 동시에, 동시에 또는 순차적으로 제공됨을 의미한다. 순차적으로 제공될 경우, 제2 화합물의 투여 개시시에, 2개의 화합물 중 제1 화합물은 바람직하게는 치료 부위에서 효과적인 농도로 계속 검출가능하다.
예를 들어, 조합 요법은 아래에서 보다 상세히 설명되는 바와 같은 하나 이상의 추가의 치료제, 예를 들어, 하나 이상의 시토킨 및 성장 인자 억제제, 면역억제제, 항염증제, 대사 억제제, 효소 억제제, 및/또는 세포독성 또는 세포증식 억제제와 동시제형화 및/또는 동시투여되는 본 발명의 하나 이상의 항체를 포함할 수 있다. 또한, 본원에서 설명되는 하나 이상의 항체는 본원에서 설명되는 2 이상의 치료제와 조합되어 사용될 수 있다. 상기 조합 요법은 유리하게는 투여되는 치료제의 보다 낮은 투여량을 이용하여, 다양한 단제요법과 연관된 가능한 독성 또는 합병증을 방지할 수 있다.
본 발명의 항체와 조합되어 사용되는 바람직한 치료제는 염증 반응에서 상이한 단계를 저해하는 물질이다. 한 실시태양에서, 본원에서 설명되는 하나 이상의 항체는 하나 이상의 추가의 물질, 예를 들어 다른 시토킨 또는 성장 인자 길항제 (예를 들어, 가용성 수용체, 펩티드 억제제, 소분자, 리간드 융합); 또는 다른 표적에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편 (예를 들어, 다른 시토킨 또는 성장 인자, 그의 수용체, 또는 다른 세포 표면 분자에 결합하는 항체); 및 항염증성 시토킨 또는 그의 효능제와 동시제형화 및/또는 동시투여될 수 있다. 본원에서 설명되는 항체와 조합되어 사용될 수 있는 물질의 비제한적인 예는 하나 이상의 인터류킨 (IL) 또는 그의 수용체의 길항제, 예를 들어 IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-18, IL-21 및 IL-22의 길항제; 시토킨 또는 성장 인자 또는 그의 수용체, 예를 들어 종양 괴사 인자 (TNF), LT, EMAP-II, GM-CSF, FGF 및 PDGF의 길항제를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 또한, 본 발명의 항체는 예를 들어 세포 표면 분자, 예를 들어 CD2, CD3, CD4, CD8, CD20 (예를 들어, CD20 억제제 리툭시맙 (리툭산 (RITUXAN)®)), CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, 또는 그의 리간드, 예를 들어 CD154 (gp39 또는 CD40L), 또는 LFA-1/ICAM-1 및 VLA-4/VCAM-1의 억제제, 예를 들어 그에 대한 항체와 조합될 수 있다 (Yusuf-Makagiansar et al. (2002) Med. Res. Rev. 22:146-67). 본원에서 설명되는 항체와 조합되어 사용될 수 있는 바람직한 길항제는 IL-1, IL-12, TNFα, IL-15, IL-18, 및 IL-22의 길항제를 포함한다.
이들 물질의 예는 IL-12 길항제, 예를 들어 IL-12 (바람직하게는 인간 IL-12)에 결합하는 키메라, 인간화, 인간 또는 시험관 내에서 생성된 항체 (또는 그의 항원 결합 단편), 예를 들어, WO 00/56772에 개시된 항체; IL-12 수용체 억제제, 예를 들어 인간 IL-12 수용체에 대한 항체; 및 IL-12 수용체, 예를 들어, 인간 IL-12 수용체의 가용성 단편을 포함한다. IL-15 길항제의 예는 IL-15 또는 그의 수용체에 대한 항체 (또는 그의 항원 결합 단편), 예를 들어, 인간 IL-15 또는 그의 수용체, IL-15 수용체의 가용성 단편 및 IL-15-결합 단백질에 대한 키메라, 인간화, 인간 또는 시험관 내에서 생성된 항체를 포함한다. IL-18 길항제의 예는 항체, 예를 들어, 인간 IL-18, IL-18 수용체의 가용성 단편, 및 IL-18 결합 단백질 (IL-18BP)에 대한 키메라, 인간화, 인간 또는 시험관내-생성된 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)를 포함한다. IL-1 길항제의 예는 인터류킨-1-전환 효소 (ICE) 억제제, 예를 들어 Vx740, IL-1 길항제, 예를 들어, IL-1RA (아니킨라, 키네레트 (KINERET)™, 암젠 (Amgen)), sIL1RII (이뮤넥스 (Immunex)), 및 항-IL-1 수용체 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)를 포함한다.
TNF 길항제의 예는 TNF (예를 들어, 인간 TNFα)에 대한 키메라, 인간화, 인간 또는 시험관 내에서 생성된 항체 (또는 그의 항원 결합 단편) (예를 들어, 휴미라 (HUMIRA)™, D2E7, 인간 TNFα 항체), CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356 (인간화 항-TNFα 항체; 셀테크 (Celltech)/파마시아 (Pharmacia)), cA2 (키메라 항-TNFα 항체; 레미케이드 (REMICADE)®, 센토코르 (Centocor)); 항-TNF 항체 단편 (예를 들어, CPD870); TNF 수용체, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 그의 유도체의 가용성 단편, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질, 엔브렐 (ENBREL)™; 이뮤넥스), p55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질 (레네르셉트 (LENERCEPT)®)); 효소 길항제, 예를 들어, TNFα 전환 효소 (TACE) 억제제 (예를 들어, 알파-술포닐 히드록삼산 유도체, 및 N-히드록시포름아미드 TACE 억제제 GW 3333, -005, 또는 -022); 및 TNF-bp/s-TNFR (가용성 TNF 결합 단백질)을 포함한다. 바람직한 TNF 길항제는 TNF 수용체, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 그의 유도체의 가용성 단편, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG, 및 TNFα 전환 효소 (TACE) 억제제이다.
다른 실시태양에서, 본원에서 설명되는 항체는 다음 중 하나 이상과 조합되어 투여될 수 있다: IL-13 길항제, 예를 들어, 가용성 IL-13 수용체 (sIL-13) 및/또는 IL-13에 대한 항체; IL-2 길항제, 예를 들어, DAB 486-IL-2 및/또는 DAB 389-IL-2 (IL-2 융합 단백질, 세라겐 (Seragen)), 및/또는 IL-2R에 대한 항체, 예를 들어, 항-Tac (인간화 항-IL-2R, 프로테인 디자인 랩스 (Protein Design Labs)). 또다른 조합은 본 발명의 항체, 길항성 소분자, 및/또는 억제성 항체와 비고갈성 항-CD4 억제제 (DEC-CE9.1/SB 210396; 비고갈성 영장류화 항-CD4 항체; IDEC/스미스클라인 (SmithKline))의 조합을 포함한다. 또다른 바람직한 조합은 동시자극 경로 CD80 (B7.1) 또는 CD86 (B7.2)의 길항제, 예를 들어 항체, 가용성 수용체 또는 길항성 리간드; 및 p-셀렉틴 당단백질 리간드 (PSGL), 항염증성 시토킨, 예를 들어, IL-4 (DNAX/쉐링 (Schering)); IL-10 (SCH 52000; 재조합 IL-10 DNAX/쉐링); IL-13 및 TGF-β, 및 그의 효능제 (예를 들어, 효능제 항체)를 포함한다.
다른 실시태양에서, 본 발명의 하나 이상의 항체는 하나 이상의 항염증 약물, 면역억제제, 또는 대사 또는 효소 억제제와 동시제형화 및/또는 동시투여될 수 있다. 본원에서 설명되는 항체와 조합될 수 있는 약물 또는 억제제의 비제한적인 예는 다음 중 하나 이상을 포함하고 이로 제한되지 않는다: 비스테로이드성 항염증 약물(들) (NSAID), 예를 들어, 이부프로펜, 테니답, 나프록센, 멜록시캄, 피록시캄, 디클로페낙, 및 인도메타신; 술파살라진; 코르티코스테로이드, 예를 들어 프레드니솔론; 시토킨 억제 항염증 약물(들) (CSAID); 뉴클레오티드 생합성 억제제, 예를 들어 퓨린 생합성 억제제, 엽산 길항제 (예를 들어, 메토트렉세이트 (N-[4-[[(2,4-디아미노-6-피페리디닐)메틸]메틸아미노]벤조일]-L-글루탐산); 및 피리미딘 생합성 억제제, 예를 들어, 디히드로오로테이트 데히드로게나제 (DHODH) 억제제. 본 발명의 항체와 조합 사용하기에 바람직한 치료제는 NSAID, CSAID, (DHODH) 억제제 (예를 들어, 레플루노미드), 및 엽산 길항제 (예를 들어, 메토트렉세이트)를 포함한다.
추가의 억제제의 예는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 코르티코스테로이드 (경구, 흡입 및 국소 주사); 면역억제제, 예를 들어, 시클로스포린, 타크롤리무스 (FK-506); 및 mTOR 억제제, 예를 들어, 시롤리무스 (라파마이신 - 라파뮨 (RAPAMUNE)™ 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어, 가용성 라파마이신 유도체 (예를 들어, 에스테르 라파마이신 유도체, 예를 들어, CCI-779); 전염증성 시토킨, 예를 들어 TNFα 또는 IL-1의 신호전달을 방해하는 물질 (예를 들어 IRAK, NIK, IKK, p38 또는 MAP 키나제 억제제); COX2 억제제, 예를 들어, 셀레콕시브, 로페콕시브, 및 그의 변이체; 포스포디에스테라제 억제제, 예를 들어, R973401 (포스포디에스테라제 타입 IV 억제제); 포스포리파제 억제제, 예를 들어, 세포액 포스포리파제 2 (cPLA2)의 억제제 (예를 들어, 트리플루오로메틸 케톤 유사체); 혈관 내피 세포 성장 인자 또는 성장 인자 수용체의 억제제, 예를 들어, VEGF 억제제 및/또는 VEGF-R 억제제; 및 혈관신생의 억제제. 본 발명의 항체와 조합 사용하기에 바람직한 치료제는 면역억제제, 예를 들어, 시클로스포린, 타크롤리무스 (FK-506); mTOR 억제제, 예를 들어, 시롤리무스 (라파마이신) 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어, 가용성 라파마이신 유도체 (예를 들어, 에스테르 라파마이신 유도체, 예를 들어, CCI-779); COX2 억제제, 예를 들어, 셀레콕시브 및 그의 변이체; 및 포스포리파제 억제제, 예를 들어, 세포액 포스포리파제 2 (cPLA2)의 억제제, 예를 들어, 트리플루오로메틸 케톤 유사체이다.
본 발명의 항체와 조합될 수 있는 치료제의 추가의 예는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 6-머캅토퓨린 (6-MP); 아자티오프린 술파살라진; 메살라진; 올살라진; 클로로퀸/히드록시클로로퀸 (플라퀘닐 (PLAQUENIL)®); 펜실아민; 오로티오르날레이트 (근육내 및 경구); 아자티오프린; 콜히친; 베타-2 아드레날린수용체 효능제 (살부타몰, 테르부탈린, 살메테랄); 잔틴 (테오필린, 아미노필린); 크로모글리케이트; 네도크로밀; 케토티펜; 이프라트로퓸 및 옥시트로퓸; 미코페놀레이트 모페틸; 아데노신 효능제; 항혈전제; 보체 억제제; 및 아드레날린성 물질.
본 발명의 항체가 그와 조합될 수 있는, 관절염 질환 (예를 들어, 류마티스 관절염, 염증성 관절염, 류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염 및 건선성 관절염)의 치료 또는 예방을 위한 물질의 비제한적인 예는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 본원에 설명된 바와 같은 IL-12 길항제; NSAID; CSAID; TNF, 예를 들어, TNFα, 본원에서 설명되는 길항제; 본원에서 설명되는 비고갈성 항-CD4 항체; 본원에서 설명되는 IL-2 길항제; 항염증성 시토킨, 예를 들어, IL-4, IL-10, IL-13 및 TGFα, 또는 그의 효능제; 본원에서 설명되는 IL-1 또는 IL-1 수용체 길항제; 본원에서 설명되는 포스포디에스테라제 억제제; 본원에서 설명되는 Cox-2 억제제; 일로프로스트: 메토트렉세이트; 탈리도마이드 및 탈리도마이드-관련 약물 (예를 들어, 셀젠 (Celgen)); 레플루노미드; 플라스미노겐 활성화 억제제, 예를 들어, 트라넥삼산; 시토킨 억제제, 예를 들어, T-614; 프로스타글란딘 E1; 아자티오프린; 인터류킨-1 전환 효소 (ICE)의 억제제; zap-70 및/또는 lck 억제제 (티로신 키나제 zap-70 또는 lck의 억제제); 본원에서 설명되는 혈관 내피 세포 성장 인자 또는 혈관 내피 세포 성장 인자 수용체의 억제제; 본원에서 설명되는 혈관신생의 억제제; 코르티코스테로이드 항염증성 약물 (예를 들어, SB203580); TNF-전환효소 억제제; IL-11; IL-13; IL-17 억제제; 금; 페니실라민; 클로로퀸; 히드록시클로로퀸; 클로람부실; 시클로포스파미드; 시클로스포린; 전 림프 조사; 항흉선세포 글로불린; CD5-독소; 경구 투여 펩티드 및 콜라겐; 로벤자리트 이나트륨; 시토킨 조절제 (CRA) HP228 및 HP466 (휴튼 파마슈티칼스, 인크. (Houghten Pharmaceuticals, Inc.)); ICAM-1 안티센스 포스포로티오에이트 올리고데옥시뉴클레오티드 (ISIS 2302; 이시스 파마슈티칼스, 인크. (Isis Pharmaceuticals, Inc.)); 가용성 보체 수용체 1 (TP10; 티 세포 사이언시스, 인크. (T Cell Sciences, Inc.)); 프레드니손; 오르고테인; 글리코사미노글리칸 폴리술페이트; 미노사이클린 (미노신 (MINOCIN)®); 항-IL2R 항체; 해양 및 식물성 지질 (어류 및 식물 종자 지방산); 오라노핀; 페닐부타존; 메클로페남산; 플루페남산; 정맥내 면역 글로불린; 질류톤; 미코페놀산 (RS-61443); 타크롤리무스 (FK-506); 시롤리무스 (라파마이신); 아미프릴로스 (테라펙틴); 클라드리빈 (2-클로로데옥시아데노신); 및 아자리빈. 바람직한 조합은 본 발명의 하나 이상의 항체와 메토트렉세이트 또는 레플루노미드, 및 중등도 또는 중증 류마티스 관절염의 경우, 시클로스포린의 조합을 포함한다.
관절염 질환의 치료를 위해 본 발명의 항체와 조합되어 사용하기 위한 억제제의 바람직한 예는 TNF 길항제 (예를 들어, TNF에 결합하는 키메라, 인간화, 인간 또는 시험관 내에서 생성된 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; TNF 수용체, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 그의 유도체의 가용성 단편, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질, 엔브렐™), p55 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질; TNF 효소 길항제, 예를 들어, TNFα 전환 효소 (TACE) 억제제); IL-12, IL-15, IL-18, IL-22의 길항제; T 세포 및 B 세포-고갈제 (예를 들어, 항-CD4 또는 항-CD22 항체); 소분자 억제제, 예를 들어, 메토트렉세이트 및 레플루노미드; 시롤리무스 (라파마이신) 및 그의 유사체, 예를 들어, CCI-779; cox-2 및 cPLA2 억제제; NSAID; p38 억제제, TPL-2, Mk-2 및 NFkb 억제제; RAGE 또는 가용성 RAGE; P-셀렉틴 또는 PSGL-1 억제제 (예를 들어, 소분자 억제제, 그에 대한 항체, 예를 들어 P-셀렉틴에 대한 항체); 에스트로겐 수용체 베타 (ERB) 효능제 또는 ERB-NFkb 길항제를 포함한다. 본 발명의 하나 이상의 항체와 동시투여 및/또는 동시제형화될 수 있는 가장 바람직한 추가의 치료제는 다음 중 하나 이상을 포함한다: TNF 수용체, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 그의 유도체의 가용성 단편, 예를 들어, 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질, 엔브렐™); 메토트렉세이트, 레플루노미드, 또는 시롤리무스 (라파마이신) 또는 그의 유사체, 예를 들어, CCI-779.
본 발명의 항체가 조합될 수 있는 다발성 경화증의 치료 또는 예방을 위한 물질의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: 인터페론, 예를 들어, 인터페론-알파 1a (예를 들어, 아보넥스™; 바이오겐 (Biogen)) 및 인터페론-1b (베타세론™ 키론 (Chiron)/베를렉스 (Berlex)); 공중합체 1 (Cop-1; 코팍손 (COPAXONE)™ (테바 파마슈티칼스 인더스트리즈, 인크. (Teva Pharmaceutical Industries, Inc.)); 고압 산소; 정맥내 면역글로불린; 클라드리빈; 본원에서 설명되는 TNF 길항제; 코르티코스테로이드; 프레드니솔론; 메틸프레드니솔론; 아자티오프린; 시클로포스파미드; 시클로스포린; 시클로스포린 A, 메토트렉세이트; 4-아미노피리딘; 및 티자니딘. 본 발명의 항체와 조합되어 사용될 수 있는 추가의 길항제는 다른 인간 시토킨 또는 성장 인자, 예를 들어, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12 IL-15, IL-16, IL-18, EMAP-11, GM-CSF, FGF, 및 PDGF에 대한 항체 또는 길항제를 포함한다. 본원에서 설명되는 항체는 세포 표면 분자, 예를 들어 CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80, CD86, CD90 또는 그의 리간드에 대한 항체와 조합될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 메토트렉세이트, 시클로스포린, FK506, 라파마이신, 미코페놀레이트 모페틸, 레플루노미드, NSAID, 예를 들어, 이부프로펜, 코르티코스테로이드, 예를 들어 프레드니솔론, 포스포디에스테라제 억제제, 아데노신 효능제, 항혈전제, 보체 억제제, 아드레날린성 물질, 본원에서 설명되는 전염증성 시토킨에 의한 신호전달을 방해하는 물질, IL-Ib 전환 효소 억제제 (예를 들어, Vx740), 항-P7, PSGL, TACE 억제제, T-세포 신호전달 억제제, 예를 들어 키나제 억제제, 메탈로프로테이나제 억제제, 술파살라진, 아자티오프린, 6-머캅토퓨린, 안지오텐신 전환 효소 억제제, 본원에서 설명되는 가용성 시토킨 수용체 및 그의 유도체 및 항염증성 시토킨 (예를 들어 IL-4, IL-10, IL-13 및 TGF)과 같은 물질과 조합될 수 있다.
본 발명의 항체가 그와 조합될 수 있는 다발성 경화증에 대한 치료제의 바람직한 예는 인터페론-β, 예를 들어, IFNβ-1a 및 IFNβ-1b; 코팍손, 코르티코스테로이드, IL-1 억제제, TNF 억제제, CD40 리간드 및 CD80에 대한 항체, IL-12 길항제를 포함한다.
본 발명의 항체가 그와 조합될 수 있는 염증성 장 질환 (예를 들어, 크론병, 궤양성 대장염)의 치료 또는 예방을 위한 물질의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: 부데노시드; 표피 성장 인자; 코르티코스테로이드; 시클로스포린; 술파살라진; 아미노살리실레이트; 6-머캅토퓨린; 아자티오프린; 메트로니다졸; 리폭시게나제 억제제; 메살라민; 올살라진; 발살라지드; 항산화제; 트롬복산 억제제; IL-1 수용체 길항제; 항-IL-1 모노클로날 항체; 항-IL-6 모노클로날 항체; 성장 인자; 엘라스타제 억제제; 피리디닐-이미다졸 화합물; 본원에서 설명되는 TNF 길항제; IL-4, IL-10, IL-13 및/또는 TGFβ 시토킨 또는 그의 효능제 (예를 들어, 효능제 항체); IL-11; 프레드니솔론, 덱사메타손 또는 부데소니드의 글루쿠로니드- 또는 덱스트란-접합된 전구약물; ICAM-1 안티센스 포스포로티오에이트 올리고데옥시뉴클레오티드 (ISIS 2302; 이시스 파마슈티칼스, 인크.); 가용성 보체 수용체 1 (TP10; 티세포 사이언시스, 인크.); 서방성 메살라진; 메토트렉세이트; 혈소판 활성화 인자 (PAF)의 길항제; 시프로플록사신; 및 리그노카인.
본 발명의 항체가 그와 조합될 수 있는 건선의 치료 또는 예방을 위한 물질의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: 코르티코스테로이드; 비타민 D3 및 그의 유사체; 레티노이드 (예를 들어, 소리아탄); 메토트렉세이트; 시클로스포린, 6-티오구아닌; 아큐탄; 히드레아; 히드록시우레아; 술파살라진; 미코페놀레이트 모페틸; 아자티오프린; 타크롤리무스; 푸마르산 에스테르; 생물제제, 예를 들어 아메비브, 엔브렐, 휴미라, 랍티바 및 레미케이드, 우스테킨맙 및 XP-828L; 광요법; 및 광화학요법 (예를 들어, 소랄렌 및 자외선 광요법의 조합).
본 발명의 항체가 그와 조합될 수 있는 염증성 기도/호흡기 질병 (예를 들어, 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식)의 치료 또는 예방을 위한 물질의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: 베타2-아드레날린 수용체 효능제 (예를 들어, 살부타몰 (알부테롤 USAN), 레발부테롤, 테르부탈린, 비톨테롤); 지속 작용성 베타2-아드레날린 수용체 효능제 (예를 들어, 살메테롤, 포르모테롤, 밤부테롤); 아드레날린성 효능제 (예를 들어, 흡입 에피네프린 및 에페드린 정제); 항콜린성 의약 (예를 들어, 이프라트로퓸 브로마이드); 흡입 스테로이드 및 지속 작용성 기관지 확장제의 조합물 (예를 들어, 플루티카손/살메테롤 (아드베어 (Advair, 미국) 및 세레티드 (Seretide, 영국)) 또는 부데소니드/포르모테롤 (심비코르 (Symbicort)); 흡입 글루코코르티코이드 (예를 들어, 시클레소니드, 베클로메타손, 부데소니드, 플루니솔리드, 플루티카손, 모메타손, 트리암시놀론); 류코트리엔 변형제 (예를 들어, 몬테루카스트, 자피르루카스트, 프란루카스트, 및 질류톤); 비만 세포 안정화제 (예를 들어, 크로모글리케이트 (크로몰린), 및 네도크로밀); 항무스카린제/항콜린제 (예를 들어, 이프라트로퓸, 옥시트로퓸, 티오트로퓸); 메틸잔틴 (예를 들어, 테오필린, 아미노필린); 항히스타민; IgE 차단제 (예를 들어, 오말리주맙); M3 무스카린 길항제 (항콜린제) (예를 들어, 이프라트로퓸, 티오트로퓸); 크로몬 (예를 들어, 크로모글리케이트, 네도크로밀); 잔틴 (예를 들어, 테오필린); 및 TNF 길항제 (예를 들어, 인플릭시맙, 아달리무맙 및 에타네르셉트).
한 실시태양에서, 본 발명의 항체는 면역 반응, 예를 들어, 이식 거부의 조절에 관련되는 다른 표적에 대해 작용하는 하나 이상의 항체와 조합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 항체가 그와 조합될 수 있는 면역 반응의 치료 또는 예방을 위한 물질의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: CD25 (인터류킨-2 수용체-a), CD11a (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4 (CD80 (B7.1), 예를 들어, CTLA4 Ig - 아바타셉트 (오렌시아 (ORENCIA)®)), ICOSL, ICOS 및/또는 CD86 (B7.2)을 포함하고 이로 제한되지 않는 다른 세포 표면 분자에 대한 항체. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 항체는 하나 이상의 일반적인 면역억제제, 예를 들어 시클로스포린 A 또는 FK506과 조합하여 사용된다.
다른 실시태양에서, 항체는 자가면역 질환, 염증성 질병 등에 대한 백신 어쥬번트로서 사용된다. 상기 종류의 질환 치료를 위한 어쥬번트의 조합은 표적화된 자가-항원으로부터의 매우 다양한 항원, 즉 자가면역에 관여되는 자가항원, 예를 들어 미엘린 염기성 단백질; 염증성 자가-항원, 예를 들어, 아밀로이드 펩티드 단백질, 또는 이식 항원, 예를 들어, 동종항원과 조합되어 사용하기 적합하다. 항원은 단백질로부터 유도된 펩티드 또는 폴리펩티드, 및 다음 중의 임의의 단편을 포함한다: 당류, 단백질, 폴리뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드, 자가항원, 아밀로이드 펩티드 단백질, 이식 항원, 알레르겐, 또는 다른 거대분자 성분. 일부 예에서, 1 초과의 항원이 항원 조성물에 포함된다.
예를 들어, 본 발명의 어쥬번트 조합물을 함유하는, 척추동물 숙주에서 알레르겐에 대한 반응을 완화하기 위한 바람직한 백신은 알레르겐 또는 그의 단편을 함유하는 것을 포함한다. 그러한 알레르겐의 예는 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 5,830,877 및 국제 특허 출원 공개 WO 99/51259에 설명되어 있고, 화분, 곤충 독액, 동물 인설 (dander), 진균 포자 및 약물 (예를 들어 페니실린)을 포함한다. 백신은 알레르기 반응의 공지의 원인인 IgE 항체의 생산을 방해한다. 다른 예에서, 본 발명의 어쥬번트 조합물을 함유하는, 척추동물 숙주에서 아밀로이드 침착을 특징으로 하는 질병을 예방 또는 치료하기 위해 바람직한 백신은 아밀로이드 펩티드 단백질 (APP)의 일부를 함유하는 것을 포함한다. 상기 질병은 알츠하이머병, 아밀로이드증 또는 아밀로이드 형성 질병으로 다양하게 언급된다. 따라서, 본 발명의 백신은 본 발명의 어쥬번트 조합물 및 Aβ 펩티드, 및 Aβ 펩티드의 단편 및 Aβ 펩티드 또는 그의 단편에 대한 항체를 포함한다.
다른 치료제의 설계 및 생성
본 발명에 따라, 그리고 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F에 대해 본원에서 생산되고 특성화된 항체의 활성을 기초로 하여, 항체 모이어티에 대한 다른 치료적 방식의 설계가 용이해진다. 그러한 방식은 진보된 항체 치료제, 예를 들어 이중특이적 항체, 면역독소, 및 방사성 표지된 치료제, 펩티드 치료제의 생산, 유전자 요법, 특히 인트라바디 (intrabody), 안티센스 치료제, 및 소분자를 포함하고 이로 제한되지 않는다.
예를 들어, 이중특이적 항체와 관련하여, (i) 하나는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F에 대한 특이성을 갖고 다른 하나는 함께 접합된 제2 분자에 대한 특이성을 갖는 2개의 항체, (ii) IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F에 특이적인 하나의 사슬 및 제2 분자에 특이적인 제2 사슬을 갖는 단일 항체, 또는 (iii) IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 및 제2 분자에 대한 특이성을 갖는 단일쇄 항체를 포함하는 이중특이적 항체를 생성할 수 있다. 상기 이중특이적 항체는 공지된 기술을 사용하여 생성된다 (예를 들어, (i) 및 (ii)와 관련하여, 예를 들어, 문헌 [Fanger et al. Immunol Methods 4:72-81 (1994)] 및 [Wright et al. Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992)], 및 (iii)과 관련하여, 예를 들어, 문헌 [Traunecker et al. Int. J. Cancer (Suppl.) 7:51-52 (1992)] 참조).
면역독소와 관련하여, 항체는 당업계에 공지된 기술을 이용하여 면역독소로서 작용하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Vitetta Immunol Today 14:252 (1993)]을 참조한다. 또한, 미국 특허 5,194,594를 참조한다. 방사성 표지된 항체의 제조와 관련하여, 상기 변형된 항체는 당업계에 공지되어 있는 기술을 사용하여 쉽게 제조될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Junghans et al. in Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686 (2d edition, Chafner and Longo, eds., Lippincott Raven (1996))] 참조). 또한 미국 특허 4,681,581, 4,735,210, 5,101,827, 5,102,990 (RE 35,500), 5,648,471, 및 5,697,902를 참조한다. 각각의 면역독소 및 방사성 표지된 분자는 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F를 발현하는 세포를 치사시킬 것이다.
치료 펩티드의 생성과 관련하여, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 및 그에 대한 항체, 예를 들어 본 발명의 항체에 관련된 구조 정보의 이용 또는 펩티드 라이브러리의 스크리닝을 통해, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F에 대해 작용하는 치료 펩티드를 생성시킬 수 있다. 펩티드 치료제의 설계 및 스크리닝은 문헌 [Houghten et al. Biotechniques 13:412-421 (1992)], [Houghten PNAS USA 82:5131-5135 (1985)], [Pinalla et al. Biotechniques 13:901-905 (1992)], [Blake and Litzi-Davis BioConjugate Chem. 3:510-513 (1992)]에서 논의되어 있다. 또한, 면역독소 및 방사성 표지된 분자도 항체와 관련하여 상기 논의된 바와 같은 펩티드 모이어티와 관련하여 유사한 방식으로 제조될 수 있다. IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 분자 (또는 스플라이스 변이체 또는 대체 형태와 같은 형태)가 질병 과정에서 기능적으로 활성임을 가정할 때, 통상적인 기술을 통해 유전자 및 그에 대한 안티센스 치료제를 설계하는 것이 또한 가능할 것이다. 그러한 방식은 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F의 기능을 조절하기 위해 이용될 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명의 항체는 그에 관련된 기능적 분석의 설계 및 이용을 용이하게 한다. 안티센스 치료제에 대한 설계 및 전략은 국제 특허 출원 WO 94/29444에 상세히 논의되어 있다. 유전자 요법에 대한 설계 및 전략은 공지되어 있다. 그러나, 특히, 인트라바디를 수반하는 유전자 치료 기술의 사용이 특히 유리한 것으로 입증될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Chen et al. Human Gene Therapy 5:595-601 (1994)] 및 [Marasco Gene Therapy 4:11-15 (1997)]을 참조한다. 또한, 유전자 치료제에 관련된 일반적인 설계 및 고려사항은 국제 특허 출원 WO 97/38137에 논의되어 있다.
IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 분자의 구조 및 그의 본 발명에 따른 다른 분자, 예를 들어 본 발명의 항체와의 상호작용으로부터 얻은 지식 등을 이용하여 추가의 치료 방식을 합리적으로 설계할 수 있다. 이와 관련하여, 약물 발견에 초점을 맞추기 위해 합리적인 약물 설계 기술, 예를 들어 X-선 결정술, 컴퓨터 보조 (또는 지원) 분자 모델링 (CAMM), 정량적 또는 정성적 구조-활성 관계 (QSAR), 및 유사한 기술을 이용할 수 있다. 합리적인 설계를 통해, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17의 활성을 변형 또는 조절하기 위해 사용될 수 있는 분자 또는 그의 특이적 형태와 상호작용할 수 있는 단백질 또는 합성 구조를 예측할 수 있다. 상기 구조는 화학적으로 합성하거나 생물학적 시스템에서 발현될 수 있다. 상기 방법은 문헌 [Capsey et al. Genetically Engineered Human Therapeutic Drugs (Stockton Press, NY (1988))]에서 검토된 바 있다. 또한, 조합 라이브러리를 설계하여 합성하고, 스크리닝 프로그램, 예를 들어 고효율 스크리닝에 사용할 수 있다.
스크리닝 방법
본 발명은 IL-17, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체의 그의 고유한 수용체에 대한 결합을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해하는 조절제, 즉, 후보 또는 시험 화합물 또는 물질 (예를 들어, 펩티드, 펩티드모방체, 소분자 또는 다른 약물) 또는 IL-17, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체의 신호전달 기능을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 저해하는 후보 또는 시험 화합물 또는 물질을 확인하는 방법 (본원에서 "스크리닝 분석"으로도 언급됨)을 제공한다. 또한, IL-17, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 신호전달과 연관된 질환의 치료에 유용한 화합물의 확인 방법도 제공된다. 또한, 본 발명은 본원에 설명되는 스크리닝 분석에서 확인된 화합물을 포함한다.
한 실시태양에서, 본 발명에서는 IL-17, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F의 신호전달 기능을 조절하는 후보 또는 시험 화합물을 스크리닝하기 위한 분석을 제공한다. 본 발명의 시험 화합물은 다음을 포함하는 당업계에 공지된 조합 라이브러리 방법에서 임의의 많은 방법을 사용하여 얻을 수 있다: 생물학적 라이브러리; 공간적으로 처리가능한 평행 고상 또는 액상 라이브러리; 디콘벌루션 (deconvolution)을 필요로 하는 합성 라이브러리 방법; "하나의-비드 하나의-화합물" 라이브러리 방법; 및 친화도 크로마토그래피 선택을 사용하는 합성 라이브러리 방법. 생물학적 라이브러리 방법은 펩티드 라이브러리로 제한되고, 다른 4개의 방법은 화합물의 펩티드, 비-펩티드 올리고머 또는 소분자 라이브러리에 적용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Lam, 1997. Anticancer Drug Design 12:145] 참조).
본원에서 사용되는 바와 같이, "소분자"는 분자량이 약 5 kD 미만, 가장 바람직하게는 약 4 kD 미만인 조성물을 의미한다. 소분자는 예를 들어 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 펩티드모방체, 탄수화물, 지질 또는 다른 유기 또는 무기 분자일 수 있다. 화학적 및/또는 생물학적 혼합물, 예를 들어 진균, 세균, 또는 조류 추출물의 라이브러리는 당업계에 공지되어 있고, 본 발명의 임의의 분석으로 스크리닝할 수 있다.
분자 라이브러리의 합성 방법의 예는 선행 기술, 예를 들어 문헌 [DeWitt, et al., 1993. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 6909]; [Erb, et al., 1994. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91: 11422]; [Zuckermann, et al., 1994. J. Med. Chem. 37: 2678]; [Cho, et al., 1993. Science 261: 1303]; [Carrell, et al., 1994. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33: 2059]; [Carell, et al., 1994. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33: 2061]; 및 [Gallop, et al., 1994. J. Med. Chem. 37: 1233]에서 볼 수 있다.
화합물의 라이브러리는 용액 내에 (예를 들어, [Houghten, 1992. Biotechniques 13: 412-421] 참조), 또는 비드 상에 ([Lam, 1991. Nature 354: 82-84] 참조), 칩 상에 ([Fodor, 1993. Nature 364: 555-556] 참조), 세균 (미국 특허 5,223,409 참조), 포자 (미국 특허 5,233,409 참조), 플라스미드 ([Cull, et al., 1992. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 1865-1869] 참조) 또는 파지 상에 ([Scott and Smith, 1990. Science 249: 386-390]; [Devlin, 1990. Science 249: 404-406]; [Cwirla, et al., 1990. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87: 6378-6382]; [Felici, 1991. J. Mol. Biol. 222: 301-310]; 및 미국 특허 5,233,409 참조) 제시될 수 있다.
한 실시태양에서, 후보 화합물은 항체-항원 복합체에 도입되고, 후보 화합물이 항체-항원 복합체를 파괴하는지를 결정하고, 상기 복합체의 파괴는 후보 화합물이 IL-17, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 복합체의 신호전달 기능을 조절함을 나타낸다. 예를 들어, 항체는 모노클로날 항체 5E12 ("Mab05")이고, 항원은 IL-17F이거나, 항체는 모노클로날 항체 41B10이고, 항원은 IL-17F 또는 IL-17A/IL-17F이다. 별법으로, 모노클로날 항체는 30D12, 29D8, 1E4, 31A3, 39F12, 12B12, 15B7, 4H11, 4B11, 8B11, 38B1, 15E6, 30D12BF, 15E6FK, 또는 39F12A이고, 항원은 IL-17F, IL-17A 또는 IL-17A/IL-17F 복합체이다.
또다른 실시태양에서, IL-17A/IL-17F 복합체가 제공되고, 적어도 하나의 중화 모노클로날 항체에 노출된다. 항체-항원 복합체의 형성이 검출되고, 하나 이상의 후보 화합물이 복합체에 도입된다. 하나 이상의 후보 화합물의 도입 후에 항체-항원 복합체가 파괴되면, 후보 화합물은 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 신호전달과 연관된 질환의 치료에 유용하다.
또다른 실시태양에서, 본 발명의 가용성 단백질이 제공되고, 적어도 하나의 중화 모노클로날 항체에 노출된다. 항체-항원 복합체의 형성이 검출되고, 하나 이상의 후보 화합물이 복합체에 도입된다. 하나 이상의 후보 화합물의 도입 후에 항체-항원 복합체가 파괴되면, 후보 화합물은 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 신호전달과 연관된 질환의 치료에 유용하다.
항체-항원 복합체와 상호작용하거나 이를 파괴하는 시험 화합물의 능력을 결정하는 것은 예를 들어 항원 또는 그의 생물학상 활성 부분에 대한 시험 화합물의 결합이 복합체 내에서 표지된 화합물을 검출함으로써 결정될 수 있도록 시험 화합물을 방사성 동위원소 또는 효소 표지와 결합시킴으로써 달성할 수 있다. 예를 들어, 시험 화합물을 125I, 35S, 14C, 또는 3H로 직접 또는 간접적으로 표지하고, 방사성 동위원소는 방사선 방출의 직접 계수에 의해 또는 섬광 계수에 의해 검출할 수 있다. 별법으로, 시험 화합물은 예를 들어 양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 또는 루시퍼라제로 효소에 의해 표지되고, 효소 표지는 적절한 기질의 생성물로의 전환을 결정함으로써 검출될 수 있다.
한 실시태양에서, 분석은 항체-항원 복합체를 시험 화합물과 접촉시키고, 항원과 상호작용하거나 존재하는 항체-항원 복합체를 파괴하는 시험 화합물의 능력을 결정하는 것을 포함한다. 상기 실시태양에서, 항원과 상호작용하고/하거나 항체-항원 복합체를 파괴하는 시험 화합물의 능력을 결정하는 것은 항체에 비해 항원 또는 그의 생물학상 활성 부분에 우선적으로 결합하는 시험 화합물의 능력을 결정하는 것을 포함한다.
또다른 실시태양에서, 분석은 항체-항원 복합체를 시험 화합물과 접촉시키고, 항체-항원 복합체를 조절하는 시험 화합물의 능력을 결정하는 것을 포함한다. 항체-항원 복합체를 조절하는 시험 화합물의 능력을 결정하는 것은 예를 들어 시험 화합물의 존재 하에 항체에 결합하거나 항체와 상호작용하는 항원의 능력을 결정함으로써 달성할 수 있다.
당업자는 본원에 개시된 임의의 스크리닝 방법에서, 항체는 중화 항체, 예를 들어 모노클로날 항체 30D12, 29D8, 1E4, 31A3, 4B11, 39F12, 12B12, 15B7, 4H11, 8B11, 38B1, 15E6, 30D12BF, 15E6FK, 또는 39F12A일 수 있고, 그 각각은 전염증성 시토킨 생산을 조절하거나 방해함을 알 것이다.
본원에 개시된 스크리닝 방법은 세포 기반 분석 또는 무세포 분석으로서 수행할 수 있다. 본 발명의 무세포 분석은 가용성 IL-17F, IL-17A, 및 또는 IL-17A/IL-17F, 및 그의 단편을 사용할 수 있다.
하나 초과의 실시태양에서, 후보 화합물의 도입 후에 하나 또는 둘 다의 비복합체화 형태로부터 복합체화 형태의 분리를 용이하게 하기 위해, 및 분석의 자동화를 위해 항체 또는 항원을 고정시키는 것이 바람직할 수 있다. 후보 화합물의 존재 및 부재 하에 항체-항원 복합체의 관찰은 반응물질을 담기 위해 적합한 임의의 용기 내에서 달성할 수 있다. 그러한 용기의 예는 미세적정 플레이트, 시험관, 및 미세-원심분리관을 포함한다. 한 실시태양에서, 하나 또는 두 단백질이 매트릭스에 결합되도록 하는 도메인을 첨가하는 융합 단백질이 제공될 수 있다. 예를 들어, GST-항체 융합 단백질 또는 GST-항원 융합 단백질은 글루타티온 세파로스 비드 (시그마 케미칼 (Sigma Chemical, 미주리주 세인트루이스)) 또는 글루타티온 유도체화된 미세적정 플레이트 상에 흡착될 수 있고, 이어서 이는 시험 화합물과 조합되고, 혼합물을 복합체 형성에 도움이 되는 조건 (예를 들어, 염 및 pH에 대한 생리학적 조건에서) 하에 인큐베이팅한다. 인큐베이션 후에, 비드 또는 미세적정 플레이트 웰을 세척하여 임의의 비결합된 성분, 비드의 경우에 고정된 매트릭스를 제거하고, 복합체를 직접 또는 간접적으로 결정한다. 별법으로, 복합체가 매트릭스로부터 해리될 수 있고, 항체-항원 복합체 형성의 수준은 표준 기술을 이용하여 결정할 수 있다.
단백질을 매트릭스 상에 고정시키기 위한 다른 기술이 또한 본 발명의 스크리닝 분석에서 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체 (예를 들어 30D12, 29D8, 1E4, 31A3, 39F12, 12B12, 15B7, 4H11, 4B11, 8B11, 38B1, 15E6, 30D12BF, 15E6FK 또는 39F12A) 또는 항원 (예를 들어 IL-17F, IL-17A 또는 IL-17A/IL-17F 단백질)을 비오틴 및 스트렙타비딘의 접합을 이용하여 고정시킬 수 있다. 비오티닐화된 항체 또는 항원 분자는 당업계에 공지된 기술을 이용하여 비오틴-NHS (N-히드록시-숙신이미드)로부터 제조하고 (예를 들어, 비오티닐화 키트, 피어스 케미칼스 (Pierce Chemicals, 미국 일리노이주 록포드)), 스트렙타비딘-코팅된 96 웰 플레이트 (피어스 케미칼스)의 웰 내에 고정시킬 수 있다. 별법으로, 관심있는 항체 또는 항원과 반응성이지만 관심있는 항체-항원 복합체의 형성을 방해하지 않는 다른 항체를 플레이트의 웰로 유도체화하고, 항체 접합에 의해 웰 내에 잡힌 항체 또는 항원을 방출시킬 수 있다. GST-고정된 복합체에 대해 상기 설명된 것에 추가로 그러한 복합체를 검출하기 위한 방법은 항체 또는 항원과 반응성인 그러한 다른 항체를 사용하는 복합체의 면역검출을 포함한다.
본 발명은 추가로 임의의 상기한 스크리닝 분석에 의해 확인된 신규한 물질 및 본원에 설명된 바와 같은 치료를 위한 그의 용도에 관한 것이다.
진단 및 예방 제형
본 발명의 huIL-17A/F MAb는 진단 및 예방 제형으로 사용된다. 한 실시태양에서, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 길항제, 예를 들어 본 발명의 huIL-17A/F MAb는 하나 이상의 상기 언급한 자가면역 또는 염증성 질병, 예를 들어, 비제한적으로 류마티스 관절염, 크론병, 건선, 다발성 경화증, 만성 폐쇄성 폐질환, 천식, 혈관신생 및 암을 발병할 위험이 있는 환자에게 투여된다. 하나 이상의 상기 언급한 자가면역, 염증성 및 세포 증식 질환에 대한 환자 또는 장기의 소인은 유전자형, 혈청학적 또는 생화학적 마커를 사용하여 결정할 수 있다.
본 발명의 또다른 실시태양에서, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 길항제, 예를 들어 huIL-17A/F 항체는 하나 이상의 상기 언급한 자가면역 또는 염증성 질병, 예를 들어 류마티스 관절염, 크론병, 건선, 다발성 경화증, 만성 폐쇄성 폐질환, 천식, 혈관신생 및 암과 연관된 임상 적응증으로 진단된 인간 개체에 투여된다. 진단 시에, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 길항제, 예를 들어 huIL-17A/F 항체는 류마티스 관절염, 크론병, 건선, 다발성 경화증, 만성 폐쇄성 폐질환, 천식, 혈관신생 및 암과 연관된 임상 적응증의 효과를 완화 또는 역전시키기 위해 투여된다.
본 발명의 항체는 환자 샘플 내의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F의 검출에서 또한 유용하고, 따라서 진단에서 유용하다. 예를 들어, 본 발명의 huIL-17A/F 항체는 환자 샘플 내의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 수준을 검출하기 위해 시험관내 분석, 예를 들어, ELISA에서 사용된다.
한 실시태양에서, 본 발명의 huIL-17A/F 항체는 고체 지지체 (예를 들어, 미세적정 플레이트의 웰(들)) 상에 고정된다. 고정된 항체는 시험 샘플 내에 존재할 수 있는 임의의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F에 대한 포획 항체로서 기능한다. 고정된 항체를 환자 샘플과 접촉시키기 전에, 고체 지지체를 세정하고, 분석물질의 비특이적 흡착을 방지하기 위해 우유 단백질 또는 알부민과 같은 차단제로 처리한다.
후속적으로, 웰을 항원을 함유하는 것으로 의심되는 시험 샘플, 또는 표준 양의 항원을 함유하는 용액으로 처리한다. 그러한 샘플은 예를 들어, 병리학의 진단인 것으로 고려되는 수준의 순환 항원을 갖는 것으로 의심되는 대상으로부터의 혈청 샘플이다. 시험 샘플 또는 표준물을 세정한 후, 고체 지지체를 검출가능하게 표지된 제2 항체로 처리한다. 표지된 제2 항체는 검출 항체로서 기능한다. 검출가능한 표지의 수준을 측정하고, 시험 샘플 내의 IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 항원의 농도를 표준 샘플로부터 개발된 표준 곡선과의 비교에 의해 결정한다.
시험관내 진단 분석에서 본 발명의 huIL-17A/F 항체를 사용하여 얻어진 결과에 기초하여, IL-17F, IL-17A 및/또는 IL-17A/IL-17F 항원의 발현 수준에 기초한 대상에서 질병 (예를 들어, 허혈, 자가면역 또는 염증성 질환과 연관된 임상 적응증)의 시기를 결정하는 것이 가능함이 이해될 것이다. 제시된 질병에 대해, 혈액의 샘플을 질병의 진행에서 다양한 시기에, 및/또는 질병의 치료 목적의 처치에서 다양한 지점에 있는 것으로 진단된 대상으로부터 취한다. 진행 또는 요법의 각각의 시기에 대한 통계학상 유의한 결과를 제공하는 샘플의 집단을 사용하여, 각각의 기의 특징으로 고려될 수 있는 항원의 다양한 농도가 지정된다.
본원에 인용되는 모든 출판물 및 특허 문서는 마치 각각의 출판물 또는 문서가 본원에 참조로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 나타내는 것처럼 본원에 참조로 포함된다. 출판물 및 특허 문서의 인용은 이들이 관련 선행 기술이라고 인정하는 것으로 의도되지 않거나, 그의 내용 및 일자에 관한 임의의 인정을 구성하지 않는다. 본 발명은 현재 상세한 설명에 의해 설명되지만, 당업자는 본 발명이 다양한 실시태양으로 실시될 수 있고, 상기한 설명 및 하기 실시예가 예시의 목적이고 아래의 특허청구범위를 제한하지 않음을 알 것이다.
실시예
실시예 1 : 인간 IL-17F, 래트 IL-17F, 사이노몰거스 ( cynomolgus ) IL-17F 및 IL-17A의 클로닝, 발현 및 정제
클로닝
성숙 인간 IL-17F (AF384857, aa 31-163), 래트 IL-17F (AAH91568, aa 21-153), 사이노몰거스 IL-17F (서열 XP_001106517, aa 31-163에 동일함) 및 사이노몰거스 IL-17A (서열 XP_001106391, aa 20-155에 동일한)를 코딩하는 cDNA를 PCR에 의해 증폭시키고 PCR4TOPO 벡터 (인비트로겐 (Invitrogen)) 내에 클로닝하였다. 또 다른 PCR 단계 시에, His 태그 또는 His 태그에 이어 AviTag (아비디티 (Avidity, 미국 콜로라도주 덴버)를 시토킨 코딩 서열의 N-말단에 도입하였다. 이어서, 이들 구성체를 리더 서열에 융합시키고, 대응하는 발현 벡터 내에 서브-클로닝시켰다.
바큘로바이러스 -감염된 세포로부터 인간 IL-17F 및 래트 IL-17F의 발현 및 정제
GP67 리더 서열 (MLLVNQSHQGFNKEHTSKMVSAIVLYVLLAAAAHSAFA; 서열 114)이 앞에 존재하는 His-태깅된 huIL-17F 또는 래트 IL-17F를 바큘로바이러스 박미드 (bacmid) 벡터 pFASTBAC Dual (인비트로겐) 내로 서브-클로닝하였다. Sf9 세포 내로 형질감염 후에, 재조합 바이러스를 단리하고 증폭시켰다. 단백질 생산을 위해, Hi5 세포 또는 SF9 세포를 바큘로바이러스로 감염시키고, 27℃에서 3일 동안 인큐베이팅하였다. 세포 배양 배지를 원심분리에 의해 청정화하고, 여과하고, SartoFlow Slice 200 (사토리우스 (Sartorius) - 히드로사트 (Hydrosart) 컷오프 10 kD) 내에서 약 10배 농축시켰다. pH를 7.0으로 조정 및 또다른 원심분리 단계 후에, 농축시킨 단백질을 Ni2 + 이온을 채운 HiTrap 킬레이팅 HP 컬럼 (지이 헬쓰케어 (GE Healthcare)) 또는 Ni-NTA 수퍼플로우 (Superflow) 컬럼 (퀴아겐 (Qiagen)) 상에서 표준 절차를 이용하여 정제하였다. IL-17F 함유 분획을 모으고, PD-10 컬럼 (지이 헬쓰케어) 상에서 탈염시켰다.
바큘로바이러스-감염된 세포로부터 인간 IL-17F 및 래트 IL-17F는 하나의 정제 단계 후에 본질적으로 오염물질이 없고, 비-환원 SDS-PAGE에 의해 입증되는 바와 같이 주로 디술피드-연결된 동종이량체로서 나타났다. His-태깅된, 바큘로바이러스-발현된 인간 IL-17F의 생물학적 활성은 상업적인 시토킨 (이. 콜라이 (E. Coli) 발현된 huIL-17F, 페프로테크 이시 (Peprotech EC) 또는 알앤디 시스템즈 (R&D Systems))의 활성에 상당하였다.
CHOK1SV 세포로부터 인간 IL-17F 및 래트 IL-17F의 발현 및 정제
CD33 리더 서열 (MPLLLLLPLLWAGALAMD; 서열 115)이 앞에 존재하는 huIL-17F 또는 래트 IL-17F 코딩 서열 + His 태그 및 AviTag (아비디티, 미국 콜로라도주 덴버)를 발현 벡터 pEE14.4. 내에서 hCMV 프로모터의 제어 하에 놓았다. IL-17F를 제2 시스트론으로서 GFP 코딩 서열 및 바이러스 내부 리보좀 도입 부위 (IRES)를 함유하는 2시스트론 (bicistronic) mRNA로부터 발현시켰다. pEE14.4. 벡터는 메티오닌 술폭시민 (MSX)을 함유하는 선택 배지 내에서 형질감염된 세포의 생존을 위해 필수적인 글루타민 합성효소 (GS) 유전자를 함유한다. 안정한 형질감염체를 론자 바이올로지스 (Lonza Biologies)의 소유물인 CHOK1SV 세포주 내에서 생성하였다. MSX의 존재 하에 4주 배양 후에, 고-발현 클론을 확인하고, 팽창시키고, 인간 또는 래트 IL-17F의 생산을 위해 사용하였다.
CHOK1SV-발현된 인간 IL-17F 및 래트 IL-17F를 Ni2 + 친화도 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 이들은 본질적으로 오염물질이 없고, 비-환원 SDS-PAGE 겔 상에서 디술피드-연결된 동종이량체로서 나타났다. His+Avi-태깅된, CHO-발현된 인간 IL-17F의 생물학적 활성은 아마도 N-말단에서 부피가 큰 이중 태그의 존재로 인해 상업적인 huIL-17F의 활성에 비해 유의하게 감소하였다.
PEAK 세포로부터 인간 IL-17F, cnIL-17F 및 cnIL-17A의 발현 및 정제
His-태깅된 huIL-17A/F, cnIL-17F, 또는 cnIL-17A 코딩 서열을 가우시아 프린셉스 (Gaussia princeps) 루시퍼라제 리더 서열 (AF015993)에 융합시키고, 에피솜 발현 벡터 pEAK8 내에서 EF1 프로모터의 제어 하에 놓았다. 시토킨-코딩 서열에 이어 바이러스 내부 리보좀 도입 부위 (IRES) 및 제2 시스트론 (GFP)이 존재한다. pEAK8 벡터는 푸로마이신 내성 유전자, EBV 핵 항원 1 (EBNA1) 및 oriP 복제 기점을 함유한다. EBNA1 및 oriP는 인간 세포 내에서 에피솜 DNA로서 pEAK8 벡터의 전파 및 안정한 형질감염체의 생성을 위해 필요하다. 2 ㎍/mL의 푸로마이신의 존재 하에 7-10일 배양 후에 안정하게 형질감염된 세포를 얻었다. 푸로마이신 내성 세포의 집단을 팽창시키고 시토킨 생산을 위해 사용하였다.
Ni2 + 친화도 크로마토그래피에 의해 정제된 PEAK-발현된 것은 >95% 순수하고, 비-환원 SDS-PAGE에 의해 입증되는 바와 같이 주로 디술피드-연결된 동종이량체 형태로 발견되었다. His-태깅된, PEAK-발현된 인간 IL-17F의 생물학적 활성은 상업적 공급원의 huIL-17A/F의 활성에 유사하였다.
실시예 2 : 면역화
마우스 항체 유전자 발현이 억제되고 인간 항체 유전자 발현으로 교체된 마우스의 트랜스제닉 동물주를 사용하여 완전 인간 모노클로날 항체를 생성하였다. 트랜스제닉 마우스의 3개의 동물주를 사용하였다:
1) HuMab® 마우스 (메다렉스 (Medarex, 미국 뉴저지주 프린스톤)).
2) KM™ 마우스: HuMAb 마우스와 키린 (Kirin)의 TC 마우스 (키린 파마 컴퍼니 (Kirin Pharma Company, 일본)) 사이의 교잡종.
3) KM (FCγRIIb-KO) 마우스: KM™ 마우스로부터 유래된 동물주, 여기서 억제성 Fc 감마 수용체 IIB를 코딩하는 유전자 Fcgr2b가 불활성화되었다.
마우스를 인간 IL-17F 또는 인간 IL-17F와 래트 IL-17F 둘 다로 면역화시켰다. 면역화를 위해 2가지 형태의 항원을 사용하였다: 비-접합된 IL-17F, 또는 키홀 림펫 (Keyhole Limpet) 헤모시아닌 (KLH)에 접합된 IL-17F. 면역화 전략은 문헌의 표준 프로토콜에 따랐다.
면역화시킨 동물의 혈청을 huIL-17F, 래트 IL-17F, 및 huIL-17A (페프로테크 이시, cat No 200-17)에 대해 생성된 인간 IgG의 존재에 대해 ELISA에 의해 주기적으로 스크리닝하였다. 대부분의 동물은 인간 IL-17F에 대해 고-역가 반응을 나타냈다. 래트 IL-17F 및 huIL-17F 둘 다를 면역화를 위해 사용할 때, 대부분의 동물은 두 항원에 대해 고-역가 반응을 나타냈다. 중요하게는, huIL-17F 및 래트 IL-17F로 둘 다 면역화시킨 KM 마우스 및 KM (FCγRIIb-KO) 마우스의 유의한 비율이 huIL-17A에 대해 교차-반응성 반응을 나타냈다. 교차-반응성 반응은 유일한 항원으로서 (즉, 래트 IL-17F 부재) huIL-17F로 면역화시킨 KM 및 KM (FCγRIIb-KO) 마우스에서 산발적으로 관찰되었다. KM 및 KM (FCγRIIb-KO) 마우스에 반대로, HuMAb 마우스는 사용된 면역화 프로토콜에 무관하게 huIL-17A에 대해 교차-반응성 역가를 나타내지 않았다.
실시예 3 : 하이브리도마의 생성
림프절 세포와 SP2/0 골수종 세포의 융합
하이브리도마를 얻기 위해, 오금, 서혜부, 대동맥 주위, 턱밑, 경부, 축 및 상완 림프절을 마우스로부터 제거하고, 콜라게나제 및 DNAse로 소화시켰다. 림프절 세포의 단일 세포 현탁액을 SP2/0 골수종 세포와 1:1 비로 혼합하고, 세포융합 (Cytofusion) 저전도성 매질 (CPS-LCMC, 사이토펄스 사이언시즈, 인크. (CytoPulse Sciences, Inc.)) 내에 현탁시켰다. 융합은 제조자 (사이토펄스 사이언시즈, 인크.)가 지시하는 바와 같이 사이토펄스 CEEF50 전기융합 장치에서 3천만 내지 6천만 개의 비장세포를 사용하여 이루어졌다. 전기융합 후에, 세포를 약 1시간 동안 37℃에서 인큐베이팅하여 회수한 후, 96-웰 플레이트에 분포시켰다.
하이브리도마의 배양
융합된 세포를 HAT 선택 배지 내에 재현탁시키고, 44 내지 52 96-웰 플레이트 내에 0.1-0.2x105/웰의 비장세포의 세포 농도로 200 ㎕ 배지 내에서 플레이팅하였다. 하이브리도마 선택을 14일 동안 계속하였다. 면역화된 마우스의 림프절의 융합으로 huIL-17F에 특이적인 항체 또는 huIL-17F 및 huIL-17A 둘 다에 특이적인 교차-반응성 항체를 생산하는 하이브리도마를 생성하였다.
하이브리도마 스크리닝
융합 14일 후에, 하이브리도마-함유 플레이트를 인간 IL-17F 및/또는 인간 IL-17A에 결합하는 인간 IgG의 존재에 대해 FLISA (형광-연결 면역흡착 분석)에 의해 스크리닝하였다. 간단히 설명하면, 6 미크론 비드 (폴리비즈 (Polybeads), cat. No 07312, 폴리사이언시즈 인크. (Polysciences Inc.))를 huIL-17F, huIL-17A (둘 다 페프로테크 이시) 또는 BSA (시그마)로 코팅하고, FMAT® 384-웰 광학 플레이트 (어플라이드 바이오시스템즈 (Applied Biosystems)) 내로 5,000 비드/웰의 밀도로 분포시켰다. 비드를 적은 부피의 하이브리도마 배양 상등액 (30 ㎕/웰)과 혼합하고, 철야 인큐베이팅한 후, FMAT Blue® 염료 (어플라이드 바이오시스템즈)에 접합된 염소 항-인간 IgG Fc (잭슨 이뮤노리서치 (Jackson Immunoresearch) No 109-005-098)를 첨가하였다. 2 내지 8시간의 인큐베이션 기간 후에, 비드의 형광을 8200 세포 검출 시스템 분석기 (어플라이드 바이오시스템즈)에서 측정하였다. huIL-17F, huIL-17A 또는 huIL-17F와 huIL-17A 둘 다에 결합하지만 BSA에 결합하지 않는 인간 IgG를 생산하는 하이브리도마를 팽창시키고, 추가로 분석하였다.
실시예 4 : huIL-17F 항체의 교차-반응성
결합 분석: huIL-17F 항체를 IL-17 패밀리의 시토킨의 다른 구성원, 및 다른 종으로부터의 IL-17A 및 IL-17F에 결합하는 그의 능력에 대해 시험하였다. 분석은 상기 설명된 바와 같이 FLISA 형식으로 수행하였다. 다음 재조합 시토킨을 폴리스티렌 비드에 결합시키고, huIL-17F 항체에 결합하는 그의 능력에 대해 시험하였다: huIL17A-F 이종이량체 (알앤디 시스템즈, cat No 5194-IL-025/CF) (huIL17B (페프로테크 이시, cat No 200-28), huIL-17C (알앤디 시스템즈, cat No 1234-IL-025/CF), huIL-17D (페프로테크 이시, cat No 200-27), huIL-17E (huIL-25, 페프로테크 이시, cat No 200-24), muIL-17A (페프로테크 이시, cat No 210-17), muIL-17F (페프로테크 이시, cat No 200-17F), muIL-17A-F 이종이량체 (알앤디 시스템즈, cat No 5390-IL-025/CF), 래트 IL-17F (His-태깅된, 사내에서 곤충 세포 내에서 생산됨), 래트 IL-17A (His-태깅된, 사내에서 PEAK 세포 내에서 생산됨), cyIL-17F, cyIL-17A 및 cyIL-17A-F 이종이량체 (3개 모두는 사내에서 PEAK 세포에서 생산됨). 이들 상이한 시토킨에 결합하는 개별 huIL-17F 항체의 능력을 아래 표 3에 요약한다:
Figure pat00059
실시예 5 : 표면 플라스몬 공명 ( 비아코어 ( Biacore ))을 통한 huIL -17A/F 교차-반응성 항체의 친화도 및 결합 운동학의 측정
huIL-17F 교차-반응성 항체의 친화도 및 결합 운동학을 비아코어 2000 기기 (비아코어 에이비 (Biacore AB, 스웨덴 웁살라)) 상에서 특성 결정하였다. 3개의 CM5 비아코어 칩을 연속적으로 사용하고, 3600, 1800 및 1540 RU (반응 단위)의 항-인간 IgG Fc (비아코어 에이비, 스웨덴 웁살라)를 EDC/NHS 화학에 의해 이들 칩 상에 고정시켰다. 상기 표면을 사용하여 huIL-17A/F 항체를 포획하였다. 표면은 각각의 사이클 후에 10 mM 글라이신 (pH=1.5)을 20 ㎕/min으로 30s 동안 주입한 후, HBS-EP 버퍼 (비아코어 에이비, 스웨덴 웁살라) 내에서 1 분의 안정화 시간에 의해 재생하였다.
결합은 다양한 IL-17 이량체성 시토킨을 이중으로 다음 농도에서 통과시킴으로써 측정하였다: 90 nM, 30 nM, 10 nM, 3.33 nM, 1.11 nM 및 0 nM. 모든 용액을 HBS-EP 버퍼 내에 희석시켰다. 주입은 75 ㎕/min으로 3 min 동안 수행한 후, 12 min의 해리 시간을 갖고, 온도는 25℃에 설정하였다. 배경 공제 결합 곡선을 1:1 랭뮈어 (Langmuir) 모델에 따라 피팅하고, 온률 (on-rate) (ka), 오프율 (off-rate) (kd) 및 해리 상수 (KD) 값을 결정하였다. 표 4 및 5에서는 huIL-17F 교차-반응성 항체의 친화도 및 운동 상수를 요약한다.
Figure pat00060
Figure pat00061
실시예 6 : MAb 15E6FK/IL-17 수용체 결합 경쟁 연구
본 연구는 15E6FK 교차-반응성 항체가 IL-17A에 대한 결합에 대해 IL-17RA 수용체와 경쟁하는지 평가하기 위해 수행하였다.
비아코어 경쟁 결합 연구는 고정된 15E6FK 항체, 가용성 인간 IL-17A 동종이량체, 및 가용성 재조합 인간 또는 마우스 IL-17RA/Fc 키메라를 경쟁자로서 사용하여 수행하였다. 항-인간 IgG-κ 항체를 CM5 비아코어 칩 상에 EDC/NHS 화학을 이용하여 고정시켰다. 상기 표면을 사용하여 15E6FK 항체를 포획하였다. 경쟁 연구를 위해, 인간 IL-17A 동종이량체 (30 nM)를 과잉의 재조합 인간 또는 마우스 IL17RA/Fc-융합 단백질 (알앤디 시스템즈 cat## 177-IR 및 4481-MR)과 함께 1시간 동안 예비-인큐베이팅하였다. 이어서, 다양한 IL-17A-IL-17RA 혼합물의 결합을 상기 설명된 바와 같이 (실시예 5) 비아코어 2000 기기 상에서 측정하였다. IL-17A를 인간 또는 마우스 기원의 가용성 수용체-IgG-Fc 융합 단백질과 함께 1:1의 IL-17A 대 IL-17RA-Fc 몰비로 예비-인큐베이팅하면, 고정된 15E6FK 항체에 대한 IL-17A의 결합을 90% 초과로 감소시켰다. IL-17A를 인간 또는 마우스 기원의 가용성 수용체-IgG-Fc 융합 단백질과 함께 1:25의 IL-17A 대 IL-17RA-Fc 몰비로 예비-인큐베이팅하면, 고정된 15E6FK 항체에 대한 상기 IL-17A의 결합을 모두 제거하였고 (~100% 억제), 이는 인간 IL-17A 동종이량체와 IL-17RA 수용체 및 15E6FK 항체의 상호작용이 상호 배타적임을 입증한다.
실시예 7 : IL-17F 및 IL-17A 활성에 대한 생물학적 분석
IL-17-자극된 마우스 배아 섬유모세포에 의한 IL-6 분비
인간 IL-17A 및 IL-17F는 대응하는 마우스 IL-17 수용체에 결합한다. 그 결과, 마우스 섬유모세포는 인간 IL-17A 및 IL-17F 둘 다에 대해 반응할 수 있다. 따라서, huIL-17A 및 huIL-17F 활성에 대해 분석하기 위해 마우스 C57BL/6 배아 섬유모세포 (MEF, ATCC No SCRC-1008)를 사용하였다.
간단히 설명하면, 96-웰 플레이트에 DMEM + 글루타민 + 10% 태소 혈청 (FBS) 내에 접종한 MEF 세포를 48 h 동안 배양한 후, 시토킨, huIL-17A 또는 huIL-17F 및 마우스 TNFα를 10 ng/ml로 첨가하였다 (페프로테크 이시, cat No 315-01A). TNF를 사용한 동시자극은 IL-17 신호전달과 상승작용하는 것으로 나타났고 (Ruddy et al. 2004, J.Biol. Chem 279:2559), 이는 IL-17A 및 IL-17F에 대한 마우스 섬유모세포의 감수성을 유의하게 증가시킨다. MAb 중화 활성에 대한 분석에서, IL-17 시토킨을 항체와 함께 1시간 동안 예비-인큐베이팅한 후, 세포에 첨가하였다. 시토킨의 존재 하에 24시간 자극한 후, 상등액을 수집하고, 마우스 IL-6의 농도를 포획을 위해 래트 항-마우스 IL6 항체 (BD cat No 554400) 및 검출을 위해 제2의 비오티닐화 래트 항 마우스 IL6 항체 (BD 554402) + 스트렙타비딘 HRP (잭슨 이뮤노리서치 016-030-084)을 사용하여 샌드위치 (sandwich) ELISA에 의해 측정하였다. 표 6은 표준 통계학 기술을 사용하여 IL-6 검정 곡선으로부터 얻은 IC50 값을 요약한 것이다. 사이노몰거스, 마우스 또는 래트 IL-17A 및 IL-17F는 또한 MEF 세포 내에서 활성이고, 상기 설명된 방법에 따라 본 발명의 모노클로날 항체에 대해 시험하였다.
Figure pat00062
IL-17-자극된 인간 섬유모세포에 의한 IL-6 분비
인간 포피 섬유모세포 (HFFF2, ECACC No 86031405) 세포를 96-웰 플레이트에서 DMEM + 글루타민 + 10% 태소 혈청 (FBS) 내에 접종하고, 24 h 동안 배양한 후, huIL-17A 또는 cyIL-17A (25 ng/ml, 0.75 nM)을 첨가하였다. MAb 중화 활성에 대한 분석에서, IL-17A를 항체와 함께 1시간 동안 예비-인큐베이팅한 후, 세포를 첨가하였다. 24시간 자극 후에, 상등액을 수집하고, 인간 IL-6의 농도를 포획을 위해 항-인간 IL6 항체 (엔도젠 (Endogen) cat No M620) 및 검출을 위해 비오티닐화 항-인간 IL6 항체 (엔도젠 M621B) + 스트렙타비딘 HRP (잭슨 이뮤노리서치 016-030-084)을 사용하여 샌드위치 ELISA에 의해 측정하였다. 표 7은 표준 통계학 기술을 사용하여 IL-6 검정 곡선으로부터 얻은 IC50 값을 요약한다.
Figure pat00063
실시예 8 . 에피토프 특성 결정.
15E6FK 항체는 인간 IL-17A (기탁 번호 Q16552) 및 사이노몰거스 IL-17A (NCBI 기탁 번호 XP_001106391)에 결합하지만, 래트 IL-17A (기탁 번호 Q61453) 또는 마우스 IL-17A (기탁 번호 Q62386)에 결합하지 않는다. 15E6FK 항체는 또한 인간 IL-17F (기탁 번호 Q96PD4), 사이노몰거스 IL-17F (NCBI 기탁 번호 XP_001106517), 래트 IL-17F (기탁 번호 Q5BJ95) 및 마우스 IL-17F (기탁 번호 Q8K4C3)에 결합한다.
이들 관찰에 기초하여, 인간 및 사이노몰거스 시토킨에 대한 결합을 위해 중요한 아미노산 잔기를 발견하기 위해 표적화된 돌연변이 유발을 수행하였다. 돌연변이 유발은 인간 및 사이노몰거스 IL-17A 사이에 공통이지만 마우스 및 래트 IL-17A에서 상이한 잔기에 제한되었다.
이들 실험을 위해, 인간 IL-17A 내의 특이적 잔기 (21T, 27N, 28I, 32N, 52N, 70K, 74L, 75G, 91P, 100R, 108N, 109S, 126P, 125T, 126P, 129H, 130H, 131V, 및 132A) 또는 잔기들의 클러스터 (LG, 잔기 74-75; NSFRL, 잔기 108 내지 112, 또는 PIVH, 잔기 126 내지 129)를 마우스 IL-17A 서열 내의 대응하는 위치에서 발견되는 아미노산으로 치환하고, 생성되는 돌연변이체 시토킨을 실시예 1에 설명된 바와 같이 포유동물 세포 내에서 발현시켰다.
돌연변이체 시토킨에 대한 15E6FK의 결합은 시토킨의 포획을 위해 토끼 항-인간 IL-17A 폴리클로날 항체 (알앤디 시스템즈, cat # 500-P07)을 사용하고 검출을 위해 항-인간 IgG 카파-HRP 항체와 함께 15E6FK를 사용하여 샌드위치 ELISA에 의해 결정하였다. L74Q 및 G75R은 15E6 결합에 영향을 미치는 유일한 2개의 아미노산 치환이었고: L74Q는 15E6FK 결합을 70% 초과로 감소시킨 반면, G75R 점 돌연변이 또는 LG에서 QR 이중 돌연변이는 결합을 완전 폐지하였다. 다른 단일 또는 다중 아미노산 치환은 어느 것도 huIL-17A에 대한 15E6FK의 결합에 영향을 미치지 않았다.
15E6FK 결합에 대한 이들 2개의 잔기의 중요성은 인간 IL-17F 내의 대응하는 잔기 (L75S 및 G76R)를 돌연변이시킨 후, 포획을 위해 토끼 항-인간 IL-17F 폴리클로날 항체 (알앤디 시스템즈, cat # 500-P90)를 사용하는 huIL-17F 샌드위치 ELISA에 의해 추가로 확인하였다. huIL-17A를 사용하여 유사하게 관찰되었다:
1) 인간 IL-17F 서열에서 L75S 치환은 15E6FK 결합을 감소시키고,
2) G76R 치환은 15E6FK 결합을 모두 폐지시키고,
3) huIL-17F에서 다른 단일 또는 다중 아미노산 돌연변이 (잔기 92P, 109V, 110S, 126T, 127P, 131H, 126-131TPVIHH) 중 어느 것도 15E6FK의 결합에 영향을 미치지 않았다.
결론적으로, 인간 IL-17A의 잔기 G75 (인간 IL-17F의 G76)는 15E6FK 결합을 위해 절대적으로 요구되고, 인접한 잔기 L74 (인간 IL-17F의 L75)는 근소한 역할을 한다. 따라서, 이들 2개의 잔기는 mAb 15E6FK에 의해 인식되는 에피토프의 필수 부분을 형성한다.
실시예 9 . 결합 저해 실험.
2개의 상이한 항체가 huIL-17F 또는 huIL-17A에 동시에 결합할 수 있는지 평가하기 위해, 일련의 결합 저해 실험을 FLISA (형광-연결 면역흡착 분석)에 의해 수행하였다. 이들 실험을 위해, 다음과 같은 4개의 항체를 결합 저해 (결합 경쟁)에 대해 시험하였다: 15E6, 29D8, 30D12, 및 39F12. 이들 4개의 항체를 결합 검출을 위해 형광 염료 접합체 (FMAT Blue, 어플라이드 바이오시스템즈)로 표지하거나, 경쟁자로서 비-표지하여 사용하였다.
이들 실험을 위해, huIL-17F 또는 huIL-17A로 코팅된 마이크로비드를 FMAT® 384-웰 광학 플레이트 (어플라이드 바이오시스템즈) 내로 분배하고, 24시간 동안 증가하는 농도의 비-표지된 경쟁자 항체 (0.1 ㎍/ml 내지 60 ㎍/ml; 즉, 검출 항체에 비해 2 내지 1200배 과량)와 함께 예비-인큐베이팅하였다. 경쟁자와 함께 예비-인큐베이팅한 후, 형광 표지된 검출 항체를 50 ng/ml의 최종 농도로 첨가하고, 인큐베이션을 계속하였다. 비드의 형광은 상이한 시점 (검출 항체의 첨가 후 1 내지 24시간)에 8200 세포 검출 시스템 분석기 (어플라이드 바이오시스템즈)를 사용하여 측정하였다.
동일한 에피토프 또는 겹치는 에피토프를 인식하는 항체는 결합을 위해 경쟁하였고, 항원에 동시에 결합할 수 없었다. 이 경우에, 고농도의 경쟁자 항체는 비드 형광의 총 소광을 일으켰다. 이와 대조적으로, 겹치지 않는 공간적으로 분리된 에피토프들을 인식하는 항체는 서로 방해하지 않고, 동시에 결합할 수 있었다 (경쟁자 항체는 비드 형광에 영향을 미치지 않았다). 별법으로, 부분적인 결합 저해가 2개의 이웃 에피토프에 아주 근접하여 결합하는 2개의 항체들 사이에서 입체 방해의 결과로서 관찰될 수 있었다 (경쟁자 항체는 비드 형광을 감소시켰지만, 심지어 최고 농도에서도 단지 부분적이었다). 이들 결합 저해 실험에 기초하여, 4개의 항체를 3개의 패밀리 또는 "에피토프 빈 (bin)"에 배정하였다:
1) 15E6 및 29D8
2) 30D12
3) 39F12.
15E6 또는 29D8 (빈 1)의 결합은 30D12 (빈 2)의 결합을 부분적으로 방해한다. 이와 대조적으로, 39F12 (빈 3)의 결합은 다른 3개의 항체 (빈 1 및 2)의 결합을 방해하지 않았다. 따라서, 39F12에 의해 결합된 에피토프는 15E6, 29D8 또는 30D12에 의해 결합된 에피토프와 공간적으로 분리된다.
SEQUENCE LISTING <110> NovImmune SA Masternak, Krzysztof Leger, Olivier <120> Anti-IL-17A/IL-17F Cross-Reactive Antibodies and Methods of Use Thereof <130> 23135-415001WO <140> IB2009/005796 <141> 2009-05-05 <150> US 61/126465 <151> 2008-05-05 <150> US 61/098369 <151> 2008-09-26 <160> 115 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 378 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc 120 actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaaccctg acagtggtgt catacgttat 180 gcacagaagt tccagggtag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagcctac 240 atggagctaa acagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagaatgg 300 ttcggggagt taccctctta ctacttctac tccggtatgg acgtctgggg ccaagggacc 360 acggtcaccg tctcctca 378 <210> 2 <211> 126 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Met Asn Pro Asp Ser Gly Val Ile Arg Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Trp Phe Gly Glu Leu Pro Ser Tyr Tyr Phe Tyr Ser Gly 100 105 110 Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 3 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctcccac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 4 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser 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gccaagggac cacggtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 8 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Val Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Val Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Gly Gln Asn Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Phe His Gly Gly His Ser Gly Tyr His Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 9 <211> 369 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 caggtgcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctgttta cacctttacc acctatggta tcagttgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaccgttt acaatggtaa cacaaactat 180 gcacagaagt tccacggcag agtcaccatg accacagaca catccacaag tacagcctac 240 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tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 30 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 31 <211> 381 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 31 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccctcagc agctatgctt tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagga atcatccctt tctttggaac agcacactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt 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Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Leu Tyr Ile Ser Asp Trp Asp Ser Tyr Ser Tyr Gly Met 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 45 <211> 318 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 45 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccttt cggcggaggg 300 accaaggtgg agatcaaa 318 <210> 46 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 47 <211> 372 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 47 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggaatg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180 gactacgttg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacc 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtatatta ctgtaccaca 300 tcgtatagca gttactggtt cccctactac tttgactact ggggccaggg aaccctggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 48 <211> 124 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly 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<213> Homo sapiens <400> 54 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Asn Trp Ser Ser Gly Gly Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ile Gly Gly Phe Gly Glu Phe Tyr Trp Asn Phe Gly Leu 100 105 110 Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 55 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 55 gaaattgtgt tgacacagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga gaaagtcacc 60 atcacctgcc gggccagtca gagcattggt agtagcttac actggtacca gcagaaacca 120 gatcagtctc caaagctcct catcaagtat gcttcccagt ccttctcagg ggtcccctcg 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcaccctca ccatcaatag cctggaagct 240 gaagatgctg caacgtatta ctgtcatcag agtagtagtt taccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 56 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Ser Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 57 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Ser Tyr Asp Ile Asn 1 5 <210> 58 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Trp Met Asn Pro Asp Ser Gly Val Ile Arg Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 59 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Glu Trp Phe Gly Glu Leu Pro Ser Tyr Tyr Phe Tyr Ser Gly Met Asp 1 5 10 15 Val <210> 60 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Thr Tyr Gly Ile 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77 Arg Ile Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Ala Thr Ala Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15 Val Ile Gly <210> 78 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Ser Val Ala Thr Thr Leu Thr Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 79 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Ser Phe Asn Met Asp 1 5 <210> 80 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Ser Ile Ser Thr Thr Ser Arg Ile Ile Tyr Ser Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 81 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 81 Val Ser Tyr Tyr Gly His Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 82 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 Asp Phe Ala Met His 1 5 <210> 83 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 83 Gly Ile Asn Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 84 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Asp Ile Ala Ala Ala Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Met Asp Val 1 5 10 <210> 85 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 86 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 86 Gly Ile 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Ser Gly Gly Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 95 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Asp Ile Gly Gly Phe Gly Glu Phe Tyr Trp Asn Phe Gly Leu 1 5 10 <210> 96 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 97 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 98 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Thr 1 5 <210> 99 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99 Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Tyr Thr 1 5 10 <210> 100 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100 Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Phe Thr 1 5 10 <210> 101 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 102 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 103 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Ile Thr 1 5 <210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser Leu His 1 5 10 <210> 105 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105 Tyr Ala Ser Gln Ser Phe Ser 1 5 <210> 106 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 His Gln Ser Ser Ser Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 107 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 108 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 109 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 110 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 111 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 111 Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Ala Thr 1 5 10 <210> 112 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 112 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 1 5 <210> 113 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 113 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Ile Thr 1 5 <210> 114 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 114 Met Leu Leu Val Asn Gln Ser His Gln Gly Phe Asn Lys Glu His Thr 1 5 10 15 Ser Lys Met Val Ser Ala Ile Val Leu Tyr Val Leu Leu Ala Ala Ala 20 25 30 Ala His Ser Ala Phe Ala 35 <210> 115 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized <400> 115 Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu 1 5 10 15 Ala Met Asp

Claims (1)

  1. 류마티스 관절염, 크론병, 건선, 다발성 경화증, 만성 폐쇄성 폐질환, 또는 천식과 연관된 임상 적응증의 증상 완화에 충분한 양의 IL-17A/IL-17F 이종이량체성 복합체의 길항제를 그를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 류마티스 관절염, 크론병, 건선, 다발성 경화증, 만성 폐쇄성 폐질환, 또는 천식과 연관된 임상 적응증의 증상을 완화시키는 방법.
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