KR20160118317A - 천연 재료의 나노현탁액 및 그의 제조 방법 - Google Patents

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Abstract

본 개시내용은 하나 이상의 천연 재료의 나노현탁액의 제조 방법에 관한 것이고, 방법은 (a) 320　μm 미만의 입자 크기 (D90)를 갖는 하나 이상의 천연 재료를 제공하는 단계; (b) 용매 내 단계 (a)에서의 상기 하나 이상의 천연 재료를 분산시키는 단계; 및 (c) 1000　nm 미만의 입자 크기 (D90)로 단계 (b)의 분산액을 밀링하는 단계를 포함한다. 나노현탁액은 약제의 제조에 유용하다.

Description

천연 재료의 나노현탁액 및 그의 제조 방법{NANOSUSPENSION OF NATURAL MATERIALS AND PREPARATION METHOD THEREOF}
본 출원은 천연 재료로부터 나노현탁액의 제조 방법, 하나 이상의 천연 재료를 포함하는 나노현탁액 및 약제의 제조에 사용되는 이러한 나노현탁액 용도에 관한 것이다.
천연 재료, 예를 들어 식물, 남세균, 조류 또는 진균은 질병 치료의 효력을 갖는 활성제를 포함한다. 천연 재료로부터 이러한 활성제를 용리하기 위해서, 수성 또는 알콜성 침투 또는 침연, 정제 또는 캡슐 형태의 건조 분말 추출물, 또는 주사 가능 투여 제제를 포함하여 다양한 의약품 제제가 공지되어 있다. 그러나, 이러한 유형의 투여와 관련되어 많은 단점이 있다. 많은 성분은 위장관 내에서 파괴되거나 간에서 초회 통과 대사를 겪는다. 또한, 인구 중 일부는 알약을 삼키기 힘들어하거나 어떠한 고형물도 허용하지 않는다. 더욱이, 많은 천연 재료의 활성제는 거의 수용성이 아니다. 따라서 천연 재료의 많은 활성제의 효력 및 치료 효과는 제한적이다.
미국 특허 제5,858,410호는 고압 균질화로 생산되는 "나노-현탁액"으로 불리는 약물 제조에 관한 것이다. 고압 균질화의 사용 이전에, 나노-현탁액은 압력 균질화와 비교하여 시간이 걸리는 방법인, 펄 밀링(pearl milling) 방법으로 제조되었다. 이 기술은 그 중에서도, 미국 특허 제5,271,944호의 주제이다. 저에너지 아지테이터, 터빈 아지테이터, 콜로이드 밀, 소놀레이터(sonolator), 오리피스, 미디아 밀, 회전자 고정자 혼합기 및 소니케이터(sonicator)를 포함하여 다수의 다른 방법은 다양한 정도의 성공으로 나노-현탁액을 제조하는 데 사용되었다.
중국 특허 출원 제CN 1 416 847 A호는 20　% 내지 11.1　% (w/w)의 농도에서 고압 균질화로 생산된 라딕스 파나시스 퀸크폴리(Radix Panacis Quinquefolii) (미국 인삼)의 나노현탁액의 제조에 관한 것이다.
유럽 특허 공보 제EP 2 226 171 A1호는 맷돌형 그라인더로 목조 재료 (예컨대 미송(Douglas fir))를 분해하여 최대 30　nm의 평균 섬유 지름을 갖는 셀룰로오스 섬유 및 이로 만들어진 대응하는 셀룰로오스 섬유 복합재를 제공하는 것에 관한 것이다. 섬유는 50 μm의 평균 최소 길이를 갖는다.
그러나, 나노-현탁액을 제조하는 종래 기술의 방법에는 많은 양의 천연 재료 즉, 고농도의 천연 재료가 있는 천연 재료로부터의 나노-현탁액의 제조 방법이 결여되어 있다. 따라서, 나노-현탁액이 질병의 치료 또는 예방에 유리하게 사용될 수 있는, 천연 재료로부터 나노-현탁액의 제조 방법은 여전히 필요하다.
따라서, 본 개시내용의 한 목적은 약제의 제조에 사용될 수 있는 천연 재료의 전체 또는 부분으로부터 나노현탁액의 제조 방법을 제공하는 것이다.
제1 측면에서, 본 개시내용은 제1항에서 개시된 바와 같이 나노현탁액의 제조 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 제1 측면의 방법에 따라 얻어질 수 있는 나노현탁액을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 동물, 바람직하게 사람에의 협측, 국소 또는 경구 적용을 위한 약제의 제조에 사용되는, 또는 동물, 바람직하게 사람에의 비경구, 경막내, 정맥내, 경피, 또는 점막 관통 적용, 바람직하게 협측, 국소 또는 경구 적용을 위한 약제의 제조에 사용되는 제1 측면에 따른 나노현탁액을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 암, 염증성 장질환 (IBD), 관절염, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), 다른 바이러스성 질병, 피부과 질병, 예를 들어 신경피부염 또는 건선, 또는 자가면역질환, 예를 들어 다발경화증의 치료 또는 예방에 사용되는 제1 측면에 따른 나노현탁액을 제공한다.
또한 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 약제의 제조를 위한 제1 측면에 따른 나노현탁액의 용도를 제공한다.
또한 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 제1 측면에 따른 나노현탁액의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에 투여하는 것을 포함하는, 암, 염증성 장질환 (IBD), 관절염, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), 다른 바이러스성 질병, 피부과 질병, 예를 들어 신경피부염 또는 건선, 또는 자가면역질환, 예를 들어 다발경화증의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.
도 1은 콜로이드화기(colloidator)의 개략도를 나타내고;
도 2는 실시예 1.1에 따른 밀링에 사용된 비에너지에서 올리브잎의 나노현탁액에 대한 입자 크기 (D90)를 나타내고;
도 3은 실시예 1.3에 따른 올리브잎의 추출물 및 나노현탁액의 건조 질량을 나타내고;
도 4는 실시예 2.1에 따른 밀링에 사용된 비에너지에서 스피룰리나(spirulina)의 나노현탁액에 대한 입자 크기 (D90)를 나타내고;
도 5는 실시예 2.3에 따른 스피룰리나의 추출물 및 나노현탁액의 건조 질량을 나타내고;
도 6은 실시예 3.1 (실선) 및 3.2　(파선)에 따른 밀링에 사용된 비에너지에서 붉은갓주름버섯(agaricus subrufescens) (ABM)의 나노현탁액에 대한 입자 크기 (D90)를 나타내고;
도 7은 실시예 3.1 (실선) 및 3.3　(파선)에 따른 밀링에 사용된 비에너지에서 붉은갓주름버섯 (ABM)의 나노현탁액에 대한 입자 크기 (D90)를 나타내고;
도 8은 실시예 3.5에 따른 붉은갓주름버섯 (ABM)의 추출물 및 나노현탁액의 건조 질량을 나타내고;
도 9는 실시예 4.1에서 제조된 바와 같은 붉은갓주름버섯의 분말과 관련된, 붉은갓주름버섯의 나노현탁액 및 상이한 추출물의 β-글루칸 함량을 나타내고;
도 10은 실시예 5.1에서 제조된 바와 같은 실리카 나노현탁액을 기재로 하는 물리적 안정화의 영향을 나타내고;
도 11은 프로판-1,2,3-트리올 없이 실시예 3.1에서 제조된 바와 같은 붉은갓 주름버섯의 나노현탁액을 기재로 하는 화학적 안정화의 영향을 나타내고;
도 12는 20　% (v/v) 프로판-1,2,3-트리올이 있는 실시예 3.1에서 제조된 바와 같은 붉은갓주름버섯의 나노현탁액을 기재로 하는 화학적 안정화의 영향을 나타내고;
도 13은 50　% (v/v) 프로판-1,2,3-트리올이 있는 실시예 3.1에서 제조된 바와 같은 붉은갓주름버섯의 나노현탁액을 기재로 하는 화학적 안정화의 영향을 나타내고;
도 14는 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 3.1에서 제조된 바와 같음) 및 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 추출물 (실시예 3.4에서 제조된 바와 같음)의 β-1,3/1,6-글루칸의 차등 중량 분율 (즉, 평균 몰 질량)을 나타내고;
도 15는 자극되지 않은 말초혈 단핵 세포 (PBMC), 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 3.1에서 제조된 바와 같음) 및 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 추출물 (실시예 3.4에서 제조된 바와 같음)로 자극된 PBMC의 샘플에서 덱틴-1 양성 단핵구 (%로의)의 상대적인 양을 나타내고;
도 16은 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 3.1에서 제조된 바와 같음) 및 5　% (w/w) 추출물 (실시예 3.4에서 제조된 바와 같음)에 의한 시토카인 TNF-알파의 시험관 내 유도의 비교를 나타내고;
도 17은 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 3.1에서 제조된 바와 같음) 및 5　% (w/w) 추출물 (실시예 3.4에서 제조된 바와 같음)에 의한 시토카인 IL-10의 시험관 내 유도의 비교를 나타내고;
도 18은 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 3.1에서 제조된 바와 같음) 및 5　% (w/w) 추출물 (실시예 3.4에서 제조된 바와 같음)에 의한 시토카인 IL-6의 시험관 내 유도의 비교를 나타내고;
도 19는 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 3.1에서 제조된 바와 같음)에 의한 입자 분포를 나타내고;
도 20은 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 12에서 제조된 바와 같음)에 의한 입자 분포를 나타내고;
도 21은 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 12에서 제조된 바와 같음)을 취하여 야기되는 CD25 활성화 T-세포 CD3+CD25+ 생체내 유도를 나타내고;
도 22는 캡슐로 취하는 붉은갓주름버섯 분말에 의한 CD25 활성화 T-세포 CD3+CD25+ 생체내 유도를 나타낸다.
본 개시내용은 하나 이상의 천연 재료를 포함하는 나노현탁액의 제조 방법에 관한 것이고, 방법은
a. 320　μm 미만의 입자 크기 (D100)를 갖는 하나 이상의 천연 재료를 제공하는 단계;
b. 용매 내 단계 a.에서의 상기 하나 이상의 천연 재료를 분산시키는 단계; 및
c. 1000　nm 미만의 입자 크기 (D90)로 (D90　<　1000　nm) 단계 b.의 분산액을 밀링하는 단계
를 포함한다.
하기에 예시적으로 기재된 바와 같이 본 발명은 본원에서 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소 및 요소들, 제한 또는 제한들의 부재하에서 적합하게 실시될 수 있다.
본 발명은 특정 실시양태에 대하여 및 소정의 도면에 대하여 기재될 것이나, 본 발명은 이것이 아닌 청구항에 의해서만 제한된다. 이하에 기재되는 용어는 달리 명시되지 않는 한 일반적으로 이의 상식에서 이해될 것이다.
용어 "포함하는"이 본 명세서 및 청구범위에 사용된 경우, 이는 다른 요소를 배제하는 것은 아니다. 본 발명의 목적을 위하여, 용어 "구성되는"은 용어 "포함하는"의 바람직한 실시양태로 고려된다. 이하에서 군이 적어도 소정 숫자의 실시양태를 포함하는 것으로 정의되면, 이는 바람직하게 이러한 실시양태만으로 구성되는 군을 개시한 것으로 또한 이해될 것이다.
단수 명사 지칭시 부정 관사 또는 정관사가 사용된 경우, 예컨대 "한", "하나" 또는 "그"는 다른 것이 구체적으로 언급되지 않는 한 복수의 명사를 포함한다.
"얻어질 수 있는" 또는 "정의될 수 있는" 및 "얻어진" 또는 "정의된"과 같은 용어는 상호 교환 가능하게 사용된다. 예컨대, 이는 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한, 용어 "얻어진"은 비록 제한된 이해는 항상 바람직한 실시양태로서 용어 "얻어진" 또는 "정의된"으로 포함되지만, 예컨대 실시양태는 예를 들어 용어 "얻어진" 후에 단계의 순서로 얻어져야 한다는 것을 명시하는 것을 의미하지 않는다.
본원에서 사용되는 "나노현탁액"은 예를 들어 물, 에탄올, 또는 그의 혼합물과 같은 용매 중의 나노-입자의 현탁액을 지칭한다. 나노현탁액은 안정화제, 또는 다른 화합물을 추가적으로 포함할 수 있다. 나노현탁액은 용매에 현탁된 나노-입자의 형태로 거의 수용성이 아닌 화합물을 포함한다. 이러한 나노현탁액은 용매, 액체 매질, 또는 모두에 거의 가용성이 아닌 화합물의 "용해도" (또는 분산도)를 증진시키는 데 사용된다. 증가된 "용해도"의 결과로, 거의 가용성이 아닌 화합물의 높은 혈장 농도가 도달되고, 상기 화합물의 최대 혈장 농도는 더 빨리 도달된다. 용어 "현탁액" 및 "분산액"은 용매 내 고형물 입자로 지칭되어, 본 개시내용에서 상호 교환 가능하게 사용된다.
본원에서 사용되는 "나노-입자"는 1000　nm 미만의 입자 크기를 갖는 입자이다. 용매 내 화합물 나노-입자는 더 작은 입자로 구성되는 덩어리 입자, 또는 1차 입자일 수 있다. 나노현탁액에서 입자 크기는 레이저 회절 분석기 (예컨대 베크만 쿨터(Beckman Coulter) LS 13320 또는 호리바(Horiba) LA-950)로 측정될 수 있다.
본 개시내용에서 사용되는 용어 천연 재료의 "용해도" 또는 "용해도 한계"는 용매에 용해될 수 있는 천연 재료의 최대량에 관한 것이다. 본 개시내용의 목적을 위해, 특정 용매에서 천연 재료의 용해도는 하기와 같이 측정될 수 있다: 입자 크기 D90　<　320　μm인 건조 천연 재료의 초기 양이 5　% 또는 10　% (w/w)의 농도에서 용매, 예를 들어 증류수 내 상기 천연 재료의 현탁액을 제조하는 데 사용된다. 상기 현탁액의 제조를 위해, 천연 재료는 30 ℃의 온도에서 용매에 60 분 동안 현탁된다. 얻어지는 현탁액은 이어서 30 분 동안 1500 g에서 원심분리되고, 침전물은 상등액으로부터 분리되었고 대조용의 이유로 칭량되었다. 상등액은 24 h 동안 60 ℃에서 건조되어, 상등액 (건조 기준)에 용해된 천연 재료가 얻어졌고, 칭량되었다. 용해도는 하기 방정식을 사용하여 계산되었다:
용해도 (%) = 상등액 (건조 기준)의 질량 x 100　/　초기 천연 재료 분말 (건조 기준)의 질량.
본 개시내용에서 사용되는 용어 "용해도 계수"는 나노현탁액을 제조하는 데 사용된 용매 내 상기 천연 재료의 용해도 또는 용해도 한계에 관하여 본 개시내용에 따른 나노현탁액 내 천연 재료의 양에 관한 것이다. 용해도 계수는 나노현탁액에 존재하는 천연 재료의 양 (% (w/w)로의) 나누기 사용된 용매 내 상기 천연 재료의 용해도이다. 다시 말해서, 만약 1의 용해도 계수가 주어졌다면, 상기 용매 내 천연 재료의 용해도 한계에 도달된다. 1 미만 용해도 계수에서, 나노현탁액 내 천연 재료의 양은 용해도 한계 미만이고, 1 초과의 용해도 계수는 상기 용매에 가용성인 천연 재료의 더 많은 양이 나노현탁액에 존재, 즉 나노현탁액 내 천연재료의 농도는 그의 용해도 한계를 초과한다는 것을 나타낸다.
본 개시내용에서 사용되는 용어 "셀룰로오스 섬유"는 > 1 μm의 섬유의 길이로 몇 백 내지 일만이 넘는 β-1,4-D-글루코스 단위의 직쇄 사슬이 있는 폴리사카라이드로 구성된 식물 섬유 (특히 목재 섬유)에 관한 것이다. 따라서 셀룰로오스 섬유는 지름 < 1 μm인 구 또는 반축 길이 < 1 μm인 타원체의 기하학적 형태를 갖는 β-1,3/1,6-글루칸으로 구성되지 않는다.
바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 천연 재료는 식물, 바람직하게 인삼 및(또는) 셀룰로오스 섬유, 남세균, 조류 및 진균을 제외한 식물로 구성되는 군에서 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 천연 재료는 인삼 및(또는) 셀룰로오스 섬유를 포함하지 않는다. 본원에서 사용되는 식물은 긴콥시다(ginkopsida) (은행), 마황강, 송백류 (예컨대 침엽수) 및 속씨식물 (현화식물)을 포함할 수 있고, 아강 예를 들어 목련아강, 백합아강 (예컨대 파인애플), 말피기목 (예컨대, 망종화, 윌로우 껍질), 장미아강 (예컨대 서양쐐기풀), 배추속 식물 (예컨대 파파야), 콩목 (예컨대 자운영), 꿀풀목 (예컨대 올리브 나무 및 올리브잎), 산토끼 꽃목(dispsacales) (예컨대 엘더(elder))를 더 포함할 수 있는, 스퍼마토피티나(spermatophytina)를 포함할 수 있다.
남세균은 예컨대 스피룰리나를 포함할 수 있다. 조류는 도메인 로도비온타(rhodobionta) (예컨대 홍조류, 갈조류 및 규조류), 녹조류 및 회색조 식물(glaucobionta)을 포함할 수 있다. 진균은 아크라소비온타(acrasobionta), 점균류, 헤테로콘토비온타(heterokontobionta) 및 미코비온타(mycobionta) (예컨대 붉은갓주름버섯과 같은 필라 진균)을 포함할 수 있다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 천연 재료는 은행, 파인애플, 망종화, 윌로우 껍질, 서양쐐기풀, 파파야, 자운영, 올리브잎, 엘더, 스피룰리나, 클로렐라 조류, 홍조류, 갈조류 및 규조류, 녹조류 및 회색조 식물, 붉은갓주름버섯, 보스웰리아, 바위돌꽃(rodiola rosea), 기나피(chincona bark), 토근, 등골나무, 브리오니 아닐(bryony anil), 아닐 뿌리, 강황, 악마의 발톱, 고양이 발톱(cat's claw), 시스투스 인카누스(cystus incanus), 아마씨, 실리범 마리아넘(sylibum marianum) (엉겅퀴), 애기똥풀 (셀란딘), 카플란-펠라고니(kaplan-pelargonie), 에키네시아, 포도 씨이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 천연 재료는 인삼 및(또는) 셀룰로오스 섬유를 포함하지 않는다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 천연 재료는 상기 천연 재료의 부분 또는 전체, 바람직하게 상기 천연 재료의 전체이다. 본 개시내용의 방법은 그의 전체, 또는 부분으로 임의의 천연 재료에 사용될 수 있다. 예시로서, 천연 재료의 유형에 따라, 식물의 부분, 예를 들어 뿌리, 줄기, 잎, 열매, 꽃 등만 사용될 수 있다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 나노현탁액은 두 개 이상의 천연 재료의 혼합물을 포함한다. 이와 같이, 나노현탁액은 단일 천연 재료, 또는 하나 초과의 천연 재료, 즉, 두 개 이상의 천연 재료의 혼합물을 함유하는 나노현탁액일 수 있다. 나노현탁액은 예컨대, 뿌리 부분 및 꽃 부분과 같이 동일한 천연 재료의 상이한 부분을 또한 포함할 수 있고(있거나) 나노현탁액은 예컨대, 상이한 식물 또는 식물과 남세균과 같이 천연 재료의 상이한 유형을 포함할 수 있다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 나노현탁액의 제조에 사용되는 천연 재료는 단계 a. 이전에 단계 a.1에서 건조, 바람직하게 동결건조된 및(또는) 열건조된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 개시된 나노현탁액의 제조에 사용되고 방법의 단계 a.에서 제공된 천연 재료는 15　% 미만 (w　<　15　%), 바람직하게 12 % 미만 (w <　12　%), 더 바람직하게 10　% 미만 (w <　10　%) 및 가장 바람직하게 8　% 미만의 수분 함량 w를 (w <　8　%) 갖는다.
나노현탁액의 제조에 사용되는 천연 재료의 수분 함량은 바람직하게 낮은 수분 함량을 갖는다. 본 개시내용에 사용되는 용어 "수분 함량" 또는 "잔류 수분"은 잔류 수분 함량 [%] w = (m 잔류 - m 건조 )/(m 젖은 - m 건조 )*100　% 식의 사용으로 함수 또는 젖은 재료의 질량 m 젖은 및 물이 없는 건조 재료의 질량 m 건조 및 잔류 수분이 있는 재료의 질량 m 잔류 로부터 계산되는, 재료, 예를 들어 천연 재료의 수분 함량 w를 지칭한다.
이렇게 낮은 수분 함량은 나노현탁액 제조시에 유리할 수 있다. 또한, 천연 재료를 320　μm 미만의 입자 크기 (D100)로 할 때 도움이 될 수 있다. 업계에는 천연 재료의 수분 함량을 감소시키는 상이한 방법이 공지되어 있고, 임의의 이러한 방법은 본 개시내용과 조합되어 사용될 수 있다. 예시로서, 천연 재료는 동결건조 (즉, 동결건조됨) 또는 열건조될 수 있다. 건조 단계 전에 천연 재료의 유형에 좌우되어, 천연 재료를 세척, 필링(peal)하고(필링하거나) 심을 파내는(core) 것이 유리할 수 있다. 하기에서, 건조의 두 예시적인 방법이 주어진다.
천연 재료는 예컨대, 하기와 같은 네 단계에서 동결건조기로 동결건조될 수 있다:
Figure pct00001
천연 재료의 크기 및 구조에 따라 나이프로 천연 재료를 약 1-2 cm의 작은 조각으로 컷팅하고;
Figure pct00002
나이프 밀 (예컨대 독일에 소재한, 레취 게엠베하(Retsch GmbH)로부터의 그린도믹스(Grindomix)® 200 또는 300)에 1-2 cm 조각을 넣었고, 하기 파라미터로 그라인딩하였다: 2000 rpm에서 10 sec 후 5000 rpm에서 10 sec 및 10.000 rpm에서 마지막 20 sec;
Figure pct00003
얻어지는 펄프는 4 h 동안 -18 ℃에서 동결되고, 동결건조로 추가로 넣어져 생성물 온도가 20 ℃가 될 때까지 동결건조된다.
상기 동결건조 방법은 예시적이라는 것이 이해될 것이고, 당업자는 천연 재료의 유형에 따라, 이 방법을 적용할 수 있다. 예시로서, 남세균은 사전 그라인딩 또는 컷팅 없이, 직접 동결건조될 수 있다. 유사하게, 나이프 밀로 조각내 자르는 것의 파라미터도 필요에 따라 조절될 수 있다.
천연 재료는 천연 재료 내 화합물의 열 민감도에 따라, 잔류 수분 함량이 8 %와 같이 낮아질 때까지 공기 중에서 또는 오븐에서 예를 들면, 36-45 ℃의 온도에서 또한 건조될 수 있다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 개시된 나노현탁액의 제조에 사용되고 방법의 단계 a.에서 제공된 천연 재료는 단계 a.1에서 건조 이전 및(또는) 이후에 바람직하게 나이프 밀로 예비-그라인딩되고, 임의적으로 320　μm 미만의 입자 크기 (D100)로 체질된다. 천연 재료의 이러한 그라인딩은 있는 그대로의 천연 재료로, 즉, 사전 컷팅 또는 건조 없이 행해질 수 있거나, 천연 재료는 전술한 바와 같이 조각으로 컷팅되고(컷팅되거나) 건조될 수 있다. 추가적으로, 천연 재료는 320　μm 미만의 입자 크기 (D100)를 갖는 천연 재료의 분말을 제공하기 위해서 체질될 수 있다.
동결건조된 천연 재료의 예비-그라인딩 및 체질에 대한 예시적인 방법은 하기와 같을 수 있다:
Figure pct00004
동결건조된 코스(course) 천연 재료 분말을 나이프 밀 (예컨대 독일에 소재한, 레취 게엠베하로부터의 그린도믹스® 200 또는 300)로 넣었고, 하기 파라미터로 그라인딩하였다: 2000 rpm에서 10 sec 후 5000 rpm에서 10 sec 및 10.000 rpm에서 마지막 20 sec;
Figure pct00005
코스 나이프 밀 방법으로부터의 천연 재료 분말을 320 μm의 메쉬 크기의 체로 체질하였고;
Figure pct00006
320　μm 초과의 천연 재료 입자를 추가 그라인딩을 위해 다시 나이프 밀에 넣었고, 그 후 320　μm 체로 체질하였다. 제2 또는 제3 그라인딩 단계의 나머지는 버릴 수 있다.
유사하게, 열건조된 천연 재료의 예비-그라인딩 및 체질에 대한 예시적인 방법은 하기와 같을 수 있다:
Figure pct00007
나이프로 열건조된 천연 재료를 약 1-2 cm의 작은 조각으로 컷팅하고;
Figure pct00008
나이프 밀 (예컨대 독일에 소재한, 레취 게엠베하로부터의 그린도믹스® 200 또는 300)에 1-2 cm 조각을 넣었고, 하기 파라미터로 그라인딩하였다: 2000 rpm에서 10 sec 후 5000 rpm에서 10 sec 및 10.000 rpm에서 마지막 20 sec;
Figure pct00009
나이프 밀 방법으로부터의 코스 천연 재료 분말을 320 μm의 메쉬 크기의 체로 체질하였고;
Figure pct00010
320　μm 초과의 천연 재료 입자를 추가 그라인딩을 위해 다시 나이프 밀에 넣었고, 그 후 320　μm 체로 체질하였다. 제2 또는 제3 그라인딩 단계의 나머지는 버릴 수 있다.
단계 a.에서 제공된 320　μm 미만의 입자 크기 (D100)를 갖는 하나 이상의 천연 재료는 본 개시내용의 방법에 따른 단계 b.에서 용매 내 분산된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 용매는 물, 바람직하게 증류수, 또는 물 및 에탄올의 혼합물이다.
용매로 사용되는 물은 일반 물, 정제수, 증류수, 바이- 또는 트리-증류수, 또는 탈염수와 같은 임의의 종류의 물이 될 수 있다. 유사하게, 사용된 에탄올은 일반 에탄올, 또는 물 및 에탄올의 혼합물일 수도 있다. 그러므로, 얻어지는 나노현탁액은 수성 나노현탁액, 또는 에탄올 내 나노현탁액, 또는 물 및 에탄올의 혼합물을 기재로 하는 나노현탁액, 또는 임의의 다른 용매 또는 용매의 혼합물일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "용매"는 단일 용매 또는 용매의 혼합물을 지칭한다. 바람직하게, 용매는 나노현탁액이 약제로 사용된다면 제약상 허용 가능한 용매이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 나노현탁액은 수성 나노현탁액 또는 물 및 에탄올의 혼합물을 기재로 하는 나노현탁액이다.
단계 b.에서 용매 내 천연 재료를 분산시킬 때, 천연 재료는 사용된 용매의 총량을 기준으로, 0.5 내지 20　% (w/w), 바람직하게 2 내지 10　% (w/w), 더 바람직하게 2 내지 5　% (w/w) 또는 5 내지 10　% (w/w) 범위의 농도를 바람직하게 갖는다. 본 출원의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 천연 재료는 사용된 용매의 총량을 기준으로, 0.5 내지 70　% (w/w), 바람직하게 40 내지 70　% (w/w), 또는 10 내지 40　% (w/w) 범위의 농도를 바람직하게 갖는다. % (w/w)로의 천연 재료의 농도는 나노현탁액 제조에 사용된 용매의 총량을 기준으로 한다. 예시로서, 1000　g 용매에 천연 재료 50 g 분말로, 5　% (w/w)가 제조된다. 상기 농도 범위 내에서, 나노현탁액으로의 현탁액의 추가 밀링은 용이하게 된다. 예컨대, 바람직하게 1000　rpm 이하의 속도로, 자성 교반기 또는 임의의 다른 회전 장치로 용매 및 천연 재료를 교반하여 분산액이 제조될 수 있다.
그러므로, 또 다른 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 천연 재료는 나노현탁액에 사용된 용매의 총량을 기준으로, 0.5 내지 20　% (w/w), 바람직하게 2 내지 10　% (w/w), 더 바람직하게 2 내지 5　% (w/w) 또는 5 내지 10　% (w/w)의 농도로 단계 b.에서 분산된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 천연 재료는 0.4 초과의, 또는 0.5 초과의, 또는 0.8 초과의, 또는 1 초과의, 또는 심지어 1.1 초과의 용해도 계수가 얻어지는 농도로 나노현탁액에 존재한다.
나노현탁액이 안정화제의 사용으로 안정화되는 것은 바람직하다. 이러한 안정화제는 인지질, 폴리소르베이트, 프로판-1,2,3-트리올 (글리세린), 정전 또는 입체 안정화제 및 계면활성제로 구성되는 군에서 선택될 수 있다. 이러한 안정화제는 단계 b.에서 분산액, 또는 밀링 단계 c. 동안, 또는 심지어 밀링 단계 c. 후에 첨가될 수 있다. 인지질, 비이온성 계면활성제 및 유화제, 예컨대 폴리소르베이트와 같은 일부 안정화제는 바람직하게 분산 단계 b.에서 나노현탁액에 바람직하게 첨가된다. 비이온성 트리블록 공중합체, 예를 들어 폴록사머와 같은 다른 안정화제는 밀링 단계 c. 동안 바람직하게 첨가된다. 심지어 프로판-1,2,3-트리올 또는 디옥틸 나트륨 설포숙시네이트 (DOSS)와 같은 다른 안정화제는 밀링 단계 c. 이후에 바람직하게 첨가된다. 만약 안정화제가 분산액 단계 b.에서 첨가되면, 특히 안정화제가 인지질이라면, 천연 재료의 총량을 기준으로, 50 % 내지 200 % (w/w) 이하의 양으로 안정화제를 첨가하는 것이 바람직하다. 만약 안정화제가 비이온성 계면활성제 또는 유화제, 예를 들어 폴리소르베이트라면, 용매의 양을 기준으로, 1.5　% (w/w) 이하의 양으로 바람직하게 첨가된다. 단계 c.에서 밀링 동안, 2 내지 10 μm 범위의 특정 입자 크기 (D90)가 도달되었을 때, 또는 입자 크기 (D90)는 예컨대, 1 시간의 밀링 시간 동안 4 % 이상으로, 밀링 단계 c. 동안 더 감소되지 않는다면, 또는 1 시간의 밀링 시간 동안 10 % 이상으로, 밀링 단계 c. 동안 증가된다면, 비이온성 트리블록 공중합체, 예를 들어 폴록사머와 같은 안정화제를 첨가하는 것이 바람직하다.
바람직한 실시양태에서, 안정화제는 인지질; 폴리소르베이트; 중합체, 예를 들어 단독중합체, 블록 및 그래프트 공중합체 (히드록시프로필 셀룰로오스 (HPC), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC) 및 폴리비닐피롤리돈 (PVP)과 같은 것); 비이온성 트리-블록 공중합체, 예를 들어 폴록사머 (예컨대, 콜리포르(Kolliphor)® P407 또는 폴록사머　188); 코폴리비닐피롤리돈; 라브라솔(Labrasol)®; 겔루시르(Gelucire)®; 젤라틴; 레시틴 (포스파티드); 검 아카시아; 콜레스테롤; 트라가칸트; 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르; 폴리옥시에틸렌 피마자유 유도체; 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르; 소르비탄 지방산 에스테르; 폴리에틸렌 글리콜; 폴리옥시에틸렌 스테아레이트; 모노 및 디글리세리드; 콜로이드 이산화규소; 나트륨 도데실설페이트; 마그네슘 알루미늄 실리케이트; 트리에탄올아민; 스테아르산; 칼슘 스테아레이트; 글리세롤 모노스테아레이트; 세토스테아릴 알콜; 세토마크로골 유화 왁스; 짧은 및 중간 사슬 알콜; 라브라필 (Labrafil)®; 푸롤-올레이크 (Purol-oleique)®; 프로판-1,2,3-트리올, 폴리비닐 알콜 및 디옥틸 나트륨 설포숙시네이트 (DOSS)로 구성되는 군에서 선택된다. 폴리소르베이트의 바람직한 예시는 폴리소르베이트 80 및 폴리소르베이트 20이다. 안정화제는 폴리소르베이트　80, 폴리소르베이트　20, 콜리포르 ®　P407 및 폴록사머 188로 구성되는 군에서 선택되는 것이 더 바람직하다. 특히 바람직한 실시양태에서, 안정화제는 콜리포르®　P407, 또는 폴리소르베이트　80, 예를 들어 트윈(Tween)®　80이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 분산 단계 b.는 인지질 및 폴리소르베이트로 구성되는 군에서 선택되는 안정화제의 첨가를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 분산 단계 b.는 나노현탁액에 사용된 용매의 총량을 기준으로, 0.5 내지 2　% (w/w)의 양으로 폴리소르베이트의 첨가를 포함하고(포함하거나), 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 80 및 폴리소르베이트 20으로 구성되는 군에서 선택된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 분산 단계 b.는 천연 재료의 양을 기준으로, 100　% 내지 200　% (w/w), 바람직하게 130　% 내지 170　% (w/w)의 양으로 인지질의 첨가를 포함하고, 바람직하게 인지질은 95　% (중량으로) 이하 포스파티딜콜린 및 20 내지 30　% (중량으로) 리소포스파티딜콜린을 함유한다. 인지질이 20-95　% 포스파티딜콜린, 바람직하게 20-75　% 포스파티딜콜린 및 20-30　% 리소포스파티딜콜린 (예컨대 독일에 소재한, 리포이드 게엠베하(Lipoid GmbH)의 리포이드 P100, P75, R LPC20)을 함유하는 것이 바람직하다. 천연 재료의 총량을 기준으로, 100 내지 300 % (w/w), 더 바람직하게 50 내지 200 % (w/w)의 양으로 인지질을 첨가하는 것이 또한 바람직할 수 있다.
안정화제로 입체 안정화제가 사용될 때, 입체 안정화제는 나노-입자의 표면 상에 흡착되거나 부착되고, 반 데르 발스 인력을 극복하는 크고 치밀한 입체 장벽을 제공하여 입체 안정화제는 집합, 응집 또는 입자 융합을 감소시킨다. 입체 안정화제는 바람직하게는 중합체, 예를 들어 단독중합체, 블록 및 그래프트 공중합체, 예컨대 히드록시프로필 셀룰로오스 (HPC), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC) 및 폴리비닐피롤리돈 (PVP)에서 선택될 수 있는 제약상 허용 가능한 부형제이다. 특히 바람직한 입체 안정화제는 비이온성 트리-블록 공중합체 콜리포르® P407이다. 콜리포르® P407은 폴리옥시에틸렌 (폴리(에틸렌 옥시드))의 두 친수성 사슬에 의해 플랭킹된 폴리옥시프로필렌 (폴리(프로필렌 옥시드))의 중앙의 소수성 사슬로 구성된다. 밀링 단계 c 동안 입체 안정화제를 첨가하는 것이 유리할 수 있다. 따라서, 밀링 단계 c. 동안 더 바람직하게 입자가 5 μm 미만의 입자 크기 (D90)를 가질 때 0.5 내지 2　% (w/w)의 양으로 입체 안정화제를 첨가하는 것이 바람직하다.
본 개시내용의 방법에 사용된 또 다른 바람직한 안정화제는 글리세린 (프로판-1,2,3-트리올)이다. 상기 글리세린은 용매의 총 부피를 기준으로, 더 바람직하게, 30 내지 100　% (v/v) 또는 40 내지 100　% (v/v), 심지어 더 바람직하게 40　% (v/v) 또는 50% (v/v)의 양으로, 밀링 단계 c. 후에 바람직하게 첨가된다.
글리세린에 추가로, 또는 그의 대안으로, 정전 안정화제로 디옥틸 나트륨 설포숙시네이트 (DOSS)가 용매의 총량을 기준으로 바람직하게 0.5 내지 2　% (w/w)의 양으로 사용될 수 있고, 바람직하게 밀링 단계 c. 후에 첨가된다.
밀링 단계 c. 동안, 320　μm 미만의 입자 크기에서 천연 재료를 함유하는 분산액이 1000　nm 미만의 입자 크기 (D90)로 밀링된다. 이는 임의의 적합한 밀로 달성될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 상기 밀링 단계 c.는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀로 수행된다.
추가로 바람직한 실시양태에서, 상기 밀링 단계 c.는 0.5 내지 1.5　mm의 그라인딩 볼 지름을 갖는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀에서의 제1 밀링 단계 c.1, 및 0.3 내지 0.4　mm의 그라인딩 볼 지름을 갖는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀에서의 제2 밀링 단계 c.2, 및 0.05 내지 0.2　mm의 그라인딩 볼 지름을 갖는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀에서의 제3 밀링 단계 c.3을 포함한다. 제2 밀링 단계 c.2는 약 3 내지 6　μm의 입자 크기 (D90)가 도달될 때까지 사용되고, 제3 밀링 단계 c.3은 약 80 내지 500　nm, 바람직하게 80 내지 300　nm의 입자 크기 (D90)가 도달될 때까지 사용된다. 320　μm 미만 천연 재료 분말의 시작 입자 크기 (D100)를 갖는 또 다른 바람직한 실시양태에서 상기 밀링 단계 c.는 0.4 내지 0.5　mm의 그라인딩 볼 지름을 갖는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀에서의 제1 밀링 단계 c.1, 및 0.05 내지 0.2　mm의 그라인딩 볼 지름을 갖는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀에서의 제2 밀링 단계 c.2를 포함한다. 제1 밀링 단계 c.1은 약 2 내지 6　μm의 입자 크기 (D90)가 도달될 때까지 사용되고, 제2 밀링 단계 c.2는 약 80 내지 500　nm, 바람직하게 80 내지 300　nm의 입자 크기 (D90)가 도달될 때까지 사용되는 것이 바람직하다. 25 내지 36　℃의 밀 챔버 내 온도 및 10 내지 14　m/s, 바람직하게 11 내지 14　m/s의 림 속도(rim speed)를 갖는 것이 더욱 바람직하다.
그러므로, 바람직한 실시양태에서, 단계 b.의 분산액은 단계 c.에서 동적 광 산란 또는 레이저 회절 분석기로 측정되는, 500　nm 미만 (D90　<　500　nm), 바람직하게 300　nm 미만 (D90　<　300　nm), 더 바람직하게 250　nm 미만 (D90　<　250　nm) 및 가장 바람직하게 200　nm 미만의 입자 크기 (D90)로 (D90　<　200　nm) 밀링된다.
따라서 얻어지는 나노현탁액은 동적 광 산란 또는 레이저 회절 분석기로 측정되는, 500　nm 미만 (D90　<　500　nm), 바람직하게 300　nm 미만 (D90　<　300　nm), 더 바람직하게 250　nm 미만 (D90　<　250　nm) 및 가장 바람직하게 200　nm 미만의 입자 크기 (D90) (D90　<　200　nm) 및 40 nm 초과의 입자 크기 (D90　>　40　nm)를 가질 수 있다.
얻어지는 나노현탁액은 모노-모드(mono-modal) 현탁액으로 얻어지는 최상의 안정화로 더 특징지어질 수 있고, 단일 모드는 300 nm 미만, 바람직하게 200 nm 미만의 평균값을 갖는다. 이러한 모노-모드 현탁액은 현탁액을 여과하여 달성될 수 있다. 필터는 450　nm 미만, 바람직하게 300　nm 미만, 더 바람직하게는 220 nm 미만의 입자 크기 (D90)로 입자 크기가 감소될 수 있다. 필터 장치로 산토리우스 스테딤 바이오테크 필터(Sartorius Stedim Biotech filter)와 같은 임의의 최신 장치가 사용될 수 있다. 만약 나노현탁액이 450　nm로 여과된다면, 이러한 여과는 안정화에 기여할 수 있는, 입자 크기 분포의 표준 편차를 심지어 더 좁게 만든다. 대안으로, 모노-모드 현탁액은 대응하는 가공 수단에 의해 달성될 수도 있다. 예시하면, 실시예　12의 현탁액은 여과 없는 모노-모드 현탁액이다.
밀링 단계 c. 동안, 소정의 비에너지가 나노현탁액에 적용된다. 비에너지는 [kW]로의 젖은 볼 아지테이터 밀의 순에너지 (총에너지 빼기 아이들링 구동력(idling drive power)) 곱하기 [h]로의 밀링 시간 나누기 용매, 천연 재료 분말 및 모든 안정화제의 총량인 [t]로의 나노현탁액의 총량으로 정의된다.
상기 개시된 바와 같은 안정화제를 사용하는 화학적 안정화에 대안으로, 나노현탁액은 도 1에서도 나타난 바와 같이, 콜로이드화기 (예컨대 독일에 소재한, 레비가타 게엠베하(Levigata GmbH)로부터 변경된 유형 카메나(modified type Kamena))로 물리적으로 안정화될 수도 있다. 이 방법 동안, 나노현탁액은 컨테이너 (1) 내에서 회전자 (4)의 회전 및 지지 회전자 (5)에 의해 거의 와류가 없는 방식으로 배플판을 통하여 이의 상단 상의 오목 실린더 (3)로 안내된다. 오목 실린더 (3) 내부에서, 내려오는 나노현탁액 스트림 (7)은 오목 실린더의 더 낮은 말단 출구에서 회전자 (4,5)에 의해 일으켜지는, 반대로 회전하는 상향 나노현탁액 스트림을 때린다. 나노현탁액의 내려오는 스트림과 나노현탁액의 정반대의 회전 스트림의 충돌에서, 나노-입자는 마찰에 의해 정적으로 로딩된다. 이 정적 로드 또는 입자 전하는 나노-입자의 분리 및 이에 따른 물리적 안정화를 가져올 수 있다. 그 후에, 나노현탁액은 역방향에서 외부 쌍곡선 실린더에서 상승한다 (6). 나노현탁액은 이로써 상향 및 하향 정렬된 운동에 놓인다. 이로써 발생한 열 에너지는 컨테이너 (1)의 이중벽 (2)에 통합된 냉수기로 수행되고, 냉각 매질은 이중벽에 공급되고 이로부터 방향이 바뀐다 (8a, 8b 9a, 9b).
따라서, 바람직한 실시양태에서, 나노현탁액은 밀링 단계 c. 후에 바람직하게 산소의 첨가와 함께, 콜로이드화기에서 콜로이드화(colloidation) 단계 d.에 추가로 놓여진다. 이러한 콜로이드화는 안정화제의 사용을 추가로 대체할 수 있고, 추가의 바람직한 실시양태에서 나노현탁액은 어떠한 안정화제도 함유하지 않고, 특히 어떠한 프로판-1,2,3-트리올도 함유하지 않는다.
앞서 상세히 기재한 바와 같이, 본 개시내용의 나노현탁액은 화학적으로 또는 물리적으로 안정화될 수 있다.
본 개시내용의 나노현탁액은 산소 (O2)를 추가적으로 함유할 수 있다. 본 개시내용에 대해, 만약 물이 산소로 농축되면, 산소는 물리적으로 또는 화학적으로 물에 용해되는 것과 같이 물에 용해될 수 있거나, 임의의 나노-입자에 부착할 수 있다. 나노현탁액을 과량의 산소로 농축하기 위하여, 상기 콜로이드화기가 사용될 수 있다. 본 개시내용의 예시적인 방법에서, 콜로이드화 방법의 시작 약 1 분 후, 산소는 20 내지 30 mg/리터 산소가 나노현탁액에 함유될 때까지 첨가될 수 있다. 이러한 종류의 방법으로, 산소는 압력 방법과 대조되는 소위 빨아들이는 방법(sucking process)으로 나노현탁액에 첨가되고, 산소는 압력을 통해 용액 내 삽입된다. 산소 농축 장치로, 이에 반드시 제한되어야하는 것은 아니나, 레비가타 리미티드의 울트라 콜로이드화기가 사용될 수 있다.
본 개시내용의 바람직한 실시양태에서, 나노현탁액은 20 내지 30　mg/l의 산소 농도를 갖는다.
하나 이상의 천연 재료 및 임의적 산소에 추가로, 본 개시내용의 나노현탁액은 향미제, 방부제, 계면활성제 및 투과 인핸서, 예를 들어 리보플라빈 또는 아스코르브산으로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상의 화합물을 또한 포함할 수 있다.
나노현탁액은 단계 c. 이후 및 임의적으로 단계 d. 이전 또는 이후 여과 단계에서 임의적으로 여과될 수 있다. 이러한 여과로, 나노현탁액 내 나노-입자의 크기는 필요에 따라 추가로 변형될 수 있다. 예로서, 나노현탁액의 멸균 여과가 언급될 수 있다. 이러한 멸균 필터는 입자 크기 (D90) 450　nm 미만, 바람직하게 220　nm 미만으로 입자 크기를 감소시킬 수 있다. 필터 장치로 임의의 최신 장치, 예를 들어 표준 밀리포어 필터(Milipore filter)가 사용될 수 있다. 만약 나노현탁액이 220 nm로 여과된다면, 상기 여과는 이러한 입자 크기 분포의 표준 편차를 심지어 더 좁게 만들 것이고, 이는 안정화에 기여할 수 있다.
본 개시내용의 바람직한 실시양태에서, 나노현탁액은 바람직하게 멸균 필터와 함께, 더 바람직하게 450 nm 미만 및 더 바람직하게 220　nm 미만 입자 크기로 단계 c. 이후에 및 임의적으로 단계 d. 이전 또는 이후에 여과된다.
나노현탁액의 사용 이전에, 나노현탁액의 농도는 필요에 따라 변형될 수 있다. 한편으로는, 나노현탁액은 추가 용매의 첨가로 희석될 수 있다. 다른 한편으로는, 나노현탁액의 농도는 추가 단계 e.에서 증가할 수 있다. 농도의 증가는 용매의 증발에 의해, 바람직하게 건조 챔버에서, 더 바람직하게 40 ℃를 초과하지 않는 온도 및 임의적으로 감압에서 달성될 수 있다. 최종 나노현탁액은 이어서 나노현탁액에 존재하는 용매의 총량을 기준으로, 10 내지 40　% (w/w), 바람직하게 10 내지 20　% (w/w) 범위의 천연 재료의 농도를 바람직하게 갖는다.
따라서, 바람직한 실시양태에서, 나노현탁액의 농도는 나노현탁액에 존재하는 용매의 총량을 기준으로, 10 내지 40　% (w/w), 바람직하게 10 내지 20　% (w/w)의 천연 재료 농도로 용매의 증발에 의해, 바람직하게 건조 챔버에서 추가 단계 e.에서 증가된다.
상기 제조 방법으로부터 결론을 내고, 실험 부분에서 실시예에 의해 뒷받침되어, 천연 재료의 나노현탁액은 하기 인자에 의해 추출물과 다르다:
활성 성분의 농도
나노현탁액은 수용성 화합물과 같은 추출된 부분뿐만 아니라 나노-입자로, 천연 재료의 전체 또는 부분을 그의 천연 조성물에 함유하기 때문에, 친수성뿐만 아니라 소수성 화합물의 농도는 추출물과 비교하여 나노현탁액에서 더 크다. 추출물에서, 각 용매 내 용해도로 인하여 친수성 또는 소수성 화합물만 용액에 있다.
건조 질량의 양
나노현탁액의 성질로 인해, 건조 질량은 보통 단계 b.에서 나노현탁액을 형성하도록 첨가된 화합물의 양과 동일하거나 거의 동일하다. 이에 반해서, 대부분 화합물의 용해도는 100 %보다 상당히 미만이기 때문에, 추출물의 건조 질량은 항상 용매로 넣어지는 화합물의 양 미만이다.
산화
나노-입자는 보통 제한된 용해도로 나노현탁액에 분산되기 때문에, 화학적 반응의 가능성은 용액-기재 제제에서 만큼 실질적이지 않다. 따라서, 나노현탁액의 화학적 안정성은 용액의 안정성보다 일반적으로 우월하다. 나노현탁액의 산화 안정성은 알루미늄 표면 상의 산화층과 유사한 메커니즘에 기인한다. 나노-입자 표면 상의 단층 분해는 이것이 일단 물 및 산소에 노출되면 생성된다. 이 단층은 추가 분해로부터 나노-입자의 내부를 보호할 수 있고, 따라서 나노현탁액의 산화 안정성을 증진시킬 수 있다.
화학적 안정화
나노-입자의 고유한 나노-규모 구조는 전통적인 마이크로 입자와 비교하여, 시험관 내 및 생체내 모두, 현저히 상이한 거동을 야기하는 표면적 대 부피 비에서 상당한 증가를 제공한다. 약물 나노-결정의 장점에 불구하고, 이는 복잡한 제조 및 안정성 문제를 포함하는 다양한 결점을 보인다. 안정성은 약물 생성물의 안전 및 효능을 보장하는 데 있어 중요한 측면 중 하나이다. 정맥내 투여되는 나노현탁액에서, 예를 들어, 더 큰 입자 (>　5 μm)의 형성은 모세혈관 차단 및 색전증으로 이어질 수 있고, 따라서 약물 입자 크기 및 크기 분포는 저장 동안 면밀히 모니터링될 필요가 있다. 이러한 큰 입자는 본 나노현탁액에서 제외된다.
물리적 안정화
입자 전하는 나노현탁액의 물리적 안정성을 결정하는 인자 중 하나이다. 입자가 더 크게 동일하게 하전될수록, 입자 간 정전기적 반발도 더 크고, 물리적 안정성도 더 크다. 전형적으로 입자 전하는 예컨대 전기장에서 입자의 전기영동이동도를 통해 측정되는, 소위 제타 전위로 정량화된다.
상기 나노현탁액의 제조 방법은 나노현탁액이 얻어진다. 그러므로, 본 개시내용은 또한 본원에서 기재되는 임의의 한 방법에 따른 얻어질 수 있는 나노현탁액에 관한 것이다.
더욱이, 본 개시내용의 나노현탁액은 약제 또는 보조제, 예를 들어 식품 보조제의 제조에 사용될 수 있다. 본 개시내용의 나노현탁액은 동물, 바람직하게 사람에 협측, 국소 또는 경구 적용을 위한 약제의 제조에 유리하게 사용될 수 있다.
천연 재료의 나노현탁액은 점막 관통 경로를 통해 투여될 가능성을 포함하는 별개의 장점을 제공한다. 천연 재료의 나노현탁액은 부피 단위 당 활성제의 더 큰 농도, 비-수용성 활성제의 더 작은 입자를 함유하고, 따라서 면역-조정 (immune-modulating) 활성제가 면역 세포에 의해 취해지고, 면역-조정 활성제의 작은 입자 크기를 필요로 하는, 면역-조정 약물에 대한 새로운 가능성을 제공한다.
구강 투여를 위해, 구강을 통한 물질의 섭취 용량이 제한되기 때문에 약물은 바람직하게 낮은 투여량에도 효능이 있고 액체여야 한다. 더욱이 구강을 통해 투여된 약물의 입자는 나노미터 범위, 예컨대, 대략 300 nm 미만이어야 하고, 그렇지 않으면 구강을 통한 통과가 제한된다. 본 개시내용의 나노현탁액은 300　nm 미만 입자 크기 D90로 제공될 수 있기 때문에, 나노현탁액은 구강 투여에 유리하게 사용될 수 있다.
구강 내에서, 생물학적 활성제의 투여의 두 가지의 일반적으로 인식된 경로가 있다. 설하 전달은 입의 바닥 층에 있는(lining) 점막을 통해 달성된다. 높은 투과성 및 풍부한 혈액 공급으로 인해, 설하 경로를 통한 수송은 작용의 급속한 시작을 야기하여, 짧은 전달 기간 조건 및 잦지 않은 투여 양생법의 매우 투과성인 활성제에 적합한 전달 경로를 제공한다. 둘째로 일반적으로 인식된 경로는 볼점막을 통하는 것이다. 이 지역은 볼의 내부 층의 점막을 포함한다. 이 지역은 또한 풍부한 혈액 공급을 갖고, 튼튼하고, 스트레스 또는 손상 후 짧은 세포 회복 시간을 제공한다. 비록 볼점막이 설하 지역보다 덜 투과성이지만, 부드럽고 상대적으로 부동성인 점막의 넓은 지역은 생물학적 활성제의 서방형 및 방출제어형 전달에 대해 매우 바람직한 흡수 경로를 제공한다. 다른 점막 관통 경로의 투여로, 두 주요한 장점은 간의 초회 통과 대사 및 위장관 내 예비-전신 제거(pre-systemic elimination)를 피하는 것을 포함한다.
추가적으로, 임의의 공지된 투과 인핸서는 본 개시내용에 따른 나노현탁액의 통과를 증가시킬 수 있다.
경구 투여와는 별도로, 본 개시내용의 나노현탁액은 동물, 바람직하게 사람에의 비경구, 경막내, 정맥내, 경피, 또는 점막 관통 적용에 사용될 수 있다. 본 개시내용의 바람직한 실시양태는 동물, 바람직하게 사람에의 비경구, 경막내, 정맥내, 경피, 또는 점막 관통 적용, 바람직하게 협측, 국소 또는 경구 적용을 위한 약제의 제조에서 나노현탁액의 용도에 관한 것이다.
본 개시내용은 대상의 혈류로 생물학적 활성제의 증진된 전달을 가능하게 하는, 천연 재료의 안정된 나노현탁액, 상기 나노현탁액의 제조 방법 및 상기 나노현탁액의 용도를 제공한다. 이러한 나노현탁액과 신체, 예컨대 볼점막을 포함하는 구강의 지역과 접촉 시, 화합물은 원하는 생물학적 반응을 이끌어내기에 충분한 양으로 혈류에 흡수된다. 그러므로, 나노현탁액은 보통 또는 미세유체화된(microfluidized) 스프레이, 에어로졸 또는 액체의 방식으로 전달될 수 있다. 전달은 비경구, 경막내, 정맥내, 경피, 점막 관통 및 임의의 또는 모든 흔히 인식된 약물 전달 방법으로 달성될 수 있다.
예컨대, 추출물과 비교하여 본원에서 개시되는 방법에 따라 제조된 나노현탁액에 대한 가장 중요한 차별화 요소는 (i) 천연 재료의 주된 활성 성분의 평균 몰 질량 - 평균 몰 질량이 낮을수록, 생체이용도는 높음, (ii) 특정 인간 수용체 (소위 병원체 인식 수용체 또는 톨 유사 수용체 TLR; TLR에 의한 검출의 등급이 높아야만, 증가된 면역 자극 효과가 이후의 시그널 연쇄반응으로 초기화될 수 있음)에 의한 인간 유기체 내 천연 재료의 주된 활성 성분의 인식의 등급, 및 (iii) 인간 유기체 내 천연 재료의 주된 활성 성분의 얻어지는 효과. 천연 재료 붉은갓주름버 섯에 대해 이러한 차별화 요소는 이하의 β-1,3/1,6-글루칸을 수불용성인 붉은갓주 름버섯의 주된 활성 성분으로 사용한 실시예 7 내지 9에서 나타난다.
본 개시내용의 나노현탁액은 암, 염증성 장질환 (IBD), 관절염, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), 다른 바이러스성 질병, 피부과 질병, 예를 들어 신경피부염 또는 건선, 또는 자가면역질환, 예를 들어 다발경화증, 혈관염, 류마티스 관절염 또는 피부근육염의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.
예컨대, 천연 재료로부터 제조된 추출물과 비교하여 본 개시내용의 나노현탁액은 긴 기간 동안 혈류 내 천연 재료의 활성제의 높은 농도를 제공하는 데 효과적이다. 이는 특히 이러한 천연 재료에 함유되는 소수성 화합물에 적용된다. 더욱이, 천연 재료로부터의 면역-조정(immune-modulatory) 화합물을 함유하는 나노현탁액은 나노미터 범위에서 더 많은 면역 자극 입자 및 더 많은 양을 함유하기 때문에, 더 넓고 강렬한 방식으로 면역계를 자극하고, 이는 예컨대, 추출물과 비교하여 각 면역 아집단(subpopulation)에 의해 더 낫게 쓰이거나 인식된다.
실험 부분
하기에서, 본 발명은 더 상세히 설명된다. 그러나, 보호 범위는 첨부된 청구항에 의해서만 결정되며, 어떠한 하기 실시예로도 제한되지 않는다는 것이 이해될 것이다. 하기 실시예는 본 발명을 이해하는 데 돕도록 기재되며, 본원에서 기재되고 청구된 본 발명을 구체적으로 제한하는 것으로 해석되어서는 안될 것이다. 현재 공지된 또는 나중에 개발된 모든 등가물의 치환을 포함하여, 당업자의 이해의 범위, 및 제제에서의 변경 또는 실험 설계에서의 변경 내일 것인, 본 발명의 이러한 변화는 본원에 도입된 본 발명의 범위 내에 속한다고 고려될 것이다.
실시예 1:
실시예 1.1: 올리브잎 나노현탁액의 안정된 제제
200　g 건조 올리브잎 분말 (입자 크기 D90: <　320　μm, 잔류 수분 < 5　%)을 4000　g 바이-증류수에 첨가하여, 물 중의 올리브잎 분말의 5 % (w/w) 분산액을 얻었다. D90 < 320　μm의 입자 크기를 갖는 올리브잎 분말의 용해도는 1.44　% (w/w)이었다. 이에 기초하여, 5　% (w/w) 나노현탁액의 농도는 올리브잎 분말의 용해도 한계 3.5의 계수 (용해도 계수) 초과였다. 젖은 볼 아지테이터 밀 (스위스에 소재한, 뷜러 아게(Buehler AG), 타입 X1)로 0.4 내지 0.5 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 약 380 nm의 입자 크기 (D90)에 도달할 때까지, 이어서 0.1 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 272 nm의 최종 입자 크기 (D90)에 도달할 때까지 400 nm 미만의 입자 크기 (D90)로 분산액을 밀링하였다. 380　nm의 입자 크기 (D90)에서, 14.5　g (0.4　% (w/w)) 트윈®　80을 첨가하였다. 이는 입자 크기를 340 nm까지 아래로 감소시켰다. 약 340　nm의 입자 크기 (D90)에서 29　g (0.7　% (w/w)) 콜리포르® P407의 부가물은 입자 크기 (D90)를 272　nm로 상당히 감소시켰다 (도 2를 참조하여라). 도 2로부터 밀링에 사용된 비에너지 [kWh/t]의 양을 볼 수 있다.
실시예 1.2: 올리브잎의 추출 ( 비교예 )
올리브 분말의 동일한 양 (200　g, 입자 크기 D90: <　320　μm)을 22 ℃의 온도에서 2 시간 동안 4000　g 바이-증류수로 추출하였다.
실시예 1.3: 건조 질량 비교
상기와 같이 제조된 추출물 (실시예 1.2) 및 나노현탁액 (실시예 1.1)의 건조 질량의 양을 각각 0.45　μm 필터 (밀리포어, 셀룰로오스 에스테르 막)로 추출물 및 나노현탁액을 여과하여 측정하였다. 여과된 고형물을 건조하였고, 여과된 입자의 건조 질량을 측정하였다. 도 3에서도 볼 수 있듯이, 올리브잎 분말 (5　% (w/w))의 동일한 농도로 추출물 0.3　% (w/w)과 비교하여 나노현탁액의 건조 질량의 양은 4.5 % (w/w)이었다.
실시예 2:
실시예 2.1: 스피룰리나 나노현탁액의 안정된 제제
300　g 스피룰리나 분말 (10　% (w/w), 입자 크기 D90: <　150　μm, 잔류 수분 <　5　%) 및 60　g 콜리포르® P407를 3000　g 바이-증류수에 첨가하여, 물 중의 스피룰리나의 분산액을 얻었다. D90 < 150　μm의 입자 크기를 갖는 스피룰리나 분말의 용해도는 0.52　% (w/w)이었다. 이에 기초하여, 10　% (w/w) 나노현탁액의 농도는 스 피룰리나 분말의 용해도 한계 19.2의 계수 (용해도 계수) 초과였다. 젖은 볼 아지테이터 밀 (스위스에 소재한, 뷜러 아게, 타입 X1)로 0.4 내지 0.5 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 약 120 nm의 입자 크기 (D90)에 도달할 때까지, 이어서 0.1 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 80 nm의 최종 입자 크기 (D90)에 도달할 때까지 약 80 nm의 입자 크기 (D90)로 분산액을 밀링하였다. 도 4로부터 밀링에 사용된 비에너지 [kWh/t]의 양을 볼 수 있다.
실시예 2.2: 스피룰리나의 추출 ( 비교예 )
스피룰리나 분말의 동일한 양 (300　g, 입자 크기 D90: <　150　μm)을 22 ℃의 온도에서 2 시간 동안 3000　g 바이-증류수로 추출하였다.
실시예 2.3: 건조 질량 비교
상기와 같이 제조된 추출물 (실시예 2.2) 및 나노현탁액 (실시예 2.1)의 건조 질량의 양을 각각 0.45　μm 필터 (밀리포어, 셀룰로오스 에스테르 막)로 추출물 및 나노현탁액을 여과하여 측정하였다. 여과된 고형물을 건조하였고, 여과된 입자의 건조 질량을 측정하였다. 도 5에서도 볼 수 있듯이, 스피룰리나 분말 (10　% (w/w))의 동일한 농도로 추출물 3.3　% (w/w)과 비교하여 나노현탁액의 건조 질량의 양은 9.4 % (w/w)이었다.
실시예 3:
실시예 3.1: 5　 % P100 , 0.5　 % 트윈 ® 80 및 1　 % 콜리포르 P407과 붉은갓주름버섯 나노현탁액의 안정된 제제
150　g 분말 붉은갓주름버섯 (입자 크기 D90: <　320　μm, 잔류 수분 <　5　%), 150　g 리포이드 P100 (5　% (w/w)) 및 15　g 폴리소르베이트 트윈®　80 (0.5　% (w/w))을 3000　g 바이-증류수에 첨가하여, 물 중의 붉은갓주름버섯 분말의 5　% (w/w) 분산액을 얻었다. D90 < 320　μm의 입자 크기를 갖는 붉은갓주름버섯 분말의 용해도는 3.2　% (w/w)이었다. 이에 기초하여, 5　% (w/w) 나노현탁액의 농도는 붉은갓주름버섯 분말의 용해도 한계 1.6의 계수 (용해도 계수) 초과였다. 젖은 볼 아지테이터 밀 (스위스에 소재한, 뷜러 아게, 타입 X1)로 0.4 내지 0.5 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 약 6.3 μm의 입자 크기 (D90)에 도달할 때까지, 이어서 0.1 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 240 nm의 최종 입자 크기 (D90)에 도달할 때까지 분산액을 밀링하였다. 도 6 (실선)으로부터 밀링에 사용된 비에너지 [kWh/t]의 양을 볼 수 있다. 약 6.3 μm의 입자 크기 (D90)에서, 30　g (1　% (w/w)) 콜리포르®　P407을 첨가하였다. 나노현탁액의 최종 입자 크기 (D90)는 240 nm이었다 (또한 도 6 - 실선을 참조하여라).
실시예 3.2: 붉은갓주름버섯 나노현탁액 10　 % P100 , 0.5　 % 트윈 ® 80 및 1　 % 콜리포르 P407의 안정된 제제
150　g 분말 붉은갓주름버섯 (입자 크기 D90: <　320　μm), 300　g 리포이드 P100 (10　% (w/w)) 및 15　g 폴리소르베이트 트윈®　80 (0.5　% (w/w))을 3000　g 바이-증류수에 첨가하여, 물 중의 붉은갓주름버섯 분말의 5　% (w/w) 분산액을 얻었다. 젖은 볼 아지테이터 밀 (스위스에 소재한, 뷜러 아게, 타입 X1)로 0.4 내지 0.5 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 약 6.3 μm의 입자 크기 (D90)에 도달할 때까지, 이어서 0.1 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 368 nm의 최종 입자 크기 (D90)에 도달할 때까지 분산액을 밀링하였다. 도 6 (파선)으로부터 밀링에 사용된 비에너지 [kWh/t]의 양을 볼 수 있다. 약 2.6 μm의 입자 크기 (D90)에서, 30　g (1　% (w/w)) 콜리포르®　P407을 첨가하였다. 나노현탁액의 최종 입자 크기 (D90)는 368 nm이었다 (또한 도 6 - 파선을 참조하여라).
실시예 3.3: 붉은갓주름버섯 나노현탁액 5　 % P100 , 0.75　 % 트윈 ® 　80의 안정된 제제
150　g 분말 붉은갓주름버섯 (입자 크기 D90: <　320　μm), 150　g 리포이드 P100 (5　% (w/w)) 및 15　g 폴리소르베이트 트윈®　80 (0.5　% (w/w))을 3000　g 바이-증류수에 첨가하여, 물 중의 붉은갓주름버섯 분말의 5　% (w/w) 분산액을 얻었다. 젖은 볼 아지테이터 밀 (스위스에 소재한, 뷜러 아게, 타입 X1)로 0.4 내지 0.5 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 분산액을 밀링하였다. 도 7 (파선)으로부터 밀링에 사용된 비에너지 [kWh/t]의 양을 볼 수 있다. 나노현탁액의 입자 크기 (D90)는 15170　kWh/t의 비에너지에서 343　nm로 감소되었다 (또한 도 7 - 파선을 참조하여라). 증가된 비에너지에서 계속된 밀링 후, 입자 크기는 아마도 응집의 원인이 될 수 있는 입자의 큰 표면적으로 인해 갑자기 증가하였다. 심지어 추가의 7.5　g 폴리소르베이트 트윈®　80의 부가물 (총 0.75　% (w/w)를 얻음)은 입자 크기를 크게 감소시키지 않았다. 비교하여, 동일하나 추가적인 1　% 콜리포르® P407 (상기 실시예 3.2) 및 0.5　% 폴리소르베이트 트윈®　80을 갖는 나노현탁액은 입자 크기의 추가적 감소와 또한 안정화를 보여준다 (도 7 - 실선을 참조하여라).
실시예 3.4: 붉은갓주름버섯의 추출 ( 비교예 )
붉은갓주름버섯 분말의 동일한 양 (150　g, 입자 크기 D90: <　320　μm)을 22 ℃의 온도에서 2 시간 동안 3000　g 바이-증류수로 추출하였다.
실시예 3.5: 건조 질량 비교
상기와 같이 제조된 추출물 (실시예 3.4) 및 나노현탁액 (실시예 3.1)의 건조 질량의 양을 각각 0.45　μm 필터 (밀리포어, 셀룰로오스 에스테르 막)로 추출물 및 나노현탁액을 여과하여 측정하였다. 여과된 고형물을 건조하였고, 여과된 입자의 건조 질량을 측정하였다. 도 8에서도 볼 수 있듯이, 붉은갓주름버섯 분말 (5　% (w/w))의 동일한 농도로 추출물 0　% (w/w)과 비교하여 나노현탁액의 건조 질량의 양은 4.4 % (w/w)이었다.
실시예 4:
실시예 4.1: 활성 성분의 농도
붉은갓주름버섯의 주된 활성제는 β-1,3/1,6-글루칸이고, 따라서 이러한 글루칸은 붉은갓주름버섯의 추출물 및 붉은갓주름버섯의 나노현탁액의 상이한 농도를 비교하도록 기준물질 재료로 사용될 수 있다. 실시예 3.1의 5　% (w/w) 나노현탁액 및 실시예 3.4의 붉은갓주름버섯 5　% (w/w) 추출물 외에, 추가의 추출물을 실시예 3.4와 비슷한 방식으로 제조하였다. 도 9에서 나타난 바와 같이, 도 9에서 다른 추출물 유형은 모든 것이 동일한 파라미터로 (3000　g 용매에 150　g 붉은갓주름버섯 분말, 2 h 동안의 추출 시간) 상이한 용매로 (바이-증류수 및 60　% (v/v) 에탄올 (EtOH)) 및 상이한 온도로 (실온 22　℃ 및 80　℃) 행해졌다.
도 9는 추출물 및 나노현탁액의 제조에 사용되는 순수한 붉은갓주름버섯 분말에 관하여, 상이한 붉은갓주름버섯 분말의 추출물 및 실시예 3.1의 나노현탁액에 대한 β-1,3/1,6-글루칸 함량의 비교를 보여준다. 나노현탁액에서, 실온에서 겨우 에탄올 추출물 2 % 및 80 ℃에서 바이-증류수 내 46 % 이하와 비교하여, 분말의 β-1,3/1,6-글루칸 함량 98 %가 혼입된다. 이는 나노현탁액 내 분말 분율로부터 거의 모든 β-1,3/1,6-글루칸이 보유된다는 것을 보여준다.
실시예 5:
실시예 5.1: 실리카 나노현탁액의 안정된 제제
100　g 실리카 분말 (입자 크기 D90: <　25　nm)을 2000　g 바이-증류수에 첨가하여, 물 중의 실리카 분말의 5　% (w/w) 분산액을 얻었다. 실리카 나노현탁액을 상세히 전술한 물리적 안정화로 안정화하였다. 레이저 회절 분석기 제타사이저(Zetasizer) (영국에 소재한, 몰번 인스트루먼츠(Malvern Instruments))로 측정한 제타 전위를 물리적 안정화의 영향을 평가하는 물리적 파라미터로 취하였다. 그러므로, 콜로이드화기로 물리적 안정화 이전 및 이후에 제타 전위를 측정하였다. 3000 min-1에서 3 분 동안 콜로이드화기 내 물리적 안정화로 인해 제타 전위는 -0.84　mV에서 -10.4　mV로 감소되었다. 이는 물리적 안정화 없는 값과 비교하여 상당한 감소이다 (도 10을 참조하여라).
실시예 6:
실시예 6에서, 상이한 나노현탁액을 이의 장기 안정성에 대해 시험하였다. 전술한 바와 같이, 분석 원심분리기 (독일에 소재한, LUM 게엠베하(LUM GmbH)의 루미푸지(Lumifuge))로 가속 안정성 시험을 행하여 나노현탁액의 침강, 부유 또는 경화와 같은 디-믹싱(de-mixing) 현상을 분류하고 정량화하였다. 나노현탁액의 안정성을 측정하는 데 이 시험을 사용하였다. 나노 입자의 침강, 부유 또는 경화가 없거나 단지 일부라면 나노현탁액은 장기간 안정된 것으로 고려된다.
가속 안정성 시험에서, 원심분리기에서 2000　g (g = 중력 상수의 힘= 9,81 m/s2)로 나노현탁액을 가속하였다. 루미푸지의 도움으로 전체 샘플 길이에 걸친 공간- 및 시간-분해 흡광 프로파일을 얻었다. 평행 광 (I0)은 전체 샘플 셀을 비추고, 투과된 광 Ⅰ은 마이크로규모 해상도로 상부에서 하부까지 전체 샘플을 가로질러 선형으로 배열된 몇 천 개의 센서로 검출된다. 투과율은 lg　(I/I0)로 흡광으로 전환되고, 입자 농도는 계산될 수 있다.
장기간 안정된 나노현탁액을 얻기 위해서, 프로판-1,2,3-트리올을 첨가하여 나노현탁액의 점도를 증가시키고 나노현탁액 내 나노입자의 침강을 방지할 수 있다. 하기 실시예는 프로판-1,2,3-트리올의 첨가의 효과를 보여준다.
실시예 6.1: 0　 % 프로판-1,2,3- 트리올을 갖는 붉은갓주름버섯 나노현탁액의 장기간 안정된 제제
실시예 3.1에서 제조되는 바와 같은 나노현탁액을 취하였고 프로판-1,2,3-트리올의 첨가 없이 약 30 분 동안 자성 교반기로 교반하였다. 이어서, 전술한 바와 같이, 분석 원심분리기 (독일에 소재한, LUM 게엠베하의 루미푸지)로 가속 안정성 시험을 행하여 나노현탁액의 침강, 부유 또는 경화와 같은 디-믹싱 현상을 분류하고 정량화하였다.
도 11은 0 % 프로판-1,2,3-트리올을 갖는 나노현탁액의 광투과율 곡선을 보여준다. 여기서 볼 수 있듯, 제1 회전 (40　% 내지 약 25　% 투과율의 밝은 회색 선)에서 2000 g 필드 하에 더 큰 입자가 침강되고, 이어서 추가의 큰 입자가 20 분 후에 침강물이 큐벳의 바닥에 형성될 때까지 다음 회전에 뒤따른다. 투과율은 처음 44 %에서 10 %까지 (큐벳의 바닥에서 침강물) 감소하여, 2000　g 필드 하 침강 과정을 설명한다. 이는 나노현탁액의 장기 불안정성을 보여준다.
실시예 6.2: 20　 % 프로판-1,2,3- 트리올을 갖는 붉은갓주름버섯 나노현탁액의 장기간 안정된 제제
실시예 3.1에서 제조되는 바와 같은 나노현탁액 500 ml를 취하였고 20 % (v/v) 프로판-1,2,3-트리올을 첨가하였다. 얻어지는 혼합물을 약 30 분 동안 자성 교반기로 교반하였다. 이어서, 전술한 가속 안정성 시험을 행하였다.
도 12는 20 % 프로판-1,2,3-트리올을 갖는 나노현탁액의 광투과율 곡선을 보여준다. 여기서 볼 수 있듯, 2000　g 필드 하에 침강되는 더 큰 입자의 양 (50　% 내지 40　% 투과율의 밝은 회색 선)은 20 분 후에 침강물이 큐벳의 바닥에 형성될 때까지, 제1 회전에서 훨씬 낮다. 투과율은 처음 58 %에서 10 %까지 (큐벳의 바닥에서 침강물) 감소하여, 2000　g 필드 하 침강 과정을 설명한다. 이는 20　% (v/v) 프로판-1,2,3-트리올을 첨가하여 나노현탁액의 안정성을 증가시킬 수 있음을 보여준다.
실시예 6.3: 50　 % 프로판-1,2,3-트리올을 갖는 붉은갓주름버섯 나노현탁액의 장기간 안정된 제제
실시예 3.1에서 제조되는 바와 같은 나노현탁액 500 ml를 취하였고 50 % (v/v) 프로판-1,2,3-트리올을 첨가하였다. 얻어지는 혼합물을 약 30 분 동안 자성 교반기로 교반하였다. 이어서, 전술한 가속 안정성 시험을 행하였다.
도 13은 50 % 프로판-1,2,3-트리올을 갖는 나노현탁액의 광투과율 곡선을 보여준다. 여기서 볼 수 있듯, 2000　g 필드 하 20 분 동안 침강이 생기지 않는다 (50　% 내지 약 53　% 투과율의 밝은 회색 선). 큐벳의 바닥에 침강이 없다. 이는 50　% (v/v) 프로판-1,2,3-트리올을 첨가하여 나노현탁액의 안정성을 추가로 증가시킬 수 있음을 보여준다.
실시예 7: 모두 5　 % (w/w) 농도로 붉은갓주름버섯 나노현탁액 및 추출물의 β-1,3/1,6-글루칸의 평균 몰 질량
도 14는 실시예 3.1에서 제조되는 바와 같은 붉은갓주름버섯 나노현탁액 및 실시예 3.4에서 제조되는 바와 같은 추출물의 β-1,3/1,6-글루칸의 차등 중량 분율 (즉, 평균 몰 질량)을 보여준다 (나노현탁액 1: 20　μl 검출기에서 주입된 부피; 나노현탁액 2: 10　μl 검출기에서 주입된 부피, 추출물: 10　μl 검출기에서 주입된 부피). 분석 방법의 신뢰도를 보여주기 위하여, 안정된 것으로 보이는 붉은갓주름버 섯 나노현탁액의 몰 질량을 두 주입된 부피로 측정하였다. 붉은갓주름버섯 나노현탁액의 활성 물질 β-1,3/1,6-글루칸의 평균 몰 질량은 15 내지 16 kDa이고, 추출물의 평균 몰 질량은 135 kDa이다. 이는 본원에서 기재되는 천연 재료로부터 나노현탁액을 제조하는 방법은 주된 활성 물질 β-1,3/1,6-글루칸의 몰 질량을 감소시킨다는 것을 보여준다. 이는 투여 시 나노현탁액 내 존재하는 β-1,3/1,6-글루칸의 높은 재흡수를 야기한다.
실시예 8: 모두 5　 % (w/w) 농도로 붉은갓주름버섯 나노현탁액 및 추출물의 β-1,3/1,6-글루칸의 검출
덱틴-1은 인간 유기체 내 β-1,3/1,6-글루칸을 검출하는 면역 세포 상의 주된 수용체이다. 도 15는 자극되지 않은 말초혈 단핵 세포 (PBMC), 각각 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 3.1에서 제조된 바와 같음) 및 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 추출물 (실시예 3.4에서 제조된 바와 같음)로 자극된 PBMC 샘플에서 덱틴-1 양성 단핵구의 상대적 양 (%로의)을 보여준다. 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 추출물로의 자극에서 122 %의 증가와 비교하여, 자극되지 않은 샘플에 관해 5　% (w/w) 붉은갓주름버섯 나노현탁액으로 자극될 때 PBMC의 수는 409 %로 증가된다.
실시예 9: 모두 5　 % (w/w) 농도로 붉은갓주름버섯 나노현탁액 및 추출물에 의한 시토카인 TNF-알파의 유도
TNF-알파는 질병 전개에서 주요한 시토카인 중 하나이다. 도 16은 붉은갓주 름버섯 나노현탁액 (실시예 3.1에서 제조된 바와 같음) 및 추출물 (실시예 3.4에서 제조된 바와 같음)에 의한 시토카인 TNF-알파의 시험관 내 유도의 비교를 보여준다. 붉은갓주름버섯 나노현탁액에 의한 TNF-알파의 유도는 추출물과 비교하여 60의 계수로 더 컸다.
실시예 10: 모두 5　 % (w/w) 농도로 붉은갓주름버섯 나노현탁액 및 추출물에 의한 시토카인 IL-10의 유도
도 17은 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 3.1에서 제조된 바와 같음) 및 추출물 (실시예 3.4에서 제조된 바와 같음)에 의한 시험관 내 유도에서 주요한 전구-염증성(pro-inflammatory) 시토카인 중 하나로, 시토카인 IL-10의 비교를 보여준다. 붉은갓주름버섯 나노현탁액에 의한 IL-10의 유도는 추출물과 비교하여 26.5의 계수로 더 컸다.
실시예 11: 인간 유기체에서 얻어지는 효과로서 모두 5　 % (w/w) 농도로 붉은갓주름버섯 나노현탁액 및 추출물에 의한 시토카인 IL-6의 유도
도 18은 붉은갓주름버섯 나노현탁액 (실시예 3.1에서 제조된 바와 같음) 및 추출물 (실시예 3.4에서 제조된 바와 같음)에 의한 시험관 내 유도에서 주요한 전구-염증성 시토카인 중 하나로, 시토카인 IL-6의 비교를 보여준다. 붉은갓주름버섯 나노현탁액에 의한 IL-10의 유도는 추출물과 비교하여 6.7의 계수로 더 컸다.
실시예 12: 5 　 % (w/w) 농도 및 7.5 % 지질을 갖는 아가리쿠스( agaricus ) 버 섯 나노현탁액의 입자 분포의 개선
150　g 분말 붉은갓주름버섯 (입자 크기 D90: <　320　μm), 225　g 리포이드 P100 (7.5　% (w/w)) 및 15　g 폴리소르베이트 트윈®　80 (0.5　% (w/w))을 3000　g 바이-증류수에 첨가하여, 물 중의 붉은갓주름버섯 분말의 5　% (w/w) 분산액을 얻었다. 젖은 볼 아지테이터 밀 (스위스에 소재한, 뷜러 아게, 타입 X1)로 0.4 내지 0.5 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 약 15 μm의 입자 크기 (D90)에 도달할 때까지, 이어서 0.1 mm 크기의 이트륨 안정화된 지르코니아 볼을 사용하여 375 nm의 최종 입자 크기 (D100)에 도달할 때까지 분산액을 밀링하였다. 약 4　μm의 입자 크기 (D90)에서, 30　g (1　% (w/w)) 콜리포르® P407을 첨가하였다. 나노현탁액의 최종 입자 크기 (D100)는 375 nm이었다. 얻어지는 나노현탁액의 여과는 불필요하였다.
실시예 3.1과 비교하여 추가의 2.5 % (w/w) 리포이드 P100의 첨가로, 두 주요한 개선이 달성되었다. 먼저, 실시예 3.1에서 10 μm의 입자 크기 (D100)와 비교하여 (도 19를 참조하여라) 375　nm의 최종 입자 크기 (D100) (도 20을 참조하여라)가 달성되었다. 둘째로, 실시예 3.1에서 바이-모드 입자 분포와 비교하여, 모노-모드 입자 분포가 얻어진다 (각각 도 19 및 도 20을 참조하여라). 나노현탁액을 안정하게 유지하도록, 모노-모드 입자 분포가 불안정한 나노현탁액을 발생 및 야기할 수 있는 오스트발트 숙성(Ostwald ripening)을 피하거나 감소시키도록 하는 것이 바람직하다. 더 상세한 두 실시예의 입자 분포로부터 그 차이는 또한 분명하다. 실시예 3.1에서, D10 입자 크기는 0.108　μm이고, D50 입자 크기는 0.159　μm이고, D90 입자 크기는 0.240　μm 및 D100 입자 크기는 10　μm이다 (도 19를 참조하여라). 이에 반해서, 실시예 12의 자세한 입자 분포는 0.065　μm의 D10 입자 크기, 0.104　μm의 D50 입자 크기, 0.178 μm의 D90 입자 크기 및 0.375 μm의 D100 입자 크기이다 (도 20을 참조하여라).
실시예 13: 인간 유기체에서 얻어지는 효과로 실시예 12의 붉은갓주름버섯 나노현탁액에 의한 CD25 활성화 T-세포의 유도
CD25 활성화 T-세포는 T-헬퍼 세포 2 (Th2)에서 T-헬퍼 세포 1 (Th1) 반응으로의 시프트를 유도하는 것으로 고려되는 하나의 중요한 T-세포 아집단이다. Th1/Th2 밸런스에서 Th1 반응으로의 시프트가 면역계의 바이러스 방어 능력의 증가의 원인이 된다. 하기 실시예에서, CD25 활성화 T-세포에서의 증가를 시장에서 입수 가능한 붉은갓주름버섯의 분말과 비교하여, 붉은갓주름버섯을 함유하는 실시예 12에 따른 나노현탁액으로 인간에서 시험하였다.
실시예 12에서 제조된 바와 같은 나노현탁액을 프로판-1,2,3-트리올 (글리세린)과 혼합하여 40 % 글리세린 함유 혼합물을 얻었다. 펌프 스프레이 액추에이터(pump spray actuator)에 의해 3.78　ml/일의 투여량으로 이 혼합물을 사람 8 명의 제1 그룹에 투여하였다. 이 투여량은 105　mg 붉은갓주름버섯 (건조 고형물 함량)에 대응한다. 상기 제1 그룹에서, CD25 활성화 T-세포는 시작 후 4 주 이내에 33 %로 증가하였다 (도 21을 참조하여라). 비교예를 위하여, 사람 8 명의 제2 그룹은 2520　mg의 일일 권장 투여량으로 캡슐 내 붉은갓주름버섯 분말 (약 220 μm의 입자 크기)을 받았다. 상기 제2 그룹에서, CD25 활성화 T-세포는 시작 후 4 주 이내에 11.5 %로 증가하였다 (도 22를 참조하여라).
상기 데이터로부터 볼 수 있듯이, 실시예 12의 나노현탁액은 분말과 비교하여 CD25 활성화 T-세포의 약 세 배 증가를 야기한다. 다시 말해서, 실시예 12의 나노현탁액은 통상적인 분말보다 약 세 배 더 강하다. 이는 분말과 비교하여 투여량이 24의 계수로 더 낮아 심지어 더 놀랍다.

Claims (35)

  1. a. 320　μm 미만의 입자 크기 (D100)를 갖는 하나 이상의 천연 재료를 제공하는 단계;
    b. 용매 내 단계 a.에서의 상기 하나 이상의 천연 재료를 분산시키는 단계; 및
    c. 1000　nm 미만의 입자 크기 (D90)로 (D90　<　1000　nm) 단계 b.의 분산액을 밀링하는 단계
    를 포함하는, 하나 이상의 천연 재료를 포함하는 나노현탁액의 제조 방법.
  2. 제1항에 있어서, 하나 이상의 천연 재료는 식물, 남세균, 조류 및 진균으로 구성되는 군에서 선택되고(선택되거나), 천연 재료는 인삼 및(또는) 셀룰로오스 섬유를 포함하지 않는 것인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 하나 이상의 천연 재료는 상기 천연 재료의 부분 또는 전체, 바람직하게 상기 천연 재료의 전체인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 나노현탁액은 두 개 이상의 천연 재료의 혼합물을 포함하는 것인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 천연 재료는 단계 a. 이전에, 단계 a.1에서 건조된, 바람직하게 동결건조된 및(또는) 열건조된 것인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 a.에서 제공된 천연 재료는 15　% 미만 (w　<　15　%), 바람직하게 12 % 미만 (w <　12　%), 더 바람직하게 10　% 미만 (w <　10　%) 및 가장 바람직하게 8　% 미만의 수분 함량 w를 (w <　8　%) 갖는 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 천연 재료는 단계 a.1에서의 건조 이전 및(또는) 이후, 바람직하게 나이프 밀에서, 예비-그라인딩되고, 임의적으로 320 μm 미만의 입자 크기 (D100)로 체질되는 것인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 용매는 물, 바람직하게 증류수, 또는 물 및 에탄올의 혼합물인 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 나노현탁액은 수성 나노현탁액 또는 물 및 에탄올의 혼합물을 기재로 하는 나노현탁액인 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 천연 재료는 나노현탁액에서 사용된 용매의 총량을 기준으로, 0.5 내지 20　% (w/w), 바람직하게 2 내지 10　% (w/w), 더 바람직하게 2 내지 5　% (w/w) 또는 5 내지 10　% (w/w)의 농도로 단계 b.에서 분산되는 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 분산 단계 b. 또는 밀링 단계 c.는 안정화제의 첨가를 포함하고, 바람직하게 분산 단계 b.는 인지질 및(또는) 폴리소르베이트의 첨가를 포함하는 것인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 분산 단계 b.는 0.5 내지 2　% (w/w)의 양으로 폴리소르베이트의 첨가를 포함하고(포함하거나), 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 80 및 폴리소르베이트 20으로 구성되는 군에서 선택되는 것인 방법.
  13. 제11항에 있어서, 분산 단계 b.는 천연 재료의 총량을 기준으로, 50 내지 200 % (w/w)의 양으로 인지질의 첨가를 포함하고, 바람직하게 인지질은 95　% (중량으로) 이하 포스파티딜콜린 및(또는) 20 내지 30　% (중량으로) 리소포스파티딜콜린을 함유하는 것인 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 c.의 밀링하는 단계는 젖은 볼 아지테이터 밀(wet ball agitator mill)로 수행되는 것인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 밀링 단계 c.는 0.5 내지 1.5　mm의 그라인딩 볼 지름을 갖는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀에서의 제1 밀링 단계 c.1, 및 0.3 내지 0.4　mm의 그라인딩 볼 지름을 갖는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀에서의 제2 밀링 단계 c.2, 및 0.05 내지 0.2　mm의 그라인딩 볼 지름을 갖는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀에서의 제3 밀링 단계 c.3을 포함하는 것인 방법.
  16. 제14항에 있어서, 밀링 단계 c.는 0.4 내지 0.5　mm의 그라인딩 볼 지름을 갖는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀에서의 제1 밀링 단계 c.1, 및 0.05 내지 0.2　mm의 그라인딩 볼 지름을 갖는 젖은 볼 밀, 바람직하게 젖은 볼 아지테이터 밀에서의 제2 밀링 단계 c.2를 포함하는 것인 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 밀링 단계 c.는 안정화제의 첨가를 포함하고, 바람직하게 안정화제는 입자 크기 D90　<　9　μm, 바람직하게 D90　<　3　μm, 더 바람직하게 D90　<　800　nm 및 가장 바람직하게 D90　<　300　nm에서 정전 및(또는) 입체 안정화제인 방법.
  18. 제11항 또는 제17항에 있어서, 안정화제는 인지질; 폴리소르베이트; 중합체, 예를 들어 단독중합체, 블록 및 그래프트 공중합체 (히드록시프로필 셀룰로오스 (HPC), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC) 및 폴리비닐피롤리돈 (PVP)과 같은 것); 비이온성 트리-블록 공중합체, 예를 들어 폴록사머 (예컨대, 콜리포르(Kolliphor)® P407 또는 폴록사머　188); 코폴리비닐피롤리돈; 라브라솔(Labrasol)®; 겔루시르(Gelucire)®; 젤라틴; 레시틴 (포스파티드); 검 아카시아; 콜레스테롤; 트라가칸트; 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르; 폴리옥시에틸렌 피마자유 유도체; 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르; 소르비탄 지방산 에스테르; 폴리에틸렌 글리콜; 폴리옥시에틸렌 스테아레이트; 모노 및 디글리세리드; 콜로이드 이산화규소; 나트륨 도데실설페이트; 마그네슘 알루미늄 실리케이트; 트리에탄올아민; 스테아르산; 칼슘 스테아레이트; 글리세롤 모노스테아레이트; 세토스테아릴 알콜; 세토마크로골 유화 왁스; 짧은 및 중간 사슬 알콜; 라브라필(Labrafil)®; 푸롤-올레이크(Purol-oleique)®; 프로판-1,2,3-트리올, 폴리비닐 알콜 및 디옥틸 나트륨 설포숙시네이트 (DOSS)로 구성되는 군에서 선택되고, 바람직하게 안정화제는 폴리소르베이트　80, 폴리소르베이트　20, 콜리포르®　P407 및 폴록사머 188로 구성되는 군에서 선택되는 것인 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 밀링 단계 c.가 끝난 후 프로판-1,2,3-트리올 (글리세린)의 첨가를 포함하는 방법.
  20. 제19항에 있어서, 안정화제는 용매의 총 부피를 기준으로 30 내지 100　% (v/v)의 양, 바람직하게 40　% (v/v) 또는 50 % (v/v)의 양의 글리세린인 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 반드시 프로판-1,2,3-트리올을 함유해야하는 것은 아닌 나노현탁액은 밀링 단계 c. 후에 바람직하게 산소의 첨가와 함께, 콜로이드화기(colloidator)에서 콜로이드화(colloidation) 단계 d.에 추가로 놓이는 것인 방법.
  22. 제21항에 있어서, 나노현탁액은 20 내지 30　mg/l의 산소 농도를 갖는 것인 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 나노현탁액은 바람직하게 멸균 필터와 함께, 더 바람직하게 450 nm 미만 및 더 바람직하게 220　nm 미만 입자 크기로 단계 c. 이후에 및 임의적으로 단계 d. 이전 또는 이후에 여과되는 것인 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 나노현탁액은 향미제, 방부제, 계면활성제 및 투과 인핸서로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상의 화합물을 추가적으로 포함하는 것인 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 b.의 분산액은 동적 광 산란 또는 레이저 회절 분석기로 측정되는, 500　nm 미만 (D90　<　500　nm), 바람직하게 300　nm 미만 (D90　<　300　nm), 더 바람직하게 250　nm 미만 (D90　<　250　nm) 및 가장 바람직하게 200　nm 미만의 입자 크기 (D90)로 (D90　<　200　nm) 밀링되는 것인 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 나노현탁액의 농도는 추가의 단계 e.에서 용매의 증발에 의해, 바람직하게 건조 챔버에서, 나노현탁액의 총 부피를 기준으로, 10 내지 40　% (w/w), 바람직하게 10 내지 20　% (w/w)의 천연 재료의 농도로 증가되는 것인 방법.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 천연 재료는 0.4 초과의, 또는 0.5 초과의, 또는 0.8 초과의, 또는 1 초과의, 또는 심지어 1.1 초과의 용해도 계수가 얻어지는 농도로 나노현탁액에 존재하는 것인 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 방법에 따라 얻어질 수 있는 나노현탁액.
  29. 제28항에 있어서, 약제, 또는 보조제, 바람직하게 식품 보조제의 제조에 사용되는 나노현탁액.
  30. 제28항에 있어서, 동물, 바람직하게 사람에의 협측, 국소 또는 경구 적용을 위한 약제의 제조에 사용되는 나노현탁액.
  31. 제28항에 있어서, 동물, 바람직하게 사람에의 비경구, 경막내, 정맥내, 경피, 또는 점막 관통 적용, 바람직하게 협측, 국소 또는 경구 적용을 위한 약제의 제조에 사용되는 나노현탁액.
  32. 제28항에 있어서, 암, 염증성 장질환 (IBD), 관절염, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), 다른 바이러스성 질병, 피부과 질병, 예를 들어 신경피부염 또는 건선, 또는 자가면역질환, 예를 들어 다발경화증, 혈관염, 류마티스 관절염 또는 피부근육염의 치료 또는 예방에 사용되는 나노현탁액.
  33. 약제의 제조에 사용되는 제28항에 따른 나노현탁액의 용도.
  34. 암, 염증성 장질환 (IBD), 관절염, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), 다른 바이러스성 질병, 피부과 질병, 예를 들어 신경피부염 또는 건선, 또는 자가면역질환, 예를 들어 다발경화증의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용되는 제28항에 따른 나노현탁액의 용도.
  35. 제28항에 따른 나노현탁액의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에 투여하는 것을 포함하는, 암, 염증성 장질환 (IBD), 관절염, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), 다른 바이러스성 질병, 피부과 질병, 예를 들어 신경피부염 또는 건선, 또는 자가면역질환, 예를 들어 다발경화증의 치료 또는 예방 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102116022B1 (ko) * 2019-07-16 2020-05-27 (주)코이즈 고농도의 산소를 함유하는 미세소구체가 포함된 화장료 조성물 및 이의 제조방법

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RS62381B1 (sr) * 2014-02-03 2021-10-29 Apurano Pharmaceuticals Gmbh Nanosuspenzija prirodnih materijala i postupak njene pripreme
RU2710952C2 (ru) 2015-08-04 2020-01-14 Апурано Лайф Сайенсис Гмбх Наносуспензия, содержащая частицы и экстракт природных материалов
WO2019189047A1 (ja) * 2018-03-27 2019-10-03 株式会社Ｍｉｚｋａｎ Ｈｏｌｄｉｎｇｓ 植物含有固体脂組成物、その製造方法及び外観・食味の改善方法
MX2021000344A (es) * 2018-07-10 2021-03-25 Applied Lifesciences And Systems Llc Metodo para preparar y suministrar soluciones de ovoquistes.
CN109432018A (zh) * 2018-12-25 2019-03-08 中国人民解放军第四军医大学 难溶性药物的纳米混悬液及其制备方法和应用
HUE061496T2 (hu) 2020-01-06 2023-07-28 Cannaxan Gmbh Kannabisz nano-készítmény elõállítása és alkalmazása
CN115998703B (zh) * 2022-12-14 2024-09-06 迪沙药业集团有限公司 一种地榆组合物及其制备方法
US11832614B1 (en) 2023-04-28 2023-12-05 King Faisal University Method of inhibiting mycotoxin growth using Arthrospira platensis nanoparticles

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3502153A1 (de) 1985-01-23 1986-07-24 Röben Kolloid Entwicklung GmbH & Co KG, 2932 Zetel Kolloidator zum kolloidieren von fliessfaehigen materialien
DE4137540A1 (de) 1991-11-14 1993-05-19 Steigerwald Arzneimittelwerk Verwendung von praeparaten der curcuma-pflanzen
JPH05221852A (ja) * 1992-02-18 1993-08-31 L T T Kenkyusho:Kk 制ガン剤の新規製剤調製方法
ZA9711731B (en) 1996-12-31 1998-07-01 Monsanto Co Aqueous glycerol formulations of somatotropin
US20050107582A1 (en) 2003-07-30 2005-05-19 Alfred Wong Method for the preparation of phytosterols from tall oil pitch
US20120042886A1 (en) * 1998-03-11 2012-02-23 Hanna Piskorz Method of producing a nicotine medicament and a medicament made by the method
DE19832304A1 (de) * 1998-07-17 2000-01-20 Reiner Weichert Verfahren und Vorrichtung zur Ultrafein-Mahlung von festen Materialien
US6375986B1 (en) * 2000-09-21 2002-04-23 Elan Pharma International Ltd. Solid dose nanoparticulate compositions comprising a synergistic combination of a polymeric surface stabilizer and dioctyl sodium sulfosuccinate
WO2001001962A1 (en) 1999-07-05 2001-01-11 Idea Ag. A method for the improvement of transport across adaptable semi-permeable barriers
JP4752233B2 (ja) * 2001-04-27 2011-08-17 味の素株式会社 免疫賦活剤
CN100391439C (zh) 2001-04-27 2008-06-04 味之素株式会社 免疫增强剂
WO2003029269A1 (en) * 2001-09-28 2003-04-10 Glycomed Sciences Limited Solvent extraction process
CN1416847A (zh) * 2001-11-07 2003-05-14 焦柏忠 纳米级西洋参制品及其制作方法
IL146737A (en) 2001-11-26 2010-02-17 Lycored Natural Prod Ind Ltd Method for protecting lycopene dispersed in tomato fibers
ATE505198T1 (de) * 2002-02-28 2011-04-15 Heitland & Petre Internat Gmbh Mikro-/nanopartikel aus lipidhaltigen marinen organismen für pharmazie und kosmetik
CA2488617A1 (en) * 2002-06-10 2003-12-18 Eugene R. Cooper Nanoparticulate sterol formulations and sterol combinations
US20120156309A1 (en) 2007-09-19 2012-06-21 Eckert C Edward Using Aqueous Oxygenation to Improve Animal Health & Wellness
US20060062926A1 (en) * 2004-05-17 2006-03-23 Richardson H W Use of sub-micron copper salt particles in wood preservation
BRPI0608173A2 (pt) 2005-02-24 2010-11-09 Elan Pharma Int Ltd composição, uso da mesma, e, método de produzir uma composição de docetaxel nanoparticulada ou análogo do mesmo
DE102005011786A1 (de) * 2005-03-11 2006-09-14 Pharmasol Gmbh Verfahren zur Herstellung ultrafeiner Submicron-Suspensionen
CN100341785C (zh) * 2005-07-27 2007-10-10 湖州吴兴恒联碳酸钙厂 亚微米级重质碳酸钙的制备方法
JP5374869B2 (ja) 2007-12-25 2013-12-25 三菱化学株式会社 セルロース繊維複合体
CN101932416B (zh) * 2007-12-21 2013-12-04 三菱化学株式会社 纤维复合体
JP5562229B2 (ja) 2008-03-17 2014-07-30 サントリー食品インターナショナル株式会社 呈味改善剤及びこれを含む茶飲料
JP5448511B2 (ja) * 2008-03-31 2014-03-19 三栄源エフ・エフ・アイ株式会社 ウコン色素組成物及びその調製方法
JP2010083839A (ja) * 2008-10-02 2010-04-15 Sanei Gen Ffi Inc ミルクカルシウムの分散安定化方法並びにその製剤
KR101160801B1 (ko) * 2010-05-27 2012-06-29 서용일 고형 보조 첨가제
CA2801689A1 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Calpis Co., Ltd. Broken cells of lactic acid bacteria for improving lipid metabolism
TWI425914B (zh) * 2011-03-21 2014-02-11 Food Industry Res & Dev Inst 含高濃度奈米／次微米疏水性機能化合物之水相分散液之製備方法
MX341663B (es) 2012-05-11 2016-08-30 Activus Pharma Co Ltd Nanopolvo de compuesto organico, metodo para producirlo y su suspension.
RS62381B1 (sr) * 2014-02-03 2021-10-29 Apurano Pharmaceuticals Gmbh Nanosuspenzija prirodnih materijala i postupak njene pripreme
JP6672258B2 (ja) * 2014-04-08 2020-03-25 フィリップ・モーリス・プロダクツ・ソシエテ・アノニム ニコチン製剤及びその作製方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102116022B1 (ko) * 2019-07-16 2020-05-27 (주)코이즈 고농도의 산소를 함유하는 미세소구체가 포함된 화장료 조성물 및 이의 제조방법
WO2021010604A1 (ko) * 2019-07-16 2021-01-21 (주)코이즈 고농도의 산소를 함유하는 미세소구체가 포함된 화장료 조성물 및 이의 제조방법

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