KR20150130430A - 타우 발현을 조절하는 조성물 및 방법 - Google Patents

타우 발현을 조절하는 조성물 및 방법 Download PDF

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Abstract

동물에서 타우 mRNA의 스플라이싱을 타우 안티센스 화합물로 조절하는 방법이 개시된다. 동물에서 타우 mRNA 및 단백질의 발현을 타우 안티센스 화합물로 감소시키는 방법이 또한 본원에서 개시된다. 그와 같은 화합물 및 방법은 그것이 필요한 개체에서 신경퇴행성 질환을 치료, 예방, 또는 개선하는데 유용하다. 타우 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여로 치료, 예방, 개선될 수 있는 신경퇴행성 질환의 예는 알츠하이머병, 전두측두 치매 (FTD), FTDP-17, 진행성 핵상 마비, 만성적 외상성 뇌병증, 간질, 및 드라벳 증후군을 포함한다.

Description

타우 발현을 조절하는 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING TAU EXPRESSION}
서열목록
본원은 전자 형태의 서열목록과 함께 출원되어 있다. 상기 서열목록은 그 크기가 대략 208 KB인 파일명 BIOL0220WOSEQ_ST25.txt (3/14/2014 제작)로서 제공된다. 서열목록의 전자 형태의 정보는 그 전체가 참고로 본원에 편입되어 있다.
1. 분야
안티센스 화합물 생화학, 분자 생물학, 및 의약 분야와 관련된 조성물 및 방법이 본원에 개시된다. 본원에 기재된 구현예는 세포 및/또는 동물에서 타우의 발현을 억제하거나 타우의 스플라이싱을 조절함으로써 타우병증, 알츠하이머병, 전두측두 치매 (FTD), FTDP-17, 진행성 핵상 마비 (PSP), 만성적 외상성 뇌병증 (CTE), 피질기저 신경절 변성 (CBD), 간질, 및 드라벳 증후군을 포함하는 신경퇴행성 질환을 치료하거나, 예방하거나 개선시키기 위한 화합물, 조성물, 및 방법에 관한 것이다.
2. 설명
타우의 주요 기능은 유사분열, 세포질분열, 및 소포 수송에 연루된 세포골격의 중요한 구조적 성분인 미세소관에 결합하여 미세소관을 안정화시키기 위한 것이다. 타우는 다수의 조직에서 발견되지만, 특히 뉴런의 축색돌기에 풍부하다. 인간에서, 엑손 2, 3, 및 10의 대안적인 스플라이싱에 의해 산출된 6가지의 타우의 동형체가 존재한다. 단백질 N-말단에서 엑손 2 및 3의 스플라이싱은 0, 1, 또는 2개의 29 아미노산 산성 도메인의 포함을 야기하며, 각각 0N, 1N, 또는 2N 타우라고 한다. 타우 기능에 대한 이들 도메인의 영향은 완전하게 명백하지 않지만, 원형질막과 상호작용하는 역할을 할 수 있다. C-말단에서 엑손 10의 포함은 엑손 10에 의해 인코딩된 미세소관 결합 도메인의 포함을 야기한다. 타우에서 다른 곳에 3개의 미세소관 결합 도메인이 존재하기 때문에, 이 타우 동형체 (엑손 10 포함됨)를 4R 타우라고 하며, 여기서 ?R?은 미세소관 결합 도메인의 반복 수를 나타낸다. 엑손 10이 없는 타우를 3R 타우라고 한다. 더 많은 미세소관 결합 도메인 (3R과 비교된 4R)이 미세소관에 대한 결합을 증가시키기 때문에, 4R 타우는 짐작컨대 유의미하게 미세소관 결합 및 어셈블리를 증가시킨다. 3R 타우를 배타적으로 발현키는 태아 조직 및 대략 동등한 수준의 3R/4R 타우를 발현시키는 성인 인간 조직을 사용하여, 3R/4R 타우의 비를 발달 중에 조절한다. 3R/4R 타우의 정상 비로부터의 일탈은 신경퇴행성 FTD 타우병증의 특징이다. 성인 동물에서 후기에 3R/4R 타우 비의 변화가 타우 발병 기전에 어떻게 영향을 미칠 것인지는 공지되지 않았다.
세린-트레오닌 지시된 인산화는 타우의 미세소관 결합 능력을 조절한다. 하이퍼인산화는 미세소관으로부터 타우의 분리를 촉진한다. 기타 타우의 변역후 변형이 기재되지만; 이들의 유의성은 불확실하다. 타우의 인산화는 또한 태아 조직에서 인산화를 더 높이고 성인에서 인산화를 훨씬 더 낮춰서 발달 중에 조절된다. 신경퇴행성 장애의 한 가지 특징은 비정상적으로 증가된 타우 인산화이다.
미세소관 네트워크는 세포의 형태를 유지하고 수송 기관을 작동시키는데 필요한 구조적 온전성을 포함하여 세포 내에서 다수의 중요한 과정에 연루된다. 미세소관에 타우의 결합이 미세소관을 안정화시키기 때문에, 타우는 이들 과정들 중 일부의 주요 매개체일 가능성이 있으며, 신경퇴행성 질환에서 정상 타우의 파괴는 이들 주요 세포 과정의 일부를 파괴할 수 있다.
타우가 신경퇴행성 증후군에서 중요할 수 있다는 초기 지표 중 하나는 타우가 알츠하이머병에서 신경섬유 내포물 중 주요 성분이라는 인식이었다. 사실상, 신경섬유 내포물은 하이퍼인산화된 타우 단백질의 응집물이다. 아밀로이드 베타 함유 플라크와 함께, 신경섬유 내포물은 알츠하이머병의 홀마크이며, 인지 손상과 유의미하게 연관된다. AD에서 타우 축적의 95%는 뉴런 과정 (neuronal process)에서 발견되며 신경증 이영양증이라 한다. 이러한 미세소관 연관된 단백질이 미세소관으로부터 이탈되어 단백질 축적을 형성하는 과정(들)과 이것이 뉴런의 독성과 어떻게 관련되는지는 잘 알려지지 않았다.
뉴런의 타우 내포물은 알츠하이머병, 뿐만 아니라 전측두엽 치매 (FTD), PSP, 및 CBD의 서브셋의 병리적 특징이다. 타우 및 신경퇴행 사이의 연관성은, 타우 유전자에서의 돌연변이가 FTD의 서브셋을 유발한다는 발견에 의해 확고해졌다. 이들 유전적 데이터는 또한 타우의 3R:4R 비의 중요성을 강조했다. FTD를 유발하는 많은 타우 돌연변이는 타우 스플라이싱의 변화로 이어지고, 이것은 엑손 10의 우선적인 포함을 야기하고 따라서 증가된 4R 타우로 이어진다. 전체 타우 수준은 정상이다. 타우 동형체 변화 또는 아미노산 변화 또는 이 둘 모두가 신경퇴행을 유발하는지는 여전히 알려지지 않았다. 최근 데이타는, PSP가 또한 증가된 4R:3R 타우 비와 연관될 수 있으며 따라서 유사한 스플라이싱 전략을 잘 받아들일 수 있음을 시사한다.
신경퇴행에 대한 타우 비의 영향을 이해하는 것을 돕기 위해, 스플라이싱 타우 돌연변이 (N279K) 중 하나를 기초로 한 마우스 모델을, 타우 프로모터 및 엑손 10의 플랭킹된 인트론 서열을 포함하는 미니유전자를 사용하여 생산했다. 인간에서와 같이, 이들 마우스는 WT 타우를 발현시키는 유전자이식물과 비교하여 4R 타우 수준의 증가를 실증하고 행동 및 운동 이상 뿐만 아니라 뇌 및 척수에서 응집된 타우의 축적을 나타낸다.
단백질 "타우"는 알츠하이머병, 전측두엽 치매, 진행성 핵상 마비, 피질기저 신경절 변성, 권투선수 치매, 염색체와 관련된 파킨슨증, 라이티코-보딕 질환, 매듭-우세한 치매, 신경절교종, 신경절세포종, 수막혈관종증, 아급성 경화 범뇌염, 납 독성뇌증, 결절성 경화증, 할러포르덴-슈파츠 질환, 피크병, 은친화성 입자 질환, 피질기저 퇴행증 또는 전두측두 변성 등을 포함하는 다수의 뇌 질환과 연관되었다. 타우-연관된 장애 예컨대 AD는 노인에서 가장 공통적인 치매 원인이다. AD는 전세계적으로 어림잡아 1500만명이 걸렸으며 85세를 초과하는 연령의 모집단 중 40%가 걸렸다. AD는 2가지 병리적 홀마크: 타우 신경섬유 내포물 (NFT) 및 아밀로이드-β (Aβ) 플라크를 특징으로 한다.
발작 장애에서, 뇌의 전기적 활성이 주기적으로 교란되어 어느 정도의 일시적 뇌 기능이상을 초래한다. 정상 뇌 기능은 규칙적인, 조직화된, 통합된 전기 자극 방출을 필요로 한다. 전기 자극은 뇌가 척수, 신경, 및 근육 뿐만 아니라 그 자체 내에서 소통하게 한다. 발작은 뇌의 전기적 활성이 파괴될 때 일어날 수 있다. 2가지 기본적 발작 유형이 있다: 간질성 발작 및 비간질성 발작. 간질성 발작은 분명한 원인 또는 자극이 없으며 반복적으로 일어난다. 비간질성 발작은 장애 또는 뇌를 자극하는 또 하나의 병태에 의해 유발되거나 촉발된다. 어떤 정신적 장애는 심인성 비간질성 발작이라고 하는 발작 증상을 유발할 수 있다.
알츠하이머병(AD)은 늦은 개시 발작에 대한 임상 위험 인자인 것으로 알려졌다. 다중 AD 마우스 모델은 이러한 증가된 발작 감수성을 재현한다. 최근 5년 내에, 많은 이들 AD 모델이 마우스 타우 녹아웃 (타우-/-)의 세팅에서 연구되었다. 증가된 발작 감수성은 이들 아밀로이드-축적 타우 녹아웃 라인에서 개선되었다. 게다가, 타우-/- 단독으로는 흥미롭게도 화학적으로 유도된 발작에 대해 보호되는 것처럼 보인다.
항경련제는 발작의 공통적인 치료 요법에 해당한다. 그러나, 항경련제는 발작 장애가 있는 사람의 상당한 퍼센트에서 비효과적이며 이들 개체를 위해서는, 수술이 유일한 방안이다. 발작 장애 및 신경퇴행성 질환을 위한 이용가능한 치료의 결핍 가운데, 본 구현예의 특정 방법은 동물에서 타우의 발현을 억제하거나 타우의 스플라이싱을 조절함으로써 발작 장애 및 신경퇴행성 질환을 치료하거나, 예방하거나 개선시키는 방법을 제공한다.
요약
세포, 조직, 및 동물에서 타우 mRNA의 스플라이싱을 조절하는 방법이 본원에서 제공된다. 세포, 조직, 및 동물에서 타우 mRNA의 발현 생성물을 조절하는 방법이 또한 본원에서 제공된다.
어떤 구현예에서, 조절은 세포 또는 조직에서 일어날 수 있다. 어떤 구현예에서, 세포 또는 조직은 동물 내에 있는 것이다. 어떤 구현예에서, 동물은 인간이다. 어떤 구현예에서, 타우 mRNA 수준은 감소된다. 어떤 구현예에서, 타우 단백질 수준은 감소된다. 어떤 구현예에서, 타우 mRNA의 스플라이싱이 조절된다. 어떤 구현예에서, 타우 mRNA의 발현 생성물이 조절된다. 어떤 구현예에서, 타우 엑손 10의 배제가 촉진된다. 어떤 구현예에서, 타우 RNA 또는 단백질의 4R 동형체의 발현이 감소된다. 어떤 구현예에서, 타우 RNA 또는 단백질의 3R 동형체의 발현이 증가된다. 어떤 구현예에서, 타우 RNA 또는 단백질의 4R 동형체의 발현이 감소되고 타우 RNA 또는 단백질의 3R 동형체의 발현이 증가된다. 어떤 구현예에서, 하이퍼인산화된 타우가 감소된다. 그와 같은 감소 및 조절은 시간-의존 방식 또는 용량-의존 방식으로 조절될 수 있다.
몇 개의 구현예는 타우-연관된 장애의 1 이상의 증상을 감소시키거나 줄이는 방법에 관한 것이다. 어떤 구현예에서, 증상은 발작이다. 어떤 구현예에서, 타우-연관된 장애 또는 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병, 전측두엽 치매, 진행성 핵상 마비, 피질기저 신경절 변성, 권투선수 치매, 염색체와 관련된 파킨슨증, 라이티코-보디그 질환, 매듭-우세한 치매, 신경절교종, 신경절세포종, 수막혈관종증, 아급성 경화 범뇌염, 납 독성뇌증, 결절성 경화증, 할러포르덴-슈파츠 질환, 피크병, 은친화성 입자 질환, 피질기저 퇴행증 또는 전두측두 변성이다. 어떤 구현예는 대상체의 발작을 높은 4R:3R 타우 동형체 비로 줄이는 방법에 관한 것이다. 어떤 구현예에서, 본 방법은 안티센스 제제를 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 제제는 타우의 발현을 줄이거나 대상체의 중추신경계에서 4R:3R 타우 비를 줄인다.
타우와 연관된 질환, 장애, 및 병태를 예방, 치료, 및 개선하는데 유용한 방법이 또한 제공된다. 어떤 구현예에서, 타우와 연관된 그와 같은 질환, 장애, 및 병태는 신경퇴행성 질환이다. 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 질환은 알츠하이머병, 전두측두 치매 (FTD), FTDP-17, 진행성 핵상 마비, 만성적 외상성 뇌병증, 간질, 또는 드라벳 증후군 중 임의의 것이다. 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 질환의 1 이상의 증상은 개선, 예방, 또는 지연된다 (진행이 느려진다). 어떤 구현예에서, 증상은 기억 상실, 불안, 또는 운동 기능의 상실. 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 기능은 개선된다. 어떤 구현예에서, 신경섬유 내포물은 감소된다.
그와 같은 질환, 장애, 및 병태는 1 이상의 위험 인자, 원인, 또는 결과를 공동으로 가질 수 있다. 신경퇴행성 질환의 발달에 대한 어떤 위험 인자 및 원인은 유전적 소인 및 노령을 포함한다.
어떤 구현예에서, 치료 방법은 타우 안티센스 화합물을 그것이 필요한 개체에게 투여하는 것을 포함한다. 안티센스 화합물은 타우의 발현을 억제하거나 타우의 스플라이싱을 조절할 수 있다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 단일가닥 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 단일가닥 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 타우 핵산에 대해 상보적이다.
어떤 구현예에서, 본 발명은 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 제공한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 올리고뉴클레오타이드는 타우 전사체에 대해 상보적이다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 엑손 10을 포함하는 타우 전사체의 표적 영역에 대해 상보적이다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 엑손 10에 인접한 인트론을 포함하는 타우 전사체의 표적 영역에 대해 상보적이다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 엑손 10 및 엑손 10의 다운스트림에 인접한 인트론을 포함하는 타우 전사체의 표적 영역에 대해 상보적이다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 엑손 10 및 엑손 10의 업스트림에 인접한 인트론을 포함하는 타우 전사체의 표적 영역에 대해 상보적이다. 어떤 구현예에서, 타우 전사체는 엑손 10에 대한 엑손 스플라이스 사일런서를 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 엑손 10의 포함을 억제한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 엑손 10의 스킵핑을 촉진한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 3R 타우 mRNA는 증가된다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 엑손 10 mRNA를 갖는 타우 mRNA는 줄어든다. 어떤 구현예에서, 타우 단백질의 4R 동형체는 줄어든다. 어떤 구현예에서, 타우 단백질의 3R 동형체는 증가된다.
상기 넘버링된 구현예 중 임의의 것을 비제한적으로 포함하는 어떤 구현예에서, 타우 전사체는 인간 내의 것이다. 상기 넘버링된 구현예 중 임의의 것을 비제한적으로 포함하는 어떤 구현에에서, 타우 전사체는 마우스 내의 것이다.
본 개시내용은 하기 비제한적인 넘버링된 구현예를 제공한다:
구현예 1. 8 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되고 타우 전사체의 동등 길이의 표적 영역에 대해 상보적인 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 상보적 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물.
구현예 2. 구현예 1의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 상보적 영역은 표적 영역에 대해 100% 상보적이다.
구현예 3. 구현예 1 또는 2의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열의 상보적 영역은 적어도 10 개의 인접 핵염기를 포함한다.
구현예 4. 구현예 1 또는 2의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열의 상보적 영역은 적어도 15 개의 인접 핵염기를 포함한다.
구현예 5. 구현예 1 또는 2의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열의 상보적 영역은 적어도 18 개의 인접 핵염기를 포함한다.
구현예 6. 구현예 1-5 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 올리고뉴클레오타이드의 전장에 대해 측정된 바와 같이 타우 전사체의 동등-길이 영역에 대해 적어도 80% 상보적이다.
구현예 7. 구현예 1-5 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 올리고뉴클레오타이드의 전장에 대해 측정된 바와 같이 타우 전사체의 동등-길이 영역에 대해 적어도 90% 상보적이다.
구현예 8. 구현예 1-5 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 올리고뉴클레오타이드의 전장에 대해 측정된 바와 같이 타우 전사체의 동등-길이 영역에 대해 100% 상보적이다.
구현예 9. 구현예 1-8 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 타우 전사체의 엑손 10 내에 있다.
구현예 10. 구현예 1-8 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 타우 전사체의 인트론 9 내에 있다.
구현예 11. 구현예 1-8 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 타우 전사체의 인트론 10 내에 있다.
구현예 12. 구현예 1-8 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 인트론 9의 일부 및 엑손 10의 일부를 포함한다.
구현예 13. 구현예 1-8 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 엑손 10의 일부 및 인트론 10의 일부를 포함한다.
구현예 14. 구현예 1-8 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 엑손 10의 5'-말단에서 엑손 10의 일부 및 인트론의 일부를 포함한다.
구현예 15. 구현예 1-8 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 엑손 10의 3'-말단에서 엑손 10의 일부 및 인트론의 일부를 포함한다.
구현예 16. 구현예 1-15 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121708 및 핵염기 122044 내에 있다.
구현예 17. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121796 및 핵염기 122044 내에 있다.
구현예 18. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121796 및 핵염기 121885 내에 있다.
구현예 19. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121873 및 핵염기 121898 내에 있다.
구현예 20. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121869 및 핵염기 121943 내에 있다.
구현예 21. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 122020 및 핵염기 122044 내에 있다.
구현예 22. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121881 및 핵염기 121898 내에 있다.
구현예 23. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121880 및 핵염기 121897 내에 있다.
구현예 24. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121879 및 핵염기 121896 내에 있다.
구현예 25. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121878 및 핵염기 121895 내에 있다.
구현예 26. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121877 및 핵염기 121894 내에 있다.
구현예 27. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121876 및 핵염기 121893 내에 있다.
구현예 28. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121875 및 핵염기 121892 내에 있다.
구현예 29. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121874 및 핵염기 121891 내에 있다.
구현예 30. 구현예 1-9 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121873 및 핵염기 121890 내에 있다.
구현예 31. 구현예 1-15 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 8-200의 서열목록번호 중 어떤 것의 핵염기 서열을 포함한다.
구현예 32. 구현예 1-15 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 8-200의 서열목록번호 중 어떤 것의 핵염기 서열로 구성된다.
구현예 33. 구현예 1-15 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 하기의 서열목록번호 중 어떤 것의 핵염기 서열을 포함한다: 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 또는 153.
구현예 34. 구현예 1-15 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 하기의 서열목록번호 중 어떤 것의 핵염기 서열로 구성된다: 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 또는 153.
구현예 35. 구현예 1-15의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 하기의 서열목록번호 중 어떤 것의 핵염기 서열을 포함한다: 31, 33, 34, 35, 36, 37, 45, 72, 79, 82, 83, 97, 106, 107, 112, 113, 130, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 157, 158, 160, 또는 200.
구현예 36. 구현예 1-15 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 하기의 서열목록번호 중 어떤 것의 핵염기 서열로 구성된다: 31, 33, 34, 35, 36, 37, 45, 72, 79, 82, 83, 97, 106, 107, 112, 113, 130, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 157, 158, 160, 또는 200.
구현예 37. 구현예 1-36 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다.
구현예 38. 구현예 37의 화합물로서, 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드는 변형된 당 모이어티를 포함한다.
구현예 39. 구현예 37의 화합물로서, 적어도 하나의 변형된 당 모이어티는 2'-치환된 당 모이어티이다.
구현예 40. 구현예 39의 화합물로서, 상기 적어도 하나의 2'-치환된 당 모이어티의 2'-치환체는 하기 중으로부터 선택된다: 2'-OMe, 2'-F, 및 2'-MOE.
구현예 41. 구현예 39의 화합물로서, 상기 적어도 하나의 2'-치환된 당 모이어티의 2'-치환체는 2'-MOE이다.
구현예 42. 구현예 37-38 중 어느 하나의 화합물로서, 적어도 하나의 변형된 당 모이어티는 바이사이클릭 당 모이어티이다.
구현예 43. 구현예 42의 화합물로서, 적어도 하나의 바이사이클릭 당 모이어티는 LNA 또는 cEt이다.
구현예 44. 구현예 37-43 중 어느 하나의 화합물로서, 적어도 하나의 당 모이어티는 당 대용물이다.
구현예 45. 구현예 44의 화합물로서, 적어도 하나의 당 대용물은 모폴리노이다.
구현예 46. 구현예 44의 화합물로서, 적어도 하나의 당 대용물은 변형된 모폴리노이다.
구현예 47. 구현예 1-46 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 5 개의 변형된 뉴클레오사이드를 포함하고, 각각은 변형된 당 모이어티를 독립적으로 포함한다.
구현예 48. 구현예 47의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 10 개의 변형된 뉴클레오사이드를 포함하고, 각각은 변형된 당 모이어티를 독립적으로 포함한다.
구현예 49. 구현예 47의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 15 개의 변형된 뉴클레오사이드를 포함하고, 각각은 변형된 당 모이어티를 독립적으로 포함한다.
구현예 50. 구현예 47의 화합물로서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오사이드이고 각각은 변형된 당 모이어티를 독립적으로 포함하고, 여기서 상기 각 변형된 뉴클레오사이드의 변형된 당 모이어티 각각은 서로 동일하다.
구현예 51. 구현예 47의 화합물로서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오사이드이고, 각각은 변형된 당 모이어티를 독립적으로 포함한다.
구현예 52. 구현예 1-51 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서로 동일한 변형된 당 모이어티를 포함하는 적어도 2 개의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다.
구현예 53. 구현예 1-52 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서로 상이한 변형된 당 모이어티를 포함하는 적어도 2 개의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다.
구현예 54. 구현예 1-53 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 5 개의 인접 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형된 영역을 포함한다.
구현예 55. 구현예 54의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 10 개의 인접 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형된 영역을 포함한다.
구현예 56. 구현예 54의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 15 개의 인접 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형된 영역을 포함한다.
구현예 57. 구현예 54의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 18 개의 인접 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형된 영역을 포함한다.
구현예 58. 구현예 54의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 20 개의 인접 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형된 영역을 포함한다.
구현예 59. 구현예 53-58 중 어느 하나의 화합물로서, 각 변형된 영역의 변형된 뉴클레오사이드는 하기 중으로부터 독립적으로 선택된 변형된 당 모이어티를 갖는다: 2'-F, 2'-OMe, 2'-MOE, cEt, LNA, 모폴리노, 및 변형된 모폴리노이다.
구현예 60. 구현예 54-59 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 영역의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 서로 동일한 변형을 포함한다.
구현예 61. 구현예 60의 화합물로서, 상기 변형된 영역의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 동일한 2'-치환된 당 모이어티를 포함한다.
구현예 62. 구현예 61의 화합물로서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드의 2'-치환된 당 모이어티는 2'-F, 2'-OMe, 및 2'-MOE로부터 선택된다.
구현예 63. 구현예 61의 화합물로서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드의 2'-치환된 당 모이어티는 2'-MOE이다.
구현예 64. 구현예 59의 화합물로서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 동일한 바이사이클릭 당 모이어티를 포함한다.
구현예 65. 구현예 64의 화합물로서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드의 바이사이클릭 당 모이어티는 LNA 및 cEt로부터 선택된다.
구현예 66. 구현예 59의 화합물로서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 당 대용물을 포함한다.
구현예 67. 구현예 66의 화합물로서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드의 당 대용물은 모폴리노이다.
구현예 68. 구현예 66의 화합물로서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드의 당 대용물은 변형된 모폴리노이다.
구현예 69. 구현예 1-68 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 뉴클레오타이드는 4 개 이상의 인접 천연 발생 뉴클레오사이드를 포함한다.
구현예 70. 구현예 1-68 중 어느 하나의 화합물로서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오사이드이다.
구현예 71. 구현예 70의 화합물로서, 각 변형된 뉴클레오사이드는 변형된 당 모이어티를 포함한다.
구현예 72. 구현예 71의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 변형된 뉴클레오사이드는 서로 동일한 변형을 포함한다.
구현예 73. 구현예 72의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 동일한 2'-치환된 당 모이어티를 포함한다.
구현예 74. 구현예 73의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 2'-치환된 당 모이어티는 2'-F, 2'-OMe, 및 2'-MOE로부터 선택된다.
구현예 75. 구현예 74의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 2'-치환된 당 모이어티는 2'-MOE이다.
구현예 76. 구현예 72의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 동일한 바이사이클릭 당 모이어티를 포함한다.
구현예 77. 구현예 76의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 바이사이클릭 당 모이어티는 LNA 및 cEt로부터 선택된다.
구현예 78. 구현예 72의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 당 대용물을 포함한다.
구현예 79. 구현예 78의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 당 대용물은 모폴리노이다.
구현예 80. 구현예 78의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 당 대용물은 변형된 모폴리노이다.
구현예 81. 구현예 1 내지 36 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 A-B2-A- B2- A-B2-A- B2-A-B2-A-B2-A2 모티프를 가지며, 여기서 각 A는 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하고, 그리고 여기서 각 B 은 2'-치환된 당 모이어티 및 비변형된 2'-데옥시 당 모이어티로부터 선택된다.
구현예 82. 구현예 81의 화합물로서, 각 A는 cEt 당 모이어티이다.
구현예 83. 구현예 81의 화합물로서, 각 A는 LNA 당 모이어티이다.
구현예 84. 구현예 81 내지 83 중 어느 하나의 화합물로서, 각 B는 비변형된 2'-데옥시 당 모이어티이다.
구현예 85. 구현예 81 내지 83 중 어느 하나의 화합물로서, 각 B는 2'-MOE 당 모이어티이다.
구현예 86. 구현예 1-85 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다.
구현예 87. 구현예 86의 화합물로서, 각 뉴클레오사이드간 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이다.
구현예 88. 구현예 86 또는 87의 화합물로서, 적어도 하나의 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다.
구현예 89. 구현예 1-85 중 어느 하나의 화합물로서, 각 뉴클레오사이드간 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이고, 그리고 여기서 각 뉴클레오사이드간 연결은 동일한 변형을 포함한다.
구현예 90. 구현예 89의 화합물로서, 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다.
구현예 91. 구현예 86의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 4 개의 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다.
구현예 92. 구현예 86의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 5 개의 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다.
구현예 93. 구현예 86의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 6 개의 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다.
구현예 94. 구현예 86의 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 7 개의 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다.
구현예 95. 구현예 91 내지 94 중 어느 하나의 화합물로서, 각각의 잔존 뉴클레오사이드간 연결은 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결이다.
구현예 96. 구현예 1-85 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 화합물은 NSNSNONSNONSNONSNONSNONSNONSNONSNSN 뉴클레오사이드간 연결 모티프를 가지며, 여기서 각 N은 뉴클레오사이드를 나타내고, 각 S는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 그리고 각 O는 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 나타낸다.
구현예 97. 구현예 1-85 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 화합물은 NSNONONONSNSNSNSNSNSNSNSNONONONSNSN 뉴클레오사이드간 연결 모티프를 가지며, 여기서 각 N은 뉴클레오사이드를 나타내고, 각 S는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 그리고 각 O는 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 나타낸다.
구현예 98. 구현예 1-97 중 어느 하나의 화합물로서, 적어도 하나의 콘주게이트를 포함한다.
구현예 99. 구현예 1-98 중 어느 하나의 화합물로서, 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
구현예 100. 구현예 1-99 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 화합물은 타우 전사체의 스플라이싱을 조절한다.
구현예 101. 구현예 1-99 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 화합물은 4R 타우 동형체의 발현을 줄인다.
구현예 102. 구현예 1-99 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 화합물은 엑손 10을 포함하는 타우 mRNA의 발현을 줄인다.
구현예 103. 구현예 1-99 중 어느 하나의 화합물로서, 상기 화합물은 엑손 10 mRNA로부터 인코딩된 아미노산을 포함하는 타우 단백질의 발현을 줄인다.
구현예 104. 구현예 1-8 또는 30-103 중 어느 하나의 화합물로서, 서열목록번호 8-200에서 제시된 서열 중 임의의 것을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
구현예 105. 구현예 1-8 또는 30-103 중 어느 하나의 화합물로서, 서열목록번호 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 또는 153에서 제시된 서열 중 임의의 것을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
구현예 106. 구현예 1-8 또는 30-103 중 어느 하나의 화합물로서, 서열목록번호 8-200에서 제시된 서열 중 임의의 것으로 구성된 핵염기 서열을 갖는다.
구현예 107. 구현예 1-8 또는 30-103 중 어느 하나의 화합물로서, 서열목록번호 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 또는 153에서 제시된 서열 중 임의의 것으로 구성된 핵염기 서열을 갖는다.
구현예 108. 구현예 1-107 중 어느 하나의 화합물을 포함하는 이중가닥 화합물.
구현예 109. ISIS 670011로 구성된 화합물.
구현예 110. ISIS 670012로 구성된 화합물.
구현예 111. ISIS 670013로 구성된 화합물.
구현예 112. ISIS 670014로 구성된 화합물.
구현예 113. ISIS 670015로 구성된 화합물.
구현예 114. ISIS 670016로 구성된 화합물.
구현예 115. ISIS 670017로 구성된 화합물.
구현예 116. ISIS 670018로 구성된 화합물.
구현예 117. ISIS 670019로 구성된 화합물.
구현예 118. ISIS 670020로 구성된 화합물.
구현예 119. ISIS 670021로 구성된 화합물.
구현예 120. ISIS 670022로 구성된 화합물.
구현예 121. ISIS 670023로 구성된 화합물.
구현예 122. ISIS 670024로 구성된 화합물.
구현예 123. ISIS 670025로 구성된 화합물.
구현예 124. ISIS 670026로 구성된 화합물.
구현예 125. ISIS 670027로 구성된 화합물.
구현예 126. ISIS 670028로 구성된 화합물.
구현예 127. ISIS 678329로 구성된 화합물.
구현예 128. ISIS 678330로 구성된 화합물.
구현예 129. ISIS 678331로 구성된 화합물.
구현예 130. ISIS 678332로 구성된 화합물.
구현예 131. ISIS 678333로 구성된 화합물.
구현예 132. ISIS 678334로 구성된 화합물.
구현예 133. ISIS 693840로 구성된 화합물.
구현예 134. ISIS 693841로 구성된 화합물.
구현예 135. ISIS 693842로 구성된 화합물.
구현예 136. ISIS 693843로 구성된 화합물.
구현예 137. ISIS 693844로 구성된 화합물.
구현예 138. ISIS 693845로 구성된 화합물.
구현예 139. ISIS 693846로 구성된 화합물.
구현예 140. ISIS 693847로 구성된 화합물.
구현예 141. ISIS 693848로 구성된 화합물.
구현예 142. ISIS 693849로 구성된 화합물.
구현예 143. ISIS 549577로 구성된 화합물.
구현예 144. ISIS 549580로 구성된 화합물.
구현예 145. ISIS 549581로 구성된 화합물.
구현예 146. ISIS 549582로 구성된 화합물.
구현예 147. ISIS 549583로 구성된 화합물.
구현예 148. ISIS 549584로 구성된 화합물.
구현예 149. ISIS 549585로 구성된 화합물.
구현예 150. ISIS 549586로 구성된 화합물.
구현예 151. ISIS 617341로 구성된 화합물.
구현예 152. ISIS 617351로 구성된 화합물.
구현예 153. ISIS 617352로 구성된 화합물.
구현예 154. ISIS 617353로 구성된 화합물.
구현예 155. ISIS 617358로 구성된 화합물.
구현예 156. ISIS 617360로 구성된 화합물.
구현예 157. ISIS 617361로 구성된 화합물.
구현예 158. ISIS 617362로 구성된 화합물.
구현예 159. 세포에서 타우 전사체의 스플라이싱을 조절하는 방법으로서, 상기 세포를 구현예 1-158 중 어느 하나에 따른 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다.
구현예 160. 구현예 158의 방법으로서, 상기 세포는 시험관내에 있는 것이다.
구현예 161. 구현예 158의 방법으로서, 상기 세포는 동물의 것이다.
구현예 162. 세포에서 타우 단백질의 발현을 조절하는 방법으로서, 상기 세포를 구현예 1-158 중 어느 하나에 따른 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다.
구현예 163. 구현예 162의 방법으로서, 타우 단백질의 4R 동형체의 발현은 줄어든다.
구현예 164. 구현예 162의 방법으로서, 타우 단백질의 3R 동형체의 발현은 증가된다.
구현예 165. 구현예 162 내지 164 중 어느 하나의 방법으로서, 상기 세포는 시험관내에 있는 것이다.
구현예 166. 구현예 162 내지 164 중 어느 하나의 방법으로서, 상기 세포는 동물의 것이다.
구현예 167. 타우-연관된 장애와 연관된 1 이상의 증상을 감소 또는 개선하는 방법으로서, 세포를 구현예 1-158 중 어느 하나에 따른 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다.
구현예 168. 구현예 167의 방법으로서, 상기 증상은 발작이다.
구현예 169. 구현예 167-168 의 방법으로서, 상기 세포는 동물의 것이다.
구현예 170. 구현예 1-158 중 어느 하나에 따른 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
구현예 171. 구현예 170의 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제는 멸균된 염수이다.
구현예 172. 구현예 170 또는 171의 약제학적 조성물을 동물에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
구현예 173. 구현예 172의 방법으로서, 상기 투여는 주사에 의한 것이다.
구현예 174. 구현예 172 또는 173에 있어서, 상기 투여는 전신 투여이다.
구현예 175. 구현예 172 또는 173에 있어서, 상기 투여는 CNS로이다.
구현예 176. 구현예 172-175 중 어느 하나의 방법으로서, 상기 동물은 1 이상의 타우-연관된 장애와 연관된 1 이상의 증상을 갖는다.
구현예 177. 구현예 176의 방법으로서, 상기 투여는 1 이상의 타우-연관된 장애와 연관된 1 이상의 증상의 개선을 야기한다.
구현예 178. 구현예 172-175 중 어느 하나의 방법으로서, 상기 동물은 알츠하이머병과 연관된 1 이상의 증상을 갖는다.
구현예 179. 구현예 178의 방법으로서, 상기 투여는 알츠하이머병과 연관된 1 이상의 증상의 개선을 야기한다.
구현예 180. 구현예 172-179 중 어느 하나의 방법으로서, 상기 동물은 마우스이다.
구현예 181. 구현예 172-179 중 어느 하나의 방법으로서, 상기 동물은 인간이다.
구현예 182. 타우-연관된 장애의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조를 위한, 구현예 1 내지 158 중 어느 하나의 화합물 또는 구현예 170-171의 조성물의 용도.
구현예 183. 타우-연관된 장애와 연관된 1 이상의 증상의 개선에 사용하기 위한 약제의 제조를 위한, 구현예 1 내지 158 중 어느 하나의 화합물 또는 구현예 170-171의 조성물의 용도.
구현예 184. 구현예 1 내지 183 중 어느 한 항의 화합물, 조성물, 또는 방법으로서, 상기 핵염기 서열은 서열목록번호: 45, 66, 68, 69, 또는 200에서 제시된 핵염기 서열로 구성되지 않는다.
구현예 185. 구현예 1 내지 183 중 어느 한 항의 화합물, 조성물, 또는 방법으로서, 상기 핵염기 서열은 핵염기 서열 CCAGCTTCTTATTAATTATC 또는 TAAGATCCAGCTTCTTATTA로 구성되지 않는다.
구현예 186. 구현예 1 내지 183 중 어느 한 항의 화합물, 조성물, 또는 방법으로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121828 및 핵염기 121847 내에 있지 않다.
구현예 187. 구현예 1 내지 183 중 어느 한 항의 화합물, 조성물, 또는 방법으로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121834 및 핵염기 121853 내에 있지 않다.
구현예 188. 구현예 1 내지 183 중 어느 한 항의 화합물, 조성물, 또는 방법으로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121840 및 핵염기 121859 내에 있지 않다.
구현예 189. 구현예 1 내지 183 중 어느 한 항의 화합물, 조성물, 또는 방법으로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121924 및 핵염기 121941 내에 있지 않다.
구현예 190. 구현예 1 내지 183 중 어느 한 항의 화합물, 조성물, 또는 방법으로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121012 및 핵염기 121029 내에 있지 않다.
구현예 191. 구현예 1 내지 183 중 어느 한 항의 화합물, 조성물, 또는 방법으로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121020 및 핵염기 121037 내에 있지 않다.
구현예 192. 구현예 1 내지 183 중 어느 한 항의 화합물, 조성물, 또는 방법으로서, 상기 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121024 및 핵염기 121041 내에 있지 않다.
도 1은 타우 동형체의 그래프로 된 묘사를 도시한다. 동형체는 튜불린-결합 도메인 (단백질의 C-말단 반에서 위치한 3 또는 4 개의 반복체)의 수에서 서로 상이할 수 있고 3R 또는 4R 타우 동형체, 각각으로 불린다. 단백질의 N-말단부 (돌출 도메인)에서 1 또는 2 개의 29-아미노-산-길이, 크게 산성인 삽입물의 존재 또는 부재에서 또한 차이가 있을 수 있다. 돌출 도메인 및 미세소관-결합 도메인 사이에 염기성 프롤린-풍부 영역이 있다.
달리 구체적인 정의가 제공되지 않으면, 본원에서 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 약효 및 약제학적 화학과 관련하여 사용된 명명법 및 그것들의 절차 및 기술은 잘 알려져 있고 당해기술에서 통상적으로 사용된 것들이다. 표준 기술 화학적 합성, 및 화학적 분석을 위해 사용될 수 있다. 어떤 그와 같은 기술 및 절차는 예를 들면 하기에서 발견될 수 있다: "Carbohydrate Modifications in Antisense Research" Edited by Sangvi and Cook, American Chemical Society, Washington D.C., 1994; "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, Pa., 21st edition, 2005; and "Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications" Edited by Stanley T. Crooke, CRC Press, Boca Raton, Florida; and Sambrook 등, "Molecular Cloning, A laboratory Manual," 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, 이들은 임의의 목적을 위해 참고로 본원에 편입되어 있다. 허용되는 경우, 본 개시내용에서 명세서에서 언급된 모든 특허들, 적용, 공개 출원 및 다른 공보 및 다른 데이타는 그 전체가 참고로 본원에 편입되어 있다.
달리 지적되지 않으면, 하기 용어들은 하기 의미를 갖는다:
본원에서 사용된 바와 같이, "뉴클레오사이드"는 핵염기 모이어티 및 당 모이어티를 포함하는 화합물을 의미한다. 뉴클레오사이드는, 비제한적으로, 천연 발생 뉴클레오사이드 (DNA 및 RNA에서 발견됨) 및 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 뉴클레오사이드는 포스페이트 모이어티에 연결될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "화학적 변형"은 천연 발생 대응물과 비교할 때 화합물에서의 화학적 차이를 의미한다. 올리고뉴클레오타이드에 관하여, 화학적 변형은 핵염기 서열에서 오로지 차이를 포함하지 않는다. 올리고뉴클레오타이드의 화학적 변형은 뉴클레오사이드 변형 (당 모이어티 변형 및 핵염기 변형 포함) 및 뉴클레오사이드간 연결 변형을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "푸라노실"은 4 개의 탄소 원자 및 1 개의 산소 원자를 포함하는 5-원 고리를 포함하는 구조를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "천연 발생 당 모이어티"는 천연 발생 RNA에서 발견된 바와 같은 리보푸라노실 또는 천연 발생 DNA에서 발견된 바와 같은 데옥시리보푸라노실을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "당 모이어티"는 뉴클레오사이드의 천연 발생 당 모이어티 또는 변형된 당 모이어티를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "변형된 당 모이어티"는 치환된 당 모이어티, 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 당 모이어티, 또는 당 대용물을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "치환된 당 모이어티"는 천연 발생 당 모이어티와는 상이한 적어도 하나의 치환체 그룹을 포함하는 푸라노실을 의미한다. 치환된 당 모이어티는 2'-위치, 3'-위치, 5'-위치 및/또는 4'-위치에서 치환체를 포함하는 푸라노실을 비제한적으로 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "2'-치환된 당 모이어티"는 H 또는 OH 이외의 2'-위치에서 치환체를 포함하는 푸라노실을 의미한다. 달리 지적되지 않으면, 2'-치환된 당 모이어티는 바이사이클릭 당 모이어티가 아니다 (즉, 2'-치환된 당 모이어티의 2'-치환체는 푸라노실 고리의 또 하나의 원자에 대한 브릿지를 형성하지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, "MOE"는 -OCH2CH2OCH3를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "바이사이클릭 당 모이어티"는 4 내지 7원 고리의 2개의 원자들을 연결하여 제2 고리를 형성함으로써 바이사이클릭 구조를 야기하는 다리를 포함하는 4 내지 7원 고리(비제한적으로 푸라노실 포함함)를 포함하는 변형된 당 모이어티를 의미한다. 어떤 구현예에서, 상기 4 내지 7원 고리는 당 고리이다. 어떤 구현예에서, 상기 4 내지 7원 고리는 푸라노실이다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 상기 다리는 푸라노실의 2'-탄소 및 4'-탄소를 연결한다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "당 대용물"은 푸라노실을 포함하지 않고 뉴클레오사이드의 천연 발생 당 모이어티를 대체할 수 있는 구조를 의미하고, 이로써 수득한 뉴클레오사이드는 (1) 올리고뉴클레오타이드로의 편입 및 (2) 상보적 뉴클레오사이드와의 하이브리드화를 가능하게 한다. 그와 같은 구조는 푸라노실보다 상이한 원자를 포함하는 고리 (예를 들면, 4, 6, 또는 7-원 고리); 비-산소 원자 (예를 들면, 탄소, 황, 또는 질소)에 의한 푸라노실의 산소의 대체; 또는 원자의 수의 변화 및 산소의 대체 둘 모두를 포함한다. 그와 같은 구조는 치환된 당 모이어티를 대신하는 것 (예를 들면, 추가의 치환체를 임의로 포함하는 6-원 카보사이클릭 바이사이클릭 당 대용물)에 상응하는 치환을 또한 포함할 수 있다. 당 대용물은 또한 더 많은 복합 당 대체물질 (예를 들면, 펩타이드 핵산의 비-고리계)를 포함한다. 당 대용물은 비제한적으로 모폴리노, 변형된 모폴리노, 사이클로헥세닐 및 사이클로헥시톨을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "뉴클레오타이드"는 포스페이트 연결 그룹을 추가로 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "연결된 뉴클레오사이드"는 포스페이트 연결에 의해 연결되거나 그렇지 않을 수 있고 따라서 비제한적으로 "연결된 뉴클레오타이드"를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "연결된 뉴클레오사이드"는 연속적 서열로 연결된 뉴클레오사이드이다 (즉 추가의 뉴클레오사이드는 연결된 것들 사이에 존재하지 않는다).
본원에서 사용된 바와 같이, "핵염기"는 올리고뉴클레오타이드에 편입될 수 있는 뉴클레오사이드를 만들기 위해 당 모이어티에 연결될 수 있는 원자의 그룹을 의미하고, 상기 원자의 그룹은 또 하나의 올리고뉴클레오타이드 또는 핵산의 상보적 천연 발생 핵염기와 결합할 수 있다. 핵염기는 천연 발생일 수 있거나 변형될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "헤테로사이클릭 염기" 또는 "헤테로사이클릭 핵염기"는 헤테로사이클릭 구조를 포함하는 핵염기를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어들, "비변형된 핵염기" 또는 "천연 발생 핵염기"는 하기의 RNA 또는 DNA의 천연 발생 헤테로사이클릭 핵염기를 의미한다: 퓨린 염기 아데닌 (A) 및 구아닌 (G), 및 피리미딘 염기 티민 (T), 시토신 (C) (i5-메틸 C 포함), 및 우라실 (U).
본원에서 사용된 바와 같이, "변형된 핵염기"는 천연 발생 핵염기가 아닌 임의의 핵염기를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "변형된 뉴클레오사이드"는 천연 발생 RNA 또는 DNA 뉴클레오사이드와 비교된 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 변형된 뉴클레오사이드는 변형된 당 모이어티 및/또는 변형된 핵염기를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "바이사이클릭 뉴클레오사이드" 또는 "BNA"는 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "구속된 에틸 뉴클레오사이드" 또는 "cEt"는 4'-CH(CH3)-O-2' 브릿지를 포함하는 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "잠겨진 핵산 뉴클레오사이드" 또는 "LNA"는 4'-CH2-O-2'브릿지를 포함하는 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "2'-치환된 뉴클레오사이드"는 H 또는 OH 이외의 2'-위치에서 치환체를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 달리 지적되지 않으면, 2'-치환된 뉴클레오사이드는 바이사이클릭 뉴클레오사이드가 아니다.
본원에서 사용된 바와 같이, "2-데옥시뉴클레오사이드"는 천연 발생 데옥시리보뉴클레오사이드 (DNA)에서 발견되는 바와 같이, 2'-H 푸라노실 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 어떤 구현예에서, 2'-데옥시뉴클레오사이드는 변형된 핵염기를 포함할 수 있거나 RNA 핵염기 (예를 들면, 우라실)를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "올리고뉴클레오타이드"는 복수의 연결된 뉴클레오사이드를 포함하는 화합물을 의미한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 비변형된 리보뉴클레오사이드 (RNA) 및/또는 비변형된 데옥시리보뉴클레오사이드 (DNA) 및/또는 1 이상의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이 "올리고뉴클레오사이드"는, 뉴클레오사이드간 연결의 어떤 것도 인 원자를 함유하지 않는 올리고뉴클레오타이드를 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 올리고뉴클레오타이드는 올리고뉴클레오사이드를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "변형된 올리고뉴클레오타이드"는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드 및/또는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이 "뉴클레오사이드간 연결"은 올리고뉴클레오타이드에서 인접한 뉴클레오사이드 사이의 공유 결합을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이 "천연 발생 뉴클레오사이드간 연결"은 3' 내지 5' 포스포디에스테르 연결을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "변형된 뉴클레오사이드간 연결"은 천연 발생 뉴클레오사이드간 연결 이외의 임의의 뉴클레오사이드간 연결을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "올리고머 화합물"은 2 이상의 하부구조를 포함하는 폴리머 구조를 의미한다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 1 이상의 콘주게이트 그룹 및/또는 말단기를 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오타이드로 구성된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "말단기"는 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단 또는 5' 말단 중 하나 또는 둘 모두에 부착된 1 이상의 원자를 의미한다. 어떤 구현예에서 말단기는 콘주게이트 그룹이다. 어떤 구현예에서, 말단기는 1 이상의 말단기 뉴클레오사이드를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "콘주게이트"는 올리고뉴클레오타이드 또는 올리고머 화합물에 결합된 원자 또는 원자의 그룹을 의미한다. 일반적으로, 콘주게이트 그룹은 약동학적, 약력학적, 결합, 흡수, 세포성 분포, 세포성 흡수, 전하 및/또는 청소능 특성을 비제한적으로 포함하는, 부착된 화합물의 1 이상의 특성을 변형시킨다.
본원에서 사용된 바와 같이, "콘주게이트 연결 그룹"은 콘주게이트를 올리고뉴클레오타이드 또는 올리고머 화합물에 부착하기 위해 사용된 임의의 원자 또는 원자의 그룹을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "안티센스 화합물"은, 적어도 하나의 안티센스 활성이 생기는, 혼성화할 수 있는 표적 핵산에 대해 상보적인 올리고뉴클레오타이드의 적어도 부분을 포함하거나 그것으로 구성된 화합물을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "안티센스 활성"은 그것의 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 혼성화가 그 원인인 임의의 검출가능한 및/또는 측정가능한 변화를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "검출하는" 또는 "측정하는"이란, 검출 또는 측정을 위한 시험 또는 검정이 수행된다는 것을 의미한다. 그와 같은 검출 및/또는 측정으로 값이 제로일 수 있다. 따라서, 검출 또는 측정용 시험으로 활성 없음 (활성 제로)을 발현하면, 그럼에도 불구하고 상기 활성을 검출 또는 측정하는 단계가 수행되었다.
본원에서 사용된 바와 같이, "검출가능한 및/또는 측정가능한 활성"이란, 제로가 아닌 통계적으로 유의미한 활성을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "본질적으로 변하지 않는다"란, 특히 훨씬 더 변하는 또 하나의 파라미터에 대해 특정한 파라미터의 변화가 거의 없거나 없다는 것을 의미한다. 어떤 구현예에서, 파라미터는, 5% 미만 변할 때 본질적으로 변하지 않는다. 어떤 구현예에서, 파라미터는, 2-배 미만 변하지만 또 하나의 파라미터가 적어도 10-배 변한다면 본질적으로 변하지 않는다. 예를 들면, 어떤 구현예에서, 안티센스 활성은 표적 핵산의 양의 변화이다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 비-표적 핵산의 양은, 그것이 표적 핵산보다 훨씬 더 적게 변하지만 그 변화가 제로일 필요는 없다면, 본질적으로 변하지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, "발현"은, 유전자가 결국 단백질로 되는 과정을 의미한다. 발현은, 비제한적으로, 전사, 후-전사 변형 (예를 들면, 5'-캡의 스플라이싱, 폴리아데닐화, 부가), 및 번역을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "표적 핵산"은, 안티센스 화합물이 혼성화하는 핵산 분자를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "mRNA"는 단백질을 인코딩하는 RNA 분자를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "전-mRNA"는 mRNA로 완전히 가공되지 않는 RNA 전사체를 의미한다. 전-RNA는 1 이상의 인트론을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "전사체"는 DNA로부터 전사된 RNA 분자를 의미한다. 전사체는, 비제한적으로 mRNA, 전-mRNA, 및 부분적으로 가공된 RNA를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "타우 전사체"는 타우 유전자로부터 전사된 전사체를 의미한다. 어떤 구현예에서, 타우 전사체는, 뉴클레오타이드 9240000 내지 9381000로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_010783.15 (서열목록번호: 1), 또는 그것의 변이체로 나타낸다.
본원에서 사용된 바와 같이, "타우 유전자"는 타우 단백질 및 임의의 타우 단백질 동형체를 인코딩하는 유전자를 의미한다. 어떤 구현예에서, 타우 단백질 동형체는 3R 동형체 및 4R 동형체를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "3R"은 엑손 10을 포함하지 않는 타우 전사체를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "3R 타우 동형체"는 엑손 10으로부터 인코딩된 아미노산을 포함하지 않는 타우 단백질 동형체를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "4R"은 엑손 10을 포함하는 타우 전사체를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "4R 타우 동형체"는 엑손 10으로부터 인코딩된 아미노산을 포함하는 타우 단백질 동형체를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "타우-연관된 질환"은 타우와 연관된 임의의 신경학적 또는 신경퇴행성 질환를 의미한다. 타우-연관된 장애의 비-제한적인 예는 하기를 포함한다: 알츠하이머병, 진행성 핵상 마비, 권투선수 치매, 전측두엽 치매, 염색체와 관련된 파킨슨증, 라이티코-보딕 질환, 매듭-우세한 치매, 신경절교종, 신경절세포종, 수막혈관종증, 아급성 경화 범뇌염, 납 독성뇌증, 결절성 경화증, 할러포르덴-슈파츠 질환, 피크병, 피질기저 신경절 변성, 은친화성 입자 질환, 핵상 마비, 피질기저 퇴행증, 전측두엽 치매, 또는 전두측두 변성이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "타우병증"은 뇌에서 타우 단백질의 빌드-업을 특징으로 하는 장애를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "타우-특이적 억제제"는 타우에 대해 표적화된 "안티센스 화합물"을 비제한적으로 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "표적으로 하는" 또는 "에 대해 표적화된"은 특정한 표적 핵산 분자 또는 특정한 영역의 표적 핵산 분자에 대한 안티센스 화합물의 연관을 의미한다. 안티센스 화합물은, 생리적 조건 하에서 하이브리드화를 허용하도록 표적 핵산에 대해 충분히 상보적이면 표적 핵산을 표적으로 한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "핵염기 상보성" 또는 "상보성"은, 핵염기를 참조할 때, 또 하나의 핵염기와 염기 짝짓기할 수 있는 핵염기를 의미한다. 예를 들면, DNA에서, 아데닌 (A)은 티민 (T)에 대해 상보적이다. 예를 들면, RNA에서, 아데닌 (A)은 우라실 (U)에 대해 상보적이다. 어떤 구현예에서, 상보적 핵염기는 그것의 표적 핵산의 핵염기와 염기 짝짓기할 수 있는 안티센스 화합물의 핵염기를 의미한다. 예를 들면, 안티센스 화합물의 어떤 위치에 있는 핵염기가 표적 핵산의 어떤 위치에서 핵염기와 수소 결합할 수 있다면, 이때 올리고뉴클레오타이드와 표적 핵산 사이의 수소 결합의 위치는 핵염기쌍에서 상보적인 것으로 간주된다. 어떤 변형을 포함하는 핵염기는 대응물 핵염기와 쌍을 이루는 능력을 유지할 수 있고 따라서, 여전히 핵염기 상보성을 유지할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 핵염기에 관한 "비-상보적"이란, 수소 결합을 서로 형성하지 않는 한 쌍의 핵염기를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 올리고머 화합물 (예를 들면, 연결된 뉴클레오사이드, 올리고뉴클레오타이드, 또는 핵산)에 관한 "상보적"이란, 엄격한 조건 하에서 핵염기 상보성을 통해 또 하나의 올리고머 화합물 또는 그것의 영역과 혼성화하기 위한 그와 같은 올리고머 화합물 또는 그것의 영역의 용량을 의미한다. 상보적 올리고머 화합물은 각각의 뉴클레오사이드에서 핵염기 상보성을 가질 필요는 없다. 오히려, 일부 미스매치가 용인된다. 어떤 구현예에서, 상보적 올리고머 화합물 또는 영역은 핵염기의 70%에서 상보적이다 (70% 상보적). 어떤 구현예에서, 상보적 올리고머 화합물 또는 영역은 80% 상보적이다. 어떤 구현예에서, 상보적 올리고머 화합물 또는 영역은 90% 상보적이다. 어떤 구현예에서, 상보적 올리고머 화합물 또는 영역은 95% 상보적이다. 어떤 구현예에서, 상보적 올리고머 화합물 또는 영역은 100% 상보적이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "혼성화"는 상보적 올리고머 화합물 (예를 들면, 안티센스 화합물 및 그것의 표적 핵산)의 짝짓기를 의미한다. 특정한 기전에 제한되지 않으면서, 짝짓기의 가장 공통의 기전은 상보적 핵염기 사이의 왓슨-크릭, 휴그스틴 또는 역전된 휴그스틴 수소 결합일 수 있는 수소 결합을 수반한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "특이적으로 혼성화하는"이란, 또 하나의 핵산 부위에 혼성화하는 것보다 더 큰 친화성으로 하나의 핵산 부위에 혼성화하기 위한 올리고머 화합물의 능력을 의미한다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 초과의 표적 부위에 특이적으로 혼성화한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "퍼센트 상보성"은 표적 핵산의 동등-길이부에 대해 상보적인 올리고머 화합물의 핵염기의 백분율을 의미한다. 퍼센트 상보성은 올리고머 화합물의 총 길이로, 표적 핵산에서 상응하는 위치에서 핵염기에 대해 상보적인 올리고머 화합물의 핵염기의 수를 나누어서 계산된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "퍼센트 동일성"은 제 1 핵산에서 핵염기의 총수에 의해 분할된, 제 2 핵산에서의 상응하는 위체에서 핵염기와 동일한 (화학적 변형에 독립적인) 유형인 제 1 핵산에서 핵염기의 수를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "조절"은 조절 전의 분자, 기능, 또는 활성의 양 또는 품질과 비교할 때, 분자, 기능, 또는 활성의 양 또는 품질의 변화를 의미한다. 예를 들면, 조절은 유전자 발현에서 변화, 증가 (자극 또는 유도) 또는 축소감소 (억제 또는 축소)를 포함한다. 추가 예로서, 발현의 조절은 전-mRNA 처리의 스플라이스 부위 선택의 변화를 포함할 수 있고, 조절의 부재에서의 양과 비교하여 특정한 스플라이스 -변이체의 절대적인 또는 상대적인 양이 변한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "모티프"는 올리고머 화합물 또는 그것의 영역에서 화학적 변형의 패턴을 의미한다. 모티프는 어떤 뉴클레오사이드 및/또는 올리고머 화합물의 어떤 연결 그룹에서의 변형에 의해 규정될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "뉴클레오사이드 모티프"는 올리고머 화합물 또는 그것의 영역에서 뉴클레오사이드 변형의 패턴을 의미한다. 그와 같은 올리고머 화합물의 연결은 변형 또는 비변형될 수 있다. 달리 지적되지 않으면, 뉴클레오사이드를 단지 기재하는 본원의 모티프는 뉴클레오사이드 모티프인 것으로 의도된다. 따라서, 그와 같은 경우에, 연결은 제한되지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, "당 모티프"는 올리고머 화합물 또는 그것의 영역에서 당 변형의 패턴을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "연결 모티프"는 올리고머 화합물 또는 그것의 영역에서 연결 변형의 패턴을 의미한다. 그와 같은 올리고머 화합물의 뉴클레오사이드는 변형 또는 비변형될 수 있다. 달리 지적되지 않으면, 연결을 단지 기재하는 본원의 모티프는 연결 모티프인 것으로 의도된다. 따라서, 그와 같은 경우에, 뉴클레오사이드는 제한되지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, "핵염기 변형 모티프"는 올리고뉴클레오타이드에 따른 핵염기에 대한 변형의 패턴을 의미한다. 달리 지적되지 않으면, 핵염기 변형 모티프는 핵염기 서열에 독립적이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "서열 모티프"는 올리고뉴클레오타이드 또는 그것의 부분을 따라 배열된 핵염기의 패턴을 의미한다. 달리 지적되지 않으면, 서열 모티프는 화학적 변형에 독립적이고 따라서 화학적 변형을 포함하지 않으면서 화학적 변형의 임의의 조합을 가질 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "유형"의 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드에 관한 "변형의 유형"은 뉴클레오사이드의 화학적 변형을 의미하고 변형된 및 비변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 따라서, 달리 지적되지 않으면, "제 1 형의 변형을 갖는 뉴클레오사이드"는 비변형된 뉴클레오사이드일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "상이하게 변형된"은 변형의 부재를 포함하여, 서로 상이한 화학적 변형 또는 화학적 치환체를 의미한다. 따라서, 예를 들면, MOE 뉴클레오사이드 및 비변형된 DNA 뉴클레오사이드는, DNA 뉴클레오사이드는 비변형될지라도 "상이하게 변형"된다. 마찬가지로, DNA 및 RNA는, 둘 모두가 천연 발생 비변형된 뉴클레오사이드일지라도, "상이하게 변형"된다. 동일한하지만 상이한 핵염기를 포함하는 뉴클레오사이드는 상이하게 변형되지 않는다. 예를 들면, 2'-OMe 변형된 당 및 비변형된 아데닌 핵염기를 포함하는 뉴클레오사이드 및 2'-OMe 변형된 당 및 비변형된 티민 핵염기를 포함하는 뉴클레오사이드는 상이하게 변형되지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, "동일한 유형의 변형"은 변형의 부재를 포함하여 서로 동일한 변형을 의미한다. 따라서, 예를 들면, 2 개의 비변형된 DNA 뉴클레오사이드는, DNA 뉴클레오사이드가 비변형될지라도 "동일한 유형의 변형"를 갖는다. 동일한 유형 변형을 갖는 그와 같은 뉴클레오사이드는 상이한 핵염기를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제"는 동물에게 투여하는데 사용하기에 적당한 임의의 물질을 의미한다. 어떤 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제는 멸균한 염수이다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 멸균한 염수는 약품 등급 염수이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "치환체" 및 "치환체 그룹"은, 명명된 모 화합물의 원자 또는 그룹을 대체하는 원자 또는 그룹을 의미한다. 예를 들면 변형된 뉴클레오사이드의 치환체는 천연 발생 뉴클레오사이드에서 발견된 원자 또는 그룹과 상이한 임의의 원자 또는 그룹이다 (예를 들면, 변형된 2'-치환체는 H 또는 OH 이외의 뉴클레오사이드의 2'-위치에 있는 임의의 원자 또는 그룹이다). 치환체 그룹은 보호 또는 비보호될 수 있다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 화합물은 모 화합물의 하나 또는 하나 초과의 위치에서 치환체를 갖는다. 치환체는 또한, 다른 치환체 그룹으로 추가로 치환될 수 있고 직접적으로 또는 연결 그룹 예컨대 알킬 또는 하이드로카르빌 그룹을 통해 모 화합물에 부착될 수 있다.
마찬가지로, 본원에서 사용된 바와 같이, 화학적 관능 그룹에 관한" 치환체"는, 원자 또는 원자의 그룹이 명명된 관능 그룹에 통상적으로 존재하는 원자 또는 원자의 그룹과 상이하다는 것을 의미한다. 어떤 구현예에서, 치환체는 관능 그룹의 수소 원자를 대체한다 (예를 들면, 어떤 구현예에서, 치환된 메틸 그룹의 치환체는 비치환된 메틸 그룹의 수소 원자 중의 하나는 대체하는 수소 이외의 원자 또는 그룹이다). 달리 지적되지 않으면, 치환체로서 잘 받아들이는 그룹은 비제한적으로, 하기를 포함한다: 할로겐, 하이드록실, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아실 (-C(O)Raa), 카복실 (-C(O)ORaa), 지방족 그룹, 지환족 그룹, 알콕시, 치환된 옥시 (-O-Raa), 아릴, 아랄킬, 헤테로사이클릭 라디칼, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 아미노 (-N(Rbb)(Rcc)), 이미노(=NRbb), 아미도 (-C(O)N(Rbb)(Rcc) 또는 -N(Rbb)C(O)Raa), 아지도 (-N3), 니트로 (-NO2), 시아노 (-CN), 카바미도 (-OC(O)N(Rbb)(Rcc) 또는 -N(Rbb)C(O)ORaa), 우레이도 (-N(Rbb)C(O)N(Rbb)(Rcc)), 티오우레이도 (-N(Rbb)C(S)N(Rbb)(Rcc)), 구아니디닐 (-N(Rbb)C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc)), 아미디닐 (-C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc) 또는 -N(Rbb)C(=NRbb)(Raa)), 티올 (-SRbb), 설피닐 (-S(O)Rbb), 설포닐 (-S(O)2Rbb) 및 설폰아미딜 (-S(O)2N(Rbb)(Rcc)--또는 -N(Rbb)S(O)2Rbb).여기서 각각의 Raa, Rbb 및 Rcc는, 독립적으로, H, 임의로 연결된 화학적 관능 그룹 또는 추가 치환체 그룹이고, 바람직한 목록은 비제한적으로, 알킬, 알케닐, 알키닐, 지방족, 알콕시, 아실, 아릴, 아랄킬, 헤테로아릴, 지환족, 헤테로사이클릭 및 헤테로아릴알킬을 포함한다. 본원에서 기재된 화합물 내의 선택된 치환체는 반복되는 정도로 존재한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "알킬"은, 본원에서 사용된 바와 같이, 최대 24 개의 탄소 원자를 함유하는 포화된 곧은 또는 분지된 탄화수소 라디칼을 의미한다. 알킬 그룹의 예는 비제한적으로, 하기를 포함한다: 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 이소프로필, n-헥실, 옥틸, 데실, 도데실 등. 알킬 그룹은 전형적으로 1 내지 약 24 개의 탄소 원자, 더욱 전형적으로 1 내지 약 12의 탄소 원자 (C1-C12 알킬)를 포함하고, 1 내지 약 6 개의 탄소 원자가 더 바람직하다.
본원에서 사용된 바와 같이, "알케닐"은, 최대 24 개의 탄소 원자를 함유하고 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는, 곧은 또는 분지된 탄화수소 사슬 라디칼을 의미한다. 알케닐 그룹의 예는 비제한적으로, 하기를 포함한다: 에테닐, 프로페닐, 부테닐, 1-메틸-2-부텐-1-일, 디엔 예컨대 1,3-부타디엔 등. 알케닐 그룹은 전형적으로 2 내지 약 24 개의 탄소 원자, 더욱 전형적으로 2 내지 약 12의 탄소 원자를 포함하고 2 내지 약 6 개의 탄소 원자가 더 바람직하다. 알케닐 그룹은, 본원에서 사용된 바와 같이, 1 이상의 추가 치환체 그룹을 임의로 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "알키닐"은, 최대 24 개의 탄소 원자를 함유하고 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중결합을 갖는 곧은 또는 분지된 탄화수소 라디칼을 의미한다. 알키닐 그룹의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 에티닐, 1-프로피닐, 1-부티닐, 등. 알키닐 그룹은 전형적으로 2 내지 약 24 개의 탄소 원자, 더욱 전형적으로 2 내지 약 12의 탄소 원자를 포함하고 2 내지 약 6 개의 탄소 원자가 더 바람직하다. 알키닐 그룹은, 본원에서 사용된 바와 같이, 1 이상의 추가 치환체 그룹을 임의로 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "아실"은, 유기산으로부터 하이드록실 그룹의 제거에 의해 형성될 라디칼을 의미하고 일반식 -C(O)-X (여기서 X은 전형적으로 지방족, 지환족 또는 방향족임)을 갖는다. 예들은 지방족 카보닐, 방향족 카보닐, 지방족 설포닐, 방향족 설피닐, 지방족 설피닐, 방향족 포스페이트, 지방족 포스페이트 등을 포함한다. 아실 그룹은, 본원에서 사용된 바와 같이, 임의로 추가 치환체 그룹을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "지환족"은 고리형 고리계를 의미하고, 상기 고리는 지방족이다. 고리계는 1 이상의 고리를 포함할 수 있고, 여기서 적어도 하나의 고리는 지방족이다. 바람직한 지환족은 고리 중 약 5 내지 약 9 개의 탄소 원자를 갖는 고리를 포함한다. 지환족은, 본원에서 사용된 바와 같이, 임의로 추가 치환체 그룹을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "지방족"은 최대 24 개의 탄소 원자를 함유하는 곧은 또는 분지된 탄화수소 라디칼을 의미하고, 상기 임의의 2 개의 탄소 원자 사이의 포화는 단일, 이중 또는 삼중결합이다. 지방족 그룹은 바람직하게는 1 내지 약 24 개의 탄소 원자, 더욱 전형적으로 1 내지 약 12의 탄소 원자를 함유하고, 1 내지 약 6 개의 탄소 원자가 더 바람직하다. 지방족 그룹의 곧은 또는 분지된 사슬은 질소, 산소, 황 및 인을 포함하는 1 이상의 헤테로원자로 방해될 수 있다. 헤테로원자에 의해 방해된 그와 같은 지방족 그룹은 비제한적으로, 폴리알콕시, 예컨대 폴리알킬렌 글리콜, 폴리아민, 및 폴리이민을 포함한다. 지방족 그룹은, 본원에서 사용된 바와 같이, 임의로 추가 치환체 그룹을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "알콕시"는 알킬 그룹과 산소 원자 사이에 형셩된 라디칼을 의미하고, 상기 산소 원자는 알콕시 그룹을 모 분자에 부착하도록 사용된다. 알콕시 그룹의 예는 비제한적으로, 하기를 포함한다: 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, sec-부톡시, tert-부톡시, n-펜톡시, 네오펜톡시, n-헥소시 등. 알콕시 그룹은, 본원에서 사용된 바와 같이, 임의로 추가 치환체 그룹을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "아미노알킬"은 아미노 치환된 C1-C12 알킬 라디칼을 의미한다. 라디칼의 알킬부는 모 분자와 공유 결합을 형성한다. 아미노 그룹은 임의의 위치에 있을 수 있고 아미노알킬 그룹은 알킬 및/또는 아미노 부분에서 추가 치환체 그룹으로 치환될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "아랄킬" 및 "아릴알킬"은 C1-C12 알킬 라디칼에 공유 결합된 방향족 구릅을 의미한다. 수득한 아랄킬 (또는 아릴알킬) 그룹의 알킬 라디칼 부는 모 분자와 공유 결합을 형성한다. 예들은 비제한적으로, 벤질, 펜에틸 등을 포함한다. 아랄킬 그룹은, 본원에서 사용된 바와 같이, 아릴, 또는 라디칼 그룹을 형성하는 둘 모두 그룹에 부착된 추가 치환체 그룹을 임의로 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "아릴" 및 "방향족"은 1 이상의 방향족 고리를 갖는,모노- 또는 폴리사이클릭 카보사이클릭 고리계 라디칼을 의미한다. 아릴 그룹의 예는 비제한적으로, 하기를 포함한다: 페닐, 나프틸, 테트라하이드로나프틸, 인다닐, 이데닐 등. 바람직한 아릴 고리계는 1 이상의 고리 중 약 5 내지 약 20 개의 탄소 원자를 갖는다. 아릴 그룹은, 본원에서 사용된 바와 같이, 임의로 추가 치환체 그룹을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "할로" 및 "할로겐"은, 불소, 염소, 브롬 및 요오드로부터 선택된 원자를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "헤테로아릴," 및 "헤테로방향족"은, 모노- 또는 폴리-고리형 방향족 고리, 고리계 또는 융합 고리계를 포함하는 라디칼을 의미하고, 여기서 고리 중 적어도 하나는 방향족이고 1 이상의 헤테로원자를 포함한다. 헤테로아릴은 또한, 융합 고리 중 1 이상이 헤테로원자를 함유하지 않는 시스템을 포함하는 융합 고리계를 포함하는 것을 의미한다. 헤테로아릴 그룹은 전형적으로, 황, 질소 또는 산소로부터 선택된 하나 이상의 고리 원자를 포함한다. 헤테로아릴 그룹의 예는 비제한적으로, 하기를 포함한다: 피리디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 피롤릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아디아졸릴, 옥사디아졸릴, 티오페닐, 푸라닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조옥사졸릴, 퀴녹살리닐 등. 헤테로아릴 라디칼은 연결 모이어티 예컨대 지방족 그룹 또는 헤테로 원자를 통해 모 분자에 부착될 수 있다. 헤테로아릴 그룹은, 본원에서 사용된 바와 같이, 임의로 추가 치환체 그룹을 포함할 수 있다.
올리고머 화합물
어떤 구현예에서, 본 발명은 올리고머 화합물을 제공한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 올리고머 화합물은 1 이상의 콘주게이트 및/또는 말단기를 임의로 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오타이드로 구성된다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 화학적 변형을 포함한다. 그와 같은 화학적 변형은 변형 1 이상의 뉴클레오사이드에 대한 변형 (당 모이어티 및/또는 핵염기에 대한 변형 포함) 및/또는 1 이상의 뉴클레오사이드간 연결에 대한 변형을 포함한다.
어떤 당 모이어티
어떤 구현예에서, 본 발명의 올리고머 화합물은 변형된 당 모이어티를 포함하는 1 이상의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 1 이상의 당-변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 그와 같은 올리고머 화합물은 천연 발생 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드만을 포함하는 올리고머 화합물에 대해 바람직한 특성, 예컨대 증대된 뉴클레아제 안정성 또는 표적 핵산과의 증가된 결합 친화도를 가질 수 있다. 어떤 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 치환된 당 모이어티이다. 어떤 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 당 모이어티이다. 어떤 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 당 대용물이다. 그와 같은 당 대용물은 치환된 당 모이어티의 것에 상응하는 하나 이상의 치환을 포함할 수 있다.
어떤 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 2' 및/또는 5' 위치에서 치환체를 비제한적으로 포함하는, 1 이상의 치환체를 포함하는 치환된 당 모이어티이다. 2'-위치에 적당한 당 치환체의 예는, 비제한적으로 하기를 포함한다: 2'-F, 2'-OCH3 ("OMe" 또는 "O-메틸"), 및 2'-O(CH2)2OCH3 ("MOE"). 어떤 구현예에서, 2'-위치에 있는 당 치환체는 알릴, 아미노, 아지도, 티오, O-알릴, O-C1-C10 알킬, O-C1-C10 치환된 알킬; O- C1-C10 알콕시; O- C1-C10 치환된 알콕시, OCF3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), 및 O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)로부터 선택되고, 여기서 각각의 Rm 및 Rn은, 독립적으로, H 또는 치환된 또는 비치환된 C1-C10 알킬이다. 5'-위치에 있는 당 치환체의 예는, 비제한적으로 하기를 포함한다: 5'-메틸 (R 또는 S); 5'-비닐, 및 5'-메톡시. 어떤 구현예에서, 치환된 당류는 1 초과 비-브릿징 당 치환체, 예를 들면, 2'-F-5'-메틸 당 모이어티를 포함한다 (참고, 추가의 5', 2'-비스 치환된 당 모이어티 및 뉴클레오사이드에 대해 예를 들면, PCT 국제 출원 WO 2008/101157).
2'-치환된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드는 2'-치환된 뉴클레오사이드로 불린다. 어떤 구현예에서, 2'- 치환된 뉴클레오사이드는 할로, 알릴, 아미노, 아지도, O- C1-C10 알콕시; O- C1-C10 치환된 알콕시, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, O-알킬, S-알킬, N(Rm)-알킬; O- 알케닐, S- 알케닐, 또는 N(Rm)-알케닐; O- 알키닐, S- 알키닐, N(Rm)-알키닐; O-알킬레닐-O-알킬, 알키닐, 알카릴, 아랄킬, O-알카릴, O-아랄킬, O(CH2)2SCH3,O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) 또는 O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn) 로부터 선택된 2'-치환체 그룹을 포함하고, 여기서 각각의 Rm 및 Rn은, 독립적으로, H, 아미노 보호 그룹 또는 치환된 또는 비치환된 C1-C10 알킬이다. 이들 2'-치환체 그룹은 하이드록실, 아미노, 알콕시, 카복시, 벤질, 페닐, 니트로 (NO2), 티올, 티오알콕시 (S-알킬), 할로겐, 알킬, 아릴, 알케닐 및 알키닐로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체 그룹으로 추가로 치환될 수 있다.
어떤 구현예에서, 2'- 치환된 뉴클레오사이드는 F, NH2, N3, OCF3 , O-CH3, O(CH2)3NH2, CH2-CH=CH2, O-CH2-CH=CH2, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2, 및 N-치환된 아세트아미드 (O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn) 로부터 선택된 2'-치환체 그룹을 포함하고, 여기서 각각의 Rm 및 Rn은, 독립적으로, H, 아미노 보호 그룹 또는 치환된 또는 비치환된 C1-C10 알킬이다.
어떤 구현예에서, 2'- 치환된 뉴클레오사이드는 F, OCF3 , O-CH3, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(CH3)2, -O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2, 및 O-CH2-C(=O)-N(H)CH3 로부터 선택된 2'-치환체 그룹을 포함하는 당 모이어티를 포함한다.
어떤 구현예에서, 2'- 치환된 뉴클레오사이드는 F, O-CH3, 및 OCH2CH2OCH3 로부터 선택된 2'-치환체 그룹을 포함하는 당 모이어티를 포함한다.
어떤 변형된 당 모이어티는 바이사이클릭 당 모이어티가 생기는 제 2 고리를 형성하는 브릿징 당 치환체를 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 바이사이클릭 당 모이어티는 4' 및 2' 푸라노스 고리 원자 사이의 브릿지를 포함한다. 그와 같은 4' 내지 2' 당 치환체의 예는, 비제한적으로 하기를 포함한다: -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- 또는, -C(RaRb)-O-N(R)-; 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2',. 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' (cEt) 및 4'-CH(CH2OCH3)-O-2', 및 그것의 유사체 (참고, 예를 들면, U.S. 특허 7,399,845, 2008년 7월 15일 발표); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' 및 그것의 유사체, (참고, 예를 들면, WO2009/006478, 2009년 1월 8일 공개); 4'-CH2-N(OCH3)-2' 및 그것의 유사체 (참고, 예를 들면, WO2008/150729, 2008년 12월 11일 공개); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (참고, 예를 들면, US2004/0171570, 2004년 9월 2일 공개); 4'-CH2-O-N(R)-2', 및 4'-CH2-N(R)-O-2'-, 여기서 각각의 R는, 독립적으로, H, 보호 그룹, 또는 C1-C12 알킬; 4'-CH2-N(R)-O-2'이고, 여기서 R은 H, C1-C12 알킬, 또는 보호 그룹이다 (참고, U.S. 특허 7,427,672, 2008년 9월 23일 발표); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (참고, 예를 들면, Chattopadhyaya, 등, J. Org . Chem.,2009, 74, 118-134); 및 4'-CH2-C(=CH2)-2' 및 그것의 유사체 (참고, 공개된 PCT 국제 출원 WO 2008/154401, 2008년 12월 8일 공개).
어떤 구현예에서, 그와 같은 4' 내지 2' 브릿지는 -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-, 및 -N(Ra)-로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 연결된 그룹을 독립적으로 포함하고;
여기서:
x는 0, 1, 또는 2이고;
n은 1, 2, 3, 또는 4이고;
각각의 Ra 및 Rb은, 독립적으로, H, 보호 그룹, 하이드록실, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, C5-C7 지환족 라디칼, 치환된 C5-C7 지환족 라디칼, 할로겐, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, CN, 설포닐 (S(=O)2-J1), 또는 설폭실 (S(=O)-J1)이고; 그리고
각각의 J1 및 J2은, 독립적으로, H, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, C1-C12 아미노알킬, 치환된 C1-C12 아미노알킬, 또는 보호 그룹이다.
바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드는 바이사이클릭 뉴클레오사이드 또는 BNA로 불린다. 바이사이클릭 뉴클레오사이드는, 이하에서 묘사된 바와 같이 비제한적으로, 하기를 포함한다: (A) α-L-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA, (B) β-D-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA (또한 일명 잠겨진 핵산 또는 LNA), (C) 에틸렌옥시 (4'-(CH2)2-O-2') BNA, (D) 아미노옥시 (4'-CH2-O-N(R)-2') BNA, (E) 옥시아미노 (4'-CH2-N(R)-O-2') BNA, (F) 메틸(메틸렌옥시) (4'-CH(CH3)-O-2') BNA (또한 일명 구속된 에틸 또는 cEt), (G) 메틸렌-thio (4'-CH2-S-2') BNA, (H) 메틸렌-아미노 (4'-CH2-N(R)-2') BNA, (I) 메틸 카보사이클릭 (4'-CH2-CH(CH3)-2') BNA, 및 (J) 프로필렌 카보사이클릭 (4'-(CH2)3-2') BNA.
Figure pct00001
여기서 Bx는 핵염기 모이어티이고 R은, 독립적으로, H, 보호 그룹, 또는 C1-C12 알킬이다.
추가의 바이사이클릭 당 모이어티는 하기의 예와 같은 당해기술에 공지되어 있다: Singh 등, Chem . Commun ., 1998, 4, 455-456; Koshkin 등, Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt 등, Proc . Natl . Acad . Sci . U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar 등, Bioorg . Med . Chem . Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh 등, J. Org . Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava 등, J. Am. Chem . Soc., 129(26) 8362-8379 (Jul. 4, 2007); Elayadi 등, Curr . Opinion Invens . Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch 등, Chem . Biol ., 2001, 8, 1-7; Orum 등, Curr . Opinion Mol . Ther ., 2001, 3, 239-243; U.S. 특허 번호 7,053,207, 6,268,490, 6,770,748, 6,794,499, 7,034,133, 6,525,191, 6,670,461, 및 7,399,845; WO 2004/106356, WO 1994/14226, WO 2005/021570, 및 WO 2007/134181; U.S. 특허 공보 번호 US2004/0171570, US2007/0287831, 및 US2008/0039618; U.S. 특허 시리즈 번호 12/129,154, 60/989,574, 61/026,995, 61/026,998, 61/056,564, 61/086,231, 61/097,787, 및 61/099,844; 및 PCT 국제 출원 번호 PCT/US2008/064591, PCT/US2008/066154, 및 PCT/US2008/068922.
어떤 구현예에서, 바이사이클릭 당 모이어티 및 그와 같은 바이사이클릭 당 모이어티를 편입시키는 뉴클레오사이드는 이성질체 배치에 의해 추가로 규정된다. 예를 들면, 4'-2' 메틸렌-옥시 브릿지를 포함하는 뉴클레오사이드는, α-L 배치 또는 β-D 배치로 존재한다. 이전에, α-L-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') 바이사이클릭 뉴클레오사이드는 안티센스 활성을 보여준 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 편입되었다 (Frieden 등, Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).
어떤 구현예에서, 치환된 당 모이어티는 1 이상의 비-브릿징 당 치환체 및 1 이상의 브릿징 당 치환체를 포함한다 (예를 들면, 5'-치환된 및 4'-2' 다리걸친 당류). (참고, PCT 국제 출원 WO 2007/134181, 11/22/07 공개, 여기서 LNA는 예를 들면, 5'-메틸 또는 5'-비닐 그룹으로 치환됨).
어떤 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 당 대용물이다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 천연 발생 당의 산소 원자는 치환되고, 예를 들면, 황, 탄소 또는 질소 원자로 치환된다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 그와 같은 변형된 당 모이어티는 상기에서 기재된 바와 같이 브릿징 및/또는 비-브릿징 치환체를 또한 포함한다. 예를 들면, 어떤 당 대용물은 2'-위치에서 (참고, 예를 들면, 공개된 미국 특허 출원 US2005/0130923, 2005년 6월 16일 공개) 및/또는 5' 위치에서 4'-황 원자 및 치환을 포함한다. 추가적인 예로써, 4'-2' 브릿지를 갖는 카보사이클릭 바이사이클릭 뉴클레오사이드가 기재되었다 (참고, 예를 들면, Freier 등, Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 및 Albaek 등, J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740).
어떤 구현예에서, 당 대용물은 5-원자 이외를 갖는 고리를 포함한다. 예를 들면, 어떤 구현예에서, 당 대용물은 6-원 테트라하이드로피란을 포함한다. 그와 같은 테트라하이드로피란은 추가로 변형 또는 치환될 수 있다. 그와 같은 변형된 테트라하이드로피란을 포함하는 뉴클레오사이드는, 비제한적으로 하기를 포함한다: 헥시톨 핵산 (HNA), 아니톨 핵산 (ANA), 만니톨 핵산 (MNA) (참고 Leumann, CJ. Bioorg . & Med. Chem. (2002) 10:841-854), 플루오로 HNA (F-HNA), 및 식 VII을 갖는 화합물들:
Figure pct00002
VII
여기서 독립적으로 식 VII의 각각의 상기 적어도 하나의 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체에 대해
Bx는 핵염기 모이어티이고;
T3 및 T4 각각은, 독립적으로, 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체를 안티센스 화합물에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결 그룹이거나, T3 및 T4 중 하나는 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체를 안티센스 화합물에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결 그룹이고 T3 및 T4 중 다른 것은 H, 하이드록실 보호 그룹, 연결된 콘주게이트 그룹, 또는 5' 또는 3'-말단기이고;
q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 각각은, 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고; 그리고
각각의 R1 및 R2는 하기: 수소, 할로겐, 치환된 또는 비치환된 알콕시, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2, 및 CN 중으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 X은 O, S 또는 NJ1이고, 각각의 J1, J2, 및 J3은, 독립적으로, H 또는 C1-C6 알킬이다.
어떤 구현예에서, 식 VII의 변형된 THP 뉴클레오사이드가 제공되고, 여기서 q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 각각은 H이다. 어떤 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 하나는 H 이외의 것이다. 어떤 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 하나는 메틸이다. 어떤 구현예에서, 식 VII의 THP 뉴클레오사이드가 제공되고 여기서 R1 및 R2 중 하나는 F이다. 어떤 구현예에서, R1은 플루오로이고 R2은 H이고, R1은 메톡시이고 R2은 H이고, R1은 메톡시에톡시이고 R2은 H이다.
많은 다른 바이사이클릭 및 트리사이클릭 당 및 당 대용물 고리계는 뉴클레오사이드를 변형시키기 위해 사용될 수 있는 당해기술에서 또한 공지되어 있다 (참고, 예를 들면, 하기 논문 검토: Leumann, J. C, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002, 10, 841-854).
어떤 구현예에서, 당 대용물은 5 개 초과의 원자 및 1 개 초과의 헤테로원자를 갖는 고리를 포함한다. 예를 들면 모폴리노 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드 및 올리고머 화합물 중 그것의 용도가 보고되었다 (참고 예를 들면: Braasch 등, Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; 및 미국 특허들 5,698,685; 5,166,315; 5,185,444; 및 5,034,506). 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "모폴리노"는 하기 구조를 갖는 당 대용물을 의미한다:
Figure pct00003
어떤 구현예에서, 모폴리노는, 예를 들면 상기 모폴리노 구조로부터 다양한 치환체 그룹을 부가하거나 변경하여 변형될 수 있다. 그와 같은 당 대용물은 본원에서 "변형된 모폴리노"로 불린다.
하기와 같은 변형의 조합이 또한 비제한적으로 제공된다: 2'-F-5'-메틸 치환된 뉴클레오사이드 (참고 다른 개시된 5', 2'-비스 치환된 뉴클레오사이드에 대해 8/21/08에 공개된 PCT 국제 출원 WO 2008/101157) 및 2'-위치에서의 리보실 고리 산소 원자 대신에 S에 의한 대체 및 추가 치환 (참고 2005년 6월 16일에 공개된 미국 특허 출원 US2005-0130923) 또는 대안적으로 바이사이클릭 핵산의 5'-치환 (참고 11/22/07에 공개된 PCT 국제 출원 WO 2007/134181, 여기서 4'-CH2-O-2' 바이사이클릭 뉴클레오사이드는 5' 위치에서 5'-메틸 또는 5'-비닐 그룹으로 추가로 치환된다). 올리고머화에 의한 카보사이클릭 바이사이클릭 뉴클레오사이드의 합성 및 제조 및 생화학 연구는 하기에서 또한 기재되었다: (참고, 예를 들면, Srivastava 등, J. Am. Chem . Soc. 2007, 129(26), 8362-8379).
어떤 핵염기
어떤 구현예에서, 본 발명의 뉴클레오사이드는 1 이상의 비변형된 핵염기를 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 뉴클레오사이드는 1 이상의 변형된 핵염기를 포함한다.
어떤 구현예에서, 변형된 핵염기는 하기로부터 선택된다: 본원에서 규정된 바와 같은 보편적인 염기, 소수성 염기, 부정확한 염기, 크기-확장된 염기, 및 플루오르화된 염기. 본원에서 규정된 바와 같이 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및, 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실을 포함하는 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린; 5-프로피닐시토신; 5-하이드록시메틸 시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 다른 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐 (-C≡C-CH3) 우라실 및 시토신 및 피리미딘계의 다른 알키닐 유도체, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실 (슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 다른 5-치환된 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노-아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌, 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌, 보편적인 염기, 소수성 염기, 부정확한 염기, 크기-확장된 염기, 및 플루오르화된 염기. 추가의 변형된 핵염기는 하기를 포함한다: 트리사이클릭 피리미딘 예컨대 펜옥사진 시티딘([5,4-b][1,4]벤족사진-2(3H)-온), 페노티아진 시티딘 (1H-피리미도[5,4-b][1,4]벤조티아진-2(3H)-온), G-c램프 예컨대 치환된 펜옥사진 시티딘 (예를 들면 9-(2-아미노에톡시)-H-피리미도[5,4-b][1,4]벤족사진-2(3H)-온), 카바졸 시티딘 (2H-피리미도[4,5-b]인돌-2-온), 피리도인돌 시티딘 (H-피리도[3',2':4,5]피롤로[2,3-d]피리미딘-2-온). 변형된 핵염기는, 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로사이클, 예를 들면 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈으로 대체횐 것을 또한 포함할 수 있다. 추가의 핵염기는 하기를 포함한다: 미국 특허 번호 3,687,808에서 개시된 것, The Concise Encyclopedia Of Polymer Science 및 Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858-859 에서 개시된 것; Englisch 등, Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613에 의해 개시된 것; 및 Sanghvi, Y.S., Chapter 15, Antisense Research and Applications, Crooke, S.T. 및 Lebleu, B., Eds., CRC Press, 1993, 273-288에 의해 개시된 것.
상기 언급된 변형된 핵염기 뿐만 아니라 다른 변형된 핵염기 중 어떤 것의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허들은 비제한적으로, U.S. 3,687,808; 4,845,205; 5,130,302; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,594,121; 5,596,091; 5,614,617; 5,645,985; 5,681,941; 5,750,692; 5,763,588; 5,830,653 및 6,005,096를 포함하고, 이들중 어떤 것은 통상적으로 본원과 함께 소유되고, 이들 각각은 그 전체가 참고로 본원에 편입되어 있다.
어떤 뉴클레오사이드간 연결
어떤 구현예에서, 본 발명은 연결된 뉴클레오사이드를 포함하는 올리고머 화합물을 제공한다. 그와 같은 구현예에서, 뉴클레오사이드는 임의의 뉴클레오사이드간 연결을 사용하여 함께 연결될 수 있다. 뉴클레오사이드간 연결 그룹의 2 개의 주요 클래스는 인 원자의 존재 또는 부재에 의해 규정된다. 뉴클레오사이드간 연결을 함유하는 대표적인 인은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 포스포디에스테르 (P=O), 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, 포스포르아미데이트, 및 포스포로티오에이트 (P=S). 뉴클레오사이드간 연결 그룹을 함유하는 대표적인 비-인은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 메틸렌메틸이미노 (-CH2-N(CH3)-O-CH2-), 티오디에스테르 (-O-C(O)-S-), 티오노카바메이트 (-O-C(O)(NH)-S-); 실록산 (-O-Si(H)2-O-); 및 N, N'-디메틸하이드라진 (-CH2-N(CH3)-N(CH3)-). 천연 포스포디에스테르 연결과 비교된 변형된 연결은, 올리고머 화합물의 뉴클레아제 저항성을 변형하기 위해, 전형적으로 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 어떤 구현예에서, 키랄 원자를 갖는 뉴클레오사이드간 연결은 라세미 혼합물로서, 또는 별개의 거울상이성질체로서 제조될 수 있다. 대표적인 키랄 연결, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 알킬포스포네이트 및 포스포로티오에이트. 인-함유 및 비-인-함유 뉴클레오사이드간 연결의 제조 방법은 당해분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
본원에서 기재된 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 비대칭 중심을 함유하고 따라서 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 및 다른 입체이성질체 배치를 생기헤 하고 이것은 당 아노머에 대해서와 같이 (R) 또는 (S), α 또는 β, 또는 아미노산 등에 대해서와 같이 (D) 또는 (L)로서 절대적인 입체화학에 관하여 규정될 수 있다. 본원에서 제공된 안티센스 화합물 내에 모든 그와 같은 가능한 이성질체, 뿐만 아니라 그것의 라세미 및 광학적으로 순수한 형태가 포함된다.
중성 뉴클레오사이드간 연결은 비제한적으로, 하기를 포함한다: 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, MMI (3'-CH2-N(CH3)-O-5'), 아미드-3 (3'-CH2-C(=O)-N(H)-5'), 아미드-4 (3'-CH2-N(H)-C(=O)-5'), 포름아세탈 (3'-O-CH2-O-5'), 및 티오포름아세탈 (3'-S-CH2-O-5'). 추가의 중성 뉴클레오사이드간 연결은 실록산 (디알킬실록산), 카복실레이트 에스테르, 카복사마이드, 설파이드, 설포네이트 에스테르 및 아미드를 포함하는 비이온성 연결을 포함한다 (참고 예를 들면: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi 및 P.D. Cook, Eds., ACS Symposium 시리즈 580; Chapters 3 및 4, 40-65). 추가의 중성 뉴클레오사이드간 연결은 혼합된 N, O, S 및 CH2 성분 부분을 포함하는 비이온성 연결을 포함한다.
어떤 모티프
어떤 구현예에서, 본 발명은 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 올리고머 화합물을 제공한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 화학적 변형을 포함한다. 어떤 구현예에서, 화학적으로 변형된 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화학적으로 변형된 올리고뉴클레오타이드는 변형된 당류를 포함하는 1 이상의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화학적으로 변형된 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 변형된 핵염기를 포함하는 1 이상의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화학적으로 변형된 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 화학적으로 변형 (당 변형, 핵염기 변형, 및/또는 연결 변형)은 패턴 또는 모티프를 규정한다. 어떤 구현예에서, 당 모이어티, 뉴클레오사이드간 연결, 및 핵염기 각각의 화학적 변형의 패턴은 서로 독립적이다. 따라서, 올리고뉴클레오타이드는 그것의 당 변형 모티프, 뉴클레오사이드간 연결 모티프 및/또는 핵염기 변형 모티프에 의해 기재될 수 있다 (본원에서 사용된 바와 같이, 핵염기 변형 모티프는 핵염기의 서열에 독립적인 핵염기에 대한 화학적 변형을 기재한다).
어떤 당 모티프
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 규정된 패턴 또는 당 변형 모티프 중 올리고뉴클레오타이드 또는 그것의 영역을 다라 배열된 1 이상의 유형의 변형된 당 모이어티 및/또는 천연 발생 당 모이어티를 포함한다. 그와 같은 모니프는 본원에서 논의된 당 변형 및/또는 다른 공지된 당 변형 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 2 개의 외부 영역 또는 "윙" 및 내부 영역 또는 "갭"을 포함하는 갭머 당 변형 모티프를 갖는 영역을 포함하거나 그것으로 구성된다. 갭머 모티프의 3 개의 영역 (5'-윙, 갭, 및 3'-윙)은 뉴클레오사이드의 인접 서열을 형성하고, 여기서 각각의 윙의 뉴클레오사이드의 당 모이어티의 적어도 일부는 갭의 뉴클레오사이드의 당 모이어티의 적어도 일부와 상이하다. 특이적으로, 갭에 아주 가까운 각각의 윙의 뉴클레오사이드 (5'-윙의 3'-대부분 뉴클레오사이드 및 3'-윙의 5'-대부분 뉴클레오사이드)의 적어도 당 모이어티는 인접하는 갭 뉴클레오사이드의 당 모이어티와 상이하고, 따라서 윙과 갭 사이의 경계를 규정한다. 어떤 구현예에서, 갭 내의 당 모이어티는 서로 동일하다. 어떤 구현예에서, 갭은 1 이상의 다른 갭의 뉴클레오사이드의 당 모이어티와 상이한 당 모이어트를 갖는 1 이상의 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 2 개의 윙의 당 모이프는 서로 동일하다 (대칭 갭머). 어떤 구현예에서, 5'-윙의 당 변형 모티프는 3'-윙의 당 변형 모티프와는 상이하다 (비대칭 갭머). 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 윙 중 2'-MOE 변형된 뉴클레오사이드 및 갭 중 2'-F 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 완전히 변형된다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 균일하게 변형된다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 균일한 2'-MOE이다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 균일한 2'-F이다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 균일한 모폴리노이다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 균일한 BNA이다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 균일한 LNA이다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 균일한 cEt이다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 균일하게 변형된 영역 및 비변형된 또는 상이하게 변형된 추가의 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 균일하게 변형된 영역은 그 길이가 적어도 5, 10, 15, 또는 20 개의 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, 균일한 영역은 2'-MOE 영역이다. 어떤 구현예에서, 균일한 영역은 2'-F 영역이다. 어떤 구현예에서, 균일한 영역은 모폴리노 영역이다. 어떤 구현예에서, 균일한 영역은 BNA 영역이다. 어떤 구현예에서, 균일한 영역은 LNA 영역이다. 어떤 구현예에서, 균일한 영역은 cEt 영역이다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드 4 초과의 인접 비변형된 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함하지 않는다. 어떤 상황에서, 4 개 초과의 인접 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 RNase H를 활성화시키고, 이로써 표적 RNA가 절단된다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 절단은 4 개 초과의 인접 2'-데옥시뉴클레오사이드를 갖지 않음으로써 피한다, 예를 들면, 여기서 스플라이싱의 변경은, 표적 RNA의 절단은 아니고, 바라던 것이다.
어떤 뉴클레오사이드간 연결 모티프
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 정의된 패턴 또는 변형된 뉴클레오사이드간 연결 모티프에서 올리고뉴클레오타이드 또는 그것의 영역을 따라 배열된 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 뉴클레오사이드간 연결은 당 변형 모티프에 대해 상기에서 기재된 바와 같이 캡핑된 모티프에서 배열된다. 그와 같은 구현예에서, 각각의 2 개의 윙 영역 중 뉴클레오사이드간 연결은 갭 중 뉴클레오사이드간 연결 영역과 상이하다. 어떤 구현예에서 윙 중 뉴클레오사이드간 연결은 포스포디에스테르이고 갭 중 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트이다. 당 변형 모티프은 독립적으로 선택되고, 이로써 갭핑된 뉴클레오사이드간 연결 모티프를 갖는 그와 같은 올리고뉴클레오타이드는 갭핑된 당 변형 모티프를 가지거나 그렇지 않을 수 있고 갭핑된 당 모티프를 가지면, 윙 및 갭 길이는 동일하거나 그렇지 않을 수 있다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 교대 뉴클레오사이드간 연결 모티프를 갖는 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 균일하게 변형된 뉴클레오사이드간 연결의 영역을 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 포스포로티오에이트에 의해 균일하게 연결된 영역을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 포스포로-티오에이트에 의해 균일하게 연결된다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트로부터 선택된다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포디에스테르 및 포스포로-티오에이트로부터 선택되고 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트이다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 6 개의 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 8 개의 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 10 개의 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 6 개의 연속되는 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 8 개의 연속되는 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 10 개의 연속되는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결 중 적어도 하나의 블록을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 하나의 12 개의 연속되는 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결의 적어도 블록을 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 적어도 하나의 그와 같은 블록은 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단에 위치한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 적어도 하나의 그와 같은 블록은 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단의3 개의 뉴클레오사이드 내에 위치한다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물 및 조성물은 CNS에 전달된다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물 및 조성물은 뇌심실내 투여 또는 뇌심실내 볼러스 투여를 통해 CNS에 전달된다. 어떤 구현예에서, 1 이상의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 핵산 표적을 향한 높은 효력 및 높은 선택성을 나타낼 수 있지만, 뇌심실내 투여를 통해 CNS에 전달될 때 어떤 정도의 급성 독성을 보유할 수 있다. 어떤 구현예에서, 1 이상의 변형의 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드간 연결로의 도입은 뇌심실내 투여를 통한 CNS 전달과 연관된 급성 독성을 개선 또는 감소시킨다. 어떤 구현예에서, 1 이상의 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결의 변형된 올리고뉴클레오타이드로의 도입은 뇌심실내 투여를 통한 CNS 전달과 연관된 급성 독성을 개선 또는 감소시킨다.
어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 아래의 표로부터 선택된 뉴클레오사이드간 연결 모티프를 가지며, 여기서 각 "N"는 뉴클레오사이드를 나타내고, 각 하첨자 "s"는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 그리고 각 하첨자 "o"는 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 나타낸다:
뉴클레오사이드간 연결 모티프
Figure pct00004
어떤 구현예에서, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9 개의 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결의 변형된 올리고뉴클레오타이드로의 포함은 뇌심실내 투여를 통한 CNS 전달과 연관된 급성 독성을 개선 또는 감소시킬 수 있다.
어떤 핵염기 변형 모티프
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 규정된 패턴 또는 핵염기 변형 모티프에서 올리고뉴클레오타이드 또는 그것의 영역을 따라 배열된 핵염기에 대한 화학적 변형을 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 핵염기 변형은 갭핑된 모티프에서 배열되어 있다. 어떤 구현예에서, 핵염기 변형은 교대 모티프에서 배열되어 있다. 어떤 구현예에서, 각각의 핵염기은 변형된다. 어떤 구현예에서, 핵염기의 어떤 것도 화학적으로 변형되지 않는다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 변형된 핵염기의 블록을 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 블록은 올리고뉴클레오타이드의 3'-말단에 있다. 어떤 구현예에서 블록은 올리고뉴클레오타이드의 3'-말단의 3 개의 뉴클레오타이드 내에 있다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 블록은 올리고뉴클레오타이드의 5'-말단에 있다. 어떤 구현예에서 블록은 올리고뉴클레오타이드의 5'-말단의 3 개의 뉴클레오타이드 내에 있다.
어떤 구현예에서, 핵염기 변형은 올리고뉴클레오타이드의 특정한 위치에서 천연 염기의 기능이다. 예를 들면, 어떤 구현예에서 올리고뉴클레오타이드 중 각각의 퓨린 또는 각각의 피리미딘은 변형된다. 어떤 구현예에서, 각각의 아데닌은 변형된다. 어떤 구현예에서, 각각의 구아닌은 변형된다. 어떤 구현예에서, 각각의 티민은 변형된다. 어떤 구현예에서, 각각의 시토신은 변형된다. 어떤 구현예에서, 각각의 우라실은 변형된다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드 중 시토신 모이어티의 일부 또는 모두는 5-메틸 시토신 모이어티이거나, 어떤 것도 그것은 아니다. 여기서, 5-메틸 시토신은 "변형된 핵염기"가 아니다. 따라서, 달리 지적되지 않으면, 비변형된 핵염기는 5-메틸을 갖는 시토신 잔기 및 5 메틸이 없는 것들 둘 모두를 포함한다. 어떤 구현예에서, 모든 또는 일부의 시토신 핵염기의 메틸화 상태가 명시된다.
어떤 전장
어떤 구현예에서, 본 발명은 다양한 범위의 길이 중 임의의 것의 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 올리고머 화합물을 제공한다. 어떤 구현예에서, 본 발명은 X 내지 Y 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 올리고뉴클레오타이드 또는 올리고머 화합물을 제공하고, 여기서 X는 그 범위에서 최소 수의 뉴클레오사이드를 나타내고 Y는 그 범위에서 최대 수의 뉴클레오사이드를 나타낸다. 어떤 그와 같은 구현예에서, X 및 Y 각각은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 및 50로부터 독립적으로 선택되고; 단, X≤Y. 예를 들면, 어떤 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 올리고머 화합물을 제공한다: 8 내지 9, 8 내지 10, 8 내지 11, 8 내지 12, 8 내지 13, 8 내지 14, 8 내지 15, 8 내지 16, 8 내지 17, 8 내지 18, 8 내지 19, 8 내지 20, 8 내지 21, 8 내지 22, 8 내지 23, 8 내지 24, 8 내지 25, 8 내지 26, 8 내지 27, 8 내지 28, 8 내지 29, 8 내지 30, 9 내지 10, 9 내지 11, 9 내지 12, 9 내지 13, 9 내지 14, 9 내지 15, 9 내지 16, 9 내지 17, 9 내지 18, 9 내지 19, 9 내지 20, 9 내지 21, 9 내지 22, 9 내지 23, 9 내지 24, 9 내지 25, 9 내지 26, 9 내지 27, 9 내지 28, 9 내지 29, 9 내지 30, 10 내지 11, 10 내지 12, 10 내지 13, 10 내지 14, 10 내지 15, 10 내지 16, 10 내지 17, 10 내지 18, 10 내지 19, 10 내지 20, 10 내지 21, 10 내지 22, 10 내지 23, 10 내지 24, 10 내지 25, 10 내지 26, 10 내지 27, 10 내지 28, 10 내지 29, 10 내지 30, 11 내지 12, 11 내지 13, 11 내지 14, 11 내지 15, 11 내지 16, 11 내지 17, 11 내지 18, 11 내지 19, 11 내지 20, 11 내지 21, 11 내지 22, 11 내지 23, 11 내지 24, 11 내지 25, 11 내지 26, 11 내지 27, 11 내지 28, 11 내지 29, 11 내지 30, 12 내지 13, 12 내지 14, 12 내지 15, 12 내지 16, 12 내지 17, 12 내지 18, 12 내지 19, 12 내지 20, 12 내지 21, 12 내지 22, 12 내지 23, 12 내지 24, 12 내지 25, 12 내지 26, 12 내지 27, 12 내지 28, 12 내지 29, 12 내지 30, 13 내지 14, 13 내지 15, 13 내지 16, 13 내지 17, 13 내지 18, 13 내지 19, 13 내지 20, 13 내지 21, 13 내지 22, 13 내지 23, 13 내지 24, 13 내지 25, 13 내지 26, 13 내지 27, 13 내지 28, 13 내지 29, 13 내지 30, 14 내지 15, 14 내지 16, 14 내지 17, 14 내지 18, 14 내지 19, 14 내지 20, 14 내지 21, 14 내지 22, 14 내지 23, 14 내지 24, 14 내지 25, 14 내지 26, 14 내지 27, 14 내지 28, 14 내지 29, 14 내지 30, 15 내지 16, 15 내지 17, 15 내지 18, 15 내지 19, 15 내지 20, 15 내지 21, 15 내지 22, 15 내지 23, 15 내지 24, 15 내지 25, 15 내지 26, 15 내지 27, 15 내지 28, 15 내지 29, 15 내지 30, 16 내지 17, 16 내지 18, 16 내지 19, 16 내지 20, 16 내지 21, 16 내지 22, 16 내지 23, 16 내지 24, 16 내지 25, 16 내지 26, 16 내지 27, 16 내지 28, 16 내지 29, 16 내지 30, 17 내지 18, 17 내지 19, 17 내지 20, 17 내지 21, 17 내지 22, 17 내지 23, 17 내지 24, 17 내지 25, 17 내지 26, 17 내지 27, 17 내지 28, 17 내지 29, 17 내지 30, 18 내지 19, 18 내지 20, 18 내지 21, 18 내지 22, 18 내지 23, 18 내지 24, 18 내지 25, 18 내지 26, 18 내지 27, 18 내지 28, 18 내지 29, 18 내지 30, 19 내지 20, 19 내지 21, 19 내지 22, 19 내지 23, 19 내지 24, 19 내지 25, 19 내지 26, 19 내지 29, 19 내지 28, 19 내지 29, 19 내지 30, 20 내지 21, 20 내지 22, 20 내지 23, 20 내지 24, 20 내지 25, 20 내지 26, 20 내지 27, 20 내지 28, 20 내지 29, 20 내지 30, 21 내지 22, 21 내지 23, 21 내지 24, 21 내지 25, 21 내지 26, 21 내지 27, 21 내지 28, 21 내지 29, 21 내지 30, 22 내지 23, 22 내지 24, 22 내지 25, 22 내지 26, 22 내지 27, 22 내지 28, 22 내지 29, 22 내지 30, 23 내지 24, 23 내지 25, 23 내지 26, 23 내지 27, 23 내지 28, 23 내지 29, 23 내지 30, 24 내지 25, 24 내지 26, 24 내지 27, 24 내지 28, 24 내지 29, 24 내지 30, 25 내지 26, 25 내지 27, 25 내지 28, 25 내지 29, 25 내지 30, 26 내지 27, 26 내지 28, 26 내지 29, 26 내지 30, 27 내지 28, 27 내지 29, 27 내지 30, 28 내지 29, 28 내지 30, 또는 29 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드. 올리고머 화합물의 뉴클레오사이드 또는 올리고뉴클레오타이드의 수가 범위 또는 특정 개수로 제한되는 구현예에서, 올리고머 화합물 또는 올리고뉴클레오타이드는, 그럼에도 불구하고 추가의 다른 치환체를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들면, 8-30 개의 뉴클레오사이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 31 개의 뉴클레오사이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 배제하지만, 달리 지적되지 않으면, 그와 같은 올리고뉴클레오타이드는, 예를 들면 1 이상의 콘주게이트, 말단기, 또는 다른 치환체를 추가로 포함할 수 있다. 어떤 구현예에서, 갭머 올리고뉴클레오타이드는 상기 길이 중 임의의 것을 갖는다.
당해분야의 숙련가는, 어떤 길이가 어떤 모티프에 대해 가능할 수 없다는 것을 인식할 것이다. 예를 들면: 4 개의 뉴클레오타이드로 구성된 5'-윙 영역, 적어도 6 개의 뉴클레오타이드로 구성된 갭, 및 3 개의 뉴클레오타이드로 구성된 3'-윙 영역을 갖는 갭머는 13 개 미만 전장의 뉴클레오타이드를 가질 수 없다. 따라서, 당업자는, 길이 하한은 13이고 "10-20" 중 10의 한계는 그 구현예에서 효과를 갖지 않는다는 것을 이해한다.
게다가, 올리고뉴클레오타이드가 전장 범위에 의해 그리고 명시된 길이를 갖는 영역에 의해 기재되는 경우, 그리고 영역의 명시된 길이의 합은 전장 범위의 상한 미만인 경우, 올리고뉴클레오타이드는 명시된 영역의 길이를 초과하여 추가의 뉴클레오사이드를 가질 수 있고, 단, 뉴클레오사이드의 총 수는 전장 범위의 상한을 초과하지 않는다. 예를 들면, 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5'-윙; 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3'-윙 및 10 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 중심 갭 (5+5+10=20)을 포함하는 20-25 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 올리고뉴클레오타이드는 5'-윙, 3'-윙, 또는 갭 (25의 전장 한계에 도달하기 전)의 일부가 아닌 최대 5 개의 뉴클레오사이드를 가질 수 있다. 그와 같은 추가의 뉴클레오사이드는 5'-윙의 5' 및/또는 3' 윙의 3'일 수 있다.
어떤 올리고뉴클레오타이드
어떤 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 그것의 당 모티프, 뉴클레오사이드간 연결 모티프, 핵염기 변형 모티프 및 전장를 특징으로 한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 파라미터 각각은 서로 독립적이다. 따라서, 갭머 당 모티프를 갖는 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드간 연결은 변형 또는 비변형될 수 있고 당 변형의 갭머 변형 패턴을 따르거나 그렇지 않을 수 있다. 따라서, 당-갭머의 윙 영역 내의 뉴클레오사이드간 연결은 서로 동일 또는 상이할 수 있고 갭 영역의 뉴클레오사이드간 연결과 동일 또는 상이할 수 있다. 마찬가지로, 그와 같은 당-갭머 올리고뉴클레오타이드는 당 변형의 갭머 패턴과는 독립적인 1 이상의 변형된 핵염기를 포함할 수 있다. 여기에서 올리고뉴클레오타이드 또는 올리고머 화합물의 설명이 1 이상의 파라미터에 대해 언급되지 않으면, 그와 같은 파라미터는 제한되지 않는다. 따라서, 추가 설명없이 갭머 당 모티프를 갖는 것으로만 기재된 올리고머는 임의의 길이, 뉴클레오사이드간 연결 모티프, 및 핵염기 변형 모티프를 가질 수 있다. 달리 지적되지 않으면, 모든 화학적 변형은 핵염기 서열에 독립적이다.
어떤 콘주게이트 그룹
어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 1 이상의 콘주게이트 그룹의 부착에 의해 변형된다. 일반적으로, 콘주게이트 그룹은 약력학, 약동학, 안정성, 결합, 흡수, 세포성 분포, 세포성 흡수, 전하 및 청소능을 비제한적으로 포함하는, 부착된 올리고머 화합물의 1 이상의 특성을 변경한다. 콘주게이트 그룹은 화학 기술에서 일상적으로 사용되고 직접적으로 또는 임의의 콘주게이트 연결 모이어티 또는 콘주게이트 연결 그룹을 통해 모 화합물 예컨대 올리고머 화합물, 예컨대 올리고뉴클레오타이드에 연결된다. 콘주게이트 그룹은 비제한적으로, 하기를 포함한다: 삽입제, 리포터 분자, 폴리아민, 폴리아미드, 폴리에틸렌 글리콜, 티오에테르, 폴리에테르, 콜레스테롤, 티오콜레스테롤, 콜산 모이어티, 폴레이트, 지질, 인지질, 바이오틴, 펜아진, 펜안트리딘, 안트라퀴논, 아다만탄, 아크리딘, 플루오레신, 로다민, 쿠마린 및 염료. 어떤 콘주게이트 그룹은, 예를 들면 이전에 하기에서 기재되었다: 콜레스테롤 모이어티 (Letsinger 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), 콜산 (Manoharan 등, Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053-1060), 티오에테르, 예를 들면, 헥실-S-트리틸티올 (Manoharan 등, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan 등, Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770), 티오콜레스테롤 (Oberhauser 등, Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), 지방족 사슬, 예를 들면, 도-데칸-디올 또는 운데실 잔기 (Saison-Behmoaras 등, EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov 등, FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk 등, Biochimie, 1993, 75, 49-54), 인지질, 예를 들면, 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸-암모늄 1,2-디-O-헥사데실-rac-글리세로-3-H-포스포네이트 (Manoharan 등, Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea 등, Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 사슬 (Manoharan 등, Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), 또는 아다만탄 아세트산 (Manoharan 등, Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), 팔미틸 모이어티 (Mishra 등, Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카보닐-옥시콜레스테롤 모이어티 (Crooke 등, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937).
어떤 구현예에서, 콘주게이트 그룹은 활성 약물 물질, 예를 들면, 아스피린, 와파린, 페닐부타존, 이부프로펜, 수프로펜, 펜-부펜, 케토프로펜, (S)-(+)-프라노프로펜, 카프로펜, 단실사르코신, 2,3,5-트리아이오도벤조산, 플루페남산, 폴린산, 벤조티아디아자이드, 클로로티아자이드, 디아제핀, 인도-메티신, 바르비투레이트, 세팔로스포린, 설파 약물, 항당뇨병성, 항균 또는 항생제를 포함한다.
어떤 구현예에서, 콘주게이트 그룹은 올리고머 화합물에서 올리고뉴클레오타이드에 직접적으로 부착된다. 어떤 구현예에서, 콘주게이트 그룹은 콘주게이트 연결 그룹에 의해 부착된다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 이작용성 연결 모이어티 예컨대 당해기술에서 공지된 것들을 비제한적으로 포함하는 콘주게이트 연결 그룹은 본원에서 제공된 화합물에 잘 수용된다. 콘주게이트 연결 그룹은 콘주게이트 그룹, 예컨대 화학적 안정화 그룹, 기능성 그룹, 리포터 그룹 및 다른 그룹을 모 화합물 예컨대 예를 들면 올리고머 화합물 중 선택적 부위에 부착하는데 유용하다. 일반적으로 이작용성 연결 모이어티는 2 개의 기능성 그룹을 갖는 하이드로카르빌 모이어티를 포함한다. 기능성 그룹 중 하나는 관심 모 분자 또는 화합물에 결합하도록 선택되고 다른 것은 본질적으로 임의의 선택된 그룹 예컨대 화학적 기능성 그룹 또는 콘주게이트 그룹에 결합하도록 선택된다. 일부 구현예에서, 콘주게이트 링커는 반복 단위 예컨대 에틸렌 글리콜 또는 아미노산 단위의 사슬 구조 또는 올리고머를 포함한다. 이작용성 연결 모이어티에서 일상적으로 사용된 기능성 그룹의 예는, 비제한적으로, 친핵성 그룹과 반응하고 친전자성 그룹과 반응하기 위한 친전자체를 포함한다. 일부 구현예에서, 이작용기 연결 모이어티는 아미노, 하이드록실, 카복실산, 티올, 불포화 (예를 들면, 이중 또는 삼중 결합), 등을 포함한다.
모이어티를 연결하는 콘주게이트의 일부 비제한적인 예는 피롤리딘, 8-아미노-3,6-디옥사옥탄산 (ADO), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로-헥산--1-카복실레이트 (SMCC) 및 6-아미노헥산산 (AHEX 또는 AHA)을 포함한다. 다른 연결 그룹은, 비제한적으로, 치환된 C1-C10 알킬, 치환 또는 비치환된 C2-C10 알케닐 또는 치환 또는 비치환된 C2-C10 알키닐을 포함하고, 여기서 바람직한 치환체 그룹의 비제한 목록은 하이드록실, 아미노, 알콕시, 카복시, 벤질, 페닐, 니트로, 티올, 티오알콕시, 할로겐, 알킬, 아릴, 알케닐 및 알키닐을 포함한다.
콘주게이트 그룹은 올리고뉴클레오타이드 (말단 콘주게이트 그룹)의 하나 또는 둘 모두의 말단에 및/또는 임의의 내부 위치에서 부착될 수 있다.
어떤 구현예에서, 콘주게이트 그룹은 올리고머 화합물의 올리고뉴클레오타이드의 3'-말단에 있다. 어떤 구현예에서, 콘주게이트 그룹은 3'-말단 근처에 있다. 어떤 구현예에서, 콘주게이트는 올리고머 화합물의 3' 말단에서이지만, 1 이상의 말단기 뉴클레오사이드 앞에서 부착된다. 어떤 구현예에서, 콘주게이트 그룹은 말단기 내에 위치한다.
어떤 구현예에서, 본 발명은 올리고머 화합물을 제공한다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오타이드 및 1 이상의 콘주게이트 및/또는 말단기를 포함한다. 그와 같은 콘주게이트 및/또는 말단 상기에서 논의된 화학적 모티프 중 임의의 것을 갖는 올리고뉴클레오타이드에 부가될 수 있다. 따라서, 예를 들면, 교대 뉴클레오사이드의 영역을 갖는 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 올리고머 화합물은 말단기를 포함할 수 있다.
안티센스 화합물
어떤 구현예에서, 본 발명은 올리고머 화합물은 안티센스 화합물이다. 그와 같은 안티센스 화합물은 표적 핵산에 혼성화될 수 있고, 이로써 적어도 하나의 안티센스 활성이 생긴다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 1 이상의 표적 핵산에 특이적으로 혼성화된다. 어떤 구현예에서, 특이적 혼성화 안티센스 화합물은 혼성화를 허용하고 안티센스 활성이 생기도록 하는 표적 핵산에 대한 충분한 상보성 및 특이적 혼성화를 원하는 조건 하에서 (예를 들면, 생체내 또는 치료 용도를 위한 생리적 조건 하에서, 그리고 검정이 시험관내 검정의 경우에 수행된 조건 하에서) 임의의 비-표적 핵산 서열에 대한 비-특이적 혼성화를 피하기 위해 임의의 비-표적에 대한 불충분한 상보성을 갖는 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 발명은 올리고뉴클레오타이드의 전장을 가로질러 표적 핵산에 대해 완전히 상보적인 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 안티센스 화합물을 제공한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 표적 핵산에 대해 99% 상보적이다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 표적 핵산에 대해 95% 상보적이다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 올리고뉴클레오타이드는 표적 핵산에 대해 90% 상보적이다.
어떤 구현예에서, 그와 같은 올리고뉴클레오타이드는 표적 핵산에 대해 85% 상보적이다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 올리고뉴클레오타이드는 표적 핵산에 대해 80% 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 핵산에 대해 완전히 상보적이고 올리고뉴클레오타이드의 전장에 걸쳐 표적 핵산에 대해 적어도 80% 상보적인 영역을 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 완전 상보성의 영역은 그 길이가 6 내지 14 개의 핵염기이다.
어떤 구현예에서 안티센스 화합물 및 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 단일-가닥 화합물을 포함한다. 어떤 구현예에서 안티센스 화합물 및 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 이중-가닥 화합물을 포함한다.
어떤 변형된 올리고뉴클레오타이드
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 31의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 33의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 34의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 35의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 36의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 37의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 45의 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 72의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 79의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 82의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 83의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 97의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 106의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 107의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 112의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 113의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 130의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 140의 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 141의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 142의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 143의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 144의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 145의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 146의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 147의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 148의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 149의 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 150의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 151의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 152의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 153의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 157의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 158의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 160의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호 200의 서열을 갖는다.
신경퇴행성 장애와 연관된 어떤 경로 및 기전
어떤 구현예에서, 신경퇴행성 증후군 또는 장애는 타우와 연관된 임의의 신경퇴행성 증후군 또는 장애일 수 있다. 타우와 연관된 신경퇴행성 장애의 비제한적인 예는 하기를 포함할 수 있다: 알츠하이머병, 진행성 핵상 마비, 권투선수 치매, 전측두엽 치매, 염색체와 관련된 파킨슨증, 라이티코-보딕 질환, 매듭-우세한 치매, 신경절교종, 신경절세포종, 수막혈관종증, 아급성 경화 범뇌염, 납 독성뇌증, 결절성 경화증, 할러포르덴-슈파츠 질환, 피크병, 피질기저 신경절 변성, 은친화성 입자 질환, 핵상 마비, 피질기저 퇴행증, 전측두엽 치매, 또는 전두측두 변성이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 전측두엽 치매 (FTD)를 변경하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 알츠하이머병 (AD)을 변경하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 진행성 핵상 마비를 변경하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 피질기저신경절 변성을 변경하는 것을 포함한다.
어떤 구현예에서, 타우를 인코딩하는 핵산의 스플라이싱을 수정하여 신경퇴행성 증후군을 변경시키는 조성물 및 방법이 본원에서 제공된다. 타우는 다중 조직에서 발견된 단백질이지만, 뉴런의 축색돌기에서 특히 풍부하다. 타우의 일차 기능은 유사분열, 세포질분열 및 소포 수송과 연루된 세포골격의 주요한 구조적 성분인 미세소관에 결합하고 그것을 안정시킨다. 인간에서, 엑손 2, 3, 및 10의 대안적인 스플라이싱에 의해 산출된 타우의 6 개의 동형체가 있다. 단백질의 N-말단에서 엑손 2 및 3의 스플라이싱은 제로, 1 또는 2 개의 29 아미노산, 산성 도메인의 포함으로 이어지고 0N, 1N, 또는 2N 타우 각각이라 한다. C-말단에서 엑손 10의 포함은 엑손 10에 의해 인코딩된 미세소관 결합 도메인의 포함으로 이어진다. 타우 중 다른 곳에 3 개의 미세소관 결합 도메인이 있기 때문에, 이러한 타우 동형체 (엑손 10 내포물)는 4R 타우라 하고, 여기서 R은 미세소관 결합 도메인의 반복체의 수를 의미한다. (도 1). 엑손 10 없는 타우는 3R 타우라고 한다. 건강한 대상체에서, 3R:4R 타우의 비는 거의 배타적으로 3R 타우를 발현시키는 태아 조직 및 대략 동등 수준의 3R/4R 타우를 발현시키는 성인 인간 조직으로 발전적으로 조절된다. 정상 비의 3R/4R 타우로부터의 편차는 신경퇴행성 증후군 예컨대 FTD 타우병증의 특징이다.
어떤 구현예에서, 대상체의 중추신경계에서 4R:3R 타우 비는 정상, 낮은 또는 높을 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 중추신경계에서 "정상 4R:3R 타우 비"는 신경퇴행성 질환을 앓고 있지 않은 동일한 종 및 대략 동일한 연령으로부터 대상체의 중추신경계에서 4R:3R 타우 비와 실질적으로 동일한 중추신경계에서 4R:3R 타우 비를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 어떤 안티센스 올리고뉴클레오타이드 조성물 및/또는 방법은 대상체의 중추신경계에서 정상 4R:3R 타우 비를 감소시킨다. 다른 구현예에서, 어떤 안티센스 올리고뉴클레오타이드 조성물 및/또는 방법은 대상체의 중추신경계에서 낮은 4R:3R 타우 비를 감소시킨다.
어떤 구현예에서, 어떤 안티센스 올리고뉴클레오타이드 조성물 및/또는 방법은 대상체의 중추신경계에서 높은 4R:3R 타우 비를 감소시킨다. 어떤 구현예에서, 어떤 안티센스 올리고뉴클레오타이드 조성물 및/또는 방법은 상기 대상체에서 타우를 인코딩하는 핵산의 스플라이싱의 결함에 의해 야기된 높은 4R:3R 타우 비를 감소시킨다. 상기 대상체에서의 타우를 인코딩하는 핵산의 스플라이싱의 결함은, 예를 들면, 타우를 인코딩하는 핵산의 스플라이싱을 변경하고 높은 4R:3R 타우 비로 유도하는 유전적 돌연변이에 의해 야기될 수 있다. 돌연변이는 신규의, 비정상적인, 스플라이스 요소를 창출하는 치환 돌연변이 또는 결실 돌연변이일 수 있다. 타우를 인코딩하는 핵산의 스플라이싱를 변경하고 높은 4R:3R 타우 비로 유도할 수 있는 유전적 돌연변이의 비-제한적인 예는 N279K, P301S, 280, L284L, N296H, N296N, 296N, P301S, G303V, E10+11, E10+12, E10+13, E+10+14 및 E10+16, 및 E10+19를 포함할 수 있다.
어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여는 타우를 인코딩하는 핵산의 스플라이싱을 변경시켜서 대상체의 중추신경계에서 4R:3R 타우 비를 감소시킨다.
어떤 구현예에서, 타우 전사체의 엑손 10의 배제의 증가는 1 이상의 타우-연관된 장애를 억제한다. 어떤 구현예에서, 타우-연관된 장애는 하기 중 임의의 것일 수 있다: 알츠하이머병, 전측두엽 치매 (FTD), FTDP-17, 진행성 핵상 마비 (PSP), 만성적 외상성 뇌병증 (CTE), 피질기저 신경절 변성 (CBD), 간질, 드라벳 증후군, 권투선수 치매, 염색체와 관련된 파킨슨증, 라이티코-보딕 질환, 매듭-우세한 치매, 신경절교종, 신경절세포종, 수막혈관종증, 아급성 경화 범뇌염, 납 독성뇌증, 결절성 경화증, 할러포르덴-슈파츠 질환, 피크병, 은친화성 입자 질환, 핵상 마비, 피질기저 퇴행증, 또는 전두측두 변성이다.
어떤 표적 핵산 및 기전
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 핵산에 대해 상보적인 영역을 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 포함하거나 그것으로 구성된다. 어떤 구현예에서, 표적 핵산은 내인성 RNA 분자이다. 어떤 구현예에서, 표적 핵산은 전-mRNA이다. 어떤 구현예에서, 표적 핵산은 타우 전사체이다. 어떤 구현예에서, 표적 RNA는 타우 전-mRNA이다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 타우 전-mRNA의 영역에 대해 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 4R 동형체를 인코딩하는 엑손을 포함하는 타우 전-mRNA의 영역 내에서 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 인트론-엑손 스플라이스 접합을 포함하는 타우 전-mRNA의 영역에 대해 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 엑손 10에 인접한 인트론-엑손 스플라이스 접합을 포함하는 타우 전-mRNA의 영역에 대해 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 인트론 9와 엑손 10 사이의 인트론-엑손 스플라이스 접합을 포함하는 타우 전-mRNA의 영역에 대해 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 엑손 10과 인트론 10 사이의 인트론-엑손 스플라이스 접합을 포함하는 타우 전-mRNA의 영역에 대해 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 엑손 10으로 구성된 타우 전-mRNA의 영역 내에서 상보적이다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 엑손 10 내에서 엑손 스플라이싱 사일런서를 포함하는 타우 전-mRNA의 영역 내에서 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 엑손 10 내에서 엑손 스플라이싱 인핸서를 포함하는 타우 전-mRNA의 영역 내에서 상보적이다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 8 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되고 타우 전사체의 동등 길이의 표적 영역에 대해 상보적인 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 상보적 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121708 및 핵염기 122044 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121796 및 핵염기 122044 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121796 및 핵염기 121885 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121873 및 핵염기 121898 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121869 및 핵염기 121943 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 122020 및 핵염기 122044 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121881 및 핵염기 121898 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121880 및 핵염기 121897 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121879 및 핵염기 121896 내에 있다.
어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호:1의 핵염기 121878 및 핵염기 121895 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121877 및 핵염기 121894 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121876 및 핵염기 121893 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121875 및 핵염기 121892 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121874 및 핵염기 121891 내에 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 서열목록번호: 1의 핵염기 121873 및 핵염기 121890 내에 있다.
어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드 전-mRNA의 스플라이싱을 조절한다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 타우 전-mRNA의 스플라이싱을 조절한다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 타우 3R mRNA의 양을 증가시킨다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 타우 mRNA 중 엑손 10의 배제를 증가시킨다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 타우 mRNA 중 엑손 10의 포함을 감소시킨다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 3R 타우 mRNA의 양을 증가시킨다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 4R 타우 mRNA의 양을 감소시킨다.
어떤 구현예에서 엑손 10을 배제하기 위해 타우 전-mRNA의 스플라이싱을 변경하는 것이 바람직하다. 엑손 10을 배제하기 위해 타우 전-mRNA의 스플라이싱을 변경하여, 3R 타우의 발현은 증가될 것이고 4R 타우의 발현은 감소될 것이다. 어떤 구현예에서 4R 타우의 발현을 감소시키기 위해 타우 전-mRNA의 스플라이싱을 변경하는 것이 바람직하다.
어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 타우 3R mRNA의 양을 감소시킨다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 타우 mRNA 중 엑손 10의 배제를 감소시킨다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 타우 mRNA 중 엑손 10의 포함을 증가시킨다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 3R 타우 mRNA의 양을 감소시킨다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 4R 타우 mRNA의 양을 증가시킨다. 어떤 구현예에서 엑손 10을 포함하기 위해, 예를 들면 마우스 또는 동물 모델에서 표현형의 효과를 얻기 위해 타우 전-mRNA의 스플라이싱을 변경하는 것이 바람직하다.
어떤 약제학적 조성물
어떤 구현예에서, 본 발명은 1 이상의 안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 약제학적 조성물은 적당한 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함한다. 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 멸균한 염수 용액 및 1 이상의 안티센스 화합물을 포함한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 약제학적 조성물은 멸균한 염수 용액 및 1 이상의 안티센스 화합물 로 구성된다. 어떤 구현예에서, 멸균한 염수는 약품 등급 염수이다. 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 1 이상의 안티센스 화합물 및 멸균수를 포함한다. 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 1 이상의 안티센스 화합물 및 멸균수 로 구성된다. 어떤 구현예에서, 멸균한 염수는 약품 등급 물이다. 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 1 이상의 안티센스 화합물 및 포스페이트-완충된 염수 (PBS)를 포함한다. 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 1 이상의 안티센스 화합물 및 멸균한 포스페이트-완충된 염수 (PBS) 로 구성된다. 어떤 구현예에서, 멸균한 염수는 약품 등급 PBS이다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 약제학적 조성물 또는 제형의 제조를 위해 약제학적으로 허용가능한 활성 및/또는 불활성 물질과 혼합될 수 있다. 약제학적 조성물의 제형을 위한 조성물 및 방법은 투여 경로, 질환 정도, 또는 투여될 용량을 비제한적으로 포함하는 수많은 기준에 의존한다.
안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 임의의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 그와 같은 에스테르의 염을 포함한다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은, 인간을 포함하는 동물에게 투여시, (직접적으로 또는 간접적으로) 생물학적 활성 대사물 또는 그것의 잔류물을 제공할 수 있는 1 이상의 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 따라서, 예를 들면, 본 개시내용은 또한 안티센스 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 그와 같은 전구약물의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 다른 생물동등성에 관한 것이다. 적당한 약제학적으로 허용가능한 염은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 나트륨 및 칼륨 염.
전구약물은 활성 안티센스 올리고머 화합물을 형성하기 위해 신체 내의 내인성 뉴클레아제에 의해 절단된 올리고머 화합물의 하나 또는 둘 모두의 말단에서 추가의 뉴클레오사이드의 편입을 또한 포함할 수 있다.
지질 모이어티는 다양한 방법으로 핵산 치료에서 사용되었다. 어떤 그와 같은 방법에서, 핵산은 양이온성 지질 및 중성 지질의 혼합물로 만들어진 미리형성된 리포좀 또는 리포플렉스에 도입된다. 어떤 방법에서, 모노- 또는 폴리-양이온성 지질을 갖는 DNA 복합체는 중성 지질의 존재없이 형성된다. 어떤 구현예에서, 지질 모이어티는 특정한 세포 또는 조직에 대한 약제의 분포를 증가시키기 위해 선택된다. 어떤 구현예에서, 지질 모이어티는 지방 조직에 대한 약제의 분포를 증가시키기 위해 선택된다. 어떤 구현예에서, 지질 모이어티는 근육 조직에 대한 약제의 분포를 증가시키기 위해 선택된다.
어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 1 이상의 변형된 올리고뉴클레오타이드 및 1 이상의 부형제를 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 부형제는 물, 염 용액, 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 락토오스, 아밀라아제, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 규산, 점성 파라핀, 하이드록시메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리돈로부터 선택된다.
어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 전달 시스템을 포함한다. 전달 시스템의 예는, 비제한적으로, 리포좀 및 에멀젼을 포함한다. 어떤 전달 시스템은 소수성 화합물을 포함하는 것을 포함하는 어떤 약제학적 조성물을 제조하는데 유용하다. 어떤 구현예에서, 어떤 유기 용매 예컨대 디메틸설폭사이드가 사용된다.
어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 본 발명의 1 이상의 약제를 특정 조직 또는 세포형에 전달하기 위해 설계된 1 이상의 조직-특이적 전달 분자를 포함한다. 예를 들면, 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 조직-특이적 항체로 코팅된 리포좀을 포함한다.
어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 보조용매 시스템을 포함한다. 그와 같은 보조용매 시스템의 어떤 것은, 예를 들면, 벤질 알코올, 무극성 계면활성제, 수-혼화성 유기 폴리머, 및 수성상을 포함한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 보조용매 시스템은 소수성 화합물을 위해 사용된다. 그와 같은 보조용매 시스템의 비-제한적인 예는 VPD 보조용매 시스템이고, 이것은 3% w/v 벤질 알코올, 8% w/v의 무극성 계면활성제 Polysorbate 80TM 및 65% w/v 폴리에틸렌 글리콜 300을 포함하는 무수 에탄올의 용액이다. 그와 같은 보조용매 시스템의 부분은 그것의 용해도 및 독성 특성을 유의미하게 변경시키기 않으면서 상당히 변화될 수 있다. 더욱이, 보조용매 구성성분의 동일성은 변할 수 있고: 예를 들면, 다른 계면활성제는 Polysorbate 80TM 대신에 사용될 수 있고, 폴리에틸렌 글리콜의 분획 크기는 변할 수 있고; 다른 생체적합성 폴리머는 폴리에틸렌 글리콜, 예를 들면, 폴리비닐 피롤리돈를 대신할 수 있다; 및 다른 당류 또는 다당류는 덱스트로오스 대신에 치환될 수 있다.
어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 경구 투여용으로 제조된다. 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 구강 투여용으로 제조된다.
어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 주사 투여용으로 제조된다 (예를 들면, 정맥내, 피하, 근육내, 등). 그와 같은 구현예의 어떤 것에서, 약제학적 조성물은 담체를 포함하고 수용액, 예컨대 물 또는 생리적으로 양립가능한 버퍼 예컨대 한스 용액, 링거액, 또는 생리적 염수 버퍼에서 제형된다. 어떤 구현예에서, 다른 성분이 포함된다 (예를 들면, 용해도에 도움이 되거나 보존제로서 쓰이는 성분). 어떤 구현예에서, 주사가능 서스펜션은 적절한 액체 담체, 현탁화제 등을 사용하영 제조된다. 주사용 어떤 약제학적 조성물은, 예를 들면, 앰풀 또는 다중-용량 용기에서단위 투여 형태로 제공된다. 주사용 어떤 약제학적 조성물은 오일성 또는 수성 비히클에서 서스펜션, 용액 또는 에멀젼이고, 제형제 예컨대 현탁화제, 안정제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 주사용 약제학적 조성물에서 사용하는데 적당한 어떤 용매는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 친지질성 용매 및 지방 오일, 예컨대 참께 오일, 합성 지방산 에스테르, 예컨대 에틸 올레이트 또는 트리글리세라이드, 및 리포좀. 수성 주사 서스펜션은 서스펜션, 예컨대 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스, 소르비톨, 또는 덱스트란의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 임의로, 그와 같은 서스펜션은 고농축 용액의 제조를 허용하도록 약제의 용해도를 증가시키는 적당한 안정제 및 제제들을 또한 함유할 수 있다.
어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 점막통과 투여용으로 제조된다. 그와 같은 구현예의 어떤 것에서 침투될 배리어에 적절한 침투제는 제형에서 사용된다. 그와 같은 침투제는 일반적으로 당해기술에서 공지되어 있다.
어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 올리고뉴클레오타이드를 치료적으로 효과적인 양으로 포함한다. 어떤 구현예에서, 치료적으로 효과적인 양은 질환의 증상을 예방, 완화 또는 개선하거나 치료될 대상체의 생존을 지속하는데 충분하다. 치료적으로 효과적인 양의 결정은 당해분야의 숙련가의 능력 내에 있다.
어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 1 이상의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 전구약물로서 제형된다. 어떤 구현예에서, 생체내 투여 시, 전구약물은 생물학적으로, 약제학적으로 또는 치료적으로 더 많은 활성 형태의 올리고뉴클레오타이드로 화학적으로 전환된다. 어떤 구현예에서, 전구약물이 유용한 것은, 상응하는 활성 형태보다 투여가 더 쉽기 때문이다. 예를 들면, 어떤 예에서, 전구약물은 상응하는 활성 형태인 것보다(예를 들면, 경구 투여를 통해) 더 생체이용가능할 수 있다. 어떤 예에서, 전구약물은 상응하는 활성 형태와 비교하여 개선된 용해도를 가질 수 있다. 어떤 구현예에서, 전구약물은 상응하는 활성 형태보다 덜 수용성이다. 어떤 예에서, 그와 같은 전구약물은 세포막을 가로지르는 우수한 전달을 가지며, 여기서 수용해도는 이동도에 해롭다. 어떤 구현예에서, 전구약물은 에스테르이다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 에스테르는, 투여 시 카복실산으로 대사작용으로 가수분해된다. 어떤 예에서 카복실산 함유 화합물은 상응하는 활성 형태. 어떤 구현예에서, 전구약물은 산 그룹에 결합된 짧은 펩타이드 (폴리아미노산)을 포함한다. 그와 같은 구현예의 어떤 것에서, 펩타이드는 투여히 절단되어 상응하는 활성 형태를 형성한다.
어떤 구현예에서, 본 발명은 세포에서 표적 핵산의 양 또는 활성을 축소시키기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 어떤 구현예에서, 세포는 동물 내의 것이다. 어떤 구현예에서, 동물은 포유동물이다. 어떤 구현예에서, 동물은 설치류이다. 어떤 구현예에서, 동물은 영장류이다. 어떤 구현예에서, 동물은 비-인간 영장류이다. 어떤 구현예에서, 동물은 인간이다
어떤 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 올리고머 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 동물에게 투여하는 방법을 제공한다. 적당한 투여 경로, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 경구, 직장, 점막통과, 창자, 장의, 국소, 좌약, 흡입을 통해, 척추강내, 뇌심실내, 복강내, 비강내, 안구내, 종양내, 및 비경구 (예를 들면, 정맥내, 근육내, 수질내, 및 피하). 어떤 구현예에서, 약제학적 척추강내는 전신 노출보다는 오히려 국소를 달성하기 위해 투여된다. 예를 들면, 약제학적 조성물은 원하는 효과 면적에서 (예를 들면, 눈, 귀로) 직접적으로 주입될 수 있다.
어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 타우-연관된 장애를 갖는 동물에게 투여된다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 투여는 4R 동형체의 발현에서의 감소를 야기한다. 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 타우-연관된 장애와 연관된 적어도 하나의 증상을 갖는 동물에게 투여된다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 투여는 적어도 하나의 증상의 개선을 야기한다. 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물의 동물에의 투여는 동물의 세포에서 4R mRNA의 감소를 야기한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 투여는 3R mRNA에서의 증가를 야기한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 투여는 4R 단백질에서의 증가 및 3R 단백질에서의 증가를 야기한다. 어떤 구현예에서, 3R 단백질은 4R 단백질보다 바람직하다. 어떤 구현예에서, 어떤 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여는 1 이상의 타우-연관된 장애의 개시를 지연시킨다. 어떤 구현예에서, 어떤 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여는 발작을 예방 또는 감소시킨다. 어떤 구현예에서, 어떤 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여는, 4R 단백질의 양이 CNS에서 감소되도록 한다. 어떤 구현예에서, 어떤 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여는 세포성 표현형을 구제한다.
참조에 의한 비제한 개시내용 및 편입
본원에서 기재된 어떤 화합물, 조성물 및 방법이 어떤 구현예에 따라 구체적으로 기재되었지만, 하기 실시예는 본원에서 기재된 화합물을 단지 설명하기 위해 쓰이고 그것을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본원에서 인용된 각각의 참조, 유전자은행 수납 번호, 등은 본원에 그 전체가 참고로 편입되어 있다.
이러한 제출을 수반하는 서열목록은 요구되는 바와 같은 "RNA" 또는 "DNA"로서 각각의 서열을 확인하지만, 실제로는, 이들 서열은 화학적 변형의 임의의 조합으로 변형될 수 있다. 당해분야의 숙련가는, 변형된 올리고뉴클레오타이드를 기재하기 위한 "RNA" 또는 "DNA"와 같은 명칭이, 어떤 예에서, 임의적이라는 것을 쉽게 인식할 것이다. 예를 들면, 2'-OH 당 모이어티 및 티민 염기를 포함하는 뉴클레오사이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 변형된 당 (DNA의 천연 2'-H에 대한 2'-OH)을 갖는 DNA로서 또는 변형된 염기 (RNA의 천연 우라실에 대한 티민 (메틸화된 우라실))을 갖는 RNA로서 기재될 수 있다.
따라서, 서열목록에 있는 것들 것 비제한적으로 포함하는 본원에서 제공된 핵산 서열은, 변형된 핵염기를 갖는 그와 같은 핵산을 비제한적으로 포함하는, 천연 또는 변형된 RNA 및/또는 DNA의 임의의 조합을 함유하는 핵산을 포함하는 것으로 의도된다. 추가 실시예에 의해 그리고 비제한적으로, 핵염기 서열 "ATCGATCG"을 갖는 올리고머 화합물은, 변형 또는 비변형되든지, 그와 같은 화합물을 비제한적으로 포함하는 그와 같은 핵염기 서열을 갖는 임의의 올리고머 화합물을 포함하고, 상기 화합물은 RNA 염기, 예컨대 서열 "AUCGAUCG"를 갖는 것들 및 일부 DNA 염기 및 일부 RNA 염기 예컨대 "AUCGATCG"를 갖는 것들 및 다른 변형된 또는 천연 발생 염기, 예컨대 "ATmeCGAUCG"를 갖는 올리고머 화합물을 포함하고, 여기서 meC는 5-위치에서 메틸 그룹을 포함하는 시토신 염기를 나타낸다.
실시예
참조에 의한 비제한적인 개시내용 및 편입
본원에서 기재된 어떤 화합물, 조성물 및 방법이 어떤 구현예에 따른 특이성과 함께 기재되었지만, 하기 실시예는 본원에서 기재된 화합물을 잔지 설명하기 위한 것이고 화합물을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본원에서 인용된 각각의 참조는 본원에 그 전체가 참고로 편입되어 있다.
실시예 1: 인간 타우 엑손 10에 대한 균일한 2'-MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
일련의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 인간 타우의 엑손 10을 표적으로 하기 위해 설계되었고 엑손 10 내포물을 시험관내에서 감소시키는 그것의 효과에 대해 스크리닝되었다. 이들 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 부위를 가로질러 4 개의 뉴클레오타이드 업스트림 또는 다운스트림 (즉 마이크로워크)를 이동시켜서 설계되었다. 그 길이가 18 개의 뉴클레오사이드이고, 여기서 각 뉴클레오사이드는 2'-MOE 변형을 갖는다. 변형된 올리고뉴클레오타이드 곳곳의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결 (P=S)이다. 변형된 올리고뉴클레오타이드 곳곳의 모든 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
"개시 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 5'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. "중단 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 3'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. 아래의 표에서 열거된 각 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호: 1에 대해 표적화된다 (뉴클레오타이드 9240000 내지 9381000로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_010783.15).
A172 세포는 Lipofectamine2000®를 5 nM 농도의 변형된 올리고뉴클레오타이드와 함께 사용하여 형질감염되었다. 대략 24 시간의 치료 기간 후, RNA는 세포로부터 단리되었고 엑손 10을 함유하는 타우 전사체의 mRNA 수준은 정량적 실시간 PCR에 의해 측정되었다. 인간 프라이머 프로브 세트 9_10 또는 10_11는 mRNA 수준을 측정하기 위해 사용되었다. 타우 엑손 10 mRNA 수준은, RIBOGREEN®에 의해 측정된 바와 같이 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 미처리된 대조군 수준에 대해 타우 엑손 10 mRNA 발현의 퍼센트로서 제공되고, "% UTC"로서 나타낸다.
인간 프라이머 프로브 세트 9_10 (서열목록번호: 2로서 본원에서 지정된 순방향 서열 CACTGAGAACCTGAAGCACC; 서열목록번호: 3으로서 본원에서 지정된 역방향 서열 GGACTGGACGTTGCTAAGATC; 서열목록번호: 4로서 본원에서 지정된 프로브 서열 TTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCC).
인간 프라이머 프로브 세트 10_11 (서열목록번호: 5로서 본원에서 지정된 순방향 서열 GGATAATATCAAACACGTCCCG; 서열목록번호: 6으로서 본원에서 지정된 역방향 서열 TGCCTAATGAGCCACACTTG; 서열목록번호: 7로서 본원에서 지정된 프로브 서열 GTCTACAAACCAGTTGACCTGAGC).
표 1 및 2에서 실증된 바와 같이, ISIS 549583, 549584, 549585, 549586, 549595, 549571, 549566, 549570, 549587, 549568, 549617, 549567, 549576, 549577, 549580, 및 549581은 미처리된 대조군과 비교하여 인간 타우 엑손 10 내포물에서 70% 초과의 감소를 보여준다.
표 1
프라이머 프로브 세트 9_10을 사용하는 인간 타우 엑손 10에 대한 균일한 2'-MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
Figure pct00005
Figure pct00006
표 2
프라이머 프로브 세트 10_11을 사용하는 인간 타우 엑손 10에 대한 균일한 2'-MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
실시예 2: 인간 타우 엑손 10에 대한 균일한 2 '- MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
일련의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 인간 타우의 엑손 10을 표적으로 하기 위해 설계되었고 엑손 10 내포물을 시험관내에서 감소시키는 그것의 효과에 대해 스크리닝되었다. 이들 변형된 올리고뉴클레오타이드는 표적 부위를 가로질러 1 개의 뉴클레오타이드 업스트림 또는 다운스트림 (즉 마이크로워크)를 이동시켜서 설계되었다. 그 길이가 18 개의 뉴클레오사이드이고, 여기서 각 뉴클레오사이드는 2'-MOE 변형을 갖는다. 변형된 올리고뉴클레오타이드 곳곳의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결 (P=S)이다. 변형된 올리고뉴클레오타이드 곳곳의 모든 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
"개시 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 5'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. "중단 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 3'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. 아래의 표에서 열거된 각 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호: 1에 대해 표적화된다 (뉴클레오타이드 9240000 내지 9381000로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_010783.15).
A172 세포는 Lipofectamine2000®를 5 nM 농도의 변형된 올리고뉴클레오타이드와 함께 사용하여 형질감염되었다. 대략 24 시간의 치료 기간 후, RNA는 세포로부터 단리되었고 엑손 10을 함유하는 타우 전사체의 mRNA 수준은 정량적 실시간 PCR에 의해 측정되었다. 인간 타우 프라이머 프로브 세트 10_11 또는 9_10 R5는 mRNA 수준을 측정하기 위해 사용되었다. 타우 엑손 10 mRNA 수준은, RIBOGREEN®에 의해 측정된 바와 같이 총 RNA 함량에 따라 조정되었다. 결과는 미처리된 대조군 수준에 대한 타우 엑손 10 mRNA 발현의 퍼센트로서 제공되고, "% UTC"로서 나타낸다.
인간 프라이머 프로브 세트 10_11 (서열목록번호: 5로서 본원에서 지정된 순방향 서열 GGATAATATCAAACACGTCCCG; 서열목록번호: 6으로서 본원에서 지정된 역방향 서열 TGCCTAATGAGCCACACTTG; 서열목록번호: 7로서 본원에서 지정된 프로브 서열 GTCTACAAACCAGTTGACCTGAGC).
인간 타우 프라이머 프로브 세트 9_10 R5 (서열목록번호: 2로서 본원에서 지정된 순방향 서열 CACTGAGAACCTGAAGCACC; 서열목록번호: 3으로서 본원에서 지정된 역방향 서열 GGACGTTGCTAAGATCCAGCT; 서열목록번호: 4로서 본원에서 지정된 프로브 서열 TTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCC).
표 3
인간 타우 프라이머 프로브 세트 10_11을 사용하는 인간 타우 엑손 10에 대한 균일한 2'-MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
표 4
인간 타우 프라이머 프로브 세트 9_10 R5를 사용하는 인간 타우 엑손 10에 대한 균일한 2'- MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
실시예 3: 인간 타우 엑손 10에 대한 균일한 2 '- MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과
표 3 및 4로부터의 몇 개의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 선택되었고 시험관내 인간 타우 엑손 10 발현의 억제에 대한 그것의 효과에 대해 추가로 평가되었다. ISIS 549595은 비교를 위한 연구에서 포함되었다.
"개시 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 5'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. "중단 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 3'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. 아래의 표에서 열거된 각 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호: 1에 대해 표적화된다 (뉴클레오타이드 9240000 내지 9381000로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_010783.15).
A172 세포는, 아래의 표에서 명시된 바와 같이 Lipofectamine2000®를 0, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 또는 30 nM 농도의 변형된 올리고뉴클레오타이드와 함께 사용하여 형질감염되었다. 대략 24 시간의 치료 기간 후, RNA는 세포로부터 단리되었고 엑손 10을 함유하는 타우 전사체의 mRNA 수준은 정량적 실시간 PCR에 의해 측정되었다. 인간 타우 프라이머 프로브 세트 9_10 R5은 ISIS 549581를 제외하고 mRNA 수준을 측정하기 위해 사용되었다. 인간 타우 프라이머 프로브 세트 10_11은 이러한 올리고뉴클레오타이드에 대해 사용되었다. 인간 타우 엑손 10 mRNA 수준은, RIBOGREEN®에 의해 측정된 바와 같이 총 RNA 함량에 따라 조정되었다.
각 올리고뉴클레오타이드의 반최대 억제 농도 (IC50)는 아래의 표에서 제공되고 각 농도에서 달성된 인간 타우 엑손 10 mRNA 발현의 퍼센트 억제와 비교하여 사용된 올리고뉴클레오타이드의 농도를 플롯팅하고, 인간 타우 엑손 10 mRNA 발현의 50% 억제가 대조군과 비교하여 달성되는 올리고뉴클레오타이드의 농도에 주목하여 계산되었다. 결과는 아래에서 제공된다.
표 5
인간 타우 엑손 10 발현에 대한 균일한 2'-MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과
Figure pct00016
실시예 4: 인간 타우 엑손 10에 대한 균일한 2 '- MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과
표 4 로부터의 몇 개의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 선택되었고 시험관내 인간 타우 엑손 10 발현의 억제에 대한 그것의 효과에 대해 추가로 평가되었다. ISIS 549595은 비교를 위한 연구에서 포함되었다.
"개시 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 5'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. "중단 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 3'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. 아래의 표에서 열거된 각 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호: 1에 대해 표적화된다 (뉴클레오타이드 9240000 내지 9381000로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_010783.15).
A172 세포는, 아래의 표에서 명시된 바와 같이 Lipofectamine2000®를 0, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 또는 30 nM 농도의 변형된 올리고뉴클레오타이드와 함께 사용하여 형질감염되었다. 대략 24 시간의 치료 기간 후, RNA는 세포로부터 단리되었고 엑손 10을 함유하는 타우 전사체의 mRNA 수준은 정량적 실시간 PCR에 의해 측정되었다. 인간 타우 프라이머 프로브 세트 9_10 R5는 mRNA 수준을 측정하기 위해 사용되었다. 인간 타우 엑손 10 mRNA 수준은, RIBOGREEN®에 의해 측정된 바와 같이 총 RNA 함량에 따라 조정되었다.
각 올리고뉴클레오타이드의 IC50은 실시예 3에서 실증된 것과 동일한 방식으로 계산되었고 결과는 아래에서 제공된다.
표 6
인간 타우 엑손 10 발현에 대한 균일한 2'-MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과
Figure pct00017
실시예 5: 인간 타우 엑손 10에 대한 균일한 2'-MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과
표 3 및 4로부터의 몇 개의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 선택되었고 시험관내 인간 타우 엑손 10 발현의 억제에 대한 그것의 효과에 대해 추가로 평가되었다. ISIS 549595은 비교를 위한 연구에서 포함되었다.
"개시 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 5'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. "중단 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 3'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. 아래의 표에서 열거된 각 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호: 1에 대해 표적화된다 (뉴클레오타이드 9240000 내지 9381000로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_010783.15).
A172 세포는, 아래의 표에서 명시된 바와 같이 Lipofectamine2000®를 0, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 또는 30 nM 농도의 변형된 올리고뉴클레오타이드와 함께 사용하여 형질감염되었다. 대략 24 시간의 치료 기간 후, RNA는 세포로부터 단리되었고 엑손 10을 함유하는 타우 전사체의 mRNA 수준은 정량적 실시간 PCR에 의해 측정되었다. 인간 타우 프라이머 프로브 세트 10_11은 ISIS 549595를 제외하고 mRNA 수준을 측정하기 위해 사용되었다. 인간 타우 프라이머 프로브 세트 9_10 R5는 이러한 올리고뉴클레오타이드에 대해 사용되었다. 인간 타우 엑손 10 mRNA 수준은, RIBOGREEN®에 의해 측정된 바와 같이 총 RNA 함량에 따라 조정되었다.
각 올리고뉴클레오타이드의 IC50은 실시예 3에서 실증된 것과 동일한 방식으로 계산되었고 결과는 아래에서 제공된다.
표 7
인간 타우 엑손 10 발현에 대한 균일한 2'-MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과
Figure pct00018
실시예 6: 인간 타우 엑손 10에 대한 균일한 2'-MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과
표 1 및 4로부터의 몇 개의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 선택되었고 시험관내 인간 타우 엑손 10 발현의 억제에 대한 그것의 효과에 대해 평가되었다. ISIS 617782, 617781, 및 415833는 비교용 연구에서 포함되었다.
"개시 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 5'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. "중단 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 3'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. 아래의 표에서 열거된 각 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호: 1에 대해 표적화된다 (뉴클레오타이드 9240000 내지 9381000로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_010783.15).
ISIS 617782는 그 길이가 21 개의 뉴클레오사이드이고, 여기서 각 뉴클레오사이드는 2'-OCH3 변형을 가지며 하첨자 "m"으로서 나타낸다. 변형된 올리고뉴클레오타이드 곳곳의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결 (P=S)이다.
ISIS 617781는 그 길이가 18 개의 뉴클레오사이드이고, 여기서 각 뉴클레오사이드는 2'-OCH3 변형을 가지며 하첨자 "m"으로서 나타낸다. 변형된 올리고뉴클레오타이드 곳곳의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결 (P=S)이다.
ISIS 415833는 그 길이가 20 개의 뉴클레오사이드이고, 여기서 각 뉴클레오사이드는 2'-MOE 변형을 갖는다. 변형된 올리고뉴클레오타이드 곳곳의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결 (P=S)이다. 변형된 올리고뉴클레오타이드 곳곳의 모든 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
A172 세포는, 아래의 표에서 명시된 바와 같이 Lipofectamine2000®를 0, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 또는 30 nM 농도의 변형된 올리고뉴클레오타이드와 함께 사용하여 형질감염되었다. 대략 24 시간의 치료 기간 후, RNA는 세포로부터 단리되었고 엑손 10을 함유하는 타우 전사체의 mRNA 수준은 정량적 실시간 PCR에 의해 측정되었다. 인간 타우 프라이머 프로브 세트 9_10 R5은 ISIS 617781 및 415883를 제외하고 mRNA 수준을 측정하기 위해 사용되었다. 인간 타우 프라이머 프로브 세트 10_11은 이들 2 개의 올리고뉴클레오타이드에 대해 사용되었다. 인간 타우 엑손 10 mRNA 수준은, RIBOGREEN®에 의해 측정된 바와 같이 총 RNA 함량에 따라 조정되었다.
각 올리고뉴클레오타이드의 IC50은 실시예 3에서 실증된 것과 동일한 방식으로 계산되었고 결과는 아래에서 제공된다.
표 8
인간 타우 엑손 10 발현에 대한 균일한 2'-MOE 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과
Figure pct00019
실시예 7: 인간 타우의 엑손 10을 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드
일련의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 인간 타우의 엑손 10을 표적으로 하기 위해 설계되었다."개시 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 5'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. "중단 부위"는 변형된 올리고뉴클레오타이드가 표적화된 3'-최말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. 아래의 표에서 열거된 각 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열목록번호: 1에 대해 표적화된다 (뉴클레오타이드 9240000 내지 9381000로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_010783.15).
아래의 표에서, "mC"는 5-메틸시토신을 나타내고, 하첨자 "e"는 2'-O-메톡시에틸을 나타내고, 하첨자 "f"는 2'-데옥시플루오로를 나타내고, 하첨자 "d"는 2'-데옥시를 나타내고, 하첨자 "p"는 펩타이드 핵산 모노머를 나타내고, 하첨자 "s"는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 하첨자 "o"는 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, "P-"는 5'-말단에서 O-링커를 나타내고 (PNA Bio, Thousand Oaks, CA), "-N"는 3'-말단 카복시 아미드를 나타낸다.
표 9
인간 타우를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
실시예 8: 인간 타우 엑손 10을 표적으로 하는 올리고뉴클레오타이드의 생체내 분석
스프래그 다우리 랫트는 표 11에서 제공된 실험에 대해 3 마리의 랫트의 그룹 및 표 12 에서 제공된 실험에 대해 2 또는 4 마리의 랫트의 그룹으로 분리되었다. 각 그룹의 랫트 중 각각의 랫트에게 표 3, 4, 또는 9로부터 선택된 올리고뉴클레오타이드의 단일 3 mg 척추강내 (IT) 용량이 투여되었다. 3 시간 내지 8 주의 주사 후 다양한 시점에서, 7 곳의 상이한 신체 부분의 동작은 각각의 랫트에 대해 평가되었다. 7 신체 부분은 아래이다: (1) 랫트의 꼬리; (2) 랫트의 후측 자세; (3) 랫트의 뒷다리; (4) 랫트의 뒷발; (5) 랫트의 앞발; (6) 랫트의 전측 자세; 및 (7) 랫트의 머리. 각각의 7 곳의 상이한 신체 부분에 대해, 각각의 랫트는, 신체가 이동하면 0의 하위-점수로서 주어지거나 신체 부분이 마비되었으면 1로서 주어진다. 각각의 7 곳의 신체 부분이 평가된 후, 하위-점수는 각각의 랫트에 대해 합해지고 그 다음 각 그룹에 대해 평균을 구했다다. 예를 들면, 랫트의 꼬리, 머리, 및 모든 다른 평가된 신체 부분이 3 mg IT 투여 후 3 시간 이동하였으면, 합산 0을 얻었다. 또 하나의 랫트가 3 mg IT 투여 3 시간 후 꼬리를 움직이지 못했지만 모든 다른 평가된 신체 부분이 움직였으면, 1의 점수를 받았다. 염수 처리된 랫트 일반적으로 0의 점수를 수용한다. 범위의 윗쪽 끝의 점수는 독성을 시사한다. 결과는 표 11 및 12에서 각 처리 그룹의 평균 점수로서 제공된다.
표 11
3 mg IT 볼러스 생체내 연구
Figure pct00023
표 12
3 mg IT 볼러스 생체내 연구
Figure pct00024
실시예 9: 인간 타우 엑손 10을 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 생체내 억제 효과
B6.Cg-Mapttm1(EGFP)Klt Tg(MAPT)8cPdav/J 마우스 (Jackson Laboratory)는 인간 타우의 3R 및 4R 동형체를 발현한다. 4R 동형체의 3R 동형체로의 이동시 표 3, 4, 또는 8로부터 선택된 올리고뉴클레오타이드의 효과는 이러한 마우스 모델에서 평가되었다.
4 마리의 B6.Cg-Mapttm1(EGFP)Klt Tg(MAPT)8cPdav/J 마우스 (3-4 월령)의 그룹에게 뇌심실내 (ICV) 볼러스 주사를 통해 500 μg의 올리고뉴클레오타이드가 투여되었다. 4 마리 마우스의 대조군 그룹은 유사하게 PBS로 처리되었다. 투여 2 주 후, 동물이 희생되었고 RNA는 대뇌겉질, 해마, 및/또는 척수로부터 추출되었다. 4R 동형체의 mRNA 발현 및 총 인간 타우는 qRT-PCR에 의해 분석되었다. 4R 동형체는 하기를 사용하여 분석되었다: 프라이머 프로브 세트 hTau 9_10 접합 (순방향 서열 5'-CACTGAGAACCTGAAGCACC-3', 서열목록번호: 219; 역방향 서열 5'-GTTGCTAAGATCCAGCTTCTT-3', 서열목록번호: 220; 프로브 서열 5'-TTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCC-3', 서열목록번호: 221) 또는 프라이머 프로브 세트 hTau 10_11 접합 (순방향 서열 5'-AATATCAAACACGTCCCGGGAG-3', 서열목록번호: 222; 역방향 서열 5'-TGCCTAATGAGCCACACTTG-3', 서열목록번호: 223; 프로브 서열 5'-GTCTACAAACCAGTTGACCTGAGC-3', 서열목록번호: 224). 총 타우는 프라이머 프로브 세트 RTS3104를 사용하여 분석되었다 (순방향 서열 5'-AAGATTGGGTCCCTGGACAAT-3', 서열목록번호: 225; 역방향 서열 5'-AGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATT-3', 서열목록번호: 226; 프로브 서열 5'-CACCCACGTCCCTGGCGGA-3', 서열목록번호: 227). 4R 동형체 대 총 타우 mRNA 수준의 비는 마우스 GAPDH 수준에 대해 정규화되었고, 이것은 프라이머 프로브 세트 mGapdh_LTS00102를 사용하여 분석되었다 (순방향 서열 5'-GGCAAATTCAACGGCACAGT-3', 서열목록번호: 228; 역방향 서열 5'-GGGTCTCGCTCCTGGAAGAT-3', 서열목록번호: 229; 프로브 서열 5'-AAGGCCGAGAATGGGAAGCTTGTCATC-3', 서열목록번호: 230). 결과는 PBS 그룹에 대한 평균 비로 나눈 각 처리 그룹에 대한 4R 동형체 대 GAPDH 수준에 대해 정규화된 총 타우 mRNA의 평균 비로서 표 13-15에서 제공된다. "ND"는 데이타 없음을 나타낸다.
염증은 피질, 해마, 및/또는 척수에서 AIF1의 발현 수준을 결정하기 위해 RT-PCT를 수행하여 평가되었다. GADPH에 대한 모든 샘플의 정규화 후, 각 처리 그룹에 대한 평균 AIF1 값은 PBS 대조군 그룹에 대한 평균 AIF1 값으로 나눈다. 결과는 표 13-15에서 제공된다.
표 13
유전자이식 마우스를 스킵핑하는 타우 엑손 10에 대한 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
Figure pct00025
표 14
유전자이식 마우스를 스킵핑하는 타우 엑손 10에 대한 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
Figure pct00026
표 15
유전자이식 마우스를 스킵핑하는 타우 엑손 10에 대한 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
Figure pct00027
실시예 10: 인간 타우 엑손 10 스킵핑에 대한 혼합된 골격 올리고뉴클레오타이드의 생체내 효과
4 마리의 B6.Cg-Mapttm1(EGFP)Klt Tg(MAPT)8cPdav/J 마우스 (참고 실시예 9)의 그룹에게 표 3, 4, 또는 9로부터 선택된 125 μg의 올리고뉴클레오타이드 또는 PBS가 ICV 볼러스 주사를 통해 투여되었다. 투여 2 주 후, 동물이 희생되었고 RNA는 대뇌겉질 및/또는 해마로부터 추출되었고 실시예 9에서 기재된 바와 같이 분석되었다. 결과는 각 처리 그룹에 대한 PBS에 대해 정규화된 4R 동형체 대 총 타우 mRNA의 평균 비로서 표 16 및 17에서 제공된다.
동종이식편 염증성 인자 (AIF1)의 발현은 피질 및 척수에서 AIF1의 발현 수준을 결정하기 위해 RT-PCT를 수행하여 염증의 측정으로서 시험되었다. GADPH에 대한 모든 샘플의 정규화 후, 각 처리 그룹에 대한 평균 AIF1 값은 PBS 대조군 그룹에 대한 평균 AIF1 값으로 나눈다. 결과는 표 16 및 17에서 제공된다.
표 16
유전자이식 마우스를 스킵핑하는 타우 엑손 10에 대한 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
Figure pct00028
표 17
유전자이식 마우스를 스킵핑하는 타우 엑손 10에 대한 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
Figure pct00029
SEQUENCE LISTING <110> Isis Pharmaceuticals, Inc. <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING TAU EXPRESSION <130> BIOL0220WO <150> 61/785,177 <151> 2013-03-14 <150> 61/943,931 <151> 2014-02-24 <160> 232 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 141001 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 aatttataaa ggaaaaaggt ttaattgact cacagttcag catgtctggg gaagtgttag 60 gaaacttaca atcatggcag aagagaaagc aaaccatcct ttctcacatg gtgacaggaa 120 gagcaaagcg gggtaagccc cttacaaaac caccagatct catgagaact cactatcacg 180 agaacaccat ggaggtaact gcccccatga ttcaattacc tcccaccagg tccctcccac 240 gacatgtggg gattatgcga actccaactc aagatgagat ttgggtgggg acacagccaa 300 accatatcag aagcttaacc ttctttggag catgattatt cagttgaacc taagttcagt 360 agtcacccag ttatgctgtc ttcagctact attttccata tgtttctcaa acatctgata 420 tatcacactg gctagtgcac tttcttccac cagcatacca tctcaattta ccactttaac 480 aattggactg ccactttgtg tcagggacta tctgtgctcc aactactaca agtgataagg 540 tcctcactga cagccaggga gcaagtgatc cagctctaaa actcacctta tcatctgctt 600 tcctagacca ctcctaacaa ccaactattc tgggttgagt tctccaagag gcagagagtt 660 caggatacag aatgttgttt tgtttttgtt gttgttgctg ttgttgtttg tgtgtgtgtt 720 tgggcttttt tgagacggag tctcactctg ttgcccaggt agaagtgcag tggcatgatc 780 tcagctccct gcaacctcca cctcctgggt ttaagtgatt cccctgcctc cacctcctga 840 gtagctggga ctacaagtgt gcgccaccac acccagctaa tttttgtgtt tttagtagaa 900 atggggtttt accatgttgg ctaggctgct cccaaactcc tgacctccag tgatccacct 960 acctctgcct cccaaagtgc tgggattaca ggcgtgagcc accacaccca gcccagaatg 1020 tttattagaa tgcacaatta ataccagagg cagtggggaa ggaaggactg agcagaggag 1080 gaagttgagt tgtgattcaa cccaacaact gcctggctgg catggggagc tctggagtta 1140 aatagggcca tcagactttc ccagtgtggg gccaacatga ctgggtcttt atacccccac 1200 ctctgtcagt cactcaacgt ggtctccctg caacaaggtg actcttgcag ccgagacaat 1260 ccctgaaggg acagagggct gaagcctgtc tgccaacagc actcccagtg gctggaacaa 1320 gtccttccct ataggggaat ctgggcggca cacctccatc tccatgtcca tcacatacga 1380 tatcacagac atttaaatat tttgataact gtacataaga gtttccttta taatcttata 1440 gatcttattt tatgcatttg aaaatattct tctgagacag ggcttttatc atattgccat 1500 agggtgccac gatataaaaa aggttaaata ctctctgatt cagaagtatc caatgatgac 1560 ttctctctca tgcatttaat tgaaaatctg gtttttctcc ttctctgcta gttctctacc 1620 tctctcccca cctcccacat catagcctat tcacatatgt ctgaatctca tgatagacaa 1680 gttcaggttc ttttcccagg ttctttttac cacatccccc cacccccaca taaaaagtat 1740 atatggcaca gcctaggttc cacccaaatc ctttctcctc ttcttcctgg gcccacaact 1800 ctcctacata cattggtata ccttgcgctt agggatggcc atgtgactaa gttctaacag 1860 tggaacatga tcagatgcca cttccagcct ctaagacagc cagtgtgttt cctccataag 1920 ctccttctct tcctcccaac tggagactct aaatgatgac cctgcctcaa gcaagcaaac 1980 aacaagtccc tcaggggtgg tgtaggctgc aaatggaagg agcttgagtc ccaaaccttc 2040 cacggagaag gctggctacc aacctggatc actcacccaa gactgctcga agagttggtt 2100 tgaaccattg tgttttgggg tctatttatt acaacagttt agcttgcttt gtgaatagat 2160 ttagtggcag agcctccaaa ttctatagat acattgatct cagtcctaac cgcatctgga 2220 acaccattaa ataaaggaat tgcaaaccca gagaaggtaa tgaatttgtc taaggtcata 2280 caagatggct aggatcagga cccaactctc cagttttctt tcttctctgc tattctgcct 2340 tctgtgatcc tacataagtg ggcatgattg tataacatat gcggccatga gatttctctt 2400 tcagcaagag aaagggacag gaagaaagag agggaatgca ttttcttggc ctgaattagt 2460 gtgagccatt agttacctac attgactaaa ttatctggaa tgaacattca actctacatc 2520 acatatagtt aaaatgacag atctgcttaa gattgtttct agcatacgtt atttcaattt 2580 aggcaaatgt gaccattcag tgtgagggga ccatactgtc attaggtccc tgtcagttct 2640 caattatact gttatcttag agggggaaaa atgtgaaatt tgaatgtaga cgagtgttga 2700 tttgactgct acagtttatt ttacgtatag aaataaaata atgtgtagca aaagcattat 2760 tacaaagatg ataatgaaat aactagtatt tataatagta taatagtata gtatttataa 2820 tagtatgata gtttaatgac tatttgtcag atgttgtgta agaaacttta tacacacaca 2880 cacacacacc tcatttaatt cctgtatcaa tcaggataca ggacgctgtg gtaacaactc 2940 ctcaaatctc ggtggcttgc acaacaaatg cttatttctt tttttttttt gacaccaagt 3000 cttgctctgt aacaggctgg agtgcaatgg tgcaatctcg gctcactgca gcctctgcct 3060 cctgggttca agcgattctc ctgcctcagt ctctcgagta gctgggaaca caggcacgcg 3120 ccaccacatc tggctaattt ttgtgatttt agtagagatg ggatttcacc atgttgctca 3180 ggctggcctt gaactcctga cctcaagcga tccacccacc tcagcctccc aaagtgctgg 3240 gattacaggc atgagccact gcgcccagcc ccaaatgttt atttcttgct catgtgacat 3300 gtacttcctc gagtttttcc ttcctgagat ctaagctgaa ggaacagctc tctggagcca 3360 cgccattctg gtggcggaaa ggaagagtaa aagtggtaga accttgcaat gctcttgaag 3420 cgcctatttg gaatgtctac atcatgtaaa tggtaatgga caagtatgta taatccccac 3480 accaaaaaaa ggggacacta ttggggacaa taaccacatt tcaatgctgc aagacggata 3540 ttgactgcac ccccttccca ctttcagaaa gaagaagagt aattttgctg aactccttct 3600 agagactgga aatgtccctt ccagttgggg tgattaggga aggctttggt aaaatttgag 3660 ctagagtttg aaggttaggt agactactgg tgggtgaaga aagaacaagg acctttgtag 3720 gcaaaggaaa acctcagaat tacagaggtg gaaaaagagt tctagtcaag ccacttcagc 3780 tggctacaga gtaggtggga aagaaaatgg gaggacaagg gctcagatga tggggggttg 3840 gggcattggg gggacacttg aaagctaaac taaggggttg aacttaattt aggaggcagt 3900 tagaagcttt tacatatttt tgagcaagag agtgacataa ttaaaatgat ctgggccagg 3960 tgtggtggct cacacctgta atcccagcac tttgggaggc tgaggagctt gggtcacctg 4020 aggtcaggag atcgagacca gcctggccaa catggtgaaa tcccgtccta ctaaaaatac 4080 aaaaattagc cgggagtggt ggcatatgcc tgtaatccca gtagctggga ggctgagaca 4140 ggaaaatcgc ttgaacccgg gaaacaggtt gcagtgagcc gagatcgtgc cactgcactc 4200 cagcctgggc aacagagcga gactccatct caaaaaaaca aaacaaacac acacaaaaaa 4260 ccaaaaataa ataaataaaa tgatcacttc tgaatactga tctaactagg ggttgcaggg 4320 tgggctgata tagggagaaa ctggagagca aggagatcac taaggtccct acatgtccag 4380 aaccaagata gaggtcttga actaggatgg tggcagttag aacaacaaca acaaaaagtc 4440 aattccaggc tgagtgcagt ggctcatgcc tgtaatccca acgctttggg aggctgaggt 4500 gggagttaga aagcagcctg ggcaacactg caagacctcc tctctaaaaa aaaaaaaaaa 4560 aaaaagttag ccaggtgtgg tggtgcccac ctgtagtccc agcaactcag aaggctgagg 4620 tgggaagatt gcttgagccc caggagttca agcttgccgt gagctacgat tgtgccactg 4680 cactccagcc tgagcaagac cttgtctcca aaaaaaggtc aattccactg acttttctaa 4740 ggtgtacacc atcaaggggc agctccatct ccaggccatt ggctcatgag acattctgta 4800 gtcagaaggc tagggcagat tgctttgagc aagcccccat ggtggttctc actcctactt 4860 ctttgggtat atgcccctct gtttaaaaat aaagttaata tgcatttaaa aaaaaaaagg 4920 agaaaaaggt cagttccaga aactgtgtga ataaagcatt ttacttgctt tttctattaa 4980 tctataacat atgttgattt tttaaaaaga atataagagc tatgcaaatt ggagcttcaa 5040 gacaacttcc catctcccta ggaggagatg gctgccctaa acccccctac atagaaatca 5100 tcccactgct tgggcttaaa cttgatgttg gggaaatgaa aaatccaagc taaggccgaa 5160 gcctggggcc tgggcgacca gcagaatgag gaccactggt cagtttcagg ctgaggtgcg 5220 tcttccaggg gacaatctct agctggccct taaacattca gacttcaagc tctatttaca 5280 gcataaaggt gtttcaaaag acgtgataca aataactgca aatgctctgc gatgtgttaa 5340 gcactgtttg aaattcgtct aatttaagat ttttttttct gacgtaacgg ttagattcac 5400 gtttcttttt ttttaagtac agttctactg tattgtaact gagttagctt gctttaagcc 5460 gatttgttaa ggaaaggatt caccttggtc agtaacaaaa aaggtgggaa aaaagcaagg 5520 agaaaggaag cagcctgggg gaaagagacc ttagccaggg gggcggtttc gggactacga 5580 agggtcgggg cggacggact cgagggccgg ccacgtggaa ggccgctcag gacttctgta 5640 ggagaggaca ccgccccagg ctgactgaaa gtaaagggca gcggacccag cggcggagcc 5700 actggccttg ccccgacccc gcatggcccg aaggaggaca cccacccccg caacgacaca 5760 aagactccaa ctacaggagg tggagaaagc gcgtgcgcca cggaacgcgc gtgcgcgctg 5820 cggtcagcgc cgcggcctga ggcgtagcgg gagggggacc gcgaaagggc agcgccgaga 5880 ggaacgagcc gggagacgcc ggacggccga gcggcagggc gctcgcgcgc gcccactagt 5940 ggccggagga gaaggctccc gcggaggccg cgctgcccgc cccctcccct ggggaggctc 6000 gcgttcccgc tgctcgcgcc tgcgccgccc gccggcctca ggaacgcgcc ctcttcgccg 6060 gcgcgcgccc tcgcagtcac cgccacccac cagctccggc accaacagca gcgccgctgc 6120 caccgcccac cttctgccgc cgccaccaca gccaccttct cctcctccgc tgtcctctcc 6180 cgtcctcgcc tctgtcgact atcaggtaag cgccgcggct ccgaaatctg cctcgccgtc 6240 cgcctctgtg cacccctgcg ccgccgcccc tcgccctccc tctccgcaga ctggggcttc 6300 gtgcgccggg catcggtcgg ggccaccgca gggcccctcc ctgcctcccc tgctcggggg 6360 ctggggccag ggcggcctgg aaagggacct gagcaaggga tgcacgcacg cgtgagtgcg 6420 cgcgtgtgtg tgtgctggag ggtcttcacc accagattcg cgcagacccc aggtggaggc 6480 tgtgccggca gggtggggcg cggcggcggt gacttggggg agggggctgc ccttcactct 6540 cgactgcagc cttttgccgc aatgggcgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 6600 tgtgtgtgtg gaggggtccg ataacgaccc ccgaaaccga atctgaaatc cgctgtccct 6660 gccgctgttc gccatcagct ctaagaaaga cgtggatcgg gttctagaaa agatgactcc 6720 ctgcacgccc ctccctgcac ctcccgagca gtgattccga cagggccttc actgcccctg 6780 attttaggcg ggggccggcc ccctcccctt ttcctccttc agaaacccgt aggggacatt 6840 tgggggctgg gagaaatcga ggagatgggg aggggtccac gcgctgtcac tttagttgcc 6900 cttccccctg cgcacgcctg gcacagagac gcgagcagcg ccgtgcctga gaacagtgcg 6960 cggatcccac tgtgcacgct cgcaaaggca gggttcacct ggcctggcga tgtggacgga 7020 ctcggcggcc gctggtcccc gttcgcgggc acgcacagcc gcagccacgc acggatgggc 7080 gcggggctgc aggtgcatct cggggcggat ttctttctca gcgctcggag cgcagggcgc 7140 ccggcgtgtg cgctccctgc cggaggcgcg gggctggcgc gcagggctcg cccctcactg 7200 cggcagtggg tgtggaccct ggtgggcgag gaagggggag gataggctgt gcctcctccc 7260 actcccgccc ccagcccccc tttttttccc cctcggaacg cgaggtgcca tcttttttcg 7320 gcgtgtcacg tctttacggt gccatgccaa accgggtggc cgggcttcat aggacagggc 7380 ggggcctggc attaaaggga gggggacaat cagcgctgaa atcttggcgt tttgctgctg 7440 cgggcgtgag cactgggggc gttcgcccag caccttcttc gggggctctt tgctttgtct 7500 gtagaggtta cgtgatctgc gctcccagcc ctggtttctg gcttttattc tgagggtgtt 7560 cagtcaacct cccccctacg cccatgcgcc tctctttcct ttttcgctcc tcatttccga 7620 gcccattgtt ggatctcgag gcttgctggg ttcgatgaac tcgagtcaac cccccgaccc 7680 ccggcacgca tggaacgggc gtgaccgcgc gcagcctcgt ctcggagtct gccggcgccg 7740 ggaagcttct gaagggatgg gattcgagtc tccgtgcgcg ctgcgggcgg cggcagaggg 7800 atctcgcccc tccctacacc ccaagtgtcc tgagggccac gccacaccag gttgcccagc 7860 gagggacgct ggctacccat ccggggatgg gtggggagcc ctggcggggc ctctccggct 7920 ttacgccctg ttgcttcgcc tggccggaga atgtgaggaa ggggcataag gttactggtg 7980 cttcggccac acccatcttt ctgagcccac tggactgggc gcagaggggg gattgccatg 8040 gaaaccacag gtgtccggag aggggatctt ggggctggcc tcaccccttc cctgcggaga 8100 ttggggaccc tggggtaggg ggagccgcgc ccagtcggcc tcctggagga cacgggagga 8160 agccccgaac ccccgcgcct gaggctgttt ctgattggcc cctggaggcc gcagacacgc 8220 agataggcgg ccctgggtgt atttttatta atattatgtc cgtactgatt aatattattt 8280 atcttaaata aatttcaccc gtgtccaagt tcaccgcgcc cccaaaaccg agtctggggc 8340 ggcaggggga actcctggcc aacgaatcca tgcctcgccc tcctgtgatg aacctggtac 8400 gcacggtttt ctggttaatt ctatcgctga aaactggtgc ggggggcgca cttctgagac 8460 ggaagagcat ctaggagctg aatcctccac gcgggtcgcc caggttgatc tgaatttctg 8520 gggaatggct tggctgcccg cccgggacca ggccgaccct ccttgacggt ggcgtagagg 8580 gctggagcct gggtactgcg aggctcctcg catggctggg cccgccgcga ggggttgcag 8640 agcggctcag ggatcgattc aagcatcgtc tctcctccct cgcccccaga cagagctggg 8700 cgcggggttc cccttccaga tggagcgagg gtctcggggt ggccccggaa aaggggagcc 8760 cgcggccacg gctacgtatt gccatctcgc gagcagagat gtcacctcct gcctttggag 8820 gaaagggagc ccggtgggga tgagcgcatt tagcccaatg ctgggaacaa agcgcactcc 8880 gcgcttctgc gatttcgctc cattttgaaa tgtgttggcg ctttggtggg gccgctgcgg 8940 tgggcaaggc cgggggcgct gttaatggag gaacctcagg gggacggtcc ttcgtaggaa 9000 actctatcct ggctctgcgc gcgctttaag gaaatggctt ccctccagga cctcgaggga 9060 tgcagctttt gcgcggatga cggtggggtg ctgaaccagc cggtgcgcct ctggaaatgt 9120 ctgggcacgg atcctggggc catcgacgac tcctccccat tcccagcagg cgggagctct 9180 tacattccga gcgagtgacc cctctcaccc tctggcgctc acacacctgt aactccaaac 9240 ctccgtctca gaatggtcca ggctggaagg gatgatgggg gctccgacag cgactgccta 9300 gctcacccct ctgcgtgctc aggctccagg ctcagcagga ccaatttgag ttctatctga 9360 tccccctcgg ccccttaact gacccatcct acaggagaca gggaaatgtc tttcctaccg 9420 cggttgattc tggggtgtca ttttgtgttt tgtgatggct gcttatattt actgtataag 9480 cattgtattt actgtataag cattgtatta taattactgt ataagctgct tatatttact 9540 gtataagcat ctccaaatcc tccctctacg taaacaaatt aatggataaa cagataagtg 9600 tatcccctgc ccccacccct gctacgcagg tccggagtga ctcttgaagc tcatacattc 9660 cttggccaag tttgcttctc taacagatgt ttatatagca ataacctggc ttggctcttg 9720 ggttcacctt tggacgattt ggggaagggg cttgttggct ttgctgggtt ttggatgagt 9780 gacagtccat gactgttcct gctggaaggg cgtgactttt aagtggtttc taatatcagg 9840 cattgctcct ccgacaggaa 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gggccactga gatgtctaga gagatgtttt tgttttcaca actcggggag 10740 ggtgctactg acatcttgtg ggtagaggcc aggaatgctg ttaaacatcc tacaaggaag 10800 gcacaggaca gtctcctaca tcaaaatatg acccagtccc aatgtcacca ctgctggggt 10860 tgacactggc actgctatct taattacatt cattgagtgt cttttaggag gccctattct 10920 aagtgcttgc taagattatc tcatttaatc ctcacaacac ttccgctatg tagcaggtgc 10980 tgttattatc tccgtgatgg ggaaactgaa gcacagagag ggttagtaac ttgctaaagg 11040 tcacagagcc agtgggtggt ggagctggtt gcctgacact agttccctcc cctctcagcc 11100 acatgtgggt ttacttggcc attgtggact agtctgggaa cccagatatg atctataaca 11160 ttgacccagt agaatattga ttccaaaacc actgtctcac aaatgaattt ttacaagagt 11220 ctgtaatcgg agcatgaccc agaataaggt tagggagatg tggagttaaa gctctcaatt 11280 tcttatctgg ccccgacaca gagagcaagg catttcactc tacattggtg ctctgtttat 11340 aaaacaaaga gcaaatatct cttcctaagg tccttaaacc tcttccccca atccagggtt 11400 tctggactgc tctgccatat gacggggcag ctggtttgat tgacccaggg aaggctggaa 11460 atcaagactg ggggatcaag acgtagattc agtgtggcca aggtcaagtc tctgaggttt 11520 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cttcctgatg tgtttgccac 140520 cgcaggcaga tgtttaagta aaacagattt taactgcagc tacaaaagca gcaacaggcc 140580 agcaaaagag aagtgctatc tcagagagca tggctttcag agccacaaga gacagcctca 140640 ctggctgttt cagcttgact gccatgcaaa gaagagagca gagggagaac cagccccacc 140700 cacttattca tcttgtacaa aaaaaaagca cctaccagcc taggctacat agtgagacac 140760 tatctccaca aaaaacccac gaaaactagc tgggtatggt ggcacatgcc tacagtccca 140820 gctactggta aggctgtggt gggaggatct cttgaggcca ggaaggagat ccaggctgca 140880 gtgagccaag attgcaccac tgcactccag tctggacaat cgagcaagat cccatctcaa 140940 acaataaaaa aaaaaagcgt gtaacctcct cagaagaaag atgttataat ctcaggcagc 141000 a 141001 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Primer <400> 2 cactgagaac ctgaagcacc 20 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Primer <400> 3 ggactggacg ttgctaagat c 21 <210> 4 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Probe <400> 4 ttaattatct gcaccttccc gcctcc 26 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial sequence 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<220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 181 tgggacgtgt gaaggtac 18 <210> 182 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 182 atgggacgtg tgaaggta 18 <210> 183 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 183 gcatgggacg tgtgaagg 18 <210> 184 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 184 cgcatgggac gtgtgaag 18 <210> 185 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 185 gcgcatggga cgtgtgaa 18 <210> 186 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 186 cggcgcatgg gacgtgtg 18 <210> 187 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 187 acggcgcatg ggacgtgt 18 <210> 188 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 188 cacggcgcat gggacgtg 18 <210> 189 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 189 agcacggcgc atgggacg 18 <210> 190 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 190 cagcacggcg catgggac 18 <210> 191 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 191 acagcacggc gcatggga 18 <210> 192 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 192 atcctgagag cccaagaa 18 <210> 193 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 193 gatcctgaga gcccaaga 18 <210> 194 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 194 agatcctgag agcccaag 18 <210> 195 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 195 ccagatcctg agagccca 18 <210> 196 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 196 gccagatcct gagagccc 18 <210> 197 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 197 agccagatcc tgagagcc 18 <210> 198 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 198 ugaagguacu cacacugccg c 21 <210> 199 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 199 uaucugcacc uuugguag 18 <210> 200 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 200 tcttattaat tatctgcacc 20 <210> 201 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 201 acgcactcac accacttc 18 <210> 202 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 202 cgcctacttg ctcgcaag 18 <210> 203 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 203 gacccgccta cttgctcg 18 <210> 204 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 204 gacccgcctg cttgctcg 18 <210> 205 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 205 cctggacccg cctgcttg 18 <210> 206 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 206 cgccuacuug cucgcaag 18 <210> 207 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> bases at these positions are DNA <400> 207 ccuggacccg ccugcutg 18 <210> 208 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> bases at these positions are DNA <400> 208 tgauauuauc cuuugagc 18 <210> 209 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> bases at these positions are DNA <400> 209 ttgauauuau ccuuugag 18 <210> 210 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> bases at these positions are DNA <400> 210 ttugauauua uccuuuga 18 <210> 211 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 211 cacuuccuaa uaauucaa 18 <210> 212 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> bases at these positions are DNA <400> 212 acaccacuuc cuaauaat 18 <210> 213 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 213 acucacacca cuuccuaa 18 <210> 214 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 214 cccgccuacu ugcucgca 18 <210> 215 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 215 gacccgccua cuugcucg 18 <210> 216 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 216 gacccgccug cuugcucg 18 <210> 217 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <220> <221> 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Claims (192)

  1. 8 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 타우 전사체의 동등 길이의 표적 영역에 대해 상보적인 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 상보적 영역을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 상보적 영역은 표적 영역에 대해 100% 상보적인 것인 화합물.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열의 상보적 영역은 적어도 10 개의 인접 핵염기를 포함하는 것인 화합물.
  4. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열의 상보적 영역은 적어도 15 개의 인접 핵염기를 포함하는 것인 화합물.
  5. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열의 상보적 영역은 적어도 18 개의 인접 핵염기를 포함하는 것인 화합물.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 올리고뉴클레오타이드의 전장에 대해 측정될 때 타우 전사체의 동등-길이 영역에 대해 적어도 80% 상보적인 것인 화합물.
  7. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 올리고뉴클레오타이드의 전장에 대해 측정될 때 타우 전사체의 동등-길이 영역에 대해 적어도 90% 상보적인 것인 화합물.
  8. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 올리고뉴클레오타이드의 전장에 대해 측정될 때 타우 전사체의 동등-길이 영역에 대해 100% 상보적인 것인 화합물.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 타우 전사체의 엑손 10 내에 있는 것인 화합물.
  10. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 타우 전사체의 인트론 9 내에 있는 것인 화합물.
  11. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 타우 전사체의 인트론 10 내에 있는 것인 화합물.
  12. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 인트론 9의 일부 및 엑손 10의 일부를 포함하는 것인 화합물.
  13. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 엑손 10의 일부 및 인트론 10의 일부를 포함하는 것인 화합물.
  14. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 엑손 10의 5'-말단에서 엑손 10의 일부 및 인트론의 일부를 포함하는 것인 화합물.
  15. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 엑손 10의 3'-말단에서 엑손 10의 일부 및 인트론의 일부를 포함하는 것인 화합물.
  16. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121708 및 핵염기 122044 내에 있는 것인 화합물.
  17. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121796 및 핵염기 122044 내에 있는 것인 화합물.
  18. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121796 및 핵염기 121885 내에 있는 것인 화합물.
  19. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121873 및 핵염기 121898 내에 있는 것인 화합물.
  20. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121869 및 핵염기 121943 내에 있는 것인 화합물.
  21. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 122020 및 핵염기 122044 내에 있는 것인 화합물.
  22. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121881 및 핵염기 121898 내에 있는 것인 화합물.
  23. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121880 및 핵염기 121897 내에 있는 것인 화합물.
  24. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121879 및 핵염기 121896 내에 있는 것인 화합물.
  25. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121878 및 핵염기 121895 내에 있는 것인 화합물.
  26. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121877 및 핵염기 121894 내에 있는 것인 화합물.
  27. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121876 및 핵염기 121893 내에 있는 것인 화합물.
  28. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121875 및 핵염기 121892 내에 있는 것인 화합물.
  29. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121874 및 핵염기 121891 내에 있는 것인 화합물.
  30. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121873 및 핵염기 121890 내에 있는 것인 화합물.
  31. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열번호: 8-200 중 임의의 것의 핵염기 서열을 포함하는 것인 화합물.
  32. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열번호: 8-200 중 임의의 것의 핵염기 서열로 이루어지는 것인 화합물.
  33. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열번호: 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 또는 153 중 임의의 것의 핵염기 서열을 포함하는 것인 화합물.
  34. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열번호: 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 또는 153 중 임의의 것의 핵염기 서열로 이루어지는 것인 화합물.
  35. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열번호: 31, 33, 34, 35, 36, 37, 45, 72, 79, 82, 83, 97, 106, 107, 112, 113, 130, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 157, 158, 160, 또는 200 중 임의의 것의 핵염기 서열을 포함하는 것인 화합물.
  36. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 서열번호: 31, 33, 34, 35, 36, 37, 45, 72, 79, 82, 83, 97, 106, 107, 112, 113, 130, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 157, 158, 160, 또는 200 중 임의의 것의 핵염기 서열로 이루어지는 것인 화합물.
  37. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 것인 화합물.
  38. 청구항 37에 있어서, 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드는 변형된 당 모이어티를 포함하는 것인 화합물.
  39. 청구항 37에 있어서, 적어도 하나의 변형된 당 모이어티는 2'-치환된 당 모이어티인 화합물.
  40. 청구항 39에 있어서, 상기 적어도 하나의 2'-치환된 당 모이어티의 2'-치환체는 2'-OMe, 2'-F, 및 2'-MOE 중으로부터 선택되는 것인 화합물.
  41. 청구항 39에 있어서, 상기 적어도 하나의 2'-치환된 당 모이어티의 2'-치환체는 2'-MOE인 화합물.
  42. 청구항 37 또는 38에 있어서, 적어도 하나의 변형된 당 모이어티는 바이사이클릭 당 모이어티인 화합물.
  43. 청구항 42에 있어서, 적어도 하나의 바이사이클릭 당 모이어티는 LNA 또는 cEt인 화합물.
  44. 청구항 37 내지 43 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 당 모이어티는 당 대용물인 화합물.
  45. 청구항 44에 있어서, 적어도 하나의 당 대용물은 모폴리노인 화합물.
  46. 청구항 44에 있어서, 적어도 하나의 당 대용물은 변형된 모폴리노인 화합물.
  47. 청구항 1 내지 46 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 5 개의 변형된 뉴클레오사이드를 포함하고, 각각은 변형된 당 모이어티를 독립적으로 포함하는 것인 화합물.
  48. 청구항 47에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 10 개의 변형된 뉴클레오사이드를 포함하고, 각각은 변형된 당 모이어티를 독립적으로 포함하는 것인 화합물.
  49. 청구항 47에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 15 개의 변형된 뉴클레오사이드를 포함하고, 각각은 변형된 당 모이어티를 독립적으로 포함하는 것인 화합물.
  50. 청구항 47에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오사이드이고 각각은 변형된 당 모이어티를 독립적으로 포함하고, 여기서 상기 각 변형된 뉴클레오사이드의 변형된 당 모이어티 각각은 서로 동일한 것인 화합물.
  51. 청구항 47에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오사이드이고, 각각은 변형된 당 모이어티를 독립적으로 포함하는 것인 화합물.
  52. 청구항 1 내지 51 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서로 동일한 변형된 당 모이어티를 포함하는 적어도 2 개의 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 것인 화합물.
  53. 청구항 1 내지 52 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서로 상이한 변형된 당 모이어티를 포함하는 적어도 2 개의 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 것인 화합물.
  54. 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 5 개의 인접 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형된 영역을 포함하는 것인 화합물.
  55. 청구항 54에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 10 개의 인접 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형된 영역을 포함하는 것인 화합물.
  56. 청구항 54에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 15 개의 인접 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형된 영역을 포함하는 것인 화합물.
  57. 청구항 54에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 18 개의 인접 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형된 영역을 포함하는 것인 화합물.
  58. 청구항 54에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 20 개의 인접 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형된 영역을 포함하는 것인 화합물.
  59. 청구항 53 내지 58 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 영역의 각 변형된 뉴클레오사이드는 2'-F, 2'-OMe, 2'-MOE, cEt, LNA, 모폴리노, 및 변형된 모폴리노 중으로부터 독립적으로 선택된 변형된 당 모이어티를 갖는 것인 화합물.
  60. 청구항 54 내지 59 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 영역의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 서로 동일한 변형을 포함하는 것인 화합물.
  61. 청구항 60에 있어서, 상기 변형된 영역의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 동일한 2'-치환된 당 모이어티를 포함하는 것인 화합물.
  62. 청구항 61에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드의 2'-치환된 당 모이어티는 2'-F, 2'-OMe, 및 2'-MOE로부터 선택되는 것인 화합물.
  63. 청구항 61에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드의 2'-치환된 당 모이어티는 2'-MOE인 화합물.
  64. 청구항 59에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 동일한 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 것인 화합물.
  65. 청구항 64에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드의 바이사이클릭 당 모이어티는 LNA 및 cEt로부터 선택되는 것인 화합물.
  66. 청구항 59에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 당 대용물을 포함하는 것인 화합물.
  67. 청구항 66에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드의 당 대용물은 모폴리노인 화합물.
  68. 청구항 66에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오사이드의 영역의 변형된 뉴클레오사이드의 당 대용물은 변형된 모폴리노인 화합물.
  69. 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오타이드는 4 개 이하의 인접 천연 발생 뉴클레오사이드를 포함하는 것인 화합물.
  70. 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오사이드인 화합물.
  71. 청구항 70에 있어서, 각 변형된 뉴클레오사이드는 변형된 당 모이어티를 포함하는 것인 화합물.
  72. 청구항 71에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 변형된 뉴클레오사이드는 서로 동일한 변형을 포함하는 것인 화합물.
  73. 청구항 72에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 동일한 2'-치환된 당 모이어티를 포함하는 것인 화합물.
  74. 청구항 73에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 2'-치환된 당 모이어티는 2'-F, 2'-OMe, 및 2'-MOE로부터 선택되는 것인 화합물.
  75. 청구항 74에 있어서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 2'-치환된 당 모이어티는 2'-MOE인 화합물.
  76. 청구항 72에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 동일한 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 것인 화합물.
  77. 청구항 76에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 바이사이클릭 당 모이어티는 LNA 및 cEt로부터 선택되는 것인 화합물.
  78. 청구항 72에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 변형된 뉴클레오사이드 각각은 당 대용물을 포함하는 것인 화합물.
  79. 청구항 78에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 당 대용물은 모폴리노인 화합물.
  80. 청구항 78에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 당 대용물은 변형된 모폴리노인 화합물.
  81. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 A-B2-A-B2-A-B2-A-B2-A-B2-A-B2-A2 모티프를 가지며, 여기서 각 A는 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하고, 각 B는 2'-치환된 당 모이어티 및 비변형된 2'-데옥시 당 모이어티로부터 선택되는 것인 화합물.
  82. 청구항 81에 있어서, 각 A는 cEt 당 모이어티인 화합물.
  83. 청구항 81에 있어서, 각 A는 LNA 당 모이어티인 화합물.
  84. 청구항 81 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, 각 B는 비변형된 2'-데옥시 당 모이어티인 화합물.
  85. 청구항 81 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, 각 B는 2'-MOE 당 모이어티인 화합물.
  86. 청구항 1 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 것인 화합물.
  87. 청구항 86에 있어서, 각 뉴클레오사이드간 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 화합물.
  88. 청구항 86 또는 87에 있어서, 적어도 하나의 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 화합물.
  89. 청구항 1 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, 각 뉴클레오사이드간 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이고, 여기서 각 뉴클레오사이드간 연결은 동일한 변형을 포함하는 것인 화합물.
  90. 청구항 89에 있어서, 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결인 화합물.
  91. 청구항 86에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 4 개의 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 것인 화합물.
  92. 청구항 86에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 5 개의 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 것인 화합물.
  93. 청구항 86에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 6 개의 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 것인 화합물.
  94. 청구항 86에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 7 개의 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 것인 화합물.
  95. 청구항 91 내지 94 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 잔존 뉴클레오사이드간 연결은 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결인 화합물.
  96. 청구항 1 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, NSNSNONSNONSNONSNONSNONSNONSNONSNSN 뉴클레오사이드간 연결 모티프를 갖는 화합물이며, 여기서 각 N은 뉴클레오사이드를 나타내고, 각 S는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 각 O는 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 나타내는 것인 화합물.
  97. 청구항 1 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, NSNONONONSNSNSNSNSNSNSNSNONONONSNSN 뉴클레오사이드간 연결 모티프를 갖는 화합물이며, 여기서 각 N은 뉴클레오사이드를 나타내고, 각 S는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 나타내고, 각 O는 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 연결을 나타내는 것인 화합물.
  98. 청구항 1 내지 97 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 콘주게이트를 포함하는 화합물.
  99. 청구항 1 내지 98 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오타이드로 이루어지는 화합물.
  100. 청구항 1 내지 99 중 어느 한 항에 있어서, 타우 전사체의 스플라이싱을 조절하는 화합물.
  101. 청구항 1 내지 99 중 어느 한 항에 있어서, 4R 타우 동형체의 발현을 줄이는 화합물.
  102. 청구항 1 내지 99 중 어느 한 항에 있어서, 엑손 10을 포함하는 타우 mRNA의 발현을 줄이는 화합물.
  103. 청구항 1 내지 99 중 어느 한 항에 있어서, 엑손 10 mRNA로부터 인코딩된 아미노산을 포함하는 타우 단백질의 발현을 줄이는 화합물.
  104. 청구항 1 내지 8 또는 30 내지 103 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 8-200에서 제시된 서열 중 임의의 것을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 화합물.
  105. 청구항 1 내지 8 또는 30 내지 103 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 또는 153에서 제시된 서열 중 임의의 것을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 화합물.
  106. 청구항 1 내지 8 또는 30 내지 103 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 8-200에서 제시된 서열 중 임의의 것으로 이루어지는 핵염기 서열을 갖는 화합물.
  107. 청구항 1 내지 8 또는 30 내지 103 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 또는 153에서 제시된 서열 중 임의의 것으로 이루어지는 핵염기 서열을 갖는 화합물.
  108. 청구항 1 내지 107 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는 이중가닥 화합물.
  109. ISIS 670011로 이루어지는 화합물.
  110. ISIS 670012로 이루어지는 화합물.
  111. ISIS 670013으로 이루어지는 화합물.
  112. ISIS 670014로 이루어지는 화합물.
  113. ISIS 670015로 이루어지는 화합물.
  114. ISIS 670016으로 이루어지는 화합물.
  115. ISIS 670017로 이루어지는 화합물.
  116. ISIS 670018로 이루어지는 화합물.
  117. ISIS 670019로 이루어지는 화합물.
  118. ISIS 670020으로 이루어지는 화합물.
  119. ISIS 670021로 이루어지는 화합물.
  120. ISIS 670022로 이루어지는 화합물.
  121. ISIS 670023으로 이루어지는 화합물.
  122. ISIS 670024로 이루어지는 화합물.
  123. ISIS 670025로 이루어지는 화합물.
  124. ISIS 670026으로 이루어지는 화합물.
  125. ISIS 670027로 이루어지는 화합물.
  126. ISIS 670028로 이루어지는 화합물.
  127. ISIS 678329로 이루어지는 화합물.
  128. ISIS 678330으로 이루어지는 화합물.
  129. ISIS 678331로 이루어지는 화합물.
  130. ISIS 678332로 이루어지는 화합물.
  131. ISIS 678333으로 이루어지는 화합물.
  132. ISIS 678334로 이루어지는 화합물.
  133. ISIS 693840으로 이루어지는 화합물.
  134. ISIS 693841로 이루어지는 화합물.
  135. ISIS 693842로 이루어지는 화합물.
  136. ISIS 693843으로 이루어지는 화합물.
  137. ISIS 693844로 이루어지는 화합물.
  138. ISIS 693845로 이루어지는 화합물.
  139. ISIS 693846으로 이루어지는 화합물.
  140. ISIS 693847로 이루어지는 화합물.
  141. ISIS 693848로 이루어지는 화합물.
  142. ISIS 693849로 이루어지는 화합물.
  143. ISIS 549577로 이루어지는 화합물.
  144. ISIS 549580으로 이루어지는 화합물.
  145. ISIS 549581로 이루어지는 화합물.
  146. ISIS 549582로 이루어지는 화합물.
  147. ISIS 549583으로 이루어지는 화합물.
  148. ISIS 549584로 이루어지는 화합물.
  149. ISIS 549585로 이루어지는 화합물.
  150. ISIS 549586으로 이루어지는 화합물.
  151. ISIS 617341로 이루어지는 화합물.
  152. ISIS 617351로 이루어지는 화합물.
  153. ISIS 617352로 이루어지는 화합물.
  154. ISIS 617353으로 이루어지는 화합물.
  155. ISIS 617358로 이루어지는 화합물.
  156. ISIS 617360으로 이루어지는 화합물.
  157. ISIS 617361로 이루어지는 화합물.
  158. ISIS 617362로 이루어지는 화합물.
  159. 세포에서 타우 전사체의 스플라이싱을 조절하는 방법으로서, 상기 세포를 청구항 1 내지 158 중 어느 한 항에 따른 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
  160. 청구항 158에 있어서, 상기 세포는 시험관 내에 있는 것인 방법.
  161. 청구항 158에 있어서, 상기 세포는 동물 내에 있는 것인 방법.
  162. 세포에서 타우 단백질의 발현을 조절하는 방법으로서, 상기 세포를 청구항 1 내지 158 중 어느 한 항에 따른 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
  163. 청구항 162에 있어서, 상기 타우 단백질의 4R 동형체의 발현은 줄어드는 것인 방법.
  164. 청구항 162에 있어서, 상기 타우 단백질의 3R 동형체의 발현은 증가되는 것인 방법.
  165. 청구항 162 내지 164 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 시험관 내에 있는 것인 방법.
  166. 청구항 162 내지 164 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 동물 내에 있는 것인 방법.
  167. 타우-연관된 장애와 연관된 하나 이상의 증상을 감소 또는 개선시키는 방법으로서, 세포를 청구항 1 내지 158 중 어느 한 항에 따른 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
  168. 청구항 167에 있어서, 상기 증상은 발작인 방법.
  169. 청구항 167 또는 168에 있어서, 상기 세포는 동물 내에 있는 것인 방법.
  170. 청구항 1 내지 158 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
  171. 청구항 170에 있어서, 상기 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제는 멸균된 염수인 약제학적 조성물.
  172. 청구항 170 또는 171의 약제학적 조성물을 동물에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  173. 청구항 172에 있어서, 상기 투여는 주사에 의한 것인 방법.
  174. 청구항 172 또는 173에 있어서, 상기 투여는 전신 투여인 방법.
  175. 청구항 172 또는 173에 있어서, 상기 투여는 CNS 투여인 방법.
  176. 청구항 172 내지 175 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동물은 하나 이상의 타우-연관된 장애와 연관된 하나 이상의 증상을 갖는 것인 방법.
  177. 청구항 176에 있어서, 상기 투여는 하나 이상의 타우-연관된 장애와 연관된 하나 이상의 증상의 개선을 야기하는 것인 방법.
  178. 청구항 172 내지 175 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동물은 알츠하이머병과 연관된 하나 이상의 증상을 갖는 것인 방법.
  179. 청구항 178에 있어서, 상기 투여는 알츠하이머병과 연관된 하나 이상의 증상의 개선을 야기하는 것인 방법.
  180. 청구항 172 내지 179 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동물은 마우스인 방법.
  181. 청구항 172 내지 179 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동물은 인간인 방법.
  182. 타우-연관된 장애의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조를 위한, 청구항 1 내지 158 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 170 또는 171의 조성물의 용도.
  183. 타우-연관된 장애와 연관된 하나 이상의 증상의 개선에 사용하기 위한 약제의 제조를 위한, 청구항 1 내지 158 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 170 또는 171의 조성물의 용도.
  184. 청구항 1 내지 183 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵염기 서열은 서열번호: 45, 66, 68, 69, 또는 200에서 제시된 핵염기 서열로 이루어지지 않은 것인 화합물, 조성물, 또는 방법.
  185. 청구항 1 내지 183 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵염기 서열은 핵염기 서열 CCAGCTTCTTATTAATTATC 또는 TAAGATCCAGCTTCTTATTA로 이루어지지 않은 것인 화합물, 조성물, 또는 방법.
  186. 구현예 1 내지 183 중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121828 및 핵염기 121847 내에 있지 않은 것인 화합물, 조성물, 또는 방법.
  187. 구현예 1 내지 183 중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121834 및 핵염기 121853 내에 있지 않은 것인 화합물, 조성물, 또는 방법.
  188. 구현예 1 내지 183 중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121840 및 핵염기 121859 내에 있지 않은 것인 화합물, 조성물, 또는 방법.
  189. 구현예 1 내지 183 중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121924 및 핵염기 121941 내에 있지 않은 것인 화합물, 조성물, 또는 방법.
  190. 구현예 1 내지 183 중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121012 및 핵염기 121029 내에 있지 않은 것인 화합물, 조성물, 또는 방법.
  191. 구현예 1 내지 183 중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121020 및 핵염기 121037 내에 있지 않은 것인 화합물, 조성물, 또는 방법.
  192. 구현예 1 내지 183 중 어느 하나에 있어서, 상기 표적 영역은 서열번호: 1의 핵염기 121024 및 핵염기 121041 내에 있지 않은 것인 화합물, 조성물, 또는 방법.
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