KR20150067227A

KR20150067227A - 암을 치료하기 위한 항-kir 항체와 항-pd-1 항체의 조합물

Info

Publication number: KR20150067227A
Application number: KR1020157011033A
Authority: KR
Inventors: 로버트 에프. 그라지아노; 아쇼크 케이. 굽타; 수 영 김; 존 위깅턴
Original assignee: 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Priority date: 2012-10-02
Filing date: 2013-10-02
Publication date: 2015-06-17
Also published as: MX2019004193A; NO2787245T3; HK1210786A1; EP2904011A1; IL237960B; CA2887027A1; AU2013327116A1; JP6239628B2; JP2015532292A; JP6533270B2; RS56624B1; SG11201502496WA; MX2015003985A; EP3263601B1; JP6707697B2; EA038920B1; CN104837868B; IL237960A0; BR112015007184A2; AU2013327116B2

Abstract

항-KIR 항체를 항-PD-1 항체와 조합하여 사용하는 암 (예를 들어, 진행성 불응성 고형 종양 또는 혈액 악성종양)의 임상 치료를 위한 방법이 제공된다.

Description

암을 치료하기 위한 항-KIR 항체와 항-PD-1 항체의 조합물 {COMBINATION OF ANTI-KIR ANTIBODIES AND ANTI-PD-1 ANTIBODIES TO TREAT CANCER}

천연 킬러 (NK) 세포는 말초 혈액 림프구의 15％를 구성하고, 바이러스 감염 및 또한 암을 퇴치하는 선천 면역계의 능력에서 중요한 역할을 한다 (Purdy AK et al., Cancer Biol Ther 2009; 8:13-22). NK 세포는 천연 세포독성 수용체 (NCR), Fc 수용체 CD16, NKG2D 등이 포함되는 다중 수용체를 통해 표적 세포에 결합한다. 리간드가 수용체에 결합하는 것은 티로신 인산화 및 보조 신호전달 분자들의 동원을 개시시킨다. 이러한 캐스케이드는 NK 세포의 활성화, 퍼포린 및 그란자임을 함유하는 미리 형성된 과립의 표적 세포 내로의 방출, 및 아폽토시스를 초래한다. 시토카인 및 케모카인의 동반 방출은 다른 면역 세포를 동원하는 미세환경을 초래한다. NK 세포는 신체 내의 모든 세포에 결합하는 능력이 있다 (Murphy WJ, et al., Biol Blood Marrow Transplant 2012; 18:S2-S7). 그러나, 상이한 세트의 수용체들을 동시에 이용하여 주요 조직접합성 복합체 (MHC) 부류 I 분자에 결합하는 NK 세포의 능력으로 인해, 정상 세포의 결합은 세포독성 활성을 초래하지 않는다. 인간 백혈구 항원 (HLA) E가 NKG2A/CD94 이종이량체성 수용체에 결합하는 것, 또는 HLA-A, B 및 C 분자가 억제성 킬러 Ig-유사 수용체 (KIR)에 결합하는 것은 티로신 인산화, 신호전달 어댑터 SHP-1 또는 SHP-2의 동원, 및 하류 신호전달을 초래한다. 최종 결과는 정상적인 활성화 신호를 억제하는 우세 신호이다. 따라서, KIR/HLA 상호작용은 NK 세포 반응성에 영향을 미칠 수 있고, 라이센싱으로 공지된 성숙형 반응성 NK 세포의 총수의 발달에 또한 영향을 미칠 수 있다.

7가지의 억제성 KIR 및 7가지의 활성화 KIR이 있고, 이는 KIR 유전 및 발현의 다양성을 초래하는 한 요인이다. KIR은 천연 킬러 T (NKT) 세포 및 작은 하위집합의 T 세포 상에서 또한 발현된다 (Uhrberg M, et al., J. Immunol. 2001; 166:3923-3932). 따라서, 기계학적으로, 억제성 KIR의 차단은 NK 세포의 활성화, 그리고 가능하게는 또한 일부 T 세포의 활성화를 허용하는 것에 의해 항-종양 효과를 유도할 수 있다.

항-종양 반응에서의 NK 세포 수반을 지지하는 증거가 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT) 환경에서 나타난다. KIR 및 HLA 양쪽 모두의 다양성을 고려하여, 공여자 NK 세포 상의 KIR이 숙주 HLA와 상호작용하지 않을 수 있는 것이 놀랍지 않고, 이는 KIR 미스매치로 지칭된다. KIR이 미스매칭된 공여자 NK 세포가 이식된 AML 환자의 더 낮은 재발율 (3％ 대 47％, p <0.01) 및 재발 위험 감소 (상대 위험 0.48, 95％ CI 0.29-0.78)가 확인된 것은 항-종양 반응에서의 NK 세포의 역할에 대한 과학적 지지를 제공하였다 (Ruggeri L, et al. Blood. 2007;110:433-440).

흑색종에서, 특정 KIR 및 HLA 조합이 더욱 면역억제성인 환경을 제공할 수 있는데, 이는 특정 조합이 비-전이 환자에 비교하여 전이 환자에서 더욱 빈번하게 나타나기 때문이다 (Naumova E, et al. Cancer Immunol Immunother 2005; 54:172-178). KIR 미스매치가 자가 HSCT를 받고 있는 고위험 신경모세포종 환자에 대한 유리한 예후 마커인 것으로 나타났다 (Delgado DC, et al., Cancer Res 2010; 70:9554-9561). 고형 종양에서의 NK 세포의 중요한 역할에 대한 실험적인 지지가 T 세포가 결여된 마우스가 IL-15 첨가에 의한 NK 세포 활성화 후에 여전히 대형 고형 종양을 박멸시킬 수 있는 뮤린 연구로부터 나타난다 (Liu RB, et al., Cancer Res 2012; 72:1964-1974).

프로그램화된 세포 사멸(Programmed Cell Death) 1 (PD-1)은 T 세포 활성화 및 내성의 조절에서 결정적인 역할을 하는 세포 표면 신호전달 수용체이다 (Keir ME, et al., Annu Rev Immunol 2008; 26:677-704). 이는 제I형 막횡단 단백질이고, BTLA, CTLA-4, ICOS 및 CD28과 함께 T 세포 공동-자극 수용체의 CD28 패밀리를 이룬다. PD-1은 활성화된 T 세포, B 세포, 및 골수 세포에서 주로 발현된다 (Dong H, et al., Nat Med 1999; 5:1365-1369). 이는 천연 킬러 (NK) 세포 상에서도 또한 발현된다 (Terme M, et al., Cancer Res 2011; 71:5393-5399). 이의 리간드인 PD-L1 및 PD-L2이 PD-1에 결합하면, 인접한 세포내 면역 수용체 티로신 억제 도메인 내의 티로신 잔기의 인산화가 초래되고, 이어서 포스파타제 SHP-2가 동원되어, 결국에는 T 세포 활성화의 하향-조절이 초래된다. PD-1의 한 중요한 역할은 감염에 대한 염증성 반응 시점에 말초 조직 내의 T 세포의 활성을 제한하고, 따라서 자가면역의 발달을 제한하는 것이다 (Pardoll DM., Nat Rev Cancer 2012; 12:252-264). 이러한 음성 조절 역할의 증거가 PD-1 결핍 마우스에서 심근병증과 함께 관절염 및 신염이 포함되는 루푸스-유사 자가면역 질환이 발달된다는 발견으로부터 나타난다 (문헌 [Nishimura H, et al., Immunity 1999; 11:141-151]; 및 [Nishimura H, et al., Science 2001; 291:319-322]). 종양 환경에서, 결과는 종양 미세환경 내에서의 면역 저항성의 발달이다. PD-1은 종양 침윤성 림프구 상에서 고도로 발현되고, 이의 리간드들이 다수의 상이한 종양의 세포 표면 상에서 상향-조절된다 (Dong H, et al., Nat Med 2002; 8:793-800). 여러 뮤린 암 모델에서, PD-1에 대한 리간드의 결합이 면역 회피를 초래한다는 것이 입증되었다. 또한, 이러한 상호작용의 차단은 항-종양 활성을 초래한다 (Topalian SL, et al., New Eng J Med 2012; 366(26):2443-2454; Topalian SL, et al., Curr Opin Immunol 2012; 24:207-212; Brahmer JR, et al., New Eng J Med 2012; 366(26):2455-2465; Hamid O, et al., New Eng J Med 2013; 369:134-144; Hamid O and Carvajal RD, Expert Opin Biol Ther 2013; 13(6):847-861).

전이성 또는 불응성 고형 종양이 있는 환자는 예후가 매우 불량하였다 (Rosenberg SA, et al., Cancer immunotherapy in Cancer: Principles & Practice of Oncology (Eds DeVita VT, Lawrence TS and Rosenberg SA) 2011; 332-344 (Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia PA)). 다양식 요법에서의 발달에도 불구하고, 이러한 환자 집단에서의 전체 생존의 증가가 제한되었다. 따라서, 본 발명의 목적은 이같은 종양 (예를 들어, 진행성 불응성 고형 종양)이 있는 대상체를 치료하는 개선된 방법을 제공하는 것이다.

인간 환자에게 항-KIR 항체와 항-PD-1 항체의 조합물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 조합물은 특정 임상 투여 요법에 따라 (즉, 특정 용량으로 특별한 투여 일정에 따라) 투여되는 (또는 이러한 투여를 위한 것인), 인간 환자에서 암, 예를 들어 진행성 불응성 고형 종양을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 한 비제한적인 실시양태에서, 인간 환자는 비-소세포 폐암 (NSCLC), 신세포 암종 (RCC), 흑색종, 결장직장암 및 장액성 난소 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된 종양 (예를 들어, 진행성 불응성 고형 종양)을 앓는다. 치료될 수 있는 기타 종양이 하기의 상세한 설명에서 기재된다.

예시적인 항-KIR 항체는 각각 서열 1 및 2에 제시된 서열의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 리릴루맙 (기존에 BMS-986015 또는 IPH2102로 또한 지칭되었음), 또는 이의 항원 결합 단편 및 변이체이다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 리릴루맙의 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 가변 영역 (VR)을 포함한다. 따라서, 한 실시양태에서, 이러한 항체는 서열 3에 제시된 서열의 리릴루맙의 중쇄 가변 (VH) 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 서열 5에 제시된 서열의 리릴루맙의 경쇄 가변 (VL) 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 7, 8, 및 9에 기재된 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3 중쇄 서열, 및 각각 서열 10, 11, 및 12에 기재된 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3 경쇄 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 3 및/또는 서열 5에 기재된 아미노산 서열의 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 4 및/또는 서열 6에 기재된 핵산 서열에 의해 코딩되는 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 결합에 대해 상기 언급된 항체와 경쟁하고/하거나 상기 언급된 항체와 동일한 KIR 상의 에피토프에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 상기 언급된 항체와의 가변 영역 아미노산 서열 동일성이 적어도 약 90％이다 (예를 들어, 서열 3 또는 5와의 가변 영역 동일성이 적어도 약 90％, 95％ 또는 99％이다).

예시적인 항-PD-1 항체는 각각 서열 17 및 18에 제시된 서열의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 니볼루맙 (WO 2006/121168에서 5C4로 지칭되었고, BMS-936558, MDX-1106 또는 ONO-4538로 또한 공지됨), 또는 이의 항원 결합 단편 및 변이체이다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 니볼루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 VR을 포함한다. 따라서, 한 실시양태에서, 이러한 항체는 서열 19에 제시된 서열의 리릴루맙의 VH 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 서열 21에 제시된 서열의 리릴루맙의 VL 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 23, 24 및 25에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열 26, 27 및 28에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 19 및/또는 서열 21에 기재된 아미노산 서열의 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 20 및/또는 서열 22에 기재된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 (VH) 및/또는 경쇄 가변 (VL) 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 결합에 대해 상기 언급된 항체와 경쟁하고/하거나 상기 언급된 항체와 동일한 PD-1 상의 에피토프에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 상기 언급된 항체와의 가변 영역 아미노산 서열 동일성이 적어도 약 90％이다 (예를 들어, 서열 19 또는 서열 21과의 가변 영역 동일성이 적어도 약 90％, 95％ 또는 99％이다).

따라서, 한 측면에서,

(a) 서열 3에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 5에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는 항-KIR 항체,

(b) 서열 19에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 21에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는 항-PD-1 항체

각각을 유효량으로 인간 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 1회 이상의 투여 주기를 포함하며, 여기서 주기는 8주의 기간이고, 1회 이상의 주기 각각에 대해, 2회 용량의 항-KIR 항체를 0.1-20 ㎎/체중 ㎏의 용량으로 투여하고, 4회 용량의 항-PD-1 항체를 0.1-20 ㎎/체중 ㎏의 용량으로 투여하는 것인, 인간 환자에서 암 (예를 들어, 진행성 불응성 고형 종양)을 치료하는 방법이 제공된다.

특정 실시양태에서, 각각의 용량의 항-KIR 항체는 0.1, 0.3, 1, 3, 6, 10 또는 20 ㎎/㎏으로 투여된다. 바람직한 실시양태에서, 각각의 용량의 항-KIR 항체는 0.3, 1 또는 3 ㎎/㎏으로 투여된다.

다른 실시양태에서, 각각의 용량의 항-PD-1 항체는 0.1, 0.3, 1, 3, 6, 10 또는 20 ㎎/체중 ㎏으로 투여된다. 바람직한 실시양태에서, 각각의 용량의 항-PD-1 항체는 0.3, 1, 3 또는 10 ㎎/㎏으로 투여된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 3 ㎎/㎏의 용량으로 투여된다.

한 실시양태에서, 항-KIR 항체 및 항-PD-1 항체는 하기 용량으로 투여된다:

(a) 0.1 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;

(b) 0.3 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;

(c) 1 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;

(d) 3 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;

(e) 6 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체; 또는

(f) 10 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체.

따라서, 한 실시양태에서, 항-KIR 및/또는 항-PD-1 항체의 용량은 ㎎/체중 ㎏으로 계산된다. 그러나, 또 다른 실시양태에서, 항-KIR 및/또는 항-PD-1 항체의 용량은 환자의 체중과 관계없이 고정된 균일-고정 용량이다. 예를 들어, 항-KIR 및/또는 항-PD-1 항체가 환자의 체중과 관계없이 5, 20, 75, 200, 400, 750 또는 1500 ㎎의 고정 용량으로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-PD-1 항체의 투여 용량이 200 ㎎으로 고정될 수 있는 한편, 항-KIR 항체가 5, 20, 75, 200, 400 또는 750 ㎎의 고정 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 최적의 원하는 반응 (예를 들어, 효과적인 반응)을 제공하도록 투여 요법이 조정된다.

또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 각각의 주기의 제1일, 제15일, 제29일 및 제43일에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-KIR 항체는 각각의 주기의 제1일 및 제29일에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 제1일 및 제29일에 항-KIR 항체의 투여 전에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-KIR 항체는 항-PD-1 항체로부터 30분 이내에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 치료는 12회 이하의 주기로 이루어진다.

한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 및 항-KIR 항체는 1선 (최전선) 치료 (예를 들어, 초기 또는 1차 치료)로서 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체 및 항-KIR 항체는 2선 치료로서 (예를 들어, 재발 후 및/또는 1차 치료가 실패한 경우를 포함하여, 동일한 치료제 또는 상이한 치료제로의 초기 치료 후에) 투여된다.

항-KIR 및 항-PD-1 항체는 임의의 적합한 수단에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 항체들은 정맥내 투여용으로 제제화된다. 또 다른 실시양태에서, 항체들은 동시에 (예를 들어, 단일 제제에서 또는 별도의 제제들로서 공동으로) 투여된다. 대안적으로, 또 다른 실시양태에서, 항체들은 순차적으로 (예를 들어, 별도의 제제들로서) 투여된다.

본원에서 제공되는 치료 방법의 효능을 임의의 적합한 수단을 사용하여 평가할 수 있다. 한 실시양태에서, 이러한 치료는 종양 크기의 감소, 경시적인 전이 병변의 수의 감소, 완전 반응, 부분 반응 및 안정 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치료 효과를 일으킨다.

항-KIR 항체, 예컨대 리릴루맙, 및 항-PD-1 항체, 예컨대 니볼루맙, 및 제약상 허용되는 담체를 함유하는 제약 조성물을 본원에 기재된 방법에서 사용하기에 적합화된 치료 유효량으로 포함하는 키트가 또한 제공된다. 한 실시양태에서, 키트는 하기의 것들을 포함한다:

(a) 서열 3에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 5에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는, 특정 용량의 항-KIR 항체;

(b) 서열 19에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 21에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는, 특정 용량의 항-PD-1 항체; 및

(c) 본 발명의 방법에서 항-KIR 항체 및 항-PD-1 항체를 사용하기 위한 지침서.

또 다른 측면에서, 1회 이상의 주기에서, 서열 19에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 21에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는 항-PD-1 항체와 공투여하기 위한, 서열 3에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 5에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는 항-KIR 항체이며, 여기서 각각의 주기에 대해 2회 용량의 항-KIR 항체가 0.1, 0.3, 1, 3, 6 또는 10 ㎎/㎏의 용량으로 투여되고, 4회 용량의 항-PD-1 항체가 3 ㎎/㎏의 용량으로 투여되는 것인, 항-KIR 항체가 제공된다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 상기 언급된 실시양태들 중 어느 하나의 항-PD-1 항체가 항-PD-L1 또는 항-PD-L2 항체로 대체되거나, 또는 항-PD-L1 또는 항-PD-L2 항체와 조합된다. 예시적인 항-PD-L1 항체가 WO 2007/005874, WO 2010/077634 및 WO 2011/066389에 기재되어 있고, 예시적인 항-PD-L2 항체가 WO 2004/007679에 기재되어 있다. 따라서, 본 발명은 상기 기재된 임상 유효 투여량의 PD-1 항체가 동일한 투여량의 항-PD-L1 또는 항-PD-L2 항체로 대체된, 상기 기재된 임상 유효 투여량의 항-PD-1 항체와 조합된 상기 기재된 임상 유효 투여량의 항-KIR 항체를 사용하여 인간 환자에서 종양을 치료하기 위한 방법, 조성물 및 키트를 또한 특징으로 한다.

도 1은 뮤린 고형 종양 모델에서 항-KIR 항체와 항-PD-1 항체의 조합 투여를 사용한 생체내에서의 종양 성장 억제를 나타낸다.
도 2는 I상 임상 시험의 파트들을 설명하는 개략도이다.

I. 정의

본원에서 사용된 바와 같이, "대상체" 또는 "환자"라는 용어는 인간 암 환자 (예를 들어, 종양, 예컨대 진행성 불응성 고형 종양, 또는 혈액 악성종양이 있는 환자)이다.

본원에서 사용된 바와 같이, "효과적인 치료"는 이로운 효과, 예를 들어 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 호전을 일으키는 치료를 지칭한다. 이로운 효과는 기준선을 넘어서는 개선, 즉 방법에 따른 요법의 개시 전에 이루어진 측정 또는 관찰을 넘어서는 개선의 형태를 취할 수 있다. 이로운 효과는 고형 종양의 마커의 해로운 진행을 정지시키거나, 느리게 하거나, 지연시키거나 또는 안정화시키는 것의 형태를 취할 수도 있다. 효과적인 치료는 고형 종양의 하나 이상의 증상의 완화를 지칭할 수 있다. 이같은 효과적인 치료는, 예를 들어 환자 통증을 감소시킬 수 있고/있거나, 병변의 크기 및/또는 수를 감소시킬 수 있고/있거나, 종양 전이를 감소시키거나 방지할 수 있고/있거나, 종양 성장을 느리게 할 수 있다.

"유효량"이라는 용어는 원하는 생물학적, 치료적 및/또는 예방적 효과를 제공하는 작용제의 양을 지칭한다. 이러한 결과는 질환의 징후, 증상 또는 원인 중 하나 이상의 감소, 호전, 고식, 경감, 지연 및/또는 완화, 또는 생물학적 시스템의의 임의의 기타 원하는 변경일 수 있다. 고형 종양과 관련하여, 유효량은 종양 축소를 야기하고/하거나 종양 성장 속도를 감소시키고/시키거나 (예컨대 종양 성장을 억제함) 또는 기타 원치 않는 세포 증식을 방지하거나 지연시키는데 충분한 양을 포함한다. 일부 실시양태에서, 유효량은 종양 발달을 지연시키는데 충분한 양이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 종양 발달을 방지하거나 지연시키는데 충분한 양이다. 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 유효량의 약물 또는 조성물은 (i) 암세포의 수를 감소시킬 수 있고/있거나; (ii) 종양 크기를 감소시킬 수 있고/있거나; (iii) 말초 기관으로의 암세포 침윤을 어느 정도 억제하거나, 지연시키거나 느리게 할 수 있고, 이를 정지시킬 수 있고/있거나; (iv) 종양 전이를 억제하고 (즉, 어느 정도 느리게 함), 이를 정지시킬 수 있고/있거나; (v) 종양 성장을 억제할 수 있고/있거나; (vi) 종양 발생 및/또는 재발을 방지하거나 지연시킬 수 있고/있거나; (vii) 암과 연관된 증상 중 하나 이상을 어느 정도 해소시킬 수 있다. 한 예에서, "유효량"은 암의 유의한 감소 또는 암, 예컨대 진행성 고형 종양의 진행을 느리게 하는 것을 초래하는 것으로 임상으로 증명된, 조합되었을 때의 항-KIR 항체의 양 및 항-PD-1 항체의 양이다.

본원에서 사용된 바와 같이, "고정 용량", "균일 용량" 및 "균일-고정 용량"이라는 용어들은 상호교환가능하게 사용될 수 있고, 환자의 체중 또는 체표면적 (BSA)과 관계없이 환자에게 투여되는 용량을 지칭한다. 따라서 고정 또는 균일 용량은 ㎎/㎏ 용량으로 제공되지 않고, 작용제 (예를 들어, 항-KIR 항체 및/또는 항-PD-1 항체)의 절대량으로서 제공된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "체표면적 (BSA)-기반 용량"은 개별적인 환자의 체표면적 (BSA)에 대해 조정된 작용제 (예를 들어, 항-KIR 항체 및/또는 항-PD-1 항체)의 용량을 지칭한다. BSA-기반 용량은 ㎎/체중 ㎏으로서 제공될 수 있다. 직접적인 측정 없이 BSA에 이르도록 다양한 계산이 공개되어 있고, 뒤 부아(Du Bois) 식이 가장 광범위하게 사용된다 (문헌 [Du Bois D, Du Bois EF (Jun 1916) Archives of Internal Medicine 17 (6): 863-71]; 및 [Verbraecken, J. et al. (Apr 2006). Metabolism - Clinical and Experimental 55 (4): 515-24] 참조). 기타 예시적인 BSA 식은 모스텔러(Mosteller) 식 (Mosteller RD. N Engl J Med., 1987; 317:1098), 헤이콕(Haycock) 식 (Haycock GB, et al., J Pediatr 1978, 93:62-66), 게한 & 조지(Gehan & George) 식 (Gehan EA, George SL, Cancer Chemother Rep 1970, 54:225-235), 보이드(Boyd) 식 (문헌 [Current, JD (1998), The Internet Journal of Anesthesiology 2 (2)]; 및 [Boyd, Edith (1935), University of Minnesota. The Institute of Child Welfare, Monograph Series, No. x. London: Oxford University Press]), 후지모토(Fujimoto) 식 (Fujimoto S, et al., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50), 타카히라(Takahira) 식 (Fujimoto S, et al., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50), 및 쉴리히(Schlich) 식 (Schlich E, et al., Ernaehrungs Umschau 2010;57:178-183)을 포함한다.

"항체"라는 용어는 하나 이상의 항체-유래 항원 결합 부위 (예를 들어, VH/VL 영역 또는 Fv, 또는 CDR)가 있는 폴리펩티드를 기재한다. 항체는 공지된 형태의 항체를 포함한다. 예를 들어, 항체는 인간 항체, 인간화 항체, 이중특이적 항체, 또는 키메라 항체일 수 있다. 항체는 Fab, Fab'2, ScFv, SMIP, 아피바디(Affibody)®, 나노바디, 또는 도메인 항체일 수도 있다. 항체는 하기의 이소형 중 임의의 것일 수도 있다: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD, 및 IgE. 항체는 자연 발생 항체일 수 있거나, 또는 (예를 들어, 돌연변이, 결실, 치환, 비-항체 모이어티에 대한 접합에 의해) 변경된 항체일 수 있다. 예를 들어, (자연 발생 항체와 비교하여) 항체는 항체의 성질 (예를 들어, 기능적인 성질)을 변화시키는 하나 이상의 변이체 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 반감기, 이펙터 기능 및/또는 환자에서의 항체에 대한 면역 반응에 예를 들어 영향을 미치는 수많은 이같은 변경이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 항체라는 용어는 하나 이상의 항체-유래 항원 결합 부위를 포함하는 인공 항체 구축물을 또한 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "킬러 Ig-유사 수용체", "킬러 억제성 수용체", 또는 "KIR"는 KIR 유전자 패밀리의 구성원인 유전자 또는 이같은 유전자로부터 제조된 cDNA에 의해 코딩되는 단백질 또는 폴리펩티드를 지칭한다. KIR 유전자 및 KIR 유전자 생성물의 명명법, 및 예시적인 KIR에 대한 진뱅크(GenBank) 등록 번호를 포함하여, KIR 유전자 패밀리의 상세한 리뷰는 "북쉘프(Bookshelf)"로 칭해지는 NCBI 웹사이트 (월드-와이드 웹 (WWW) 주소 ncbi.nlm.nih.gov/books에서 접속가능함)에서 입수가능한 엠. 캐링턴(M. Carrington) 및 피. 노먼(P. Norman)의 "The KIR Gene Cluster"이다. 인간 KIR 유전자 및 cDNA의 서열, 뿐만 아니라 이들의 단백질 생성물이 진뱅크를 포함하는 공공 데이터베이스에서 입수가능하다. 인간 KIR의 비제한적인 예시적인 진뱅크 등록물의 등록 번호는 하기와 같다: KIR2DL1: 진뱅크 등록 번호 U24076, NM_014218, AAR16197, 또는 L41267; KIR2DL2: 진뱅크 등록 번호 U24075 또는 L76669; KIR2DL3: 진뱅크 등록 번호 U24074 또는 L41268; KIR2DL4: 진뱅크 등록 번호 X97229; KIR2DS1: 진뱅크 등록 번호 X89892; KIR2DS2: 진뱅크 등록 번호 L76667; KIR2DS3: 진뱅크 등록 번호 NM_012312 또는 L76670 (스플라이스 변이체); KIR3DL1: 진뱅크 등록 번호 L41269; 및 KIR2DS4: 진뱅크 등록 번호 AAR26325. KIR은 1 내지 3개의 세포외 도메인을 포함할 수 있고, 긴 세포질 꼬리 (즉, 아미노산 40개 초과) 또는 짧은 세포질 꼬리 (즉, 아미노산 40개 미만)가 있을 수 있다. 본원에서 앞서 기재된 바와 같이, 이러한 특징들이 KIR의 명칭을 결정한다. 예시적인 KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, 및 KIR2DS4 분자들은 하기의 각각의 아미노산 서열의 폴리펩티드를 포함한다:

KIR2DL1 세포외 도메인:

KIR2DL2 세포외 도메인:

KIR2DL3 세포외 도메인:

KIR2DS4 세포외 도메인:

"KIR2DL2/3"이라는 용어는 KIR2DL2 및 KIR2DL3 수용체 중 하나 또는 양쪽 모두를 지칭한다. 이러한 2개의 수용체는 상동성이 매우 높고, 동일한 유전자의 대립유전자 형태에 의해 코딩되며, 관련 기술분야에서 기능적으로 유사한 것으로 간주된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "프로그램화된 사멸 1", "프로그램화된 세포 사멸 1", "PD-1 단백질", "PD-1", "PD1", "PDCD1", "hPD-1" 및 "hPD-I"이라는 용어들은 상호교환가능하게 사용되고, 인간 PD-1의 변이체, 이소폼, 종 상동체, PD-1과의 하나 이상의 공통적인 에피토프가 있는 유사체를 포함한다. 완전 PD-1 서열을 진뱅크 등록 번호 U64863 (서열 29) 하에 확인할 수 있다.

프로그램화된 사멸 1 (PD-1) 단백질은 CD28 수용체 패밀리의 억제성 구성원이고, 이러한 패밀리는 CD28, CTLA-4, ICOS 및 BTLA를 또한 포함한다. PD-1은 활성화된 B 세포, T 세포, 및 골수 세포 상에서 발현된다 (Agata et al., 상기 문헌; Okazaki et al. (2002) Curr. Opin. Immunol. 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J Immunol 170:711-8). 이러한 패밀리의 최초의 구성원인 CD28 및 ICOS는 모노클로날 항체를 첨가한 후에 T 세포 증식을 증진시키는 것에 대한 기능적인 효과에 의해 발견되었다 (Hutloff et al. (1999) Nature 397:263-266; Hansen et al. (1980) Immunogenics 10:247-260). PD-1은 아폽토시스 세포에서의 차별적인 발현에 대한 스크리닝을 통해 발견되었다 (Ishida et al. (1992) EMBO J 11:3887-95). 이러한 패밀리의 기타 구성원인 CTLA-4 및 BTLA는 각각 세포독성 T 림프구 및 TH1 세포에서의 차별적인 발현에 대한 스크리닝을 통해 발견되었다. CD28, ICOS 및 CTLA-4 모두는 동종이량체화를 허용하는 쌍을 이루지 않은 시스테인 잔기가 있다. 대조적으로, PD-1은 다른 CD28 패밀리 구성원에서 특징적인 쌍을 이루지 않은 시스테인 잔기가 결여되어, 단량체로서 존재하는 것으로 제안된다.

PD-1 유전자는 Ig 유전자 슈퍼패밀리의 일부분인 55 kDa의 제I형 막횡단 단백질이다 (Agata et al. (1996) Int Immunol 8:765-72). PD-1은 막 근위부의 면역수용체 티로신 억제성 모티프 (ITIM) 및 막 원위부의 티로신-기반 스위치 모티프 (ITSM)를 함유한다 (Thomas, M.L. (1995) J Exp Med 181:1953-6; Vivier, E 및 Daeron, M (1997) Immunol Today 18:286-91). CTLA-4과 구조적으로 유사하지만, PD-1은 B7-1 및 B7-2 결합에 결정적인 MYPPPY 모티프가 결여된다. PD-1에 대한 2개의 리간드인 PD-L1 및 PD-L2이 확인되었고, 이들은 PD-1에 결합했을 때 T 세포 활성화를 하향조절하는 것으로 나타났다 (Freeman et al. (2000) J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. (2001) Nat Immunol 2:261-8; Carter et al. (2002) Eur J Immunol 32:634-43). PD-L1 및 PD-L2 양쪽 모두 PD-1에 결합하는 B7 상동체이지만, 다른 CD28 패밀리에는 결합하지 않는다. PD-L1은 다양한 인간 암에서 풍부하다 (Dong et al. (2002) Nat. Med. 8:787-9). PD-1과 PDL1 사이의 상호작용은 종양 침윤 림프구의 감소, T-세포 수용체 매개 증식의 감소, 및 암성 세포에 의한 면역 회피를 초래한다 (Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100). PD-1과 PD-L1의 국소적인 상호작용을 억제함으로써 면역 억제가 역전될 수 있고, 이러한 효과는 PD-1과 PD-L2의 상호작용이 또한 차단되는 경우에 부가적이다 (Iwai et al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol. 170:1257-66).

PD-1이 CD28 패밀리의 억제성 구성원인 것과 일관되게, PD-1 결핍 동물에서 자가면역 심근병증 및 루푸스-유사 증후군 + 관절염 및 신장염이 포함되는 다양한 자가면역 표현형이 발달된다 (Nishimura et al. (1999) Immunity 11:141-51; Nishimura et al. (2001) Science 291:319-22). 추가로, PD-1은 자가면역 뇌척수염, 전신 홍반성 루프스, 이식편-대-숙주 질환 (GVHD), 제I형 당뇨병, 및 류마티스 관절염에서 역할을 하는 것으로 확인되었다 (Salama et al. (2003) J Exp Med 198:71-78; Prokunina and Alarcon-Riquelme (2004) Hum Mol Genet 13:R143; Nielsen et al. (2004) Lupus 13:510). 뮤린 B 세포 종양 세포주에서, PD-1의 ITSM이 BCR-매개 Ca² ⁺-유입 및 하류 이펙터 분자의 티로신 인산화를 차단하는데 필수적인 것으로 나타났다 (Okazaki et al. (2001) PNAS 98:13866-71).

IIa. 항- KIR 항체

관련 기술분야에 주지된 방법을 사용하여 본 발명에서 사용하기에 적합한 항-인간-KIR 항체 (또는 이로부터 유래된 VH/VL 도메인)가 생성될 수 있다. 대안적으로, 관련 기술분야에 인식된 항-KIR 항체가 사용될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 항-KIR 항체는 다수의 억제성 KIR 수용체와 교차-반응성이고, 이러한 수용체 중 하나 이상을 보유하는 NK 세포의 세포독성을 강화한다. 예를 들어, 항-KIR 항체가 KIR2D2DL1, KIR2DL2, 및 KIR2DL3 각각에 결합할 수 있고, 이러한 KIR들 중 어느 하나 또는 모두에 의해 매개되는 NK 세포 세포독성의 억제를 감소시키고/시키거나, 중화시키고/시키거나 역전시킴으로써 NK 세포 활성을 강화한다. 추가적인 실시양태에서, 항-KIR 항체는 KIR2DS4 및/또는 KIR2DS3에 결합하지 않는다. 예를 들어, WO 2006/003179 (이의 교시내용은 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 모노클로날 항체 1-7F9 (IPH2101로 또한 공지됨), 14F1, 1-6F1 및 1-6F5가 사용될 수 있다. KIR에 결합하는 것에 대해 이러한 관련 기술분야에 인식된 항체 중 임의의 것과 경쟁하는 항체가 또한 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 추가적인 관련 기술분야에 인식된 항-KIR 항체는, 예를 들어 WO 2005/003168, WO 2005/009465, WO 2006/072625, WO 2006/072626, WO 2007/042573, WO 2008/084106, WO 2010/065939, WO 2012/071411 및 WO/2012/160448에 개시된 것들을 포함한다.

예시적인 항-KIR 항체는 각각 서열 1 및 2에 제시된 서열의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 리릴루맙 (BMS-986015, IPH2102로도 지칭되거나, 또는 WO 2008/084106에서는 1-7F9(S241P)로 지칭됨), 또는 이의 항원 결합 단편 및 변이체이다. 리릴루맙은 1-7F9 (WO 2006/003179에 기재됨)와 동일한 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 완전히 인간형인 항-KIR 항체이고, 따라서 1-7F9와 동일한 에피토프에 결합하지만, (1) 이는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포에서 제조되는 반면, 1-7F9는 하이브리도마 세포로부터 제조되고, (2) 안정화 힌지 돌연변이 (S231P)가 리릴루맙 내로 도입되었다는 점에서 1-7F9와 상이하다 (WO 2008/084106).

다른 실시양태에서, 이러한 항체는 리릴루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역을 포함한다. 따라서, 한 실시양태에서, 이러한 항체는 서열 3에 기재된 서열의 리릴루맙의 VH 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 서열 5에 기재된 서열의 리릴루맙의 VL 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 7, 8, 및 9에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열 10, 11, 및 12에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 3 및/또는 서열 5에 기재된 아미노산 서열의 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 4 및/또는 서열 6에 기재된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 (VH) 및/또는 경쇄 가변 (VL) 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 결합에 대해 상기 언급된 항체와 경쟁하고/하거나, 상기 언급된 항체와 동일한 KIR 상의 에피토프에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 상기 언급된 항체와의 가변 영역 아미노산 서열 동일성이 적어도 약 90％이다 (예를 들어, 서열 3 또는 5와의 가변 영역 동일성이 적어도 약 90％, 95％ 또는 99％이다).

IIb. 항-PD-1 항체

관련 기술분야에 주지된 방법을 사용하여 본 발명에서 사용하기에 적합한 항-인간-PD-1 항체 (또는 이로부터 유래된 VH 및/또는 VL 도메인)이 생성될 수 있다. 대안적으로, 관련 기술분야에 인식된 항-PD-1 항체가 사용될 수 있다. 예를 들어, WO 2006/121168 (이의 교시내용은 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 모노클로날 항체 5C4 (본원에서 니볼루맙으로 지칭됨), 17D8, 2D3, 4H1, 4A11, 7D3, 및 5F4가 사용될 수 있다. 기타 공지된 PD-1 항체는 WO 2008/156712에서 h409A11로 기재된 람브롤리주맙 (MK-3475), 및 WO 2012/145493에서 기재된 AMP-514를 포함하고, 이들의 교시내용은 본원에 참조로 포함된다. 추가적인 공지된 PD-1 항체 및 기타 PD-1 억제제는 WO 2009/014708 및 WO 2009/114335에 기재된 것들을 포함하고, 이들의 교시내용은 본원에 참조로 포함된다. PD-1에 결합하는 것에 대해 이러한 관련 기술분야에 인식된 항체들 중 임의의 것과 경쟁하는 항체가 또한 사용될 수 있다.

예시적인 항-PD-1 항체는 각각 서열 17 및 18에 제시된 서열의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 니볼루맙, 또는 이의 항원 결합 단편 및 변이체이다. 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 니볼루맙의 가변 영역의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역을 포함한다. 따라서, 한 실시양태에서, 이러한 항체는 서열 19에 기재된 서열의 니볼루맙의 VH의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 21에 기재된 서열의 니볼루맙의 VL의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 23, 24 및 25에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 각각 서열 26, 27 및 28에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 19 및/또는 서열 21에 기재된 아미노산 서열의 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 각각 서열 20 및/또는 서열 22에 기재된 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 (VH) 및/또는 경쇄 가변 (VL) 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 결합에 대해 상기 언급된 항체와 경쟁하고/하거나, 상기 언급된 항체와 동일한 PD-1 상의 에피토프에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 항체는 상기 언급된 항체와의 가변 영역 아미노산 서열 동일성이 적어도 약 90％이다 (예를 들어, 서열 19 또는 서열 21과의 가변 영역 동일성이 적어도 약 90％, 95％ 또는 99％이다).

III. 제약 조성물

인간 환자에게 투여하기에 적합한 제약 조성물은 전형적으로 비경구 투여용으로, 예를 들어 액체 담체 내에서 제제화되거나, 또는 정맥내 투여용 액체 용액 또는 현탁액으로의 재구성에 적합하다.

일반적으로, 이같은 조성물은 전형적으로 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "제약상 허용되는"이라는 용어는 동물, 특히 인간에서의 사용에 대해 정부 감독 기관에 의해 허용되었거나 또는 미국 약전 또는 또 다른 일반적으로 승인된 약전에 열거되어 있음을 의미한다. "담체"라는 용어는 화합물이 이와 함께 투여되는 희석제, 보조제, 부형제, 또는 비히클을 지칭한다. 이같은 제약 담체는 멸균성 액체, 예컨대 물 및 오일 (석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 오일이 포함됨), 예컨대 땅콩 오일, 대두 오일, 미네랄 오일, 참깨 오일, 글리세롤 폴리에틸렌 글리콜 리시놀레에이트 등일 수 있다. 물 또는 수성 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이 담체로서, 특히 주사 용액 (예를 들어, 항-KIR 또는 항-PD-1 항체를 포함하는 용액)용으로 사용될 수 있다. 비경구 투여용 액체 조성물은 주사 또는 연속 주입에 의한 투여용으로 제제화될 수 있다. 주사 또는 주입에 의한 투여 경로는 정맥내, 복막내, 근육내, 척수강내 및 피하를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-KIR 및/또는 항-PD-1 항체는 정맥 내로 투여된다 (예를 들어, 각각 예를 들어 1시간, 90분 또는 2시간의 과정에 걸쳐서, 별도로 또는 함께).

IV. 환자 집단

항-KIR 항체와 항-PD-1 항체의 조합물을 사용하여 인간 환자에서 암 (예를 들어, 진행성 불응성 고형 종양 또는 혈액 악성종양)을 치료하기 위한 효과적인 방법이 본원에서 제공된다.

이러한 방법은 T 세포 및 NK 세포 상의 억제성 수용체를 차단하는 것에 의해 면역 반응을 강화함으로써 작용하기 때문에, 이는 매우 넓은 범위의 암에 적용가능하다. 한 실시양태에서, 인간 환자는 비-소세포 폐암 (NSCLC), 신세포 암종 (RCC), 흑색종 (예를 들어, 피부 또는 안내 악성 흑색종), 결장직장암, 또는 장액성 난소 암종을 앓는다. 항-PD-1 항체 및 항-KIR 항체의 조합물을 사용하여 치료될 수 있는 추가적인 암의 예는 간암, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 유방암, 폐암, 자궁암, 결장암, 직장암, 항문부암, 위암, 고환암, 자궁암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 비-호지킨 림프종, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 소아 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신우암, 중추신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척추축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양암, 편평세포암, 석면에 의해 유도된 암을 포함하는 환경에 의해 유도된 암, 다발성 골수종, B-세포 림프종, 호지킨 림프종/원발성 종격 B-세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 급성 골수성 림프종, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 여포성 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종, 버킷 림프종, 면역모세포성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 외투세포 림프종, 급성 림프모구성 백혈병, 균상 식육종, 역형성 대세포 림프종, T-세포 림프종 및 전구체 T-림프모구성 림프종이 예를 들어 포함되는 혈액 악성종양, 및 상기 암들의 임의의 조합을 포함한다. 본 발명은 전이성 암의 치료에 또한 적용가능하다.

치료 전에, 치료 동안에 또는 치료 후에 상기 기재된 임상 속성들 중 하나 이상에 대해 환자들을 테스트하거나 선별할 수 있다.

V. 조합 요법

본원에서 제공되는 조합 요법은 암 (예를 들어, 진행성 불응성 고형 종양)에 걸린 대상체를 치료하기 위한 항-KIR 항체 및 억제성 면역 수용체 (예를 들어, 자신의 천연 리간드에 결합했을 때 활성, 예컨대 세포독성 활성을 억제/중화하는 수용체)를 차단하는 또 다른 항체, 예컨대 항-PD-1 항체의 투여를 수반한다.

한 실시양태에서, 본 발명은 고형 종양 (예를 들어, 진행성 불응성 고형 종양)이 있는 대상체를 치료하기 위한 조합된 항-KIR 항체 및 항-PD-1 항체를 제공한다. 특정 실시양태에서, 항-KIR 항체는 리릴루맙이다. 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 보조 또는 조합 투여 (공투여)는 동일한 투여 제제 또는 상이한 투여 제제 내의 화합물들을 동시에 투여하는 것, 또는 화합물들을 별도로 투여하는 것 (예를 들어, 순차적 투여)을 포함한다. 따라서, 항-KIR 및 항-PD-1 항체는 단일 제제 내에서 동시에 투여될 수 있다. 대안적으로, 항-KIR 및 항-PD-1 항체는 별도의 투여를 위해 제제화될 수 있고, 공동으로 또는 순차적으로 투여된다.

예를 들어, 항-PD1 항체가 먼저 투여된 후 (예를 들어, 직후)에 항-KIR 항체가 투여될 수 있거나, 또는 반대일 수 있다. 한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 제1일 및 제29일에 항-KIR 항체의 투여 전에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-KIR 항체는 항-PD-1 항체로부터 30분 이내에 투여된다. 바람직하게는 이같은 공동 투여 또는 순차적 투여는 치료된 환자 내에 양쪽 항체가 동시에 존재하는 것을 초래한다.

VI. 치료 프로토콜

암에 걸린 인간 환자를 치료하기 위한 적합한 치료 프로토콜은, 예를 들어

각각을 유효량으로 인간 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 1회 이상의 투여 주기를 포함하며, 여기서 주기는 8주의 기간이고, 1회 이상의 주기 각각에 대해, 2회 용량의 항-KIR 항체를 0.1-20 ㎎/체중 ㎏의 용량으로 투여하고, 4회 용량의 항-PD-1 항체를 0.1-20 ㎎/체중 ㎏의 용량으로 투여한다.

한 실시양태에서, 항-KIR 항체 및 항-PD-1 항체는 하기의 용량으로 투여된다:

(a) 0.1 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;

(b) 0.3 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;

(c) 1 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;

(d) 3 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;

(e) 6 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체; 또는

(f) 10 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체.

또 다른 실시양태에서, 항-KIR 및/또는 항-PD-1 항체의 용량은 시간에 따라 변한다. 예를 들어, 항-KIR 항체 및/또는 항-PD-1 항체는 초기에는 고용량으로 투여될 수 있고, 시간에 따라 저하될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항-KIR 항체 및/또는 항-PD-1 항체는 초기에는 저용량으로 투여되고, 시간에 따라 증가된다.

또 다른 실시양태에서, 투여되는 항-KIR 및/또는 항-PD-1 항체의 양은 각각의 용량에 대해 일정하다. 또 다른 실시양태에서, 투여되는 항체의 양은 각각의 용량에 따라 변한다. 예를 들어, 항체의 유지 (또는 후속) 용량은 먼저 투여되는 로딩 용량보다 더 높거나 또는 이와 동일할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체의 유지 용량은 로딩 용량보다 더 낮거나 또는 이와 동일할 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 항-KIR 및/또는 항-PD-1 항체는 정맥내 투여용으로 제제화된다. 한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 각각의 주기의 제1일, 제15일, 제29일 및 제43일에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-KIR 항체는 각각의 주기의 제1일 및 제29일에 투여된다.

다른 실시양태에서, 항-KIR 및/또는 항-PD-1 항체는 일주일에 1번, 2주 또는 3주마다 1번, 1개월에 1번, 또는 임상 이익이 관찰되는 한, 또는 완전 반응, 확인된 진행성 질환 또는 관리불가능한 독성이 있을 때까지 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 투여 주기는 8주이고, 이는 필요하다면 반복될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 치료는 12회 이하의 주기로 이루어진다.

또 다른 실시양태에서, 4회 용량의 항-PD-1 항체가 8주 주기마다 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 2회 용량의 항-KIR 항체가 8주 주기마다 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체 및 항-KIR 항체는 1선 치료 (예를 들어, 초기 또는 1차 치료)로서 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체 및 항-KIR 항체는 2선 치료로서 (예를 들어, 재발 후 및/또는 1차 치료가 실패한 경우를 포함하여, 초기 또는 1차 치료 후에) 투여된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 항-PD-1 항체가 항-PD-L1 또는 항-PD-L2 항체로 대체되었거나 또는 항-PD-L1 또는 항-PD-L2 항체와 조합된, 상기 언급된 실시양태들 중 임의의 것을 특징으로 한다.

VII. 결과

표적 병변과 관련하여, 요법에 대한 반응은 하기를 포함할 수 있다:

비-표적 병변과 관련하여, 요법에 대한 반응은 하기를 포함할 수 있다:

본원에 개시된 방법에 따라 치료된 환자는 바람직하게는 암의 하나 이상의 징후에서의 개선을 경험한다. 한 실시양태에서, 개선은 측정가능한 종양 병변의 양 및/또는 크기에서의 감소에 의해 측정된다. 또 다른 실시양태에서, 병변은 흉부 x선 또는 CT 또는 MRI 필름 상에서 측정될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 세포학 또는 조직학을 사용하여 요법에 대한 반응성을 평가할 수 있다.

한 실시양태에서, 치료된 환자는 완전 반응 (CR), 부분 반응 (PR), 안정 질환 (SD), 면역-관련 완전 반응 (irCR), 면역-관련 부분 반응 (irPR), 또는 면역-관련 안정 질환 (irSD)을 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 치료된 환자는 종양 축소 및/또는 성장 속도 감소, 즉 종양 성장의 억제를 경험한다. 또 다른 실시양태에서, 원치 않는 세포 증식이 감소되거나 또는 억제된다. 또 다른 실시양태에서, 하기 중 하나 이상이 발생할 수 있다; 암세포 수가 감소될 수 있음; 종양 크기가 감소될 수 있음; 말초 기관으로의 암세포 침윤이 억제되거나, 지연되거나, 느려지거나 또는 정지될 수 있음; 종양 전이가 느려지거나 또는 억제될 수 있음; 종양 성장이 억제될 수 있음; 종양 재발이 방지되거나 또는 지연될 수 있음; 암과 연관된 증상 중 하나 이상이 어느 정도로 해소될 수 있음.

다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 방법 중 어느 하나에 따른 유효량의 항-KIR 항체 및 항-PD-1 항체의 투여는 종양 크기의 감소, 경시적으로 나타나는 전이성 병변의 수의 감소, 완전 완화, 부분적 완화, 또는 안정 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치료 효과를 일으킨다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 치료 방법은 항-KIR 항체 또는 항-PD-1 항체 단독으로 달성되는 것보다 양호한 필적하는 임상 이익률 (CBR = CR+ PR+ SD ≥ 6개월)을 일으킨다. 다른 실시양태에서, 임상 이익률의 개선은 항-KIR 항체 또는 항-PD-1 항체 단독에 비교하여 약 20％ 20％, 30％, 40％, 50％, 60％, 70％, 80％ 또는 이를 초과하는 값이다.

VIII. 키트 및 단위 투여량 형태

항-KIR 항체, 예컨대 리릴루맙, 및 항-PD-1 항체, 예컨대 니볼루맙, 및 제약상 허용되는 담체를 선행 방법에서 사용하기에 적합화된 치료 유효량으로 함유하는 제약 조성물을 포함하는 키트가 본원에서 또한 제공된다. 키트는 조성물을 암 (예를 들어, 고형 종양)에 걸린 환자에게 투여하기 위해 실행자 (예를 들어, 의사, 간호사 또는 환자)가 키트 내에 함유된 조성물을 투여하게 하는 지침서, 예를 들어 투여 일정을 포함하는 지침서를 임의로 또한 포함할 수 있다. 키트는 주사기를 또한 포함할 수 있다.

임의로, 키트는 상기 제공된 방법에 따른 단일 투여를 위한 유효량의 항-KIR 또는 항-PD-1 항체를 각각 함유하는 단일-용량 제약 조성물들의 다중 포장물을 포함한다. 제약 조성물(들)을 투여하는데 필요한 기구 또는 장치가 키트 내에 또한 포함될 수 있다. 예를 들어, 키트는 특정량의 항-KIR 또는 항-PD-1 항체를 함유하는 하나 이상의 미리 충전된 주사기를 제공할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명은

(c) 본원에서 제공된 방법에서 항-KIR 항체 및 항-PD-1 항체를 사용하기 위한 지침서

를 포함하는, 인간 환자에서 암을 치료하기 위한 키트를 제공한다.

하기의 예들은 단지 설명적이고, 본 개시내용을 읽었을 때 통상의 기술자에게 다수의 변동 및 등가물이 명백해질 것이기 때문에 어떠한 방식으로도 이러한 개시내용의 범주를 한정하는 것으로 해석되지 않아야 한다.

본 출원의 전반에 걸쳐 인용된 모든 참고문헌, 진뱅크 등록물, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용은 명백하게 본원에 참조로 포함된다.

실시예

실시예 1: 항-PD-1 항체 ( 니볼루맙 )의 임상-전 약리학

니볼루맙은 높은 친화성 및 특이성으로 PD-1에 결합하고, 따라서 이의 리간드인 PD-L1 및 PD-L2에 결합하는 것을 방해하는, 완전히 인간형인 IgG4 (카파) 이소형 모노클로날 항체이다 (WO 2006/121168 참조). 니볼루맙이 PD-1에 결합하는 것의 K_D는 표면 플라즈몬 공명 (비아코어(Biacore)) 분석으로 측정 시에는 약 10^-9 M인 것으로 (WO 2006/121168 참조), 바이오-레이어(bio-layer) 간섭측정법 (포르테바이오(ForteBio))으로 결정 시에는 약 2.9 × 10^-12 M인 것으로 결정되었다. 니볼루맙은 다른 관련된 패밀리 구성원, 예컨대 BTLA, CTLA-4, ICOS 또는 CD28에는 결합하지 않는다. 니볼루맙의 임상-전 테스트에서, PD-1에 결합하는 것이 시험관내에서 강화된 T 세포 증식 및 인터페론-감마 (IFN-감마) 방출을 초래한다는 것이 입증되었다 (WO 2006/121168 참조). 니볼루맙의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열이 각각 서열 1 및 2에서 제공된다.

실시예 2: 생체내에서의 항-PD-1 항체 ( 니볼루맙 )의 낮은 독성

시노몰구스 원숭이에서의 독성학 연구에서, 27회의 용량 동안 일주일에 2회 제공된 50 ㎎/㎏ 이하의 용량에서 니볼루맙이 잘 허용되었음이 확인되었다. 약물-관련 발견은 28％만큼의 트리아이오도티로닌 (T3)의 가역적인 감소에 한정되었고, 다른 갑상선 기능 마커에서의 부수적인 이상이 없었다 (데이터는 제시되지 않음).

실시예 3: 항-PD-1 항체의 임상 약리학 및 안전성

2011년 5월 현재, 273명의 대상체가 4개의 I상 연구에서 니볼루맙으로 치료되었다. 하나는 활성 C형 간염에 감염된 대상체의 연구였고, 둘은 진행성 악성종양이 있는 대상체에서의 용량 증량 연구였으며, 나머지는 이필리무맙과의 조합 연구였다. 총 273명의 대상체에게 1회 이상의 용량의 니볼루맙을 0.3 내지 10 ㎎/㎏의 용량으로 제공하였다. 최대 허용 용량 (MTD)에 도달되지 않았다. 용량 또는 종양 유형에 따른 유해 사례 (AE)의 발생, 중증도 또는 관계의 패턴이 없었다. 23명의 대상체 (8.4％)에 니볼루맙과 관련된 심각한 유해 사례 (SAE)가 있었다.

한 연구 (CA209001)에서, 39명의 대상체에게 3개월 시점에서의 재치료 기회와 함께 단일 용량의 0.3, 1, 3, 또는 10 ㎎/㎏의 니볼루맙이 제공되었다. 모든 대상체에 하나 이상의 AE가 있었고, 이 중 35명 (88％)이 치료와 관련되었다. 인과성과 관계없이 가장 빈번한 AE는 피로 (56％), 오심 (44％), 단백뇨 (38％), 변비 (33％), 요통 (33％), 구강 건조 (28％), 구토 (28％), 발진 (26％), 호흡곤란 (26％), 및 식욕부진 (23％)이었다. 39명 중 35명 (90％)의 대상체에서 치료-관련 AE가 보고되었다. 이들 중에서, 11명이 3등급 AE를 겪었고, 1명의 대상체는 4등급 림프구 수 감소가 있었다. 68개의 SAE가 있었고, 3가지가 치료와 관련되었다 (2등급 빈혈, 2등급 갑상선기능저하증, 및 3등급 결장염). 12명의 사망 중에서, 아무도 니볼루맙과 관련된 것으로 간주되지 않았다.

여전히 진행 중인 더 큰 I상 연구 (CA209003)에서, 169명의 대상체에게 다중 용량의 0.1, 0.3, 1, 3 및 10 ㎎/㎏의 니볼루맙을 2주마다의 간격으로 제공하였다. 140명 (83％)의 대상체가 하나 이상의 AE를 보고하였고, 이들 중 가장 통상적인 것은 상기 열거된 것들과 크게 다르지 않았다. 이는 니볼루맙의 단일 용량 투여에서 관찰된 안전성 경험과 일관되었다. 가장 통상적인 치료-관련 AE는 피로 (22％), 발진 (15％), 소양증 (11％), 설사 (9％) 및 오심 (8％)이었다. 65명 (38％)의 대상체가 3등급 또는 4등급 AE를 겪었고, 이들 중에서 23명의 대상체에 치료와 관련된 AE가 있었다. 58명 (34％)의 대상체가 SAE를 보고하였고, 이들 모두 1, 3 또는 10 ㎎/㎏ 치료군에서 발생하였으며, 이들 중 16명 (9％)의 대상체에서 치료에 관련된 SAE가 있었다. 치료-관련 SAE의 유형은 내분비병증 (갑상선기능항진증, 뇌하수체염, 2차 부신피질 부전증, 리파제 증가), 위장 독성 (복통, 오심, 구토, 탈수, 설사, 결장염), 간독성 (간염, ALT, AST 및 알칼리성 포스파타제 증가), 폐 독성 (호흡곤란, 폐렴, 급성 호흡곤란 증후군), 및 기타 독성 (피로, 연조직염, 주입-관련 반응, 근간대성경련, 악성 신생물, 골수이형성 증후군)을 포함하였다. 2011년 11월 30일 현재, 33명의 사망이 보고되었다; 0.1 ㎎/㎏ 용량의 대상체 2명, 1 ㎎/㎏ 용량의 대상체 8명, 3 ㎎/㎏ 용량의 대상체 3명, 및 10 ㎎/㎏ 용량의 대상체 20명. 30명의 사망이 질환 진행에 대해 2차적인 것으로 간주되었고, 1명은 허혈형 심근병증에 기인하는 것으로 보고되었으며, 약물과 관련되지 않는 것으로 간주되었다. 2명의 대상체는 약물-관련 사망이었다. 10 ㎎/㎏으로 치료된 대상체 1명은 4등급 폐렴에 걸렸고, 5등급 패혈증으로 사망하였다. 1 ㎎/㎏으로 치료된 나머지 대상체 1명은 3등급 폐렴 및 4등급 급성 호흡곤란 증후군이 발달되었고, 5등급 패혈증으로 사망하였다. 폐 증상이 중증일 때까지 어떠한 대상체에게도 스테로이드를 제공하지 않았다. 폐렴 및 급성 호흡곤란 증후군을 치료하기 위한 코르티코스테로이드 및 인플릭시맙과 같은 면역억제제의 사용을 포함하여 관리 알고리즘이 관련 기술분야에 공지되어 있다.

예비 결과는 상기 언급된 시험 양쪽 모두에서의 임상 활성을 입증하였다. CA2009001의 39명의 대상체 중에서, 3명의 대상체가 부분 반응 (결장직장 암종, 흑색종, 및 신세포 암종)이었고, 10명의 대상체가 안정 질환이었다. CA209003에서는, 91명의 대상체가 종양 반응에 대해 평가가능하였고, 완전 또는 부분 반응이 비-소세포 폐암, 신세포 암종 및 흑색종에 걸린 대상체에서 1, 3 및 10 ㎎/㎏의 용량 수준에서 보고되었다. 이러한 진행 중인 임상 시험으로부터의 데이터는 최근에 문헌 [Topalian SL, et al., New Eng J Med 2012; 366(26):2443-2454]에서 보고되었다 (WO 2008/156712 (h409A11) 및 문헌 [Hamid O et al., New Eng J Med 2013; 369:134-144]를 또한 참조한다).

실시예 4: 항-PD-1 항체 ( 니볼루맙 )의 약동학

0.3, 1, 3 및 10 ㎎/㎏의 니볼루맙이 제공된 39명의 암 환자의 단일 용량 약동학 분석에서, 개별적인 값들은 0.9 내지 7시간 범위이면서 단일 용량들에 걸친 중앙값 T_max가 1.6 내지 3시간 범위였음이 밝혀졌다. 니볼루맙의 약동학은 0.3 내지 10 ㎎/㎏의 범위에서 선형이었고, 이때 최대 혈청 농도 (C_max) 및 0시에서 무한대까지의 농도-시간 곡선하 면적 (AUC_INF)이 용량에 비례하여 증가하였으며, 저도 내지 중등도의 대상체간 변동이 각각의 용량 수준에서 관찰되었다. 니볼루맙의 평균 최종 소실 반감기는 17 내지 25일이었고, 이는 내인성 IgG4의 반감기와 일치한다. 니볼루맙의 소실 및 분포 양쪽 모두 용량에 독립적이었다 (데이터는 제시되지 않음).

실시예 5: IPH -2101의 I상 임상 시험

IPH-2101 (1-7F9로 또한 공지되어 있고, WO 2006/003179에서 기재됨)은 KIR2DL-1, 2 및 3 및 KIR2DS-1 및 2에 특이적으로, 그리고 높은 친화성으로 결합하고, 따라서 KIR과 HLA-C 사이의 상호작용을 방지하는, 완전히 인간형인 항-KIR 모노클로날 항체이다. AML 환자에서의 IPH-2101의 I상 임상 시험이 완료되었다. 0.0003, 0.003, 0.015, 0.075, 0.3, 1 및 3 ㎎/㎏ 용량의 단일 투여는 최대 허용 용량에 도달하지 않았다. 2개의 I상 연구 및 3개의 II상 연구가 AML 또는 다발성 골수종 환자에서 진행 중이다. 이러한 연구에서, 다양한 용량 수준이 4주마다의 간격으로 3 ㎎/㎏까지 테스트되었고, 투여된 주기의 최대 횟수는 6회였다. 약동학 연구는 0.3 ㎎/㎏보다 높은 용량에서의 12-14일의 반감기를 시사하였다. 0.075 ㎎/㎏의 용량에서, 충분한 KIR 점유 (>90％)가 7일 미만 동안 나타났다. 0.3 ㎎/㎏의 용량에서, KIR 점유가 제28일에 시작하여 90％ 미만으로 감소되었다. 4주에 걸친 지속적인 충분한 KIR 점유가 3 ㎎/㎏의 용량에서 달성되었다.

2011년 12월 1일 현재, 이러한 시험에서의 136명의 환자에 대해 임상 안전성 데이터가 입수가능하였다. 유해 사례 (AE)가 136명 중 128명 (94％)의 대상체에서 보고되었고, 가능하게는, 아마도 또는 확실하게 IPH-2101에 관련된 734개 중 183개 (25％)를 포함하였다. 1명을 초과하는 대상체에서 보고된 AE는 전신 증상 (오한, 발열, 피로, 쇠약), 위장 증상 (오심, 구토, 설사), 신경계 증상 (어지럼증, 두통, 진전), 폐 증상 (호흡곤란), 피부 증상 (홍반, 소양증, 발진), 기타 (홍조, 고혈압, 근육연축, 근육통), 및 실험실 이상 (고칼륨혈증, 리파제 증가, 백혈구, 호중구 및 혈소판 수의 감소)을 포함하였다. 이러한 사례들은 대부분 1등급 및 2등급이었고, 1 ㎎/㎏을 초과하는 용량에서 더욱 빈번한 경향이 있었다. 1명의 다발성 골수종 환자만 중증 유해 사례 (SAE)를 겪었고, 이는 급성 신부전에 기인하였다. IPH-2101에 관련된 것으로 생각되었지만, 이러한 환자는 질환 진행도 있었다. 전반적으로, 0.0003 내지 3 ㎎/㎏의 용량에서 IPH-2101이 허용가능하였다.

실시예 6: 항- KIR 항체 ( 리릴루맙 )의 임상-전 약리학

리릴루맙은 KIR들의 부분집합, 즉 KIR2DL-1, 2 및 3 및 KIR2DS-1 및 2에 특이적으로, 그리고 높은 친화성으로 결합하는 완전히 인간형인 IgG4 모노클로날 항체이다. 표면 플라즈몬 공명 분석에서, 리릴루맙의 재조합 가용성 KIR2DL1에 대한 1가 친화성은 2.04 × 10^-8 M (s.d. 0.31 × 10^- ⁸)인 것으로, KIR2DL3에 대해서는 3.01 × 10^-10 M (s.d. 0.41 × 10^- ¹⁰)인 것으로 입증되었다. 리릴루맙의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열이 각각 서열 17 및 18에서 제공된다.

실시예 7: 마우스에서의 항- KIR 항체 ( 리릴루맙 )의 독성 결여

리릴루맙 또는 IPH-2101은 비-인간 영장류 또는 안전성 테스트에서 전통적으로 사용되는 기타 종으로부터의 NK 세포에 결합하지 않는다. 그러나, Ly49C/I는 인간 KIR에 대해 기능적으로 상동성인 뮤린 억제성 수용체이다. 4주 동안 1주일에 1번 10 ㎎/㎏의 리릴루맙으로 또는 13주 동안 매주 2번 대용물인 항-Ly49 항체 5E6F(ab')2로 처리된 마우스에서 불리한 발견이 없었다 (데이터는 제시되지 않음).

실시예 8: 항- KIR 항체 ( 리릴루맙 )의 임상 약리학 및 안전성

IPH-2101로 치료된 136명의 대상체에 대한 안전성 데이터가 상기 실시예 5에서 기재되어 있다. 리릴루맙은 IPH-2101 (1-7F9로도 알려짐)과 동일한 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 따라서 IPH-2101과 동일한 에피토프에 결합하지만, (1) 이는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포에서 제조되는 반면, IPH-2101은 하이브리도마 세포로부터 제조되고, (2) 안정화 힌지 돌연변이 (S231P)가 리릴루맙 내로 도입되었다는 점에서 IPH-2101과 상이하다.

KIR 점유의 예비 약역학 평가에서, 0.015 ㎎/㎏의 리릴루맙이 제공된 3명의 대상체 모두에서 1주일 미만 동안 KIR2D의 충분한 포화 (>90％ KIR 점유)가 있었음이 밝혀졌다. 0.3 ㎎/㎏이 제공된 대상체는 8주 이상 동안 충분한 포화가 있었고, 이는 더 높은 용량이 제공된 대상체에서는 더 길게 연장되었다. 테스트된 최종 코호트 내의 3명 모두를 포함한 대상체 (0.015, 0.3, 1 및 3 ㎎/㎏)의 절반에서 인터페론 감마 수준에서의 수수한 증가가 있었다 (데이터는 제시되지 않음).

추가로, 리릴루맙과 동일한 가변 영역이 있지만 안정화 S241P 힌지 돌연변이가 결여된 관련 항체 IPH2101 (WO 2006/003179에서 1-7F9로 또한 지정됨)을 수반하는 I상 연구가 진행성 혈액 악성종양에 걸린 대상체에 대해 완료되었다 (Vey N et al. (2012) Blood 120(22):4317-23). 2012년 5월 7일 현재, 20명의 대상체에게 0.015, 0.3, 1, 3, 6, 및 10 ㎎/㎏의 용량 수준의 IPH2101이 제공되었다. 6명의 대상체에 고형 종양이 있었고 (난소암 4명, 자궁내막암 1명, 유방암 1명), 14명은 혈액 악성종양이었다. 3가지의 더 낮은 용량 수준의 대상체에게는 4주마다의 간격으로 4회 용량이 제공되었다. 3, 6, 및 10 ㎎/㎏의 더 높은 용량 수준의 대상체에게는 1회 용량이 제공되었다. 용량 제한 독성이 없었다. 용량 수준과 관련되는 AE 빈도의 경향이 없었다. 20명 중 18명 (90％)의 대상체가 AE를 보고하였다. 대부분의 사례는 중증도가 1등급 (65％) 또는 2등급 (23％)이었다. 총 111개의 AE 중에서, 38개 (34％)가 리릴루맙에 관련되는 것으로 간주되었고, 이들 중 가장 통상적인 것은 피로 (16％), 두통 (13％), 소양증 (11％), 무력증 (5％), 변비 (5％), 고혈압 (5％), 말초 부종 (5％) 및 발진 (5％)이었다. 리릴루맙과 관련된 3등급 사례는 1개만 있었고, 이는 1회의 6 ㎎/㎏ 용량이 제공된 대상체에서 발생하였다. 이는 2등급 리파제 증가인 상태로 연구에 참가한 대상체에서의 리파제 증가였고, 22일 후에 기준선으로 되돌아갔다. SAE는 없었다.

실시예 9: 항- KIR 항체 ( 리릴루맙 )의 약동학

진행 중인 I상 연구로부터의 약동학 결과가 계류 중이다. 그러나, PK 모델은 리릴루맙의 PK 프로파일이 IPH-2101에 필적할 것임을 시사한다. AML 및 다발성 골수종에 걸린 대상체에서의 이전의 IPH-2101 I상 임상 시험에서, 2-구획 모델 + 1차 소실이 용량-의존적 소거로 데이터를 적절하게 기재하는 것으로 확인되어, 용량이 증가함에 따라 소거가 감소되었다. 최고 용량 (3 ㎎/㎏)에서의 최종 반감기가 18일인 것으로 결정되었고, 이는 문헌에서의 보고값과 일치한다.

실시예 10: 항-KIR 항체와 항-PD-1 항체의 조합 치료에 의한 생체내에서의 종양 성장 억제

항-KIR 및 항-PD-1의 조합이 항-종양 효능을 강화할 것이라는 가설을 테스트하기 위해 뮤린 고형 종양 모델에서 실험을 수행하였다. 원리는 제약 조작을 사용하여 선천 및 적응 면역을 조화롭게 조절하고 KIR 미스매치가 있는 동종이식 후의 환자에서 나타나는 생물학을 재현하는 것이었다. 니볼루맙 (항-인간 PD-1 항체) 및 리릴루맙 (항-인간 KIR 항체) 양쪽 모두 인간 서열만 인식한다. 따라서, 뮤린 특이적 PD-1 항체, 항-Ly49 항체, 및 Ly49C/I (마우스에서의 KIR 상동체임)를 인식하는 F(ab)2를 사용하여 이러한 가설을 테스트하였다.

마우스에 동계 MC38 뮤린 결장 암종 세포주를 주사하고, 촉진할 수 있는 종양이 형성된 후, 마우스를 대조군 IgG, 항-Ly49 항체, 항-PD-1 항체, 또는 양쪽 항체 모두가 제공된 4개의 코호트 중 하나로 무작위화하였다. 도 1에 나타난 바와 같이, 대조군 IgG 항체로 처리된 마우스는 급속한 종양 성장이 있었다 (도 1의 왼쪽 위의 패널 참조). 항-Ly49 항체로 처리된 마우스는 대조군 동물과 유의하게 상이하지 않았다 (도 1의 왼쪽 아래의 패널 참조). 뮤린 항-PD-1 항체로 처리된 것들은 종양 진행에서의 잠복기를 나타냈고, 30％의 마우스가 계속 종양이 없었다 (도 1의 오른쪽 위의 패널 참조). 항-Ly49 및 항-PD-1 항체 양쪽 모두로 처리된 것들 또한 종양 진행에서의 잠복기가 있었고, 60％의 마우스에 확립된 종양의 퇴행이 있었다 (도 1의 오른쪽 아래의 패널 참조). 이러한 결과들은 뮤린 고형 종양 모델에서 항-PD-1 항체의 효능을 상승작용적으로 (즉, 부가적인 것보다 많이) 강화하는 항-KIR 항체의 능력의 임상-전 증거를 제공한다.

실시예 11: 고형 종양이 있는 환자에서의 1상 시험

조합 치료로서 리릴루맙 및 니볼루맙을 투여하는 것의 효능 (상승작용성 효과 포함)을 입증하기 위해 항-KIR 항체 (리릴루맙) 및 항-PD-1 항체 (니볼루맙)의 1상 시험이 진행성 고형 종양이 있는 환자에서 수행되었다 (NCT01714739; Sanborn et al., 2013).

1. 목적

이러한 연구의 한 목적은 진행성 (전이성 및/또는 절제불능성) 고형 종양이 있는 대상체에서 니볼루맙과 조합되어 제공된 리릴루맙의 안전성 및 허용성을 평가하고 조합물의 용량 제한 독성 (DLT) 및 최대 허용 독성 (MTD)을 확인하는 것이다.

기타 목적은 진행성 고형 종양이 있는 대상체에서 리릴루맙 및 니볼루맙의 조합물의 예비 항-종양 활성을 평가하는 것, 공투여되었을 때의 리릴루맙 및 니볼루맙의 약동학 (PK)을 특성화하는 것, 조합 요법으로서 투여된 리릴루맙 및 니볼루맙의 면역원성을 모니터링하는 것, 및 니볼루맙과 조합되어 제공된 리릴루맙으로 치료된 흑색종 대상체로부터의 종양 침윤 림프구 (TIL) 부분집합에 대한 종양 조직에서의 약역학 효과를 평가하는 것을 포함한다.

추가적인 목적은 NK 세포 및 T 세포 구획 및 혈청 단백질 (시토카인 및 기타 면역 조절인자)을 포함하는 말초 혈액 내의 바이오마커에 대한 니볼루맙과 조합되어 제공된 리릴루맙 대 용량 및/또는 노출의 약역학 효과를 평가하는 것, 선택적인 생검을 받은 리릴루맙 및 니볼루맙으로 치료된 대상체 내의 종양 조직 및 말초 혈액에서의 약역학 활성을 평가하는 것, 바이오마커 측정치와 항-종양 활성 간의 잠재적인 연관을 연구하는 것, 니볼루맙과 조합되어 제공된 경우의 리릴루맙의 다중 용량 수준에서의 KIR 점유 및 NK 기능을 추가로 특성화하는 것, 대상체 KIR 및 HLA 유전자형과 임상 결과의 잠재적인 연관을 평가하는 것, 및 리릴루맙 및 니볼루맙의 조합물로의 요법을 시작하고 나서 3년 후의 랜드마크 전체 생존을 평가하는 것을 포함한다.

2. 연구 디자인 및 기간

이러한 연구는 I상 개방 표지 연구이고, 2개의 파트로 수행되었다. 연구의 제1 파트는 진행성 고형 종양이 있는 대상체에서 니볼루맙과 함께 투여된 리릴루맙의 안전성 및 허용성의 용량 증량 평가로 이루어졌다. 연구의 제2 파트는 최대 허용 용량 (MTD), 최대 투여 용량 (MAD), 또는 대안적인 용량의 각각 약 16명의 대상체가 있는 6개의 확장 코호트를 포함하였다. 이러한 파트는 질환이 제한되었다.

대상체는 4개 이하의 연구 기간을 완료하였다: 스크리닝 (28일 이하), 치료 (최대 2년 이하의 연구 요법), 임상 추적 (100일), 및 생존 추적 (연구 약물의 제1 용량 이후 3년 이하). 치료 기간은 12회 이하의 8주 치료 주기로 이루어졌다. 각각의 치료 주기는 4회 용량의 니볼루맙 및 2회 용량의 리릴루맙으로 구성되었다. 니볼루맙은 각각의 치료 주기의 제1일, 제15일, 제29일 및 제43일에 투여되었고, 리릴루맙은 제1일 및 제29일에 투여되었다. 양쪽 모두의 연구 약물이 제공되는 날에는, 니볼루맙이 먼저 제공된 후, 니볼루맙의 60분 주입을 완료하고 나서 30분 이내에 리릴루맙이 제공되었다. 각각의 치료 주기 후에, 연구 요법의 추가적인 주기로 대상체를 치료하는 결정은 종양 평가 (제49일과 제56일 사이에 수행되고 다음 주기의 제1 용량 이전에 완료되는 평가)를 기초로 하였다. 대상체 관리에 관련된 치료 결정은 독점적으로 면역 관련 (ir) 반응 기준인 irRECIST (Wolchok JD, et al., Clin Cancer Res 2009; 15:7412-7420)를 기초로 하였다. 소정의 주기의 말기에 전반적인 반응이 irPD-미확인, irSD, irPR, 또는 irCR-미확인인 대상체는 다음 치료 주기를 계속하였다. 일반적으로 대상체는 하기의 것들 중 어느 하나가 처음 발생할 때까지 연구 요법을 계속하도록 허용되었다: 1)irCR-확인의 달성; 2) 최대 주기 횟수의 완료, 3) ir-PD가 있음, 4) 치료로부터의 추가적인 이익이 없을 것임을 시사하는 임상 악화, 5) 요법을 허용할 수 없음; 또는 6) 대상체가 연구 요법 중단에 대한 기준을 충족시킴. 대상체는 임상 추적 기간에 진입하고, 이때 유해 사례를 모니터링하기 위해 제30일, 제60일 및 제100일의 방문이 예정되었다.

임상 추적 기간의 완료 후, 대상체는 생존 추적 기간에 진입하였다. 이러한 기간 동안, 생존 상태를 평가하기 위해 3개월 마다의 병원 방문 또는 전화 연락이 수행되었다. 이러한 기간은 연구 약물의 제1 용량 이후 3년 이하였다. 연구 개략도가 도 2에서 제시된다.

완전 완화 상태였지만 임상 추적 기간 또는 생존 추적 기간 동안 진행이 일어난 대상체는 양쪽 연구 약물을 이들이 이전에 제공된 것과 동일한 용량 및 동일한 일정으로 제공하는데 적격이었다. irCR-확인에 도달할 때까지 또는 1년의 기간 동안 요법이 계속되었다. 대상체는 또다시 적격성 기준 모두를 충족시켜야 했다. 담당 보건 당국 및 윤리 위원회의 승인을 필요로 하는 차환 연구인 연구 확장을 통해, 또는 또 다른 메카니즘을 통해 연구 약물이 제공되었다.

스크리닝 기간은 28일 이하로 지속되었다. 치료 기간은 2년 이하로 지속되었다. 임상 추적 기간은 100일 동안 지속되었다. 생존 추적 기간은 연구 약물의 제1 용량 이후 3년 이하로 지속되었다. 임의의 개별적인 대상체에 대한 총 연구 시간은 3.1년을 초과하지 않았다. 총 연구 기간은 제1 환자의 제1 방문 시점으로부터 등록된 마지막 환자의 필요한 생존 추적까지 4.5년이었다.

3. 용량 증량

6+3 디자인을 사용하여 니볼루맙과 조합되어 제공된 리릴루맙의 안전성을 평가하였다. 용량 증량 동안의 투여량이 하기 표 1에서 제공된다.

용량 제한 독성 (DLT) 관찰 기간은 8주 동안 지속되었다 (주기 1). 6명의 대상체를 각각의 용량에서 치료하였고, 이때 처음 6명의 대상체에서 2명의 용량 제한 독성이 관찰되면 9명의 대상체로 확장하였다. 0 또는 1명의 DLT가 대상체 6명의 코호트에서 발생하면, 대상체 6명의 새로운 코호트를 다음으로 더 높은 용량 수준에서 치료하였다. 6명 중 2명의 DLT가 발생하면, 이러한 코호트를 9명의 대상체로 확장하였다. 코호트 내에서 6명의 대상체 중 3명 이상, 또는 9명 중 3명 이상이 DLT를 경험하면, 이러한 용량 수준은 최대 허용 용량 (MTD)을 초과한 것으로 결정되었다. 코호트 4에서 MTD에 도달하지 않으면, 용량 증량 동안의 종합적 안전성 경험을 기초로 3 ㎎/㎏ 니볼루맙과 조합되어 제공되는 6 ㎎/㎏ 리릴루맙 및 10 ㎎/㎏ BMS 986015의 추가적인 코호트가 고려되었다.

용량 증량 동안의 새롭게 나타난 안전성 신호를 추가로 연구하기 위해, 총 12명 이하의 대상체가 임의의 용량 수준에 축적되었다. 추가 등록은 이러한 코호트에서의 용량 수준이 평가되었고 용량 증량에 대해 안전한 것으로 선고되었을 때만 허용되었다. 용량 수준에 등록된 처음 6-9명의 대상체에서의 DLT만 정식으로 용량 증량 및 후속 MTD 결정에서 평가되었다. 그러나, 치료된 모든 대상체로부터의 안전성 데이터가 코호트 확장을 위한 용량 선택에서 고려되었다.

대상체-내 용량 증량 또는 감소는 허용되지 않았다. DLT 이외의 이유로 DLT 기간 동안 연구를 중단한 대상체는 동일한 용량 수준 내에서 대체되었다. 안전성 관점에서 용량 증량에 대한 결정을 내리기 위한 목적으로, 1회의 빠진 용량이 비-의학적 이유에 속발성인 경우에만, 8주 관찰 기간에 걸쳐 4회 일정의 니볼루맙 용량 중 3회가 제공되었으면 대상체가 평가가능한 것으로 간주되었다.

용량 증량은 주기 1 동안 경험한 용량 제한 독성 (DLT)의 수를 기초로 하였다. 각각의 용량 수준에서의 처음 6명의 대상체는 PD 마커에 대한 말초 혈액 평가를 받았다.

모든 입수가능한 임상 및 실험실 데이터, 및 용량 증량 동안 관찰된 DLT의 성질, 개시 시점 및 해소 시점을 검토하여, 필요하다면 대안적인 용량 일정이 시험되어야 하는지 여부를 결정하였다. 합의되었으면, 대안적인 일정을 프로토콜 수정에 의해 확인하였다.

4. 코호트 확장

코호트 확장의 목적은 리릴루맙 및 니볼루맙의 조합에 관한 추가적인 안전성, 허용성, 예비 효능 및 약역학 정보를 수집하는 것이었다. 일단 테스트된 모든 용량의 안전성 프로파일이 특성화되고, 리릴루맙 및 니볼루맙의 조합 투여의 MTD가 정의되었으면, MTD, 최대 투여 용량 (MAD), 또는 대안적인 용량에서 코호트 확장을 시작하였다. 하기 표 2에서 열거된 종양 유형에 6개의 확장 코호트가 제한되었다.

코호트 확장에서의 독성 사례의 연속 평가를 확장 코호트에 등록한 동안 내내 수행하였다. DLT 비율이 33％를 초과하면, 이러한 발견을 논의하고 추가적인 등록을 중단하였다. 독성으로 인해 확장 코호트가 중단되면, 이전에 테스트된 더 낮은 용량 수준에서 새로운 코호트를 시작하였다.

5. 치료

연구 치료는 니볼루맙 및 리릴루맙을 포함하였다. 표 1은 각각의 패널에 대해 사용될 용량 수준을 가리킨다. 테스트된 최고 용량 또는 스폰서가 선택한 바와 같은 상이한 용량 수준에서 확장 코호트가 치료되었다. 리릴루맙 및 니볼루맙 양쪽 모두가 투여되는 때의 치료 방문의 경우, 니볼루맙이 먼저 투여되고 나서, 니볼루맙 주입 완료 후 30분 이내에 리릴루맙이 투여되었다.

6. 용량 제한 독성

리릴루맙은 니볼루맙과 연관된 기존에 기재된 유해 사례의 빈도 및 중증도를 증진시키거나 또는 새로운 독성을 발달시키는 잠재력이 있다. 연구 약물과 관련되고 연구 약물 개시로부터 56일 (주기 1 완료까지의 8주) 이내에 발생한 유해 사례의 발생, 강도 및 기간을 기초로 용량 제한 독성 (DLT)이 결정되었다. NCI CTCAEv4에 따라 유해 사례의 중증도의 등급이 매겨졌다. 하기 개요된 바와 같이 간, 비-혈액 및 혈액 DLT가 따로따로 정의되었다:

하기의 사례들 중 임의의 것이 간 DLT로 간주된다:

기간과 관계없이, ALT 또는 AST > 8× ULN

ALT 또는 AST > 5× 및 ≤ 8× ULN이고, 의학적 개입에도 불구하고 5일 이내에 1등급 이하로 돌아가지 못함

3등급 총 빌리루빈

ALT 또는 AST > 3× ULN 및 동반적인 총 빌리루빈 > 2× ULN

하기의 사례들 중 임의의 것이 비-혈액 DLT로 간주된다:

전신 치료를 필요로 하는 2등급 눈 통증 또는 시력 감소

국소 요법에 반응하지 않고 국소 요법 개시로부터 2주 이내에 1등급으로 개선되지 않는 2등급 눈 통증 또는 시력 감소

하기를 제외한 3등급 비-간 또는 비-혈액 독성:

하기의 3등급 비-혈액 사례는 DLT로 간주되지 않는다:

72시간 미만 동안 지속되고, 임상으로 합병성이 아니며, 자발적으로 해소되거나 또는 통상적인 의학적 개입에 반응하는 3등급 전해질 이상

췌장염의 임상 또는 방사선사진 증거와 연관되지 않은 3등급 아밀라제 또는 리파제 증가

48시간 미만 동안 지속되고, 자발적으로 또는 통상적인 의학적 개입으로 1등급 이하로 해소되는 3등급 오심 또는 구토

72시간 미만으로 지속되고, 혈류역학적 위험 (저혈압, 또는 종말 기관 관류 손상의 임상 또는 실험실 증거가 포함됨)과 연관되지 않은 3등급 열

호르몬 대체에 의해 잘 제어되는 3등급 내분비병증

3등급 종양 발적 (알려진 종양 또는 추정 종양의 부위에 국소화된 통증, 자극 또는 발진으로 정의됨)

3등급 피로

6시간 미만 이내에 1등급으로 돌아간 3등급 주입 반응

하기의 사례들 중 임의의 것이 혈액 DLT로 간주된다:

5일을 초과하여 지속되는 4등급 중성구감소증

4등급 저혈소판증

임상으로 유의한 출혈과 연관된 3등급 저혈소판증

48시간을 초과하여 지속되는 3등급 열성 중성구감소증

3등급 용혈

7. 용량 변형에 대한 지침

개별적인 용량 수준에서의 장기 안전성 및 효능의 더 양호한 평가를 허용하기 위해 이러한 연구에서 리릴루맙 및 BMS-986558의 대상체-내 용량 증량 또는 감소는 허용되지 않았다.

DLT를 경험한 대상체는 독성이 해소될 때까지 요법을 보류하여야 한다. 유해 사례가 28일 이내에 중증도 면에서 1등급 이하, 또는 기준선으로 해소되면, 양쪽 연구 약물에 대해 동일한 용량으로 요법을 재개하였다. 독성이 28일 후에 해소되고, 대상체가 임상 이익을 얻는다고 연구원이 믿는다면, 대상체는 연구 약물을 재개하는데 적격이었다. 이후에 대상체가 후속 DLT를 경험하고, 이 또한 해소되며, 대상체가 임상 이익을 얻는다고 연구원이 믿는다면, 대상체는 연구 약물을 재개하는데 적격이었다.

하기에 대해서는 대상체는 영구적으로 양쪽 연구 약물을 중단하도록 요구되었다:

≤ 72시간에 해소된 4등급 전해질 이상, ≤ 5일 기간의 4등급 중성구감소증, 또는 ≤ 5일 기간의 4등급 림프구감소증을 제외한, 임의의 4등급 유해 사례.

임상 위험이 있는 임의의 유해 사례를 사례별로 평가하여, 해소 후에 요법을 계속하는 것 대 요법을 영구적으로 중단하는 것의 위험 및 이익을 결정하였다. 해소 시 요법을 계속하는 것의 위험에 비해 더 높은 이익 가능성을 시사하는 개체의 이력 및 임상 과정의 요소가 있지 않다면, 중추신경계, 눈, 간 또는 폐를 수반하는 높은 등급의 사례들은 일반적으로 영구적인 중단을 필요로 할 것이다.

8. 안전성 평가

연구 동안, 그리고 최종 치료 후 100일 동안 유해 사례를 계속 평가하였다. 가장 최근 버전의 MedDRA를 사용하여 유해 사례를 코딩하였고, 잠재적인 유의성 및 중요성에 대해 검토하였다. NCI CTCAE 버전 4.0에 따라 유해 사례를 평가하였다. 모든 치료-관련 유해 사례가 기준선으로 회복되거나 또는 연구원이 이를 비가역적이라고 생각할 때까지 대상체들을 추적하여야 했다.

9. 효능 평가

적합한 바와 같은 컴퓨터 단층촬영술 (CT) 및/또는 자기 공명 영상화 (MRI)로의 질환 평가를 기준선에, 그리고 확인된 질환 진행이 있을 때까지 8주마다, 추적 완료 시, 또는 대상체가 연구를 취소할 때까지 수행하였다. 연구원이 종양 진행을 우려하면 기타 시점에서의 질환 평가를 수행하였다. RECIST v1.1 (Eisenhauer EA, Eur J Cancer 2009; 45:228-247), 뿐만 아니라 면역-관련 반응 기준인 irRECIST (Wolchok JD, et al., Clin Cancer Res 2009; 15:7412-7420)에 의해 정의된 바와 같이 대상체들의 적합한 집단에 대해 종양 반응을 결정하였다. 대상체 관리에 관한 치료 결정은 독점적으로 irRECIST 기준을 기초로 하였다. 스캔 및 측정치들을 중앙으로 수집하여, 나중에 또는 연구 동안의 임의의 시점에 irRECIST 및/또는 RECIST v1.1 기준을 사용하여 독립적인 방사선 전문의가 이를 검토하였다.

irRECIST 기준을 사용하여 연구원이 종양 측정치 및 종양 반응에서의 변화를 평가하였다. 연구원은 연구 중에 나타난 새로운 병변의 수 및 크기를 또한 보고하였다. irRECIST 기준을 사용한 연구원의 평가를 기초로 하는 CRF 상에서 시점 종양 평가가 보고되었다. 또한, RECIST v1.1 시점 평가가 프로그램에 의해 유래되었다.

10. 탐색적 효능 평가

연구 약물 치료를 시작하고 나서 3년까지 전체 생존 데이터를 수집하였다. 리릴루맙 및/또는 니볼루맙 PK 평가를 위한 혈청 샘플을 용량 증량 및 코호트 확장 양쪽 모두에서의 모든 대상체에 대해 수집하였다. 혈청 농도 대 시간으로부터 리릴루맙의 약동학이 유래되었다. 평가된 약동학 파라미터는 하기를 포함하였다:

Cmax 관찰된 최대 혈청 농도

Tmax 관찰된 최대 혈청 농도의 시간

AUC(0-T) 0시점에서 최종 정량가능 농도까지의 혈장 농도-시간 곡선하 면적

AUC(INF) 0시점에서 무한 시점까지 외삽된 혈장 농도-시간 곡선하 면적

C저점 저점에서 관찰된 혈청 농도

AUC(TAU) 1회 투여 간격에서의 농도-시간 곡선하 면적

CL 소거

Vss 정상 상태에서의 분포 부피

t_1/ ₂ 반감기

인증된 약동학 분석 프로그램에 의한 비-구획 방법에 의해 개별적인 대상체의 약동학 파라미터 값이 유래되었다. 실제 시간이 분석에 사용되었다. 또한, 니볼루맙 주입 종점 및 저점 (Cmin) 농도가 특정 방문 시에 계산되었다.

혈청 샘플을 인증된 면역검정에 의해 리릴루맙 및 니볼루맙에 대해 분석하였다. 추가로, 직교성 생분석 방법 (예를 들어, LC/MS-MS)에 의한 잠재적인 탐색적 약동학 분석을 위해 샘플들을 기탁하였다.

11. 탐색적 바이오마커 평가

조합된 리릴루맙 및 니볼루맙의 약역학을 말초 혈액으로부터의 바이오마커를 정량함으로써 평가하였다.

12. 용량 증량 동안의 환자에 대한 평가

NK 세포 및 T 세포 기능 평가 및 KIR 점유: 치료-전 및 치료-중의 PBMC를 사용하여, 대용물 표적 세포와의 공동-배양 검정에서 유동 세포측정법을 사용하여 CD107a 및 세포내 INFγ 발현에 의해 측정된 바와 같은 NK 세포 기능과 KIR 점유 (리릴루맙의 표적) 사이의 관계를 조사하였다. 구체적으로, NK 세포를 PBMC로부터 단리하고, 과량의 리릴루맙의 존재 하에 표적 세포 (HLA 부류 I-양성 및 HLA-부류 I 음성)와 함께 공동 배양하여, 용량, 투여 후의 시간, KIR 점유 정도, 및 리릴루맙의 순환 수준 (PK)의 함수로서 KIR-양성 세포로부터의 NK 세포용해 활성의 유도를 평가하였다. NK 세포 기능과 KIR 점유 또는 순환 리릴루맙 수준 사이의 관계를 이해하는 것은 최적의 약물 투여량 및/또는 다른 바이오마커를 조사하는 시기를 확립하는데 중요하다. 유동 세포측정법을 사용하여 세포내 INFγ 발현에 의해 측정된 바와 같은 T 세포 기능에 대한 리릴루맙 및 니볼루맙의 효과를 평가하는데 PBMC를 또한 사용하였다. 구체적으로, T 세포 부분집합을 항-CD3으로 코팅된 플레이트에서 인큐베이션하여, 용량, 투여 후 시간, 및 리릴루맙 및 니볼루맙의 순환 수준 (PK)의 함수로서 T 세포 활성화를 평가하였다. T 세포 활성화와 리릴루맙 및 니볼루맙 수준의 다양한 용량 조합 사이의 관계를 이해하는 것은 최적 약물 투여량 및/또는 다른 바이오마커를 평가하는 시기를 확립하는데 중요하다. 이러한 연구들을 각각의 용량 코호트의 처음 6명의 대상체에서 수행하였다.

NK 세포 및 T 세포 부분집합의 면역표현형 결정: 림프구 부분집합들의 상대적인 비율을 말초 혈액 샘플로부터 평가하였다. 추가로, PBMC를 사용하여, 다색성 세포 유동측정법에 의해 NK 세포 및 T 세포 부분집합에 대한 억제 및 활성화의 특정 마커를 특성화하고 정량하였다. Treg 세포의 면역표현형 결정은 하기를 포함하지만, 이에 한정되지 않았다: HLA-DR, CD3, CD4, FoxP3, PD-L1, PD-1, LAG-3, ICOS, 및 CD25. 메모리/이펙터 T 세포의 면역표현형 결정은 하기를 포함하지만, 이에 한정되지 않았다: CCR7, CD45RA, CD27, CD28, CD3, CD4, CD8, Ki67, HLA-DR, PD-L1, PD-1, CTLA4, 및 ICOS. NK 세포 면역표현형 결정은 하기를 포함하지만, 이에 한정되지 않았다: CD56, CD3, CD16, CD54, CD94, KIR, NKG2D, NKp30, NKp46, IL-21R, Ki67, CD25, 및 그란자임 B.

가용성 인자의 면역 조절 분석: 케모카인, 시토카인 및 기타 면역 매개물의 치료-전 및 치료-중 혈청 수준을 ELISA 또는 다면 검정을 포함하지만 이에 한정되지 않는 기술에 의해 평가하였다. 분석물은 면역 활성화, 조절 또는 염증 마커 예컨대 IFN-γ, 가용성 NKG2D 리간드 (즉, 가용성 MICA), 및 sCD25를 포함하였다.

NK 세포 상에서의 KIR 발현: KIR-양성 발현 세포의 절대적인 계수를 치료 전 및 치료 중에 수집된 말초 혈액 샘플로부터 결정하였다. 유동 세포측정법을 사용하여, 양성 KIR-발현 세포 (KIR2DL1/2/3)의 백분율을 평가할 뿐만 아니라 KIR 발현량을 정량하였다.

13. 코호트 확장 동안의 환자에 대한 평가

치료 전에 코호트 확장의 모든 대상체로부터 혈액 샘플을 수집하여, KIR 및 HLA 유전자형의 결정을 위해 DNA를 단리하였다. 중합효소 연쇄 반응 (PCR)을 사용하여 유전자형을 규정하였고, 이를 니볼루맙과 조합된 리릴루맙 후의 임상 결과와 상관시켰다.

14. 종양 생검을 받는 대상체 에 대한 평가

종양/정상 쌍을 수득하기 위해 종양 생검에 동의한 모든 대상체에 대해 혈액을 수득하였다. 흑색종 코호트 확장 내의 최소 10명의 대상체에서 치료 전 및 치료 중 (제16주 말기)에 종양 생검을 수득하였다. 어떠한 이유든, 대상체가 치료 중 생검을 받을 수 없으면, 제1 샘플은 쌍을 이룬 치료 전 및 치료 중 샘플이 있는 10명의 대상체에 대한 조건의 일부로서 포함되지 않았다. 가능한 경우, 치료 후 생검을 받을 기회를 대상체에게 제공하였다. 모든 다른 대상체에게 종양 생검을 받을 기회를 또한 제공하였다. 종양 샘플을 사용하여, 잠재적인 작용 메카니즘을 평가하고 반응에 대한 잠재적인 바이오마커로서 평가하기 위해 요법 전, 요법 동안 및 가능하게는 요법 후에 존재하는 특정 종양 침윤 림프구 집단 (NK 세포, Treg 세포, CTL)을 평가하였다. KIR의 종양-연관 림프구 발현을 또한 종양 시험편 상에서 탐구하였다. 또한, 종양-발현 단백질 (즉 PD-L1 및 HLA 부류 I)을 IHC로 평가하여, 리릴루맙 및 니볼루맙의 조합에 대한 임상 반응 또는 약역학 효과와의 가능한 연관성을 결정하였다. 허용가능한 양의 조직이 수집되면, 치료 전 및 치료 중에 수집된 종양 생검으로부터의 절편을 잠재적인 추후의 유전자 발현 분석을 위해 냉동보관하였다. 관심 유전자는 PD-1, PD-L1, KIR, 및 LAG-3을 포함하지만, 이에 한정되지 않았다. KIR 및 PD-1의 조합 차단으로부터 초래되는 약역학 사례들을 이해하고 상호관련시키기 위해, 그리고 잠재적인 메카니즘 또는 임상 결과를 알리기 위해 동일한 대상체로부터의 말초 혈액/혈청 샘플 및 종양 조직의 동시 수집 (비록 종양 생검의 수가 제한되더라도)이 요구되었다.

흑색종 확장 코호트에서의 최소 10명의 대상체는 중심부 바늘 (최소 사이즈 16 게이지)을 통한 반복 생검 (치료 전, 치료 중 및 가능하게는 치료 후 생검)을 받는데 충분히 큰 하나 이상의 병변이 있어야 하거나, 또는 중심부 바늘 또는 절제 생검에 적격인 2개 이상의 별개의 병변이 있어야 한다. 이러한 병변들은 대상체의 이전의 방사선 요법을 받은 유일한 표적 병변 또는 부위가 아니여야 한다. 임상 위험이 허용된다고 생각한다면 모든 다른 확장 코호트의 대상체에게 생검을 받을 기회를 제공하였다. 중심부 바늘 길이는 5 ㎜를 초과하였다. 각각의 시점에 2개 이상의 중심부 생검을 취해야 했지만, 연구원이 임상으로 안전하다고 생각한다면, 추가적인 중심부 수집이 강력하게 권장되었다. 펀치 및 절제 생검이 또한 이용가능하였다. 이상적인 최소 종양 부피는 150 ㎣였다. 충분한 조직 수집 및 생검 품질을 확증하기 위해 종양 생검 시점에 병리학적 확인이 강력하게 권장되었다. 수집된 모든 생검은 시험편과 함께 상세한 병리학 보고서가 제출되어야 했다. 이러한 시험편의 수득, 가공, 표지, 취급, 보관 및 운송에 관한 상세한 지침이 연구 시작 시점에 별도의 절차 지침서에서 제공되었다. 스크리닝 생검에서 불충분한 조직 양 또는 질이 산출된 대상체들이 연구에서 지속되도록 허용되었다. 처리 전 생검이 있는 10명의 대상체를 수득하기 위해 이러한 대상체들은 대체되었다. 대상체에 치료에 대한 반응이 있으면, 치료 중 및 치료 후 생검이 가능하지 않았다.

15. 면역원성 평가

ADA 발달 분석을 위한 혈청 샘플을 리릴루맙 및 니볼루맙 혈청 농도의 분석과 함께 채취하였고, 모든 대상체로부터 주기 1의 제1일, 제15일 및 제29일, 주기 2의 제29일, 주기 3의 제1일의 용량 전, 치료 말기, 및 3회 모두의 임상 추적 방문에 수집하였다. 이러한 혈청 샘플들을 인증된 면역검정으로 ADA에 대해 분석하였다. 추가로, 리릴루맙 및 니볼루맙 샘플을 직교성 생분석 방법 (예를 들어, 약물-ADA 면역 복합체의 분석)에 의한 잠재적인 탐색적 약동학 분석을 위해 기탁하였다.

16. 유해 사례

유해 사례 (AE)는 연구 (의약) 제품이 투여된 임상 연구 대상체에서의 임의의 새로운 불리한 의학적 발생 또는 기존의 의학적 상태의 악화로서 정의되고, 반드시 이러한 치료와 인과 관계가 있지는 않다. 따라서 AE는, 연구 제품에 관련되는 것으로 간주되든 또는 간주되지 않든, 연구 제품의 사용과 일시적으로 연관된 임의의 바람직하지 않고 원치 않는 징후 (예컨대, 비정상적인 실험실 발견), 증상 또는 질환일 수 있다.

연구 약물에 대한 인과 관계는 의사에 의해 결정되고, 모든 유해 사례 (AE)를 평가하는데 사용되어야 한다. 인과 관계는 하기의 것들 중 하나일 수 있다:

관련됨: 연구 약물 투여와 AE 사이에 합리적인 인과 관계가 있음.

관련되지 않음: 연구 약물 투여와 AE 사이에 합리적인 인과 관계가 없음.

"합리적인 인과 관계"라는 용어는 인과 관계를 시사하는 증거가 있음을 의미한다.

유해 사례는 자발적으로 보고될 수 있거나 또는 대상체의 개방형 질문, 검사 또는 평가 동안 도출될 수 있다. (보고 편형을 방지하기 위해, 대상체에게 하나 이상의 AE의 구체적인 발생에 관하여 질문하지 않아야 한다.)

중증 유해 사례 (SAE)는 임의 용량에서의 임의의 불리한 의학적 발생이다:

사망을 초래함

생명을 위협함 (대상체가 사례 시점에 사망 위험에 처한 사례로서 정의됨; 이는 더욱 중증이라면 가설적으로 사망을 야기하였을 사례를 지칭하지 않는다)

환자 입원을 필요로 하거나 또는 기존 입원의 연장을 야기함

지속적이거나 유의한 장애/무능을 초래함

선천적 이상/출생 결함임

중요한 의학적 사례 (즉각적으로 생명을 위협하거나 사망 또는 입원을 초래하지 않지만, 적합한 의학적 및 과학적 판단을 기초로, 대상체를 위태롭게 하거나 또는 상기 정의에서 열거된 다른 중증 결과들 중 하나를 방지하기 위한 개입 [예를 들어, 의학적 개입, 수술 개입]을 필요로 하는 의학적 사례(들)로서 정의됨)임. 이같은 사례의 예는 입원을 초래하지 않는 알러지성 기관지연축, 혈액 질환 또는 경련에 대한 응급실 또는 가정에서의 집중 치료를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 잠재적인 약물-유도 간 손상 (DILI)도 중요한 의학적 사례로 간주된다.

연구 약물을 통한 감염체 (예를 들어, 병원성 또는 비-병원성)의 추정 전파는 SAE이다. 임신, 과용량, 암, 및 잠재적인 약물-유도 간 손상 (DILI)은 규정 정의에 의해 항상 중증이지는 않지만, 이러한 사례들은 SAE로 취급된다. 연구 요법에 관련되는 것으로 간주되는 연구 종점의 임의의 성분은 SAE로서 보고되어야 한다 (예를 들어, 사망이 종점이고, 사망이 아나필락시스로 인해 발생하으면, 아나필락시스가 보고된다).

하기의 입원은 SAE로 간주되지 않는다:

- 입원을 초래하지 않는, < 24시간 동안의 응급실 또는 기타 병원 부서의 방문 (중요한 의학적 사례 또는 생명을 위협하는 사례로 간주되지 않는다면)

- 동의서에 사인하기 전에 계획된 선택적 수술

- 계획된 의학적/수술 절차를 위한 프로토콜에 따른 입원

- 건강 상태의 기준선/경향을 위한 입원을 필요로 하는 일상적인 건강 평가 (예를 들어, 일상적인 대장내시경검사)

- 아픈 건강 상태의 처치 이외의 것이고 연구에 참가하기 전에 계획된 의학적/수술 입원. 적합한 문서가 이러한 사례들에서 요구된다

- 건강 상태와 관계가 없고 의학적/수술 개입을 필요로 하지 않는 또 다른 생활 환경 (예를 들어, 거주지 결여, 경제적 부족, 돌보미 위탁, 가족 상황, 행정적)에 대한 입원.

연구에 참여한다는 대상체의 서면 동의서 후에, 프로토콜-특정 절차와 연관되는 것으로 생각되는 것들을 포함하여, 연구 약물에 관련되든 또는 관련되지 않든, 모든 SAE를 수집하였다. 스크리닝 기간 동안, 그리고 투여 중단으로부터 100일 이내에 발생한 모든 SAE를 수집하였다. 적용가능하다면, 임의의 나중의 프로토콜-특정 절차 (예를 들어, 추적 피부 생검)에 관련되는 SAE를 수집하였다. 연구원은 연구 약물 또는 프로토콜-특정 절차에 관련되는 것으로 여겨지는 이러한 기간 이후에 발생하는 모든 SAE를 보고하여야 했다. 이의 중증도 상태와 관련하여 의심이 존재하는 모든 사례에 대해 SAE 보고서가 완료되어야 했다. SAE가 연구 약물과 관련되지 않지만, 잠재적으로는 연구 조건 (예컨대 이전 요법의 철회, 또는 연구 절차의 복잡성)과 관련된다고 연구원이 여긴다면, 이러한 관계가 SAE 보고서 형식의 서술 섹션에서 상술되어야 했다. 24시간 이내에 SAE (연구 약물에 관련되었든 또는 관련되지 않았든), 및 임신이 보고되었다.

비-중증 AE 정보의 수집이 연구 약물을 개시할 때 시작되어야 하였다. 대상체의 기준선 상태를 확립하기 위해 의도된 위약 도입 기간 또는 기타 관찰 기간을 시작할 때부터 비-중증 AE 정보가 또한 수집되어야 했다.

비-중증 AE는 해소 또는 안정화되어야 하거나, 또는 중증이 되면 SAE로 보고되어야 했다. 적합하다면, 연구 약물의 방해 또는 중단을 야기하는 비-중증 AE 및 연구 치료의 말기에 존재하는 비-중증 AE에 대한 추적이 또한 요구되었다. 모든 확인된 비-중증 AE를 CRF (종이 또는 전자식)의 비-중증 AE 페이지 상에 기록 및 기재하였다. 연구 과정 동안 보고/확인된 AE 및/또는 실험실 이상에 대해 보충 CRF의 완료가 요청되었다.

17. 통계학적 고려사항

용량 증량: 이는 1상 용량 증량 시험이기 때문에, 각각의 용량에서의 샘플 사이즈를 정확하게 결정할 수 없었는데, 이러한 사이즈가 관찰된 독성의 수에 좌우되기 때문이다. 약 6명 내지 9명의 대상체가 용량 증량 동안 각각의 용량 수준에서 치료되었고, 12명 이하의 대상체가 선택된 용량 수준에서 투여되었다. 6+3 디자인을 사용하는 것은 각각의 용량에서의 6명의 대상체가 연구된 바이오마커의 잠재적인 약역학 효과에 대한 신호를 평가하는 것을 확실하게 하였다.

코호트 확장: 코호트 확장 동안, 약 16명의 대상체가 6가지 종양 유형 각각에서 등록되었고, 이전에 결정된 MTD, MAD, 또는 대안적인 용량에서 치료되었다. 확장 코호트에서, 2회 (12.5％), 3회 (18.8％), 또는 4회 (25％) 반응이 관찰되면, 객관적 반응률에 대한 90％ 단측 신뢰 구간의 하한은 각각 3.4％, 7.1％ 및 11.4％였다. 또한, 80％ 신뢰 구간이 반응률에 대해 전적으로 11％ 초과이도록 4회의 반응이 16명의 대상체에서 관찰될 필요가 있을 것이었다. 이러한 계산은 정확한 신뢰 구간에 대한 클로퍼-피어슨(Clopper-Pearson) 방법을 기초로 하였다. 또한, 종양 유형/확장 코호트에서의 참 객관적 반응률 (ORR)이 15％이면, 각각의 코호트에서의 16명의 환자로, 2회 이상의 반응을 관찰할 가능성이 72％였고, 3회 이상의 반응을 관찰할 가능성이 44％였으며, 0회 또는 1회 반응을 관찰할 가능성이 28％였다 (가음성률). 종양 유형에서의 참 ORR이 15％보다는 5％이면, 16명의 대상체에서 2회 이상 또는 3회 이상의 반응이 있을 가능성이 각각 19％ 및 4％였다 (가양성률).

분석용 집단:

모든 등록 데이터 세트: 사전 동의서에 서명하고 연구에 등록한 대상체.

모든 치료 데이터 세트: 1회 이상의 용량의 어느 한쪽 연구 약물이 제공된 모든 대상체.

반응-평가가능 데이터 세트: 어느 한쪽 연구 약물이 제공되고, 측정가능한 질환의 기준선 종양 평가를 받았으며, 하기 중 하나인 모든 치료된 대상체:

- 1회 이상의 평가가능한 치료-중 종양 평가,

- 임상 진행, 또는

- 제1 치료-중 종양 평가 이전의 사망.

리릴루맙 약동학 데이터 세트: 1회 이상의 용량의 리릴루맙이 제공되고 리릴루맙 PK에 대한 충분한 혈청 농도 데이터가 있는 모든 대상체.

니볼루맙 약동학 데이터 세트: 1회 이상의 용량의 리릴루맙이 제공되고 니볼루맙 PK에 대한 충분한 혈청 농도 데이터가 있는 모든 대상체.

리릴루맙 면역원성 데이터 세트: 1회 이상의 용량의 리릴루맙이 제공되고 하나 이상의 이용가능한 ADA 샘플이 있는 모든 대상체.

니볼루맙 면역원성 데이터 세트: 1회 이상의 용량의 니볼루맙이 제공되고 하나 이상의 이용가능한 ADA 샘플이 있는 모든 대상체.

바이오마커 데이터 세트: 이용가능한 바이오마커 데이터가 있는 모든 대상체.

종점 정의: 안전성이 이러한 1상 연구의 1차 종점이다. 1회 이상의 용량의 리릴루맙 또는 니볼루맙이 제공된 모든 대상체를 치료 동안, 그리고 추적에서 100일 동안 평가된 유해 사례, 중증 유해 사례, 사망 및 실험실 이상의 발생으로 평가되는 바와 같이 안전성에 대해 평가하였다.

1차 목적 (니볼루맙과 조합되어 제공된 리릴루맙의 안전성 및 허용성을 평가하고, 조합물의 용량 제한 독성 (DLT) 및 최대 허용 용량 (MTD)을 확인하는 것)를 하기의 1차 종점에 의해 측정하였다.

a) 유해 사례의 발생: 모든 비-중증 유해 사례를 제1일부터 대상체의 마지막 연구 약물 투여 후 100일까지 또는 대상체가 연구를 중단할 때까지 수집하였다. 모든 중증 유해 사례를 대상체의 서면 동의서 날짜부터 투여 중단 후 100일까지 또는 대상체가 연구를 중단할 때까지 수집하였다.

b) 특정 시점에 평가된, 혈액학 및 혈청 화학을 포함하는 임상 실험실 테스트 이상, 및 갑상선 패널 이상의 발생.

평가는 유해 사례 보고서, 및 활력 징후 측정, 심전도 (ECG), 신체 검사, 영상 연구, 및 임상 실험실 테스트의 결과를 기초로 하였다. 가장 최근 버전의 [Medical Dictionary for Regulatory Activities] (MedDRA)를 사용하여 유해 사례를 카테고리화하였다; [National Cancer Institute (NCI) Common Terminology Criteria for Adverse Events] (CTCAE) v4를 사용하여 AE 및 실험실 테스트 양쪽 모두를 등급화하였다. 연구 약물 요법을 받은 모든 대상체를 유해 사례 (AE), 및 중증 유해 사례 (SAE)의 비율에 의해 측정되는 바와 같은 안전성에 대해 평가하였고, 치료 동안, 그리고 추적에서 100일 동안 평가하였다.

예비 항-종양 활성을 평가하는 2차 목적은 irRECIST (Wolchok JD, et al., Clin Cancer Res 2009; 15:7412-7420) 및 RECIST v1.1 (Eisenhauer EA, Eur J Cancer 2009; 45:228-247)을 사용하여 기재된 종점을 기초로 하였다. 환자 관리의 목적을 위해, 임상 결정은 독점적으로 irRECIST를 기초로 하였다. 따라서, irRECIST를 사용한 연구원의 평가를 기초로 하는 CRF 상에 시점 종양 반응 평가를 기록하였다. 통계 분석 및 보고는 양쪽 모두의 기준을 기초로 하였다.

최상의 전반적인 반응 (BOR)은 RECIST v1.1 또는 irRECIST 기준을 기초로 하는, 확증을 위해 모든 요건을 고려하여 연구 치료 시작부터 치료를 끝낼 때까지 기록된 최상의 반응 지정이다. BOR 평가에 포함된 CR 또는 PR 결정은 반응 기준이 최초로 충족되고 나서 적어도 4주 후에 수행된 반응 기준을 충족시키는 연속적인 2차 (확증) 평가에 의해 확증되었다. 이는 치료 기간 (주기 1의 제1일부터 주기 12의 제56일까지) 동안 8주 마다, 그리고 임상 추적 기간 동안 1번 발생한 종양 측정을 기초로 결정되었다.

이러한 목적을 평가하는데 사용된 연구 수준 종점은 하기와 같이 정의되었다:

객관적 반응률 (ORR)은 BOR이 CR 또는 PR인 대상체의 총수를 관심 집단 내의 대상체의 총수로 나눈 것으로 정의된다.

CR 또는 PR의 BOR이 있는 대상체에 대해서만 계산된 반응 기간 (DOR)은 1차 반응 날짜와 기준 (RECIST v1.1 또는 irRECIST)을 기초로 하는 객관적으로 문서화된 이후의 질환 진행 날짜 또는 사망 (어느쪽이든 먼저 발생한 것) 사이의 일수로서 정의되었다. 살아 있고 진행되거나 후속 요법을 받지 않은 대상체의 경우, 반응 기간은 마지막 종양 평가일에 검열되었다. 후속 요법을 받은 대상체는 후속 요법을 시작할 때 검열되었다.

무진행 생존율 (PFSR)은 24주까지 무진행으로 남아 있고 생존 중인 대상체의 확률로서 정의되었다. 이러한 확률은 제1 용량의 연구 약물과 진행성 질환 또는 사망 (각각의 기준에 의해 정의된 바와 같음) 사이의 일수를 기초로 계산되었다. 살아 있고 진행되지 않은 대상체의 경우, 마지막 종양 평가일에 PFS가 검열되었다. 이는 치료 동안에는 8주 마다, 그리고 임상 추적 기간 동안에는 계획된 시점에 발생한 종양 측정을 기초로 계산되었다.

약동학 (PK): 리릴루맙 최대 농도 Cmax (㎍/㎖), 최대 농도까지의 시간 Tmax (hr), 곡선하 면적 AUCTAU (㎍.hr/㎖), 곡선하 면적 AUCinf (㎍.hr/㎖), 소거 (L/일), 분포 부피 (Vss), 반감기 (t1/2), 및 저점 농도 Cmin (㎍/㎖)를 모든 연구 대상체에서 비-구획 분석을 사용하여 평가하였다. 또한, 니볼루맙 주입 종점 및 저점 (Cmin) 농도를 특정 방문 시에 계산하였다.

면역원성: 리릴루맙 및 니볼루맙에 대한 특정 항-약물 항체의 발생을 제1주, 제3주, 제5주, 제13주, 제17주, 치료 말기, 및 모든 3회의 임상 추적 방문 시의 측정으로부터 결정하였다.

바이오마커: 기준선 및 기준선 결과로부터의 변화를 포함하는, 최소 10명의 흑색종 코호트 확장 대상체로부터의 의무적인 종양 생검에 대한 면역조직화학을 사용한 TIL, PD-L1 및 HLA 부류 I 발현의 측정.

탐색적 종점(들): 말초 혈액으로부터의 바이오마커들은 KIR 및 HLA 유전자형, KIR 점유, NK 및 T 세포 기능 검정, 가용성 인자, NK 세포 상에서의 KIR 발현의 측정을 포함할 것이었다. 전체 생존 (OS)이 탐색적 효능 종점이었다.

18. 분석

인구 통계 및 기준선 특성: 성별 및 인종의 빈도 분포를 표로 작성하였다. 연령, 체중 및 신장에 대한 요약 통계가 수집되었고, 신체 질량 지수(BMI)가 추론되었다.

효능 분석: 개별적인 최상의 전반적인 반응 (BOR), 반응 기간 및 PFS를 RECIST v1.1 및 irRECIST를 사용하여 열거하였다. BOR 결과를 질환 유형 및 용량에 의해 표로 작성하였다. 객관적인 반응률 (ORR) 및 PFS 비율 (예를 들어 24주의 값) 및 상응하는 신뢰 구간이 종양 유형 및 치료에 의해 제공되었다. 데이터 입수가능성에 따라, 반응 기간, 안정 질환 기간 및 PFS를 질환 유형에 의해 카플란-마이어 방법으로 추정하였다. 24주의 PFS 비율을 K-M 방법을 기초로 유사하게 추정하였다. ORR, 반응 기간 및 PFS 분석은 코호트 확장 단계의 대상체 및 질환 유형 및 치료에 의해 코호트 확장에서의 대상체와 매칭되는 용량 증량의 대상체를 포함할 것이었다. 시간에 따른 종양 부하에서의 개별적인 변화가 질환 유형 내에서 그래프로 제시되었다. 각각의 종양 유형에 대한 카플란-마이어 플롯 및 중앙값에 의해, 탐색적 효능 분석의 일부로서 랜드마크 전체 생존을 평가하였다.

안전성 분석: 모든 기록된 유해 사례를 전신 장기 부류, 선호 용어 및 치료에 의해 열거하고 표로 작성하였다. 활력 징후 및 임상 실험실 테스트 결과를 치료에 의해 열거하고 요약하였다. 임의의 유의한 신체 검사 발견, 및 임상 실험실 결과를 열거하였다. ECG 판독물을 연구원이 평가하였고, 이상이 존재하는 경우 이를 열거하였다.

약동학 분석: 용량 및 연구 일/주에 의해 리릴루맙의 약동학 파라미터에 대해 요약 통계를 표로 작성하였다. 항-KIR의 용량에 대한 의존성을 기재하기 위해, Cmax 및 AUC(TAU) 대 용량의 스캐터 플롯이 각각의 측정일에 대해 제공되었다. 니볼루맙과 공투여되었을 때의 리릴루맙의 용량 비례성을 파워 모델을 기초로 평가하였다. 니볼루맙 주입 종점 및 저점 (Cmin) 농도를 요약 통계에 의해 표로 작성하였다. 이러한 데이터를 별도의 보고서의 일부분인 집단 PK 분석을 위해 다른 데이터 세트와 또한 풀링하였다.

바이오마커 분석: 종양 침윤 림프구 (TIL) 및 PD-L1 및 HLA 부류 I을 포함하는 종양 마커의 발현에 대한 리릴루맙의 약역학 효과를 요약 통계에 의해 평가하고, 그래프로 연구하여, 흑색종 확장 코호트의 대상체에 대해 변화 패턴, 예를 들어 약물 노출로의 변화 패턴을 조사하였다. 또한, 연관을 평가하기 위해, TIL 변화 및 종양 마커 발현과 말초 혈액 마커 측정치의 상관관계를 그래프로, 또는 데이터 입수가능성을 기초로 적합한 통계 방법에 의해 조사하였다.

탐색적 바이오마커 분석: KIR 점유에 대한 리릴루맙의 약역학 효과 및 말초 혈액 내의 마커 및 혈청 단백질에 대한 리릴루맙과 함께 제공된 니볼루맙의 조합물의 약역학 효과를 요약 통계에 의해 평가하였고, 그래프로 연구하여, 시간에 따른 변화의 패턴 및 이러한 패턴이 용량 수준 및 노출 간에 어떻게 상이한지를 조사하였다. 시간에 따른 패턴에서 의미있는 징조가 있으면, 추가적인 분석 (예를 들어, 선형 혼합 모델에 의한 분석)을 수행하여 관계를 특성화하였다. 데이터 입수가능성에 따라 흑색종 이외의 코호트 내의 종양 마커에 대한 약역학 효과를 유사하게 평가하였다. 말초 혈액 또는 종양 생검으로부터의 바이오마커 측정치와 임상 결과 사이의 연관을 또한 그래프로 연구하였고, 필요하다면 로지스틱 회귀와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 방법으로 추가로 평가하였고, 적합한 통계에 의해 특성화하였다.

기타 분석: 모든 입수가능한 면역원성 데이터의 목록이 제공되었다. 추가로, 임의 시점의 하나 이상의 양성 항-약물 항체 (ADA)가 있는 대상체로부터의 면역원성 데이터의 목록이 각각의 분석물에 대해 치료에 의해 제공되었다. 1회 이상의 양성 ADA 평가가 있는 대상체의 빈도, 및 음성 기준선 평가 후에 ADA가 발달된 대상체의 빈도가 제공되었다. 면역원성과 안전성 사이의 잠재적인 관계를 검사하기 위해, 특정 관심 AE의 빈도 및 유형을 전반적인 면역원성 상태에 의해 검사하였다. 리릴루맙 (또는 니볼루맙)의 저점 농도와 상응하는 ADA 평가치 사이의 연관을 조사하였다.

중간 분석: 이러한 연구로부터 나타난 데이터가 연구의 후속 파트에서의 절차에 대한 조정에 관한 적시의 결정에 요구되었다. 따라서, 연구 데이터베이스의 최종 잠금 이전에 데이터를 검토하였다. 관리 목적 또는 공개를 위해 추가적인 중간 분석을 또한 수행하였다. 분석은 입수가능한 데이터의 열거, 요약 및 그래프만으로 이루어졌다. 통계적 유의 수준에 대한 임의의 조정을 필요로 하는 형식적 추론이 수행되지 않았다. 중간 데이터를 기초로 하는 효능 분석은 분석 목적에 따라 평가가능한 반응 또는 모든 치료된 집단을 사용하였다.

서열 요약

SEQUENCE LISTING <110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY <120> COMBINATION OF ANTI-KIR ANTIBODIES AND ANTI-PD-1 ANTIBODIES TO TREAT CANCER <130> MXI-515PC <140> PCT/US2013/063068 <141> 2013-10-02 <150> 61/708,784 <151> 2012-10-02 <160> 30 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 450 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Phe Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Ile Pro Ile Phe Gly Ala Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ile Pro Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Asp Tyr Asp Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205 Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys 210 215 220 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro 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tggccgtcat ctgctcccgg gccgcacgag 660 ggacaatagg agccaggcgc accggccagc ccctgaagga ggacccctca gccgtgcctg 720 tgttctctgt ggactatggg gagctggatt tccagtggcg agagaagacc ccggagcccc 780 ccgtgccctg tgtccctgag cagacggagt atgccaccat tgtctttcct agcggaatgg 840 gcacctcatc ccccgcccgc aggggctcag ccgacggccc tcggagtgcc cagccactga 900 ggcctgagga tggacactgc tcttggcccc tctgaccggc ttccttggcc accagtgttc 960 tgcagaccct ccaccatgag cccgggtcag cgcatttcct caggagaagc aggcagggtg 1020 caggccattg caggccgtcc aggggctgag ctgcctgggg gcgaccgggg ctccagcctg 1080 cacctgcacc aggcacagcc ccaccacagg actcatgtct caatgcccac agtgagccca 1140 ggcagcaggt gtcaccgtcc cctacaggga gggccagatg cagtcactgc ttcaggtcct 1200 gccagcacag agctgcctgc gtccagctcc ctgaatctct gctgctgctg ctgctgctgc 1260 tgctgctgcc tgcggcccgg ggctgaaggc gccgtggccc tgcctgacgc cccggagcct 1320 cctgcctgaa cttgggggct ggttggagat ggccttggag cagccaaggt gcccctggca 1380 gtggcatccc gaaacgccct ggacgcaggg cccaagactg ggcacaggag tgggaggtac 1440 atggggctgg ggactcccca ggagttatct gctccctgca ggcctagaga agtttcaggg 1500 aaggtcagaa gagctcctgg ctgtggtggg cagggcagga aacccctccc acctttacac 1560 atgcccaggc agcacctcag gccctttgtg gggcagggaa gctgaggcag taagcgggca 1620 ggcagagctg gaggcctttc aggccagcca gcactctggc ctcctgccgc cgcattccac 1680 cccagcccct cacaccactc gggagaggga catcctacgg tcccaaggtc aggagggcag 1740 ggctggggtt gactcaggcc cctcccagct gtggccacct gggtgttggg agggcagaag 1800 tgcaggcacc tagggccccc catgtgccca ccctgggagc tctccttgga acccattcct 1860 gaaattattt aaaggggttg gccgggctcc caccagggcc tgggtgggaa ggtacaggcg 1920 ttcccccggg gcctagtacc cccgcgtggc ctatccactc ctcacatcca cacactgcac 1980 ccccactcct ggggcagggc caccagcatc caggcggcca gcaggcacct gagtggctgg 2040 gacaagggat cccccttccc tgtggttcta ttatattata attataatta aatatgagag 2100 catgct 2106 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Unknown <220> <221> source <223> /note="Description of Unknown: CTLA-4 motif peptide" <400> 30 Met Tyr Pro Pro Pro Tyr 1 5

Claims

(a) 서열 3에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 5에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는 항-KIR 항체,
(b) 서열 19에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 21에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는 항-PD-1 항체
각각을 유효량으로 인간 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 1회 이상의 투여 주기를 포함하며, 여기서 주기는 8주의 기간이고, 1회 이상의 주기 각각에 대해, 2회 용량의 항-KIR 항체를 0.1, 0.3, 1, 3, 6 또는 10 ㎎/㎏의 용량으로 투여하고, 4회 용량의 항-PD-1 항체를 3 ㎎/㎏의 용량으로 투여하는 것인, 인간 환자에서 고형 종양을 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 항-KIR 항체 및 항-PD-1 항체를 하기 용량:
(a) 0.1 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;
(b) 0.3 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;
(c) 1 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;
(d) 3 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체;
(e) 6 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체; 또는
(f) 10 ㎎/㎏의 항-KIR 항체 및 3 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체
로 투여하는 것인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 항-PD-1 및 항-KIR 항체가 정맥내 투여용으로 제제화되는 것인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 12회 이하의 주기로 이루어지는 것인 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체를 각각의 주기의 제1일, 제15일, 제29일 및 제43일에 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항-KIR 항체를 각각의 주기의 제1일 및 제29일에 투여하는 것인 방법.
제6항에 있어서, 항-PD-1 항체를 제1일 및 제29일에 항-KIR 항체의 투여 전에 투여하는 것인 방법.
제7항에 있어서, 항-KIR 항체를 항-PD-1 항체로부터 30분 이내에 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 종양 크기의 감소, 경시적인 전이 병변의 수의 감소, 완전 반응, 부분 반응 및 안정 질환으로부터 선택된 하나 이상의 치료 효과를 일으키는 것인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양이 비-소세포 폐암 (NSCLC), 신세포 암종 (RCC), 흑색종, 결장직장암 및 장액성 난소 암종으로부터 선택되는 것인 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항-KIR 항체가
(a) 서열 7에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 CDR1;
(b) 서열 8에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 CDR2;
(c) 서열 9에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 CDR3;
(d) 서열 10에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 CDR1;
(e) 서열 11에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및
(f) 서열 12에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 CDR3
을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항-KIR 항체가 각각 서열 3 및 5에 기재된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항-KIR 항체가 각각 서열 1 및 2에 기재된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체가
(a) 서열 23에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 CDR1;
(b) 서열 24에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 CDR2;
(c) 서열 25에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 CDR3;
(d) 서열 26에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 CDR1;
(e) 서열 27에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및
(f) 서열 28에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 CDR3
을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체가 각각 서열 19 및 21에 기재된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체가 각각 서열 17 및 18에 기재된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 것인 방법.
(a) 서열 3에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 5에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는, 특정 용량의 항-KIR 항체;
(b) 서열 19에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 21에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는, 특정 용량의 항-PD-1 항체; 및
(c) 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 방법에서 항-KIR 항체 및 항-PD-1 항체를 사용하기 위한 지침서
를 포함하는, 인간 환자에서 고형 종양을 치료하기 위한 키트.
1회 이상의 주기에서, 서열 19에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 21에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는 항-PD-1 항체와 공투여하기 위한, 서열 3에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인 및 서열 5에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함하는 항-KIR 항체이며, 여기서 각각의 주기에 대해 2회 용량의 항-KIR 항체가 0.1, 0.3, 1, 3, 6 또는 10 ㎎/㎏의 용량으로 투여되고, 4회 용량의 항-PD-1 항체가 3 ㎎/㎏의 용량으로 투여되는 것인, 항-KIR 항체.