KR20150033703A

KR20150033703A - 당뇨병 치료를 위한 ctla4 융합 단백질

Info

Publication number: KR20150033703A
Application number: KR20157002259A
Authority: KR
Inventors: 티하머 오르반
Original assignee: 오르반 바이오테크 엘엘씨
Priority date: 2012-06-27
Filing date: 2013-06-27
Publication date: 2015-04-01
Also published as: AU2018201965B2; US20150104451A1; AU2018201965A1; ZA201500228B; IN2015DN00214A; WO2014004857A1; US20190211105A1; US20140099306A1; US10233242B2; EP3811966A1; US11286303B2; JP2015522026A; CN113138279A; EP2866823A4; CN104519900A; MX2015000237A; CA2877986A1; EP2866823A1; AU2013284460A1

Abstract

본 발명은 세포독성 T-림프구 관련된 항원 4(CTLA4)의 유효량을 투여함으로써 제1형 진성 당뇨병 자가면역의 진행을 치료, 예방, 또는 지연시키는 방법을 제공한다. CTLA4 분자는 CTLA4 세포 외 영역 및 아바타셉트와 같은 면역글로불린의 융합 단백질일 수 있다.

Description

당뇨병 치료를 위한 CTLA4 융합 단백질{CTLA4 fusion proteins for the treatment of diabetes}

본 발명은 통상적으로 자가면역 질병의 분야 및 특히 제1형 진성 당뇨병(Type 1 diabetes mellitus)의 치료, 예방, 또는 지연된 진행(progressive)에 관련된다.

제1형 진성 당뇨병(T1DM)의 가장 일반적인 형태는 인슐린 분비 β-세포가 자가면역 반응에 의해 파괴되는 면역 매개 질병이다. 질병의 발병과 관련된 많은 유전적 및 환경적 인자들이 있으며, 이들은 특히 인슐린 분비 β-세포를 타겟으로 하는 면역세포를 포함하는 췌장도(pancreatic islets)의 진행성 염증성 침윤(progressive inflammatory infiltration)을 포함한다. 이러한 병리는 불확정(indeterminate) 기간(수개월에서 수년) 동안 발달한다. 인슐린의 발견은 T1DM의 치료를 감안하였으나, 현재 치료법은 없다. 제1형 진성 당뇨병의 가장 일반적인 형태는 면역 매개성이며, 인슐린을 생산하는 β 세포가 파괴되어 있다. 아직, 진단 시, 대부분의 환자는 여전히 인슐린 생산의 상당한 양을 갖는다. 잔여 β-세포 기능의 보존은 이것이 질병의 단기 및 장기 합병증을 감소시킬 수 있기 때문에 매우 바람직하다.

몇몇 임상 실험이 면역조절제(immunomodulatory agents) 또는 항원 기초의 치료와 함께 제1형 당뇨병에 자가면역을 저지하기 위해 수행되었다. 가장 중요하게, 항-CD3, 항-CD20, 및 GAD-65 항원 백신의 실험이 자극된 C-펩타이드 분비에 의해 입증된 β-세포 기능의 보존에 일부 효율을 보였다. T 세포는 제1형 당뇨병과 관련된 자가면역에서 중심부 역할을 수행한다.

그러나, 특히 최근 제1형 당뇨병으로 진단받은 환자에서, β-세포 기능 및 C-펩타이드 분비를 보존하는 자가면역 β-세포 파괴를 중단 또는 지연할 수 있는 제1형 진성 당뇨병의 추가적인 새로운 치료법이 요구된다.

본 발명이 해결하고자 하는 과제는 세포독성 T-림프구 관련된 항원 4(CTLA4)의 유효량을 투여함으로써 제1형 진성 당뇨병 자가면역의 진행을 치료, 예방, 또는 지연시키는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 특정한 실시예에 따라 T-세포 공동 자극(co-stimulation) 길항제 및 면역글로불린 분자의 일부를 포함하는 융합 단백질 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 개체의 진성 당뇨병의 치료 방법에 관한 것이다.

일부 실시예에서, T-세포 공동 자극 길항제는 CTLA4의 세포외 도메인, 세포외 도메인의 유효 절편 또는 세포외 도메인의 면역학적으로 활성인 변이체를 포함한다. T-세포 공동 자극 길항제는 B 세포 또는 다른 항원 제시 세포(APCs)에 발현되는 B7 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시예에서, B7 항원은 B 세포 및 APCs에 발현된다.

일부 실시예에서, 융합 단백질은 아바타셉트(Abatacept)이다. 일부 실시예에서, 조성물은 추가적으로 유중수(water-in-oil) 에멀전(예를 들어 IFA 또는 Montamide ISA)와 같은 오일 기초의 담체를 포함한다. 조성물은 생리식염수 약 50 내지 200 ml과 같이 또는 약 5mg/kg 내지 약 50 mg/kg 범위의 투여량으로 또는 약 250 내지 2000 mg 범위의 투여량으로, 또는 500 mg, 750 mg, 또는 1000 mg의 투여량으로 정맥내 주입을 통해 투여될 수 있다.

본 발명에서 설명된 방법은 또한 자가-공격(auto-aggressive) T-세포의 활성화 억제에 치료 효과의 지표로써 시간에 따른 개체로부터 수득된 혈액 샘플 내 C-펩타이드의 수준을 결정하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 자가-공격 T-세포의 활성화 억제에 조성물의 효과는 C-펩타이드 생산의 유지 또는 표준에 비해 C-펩타이드 생산의 감소에 지연에 의해 또는 향상된 HbA1c 또는 표준에 비해 상기 개체에 의한 인슐린의 사용의 감소에 의해 표시된다. 이러한 측정은 혈액 샘플 분석에 의한 것과 같이, 체외(ex vivo)에서 수행될 수 있다. 상기 개체 내 C-펩타이드 생산의 감소는 적어도 3, 6, 9, 12, 또는 18 개월, 또는 2, 3, 4, 또는 그 이상의 해 동안 지연될 수 있다.

일부 실시예에서, 바람직한 환자 수가 치료되었다. 예를 들어, 백인 환자와 같이, 통계적으로 높은 반응 속도를 갖는 인구로부터 선택된 환자가 치료되었다.

본 발명에서 제공된 일부 실시예는 T-세포 공동 자극 길항제 및 면역글로불린 분자의 일부를 포함하는 융합 단백질 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 진성 당뇨병의 위험에 개체 내 당뇨병의 발병을 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명에서 제공된 일부 실시예는 T-세포 공동 자극 길항제 및 면역글로불린 분자의 일부를 포함하는 융합 단백질 조성물의 유효량을 투여함으로써 진성 당뇨병의 위험에 대해 개체 내 3, 6, 9, 12, 또는 18 개월, 또는 2, 3, 4, 또는 그 이상의 해 동안 당뇨병의 발병을 지연시키는 방법을 제공한다.

명백해질 실시예의 이들 및 다른 특징은 본 발명에 제시되고 설명된다.

본 발명의 치료 방법은 세포독성 T-림프구 관련된 항원 4(CTLA4)의 유효량을 투여함으로써 제1형 진성 당뇨병 자가면역의 진행을 치료, 예방, 또는 지연시킬 수 있다.

다양한 실시예의 상세한 설명은 하기 도면에, 실시예의 방법에 의해, 참조와 함께 본 발명의 하기에 제공된다. 기술 분야의 당업자는 도면, 하기 설명이 단지 설명을 위한 목적인 것을 이해할 것이다. 도면은 어떠한 방법으로도 출원인의 교시(teachings)의 범위를 제한하는 것은 아니다.
도 1은 각 치료군의 시간에 따른 자극된 C-펩타이드 2-h AUC 평균의 인구 평균이다. 측정은 연령, 성별, C-펩타이드의 기초값, 및 치료 할당(assignment)을 조절하는 ANCOVA 모델로부터이다. Y-축은 로그(y+1) 범위이다. 오차 바(Error bars)는 95% 신뢰 구간(Cis)을 나타낸다. AUC=곡선 아래 구역.
도 2는 각 치료군에 시간에 따른 자극된 C-펩타이드 2-h AUC 평균의 예상된 인구 평균이다. 측정은 연령, 성별, C-펩타이드의 기초값, 및 치료 할당을 조절하는 혼합 효과 모델의 분석으로부터이며, 로그(y+1) 범위에 직선과 같은 시간에 대한 고정된 효과를 포함한다. AUC=곡선 아래 구역.
도 3은 각 치료군에 대한 시간에 따른 0.2 nmol/L 또는 그 초과가 남은 2-h 피크 C-펩타이드를 갖는 참가자들의 비율이다.
도 4A 및 4B는 각 치료군에 대한 시간에 따른 (A) HbA1c 및 (B) 인슐린 사용의 인구 평균이다. 측정은 연령, 성별, HbA1c의 기초값, 및 치료 할당을 조절하는 ANCOVA 모델로부터이다. 인슐린 사용은 3달 간격으로 체중의 kg 당이다. 오차 바는 95% CIs를 나타낸다. HbA1c는 당화 헤모글로빈 A1c이다.
도 5는 사전 지정된 기초 인자의 카테고리 내 2년 자극된 C-펩타이드 AUC 평균에 치료 효과의 비율(아바타셉트(abatacept) 내지 플라시보(placebo))이다. 측정은 연령, 성별, C-펩타이드의 기초값, 표지된 카테고리화된 인자, 치료 할당, 및 치료 상호작용 기간을 조절하는 C-펩타이드의 ANCOVA 모델링 로그로부터이다. 치료 효과의 동종성(homogeneity) 테스트는 DR3 대립유전자 상태(allele status) (p=0.025) 및 종(race) (p=0.0003)에 대해 명백하다. AUC=곡선 아래 구역. HbA1c=당화 헤모글로빈A1c.
도면은 오직 예시적인 것이며 도면에 대한 모든 참조는 오직 설명의 목적을 위한 것으로 이해될 것이며, 어떠한 방법으로도 하기 본 발명에 설명된 실시예의 범위를 제한하려는 의도는 아니다.

CTLA4 분자는 개체 내 제1형 진성 당뇨병(T1DM)의 치료, 예방, 또는 지연된 진행을 위해 사용될 수 있는 것으로 발견되었다.

잔여 β-세포 기능(피크(peak) C-펩타이드 ≥0.2 nmol/L 에 의해 측정됨)의 보존은, 이것이 질병의 단기 및 장기 합병증을 감소시킬 수 있기 때문에 매우 바람직하다. 몇몇 임상 실험은 면역조절제 또는 항원 기초 치료와 함께 제1형 당뇨병에 자가면역을 저지하기 위해 수행되었다. 가장 중요하게, 항-CD3, 항-CD20, 및 GAD-65 항원 백신의 실험이 자극된 C-펩타이드 분비에 의해 입증된 β-세포 기능의 보존에 일부 효율을 보였다. C-펩타이드는 인슐린에 따라 체내에서 생산되는 단백질이다. 건강한 췌장에서, 인슐린전구물질(preproinsulin)은 A-체인, C-펩타이드, B-체인, 및 신호 서열과 함께 분비된다. 신호 서열은 절단되고, 프로인슐린(proinsulin)을 떠난다. 이후 C-펩타이드는 절단되고, 인슐린을 형성하기 위해 A-체인 및 B-체인을 떠난다. C-펩타이드 및 인슐린이 등몰(equimolar)량으로 존재하기 때문에, 이는 인슐린 생산 및 췌장 β 세포의 건강에 대한 매우 믿을 수 있는 마커이다.

T 세포는 제1형 당뇨병과 관련된 자가면역에 중요한 역할을 수행한다. 완전히 활성화 및 자가면역(autoaggressive)되기 위하여, T 세포는 적어도 두 중요한 신호가 필요한 것으로 여겨진다. (Marelli-Berg FM, Okkenhaug K, Mirenda V. A Trends Immunol 2007; 28: 267-73.) 첫번째 신호는 항원 제시 세포 상 MHC 분자의 그루브(groove) 내 항원 및 T-세포 수용체(TCR) 간의 상호작용이다. 가장 중요한 두번째 신호는 항원 제시 세포(APCs) 상 CD80 및 CD86과 T 세포 상 CD28사이의 상호작용이다. 이러한 동시 자극적(costimulatory) 두번째 신호는 세포의 완전한 활성화를 위해 필요하며, 이것이 없이 T 세포는 기능적으로 되지 못한다. 따라서, 동시 자극 봉쇄는 자가면역 및 이식에 대한 치료적 형태(therapeutic modality)로써 제안되어 왔다. (Bluestone JA, St Clair EW, Turka LA. Immunity 2006; 24: 233-38.)

세포독성 T-림프구 관련 항원 4(CTLA4), 또한 CD152로 알려진 것은 면역계의 조절에 포함된 단백질이다. 자연 발생 CTLA4는 미국특허번호 5,434,131, 5,844,095, 및 5,851,795에서 설명된다. 자연 CTLA4 단백질은 CTLA4 유전자에 의해 코딩된다. CTLA4는 N-말단 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 C-말단 세포질 도메인을 갖는, 세포 표면 단백질이다. 세포외 도메인은 CD80 및 CD86과 같은 표적 항원에 결합 및/또는 방해하며, T 세포 자극의 자연(nature) 자연적 파괴(natural break)를 제공한다. 일부 실시예에서, CTLA4 분자의 세포외 도메인은 위치 + 1에 메티오닌으로 시작하며 위치 +124에 아스파르트산으로 종결된다; 다른 실시예에서 세포외 도메인은 -1 위치에서 알라닌으로 시작하며 +124 위치에서 아스파르트산으로 종결된다.

CTLA4 분자는 세포독성 T-림프구-관련 항원 4(CTLA4) 세포외 도메인을 포함하는 분자이다. 일부 실시예에서, CTLA4의 세포외 도메인은 B 세포 및 APCs에서 발현되는 B7 항원과 같이 적어도 하나의 B7(CD80/86) 항원을 인식 및 결합하는CTLA4 단백질의 일부를 포함한다. 세포외 도메인은 또한 B7 항원에 결합하는 CTLA4의 절편 또는 유도체를 포함할 수 있다. CTLA4 세포외 도메인은 또한 CD80(B7-1) 및/또는 CD86(B7-2)를 인식 및 결합할 수 있다. 세포외 도메인은 또한 CD80 및/또는 CD86에 결합하는 CTLA4의 절편 또는 유도체를 포함할 수 있다.

CTLA4 분자는 융합 단백질일 수 있으며, 융합 단백질은 기술분야에서 알려진 방법을 사용하여 서로 결합된 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열로 정의된다. 결합된 아미노산 서열은 따라서 하나의 융합 단백질을 형성한다. 일부 실시예에서, CTLA4 분자는 적어도 면역글로불린의 Fc 일부와 같은, 면역글로불린의 일부를 포함한다. 일부 실시예에서 CTLA4 분자는 분리되고 CTLA4 분자로 정제된다.

일부 실시예에서, CTLA4 분자는 면역글로불린의 Fc 일부와 같은, 적어도 면역글로불린의 일부를 포함하는 단백질이다. 일부 실시예에서, CTLA4 분자는 분리되고 CTLA4 분자로 정제된다.

바람직한 일 실시예에서, CTLA4 분자는 아바타셉트(abatacept)이다. 아바타셉트는 인간 면역글로불린 G1(IgG1)의 변형된 Fc(힌지(hinge), CH2, 및 CH3 도메인) 일부에 연결된 인간 CTLA-4의 세포외 도메인으로 구성된 용해성 융합 단백질이다. 아바타셉트는 포유동물 세포 발현 시스템 내 재조합 DNA 기술에 의해 생산된다. 아바타셉트의 명백한 분자량은 92 킬로달톤이다.

아바타셉트는 성인 류마티스성 관절염 및 소아 특발성 관절염에 사용을 위해 개발되었고, 경미 내지 심각한 활성 류마티스성 관절염을 갖는 성인 환자에 징후 및 증상을 감소, 주요 임상 반응을 유도, 구조적인 결함의 진행을 억제, 및 생리학적 기능을 향상시킴을 가리킨다.

아바타셉트는 브리스톨-마이어스 스퀴브(Bristol-Myers Squibb)에 의해 개발되었고, 예를 들어 미국 특허 5,851,795, 미국 특허 7,455,835, 및 미국 특허 공개 20011/311529에서 공개되었다. 상품명 ORENCIA인 아바타셉트는 단일요법 또는 종양 괴사 인자(TNF) 길항제를 제외한 질병-변형 항류마티스성 약물(DMARDs)을 수반하여 사용될 수 있다. 아바타셉트는 또한 경미 내지 심각한 활성 다관절 유아 특발성 관절염을 갖는 6세 이상의 소아 환자에 징후 및 증상을 감소시킴을 가리킨다. 아바타셉트는 단일요법 또는 메토트렉사트(methotrexate, MTX)를 수반하여 사용될 수 있다. 아바타셉트는 선택적 공동 자극 조절자이며 T 세포 공동 자극을 억제하기 때문에, 이는 TNF 길항제를 수반하여 투여되면 안된다.

아바타셉트는 선택적으로 CD80 및 CD86에 결합하고, 그에 따라 CD28과 상호작용을 봉쇄하고 T-세포 활성화를 방해한다. 이는 나이브(naive) T 세포 활성화를 억제하고, 따라서 넓은 면역 억제 대신에 특정한 항원에 대한 T 세포 반응을 선택적으로 억제하기 위한 잠재력을 갖는다. 주효 기억 T-세포 반응은 CD28 공동 자극에 덜 의존적이며, 아마도, 공동 자극 봉쇄에 의해 덜 억제된다. (Lo DJ, Weaver TA, Stempora L, et al. Am J Transplant 2011; 11: 22-33.)

동물 및 인간 모두에 대한 연구는 공동 자극 두번째 신호의 중단은 자가면역에 유익하게 영향을 미침을 보인다. 아바타셉트로 공동 자극 봉쇄는 건선(Abrams JR, Lebwohl MG, Guzzo CA, et al. J Clin Invest 1999; 103: 1243-52) 및 건선성 관절염(Mease P, Genovese MC, Gladstein G, et al. Arthritis Rheum 2011; 63: 939-48)에 임상적 효율을 보였으며, 소아 류마티스성 관절염(Ruperto N, Lovell DJ, Quartier P, et al Lancet 2008; 372: 383-91.) 을 포함하는 류마티스성 관절염(Genant HK, Peterfy CG, Westhovens R, et al. Ann Rheum Dis 2008; 67: 1084-89) 의 치료에 증명되었다. 추가적으로, 공동 자극 봉쇄는 동종 이식 거부(allograft rejection)의 조절에 효과적이었다. (Vincenti F, Larsen C, Durrbach A. N Engl J Med 2005; 353: 770-81.) 게다가, Lenschow 및 그의 동료들은(Lenschow DJ, Ho SC, Sattar H, et al. J Exp Med 1995; 181: 1145-55) 항 B7-2 단일 클론 항체 및 CTLA4-면역글로불린 융합 단백질 모두의 공동 자극 봉쇄는 NOD 쥐 모델에 10주령 전에 투여될 때 당뇨병을 예방함을 보였다.

현재 CTLA-4 조성물 및 특정한 아바타셉트와 같은, T-세포 공동 자극 길항제로 공동 자극 조절은 자가면역(autoaggressive) T 세포의 발생을 차단함으로써 최근에 제1형 당뇨병으로 진단된 환자에서 C-펩타이드 분비를 보존하는 것을 유도하는 자가면역 β-세포 파괴를 중단 또는 지연시키는 것으로 나타났다 (Orban et al., Lancet 2011; 378 (9789): 412-9.)

따라서 본 발명은 CTLA4 분자 투여에 의해 진성 당뇨병의 진행을 치료, 예방, 또는 지연하는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 진성 당뇨병의 발병을 예방 또는 지연, 또는 β-세포 질량 감소를 예방 또는 지연시킬 수 있어, 보다 긴 완화 주기(remission period)를 제공하고 수명의 말기에 당뇨병 관련된 합병증의 발병을 지연시킨다.

T1DM은 본 발명에 설명된 방법으로 치료될 수 있다. 치료는 잔여 베타 세포 기능을 갖는 개체 뿐만 아니라 베타 세포 기능을 더 이상 갖지 않는 것에 대해서도 할 수 있다. 치료는 또한 이식 또는 주사 또는 다른 베타 세포 교체 방식(modalities)(배아 또는 다른 줄기 세포 치료 또는 다른 교체 방식과 같은)을 통해 외인성의 베타 세포가 제공된 개체에 대해 제안될 수 있다.

T1DM은 당뇨병의 발달 및 본 발명에 설명된 CTLA4 분자 투여에 민감한 개체의 첫번째 선택에 의해 개체 내에서 예방될 수 있다. 당뇨병의 발달에 민감한 개체는 GAD65 자가항체(GAAs), ICA512 자가항체(ICA512AAs), 또는 항-인슐린 자가항체(IAAs) 중 하나 또는 그 이상의 발현에 의해 선택될 수 있다. 이들 자가항체 각각은 자가면역 제1형 당뇨병의 진행의 위험과 관련된다. GAD65 자가항체(GAAs), ICA512 자가항체 (ICA512AAs), 또는 항-인슐린 자가항체(IAAs) 중 둘 또는 그 이상의 발현은 자가면역 제1형 당뇨병의 진행의 높은 위험과 관련된다. (Liping Yu et al., Diabetes August 2001 vol. 50 no. 8 1735-1740; Verge CF et al., Diabetes 45:926-933, 199; Verge CF. et al, Diabetes 47:1857-1866, 1998; and Bingley PJ, et al., Diabetes 43 : 1304- 1310, 1994).

T1DM의 발현은 인슐린이 보다 긴 시간 동안 개체에 의해 필요하지 않는 본 발명에 설명된 방법에 의해 지연될 수 있다. 그렇지 않으면 또는 추가적으로, 본 발명의 방법은 이미 당뇨병이 있는 개체에 "허니문 단계(honeymoon phase)"로 확장될 수 있다. 허니문 단계는 높은 혈당 수준이 가라 앉도록 유도하고, 인슐린 주사 및 치료에 반응에 의해 글루코스 수준을 정상 또는 정상에 가깝게 초래하는, 인슐린이 췌장에 의해 방출되는 곳이다.

본 발명에 설명된 CTLA4 분자는 약학적으로 허용가능한 담체와 조합되어 투여 및 약학적 조성물로써 투여될 수 있다.

용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는 특정한 바람직한 투여 형태에 적합한, 어느(any and all) 용매, 희석제, 또는 다른 액체 수송체(vehicle), 분산제 또는 현탁제, 계면 활성제, 등장성 제재, 농화 또는 유화제, 보존제, 고체 결합제, 활택제 등을 포함한다. 레밍턴 제약학, 6판, E. W. 마틴(Remington's Pharmaceutical-Sciences, Sixteenth Edition, E. W. Martin) (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980)은 약학적 조성물 제조에 사용되는 다양한 담체 및 이의 제조에 알려진 기술들을 개시한다. 어느 부적절한 생물학적 효과에 의한 또는 그렇지 않으면 약학적 조성물의 어느 다른 구성요소(들)과 해로운 환경에서 상호 작용과 같이, 본 발명에 제공된 화합물과 친화적이지 않는 어느 통상적인 담체 배지를 제외하고, 이의 사용은 본 발명의 범위 내로 고려된다. 약학적으로 허용가능한 담체로 제공될 수 있는 물질의 일부 예시들은, 이에 제한되지 않으며, 락토스, 글루코스 및 수크로스와 같은 당; 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분; 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 셀룰로스 및 이의 유도체; 트라가칸스(tragacanth) 분말; 맥아; 젤라틴; 탈크; 코코아버터 및 좌제 왁스(suppository wax)와 같은 부형제; 땅콩유, 목화씨유와 같은 오일; 홍화유, 참기름; 올리브유; 옥수수 기름 및 콩기름; 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜; 에틸 올레이트 및 에틸 라우레이트와 같은 에스터; 아가; 마그네슘 하이드록사이드 및 알루미늄 하이드록사이드와 같은 버퍼제; 알긴산; 무 피로겐(pyrogen) 물; 등장성 식염수; 링거 용액; 에틸 알코올, 및 포스페이트 버퍼 용액 뿐만 아니라, 소듐 라우릴 설페이트 및 마그네슘 스테아레이트와 같은 다른 비독성 호환성 있는 활택제 뿐만 아니라, 착색제, 방출제, 코팅제, 감미료, 조미 및 향료를 포함하며, 보존제 및 항산화제 또한 제조자의 판단에 따라 조성물 내에 존재할 수 있다.

약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 본 발명에 설명된 조성물은 투여 경로 또는 방법의 넓은 다양성을 사용하여 환자에게 전달될 수 있다. 적절한 투여 경로는 이에 제한되지 않고, 흡입, 경피, 구강, 직장, 점막 관통, 장내 및 근육 내, 피하 및 정맥 내 주사를 포함하는 비경구 투여를 포함한다.

본 발명에 설명된 조성물은 어쥬번트와 함께 투여될 수 있다. 용어 "어쥬번트"는 단독으로 투여되면 현저한 활성이 부족하지만 다른 치료적 제제의 활성을 증가시킬 수 있는 화합물일 수 있다. 일부 실시예에서, 어쥬번트는 버퍼, 항 미생물 보존제, 계면활성제, 항산화제, 토닉(tonic) 조절제, 방부제, 농화제 및 점도 향상제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 어쥬번트는 IFA 이거나, 다른 오일 기초 어쥬번트는 30-70% 사이, 바람직하게는 40-60% 사이, 더욱 바람직하게는 45-55% 사이의 중량비(w/w)로 존재한다. 일부 실시예에서 CTLA4 및 IFA 또는 다른 오일 기초 어쥬번트는 약 50/50 중량비로 존재한다. 일부 실시예에서, 약학적 조성물은 오염물, 예를 들어 피로겐(pyrogens)이 없다.

경구 투여를 위해, 화합물은 기술분야에 잘 알려진 하나 또는 그 이상 약학적으로 허용가능한 담체와 CTLA4 분자 조합에 의해 즉시 제조될 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 화합물이 치료될 환자에 의해 경구 섭취를 위해, 정제(tablets), 알약(pills), 당과(dragees), 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 제조되는 것을 가능하게 한다. 경구 사용을 위한 약학적 제조는, 만약 정제 또는 당과 코어를 획득하려면, 고체 부형제, 선택적으로 결과 혼합물을 그라인딩(grinding), 및 과립의 혼합물을 제조, 적절한 보조제를 첨가한 이후에 획득될 수 있다. 고체 부형제는 특히 락토스, 수크로스, 만니톨, 또는 솔비톨을 포함하는 당; 예를 들어 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 검 트라가칸스, 메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 및/또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)와 같은 셀룰로스 제제와 같은 필러이다. 필요에 따라, 가교 결합된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 또는 알긴산 또는 소듐 알기네이트와 같은 이의 염과 같은, 붕해제가 첨가될 수 있다.

화합물은 주사에 의한, 예를 들어 한 회 분 주사 또는 계속적 주입에 의한 비경구 투여를 위해 제조될 수 있다. 주사는 본 발명의 조성물의 투여의 바람직한 방법이다. 주사를 위한 제형은 첨가된 보존제와 함께 단위 투여 형태로, 예를 들어 앰플 또는 다중 투여 용기로 존재할 수 있다. 조성물은 현탁액, 용액 또는 유성 또는 수성 수송체(vehicles) 내 에멀전의 형태일 수 있으며, 가교 결합된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 또는 알긴산 또는 소듐 알기네이트와 같은 이의 염과 같은, 첨가될 수 있는 현탁, 안정화 및/또는 분산제와 같은 제형제(formulatory agents)를 포함할 수 있다. 따라서, 일부 실시예에서, 조성물은 유중수 에멀전일 수 있다. 다른 실시예에서, 조성물은 수중유 에멀전일 수 있다. 이러한 수중유 에멀전은 방출 프로파일(profile)을 조절하고 잠재적으로 에멀전과 같은 변하지 않은 형태로 흡수되는, 유효 약물의 늦은 방출을 제공하는데 특히 유용하다.

비경구 투여를 위한 약학적 제형은 수용성 형태 내 활성 화합물(active compouns)의 수용액을 포함한다. 추가적으로 활성 화합물의 현탁액은 적절한 오일 주사 현탁액으로써 제조될 수 있다. 적절한 지방친화성 용매 또는 수송체는 참기름과 같은 지방유, 또는 에틸올레이트 또는 트리글리세라이드와 같은 합성 지방산 에스터, 또는 리포솜을 포함한다. 수용액 주사 현탁액은 소듐카르복시메틸셀룰로스, 솔비톨, 또는 덱스트란과 같은 현탁액의 점성을 증가시키는 물질을 포함할 수 있다. 선택적으로, 현탁액은 또한 적절한 안정화제 또는 매우 농축된 용액의 제조를 위한 화합물의 용해도를 증가시키는 제재를 포함할 수 있다. 주사를 위해, 본 발명의 제재는 수용액으로, 바람직하게는 행크스 용액(Hanks's solution), 링거 용액(Ringer's solution), 또는 생리 식염수 버퍼와 같은 생리학적으로 호환가능한 버퍼로 제조될 수 있다. 그렇지 않으면, 유효 성분은 사용 전에, 적절한 수송체, 예를 들어 멸균 무피로겐 물과 함께 구성(constitution )을 위한 파우더 형태일 수 있다.

일부 실시예에서, CTLA4 분자를 포함하는 조성물은 또한 오일 베이스 담체를 포함한다.

오일 베이스 담체는 치료제와 함께 인체에 투여하기에 적합한 천연 또는 합성 오일의 적어도 10 중량%를 포함하는 조성물이다. 바람직한 실시예에서, 담체는 적어도 20, 30, 50, 70, 80, 90, 95, 98, 또는 99 중량%의 오일을 포함한다. 일부 실시예에서, 오일 베이스 담체는 70, 60, 50, 40, 30 또는 20 중량% 미만의 오일을 포함할 수 있다. 바람직한 실시예에서, 오일은 10 내지 95 중량%, 바람직하게 20 내지 90 중량% 또는 30 내지 70 중량% 오일의 범위이다. 오일은 개체에 투여될 때 물질의 확산의 지속적인 방출을 제공하는 것으로 선택되어야 한다. 적절한 오일은 미네랄 오일(예를 들어, 드라케올(Drakeol) 6 VR 라이트(light) 미네랄 오일), 식물성 오일, 스쿠알렌, 또는 액상 파라핀을 포함한다. 일부 실시예에서, 오일 기초 담체는 한 종류 이상의 오일을 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 오일 기초 담체는 면역 자극제, 예를 들어 면역자극 글루칸(immunostimulating glucan)을 포함할 수 있으나, 오일 기초 담체가 면역 자극제, 예를 들어 면역자극 글루칸, 박테리아 구성요소, 예를 들어 마이코박테리아(mycobacterial) 구성요소를 포함하지 않는 것이 더욱 바람직하다. 바람직한 실시예에서, 오일 기초 담체는 알룸(alum) 구성요소를 포함하지 않는다.

이론에 구속되고자 하는 것은 아니지만, 오일 기초 담체는 소염 뿐만 아니라 방어 능력과 관련된 면역 적격(immunocompetent) 세포를 트리거링(triggering)하여 수행되는 것으로 여겨진다. 오일 기초 담체는 또한 항원 수송체 및 늦은 방출 또는 장기간 항원 제시 장치로 활동할 수 있다. 개체에 주사될 때, 오일 기초 담체 및 항원 구성요소는 주사 위치에 항원의 창고(depot)를 형성할 수 있어, 그에 따라 분해로부터 항원을 보호한다. 이러한 창고로부터 항원은 시스템으로 천천히 방출될 수 있으며 장기적인 항원 제시뿐만 아니라 확장된 총 접촉 표면 및 항염 세포의 유인(attraction)을 제공한다. 대식세포는 대부분의 포함된(incorporated) 물질을 소화할 수 있으며, 그들의 표면에 가공된 항원을 제시한다. 이러한 창고로부터 항원은 시스템으로 천천히 방출될 수 있으며 공동 자극 조절자로써 활동하기 위해 장기적인 항원 공급을 제공한다.

오일 기초 담체는 선택적으로 유화제 또는 계면활성제 구성요소를 포함한다. 유화제 또는 계면활성제(및 유화제 또는 계면활성제의 함량)은 물질의 혼합 또는 분산, 예를 들어 오일과 함께 항원 제조를 촉진하는 것에 선택된다. 오일 기초 담체는 0.1 내지 50 중량%, 바람직하게는 1 내지 30 중량%, 더욱 바람직하게는 5 내지 20 중량%의 계면활성제 또는 유화제를 포함할 수 있다. 유화제 또는 계면활성제의 예시는 아를라셀 A(Arlacel A), 만니드 올레이트(mannide oleate)(예를 들어 몬타미드 80-만니드 모노올레이트(Montamide 80-mannide monooleate), 무수 만니톨/올레산 에스터, 폴리옥시에틸렌 또는 폴리옥시프로필렌을 포함한다.

오일 기초 담체 또는 어쥬번트는 전형적으로 두 구성요소: (1) 오일, 및 (2) 유화제 또는 계면활성제로 이루어지고 물과 혼합된다. 적절한 오일 및 유화제는 기술분야에서 알려져 있다. 예를 들어 오일은 미네랄 오일, 식물성 오일, 스쿠알렌 또는 액상 파라핀일 수 있다. 유화제 또는 계면활성제는 예를 들어 아를라셀 A, 만니드 올레이트, 무수 만니톨/올레산 에스터, 폴리옥시에틸렌 또는 폴리옥시프로필렌일 수 있다. 오일 기초 어쥬번트의 예시는 통상적인 IFA, 몬타미드 ISA 어쥬번트, 또는 헌터 타이터맥스(Hunter's TiterMax) 어쥬번트를 포함한다. 바람직한 실시예에서, 어쥬번트는 20 내지 95 중량%, 바람직하게는 30 내지 90 중량%, 더욱 바람직하게는 40 내지 70 중량%의 오일상 및, 0.1 내지 50 중량%, 바람직하게는 1 내지 30 중량%, 더욱 바람직하게는 5 내지 20 중량%의 계면활성제 또는 유화제를 포함한다. 오일 기초 어쥬번트의 다양한 형태는 예를 들어 미국특허번호 5,814,321, 미국특허번호 6,299,884, 미국특허번호 6,235,282, 및 미국특허번호 5,976,538에서 설명되었다.

IFA는 전형적으로 비 대사성 오일(예를 들어 미네랄 오일), 물, 및 계면활성제(예를 들어 아를라셀 A)의 혼합물이다. 완전 프로이드 어쥬번트(Complete Freund's Adjuvant, CFA)와 다르게, IFA는 박테리아 구성요소, 예를 들어 마이코박테리아를 포함하지 않는다. 인체에 IFA를 사용한 첫번째 대규모 백신 접종은 US 군인 인력에 수행되었다 (Davenport (1968) Ann Allergy 26:288-292; Beebe et al., (1972) Am J Epidemiol 95:337-346; Salk & Salk (1977) Science 195:834-847). 결과는 악성 종양, 알러지성 질병 및 교원질증(collagenosis)에 대해 본질적으로 부정적이었으나, 일부 인원은 접종 부위에 낭포 유사 반응을 가진다는 증거가 있었다. 후속 연구는 이들 유해 사례(adverse events)는 화합물의 부적절한 투여에, 즉 i.m. 대신 s.c.을 주입에 기인한 것임을 보였다. 이들 실험들로부터, 비록 동물 실험에 널리 사용되고 있더라도, IFA는 인체 목적에 부적절한 것으로 여겨졌다. 최근 몇 년 내에, IFA의 새로운 형태는 HIV 면역 치료 또는 치료적 백신 접종에 인체 용도에 안전한 것을 보였다 (Turner et al. (1994) AIDS 8:1429-1435; Trauger et al. (1995) J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol 10 Supp2:S74-82; Trauger et al. (1994) J Infect Dis 169:1256-1264).

몬타니드 ISA 어쥬번트 (Seppic, Paris, France)는 다른 계면활성제가 비-대사성 미네랄 오일, 대사성 오일, 또는 이들의 혼합물로 조합된 오일/계면활성제 기초 어쥬번트의 그룹이다. 그들은 수용성 Ag 용액과 함께 에멀젼으로써 용도를 위해 제조된다. 몬타니드 ISA 50 (ISA=불완전 셉틱 어쥬번트(Incomplete Seppic Adjuvant))에 대한 계면활성제는 만니드 올레이트, 프로이드 어쥬번트 내 계면활성제의 주요 구성요소이다. 몬타니드 그룹의 계면활성제는 프로이드 어쥬번트에 사용된 일부 많은 아를라셀 A에 발견되는, 과도한 염증을 유발할 수 있는 어떠한 물질에 의해 오염되는 것을 방지하기 위해 엄격한 품질 관리를 받는다. 어쥬번트의 다양한 몬타니드 ISA 그룹은 유중수 에멀전, 수중유 에멀전, 또는 수중 유중수 에멀전으로 사용된다. 다른 어쥬번트는 다른 수상/오일상 비율을 제공하며, 계면활성제 및 오일의 조합이 다양하기 때문이다.

헌터 타이터맥스 (CytRx Corp., Norcross, Ga.)는 통상적인 프로이드 어쥬번트에 사용되는 것과 유사한 방법으로 유중수 에멀전으로 제조된 오일/계면활성제 기초 어쥬번트이다. 그러나 이는 좋은 단백질 항원 결합 능력 뿐만 아니라 어쥬번트 활성을 갖는 대사성 오일(스쿠알렌) 및 비이온성 계면활성제를 사용한다. 어쥬번트 활성은 비장 및 림프절에서 여포성 수상돌기세포(follicular dendritic cells)에 Ag를 목표로 하는 것을 돕는 것과 같이, 보체를 활성화시키고 보체 구성요소에 결합하기 위한 계면활성제의 능력과 일부 관련될 수 있다. 상업적으로 이용가능한 어쥬번트에서 사용되는 계면활성제는 헌터에 의해 개발된 폴리옥시에틸렌 및 폴리옥시프로필렌의 다양한 합성 비이온성 블록 코폴리머 가운데 하나이다 (Hunter et al., 1991 Vaccine 9:250-256). 에멀전을 안정화시키기 위한 코폴리머 코팅된 마이크로입자의 활용은 20% 오일 미만의 안정한 유화제의 형성을 허용하며, 주사되는 총 어쥬번트를 최소화하는 중요한 인자이다.

어쥬번트는 세포 매개 면역 및 방어 아이소타입(protective isotypes) (쥐 내 IgG2a 및 영장류 내IgG1)의 항체 생산을 촉진하는데 항원과 함께 사용될 수 있다. 어쥬번트의 다양한 형태는 주사 부위에 반응 및 발열성과 같은, 유사한 부작용을 공유한다. 알룸, 인체 백신에 일반적으로 사용되는 어쥬번트는 주사 부위에 뚜렷한 육아종 반응을 또한 생산한다 (Allison & Byars (1991) Mol Immunol 28:279-284). 불완전 프로이드 어쥬번트의 활동 모드는 비특이적 뿐만 아니라 특이적 면역 반응을 포함할 수 있다. IFA는 항염 뿐만 아니라 방어 능력과 관련된 면역적격 세포를 트리거링함으로써 수행되는 것으로 보인다. IFA는 또한 항원 수송체 및 늦은 방출 또는 장기간 항원 제시 장치로써 활동한다. IFA 및 항원 화합물로 환자에 주사는, 주사 부위에 항원의 창고를 형성하며, 그에 따라 분해로부터 항원을 보호한다. 이러한 창고로부터 항원은 시스템으로 서서히 방출되며 장기간 항원 제시 뿐만 아니라 확장된 총 접촉면 및 항염 세포의 유도를 제공한다. 대식세포는 대부분의 포함된 물질을 소화하고 그들의 표면에 가공된 항원을 제시한다. 이러한 창고로부터 항원은 서서히 시스템으로 방출될 수 있으며 공동 자극 조절자로서 활동을 위해 장기간 항원 공급을 제공한다.

항원 면역원성에 대한 IFA의 특이적 향상 효과는 증가된 체액성 면역(우선적으로 방어 항체 생산; 인체 내 IgG1 및 쥐 내 IgG2a)을 초래하고 특이적 세포 중재 면역(우선적으로 Th2 타입)을 촉진하는 것으로 발견되었다. 구체적으로, 예로써 IFA 내 인간 재조합 인슐린 B-체인은 NOD 쥐 섬(mice islets) 내 Th2 사이토카인 패턴을 초래한다 (Ramiya et al. (1996) J Autoimmun 9:349-356). IFA는 동물 모델 내 당뇨병 예방을 위해 실험된 어쥬번트 가운데 독특하다. 라미야 및 그의 동료들은(supra) 어쥬번트로서 알룸 및 DPT는 사용된 항원과 무관한 '비특이적' 방어 효과 를 가지는 반면, IFA는 동물 내 당뇨병 예방을 위해 항원 특이적 방어 효과를 갖는 유일한 하나인 것으로 결론지었다.

IFA, 바람직하게 인체 용도를 위해 인증된 IFA, 예를 들어 몬타니드(예를 들어, 몬타니드 ISA51, Seppic Inc., France) 또는 동등한 조성물은 본 발명에 설명된 방법 및 백신에 사용하기에 바람직한 어쥬번트이다. 몬타니드 ISA51은 우리의 동물 및 우리의 인간 연구에서 시스템 또는 현저한 국소(local) 부작용을 보이지 않았다.

경구 투여를 위해, 화합물은 기술분야에서 잘 알려진 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 활성 화합물(들)을 조합함으로써 즉시 제조될 수 있다. 이러한 담체는 치료될 환자에 경구 섭취를 위해 본 발명의 화합물을 정제, 알약, 당과, 캡슐, 액상, 젤, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 제조하는 것을 가능하게 한다. 경구 사용을 위해 약학적인 제조는 만약 필요한 경우 정제 또는 당과 코어를 얻기 위해, 고체 부형제, 선택적으로 생산된 혼합물을 그라인딩(grinding), 및 적절한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물을 가공하여 얻을 수 있다. 적절한 부형제는 특히, 락토스, 수크로스, 만니톨, 또는 솔비톨을 포함하는 당과 같은 필러; 예를 들어 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 검 트라가칸스, 메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 및/또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)와 같은 셀룰로스 조제이다. 만약 필요한 경우, 가교 결합된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 또는 알긴산 또는 소듐 알기네이트와 같은 이의 염과 같은, 붕해제가 첨가될 수 있다.

화합물은 주사를 통한, 예를 들어 볼루스 주사 또는 지속 주입법에 의한 비경구 투여를 위해 제조될 수 있다. 주사는 본 발명의 조성물에 대한 바람직한 투여 방법이다. 주사를 위한 제형은 첨가된 보존제와 함께 단위 투여 형태, 예를 들어 앰플 또는 멀티-도즈 컨테이너로 존재할 수 있다. 조성물은 현탁액, 용액 또는 오일 또는 수용성 수송체 내 에멀전과 같은 형태를 가질 수 있으며, 현탁과 같은 제형제(formulatory agent)를 포함할 수 있으며, 가교 결합된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 또는 알긴산 또는 소듐 알기네이트와 같은 이의 염과 같은 안정제 및/또는 분산제가 첨가될 수 있다.

비경구 투여를 위한 약학적 제형은 수용성 형태 내 활성 화합물의 수용액을 포함한다. 추가적으로 활성 화합물의 현탁액은 적절한 오일 주사 현탁액으로 제조될 수 있다. 적절한 지방친화성 용매 또는 수송체는 참기름, 또는 에틸 올레이트 또는 트리글리세라이드와 같은 합성 지방산 에스터, 또는 리포솜과 같은 지방유를 포함한다. 수용성 주사 현탁액은 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 솔비톨, 또는 덱스트란과 같이, 현탁액의 점성을 증가시키는 물질을 포함할 수 있다. 선택적으로, 현탁액은 또한 매우, 농축된 용액의 제조를 위한 화합물의 용해도를 증가시키는 적절한 안정화제 또는 제제를 포함할 수 있다. 주사를 위해, 본 발명의 제제는 수용액으로, 바람직하게는 행크스 용액, 링거 용액, 또는 생리 식염수 버퍼와 같은 생리학적으로 호환가능한 버퍼로 제조될 수 있다. 그렇지 않으면, 유효 성분은 사용 전에 적절한 수송체, 예를 들어 멸균 무피로겐 물을 갖는 구조를 위한 파우더 형태일 수 있다.

개체에 제공되는 CTLA4 분자의 조합의 양은 개체의 크기 및 중량뿐만 아니라 질병의 진행 상태에도 의존한다. 본 발명의 화합물에 있어서, 치료적 유효량은 체외 분석으로부터 초기 결정될 수 있다. 본 발명의 화합물이 낮은 흡수 및 낮은 생체 활용율을 가지기 때문에, 치료적 유효량은 예를 들어 화합물의 혈액 수준 또는 이의 대사체 또는 화합물의 분류(fecal) 농도 또는 이의 대사체로부터 결정될 수 있다. 기술분야에 알려진 바와 같이, 인체에 사용하는데 치료적 유효량은 또한 동물 모델로부터 결정될 수 있다. 치료적 유효량은 또한 유사한 약학적 활성을 보이는 것으로 알려진 화합물에 대한 인체 데이터로부터 결정될 수 있다. 적용된 투여량은 알려진 화합물에 비해 투여된 화합물의 상대적인 잠재력에 기초하여 조절될 수 있다.

본 발명의 화합물의 비경구 투여를 위한 환자 투여량은 일반적으로 약 1 mg/일 내지 약 10,000 mg/일, 더욱 일반적으로 약 10 mg/일 내지 약 1,000 mg/일, 및 가장 일반적으로 약 50 mg/일 내지 약 500 mg/일의 범위이다. 환자 체중의 관점에서 말하면, 일반적인 투여량은 약 0.01 내지 약 150 mg/kg/일, 더욱 일반적으로 약 0.1 내지 약 15 mg/kg/일, 및 가장 바람직하게는 약 1 내지 약 10 mg/kg/일의 범위이며, 예를 들어 5 mg/kg/일 또는 3 mg/kg/일이다.

CTLA4 분자는 매일 일회 투여량으로 투여되거나 매일 수회 투여될 수 있다. 그렇지 않으면, 이는 하루에 1회 미만으로 투여될 수 있다. 투여는 한달에 한번 또는 매 28일 마다 같은 기간일 수 있다. 일부 실시예에서, 추가적 투여(예를 들어 볼루스 투여)는 치료의 시작에 주어질 수 있다. 일부 실시예에서, 투여는 약 5, 10, 20, 30, 50, 100 mg/kg의 CTLA4 분자를 포함한다.

본 발명에 사용된 용어의 정의는 화학 및 약학 분야에서 각 용어로 인식된 본 최신 기술의 정의를 포함하는 것을 의미한다. 적절하게, 예시가 제공된다. 그들이 본 명세서 전반에 사용되는 것처럼 정의는 용어에 적용되며, 그렇지 않으면 특정한 경우, 개인적 또는 큰 그룹의 일부로써 제한된다.

본 발명에 사용된, 용어 "투여(administering)" 또는 "투여(administration)"은 이의 의도되는 활성 부위에 직접 및 간접적으로 화합물을 전달하기 위한 모든 수단을 포함하는 것을 의미한다.

진성 당뇨병의 진행을 지연시키는 맥락에서 사용된 구절 "진행을 지연(delaying the progression)"은 제1형 당뇨병의 임상적 발병이 지연된 이후에, 기능성 잔여 β-세포 질량의 손실을 의미한다. T1DM의 지연된 진행은 예를 들어 C-펩타이드 생산을 측정함으로써 측정될 수 있다.

구절 "약학적으로 허용가능한"은 포유동물(예를 들어 인간)과 같은 동물에 투여할 때, 생리학적으로 용인가능하고 일반적으로 알러지 또는 위산 역류(gastric upset), 현기증 등과 같은 유사한 원치 않는 반응을 생산하지 않는 첨가제 또는 조성물을 의미한다. 용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는 원하는 특정 투여 형태로 적합하게, 어느 용매, 희석제, 또는 다른 액체 수송체, 분산 또는 현탁제, 계면활성제, 등장성 제재, 농화 또는 유화제, 보존제, 고체 결합제, 활택제 등을 포함한다. 레밍턴(Remington's), The Science and Practice of Pharmacy, (Gennaro, A. R., ed., 19^th edition, 1995, Mack Pub. Co.)은 약학적 조성물 제조에 사용되는 다양한 담체 및 이의 제조에 알려진 기술들을 개시한다. 어느 부적절한 생물학적 효과에 의한 또는 그렇지 않으면 약학적 조성물의 어느 다른 구성요소(들)과 해로운 환경에서 상호 작용과 같이, 본 발명에 제공된 화합물과 친화적이지 않는 어느 통상적인 담체 배지를 제외하고, 이의 사용은 본 발명의 범위 내로 고려된다. 약학적으로 허용가능한 담체로 제공될 수 있는 물질의 일부 예시들은, 이에 제한되지 않으며, 락토스, 글루코스 및 수크로스와 같은 당; 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분; 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 셀룰로스 및 이의 유도체; 트라가칸스(tragacanth) 분말; 맥아; 젤라틴; 탈크를 포함한다. 코코아버터 및 좌제 왁스(suppository wax)와 같은 부형제; 땅콩유, 목화씨유와 같은 오일; 홍화유, 참기름; 올리브유; 옥수수 기름 및 콩기름; 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜; 에틸 올레이트 및 에틸 라우레이트와 같은 에스터; 아가; 마그네슘 하이드록사이드 및 알루미늄 하이드록사이드와 같은 버퍼제; 알긴산; 무 피로겐 물; 등장성 식염수; 링거 용액; 에틸 알코올, 및 포스페이트 버퍼 용액 뿐만 아니라, 소듐 라우릴 설페이트 및 마그네슘 스테아레이트와 같은 다른 비독성 호환성 있는 활택제 뿐만 아니라, 착색제, 방출제, 코팅제, 감미료, 조미 및 향료를 포함하며, 보존제 및 항산화제 또한 제조자의 판단에 따라 조성물 내에 존재할 수 있다.

용어 "약학적 조성물"은 담체 및/또는 부형제와 같은 다른 제재와 함께, 본 발명에 설명된 조성물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 의미한다. 바람직하게, 약학적 조성물은 적어도 95% 순도, 또는 98% 순도, 또는 99% 순도, 또는 그 이상의 활성 제재를 가질 것이다.

본 발명에서 사용된, 용어 "개체"는 당뇨병, 전당뇨병(prediabetes), 또는 당뇨병 소인(predisposition) 을 갖는 인간 또는 다른 동물이다. 따라서, 일부 실시예에서 개체는 본 발명에서 제공된 테라피(therapeutic) 치료가 필요할 것이다. 바람직한 환자는 포유동물이다. 환자의 예시는 인간, 말, 원숭이, 개, 고양이, 쥐, 랫(rates), 소, 돼지, 염소 및 양을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 실시예에서, "개체"는 일반적으로 당뇨병을 갖는 인간 환자이다. 일부 실시예에서, "개체"는 지난 200, 100, 또는 50일 이내에 T1DM으로 진단받은 인간 환자이다. 일부 실시예에서, "개체"는 진성 당뇨병으로 최근에 진단받은 인간 환자이나, 여전히 잔여 베타-세포 기능을 가진다. 이러한 일부 실시예 내 잔여 베타 세포 기능은 발견될 수 있거나, 완전히 기능하는 췌장 내 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 또는 그 이상의 베타 세포이다.

용어 "치료적 유효량"은 세포 배지, 조직 시스템, 동물, 또는 인간에 원하는 생물학적 또는 의학적 반응(예를 들어 원하는 치료적 결과)을 달성하기 위해, 투여량 및 필요한 기간 동안 유효량을 의미한다. 조성물의 치료적 유효량은 질병 상태, 연령, 성별, 및 개인의 체중과 같은 인자, 및 각 개인에 원하는 반응을 촉진하는데 CTLA4 분자의 능력에 따라 다양할 수 있다. 치료적 유효량은 또한 약리학제(pharmacological agent)의 어떠한 독성 또는 해로운 효과가 치료적으로 유용한 효과보다 크지 않은 것이다. 일부 실시예에서, 반응은 질병, 컨디션, 또는 치료될 질환의 하나 또는 그 이상의 증상의 경감 및/또는 지연을 포함한다.

본 발명에 사용된 용어 "치료(treatment)" 또는 "치료(treating)"는 개체에 치료제의 적용 또는 투여 또는 당뇨병, 질병의 증상 또는 질병에 대한 소인을 갖는 개체로부터 분리된 조직 또는 세포 라인에 치료제의 적용 또는 투여로 정의된다. 치료는 질병, 질병의 증상 또는 질병에 대한 소인 발병의 예방, 진행의 지연, 역전 또는 그렇지 않으면 개선(ameliorating), 개선(improve), 또는 영향을 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 본 발명에 설명된 조성물로 개체, 예를 들어 인간 개체의 치료는 제1형 당뇨병의 임상적 발병 전, 중, 후에 개체 내 자가면역의 진행, 예를 들어 췌장 β-세포에 대한 반응을 지연, 개선(improve), 또는 정지할 수 있다.

용어 "약(about)" 또는 "대략(approximately)"은 기술분야에서 통상의 기술자에 의해 결정되는 특정 수치 범위에 수용 가능한 오차 내를 의미하며, 수치가 어떻게 측정 또는 결정되는지에 따라, 예를 들어 측정 시스템의 한계, 또는 특정한 목적을 위해 요구되는 정확성의 정도에 일부분 의존할 것이다. 예를 들어, "약"은 기술 분야의 관행에 따라, 1 이내 또는 2 이내 표준 편차를 의미할 수 있다. 그렇지 않으면, "약"은 주어진 값의 20% 까지, 바람직하게는 10% 까지, 및 더욱 바람직하게는 5% 까지의 범위를 의미할 수 있다. 특정 수치가 본 출원 및 청구항 내 설명되는 곳은, 다른 언급이 없으면, 용어 "약"은 가정되는 특정한 수치의 수용 가능한 오차 범위 내를 의미한다.

본 발명에 사용되고 첨부된 청구항 내, 단수 형태 "a," "an," 및 "the,"는 문맥상 다른 명확한 지시가 없는 이상 복수의 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "분자(a molecule)"에 대한 언급은 이러한 분자 하나 또는 그 이상을 포함하며, "레진(a resin)"은 이러한 다른 레진을 하나 또는 그 이상 포함하며 "방법(the method)"에 대한 언급은 본 발명에 설명된 방법에 대해 변형 또는 치환될 수 있는 기술분야에 통상의 기술자에게 알려진 동등한 단계 및 방법에 대한 언급을 포함한다.

상기 설명은 다양한 실시예의 예시 및 특정한 세부 사항을 제공하는 반면, 설명된 실시예의 일부 특징 및/또는 기능은 설명된 실시예의 범위로부터 떨어짐이 없는 변형을 인정할 것이다. 상기 설명은 본 발명의 명확한 설명(illustrative)을 의미하며, 이의 범위는 오직 본 발명에 첨부된 청구항의 언어에 의해 한정된다.

실시예

출원인의 교시의 양태는 하기 실시예에 비추어 이해될 수 있으며, 이는 어떠한 방법으로도 출원인의 교시의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

실시예 1 - 연구 설계(Study design) 및 환자

지난 100일 내 제1형 당뇨병으로 진단받은 환자(6-45살)들은 본 연구를 위해 평행 스크리닝(parallel-screened) 되었다. 환자들은 만약 그들이 적어도 하나의 당뇨병 관련된 자가항체(미세분석된(microassayed) 인슐린 항체 [만약 인슐린 치료의 기간이 7일 미만일 경우]; 글루탐산 디카르복실레이즈-65 [GAD-65] 항체; 섬세포 항원-512 [ICA-512] 항체; 또는 섬-세포 자가항체)를 가지며, 0.2 nmol/L 또는 당뇨병 진단 이후 적어도 21일 및 무작위로 37일 내 혼합 식사 내성 테스트(mixed-meal tolerance test, MMTT) 수행 동안 높게 측정된 자극된 C-펩타이드 농도를 갖는다면 연구에 참여할 자격이 있다.

혈액 샘플이 B형 간염 표면 항원, C형 간염, 또는 HIV에 세럼 항체에 대해 양성으로 스크린된 사람은 참여에서 제외되었다. 샘플은 또한 엡스테인-바 바이러스(Epstein-Barr virus, EBV)에 대해 실험되었다. 스크리닝 시간에 활성 EBV 감염의 증가를 갖는 개인들은 자격이 없었다. 무작위화 이후 활성 EBV 감염의 증거를 보인 참여자들은 해결될 때까지 추가적인 연구 약물을 받지 못했다.

환자들은 더블 블라인드 프로토콜을 사용하여 아바타셉트(abatacept) 또는 플라시보(placebo)와 함께 실험 치료를 받기 위해, 참여 장소에 의해 중층으로(stratified), 2:1 비율로 무작위로 할당되었다. 표 1은 참여자들의 베이스 라인 인구학적 및 실험적 특성을 제공한다.

	아바타셉트 ( Abatacept ) (n=77)	플라시보 (Placebo) (n=35)
연령
평균 (년)	13.9 (6.9)	13.7 (5.3)
중간(Median) (년)	12 (6.36)	14 (7.34)
남자(Men)	41 (53%)	25 (71%)
레이스(Race)* 화이트(White)	71 (93%)	32 (91%)
비-히스패닉 인종 (Ethnic origin Non-Hispanic)	67 (87%)	31 (89%)
당뇨병 관련 자가항체의 수†
1	9 (12	4 (11%)
2	26 (34%)	9 (26%)
3	26 (34%)	15 (43%)
4	16 (21%)	7 (20%)
첫번째 인퓨전(infusion)에 진단으로부터 수일‡	87.9 (14.1)	83.2 (17.8)
체중 (kg)	52.6 (21.9)	53.0 (19.7)
신체 용적 지수(Body-mass index) (kg/m²)	21.0 (4.5)	20.5 (3.9)
C-peptide에 대한 평균 AUC (nmol/L)	0.743 (0.42)	0.745 (0.31)
베이스라인에 HbA1c* (%)	6.31% (0.80)	6.74% (0.94)
베이스라인에 매일 인슐린 투여량의 총합* (U/kg)	0.385 (0.24)	0.339 (0.22)
진단에 케토에시도시스(Ketoacidosis)	25 (32%)	8 (23%)
당뇨병 관련된 HLA 대립형질 존재(present)*
DR3 및 DR4	25 (34%)	16 (49%)
DR3 단독	11 (15%)	5 (15%)
DR4 단독	30 (41%)	10 (30%)
둘다 없음(Neither)	8 (11%)	2 ( 6%)

데이터는 n (%), 평균 (SD), 또는 중간 (범위)이다. AUC=곡선 아래 부위. HbA1c=당화 헤모글로빈 A1c.

*지시된 가변성에 대해 상실된 데이터를 갖는 참여자는 제외 (상실된 수: 레이스, 1; HbA1c, 2; 인슐린 사용, 1; HLA 대립형질 상태, 4). †면역형광검사에 의한 섬-세포 자가항체는 16 환자에 실험되지 않았다(카운트에서 음성(negative)로 고려됨). ‡아바타셉트에 대한 51-108 및 플라시보에 대한 38-107 범위.

실시예 2 - 절차(Procedures)

아바타셉트 (Orencia, Bristol-Myers Squibb, Princeton, NJ, USA)는 100 mL 0.9% 소듐 클로라이드 주입(infusion) 내 10 mg/kg의 투여량(투여 당 최대 1000 mg)에서 30분 정맥내 주입과 같이 700일에 최종 투여량(총 27 투여)으로 1, 14, 및 28일, 및 이후 매 28일에 주어졌다. 일반적인 식염수 주입은 플라시보로 사용되었다. 환자들은 어떠한 예비 투약도 받지 않았다.

모든 환자는 집중적인 당뇨병 관리를 받았다. 목표는 미국 당뇨병 협회에 의해 추천되는 집중 혈당 조절을 달성하는 것이었다. (American Diabetes Association. Diabetes Care 2011; 33 (suppl 1): S11-61.) 환자들은 수회 일일 인슐린 주사 또는 인슐린 펌프를 사용하였다. 혈당 모니터링은 빈번한 매일 혈당 모니터링의 수단에 의해 수행되었다. 혈당 조절에 효과를 주는 비 인슐린 약품의 사용은 허용되지 않았다.

혈액 샘플은 중점적으로 분석되었다. C-펩타이드 농도는 두 부위 면역효소 측정분석으로 냉동 플라즈마로부터 측정되었다 (Tosoh Bioscience, South San Francisco, CA, USA). 당화 헤모글로빈 A1c (HbA1c)는 이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피 (Variant II, Bio-Rad Diagnostics, Hercules, CA, USA)로 측정되었다. 각 분석에 대한 신뢰도 계수는 분할 사본 샘플로부터 0.99 보다 크다. 생화학 자가항체(미세분석된 인슐린 항체, GAC-65 항체, ICA-512 항체)는 방사 면역 결합성 분석 및 간접적 면역 형광법과 함께 섬 세포 자가항체(ICA)로 측정되었다. 일반적인 화학 패널이 수행되었다 (Roche Diagnostics [Indianapolis, IN, USA] Hitachi 917 Analyzer and reagents). HLA 클래스 II 대립유전자는 PCR 증폭 및 서열 특이적 혼성화로 측정되었다. β-세포 기능은 자극된 C-펩타이드 분비를 통해 측정되었다. 본 실험의 사전 지정된 주요 결과는 24개월 방문(visit)에 수행된, 4-h MMTT2의 처음 2시간 자극된 C-펩타이드 반응의 곡선 아래 부위(AUC)의 비교이다. 4-h MMTTs는 베이스라인 및 24개월에 수행되었고; 2-h MMTTs는 3, 6, 12, 및 18 개월에 획득되었다. 그들의 2년 방문 MMTT가 완성된 환자는 일차 결과 평가에 포함되었다. 2년 치료 단계의 완료 이후, 참가자들은 매 6개월 마다 MMTT를 포함하여, 안전성 및 효율성 평가를 계속하기 위해 2년 후속 단계에 들어갔다(더블 블라인드로 남아있는 연구). 사전 지정된 2차 결과물은 포함된다: 시간에 따른 C-펩타이드의 경사, 0.2 nmol/L 미만의 C-펩타이드 피크의 손실의 발생정도에 그룹간의 차이, 시간에 따른 HbA1c 및 인슐린 투여량의 차이, 및 안정성. 사전 지정된 하위그룹 인자는 연령, 성별, 인종, 베이스라인 C-펩타이드, 베이스라인 인슐린 사용, 베이스라인 HbA1c, 및 HLA 형태를 포함한다.

실시예 3 - 통계적 분석(Statistical analyses)

스폿파이어(Spotfire) S+ 8.1, 통계 분석 소프트웨어가 모든 분석을 위해 사용되었다. 108 참여자들의 샘플 사이즈는 0.05 수준(한 측면)에서 실험을 사용하여, 플라시보 그룹에 비해 상승 평균(geometric mean) C-펩타이드에 50% 증가를 검출하기 위해 85% 힘을 제공하기 위해, 후속에 10% 손실 및 대조군에 비해 치료에 2:1 할당과 함께 (측정된 0.248의 평균 및 0.179 SD 기초하여, 변형된 스케일에서) 계획되었다. 모든 분석은 알려진 측정과 함께 집단(cohort)을 치료하는데 사전 지정된 의도에 기초한다. 결측치 값(missing values)은 무작위로 누락된 것으로 가정하였다. 비록 실험의 설계가 일 측면 가설 검증에 기초하더라도, 일차 및 이차 종점(endpoints)의 치료 비교 치료 의도와 관련된 p 수치는 양면이다. 종점 치료 효과에 대한 중간(Interim) 분석은 수행되었고 오브라이언-플레밍 바운더리(O'Brien-Fleming boundaries)와 함께 란 및 드멧(Lan and DeMets)의 방법에 따라 데이터 및 안전성 모니터링 보드에 한번 보고되었다. (Lan KKG, DeMets DL. Biometrika 1983; 70: 659-63.) C-펩타이드 평균 AUC, HbA1c, 및 총 일일 인슐린 투여량에 대한 사전 지정된 분석 방법은 연령, 성별, 및 가변성에 의존한 베이스라인 수치, 및 치료 과제에 조정된 공분산 모델의 분석이다. 각 치료군에 대한 예상된 평균 및 관련된 95% 신뢰 구간(Cis)은 다른 공분산의 평균에 설정되었다. 치료 효과와 관련된 현저한 수준은 워드 테스트로부터(적합한 모델로부터)이다. log(XC-Pep + 1)의 일반적 변화는 C-펩타이드 AUC 평균, 및 적절하다고 제안된 잔여물의 일반적인 플롯(plots)에 대해 사전 지정된다. C-펩타이드 평균 AUC는 2-h 간격으로 나뉜 AUC(즉, AUC/120)와 동일하다. AUC는 MMTT 동안 C-펩타이드의 정기 측정으로부터 사다리꼴 규칙을 사용하여 계산된다. 0.2 nmol/L (상기 수준은 합병증의 감소된 위험과 관련됨) 미만의 첫번째 자극된 피크 C-펩타이드에 대한 시간은 표준 생존 방법(콕스 모델(Cox model) 및 카플란-메이어 방법(Kaplan-Meier method))으로 분석되었다. 부작용 등급은 윌콕슨 순위 합 테스트(Wilcoxon rank sum test)로 분석되었다. (Agresti A. Categorical data analysis. New York, NY, USA: John Wiley and Sons, 1990.) C-펩타이드 평균 AUC 6 내지 24개월의 변화의 평균 속도는 연령, 성별, 베이스라인 C-펩타이드 평균 AUC, 및 치료 과제에 조정된 무작위 절편(intercept) 및 경사와 함께 혼합 효과 모델로 측정되었다. 초기 적합성(fit)은 치료 효과 및 시간의 고정된 상호작용을 포함하나, 0이 아닌 어느 통계상의 증거의 부재로 인해 제거된다. 전체 기간에 따른 치료 효과의 측정을 위해, 우리는 구조가 없이 시간을 정의하고 6달 간격으로 그룹화하여 유사한 혼합 모델을 차이가 있는 데이터에 맞추었다.

실시예 4 - 결과(Results)

본 연구에 등록된 112명의 환자의, 77명은 아바타셉트로 실험적 치료를 받기 위해 무작위로 할당되고 35명은 플라시보를 받는 것으로 할당되었다. 표 1은 두 그룹의 베이스라인 특성을 요약하였다. 유일하게 주목할만한 불균형은 아바타셉트 그룹에 비해 플라시보 그룹 내 남자의 보다 높은 비율 및 플라시보 그룹 내 높은 평균 HbA1c이다. 치료군에 의해 실제로 관리된 주입의 횟수는 윌콕슨 순위 합 테스트를 사용하여 비교되었고; 현저한 차이는 발견되지 않았다(p=0.61). 종합적으로, 3024 잠재적 주입의 2514(83%)가 주어졌고, 주어지지 않은 다수는 프로토콜에 따랐다(예를 들어, 발달된 EBV 감염 또는 임신한 환자). 738 중 689 (93%) 예상된 MMTTs가 수행되었다. 2년차에 1차 분석에, 아바타셉트에 할당된 참여자는 플라시보에 할당된 이들에 대해 0.266 nmol/L (0.171-0.368)에 비해 자극된 C-펩타이드 2-h AUC의 0.375 nmol/L (95% CI 0.290-0.465) 기하평균을 가졌다. 2년차에 조정된 인구 C-펩타이드 평균 2-h AUC는 아바타셉트 그룹에 0.378 nmol/L 및 플라시보 그룹에 0.238 nmol/L였으며; 따라서 2년차에 C-펩타이드 AUC는 아바타셉트(p=0.0029)가 높은 59%(95% CI 6.1-112)였다. 베이스라인 HbA1c가 공변인(covariate)으로 추가될 때 결과는 변하지 않고 현저하였다(p=0.0028). 베이스라인 내지 2년 평가(일차 종점)까지 C-펩타이드 농도의 차이를 다루기 위해, 3, 6, 12, 및 18개월에 대한 C-펩타이드 결과는 분리되어 모델화되었다.

도 1은 2년 이상 적응된 인구 C-펩타이드 평균 2-h AUC를 나타낸다. 아바타셉트를 받은 환자는 플라시보에 할당된 이들에 비해 6, 12, 및 18개월에 현저하게 높은 평균 AUC 및 전체적으로 모든 시점에 가졌다 (p=0.0022). C-펩타이드의 감소를 지연시키는 치료의 효과를 계산하기 위해, 시간에 따른 치료군에 의해 C-펩타이드 AUC 평균의 예견된 인구 평균을 계산하였다(도 2). 라인은6, 12, 18, 및 24 개월에 MMTTs로부터 모든 사용가능한 데이터를 사용하여 혼합된 선형 모델의 피팅(fitting)에 기초하였다. 경사 및 치료의 상호작용 기간에 대해 적합한 개선을 위한 실험을 할 때 (즉, 두 치료군이 다른 C-펩타이드 부패 속도를 갖는 증거를 실험), 이러한 결과는 현저하지 않았다(p=0.85). 결과적으로, 동일한 경사를 가정하는 유사한 모델이 사용되었고 도 2에 이들 결과를 나타내었다. 따라서, 플라시보 그룹 처럼 동일한 수준으로 떨어지기 위해 아바타셉트 그룹의 평균으로 측정된 지체 시간은 9.6 개월이었다(95% CI 3.47-15.6). 24개월 평가에 의해, 아바타셉트 그룹 내 (32%) 환자는 플라시보(도 3)에 15 (43%) 환자에 비해, 0.2 nmol/L 미만의 자극된 C-펩타이드 AUC 피크를 가졌다. 0.2 nmol/L 이하에 들어가도록 피크 C-펩타이드의 조정된 상대적인(아바타셉트 대비 플라시보 그룹) 위험은 0.433 (95% CI 0.218-0.861)이다. 후속적인 24개월 동안, 비록 HbA1c가 또한 베이스라인에서 낮더라도, 아바타셉트 그룹은 플라시보 그룹(전체적으로 모든 시점에 대해, p=0.002)에서 한 것에 비해 낮은 조정된 평균 HbA1c (도 4A)를 가진다. 그렇더라도, 베이스라인에 차이에 대한 조정 이후에도, 24개월 이상 치료군 차이가 계속되었다(p=0.0071). 연구 결과, 아바타셉트에 34명 (47%) 환자는 플라시보에 8명 (26%)에 비해 7% 낮은 HbA1c를 가졌다. 이는 특히 주목할만한 점은 모든 환자들의 86%는 18세 이하인 것이다; 이러한 그룹 내 HbA1c은 ADA 연령 특이적 목표 HbA1c로 보다 낫다. 아바타셉트 그룹 내 참여자들은 연구 도중 일부 시점에서(6 및 12 개월) 낮은 인슐린 투여량을 가졌으나, 24개월에, 두 그룹 내 인슐린 투여량은 유사하였다 (도 4; 24개월에 p=NS, 그러나 초기 시점에 차이로 인해, 전체적으로 모든 시점에 p=0.040).

도 5는 연령, 성별, 인종, 베이스라인 C-펩타이드, 베이스라인 인슐린 사용, 베이스라인 HbA1c, 및 HLA 타입에 치료 효과의 균질성 실험 결과를 나타낸다. 비-백인 참여자들 내 아바타셉트의 분명한 역효과는 가설 생성일 수 있으나 , 그룹 크기는 작다.

표 2 및 표 3은 안정성 및 부작용 사례를(adverse events) 요약하였다. 아바타셉트는 내 약성되었다(well tolerated). 주입 관련된 유해 사례는 낮은 빈도로 나타났으며(27명 환자들을 포함하는 2514 주입의 47 [2%]) 임상적으로 현저하지 않았다. 이들의, 36 반응은 아바타셉트에 77명 중 17명(22%) 환자들에 발생하였고 11 반응은 플라시보에 35명 중 6명 (17%)이었다(p=피셔(Fisher's) 추출 실험에 의한 참여자들의 비율에 대해 p=0.62). 전체 이상 반응 속도(실험적 비정상 포함)는 두 그룹 사이에 차이 없이 낮았다. 구체적으로, 감염(EBV 포함) 또는 호중구 감소증(neutropenia)(아바타셉트에 환자의 7명[9%], 플라시보에 5명[14%]에 발생한)에 증가는 없었다. 유해 사례로 보고된 저혈당증의 7가지 사건이 있으며, 그들 가운데 2가지는 심각한 저혈당증 이었다(각 그룹의 하나). 하기 표 2는 유해 효과의 최악(worst) 등급에 의한 환자의 수를 나타내었다.

	아바타셉트 (n=77)	플라시보 (n=35)
없음	14 (18%)	8 (23%)
등급 1	1 (1%)	1 (3%)
등급 2	44 (57%)	17 (49%)
등급 3	12 (16%)	7 (20%)
등급 4	5 (6%)	2 (6%)
등급 5 1	(1%)*	0

데이터는 n(%)이다. 치료군에 의한 최악 등급은 윌콕슨 순위 합 실험과 통계적으로 차이가 없다. *사고사는 본 연구와 무관함.

하기 표 3은 유해 사례의 형태에 의한 사례 및 환자의 수를 나타내었다.

	아바타셉트 (n=77)	플라시보 (n=35)	아바타셉트 (n=77)	플라시보 (n=35)
	사례의 수	사례를 갖는 환자의 수	사례의 수	사례를 갖는 환자의 수
알러지/면역(immunology)	3	2 (3%)	0	0
청각/귀	3	3 (4%)	0	0
혈액/골수	16	11 (14%)	18	6 (17%)
심부정맥	1	1 (1%)	1	1 (3%)
심장(Cardiac), 일반(general)	2	2 (3%)	0	0
체질 증상	19	15 (19%)	2	2 (6%)
죽음*	1	1 (1%)	0	0
피부학(Dermatology)/피부	15	13 (17%)	5	4 (11%)
내분비	4	4 (5%)	2	2 (6%)
위장	30	18 (23%)	11	7 (20%)
감염	63	32 (42%)	31	15 (43%)
저혈당증	5	3 (4%)	2	1 (3%)
대사(Metabolic)/실험(laboratory)†	8	6 (8%)	4	2 (6%)
근골격계/연조직	13	11 (14%)	7	6 (17%)
신경계	13	8 (10%)	3	2 (6%)
안구/시각(visual)	3	3 (4%)	1	1 (3%)
통증	7	6 (8%)	5	4 (11%)
폐/상기도	20	10 (13%)	7	4 (11%)
신장/비뇨 생식기	0	0	1	1 (3%)
이차성암	1	1 (1%)	0	0
성/생식 기능	1	1 (1%)	0	0
수술(Surgery)/수술중(intraoperative) 부상	2	2 (3%)	0	0
증후군	9	9 (12%)	5	5 (14%)
총계	239		105

데이터는 n 또는 n(%)이다. 치료군에 의한 역효과 카테고리는 일 측면(아바타셉트 그룹 내 높은 빈도의 대안) 피셔 추출 실험(Fisher's Exact Test)으로 실험되었다; 오직 체질 증상이 현저하였다(p=0.049). *사고사는 본 연구와 무관. †저혈당증이 아닌 다른 것.

실시예 5 - 결론

결과는 아바타셉트로 2년 이상 공동 자극은 9.6 개월에 최근 발병 제1형 당뇨병 내 β-세포 기능에 감소를 지연시키는 것을 나타낸다. 비록 질병 경로가 몇 년 동안 진행되고 있는 것으로 추정되더라도, 초기 유익한 효과는 제1형 당뇨병의 임상적 진단 시간 부근에 T-세포 활성화가 여전히 발생하는 것을 제안한다. 그러나, 24개월 이상 아바타셉트의 지속된 투여에도 불구하고, 아바타셉트 그룹 내 β-세포 기능의 감소는 혼합된 모델 결과의 기초에 플라시보 그룹과 평행한다. 이러한 β-세포 기능의 지속적인 감소는 우리에게 계속적인 T-세포 활성화가 질병 진행의 임상적 경로로써 진정된다는 추측을 유발한다. 그럼에도 불구하고, 플라시보 그룹으로부터 차이는 약물 투여 동안 유지된다. 추가적인 관측은 매달 아바타셉트 주입의 중지 이후에 유익한 효과가 지속되는지에 따라 설정될 것이다. 이들 환자의 후속 조치는 약물 유익한 효과가 적어도 1년의 약물 투여 이후에 지속되는 것을 나타낸다.

아바타셉트는 내약성 되었고, 유해 사례에 두 그룹간의 차이는 없었다. 그러나, 임상적 적용에 잠재적 한계는 생백신이 아바타셉트 치료의 3개월 내에 사용될 수 없는 것이다. 이러한 요소는 목표 인구의 어린 연령의 관점에서 중요할 수 있다. 주요한 효과는 β-세포 기능의 감소의 차후 재개와 함께 치료의 시작 이후에 일찍 발생하는 것으로 보인다. 이러한 패턴은 항-CD3, 항-CD20, 및 GAD-65 백신의 효과를 연상시키며, 이들 모두는 대조군에 평행하는 β-세포 기능 감소 이후에 따르는 일부 효과를 나타낸다. 그러나 이러한 접근은 이것이 다른 개입(interventions) 요청된(enlisted) 것과 달리 주목할 만한 부작용이 미약하거나 없는 것이 두드러진다. 이러한 결과는 T-세포 활성화가 중요한 진단 이후에 이른 기회의 창이 있다는 우리의 생각과 일치한다. 본 연구에서 24개월에 플라시보에 비해 아바타셉트로 59% 높은 평균 AUC C-펩타이드는 연령, 무작위 시간에 질병 기간, 및 베이스라인 HbA1c를 포함하는, 중요한 베이스라인 특징에 차이 때문에 비록 연구의 직접적인 비교가 어렵더라도, 이들 다른 개입에 보여지는 것과 유사하다. 게다가, 본 연구는 아바타셉트가 연구 전체를 통해 지속적으로 투여되는 반면, 항-CD3, 항-CD20, 및 GAD-65 백신의 경우에는 약물의 투여가 무작위화 이후 2-4 주 내에 완료되어, 그러한 연구들과 다르다. 결정적으로, 본 연구는 짧은 치료 프로토콜(protocol)이 2년 이상 향상된 C-펩타이드 분비를 유지하기에 충분한지 또는 치료의 지속이 2년 이후에도 필요한지에 대해 설정하는 것은 설계되지 않았다. 아바타셉트의 완성된 그들의 코스를 가지는 모든 환자와 함께, 본 연구의 진행중인 후속 절차는 약물의 중단 이후에 향상된 C-펩타이드 분비가 유지되는지 및 얼마나 오래 가는지 조사될 것이다. 하나의 항-CD3 실험 내 환자의 장기 후속 조치는 3년 이후에 치료 및 플라시보 그룹 간에 C-펩타이드 분비에 차이를 절감하는 것을 보였다. 이는 치료 이후 일년 데이터가 유익한 효과가 유지되는 것을 보이는 것처럼, 아바타셉트 처리된 것과 플라시보 그룹 간의 C-펩타이드 보존에 차이가 감소되지 않은(플라시보 그룹에 비해 3년에 아바타셉트 그룹 내 62% 이상 C-펩타이드), 아바타셉트의 경우에는 해당되지 않는다. 추가로, 아바타셉트 처리된 그룹 HbA1c는 치료 1년 이후에도 현저하게 나음을 유지하였다.

아바타셉트 그룹 내, 평균 HbA1c는 비록 이것이 또한 베이스라인에서 보다 낮더라도, 실험 전체에 걸쳐 플라시보 그룹에 비해 낮다. 아바타셉트 처리된 그룹 내 18개월 동안 7% 미만 HbA1c의 유지는 연구 참여자들의 96명(86%)가 18살 또는 그 미만이므로, 주목 할만하다. 이러한 향상된 수준에서 HbA1c의 임상적 중요성은 잘 알려져 있다. (The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. N Engl J Med 1993; 329: 977-86.) 인슐린은 두 그룹 사이에 유사하며 따라서 HbA1c 내 차이에 기여하지 않는다. 본 실험에서, 최근 제1형 당뇨병이 발병한 아바타셉트 처리된 환자는 연구 약물 투여의 2년 동안, C-펩타이드에 의해 측정되는, 더욱 내인성인 인슐린 생산을 가진다. 아바타셉트의 중단 이후에 이들의 효과의 지속 기간은 이들 환자의 후속 조치의 진행에서 실험된다. 일년 이후 치료 데이터는 아바타셉트의 유익한 효과가 약물 투여 이후 적어도 1년 동안 지속됨을 보였다. 환자들은 추가적으로 추적되었다. 2년 이상 투여된 아바타셉트는 제1형 당뇨병을 갖는 환자에 우수한 안정성 프로필(profile)을 보였다. 이의 주요한 효과는 치료의 시작 이후에 초기에 발생하는 것으로 보이나, 추가적인 연구는 자가면역 과정에서 본 약물이 자가면역을 지연시키는 데 얼마나 효과적일 수 있는지 테스트가 필요하다. 이들 접근은 아바타셉트의 피하 형태로 더욱 용이하게 실험될 수 있다.

본 발명에 사용된 부문 제목(section headings)은 오직 구성 상의 목적을 위한 것이며 어떠한 방법으로도 본 발명의 주제를 제한하는 것으로 해석되는 것은 아니다.

출원인의 교시가 다양한 실시예와 결합하여 설명되는 반면, 이는 출원인의 교시가 이러한 실시예에 제한되는 것을 의도하는 것은 아니다. 반면에, 출원인의 교시는 기술분야에서 통상의 기술자에 의해 인식될 수 있는, 다양한 대안, 변형, 및 동등물을 포함한다.

Claims

T-세포 공동 자극(co-stimulation) 길항제 및 면역글로불린 분자의 일부를 포함하는 융합 단백질 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 개체 내 당뇨병(diabetes mellitus)의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 T-세포 공동 자극 길항제는 CTLA4의 세포외 도메인, 세포외 도메인의 유효 절편 또는 세포외 도메인의 면역학적 활성 변이체를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 T-세포 공동 자극 길항제는 B 세포 및/또는 항원 제시 세포(APCs)에서 발현되는 B7 항원에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 아바타셉트(Abatacept)를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 염으로써 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 추가적으로 오일 베이스 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제6항에 있어서, 상기 오일 베이스 담체는 유중수 에멀전인 것을 특징으로 하는 방법.
제6항에 있어서, 상기 오일 베이스 담체는 수중유 에멀전인 것을 특징으로 하는 방법.
제6항에 있어서, 상기 오일 베이스 담체는 IFA인 것을 특징으로 하는 방법.
제6항에 있어서, 상기 오일 베이스 담체는 몬타니드 ISA(Montanide ISA)인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 정맥내 주입으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 생리 식염수 약 50 내지 200 ml 내 정맥내 주입으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약 5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg 범위의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제11항에 있어서, 상기 조성물의 정맥내 주입은 수회 반복되는 것을 특징으로 하는 방법.
제11항에 있어서, 상기 조성물의 정맥내 주입은 약 1주 내지 약 2개월의 시간 간격에 따라 적어도 한번 반복되는 것을 특징으로 하는 방법.
제11항에 있어서, 상기 조성물은 약 250 내지 2000 mg의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제16항에 있어서, 상기 조성물은 500 mg의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제16항에 있어서, 상기 조성물은 750 mg의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제16항에 있어서, 상기 조성물은 1000 mg의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 자가 면역(auto-aggressive) T-세포의 활성화를 억제하는 치료 효과의 지표로써 시간이 지남에 따라 개체로부터 수득된 혈액 샘플 내 C-펩타이드의 수준을 결정하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제20항에 있어서, 상기 자가 면역 T-세포의 활성화를 억제하는 조성물의 효과는 표준에 비해 C-펩타이드 생산의 유지 또는 C-펩타이드 생산의 감소 지연에 의해 표시되는 것을 특징으로 하는 방법.
제20항에 있어서, 상기 자가 면역 T-세포의 활성화를 억제하는 조성물의 효과는 표준에 비해 향상된 HbA1c 또는 상기 개체에 의한 인슐린 사용의 감소에 의해 표시되는 것을 특징으로 하는 방법.
제20항에 있어서, 상기 개체 내 C-펩타이드 생산의 감소는 적어도 6개월 동안 지연되는 것을 특징으로 하는 방법.
제20항에 있어서, 상기 개체 내 C-펩타이드 생산의 감소는 적어도 9개월 동안 지연되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 백인(white)인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체 내 진성 당뇨병의 치료는 진성 당뇨병에 대한 위험에 처한 개체 내 당뇨병의 발병을 예방하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체 내 진성 당뇨병의 치료는 진성 당뇨병에 대한 위험에 처한 개체 내 적어도 6개월 동안 당뇨병의 발병을 지연시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.