KR20150013949A - 항암요법에 반응할 가능성이 증가된 환자를 확인하는 방법 - Google Patents

항암요법에 반응할 가능성이 증가된 환자를 확인하는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 VEGF 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 환자를 확인하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항암요법에 대한 환자의 반응을 모니터링하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 방법들에서 사용될 키트 및 제품에 관한 것이다.

Description

항암요법에 반응할 가능성이 증가된 환자를 확인하는 방법{METHOD TO IDENTIFY A PATIENT WITH AN INCREASED LIKELIHOOD OF RESPONDING TO AN ANTI-CANCER THERAPY}
본 발명은 어떤 환자가 항암제를 사용한 치료로부터 가장 많은 이익을 얻을 것인지를 확인하는 방법, 및 항암제를 사용한 치료에 대한 환자의 민감성 및 반응성에 대해 환자를 모니터링하는 방법에 관한 것이다.
관련 출원
본원은 2010년 7월 19일자로 출원된 유럽 특허출원 제10170004.5호 및 제10170008.6호, 및 2010년 11월 17일자로 출원된 미국 가출원 제61/414,853호, 61/414,859호 및 제61/414,861호(이들 각각의 개시내용은 모든 목적을 위해 전체적으로 본원에 참고로 도입됨)에 관한 것이다.
암은 인간 건강에 가장 치명적인 위험들 중 하나이다. 미국에서만, 암은 매년 약 130만명의 새로운 환자들에게 영향을 미치고 심혈관 질환 다음으로 사망의 두 번째 주요 원인이고 사망의 약 4분의 1을 차지한다. 고형 종양이 이들 사망의 대다수의 원인이다. 일부 암들의 의학적 치료에 있어서 상당한 진보가 있지만, 모든 암들의 전체 5년 생존율은 과거 20년 동안 약 10%까지만 개선되었다. 암 또는 악성 종양은 전이하고 비-조절된 방식으로 급속히 성장하여 시기적절한 검출 및 치료를 매우 어렵게 만든다.
암의 종류에 따라 환자들은 전형적으로 화학요법, 방사선 및 항체 계열 약물을 포함하는, 그들에게 이용될 수 있는 여러 치료 방법을 갖는다. 상이한 치료 섭생법으로부터 임상적 결과를 예측하는 데에 유용한 진단 방법은 이들 환자들의 임상적 관리에 매우 유익할 것이다.
따라서, 어떤 환자가 어떤 치료에 반응할 것인지를 확인하는 보다 효과적인 수단, 및 (단독 약제로서 사용되거나 다른 약제와 조합되어 사용되는) 항암요법을 사용하는 보다 효과적인 환자 치료 섭생법 내로 상기 확인된 결과를 도입하는 보다 효과적인 수단이 필요하다.
본 발명은 항암제, 예를 들면, 혈관 내피 성장 인자(VEGF)-A 길항제, 예컨대, 베바시주마브(bevacizumab)를 사용한 치료에 반응할 환자를 확인하는 방법을 제공한다.
본 발명의 한 실시양태는 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, VEGF 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 환자를 확인하는 방법으로서, 이때 (예를 들면, 기준 샘플과 비교될 때) 상기 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 수준이 기준 수준 이상인 것이 상기 환자가 상기 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있다는 것을 표시하는, 방법을 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 암은 대장암, 교모세포종, 신장암, 난소암, 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함), 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함), 위암 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시양태에서, 환자로부터 수득된 샘플은 전혈, 혈장, 혈청 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 구성원이다. 몇몇 실시양태에서, VEGF110 수준은 단백질 수준이다. 몇몇 실시양태에서, VEGF110 단백질 수준은 VEGF110 혈장 단백질 수준의 측정에 의해 결정된다. 몇몇 실시양태에서, 기준 수준 이상인 VEGF110의 혈장 수준은 환자가 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 수 있거나, 상기 항암요법에 반응할 가능성이 보다 더 높거나, 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것을 표시한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제2 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 동시에 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 순차적으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제3 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 동시에 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 순차적으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, VEGF-A 길항제는 항체이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 베바시주마브이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함)이고, 제2 항암요법은 독세탁셀(docetaxel)이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함)이고, 제2 항암요법은 젬시타빈(gemcitabine)이고, 제3 항암요법은 에를로티니브(erlotinib)이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 위암이고, 제2 항암요법은 카페시타빈(capecitabine)이고, 제3 항암요법은 시스플라틴(cisplatin)이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 폐암이고, 제2 항암요법은 젬시타빈이고, 제3 항암요법은 시스플라틴이다.
본 발명의 추가 실시양태는 암을 앓는 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료에 대한 상기 환자의 반응성을 예측하는 방법으로서, 이때 (예를 들면, 기준 샘플과 비교될 때) 상기 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 수준이 기준 수준 이상인 것이 상기 환자가 상기 항암요법을 사용한 치료에 반응할 가능성이 보다 더 높다는 것을 표시하는, 방법을 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 암은 대장암, 교모세포종, 신장암, 난소암, 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함), 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함), 위암 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시양태에서, 환자로부터 수득된 샘플은 전혈, 혈장, 혈청 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 구성원이다. 몇몇 실시양태에서, VEGF110 단백질 수준은 VEGF110 혈장 단백질 수준의 측정에 의해 결정된다. 몇몇 실시양태에서, 기준 수준 이상인 VEGF110의 혈장 수준은 환자가 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 수 있거나, 상기 항암요법에 반응할 가능성이 보다 더 높거나, 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것을 표시한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제2 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 동시에 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 순차적으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제3 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 동시에 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 순차적으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, VEGF-A 길항제는 항체이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 베바시주마브이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 베바시주마브이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함)이고, 제2 항암요법은 독세탁셀이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함)이고, 제2 항암요법은 젬시타빈이고, 제3 항암요법은 에를로티니브이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 위암이고, 제2 항암요법은 카페시타빈이고, 제3 항암요법은 시스플라틴이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 폐암이고, 제2 항암요법은 젬시타빈이고, 제3 항암요법은 시스플라틴이다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 암을 갖는 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 상기 환자가 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성을 측정하는 방법으로서, 이때 (예를 들면, 기준 샘플과 비교될 때) 상기 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 수준이 기준 수준 이상인 것이 상기 환자가 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것을 표시하는, 방법을 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 암은 대장암, 교모세포종, 신장암, 난소암, 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함), 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함), 위암 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시양태에서, 환자로부터 수득된 샘플은 전혈, 혈장, 혈청 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 구성원이다. 몇몇 실시양태에서, VEGF110 단백질 수준은 VEGF110 혈장 단백질 수준의 측정에 의해 결정된다. 몇몇 실시양태에서, 기준 수준 이상인 VEGF110의 혈장 수준은 환자가 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 수 있거나, 상기 항암요법에 반응할 가능성이 보다 더 높거나, 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것을 표시한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제2 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 동시에 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 순차적으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제3 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 동시에 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 순차적으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, VEGF-A 길항제는 항체이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 베바시주마브이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 베바시주마브이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함)이고, 제2 항암요법은 독세탁셀이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함)이고, 제2 항암요법은 젬시타빈이고, 제3 항암요법은 에를로티니브이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 위암이고, 제2 항암요법은 카페시타빈이고, 제3 항암요법은 시스플라틴이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 폐암이고, 제2 항암요법은 젬시타빈이고, 제3 항암요법은 시스플라틴이다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법의 치료 효과를 최적화하는 방법으로서, 이때 (예를 들면, 기준 샘플과 비교될 때) 상기 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 수준이 기준 수준 이상인 것이 상기 환자가 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것을 표시하는, 방법을 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 암은 대장암, 교모세포종, 신장암, 난소암, 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함), 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함), 위암 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시양태에서, 환자로부터 수득된 샘플은 전혈, 혈장, 혈청 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 구성원이다. 몇몇 실시양태에서, VEGF110 단백질 수준은 VEGF110 혈장 단백질 수준의 측정에 의해 결정된다. 몇몇 실시양태에서, 기준 수준 이상인 VEGF110의 혈장 수준은 환자가 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 수 있거나, 상기 항암요법에 반응할 가능성이 보다 더 높거나, 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것을 표시한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제2 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 동시에 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 순차적으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제3 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 동시에 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 순차적으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, VEGF-A 길항제는 항체이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 베바시주마브이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 베바시주마브이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함)이고, 제2 항암요법은 독세탁셀이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함)이고, 제2 항암요법은 젬시타빈이고, 제3 항암요법은 에를로티니브이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 위암이고, 제2 항암요법은 카페시타빈이고, 제3 항암요법은 시스플라틴이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 폐암이고, 제2 항암요법은 젬시타빈이고, 제3 항암요법은 시스플라틴이다.
본 발명의 추가 실시양태는 환자로부터 수득된 샘플이 (예를 들면, 기준 샘플과 비교될 때) 기준 수준 이상의 VEGF110의 수준을 갖는지를 확인하는 단계, 및 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 유효량으로 상기 환자에게 투여하여 암을 치료하는 단계를 포함하는, 상기 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 암은 대장암, 교모세포종, 신장암, 난소암, 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함), 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함), 위암 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시양태에서, 환자로부터 수득된 샘플은 전혈, 혈장, 혈청 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 구성원이다. 몇몇 실시양태에서, VEGF110 단백질 수준은 VEGF110 혈장 단백질 수준의 측정에 의해 결정된다. 몇몇 실시양태에서, 기준 수준 이상인 VEGF110의 혈장 수준은 환자가 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 수 있거나, 상기 항암요법에 반응할 가능성이 보다 더 높거나, 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것을 표시한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제2 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 동시에 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 순차적으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제3 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 동시에 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제는 순차적으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, VEGF-A 길항제는 항체이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 베바시주마브이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 베바시주마브이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함)이고, 제2 항암요법은 독세탁셀이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함)이고, 제2 항암요법은 젬시타빈이고, 제3 항암요법은 에를로티니브이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 위암이고, 제2 항암요법은 카페시타빈이고, 제3 항암요법은 시스플라틴이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 폐암이고, 제2 항암요법은 젬시타빈이고, 제3 항암요법은 시스플라틴이다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 환자가 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는지를 확인하기 위한 키트로서, 하나 이상의 생체마커의 수준을 측정함으로써 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료에 대한 환자의 반응성을 예측하기 위한 화합물 세트를 포함하는 키트를 제공하고, 이때 기준 수준(예를 들면, 기준 샘플 중의 VEGF110의 수준) 이상의 VEGF110의 수준은 상기 환자가 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있다는 것을 표시한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 화합물은 단백질이다. 몇몇 실시양태에서, 상기 단백질은 항체이다.
본 발명의 추가 실시양태는 VEGF110의 수준을 검출하기 위한 화합물 세트로서, VEGF110에 특이적으로 결합할 수 있는 1종 이상의 화합물을 포함하는 화합물 세트를 제공한다. 바람직하게는, 상기 화합물 세트는 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료에 대한 환자의 반응성을 예측하는 데에 사용된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 화합물은 단백질이다. 몇몇 실시양태에서, 상기 단백질은 항체이다.
이들 실시양태 및 다른 실시양태는 하기 상세한 설명에 의해 추가로 기재된다.
도 1: 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브(저 또는 고 투여량) + 독세탁셀 요법 대 플라시보 + 독세탁셀 요법의 경우 전체 생체마커 집단에 대한 무진행 생존에 대한 카플란 메이에르(Kaplan Meier) 곡선. 짧은 쇄선은 플라시보 + 독세탁셀을 나타낸다. 직선은 저 투여량의 베바시주마브(3주마다 7.5 ㎎/㎏) + 독세탁셀을 나타낸다. 긴 쇄선은 고 투여량의 베바시주마브(3주마다 15 ㎎/㎏) + 독세탁셀을 나타낸다.
도 2: 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브(저 투여량) + 독세탁셀 요법 대 플라시보 + 독세탁셀 요법의 경우 이분화된 분석인, 생체마커(플라시보 및 저 투여량 베바시주마브)에 의한 후속 항혈관신생 요법의 시작 전 무진행 생존의 위험 비의 포레스트(Forest) 도표.
도 3: 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브(고 투여량) + 독세탁셀 요법 대 플라시보 + 독세탁셀 요법의 경우 이분화된 분석인, 생체마커(플라시보 및 고 투여량 베바시주마브)에 의한 후속 항혈관신생 요법의 시작 전 무진행 생존의 위험 비의 포레스트 도표.
도 4: 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브(저 또는 고 투여량) + 독세탁셀 요법 대 플라시보 + 독세탁셀 요법의 경우, 저 발현 수준(<125 pg/㎖) VEGFA(도 4a) 및 고 발현 수준(≥125 pg/㎖) VEGFA(도 4b)에 대한 후속 항신생물 요법의 시작 전 무진행 생존의 카플란 메이에르 곡선. 짧은 쇄선은 플라시보 + 독세탁셀을 나타낸다. 직선은 저 투여량의 베바시주마브(3주마다 7.5 ㎎/㎏) + 독세탁셀을 나타낸다. 긴 쇄선은 고 투여량의 베바시주마브(3주마다 15 ㎎/㎏) + 독세탁셀을 나타낸다.
도 5: 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브(저 또는 고 투여량) + 독세탁셀 요법 대 플라시보 + 독세탁셀 요법의 경우, 저 발현 수준(<11 ng/㎖) VEGFR2(도 5a) 및 고 발현 수준(≥11 ng/㎖) VEGFR2(도 5b)에 대한 후속 항신생물 요법의 시작 전 무진행 생존의 카플란 메이에르 곡선. 짧은 쇄선은 플라시보 + 독세탁셀을 나타낸다. 직선은 저 투여량의 베바시주마브(3주마다 7.5 ㎎/㎏) + 독세탁셀을 나타낸다. 긴 쇄선은 고 투여량의 베바시주마브(3주마다 15 ㎎/㎏) + 독세탁셀을 나타낸다.
도 6: 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브(저 또는 고 투여량) + 독세탁셀 요법 대 플라시보 + 독세탁셀 요법의 경우, 조합된 저 발현 수준(수학식 1 < -0.132) 및 조합된 고 발현 수준(수학식 1 ≥ -0.132)의 VEGFA 및 VEGFR2에 대한 후속 항신생물 요법의 시작 전 무진행 생존의 카플란 메이에르 곡선. 직선은 플라시보 + 독세탁셀을 나타낸다. 긴 쇄선은 저 투여량의 베바시주마브(3주마다 7.5 ㎎/㎏) + 독세탁셀을 나타낸다. 짧은 쇄선은 고 투여량의 베바시주마브(3주마다 15 ㎎/㎏) + 독세탁셀을 나타낸다.
도 7: 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브(저 또는 고 투여량) + 독세탁셀 요법 대 플라시보 + 독세탁셀 요법의 경우, 조합된 저 발현 수준(수학식 2 < -0.006) 및 조합된 고 발현 수준(수학식 2 ≥ -0.006)의 VEGFA 및 PLGF에 대한 후속 항신생물 요법의 시작 전 무진행 생존의 카플란 메이에르 곡선. 직선은 플라시보 + 독세탁셀을 나타낸다. 긴 쇄선은 저 투여량의 베바시주마브(3주마다 7.5 ㎎/㎏) + 독세탁셀을 나타낸다. 짧은 쇄선은 고 투여량의 베바시주마브(3주마다 15 ㎎/㎏) + 독세탁셀을 나타낸다.
도 8: 서열번호 1, VEGFA의 예시적인 아미노산 서열.
도 9: 서열번호 2, VEGFR2의 예시적인 아미노산 서열.
도 10: 서열번호 3, PLGF의 예시적인 아미노산 서열.
도 11: IMPACT 칩 상에서 측정된, VEGF111, VEGF121, VEGF165 및 VEGF189의 증가하는 농도의 측정.
도 12: 자동화된 엘렉시스(Elecsys)(등록상표) 분석기 상에서 엘렉시스(등록상표) 분석의 이용을 통해 측정된 VEGF110, VEGF121 및 VEGF165의 증가하는 농도의 측정.
도 13: 수술불가능한 국소적으로 진행된/전이성 위/위식도 선암종에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브 + 카페시타빈/시스플라틴 요법 대 대조군 플라시보 + 카페시타빈/시스플라틴 요법의 경우, 고 발현 수준(>111 pg/㎖) 및 저 발현 수준(≤111 pg/㎖) 둘다에 대한 마커 VEGFA에 대한 전체 생존(도 13a) 및 무진행 생존(도 13b)에 대한 카플란 메이에르 곡선.
도 14: 수술불가능한 국소적으로 진행된/전이성 위/위식도 선암종에 대해 치료받는 아시아-태평양 지역으로부터의 환자를 위한 베바시주마브 + 카페시타빈/시스플라틴 요법 대 대조군 플라시보 + 카페시타빈/시스플라틴 요법의 경우, 고 발현 수준(>111 pg/㎖) 및 저 발현 수준(≤111 pg/㎖) 둘다에 대한 마커 pVEGFA에 대한 전체 생존(도 14a) 및 무진행 생존(도 14b)에 대한 치료 효과와의 관련성에 대한 카플란 메이에르 곡선.
도 15: 수술불가능한 국소적으로 진행된/전이성 위/위식도 선암종에 대해 치료받는 비-아시아-태평양 지역으로부터의 환자를 위한 베바시주마브 + 카페시타빈/시스플라틴 요법 대 대조군 플라시보 + 카페시타빈/시스플라틴 요법의 경우, 고 발현 수준(>111 pg/㎖) 및 저 발현 수준(≤111 pg/㎖) 둘다에 대한 마커 VEGFA에 대한 전체 생존(도 15a) 및 무진행 생존(도 15b)에 대한 치료 효과와의 관련성에 대한 카플란 메이에르 곡선.
도 16: 전이성 췌장암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브 + 젬시타빈-에를로티니브 요법 대 대조군 플라시보 + 젬시타빈-에를로티니브 요법의 경우 전체 생존(도 16a) 및 무진행 생존(도 16b)에 대한 카플란 메이에르 곡선. 도면에서, 직선은 베바시주마브/젬시타빈-에를로티니브 치료를 나타내고, 점선은 플라시보/젬시타빈-에를로티니브 치료를 나타낸다.
도 17: 전이성 췌장암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브 + 젬시타빈-에를로티니브 요법 대 대조군 플라시보 + 젬시타빈-에를로티니브 요법의 경우, 고 발현 수준(≥152.9 pg/㎖) 및 저 발현 수준(<152.9 pg/㎖) 둘다에 대한 마커 VEGFA에 대한 전체 생존에 대한 치료 효과와의 관련성(도 17a) 및 마커 VEGFA에 대한 무진행 생존에 대한 치료 효과와의 관련성(도 17b)에 대한 카플란 메이에르 곡선. 도면에서, 직선은 베바시주마브/젬시타빈-에를로티니브 치료를 나타내고, 점선은 플라시보/젬시타빈-에를로티니브 치료를 나타낸다.
도 18: 전이성 췌장암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브 + 젬시타빈-에를로티니브 요법 대 대조군 플라시보 + 젬시타빈-에를로티니브 요법의 경우, 고 발현 수준(수학식 1 ≥ -0.1) 및 저 발현 수준(수학식 1 < -0.1) 둘다에 대한 조합된 발현 수준으로서 마커 VEGFA 및 VEGFR2(도 18a), 및 고 발현 수준(수학식 2 ≥ -0.042) 및 저 발현 수준(수학식 2 < -0.042) 둘다에 대한 조합된 발현 수준으로서 마커 VEGFA 및 PLGF(도 18b)에 대한 전체 생존에 대한 치료 효과와의 관련성에 대한 카플란 메이에르 곡선. 도면에서, 직선은 베바시주마브/젬시타빈-에를로티니브 치료를 나타내고, 점선은 플라시보/젬시타빈-에를로티니브 치료를 나타낸다.
도 19: 전이성 췌장암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브 + 젬시타빈-에를로티니브 요법 대 대조군 플라시보 + 젬시타빈-에를로티니브 요법의 경우, 고 발현 수준(수학식 1 ≥ -0.1) 및 저 발현 수준(수학식 1 < -0.1) 둘다에 대한 조합된 발현 수준으로서 마커 VEGFA 및 VEGFR2(도 19a), 및 고 발현 수준(수학식 2 ≥ -0.042) 및 저 발현 수준(수학식 2 < -0.042) 둘다에 대한 조합된 발현 수준으로서 마커 VEGFA 및 PLGF(도 19b)에 대한 무진행 생존에 대한 치료 효과와의 관련성에 대한 카플란 메이에르 곡선. 도면에서, 직선은 베바시주마브/젬시타빈-에를로티니브 치료를 나타내고, 점선은 플라시보/젬시타빈-에를로티니브 치료를 나타낸다.
도 20: 전이성 췌장암에 대해 치료받는 환자를 위한 베바시주마브 + 젬시타빈-에를로티니브 요법 대 대조군 플라시보 + 젬시타빈-에를로티니브 요법의 경우, 고 발현 수준(수학식 3 ≥ 0.837) 및 저 발현 수준(수학식 3 < 0.837) 둘다에 대한 조합된 발현 수준으로서 마커 VEGFA, VEGFR2 및 PLGF(도 20a)에 대한 전체 생존에 대한 치료 효과와의 관련성, 및 고 발현 수준(수학식 3 ≥ 0.837) 및 저 발현 수준(수학식 3 < 0.837) 둘다에 대한 조합된 발현 수준으로서 마커 VEGFA, VEGFR2 및 PLGF(도 20b)에 대한 무진행 생존에 대한 치료 효과와의 관련성에 대한 카플란 메이에르 곡선. 도면에서, 직선은 베바시주마브/젬시타빈-에를로티니브 치료를 나타내고, 점선은 플라시보/젬시타빈-에를로티니브 치료를 나타낸다.
도 21: IMPACT 분석으로 2회 측정된 동일 환자로부터의 EDTA 및 시트레이트 샘플로부터의 데이터. VEGFA 농도는 EDTA-시트레이트 방법 비교에 대한 약 0.8의 스페어만(Spearman) 상관계수를 가지면서 시트레이트의 경우보다 EDTA-혈장의 경우 약 40% 더 높다.
I. 도입
본 발명은 VEGF 길항제를 포함하는 항암요법에 반응할 증가된 가능성을 갖는 환자를 확인하는 방법을 제공한다.
II . 정의
일부 실시양태에서, 용어 "증가" 또는 "초과"는 기준 수준 초과의 수준을 의미하거나, 기준 샘플로부터의 VEGF110 수준과 비교될 때 본원에 기재된 방법에 의해 검출된 VEGF110 수준에서의 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% 또는 그 이상의 전체 증가를 의미한다. 일부 실시양태에서, 용어 증가는 VEGF110 수준의 증가를 의미하고, 이때 상기 증가는 예를 들면, 기준 샘플로부터 미리 측정된 VEGF110 수준에 비해 약 1.5배, 1.75배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 75배, 80배, 90배 또는 100배 이상 더 높다. 한 바람직한 실시양태에서, 용어 증가된 수준은 기준 수준 이상의 값에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 본원에서 용어 "감소" 또는 "미만"은 기준 수준 미만의 수준을 의미하거나, 기준 샘플로부터의 VEGF110 수준과 비교될 때 본원에 기재된 방법에 의해 검출된 VEGF110 수준에서의 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 전체 감소를 의미한다. 일부 실시양태에서, 용어 "감소"는 VEGF110 수준에서의 감소를 의미하고, 이때 감소된 수준은 기준 샘플로부터 최대 약 0.9배, 0.8배, 0.7배, 0.6배, 0.5배, 0.4배, 0.3배, 0.2배, 0.1배, 0.05배 또는 0.01배의 VEGF110 수준 또는 이보다 낮은 수준이다.
일부 실시양태에서, 용어 "기준 수준"은 본원에 기재된 방법에 의해 기준 샘플로부터 검출된 VEGF110 수준과 동일한 수준을 의미한다.
일부 실시양태에서, 본원에서 용어 "기준 수준"은 미리 측정된 값을 의미한다. 당업자는 기준 수준이 미리 측정되고 예를 들면, 특이성 및/또는 민감성의 관점에서 요건을 충족시키도록 설정된다는 것을 인식할 것이다. 이들 요건은 예를 들면, 규제기관마다 상이할 수 있다. 예를 들면, 분석 민감성 또는 특이성은 각각 일정 한계, 예를 들면, 80%, 90% 또는 95%로 설정되어야 할 수 있다. 이들 요건은 양성 또는 음성 예측 값의 관점에서 정의될 수도 있다. 그럼에도 불구하고, 본 발명에서 제시된 교시에 근거하여, 이들 요건을 충족시키는 기준 수준에 항상 도달할 수 있을 것이다. 한 실시양태에서, 기준 수준은 건강한 개체에서 측정된다. 한 실시양태에서, 기준 수준은 환자가 속하는 질환체(disease entity)에서 미리 측정된다. 일부 실시양태에서, 기준 수준은 예를 들면, 조사되는 질환체에서 값의 전체 분포의 25% 내지 75% 중 임의의 백분율로 설정될 수 있다. 다른 실시양태에서, 기준 수준은 예를 들면, 조사되는 질환체에서 값의 전체 분포로부터 측정된 중간, 삼분위 또는 사분위로 설정될 수 있다. 한 실시양태에서, 기준 수준은 조사되는 질환체에서 값의 전체 분포로부터 측정된 중간 값으로 설정된다.
본 발명의 내용에서, "VEGF", "VEGFA" 또는 "VEGF-A"는 도 8에 나타낸 서열번호 1(스위스 프롯(Swiss Prot) 접수번호 P15692, 유전자 ID (NCBI): 7422)로 예시된 혈관 내피 성장 인자 단백질 A를 의미한다. 용어 "VEGFA"는 서열번호 1의 아마노산 서열을 갖는 단백질뿐만 아니라 이의 상동체 및 동형체(isoform)도 포함한다. 또한, 용어 "VEGF-A"는 문헌[Ferrara Mol. Biol. Cell 21:687 (2010)], 문헌[Leung et al. Science 246:1306 (1989)] 및 문헌[Houck et al. Mol. Endocrin. 5:1806 (1991)]에 기재된 바와 같이 VEGF165의 플라스민 절단에 의해 발생된 110개 아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자를 포함하는 VEGF-A의 공지된 동형체, 예를 들면, 스플라이스 동형체, 예를 들면, VEGF121, VEGF145, VEGF165, VEGF189 및 VEGF206을 이들의 천연 대립유전자 형태 및 프로세싱된 형태와 함께 포함한다. 본 발명의 내용에서, 용어 "VEGF-A"는 이의 변이체 및/또는 상동체뿐만 아니라 VEGF-A의 단편도 포함하되, 상기 변이체 단백질(동형체를 포함함), 상동성 단백질 및/또는 단편은 하나 이상의 VEGF-A 특이적 항체, 예컨대, 각각 벤더 렐리아 테크(Bender Relia Tech) 및 알앤드디 시스템스(R&D Systems)로부터 입수가능한 항체 클론 3C5 및 26503, 및 문헌[Kim et al., Growth Factors 7(1): 53-64 (1992)]에 기재된 A4.6.1에 의해 인식된다. 본 발명의 내용에서, VEGF, VEGFA 또는 VEGF-A의 용어 "동형체"는 스플라이스 동형체, 및 효소적 절단(예를 들면, 플라스민)에 의해 발생된 형태 둘다를 의미한다.
본 발명의 내용에서, "VEGFR2"는 도 9에 나타낸 서열번호 2(스위스 프롯 접수번호 P35968, 유전자 ID (NCBI): 3791)로 예시된 혈관 내피 성장 인자 수용체 2를 의미한다. 용어 "VEGFR2"는 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 단백질뿐만 아니라 이의 상동체 및 동형체도 포함한다. 본 발명의 내용에서, 용어 "VEGFR2"는 서열번호 2의 아미노산 서열에 대해, 또는 이의 변이체 및/또는 상동체의 아미노산 서열 및 이 서열의 단편에 대해 85% 이상, 90% 이상 또는 95% 이상의 상동성을 갖는 단백질도 포함하되, 상기 변이체 단백질(동형체를 포함함), 상동성 단백질 및/또는 단편은 1종 이상의 VEGFR2 특이적 항체, 예컨대, 알앤드디 시스템스로부터 입수가능한 항체 클론 89115 및 89109에 의해 인식된다.
본 발명의 내용에서, "PLGF"는 도 10에 나타낸 서열번호 3(스위스 프롯 접수번호 P49763, 유전자 ID (NCBI): 5228)으로 예시된 태반 성장 인자를 의미한다. 용어 "PLGF"는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 단백질뿐만 아니라 이의 상동체 및 동형체도 포함한다. 본 발명의 내용에서, 용어 "PLGF"는 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해, 또는 이의 변이체 및/또는 상동체의 아미노산 서열 및 이 서열의 단편에 대해 85% 이상, 90% 이상 또는 95% 이상의 상동성을 갖는 단백질도 포함하되, 상기 변이체 단백질(동형체를 포함함), 상동성 단백질 및/또는 단편은 1종 이상의 PLGF 특이적 항체, 예컨대, 로슈 다이아그노스틱스 게엠베하(Roche Diagnostics GmbH)로부터 입수가능한 항체 클론 2D6D5 및 6A11D2에 의해 인식된다.
또한, 용어 "VEGF"는 비-인간 종, 예컨대, 마우스, 래트 또는 영장류로부터의 VEGF를 의미한다. 종종, 특정 종으로부터의 VEGF는 용어, 예컨대, 인간 VEGF에 대해 hVEGF, 뮤린 VEGF에 대해 mVEGF 등으로 표시된다. 또한, 용어 "VEGF"는 165개 아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자의 아미노산 8 내지 109 또는 1 내지 109를 포함하는 절두된(truncated) 형태의 폴리펩티드를 의미하기 위해 사용된다. 임의의 이러한 형태의 VEGF에 대한 언급은 본원에서 예를 들면, "VEGF(8-109)," "VEGF(1-109)" 또는 "VEGF165"에 의해 확인될 수 있다. "절두된" 천연 VEGF에 대한 아미노산 위치는 천연 VEGF 서열에서 표시된 바와 같이 넘버링된다. 예를 들면, 절두된 천연 VEGF에서 아미노산 위치 17(메티오닌)은 천연 VEGF에서도 위치 17(메티오닌)이다. 절두된 천연 VEGF는 KDR 및 Flt-1 수용체에 대해 천연 VEGF에 필적할만한 결합 친화성을 갖는다. 바람직한 실시양태에 따라, VEGF는 인간 VEGF이다.
"VEGF 생물학적 활성"은 임의의 VEGF 수용체와의 결합 또는 임의의 VEGF 신호전달 활성, 예컨대, 정상 및 비정상 혈관신생 및 맥관형성 둘다의 조절(Ferrara and Davis-Smyth (1997) Endocrine Rev. 18:4-25; Ferrara (1999) J. Mol. Med. 77:527-543); 배아 맥관형성 및 혈관신생의 촉진(Carmeliet et al. (1996) Nature 380:435-439; Ferrara et al. (1996) Nature 380:439-442); 및 여성 생식관에서의 주기적 혈관 증식, 및 골 성장 및 연골 형성을 위한 주기적 혈관 증식의 조절(Ferrara et al. (1998) Nature Med. 4:336-340; Gerber et al. (1999) Nature Med. 5:623-628)을 포함한다. VEGF는 혈관신생 및 맥관형성에 있어서 혈관신생 인자라는 점 이외에 다면발현성 성장 인자로서 다른 생리학적 과정, 예컨대, 내피 세포 생존, 혈관 투과성 및 혈관확장, 단핵구 화학주성 및 칼슘 유입에서 다수의 생물학적 효과를 나타낸다(상기 문헌[Ferrara and Davis-Smyth (1997)] 및 문헌[Cebe-Suarez et al. Cell. Mol. Life Sci. 63:601-615 (2006)]). 나아가, 최근 연구는 몇몇 비-내피 세포 종류, 예컨대, 망막 색소 상피 세포, 췌장관 세포 및 슈반(Schwann) 세포에 대한 VEGF의 유사분열촉진 효과를 보고하였다(문헌[Guerrin et al. (1995) J. Cell Physiol. 164:385-394; Oberg-Welsh et al. (1997) Mol. Cell. Endocrinol. 126:125-132; Sondell et al. (1999) J. Neurosci. 19:5731-5740]).
"VEGF 길항제" 또는 "VEGF 특이적 길항제"는 VEGF에 결합할 수 있거나; VEGF 발현 수준을 감소시킬 수 있거나; 1종 이상의 VEGF 수용체와 VEGF의 결합, 및 VEGF 매개 혈관신생 및 내피 세포 생존 또는 증식을 포함하나 이들로 한정되지 않는 VEGF 생물학적 활성을 중화시킬 수 있거나, 차단할 수 있거나, 억제할 수 있거나, 제거할 수 있거나, 감소시킬 수 있거나 방해할 수 있는 분자를 의미한다. VEGF에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드, VEGF 수용체에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드, 항-VEGF 항체 및 이의 항원 결합 단편, VEGF에 특이적으로 결합하여 VEGF와 1종 이상의 수용체의 결합을 봉쇄하는 수용체 분자 및 유도체, 융합 단백질(예를 들면, VEGF-트랩(Trap)(리제네론(Regeneron))), 및 VEGF121-겔로닌(gelonin)(페레그린(Peregrine))이 본 발명의 방법에서 유용한 VEGF 특이적 길항제로서 포함된다. VEGF 특이적 길항제는 VEGF 폴리펩티드의 길항제 변이체, VEGF에 대해 유도된 안티센스 뉴클레오염기(nucleobase) 올리고머, VEGF에 대해 유도된 RNA 소분자, RNA 앱타머, VEGF에 대한 펩티바디(peptibody) 및 리보자임, 엄격한 조건 하에 VEGF 또는 VEGF 수용체를 코딩하는 핵산 서열에 혼성화하는 핵산(예를 들면, RNAi), 면역어드헤신(immunoadhesin), 항-VEGF 수용체 항체 및 VEGF 수용체 길항제, 예컨대, VEGFR 티로신 키나제(kinase)의 소분자 억제제도 포함한다. 한 바람직한 실시양태에 따라, VEGF 길항제는 VEGF에 결합하고 시험관내에서 VEGF 유도된 내피 세포 증식을 억제한다. 한 바람직한 실시양태에 따라, VEGF 길항제는 비-VEGF 또는 비-VEGF 수용체보다 더 높은 친화성으로 VEGF 또는 VEGF 수용체에 결합한다. 한 바람직한 실시양태에 따라, VEGF 길항제는 1 μM 내지 1 pM의 Kd로 VEGF 또는 VEGF 수용체에 결합한다. 또 다른 바람직한 실시양태에 따라, VEGF 길항제는 500 nM 내지 1 pM의 Kd로 VEGF 또는 VEGF 수용체에 결합한다. VEGF 특이적 길항제는 VEGF에 결합하여 VEGF 생물학적 활성을 차단할 수 있거나, 억제할 수 있거나, 제거할 수 있거나, 감소시킬 수 있거나 방해할 수 있는 비-펩티드 소분자도 포함한다. 따라서, 용어 "VEGF 활성"은 구체적으로 VEGF의 VEGF 매개 생물학적 활성을 포함한다. 일부 실시양태에서, VEGF 길항제는 VEGF의 발현 수준 또는 생물학적 활성을 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 이상까지 감소시키거나 억제한다.
바람직한 실시양태에 따라, VEGF 길항제는 폴리펩티드, 예컨대, 항체, 펩티바디, 면역어드헤신, 소분자 및 앱타머로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 항-VEGF 항체, 예컨대, 베바시주마브(아바스틴(AVASTIN)(등록상표)) 또는 항-VEGF 수용체 항체, 예컨대, 항-VEGFR2 또는 항-VEGFR3 항체이다. VEGF 길항제의 다른 예는 VEGF-트랩, 뮤카겐(Mucagen), PTK787, SU11248, AG-013736, Bay 439006(소라페니브(sorafenib)), ZD-6474, CP632, CP-547632, AZD-2171, CDP-171, SU-14813, CHIR-258, AEE-788, SB786034, BAY579352, CDP-791, EG-3306, GW-786034, RWJ-417975/CT6758 및 KRN-633을 포함한다.
"항-VEGF 항체"는 충분한 친화성 및 특이성으로 VEGF에 결합하는 항체이다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 통상적으로 VEGF에 대한 충분한 결합 친화성을 가질 것이고, 예를 들면, 상기 항체는 100 nM 내지 1 pM의 Kd 값으로 hVEGF에 결합할 수 있다. 항체 친화성은 예를 들면, 표면 플라스몬 공명에 근거한 분석(예컨대, PCT 특허출원 공개 제WO2005/012359호에 기재된 비아코어(BIAcore) 분석); 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA); 및 경쟁 분석(예를 들면, RIA)에 의해 측정될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 항-VEGF 항체는 VEGF 활성이 관여하는 질환 또는 병태를 표적화하거나 방해하는 데 있어서 치료제로서 사용될 수 있다. 항-VEGF 항체는 통상적으로 다른 VEGF 상동체, 예컨대, VEGF-B 또는 VEGF-C에 결합하지 않을 것이고 다른 성장 인자, 예컨대, PlGF, PDGF 또는 bFGF에도 결합하지 않을 것이다. 바람직한 항-VEGF 항체는 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생성된 단일클론 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 단일클론 항체이다. 보다 바람직하게는, 항-VEGF 항체는 베바시주마브(BV; 아바스틴(등록상표))로서 공지된 항체를 포함하나 이로 한정되지 않는, 문헌[Presta et al., (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]에 따라 발생된 재조합 인간화된 항-VEGF 단일클론 항체이다. 또 다른 실시양태에 따라, 사용될 수 있는 항-VEGF 항체는 PCT 특허출원 공개 제WO2005/012359호에 개시된 항체를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 한 실시양태에 따라, 항-VEGF 항체는 PCT 특허출원 공개 제WO2005/012359호의 도 24, 25, 26, 27 및 29에 개시된 항체들(예를 들면, G6, G6-23, G6-31, G6-23.1, G6-23.2, B20, B20-4 및 B20.4.1) 중 어느 하나의 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 라니비주마브(ranibizumab)로서 공지된 항-VEGF 항체는 안질환, 예컨대, 당뇨병성 신경병증 및 AMD를 위해 투여되는 VEGF 길항제이다.
일부 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 VEGF 활성이 관여하는 질환 또는 병태를 표적화하거나 방해하는 데 있어서 치료제로서 사용될 수 있다. 또한, 상기 항체는 예를 들면, 치료제로서의 그의 효과를 평가하기 위해 다른 생물학적 활성 분석으로 분석될 수 있다. 이러한 분석은 당업계에서 공지되어 있고 항체의 표적 항원 및 의도된 용도에 의해 좌우된다. 예로는 HUVEC 억제 분석; 종양 세포 성장 억제 분석(예를 들면, PCT 특허출원 공개 제WO89/06692호에 기재됨); 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC) 및 보체 매개 세포독성(CDC) 분석(미국 특허 제5,500,362호); 및 작용제 활성 또는 조혈 분석(PCT 특허출원 공개 제WO95/27062호 참조)이 있다. 항-VEGF 항체는 통상적으로 다른 VEGF 상동체, 예컨대, VEGF-B 또는 VEGF-C에 결합하지 않을 것이고 다른 성장 인자, 예컨대, PlGF, PDGF 또는 bFGF에도 결합하지 않을 것이다. 한 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생성된 단일클론 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 단일클론 항체이다. 또 다른 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 베바시주마브(BV; 아바스틴(등록상표))로서 공지된 항체를 포함하나 이로 한정되지 않는, 문헌[Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]에 따라 발생된 재조합 인간화된 항-VEGF 단일클론 항체이다.
"rhuMAb VEGF" 또는 "아바스틴(등록상표)"으로도 공지된 항-VEGF 항체 "베바시주마브(BV)"는 문헌[Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]에 따라 발생된 재조합 인간화된 항-VEGF 단일클론 항체이다. 상기 항체는 돌연변이된 인간 IgG1 골격 영역, 및 인간 VEGF와 그의 수용체의 결합을 차단하는 뮤린 항-hVEGF 단일클론 항체 A.4.6.1로부터의 항원 결합 상보성 결정 영역을 포함한다. 상기 골격 영역의 대부분을 포함하는, 베바시주마브의 아미노산 서열의 약 93%는 인간 IgG1로부터 유래되고, 상기 서열의 약 7%는 뮤린 항체 A.4.6.1로부터 유래된다. 베바시주마브는 약 149,000 달톤의 분자 질량을 갖고 글리코실화되어 있다. 베바시주마브 및 다른 인간화된 항-VEGF 항체는 미국 특허 제6,884,879호 및 PCT 특허출원 공개 제WO2005/044853호에 추가로 기재되어 있다.
항-VEGF 항체 라니비주마브 또는 루센티스(LUCENTIS)(등록상표) 항체 또는 rhuFab V2는 인간화된 친화 성숙된 항-인간 VEGF Fab 단편이다. 라니비주마브는 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli) 발현 벡터에서의 표준 재조합 기술 방법 및 세균 발효에 의해 생성된다. 라니비주마브는 글리코실화되어 있지 않고 약 48,000 달톤의 분자 질량을 갖는다(예를 들면, PCT 특허출원 공개 제WO98/45331호 및 미국 특허출원 공개 제2003/0190317호 참조).
2종의 가장 잘 특징규명된 VEGF 수용체는 (Flt-1로도 공지된) VEGFR1 및 (뮤린 상동체에 대해 KDR 및 FLK-1로도 공지된) VEGFR2이다. 각각의 VEGF 과(family) 구성원에 대한 각각의 수용체의 특이성은 상이하지만, VEGF-A는 Flt-1 및 KDR 둘다에 결합한다. 전장 Flt-1 수용체는 7개의 Ig 도메인을 갖는 세포외 도메인, 경막 도메인, 및 티로신 키나제 활성을 갖는 세포내 도메인을 포함한다. 상기 세포외 도메인은 VEGF의 결합에 관여하고, 상기 세포내 도메인은 신호 전달도입에 관여한다.
VEGF에 특이적으로 결합하는 VEGF 수용체 분자 또는 이의 단편은 VEGF 단백질에 결합하여 이를 격리시킴으로써 VEGF 단백질의 신호전달을 방해하는 VEGF 억제제로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, VEGF 수용체 분자 또는 이의 VEGF 결합 단편은 가용성 형태, 예컨대, sFlt-1이다. 상기 수용체의 가용성 형태는 VEGF에 결합하여 VEGF 단백질의 생물학적 활성에 대한 억제 효과를 발휘함으로써 상기 VEGF 단백질이 표적 세포의 표면 상에 존재하는 그의 천연 수용체에 결합하는 것을 방해한다. VEGF 수용체 융합 단백질도 포함되고, 이의 예는 이하에 기재되어 있다.
키메라 VEGF 수용체 단백질은 2종 이상의 상이한 단백질(이들 중 1종 이상의 단백질은 VEGF에 결합하여 VEGF의 생물학적 활성을 억제할 수 있는 VEGF 수용체 단백질(예를 들면, flt-1 또는 KDR 수용체)임)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 수용체 분자이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 키메라 VEGF 수용체 단백질은 단지 2종의 상이한 VEGF 수용체 분자들로부터 유래된 아미노산 서열들로 구성되지만, flt-1 및/또는 KDR 수용체의 세포외 리간드 결합 영역으로부터의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 모든 7개의 Ig 유사 도메인을 포함하는 아미노산 서열이 다른 관련 없는 단백질로부터의 아미노산 서열, 예를 들면, 면역글로불린 서열에 연결될 수 있다. Ig 유사 도메인과 조합되는 다른 아미노산 서열은 당업자에게 용이하게 자명할 것이다. 키메라 VEGF 수용체 단백질의 예는 가용성 Flt-1/Fc, KDR/Fc, 또는 Flt-1/KDR/Fc(VEGF 트랩으로도 공지됨)를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. (예를 들면, PCT 특허출원 공개 제WO97/44453호를 참조한다.)
가용성 VEGF 수용체 단백질 또는 키메라 VEGF 수용체 단백질은 경막 도메인을 통해 세포의 표면에 고정되지 않는 VEGF 수용체 단백질을 포함한다. 따라서, 키메라 수용체 단백질을 포함하는 VEGF 수용체의 가용성 형태는 VEGF에 결합하여 VEGF를 불활성화시킬 수 있지만 경막 도메인을 포함하지 않으므로 일반적으로 이 분자가 발현되는 세포의 세포막과 결합되지 않는다.
추가 VEGF 억제제는 예를 들면, PCT 특허출원 공개 제WO99/24440호, PCT 특허출원 제PCT/IB99/00797호, PCT 특허출원 공개 제WO95/21613호, PCT 특허출원 공개 제WO99/61422호, 미국 특허 제6,534,524호, 미국 특허 제5,834,504호, PCT 특허출원 공개 제WO98/50356호, 미국 특허 제5,883,113호, 미국 특허 제5,886,020호, 미국 특허 제5,792,783호, 미국 특허 제6,653,308호, PCT 특허출원 공개 제WO99/10349호, PCT 특허출원 공개 제WO97/32856호, PCT 특허출원 공개 제WO97/22596호, PCT 특허출원 공개 제WO98/54093호, PCT 특허출원 공개 제WO98/02438호, PCT 특허출원 공개 제WO99/16755호 및 PCT 특허출원 공개 제WO98/02437호(이들 모두가 전체적으로 참고로 본원에 도입됨)에 기재되어 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "B20 시리즈 폴리펩티드"는 VEGF에 결합하는 항체를 포함하는 폴리펩티드를 의미한다. B20 시리즈 폴리펩티드는 미국 특허출원 공개 제2006/0280747호, 미국 특허출원 공개 제2007/0141065호 및/또는 미국 특허출원 공개 제2007/0020267호(이들 특허출원들의 내용은 명백히 참고로 본원에 도입됨)에 기재된 B20 항체 또는 B20 유래된 항체의 서열로부터 유래된 항체를 포함하나 이로 한정되지 않는다. 한 실시양태에서, B20 시리즈 폴리펩티드는 미국 특허출원 공개 제2006/0280747호, 미국 특허출원 공개 제2007/0141065호 및/또는 미국 특허출원 공개 제2007/0020267호에 기재된 B20-4.1이다. 또 다른 실시양태에서, B20 시리즈 폴리펩티드는 미국 특허출원 제60/991,302호(이의 전체 개시내용은 명백히 참고로 본원에 도입됨)에 기재된 B20-4.1.1이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "G6 시리즈 폴리펩티드"는 VEGF에 결합하는 항체를 포함하는 폴리펩티드를 의미한다. G6 시리즈 폴리펩티드는 미국 특허출원 공개 제2006/0280747호, 미국 특허출원 공개 제2007/0141065호 및/또는 미국 특허출원 공개 제2007/0020267호에 기재된 G6 항체 또는 G6 유래된 항체의 서열로부터 유래된 항체를 포함하나 이로 한정되지 않는다. 미국 특허출원 공개 제2006/0280747호, 미국 특허출원 공개 제2007/0141065호 및/또는 미국 특허출원 공개 제2007/0020267호에 기재된 G6 시리즈 폴리펩티드는 G6-8, G6-23 및 G6-31을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
추가 항체에 대해서는 미국 특허 제7,060,269호, 미국 특허 제6,582,959호, 미국 특허 제6,703,020호, 미국 특허 제6,054,297호, PCT 특허출원 공개 제WO98/45332호, PCT 특허출원 공개 제WO96/30046호, PCT 특허출원 공개 제WO94/10202호, 유럽 특허 제0666868B1호, 미국 특허출원 공개 제2006/009360호, 미국 특허출원 공개 제2005/0186208호, 미국 특허출원 공개 제2003/0206899호, 미국 특허출원 공개 제2003/0190317호, 미국 특허출원 공개 제2003/0203409호 및 미국 특허출원 공개 제2005/0112126호; 및 문헌[Popkov et al., Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 다른 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, I91, K101, E103 및 C104를 포함하거나, 다르게는 잔기 F17, Y21, Q22, Y25, D63, I83 및 Q89를 포함하는 인간 VEGF 상의 기능성 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다.
다른 항-VEGF 항체도 공지되어 있고 예를 들면, 문헌[Liang et al., J Biol Chem 281, 951-961 (2006)]에 기재되어 있다.
항암제를 사용한 치료에 대한 환자의 "효과적인 반응" 또는 환자의 "반응성" 또는 "민감성"은 암에 대한 고위험 환자 또는 암을 앓는 환자에게 부여된 임상적 또는 치료적 이익, 또는 항암제, 예컨대, 항-VEGF-A 항체를 사용한 치료의 결과로서의 임상적 또는 치료적 이익을 의미한다. 이러한 이익은 세포 또는 생물학적 반응, 완전한 반응, 부분적 반응, (진행 또는 재발이 없는) 안정한 질환, 또는 길항제를 사용한 치료로부터 또는 길항제를 사용한 치료의 결과로서 환자의 후기 재발을 갖는 반응을 포함한다. 예를 들면, 효과적인 반응은 감소된 종양 크기, 무진행 생존 또는 전체 생존일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "길항제"는 그 자신이 결합하는 분자의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 화합물 또는 약제를 의미한다. 길항제는 선택적으로 또 다른 분자와 접합된 또는 융합된 상태로 VEGF에 결합하는 항체, 합성 또는 천연 서열 펩티드, 면역어드헤신 및 소분자 길항제를 포함한다. "차단" 항체 또는 "길항제" 항체는 그 자신이 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 항체이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "작용제 항체"는 관심있는 폴리펩티드의 기능적 활성들 중 1종 이상의 활성을 부분적으로 또는 전체적으로 모방하는 항체이다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로 단일클론 항체, 다클론 항체, 2종 이상의 온전한 항체로부터 형성된 다중특이적 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및 항체 단편을 포함하되, 이들은 원하는 생물학적 활성을 나타내어야 한다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 방법에서 VEGF 길항제로서 사용되는 항체는 다중특이적 항체, 예를 들면, 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 2개 이상의 상이한 부위에 대한 결합 특이성을 갖는 단일클론 항체이다. 일부 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 VEGF에 대한 결합 특이성이고, 나머지 하나는 임의의 다른 항원에 대한 결합 특이성이다. 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 VEGF의 2개 이상의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 세포독성제를, VEGF를 발현하는 세포에 국한시키는 데에 사용될 수도 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.
다중특이적 항체의 제조 기법은 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 동시발현(문헌[Milstein, C. and Cuello, A.C., Nature 305 (1983) 537-540], PCT 특허출원 공개 제WO93/08829호 및 문헌[Traunecker, A. et al., EMBO J. 10 (1991) 3655-3659] 참조), 및 "놉-인-홀(knob-in-hole)" 조작(예를 들면, 미국 특허 제5,731,168호 참조)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 다중특이적 항체는 항체 Fc-이종이량체 분자의 제조를 위한 정전기 조정(steering) 효과의 조작(PCT 특허출원 공개 제WO2009/089004호); 2개 이상의 항체 또는 단편의 가교결합(예를 들면, 미국 특허 제4,676,980호 및 문헌[Brennan, M. et al., Science 229 (1985) 81-83]); 이중특이적 항체를 제조하기 위한 류신 지퍼의 사용(예를 들면, 문헌[Kostelny, S.A. et al., J. Immunol. 148 (1992) 1547-1553] 참조); 이중특이적 항체 단편의 제조를 위한 "디아바디" 기술의 사용(예를 들면, 문헌[Holliger, P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 6444-6448] 참조); 단일 쇄 Fv(sFv) 이량체의 사용(예를 들면, 문헌[Gruber, M et al., J. Immunol. 152 (1994) 5368-5374] 참조); 및 예를 들면, 문헌[Tutt, A. et al., J. Immunol. 147 (1991) 60-69]에 기재된 바와 같은 삼중특이적 항체의 제조에 의해 만들어질 수도 있다.
"옥토퍼스 항체"를 포함하는, 3개 이상의 기능성 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체도 본원에 포함된다(예를 들면, 미국 특허출원 공개 제2006/0025576호 참조).
본원에서 항체 또는 단편은 VEGF뿐만 아니라 또 다른 상이한 항원에도 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"도 포함한다(예를 들면, 미국 특허출원 공개 제2008/0069820호 참조).
본원에서 제공된 방법에서 VEGF 길항제로서 사용되는 항체 또는 항체 단편은 PCT 특허출원 공개 제WO2009/080251호, PCT 특허출원 공개 제WO2009/080252호, PCT 특허출원 공개 제WO2009/080253호, PCT 특허출원 공개 제WO2009/080254호, PCT 특허출원 공개 제WO2010/112193호, PCT 특허출원 공개 제WO2010/115589호, PCT 특허출원 공개 제WO2010/136172호, PCT 특허출원 공개 제WO2010/145792호 및 PCT 특허출원 공개 제WO2010/145793호에 기재된 다중특이적 항체도 포함한다. 이중특이적 VEGF 항체의 예는 예를 들면, PCT 특허출원 공개 제WO2010/040508호 (VEGF-ANG2), PCT 특허출원 제PCT/EP2011/054504호(VEGF-ANG2), PCT 특허출원 공개 제WO2005/087812호(VEGF-PDGF), PCT 특허출원 공개 제WO2009/120922호(VEGF-PDGFR 베타) 및 PCT 특허출원 공개 제WO2011/039370호(VEGF-DII4)에 기재되어 있다.
"단리된" 항체는 그의 천연 환경의 성분으로부터 확인되고 분리되고/되거나 회수된 항체이다. 그의 천연 환경의 오염 성분은 항체에 대한 연구, 진단 또는 치료 용도를 방해하고 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있는 물질이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 (1) 예를 들면, 로우리(Lowry) 방법에 의해 측정될 때 95 중량% 초과의 항체, 몇몇 실시양태에서 99 중량% 초과의 항체 수준까지; (2) 예를 들면, 회전 컵 서열분석기(spinning cup sequenator)를 이용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 15개 이상의 잔기를 수득하기에 충분한 정도까지; 또는 (3) 예를 들면, 코마시에 블루 또는 은 염색을 이용하는 환원 또는 비-환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의해 분석되었을 때 균질한 정도까지 정제된다. 단리된 항체는 항체의 천연 환경의 1종 이상의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에 재조합 세포 내의 제자리(in situ) 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 단리된 항체는 1개 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
"천연 항체"는 통상적으로 2개의 동일한 경쇄(L) 및 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된 약 150,000 달톤의 이종사량체성 당단백질이다. 각각의 경쇄는 1개의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결되어 있지만, 이황화 결합의 수는 상이한 면역글로불린 동종형의 중쇄 사이에 상이하다. 또한, 각각의 중쇄 및 경쇄는 규칙적으로 이격되어 있는 쇄내 이황화 가교도 갖는다. 각각의 중쇄는 한 말단에서 가변 도메인(VH)에 이어서 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각각의 경쇄는 한 말단에서 가변 도메인(VL)을 갖고 그의 다른 말단에서 불변 도메인을 갖고, 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되어 있고, 경쇄의 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬되어 있다. 특정 아미노산 잔기들이 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이의 경계를 형성하는 것으로 생각된다.
항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노 말단 도메인을 의미한다. 중쇄의 가변 도메인은 "VH"로서 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 도메인은 "VL"로서 지칭될 수 있다. 이들 도메인들은 일반적으로 항체의 가장 가변적인 부분이고 항원 결합 부위를 함유한다.
용어 "가변"은 가변 도메인의 일부 부분이 항체들 사이에 서열 면에서 광범위하게 상이하고 그의 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다는 사실을 의미한다. 그러나, 가변성은 항체의 가변 도메인 전체에 걸쳐 균일하게 분포되어 있지 않다. 상기 가변성은 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 둘다에서 초가변 영역(HVR)으로 지칭되는 3개의 분절에 집중되어 있다. 가변 도메인의 보다 더 고도로 보존된 부분은 골격 영역(FR)으로 지칭된다. 천연 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 도메인은 3개의 HVR에 의해 연결되어 베타 쉬트(sheet) 구조를 연결하는 루프(loop)를 형성하고 일부 경우 베타 쉬트 구조의 일부를 형성하는, 주로 베타 쉬트 입체구조를 채택하는 4개의 FR 영역을 포함한다. 각각의 쇄 내의 HVR은 FR 영역에 의해 가깝게 인접하여 밀집되어 있고, 다른 쇄로부터의 HVR과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)] 참조). 불변 도메인은 항체와 항원의 결합에 직접적으로 관여하지 않지만 다양한 효과기 기능, 예컨대, 항체 의존적 세포 매개 독성에의 항체의 참가를 나타낸다.
임의의 척추동물 종으로부터의 항체(면역글로불린)의 "경쇄"는 그들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 근거하여 카파(κ) 및 람다(λ)로 지칭되는 2종의 명확히 상이한 쇄들 중 하나로 배정될 수 있다.
항체(면역글로불린)는 그들의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라 상이한 클래스로 배정될 수 있다. 면역글로불린의 5종의 주요 클래스, 즉 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위클래스(동종형), 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 세분될 수 있다. 면역글로불린의 상이한 클래스들에 상응하는 중쇄 불변 도메인들은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 지칭된다. 면역글로불린의 상이한 클래스들의 하위유닛 구조 및 삼차원적 입체구조는 잘 공지되어 있고 예를 들면, 문헌[Abbas et al., Cellular and Mol. Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders, Co. 2000)]에 일반적으로 기재되어 있다. 항체는 항체와 1종 이상의 다른 단백질 또는 펩티드의 공유결합 또는 비-공유결합에 의해 형성된 보다 큰 융합 분자의 일부일 수 있다.
용어 "전장 항체", "온전한 항체" 및 "전체 항체"는 이하에 정의된 항체 단편을 의미하기 위해서가 아니라 실질적으로 온전한 형태의 항체를 의미하기 위해 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 상기 용어들은 특히 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 의미한다.
본원의 목적을 위해 "네이키드(naked) 항체"는 세포독성 모이어티(moiety) 또는 방사성표지에 접합되어 있지 않은 항체이다.
"항체 단편"은 바람직하게는 그의 항원 결합 영역을 포함하는, 온전한 항체의 일부를 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; 단일 쇄 항체 분자; 및 항체 단편들로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
항체의 파파인(papain) 분해는 단일 항원 결합 부위를 각각 갖는, "Fab" 단편으로 지칭되는 2개의 동일한 항원 결합 단편, 및 잔류 "Fc" 단편(이의 명칭은 용이하게 결정화하는 그의 능력을 반영함)을 생성한다. 펩신 처리는 2개의 항원 결합 부위를 갖지만 여전히 항원에 가교결합할 수 있는 F(ab')2 단편을 생성한다.
"Fv"는 완전한 항원 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 한 실시양태에서, 2-쇄 Fv 종은 단단한 비-공유결합에 의해 1개의 중쇄 가변 도메인 및 1개의 경쇄 가변 도메인으로 형성된 이량체로 구성된다. 단일 쇄 Fv(scFv) 종에서, 1개의 중쇄 가변 도메인 및 1개의 경쇄 가변 도메인은 상기 경쇄 및 중쇄가 2-쇄 Fv 종과 유사한 "이량체" 구조로 결합할 수 있도록 유연한 펩티드 연결기에 의해 공유결합될 수 있다. 이 입체구조에서, 각각의 가변 도메인의 3개의 HVR은 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상에서 항원 결합 부위를 정의한다. 종합하건대, 6개의 HVR이 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)조차도 전체 결합 부위보다 낮은 친화성으로 항원에 결합하지만 항원을 인식하고 항원에 결합하는 능력을 갖는다.
Fab 단편은 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 함유하고 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)도 함유한다. Fab' 단편은 항체-힌지 영역으로부터의 1개 이상의 시스테인을 포함하는 소수의 잔기들이 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에 부가됨으로써 Fab 단편과 구별된다. Fab'-SH는 본원에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 자유 티올 기를 보유하는 Fab'를 표시한다. F(ab')2 항체 단편은 원래 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편들의 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 공지되어 있다.
"단일 쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하고, 이때 이들 도메인들은 단일 폴리펩티드 쇄에 존재한다. 일반적으로, scFv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는 폴리펩티드 연결기를 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 추가로 포함한다. scFv의 검토를 위해서는 예를 들면, 문헌[Plueckthun, in The Pharmacology of Mono-clonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. (Springer-Verlag, New York 1994), pp. 269-315]을 참조한다.
용어 "디아바디"는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 의미하고, 상기 단편은 동일한 폴리펩티드 쇄(VH-VL) 상에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 동일한 쇄 상에서 상기 2개의 도메인들 사이에 페어링(pairing)을 가능하게 하기에는 너무 짧은 연결기의 사용에 의해 상기 도메인들은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 페어링하게 되어 2개의 항원 결합 부위를 생성한다. 디아바디는 2가 또는 이중특이적 항체일 수 있다. 디아바디는 예를 들면, 유럽 특허 제404,097호, PCT 특허출원 공개 제WO1993/01161호, 문헌[Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)] 및 문헌[Hollinger et al., PNAS USA 90: 6444-6448 (1993)]에 보다 완전하게 기재되어 있다. 트리아바디(Triabody) 및 테트라바디(tetrabody)도 문헌[Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기재되어 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체들의 집단으로부터 수득된 항체를 의미하고, 즉 상기 집단을 구성하는 개별 항체들은 소량으로 존재할 수 있는 가능한 돌연변이, 예를 들면, 천연 돌연변이를 제외하고 동일하다. 따라서, 수식어 "단일클론"은 항체의 특징을 상이한 항체들의 혼합물이 아닌 것으로서 표시한다. 일부 실시양태에서, 이러한 단일클론 항체는 전형적으로 표적에 결합하는 폴리펩티드 서열을 포함하는 항체를 포함하고, 이때 표적 결합 폴리펩티드 서열은 다수의 폴리펩티드 서열들로부터 단일 표적 결합 폴리펩티드 서열을 선택하는 것을 포함하는 과정에 의해 수득되었다. 예를 들면, 선택 과정은 다수의 클론들, 예컨대, 하이브리도마 클론, 파지 클론 또는 재조합 DNA 클론의 풀(pool)로부터 특별한 클론을 선택하는 것일 수 있다. 선택된 표적 결합 서열은 표적에 대한 친화성의 개선, 표적 결합 서열의 인간화, 세포 배양물에서의 그의 생성의 개선, 생체내에서의 그의 면역원성의 감소, 다중특이적 항체의 생성 등을 위해 추가로 변경될 수 있고 변경된 표적 결합 서열을 포함하는 항체도 본 발명의 단일클론 항체라는 것을 이해해야 한다. 전형적으로 상이한 결정인자들(에피토프들)에 대해 유도된 상이한 항체들을 포함하는 다클론 항체 제제와 대조적으로, 단일클론 항체 제제의 각각의 단일클론 항체는 하나의 항원 상의 단일 결정인자에 대해 유도된다. 단일클론 항체 제제는 그들의 특이성 이외에 그들이 전형적으로 다른 면역글로불린에 의해 오염되어 있지 않다는 점에서 유리하다.
수식어 "단일클론"은 항체의 특징을 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 것으로서 표시하고 임의의 특정 방법에 의한 항체의 제조를 필요로 하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용될 단일클론 항체는 예를 들면, 하이브리도마 방법(예를 들면, 문헌[Kohler and Milstein., Nature, 256:495-97 (1975)]; 문헌[Hongo et al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995)]; 문헌[Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988]; 및 문헌[Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)]), 재조합 DNA 방법(예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호 참조), 파지 표시 기술(예를 들면, 문헌[Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991)]; 문헌[Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)]; 문헌[Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)]; 문헌[Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)]; 문헌[Fellouse, PNAS USA 101(34): 12467-12472 (2004)]; 및 문헌[Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)] 참조), 및 인간 면역글로불린 서열들을 코딩하는 인간 면역글로불린 좌위들 또는 유전자들의 일부 또는 전부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간 유사 항체를 제조하는 기술(예를 들면, PCT 특허출원 공개 제WO1998/24893호; PCT 특허출원 공개 제WO1996/34096호; PCT 특허출원 공개 제WO1996/33735호; PCT 특허출원 공개 제WO1991/10741호; 문헌[Jakobovits et al., PNAS USA 90: 2551 (1993)]; 문헌[Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993)]; 문헌[Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993)]; 미국 특허 제5,545,807호; 미국 특허 제5,545,806호; 미국 특허 제5,569,825호; 미국 특허 제5,625,126호; 미국 특허 제5,633,425호; 미국 특허 제5,661,016호; 문헌[Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992)]; 문헌[Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994)]; 문헌[Morrison, Nature 368: 812-813 (1994)]; 문헌[Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996)]; 문헌[Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996)]; 및 문헌[Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol.13: 65-93 (1995)] 참조)을 포함하는 다양한 기법에 의해 제조될 수 있다.
본원에서 단일클론 항체는 구체적으로, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 클래스 또는 하위클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 이 상응하는 서열에 대한 상동성을 나타내는 반면, 상기 쇄(들)의 나머지가 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 클래스 또는 하위클래스에 속하는 항체 및 이러한 항체의 단편의 상응하는 서열과 동일하거나 이 상응하는 서열에 대한 상동성을 나타내는 "키메라" 항체들을 포함하되, 이들은 원하는 생물학적 활성을 나타내어야 한다(예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호 및 문헌[Morrison et al., PNAS USA 81:6851-6855 (1984)]). 키메라 항체는 프리마티제드(PRIMATIZED)(등록상표) 항체를 포함하고, 이때 상기 항체의 항원 결합 영역은 예를 들면, 짧은 꼬리 원숭이를 관심있는 항원으로 면역화시킴으로써 생성된 항체로부터 유래된다.
비-인간(예를 들면, 뮤린) 항체의 "인간화된" 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 한 실시양태에서, 인간화된 항체는 수용자의 HVR로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화성 및/또는 성능을 갖는 비-인간 종(공여자 항체), 예컨대, 마우스, 래트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 HVR로부터의 잔기로 치환되어 있는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 몇몇 경우, 인간 면역글로불린의 FR 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 치환된다. 나아가, 인간화된 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 더 개선하도록 만들어질 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 모든 1개 이상의, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 포함할 것이고, 이때 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프들이 비-인간 면역글로불린의 초가변 루프에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR들이 인간 면역글로불린 서열의 FR이다. 또한, 인간화된 항체는 선택적으로 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가 세부사항에 대해서는 예를 들면, 문헌[Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)]; 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)]; 및 문헌[Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)]을 참조한다. 예를 들면, 문헌[Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998)]; 문헌[Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995)]; 문헌[Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)]; 미국 특허 제6,982,321호; 및 미국 특허 제7,087,409호도 참조한다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하고/하거나 본원에 개시된 인간 항체의 제조 기법들 중 임의의 기법의 이용을 통해 만들어진 항체이다. 인간 항체의 이 정의는 비-인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 구체적으로 배제한다. 인간 항체는 파지 디스플레이 라이브러리를 포함하는, 당업계에서 공지된 다양한 기법의 이용을 통해 생성될 수 있다(문헌[Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]). 문헌[Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)] 및 문헌[Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)]에 기재된 방법도 인간 단일클론 항체의 제조를 위해 이용될 수 있다. 문헌[van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)]도 참조한다. 인간 항체는 항원성 챌린지에 반응하여 이러한 항체를 생성하도록 변형되어 있으나 그의 내인성 좌위가 불능화되어 있는 형질전환 동물, 예를 들면, 면역화된 제노마우스에게 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다(제노마우스(상표) 기술에 대해서는 예를 들면, 미국 특허 제6,075,181호 및 미국 특허 제6,150,584호 참조). 또한, 인간 B 세포 하이브리도마 기술을 통해 발생된 인간 항체에 대해서는 예를 들면, 문헌[Li et al., PNAS USA, 103:3557-3562 (2006)]을 참조한다.
본원에서 사용될 때 용어 "초가변 영역", "HVR" 또는 "HV"는 서열 면에서 초가변성을 나타내고/내거나 구조적으로 정의된 루프를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역을 의미한다. 일반적으로, 항체는 총 6개의 HVR, 즉 VH에서 3개의 HVR(H1, H2 및 H3) 및 VL에서 3개의 HVR(L1, L2 및 L3)을 포함한다. 천연 항체에서, H3 및 L3은 6개의 HVR 중에서 가장 높은 다양성을 나타내고, 특히 H3은 항체에 미세한 특이성을 부여하는 데 있어서 독특한 역할을 수행하는 것으로 생각된다. 예를 들면, 문헌[Xu et al. Immunity 13:37-45 (2000)] 및 문헌[Johnson and Wu in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)]을 참조한다. 실제로, 중쇄만으로 구성된 천연 낙타과 항체는 경쇄의 부재 하에서 기능성 및 안정성을 나타낸다. 예를 들면, 문헌[Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993)] 및 문헌[Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)]을 참조한다.
다수의 HVR 묘사가 사용되고 있고 본원에 포함된다. 카바트(Kabat) 상보성 결정 영역(CDR)인 HVR은 서열 가변성에 근거하고 가장 통상적으로 사용된다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). 초티아(Chothia)는 대신에 구조 루프의 위치를 언급한다(Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). AbM HVR은 카바트 CDR과 초티아 구조 루프 사이의 절충을 대표하고 옥스퍼드 분자 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 이용된다. "접촉" HVR은 이용가능한 결합체 결정 구조의 분석에 근거하다. 각각의 이들 HVR로부터의 잔기는 이하에 표시되어 있다.
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HVR은 다음과 같이 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34(L1), 46-56 또는 50-56(L2), 및 89-97 또는 89-96(L3); 및 VH에서 26-35(H1), 50-65 또는 49-65(H2), 및 93-102, 94-102 또는 95-102(H3). 이들 연장된 HVR 정의 각각에 대한 가변 도메인 잔기는 상기 문헌[Kabat et al.]에 따라 넘버링된다.
"골격" 또는 "FR" 잔기는 본원에서 정의된 HVR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
표현 "카바트에서와 같은 가변 도메인 잔기 넘버링" 또는 "카바트에서와 같은 아미노산 위치 넘버링" 및 이의 어미변화는 상기 문헌[Kabat et al.]에서 항체들의 집합물의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 이용되는 넘버링 시스템을 의미한다. 이 넘버링 시스템을 이용하는 경우, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축 또는 FR 또는 HVR 내로의 삽입에 상응하는 보다 적은 또는 추가 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들면, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 다음에 삽입된 단일 아미노산(카바트에 따른 잔기 52a) 및 중쇄 FR 잔기 82 다음에 삽입된 잔기(예를 들면, 카바트에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 소정의 항체에 대한 잔기의 카바트 넘버링은 상동성 영역에서 상기 항체의 서열을 "표준" 카바트 넘버링된 서열과 정렬함으로써 결정될 수 있다.
"친화 성숙된" 항체는 변경을 보유하지 않는 모 항체에 비해 항원에 대한 항체의 친화성을 개선하는 1개 이상의 변경을 그의 1개 이상의 HVR 내에 보유하는 항체이다. 한 실시양태에서, 친화 성숙된 항체는 표적 항원에 대한 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화성을 갖는다. 친화 성숙된 항체는 당업계에 공지된 절차에 의해 제조된다. 예를 들면, 문헌[Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)]은 VH 도메인 및 VL 도메인 셔플링에 의한 친화 성숙을 기술한다. HVR 및/또는 골격 잔기의 무작위 돌연변이유발은 예를 들면, 문헌]Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994)]; 문헌[Schier et al. Gene 169:147-155 (1995)]; 문헌[Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995)]; 문헌[Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995)]; 및 문헌[Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)]에 기재되어 있다.
"성장 억제" 항체는 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포의 증식을 방해하거나 감소시키는 항체이다.
"아폽토시스를 유도하는" 항체는 표준 아폽토시스 분석, 예컨대, 아넥신 V의 결합, DNA의 단편화, 세포 수축, 세포질세망(endoplasmic reticulum)의 팽창, 세포 단편화, 및/또는 막 소포(아폽토시스체로 지칭됨)의 형성에 의해 측정될 때 프로그래밍된 세포 사멸을 유도하는 항체이다.
항체 "효과기 기능"은 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인할 수 있는 생물학적 활성을 의미하고 항체 동종형에 따라 상이하다. 항체 효과기 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존적 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC); 식균작용; 세포 표면 수용체(예를 들면, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화를 포함한다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계가 상이할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로 위치 Cys226 또는 Pro230에 존재하는 아미노산 잔기부터 그의 카복실 말단까지 걸쳐 있는 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들면, 항체의 생성 또는 정제 동안 제거될 수 있거나 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산의 재조합 조작에 의해 제거될 수 있다. 따라서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기를 갖는 항체와 K447 잔기를 갖지 않는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다.
본원에서 달리 명시되어 있지 않은 한, 면역글로불린 중쇄에서 잔기의 넘버링은 상기 문헌[Kabat et al.]에서와 같은 EU 지수의 넘버링이다. "카바트에서와 같은 EU 지수"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 의미한다.
"기능성 Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역의 "효과기 기능"을 보유한다. 예시적인 "효과기 기능"은 C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식균작용; 세포 표면 수용체(예를 들면, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등을 포함한다. 이러한 효과기 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들면, 항체 가변 도메인)과 조합될 것을 요구하고 예를 들면, 본원의 정의 단락에 개시된 바와 같은 다양한 분석의 이용을 통해 평가될 수 있다.
"천연 서열 Fc 영역"은 천연 상태에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역(비-A 동종이형(allotype) 및 A 동종이형), 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역, 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역뿐만 아니라 이들의 천연 변이체도 포함한다.
"변이체 Fc 영역"은 1개 이상의 아미노산 변형, 바람직하게는 1개 이상의 아미노산 치환(들)에 의해 천연 서열 Fc 영역 내에 아미노산 서열과 구별되는 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역에 비해 1개 이상의 아미노산 치환, 예를 들면, 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역에서 약 1개 내지 약 10개의 아미노산 치환, 바람직하게는 약 1개 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원에서 변이체 Fc 영역은 바람직하게는 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역에 대해 약 80% 이상의 상동성, 보다 바람직하게는 약 90% 이상의 상동성, 가장 바람직하게는 약 95% 이상의 상동성을 보유할 것이다.
용어 "Fc 영역 포함 항체"는 Fc 영역을 포함하는 항체를 의미한다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들면, 항체의 정제 동안에 제거될 수 있거나 항체를 코딩하는 핵산의 재조합 조작에 의해 제거될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 Fc 영역을 갖는 항체를 포함하는 조성물은 K447을 갖는 항체, 모든 K447이 제거된 항체, 또는 K447 잔기를 갖는 항체와 K447 잔기를 갖지 않는 항체의 혼합물을 포함할 수 있다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기술한다. 몇몇 실시양태에서, FcR은 천연 인간 FcR이다. 몇몇 실시양태에서, FcR은 IgG 항체에 결합하는 수용체(감마 수용체)이고, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위클래스의 수용체(이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 택일적으로 스플라이싱된 형태를 포함함)를 포함한다. FcγRII 수용체는 주로 그들의 세포질 도메인에서 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는 FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("억제 수용체")를 포함한다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인 내에 면역수용체 티로신 기제 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인 내에 면역수용체 티로신 기제 억제 모티프(ITIM)를 함유한다. (예를 들면, 문헌[Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)]을 참조한다.) FcR은 예를 들면, 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)], 문헌[Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994)] 및 문헌[de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)]에서 검토되어 있다. 장래에 확인될 FcR을 포함하는 다른 FcR도 본원에서 용어 "FcR"에 포함된다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 모체 IgG를 태아로 전달하는 것(문헌[Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976)] 및 문헌[Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))] 및 면역글로불린의 항상성의 조절을 담당하는 신생아(neonatal) 수용체도 포함한다. FcRn과의 결합을 측정하는 방법은 공지되어 있다(예를 들면, 문헌[Ghetie and Ward, Immunology Today, 18 (12):592-8 (1997)], 문헌[Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15 (7):637-40 (1997)], 문헌[Hinton et al., J. Biol. Chem., 279(8):6213-6 (2004)] 및 PCT 특허출원 공개 제WO2004/92219호(Hinton et al.) 참조).
생체내에서의 인간 FcRn과의 결합 및 인간 FcRn 고 친화성 결합 폴리펩티드의 혈청 반감기는 예를 들면, 인간 FcRn을 발현하는 형질전환 마우스 또는 형질감염된 인간 세포주, 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드가 투여된 영장류에서 분석될 수 있다. PCT 특허출원 공개 제WO2000/42072호(Presta)는 FcR과의 결합이 개선되거나 감소된 항체 변이체를 기술한다. 예를 들면, 문헌[Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)]도 참조한다.
"결합 친화성"은 일반적으로 분자(예를 들면, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너(예를 들면, 항원) 사이의 비-공유 상호작용의 합계 총 강도를 의미한다. 달리 명시되어 있지 않은 한, 본원에서 사용된 바와 같이, "결합 친화성"은 결합 쌍의 구성원들(예를 들면, 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화성을 의미한다. 그의 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화성은 일반적으로 해리 상수(Kd)로 표시될 수 있다. 친화성은 본원에 기재된 방법을 포함하는, 당업계에서 공지된 통상적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 저 친화성 항체는 일반적으로 항원에 느리게 결합하고 용이하게 해리되는 경향을 보이는 반면, 고 친화성 항체는 일반적으로 항원에 보다 빠르게 결합하고 결합된 상태를 보다 오래 유지하는 경향을 보인다. 다양한 결합 친화성 측정 방법들이 당업계에서 공지되어 있고, 이들 중 임의의 방법이 본 발명의 목적을 위해 이용될 수 있다. 결합 친화성의 측정에 대한 특정 예증적 및 예시적인 실시양태는 하기 기재되어 있다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 "Kd" 또는 "Kd 값"은 하기 분석에 의해 기재된 바와 같이 관심있는 항체의 Fab 버전과 그의 항원을 사용하여 수행한 방사성표지된 항원 결합 분석(RIA)에 의해 측정된다. 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화성은 적정 시리즈의 비-표지된 항원의 존재 하에서 Fab를 최소 농도의 (125I)-표지된 항원으로 평형화시킨 후 결합된 항원을 항-Fab 항체 코팅된 플레이트로 포획함으로써 측정된다(예를 들면, 문헌[Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)] 참조). 분석을 위한 조건을 확립하기 위해, 마이크로타이터 플레이트(다이넥스 테크놀로지스 인코포레이티드(DYNEX Technologies, Inc.))를 50 mM 탄산나트륨(pH 9.6) 중의 5 ㎍/㎖의 포획 항-Fab 항체(카펠 랩스(Cappel Labs))로 밤새 코팅한 후, 실온(약 23℃)에서 PBS 중의 2%(중량/부피) 소 혈청 알부민으로 2시간 내지 5시간 동안 차단한다. 비-흡착된 플레이트(넌크(Nunc) #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM의 [125I]-항원을 원하는 Fab의 일련의 희석물과 혼합한다(예를 들면, 문헌[Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)]에서 항-VEGF 항체인 Fab-12의 평가와 일치함). 그 다음, 관심있는 Fab를 밤새 항온처리하되, 평형에 도달하는 것을 보장하기 위해 상기 항온처리를 보다 오랜 기간(예를 들면, 약 65시간) 동안 계속할 수 있다. 그 후, 혼합물을 포획 플레이트로 옮겨 실온에서 (예를 들면, 1시간 동안) 항온처리한다. 그 다음, 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS 중의 0.1% 트윈-20(상표) 계면활성제로 8회 세척한다. 플레이트가 건조되면, 150 ㎕/웰의 신틸란트(scintillant)(마이크로신트(MICROSCINT)-20(상표); 팩커드)를 첨가하고, 플레이트를 탑카운트(TOPCOUNT)(상표) 감마 카운터(팩커드) 상에서 10분 동안 카운팅한다. 20% 이하의 최대 결합을 제공하는 각각의 Fab의 농도를 경쟁 결합 분석에서의 사용을 위해 선택한다.
또 다른 실시양태에 따라, Kd 또는 Kd 값은 25℃에서 약 10 반응 유닛(RU)의 고정된 항원 CM5 칩과 함께 비아코어(등록상표)-2000 또는 비아코어(등록상표)-3000 장치(비아코어 인코포레이티드(BIAcore, Inc.), 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재)를 이용하는 표면 플라스몬 공명 분석을 이용함으로써 측정된다. 요약하건대, 카복시메틸화된 덱스트란 바이오센서 칩(CM5, 비아코어 인코포레이티드)을 공급자의 설명서에 따라 N-에틸-N'-(3-다이메틸아미노프로필)-카보다이이미드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시석신이미드(NHS)로 활성화시킨다. 항원을 10 mM 아세트산나트륨(pH 4.8)으로 5 ㎍/㎖(약 0.2 μM)까지 희석한 후 5 ㎕/분의 유속으로 주입하여 약 10 반응 유닛(RU)의 커플링된 단백질을 달성한다. 항원의 주입 후, 1 M 에탄올아민을 주입하여 미반응된 기를 차단한다. 동역학적 측정을 위해, PBS 중의 Fab의 2배 연속 희석물(0.78 nM 내지 500 nM)을 25℃에서 약 25 ㎕/분의 유속으로 0.05% 트윈 20(상표) 계면활성제(PBST)와 함께 주입한다. 결합 센소그램 및 해리 센소그램을 동시에 피팅함으로써 단순 1 대 1 랭뮤어 결합 모델(비아코어(등록상표) 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 이용하여 결합 속도(kon) 및 해리 속도(koff)를 계산한다. 평형 해리 상수(Kd)는 비 koff/kon으로서 계산된다. 예를 들면, 문헌[Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)]을 참조한다. 상기 표면 플라스몬 공명 분석에 의해 측정된 결합-속도가 106 M-1s-1을 초과하는 경우, 분광계, 예컨대, 정류 장착 분광광도계(아비브 인스트루먼츠(Aviv Instruments)) 또는 교반 큐빗을 갖는 8000-시리즈 SLM-AMINCO(상표) 분광광도계(써모스펙트로닉(ThermoSpectronic))에서 측정된 증가하는 농도의 항원의 존재 하에서 25℃에서 PBS(pH 7.2) 중의 20 nM 항-항원 항체(Fab 형태)의 형광 방사 강도의 증가 또는 감소(여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 밴드-통과)를 측정하는 형광 소광(quenching) 기법으로 결합-속도를 측정할 수 있다.
본 발명에 따른 "결합-속도", "결합의 속도", "결합 속도" 또는 "kon"는 비아코어(등록상표)-2000 또는 비아코어(등록상표)-3000 시스템(비아코어 인코포레이티드, 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재)의 이용을 통해 전술된 바와 같이 측정될 수도 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "실질적으로 유사한" 또는 "실질적으로 동일한"은 당업자가 2개의 수치 값들 사이의 차이를 상기 값들(예를 들면, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특징 면에서 생물학적으로 및/또는 통계학적으로 거의 또는 전혀 유의하지 않은 것으로 간주할 정도로 상기 2개의 수치 값들(예를 들면, 본 발명의 항체와 관련된 수치 값 및 기준/비교 항체와 관련된 수치 값) 사이의 충분히 높은 정도의 유사성을 표시한다. 상기 2개의 값들 사이의 차이는 예를 들면, 기준/비교 값의 함수로서 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만 및/또는 약 10% 미만이다.
본원에서 사용된 어구 "실질적으로 감소된" 또는 "실질적으로 상이한"은 당업자가 2개의 수치 값들 사이의 차이를 상기 값들(예를 들면, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특징 면에서 통계학적으로 유의한 것으로 간주할 정도로 상기 2개의 수치 값들(일반적으로 분자와 관련된 수치 값 및 기준/비교 항체와 관련된 수치 값) 사이의 충분히 높은 정도의 차이를 표시한다. 상기 2개의 값들 사이의 차이는 예를 들면, 기준/비교 분자에 대한 값의 함수로서 약 10% 초과, 약 20% 초과, 약 30% 초과, 약 40% 초과 및/또는 약 50% 초과이다.
일부 실시양태에서, 본원에서 유용한 인간화된 항체는 IgG Fc 내에 아미노산 변경을 추가로 포함하고 야생형 IgG Fc를 갖는 항체에 비해 60배 이상, 70배 이상, 80배 이상, 보다 바람직하게는 100배 이상, 바람직하게는 125배 이상, 훨씬 더 바람직하게는 150배 내지 약 170배 이상 증가된 인간 FcRn에 대한 결합 친화성을 나타낸다.
"장애" 또는 "질환"은 본 발명의 물질/분자 또는 방법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 임의의 상태이다. 이것은 포유동물이 해당 장애에 잘 걸리게 하는 병리학적 상태를 포함하는 만성 및 급성 장애 또는 질환을 포함한다. 본원에서 치료될 장애의 비-제한적인 예는 암(예를 들면, 악성 및 양성 종양; 비-백혈병 및 림프 악성 종양); 신경, 아교, 성상세포, 시상하부 및 다른 샘, 대식세포, 상피, 간질 및 포배강 장애; 및 염증, 면역학적 및 다른 혈관신생 관련 장애를 포함한다.
용어 "세포 증식 장애" 및 "증식 장애"는 어느 정도의 비정상적인 세포 증식과 관련된 장애를 의미한다. 한 실시양태에서, 세포 증식 장애는 암이다. 한 실시양태에서, 세포 증식 장애는 혈관신생이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "종양"은 악성이든 양성이든 관계없이 모든 신생물 세포 성장 및 증식, 및 모든 전구암성 및 암성 세포 및 조직을 의미한다. 용어 "암", "암성", "세포 증식 장애", "증식 장애" 및 "종양"은 본원에서 언급된 바와 같이 서로 배타적이지 않다.
용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로 비-조절된 세포 증식을 특징으로 하는 포유동물의 생리학적 상태를 의미하거나 기술한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 이러한 암의 보다 구체적인 예는 편평 세포암, 폐암(소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평 암종을 포함함), 복막암, 간세포암, 위암(예를 들면, 위장암을 포함함), 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함), 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포종, 유방암(국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함), 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암 또는 신암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암종 및 다양한 종류의 두경부암, 및 B 세포 림프종(저등급/소포 비-호지킨 림프종(NHL), 소림프구(SL) NHL, 중등급/소포 NHL, 중등급 미만성 NHL, 고등급 면역모세포성 NHL, 고등급 림프모세포성 NHL, 고등급 비-분할 소세포 NHL, 벌키 질환 NHL, 맨틀 세포 림프종, AIDS 관련 림프종 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함함), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 림프모세포성 백혈병(ALL), 모발세포 백혈병, 만성 골수모세포성 백혈병, 및 이식 후 림프증식 장애(PTLD)뿐만 아니라, 모반증과 관련된 비정상적인 혈관 증식, 부종(예컨대, 뇌종양과 관련된 부종) 및 메이그 증후군을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
용어 "항신생물 조성물", "항암 조성물" 또는 "항암제"는 1종 이상의 활성 치료제, 예를 들면, "항암제"를 포함하는, 암 치료에 유용한 조성물을 의미한다. 치료제(항암제)의 예는 예를 들면, 화학요법제; 성장 억제제; 세포독성제; 방사선요법에서 사용되는 약제; 항혈관신생제; 항림프관신생제; 아폽토시스제; 항-튜불린제; 및 다른 암 치료제, 예컨대, 항-HER-2 항체, 항-CD20 항체, 상피 성장 인자 수용체(EGFR) 길항제(예를 들면, 티로신 키나제 억제제), HER1/EGFR 억제제(예를 들면, 에를로티니브(타세바(Tarceva)(상표)), 혈소판 유래 성장 인자 억제제(예를 들면, 글리벡(Gleevec)(상표)(이마티니브 메실레이트)), COX-2 억제제(예를 들면, 셀레콕시브), 인터페론, 사이토카인, 표적 ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-베타, BlyS, APRIL, BCMA VEGF 및 VEGF 수용체(들) 중 1종 이상의 표적에 결합하는 길항제(예를 들면, 중화 항체), TRAIL/Apo2, 및 다른 생체활성 및 유기 화학 약제 등을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 이들의 조합물도 본 발명에 포함된다.
본원에서 사용된 바와 같이 "치료"는 치료될 개체 또는 세포의 천연 과정을 변경시키고자 하는 시도의 임상적 중재를 의미하고 예방을 위해 또는 임상적 병리 과정 동안 수행될 수 있다. 치료의 원하는 효과는 질환의 발병 또는 재발의 예방, 증상의 경감, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리학적 결과의 감소, 전이의 예방, 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 완화 또는 진정, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체는 질환 또는 장애의 발달을 지연시키기 위해 사용된다.
"유효량"은 필요한 기간 동안 필요한 투여량에서 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기에 효과적인 양을 의미한다.
본 발명의 물질/분자, 작용제 또는 길항제의 "치료 유효량"은 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 상기 물질/분자, 작용제 또는 길항제의 능력과 같은 인자에 따라 상이할 수 있다. 또한, 치료 유효량은 치료적으로 유리한 효과가 상기 물질/분자, 작용제 또는 길항제의 임의의 독성 또는 유해 효과를 능가할 때의 양이다. 용어 "치료 유효량"은 포유동물(즉, 환자)에서 질환 또는 장애를 "치료"하기에 효과적인 본 발명의 항체, 폴리펩티드 또는 길항제의 양을 의미한다. 암의 경우, 약물의 치료 유효량은 암세포의 수를 감소시킬 수 있고/있거나, 종양 크기 또는 중량을 감소시킬 수 있고/있거나; 말초 기관 내로의 암세포 침윤을 억제할 수 있고/있거나(즉, 어느 정도 느리게 할 수 있고, 바람직하게는 정지시킬 수 있고/있거나); 종양 전이를 억제할 수 있고/있거나(즉, 어느 정도 느리게 할 수 있고, 바람직하게는 정지시킬 수 있고/있거나); 종양 성장을 어느 정도 억제할 수 있고/있거나; 암과 관련된 증상들 중 1종 이상의 증상을 어느 정도 경감시킬 수 있다. 약물이 암세포의 성장을 예방할 수 있고/있거나 기존 암세포를 사멸시킬 수 있는 정도까지 상기 약물은 세포증식정지 및/또는 세포독성 효과를 나타낼 수 있다. 한 실시양태에서, 치료 유효량은 성장 억제 양이다. 또 다른 실시양태에서, 치료 유효량은 환자의 생존을 연장시키는 양이다. 또 다른 실시양태에서, 치료 유효량은 환자의 무진행 생존을 개선하는 양이다. 본원에서 사용된 바와 같이, "무진행 생존"은 치료 동안 및 치료 후 치료 의사 또는 조사자의 평가에 따를 때 환자의 질환이 더 악화되지 않는, 즉 진행되지 않는 기간을 의미한다.
"예방 유효량"은 필요한 기간 동안 필요한 투여량에서 원하는 예방 결과를 달성하기에 효과적인 양을 의미한다. 전형적으로(그러나, 반드시는 아님), 예방 투여량이 질환의 초기 단계 전에 또는 초기 단계에서 대상체에서 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량보다 적다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제하거나 방해하고/하거나 세포의 파괴를 야기하는 물질을 의미한다. 상기 용어는 방사성 동위원소(예를 들면, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학요법제, 예를 들면, 메토트렉세이트(methotrexate), 아드리아마이신(adriamicin), 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid)(빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 에토포사이드(etoposide)), 독소루비신(doxorubicin), 멜팔란(melphalan), 미토마이신 C(mitomycin C), 클로람부실(chlorambucil), 다우노루비신(daunorubicin) 또는 다른 인터칼레이팅제, 효소 및 이들의 단편, 예컨대, 핵분해 효소, 항생제, 및 세균, 진균, 식물 또는 동물 유래의 독소, 예컨대, 소분자 독소 또는 효소 활성 독소(이들의 단편 및/또는 변이체를 포함함), 및 이하에 개시된 다양한 항종양제 또는 항암제를 포함하기 위한 것이다. 다른 세포독성제는 이하에 기재되어 있다. 종양사멸제는 종양 세포의 파괴를 야기한다.
"화학요법제"는 암의 치료에서 유용한 화합물이다. 화학요법제의 예는 하기 물질들을 포함한다: 알킬화제, 예컨대, 티오테파(thiotepa), 사이톡산(CYTOXAN)(등록상표) 사이클로포스프아미드; 알킬 설포네이트, 예컨대, 부설판(busulfan), 임프로설판(improsulfan) 및 피포설판(piposulfan); 아지리딘(aziridine), 예컨대, 벤조도파(benzodopa), 카보쿠온(carboquone), 메투레도파(meturedopa) 및 우레도파(uredopa); 알트레타민(altretamine), 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌포스포르아미드, 트라이에틸렌티오포스포르아미드 및 트라이메틸올로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜아민; 아세토게닌(acetogenins)(특히, 불라타신(bullatacin) 및 불라타시논(bullatacinone)); 델타-9-테트라하이드로카나비놀(드로나비놀(dronabinol), 마리놀(MARINOL)(등록상표)); 베타-라파콘(lapachone); 라파콜(lapachol); 콜히친(colchicine); 베툴린산(betulinic acid); 캄프토테신(camptothecin)(합성 유사체 토포테칸(topotecan)(하이캄틴(HYCAMTIN)(등록상표))을 포함함), CPT-11(이리노테칸(irinotecan), 캄프토사르(CAMPTOSAR)(등록상표)), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴(scopolectin) 및 9-아미노캄프토테신); 브리오스타틴(bryostatin); 칼리스타틴(callystatin); CC-1065(그의 아도젤레신(adozelesin), 카젤레신(carzelesin) 및 비젤레신(bizelesin) 합성 유사체를 포함함); 포도필로톡신(podophyllotoxin); 포도필린산(podophyllinic acid); 테니포사이드(teniposide); 크립토파이신(cryptophycin)(특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 돌라스타틴(dolastatin); 듀오카마이신(duocarmycin)(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함함); 엘레우테로빈(eleutherobin); 판크라티스타틴(pancratistatin); 사코딕티인(sarcodictyin); 스폰기스타틴(spongistatin); 질소 머스타드, 예컨대, 클로람부실(chlorambucil), 클로르나파진(chlornaphazine), 콜로포스프아미드(cholophosphamide), 에스트라무스틴(estramustine), 이포스프아미드(ifosfamide), 메클로르에타민(mechlorethamine), 메클로르에타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친(novembichin), 페네스테린(phenesterine), 프레드니무스틴(prednimustine), 트로포스프아미드(trofosfamide), 우라실 머스타드; 니트로소우레아(nitrosureas), 예컨대, 카무스틴(carmustine), 클로로조토신(chlorozotocin), 포테무스틴(fotemustine), 로무스틴(lomustine), 니무스틴(nimustine) 및 라님누스틴(ranimnustine); 항생제, 예컨대, 에네다이인(enediyne) 항생제(예를 들면, 칼리케아미신(calicheamicin), 특히 칼리케아미신 감마II 및 칼리케아미신 오메가II(예를 들면, 문헌[Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)] 참조); 다이네마이신(dynemicin) A를 포함하는 다이네마이신; 에스퍼아미신(esperamicin); 및 네오카지노스타틴(neocarzinostatin) 발색단 및 관련 발색단백질 에네다이인 항생제 발색단), 아클라시노마이신(aclacinomysin), 악티노마이신(actinomycin), 아우쓰라마이신(authramycin), 아자세린(azaserine), 블레오마이신(bleomycin), 칵티노마이신(cactinomycin), 카라비신(carabicin), 카미노마이신(carminomycin), 카지노필린(carzinophilin), 크로모마이시니스(chromomycinis), 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신, 데토루비신(detorubicin), 6-다이아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신(등록상표) 독소루비신(모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신을 포함함), 에피루비신(epirubicin), 에소루비신(esorubicin), 이다루비신(idarubicin), 마셀로마이신(marcellomycin), 미토마이신, 예컨대, 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신(olivomycin), 펩로마이신(peplomycin), 포트피로마이신(potfiromycin), 퓨로마이신(puromycin), 쿠엘라마이신(quelamycin), 로도루비신(rodorubicin), 스트렙토니그린(streptonigrin), 스트렙토조신(streptozocin), 튜버시딘(tubercidin), 우베니멕스(ubenimex), 지노스타틴(zinostatin), 조루비신(zorubicin); 항대사물질, 예컨대, 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예컨대, 데노프테린(denopterin), 메토트렉세이트, 프테로프테린(pteropterin), 트라이메트렉세이트(trimetrexate); 퓨린 유사체, 예컨대, 플루다라빈(fludarabine), 6-머캡토퓨린, 티아미프린(thiamiprine), 티오구아닌(thioguanine); 피리미딘 유사체, 예컨대, 안시타빈(ancitabine), 아자시티딘(azacitidine), 6-아자유리딘(azauridine), 카모푸르(carmofur), 사이타라빈(cytarabine), 다이데옥시유리딘, 독시플루리딘(doxifluridine), 에노시타빈(enocitabine), 플록스유리딘(floxuridine); 안드로겐, 예컨대, 칼루스테론(calusterone), 드로모스타놀론(dromostanolone) 프로피오네이트, 에피티오스타놀(epitiostanol), 메피티오스탄(mepitiostane), 테스토락톤(testolactone); 항-아드레날, 예컨대, 아미노글루테티미드, 미토탄(mitotane), 트라이로스탄(trilostane); 엽산 보충제, 예컨대, 프롤린산(frolinic acid); 아세글라톤(aceglatone); 알도포스프아미드 글리코사이드(aldophosphamide glycoside); 아미노레불린산(aminolevulinic acid); 에닐우라실(eniluracil); 암사크린(amsacrine); 베스트라부실(bestrabucil); 비산트렌(bisantrene); 에다트락세이트(edatraxate); 데포파민(defofamine); 데메콜친(demecolcine); 다이아지쿠온(diaziquone); 엘포르니틴(elfornithine); 엘립티늄(elliptinium) 아세테이트; 에포틸론(epothilone); 에토글루시드(etoglucid); 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난(lentinan); 로니다이닌(lonidainine); 메이탄시노이드(maytansinoid), 예컨대, 메이탄신(maytansine) 및 안사미토신(ansamitocin); 미토구아존(mitoguazone); 미톡산트론(mitoxantrone); 모피단몰(mopidanmol); 니트라에린(nitraerine); 펜토스타틴(pentostatin); 페나메트(phenamet); 피라루비신(pirarubicin); 로속산트론(losoxantrone); 2-에틸하이드라지드; 프로카바진(procarbazine); PSK(등록상표) 폴리사카라이드 결합체(제이에이치에스 네추랄 프로덕츠(JHS Natural Products), 미국 오레곤주 유진 소재); 라족산(razoxane); 리족신(rhizoxin); 시조피란(sizofiran); 스피로게르마늄(spirogermanium); 테누아존산(tenuazonic acid); 트라이아지쿠온(triaziquone); 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민; 트라이코테센(trichothecene)(특히 T-2 독소, 베라쿠린(verracurin) A, 로리딘(roridin) A 및 안구이딘(anguidine)); 우레탄(urethan); 빈데신(vindesine)(엘디신(ELDISINE)(등록상표), 필데신(FILDESIN)(등록상표)); 다카바진(dacarbazine); 만노무스틴(mannomustine); 미토브로니톨(mitobronitol); 미톨락톨(mitolactol); 피포브로만(pipobroman); 가사이토신(gacytosine); 아라비노사이드("Ara-C"); 티오테파; 변성독소, 예를 들면, 탁솔(등록상표) 파클리탁셀(paclitaxel)(브리스톨-메이어스 스퀴브 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 미국 뉴저지주 프린스톤 소재), 아브락산(ABRAXANE)(상표) 크레모포르(Cremophor) 부재 알부민-조작된 파클리탁셀 나노입자 제제(아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 미국 일리노이주 샤움버그 소재) 및 탁소테레(TAXOTERE)(등록상표) 독세탁셀(론-포울렌크 로레르(Rhone-Poulenc Rorer), 프랑스 안토니 소재); 클로란부실(chloranbucil); 젬시타빈(젬자르(GEMZAR)(등록상표)); 6-티오구아닌; 머캡토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대, 시스플라틴 및 카보플라틴(carboplatin); 빈블라스틴(벨반(VELBAN)(등록상표)); 백금; 에토포사이드(VP-16); 이포스프아미드; 미톡산트론; 빈크리스틴(온코빈(ONCOVIN)(등록상표)); 옥살리플라틴(oxaliplatin); 류코보빈(leucovovin); 비노렐빈(vinorelbine)(나벨빈(NAVELBINE)(등록상표)); 노반트론(novantrone); 에다트렉세이트(edatrexate); 다우노마이신; 아미노프테린(aminopterin); 이반드로네이트(ibandronate); 토포이소머라제(topoisomerase) 억제제 RFS 2000; 다이플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노이드, 예컨대, 레티노산; 카페시타빈(젤로다(XELODA)(등록상표)); 전술한 물질들 중 임의의 물질의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 및 전술한 물질들 중 2종 이상의 물질들의 조합물, 예컨대, CHOP(사이클로포스프아미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 병용 요법에 대한 약어), 및 FOLFOX(5-FU 및 류코보빈과 조합된 옥살리플라틴(엘록사틴(ELOXATIN)(상표))을 사용한 치료 섭생법에 대한 약어). 추가 화학요법제는 항체 약물 접합체로서 유용한 세포독성제, 예컨대, 메이탄시노이드(예를 들면, DM1) 및 아우리스타틴(auristatin) MMAE 및 MMAF를 포함한다.
"화학요법제"는 암의 성장을 촉진할 수 있는 호르몬 효과를 조절하거나, 감소시키거나, 차단하거나 억제하는 작용을 하고 종종 전체 또는 전신 치료의 형태로 존재하는 "항호르몬제"도 포함한다. 이들은 호르몬 그 자체일 수 있다. 예로는 예를 들면, 타목시펜(tamoxifen)(놀바덱스(NOLVADEX)(등록상표) 타목시펜을 포함함), 에비스타(EVISTA)(등록상표) 랄록시펜(raloxifen), 드롤록시펜(droloxifene), 4-하이드록시타목시펜, 트라이옥시펜(trioxifene), 케옥시펜(keoxifene), LY117018, 오나프리스톤(onapristone) 및 파레스톤(FARESTON)(등록상표) 토레미펜(toremifene)을 포함하는 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM); 항프로게스테론; 에스트로겐 수용체 하향 조절제(ERD); 난소를 억제하거나 정지시키는 기능을 하는 약제, 예를 들면, 황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH) 작용제, 예컨대, 루프론(LUPRON)(등록상표) 및 엘리가드(ELIGARD)(등록상표) 류프롤라이드 아세테이트, 고세렐린(goserelin) 아세테이트, 부세렐린(buserelin) 아세테이트 및 트립테렐린(tripterelin); 다른 항안드로겐, 예컨대, 플루타미드, 닐루타미드 및 비칼루타미드; 및 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는 효소인 아로마타제(aromatase)를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들면, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메가스(MEGASE)(등록상표) 메게스트롤 아세테이트, 아로마신(AROMASIN)(등록상표) 엑세메스탄(exemestane), 포르메스타니(formestanie), 파드로졸(fadrozole), 리비저(RIVISOR)(등록상표) 보로졸(vorozole), 페마라(FEMARA)(등록상표) 레트로졸(letrozole) 및 아리미덱스(ARIMIDEX)(등록상표) 아나스트로졸(anastrozole)이 있다. 추가로, 화학요법제의 이러한 정의는 비스포포네이트, 예컨대, 클로드로네이트(clodronate)(예를 들면, 보네포스(BONEFOS)(등록상표) 또는 오스탁(OSTAC)(등록상표)), 다이드로칼(DIDROCAL)(등록상표) 에티드로네이트(etidronate), NE-58095, 조메타(ZOMETA)(등록상표) 졸레드론산(zoledronic acid)/졸레드로네이트(zoledronate), 포사맥스(FOSAMAX)(등록상표) 알렌드로네이트(alendronate), 아레디아(AREDIA)(등록상표) 파미드로네이트(pamidronate), 스켈리드(SKELID)(등록상표) 틸루드로네이트(tiludronate) 또는 악토넬(ACTONEL)(등록상표) 리세드로네이트(risedronate); 및 트록사시타빈(troxacitabine)(1,3-다이옥솔란 뉴클레오사이드 사이토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 특히 비정상적인 세포 증식에 관여하는 신호전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들면, PKC-알파, Raf, H-Ras, 및 표피 성장 인자(EGF-R); 백신, 예컨대, 테라토프(THERATOPE)(등록상표) 백신 및 유전자 요법 백신, 예를 들면, 알로벡틴(ALLOVECTIN)(등록상표) 백신, 레우벡틴(LEUVECTIN)(등록상표) 백신 및 백시드(VAXID)(등록상표) 백신; 루르토테칸(LURTOTECAN)(등록상표) 토포이소머라제 1 억제제; 아바렐릭스(ABARELIX)(등록상표) rmRH; 라파티니브(lapatinib) 다이토실레이트(ErbB-2 및 EGFR 이중 티로신 키나제 소분자 억제제(GW572016으로도 공지되어 있음)); 및 전술된 물질들 중 임의의 물질의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체를 포함한다.
본원에서 사용될 때 "성장 억제제"는 세포의 성장 및/또는 증식을 억제하는 화합물 또는 조성물을 의미한다. 성장 억제제의 예는 세포 주기 진행을 (S 기 이외의 주기에서) 차단하는 약제, 예컨대, G1 정지 및 M 기 정지를 유도하는 약제를 포함한다. 고전적인 M 기 차단제는 빈카스(vincas)(빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁산 및 토포이소머라제 II 억제제, 예컨대, 안쓰라사이클린 항생제 독소루비신 ((8S-시스)-10-[(3-아미노-2,3,6-트라이데옥시-α-L-라이소-헥사피라노실)옥시]-7,8,9,10-테트라하이드로-6,8,11-트라이하이드록시-8-(하이드록시아세틸)-1-메톡시-5,12-나프타센다이온), 에피루비신, 다우노루비신, 에토포사이드 및 블레오마이신을 포함한다. G1에서 정지시키는 약제, 예를 들면, DNA 알킬화제, 예컨대, 타목시펜, 프레드니손, 다카바진, 메클로르에타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실 및 아라-C는 S 기 정지도 유발한다. 추가 정보는 문헌[The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds., Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and anti-neoplastic drugs" by Murakami et al. (WB Saunders: Philadelphia, 1995), especially p. 13]에서 발견될 수 있다. 탁산(파클리탁셀 및 독세탁셀)은 주목나무로부터 유래된 항암 약물이다. 유럽 주목나무로부터 유래된 독세탁셀(탁소테레(등록상표), 론-포울렌크 로레르)은 파클리탁셀(탁솔(등록상표), 브리스톨-마이어스 스퀴브)의 반합성 유도체이다. 파클리탁셀 및 독세탁셀은 세포에서 유사분열의 억제를 초래하는 탈중합을 방지함으로써 튜불린 이량체로부터의 마이크로튜불의 조립을 촉진하고 마이크로튜불을 안정화시킨다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "환자"는 치료가 요구되는 임의의 단일 동물, 보다 바람직하게는 포유동물(비-인간 동물, 예를 들면, 개, 고양이, 말, 토끼, 동물원 동물, 소, 돼지, 양 및 비-인간 영장류를 포함함)을 의미한다. 가장 바람직하게는, 본원에서 환자는 인간이다.
본원에서 "대상체"는 혈관신생성 장애의 1종 이상의 징후, 증상 또는 다른 표시자를 경험하고 있거나 경험한, 치료하기에 적합한 환자를 포함하는 임의의 단일 인간 대상체이다. 임의의 임상적 질환 징후를 보이지 않는, 임상 연구 시험에 관여한 임의의 대상체, 유행병 연구에 관여한 대상체, 또는 대조군으로서 한번 이용된 대상체도 대상체로서 포함된다. 대상체는 이전에 항암제로 치료받았을 수 있거나 치료받지 않았을 수 있다. 대상체는 본원의 치료가 시작될 때 사용되는 추가 약제(들)에 대한 경험이 없을 수 있다. 즉, 대상체는 "기준 시점"(즉, 본원의 치료 방법에서 항암제의 제1 투여량의 투여 전 설정 시점, 예컨대, 치료가 시작되기 전 대상체를 스크리닝한 날)에서 예를 들면, 항신생물제, 화학요법제, 성장 억제제 또는 세포독성제로 이전에 치료받은 경험이 없을 수 있다. 이러한 "무경험" 대상체는 일반적으로 이러한 추가 약제(들)을 사용한 치료에 대한 후보로서 간주된다.
용어 "약학 제제"는 약물의 생물학적 활성이 효과적이게 하는 형태로 존재하고 상기 제제가 투여될 대상체에게 허용불가능한 독성을 나타내는 추가 성분을 함유하지 않는 멸균 제제를 의미한다.
"멸균" 제제는 무균 상태 또는 모든 살아있는 미생물 및 이들의 포자를 갖지 않는 상태이다.
"포장 삽입물"은 증상, 용법, 투여량, 투여, 사용금지사유, 포장된 제품과 조합되는 다른 치료 제품, 및/또는 이러한 치료 제품 또는 약제의 사용에 관한 경고 등에 대한 정보를 함유하는, 치료 제품 또는 약제의 상업적 포장물 내에 통상적으로 포함되는 설명서를 의미하기 위해 사용된다.
"키트"는 1종 이상의 시약, 예를 들면, 혈관신생 장애의 치료를 위한 약제, 또는 본 발명의 생체마커 유전자 또는 단백질을 특이적으로 검출하기 위한 프로브를 포함하는 임의의 제품(예를 들면, 포장물 또는 용기)이다. 상기 제품은 바람직하게는 본 발명의 방법을 실시하기 위한 유닛으로서 홍보되거나, 배포되거나 시판된다.
약제(들)에 대한 비-반응을 목적으로, 1종 이상의 약제를 사용한 이전 또는 현재 치료로부터 "임상적으로 허용불가능한 고 수준의 독성"을 경험하는 대상체는 숙련된 임상의에 의해 유의한 것으로 간주되는, 상기 약제와 관련된 1종 이상의 부정적인 부작용 또는 불리한 사건, 예를 들면, 심각한 감염, 울혈 심부전, 탈수초(다발성 경화증을 유발함), 유의한 과민감성, 신경병리학적 사건, 고도의 자가면역, 암, 예컨대, 자궁내막암, 비-호지킨 림프종, 유방암, 전립선암, 폐암, 난소암, 흑색종, 결핵(TB) 등을 경험한다.
"부정적인 부작용의 위험을 감소시키는"은 본원의 길항제를 사용한 치료로부터 발생된 부작용의 위험을, 이전에 투여된 약제를 사용한 동일한 환자 또는 또 다른 환자의 치료로부터 발생된 관찰된 위험보다 더 낮은 정도로 감소시키는 것을 의미한다. 이러한 부작용은 독성과 관련하여 전술된 부작용을 포함하고 바람직하게는 감염, 암, 심부전 또는 탈수초이다.
"상호관련되어 있다" 또는 "상호관련되어 있는"은 제1 분석 또는 프로토콜의 성능 및/또는 결과를 제2 분석 또는 프로토콜의 성능 및/또는 결과와 어떠한 방식으로든 비교하는 것을 의미한다. 예를 들면, 제2 프로토콜을 수행하는 데 있어서 제1 분석 또는 프로토콜의 결과를 이용할 수 있고/있거나, 제2 분석 또는 프로토콜이 수행될 수 있는지를 확인하기 위해 제1 분석 또는 프로토콜의 결과를 이용할 수 있다. 본원의 다양한 실시양태에 대하여, 항암제, 예컨대, 항-VEGF 항체를 사용한 특정 치료 섭생법이 수행되어야 하는지를 확인하기 위해 분석적 분석의 결과를 이용할 수 있다.
III . 방법
본 발명은 VEGF 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 환자를 확인하는 방법, VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료에 대한 암을 앓는 환자의 반응성을 예측하는 방법, 암을 앓는 환자가 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성을 측정하는 방법, 및 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법의 치료 효과를 최적화하는 방법을 제공한다.
상기 방법들은 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는데, 이때 상기 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 수준이 기준 수준 이상인 것이 상기 환자가 VEGF 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있다는 것, 상기 환자가 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것, 또는 상기 환자가 상기 항암요법을 사용한 치료에 반응할 가능성이 보다 더 높다는 것을 표시한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법들은 VEGF 길항제를 포함하는 항암요법을 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 이 방법은 환자로부터 수득된 샘플이 기준 수준 이상의 VEGF110의 수준을 갖는지를 확인하는 단계, 및 VEGF 길항제를 포함하는 항암요법을 유효량으로 상기 환자에게 투여하여 암을 치료하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 추가 약제(들)(예를 들면, 제2, 제3 또는 제4 약제)를 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
A. 검출 방법
개시된 방법 및 분석은 환자를 치료하기에 적절한 또는 효과적인 요법을 평가하는 데 있어서 유용한 데이터 및 정보를 수득하는, 편리하고 효율적이고 잠재적으로 비용 효과적인 수단을 제공한다. 예를 들면, 본 발명의 방법에 따라, 환자는 VEGF 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료 전 혈액 샘플을 제공할 수 있고, 상기 샘플 중의 VEGF110의 수준은 측정되어 각각 기준 샘플 중의 VEGF110의 수준 또는 미리 측정된 기준 값과 비교될 수 있다. 증가된 수준의 VEGF110을 갖는 환자는 VEGF 길항제, 예컨대, 항-VEGF 항체를 포함하는 항암요법에 반응할 가능성이 높은 환자로서 확인된다. 상기 방법은 단백질 발현을 검출하는 분석(예컨대, 효소 면역분석) 및 적절한 활성을 검출하는 생화학적 분석을 포함하는 다양한 분석 형식으로 수행될 수 있다. 샘플 중의 이러한 생체마커의 발현 또는 존재의 확인은 상기 샘플을 제공하는 환자가 VEGF 길항제의 생물학적 효과에 민감할 것임을 예측한다. 전형적으로, 기준 수준 이상의, 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 발현 수준은 환자가 VEGF 길항제를 사용한 치료에 반응하거나 민감할 것임을 표시한다.
의학 분야에서 숙련된 자, 특히 진단 시험 및 치료제를 사용한 치료의 적용 분야에 속하는 숙련된 자는 생물학적 시스템이 다소 변경가능하고 항상 전체적으로 예측될 수 없으므로 많은 우수한 진단 시험 또는 치료제가 종종 비효과적이라는 것을 인식할 것이다. 따라서, 개별 환자에 가장 적합한 치료 과정을 결정하는 것은 궁극적으로 시험 결과, 환자 상태 및 병력, 주치 의사 자신의 경험에 근거한 주치 의사의 판단에 달려 있다. 예를 들면, 환자가 VEGF 길항제에 대해 특별히 민감성을 나타낼 것으로 예측되지 않는 경우조차도, 특히 다른 자명한 치료 방법들 전부 또는 대다수가 실패하였거나 또 다른 치료와 함께 제공될 때 어느 정도의 상승효과가 기대되면 의사는 진단 시험 또는 다른 기준으로부터의 데이터에 근거하여 환자를 VEGF 길항제로 치료하는 것을 선택하는 경우도 종종 존재할 수 있다.
추가 발현된 실시양태에서, 본 발명은 샘플 중의 VEGF110의 수준을 평가하는 단계; 및 VEGF 길항제에 의한 억제에 대한 환자의 민감성을 예측하는 단계를 포함하는, VEGF 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료에 대한 환자의 민감성을 예측하거나 환자가 VEGF 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료에 효과적으로 반응할 것인지를 예측하는 방법을 제공하는데, 이때 기준 수준 이상의 VEGF110의 발현 수준은 VEGF 길항제를 사용한 치료에 대한 효과적인 반응에 대한 상기 환자의 높은 민감성과 상호관련되어 있다.
샘플은 예를 들면, 대장암, 교모세포종, 신장암, 난소암, 유방암(예를 들면, 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 포함함), 췌장암(예를 들면, 전이성 췌장암을 포함함), 위암 및 폐암을 포함하는 암을 갖는 것으로 의심되거나 진단되어 치료가 필요할 것 같은 환자로부터 수득될 수 있거나 임의의 장애를 갖는 것으로 의심되지 않는 정상 개체로부터 수득될 수 있다. 마커 발현의 평가를 위해, 환자 샘플, 예컨대, 세포, 또는 이 세포로부터 생성된 단백질 또는 핵산을 함유하는 환자 샘플이 본 발명의 방법에서 사용될 수 있다. 본 발명의 방법에서, 생체마커의 수준은 샘플 중의 상기 마커의 양(예를 들면, 절대량 또는 농도)을 평가함으로써 측정될 수 있고, 바람직하게는 검출가능한 수준의 생체마커를 함유하는 체액 또는 분비물에서 평가될 수 있다. 본 발명에서 샘플로서 유용한 체액 또는 분비물은 예를 들면, 혈액, 림프액, 객담, 복수액, 또는 임의의 다른 신체 분비물 또는 이들의 유도체를 포함한다. 용어 "혈액"은 전혈, 혈장, 혈청, 또는 혈액의 임의의 유도체를 포함하기 위한 것이다. 이러한 체액 또는 분비물 중의 생체마커의 평가는 침습 샘플링 방법이 부적절하거나 불편한 환경에서 종종 바람직할 수 있다. 그러나, 본원에서 시험될 샘플은 바람직하게는 혈액, 가장 바람직하게는 혈액 혈장이다. 한 실시양태에서, 샘플은 EDTA-혈장이다. 한 실시양태에서, 샘플은 시트레이트-혈장이다.
샘플은 동결될 수 있고/있거나, 새로 수득될 수 있고/있거나, 고정(예를 들면, 포르말린 고정)될 수 있고/있거나, 원심분리될 수 있고/있거나, 포매(예를 들면, 파라핀 포매)될 수 있다. 물론, 세포 샘플은 이 샘플 중의 상기 마커의 양을 평가하기 전에 다양한 잘 공지된 수집 후 준비 및 저장 기법(예를 들면, 핵산 및/또는 단백질 추출, 고정, 저장, 동결, 한외여과, 농축, 증발, 원심분리 등)으로 처리될 수 있다. 마찬가지로, 생검도 수집 후 준비 및 저장 기법, 예를 들면, 고정으로 처리될 수 있다.
A. VEGF 110 의 검출
VEGF110 단백질을 당업계에 공지된 임의의 적절한 방법을 이용하여 검출할 수 있다. 예를 들면, 포유동물로부터의 조직 또는 세포 샘플을 단백질에 대해 웨스턴, ELISA 등을 이용하여 편리하게 분석할 수 있다. 상기 기법들을 적용하는 데 있어서 지침을 제공하는 많은 참고문헌들이 이용될 수 있다(문헌[Kohler et al., Hybridoma Techniques (Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1980)]; 문헌[Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays (Elsevier, Amsterdam, 1985)]; 문헌[Campbell, Monoclonal Antibody Technology (Elsevier, Amsterdam, 1984)]; 문헌[Hurrell, Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications (CRC Press, Boca Raton, FL, 1982)]; 및 문헌[Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc., 1987)]).
VEGF110의 검출 또는 수준이 언급되는 경우, 이것은 VEGF110 동형체, 즉 절단 생성물 VEGF110이 측정된다는 것을 의미한다.
VEGF110 단백질의 검출에 대하여, 다양한 분석이 이용될 수 있다. 예를 들면, 샘플은 (예를 들면, 샌드위치 분석에서) 짧은 VEGF-A 동형체 VEGF110에 우선적으로 또는 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 조합물과 접촉될 수 있다. 바람직하게는, VEGF110은 긴 동형체에 비해, 특히 VEGF165에 비해 3배 이상 더 높은 민감도로 검출된다. 한 실시양태에서, VEGF165에 비해 VEGF110에 대한 3배 이상 더 높은 민감성을 갖는 항체가 사용된다. VEGF110에 대한 이러한 3배 이상 더 높은 민감성은 동일한 시약을 사용하여 VEGF165(SDS-PAGE에 의해 측정된 90% 이상의 순도 및 OD 280 nm에 의해 측정된 농도)와 절단 생성물 VEGF110(SDS-PAGE에 의해 측정된 90% 이상의 순도 및 OD 280 nm에 의해 측정된 농도)을 비교함으로써 평가된다. 이 비교에서 VEGF165에 대해 수득된 신호가 VEGF110의 사용에 의해 수득된 신호의 단지 3분의 1 이하인 경우, VEGF110은 3배 이상 더 높은 민감도로 검출된다. 당업자는 상기 신호가 바람직하게는 최대 신호의 약 50%의 판독치라는 것을 인식할 것이다. 또한, 바람직하게는, VEGF110에 대한 민감성은 긴 동형체에 비해, 특히 VEGF165에 비해 4배 이상, 5배 이상, 6배 이상, 7배 이상, 8배 이상 또는 9배 이상 더 높다.
한 바람직한 실시양태에서, VEGF110은 특이적으로 검출된다.
이러한 특이적 검출은 예를 들면, VEGF110의 자유 C-말단에 결합하는 항체, 특히 단일클론 항체가 사용되는 경우 가능하다. 이러한 VEGF110 항-C-말단 항체는 긴 폴리펩티드 쇄의 일부로서 아미노산 110을 포함하는 임의의 VEGF-A 동형체, 또는 예를 들면, 아미노산 109에서 종결되는 짧은 VEGF-A 단편에 결합하지 않는다. 상기 의미에서 VEGF110과의 특이적 결합은 사용된 항체가 그의 C-말단에서 아미노산 110을 갖지 않는 VEGF의 짧은 단편과 10% 미만의 교차반응성을 나타내고 자유 C-말단 아미노산 110을 갖지 않는 VEGF-A 동형체와 10% 미만의 교차반응성을 나타내는 경우 인식된다. 또한, 바람직하게는, 상기 교차반응성은 자유 C-말단 아미노산 110을 갖지 않는 VEGF 및 VEGF 동형체의 짧은 단편들 둘다에 대해 각각 5%, 4%, 3%, 2% 및 1% 미만일 것이다.
짧은 VEGF 절단 생성물 VEGF110에만 결합하는 적절한 특이적 항체는 표준 절차에 따라 수득될 수 있다. 통상적으로, VEGF110의 주로 C-말단에 존재하는 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이상의 아미노산을 나타내거나 포함하는 펩티드가 합성될 것이고 선택적으로 담체에 커플링될 것이고 면역화를 위해 사용될 것이다. 특이적 다클론 항체는 적절한 면역흡착 단계에 의해 수득될 수 있다. 단일클론 항체는 VEGF110과의 반응성 및 적절한 낮은 교차반응성에 대해 용이하게 스크리닝될 수 있다. VEGF110 특이적 항체의 관점에서 낮은 교차반응성은 VEGF110의 자유 C-말단 아미노산을 갖지 않는 VEGF110(예를 들면, VEGF110의 C-말단 아미노산을 결여함) 및 VEGF-A 동형체의 짧은 단편 둘다에 대해 평가될 수 있다.
다양한 측정 방법이 이용될 수 있고, 예를 들면, 항체-VEGF110 결합체가 형성되기에 충분한 조건 하에서 샘플을 VEGF110에 대한 항체와 접촉시킨 후 상기 결합체를 검출할 수 있다. VEGF110 단백질의 존재를, 매우 다양한 조직 및 샘플(혈장 또는 혈청을 포함함)을 분석하기 위한 다수의 방식, 예컨대, 웨스턴 블롯팅(면역침전을 이용하거나 이용하지 않음), 2차원적 SDS-PAGE, 면역침전, 형광 활성화된 세포 분류(FACS), 유동세포분석(flow cytometry) 및 ELISA 절차로 검출할 수 있다. 이러한 분석 형식을 이용하는 광범위한 면역분석 기법들이 이용될 수 있다(예를 들면, 미국 특허 제4,016,043호, 미국 특허 제4,424,279호 및 미국 특허 제4,018,653호 참조). 이들은 비-경쟁 유형의 단일 부위 분석 및 2개 부위 또는 샌드위치 분석 둘다를 포함할 뿐만 아니라 전통적인 경쟁 결합 분석도 포함한다. 이들 분석은 표지된 항체와 표적 생체마커의 직접적인 결합도 포함한다.
샌드위치 분석은 가장 유용한 통상적으로 이용되는 분석들 중 하나이다. 샌드위치 분석 기법의 다수의 변경된 기법들이 존재하고, 모두 본 발명에 포함된다. 요약하건대, 전형적인 정방향 분석에서 비-표지된 항체를 고체 기판 상에 고정시키고, 시험될 샘플을 결합된 분자와 접촉시킨다. 이 포획 항체의 고정은 고체상에의 직접적인 흡착에 의해 달성될 수 있거나 예를 들면, 특이적 결합 쌍, 예를 들면, 스트렙타비딘-바이오틴 결합 쌍을 통해 간접적으로 달성될 수 있다. 적절한 항온처리 기간 후, 즉 항체-항원 결합체를 형성하기에 충분한 시간 동안 항온처리한 후, 검출 신호를 생성할 수 있는 레포터 분자로 표지된 항원(즉, VEGF110)에 대해 특이적인 제2 항체를 첨가하고 항체-항원-표지된 항체로 구성된 또 다른 결합체를 형성하기에 충분한 시간 동안 항온처리한다. 임의의 미반응된 물질을 세척하여 제거하고, 레포터 분자에 의해 생성된 신호를 관찰하여 VEGF110의 존재를 확인한다. 결과는 가시적 신호의 단순 관찰에 의해 정성적으로 확인될 수 있거나 공지된 양의 생체마커를 함유하는 대조군 샘플과의 비교에 의해 정량될 수 있다. 대안적인 설정에서, VEGF110에 대해 특이적인 항체 각각을 고정시키고, 선택적으로 레포터 분자를 보유하는, VEGF110에 결합하는 항체를 사용하여 표적 분자들을 검출할 수 있다.
정방향 분석에 대한 변경은 샘플 및 표지된 항체 둘다가 결합된 항체에 동시에 첨가되는 동시적 분석을 포함한다. 이들 기법들(용이하게 자명한 바와 같이 임의의 소수의 변경된 기법들을 포함함)은 당업자에게 잘 공지되어 있다. 전형적인 정방향 샌드위치 분석에서, 제1 항체는 고체 표면에 공유 또는 수동 결합된다. 상기 고체 표면은 전형적으로 유리 또는 중합체이고, 가장 통상적으로 사용되는 중합체는 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드 또는 폴리프로필렌이다. 고체 지지체는 튜브, 비드, 마이크로플레이트의 디스크, 또는 면역분석을 수행하기에 적합한 임의의 다른 표면일 수 있다. 결합 과정은 당업계에서 잘 공지되어 있고 일반적으로 가교결합, 공유결합 또는 물리적 흡착으로 구성되고, 중합체-항체 결합체는 시험 샘플의 제조에서 세척된다. 그 다음, 시험될 샘플의 분취액을 고체상 결합체에 첨가하고 충분한 시간(예를 들면, 2분 내지 40분 또는 보다 편리한 경우 밤새) 동안 적절한 조건(예를 들면, 실온 내지 40℃, 예컨대, 25℃ 내지 32℃를 포함함) 하에서 항온처리하여 제1 또는 포획 항체와 상응하는 항원 사이의 결합을 허용한다. 항온처리 기간 후, 제1 또는 포획 항체 및 이에 결합된 항원을 포함하는 고체상을 세척하고 상기 항원 상의 또 다른 에피토프에 결합하는 제2 또는 표지된 항체와 함께 항온처리한다. 제2 항체는 제1 항체와 관심있는 항원의 결합체와 제2 항체의 결합을 표시하는 데에 사용되는 레포터 분자에 연결되어 있다.
대안적인 경쟁 방법은 VEGF110을 고체상에 고정시킨 후, 고정된 표적을 샘플과 함께 VEGF110에 대해 특이적인 항체(레포터 분자로 표지될 수 있거나 표지되지 않을 수 있음)에 노출시키는 단계를 포함한다. 표적의 양 및 레포터 분자 신호의 강도에 따라, 표적 분자에 의한 경쟁은 이러한 표지된 항체를 통해 직접적으로 검출될 수 있다. 다르게는, 제1 항체에 대해 특이적인 제2 표지된 항체를 표적-제1 항체 결합체에 노출시켜 표적-제1 항체-제2 항체 삼차 결합체를 형성한다. 상기 결합체를 레포터 분자에 의해 방사된 신호로 검출한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "레포터 분자"는 그의 화학적 성질에 의해 항원 결합된 항체의 검출을 허용하는 분석적으로 확인될 수 있는 신호를 제공하는 분자를 의미한다. 이러한 종류의 분석에서 가장 통상적으로 사용되는 레포터 분자는 효소, 형광단 또는 방사성핵종 함유 분자(즉, 방사성 동위원소) 및 화학발광 분자이다.
효소 면역분석의 경우, 효소는 일반적으로 글루타르알데하이드 또는 페리오데이트에 의해 제2 항체에 접합된다. 그러나, 용이하게 인식될 바와 같이, 당업자에 의해 용이하게 이용될 수 있는 매우 다양한 상이한 접합 기법들이 존재한다. 통상적으로 사용되는 효소는 특히, 호스라디쉬 퍼록시다제, 글루코스 옥시다제, 베타-갈락토시다제 및 알칼리성 포스파타제를 포함한다. 특이적 효소와 함께 사용될 기질은 일반적으로 상응하는 효소에 의한 가수분해 시 검출가능한 색채 변화를 발생시키도록 선택된다. 적합한 효소의 예는 알칼리성 포스파타제 및 퍼록시다제를 포함한다. 전술된 발색 기질보다는 오히려 형광 생성물을 생성하는 형광발생 기질을 사용할 수도 있다. 모든 경우에서, 효소 표지된 항체를 제1 항체-분자 마커 결합체에 첨가하고 결합시킨 후 과량의 시약을 세척하여 제거한다. 이어서, 적절한 기질을 함유하는 용액을 항체-항원-항체의 결합체에 첨가한다. 상기 기질은 제2 항체에 연결된 효소와 반응하여, 통상적으로 분광광도계에 의해 더 정량될 수 있는 정성적 가시적 신호를 제공함으로써 샘플에 존재하는 VEGF110의 양의 표시를 제공할 것이다. 다르게는, 항체의 결합 성능을 변경시키지 않으면서 형광 화합물, 예컨대, 플루오레세인 및 로다민을 항체에 화학적으로 커플링시킬 수 있다. 특정 파장의 광을 사용한 조명에 의해 활성화되는 경우, 형광색소 표지된 항체는 분자에서 여기가능한 상태를 유도하는 광 에너지를 흡수한 후 광학 현미경에 의해 가시적으로 검출될 수 있는 특징적인 색채에서 광을 방사한다. EIA에서와 같이, 형광 표지된 항체를 제1 항체-분자 마커 결합체에 결합시킨다. 비결합된 시약을 세척한 후, 남은 삼차 결합체를 적절한 파장의 광에 노출시키고, 관찰된 형광은 VEGF110의 존재를 표시한다. 면역형광 및 EIA 기법 둘다 당업계에서 매우 잘 확립되어 있다. 그러나, 다른 레포터 분자, 예컨대, 방사성 동위원소, 화학발광 또는 생체발광 분자도 사용될 수 있다. VEGF를 검출하기 위한 면역분석은 예를 들면, 미국 특허 제6,855,508호, 미국 특허 제7,541,160호 및 미국 특허출원 공개 제2010/0255515호에 기재되어 있다. VEGF를 검출하기에 적합한 플랫폼은 예를 들면, 유럽 특허 제0939319호 및 유럽 특허 제1610129호에 기재되어 있다.
B. 키트
VEGF110의 검출에서 사용될 키트 또는 제품도 본 발명에 의해 제공된다. 이러한 키트는 대상체가 VEGF 길항제를 포함하는 항암요법에 효과적으로 반응할지를 확인하는 데에 사용될 수 있다. 이들 키트는 밀폐된 공간 내에 1개 이상의 용기 수단, 예컨대, 바이알, 튜브 등을 수용하도록 구획화되어 있는 담체 수단을 포함할 수 있고, 각각의 용기 수단은 상기 방법에서 사용될 분리된 구성요소들 중 하나를 포함한다. 예를 들면, 용기 수단 중 하나는 검출가능하게 표지되어 있거나 표지될 수 있는 프로브를 포함할 수 있다. 이러한 프로브는 VEGF110 단백질에 대해 특이적인 항체일 수 있다. 상기 키트는 레포터 분자, 예컨대, 효소 표지, 형광 표지 또는 방사성 동위원소 표지에 결합된 레포터 수단, 예컨대, 바이오틴 결합 단백질, 예를 들면, 아비딘 또는 스트렙타비딘을 포함하는 용기를 가질 수도 있다.
이러한 키트는 전형적으로 전술된 용기, 및 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 주사기 및 사용을 위한 설명서를 갖는 포장 삽입물을 포함하는, 상업적 및 사용자 관점에서 볼 때 바람직한 물질을 포함하는 1개 이상의 다른 용기를 포함할 것이다. 조성물이 특정 적용을 위해 사용된다는 것을 표시하고 생체내 또는 시험관내 용도, 예컨대, 전술된 용도에 대한 지시도 표시할 수 있는 표지가 용기 상에 존재할 수 있다.
본 발명의 키트는 다수의 실시양태를 갖는다. 전형적인 실시양태는 용기, 상기 용기 상의 표지 및 상기 용기 내에 함유된 조성물을 포함하는 키트이고, 이때 상기 조성물은 VEGF110에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 용기 상의 표지는 상기 조성물이 샘플 중의 VEGF110의 존재를 평가하는 데에 사용될 수 있다는 것을 표시하고, 상기 키트는 특정 종류의 샘플 중의 VEGF110의 존재를 평가하기 위한 항체의 사용에 대한 설명서를 포함한다. 상기 키트는 샘플을 준비하고 항체를 샘플에 적용하기 위한 설명서 및 물질의 세트를 추가로 포함할 수 있다. 상기 키트는 일차 항체 및 이차 항체 둘다를 포함할 수 있고, 이때 이차 항체는 표지, 예를 들면, 효소 표지에 접합된다.
키트의 다른 선택적인 성분은 1종 이상의 완충제(예를 들면, 차단 완충제, 세척 완충제, 기질 완충제 등), 효소 표지에 의해 화학적으로 변경되는 다른 시약, 예컨대, 기질(예를 들면, 발색체), 에피토프 복구 용액, 대조군 샘플(양성 및/또는 음성 대조군), 대조군 슬라이드(들) 등을 포함한다. 키트는 이 키트를 사용하여 수득한 결과의 해석에 대한 설명서도 포함할 수 있다.
한 추가 특정 실시양태에서, 항체 기제 키트의 경우, 이 키트는 예를 들면 (1) VEGF110에 결합하는 (예를 들면, 고체 지지체에 부착되어 있거나 고체 지지체에 결합할 수 있는) 제1 항체, 및 (2) VEGF110에 우선적으로 결합하는 상이한 제2 항체 각각을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 후자 항체는 동일한 레포터 분자로 표지된다. 물론, 이러한 분석을 디자인할 때 제1 항체를 제2 항체와 교환할 수도 있고 반대의 경우도 가능하다.
B. 치료 방법
본 발명의 몇몇 방법은 기준 샘플에 비해 증가된 수준의 VEGF110을 갖는 환자에게 VEGF 길항제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 본 발명의 다른 실시양태는 VEGF 길항제를 포함하는 항암요법으로 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 투약 섭생법은 원하는 최적 반응(예를 들면, 치료 반응)을 제공하도록 조절될 수 있다. 예를 들면, 1회 투여량이 투여될 수 있거나, 수회 분할된 투여량이 시간에 따라 투여될 수 있거나, 투여량이 치료 상황의 요건에 의해 표시되는 바와 같이 비례적으로 감소될 수 있거나 증가될 수 있다.
당업계에서 통상의 기술을 가진 의사는 구체적인 항암제의 종류와 같은 인자에 따라 요구되는 약학 조성물의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들면, 상기 의사는 원하는 치료 효과를 달성하기 위해 요구되는 수준보다 낮은 수준으로 약학 조성물에서 사용되는 이러한 항암제, 예컨대, 항-VEGF-A 항체의 투여량으로 시작하고 원하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점진적으로 증가시킬 수 있다. 상기 길항제의 주어진 투여량 또는 치료 섭생법의 효과는 예를 들면, 표준 효과 측정을 이용하여 환자에서 징후 및 증상을 평가함으로써 측정될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 대상체는 동일한 항암제, 예컨대, 항-VEGF-A 항체로 2회 이상 치료받는다. 따라서, 제1 길항제 노출 및 제2 길항제 노출은 바람직하게는 동일한 길항제에 의해 달성되고, 보다 바람직하게는 모든 길항제 노출이 동일한 길항제에 의해 달성된다. 즉, 처음 2회 노출, 바람직하게는 모든 노출을 위한 치료가 1종의 항암제, 예를 들면, VEGF에 결합하는 길항제, 예컨대, 항-VEGF 항체, 예를 들면, 베바시주마브에 의해 달성된다.
본원에 기재된 모든 본 발명의 방법에서, 항암제(예컨대, VEGF에 결합하는 항체)는 비접합된 항체, 예컨대, 네이키드 항체일 수 있거나, 추가 효과, 예를 들면, 반감기를 개선하기 위해 또 다른 분자와 접합될 수 있다.
본원에서 한 바람직한 항암제는 키메라, 인간화된 또는 인간 항체, 예를 들면, 항-VEGF 항체, 바람직하게는 베바시주마브이다.
또 다른 실시양태에서, VEGF 길항제(예를 들면, 항-VEGF 항체)가 대상체에게 투여되는 유일한 약제이다.
한 실시양태에서, 길항제는 약 100 ㎎ 또는 400 ㎎의 투여량으로 1주, 2주, 3주 또는 4주마다 투여되거나 약 1 ㎎/㎏, 3 ㎎/㎏, 5 ㎎/㎏, 7.5 ㎎/㎏, 10 ㎎/㎏, 15 ㎎/㎏ 또는 20 ㎎/㎏의 투여량으로 1주, 2주, 3주 또는 4주마다 투여되는 항-VEGF 항체이다. 상기 투여량은 단회 투여량 또는 다회 투여량(예를 들면, 2회 또는 3회 투여량)으로서 투여, 예컨대, 관주될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 진단 단계 후 암으로 진단받은 대상체에게 항암제(예를 들면, 항-VEGF 항체)를 계속 투여할 것인지를 결정하는 방법으로서, 길항제의 제1 투여 후 영상화 기법, 예컨대, 방사선촬영 및/또는 MRI를 이용하여 종양 크기의 감소를 측정하는 단계, 길항제의 제2 투여 후 영상화 기법, 예컨대, 방사선촬영 및/또는 MRI를 이용하여 대상체에서 종양 크기의 감소를 측정하는 단계, 제1 투여 및 제2 투여에서 상기 대상체의 영상화 소견을 비교하는 단계, 및 점수가 제1 투여에서보다 제2 투여에서 더 낮은 경우 길항제의 투여를 계속하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
추가 실시양태에서, 반응 수준이 혈관신생 장애의 치료에 효과적인지를 확인하기 위해 투여 단계 후 치료에 대한 대상체의 반응을 시험하는 단계가 치료 방법에 포함된다. 예를 들면, 투여 후 영상화(방사선촬영 및/또는 MRI) 점수를 시험하고 이를 치료 전에 수득된 기준 영상화 결과와 비교하여 상기 점수가 변화되었다면 얼마나 변화되었는지를 측정함으로써 치료가 효과적인지를 확인하는 단계가 포함된다. 이 시험은 임의의 부분적 또는 완전한 관해의 유지를 결정하기 위해 치료 후 다양한 예정된 또는 예정되지 않은 시간 간격에서 반복될 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, VEGF 길항제, 예컨대, 항-VEGF 항체 이외의 다른 약제는 암을 치료하기 위해 대상체에게 투여되지 않는다.
본원의 방법들 중 임의의 방법에서, 항암제는 유효량의 추가 약제(들)와 조합되어 투여될 수 있다. 적합한 추가 약제(들)는 예를 들면, 항림프관신생제, 항혈관신생제, 항신생물제, 화학요법제, 성장 억제제, 세포독성제 또는 이들의 조합물을 포함한다.
모든 이들 추가 약제(들)이 서로 조합되어 사용될 수 있거나 그들 자체가 제1 약제와 조합되어 사용될 수 있으므로, 본원에서 사용된 표현 "추가 약제"는 이 추가 약제가 VEGF 길항제 이외의 유일한 약제임을 의미하지는 않는다. 따라서, 추가 약제는 단일 약제일 필요가 없고 1종 초과의 이러한 약물을 구성할 수 있거나 포함할 수 있다.
본원에 기재된 이들 추가 약제(들)는 일반적으로 상기 사용된 바와 동일한 투여량 및 투여 경로로 사용되거나 상기 사용된 투여량의 약 1% 내지 99%로 사용된다. 이러한 추가 약제(들)가 어쨌든 사용되는 경우, 바람직하게는, 상기 추가 약제는 제1 약제가 존재하지 않는 경우보다 더 낮은 양으로, 특히 이러한 사용에 의해 야기되는 부작용을 제거하거나 감소시키기 위해 제1 약제를 사용한 제1 투약 후 후속 투약에서 사용된다.
본원에 기재된 재치료 방법에서, 추가 약제(들)가 길항제 노출과 함께 유효량으로 투여되는 경우, 상기 추가 약제는 임의의 노출과 함께, 예를 들면, 1회 노출과 함께 또는 1회 초과의 노출과 함께 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 추가 약제(들)는 제1 노출과 함께 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 추가 약제(들)는 제1 노출 및 제2 노출과 함께 투여된다. 추가 실시양태에서, 추가 약제(들)는 모든 노출과 함께 투여된다. 예컨대, 스테로이드의 제1 노출 후, 이러한 추가 약제(들)의 양이 부작용을 갖는 약제, 예컨대, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론 및 사이클로포스프아미드에의 대상체의 노출을 감소시키기 위해 감소되거나 제거되는 것이 바람직하다.
추가 약제(들)의 조합된 투여는 분리된 제제 또는 단일 약학 제제를 사용하는 동시 투여(병행 투여), 및 임의의 순서의 연속 투여를 포함하고, 이때 바람직하게는 활성제(약제) 둘다(또는 모두)가 그들의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는 기간이 존재한다.
항암요법은 비경구, 국소, 피하, 복강내, 폐내, 비내 및/또는 병소내 투여를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여된다. 비경구 관주는 근육내, 정맥내(i.v.), 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 경막내 투여도 고려된다. 또한, 항암제는 적합하게는 펄스 관주, 예를 들면, 항암제의 투여량을 감소시키면서 투여될 수 있다. 바람직하게는, 투약은 정맥내 또는 피하로 제공되고, 보다 바람직하게는 정맥내 관주(들)에 의해 제공된다.
항암제의 다회 노출이 제공되는 경우, 동일한 또는 상이한 투여 수단을 사용하여 각각의 노출을 제공할 수 있다. 한 실시양태에서, 각각의 노출은 정맥내 투여에 의해 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 각각의 노출은 피하 투여에 의해 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 노출은 정맥내 투여 및 피하 투여 둘다에 의해 제공된다.
한 실시양태에서, 항암제, 예컨대, 항-VEGF 항체는 관주 푸쉬(push) 또는 볼루스(bolus)보다는 오히려 느린 정맥내 관주로서 투여된다. 예를 들면, 스테로이드, 예컨대, 프레드니솔론 또는 메틸프레드니솔론(예를 들면, 약 80 ㎎ 내지 120 ㎎ 정맥내, 보다 구체적으로 약 100 ㎎ 정맥내)은 항-VEGF 항체의 임의의 관주 약 30분 전에 투여된다. 항-VEGF 항체는 예를 들면, 전용선을 통해 관주된다.
항-VEGF 항체에의 다회 투약 노출의 제1 투약, 또는 노출이 1회만의 투약을 수반하는 단회 투약의 경우, 이러한 관주는 바람직하게는 약 50 ㎎/시간의 속도로 시작된다. 이것은 예를 들면, 약 30분마다 약 50 ㎎/시간 증가의 속도로 약 400 ㎎/시간의 최대치까지 상승될 수 있다. 그러나, 대상체가 관주 관련 반응을 경험하는 경우, 관주 속도는 바람직하게는 예를 들면, 현재 속도의 절반까지, 예를 들면, 100 ㎎/시간에서 50 ㎎/시간까지 감소된다. 바람직하게는, 이러한 투여량(예를 들면, 약 1000 ㎎ 총 투여량)의 항-VEGF 항체의 관주는 약 255분(4시간 15분)에서 완료된다. 선택적으로, 대상체는 관주 시작 약 30분 내지 60분 전에 구강을 통해 아세트아미노펜/파라세타몰(예를 들면, 약 1 g) 및 다이펜하이드라민 HCl(예를 들면, 약 50 ㎎ 또는 등가 투여량의 유사한 약제)의 예방 치료를 제공받는다.
총 노출을 달성하기 위해 항-VEGF 항체의 1회 초과의 관주(투약)가 제공되는 경우, 이 관주 실시양태에서 제2 또는 후속 항-VEGF 항체 관주는 바람직하게는 제1 관주보다 더 높은 속도, 예를 들면, 약 100 ㎎/시간의 속도로 시작된다. 이 속도는 예를 들면, 약 30분마다 약 100 ㎎/시간 증가의 속도로 약 400 ㎎/시간의 최대치까지 상승될 수 있다. 관주 관련 반응을 경험하는 대상체의 경우 바람직하게는 관주 속도를 그 속도의 절반까지, 예를 들면, 100 ㎎/시간에서 50 ㎎/시간까지 감소시킨다. 바람직하게는, 이러한 제2 또는 후속 투여량(예를 들면, 약 1000 ㎎ 총 투여량)의 항-VEGF 항체의 관주는 약 195분(3시간 15분)까지 완료된다.
바람직한 실시양태에서, 항암제는 항-VEGF 항체이고 약 0.4 g 내지 4 g의 투여량으로 투여되고, 보다 바람직하게는 상기 항체는 약 1개월의 기간 이내에 1회 내지 4회 투약의 빈도로 약 0.4 g 내지 1.3 g의 투여량으로 투여된다. 훨씬 더 바람직하게는, 투여량은 약 500 ㎎ 내지 1.2 g이고, 다른 실시양태에서 약 750 ㎎ 내지 1.1 g이다. 이러한 양태에서, 길항제는 바람직하게는 2회 내지 3회 투약으로 투여되고/되거나 약 2주 내지 3주의 기간 이내에 투여된다.
한 실시양태에서, 대상체는 암을 치료하기 위해 이전에 임의의 약물(들)을 투여받은 경험이 없다. 또 다른 실시양태에서, 대상체 또는 환자는 암을 치료하기 위해 이전에 1종 이상의 약물(들)을 투여받았다. 추가 실시양태에서, 대상체 또는 환자는 이전에 투여받은 1종 이상의 약물에 대해 반응하지 않았다. 대상체가 반응하지 않을 수 있는 이러한 약물은 예를 들면, 항신생물제, 화학요법제, 세포증식정지제 및/또는 성장 억제제를 포함한다. 보다 구체적으로, 대상체가 반응하지 않을 수 있는 약물은 VEGF 길항제, 예컨대, 항-VEGF 항체를 포함한다. 추가 양태에서, 이러한 항암제는 대상체가 이전에 반응하지 않은 본 발명의 1종 이상의 항체 또는 면역어드헤신을 사용한 재치료가 고려되도록 항체 또는 면역어드헤신을 포함한다.
IV . 항암제를 사용한 치료
일단 VEGF 길항제를 사용한 치료에 가장 잘 반응하거나 민감한 환자 집단이 확인되면, 단독으로 또는 다른 약제와 조합하여 VEGF 길항제를 사용하는 치료는 암 환자에게 치료적 이익을 제공한다. 예를 들면, 이러한 치료는 종양 크기 감소 또는 무진행 생존을 제공할 수 있다. 나아가, 항암제와 1종 이상의 추가 약제(들)의 조합물을 사용한 치료는 바람직하게는 부가적, 보다 바람직하게는 상승작용적(또는 부가적보다 더 큰) 치료 이익을 환자에게 제공한다. 바람직하게는, 이러한 조합 방법에서 추가 약제(들)의 1회 이상의 투여와 항암제의 1회 이상의 투여 사이의 시간은 약 1개월 이하, 보다 바람직하게는 약 2주 이하이다.
당업자는 항암제에 대한 환자의 가능한 반응성의 진단 후 치료 유효량의 항암제를 상기 환자에게 투여하는 정확한 방식이 주치 의사의 재량에 달려 있을 것임을 인식할 것이다. 투여량, 다른 약제와의 조합, 투여 시간 및 빈도 등을 포함하는 투여 방식은 이러한 항암제에 대한 환자의 가능한 반응성의 진단뿐만 아니라 환자의 상태 및 병력에 의해 영향을 받을 수 있다. 따라서, 항암제에 대해 상대적으로 민감하지 않을 것으로 예측되는 장애로 진단받은 환자조차도 상기 항암제를 사용한 치료, 특히 상기 항암제에 대한 환자의 반응성을 변경시킬 수 있는 약제를 포함하는 다른 약제와 조합된 상기 항암제를 사용한 치료로부터 여전히 이익을 얻을 수 있다.
항암제를 포함하는 조성물은 우수한 의학적 관행과 일치하는 방식으로 제제화되고 투약되고 투여될 것이다. 이 내용에서 고려될 인자는 치료될 구체적인 장애의 종류, 치료받을 구체적인 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 혈관신생 장애의 원인, 약제의 전달 부위, 가능한 부작용, 길항제의 종류, 투여 방법, 투여 일정 및 의사에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 투여될 항암제의 유효량은 이러한 고려사항에 의해 좌우될 것이다.
일반적인 제안으로서, 투여량 당 비경구적으로 투여되는 항암제의 유효량은 1회 이상의 투약에 의한 약 20 ㎎ 내지 약 5000 ㎎의 범위 내에 있을 것이다. 항체, 예컨대, 항-VEGF 항체에 대한 예시적인 투약 섭생법은 1주, 2주, 3주 또는 4주마다 100 ㎎ 또는 400 ㎎을 포함하거나 1주, 2주, 3주 또는 4주마다 약 1 ㎎/㎏, 3 ㎎/㎏, 5 ㎎/㎏, 7.5 ㎎/㎏, 10 ㎎/㎏, 15 ㎎/㎏ 또는 20 ㎎/㎏의 투여량이 투여된다. 상기 투여량은 단회 투여량 또는 다회 투여량(예를 들면, 2회 또는 3회 투여량)으로서 투여, 예컨대, 관주될 수 있다.
그러나, 전술된 바와 같이, 항암제의 이들 제안된 양은 많은 치료 재량에 의해 좌우된다. 전술된 바와 같이, 적절한 투여량을 선택하고 일정을 조정함에 있어서 핵심 인자는 수득된 결과이다. 몇몇 실시양태에서, 항암제는 장애의 제1 징후, 진단, 출현 또는 발병에 가능한 가까운 시점에서 투여된다.
항암제는 비경구, 국소, 피하, 복강내, 폐내, 비내 및/또는 병소내 투여를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여된다. 비경구 관주는 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 경막내 투여도 고려된다. 또한, 길항제는 적합하게는 펄스 관주, 예를 들면, 항암제의 투여량을 감소시키면서 투여될 수 있다. 가장 바람직하게는, 투약은 정맥내 주사에 의해 제공된다.
전술된 바와 같이, 본원의 항암제와 함께 추가 약제(들)를 투여할 수 있다. 조합된 투여는 분리된 제제 또는 단일 약학 제제를 사용하는 동시 투여, 및 임의의 순서의 연속 투여를 포함하고, 이때 바람직하게는 활성제 둘다(또는 모두)가 그들의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는 기간이 존재한다.
전술된 바와 같이 항암제를 전통적인 경로로 환자에게 투여하는 것과 별개로, 본 발명은 유전자 요법에 의한 치료를 포함한다. 항암제를 코딩하는 핵산의 이러한 투여는 표현 "유효량의 항암제를 투여하는"에 포함된다. 예를 들면, 세포내 항체를 발생시키기 위한 유전자 요법의 이용에 관해서는 PCT 특허출원 공개 제WO1996/07321호를 참조한다.
환자의 세포 내로 (선택적으로 벡터 내에 함유된) 핵산을 도입하는 2종의 주요 방법, 즉 생체내 전달 및 생체외 전달이 존재한다. 생체내 전달의 경우, 핵산을 통상적으로 길항제가 요구되는 부위에서 환자 내로 직접 주사한다. 생체외 치료의 경우, 환자의 세포를 제거하고, 핵산을 이들 단리된 세포 내로 도입하고, 변형된 세포를 직접 환자에게 투여하거나 예를 들면, 환자 내로 이식되는 다공성 막 내에 캡슐화시킨다(예를 들면, 미국 특허 제4,892,538호 및 미국 특허 제5,283,187호 참조). 핵산을 생존 세포 내로 도입하기 위해 이용될 수 있는 다양한 기법들이 존재한다. 이 기법들은 핵산이 시험관내에서 배양된 세포 내로 전달되는지 아니면 생체내에서 의도된 숙주의 세포 내로 전달되는지에 따라 상이하다. 시험관내에서 핵산을 포유동물 세포 내로 전달하기에 적합한 기법은 리포좀의 이용, 전기천공, 마이크로주사, 세포 융합, DEAE-덱스트란, 인산칼슘 침전 방법 등을 포함한다. 유전자의 생체외 전달을 위해 통상적으로 사용되는 벡터는 레트로바이러스이다.
현재 바람직한 생체내 핵산 전달 기법은 바이러스 벡터(예컨대, 아데노바이러스, 헤르페스 심플렉스 I 바이러스 또는 아데노 관련 바이러스) 및 지질 계열 시스템(유전자의 지질 매개 전달에 유용한 지질은 예를 들면, DOTMA, DOPE 및 DC-Chol임)을 사용한 형질감염을 포함한다. 몇몇 상황에서, 표적 세포에 대해 특이적인 약제, 예컨대, 표적 세포 상의 세포 표면 막 단백질에 대해 특이적인 항체, 표적 세포 상의 수용체에 대한 리간드 등을 핵산 공급원에 제공하는 것이 바람직하다. 리포좀이 사용되는 경우, 세포내이입(endocytosis)과 관련된 세포 표면 막 단백질에 결합하는 단백질, 예를 들면, 특정 종류의 세포에 대한 친화성을 보이는 캡시드 단백질 또는 이의 단편, 세포주기에서 내재화를 경험하는 단백질에 대한 항체, 및 세포내 국소화를 표적화하고 세포내 반감기를 향상시키는 단백질이 표적화를 위해 및/또는 섭취를 촉진하기 위해 사용될 수 있다. 수용체 매개 세포내이입의 기법은 예를 들면, 문헌[Wu et al., J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)] 및 문헌[Wagner et al., PNAS USA 87:3410-3414 (1990)]에 기재되어 있다. 유전자 마킹(marking) 및 유전자 요법 프로토콜은 예를 들면, 문헌[Anderson et al., Science 256:808-813 (1992)] 및 PCT 특허출원 공개 제WO1993/25673호에 기재되어 있다.
항암제는 약학 조합 제제 또는 병용 요법으로서의 투약 섭생법에서 항암성을 갖는 1종 이상의 추가 화합물과 조합될 수 있다. 상기 약학 조합 제제 또는 투약 섭생법의 상기 1종 이상의 추가 화합물은 바람직하게는 서로에 불리한 영향을 미치지 않도록 VEGF 길항제 조성물에 대한 상보적 활성을 갖는다.
상기 1종 이상의 추가 화합물은 화학요법제, 세포독성제, 사이토카인, 성장 억제제, 항호르몬제, 항혈관신생제, 항림프관신생제 및 이들의 조합물일 수 있다. 이러한 분자는 적합하게는 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 존재한다. VEGF 길항제(예를 들면, 항-VEGF 항체)를 함유하는 약학 조성물은 치료 유효량의 항신생물제, 화학요법제, 성장 억제제, 세포증식정지제 또는 이들의 조합물도 포함할 수 있다.
한 양태에서, 제1 화합물은 항-VEGF 항체이고, 1종 이상의 추가 화합물은 항-VEGF 항체 이외의 치료 항체이다. 한 실시양태에서, 상기 1종 이상의 추가 화합물은 암 세포 표면 마커에 결합하는 항체이다. 한 실시양태에서, 상기 1종 이상의 추가 화합물은 항-HER2 항체인 트라스투주마브(예를 들면, 헤르셉틴(Herceptin)(등록상표), 제넨테크 인코포레이티드(Genentech, Inc.), 미국 캘리포니아주 사우쓰 샌 프란시스코 소재)이다. 한 실시양태에서, 상기 1종 이상의 추가 화합물은 항-HER2 항체인 퍼투주마브(옴니타르그(Omnitarg)(상표), 제넨테크 인코포레이티드, 미국 캘리포니아주 사우쓰 샌 프란시스코 소재, 미국 특허 제6949245호 참조)이다. 한 실시양태에서, 상기 1종 이상의 추가 화합물은 항체(네이키드 항체 또는 ADC)이고, 추가 항체는 제2 항체, 제3 항체, 제4 항체, 제5 항체, 제6 항체 또는 그 이상의 항체이므로, (네이키드 항체 또는 ADC로서의) 이러한 제2 항체, 제3 항체, 제4 항체, 제5 항체, 제6 항체 또는 그 이상의 항체의 조합물은 혈관신생 장애의 치료에 효과적이다.
본 발명에 따른 다른 치료 섭생법은 VEGF-길항제 항암제의 투여를 포함할 수 있고 방사선요법 및/또는 골수 및 말초 혈액 이식, 및/또는 세포독성제, 화학요법제 또는 성장 억제제를 포함할 수 있으나 이들로 한정되지 않는다. 이러한 실시양태들 중 한 실시양태에서, 화학요법제는 1종의 약제이거나, 약제들, 예컨대, 사이클로포스프아미드, 하이드록시다우노루비신, 아드리아마이신, 독소루비신, 빈크리스틴(온코빈(ONCOVIN)(상표)), 프레드니솔론, CHOP, CVP 또는 COP, 또는 면역치료제, 예컨대, 항-PSCA, 항-HER2(예를 들면, 헤르셉틴(등록상표), 및 옴니타르그(상표))의 조합물이다. 병용 요법은 동시적 또는 순차적 섭생법으로서 투여될 수 있다. 순차적으로 투여되는 경우, 병용 요법은 2회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 조합된 투여는 분리된 제제 또는 단일 약학 제제를 사용하는 동시 투여, 및 임의의 순서의 연속 투여를 포함하고, 이때 바람직하게는 활성제 둘다(또는 모두)가 그들의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는 기간이 존재한다.
한 실시양태에서, 항-VEGF 항체를 사용한 치료는 본원에서 확인된 항암제와 1종 또는 2종 이상의 화학요법제 또는 성장 억제제의 조합된 투여(상이한 화학요법제들의 칵테일의 동시 투여를 포함함)를 포함한다. 화학요법제는 탁산(예컨대, 파클리탁셀 및 독세탁셀) 및/또는 안쓰라사이클린 항생제를 포함한다. 이러한 화학요법제에 대한 제조 및 투약 일정은 제조자의 설명서에 따라 이용될 수 있거나 숙련된 실시자에 의해 실험적으로 결정된 바와 같이 이용될 수 있다. 이러한 화학요법에 대한 제조 및 투약 일정은 문헌["Chemotherapy Service", (1992) Ed., M.C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, Md]에도 기재되어 있다.
상기 동시 투여되는 약제들 중 임의의 약제에 대한 적합한 투여량은 현재 이용되는 투여량이고 새롭게 확인된 약제 및 다른 화학요법제 또는 치료의 조합된 작용(상승효과)으로 인해 낮아질 수 있다.
병용 요법은 "상승효과"를 제공할 수 있고 "상승작용적" 효과, 즉 함께 사용된 활성 성분들이 화합물을 따로 사용하였을 때 발생된 효과의 합계보다 더 큰 경우 달성되는 효과를 나타낼 수 있다. 상승작용적 효과는 활성 성분들이 (1) 동시제제화되어 조합된 유닛 투약 제제로 동시에 투여되거나 전달되는 경우; (2) 분리된 제제로서 교대로 또는 병렬적으로 전달되는 경우; 또는 (3) 몇몇 다른 섭생법에 의해 전달되는 경우 달성될 수 있다. 교대 요법으로 전달되는 경우, 상승작용적 효과는 화합물들이 예를 들면, 분리된 주사기에 의한 상이한 주사에 의해 순차적으로 투여되거나 전달되는 경우 달성될 수 있다. 일반적으로, 교대 요법 동안 유효 투여량의 각각의 활성 성분이 순차적으로, 즉 연속적으로 투여되는 반면, 병용 요법에서 유효 투여량의 2종 이상의 활성 성분은 함께 투여된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 추가 치료제의 적절한 투여량은 치료될 질환의 종류, 항체의 종류, 질환의 중증도 및 경과, VEGF 길항제 및 추가 약제가 예방 목적으로 투여되는지 아니면 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 VEGF 길항제 및 추가 약제에 대한 환자의 반응, 및 주치 의사의 재량에 의해 좌우될 것이다. VEGF 길항제 및 추가 약제는 적합하게는 환자에게 한 번에 투여되거나 일련의 치료에 걸쳐 투여된다. VEGF 길항제는 전형적으로 전술된 바와 같이 투여된다. 질환의 종류 및 중증도에 따라 약 20 ㎎/㎡ 내지 600 ㎎/㎡의 추가 약제가 예를 들면, 1회 이상의 분리된 투여에 의해 투여되든 아니면 연속적 관주에 의해 투여되든 관계없이 환자에게 투여될 초기 후보 투여량이다. 전형적인 1일 1회 투여량은 전술된 인자에 따라 약 20 ㎎/㎡, 85 ㎎/㎡, 90 ㎎/㎡, 125 ㎎/㎡, 200 ㎎/㎡, 400 ㎎/㎡ 또는 500 ㎎/㎡ 이상이다. 여러 날 또는 이보다 긴 기간에 걸친 반복된 투여의 경우, 상태에 따라 치료는 질환 증상의 원하는 억제가 일어날 때까지 지속된다. 따라서, 약 20 ㎎/㎡, 85 ㎎/㎡, 90 ㎎/㎡, 125 ㎎/㎡, 200 ㎎/㎡, 400 ㎎/㎡, 500 ㎎/㎡ 또는 600 ㎎/㎡(또는 이들의 임의의 조합)의 1회 이상의 투여량이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 투여량은 (예를 들면, 환자가 약 2회 내지 약 20회, 예를 들면, 약 6회 투여량의 추가 약제를 제공받도록) 간헐적으로, 예를 들면, 매주마다, 또는 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주마다 투여될 수 있다. 초기 보다 높은 적재 투여량에 이어서 1회 이상의 보다 낮은 투여량이 투여될 수 있다. 그러나, 다른 투약 섭생법도 유용할 수 있다. 이 요법의 진행은 통상적인 기법 및 분석에 의해 용이하게 모니터링된다.
V. 약학 제제
본 발명에 따라 사용되는 길항제의 치료 제제는 원하는 순도를 갖는 상기 길항제를 선택적인 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합함으로써 동결건조된 제제 또는 수용액의 형태로 저장용으로 제조된다. 제제에 관한 일반적인 정보에 대해서는 예를 들면, 문헌[Gilman et al. , (eds.) (1990), The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8th Ed., Pergamon Press]; 문헌[A. Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, (1990), Mack Publishing Co., Eastori, Pennsylvania.]; 문헌[Avis et al., (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications Dekker, New York]; 문헌[Lieberman et al.., (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets Dekker, New York]; 문헌[Lieberman et al., (eds.) (1990), Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, New York]; 및 문헌[Kenneth A. Walters (ed.) (2002) Dermatological and Transdermal Formulations (Drugs and the Pharmaceutical Sciences), Vol 119, Marcel Dekker)]을 참조한다.
허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성을 나타내고 완충제, 예컨대, 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 방부제(예컨대, 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신; 모노사카라이드, 다이사카라이드, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이팅제, 예컨대, EDTA; 당, 예컨대, 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온, 예컨대, 나트륨; 금속 착물(예를 들면, Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대, 트윈(TWEEN)(상표), 플루로닉스(PLURONICS)(상표), 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
예시적인 항-VEGF 항체 제제는 미국 특허 제6,884,879호에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 항체는 1회용 바이알 내에 25 ㎎/㎖의 양으로 제제화된다. 일부 실시양태에서, 100 ㎎의 항-VEGF 항체는 240 ㎎의 α,α-트레할로스 이수화물, 23.2 ㎎의 인산나트륨(일염기성, 일수화물), 4.8 ㎎의 인산나트륨(이염기성 무수물), 1.6 ㎎의 폴리소르베이트 20 및 주사용수(USP)와 함께 제제화된다. 일부 실시양태에서, 400 ㎎의 항-VEGF 항체는 960 ㎎의 α,α-트레할로스 이수화물, 92.8 ㎎의 인산나트륨(일염기성, 일수화물), 19.2 ㎎의 인산나트륨(이염기성 무수물), 6.4 ㎎의 폴리소르베이트 20 및 주사용수(USP)와 함께 제제화된다.
피하 투여용으로 적합한 동결건조된 제제는 예를 들면, 미국 특허 제6,267,958(Andya et al.)호에 기재되어 있다. 이러한 동결건조된 제제는 높은 단백질 농도까지 적합한 희석제로 재구성될 수 있고, 재구성된 제제는 본원에서 치료될 포유동물에게 피하 투여될 수 있다.
결정화된 형태의 길항제도 고려된다. 예를 들면, 미국 특허출원 공개 제2002/0136719A1호(Shenoy et al.)를 참조한다.
본원의 제제는 1종 초과의 활성 화합물들(전술된 바와 같은 추가 약제(들)), 바람직하게는 서로에 불리하게 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 갖는 활성 화합물들을 함유할 수도 있다. 이러한 약제들의 종류 및 유효량은 예를 들면, 상기 제제에 존재하는 VEGF 길항제의 양 및 종류, 및 대상체의 임상적 파라미터에 의해 좌우된다. 바람직한 이러한 추가 약제(들)은 전술되어 있다.
활성 성분은 예를 들면, 코아세르베이션 기법 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들면, 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴 마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들면, 리포좀, 알부민 미세구, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐), 또는 마크로에멀젼 내에 포획될 수도 있다. 이러한 기법은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.
지속 방출 제제가 제조될 수 있다. 지속 방출 제제의 적합한 예는 길항제를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 상기 매트릭스는 성형된 제품, 예를 들면, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태로 존재한다. 지속 방출 매트릭스의 예는 폴리에스터, 하이드로겔(예를 들면, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 폴리(비닐알코올)), 폴리락타이드(미국 특허 제3,773,919호), L-글루탐산과 γ-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대, 루프론 데포(LUPRON DEPOT)(상표)(락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤라이드 아세테이트로 구성된 주사가능한 미세구), 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다.
생체내 투여를 위해 사용되는 제제는 멸균 상태이어야 한다. 이것은 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.
VI . 키트
VEGF110의 검출에서 사용될 키트 또는 제품도 본 발명에 의해 제공된다. 이러한 키트는 대상체가 VEGF 길항제(예를 들면, 항-VEGF 항체, 예컨대, 베바시주마브를 포함함)를 포함하는 항암요법에 효과적으로 반응할지를 확인하는 데에 사용될 수 있다. 이들 키트는 밀폐된 공간 내에 1개 이상의 용기 수단, 예컨대, 바이알, 튜브 등을 수용하도록 구획화되어 있는 담체 수단을 포함할 수 있고, 각각의 용기 수단은 상기 방법에서 사용될 분리된 구성요소들 중 하나를 포함한다. 예를 들면, 용기 수단 중 하나는 VEGF121에 특이적으로 결합하는 화합물을 포함할 수 있다.
이러한 키트는 전형적으로 전술된 용기; 및 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 주사기 및 사용을 위한 설명서를 갖는 포장 삽입물을 포함하는, 상업적 및 사용자 관점에서 볼 때 바람직한 물질을 포함하는 1개 이상의 다른 용기를 포함할 것이다. 조성물이 특정 적용을 위해 사용된다는 것을 표시하고 생체내 또는 시험관내 용도, 예컨대, 전술된 용도에 대한 지시도 표시할 수 있는 표지가 용기 상에 존재할 수 있다.
본 발명의 키트는 다수의 실시양태를 갖는다. 전형적인 실시양태는 용기, 상기 용기 상의 표지 및 상기 용기 내에 함유된 조성물을 포함하는 키트이고, 이때 상기 조성물은 VEGF110에 특이적으로 결합하는 화합물(들)을 포함하고, 상기 용기 상의 표지는 상기 조성물이 VEGF110의 검출에 사용될 수 있다는 것을 표시하고, 상기 키트는 VEGF110을 검출하기 위한 상기 화합물(들)의 사용에 대한 설명서를 포함한다. 상기 키트는 상기 화합물(들)의 제조 및 사용에 대한 설명서 및 물질 세트를 추가로 포함할 수 있다.
키트의 다른 선택적인 성분은 1종 이상의 완충제(예를 들면, 희석 완충제 등), 다른 시약, 예컨대, 담체(예를 들면, 덱스트란, 알부민) 등을 포함한다. 키트는 이 키트를 사용하여 수득한 결과의 해석에 대한 설명서도 포함할 수 있다.
실시예
하기 실시예는 예증을 위해 제공되는 것이지 본원에서 청구된 발명을 한정하기 위해 제공되는 것이 아니다.
실시예 1 :
AVADO 시험(BO17708)에서, 치료받지 않은 국소적으로 진행된, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암을 갖는 환자를 독세탁셀 100 ㎎/㎡ + 3주마다 베바시주마브 7.5 ㎎/㎡ 군, 독세탁셀 100 ㎎/㎡ + 3주마다 베바시주마브 15 ㎎/㎏(n=247) 군, 또는 독세탁셀 100 ㎎/㎡ + 플라시보(n=241)로 무작위적으로 나누었다. 문헌[Miles, J. Clin. Oncol. 24, May 2010 (e-published)]을 참조한다.
혈액 혈장 기준 샘플을 본 시험에서 396명의 환자로부터 입수하였다.
혈관신생 및 종양발생과 관련된 생체마커의 상태의 연구는 전체 생체마커 환자 집단에서 확인된, 대조군 수준에 비해 상대적인 3종의 생체마커의 발현 수준이 개선된 치료 파라미터와 상호관련되어 있다는 것을 보여주었다. 구체적으로, 전체 생체마커 환자 집단에서 확인된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 VEGFA 발현 수준을 나타내는 환자는 독세탁셀 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 무진행 생존을 입증하였다. 전체 생체마커 환자 집단에서 확인된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 VEGFR2 발현 수준을 나타내는 환자는 독세탁셀 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 무진행 생존을 입증하였다. 또한, 전체 생체마커 환자 집단에서 확인된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 조합된 VEGFA 및 VEGFR2 발현 수준을 나타내는 환자는 독세탁셀 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 무진행 생존을 입증하였다. 또한, 전체 환자 집단에서 확인된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 조합된 VEGFA 및 PLGF 발현 수준을 나타내는 환자는 독세탁셀 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 무진행 생존을 입증하였다.
환자 및 면역화학 방법
BO17708 연구에 참가한 총 736명의 환자들, 및 참가자들 중 396명으로부터 수득된 혈액 혈장 샘플이 생체마커 분석을 위해 이용될 수 있었다. 생체마커 분석에서 396명의 환자들, 및 생체마커 분석이 불가능한 남은 환자들의 기준 특성은 하기 표 1A 및 표 1B에 제공되어 있다.
[표 1A]
Figure pat00002
Figure pat00003
[표 1B]
Figure pat00004
Figure pat00005
혈액 혈장 분석
혈장 샘플을 무작위화 후 및 임의의 연구 치료가 투여되기 전에 수집하였다. 모든 샘플들은 질환 진행까지 독세탁셀 100 ㎎/㎡ + 3주마다 베바시주마브 7.5 ㎎/㎏, 독세탁셀 100 ㎎/㎡ + 3주마다 베바시주마브 15 ㎎/㎏, 또는 독세탁셀 100 ㎎/㎡ + 플라시보로 치료받은 환자들로부터 수득되었다.
총 4.9 ㎖의 혈액을 S-모노베트(monovette)(등록상표) (EDTA) 튜브(또는 항응고제 요법을 받는 16명의 환자의 경우 시트레이트 처리된 혈장 튜브) 내로 뽑아 넣었다. 그 후, 즉시 상기 튜브를 약하게 역위시킴으로써 상기 혈액을 혼합하고 원심분리기 내에서 약 1500g로 30분 동안(실온에서 10분 동안) 원심분리하였다. 이 후, 즉시 상청액 혈장을 투명 폴리프로필렌 5 ㎖ 전달 튜브 내로 분취하였다. 그 후, 혈장을 2개의 플라스틱 저장 튜브(각각 약 1.25 ㎖) 내로 분취하였다. 샘플을 -70℃에서 수직으로 세워 저장하였다. 몇몇 경우, 샘플을 최대 1개월 동안 -20℃에서 저장한 후 -70℃로 옮겼다.
로슈 다이아그노스틱스 게엠베하(Roche Diagnostics GmbH)로부터의 면역학적 다중파라미터 칩 기술(Immunological MultiParameter Chip Technology; IMPACT)을 이용하여 VEGFA, VEGF 수용체-1(VEGFR1), VEGFR2, PLGF 및 E-셀렉틴(SELECTIN)의 수준을 측정하는 데에 샘플을 사용하였다.
IMPACT 다중 분석 기술
로슈 프로페셔날 다이아그노스틱스(로슈 다이아그노스틱스 게엠베하)는 작동 명칭 IMPACT(면역학적 다중파라미터 칩 기술) 하에 다중마커 플랫폼을 개발하고 있다. 이 기술은 상기 "혈액 혈장 분석" 단락에서 언급된 단백질 마커들의 측정을 위해 이용되었다. 상기 기술은 유럽 특허 제0939319호 및 유럽 특허 제1610129호에 개시된 절차에 의해 제작된 작은 폴리스티렌 칩에 근거한다. 상기 칩 표면을 스트렙타비딘 층으로 코팅한 후, 모든 분석을 위해 바이오티닐화된 항체를 상기 층 상에 스폿팅하였다. 각각의 마커에 대해, 항체의 스폿을 상기 칩 상에 수직선으로 적재하였다. 분석 동안, 특정 분석물을 함유하는 표본 샘플로 어레이를 프로빙하였다.
1개의 칩 상의 모든 마커들을 측정하기 위해 표본 당 요구되는 혈장 부피는 8 ㎕이었고, 이것을 32 ㎕의 항온처리 완충제(50 mM HEPES pH 7.2, 150 mM NaCl, 0.1% 테싯(Thesit), 0.5% 소 혈청 알부민 및 방부제로서의 0.1% 옥시피리온(Oxypyrion))와 함께 적용하였다. 상기 칩을 12분 동안 항온처리하고 세척 완충제(5 mM 트라이스(Tris) pH 7.9, 0.01% 테싯 및 0.001% 옥시피리온)를 사용하여 세척한 후, 다이곡시제닐화(digoxigenylating)된 단일클론 항체 혼합물(다이곡시제닌으로 표지된 분석물 특이적 항체들의 혼합물을 포함하는 40 ㎕의 항온처리 완충제)을 첨가하고 추가 6분 동안 항온처리하여 포획된 분석물 상에 결합시켰다. 형광 라텍스와 커플링된 항-다이곡시제닌 항체 접합체를 포함하는 40 ㎕의 시약 완충제(62.5 mM TAPS pH 8.7, 1.25 M NaCl, 0.5% 소 혈청 알부민, 0.063% 트윈 20 및 0.1% 옥시피리온)를 사용하여 제2 항체를 최종적으로 검출하였다. 이 표지를 사용하여, fmol/L 농도까지 매우 높은 민감성을 나타내는 10개의 개별 결합 사건들을 단일 스폿 내에서 검출할 수 있었다. 칩을 검출 유닛 내로 옮겼고, 전하 커플링된 장치(CCD) 카메라는 전용 소프트웨어를 이용하여 신호 강도로 전환되는 영상을 발생시켰다. 개별 스폿들을 예정된 위치에 자동으로 위치시키고 영상 분석으로 정량하였다. 각각의 마커에 대해, 10개 내지 12개의 스폿으로 구성된 선을 상기 칩 상에 적재하였고, 샘플의 평균 농도를 측정하기 위해 최소 5개의 스폿이 요구되었다. 이 기술의 장점은 샌드위치 또는 경쟁 형식으로 최대 10개의 파라미터를 다중분석하는 능력이다. 보정제 및 환자 샘플을 이중으로 측정하였다. 하나의 실시가 실시 대조군으로서의 2개의 다중 대조군을 포함하는 총 100회의 측정을 함유하도록 디자인되었다. 선택된 분석물들 중 몇몇은 서로 반응하기(즉, VEGFA 및 PLGF와 VEGFR1, VEGRF2 또는 VEGFA는 PLGF와 함께 이종이량체를 형성함) 때문에, 5개의 분석물들이 하기와 같이 3개의 상이한 칩 상에 나누어졌다:
칩 1: VEGFA
칩 2: VEGFR1, VEGFR2, E-셀렉틴
칩 3: PLGF
하기 항체들이 상이한 분석을 위해 사용되었다:
Figure pat00006
통계학적 분석
샘플 중간 값을 이용하여 생체마커 값을 낮은(중간 값 미만의) 또는 높은(중간 값 이상의) 값으로서 이분화하였다.
높은 또는 낮은 생체마커 수준을 갖는 환자들의 하위군에서 치료 효과의 위험 비를 비례 위험 콕스 회귀 분석으로 평가하였다.
추가로, 비례 위험 콕스 회귀를 이용하여 생체마커 수준과 치료 효과 사이의 관련성을 평가하였다. 모델은 하기 공변량을 포함하였다: 시험 치료, 생체마커 수준, 이원 층화 인자(ER/PgR 상태, 기준 시점에서 측정가능한 질환, 선행 보조제 탁산 요법), 생체마커 수준에 의한 치료의 상호작용 항(term). 상호작용 항에 대한 왈드(Wald) 검정을 이용하여 생체마커 수준과 치료 효과 사이의 관련성을 측정하였다. 0.05 미만의 P 값은 유의한 것으로 간주되었다.
결과
혈액 혈장 마커
생체마커의 기준 기술 통계학이 하기 표 2에 제공되어 있다.
[표 2]
Figure pat00007
표 3은 VEGFA 또는 VEGFR2와 무진행 생존에 대한 치료 효과의 관련성을 분석하여 수득한 결과를 제공한다.
[표 3]
Figure pat00008
본 분석에서, VEGFA에 대하여 저 수준 VEGFA(<125 pg/㎖) 및 고 수준 VEGFA(≥125 pg/㎖)를 사용하였고, VEGFR2에 대하여 저 수준 VEGFR2(<11 ng/㎖) 및 고 수준 VEGFR2(≥11 ng/㎖)를 사용하였다.
이들 결과는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA를 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA를 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 또한, 이들 결과는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFR2를 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFR2를 갖는 환자 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 동일한 경향이 저 투여량 및 고 투여량 베바시주마브를 플라시보와 비교하였을 때 관찰되고, 고 수준 생체마커 하위군과 저 수준 생체마커 하위군 사이의 차이의 통계학적 증거는 저 투여량 베바시주마브로 치료받은 환자에서 더 강하다. 따라서, VEGFA 및 VEGFR2는 무진행 생존에 대한 베바시주마브 치료 효과에 대한 각각의 독립적인 예측 생체마커이다.
표 4는 저 투여량(3주마다 7.5 ㎎/㎏) 베바시주마브 및 고 투여량(3주마다 15 ㎎/㎏) 베바시주마브를 사용한 경우 생체마커 조합물과 무진행 생존에 대한 치료 효과의 관련성의 분석을 제공한다.
이 분석에서 사용된 수학식은 다음과 같다:
수학식 1: norm(VEGFA)+1.3*norm(VEGFR2)
등가 수학식: 0.71*log2(VEGFA)+3.16*log2(VEGFR2)-15.6
수학식 2: 0.25*norm(VEGFA)+0.21*norm(PLGF)
등가 수학식: 0.18*log2(VEGFA)+0.42*log2(PLGF)-3.1
상기 식에서, 본 발명자들은 log2 변환 및
Figure pat00009
를 이용하였다.
상기 식에서, mad는 계수 1.4826에 의해 조절된 중간 절대 편차이다.
[표 4]
Figure pat00010
본 분석에서, VEGFA와 VEGFR2의 조합된 고 발현 수준은 수학식 1 ≥ -0.132이고, VEGFA와 VEGFR2의 조합된 저 발현 수준은 수학식 1 < -0.132이고, VEGFA와 PLGF의 조합된 고 발현 수준은 수학식 2 ≥ -0.006이고, VEGFA와 PLGF의 조합된 저 발현 수준은 수학식 2 < -0.006이다.
이들 결과는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA 및 VEGFR2 조합물을 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA 및 VEGFR2 조합물을 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 또한, 이들 결과는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA 및 PLGF 조합물을 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA 및 PLGF 조합물을 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 동일한 경향이 저 투여량 및 고 투여량 베바시주마브를 플라시보와 비교하였을 때 관찰되고, 고 수준 생체마커 하위군과 저 수준 생체마커 하위군 사이의 차이의 통계학적 증거는 저 투여량 베바시주마브로 치료받은 환자에서 더 강하다. 따라서, VEGFA 및 VEGFR2 조합물 및 VEGFA 및 PLGF 조합물은 무진행 생존에 대한 베바시주마브 치료 효과에 대한 각각의 독립적인 예측 생체마커이다.
베바시주마브 15 ㎎/㎏ 군에서 VEGF-A의 예측 값을, 집단을 VEGF-A 수준에 따라 사분위로 세분함으로써 더 조사하였다. 모든 사분위에 대한 95% 신뢰구간이 중첩되었다. 제1 사분위(< 64 pg/㎖)에서, 매우 한정된 치료 효과가 관찰되었다(위험 비 0.86). 가장 높은 사분위(>240 pg/㎖)에서, PFS에 대한 위험 비는 0.39(95% CI:0.19-0.77)이었고, 중간 PFS의 차이는 다른 군에서보다 더 현저하였다. 종합하건대, 사분위의 점 추정값은 VEGF-A 수준의 증가에 따라 위험 비에서 일관된 개선을 보인다. 이들 결과는 하기 표 5에 나타나 있다.
[표 5]
Figure pat00011
실시예 2: IMPACT 분석을 이용한 VEGF -A의 짧은 동형체의 검출
본 실시예는 IMPACT 플랫폼 상의 VEGF-A의 검출에 사용된 항체에 근거하여 VEGF-A의 짧은 동형체가 VEGF-A의 긴 동형체에 비해 우선적으로 측정된다는 것을 입증한다.
"통계학적 분석" 단락 앞에 기재된 표에 나열된 항체들을 사용하여 IMPACT 기술에 관한 단락에 전술되어 있는 바와 같이 본 분석을 수행하였다.
4종의 상이한 VEGF-A 형태, 즉 VEGF111, VEGF121, VEGF165 및 VEGF189를 입수할 수 있었고 본 분석에서 사용하였다. VEGF111, VEGF121 및 VEGF165를 알앤드디 시스템스(미국 미네아폴리스 소재)로부터 구입하였고, VEGF189를 렐리아테크(독일 볼펜부텔 소재)로부터 입수하였다. 도 11에 나타낸 바와 같이, 각각 111개 또는 121개의 아미노산을 갖는 짧은 동형체는 각각 165개 및 189개의 아미노산을 갖는 긴 동형체에 비해 더 잘 검출된다. 생물학적으로 흥미로운 플라스민 절단 생성물 VEGF110은 이 시점에서 시험을 위해 입수될 수 없었지만, 이 동형체의 검출은 111개의 아미노산을 갖는 VEGF 분자에 대해 관찰된 검출에 필적할만할 것으로 예측되어야 한다.
이 이론에 구속받고자 하는 것은 아니지만, 이 분석의 짧은 VEGF 동형체, 예컨대, VEGF110 및 VEGF121의 우선적인 결합은 본원에 기재된 연구에서 통계학적으로 유의한 예측 값이 관찰된 이유를 설명할 수 있다고 추정되는 반면, VEGF-A의 이전 측정은 이러한 면에서 모순되는 결과를 초래하였다.
실시예 3: 엘렉시스 (등록상표) 분석기를 이용한 짧은 VEGF 동형체의 검출
본 실시예는 엘렉시스(등록상표) 분석기를 이용하는 분석을 이용하여 인간 혈장에서 짧은 VEGF 동형체를 검출할 수 있다는 것을 입증하는 실험을 기술한다.
VEGF-A 분석은 IMPACT로부터 자동화된 시험관내 진단 시스템 엘렉시스(등록상표)(로슈 다이아그노스틱스 게엠베하, 독일 만하임 소재)로 넘어갔다. IMPACT 분석에서의 포획 항체와 동일한 포획 항체인 <hVEGF-A>-m3C5(렐리아테크, 독일 불펜부텔 소재)를 사용한 반면, IMPACT 시스템 상에서 사용된 포획 항체 <hVEGF-A>-m25603(알앤드디 시스템스, 미국 미네아폴리스 소재)을 <hVEGF-A>-mA4.6.1(제넨테크, 미국 사우쓰 샌프란시스코 소재)로 교체하였다.
자동화된 엘렉시스(등록상표) 시스템 상에서 수행되는 면역분석은 전기화학발광(ECLIA)을 신호 발생 기술로서 이용하는 면역분석이다. 본 샌드위치 분석에서, 바이오티닐화된 포획 항체는 스트렙타비딘으로 코팅된 자기 마이크로입자에 결합하고, 루테닐화된 검출 항체는 신호 발생을 가능하게 한다. 반응 완충제(50 mM 트라이스(pH 7.4), 2 mM EDTA, 0.1% 테싯(Thesit), 0.2% 소 IgG, 1.0% 소 혈청 알부민) 중의 1.5 ㎍/㎖ 농도의 75 ㎕ 바이오티닐화된 <VEGF-A>-m3C5 및 2 ㎍/㎖ 농도의 75 ㎕ 루테닐화된 <VEGF-A>M-A.4.6.1을 20 ㎕의 샘플과 9분 동안 항온처리하였다. 항온처리의 처음 9분 후 30 ㎕의 마이크로입자 현탁액을 첨가한 후, 전체 혼합물을 추가 9분 동안 항온처리하였다. 이들 항온처리 단계들 동안 마이크로입자에 결합되는 항체-분석물-항체 샌드위치가 형성된다. 최종적으로, 마이크로입자를 신호 발생 및 판독을 위한 엘렉시스 시스템의 검출 챔버로 옮겼다.
엘렉시스(등록상표) VEGF-A 분석의 절단 생성물/동형체 선호도를 하기 정제된 재조합 단백질을 사용하여 평가하였다: VEGF110(제넨테크(미국 사우쓰 샌프란시스코 소재)에서 플라스민 절단에 의해 제조됨), VEGF121 및 VEGF165(둘다 알앤드디 시스템스(미국 미네아폴리스 소재)에 의해 공급됨). IMPACT(등록상표) 분석을 이용하였을 때 관찰된 짧은 VEGF 동형체의 우선적인 결합이 엘렉시스 분석에서 확인되었다. 도 12에 나타낸 바와 같이, 엘렉시스(등록상표) 분석에서 동형체 VEGF121 및 플라스민 절단 생성물 VEGF110 둘다 각각 VEGF165보다 약 5배 더 높은 민감도로 검출되었다.
실시예 4 : 일차 절제불가능한 국소적으로 진행된 전이성 위암에서 화학요법과 조합된 베바시주마브의 III 기 무작위화된 시험
본 실시예는 AVAGAST 임상 시험에서 치료받은 일차 전이성 위암을 갖는 환자로부터 수득된 결과의 분석에 관한 것이다. 본 연구의 일차 목적은 전체 생존(OS)에 의해 측정되었을 때 위암 치료에 있어서 화학요법에의 베바시주마브의 첨가의 임상 이익을 측정하는 것이다. 이차 평가지표는 무진행 생존(PFS), 전체 반응률 및 반응의 지속시간을 포함한다. 본 시험에서 사용된 화학요법은 카페시타빈 또는 5-플루오로우라실(5-FU)과 시스플라틴의 조합물이었다.
연구 디자인
774명의 환자들을 AVAGAST 시험에 등록하였고 하기 2개의 군으로 1:1로 무작위적으로 나누었다.
군 A(387):
Figure pat00012
1,000 ㎎/㎡의 경구 카페시타빈을 2주 동안 매일 2회씩 투여한 후 1주 동안 휴식을 취하는 과정을 질환 진행 또는 관리불가능한 독성이 관찰될 때까지 3주마다 수행하거나, (예를 들면, 삼키기 곤란함, 흡수장애 또는 경구 카페시타빈 약물의 섭취에 영향을 미칠 수 있는 다른 상태로 인해) 경구 카페시타빈을 복용하기에 적합한 것으로 간주되지 않은 환자의 경우 5-플루오로우라실을 3주마다 5일(각각의 주기의 1일 내지 5일)에 걸쳐 연속 정맥내 관주로서 800 ㎎/㎡/일의 투여량으로 투여할 수 있고;
Figure pat00013
과다수화를 이용한 2시간 정맥내 관주로서 시스플라틴 80 ㎎/㎡ 투여 및 예비약물(스테로이드 및 진토제) 투여를 질환 진행 또는 관리불가능한 독성이 관찰될 때까지 최대 6주기 동안 3주마다 수행한다.
군 B:
Figure pat00014
1,000 ㎎/㎡의 경구 카페시타빈을 2주 동안 매일 2회씩 투여한 후 1주 동안 휴식을 취하는 과정을 질환 진행 또는 관리불가능한 독성이 관찰될 때까지 3주마다 수행하거나, (예를 들면, 삼키기 곤란함, 흡수장애 또는 경구 카페시타빈 약물의 섭취에 영향을 미칠 수 있는 다른 상태로 인해) 경구 카페시타빈을 복용하기에 적합한 것으로 간주되지 않은 환자의 경우 5-플루오로우라실을 3주마다 5일(각각의 주기의 1일 내지 5일)에 걸쳐 연속 정맥내 관주로서 800 ㎎/㎡/일의 투여량으로 투여할 수 있고;
Figure pat00015
과다수화를 이용한 2시간 정맥내 관주로서 시스플라틴 80 ㎎/㎡ 투여 및 예비약물(스테로이드 및 진토제) 투여를 질환 진행 또는 관리불가능한 독성이 관찰될 때까지 최대 6주기 동안 3주마다 수행하고;
Figure pat00016
베바시주마브(7.5 ㎎/㎏) 투여를 질환 진행 또는 관리불가능한 독성이 관찰될 때까지 3주마다 수행한다.
치료 군들은 진행된 질환을 제외하고 층화 변수에 대해 균형을 이루었다(2% 대 5%). 약 95%의 환자들(3분의 2가 남성, 49%가 아시아/태평양계, 32%가 유럽계, 및 19%가 아메리카계)이 전이성을 나타내었다.
베바시주마브(아바스틴(등록상표))는 2종의 크기의 바이알 내에 비경구 투여용으로 준비된 투명한 내지 약간 오팔색의 멸균 액체로서 공급되었다: 각각 100 ㎎(25 ㎎/㎖ - 4 ㎖ 충전) 유리 바이알은 포스페이트, 트레할로스, 폴리소르베이트 20 및 주사용 멸균수(USP)와 함께 베바시주마브를 함유하였고, 각각의 400 ㎎(25 ㎎/㎖ - 16 ㎖ 충전) 유리 바이알은 포스페이트, 트레할로스, 폴리소르베이트 20 및 주사용 멸균수(USP)와 함께 베바시주마브를 함유하였다. 5 ㎎/㎏의 투여량에 필요한 양을 뽑아내어 정맥내 투여 전에 총 부피 100 ㎖의 0.9% 염화나트륨 주사용 USP 중에 희석함으로써 아바스틴(등록상표)을 투여하였다.
방법
자격이 있는 대상체/환자는 하기 핵심 자격 기준을 가졌다: 18세 초과의 연령, ECOG 0, 1 또는 2(ECOG 수행 상태 스케일). 모든 대상체들이 치유 요법에 잘 반응하지 않는 수술불가능한 국소적으로 진행된 또는 전이성 질환과 함께 위 또는 위-식도 연접부의 조직학적으로 확인된 선암종을 가졌다. 대상체들은 측정될 수 있거나 측정될 수 없지만 (고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST)에 따를 때) 평가될 수 있는 질환을 가졌을 수 있다. 항응고제 약물치료를 제공받지 않은 대상체는 무작위화 전 7일 이내에 1.5 이하의 INR 및 1.5 x ULN 이하의 PTT를 가졌다.
배제 기준은 하기 요건을 포함하였다: 국소적으로 진행된 또는 전이성 위암에 대한 선행 화학요법(신생보조제 또는 보조제 화학요법이 무작위화하기 6개월 이상 전에 완료된 한, 환자는 상기 신생보조제 또는 보조제 화학요법을 이전에 받았을 수 있음); 선행 백금 또는 항혈관신생 요법(즉, 항-VEGF 또는 VEGFR 티로신 키나제 억제제 등); 치유 요법(수술 및/또는 화학요법 및/또는 방사선요법을 포함함)에 대한 후보자이었던, 국소적으로 진행된 질환을 갖는 환자; 무작위화하기 전 28일 이내의 방사선요법; 무작위화하기 전 28일 이내의 주요 수술 절차, 개방 생검 또는 유의한 외상적 손상, 또는 연구 치료의 과정 동안 주요 수술에 대한 필요성의 예상(계획된 대기 수술); 무작위화하기 전 2일 이내의 간단한 수술 절차; 기준 시점에서의 CNS 전이의 증거; 표준 의학적 요법으로 적절하게 치료받지 않은 경우 암과 관련되지 않은 CNS 질환, 예를 들면, 비-조절된 발작의 물리적/신경학적 검사 시 병력 또는 증거; 부적절한 골수 기능, 간 기능 또는 신장 기능; 비-조절된 고혈압 또는 임상적으로 유의한(즉, 활성) 심혈관 질환; 무작위화에서 정맥내 항생제를 필요로 하는 활성 감염; 출혈의 위험을 갖는 유전된 출혈 체질 또는 응고병증의 병력 또는 증거; 심각한 또는 비-치유 상처, 소화 궤양 또는 (불완전하게 치유된) 골절; 활성 위장 출혈; 무작위화하기 전 6개월 이내의 복부 누공, 위장 천공 또는 복부내 농양의 병력; CTCAE v3.0에 따를 때 등급 II 이상의 신경병증(예를 들면, 청각 및 균형의 손상); 아스피린 또는 클로피도그렐을 사용한 만성 매일 치료; 경구 코르티코스테로이드를 사용한 만성 매일 치료(흡입된 스테로이드, 및 진토 효과를 위해 또는 식욕 자극제로서 경구 스테로이드의 단기간 사용은 허용됨); 공지된 다이하이드로피리미딘 데하이드로게나제(DPD) 결핍; 및 HBV 또는 HCV에 의해 공지된 급성 또는 만성 활성 감염.
본 연구의 일차 평가지표는 무작위화부터 임의의 원인에 의한 사망까지 소요되는 시간으로서 정의되는 전체 생존(OS)이었다. 층화 log 순위 검정을 이용하여 치료 군들 사이에 시간-대-사건 데이터를 비교한다. 카플란-메이에르 방법을 이용하여 시간-대-사건 데이터의 지속시간을 평가하였다. 브룩메이어-크로울리(Brookmeyer-Crowley) 방법을 이용하여 중간 시간-대-사건에 대한 95% 신뢰구간을 산출하였다. 층화 콕스 회귀 모델을 이용하여 시간-대-사건 데이터에 대한 HR을 평가하였다.
이차 평가지표는 무진행 생존(PFS), 객관적인 반응률(RR), 반응의 지속시간 및 안전성을 포함하였다. 무진행 생존(PFS)은 무작위화부터 조사자의 평가에 근거한 질환 진행 또는 사망까지 소요되는 시간으로서 정의된다. 카플란-메이에르 방법을 이용하여 각각의 치료 군에 대한 중간 PFS를 평가하였다. 일부 실시양태에서, 층화 log 순위 검정에서 사용된 층화 계수와 동일한 층화 계수를 사용하는 층화 콕스 회귀 모델을 이용하여 PFS에 대한 위험 비를 평가하였다. 각각의 집단에서 PFS의 분석을 양측 α=0.05 수준에서 수행하였다. 층화 log 순위 검정을 이용하여 치료 군들 사이에 시간-대-사건 데이터를 비교하였다. 카플란-메이에르 방법을 이용하여 시간-대-사건 데이터의 지속시간을 평가하였다. 브룩메이어-크로울리 방법을 이용하여 중간 시간-대-사건에 대한 95% 신뢰구간을 산출하였다. 층화 콕스 회귀 모델을 이용하여 시간-대-사건 데이터에 대한 HR을 평가하였다. RR은 반응의 초기 기록 후 28일 이후에 확인된 완전한 또는 부분적 반응을 달성한 환자의 백분율로서 정의된다. 층화 맨텔-헨젤(Mantel-Haenszel) χ2 검정을 이용하여 기준 시점에서 측정가능한 질환을 갖는 환자들의 RR을 비교하였다. 무작위화 층화 계수가 모든 층화 분석에 포함되었다.
수술불가능한 국소적으로 진행된/전이성 위/위식도 선암종의 치료를 위해 베바시주마브를 카페시타빈/시스플라틴 요법에 첨가한 결과를 비교하는 무작위화된 III 기 연구에 참가한 환자들로부터 혈액 혈장 샘플을 수집하였다(BO20904 연구, 문헌[Kang et al., J. Clin. Oncol. 2010; 28 (18S): LBA4007] 참조).
혈관신생 및 종양발생과 관련된 생체마커의 상태의 연구는 전체 생체마커 환자 집단에서 측정된, 대조군 수준에 비해 상대적인 1개의 혈장 생체마커의 발현 수준이 개선된 치료 파라미터와 상호관련되어 있다는 것을 보여주었다. 구체적으로, 전체 생체마커 환자 집단에서 측정된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 VEGFA의 발현 수준을 나타내는 환자는 카페시타빈/시스플라틴 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 전체 생존 및 연장된 무진행 생존을 입증하였다.
환자, 샘플 및 면역화학 방법
BO20904 연구에 참가한 총 774명의 환자들, 및 혈장 VEGF-A의 분석을 위한 혈액 혈장 샘플링이 본 프로토콜에서 미리 특정되었다.
카페시타빈/시스플라틴 + 베바시주마브 또는 플라시보로 치료받은 환자들로부터 모든 샘플들을 수득하였다. 총 4.9 ㎖를 4.9 ㎖ EDTA S-모노베트(등록상표) 혈액 수집 튜브 내에 수집하였다.
혈액 수집의 30분 내지 60분 이내에, 혈액 튜브를 원심분리기 내에 넣었고 세포와 혈장이 분리될 때까지 4℃에서 1500 g로 15분 동안 원심분리하였다. 원심분리 직후, 플라스틱 피펫을 이용하여 혈장을 프로필렌 전달 튜브 내로 조심스럽게 옮겼는데, 이때 상기 튜브의 바닥에 존재하는 혈소판을 함유하는 계면이 흡입되지 않도록 조심해야 한다. 그 다음, 피펫을 이용하여 혈장을 2개의 저장 튜브(각각 약 1.25 ㎖의 절반 부피) 내로 동등하게 분취하였다.
일단 혈장이 분리되면, 샘플을 -70℃에서 수직으로 세워 저장하였다. -20℃에서만 저장될 수 있는 샘플은 혈액 채취 후 1개월 이내에 로슈 중앙 샘플 보관소(CSO)로 운반되었다. 모든 샘플들을 로슈 다이아그노스틱스 게엠베하(독일 펜즈베르그 소재)에서 분석하였다.
모든 샘플들을 해동하였고 40 ㎕씩 분취하여 72개의 회분으로 384-웰 REMP 마이크로튜브 플레이트 내로 분배하였다. 상기 튜브를 알루미늄 격막으로 밀봉하였고 분석할 때까지 -85℃ 내지 -55℃의 온도를 유지하기 위해 냉동고 세트 내에서 저장하였다. 샘플들을 VEGFA 농도에 대해 분석하였다.
712명의 참가자들로부터의 혈장 샘플들을 생체마커 분석을 위해 이용할 수 있었다. 생체마커 분석에서 712명의 환자들의 기준 특징이 하기 표 6에 제공되어 있다.
[표 6]
Figure pat00017
Figure pat00018
혈액 혈장 분석
혈장 샘플을 무작위화 후 및 임의의 연구 치료가 환자에게 제공되기 전에 수집하였다. 실시예 1에 기재된 다중 IMPACT ELISA 분석을 이용하여 VEGFA를 측정하였다.
통계학적 분석
샘플 중간 값을 이용하여 생체마커 값을 낮은(중간 값 미만의) 또는 높은(중간 값 이상의) 값으로서 이분화하였다.
높은 또는 낮은 생체마커 수준을 갖는 환자들의 하위군에서 치료 효과의 위험 비를 비례 위험 콕스 회귀 분석으로 평가하였다.
추가로, 비례 위험 콕스 회귀를 이용하여 생체마커 수준과 치료 효과 사이의 관련성을 평가하였다. 모델은 하기 공변량을 포함하였다: 시험 치료, 생체마커 수준, 생체마커 수준에 의한 치료의 상호작용 항. 상호작용 항에 대한 왈드 검정을 이용하여 생체마커 수준과 치료 효과 사이의 관련성을 측정하였다. 0.05 미만의 P 값은 유의한 것으로 간주되었다.
정량 한계 미만(BLQ) 또는 정량 한계 초과(ALQ)로서 보고된 값들을 정량 하한(LLQ) 값 및 정량 상한(ULQ) 값에서 입력하였다. 농도 수준의 대수 변환을 본 분석에서 이용하였다. 컷-오프가 분석을 위해 필요한 경우, 샘플 중간 값을 사용하였다.
결과
혈액 혈장 마커
생체마커의 기준 기술 통계학이 하기 표 7에 제공되어 있다.
[표 7]
Figure pat00019
표 8은 선택된 생체마커와 전체 생존에 대한 치료 효과의 관련성의 일변량 분석을 제공한다.
[표 8]
Figure pat00020
본 분석에서, VEGFA에 대해 저 수준 VEGFA ≤ 111 pg/㎖ 및 고 수준 VEGFA > 111 pg/㎖를 사용하였다.
VEGFA에 대해, 예정된 분석 계획에 따라 환자의 50%가 고 발현을 갖고 환자의 50%가 저 발현을 갖도록 컷-오프 수준을 샘플 데이터 중간 값으로서 결정하였다.
이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA를 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA를 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 따라서, VEGFA는 전체 생존에 대한 베바시주마브 치료 효과에 대한 독립적인 예측 생체마커이다.
표 9는 선택된 생체마커와 무진행 생존에 대한 치료 효과의 관련성의 일변량 분석을 제공한다.
[표 9]
Figure pat00021
본 분석에서, VEGFA에 대해 저 수준 VEGFA ≤ 111 pg/㎖ 및 고 수준 VEGFA > 111 pg/㎖를 사용하였다.
VEGFA에 대해, 예정된 분석 계획에 따라 환자의 50%가 고 발현을 갖고 환자의 50%가 저 발현을 갖도록 컷-오프 수준을 샘플 데이터 중간 값으로서 결정하였다.
이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA를 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA를 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 따라서, VEGFA는 무진행 생존에 대한 베바시주마브 치료 효과에 대한 독립적인 예측 생체마커이다.
실시예 5:
전이성 췌장암에서 화학요법과 조합된 베바시주마브의 III 기 무작위화된 시험
전이성 췌장 선암종을 갖는 환자를 젬시타빈-에를로티니브 + 베바시주마브(n=306) 또는 플라시보(n=301)로 무작위화하였다.
전이성 췌장암의 치료를 위해 베바시주마브를 젬시타빈-에를로티니브 요법에 첨가한 결과를 비교하는 무작위화된 III 기 연구에 참가한 환자들로부터 혈액 혈장 샘플을 수집하였다(BO17706 연구, 문헌[Van Cutsem, J. Clin. Oncol. 2009 27:2231-2237] 참조). 전이성 췌장 선암종을 갖는 환자를 젬시타빈-에를로티니브 + 베바시주마브(n=306) 또는 플라시보(n=301)로 무작위화하였다. 전이성 췌장 선암종을 갖는 환자들은 젬시타빈(1,000 mg/m2/주), 에를로티니브(100 mg/일) 및 베바시주마브(5 mg/kg, 2주마다) 또는 젬시타빈, 에를로티니브 및 플라시보를 제공받도록 무작위적으로 배정되었다.
혈관신생 및 종양발생과 관련된 생체마커의 상태의 연구는 전체 생체마커 환자 집단에서 측정된, 대조군 수준에 비해 상대적인 3개의 생체마커의 발현 수준이 개선된 치료 파라미터와 상호관련되어 있다는 것을 보여주었다. 구체적으로, 전체 생체마커 환자 집단에서 측정된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 VEGFA의 발현 수준을 나타내는 환자는 젬시타빈/에를로티니브 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 전체 생존 및 연장된 무진행 생존을 입증하였다. 전체 생체마커 환자 집단에서 측정된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 VEGFR2의 발현 수준을 나타내는 환자는 젬시타빈/에를로티니브 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 전체 생존을 입증하였다. 전체 생체마커 환자 집단에서 측정된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 PLGF의 발현 수준을 나타내는 환자는 젬시타빈/에를로티니브 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 무진행 생존을 입증하였다. 또한, 전체 생체마커 환자 집단에서 측정된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 VEGFA와 VEGFR2의 조합된 발현 수준을 나타내는 환자는 젬시타빈/에를로티니브 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 전체 생존 및 연장된 무진행 생존을 입증하였다. 또한, 전체 생체마커 환자 집단에서 측정된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 VEGFA와 PLGF의 조합된 발현 수준을 나타내는 환자는 젬시타빈/에를로티니브 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 전체 생존 및 연장된 무진행 생존을 입증하였다. 전체 생체마커 환자 집단에서 측정된, 대조군 수준에 비해 상대적으로 더 높은 VEGFA, VEGFR2 및 PLGF의 조합된 발현 수준을 나타내는 환자는 젬시타빈/에를로티니브 요법에의 베바시주마브의 첨가에 반응하여 연장된 전체 생존 및 연장된 무진행 생존을 입증하였다.
환자 및 면역화학 방법
BO17706 연구에 참가한 총 607명의 환자들, 및 참가자들 중 224명으로부터 수득된 혈액 혈장 샘플이 생체마커 분석을 위해 이용될 수 있었다. 생체마커 분석에서 224명의 환자들의 기준 특징은 하기 표 10에 제공되어 있다.
[표 10]
Figure pat00022
혈액 혈장 분석
혈장 샘플을 무작위화 후 및 임의의 연구 치료가 환자에게 제공되기 전에 수집하였고, 상기 실시예 1에 기재된 IMPACT 분석을 이용하여 VEGFA, 혈관 내피 성장 인자 수용체 1(VEGFR1), VEGFR2, PLGF 및 E-셀렉틴을 측정하였다.
통계학적 분석
샘플 중간 값을 이용하여 생체마커 값을 낮은(중간 값 미만의) 또는 높은(중간 값 이상의) 값으로서 이분화하였다.
높은 또는 낮은 생체마커 수준을 갖는 환자들의 하위군에서 치료 효과의 위험 비를 비례 위험 콕스 회귀 분석으로 평가하였다.
추가로, 비례 위험 콕스 회귀를 이용하여 생체마커 수준과 치료 효과 사이의 관련성을 평가하였다. 모델은 하기 공변량을 포함하였다: 시험 치료, 생체마커 수준, 생체마커 수준에 의한 치료의 상호작용 항. 상호작용 항에 대한 왈드 검정을 이용하여 생체마커 수준과 치료 효과 사이의 관련성을 측정하였다. 0.05 미만의 P 값은 유의한 것으로 간주되었다.
결과
혈액 혈장 마커
생체마커의 기준 기술 통계학이 하기 표 11에 제공되어 있다.
[표 11]
Figure pat00023
표 12는 선택된 생체마커와 전체 생존에 대한 치료 효과의 관련성의 일변량 분석을 제공한다.
[표 12]
Figure pat00024
본 분석에서, VEGFA에 대해 저 수준 VEGFA <152.9 pg/㎖ 및 고 수준 VEGFA ≥ 152.9 pg/㎖를 사용하였고, VEGFR2에 대해 저 수준 VEGFR2 < 9.9 pg/㎖ 및 고 수준 VEGFRA ≥ 9.9 pg/㎖를 사용하였고, PLGF에 대해 저 수준 PLGF < 36.5 pg/㎖ 및 고 수준 PLGF ≥ 36.5 pg/㎖를 사용하였다.
VEGFA 및 VEGFR2에 대해, 예정된 분석 계획에 따라 환자의 50%가 고 발현을 갖고 환자의 50%가 저 발현을 갖도록 컷-오프 수준을 샘플 데이터 중간 값으로서 결정하였다. PLGF 컷-오프 수준을 상기 데이터의 제42 백분위수로서 결정하였다. 따라서, 58%의 환자들이 PLGF의 고 발현을 갖고, 42%의 환자들이 저 발현을 갖는다. 상기 컷-오프는 고 수준 하위군의 치료 효과와 저 수준 하위군의 치료 효과 사이의 통계학적 차이를 증가시키도록 결정되었다.
이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA를 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA를 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 또한, 이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFR2를 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFR2를 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 따라서, VEGFA 및 VEGFR2는 전체 생존에 대한 베바시주마브 치료 효과에 대한 각각의 독립적인 예측 생체마커이다.
표 13은 선택된 생체마커와 무진행 생존에 대한 치료 효과의 관련성의 일변량 분석을 제공한다.
[표 13]
Figure pat00025
본 분석에서, VEGFA에 대해 저 수준 VEGFA <152.9 pg/㎖ 및 고 수준 VEGFA ≥ 152.9 pg/㎖를 사용하였고, VEGFR2에 대해 저 수준 VEGFR2 < 9.9 pg/㎖ 및 고 수준 VEGFRA ≥ 9.9 pg/㎖를 사용하였고, PLGF에 대해 저 수준 PLGF < 36.5 pg/㎖ 및 고 수준 PLGF ≥ 36.5 pg/㎖를 사용하였다. VEGFA 및 VEGFR2에 대해, 예정된 분석 계획에 따라 환자의 50%가 고 발현을 갖고 환자의 50%가 저 발현을 갖도록 컷-오프 수준을 샘플 데이터 중간 값으로서 결정하였다. PLGF 컷-오프 수준을 상기 데이터의 제42 백분위수로서 결정하였다. 따라서, 58%의 환자들이 PLGF의 고 발현을 갖고, 42%의 환자들이 저 발현을 갖는다. 상기 컷-오프는 고 수준 하위군의 치료 효과와 저 수준 하위군의 치료 효과 사이의 통계학적 차이를 증가시키도록 결정되었다.
이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA를 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA를 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 또한, 이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 PLGF를 갖는 환자에 비해 고 수준 PLGF를 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 따라서, VEGFA 및 PLGF는 무진행 생존에 대한 베바시주마브 치료 효과에 대한 각각의 독립적인 예측 생체마커이다.
표 14는 생체마커 조합물과 전체 생존에 대한 치료 효과의 관련성의 분석을 제공한다.
이 분석을 위해 하기 수학식이 사용되었다:
수학식 1: norm(VEGFA)+1.3*norm(VEGFR2), 컷-점 = 중간 또는 0
등가 수학식: VEGFA+3.3*VEGFR2, 컷-점 = 중간 또는 0
수학식 2: 0.25*norm(VEGFA)+0.21*norm(PLGF), 컷-점 = 중간 또는 0
등가 수학식: 0.19*VEGFA+0.67*PLGF, 컷-점 = 중간 또는 4.8
상기 식에서, 본 발명자들은 log2 변환 및
Figure pat00026
를 이용하였다.
[표 14]
Figure pat00027
본 분석에서, VEGFA와 VEGFR2의 조합된 고 발현 수준은 (수학식 1 ≥ -0.10)이고, VEGFA와 VEGFR2의 조합된 저 발현 수준은 (수학식 1 < -0.10)이고, VEGFA와 PLGF의 조합된 고 발현 수준은 (수학식 2 ≥ -0.042)이고, VEGFA와 PLGF의 조합된 저 발현 수준은 (수학식 2 < -0.042)이다.
이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA 및 VEGFR2 조합물을 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA 및 VEGFR2 조합물을 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 또한, 이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA 및 PLGF 조합물을 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA 및 PLGF 조합물을 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 따라서, VEGFA 및 VEGFR2 조합물 및 VEGFA 및 PLGF 조합물은 전체 생존에 대한 베바시주마브 치료 효과에 대한 각각의 독립적인 예측 생체마커이다.
표 15는 생체마커 조합물과 무진행 생존에 대한 치료 효과의 관련성의 분석을 제공한다.
이 분석을 위해 하기 수학식이 사용되었다:
수학식 1: norm(VEGFA)+1.3*norm(VEGFR2), 컷-점 = 중간 또는 0
등가 수학식: VEGFA+3.3*VEGFR2, 컷-점 = 중간 또는 0
수학식 2: 0.25*norm(VEGFA)+0.21*norm(PLGF), 컷-점 = 중간 또는 0
등가 수학식: 0.19*VEGFA+0.67*PLGF, 컷-점 = 중간 또는 4.8
상기 식에서, 본 발명자들은 log2 변환 및
Figure pat00028
를 이용하였다.
[표 15]
Figure pat00029
본 분석에서, VEGFA와 VEGFR2의 조합된 고 발현 수준은 (수학식 1 ≥ -0.10)이고, VEGFA와 VEGFR2의 조합된 저 발현 수준은 (수학식 1 < -0.10)이고, VEGFA와 PLGF의 조합된 고 발현 수준은 (수학식 2 ≥ -0.042)이고, VEGFA와 PLGF의 조합된 저 발현 수준은 (수학식 2 < -0.042)이다.
이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA 및 VEGFR2 조합물을 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA 및 VEGFR2 조합물을 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 또한, 이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA 및 PLGF 조합물을 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA 및 PLGF 조합물을 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 따라서, VEGFA 및 VEGFR2 조합물 및 VEGFA 및 PLGF 조합물은 무진행 생존에 대한 베바시주마브 치료 효과에 대한 각각의 독립적인 예측 생체마커이다.
표 16 및 17은 VEGFA, VEGFR2 및 PLGF의 생체마커 조합물과 전체 생존 및 무진행 생존 각각에 대한 치료 효과의 관련성의 분석을 제공한다.
본 분석에서, 하기 수학식이 사용되었다:
수학식 3: 0.0127*ln(PLGF+1)+0.144*ln(VEGFR2+1)+0.0949*ln(VEGFA+1)
상기 식에서, ln은 log 무리수 e이다.
[표 16]
Figure pat00030
[표 17]
Figure pat00031
본 분석에서, 전체 생존에 대해 VEGFA, VEGFR2 및 PLGF의 조합된 고 발현 수준은 (수학식 3 ≥ 0.837)이고 VEGFA, VEGFR2 및 PLGF의 조합된 저 발현 수준은 (수학식 3 < 0.837)이고, 무진행 생존에 대해 VEGFA, VEGFR2 및 PLGF의 조합된 고 발현 수준은 (수학식 3 ≥ 0.837)이고 VEGFA, VEGFR2 및 PLGF의 조합된 저 발현 수준은 (수학식 3 < 0.837)이다.
이 결과 표는 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA 및 VEGFR2 및 PLGF 조합물을 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA 및 VEGFR2 및 PLGF 조합물을 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 따라서, VEGFA 및 VEGFR2 및 PLGF 조합물은 무진행 생존에 대한 베바시주마브 치료 효과에 대한 예측 생체마커이다.
이 결과 표는 전체 생존에 대해 치료 효과에 대한 위험 비가 저 수준 VEGFA 및 VEGFR2 및 PLGF 조합물을 갖는 환자에 비해 고 수준 VEGFA 및 VEGFR2 및 PLGF 조합물을 갖는 환자의 하위세트에서 유의하게 더 우수하다는 것을 보여준다. 따라서, VEGFA 및 VEGFR2 및 PLGF 조합물은 전체 생존에 대한 베바시주마브 치료 효과에 대한 예측 생체마커이다.
실시예 6 : VEGFA 에 대한 추가 혈장 샘플의 분석
AVF2107g(전이성 대장암을 갖는 환자에서 표준 화학요법과 조합된 rhumab(베바시주마브)의 효능 및 안전성을 평가하기 위한 III 기 다중심 무작위화된 능동 조절된 임상 시험), AVAiL(선행 화학요법을 제공받지 않은 진행된 또는 재발성 비-편평 비-소세포 폐암을 갖는 환자에서 시스플라틴 및 젬시타빈 대 플라시보, 시스플라틴 및 젬시타빈과 조합된 베바시주마브의 무작위화된 이중 맹검 다중심 III 기 연구) 및 AVOREN(전이성 투명 세포 신장 세포 암종을 갖는 신장절제된 환자에게 투여된 일차 치료로서의 인터페론 알파-2a(로페론) 대 인터페론 알파-2a 및 플라시보와 조합된 베바시주마브의 효능 및 안전성을 평가하기 위한 무작위화된 이중 맹검 III 기 연구)으로부터의 기준 샘플들도 실시예 1에 기재된 IMPACT 분석으로 분석하였다.
연구 AVF2107g에서, 47%의 환자들로부터의 380개 샘플들이 재시험을 위해 이용될 수 있었다. 새로운 VEGF-A 데이터는 VEGF-A에 대한 예후 값을 확인시켜주었지만 잠재적인 예측 값을 보이지 않았다. IMPACT ELISA에 의해 측정되었을 때 고 수준의 VEGF-A를 갖는 전이성 대장암을 갖는 환자는 PFS(VEGF-A 고 수준에 대한 0.52 대 VEGF-A 저 수준에 대한 0.64) 및 OS(VEGF-A 고 수준에 대한 0.68 대 VEGF-A 저 수준에 대한 0.70)에 대한 유사한 위험 비를 가졌다.
유사한 예후 값이 852명의 AVAiL 샘플들(52%)의 재시험의 결과에서 관찰되었다. 그러나, 고 수준의 VEGA-A를 갖는 비-소세포 폐암을 갖는 환자도 7.5 mg/kg 군에서 저 수준의 VEGF-A를 갖는 환자에 비해 유사한 위험 비(PFS에 대한 각각 0.75 대 0.77, 및 OS에 대한 0.89 대 0.92)를 보였다. 15 mg/kg 투약 군 또한 저 수준을 갖는 환자(PFS에 대한 0.96 및 OS에 대한 0.97)에 비해 고 수준의 VEGF-A를 갖는 환자(PFS에 대한 0.76 및 OS에 대한 0.98)에 대해 유사한 위험 비를 보였다.
AVOREN 시험에서도, 생체마커의 예후 값이 관찰되었지만, 400개의 기준 혈장 샘플들(62%)의 재시험은 신장 세포 암종을 갖는 환자에서 VEGF-A에 대한 잠재적인 예측 값을 보이지 못하였다. 고 수준의 VEGF-A를 갖는 환자는 저 수준의 VEGF-A를 갖는 환자에 대한 0.49에 비해 PFS에 대한 0.67의 위험 비를 보였다.
상기 6종의 상이한 아바스틴(등록상표) 연구로부터의 임상 결과와 VEGF-A 생체마커의 상관관계는 하기 표 18에 제공되어 있다.
[표 18]
Figure pat00032
Figure pat00033
모든 3종의 연구들이 이전 VEGF-A 분석에서 이미 입증된 바와 같이 혈장 VEGF-A의 예후 값을 확인시켜주었다. 그러나, AVADO, AVITA 및 AVAGAST에서 입증된 바와 같이 잠재적인 예측 값은 3종의 상이한 질환들에서 추가 시험에서 확인될 수 없었다. AVF2107g, AVAiL 및 AVOREN 시험에서 수집된 샘플들이 AVADO, AVITA 및 AVAGAST에서 수집된 샘플들에 비해 다소 상이하게 취급되었다는 것(즉, 시트레이트 대 EDTA, 12% 내지 16%의 샘플들에서 보다 많은 냉동/해동 주기, 보다 긴 저장 시간)을 주목해야 한다. 하기 실시예 7에서 입증된 바와 같이, 시트레이트 또는 EDTA 내로의 혈장의 수집은 VEGF-A 분석의 민감성에 영향을 미칠 수 있다. 샘플들 사이의 정확한 차이는 하기 표 19에 제시되어 있다.
[표 19]
Figure pat00034
따라서, 이들 3종의 연구에서 예측 값의 결여는 VEGF-A가 MBC에서 예측 마커로서 작용할 수 있는 가능성을 부정하지 않는다. 또한, 상기 발견이 질환 특이적이라는 것을 배제할 수 없다. 상기 2종의 분석들 사이의 차이는 짧은 VEGF 동형체(VEGF110 및 VEGF121)에 대한 제2 세대 분석의 민감성의 차이를 보여주었다. 이론에 구속받고자 하는 것은 아니지만, 상이한 질환들에서 상이한 동형체들의 상이한 생물학적 효과 및 존재도가 있을 수 있다. 예를 들면, VEGF121은 형질감염된 이종이식 모델에서 다른 통상적으로 발현된 165 및 189 동형체들보다 더 강한 종양발생 유도를 보였다(Zhang, H.T. et al., Brit. J. Cancer 83 (2000) 63-68). 혈관 내피 성장 인자의 121개 아미노산 동형체는 생체내에서 다른 스플라이스 동형체들보다 더 강한 종양발생성을 보인다(Zhang, H.T. et al., Brit. J. Cancer 83 (2000) 63-68). 이것은 121 동형체가 원발성 인간 유방 암종에서 우세한 동형체인 것으로 밝혀졌다는 사실에 비추어 볼 때 특히 의미있다(Relf, M. et al., Cancer Res. 57 (1997) 963-969).
요약하건대, IMPACT 분석은 시험된 질환들 전체에서 혈장 VEGF-A에 대한 일관된 예후 값을 보였다. 또한, 이 시험은 AVADO, AVITA 및 AVAGAST에서 이들 질환들에서 베바시주마브에 대한 예측 값을 입증하는 일관된 결과를 발생시킨 반면, AVF2107g, AVAiL 및 AVOREN에서 혈장 샘플들의 재시험은 이러한 상관관계를 보이지 못하였는데, 이것은 이들 3종의 다른 질환들에서 혈장 VEGF-A 발현의 잠재적인 예측 값이 없다는 것을 암시한다. 그러나, 샘플들의 차이가 이들 결과의 차이에 영향을 미쳤다는 것을 주목해야 한다(하나의 이러한 차이는 하기 실시예 7에서 입증됨). 이론에 구속받고자 하는 것은 아니지만, IMPACT 분석이 짧은 동형체 VEGF110 및 VEGF121에 유리한 한, 상이한 질환들에서 상이한 동형체들의 상이한 생물학적 효과 및 존재도가 있을 수도 있다.
실시예 7 : Na 시트레이트 및 EDTA 에서 수집된 혈장 중의 짧은 VEGF 동형체의 검출
HER2+ 국소적 재발성 또는 전이성 유방암을 갖는 환자로부터 쌍을 이룬 혈장 샘플들을 EDTA 모노베트(5 ㎖) 및 시트레이트 모노베트 수집 튜브(5 ㎖) 둘다 내로 수집하였다. 혈액 수집의 30분 이내에, 혈액 튜브를 원심분리기 내에 넣었고 세포와 혈장이 분리될 때까지 실온에서 1500 g로 10분 동안 원심분리하였다. 원심분리 직후, 피펫을 이용하여 혈장을 프로필렌 전달 튜브 내로 조심스럽게 옮긴 후 2개의 저장 튜브(각각 약 1.25 ㎖의 절반 부피) 내로 동등하게 분취하였다. 샘플 중의 VEGF-A의 수준을 전술된 IMPACT 분석을 이용하여 측정하였다. 도 21에 나타낸 바와 같이, VEGFA 농도는 치료 전 수집된 기준 샘플의 경우 EDTA-시트레이트 방법 비교에 대한 약 0.8의 스페어만 상관계수를 가지면서 시트레이트에 수집되고 저장된 혈장 샘플에 비해 EDTA에 수집되고 저장된 혈장 샘플의 경우 약 40% 더 높다.
상기 발명이 명확한 이해를 목적으로 예증 및 실시예에 의해 다소 상세하게 기재되어 있지만, 상기 설명 및 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본원에서 인용된 모든 특허들, 특허출원들, 과학 참고문헌들 및 진뱅크 접수번호의 개시내용은 마치 각각의 특허, 특허출원, 과학 참고문헌 및 진뱅크 접수번호가 구체적으로 및 개별적으로 참고로 도입되는 것처럼 모든 목적을 위해 전체적으로 명백히 참고로 도입된다.
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Hoffmann-La Roche AG <120> METHOD TO IDENTIFY A PATIENT WITH AN INCREASED LIKELIHOOD OF RESPONDING TO AN ANTI-CANCER THERAPY <130> 27121 WO-WN <150> PCT/EP2011/062228 <151> 2011-07-18 <150> US 61/414,853 <151> 2010-11-17 <150> US 61/497,753 <151> 2011-06-16 <150> EP 10170004.5 <151> 2010-07-19 <150> EP 10170008.6 <151> 2010-07-19 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 232 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala Pro Met Ala Glu Gly 20 25 30 Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe Met Asp Val Tyr Gln 35 40 45 Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val Asp Ile Phe Gln Glu 50 55 60 Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys Pro Ser Cys Val Pro Leu 65 70 75 80 Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly Leu Glu Cys Val Pro 85 90 95 Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met Arg Ile Lys Pro His 100 105 110 Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu Gln His Asn Lys Cys 115 120 125 Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln Glu Lys Lys Ser Val 130 135 140 Arg Gly Lys Gly Lys Gly Gln Lys Arg Lys Arg Lys Lys Ser Arg Tyr 145 150 155 160 Lys Ser Trp Ser Val Tyr Val Gly Ala Arg Cys Cys Leu Met Pro Trp 165 170 175 Ser Leu Pro Gly Pro His Pro Cys Gly Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys 180 185 190 His Leu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn 195 200 205 Thr Asp Ser Arg Cys Lys Ala Arg Gln Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr 210 215 220 Cys Arg Cys Asp Lys Pro Arg Arg 225 230 <210> 2 <211> 1356 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Gln Ser Lys Val Leu Leu Ala Val Ala Leu Trp Leu Cys Val Glu 1 5 10 15 Thr Arg Ala Ala Ser Val Gly Leu Pro Ser Val Ser Leu Asp Leu Pro 20 25 30 Arg Leu Ser Ile Gln Lys Asp Ile Leu Thr Ile Lys Ala Asn Thr Thr 35 40 45 Leu Gln Ile Thr Cys Arg Gly Gln Arg Asp Leu Asp Trp Leu Trp Pro 50 55 60 Asn Asn Gln Ser Gly Ser Glu Gln Arg Val Glu Val Thr Glu Cys Ser 65 70 75 80 Asp Gly Leu Phe Cys Lys Thr Leu Thr Ile Pro Lys Val Ile Gly Asn 85 90 95 Asp Thr Gly Ala Tyr Lys Cys Phe Tyr Arg Glu Thr Asp Leu Ala Ser 100 105 110 Val Ile Tyr Val Tyr Val Gln Asp Tyr Arg Ser Pro Phe Ile Ala Ser 115 120 125 Val Ser Asp Gln His Gly Val Val Tyr Ile Thr Glu Asn Lys Asn Lys 130 135 140 Thr Val Val Ile Pro Cys Leu Gly Ser Ile Ser Asn Leu Asn Val Ser 145 150 155 160 Leu Cys Ala Arg Tyr Pro Glu Lys Arg Phe Val Pro Asp Gly Asn Arg 165 170 175 Ile Ser Trp Asp Ser Lys Lys Gly Phe Thr Ile Pro Ser Tyr Met Ile 180 185 190 Ser Tyr Ala Gly Met Val Phe Cys Glu Ala Lys Ile Asn Asp Glu Ser 195 200 205 Tyr Gln Ser Ile Met Tyr Ile Val Val Val Val Gly Tyr Arg Ile Tyr 210 215 220 Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu 225 230 235 240 Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile 245 250 255 Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu 260 265 270 Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe 275 280 285 Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu 290 295 300 Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Val Arg Val His Glu Lys Pro Phe Val Ala Phe Gly Ser Gly Met 325 330 335 Glu Ser Leu Val Glu Ala Thr Val Gly Glu Arg Val Arg Ile Pro Ala 340 345 350 Lys Tyr Leu Gly Tyr Pro Pro Pro Glu Ile Lys Trp Tyr Lys Asn Gly 355 360 365 Ile Pro Leu Glu Ser Asn His Thr Ile Lys Ala Gly His Val Leu Thr 370 375 380 Ile Met Glu Val Ser Glu Arg Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Val Ile Leu 385 390 395 400 Thr Asn Pro Ile Ser Lys Glu Lys Gln Ser His Val Val Ser Leu Val 405 410 415 Val Tyr Val Pro Pro Gln Ile Gly Glu Lys Ser Leu Ile Ser Pro Val 420 425 430 Asp Ser Tyr Gln Tyr Gly Thr Thr Gln Thr Leu Thr Cys Thr Val Tyr 435 440 445 Ala Ile Pro Pro Pro His His Ile His Trp Tyr Trp Gln Leu Glu Glu 450 455 460 Glu Cys Ala Asn Glu Pro Ser Gln Ala Val Ser Val Thr Asn Pro Tyr 465 470 475 480 Pro Cys Glu Glu Trp Arg Ser Val Glu Asp Phe Gln Gly Gly Asn Lys 485 490 495 Ile Glu Val Asn Lys Asn Gln Phe Ala Leu Ile Glu Gly Lys Asn Lys 500 505 510 Thr Val Ser Thr Leu Val Ile Gln Ala Ala Asn Val Ser Ala Leu Tyr 515 520 525 Lys Cys Glu Ala Val Asn Lys Val Gly Arg Gly Glu Arg Val Ile Ser 530 535 540 Phe His Val Thr Arg Gly Pro Glu Ile Thr Leu Gln Pro Asp Met Gln 545 550 555 560 Pro Thr Glu Gln Glu Ser Val Ser Leu Trp Cys Thr Ala Asp Arg Ser 565 570 575 Thr Phe Glu Asn Leu Thr Trp Tyr Lys Leu Gly Pro Gln Pro Leu Pro 580 585 590 Ile His Val Gly Glu Leu Pro Thr Pro Val Cys Lys Asn Leu Asp Thr 595 600 605 Leu Trp Lys Leu Asn Ala Thr Met Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asp Ile 610 615 620 Leu Ile Met Glu Leu Lys Asn Ala Ser Leu Gln Asp Gln Gly Asp Tyr 625 630 635 640 Val Cys Leu Ala Gln Asp Arg Lys Thr Lys Lys Arg His Cys Val Val 645 650 655 Arg Gln Leu Thr Val Leu Glu Arg Val Ala Pro Thr Ile Thr Gly Asn 660 665 670 Leu Glu Asn Gln Thr Thr Ser Ile Gly Glu Ser Ile Glu Val Ser Cys 675 680 685 Thr Ala Ser Gly Asn Pro Pro Pro Gln Ile Met Trp Phe Lys Asp Asn 690 695 700 Glu Thr Leu Val Glu Asp Ser Gly Ile Val Leu Lys Asp Gly Asn Arg 705 710 715 720 Asn Leu Thr Ile Arg Arg Val Arg Lys Glu Asp Glu Gly Leu Tyr Thr 725 730 735 Cys Gln Ala Cys Ser Val Leu Gly Cys Ala Lys Val Glu Ala Phe Phe 740 745 750 Ile Ile Glu Gly Ala Gln Glu Lys Thr Asn Leu Glu Ile Ile Ile Leu 755 760 765 Val Gly Thr Ala Val Ile Ala Met Phe Phe Trp Leu Leu Leu Val Ile 770 775 780 Ile Leu Arg Thr Val Lys Arg Ala Asn Gly Gly Glu Leu Lys Thr Gly 785 790 795 800 Tyr Leu Ser Ile Val Met Asp Pro Asp Glu Leu Pro Leu Asp Glu His 805 810 815 Cys Glu Arg Leu Pro Tyr Asp Ala Ser Lys Trp Glu Phe Pro Arg Asp 820 825 830 Arg Leu Lys Leu Gly Lys Pro Leu Gly Arg Gly Ala Phe Gly Gln Val 835 840 845 Ile Glu Ala Asp Ala Phe Gly Ile Asp Lys Thr Ala Thr Cys Arg Thr 850 855 860 Val Ala Val Lys Met Leu Lys Glu Gly Ala Thr His Ser Glu His Arg 865 870 875 880 Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Leu Ile His Ile Gly His His Leu 885 890 895 Asn Val Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Lys Pro Gly Gly Pro Leu 900 905 910 Met Val Ile Val Glu Phe Cys Lys Phe Gly Asn Leu Ser Thr Tyr Leu 915 920 925 Arg Ser Lys Arg Asn Glu Phe Val Pro Tyr Lys Thr Lys Gly Ala Arg 930 935 940 Phe Arg Gln Gly Lys Asp Tyr Val Gly Ala Ile Pro Val Asp Leu Lys 945 950 955 960 Arg Arg Leu Asp Ser Ile Thr Ser Ser Gln Ser Ser Ala Ser Ser Gly 965 970 975 Phe Val Glu Glu Lys Ser Leu Ser Asp Val Glu Glu Glu Glu Ala Pro 980 985 990 Glu Asp Leu Tyr Lys Asp Phe Leu Thr Leu Glu His Leu Ile Cys Tyr 995 1000 1005 Ser Phe Gln Val Ala Lys Gly Met Glu Phe Leu Ala Ser Arg Lys Cys 1010 1015 1020 Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Leu Ser Glu Lys Asn 1025 1030 1035 1040 Val Val Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile Tyr Lys Asp 1045 1050 1055 Pro Asp Tyr Val Arg Lys Gly Asp Ala Arg Leu Pro Leu Lys Trp Met 1060 1065 1070 Ala Pro Glu Thr Ile Phe Asp Arg Val Tyr Thr Ile Gln Ser Asp Val 1075 1080 1085 Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Phe Ser Leu Gly Ala Ser 1090 1095 1100 Pro Tyr Pro Gly Val Lys Ile Asp Glu Glu Phe Cys Arg Arg Leu Lys 1105 1110 1115 1120 Glu Gly Thr Arg Met Arg Ala Pro Asp Tyr Thr Thr Pro Glu Met Tyr 1125 1130 1135 Gln Thr Met Leu Asp Cys Trp His Gly Glu Pro Ser Gln Arg Pro Thr 1140 1145 1150 Phe Ser Glu Leu Val Glu His Leu Gly Asn Leu Leu Gln Ala Asn Ala 1155 1160 1165 Gln Gln Asp Gly Lys Asp Tyr Ile Val Leu Pro Ile Ser Glu Thr Leu 1170 1175 1180 Ser Met Glu Glu Asp Ser Gly Leu Ser Leu Pro Thr Ser Pro Val Ser 1185 1190 1195 1200 Cys Met Glu Glu Glu Glu Val Cys Asp Pro Lys Phe His Tyr Asp Asn 1205 1210 1215 Thr Ala Gly Ile Ser Gln Tyr Leu Gln Asn Ser Lys Arg Lys Ser Arg 1220 1225 1230 Pro Val Ser Val Lys Thr Phe Glu Asp Ile Pro Leu Glu Glu Pro Glu 1235 1240 1245 Val Lys Val Ile Pro Asp Asp Asn Gln Thr Asp Ser Gly Met Val Leu 1250 1255 1260 Ala Ser Glu Glu Leu Lys Thr Leu Glu Asp Arg Thr Lys Leu Ser Pro 1265 1270 1275 1280 Ser Phe Gly Gly Met Val Pro Ser Lys Ser Arg Glu Ser Val Ala Ser 1285 1290 1295 Glu Gly Ser Asn Gln Thr Ser Gly Tyr Gln Ser Gly Tyr His Ser Asp 1300 1305 1310 Asp Thr Asp Thr Thr Val Tyr Ser Ser Glu Glu Ala Glu Leu Leu Lys 1315 1320 1325 Leu Ile Glu Ile Gly Val Gln Thr Gly Ser Thr Ala Gln Ile Leu Gln 1330 1335 1340 Pro Asp Ser Gly Thr Thr Leu Ser Ser Pro Pro Val 1345 1350 1355 <210> 3 <211> 221 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Pro Val Met Arg Leu Phe Pro Cys Phe Leu Gln Leu Leu Ala Gly 1 5 10 15 Leu Ala Leu Pro Ala Val Pro Pro Gln Gln Trp Ala Leu Ser Ala Gly 20 25 30 Asn Gly Ser Ser Glu Val Glu Val Val Pro Phe Gln Glu Val Trp Gly 35 40 45 Arg Ser Tyr Cys Arg Ala Leu Glu Arg Leu Val Asp Val Val Ser Glu 50 55 60 Tyr Pro Ser Glu Val Glu His Met Phe Ser Pro Ser Cys Val Ser Leu 65 70 75 80 Leu Arg Cys Thr Gly Cys Cys Gly Asp Glu Asn Leu His Cys Val Pro 85 90 95 Val Glu Thr Ala Asn Val Thr Met Gln Leu Leu Lys Ile Arg Ser Gly 100 105 110 Asp Arg Pro Ser Tyr Val Glu Leu Thr Phe Ser Gln His Val Arg Cys 115 120 125 Glu Cys Arg His Ser Pro Gly Arg Gln Ser Pro Asp Met Pro Gly Asp 130 135 140 Phe Arg Ala Asp Ala Pro Ser Phe Leu Pro Pro Arg Arg Ser Leu Pro 145 150 155 160 Met Leu Phe Arg Met Glu Trp Gly Cys Ala Leu Thr Gly Ser Gln Ser 165 170 175 Ala Val Trp Pro Ser Ser Pro Val Pro Glu Glu Ile Pro Arg Met His 180 185 190 Pro Gly Arg Asn Gly Lys Lys Gln Gln Arg Lys Pro Leu Arg Glu Lys 195 200 205 Met Lys Pro Glu Arg Cys Gly Asp Ala Val Pro Arg Arg 210 215 220

Claims (33)

  1. 환자로부터 수득된 샘플 중의 혈관 내피 성장 인자(VEGF)110의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, VEGF 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 환자를 확인하는 방법으로서, 이때 상기 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 수준이 기준 수준 이상인 것이 상기 환자가 상기 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있다는 것을 표시하는, 방법.
  2. 암을 앓는 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료에 대한 상기 환자의 반응성을 예측하는 방법으로서, 이때 상기 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 수준이 기준 수준 이상인 것이 상기 환자가 상기 항암요법을 사용한 치료에 반응할 가능성이 보다 더 높다는 것을 표시하는, 방법.
  3. 암을 앓는 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 상기 환자가 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성을 측정하는 방법으로서, 이때 상기 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 수준이 기준 수준 이상인 것이 상기 환자가 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것을 표시하는, 방법.
  4. 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법의 치료 효과를 최적화하는 방법으로서, 이때 상기 환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 수준이 기준 수준 이상인 것이 상기 환자가 상기 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것을 표시하는, 방법.
  5. 환자로부터 수득된 샘플이 기준 샘플 중의 VEGF110의 수준 이상의 VEGF110의 수준을 갖는지를 측정하는 단계, 및
    VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 유효량으로 상기 환자에게 투여하여 암을 치료하는 단계
    를 포함하는, 상기 환자에서 암을 치료하는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    암이 대장암, 교모세포종, 신장암, 난소암, 유방암, 췌장암, 위암 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    환자로부터 수득된 샘플이 전혈, 혈장, 혈청 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 방법.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    VEGF110 수준이 단백질 수준인, 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    단백질 수준이 혈장 단백질 수준의 측정에 의해 결정되는, 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    환자로부터 수득된 샘플 중의 VEGF110의 혈장 수준이 기준 샘플 중의 VEGF110의 수준 이상인 것이 상기 환자가 항암요법으로부터 이익을 얻을 수 있거나, 항암요법에 반응할 가능성이 보다 더 높거나, 항암요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 증가된 것을 표시하는, 방법.
  11. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  12. 제11항에 있어서,
    VEGF-A 길항제가 항체인, 방법.
  13. 제12항에 있어서,
    항체가 베바시주마브(bevacizumab)인, 방법.
  14. 제11항에 있어서,
    세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제2 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제가 동시에 투여되는, 방법.
  16. 제14항에 있어서,
    제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제가 순차적으로 투여되는, 방법.
  17. 제14항에 있어서,
    세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제3 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  18. 제17항에 있어서,
    제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제가 동시에 투여되는, 방법.
  19. 제17항에 있어서,
    제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제가 순차적으로 투여되는, 방법.
  20. 제5항에 있어서,
    VEGF-A 길항제가 항체인, 방법.
  21. 제20항에 있어서,
    항체가 베바시주마브인, 방법.
  22. 제5항에 있어서,
    항암요법이 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제2 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  23. 제19항에 있어서,
    제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제가 동시에 투여되는, 방법.
  24. 제19항에 있어서,
    제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제가 순차적으로 투여되는, 방법.
  25. 제19항에 있어서,
    항암요법이 세포독성제, 화학요법제, 성장 억제제, 항혈관신생제 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 제3 항암요법을 유효량으로 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  26. 제25항에 있어서,
    제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제가 동시에 투여되는, 방법.
  27. 제25항에 있어서,
    제3 항암요법, 제2 항암요법 및 VEGF-A 길항제가 순차적으로 투여되는, 방법.
  28. VEGF110에 특이적으로 결합할 수 있는 화합물 세트; 및
    VEGF110의 수준을 측정하여 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료에 대한 환자의 반응성을 예측하기 위한 상기 화합물의 사용에 대한 설명서
    를 포함하는, 환자가 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는지를 측정하기 위한 키트로서, 이때 VEGF110의 수준이 기준 샘플 중의 VEGF110의 수준 이상인 것이 상기 환자가 VEGF-A 길항제를 포함하는 항암요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있다는 것을 표시하는, 키트.
  29. 제28항에 있어서,
    화합물이 단백질인, 키트.
  30. 제29항에 있어서,
    단백질이 항체인, 키트.
  31. VEGF110의 수준을 검출하기 위한 화합물 세트로서, VEGF110에 특이적으로 결합할 수 있는 1종 이상의 화합물을 포함하는 화합물 세트.
  32. 제31항에 있어서,
    화합물이 단백질인, 화합물 세트.
  33. 제32항에 있어서,
    단백질이 항체인, 화합물 세트.
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