KR20150013476A

KR20150013476A - 조합요법용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR20150013476A
Application number: KR1020147030277A
Authority: KR
Inventors: 로스 니콜라스 워터스; 에바 수잔나 워터스
Original assignee: 아이백스 인터내셔널 게엠베하
Priority date: 2012-04-04
Filing date: 2013-04-03
Publication date: 2015-02-05
Also published as: US11207308B2; JP6177875B2; ZA201407726B; EA027748B1; ES2776678T3; HK1206297A1; NZ630560A; BR112014024672A8; CA2869145A1; US20200000785A1; JP2015515475A; US20130267552A1; EP2844346A1; IL234831A0; IL234831B; EP2844346B1; WO2013152105A1; EA201491819A1; MX2014011971A; CN104470585A

Abstract

본 발명은 테트라베나진으로 알려진 소포 모노아민 수송체 2 (VMAT)의 억제제 및 프리도피딘으로 알려진 도파민 작용 안정제의 치료학적 유효량의 조합물을 포함하는 신규한 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따라 사용하기 위한 약학적 조성물은 운동 장애 및 특히 헌팅턴병, 질 드 라 투렛 증후군 또는 지연성운동장애과 관련된 운동 장애의 치료에서 테트라베나진의 반대 효과를 감소시키고, 증상적 치료학적 효과를 향상시키는데 특히 유용한 것으로 사료된다.

Description

조합요법용 약학적 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR COMBINATION THERAPY}

본 출원은 2013년 3월 14일 출원된 미국 가특허 출원 제 61/783,730호, 2012년 4월 17일 출원된 미국 가특허 출원 제 61/625,192 및 2010년 4월 4일 출원된 미국 가특허 출원 제 61/620,203호의 우선권을 주장하고, 상기 출원의 전체 내용은 본 명세서에서 참조로서 포함된다.

본 출원 전체에서, 다양한 문헌들이 인용되고, 이들 문헌의 전문은 본 명세서에 기술된 발명일자로 기술상태를 더욱 충분히 설명하기 위해 본 명세서에서 참조로 포함된다.

본 발명은 테트라베나진으로 알려진 소포 모노아민 수송체 2 (VMAT)의 억제제 및 프리도피딘으로 알려진 도파민 작용 안정제의 치료학적 유효량의 조합물을 포함하는 신규한 약학적 조성물에 관한 것이다.

프리도피딘 (predopidine), 즉 4- (3-메탄설포닐-페닐)-1-프로필-피페리딘은 현재 헌팅턴병의 치료를 위해 임상적으로 최근에 개발되고 있는 의료 물질이다. 이 화합물은 WO 01/46145에서 처음 기술되었다.

프리도피딘은 빠른 해리 운동역학을 갖는, 경쟁적 도파민 D2 수용체 길항활성을 나타내는 도파민 작용 안정제이다 (Dyhring, 2010). 생체 내에서 프리도피딘은 선조체 및 전두엽에서 도파민의 회전율 및 방출율을 증가시킨다 (Poten, 2010; Pettersson 2010). 행동 효과는 정신자극제 유발 행동과다증의 길항활성을 포함하고, 이것은 항정신성을 암시하나, 자발적 이동운동 활성에 대한 억제 효과는 암시하지 않는다 (Ponten, 2010; Natesan 2006; Nilsson, 2004).

테트라벤진, 즉 (SS,RR)-3-이소부틸-9,10-디메톡시-1,3,4,6,7,11b-헥사히드로-피리도[2,1-a]이소퀴놀린-2-온은 특정 운동 장애의 대증요법을 위해 시판되는 의료 물질이다 (FDA Label for XENAZINE (Tetrabenzine) 07/06/2011). 테트라베나진은 뇌에서 모노아민 신경전달물질의 소포성 저장을 방해하여, 도파민, 세로토닌 및 노르에피네프린의 시냅스 방출을 감소시키는 소포 모노아민 수송체 2 (VMAT)의 억제제이다 (Paleacu, 2007). 모노아민 신경전달의 이러한 감소 현상은, 예를 들어 운동 및 보상을 포함하는 도파민 의존성 기능의 억제와 관련되어 있다. 상기 운동 억제는 예를 들어 헌팅턴병, 지연성운동장애 및 투렛 증후군에서 불수의 운동을 개선시키기 위해 치료학적으로 사용된다. 그러나, 테트라베나진으로의 치료는 심각한 부활성과 관련되어 있다. 이러한 부활성은 파킨슨증, 즉 강직 및 운동 기능 이상, 우울증 및 기능적 용량 이상을 포함한다.

예를 들어 헌팅턴병의 임상 증상의 일부로서 발생하는 무도증 및 이상 운동증과 같은 불수의 운동은 피질-선조체-시상 간접 회로에서 활성 이상과 관련된 것으로 여겨진다. 따라서, 이러한 불수의 운동에서의 테트라베나진의 유리한 효과는 테트라베나진에 의해 야기되는 도파민 전달의 감소의 결과로서 발생하는 것으로서, 상기 간접 회로의 중형 돌기 신경의 도파민 D2 수용체 톤 (tone)의 감소로 인한 것이다. 도파민 D2 수용체 톤의 감소는 이들 중형 돌기 신경의 억제 감소를 초래하고, 따라서 상기 간접 회로의 활성이 증가하고, 상기 불수의 운동의 억제가 향상된다. 따라서, 도파민 D2 길항제는 또한 HD에서 무도증을 완화시키기 위해 자주 사용된다 (Steward 2001).

조합 요법

운동 장애와 같은 수정의 증상을 치료하기 위한 2종의 약물의 투여는 다수의 잠재적 문제들을 야기한다. 생체 내에서 2종의 상호작용은 복합적이다. 임의의 단일 약물의 효과는 상기 약물의 흡수, 분포 및 제거와 관련된다. 2종의 약물이 체내로 도입되면, 각각의 약물은 다른 약물의 흡수, 분포 및 제거에 영향을 주고, 따라서 다른 약물의 효과를 변화시킨다. 예를 들어, 1종의 약물은 다른 약물의 제거의 대사 경로에 포함되는 효소의 생성을 억제하거나, 활성화하거나 또는 유발할 수 있다 (Guidance for Industry, 1999). 일예로, GA 및 인터페론 (IFN)의 조합 투여는 실험적으로, 다른 치료법의 임상적 효과를 제거하는 것으로 나타났다. (Brod 2000). 다른 실험에서, IFN-β와의 조합 요법에서 프리드니손의 첨가는 그의 상향-조절 효과에 대해 길항활성하는 것으로 보고되었다. 따라서, 동일 증상을 치료하기 위해 2종의 약물이 투여되는 경우, 인간 대상체에서 각각의 약물이 다른 약물의 치료학적 활성을 보충할 것인지, 영향을 주지 않을 것인지 또는 이를 억제할 것인지는 예측할 수 없다.

2종의 상호작용이 각각의 약물의 의도된 치료학적 활성에 영향을 줄 수 있을 뿐만 아니라, 이들 상호작용은 독성 대사물의 수준을 증가시킬 수 있다 (Guidance for Industry, 1999). 또한 이들 상호작용은 각각의 약물의 부활성을 고조시키거나 또는 완화할 수 있다. 따라서, 증상의 치료를 위해 2종의 약물을 투여하는 경우, 각각의 약물의 부정적 특성에 어떤 변화가 발생할지는 예측할 수 없다. 일예로, 나탈리주맙 및 인터페론 β-1a의 조합은 예상치 못한 부활성의 위험을 증가시키는 것으로 관찰되었다 (Vollmer, 2008; Rudick 2006; Kleinschmidt-DeMasters, 2005; Langer-Gould 2005).

또한, 2종의 약물 간의 상호작용의 효과가 언제 나타날지를 정확하게 예측하는 것은 어려운 일이다. 예를 들어, 약물 간의 대사적 상호작용은 2종의 약물이 항정 상태 농도에 도달하거나 또는 2종의 약물 중 하나의 중단에 도달된 후에, 제2 약물의 투여 개시시에 분명해질 수 있다 (Guidance for Industry, 1999).

따라서, 출원 당시의 기술 상태에서는, 2종의 약물, 특히 프리도피딘 및 테트라베나진의 조합 요법의 효과는 조합 연구의 결과가 나올 때까지 예측할 수 없다.

본 발명의 요약

놀랍게도 현재 프리도피딘이 테트라베나진에 의해 야기되는 운동 억제를 반전시킬 수 있고, 프리도피딘, 즉 도파민 D2 수용체 차단의 일차적 약물학적 효과를 유설명서킨다는 것이 밝혀졌다. 이러한 발견은 프리도피딘 및 테트라베나진의 동시 투여가 테트라베나진의 치료학적으로 유리한 효과를 향상시키고, 즉 반대활성 및 정의적 효과 (affective effect)를 감소시킬 뿐만 아니라 불수의 운동을 추가로 완화한다는 것을 시사한다.

본 발명은 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 주기적으로 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 비만, 비만 관련 장애 또는 프리도피딘의 심혈관계 부활성을 겪고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 대상체에게 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 주기적 투여시의 하나 이상의 부활성을 감소시키거나 또는 예방하는 방법으로서, 상기 대상체에게 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 주기적으로 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한

a) 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제1 약학적 조성물;

b) 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제2 약학적 조성물; 및

c) 운동 장애를 겪고 있는 대상체 치료를 위한 제1 약학적 조성물 및 제2 약학적 조성물의 공용 사용에 대한 설명서를 포함하는 패키지를 제공한다.

본 발명은 또한 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하기 위해 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과 조합하여 또는 부가적 치료법으로 사용하기 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

본 발명은 또한 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 운동 장애를 겪고 있는 대상체 치료를 위한 조합물을 제조하기 위한,

a) 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염; 및

b) 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 양의 용도로서, 여기서 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 공동 투여되거나 또는 동일기간 내에 투여되는 것인 용도를 제공한다.

본 발명은 또한 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과 함께, 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물로서, 상기 대상체에 상기 약학적 조성물 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 주기적으로 투여함으로써, 상기 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과 함께, 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물로서, 상기 대상체에 상기 약학적 조성물 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 주기적으로 투여함으로써, 상기 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 운동 장애를 겪고 있는 대상체 치료를 위한 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 여기서 상기 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 상기 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여된다.

본 발명은 또한 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하기 위해 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제품을 제공한다.

본 발명은 또한 비만, 비만 관련 장애 또는 프리도피딘의 심혈관계 부활성을 겪고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 치료학적 유효량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법을 제공한다. 여기서 조합 투여시의 양은 상기 대상체를 치료하는데 효과적인 것인 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 인간을 포함한 포유동물에서, 비만 또는 비만 관련 장애의 치료, 예방 또는 완화 및 프리도피딘의 심혈관계 부활성의 치료, 예방 또는 완화를 위한, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염; 및 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 운동 장애의 치료, 예방 또는 완화를 위한 의약품으로서 사용하기 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 의약품으로서 사용하기 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 인간을 포함한 포유동물에서 비만 또는 비만 관련 장애의 치료, 예방 또는 완화 및 프리도피딘의 심혈관계 부활성의 치료, 예방 또는 완화를 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염; 및 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 인간을 포함한 포유동물에서 운동 장애의 치료, 예방 또는 완화를 위한 의약품의 제조를 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염; 및 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물의 용도에 관한 것이다.

다른 측면에서, 본 발명은 운동 장애의 치료, 예방 또는 완화를 위한 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물과 함께 조합 요법에서 사용하기 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 아쥬반트, 부형제, 담체 및/또는 희석제와 함께 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 치료학적 유효량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 인간을 포함한 살아있는 동물체에서의 운동 장애의 치료, 예방 또는 완화 방법으로서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과의 조합 요법에서 이를 필요로 하는 살아 있는 동물체에 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 적어도 2 개의 개별적 단위 투여 형태 (A) 및 (B)를 포함하고, 여기서 (A)는 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하고; 또한 (B)는 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하고; 또한 임의로 (C) 이를 필요로 하는 환자에게 (A)의 프리도피딘 및 (B)의 테트라베나진의 동시 투여, 순차적 투여 또는 개별 투여의 설명서를 포함하는 부품 키트를 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 (A) 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제1 약학적 투여 형태; 및 (B) 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제2 약학적 투여 형태를 포함하는 제조물을 제공하고, 여기서 상기 제조물은 제1 및 제2 약학적 투여 형태를 함유한다.

다른 측면에서, 본 발명은 운동 장애를 겪고 있는 대상체의 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 치료학적 유효량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 공동 투여시의 상기 소정량은 상기 인간 환자를 치료하는데 효과적인 것인 방법을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 비만 또는 비만 관련 장애 또는 프리도피딘의 심혈관계 부활성을 겪고 있는 인간을 포함한 포유동물의 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 치료학적 유효량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 투여하는 단계를 포함하고. 여기서 공동 투여시의 상기 소정량은 상기 포유동물을 치료하는데 효과적인 것인 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 목적은 하기의 상세한 설명 및 실시예로부터 당업자에게 분명할 것이다.

본 발명은 첨부 도면과 관련하여 추가로 기술된다.
도 1은 테트라베나진에 대한 평균 대조군 값의 백분율로서 표시된 자발적 이동운동 활성 (LMA)이다. 활성은 각각의 기록 시간 기간 동안 투여량으로 나타낸다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (0.37; 0.64 및 1.1 μmol/kg)으로 시험된 테트라베나진 및 비히클 (글루코오스 5.5% v/w)로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 2는 테트라베나진의 선조 DOPAC (3,4-디히드록시페닐아세트산)에 대한 효과이다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (0.37; 0.64 및 1.1 μmol/kg)으로 시험된 테트라베나진 및 비히클 (글루코오스 5.5% v/w)로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 3은 테트라베나진으로 처리한 후 평균 대조군 값의 백분율로서 표시된 Arc 유전자 발현 (Arc mRNA 수준 또는 Arc)이다. 발현은 투여량 및 부품 (선조 arc (arcS) 또는 전두엽 arc (arcF))에 의해 나타낸다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (0.37; 0.64 및 1.1 μmol/kg)으로 시험된 테트라베나진 및 비히클 (글루코오스 5.5% v/w)로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 4는 프리도피딘에 대한 평균 대조군 값의 백분율로서 표시된 자발적 이동운동 활성이다. 활성은 각각의 기록 시간 기간 동안 투여량에 의해 나타낸다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (11; 33 및 100 μmol/kg)으로 시험된 프리도피딘 및 비히클 (염수; NaCl 0.9% v/w)로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 5는 프리도피딘 (NS30016)의 선조 DOPAC에 대한 효과이다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (11; 33 및 100 μmol/kg)으로 시험된 프리도피딘 및 비히클 (염수; NaCl 0.9% v/w)로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 6은 프리도피딘 처리한 후 평균 대조군 값의 백분율로서 표시된 Arc 유전자 발현이다. 발현은 투여량 및 부품 (선조 arc (arcS) 또는 전두엽 arc (arcF))에 의해 나타낸다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (11; 33 및 100 μmol/kg)으로 시험된 프리도피딘 및 비히클 (염수; NaCl 0.9% v/w)로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 7은 할로페리돌에 대한 평균 대조군 값의 백분율로서 표시된 자발적 이동운동 활성이다. 활성은 각각의 기록 시간 기간 동안 투여량에 의해 나타낸다. 동물을 n = 4인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (0.12; 0.37 및 1.1 μmol/kg)으로 시험된 할로페리돌 및 비히클 (글루코오스 5.5% v/w)로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 8은 할로페리돌에 대한 평균 대조군 값의 백분율로서 표시된 자발적 이동운동 활성이다. 동물을 n = 4인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 네 가지 투여량 (0.04; 0.12; 0.37 및 1.1 μmol/kg)으로 시험된 할로페리돌 및 비히클 (글루코오스 5.5% v/w)로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 9는 할로페리돌의 선조 DOPAC에 대한 효과이다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (0.12; 0.37 및 1.1 μmol/kg)으로 시험된 할로페리돌 및 비히클 (글루코오스 5.5% v/w)로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 10은 할로페리돌 처리한 후, 평균 대조군 값의 백분율로 표시된 Arc 유전자 발현이다. 발현은 투여량 및 부품 (선조 arc (arcS) 또는 전두엽 arc (arcF))에 의해 나타내었다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (0.12; 0.37 및 1.1 μmol/kg)으로 시험된 할로페리돌 및 비히클 (글루코오스 5.5% v/w)로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 11은 테트라베나진 + 프리도피딘에 대한 평균 대조군 값의 백분율로서 표시된 자발적 이동운동 활성이다. 활성은 각각의 기록 시간 기간 동안 투여량에 의해 나타낸다. 이 실험은 하기 두 가지 방법 중 하나로 완료하였다: (1) "처리과정 BS81", 여기서, 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 비히클 1:1 (염수; NaCl 0.9% v/w+ 5.5% 글루코오스, HAc 몇 방울)로 구성하고, 제2 군은 테트라베나진 (0.64 mg/kg)의 단일 투여량으로 구성하고, 제3 군 및 제4 군은 두 가지 투여량 (단일 투여량 (0.64 mg/kg)으로 시험된 테트라메나진과 함께 33 및 100 μmol/kg)으로 시험된 프리도피딘으로 구성하였다. 또는 (2) "처리과정 TA284", 여기서, 동물을 n = 10인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 비히클 1:1 (염수; NaCl 0.9% v/w+ 5.5% 글루코오스, HAc 몇 방울)로 구성하고, 제2 군은 테트라베나진 (0.64 mg/kg)의 단일 투여량으로 구성하고, 제3 군 및 제4 군은 두 가지 투여량 (단일 투여량 (0.64 mg/kg)으로 시험된 테트라베나진과 함께 33 및 100 μmol/kg)으로 시험된 프리도피딘으로 구성하였다. 이 실험에서 뇌조직을 수집하지 않았다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 12는 프리도피딘의 테트라베나진 유발 선조 도파민 증가에 대한 효과이다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 비히클 1:1 (염수; NaCl 0.9% v/w+ 5.5% 글루코오스, HAc 몇 방울)로 구성하고, 제2 군은 테트라베나진 (0.64 mg/kg)의 단일 투여량으로 구성하고, 제3 군 및 제4 군은 두 가지 투여량 (단일 투여량 (0.64 mg/kg)으로 시험된 테트라베나진과 함께 33 및 100 μmol/kg)으로 시험된 프리도피딘으로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 13은 테트라베나진 + 프리도피딘 처리한 후, 평균 대조군 값의 백분율로서 표시된 Arc 유전자 발현이다. 발현은 투여량 및 부품 (선조 arc (arcS) 또는 전두엽 arc (arcF))에 의해 나타낸다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 비히클 1:1 (염수; NaCl 0.9% v/w+ 5.5% 글루코오스, HAc 몇 방울)로 구성하고, 제2 군은 테트라베나진 (0.64 mg/kg)의 단일 투여량으로 구성하고, 제3 군 및 제4 군은 두 가지 투여량 (단일 투여량 (0.64 mg/kg)의 테트라베나진과 함께 33 및 100 μmol/kg)으로 시험된 프리도피딘으로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 14는 테트라베나진 + 할로페리돌에 대한 평균 대조군 값의 백분율로서 표시된 자발적 이동운동 활성이다. 활성은 각각의 기록 시간 기간 동안 투여량에 의해 나타내었다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 비히클 1:1 (염수; NaCl 0.9% v/w+ 5.5% 글루코오스, HAc 몇 방울)로 구성하고, 제2 군은 테트라베나진 (0.64 mg/kg)의 단일 투여량으로 구성하고,제3 군 및 제4 군은 두 가지 투여량 (단일 투여량 (0.64 mg/kg)의 테트라베나진과 함께 0.04 및 0.12 mg/kg)으로 시험된 할로페리돌로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 15는 할로페리돌의 테트라베나진 유발 선조 도파민 증가에 대한 효과이다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 비히클 1:1 (염수; NaCl 0.9% v/w+ 5.5% 글루코오스, HAc 몇 방울)로 구성하고, 제2 군은 테트라베나진 (0.64 mg/kg)의 단일 투여량으로 구성하고,제3 군 및 제4 군은 두 가지 투여량 (단일 투여량 (0.64 mg/kg)의 테트라베나진과 함께 0.04 및 0.12 mg/kg)으로 시험된 할로페리돌로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.
도 16은 테트라베나진 + 할로페리돌 처리한 후, 평균 대조군 값의 백분율로서 표시된 Arc 유전자 발현이다. 발현은 투여량 및 부품 (선조 arc (arcS) 또는 전두엽 arc (arcF))에 의해 나타내었다. 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 비히클 1:1 (염수; NaCl 0.9% v/w+ 5.5% 글루코오스, HAc 몇 방울)로 구성하고, 제2 군은 테트라베나진 (0.64 mg/kg)의 단일 투여량으로 구성하고,제3 군 및 제4 군은 두 가지 투여량 (단일 투여량 (0.64 mg/kg)의 테트라베나진과 함께 0.04 및 0.12 mg/kg)으로 시험된 할로페리돌로 구성하였다. 모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.

본 발명은 운동 장애의 치료, 예방 또는 완화를 위해 프리도피딘 및 테트라베나진을 사용하는 조합 요법에 관한 것이다.

테트라베나진과 함께 제공될 때 프리도피딘의 효과는 우선, 프리도피딘의 일차 약물학적 효과, 즉 도파민 D2 수용체 차단이 테트라베나진과의 공동 투여 하에서 여전히 존재한다는 것을 제시한다. 이것은 테트라베나진 처리 랫트에서 프리도피딘에 의해 유발된 선조 DOPAC에서의 추가적 증가에 의해 반영된다. 선조 D2 수용체 톤의 감소가, 예를 들어 헌팅턴병, 투렛병 및 지연성운동장애에서 테트라베나진이 불수의 운동을 완화하는 제안된 메커니즘인 것을 고려할 때, 이것은 프리도피딘과 테트라베나진의 조합이 이들 장애에서 추가의 임상적 장점을 제공할 수 있다는 것을 나타낸다.

두 번째로, 프리도피딘은 테트라베나진에 의해 야기되는 운동 억제를 반전시켰다. 이러한 운동 억제는 테트라베나진의 사용을 제한하는 문제거리인 일부 도파민 관련 부활성, 특히 클리어 컷 운동 (clear-cut motor) 부활성, 예를 들어 파킨슨증, 즉 운동성의 감소 뿐만 아니라 가능한 경우 우울 기분의 임상전 관련성을 갖는다. 테트라베나진에 의해 유발되는 운동 억제가 프리도피딘과 같은 도파민 D2 수용체에서 순수 길항제로서 활성하는 화합물로부터 예측되지 않았고, 도파민 D2 길항제 할로페리돌로 수행된 유사한 연구에서 관찰되지 않았다는 것을 알아야 한다. 더 정확히 말하면, 할로페리돌과의 공동-치료는 운동 활성을 더욱 감소시켰다.

따라서, 이러한 임상전 운동 데이타는 프리도피딘이 테트라베나진의 정의적 효과 및 반대 활성을 제거한다는 것을 함축한다.

본 발명은 운동 장애를 겪고 있는 대상체의 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 주기적으로 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 비만, 비만 관련 장애 또는 프리도피딘의 심혈관계 부활성을 겪고 있는 대상체의 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

일 실시형태에서, 공동 투여시의 상기 소정량은 각각의 제제가 동량으로 단독 투여되는 경우보다 상기 대상체를 치료하는데 더욱 효과적이다.

일 실시형태에서, 단독 투여시의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량 및 단독 투여시의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량 또는 단독 투여시의 각각의 이들의 양은 상기 대상체를 치료하는데 효과적이지 않다.

일 실시형태에서, 상기 하나 이상의 부활성은 우울증, 자살경향성, 좌불안석증, 불안, 흥분, 파킨슨증, 진정, 경면 및 연하곤란으로부터 선택된다.

일 실시형태에서, 상기 부활성은 파킨슨증이다.

일 실시형태에서, 상기 대상체는 운동 장애를 겪고 있다.

일 실시형태에서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 경구 투여를 통해 투여된다.

일 실시형태에서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 매일 투여된다.

일 실시형태에서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 하루에 2회 투여된다.

일 실시형태에서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 하루에 3회 투여된다.

일 실시형태에서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량은 0.05 mg/kg/일 내지 0.20 mg/kg/일이다.

일 실시형태에서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량은 5-100 mg/일이다.

일 실시형태에서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량은 12.5 mg/일, 25 mg/일, 37.5 mg/일, 50 mg/일, 75 mg/일 또는 100 mg/일이다.

일 실시형태에서, 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 경구 투여를 통해 투여된다.

일 실시형태에서, 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 매일 투여된다.

일 실시형태에서, 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 하루에 2회 투여된다.

일 실시형태에서, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량은 1.5 μmol/kg/일 내지 20 μmol/kg/일이다.

일 실시형태에서, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량은 10-100 mg/일이다.

일 실시형태에서, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량은 10 mg/일, 20 mg/일, 22.5 mg/일, 45 mg/일 또는 90 mg/일이다.

일 실시형태에서, 상기 운동 장애는 헌팅턴병, 투렛 증후군 또는 지연성운동장애이다.

일 실시형태에서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 상기 운동 장애의 증상을 완화시키는데 효과적이다.

일 실시형태에서, 상기 증상은 무도증이다.

일 실시형태에서, 상기 대상체는 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 투여 개시 전에 테트라베나진 치료법을 받았다.

일 실시형태에서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 동시에 투여된다.

일 실시형태에서, 상기 대상체는 인간 환자이다.

본 발명은 또한

c) 운동 장애를 겪고 있는 대상체 치료를 위한 제1 약학적 조성물 및 제2 약학적 조성물의 공동 사용에 대한 설명서를 포함하는 패키지를 제공한다.

일 실시형태에서, 상기 패키지는 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 것이다.

본 발명은 또한 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하기 위해 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과 조합하여 또는 부가적 치료법으로서 사용하기 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

일 실시형태에서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량은 5-100 mg이다.

일 실시형태에서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량은 5 mg, 6.25 mg, 12.5 mg, 25 mg, 37.5 mg, 50 mg, 75 mg 또는 100 mg이다.

일 실시형태에서, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량은 10-100 mg이다.

일 실시형태에서, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량은 10 mg, 22.5 mg, 45 mg 또는 90 mg이다.

일 실시형태에서, 상기 약학적 조성물은 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 것이다.

일 실시형태에서, 상기 약학적 조성물은 비만, 비만 관련 장애 또는 프리도피딘의 심혈관계 부활성을 겪고 있는 대상체의 치료, 예방 또는 완화에 사용하기 위한 것이다.

b) 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 양의 용도로서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 공동 투여되거나 또는 동일기간 내에 투여되는 것인 용도를 제공한다.

본 발명은 또한 운동 장애를 겪고 있는 대상체 치료를 위한 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 여기서 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 상기 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여된다.

본 발명은 또한 운동 장애를 겪고 있는 대상체 치료에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제품을 제공한다.

본 발명은 또한 비만, 비만 관련 장애 또는 프리도피딘의 심혈관계 부활성을 겪고 있는 대상체의 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 치료학적 유효량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 공동 투여시의 상기 소정량은 상기 대상체를 치료하는데 효과적인 것인 방법을 제공한다.

일 실시형태에서, 상기 대상체는 인간 환자이다.

본 발명은 또한 인간을 포함한 포유 동물에서 비만 또는 비만 관련 장애의 치료, 예방 또는 완화 및 프리도피딘의 심혈관계 부활성의 치료, 예방 또는 완화를 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염; 및 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 약학적으로 효과적인 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 운동 장애의 치료, 예방 또는 완화를 위해 치료학적 유효량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과 함께 투여되는 조합 요법에 관한 것이다.

바람직한 실시형태에서, 상기 운동 과잉 운동 장애는 헌팅턴병, 질 드 라 투렛 증후군 또는 지연성운동장애로부터 발생하는 비자발적 행동 과잉 운동 장애, 특히 헌팅턴병으로부터 발생하는 비자발적 행동 과잉 운동 장애이다.

다른 측면에서 볼 때, 본 발명은 의약품으로서 사용하기 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 인간을 포함한 포유 동물의 운동 장애의 치료, 예방 또는 완화를 위한 의약품 제조를 위한

(i) 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염; 및

(ii) 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염;의 조합물의 용도에 관한 것이다.

다른 측면에서, 본 발명은 운동 과잉 운동 장애의 치료, 예방 또는 완화를 위해 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과의 조합 요법에서 사용하기 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과의 조합 요법에서 이를 필요로 하는 동물체에 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 살아있는 동물체의 운동 과잉 운동 장애의 치료, 예방 또는 완화 방법을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 치료학적 유효량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

추가 측면에서, 본 발명은 적어도 2 개의 개별적 단위 투여 형태 (A) 및 (B)를 포함하고, 여기서 (A)는 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하고; 또한 (B)는 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하고; 또한 임의로 (C) 이를 필요로 하는 환자에게 (A)의 프리도피딘 및 (B)의 테트라베나진의 동시 투여, 순차적 투여 또는 개별 투여의 설명서를 포함하는 부품 키트를 제공한다.

추가 측면에서, 본 발명은 (A) 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제1 약학적 투여 형태; 및 (B) 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제2 약학적 투여 형태를 포함하는 제조물을 제공하고, 여기서 상기 제조물은 제1 및 제2 약학적 투여 형태를 함유한다.

추가 측면에서, 본 발명은 운동 장애를 겪고 있는 대상체의 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 치료학적 유효량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

일 실시형태에서, 상기 운동 장애는 헌팅턴병, 질 드 라 투렛 증후군 또는 지연성운동장애로부터 발생하는 비자발적 행동 과잉 운동 장애이다.

일 실시형태에서, 상기 운동 장애는 헌팅턴병으로부터 발생하는 비자발적 행동 과잉 운동 장애이다.

추가 측면에서, 본 발명은 비만 또는 비만 관련 장애 또는 프리도피딘의 심혈관계 부활성을 겪고 있는 인간을 포함한 포유 동물의 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 치료학적 유효량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 조합물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 공동 투여시의 상기 소정량은 포유 동물의 치료에 효과적인 것인 방법을 제공한다.

일 실시형태에서, 상기 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량의 양 및 상기 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량의 양은 경구로 투여된다.

일 실시형태에서, 상기 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량의 양 및 상기 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량의 양은 정맥 내로 투여된다.

일 실시형태에서, 상기 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량의 양 및 상기 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량의 양은 약물의 각질층을 통한 직접 투과에 의해 투여된다.

상기 프리도피딘 함유 의약품은 테트라베나진과 동시, 순차적 또는 개별적 투여에 의해 적용될 수 있다. 바람직하게 프리도피딘은 테트라베나진과 동시에 제공된다.

현재 프리도피딘은 매일 약 0.01 - 1000 mg API의 범위, 더욱 바람직하게는 매일 약 1 - 500 mg API의 범위, 더더욱 바람직하게는 매일 약 10 - 200 mg API의 범위의 치료학적 유효량의 양으로 사용 (테트라베나진과 공동 투여)될 수 있다고 생각된다.

현재 테트라베나진은 매일 약 0.01 - 1000 mg API의 범위, 더욱 바람직하게는 매일 1 - 500 mg API의 범위, 더더욱 바람직하게는 매일 약 10 - 200 mg API의 범위의 치료학적 유효량의 양으로 사용 (프리도피딘과 공동-투여)될 수 있다고 생각된다.

프리도피딘 및 테트라베나진은 임의의 통상적인 경로에 의해 동시-투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 프리도피딘 및 테트라베나진은 경구로, 정맥내로, 혈관내로, 복강내로, 피하로, 근육내로, 흡입에 의해, 국소적으로, 패치에 의해 또는 좌약에 의해 투여될 수 있다.

더욱 바람직한 실시형태에서, 프리도피딘 및 테트라베나진은 경구 (p.o.)로 투여된다.

더욱 바람직한 다른 실시형태에서, 프리도피딘 및 테트라베나진은 정맥내 (i.v.)로 투여된다.

다른 실시형태에서, 프리도피딘 및 테트라베나진은 피하 (s.c.) 주사에 의해 투여된다.

본 명세서에서 기술된 2 또는 그 이상의 실시형태의 임의의 조합은 본 발명의 범위 내로 볼 수 있다.

약학적으로 허용가능한 염

본 발명에 따라 사용하기 위한 활성 화합물은 원하는 투여에 적합한 임의의 형태로 제공될 수 있다. 적합한 형태는 본 발명의 화합물의 약학적으로 (즉, 생리학적으로) 허용가능한 염 및 프리드러그 (predrug) 또는 프로드러그 (prodrug) 형태를 포함한다.

약학적으로 허용가능한 부가 염의 예는, 비제한적으로, 무독성 무기산 및 유기산 부가 염, 예를 들어 염화수소산염, 브롬화수소산염, 질산염, 과염소산염, 인산염, 황산염, 포름산염, 아세트산염, 아코네이트 (aconate), 아스코르브산염, 벤젠-설포네이트, 벤조산염, 신남산염, 시트르산염, 엠보네이트, 에난테이트, 푸마레이트, 글루타메이트, 글리콜레이트, 락테이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메탄-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 프탈레이트, 살리실레이트, 소르베이트, 스테아레이트, 석시네이트, 타르트레이트, 톨루엔-p-설포네이트 등을 포함한다. 이들 염은 당업계에 잘 알려지고, 기술되어 있는 공정에 의해 형성될 수 있다.

약학적 조성물

본 발명에 따라 사용하기 위한 화합물은 원료 화합물의 형태로 투여될 수 있고, 임의로 생리학적으로 허용가능한 염의 형태로, 하나 이상의 아쥬반트, 부형제, 담체, 완충제, 희석제 및/또는 다른 통상의 약학적 보조제를 포함하는 약학적 조성물로, 상기 활성 성분을 도입시키는 것이 바람직하다.

바람직한 실시형태에서, 본 발명은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체 및 임의로 당업계에서 공지 사용되는 다른 치료 성분 및/또는 예방 성분과 함께 상기 활성 화합물 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유발체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 상기 담체는 그의 수용자에 유해하지 않고 상기 제형물의 다른 성분과 화합할 수 있어야 한다는 관점에서 "허용가능한 (acceptable)" 것이어야 한다.

본 발명의 약학적 조성물은 원하는 치료법에 적합한 임의의 편리한 경로에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 투여 경로는 경구 투여, 특히 정제, 캡슐, 당의정, 분말 또는 액체형태 투여 및 비경구 투여, 특히 피부, 피하, 근육 내 또는 정맥 내 주사에 의한 투여를 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물은 원하는 제형에 적절한 표준 방법 및 통상 기술을 사용하여 당업자에 의해 제조될 수 있다. 바람직한 경우, 상기 활성 성분을 지속적으로 방출할 수 있는 조성물이 사용될 수 있다.

제형 및 투여 기술에 대한 추가 상세 사항은 Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, PA) 최신판에서 찾아 볼 수 있다.

각각의 활성 성분의 실제 투여량은 치료 질병의 특성 및 중증도, 정확한 투여 모드, 투여 형태에 따라 다를 수 있고, 의사의 재량이며, 원하는 치료학적 효과를 발생시키기 위해 본 발명의 특정 상태로 투여량을 조절함으로써 달라질 수 있다. 그러나, 상기 화합물 및 상기 항-비만 화합물의 하기 투여량이 바람직하고 적합할 수 있다.

상기 화합물의 투여량은 API (Active Pharmaceutical Ingredient)로서 결정될 수 있고, 즉 유리 염기로서 계산될 수 있다.

매일 약 0.1-2 mg API, 바람직하게는 매일 약 0.25-1 mg API, 특히 매일 0.25, 0.5 또는 1.0 mg API의 범위의 일일 투여량이 치료학적 처리에 적합할 수 있다. 상기 화합물의 일일 투여량은 1회 또는 수회 투여, 예를 들어 2회/일로 투여될 수 있다.

상기 항-비만 화합물의 일일 투여량은 상기 실제 화합물에 따라 활성 성분의 약 0.1-500 mg의 범위로 고려될 수 있다. 더욱 구체적인 투여 간격은 매일 약 0.1-2 mg, 약 1-10 mg, 약 10-50 mg, 약 25-100 mg, 약 50-200 mg 및 약 100-500 mg의 범위일 수 있다. 상기 항-비만 화합물의 일일 투여량은 1회 또는 수회 투여, 예를 들어 2회/일로 투여될 수 있다. 일 실시형태에서, 상기 일일 투여량은 1회 투여로 투여될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 목적을 달성하는데 유효한 양에서와 같은 "유효한"은 이러한 설명 방식에서 사용되는 경우 합당한 이익/위험 비율에 비례하고, 과도한 부활성 (예를 들어, 독성, 자극 또는 알러지 반응) 없이 목적하는 치료학적 반응을 발생시키기에 충분한 성분 양을 의미한다. 예를 들어, 운동 장애 치료에 효과적인 양. 구체적인 효과적인 양은 치료 대상 상태, 환자의 신체적 상태, 치료 대상 포유 동물의 종류, 치료 기간, (임의의) 병행 치료법의 특성 및 사용되는 특정 제형 및 상기 화합물 또는 그의 유발체의 구조와 같은 요소에 따라 달라질 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "치료하다" 또는 "치료하는"은, 예를 들어 장애 및/또는 질병의 억제, 감퇴 또는 정체의 유발를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 대상체의 질병의 진행 또는 질병 합병증의 "억제"는 대상체의 질병 진행 및/또는 질병 합병증을 예방하거나 또는 감소시키는 것을 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "조합"은 동시 또는 공동 (Contemporaneous) 투여에 의한 치료법에서 사용하기 위한 시약의 결합을 의미한다. 동시 투여는 프리도피딘 및 테트라베나진의 혼합물 (순수 혼합물, 현탁액, 에멀션 또는 다른 물리적 조합물 여부와 관계 없음)의 투여를 의미한다. 이러한 경우, 상기 조합물은 투여 직전에 조합된 프리도피딘 및 테트라베나진의 혼합 또는 개별 용기일 수 있다. 공동 (Contemporaneous) 투여는 프리도피딘 또는 테트라베나진 각각의 활성에서 부가되거나 또는 더욱 부가된 활성 또는 상승 활성이 관찰되기에 충분히 가까운 시간에 또는 동시에 프리도피딘 및 테트라베나진의 개별 투여를 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "DOPAC"은 3,4-디히드록시페닐아세트산이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "LMA"은 이동운동 (locomotor) 활성이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "TBZ"은 테트라베나진이다.

약학적 부품 키트

본 발명에 따르면, 적어도 2 개의 개별적 단위 투여 형태 (A) 및 (B)를 포함하고, 여기서 (A)는 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하고; 또한 (B)는 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하고; 또한 임의로 (C) 이를 필요로 하는 환자에게 (A)의 프리도피딘 및 (B)의 테트라베나진의 동시 투여, 순차적 투여 또는 개별 투여의 설명서를 포함하는 부품 키트를 제공된다.

본 발명에 따라 사용하기 위한 프리도피딘 및 본 발명에 따라 사용하기 위한 테트라베나진은 바람직하게는 서로 함께 투여되기에 적합한 형태로 제공될 수 있다. 두 제형물 중 하나 또는 다른 것이 다른 성분의 투여 전에, 투여 후에 및/또는 동시에 투여 (임의 반복)될 수 있는 예를 포함하는 것이다.

또한, 본 발명에 따라 사용하기 위한 프리도피딘 및 본 발명에 따라 사용하기 위한 테트라베나진은 조합 형태로 또는 개별적으로 또는 순차적으로 투여될 수 있고, 여기서 순차적 투여의 시간 간격은 짧거나 길 수 있다. 이것은 특히 두 제형물 중 하나가 동일한 처리 과정 상에서 다른 제형물의 부재 하에 단독 투여 (임의 반복)되기 보다는 관련 조건의 처리 과정 상에서 환자에 유리한 효과를 나타내기에 충분히 가까운 시간 간격으로 투여 (임의 반복)되는 것을 포함할 수 있다. 조합물이 특정 조건의 처리 과정 상에서 그에 대한 더욱 유리한 효과를 제공하는지 여부에 대한 결정은 치료 또는 예방되는 증상에 따라 다를 수 있고, 당업자에 의해 통상적으로 인지될 수 있다.

본 문맥에서 사용되는 용어 "공동 투여" 및 "~과 동시에 투여"는 프리도피딘 및 테트라베나진의 각각의 투여량이 각각 48 시간 이내, 예를 들어 24 시간 이내에 투여되는 것을 포함한다.

상기 두 성분이 서로 교류되도록 한다는 것은, 성분 (A) 및 (B)가 조합 요법에서 서로 결합하여 사용하기 위해 순차적으로 전달되거나; 또는 조합 요법에서 서로 결합하여 사용하기 위한 "조합 팩"의 개별 성분으로서 함께 묶어서 제공되는 개별 제형물 (즉 서로 독립적으로)로서 제공될 수 있는 것을 포함한다.

본 발명에 따르면, (A) 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제1 약학적 투여 형태; 및 (B) 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제2 약학적 투여 형태를 포함하는 제조물이 또한 제공되고, 여기서 상기 제조물은 제1 및 제2 약학적 투여 형태를 함유한다.

치료법

다른 측면에서, 본 발명은 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과의 조합 요법으로 이를 필요로 하는 살아 있는 동물체에 치료학적 유효량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 인간을 포함한 살아 있는 동물체의 운동 과잉 운동 장애의 치료, 예방 또는 완화 방법을 제공한다.

운동 과잉 운동 장애는 특히 헌팅턴병, 질 드 라 투렛 증후군 또는 지연성운동장애로부터 발생하는 비자발적 행동 장애일 수 있다.

바람직한 실시형태에서, 상기 운동 과잉 운동 장애는 헌팅턴병으로부터 발생하는 비자발적 행동 장애이다.

실시예 개론

운동 기능 (motor function)은 기저핵 및 시상을 포함한 피질하 구조와 대뇌 피질을 연결하는 복잡한 회로에 의해 조절된다. 이러한 회로 내의 주요 회로의 하나는 도파민 D2 수용체를 발현하는 중형 돌기 신경, 선조 GABA-ergic 군을 통해 피질, 선조체 및 시상을 연결하는 밀접 피드백 루프 (closed feed-back loop)를 형성하는 이른바 "간접 회로"이다. 이 회로는 행동의 네거티브 조절자로서 기능하고, 과잉 행동의 억제에 중요한 역할을 한다. 도파민은 이러한 수용체에서의 도파민 톤의 증가가 상기 간접 회로의 활성을 감소시킴에 따라 행동 억제력이 감소되는 방식으로 도파민 D2 수용체를 억제함으로써 상기 간접 회로를 조절한다. 한편으로, 도파민 톤의 감소는 더욱 강력한 행동 억제와 관련된 간접 회로의 활성을 증가시킨다.

운동 조절에 포함되는 다른 중요한 피질-선조체-시상 회로는 도파민 D1 수용체를 발현하는 중형 돌기 신경, 선조 GABA-ergic를 통해 밀접 포지티브 피드백 루프를 형성하는 이른바 "직접 회로"이다. 상기 직접 회로는 상기 선택에 포함되고, 자발적 행동을 가능하게 하는 운동 기능의 포지티브 조절자이다. D1 수용체에서 활성하는 도파민은 상기 직접 회로에서 GABA-ergic 뉴런을 자극하여, 행동을 강화시킨다. 반대로, 이러한 D1 수용체에서의 도파민 톤의 감소는 자발적 행동을 수행하는 능력을 감소시킨다.

테트라베나진 처리로부터 기인하는 도파민 전달의 일반적 감소는 다른 도파민 의존성 기능을 감소시킨다. 특히, 도파민 D1 수용체를 발현하는 선조 뉴런과 함께 상기 직접 회로에서 도파민 톤이 또한 감소되면, 상기 직접 회로를 약화시키고, 따라서 자발적 행동을 수행하는 능력이 감소된다. 또한, 테트라베나진에 의해 유발되는 도파민 감소는 도파민 의존성 자극 및 보상을 손상시키는 경향이 있고, 이것은 테트라베나진의 프로-저해 역효과 (pro-depressant adverse effect)의 바탕이 되는 것으로 가정된다.

프리도피딘이 도파민 D2 수용체에서 활성 활성이 없는 순수 길항제인 점을 고려할 때, 프리도피딘 및 테트라베나진의 치료학적 조합은 도파민 D2 수용체에서 톤의 감소를 더욱 강화시키고, 따라서 테트라베나진 단독 처리와 비교하여 이동운동 (이동운동)의 전체 활성이 더욱 감소된다.

실시예

본 발명은 청구된 본 발명의 범위를 제한하지 않는 하기 실시예와 관련하여 추가로 기술된다.

하기 실시예는 이동운동 활성에서 프리도피딘 및 테트라베나진의 상호작용을 분석하는 것이다. 도파민 및 DOPAC의 선조 수준을 또한 측정하였다. 테트라베나진은 VMAT 억제의 직접적 결과로서 도파민의 조직 수준을 감소시킨다. 두 화합물은 생체 내에서 투여량-의존성 방식으로 선조 DOPAC 수준을 증가시키고, 이것은 도파민 D2 수용체에서의 톤의 감소를 반영하는 것이다 (Ponten). 또한, 즉시 반응 유전자 (immediate-early genes) Arc (활성-조절 세포골격-관련 단백질/활성-조절 유전자 3.1)의 발현에 대한 효과를 전두엽 및 선조체에서 측정하였다. Arc 유전자 발현은 시냅스 활성을 반영하는 생체지표이다 (Steward, 2001; Kawashima 2009). 프리도피딘의 효과를 전형적인 도파민 D2 수용체 길항제의 효과와 비교하기 위해, 테트라베나진 및 도파민 D2 길항제 할로페리돌의 상호작용 실험을 또한 수행하였다.

1) 이동운동 활성, 선조 DOPAC 및 Arc 에 대한 테트라베나진의 효과

테트라베나진을 0.37, 0.64 및 1.1 mg/kg으로 피하 제공하였다. 투여 후 LMA을 60 분 동안 기록하였다. 랫트를 희생시킨 후, 뇌를 수집하였다. 뇌 조직의 분석물은 선조체의 DOPAC 및 전두엽 및 선조체의 Arc mRNA를 포함하였다.

테트라베나진은 이동운동 활성을 감소시켰다 (도 1). 테트라베나진은 자발적 이동운동 활성을 투여량 의존적으로 억제하였다. 전체 기록 시간을 고려할 때, 1.1 mg/kg 테트라베나진 투여 군은 비히클 대조군 평균의 40%로 현저하게 감소 (P<0.01)한 것으로 나타났다. 상기 초기 15 분 동안 1.1 및 0.37 mg/kg 테트라베나진 투여 군 둘다에서 현저한 감소 (P<0.05)가 나타났고, 투여 후 15-60 분 동안은 현저한 효과 (P<0.05)가 0.64 및 1.1 mg/kg에서 관찰되었다. 이동운동 활성의 이러한 감소는 VMAT2 억제에 의해 야기된 도파민 전달 감소를 반영하는 것이다.

테트라베나진은 시험된 모든 투여량에서 통계적으로 현저한 효과로 선조 DOPAC를 투여량 의존적으로 증가시켰다. DOPAC에서의 증가는 테트라베나진으로 처리된 랫트에서 도파민 전달의 감소로 인한, 도파민 D2 수용체에서의 톤 감소의 뉴런 지표이다. 표 1 및 도 2 참조.

선조체 및 피질의 Arc: 테트라베나진은 선조 Arc를 증가시키고, 전두엽 Arc를 감소시켰다. 테트라베나진은 시험된 최고 투여량 (1.1 mg/kg)에서 비히클 대조군 평균의 147% (P<0.01)에 달하는 것으로서, 선조체의 Arc mRNA를 투여량 의존적으로 증가시켰다. 전두엽에서, 비히클 대조군 평균의 66%인 Arc mRNA의 현저한 감소는 1.1 mg/kg의 테트라베나진 투여량에서 관찰되었다 (P<0.05). 0.64 mg/kg의 테트라베나진 투여량에서, 전두엽 mRNA에서의 감소 (대조군 평균의 83%, p=0.14) 경향이 있었다. 도 3 참조. 선조체에서의 Arc 증가는 주로 도파민 D2 수용체에서의 톤 감소로 인한 것일 수 있다. 전두엽에서의 Arc 감소는 도파민 D1 수용체에서의 톤 감소를 초래하는 피질에서의 도파민 전달의 감소와 관련된 것일 수 있다.

2) 이동운동 활성, 선조 DOPAC 및 Arc 에 대한 프리도피딘의 효과

프리도피딘을 11, 33 및 100 μmol/kg에서 피하 제공하였다. 프리도피딘은 자발적 이동운동 활성에 대한 억제 효과를 나타내지 않았다. 이동운동 활성의 소폭 증가가 총 60 분 기록 기간 동안 중간 투여량, 33 μmol/kg에서 관찰되었다. 도 4 참조. 전체 기록 시간을 조사하면, 비히클 대조군 평균의 138%인 이동운동 활성의 현저한 증가가 33 μmol/kg 프리도피딘 투여 군에서 관찰되었다 (P<0.05). 초기 15 분 동안, 현저한 증가가 11 μmol/kg 프리도피딘 투여 군에서 관찰되었고 (P<0.05), 투여 후 15-60 분 동안은 현저한 효과가 관찰되지 않았다.

프리도피딘은 시험된 모든 투여량에서 통계적으로 현저한 효과로서 선조 DOPAC를 투여량 의존적으로 증가시켰다. DOPAC의 증가는 프리도피딘에 의한 도파민 D2 수용체 길항활성으로 인한 도파민 D2 수용체에서의 톤 감소의 뉴런 지표이다. 도 5 및 표 1을 참조한다.

프리도피딘은 시험된 최고 투여량에서 통계적으로 현저한 것으로, 선조 및 피질 arc 유전자 발현을 투여량 의존적으로 증가시켰다. 프리도피딘은 전두엽에서 33　μmol/kg 및 100　μmol/kg의 투여에서 각각 비히클 대조군 평균의 최고 149% (p　<　0.01) 및 222% (p　<　0.001)로 투여량-의존 방식으로 Arc mRNA 수준을 증가시켰다. (도 6). 프리도피딘은 선조체에서 투여량-의존 방식으로 Arc mRNA 수준을 증가시켰다. 관련 대조군 평균과 비교하면, 168% 및 253% (각각 프리도피딘 33　μmol/kg 및 100　μmol/kg에서의 투여량 둘 모두에서 p　<　0.01)에 달하는 것이다. (도 6). 선조체에서의 Arc 증가는 주로 도파민 D2 수용체에서의 톤 감소로 인한 것일 수 있다. 전두엽에서의 Arc 증가는 도파민 D1 수용체에서의 톤 증가를 초래하는 피질에서의 도파민 전달 증가와 관련된 것일 수 있다.

3) 이동운동 활성, 선조 DOPAC 및 Arc에 대한 할로페리돌의 효과

할로페리돌을 0.12, 0.37 및 1.1 mg/kg에서 피하 제공하였다 (도 7 참조). 추가 실험에서, 적은 투여량, 0.04, 0.12. 0.37 및 1.1 mg에서의 효과에 대한 평가가 이루어졌다 (도 302 참조). 할로페리돌은 자발적 이동운동 활성에 대한 투여량-의존성 억제 효과를 나타내었다. 0.12 mg/kg 투여량 및 그 이상의 투여량에서 통계적으로 현저한 효과가 관찰되었으나, 시험된 최저 투여량인 0.04 mg/kg에서는 그러한 효과가 관찰되지 않았다.

더욱 구체적으로, 전체 기록 시간을 고려하면, 0.37 및 1.1mg/kg 할로페리돌 투여 군은 비히클 대조군 평균의 약 35%인 현저한 감소 (P<0.05)를 나타내었다. 초기 15 분 동안, 0.37 및 1.1 mg/kg 할로페리돌 투여 군 둘 모두에서 현저한 감소 (P<0.05)가 관찰되었고, 투여 후 15-60 분 동안에는, 1.1 mg/kg 투여 군에서만 현저한 효과 (P<0.05)가 관찰되었다.

할로페리돌은 시험된 모든 투여량에서 통계적으로 현저한 효과로서 선조 DOPAC를 투여량 의존적으로 증가시켰다. DOPAC에서의 증가는 도파민 D2 수용체 길항활성으로 인한 도파민 D2 수용체에서의 톤 감소의 뉴런 지표이다. 표 1 및 도 9 참조.

할로페리돌은 선조체에서 0.12 mg/kg, 0.37 mg/kg 및 1.1 mg/kg 투여에서 각각 비히클 대조군 평균의 262% (P<0.01), 331% (P<0.001), 409% (P<0.01)에 달하는 것으로서, Arc mRNA를 투여량 의존적으로 증가시켰다. 선조체에서의 Arc 증가는 주로 도파민 D2 수용체에서의 톤 감소로 인한 것일 수 있다. 피질 Arc 유전자 발현 상의 할로페리돌의 현저한 효과는 없었다. 도 10 참조.

［표 1］ 약물 비처리 (drug-naive) 및 테트라베나진-처리 랫트에서 선조 DOPAC에 대한 효과

데이타는 대조군 평균의 백분율로서 표시된 평균 ±SEM DOPAC로서 나타낸다.

C, 비히클 대조군; DOPAC, 3,4-디히드록시페닐아세트산; TC,

테트라베나진 대조군

*p　<　0.05; **p　<　0.01***; p　<　0.001 vs. 비히클 대조군; ⁺ p　<　0.05;

⁺⁺ p　<　0.01; ⁺⁺⁺ p　<　0.001 vs. 테트라베나진 대조군.

요약하면, 생성된 모든 세 개의 항도파민 활성 화합물은 선조 DOPAC를 증가시키고, 선조 arc 유전자 발현을 증가시켰으며, 두 효과는 주로 도파민 D2 수용체에서의 톤 감소와 관련된 것일 수 있고, 프리도피딘은 이동운동 활성을 저해하지 않았다는 점에서 유일한 것이었다. 할로페리돌 또는 테트라베나진로부터 프리도피딘을 차별화하는 다른 특성은 피질 Arc 유전자 발현을 증가시켰다는 것이다.

조합 실험

부분적 도파민 제거 동물에 투여시의 도파민 D2 길항제의 효과를 시험하기 위해, 선조 dopac 및 이동운동 활성 상에 준최대이나 현저한 효과를 발생시키는 투여량으로 할로페리돌 및 프리도피딘을 테트라베나진과 조합하였다.

4) 테트라베나진 유발 이동운동 활성 감소, 선조 도파민 증가 및 Arc 상의 프리도피딘의 효과

프리도피딘 및 테트라베나진의 상호작용 실험에서, 프리도피딘을 0.64 mg/kg의 테트라베나진과 조합하여, 33 및 100 μmol/kg으로 제공하였다. 도 11 참조. 상기 이동운동 기록은 프리도피딘이 테트라베나진에 의해 유발되는 행동 억제를 반전시킨다는 것을 입증하였다. 그러나, 선조 DOPAC 상의 효과, 즉 프리도피딘의 공동 투여는 선조 DOPAC를 더욱 증가시켰다.

이동운동 억제에서, 전체 기록 시간 (P<0.001) 동안 0-15 분 (P<0.01) 및 15-60 분 (P<0.01) 두 기간 모두에서 테트라베나진 대조군 vs. 비히클 처리 대조군에서 현저한 감소가 나타났다. 전체 기록 시간을 고려할 경우, 프리도피딘은 33 및 100 μmol/kg 투여 군 둘 모두에서 테트라베나진에 의해 유발된 이동운동 억제를 반전시켰고, 각각 테트라베나진 대조군 평균의 135% (P<0.05) 및 137% (P<0.01)이었다. 15-60 분의 기간뿐만 아니라 0-15 분 동안, 이러한 반전 효과는 프리도피딘 100 μmol/kg 투여 군에서 현저하였다. 이것은 프리도피딘을 모노아민 제거 동물에 첨가할 경우, 선조 D2 수용체에서의 톤이 더욱 감소한다는 것을 시사한다. 도 11 참조.

테트라베나진 0.64 mg/kg을 각각 프리도피딘 33 μmol/kg 또는 100 μmol/kg과 조합한 상호작용 실험에서, 테트라베나진에 의해 유발된 선조 DOPAC 수준의 현저한 증가는 비히클-처리 대조군과 비교하여 제시된다 (p < 0.01; 표 1). 프리도피딘은 선조체에서 DOPAC 수준을 추가로 증가시켰고, 100 μmol/kg 투여에서 테트라베나진 대조군 평균의 155%였다 (p < 0.01). 표 1 및 도 12 참조.

유사하게, 선조 Arc 발현은 프리도피딘 첨가에 의해 추가로 증가하였다. 반대로 테트라베나진에 의해 유발된 감소는 프리도피딘에 의해 제거되었다.

프리도피딘은 도 13에서 제시된 바와 같이 테트라베나진에 의해 유발된 전두엽 Arc 유발에서의 감소를 반전시켰다. 더욱 구체적으로, 상호작용 실험에서 사용된 0.64 mg/kg 투여에서 테트라베나진은 선조 Arc mRNA에 대해 현저한 효과를 나타내지 않았다. 테트라베나진과 공동 투여하는 경우, 프리도피딘은 선조 Arc를 투여량 의존적으로 증가시켰고, 각각 프리도피딘의 100 μmol/kg 투여 및 33 μmol/kg 투여에서 테트라베나진 대조군 평균의 144% (P<0.05) 및 207% (P<0.01)였다.

0.64 mg/kg 투여에서 전두엽 Arc mRNA의 감소 경향에 따른, 전두엽 Arc mRNA에서 테트라베나진에 의해 유발된 현저한 감소 (P<0.05)가 테트라베나진으로의 투여 반응 실험에서 관찰되었다 (도 3). 프리도피딘은 테트라베나진에 의해 유발된 전두엽 Arc mRNA에서의 감소를 투여량 의존적으로 반전시켰다. 프리도피딘의 33 μmol/kg 및 100 μmol/kg에서, Arc mRNA는 각각 테트라베나진 대조군 평균의 125% (P<0.05) 및 193% (P<0.05)로 증가하였다.

5) 테트라베나진 유발 이동운동 활성 감소, 선조 도파민 증가 및 Arc 상의 할로페리돌의 효과

할로페리돌 및 테트라베나진의 상호작용 실험에서, 할로페리돌을 0.64 mg/kg에서 테트라베나진과 조합하여, 0.04 및 0.12 mg/kg로 제공하였다.

이동운동 기록은 할로페리돌이 테트라베나진 처리 동물에서 이동운동 활성을 더욱 감소시킨다는 것을 시사하였다. 더욱 구체적으로, 전체 시간 동안의 이동운동 기록은 할로페리돌이 0.04 및 0.12 mg/kg 투여 둘 모두에서 테트라베나진으로 처리된 랫트에서 이동운동 활성을 각각 테트라베나진 대조군 평균의 51% 및 41%로 현저하게 감소 (P<0.01) 시켰다는 것을 입증하였다. 처음 15 분의 기록 시간 동안, 이러한 감소 효과는 0.04 mg/kg (P<0.01) 및 상기 0.12 mg/kg (P<0.05) 투여 둘 모두에서 현저하였고, 15-60 분 동안은 0.12 mg/kg 투여 (P<0.05)에서만 현저한 감소를 나타내었다. 도 14 참조.

선조 DOPAC에 대한 효과는 부가적이었다, 즉 테트라베나진과 할로페리돌의 공동 투여는 선조 DOPAC에서 추가적 증가를 야기하였다. 테트라베나진 0.64　mg/kg을 할로페리돌 0.04　mg/kg 또는 0.12　mg/kg과 조합한 상호작용 실험에서, 선조 DOPAC 수준에서 테트라베나진에 의해 유발된 현저한 증가를 비히클-처리 대조군 (p　<　0.001; 표 1)과 비교하였다. 할로페리돌은 선조체에서 DOPAC 수준을 추가로 증가시켰고, 이것은 각각 0.04　mg/kg 및 0.12　mg/kg 투여에서 테트라베나진 대조군 평균의 187% 및 218%이였다 (두가지 투여 모두에서 p　<　0.001). 표 1 및 도 15 참조. 테트라베나진과 공동 처리된 랫트에서는 피질 Arc 유전자 발현 상에 할로페타돌의 현저한 효과가 나타나지 않았다. 할로페리돌은 테트라베나진 처리 동물에서 선조 Arc를 추가로 증가시켰다 (도 16). 테트라베나진은 상호작용 실험에서 사용된 0.64 mg/kg 투여에서 선조 Arc mRNA 상에 현저한 효과를 나타내지 않았다. 테트라베나진과 공동 투여되는 경우, 할로페리돌은 선조 Arc를 투여량 의존적으로 증가시켰고, 이것은 각각 할로페리돌의 0.12 mg/kg 투여 및 0.04 mg/kg 투여에서 테트라베나진 대조군 평균의 272% (P<0.001) 및 400% (P<0.001)이였다.

테트라베나진으로의 투여 반응 실험에서 관찰된 0.64 mg/kg 투여에서 전두엽 Arc mRNA의 감소 (도 3) 및 프리도피딘 및 테트라베나진으로의 상호작용 실험에서 관찰된 현저한 감소 (도 13) 경향에 따라, 테트라베나진은 전두엽 Arc mRNA (P=0.08)를 감소시키는 경향을 보였다. 테트라베나진 처리 동물에서 전두엽 Arc mRNA 상의 할로페리돌의 현저한 효과는 나타나지 않았다.

시험 방법

본 발명에 따라 사용하기 위한 화합물의 평가를 위해 하기 시험을 사용하였다.

동물

B&K Scanbur (Sollentuna, Sweden) (IBBS58), Charles River (Koln, Germany) (KR104, BS31) 또는 Taconic (Ejby, Denmark) (BS85, BS81, KR219, TA284)로부터 수컷 Sprague-Dawley 랫트를 사용하였다. 도착 시점에 랫트의 중량은 160-180g이였다. 이동운동 및 조직 신경 화학 연구 시점에서 랫트의 중량은 220-260g이였다. 06:00와 18:00 사이에 빛을 제공하면서 케이지 당 5 마리의 동물을 사욕하였다. 모든 실험은 스웨덴 동물 보호법 및 고텐부르그의 지방 동물 윤리 위원회의 승인에 따라 수행하였다.

투여량

IBBS58: 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (11; 33 및 100 μmol/kg)으로 시험된 비히클 (염수; NaCl 0.9% v/w) 및 ACR16로 구성하였다.

BS31: 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (0.12; 0.37 및 1.1 μmol/kg)으로 시험된 할로페리돌 및 비히클 (글루코오스 5.5% v/w)로 구성하였다.

KR104: 동물을 n = 4인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 네 가지 투여량 (0.04; 0.12; 0.37 및 1.1 μmol/kg)으로 시험된 할로페리돌 및 비히클 (글루코오스 5.5% v/w)로 구성하였다.

KR219: 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 세 가지 투여량 (0.37; 0.64 및 1.1 μmol/kg)에서 테트라베나진 및 비히클 (글루코오스 5.5% v/w)로 구성하였다.

BS81: 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 비히클 1:1 (염수; NaCl 0.9% v/w+ 5.5% 글루코오스, HAc 몇 방울)로 구성하고, 제2 군은 테트라베나진 (0.64 mg/kg)의 단일 투여량으로 구성하고,제3 군 및 제4 군은 단일 투여 (0.64 mg/kg)의 테트라베나진과 함께 두 가지 투여량 (33 및 100 μmol/kg)으로 시험된 NS30016로 구성하였다.

TA284: 동물을 n = 10인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 비히클 1:1 (염수; NaCl 0.9% v/w+ 5.5% 글루코오스, HAc 몇 방울)로 구성하고, 제2 군은 테트라베나진 (0.64 mg/kg)의 단일 투여량으로 구성하고,제3 군 및 제4 군은 단일 투여 (0.64 mg/kg)의 테트라베나진과 함께 두 가지 투여량 (33 및 100 μmol/kg)으로 시험된 NS30016로 구성하였다. 이 실험으로부터 뇌 조직을 수집하지 않았다.

BS85: 동물을 n = 5인 4 개의 다른 처리군으로 나누었다. 상기 처리군은 비히클 1:1 (염수; NaCl 0.9% v/w+ 5.5% 글루코오스, HAc 몇 방울)로 구성하고, 제2 군은 테트라베나진 (0.64 mg/kg)의 단일 투여량으로 구성하고,제3 군 및 제4 군은 단일 투여량 (0.64 mg/kg)의 테트라베나진과 함께 두 가지 투여량 (0.04 및 0.12 mg/kg)으로 시험된 할로페리돌로 구성하였다.

모든 화합물은 5 ml/kg의 부피에서 기록된 운동 활성의 시작 4 분 전에 피하 투여하였다.

생체 내 시험: 행동

행동 활성은 디지탈 인터페이스 보드가 장착된 애플 매킨토시 컴퓨터 (NB DIO-24, National Instruments, USA) 및 Omnitech Digiscan 분석기에 연결된 8 개의 Digiscan 활성 모니터 (RXYZM (16) TAO, Omnitech Electronics, Columbus, OH, USA)를 사용하여 행동 활성을 측정한다. 각각의 활성 모니터는 포토빔 센서가 장착된 2차 메탈 프레임 (quadratic metal frame)으로 구성한다. 행동 활성 측정 과정 동안, 검정색 바닥의 투명 아크릴 케이지 (WxLxH, 41 x 41 x 30 cm)에 넣은 후, 차례로 상기 활성 모니터에 배치한다. 각각의 활성 모니터는 16 개의 센서로 이루어진 세 줄의 적외선 포토빔 센서로 장착되었다. 두 줄은 90 도 각도로 케이지 바닥의 전면 및 측면을 따라 배치하고, 세 번째 줄은 수직 활성을 측정하기 위해 바닥 위 10 cm에 배치한다. 포토빔 센서는 2.5 cm 간격으로 배치한다. 각각의 활성 모니터는 약한 실내 빛과 환풍기가 포함된 동일한 소리 및 빛을 약화시키는 박스 (WxLxH - 55 x 55 x 45) 내에 고정시킨다.

상기 컴퓨터 소프트웨어는 객체 지향 프로그래밍 (object oriented programming)을 사용하여 조작한다 (LabVIEW^TM, National instruments, Austin, TX, USA).

각각의 활성 모니터로부터 각 시간에 동물의 위치 (중력의 수평 중심 및 수직 활성)를 나타내는 행동 데이타를 25 Hz의 샘플링 주파수에서 기록하고, 통상적으로 조작된 LABView^TM 적용을 사용하여 수집한다. 각각의 기록 시간으로부터의 데이타를 저장하고, 이동 거리에 대해 분석한다. 각각의 행동 기록 시간은 시험 화합물의 주입 후 약 4 분에 시작하여 60 분 동안 지속한다. 상기 결과는 임의의 길이 단위에서 계수/60 분, 계수/45 분 또는 계수/15 분으로 제공한다. 통계적 비교는 대조군에 대해 스튜던트 t-시험을 사용하여 수행한다.

생체 내 시험: 신경 화학

행동 활성 시간 직후, 랫트의 목을 자르고, 랫트의 뇌를 신속하게 꺼낸 후 얼음 냉각된 페트리 디쉬에 넣는다.

뇌를 선조체, 대뇌 부위 (중격핵 - 코어 및 쉘 (shell) 둘 모두, 편도체, 대부분의 후결절 및 배쪽 창백 함유), 전두엽 및 해마로 해부한다. 조직 샘플을 즉시 동결시키고, 내부 표준으로서 과염소산 (PCA) (0.1M), 에틸렌-디아민-테트라아세트산 (EDTA) (5,37 mM), 글루타티온 (GSH) (0.65 mM) 및 알파-메틸-도파민 (0.25 mM)으로 균질화하기 전까지 -80℃에 저장한다. 선조체 및 대뇌 부위로부터 조직을 균질화하기 위해 디지탈 음파처리기 (Branson Digital Sonifier 250-D)를 사용한다. Ultra Turrax T25 균질기를 사용하여 피질 조직을 균질화한다. 모든 샘플을 +4℃에서 10 분 동안 10.000 rpm에서 원심분리한다. 피질 조직을 Munktell 필터 페이퍼 5.5 cm 퀄리티 1F에서 여과한다. HPLC 분리 및 전기화학 검출 (HPLC/EC)에 의해 아민 대사물 (노르메탄에프린 (NM), 3-메톡시티르아민 (3-MT)) 및 산 대사물 (3,4-디히드록시페닐아닐린 (DOPAC), 5-하이드록시인돌아세트산 (5-HIAA), 호모바닐린산 (HVA))뿐만 아니라 모노아민 전송 물질 (노르에피네프린 (NA), 도파민 (DA), 5-하이드록시트립트아민 (5-HT))의 조직 농도에 대해 조직 용출액을 분석한다. 스탁 표준 (DA, NA, 5-HT, 3-MT, DOPAC, HVA, HIAA, 500μg/ml) 및 내부 표준 (AMDA 500μg/ml)을 세 달에 한 번 제조한다. 5-HT 및 5HIAA를 milliQ 물에 용해시킨다. DA, NA, DOPAC, NM, 3-MT 및 HVA는 0.01 M HCl에 용해시킨다. 5-HT, 5-HIAA, NM 및 HVA는 냉장고에 유설명서키고; DA, DOPAC, NA 및 3-MT는 냉동고에 유설명서킨다. 균질화 용액 중에서 0.05 μg/ml의 농도로 희석시킨 분석물 함유 표준의 표준 용액을 매일 제조한다.

분석 방법은 아민 또는 산에 대한 2 개의 크로마토그래피 분리에 기초한 것이다. 2 개의 크로마토그래피 시스템은 상기 2 개의 시스템 상에 동시 주입을 위한 2 개의 샘플 루프 (loop) 및 10-포트 밸브가 포함된 상용 자동 주입기를 공유한다. 두 시스템은 역상 칼럼 (Luna C18 (2), dp 3 μm, 50 x 2 mm i.d., Phenomenex)이 장착되었고, 전기 화학 검출은 유리질 탄소 전극 (MF-1000, Bioanalytical 시스템s, Inc.) 상에서 2 개의 포텐셜에서 획득한다. 칼럼 탈리액을 T-연결을 통해 검출 세포로 통과시키고, 폐기물 배출구로 통과시킨다. 이것은 폐기물 또는 검출기 배출구를 차단하는 2 개의 솔레노이드 밸브에 의해 획득된다. 상기 검출기에 이르는 크로마토그래피 전면을 막음으로써, 더 나은 검출 조건이 달성된다. 상기 산 시스템의 수성 이동 상 (0.4 ml/분)은 시트르산 14 mM, 시스트산 나트륨 10 mM, MeOH 15% (v/v) 및 EDTA 0.1 mM를 함유한다. Ag/AgCl 참조와 비교한 검출 포텐셜은 0.45 및 0.60V이다. 상기 아민 시스템의 수성 이온 쌍 이동 상 (0.5 ml/분)은 시트르산 5 mM, 시트르산 나트륨 10 mM, MeOH 9% (v/v), MeCN 10.5% v/v), 데칸 설폰산 0.45 mM 및 EDTA 0.1 mM를 함유한다. Ag/AgCl 참조와 비교한 검출 포텐셜은 0.45 및 0.65V이다.

PCR

도 3, 도 13 및 도 16에 제시된 데이타를 위해 하기 방법을 사용하였다.

총 RNA를 구아니딘 이소티오시아네이트 방법 (Chomczynski, 1987)에 의해 제조한다. RNA 펠릿을 MQ 물에 용해시키고 -80℃에 저장한다. 상기 샘플 농도를 NanoDrop ND-1000에 의해 분광광도계로 측정한다. r-RNA의 질적 지표 수 및 안정화 수를 무작위 샘플에서 Experion (Bio-Rad)로 측정한다.

2 단계 역전사를 SuperScript III 키트 (Invitrogen)를 사용하여 수행한다. 총 RNA의 1 μg을 5 μl 2x RT 반응물 Mix, 1 μl RT Enzyme Mix로 역전사시키고, 부피를 DEPC-처리 물에 의해 10 μl로 조절한다. E.coli RNase H 1 U를 첨가한다. cDNA를 40 배로 희석시키고, -20℃에 저장한다.

세 개의 서열 (한 개의 목적 유전자 및 두 개의 참조 유전자)을 삼중 PCR-반응에서 함께 증폭시킨다. 실시간 PCR 측정: 5 μl의 cDNA 반응물을 10 μl Quanta 완충액, 3.5 μl MQ, 0.15 μm의 각 프라이머 및 0.1 μm의 각 프로브를 함유하는 20 μl 반응 혼합물에서 증폭시킨다. 실시간 PCR을 모든 유전자에 대해 하기 세팅을 사용하여 CFX96 (Biorad) 상에서 측정한다: 95℃에서 3 분 사전 배양 후 15 초 동안 95℃에서 변성 40 사이클, 1 분 동안 60℃에서 어닐링 및 연장.

참조 유전자는 HPRT 및 시클로필린이다.

상기 프라이머 및 프로브 서열은 arc 측정에 대해 하기와 같다:

활성-조절 유전자 ( Arc ) (수탁 번호 U19866 )

센스: 5'- GGA GTT CAA GAA GGA GTT TC-3'

안티센스: 5'- CCA CAT ACA GTG TCT GGT A-3'

프로브: CCG CTT ACG CCA GAG GAA CT

Dye: 5'FAM

Quencher: 3'BHQ1

제품 크기: 149

히폭산틴 포스포리보실 트랜스퍼라아제 ( HPRT ) (수탁 번호 AF001282 )

센스: 5'- AGG GAT TTG AAT CAT GTT TG -3'

안티센스: 5'- CTG CTA GTT CTT TAC TGG C -3'

프로브: TGT AGA TTC AAC TTG CCG CTG TC

Dye: 5'HEX

Quencher: 3'BHQ1

제품 크기: 121

시클로필린 A (수탁 번호 M19533 )

센스: 5'- CTG GAC CAA ACA CAA ATG-3'

안티센스: 5'- ATG CCT TCT TTC ACC TTC -3'

프로브: TTG CCA TCC AGC CAC TCA GT

Dye: 5'Texas red

Quencher: 3'BHQ2

제품 크기: 100

정확한 PCR 제품을 아가로오스 겔 전기영동 (2%)으로 확인한다. PCR 제품을 Qiagen (Valencia, CA, USA)의 PCR 정제 키트로 정제한다. 모든 유전자는 MWG, Germany에서 서열화한다. 목적 유전자의 양을 두 개의 참조 유전자 HPRT 및 시클로필린 A로 정규화한다.

도 6에 제시된 데이타에 대해, 역전사 및 PCR을 하기와 같이 수행하였다:

역전사는 ThermoScript 키트 (Invitrogen)를 사용하여 수행한다. 1μg의 총 RNA을 25 pmol 올리고 (dT), 62.5 ng 무작위 헥사머, 7.5U Thermoscript RT, 10U RNaseOut, 2μl 5x cDNA 합성 완충액, 1mM dNTP, 0.05 M DTT로 역전사시키고, 부피를 DEPC-처리 물로 10 μl로 조절한다. 이어서 cDNA은 40 배 희석시키고 -20℃에서 저장한다.

실시간 싱글플렉스 PCR 측정: 0.7 μl의 cDNA 반응물을 1 x pcr 완충액, 0.2 mM dNTP, 3.7 mM MgCl2, 0.15 mM SYBR 그린, 0.4 μm 프라이머 및 1 U Taq 중합효소를 함유하는 25 μl 반응 혼합물에서 증폭시킨다. 실시간 PCR을 모든 유전자에 대해 하기 세팅을 사용하여 Icycler (Biorad) 상에서 측정한다: 95℃에서 60 초 사전 배양 후 20 초 동안 95℃에서 변성 40 사이클, 20 초 동안 56℃에서 어닐링 및 30 초 동안 72℃에서 연장.

Arc mRNA 분석: 테트라베나진 , 프리도피딘 및 할로페리돌의 투여-반응 및 상호작용 연구

전체 RNA를 구아니딘 이소티오시아네이트 방법 (Schaefer 1984)에 의해 제조하였다. RNA 펠릿을 초순수 (ultrapure water)에 용해시키고, -80℃에 저장하였다. RNA 농도를 NanoDrop ND-1000 (Thermo Scientific, Waltham, Massachusetts, USA)를 사용하여 분광광도계로 측정하였다. 리보솜 RNA의 질적 지표 수 및 완전화 수를 Experion 전기영동 시스템 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, California, USA)을 사용하여 무작위 샘플에 대해 측정하였다. SuperScript III 키트 또는 ThermoScript 키트 (둘 모두 Life Technologies Europe BV, Stockholm, Sweden)를 사용하여 역전사를 수행하였다. 테트라베나진 투여-반응 및 상호작용 연구에서, 1　μg RNA를 5　μl 2x RT 반응물 Mix 및 1　μl RT Enzyme Mix (SuperScript III kit)로 역전사시기고; 프리도피딘 및 할로페리돌로의 연구에서, 1　μg RNA를 25　pmol 올리고 (dT), 62.5　ng 무작위 헥사머, 7.5　U ThermoScript 역전사 효소, 10　U RNaseOut, 2　μl 5x cDNA 합성 완충액, 1　mM dNTPs 및 0.05　M 디티오트레이톨의 ThermoScript 키트를 사용하여 역전사시켰다. 모든 연구에서, cDNA 부피를 디에틸피로카보네이트-처리 물로 10　μl로 조절하였다. Escherichia coli RNase H (1　U)를 첨가한 다음, cDNA를 40 배로 희석하고, -20℃에서 저장하였다.

두 개의 참조 유전자 및 Arc의 cDNA, 히폭산틴구아닌 포스포리보실트렌스퍼라아제 (HPRT) 및 시클로필린 A를 삼중 반응 (테트라베나진 연구) 또는 세 개의 싱글플렉스 반응 (프리도피딘 및 할로페리돌로의 연구) 중 하나에서 실시간 PCR에 의해 증폭시켰다. 삼중 실시간 PCR에서, 5　μl cDNA를 10 μl Quanta 완충액 (Quanta BioSciences Inc., Gaithersburg, Maryland, USA), 3.5 μl 초순수, 0.15 μm의 각각의 프라이머 및 0.1 μm의 각각의 프로브 (사용된 프라이머 및 프로브 서열은 표 3에 제시됨)를 함유하는 20　μl 반응 혼합물에서 증폭시켰다. 상기 삼중 실시간 PCR 제품을 모든 유전자에 대해 하기 세팅을 사용하여 CFX96 시스템 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, California, USA) 상에서 검출하였다: 95℃에서 3 분 사전 배양 후 15 초 동안 95℃에서 변성 40 사이클, 1 분 동안 60℃에서 어닐링 및 연장. 단일 실시간 PCR 측정에서, 0.7　μl cDNA을 1x PCR 완충액, 0.2　mM dNTPs, 3.7　mM MgCl₂, 0.15　mM SYBR Green, 0.4　μm 프라이머 (표 2) 및 1　U Taq 중합효소 함유하는 25　μl 반응 혼합물에서 증폭시켰다. Icycler 검출 시스템 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, California, USA)을 사용하고, 모든 유전자에 대해 하기 세팅을 사용하였다: 95℃에서 60 초 사전 배양 후 20 초 동안 95℃에서 변성 40 사이클, 20 초 동안 56℃에서 어닐링 및 30 초 동안 72℃에서 연장. 정확한 크기의 PCR 제품을 아가로오스 겔 (2%)에서 전기영동에 의해 확인하였다; 이어서 상기 제품을 Qiagen (Valencia, CA, USA)의 PCR 정제 키트로 정제하였다. 모든 유전자는 MWG Biotech (Ebersberg, Germany)에서 서열화하였다. 양적 Arc mRNA를 정제된 PCR 제품의 6 연속 4-배 희석액을 사용하여 모든 유전자에 대해 구성된 표준 곡선에 의해 상기 두 개의 참조 유전자에 대해 정규화하였다.

프라이머:

히폭산틴 포스포리보실 트렌스퍼라아제 ( HPRT ) (수탁 번호 AF001282 )

센스: 5'-GGC CAG ACT TGT TGG ATT TG-3'

안티센스: 5'-CCG CTG TCT TTT AGG CTT TG-3'

시클로필린 A (수탁 번호 M19533 )

센스: 5'-GTC TCT TTT CGC CGC TTG CT-3'

안티센스: 5'-TCT GCT GTC TTT GGA ACT TTG TCT G-3'

활성-조절 유전자 (Arc ) (수탁 번호 U19866 )

센스: 5'- GTC CCA GAT CCA GAA CCA CA-3'

안티센스: 5'- CCT CCT CAG CGT CCA CAT AC-3'

초기 DNA 양을 정제된 PCR 제품의 6 연속 4-배 희석을 사용하여 모든 유전자에 대해 구성된 표준 곡선에 의해 정량화하였다.

도 10에 제시된 데이타에 대해, PCR을 MyIQ thermal cycler (Biorad) 상에서 구동시킨 것을 제외하고, 도 6의 데이타와 동일한 방법을 적용하였다.

실시예에 대한 논의:

프리도피딘이 테트라베나진에 의해 유발된 행동 억제를 반전시킨다는 것이 입증되었다. 이러한 효과는 테트라베나진 처리 동물에서 이동운동 활성을 감소시키는 할로페리돌에 의해 공유되지 않았다. 상기 상호작용 실험은 테트라메나진과의 공동 투여시의, 프리도피딘 및 할로페리돌 둘 모두 특징적인 신경 화학적 효과, 즉 선조 DOPAC에서의 증가를 보유한다는 것을 추가로 시사하였다. 유사하게, 프리도피딘 및 할로페리돌에 의해 유발된 선조 arc mRNA 수준의 증가는 테트라베나진과의 상호작용 실험에서 유지되었다.

이동운동 강하 및 증가된 선조 DOPAC 수준에 더하여, 테트라베나진은 프리도피딘 또는 할로페리돌의 공동 투여에 의해 영향을 받지 않는, 선조 도파민 수준의 투여량-의존성 감소를 생성시켰다. 또한, 테트라베나진은 전두엽 Arc mRNA 수준의 투여량-의존성 증가를 생성시켰다. 이러한 효과는 프리도피딘에 의해 투여량-의존성 방식으로 제거되었고, 할로페리돌에 의해서는 제거되지 않았다.

프리도피딘 테트라베나진에 의한 행동 우울증을 제거하였다. 이전의 데이타와 일관된 것으로서, 테트라베나진 및 할로페리돌 둘 모두는 자발적 이동운동 활성을 분명하게 억제하였고 (Satou 2001, Schaefer 1984), 프리도피딘은 이러한 효과는 나타내지 않았다. 랫트에서 이러한 자발적 이동운동 활성 상의 억제 효과의 결핍은 프리도피딘의 특징적 약물학적 특성의 일부이다 (Ponten 2010).

도파민 D2 수용체에서의 프리도피딘의 약물학적 효과는 또한 테트라베나진과의 공동 투여시의에도 나타났다. 이러한 신경 화학적 분석은 이전의 결과와 일맥상통하는 것으로서, 시험된 모든 3 종의 화합물이 선조 DOPAC에서 적용된 최고 투여량에서 대조군 수준의 약 250-300%인 투여량 의존성 증가를 생성시켰다는 것을 입증하였다. 선조 DOPAC에서의 증가는 본래 저활성을 갖는 부분적 길항제 및 모노아민 감손 약물을 포함하여 중심 도파민 D2 수용체에서 톤을 일반적으로 감소시키는 화합물뿐만 아니라 도파민 D2 길항제의 일반적 특성이다 (Jordan, 2004; Roffler-Tarlov 1971). 선조 DOPAC에서 나타나는 이러한 증가는 따라서 시험된 각각의 화합물의 핵심적 약물학적 효과를 나타낸다. 상기 상호작용 실험에서, 할로페리돌 및 프리도피딘은 둘 모두 테트라베나진과의 공동 투여시의 선조 DOPAC에서 추가적 증가를 생성시켰다. 이것은 프리도피딘 및 할로페리돌의 일차적 효과가 모노아민이 부분적으로 감손된 랫트에서 여전히 존재한다는 것을 강력히 시사하는 것이다. 또한 프리도피딘이 공동 투여시의 테트라베나진의 이동운동-억제 효과를 반전시킨다는 사실에도 불구하고, 테트라베나진의 특징적 효과로서 유발되는 도파민의 조직 수준에서의 감소는 프리도피딘에 의해 영향을 받지 않고, 이것은 테트라베나진의 약물학적 효과를 파기하지 않는다는 것을 시사하는 것이다.

종합하면, 도파민 수준뿐만 아니라 DOPAC 상의 3 종의 화합물 모두의 일반적인 신경 화학적 효과가 상기 연구를 통해 존재하였고, 이것은 도파민 활성 전달 상의 각각의 화합물의 핵심적 효과가 유지된다는 것을 나타낸다.

프리도피딘 공동 처리에 의한 피질에서의 Arc mRNA의 증가는 테트라베나진 유발 이동운동 강하의 반전을 설명할 수 있게 할 것이다. 특히 프리도피딘 및 할로페리돌의 차이와 관련된 추가의 생체 지표로서, 전두엽 및 선조체에서 Arc mRNA를 측정하였다. Arc은 시넵스 활성화 및 NMDA 수용체 시그널링과 관련된 초기 유전자이고, 도파민 작용 안정제뿐만 아니라 다수의 도파민 D2 길항제에 대한 반응에서 선조체에서의 증가는 이미 보고된 바 있다. 그러나 Arc 유전자 발현 상의 테트라베나진의 상기 효과는 종래에 보고되지 않았다. 상기 실시예에서 입증된 바와 같이, 테트라베나진은 선조 Arc에서 현저한 증가를 유발하였다. 프리도피딘 및 할로페리돌의 효과에 비해 다소 작은 것일 지라도, 이러한 효과는 또한 테트라베나진 처리 동물에서 선조 도파민 전달의 감소와 관련된 것이라고 할 수 있다. DOPAC의 경우와 같이, 테트라베나진 및 프리도피딘 둘 모두는 테트라베나진 처리 랫트에서와 같이 비처리 랫트에서 선조 Arc 상에 유사한 효과를 생성시켰다.

전두엽에서, 테트라베나진은 Arc 유전자 발현을 투여량 의존적으로 감소시키고, 상기 상호작용 실험에서 사용된 투여량 및 그 이상에서 현저한 효과를 나타내었다. 프리도피딘 및 할로페리돌의 투여 반응 연구는 프리도피딘에 의한 전두엽 Arc 유전자 발현에서의 투여량 의존적 증가를 입증하고, 할로페리돌의 효과는 입증하지 못하였다. 전두엽 Arc 유전자 발현을 증가시키는 프리도피딘의 능력은 또한 테트라베나진 처리 랫트에서 분명하였다. 따라서, 할로페리돌 및 다른 통상의 도파민 D2 길항제로부터 프리도피딘을 구별시키는 이러한 약물학적 효과는 모노아민의 부분적 감손시에도 유지된다. 이것은 일정 정도의 피질 시냅스 활성화가 테트라베나진 처리 랫트에서 테트라베나진에서의 행동 억제를 제거하는 프리도피딘의 능력에 기여한다는 것을 나타내는 것으로 볼 수 있다. 이러한 해석에 대한 뒷받침으로서, 프리도피딘이 전두엽에서 자발적 활성 추상세포의 작동을 증가시키는 것으로 나타났다.

실시예는 프리도피딘이 테트라베나진과 공동 투여되는 경우 프리도피딘의 효과가 유지되고, 프리도피딘 및 테트라베나진의 조합이 반대 효과의 어떤 신호도 발생시키지 않는 다는 것을 분명하게 보여준다. 반대로, 할로페리돌 및 테트라베나진의 조합은 현저한 행동 우울증을 발생시키고, 이것은 현재 헌팅턴병 환자에서 테트라베나진 및 신경 이완 약물의 조합 치료와 관련한 주의 사항과 일맥상통하는 것으로서, 인간에서 이러한 조합의 과도한 항-도파민 활성 운동 부활성의 위험을 시사하는 것이다.

선조체에서 도파민 수준 정리

상기 각각의 다른 처리시 도파민의 선조 조직 수준 상의 효과는 표 1에 제시되어 있다. 테트라베나진은 선조 도파민에서 투여량 의존성 감소를 유발하였다. 상기 상호작용 실험에서 사용된 투여량, 0.64 mg/kg에서, 테트라베나진은 상기 연구 수행 과정 동안 선조 도파민을 현저하게 감소시켰고, 이것은 비히클 대조군 평균의 약 50%이였다. 프리도피딘 및 할로페리돌은 둘 모두 시험된 최고 투여량에서 선조 도파민에서 소폭 감소를 발생시켰다. 상기 상호작용 실험에서, 테트라베나진의 선조 도파민에 대한 효과는 실질적으로 프리도피딘 또는 할로페리돌의 조합처리에 의해 영향을 받지 않았다.

요약하면, 프리도피딘은 도파민 D2 수용체 길항활성과 관련된 프리도피딘의 핵심적 신경 화학적 효과를 유설명서키면서, 모노아민 감손 화합물 테트라베나진에 의해 유발된 행동 억제를 반전시켰다. 따라서, 프리도피딘이 테트라베나진에 더하여 투여되는 경우 선조 도파민 D2 수용체에서 톤이 추가로 감소됨에도 불구하고, 테트라베나진의 이동운동 억제 효과는 프리도피딘에 의해 완화되었다. 프리도피딘은 또한 테트라베나진에 의해 유발된 전두엽 Arc 유전자 발현에서의 감소를 반전시켰다. 가정한다면, 이것은 모노아민이 부분적으로 감손된 저활동성 랫트에서 피질 뉴런 활성의 활성화가 프리도피딘의 이동운동 자극 효과에 기여하는 것을 반영하는 것이다.

［표 2］투여-반응 및 상호작용 연구 정리

^a동물 Scanbur; ^b동물 Taconic; ^c동물 Charles River; ^d0.9% (w/v) NaCl; ^e5.5% (w/v) 글루코오스; ^f빙초산으로 pH　4.5로 조정된 0.9% (w/v) NaCl 및 5.5% (w/v) 글루코오스의 1:1 혼합물

［표 3］두 개의 참조 유전자 및 Arc 발현 측정용 프라이머 및 프로브 서열

참조

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FDA Label for XENAZINE (Tetrabenzine) 07/06/2011

Claims

운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 프리도피딘 (predopidine) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 양을 주기적으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
비만, 비만 관련 장애 또는 프리도피딘의 심혈관계 부활성을 겪고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 공동 투여시의 상기 소정량은 각각의 제제가 동량으로 단독 투여되는 경우보다 상기 대상체를 치료하는데 더욱 효과적인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 단독 투여시의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량 및 단독 투여시의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량 또는 단독 투여시의 각각의 이들의 양은 상기 대상체를 치료하는데 효과적이지 않은 것인 방법.
대상체에게 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 주기적 투여시의 하나 이상의 부활성을 감소시키거나 또는 예방하는 방법으로서, 상기 대상체에게 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 주기적으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제5항에 있어서, 하나 이상의 부활성이 우울증, 자살경향성, 좌불안석증, 불안 (restlessness), 흥분 (agitation), 파킨슨증, 진정 (sedation), 경면 (somnolence) 및 연하곤란 (dysphagia)으로부터 선택되는 것인 방법.
제6항에 있어서, 상기 부활성이 파킨슨증인 방법.
제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 운동 장애를 겪고 있는 것인 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 경구 투여를 통해 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 매일 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 하루에 2회 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 하루에 3회 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량이 0.05 mg/kg/일 내지 0.20 mg/kg/일인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량이 5-100 mg/일인 방법.
제14항에 있어서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량이 12.5 mg/일, 25 mg/일, 37.5 mg/일, 50 mg/일, 75 mg/일 또는 100 mg/일인 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 경구 투여를 통해 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 매일 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 하루에 2회 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량이 1.5 μmol/kg/일 내지 20 μmol/kg/일인 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량이 10-100 mg/일인 방법.
제20항에 있어서, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량이 10 mg/일, 20 mg/일, 22.5 mg/일, 45 mg/일 또는 90 mg/일인 방법.
제1항, 제3항, 제4항 또는 제8항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 운동 장애가 헌팅턴병, 투렛 증후군 또는 지연성운동장애인 방법.
제1항, 제3항, 제4항 또는 제8항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 상기 운동 장애의 증상을 완화시키는데 효과적인 것인 방법.
제23항에 있어서, 상기 증상이 무도증인 방법.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 투여 개시 전에 테트라베나진 치료법을 받은 것인 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 동시에 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 인간 환자인 방법.
a) 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제1 약학적 조성물;
b) 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제2 약학적 조성물; 및
c) 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하기 위해 상기 제1 약학적 조성물 및 제2 약학적 조성물의 공동 사용에 대한 설명서를 포함하는 패키지.
제28항에 있어서, 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하기 위한 것인 패키지.
제28항 또는 제29항에 있어서, 상기 운동 장애가 헌팅턴병, 투렛 증후군 또는 지연성운동장애인 패키지.
운동 장애를 겪고 있는 대상체 치료에서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과 조합하여 또는 부가적 치료법 (add-on therapy)으로서 사용하기 위한 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
제31항에 있어서, 상기 운동 장애가 헌팅턴병, 투렛 증후군 또는 지연성운동장애인 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 양 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
제33항에 있어서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 5-100 mg인 약학적 조성물.
제34항에 있어서, 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량이 5 mg, 6.25 mg, 12.5 mg, 25 mg, 37.5 mg, 50 mg, 75 mg 또는 100 mg인 약학적 조성물.
제32항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량이 10-100 mg인 약학적 조성물.
제36항에 있어서, 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 소정량이 10 mg, 22.5 mg, 45 mg 또는 90 mg인 약학적 조성물.
제33항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 것인 약학적 조성물.
제38항에 있어서, 상기 운동 장애가 헌팅턴병, 투렛 증후군 또는 지연성운동장애인 약학적 조성물.
제33항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 비만, 비만 관련 장애 또는 프리도피딘의 심혈관계 부활성을 겪고 있는 대상체를 치료, 예방 또는 완화하는데 사용하기 위한 약학적 조성물.
운동 장애를 겪고 있는 대상체 치료용 조합물을 제조하기 위한,
a) 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염; 및
b) 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 용도로서, 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 동시 투여되거나 또는 동일기간내에 투여되는 것인 용도.
제41항에 있어서, 상기 운동 장애가 헌팅턴병, 투렛 증후군 또는 지연성운동장애인 용도.
소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과 함께, 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물로서, 상기 대상체에 상기 약학적 조성물 및 상기 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 주기적으로 투여함으로써, 상기 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 약학적 조성물.
소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염과 함께, 운동 장애를 겪고 있는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물로서, 상기 대상체에 상기 약학적 조성물 또는 상기 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 주기적으로 투여함으로써, 상기 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 약학적 조성물.
제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 운동 장애가 헌팅턴병, 투렛 증후군 또는 지연성운동장애인 약학적 조성물.
운동 장애를 겪고 있는 대상체 치료용 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염으로서, 상기 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 상기 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여되는 것인 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
제46항에 있어서, 상기 운동 장애가 헌팅턴병, 투렛 증후군 또는 지연성운동장애인 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
운동 장애를 겪고 있는 대상체 치료에서, 동시에 사용되거나, 개별적으로 사용되거나 또는 순차적으로 사용되는 소정량의 테트라베나진 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 소정량의 프리도피딘 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제품.
제48항에 있어서, 상기 운동 장애가 헌팅턴병, 투렛 증후군 또는 지연성운동장애인 제품.